TW509573B - Polymer platinum compounds - Google Patents

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Robert G Buckley
Elisabetta Gianasi
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Description

509573 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（1 ) 本説明書宣稱美國專利申請序號60/044,743之優先權， 1997年4月18日建檔，其在此併入供參考。 發明範_ 本發明係有關用於腫瘤治療之聚合物·鉑化合物。 I考文獻
Bogdanov，Jr.，Α·Α·等，生物結合物化學 1:144-149(1996)。 Duncan，R·等，Brit. J. Cancer 11:165-174 (1987)，
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Filip〇vi-/Voprhlova，M.等，控制釋出會刊 12 (89-98) (1991) 〇
Freise，J.等，Arch. Int· Pharmacodyn. 258:180-192 (1982)。
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Han，M.J.等 ’ J· Bioact和Biocompat.聚合物£:142 (1994)。 Johnsson，A ·和 C a v a 1 Iin-St3hl，E·，抗癌藥物 I_:70-77 (1996)。
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Prestayko, A.W.癌症和化皋〇第III卷(Crooke等，編者）學術 出版社，紐約市，1 3 3 - 1 5 4 ( 1 9 8 1 )。
Schechter，B·等，控制釋出會刊垃:75_87 (1989)。 -4- 本紙張尺度適用中國國象標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) _·裝·
、1T 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 -_________B7 _ 五、發明説明（2 )
Seymour，L.W·等，J. Biomed· Mat. Res. 21:1341-1358 (1987) 〇
Steerenberg，Ρ·Α·等，國際醫藥學會刊ϋ:51-62 (1987)。
Sur，Β·等，腫瘤學姐:372-276 (1983)。
Weiss，R.B.等，藥物处(3) 360-377 (1993)。 背景 順二胺二氣鉑（11)(順鉑素）廣泛地用於癌症化學療法以治 療固體腫瘤’包括卵巢、睪丸及頭和頸，及特別地有效於 組合化學療法對抗鱗狀細胞瘤癌和小細胞肺瘤癌（Sur等， 1983; Steerenberg等，1987) 〇 順銘素之抗腫瘤活性源自二價物種交聯產生股内和股間 又聯之DNA N-7鳥嘌呤殘基之能力。爲展現抗腫瘤活性， 鉑錯合物需要2個順氏胺或銨官能性，具至少1個氫原子， 其將氫鍵結至DNA磷酸基團之氧原子和2個強結合之脱離基 ，例如氣化物。 如其他癌症化學治療劑，順鉑素爲高度毒性之藥物。順 鉑素之主要缺點爲其極度之腎毒性，其爲主要之劑量限制 因子，其經腎快速排出，具僅幾分鐘之循環半生期，及其 對血漿蛋白之強親和力（Freise等，1982)。 將藥物毒性最小化之嘗試已包括組合化學療法、順鉑素 類似物之合成（prestayko，1991; Weiss 等，1 993 )、免 疫療法和脂質體中之陷入（Sur等，1983; Weiss等，1993)及聚 合物-銘化物共軏物之製備（Bogdanov，Jr.，等，1996;Filipovi- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210x297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
經濟部中央標準局員工消費合作社印製 509573 A7 ____B7 五、發明説明（3 ) ~~
Voprhlow 等，1991;Fuji 等，1 996;Han 等，1 994; Johnsson 和 Cavillin-Stihl，1996; Han 等，1994; J〇hnsson 和 Cavillin-Stihl，1996; Fiebig 等，1996; Neuse 等，1995·
Schechter等，1989)。 關於順舶素類似物之合成’無數之舶類似物已經過預臨 床和臨床試驗，然而僅順鉑素和碳鉑素經允許供例行之臨 床用途（Prestayko, 1991; Weiss等，1993)。許多類似物當與 順銘素比較時，在治療指標中顯示無顯著改進。順鉑素和 其類似物具其他缺點。當口服施用時，許多爲不活化的， 一些在水中具低溶解度及大多數謗生嚴重之毒性副作用， 包括腎玄功能、反胃和嘔吐、脊髓壓抑和神經毒性。 關於聚合物-鉑共軛物之製備，如此共軛物經建議爲增加 落解度和降低系統性毒性之途徑。雖然一些鉑-聚合物系統 t 報導（Bogdanov, Jr·等，1996; FilipovS-Voprgilova，1991; Fuji ’ 等·，l996;Han 等 ’ 1994; Johnsson 和 Cavallin-Stihl， 1996;Fiebig等，1996;Neuse 等，1995; Schechter 等，1989)， 目前尚無腸内臨床探討及少數在體内展現顯著益處。失敗是 因爲缺乏生物相容性、建議載體之毒性、缺乏抗腫瘤活性 及其他問題。 發明簡要 於是’本發明之目標在提供在體内具抗腫瘤活性之新穎 聚合物-舶化合物。 在一個要素中，本發明包括用於腫瘤治療之組合物，包 括設計在腫瘤部位上蓄積之聚合物-鉑化合物。化合物係由 本紙張尺度適财K國家標準（CNS ) A4規格) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 訂 d 509573 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 發明説明（4 ) 合成聚合物主鏈組成，沿主鏈具間隔之含鉑支鏈。支鏈（i) 係由寡肽組成，在一端連接至主鏈及在另一端至鉑化合物 及（i i)包括至少一個鍵鏈，其經設計在選定之生理條件下裂 解生成鉑化合物.，其具或在體内經轉化以具抗腫瘤活性。 在一個具體實施例中，合成聚合物爲N-烷基丙晞醯胺之 共聚物’具在約1，000-5，0〇〇,〇〇〇道耳呑間之分子量。 在另一個具體實施例中，合成聚合物爲具在“㈧一 5,000,000道耳呑間之分子量及含2個重複單元m和n，以在 約0 · 1 - 9 9 · 9間之比値m : η。 重複單元，在一個具體實施例中，包括Ν-烷基丙烯醯胺 單元和載有寡肽支鏈之單元，其終止在能連接鉑化合物之 最近末端。 在一個具體實施例中’在聚合物-銘化合物中之聚合物爲 下式之共聚物： Γ-"* 1 -CH，一C -_ 1 ru Γ _ 1 一L ——— ^ | 一 CO — 01 一 CO 一η NH R' I ^ 其中Rly^H或CH3 ’ R2爲低碳燒基或低碳經基燒基，及 R 3爲寡肽支鏈。， 寡肽，在另一個具體實施例中，爲式Gly·(w)p-Gly之寡 肽，其中P可爲0至3及（W)可爲任何胺基酸或任何胺基酸之 用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 509573 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（5 ) 組合。在一個具體實施例中，肽爲Gly-Phe-Leu-Gly及終 止於連接至銘化合物之羧基、二胺或丙二醯基部分。在另 一個具體實施例中，肽爲Gly_Gly，終止於最近之羧基端 基團。 在較佳之具體實施例中，Ri爲CH3，R2爲2-羥基丙基， 及R3爲Gly-Phe-Leu-Gly-[X]，其中[X]爲二胺、羧基或 丙二醯基部分。 聚合物-銘化合物經溶於適合腸外施藥之在醫藥上可接受 之媒液。 在另一個要素中，本發明包括在個體中標的鉑化合物至 固體腫瘤之方法。該方法包括製備聚合物-鉑化合物，由具 沿主鏈間隔之支鏈之合成聚合物主鏈組成。支鏈（丨）係由寡 肽組成，在一端連接至主鏈及在另一端至鉑化合物及（i丨）包 括至少一個鍵鏈，其經設計在選定之生理條件下裂解生成 銘化合物’其具，或在體内經轉化以具抗腫瘤活性。化合 物以治療有效量經腸外施藥至個體。 在另一個要素中，本發明包括增強鉑化合物之治療指標 (方法，當化合物用於治療腫瘤時，由腸外施用含化合物 之醫藥上可接受之溶液至個體。在施用化合物前，方法包 括以共聚物錯合鉑化合物，其共聚物由N_烷基丙烯醯胺第j 個重複單元和具寡肽支鏈之第2個重複單元組成，其終止於 能與鉑化合物錯合之最近末端基團。 在另一個要素中，本發明改進鉑化合物之溶解度和/或穩 定性之方法，由共聚物錯合化合物，其共聚物由N_烷基丙 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁}
