TWI230619B - Method of crosslinking of porous biodegradable polymers - Google Patents

Description

1230619 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本务明係有關於一種多孔性生物可分解高分子之製備技術， 且特別有關於一種多孔性生物可分解高分子之新交鏈技術。 【先前技術】 多孔性可分解高分子材料可廣泛地應用於藥物釋放控制、人 工皮膚、補骨材料、燒燙傷材料、止血板及各種組織工程的應用。 可分解性的高分子材料在大氣中或在生物體内會逐漸分解，其自 u水角牛或被生物體内之酵素系統分解或吸收。為了使此多孔性可 分解高分子材料具有更有效及較長時關植人應用以避免在生物 體内快速的分解並降低免赫斥反應，且能在實際時依據實 際臨床需要，達到所欲求之高分子材料之分解速率，因此所製備 之可分解高分子材财需進—步進行交鏈反L制其分解速率 。另-重制課題則是將此可分解之高分子製備献有孔洞型態 的構造，例如開放式孔洞（適合作為組織工程細胞生長之載體） 或者封閉式孔洞（常作為藥物包覆釋放之基材），如何成功的製備 具有適合孔洞型態且可達麻求之交鏈程度以提高此材料的強度 並降低裂解，便成近年來生醫材制發及朗㈣要研究領域。 一般天然可分解高分子製備成多孔性基材的方法多以冷凍乾 爍法（freeze drying)製備，少數是以臨界點乾燥法 point drying)或是自然乾燥法（air drying)製備。去多孔性 生物可分解高分子製備出來必須再進行化學交鏈，經過化學交鏈 1230619 處理過才可增加高分子的機械性質及增加高分子的抗酵素分解能 力，否則，製備出的多孔性高分子短時間内就會被分解，無法達 到應有的效果。 專利文獻上對於具蛋白質結構而含有多量氫鍵之生物高分子 進行交鏈反應一般有物理及化學方法兩種方式。其中物理方法有 加熱脫水[參考Wang M-Cetal·，1994]及照射UV [參考Weadock Κ· S· etal·，1995]光或γ-ray等方式，其結果常有交鏈程度 不鬲且不均勻的象現，因此在應用上相當的受限。至於化學方法 又可刀為液相及氣相兩種方式[參考Yannas扣al.，1980]。 1·溶液相交鏈方式： 將多孔性高分子浸泡於含有化學交鏈劑的溶液t，經過化學 反應後，糊其他溶液清洗，將殘留的未反應的交鏈劑清洗掉， 再利用冷凍乾燥的方式，製備出多孔性基材。 2·氣相交鏈方式·· 將多孔性高分子放置於含化學交鏈齡液的上方，將含化學 交鏈劑的溶液加埶，#吝別料古 …、使夕孔^分子在充滿化學交鏈劑的蒸氣壓 中進行化學反應，當化學反庫 L… 干反應進仃完畢，利用空氣氣體來清洗多 门刀子I未反應的化學交鏈劑清洗乾淨。 =倾轉被鏈這兩齡式是最錢方式，但 態。氣相 二士且:3。〉容液相交鍵的缺點為，需經過再—次的冷魏燥， 糾且步驟繁雜，而且破壞了原先基材的孔洞結構和型 ί〆19 矣鏈的缺點為，常會造成交鏈程度的不均勻，有的地方過度交鏈， 濟的地方交鏈程度不夠，而且，常常會有交鏈劑的殘留問題存在， 梦以去除。例如商業上常用戊二醛作氣相交鏈，然而戊二醛易有 疼^且殘留劑易引發局部组織詞化反應和引起細胞毒性反應等 [^Trowbridge E. A. et al., 1988|%Speer? D. P. et 沒 1.,1980]。 綜合以上方法可知，利用傳統方式完成交鏈反應 ，不是交鏈 择度不夠，就是有化學品殘留、操作時間過長久及步驟煩雜等問 癉。因此本專利提出以超臨界流體（例如scC⑹技術來進行開放 式多孔性生物可分解高分子之交鏈反應，以解決上述問題。 【先前技藝】 1.美國專利第5, 629, 353號利用芳香族單體和苯乙烯混合，並 加入交鏈劑（cross—Hnking agent)進行聚合反應。交鏈劑為多 官能基之鹵化醯（acyl halides)與鹵化苯曱酸（benzylic halids)。