FR2769505A1 - Compositions de cytokines a administrer a la muqueuse buccale, et leurs utilisations - Google Patents

Abstract

Des compositions pharmaceutiques pour le contact avec la muqueuse buccale afin de stimuler les mécanismes de défense d'un hôte consistant en un mammifère, comprenant une quantité efficace d'une cytokine stimulant les cellules Th1 ou Th2, et des méthodes de traitement avec ces compositions sont proposées.

Description

DONAINE DE L' INVENTION
La présente invention a pour objet des méthodes de stimulation des mécanismes de défense d1un hôte consistant en un mammifère par administration de cytokines spécifiques des cellules Thl ou Th2 par l'intermédiaire de la muqueuse buccale ainsi que des compositions destinées à délivrer des cytokines spécifiques des cellules Thl ou Th2 par l'intermédiaire de la muqueuse buccale. La présente invention est applicable en particulier à des méthodes de traitement de maladies auto-immunes, allergiques, inflammatoires, bactériennes intracellulaires, néoplasiques, neurologiques, parasitaires et virales.

FOND DE L'INVENTION
Les interleukines (IL) constituent une catégorie de molécules diverses consistant en peptides et protéines sécrétés dont la fonction principale est la médiation d'interactions locales entre les cellules. La plupart des informations concernant les IL proviennent de travaux effectués avec des leucocytes, notamment des lymphocytes.

Il est à présent admis de manière générale que les lymphocytes T CD4 peuvent être divisés en deux souscatégories fonctionnellement distinctes, consistant en les lymphocytes T auxiliaires 1 (Thl) et les lymphocytes T auxiliaires 2 (Th2), caractérisées par la gamme de cytokines qui sont produites par ces cellules. Ainsi, les cellules Thl de souris produisent l'interféron y (IFN-y), le facteur de nécrose de tumeur P (TNF ss) et l'interleukine 2 (IL-2), tandis que les cellules Th2 de souris produisent les IL-4,
IL-5, IL-6, IL-9, IL-10 et IL-13. Les cellules Thl et Th2 humaines sécrètent des gammes similaires aux cytokines, bien que la synthèse de IL-2, de IL-6, de IL-10 et de IL-13 ne soit pas aussi étroitement limitée à une seule sous-catégorie comme dans le cas de la souris. Plusieurs autres cytokines sont sécrétées à la fois par les cellules Thl et les cellules
Th2, ces cytokines comprenant le IL-3, le TNF a, le facteur de stimulation de colonies de granulocytes-macrophages (GM
CSF), la Met-enképhaline et certaines chimiokines (CK).

D'autres cytokines nouvelles, telles que la IL-18 (Yoshimoto et al. 1997, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94, 3948-3953), appelée initialement facteur d'induction d'interféron gamma (IGIF), potentialisant les réponses de Thl, continuent à être décrites et il est hautement probable que d'autres cytokines nouvelles qui influencent une réponse des cellules Thl ou
Th2, seront découvertes dans le futur.

Les gammes de cytokines sécrétées par les cellules Thl et Th2 correspondent à des phénotypes effecteurs activés engendrés au cours d'une réponse immunitaire. Elles n'existent pas dans les lymphocytes T naïfs. Ainsi, lorsqu'elles sont stimulées initialement par un antigène ou des cellules présentatrices d'antigène (APC), les lymphocytes T
CD4+ naïfs produisent initialement seulement la IL-2, puis subissent une différenciation en phénotypes qui sécrètent d'autres cytokines. Il a été identifié une troisième catégorie de lymphocytes T CD4+, appelés cellules ThO, consistant en cellules effectrices partiellement différenciées qui expriment à la fois les gammes de cytokines des cellules Thl et Th2 et qui peuvent représenter un stade transitoire dans le processus de différenciation en cellules Thl et Th2. Une quatrième catégorie de lymphocytes T CD4+, appelés cellules
Th3, produisant de hautes teneurs en facteur de croissance transformant p (TGFp), a été également reconnue.

Les cellules Thl et Th2 produisent non seulement des séries différentes de cytokines, ayant pour résultat des propriétés fonctionnelles distinctes, mais expriment également de manière préférentielle certains marqueurs d'activation. Ainsi, les cellules Thl humaines expriment préférentiellement le gène d'activation de lymphocyte 3 (LAG-3), qui est un membre de la superfamille des immunoglobulines, tandis que les cellules Th2 humaines expriment préférentiellement
CD 30, qui est un membre de la famille des récepteurs de TNF.

L'expression de LAG-3 est accrue par le IFN y et est inhibée par la IL-4, tandis que l'expression CD 30 dépend de la présence de IL-4. Les cellules Thl expriment également la sélectine E, des ligands de sélectine p et la chaîne P du récepteur de IL-2, qui ne sont pas exprimés par les cellules
Th2.

Les sous-catégories de cellules cytotoxiques (Tc) consistant en lymphocytes T CD8+ peuvent également être différenciées sur la base des cytokines qu'elles produisent.

Ainsi, les cellules Tcl sécrètent la IL-12 et le IFN y et les cellules ayant le profil des cellules Tc2 sécrètent la IL-4 et la IL-5 et sont présentes dans certaines conditions pathologiques, telles que la lèpre lépromateuse et l'infection par le VIH d'individus ayant de hautes teneurs en IgE.

Les fonctions des cellules Thl et Th2 présentent une bonne corrélation avec leurs cytokines distinctives.

Ainsi, les cellules Thl sont impliquées dans les réponses immunitaires à médiation cellulaire (activation des macrophages, cytotoxicité cellulaire sous la dépendance d'anticorps et hypersensibilité de type retardé) et dans la résistance à une infection virale, et plusieurs cytokines des cellules Thl actives des réactions cytotoxiques et inflammatoires. Les cytokines des cellules Th2 potentialisent la production d'anticorps, en particulier les réponses par IgE, et accroissent également l'immunité muqueuse par la production de facteurs de croissance et facteurs de différenciation pour des mastocytes et les cellules et eosinophiles. En conséquence, les cellules Th2 sont associées à la production d'anticorps, à des réactions allergiques et à la sensibilité à une infection virale.

Les cytokines des cellules Thl et Th2 sont mutuellement inhibitrices pour la différenciation et les fonctions effectrices du phénotype réciproque. Ainsi, la IL12 et le IFN y inhibent sélectivement la prolifération des cellules Th2 et la IL-4 et IL-10 inhibent le développement des cellules Thl. Dans de nombreux cas, l'utilisation de cytokines ou d'anticytokines peut inverser la résistance de l'hôte ou la sensibilité à une infection. Voir le Thl-Th2
Paradigm, Sergio, Romagani, Immunology Today, Juin 1997, 18:6 (263-266).

L'interleukine-2 (IL-2) est un modificateur de réponse biologique qui active les lymphocytes T cytolytiques et les cellules tueuses naturelles (voir Kuziel, W.A. et
Gree, W. C. (1991), Intreleukin-2, in The Cytokine Handbook,
A. Thompson (Ed.), San Diego, California, Academic Press, pages 83-102). En conséquence, IL-2 a été étudié en ce qui concerne son potentiel thérapeutique contre des infections malignes, des immunodéficiences et des infections chroniques.

Fondamentalement, la IL-2 régule la prolifération et la différenciation des lymphocytes T et d'autres cellules lymphoïdes, en se liant à un récepteur de surface cellulaire à forte affinité constitué de trois chaînes polypeptidiques alpha, bêta et gamma (Waldmann, T.A., 1993, Immunol. Today, 14:264). Les résultats présentés par Vasily Gelfanov et al.

(Proceedings of the Keystone Symposium on Mucosal Immunity, 1997, S112:12) montrent que les lymphocytes intra-épithéliaux intestinaux, dont on sait qu'ils diffèrent par un certain nombre d'aspects importants des lymphocytes T du système immunitaire central, répondent préférentiellement à un facteur de croissance de lymphocyte T identifié récemment, consistant en l'interleukine 15 (IL-15), plutôt qu'au facteur de croissance de lymphocyte T classique consistant en IL-2.

La IL-15 interagit avec un récepteur de surface cellulaire hétérotrimère qui consiste en les sous-unités bêta et gamma du récepteur de IL-2 ainsi qu'une sous-unité de liaison de IL-15 à forte affinité appelée IL-15R alpha.

Puisque les deux sous-unités bêta et gamma du récepteur de
IL-2 sont requises pour l'avertissement par la IL-2 ou la IL15, il n'est pas surprenant qu'il ait été indiqué que ces deux cytokines présentent un certain nombre d'activités biologiques communes (Kennedy, M.K. et Park L.S, 1996, J.

Clin. Immunol., 16:134-143).

En commun avec l'interféron alpha, la IL-12 est un des principaux régulateurs de l'activité des cellules tueuses (NK) naturelles, qui joue un rôle important dans la défense de l'hôte contre des cellules néoplasiques (Kobayashi, M., 1989, J. Exptl. Med., 170:827). La IL-12, qui est produite principalement par les macrophages, induit également la libération d'interféron gamma par les lymphocytes T activés et les cellules NK, et présente une synergie avec la IL-2 pour engendrer des cellules tueuses activées par une lymphokine (LAX) (Aragane et al., 1994, J. Immunol., 153:5366-5372). La IL-12, conjointement avec la IL-2 et l'interféron gamma, joue un rôle central dans le développement des cellules effectrices consistant en lymphocytes T auxiliaires de type 1 (Thl). Une réponse par les cellules Thl est souvent associée à une résistance à une infection et il a été montré récemment qu'elle joue un rôle décisif dans l'action antivirale de l'interféron alpha 2 chez des patients infectés par le virus de papillome humain (Arany, I. et
Tyring, K., 1996, J. Interferon and Cytokine Res., 16:453460).

I1 est considéré que l'activité antitumorale de la IL-2 administrée par voie générale est soumise principalement à une médiation par les cellules LAK (Natuk et al., 1989, J. Virol., 63:4969-4971). I1 est considéré que l'activité antivirale de la IL-2 administrée par voie générale est soumise principalement à une médiation par la cytotoxicité cellulaire sous la dépendance d'anticorps à médiation par les macrophages (ADCC), qui fait intervenir l'induction de l'interféron gamma dans les lymphocytes T auxiliaires (Kohe et al., J. Inf. Dis., 159:239-247), et par l'intermédiaire des cellules LAK (Natuk et al., 1989, J. Virol., 63:4969 4971).

