TWI322154B - Il-17 receptor like molecules and uses thereof - Google Patents

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TWI322154B
TWI322154B TW090106157A TW90106157A TWI322154B TW I322154 B TWI322154 B TW I322154B TW 090106157 A TW090106157 A TW 090106157A TW 90106157 A TW90106157 A TW 90106157A TW I322154 B TWI322154 B TW I322154B
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TW090106157A
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Jing Shuqian
Medlock Eugene
Yeh Richard
Michael Silbiger Scott
S Elliott Gary
Q Nguyan Hung
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Amgen Inc
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Description

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1322154 A7 B7___ 五、發明說明（1 ) 相關申請案 本申請案宣稱優先於2000年11月27曰建檔之美國專利申 請案第09/723,232號（委託案件第〇1〇 17/36917號），其宣稱 優先於2000年3月16曰建檔之國美專利臨時申請案第 60/189,923號（委託案件第A-666-P號）和2000年5月12曰建 檔之美國專利臨時申請案第60/204,208號（委託案件第 A-666A-P號）。本申請案亦宣稱優先於2001年2月2日建檔之 美國專利臨時申請案第60/266,159號（委託案件第 010 17/37 128號），其宣稱優先於2〇〇〇年6月22日建樓之美國 專利臨時申請案第60/2 13,125號（委託案件第A-707-P號）。 將所有上文-確認之申請案均以其完整内容合併於此以作 爲參考。 發明範圍 本發明係關於新穎的類IL-17受體多肽和編碼相同物的 核酸分子。本發明亦關於產製類IL-1 7受體多肽之載體、宿 主細胞、醫藥組合物、選擇性結合劑和方法。亦提供診斷 、治療、改善及/或預防與類IL-17受體多肽有關之疾病的方 法0 發明背景 在確認、選殖、表現和操縱核酸分子上的技術進步，已 經大大地加速了以破解人類基因组爲基礎之新穎治療劑的 發現。現在，快速的核酸定序技術，可以空前的速率產生 序列資訊，並連接計算分析，容許將部份重疊的序列組合 成部份或完整的基因組，並確認編碼多肽的區域。對已 裝--------訂---------. (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
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五、發明說明（2 ) 胺基酸序列的資料庫編譯比較預測的胺基酸序列，容許決 定對先前確認之序列及/或結構介標之同種性的程度。核酸 分子編碼多肽之區域的選殖和表現，提供了可用來進行妹 構和功能分析的多肽產物。操縱核酸分子並編碼多肽，產 生其變體和衍生物’可賦與用來作爲治療劑之產物有利的 特性。 儘管在過去十年中，在基因組研究上顯著的技術進步， 以人類基因組爲基礎之發展新穎治療劑的可能性，仍然是 相當不眞實的。仍尚未確認出許多編碼可能有益之多肽治 療劑的基因，或那些編碼可作爲治療分子之"標靶"的多肽 之基因。此外，尚未進行得自許多基因之多肽產物的結構 和功能分析。 因此’本發明的目標是確認新穎的多肽，和編碼相同物 的核酸分子，其具有診斷或治療的利益。 發明概述 本發明係關於新穎的類IL-1 7受體核酸分子及编碼多肽。 本發明提供經過分離的核酸分子，包括選自包括下列的 核每酸序列： (a) 在序列識別丨號、序列識別4號或序列識別6號任一個中 陳述的核苷酸序列，包括其組合； (b) 编碼在序列識別2號、序列識別5號或序列識別7號任一 個中陳述之多肤的核替酸序列，包括其組合； (c) 在中等或高度嚴格的條件下與（&)或（13)之互補物雜交的 核铝酸序列，其中該編碼多肽具有在序列識別2號、序 -5- 本纸張尺又適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐〉 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝-----II 訂----！！ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1322154 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（3) 列識別5號或序列識別7號任一個中陳述之多肽’包括 其組合的活性；以及 (d)與（a)-(c)中任一個互補的核甞酸序列。 本發明亦提供經過分離的核酸分子’包括選自包括下列 的核苷酸序列： (a) 编碼與在序列識別2號、序列識別5號或序列識別7號任 一個中陳述之多肽’包括其組合，有至少大約70、7 5 、80、85、90、95、96、97、98或99 %相同之多肽的核 苷酸序列，其中該編碼多肽具有在序列識別2號、序列 識別5號或序列識別7號任一個中陳述之多肽，包括其 組合的活性； (b) 編碼在序列識別1號、序列識別4號或序列識別6號任一 個中陳述之核甞酸序列，包括其組合的對偶基因變體 或接合變體之核甞酸序列，其中該編碼多肽具有在序 列識別2號、序列識別5號或序列識別7號任一個中陳述 之多肽，包括其組合的活性； (c) 序列識別1號、序列識別4號或序列識別6號，包括其组 合；（a)或（b)之核苷酸序列的區域，编碼至少大約25個 胺基酸殘基的多肽片段，其中該多肽具有在序列識別2 號、序列識別5號或序列識別7號任一個中陳述之多肽 ，包括其組合的活性； (d) 序列識別1號、序列識別4號或序列識別6號，包括其組 合；或（a)-(c)中任一個的核嘗酸序列，包括至少大約16 個核甞酸的片段； -6- 本紙張尺度過用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 禮 裝 訂--I!—!· 1322154 A7 五、發明說明（4 ) (e) 在中等或高度嚴格的條件下，與（a)_(d)中任一個的互補 物雜交的核嘗酸序列’其中該多肽具有在序列識別2號 、序列識別5號或序列識別7號任一個中陳述之多肽， 包括其組合的活性；以及 (f) 與（a)-(e)中任一個互補的核:y：酸序列。 本發明更提供經過分離的核酸分子，包括選自包括下列 的核甞酸序列： (a) —種核苷酸序列，其編碼如序列識別2號、序列識別5 號或序列識別6號任一個中陳述之多肽，包括其組合， 帶有至少一個保留性胺基酸置換，其中該多肽具有在 序列識別2號、序列識別5號或序列識別7號任一個中陳 述之多肽，包括其組合的活性； (b) —種核甞酸序列，其編碼如序列識別2號、序列識別5 號或序列識別7號任一個中陳述之多肽，包括其組合， 帶有至少一個胺基酸插入，其中該多肽具有在序列識 別2號、序列識別5號或序列識別7號任一個中陳述之多 肽，包括其組合的活性； (c) 一種核菩酸序列，其編碼如序列識別2號、序列識別5 號或序列識別7號任一個中陳述之多肽，包括其組合， 帶有至少一個胺基酸刪除，其中該多肽具有在序列識 別2號、序列識別5號或序列識別7號任一個中陳述之多 肚·’包括其組合的活性； (d) —種核苷酸序列，其編碼如序列識別2號、序列識別5 號或序列識別7號任一個中陳述之多肽，包括其組合’ 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公 請 先 閱 讀 背 面 之 注 意 事 項 寫 頁 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1322154 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7__ 五、發明說明（5 ) 其具有C-及/或N-終端截短，其中該多肽具有在序列識 別2號、序列識別5號或序列識別7號任一個中陳述之多 肽，包括其組合的活性； (e) —種核苷酸序列，其編碼如序列識別2號、序列識別5 號或序列識別7號任一個中陳述之多肽，包括其組合， 帶有至少一個選自包括胺基酸取代、胺基酸插入、胺 基酸刪除、C-終端截短和N-終端截短的修改，其中該 多肽具有在序列識別2號、序列識別5號或序列識別7號 任一個中陳述之多肽，包括其組合的活性； (f) (a)-(e)的核甞酸序列，包括至少大約1 6個核每:酸的片段 ， (g) 在中等或高度嚴格的條件下，與（a)-(f)中任_個的互補 物雜交的核嘗酸序列，其中該多肽具有在序列識別2號 、序列識別5號或序列識別7號任一個中陳述之多肽， 包括其組合的活性；以及 (h) 與（a)-(e)中任一個互補的核苷酸序列。 本發明亦提供經過分離的多肤’包括選自包括下列的胺 基酸序列： (a) 序列識別2號、序列識別5號或序列識別7號任一個之正 類似物（ortholog)的胺基酸序列，其中該編碼多肽，包 括其紐·合；其中該編碼多肽具有在序列識別2號、序列 識別5號或序列識別7號任一個中陳述之多肽，包括其 組合的活性； (b) 與序列識別2號、序列識別5號或序列識別7號任―個之 -8 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1322154 Α7 Β7 五、發明說明（6) 胺基酸序列，包括其組合至少有大約70、80、85' 90 、95、96、97、98或99%相同的胺基酸序列’其中該多 肽具有在序列識別2號、序列識別5號或序列識別7號任 一個中陳述之多肽，包括其組合的活性； (c) 在序列識別2號、序列識別5號或序列識別7號任一個中 陳述之胺基酸序列，包括其組合的片段’其包括至少 大約25個胺基酸殘基，其中該多肽具有在序列識別2號 、序列識別5號或序列識別7號任一個中陳述之多肤’ 包括其組合的活性； (d) 在序列識別2號、序列識別5號或序列識別7號任一個中 陳述之胺基酸序列，包括其組合’或至少一個（a)_(b) 之對偶基因變體或接合變體的胺基酸序列’其中該多 肽具有在序列識別2號、序列識別5號或序列識別7號任 一個中陳述之多肽，包括其組合的活性。 本發明更提供經過分離的多肽’包括選自包括下列的胺 基酸序列： (a) 在序列識別2號、序列識別5號或序列識別7號任一個中 陳述之胺基酸序列’包括其組合’帶有至少一個保留 性胺基酸置換，其中該多肽具有在序列識別2號 '序列 識別5號或序列識別7號任一個中陳述之多肽’包括其 組合的活性； (b) 在序列識別2號、序列識別5號或序列識別7號任一個中 陳述之胺基酸序列，包括其組合，帶有至少一個胺基 酸插入，其中該多肽具有在序列識別2號、序列識別5 -9- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公爱） 1^1 I ϋ n n ϋ I I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1322154 A7 B7 五、發明說明（7 ) 號或序列識別7號任一個中陳述之多肽’包括其組合的 活性； (c) 在序列識別2號、序列識別5號或序列識別7號任一個中 陳述之胺基酸序列，包括其組合，帶有至少—個胺基 酸刪除，其中該多肽具有在序列識別2號、序列識別5 號或序列識別7號任一個中陳述之多肽’包括其組合的 活性； (d) 在序列識別2號、序列識別5號或序列識別7號任一個中 陳述之胺基酸序列，包括其組合，其具有C-及/或N-終 端截短，其中該多肽具有在序列識別2號、序列識別5 號或序列識別7號任一個中陳述之多肽，包括其組合的 活性；以及 (e) 在序列識別2號、序列識別5號或序列識別7號任一個中 陳述之胺基酸序列，包括其組合，帶有至少一個選自 包括胺基酸取代、胺基酸插入、胺基酸刪除、C-終端 截短和N -終端截短的修改，其中該多肽具有在序列識 別2號、序列識別5號或序列識別7號任一個中陳述之多 肤，包括其組合的活性。 亦提供包括上文（a)-(e)之胺基酸序列的融合多肽。 本發明亦提供包括如同在本文中陳述之經過分離之核酸 分子的表現載體，包括如同在本文中陳述之重組核酸分子 的重組宿主細胞，以及產製類IL-1 7受體多肽的方法，包括 培養宿主細胞’並可視需要分離如此產製的多肽。這些表 現載體包括利用昆蟲細胞表現的桿狀病毒表現載體。 -10- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公楚） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
1JZZ154 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -14 - 五、發明說明（11 ，CeU，严：㈣-⑽（1996)。在本文中將詳細描述這些 及其他類IL-17受體配體的選殖實驗。類化_17受冑配- 的分離’容許確認或發展類IL_17受體之發訊路徑心J 動劑及/或拮抗劑。 、吸 在本文中，在實例8和序列識別23號中，已經確認出—個 配體（在本又中以IL-17E表示）。組織表現數據，與其他江_17 配體的同種性，以及基因轉殖老鼠的表現型過度表現 IL-17E’暗示該IL-17E配體(本發明之類IL_n受體多肽並因 此與孩IL-17E結合），在炎症，包括自體免疫疾病，以及在 骨髓組織生成，特別是嗜曙紅細胞和淋巴細胞（尤其是& 淋巴細胞)的發育、刺激及/或募集中，扮演某種角色。參 見美國專利臨時申請案第6〇/266，159號（委託案件第 0101 7/3 7 128號）’將其完整内容合併於此以作爲參考，其 中確涊IL-17E多肽爲本發明之類乩_17受體多肽il_i7rb_2 和IL-17RB-3(序列識別2和5號）的配體。 本發明的一個具體實施例提供確認化_丨7受體多肽與 IL-17E配體之交互作用的抑制劑的方法。這些方法包括在 爻試化合物的存在和缺乏之下，檢測類IL_丨7受體多肽，像 是包括在序列識別2、5或7號中陳述之成熟蛋白質序列的多 肤’與IL-17E配體’像是包括在序列識別23號中陳述之成 熟蛋白質序列的多肽結合的步驟，並在當該受試化合物存 在’而降低孩結合作用時，確認該受試化合物爲候選的抑 制劑。適當的受試化合物包括核酸分子、蛋白質、肽、碳 水化合物、脂質、有機和無機化合物，可使用已知的高輸 本紙張尺細中國國家標準(〇^Γ^ΐ〇χ297 11--- --------訂-------—I Γ请先閱讀背面之>i意事項再填寫本頁> A7 B7 五、發明說明（12)
If4選程序來歸選該庫。本發明更提供治療、預防或改 :由IL-17E調節之病理學病況的方法，包括投與在治療上 有效含量之專一地與IL_17E配體結合的分子β本發明亦提 供抑制不受歡迎之類IL.17受體多肽與IL17E配體之交互 作用的方法，包括投與在治療上有效含量之能夠與類IL17 受體多肽或IL-17E配體結合的分子。 這些已經確認之候選抑制劑，包括本發明之類虬_17受體 多肽的選擇性結合劑、片段或變體，以及其融合蛋白質。 代表性的IL-17E調節之病理學病況，包括但不限於與免疫 系統功能障礙、炎症、感染有關的那些病況。還有癌症的 進行。類IL-17多肽和多核苷酸，可能在淋巴瘤病況中扮演 某種角色，且類IL-1 7多肽或多核：y：酸的增加表現，可能表 示爲前淋巴瘤（prelymphoma)的狀態。 本發明亦提供抑制類IL-1 7受體多肽與il- 1 7E配體之不 文歡迎之交互作用的方法，包括投與在治療上有效含量之 能夠與類IL-1 7受體多肽或il- 17E配體結合的分子。 本發明亦包括調節類IL· 17受體多肽之表現，和調整（也 就是增加或降低）其含量或活性的方法。一種方法包括對動 物投與編碼類IL-17受體多肽之核酸分子。在另一個方法中 ’可投與包括將會調節或調整類IL-17受體多肽表現之要素 的核酸分子。相反地，可投與選擇性結合劑或反義寡核苌 酸’來治療 '預防或改善與增加含量之類IL-1 7受體多肽有 關的病理學病況。這些方法的實例包括基因治療、細胞治 療’和反義治療，如同在本文中更進一步描述的。 -15- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 χ 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 摩裝 Τ項再填寫-*:
-I -- ^ , - - -----I 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1322154 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 Α7 Β7 五、發明說明（13) 爲了蛋白質配體，已經廣泛地使用酵母兩個-雜化物的筛 選來確認和選殖受體。（Chien等人，pr〇c. Natl. Acad. Sci. U.S.A·，88 : 9578-9583, 1991)。類 IL-17受體多肽結合夥伴 的分離，可用來確認或發展類IL-1 7受體多肽活性的新穎激 動劑和拮抗劑。這類激動劑和拮抗劑，包括但不限於可溶 性抗-類IL-1 7受體多肽（例如缺乏全部或部份穿透膜及/或 細胞質區域（群）的片段、或保留配體結合活性之細胞外區 域（群）的片段，以及其與異種多肽的融合，像是免疫球蛋 白的悝定功能部位，或其保持在循環中延長半衰期之能量 的片段或變體）、類IL-17受體選擇性結合劑（像是抗體及其 衍生物，包括與類IL-1 7受體多肽或其配體-結合部位專一 地結合之嵌合型、人類化或人類的抗體，或其片段）、小分 子、肽’或其能夠與類IL-1 7受體多肽或其配體結合部位 (群）結合的衍生物’或反義寡核苷酸（例如專一地與類IL_ 17 受體编碼DNA或RNA ’或調節序列結合，並抑制類iL· 1 7受 體多肽表現者）’可使用其中任一個來有效地治療一或多種 已揭示之疾病或障礙，包括在本文中提及的那些。 本發明更包括在生物學、組織或細胞試樣中，決定類 IL-1 7觉體核酸存在的方法。這些方法包括下列步驟：提供 懷疑含有類IL-17受體核酸的生物試樣；在其中該診斷試劑 將與在該生物試樣中所含有之類丨L _丨7受體核酸雜交的條 件下，使Μ生物試樣與本發明之診斷試劑接觸；檢測在該 生物試樣中之核酸與診斷試劑之間的雜交作用；並將在該 生物試樣和診斷試劑之間的雜交程度，與在已知濃類 -----— — It---I I I I I · (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
1322154 Α7 Β7 五、發明說明（14) IL-1 7受體核酸和診斷試劑之間的雜交程度做比較。在這些 方法中檢測到的多核甞酸，可能是類〗L-17受體DNA及/或 類IL-17受體RNA。 本發明亦提供一種裝置，其包括適合植入患者的膜；以 及包膠在該膜内的細胞，其中該細胞分泌本發明之類IL-1 7 受體多肽，其中該膜對蛋白質產物是可通透的，但對有害 該細胞之物質是不可通透的。本發明更提供一種裝置，其 包括適合植入的膜，並將類IL-17受體多肽包膠在可通透該 多肽的膜中。 本發明亦包括診斷試劑，包括以可檢測方式標示的多核 站酸，其編碼序列識別2號、序列識別5號或序列識別7號之 胺基酸序列，其片段、變體、同系物。此外，本發明亦提 供在生物學、細胞和組織試樣中，決定類IL-17受體核酸存 在（包括DNA和RNA)的方法，係藉著使該試樣與在本文中 描述之診斷試劑接觸，其將與在該試樣中所含有之類IL-1 7 受體核酸雜交，檢測該雜交作用，並將在該試樣與診斷試 劑之間的雜交程度，與在已知濃度之類IL-1 7受體核酸和診 斷試劑之間的雜交程度做比較。 圖片簡述 圖1敘述第一個人類類IL-1 7受體多肽的核酸序列（序列 識別1號）和胺基酸序列（序列識別2號）° 圖2敘述第一個人類類IL-17受體多肽之胺基酸序列（序 列識別2號）和已知之IL-1 7受體家族成員（序列識別3號）的 同種性。 -17- 一 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) I--I ^ ·1111111 · 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 x^2154 A7 ^^ ____B7__ 五、發明說明（15) 圖3敘述第二個人類類IL-17受體多肽的核酸序列（序列 識別4號）和胺基酸序列（序列識別5號）。 圖4敘述第二個人類類IL-17受體多肽之胺基酸序列（序 列識別5號）和已知之IL-1 7受體家族成員（序列識別3號）的 同種性。 圖5敘述第三個人類類IL-17受體多肽的核酸序列（序列 識別6號）和胺基酸序列（序列識別7號）。 圖6敘述第三個人類類IL-1 7受體多肽之胺基酸序列（序 列識別7號）和已知之IL-17受體家族成員（序列識別3號）的 同種性。 圖7敘述第一個（序列識別2號；IL-17RB-2)、第二個（序列 識別5號；IL-17RB-3)和第三個（序列識別7號）人類類IL-17 受體多肽之胺基酸序列的部份重疊。加下標線之序列是預 測的穿透膜功能部位，其橫跨序列識別2號的殘基293至3 1 3 ，序列識別5號的殘基351至371，和序列識別7號的殘基176 至196。預測的信號肽以粗體字表示，其橫跨序列識別2和5 號的殘基14。因此，預測的細胞-外序列橫跨序列識別2號 的胺基酸14至292，以及序列識別5號的胺基酸14至350。 圖8敘述在基因轉殖之創始老鼠（第1、16、27、29、55、 6 1、20、52和66號）的驗屍中’檢測類IL-1 7過度表現之轉 殖基因的北方墨點。對照組老鼠（第2、1 7、53和65號）是未 經基因轉殖的同胎老鼠。以nbl"標記的跑道是空白的跑道 ’而陽性對照組（+)是類IL-17 cDNA。出現〇_54 kb的譜帶 ，代表轉殖基因的表現。 -18- I— I— I I ---I I ^0 — — — — — — — — (請先間讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1322154 經濟部智慧財產局員工消費合作社印裝 A7 ---------- 五、發明說明（16 ) 圖9敛述在肝切除之基因轉殖的創始老鼠（第1〇、丨丨、3〇 、31、33、37、46、67和68號）的驗屍中，檢測類^了過 度表現之轉殖基因的北方墨點。對照組老鼠（第32、35 ' 36 和45唬）是未經基因轉殖的同胎老鼠。以,,MI”標記的跑道， 表示裝載微量注射之片段，係作爲陽性對照組。出現〇 54 kb 的譜帶’代表轉殖基因的表現。 圖10敘述得自類IL-17基因轉殖老鼠（B，D，F，H)或未經 基因轉殖之對照組老鼠（A，c，E，G)的淋巴結（A_H)或骨 髓（I ’ J)之蘇木素和曙紅（A，B，g-J)、B220 (C，D)和 F4/80 (E，F)染色切片。方格A-F説明類IL_17基因轉殖之淋巴結 明顯地增大，並伴隨有其正常結構的瓦解，歸因於顯著的 細胞浸潤（在方格B中的星號），含有大量们2〇陽性的B淋巴 細胞（万格D)和一些F4/80染色的巨噬細胞。方格明該細 胞浸潤亦含有許多嗜曙紅細胞（箭頭），以及多核的炎症性 巨細胞（箭號）。 圖11敘述得自類1L·1?基因轉殖老鼠（B，D，F，Η，J)或 未經基因轉殖之對照組老鼠（A，c，E，G，的淋巴骨髓Μ ，Β)、脾臟（C-F)和腎臟（G_j)之蘇木素和曙紅（Α，Β ; Ed) 和B220 (C，D)染色切片。方格A_F説明明顯的嗜曙紅性骨 髓增生。方格D説明淋巴增生，在類比_17基因轉殖的老鼠 脾臟中，伴隨有優勢的的20陽性B細胞（箭號），而方格F則 説明在類IL-1 7基因轉殖之脾臟紅髓中的嗜曙紅性骨髓増 生’可與未經基因轉殖之脾臟紅髓相比擬。方格Η和j 說明腎盂的擴張（在Η中之箭號），在腎盂中有明顯的嗜紅 |裝--- C請先間讀背面之注意事項再填寫本頁) . -V.
1322154 A7 Β7 五 '發明說明（17) 性炎症浸潤（腎盂腎炎，方格j)。 圖12敘述柱狀直方圖’與未經基因轉殖之同胎老鼠對昭 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 組相比較：9隻類IL-17基因轉殖的老鼠中，有4隻在周圍： 液中’顯7F出在CD19 + B淋巴細胞之絕對數量上的顯著增 加0 ' 圖13敘述柱狀直方圖，與未經基因轉殖之同胎老鼠評 組相比較，1〇隻類IL-17基因轉殖的老鼠中，有5隻在_ 中，顯示出在CD 1 9 + B淋巴細胞之絕對數量上的增加。 圖14敘述柱狀直方圖，與未經基因轉殖之同胎老鼠對照 組相比較，在類IL-17基因轉殖老鼠的骨髓中，顯示出在 CD 19 + B淋巴細胞之絕對數量上的稍微降低。 圖15敘述柱狀直方圖，與未經基因轉殖之同胎老鼠對照 組相比較，9隻類IL-〖7基因轉殖的老鼠中，有4隻在周圍血 液中’顯示出在CD4 + T淋巴細胞之絕對數量上的增加。 圖16敘述柱狀直方圖，與未經基因轉殖之同胎老鼠對照 組相比較，在類IL-1 7基因轉殖老鼠的脾臟中，顯示出在CD4 + T淋巴細胞之絕對數量上的增加。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 圖17敘述表示發生在類il-17基因轉殖老鼠對其未經基 因轉殖之同胎老鼠對照組中之改變的點圖。標示爲” A”的兩 個上方作圖，爲2 -色流動細胞計數的點圖，其中將匚d 4 5 R +和類IL-1 7-Fc標示描繪在其個別的軸上。對照組作圖”A„ 顯示在區域R1中缺乏CD45R+/類IL-17-Fc+細胞，而在基 因轉殖之作圖”A"中，該族群出現在區域R1中，並代表總粒 性細胞族群的8%。在相對應之前方對側面點圖（"b"和"c") -20- 本紙張尺度適用令國國家標準（CNS>A4規格（2】〇χ297公釐) 丄 jq· A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作杜印製 五、發明說明（18 ) 中，以粉紅色的點來描输這些細胞。在對照组作圖B "中缺 乏該族群。 圖18敘述表不發生在類IL17基因轉殖老鼠對其未經基 因轉殖之同胎老鼠對照組中之改變的點圖。標示爲T的兩 個上万作圖，爲2-色流動細胞計數的點圖，其中將CD4和 類IL. 1 7-Fc標示描績在其個別的轴上。對照組作圖"a,顯示 在區域R1中缺之CD4 + /類il-17-Fc +細胞，而在基因轉殖 之作圖”A"中’該族群出現在區域㈣，並代表總粒性細胞 族群的14%。在相對應之前方對側面點圖（尺寸對粒性）中， 類IL-17基因轉殖之老鼠（B)的這些細⑯，剛好位在經常發 現粒性細胞的區域之上（紅色的點）。在對照組作圖"B,，中缺 乏這些細胞。此外，關於基因轉殖的老鼠（A),出現既不是 CD4 +也不是類il-17-FC +的細胞族群（區域2)，但具有嗜 曙紅細胞的分散特性，在前方對侧面點圖"B"中，位在粒性 細胞的左邊（綠色的點）。在對照組作圖"B"中缺乏該族群。 圖19敘述柱狀直方圖，與未經基因轉殖之同胎老鼠對照 組相比較，10隻類IL-1 7基因的轉殖老鼠中，有5隻在骨髓 中，顯示出在類rhIL-17-Fc+/CD45R +類-粒性細胞之細胞 的絕對數量上的增加。 圖20敘述枉狀直方圖，與未經基因轉殖之同胎老鼠對照 組相比較，在類IL-17基因轉殖老鼠的骨髓中，顯示出在類 rhIL· 1 7-Fc + /CD4 +類-粒性細胞之細胞的絕對數量上的增 加0 圖2 1敘述代表性之前方對側面點圖的實例（尺寸對粒性） -21 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ~裝--------訂---------. (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
XI ^22154 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（19) 。可儲存在門内的細胞，提供經過純化的族群。 圖22陳述IL-17RB-2融合蛋白質的序列（序列識別24號） ，包括IL-17RB-2(序列識別2號）之細胞外功能部位，和FC 融合肽（序列識別2 1號）。將FC融合部份的胺基酸序列加下 標線，並以粗體字表示IL-17RB-2的天然信號肽。 圖2 3陳述IL -1 7RB - 3融合蛋白質的序列（序列識別2 5號） ，包括IL-17RB-3(序列識別5號）之細胞外功能部位，和fc 融合肽（序列識別2 1號）。將FC融合部份的胺基酸序列加下 標線，並以粗體字表示IL-17RB-3的天然信號肽。 發明説明 在本文中使用的段落標題僅爲了組織化的目的，並不應 解釋爲限制在本文中所描述的主題。所有在本申請案中提 及的參考文獻，均明確地合併於此以作爲參考。 定義 "類IL-17受體基因"或"類IL-17受體核酸分子”或"多核苷 酸"一詞，意指包括或包含在序列識別1號、序列識別4號或 序列識別6號任一個中陳述之核苷酸序列，包括其組合；编 碼在序列識別2號、序列識別5號或序列識別7號任一個中陳 述之多肽的核苷酸序列，包括其組合（像是，但不限於如同 在本文中描述之融合蛋白質）；Amgen存放编號Α-666Α-Ρ-» DNA插入物（群）的核牮酸序列（hIL-17rl.l，hIL-17r丨.2和 hIL-17rl.3);以及如同在本文中定義之核酸分子的核酸分 子。 ••類IL-1 7受體多肽"一詞意指包括序列識別2號、序列識 -22- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公髮) --------I ----— · — 訂·---— II-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) U22154 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（20 ) 別5號或序列識別7號任一個之胺基酸序列的多肽，包括其 組合’和相關的多肽。相關的多肽包括類IL-1 7受體多肽對 偶基因變體、類IL-17受體多肽正類似物、類IL-17受體多肽 接合變體、類IL-17受體多肽變體和類IL-17受體多肽衍生物 。類IL-17受體多肽可以是成熟的多肽，如同在本文中之定 義’並可以或可以不具有胺基終端的甲硫胺酸殘基，依據 製備它們的方法而定。 ”類IL-1 7受體多肽對偶基因變體” 一詞意指在生物或生 物族群之染色體上，佔據特定位置之數種可能的天然存在 之基因交替形式的其中之一。 "類IL-1 7受體多肽衍生物” 一詞意指如同在本文中之定 義，已經以化學方式修改的在序列識別2號、序列識別5號 或序列識別7號任一個中陳述的多肽，包括其組合、類IL_ i 7 受體多肽對偶基因變體、類IL-17受體多肽正類似物、類 IL-17受體多肽接合變體，或類IL_ 17受體多肽變體。 "類IL-1 7受體多肽片段” 一詞意指包括在序列識別2號、 序列識別5號或序列識別7號任一個中陳述之多肽，包括其 組合的胺基終端截短（有或無前導序列），及/或羧基終端截 短的多肽、類IL-1 7受體多肽對偶基因變體、類JL-1 7受體多 肽正類似物、類IL-1 7受體多肽接合變體，及/或與在序列識 別2號、序列識別5號或序列識別7號任一個中陳述之類 IL -1 7受體多肽的胺基酸序列’包括其组合相比較，具有一 或多個胺基酸添加或取代，或内部删除的類IL_ 17受體多肽 變體（其中所得的多肽將是至少6個胺基酸或更長之長度） -23- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ---lilt--------- f請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 丄 丄 A7
五、發明說明（21 ) 4 IL_17受體多肽片段可起因於另一種RNA接合，或由於 在活體内的蛋白酶活性而產生。關於類IL-17受體多肽之穿 透膜或與膜結合的形式，較佳的片段包括可溶的形式，像 疋缺之穿透膜或與膜結合之功能部位的那些。例如’類 IL-17受體多肽的可溶性片段，是包括序列識別2號的多肽 ，其缺乏胺基酸293至313，或包括序列識別5號的多肽，其 缺之胺基酸351至371。較佳的類比_17受體多肽片段保留了 與類IL-1 7受體多肽配體結合的能力，像是序列識別23號的 IL-17E。在較佳的具體實施例中，截短包括大約丨〇個胺基 酸’或大約20個胺基酸，或大約5〇個胺基酸，或大約75個 胺基酸，或大約1〇〇個胺基酸，或大約1〇〇個以上的胺基酸 。如此產生的多肽片段，將包括大約25個相鄰的胺基酸， 或大約50個胺基酸，或大約75個胺基酸，或大約1〇〇個胺基 酸，或大約150個胺基酸’或大約2〇〇個胺基酸。這類類il-17 受體多肽片段可視需要包括胺基終端的曱硫胺酸殘基。將 知曉可使用這類片段’例如，來產製類IL_丨7受體多肽的抗 體。 "類IL-1 7受體融合多肽π —詞意指在序列識別2號、序列 識別5號或序列識別7號任一個中陳述之多肽，包括其組合 、在本文中定義之類IL-17受體多肽對偶基因變體、類IL_17 受體多肽正類似物、類IL-17受體多肽接合變體，或與在序 列識別2號、序列識別5號或序列識別7號任一個中陳述之類 IL -1 7受體多肽的胺基酸序列，包括其組合相比較，具有一 或多個胺基酸删除、取代或内部添加之類IL-17受體多肽變 -24- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐〉 — — — — — —--I · — I-----訂- -------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員Η消費合作社印製 1322154 經濟部智慧財產局員工消費合作杜印製 A7 B7 五、發明說明（22) 體的胺基或羧基終端處，融合一或多個胺基酸（像是異種的 肽或多肽）。將知曉該融合蛋白質包括在序列識別2號、序 列識別5號或序列識別7號任一個中陳述之多肽胺基酸序列 的組合。 "類IL-17受體多肽正類似物”一詞意指得自其他物種，相 當於在序列識別2號、序列識別5號或序列識別7號任一個中 陳述之類IL-1 7受體多肽胺基酸序列，包括其組合的多肽。 例如，將老鼠和人類的類IL-17受體多肽視爲彼此的正類似 物。 '•類IL-1 7受體多肽接合變體”一詞意指藉著在序列識別2 號、序列識別5號或序列識別7號任一個中陳述之類IL-17受 體多肽胺基酸序列，包括其組合的RNA轉錄本中，插入序 列的另一種加工處理而產生的核酸分子’通常是RNA。 ”類IL-17受體多肽變體"一詞意指與在序列識別2號、序 列識別5號或序列識別7號任一個中陳述之類IL-1 7受體多 肽的胺基酸序列，包括其組合（有或無前導序列）相比較， 由具有一或多個胺基酸序列取代、刪除（像是内部的刪除， 及/或類IL-17受體多月太片段）’及/或添加（像是内部的添加 ，及/或類IL-17受體融合多肽）之胺基酸序列所组成的類 IL-1 7受體多肽。變體可以是天然存在的（例如類il- 17受體 多肽對偶基因變體、類IL-17受體多肽正類似物和類匕-^ 受體多肽接合變體）’或人工建構的。因此，可從具有與在 序列識別1號、序列識別4號或序列識別6號任—個中陳述之 DNA序列’包括其組合不同的DNA序列的相對應核酸分子 -25- 本紙張尺度適用中國國家標準（cns)a4規格（210 x 297公爱） ~ 裝·！—訂---------. (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1322154 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（23) ’來製備這類類IL-1 7受體多肽變體。在較佳的具體實施例 中，變體具有從1至3、或從1至5、或從1至丨〇、或從丨至15 、或從1至20、或從1至25、或從1至50、或從1至75、或從ι 至100、或100個以上的胺基酸取代、插入、添加及/或刪除 ’其中該取代作用可以是保留性或非-保留性的，或其任何 組合。 ”抗原"一詞意指分子或分子的一部份，能夠與諸如抗體 之類的選擇性結合劑結合，並額外地能夠使用於動物中， 產製也夠與遠抗原之抗原決定位結合的抗體。抗原可具有 一或多個抗原決定位。 上文提及的專一性結合反應一詞，意指抗原將以極高之 選擇方式與其相對應的抗體反應，但不與眾多可能由其他 抗原唤起的其他抗體反應。 "具有生物活性之類IL-1 7受體多肽π —詞意指具有至少 一種爲包括序列識別2號、序列識別5號或序列識別7號任一 個之胺基酸序列的多肽，包括其組合之特徵活性的類IL_ j 7 受體多肽。 ”有效含量"和"在治療上有效的含量”一詞，分別意指所 使用之類IL-17受體多肽或類il-17受體核酸分子的含量，使 在本文中陳述之類IL-1 7受體多肽的一或多個生物活性維 持在値得注意的程度。 ”表現載體π —詞意指適用於宿主細胞’並含有指揮及/或 控制被插入之異種核酸序列表現之核酸序列的載體。表現 包括但不限於諸如轉錄、轉譯之類的加工處理，如果出現 -26- 本Α張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210x297公釐 I 裝--------訂---------. (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1322154 A7 B7 五、發明說明（ 24 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製 插入序列，還有RNA之接合。 所使用的"宿主細胞"一詞，意指已經轉化，或能夠利用 核酸序列轉化，然後表現選出之感興趣基因的細胞。該名 詞包括親代細胞的子代，無論該子代是否在形態學上或在 遺傳構造上與起源的親代相同，只要出現所選出的基因即 〇 "同一性"一詞’如同此項技藝中已知的，意指在二或多 個多肽分子，或二或多個核酸分子序列之間的關係，藉著 比較該序列來決定之。在此項技藝中，”同一性，，亦意指在 核酸分子或多肽之間序列關係的程度，可視情況藉著在二 或多個核甞酸或二或多個胺基酸序列的行列間配對來決定 之。"同一性"藉著特定的數學模式或電腦程式（也就是"演算 法"）寺址，使在一或多個序列中較小的一個帶有間隙排列（ 若有的話），來測量它們之間相同配對的百分比。 "類似性"一詞是相關的概念，但與”同一性"相反，意指 類似性之測量値，包括相同配對和保留性置換配對兩者。 如果兩個多肽序列，例如具有10/20相同的胺基酸，而剩下 的全都是非-保留性的置換，此時同一性和類似性的百分比 皆爲50%。如果在相同的實例中，另外有五個位置是保留 性置換，則此時同一性的百分比仍是5〇%，但類似性的百 分比將是75% (丨5/20)。因此，在具有保留性置換的案例中 ，在兩個多肽之間的類似性百分比將比在這兩個多肽之間 的同一性百分比更高。 ”經過分離的核酸分子"一詞意指本發明之核酸分子，其 -27-