將共聚合物膠體（copolymer gel)浸置於溶劑内，把 未反應的單體和交鏈劑去除，再利用二氧化碳超臨界流體與溶劑 置換出來’加熱至臨界乾餘溫度（critical point temperature) 即可出現開放式的細孔（〇pence 11 ed nanopore)。 2·美國專利第5, 710,187號將多種的芳香族單體和巨單體混 合，並加入催化劑（catalyst)與交鏈劑（cross-linking agent)進行聚合反應。將共聚合物膠體（cop〇iymer gel) 7 1230619 浸置於溶劑内，把未反應的單體和交鏈劑去除，再利用二氧化碳 超臣品界流體與溶劍置換出來’加熱至臨界乾燥溫度（criticai point temperature)即可出現開放式的細孔（〇penceilecl nanopore)。此種交鏈過的小孔洞聚合物可應用於分離薄膜 (separation membrane)〇 3·美國專利第4, 873, 218號利用不同比例的聚羥基苯 (polyhydroxy benzene)和甲醛（formaldehyde)加入催化劑， 催化劑為峡酸納。化合物混合後成為aer〇gei，加熱至高溫即可成 為低密度多孔性膠體。 4·美國專利弟4，997, 804*5虎將間苯二盼-甲搭aerogels (Resorcino；L-Formaldehyde aerogels)加入碳酸鈉混合後成為 aerogel，加熱至高溫即可成為低密度多孔性膠體，密度範圍為 30〜100 mg/cc 〇 5·文獻上對於具蛋白質結構而含有多量氫鍵之生物高分子進 行交鏈反應有物理及化學方法兩種方式。其中物理方法有加熱脫 水[參考13呢^1-〇6七&1.，61〇11^161^&13，15，507，1994.]及照 射UV光[參考WeadockL S· etal·，J. Biomed· Mater. Res·，29, 1373，1995.]或ray等方式，其結果常有交鏈程度不高且不均 勻的象現，因此在應用上相當的受限。 6.文獻上有利用超臨界二氧化碳流體（scC〇?)來乾燥多孔性 膠原蛋白基材，主要是比較不同的乾燥步驟，有凍乾燥法（freeze 1230619 drying)、臨界點乾燥法（critical point drying)、自然乾燥法 (air drying)，來製作出多孔性膠原蛋白基材，並利用液相及氣 相兩種化學交鏈方法交鏈多孔性膠原蛋白基材。[參考此职1业1311 et al·, Mater· Res·，14，511，1980·] 7·在1988年Trowbridge以浸泡過戊二醛溶液的動物心包膜 [Trowbridge E· A· etal·，Cardiovasc. Surg·，95，577-585， 1988·]，來取代病人的心臟瓣膜，他們發現經戊二搭交鏈處理過 的生物組織會產生過硬和鈣化的現象。而當戊二醛溶液的濃度高 於3至25 ppm時，會對細胞產生毒性的影響，因此以戊二醛交鏈處 理的生物組織在植入人體後，可能會對人體細胞產生毒性。 81对與以311职11曾分別在197〇年[艷此1^(1齟呢肌1丄，

Nature, 228, 466-468，1970·)，以脂肪酵素（iipase)和胰蛋白 酵素(trypsin)來分解經戊二醛(giutaraidehyde)交鏈處理過的 葉綠質小粒（chloroplast)，他們發現這些酵素分解交鏈處理後葉 綠質小粒的能力都明顯的降低了。 【發明内容】 【發明概述】 本發明的目的之一就是為了改善溶液相與蒸氣相交鏈方式的 缺點，而提供一種多孔性生物可分解高分子之新交鏈方法。 本叙明的目的之二就是提供一種多孔性生物可分解高分子之 父鏈方法，其不會破壞原先基材的孔洞結構和型態 ^30619 本發明的目的之三就是提供 交鏈方 禋夕孔性生物可分解高分子之 去，其可得到交鏈均勾的多孔性高分子。 交鏈==目狀四就是提供—種多孔性生物可分解高分子之 彳"可解決交鏈劑殘留的問題。 本發明的目的之五就是提一' 交鏈方 捉1，、種多孔性生物可分解高分子之 限制。、可使用各種交聯劑，不會受到交鏈継氣壓不足的 制1月的目的之六就是提供—種操作簡單、快速、且容易控 物可分解高好之交鏈方法。 