TW542721B

TW542721B - Dietary supplements containing natural ingredients

Info

Publication number: TW542721B
Application number: TW087112770A
Authority: TW
Inventors: Lynn Perkes
Original assignee: Melaleuca Inc
Priority date: 1997-08-06
Filing date: 1998-08-03
Publication date: 2003-07-21
Also published as: AU731089B2; EP1009417A1; HK1027973A1; JP2001513332A; AU8686898A; CN101849675A; DE69836335T2; EP1009417A4; CN1268891A; WO1999007400A1; CN101849675B; JP4047538B2; EP1009417B1; CA2244512C; DE69836335D1; US6818233B2; CA2244512A1; ATE344048T1; US20020048575A1

Description

542721 A7 B7 五、發明説明（〗) 技術領域本發明涉及含天然成份的飮食補品。背景信息冠狀動脈病、心肌梗塞、中風和其它血管閉鎖症是主要影響健康的疾病。這些疾病的一個共同特徵是具有動脈粥樣硬化過程，或稱動脈狹窄。血小板通過釋放促進動脈粥樣硬化過程的生長因子、向化質因子和其它因子影響到動脈粥樣硬化過程的進展。而且，由於血小板凝集在動脈壞損處或靠近壞損處，從而決定了動脈粥樣硬化的進展和急性血小板血栓的形成。低密度脂蛋白（LDL )膽固醇也與動脈粥樣硬化有關。現有技術已經指出，通過多不飽和脂的氧化作用，循環在血液中的非致動脈粥樣硬化的LDL膽固醇被轉化成致動脈粥樣硬化的LDL膽固醇，其導致脫輔基蛋白的變化。經满部中决摞準局員工消費合竹社印f (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 醫生使用各種藥物如阿斯匹林來處理動脈粥樣硬化的情況。但是，阿斯匹林並非沒有副作用包括對腸胃的刺激。也可以利用諸如血管成形術的排解法以擴張狹窄的動脈，從而增加血流。但是，這些排解技術會產生內膜的和中層的動脈損壞並曝露血栓形成表面。因此，對於已知或被懷疑是冠狀動脈疾病的病人，血管成形術後的再狹窄和突發冠狀死亡的發生率是他們主要關心的問題。既然動脈粥樣硬化具有不良後果以及與醫療相關的費用很大，所以需要在藥理和營養上進行排解，用來防止本紙張尺度適用中國國家標準（rNS ) Λ4規格（210X 297公釐） 542721 A7 B7 五、發明説明（2 ) 上述情況的發生和再發生。流行病硏究得知，從水果和蔬菜中攝取的飮食黃酮類化合物與由於冠狀動脈疾病而發生的死亡之間有著反向的關聯。人們認爲這種關聯源於存在於水果和蔬菜中的黃酮類化合物的抗氧化作用和對血小板的抑制特性。特定的黃酮類化合物，包括存在於葡萄籽和葡萄皮提取物中的那些黃酮類化合物，與服用阿斯匹林觀察到的對身體的有益效果有關，但並不具有由阿斯匹林導致的副作用。然而，在許多黃酮類化合物原料中，它們的生物利用率或活性不高。因此，某些飮食黃酮類化合物的原料需要大劑量使用。結果，許多黃酮類化合物的原料在日常的基礎上是太昂貴、不現實的。槪述經滴部中决標準局員工消費合作社印f ml----t! (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明涉及以下的發現：以飮食補品爲形式的特定黃酮類化合物和酶的混合物降低了所需補品的劑量，該劑量有效地減少了哺乳動物中血小板的活性和LDL膽固醇的氧化。本發明還涉及處理與血小板活性和LDL膽固醇氧化有關情況的方法··提供黃酮類化合物和酶的混合物以降低血小板活性和LDL膽固醇氧化。一方面，本發明的特徵在於含有至少一種黃酮類化合物原料和一種酶的飮食補品，其中該補品能有效抑制哺乳動物中血小板活性和LDL膽固醇氧化，劑量約爲30mg/kg 或更小。根據本發明的一個飮食補品的例子是本紙張尺度適用中國國家標嗶（rNS ) Λ4規格（210X 297公釐） 542721 經漓部中央標準局員工消費合作社印f A7 B7 五、發明説明（3 ) PR〇VEXCVTM。應當理解的是，作爲本發明使用的補品劑量是押是黃酮類化合物原料和酶的混合重量。而且，其它的配料如塡料、潤滑劑、載體等也可以作爲添加成份。該飮食補品中的黃酮類化合物原料可以來自葡萄籽提取物、葡萄皮提取物、銀杏葉提取物、越桔提取物或槲皮黃酮。酶可以包括真菌蛋白酶、酸穩定蛋白酶、中性穩定蛋白酶、鹼性穩定蛋白酶或菠蘿蛋白酶。另一方面，本發明的特徵在於含有至少一種黃酮類化合物原料的飮食補品，其中該補品能有效抑制哺乳動物中的血小板活性和LDL膽固醇氧化，劑量約爲30mg/kg 或更小。根據本發明這方面的飮食補品優選還包括一種酶，該酶能基本上降低獲得上述抑制效果所需的劑量。另一方面，本發明的特徵在於抑制哺乳動物中血小板活性或LDL膽固醇氧化或兩者都得到降低的方法，即提供含有一種黃酮類化合物和一種酶的飮食補品，其中該飮食補品在約爲30mg/kg或更小的劑量下能有效降低血小板活性或LDL膽固醇氧化。該方法也可以用來處理與血小板活性或LDL膽固醇氧化有關的條件，即通過提供含有能有效降低血小板活性或LDL膽固醇氧化的一種黃酮類化合物和一種酶的飮食補品。另一方面，本發明的特徵在於一種包\在包裝材料中的含有能有效降低血小板活性和LDL膽固醇氧化的飮食補品的製品，其中包裝材料上標明該飮食補品在約爲 30mg/kg或更小的劑量下能有效降低哺乳動物中血小板活本紙張尺度適用中國國家標净（C、NS ) A4規格（2〗0X297公釐） — I!-----f II (讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 542721 經漪部中决標準局貝5消費含作社印f A7 B7 五、發明説明（4 ) 性或LDL膽固醇氧化或兩者都得到降低。在該製品的另一個實施方案中，包裝材料上可以標明該飮食補品用於處理與血小板活性或LDL膽固醇氧化有關的情況。除非另有定義，本發明所用的全部科技術語和縮寫都與本技術領域的普通技術人員通常理解的相同。儘管在本發明的實施或試驗中可以使用與所述的方法和原料相似或相同的方法和原料，但是以下記載的是合適的方法和原料。所有的公開文件、專利申請、專利和其它本發明涉及的參考文獻全部被本發明列入參考。在抵觸的情況下，本發明的詳細說明包括定義將作爲核對內容。本發明的其它特徵和優點將從下面的詳細描述和申請專利範圍中得知。附圖說明圖1表不描述產生狹窄動脈的動物模型的示意圖，用以測量發生周期性血栓時所觀察到的冠狀血流變化，目的是模擬發生在冠狀動脈狹窄病人身上由於動脈粥樣硬化而出現的問題。圖2是條形圖記錄，表不栓化後重復血小板間接血栓形成，使得環流降低（CFRS)，這是由Folts模型產生的在狹窄動脈中測量的血流所觀察到的。圖3是條形圖記錄，表示在攝入PRO'VEXC VTM之後 CFR，S的消除，這是由於在體內PR〇VEXCVTM對血小板的抑制特性，所以根據本發明，PROVEXCV™是優選的飮食補品。本紙張尺度適用中國國家標蜂(（、NS ) Λ4規格（210X 297公釐） — I!-----.f II (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 542721 經滴部中央標準局貝J1消費合竹私印繁 A7 B7 i、發明説明（5 ) 圖4是條形圖記錄，表示食用PROVEXCVTM後兩個半小時再服用腎上腺素時，由於食用PR〇VEXCVTM而消除的CFR's不再出現。圖5表示描述本發明所用全血聚集度測定方法的示意圖，該方法是在體外測量血小板的活性。圖6表示存在維生素E、ProVex PlusTM或PROVEXCVTM 時在234nm下監控的LDL膽固醇氧化的時程圖。圖7表示由PROVEXCVTM提供的防止LDL膽固醇氧化數値的圖。圖8是記載LDL膽固醇氧化數値的圖。詳細說明本發明涉及的發現是，以飮食補品爲形式的特定黃酮類化合物和酶的混合物減少能有效降低哺乳動物中血小板活性和LDL膽固醇氧化所需的補品劑量。本發明還涉及一種處理與血小板活性和LDL膽固醇氧化有關情況的方法，即通過供給黃酮類化合物、提取物和酶的混合物以降低血小板活性和LDL膽固醇氧化。冠狀動脈疾病、腦血管疾病和周圍血管閉塞的特徵在於動脈狹窄。如果動脈狹窄還兼有血栓形成的閉塞，血流就會進一步降低，並且可能發生心肌梗塞或中風。這些情況與血小板活性和LDL膽固醇氧化有關。目前治療這一類型的血管閉塞的方法如血管成形術，會導致動脈內膜和中層損壞，對於病人則會產生心瓣再狹窄、急性血栓形本紙張尺度適用中國國家標哗（（，NS ) Λ4規格（210X 297公釐） ----^-----— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 542721 經满部中决標準局員-X消費合作社印$ A7 B7 1、發明説明（7 ) 而不被動脈干擾的血流。然後，夾緊該動脈以造成冠狀動脈的Ρ Θ吴和中層損壞。在該動脈損壌處，將一個塑料限制管型繞在冠狀動脈的外側，目的是減小冠狀動脈的內徑。狹窄的程度或由管型產生的直徑的減小量用血管成形術囊或其它合適的方法進行調節。冠狀動脈流探針測量周期性地產生凝塊時冠狀動脈血流的變化。當動脈狹窄時，血小板在冠狀動脈的狹窄處和損壞部分周期性地產生凝集。血小板凝集增大導致血栓形成（血凝塊），逐漸阻止冠狀動脈的血流。由於動脈咬合，血小板凝集後產生壓力，可以移去迫使其通過狹窄血管的凝塊，這樣使得在狹窄動脈處的冠狀血流突然回復。足以使血流降低的在損壞動脈處的血小板的凝集被稱爲急性血小板血栓形成（APTF)。人類粥樣硬化動脈中血栓形成的動脈閉塞被認爲始於在動脈內膜層之下血栓形成表面的曝露。而且，現有的信息指出，各種不同的刺激素促使血小板在曝露的血栓形成表面黏附和凝集。但是，應知道本發明的範圍並不受特定的發病機制理論的限制。重復血小板間接血栓形成繼之以栓化和所觀察到伴隨的血流變化稱作環流降低（CFR'S)或環流變化（CFV’S)。本文使用術語CFR'S。在人類股動脈或冠狀動脈疾病中的損傷和狹窄的動脈中也觀察到CFR'S。參閱Folts等人的 Tex. Heart Int· J·，9:19-27(1982); Eichorn 等人的 J. Am. Coll. Cardiol.，17:43-5 2(1991)。如圖2所示，通過測量冠狀動 -10- 本紙張尺度適用中國國家標净（CNS ) Λ4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 衣·