Les interleukines sont administrées généralement par voie parentérale. Cependant, l'administration parentérale de IL-2 est associée à un certain nombre d'effets secondaires graves, tels qu'une toxicité hématologique et un dysfonctionnement rénal (voir Haworth, C., et Feldmann, M., 1991,
Applications of cytokines in human immunotherapy in The
Cytokine Handbook, A. Thompson (ED.), San Diego, California
Academic Press, pages 301-324). Des effets toxiques similaires ont été observés pour un certain nombre d'autres interleukines.

De la IL-2 humaine recombinante administrée par voie générale a été également utilisée couramment pour le traitement d'un certain nombre de maladies néoplasiques, comprenant le carcinome des cellules rénales (Rozenberg et al., 1989, Ann. Surg., 210:474) et un mélanome malin (Rozenberg et al., 1987, New Engl. J. Med., 316:889) et, dans une moindre mesure, pour le traitement de certaines maladies virales comprenant l'hépatite B chronique (Kakumu et al, 1988, Hepatology, 8:487-492). Dans toutes ces études, il a été observé une toxicité considérable, comprenant de la fièvre, des frissons, une anorexie et de la fatigue (Kakumu et al., 1988, Hepatology, 8:487-492).

Une série de brevets et de publications de brevets mentionne en termes généraux entre autres, la possibilité d'administration orale de diverses interleukines.

Par exemple, le document WO 91/16917 fait connaître la IL-1 pour le traitement d'ulcères gastriques et de l'obésité ; le document WO 92/11030 fait connaître la IL-4 pour amplifier la réponse immunitaire à des agents immunogènes dans des vaccins ; le brevet des Etats-Unis d'Amérique N 5 601 814 fait connaître la IL-6 pour le traitement d'un choc toxique le brevet des Etats-Unis d'Amérique N" 5 188 828 fait connaître la IL-6 pour amplifier les taux d'érythropoïétines endogènes ; et le document WO 96/25171 fait connaître la IL12 pour inhiber l'angiogénèse. Cependant, ces descriptions générales ne comportent pas l'absorption orale effective de l'ingrédient actif, et aucun des exemples ne renferme des descriptions de l'absorption orale ou de l'activité de protéine après administration orale. Par exemple, bien que le brevet des Etats-Unis d'Amérique Ne 5 449 515 décrive en termes généraux l'administration orale de IL-4, il révèle également que la IL-4, si elle est incorporée à une forme posologique orale peut être enrobée, ou administrée, avec une matière destinée à empêcher son inactivation et décrit diverses matières destinées à être utilisées pour éviter l'inactivation. Les mesures proposées comprennent des inhibiteurs d'enzymes et l'incorporation de l'interleukine à des liposomes (voir colonne 3, 7-22). I1 est manifeste que l'administration par voie buccale pour délivrer cette molécule à l'intestin grêle est envisagée effectivement par ces références.

Koren S. et Fleischmann W.R. Jr., Journal of
Interferon Research, 14(6):343-7, décembre 1994, ont décrit la modulation des numérations de leucocytes périphériques et de la fonction de la moelle osseuse chez des souris dépourvues d'agents pathogènes par administration orale de rhIL-2 et ont déterminé les degrés de suppression des nombres de leucocytes sanguins similaires à ceux atteints avec une dose sous-cutanée. Ils ont conclus que la IL-2 administrée par voie orale peut exercer des effets systémiques et ont émis l'hypothèse que l'administration orale de IL-2 peut présenter un potentiel thérapeutique. Marinaro, M., Boyaka, P.N.,
Finkelman, F.D., Kiyono, H., Jackson, R.J., Jirillo, E., et
McGhee, J.R., J. Exp. Med., 3 Février 1997, 185(3), pages 415-27, ont déterminé que l'administration intragastrique, mais non parentérale, de IL-12 murine recombinante (rmIL-12) redirige les réponses des lymphocytes T auxiliaires de type 2 (Th2) à un vaccin oral sans modifier les réponses par IgA de la muqueuse intestinale. Les auteurs ont conclus que IL-12 peut être administrés par voie "orale" pour réguler la réponse systémique à un vaccin oral et ont suggéré que de la IL-12 orale formulée pour être délivrée aux plaques de Peyer de l'intestin grêle peut également exercer des effets immunomodulateurs au niveau des muqueuses.

Marinaro, M., Boyaka, P.N., Jackson, R.J.,
Finkelman, F.D., Kiyono, H., McGhee, J.R., J. Allergy Clin.

Immunol., 99, N 1, Pt.2, S34, 1997, ont étudié l'administration intranasale, par rapport à l'administration orale, de IL-12 complexée avec des liposomes. Ils ont trouvé que l'administration de IL-12 par voie intranasale exacerbe les réponses de type Th2, tandis que l'administration de IL-12 par voie orale redirige les réponses de type Th2 vers des réponses de type Thî. Cela montre que l'administration de IL12 par deux voies différentes au niveau des muqueuses a pour résultat des types opposés de réponses immunitaires muqueuses et systémiques à un vaccin oral.

Cependant, il est manifeste que, dans toutes ces publications de brevets et publications de la littérature, l'expression "administration orale" désigne l'administration par voie buccale pour délivrer la molécule à l'intestin grêle, où la IL est absorbée effectivement.

La Demanderesse a trouvé à présent de manière inattendue que l'administration de cytokines spécifiques des cellules Thl à la muqueuse buccale a un effet considérable de prolongement de la survie de souris après épreuve avec des virus et des tumeurs qui sont normalement rapidement létaux.

SOMMAIRE DE L'INVENTION
La présente invention propose une méthode pour stimuler les mécanismes de défense d'un hôte consistant en un mammifère par administration à la muqueuse buccale d'une cytokine spécifique de cellules Thl ou Th2 de préférence à des doses qui induisent un effet de stimulation des mécanismes de défense de l'hôte, c'est-à-dire une utilisation d'une cytokine spécifique des cellules Thl ou Th2 pour la préparation d'un médicament, destinée à la muqueuse buccale, pour stimuler les mécanismes de défense d'un hôte consistant en un mammifère, des compositions pour délivrer à la muqueuse buccale les cytokines et des méthodes de traitement d'états pathologiques avec les cytokines.

La présente invention propose également une méthode de stimulation d'une réponse immunitaire chez un mammifère, comprenant l'étape consistant à administrer à ce mammifère une quantité immunostimulatrice d'une cytokine spécifique des cellules Thl et Th2 par contact avec la muqueuse buccale, c'est-à-dire l'utilisation d'une cytokine spécifique des cellules Thl ou Th2 pour la préparation d'un médicament, destiné à la muqueuse buccale, pour stimuler les mécanismes de défense de l'hôte consistant en un mammifère.

Dans la présente invention et ci-après, les formes de réalisation représentées en tant que formes préférées pour les méthodes de stimulation des mécanismes de défense de l'hâte ou d'une réponse immunitaire sont également les formes de réalisation préférées pour les utilisations des cytokines spécifiques des cellules Thl ou Th2 pour la préparation d'un médicament destiné à la muqueuse buccale.

De préférence, la cytokine des cellules Thl est choisie dans le groupe consistant en l'interféron alpha, 1 'interféron bêta, 1' interféron oméga, 1' interféron gamma, la
IL-2, la IL-12, la IL-15, la IL-18, le GM-CSF et le facteur de nécrose de tumeur bêta (lymphotoxine). De préférence, la cytokine des cellules Th2 est choisie dans le groupe consistant en la IL-4, la IL-5, la IL-10 et la IL-13. De préférence, la cytokine est produite par la technologie de 1'ADN recombinant.

Les méthodes et compositions de la présente invention sont applicables au traitement de l'homme et de mammifères autres que l'homme, comprenant des animaux de compagnie tels que les chats et les chiens, et des animaux domestiques tels que les chevaux, les bovins et les moutons.

La méthode de la présente invention permet également l'administration d'une quantité d'une cytokine spécifique des cellules Thl ou Th2 qui est supérieure à une dose de la même cytokine qui induit une réponse pathologique lorsqu'elle est administrée par voie parentérale. En variante, la présente invention propose une méthode pour accroître l'indice thérapeutique d'une cytokine des cellules
Thl ou Th2 par administration de la cytokine à la muqueuse buccale.

DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION
La présente invention est décrite maintenant en détail à titre de référence seulement au moyen des définitions et des exemples suivants. Tous les brevets et toutes les publications mentionnés dans le présent mémoire sont expressément cités à titre de référence dans ce présent mémoire.

L'expression "muqueuse buccale" désigne la muqueuse tapissant la cavité buccale et/ou la cavité rhinopharyngienne. Aux fins des expérimentations animales décrites dans le présent mémoire, les expressions "muqueuse buccale", "oropharyngienne", "intranasale/orale", "intranasale plus orale" et "dans/ou" par référence à la voie d'administration de la cytokine sont synonymes et on doit considérer qu'elles désignent l'administration de la préparation de cytokine en profondeur dans la cavité nasale ou la cavité buccale de telle sorte que la cytokine soit distribuée rapidement dans la bouche et la gorge du mammifère receveur, de manière à assurer le contact avec la muqueuse tapissant cette cavité.

Bien que ce soit le site d'absorption, et non la méthode d'administration, qui soit déterminant, il n'est pas nécessaire que la cytokine entre en contact avec la totalité de la muqueuse tapissant les cavités nasale, orale et pharyngienne.

Lorsqu'il est utilisé dans le présent mémoire sans autre qualification, le terme "cytokine" désigne une cytokine spécifique des cellules Thl ou Th2, c'est-à-dire une cytokine qui stimule l'activité des cellules Thl ou Th2.

Tel qu'il est utilisé dans le présent mémoire, le terme "interleukine" désigne une protéine consistant en une cytokine produite par des lymphocytes, comprenant, mais à titre non limitatif, celles appelées couramment IL-2, IL-3,
IL-4, IL-5, IL-10, IL-12, IL-13, IL-15, IL-18 et leurs mélanges. L'interleukine peut être dérivée de sources naturelles mais est de préférence un produit recombinant. Aux fins de la présente invention, le terme "cytokine" désigne également des polypeptides ou leurs fragments qui ont une activité de cytokine, et des formes chimères ou mutantes d'une cytokine dans lesquelles des modifications de séquence ont été introduites, par exemple pour accroître la stabilité, sans influencer la nature de leur activité biologique.

D'autres modifications telles que des formes conjuguées avec des motifs polyoxyéthylène et des protéines de fusion avec des immunoglobulines ou d'autres protéines entrent également dans le cadre de la présente invention.