進疒二達述目的，本發明之特徵係採用超臨界流體攜帶交鏈劑 易:、献應’並_超5篇界流體來有效移除未反應的交鏈劑。 八。之，本發明的方法包括下列主要步驟：（a)將一多孔性生物可 早高刀子置於一裝置；以及（b)將一含有交鏈劑之超臨界流體通 入袭i 5 N、/ ^ ，以進行多孔性生物可分解高分子之交鏈反應。此外，在 / (b)之後可視需要更包括：（c)將一純的超臨界二氧化石炭通入 衣置，以清洗上述已交鏈之高分子。 本發明之技術可有效地解決傳統交鏈方法中交鏈程度不夠、 才木作時間長久、化學品殘留及二次清洗步驟繁雜並可能造成孔洞 外型改變甚至縮小等問題。且此生物可分解性多孔性高分子之交 鏈程度、泡孔型態亦可藉操作條件而做多樣化改變，達到可控制 其分解速度以做為不同的應用 10 1230619 Ο 為讓本發明之上述和魏目的、傾、和優職更明顯易懂， 下文配合所附圖式，作詳細說明如下。 【本發明詳細說明】 超臣品界流體為超過臨界點之氣體或液體。在臨界點下 ，氣體與液體具有相同的物理性質（特別是密度），且對一特定流 體而έ，其臨界點的溫度與壓力為一定值。在本發明的方法中可 使用各式各樣的超臨界流體，例如二氧化破、氨氣(Ν出）、惰性氣 月豆（如Ar)、4媒以及低石反烧類（如丙烧），但其中超臨界二氧化碳 較佳。 以下將以超臨界二氧化碳為例，配合第1圖之流程圖與第2圖 之裝置示意圖，說明本發明之操作步驟。首先，將一多孔性可分 解高分子置於高壓容器8中，設定操作溫度並開啟C0?及幫浦使 C(k壓力及流量達設定點。接著，轉動三向閥6-1,6-2使CCb流經 交鏈劑桶7中，約1〜2小時後轉動三向閥6-3, 6-4使含共溶劑及交 鏈劑的C0?進入多孔性可分解高分子中至某一固定時間。當實驗完 成時 ，轉動三向闊6-1,6-2,利用純的高壓C02來清洗已交鏈之多孔性 可分解高分子，以移除未反應之交鏈劑，當清洗完成後，卸除壓 力，從高壓容器中取出多孔性生物可分解高分子，即可完成。 本發明的方法特別適用於可分解性高分子之交鏈，例如親水 1230619 性生物高分子之蛋白質類如膠原蛋白、明膠及其他動物性、植物 性蛋白.，多醣類如透明質酸、幾丁質、幾丁聚醣及其他多醣體， 合成類可分解之高分子，如PVA、PLGA、PLA、PGA、PCL及其他可 分解高分子，以及上述高分子之混和物或共聚物等。此外，本發 明的方法亦可用在一般高分子的交鏈。 多孔性生物可分解高分子之孔洞型式並無特別限制，可為流 道型、開孔型之開放式連通孔洞，或封閉型密閉式孔洞，其孔洞 範圍可介於500//m〜0.01//m之間；其孔隙度可介於0.99〜〇.〇5之 間。 目前被用來交鏈生物組織的交鏈劑包括有：曱盤 (formaldehyde)、戊二醛（glutaraldehyde) [Nimni，Μ·Ε·，Cheung， D·，Strates，B·，Kodama，M·，Sheikh，K·，"Bioprosthesis derived from cross-linked and chemically modified collagenous tissue,M in Collagen Vol. Ill, Florida, Μ. E. Nimni (ed·)，CRC Press, Boca Raton, 1-38，1988]、二醛澱粉 (dialdehyde starch)[Rosenberg, D., MDialdehyde starch tanned bovine heterografts: Develoment,n New York, in Vascular Grafts, P. N. Sawyer and M. J. Kaplitt (eds.), Appleton-Century-Crofts, 261-270，1978]及環氧化物（epoxy compound)[參考Tu，R.，etal，1993]等。而戊二醛是目前臨床 上使用最多的生物組織交鏈劑。 12 1230619 應u疋由於本發明是利用超臨界流體來攜帶交鍵劑， 而非利用交鏈_蒸氣麵行交戦應，因此本發騎使用的交 鏈劑不會受到蒸氣壓太低的限制，可廣泛使用各種型式的交鏈 劑。