、1T 542721 經满部中决摞準局員工消費合作社印f A7 B7 五、發明説明（8 ) 脈血流來檢測和監控CFR'S。儘管圖2是說明對於冠狀血流所f察到的CFR’S，但應知道Folts方法能用於普通的動脈流（例如，股動脈流）。另外，使用Folts模型所需的技術和模型的變化都記載在Folts〗.0.的emulation (Supplement 4), 83:3 — 14(1991); Folts，J.D.的 J· Cardiovasc. Drugs & Therapy，9:3 1 — 43(1995)和其中的參考文件。每單位時間的CFR’S頻率或數値能直接衡量在體內血小板活性。參閱 Folts J.D.的 J. Cardiovasc. Drugs & Therapy， 9:3 1 - 43(1995)。通過測量在狹窄動脈處的CFR’S頻率和大小，可以使用Folts模型來評價改變血小板活性的試劑。參閱 Folts，J.D.的 J. Cardiovasc. Drugs Ther·，9:31 — 43(1995)。因此，Folts模型確定血小板的抑制劑、抑制劑活性的大小、抑制劑的有效劑量、抑制的持續時間和抑制劑抵抗血小板興奮劑的能力。阿斯匹林爲Folts模型提供說明性的實施例。Folts模型說明在實驗條件下，阿斯匹林抑制血小板的活性，消除了 CFR'S。參閱 Folts 等人的 Clin· Res.，22:595(1974)(摘要）；Folts J.D·的 Circulation (Supplement 4)，83:3 — 14(1991); Folts，LD·，的 J. Cardiovasc. Drugs & Therapy, 9:31 — 43(1995)。已知阿斯匹林抑制血小板活性的劑量是 5mg/kg。血小板活性在Folts模型所使用的條件下受阿斯匹林抑制時，通過提高血液中的腎上腺素或去甲腎上腺素的濃度可以復原血小板的活性。在許多人當中，腎上腺素的提高常發生在他們緊張、害怕、焦急或鍛煉的時候。參 -11 - 本紙張尺度適用中國國家標準（rNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 542721 A7 B7 五、發明説明（9 ) 閱.Folts，J.D.和 Rowe，G.G.的 Thromb· Res.，50:507-5 16(1988)。另外，動脈狹窄的增加也會導致受阿斯匹林消除的CFR’S的再次發生◦參閱Folts J.D.的Circulation (Supplement 4), 83:3 — 14(1991)。因此，Folts 模型提供了評價抑制血小板活性的有效工具。 2血小板聚集度測定試驗經漓部中央標準局員工消費告作社印f (誚先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 衡量人類或動物中血小板活性的第二種方法是全血血小板聚集度測定試驗。這裡所述和使用的進行全血血小板聚集度評定的儀器和方法可由Chronolog Inc.，2 West Park Rd.,Haverton，PA19083買到。爲了進行該試驗，通過標準方法抽取血樣，然後將其放入塑料管中。將一對電極插入血樣中以測量血樣的電阻。由於血中有很多離子和電解質，所以血的電阻通常是低的。隨後，將已知的血小板凝集刺激物例如二磷酸腺苷（ADP)或膠原蛋白添加到該血樣中以活化血小板。活化的血小板將黏附在該血小板聚集度測定試驗所用的電極上。由圖5(右邊）所示，由於血小板凝集在了電極上，通常血樣的電阻以S形模式增長。如果給受驗物提供一種抑制血小板活性的物質，在添加血小板刺激物後的電阻增長將變得較小。阿斯匹林爲使用血聚集度測定試驗提供了一個說明例。從人體抽取的血樣具有血小板活性的基線。添加ADP 增加了血樣的電阻。參見圖5，右邊，“ ADP”曲線。在給人服用325mg阿斯匹林片後兩小時，抽取第二種血樣。 _________- 12-______ 糸紙張尺度適用中國國家標缚((哪）八4規格（210乂 297公釐） "~~" "~ 542721 A7 B7 五、發明説明（10 ) 添加ADP後的血小板活性不會增加到從起始血樣所觀察到的本平。參見圖5，右邊，“ADP+ASA”曲線。所觀察到的血阻的減少以在體外由於阿斯匹林所引起的血小板活性的百分減少量來表示。在抽取血樣前，如果攝入阿斯匹林的人的腎上腺素水平得到提高，那麼所觀察到的阿斯匹林抑制效果就會降低。參見圖5，右邊，“ADP+ ASA + EPI” 曲線。參閱 Folts, J.D.,的 J. Cardiovascular Drugs & Therapy, 9:3 1 — 43(1995); Ingerman-Wojenski 和 Silver 的 Thromb. Haemost·, 5 1:154-156(1984)。當膠原蛋白用來刺激血小板活性時，阿斯匹林也有相似的反應。在血聚集度測定試驗中用膠原蛋白刺激血小板活性時，阿斯匹林將血小板活性降低約30 - 40%。因此，還可以將血聚集度測定技術用作由藥或黃酮類化合物產生的另一項血小板抑制效果的測量。 3評價LDL膽固醇的氧化經滴部中央標準局負-T消費合竹社印繁 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) LDL膽固醇氧化或防止其氧化可以用幾種方法來確定。Kleinveld 等人的 Clin· Chem·，38(10):2066 - 2072(1992) 記載了本文所述和使用的LDL膽固醇氧化實驗的方法。執行該方法的一個優選途徑包括從全血樣中提取LDL膽固醇，所述全血樣是利用標準技術由一受驗物中收集的。所提取的LDL膽固醇被分成對照樣品和黉驗樣品。通過向每一種LDL膽固醇樣品中添加一種銅離子溶液來催化 LDL的氧化。已知銅離子能催化和增強LDL膽固醇的氧化。 -------------- ----- 13 - ___ 本紙張尺度適用中國國家標季((:叫/\4規格（210、，297公釐） 542721 經滴部中央標準局員工消費合竹社印f A7 B7 夂、發明説明（11 ) -對照LDL膽固醇樣品含有提取的LDL膽固醇和銅離子。這些對照樣品提供了在該受驗物規定飮食下和由此製備的LDL膽固醇中的抗氧劑的基線測量値，其中血液是從該受驗物抽取的。在有或沒有添加化合物如可作爲抗氧劑的飮食補品時，試驗LDL膽固醇樣品就與銅離子混合。另外，在收集血樣前通過標準技術可使一受驗物服用一種抗氧劑，這樣就便於測量體內的抗氧劑特性。爲測量體內LDL膽固醇的抗氧劑特性，在服用一種待試抗氧化劑源之前和之後獲取全血樣。銅離子加速LDL膽固醇氧化中共軛二烯的產生，其吸收光在234nm。因此，監控LDL膽固醇氧化的方法是：如圖6所示，作爲時間的一個函數，吸收率在234nm時增加。抗氧劑延長了 LDL膽固醇中產生二烯的開始反應。結果，含有抗氧劑的LDL膽固醇樣品可以通過計算觀察 LDL膽固醇氧化前經過的時間（落後時間）進行比較。參見圖7。在本文所述的LDL氧化實驗條件下，該落後時間是 LDL膽固醇防止氧化破壞的最好的監視器。落後時間越長說明抗氧化特性越好。抑制血小板活性和降低LDL膽固醇氧化很多復合因素導致動脈粥樣硬化、冠狀動脈疾病和相關的情況。在這些因素中，已知與動脈-相互作用的血小板能增強動脈粥樣硬化進程。此外，提高血小板活性直接影響到動脈粥樣硬化的進展和血栓形成的瞬時發生和長期發生。所以，在日常基礎上減少血小板活性的因素應當 ________- 14- ^紙張尺度適用中國國家標_ ( (、NS ) Λ4規格（210X 297公釐）丨^I ΓΙ — |_II (讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