L'administration à la muqueuse buccale peut comprendre l'administration d'une dose efficace de cytokine sous forme d'une dose unique, ou bien la dose efficace peut être administrée en une pluralité de doses plus petites en un temps suffisant pour engendrer une immunostimulation équivalente à celle provoquée par une dose unique. De manière similaire, la dose de cytokine peut être admnistrée de manière continue pendant un temps suffisant pour induire un effet équivalent à celui d'une dose unique.

La présente invention propose une méthode pour le traitement d'une affection faisant partie du groupe consistant en infections bactériennes intracellulaires, maladies neurologiques, états allergiques, états inflammatoires, maladies néoplasiques, infections parasitaires et infections virales, comprenant l'étape consistant à administrer au mammifère une quantité efficace d'une cytokine spécifique des cellules Thl par contact avec la muqueuse buccale.

La présente invention propose en outre une méthode pour le traitement de maladies auto-immunes, comprenant, mais à titre non limitatif, l'arthrite rhumatoïde, le diabète de type I, le lupus érythémateux, la sclérose en plaques et le psoriasis par administration à la muqueuse buccale d'une cytokine spécifique des cellules Th2.

Des états inflammatoires tels que la colite ulcérative et la maladie de Crohn, des infections bactériennes intracellulaires comprenant des infections par des
Listeria, des infections mycobactériennes telles que la lèpre et la tuberculose, des maladies neurologiques comprenant la sclérose en plaques et la sclérose latérale amyotrophique, des maladies parasitaires tels que le palludisme, la schistosomiase et la leishmaniose, et des infections par le
CMV ainsi que des états allergiques comprenant l'asthme et la dermatite atopique, peuvent être traités par administration d'une cytokine à la muqueuse buccale.

La présente invention propose également une méthode pour le traitement d'états néoplasiques tels qu'un myélome multiple, la leucémie à tricholeucocytes, la leucémie myélogène chronique, un lymphome de rang bas, un lymphome cutané à lymphocytes T, des tumeurs carcinoïdes, le cancer du col, des sarcomes comprenant le sarcome de Kaposi, des carcinomes comprenant le carcinome des cellules rénales, un carcinome hépatocellulaire, un carcinome rhinopharyngien, des affections malignes hématologiques, le cancer colorectal, un glioblastome, les papillomes laryngés, le cancer du poumon, le cancer du côlon, un mélanome malin et des tumeurs cérébrales comprenant des tumeurs cérébrales malignes.

Bien que la méthode de la présente invention puisse être utilisée sans un traitement conjoint avec d'autres agents, il est envisagé que cette forme de réalisation de la présente invention soit particulièrement utile dans les cas suivants
a) comme traitement d'appoint, après une intervention chirurgicale, une chimiothérapie ou une radiothérapie (rayons X, rayons W), effectuée par des protocoles classiques
b) pour le traitement de néoplasies sensibles aux cytokines, la méthode de la présente invention étant utilisée seule ou en association avec une chimiothérapie ou radiothérapie classique
c) pour le traitement de néoplasies résistantes aux cytokines, la méthode de la présente invention étant utilisée seule ou de préférence en association avec une chimiothérapie ou radiothérapie classique.

Dans une troisième forme de réalisation, la maladie à traiter consiste en une infection virale. L'infection virale peut être une infection aiguë ou fulminante, telle qu'une infection par un rhinovirus, un virus grippal, le virus du zona, le virus de la dingue, ou une encéphalite virale, comprenant, mais à titre non limitatif, l'encéphalite provoquée par le virus de la rougeole, l'encéphalite de la vallée de la Murray, l'encéphalite japonaise B, l'encéphalite transmise par les tiques et l'encéphalite herpétique ; des fièvres hémorragiques telles que la fièvre provoquée par le virus Ebola, la fièvre provoquée par le virus de Marburg, la fièvre de Lassa ; des infections par le virus de Hanta, et d'autres infections virales considérées comme étant transmises des animaux à l'homme, telles que l'infection par un morbillivirus équin. Dans la plupart de ces affections, il n'existe aucun traitement et/ou aucun vaccin actuellement disponible, et des traitements de soutien peuvent être inadéquats. En variante, l'état viral peut être le résultat d'une infection chronique, telle que l'hépatite B, l'hépatite
C, l'hépatite D ou d'autres formes d'hépatite virale, ou d'une infection par un cytomégalovirus (CMV), par le virus d'immunodéficience humaine (VIH), par un virus de papillome humain (HPV) et par les virus herpes simplex I & II (HSV
I & II).

La méthode et la forme posologique de la présente invention peuvent de nouveau être utilisées conjointement avec d'autres traitements. Par exemple, pour une infection par un virus de l'herpès, il est possible d'utiliser l'acyclovir ou le ganciclovir. Pour une infection par le VIH, il est possible d'utiliser l'azidothymidine (zidovudine) ou bien un ou plusieurs autres inhibiteurs de la transcriptase inverse de VIH, et/ou des inhibiteurs de protéase de VIH.

Dans une quatrième forme de réalisation, la maladie à traiter est le palludisme et une cytokine de nouveau administrée de la manière décrite ci-dessus. L'organisme responsable du palludisme peut consister en Plasmodium malariae, Plasmodium vivax, Plasmodium falciparum ou Plasmodium ovale. I1 est envisagé en particulier que la méthode de la présente invention confère une protection contre l'évolution du palludisme vers la forme cérébrale. Facultativement, un médicament antipalludique, par exemple la chloroquine, peut également être utilisé.

Un autre aspect de la présente invention consiste en l'utilisation d'une composition pharmaceutique pour stimuler par l'intermédiaire de la muqueuse buccale les mécanismes de défense d'un hôte consistant en un mammifère, composition qui comprend une cytokine stimulant les cellules
Thl ou Th2 et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable utile pour l'administration à la muqueuse buccale.

De la manière précitée, dans la présente invention, les formes de réalisation présentées en tant que formes préférées pour les méthodes destinées à la stimulation des mécanismes de défense de l'hâte, sont également les formes de réalisation préférées pour les utilisations des cytokines spécifiques des cellules Thl ou Th2 pour la préparation d'un médicament destiné à la muqueuse buccale pour stimuler les mécanismes de défense d'un hôte consistant en un mammifère.

Dans un autre aspect, la présente invention propose une composition pharmaceutique pour l'administration à la muqueuse buccale, comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'au moins une cytokine spécifique des cellules Thl ou Th2 et un support pharmaceutiquement acceptable apte à l'administration à la muqueuse buccale. La composition peut être présentée sous forme d'une solution d'un comprimé, d'une pastille, d'un sirop, d'un liquide de pulvérisation nasale, de gouttes nasales, d'une formulation apte à l'inhalation, d'une pâte ou d'un système d'administration à la muqueuse buccale par libération contrôlée. Facultativement, la composition peut contenir des tampons, des stabilisants, des agents épaississants, des activateurs d'absorption et des agents d'accroissement de viscosité, etc.

La méthode peut être mise en oeuvre en tant que seule approche thérapeutique ou bien comme traitement d'appoint à une radiothérapie, une chimiothérapie ou un traitement avec un ou plusieurs autres agents ou avec des inducteurs d'interférons ou inducteurs d'interleukines. Dans certains cas, il est possible d'utiliser plus d'une cytokine, conjointement ou de manière successive, pour tirer partie d'autres mécanismes d'action.

Les résultats obtenus jusqu'à présent par la
Demanderesse indiquent qu'il n'existe aucun effet toxique significatif et qu'il existe dans le pire des cas seulement de faibles effets secondaires engendrés par l'administration de cytokines à la muqueuse buccale. Ainsi, la méthode de la présente invention permet également l'administration d'un

Les cytokines administrées à la muqueuse buccale peuvent être administrées à une dose inférieure, égale ou supérieure à la dose parentérale à laquelle se produit la stimulation des mécanismes de défense de l'hôte. Dans une forme particulièrement appréciée de la présente invention, la dose totale est comprise dans l'intervalle d'environ 0,01 Ag/kg à environ 150 yg/kg.

Facultativement, la cytokine peut être administrée avec un inducteur ou potentialisateur de production, d'activation ou de libération de cytokines. L'inducteur peut être administré conjointement avec la cytokine destinée à la muqueuse buccale, ou bien peut être administré séparément.

Des inducteurs de IL sont connus ; par exemple, un liposaccharide bactérien stimule la libération de diverses IL et d'autres cytokines.

Les méthodes, utilisations et compositions de la présente invention peuvent être utilisées facultativement en association avec un ou plusieurs autres traitements pour l'affection spécifique, et le médecin traitant ou le vétérinaire sera aisément apte à choisir de tels autres traitements pouvant être appropriés dans les cas considérés.

Les méthodes, dans la mesure ou elles concernent le traitement d'états néoplasiques, sont destinées à induire et/ou maintenir une rémission de la maladie. L'expression "conjointement avec un autre traitement" signifie que la cytokine est administrée avant, pendant et/ou après l'intervention chirurgicale, la radiothérapie ou une autre chimiothérapie. Le protocole convenant le mieux dépend de divers facteurs, de la manière décrite ci-dessous.

En particulier, il est envisagé que la méthode de la présente invention soit utilisée de préférence en association avec au moins un autre traitement choisi dans le groupe consistant en une chimiothérapie au moyen de médicaments cytostatiques, l'utilisation d'une ou plusieurs autres cytokines ayant une activité anti-cancéreuse mais qui ont un mécanisme d'action différent de celui de la cytokine administrée par la muqueuse buccale, l'utilisation d'agents antiangiogéniques, et l'utilisation d'agents qui potentialisent l'activité de cytokines spécifiques. De préférence, la seconde cytokine consiste en l'interféron a, l'interféron p, l'interféron y, l'interféron X ou l'interféron consensus ; de préférence, l'inhibiteur d'angiogénèse consiste en le AGM1470 (ester (3R-(3a,4a(2R*,3R*),5ss,6ss))-5-méthoxy-4-(2- méthyl-3-(3-méthoxy-2-butényl)oxirannyl)-1-oxaspiro(2.5]oct- 6-ylique d'acide (chloracétyl)carbamique].

