TWI233357B

TWI233357B - Oromucosal cytokine compositions and uses thereof

Info

Publication number: TWI233357B
Application number: TW087116780A
Authority: TW
Inventors: Michael Gerard Tovey
Original assignee: Pharma Pacific Pty Ltd
Priority date: 1997-10-10
Filing date: 1998-10-09
Publication date: 2005-06-01
Also published as: NZ504955A; FR2769505A1; EP1027068B1; CA2312906A1; EP1027068A1; DE69832902T2; WO1999018992A1; HK1030150A1; ES2252859T3; IL136604A0; DE69832902D1; AU9455698A; CN1281368A; ZA989206B; AU762360B2; FR2769505B1; CN1259104C; ATE313331T1; AR015956A1

Description

A7 1233357 B7 五、發明説明（（）發明範圍 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明係關於經由口腔黏膜施用對T h 1或T h 2具專一性的細胞激素於一哺乳動物中來刺激宿主防禦機制之方法，以及用於口腔黏膜輸送對Th 1或Th 2具專一性的細胞激素之組成物。特別的是，本發明可適用於治療自體免疫，過敏，發炎，細胞內細菌，贅瘤，神經性，寄生蟲以及病毒疾病之方法。發明背景介白素（I L s )爲一多類的分泌性肽類及蛋白質，其主要功能係爲介導細胞間的局部交互作用，關於介白素的大部分訊息係來自與白血球，特別是淋巴球之作用。經濟部中央標準局員工消費合作社印裝目前一般已接受C D 4 T細胞可分爲兩種功能上不同的亞群（subsets)，即T輔助細胞1 (Thl)及T輔助細胞2(Th2)，係由該等細胞所製造的細胞激素之型式來定特性，因而，老鼠T h 1細胞製造干擾素γ ( I F N 一γ)，腫瘤壞死因子β ( T N F β)以及介白素2 ( I L —2 )，而老鼠T h 2細胞製造I L — 4，I L — 5，I L — 6，IL — 9，IL一 10以及 IL— 13，人類丁 h 1及T h 2細胞具有細胞激素分泌之相似型式，雖然I L一 2，IL — 6，IL一 10及 IL— 13之合成並不像老鼠一般嚴密限制於單一亞群，一些其他的細胞激素係由T h 1及T h 2細胞兩者所分泌，包括I L 一 3，丁 N Fa，粒性細胞一巨噬細胞株落刺激因子（GΜ- C S F )，Met-腦啡肽(enkephalin)，以及特定的化學激素（c Κ ______ ^_ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 1233357 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 Α7 Β7 五、發明説明（>) )，另外的新穎細胞激素，例如I L ― 1 8 (Yoshimoto et al. 1997, Proc· Natl· Acad· Sci. USA，94, 3948-3953)，其最初被稱爲干擾素伽瑪誘導因子（I G I F )，可加強T h 1之反應持續被敘述，並且極可能其他影響T h 1或丁 h 2反應之新穎的化學激素將會於未來被發現。細胞激素分泌的T h 1及T h 2型式係相當於在免疫反應期間所產生之活化效應(effector)的表型，其等在先天的T細胞之間並不存在，因此，當最先被位於抗原表現細胞（APC)上的抗原刺激時，先天的CD 4+ 丁細胞最初僅製造I L - 2，但接著分化爲分泌其他細胞激素的表型。第三類CD 4+ T細胞，稱爲ThO細胞，已被鑑定出來係由部分分化的效應(effector)細胞所組成，該等細胞在細胞激素的表現上係表現Th 1及Th 2型式兩者並可代表在分化爲T h 1及T h 2細胞的途徑中的一過渡時期。第四類CD 4+ T細胞，即以Th 3細胞爲名，其可製造高含量的轉形生長因子P(TGFP)，亦已被確認出來〇 T h 1及T h 2細胞不僅製造不同類型的細胞激素而造成明顯的功能性質，亦也較佳地表現特定的活化標記，因此，人類Th1細胞較佳地表現淋巴球活化基因3(L A G — 3 )，其爲免疫球蛋白總科(superfamily)的一員，而人類丁 h 2細胞較佳地表現C D 3 0，其爲TN F受體族群之一員。L A G — 3的表現係由I F Νγ增強並由I L 一 4而抑制，而c D 3 0的表現係視I L 一 4之存在而定 ______4 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝- 1233357 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（>]) ，T h 1 細胞也表現 E 一 selectin，p — selectin 配位體 (ligand)以及I L — 1 2受體的β鏈’其等並不被T h 2細胞表現。 C D 8 + T細胞的細胞毒性（T c )細胞亞群也可基於其所製造的細胞激素而區分，因此，T c 1細胞會分泌I L 一 1 2及I FNy，且具T c 2外形(profile)的細胞會分泌I L 一 4及I L — 5，且發現於特定的病理狀況中，例如結節型痲瘋(lePromatous leprosy)及具高I g E含量之受到Η I V感染的個體中。 T h 1及T h 2細胞之功能與其特有的細胞激素極具關聯性，因此，T h 1細胞係牽涉細胞介導的免疫反應（巨噬細胞的活化，抗體依賴性細胞毒性以及延遲型過敏反應）以及對於病毒的抗性，並且一些T h 1細胞激素會活化細胞毒性及發炎反應，T h 2細胞激素可使抗體製造，特別是I g E反應，並且也藉由製造肥大細胞(mast cell)及嗜中性球之生長及分化因子而增進黏膜免疫性，因此，T h 2細胞與抗體的製造、過敏反應以及對病毒感染之敏感性有關。 T h 1及T h 2細胞激素係對於相互的表型之分化及效應器(effector)功能上爲互相抑制的，因而，I L 一 1 2 及I F Νγ的選擇性會抑制T h 2細胞的增生並且I L 一 4 及I L — 1 〇會抑制τ h 1的生成，在許多情況下，使用細胞激素或抗細胞激素可逆轉宿主的抗性或對感染的敏感性’參見 T h 1 — T h 2 Paradigm，Sergio Romagani， -;-_5__ 本紙張尺度適用中國國家榡準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 装· 訂 A7 1233357 B7 五、發明説明（（V )

Immunology Today，June 1997，18:6 (263-266) 〇 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 介白素（I L 一 2 )係爲一種生物反應的調節器 (modifier)，其活化細胞溶解的丁細胞及自然殺手細胞（參見 Kuziel，W. A· and Gree，W· C· (1991)，Interleukin-2，in The Cytokine Handbook，A. Thompson (Ed·)，San Diego， California，Academic Press，pages 83-102)，因此，I L - 2已被檢驗其對抗惡性，免疫不全及慢性感染之治療潛力。經濟部中央標準局員工消費合作社印製基本上，IL-2係藉由結合至一高親合性細胞表面受體來調控T淋巴球及其他淋巴細胞之增生及分化，該細胞表面受體是由α，β及γ三種多肽鏈所組成（Waldmann，T. A·，1993，Immunol. Today，14:264)，由 Vasily Gelfanov 等人戶斤示的資料（Proceedings of the Keystone Symposium on Mucosal Immunity，1997，SI 12:12)係顯示已知與中央免疫系統的T細胞在一些重要方面上不同之腸上皮內淋巴球會對於最近鑑定出來的一種Τ細胞生長因子，即介白素 1 5 ( I L - 1 5 )有較佳的反應，而非對於典型的τ細胞生長因子，即I L _ 2。 I L 一 1 5會與一異三體(heterotrimeric)細胞表面受體交互作用，該受體係由I L - 2受體的β及γ次單元以及一特定的高親合性I L 一 1 5結合次單元稱爲I L 一 1 5 Ra所組成，因爲I L 一 2受體的β及γ次單元兩者爲I L 一 2或I L — 1 5之訊息傳遞所必須的，故不會令人驚詞1 地兩種細胞激素已被報導具有一些相同的生物活性（ -------6______ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210 X 297公釐） 1233357 A7 B7 五、發明説明（< )