'1T 542721 經满部中决標準局員Μ消費合竹社印？木 A7 B7 五、發明説明（13)

Cardiology, 29(2) (Supplement A):226A(1997);Folts 等人的 J. Am. Coll. Cardiology，29(2) (Supplement A):180A(1997)。而且，血流過程的環境條件並不是靜止的。爲了起到有效的作用，飮食補品必須在趨於升高血小板活性水平的各種條件包括各種緊張、興奮和鍛練條件下都有效。最後，許多黃酮類化合物的飮食原料還含有不需要的成分，例如葡萄酒和啤酒中的醇，葡萄汁中的糖和熱量。也存在對於各種黃酮類化合物和藥的毒性物質。例如，人們已經充分地說明阿斯匹林具有副作用，包括對腸胃的刺激、在腎上腺素存在下效果的損失以及在極度狹窄的狀況下不能抑制CFR'S。因此，假定產生這樣的飮食補品是有用的：該補品能在各種條件下以實際的和費用低廉的方式抑制血小板活性和LDL膽固醇氧化。進一步假定的是：有用的飮食補品的一個重要特徵是通過包含一些能增強吸收飮食補品活性成分的組分來提高飮食補品的生物利用率。本發明人發現了這樣的飮食補品並在本文中加以描述該補品以及要求保護該補品。在第一個實施方案中，本發明提供了一種含有至少一種黃酮類化合物原料和一種酶的飮食補品，該補品有效抑制哺乳動物血小板活性和LDL膽固醇氧化的劑量約爲 30mg/kg或更小。該飮食補品進一步含有黃酮類化合物原料例如葡萄籽提取物、葡萄皮提取物、銀杏葉提取物、槲皮黃酮、越桔提取物或任何其它特定的黃酮類化合物。“黃 -16 - 本紙張尺度適用中國國家標净(rNS ) Λ4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