除了上述所提及的交鏈劑之外，其它如碳化亞胺 (carbodiimide)、異氰酸酯（is〇cyanates) 、金屬父鏈劑、離子交_、有機轉化合物（如咖細）及壓 克力酸系衍生物等，均可適用於本發明。 此外，為了促較_在超臨界流體解度，在進入交鍵 劑桶7之前，可裝置另-含聽劑之桶（共溶劑定義：包含兩種或 兩種以上成分之混合液體），例如水相溶液、醇類溶液等。 根據本發_特徵之―，可簡單地藉由操作時間、交鍵劑濃 度、壓力、溫度及流f的變絲控制乡孔性生物可分解高分子材 料之交鏈程度，其巾交鏈_濃度可為任意濃度，需視個別交鏈 劑種類而^，但—般以可達交鏈效果之最低濃度劑量為佳；壓力 範圍為大於-大^上’需視個別交鏈讎類而定；溫度範圍 為室溫〜15(TC，較佳在2(rc〜50。〇之間；超臨界流體之流量範圍為 〇·1 〜1〇 L/min ，反應時間至少大於1分鐘，通常在30分〜8小時之間。 根據本發明的另一特徵，在交鏈反應完成之後，可利用超臨 界流體來清洗已交鏈之多孔性可分解高分子，以移除未反應之交 鏈劑。此處用來清洗用的超臨界流體可與先前使用之超臨界流體 13 1230619 _或不同、’清洗的操作時間可持續聰交鏈劑實質上從高分子 中疋王和除為止b此來可以避免交鍵劑的殘留造成毒性或其 他問題。 根據上述方法所得之多孔性高分子可應用於藥物釋放 、細胞生長之模板、傷Π敷料、組織填補材料、可分解之日常用 具即可分解之發泡鮮可在生物體内紐外分解之應用。 絲上所述，本發明係利用超臨界流體技術，進行多孔性生物 可分解高分子之交鏈反應，以避免从性結構遭破壞、交鏈程度 不均勻、化學α口殘留及插作時間過長等缺點。此外本製程可簡單 地藉由操作時間、交鏈劑濃度、壓力、溫度及流量的變化來控制 多孔性生物可分解高分子材料之交鏈程度，並且藉超臨界流體沖 洗出殘留的交鏈劑而且操作簡單又快速，基於這些優點使本製程 更具創新之進步性以及實際商業化量產的效益。 【實施方式】 【實施例一：多孔性生物高分子之製備】 將去離子水加入明膠中配成lwt %溶液，攪拌完全後置放冷 凍乾燥機（VIS，USA)中。將溫度及真空度分別設為-80t：及100 mi 11 itorr進行24小時冷凍抽真空乾燥，俾使溶劑在固態狀況下 移除，以製得開放式多孔性生物高分子材料。由此操作條件所得 到之多孔性材料其孔隙度> 99 %。產物的孔隙度由以下方程式決 定： P-[1~(Di/D2)]x100 1230619 其中Di為發泡體岔度而為真實密度，密度由密度計（Eiectric dencimeter，MP-200S)所測得。此多孔性材料的孔洞形式，由掃 目苗式電子顯微鏡（SEM)的圖形可知，其孔洞大小介於5〇至200 v in之間，為一開放式多孔性結構（如圖三所示）。 【實施例二：多孔性生物高分子之交鏈反應】 由範例一所得之多孔性生物高分子進行實驗，首先將多孔性 生物高分子置於高壓容器中，設定(：〇?流經交鏈劑（戊二醛）槽之 壓力、溫度及流量分別為1〇〇〇 pSi、3〇°C及1 L/min (系統外）以 進行1小時之交鏈反應。待反應結束後將壓力調整至3〇〇〇 psi 來β洗已父鏈之多孔性生物高分子1小時(EXp 1)，以移除未反應 之交鏈劑戊二搭。 【貫施例三：多孔性生物高分子之交鏈反應】 由範例一所得之多孔性生物高分子進行實驗，首先將多孔性 生物高分子置於高壓容器中，設定CO?流經交鏈劑（戊二醛）槽 之壓力、溫度及流量分別為1〇〇〇 psi、3〇。(：及1 L/min (系統外） 以進行1小時之交鏈反應。待反應結束後將C〇2壓力調整至3〇〇〇 psi來清洗已交鏈之多孔性生物高分子3小時（Εχρ 2)，以移除 未反應之交鏈劑戊二醛。 將未經交鏈處理之範例一所得之多孔性明膠高分子置於磷酸 鹽緩衝溶液(Phosphate Buffer Solution ; PBS)溶液，會立即使 孔洞塌陷並溶解。但經此交鏈反應所得之多孔性明膠，則可在相 15 1230619 同溶劑中保有其原孔洞型態-段時間而不會塌陷（如圖四、圖 =、圖六所示足以顯示交鏈效果相t好而且均勻度較佳。 瘦週試（Swelling Test) 實驗步驟： & 1.將不同條件樣品裁鮮面積（約m,3㈤，分別置於6_井 淺盤（6-weil dish)中，每個條件作3次重複。 2.事先測量所有樣品之長和寬，並將其置放於航烘箱中， 供乾3小時以上。 3·取出樣品後馬上量測其重量，並記錄之。 4·將樣品浸入等量的磷酸鹽緩衝溶液中，約8 ml。 5. 1小時，6小時’ 24小時之後取出，用濾紙輕輕吸乾，秤重 並量測其面積。 6·將測量後之樣品置於3〇。(：烘箱中烘乾過夜(〇ver night)。 7 ·烘乾之樣品取出後，隨即量測其重量，並記錄之。 8·計算公式： 膨潤率（swelling ratio) =(Ww-Wd) / Wd * 100% 其中Ww :樣品之濕重；wd :樣品之乾重 貫驗結果如圖七所示，未經交鏈處理的多孔性明膠基材，經 過PBS的浸泡，一分鐘内就溶解，因此沒有實驗數據，經由戊二醛 交鍵過的Expl可膨潤約a倍，Exp2可膨潤約丨丨倍，並且無解離分 散現象，顯示確有交鏈成效。 16 1230619 解實驗（Degradation Test) 實驗步驟： 1·將不同條件樣品裁成等面積（約irL3cm)，分別至於6-井 淺盤中，每個條件作3次重複。 2·事先測量所有樣品之長和寬，並將其置放於30°C烘箱中， 供乾3小時以上。 3·取出樣品後馬上量測其重量，並記錄之。 4·將樣品浸入等量的PBS溶液中，約8 ml。 5· 1小時，6小時，24小時之後取出，樣品置於3(rc烘箱中烘 乾過夜。 6·烘乾之樣品取出後，隨即量測其重量，並記錄之。 7·計算公式： 保有重量比％(retention weight%) = l〇〇 -【（Wdl-Wd2)/ Wdl *100%】 其中Wdl ··樣品之乾重；Wd2 :浸泡溶液後樣品之乾重 貫驗結果如圖八所示，未經交鏈處理的多孔性明膠基材，經過PBs 的浸泡，一分鐘内就溶解，所以沒有實驗數據，浸泡在PBS溶液中， 六小時後Expl與Exp2仍可保有98%的重量，24小時後Expl與Exp2仍 可保有90%的重量。可由實驗結果中明顯的發現，經過交鍵劑交鍵 過的明膠基材浸泡2 4小時還可以保有9 0 %的重量。 、細胞毒性測Μ 17 1230619 目前細胞培養試驗程序主要有三種方法較常被使用即：直接 接觸（Direct Contact)，瓊脂擴散（Agar Diffusion)及溶出物 (Extract ion)試驗法。本發明之細胞毒性測試採取的是ASTMI?—895 Standard Test Method for Agar Diffusion Cell Culture for Cytotoxicity n操作規範。此試驗方法適用於許多種形狀之材料 及非必須滅菌之材料，亦適用於材料數量有限之情況，例如，小 的元件或粉末可以置於瓊脂之上而妨礙細胞成長的情形亦可被檢 視’而瓊脂層可作用為緩衝層以保護細胞免受試樣之重壓，然而 由於某些材料相當重而會重壓瓊脂而妨礙擴散作用或造成細胞機 械性傷害’對於這類材料本試驗方法並不適用。當溶出物無法經 由瓊脂或凝膠（Agarose)擴散時本試驗法亦不適用。 實驗結果 利用中性紅染劑染活細胞，由照片可見活細胞為紅色，並且 呈紡綞型伸展。 反應指數=區域指數/溶解指數 (Response index = Zone index / Lysis index) 判別區域描述(Zone Description)如表一，判別溶解描述 (Lysis Description)如表二，實驗結果如表三及圖九。可明顯的 發現Exp2的毒性較低，證明超臨界二氧化碳流體可將未反應的交 鏈劑攜帶走。 18 1230619 表 1 :區域描述(Zane Description) 區域指數 _區域描述_ 〇 於試樣附近或試樣之下沒有可檢測出之區域 1 區域限制於試樣下之面積 2 區域超過試樣但小於Q.5公分 3 區域超過試樣|:〕. 