Des exemples d'agents chimiothérapeutiques anticancéreux sont des antimétabolites tels que la 6-mercaptopurine, le 5-fluoro-uracile, le cytosine-arabinoside et les métabolites et dérivés de ces agents. D'autres agents chimiothérapeutiques anti-cancéreux sont des antifolates tels que le méthotrexate ou des agents dérivés de produits naturels, par exemple dérivés d'alcaloïdes extraits de la pervenche du genre Vinca, tels que la vinblastine, la vincristine et la colchicine ; l'adriamycine, la daunorubicine, la doxorubicine, le téniposide ou l'étoposide. Ces agents chimiothérapeutiques anti-cancéreux comprennent également des médicaments anti-cancéreux dérivés du platine, tels que le cisplatine et le carboplatine. En outre, les agents de la présente invention peuvent être administrés avec le cyclophosphamide, la busulfone, la procarbazine, la dacarbazine, la carmustine, la lomustine, la méchloréthamine, le chlorambucile, l'hydroxyurée, la nitroso-urée et ses dérivés, le melphalan, la mitotone, le taxol, l'a-difluorométhylornithine et le spirogermanium. Le plus souvent, une résistance des médicaments multiples est observée avec les alcaloïdes dérivés de la pervenche du genre Vinca, les anthracyclines consistant en daunorubicine, doxorubicine et adriamycine ; et l'étoposide et le téniposide ; moins fréquemment avec des antimétabolites et les autres agents chimiothérapeutiques.

Les médicaments cytostatiques préférés pour l'administration conjointement avec la cytokine comprennent, mais à titre non limitatif, le cyclophosphamide, le cisplatine, le carboplatine, la carmustine (BCNU ; N,N-bis(2 chloréthyl) -N-nitroso-urée), le méthotrexate, l'adriamycine, 1 'a-difluorométhylornithine et le 5-fluoro-uracile.

Dans la préparation des compositions pharmaceutique de la présente invention, il est possible d'utiliser divers véhicules et excipients pour la cytokine, comme cela sera manifeste pour l'homme de l'art. Un exemple de technologie de formulation est décrit entre autres, par Remington
The Science and Practice of Pharmacy, 19ème édition, Mack
Publishing Co., Easton, PA, 1995, et dans les éditions précédentes de cet ouvrage. La formulation de cytokine peut comprendre des agents accroissant la stabilité, telle que la glycine ou l'alanine, de la manière décrite dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique N" 4 496 537, et/ou un ou plusieurs supports, tels qu'une protéine. Par exemple, pour le traitement de l'homme, de la sérum-albumine humaine de qualité pharmaceutique, facultativement en association avec du sérum physiologique tamponné avec un phosphate servant de diluant, est couramment utilisée. Lorsque l'excipient pour la cytokine consiste en sérum-albumine humaine, la sérum-albumine humaine peut être dérivée de sérum humain, ou bien peut être d'origine recombinante.

La cytokine peut être administrée par un moyen qui assure le contact de la cytokine avec la cavité de la muqueuse buccale du receveur pendant un temps suffisant pour parvenir à la stimulation désirée. D'autres muqueuses peuvent présenter une réponse similaire. Ainsi, on comprendra aisément que la présente invention n'est pas limitée à un quelconque type particulier de formulation. Le présent mémoire décrit l'administration d'une cytokine en profondeur à la muqueuse de la cavité buccale ; cela peut être réalisé avec des liquides, des substances solides ou des aérosols, ainsi qu'avec des gouttes nasales ou des liquides de pulvérisation nasale. Ainsi, la présente invention comprend, mais à titre non limitatif, un liquide, une formulation à pulvériser, un sirop, des pastilles, des comprimés buccaux et des formulations pour nébuliseur. L'homme de l'art reconnaîtra que, pour les formulations en aérosols ou formulations pour nébuliseurs, le diamètre des particules de la préparation peut être important, et il sera au fait de procédés convenables permettant de modifier les diamètres de particules. Des formulations micronisées sont envisagées spécifiquement.

Dans un aspect, la cytokine est administrée en une dose unique. En variante, la cytokine est administrée en une pluralité de doses plus faibles, réparties au cours du temps, de telle sorte que l'effet total soit équivalent à celui de l'administration de la dose unique plus forte. Une approche concernant ce mode d'administration consiste en la préparation d'un dispositif à libération prolongée ou contrôlée adhérant à, ou implanté dans, la cavité buccale et conçu pour libérer une cytokine au cours du temps en une quantité équivalente à une forte dose unique.

Une formulation d'une cytokine destinée à être utilisée au niveau de la muqueuse buccale est la suivante (tous les pourcentages sont exprimés en poids/poids)
comprimé : Dextrose pharmacopée britannique (BP) 45 % ; gélatine BP 30 % ; amidon de blé BP 11 % ; carmellose sodique BP 5 % ; albumine d'oeuf BPC 4 % ; leucine pharmacopée des Etats-Unis d'Amérique (USP) 3 % ; propylène-glycol
BP 2 % et cytokine 1 %. I1 est possible d'utiliser le comprimé tel quel et de le laisser se dissoudre lentement dans la bouche ou bien il peut être dissous dans de l'eau et maintenu dans la bouche en contact avec la muqueuse buccale, de la manière requise.

Une pâte renfermant une cytokine peut être préparée, de la manière décrite dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique Ne 4 675 184, à partir de 45 % de glycérol, 2 % de
CMC sodique, 25 % d'un tampon au citrate (pH 4,5), de 1 d'une cytokine et d'une quantité d'eau distillée permettant d'atteindre 100 %. I1 est possible de faire adhérer à la muqueuse buccale la pâte renfermant une cytokine.

De manière similaire, un gargarisme ou un sirop peut être préparé en ajoutant la quantité désirée de cytokine à une formulation de bain de bouche ou de sirop pour la toux disponible dans le commerce.

Dans les intervalles de doses spécifiques précités, le traitement, dans n'importe quel cas désiré, dépend de la nature de l'affection, du stade de la maladie, d'une thérapeutique précédente, d'une autre thérapeutique se poursuivant, de l'état général de santé du mammifère, de la sensibilité du sujet à la cytokine, etc., et est donc à la discrétion du médecin ou vétérinaire, en gardant à l'esprit toutes ces circonstances. La durée du traitement varie bien entendu en fonction de l'état traité ; par exemple, il est prévu que le traitement d'un cancer à développement lent, tel que le cancer de la prostate, implique une durée de traitement différente de celle d'un cancer à croissance rapide, tel qu'un carcinome hépatocellulaire. De manière similaire, il est prévu qu'une infection aiguë telle que celle provoquée par le virus Ebola implique une durée de traitement différente de celle d'une affection chronique, telle que l'hépatite.

La dose efficace décrite dans le présent mémoire est une dose qui peut engendrer une réponse pathologique chez le mammifère lors de son administration par voie parentérale, mais qui est à la fois efficace et non toxique ou moins toxique lorsqu'elle est administrée par l'intermédiaire de la muqueuse buccale. Une réponse pathologique peut être aiguë, chronique ou cumulative et peut se manifester par des modifications de la composition chimique sanguine, telles qu'une leucopénie, une dépression de la fonction de la moelle osseuse, ou des modifications d'autres paramètres histologiques. Telle qu'elle est utilisée dans le présent mémoire, une réponse pathologique comprend des effets secondaires néfastes, tels que la fièvre, des frissons, une anorexie, la fatigue, un malaise ou des symptômes de type grippal, des réactions vasculaires, telles qu'une phlébite, et des réactions inflammatoires locales au site d'injection. Ces réponses varient considérablement entre les différents patients en raison de variations individuelles de sensibilité aux cytokines.

Pour de nombreux patients, il est prévu que les doses destinées à la muqueuse buccale excèdent les doses dont on sait qu'elles sont tolérées dans les protocoles parentéraux autorisés existants. Dans une forme de réalisation, la dose totale peut être administrée sous forme de plus faibles doses multiples au cours du temps, ou même peut être délivrée de manière continue ou de manière pulsatile par un dispositif à libération contrôlée adhérant å, ou implanté dans, la muqueuse buccale.

En résumé, la présente invention a pour objet
- Une méthode pour stimuler les mécanisme de défense d'un hôte consistant en un mammifère, méthode qui comprend l'administration à ce mammifère d'une quantité stimulante d'une cytokine de stimulation des cellules Thl ou
Th2 par contact avec la muqueuse buccale.

- Une telle méthode pour la stimulation d'une réponse immunitaire chez un mammifère, méthode qui comprend l'administration à ce mammifère d'une quantité stimulante d'une cytokine de stimulation des cellules Thl ou Th2 par contact avec la muqueuse buccale.

- Une telle méthode, dans laquelle ladite quantité est comprise dans l'intervalle d'environ 0,01 4g à environ 150 pg de cytokine par kg de poids corporel.

- Une telle méthode dans laquelle la quantité efficace de cytokine est administrée en une quantité unique.

- Une telle méthode dans laquelle la quantité efficace de cytokine est administrée en une pluralité de quantités plus petites pendant un temps suffisant pour engendrer une stimulation équivalente à celle provoquée par une quantité unique.

- Une méthode dans laquelle une quantité stimulante de cytokine est administrée de manière continue pendant un temps suffisant pour engendrer une stimulation équivalente à celle provoquée par une quantité unique.

- Une méthode pour stimuler les mécanismes de défense d'un mammifère hôte, méthode qui comprend l'administration à ce mammifère d'une quantité stimulante d'une cytokine de stimulation des cellules Thl par contact avec la muqueuse buccale.

- Une méthode pour stimuler une réponse immunitaire chez un mammifère, méthode qui comprend l'administration à ce mammifère d'une quantité stimulante d'une cytokine de stimulation des cellules Thl par contact avec la muqueuse buccale.

- Une telle méthode dans laquelle la quantité est comprise dans l'intervalle d'environ 0,01 jg à environ 150 g de cytokine par kg de poids corporel.

- Une telle méthode dans laquelle la quantité efficace de cytokine est administrée en une quantité unique.

- Une telle méthode dans laquelle la quantité efficace de cytokine est administrée en une pluralité de quantités plus petites pendant un temps suffisant pour engendrer une stimulation équivalente à celle provoquée par une quantité unique.

- Une telle méthode dans laquelle une quantité stimulante d'une cytokine est administrée de manière continue pendant un temps suffisant pour engendrer une stimulation équivalente à celle d'une quantité unique.

- Une méthode pour le traitement d'un état néoplasique chez un mammifère, méthode qui comprend l'admi nistration à ce mammifère d'une quantité efficace d'une cytokine de stimulation des cellules Thl par contact avec la muqueuse buccale, et une telle méthode dans laquelle la cytokine comprend l'interféron o, l'interféron a, l'interféron ss, l'interféron y, l' interleukine-2, l'interleukine-12, l'interleukine-15, l'interleukine-18, le facteur de nécrose de tumeur ss ou le facteur de stimulation des colonies de granulocytes-macrophages (GM-CSF).