509573 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（6 ) 晞醯胺第1個重複單元和具寡肽支鏈之第2個重複單元組成 ’其終止於能與該鉑化合物錯合之最近末端基團。聚合物· 銷錯合物在生理條件下較非錯合物鉑化合物更可溶和/或更 穩定。 本發明之此些和其他目標和特徵將更全然地認知，當本 發明之以下詳細之説明與隨附圖一起閱讀時。 圖之簡要説明 圖1A-1B爲合成羥基丙基甲基丙晞醯胺（ηρμα)共聚物 之反應圖式，其載有具乙二胺端基團之寡肽支鏈，其中寡 肽爲 Gly-Phe-Leu-Gly(圖 1A)或 Gly-Gly (圖 B)。 圖2爲合成HPMA共聚物之反應圖式，其載有具羧基端基 團之Gly-Gly寡肽支鏈； 圖3爲紅血球解離之線圖，以控制組清潔劑導致完全解離 之百分比表示，以聚合物濃度在微克/毫升之函數，爲 HPMA-Gly-Gly-乙二胺（空心圓）、HPMA-Gly-Phe-Leu-Gly -乙二胺（空心三角）、HPMA-Gly-Gly-COOH(實心 圓）和 HPMA-Gly-Phe_Leu-Gly-COOH(實心三角）； 圖4 A-4B爲合成聚合物·鉑化合物之反應圖式，其中聚合 物爲具乙二胺端基團之Gly-Phe-Leu-Gly寡肽支鏈（圖4A) 和具末端乙二胺基團之Gly-Gly寡肤支鍵（圖4B)之HPMA 共聚物； 圖5A-5B爲合成聚合物-鉑化合物之反應圖式，其中聚合 物爲具終止於羧基之Gly-Phe-Leu-Gly(圖5A)或Gly-Gly(圖5B)寡肽支鏈之HPMA共聚物； -9- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) "tv d 509573 A7 _________ B7 五、發明説明（7 ) 圖6爲合成根據本發明另一個具體實施例之聚合物-鉑化 b物之反應圖式’其中聚合物爲具Gly — Phe-Leu-Gly肽支 鏈之HPMA共聚物’終止於與鉑化合物連接之丙二醯基部分； 圖7 A-7E顯示根據本發明之其他具體實施例之聚合物-鉑 化合物。 圖8A-8B爲線圖，顯示鉑在試管中自ηρμΑ共聚物-鉑化 合物釋出之百分比，以時間爲函數，在小時數下，在 ρΗ = 5·5(圖 8A)和 ρΗ = 7·4(ϋ8Β)，爲 HPMA-Gly-Gly-乙 一胺-Pt(空心圓）、HPMA-Gly-Phe-Leu-Gly-乙二胺-pt(空心 三角）、ΗΡΜΑ-Gly-Gly-O-Pt(實心圓）和HPMA-Gly-Phe-Len-
Gly-0-Pt(實心三角）； 圖9 A - 9 B爲線圖，顯示舶自聚合物·銘化合物η ρ μ a _ Gly-Phe-Leu-Gly-丙二酸_pt至鹽水之試管中釋出，以時 間爲函數，其中釋出之鉑由AAS(圖9 A)和由鄰伸苯二胺比 色分析法（圖9B)測定； 圖 10A-10B 爲柱形圖，顯示 HPMA-Gly-Phe_Leu_Gly-乙二 月士 -Pt(圖 10A)和 HPMA-Gly-Phe-Leu-Gly-〇-Pt(圖 iqb) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 在小鼠中對抗建立之B 1 6黑瘤之效果，以治療動物之平均殘 存時間對未治療控制組動物之平均殘存時間之比値χ 100(T/C)表示，爲不同之鉑劑量，及與接受/亳克/公斤順 鉑素之動物，及與未治療之控制組動物比較； 圖1 1爲線圖，顯示腫瘤大小在平方毫米，以時間在天爲 函數，爲載有S · C · B 1 6黑瘤之小鼠，以1 〇亳克/公斤 HPMA_Gly-Phe-Leu-Gly-0-Pt(實心三角），以1亳克/公斤順 ]0- i紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ' '^ - 五、發明説明（8 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 銷素（空心三角）治療或未治療（實線）； 圖1 2爲線圖，顯示在B丨6F丨〇腫瘤中在靜脈注射i毫克/ 公斤HPMA-Gly-Gly-乙二胺_Pt(空心三角）或j毫克/公斤順 鉑素（實心圓）後7 2小時，以時間在分鐘數下爲函數之相對 鉑濃度；及 圖1 3爲圖形’顯示在小鼠中在腫瘤中在靜脈施用HpMa 共聚物-G1 y _Phe_Leu-Gly-丙二酸_ p t (實心方塊）或游離順鉑 素（2心圓）’以時間爲函數之鉑含量在微克/克。 發明之詳細説明 I ·聚合物·舶化合物之攀借 本發明之聚合物-鉑化合物包括連接鉑化合物聚合物。如 在此所指’’’鉑’’典型地用於鉑錯化合物或化合之文中，指 與1或多個配位體結合之鉑金屬原子。鉑原子可載有正式之 %荷，如在鉑鹽之例，如K2PtCl4，四氣鉑酸鉀，其中鉑載 有（-2)之正式電荷’或可載有無正式電荷，如在順鉑素中 ’ PtCldNH3)2。鉑金屬原子可以不同氧化態存在，如 Pt(0)、Pt(II)或pt(IV)，但是鉑在本發明之文中，典型地 爲Pt(II)。鉑物種可以任何配位態，但典型地爲4_配位體 。’’鉑酸鹽”或”鉑酸物種”，如在此所用，指鉑化合物，其 中銘原子爲Pt(II)或Pt(IV)之氧化態。 多種聚合物係適合使用的及通常包括任何聚合物，其爲 生物相容的，例如無毒性和非免疫原的。較佳地，聚合物 爲合成的，易於調整分子量範圍以達成適於增強皮下滲透 之尺寸及在腫瘤部位和腎過濾之滯留。較佳之聚合物爲親 -11- ^紙^ 適财 格（2丨〇>< 297公幻 ~-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 【裝·
、1T 4 509573 Α7 Β7 五、發明説明（9 ) 水性，方便於製備醫藥劑及更佳地，聚合物爲水溶性。聚 合物亦應爲穩定的，及特別地在聚合物-鉑化合物之製備及 調配成醫藥製備後，穩定的。 體内施用及與藥物結合之合適聚合物已由Duncan回顧 (Duncan等，1992)。如此聚合物，其亦適合用於本發明，包 括聚乙烯基吡咯啶酮、聚乙二醇和其共聚物、糊精、甲基 丙晞酸鹽-乙烯基吡咯啶酮共聚物及其他。應認知的是選定 之聚合物可以適合連接鉑化合物之化學部分衍生化。 聚合物可爲同聚物或共聚物，包括塊共聚物、隨機共聚 物和交互共聚物。聚合物在需要具非可降解或生物可降解 鍵結以達成所要之物理性質時，可經交聯。用於本發明之 一較佳群聚合物爲N-烷基丙晞醯胺聚合物及包括自丙烯醯 胺族之單體製備之同聚物和共聚物，如丙烯醯胺、甲基丙 烯醯胺和羥基丙基丙晞醯胺。在進行支持本發明之研究中 ，基於N-(2-羥基丙基）甲基丙晞醯胺（HPMA)之共聚物經 製備’由具連接鉑化合物之寡肽支鏈之單體共聚合ΗρΜΑ 。共聚物與鉑化合物反應生成在帶腫瘤之哺乳類中具抗腫 瘤活性之聚合物-鉑化合物。 A·例証性HPMA共聚物之製備 經濟部中央標率局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) d 製備支持本發明之例証性聚合物爲由2個重複單元組成之 共聚物。一個爲N-烷基丙晞醯胺之重複單元。另一個單元 經設計載有寡肽支鏈，其終止於與鉑化合物連接之末端基 團。例註性N -烷基丙晞醯胺共聚物具下式： 12- 本紙張尺度ϋ中家標準（CNS ) A4規格（21〇T^公釐） 509573 A7 B7 五、發明説明（10 )
Ri | 一 Ri Ί -(¾ C 審 r*u Γ • 1 v»rl7一\j-- _ 1 L CO」 m —CO Jn i I NH ' I 1{3 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 其中Ri爲Η或CH3，R2爲低碳烷基或低碳輕基燒基，及 R3爲下述之基鏈或肽基支鏈，及爪和η各在01-99.9莫耳 %間，更佳地在1-99莫耳％間，最佳地在5-95莫耳％間。 ’’ fe基π指烴鏈，典型地長度範園在約1至1 2個碳原子。烴 鏈可爲飽和或不飽和的及視情況可含與其連結之附加官能 基，如羥基或_基。烴鏈可爲分支或直鏈。例証性烷基包 括乙基、丙基、1-甲基丁基、丨·乙基丙基和3·甲基戊基。 "低碳烷基π指含自1至5個碳原子之烷基，及可爲直鏈或 分支的，如由甲基、乙基、正丁基、異丁基、第三丁基所 例証，包括其氟化、單羥基或氣化形式。 寡肽支鏈R3較佳地由肽基或胺基酸部分組成，其含，或 可經官能化而含，結合鉑之官能基。支鏈應不相反地影響 生成舶-聚合物錯合物之體内溶解度或毒性特質。在較佳之 具體實施例，寨肽支鏈終止於能與鈦化合物結合之最近末 端基團’其中結合意在包括連結、錯合、配位、螯合和共 價鍵結。亦可能地，鉑化合物含或經官能化而含與寡肤支 鍵反應和錯合之基團。 -13- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1Τ d • ! = 11 -- SI -- i 509573 ΑΊ B7 五、發明説明（11 ) π胺基酸n指含胺基和羧酸基兩者之任何化合物。胺基可 發生在與羧基功能鄰接之位置上，如在胺基酸中，或在 分子内之任何位置上。胺基酸亦可含附加之官能基，如胺 基、硫基、羧基、羰醯胺、咪唑等。胺基酸可爲合成或天 然來源的。 π寡肽'’或11肽基”指聯結在一起之2個或多個胺基酸。代表 性寡肽包括，但不限於以下之胺基酸組合物：Gly_Gly、Gly_