Kennedy, Μ. K. and Park L. S.5 1996, J. Clin. Immunol., 16:134-143 )。與干擾素α相同地，I L 一 1 2係爲自然殺手（NK )細胞活性的主要調控子(regulator)，其在宿主對抗新細胞之防禦上扮演一個重要的角色（尺(^&73心，：^.，1989，1· Exptl. Med·，170:827)，I L 一 1 2，主要是由巨卩遼細胞所製造的，亦藉由活化的T細胞及NK細胞來誘導干擾素γ 的釋出，並與I L - 2協乘性地作用而產生淋巴激素活化的殺手（L A Κ )細胞（Aragane et al·，1994，J· Immunol·， 153:5366-5372 )，I L 一 1 2 與 I L — 2 以及干擾素γ在 Τ輔助第1型（T h 1 )效應細胞之發展上扮演一個重要的角色，T h 1反應通常與感染的抗性有關並已顯示出在感染人類乳頭狀瘤病毒(papillomavirus)之患者中干擾素α 2 的抗病毒作用上扮演一個決定性的角色（Arany，I. and Tyring，K·，1996，J. Interferon and Cytokines Res·，16:453-460) o 經濟部中央檩準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 全身性施用I L - 2之抗腫瘤活性被認爲主要由L A K 細胞所調控（Natuk et al·，1989, J· Virol·，63:4969-4971 )，全身性施用IL-2之抗病毒活性被認爲主要由巨噬細胞介導的抗體依賴性細胞毒性（A D C C )來調控，其牽涉在輔助丁細胞中干擾素γ的誘導（Kohe et al·，J. Inf. Dis·，159:239-247 )，並透過 L A K 細胞（Natuk et al·， 1989, J. Virol., 63:4969-4971 )。介白素一般係以非經腸的方式施用，但是，非經腸的尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210Χ 2977公釐） " 1233357 A7 B7 五、發明説明（b ) 途徑施用I L - 2會與一些嚴重的副作用有關，如血液毒性及腎衰竭（參見 Haworth，C·，and Feldmann，M·，1991， Applications of cytokines in human immunotherapy in The Cytokine Handbook， A. Thompson (Ed.) San Diego, California: Academic Press，pages 301-324)，已觀察到一些其他介白素之類似的毒性作用。全身性施用重組的人類I L - 2亦已廣泛用於治療一些贅瘤疾病，包括腎細胞瘤（Rozenberg et al·，1989，Ann. Surg·，210:474 )以及惡性黑色素瘤（Rozenberg et al.， 1987, New Engl· J. Med.，316:889)，並且較低程度上用於治療特定病毒疾病包括慢性B型肝炎（Kakumu，et al·， 1988, Hepatology，8:487-492)，在所有的這些硏究中，已遭遇不少毒性，包括發燒，發冷，厭食以及疲累（Kakumu et al·，1988, Hepatology，8:487-492)。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 一系列專利及專利刊物係尤其以一般名辭提到口服施用不同介白素之可能性，舉例來說，W〇91/1691 7揭示用於治療胃潰瘍及肥胖之IL 一 1;W〇 9 2/1 1 0 3 0揭示用於增進對疫苗中免疫原的免疫反應之I L —4 ;美國專利第5，6 0 1，8 1 4號揭示用於治療毒性休克之I L 一 6 ;美國專利第5，1 8 8，8 2 8號揭示用於增進內生性紅血球生成素含量之I L - 6 ;以及W 〇9 6 / 2 5 1 7 1揭示用於抑制血球生成之I L — 1 2 。但是’這些一般的揭示內容並不包含活性成份的實際口服吸收’亦無任何實例包括在口服輸送後蛋白質活性口服 ------ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 1233357 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（q) 吸收之報告，例如，美國專利第5，4 9 9，5 1 5號揭示一般名辭之口服輸送I L 一 4，其也揭示了若包含於口服劑量形式時I L - 4可被一物質塗覆或與該物質一同施用以預防其失活，並討論使用不同物質以避免失活，此提出的方法包括酵素抑制劑以及微脂粒中包含介白素（參見第三欄，第7-22行），經口施用而輸送至小腸確實可淸楚地由這些參考資料預期得到。

Koren S. and Fleischmann W. R. Jr., Journal of Interferon Research，14(6):343-7，December 1994 余戈述藉由口服施用r h I L — 2於不含致病原的老鼠中周邊白血球數目及骨髓之功能確認白血球細胞數目受到抑制之含量係類似於以皮下劑量所達到者，該文獻下結論：口服施用I L 一 2可得到全身性的效果並可憶測口服施用I L 一 2可具有治療的潛力。Marinaro，M·，Boyaka，Ρ· N·，Finkelman， F. D., Kiyono, H., Jackson, R. J., Jirillo, E., and McGhee, J. R·，J· Exp. Med.，Feb 3 1997，185 (3) pages 415-27 確認胃內並非非經腸胃施用重組鼠的IL一 12 (rmIL — 12 )更改T輔助細胞2 (T h 2 )類型對於口服疫苗的反應，而不會改變腸黏膜的I g A反應，該等作者所得到結論爲：IL 一 12可藉由口的途徑來施用以調控對於口服疫苗的全身性反應，並建議了用於輸送至小腸中Peryer’s patches之口服製成配方的I L 一 1 2亦可在黏膜含量上具有免疫調節效果。