- Une méthode pour le traitement d'une infection virale, méthode qui comprend l'administration au mammifère d'une quantité efficace d'une cytokine de stimulation des cellules Thl par contact avec la muqueuse buccale, et une telle méthode dans laquelle la cytokine comprend l'interféron a, l'interféron p, l'interféron o, l'interféron y, l'interleukine-2, l'interleukine-12, l'interleukine-15, l'interleukine-18, le facteur de nécrose de tumeur p et le facteur de stimulation des colonies de granulocytes-macrophages (GM-CSF).

- Une méthode pour le traitement d'une affection allergique chez un mammifère, qui comprend l'administration à ce mammifère d'une quantité efficace d'une cytokine spécifique des cellules Thl par contact avec la muqueuse buccale, une telle méthode dans laquelle la cytokine est choisie dans le groupe consistant en l'interféron a, l'interféron p, l'interféron o, l'interféron y, l'interleukine-2, 1' interleukine-l2, l'interleukine-15, l'interleukine-18, le facteur de nécrose de tumeur p et le GM-CSF.

- Une méthode pour le traitement de l'asthme, qui comprend l'administration au mammifère d'une quantité efficace d'une cytokine spécifique des cellules Thl par contact avec la muqueuse buccale, et une telle méthode dans laquelle la cytokine est choisie dans le groupe consistant en l'interféron a, l'interféron P, l'interféron o, l'interféron y, 1' interleukine-2, 1' interleukine-12, 1' interleukine- 15, l'interleukine-18, le facteur de nécrose de tumeur p et le GM-CSF.

- Une méthode pour le traitement de la dermatite atopique, qui comprend l'administration au mammifère d'une quantité efficace d'une cytokine spécifique des cellules Thl par contact avec la muqueuse buccale, et une telle méthode dans laquelle la cytokine est choisie dans le groupe consistant en l'interféron a, l'interféron p, 1'interféron o, 1' interféron Y, 1' interleukine-2, 1' interleukine-12, l'interleukine-15, l'interleukine-18, le facteur de nécrose de tumeur p et le GM-CSF.

- Une méthode pour la stimulation des mécanismes de défense d'un hôte consistant en un mammifère, méthode qui comprend l'administration au mammifère d'une quantité stimulante d'une cytokine de stimulation des cellules Th2 en contact avec la muqueuse buccale.

- Une méthode pour la stimulation d'une réponse immunitaire chez un mammifère, méthode qui comprend l'administration à ce mammifère d'une quantité stimulante d'une cytokine de stimulation des cellules Th2 par contact avec la muqueuse buccale.

- Une telle méthode dans laquelle ladite quantité est comprise dans l'intervalle d'environ 0,01 pg à environ 150 pg de cytokine par kg de poids corporel.

- Une telle méthode dans laquelle la quantité efficace de cytokine est administrée en une quantité unique.

- Une telle méthode dans laquelle la quantité efficace de cytokine est administrée en une pluralité de quantités plus petites pendant un temps suffisant pour engendrer une stimulation équivalente à celle provoquée par une quantité unique.

- Une telle méthode dans laquelle une quantité stimulante d'une cytokine est administrée de manière continue pendant un temps suffisant pour engendrer une stimulation équivalente à celle provoquée par une quantité unique.

- Une méthode pour le traitement d'une maladie auto-immune chez un mammifère, méthode qui comprend l'administration à ce mammifère d'une quantité efficace d'une cytokine de stimulation des cellules Th2 par contact avec la muqueuse buccale, et une telle méthode dans laquelle la cytokine est choisie dans le groupe consistant en l'interleukine-4, l'interleukine-5, l'interleukine-lo et l'interleukine-13.

- Une telle méthode dans laquelle la cytokine comprend une cytokine recombinante.

- L'utilisation d'une cytokine spécifique des cellules Thl ou Th2 pour la préparation d'un médicament à administrer à la muqueuse buccale pour la stimulation des mécanismes de défense d'un hôte consistant en un mammifère.

- Une composition pharmaceutique pour la stimulation, par contact avec la muqueuse buccale, des mécanismes de défense d'un hôte consistant en un mammifère, composition qui comprend une cytokine de stimulation des cellules Thl ou Th2 et au moins un excipient pharmaceutiquement utile pour l'administration à la muqueuse buccale.

- Une composition pharmaceutique dans une forme posologique unitaire apte à l'administration à la muqueuse buccale, comprenant environ 0,01 pg à environ 10 000 pg d'une cytokine de stimulation des cellules Thl ou Th2 et un support pharmaceutiquement acceptable, et une telle composition comprenant environ 10 Ug à environ 10 000 Ug de cytokine.

- Une telle composition comprenant une cytokine spécifique des cellules Thl.

- Une telle composition comprenant une cytokine spécifique des cellules Th2.

I. FORMULATIONS DE CYTOKINES
Interféron er/ss murin naturel
De l'interféron a/P murin a été préparé à partir de cultures de cellules C243-3 soumises à une induction avec le virus de la maladie de Newcastle (NDV) et a été purifié de la manière décrite précédemment (Tovey et al, Proc. Soc. Exp.

Biol. Med., 1974, 146:406-415). La préparation utilisée dans cette étude (lot n T638) avait un titre de 1 x 106 UI/ml et une activité spécifique de 5 x 107 UI/mg de protéine suivant l'analyse effectuée sur des cellules L929 de souris ayant subi une épreuve avec le virus de la stomatite vésiculaire (VSV) (Tovey et al, Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 1974, 146:406-415), et a été normalisé par rapport à la préparation internationale de référence d'interféron a/ss murin des US
National Institutes of Health (G-002-9004-5411).

Interleukine-2 murine recombinante
De l'interleukine-2- murine recombinante (IL-2) a été acquise auprès de R & D Systems, Inc. (Minneapolis,
MN). La préparation utilisée dans cette étude (Lot N MX056111) avait une pureté superieure à 97 % de la manière déterminée par électrophorèse sur gel de polyacrylamide au dodécylsulfate de sodium (SDS-PAGE) et avait une DE50 de 0,1 à 0,4 ng/ml, mesurée dans un essai de prolifération cellulaire en utilisant une lignée de lymphocytes T cytotoxiques murins sous la dépendance de IL-2, CTLL-2 (Gearing, A.J.H. and C.B. Bird, 1987, Lymphokines and interferons, a practical approach, Clements, M.J., Morris, A.G. et A.J.H. Gearing, eds., IRL Press, page 296).

Interleukine-4 murine recombinante
De l'interleukine-4 murine recombinante (IL-4) a été acquise auprès de Protein Institute Inc. (Paris, France).

La préparation utilisée dans cette étude (Lot N" P200M-04) avait une pureté supérieure à 98 % de la manière déterminée par SDS-PAGE et par une analyse de la séquence N-terminale.

La préparation avait une DE50 de 2,0 ng/ml.

Interleukine-5 murine recombinante
De l'interleukine-5 murine recombinante (IL-5) a été acquise auprès de R & D Systems Inc. La préparation utilisée dans cette étude (lot Ne 405-ML-025) avait une pureté supérieure à 97 % de la manière déterminée par SDS
PAGE et avait une DE50 de 0,04 à 0,15 ng/ml.

Interleukine-10 murine recombinante
De l'interleukine-10 murine recombinante (IL-10) a été acquise auprès de Protein Institute Inc. La préparation utilisée dans cette étude (lot N P200M-10) avait une pureté supérieure à 98 % de la manière déterminée par SDS-PAGE et par analyse de la séquence N-terminale. La préparation avait une DE50 de 2,0 ng/ml.

Interleukine- 12 murine recombinante
De l'interleukine-12 murine recombinante (IL-12) a été acquise auprès de R & D Systems Inc. La préparation utilisée dans cette étude (lot N PB017011) avait une pureté supérieure à 97 % de la manière déterminée par SDS-PAGE et avait une DE50 de 0,05 à 0,2 ng/ml, mesurée de la manière précitée.

Interleukine-13 murine recombinante
De l'interleukine-13 murine recombinante (IL-13) a été acquise auprès de R & D Systems Inc. La préparation utilisée dans cette étude (lot N" 413-ML-025) avait une pureté supérieure à 97 % de la manière déterminée par SDS
PAGE et avait une DE50 de 3 à 6 ng/ml.

Interleukine-15 murine recombinante
De l'interleukine-15 murine recombinante (IL-15) a été acquise auprès de Protein Institute Inc. La préparation utilisée dans cette étude (lot N" P200-15) avait une pureté supérieure à 98 % de la manière déterminée par SDS-PAGE et par analyse de la séquence N-terminale. La préparation avait une DE50 inférieure à 0,5 ng/ml, correspondant à une activité spécifique de 2 x 106 unités/mg.

Interleukine-18 murine recombinante
De l'interleukine-18 murine (IL-18) a été acquise auprès de Protein Institute Inc. La préparation utilisée dans cette étude (lot N P200-18) avait une pureté supérieure à 98 % de la manière déterminée par SDS-PAGE et par analyse par chromatographie en phase liquide à hautes performances (CLHP). La préparation utilisée dans cette étude avait une
DE50 de 0,1 à 5 ng/ml.

Facteur de stimulation de colonies de granulocytesmacrophages murin recombinant
Le facteur de stimulation de colonies de granulocytes-macrophages murin recombinant (GM-CSF) a été acquis auprès de Protein Institute Inc. La préparation utilisée dans cette étude (lot N P300M-03) avait une pureté supérieure à 98 % de la manière déterminée par SDS-PAGE et par analyse de la séquence N-terminale. La préparation avait une DE50 de 0,1 ng/ml.

L'interféron a/ss murin, les IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, IL-12, IL-13, IL-15, IL-18 murines recombinantes et le
GM-CSF murin recombinant ont été prélevés à l'état incorporé à l'excipient Ferimmune avant administration.

EXCIPIENT
Les préparations de cytokines ont été diluées dans du sérum physiologique tamponné avec un phosphate (STP) contenant de la sérum-albumine bovine (SAB) ou dans l'exci- pient de la marque indiquée ci-dessous. La fraction V de sérum-albumine bovine (de qualité pour analyse radioimmunologique (RIA) ; dépourvue d'immunoglobulines ; N de catalogue A7888 ; Sigma, USA) a été dissoute à une concentration finale de 100 pg/ml dans du STP (pH 7,4) et a été stérilisée par filtration (0,2 ssm, Millex-GV, Millipore,
USA).