Phe-Gly、Gly-Phe-Phe、Gly_Leu-Gly、Gly-Val-Ala、Gly麵 Phe_Ala、Gly_Leu-Phe、Gly-Leu-Ala、Ala-Val-Ala、Gly-Phe-Leu-Gly > Gly-Phe-Phe-Leu > Gly-Leu-Leu-Gly > Gly-Phe-Tyr-Ala、Gly-Phe-Gly-Phe、Ala-Gly-Val-Phe、Gly-Phe-Phe-Gly N Gly-Phe-Leu-Gly-Phe Λ Gly-Gly-Phe-Leu-Gly-Phe 。較佳之寡肽爲式Gly-(W)P-Gly者。其中P爲0-3及（W)爲任何 胺基酸或任何胺基酸之組合物。2個實例包括Gly-Gly和Gly--Phe-Leu-Gly。鉑化合物可與寡肽醯胺或羧基錯合，或將於 下討論’肤基支鍵終止於與舶以早齒或二齒結合而錯合之 最近末端基團。 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 如上述，在較佳之具體實施例中，寡肽支鏈共價載有其 近側端之基團，鉑化合物經其與聚合物錯合。末端基團通 常爲一個具適合經較佳地在試管中穩定之鍵結而結合鉑之 部分者，但可在體内裂解以釋出活性形式之鉑化合物。例 証性末端基團包括羥基、羧基、多種α，ω_胺包括乙二胺和 乙三胺及錯合或螯合環如丙二醯基部分。 用於本發明化合物之較佳共聚物爲HPΜΑ之共聚物。關 -14- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 509573 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（I2 ) 於以上之結構，HPMA共聚物爲其中Ri爲CH3和r2爲 Ct^CHOHCH3(羥基丙基）者。研究由製備包括具近末端乙二 胺、羧基或丙二酸基團之Gly_Gly卜Gly寡肽支 鏈之HPMA共聚物進行而支持本發明，將予以描述。 圖1Α·1Β顯示合成羥基丙基甲基丙烯醯胺（HpMA)共聚 物之反應圖式，其載有Gly_Phe_Leu-Gly(圖1A)或Gly-Gly(圖 1B)之肽基支鏈和乙二胺之最近端基團。如在實施例丨中所述 ，HPMA-Gly-Phe-Leu-Gly -乙二胺共聚物（在圖1A之化 合物111)係由含Gly_Phe-Leu-Gly對硝基酚（化合物丨）支鏈之 HPMA共聚物與乙二胺（化合物Π)反應製備。含肽基對硝基 紛之HPMA共聚物之製備已由Duncan描述（Duncan等， 1987)，其以其全體在此併入供參考。 圖2顯示合成載有肽基羧基垂懸基團之ηρμα共聚物之反 應圖式’其中肽基支鏈爲Gly-Gly。如在實施例2中所述，含 Gly-Gly對硝基酚支鏈之HPMA共聚物（化合物IV)經製備及 以氫氧化鈉（化合物VI)處理，形成羧酸鈉（化合物νπ)。與 0.02莫耳濃度HC1之反應生成所要之HPMA共聚物，載有 具羧基端基團之Gly-Gly寡肽支鏈（化合物VIII)。 圖2之反應圖式亦適合於合成ηρμα共聚物，含具末端羧 基之Gly-Phe-Leu_Gly寡肽支鏈（化合物XII，圖5Α)。如上 討論，用於聚合物-鉑錯合物之聚物，在另一個具體實施例 中，爲同聚物，特別地自丙晞醯胺族之單體製備之同聚物 。同聚物以連接鉑化合物之支鏈根據熟諳此技藝者所知之 方法衍生化。 -15- —本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） ' (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)
、1T d A7 --〜______ B7 五、發明説明（13 ) — 用於本發明聚合物-鉑錯合物之合成聚合物具在約1,〇〇〇_ 5,00〇,〇〇〇道耳呑間之分子量，更佳地在5〇〇(m，〇〇〇，⑼〇道 耳呑間。分子量爲重要之參數以決定化合物之血液循環生 命期和體内分佈，特別地其增強之皮下滲透及在腫瘤之滯 留。聚合物之聚散佈亦爲循環生命期和分佈之因子 (Seymour等，1987) ° 如上紂論，用於聚合物_鉑化合物之聚合物爲溶於在生理 上可接受媒液者。較佳地，爲在鹽水或其他水基質醫藥載 體中施用，聚合物爲水溶性的。 如在實施例1和2中所述地製備之聚合物如在實施例3中所 述地測試生物相容性。聚合物之細胞毒性由添加Η ρ μ a共 聚物至L 1 3 2 (人胚胎肺細胞）或b ! 6黑瘤細胞之培養物及培 養72小時而決定。培養後，5 -二甲基噻唑·2-基2,5-二苯基 四娃溴（MTT)經加入培養基及在除去培養基和加入二曱基 亞楓以溶解Μ T T結晶前培養。細胞之吸光値經定量以測定 相對於控制組細胞培養物在無聚合物下測試培養物之生存 能力。聚-L -離胺酸之正控制組亦經測試。在與聚葡萄糖作 爲負控制組和聚-L -離胺酸作爲正控制組之比較下，未見到 ΗΡΜΑ共聚物之毒性。 ΗΡΜ Α共聚物之生物相容性亦由評估聚合物解離紅血球 之能力而決定。如在實施例3 B中所述，在嶙酸鹽缓衝鹽水 中懸浮之紅血球經加入HPMA共聚物及培養1小時或24小時 。聚-L-離胺酸經作爲正控制組聚合物及清潔劑Triton X 1 0 0經用以產生1 0 0 %解離。培養後，試驗細胞經離心及上 -16- 本紙張尺ϋ用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） " 一 - In · (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 4 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 509573 A7 B7 五、發明説明（I4 清液經分析血紅素釋出。結果經示於圖3，其中紅血球，以 導致冗全解離之控制組清潔劑百分比表示，經示爲聚合物 濃度在微克/毫升之函數，爲HPMA-Gly-Gly_乙二胺（空心圓) 、HPMA-Gly-Phe-Leu-Gly·乙二胺（空心三角）、HPMA-Gly-Gly_COOH(實心圓）和HPMA-Gly_Phe-Gly-COOH(實心三角）。 數據顯示HPMA共聚物並不顯著地解離紅血球。 B .聚合物-鉑化合物之製備 如在實施例1和2中所述地製備之HPMA共聚物經用以製 備與本發明一致之聚合物-鉑化合物。 圖4A顯示合成聚合物·鉑化合物之反應圖式，其由具以乙 二胺終止之Gly-Phe-Leu-Gly寡肽支鏈之HPMA共聚物組成 。如在實施例4 A中所述，Η Ρ Μ A共聚物與四氣鉑酸（11)抑（ 化合物I X)反應，形成具鉑結合至乙二胺端基團之胺官能性 之化合物（化合物X)。 圖4B爲具以乙二胺終止之Gly-Gly支鏈之HPMA共聚物相 似之反應圖式，如關於圖1 B所述地製備。如在實施例4 B中 所詳述，與四氣鉑酸鉀反應生成具鉑結合至乙二胺末端基 團之胺基之化合物（化合物XI)。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製
(請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁J ，、=0 4 在圖4 A - 4 B中所示聚合物-鉑化合物之溶解度研究經進行 以決定在25°C下在水中之溶解度。結果，示於表1及相較於 順鉑素之水溶解度，顯示聚合物-鉑化合物具水溶解度大於 約3 2 0耄克/毫升，顯著改進優於順鉑素之溶解度。在表1中 所示化合物之穩定性數據指出化合物保持在溶液中，例如 穩定大於6個月。 -17- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 509573 第871〇5951號專利申請案 中文說明書修正頁(89年12月） Α7 【R7 it 補充 五、發明説明（15 ) 表1 化合物或醫藥 Pt1含量（重量％) 水落解度宅克/毫升 HPMA-GPLG-en2-Pt 6.5 >323 HPMA-GG-en2-Pt 4.6 >345 順鉑素 1 . 65.0 2 重量％ P t由原子吸收分光法測定。 2 e η =乙二胺 聚合物-鉑化合物自具含末端游離酸羥基之肽基支鏈之 ΗΡΜΑ共聚物合成係示於圖5Α-5Β及述於實施例5。在圖 )Α中’具Gly-Phe-Leu-Gly支鏈和末端羧基之ΗΡΜΑ共聚物 與順鉑素（化合物ΧΙΠ)反應，生成聚合物-錡化合物，其中 銘經羧基錯合至聚合物（化合物XIV)。圖5B顯示具Gly_ Gly支鏈之ΗΡΜΑ共聚物之相似反應。 圖6為合成根據本發明另一個具體實施例之聚合物-銷化 合物之反應圖式，其中聚合物為ΗΡΜΑ共聚物，具終止於 與銷化合物連接之丙二醯基部分之Gly - Phe-Leu-Gly肽支鏈 。聚合物由具Gly-Phe-Leu-Gly-對硝基酚支鏈之Hp M a 共聚物（化合物XVI)與二乙基胺基丙二酸酯氫氯鹽（化合物 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -----V------ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) XVII)反應製備。產物（化合物ΧνΠΙ)如在實施例6中所述