Marinaro，M·，Boyaka，P. N·，Jackson, R. J·，Finkelman， 9 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝_ 、?τ 1233357 經濟部中央標準局員工消費合作社印裂 A.7 B7 五、發明説明（y ) F· D·，Kiy〇n〇，H·，McGhee，J. R·，J. Allergy Clin. Immunol·， 99, No· 1，ιη·2, S34, 1997 係調查與微脂粒(lipos〇me)複合的 Ϊ L 一 1 2之鼻內輸送以及經口輸送，他們發現鼻內I L 一 1 2的輸送會加深T h 2類型的反應，而口服I L 一 1 2會更改T h 2成爲T h 1類型的反應，此顯示藉由兩種不同黏膜之途徑來輸送IL-12導致對於一口服疫苗相反類型的黏膜及全身性免疫反應。無論如何，在所有這些專利及文獻刊物中，“經口輸送 ”代表經由口施用以輸送至小腸，其爲介白素真正被吸收處〇申請人目前已令人驚訝地發現，在以通常快速致命的病毒及腫瘤之抗原施打之後，施用對T h 1具專一性的細胞激素於口腔黏膜中具有延長老鼠存活之明顯效果。發明摘沭本發明係提供一種刺激哺乳動物中宿主防禦機制之方法，其係經由口腔黏膜施用對Th 1及Th 2具專一性的細胞激素，較佳是以誘導刺激宿主防禦機制效果之劑量施用，也就是使用T h 1或T h 2細胞激素於製備用來刺激哺乳動物中宿主防禦機制之口腔黏膜藥物，口腔黏膜輸送細胞激素之組成物以及以細胞激素治療疾病狀態之方法。本發明也提供一種刺激哺乳動物中免疫反應之方法’ 其係包括藉由口腔黏膜接觸施用一免疫刺激量之對T h 1 或T h 2具專一性的細胞激素於哺乳動物中之步驟，也就是使用Th 1或Th 2細胞激素於製備用來刺激哺乳動物 ___10 用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝· 1233357 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（q ) 中宿主防禦機制之口腔黏膜藥物。較佳地’ Th 1細胞激素係選自由干擾素一a，干擾素一 β，干擾素_ω，干擾素一γ，il 一 2，IL 一 12 ，IL— 15，IL—18，GM—CS F以及腫瘤壞死因子一 β(淋巴毒素)所組成的族群中者，較佳地，T h 2細胞激素係選自由IL — 4，IL — 5，IL— 10及IL - 1 3所組成的族群中者，較好地，細胞激素是以重組d NA技術來製造。本發明的方法及組成物可應用於治療人類及非人類的哺乳動物，包括寵物動物如貓及狗，以及家畜動物如馬、牛及羊。本發明之方法也使得施用一量之對T h 1或T h 2具專一性的細胞激素，其係以相同細胞激素當其以非經腸胃施用而誘導病理反應之較多劑量施用，或者，本發明提供一種藉由口腔黏膜施用細胞激素而增加T h 1或T h 2細胞激素之治療指數之方法。發明詳沭本發明現在將藉著僅使用下列定義及實例之參考而詳細敘述，所有在此所指的專利及刊物係以參考方式倂於本文來表示。 “口腔黏膜”一詞係代表口及/或鼻咽腔襯裏之黏膜，就敘述於此說明書中的動物實驗之目的而言，關於施用細胞激素的途徑之“口腔黏膜”，“口咽”，‘‘鼻內/口”，“鼻內及口”，以及“於/或”之表示爲相同意義的，並且被用於 11 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐) I--------裝 I-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 费經濟部中央標準局員工消費合作社印製 1233357 A7 B7 五、發明説明（) 表示施用細胞激素製劑於深入鼻或口腔內，使細胞激素快速分佈進入接受者哺乳動物的口及咽喉中，以與此腔內黏膜襯裏接觸，既然其爲吸收部位而非施用方法之具重要性，故不須使細胞激素與鼻、口及咽腔之黏膜襯裏整個完全接觸。當不需進一步條件在此使用時，“細胞激素”一詞係指對Th 1或Th 2具專一性的細胞激素，亦即刺激Th 1 或T h 2細胞活性之細胞激素。如在此所使用者，“介白素”係指由淋巴細胞所製造的細胞激素蛋白質，包括但不限於一般稱爲I L 一 2，I L 一 3’ IL — 4’ IL一 5’ IL一 10，IL— 12， IL一 13，IL — 15，IL一 18及其混合物者，介白素可衍生自自然來源，但較佳係爲一種重組產物，對於本發明的目的而言，“細胞激素”一詞也包括多肽類或其等具有細胞激素活性的片段，以及混雜性(chimeric)或突變形式的細胞激素，其中序列已進行修飾，例如增進穩定性而不影響其等生物活性之性質，其他修飾例如pegylated形式及與免疫球蛋白或其他蛋白質之融合蛋白質亦包括在本發明的範圍內。口腔黏膜施藥可包括以單一劑量施用一有效劑量的細胞激素，或以多次較少劑量施用該有效劑量經過一段相等於單一劑量足以引起免疫刺激性之時間，相同地，細胞激素的劑量可持續地施用一段足以引起相同於單一劑量所誘導效果之時間。 12 —---------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 訂_ 费本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 1233357 A7 五、發明説明（Μ ) 本發明係提供一種治療選自下列所組成族群中的狀況之方法：細胞內細菌感染，神經疾病，過敏狀況，發炎狀況，贅瘤疾病，寄生蟲感染，以及病毒感染，其係包括經由口腔黏膜接觸施用一有效量之對T h 1具專一性的細胞激素於哺乳動物中之步驟。此外，本發明提供一種治療自體免疫疾病之方法，其包括但並不限於風濕性關節炎，第I型糖尿病，紅斑性狼瘡，多發性硬化，以及牛皮癖，其藉由經口腔黏膜施用丁 h 2細胞激素。可以藉由口腔黏膜施用一細胞激素而治療發炎狀況例如潰瘍性結腸炎以及克隆氏(Crohn’s)疾病，細胞內細菌感染包括李斯特菌，分枝桿菌(mycobacterial)感染例如痲瘋及結核病，神經疾病包括多發性硬化及肌萎縮性脊髓側索硬化，寄生蟲感染例如瘧疾、血吸蟲病及萊什曼體病，以及 CΜV感染及過敏狀況包括氣喘及異位性皮炎。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明也提供一種治療新生狀況例如多發性骨髓瘤，髮細胞白血病，慢性骨髓性白血病，低等級淋巴瘤，表皮 Τ細胞淋巴瘤，類癌腫瘤，子宮頸癌，肉瘤包括卡波西氏 (Kaposi’s)肉瘤，瘤癌症(carcinomas)包括腎細胞癌，肝細胞癌，鼻咽癌，血液惡性瘤(hematological malignancies)，結腸直腸癌，神經母細胞瘤，喉乳頭狀瘤，肺癌，結腸癌，惡性黑色素瘤，以及腦瘤包括惡性腦瘤。雖然本發明的方法可在不須同時使用其他試劑之治療而被使用，但可預期的是本發明的此具體實施例將特別有 _______13 ___ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ' 一 1233357 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 Α7 Β7 五、發明説明（（> ) 效於下列設計中： a) 作爲一種佐劑治療，在以標準程序進行手術、化學治療或雷射治療（X射線，u v)之後； b) 用於治療對細胞激素敏感的贅瘤形成’本發明的方法係單獨使用或與習知的化學治療或雷射治療結合使用 ;以及 c )用於治療耐細胞激素的贅瘤形成，本發明的方法係單獨使用或與習知的化學治療或雷射治療結合使用。在第三個具體實施例中，將被治療的疾病係爲病毒感染。病毒感染可爲急性或突發的感染，例如鼻病毒’感冒，帶狀疱疹，登革熱，或病毒性腦炎包括但不限於痲疹病毒性腦炎，Murray Valley腦炎，日本B型腦炎，壁1¾所致腦炎以及疱疹腦炎；出血性發熱，例如伊波拉病毒(Ebola virus)，瑪柏格病毒(Marburg virus)，拉沙熱(Lassa fever); 漢他病毒(Hanta virus)感染，以及其他可能由動物傳播至人類之病毒感染’例如馬瘋疼病毒(equine morbillivirus)。在這些情況大部分中，目前並沒有治療法及/或疫苗可得，且支持性治療法可能不足。或者，病毒的狀況可能是慢性感染的結果，例如B型，C型，〇型肝炎或其他型式的病毒性肝炎’或巨細胞病毒（C Μ V)，人類免疫不全病毒 (HIV) ’人類乳頭狀瘤病毒（hpv)，以及單純瘤疹第I型及第II型（HSV Ι&ΙΙ) 此外，本發明的方法及劑量形式可與其他治療法結合使用，舉例來說，對於癒疹病毒的感染，可使用無環鳥苦適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（------_ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝· 、1Τ 1233357 經濟部中央標準局員工消費合作衽印製 A7 B7 五、發明説明（Ol ) (acyclovir)或ganciclovir，對於HIV之感染，可使用 azidothymidine (zidovudine)或一種或更多種的其他Η I V 反轉錄酶抑制劑，以及/或Η I V蛋白酶抑制劑。在第四個具體實施例中，被治療的疾病係爲瘧疾，並且細胞激素係以上述的方式施用，瘧疾的致病生物可爲四目瘧原蟲（Plasmodium malariae)，間日瘧原蟲（Plasmodium vivax)，鐮狀瘧原蟲(Plasmodium falciparum)或卵圓瘧原蟲 (Plasmodium ovale)，特別可預期的是本發明的方法將保護防止瘧疾進行成爲腦部形式，可選擇地，也可使用一種抗瘧疾的藥物，例如chloroquine。本發明的另一方面係爲使用一種醫藥組成物來經口腔黏膜刺激哺乳動物中宿主防禦機制，該組成物包括一種刺激Thl或Th2的細胞激素以及至少一種有效用於口腔黏膜輸送之醫藥上可接受的賦形劑。如上所述，在本發明中，作爲對於刺激宿主防禦機制之方法較好的具體實施例也是對於製備刺激哺乳動物中宿主防禦機制的口腔黏膜藥物之T h 1或T h 2細胞激素用途之較好具體實施例。在另一方面，本發明係提供一種用於口腔黏膜施用的醫藥組成物，其包括一治療上有效量的至少一種對T h 1 或T h 2具專一性的細胞激素，以及一種適合於口腔黏膜施用之醫藥上可接受的載劑，該組成物可以一種溶液’錠片，錠劑(lozenge)，膠質，糖漿，鼻噴霧，鼻藥水，吸入性配方，糊劑，或控制性釋出口腔黏膜輸送系統’選擇性 _____15 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） --------裝-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 1233357 A7 B7 五、發明説明（A) 地，該組成物可包括緩衝液，穩定劑，稠化劑，吸收及黏度增強劑，以及其類似物。本發明的方法可在以單獨治療方法或作爲附加於幅射治療，化學治療，或以一種或其他藥劑治療，或以干擾素誘導劑或介白素誘導劑治療來實施，在一些情況下，可同時或連續地使用一種以上的細胞激素，以利用另一種作用的機制。目前爲止本發明的結果係顯示口服施用細胞激素沒有毒性以及，最壞程度爲僅有輕微副作用，因而，本發明的方法也允許施用一量之對T h 1或T h 2具專一性的細胞激素，該量爲超過相同細胞激素當非經腸胃施用會誘導一病理反應之劑量，或者，本發明提供一種藉著經口腔黏膜施用細胞激素而增加對T h 1或T h 2具專一性的細胞激素之治療指標。經濟部中央標準局員Η消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 口腔黏膜細胞激素之劑量可爲一低於、相當於或高於刺激宿主防禦機制發生的非經腸胃劑量之含量，本發明的一個特別較佳的形式中，總劑量係爲約0 · 0 1 Mg/kg至約 1 5 0 Kg/kg。選擇性地，細胞激素可以一製造、活化或釋放細胞激素之誘發劑或強化劑(potentiator)來施用，誘發劑可與口腔黏膜細胞激素一起施用或可分別單獨施用’細胞激素的誘發劑爲已知，舉例來說，細菌的脂多醣會刺激多種類的細胞激素及其他細胞激素之釋放。本發明的方法，用途以及組成物可選擇性地針對特定 ___16 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）經濟部中央標準局員工消費合作社印製 1233357 A7 _B7 五、發明説明（3 ) 狀況與一種或多種的其他治療結合使用，並且參與的醫生及獸醫將可容易地選擇可能適合用於此等狀況下之這類其他的治療。在其關於治療形成贅瘤(neoplastic)狀況之方法係針對於誘導及/或保持疾病的減緩。“與其他治療結合使用”係代表細胞激素是在外科手術、雷射治療或其他化學治療之前、期間及/或之後被施用，最適合的流程係視多種的因子而定，如下所述。特別的是，可預期的是本發明之方法將較佳地與至少一種其他治療結合使用，該至少一種其他治療係選自使用細胞抑制(cytostatic)藥物，一種或多種具有抗癌症活性但具有不同於口腔黏膜細胞激素的作用機制之其他細胞激素，抗血管生成藥劑以及強化特定細胞激素活性的藥劑之化學治療所組成的族群中。較好是第二種細胞激素係爲干擾素α，干擾素β，干擾素γ，干擾素ω或共同干擾素；較佳的抗血管生成抑制劑係爲AGM-1470 {(氯乙醯基)-胺基甲酸 (3R-(3a，4a (2R*，3R*)，5β，6β))-5-甲氧基-4-(2•甲基-3-(3- 甲氧基-2-丁烯基)環氧基)小氧旋(〇xaspir〇)(2.5)辛-6-基酯] 〇癌症治療藥劑之實例係爲抗代謝物(antimetabolites)，例如6-硫醇漂呤，5-氟尿嘧啶，胞嘧啶阿拉伯糖苷以及這些藥劑的代謝物與衍生物。其他癌症化學治療藥劑係爲抗葉酸鹽（antifolates)，例如胺基甲基葉酸(methotrexate)或由天然產物所衍生的藥劑，例如衍生自長春花(vinca)的生物本紙張尺度·適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝· 訂 1233357 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 A7 B7 五、發明説明（士）鹼如長春花植物鹼(vinblastine)及秋水仙素(colchicine);阿黴素（adriamycin)，唐諾魯比辛(daunorubicin)，多索魯比辛 (doxorubicin)，鬼臼瞳吩武（teniposide)或鬼白乙叉式 (etoposide)。這類癌症化學治療藥劑也包括粕抗癌症藥物，例如順鉛(cisplatin)以及碳鈾(carboplastin)，除此之外，本發明的藥劑可環磷醯胺，biisiilfone，鹽酸甲基苄井 (procarbazine)，達卡巴嗪（dacarbazine)，亞硝腺氮芥 (carmustine)，羅馬斯丁（lomustine)，二氯甲基二乙胺 (mechlorethamine)，苯丁酸氮芥（chlorambucil)，經基尿素，亞硝基尿素以及其衍生物，苯丙氨酸氮芥(melphalan)，麥托酮(mitotone)，紫杉醇(taxol)，oc-二氟甲基鳥糞胺酸，以及spirogermanium，最常見的多重藥物抗性可發現於長春花生物鹼，恩環類抗生素(anthracyclines)唐諾魯比辛，多索魯比辛及阿黴素；以及鬼臼噬吩甙及鬼臼乙叉甙；較不常見的是抗代謝物以及其他化學治療藥劑。與細胞激素以起施用之較佳的細胞抑制藥物包括但不限於環磷醯胺，順鈾(cisplatin)，碳鈾(carboplatin)，亞硝脲氮芥(carmustine) (BCNU ; N，N-二(2_氯乙基)_N-亞硝基尿素），胺基甲基葉酸，阿黴素，α-二氟甲基鳥糞胺酸以及 5-氟尿嘧啶。在製備本發明的醫藥組成物上，可使用多種對於細胞激素的載劑及賦形劑，如同熟悉此技術者所知者。代表性配方的科技特別教示於Remington: The Science and Practice of Pharmacy，19th ed·，Mack Publishing Co.，Easton， ____ 18 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21 OX 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝·