542721 經滴部中央標準局員Μ消费合作社印繁 A7 B7 五、發明説明（14 ) 酮類化合物原料”可來自任何原料，可以包括合成的或純的來自已知原料的黃酮類化合物。黃酮類化合物原料還可以是，例如，確定爲單獨高活性的一種或幾種黃酮類化合物或是一種混合物，其中黃酮類化合物是從復合的混合物如含有多種黃酮類化合物的植物提取物中分離的。在不被特定的作用理論束縛情況下，人們相信本發明公開的飮食補品的組成經提高生物利用率或藥理相互作用產生協同作用，抑制了血小板的活性和LDL膽固醇氧化。按本發明一個相關方面，在提高血小板興奮劑（例如腎上腺素）濃度的情況下，該飮食補品仍能有效地降低血小板活性和抑制LDL膽固醇氧化。飮食補品配方實例包括一種或多種以下的組分：水果提取物、蔬菜提取物、消化酶、草藥、黃酮類化合物、抗氧劑和其它類似的物質。有效的消化酶的說明例包括胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、真菌蛋白酶、酸穩定蛋白酶、中性穩定蛋白酶、鹼穩定蛋白酶和菠蘿蛋白酶。有效的黃酮類化合物的說明例包括兒茶酚、親花青素（procyanidins)、原花色素（proanthocyanidins)、槲皮黃酮、芸香苷和黃酮類化合物的糖苷形式。本發明的飮食補品的供給渠道可以是Ώ服、靜脈內、皮下、舌下、胃內、作爲一種植物體或通過任何可接受的供給方法。另外，該飮食補品可以與任何合適的載體混合以便於輸送。利用Folts模型在本發明中試驗的飮食補品 -17- _ !：、紙張尺度適用f國國家標淳"1 <^8)/\4規格（210父297公釐） — limit! (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 542721 A7 B7 i、發明説明（15) 既可以靜脈內供給也可以胃內供給。通過胃層的吸收通常花費2-4小時。因此，經胃內供給的飮食補品直到服用該飮食補品之後約2-4小時才影響到CFR’S。商品化飮食補品一般配製成口服的製品。飮食補品有效的供給形式包括九、膏、粉、液體和其它通用的口服配方。對於本發明所述的補品的各種形式，該飮食補品可以利用常規的生產技術進行製備。本發明所述的飮食補品還可附加含有硬脂酸鎂作爲潤滑劑以便於將該補品送進膠囊。硬脂酸鎂的使用濃度通常是l-4mg/膠囊，優選是l-2mg/ 膠囊。

Folts模型可以用來確定降低血小板活性的飮食補品的配方。製備狗冠狀動脈來顯示本發明所述的CFR'S。然後，通過一種已被認可的方法給狗提供測過劑量的飮食補品。飮食補品劑量的效果表現在對所觀察CFR'S的監控。通過利用Folts模型，能夠確定有效劑量、半衰期和吸收的大小。從該狗抽取的血樣提供血流有關補品濃度和血小板活性水平的信息。經滴部中央標準局員工消費合作社印f --------— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 附加的實驗可以用來評價有效的飮食補品的特徵。例如，在提供飮食補品之後可能提高狹窄的嚴重性，目的是確定CFR’S是否再發生。另外，在供給飮食補品前或後的各個時間點提供血小板興奮劑，將確定能支持在血小板活化條件下CFR消失的飮食補品。有效的興奮劑包括腎上腺素和去甲腎上腺素。爲此目的腎上腺素的有效劑量包括腎上腺素經靜脈內供給的劑量爲0.2 // g/kg/分鐘，時間 -18 - ^紙張尺ϋ用中國國家標準（C、NS ) Λ4規格（210父297公釐1 — 542721 經潢部中决標準局貝-T-消费合作社印繁 A7 B7 五、發明説明（16) 達15分鐘。患有人類冠狀動脈疾病的自願服用人員或病人也可以服用本發明所述和申請專利範圍所要求保護的飮食補品及其變化品，目的是評價利用本發明所述的血小板凝集和 LDL膽固醇氧化實驗的飮食補品效力。有效的飮食補品配方可以包括一種或多種以下成分：葡萄籽提取物、葡萄皮提取物、銀杏葉提取物、越桔提取物、槲皮黃酮和酶的摻混物。該飮食補品可以按重量計按下列方式配製：葡萄籽提取物12% w/w，葡萄皮提取物20% w/w，銀杏葉提取物10%w/w，越桔提取物10% w/w ’ 槲皮黃酮24% w/w與一種酶摻混合物24% w/w。因此，根據本發明含有黃酮類化合物和酶的一種有效的飮食補品是PR〇VEXCVTM。PR〇VEXCVTM可以購自 Melaleuca, Inc., IdahoFalls，Idaho 〇 PR0VEXCV™ 每3 80毫克膠囊含有以下的成分：成分 %配方量葡萄籽提取物 12% 45mg 銀杏葉提取物 10% 38mg 越桔提取物 10% 38mg 葡萄皮提取物 20% 76mg 槲皮黃酮 24% ' 92mg 酶摻混物 24% 91mg 總量 100% 380mg -19- 本紙張尺度中國國家標f ： (、NS ) Λ4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

542721 經消部中决標率局貝h消费合作社印轚 A7 B7 五、發明説明（17) 根據本發明還可以製備一種補品’包括除酶摻混物之外的所有上述成分。 PR〇VEXCVTM的每380毫克膠囊中所用的酶摻混物含有以下酶：成分 %酶摻混物活性單位真菌蛋白酶20053 25% 1 1250HUT 真菌蛋白酶20054 25% 1 1250HUT 酸穩定蛋白酶 25% 3375SAPU 菠蘿蛋白酶 25% 5760000PU 總量 100% 真菌蛋白酶20053和20054是酸性、中性和鹼性蛋白酶的酶混合物。HUT活性是在FCCHUT分析中測量的酶活性，它是以變性血紅蛋白的水解爲根據的。一個HUT 單位定義爲在一分鐘內產生一種水解產物的酶量，該水解產物在275nm的吸收値等於在0.006N HCL中1.10 mg/ml 酪氨酸溶液的吸收値。SAPU活性是在FCCSAPU分析中根據Hammarstan酪蛋白酶解物的水解而測量的。一個 SAPU單位定義爲在PH3和37t下每分鐘釋放1 μχηοΐ酪氨酸的酶量。PU活性是在FCCPU分析中根據酪蛋白的水解而測量的酶活性。一個PU單位定義爲在ΡΗ6.0和40°C 下每小時釋放1 Mg酪氨酸的酶量。關於上述酶的更多信息可以NationalEnzymeCompany，Forsyth，Missouri，（417)-5 4 6 - 4 7 9 6通過涉及适些酶的技術公報得到。 -20- 本紙張尺度適用中國國家標净（（、NS ) Λ4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) .♦衣· 訂 54272i A7 B7 Λ、發明説明（18 ) PROVEXCVTM中所含的成分可從以下地方得到。由供應廠商下方劃線來表示所用提取物的實際出處。成分/提取物購自葡萄好提取物 Indena-Milan，Italy

Polyphenolics-Canandaigua, NY InterHeallth-Concord, CA Tri-K Industries-Fanerson, NJ 銀杏葉提取物 Indena-Milan，Italy

Weinstein Nutritional-Irvine, CA ----„-----— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 越桔提取物葡萄皮提取物經滴部中决標準局員H消費合作社印f 槲皮黃酮酶摻混物