地處理及最後與順-[ΡΜΝΗ3)2^^)2]2^如在實施例6A 中所述地製備）反應，生成所要之聚合物-鉑化合物（化合物 XX)。 上述之聚合物-鉑化合物使用順鉑素或四氯鉑酸_作為銘 之起始物製備。應瞭解地，任何多種易得或合成之舶錯合 -18- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 509573 A7 ___________B7 五、發明説明（16 ) 物可用以形成本發明之聚合物_鉑錯合物。鉑起始物應擁有 至少1個易置換之配位體，較佳地2個，以錯合聚合物，及 較佳地爲水溶性以方便合成。起始鉑化合物並不必須具體 内之治療活性，及在全部或部分地生物謗導置換聚合物時 ’較佳地在體内轉化成生物活性形式。更佳地，鉑化合物 在體内在有意之目標部位上由聚合物之全部或部分釋出轉 化成生物活性形式。 亦應暸解地，鉑化会物可經連接至肽基支鏈之醯胺或羧 基與聚合物錯合。在具體實施例中，其中支鏈包括連接鉑 化a物之取近端基團，應瞭解地化合物可以如此方式連接 生成單齒物、二齒物或其混合物。以上爲製備聚合物-鉑化 合物説明之反應條件生成單齒和二齒物之混合物。反應條 件於是可經選定以偏好1或多種此些物種。亦應認知地，連 接鉑化合物之其他末端基團經預期，及一些實例經示於圖7 。在此些結構中，聚合物主鏈由波線代表及單肽基支鏈經 不以連接至聚合物，及（AA)爲任何胺基酸：1爲〇-4 ; q爲〇- 2 ; Z1 爲 〇 或 NH ; Z2 爲 OH 或 NH2 ; Z3 爲 〇h2、nh3、 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 NH2R4，其中R4爲低碳烷基；χ爲F、j、〇H或 水；a爲0·9 ; b和c可獨立爲〇-2，但一起和不大於2 ; R5和 R舄Η、低碳燒基或在一起形成5-7個原子之環。 II·聚合物-銘化合物之試管中特性化 如在實施例7A-7C中所述，如上所述地（實施例4、5和6) 製備之聚合物-鉑化合物經測試在試管中鉑之釋出。試管中 釋出分別在pH 5.5和在pH 7.4下測定，由溶解測試化合物 -19- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 509573 A7 B7 五、發明説明（Π ) 於擰檬酸磷酸緩衝液或於磷酸緩衝鹽水（PBS)中。在緩衝液 中之游離Pt使用o_PDA分析法或由AAS分析，如述於以下 之方法節中。
具乙二胺和瘦基最近端基團之聚合物·鉑化合物之結果示 於圖8A_8B，其中自聚合物-鉑化合物釋出之以濃度，以總 有效量百分比表示，係以時間之函數作圖。如見，在pH 5.5 (圖8A)和在pH 7.4(圖8B)，具末端幾基支鏈之HPMA 共聚物 ’ HPMA-Gly-Gly-〇-Pt(實心圓）和 HPMA-Gly-Phe-Leu_Gly-0-Pt(實心三角）較乙二胺末端之共聚物， HPMA-Gly-Gly·乙二胺Pt(空心圓）*HPMA-Gly-Phe- L e u - G1 y _乙二胺P t (空心三角）更快地釋出鉑。 此些結果指出經竣基端基團連接至聚合物之銘較經乙二 胺端基團連接至聚合物之鉑更快地釋出。結果亦建議終止 於乙二胺物種之肽基支鏈必須先經醇素性裂解以釋出鉑物 種0 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) d 如可見，HPMA-Gly-Gly-0-Pt 和 HPMA-Gly-Phe-Leu-Gly_0-Pt在pH 5.5下以近等量速率釋出銘。在pH 7.4下，具較短Gly-Gly支鏈之聚合物以在pH 5.5下約 5 0 %速率釋出p t。此結果指出鉑化合物自聚合物-鉑化合物 之釋出速率可經選擇支鏈之組成和長度而控制。 具丙二酸端基團之聚合物·鉑化合物之試管中釋出結果經 示於圖9A-9B。在圖9A中，化合物（如在實施例6中所述地 製備）在3 7°C下經溶於磷酸緩衝鹽水，pH 7.4及溶液在7分 鐘、4小時和2 4小時下取樣，及更全然地在實施例7 B中描 -20- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 509573 Μ B7 五、發明説明（18 ) 述。樣品由A AS分析Pt含量及結果以總量之百分比表示。 在圖9 B中，自相同聚合物之鉑釋出如在實施例7 c中所述地 測定’而樣品在7 2小時内取樣及使用鄰伸苯二胺比色分析 法分析游離P t。圖9 A和9 B之結果是相一致。 簡言之，試管中釋出數據顯示鉑自聚合物-鉑化合物之釋 出速率可經選擇連結鉑之末端基團、經寡肽支鏈之組成和 長度及由p Η控制。 111 ·聚合物-鉑化合物之體内特性化 如上述地製備之聚合物-鉑化合物在小鼠中經體内測試， 以評估抗腫瘤活性、毒性和生物分佈。抗腫瘤活性和毒性 使用在實施例8中所述之腫瘤模式評估。 Α·腹膜内接種之LI210M痼 如在實施例8 Α中所述，聚合物-鉑化合物對l 12 1 〇腹膜内 (1 · p ·)腫瘤模式測試。腫瘤在第〇天時接種及接著在第1、2 和 3 天時以 HPMA-Gly-Phe-Leu-Gly-乙二胺-Pt 或 HPMA-Gly-Gly-乙二胺_Pt治療，在不同劑量下施用，每 24小時以單一劑量施用。游離順鉑素經施用作爲比較治療 組。結果經示於表2。 ,0 ^ 訂 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 表2 治療 劑量Pt(毫克/公斤)1 T/C2 毒性死亡 順鉑素 2 171 0/10 3 64 9/10 HPMA-GPLG-en3-Pt 3 150 0/5 5 137 0/5 -21- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印袋 509573 A7 ____________ B7 五、發明説明（I9 ) 10 126 0/5 15 131 0/10 30 70 2/5 45 30 5/5 HPMA-GG-en3-Pt 6 114 0/5 19 38 5/5 38 20 5/5 57 20 5/5 1 4匕-七1校 > 仏A U> . - 1指示劑量在腫瘤接種後每天施用一次共3天。 2T/C =治療動物之平均殘存時間除以未治療控制組之平均殘 存時間之比値X 1 0 0。 3en=乙二胺 如見於表2，在此模式中游離順鉑素之最大容忍劑量爲每 天施用1次2毫克/公斤，計3天。具終止於連接鉑之乙二胺 而酵素可降解之支鏈Gly-Phe-Leu-Gly之HPMA共聚物當與 最適劑量之游離順鉑素比較時係相同有效的。然而， HPMA共聚物較游離順鉑素顯著地更少毒性，如由多於7倍 鉑劑量增加而無毒性死亡所例註，例如相較於2毫克/公斤 游離順鉑素之每天1次15毫克/公斤，共3天。亦記載地， HPMA_Gly-Phe-Leu-Gly-乙二胺-pt化合物在每天3毫克/公斤 之劑量下共3天，具抗腫瘤活性。相反地，游離順鉑素在此 劑量下是有毒的。 繼續參閱表2，具非酵素性生物可降解之支鏈（}17_〇1丫之 HPMA共聚物，具連接鉑之末端乙二胺基團，在測試之劑 -22- 本紙張尺度適用中國（ CNS ) M規格（21〇>< 297公髮） *— (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)
509573 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（2〇 ) 量範圍内不顯示顯著活性。 B ·腹膜内B 1 6黑瘤腫瘤模式 如在實施例8 B中所述，聚合物-鉑化合物Η P M A - Gly-Phe_Leu-Gly-乙二胺-Pt對腹膜内（i.p_)接種之B 1 6黑瘤模式 測試。接種後當天，HPMA共聚物以單一劑量在5、！ 〇、 15和20毫克/公斤之舶濃度下i.p.施用。結果經示於表3。 表3 治療 劑量Pt(毫克/公斤） T/C1 毒性死亡 順鉑素 HPMA-GPLG-en2-Pt 5 89 2/5 5 99 0/5 10 104 0/5 15 105 0/5 20 100 0/5 T/C =治療動物之平均殘存時間除以未治療控制組之平均殘 存時間之比値。 2en=乙二胺 數據顯示可安全地以聚合物-鉑化合物形式施用之舶量較 可安全施用之游離順鉑素更多4倍；例如在5毫克/公斤游離 順銘素下2 / 5毒性死亡及在2 0毫克/公斤聚合物-鉑化合物下 〇 / 5毒性死亡。 C_gJ6黑瘤皮下腫瘤模式 如在實施例8 C中所述’小鼠以B 1 6黑瘤細胞皮下接種以 建立固體腫瘤。