、1T 费 A7 B7 1233357 五、發明説明（J) PA，1995，以及其以前的版本中，細胞激素配方可包括安定增強劑，例如甘胺酸或胺基丙酸，如敘述於美國專利第 4，496，537號中者，以及/或載體，例如一載體蛋白質。舉例來說，在治療人類上，一般常使用醫藥等級的人類血淸白蛋白，選擇性地與作爲稀釋液的磷酸鹽緩衝鹽水一起使用，其中細胞激素的賦形劑係爲人類血淸白蛋白，該人類血淸白蛋白可源自於人類血淸，或可由重組方式得到。細胞激素可藉由提供細胞激素與接受者口腔黏膜腔的接觸一段足以得到所欲刺激之方式施用，其他黏膜可類似地具有反應性，因而將淸楚地被瞭解的是，本發明並不限於任何特定形式的配方，本發明說明書敘述將細胞激素施用深入口腔黏膜腔中；此可藉由液體、固體以及鼻滴藥或噴霧而達到，因此，本發明係包括，但不限於液體，噴霧，糖漿，含錠劑，含錠，以及噴霧器配方，熟習此技術人士將知悉就氣膠或噴霧器配方而言，製劑的顆粒大小可爲重要的，並將知道可改良顆粒大小之適合方法，特別期待的是硏磨極細的配方。在一方面，細胞激素係以一單一劑量被施用，或者，細胞激素是以多個較低劑量、經時間分配而被施用，以使其淨效果相等於單一較高劑量之施藥。一種對此運送模式之方法係經由提供黏附或裝設於口腔黏膜腔之一持久或控制的釋出裝置，並且其被設計來以一相等於單一高劑量之量釋出細胞激素經過一段時間。 --------19 一本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 、11 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 1233357 Α7 Β7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（d) 用於口腔黏膜使用上的一種細胞激素配方係爲下列（所有：錠片：右旋糖B P 4 5 % ;明膠B P 3 0 % ;小麥激粉B P 1 1 % ;竣甲醚纖維素鈉（carmellose sodium)B P 5%;卵白蛋白BPC 4%;白安酸U S P 3 % ；丙二醇B P 2% ;以及1%細胞激素。此錠片可被使用並允許緩慢溶解於口中或可溶解於水中，並在需要時保持與口腔黏膜相接觸。如美國專利第4，6 7 5，1 8 4號中所述，細胞激素漿劑由甘油4 5%，鈉CMC 2%，檸檬酸緩衝液（P Η 4 · 5 ) 2 5 %，蒸餾水加至1 0 0 %以及1 %細胞激素中而製備，細胞激素漿劑可黏附至口腔黏膜。相同地，一含漱劑或糖漿可藉著加入所欲量的細胞激素於商業上可獲得的漱口水或感冒糖漿配方中而製備。在上述所提到的特定劑量之內，任何個體情況中的'治療將視下列而定：狀況的性質，疾病之階段，先前的治療，其他持續的治療，哺乳動物健康的一般狀態，受體對於細胞激素的敏感性等，且醫生或獸醫將牢記所有的情況因而自行選擇。治療的長度的確將因被治療的狀況而有改_ ，例如治療一緩慢生長的癌症，例如前列腺癌，可被預期含不同於治療一快速生長的癌症，如肝細胞癌，之治療過1 程，相似地，一急性感染例如由伊波拉病毒所導致者’ $ 被預期含不同於慢性狀況例如肝炎之治療過程。在此所揭示之有效劑量係爲一種可在非經腸胃施藥後 _____20 _— ——— 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) .裝· 、1Τ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 1233357 Α7 Β7 五、發明説明（A ) 晡乳於動物中產生病理反應，但在經口腔黏膜施藥後有效及不具毒性或較不具毒性之劑量，一種病理反應可爲急性、慢性或累積性的，且可藉由血液化學性的改變而顯現，例如白血球減少(leukopenia)，骨髓降低，或其他組織的因子，如在此所使用者，一種病理反應係包括負面作用，例如發熱，發冷，厭食，疲勞，不適，或類似流行性感冒的症狀，血管反應如靜脈炎，以及在注射的部位上之局部發炎反應，這類反應將會因爲個體對於細胞激素的敏感性之改變而在患者族群中有相當的不同。對於許多患者而言，預期的是口腔黏膜劑量將超過已知存在允許的非經腸胃程序中被容許的劑量。在一個具體實施例中，總劑量可以多次較低劑量施用一段時間，或甚至可持續地被運送或以由一個附著或裝設於口腔黏膜上的控制釋出裝置以搏動方式施用。總而言之，本發明係針對： -一種刺激哺乳動物內宿主防禦機制之方法，該方法包括經由口腔黏膜接觸施用一刺激量之刺激T h 1或T h 2的細胞激素於哺乳動物中。 -該刺激哺乳動物中免疫反應之方法，該方法包括經由口腔黏膜接觸施用一刺激量之刺激T h 1或丁 h 2的細胞激素於哺乳動物中。一一種該方法，其中該量係爲每公斤體重由約0 · 0 1微克至約1 5 0微克的細胞激素。種該方法，其中有效量的細胞激素係以單一量施 ------ 21_____ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297^^1 " ' (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) •裝_ 訂 1233357 A7 B7 五、發明説明（y°) 用。 -一種該方法，其中有效量的細胞激素係以多次較低量施用一段足以激發相等於單〜量的刺激之時間。 -一種其中持續施用一刺激量的細胞激素一段足以激發相等於單一量的刺激之時間的方法。 __種刺激哺乳動物中宿主防禦機制之方法，該方法包括經由口腔黏膜接觸施用一刺激量之刺激τ h1的細胞激素於該晡乳動物中° -一種刺激哺乳動物中免疫反應之方法’該方法包括經由口腔黏膜接觸施用一刺激量之刺激T h1的細胞激素於該哺乳動物中。 __種該方法，其中該量係爲每公斤體重約0 · 〇1 至約1 5 0微克的細胞激素。一一種該方法，其中有效量的細胞激素係以單一量施用。一一種該方法，其中有效量的細胞激素係以多次較低量施用一段足以激發相等於單一量的刺激之時間。 ___種該方法，其中持續施用一刺激量的細胞激素一段足以激發相等於單一量的刺激之時間。一一種治療哺乳動物中贅瘤狀況之方法’該方法包括經由口腔黏膜接觸施用一有效量的刺激T h1的細胞激素，並在該方法中細胞激素包括干擾素一ω，干擾素—α，干擾素一 β，干擾素一γ ,介白素一 2，介白素一 12，介白素一 1 5，介白素一 1 8，腫瘤壞死因子β，或粒性球巨噬 ______72____ 本紙張尺度適用中國國家檩準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1Τ ,·· 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 1233357 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 Α7 Β7 五、發明説明（7久）細胞一株落刺激因子（GM-CSF)。 --種治療病毒感染的方法，該方法包括經由口腔黏膜接觸施用一有效量之刺激T h 1的細胞激素於該哺乳動物中，並在該方法中細胞激素包括干擾素-α，干擾素-β ，干擾素一 ω，干擾素一 γ，介白素一 2，介白素一 12，介白素一 1 5，介白素一 1 8，腫瘤壞死因子β，以及粒性球巨噬細胞一株落刺激因子（GM—CSF)。 --種治療哺乳動物中過敏疾病之方法，其包括經由口腔黏膜接觸施用一有效量之T h 1細胞激素於哺乳動物中，並在該方法中細胞激素係選自干擾素-α，干擾素-β ，干擾素一ω，干擾素一 γ，介白素一 2，介白素一 12，介白素一 15,介白素一 18,腫瘤壞死因子β，以及G Μ 一 C S F所組成的族群中。 -一種治療氣喘之方法，其包括經由口腔黏膜接觸施用一有效量之T h 1細胞激素於哺乳動物中，並在該方法中細胞激素係選自干擾素一α，干擾素一β，干擾素一ω，干擾素一γ，介白素一 2，介白素一 12，介白素一 15，介白素一1 8，腫瘤壞死因子β，以及GM— C S F所組成的族群中。