Dans la plupart des expérience décrites dans le présent mémoire, les préparations de cytokines ont été diluées dans un excipient commercialisé. L'excipient utilisé était le suivant, fourni sous forme de comprimés (Ferimmune,
Pharma Pacific)

<tb> <SEP> % <SEP> en <SEP> poids/poids <SEP> mg/comprimé
<tb> Dextrose <SEP> (glucose) <SEP> BP** <SEP> 44,67*** <SEP> 55,84
<tb> Gélatine <SEP> BP** <SEP> 30,6 <SEP> 37,58
<tb> Amidon <SEP> de <SEP> blé <SEP> BP** <SEP> 11,31 <SEP> 14,14
<tb> Carmellose <SEP> sodique <SEP> BP** <SEP> 4,96 <SEP> 6,20
<tb> Albumine <SEP> d'oeuf <SEP> BPC*** <SEP> 4,03 <SEP> 5,04
<tb> Leucine <SEP> USP <SEP> 3,00 <SEP> 3,75
<tb> Propylène-glycol <SEP> BP <SEP> 1,88 <SEP> 2,35
<tb> Dextrane <SEP> 40** <SEP> (sous
<tb> forme <SEP> de <SEP> dextrane <SEP> 40
<tb> pour <SEP> préparations
<tb> éjectables <SEP> BP) <SEP> 0,06 <SEP> 0,08
<tb> Phosphate <SEP> de <SEP> sodium <SEP> BP <SEP> 0,03 <SEP> 0,04
<tb> Chlorure <SEP> de <SEP> sodium <SEP> BP <SEP> 0,01 <SEP> 0,01
<tb> Phosphate <SEP> acide <SEP> de
<tb> sodium <SEP> BP <SEP> 0,01 <SEP> 0,01
<tb> Total <SEP> 100,02 <SEP> 125,04
<tb>
** quantité calculée sur base anhydre
*** quantité obtenue avec 44,64 % de dextrose (glucose anhydre) BP et 0,03 t de glucose BP (sous forme de dextrane 40 pour préparations injectables BP)
Un seul comprimé d'excipient Ferimmune (lot
Ne B095002, d'expiration en septembre 1997) a été dissous dans 1,5 ml de STP dans un tube à microcentrifugation d'Eppendorf de 2 ml pendant trois heures à température ambiante sur un mélangeur rotatif. Puis la suspension a été centrifugée à 16 000 g pendant 15 minutes et le surnageant a été recueilli. L'excipient Ferimmune a été préparé chaque jour immédiatement avant utilisation.

II. Système d'administration
Des expériences préliminaires ont montré que l'application de 5 p1 de cristal violet à chaque narine d'une souris adulte normale au moyen d'une micropipette Eppendorf
P20 a eu pour résultat la distribution pratiquement immédiate du colorant sur la totalité de la surface de la cavité rhinopharyngienne. La coloration de la cavité rhinopharyngienne était encore apparente de l'ordre de 30 minutes après l'application du colorant. Cette méthode d'administration a donc été utilisée dans toutes les expériences suivantes.

III. Matières expérimentales
(1) EMCV (Virus d'encéphalomyocardite)
Echantillon : lot N" 095001
Date d'expiration : décembre 1997
Préparation : la souche de EMCV JH a été multipliée sur des cellules L929 de souris en utilisant les procédés décrits par Gresser I, Bourali C, Thomas M T,
Falcoff E., Effect of epeated inoculation of interferon preparations on infection of mice with encephalomyocarditis virus. Proc. Soc. Exp. Biol. Med., février 1968 ; 127:491-6.

Caractérisation : le stock de virus utilisé dans cette étude avait un titre de 5 x 108,62TCID50 résumé, des souris DBA/2 ont été soumises à une inoculation par injection intrapéritonéale (ip) d'approximativement 100 DL50 de cellules 3C18 et, une semaine plus tard, les cellules tumorales ont été collectées dans le péritoine des souris, dénombrées, et d'autres souris ont été de nouveau soumises à l'inoculation avec 100 DL50 de cellules 3C18. Ce mode opératoire a été répété pendant 60 à 100 passages. I1 a été montré que les cellules 3C18 utilisées pendant la période allant du 60ème au 100ème passages in vivo sont hautement métastatiques pour le foie et la rate (Gresser et al, Int. J.

Cancer, 1987 39:789-792). Le phénotype de résistance au IFN a été confirmé de manière usuelle en cultivant in vitro en présence d'interféron a:ss les cellules ayant subi des passages in vivo (Belardelli et al, Int. J. Cancer, 1982 30:813-820).

IV. Animaux expérimentaux
Les souris utilisées dans cette étude ont été obtenues à partir d'une colonie spécifique dépourvue d'agents pathogènes (IFFA CREDO, France). Elles ont été maintenues en cage dans une installation spécifique pour animaux dépourvus d'agents pathogènes à l'Institut Fédératif du CNRS à
Villejuif suivant les normes de la CEE.

ExemPle 1
Effet de la IL-2 et de la IL-12 sur des souris soumises à une épreuve avec une dose létale de EMCV (virus d'encéphalomyocardite)
Des groupes de dix souris Suisse mâles âgées de 6 semaines ont été infectées avec 100 DL50 de virus d'encéphalomyocardite (EMCV). Une heure après l'infection virale, les souris ont été laissées sans traitement ou bien ont été traitées une fois par jour pendant 4 jours par la voie intranasale/orale avec de la IL-2 murine recombinante ou de la IL-12 murine recombinante dans un volume de 10 1 d'excipient Ferimmune ou avec 10 1 d'excipient seul (témoin), ou par injection intrapéritonéale (IP) dans 200 p1 d'excipient, ou bien avec 200 p1 d'excipient seul.

Le traitement des souris adultes avec 2 ssg de
IL-2 murine recombinante par jour pendant 4 jours par la voie intranasale/orale a eu pour résultat une augmentation du pourcentage d'animaux survivant à 11 infection avec une dose létale d'EMCV. Jusqu'à 40 % des animaux traités étaient vivants 100 jours après l'infection avec une dose létale d'EMCV, dans des conditions dans lesquelles tous les animaux infectés avec le virus et non traités ou bien traités avec l'excipient étaient morts au bout de 6 jours.

Le traitement des souris adultes avec de la IL-2 murine recombinante par la voie intranasale/orale a eu pour résultat une forte augmentation du pourcentage d'animaux survivant à l'infection avec une dose létale d'EMCV.

L'augmentation du pourcentage d'animaux survivant à l'infection avec une dose létale d'EMCV dépendait de la dose de
IL-2 administrée par la voie intranasale/orale. Ainsi, le traitement de souris adultes avec 1 p1 de IL-2 murine recombinante par jour pendant 4 jours par la voie intranasale/orale a eu pour résultat la survie de 30 % des animaux infectés avec une dose létale d'EMCV, tandis que le traitement des animaux avec 3 pg de IL-2 murine recombinante par jour pendant 4 jours par la voie intranasale/orale a eu pour résultat la survie de 60 % des animaux. Les animaux traités avec la IL-2 étaient vivants et bien portants 100 jours après l'infection avec une dose létale d'EMCV, dans des conditions dans lesquelles tous les animaux infectés avec le virus et non traités ou bien traités avec l'excipient étaient morts au bout de 6 jours. A l'opposé, le traitement de souris adultes avec 0,1 ssg de IL-2 murine recombinante par jour pendant 4 jours par la voie intranasale/orale n'a pas augmenté de manière significative la survie des animaux infectés avec une dose létale d'EMCV.

Les animaux traités avec 0,1 ou 1 Zg de IL-2 murine recombinante par jour pendant 4 jours par la voie intranasale/orale n'ont présenté aucun signe détectable de toxicité. Cependant, les signes de toxicité aigus comprenant des tremblements, une léthargie et une fourrure ébouriffée ont été observés chez les animaux traités par la voie intranasale/orale avec 3 pg de IL-2 recombinante, qui est la plus forte dose de IL-2 testée.

Le traitement de souris Suisse adultes avec de la IL-12 murine recombinante par la voie intranasale/orale s'est révélé également accroître le pourcentage d'animaux survivant à l'infection avec une dose létale d'EMCV, bien que dans une moindre mesure par rapport au traitement avec la même quantité de IL-2 recombinante. Ainsi, le traitement de souris
Suisse adultes avec 2 g de IL-12 murine recombinante par jour pendant 4 jours par la voie intranasale/orale a eu pour résultat la survie, au bout de 100 jours, d'approximativement 20 % des animaux infectés avec une dose létale d'EMCV.

Des observations cliniques suggèrent que tous les animaux traités avec la IL-2 et les animaux traités avec la IL-12, vivants au centième jour, survivent.

De manière similaire, le traitement de souris adultes avec de la IL-2 murine recombinante par la voie intrapéritonéale a eu pour résultat une augmentation, dépendant de la dose, du pourcentage d'animaux survivant à l'infection avec une dose létale d'EMCV. Ainsi, le traitement d'animaux avec 0,1 ssg de IL-2 murine recombinante par jour pendant 4 jours par la voie intrapéritonéale n'a pas augmenté de manière significative la survie des animaux infectés avec le virus, tandis que le traitement de souris avec 1 pg ou 3 g de IL-2 murine recombinante par jour pendant 4 jours par la voie intrapéritonéale a eu pour résultat la survie, respectivement, de 40 % à 70 % des animaux infectés avec une dose léthale d'EMCV.

Les résultats des expériences décrites dans le présent mémoire suggèrent que la voie d'administration par la muqueuse buccale offre un moyen efficace d'administration de très fortes doses de IL-2 avec une toxicité acceptable.

Ainsi, les animaux traités avec 0,1 pg ou 1 ,ug de IL-2 murine recombinante par jour pendant 4 jours par la voie intranasale/orale n'ont présenté aucun signe détectable de toxicité. Sur la base du poids corporel (0,025 kg pour une souris adulte, et un poids corporel de 60 kg pour un patient adulte humain), cela correspond à des valeurs d'équivalent de dose approximatif chez l'homme de 0,24 à 2,4 mg, respectivement, soit 24 et 240 fois la dose maximale tolérée de
IL-2 administrée par voie parentérale (Huland et al., 1994,
J. Cancer Res. Clin. Oncol. 120, 221-228).

Les résultats des expériences suggèrent que la voie d'administration par la muqueuse buccale offrent un moyen efficace d'administration de IL-2 et de IL-12 sans toxicité apparente. Ces résultats ont des implications importantes pour l'utilisation clinique de la IL-2 et de la
IL-12 comme agents antiviraux.