OptiPure-Los Angles, CA Botanicals International-Long Beach, CA Indena-Milan, Italy OptiPure-Los Angeles, CA Chemco Industries-Los Angeles, CA Freeman Industries-Tuckahoe, NY Weinstein Nutritional-Irvine，CA Brucia Extracts-California Weinstein Nutritional-Irvine, CA Botanicals International-Long Beach, CA Triarco Industries-Wayne,NY National Enzyme Co.-Forsyth,Mo Makwood-Thiensville，WI 訂 -21 - 本紙張尺度適用中國國家標準（（，NS ) Λ4規格（210X 297公釐）經满部中决標準局員τ-消费合作社印？木 542721 A7 B7 五、發明説明（19 )

Botanicals International-Long Beach, CA 柑橘提取物 Botanicals International-Long

Beach, CA

ProVexPlusTM每125mg膠囊含有以下成分：成分 %配方含量葡萄籽提取物 20% 25mg 銀杏葉提取物 8% 1 Omg 越桔提取物 8% 1 Omg 葡萄皮提取物 24% 30mg 柑橘提取物 40% 50mg 總量 100% 125mg 在Folts模型中的實驗表明了這種補品有效消除CFR’S 的劑量約爲20mg/kg或更小，其中所使用的補品含有除酶摻混物之外的PR〇VEXCVTM所有成分。已經發現通過飮食黃酮類化合物與酶混合可以進一步降低在Folts模型中觀察消除CFr'S所需的劑量。在含有除酶摻混物之外的含有PROVEXCV™所有成分的補品中添加一種酶的摻混物，使在本發明所用的動物模型中消除CFR'S所需的劑量降低至約20mg/kg至約1 Omg/kg，其中所述的酶摻混物含有等份的兩種真菌蛋白酶即酸穩定蛋白酶和菠蘿蛋白酶。 PROVEXCVTM的有交夂1生是：PROVEXCVTM將消除本發明所用動物模型中CFR’S的所需劑量自約30mg/kg降低至 -22- 本紙張尺度適用中國國家標净((:奶）八4規格（210'乂 297公釐） ^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 542721 A7 B7 五、發明説明（2G) 約 10mg/kg，即對於 Pr〇VexPlusTM 需要約 30mg/kg，對於 PR〇VEXCVTM需要約l〇mg/kg。結果，本發明所述的飮食補品的有效劑量是約30mg/kg或更小。優選的有效劑量是約20mg/kg或更小。更優選的有效劑量是約i〇mg/kg或更小。因此，服用具有抗氧劑和血小板抑制特性的 PROVEXCVTM可以防止冠狀動脈疾病、急性閉塞性血栓形成、心肌梗塞致死以及其它與血小板活性和LDL膽固醇 .氧化有關情況的發展。本發明另一實施方案包括稱爲PROVEXCV2TM的飮食補品。如同 ProVexPlusTM® PR〇VEXCVTM— 樣， PROVEXCV2TM也可用作抑制血小板活性和LDL膽固醇氧化的飮食補品。PR〇VEXCV2TM每 1638毫克含有以下的成分：成分 %配方含量酶摻混物 4.58% 75mg 葡萄籽提取物 3.30% 54mg 葡萄皮提取物 67.77% lllOmg 槲皮黃酮 7.32% 1 20mg 銀杏葉提取物 9.71% 1 59mg 越桔提取物 7.32% ' 120mg 總量 100% 1638mg 經满部中央標準局員JT消費合作社印繁 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明所述包括PROVEXCV2TM的飮食補品的成分可 -23- 本紙張尺度適用中國國家標埤（（、NS ) Λ4規格（210X 297公釐） 542721 A7 B7 五經满部中决標準局員„τ消費告竹社印？^ 發明説明（21) 從任何供應廠商得到。例如，通過上面所列供應廠商能得到PR0VEXCV2TM的全部成分。另外，這些成分可從不進行發酵過程的原料得到。例如，未發酵的葡萄籽提取物和未發酵的葡萄皮提取物可以用作本發明所述飮食補品的配料。這些未發酵的配料可從任何供應廠商如polyphenolics (Canandaigua，NY)得到。簡單地說，在製造葡萄酒的過程中會使用發酵方法。如果配料來自進行葡萄酒製造的供應廠商，那麼該配料可能是發酵過的配料。例如，發酵的配料如發酵的葡萄籽提取物或發酵的葡萄皮提取物，它們可以是從原料如葡萄分離的進行發酵的任何配料。相反，未發酵的配料可以是從原料分離的不進行發酵的任何配料。與發酵的配料相比，這些未發酵的配料是較有效的黃酮類化合物原料。例如，與發酵的葡萄籽提取物或發酵的葡萄皮提取物相比，未發酵的葡萄好提取物或未發酵的葡萄皮提取物能夠更有效地抑制血小板活性或LDL膽固醇氧化。注意只要最終的組合物能夠抑制血小板活性或LDL 膽固醇氧化，ProVexPlusTM、PR〇VEXCVTM、PR〇VEXCV2TM 中的每一種配料的百分數是可以變化的。例如，銀杏葉提取物的百分數可以提高到大於10%。另一方面，本發明提供一種抑制哺乳^力物中血小板活性或LDL膽固醇氧化的方法，即通過供給含有至少一種黃酮類化合物原料和一種酶的飮食補品，該飮食補品能有效降低血小板活性或LDL膽固醇氧化或能有效降低這 -24- 本紙張尺度適用中國國家標缚(rNS ) Λ4規格（210X 297公釐） (誚先閲讀背面之注意事項再頊寫本頁)