5〜1. ϋ公分 4 區域超過試樣1. Q公分以上但並未發生於整個盤內 5 區域發生於整個盤內 表2 :溶解描述(Lysis Description) 溶解指數 區域描述 0 沒有可觀測到之細胞毒性 1 小於2(3%區域受到影響 2 20%〜39%區域受到影響 3 20%〜59%區域受到影響 4 20%〜80:¾區域受到影響 5 大於80%區域受到影響 表3 :細胞毒性冨驗結果 樣品 反應指數 負控制組(1 a t e X R u b b e r) 4/4 正控制組(Teflon) 0/0 明膠 0/0 Expl 2/3 Exp2 1D/2 雖然本發明已以較佳實施例揭露如上，然其並非用以限定本 發明，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神和範圍内，當 19 1230619 ϋ此本發明之保護範圍當視後附之申請 可作些許之更動與潤飾， 專利範圍所界定者為準。 幸乂佳貫施例之交鏈方法之流程圖。 【圖式簡單說明】 圖一為本潑^明一輕 圖二為本發明—較佳實酬所制之裝置示意圖。 圖三為明膠多孔性基材掃喊電子 I微鏡(SEM)圖，100倍。

例二_) ’馬上浸置於PBS溶液，所照的圖。 圖五為將未經父鏈處理之多孔性明膠高分子（實施例一明膠） 以及經交鏈麟理·多孔性_高分子（實施例二_與實施 例一Εχρ2) /又置於溶液，經過2分鐘之後所照的圖。 圖六為將未經交鏈處理之多孔性明膠高分子（實施例一明膠） 以及經交鍵劑處理過的多孔性明膠高分子（實施例二Εχρ1與實施 例二Εχρ2) ’浸置於pbS溶液，經過51天之後所照的圖，可明顯看鲁 出經由本專利之方法確實可以達到有效交鏈之目的。 圖七為膨潤測試之結果。Expl為實施例二之樣品，Exp2為實 . 施例三之樣品。 圖八為多孔性明膠基材分解實驗結果。Expl為實施例二之樣 品’ Exp2為實施例三之樣品。 圖九為多孔性明膠基材Astm F-895 Agar Diffusion Cytotoxicity測試結果 20 1230619 【主要元件符號說明】 1〜二氧化碳鋼瓶；2〜調節裝置； 3〜幫浦； 4〜背壓調節裝置； 5〜計量閥； 6〜三向閥； 7〜交鏈劑桶； 8〜高壓容器； 9〜常溫浴； 10〜氣流計量器。 21

Claims (1)

1. ^ 1230619 7$年，0 E] "L·/ I IMiian, ........ 第90120067號專利申請案申請專利範圍修正本 十、申請專利範圍： 1· 一種多孔性生物可分解高分手之交鏈方法，包括下列步驟： (a) 將一多孔性生物可分解高分子置於一裝置； (b) 將一含有交鏈劑之超臨界流體通入該裝置，以進行該多孔 性生物可分解南分子之交鍵反應；以及 (c) 將一純的超臨界流體通入該裝置，以清洗該已交鏈之高分 子，持續到該交鏈劑實質上從該高分子中移除為止； 其中該多孔性生物可分解高分子為擇自下列高分子所組成之 族群··蛋白質類、多醣類、合成類、以及上述之混合物或共聚物； 且5亥多孔性生物可分解高分子具有開放式孔洞、封閉式孔洞或是 同時具有開放式-封閉式孔洞；該超臨界流體係擇自下列所組成之 群組·二氧化碳、氮氣、惰性氣體、冷媒、低碳烷類、以及前述 之混合；該交鏈劑係擇自下列所組成之群組··醛類、環氧化物 (epoxides)、碳化亞胺（cari3〇diiinide)、異氰酸酯 (lsocyanates)、金屬交鏈劑、離子交鏈劑、有機雜環化合物、 壓克力酸系衍生物、以及前述之混合； 其中在步驟(C)之超臨界流體與步驟（b)之超臨界流體，可相同或 不相同。 2·如申請專利範圍第：[項所述之方法，其中步驟⑹之超臨界 流體更包含一共溶劑。 22 ,1230619 3.如申請專利範圍第i項所述之方法，其中步驟(b)之超臨界 二氧化碳之流量範圍為〇. 。 4·如申凊專利範圍第1項所述之方法，其令步驟（b)之操作時 間大於1分鐘。 5·如申請專利範圍第1項所述之方法，其中步驟（b)之操作溫 度範圍為室溫〜15(TC。 6·如申請專利範圍第1項所述之方法，其中步驟(b)之操作壓 力乾圍為大於一大氣壓以上。

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