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訂·---I I I I I f 1322154 A7 五、發明說明（25 ) (1)已經從至少大約50%的蛋白晳 时肪 ^ 自質、月日負、碳水化合物戋立 他物質中分離出來，這些物皙A /' 質在仗來源細胞中分離總dna 時’天然地與其一起被發現，「9土 Λ 士 a _ 兄（2)並未與在自然界中與該" 經過分離之核酸分子”連接的冬却 ./v . 一 條的全邵或一邵份多核荅酸連接 ，（3)以可操作之方式，與在自蚨 在目，，、、界中並未與其連接的多核 苷酸連接，或（4)在自然界中#去& 1 Y亚禾成為較大&多核甞酸序列 的一部份。較佳的是，本發明之經過分離的核酸分子實質 上不含天然與其連接之至少一種污染的核酸分子。較佳的 是，本發明之經過分離的核酸分子，實質上不含任何其他 污染的核酸分子（群），或在其自然環境中發現的其他污染 物，、其將干擾它在多肽產製上的用途，或其治療、診斷、 預防或研究用途。 ，，經過分離的多肽"一詞意指本發明之多肽，其（1)已經從 至少大約50%的多核誓酸、脂質、碳水化合物或其他物質 中分離出來，這些物質在從來源細胞中分離時，天然地與 其起被發現，（2)並未與在自然界中與該"經過分離之多肽 連接的全邵或一部份多肽連接（藉著共價的或非共價的交 互作用）’（3)以可操作之方式，與在自然界中並未與其連接 的多肽連接（藉著共價或非共價的交互作用），或（4)並未出 現在自然界中。較佳的是，經過分離的多肽實質上不含任 何其他的污染多肽，或在其自然環境中找到的其他污染物 ’其將干擾它的治療、診斷、預防或研究用途。 員 訂 成為的類IL-1 7受體多肽” 一詞意指缺乏前導序列的類 IL_17受體多肽。成熟的類IL-17受體多肽亦可包括其他修改 製 -28- ^紙^尺度適用111國國家標準（CNS)A4規格（21G X 297公釐 1322154 A7 B7 五、發明說明（26) ’像是胺基終端（有或無前導序列）及/或羧基終端的蛋白水 解處理’從較大的前驅物中切開較小的多肽，N_連接及/ 或〇 -連接的糖基化作用，及其類似者。 "核酸序列”或"核酸分子，，一詞意指DNA或RNA序列。該 名詞包括由任何DNA或RNA之已知的鹼基類似物所形成的 分子，像是但不限於4-乙醯基胞嘧啶、8-羥基-N6-甲基腺嘌 呤、氮丙哫基-胞嘧啶、假異胞嘧啶、5_(羧基羥甲基）尿嘧 哫、5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-羧甲基胺甲基-2-硫尿嘧 淀、5-¾基-甲胺基甲基尿p密咬、二氫尿。密淀、肌誓、n6_ 異-戊烯基腺嘌呤、1-甲基腺嘌呤、丨_甲基假尿嘧啶、丨_甲 基鳥嘌呤' 1-甲基肌苷、2,2_二甲基_鳥嘌呤、2·甲基腺嘌 吟、2 -甲基鳥嘴岭、3 -甲基胞p·密症、5 -甲基胞p«密唉、N6 -甲 基腺嘌呤、7·曱基鳥嘌呤、5_甲胺基甲基尿嘧啶、5_甲氧基 胺甲基-2-硫尿嘧啶、々_D_甘露糖基快歐甞、5,_甲氧羰基_ 甲基尿π密咳：、5-甲氧基尿嘧啶、2-甲硫基-N6-異戊烯基腺嘌 呤、尿嘧啶-5-氧代乙酸甲基酯、尿嘧啶·5_氧代乙酸、氧代 丁氧苷（oxybutoxosine) ' 假尿嘧啶、快歐苷（que〇sine)、2_ 硫胞嘧啶、5-甲基-2-硫尿嘧啶、2_硫尿嘧啶、4_硫尿嘧啶 、5-甲基尿嘧啶、N_尿嘧啶_5·氧代乙酸甲基酯、尿嘧啶-% 氧代乙酸、假尿嘧啶、快歐甞、2_硫胞嘧啶和2,6二胺基嘌 ϊφ- 〇 "天然存在，，或，，天然的"一詞，當與諸如核酸分子、多肽 、很主細胞及其類似物之類的生物物質連接使用時，意指 在自然界中找到該物質，而不是由人類製造的。同樣的， 29- 丄丄：)4 A7 B7 五、發明說明（27 S在本文中使用"非_天然存在”或"非天然的，，時，意指並未 在自然界中發現該物質，或是已經由人類修改結構或合成 的。 當在本文中使用"以可操作之方式連接"一詞時，意指侧 面序列的排列，其中配置或裝配如此描述的側面序列，使 其得以執行其平常的功能。因此，以可操作之方式與密碼 序列連接的側面序列，能夠完成該密碼序列的複製、轉錄 及/或轉譯。例如’將密碼序列以可操作之方式與啓動基因 連接’此時該啓動基因能夠指揮該密碼序列的轉綠。側面 序列不需要與密碼序列相鄰，只要其正確地發揮功能即可 。因此’例如，可在啓動基因序列與密碼序列之間出現介 入的非轉澤但可轉錄之序列’而對該密碼序列而言，仍可 將該啓動基因序列視爲”以可操作之方式連接”的。 當在本文中使用"在藥學上可接受的載劑"或”在生理學 上可接受的載劑"一詞時，意指一或多種適合以醫藥組合物 之开> 式’達成或提南類IL-17受體多肽、類il-17受體核酸分 子或類IL-17受體選擇性結合劑之遞送的調配物質。 "選擇性結合劑” 一詞意指對類IL-1 7受體多肽具有專一 性的分子或分子群。選擇性結合劑包括抗體，像是多株抗 體、單株抗體（mABs)、嵌合型抗體、CDR-移植之抗體、抗 -遣傳性型（抗-Id)抗體，可以可溶性或結合的形式來標示抗 體，以及其抗片段 '區域或衍生物，係藉著已知的技術來 提供，包括但不限於酵素切開作用、肽合成或重組技術。 可使用類IL-17受體多肽、片段、變體和衍生物，使用此 30 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) I I I I I 訂 111111-· 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製
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員技藝中已熟知的方法，來製備類IL- i 7受體選擇性結合劑 因此，與類IL· 17受體多肽結合的抗體和抗體片段，亦包 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 括在本發明的範圍内。抗體片段包括抗體與在類il_17受體 多肽上之抗原決定位結合的那些部份❹這類片段的實例， 包括藉著全長抗體之酵素切開作用而產生的Fab和F(ab),片 奴。其他的結合片段包括藉著重組DNA技術產生的那些， 像是表現含有編碼抗體可變區之核酸序列的重組質體。這 些杬體可能是，例如多株的、單一專一性之多株的、單株 的、重組的、嵌合型的、人類化的、人類的、單鏈的及/或 雙重專一性的。 當在本文中使用時專—性的”和"專一性"一詞意指選 擇性結合劑與人類類IL_ 17受體多肽結合，但不與人類非_ 類IL-17受體多肽結合的能力。然而，將知曉該選擇性結合 劑亦可與在序列識別2號、序列識別5號或序列識別7號任一 個中陳述之多肽，包括其組合的正類似物結合，也就是其 物種之間的版本，像是老鼠或大鼠的多肽。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 所使用之”轉導作用”一詞，意指將基因從一個細菌轉移 至另一個，通常是藉著噬菌體。"轉導作用"亦意指藉著逆 轉錄病毒，獲得並轉移眞核生物細胞的序列。 所使用之'轉移感染” 一詞，意指由細胞攝入外來或外源 的DNA ’且當已經將外源的〇ΝΑ導入該細胞膜的内部時， 便已經”轉移感染”了該細胞。各種轉移感染的技術爲此項 技藝中已熟知的，並在本文中揭示之。參見，例如Graham 等人 ’ Virology，11: 456 (1973) ; Sambrook等人，Molecuiar -31 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS〉A4規格（210 x 297公釐） 1322154 A7 五、發明說明（29 )
Cloning, a laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories (New York，1989) ; Davis等人，Basic Meth〇ds in Molecular Biology，Elsevier, 1986;以及Chu等人，Gene，
il · 1 97 (198 1)。可使用這類技術，將一或多個外源的DNA 部份導入適當的宿主細胞中。 當在本文中使用"轉化作用"一詞時，意指在細胞遺傳特 徵上的改變’且當已經修改該細胞’使其含有新的Dna時 ，便已經轉化了該細胞。例如，在被轉化的細胞中，以遺 傳上的方式修改其天然的狀態。在轉移感染或轉導之後， 可藉著在物理上整合至該細胞的染色體内，將正在轉化的 DNA與細胞的重組’可暫時以附加體要素之形式維持，不 進行複製’或可以質體的形式獨立地複製。當DNA隨著細 胞分裂而複製時，便將該細胞視爲已經被穩定地轉化。 所使用的”載體”一詞意指任何用來將編碼之資訊運送至 宿主細胞的分子（例如核酸、質體或病毒）。 接酸分子及/或多肽的關係 了解相關的核酸分子包括序列識別1號、序列識別4號或 序列識別6號任一個之核酸分子，包括其組合的對偶基因或 接合變體，並包括與上述核：y：酸序列中任一個互補的序列 。相關的核酸分子亦包括與在序列識別2號、序列識別5號 或序列識別7號任一個中之多肽，包括其組合相比較，编碼 基本上包括或包含一或多個胺基酸殘基之取代、修改、添 加及/或删除之多肽的核|酸序列。 片段包括編碼序列識別2號、序列識別5號或序列識別7 -32- 冬紙狀MM關家標準(5^ΓΑ4規格（21〇x 297公爱） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) — 訂—1 I ---I I . 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1322154 A7 B7 五、發明說明（3〇 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 號任一個之多肽，包括其組合的至少大約25個胺基酸殘基 ，或大約50個，或大約75個，或大約100個，或大約100個 胺基酸殘基以上之多肽的分子。 此外，相關的類IL-1 7受體核酸分子亦包括那些包括在如 同在本文中定義之中等或高度嚴格的條件下，與序列識別i 號、序列識別4號或序列識別6號之核酸分子，包括其組合 ，或編碼在序列識別2號、序列識別5號或序列識別7號任一 個中出示之胺基酸序列，包括其組合的多肽之分子，或在 本文中定義之核酸片段’或編碼在本文中定義之多肽的核 酸片段完全互補之序列雜交的核苷酸序列之分子。可使用 在本文中提供的類IL-1 7受體序列來製備雜交探針，就相關 的序列來篩選cDNA、基因組或合成的DNA庫。使用如同在 本文中描述的序列排列演算法，可迅速地決定對已知序列 顯示出明顯同一性之類IL-17受體多肽的DNA及/或胺基酸 序列之區域，並可使用那些區域來設計篩選用的探針。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 ’’高度嚴格的條件”一詞意指被設計成容許其序列爲高度 互補之DNA股進行雜交，並排除明顯誤配之DNAs進行雜交 的那些條件。雜交的嚴格性原則上是由溫度、離子強度和 諸如曱醯胺之類變性劑的濃度來決定。對雜交和沖洗而言 ，”高度嚴格的條件"之實例是在65-68°C下，0.015 Μ氣化鈉 、0.0015 Μ擰檬酸鈉，或在42°C下，0.015 Μ氣化鈉、0.0015 Μ 擰檬酸和 50% 甲臨胺。參見Sambrook，Fritsch & Maniatis， Molecular Cloning : A Laboratory Manual，第 2版，Cold Spring Harbor Laboratory (Cold Spring Harbor, N.Y. 1989) -33-^本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公爱） (ff 1322154 A7 B7 五、發明說明（31 ) ;Anderson等人，Nucleic Acid Hybridisation : a practical approach，第 4章，IRL Press Limited (Oxford，England)。 亦可使用較嚴格的條件（像是較高的溫度、較低的離子強 度、較高的甲醯胺或其他變性劑），然而，將會影響雜交的 速率。爲了降低非-專一性及/或背景雜交作用，在雜交和 沖洗緩衝溶液中可含有其他製劑。實例爲0· 1 %牛血清白蛋 白、0.1°/〇聚乙晞吡咯烷酮、〇· 1%焦磷酸鈉、〇· 1%硫酸十二 烷基鈉（NaDodS04或SDS)、發克（ficoll)、登哈特氏 (Denhardfs)溶液、經過超音波振盪的鮭精DNA(或其他非_ 互補的DNA)和硫酸葡聚糖，雖然亦可使用其他適當的製劑 。可改變這些添加物的濃度和類型，實質上不影響雜交條 件的嚴格性。通常在pH6.8-7.4下進行雜交實驗，然而，在 典型的離子強度條件下，雜交速率幾乎與pH値無關。參見
Anderson等人，Nucleic Acid Hybridisation : a Practical Approach，第 4章 ’ IRL Press Limited (Oxford，England)。 影響DNA雙股之穩定性的因素，包括鹼基的組成、長度 和驗基配對的誤配程度。可由熟諳此藝者調整雜交的條件 ，以便順應這些變數，並容許具有不同序列關係的DNAs 形成雜化物。可藉著下列的等式估計完全相配之DNa雙股 的解鏈溫度：
TmfC): 81.5 + 16.6(log[Na + ]) + 〇.41(%G + C)-600/N-0.72(%甲酿胺） 其中N爲所形成之雙股的長度，[Na+]爲鈉離子在雜交或 沖洗溶液中的莫耳濃度，％G + C爲在雜化物中（鳥嘌呤+胞 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 一裝---- ----訂---I -----j 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製 34- 1322154 A7 _______B7_________ 五、發明說明（32 ) Ρ密呢）驗基的百分比。至於不完全相配的雜化物，每1 %的誤 配降低解鏈溫度大約rc。 "中等嚴格的條件"一詞，意指在該條件下，DNA雙股具 有比在”高度嚴格的條件，，下能夠形成時所發生的誤配，更 向程度的驗基對誤配。典型的"中等嚴格之條件"的實例爲 在50-65°C下，0.015 Μ氣化鈉，0.0015 Μ檸檬酸鈉，或在 37-50°C下，0.015 Μ氯化鈉，0.0015 Μ檸檬酸鈉和20%甲酿 胺。舉例來説，在50Ό下，在0.0 1 5 Μ鈉離子中的"中等嚴 格的條件"，將容許大約2 1 %的誤配。 熟諳此藝者將知曉在”高度”和"中等”嚴格的條件之間， 並沒有絕對的差異。例如在〇 · 〇 1 5 Μ鈉離子（無甲醯胺）下， 完全配對之長DNA的解鏈溫度爲大約71°C。在65°C下（以相 同的離子強度）沖洗，將容許大約6%的誤配。欲捕捉關係更 遠的序列’熟諳此藝者可簡單地降低溫度，或升高離子強 度。 對於高達大約2〇個核：y：酸的寡核苷酸探針，藉著下式提 供在1 M NaCT中之解鏈溫度的良好估計：
Tm= 2°C每個A-T鹼基對+ 4°C每個G-C鹼基對 •在6X鹽檸檬酸鈉（SSC)中的鈉離子濃度爲1M。參見 Suggs等人，Developmental Biology Using Purified Genes ，第 683 頁，Brown 和 Fox(编輯）（1981)。 寡核誓酸之高度嚴格的沖洗條件，通常是在低於該寡核 苷酸在6X SSC，0.1% SDS中之Tm 0-5°C的溫度下。 -35- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝 —訂---------1 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 ^22154 A7 B7 1、發明說明（33 ) 在其他的具體實施例中，相關的核酸分子包括或包含與 在序列識別1號、序列識別4號或序列識別6號任一個中所示 之核苷酸序列，包括其組合有至少大約70%相同的核苷酸 序列，或基本上包括或包含編碼與在序列識別2號、序列識 別5號或序列識別7號任一個中陳述之多肽，包括其組合有 至少大約70%相同之多肽的核甞酸序列。在較佳的具體實 施例中，該核甞酸序列與在序列識別1號、序列識別4號或 序列識別6號任一個中所示之核甞酸序列，包括其組合有大 約75%，或大約80%，或大約85%，或大約90%，或大約95 、96、97、98或99%相同，或該核苷酸序列編碼之多肽， 與在序列識別2號、序列識別5號或序列識別7號任一個中陳 述之多肽序列，包括其組合有大約75%，或大約80%，或大 約85%，或大約90%，或大約95、96、97、98或99%相同。 在核酸序列中的差異，可能導致相對於序列識別2號、序 列識別5號或序列識別7號任一個的胺基酸序列，包括其組 合的胺基酸序列之保留性及/或非-保留性修改。 序列識別2號、序列識別5號或序列識別7號任一個之胺基 酸序列，包括其組合的保留性修改（以及對編碼核苷酸的相 對應修改），將產生具有與那些天然存在之類IL-17受體多 肽類似之功能和化學特徵的多肽。相反的，可藉著在序列 識別2號、序列識別5號或序列識別7號任一個之胺基酸序列 ，包括其組合中的選擇性取代作用，而達到在類IL-17受體 多肽之功能及/或化學特徵上的實質修改，該修改對於其維 持（a)在取代區之分子主鏈的結構，例如以長條或螺旋之構 -36- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) --------訂------l!i 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 /76 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1322154 A7 ------________ 五、發明說明（38 ) 熟淆此藝者將能夠使用已熟知的技術，決定在序列識別2 號、序列識別5號或序列識別7號任一個中陳述之多肽，包 括其組合的適當變體。爲了確認在分子中可加以改變，但 不破壞活性的適當區域，熟諳此藝者可瞄準咸相信對活性 不重要的區域。例如，當已知得自相同物種或得自其他物 種足類似多肽，具有類似的活性時，熟諳此藝者可比較類 IL-1 7受體多肽與這類類似之多肽的胺基酸序列。利用這類 比較，可確認出該分子在類似多肽中被保留的殘基和部= 。將知曉改變在相對於這類類似多肽中，較不受保留之類 IL-17受體多肽的區域時，將較不可能對類IL_n受體多肽之 生物活性及/或結構有不利的影響。熟諳此藝者亦將知道， 即使是在相對上較受保留的區域，可以在化學上類似的胺 基酸來取代天然存在的殘基，而仍保有活性（保留性胺基酸 殘基之置換作用）。因此，即使該區域對於生物活性或結構 很重要，仍可使其經歷保留性胺基酸置換，而不破壞生物 活性’或不會對該多肽之結構有不利的影響。 爲了預測該分子中可加以改變，而不破壞活性的適當區 域，熟諳此藝者可瞄準咸相信對活性不重要的區域。例如 ，當已知得自相同物種或得自其他物種之類似多肽，具有 類似的活性時，熟諳此藝者可比較類IL_丨7受體多肽與這類 類似多肽的胺基酸序列。在進行這類比較之後，熟諳此藝 者可定出該分子在類似多肽中被保留的殘基和部份。熟諳 此藝者將知曉在類IL_17受體分子中，在未受保留之區域^ 發生改變，將較不可能對類IL_1 7受體多肽之生物活性 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ----訂----------j
A7 B7 五 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 、發明說明（39 或結構有不利的影響。熟諳此藝者亦將知道即使是在相對 上較文到保留的區域中，亦可以在化學上類似的胺基酸來 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 取代天然存在的殘基，而仍保有活性（保留性胺基酸殘基之 置換作用）。 此外’熟諳此藝者可回顧結構-功能研究，確認在類似的 多月太中’對於活性或結構很重要的殘基。在這類比較的回 顧中’可預測在類IL-17受體多肽中胺基酸殘基的重要性， 其相當於在類似多肽中，對於活性或結構很重要的胺基酸 殘基。熟諳此藝者可對於在類IL_17受體多肽中，預測其很 重要的這類胺基酸殘基’選擇在化學上類似的胺基酸取代 作用。 沾諳此藝者亦可關於在類似多肽中的結構，分析三維結 構和胺基酸序列。在這類資訊的回顧中，熟諳此藝者可就 其三維結構預測類IL-17受體多肽之胺基酸殘基的排列。熟 错此藝者可選擇不使預測是在蛋白質表面上的胺基酸殘基 發生基團改變，因爲這類殘基可能涉及與其他分子的重要 交互作用。再者’熟諳此藝者可創造在每個想要的胺基酸 殘基處，含有單一胺基酸取代的測試變體。然後可使用熟 諳此藝者已知的活性測定來篩選變體。可使用這類變體， 收集有關於適當變體的資訊。例如，如果發現改變某個特 定的胺基酸殘基，將導致受到破壞、不受歡迎地降低或不 適當的活性時’則將避免帶有這類改變的變體。換句話說 ，以從這類例行實驗中收集到的資訊爲基礎，熟諳此藝者 將可迅速地決定單獨或與其他突變組合時，應該避免進_ -42-表紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） Ο I322l54 A7 _____B7__ 五、發明說明（4〇 ) 步取代的胺基酸。 許多科學出版物已經致力於從胺基酸序列的分析中，預 測二級結構，並確認抗原決定位。參見Chou等人， Biochemistry, 13 (2) ： 222-245 (1974) ; Chou 等人，
Biochemistry, 1 13 (2) : 21 1-222 (1974) ; Chou等人，八(^· Enzymol. Relat. Areas Mol. Biol., 47 ： 45-148 (1978) ; Chou 等人，Ann. Rev. Biochem·，47 : 251 ·276 ;和 Chou等人， Biophys. J., 26 : 367-384 (1979)。再者，目前可利用電腦 程式幫助預測蛋白質之抗原性部份和抗原決定之核心區。 實例包括那些以Jameson-Wolf分析爲基礎的程式（Jameson 等人，Comput. Appl. Biosci., 4 (1) : 181-186 (1998)和 Wolf 等人，Comput. Appl‘ Biosci.，4 (1) : 187-191 (1988))，程 式 PepPlot® (Brutlag等人，CABS, 6 : 237-245 (1990)，以及 Weinberger等人，Science, 228 : 740-742 (1985)，以及其他 關於蛋白質之三級結構預測的新穎程式（Fetrow等人， Biotechnology, 11 ： 479-483 (1993))° 再者，目前可利用電腦程式幫助預測二級結構。一種預 測二級結構的方法是以同種性塑型爲基礎。例如，兩個多 肽或蛋白質具有超過30%的序列同一性，或超過40%的類似 性’通常具有類似的結構拓樸學。蛋白質結構資料庫（PDB) 近來的成長，已經提供了増加的二級結構之預測力，包括 在多肽或蛋白質之結構内可能的折疊數目。參見Holm等人 ，Nucl. Acid· Res.，27 (1):244-247 (1999)。已經暗示 (Brenner等人 ’ Curr. 〇ρ· struct. Biol·，7 (3) : 369-376 __-43- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公爱)-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -------—訂·--I----- 1322154 A7 B7 五、發明說明（41 ) (1997))在特定的多肽或蛋白質中，具有有限的折疊數目， 且一旦已經解決該結構的關鍵性數目，則該結構的預測將 戲劇化地變得更正確。 其他預測二級結構的方法，包括，，穿線（threading) "(J0nes， D.，Curr· 〇pin. struct. Biol·，7 (3) ： 377-87 (1997) ; Sippl 等人，Structure，4 m ： 1 5-9 (1 996))，"輪廓分析"（B owie 等人，Science，164-170 (1991) ; Gribskov等人，Meth. Enzym·, 183 : 146-159 (1 990) ; Gribskov等人，Proc. Nat. Acad. Sci. 84, (1 3 j ： 43 5 5-43 5 8 (1 987))，以及"進化連接" (參見Home’在前，和Brenner’在前）。 可藉著將類IL-17受體多肽之胺基酸序列與相關家族成 員做比較，來決定本發明之類IL_丨7受體多肽類似物。代表 性的類IL-17受體多肽之相關家族成員爲在序列識別3號中 陳述的人類IL-17受體多肽。可藉著使用Pileup排列 (Wisconsin GCG套裝程式）或相等物（部份重疊），在保留和 非-保留區域内比較多個家族成員，來完成該比較。 如同在圖2、4和6中所示，將人類類il-17受體多肽的預 測胺基酸序列（序列識別2、5和7號）分別與已知之人類IL_ i 7 受體家族成員（序列識別3號）排成一直線。可使用這些方法 ’或其他热清此藝者已知的方法，來決定其他類化_17受體 多肽的類似物。這些部份重疊的序列提供產生額外的類 IL-1 7丈體類似物之保留性和非_保留性胺基酸置換的指導 。將知曉這些胺基酸取代可包括天然存在或非-天然存在的 胺基酸。例如，有效的類IL-1 7受體類似物可能在序列識別 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ----訂--------- 9 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製
(0% 1322154 A7 B7 五、發明說明（44 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製 疫球蛋白值定區；以及具有與包括在序列識別2號、序列識 別5號或序列識別7號任一個中陳述之胺基酸序列，包括其 組合的多肽’或類IL-1 7受體多肽變體不同之治療活性的多 肤。 可在包括在序列識別2號、序列識別5號或序列識別7號中 陳述之胺基酸序列，包括其組合之多肽，或類IL_17受體多 月太變體的胺基終端或羧基終端進行融合。可不需交聯劑或 接合體分子直接融合，或使用交聯劑或接合體分子間接融 合。交聯劑或接合體分子可以是一或多個胺基酸殘基，通 常疋尚達大約2 0個胺基酸殘基至大約5 〇個胺基酸殘基。亦 可將乂聯劑或接合體分子設計成帶有可供Dna核酸限制内 切酶或蛋白酶切開的位置，以便容許分離融合的部份。將 知曉一但建構，便可根據在本文中描述的方法衍生該融合 多肽。 在本發明更多的具體實施例中，將包括序列識別2號、序 列硪別5號或序列識別7號任一個之胺基酸序列，包括其組 合的多肽，或類IL-17受體多肽變體，與一或多個人類IgG 之Fc區的功能部位融合。抗體包括兩個功能獨立的部份， 稱爲"Fab”的可變功能部位，其與抗原結合，以及稱爲"Fc" 的恒定功能部位，其涉及效應物功能，像是補體激活作用 ，並被呑噬細胞攻擊。以具有長的血清半衰期，而Fab是短 暫的。Capon等人，Nature, 525_3 1 (1989)。當與治療 性蛋白質一起建構時，Fc功能部位可提供較長的半衰期， 或併入諸如Fc受體結合、蛋白質八結合、補體固定，甚至
(請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 111111· ΜΨ. 1322154 A7 一B7 五、發明說明C^5 ) 還有胎盤轉移之類的功能。在前。表U概述在此項技藝中 已知的某些Fc融合之用途，包括可用於產製融合類^-丨了受 體多肽的材料和方法。411 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製
Fc之形式 融合夥伴 泛及之治療 參考文獻 IgGl CD30-L 的 N-終端 霍奇金氏症；退行 發育淋巴瘤； 胞白血病 美國專利第 5,480,981 號 老鼠Fc r 2a IL-10 消炎；a 移植排斥 Zheng等人，1995, J. Immunol. 154 ： 5590-5600 IgGl TNF受體 敗血性休克 Fisher 等人，1996, N. Engl. J. Med. 334 ： 1697-1702 ; Van Zee 等人，1996, J. Immunol. 156 ·· 2221-2230 IgG, IgA, IgM 或IgE (排除第一個 功能部位） TNF受體 炎症反應， 自體免疫的障礙 美國專利第 5,808,029號， 1998年9月15日頒佈 IgGl CD4受體 AIDS Capon 等人，1989, Nature 337 : 525-531 IgG 卜 IgG3 IL-2的Ν·終端 抗-癌症；抗病毒的Harvill等人，1995, Immunotech. 1 ： 95-105 IgGl OPG的C-終端 骨關節炎； 骨密度 WO 97/23614，1997年 7月3曰公告 IgGl 莱普亭(leptin) 的N-終端 抗-肥胖 PCT/US 97/23183，於 1997年12月11日建檔 人類igC r l CTLA-4 自體免疫的障礙 Linsley, 1991, J. Exp. Med., 174 ： 561-569 -48- <請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 丨蠢裝 _事項再填寫士 訂·丨— ! I! 丄 A7
1322154 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製 A7 B7 五、發明說明（47) 述決定同一性和類似性的方法。在兩個序列之間決定同一 性和類似性的較佳電腦程式法，包括但不限於GCG套裝程 式’包括 GAP (Devereux等人 ’ Nucl· Acid· Res.，12 : 387 (1984); Genetics Computer Group, University of Wisconsin, Madison, WI)，BLASTP，BLASTN和 FASTA(Altschul等人 ，J. Mol. Biol·，215. ： 403-410 (1990))。該 BLASTX程式可 公開獲自 National Center for Biotechnology Information (NCBI)和其他來源（BLAST Manual, Altschul 等人， NCB/NLM/NIH，Bethesda, MD 20894 ; Altschul等人，在前） 。亦可使用已熟知的Smith Waterman演算法來決定同一性 某些將兩個胺基酸序列排成一直線的排列計劃，僅可產 生兩個序列之短區域的相配，而這小的排成一直線之區域 ’可能具有極高的序列同一性，即使在這兩個全長序列之 間並沒有重要的關係。因此，在較佳的具體實施例中，所 選擇的排列方法（GAP程式）將產生橫跨標靶多肽至少50個 相鄰胺基酸的排列。 例如，使用電腦演算法GAP (Genetics Computer Group, University of Wisconsin，Madison，WI)，就其個別胺基酸的 最佳配對，來排列兩個待決定其序列同一性百分比的多肽（ 由凟算法來決定"配對跨幅”）。連同演算法，使用間隙開口 則點（按3X平均對角線來計算；所使用的"平均對角線"爲將 使用之比較矩陣的對角線平均値；"對角線"爲由特定的比 較矩陣指派給每個完全胺基酸配對的分數或數字）和間隙 裝----- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂！！鲁· -50- 1322154 A7 B7 五、發明說明（48 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 延伸罰點（其通常爲1 /1 〇倍的間隙開口罰點），以及諸如PAM 250或BLOSUM 62之類的比較矩陣。亦藉著演算法使用標 準比較矩陣（關於PAM 250比較矩陣，參見Dayhoff等人，