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五、發明説明（22 經滴部中次摞準局員工消费合作扣印f 兩方面。本發明的另一方面，即提供一種處理與哺乳動物中血小板活性或LDL膽固醇氧化有關情況的方法。該方法包括供給一種飮食補品的步驟，該飮食補品含有至少一種黃酮類化合物原料和一種酶，它們能有效降低血小板活性或LDL膽固醇氧化的劑量約爲3〇mg/kg或更小。爲進行上述方法，通過可接受的輸送方法，使一哺乳動物服用如上所述劑量的飮食補品。根據情況，劑量可以以小時、天、週或其一部分地供給。供給該飮食補品後，就可評價哺乳動物的血小板活性和LDL膽固醇氧化。然後’可將該血小板活性和LDL膽固醇氧化水平與供給該飮食補品之前的同樣水平作比較。在另一方面，本發明提供了製備一種含有能有效降低血小板活性和LDL膽固醇氧化的飮食補品的製品。該製品包在一種包裝材料中，在包裝材料上有標示說明該飮食補品用於降低哺乳動物中血小板活性或LDL膽固醇氧化或降低迨兩方面’其劑量約爲30mg/kg或更小。在製備該製品的另一個實施方案中，在包裝材料上標示說明該飲食補品用於處理與血小板活性或LDL膽固醇氧化有關的情況。任何慣用的包裝和打印方法都可以用 '來製備該製品。參考以下的說明性實施方案將進一步理解本發明，這些實施方案單純是舉例性的，不應當看成是對本發明申 25- 本紙張尺度適用中國國家標缚（CNS ) Λ4規格（210X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1: Γ 542721 A7 B7 五、發明説明（23) 請專利範圍的限制。實例實例1評價飮食補品對血小板的抑制作用經消部中决標準局員工消費合竹社印f (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 爲進行評價，準備10條具有冠狀狹窄和內側損傷被麻醉的狗，利用Folts模型的方法，就如在Folts，J.D的 Criculation (Supplement 4)，83:3-14(1991)所公開的。在整個實驗過程中連續監控血壓和冠狀動脈血流。如圖2中所說明的，CFR'S與圖2中所示的CFR’S相似，這是由於急性血小板血栓形成（APTF)，其在服用PROVEXCV™之前10 條狗中每30分鐘間隔發生8土3次。以條形圖記錄表示的所有圖具有相同的刻度，即每12個方格是10分鐘。然後，通過胃管給每條狗提供10mg/kg的PR〇VEXCVTM。如圖3 中所說明的，胃內供給10mg/kg的10條狗的9條中消除了所觀察到的CFR’S 174 ±24分鐘。服用 10mg/kg的PR〇VEXCVTM之後3小時的30分鐘間隔內，在第10條狗中所觀察到的CFR3減少到2CFITS。在 PRO VEX。VTM中由飮食黃酮類化合物產生的心率或動脈血壓沒有變化。當利用Folts模型進行評價時，由阿斯匹林抑制的血小板活性可通過靜脈供給0.2 pg/kg/分鐘#上腺素而被再活化。參閱 Folts，J·的 Circulation (Supplement 4)，83:3-14(1991)。經服用 10 mg/kg PR〇VEXCVTM 而消除 CFR，S 的 8條狗在15分鐘內靜脈供給0.2(g/kg/分鐘的腎上腺素。 -26- 本紙張尺度適用中國國家標嘩（（、NS ) Λ4規格（210X 297公釐） 542721 A7 B7 五、發明説明（24) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 圖4的右邊表示，當給所有8條狗在15分鐘內靜脈供給 0.2 gg/kg/分鐘腎上腺素時，經胃內供給1〇 mg/kg PR〇VEXCVTM而消除的CFR’S沒有再現。利用本文所述的全血聚集度測定方法對所有10條狗確定體外的血小板活性。在提供10 mg/kg PR〇VEXCVTM 之前和之後，從每只狗中抽取血樣，進行試驗。當用膠原蛋白刺激血小板凝集時，在供給10 mg/kg PROVEXCVTM 的所有1〇只狗中，體外全血血小板凝集降低40% ±9%。不同於圖5所示的阿斯匹林，服用PR〇VEXCVTM觀察到由於腎上腺素而使血小板凝集增加的現象沒有出現。實例2評價飮食補品對LDL膽固醇氧化作用如上所述，作爲時間的一個函數通常是通過觀察在 234nm下的吸收値（Abs 234nm)來衡量LDL膽固醇的氧化，而LDL膽固醇則被經受氧化條件的作用。確定 PR〇VEXCVTM和其它物質的抗氧劑效果。經满部中次摞準局負二消費告作社印嚷從自願服用人員的血樣中製備LDL膽固醇。然後將分離過的LDL膽固醇與緩衝劑、維生素E、ProVexPlusTM(圖 6中'’〇啦’’）或PR〇VEXCVTM(圖6中“Curr”）混合。製備 ProVexPlusTM和PR0VEXCVTM的實驗溶液的最終濃度爲0.5 和 1.0 mgH。選擇 ProVexPlusTm PR0VEXCVT13 濃度是基於所接受血吸收模型的飮食補品的預期血液水平估計値。向每種樣品中添加測定量的銅離子。所用維生素E 的量和供給400IU維生素E人體血液中的預期値相差不 -27- 中國國家標i； (、NS ) A4規格（210X 297公釐） 542721 經漓部中决標準局員Μ消費合作#印f Α7 Β7 五、發明説明（25 ) 大。混合後，作爲時間一個函數監控每種溶液的吸收値 234nm。如圖 6 所示，孵育 ProVexPlus™ 或 PR〇VEXCVTM 濃度在0.5mg/L或1.0mg/L的LDL膽固醇，防止LDL膽固醇氧化時間長於觀察已知5.3IU/L的抗氧劑維生素E的防止氧化時間。如圖7所示，LDL膽固醇直到添加銅離子後45分鐘才表現出明顯的氧化作用。在上述濃度下的維生素E防止LDL膽固醇氧化的時間約爲95分鐘。1.0 mg/L Pr〇VexPlusTM防止LDL膽固醇氧化的時間多於100分鐘。最後，在這些實驗條件下，1.0 mg/LPR〇VEXCVTM防止LDL 膽固醇氧化長達150分鐘。因此，？1*〇\^1?11^1^和 PROVEXCVTM比維生素E的抗氧劑效果好。實例3評價PR〇VEXCV2tm 在狗中，利用Folts模型在體內以及利用全血血小板聚集度測定試驗在體外評價PROVEXCV2TM對血小板活性的作用。簡單地說，麻醉10條不分性別的成年雜種狗，並在第五肋間空隙打開胸廓。解剖左邊捲曲的冠狀動脈，電磁流探針圍繞該動脈放置以衡量冠狀血流。在該電磁流探針的末端，用特定的外科夾具將動脈夾'緊三次以造成動脈內膜和醫療損傷。具有合適內徑的塑料管型繞放在動脈上，目的是使動脈直徑減小70%。在發生CFR’S的過程中，抽取血樣作體外全血血小板 -28 - 本紙張尺度β用中國國家標蜂(CNS ) Λ4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) .#<· 訂 542721 經满部中决標率局員二消费合作社印f Α7 Β7 五、發明説明（26) 聚集度測定試驗。監控CFR’S連貫形成20分鐘後，通過胃管供給15 mg/kg的PR〇VEXCV2TM。監控CFR’S的時間爲3小時。消除CFR3時，抽取第二種血樣，重復在體外的血小板聚集度試驗。然後注入腎上腺素（0.2 pg/kg/分鐘）達20分鐘以觀察CFR’S是否恢復。由於每30分鐘頻率爲7 ± 3次的急性血小板血栓形成，這10條具有冠狀動脈狹窄和內膜損傷的狗出現了 CFR'S。經胃管供給 15mg/kg 的 PR〇VEXCV2TM 後，CFR’S 消除164土29分鐘。在任一狗中靜脈注射腎上腺素（0.2 Kg/kg/分鐘達20分鐘），沒有再現CFR'S。但是，借助5-10 mg/kg阿斯匹林來消除CFR’S後注射腎上腺素會導致實驗狗恢復50-60%的CFR'S。因此，PROVEXCV2TM表現出比阿斯匹林更有效的抑制血小板活性的作用。利用全血血小板聚集度測定試驗，在體外評價供給 PR〇VEXCV2TM前和後所收集的全血樣中的血小板活性。供糸合PR〇VEXCV2TM後，由ADP (20 μιηοΐ/ml)弓ί起的血小板凝集降低42 ±10% (ρ<0.03)。另外，在供給 PR〇VEXCV2TM後，由混合腎上腺素和ADP而產生的血小板凝集降低32±11%(ρ<0.05)。對於人類，也利用全血血小板聚集度測定試驗在體外評價PR〇VEXCV2TM對血小板活性的作用。具體地說，招募12名健康的年齡在22-50歲之間的自願服用人員（8 男，4女）。在硏究之前一星期和硏究的全過程，戒除他們食用茶、酒精飮料、葡萄產品、黃酮類化合物、維生素 -29- 紙張尺ϋ用中國國家標潭((、奶），\4規格（210、/297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