Exemple 2
Effet de la IL-2 et de la IL-12 sur des souris soumises à une épreuve avec des cellules de leucémie Friend hautement métastatique
Des groupes de dix souris DBA/2 âgées de 6 semaines ont été soumis à une épreuve par voie intraveineuse avec 105 cellules de leucémie Friend (clone résistant à l'interféron 3C18), ce qui équivaut à approximativement 20 000 DL50 au jour 0. Les souris soumises à l'inoculation des cellules tumorales ont été laissées sans traitement ou bien ont été traitées deux fois par jour pendant un temps à l'âge de 20 jours par la voie intranasale/orale avec de la IL-2 murine recombinante ou de la
IL-12 murine recombinante,dans un volume de 10 ,ul d'excipient
Ferimmune, ou bien avec 10 p1 d'excipient seul (témoin).

Le traitement de souris adultes avec 2 ,ug de IL-2 murine recombinante deux fois par jour pendant 20 jours par la voie intranasale/orale a eu pour résultat une forte augmentation du temps de survie d'animaux soumis à l'inoculation d'approximativement 20 000 DL50 de cellules de leucémie
Friend. Ainsi, bien qu'aucun des animaux soumis à l'inoculation des cellules tumorales et traités avec la IL-2 n'ait survécu pendant plus de 32 jours, le traitement de souris
DBA/2 adultes avec 2 g de IL-2 murine recombinante deux fois par jour pendant 20 jours par la voie intranasale/orale a eu pour résultat une augmentation statistiquement significative du temps de survie (nombre moyen de jours jusqu'à la mort, 22,6 + 2,08 jours), par rapport aux animaux soumis à l'inoculation des cellules tumorales et non traités aux animaux soumis à l'inoculation des cellules tumorales et traités avec l'excipient (nombre moyen de jours jusqu'à la mort, 13,8 + 0,13 jours).

Le traitement de souris DBA/2 adultes avec de la IL-12 murine recombinante par la voie intranasale/orale s'est révélé également provoquer une augmentation du temps de survie des animaux soumis à l'inoculation d'une dose létale de cellules de leucémie Friend, bien que dans une moindre mesure par rapport à l'administration de la même quantité de
IL-2 recombinante. Ainsi, bien qu'aucun des animaux soumis à l'inoculation des cellules tumorales et traités avec la IL-12 n'ait survécu pendant plus de 20 jours, le traitement de souris DBA/2 adultes avec 2 ssg de IL-12 murine recombinante deux fois par jour pendant un temps allant jusqu'à 20 jours par la voie intranasale/orale a eu pour résultat une augmentation statistiquement significative du temps de survie (nombre moyen de jours jusqu'à la mort, 15,9 + 0,56 jours), par rapport aux animaux soumis à l'inoculation des cellules tumorales et non traités ou des animaux soumis à l'inoculation des cellules tumorales et traités avec l'excipient (nombre moyen de jours jusqu'à la mort, 13,8 + 0,13 jours).

Les résultats des expériences montrent que la IL2 murine recombinante présentent une activité anti-tumorale marquée sur des souris soumises à l'inoculation de cellules de leucémie Friend hautement métastatiques, après administration par la voie intranasale/orale. Ces résultats sont remarquables car il avait été indiqué antérieurement que la
IL-2 recombinante administrée par voie générale était totalement inefficace dans l'accroissement du temps de survie de souris soumises à l'inoculation intraveineuse de cellules de leucémie Friend (Belardelli et al., 1989, Int. J. Cancer, 44:1108-116). Les résultats suggèrent également que la voie d'administration par la muqueuse buccale offre un moyen efficace d'administration de IL-2 sans toxicité apparente.

ExemPle 3
Effet de l'association de IL-2 et de IFN sur des souris soumises à l'épreuve d'administration d'une dose létale d'EMCV
Des groupes de dix souris Suisse mâles âgées de 6 semaines ont été infectés avec 100 DL50 d'EMCV. Une heure après l'infection virale, les souris ont été laissées sans traitement ou bien ont été traitées une fois par jour pendant 4 jours par la voie intranasale/orale ou par la voie intrapéritonéale avec 1,0 pg de IL-2 murine recombinante, 103 UI d'interféron a/p murin, ou la même dose de IL-2 murine recombinante et d'interféron a/P murin dans l'excipient
Ferimmune , ou avec un volume égal d'excipient seul (témoin).

En variante, les souris ont été traitées par injection intrapéritonéale avec la même dose de IL-2 murine recombinante, d'interféron a/ss murin, ou de IL-2 murine recombinante et d'interféron a/p murin.

Afin de déterminer si l'administration de IL-2 murine recombinante, conjointement avec de l'interféron a/p murin, a pour résultat un effet antiviral additif ou même synergique, les animaux ont été traités initialement par la voie intranasale/orale avec de la IL-2 murine recombinante et ensuite, 30 minutes plus tard, avec de l'interféron a/ss murin. Le traitement des souris adultes avec la IL-2 murine recombinante conjointement avec de l'interféron a/ss murin par la voie intranasale/orale a eu pour résultat une augmentation additive du pourcentage d'animaux survivant à l'infection avec une dose létale d'EMCV. Ainsi, le traitement de souris adultes une fois par jour pendant 4 jours par la voie intranasale/orale avec 1 pg de IL-2 murine recombinante, puis avec 103 UI d'interféron a/ss murin a eu pour résultat la survie de 80 % des animaux infectés avec une dose létale d'EMCV.

Le traitement de souris adultes avec 1,0 Zg de
IL-2 murine recombinante, puis, 30 minutes plus tard, avec 103 UI d'interféron a/p murin par la voie intrapéritonéale a eu pour résultat la survie de 80 % des animaux infectés avec une dose létale d'EMCV.

Les animaux traités une fois pendant 4 jours avec 1 pg de IL-2 murine recombinante, 103 UI d'interféron a/ss ou bien à la fois avec la IL-2 murine recombinante et l'interféron a/ss, par la voie intranasale/orale ou par la voie intrapéritonéale n'ont présenté aucun signe détectable de toxicité.

Exemple 4
Effet de différentes cytokines spécifiques des cellules Thl et Th2 sur des souris soumises à une épreuve avec une dose létale d'EMCV
Des groupes de dix souris Suisse mâles âgées de 6 semaines ont été infectés avec 100 DL50 d'EMCV. Après l'infection virale, les souris ont été laissées sans traitement ou bien ont été traitées une fois par jour pendant 4 jours par la voie intranasale/orale avec du IFN a/ss murin, de la IL-2, IL-4, IL-10, IL-12 ou IL-15 murine recombinante dans un volume de 10 p1 d'excipient Ferimmune, ou avec 10 p1 d'excipient seul (témoin).

Le traitement des souris adultes avec de l'interféron a/P murin par la voie intranasale/orale a eu pour résultat une forte augmentation du pourcentage d'animaux survivant à l'infection avec une dose létale d'EMCV. Ainsi, 50 % des animaux traités avec 103 UI d'interféron a/p murin étaient vivants 86 jours après l'infection avec une dose léthale d'EMCV, dans des conditions dans lesquelles tous les animaux infectés avec le virus et non traités ou les animaux infectés avec le virus et traités avec l'excipient étaient morts au bout de 7 jours. Le traitement des souris adultes avec 1 p1 de IL-2 murine recombinante par jour pendant 4 jours par la voie intranasale/orale a eu également pour résultat une forte augmentation du pourcentage d'animaux survivant à l'infection avec une dose létale d'EMCV. Ainsi, 30 % des animaux traités avec de la IL-2 murine recombinante par la voie intranasale/orale étaient vivants 86 jours après l'infection virale. De manière similaire, le traitement de souris adultes avec 1 pg de IL-15 murine recombinante par jour pendant 4 jours par la voie intranasale/orale a eu également pour résultat la survie de 30 % des animaux infectés avec une dose létale d'EMCV. Le traitement de souris adultes avec 1 g de GM-CSF murin recombinant par jour pendant 4 jours par la voie intranasale/orale a eu également pour résultat la survie de 20 % des animaux infectés avec une dose létale d'EMCV.

Le traitement de souris Suisse adultes avec de la
IL-12 murine recombinate par la voie intranasale/orale s'est révélé également provoquer une augmentation du pourcentage d'animaux survivant à l'infection avec une dose létale d'EMCV, bien que dans une moindre mesure par rapport à l'administration de la même quantité de IL-2 ou IL-15 recombinante. Ainsi, le traitement de souris Suisse adultes avec 1 pg de IL-12 murine recombinante par jour pendant 4 jours par la voie intranasale/orale a eu pour résultat la survie d'approximativement 20 % des animaux infectés avec une dose létale d'EMCV.

Des observations cliniques suggèrent que tous les animaux traités avec l'interféron, traités avec la IL-2, traités avec la IL-12, traités avec la IL-15 et traités avec le GM-CSF, vivants au bout de 86 jours, survivent pendant une durée de vie normale.

A l'opposé, le traitement d'animaux avec 1 g de
IL-4 ou IL-10 murine recombinante par jour pendnt 4 jours par la voie intranasale/orale n'a pas eu pour résultat une augmentation significative de la survie des animaux infectés avec une dose létale d'EMCV. Ainsi, toutes les souris traitées avec la IL-4 et la IL-10 étaient mortes 8 jours après l'infection virale, c'est-à-dire dans les limites de 24 heures des animaux infectés avec le virus et non traités ou des animaux infectés avec le virus et traités avec les excpients.

Exemple 5
Effet de diverses cytokines spécifiques des cellules Thl et
Th2 sur des souris soumises à une épreuve avec une dose létale d'EMCV
Des groupes de dix souris Suisse âgées de 6 semaines ont été infectés avec 100 DL50 d'EMCV. Après l'infection virale, les souris ont été laissées sans traitement, ou bien ont été traitées une fois par jour pendant 4 jours par la voie intranasale/orale avec du IFN a/p murin, de la IL-5, IL-13 ou IL-18 murine recombinante, dans un volume de 10 p1 d'excipient Ferimmune, ou avec 10 p1 d'excipient seul (témoin).

Le traitement de souris adultes avec de l'interféron a/ss murin par la voie intranasale/orale a eu pour résultat une forte augmentation du pourcentage d'animaux survivant à l'infection avec une dose létale d'EMCV. Ainsi, 50 % des animaux traités avec 103 UI d'interféron a/ss murin étaient vivants 52 jours après l'infection avec une dose létale d'EMCV, dans des conditions dans lesquelles tous les animaux infectés avec le virus et non traités ou les animaux infectés avec le virus et traités avec l'excipient étaient morts au bout de 6 jours. Le traitement de souris adultes avec 1 ssg de IL-18 murine recombinante par jour pendant 4 jours par la voie intranasale/orale a eu également pour résultat une forte augmentation du pourcentage d'animaux survivant à l'infection avec une dose létale d'EMCV. Ainsi, 20 % des animaux traités avec de la IL-18 murine recombinante par la voie intranasale/orale étaient vivants 52 jours après l'infection virale.