HPMA共聚物鉑化合物對腫瘤之活性由施 用聚合物·舶化合物HPMA-Gly-Phe-Leu_Gly_乙二胺_Pt和 -23- 本紙張尺度適用^^家標準（0奶）八4規格（21〇>< 297公釐） ’一·一 —- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -$ 509573 A7 B7 五、發明説明（21 ) HPMA-Gly-Phe-Leu-Gly-0-Pt在2、5、10、15 毫克/公斤 之鉑劑量下測試。結果經示於圖1 0 A - 1 0 B，其中圖1 〇 a相 對應於以HPM A - Gly-Phe-Leu-Gly-乙二胺-Pt治療之動物及 圖 1 0B 爲以 HPMA-Gly-Phe-Leu-Gly-0-Pt 治療之動物。數 據以治療動物之平均殘存時間對未治療控制組動物之平均 殘存時間之比値X 1 0 0 (T / C )表示，爲一些銘劑量。一動物 試驗組接受1毫克/公斤順鉑素及一組帶腫瘤之小鼠留置未 治療作爲控制組。 可自數據見到HPMA共聚物-舶化合物較順舶素在s . C ·腫 瘤模式中具明顯更佳之抗腫瘤性質。關於HPMA-Gly-Phe-Leu-Gly·乙二胺-Pt化合物（圖10A)，抗腫瘤活性相對於游 離順鉑素係顯著地允許及在1 0毫克/公斤之鉑劑量下最佳。 HPM A共聚物Gly-Phe-Leu-Gly-乙二胺-Pt較游離順鉑素多 於1 5倍之較少毒性。 關於 HPMA-Gly-Phe-Leu-Gly-0-Pt化合物（圖 10B)，抗 腫瘤活性在1 0毫克/公斤下最高，而T/C大於200。在1 〇毫 克/公斤和1 5毫克/公斤之劑量下之毒性死亡（分別地2 / 6和 4/4)發生在10公斤/毫克和15公斤/毫克劑量下，然而， HPMA-Gly-Phe-Leu_Gly-0-Pt化合物係較游離順鉑素5 -1 〇 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 倍較少毒性，順鉑素之最大容忍劑量在此模式中爲1毫克/公 斤。 繼續參閲圖1 0A -1 0B，具經游離酸羥基連接之鉑之化合 物，其抗腫瘤活性，例如由末端羧基所提供，（圖1 〇 B )顯示 較具乙二胺連接鉑之化合物（圖10A)更大之抗腫瘤活性。此 -24- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 509573 A7 B7 五、發明説明（22 ) 一 ~ 結果與以上討論之試管中鉑釋出測定速率（圖8a_8b)相關 。HPMA-Gly-Phe_LeU-Gly-乙二胺_Pt在試管中係穩定的及 需要内腫瘤之酵素性活化抗腫瘤活性。此導致一種較游離 藥物戲劇性地更少毒性之化合物。自酵素性可生物降&Giy_
Phe-Leu-Gly支鏈之釋出速率可由施用促進酵素性裂解之合 適酵素而控制，如蛋白酶，胰蛋白酶或木瓜蛋白酶。 此些結果展現鉑化合物自聚合物-鉑化合物之釋出速率可 經選疋連接舶化合物之末端基團及經選定寡肽支鏈之組成 而控制。 載有固體B 1 6腫瘤之動物之腫瘤大小以時間在天數下之函 數監測，爲以聚合物銘化合物HPMA-G1y-Phe Leu Gly 〇_ P t或以順鉑素治療之小鼠。如在圖1 1中所見，以1 〇毫克/公 斤聚合物-鉑錯合物治療之動物（實心三角）相較於該等以J 写克/公斤順鉑素治療者（空心圓），具腫瘤生長之明顯抑制 。實線代表未處理動物。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 簡言之，體内數據顯示本發明之聚合物-鉑化合物當與順 銷素比較時，達成增強之抗腫瘤活性。聚合物_鉑化合物至 少邵分地由化合物在腫瘤部份上蓄積而達成改進之抗腫瘤 活性。聚合物-鉑化合物能釋出生物活性形式之鉑，其中鉑 之釋出可經選定連接鉑之末端基團及經選定寡肽支鏈之組 成和長度而控制。 聚合物-鉑化合物在腫瘤區域中增強蓄積之進一步証據係 不於圖1 2。如在實施例9中所述載有腫瘤之小鼠以游離順鉑 素（1亳克/公斤，實心圓）或HPMA-Gly-Gly-乙二胺-Pt(l毫 -25- -… — ' 1 - _ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21GX 297公釐） 挪573 A7 B7 五、發明説明（23 ) 克/公斤，空心三角）靜脈内治療。在治療後不同時間下，腫 瘤經切下及鉑含量由原子吸收分光法測定。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 如在圖12中所見，在以HPMA共聚物治療之腫瘤中之相 對鉑濃度係顧著地高於以等劑量順鉑素治療之動物。此指 出以聚合物-鉑化合物形式施用之鉑在腫瘤部位上達到改進 之蓄積。此改進之蓄積展現增強或選擇性引導或標的聚合 物-鉑化合物至腫瘤。 4 在另一個研究中，如在實施例i 〇中，載有腫瘤之小鼠以 HPMA共聚物Gly-Phe-Leu-Gly-丙二酸-Pt治療。腫瘤在施 用聚合物-鉑化合物後多至72小時之時段下除去及由AAS分 析銷含量。結果經示於圖1 3及如所見，在以聚合物-銘化合 物治療之小鼠（實心方塊）和在以游離順鉑素治療之小鼠（空 心圓）間之鉑含量有顯著差異。施用HPMA共聚物-Gly-Phe-Leu-Gly-丙二酸-Pt後4小時，測出腫瘤鉑含量之最大値，此 最大量較在以游離順鉑素治療小鼠之腫瘤中存在之鉑近乎4 倍量更高。清楚地，本發明之聚合物-鉑化合物係有效於腫 瘤中蓄積。 IV ·旌用和標的聚合物-鉑化合物之方法 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 在另一個要素中，本發明包括施用鉑化合物至個體之腫 瘤之方法。該方法包括製備聚合物-鉑化合物，含具如上述 含舶暴歛支鏈之聚合物。化合物以治療有效量施至載有腫 瘤之個體。 爲施用，化合物可以多種方式調配。爲腸外施用，聚合 物-鉑化合物在所要之鉑濃度下經溶於水性媒液，例如等滲 -26- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 509573 A7 ;---~--------- B7 五、發明説明（24 ) " — 壓鹽水。化合物可以單一帛丸劑量或以緩慢灌注而腸外施 用。可替代地，化合物可由製備錠劑、藥液、懸浮液及其 類似物而調配供口服施用。 腫瘤治療之適當劑量基於在此所示之數據，爲體内施用 至載有腫瘤之小鼠而測定。此資料，與其他鉑化合物如順 鉑素和碳鉑素之已知劑量結合及相關性係在此傳統鉑酸鹽 和本發明之聚合物_鉑化合物間之毒性，提供選擇在人體中 適當治療劑量之指引。熟諳此技藝者可調整調劑量和療法 ，基於已知鉑酸鹽之毒性和/或藥學動力學與聚合物·鉑化合 物者之差異，以達成甚至更大之治療好處。 使用本發明之聚合物-鉑化合物與其他化學治療劑之化學 療法亦可適合於一些類型之癌症。例如，長春花鹼、博菜 黴素、放線菌素、亞德里亞黴素、脱氫可的松、長春新鹼 、紫杉烷類（紫杉帖、紫杉酚）、5_氟尿嘧啶、喜樹鹼、環 磷醯胺和琴胸鹼（gemcytobine)可與聚合物鉑化合物結合施 用。作爲實例，卵巢癌之療法可包括施用治療有效劑量之 聚合物-鉑化合物及以24小時灌注共同施用亞得里亞黴素。 進一步預期地，在發展中之其他化學治療劑如拓撲異構酶 抑制劑、血管生成抑制劑，可與聚合物_鉑化合物結合施用 〇 在另一個要素中，本發明提供增強鉑物種治療指標之方 法，該方法包括經肽基支鏈錯合鉑化合物，其終止於爲如 此連結以達成增強治療指標之最近末端基團，例如最大容 忍劑量對最小治療劑量之比値。此由以上討論之體内數據 •27- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210x197公釐） ~ ： --~~ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) k裝· 、11 509573 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（25 ) 所例*正’其中聚合物-舶錯合物較順銘素顯著地更少毒性， 其對腫瘤治療係生物有效的。 在另一個要素中，本發明提供標的或選擇性地引導更多 百分比例劑量物質至腫瘤之方法。如提供之實例所上示， 以聚合物-舶化合物形式施用之鉑在腫瘤中相關於鉑化合物 ’及特別地不與聚合物錯合之鉑酸鹽化合物，達到更大之 蓄積。自前面，可認知本發明之不同特徵和目標是如何達 成的。本發明之聚合物·鉑化合物爲生物相容的，如由無細 胞母性和典解離紅血球之能力。舶化合物經寡肤支鏈連接 至聚合物主鏈’其以最遠端鍵結至水溶性之合成聚合物及 在其最近端至鉑化合物。連接鉑化合物之釋出速率係經選 擇支鏈之組成和長度及在支鏈上之末端基團控制。在具體 實施例中之支鏈係酵素性地生物可降解的，提供在缺乏合 適酵素下之穩定化合物。在另一個具體實施例中，支鏈爲 非酵素性地生物可降解的及提供達到改進抗腫瘤活性之更 想要之鉑釋出率。鉑化合物自聚合物-鉑化合物之釋出率亦 可pH在寡肽支鏈之組成和長度兩者之作用上控制。 由本發明之I合物-舶錯合物達成之抗腫瘤活性是因爲， 至少部分，舶化合物在腫瘤部位上之增強蓄積。聚合物和 寡肽支鏈之組成和分子量爲影響化合物在腫瘤中蓄積和滞 留之因子。 ' < 應認知的，非HPMA之聚合物係合適於聚合物·舶化合物 中之用途。如上討論，用於化合物之聚合物爲生物相容者 ’及其具足以供在腫瘤部位之皮下滲透性及由腎清除自體 -28- 本紙張尺>^適用：^"^標準（〇奶）八4規格（210'/297公釐）—' ' ----- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