542721 經滴部中决標準局員工消費合作社印f A7 B7 五、發明説明（27) 補品以及包括阿斯匹林產品的所有藥品。該硏究排除了素食者。在每名自願服用人員1天的硏究中，爲進行體外的全血血小板聚集度測定試驗，在空腹狀態下，上午8點至中午12點之間抽取18ml的靜脈血。然後通知每名自願服用人員服用5-7顆PR〇VEXCV2TM膠囊（約20mg/kg/天）達7-14 天，這是根據他們的體重而定的。7-14天後，每名自願服用人員以空腹狀態並服用了當天劑量的PROVEXCV2™ 後回到實驗室，抽取第二種血樣。抽取該血樣是在服用最後劑量的PR〇VEXCV2TM後約2-4小時。簡單地說，將18ml全血抽進一含有2ml3.8%檸檬酸鈉作爲抗凝劑的注射器中。立即用等容積的無防腐劑鹽水稀釋該血樣。將1毫升（lml)稀釋的血放在一小杯中，該小杯裝有矽化的攪棒，並加熱至37°C達5分鐘。將一電極放在該小杯中，測量阻抗變化，它與血小板凝集成比例的關係。一旦記錄基線血小板活性後，向該預熱血中添加大劑量膠原蛋白（12.5 μ2)，並將其放在聚集度計中以獲得最大的血小板凝集響應値。由血小板凝集產生的阻抗變化進行7分鐘。作爲血小板興奮劑，使用亞極大劑量的膠原蛋白（0.5 μ2/ιη1)、12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯佛波醇（ΡΜΑ) (0.5 nmol/ml)和 ADP (20 μιηοΐ/ml)。另外，、在 lml 用腎上腺素（0.5 pg/ml)預先孵育1分鐘的血中，也可以使用ADP (20 μιηοΐ/ml)作爲興奮劑來凝集血小板。兩次測量對照血樣中的凝集響應値，與每天服用PR〇VEXCV2TM達 7-14天 -30 - 本紙張尺度適用中國國家標净（CNS ) Λ4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

54272! 五 _ 經滴部中决標準局貝_T消費合作社印f A7 B7 發明説明（28) 後的響應値作比較。在每天服用PR〇VEXCV2TM達 7-14天後收集的血樣中，響應膠原蛋白（〇·5呢/m1)、ADP(20陣ol/ml)和12_肉豆蔻酸酯13-乙酸酯佛波醇（PMA ; 0.5 nmol/ml)的血小板凝集顯示分別降低 51·6±41·1% (ρ<0.005)、39.8土41.5% (p<0.005)和 Π.9士 10.0% (Ρ<〇·〇〇2)。此外’在每天服用 PR〇VEXCV2TM達 7-14天後收集的血樣中’響應腎上腺素 (0.5 pg/ml)和ADP (20 μιηοΐ/ιηΐ)混合物的血小板凝集顯示降低14.9 ±8.5 % (ρ<0.05)。這些結果表明，血小板活性受 PROVEXC V2TM抑制的機理可會g通過抑芾[J血小板蛋白激酶 C，因爲在每天服用PR〇VEXCV2TM達 7-14天後PMA引發的血小板凝集降低了。除了評價PROVEXCV2TM對血小板活性的作用之外，還硏究了 PR〇VEXCV2TM對LDL膽固醇氧化的作用。簡而言之，利用具有旋轉的連續超速離心方法，從一名健康空腹自願服用人員收集的血淸中分離LDL膽固醇，密度爲 1.006g/ml以去除VLDL/乳糜微粒，密度爲1.063g/ml(KB〇以從稠密的HDL和血淸蛋白中回收LDL。利用Beckman Optima 裝置在 1〇〇,〇〇〇 rpms (〉4,000,000Xg)下每次旋轉的持續時間爲3小時。借助含有EDTA的具有多種緩衝劑變化的磷酸鹽緩衝鹽水（PBS)對LDL進行透析48小時。然後’通過電泳（瓊脂糖凝膠）檢測透析的物質，證明缺少其它脂蛋白餾分或血淸蛋白。測量分離LDL的蛋白質濃度，並用含EDTA的PBS作爲稀釋液將其調整到〇.5g/L。然後 -31 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 衣.

、1T 542721 經滴部中决標準局員工消費合作社印f A7 B7 i、發明説明（29 ) 將LDL溶液以0.7ml的容積等分到用螺絲帽密封的小玻璃容器中。用氮沖洗該管瓶和LDL溶液，以去除痕量氧，確保在使用前穩定並貯存在-80°C下。進行如上所述的LDL氧化作用。簡單地說，LDL用無EDTA的PBS稀釋，即在硏究氧化性能前將1〇〇 μΐ熔化的LDL與900 μΐ PBS混合。然後，在該LDL溶液中添加1 0 μΐ新製備的CuCl2(最後濃度爲5 μιηοΙ/L)以開始氧化反應。通過分光光度測量法在234nm和30°C下5小時內監控共軛二烯的形成値，每3分鐘讀取吸收値。該分光光度計裝有6個位置的自動樣品儲存器，目的是在一次運作所分析的6個樣品中提供一個最大値。當在體內的實驗中使用直接混合法評價PR〇VEXCV2TM的性能時，單獨與PBS 和CuCl2混合的LDL用作對照。 LDL氧化的時程表明有三個連續相：一滯後相，此時難以形成共軛二烯；一增長相，二烯形成快速增加；最後是一分解相。以添加CnCl2和開始增長間的時限定義的滯後相被認爲反映了 LDL對於氧化應激反應的靈敏性。在LDL膽固醇樣品中的共軛二烯的產生値如圖8所示。原始的LDL膽固醇與用維生素E(5.3mg/L)孵育或用 PR〇VEXCV2TM( 1 .Omg/L)孵育相同的LDL膽固醇樣品作比較。用維生素E氧化之前推遲滯後時間，用PR〇VEXCV2tm 在氧化之前推遲滯後時間的程度較爲顯著。該結果表明，與維生素E相比，在經受銅離子作用強化氧化時， PROVEXCV2TM的抗氧化性會g更有效。 -32· 本紙張尺度適用中國國家標净（（、NS ) Λ4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) .#衣·

、1T 542721 A7 B7 五、發明説明（30 ) 本發明的其它方面、優點和變化都在下面申請專利內，圍 ξ車 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1Τ Μ满部中决標準局貝J消費告竹私印來本紙張尺度適用中國國家標嘩（CNS ) Λ4規格（210X 297公釐）