Atlas of Protein Sequence and Structure，第 5册，附綠 3 ( 197 8);關於BLOSUM 62比較矩陣，參見Henikoff等人， Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89. ： 109 1 5- 109 19 (1 992))。 多肽序列比較的較佳參數，包括下列： 溟算法：Needleman等人，J. Mol_ Biol., 48 ： 443-453 (1970) 比較矩陣：得自 Henikoff等人，pr〇c_ Natl. Acad. Sci. USA, ❿：10915-10919 (1992);的 BLOSUM 62 ; 間隙罰點：12 間隙長度罰點：4 類似性之閾値：〇 利用以上的參數，可使用GAP程式。前述之參數是使用 GAP演算法之多肽比較的缺席參數（並未連同末端間隙的 罰點）。 核酸分子序列比較的較佳參數，包括下列： 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製 演算法：Needleman等人，J. Mol. Biol.,处：443-453 (1970) 比較矩陣：相配=+ 1 〇，誤配=〇 間隙罰點：50 間隙長度罰點：3 利用以上的參數，亦可使用GAP程式。前述之參數是核 51 -
1322154 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 -------_____ 五、發明說明（49 ) 酸分子比較的缺席參數。 可使用其他代表性的演算法、間隙開口罰點、間隙延伸 罰點、比較矩陣和類似性之閾値等等，包括在Pr〇gram
Manual，Wisconsin Package，第 9版，1997年 9 月中陳述的那 些。顯然沾清此藝者將進行特定的選擇，並將依據待進行 的特定比較，像是DNA對DNA、蛋白質對蛋白質、蛋白質 對DNA ;以及額外地，該比較是否在特定成對的序列之間 (在該案例中，GAP或BestFit通常是較佳的），或是在一個序 列與序列的大資料庫之間（在該案例中，FASTa或BLASTa 是較佳的）進行比較。 合成 熟請此藝者將知曉可藉著重组和其他方法，來產製在本 文中描述的核酸和多肽分子。 核酸分子 可以各種方法輕易地獲得編碼包括類IL_丨7受體多肽之 胺基酸序列之多肽的核酸分子，包括但不限於化學合成法 、cDNA或基因組庫篩選、表現庫篩選，及/或的PCR 擴大作用。 在本文中使用的重组DNA方法，通常是在sambrook等人 ，Molecular Cloning : A Laboratory Manual, Cold Spring
Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，NY (1989)及 / 或 Ausube丨等人’编輯 ’ Current Protocols in Molecular Biology, Green Publishers Inc.和 Wiley and Sons，NY (1994)中陳述的那些。本發明提供在本文中描述的核酸分 -52- 本紙張尺度適用中國國豕標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） — II----1111111 · I I I I - I — (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1322154 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 _______B7 五、發明說明（5〇 ) 子，和獲得這些分子的方法。 可藉著基因組或CDNA庫的雜交篩選，或藉著Pcr擴大作 用’獲得編碼類IL-1 7受體多肽或其片段的基因或cDNA。 在已經從一個物種中確認出編碼類IL_丨7受體多肽之胺基 酸序列的基因之處，可使用該基因的全部或一部份作爲探 針’來確認得自其他物種之基因（正類似物），或得自相同 物種的相關基因。可使用探針或引子，篩選得自咸相信其 表現類IL-17受體多肽之各種組織來源的cDNA庫。此外， 亦可使用具有在序列識別1號、序列識別4號或序列識別6 號任一個中陳述之序列，包括其組合的核酸分子的一部份 或全邵，來篩選基因組庫，以便確認並分離編碼類IL_丨7受 骨a夕肽之胺基酸序列的基因。通常，將使用中等或高度嚴 格的條件來篩選，以便使從該篩選中獲得假陽性的數目減 至最少。 亦可藉著以表現蛋白質之特性爲基礎，使用陽性純種系 疋檢測的表現選殖，來確認編碼類IL-17受體多肽之胺基酸 序列的核酸分子。通常，藉著使抗體或其他結合夥伴（例如 <5：骨a或配體）與在宿主細胞表面上表現和展示之選殖蛋白 貝、、σ，來篩選核酸庫。利用可檢測標記來修改抗體或結 合夥伴，以便確認表現想要之純種系的那些細胞。 可依據按照下述之説明經營的重組表現技術，來產製這 些多核甞酸，並表現編碼的多肽。例如，藉著將编碼類il_17 文fla多肽之胺基酸序列的核酸序列插入適當的載體中，熟 諸此藝者將可輕易地產製大量想要的核苷酸序列。然後 <請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
裝------ I 訂--- ----I -53- 丄叫154 A7 B7 五、發明說明（51 ) 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 社 印 製 使用該序列來產製檢測探針或擴大引子。另外，亦可將編 碼類IL-1 7受體多肽之胺基酸序列的多核苷酸，插入表現載 體内。藉著將表現載體導入適當的宿主中，可大量產製编 碼的類IL-17受體多肽。 其他獲彳于適g核阪序列的方法，是聚合酶蓮鎖反應（PCR) 。在該方法中，使用酵素反轉錄酶，從聚（A) + RNA或總RNA 來製備cDNA。然後將兩個引子，通常是與編碼類化_17受 體多肽之胺基酸序列的cDNA(寡核钻酸）之兩個不同區域 互補的，連同諸如Taq聚合酶之類的聚合酶，一起加至cDNA 中，而聚合酶擴大了在兩個引子之間的cDN A區域。 其他製備編碼類IL-17受體多肽之胺基酸序列的核酸分 子’包括片段或變體的方法，是使用熟諳此藝者已熟知之 方法的化學合成法，像是由Engels等人，Angew. Chem. Inti Ed·’ . 7 16-734 (1 989)描述的那些。這些方法特別包括用 於核酸合成的磷酸三酯、磷醯胺酸法和H —膦酸鹽法。這類 化學合成的較佳方法是使用標準磷醯胺酸化學法的聚合物 -支撑之合成作用。通常，編碼類乩_17受體多肽之胺基酸 序列的DNA，將具有數百個核：y：酸的長度。可使用這些方 法，以數個片段之方式，合成超過大約i 00個核苷酸的核酸 。然後可將片段連接在一起，形成類匕-丨了受體多肽的全長 核甚酸序列。通常，编碼多肽之胺基終端的DNA片段，將 具有編碼甲梳胺酸殘基的ATG。該甲硫胺酸可以或可以不 出現在類IL-1 7受體多肽的成熟形式中，依據在宿主細胞中 產製之多肽是否被設計成從該細胞中分泌出而定。亦可使 <請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝 ----^--------- mw -54- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）
五、發明說明（52 ) 用熟諳此藝者已知的其他方法。 在某些情況下，可能想要製備编碼類IL_〗7受體多肽變體 的核酸分子。可使用位置指定之突變生成作用、pcR擴大 作用或其他適當的方法，來產製編碼變體的核酸分子，其 中引子（群）具有想要的點突變（參見Sambr〇〇k等人，在前， 和Ausubel等人，在前，關於突變生成技術的説明）。亦可 使用利用由Engels等人，在前描述之方法的化學合成法， 來製備這類變體。亦可使用熟諳此藝者已知的其他方法。 在某些具體實施例中，核酸變體含有爲了在特定的宿主 細胞中最適切地表現類IL-17受體多肽而加以改變的密碼 子。特定的密碼子改變將依據類匕_17受體多肽（群）和選擇 用來表現的宿主細胞（群）而定。可藉著各種方法進行這類" 密碼子最優化作用”，例如，藉著選出在特定宿主細胞中， 尚度表現基因較喜愛使用的密碼子。可使用爲了高度表現 細菌基因之法'碼子偏好而合併諸如"Ec〇h丨gh ·c〇d ”之類的密 碼子頻率表的電腦演算法，並可由University of Wisconsin
Package 第 9.0版，Genetics Computer Group, Madison，WI 提供之。其他有用的密碼子頻率表包括”Celegans_high e()d" ' "Celegans low.cod"' "Drosophila high.cod"' "Humanjiigh.cod" 、"Maize high.cod"和"Yeast—high.cod"。 在其他的具體實施例中，核酸分子編碼帶有在本文中描 述之保留性胺基酸置換的類IL- 1 7受體變體，包括一或多個 N-連接或0-連接之糖基化作用位置的添加及/或刪除的類 IL-17受體變體，具有一或多個半胱胺酸殘基之刪除及/或取 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) |裝--------訂----------j 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製 C11 -55
或如同在本文中之描述的類1卜1 7 核酸分子亦可編碼在本文中描述之 片段和融合多肽的组合。 五、發明說明（53) 代的類IL-17受體變體 受體多肽片段。此外 任何類IL-1 7受體變體 _載體和宿主細胎 可使用I準連接技術，將編碼類^ 7受體多肽之胺基酸 序列的核酸分子插人適當的表現載體中。通常選擇在所使 用的特疋佰主細胞中具有功能的載體(也就是該載體可與 宿主細胞機制相容’而得以發生基因的擴大作用及/或基因 的表現）。可在原核生物、酵母菌、昆蟲（桿狀病毒系統）， 及/或興核生物但主細胞中，擴大/表現编碼類1 7受體多 肽之胺基酸序列的核酸分子。宿主細胞的選擇，部份將依 據是否要在轉譯-後修改類1]_17受體多肽（例如糖基化及/ 或嶙酸化）。如果是，則酵母菌、昆蟲或哺乳動物宿主細胞 是較佳的。關於表現載體的回顧，參見Meth_ Enz,第185
册 ’ D,V· Goeddel編輯，Academic Press Inc·, San Diego, CA (1990)。 通常，在任何宿主細胞中使用的表現載體，將含有用來 維持質體並選殖和表現外源之核苷酸序列的序列。這類序 列’集體地稱爲"側面序列"，在某些具體實施例中，通常 將含有一或多個下列的核：y：酸序列：啓動基因、一或多個 促進子序列、複製起點、轉綠終止序列、含有捐贈者和接 受者接合位置的芫全插入序列、編碼多肽分泌之前導序列 的序列、核糖體結合位置、聚腺苷酸化作用序列、插入編 碼待表現之多肽的核酸的多交聯劑區，以及可選擇標記要 -56 - 本紙張尺度適用尹國國家標準（CNS〉A4規格（2〗〇 X 297公髮〉 -裝·！----訂-------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1322154 A7 B7 五、發明說明（54 ) 素。在下文中將分別討論這些序列。 載體可視需要含有編碼"標籤”的序列，也就是位在類 m受體多肽密碼序列之5,或3'末端的寡料酸分子；該 暴核嘗酸序列編碼聚His(像是六叫），&其他”標藏”，像是 FLAG、HA(血球凝集素流行性感f病毒）或⑽，現存有其 可購得的抗體。通常在表現多肽時，將該標籤與該多肽融 合，並可作爲從宿主細胞中以親和力純化類化七受體多月太 的工具。例如，可藉著管柱層析法，使用對抗該標籤之抗 體作爲親和力基質，來完成親和力純化作用。可視需要藉 著各種方法，像是使用某些肽酶切開，接著從經過純化的 類IL-1 7受體多肽中移除該標籤。 側面序列可以是同種的（也就是得自與宿主細胞相同从 物種及/或品系），異種的（也就是得自與宿主細胞物種或 系不同的物種），雜種的（也就是得自一種以上來源的侧 序列之組合），或合成的，或側面序列可以是天然的序列 其正常具有調節類IL-17受體多肽表現的功能。側面序列” 來源本身，可以是任何原核生物或眞核生物，任何脊椎動 物或無脊推動物，或任何植物，只要該側面序列在宿主細 胞機構中是具有功能的，並可由宿主細胞機構活化。 可藉著此項技藝中已熟知的數種方法中任一種，獲得在 本發明之載體中有用的側面序列。通常，在本文中有用的 側面序列，與類IL-17受體基因的側面序列不同，之前已經 藉著作圖及/或藉著核酸限制内切酶消化作用確認，並因此 可使用適當的核酸限制内切酶，從適當的組織來源中分離 -57- 七紙張尺度適財關家辟(CNS)A4規格咖x 297公爱 5. 訂 品 面 的 I f 1322154 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 出來。在某些情況下’側面序列全部的 " 已知的。此時，可使用在本文中描 ，=了-疋 殖的方法，合成該側面序列。 Μ輪合成或選 在已知全邵或只有一部份側面序列時， 他寡核㈣及/或側面序列片：，二 C…選基因組庫而獲#。在不知道側面序列之 處’可义可能含有，例如密碼序列或其 因群之較大的謝碎片中，分：二^ 或基 ^ Τ刀離含有側面序列的DNA片段 。可楮著核酸限制内切酶消化作用完成分離，產生適當的 DNA片段，接著使用瓊脂糖凝膠純化作用，叫抑@管^ 析法（ChatSworth，CA)，或熟諳此藝者已知的其他方法來： 離之。熟諳此藝者將迅速知曉選擇適當的酵素來達成該目 標。 複製起點通常是那些可賭得之原核生物表現載體的一部 份，且該起點有助於載體在宿主細胞中的擴大作用。在某 些情況下，載體擴大至某個副本數目，對於類IL_ 1 7受體多 肽的最佳表現是很重要的。如果選擇的載體不含複製起點 位置，則可以已知的序列爲基礎，以化學方式合成一個複 製起點，並連接到該載體内β例如，得自質體pBR3 22的複 製起點（產品編號 303-3s，New England Biolabs，Beverly， ΜΑ) ’適合大部份革蘭氏陰性的細菌，而各種起點（例如 SV40、多瘤、腺病毒、水疱性口炎病毒（vsv)或乳頭狀瘤 病毒’像是HPV或BPV)，對於在哺乳動物細胞中選殖載體 均是有用的。通常，哺乳動物表現載體不需要複製起點的 58 本纸張尺度過用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公髮 裝--------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 五、發明說明（) 成份（例如，通常僅使用SV40起點，因爲它含有早期啓動基 因）。 轉錄終止序列通常位在多肽密碼區的3,端，並用來終止 轉錄作用。通常，在原核生物細胞中的轉錄終止序列是富 3 G-C的片段，接著是聚_τ序列。而該序列很容易從庫中選 殖或甚至可以載體的一部份購得，它亦可使用核酸合成 的方法輕易地合成，像是在本文中描述的那些。 可選擇標記基因要素，編碼宿主細胞生長在選擇性培養 基中存活和生長所必需的蛋白質。代表性的選擇標記基因 所編碼的蛋白質’其⑷賦與對抗生素或其他毒素的抵抗力 ，例如關於原核生物宿主細胞的氨苄青黴素、四環素或康 黴素，(b)與細胞之營養缺陷互補；或⑷供應不能獲自複雜 培養基的重要營養。較佳的可選擇標記是康黴素抗藥性基 因、氨芊青黴素抗藥性基因和四環素抗藥性基因。至於在 原核生物和眞核生物宿主細胞中的選擇，亦可使用新徵素 抗藥性基因。 可使用其他的選擇基因來擴大將要表現的基因。擴大作 用是其中在重組細胞連續世代的染色體内，以縱列重申基 =，使其以較大的需求，產製對於生長具有重要性之蛋白 貝的過程。哺乳動物細胞之適當可選擇標記的實例，包括 - a茱酸還原酶(DHFR)和胸腺核苷激酶。將哺乳動物細胞 轉化物放在選擇壓力之下，Λ中僅有藉著出現在載體中之 選擇基因，唯-適應的轉化物存活。藉著在其中連繪改變 選擇劑在培養基巾之濃度的條件·f，培#_轉化的細胞 1322154 A7 _ B7 五、發明說明（57) ’強加上選擇壓力，藉此導致選擇基因和編碼類IL _ 1 7受體 多肽之DNA兩者的擴大作用。結果，從經過擴大的DNa中 ，合成增加含量的類IL-1 7受體多肽。 核糖體結合位置，通常是mRNA開始轉譯所必需的，且 其特徵爲Shine-Dalgarno序列（原核生物）或Kozak序列（眞 核生物）。該要素通常位在啓動基因的3，和待表現之類IL-1 7 受體多肽密碼序列的5'。Shine-Dalgarno序列是多變的，但 通常是聚嗓吟（也就是具有高A-G内含量）。已經確認許多 Shine-Dalgarno序列，可使用在本文中陳述的方法分別迅速 地合成它們，並用於原核生物載體中。 可使用前導序列或信號序列，來指揮類IL-1 7受體多肽到 宿主細胞外面。編碼信號序列的核铝酸序列通常位在類 IL-1 7受體核酸分子的密碼區中，或直接位在類IL_丨7受體多 肽密碼區的5 ’端。已經確認出許多信號序列，並可連同類 IL- 1 7受體核酸分子，一起使用任一個在所選出的宿主細胞 中具有功能的那些。因此，信號序列可以是與類IL-1 7受體 基因或cDNA同種的（天然存在的，像是序列識別2或5號的 胺基酸1至14)或異種的。此外，亦可使用在本文中描述的 方法，以化學方式合成信號序列。在大多數的情況下，經 由信號肽的出現，從宿主細胞中分泌類IL-1 7受體多肽，將 導致從已經分泌的類IL-17受體多肽中移除該信號肽。信號 肽可以是載體的成份，或其可以是插入載體中之類IL-17受 體核酸分子的一部份。 在本發明的範圍中，包括編碼與類11^-17受體多肽密碼區 -60- 不紙诋尺度過用中國國家標準（CNS)A4規格（210 nr" (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) · II I I I I I 訂--------— 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 297公釐） 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 丄叫154 A7 ^--------- 五、發明說明（58) 連接之天然類IL-17受體多肽信號序列的核苷酸序列，或編 碼與類IL-1 7受體多肽密碼區連接之異種信號序列的核芬 酸序列的用途。所選擇的異種信號序列應該是可由宿主細 胞認得’並由其加工處理，也就是被信號肽酶切開的信號 序列。關於原核生物的宿主細胞，並不認得和加工處理天 然的類IL-1 7受體多肽信號序列，藉著選自包括例如鹼性磷 酸酶、青黴素酶或熱-穩定之腸毒素Π前導序列的原核生物 信號序列，來取代該信號序列。至於酵母菌分泌作用，可 赛著酵母菌轉化酶、α因子或酸性ί粦酸酶前導序列，來取 代天然的類IL-1 7受體多肽信號序列。在哺乳動物細胞中表 現時’天然的信號序列是令人滿意的，雖然其他的哺乳動 物信號序列也可能是合適的。 在某些情況下，像是在眞核生物宿主細胞表現系統中想 要糖基化作用之處，可製造各種前序列（presequence)來改 善糖基化作用或產量。例如，可改變特定信號肽的肽酶切 開位置’或加入前序列，其亦可影響糖基化作用。最終的 蛋白質產物可在-丨位置處（相對於成熟蛋白質的第—個胺 基酸）’具有一或多個額外胺基酸的附帶表現，其可能尚未 全部移除。例如，最終的蛋白質產物可能具有一或兩個在 肽酶切開位置處找到的胺基酸殘基，附接於Ν·終端。另外 ，使用一些酵素切開位置，如果該酵素在成熟多肽内的這 類地方將其切開，便可能產生想要的類IL _ 1 7受體多肽之稍 微截短的形式。 在-午夕餉况下，藉著一或多個出現在載體中的插入序列 — — I— I — * I------------ I - I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
I3221M 五、發明說明（59 ) ，增加核酸分子的棘錄柞.、工丄 扪锷绿作用’廷在於眞核生物宿主細胞中 產製多肽之處是特別眞實的，尤其是哺乳動物宿主細胞。 所使用的插入序列可以是天然存在於類iL n受體基因中 的，特別是在所使用的基因爲全長的基因組序列，或立片 段之處。當插入序列並非天然存在於該基因中時(像是大多 數的cDNAs)，可從其他來源獲得插入序列（群）。插入序列 的位置相對於側面序列和類IL.17受體基因而言，通常是很 重要的，因爲插入序列必須被有效地轉錄。因此，當正在 轉錄類IL_17受體cDNA分子時，插入序列的較佳位置是轉 錄起始位置的3’，和聚_A轉錄終止序列的5，。較佳的是，插 ^序列或插人序列群將位在伽八的_邊或另—邊（也就是 5或3 )’使其不致於使密碼序列中斷。可使用得自任何來 源的任何插入序列，包括任何病毒的、原核生物和直核生 物（植物或動物）的生物’來實行本發明，其限制條件爲它 與將其插入之宿主細胞(群)是可相容的。在本文中亦包括 合成的插入序列。可視需要在載體中可使用一個以上的插 入序列。 本發明之表現和選殖載體通常將分別含有由宿主生物認 出的。動基因，並以可操作之方式與編碼類1 7受體多肽 的分子連接。啓動基因是未經轉錄的序列，位在結構基因 之起始密碼子的上游（5,)(通常在大約100至1000個鹼基對 f内），其控制該結構基因的轉錄作用。習慣上將啓動基因 刀成兩读·可s秀導的啓動基因和組成的啓動基因。可诱導 的啓動基因在其反映在培養條件中的某些改變的控制之下 1322154 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 I 7 /0 A7 五、發明說明（60 ) ，像是營養的存在或缺乏，或是溫度的改變，開始増加從 DNA中轉錄的含量。而組成的啓動基因，換句話說，發動 連續的基因產物之產製；也就是在整個基因表現中，很少 或沒有受到控制。由各種可能的宿主細胞認得的大量啓^ 基因，是已爲人所熟知的。藉著以限制酵素消化作用，從 來源DNA中移出啓動基因，並將想要的啓動基因序列插Z 載體内，將適當的啓動基因以可操作之方式與編碼類iL-S 受體多肽的DNA連接。可使用天然的類11^_17受體基因之户欠 動基因序列，來指揮類IL-17受體核酸分子的擴大及/咬表^ 。然而，與天然的啓動基因相比較，如果異種啓動基因容 許以較大的轉錄和較高的產量來表現蛋白質，且若其與已 經選擇使用之宿主細胞是可相容的，則該異種啓動基因是 較佳的。 適合原核生物宿主使用的啓動基因包括内醯胺酶和 礼糖啓動基因系統；鹼性磷酸酶，色胺酸（Trp)啓動基因系 統；和雜種的啓動基因，像是tac啓動基因。其他已=的細 菌啓動基因亦是適合的。已經公告其序列，藉此使熟諳此 藝者得以按照需要使用交聯劑或接合體，將其與想要的 DNA序列（群）連接，以便提供任何有用的限制位置。 可供酵母菌宿主使用的適當啓動基因亦爲此項技藝中已 熟知的。酵母菌促進子有利地與酵母菌啓動基因一起使用 。可供哺乳動物宿主細胞使用的適當啓動基因是已熟知的 ，並包括但不限於獲自病毒之基因組的那些，像是多瘤病 毒、禽痘病毒、腺病毒（像是腺病毒2)、牛乳頭狀瘤病毒、 -63- 木紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格⑵G χ 297公爱 (請先閱讀背δ·之注意事項再填寫本頁}
裝--------訂--------II A7 ----- B7____ 五、發明說明（61 ) 鳥類肉瘤病毒、細胞巨大病毒 '逆轉錄病毒、B型肝炎病毒 和最佳的猿病毒40 (SV40)。其他適當的哺乳動物啓動基因 包括異種的哺乳動物啓動基因，例如熱.休克啓動基因和肌 動蛋白啓動基因。 在控制類IL-1 7受體基因的轉錄上，可能感興趣的其他啓 動基因，包括但不限於SV40早期啓動基因區（Bern〇ist = Chambon，Nature，證：3〇4-3 1〇, 198; CMV啓動基因； 在勞氏肉瘤病毒之3’長端重覆段中所含有的啓動基因 (Yamamoto等人，以丨丨，^: 787_797, 198〇);疱疹胸腺核苷 激酶啓動基因（Wagner等人，Pr〇c. Natl. Acad. Sci. USA，78^ :144-1445, 1981);金屬硫肽基因的調節序列（Brinster等人 ’ Nature，39-42, 1 982)，·原核生物表現載體，像是々 -内臨胺酶啓動基因（Villa-Kamaroff等人，proc· Natl. Acad. Sci. USA，3727-373 1，1978);或 tac 啓動基因（DeBoer 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA，21-25, 1983)。亦感 興趣的是下列的動物轉錄控制區，其顯示出組織專一性， 並已經利用於基因轉殖之動物中：彈性蛋白酶I基因控制 區’其在騰臟腺泡細胞中是有活性的（Swift等人，Ce 11，38, :639-646，1984 ; Ornitz等人，Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 50.： 399-409 (1986) ; MacDonald, Hepatology, z : 425-515, 1 987);胰島素基因控制區，其在胰臟万細胞 中是有活性的（Hanahan, Nature, : 1 1 5- 122, 1 985);免 疫球蛋白基因控制區，其在淋巴細胞中是有活性的 (Grosschedl等人，Cell，3_8 ： 647-658 (1984) ; Adames等人 -64 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 x 297公釐） /a (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝--------訂---------^ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1322154 A7 五、發明說明（62 ) ’ Nature,退：533-538 (1 985) ; Alexander 等人，]^。！·〜"· Biol·，2_: 143 6-1444, 1987);老鼠乳房腫瘤病毒控制區，其 在睪丸、乳房、淋巴和肥胖細胞中是有活性的（Leder等人 ，Cell，: 485-495，1986);白蛋白基因控制區，其在肝 臟中是有活性的（Pinkert等人，Genes and Devel.，j_: 26 8-2 76，1987) ; 胎兒蛋白質基因控制區，其在肝臟中是 具有活性的（Krumlauf等人，Mol.Cell. Biol.，坌：1639-1648, 1985 ; Hammer等人，Science, 235_ ： 53-58, 1987) ; π 卜抗 胰蛋白酶基因控制區，其在肝臟中是有活性的（Kelsey等人 ，Genes and Devel.，1: 161.171, 1987); 血球蛋白基因 控制區，其在髓樣細胞中是有活性的（M〇gram等人， 訂 111 . 33 8-3 40，1985 ; Kollias等人，Cell，H9-94，1986) γ骨髓磷脂鹼性蛋白質基因控制區，其在腦中之寡樹突膠 質細胞中是有活性的（Readhead等人，Ce丨丨丛：7〇3 712, t f 1 987);肌球蛋白輕鏈_2基因控制區，其在骨骼肌中是有活 ，的（Sani，Nature，^: 283_286, 1985);以及促性腺釋放 荷爾蒙基因控制區，其在下視丘中是有活性的（Mas〇n等人 ，Science，1372- 1 378, 1 986)。 員 工 消 可將促進子序列插入載體内，以便增加由較高等之眞核 生物轉錄編碼本發明之類比_17受體多肽的dna。促進子爲 順式-作用的DNA要素，通常長度约爲10-300個鹼基對，其 作用在啓動基因上，以便增加轉錄。促進子爲相對上方向 和位置獨立的。已經發現它們在轉錄單位的5,和3,。數個可 狻自哺乳動物基因的促進子序列是已知的（例如血球蛋白 ------------ -65-
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五、發明說明) 、彈性蛋白酶'白蛋白…胎兒_蛋白質和胰島素)'然而 ，通常將使用得自病毒的促進子。SV40促進子、細胞巨大 病毒早期啓動基因促進子、多瘤促進子和腺病毒促進子， 是眞核生物啓動基目之激活作料代表性促進要素。可在 類IL-17受體核酸分子之位置5，或3;處，將促進子接合至載 體内，其通常位在啓動基因的y位置。 □ □□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□ □ □□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□ □ □□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□ □ □□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□ 得每個侧面序列的方法，爲熟諳此藝者已熟知的。 實行本發明的較佳載體，是可與細菌、昆蟲和哺乳動物 宿主細胞相容的那些。這類載體特別包括pCRII、pCR3和
pcDNA 3.1 (Invitrogen Company, Carlsbad, CA) ' pBSII (Stratagene Company, La Jolla，CA)、pET15 (Novagen，
Madison, WI) ' pGEX (Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 、pEGFP-N2 (Clontech，Pal。Alt。，CA)、pETL (BlueBacII， Invitrogen)、pDSR- 〇/ (PCT 出版物第 WO 90/14363 號）和 pFastBacDual (Gibco/BRL，Grand Island，NY)。
其他適當的載體包括但不限於黏接質體、質體或經過修 改的病毒，但將知曉該載體系統必須與選出之宿主細胞是 可相容的。這類載體包括但不限於諸如Bluescript®質體衍 生物（以咼副本數目ColEl爲基礎之嗤菌體質體，Stratagene Cloning Systems Inc.，La Jolla CA)、爲 了選殖Taq-擴大 PCR -66- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 χ 297公釐) (Ο, 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1322154 A7 - R7 ------- 五、發明說明（64 ) 產物而設計的PCR選殖質體（例如T〇p〇TM TA Ci〇ning®套 組，PCR2.1®質體衍生物，Invitr〇gen，CarIsbad，CA)之類的 質體，以及哺乳動物、酵母菌或病毒載體，像是桿狀病毒 表現系統（pBacPAK質體衍生物，cl〇ntech，pal() AU〇， 。可經由轉化、轉移感染、感染或其他已知的技術，將重 組分子導入宿主細胞中。 在已經建構載體，並已經將編碼類IL_丨7受體多肽的核酸 分子插入載體的適當位置内之後，可將完成的載體插入適 當的宿主細胞中，進行擴大及/或多肽的表現。可藉著已熟 知的方法’包括諸如轉移感染、感染 '氣化鈣、電穿透作 用、微量注射、脂染作用或DEAE_葡聚糖法之類的方法， 或其他已知的技術，完成將類比_17受體多肽之表現載體轉 化至所選出之宿主細胞内的作用。選擇方法一部份將是所 使用之宿主細胞類型的函數。這些方法及其他適當的方法 ，均爲熟諳此藝者已熟知的，並在例如Sambr〇〇k等人，在 前中陳述之。 宿主細胞可以是原核生物宿主細胞（像是大腸桿菌）或眞 核生物宿主細胞（像是酵母菌 '昆蟲或脊椎動物細胞）^當 在適當的條件下培養時’宿主細胞合成類IL-1 7受體多肽， 後續可從培養基中收集（如果宿主細胞將其分泌至培養基 中）’或直接從產製它的宿主細胞中收集（如果未分泌出來） 。適當宿主細胞的選擇，將依據各種因素，像是想要的表 現程度、對於活性而想要或必要的多肽修改，像是糖基化 作用或磷酸化作用，以及折疊成具有生物活性之分子的容 -67- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐〉 -裝丨-----—訂- - -----. C請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ((〇< 1322154 A7 B7 五、發明說明（65 易程度。 在此項技藝中已知許多適當的宿主細胞，且許多均可獲 自 American Type Culture Collection (ATCC), 10801 University Boulevard，Manassas，VA 201 10-2209。實例包括 但不限於哺乳動物細胞，像是中國倉鼠卵巢細胞（CH〇) (ATCC 编號 CCL61)、CHO DHFR-細胞（Urlaub 等人，卩1*〇(：· Natl. Acad. Sci. USA，ϋ : 4216-4220 (1980))、人類胚胎腎 臟（ΗΕΚ) 293 或 293Τ細胞（ATCC 编號 CRL1573)，或 3Τ3 細胞 (ATCC編號CCL92)。適當之哺乳動物宿主細胞的選擇，以 及轉化、培養、擴大、篩選、產物產製和純化的方法，均 爲此項技藝中已知的。其他適當的哺乳動物細胞株，是猴 子 COS-1 (ATCC 編號 CRL165 0)和 COS-7 細胞株（ATCC 編號 CRL1651)，以及CV-1細胞株（ATCC編號CCL70)。更具代表 性的哺乳動物宿主細胞，包括靈長類的細胞株和嚙齒類的 細胞株，包括經過轉化的細胞株。正常的二倍體細胞、衍 生自在活體外培養之原始組織的細胞品系，以及原始的移 植物，亦是適合的。候選細胞可以在基因型上，是具有選 擇基因缺陷的’或可含有優勢作用的選擇基因。其他適當 的哺乳動物細胞株，包括但不限於老鼠神經胚細胞瘤N2 a 細胞、HeLa、老鼠L-929細胞' 衍生自Swiss' Balb-c或NIH 老鼠的3T3細胞株、BHK或HaK倉鼠細胞株，均可獲自ATcc 。這些細胞株均爲熟諳蛋白質表現技藝者已知，並可利用 的0 同樣可用來作爲適合本發明之宿主細胞的是細菌細胞。 -68- ^纸張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝 I I I I --------- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1322154 經 濟 部 智 慧 財 A 局 員 A7 五、發明說明（66 ) 例如在生物技術的領域中，已熟知可作爲宿主細胞的各種 品系大腸样菌（例如HB101 (ATCC編號33694)、DH5a、 DH10和MC1061 (ATCC編號53338))。在本方法中亦可使用 各種品系的枯草桿菌（Β· subtiHs)、假單孢菌屬 (Pseudomonas spp·)、其他的桿菌屬（BaciUus spp )、鏈黴菌 屬（Streptomyces spp.)及其類似物。 热讀此藝者已知許多品系的酵母菌細胞，亦可用來作爲 表現本發明足多肽的宿主細胞。較佳的酵母菌細胞，包括 例如酒酵母菌（SaCCharomyces cerivisae)和巴斯德畢赤酵母 (Pichia pastoris) ° 此外，在想要之處，亦可在本發明之方法中使用昆蟲細 胞系統。在例如Kitts等人，Biotechniques，过：81〇 817 (1993) ; Lucklow, Curr. 〇pin. Biotechnol., £ ： 564-572 (1993);以及Lucklow等人，j. Vir〇1，红：4566 4579 (l993) 中描述了這類系統。較佳的昆蟲細胞是Sf_9和Hi5 (Invitrogen，Carlsbad，CA)。 亦可使用基因轉殖的動物來表現糖基化的類IL_17受體 多肽。例如，可使用基因轉殖的產乳動物（例如牛或山羊） ，並在该動物的乳汁中獲得該糖基化的多肽。亦可使用植 物來產製類IL-17受體多肽，然而，通常在植物中出現的糖 基化作用與在哺乳動物細胞中產生的不同，並可能產生並 不適合人類之治療用途的糖基化產物。 多肽產劁 可使用熟諳此藝者已熟知的標準培養基，來培養包括類