-一種治療異位性皮炎之方法，其包括經由口腔黏膜接觸施用一有效量之T h 1細胞激素於哺乳動物中，並在該方法中細胞激素係選自干擾素-α，干擾素-β，干擾素一 ω，干擾素一γ，介白素一 2，介白素一 12，介白素一 1 5，介白素一 1 8，腫瘤壞死因子β，以及GM — C S F _______23 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） -----------费 -------1Τ------0— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ( 1233357 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明说明（f) 所組成的族群中。 -一種刺激哺乳動物中宿主防禦機制之方法，該方法包括經由口腔黏膜接觸施用一刺激量之刺激T h 2的細胞激素於該哺乳動物中。 -一種刺激哺乳動物中免疫反應之方法，該方法包括經由口腔黏膜接觸施用一刺激量之刺激T h 2的細胞激素於該晡乳動物中。一一種該方法，其中該量係爲每公斤體重約〇 · 〇 1 至約1 5 0微克的細胞激素。 -一種該方法，其中有效量的細胞激素係以單一量施用。 -一種該方法，其中有效量的細胞激素係以多次較低量施用一段足以激發相等於單一量的刺激之時間。 -一種該方法，其中持續施用一刺激量的細胞激素一段足以激發相等於單一量的刺激之時間。 -一種治療自體免疫疾病之方法，該方法包括經由口腔黏膜接觸施用一有效量之刺激T h 2的細胞激素於哺乳動物中，並在該方法中細胞激素係選自介白素一 4，介白素一5，介白素一 10，以及介白素一 13所組成的族群中0 -一種該方法，其中細胞激素包括一種重組的細胞激素。一 T h 1或τ h 2用於製備刺激哺乳動物中宿主防禦機制的口腔黏膜藥物之用途。 24 ---- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ------------------IT------·· (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1233357 A7 B7 五、發明説明（0) -一種用於經口腔黏膜刺激哺乳動物中宿主防禦機制之醫藥組成物，該組成物包括刺激T h 1或T h 2的細胞激素以及至少一種有效用於口腔黏膜輸送之醫藥上可接受的賦形劑。 -一種適用於口腔黏膜施用之以單位劑量形式存在的醫藥組成物，其包括約0 · 0 1微克至約1 0 0 0 0微克之刺激Th1或丁h2的細胞激素以及一種醫藥上可接受的載劑，且該組成物係包括約1 0微克至約1 0 0 0 0微克的細胞激素。 ---種該組成物，其包括一種T h 1細胞激素。一一種該組成物，其包括一種T h 2細胞激素。 I·細胞激素配方自然鼠性干擾素一 α/β 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 鼠性干擾素一 α/β係由以新城疫病毒（Newcastle Disease Virus ; N C V )所誘發的C 2 4 3 - 3細胞培養物所製得並如先前敘述來純化（丁(^67 61&1.，？1*〇(^8〇〇· Exp· Biol· Med·，1974，146:406-415)，用於此實驗的製劑 (批號T638 )在當以水泡性口腔炎病毒（Vesicular Stomatitis virus ; V SV)攻擊之老鼠L 9 2 9細胞上分析時具有1 X 1 〇 6 I U/m 1 5之效價(titer)以及5 X 1 0 7 I U / m g 之專一活性（Tovey et al，Proc· Soc· Exp. Biol. Med.，1974，146:406-415 )，並以美國國家衛生硏究院之鼠性干擾素α/β的國際參考製劑來標準化（G-002-9004-5411)。 ___ 25 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 1233357 A7 五、發明説明（.一）重組的鼠性介白素一 2 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 重組的鼠性介白素一 2 ( I L — 2 )係購自R&D Systems公司（Minneapolis，MN )，使用於此實驗之製劑 (批號MX056111 )係由S D S - P A G E測定出高於9 7%的純度，以及具有0·l至0·4ng/ml之ED 5 0値，其係使用I L 一 2依賴性的鼠性細胞毒性T細胞株，C T L L - 2，於細胞增生分析中測量（Gearing， A.J.H. and C.B.Bird, 1987, Lymphokines and interferons, a practical approach, Clements, M.J., Morris, A.G. and A.J.H. Gearing，eds·，IRL Press，P. 296 ) o 重組的鼠性介白素一 4 重組的鼠性介白素—4 ( I L — 4 )係購自Protein Institute公司（Paris，France)，使用於此實驗之製劑（批號P 200M-04)係由S D S — P A G E及N —端序列分析而測定出高於9 8 %的純度，該製劑具有2 · 0 n g/m 1之E D 5 0値。重組的鼠性介白素一 5 經濟部中央榡準局員工消費合作社印製重組的鼠性介白素一 5 ( I L — 5 )係購自R&D Systems公司，使用於此實驗之製劑（批號405-ML-025 ) 係由SDS — PAG E測定出高於9 7%的純度，且具有 0·04至◦·15ng/ml之ED50値。重組的鼠性介白素一10 重組的鼠性介白素一 1 0 ( I L - 1 〇 )係購自 Protein Institute 公司（Paris，France)，使用於此實驗之製 ____26 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 1233357 A7 B7 五、發明説明（A) 劑（批號P 200M-10)係由SDS - PAGE及N—端序列分析而測定出高於9 8 %的純度，該製劑具有2 · Ο η g/ml之ED50値。重組的鼠性介白素一12 重組的鼠性介白素—1 2 ( I L — 1 2 )係購自R&D Systems公司，使用於此實驗之製劑（批號PB017011)係由SDS —PAG E測定出高於9 7 %的純度，且具有〇 • 05至0 · 2ng/ml之ED50値，如上述所測量〇重組的鼠性介白素一13 重組的鼠性介白素一 1 3 ( I L — 1 3 )係購自R&D Systems公司，使用於此實驗之製劑（批號413-ML-025 ) 係由SD S —PAGE測定出高於9 7%的純度，且具有 3至6 n g/m 1之E D 5 0値。重組的鼠性介白素一15 重組的鼠性介白素一 1 5 ( I L - 1 5 )係購自 Protein Institute公司，使用於此實驗之製劑（批號P 200M-15)係由SDS — PAGE及N —端序列分析而測定出高於9 8 %的純度，該製劑具有低於〇 · 5 n g/m 1之E D 5 0値，相當於2 x 1 0 6單位/毫克之專一活性〇重組的鼠性介白素一18 重組的鼠性介白素一 1 8 ( I L - 1 8 )係購自 Protein Institute公司，使用於此實驗之製劑（批號P 200- 71 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) I, 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 1233357 A7 五、發明説明（> ) 18)係由SDS — PAGE及HPL C分析而測定出高於 9 8 %的純度，用於此實驗之該製劑具有〇 · 1至5 n g /m 1 之E D 5 0値。重組的鼠性粒性球巨噬細胞-株落刺激因子（G Μ - C S F ) 重組的鼠性粒性球巨噬細胞-株落刺激因子（GM-C S F )係購自Protein Institute公司，使用於此實驗之製劑（批號P 300 M-03)係由SDS - PAGE及N -端序列分析而測定出高於9 8 %的純度，該製劑具有低於〇 · lng/ml之ED50値。 IL一 2，IL — 4，IL — 5，IL— 1〇，IL —12， IL-13， IL-15， IL-18及GM— c S F係在施用之前包入Ferimmum™賦形劑中。賦形劑細胞激素製劑係在含有牛血淸白蛋白（B S A )之磷酸緩衝鹽水（P B S )或在上述專利賦形劑中被稀釋，牛血淸白蛋白部分V ( R I A等級；不含免疫球蛋白；Cat· 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

No. A7888 ; Sigma，USA)係以於 P BS(pH7.4)中的最終濃度1 0 0微克/毫升被溶解並且以過濾來消毒（ 0 · 2 微米，Millex-GV，Millipore，USA) 〇在此所述的大部分實驗中，細胞激素製劑係以一專利賦形劑來稀釋，所使用的賦形劑如下所示，係以錠片形式供應（FerimmuneTM，Pharma Pacific) ·· ；_28______ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）一 1233357 A7 Β7 、發明説明（Ά ) %w/w 毫克/錠片右旋糖(葡萄糖)ΒΡ** 44.67*** 55.84 明膠ΒΡ** 30.06 37.58 小麥澱粉ΒΡ** 11.31 14.14 羧甲醚纖維素鈉 4.96 6.20 (Carmellose Sodium) BP** 卵白蛋白BPC# 4.03 5.04 白胺酸USP 3.00 3.75 丙二醇BP 1.88 2.35 葡聚糖(Dextran )40** 0.06 0.08 (作爲葡聚糖40注射BP) 磷酸鈉BP 0.03 0.04 氯化鈉BP 0.01 0.01 酸性磷酸鈉BP 0.01 0.01 合計 100.02 125.04 氺氺氺氺氺 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 一裝·