Claims

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A8 B8 C8 D8 (2003年5月修正）六、申請專利範圍 1·一種飮食補品，包含至少一種黃酮類化合物原料和一種酶，所述補品有效抑制哺乳動物中血小板活性和LDL 膽固醇氧化的劑量約爲30mg/kg或更小，其中所述黃酮類化合物原料爲一葡萄籽提取物、葡萄皮提取物、越桔提取物、銀杏葉提取物或槲皮黃酮，及其中所述酶爲一真菌蛋白酶、酸穩定蛋白酶或菠蘿蛋白酶。 2. 如申請專利範圍第1項所述的補品，其中所述黃酮類化合物原料包括一葡萄籽提取物，其佔該補品重量的 3.3%或更高的百分比。 3. 如申請專利範圍第1項所述的補品，其中所述黃酮類化合物原料包括一葡萄籽提取物及一葡萄皮提取物，且它們佔該補品重量的32%或更高的百分比。 4. 如申請專利範圍第1項所述的補品，其中所述補品有效抑制血小板活性和LDL膽固醇氧化的劑量約爲20 mg/kg或更小。 5. 如申請專利範圍第1項所述的補品，其中所述補品有效抑制血小板活性和LDL膽固醇氧化的劑量約爲10 mg/kg或更小。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) --線· 6. 如申請專利範圍第丨項所述的補品，其中所述黃酮類化合物原料包括至少一種葡萄提取物。 7. 如申請專利範圍第丨項所述的補品，其中所述黃酮類化合物原料包括越桔提取物。 8. 如申請專利範圍第1項所述的補品，其中所述黃酮類化合物原料包括銀杏葉提取物。 -34- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 542721 A8 B8 C8 (2003年5月修正) LJO 六、申請專利範圍 9·如申請專利範圍第1項所述的補品，其中所述黃酮類化合物原料包括槲皮黃酮。 10·如申請專利範圍第1項所述的補品，其中所述補品在攝入所述補品後至少4小時能有效抑制血小板活性。 11. 如申請專利範圍第1項所述的補品，其中所述補品有效抑制哺乳動物中血小板活性的劑量約爲30 mg/kg或更小，並且是在提供劑量約爲0.2 pg/kg/分鐘的腎上腺素後。 12. 如申請專利範圍第1項所述的補品，其中所述酶是按重量計所述補品的約24%或更小。 13. 如申請專利範圍第1項所述的補品，其中所述飮食補品包括12%葡萄籽提取物，10%銀杏葉提取物，10%越桔提取物，20%葡萄皮提取物，24%槲皮黃酮，24%酶摻混物，及其中該酶摻混物包含50%真菌蛋白酶，25%酸穩定蛋白酶，及25 %菠蘿蛋白酶。 14. 如申請專利範圍第1項所述的補品，其中所述飮食補品包括3.3%葡萄籽提取物，9. 71%銀杏葉提取物，7.32 %越桔提取物，67.77%葡萄皮提取物，7.32%槲皮黃酮， 4.58%酶摻混物，及其中該酶摻混物包含50%真菌蛋白酶，25%酸穩定蛋白酶，及25%菠蘿蛋白酶。 15. —種飮食補品，包括葡萄籽提取物、葡萄皮提取物、銀杏葉提取物、越桔提取物、槲皮黃酮、真菌蛋白酶、酸穩定蛋白酶和菠蘿蛋白酶，所述補品有效抑制哺乳動物中血小板活性和LDL膽固醇氧化的劑量約爲30 mg/kg或更小0 -35- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） --------------------^---------線 IAW. (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) 542721 098899 ABCD (2003年5月修正) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製六、申請專利範圍 16.如申請專利範圍第15項所述的補品，所述補品是呈九狀的。 17·如申請專利範圍第15項所述的補品，所述補品是呈粉狀的。 18.如申請專利範圍第15項所述的補品，所述補品是呈液狀的。 19·如申請專利範圍第15項所述的補品，其中所述補品有效抑制血小板活性和LDL膽固醇氧化的劑量約爲20 mg/kg或更小。 20. 如申請專利範圍第15項所述的補品，其中所述補品有效抑制血小板活性和LDL膽固醇氧化的劑量約爲10 mg/kg或更小。 21. —種飮食補品，包括一種未發酵的黃酮類化合物原料和一種酶，所述補品有效抑制哺乳動物中血小板活性和 LDL膽固醇氧化的劑量約爲30 mg/kg或更小，其中所述未發酵的黃酮類化合物原料爲一葡萄籽提取物、葡萄皮提取物、越桔提取物、銀杏葉提取物或槲皮黃酮，及其中所述酶爲一真菌蛋白酶、酸穩定蛋白酶或菠蘿蛋白酶。 22. 如申請專利範圍第21項所述的補品，其中所述補品包括多種黃酮類化合物原料。 23·如申請專利範圍第22項所述的補品，其中所述補品包括3.3%葡萄籽提取物，9.71%銀杏葉提取物，7.32 %越桔提取物，67.77%葡萄皮提取物，7. 32%槲皮黃酮， 4.58%酶摻混物，及其中該酶摻混物包含50%真菌蛋白 -36- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格(210 X 297公釐） " (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) Φ 訂---------線- 542721 A8 B8 g懲（2003年5月修正) 六、申請專利範圍酶，25 %酸穩定蛋白酶，及25%菠蘿蛋白酶。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 24·—種包含飮食補品的製品，包括至少一種黃酮類化合物原料和一種酶，所述補品有效抑制哺乳動物中血小板活性和LDL膽固醇氧化的劑量約爲30 mg/kg或更小，該製品包在一種包裝材料中，其中所述包裝材料上標明所述飮食補品用於降低血小板活性或LDL膽固醇氧化或這兩種情況都得到降低，其中所述未發酵的黃酮類化合物原料爲一葡萄籽提取物、葡萄皮提取物、越桔提取物、銀杏葉提取物或榭皮黃酮，及其中所述酶爲一真菌蛋白酶、酸穩定蛋白酶或菠蘿蛋白酶。 25·如申請專利範圍第24項所述的製品，其中所述包裝材料上標明所述飮食補品用於處理與血小板活性或LDL 膽固醇氧化有關的情況或處理與這兩種情況都有關的情況。 26·如申請專利範圍第15項所述的補品，其中所述葡萄籽提取物佔該補品重量的3.3%或更高的百分比。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 27·如申請專利範圍第15項所述的補品，其中所述黃葡萄籽提取物及葡萄皮提取物佔該補品重量的32%或更高的百分比。 28.如申請專利範圍第21項所述的補品，其中所述黃酮類化合物原料包括一葡萄籽提取物，其佔該補品重量的 3.3%或更高的百分比。 29·如申請專利範圍第21項所述的補品，其中所述黃 -37- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ' 542721 A8 B8 g| (2003年5月修正)六、申請專利範圍酮類化合物原料包括一葡萄籽提取物及一葡萄皮提取物，且它們佔該補品重量的32%或更高的百分比。 30·如申請專利範圔第24項所述的製品，其中所述黃酮類化合物原料包括一葡萄籽提取物，其佔該補品重量的 3.3%或更高的百分比。 31·如申請專利範圍第24項所述的製品，其中所述黃酮類化合物原料包括一葡萄籽提取物及一葡萄皮提取物，且它們佔該補品重量的32%或更高的百分比。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -38- ^紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公h