、1T 4 509573 Α7 Β7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（26 内除去之分子量。爲HPMA，限制腎小管過濾之分子量閾 値已、、、工鑑疋在約4 5，〇〇〇道耳呑（Seym〇ur等，！ 9 8 7)。此閾 値當然將因各聚合物而不同，根據其物理化學性質，及可 在實驗上測定。爲任何選定之聚合物，在腫瘤部位之皮下 滲透性和由腎清除機制間之平衡可在實驗上測定。聚合物 進一步具物理化學特性，例如溶解度，穩定性，可改善以 調配在醫藥上可接受之載體中及長期保存。 實施例 以下之實施例説明本發明聚合物-鉑化合物之製備及化合 物之特性化。應認知的，實施例係例証性的及不以任何方 式限制本發明。 V.物質 A. 化學物 順舶素（順二胺二氯鉑（II ))、四氯鉑酸鉀、鄰伸苯二胺、 乙一胺、二乙三胺、寧海準和海準單聽（hydrindatin)係由 Sigma，英國供應。胺基丙_2·醇由Fluka供應。所有溶劑及 化學品由Sigma英國或Aldrich英國供應及在使用前經蒸餾或 在分子篩中脱水。 B. 細胞系 使用之細胞系L13 2 (人胚胎肺細胞）、C Ο R L 2 3 (非小細胞 肺癌細胞）和Η 6 9 (小細胞肺癌）係獲自歐洲細胞菌種中心， 應用生物、微生物和研究中心，沙里斯堡里，威爾特群， 英國。 VI·方法 • 29· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項存填寫本頁) ,ιτ d. 經濟部中央標準局員工消費合作社印t 509573 A7 _____ B7_____ 五、發明説明（27 ) A. 原子吸收分光法（AAS) 原子吸收係使用（火焰）Perkin-Elmer 280儀器”伫以丨卜 E1 m e r，諾渥克，康乃狄克州）或（無焰）P e r k i η _ E1 m e r AA100(石墨灰化爐）進行，以四氣鉑酸鉀（K2PtCl4)或順鉑 素（Pt(NH3)2Cl2)在濃硝酸、濃鹽酸及過氧化氫（30%)之水溶 液檢量。 B. 鄰伸苯二胺比色分析法（0_pdA) 含1 - 5毫克未知鉑含量之樣品經溶於1毫升二次蒸餾水和1 毫升鄰伸苯二胺（o-PDA)在二甲基甲醯胺（DMF)(l-2毫克/ 毫升）之溶液及在1 0 0 °C下培養1 0分鐘。在樣品中存在之鉑 量由測定在7 0 3毫微米下之吸光値決定，使用順鉑素作爲參 考物。 實施例1 HPMA共聚物-肽-乙二胺之合成 含肽基對硝基酚（ON p)之HPM A共聚物之合成已經描述 於前(Duncan等，1987)，在此描述合成之節在此併入供參考。 1克約30,000重量平均分子量（MW)之HPMA共聚物和含 垂懸肽基支鏈之聚分散（Mw/Mn)1.3-1.5，例如Gly-Gly-ONp 或Gly-Phe_Leu-Gly_〇Np(5 莫耳％或10 莫耳％)經加入50 毫 升二次蒸餾水（DDW)及在室溫下攪拌15分鐘或直至溶解。 在需要時，pH以0.01莫耳濃度HC1調至5.7。 溶液在2 0分鐘内逐滴加入乙二胺在1 〇毫升d D W之攪拌溶 液及然後攪拌4小時。混合液在對5升DDW之4天透析（伸展 管，孔徑1 0,000)前過濾。生成之溶液經濃縮至約2〇毫升 -30- 本紙張尺度關家標準（CNS ) A4規格（21GX297公釐) ~ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 4 509573 A7 B7 五、發明説明（28 ) ，使用Ami_”CENTRIPREP”過濾器（Amic〇n，丹佛斯，麻州 )，孔徑10,000及冷凍乾燥，生成白/近白色絨毛狀產物（典型 產量：0·9克）。 在產物中乙二胺之含量由寧海準方法測定。寧海準溶液 (1¾升，包括20克/升寧海準和3克/升海準單聽在DMS〇和 乙酸鈉緩衝液（pH 5.5)75:25 v/v之溶液）經加入/毫升樣品 溶液及在7 5 °C下培養1 5分鐘。溶液允許在添加3亳升乙醇 溶液（5 0% v/v在DDW)前在室溫下靜置15分鐘。吸光値在 5 70毫微米下記錄。HPMA-Gly-Phe-Leu-Gly-乙二胺之初級 胺基數目，參比自1 ·胺基丙 2 ·醇製備之標準溶液計算，爲 3-4xl0·4 莫耳/ 毫克及HPMA_Gly_Gly-乙二胺者爲 38χ1〇-4莫耳/毫克。 實施例2 ίΙΡΜΑ共聚物肽-c〇ONa之合成 合肽基對硝基酚（〇Np)之HPMA共聚物之合成已述於前 面（Duncan等，1987)。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
NaOH(0.01莫耳濃度，5〇毫升）之溶液經加入1克犯^1八 共聚物，其重量平均MW約3 0,000及含垂懸肽基支鏈之聚 分散（Mw/Mn) 1.3-1.5，例如Gly-Gly-ONp 或 Gly-Phe-Leu-Gly-ONp(5或10莫耳％)。溶液在過濾及使用伸展管，孔徑 1 0,0005升DDW透析4天前在室溫下攪拌4小時。在需要時 過濾下’生成之溶液經濃縮成20毫升，使用Amicon "CENTRIPREP^^滤器，孔徑ι〇,〇〇〇及冷床乾燥，生成白/近 白色絨毛狀產物（典型產量〇.9克）。 -31- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 509573 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（29 ) 以下之程序經用以生成HPMA共聚物-Gly-Gly-OH和 HPMA共聚物-Gly-Phe-Leu-Gly-OH。HC1 (0.02莫耳濃度;20毫 升）之溶液經加入HPMA共聚物Gly_Gly-ONa或HPMA共聚物 Gly-Phe-Leu-Gly-ONa(0.7 克）及混合液在由使用 Amicon ’’CENTRIPREP"過濾器，孔徑1 0,000離心純化前在室溫下 攪拌4小時。樣品在2,000 g下離心40分鐘，直至過濾之溶 液無色（最少離心4次）。在各階段，聚合物溶液在離心前以 D D N稀釋至1 5毫升。生成之溶液經冷凍乾燥，得到絨毛狀 白/近白色產物（典型產物0·5克）。 羧酸基團之定量由已知重量之樣品在DDW之溶液滴定已 知濃度之氫氧化鈉而達成（酸鹼滴定）。爲HPMA_Gly-Phe-Leu-Gly-OH，存在有2xl0·4莫耳/克COOH基團及爲HPMA-Gly-Gly-OH，存在有3-5xl0·4莫耳/克COOH基團。 實施例3 HPMA共聚物之生物相容性 A .細胞毒4生 細胞在微滴盤中使用標準條件培養。24小時後，以ΐχΐ 〇_6 個細胞/毫升測試聚合物之密度接種細胞（典型L13 2或B 1 6 黑瘤）及眾-L-離胺酸（MW5 6,5 00)作爲正參考値心不同濃 度（0-5)毫克/毫升）加入。細胞在添加5 -二甲基喧吐_2-基-2，5 - 一琴基四鋰溴（Μ T T : 1 0微升）至培養基前經培養7 2小 時。培養盤經培養再5小時，培養基經除去及1 〇 〇微升二甲 基亞颯（DMSO)經加入以溶解暗藍色結晶。在55〇毫微米下 吸光値使用微滴盤閲讀機測定及測試培養物之生命力以控 -32- 本&張尺度顧巾關家辟（CNS ) Α4規格（21GX297公釐)~ —-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、v" d 509573 第87105951號專利申請案 A7 月） B7 _ 五、發明説明（30 ) 制組細胞在無聚合物下培養之百分比表示。 B .紅血球觫雜 血液自雄W i s t a r大鼠在心戳刺犧牲後獲得。紅血球由血 液在冷$粦酸缓衝鹽水（PBS)中在4°C下在1，〇〇〇 g下離心1〇分 名里3次收集。終片狀物再懸浮於p b s，得到2 % w / v紅血球 溶液。使用微滴盤分析法，1 〇 〇微升紅血球溶液經加入約 100微升不同濃度之測試聚合物及培養5小時。清潔劑 Triton X 100(1% v/v)—次使用以產生1 〇 〇 %解離。培養後， 微滴盤在1，〇 〇 〇 g下離心1 〇分鐘以沉降完整細胞及上清液 (1 0 0微升）轉入新盤中，以測定在5 5 〇毫微米之分光光度測 足下之血紅素釋出。結果，以血紅素釋出量之總量（丁出011 X-100)百分比表示，係示於圖3。 順鉑素及快速釋放之聚合物羧酸鉑類顯示之I C 5 〇值對 B 1 6細胞素為1 0微克P t /毫升，而其他較慢釋放之共轭物超 出此劑量亦無毒性。 實施例4 HPMA 共聚物- Glv-Phe-Leu-Glv-乙二胺-Pt 和 HPMA-Glv-
Glv-乙二胺-Pt之合成 A.HPMA·Glv-Phe-LeιI-GlV-乙二胺-Pt乏 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 在HPMA共聚物-Gly-Phe-Leu-Gly-乙二胺（自實施例〇 (0.8克在20毫升，DDW)之溶液中，在20分鐘内逐滴加入 K2[PtCl4]在DDW 。未結合之鉑由離心（Amic〇n "CENTRIPREP，，過濾器，孔徑 1〇,〇〇〇)除去，在 2,000 xg 下重複地旋轉4 0分鐘（最少4次），直至分開之溶液無色。含 η η -J J - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇X 297公釐） 刈9573 m to ? 9 A 7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 第87105951號專利申請案 中文說明書修正頁(89年12月） 五、發明説明（30a) 聚合物-鉑化合物之生成溶液以D D W在各次離心開始時稀 釋至1 5毫升。生成之聚合物-鉑溶液經冷凍乾燥，生成標色 絨毛狀固體（典型產量〇 · 7克）。反應係說明於圖4 a -33a - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇X別公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
509573 A7 B7 __________ _________________ ___ 五、發明説明（Ή ) 總鉑含量係由如上述之原子吸收分光法或〇·PDA方法測 定。 幾批次HPMA共聚物- Gly-Phe-Leu-Gly-乙二胺-Pt之典型 分析結果經示於表4。 表4 樣品號 由AAS之總Pt(重量％) 1 5.5 2 6·9 ± 1.63 3 10·1 土 1 · 1 8 4 8.5 5 6.9 B .HPMA-Glv-Glv·乙二胺-Pt之合成 在HPMA共聚物- Gly-Gly -乙二胺（自實施例ΐ)(〇·8克在 20毫升DDW)之溶液中，在20分鐘内逐滴加AK2[PtCl4J 在DDW。未結合之鉑由離心（Amicon "CENTRIPREP，，過遽 器，孔徑1 0,000)，在2,000 Xg下重複地旋轉40分鐘（最少 4次），直至分開之溶液無色。含聚合物·鉑之生成溶液以 D D W在各次離心開始時稀釋至！ 5毫升。離心之聚合物- 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 溶液經冷凍乾燥，生成棕色絨毛狀固體（典型產量Ο · 7克）。 反應係説明於圖4 B。 總銷含量係由原子吸光分光法或〇-PDA方法測定，如上 述於方法節中。幾批次HPMA共聚物Gly-Gly-乙二胺-pt之典 型分析結果經示於表5。 -34- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) μ規格（210X297公釐） 509573 A7 B7 五、發明説明（32 ) 表5 樣品號 由AAS之總Pt(重量％) 1 ' 7 2' 4.2 土 1。4 3 8.59 土 1.65 4 7.8 實施例5
HgMA共聚物_Glv-Gly-0-Pt和HPMA共聚物HPMA共聚物
Qjy-Phe-Leu-GW-O-Pt之合成
Pt(NH3)2Cl2(〇.12克在80毫升二次蒸餾水）在室溫下在 20分鐘内逐滴加入在攪拌下HPMA共聚物Gly-Gly_ ON a (0.8克在30毫升DDW)之溶液。混合物經攪拌再4小時 。未結合之鉑由離心（Amicon，，CENTRIPREP，，過濾器，孔徑 1 0,000)分開，在2,000 xg下重複地旋轉40分鐘（最少4次） ’直至分開之溶液無色。生成之溶液，典型地2 0毫升，經 冷凍乾燥生成白色絨毛狀固體（典型產量〇 . 7克）。反應係説 明於圖5 A - 5 B。 鉑含量係由如上述之AAS和〇· PDA分析法測定。 HPMA 共聚物 Gly-Gly-O-Pt和HPMA共聚物-Gly-Phe-Leu-Gly-O- P t之典型分析結果經示於表6。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 表6 樣品號 由AAS之總Pt(重量％) HPMA-Glv-Glv-0-Pt 1 2.0 2 2 A HPMA-Gly-Phe-Leu-Gly-0-Pt 1 7.7 -35- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 509573 A7 B7 五、發明説明（33 ) 實施例6 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) HPMA共聚物-Glv-Phe-Leu-Gly·丙二酸-Pt之合成 二乙基胺基丙二酸氫氣鹽（化合物XVII，0.21克在2亳升 無水DMF)之溶液經加入HPMA共聚物Gly_Phe-Leu-Gly-〇Np(化合物XVI，0.5克在4毫升無水DMF)之攪拌溶液。三 乙基胺（0.2克）然後在4分鐘内加入及全部攪拌1 5小時。在 眞空下蒸發至乾涸後，殘留物經溶於4毫升DDW。溶液然 後經過滤，施至2 · 6x3 4厘米Sephadex G-25管柱及以DD W 溶析。聚合物區分液經合併及冷凍乾燥，生成絨毛狀白色 固體（化合物χνπΐ，0 _43 9克）。0.43 5克固體部分經溶於 1 · 3毫升甲醇。溶液經冷至1 5 X：及以攪拌加入〇 · 6 8 6毫升 〇 · 9 9莫耳濃度氫氧化鈉水溶液。在1 5 °C下攪拌1 5分鐘後， 攪拌在室溫下繼續再3 · 7 5小時。溶液之ρ Η由添加1莫耳濃 度鹽fe #周至約1 0 · 5及在過滤後，溶液施至2.6 X 3 4厘米 Sephadex G-25管柱及以水溶析。聚合物區分液（體積60毫 升）經合併及使用Amicon "Centriperp 10，，濃縮器（分子量截 面10,000道耳呑），濃縮至體積20毫升（八11^〇11，丹佛斯， 麻州）。體積使用2次蒸餾水調至4 5毫升及濃縮成3 0毫升， 調至4 5毫升及最後濃縮成1 2毫升（重複性超過濾程序）。9毫 升溶液部分之pH使用0.01莫耳濃度NaOH調至7.5及溶液（ 化合物XIX)然後逐滴加入7.53之順[Pt (ΝΗ3)2(Η20)2]2 + 溶液，如下述地製備。全部在黑暗中攪拌20小時及然後過 濾。濾液經施至2 · 6 X 3 4厘米Sephadex G-25管柱及以水溶 -36- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇Χ 297公釐） 509573 Μ Β7 五、發明説明（34 ) 析。聚合物區分液經合併及冷凍乾燥，生成白色絨毛狀固 體（產量0.206克）。固體（化合物XX)經發現含9·9重量 %Pt(ICP分析）。反應圖式經説明於圖6。 A·順「Pt(NHL) 液之製備 在順[PtCl2(NH3)2](〇.2克在4亳升2次蒸餾水）之攪拌懸 浮液中，加入硝酸銀（0 · 2 2 1克在4毫升二次蒸餾水）溶液。 混合液在黑暗中攪拌4小時及然後過濾。濾液之1組體積經 用於如上述之銘化目的。
實施例7A
Pt自聚合物-鉑化合物之詖管中釋出 如在實施例4和5中上述地製備之聚合物-鉑錯合物分別在 pH 5.5和pH 7.4下溶於擰檬酸嶙酸緩衝液或鱗酸緩衝鹽水 (PBS)，及在37°C下對個別之溶液透析。樣品在48小時内 自透析液規則地取樣及游離Pt使用〇-PDA分析或由AAS如 上述地分析。自聚合物-鉑化合物釋出之pt濃度以總可得量 之百分比表示及結果係示於圖8 A · 8 B。
實施例7 B 自HPMA共聚物- Gly-Phe-Leu-Gly -丙二酸-Pt之試管 中釋出（AAS古法、 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 如在實施例6中所述地製備之共軛物在3 7 Ό下溶於磷酸緩 衝鹽水，pH 7.4(PBS)。溶液之樣品在7分鐘、4小時和24 小時下取樣及各施至Sephadex G-25管柱。管柱使用PBS溶析 及溶析之溶析液由AAS分析Pt含量。Pt自共軏物釋出之量 以總量之百分比表示及結果係示於圖9 A。 -37- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇χ297公釐） 509573 A7 B7 五、發明説明（35 )
實施例7 C gj自HPMA共聚物- Glv-Phe-ren-Gly -丙二酸-Pt之試管 中釋出（o-PDA方法、 如在實施例6中上述地製備之共軛物經溶於磷酸緩衝鹽水 ’ pH 7.4及在37 °C下對pbS溶液透析（無縫伸展纖維素管 ’具孔徑2.4毫微米及分子量截面約1〇,〇〇〇)。樣品在72小時 内自透析液規則地取樣及游離Pt使用鄰伸苯二胺比色分析 法（〇 - P D A)進行分析；含未知鉑含量之樣品經加入1毫升〇 · PDA在DMF之溶液（1· 2毫克/毫升）及在1〇〇。(：下培養1〇分 鐘。在樣品中存在之鉑量由測定在7 〇 4毫微米下之吸光値決 定’使用順舶素作爲參考物。自共軛物釋出之濃度pt以總 可得量之百分比表示及結果係示於圖9 b。 實施例8 拯腫瘤活性和毒性之體内評估 所有動物研究根據UKCCCR(英國癌症研究協調委員會） 指引進行。 I · I^I210i.p·腫瘤模式 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1 06個活細胞在第〇天i. P ·施至D B A 2小鼠（雄9 -1 2週， 20-30克）。動物接著以順鉑素或以具HpMA-G1厂phe_Leu_ Gly-乙二胺-pt或HPMA-Gly-Gly-乙二胺-pt之聚合物-鉑化 合物（如在實施例4中所述地製備），以單或多i p·劑量在第i 、2或天治療。動物每天稱重及一天觀察腫瘤進展象徵2次 及在其體重低於起始重之8 〇 %時或若見到其他嚴重之毒性 問題時犧牲。在實驗之最後，記載在粗解剖之變化。結果 -38- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 509573 第87105951號專利申請案 中文說明書修正頁(89年12月） A7 B7 五、發明説明（36 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 係示於表2。 A . B 1 6黑瘤i · p ·模式 雄C 5 7 B L / 6 J小鼠以1 〇 6個活B 1 6 F 1 0細胞腹膜内（i. p ) 接種。細胞在第0天注射及游離順鉑素或聚合物-鉑化合物 HPMA-Gly_Phe-Leu-Gly-乙二胺-Pt在其後天中以單或多劑 量i. p .注射。動物如上述地監測。結果係示於表3。 B . B 1 6黑瘤S . C .槿式 雄C 5 7 B L/ 6 J小鼠以1 〇 5個活B 1 6 F 1 0細胞皮下（s · c )接 種。腫瘤允許建立直至面積約50-70平方毫米，如由2個直 交直徑之積測定。載有s . c ·腫瘤之動物由游離順鉑素或托 合物-銷化合物 Η P M A - Gly-Phe-Leu-Gly-乙二胺 HPMA-Gly-Phe-Leu-Gly-O-Pt 之 i.p.或 i.v.注射在2、$ 1 0、1 5毫克P t /公斤下治療。 為HPM A - Gly-Phe-Leu-Gly-乙二胺-Pt化合物之妹果麵厂、 於圖 1 0A及為 HPMA-Gly-Phe-Leu-Gly-羥基-pt化人物 ^ 了 圖1 0 B。數據以治療動物之平均殘存時間佴 於 組之比值X 1 0 0 ( T / C )表示。 、二 表2中的ED50及LD5Q值分別為（¾克Pt/公斤）· 順鉑素：2.5 ; 2.5Η P M A - G F L G - e n - P t : < 3 ; 3 5 HPMA-GG-en-Pt : <6 ; 12 表3中的ED5〇及LD5〇值分別為（毫克pt/公斤）· 順銘素：< 5 ; 2 5HPMA-GFLG-en-Pt : 10 ; >20 ·——:----·τ f請先聞讀背面之注意事^再填寫本頁) -訂
Jm -39- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2ΐ〇χ 297公董） 509573 第87105951號專利申請案 M 中文說明書修正頁(89年12月） B7 年月口修正I 2D | --- 五、發明説明（36a) -W*] HP M A共聚物鉑化舍物之生物分佈 A . B 1 6黑瘤S Γ楛式 雄C5 7BL/6J小鼠以1〇5個活Bi6F10細胞s.c.接種及腫 瘤允許建立直至面積約5 0 - 7 0平方毫米，如由2個直交直徑 之積载。動物以游離錢素（1毫克/公斤）或HpMA共聚 物-Gly-Gly-乙二胺Pt(1毫克/公斤)"_注射及在多至”小 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 a 9 用 適 尺 張 一纸 I本 一準 I標 家 一釐 公 509573 A7 B7 五、發明説明（37 ) ' 時心時間下犧牲。腫瘤經解剖及使用Na〇H溶解以得到無色 洛液。樣品使用AAS分析以允許自以游離順鉑素和聚合物_ 鉑錯合物注射之動物所取腫瘤之pt含量之比較。結果係示 於圖1 2。 ' 實施例1 0 丙二酸-PtA # 右1^ 5F1〇 里JtA小鼠中之营藉 雄C57B1/63小鼠以l〇5個活B16F1〇細胞sc•接種及腫 瘤允許建立直至面積約5〇-7〇平方毫米，如由2個直交直徑 之積測定。動物以游離順鉑素（1毫克/公斤）或Ηρμα共聚 物-Gly-Phe-Leu-Gly-丙二酸邛41毫克/公斤）iv注射及動 物在多至72小時之時間下犧牲。腫瘤經取代、稱重及在硝 酸中落解’接著過氧化氳，得到無色溶液及其後以水調至 已知體積。樣品使用原子吸收（無焰）分析法分析，其使用 卩64111411116『280儀器進行及以順鉑素（？1(]^113)2(：：12)在濃 硝酸、過氧化氫（3 0❶/〇)和水進行檢量。結果係示於圖1 3。 雖然本發明已述於相關之特別具體實施例，對熟諳此技 藝者很明顯的，不同之變化和修飾可以產生而不偏離本發 明。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
、1T i# 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -40-
• n I 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）

Claims (1)

  1. 509573 A8 B8 C8 D8 91· 9· 18 f@105951號專利申請案 中肩^~請專利範圍修正本(91年9月） --七---- r甲讀專利範圍 1· 一種用於腫瘤治療之組合物，包括 一種聚合物-鉑化合物，設計在腫瘤部位上蓄積及由 N-虎基甲丙烯醯胺單元之合成聚合物組成，分子量介 於1，000_1，000,000道爾頓（1)化〇115)，其結構為： Ri Γ R1 一 -CH7—C --- 广pt r 一 l- 一 CO — m 一 CO - η I ^2 其中111 = 0且11=100，或其中111:11之比例為0.1_99.9 ’其中及丨為！·！或CH3 ;其中反2為（：1-€：6經燒基，及其 中R3為在生理條件下能裂解具有序列Gly-(W)P-Gly 之寡肽鏈，其中p為0-3且W為胺基酸或任何胺基酸之 組合’其C端為羧基基團或連結至二胺基基團或丙二醯 基’其任一可與鉑類形成錯合物，在活體内已轉化或 可轉化而具有抗腫瘤活性。 2·根據申請專利範圍第1項之組合物，其中該寡肽係選自 Gly-Phe-Leu-Gly和Gly_Gly。 3·根據申請專利範圍第1項之組合物，其中R ^為〔η 3，R2 為2 -幾基丙基，及r 3為g 1 y _ p h e - l e u _ G1 y - [ X ]，其中 [X]係選自叛基、二胺和丙二醯基。 4.根據申請專利範圍第1項之組合物，其中R i為匸η 3，R 2 為2·#至基丙基，及r3為Gly-Phe-Leu_Gly及最近末端 O:\52\52736-910919.doc 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) -------—— —_ D8 六、申請專利範圍 基團為二胺。 5·根據申請專利範圍第1項之組合物，其中該聚合物·鉑化 合物係溶於適合於腸外施用之水性媒液中。 6· —種活體外改進鉑化合物水性溶解度之方法，包括以一 種極具水溶性之合成聚合物錯合鉑化合物，該聚合物由 N_燒基甲丙烯醯胺單元所組成，分子量介於ιοοο-1，〇〇〇,000道爾頓（Dalt0Ils)，其結構為： Ri •CH,—C — -I 匕 C〇」m I Ri I — NH I 其中111 = 0且11=100，或其中111:11之比例為0.1-99.9 ;其中Ri為H或CH3 ;其中羥烷基，及其 中R3為在生理條件下能裂解具有序列Gly-(W)P-Gly 之寡肽鏈，其中p為〇·3且W為胺基酸或任何胺基酸之 組合’其C端為羧基基團或連結至二胺基基團或丙二醯 基，其任一可與鉑類形成錯合物。 7· —種活體外改進鉑化合物穩定性之方法，包括以一種極 具水溶性之合成聚合物錯合化合物，該聚合物由Ν-烷 基甲丙婦酿胺单凡所組成’分子量介於1，〇 〇 〇 _ 1，000,000道爾頓（Daltons)，其結構為： -2- O:\52\52736-910919.doc 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 509573 8 8 8 8 ABCD 六、申請專利範圍 R, Ή -CH，一 0 I ΝΗ I «2 其中m = 0且n=100，或其中m:n之比例為〇卜99 9 ，其中R^H或CH3 ;其中I為c丨_C6羥烷基，及其 中R3為在生理條件下能裂解具有序列Gly_(w)p_Gly 之寡肽鏈，其中p為〇-3且W為胺基酸或任何胺基酸之 組合’其C端為羧基基團或連結至二胺基基團或丙二醯 基，其任一可與鉑類形成錯合物。 O:\52\52736-910919.doc 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐)
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