(請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
五、發明說明（67 ) IL-1 7党體多肽表現載體的宿主細胞。該培養基通常含有所 有細胞生長和存活所必需的營養。培養大腸桿菌細胞的適 备培養基’包括例如Luria肉湯（LB)及/或Terrific肉湯（TB) 培養興核生物細胞的適當培養基，包括Roswe丨丨park
Memorial Institute培養基 164〇 (RpMI 1640)、Minimal Essential Medium (MEM)及/或 Dulbecco's Modified Eagle
Medium (DMEM) ’全都可按照待培養之特定細胞的需要， 補充血清及/或生長因子。適合昆蟲培養的培養基是按照需 要補充酵母菌溶胞產物、乳清蛋白水解產物及/或胎牛血清 的Grace's培養基。 通4 ’以培養基添加物之形式加入抗生素，或其他對於 轉化細胞之選擇性生長有用的化合物。所使用的化合物將 由出現在用來轉化該宿主細胞之質體上的可選擇標記要素 指定。例如’在可選擇標記要素爲康黴素抗藥性時，加至 培養基中的化合物將是康黴素。其他對於選擇性生長有用 的化合物’包括氨苄青徽素、四環素和新徵素。 可使用此項技藝中已知的標準方法，來評估由宿主細胞 產製之類IL-17受體多肽的含量。這類方法包括但不限於西 方墨點分析、SDS_聚丙烯醯胺凝膠電泳、未-變性的凝膠電 泳、高效率液相層析法（HPLC)分離、免疫沉澱法，及/或活 性測足，像是DN A結合凝膠轉移測定。 如果已經將類IL-17受體多肽設計成從宿主細胞中分泌 ’則大部份的多肽可在細胞培養基中找到。然而，如果並 未從宿主細胞中分泌類i L - i 7受體多肽，則其將出現在細胞 1322154 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（册 質及/或核中（對眞核生物宿主 (對細菌宿主細胞而言)。通常以：：言):或在細胞溶質中 宿主細胞破裂’以便將細胞内二式或利用清潔劑使 。钬後可從兮·，六读由八私^ 内合物釋放至緩衝溶液中 ·，、、便了仗该洛履中分離類江-丨？受體多肽。 至於位在宿主細胞細胞質及/七丄 ΠΑ r- ... 或核中（對眞核生物宿主細 肊而β )’或在細胞溶質中（對細 為邮夕找菌依王細胞而言）的類IL-17 又m夕肽，可使用任何熟諳此蓺 ..,, 在有已知的標準技術，從宿 王細胞中年取細胞内的物質（包 γ 一# 貝括革闌氏-陰性細菌的包涵 m )。例如，可精耆法式壓榨、 3負化作用及/或超音波振 盪，接著離心，使宿主細胞溶解 鮮以便釋放出胞漿周圍/細 胞質的内容物。 如果類IL-17受體多肽在細胞溶質中形成包涵體，通常可 使該包涵體與内側及/或外側的細胞膜結合，並因此將在離 心之後，主要在小球物質中找到。然後以pH値的兩極，或 諸如清潔劑、W、胍衍生物、腺或膽衍生物之類促溶劑， 在諸如二硫蘇糖醇之類還原劑的存在下，在鹼性的pH値下 ，或以二羥甲基胺基甲烷羧乙基膦，在酸性的下處理 小球物質，以便釋放、拆開和溶解該包涵體。然後可使用 凝膠^泳、免疫沉殿法及其類似者，來分析目前爲可溶形 式的類IL-1 7受體多肽。如果想要分離類IL·丨7受體多肽，則 可使用標準方法，像疋在本文中或是在Marston等人，Meth. Enz., 1_81 ： 264-275 (1990)中描述的那些，完成分離作用。 在某些情況下，在分離時的類IL-1 7受體多肽可能不具有 生物活性。可使用各種有關於"再折疊”或將該多肽轉變爲 71 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
丄叫154 發明說明（69) 其三級結構’並產生二硫鍵結的方法，使其恢復生物活性 适類方法包括使已溶解之多肽暴露在通常大約7以上的 下’並在特定濃度之促溶劑的存在下。促溶劑的選 擇非“似爲了溶解包涵體所使用的選擇方法，但通常使 用較低濃度的促溶劑’且不要與溶解作用所使用的促 樣。在大多數的情況下’再折疊/氧化溶液亦將冬有 還原劑或按特定比例的還原劑加其氧化形式，以便產生特 疋的氧化還原電位，容許在形成蛋白質之半胱胺酸橋（群） 時，發生二硫化物的洗牌。一些經常使用的氧化還原對包 括半胱胺酸/胱胺，穀胱甘肽（GSH)/二硫雙GSH，氣化銅， 二硫蘇糖醇（DTT)/二嘧烷DTT，和2_2_巯基乙醇（万ME)/二 硫1 (ME)。可使用共溶劑來増加再折疊的效率，而爲了此 一目的常用的試劑包括乙二醇 '各種分子量的聚乙二醇、 精胺酸及其類似物。 如果在類IL-17受體多肽的表現中，並未形成明顯程度的 包涵體，此時在離心細胞勻漿之後，將主要在上清液中找 到该多肽。可進一步使用諸如在本文中描述的那些方法， 從上清液中分離多肽。 可使用各種技術完成從溶液中純化類IL-1 7受體多肽。如 果使已經合成的多肽在其羧基或胺基終端含有標籤，像是 六组胺酸（類IL -1 7受體多肽/六H i s )，或其他的小肽，像是 FLAG (Eastman Kodak Co.，New Haven, CT)或 myc (Invitrogen，
Carlsbad，CA)，則可以一個-步驟的方法，藉著使該溶液通 過親和力管柱來純化，其中管柱基質對該標籤具有高度的 -72 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝
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五、發明說明（7〇 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 親和力。 例如，組胺酸以相當大的親和力和專一性與鎳結合， 因此可使用鎳的親和力管柱（像是Qiagen®鎳管柱）來純化類 IL-17受體夕月太/聚His。參見，例如Ausubel等人，编輯， Current Protocols in Molecular Biology’ 第 1〇 η 8段，J〇hn Wiley & Sons, New York (1993)。 此外，可經由使用能夠專一地辨認並與類IL_丨7受體多肽 結合的單株抗體，來純化類IL_丨7受體多肽。 因此，適當的純化程序包括但不限於親和力層析法 '免 疫親和力層析法、離子交換層析法、分子篩層析法、高效 率液相層析法（HPLC)、電泳（包括天然的凝膠電泳），接著 是凝膠洗脱，以及製備等電聚焦作用（"Is〇prime"機制/技術 ，Hoefer Scientific，San Francisco, CA)。在某些情況下， 可混合兩或多種的純化技術，達到增加的純度。 亦可籍著化學合成法（像是固相肽合成），使用此項技藝 中已知的技術’像是由Merrifield等人，j. Am. Chem. Soc., ϋ: 2149 (1963) ; Houghten等人，？咖.；^1.八(^(1.8(^· USA, . 5 1 32 ( 1 985);以及 Stewart和 Y〇ung，Solid Phase
Peptide Synthesis, Pierce Chemical Co., Rockford, IL (1984)陳述的那些，來製備類IL_n受體多肽，包括其片段 、變體及/或衍生物。可合成在其胺基終端有或無曱硫胺酸 的這類多肽。可使用在這些參考文獻中陳述的方法，將以 化學方式合成的類IL-17受體多肽氧化，形成二硫橋。預期 以化學方式合成的類IL-1 7受體多肽，具有可與以重組方式 73- 本紙張尺度過用甲鬯鬯豕私準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） - I I I I I - - ^ ·1111111 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1322154 A7
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1322154 A7 -------- 五、發明說明（72) 多個由该隨機基因編碼的蛋白質來進行之。然後篩選宿主 細胞，確認產生具有想要活性之肽或多肽的那些純種系。 其他產IL肽或多肽的方法，描述在Athersys，Inc.提出的 PCT/US9 8/20094 (WO 9 9/15650)中。稱爲”基因發現之基因 表現的隨機激活作用"（RAGE-GD)，該方法涉及藉著就地重 組方法，激活内源的基因表現或基因的過度·表現。例如， 藉著將調節序列整合到能夠藉著非-同種或違法的重組作 用，激活基因表現的標靶細胞内，來激活或增加内源基因 的表現。首先使標靶DNA接受照射，並插入基因的啓動基 因。啓動基因最後位在基因前面的裂口，開始基因的轉錄 作用。結果產生想要之肽或多肽的表現。 將知曉亦可使用這些方法，產生總括性的類IL_丨7受體蛋 白質表現庫，接著可在各種測定中，使用它來進行高輸貫 量的表現型篩選，像是生化測定、細胞測定和整體生物的 測定（例如植物、老鼠等等）。 化學衍生物 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 裝— — (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 聲 可由熟諳此藝者製備類IL- 1 7受體多肽的化學修改衍生 物’提供在下文中陳述的揭示内容。以與-天然附接於該多 肽上之分子的類型或位置不同的方式，來修改類IL -1 7受體 多肽衍生物。衍生物可包括藉著刪除一或多個天然-附接之 化學基團而形成的分子。可藉著共價附接一或多種聚合物 ，來修改包括序列識別2號、序列識別5號或序列識別7號任 一個之胺基酸序列，包括其組合的多肽，或類IL_丨7受體多 肽變體。例如，通常選擇水溶性的聚合物，使得與其附接 -75- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） (S? 1322154 A7 五、發明說明（73 ) 的蛋白質不會在含水的環境中沉澱，像是生理學的環境。 聚合物的混合物亦包括在適當聚合物的範圍内。較佳的是 ，爲了終產物製品的治療用途，該聚合物將是在藥學上可 接受的。 聚合物可分別具有任何的分子量，並可以是分支或不分 支的。聚合物通常分別具有在大约2 kDa到大约1〇〇 kDa之 間的平均分子量（"大約"—詞意指在水溶性聚合物之製品 中，有些分子將比所陳述之分子量更重，有些則更輕）。每 個聚合物的平均分子量最好是在大約5 kDa到大約5〇 kDa 之間’更佳的是在大約12 kDa到大約40 kDa之間，而最佳 的是在大約20 kDa到大約35 kDa之間。 適當的水溶性聚合物或其混合物，包括但不限於N _連接 或〇·連接的碳水化合物、糖類、磷酸鹽類、聚乙二醇（PEG) (包括已經用來衍生蛋白質的PEG形式，包括單_(Cl_cl())烷 氧基-或芳氧基-聚乙二醇）、單甲氧基-聚乙二醇、葡聚醣 (像是低分子量的葡聚醣，例如具有大約6 kD)、纖維素， 或其他以碳水化合物爲基礎的聚合物，聚_(N_乙締吡咯烷 酮）聚乙二醇、丙二醇同聚物、聚環氧丙烷/環氧乙烷共-聚 物、聚氧乙晞化的多元醇（例如甘油）和聚乙烯醇。本發明 亦包括雙重功能的交聯分子，其可用來製備包括序列識別2 虎、序列識別5號或序列識別7號任一個之胺基酸序列，包 括其組合的多肽，或類IL-1 7受體多肽變體的共價附接之多 聚體。 一般而言，可在任何用來使蛋白質與活化聚合物分子反 76- 木紙張尺度適用十國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝---- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 cr> 1322154 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（74 ) 應的適當條件下，進行化學衍生作用。製備多肽之化學衍 生物的方法，通常將包括下列步驟：（a)使該多肽與活化的 聚合物分子（像是聚合物分子的反應性酯或醛衍生物），在 藉以使包括序列識別2號、序列識別5號或序列識別7號任一 個之胺基酸序列，包括其組合的多肽，或類IL-17受體多肽 變體與一或多個聚合物分子附接的條件下反應，並獲得 該反應產物（群）。將以已知的參數和想要的結果爲基礎， 決定取適切的反應條件。例如，聚合物分子：蛋白質的比 例越高，則附接之聚合物分子的百分比就越高。在一個具 體實施例中，類IL-1 7受體多肽衍生物可在胺基終端具有單 一的聚合物分子部份。參見，例如美國專利第5,234,784號 〇 可藉著任何此項技藝中已知的聚乙二醇化反應，專一地 完成多肽的聚乙二醇化作用，像是例如在下列參考文獻中 描述的：Francis等人，Focus on Growth Factors, 4-10 (1992);歐洲專利〇i543 16號；歐洲專利〇4〇1384號和美國 專利第4，179,337號。例如，可經由醯化反應或烷基化反應 ’利用如同在本文中描述的反應性聚乙二醇分子（或類似的 反應性水-溶性聚合物），完成聚乙二醇化作用。關於醯化 反應’選出之聚合物（群）應該具有單一的反應性酯基團。 關於還原性烷基化作用，選出之聚合物（群）應該具有單一 的反應性醛基團。反應性醛基團，是例如聚乙二醇丙醛， 其對水是穩定的，或其單CrCio烷氧基或芳氧基衍生物（參 見美國專利第5,252,7 14號）。 -77- 本纸張尺度適用中國國豕標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱 -i^i I ϋ ——，I «^1 I · (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1322154 A7 -----------B7 五、發明說明（75) 在其他的具體實施例中，類IL_17受體多肽可以化學方式 與生物素偶聯，然後容許生物素/類IL_17受體多肽分子與抗 生物素蛋白結合’產生四價的抗生物素蛋白/生物素/類 IL-17受體多肽分子。類IL·"受體多肽亦可與二硝基酚 (DNP)或三硝，基驗（TNP)共價附接，並使所得的共扼物與抗 -DNP或抗-TNP-IgM—起沉澱’形成價數1〇的十聚體共軛物 〇 .通常’可藉著投與本發明之類化_17受體多肤衍生物而改 善或調節的病況，包栝在本文中對於類IL_n受體多肽所描 述的那些。然而，在本文中揭示之類IL_nt體多肽衍生： 可具有額外的活性，提高或降低的生物活性，或其他的特 徵，像是與未·經衍生的分子相比較，增加或減少的半衰期 0 專方式設計的非-人鉬釦胳 在本發明的範圍内，額外地包括非_人類的動物，像是老 鼠、大鼠或其他的嚆齒類；兔子、山羊或綿羊，或其他農 場動物，其中已經使編碼天然的類[—^受體多肽之基因 (或基因群）瓦解（”擊倒"），使得該基因或基因群的表現^度 明顯地減少或完全廢除。可使用諸如描述在美國專利第 5,5 57,032號中的那些技術和方法，來製備這類動物。 本發明更包括非-人類的動物，像是老鼠、大鼠或其他的 嚆齒類；兔子、山羊、綿羊或其他農場動物；其中由該動 物過度表現該動物之天然形式的類IL_ i 7受體基因（群），成 異種的類IL-17受體基因（群），藉此產生"基因轉殖的”物 本纸張尺度適用中國國家標準格⑵“ {Of (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
-78- A7 B7 五、發明說明（76 可使用已熟知的方法來製備這類基因轉殖的動物，像是 在美國專利第5,489,743號和PCT出版物第W0 94/28 122號 中描述的那些。 采本發月更包括非_人類的動物，其中將一或多個本發明之 '頁IL 1 7又體多肽@啓動基因;鼓活或使其失活(例如藉著使 同種重，.且方法），來改變一或多個天然的類1 7受體多 肽的表現程度。 * :使用這些非_人類的動物進行藥物候選者的篩選。在這 類筛選中’可測量藥物候選者對該動物的影響。例如，藥 :，選者可降低或增加類IL_ 17受體基因的表現。在某些具 a實她例中，可在將動物暴露在藥物候選者下之後，測量 2所產製之類IL_17受體多月大的含量。另夕卜，在某些具體實 她例中’可檢測藥物候選者對該動物的 特定基因的過度表現，可導致或與疾病或病=病： 在^類案例中，可測試藥物候選者降低該基因表現的能 t ’或其㈣或抑制該病理學病況的能力。在其他的實例 定代謝產物的產製’像是多肽的片段，可導致或與 =病理學病況有關。在這類案例中，可測試藥物候選 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製 二：：這類代謝產物之產製的能力，或其預防或抑制該病 理學病況的能力。 微障 ，知曉可根據本發明，使用麗微陣列技術。麵微陣 陣Γΐ!如破璃之類固體支撑物上的核酸之小型高密度 卜㈣列中的每㈣子或要素’具有單—物種之dna _____ -79- 本紙張尺i適用中⑵“ > 1322154 A7 B7 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製 五、發明說明（77 的許多副本，其擔任與其關聯mRNA雜交之標把的職務。 在使用DNA微陣列技術描續表現輪廓時，首先從細胞或組 織試樣中萃取mRNA ’然後以酵素方式將其轉變爲以螢光 標示的cDNA。使該物質與微陣列雜交，並藉著沖洗移除未 結合的cDNA。然後藉著定量專一地與每個標靶〇να結合的 已標示之cDN A的含量，使在陣列上代表個別基因的表現具 像化。以此方式，可以高輸貫量的平行方式，從生物物質 的單一試樣中，定量數千個基因的表現。 遠南輸㈢量表現之描纟會輪廓的方法，對於本發明之類 IL-17受體分子具有廣泛的應用，包括但不限於：確認和批 准可作爲治療劑之標祀’並與類IL_17受體疾病有關之基因 ;類比-17受體分子及其抑制劑的分子毒物學；臨床試驗的 族群階級化和代用品標記的產製；以及藉著以高輸貫量篩 選（HTS)協助確認選擇性化合物，而促進與類lL_i7受體有 關之小分子藥物的發現。 選擇性結合 當在本文中使用時，”選擇性結合劑詞意指對一或多 個類IL-17受體多肽具有專一性的分子。適當的選擇性姓人 劑包括但不限於抗體及其衍生物、多肽和小分子。可使= 此項技藝中已知的方法來製備適當的選擇性結合劑。本發 明之代表性類IL-17受體多肽的選擇性結合劑，能夠愈類 _受體多肽的某些部份結合’藉此抑制配體，像是序列 識別23號的IL17E，與類IL_17受體多肽受體（群）的結人作用。 選擇性結合劑，像是與類IL-17受體多月太結合之^或抗 80- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21G X 297公爱） 裝i—丨—丨丨訂--------. (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 $ A7 ------------ 五、發明說明（78 ) ' 月且片鲛σ在本發明的範圍内。抗體可以是多株的，包 括單-專-性的多株抗體、單株抗體（Μ·)、重組的、嵌 合型的、人類化的，像异pnR梦& 诼疋LDR-移植的、人類的、單鏈的， 及/或又重專性的’以及其片段、變體或衍生物。抗體片 段包括抗體與類IL.17受體多肽上之抗原決定位結合^那 些邵份。这類片段的實例包括藉著酵素切開全長抗體而產 生的Fab和F(ab，）片段。其他的結合片段包括藉著重組dna 技術，像是表現含有編碼抗體可變區之核酸序列的重組質 體，而產製的那些。 通常藉著多次皮下或腹腔内注射類IL_丨7受體多肽和佐 劑，在動物（例如兔子或老鼠）中產製針對類IL_丨7受體多肽 的多株抗體。使類IL-1 7受體多肽與在待免疫之物種中爲免 疫原性的載劑蛋白質結合可能是有用的，像是鎖孔_血藍 蛋白、血清、白蛋白、牛甲狀腺球蛋白或大豆胰蛋白酶抑 制劑。此外，亦使用諸如明礬之類的凝集劑，來促進免疫 反應。在免疫接種之後，將動物採血，並分析血清之抗_ 類IL -1 7受體多肽的抗體力價。 使用任何藉著培養連續細胞株，提供抗體分子之產製的 方法，來產製針對類IL-1 7受體多肽的單株抗體。製備單株 抗體之適當方法的實例，包括Kohler等人，Nature, 256.： 495-497 (1975)的融合瘤方法，以及人類B-細胞融合瘤方法 ，Kozbor, J. Immunol·，133 ： 3001 (1984) ·’ Brodeur等人， Monoclonal Antibody Production Techniques and
Applications，第 51-63 頁（Marcel Dekker，Inc·, New York, -81 - 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） --------訂-----.—AKV (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) U厶厶丄JH· U厶厶丄JH· A7
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經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1322154 A7 _______________ 五、發明說明（8〇) 本發明亦包括與類IL-17受體多肽結合的人類抗體。使用 基因轉殖之動物（例如老鼠），其能夠在缺乏内源免疫球蛋 白的產製之下，產生人類抗體的節目，藉著以可視需要與 載劑結合的類IL-17受體抗原（也就是具有至少6個相鄰的 胺基酸）免疫接種而產生這類抗體。參見，例如Jak〇b〇vits 等人，Proc. Natl. Acad. Sci·，延：255 1-2555 (1993); Jakobovits等人，Nature，255-258 (1993); Bruggermann 等人，Year in Immuno.，I : 33 (1993)。在一種方法中，可 藉·著使其中内源的邵位不能編碼重和輕的免疫球蛋白鍵， 並將編碼人類重和輕鏈蛋白質的部位插入其基因組内，來 產生這類基因轉殖的動物。然後使經過部分修改的動物雜 交，也就是具有比全部補體之修改作用更少的那些，獲得 具有全邵想要之免疫系統修改的動物。當投與免疫原時， 這些基因轉殖的動物產生帶有人類可變區，包括人類（而非 ’例如老鼠）之胺基酸序列的抗體，包括可變區，包括對這 些抗原爲免疫專一性的人類。參見PCT申請案第 PCT/US96/05928 號和 PCT/US93/06926 號。在美國專利第 5,545,807 號、PCT 中請案第 PCT/US91/245 號和 PCT/GB89/01207號，以及在歐洲專利申請案第546〇73Bl號 和546073 A1號中描述了其他的方法。亦可藉著重組dna在 宿主細胞中的表現，或藉著在如同本文所述之融合瘤細胞 中的表現，來產製人類抗體。 在另一個具體實施例中’亦可從噬菌體-展示庫中產製人 類抗體（Hoogenboom等人，J· Mol. Biol. 227 ： 381 (1991) -83- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 χ 297公釐) Μ 裝--------訂—.— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) “22154
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 ;Marks等人 ’ J. Mol. Biol. 211: 58 1 ( 199 1))。這些方法細 由在絲狀禮菌體表面上展示的抗體節目，以及後續藉著其 與所選擇之抗原的結合作用選擇噬菌體，來模仿免疫選擇 。在PCT申請案第PCT/US98/17364中描述了 一種這類技術 ’其描述使用這類方法’分離MPL -和msk-受體的高親和力 並具有激動劑功能之抗體。 通¥精者重組方法來產製欲合型、CDR移植和人麵化的 柷體。將编碼柷體的核酸導入宿主細胞内，龙使用在本文 中描述的材料和程序表現之。在較佳的具體實施例中，在 哺乳動物宿主細胞中產製抗體，像是CHO細胞。可藉著重 組DNA在宿主細胞中的表現，或藉著在如同在本文中描述 之融合瘤細胞中的表現，來產製單株（例如人類）抗體。
爲了檢測和定量類IL-1 7受體多肽，可在任何已知的測定 方法中，像是競爭性結合測定、直接或間接的三明治測定 ’以及免疫沉殿測定（Sola, Monoclonal Antibodies: A
Manual of Techniques，第 147-158 頁（CRC Press，Inc.， 1987))中，使用本發明的抗-類il-17受體抗體。該抗體將以 適合待使用之測定方法的親和力，與類IL-1 7受體多肽結合 關於診斷應用，在某些具體實施例中，可利用可檢測部 份來標示抗-類IL-1 7受體抗體。可檢測部份可以是任一種 能夠直接或間接產生可檢測信號的部份。例如，可檢測部 份可以是放射性同位素，像是3H、l4C、32p、35S或1251，螢 光或化學發光的化合物，像是螢光素異硫代氰酸酯、若丹 -84- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公复） /4^ 裝------ f請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂！！黪· 54 1Χ 2 Α7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 ---------- 五、發明說明（82 ) 明（rhodamine)或蟲螢光素；或是酵素，像是鹼性磷酸酶、 々-半乳糖荅酶或辣根過氧化酶（Bayer等人，Meth Enz , ill : 138-163 (1990)) 〇 w爭性結合測足依賴經過標示之標準物（例如類IL _ 1 7受 體多肽，或其在免疫學上有反應性的部份）與受試試樣分析 物（類IL-17受體多肽）’競爭與有限含量之抗-類1 7受體 抗體結合的能力。在受試試樣中類IL_ 1 7受體多肽的含量， 與已經與5亥抗體結合之標準物的含量成反比。欲更容易決 足已經結合之標準物的含量，抗體通常在競爭作用之前或 之後是不可溶的，而得以從仍然未結合之標準物和分析物 中，便利地分離出與該抗體結合的標準物和分析物。 三明治測定通常涉及使用兩個抗體，分別能夠與待檢測 及/或定量之蛋白質的不同免疫原部份或抗原決定位結合 。在三明治測定中，通常藉著第一個固定在固體支撑物上 的抗體與受試試樣分析物結合，隨後使第二個抗體與該分 析物結合’藉此形成不溶的三個部份的複合物。參見，例 如美國專利第4，3 7 6，1 1 0號。第二個抗體本身可利用可檢測 邵份標示（直接的三明治測定），或可以使用以可檢測部份 標示的抗-免疫球蛋白抗體來測量（間接的三明治測定）。例 如，一種類型的三明治測定爲酵素-連結的免疫吸附測定 (ELISA)，在該案例中，可檢測的部份爲酵素。 選擇性結合劑，包括抗-類IL-17受體抗體，對於在活體 内呈像亦是有用的。可對動物投與以可檢測部份標示的抗 體，最好是進入血流中，並測定已標示之抗體在宿主中的 -85- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） Μ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
1322154 A7 五、發明說明（83) 出現和位置。可利用任何在動物中，可藉著核磁共振、 射線學或其他此項技藝中已知的檢測方法來檢測的部产= 示該抗體。 標 本發明亦關於包括類IL-1 7受體選擇性結合劑（像是抗體 以及其他可用來在生物試樣中檢測類化· 1 7受體多狀本β 之試劑的套組。這類試劑可包括第二活性、可檢測標 封阻血清、正和負對照組試樣，以及檢測試劑。 可使用本發明的選擇性結合劑，包括抗體，作爲治療劑 。這些治療劑通常是激動劑或拮抗劑，因爲它們分别促進 ，降低至少一種類IL-17受體多肽的生物活性。在—個具體 實施例中，本發明之拮抗劑抗體是抗體或其結合片段，= 能夠專一地與類！L_17受體多肽結合，並能夠在活體内或在 活體外抑制或排除類IL-17受體多肽的功能活性。在較佳的 二、Sa貫誕例中，選擇性結合劑，例如拮抗劑抗體，將抑制 類IL-17受體多肽的功能活性至少大約5〇%，而更佳的是至 ^大約8〇%。在另一個具體實施例中，選擇性結合劑=以 是抗-類IL-17受體多肽之抗體，其能夠與類化_17受體結合 夥伴（配體或受體）產生交互作用，藉此在活體外或在^骨^ 内抑制或排除類IL-17受體的活性。藉著在此項技藝中已= 知的筛選測定，來確認選擇性結合劑，包括激動劑和拮= 劑抗-類IL-17受體抗體。 13/0 本發明亦關於包括類IL-Π受體選擇性結合劑（像是抗體） ，以及其他可用來在生物試樣中檢測類IL17受體多肽含量 之試劑的套組。這類試劑可包括可檢測標記、封阻血^、 •86· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公复— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 裝----- —訂---------^ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（84 正和負對照组試樣，以及檢測試劑。 可利用”表現選殖，•策略，使用類化]7受體多月太來選殖雍 丨25 7又把配體(群）。可在結合測定中使用放射性標示 (”）的㉙IL-1 7文體多月太，或"以親和力/活性-標藏標开 的類IL-17^體多肽（像是^融合或鹼性磷酸酶融合），來碎 認表現類IL.17受體配體（群）的細胞株或組織之細胞類型。 然後可將從這類細胞或组織中分離的RNa轉變爲CD·，選 :到哺乳動物表現載體内’再轉移感染至哺乳動物細胞 内(例如COS或293)，產生表現庫。然後可使用以放射性桿 不或標籤標示之航_17受體多肽作爲親和力試劑，確認和 分離在孩庫中表現類IL·17受體配體（群）的細胞亞组。狹後 ，這，細胞中分離舰，並轉移感染至哺乳動物細胞内， 2第個表現庫，其中表現類IL_ 17受體配體（群）的細胞 ::L將比在原始庫中的鬲出許多倍。可反覆地重覆該 ::過程’直到分離出含有類心7受體配體的單一重組純 展:=1广17受體配體(群)的分離，可用來確認或發 發訊路徑的新穎激動劑和拮抗劑。這類激動 =抗劑，包括靠-17受體配體(群)、抗抓η受體 配3a之杬體、小分子或反義寡核苷酸。 邊多肽活性之其的測定 在某些狀況下，可能想要確初、R相Ττ ^ ^ 〜晋崔°心馬類IL-n受體多肽活性之 抑_卜割，也就是激動劑或拮抗劑的分子。可使 二個筛選測定，像是在本文中描述的那些，來確認調節類 (L-π受體多肽的天然或合成分子。可以在活體外或在活體 -87 紙張尺度適財關家標準（CNS)A4規格（21Q x 297公釐了
1322154 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 五、發明說明（85 ) 内的方式，藉著注射，哎藉签 7 ^ 飞軋者口服遞送，植入裝置或其類 似物，來投與這類分子。 ”受試分子（群）”意指在評估調節（也就是增加或減少）類 H7受體多肽活性的能力之下的分子。最常見的是，受試 分子將直接與類IL-17受體多肚连* · , 又把夕肽產生趸互作用。然而，亦期 待亦可間接調節類IL-17受髀容Ηί· 1 又夕肽活性的受試分子，像是藉 著影響類IL-17受體的基因表現’或藉著與類^受體結合 夥伴(例如受體或配體)結合。在—個具體實施例中，受試 分子將以至少大約10.6 μ的親和力常數與類㈣受體多肽 結合，較佳的是大約ΗΓ8Μ，更佳的是大約1〇_9Μ，而再更 佳的是大約1 (Γ1G Μ。 本發明包括確認與類IL-17受體多肽產生交互作用之化 合物的方法。在某些具體實施例中，在容許該受試分子與 類IL· 1 7受體多肽進行X互作用的條件下，將類化_〗7受體多 肽與雙試分子一起培養，並測量該交互作用的程度。可以 貫質上經過純化的形式，或以粗製混合物之形式，來筛選 受試分子（群）。受試分子可以是核酸分子、蛋白質、肤、 碳水化合物、脂質、有機和無機的化合物。 在某些具體實施例中，類1L-1 7受體多肽激動劑或拮抗劑 可以是蛋白質、肽、碳水化合物、脂質或小分予量的分子 ，其與類IL-Π受體多肽，或其配體產生交互作用，而調節 其活性。調節類IL-1 7受體多肽表現的分子包括與編碼類 IL-1 7受體多肽之核酸互補的核酸，或是與指揮或控制類 IL· 1 7受體多肽表現之核酸序列互補的核酸，且其擔任表現 •88- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (钟 I — — — — — — — -1 ----— It-----^ 11-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 上扣154 A7 B7 五 、發明說明（册 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 作 印 製 的反義調節者。 —旦已經確認—組受試分子與類1L-1 7受體多肽產生交 互作用，便可進一步評估該分子增加或降低類IL_n受體多 肽活性的能力。以數種格式進行受試分子與類IL_n受體多 肽之父互作用的測量，包括以細胞爲基礎的結合測定、膜 結合測定、溶液-相測定和免疫測定。一般而言，將受試分 予與類IL-1 7受體多肽一起培養一段特定的時間，並藉著一 或多種測量生物活性的測定，定出類匕-”受體多肽的活性 亦可在免疫測定中，使用多株或單株抗體，直接測定受 試分子與類IL-1 7受體多肽的交互作用。另外，亦可在免= 測定中，使用含有如同在本文中描述之抗原決定位標籤二 類IL-1 7受體多肽之修改形式。 在某些具體實施例中，類IL-17受體多肤激動劑或拮抗劑 可以是蛋白質、肽、碳水化合物、脂質或小分子量的分子 ，其與類IL-17受體多肽產生交互作用，而調節其活性。類 IL-17受體多肽可能的蛋白質拮抗劑，包括與該多肽之活2 區產生父互作用的抗體’並抑制或排除至少一種類IL 1 7為 體分子的活性。調節類IL-17受體多肽表現的分子，包括$ 編碼類IL-17受體多肽之核酸互補的核酸，或與指揮或控制 類IL-1 7受體多肽表現之核酸序列互補的核酸，且其擔任表 現的反義調節者。 在類IL-17受體多肽經由與結合夥伴（例如受體或配體）之 交互作用來展現其生物活性的事件中，可使用各種在活體 89- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ▼裝------ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
訂· I---I--I f 1322154 A7 B7 五、發明說明（87 卜^測疋，來測I類IL_丨7受體多肽與相對應之結合夥伴 (像是選擇性結合劑、受體或配體）的結合作用。可使用這 ^測定’就其増加或降低類IL_17受體多肽與其結合夥伴結 合之速率及/或程度的能力，來篩選受試分子。在一個測定 中’將類IL-17受體多肽固定在微量滴定盤的孔中。然後將 放射性標示之類IL_丨7受體結合夥伴（例如碘化的類il_17受 體結合夥伴）和受試分子（群）一次一個（按任一種次序），或 同時加土 3孔中。在培養之後，可沖洗該&，並使用閃爍 計數器計算放射性，決定結合夥伴與類IL-17受體多肽結合 的：度。通常，爲了在評估結果時的正確性，將測試在某 一濃度範圍内的分子，並可使用一連串缺乏一或多個受試 W足之要素的對知、組孔。該方法的另一種選擇涉及顚倒蛋 白2的”位置"，也就是將類乩_17受體結合夥伴固定在微量 滴疋盤的孔中，與受試分子和以放射性標示的類I?受體 多肽一起培養，並決定類IL_17受體多肽結合的程度。參見 ’例如第 18 章，Current Pr0t0C0ls in M〇lecuUr
Ausubel等人，編輯，John Wiley & s〇ns，心从 Y〇rk，财 (1995)。 ’ 另一種放射性標示法，是將類^7受體多肽或其結合夥 伴與生物素偶聯，然後可使用與酵素連接的鏈黴菌抗生物 素蛋白，像是辣根過氧化酶（HRP)或鹼性磷酸酶（Ap)，其以 色原方式，或藉著以螢光標籤標示之鏈黴菌抗生物素蛋白 ，來檢測生物素基化之蛋白質的存在。亦可使用針對類 IL I 7又虹夕肽或類IL-1 7受體結合夥伴的抗體，並將其與生 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） ί請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁> ----訂---------- f 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製 A7 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製
五、發明說明 为素偶聯，可在與AP或HRP連接之酵素-連接的鏈黴菌抗生 物素一起培養之後進行檢測。 、二亦可藉著附接於瓊脂糖小珠 '丙烯酸小珠或其他類型的 =類惰性固相受酶質上，固定類化_17受體多肽或類 文體結合夥伴。可將受酶質_蛋白質複合物放在含有互補蛋 白質和受試化合物的溶液中。在培養之後，藉著離心使小 f沉澱，並使用在本文中描述的方法，評估在類匕_17受體 夕肽與其結合夥伴之間的結合量。另外，亦可將受酶質_ 蛋白質複合物固定在管柱中，並使受試分子和互補的蛋白 質通過該管柱。然後可使用在本文中陳述的任何技術，也 •沈疋放射性標示、抗體結合或其類似者，來評估在類匕_ ^ 文體多肽與其結合夥伴之間形成的複合物。 其他可用來確認增加或減少在類IL_丨7受體結合蛋白質 和類IL-17受體結合夥伴之間形成複合物之受試分子的活 體外測定，是表面質粒基因組共振檢測器系統，像是 BIAcore測定系統（Pharmacia，Piscataway，NJ)。使用製造者 的草案來執行該BIAcore系統。該測定基本上涉及類化」？ 党體多肽或類IL-1 7受體結合夥伴與位在檢測器中，塗覆葡 瓜醣之感應晶片的共價結合。然後可將受試化合物和其他 互補的蛋白質同時或連續地注射至含有該感應晶片的小室 内。可以分子質量上的改變爲基礎，其與感應晶片塗覆有 葡聚酿的一側有物理學上的關聯；並藉著檢測器系統測量 在分子質量上的改變’來評估結合之互補蛋白質的含量。 在某些情況下’可此想要就其增加或減少在類丨1 7受體 -91 - 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 裝--------訂-------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 聲 1322154 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 五、發明說明（89 ) 多肽和類IL-17受體結合夥伴之間形成複合物的能力，— 評估二或多種的受試化合物。在這些案例中，可藉著將言 類額外的受試化合物（群）同時或連續地加至第一 ^受試= 合物中，輕易地修改在本文中陳述的測定。在該測定中其 餘的步驟，如同在本文中陳述的。 可便利地使用在活體外的測定，像是在本文中描述的那 些，就其對在類IL-1 7受體多肽和類IL_丨7受體結合夥伴之間 形成複合物的影響，篩選大量的化合物。該測定可自動篩 選在噬菌體展示、合成肽和化學合成庫中產生的化合物。 亦可在細胞培養中，使用表現類IL_17受體多肽或類 IL-1 7觉體結合夥伴的細胞和細胞株，來篩選在類化_ 1 7受體 多肽和類IL-17受體結合夥伴之間，增加或減少複合物之形 成的化合物。可從任何哺乳動物中獲得細胞和細胞株，但 較佳的將是得自人類或其他靈長類、犬或噶齒類來源的。 在叉試分子的存在或缺乏之下，評估類IL_丨7受體多肽與在 其表面上表現類IL-1 7受體結合夥伴之細胞的結合作用，並 可藉著例如流動細胞計數法，使用針對類IL_丨7受體結合夥 伴之生物素基化的抗體，來決定結合的程度。可便利地使 用細胞培養測定’進一步評估在本文中描述之蛋白質結合 測足中，得分爲正値的化合物。 亦可使用細胞培養物來篩選藥物候選者的影響。例如， 藥物候選者可降低或增加類IL•丨7受體基因的表現。在某些 具體實施例中，可在使細胞培養物暴露在藥物候選者下之 後’測量其所產生之類IL-1 7受體多肽的含量。在某些具體 rtt先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
297公釐） 1322154 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（9〇 實施例中，可檢測藥物候選者對細胞培養物的精確影響。 例如，特定基因的過度表現，可能對細胞培養物具有特定 的影響。在這類案例中，可測試藥物候選者增加或降低該 基因表現的能力，或其預防或抑制對細胞培養物之特定影 響的能力。在其他的實例中，特定代謝產物的產製，像= 多肽的片段，可能導致或與疾病或病理學病況有關。在這 類案例中，可測試藥物候選者在細胞培養物中降低這類代 謝產物之產製的能力。 可使用酵母兩個-雜化物系統（Chien等人，Proc Nati
Acad· Sci· USA，88 : 9578-9583，1991) ’ 來確認與類 il-17 受體多肽結合，或產生交互作用的新穎多肽。例如，可在 載體（像是得自Clontech的pAS2-l)中產生酵母-兩個雜化物 誘斜構築體，其编碼與Cdkl 1多核：y：酸融合的酵母 GAL4-DNA結合功能部位。可使用該誘_構築體來篩選其 中cDNA庫序列與GAL4激活功能部位融合的人類cDNA庫 。正的交互作用將導致諸如0 -gal之類報告者基因的激活。 可進一步定出從該篩選中脱穎而出之陽性純種系的特徵， 以便確認發生交互作用的蛋白質。 内化的蛋白皙 可使用tat蛋白質序列（得自HIV)使蛋白質内化至細胞中 。參見，例如 Falwell 等人，Proc. Natl. Acad. Sci., 91 : 664-668 (1994)。例如，已經描述了 HIV tat蛋白質的11個胺 基酸序列（YGRKKRRQRRR ;序列識別18號）（稱爲”蛋白質 轉導功能部位π或TAT PDT)，通過細胞的細胞質膜和核膜 -93- 本紙張尺度適用+國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公复） -i — — — — — — ^ ---II---— (請先間讀背面之注意事項再填寫本頁) 1322154 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（91 ) 傳達遞送。參見 Schwarze 等人，Science，28J. ： 1 569- 1 572 (1999);和 Nagahara 等人，Nature Medicine，生：1449 1452 (1998) 。在這些程序中，製備FITC·構築體（FITC- GGGGYGRKKRRQRRR ;序列識別19號），藉著螢光激活的 細胞挑選（FACS)分析，觀察其與細胞的結合作用，並在腹 腔内投與之後’這些構築體將貫穿組織。接下來，建構 tat-bgal融合蛋白質。以該構築體處理的細胞，證實了々_gal 的活性。在注射之後，已經發現許多組織，包括肝臟 '腎 臟、肺臟、心臟和腦組織，證實使用這些程序的表現。咸 相信這類構築體經歷了某種程度的伸展，以便進入細胞； 並在進入細胞之後’本身可能需要再折疊。 因此將知曉可使用該tat蛋白質序列，將想要的蛋白質或 多肽内化至細胞内。例如，使用tat蛋白質序列，可以細胞 内之方式投與類IL-1 7受體拮抗劑（像是抗-類IL_丨7受體選 擇性結合劑、小分子、可溶性受體或反義寡核荅酸），而抑 制類IL-1 7受體分子的活性。當在本文中使用„類IL_丨7受體 分子"一詞時’意指如同在本文中定義的類IL_丨7受體核酸 分子和類IL-17受體多肽兩者。在想要之處，亦可使用這些 权序’將類IL-1 7受體蛋白質本身以内部之方式投與細胞。 亦參見Strauss, E.,"將蛋白質導入體細胞内（Intr〇ducing
Proteins Into the Body's Cells)", Science, 285.： 1466-1467 (1999) 。 使用類IL -1 7受體多肽確認細胞來源 根據本發明的某些具體實施例，能夠決定某些與類IL_ j 7 裝·-------訂·—— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) a -94 1322154 A7 五、發明說明（92) 受體多肽有關之細胞類型的來源可能是有用的。例如，可 用來決定疾病或病理學病況的起源，而協助選擇適當的治 療。 /〇 治療用途 可利用本發明之類1L_17受體核酸、多肽，以及激動劑和 拮抗劑來治療、診斷、改善或預防之並非·唯一的急性和慢 性疾病之一覽表，包括： 診斷並/或治療涉及免疫系統功能障礙的疾病。這類疾 病的實例包括但不限於風濕性關節炎、牛皮癖性關節炎 、炎症性關節炎、骨關節炎、炎症性關節疾病、自體免 疫疾病，包括自體免疫脈管炎、多發性硬化症、紅斑性 狼瘡、糖尿病（例如胰$素糖尿病）、炎症性腸病、移植 排斥、移植對宿主之疾病，以及起因於運動過度、扭傷 、軟骨損傷、創傷 '矯形外科手術、感染或其他疾病過 牡的火症性病況。其他受到免疫系統功能障礙影響的疾 病，亦包括在本發明的範圍内，包括但不限於過敏。本 發明之類IL-〗7受體核酸、多肽，以及激動劑和拮抗劑 ’亦可用來抑制丁細胞增殖、抑制T細胞活化，並/或抑 制B細胞增殖及/或免疫球蛋白的分泌。 衫斷並/或治療涉及感染的疾病。這類疾病的實例包括 但不限於麻風、病毒感染，像是肝炎或HIV、細菌感染 ’像是與疾病有關之梭狀芽胞桿菌屬（Cl〇stridium)，包 括與板狀芽胞杯菌有關的下病、肺結核、起因於細菌本 身或病毒的急性熱病、發燒、肝臟的急性期反應、敗血 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) « — — — — — — I. f. 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製 -95 1322154 五、發明說明（93) 症' 敗血性休克。 的範圍内。 其他涉及感染的疾病亦包括在本發明 •診斷並/或治療涉及體重失調的疾病。這類疾病的實例 包括但不限於肥胖、食懲缺乏、惡病f，包括a工D s _誘 發的惡病質、肌病(例如肌肉蛋白質代謝，像是在敗血 症中）’以及低血糖症。其他涉及體重失調的疾病，亦 包括在本發明的範圍内。 •診斷並/或治療涉及神經元功能障礙的疾病。這類疾病 勺貫例I括但不限於早老性癡呆、帕金森氏症 '神經毒 性(JN如由HIV引起的）、ALS、腦部傷害、緊迫、抑營、 傷。又I·生和其他疼痛（包括與癌症有關的疼痛）、痛覺 過敏、癲癇、學習損傷和記憶障礙、睡眠失常，以及周 圍和中框神經病變。其他神經學上的障礙，亦包括在本 發明的範圍内。 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製 •診斷並/或，冶㈣及肺臟的疾這類疾病的實例包括 但不限於急性或慢性的肺傷害，包括間質性肺病 ' 糸性 呼吸疾病徵候群、肺高血壓、氣腫、胰囊性纖維變：、 肺纖維變性和氣喘。其他的肺臟疾病亦包括在本發明的 範圍内。 •衫斷並/或治療涉及皮膚的疾病。這類疾病的實例包括 但不限於牛皮癬、濕疹和傷口癒合。其他的皮膚疾病亦 包括在本發明的範圍内。 ►診斷並/或治療涉及腎臟的疾病。這類疾病的實例包括 但不限於急性和慢性的血管球性腎炎。其他的腎臟疾病 本紙張尺度適用中國
國家標準（CNS)A4規格⑵Ο X -96- 公釐 ) 1322154 % 五、發明說明（94 參 產 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製 亦包括在本發明的範圍内。 診斷並/或治療涉及骨骼的疾病。這類疾病的實例包括 但不限於骨質疏鬆症、骨質石化症'成骨不全、佩士特 氏（㈣叫症、牙周病1下料關節疾病和高血轉症 。其他的骨骼疾病亦包括在本發明的範圍内。 診斷並/或治療涉及脈管系統的疾病。這類疾病的實例 包括但不限於出血或猝發、出血性休克、局部缺血，包 括心臟局部缺血和大腦局部缺血(例如起因於創傷 '癲 痛、出血或猝發的腦部傷害’其可分別導致神經變性） 、動脈粥樣硬化、鬱血性心衰竭；再狹窄、再灌注的傷 害，以及血管生成作m。其他脈管系統的疾病#包括在 本發明的範圍内。 診斷並/或治療腫瘤細胞。這類疾病的實例包括但不限 於淋巴瘤、骨肉瘤、慢性和急性的骨髓性白血病（AML 和CML)，骨髓單核細胞性白血病以及其他的白血病、 多發性骨髓瘤、肺癌、乳癌、腫瘤轉移和來自照射治療 的副作用。其他涉及腫瘤細胞的疾病，亦包括在本發明 的範圍内。 診斷並/或治療生殖障礙。這類疾病的實例包括但不限 於不孕、流產、不足月生產和分娩，以及子宮内膜炎。 其他涉及生殖系統的疾病，亦包括在本發明的範園内。 診斷並/或治療眼睛障礙。這類疾病的實例包括但不限 於炎症性眼病，可能與例如角膜移植有關；視網膜變性 、瞎眼、黃斑變性、青光眼、葡萄膜炎和視網膜神經病 訂 -97 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 ^^ --------B7__ 五、發明說明（95 ) =。其他的眼晴疾病亦包括在本發明的範圍内。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) •珍斷並/或治療涉及炎症的疾病。這類疾病的實例包括 但不限於在本文中描述的那些。 —可使用在本發明範圍内之製劑來治療的其他疾病，包括 急性胰臟炎、慢性疲勞徵候群、纖維肌痛（fibr〇myalgia)， 和川崎氏（Kawasaki's)症（MLNS)。 其他與不受歡迎之含量的一或多種ILi、比丨以、本發明 之類IL-1 7叉體多肽的配體，及/或本發明之類iL_ 1 7受體多 肽本身有關之疾病，亦包括在本發明的範圍内。不受歡迎 之含量包括過量及/或低於正常含量的江」、IL_lra、本發 明之類IL-17受體多肽的配體，及/或在本文中描述的類 IL-17受體多肽。 ’ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本發明亦企圖以其他治療之附屬物的形式，投與類匕_ i 7 受體多肽的激動劑或拮抗劑（包括但不限於抗-類IL_丨7受體 選擇性結合劑（像是抗體）、類IL-1 7受體之配體、可溶性類 IL-1 7受體多肽、小分子和反義寡核苷酸，或類匕_ i 7受體多 肽本身）’並亦帶有其他適合待治療之適應症的醫藥組合物 。可分別、連續或同時投與類IL-17受體多肽之激動劑或括 抗劑’及/或類IL -1 7受體多肤本身’和任一或多種類外的、;A 療劑或醫藥調配物。 在特定的具體實施例中，本發明針對與任一或多種IL_ 1 抑制劑混合（治療前、治療後或同時治療）之類IL-17受體多 肽的激動劑或拮抗劑，及/或類IL-1 7受體多肽本身，在治療 或預防在本文中提及之疾病和障礙上的用途。 -98- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1322154 ------B7____ 五、發明說明（96 ) IL-1抑制劑包括任何能夠專一地預防活化il_ 1之細胞受 體的蛋白質’其可起因於許多機制中的任-種。這類機制 i括向下調sML-i的產製、與自由的IL-1結合干擾id 與其受體的結合、干擾IL-1受體複合物的形成（也就是比^ 丈體與IL-1丈體附屬蛋白質的結合），或在與其受體結合之 後’干擾IL-1發送信號的調節作用。介白素-"中制劑的種 類包括： •介白素―1受體拮抗劑，像是IL_ira，如同在本文中的描 述； •柷-IL-1受體單株抗體（例如歐洲專利623674號）； • IL]結合蛋白質，像是可溶性IL-1受體（例如美國專利第 5,492,888號、美國專利第5,488,〇32號，以及美國專利第 5,464,937號、美國專利第5,319,〇71號，和美國專利第 5，180,812號）； •抗-IL· 1 單株柷體（例如 w〇 9501 997、W0 9402627、W0 9006371 '美國專利第4,935,343號、歐洲專利364778號 、歐洲專利2 6 7 6 1 1號和歐洲專利2 2 〇 〇 6 3號）； • IL_1受體附屬蛋白質及對抗它的抗體（例如w〇 96/23067); >»1白素-1 轉’史酶（ICE)的抑制劑或卡佩斯酶（caspase) I ，其可用來抑制IL-1々的產製和分泌； • 介白素-1々蛋白酶抑制劑； •其他在活體内阻斷IL-1之合成或細胞外釋放的化合物 和蛋白質。 -99- 本纸張尺度適用申國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐〉 W.裝--------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1322154 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（97 ) 代表性的IL-1抑制劑，揭示在下列的參考文獻中： 美國專利第 5747444號、5359032號、5608035號、5843905 號、5359032號、5866576號、5869660號 ' 58693 1 5 號、5872095 號、5955480號； 國際（W〇）專利申請案 98/2 1957、96/09323、91/17184、 96/40907 、 98/32733 、 98/42325 、 98/44940 、 98/47892 、 98/56377 ' 99/03837 ' 99/06426 ' 99/06042 ' 91/17249 ' 98/32733 ' 98/17661 ' 97/08174 ' 95/34326 ' 99/36426和 99/36415 ; 歐洲（EP)專利申請案534978和894795號；以及法國專利 申請案FR 27625 14號；
介白素-1受體拮抗劑（IL-Ira)是一種人類蛋白質，其作用 爲介白素-1的天然抑制劑。較佳的受體拮抗劑（包括IL-1 ra 及其變體和衍生物），及其製造和使用方法，描述在美國專 利第 5,075,222號；WO 91/08285 ; WO 91/17184 ;澳洲專利 9 1 73636 號；WO 92/1622 1 ; WO 93/21946 ; WO 94/06457 ;WO 94/21275 ;法國專利 2706772號；WO 94/2 1235 ;德 國專利 42 19626 號；WO 94/205 1 7 ; WO 96/22793 ; WO 97/2 8828和WO 9 9/36541中。該蛋白質包括糖基化和未_糖 基化的IL -1受體抬抗劑。 熟請此藝者將認可在IL-1 ra的胺基酸序列中可進行許多 刪除、插入和取代（在本文中爲個別或集體的”變體（群）"）的 組合，其限制條件爲所得的分子是具有生物活性的（例如具 有影響一或多種疾病和障礙的能力，像是在本文中提及的 -100- -----I 訂· 11 _ I ! (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 一 ! · - ·τ ro * * ▲ - ¾ / y A7 〜 ----一 1、發明說明（98) 那些）〇 在特定的具體實施例中，本發明係針對與任一或多種 TNF抑制劑混合（治療前、治療後或同時治療）之類IL_丨7受 體多肽的激動劑或拮抗劑，及/或類IL_丨7受體多肽本身，在 治療或預防在本文中提及之疾病和障礙上的用途。 這類TNF抑制劑包括在活體内阻斷TNF合成或細胞外釋 放的化合物和蛋白質。在特定的具體實施例中，本發明針 對與任一或多種下列之TNF抑制劑混合（治療前、治療後或 同時治療）之類IL-17受體多肽的激動劑或拮抗劑，及/或類 IL-17^體多肽本身的用途：TNF結合蛋白質（可溶性TNF受 體第I型和可溶性TNF受體第II型（"sTNFRs")，如同在本文 中之定義）、抗-TNF抗體、粒性細胞菌落刺激因子；沙利度 胺（thalidomide) ; BN 50730 ;替尼達普（tenidap) ; E 553 1 ;嘧帕凡特（tiapafant) PCA 4248 ;尼美舒利（nimesulide); 帕納菲爾（panavir);羅利普蘭（rolipram) ; RP 73401 ;肽 T ;MDL 201，449A ; (1R，3S)-順-l-[9-(2,6-二胺基嘌呤基）]-3-羥基-4-環戊烯鹽酸鹽；（1R,3R)-反-l-[9-(2,6-二胺基）嘌呤] -3-乙醯氧基環戊烷；（1R,3R)-反-l-[9-腺嘌呤基]-3-疊氮基 環戊坑鹽酸鹽和（1R,3R)-反-1-(6-#i基-嘌呤-9-基）-3-疊氮 基環戊烷。TNF結合蛋白質揭示在該技藝中（歐洲專利 308 378號、歐洲專利422 339號、英國專利2 218 101號、 歐洲專利393 438號、WO 90/13575、歐洲專利398 327號、 歐洲專利412 486號、WO 91/03553、歐洲專利418 014號、 曰本專利127,800/1991、歐洲專利433 900號、美國專利第 -101 - 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝 ----訂 ----k 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1322154 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 ____B7_____ 五、發明說明（99 ) 5,136,021號、英國專利2 246 569號、歐洲專利464 533號、 WO 92/01002、WO 92/13 09 5 ' WO 92/16221、歐洲專利 512 528號、歐洲專利526 905號、WO 93/07863、歐洲專利 568 928號、WO 93/21946、WO 93/19777、歐洲專利 417 563 號、WO 94/06476，以及PCT國際專利申請案第 PCT/US97/12244號）〇 例如，歐洲專利393 438號和歐洲專利422 339號敎導可溶 性TNF受體第I型（亦稱爲”sTNFR-Γ或M30 kDa TNF抑制劑'，） 和可溶性TNF受體第II型（亦稱爲”sTNFR-ΙΓ或”40 kDa TNF抑制劑"），集體地稱爲”sTNFRs”，以及其修改形式（例 如其片段、功能衍生物和變體）的胺基酸和核酸序列。歐洲 專利393 438號和歐洲專利422 339號亦揭示分離負責編碼 該抑制劑之基因、在適當載體和細胞類型中選殖該基因， 以及表現該基因’產生該抑制劑的方法。此外，亦已經揭 示sTNFR-I和sTNFR-II的多價形式（也就是包括一個以上活 性部份的分子）。在一個具體實施例中，可藉著以化學方式 偶聯至少一個TNF抑制劑和帶有任何在臨床上可接受之交 聯劑，例如聚乙二醇（WO 92/16221和WO 95/34326)的其他 部份，藉著肽交聯劑（Neve等人（1996)，Cytokine，8 m ： 3 65-3 70) ’藉著以化學方式偶聯生物素，然後與抗生物素 蛋白結合（W0 91/03553)，最後藉著混合嵌合型抗體分子 (美國專利第 5,1 16,964號、WO 89/09622、W0 9 1/16437和 歐洲專利3 15062號），來建構多價的形式。 抗-TNF抗體包括MAK 195F Fab抗體（Holler等人（1993) -102 私纸張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公复 -------- — —-----. (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1322154 A7 B7 五、發明說明（1〇〇) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ，International Symposium on Cytokines in Bone Marrow Transplantation, 147) ; CDP 571 抗-TNF 單株抗體（Rankin 等 人（1995)，British Journal of Rheumatology, 34. ： 334-342) ;BAY X 1351老鼠抗-腫瘤壞死因子單株抗體（Kieft等人 (1995)» 7th European Congress of Clinical Microbiology and Infectious Diseases，第 9頁）；CenTNF cA2 (REMICADE)抗 -TNF單株抗體（Elliott 等人（1994)，Lancet, 344 ： 1125-1127 和 Elliott等人（1994)，Lancet. 344 : 1105-1110)。 將知曉可按照待治療之適應症，使用（同時或連續）與一 或多種細胞分裂素、生長因子、抗生素、消炎藥及/或化學 治療劑混合的類IL-1 7受體多肽。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 在一個特定的具體實施例中，本發明係針對使用與分泌 或可溶性人類fas抗原或其重組版本（WO 96/20206和 Mountz等人，J_ Immunology, 155 ： 4829-4837 ;以及歐洲 專利5 10 69 1號）混合（治療前、治療後或同時治療）的類 IL-17受體多肽之激動劑或括抗劑，及/或類il- 1 7受體多肽 本身。WO 96/20206號揭示了分泌性人類fas抗原（天然和重 組的，包括Ig融合蛋白質），分離負責编碼該可溶性重組人 類fas抗原之基因的方法，在適當的載體和細胞類型中選殖 該基因的方法，以及表現該基因，產製該抑制劑的方法。 歐洲專利510 691號描述编碼人類fas抗原的DNAs,包括可 溶性fas抗原，表現該DNAs之載體，以及以該載體轉移感 染的轉化物。當以非經腸之方式投藥時，分泌或可溶性fas 抗原融合蛋白質的劑量，通常分別爲從大約1微克/公斤到 -103- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1322154 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製^ A7 五、發明說明（101 大約100微克/公斤。 在本文中提及之疾病和障礙的治療，可包括使用第一線 的藥物來控制疼痛和炎症反應》將這些藥物歸類爲非-類固 醇的消炎藥（NASIDs)。第二個治療包括皮質類固醇，緩慢 作用的抗風濕病藥物（SAARDs)，或修改疾病（DM)的藥物。 關於下列化合物之資訊’可在The Merck Manual of
Diagnosis and Therapy，第 16版，Merck，Sharp & Dohme Research Laboratories, Merck & Co.，Rahway, NJ (1992)， 以及在 Pharmaprojects，PJB Publications Ltd中找到。 在特定的具體實施例中，本發明針對使用類IL-1 7受體多 肽之激動劑或拮抗劑，及/或類IL-17受體多肽本身，和任一 或多種NSAIDs來治療在本文中提及的疾病和障礙，包括急 性和慢性的炎症，像是風濕性疾病；以及移植物對宿主的 疾病。N S AID s由於其消炎的作用，至少部份地抑制了前列 腺素合成（Goodman 和 Gilman，在"The Pharmacological Basis of Therapeutics," MacMillan第 7版（1985)中）〇DSAIDs 可依其特徵分成至少九種：（1)水楊酸衍生物、（2)丙酸衍生 物、（3)醋酸衍生物、（4)芬那酸（fenamic acid)衍生物、（5) 羧酸衍生物、（6)丁酸衍生物、（7)昔康類（0Xicarns)、（8)毗 唑類和（9)吡唑酮類。 在其他特定的具體實施例中，本發明針對與任一或多種 水楊酸衍生物、前藥酯，或其在藥學上可接受的鹽類混合 (在治療前、治療後或同時治療）的類IL-17受體多肽之激動 劑或拮抗劑，及/或類IL-17受體多肽本身的用途。這類水楊 -104- t紙張尺度適用t國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 裝------ί 訂——— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1322154 A7 B7 五、發明說明（1〇2) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 酸衍生物、前藥酯及其在藥學上可接受的鹽類包括乙醯氨 基薩羅（acetaminosalol)、阿洛潑林（aloxiprin)、阿斯匹靈、 貝諾酯（benorylate)、溴水楊醇（bromosaligenin)、乙醯水楊 酸鈣、膽鹼三水楊酸鎂、水楊酸鎂、水楊酸膽鹼、雙氟尼 酸（diflusinal)、依特柳酯（etersalate)、芬度柳（fendosal)、 2,5 -二#至苯甲酸、乙二醇水楊酸酯、水楊酸咪唑、乙醯水 楊酸離胺酸、間-胺基水楊酸（mesalamine)、水楊酸嗎淋、 水楊酸1 -萘醋、奥沙拉秦（olsalazine)、帕沙米特（parsalmide) 、乙醯基水楊酸苯醋、水楊酸苯醋、醋水楊胺（sal acetamide) '水楊驢胺0-醋酸、雙水楊酸醋（salsalate)、水楊酸鈉和柳 氣確胺p比咬（sulfasalazine)。具有類似之止痛和消炎性質的 在結構上相關的水揚酸衍生物，亦企圖包括在該類中。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 在其他特定的具體實施例中，本發明針對與任一或多種 丙酸衍生物、前藥酯，或其在藥學上可接受的鹽類混合 (在治療前、治療後或同時治療）之類IL-17受體多肽的激動 劑或拮抗劑，及/或類IL-1 7受體多肽本身的用途。這類丙酸 衍生物、前藥酯及其在藥學上可接受的鹽類包括：阿明洛 芬（alminoprofen)、苯哼咯芬（benoxaprofen)、布氣酸 (bucloxic acid)、卡洛芬（carprofen)、右旋吲嗓洛芬 (dexindoprofen)、苯氧苯丙酸（fenoprofen)、氟諾洛芬 (flunoxaprofen)、氟洛芬（fluprofen)、氟比洛芬（flurbiprofen) 、呋氯洛芬（furcloprofen)、布洛芬（ibuprofen)、鋁布洛芬 、異丁普生（ibuproxam)、吲哚洛芬（indoprofen)、異洛芬 (isoprofen)、酮洛芬（ketoprofen)、氣索洛芬（l〇XOprofen)、 -105- 本紙張尺度適用中國國豕標準（CNS)A4規格（2〗〇 X 297公髮） ^7 1322154 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（103) 米若洛芬（miroprofen)、萘普生（naproxen)、鈉莕普生、„号 丙嗪（oxaprozin)、吡酮洛芬（piketoprofen) '吡美洛芬 (pimeprofen)、吡洛芬（pirprofen)、普拉洛芬（pran〇pr〇fen) 、丙替嗪酸（protizinic acid)' 吡哆洛芬（Pyridoxipr〇fen)、 舒洛芬（suprofen)、p塞洛芬酸（tiaprofenic acid)和p塞薩洛芬 (tioxaprofen)。具有類似之止痛和消炎性質的在結構上相關 的丙酸衍生物，亦企圖包括在該類中。 在其他特定的具體貫施例中，本發明針對與任一或多種 醋酸衍生物、前藥@旨’或其在藥學上可接受的鹽類混合 (在治療前、治療後或同時治療）之類IL-17受體多肽的激動 劑或括抗劑’及/或類IL -1 7受體多肽本身的用途。這類醋酸 衍生物、前藥酯及其在藥學上可接受的鹽類包括：阿西美 辛（acemetacin)、阿氣芬酸（alclofenac)、氨芬酸（amfenac) 、丁笨羥酸（bufexamac) '桂美辛（cinmetacin)、氣吡酸 (clopirac)、地美他辛（delmetacin)、雙氣芬酸（diclofenac) 鉀、雙氣芬酸鈉、依托度酸（etodolac)、聯苯乙酸（feibinac) 、芬氣芬酸（fenclofenac)、芬克洛雷（fenclorac)、芬克洛酸 (fenclozic acid)、芬替酸（fentiazac)、呋芬克酸（furofenac) 、葡美辛（glucametacin)、異丁芬酸（ibufenac)、》5丨味美辛 (indomethacin)、三苯吐酸（isofezolac)' 伊索克酸（isoxepac) 、氣那峻酸（lonazolac)、甲嗔酸（metiazinic acid)、奥沙美 辛（oxametacin)、奥沙比酸（oxpinac)、比美辛（pimetacin)、 丙穀美辛（proglumetacin)、舒林酸（sulindac)、他爾美辛 (talmetacin)、口塞拉米特（tiaramide)、替歐比酸（tiopinac)、 -106- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝
ϋ ϋ , n i I I 聲 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1322154 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 五、發明說明（1〇4) 托美辛（tolmetin)、托美辛鈉、齊多美辛（zid〇metacin)和佐 美酸（zomepirac)。具有類似之止痛和消炎性質的在結構上 相關的醋酸衍生物’亦企圖包括在該類中。 在其他特定的具體實施例中，本發明針對與任一或多種 芬那酸衍生物、前藥醋，或其在藥學上可接受的鹽類混合 (在治療前、治療後或同時治療）之類比_17受體多肽的激動 劑或拮抗劑，及/或類IL-17受體多肽本身的用途。這類芬那 酸衍生物、前藥酯及其在藥學上可接受的鹽類包括··苯乙 氨茴酸（enfenamic acid)、依托芬那酯（et〇fenamate)、氟芬 那 (flufenamic acid)、異尼辛（isonixjn)、甲氯芬那酸 (meclofenamic acid)、甲氯芬那酸鈉、美多芬那酸 (medofenamic acid) ' 甲芬那酸（mefenamic aeid)、尼氟滅酸 (niflumic acid)、他尼氟酯（taininumate)、特羅芬那酸酯 (terofenamate) ' 托芬那酸（t〇ifenamic acid)和優芬那酸酯 (ufenamate)。具有類似之止痛和消炎性質的在結構上相關 的芬那酸衍生物，亦企圖包括在該類中。 在其他特定的具體實施例中，本發明針對與任一或多種 羧酸衍生物、前藥酯，或其在藥學上可接受的鹽類混合 (在治療前、治療後或同時治療）之類IL_丨7受體多肽的激動 劑或拮k劑，及/或類IL-17受體多肽本身的用途。這類叛酸 衍生物、前藥酯及其在藥學上可接受的鹽類包括：氯環茚 酸（clidanac)、雙氟尼酸 '氟芬尼酸（flufenisai)、依諾立定 (inoridine)、酮咯酸（ketorolac)和替諾立定（tin〇ridine)e 具 有類似之止痛和消炎性質的在結構上相關的羧酸衍生物， 裝--------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 107- 1322154 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 五、發明說明（105 亦企圖包括在該類中。 在另外特定的具體實施例中，本發明針對與任一或多種 丁酸衍生物、前藥酯，或其在藥學上可接受的鹽類混合 (在治療前、治療後或同時治療）之類IL-17受體多肽的激動 劑或拮抗劑，及/或類IL-17受體多肽本身的用途。這類丁酸 衍生物、前藥酯及其在藥學上可接受的鹽類包括：布馬地 罘（bumadizon)、異丁 苯丁酸（butibufen)、芬布芬（fenbufen) 和聯苯丁酸（xenbucin)。具有類似之止痛和消炎性質的在結 構上相關的丁酸衍生物，亦企圖包括在該類中。 在其他特定的具體實施例中，本發明針對與任一或多種 昔康類衍生物、前藥酯，或其在藥學上可接受的鹽類混合 (在治療前、治療後或同時治療）之類IL-17受體多肽的激動 劑或拮抗劑，及/或類IL-17受體多肽本身的用途。這類昔康 類衍生物、前藥酯及其在藥學上可接受的鹽類包括：屈吟 昔康（droxicam)、依諾利康（enolicam)、伊索昔康（is〇xicam) 、吡羅昔康（piroxicam)、蘇多昔康（sudoxieam)、替諾昔康 (tenoxicam)和4-羥基-1，2-笨并嘍畊_丨小二氧化物_4·(Ν_苯 基）-羧醯胺。具有類似之止痛和消炎性質的在結構上相關 的昔康類衍生物，亦企圖包括在該類中。 在更多額外的特定具體實施例中，本發明針對與任一或 多種吡唑衍生物、前藥酯，或其在藥學上可接受的鹽類混 合（在治療前、治療後或同時治療）之類IL·丨7受體多肽的激 動劑或拮抗劑，及/或類IL-17受體多肽本身的用途。這類吡 唑衍生物、前藥酯及其在藥學上可接受的鹽類包括：二苯 --------訂——.—— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) •108- 丄以2154 A7 B7 五、發明說明（106) 米唑（difenamizole)和依匹唑（epirizo丨e)。具有類似之止痛和 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) /肖泛性質的在結構上相關的P比嗅衍生物，亦企圖包括在該 類中。 在其他特定的具體實施例中，本發明針對與任一或多種 p比唆g同竹生物 '前藥g旨’或其在藥學上可接受的鹽類混合 (在治療前、治療後或同時治療）之類IL_17受體多肽的激動 劑或拮抗劑，及/或類IL-1 7受體多肽本身的用途。這類吡唑 酮衍生物、前藥酯及其在藥學上可接受的鹽類包括：阿扎 丙示（apazone)、阿扎普帕宗（azapr〇pazone)、爷p底立隆 (benzpiperylon)、非普拉宗（feprazone)、莫非布宗 (mofebutazone)、嗎拉宗（morazone)、羥布宗 (oxyphenbutazone)、保泰松（phenylbutazone)、哌布宗 (pipebuzone)、丙基非那宗（pr〇pylphenazone) ' 雷米那 g同 (ramifenazone)、琥布宗（suxibuzone)和遠〇坐琳保泰松 (thiazolinobutazone)。具有類似之止痛和消炎性質的在結構 上相關的ρ比嗤酮衍生物，亦企圖包括在該類中。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 在其他特定的具體實施例中，本發明針對與任一或多種 下列之NSAIDs混合（在治療前、治療後或同時治療）之類 IL-1 7受體多肽的激動劑或拮抗劑，及/或類IL_ 1 7受體多肽 本身的用途：ε-乙醯胺基己酸、S-腺苷甲硫胺酸、3-胺基 -4-¾ 基丁酸、阿西米群（amixetrine)、安左扎芬（anitrazafen) 、安曲非寧（antrafenine)、_達酸（bendazac)、节達酸離胺 酸鹽、炎痛靜（benzydamine)、比普辛（beprozin)、布普雷蒙 (broperamole)、布可隆（bucolome)、布非佐酸（bufezolac)、 109 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1322154 A7 _____ B7 五、發明說明（1〇7) 環丙，奎宗（ciproquazone)、氣西美特（cloximate)、達西答胺 (dazidamine)、地玻沙美（deboxamet)' 地托咪定（detomidine) 、聯苯p比胺（difenpiramide)、聯苯旅胺（difenpyramide)、地 非沙胺（diHsalamine)、地他峻（ditazol)、依莫法宗 (emorfazone)、芬尼提®坐（fanetizole)曱續酸酯、芬氟米唆 (fenflumizole) ' 夫洛非寧（floctafenine)、氟米嗤（flumizole) 、氟尼辛（flunixin)、氟丙峻宗（fluproquazone)、福比托林 (fopirtoline)、轉柳酸（fosfosal)、癒創美索（guaimesal)、瘡 創藍油烴（guaiazolene)、異尼辛（isonixirn)、弗列他明 (lefetamine) HC1、立氟諾邁（leflunomide)、洛芬米唑 (lofemizole)、洛替法唑（lotifazole) '離胺酸氣尼辛酸鹽 (lysin clonixinate)、美西克峻（meseclazone)、萘 丁美綱 (nabumetone)、尼可丁朵（nictindole)、尼美舒利（nimesulide) 、歐格汀（orgotein)、歐潘辛（orpanoxin)、奥沙西羅 (oxaceprol)、奧帕多（oxapadol)、瑞尼托林（paranyline)、喊 立索峻（perisoxal)、〇瓜立索峡擰檬酸鹽、匹福赛（pifoxime) 、p底普辛（piproxen)、p比拉咬酸（pirazolac)、ρ比芬尼酮 (pirfenidone)、普羅 p奎宗（proquazone)、普羅沙嗅 (proxazole) ' 塞拉凡 B (thielavin B) ' 替凡米吐（tiflamizole) 、替米格代（timegadine)、托利可汀（tolectin)、托巴多 (tolpadol)、色塔邁（tryptamid)，以及以公司密碼命名的那 些，像是 480156S、AA861、AD1590、AFP802、AFP860、 AI77B、AP504、AU8001、BPPC、BW540C、CHINOIN 127 、CN100、EB3 82、EL508、F1044、FK-506、GV365 8、ITF182 -110- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） L. —II----裝----— 訂-------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1322154 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（108) 、KCNTEI6090、KME4、LA285 1、MR714、MR897、MY309 、0N03 144、PR823、PV102、PV108、R830、RS213hSCR152 、SH440、SIR133、SPAS510、SQ27239、ST281、SY6001 、TA60、TAI-901(4-苯曱醯基-i_ 二氫茚叛酸）、TVX2706 、U60257 ' UR2301 和 WY41770。具有類似 NSAIDs之止痛 和消炎性質的在結構上相關的NS AIDs，亦企圖包括在該類 中 〇 在更多額外的特定具體實施例中，本發明針對使用與任 一或多種皮質類固醇、前藥酯，或其在藥學上可接受的鹽 類混合（在治療前 '治療後或同時治療）之類IL-17受體多肽 的激動劑或拮抗劑，及/或類IL-1 7受體多肽本身，來治療在 本文中提及的疾病和障礙，包括急性和慢性的炎症，像是 風濕性的疾病、移植物對宿主的疾病，以及多發性硬化症 。皮質類固醇、前藥酯及其在藥學上可接受的鹽類包括氫 基可體松，和衍生自氫基可體松的化合物，像是2 1 -乙醯氧 基孕甾稀醇酮、阿氯米松（alclomerasone)、阿爾孕|同 (algestone)、安西奈德（amcinonide)、倍氣米松 (beclomethasone) ' 倍他米松（betamethasone)、倍他米松戊 酸鹽、布地奈德（budesonide)、氯脱氫皮甾醇 '氣倍他索 (clobetasol)、氣倍他索丙酸鹽、氣倍他松（clobetasone)、氣 倍他松丁酸鹽、氣可托龍（clocortolone)、氯潑尼醇 (cloprednol)、皮質酮、17-#至-11-脱氫皮質酮、考的伐唾 (cortivazol)、地夫可特（deflazacon)、地奈德（desonide)、去 經米松（desoximethasone) ' 地塞米松（dexamethasone)、二 -111 - 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 裝---- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 1111111 ^22154 A7 _B7_ 五、發明說明（1〇9) 氟拉松（diflorasone)、雙氟可龍（diflucortolone)、雙氟潑尼 酯（difluprednate)、甘草次酸（enoxolone)、氟扎可特 (fluazacort)、氟氣奈德（flucloronide)、氟米松（flumethasone) 、說米松新戊酸鹽、氟輕松（〇11〇(^11〇1〇1^3061〇11丨(!6)、氟1尼 縮松（flunisolide)、氟輕松醋酸g旨（fluocinonide)、氟輕松、 氟可丁-丁酯（〇110(；01^111)1^1)、氟可龍（『丨110001^0丨0116)、氟 可龍己酸鹽、雙氟可龍戊酸鹽、敦米龍（fluorometholone) 、氟培龍乙酸酯（fluperolone acetate)、氟潑尼定醋酸酯 (fluprednidene acetate)、氟潑尼龍（fluprednisolone)、氫輕 縮松（flurandenolide)、福莫他可（formocortal)、哈西奈德 (halcinonide)、鹵米松（halometasone)、鹵潑尼松 (halopredone acetate)、氫可他酉旨（hydrocortamate)、藏基可 體松 '氫基可體松醋酸酯、氫基可體松丁酸酯、氫基可體 松磷酸酯、氫基可體松21-琥珀酸鈉、氫基可體松替布酸酯 (tebutate)、馬潑尼酮（mazipredone)、甲 #^^>(medrysone)、 甲潑尼松（mep re dn is one) '曱基脱氳皮甾醇、莫米松吱喃曱 酸酉旨（mometasone furoate) 、 t白拉米松（paramethasone)、潑 尼卡酯（prednicarbate)、脱氫皮甾醇、脱氫皮甾醇21-二乙 胺基醋酸酯、脱氫皮留醇磷酸鈉、脱氫皮络醇琥珀酸鈉、 脱氫皮甾醇21-間-磺基苯甲酸鈉、脱氫皮甾醇21-硬脂酸乙 醇酸鈉、脱氫皮留醇替布酸酯、脱氫皮留醇21-三甲基醋酸 酯、脱氫可的松、脱氫皮甾醇戊酸酯（prednival)、潑尼立 定（prednylidene)、潑尼立定21-二乙胺基醋酸酯 '替可的松 (tixocortol)、曲安西龍（triamcinolone)、曲安奈德 -112- 私紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝·! —訂---------
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1322154 A7 ---^--- 五、發明說明（11〇) (triamcinolone acetonide)、苯曲安奈德（triamcin〇1〇ne benetomde)和己曲安奈德（triamcinolone hexacetonide)。具 有類似之止痛和消炎性質的在結構上相關的皮質類固醇， 亦企圖包括在該類中。 在其他特定的具體實施例中’本發明針對使用與任一或 多種緩慢作用的抗風濕藥物（SAARDs)或修改疾病之抗風 濕藥物（DMARDS)、前藥酯，或其在藥學上可接受的鹽類 混合（在治療前、治療後或同時治療）之類IL_丨7受體多肽的 激動劑或拮抗劑’及/或類IL- 1 7受體多肽本身，來治療在本 文中提及的疾病和障礙’包括急性和慢性的炎症，像是風 濕性的疾病、移植物對宿主的疾病，以及多發性硬化症。 SAARDs或DMARDS、前藥酯及其在藥學上可接受的鹽類包 括：阿洛銅納（allocupreide sodium)、金諾芬（auranofin)、 金硫葡糖（aurothioglucose)、金硫醋苯胺（aurothioglycanide) 、硫唑嘌呤（azathioprine)、布喳那（brequinar)鈉、布西拉明 (bucillamine)、3-金硫代-2-丙醇-1-磺酸鈣、苯丁酸氮芥 (chlorambucil)、氣喳、氣 丁扎利（cl〇buzarit)、銅克索林 (cuproxoline)、環磷醯胺、環孢靈、氨苯颯（dapsone)、15-脱氧斯普蓋林（deoxyspergualin)、雙醋瑞因（diacerein)、葡 萄糖胺、金鹽類（例如環V»奎（eyeloquine)金鹽、硫經蘋果酸金 鈉、硫代硫酸金鈉）、羥基氣喳、羥基氣喳硫酸酯 '羥基月尿 、凱布宗（kebuzone) '左旋咪唑（levamisole)、氣苯扎利 (lobenzarit)、蜂毒素（meli-ttin)、6-疏基嘌呤、胺甲碟呤、 咪嗤立賓（mizoribine)、黴齡酸嗎琳乙酯（mycophenolate -113- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐) (Π (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 一裝--------訂---------
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1322154
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製(" CzT A7 ---------- 五、發明說明（111) mofetil)、金硫乙酸鈣（my0rai)、氮芥、d·青黴胺、吡醇 (pyridinol)、咪唑類，像是 SKNF86002和 SB203580 ' 雷帕 黴素（rapamycin)、硫醇類、胸腺生成素（thym〇p〇ieUn)和長 春新鹼（vincristine)。具有類似之止痛和消炎性質的在結構 上相關的SAARDs或DMARDs，亦企圖包括在該類中。 在其他特定的具體實施例中，本發明針對使用與任一或 多種C0X2抑制劑、前藥酯，或其在藥學上可接受的鹽類混 合（在治療前、治療後或同時治療）之類IL_17受體多肽的激 動劑或拮抗劑，及/或類IL-17受體多肽本身，來治療在本文 中提及的疾病和障礙，包括急性和慢性的炎症。c〇X2抑制 劑、前藥酯及其在藥學上可接受之鹽類的實例，包括例如 塞jl可西（celecoxib)。具有類似之止痛和消炎性質的在結 構上相關的COX2抑制劑，亦企圖包括在該類中。 在其他特定的具體實施例中，本發明針對使用與任一或 多種抗微生物製劑、前藥酯，或其在藥學上可接受的鹽類 混合（在治療前、治療後或同時治療）之類化_17受體多肽的 激動劑或拮抗劑，及/或類IL_17受體多肽本身，來治療在本 文中提及的疾病和障礙，包括急性和慢性的炎症。抗微生 物製劑包括例如各種類型的青黴素類、頭孢菌素類和其他 点-内醯胺、胺基糖苷類、吡咯類、喹諾酮類、大環内酯類 '利褐黴素類 '四環素類、磺醯胺類、林可沙醯胺 (lmC0samides)和多黏菌素。青黴素類包括但不限於青黴素 G、青黴素V、曱氧西林（methiciuin)、萘夫西林（滅⑴⑷ 、苯唑西林（oxaciUin)、鄰氣青黴素（cl〇xaciuin)、雙氣青 ______-114- 本紙狀_ _家標準（“Μ4規格⑵q χ撕公笼） -裳--------訂---------- f請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 r? 1322154 A7 _____B7__ 五、發明說明（112) 黴素（dicloxacillin)、氟氣西林（floxacillin)、氨芊青黴素、 氨芊青黴素/舒巴坦（sulbactam)、羥氨芊青黴素 (amoxicillin)、經氨爷青黴素/棒酸自旨、海他西林（hetacillin) 、環己青黴素（cyclacillin)、巴卡西林（bacampicillin)、叛爷 西林（carbenicillin)、羧苄青黴素二氫茚酯、替卡西林 (ticarcillin)、替卡西林/棒酸醋、阿洛西林（azlocillin)、美 洛西林（mezlocillin)、培普西林（peperacillin)和美西林那 (mecillinam)。頭抱菌素類和其他/?-内醯胺類包括但不限 於頭孢p塞吩（cephalothin)、頭抱匹林（cephapirin)、頭孢氨 节（cephalexin)、頭抱雷定（cephradine)、頭抱唆林（cefazolin) '頭孢經芊氨（cefadroxil)、頭孢克羅（cefaclor)、頭孢孟多 (cefamandole)、頭抱替坦（cefotetan)、頭抱西丁（cefoxitin) 、頭孢呋新（cefuroxime)、頭孢尼西（cefonicid)、頭孢雷特 (ceforadine)、頭孢克肟（cefixime)、頭孢嘍肟（cefotaxime) 、拉氧頭孢（moxalactam)、頭孢唑肟（ceftizoxime)、頭孢曲 松（cetriaxone)、頭孢喊酮（cefoperazone)、頭抱他定 (ceftazidime)、亞胺培南（imipenem)和氨曲南（aztreonam)。 胺基糖甘類包括但不限於鏈黴素、健大徽素、妥布黴素 (tobramycin)、丁胺卡那黴素（amikacin)、奈替米星 (netilmicin) '康黴素和新黴素。吡咯類包括但不限於氟康 唑（fluconazole)。喳諾酮類包括但不限於莕啶酸（nalidixic acid)、諾氟沙星（norfloxacin)、氟啶酸（enoxacin)、環丙沙 星（ciprofloxacin)、氧氟沙星（〇fl〇xacin)、司氟沙星 (5?31〇0乂&(^11)和替馬沙星以1113〇〇\3(^)。大環内酯類包括 -115- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） w,^4 -------—訂· ------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1322154 κι 五、發明說明（113) 但不限於紅黴素、螺旋黴素（SpiramyCin)和阿齊黴素 (azithromycin)。利福黴素類包括但不限於利福平（rifampin) 。四環素類包括但不限於螺環素（spicycnne)、金黴素 (chlorocycline)、乳莫環素（ci〇m〇CyCnne)、去甲金黴素 (demeclocycline)、去氧環素（de〇XyCyCHne)、胍甲四環素 (guamecycline)、賴甲環素（lymecycline)、曱氣環素 (meclocycline)、美他環素（methaCyC】ine)、米諾環素 (minocycline)、起四環素（〇XytetraCyCHne)、青 ρ底環素 (penimepicycline)、匹哌環素（pipacycHne)、羅利環素 (rolitetracycline)、山環素（saneyCijne)、塞諸環素 (senociclin)和四環素。磺醯胺類包括但不限於磺胺、磺胺 甲基異11 号嗤（sulfamethoxazole)、乙醯磺胺、磺胺嘧啶、磺 胺異气。坐（sulfisoxazole)和同-三曱嘮唑（c〇_trim〇xaz〇le)(三 曱氧苄二氨嘧啶（trimethoprim)/磺胺甲基異噚唑）。林可沙 醯胺類包括但不限於克林達黴素（C1 indamycin)和林可黴素 。多黏菌素類（多肽類）包括但不限於多黏菌素3和粒菌素 (colistin)。 類IL-17受體組合物釦崧甲 治療性组合物亦在本發明的範圍内。這類類比-丨7受體之 醫藥組合物可包括在治療上有效含量的類IL_丨7受體多肽 或類IL-17受體核酸分子，與針對適合其之投藥形式而選出 的在藥學上或在生理學上可接受的調配劑混合。其他的醫 藥組合物可包括在治療上有效含量的一或多種類兀_17受 體選擇性結合劑，與針對適合其之投藥形式而的在 ^------— —訂-----—II (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -116-
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1322154 A7 ------BZ____ 五、發明說明（115 ) 通、二甲醇氨基甲燒（tr〇methamine)、卵辨脂、膽固醇或泰 洛沙泊（tyloxapal))、穩定性促進劑（像是蔗糖或山梨糖醇） '張力促進劑（像是鹼金屬卣化物（較佳的是氣化鈉或鉀）， 或甘露糖醇山梨糖醇）、遞送媒劑、稀釋劑、賦形劑及/或 藥學佐劑。參見 Remington's Pharmaceutical Sciences，第 18 版，A.R. Gennaro編輯，Mack Publishing Company (1990) o 將由熟諸此藝者依據例如想要的投藥途徑、遞送格式和 想要的劑量，來決定最適切的醫藥組合物。參見，例如 Remington's Pharmaceutical Sciences，在前。這類組合物可 影響類IL-17受體分子的物理狀態、穩定性、在活體内的釋 放速率和在活體内的清除速率。 在醫藥組合物中主要的媒劑或載劑，實際上可以是含水 的或不-含水的。例如，適當的媒劑或載劑可以是注射用水 、生理鹽水溶液或人造的腦脊髓液，可能補充有在非經腸 投藥之組合物中常用的其他物質。中性的緩衝生理鹽水戈 與血清白蛋白混合的生理鹽水，是更具代表性的媒劑。其 他代表性的醫藥組合物包括大約pH 7.0-8.5的Tris緩衝溶液 ，或大約pH 4.0-5.5的醋酸緩衝溶液，其可進一步包含山梨 糖醇或適當的取代物。在本發明的一個具體實施例中，可 藉著將具有想要純度等級的選出之組合物與任意的調配齊丨 混合（Remington’s Pharmaceutical Sciences，在前），以冷凍 乾燥餅或含水溶液之形式，製備可供儲存的類IL-17受體多 肽組合物。此外，亦可使用適當的賦形劑，像是薦糖，調 -118- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） II I — --------^« — 1 —--11 f請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) A7 五、發明說明（116 ) 配冷凍乾燥物形式的類IL-17受體多肽產物。 爲了非經腸遞送，可選擇類仄_17受體多肽之醫藥組合物 。另外’亦可爲了吸入或經由消化道遞送，像是口服:來 選擇組合物。彡類在藥學上可接受之組合物的製備，亦在 此項技藝的技術範圍内。 以投藥部位可接受的濃度來提供調配成份。例如，使用 緩衝溶液將該組合物維持在生理學的p Η値或稍低的p Η値 下’通常是在從大約5到大約8的pH値範圍内。 訂
I 在期待非經腸投藥之時，在本發明中使用的治療組合物 可以是供-熱原、非經腸可接受的含水溶液之形式，其在藥 學上可接受的媒劑中，包括想要的類IL_丨7受體分予。特別 適合非經腸注射的媒劑是無菌的蒸餾水，在其中將類il_i7 受體分子調配成無菌的等張溶液，適當地保存。其他製品 可能涉及將想要的分子與諸如可注射之中心體、生物可腐 蝕之顆粒、聚合化合物（像是聚乳酸或聚乙醇酸），或小珠 ’或微脂粒之類的製劑一起調配，其提供經過控制或延遲 釋放的產物，然後可以儲積注射之形式來遞送。亦可使用 透明質酸，且其可能具有在猶環中增進維持期間的效果。 其他導入想要分子的適當方法，包括可植入的藥物遞送裝 置。 亦想像諸如（1)缓慢-釋放之調配物、（2)吸入煙霧或口 服之活性調配物之類的醫藥組合物。通常爲了非經腸投藥 來調配類IL -1 7受體分子的醫藥组合物。這類非經腸投藥的 治療性組合物，通常是以無-熱原、非經腸可接受的含水溶 -119 _本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格(210 X 2^7公釐） 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 A 社 印 製
五、發明說明（117) 液之开=式，其在藥學上可接受的媒劑中，包括想要的類 IL-17丈體分予。類IL_17受體分子的醫藥組合物亦可包括聚 合化合物的顆粒製品，像是聚乳酸、聚乙醇酸等等，或將 孩分子導入微脂粒中。亦可使用透明質酸，且其可能具有 在循環中促進維持期間的效果。 在一個具體實施例中，可將醫藥組合物調配成供吸入用 的。例如，可將類化-17受體分子調配成吸入用的乾粉。亦 可爲了氣溶膠遞送，利用液化的推進劑來調配類乩-丨7受體 多肽或類IL-17受體核酸分子之吸入溶液。在另一個具體實 施例中，可將溶液霧化。在PCT申請案第pCT/US94/〇〇l875 中進一步描述了肺臟投藥，其描述以化學方式修改之蛋白 質的肺臟遞送。 亦期待可口服投與某些調配物。在本發明的—個具體實 施例中，可利用或不利用習慣上在調製固體劑量形式，像 是錠劑和膠囊時所使用的那些載劑，調配以該方式投與的 類IL-17受體分子。例如，可將膠囊設計成在胃腸道中生物 利用性最高，而前-全身降解作用最低之處釋放調配物的活 性部份。可含有額外的製劑，以便促進類IL-]7受體分子的 吸收。亦可使用稀釋劑、香料、低熔點的蠟、植物油、潤 滑劑、懸浮劑、錠劑崩解劑和黏合劑。 其他的醫藥组合物可能涉及在帶有適合製造錠劑之無毒 性賦形劑的混合物中，有效含量的類IL_ 1 7受體分子。藉著 使錠劑溶解於無菌的水中’或其他適當的媒劑中，可製備 單位-劑量形式的溶液。適當的賦形劑包括但不限於惰性稀 -120-本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 x 297公釐） 0^ 1322154 A7 B7 五、發明說明（119 3 = Γ來乾燥之處’可在冷滚乾燥和重建之前或 在..容液；二7法的滅菌作用。可以冷來乾燥形式或 在办及中，儲存非經腸投藥用 ^ ^ AA in yV ,λ ，·· Q物。此外，通常將# ^ g, ^ 安只的各态中，例如靜脈内的 ^或具有可被皮下注射針頭刺穿之塞子的小瓶。 經調配好醫藥組合物，便可以溶液、懸浮液、凝 膠、礼劑、固體或脱水或冷凍乾燥 左六， 7果乾^粉末的形 將其儲 存在滅適的小瓶中。這類調配物可以現成可使用之形式， 或以在投與之前需要重建的（例如冷;東乾燥的）形式儲存。 在特定的具體實施例中，本發明針對產生單—劑量投藥 早位的套組。該套組可分別含有第—個具有脱水蛋白質的 容器’和第二個具有含水調配物的容器。在本發明的範圍 内，亦包括含有隔成一和多個-隔間之預先_裝填的注射筒 (例如液體注射筒和溶解注射筒）的套組。 在治療上待使用之類IL_17受體醫藥組合物的有效含量 ，將依據例如治療的前後關係和目標而定。因此，熟二此 藝者將知曉治療的適當劑量含量，一部份將依據遞送之分 子，將使用該類IL-17受體分子的適應症，投藥的途押，以 及患者的大小（體重 '體表面積或器官的大小）和狀況（年^ 和一般健康狀況）而改變。因此，臨床醫師將滴定劑量，並 修改投藥途挺’以便獲得最佳的治療效果β代表性的劑、 範圍可以從大約0.1微克/公斤至高達大約1〇〇毫克/公斤。 更多’係依據上文提及的因素。在其他的具體實施例中 劑量範圍可從0· 1微克/公斤到高達大約1 00毫克/公斤，。 ，或1 -122- 木紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝 - ------訂·--------
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製r0 丄JH· A7 五、發明說明（120 B7 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製 子數據在通待r之調配物中類，雜分 到達到獲得想=果=:臨床醫師將投與組合物，直 内，以單_劑量、 馬止。因此’可在-段時間 含相同含量與— 。由熟諸此藝者例行地進行適當劑量更詳細 在例仃由他們完成之職務的範圍内。可經由使用適當 量-反應數據，來確定適當的劑量。 ” 醫樂組合物的投藥途徑，係根據已知的方法，例如 、吸入、經由靜脈内、腹腔内、大腦内(實質内）、腦室内 、肌肉内、眼内、動脈内 '門脈内㈣apcrnal)或病灶内 路徑注射或輸液’或藉著持續釋放的系、統，或藉著植入裳 置。在想要之處’可藉著輸液、藉著團塊注射，或藉著衿 液或植入裝置連續地投與該組合物。 則 另外或額外地，亦可經由膜、海綿，或其他已經在其中 吸附或包封想要分子之適當物質的植A，局部投與該组合 物。在使用植入裝置之處，可將該裝置植入任何適當的: 織或器官中，並可經由擴散、按時釋放之團塊，或連續投 藥’或經由套管連續輸液，來遞送想要的分子。 更將知曉可單獨、一起或與其他多肽和醫藥組合物混合 使用類IL· 1 7受體多肽，包括片段 '變體和衍生物。例如， 可依照適合待治療的適應症，與細胞分裂素、生長因子、 123- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公楚） • —1 ^^1 ^^1 m ϋ I I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁}
----訂 ---II Φ 1322154 A7 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製 五、發明說明（121) 抗生素、消炎藥及/或化學治療劑混合使用類IL- 1 7受體多肽 在一些情況下，可能想要以在活體外之方式來使用類 IL -17受體的醫藥組合物。在這類例子中，使已經從患者中 移出的細胞 '組織或器官，先暴露在類IL_丨7受體的醫藥組 合物之下，然後再將該細胞、組織及/或器官移植回該患者 内。 在其他的情況下’可藉著移植某些細胞，來遞送類IL_ i 7 受體多肽’那些細胞業已使用諸如在本文中描述的那些方 法，以遺傳方式設計，以便表現和分泌該多肽。這類細胞 可以是動物或人類的細胞，並可以是自體的、異種的或異 種的。該細胞可視需要爲永存不死的。爲了降低免疫學反 應的改變’可將細胞包膠，以避免周圍組織的浸潤。包膠 的材料通常是生物可相容的、半-滲透性的聚合封入物或膜 ，其容許蛋白質產物（群）的釋放，但防止該細胞被患者的 免疫系統，或被其他來自周圍組織的有害因素破壞。 本發明的其他具體實施例，係關於在活體外產製治療性 多肽，並藉著基因治療或細胞治療來產製和遞送該治療性 多肽的細胞和方法（例如同種重組作用，及/或其他的重組 產製方法）兩者。可使用同種或其他的重組方法來修改含有 正常無聲轉錄的類IL-17受體基因，或表現-低下之基因的 細胞，並藉此產生表現出在治療上有效含量之類IL· 1 7受體 多肽的細胞。 更想像藉著同種重組作用，或利用重组產製方法，其利 ------------裝--------訂----- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 鲁 -124- 丄义2154 A7 B7 五、發明說明（122) 用導入業已含有編碼類IL-1 7受體多肤之DNA的細胞内的 控制要素’可在活體外或在活體内產製類IL-17受體多肽。 例如，同種重組作用最初是爲了在具有轉綠活性的基因中 瞒準基因，以便誘發或修正突變而發展出的技術。 (Kucherlapati, Prog, in Nucl. Acid Res. & Mol. Biol., 36 : 3 〇 1，19 8 9)。發展基本的技術，作爲將特定突變導入哺乳動 物基因組之特定區域内（Thomas等人，Cell,生£ : 419-428, 1986 ; Thomas 和 Capecchi，Cell, 5J_ ： 503-5 12, 1987 ; Doetschman等人，pr〇c· Natl. Acad. Sci.，85_ ： 8583-8587, 1988)，或在有缺陷的基因内修正特定突變的方法 (Doetschman等人，Nature，330 ： 576-578，1987)。在美國專 利第5,272,071號（歐洲專利9193〇51號、歐洲專利出版物第 505500 號；PCT/US90/07642、國際出版物第 w〇 91/09955 號）中描述了代表性的同種重组技術。 經由同種重組作用，可藉著將其與瞄準DNA附接，指揮 待插入基因組内的DNA序列至感興趣基因的特定區域。瞄 準DNA是與基因組DNA之該區互補的（同種的）核苷酸序列 。在DNA複製的過程中，使與基因組特定區互補的小片瞄 準DNA與親代股接觸。已經插入細胞内&DNa進行雜交， 消 爲Π的特性，並因此經由共享的同種區，與其他片的 内源DNA重組。如果該互補股與含有突變或不同序列，或 額外核苷酸的寡核甞酸附接，則由於重組的結果，也將它 併入新合成的股中。由於校對的功能，可能以dna的新序 列做爲模板。因此，將轉移的〇1^八併入基因組中。 -125- 2975^7 f ^纸張尺度剌τ關家辟（CNS)A4__ (21_Q- 1322154 A7 五 發明說明（123 ) 與那些瞄準DNA之斷片附垃 呵巧附接的，疋可與類IL-17受體多肽 之表現產生父互作用或和？制亡沾·Λ , t i制匕的DN A區域，例如側面序歹〇 。例如，在足以影響編碼相要 。I足涌1L-1 7梵體多肽的〇ΝΑ之 轉錄作用的附近和方位，將户欠叙耸m 將啓動基因/促進子要素、抑制者 基因，或外源的轉錄調節要去护人相φ、^、 叫即要素插入想要心宿主細胞的基因 .且中#制要素控制了在宿主細胞基因组中出現的部 份。因此，可不藉編碼魏-17受體基因本身之dna的轉移 感染’而寧可藉著使用與DNA調節斷片偶聯之瞒準dna (含有與感興趣之内源基因同種的區域），該DNA調節斷片 •供内源的基因序列，帶右·5|*初φ相了 了 一 η』咿百可3忍出類IL-Π受體基因轉綠的 信號，而達成想要之類IL“7受體多肽的表現。 在代表性的方法中，藉著導入至少包括調節序列、表現 序列和接合捐贈者位置的DNA，經由在細胞基因组内，在 預先選擇位置處的同種重組作用，改變了想要之標靶基因 在細胞中的表現（也就是想要的内源細胞基因）。事實上， 以這類方式將這些成份導入染色體（基因組的）DNA内，結 果產生了新的轉綠單位（其中出現在該DNA構築體中的調 節序列、表現序列和接合捐贈者位置，以可操作之方式與 内源基因連接）。由於將這些成份導入染色體DNA内的結果 ，改變了想要之内源基因的表現。 改變的基因表現，如同在本文中的描述，包括活化（或誘 發表現）正常在獲得它的細胞中是無聲（未表現）的基因，以 及增加在獲得它的細胞中並未以生理學上顯著的程度表現 之基因的表現。具體實施例更包括改變調節或誘導的模式 <請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ----訂-------- 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製 -126 1522154 A7 B7 五、發明說明（124) ，使其與在獲得它的細胞中發生之調節或誘導的模式不同 ，並降低（包括排除）在獲得它的細胞中表現之基因的表現 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 零裝------ (請先間讀背面之注意事項再填寫本頁) 鲁 一種藉著使用同種重组作用，來增加或引起從細胞内源 之類IL-17受體基因中產製類匕_17受體多肽的方法，涉及首 先使用同種重組作用，將得自位置_專一性之重組系統的重 組序列（例如 Cre/loxP，FLp/FRT)(SaUer，Current Opinion In Biotechnology, 5_ ： 521-527, 1994 ; Sauer, Methods In Enzymology，组：890_900, 1993)，放在細胞的内源基因組 之類IL-17受體多肽密碼區的上游（也就是5ι)。將含有與剛 好放在基因組類IL-1 7受體多肽密碼區上游之位置同種的 重組位置之為體’連同適當的重組酶（rec〇mbinase)酵素一 起導入經過修改的細胞株中。該重組酶引起質體經由該質 體的重組位置’整合到在該細胞株中，剛好位在基因組類 IL-17受體多肽密碼區之上游的重組位置内（Baub〇nis* Sauer, Nucleic Acids Res., 21 ： 2025-2029,1993 ; O'Gorman 等人，Science，Hi: 135 1-1355，1991)。已知可增加轉綠的 任何側面序列（例如促進子/啓動基因、插入序列、轉譯促 進子）’如果在該質體中位在適當之處，便將以這類方式整 合’產生新的或經過修改的轉錄單位，導致從細胞内源的 類IL-17受體基因中’重新或增加類IL-17受體多肽的產製。 進一步的方法使用其中已經將位置專一性的重組序列， 正好放在細胞之内源基因組的類IL· 1 7受體多肽密碼區之 上游的細胞株，該方法使用同種重組作用，在細胞株之基 127- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（2〗〇 X 297公釐） 1322154 A7 發明說明（125) 因組的別處，導入第二個重組位置。然後將適當的重組酶 酵素導入兩個-重組-位置的細胞株内，謗發重組的事件（删 除、倒位和移位）（Sauer，Current 〇pini〇n In Bi〇techn〇1〇訂 在削，1994 ’ Sauer, Methods In Enzymology，在前，1993) ’其將產生新的或經過修改的轉錄單位，導致從細胞内源 的類IL-17焚體基因中，重新或增加類仏—^受體多肽的產製 從細胞内源的類IL_1 7受體基因中，增加或誘發類匕」^ 文體多肽表現的其他方法，涉及增加或誘發基因或基因群 (例如轉錄因子）的表現，及/或降低基因或基因群（例如轉綠 阻遏物）的表現，以此方式導致從細胞内源的類IL_ 1 7受體 基因中’重新或增加類IL-1 7受體多肽的產製。該方法包括 將非-天然存在的多肽（例如包括與轉綠因子功能部位融合 (位置專一性的DNA結合功能部位的多肽）導入細胞内，而 得以產生從細胞内源的類比—丨7受體基因中，重新或增加類 IL_ 1 7受體多肽之產製的結果。 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 作 社 本發明更關於在改變標靶基因之表現的方法中，有用的 DNA構築體。在某些具體實施例中，代表性的DNA構築體 包括：（a)—或多個瞄準序列；（b)調節序列；（c)表現序列和 (d)不成對的接合-捐贈者位置。在DNA構築體中的瞄準序列 ’指揮要素（a)-(d)整合至細胞中的標靶基因内，使得要素 (b)-(d)以可操作之方式與内源標靶基因的序列連接。在另 一個具體實施例中，DN A構築體包括：（a) —或多個瞄準序 列’（b)調節序列，（c)表現序列，（d)接合-捐贈者位置，（e) 印 製 ____ -128- 本紙張尺度適用中明冢標準（cns)a4規格⑽χ 297公爱 1 丄犯154 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 五、發明說明（126) 插入序列和（f)接合-接受者位置，其中該瞄準序列指揮要素 u)-(f)的整合作用，使得要素（b)_(f)以可操作之方式與内源 的基因連接。瞄準序列是與在細胞之染色體dna中，預先 選出將發生同種重組作用之位置同種的。在該構築體中， 表現序列通常在調節序列的3,，而接合_捐贈者位置是在表 現序列的3 ·。 如果特定基因的序列是已知的，像是編碼在本文中提供 之類IL-17受體多肽的核酸序列，便可合成或另行獲得與選 出之基因區互補的一片DNA，像是藉著在與感興趣之區域 結合的特定認知部位處’天然DNA的適當限制。這一片在 插入細胞内時擔任瞄準序列（群），並將與其在基因組内同 種的區域雜交。如果在.DNA複製時發生雜交作用，則這片 DNA及任何附接於其上的額外序列，將擔任岡崎（〇kazaki) 片段，並將併入新合成的DNA後代股内。因此，本發明包 括可用來做爲瞄準序列之編碼類IL-1 7受體多肽的核菩酸。 亦企圖包括類IL-1 7受體多肽的細胞治療，例如植入產生 類IL· 1 7受體多肽的細胞。該具體實施例涉及植入能夠合成 並分泌生物活性形式之類IL-1 7受體多肽的細胞。這類產製 類IL-1 7受體多肽的細胞，可以是屬於類IL-1 7受體多肤之天 然生產者的細胞，或可以是已經藉著以编碼想要之類IL-1 7 受體多肽的基因，或以增加類IL-17受體多肽表現之基因轉 化，增加其產生類IL -1 7受體多肽之能力的重組細胞。可藉 著適合用來遞送基因，並促進其表現和分泌的載體，來完 成這類修改。爲了使在投與類IL-17受體多肽之患者中可能 -129- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） --------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) % 1322154 A7
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1322154 Α7 ____ Β7 五、發明說明（128)
Aebischer等人的PCT申請案第PCT/US91/00157號中。亦參 見 Aebischer 等人的 PCT 申請案第 PCT/US91/00155 號，Winn 等人，Exper. Neurol·，m: 322-329 (1991) ; Aebischer等 人，Exper. Neurol” 1_1J_ ： 269-275 (1 99 1);和 Tresco等人， ASAIO 3_8 ： 17-23 (1992) 〇 亦想像遞送類IL-17受體多肽的在活體内和在活體外之 基因治療。基因治療技術的一個實例，是使用編碼類IL_ j 7 受體多肽的類IL-1 7受體基因（基因組DNA、cDNA及/或合成 的DNA)，其以可操作之方式與組成的或可誘導的啓動基因 連接’形成”基因治療之DN A構築體”。啓動基因可以是與 内源的類IL -1 7受體基因同種或異種的，其限制條件爲它在 將插入該構築體的細胞或組織類型中，是具有活性的。基 因治療之DN A構築體的其他成份，可視需要包括爲了位置_ 專一性的整合作用而設計的DNA分子（例如可用於同種重 组作用的内源序列）、組織-專一性的啓動基因、促進子（群） 或無聲序列（silencer)(群）、能夠提供勝過親代細胞之選擇 性優勢的DNA分子、可用來做爲標記以便確認轉化細胞的 DNA分子、陰性選擇系統、細胞專一性結合劑（像是例如爲 了瞄準細胞）、細胞-專一性的内化因子、和促進由載體表 現的轉錄因子，以及使載體能夠產製的因子。 & 然後可使用病毒或非-病毒的載體，將基因治療之dna構 築體導入細胞内（在活體外或在活體内）。— 观令入基因治 療之DNA構築體的方法，是藉著如同在本 +人τ描述的病毒 載體。某些載體，像是逆轉綠病毒載體，會將DNa構築體 -131 - 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 x 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
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五、發明說明（129) 认送至細胞的染色體DNA内，並將該基因整合到染色體 DNA内。其他的載體將具有附加體之功能，並將基因治療 之DNA構築體維持在細胞質内。 ’' 在另外的具體實施例中，爲了在標靶細胞中控制類化_! 7 受體基因的表現，可包含調節要素。這類要素可反映適當 的效應物而打開。以此方式便可在想要之時表現治療性的 多肽。一種傳統的控制方法涉及使用小分子的二聚體或雷
帕洛體（rapalog)(如同在 w〇 9641865 (P(：t/us96/〇99486) ;W0 9731898 (PCT/US97/03 137)和 W0 9731899 (PCT/US 95/03 1 57)中的描述），二聚嵌合型蛋白質，其含有小分子_ 結合功能部位和能夠發動生物加工的功能部位，像是dna_ 結合蛋白質或轉綠激活蛋白質。可使用蛋白質的二聚作用 來發動轉殖基因的轉錄作用。 另一種調節技術’使用以凝集物或集群之形式，將從感 興趣之基因中表現的蛋白質保存在細胞内的方法。以融合 蛋白質之形式來表現感興趣的基因，其包括有條件的凝集 功能部位，導致已凝集的蛋白質保留在内質網中。被儲存 的蛋白質在細胞中是穩定和無活性的。然而，可藉著投與 藥物（例如小分子的配體）釋放該蛋白質，其移除有條件的 凝集功能部位’並藉此專一地打破分開該凝集物或集群， 而得以從細胞中分泌該蛋白質。參見Science 287. ： 816-817 和 826-830 (2000)。 其他適當的控制方法或基因開關，包括但不限於下列的 系統。使用米非司酮（Mifepristone)(RU486)做爲黃體酮的拮 _____ -132- 本紙張尺度適用中圉國家標準（CNS)A4規格⑵Q x 297 )
1322154 五、發明說明（13〇) 抗劑。經過修改之普體酮典鄉 '、體钔又恤配體-結合功能部位與黃體酮 括抗劑的結合，藉菩开;？击石他# & m 、 楮耆形成兩個轉錄因子的二聚體，然後越 過進入細胞核内與DNA έ士人，品你，工λ* μ 口，而激活轉錄作用。修改該配 體-結合功能部位，排除了香I#盘；姑κ _ 併你〗又與天然配體結合的能力。經 過修改的類固醇荷爾蒙香辦> $ & ^ j〗豕又糸統，進一步描述在美國專利 第 5,364,791 號、W0 964091 1和 W0 9710337 中。 另一種控制系統使用蛻皮激素（果蠅類固醇荷爾蒙），其 結合並激活蛻皮激素受體（細胞質之受體）。然後該受體移 位至核，與專一的DNA反應要素（得自蜆皮激素_反應性基 因的啓動基因）結合。蛻皮激素受體包括轉活化功能部位 / D N A -結合功能部位/發動轉錄的配體·結合功能部位。在美 國專利第 5,514,578 號；W0 9738U7; W〇 9637609，·和 w〇 93 03 1 62中進一步描述了蛻皮激素系統。 其他的控制方法使用正的四環素-可控制轉活化劑 (transactivator)。該系統涉及與激活轉綠作用之多肽連接的 突變tet阻遏物蛋白質DNA-結合功能部位（突變的tet R_4胺 基酸改變’其導致逆向调節四環素的轉活化劑蛋白質，也 就是説’其在四環素的存在下與tet操縱基因結合）。在美國 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 專利第5,464,758號、5,650,298號和5,654,168號中描述了這 類系統。 在 Innovir Laboratories Inc·的美國專利第 5,741，679 號和 5,834,186號中描述了其他的表現控制系統和核酸構築體。 可經由類IL-17受體核酸分子的局部注射，或藉著其他適 當之病毒或非-病毒的遞送載體’藉著將编碼類IL-17受體 -133- 本纸張尺度適用中國國家標準（CIsJS)A4規格（210 x 297公釐） η 1322154 A7
五、發明說明（131 ) 多肽的基因導入細胞内，完成在活體内的基因治療。Hefti, Neurobiology’il: 1418-1435 (1994)。例如，可在與腺有關 的病毒（AAV)載體内包含編碼類IL_17受體多肽的核酸分予 ’以便遞送至標靶細胞（例如j〇hns〇n，國際出版物第w〇 95/34670號；國際申請案第…丁川““”丨”號）。重組的 AAV基因組通常含有位在編碼類IL_17受體多肽之DNA序 列侧面的AAV逆向終端重覆段，其以可操作之方式與具有 功能的啓動基因和聚腺甞酸化作用序列連接。 另一種適當的病毒載體，包括但不限於逆轉綠病毒、腺 病毒、單純癌療病毒、慢病毒 '肝炎病毒、微小病毒、乳 頭狀瘤多瘤空泡化病毒、痘病毒'α病毒、冠狀病毒、桿 形病毒、副黏液病毒和乳頭狀瘤病毒載體。美國專利第 5,672,344號描述了在活體内病毒-調節之基因運送系統，其 涉及重組的趨神經之HSV-1載體。美國專利第5,399,346號 提供了加工處理的實例，其藉著遞送已經在活體外處理， 插入編碼治療性蛋白質之D Ν Α斷片的人類細胞，提供串者 治療性蛋白質。其他實行基因治療技術的方法和材料，描 述在美國專利第5,63 1,236號，其涉及腺病毒載體；美國專 利第5,672,5 10號，其涉及逆轉綠病毒載體；以及美國專利 第5，635,399號，其涉及表現細胞分裂素之逆轉綠病毒載體 非病毒的遞送方法，包括但不限於微脂粒-調節之運送 裸露的DNA遞送（直接注射）、受體-調郎的運送（配㈣a 複合體）、電穿透作用、磷酸鈣沉澱法和微顆粒撞擊（例令 -134- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐）
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經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製 9? 1322154 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 五、發明說明（132) 基因槍）。基因治療之材料和方法，亦可包括使用可誘導的 啓動基因、組織-專一性的促進子-啓動基因、爲了位置-專 一性之整合作用而設計的DNA序列、能夠提供勝過親代細 胞之選擇性優勢的DN A序列、確認轉化細胞之標記、陰性 的選擇系統’以及表現控制系統（安全性測量）、細胞-專一 性的結合劑（爲了瞄準細胞）、細胞-專一性的内化因子，和 促進由載體表現的轉錄因子，以及載體製造的方法。這類 實行基因治療技術的額外方法和材料，描述在美國專利第 4,970,154號，其涉及電穿透技術；W0 96/40958，其涉及 核配體；美國專利第5,679,559號，描述基因遞送之含有脂 蛋白的系統；美國專利第5,676,954號，其涉及微脂粒載劑 ;美國專利第5,593,875號，係關於磷酸鈣轉移感染的方法 ;以及美國專利第4,945,050號，其中以藉此使顆粒貫穿細 胞表面並併入細胞内部之速度，在細胞中推動生物活性顆 粒的方法。 亦企圖使類IL-17受體之基因治療或細胞治療，更包括在 相同或不同的細胞（群）中，遞送一或多個額外的多肽（群） 。可將這類細胞分別導入患者中，或可在單一的可植入裝 置中含有這些細胞，像是上述的包膠膜，或可藉著病毒載 體分別修改這些細胞。 在細胞中經由基因治療來增加内源之類IL-1 7受體多肽 表現的方法，是將一或多個促進子要素插入類IL-1 7受體多 肽的啓動基因中，促進子要素（群）在該處可能擔任増加類 IL· 17受體基因之轉錄活性的職務。將以想要在其中激活該 -135- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS〉A4規格（210 X 297公釐）
五、發明說明（133) 基因（群）的組織爲基礎，來選擇所使用的促進子要素（群） ’已知促進子要素在將選出的组織中賦與啓動基因活化。 例如，若要在T細胞中"打開u编碼類化_17受體多肽的基因 ，則可使用lek啓動基因促進子要素。在此，可使用標準選 殖技術，將欲加入之轉綠要素有功能的部份插入含有類 IL-17受體多肽啓動基因的DNA片段中（並可視需要插入載 體及/或5’及/或3’側面序列（群）内）。然後可在活體外或在活 體内，將孩構築體，稱爲，，同種重組之構築體"導入想要的 細胞内。 亦可使用基因治療，藉著修改内源啓動基因（群）的核甞 酸序列，降低類IL-17觉體多肽的表現。通常經由同種重组 的方法來完成這類修改。例如，可設計含有全部或一部份 就失活作用選出之類比-17受體基因（群）之啓動基因的dna 刀予，以便移除並/或置換調節轉錄作用之啓動基因的碎片 。例如，可使用標準的分子生物學技術，刪除啓動基因之 轉錄活化劑的TATA盒子及/或結合位置；這類刪除可抑制 啓動基因的活性，藉此抑制相對應之類IL_丨7受體基因的轉 綠。在啓動基因中刪除TATA盒子或轉錄活化劑結合位置， 可藉著（從與待調節之類化_17受體基因（群）相同或相關的 物種中）產生包括全部或相關部份之類化·〗？受體多肽户欠動 基因（群）的DNA構築體來完成，其中經由一或多個核^酸 的取代、刪除及/或插入，使一或多個TATA盒予及/或轉錄 活化劑結合位置的核苷酸產生突變。結果，盒子及/ 或活化劑結合位置具有降低之活性，或變成完全失活的。 A7 五、發明說明（134) 該構築體，通常亦將含有至少大約5〇〇個鹼基的麗，相當 於與已經修改之啓動基因斷片相鄰、天㈣（内源的）5，和3, DNA序列。可直接或經由如同在本文中描述之病毒載體， 將該構築體導入適當的細胞内(在活體外或在活體内）。通 系’將構築體整合到細胞之基因組DNA内的作用，將經由 同種重組作用’其中在啓動基因構築體中的51和3, dna序 列’可經由與内源染色體DNA的雜交作用，協助整合經過 修改的啓動基因區。 鱼ILiJJ受體核醢釦容肽的頦外 可使用本發明之核酸分子（包括不是它自己、編碼具有生 物活性之多肽的那些），來描繪類江_17受體基因和相關基 因在染色體上的位置圖。可藉著此項技藝中已知的技術進 行作圖，像是PCR擴大作用和就地雜交作用。 可在診斷測定中，使用類化」？受體核酸分子（包括不是 Έ自己、編碼具有生物活性之多肽的那些），作爲雜交探針 ，定性或定量地測試在哺乳動物组織或體液試樣中，類 IL-17受體DNA或相對應之rna的存在。 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製 亦可使用其中想要抑制一或多個類IL_ 1 7受體多肽之舌 性的其他方法。可藉著與表現控制序列（形成三股螺旋）戈 類IL-17受體mRNA互補並與其雜交的核酸分予，來完 類抑制作用。例如，可將具有與所選出之類IL_17 ^ (群）至少一邵份互補之序列的反義DNA或RNA分子，導入 細胞内。可藉著可利用的技術，使用在本文中揭示之: IL-I 7丈體多肽的序列來設計反義探針。通常，這 啤久義分 ______-137- 本纸張尺度適用中國圉家標準(CNS)A4 ϋ2ι〇 x 297公]-
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1322154 A7 -------------. 五、發明說明（135) 子將分別與每個選出之類IL-17受體基因的起始位置（5•末 端）互補。當該反羲分子與相對應之類比_17受體mRNA雜交 時，便阻止或降低了該mRNA的轉譯。反義抑制劑提供了 有關於在細胞或生物中減少或缺乏類IL-17受體多肽的資 訊0 另外，可使用基因治療來創造一或多個類IL·丨7受體多肽 的負面優勢抑制劑。在該狀況下，可製備編碼每個^出之 類IL-17受體多肽之突變種多肽的DNA，並使用如同在本文 中描述的病毒或非-病毒方法，將其導入患者的細胞内。通 常將這類突變種，分別設計成在其生物學角色上，與内源 的多肽競爭。 ’、 此外，類IL-17受體多肽，無論是否具有生物活性，均可 用來作爲免疫原，也就是該多肽含有至少一個可使對抗它 的抗體升高之抗原決定位。可爲了在活體内和在活體外的 诊斷目的’使用與類IL-1 7受體多肽結合的選擇性結合劑 (如同在本文中的描述）’包括但不限於在體液或細胞試樣 中，使用已標示之形式來檢測類IL-1 7受體多肽的存在。亦 可使用抗體來預防、治療或診斷許多疾病和障礙，包括在 本文中提及的那些。抗體可與類IL-17受體多肽結合，而得 以減少或阻斷至少一種類IL-17受體多肽的活性特徵，咬可 與該多肽結合，而增加至少一種類IL-1 7受體多肽的活性特 徵（包括増加類IL-17受體多肽的藥物動力學）。 實例1 撰殖第一個類IL-17受體多觖 | 裝--------訂--------k.· (請先閱讀背面之注意$項再填寫本頁) Ψ -138-
五、發明說明（136) ,kAmgenesis資料庫中確認出477個鹼基對的EST序列（稱 爲 zhgb-aa287951")。然後定出 zhgb aa28795 】的 1392個鹼 基對之全長核铝酸序列。進行PCR’筛選多個人類cDNA庫 如下製備人類cDNA庫：使用標準RNA萃取程序從各種人 類组織中萃取總RNA，並使用熟諳此藝者已知的標準程序 ，处，玄總RNA中選出聚_A+ RNA。使用在cDNA合成和質體 選殖套組之Superscript質體系統（Gibc〇 BRL，―， ockville，MD)手册中的程序，或使用其他熟諳此藝者已知 的適當程序，從眾聚-A+ RNA中合成隨機誘發或寡（dT)誘 發之cDNA。以適當之限制酵素消化所得的cDNA，產生黏 性〇，幫助與選殖載體連接。將該經過消化的cDNA連接到 已經利用適當之限制酵素消化的pSp〇RT i選殖載體内，或 熟請此藝者已知的其他適當載體内。使用此項技藝中已知 的標準技術，將連接產物轉化至大腸桿菌内，並依據所使 用的特定選殖載體，在含有氨笮青黴素、四環素、康黴素 或氣黴素的細菌培養盤上選擇轉化物。cDNA庫包括所有或 這些轉化物的亞組。 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 社 印 製 使用從作爲模板之陽性庫來製備的質體Dnas，使用如下 的觸地草案，完成5·-和3，-末端兩者的RACE。簡言之，p(：R 條件如下：94°C 30秒；94°C 5秒和72Ό 2分鐘的5次循環 ，94 C 5秒和70 C 2分鐘的5次循環；94°C 5秒和68°C 2 分鐘30秒的25次循環；接著是72。(： 7分鐘的最後延伸，並 保持在4。(：下。該反應使用每個cdna庫各50毫微克，每種 引予各10微微莫耳，200 μΜ的dNTP's(終濃度），以及在5〇 -139- X 297公釐） 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 1322154 A7 _B7_ 五、發明說明（137) 微升終體積中lx濃度的Clontech's Advantage-HF2 cDNA聚 合酶混合物（目錄# ΚΙ 914-1)。對主要的RACE產物進行巢式 PCR反應。然後繼代選殖最後的PCR產物，並定出其核#酸 序歹|j。使用PCR-衍生之DNA片段作爲探針，篩選cDNA庫 ，並對該基因選殖cDNA。在7個陽性庫上，使用PCR進行 5'RACE和3'RACE反應，使用觸地草案。5'RACE引子，使 用基因專一性引子 2429-59 (5’-GCA GAC ACT GAG AGC ATT GTA ATC-3·;序列識別8號）和庫載體（pCMV-SPORT) 引子 1916-83 (5'_GGC TCG TAT GTT GTG TGGAAT TGT GAG CG-3’ ；序列識別9號）。3'RACE引子，使用基因專一 性引子 2429-56 (5'-AGG ATC AAA ACT TTC TTT TCT 八(：-3';序列識別10號）和庫載體引子1918-80(5^丁00八八0 GCG ATT AAG TTG GGT AACGCC AG-31 ;序列識別 11 號） 〇 PCR條件與上述的相同。對上文的實例進行巢式PCR反應 ，使用5微升第一輪PCR 5'和3’ RACE產物的1 : 50稀釋，巢 式基因專一性引子和巢式載體引子各10微微莫耳。關於5'-巢式RACE，基因專一性引子和載體引子分別爲5'-GCC GAC GGG GAC GTG GAT GAA C-3，（序列識別 12號）和 5，-CAT GAT TAC GCC AAG CTC TAA TAC GAC TC-3'(序 列識別13號）。關於3'-巢式RACE，引子分別爲Y-CTTCGC CGA GTG CCT GTGCAG-3’（序列 ΐ我別 14號）和 5'-TCA CGA CGT TGT AAA ACG ACG GCC AGTG-3'(序列識另 |J 15號）。 剩餘之試劑和PCR反應草案與在主要RACE反應中所使用 -140- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（2〗0 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意^^再填寫本頁) -裝--------訂-------- % 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1322154 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（138 ) 的那些相同。 在1%TBE瓊脂糖凝膠上，以5伏特/公分對10微升得自巢 式RACE之終產物執行電泳。從凝膠上分離徹底定義的單一 譜帶，並使用Qiagen凝膠萃取套組（目錄#28704)純化，並接 受定序。 實例2 選殖第二和第三個類IL_ 1 7受體同功裀 爲了選殖類IL-1 7受體分子的第二和第三個同功型，使用 兩個新的基因專一性引子，對陽性庫進行更進—步的PCR 反應。這些引子如下：2469-50 (5'-GCG ATG TCG CTC GTGCTG CTA AG-3，；序列識別 16 號）和 2469-54(5，-GCA GCC TGG TGA GGT GAA ATT CAC-3,；序列識別 17號）。 在這些反應中使用的PCR條件如下：94°C 2分鐘；94°C 30 秒，66°C 3〇秒和72°C 45秒的35次循環；接著是72°C 7分 鐘的最後延伸，並保持在4°C下。該反應使用每個cDNA庫 各50毫微克，每種引子各10微微莫耳，200 μΜ的dNTP's (終濃度），以及在50微升終體積中Ιχ濃度的Clontech's Advantage-HF2 cDNA聚合酶混合物（目錄# K1914-1)。 在1% TBE瓊脂糖凝膠上，以5伏特/公分對10微升產物執 行電泳。從凝膠上分離徹底定義的單一譜帶，並使用Qiagen 凝膠萃取套組（目錄#28704)純化，並接受定序。 會例3 mRNA在不同組镟中的出現和分布 使用PCR，篩選藉著使用引子2429-56和2429-59各2.5微 -141 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）
1322154 A7 B7 五、發明說明（139) 微莫耳，以及50毫微克庫cDNA(現成的pCR小珠Am er sham Pharmacia Biotech目錄#27-9553)製備之77個人類組織庫的 名單。PCR條件爲94°C 2分鐘；接著是94°C 30秒，66°C 30 秒和72°C 45秒的3 5次循環；72°C 7分鐘的最後延伸，並 保持在4°C下。在40個具有不同信號強度的來源中，確認出 440個鹼基對的譜帶。結果如下： 組織來源 表現程度 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 T/ 胎兒胰臟 胎兒頭皮 胎兒膀胱 大腦 腦橋/髓質 (中腦）LNV塊10 淋巴細胞株 前列腺腫瘤T1175 前列腺腫瘤T1940 結腸腫瘤T24 卵巢腫瘤T22 結腸腫瘤T25 胎兒胃 胎兒膀胱 胎兒腎臟 胎兒肝臟 胎兒卵巢 -142- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) + +- n ϋ I tn 1
1322154 A7 B7 五、發明說明（14〇) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 胎兒股骨 胎兒顱頂 胎兒腸系膜 胎兒脾臟 胎兒肺臟 胎兒心臟 前腦 睪丸 氣管 骨骼（附肢） 脊椎 視丘 (中腦）LNV塊10 乳房腫瘤T1485 乳房腫瘤T1543 卵巢腫瘤T23 肺臟腫瘤T27 成人T -細胞 細胞質之乳癌細胞株 胎兒胸腺 胎盤 子宮 標準化之胎兒組織 + + + + (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) n =TnJI n n I · -143 表紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1322154 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（141) 實例4 產製類IL-17受體多肽 A.細菌表現 使用PCR擴大編碼類IL-17受體多肽的模板DNA序列，使 用相當於該序列之5'和y末端的引子。可修改經過擴大之 DNA產物，使其含有限制酵素位置，而容許插入表現載體 内。以凝膠純化PCR產物，並使用標準重組dna方法學， 將其插入表現載體内。以BamHI和Ndel消化代表性的載體 ，像是pAMG21 (ATCC編號98113)，其含有lux啓動基因和 編碼康黴素抗藥性的基因，以便定向選殖被插入之DNA。 藉著電穿透作用，將連接混合物轉化至大腸桿菌宿主品系 内’並就康黴素抗藥性來選擇轉化物。分離得自所選出之 菌落的質體DNA，並使其進行DNA定序，以便證實插入物 的存在。 在誘導之前，將已經轉化的宿主細胞培養在3〇°C下，含 有30毫克/毫升康黴素之2xYT培養基中。藉著加入n_(3-氧 代己醯基）-dl-高絲胺酸内酯至終濃度30毫微克/毫升，接著 在30°C或3 7°C下培養6小時，來誘導基因表現。藉著離心培 養物，再懸浮並溶解細菌的小球，然後藉著SDS-聚丙晞酿 胺凝膠電泳分析宿主細胞之蛋白質，來評估類IL-1 7受體多 肽的表現。 如下純化含有類IL-1 7受體多肽的包涵體。藉著離心使細 菌細胞形成小球，並再懸浮於水中。藉著超音波振盪使知 胞懸浮液溶解，並藉著以195,000 xg離心5至10分鐘，使其 -144 私紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） —裳------丨訂----I I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1322154 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（142) 形成小球。拋棄上清液，並沖洗小球，然後移至均質器中 。在5毫升Percoll溶液（75%液態Percoll/0.15MNaCl)中將小 球均質化，直到均一地懸浮爲止，然後稀釋，並以2 1，600 xg 離心30分鐘。回收並集合含有包涵體的梯度溶離份。藉著 SDS-PAGE分析經過分離的包涵體。 從凝膠中切開在SDS聚丙烯醯胺凝膠上，相當於大腸桿 菌·產製之類IL-1 7受體多肽的單一譜帶，並基本上按照 Matsudaira等人，J.Biol. Chem. 262 : 10-35 (1987)的描述， 定出N-終端的胺基酸序列。 B _哺乳動物細胞產製 使用PCR擴大編碼類IL-17受體多肽的模板DNA序列，使 用相當於該序列之5,和3,末端的引子。在上文描述了相當於 5'和3’末端的引子序列。可修改經過擴大的DNA產物，使其 含有限制酵素位置，而容許插入表現載體内。以凝膠純化 PCR產物，並使用標準重組DNA方法學，將其插入表現載 體内。可使用代表性的表現載體pCEP4 (Invitrogen, Carisbad，CA)，其含有愛氏頓病毒之複製起點，在 293-EBNA-1(愛氏頓病毒核抗原）細胞中表現類il-17受體 。將經過擴大和凝膠純化的PCR產物連接到pCEP4載體内， 並脂染至293-EBNA細胞中。在1〇〇毫克/毫升潮黴素中選擇 經過轉移感染的細胞，並使所得的藥物-抗藥性培養物生長 至匯合。然後在不含血清的培養基中培養該細胞72小時。 移除有條件的培養基，並藉著SDS-PAGE分析類IL-17受體 蛋白質多肽的表現。 -145- 本纸張尺度遇用中國國家標準（CNS)A4規格（2丨〇 χ 297公釐） 11. 裝--------訂---- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
五、 發明說明（144) J 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 丄 黃嘌呤、胺基蝶呤和胸腺核苷）中培養。在選擇之後，從每 個含有融合瘤的孔中取得組織培養的上清液，並藉著 ELISA測試抗-類IL-17受體抗體的產製。 亦可使用另一種獲得抗-類IL-17受體抗體的程序，像是 爲了產製人類抗體，免疫接種藏有人類4位置的基因轉殖 老鼠，以及篩選合成的抗體庫，像是藉著抗體可變功能部 位之突變生成作用產生的那些。 貫例6 重組的人類類IL-17受體-Fc融合蛋白質： 欲製備類IL-17受體-Fc融合蛋白質，將人類類IL-π受體 多肽之細胞外功能部位（IL-17RB-2的胺基酸#1-292， IL-17RB-3之胺基酸# 1 -350，分別爲序列識別2號和序列識 別5號）與人類IgGl重鏈恆定區（Fc)融合。利用Notl和Xhol 位置，將在其5'末端帶有Notl限制位置，並在其3,末端帶有 Xhol限制位置之編碼人類Fc(在序列識別2 1號中陳述之胺 基酸序列）的DNA片段，定向連接至PCEP4載體内。將在 pCEP4中含有Fc密碼序列的所得載體，稱爲PCEP4-Fc載體 。藉著PCR產生在其5'末端帶有Hindlll限制位置和kozak序 列（CCACC)，並在其3'末端帶有NotlP艮制位置，編碼人類類 IL-17RB-2或IL-17RB-3(分別爲序列識別2號或序列識別5 號）之細胞外功能部位的DNA片段。使用Hindlll和Notl限制 位置，將這些DNA片段定向連接到pCEP4-Fc表現載體内， 並命名爲 pCEP4-hu 類 IL-17RB-2-FC 或 pCEP4-hu 類 IL-17RB-3-FC。藉著DNA定序，使用此項技藝中已知的標 147- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）
1322154 A7 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製 五、發明說明（145 ) 準方法，證實DNA的完整和接合位置。 使用Superfect (Qiagen)，根據製造者的指示，暫時將 pCEP4.hu類 IL-17RB-2-FC 質體或 pCEP4_h_ il_17RB 3 Fc 質體轉移感染至人類293/EBNA細胞中。在轉移感染後72小 時，從細胞收獲不含血清的有條件培養基。藉著親和力層 析法，使用HiTrap蛋白質G管柱（Amersham Pharmacia)分離 重組的人類類IL“7RB-Fc融合蛋白質，預期它具有位在成 熟蛋白質之胺基-終端的胺基酸序列APS。在圖22 (IL-17RB-2-FC融合蛋白質；序列識別24號）和圖23 (IL-17RB-3-FC融合蛋白質；序列識別25號）中，陳述所得的 融合蛋白質之胺基酸序列。 在4 C下，對PBS缓衝溶液透析重组的人類類il- 1 7RB-Fc 融合蛋白質72小時，使用Spectra/Pore膜MWCO 1〇,〇〇〇 (Spectrum Laboratories)。接著，在1〇%丙締醯胺凝膠 (N〇vex)上進行重組的人類類IL_17RB_Fc融合蛋白質之電 泳，並以考馬斯藍（(：0001358丨6-3丨1^)染色。以光密度計掃瞒 已經染色的凝膠，定出代表感興趣之蛋白質譜帶的百分比 。根據製造者的指示，使用經過修改的洛里（Lowry)蛋白質 測定試劑（Pierce)，定出總蛋白質的濃度。然後，藉著將類 IL-1 7RB-Fc融合蛋白質之百分比乘以總蛋白質之濃度，來 計算人類類IL-17受體-Fc融合蛋白質的量。 亦可利用 Epogen信號肽（MGVHECPAWLWLLLSLLSLPLGLPVLG (序列識別20號）），在骨架中與預測的成熟蛋白質融合，代 替與上述之天然的細胞外功能部位融合，產生IL-1 7RB融合 -148- 紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 χ 297公釐） (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) |褒· — I I----訂 illllli.
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五、發明說明（147) N〇tI限制位置，將人類IL-17E片段定向連接至pCEP4_ EpoSP Fc表現載 内’並命名爲 pCEp4 Ep〇sp huIL17E Fc 藉著DNA疋序，使用此項技藝中已知的標準方法，證實 DNA的完整和接合位置。 使用Superfect (Qiagen)，根據製造者的指示，暫時將 pCEP4-EP〇SP-IL-17E-Fc質體轉移感染至人類293/EBNA細 胞中。在轉移感染後72小時，從細胞收獲不含血清的有條 件培養基。藉著親和力層析法，使用HiTrap蛋白質σ管柱 (AmershamPharmacia)分離重組的人類IL_17E Fc融合蛋白 質，預期它具有位在成熟蛋白質之胺基·終端的胺基酸序列 APS。然後在4 °C下，對PBS緩衝溶液透析重組的人類 IL-17E-Fc融合蛋白質72小時，使用Spectra/Pore膜MWCO lO’OOO (Spectrum Laboratories)。接著，在 1〇%丙烯醯胺凝 膠（Novex)上進行重組的人類IL_17E_Fc融合蛋白質之電泳 ，並以考馬斯藍染色。以光密度計掃瞄已經染色的凝膠， 定出代表感興趣之蛋白質譜帶的百分比。根據製造者的指 示，使用經過修改的洛里蛋白質測定試劑（pierce)，定出總 蛋白質的濃度。然後，藉著將IL-17E-FC融合蛋白質之百分 比乘以總蛋白質之濃度，來計算人類IL_17E_Fc融合蛋白質 的量。 實例8 IL-17E多肽與類IL-17#體容a备娃厶 欲決定IL-17E多肽（序列識別23號）是否爲類il-17受體多 肽（序列識別2及/或5號；分別爲IL-17RB-2及/或IL-17RB-3) -150- @張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1322154 經濟部智慧財農局員工消費合作社印製 A7 - B7 五、發明說明（148) 的配體，利用人類B-淋巴胚細胞株GM31〇4A來進行競爭性 結合測定，已經藉著北方墨點和RT_PCR分析，顯示該細胞 表現類IL-17受體多肽。從按照上文實例7中之描述來製備 的經過轉移感染，以便表現IL-17E_Fc融合蛋白質（序列識別 23號）的293E細胞中，收集有條件培養基，將其濃縮，並用 於結合到定中。藉著與可溶性封阻受體，IL_ i 7rb_2_Fc4 IL-17RB-3-Fc融合蛋白質（分別爲序列識別22或23號）的競 爭作用’定出配體結合的專一性。從收集自經過轉移感染 之293E細胞的有條件培養基中，純化IL_17R_Fc融合蛋白質 (包括序列識別3號的細胞外功能部位），並作爲對照組。利 用Amicon 3Kd截止Centracon (#4203)，濃縮（5χ)得自按照在 上文實例6中之描述，以il-17RB-2-Fc或IL-17RB-3-FC轉移 感染之293Ε細胞的有條件培養基，並用於封阻。 在結合測定之前，將含有0.5毫升IL-17E-FC融合蛋白質 (1X)之有條件培養基加至小瓶中，分別含有毫升 IL-17RB-2-FC、IL-17RB-3-FC 的 5χ有條件培養基，或〇 5毫 升5微克/毫升的IL-17R-FC蛋白質，在RPMI 1640中。在冰 上培養每個小瓶2小時。 接著’在4°C下，利用1毫升8% FBS/PBS培養GM3 104Α 細胞（每個試樣1 X 106個細胞）1小時。然後以〇. 5 % ρB S/PB S 沖洗細胞，並在4°C下以1毫升未經轉移感染之293E細胞的 有條件培養基、含有IL-17E-Fc的有條件培養基，或含有預 先與封阻受體（IL-17RB-2或IL-17RB-3)-起培養之 IL-17E-Fc的有條件培養基培養2小時，並溫和地振盈。在 -151 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 裝 訂1 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1322154 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 ----B7 ____五、發明說明（Mg ) 培養之後，以1毫升冰冷的0.5% BSA/PBS沖洗細胞3次。 以在0.5% BSA/PBS中稀釋的2微克/1〇〇微升山羊抗人類 IgG-Fc-FITC (Chemicon，AP113F)將每個細胞染色。在冰上 培養細胞1小時’並以1毫升冰冷的0.5% BSA/PBS沖洗3次 。接著，利用螢光-激活之細胞挑選分析，使用 FACScan(Becton Dickinson)，檢測配體的結合。該分析表 示IL-17E-FC融合蛋白質與GM3 104A細胞結合。該結合作用 可被IL-1 7RB-2和IL-1 7RB-3(本發明的同功型）抑制，但不會 被IL-17R抑制。 實例1 0 IL -1 7 E多肤诱導如炎症性細胞分裂素的表規， 因爲已經顯示IL-1 7E多肽與本發明之il- 17受體（序列識 別2和5號）結合，所以IL-1 7E多肽對前炎症性細胞分裂素之 表現的影響，可能與本發明之IL· 1 7受體的激活作用有關。 從表現 IL-17E-FC融合蛋白質、IL-17B-FC、IL-17C-FC或 IL-17D-FC的293E細胞中收集有條件培養基，在測定中用來 作爲配體。然後使用Amicon 3Kd截止Centracon (#4032)， 濃縮（15x)含有 IL-17B-‘Fc、IL-17C-Fc ' IL-17D-Fc和 IL-17E-Fc的有條件培養基，並藉著加入新鮮的20% FBS/1640培養 基，重建成lx培養基。 在重建濃縮的有條件培養基中，其分別含有IL-1 7配體 (IL-17E-FC 多肽 ' IL-17B-Fc、IL-17C-Fc、IL-17D-FC和人 類Fc)，培養人類B-淋巴胚細胞（GM3104A，1x10個細胞/試 樣）。在37°C和5% C02中培養18小時之後，收集培養基，並 -152- (請先閱讀背面之注意事 -- ^^^填寫士 -------訂---------痒 本頁)
本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐) 1322154 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（15〇) 利用適當的Quantikine免疫測定工具組（R&D Systems)，依 據製造者的指示，測量釋放至培養基中之IL-1 a、IL-1々、 IL-6、INF-厂、G-CSF和TNF- α的含量。結果概述於表III 中。IL-17E-FC融合蛋白質誘導TNF- a、IL-1 π和IL-6的釋 放，達到比其他受試的IL-1 7配體更高許多的程度。對任何 配體均未檢測到IL -1 /?、IN F - 7"和G_ C S F的釋放。
表III 配體 TNF- α (微微克/毫升） IL-1 α (微微克/毫升） IL-6 (微微克/毫升） Mock CM 190 6 157.6 人類Fc 210 8 199 IL-17B 180 11 138 IL-17C 170 8 152 IL-17D 180 22 155 類IL-17 460 25 362 實例9 邊Α表現IL-17E0h某因轉殖老鼠 如同在實例7中的描述，IL-17E多肽是本發明之IL-17受 體的配體。下列的實例描述過度表現IL-17E多肽的基因轉 殖老鼠。可使用得自這些老鼠的資訊，來決定本發明之 IL-1 7受體之激活作用及/或過度表現的生物學影響。 A.轉殖基因的製備 將帶有緊接在起始ATG之前，更改Kozak序列CCACC的 人類IL-17ECDNA的密碼區（序列識別22號），連接到肝臟_ -^1 ϋ J n ϋ I n^OJ» I ϋ n (請先閱讀背面之注意事勒再填寫本頁) -HIP. -153-
五、發明說明（151) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 專一性的表現載體中。表現載體由774個鹼基對之DNA片段 所組成，含有得自在染色體19上之人類脱輔基脂蛋白 (apo)C-I/C-r整合區的肝細胞控制區（HCR)(sim〇net等人， L Biol· Chem·，268 : 8221-8229, 1993)。該載體亦含有 1450 個鹼基對的DNA連續斷片，其由人類ap〇E基因5，_側面序列 、第一個表現序列、第一個插入序列，以及邛〇£基因之第 二個表現序列的一部份所組成（Sim〇net等人，j CUn
Invest.，94 : 1310-1319, 1994)。SV40聚腺甞酸化作用信號 ，位在cDNA插入位置的下游。藉著定序，使用此項技藝中 已知的標準方法，證實cDNA的完整。 B.製備和分析過度表現il-ΠΕ的基因轉殖老鼠 純化所得的質體（在本文中命名爲Ap〇E_hIL_17)，並爲了 微量注射分離轉殖基因之插入物。基本上按照在Brinster 等人（Proc. Natl· Acad. Sci. USA, 82 : 4438-4442，1985)中 的描述’注射得自BDFlxBDFl·雜交老鼠的單細胞胚胎。 在3 7°C和5% C〇2恆溫箱中培養胚胎過夜。接著，將丨5至2〇 個2-個細胞的胚胎’移至十三隻假懷孕之cD丨雌鼠的輸卵 管中。藉著PCR篩選，利用引子來確認基因轉殖之後代， 該引子從由耳朵活組織檢查中製備的DNA中，擴大了人類 apoE第一個插入物之368個鹼基對的片段，如同在simonet 等人（J_ Clin. Invest·，94 : 1310-1319，1994)中的描述。 實例11 過度表現IL-1 7E之基因轉殖老鼠的驗屍分析 在8-10週齡時，對1〇隻過度表現IL-17E之基因轉殖老鼠 -154- 本紙張尺度適用中國固家標準(CNS)A4規格（210 X 297公爱） ----- - -- 訂-------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 彎 1322154 A7
(請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) _裝--------訂---------
1322154 A7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 ff 五、發明說明（153 ) 口。按照上述，從肝臟中分離RNA，並進行北方墨點分析 。雜父墨點在-80°C下使X-光軟片（Kodak)曝光24小時，然 後使其顯影。 對剩餘創始者進行的北方墨點分析，指出與未經基因轉 殖之同胎老鼠相比較，這些老鼠在肝臟中表現出較高程度 的IL-17E RNA。在10隻受試老鼠中，命名爲^、3〇、33、 46和68的那些’表現出最高程度的il_17rna(參見圖9)。 實例12 A.驗屍 在本研究中，就可能的IL-17E表現型，對七隻6_8週齡之 過度表現IL-17E的老鼠和五隻6-8週齡之未經基因轉殖的 同胎老鼠（兩隻雄性和三隻雌性），進行病理學上的分析。 對IL-17E mRNA的肝臟表現而言，第29、52、61和66號的 老鼠爲強陽性的，而第1、16和5 5號的老鼠爲弱陽性。五隻 未經基因轉殖之對照組老鼠（2、17、28、53和65號）爲陰性 的。在驗屍時，將老鼠稱重，爲了血液學和血清化學而採 血，並稱取肝臟、脾臟、腎臟、心臟和胸腺的重量。爲了 組織學分析’獲得肝礆、脾臟、肺臟、腦、心臟、腎臟、 腎上腺、胃、小腸、胰臟 '盲腸、結腸、腸系膜淋巴結、 皮膚、乳腺、氣管、食道、甲狀腺、副甲狀腺、唾液腺、 膀胱、卵巢或睪丸、子宮或精囊、骨骼肌、骨骼和骨髓的 切片。 B ·組織學 在10%中性緩衝之鋅福馬林（Anatech，Battie creek， -156- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 χ 297公釐） (請先閱讀背面之注意事^^填寫本頁) 填寫*
訂---------線 1322154 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 -------B7_____ 五、發明說明（154 )
Michigan)中，固定得自IL_17E基因轉殖和未經基因轉殖之 老鼠的肝臟、脾臟、肺臟、腦、心臟、腎臟、腎上腺、胃 '小腸 '胰臟 '盲腸、結腸、腸系膜淋巴結 '皮膚、乳腺 、氣官、食道、甲狀腺、副甲狀腺、唾液腺、膀胱、卵巢 或睪丸、子宮或精囊、骨骼肌、骨骼和骨髓的切片過夜， 以石蠛包埋’切成3微米’並以蘇木素和曙紅（Η & E)染色， 以便進行例行的組織學檢查。 C ·免疫組織化學 在4微米厚的石蠟包埋切片上，使用自動dpc Mark 5組織 化學染色系統（Diagnostic Products Corp，Randolph, NJ)，進 行免疫組織化學的染色。利用CAS封阻劑（Zymed Laboratories，San Francisco，CA)封阻脱石蠟的組織切片， 與對抗巨噬細胞之大鼠抗-老鼠單株抗體（F4/80，Serotec Inc.，Raleigh, NC)，或對抗所有類型之B細胞的大鼠抗-老 鼠 CD45R/B220 單株抗體（PharMingen，San Diego, CA)—起 培養。使用生物素基化之兔子抗-大鼠免疫球蛋白二級抗體 (Vector Laboratories，Burlingame, CA)檢測初級抗體。然後 利用3 %過氧化氫使切片驟冷，並與抗生物素蛋白-生物素複 合物三級（Vector Laboratories)反應。利用二胺基聯苯胺 (DAB，Dako Carpinteria，CA)使染色反應呈像，並利用蘇木 素對切片進行對比染色。 D·巨觀的病理學發現 得自四隻高度表現IL-17E的基因轉殖老鼠（29、52、61和 66號）加一隻低程度表現老鼠（55號）的腸系膜淋巴結，在尺 -157- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS〉A4規格（210 X 297公釐^ " - ^1 ^1 ϋ —a a— ί I ϋ n n I a (請先閱讀背面之注意事展再填寫本頁) 1322154 A7 B7 表IV IL-17E基因 理之器官的重量 五、發明說明（155) 寸上有明顯的增加。同樣的，得自這五隻IL_17E基因轉殖 又老鼠的脾臟變大，並顯示在重量上有顯著的增加（體重的 1·〇8±〇.27 SD%對在未經基因轉殖之對照組老鼠中，體重 的〇.37±0.12 SD%，ρ = 〇.〇〇07)。得自另兩隻低程度表現之 基因轉殖老鼠（1和16號）的腸系膜淋巴結和脾臟，似乎是正 常的。在表IV中顯示未經處理之器官的重量資料，並在表 VI中概述顯著差異。 轉殖老鼠對未經基因轉殖老鼠的未經處 組別 ――-· . L. 性別 TBW 肝臟 體#% 脾臟 體重％ 心臟: 擊重％ 腎臟 體重％ 胸腺 體重％ 未經基因轉殖的 2 F 21.8 0.925 4.23 0.070 0.32 0.121 0.56 0.351 1.61 0.061 0.28 17 F 20.5 0.912 4.45 0.089 0.43 0.112 0.55 0.273 1.33 0.048 0.23 28 F 22.5 1.125 5 0.123 0.55 0.127 0.56 0.398 1.77 0.058 0.26 53 Μ 25.8 1.315 5.1 0.076 0.29 0.140 0.54 0.423 1.64 0.031 0.12 65 Μ 29 1.45 5 0.082 0.28 0.169 0.58 0.523 1.8 0.055 0.19 平均値 4.76 0.37 0.56 1.63 0.22 標準差 0.39 0.12 0.01 0.19 0.06 IL-17E基因轉殖的 1 F 31.9 1.406 4.41 0.118 0.37 0.151 0.47 0.433 1.36 0.071 0.22 16 F 22,5 1.121 4.98 0.085 0.38 0.115 0.51 0.350 1.56 0.061 0.27 29 F 24.4 1.439 5.90 0.333 1.36 0.123 0.5 0.861 3.53 0.061 0.25 52 M 25.6 1.583 6.18 0.223 0.87 0.129 0.5 0.356 1.39 0.074 0.29 55 F 19.1 1.181 6.18 0.196 1.03 0.122 0.64 0.388 2.03 0.04 0.21 61 F 24.5 1.401 5.72 0.190 0.78 0.118 0.48 0.372 1.52 0.059 0.24 66 M 25 1.47 5.88 0.338 1.35 0.162 0.65 0.433 1.73 0.026 0.1 平均値 5.61 0.88 0.54 1.87 0.23 標準差 0.67 0.41 0.08 0.76 0.06 158- 表纸張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -^1 ^1 — ϋ ϋ ϋ 一-0, ϋ ϋ n ϋ I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 0 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 丄丄：)4 A7
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五 發明說明（157 ) 表V IL-17E基因轉殖老鼠對未絲其 7木，.二暴因轉殖老鼠的未經處理 之血液學數據 經濟部智慧財產局員工消費合作杜印製 组別 WBC 一 丨... RBC HGB HCT PLT MPV 嗜中性淋巴球單核球咳碎紅嗓缺性 LUC 未經基因轉殖的 2 2.52 9.39 13.9 48.9 1179 5.0 0.69 1.64 0.02 0.03 0.01 0.13 17 3.48 10.12 15.1 50.9 938 5.1 0.72 2.63 0.02 0.04 0.01 0.06 28 2.45 9.51 14.8 49.5 1013 5.7 0.37 2.00 0.02 0.01 0.01 0.05 53 2.70 10.67 16.1 55.9 1353 5.0 0.61 1.88 0.04 0.04 0.01 0.11 65 4.30 11.55 17.8 61.4 1362 4.5 2.20 1.81 0.11 0.02 0.01 0.16 平均値 3.09 10.25 15.5 53.3 1169 5.1 0.92 1.99 0.04 0.03 0.01 0.10 標準差 0.79 0.89 1.5 5.3 193 0.4 0.73 0.38 0.04 0.01 0.00 0.05 IL-丨7E基因轉殖的 1 2.80 10.80 16.3 56.8 1113 5.2 0.69 1.91 0.03 0.02 0.01 0.14 16 3,49 10.29 15.8 54.7 1134 4.8 1.30 2.01 0.05 0.04 0.01 0.07 29 無試樣 52 13.32 8.81 12-5 45.8 977 6.3 3.25 6.61 0.17 2.12 0.04 1.13 55 16.89 7.89 12.0 36.6 2758 5.4 1.84 9.80 0.09 2.14 0.04 2.99 61 11.32 9.18 14,1 50.0 1102 5.2 2.66 6.47 0.08 0.96 0.03 1.12 66 6.19 6.24 7.8 31.7 2195 4.4 1.42 4.16 0.05 0.16 0.01 0.40 平均値 9.00 8.87 13.1 45.9 1547 5.2 1.86 5.16 0.08 0.91 0.02 0.98 標準差 5.71 1.66 3.1 10.0 744 0.6 0.94 3.06 0.05 1.01 0.02 1.09 -160 張 紙 本 尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1322154 A7 五、發明說明（158 ) =====轉:樣㈣ 以體重％表示 之脾臟重 嗜中性白血球
2_29χ103土 0.67χ103 SD
0·92χ1〇3土 °·53χ1〇3 SD 0.032 0.0025 F.組織病理學的發現 檢查得自七隻IL刪因轉殖老鼠和五隻未經基因轉殖 《對照組同胎老鼠的肝臟、脾臟、肺臟、腦、心臟 '腎臟 、腎上腺、胃、小腸、姨臟、盲腸、結腸、腸㈣淋巴結 、皮膚、乳腺、氣管、食道、甲狀腺、副甲狀腺、唾液腺 、膀胱、卵巢或睪丸、子宮或精囊、骨路肌、骨路和骨髓 的蘇木素和曙紅染色之切片。亦檢查得自所有老鼠之淋一 結和脾臟的B220(對所有的b細胞有專一性）和F4/8〇(對巨 嗟細胞有專-性）之免疫染色切片。五修_17£基因轉殖的 -161 - 巴
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五、發明說明〇59 ) 老机（29、52、55、6 1和66號）具有類似的组織學發現，其 特徵在於明顯的腸系膜淋巴腺病 '脾臟的淋巴增生，和紅 髓嗜曙紅性的髓樣增生，以及骨髓嗜曙紅性的增生。最醒 目的組織學發現是腸系膜淋巴腺病，其特徵在於廣泛性的 結節增大，由於含有大量嗜曙紅細胞、反應性B細胞（以B22〇 染色）和漿細胞、巨噬細胞（以F4/8〇染色）和多核之炎症性巨 細胞的炎症細胞之混合族群，而喪失了正常的結節結構和 髓質的伸展（參見圖1〇)。這五隻IL_17E基因轉殖的老鼠，亦 顯示出明顯的骨髓嗜曙紅性的髓樣增生（圖丨1B)和適度至 明顯的脾臟B細胞之淋巴增生，以及紅髓嗜曙紅性的髓樣增 生（圖11F)。此外，一隻IL-17E基因轉殖的老鼠（29號），亦 顯示出明顯、慢性的嗜曙紅性和化膿性腎盂腎炎，在一個 S臟中有腎盂的擴張’而在另一個腎臟中有適度的慢性嗜 曙紅性和化膿性腎盂炎（圖11J)，而另一個IL_17E基因轉殖 的老鼠（5 5號）’顯示出嚴重的、慢性的嗜曙紅性和化膿性 膀胱炎，伴隨有中等雙側的慢性嗜曙紅性和化膿性腎盂炎 。最後，四隻IL-17E基因轉殖的老鼠（29、55、61和66號） 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製 ’顯示出很少至中等的嗜曙紅性和淋巴漿細胞性的結腸炎 及/或迴腸炎。 G.概述在過度表現人類IL_i7E多肽之基因轉殖老鼠中的表 現型發現 五隻過度表現IL-17E之基因轉殖老鼠（29、52、55、61和 66號）具有類似的表現型’其特徵在於白血球增多症。伴隨 有明顯升高的嗜曙紅細胞、淋巴細胞和大的未染色細胞， ____-162- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）
Of 1322154 A7 ___ ___B7_____ 五、發明說明（16〇 ) 其可能是大的粒性淋巴細胞，明顯的淋巴腺病，帶有明顯 的嗜曙紅性成份，骨髓嗜曙紅性的髓樣增生，以及脾臟B 細胞的淋巴增生和嗜曙紅性髓樣增生。兩隻IL-17E基因轉 殖的老鼠（5 5和66號）亦顯示出中等的貧血和血小板增加症 。此外，IL-17E基因轉殖的老鼠55和29號，其腎臟及/或膀 胱顯示有嗜曙紅性和化膿性的炎症。最後，四隻過度表現 IL-17E的基因轉殖老鼠（29、55、61和66號），具有很少至中 等的嗜曙紅性和淋巴漿細胞性的結腸炎及/或迴腸炎。所有 的這些發現均暗示IL-1 7E多肽，在炎症和骨髓組織生成中 扮演某種角色，特別是在嗜曙紅細胞和B淋巴細胞的發育、 刺激及/或募集上，而與該IL-17E結合的本發明之類IL-17 受體多肽，可調解該炎症和骨髓組織生成。 實例1 3 過度表現IL-1 7E老鼠的某因轉殖轰現剞 對10隻基因轉殖的老鼠和5隻未經基因轉殖的同胎老鼠 ’進行表現型分析。從每隻基因轉殖的老鼠及其同胎老鼠 對照組中，獲得股骨、周圍血液（藉著心臟穿刺獲得）和縱 切的半片脾臟。分析五隻基因轉殖的老鼠（29、52、55、61 和66號），顯示表現型的改變。 欲分析基因轉殖老鼠的表現型，定量包括活化T細胞的主 要造血族群。此外，亦按照在Antonysomy等人（J. lmmunol， 162 : 577-5 84，1999)中的描述，亦按照在本文中之實例7中 的描述，定量本發明之類IL-17受體多肽（IL-17RB)的組織和 血統專一性表現。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ▼裝---— — — — — 訂·！--I---
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 163- 1322154 A7 B7 五、發明說明（161 ) 設計下列的抗體名單，以便利用螢光激活之細胞挑選 (FACS)進行上文·確認的測量。利用抗體CD4-PE檢測輔助T 細胞，並與藉著抗體CD69-FITC檢測之早期活化作用的標 記做比較。利用抗體CD3-FITC檢測泛τ細胞標記，並與藉 著抗體CD8-PE檢測之殺手T細胞做比較。利用抗體 CD14-FITC檢測單核球系統的細胞，並與利用抗體cD19_pe 檢測的B系統之細胞（前B至成熟的表面免疫球蛋白陽性b 細胞）標記做比較。利用抗體GR_丨_FITC檢測粒性細胞，並 與利用抗體NK 1.1-PE檢測的自然殺手τ細胞做比較。將藉 著與重组IL-1 7E-Fc融合蛋白質之結合作用來檢測的類 IL-17受體多肽（IL-17rB)之表現模式，與利用抗體 CD45R-PE檢測的B細胞、利用抗體CD4-PE檢測的輔助τ細 胞，以及利用抗體CD 1 1C-PE檢測的樹突細胞做比較。 犧牲基因轉殖的老鼠和未經基因轉殖之同胎老鼠，並切 開股骨和脾臟。製造得自股骨之骨髓和脾臟的細胞懸浮液 ，以PBS/0.5% BSA沖洗兩次，並再懸浮於其中。利用c〇u丨ter Z1 Coulter計數器’定量每個細胞懸浮液的細胞數目，使用 100微米之孔徑，並設定4微米的較低閾値❶將每個細胞懸 浮液各10微升的等份，加至10毫升含有3滴雷波血球蛋白 (Zapoglobin)(溶解紅血球）的isoton緩衝溶液中，並計數。 在4 C下將細胞懸浮液與Fc-封阻物（CD 16/32)—起培養j 5 分鐘。接著，將1x10個細胞（懸浮於PBS/0.5% BSA中）分別 加至在96孔培養盤上，含有各個抗體的孔中。 此外，藉著心臟穿刺從基因轉殖之老鼠和未經基因轉殖 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) _裝--------訂----------
經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製 -164 - 五 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 、發明說明（162 之同胎老鼠中獲得周圍血液試樣，並進行Cbc分析。接著 ’在96孔培養盤上，將剩下的血液等分在含有抗體的8個孔 中。 在室溫下’在抗體的存在下，培養細胞懸浮液和血液試 樣30分鐘。接著，沖洗細胞兩次，並在室溫下利用FACS溶 解緩衝落液（200微升/孔；Bect〇n Dickins〇n)溶解15分鐘， 以便除去紅血球。在溶解之後，沖洗細胞，並再懸浮於4〇〇 微升的FACS緩衝溶液中，並藉著流動細胞計數計分析。 在5隻基因轉殖的老鼠中，顯示出在周圍血液中cD19 + 細胞（B細胞）顯著增加的表現型（29、52、55、61和66號）。 如同在圖12中所示，與對照組相比較，cd 1 9 +細胞的絕對 數目増加高達5倍。此外，如同在圖13中所示，在脾臟中 CD 19 +細胞的絕對數目亦增加2_4倍。在股骨的骨髓中， CD19 +細胞稍微降低（圖u)。關於CD45r的染色，遵循類 似的傾向。從基因轉殖之老鼠中分離的周圍血液和脾臟， 亦顯不輔助T細胞（CD4 + T淋巴細胞）的絕對數目有2-3倍的 增加。（分別參見圖15和16)。 基因轉殖的老鼠具有細胞大族群的一致外觀（例如33%的 粒性細胞），帶有類似嗜曙紅細胞的光散射特性（圖丨7和j 8) 。此外，該細胞未表現粒性細胞的標記。亦具有屬於較小 的，但不同族群之類粒性細胞的一致外觀（例如8_丨7%的粒 性細胞），其在血液和骨髓中表現類比_17受體多肽。（參見 圖1 9和20)。以點圖的關連性爲基礎，基因轉殖的老鼠似乎 具有下列的多-系統表現型：CD4 +、CD45R +、CD 1 1 c + 165 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公爱 -I I I-----------! I 訂-------·▲ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
U22154 A7 B7 五、發明說明（163 ，並爲大的和粒性的。 該分析指出在基因轉殖的老鼠中’在股骨骨髓和周圍血 液中，π楚地顯露出類嗜曙紅性的族群。如同在圖2丨中所 不，這些細胞的散射輪廓密切地類似嗜曙紅細胞的前方對 側面散射（尺寸對粒性）之特性的”敎科書"實例。 在循環和脾臟之c D19 + Β細胞的絕對數目（以及隔間百 分比）上’亦有重大的增加。雖然CD〗9 +淋巴細胞對於活 化払纪CD69 +而言，並不是陽性的，但其在周圍中的絕對 數目上之增加’以及在骨髓中的梢微減少，暗示移動至周 圍組織，而在那裏發生增殖作用。 多-系統表現型在血液和骨髓中的外觀，暗示類似淋巴瘤 的表現型。此外’因爲類IL_i 7受體多肽（序列識別2和5號） 似乎在這些細胞中被向下調節，所以它暗示該族群可能對 無所不在的類IL-1 7蛋白質是具有反應性的。連同在這些老 鼠中有明確的嗜曙紅細胞增多症的事實一起，該多-系統表 現型密切地適合急性骨髓單核球性白血病（M4AML)的敘述 .(Campena & Behm, J. Immunol. Meth. 234 ： 59-75,2000) 〇 * 實例14 類IL-17受體RNA的北方墨點分析 進行北方墨點分析，決定表現類IL-1 7受體RNA的細胞株 。使用 RNeasy Mini套組（目錄第 74104 號，Qiagen，Valencia, CA)，從17個細胞株中分離總RNA。藉著PCR產生探針，使 用下列的引子（引子2445-34: CATTTTCCTACATCGGCTTCCCTG 和引子 2429-61 : TGAATCTGGCTTCTTTCACTGC) ° 使用 -166- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐) ίι (請先閱讀背面之注意事*^5:填寫本頁) 訂 ί!_·
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1322154 A7 B7 五、發明說明（164 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 ediprimell 套組（目綠第 rpn 1633 號；Amersham Pharmacia Biotech) ’ 以 32P-dCTP(目綠第 AA0005 號；Amersham Pharmacia Biotech)標示探針。利用北方Max_G]y套组（目錄 第1946號，Ambion)，進行北方墨點分析。 測試下列的人類、老鼠和·兔予細胞株，並指出類IL·丨7受 體RNA的表現程度。 人類細胞株： GM3 104A (B-淋巴胚細胞） CCRF-SB (B-淋巴胚細胞） CESS(淋巴瘤） Τ Η P -1 (急性单核球性白血病） DAMI(巨核細胞） H-9 (T-細胞淋巴瘤） CCRF CEM(T-淋巴胚細胞） MOLT 4(T-細胞，淋巴細胞） Hs 67(胸腺，正常的） Jurkat E6-1(T-細胞白血病） J 45.01 (T-細胞白血病） BW5147.3 (T-細胞淋巴瘤） CCRF HSB2 (T-淋巴胚細胞） AML 193(s)(急性單核球性白血病） 動物細胞株： HIG-82(兔子滑膜細胞 C 1498(老鼠淋巴瘤） A 20(老鼠B細胞淋巴瘤） 表現程度
+ + /_ + /- (請先閱讀背面之注意事填寫本頁) 填寫* 訂---------
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Claims (1)

1322154 第090106157號專利申請 中文申請專利範圍替換4 ‘(98年10#^舍修(更)正本 -—---- 六、申請專利範圍 公J ι· 一種經過分離的核酸分子，其包括選自下列所組成之 群的核甞酸序列： (a) 包括序列識別4號之50至1 729核苷酸的核：y：酸序列 » (b) 包括序列識別4號之50至1099核苷酸之核甞酸序列 (c) 包括序列識別4號之89至1099核苷酸的核：y：酸序列 » (d) 編碼包括序列識別5號之1至560胺基酸之多肽的核 苷酸序列； (e) 編碼包括序列識別5號之1至350胺基酸之多肽的核 苷酸序列； (f) 編碼包含序列識別5號之14至350胺基酸之多肽之核 苷酸序列；及 (g) 與（a)-(f)中任一個互補的核甞酸序列。 2. —種包括申請專利範圍第1項之核酸分子的載體。 3. 根據申請專利範圍第2項之載體，其係病毒載體。 4· 一種包括申請專利範圍第1項之核酸分子的經分離宿主 細胞。 5·根據申請專利範圍第4項之宿主細胞，其為真核生物細 胞。 6. 根據申請專利範園第4項之宿主細胞，其為原核生物細 胞。 7. —種經分離宿主細胞，其包括以可操作之方式與調節 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公羹) 1322154
序列連接的申請專利範圍第1項之核酸分子，該調節序 列與：：的類IL-17受體多肽的啟動基因不同。 8. 種2著以調節核酸之轉化或轉移感染作用修改的經 Λ離伯，-田⑯其中該調節核酸啟動包括申請專利範 圍第1項之核酸分子的轉錄或轉譯作用。 9. 根據申請專利範圍第8項之宿主細胞，其中該調節核酸 序列為啟動基因。 Η).根據中請專利範圍第8項之宿主細胞，丨中該調節核酸 序列為轉錄因子。 11. 一種產製類IL-17受體多肽的方法，包括在適合該多肽 表現的條件下，培養申請專利範圍第4、7或8項之宿主 細胞，並可視需要從培養物中分離該多肽。 12. 根據申請專利範圍第1丨項之方法，其中該核酸分子包 括與天然之類IL-17受體多肽的啟動基因DNA不同的啟 動基因DNA ’以可操作之方式與编碼類IL_17受體多肽 的DNA連接。 13_—種藉著申請專利範圍第11項之方法產製的多肽。 14. 一種經過分離的多肽，其包括選自包括下列的胺基酸序 列： (a) 序列識別5號之1至560胺基酸； (b) 序列識別5號之1至350胺基酸；及 (c)序列識別5號之14至350胺基酸。 15.根據申請專利範圍第14項之多肽，其中在序列識別5號 之位置225處的胺基酸為白胺酸、異白胺酸、纈胺酸、 -2- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐)
裝 订 1322154 A BCD 六、申請專利範圍 曱硫胺酸或苯丙胺酸。 16. 根據申請專利範圍第14項之多肽，其中在序列識別5號 之位置319處的胺基酸為半胱胺酸、絲胺酸或丙胺酸。 17. 根據申請專利範圍第14項之多肽，其中在序列識別5號 之位置357處的胺基酸為白胺酸、去曱白胺酸、麵醯胺 、天門冬酿胺、精胺酸或1，4-二胺基-丁酸。 18. 根據申請專利範圍第14項之多肽，其中在序列識別5號 之位置371處的胺基酸為路胺酸、苯丙胺酸或色胺酸。 19. 根據申請專利範圍第14項之多肽’其中在序列識別5號 之位置471處的胺基酸為甘胺酸、脯胺酸或丙胺酸。 20. 根據申清專利範圍第14項之多肽，其中在序列識別5號 之位置491處的胺基酸為天門冬胺酸或麩胺酸。 21. 根據申請專利範圍第14項之多肽，其以共價方式利用 水-溶性聚合物修改。 22_根據申凊專利範圍第2 1項之多肤，其中該水-溶性聚合 物係選自包括聚乙二醇、單甲氧基-聚乙二醇、葡聚糖 、纖維素、聚-(N-乙烯吡咯烷鲖）聚乙二醇、丙二醇同 聚物、聚環氧丙烷/環氧乙烷丼-聚物、聚氧乙烯化的多 元醇和聚乙烯醇所組成之群。 23_ —種檢測類il- 1 7受體多肽活性之候選抑制劑的方法， 其包括在IL-17配體存在下，使表現申請專利範圍第14 項之多肽之細胞暴露在該候選抑制劑之下，在該細胞 中檢測類IL- 1 7受體多肽的活性，並將暴露在該候選抑 制劑下之細胞中的類IL-17受體多肽活性，與未暴露在 本纸張尺度適用中国國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1322154 ABCD 六、申請專利範園 該候選抑制劑下之細胞中的活性做比較。 24. —種檢測類IL-17受體多肽活性之候選刺激劑的方法， 其包括使表現申請專利範圍第14項之多肽之細胞暴露 在該候選刺激劑之下，在該細胞中檢測類IL_丨7受體多 肽的活性’並將暴露在該候選刺激劑下之細胞中的類 IL-17受體多肤活性，與未暴露在該候選刺激劑下之細 胞中的活性做比較。 25. —種藉著以一或多個申請專利範圍14項之多肽或其免 疫原肽來免疫動物而產生的抗體。 26. —種抗體或其抗廣結合片段’其專一地與申請專利範 圍第14項之多肽結合。 27_根據申請專利範圍第26項之抗體或其抗原結合片段， 其為單株抗體。 28. 根據申請專利範圍第26項之抗體或其抗原結合片段， 其為人類化的抗體。. 29. 根據申請專利範圍第26項之抗體或其抗原結合片段， 其為人類抗體或其片段。 30. 根據申請專利範圍第26項之抗體或其抗原結合片段， 其為多株抗體或其片段。 31. 根據申請專利範圍第26項之抗體或其抗原結合片段， 其為嵌合型抗體或其片段。 32. 根據申請專利範圍第26項之抗體或其抗原結合片段， 其為CDR-移植的抗體或其片段。 33. 根據申請專利範圍第26項之抗體或其抗原結合片段， -4- 本紙張尺度適用中国國家標準(CNS) A4规格(210X297公釐) 1322154 A8 B8 C8 __· D8 六、申請專利範園 其為抗遺傳性型之抗體或其片段》 34_根據申請專利範圍第26項之抗體或其抗原結合片段， 其為可變區片段。 35. 根據申請專利範圍第34項之抗體或其抗原結合片段， 其為Fab或Fab·片段。 36. 根據申請專利範圍第32項之抗體或其抗原結合片段， 其包括至少一個互補決定區，其對申請專利範圍第14 或17項的多肽具有專一性。 37. 根據申請專利範圍第26項之抗體或其抗原結合片段， 其與可檢測標記結合。 38. 根據申請專利範圍第26項之抗體或其抗原結合片段， 其拮抗類IL-17受體多肤的生物活性。 39. 根據申請專利範圍第26至38項中任一項之抗體，其抑 制申請專利範圍第1項之多肽與IL-17E配體的結合作用 〇 40. —種融合瘤，其產製申請專利範圍27項的單株抗體。 41. 根據申請專利範圍第4〇項之融合瘤，其產生申請專利 範圍26至39項中任一項之抗體。 42. —種檢測或定量類IL_17受體多肽之含量的活體外方法 ’其係使用申請專利範圍第25、26或27項之抗_類匕_17 受體抗體或其抗原結合片段。 43. —種根據申請專利範圍第26至39項中任—項之抗體之 用途’其係用於製備用於治療、預防或改善與類IL· t 7 受體多肽有關疾病之醫藥組合物。 -5-
A8
44.一種用於、冶療、改善或預防與類1£_17受體多肽有關疾 2之醫藥組合物，其包括申請專利範圍26至39項中任 項之抗體或其抗原結合片段，以及在藥學上可接受 的調配劑。 45·-種用於治療、改善或預防與類比_17受體多肽有關疾 病之醫藥組合物’彡包括申請專利範圍第14項之多肽 ’以及在藥學上可接受的調配劑β 46. 根據申請專利範圍第45項之醫藥組合物，其中該在藥 學上可接受的調配劑為載劑、佐劑、促溶劑、穩定劑 或抗-氧化劑。 47. 種用於治療、改善或預防與類il- 17受體多肽有關疾 病之醫藥組合物’其包括申請專利範圍第1項之核酸分 子’以及在藥學上可接受的調配劑。 48. 根據申請專利範圍第47項之醫藥組合物，其中該核酸 分子係包含在病毒載體内。 49. 一種融合多肽’其包括與異種胺基酸序列融合的申請 專利範圍第14項之多肽，其中該異種胺基酸序列為免 疫球蛋白恆定功能部位。 50. —種根據申請專利範圍第14項之多肽或由申請專利範 圍第1項之核酸編碼的多肽之用途，其係用於製備用於 治療、預防或改善炎症或與IL-17Ε誘發嗜伊紅血球增 生有關疾病之醫藥組合物。 51. —種根據申請專利範圍第i項之核酸或啟動申請專利範 圍第1項之核酸轉錄或轉譯的核酸之用途，其係用於製 本紙張尺度通用中國國家標準(CNS) A4规格(210X 297公嫠)
裝 訂 1322154 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 備用於在哺乳動物中，治療、預防或改善由於降㈣ il-17受體多肽含量或活性而引起之醫學病況的醫藥組 合物。 52. —種確認與類IL-17多肽結合之化合物的活體外方法， 其包括： (a) 使申請專利範圍第14項之多肽與該化合物接觸；並 (b) 決定該多肽與該化合物的結合程度。 53. —種用於診斷類„^_17受體多肽相關聯病症之診斷試劑 ，其包括以申請專利範圍第丨項之核酸分子之反義股或 其片段為基礎之可檢測經標示的雜交探針。 54. —種在生物試樣中檢測類乩_17受體核酸之存在的活體 外方法，其包括下列步驟： (a) 提供懷疑其含有類iL_丨7受體核酸之生物試樣； (b) 在其中該診斷試劑將與該生物試樣所含有之核酸雜 交的條件下，使該生物試樣與根據申請專利範圍第 53項之診斷試劑接觸； (c) 檢測在該生物試樣中之類IL17受體核酸與該診斷 試劑之間的雜交作用；並 (d) 比較在該生物試樣和該診斷試劑之間的雜交程度， 與在已知濃度之類IL-17受體核酸和該診斷試劑之 間的雜交程度。 55. 根據申請專利範圍第54項之方法，其中該核酸為dNa 〇 56. 根據申請專利範圍第54項之方法，其中該核酸為rNA 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 六、申請專利範圍 57. —種確認申請專利範圍第14項之類江·^受體多肽與 IL 1 7E配體之交互作用之候選抑制劑的活體外方法， 其包括在欠試化合物的存在和缺乏之下檢測該類 ^-17受體多肽與該IL_17E配體的結合作用並在該受 試化η物存在下，該結合作用降低時，確認該受試化 合物為候選抑制劑。 58. 根據申明專利範圍第57項之方法其中該配體 包括序列識別23號的成熟蛋白質之胺基酸序列。 59. 根據申請專利範圍第57項之方法，其中該類iL-i7受體 多肽包括序列識別5號的成熟蛋白質之14至35〇胺基酸。 60·—種根據申請專利範圍第57項之方法所確認之抑制劑 之用途，其係用於製備用於治療、預防或改善由 IL-17E配體調節之病理學病況的醫藥組合物。 61_根,據申請專利範圍第60項之用途，其中該抑制劑為申 請專利範圍第26至39項中任—項之抗體或其抗原結合 片段。 62. 根據申請專利範圍第6〇項之用途，其中該抑制劑為申 清專利辄圍第1 4項之多肽，其與IL·丨7E配體結合。 63. 根據申請專利範圍第60項之用途，其中該病^學病況 係關於免疫系統功能障礙、炎症或感染。 64. —種與類扎-17受體多肽具有專一性之化合物之用途， 其係用於製備用於拮抗類IL· 17受體多肽之活性的醫藥 組合物，其中該化合物為根據申請專利範圍第“或“ I - 8 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4规格(210X297公釐) 1322154 8 8 8 8 A BCD 六、申請專利範圍 項之多肽，或類IL-1 7受體多肽的選擇性結合劑、小分 子反義寡核苷酸、肽 '或其對類IL-17受體多肽具有專 一性的衍生物。 -9- 本紙張尺度逋用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐)
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