TW311088B - - Google Patents

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經濟部中央標準局員工消費合作社印製 311088 A7 B7 五、發明説明（/ ) 發明背景 本發明通常相關於生化學及醫藥的領$ ° ® ，本發明相關於用於加速組織生長或癒合的方法及物w ° 哺乳動物組織的創傷（即，傷痕或開口）造成組織1^ 損及微血管在傷口表面凝結。此種組織的修補表示一有順 序之控制下對創傷的细胞反應。所有柔軟姐織的創傷’不 論大小，皆Μ相同的方式癒合。組織生長及修補為一生物 性系統，其中细胞的增生及血管新生發生於氧氣梯度的的 存在時。在組織修補當中所發生之連續性形態及结構的變 化已經由〔Hunt， T. K.等人.，〃 Coagulation and macrophage stimulation of angiogenesis and wound healing * ’， in The surgical wound » PP · 1-18， ed • F · Dineen & G * Hildrick— Smith (Lea & Febiger ， Philadelphia ： 1 9 8 1)〕加K詳细定性，並且在一些 實例中予以定量化。. 细胞形態包括三個不同的區域。中央無血管創傷區域 為缺乏氧氣的，酸性的及高血碳酸的（hypercarbic)，且 具有高濃度乳酸。鄰近創傷區域者為局部貧血（缺血）之 梯度區域，其經由分開纖維母细胞而形成。在最表面區域 之下為一膠原蛋白積極產生的部份，其特徴為成熟的纖維 母细胞及大量新生的微血管（即，血管新生作用）。雖然 此種新血管的生長（血管新生）對於創傷組織的癒合是必 須的，血管產生劑通常不能滿足長時間提供組織修補的額 本紙張尺度適用中國國家樣準（CNS ) Λ4規格（210X 297公嫠） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 A7 B7_ 五、發明説明（) 外生物合成效果之需要。雖然基於創傷（即，嚴重灼傷， 手術切口，傷口及其他創傷）較快癒合的需要，到現在K 藥物僅得到在加速創傷癒合上有限的成功。 屬於DiZerega之美國專利 5，015. 629 (其完整的揭 示在此併入作為參考資料）描述一種用於加速創傷組織癒 合速度的方法，包括將足Μ加速癒合創傷之份量的血管張 力素 II ( AT II)施用到該組織。血管張力素II施用至創 傷組織明顯地增加創傷癒合的速度，導致較快速的表皮细 胞再生及組織修補。專有名詞血管張力素 II指一種出現 在人類及其他生物的八狀，其具有的序列為 Asp— Arg — Val - Tyr - lie - His - Pro - Phe [ SEQ ID NO: 1]。血管 張力素II為一已知的升血壓劑且已經商業化。 雖然血管張力素 II可Μ作為加速創傷癒合的用途，仍 然有需要額外的藥劑促使創傷癒合。進而*使用一種在誘 發高血壓方面低於血管張力素II之藥劑是非常有利地。 發明縴論 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明相關於血管張力素 III ( ΑΤΙΙΙ)及其類似物 用於創傷癒合的用途。本發明有利的化合物具有下列通式 R1 - R2 - R3 - R4 - R5 - R6 - R7 ι 其中 R1係選自包含 Η， Arg - Lys， Ala， Orn * Ser(Ac) ， Sar， D— Arg 及 D-Lys 之一群組； R2 係選自包含 Val， Ala’ Leu， lie. G1 y * Pro ，A i b > Acpc 及 Tyr 之一群組； -4- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨〇〆297公釐） 3H〇88 A7 ---—_;-—---— 五、發明説明（^ ) R3係選自包含 Tyr， Thr > Ser及az.aTyr之一群組 > R4係選自包含 lie， Ala， Leu * Val及Gly之一群 組；

Rs 為 His或 Arg; R6為Pro或Ala;且 R7係選自包含 Phe， Phe(BR)及Tyr之一群組。 這些類似物形成有利於加速創傷癒合之組成物類的基 本，這些組成物至少包括一種加速創傷癒合之有效份量之 通式I化合物。偏好的是，這些組成物類為基質性或微體溶 液類。 發明詳述 依據本發明，在哺乳動物組缅中的創傷癒合經由使用 含有一有效量之至少一種通式I化合物而受到促進。通式I 之活性藥劑通長M —種基質性或微體性溶液加Μ施用且， 即使在非常低的濃度下，對於加速上皮细胞再生及組織修 補是非常有效地。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 在本發明組成物中所使用的化合物部份相關於血管張 力素 II;特別是，血管張力素III為血管張力素II之主 要代謝物。血管張力素II為已知一種最有效之血管收縮素 ，引起分枝形成微血管之小型動脈（即小動脈）的收縮。 血管張力素的生物形成始自於腎素對於血漿基質血管張力 素原之作用。因而形成之物質為一種十肽而稱為血管張力 -5- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（彡） 素 I，其經由轉換性血管張力素酶自血管張力素 I之c端 His - Leu殘基被轉換成血管張力素II。 最近的研究顯示腎素-血管張力素糸統之血管活性產 物，血管張力素II (All) *可以增強生長因子、增生因 子、趨化因子的釋放，Μ及培養细胞之细胞外基質的釋放 ，其牽涉創傷修補作用〔Dzau ν·Ε·等人· （1989)

Molecular mechanism of Angiotensin in the regulation of vascular and cardiac growth· J · Mol • Cell· Cardiol * 21 ( Supple III) ： S 7 ; Berk > BC 等人♦ ( 1 9 8 9) Angiotensin II stimulated protein synthesis in cultured vascular smooth muscle cells • Hypertension 13: 305—14; Kawahara， Y，等人·

(1 9 8 8) Angiotensin II induces expression of the c —fos gene through protein kinase C activation and calcium ion mobilization in cultured vascular smooth muscle cell· BBRC 150： 52—9; Naftilan * A • J·等人· （1989) Induction of platelet- derived growth factor A— chain and c — myc gene expressions by Angiotensin II in cultured rat vascular smooth muscle cells· J * Clin· Invest 83: 1419—24; Taubman， MB.等人(1 9 8 9) Angiotensin II induces c

一 fos in R N A in aortic smooth muscle · Role of C az + mobilization and protein kinase C activation · J 一6- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ----------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 311088 A7 B7 五、發明説明（f)

Biol Chem 2 6 4： 5 2 6 - 5 3 0; N akahara « K 等人· （1992 ) Identification of three types of PDGF- A chain gene transcripts in rabbit vasculur smooth muscle and their regulated expression during development and by Angiotensin II· BBRC 184 ： 811-8; Stouffer GA and GK Owens · ( 1 9 9 2 ) Angiotensin II induced mitogenesis of spontaneously hypertensive rat derived cultured smooth muscle cells is dependent on autocrine production of transforming growth factor- β ♦ Circ· Res · 70 : 820; Wolf， G 等人· (1 9 9 2 ) Angiotensin II stimulates the proliferation and biosynthesis of type I collagen in cultured murine mesangial cells · Am - J · Pathol · 1 4 0 95—107; Bell， L and J A Maclri ( 1990) Influence of the Angiotensin system on endothelial and smooth muscle cell migration · Am J Pathol 137: 7 — 12〕。另外，All在兔子角膜及雞绒毛 膜模式中顯示具有血管新生性（Fernandez * LA等人·（ 1985) Neovascularization produced by Angiotensin II· J · Lab- Clin* Med· 105: 141; LeNoble， FAC 等人· ( 1991) Angiotensin II stimulates angiogenesis in the chorio— allantoic memhrane of the chick embryo· E u r J Pharmacol 195： 305— 6〕 〇 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） --------^ -L 裝-------訂------I M (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標隼局員工消费合作社印製 A7 B7___ 五、發明説明（& ) 因此* All可K經由增加血管新生作用，生長因子的 釋放，上皮细胞再生及细胞外基質的生產而達到加速創傷 修補。經由血液流量及營養到達受傷組織的增加，All可 Μ增加創傷修補的速度。All亦可經由在受傷位置產生生 長因子來加速創傷修補。生長因子之外源性添加已顯示可 K經由不同的機轉加速創傷修補〔Grotendorst， GR等人 • ( 1 9 8 5) Stimulation of granulation tissue formation by platelet— derived Growth factor in normal and diabetic rats- J · Clin· Invest · 76: 2323-9; Mustoe * TA 等人· ( 1 98 7 ) Accelerated healing of incisional wounds in rats induced hy transforming growth factor- β · Science 237： 1333 -5; Pierce > GF等人· （1988) In vivo incisional wound healing augmented hy platelet- derived growth factor and recombinant c— sis gene homodimeric proteins · J · Exp· Med· 167; 974—87; Lynch > S E 等人· ( 1 9 8 9) Growth factors in wound healing * J Clin Invest 84: 640—6; Greenhalgh > DG等人·( 1 9 9 0 ) P D G F and F G F stimulate wound healing in the genetically diabetic mouse · Am J Pathol 136： 1235 - 46〕。最近的研究顯示 All在創傷後於頸動脈及主動脈 增加新血管内膜（neointima)的形成〔Powell， JS等人 • ( 1989 ) Inhibitors of angiotensin- converting -8 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝 訂 3H〇88 A7 B7 五、發明説明（j ) enzyme prevent rayointimal proliferation after vascular injury · Science 245， 186—8 ; Powell * JS 等人· （1991) The proliferative response to vascular injury is suppressed by converting enzvme inhibition · J · Cardiovasc Pharmacol 16 ( s upp 1 4 )：S42- 9; Capron， L 等人，(1991) Effect of ramipril » an inhibitor of angiotensin converting enzyme » on the response of rat thoracic aorta to injury with a balloon catheter J Cardiovasc Pharmacol 18 · 207 一 11; Osterr i e d e s， W等人.（1991 )- Ro 1 e of angiotensin 11 injury— induced neointima f 0 r in a 1 ion in rats • Hypertension 18: S upp 1 116 0- 64 ； D a e m e n * M JAP 等人· （ 1991) Angiotensin II induces smooth muscle cell 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) proliferation in the normal and injured rat arterial wall* Circ Res 68: 450— 6〕。由於這些觀察 的结果，進行研究K決定内源性 All引發血管内膜增生的 機轉。All經顯示可Μ作為平滑肌，纖維母细胞及内皮细 胞的分生原〔Sc helling， P 等人· （ 1979) Effects o f angiotensin II and angiotensin I I antagonist saralysin on cell growth and renin in 3 T 3 and SV3T3 cells * J · Cell* Physiol· 98: 503 —13;

Campbell — Boswell， M and A L Robertson * ( 1981) -9- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（广）

Effects 〇f angiotensin II and vasopressin on human smooth muscle cell in vitro · Exp· Mol· Pathol · 35: 265-76; Emmett ， N 等人.（1986) Effect of saralasin ( angiotensin II antagonist) on 3 T 3 cell growth and proliferation · J Cell Biol 103： 171 ( Abst) ; Paquet · JL 等人.（1990)

Angiotensin II— induced proliferation of aortic myocytes in spontaneously hypertensive rats· J · Hypertens 8: 565-72; Dzau等人，同上述參考文獻〕 0 AII 亦增加血管平滑肌细胞的蛋白質内含量及大小〔 Berk 等人· （ 1 989)，同上述參考文獻；Geisterfer， AAT 等人.(1 9 8 8) Angiotensin II induces hypertrophy > not hyperplasia > of cultured rat aortic smoolh muscle cells. Circ Res 62: 749—56〕 。研究顯示 All 增強不同型態之生長因子的分泌，包括 PDGF，肝素结合性EGF及轉形性生長因子一/? (TGF/S)， 及來自平滑肌细胞，内皮细胞及心纖維母细胞的原生性-腫瘤基因〔Kawahara等人.（1988)，同上述參考文獻； Naftilan * A J ( 1 9 9 2 ) The role of angiotensin II in vascular smooth muscle cell growth · J Cardiovas Pharmacol 20; S 37 一 40; Naftilan 等人· ( 1 9 8 9 )， 同上述參考文獻； Taubman等人· （1989)，同上述參考 文獻； Nakahara 等人· （ 1 9 9 2 )，同上逑參考文獻； -10- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） --------f L 裝一-I (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 .丨1衫： 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（q )

Temizer等人（1992) ’同上述參考文獻；Gibbons’ GH 等人· ( 1 9 9 2 ) Vascular smooth muscle cell hypertrophy vs hyperplasia · Autocrine transforming growth factor — beta 1 expression determines grow 1 h response to angiotensin II· J Clin Invest 90: 456 —61; Bell ， L 等人.（1992) Autocrine angiotensin system regulation of bovine aortic endothelial cell migration and plasminogen activator involves modulation of proto— oncogene pp60c— src expression · J · Clin· Invest 89: 315 -2 0; Stouffer and Owens ( 1992)，同上述參考文獻 〕。AI I經由 PDGF使血管平滑肌细胞異常發達〔Berk， BC and G N R a ο · ( 1 9 9 3 ) Angiotensin II - induced vascular smooth muscle cell hypertrophy ： PDGF A -chain mediates the increase in size· J Cell Physiol 154 ： 368-80〕 ° 因此，可想像的是 A I I經由在創傷組織中增強這些生 長因子的水平而加速創傷修補。額外地，All經顯示可以 剌激膠原细胞合成，因此暗示此類因子在细胞外基質形成 作用中的角色。〔Wolf， G 等人.（1991)

Intracellular signalling of transcription and secretion of type IV collagen after angiotensin II —induced cellular hypertrophy in cultured proximal -11- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) I J 裝------訂---- 311088 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（/0 ) tubular cells · Cell Reg 2 ： 219- 27 ; Wolf 等人·（ 1 9 9 2 )，同上述參考文獻； Zhou， G 等人.（ 1 9 9 2 ) angiotensin II mediated stimulation of collagen synthesis in cultured cardiac fibroblasts · FASEB J 6 : A 1 9 1 4〕。創傷修補亦涉及必要细胞型態進入創傷底床 的趨化作用。All亦經顯示可Μ於體外引發内皮细胞及平 滑肌细胞的移動。〔Bell and Madri (1990)，同上述參 考文獻〕。 最近的研究亦指出All受體的表現在創傷修補當中會 增加〔Viswanathan， Μ > and JH Saavedra ( 1 9 9 2 ) Expression of Angiotensin II AT2 Receptors in the Rat Skin During Experimental Wound Healing · Peptides 13:783-6; Kimura， B 等人· ( 1 9 9 2 ) Changes in skin angiotensin II receptors in rats during wound healing · BBRC 187; 1083— 1090] ° 這些 增強，以及 All在修補位置之局部性增強的佐證，建議All 可能在創傷修補的過程中扮演一重要角色。 已經觀察到 ATII及 ATIII在一些方面具有相當差異 的生物性活性。例如，ATII顯示一種對於激發性神經元新 醫上腺素釋放之兩相效果（稍早減少及稍後增加），然而 僅有在第12分鐘後才增強自發性新聚上腺素之釋放； ATII I 對激發性及自發性神經元新腎上腺素的釋放均有一 種兩相性效果〔Vatta， MS 等人· （1992) Monophasic -12- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝. 訂 丨绍 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公嫠） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（丨1 ) and hiphasic effects of angiotensin II and III on norepinephrine uptake and release in rat adrenal medulla · Can· J · Physiol · Pharmacol · 70: 821] 。進而， ATII及 ATIII顯示對於壓力受體-心臟—反射 之分化性影響·· ATII增強該反射的敏感性，然而 ATIII 降低該反射〔Brattstrom， Α·等人· （1992)

Neuropeplides within the nucleus tractus solitarii modulate the central cardiovascular control process • Progress in Brain Research 91: 75〕·。令人驚異的 是，現在已經發現，不管在血管張力素 II及血管張力素 III之間生物活性有顯著地不同， ATIII及特別是其類似 物有利於加速創傷癒合。

根據本發明特別有利之化合物類為通式I R 1 - R2 - R3 - R4 - R5 - R6 - R7 其中 R1係選自包含 Η， Arg « Lys， Ala， 〇rn > S e r (Ac) Sar， D— Arg 及 D— Lys 之一群組；

Rz 係選自包含 Val， Ala， Leu， lie， Gly’ Pr 0 ，A i b > Acpc 及 Tyr 之一群組； R3係選自包含 Tyr* Thr， Ser及azaTyr之一群組 f R4僖選自包含 lie， Ala， Leu > Val及Gly之一群 組； R5 為 His 或 Arg; -13- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 i丨錨 B7 五、發明説明（1厶） R6為Pro或Ala;且 R7係選自包含 Phe， Phe(BR)及 Tyr之一群組。 一偏好類別之化合物類具有下式 R1 — R2 — Tyr — R4 — His — Pro — Phe [SEQ ID NO : 2] 其中R1 ， R2及R4具有前述的定義。特別偏好的是 式 Arg— Val — Tyr— lie — His — Pro — Phe 之血管張力素 III [SEQ ID NO: 3〕 〇 在上述的化學式中，使用標準的胺基酸殘基之三字簡 寫。若沒有相反的指示，即指 L 一型式之胺基酸。其他殘 基類的簡寫如下： (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 S a r N—甲基甘胺醯 （sarcosine) Aib 2_胺基異丁酸 A c p c 1 一羧酸胺基環戊酯 azaTyr aza— ot' —同質一 L 一賂胺醮 P h e ( S a r ) P—溴一 L 一苯基丙胺接藤基 -14- i lif 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 3ll〇88 Α7 ____Τ__ 五、發明説明（pj ) 已有建議 ATIII及其類似物採用gamma或beta轉折方 式〔Regoli， D ·等人.(1 9 7 4 ) Pharmacology of Angiotensin · Pharmacological Reviews 26: 69〕 〇 通 常，據信在 R2 ， R4及 R6的中央支键會涉及維持介於 R3 ， R5及R7之間活性基團的距離，這些活性基團原來 負責结合至受體類及/或内生性活性。在R2 ，R4及 R7 的厭水性支鏈在整個肽的構形中亦扮演一重要的角色及/ 或導致一理論上厭水性袋的形成。 如由通式I觀之甚為明顯的是，用於本發明之最簡單的 結構需要六肽R2 — R3 — R4 — R5 - R6 — R7 (即，R1為 H)。然而，在位置R1之胺基酸上的合適支鏈可造成用於 尋標受體之化合物的親和性及/或在該肽的構形中扮演一 重要的角色。為此原因，Arg及Lys特別偏好為R1 。 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 為了本發明的目的，據信R2可能涉及線性或非線性氫 键的形成，這些氫鐽與R4相連（在garona轉折模式）或與R 5相連（在bet a轉折模式）。1?2亦參與在一反向平行结構 (其已被提出為一種可能结構）中的第一轉折。於在通式I 的其他位置相反的是，在此位置beta及gamma分支為均等有 效的。進而，單一氫鍵可足以維持一相對毽定的構形。據 此，R2 可 Μ 合適地選自 Val，Ala，Leu，lie，Gly，Pro， Aib，Acpc及 Tyr ° 關於R3 ，構形分析已建議在此位置的支鏈（K及在R 2及 R4位置）導致一厭水性叢，其據信對於受體的佔據 -1 5- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 經濟部中央榡準局員工消費合作社印製 A7 B7 ---------— 五、發明説明（丨4) 及剌激是必要的。因此，R3偏好選自Tyr·，Thr，Ser及 azaTyr。在此位置中，T y r為特別偏好的，因為其可K與受 體位置形成一氫鐽，而能夠接受來自羥基酚的一個氫〔 Regoli等人.（1974)，同上述參考文獻〕。 在 R4位置，一具有/3—脂肪性或脂肪環性鏈的胺基 酸是特別希望的。因此，雖然 Gly在 R4位置是合適的， 在此位置偏好的胺基酸係選自lie， Ala， Leu及 Val。 在根據本發明特別有利的類似物中， R5為His或Arg 。組胺酸之眯唑環之獨特性質（例如，生理PH時的離子化 現象，能夠作為質子提供者或接受者，芳香性特徵）據信 導致其作為 Rs之特殊用途。例如，構形的模式建議His 可能參與氫鍵的形成（在/S轉折模式中）或藉由影響R6的 方向參與反向平行结構之第二轉折。同樣地，最近也已考 慮到R6應為Pro K提供R7之最適合的方向。在R7位置 ’ 一厭水性環或一陰離子性羧基端顯然特別有利於目標類 似物對受體的结合；因此，針對本發明的目的，Tyr 及特 -別是Phe為偏好的。 根據本發明的方法，血管張力素III及其特異性類似 物K足Μ增加組織癒合速率的份量施用於創傷。這些化合 物類可Μ於體外或於體内在微毫克的階段明顯地加速癒合 速率。特別是，當本發明之至少一種化合物於每毫升含有 微毫克份量的溶液施用到組織時，可Μ增加在傷口組織中 血管新生作用的速率，且當使用每毫升含有微克级份量之 -1 6- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝. 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（r() 溶液時*微血管的增生作用會明顯地增加。 本發明的化合物類可以不同的溶液類施用。用於本發 明的合適溶液類為無菌的，溶有足量的肽，且對創傷組織 無害。在此方面，本發明是非常安定的，但是可以使用強 酸或強鹼進行水解。本發明的化合物類於pH 5 - 8可溶於有 機性溶劑類或水性溶液類。 可以使用任何的施用方式諶活性藥劑於一段時間後進 入組織中。例如，一水性溶液可Μ經由一钞布繃帶或布條 施用到創傷組織，或此種溶液可Κ被調製Κ得到一種時間 合宜的灌注方式（使用，例如，微脂體類，软膏類，微體 類’等）。製備這些含有本發明化合物之配方的方法對本 技藝中普通人士而言是極為顯明的。所使用的活性藥劑之 特定濃度並非是重要的，因為即使本發明化合物僅有微毫 克级份量時*對組織修補也是有效的。 偏好地，所使用含有活性藥劑之基質性或微體性溶液 為每毫升至少30微克。在一·經描述的實施例中表現有利之 一種特定基質性溶液，為一種半-固體聚伸乙基乙二醇聚 和物，其商標名 Hydron b y H y d r 〇 ，由 M e d . Sciences， New Brunswick， N e w J e r s e y製造。另一種偏好的溶液為 一種微體性溶液，其商標名為Pluronics F108，由BASF, Ludwigshafen · Germany製造。在室溫的條件下，使溶液 為一液體，但是當施用到溫暖組織時，該溶液形成一種凝 膠，使得活性藥劑成份在數天的時間内進入創傷組織。其 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -- 二 I I I n —I - - --1 —ii 11 I- 1— -1-li-I i I - I— J n (請先閱讀背面之注意事項再填寫本X) A7 B7 修正 +衣年月Β f南充 86. 2. 2 7 五、發明説明（） 他有利的配方包括羧基甲基纖維製備物類，類結晶製備物 類（例如，鹽水，林格氏（R i n g e r ’ s )乳酸溶液，磷酸鹽 緩衝性鹽水，等等）及傷口包紮（例如，繃帶，等等）。 本發明化合物類的癒合效果可以不同的方式加以供應 。該溶液或許可以在鼹重灼傷，創傷，鬱滞性潰瘍，牙周 變化，割傷及其他的條件下施用至表層創傷組織。另外， 腹腔内創傷組織，如由侵入性手術造成，可以用本發明的 組成物加以處理以加速癒合。例如，在手術去除部份大腸 或其他組織之後，在手術部位縫合前可以活性藥劑之溶液 加以被覆，加速内部微血管灌流及癒合。此外，經由將活 性藥劑以注射或其他方式進行皮下施用可以增加局部癒合 的速率。 本發明藉由附加實施例可以被更佳地瞭解。實施例的 目的僅在於示範説明，且不應被解釋成對本發明附加之申 請專利範圍所定義之範圍有任何意義的限制。 画示簡述 ' 圖1顯示血管張力素ill與僅市載劑之對照組比較可實 頁上加速創傷癒合。如圖所示，分別在3徹克及1 0徹克劑量 測試血管張力素11 I。 圖2顯示施用Am類似物1A, 2至4時，相對於載劑處理 之對照組之傷口癒合之控制反應百分比。 圖3顯示施用A I類似物5至8時，相對於載劑處理之對 照組之傷口癒合之控制反應百分比。 -1 8 ~ 本紙張尺度適用中國國家榇準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 J11088 修正 本年月- A7 ^ ^ S3. 2. 27 I 87 五、發明説明（） 圖4顯示施用AM類似物ΙΑ,ΙΒ,2及3時，肉芽組織形成 之控制反應百分比。 圖5顯示施用A Μ類似物4至7時肉芽組織形成之控制反 應百分比。 實施例1 雄性 s P r a g u e D a w 1 e y大鼠，1 2週大，得自賽門森 實驗室（S i m ο n s e n L a b o r a t ◦ r i e s) , Gilroy, CA。在手 術當天，於手術準備之前，大鼠接受肌肉内ketamine/ rompum麻醉。大鼠括除毛髮並以betadine進行擦洗。在大 鼠背面製造四個 2 X 2 cm之皮虜傷口。在去除皮廉以後， 傷口的大小於一玻璃載片上估計，且藥物以1 0 0微升之 Hydron溶液施用，該溶液包括 10% Hydron, 1%聚伸乙 基乙二醇（HW 400 )及6 0%乙醇。受試物質以隨機的方式 加以施用；血管張力素11 I於3及1 0徹克/創傷時進行 評估。對照組僅用載劑加以處理。 施用這些藥物之後，大鼠被綁縛繃帶且使其由麻醉中 甦醒。於第2 , 5 , 6 , 8及1 0天，皮廉創傷的區域於甲 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 氣基氟烷（methoxyflurane)(商業化可用的産品名為 Metofane,得自 Pittman— Moore, Mundelein, IL)麻 醉下進行測量。傷口面積之決定偽藉由：（1)於圖紙（1 X 1 mm方格）上追蹤傷口形狀（2)剪下該形狀之紙Η ; (3)稱重該紙Η並與2 X 2 cm剪下紙片的中量比較；且 (4 )計算方格的數目。 -19- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） A7 B7 木年月t 嘯亦.86. 2. 27 五、發明説明（） 如圖 1所示，當受試動物以血管張力素III加以處理 時，於3徹克及1 〇徹克劑量時，，傷口的收合相對於對照組 動物基本上有增強現象。該圖示範説明創傷的收合相對於 以載劑處理的對照組而言所增強的百分比。 實施例2 雌性 Sprague Dawley大鼠，12週大，得自賽門森 實驗室（Sinonsen Laboratories) , Gilroy, CA。（同 前說明書所述作手術準備）在大鼠背面製造二個1.5 xl.5 cm之全深皮廉傷口。在去除皮虜以後，傷口的大小於一玻 璃載片上估計，且藥物以 1〇〇撤升之Hydron溶液施用， 該溶液包括10 % Hydron, 1%聚伸乙基乙二醇（MW 400 )及60 %乙醇。受試物質以隨機的方式加以施用；於10 徹克/創傷時進行評估。對照組僅用載劑加以處理。施用 這些藥物之後，大鼠被綁缚繃帶且使其由麻醉中甦醒。於 第2 - 3 , 5 , 7-8, 8及9 - 1 0天，皮虜創傷的區域於甲氣 基氟烷（methoxyflurane)(商業化可用的産品名為 Metofane,得自 Pittman- Moore, Mundelein, IL )麻 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 物 似 類 對 針 量 測 一了 /i— 進 下 醉 至 2 及 偽 定 決 之 積 面 Π 傷 由 紙 圖 於 片 紙 之 狀 形 該 下 剪 較 比 量 中 的 Η 紙 下 剪 第1’ 在1Α ， 物 外似 另類 對 針 及 至 2 及 狀 2 形 X □ 2 傷與 蹤並 追片 上紙 } 該 格重 方稱 且 織 。組 目 芽 : 數肉下 的試如 格测物 方法似 算方類 計似的 } 類用 (4以使 , 被 天 〇 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（2丨〇><297公楚） 五、發明説明（

類 似 物 1A lie7 -血 管 張 力 素 III 類 似 物 1B Va I4 -血 管 張 力 素 III 類 似 物 2 L y s 1 -血 管 張 力 素 III 類 似 物 3 Ala2 -血 管 張 力 素 III 類 似 物 4 Thr3 -血 管 張 力 素 III 類 似 物 5 Leu4 -血 管 張 力 素 III 類 似 物 6 A r g 5 -血 管 張 力 素 III 類 似 物 7 Ala6 -血 管 張 力 素 III 類 似 物 8 T y r 7 -血 管 張 力 素 III (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 如上所命名，這些肽類似物為在上標所示位置有胺基 酸取代之AIII類似物。因此，Tyr7 —血管張力素III為在 AIII位置7有Tyr殘基取代之All I類似物。 如圖2至5所示，相對於對照組傷口，當受試傷口以根 據本説明書中通式I之類似物1至8處理時，傷口癒合實質上 被加速。圖2及3示範相對於一載劑處理對照組之傷口癒合 之控制反應百分比；在各種情形下，施用類似物中一種可加 速手術後傷口癒合。圖4及5示範肉芽組織形成之控制反應 百分比；在各種情形下，施用類似物中一種，與僅施用載 劑比較，可加速肉芽組織之形成。因此，這些類似物明顯 有效促進傷口癒合。 由前面的敘述，一個習於此技藝者可以輕易確認本發 -2 1- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 訂 經濟部中央樣準局貝工消費合作社印製

A7 B7 五、發明説明（） 明的基本特性，且在不偏離本發明的精神及範圍上，可以 改寫本發明成為不同的用途及條件。在型態的改變及相等 例的取代是可以想像的，因為不同的環境可以建議或給予 便利，且雖然在此使用特異性專有名詞，僅打算作為敘述 且不為任何限制的目的。 序列表示 (1) 一般資訊： (i) 申請人：Rodgers, Kathleen E. diZerega, Gere S. (ii) 發明名稱：血管張力素III及其類似物作為組織修補 用途 (iii) 序列數目：3 (iv) 回應地址： (A) 回應者：Robbins, Berliner & Carson (B) 街道：201 North Figueroa street，Fifth Floor (C) 城市：Los Angeles (D) ： California (E) 國家：U . S . A · -22- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -訂 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 311088

If ιΕ # A7 B7 五、發明説明（ 尤86. (F) 郵遞區號：9 0 0 1 2 (V) 電腦可讀型式： (A) 資料媒體種類：軟式磁碟 (B) 電腦：I Β Μ P C相容性 (C) 作業条統：PC-DOS/MS— DOS (D) 軟體：Patantln Release #1. 0,

Version #1. 25 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) V". 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (vi) 目前申請資料： (A) 申請號碼： (B) 申請日： (Ο 分類 (v I i i) 專利代理人/代理資料： (A) 代理人名稱：Spitals, John P. (B) 登記號碼：2 9 , 2 1 5 (C) 參考資料/檔案號碼：1920—336 (ix) 電傳資料： (A) 電話： (2 1 3 ) 9 7 7 - 1 0 0 1 (B) 傳真： ( 2 1 3 ) 977-1003 (2) SEQ ID NO: 1 資料 -23- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 訂 ί Α7 t：i Β7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 86. 2. 27 五、發明説明（）一" - ~ -vr—. * _ ,一一 ------- (i) 序列特徽： (ή) 長度：8個 胺基酸 (B) 種類：胺基 酸 (D) 拓樸學：線 性 (ii) 分子種類： 肽 (x i) 序列描述 SEQ ID NQ ： 1 ： Asp A rg Val Tyr I 1 e His P r ο P h e 1 5 (2) SEQ ID NO ： 2資料： (i) 序列特徵： (A) 長度：7個 胺基酸 (B) 種類：胺基 酸 (D) 拓樸學：線 性 (ii) 分子種類： 肽 (x i) 序列描述： SEQ ID NO ： 2 ： -24- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 訂 r- 311088 五、發明説明（~ 86. 2,2' Α7 Β7 X a a X a a Tyr X a a His Pro Phe (2) SEQ ID NO : 3資料： (i) 序列待戲： (A) 長度：7個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D) 拓樸學：線性 (ϋ) 分子種類：肽

Cxi)序列描述：S E Q ID N 0 : 3 :

Arg Val Tyr lie His Pro Phe 1 5 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印装 25- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）

Claims (1)

1. 1，一種加速傷口癒合的組成物，其包括一合適的載劑或 稀釋劑及足以加速傷口癒合份量之至少一種通式I的化合物 R 1 - R z — R3 - R4 - R5 — R。一 R7 其中 R 1 係 選自包 含 H， A r g ，L y s， Ala， 0 r n， S e r (Ac) i s a r ，D - A r g及 D - L y s之一群 組； R2係 選 自 包 含 V a 1 ，Ala ，L e u， lie· 'Gly， Pro ，Aib* Acpc 及 Tyr 之一群'組； R3係選自包含 Tyr， Thr > Ser及azaTyr之一群組 > R4係選自包含lie， Ala， Leu - Val及Gly之一群 組； R s 為 H i s 或 A r· g ; R6為Pro或Ala;且 R7係選自包含 Phe， Phe ( BR)及 Tyr之一群組。 2·如申請專利範圍第1項之組成物，其中通式I之化合 物具有下式 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) R1- R2- Tyr- R4- His— Pro— Phe [SEQ ID NO : 2〕 其中 R1 ， R2及 R4具有前述的定義。 3 ·如申請專利範圍第1項之組成物，其中通式I之化 合物為 A r g — Val — Tyr 一 lie — His — Pro — Phe -1 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 311088

   申請專利範® [SEQ ID NO ： 3]。 4 ·如申請專利範圍第1項之組成物，其中通式I之化 合物Μ基質性或微體性溶液加K疵用。 5 -如申請專利範圍第1項之組成物，其中通式I之化 合物Μ在一合適的載劑或稀釋劑中每毫升至少3 Q微克之濃 度加Μ施用。 6 ·如申請專利範圍第5項之組成物，其中該載劑或 稀釋劑係選自半一固體聚伸乙基乙二醇聚合物，羧基甲基 纖維素製備物類及類结晶製備物類。 7·如申請專利範圍第1項之組成物，其中通式I之化 合物與一創傷包覆物一起施用。 --------!裝----"-------·Λ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐）