TWI395580B - 一種用於骨移植之半水硫酸鈣／非晶形磷酸鈣（ｃｓｈ／ａｃｐ）複合物及其製法 - Google Patents

Description

一種用於骨移植之半水硫酸鈣/非晶形磷酸鈣(CSH/ACP)複合物及其製法

本發明係提供一種α-半水硫酸鈣/非晶型磷酸鈣(α-CSH/ACP)複合物及其製備方法，特定言之，本發明之複合物包含α-CSH與ACP且兩者之重量比係約10:90至約90:10。

合成骨移植替代物(synthetic bone graft substitutes,SBGSs)因具備良好之生物相容性、骨傳導性及低疾病傳播風險，使其逐漸的被廣泛應用於骨缺損之修復。典型的陶瓷骨移植材料如氫氧基磷灰石(HA,Ca₁₀ (PO₄ )₆ (OH)₂ )、β-三鈣磷酸鹽(β-Ca₃ (PO₄ )₂ ,β-TCP)及硫酸鈣(CS,CaSO₄ )等，以粉末、顆粒、片狀、膏狀或塊狀等不同形式應用於各種骨缺損狀況。現今已發展多種骨移植物之製備方式，總結於表1。

在牙科領域中，對於SBGSs的吸收速率仍有改善的空間。用於骨缺損處之SBGSs需快速地被吸收且被新骨取代，使其可儘早執行牙科植體之放置。然而，用於牙科之SBGSs的理想吸收期間仍然未知。依據臨床研究報導，骨組織在無應力的癒合期間為3至6個月，舉例來說，Kawai等人在其X光檢查頜骨缺損及骨折之癒合的研究中，提出骨癒合的時間約在3至6個月(Kawai T,Murakami S,Hiranuma H,Sakuda M. Healing after removal of benign cysts and tumors of the jaws. A radiologic appraisal. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod 1995;79(4): 517-25;Kawai T,Murakami S,Hiranuma H,Sakuda M. Radiographic changes during bone healing after mandibular fractures. Br J Oral Maxillofac Surg 1997;35(5): 312-8)。因此在自然癒合之狀態下，頜骨缺損癒合之平均時間應為為3至6個月，而SBGSs的吸收時間也應符合上述之骨癒合時間才不為造成癒合上之困擾。

硫酸鈣(Calcium sulfate,CS)是一種可快速被吸收和生物相容性之骨替代材，並具有骨引導功效。根據所含之結晶水數量，硫酸鈣可分為二水硫酸鈣(CaSO₄ ‧2H₂ O，即石膏)、半水硫酸鈣(CaSO₄ ‧0.5 H₂ O，即熟石膏)或無水硫酸鈣(CaSO₄ )。以下為上述反應之化學反應方程式：去水反應：CaSO₄ ‧2H₂ O(s)+heat→CaSO₄ ‧H₂ O(s)+1H₂ OCaSO₄ ‧H₂ O(s)+heat→CaSO₄ +2 H₂ O水合反應：CaSO₄ ‧H₂ O(s)+3/2 H₂ O→CaSO₄ ‧2H₂ O(s)半水硫酸鈣在體內的吸收時間長於二水硫酸鈣，然而，半水硫酸鈣會透過水合反應而轉變成二水硫酸鈣，因此，在商業上生產錠狀之硫酸鈣骨替代材時，係先將半水硫酸鈣調水形成錠狀之二水硫酸鈣，而後該錠狀之二水硫酸鈣脫水後轉化為半水硫酸鈣。CS與許多生物材料有關，已有報導成骨細胞附著於CS及CS被破骨細胞吸收之體外研究，然而，其1至2個月之體內吸收時間似乎過於迅速，因此針對其吸收速率仍有改進之空間。。

文獻建議將CS與吸收速度較慢之磷酸鈣化合物合併使用以降低CS複合材的吸收速率，如氫氧基磷灰石(HAp)、β-磷酸三鈣(β-TCP)及α-磷酸三鈣(α-TCP)之結合(Urban RM,Turner TM,Hall DJ,Inoue N,Gitelis S. Increased bone formation using calcium sulfate-calcium phosphate composite graft. Clin Orthop Relat Res 2007;459:110-7;Nilsson M,Wang JS,Wielanek L,Tanner KE,Lidgren L. Biodegradation and biocompatibility of a calcium sulfate-hydroxyapatite bone substitute. J Bone Joint Surg 2004;86(1):120-125)。美國專利公開第20050119746號提供一種人造骨礦物質替代材，其包含至少一種陶瓷及至少一種水溶性之非離子X-射線造影劑，並提供了一個實施例，其包括1至30%之半水硫酸鈣及50至99%之α-TCP，然而，該替代材之吸收率過於緩慢。

非晶型磷酸鈣(ACP，具有近似Ca₃ (PO₄ )₂ ‧0.8H₂ O)的化學式)，是一種非結晶且為磷酸三鈣中溶解度最高的形式，在體內，其通常做為骨形成時生物性骨磷灰石之前驅物；在體外，ACP則為由快速混合含鈣及磷酸根離子溶液而得之過飽和溶液析出之第一相。先前已有研究證實，因骨細胞於ACP基質較結晶HAp基質有更佳之貼附、增生及分化能力，因此ACP之生物活性更勝於HAp。然而，ACP在接觸水後，經由相轉變，會轉變為吸收速率較長之HAp。

美國專利第7,351,280號係關於一種組合物及生產具相互連通大孔隙、可吸收且可注射之以磷酸鈣為基底之骨水泥(MICPCs)，其係為可自我固化之磷酸鈣骨水泥(CPC)，該專利之發明係添加碳酸根、鎂、鋅、氟及焦磷酸鹽離子來穩定ACP。美國專利第7,670,419號揭示一種用於手術之水性骨水泥，其以磷酸鈣為基底，其包含有A)第一成份，其包含粉末顆粒之磷酸鈣；及B)第二成份，其包含水。該專利之發明係將ACP預熱至500℃，然後研磨，以縮短CPC水合及硬化的時間。美國專利公開第20020183417號則關於一種磷酸鈣骨移植材、製備該磷酸鈣骨移植材之方法以及經該磷酸鈣骨移植材所製成之骨植入物，該專利係以電漿噴覆的方式，將ACP塗覆於HAp的表面而形成一種新的骨植入物，此專利並非作為骨替代材之應用。美國專利公開號第20080014242號揭示一種合成之骨替代材料，其適合做為骨移植組合物中之海綿骨替代物，該材料包含了具有相互連通孔洞構照之生物陶瓷支架，以及一種固體無孔之組合物，其實質上填補間質孔隙體積，並與網狀骨架緊密接觸之組合物包含了硫酸鈣。然而，上述先前技術所提供之骨替代材之皆無令人滿意之吸收率。

因此，在技術領域中，仍需要具有吸收率與人體骨自然癒合率相類似之改良之骨替代材。

本發明係提供一種α-半水硫酸鈣/非晶型磷酸鈣(α-CSH/ACP)複合物，其包含α-CSH及ACP且其重量比係約10:90至約90:10。

本發明亦提供一種製備α-半水硫酸鈣/非晶型磷酸鈣(α-CSH/ACP)複合物之方法，其包含以下步驟：

(a)分別將含鈣離子溶液及含硫酸根離子溶液溶於氯化鈣溶液；

(b)將步驟(a)之溶液加熱至約80℃至100℃，及混合兩種溶液使其反應產生α-半水硫酸鈣(α-CSH)；

(c)過濾步驟(b)所得之溶液以分離溶液中之α-CSH固體；

(d)加入磷酸化合物於步驟(c)之溶液，使其與步驟(a)之氯化鈣反應產生非晶型磷酸鈣(ACP)；及

(e)混合步驟(c)之α-CSH及步驟(d)之ACP，隨後加水以製備α-半水硫酸鈣及非晶型磷酸鈣(α-CSH/ACP)複合物。

本發明發展一種可作為骨移植替代材之可吸收性α-半水硫酸鈣/非晶性磷酸鈣(α-CSH/ACP)複合物，以及一種α-半水硫酸鈣/非晶性磷酸鈣(α-CSH/ACP)可吸收性之骨移植替代材之單槽式製備方法。令人意外地，本發明之α-CSH/ACP複合物具有3至6個月的吸收期，其可適用於牙科植入手術。此外，本發明之單槽式製法可在單一製程中製備α-CSH及ACP，且輕易地製得α-CSH/ACP複合物。

在一方面，本發明提供一種α-半水硫酸鈣/非晶型磷酸鈣(α-CSH/ACP)複合物，其包含α-CSH及ACP且其重量比係約10:90至約90:10。在一實施例中，α-CSH係α-CaSO₄ ‧0.5H₂ O。在另一實施例中，該α-CSH及ACP之重量比係約10:90、約20:80、約30:70、約40:60、約50:50、約60:40、約70:30、約80:20或至約90:10。在本發明之另一實施例中，本發明之α-CSH/ACP複合物係為顆粒形態、粉末形態或糊劑形態。

根據本發明，用於植入之合成骨移植材(SBGS)之理想吸收率應與人體骨之自然癒合率相類似，而本發明出人意料地發現α-CSH與ACP在特定之比例下加水可進行水合，且α-CSH與ACP各自不會轉化為吸收時間較長之HAp及吸收時間較短之二水硫酸鈣(CSD)。本發明結合α-CSH與ACP以製得一種體內吸收期為3至6個月的SBGS，因為α-CSH/ACP複合物之吸收期符合下顎骨組織的再生速率，因此該發明物特別適合用於牙科領域之使用。

根據本發明，將ACP加入CS中，可透過降低吸收率以及模擬天然骨結構及礦物成份，而改善骨移植材之促進骨再生之效能。本發明之α-CSH/ACP係生物可相容、具骨傳導性且可吸收的骨替代材，其具有3至6個月的吸收期。本發明的α-CSH/ACP複合物可縮短移植癒合及治療期間。其吸收速率與下顎骨缺損再生速率相當，因此，本發明之複合物是一種非常適合應用於牙科骨缺損之理想SBGS。

在另一方面，本發明提供一種製備α-半水硫酸鈣/非晶型磷酸鈣(α-CSH/ACP)複合物之方法，其包含以下步驟：

(a)分別將含鈣離子溶液及含硫酸根離子溶液溶於氯化鈣溶液；

(b)將步驟(a)之溶液加熱至約80℃至100℃，及混合兩種溶液使其反應產生α-半水硫酸鈣(α-CSH)；

(c)過濾步驟(b)所得之溶液以分離溶液中之α-CSH固體；

(d)加入磷酸化合物於步驟(c)之溶液，使其與步驟(a)之氯化鈣反應產生非晶型磷酸鈣(ACP)；及

(e)混合步驟(c)之α-CSH及步驟(d)之ACP，隨後加水以製備α-半水硫酸鈣及非晶型磷酸鈣(α-CSH/ACP)複合物。

本發明提供一種製備本發明之α-CSH/ACP複合物之單槽式製備方法，該方法同時製備α-CSH及ACP，且藉由混合所得之α-CSH及ACP而得到α-CSH/ACP複合物。簡言之，上述之反應可於單槽式製備方法中完成，且可透過該單槽式製備方法輕易地製得α-CSH、ACP及α-CSH/ACP。

根據本發明，在該方法之步驟(a)中，一種含鈣離子溶液及一種含硫酸根離子溶液溶係分別溶於氯化鈣溶液。在本發明之一實施例中，該含鈣離子溶液係為硝酸鈣，但不限於，含氯化鈣、氫氧化鈣、硝酸鈣或氧化鈣之溶液。較佳地，該含鈣離子溶液為硝酸鈣溶液。在本發明之另一實施例中，該硫酸根離子溶液為硫酸鉀，但不限於，含硫酸鈉、或硫酸鎂之硫酸根離子溶液。根據本發明，該方法中之氯化鈣係用於做為結晶催化劑，以確保步驟(b)中產生的結晶相半水硫酸鈣不會轉化為二水硫酸鈣。

根據本發明，在該方法之步驟(b)中，步驟(a)之溶液加熱至高於80℃，並混合使其反應產生α-半水硫酸鈣(α-CSH)。較佳地，該溶液係加熱至95℃。根據本發明之一實施例，該反應時間係至少2小時。

根據本發明，在該方法之步驟(c)中，(b)步驟所得之溶液係經由過濾以分離溶液中之固體α-CSH，藉以分別得到α-CSH及溶液部分。

根據本發明，在該方法之步驟(d)中，係將一種磷酸化合物加入步驟(c)之溶液，使其與步驟(a)之氯化鈣反應產生非晶型磷酸鈣(ACP)。在本發明之一實施例中，該磷酸化合物為，但不限於，磷酸二氫鈉(Na₂ HPO₃ )、磷酸二氫鉀(K₂ HPO₃ )或磷酸(H₃ PO₄ )。較佳地，該磷酸根化合物係磷酸二氫鈉。在發明之另一實施例中，該反應係於鹼性pH下作用，較佳地，該pH值係介於7.5至10.0。

根據本發明，在該方法之步驟(e)中，係將步驟(c)之α-CSH及步驟(d)之ACP混合以形成一混合物，隨後將水加入該混合物中以製備α-半水硫酸鈣及非晶型磷酸鈣(α-CSH/ACP)之複合物。在本發明之一實施例中，該α-CSH及ACP係以重量比約10:90至約90:10混合。根據本發明，將水加入α-CSH及ACP之混合物中會使其產生水合反應，並製備且硬化α-CSH/ACP複合物。在本發明之一實施例中，該α-CSH及ACP係以一比例範圍混合以得到所欲之吸收期。較佳地，該α-CSH係α-CaSO₄ ‧0.5H₂ O。在另一實施例中，該α-CSH及ACP係以重量比約60:40混和。較佳地，本發明之α-CSH/ACP複合物具有3至6個月吸收期。

以下實施例不應視為過度地限制本發明。本發明所屬技術領域中具有通常知識者可在不背離本發明之精神或範疇的情況下對本文所討論之實施例進行修改及變化，而仍屬於本發明之範圍。

實施例1 本發明α-CSH/ACP複合物之製備 製備α-CSH

將氯化鈣(CaCl₂ )作為晶型催化劑並以濕式沉澱法製備純α-CSH。0.1 M之硝酸鈣(Ca(NO₃ )₂ 4H₂ O)以及0.1 M之硫酸鉀(K₂ SO₄ )分別溶於3.5 M之50 ml之CaCl₂ 溶液。兩溶液皆預熱至95℃後，將之混合並於大氣壓下反應兩小時，詳細流程述於美國專利第7,700,066號。該結晶態之α-CSH以X光繞射儀(XRD)、掃描式熱差分儀(DCS)以及掃描式電子顯微鏡(SEM)分析之。α-CSH之SEM如圖1-1(a)所示，其具有細長如針狀，且互相交錯之結晶型；此外，其XRD分析顯示於圖1-2(c)，對於結晶面(110)、(310)、(220)以及(-114)在2θ之14.75、25.71、29.76以及31.91有波峰，可確認其為α-CSH。而其DCM圖譜如圖1-2(d))所示，約210℃有一吸熱峰，且於230℃有一微小放熱峰，顯示α-CSH之特徵。

製備ACP

將100 ml之蒸餾水加入氫氧化鈉(NaOH)以製備pH為9之鹼性水溶液。ACP之製備係將100 ml之磷酸氫二鈉(J.T.Baker,ST,USA)水溶液(2.33 M)以及100 ml之氯化鈣溶液(3.5 M)迅速加入鹼性水溶液中。所得非晶性磷酸鈣以高功率過濾(Sibata,Circulating Aspirator WJ-20,Tokyo,Japan)並儲存於冷凍庫中。冷凍乾燥兩天後，該結晶型態以XRD分析確認。該溼式沉澱法所製備之磷酸鈣之XRD圖譜呈現寬光譜(圖1-2(c))，顯示其為非晶型之狀態，而圖1-1(b)則顯示ACP在SEM下呈現片狀。

製備α-CSH/ACP(60/40)顆粒

α-CSH與ACP以60:40之重量比混合後，所得混合物與蒸餾水以10:6之比例混合，該混合物溫度達室溫後，再以80℃之烘箱乾燥。將該物質以杵在研缽中粉碎並過篩以得到420~840 μm之顆粒。當α-CSH與水以10:6之比例混合24小時後，以XRD分析，顯示α-CSH經由水合反應而完全相變為二水硫酸鈣(CSD)因為其在CSD的結晶面(020)、(021)、(040)以及(041)在11.64°、20.75°、23.41°以及29.14°有新波峰。相反地，當α-CSH/ACP(60/40)與水混合過夜後，該水合複合物之XRD顯示其於與CSH的結晶面(110)、(310)、(220)以及(-114)有關的14.75°、25.66°、29.76°以及31.91°位置具有波峰，而在顯示相轉變為CSD的2θ並未有可測得之波峰(見圖2)。圖3顯示α-CSH/ACP(60/40)之SEM圖。

實施例2 α-CSH/ACP體外溶離試驗

體外溶離試驗係必不可少之等同於證明臨床上所使用可吸收性生物材料之溶離特性。準備各種測試材料，α-CSH/ACP(60/40)及CS各1g，樣品置於茶包袋中，並置於聚乙烯管，並以精確度0.01 mg秤重。之後將50 ml之磷酸鹽緩衝液(PBS)添加至各管，於37℃下，轉速30 rpm之震盪器培育(B603D,FIRSTREK,ST,USA)。三天後，將聚乙烯管離心(Hermle,Z 323 K,United Corps,Germany)並小心地把PBS移除。樣品以30 ml之去離子水清洗，烘乾並冷卻後，紀錄新的重量，加入額外的50 ml新鮮PBS，並將其放回震盪器中再過三天。計算樣品之滯留重量百分比以量測樣品之溶離比率。3個月後，當微小的損失比率難以測得時則停止試驗。圖4-1(a)顯示α-CSH/ACP(60/40)及CS浸於PBS高達90天之不同時期之滯留重量圖表，兩者均顯示在前20天可快速溶解，接著降解速率降低並且達到平穩期，經過90天之降解，其殘留樣品種量百分率分別為13.5±0.7%和40.5±1.4%。圖4-2(b)則為XRD分析體外溶離試驗之殘餘物，兩者均發現有低結晶性氫氧基磷灰石(HAp)，但皆未發現CS的存在，因此，在溶解於PBS後，CS及α-CSH/ACP(60/40)皆會轉變為低結晶性之HAp。

實施例3 動物試驗

使用8隻米格魯犬(約一歲大)進行試驗。犬隻飼養於國立屏東大學之科學及技術系。動物的挑選、管理以及手術流程皆經由台北醫學大學動物照護及使用委員會之核准。分別以肌肉注射0.1 mg/kg之阿托平(Tai-Yu Co.,Hsinchu,Taiwan)及6至12 mg/kg之舒泰(Zoletil)/維克50(Virbac 50)(Virbac Laboratories,France)以進行全身或局部的麻醉。注射利多卡因/腎上腺素(Ora Inj.cartridge,2% lidocaine hydrochloride and epinephrine 1：73,000,Showa Yakuhin-Kako,Japan)以進行局部麻醉。取出所有犬隻的雙邊下頷第一臼齒、第二、第三以及第四前臼齒(M1及P2至P4)，傷口予以三個月的癒合期。術後給予犬隻安比西林以抗發炎。下頷以取骨鑽鑿出5-及8-mm之深度，並以α-CSH/ACP(60/40)、Osteoset^® (CS,Wright Medical Technology,Arlington,TN,USA)填補，另以不填補任何物質作為空白對照組，樣本(n為4)在3週及6週後收集，於每個收集時間點，使用取骨鑽(直徑6毫米)來收集標本，並迅速置於10%之福馬林中。切片的樣品以蘇木紅及伊紅染色。使用光學顯微鏡檢測切片之生物相容性及骨再生性。新生骨形成的面積百分比以ImageJ 1.37c(National Institutes of Health(NIH),Bethesda,MD,USA)軟體計算。試驗組缺損及控制組缺損之新生骨形成之面積百分比之差異利用不成對之t-檢定(unpaired Student's t-test)進行試驗，p值小於0.05者具有統計學意義。

圖5顯示3週時，空白對照組的傷口充滿結締組織，而市售商品組及α-CSH/ACP(60/40)組則皆顯示有明顯的骨頭形成，但兩者仍存有一些結締組織。術後六週，則皆未觀察到有任何的纖維組織或發炎細胞，而在空白對照組觀察到有少許的骨頭，但亦存有許多未癒合的空腔。在α-CSH/ACP(60/40)組及組，則可觀察到有顯著的骨頭產生，然而組較α-CSH/ACP(60/40)組有更多的未癒合空腔。確切的骨頭形成區域則由下述之組織型態學方法量測。

實施例4　組織型態學試驗(定量測量)

新骨之形成以影像軟體來定量，結果總結於表1中。在第3週，植入α-CSH/ACP(60/40)組別之新骨形成率為21.1±15.0%，顯著高於空白對照組之13.6±9.5%(p值<0.05)，但與組之新骨形成率29.0±16.0%則無顯著差異。因此，在3週內，以α-CSH/ACP(60/40)或Osteoset^® 填充缺損處皆可增進新骨再生率。術後六週，以α-CSH/ACP(60/40)處理缺損處之新骨形成率為62.2±6.8%，其新骨再生率皆較Osteoset^® 組之53.3±4.6%(p值<0.01)以及空白對照(40.1±7.2%)(p值<0.0002)為高。上述結果顯示，α-CSH/ACP(60/40)組有較好的表現，因此，將ACP加入CS中可增進骨再生之表現。

最後，利用線性最小平方趨勢法(linear least squares fitting technique)推測在犬隻模型實驗中，以預測α-CSH/ACP(60/40)骨替代材植入後，骨缺損完全癒合之時間。

外插圖(圖6)推估使用α-CSH/ACP(60/40)骨替代材之完全癒合時間為10至12週(10.3週)之範圍內，而通常犬隻之骨再生速率快於人類1.5至2倍，因此，在本試驗中10至12週之癒合時間約等同於人體內15~18週(3.75至4.5個月)。

圖1-1(a)顯示α-CSH之SEM圖；圖1-1(b)顯示ACP之SEM圖；圖1-2(c)顯示α-CSH以及ACP之XRD圖譜；及圖1-2(d)顯示α-CSH之DSC圖譜； 圖2顯示轉化ACP、α-CSH/ACP、CSH及CSD之XRD圖譜；圖3顯示本發明α-CSH/ACP之SEM圖；圖4-1(a)顯示硫酸鈣(CS)單獨及α-CSH/ACP(60/40)於PBS中之溶解試驗，及圖4-2(b)顯示CS和α-CSH/ACP於PBS經溶解試驗後殘留物之XRD圖譜；圖5顯示以α-CSH/ACP(60/40)、Osteoset^® 填補骨缺損及空白對照之組織切片顯微圖(每張圖相皆為原本放大20倍；CT：結締組織；NB：新成骨)；及圖6顯示以外插法繪製之α-CSH/ACP(60/40)骨替代材於狗齒槽骨缺損之完全癒合期間趨勢圖。

(無元件符號說明)

Claims (18)

1. 一種α-半水硫酸鈣/非晶型磷酸鈣(α-CSH/ACP)複合物，其包含α-CSH及ACP且其重量比係40：60至80：20。
2. 如請求項1之複合物，其中該α-CSH係α-CaSO₄ ．0.5H₂ O。
3. 如請求項1之複合物，其中該α-CSH及ACP之重量比係40：60、50：50、60：40、70：30或80：20。
4. 如請求項1之複合物，其係為顆粒型態。
5. 如請求項1之複合物，其係為粉末型態。
6. 如請求項1之複合物，其係為糊劑型態。
7. 如請求項1之複合物，其於人體中具有3至6個月吸收期。
8. 一種製備如請求項1之α-半水硫酸鈣/非晶型磷酸鈣(α-CSH/ACP)複合物之方法，其包含以下步驟：(a)分別將含鈣離子溶液及含硫酸根離子溶液溶於氯化鈣溶液；(b)將步驟(a)之溶液加熱至80℃至100℃，及混合兩種溶液使其反應產生α-半水硫酸鈣(α-CSH)；(c)過濾步驟(b)所得之溶液以分離溶液中之α-CSH固體；(d)加入磷酸化合物於步驟(c)之溶液，使其與步驟(a)之氯化鈣反應產生非晶型磷酸鈣(ACP)；及(e)混合步驟(c)之α-CSH及步驟(d)之ACP，其中該α-CSH及ACP係以重量比40：60至80：20混合，隨後加水以製備α-半水硫酸鈣及非晶型磷酸鈣(α-CSH/ACP) 複合物。
9. 如請求項8之方法，其中該含鈣離子溶液為含氯化鈣、氫氧化鈣、硝酸鈣或氧化鈣之溶液。
10. 如請求項8之方法，其中該含鈣離子溶液為硝酸鈣溶液。
11. 如請求項8之方法，其中該含硫酸根離子溶液為含硫酸鉀或硫酸之溶液。
12. 如請求項8之方法，其中步驟(d)中，該磷酸化合物為磷酸二氫鈉(Na₂ HPO₃ )、磷酸二氫鉀(K₂ HPO₃ )或磷酸(H₃ PO₄ )。
13. 如請求項8之方法，其中步驟(d)中，該磷酸化合物為磷酸二氫鈉。
14. 如請求項8之方法，其中步驟(d)係於鹼性pH下反應。
15. 如請求項14之方法，其中該pH值係介於7.5至10.0。
16. 如請求項8之方法，其中該α-CSH及ACP之重量比係40：60、50：50、60：40、70：30或80：20。
17. 如請求項8之方法，其中步驟(e)中，該α-CSH係α-CaSO₄ ．0.5H₂ O。
18. 如請求項8之方法，其中步驟(e)中，該生成之α-CSH/ACP複合物於人體中具有3至6個月吸收期。