、1T 經濟部中夬標隼局員工消費合作杜印製以無水物爲基礎計算由44.64%的右旋糖(無水葡萄糖)BP以及0.03%的葡萄糖BP(作爲葡聚糖Dextran 40注射BP) 一個單一的FerimmuneTM賦形劑錬片（批號B095002，保存期限至1997年九月）係在室溫下於一旋轉式混合器(一端內溶解於2毫升的Eppendorf微量離心管之1 · 5毫升的P B S中三小時，懸浮液接著在1 6，0 0 0 g下離心 1 5分鐘，並且該上淸液被回收，FerimmuneTM賦形劑係在每日使用之前立即製備。 II·運輸系統 29 截張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）經濟部中央標準局員工消費合作衽印製 1233357 A7 _B7 _ 五、發明説明（J ) 初步實驗顯示使用P 2 0 Eppendorf微量滴管來施用 5微升的結晶紫於正常成鼠的鼻孔內’可使用該染劑幾乎立即分佈於鼻咽腔的整個表面上，鼻咽腔的染色在施用該染劑3 0分鐘後仍可朋顯看見，因此，此種施用的方法係用於所有後續的實驗中。 III·實驗材料 (1 ) EMC V (腦心肌炎病毒）批次：批號095001 保存期限：1997年12月製備：使用 Gresser I，Bourali C，Thomas Μ T，Falcoff Ε，重覆接種干擾素製劑對於老鼠感染腦心肌炎病毒之影響（Effect of repeated inoculation of interferon preparation on infection of mice with encephalomyocarditis virus), Proc Soc Exp Biol Med 1968 Feb;127:491-6 中所敘述之方法，使 EMC V的J Η株繁殖於老鼠L 9 2 9細胞中。 (2 )弗蘭德氏紅白血病細胞（Friend Erythroleukaemia Cells) 具干擾素-α/β抗性之細胞株，Friend紅白血球病細胞（FLC)之 3C18，係得自 Dr· E. Affabris，Rome 且詳細敘述於 Affabris et al，1982 (Virology，120: 44卜452 )中，這些細胞後續是以活體路徑來保持。簡而言之，D BA/2老鼠係藉由腹膜內（ip)注射來以約1 〇〇 LD5 0之3 C 1 8細胞來接種，且在一週後腫瘤細胞由老鼠的腹膜來收集、計算，而其他老鼠再次以10 0 LD 5 0之 ____ _30 __ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -41^ I------、訂------·~ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1233357 A7 __B7 五、發明説明（A ) 3 C 1 8細胞接種，此步驟係重覆進行6 0至1 0 〇路徑 ’已顯示出用於第6 0至第1 〇〇次活體路徑時之3 C 1 8細胞筒度轉移至肝及脾臟（Gresser et al，Int. J. Cancer， 1987 39: 789-792)，I F N抗性之表現型係由在干擾素一 oc /β之存在下於試管內培養經活體路徑的細胞（Belardelli et al，Int· J· Cancer，1982 30: 813-820) o I V ·實驗動物使用於此實驗中的老鼠係得自一具專一性且不含致病原的株落(IFFA CREDO, France)，這些動物係根據E E C 標準被置於在 Villejuif 之 Institute Federatif CNRS 內特定不含致病原之設施中。實例1 IL一2及IL — 12對於在以一致命劑量的E M C V (腦心肌炎病毒）攻擊之老鼠上之影響經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 一組十隻六週大的雄性瑞士鼠係以1 〇〇 L D 5 0 之腦心肌炎病毒（E M C V)感染，在病毒感染一小時之後，老鼠保持未治療或者每天一次以重組鼠性1 L 一 2或重組鼠性I L 一 1 2經由鼻內/口途徑治療4天，以1 0 微升體積的Ferimmune賦形劑或以1 0微升的單獨賦形劑( 控制組），或經由腹膜內(IP)注射於2 0 〇微升的賦形劑’ 或單獨以2 0 〇微升的賦形劑施用。每天以2微克的重組鼠性I L 一 2經由鼻內/口途徑治療成鼠4天，會使用受到致命劑量的E M C V感染之存活的動物比率增加，高達4 0 %被治療的動物在以致命劑 ____31_______ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（2!0Χ297公釐） 1233357 A7 B7 __ 五、發明説明（W ) 量的E M C V感染後1 0 0天仍存活，在所有未治療或以賦形劑治療之情況下，病毒感染的動物在第6天會死亡。藉由鼻內/口途徑以重組鼠性I L - 2治療成鼠會導致受到致命劑量的E M C V感染之存活的動物比率明顯增加，受到致命劑量的E M C V感染而存活的動物比率之增加係視經鼻內/口途徑施用I L 一 2之劑量而定’因此’ 每天以1微升的重組鼠性I L - 2經鼻內/口的途徑治療成鼠四天，會使得以一致命劑量的E M C V感染之動物有 3 0 %存活，而以3微克的重組鼠性I L 一 2經由鼻內/ 口途徑治療動物4天會使得動物有6 0 %存活。以Ϊ L 一 2治療的動物在以一致命劑量的E M C V感染後1 〇〇天仍存活且良好，在所有未治療或賦形劑治療的情況下’病毒感染的動物在第6天死亡。相反地，每天以〇 · 1微克的重組鼠性I L 一 2經由鼻內/口途徑治療成鼠4天’並不會明顯增加以致命劑量的EMC V感染之動物的存活。經濟部中央榡準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本買) 每天以0 · 1或1微克的重組鼠性I L 一 2經由鼻內 /口途徑治療之動物並沒有顯示任何可偵測到的毒性之徵兆，急性毒性之徵兆包括發抖，嗜睡及有皺摺的舌苔 (ruffled fur)可被觀察到，但是，在以3微克的重組1 L 一 2經由鼻內/口途徑治療之動物中，測得Ϊ L 一 2的最筒劑量。經由鼻內/口途徑以重組鼠性IL一12治療成年瑞士鼠，也發現受到致命劑量的EMC V感染之動物存活比率會增加，雖然與相同量的重組I L - 2相比爲較小的程 ___________32 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 1233357 A7 五、發明説明（) 度，因此，每天以2微克的重組鼠性I L - 1 2經由鼻內 /口途徑治療成年瑞士老鼠4天，會使得受到致命劑量的 EMC V感染之動物之1 0 0天存活約爲2 0%。臨床觀察建議了所有以I L 一 2治療以及以I L 一 1 2治療之動物在第1 0 0天仍將存活。相似地，經由腹膜內途徑以重組鼠性I L - 2治療成鼠會導致在受到致命劑量的E M C V感染之動物存活百分率有一劑量依賴性的增加，因此，每天以0 · 1微克的重組鼠性I L - 2經腹膜內途徑治療4天，並不會明顯增加病毒感染的動物之存活，而每天以1微克或3微克的重組鼠性I L - 2經由腹膜內途徑治療老鼠4天，會使得受到致命劑量的EMC V感染之動物有4 0%及7 0%存活。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 在此所示的實驗結果教示了口腔黏膜途徑提供一種有效施用非常高劑量的I L - 2且具有可接受毒性之方法’ 因此，每天以0 · 1或1微克的重組鼠性I L 一 2經由鼻內/口途徑治療動物4天，不會顯示任何可偵測到的毒性，基於體重（成鼠0 · 0 2 5公斤且人類成人體重6 0公斤），此分別相當於大約人類劑量之〇 · 2 4及2 · 4毫克的等量以及2 4及2 4 0倍非經腸胃施用I L 一 2之最大可容忍劑量（Hulandetal·，1994，J·CancerRes·Clin· Oncol· 120, 221-228)。實驗的結果係教示了口腔黏膜途徑提供一種有效施用 I L 一 2及I L 一 1 2且不具明顯毒性之方法’這些結果在使用作爲抗病毒劑之I L 一 2及I L 一 1 2上具重要之 ______33 ___ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇X297公釐） 1233357 A7 B7 五、發明説明（π) 暗示。實例2 IL 一 2及IL 一 12在受到高度轉移的Friend白血病細胞攻擊上之影響以組十隻六週大的D BA/2老鼠以1 〇 5個弗蘭德氏白血病細胞（抗干擾素細胞株3 C 1 8 ),經靜脈內感染，相等於在第0天約20，000 LD50値，接種腫瘤的老鼠係未經治療，或一天兩次以重組鼠性I L - 2或重組鼠性I L 一 1 2經由鼻內/口途徑治療達2 〇天，其體積是以1 0微升的Ferimmune賦形劑或以1 〇微升的單獨賦形劑（控制組）施用。經濟部中央標準局員Η消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -- 每天兩次以2微克的重組鼠性I L~2經由鼻內/口途徑治療成鼠2 0天，會導致在以約20, 〇〇〇 LD5 0値的弗蘭德氏白血病細胞接種的動物存活時間上有明顯的增加，因此，雖然沒有以任何I L - 2治療，接種腫瘤的動物存活了超過3 2天，每天兩次以2微克重組鼠性I L 一 2經由鼻內/口途徑治療成年D BA/2老鼠2 0天，使得在存活時間有統計學上明顯的增加（死亡平均曰爲 2 2 · 6±2 · 0 8天），相較於未治療或以賦形劑治療之接種腫瘤之動物（死亡平均日爲1 3 · 8±0 · 1 3天）。以重組鼠性I L 一 1 2經由鼻內/口途徑治療成年D B A/2老鼠亦發現接種一致命劑量的弗蘭德氏白血病細胞之動物的存活時間增加，雖然與以相同量的I L - 2治療相比係爲較低程度。因此，雖然沒有以任何I L - 1 2 --- 34 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 1233357 A7 五、發明説明（V]) 治療，接種腫瘤的動物存活超過2 0天，一天兩次以2微克的重組鼠性I L 一 1 2經由鼻內/口途徑治療成年D B A/2老鼠達2 0天，使得在存活時間上有統計學上明顯的增加（死亡平均日爲1 5 · 9土0 · 5 6天），相較於未治療或以賦形劑治療接種腫瘤之動物（死亡平均日爲1 3 • 8 土0 · 1 3天）。實驗結果顯示重組鼠性IL-2表現了在經鼻內/口途徑施用之後在接種高度轉移性的弗蘭德氏白血病細胞之老鼠上一種明顯的抗腫瘤活性，這些結果爲顯著的，因爲全身性施用重組I L - 2先前已被報導在增加靜脈內接種弗蘭德氏白血病細胞之老鼠的存活時間上爲完全無效( belardelli et al·，1989, Int· J. Cancer，44:1108-116)，這些結果也教示了口腔黏膜途徑提供一種有效施用I L - 2且不具明顯毒性之方法。實例3 結合之I L 一 2及I F N在以一致命劑量的EMC V攻擊之老鼠上之影響經濟部中央榡準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 一組十隻六週大的雄性瑞士鼠係以1 0 0 L D 5 0 之腦心肌炎病毒（E M C V)感染，在病毒感染一小時之後，老鼠保持未治療或者每天一次經由鼻內/口或腹膜內途徑以於FerimmimeTM賦形劑中之1 · 0微克的重組鼠性 I L 一 2，1 0 3 I U的干擾素α/β，或相同劑量的I L - 2及鼠性干擾素α/β，或單獨以相同體積的賦形劑（控制組）治療4天。或者，經由腹膜內注射以相同劑量的重 _____35 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 1233357 A7 B7 五、發明説明（科）組鼠性I L 一 2，鼠性干擾素α/(3，或重組鼠性I 1 一 2 及鼠性干擾素α/β來治療老鼠。爲了測定是否施用重組鼠性I L - 2以及鼠性干擾素 α/β會導致一種加成或甚至協乘性的抗病毒作用，故最初經由鼻內/口途徑以重組鼠性I L - 2治療動物，接著以鼠性干擾素α/β治療3 〇分鐘，同時以重組鼠性I L 一 2 以及鼠性干擾素α/β經由鼻內/口途徑治療成鼠，係得到一種在受到一致命劑量的E M C V感染而存活的動物百分率上加成性之增加，因此，每天一次經由鼻內/口途徑以 1微克的重組鼠性I L 一 2然後以1 0 3 I U的鼠性干擾素α/β來治療成鼠4天，係使得受到一致命劑量的E M C V感染之動物有8 0%存活。經由腹膜內途徑以1 · 〇微克的重組鼠性I L 一 2且經過3 0分鐘之後以1 〇 3 I U的鼠性干擾素α/β來治療成鼠，會使得受到一致命劑量的E M C V感染之動物有8 0%存活。經濟部中央榡準局員Η消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 每天一次以1微克的重組鼠性I L 一 2，1 0 3 I u 的干擾素α/β，或重組鼠性I L 一 2及干擾素°^/卩兩者經由鼻內/口或腹膜內途徑來治療動物，並沒有領示任何可偵測到的毒性之徵兆。實例4 不同的T h 1及T h 2細胞激素對於受到一致命劑量的Ε MC V攻擊之老鼠的影響一組十隻六週大的雄性瑞士鼠係以1 〇〇 L D 5 0 ______36 _ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 1233357 A7 B7 五、發明説明（A) 經濟部中央標準局員工消費合作衽印製之腦心肌炎病毒（E M C V )感染，在病毒感染之後，老鼠保持未治療，或者每天一次經由鼻內/口途徑以於1 〇微升體積的FerimmuneTM賦形劑中之鼠性I F Ν α/β，重組鼠性IL一2，IL—4，IL—10， IL—12 ，或I L 一 1 5，或單獨以1 〇微升的賦形劑（控制組）治療4天。以鼠性干擾素α/β經由鼻內/口途徑治療成鼠，會使得受到一致命劑量的E M C V感染之動物存活百分率有明顯的增加，因此，5 0 %之以1 〇 3 I U的鼠性干擾素α /β治療之動物在受到一致命劑量的EMC V感染之後8 6 天仍存活，在所有未治療或以賦形劑治療的情況下之病毒感染動物在第7天時死亡。每天以1微克的重組鼠性I L - 2經由鼻內/口途徑來治療成鼠4天，也會使得受到一致命劑量的E M C V感染之動物存活百分率明顯增加，因此，3 0 %之以重組鼠性I L 一 2經由鼻內/口途徑治療之動物在病毒感染之後8 6天仍存活，相似地，每天以1 微克的重組鼠性I L - 1 5經由鼻內/口途徑來治療成鼠 4天，也會使得受到一致命劑量的E M C V感染之動物有 3 0 %存活，每天以1微克的重組鼠性GM— C S F經由鼻內/口途徑治療4天，亦會使得受到一致命劑量的ΕΜ C V感染之動物有2 0%存活。亦發現以重組鼠性I L 一 1 2經由鼻內/口途徑治療成年瑞士鼠會增加受到一致命劑量的E M C V感染之動物存活百分率，雖然與相同量的重組I L 一 2或I L 一 1 5 37 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨〇><297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 丁 1233357 Α7 Β7 五、發明説明（沙）治療相比係爲較低的程度。因此，每天以1微克的重組鼠性I L 一 1 2經由鼻內/口途徑治療成年瑞士鼠4天’會使得受到一致命劑量的E M C V感染之動物存活大約2 0 % ° 臨床觀察建議了所有以干擾素治療、以I L 一 2治療、以I L 一 1 2治療及以I L一 1 5和GM—CS F治療的動物在第8 6天仍活且將存活一段正常的生命時期。相反地，每天以1微克的重組鼠性I L 一 4或I L 一 1 0經由鼻內/口途徑治療動物4天，並不會明顯增加受到一致命劑量的E M C V感染的動物之存活，因此，所有以I L 一 4及I L 一 1 0治療的老鼠在病毒感染之後8天死亡，在未治療或以賦形劑治療之病毒感染動物則在2 4 小時內死亡。實例5 不同的Th 1及Th 2細胞激素對於受到一致命劑量的Ε M C V攻擊之老鼠的影響經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 一組十隻六週大的雄性瑞士鼠係以1 〇〇 L D 5 0 之腦心肌炎病毒（E M c V)感染，在病毒感染之後’老鼠保持未治療，或者每天一次經由鼻內/口途徑以於1 0 微升體積的FerimmuneTM賦形劑中之鼠性1 F Ν α/β ’ 重組鼠性IL一 5 ’ IL— 13 ’或IL — 18 ’或單獨以1 0微升的賦形劑（控制組）治療4天。以鼠性干擾素α/β經由鼻內/口途徑治療成鼠，會使得受到一致命劑量的E M C V感染之動物存活百分率有明 ______is 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） 1233357 A7 B7 五、發明説明（V)) 顯的增加，因此，5 0 %之以1 0 3 I U的鼠性干擾素α /β治療之動物在受到一致命劑量的EMC V感染之後5 2 天仍存活，在所有未治療或以賦形劑治療的情況下之病毒感染動物在第6天時死亡。每天以1微克的重組鼠性I L 一 1 8經由鼻內/口途徑來治療成鼠4天，也會使得受到一致命劑量的EMC V感染之動物存活百分率明顯增加’ 因此，20%之以重組鼠性IL一18經由鼻內/口途徑治療之動物在病毒感染之後5 2天仍存活。臨床觀察建議了所有以干擾素治療、以I L 一 2治療、以I L 一 1 2治療及以IL— 15和GM— CS F治療的動物在第5 2天仍活且將存活一段正常的生命時期。相反地，每天以1微克的重組鼠性I L 一 5或I L 一 1 3經由鼻內/口途徑治療動物4天，並不會明顯增加受到一致命劑量的EMC V感染的動物之存活，因此，所有以I L 一 5及I L 一 1 3治療的老鼠在病毒感染之後9天死亡，在未治療或以賦形劑治療之病毒感染動物則在7 2 小時內死亡。經濟部中央榡準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項存填寫本頁) 每天以1，000 IU的IFNa/β，或1微克的重組鼠性IL一 5，IL—13或IL— 18經由鼻內/ 口途徑治療4天之動物並不會顯示任何毒性之可偵測徵兆，其教示口腔黏膜途徑提供一種有效施用細胞激素而不存在明顯毒性之方法。 I L 一 4及I L 一 1 0，兩者爲T h 2反應性之有效刺激物，在經由鼻內/口途徑施用後已被發現缺乏抗病毒 ._ 39 _ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 1233357 r A/ B7 五、發明説明（¥ ) 活性，其強調了誘導丁 h 1反應性之能力及在經由口腔黏膜施用後抗病毒活性之誘導兩者之間的密切關係。對T h 1具有專一性的細胞激素顯示在經由口腔黏膜途徑施用之後具顯著活性，此證實係表示經由口腔黏膜施用細胞激素可誘導全身性T h 1的反應性，其已知在對抗病毒感染及贅瘤疾病之宿主防禦上扮演一重要的角色。實例6 IFN在受到豕草花粉攻擊之老鼠上的影響用於此實驗之干擾素α/β製劑（儲存號碼RT6)具有 1 X 1 0 7 I U/m 1之效價量以及 5 X 1 0 7 I U/m g蛋白質之專一活性，如在受到水泡性口腔炎病毒（v S V )感染的老鼠L 9 2 9細胞上所分析的（Tovey et al， Proc· Soc. Exp. Biol· Med.，1974, 146:406-415)。在施用之前，鼠性I F Να/Ρ係被溶解於牛血淸白蛋白/磷酸緩衝鹽水（B S A/P B S )賦形劑中。經濟部中央標準局員工消費合作衽印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

一組四隻8週大的雄性瑞士鼠或Balb/c老鼠係在第〇天及第4天經由腹膜內注射2 0 0微克之於明礬佐劑（ Imject Alum，Pierce Laboratories)的去脂不含熱原的豕草花粉過敏原（Greer Laboratories，Lenoir，USA)而免疫，接著，老鼠在第1 1天經由氣管內途徑以2 0 0微克之於 Coca’s緩衝液中的豕草過敏原（〇·〇85Μ NaCl ，〇.〇64MNaHC〇3，pH8.1)使之感染，數組動物經由口腔黏膜途徑每天一次由第0至含第6天以於1 0微升體積的模擬干擾素之1 0 0 0 I U的鼠性I F -----40___ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 1233357 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（4) Να/β或單獨以1 〇微升的模擬干擾素來治療（Tovey et al，Proc. Soc. Exp. Biol. Med·，1974，146:406-415 )，其他組的動物經由腹膜內途徑每天一次由第〇至含第6天以於 2 0 0微升體積的模擬干擾素之1 〇 3 I U的鼠性I F N α/β或單獨以2 0 0微升的模擬干擾素（控制組）來治療，數組的動物也經由口腔黏膜或腹膜內途徑二次於第11 天及一次於第1 2天以分別於1 〇微升或2 0 0微升體積的模擬干擾素之1 0 0 0 I U的鼠性I F Να/β或單獨以1 0微升或2 0 0微升的模擬干擾素（控制組）來治療，另外組的動物係在第0天至第6天及第1 1天至第1 2 天以如上述方式治療，所有的動物在第1 4天殺死，且周邊血液的樣本以及支氣管及肺泡washing ( B A L )被收周邊血液的樣本係在含有EDTA的真空管中收集（ B.D·，目錄號碼367624)，在4。(：下於8 0 0 xg離心1 0分鐘，血淸被收集並係利用酵素結合免疫吸附分析（E L I S A )來分析對於I g G或I g E豕草花粉具專一性的抗體之存在。簡而言之，血淸樣本在P B S中預稀釋1 : 1 〇〇，並進一步連續稀釋於塗覆有於0 · 1 Μ N a H C 0 3，p Η 8 · 5中的豕草花粉（2 0微克/毫升）之微量滴定盤內（Maxisorb，Nunc)，對豕草具專一性的I g G或I g E之偵測係使用鹼性磷酸酶爲標記羊、抗老鼠I g G或生物素共軛的大鼠單株抗老鼠I g E，接著分別使用鹼性磷 41 本紙張尺度·適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) Ψ 、言 A7 1233357 五、發明説明（Μ ) 酸酶以及抗生蛋白鏈菌素(streptavidine)，平均吸收値（4 0 5 n m)係以重覆樣本來測定。以不含熱原的豕草花粉過敏原在第0天及第4天經由腹膜內注射，接著在第1 1天經由氣管內攻擊來使8週大的雄性Balb/c老鼠產生免疫性，導致在第1 4天測定出高含量之對I g G及I g E豕草花粉具專一性的抗體。每天一次由第0天至第6天（包含）及在第1 1至第1 2天以1 Ο Ο Ο I U的鼠性I F Να/β經由口腔黏膜途徑來治療動物，會使得相對於以模擬的干擾素治療之動物而言，對I g Ε過敏原具專一性的抗體產量上有明顯的抑制作用，口腔黏膜干擾素之治療也會抑制對過敏原具專一性的I g G抗體反應，雖然與I g E反應相比係爲較低的程度。在僅於第0至第6天或僅於第1 1至第1 2天以1 〇〇 I U的鼠性I F Να/β經由口腔黏膜途徑來治療動物，會使得抗體產量比結合性治療抑制相較有較不明顯的抑制。每天一次在第0天至第6天（包含第6天）及第1 1天至第1 2天，或是僅在第1 1及第1 2天以1 0 0 0 I U 的鼠性I F Να/β經由口腔黏膜途徑來治療動物，會得到比腹膜內注射1 〇〇〇 I U的鼠性I F Να/β之動物具有更高抑制對I g Ε具專一性的抗體的產量。每天一次在第0天至第6天(包含第6天）及第1 1天至第1 2天以1 〇〇〇 I U的鼠性I F Να/β經由口腔黏膜途徑治療動物，會導致相對於以模擬干擾素治療的動 -___ _42_ 本紙張尺度適用中國國家檩準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐）訂 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 1233357 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（令') 物而言之三倍抑制存在於周邊血液中嗜伊紅血球數目，以 1 0 0 0 I U的鼠性I F Να/β經由口腔黏膜途徑治療動物會得到比腹膜內注射1 〇〇〇 I ϋ的I F Να/β之動物兩倍更明顯的抑制嗜伊紅血球數目之效果’僅在第1 1天及第1 2天以1 〇〇〇 I u的鼠性I F Ν α/β經由口腔黏膜或腹膜內途徑治療動物，並不會得到任何存在於周邊血液中循環性嗜伊紅紅血球之可偵測到的抑制效果’ 且在口腔黏膜性干擾素治療的情況下’甚至可造成相對於以模擬干擾素治療的動物而言在嗜伊紅血球百分率之輕微的增加。口腔黏膜I F Να治療在對過敏原專一性I g Ε的反應上以及過敏原誘導的嗜伊紅血球的反射增進上之影響’ 似乎比先前對於在具過敏原誘導的特感性氣喘之相同動物模型中測試的I L — 1 2之報導較不具顯著性（Sur et al·， J. Immunol. 1996, 157, 4173-4180)，但是，其可能是由於比在此實驗所使用的1 0 0 0 I U相對低單一劑量較高劑量的I F N會有相對地較大的效果，就重量而言本實驗係爲2 0 0倍低於Sue et al·所使用的I L 一 1 2的劑量（J· Immunol·，1996，157,4173_4180)。雖然當治療係在過敏原敏感化作用時期的早期間開始，IL一12係爲一種測試於具過敏原誘導的特感性氣喘之動物模型中最有效的細胞激素之一，但是當治療係在肺內過敏性發炎反應時期間疾病發展過程中晚期開始，IL-12在降低對過敏原專一性I g E的反應上則是完全無效。相反地，口腔黏膜干擾 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