Des observations cliniques suggèrent que tous les animaux traités avec de l'interféron et les animaux traités avec de la IL-18, vivant au bout de 52 jours, survivent pendant une durée de vie normale.

A l'opposé, le traitement d'animaux avec 1 yg de
IL-5 ou de IL-13 murine recombinante par jour pendant 4 jours par la voie intranasale/orale n'a pas eu pour résultat une augmentation significative de la survie des animaux infectés avec une dose létale d'EMCV. Ainsi, toutes les souris traitées avec la IL-5 et la IL-13 étaient mortes 5 jours après l'infection virale, c'est-à-dire dans la limite de 72 heures des animaux infectés avec le virus et non traités ou des animaux infectés avec le virus et traités avec l'excipient.

Aucun des animaux traités avec 1000 UI de IFN a/p ou 1 pg de IL-5, IL-13 ou IL-18 murine recombinante par jour pendant 4 jours par la voie intranasale/orale n'a présenté de signes détectables de toxicité, ce qui suggère que la voie d'administration par la muqueuse buccale offre un moyen efficace d'administrer des cytokines, en l'absence de toxicité apparente.

La IL-4 et la IL-10, qui sont l'une et l'autre de puissants stimulateurs de la réactivité des cellules Th2, se sont révélées être dépourvues d'activité antivirale après administration par la voie intranasale/orale, ce qui souligne l'étroite association entre l'aptitude à induire une réactivité avec les cellules Thl et l'induction d'activité antivirale après administration à la muqueuse buccale.

La démonstration que des cytokines spécifiques des cellules Thl présentent une forte activité après administration par la voie d'administration par la muqueuse buccale indique que l'administration par la muqueuse buccale de cytokines peut être utilisée pour induire une réactivité systémique des cellules Thl, dont on sait qu'elle joue un rôle important dans la défense de l'hôte contre une infection virale et une maladie néoplasique.

L'administration par la muqueuse buccale de cytokines spécifiques des cellules Thl biologiquement actives mais mal tolérées présente une importance potentielle considérable pour le traitement de maladies virales et de maladies néoplasiques. L'administration par la muqueuse buccale de cytokines spécifiques des cellules Thl peut également trouver une application de traitement de maladies telles que l'asthme et la dermatite atopique. I1 a été montré que l'administration par la muqueuse buccale de cytokines spécifiques des cellules Th2 est inefficace dans le traitement des cancers et des affections virales répondant au traitement avec des cytokines spécifiques des cellules Thl par administration par la muqueuse buccale. Cette observation est en accord avec les rôles connus des cellules Thl et Th2 dans les mécanismes de défense d'un hôte. Les états pour lesquels il est prévu qu'ils répondent à l'administration de cytokines spécifiques des cellules Th2, sont alors ceux caractérisés par une stimulation excessive des cellules ThI, tels que des maladies auto-immunes. L'administration par la muqueuse buccale d'une cytokine spécifique des cellules Th2 peut trouver une application dans le traitement d'arthrite rhumatoïde, du diabète de type I, du lupus érythémateux, de la sclérose en plaques et du psoriasis.

Claims (36)

REVENDICATIONS

1. Utilisation d'une cytokine spécifique des cellules Thl ou Th2 pour la préparation d'un médicament à administrer à la muqueuse buccale pour stimuler les mécanismes de défense d'un hôte consistant en un mammifère.

2. Utilisation selon la revendication 1 consistant à stimuler une réponse immunitaire chez un mammifère.

3. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle le médicament comprend une quantité efficace d'une cytokine comprise dans l'intervalle d'environ 0,01 pg à environ 150 Ag de cytokine par kg de poids corporel.

4. Utilisation selon la revendication 3, dans laquelle la quantité efficace de cytokine est administrée en une quantité unique.

5. Utilisation selon la revendication 3, dans laquelle la quantité efficace de cytokine est administrée en une pluralité de quantités plus petites pendant un temps suffisant pour engendrer une stimulation équivalente à celle provoquée par une quantité unique.

6. Utilisation selon la revendication 3, dans laquelle une quantité stimulante de cytokine est administrée de manière continue pendant un temps suffisant pour engendrer une stimulation équivalente à celle provoquée par une quantité unique.

7. Utilisation selon la revendication 1 d'une cytokine spécifique des cellules Thl.

8. Utilisation selon la revendication 2 d'une cytokine spécifique des cellules Thl.

9. Utilisation selon la revendication 7 ou 8, dans laquelle le médicament comprend une quantité efficace d'une cytokine comprise comprise dans l'intervalle d'environ 0,01 pg à environ 150 pg de cytokine par kg de poids corporel.

10. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 7 à 9, dans laquelle le médicament comprend une quantité efficace d'une cytokine administrée en une seule quantité.

11. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 7 à 9, dans laquelle le médicament comprend une quantité efficace d'une cytokine administrée en une pluralité de quantités plus petites pendant un temps suffisant pour engendrer une stimulation équivalente à celle provoquée par une quantité unique.

12. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 7 à 9, dans laquelle le médicament comprend une quantité efficace d'une cytokine administrée de manière continue pendant un temps suffisant pour engendrer une stimulation équivalente à celle provoquée par une quantité unique.

13. Utilisation d'une cytokine spécifique des cellules Thl pour la préparation d'un médicament a administrer à la muqueuse buccale pour le traitement d'un état néoplasique chez un mammifère.

14. Utilisation selon la revendication 13, dans laquelle la cytokine comprend l'interféron a, l'interféron B, l'interféron , l'interféron , l'interleukine-2, 1' interleukine-12, 1' interleukine-15, 1' interleukine-18, le facteur de nécrose de tumeur ss ou le facteur de stimulation des colonies de granulocytes-macrophages (GM-CSF) .

15. Utilisation d'une cytokine spécifique des cellules Thl pour la préparation d'un médicament à administrer à la muqueuse buccale pour le traitement d'une infection virale.

16. Utilisation selon la revendication 15, dans laquelle la cytokine comprend l'interféron a, l'interféron ss, l'interféron , l'interféron Y, l'interleukine-2, 1' interleukine-12, 1' interleukine-15, 1' interleukine-18, le facteur de nécrose de tumeur ss et le facteur de stimulation des colonies de granulocytes-macrophages (GM-CSF).

17. Utilisation d'une cytokine spécifique des cellules Thl pour la préparation d'un médicament à administrer à la muqueuse buccale pour le traitement d'un état allergique chez un mammifère.

18. Utilisation selon la revendication 17, dans laquelle la cytokine est choisie dans le groupe consistant en l'interféron a, l'interféron ss, l'interféron , 1' interféron Y, 1' interleukine-2, 1' interleukine-12, l'interleukine-15, l'interleukine-18, le facteur de nécrose de tumeur ss et le GM-CSF.

19. Utilisation d'une cytokine spécifique des cellules Thl pour la préparation d'un médicament à administrer à la muqueuse buccale pour le traitement de l'asthme.

20. Utilisation selon la revendication 19, dans laquelle la cytokine est choisie dans le groupe consistant en l'interféron a, l'interféron p, l'interféron , l'interféron r, l'interleukine-2, 1' interleukine-12, l'interleukine-15, l'interleukine-18, le facteur de nécrose de tumeur et le GM-CSF.

21. Utilisation d'une cytokine spécifique des cellules Thl pour la préparation d'un médicament à administrer à la muqueuse buccale pour le traitement de la dermatite atopique.

22. Utilisation selon la revendication 21, dans laquelle la cytokine est choisie dans le groupe consistant en l'interféron a, I'interféron ss, l'interféron , l'interféron y, l'interleukine-2, 1' interleukine-12, I'interleukine-15, l'interleukine-18, le facteur de nécrose de tumeur B et le GM-CSF.

23. Utilisation d'une cytokine spécifique des cellules Th2 pour la préparation d'un médicament à administrer à la muqueuse buccale pour stimuler les mécanismes de défense d'un hôte consistant en un mammifère.

24. Utilisation d'une cytokine spécifique des cellules Th2 pour la préparation d'un médicament à administrer à la muqueuse buccale pour stimuler une réponse immunitaire chez un mammifère.

25. Utilisation selon la revendication 23 ou 24, dans laquelle le médicament comprend une quantité efficace d'une cytokine comprise dans l'intervalle d'environ 0,01 pg à environ 150 pg de cytokine par kg de poids corporel.

26. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 23 à 25, dans laquelle le médicament comprend une quantité efficace d'une cytokine administrée en une seule quantité.

27. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 23 à 25, dans laquelle le médicament comprend une quantité efficace d'une cytokine administrée en une pluralité de quantités plus petites pendant un temps suffisant pour engendrer une stimulation équivalente à celle provoquée par une quantité unique.

28. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 23 à 25, dans laquelle le médicament comprend une quantité efficace d'une cytokine administrée de manière continue pendant un temps suffisant pour engendrer une stimulation équivalente à celle provoquée par une quantité unique.

29. Utilisation d'une cytokine spécifique des cellules Th2 pour la préparation d'un médicament à administrer à la muqueuse buccale pour le traitement d'une maladie auto-immune chez un mammifère.

30. Utilisation selon la revendication 29, dans laquelle la cytokine est choisie dans le groupe consistant en 1' interleukine-4, 1' interleukine-5, 1' interleukine-lO et 1' interleukine-13

31. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 30, dans laquelle la cytokine comprend une cytokine recombinante.

32. Composition pharmaceutique pour stimuler, par administration à la muqueuse buccale, les mécanismes de défense d'un hôte consistant en un mammifère, composition qui comprend une cytokine stimulant les cellules Thl ou Th2 et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable utile pour l'administration à la muqueuse buccale.

33. Composition pharmaceutique sous une forme posologique unitaire apte à l'administration à la muqueuse buccale, comprenant environ 0,01 pg à environ 10 000 pg d'une cytokine stimulant les cellules Thl ou Th2 et un support pharmaceutiquement acceptable.

34. Composition selon la revendication 31, comprenant environ 10 pg à environ 10 000 pg de cytokine.

35. Composition selon l'une quelconque des revendications 32 à 34, comprenant une cytokine spécifique des cellules Thî.

36. Composition selon lune quelconque des revendications 32 à 34, comprenant une cytokine spécifique des cellules Th2.