T 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 1233357 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 __ B7 五、發明説明（0^) 素α治療似乎在降低對過敏原專一性I g Ε的反應上爲有效的，即使當治療是在疾病發展的晚期才開始，除此之外，臨床上使用I L - 1 2於具腎臟癌之病人中會與實質的毒性相關（Cohen J·，Science，1995, 270· 908)。在此所報導的硏究結果顯示口腔黏膜I FNoc治療均顯著地降低在對一般人類過敏原豕草花粉敏感化的動物中對過敏原具專一性的I g E反應及過敏原所誘導的嗜伊紅血球反應增進，口腔黏膜干擾素治療對於特感性氣喘的兩種特徵之影響係建議了雖然當由一嚼齒動物模型而推測至一臨床設置時必須謹慎小心，即使在當使用一般人類過敏原時，口腔黏膜I F Να治療可找到在治療氣喘上的應用〇具生物活性但具差耐性的T h 1細胞激素之口腔黏膜施用，係對於治療病毒及贅瘤疾病上均有相當的潛在重要性，口腔黏膜施用Th 1細胞激素也可找到治療疾病如氣喘及異位性皮膚炎之應用。口腔黏膜施用T h 2細胞激素已被發現在治療癌症及對口腔黏膜T h 1細胞激素所反應的病毒狀況是無效的，此一觀察係與Th 1及Th 2在宿主防禦機制上已知的角色爲一致，然後，預期對T h 2細胞激素所反應的狀況係爲那些特徵爲T h 1過度刺激，如自體免疫疾病者，口腔黏膜施用T h 2細胞激素可找到在治療風濕性關節炎，第I型糖尿病，狼瘡，多重硬化及乾癬之應用。 -— ___άά 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

Claims

A8B8C8D8 1233357 六、申請專利範圍係病毒疾病。 7 ·根據申請專利範圍第3項之組成物，其中該疾病係選自由過敏狀況、氣喘及異位性皮膚炎所組成的組群。 8·根據申請專利範圍第7項之組成物，其中該疾病係過敏狀況。 9 ·根據申請專利範圍第7項之組成物，其中該疾病係氣喘。 1 0 ·根據申請專利範圍第7項之組成物，其中該疾病異位性皮膚炎。 1 1 ·根據申請專利範圍第2項之組成物，其包括一有效量的細胞激素，每公斤受治療之哺乳動物體重約0.01 微克至約150微克的細胞激素。 1 2 ·根據申請專利範圍第2至1 1項中任一項之組成物，其中該細胞激素係以有效量存在，其含量大到當以非經腸胃施用時可產生病理反應。 1 3 ·根據申請專利範圍第2至1 1項中任一項之組成物，其係爲單位劑量形式，其中該劑量爲將有效量的細胞激素以單一量施用。 1 4 ·根據申請專利範圍第2至1 1項中任一項之組成物，其係爲單位劑量形式，其中該劑量爲將有效量的細胞激素於一段時間內以多次量施用，每一次都小於有效量，使足以激發相等於單一有效量的刺激。 1 5 ·根據申請專利範圍第2至1 1項中任—項之組成物，其係爲單位劑量形式，其中該劑量爲將有效量的細 2 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210 X 297公釐) ' ' -- --------------------!·$·..............1T----------------0 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 1233357 篇 C8 D8 六、申請專利範圍 ‘ 胞激素持續施用足以激發相等於單一有效量的刺激之一段時間。 1 6 ·根據申請專利範圍第1項之組成物，其中該細胞激素是刺激Th 2的細胞激素，且該哺乳動物係具有可從 Th2刺激作用中受益之疾病。 1 7 ·根據申請專利範圍第1 6項之組成物，其中該可從Th 2刺激作用中受益之疾病係自體免疫疾病。 1 8 ·根據申請專利範圍第1 6項之組成物，其包括一有效量的細胞激素，每公斤受治療之哺乳動物體重約 0.01微克至約150微克的細胞激素。 1 9 ·根據申請專利範圍第1 6至1 8項中任一項之組成物，其中該細胞激素係以有效量存在，其含量大到當以非經腸胃施用時可產生病理反應。 2 0 ·根據申請專利範圍第1 6至1 8項中任一項之組成物，其係爲單位劑量形式，其中該劑量爲將有效量的細胞激素以單一量施用。 2 1 ·根據申請專利範圍第1 6至1 8項中任一項之組成物，其係爲單位劑量形式，其中該劑量爲將有效量的細胞激素於一段時間內以多次量施用，每一次都小於有效量，使足以激發相等於單一有效量的刺激。 2 2 ·根據申請專利範圍第1 6至1 8項中任一項之組成物，其係爲單位劑量形式，其中該劑量爲將有效量的細胞激素持續施用足以激發相等於單一有效量的刺激之一段時間。 3 !……--------------•裝.——· (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 訂： # 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格(210 X 297公釐） 1233357 公告申請專利範圍補充 B8 C8 D8 巧f本In〉〆® 1 ·—種用於經由口腔黏膜乳動物中宿主防禦機制的醫藥組成物，該哺乳動物係具有可從Thl或 Th2刺激作用中受益之疾病，口腔黏膜接觸的達成方式係藉由提供與接受者的口腔黏膜腔接觸一段足以得到想要之刺激的時間，其包含有效量之刺激T h 1的細胞激素或刺激T h 2細胞激素，以及一有效用於口腔黏膜傳送之醫藥上可接受的賦形劑，其中該經由口腔黏膜接觸以刺激哺乳動物(具有可從Thl刺激作用中受益之疾病)宿主防禦機制之刺激T h 1的細胞激素係選自由IL-2、IL-12、IL-15、 IL-18、TNF-β及GM-CSF所組成的組群，且其中該經由口腔黏膜接觸以刺激哺乳動物(具有可從Th2刺激作用中受益之疾病)宿主防禦機制之刺激Th2的細胞激素係選自由IL-4 、IL-5、IL-10及IL-13所組成的組群。 2 ·根據申請專利範圍第1項之組成物，其中該紐胞激素是刺激Thl的細胞激素，且該哺乳動物係具有可從 Thl刺激作用中受益之疾病。 3 ·根據申請專利範圍第1項之組成物，其中該可從 Thl刺激作用中受益之疾病係選自由贅瘤疾病、病毒疾病、過敏狀況、氣喘及異位性皮膚炎所組成的組群。 4 ·根據申請專利範圍第3項之組成物，其中該疾病係選自由贅瘤疾病和病毒疾病所組成的組群。 5 ·根據申請專利範圍第4項之組成物，其中該疾病係贅瘤疾病。 6 ·根據申請專利範圍第4項之組成物，其中該疾病本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210 X 297公釐） ------------------------------------------·裝---------------1Τ................Φ (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁)