CN106456698B - β-抑制蛋白效应物的合成 - Google Patents

Abstract

本文公开的实施方式提供了制备β‑抑制蛋白效应物的化合物和方法。

Description

β-抑制蛋白效应物的合成

相关申请的交叉引用

本申请要求提交于2014年5月19日的美国临时申请号62/000,329的优先权，其全部内容通过引用并入本文。

技术领域

本公开内容描述了可作为β-抑制蛋白效应物的化合物的合成方法。

背景技术

美国专利号8,486,885公开了作为GPCR受体的GPCR激动剂的肽(例如血管紧张素II)。GPCR激动剂引起异源三聚体“G蛋白”的激活。这种激活导致引起生理功能(例如血压和流体内环境稳定)变化的第二信使/下游信号转导(例如，通过二酰基甘油、肌醇-三磷酸、钙等)。在美国专利号8,486,885中公开的一种特别的肽(其全部内容通过引用并入本文)在其中被称为“SEQ ID NO.27”，其具有以下氨基酸序列：NH2-肌氨酸L-精氨酸L-缬氨酸L-酪氨酸L-异亮氨酸L-组氨酸L-脯氨酸D-丙氨酸-OH，被称为NH2-Sar–Arg–Val–Tyr–Ile–His–Pro–(D)Ala-OH。

在美国专利号8,486,885中提到的SEQ ID NO.27(本文以下称为SEQ ID NO:1)是一种通过ATI血管紧张素受体的β-抑制蛋白/GRK介导的信号转导的激动剂。包括但不限于SEQ ID NO.1的肽或肽模拟物的分子式、变体、衍生物的该氨基酸序列，化合物影响G蛋白介导的信号转导或GPCR活性的能力，或这种信号转导/活性的缺乏，制备SEQ ID NO:1的方法，以及其他相关的肽公开于美国专利号8,486,885，其全部内容通过引用并入本文。

本领域仍然需要制备SEQ ID NO.1和相关化合物的其他更具成本效益且高效的方法。

发明内容

在一些实施方式中，提供了制备分子式1A化合物

或其药学上可接受的盐、溶剂化物或其水合物的方法。在一些实施方式中，该方法包括使分子式M的化合物脱保护

其中

P₁是氮保护基，例如但不限于Cbz、Fmoc、Boc、Alloc、TFA；

P₂是H或胍保护基，所述胍保护基例如但不限于NO₂、Boc、Cbz、Pbf；

P₃是H或胍保护基，所述胍保护基例如但不限于NO₂、Boc、Cbz、Pbf；

P₅是H、tBu、Bom、TBS或其他常用的用于醚或酚的保护基；

P₈是H、三苯甲基、tBu、Bom、TBS或其他常用的用于咪唑的保护基；

R₉是H或甲基；

R₁₀是H、Me、Et、tBu、Bn、TMS或其他用于羧酸的保护基；

A₁是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br；

A₂是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br；

A₃是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br；并且

A₄是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br。

在一些实施方式中，脱保护包括在乙酸溶液中的氢化。在一些实施方式中，脱保护是通过用钯/碳催化剂的氢化进行的。在一些实施方式中，分子式1A的化合物是根据本文所述的方法制备的，其中A1、A2、A3、A4是H，并且R₉是甲基。

在一些实施方式中，方法包括制备分子式M的化合物，该方法包括使分子式K的化合物与分子式C的化合物在足以产生分子式M的化合物的条件下接触。

在一些实施方式中，方法包括制备分子式K的化合物，包括使分子式A的化合物与分子式B的化合物在足以产生分子式K的化合物的条件下接触。

在一些实施方式中，方法包括制备分子式M的化合物，方法包括使分子式A的化合物与分子式F的化合物在足以产生分子式M的化合物的条件下接触。

在一些实施方式中，方法包括制备分子式F的化合物，包括使分子式B的化合物和分子式C的化合物在足以产生分子式F化合物的条件下接触。

在一些实施方式中，制备分子式(1)或SEQ ID NO:1

的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或其水合物的方法，方法包括：使H-His(HCl)-Pro-(D)-Ala-OR₄和R₁-Val-Tyr-Ile-OH在足以产生R₁-Val-Tyr-Ile-His-Pro-(D)-Ala-OR₄(SEQ ID NO:2)的条件下接触；将R₁-Val-Tyr-Ile-His-Pro-(D)-Ala-OR₄(SEQ ID NO:2)脱保护以产生H-Val-Tyr-Ile-His-Pro-(D)-Ala-OR₄(SEQ ID NO:3)；使H-Val(acid)-Tyr-Ile-His-Pro-(D)-Ala-OR₄(SEQ IDNO:3)和Z-Sar-Arg-OH在足以产生Z-Sar-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-(D)-Ala-OR₄(SEQ IDNO:4)的条件下接触；以及将Z-Sar-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-(D)-Ala-OR₄(SEQ ID NO:4)脱保护以产生

其中Z是苄氧羰基；R₁是氮保护基；且R₄是H、Me、Et、叔丁基(tert-Bu)、Bn、TMS或其他羧酸保护基，

在一些实施方式中，提供了制备

或其药学上可接受的盐、溶剂化物或其水合物的方法，方法包括：a)使H-His(HCl)-Pro-(D)-Ala-OR₄和Z-Sar-Arg(NO₂)-Val-Tyr-IIe-OH在足以产生Z-Sar-Arg(NO₂)-Val-Tyr-Ile-His-Pro-(D)-Ala-OR₄(SEQ ID NO:5)的条件下接触；以及b)将Z-Sar-Arg(NO₂)-Val-Tyr-Ile-His-Pro-(D)-Ala-OR₄(SEQ IDNO:5)氢化以产生

其中Z是苄氧羰基；且R₄是H、Me、Et、叔丁基(tert-Bu)、Bn、TMS或其他羧酸保护基。

在一些实施方式中，提供了制备Sar-Arg-Val-Ww-Zz-His-Pro-(D)-Ala的方法。在一些实施方式中，方法包括：使H-His(HCl)-Pro-(D)-Ala-OR₄与R₁-Val-Ww-Zz-OH在足以产生R₁-Val-Ww-Zz-His-Pro-(D)-Ala-OR₄的条件下接触；用酸处理R₁-Val-Ww-Zz-His-Pro-(D)-Ala-OR₄以产生H-Val(HCl)-WW-Zz-His-Pro-(D)-Ala-OR₄；使H-Val(HCl)-WW-Zz-His-Pro-(D)-Ala-OR₄和

在足以产生Z-Sar-Arg-Val-Ww-Zz-His-Pro-(D)-Ala-OR₄的条件下接触；以及氢化Z-Sar-Arg-Val-Ww-Zz-His-Pro-(D)-Ala-OR₄以产生Sar-Arg-Val-Ww-Zz-His-Pro-(D)-Ala，其中：Z是苄氧羰基；R₁是氮保护基；R₄是H、Me、Et、叔丁基、Bn、TMS或其他羧酸保护基，Ww是L-Tyr、3-羟基-L-Tyr、3-氟-L-Tyr、2,6-二氟-L-Tyr、3-硝基-L-Tyr、3,5-二硝基-L-酪氨酸、3-氯-L-酪氨酸、2,6-二甲基-L-酪氨酸、4-氟苯基-L-丙氨酸、3,5-二溴-L-酪氨酸或O-烯丙基-L-酪氨酸；并且Zz是L-Val或L-Ile。

在一些实施方式中，提供了根据本文所述的一种或多种方案制备分子式A、B、B₁、C、E、F、G、H、J、K、L和M的化合物的方法。

在一些实施方式中，提供了制备分子式1的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或其水合物的方法，方法包括使分子式H的化合物脱保护：

其中

P₁是氮保护基，例如但不限于Cbz、Fmoc、Boc、Alloc、TFA；

P₂是H或胍保护基，所述胍保护基例如但不限于NO₂、Boc、Cbz、Pbf；

P₃是H或胍保护基，所述胍保护基例如但不限于NO₂、Boc、Cbz、Pbf；

P₅是H、tBu、Bom、TBS或其他常用的用于醚或酚的保护基；

P₈是H、三苯甲基、tBu、Bom、TBS或其他常用的用于咪唑的保护基；并且

R₁₀是H、Me、Et、tBu、Bn、TMS或其他用于羧酸的保护基。

在一些实施方式中，提供了制备分子式(1A)的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或其水合物的方法，方法包括使分子式M的化合物脱保护：

其中

P₁是氮保护基，例如但不限于Cbz、Fmoc、Boc、Alloc、TFA；

P₂是H或胍保护基，所述胍保护基例如但不限于NO₂、Boc、Cbz、Pbf；

P₃是H或胍保护基，所述胍保护基例如但不限于NO₂、Boc、Cbz、Pbf；

P₅是H、tBu、Bom、TBS或其他常用的用于醚或酚的保护基；

P₈是H、三苯甲基、tBu、Bom、TBS或其他常用的用于咪唑的保护基；

R₉是H或甲基；

R₁₀是H、Me、Et、tBu、Bn、TMS或其他用于羧酸的保护基；

A₁是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br；

A₂是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br；

A₃是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br；并且

A4是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br。

在一些实施方式中，提供了分子式A的化合物

其中

P₁是氮保护基，例如但不限于Cbz、Fmoc、Boc、Alloc、TFA；

P₂是H或胍保护基，所述胍保护基例如但不限于NO₂、Boc、Cbz、Pbf；

P₃是H或胍保护基，所述胍保护基例如但不限于NO₂、Boc、Cbz、Pbf；并且

R₅是H、Me、Et、叔丁基、Bn、TMS或类似的羧酸保护基。

在一些实施方式中，提供了分子式B的化合物

其中

P₄是H、Cbz、Fmoc、Boc、Alloc、TFA或其他氮保护基；

P₅是tBu、Bom、TBS、烯丙基、Bn或其他用于醚或酚的保护基；

R₈是H、Me、Et、tBu、Bn、TMS或其他用于羧酸的保护基。

在一些实施方式中，提供了分子式B₁的化合物

其中：

P₄是H、Cbz、Fmoc、Boc、Alloc、TFA或其他常用的氮保护基；

P₅是H、tBu、Bom、TBS、烯丙基或其他常用的用于醚或酚的保护基；

R₈是H、Me、Et、tBu、Bn、TMS或其他用于羧酸的保护基；

R₉是H或甲基；

A₁是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br；

A₂是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br；

A₃是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br；并且

A4是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br。

在一些实施方式中，提供了如下所示的分子式B2的化合物。

在一些实施方式中，提供了分子式C的化合物。

其中

P₆是Cbz、Fmoc、Boc、Alloc、TFA或其他常用的氮保护基；

P₈是H、三苯甲基、tBu、Bom、TBS或其他常用的用于咪唑的保护基；并且

R₁₀是H、Me、Et、tBu、Bn、TMS或其他用于羧酸的保护基。

在一些实施方式中，提供了分子式E的化合物

其中

P₄是H、Cbz、Fmoc、Boc、Alloc、TFA或其他常用的氮保护基；

P₅是H、tBu、Bom、TBS、烯丙基、Bn或其他常用的用于醚或酚的保护基；

P₈是H、三苯甲基、tBu、Bom、TBS或其他常用的用于咪唑的保护基；

R₁₀是H、Me、Et、tBu、Bn、TMS或其他用于羧酸的保护基。

在一些实施方式中，提供了分子式F的化合物

其中

P₄是H、Cbz、Fmoc、Boc、Alloc、TFA或其他常用的氮保护基；

P₅是H、tBu、Bom、TBS、烯丙基、Bn或其他常用的用于醚或酚的保护基；

P₈是H、三苯甲基、tBu、Bom、TBS或其他常用的用于咪唑的保护基

R₉是H或甲基；

R₁₀是H、Me、Et、tBu、Bn、TMS或其他用于羧酸的保护基；

A₁是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br；

A₂是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br；

A₃是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br；并且

A4是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br。

在一些实施方式中，提供了分子式G的化合物

其中

P₄是H、Cbz、Fmoc、Boc、Alloc、TFA或其他常用的氮保护基；

P₈是H、三苯甲基、tBu、Bom、TBS或其他常用的用于咪唑的保护基；

R₉是H或甲基；并且

R₁₀是H、Me、Et、tBu、Bn、TMS或其他用于羧酸的保护基。

在一些实施方式中，提供了分子式H的化合物

其中

P₁是氮保护基，例如但不限于Cbz、Fmoc、Boc、Alloc、TFA；

P₂是H或胍保护基，所述胍保护基例如但不限于NO₂、Boc、Cbz、Pbf；

P₃是H或胍保护基，所述胍保护基例如但不限于NO₂、Boc、Cbz、Pbf；

P₅是H、tBu、Bom、TBS、烯丙基、Bn或其他常用的用于醚或酚的保护基；

P₈是H、三苯甲基、tBu、Bom、TBS或其他常用的用于咪唑的保护基；并且

R₁₀是H、Me、Et、tBu、Bn、TMS或其他用于羧酸的保护基。

在一些实施方式中，提供了分子式J的化合物

其中

P₁是氮保护基，例如但不限于Cbz、Fmoc、Boc、Alloc、TFA；

P₂是H或胍保护基，所述胍保护基例如但不限于NO₂、Boc、Cbz、Pbf；

P₃是H或胍保护基，所述胍保护基例如但不限于NO₂、Boc、Cbz、Pbf；

P₅是H、tBu、Bom、TBS、烯丙基、Bn或其他常用的用于醚或酚的保护基；

R₈是H、Me、Et、tBu、Bn、TMS或其他用于羧酸的保护基。

在一些实施方式中，提供了分子式K的化合物

其中

P₁是氮保护基，例如但不限于Cbz、Fmoc、Boc、Alloc、TFA；

P₂是H或胍保护基，所述胍保护基例如但不限于NO₂、Boc、Cbz、Pbf；

P₃是H或胍保护基，所述胍保护基例如但不限于NO₂、Boc、Cbz、Pbf；

P₅是H、tBu、Bom、TBS、烯丙基、Bn或其他常用的用于醚或酚的保护基；并且

R₈是H、Me、Et、tBu、Bn、TMS或其他用于羧酸的保护基；

R₉是H或甲基；

A₁是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br；

A₂是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br；

A₃是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br；并且

A4是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br。

在一些实施方式中，提供了分子式L的化合物

其中

P₁是氮保护基，例如但不限于Cbz、Fmoc、Boc、Alloc、TFA；

P₂是H或胍保护基，所述胍保护基例如但不限于NO₂、Boc、Cbz、Pbf；

P₃是H或胍保护基，所述胍保护基例如但不限于NO₂、Boc、Cbz、Pbf；

R₈是H、Me、Et、tBu、Bn、TMS或其他用于羧酸的保护基；并且

R₉是H或甲基。

在一些实施方式中，提供了分子式M的化合物

其中

P₁是氮保护基，例如但不限于Cbz、Fmoc、Boc、Alloc、TFA；

P₂是H或胍保护基，所述胍保护基例如但不限于NO₂、Boc、Cbz、Pbf；

P₃是H或胍保护基，所述胍保护基例如但不限于NO₂、Boc、Cbz、Pbf；

P₅是H、tBu、Bom、TBS、烯丙基、Bn或其他常用的用于醚或酚的保护基；

P₈是H、三苯甲基、tBu、Bom、TBS或其他常用的用于咪唑的保护基；

R₉是H或甲基；

R₁₀是H、Me、Et、tBu、Bn、TMS或其他用于羧酸的保护基；

A₁是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br；

A₂是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br；

A₃是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br；并且

A4是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br。

在一些实施方式中，提供了分子式2、分子式3、分子式4、分子式5、分子式6、分子式7、分子式8、分子式9和分子式10的化合物：

在一些实施方式中，提供了本文所述的任何化合物。在一些实施方式中，该化合物不是分子式1或分子式1A的化合物。

在一些实施方式中，提供了包含本文所述化合物的溶液。在一些实施方式中，该溶液不包含分子式1或分子式1A的化合物。

在一些实施方式中，提供了本文所述化合物的活化的化合物。在一些实施方式中，该活化的化合物不是分子式1或1A的化合物。在一些实施方式中，提供了包含该活化的化合物的溶液。

具体实施方式

除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本领域普通技术人员通常理解的相同的含义。虽然类似或等同于本文所述的那些方法和材料可以用于实践或测试，但是本文描述了合适的方法和材料。本文提及的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献的全部内容通过引用并入。在冲突的情况下，以本说明书(包括定义)为准。此外，材料、方法和实施例仅仅是说明性的，而不意为限制性的。根据本详细说明书和权利要求书，本文公开的实施方式的其他特征和优点将变得明显。

术语“盐”或“盐(复数)”可指任何酸加成盐，包括游离酸的加成盐或游离碱的加成盐。所有这些盐(或其他类似的盐)可以通过常规方法制备。所有这些盐都是可接受的，只要它们是无毒的并且基本上不干扰所需的药理活性。

术语“药学上可接受的”或“治疗上可接受的”是指生理上可耐受的分子实体和组合物，并且优选地当给药至人类时，通常不产生过敏或类似的不良反应，例如胃部不适、眩晕等等。优选地，如本文所使用的，术语“药学上可接受的”是指由联邦或州政府的管理机构批准的或在美国药典或其他公认的药典中列出的(例如，Remington's PharmaceuticalSciences,Mack Publishing Co.(A.R.Gennaro edit.1985)(《Remington药物科学》，Mack出版公司(A.R.Gennaro编辑，1985)))用于动物、更特别是用于人类。

术语“约”或“大约”表示加或减5％。

如本文和所附权利要求中所使用的，单数形式“一(a)”、“一(an)”和“该/所述”包括复数指代，除非上下文另有明确指示。

术语“CBz-Sar”是指被苄氧羰基保护的肌氨酸残基。CBz-Sar也可以表示为“Z-Sar”。

术语“CBz”或“Cbz”是指苄氧羰基。苄氧羰基在化合物的分子式中也可以被称为或显示为“OBn”。

由于肽在生物过程中的巨大重要性，需要合成的肽用于各种各样的应用中。固相肽合成方法的发展已经提高了肽类化合物的可得性。然而，经典的液相方法仍然保留其有用性，尤其是当大规模进行时。目前通过溶液中的化学合成产生的一些批准的肽类药物包括催产素、去氨加压素、亮丙瑞林、戈舍瑞林和奥曲肽。

本文公开的实施方式提供了SEQ ID NO:1和其他相关化合物的液相合成。八肽序列可以根据若干种途径制备。除了新颖和非显而易见的策略方法，例如使用O,N-双/三-TMS-氨基酸和诸如五氟苯基酯的活化剂，该合成具有仅使用精氨酸、酪氨酸和组氨酸中侧链官能团的最小正交保护以实现最大的原子经济性和步骤经济性的优点，这还导致在一些实施方式中，在制备诸如SEQ ID NO:1的化合物时，没有(不用)色谱柱层析。

也可以称为分子式1的SEQ ID NO:1可以由以下分子式表示：NH2-Sar–Arg–Val–Tyr–Ile–His–Pro–(D)Ala-OH。SEQ ID NO:1也可以由以下分子式表示：

如本文所使用的，术语“包括(comprise)”，“具有”和“包括(include)”及其动词的变化形式表示“包括但不限于”。尽管各种组合物、方法和装置是按照“包括”各种组分或步骤(解释为表示“包括但不限于”)被描述，但组合物、方法和装置也可以“基本上由各种组分和步骤组成”或“由各种组分和步骤组成”。

本文所述的方法提供了SEQ ID NO:1(分子式1)的制备和/或分子式1A的制备。化合物可以根据本文所述的方案和方法制备，包括但不限于实施例中描述的方案。另外，本文所述的方法提供了制备中间体的方法。

在一些实施方式中，还提供了制备中间体的方法。在一些实施方式中，方法包括使

与

在足以产生分子式

的化合物的条件下接触，其中

P₁是氮保护基，例如但不限于Cbz、Fmoc、Boc、Alloc、TFA；

P₂是H或胍保护基，所述胍保护基例如但不限于NO₂、Boc、Cbz、Pbf；

P₃是H或胍保护基，所述胍保护基例如但不限于NO₂、Boc、Cbz、Pbf；

R₅是H、Me、Et、叔丁基(tert-Bu)、Bn、TMS或类似的羧酸保护基。

还提供了制备分子式B的化合物的方法：

其中

P₄是H、Cbz、Fmoc、Boc、Alloc、TFA或其他氮保护基；

P₅是tBu、Bom、TBS、烯丙基、Bn或其他用于醚或酚的保护基；

R₈是H、Me、Et、tBu、Bn、TMS或其他用于羧酸的保护基。

在一些实施方式中，分子式B的化合物根据以下方案制备：

其中：

P₄是H、Cbz、Fmoc、Boc、Alloc、TFA或其他氮保护基；

P₅是tBu、Bom、TMS、TBS、烯丙基、Bn或其他用于醚或酚的保护基；

R₇是H、Me、Et、tBu、Bn、TMS或其他用于羧酸的保护基；并且

R₈是H、Me、Et、tBu、Bn、TMS或其他用于羧酸的保护基。活化剂的示例包括但不限于三氟乙酸五氟苯酯、五氟苯基酯、碳化二亚胺试剂、氯甲酸酯或N-酰基苯并三唑。本领域技术人员可以基于本公开内容选择合适的活化剂。

可以根据所示用于分子式B的类似方案制备的化合物的其他示例包括但不限于下述分子式的化合物：

其中：

P₄是H、Cbz、Fmoc、Boc、Alloc、TFA或其他常用的氮保护基；

P₅是H、tBu、Bom、TBS、烯丙基或其他常用的用于醚或酚的保护基；

R₈是H、Me、Et、tBu、Bn、TMS或其他用于羧酸的保护基；

R₉是H或甲基；

A₁是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br；

A₂是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br；

A₃是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br；并且

A4是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br。

可以通过修改上述方案制备的分子式B的化合物的其他非限制性示例包括但不限于下述分子式的化合物：

其中：

P₄是H、Cbz、Fmoc、Boc、Alloc、TFA或其他常用的氮保护基；

R₈是H、Me、Et、tBu、Bn、TMS；并且

R₉是H或甲基。

在一些实施方式中，提供了制备分子式C的化合物的方法：

其中：

P₆是Cbz、Fmoc、Boc、Alloc、TFA或其他常用的氮保护基；

P₈是H、三苯甲基、tBu、Bom、TBS或其他常用的用于咪唑的保护基；并且

R₁₀是H、Me、Et、tBu、Bn、TMS或其他用于羧酸的保护基。

在一些实施方式中，根据以下方案制备了分子式C的化合物，该方案包括一个或多个以下所示的步骤：

其中：

P₇是Cbz、Fmoc、Boc、Alloc、TFA或其他常用的氮保护基；

P₆是Cbz、Fmoc、Boc、Alloc、TFA或其他常用的氮保护基；

P₈是H、三苯甲基、tBu、Bom、TBS或其他常用的用于咪唑的保护基；并且

R₁₀是H、Me、Et、tBu、Bn、TMS或其他用于羧酸的保护基。分子式C的化合物也可以用酸(例如HCl)处理以形成与酸络合的分子式C的化合物。这种化合物的示例包括但不限于如方案1、2和3中所示的分子式7的化合物。

在一些实施方式中，提供了制备分子式E的化合物的方法：

其中

P₄是H、Cbz、Fmoc、Boc、Alloc、TFA或其他常用的氮保护基；

P₅是H、tBu、Bom、TBS、烯丙基、Bn或其他常用的用于醚或酚的保护基；

P₈是H、三苯甲基、tBu、Bom、TBS或其他常用的用于咪唑的保护基；

R₁₀是H、Me、Et、tBu、Bn、TMS或其他用于羧酸的保护基，

其中该方法包括使具有分子式B的化合物的化合物与具有分子式C的化合物的化合物在足以产生分子式E的化合物的条件下接触。在一些实施方式中，根据以下方案产生分子式E的化合物：

在本文和实施例中描述了制备分子式E的化合物的条件。例如，分子式B的化合物可以使用三氟乙酸五氟苯酯、碳二亚胺试剂或N-酰基苯并三唑活化。五氟苯基酯可以使用三氟乙酸五氟苯酯而形成。本领域技术人员可以根据本公开内容并参考本文包含的具体实施例选择适合的活化剂用于合适的方案和产生的化合物。

在一些实施方式中，提供了制备分子式F的化合物的方法

其中：

P₄是H、Cbz、Fmoc、Boc、Alloc、TFA或其他常用的氮保护基；

P₅是H、tBu、Bom、TBS、烯丙基、Bn或其他常用的用于醚或酚的保护基；

P₈是H、三苯甲基、tBu、Bom、TBS或其他常用的用于咪唑的保护基；

R₉是H或甲基；

R₁₀是H、Me、Et、tBu、Bn、TMS或其他用于羧酸的保护基；

A₁是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br；

A₂是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br；

A₃是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br；并且

A₄是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br，

其中该方法包括使分子式B₁的化合物与分子式C的化合物在足以产生分子式F的化合物的条件下接触。在一些实施方式中，根据以下方案产生分子式F的化合物：

其中变量是如本文对特定化合物所定义的。在本文中描述了并且例如在实施例中描述了制备分子式F的化合物的条件。本领域技术人员可以根据本公开内容并参考本文包含的具体实施例选择适合的活化剂用于合适的方案和产生的化合物。

在一些实施方式中，提供制备分子式G化合物的方法

其中

P₄是H、Cbz、Fmoc、Boc、Alloc、TFA或其他常用的氮保护基；

P₈是H、三苯甲基、tBu、Bom、TBS或其他常用的用于咪唑的保护基；

R₉是H或甲基；并且

R₁₀是H、Me、Et、tBu、Bn、TMS或其他用于羧酸的保护基，

其中该方法包括使分子式B₂的化合物与分子式C的化合物在足以产生分子式G的化合物的条件下接触来制备化合物。在一些实施方式中，根据以下方案产生分子式F的化合物：

其中变量是如本文对特定化合物所定义的。在本文中描述了并且例如在实施例中描述了制备分子式G的化合物的条件。本领域技术人员可以根据本公开内容并参考本文包含的具体实施例选择适合的活化剂用于合适的方案和产生的化合物。

在一些实施方式中，提供了制备分子式H化合物的方法

其中

P₁是氮保护基，例如但不限于Cbz、Fmoc、Boc、Alloc、TFA；

P₂是H或胍保护基，例如但不限于NO₂、Boc、Cbz、Pbf；

P₃是H或胍保护基，例如但不限于NO₂、Boc、Cbz、Pbf；

P₅是H、tBu、Bom、TBS、烯丙基、Bn或其他常用的用于醚或酚的保护基；

P₈是H、三苯甲基、tBu、Bom、TBS或其他常用的用于咪唑的保护基；并且

R₁₀是H、Me、Et、tBu、Bn、TMS或其他用于羧酸的保护基。

在一些实施方式中，方法包括使分子式E的化合物与分子式A的化合物在足以产生分子式H的化合物的条件下接触。在一些实施方式中，根据以下方案产生分子式H的化合物：

其中变量是如本文对特定化合物所定义的。在本文中描述了并且例如在实施例中描述了制备分子式H的化合物的条件。本领域技术人员可以根据本公开内容并参考本文包含的具体实施例选择适合的活化剂用于合适的方案和制备的化合物。在一些实施方式中，分子式H的化合物被脱保护(例如氢化)以产生分子式1的化合物。氢化可以例如在如本文公开的一些实施方式中所示的乙酸(AcOH)溶液中进行。

在一些实施方式中，提供了制备分子式J的化合物的方法

其中：

P₁是氮保护基，例如但不限于Cbz、Fmoc、Boc、Alloc、TFA；

P₂是H或胍保护基，所述胍保护基例如但不限于NO₂、Boc、Cbz、Pbf；

P₃是H或胍保护基，所述胍保护基例如但不限于NO₂、Boc、Cbz、Pbf；

P₅是H、tBu、Bom、TBS、烯丙基、Bn或其他常用的用于醚或酚的保护基；并且

R₈是H、Me、Et、tBu、Bn、TMS或其他用于羧酸的保护基。

在一些实施方式中，通过使分子式A的化合物与分子式B的化合物在足以产生分子式J化合物的条件下接触来制备分子式J的化合物。在一些实施方式中，分子式J的化合物根据以下方案制备：

其中变量如本文对特定化合物所定义的。在本文中描述了并且例如在实施例中描述了制备分子式J的化合物的条件。本领域技术人员可以根据本公开内容并参考本文包含的具体实施例选择适合的活化剂用于合适的方案和产生的化合物。

在一些实施方式中，制备分子式H的化合物的方法包括使分子式C化合物与分子式J化合物在足以产生分子式H化合物的条件下接触。在一些实施方式中，分子式H的化合物根据以下方案产生：

其中变量是如本文对特定化合物所定义的。在本文中描述了并且例如在实施例中描述了制备分子式H化合物的条件。本领域技术人员可以根据本公开内容并参考本文包含的具体实施例选择适合的活化剂用于合适的方案和制备的化合物。在一些实施方式中，分子式H的化合物被脱保护(例如氢化)以产生分子式1的化合物。氢化可以例如在如本文公开的一些实施方式中所示的乙酸(AcOH)溶液中进行。

在一些实施方式中，提供了制备分子式K的化合物的方法

其中

P₁是氮保护基，例如但不限于Cbz、Fmoc、Boc、Alloc、TFA；

P₂是H或胍保护基，所述胍保护基例如但不限于NO₂、Boc、Cbz、Pbf；

P₃是H或胍保护基，所述胍保护基例如但不限于NO₂、Boc、Cbz、Pbf；

P₅是H、tBu、Bom、TBS、烯丙基、Bn或其他常用的用于醚或酚的保护基；并且

R₈是H、Me、Et、tBu、Bn、TMS或其他用于羧酸的保护基；

R₉是H或甲基；

A₁是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br；

A₂是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br；

A₃是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br；并且

A₄是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br。

在一些实施方式中，通过使分子式A的化合物与分子式B₁的化合物在足以产生分子式K的化合物的条件下接触来制备分子式K的化合物。在一些实施方式中，分子式K的化合物根据以下方案产生：

其中变量是如本文对特定化合物所定义的。在本文中描述了并且例如在实施例中描述了制备分子式K化合物的条件。本领域技术人员可以根据本公开内容并参考本文包含的具体实施例选择适合的活化剂用于合适的方案和产生的化合物。

在一些实施方式中，提供了制备分子式L化合物的方法

其中

P₁是氮保护基，例如但不限于Cbz、Fmoc、Boc、Alloc、TFA；

P₂是H或胍保护基，所述胍保护基例如但不限于NO₂、Boc、Cbz、Pbf；

P₃是H或胍保护基，所述胍保护基例如但不限于NO₂、Boc、Cbz、Pbf；

R₈是H、Me、Et、tBu、Bn、TMS或其他用于羧酸的保护基；并且

R₉是H或甲基。

在一些实施方式中，通过使分子式A的化合物与分子式B₂的化合物在足以产生分子式L的化合物的条件下接触来制备分子式L的化合物。在一些实施方式中，分子式L的化合物根据以下方案产生：

其中变量是如本文对特定化合物所定义的。在本文中描述了并且例如在实施例中描述了制备分子式L的化合物的条件。本领域技术人员可以根据本公开内容并参考本文包含的具体实施例选择适合的活化剂用于合适的方案和产生的化合物。

在一些实施方式中，提供了制备分子式M的化合物的方法

其中

P₁是氮保护基，例如但不限于Cbz、Fmoc、Boc、Alloc、TFA；

P₂是H或胍保护基，所述胍保护基例如但不限于NO₂、Boc、Cbz、Pbf；

P₃是H或胍保护基，所述胍保护基例如但不限于NO₂、Boc、Cbz、Pbf；

P₅是H、tBu、Bom、TBS、烯丙基、Bn或其他常用的用于醚或酚的保护基；

P₈是H、三苯甲基、tBu、Bom、TBS或其他常用的用于咪唑的保护基；

R₉是H或甲基；

R₁₀是H、Me、Et、tBu、Bn、TMS或其他用于羧酸的保护基；

A₁是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br；

A₂是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br；

A₃是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br；并且

A4是H、OH、F、NO₂、Cl、CH₃或Br；

其中方法包括使分子式K的化合物与分子式C的化合物在足以产生分子式M的化合物的条件下接触。可以将分子式M的化合物氢化以产生分子式1或分子式1A的化合物，取决于分子式K的化合物上的取代基。氢化可以例如在乙酸中进行。在一些实施方式中，根据以下方案制备分子式M的化合物：

在本文中描述了并且例如在实施例中描述了制备分子式M的化合物的条件。本领域技术人员可以根据本公开内容并参考本文包含的具体实施例选择适合的活化剂用于合适的方案和产生的化合物。

在一些实施方式中，分子式M的化合物是根据包括使分子式A的化合物与分子式F的化合物接触的方法来制备的。在一些实施方式中，使用本文所述的活化剂之一活化分子式A的化合物。在一些实施方式中，根据以下方案制备分子式M的化合物：

如本文所讨论的，分子式M的化合物可以例如通过氢化来脱保护，以产生分子式1的化合物或分子式1A的化合物。

除了制备本文所述的各种化合物的方法之外，本实施方式还提供了本文公开的分子式的化合物。因此，在一些实施方式中，提供了选自由分子式A、分子式B、分子式B₁、分子式B₂、分子式C、分子式D、分子式E、分子式F、分子式G、分子式H、分子式J、分子式K、分子式L和分子式M的化合物组成的组的化合物。在一些实施方式中，使每种所选择的分子式的化合物与酸例如HCl接触，以形成酸络合物。本文提供了化合物的酸式分子式的非限制性示例。

在一些实施方式中，还提供了用于合成的化合物。因此，在一些实施方式中，还提供了以下分子式的化合物：

在一些实施方式中，根据以下方案(方案1)制备SEQ ID NO:1。

方案1.

在一些实施方式中，方法可以包括所示步骤中的一个或多个或所有步骤。

在一些实施方式中，根据以下方案(方案2)制备SEQ ID NO:1。

方案2

在一些实施方式中，方法可以包括所示步骤中的一个或多个或所有步骤。

在一些实施方式中，提供了制备Sar-Arg-Val-Ww-Zz-His-Pro-(D)-Ala-OH(分子式1A)的方法，其中

Ww是L-Tyr、3-羟基-L-Tyr、3-氟-L-Tyr、2,6-二氟-L-Tyr、3-硝基-L-Tyr、3,5-二硝基-L-酪氨酸、3-氯-L-酪氨酸、2,6-二甲基-L-酪氨酸、4-氟苯基-L-丙氨酸、3,5-二溴-L-酪氨酸或O-烯丙基-L-酪氨酸；并且

Zz是L-Val或L-异亮氨酸。

在一些实施方式中，制备分子式1A的方法包括根据以下方案(方案3)制备化合物：

方案3.

在一些实施方式中，方法可以包括所示步骤中的一个或多个或所有步骤。

如本文所讨论的，化合物1可以根据方案1制备用于线性八肽的装配。方案2和方案3也可以被修改，例如，在产率、质量、分离过程和所有中间体的可规模化方面实现某些非限制性的目的。该方案例如可以采用在偶联反应之前用TMS(通过TMSCl)掩蔽氨基和羧酸基团(包括其侧链官能团(Tyr、His))的策略。TMS保护基最终可在用HCl水溶液处理期间裂解。该序列例如节省了步骤并允许使用廉价的氨基酸作为起始材料。在一些实施方式中，该方案用于以多克的规模和高产率制备中间体化合物5。当中间体化合物7与活化的亚基5或9偶联时，也可以使用类似的策略(参见例如方案1、2、3)。临时保护策略(方案3)的灵活性允许合成其中天然的或非天然的不同氨基酸可以容易地安装而不必担心使用哪个保护基的不同亚基5(方案4)。

在一些实施方式中，化合物4(Z-SAR-Arg-OH)和化合物8(Z-SAR-Arg(NO2)-OH)可以从市售的Z-肌氨酸开始来合成。在一些实施方式中，三氟乙酸五氟苯酯(TfaOPfp)可以用作与未保护的精氨酸或H-Arg(NO₂)-OH高效偶联的试剂。在一些实施方式中，在加入NH₄Cl之前，将Z-SAR-OH在DCM中与1当量的吡啶和PFP-三氟乙酸酯混合约2小时。在一些实施方式中，混合物用5％HCl、碳酸氢盐和/或盐水洗。在一些实施方式中，所得溶液可以用Na₂SO₄干燥并在真空下浓缩，以定量的产率提供准备用于偶联的Z-SAR-OPfp。在一些实施方式中，将组合物转换为乙腈的溶剂，加入L-精氨酸(0.9当量)和1体积的水，将混合物搅拌约16h。可以将混合物浓缩并将溶剂交换成正丁醇。然后可将所得混合物加入MTBE中以沉淀化合物4(90％产率)。在一些实施方式中，化合物8以相同的方式被合成，但加入三乙胺，因为Z-Sar-Arg(NO₂)-OH在CH₃CN/H₂O中的溶解度低。

在一些实施方式中，不需要对精氨酸的强碱性胍基进行保护。精氨酸的胍基可以被去活，例如使用1当量的酸(参见例如方案5)。在一些实施方式中，当与亚基3偶联时，可以在酸性条件下使用DCC和HOBt的组合(参见例如方案3)。在一些实施方式中，还可以将BtH/SOCl₂的组合用作偶联试剂在原位产生去活方法。

方案5

在一些实施方式中，设计的亚基5(Boc-Val-Tyr-Ile-OH)可以通过使用汇聚式策略的液相合成，其涉及例如使用双-和三-TMS-氨基酸的混合酸酐法(参见例如方案7)。Boc-缬氨酸-OH可以使用EtOCOCl在NMM存在下在0℃下被转化为其混合酸酐，并与新鲜制备的三-TMS-酪氨酸16偶联，其可以通过将游离的酪氨酸在DCM中与TEA和TMSCl(3当量)的混合物回流而产生。该反应可以用HCl水溶液淬灭，以及在一些实施方式中，有机层可以用水洗。在一些实施方式中，粗产物17(Boc-Val-Tyr-OH)可以共沸干燥，并且可以在与另一新鲜制备的二-TMS-异亮氨酸18偶联之前再次活化为其混合酸酐。可以搅拌反应混合物，直至反应完成，然后用酸的水溶液(例如盐酸)淬灭。所得溶液可用水洗，并将溶剂交换为MIBK。可以将溶液冷却，导致化合物5的结晶。可以通过过滤分离固体，用冷的MIBK洗并干燥，得到白色固体。从Boc-Val-OH，其产率可以是约60-70％。在一些实施方式中，没有将柱层析用于5的合成。即使不同保护基团(例如Boc对Fmoc)的反应性可以存在差异，但当使用双-和三-TMS-氨基酸(16和18)时，两种过程都起作用。在一些实施方式中，三氟乙酸五氟苯酯可以用于将羧酸活化为五氟苯基酯，其可以被分离并且准备好偶联而无需纯化。

方案7：5(Boc-Val-Tyr-Ile-OH)的合成

在一些实施方式中，H-His-Pro-(D)-Ala-OBn(7)的合成依赖于N-酰基苯并三唑进行N-酰化。使用BtH/SOCl₂的组合来活化羧酸尤其用于未保护的组氨酸的Katrizky的报道可以应用于Fmoc-His-OH的程序，用于活化和随后与H-Pro-(D)-Ala-OBn的偶联，以在室温下使用二乙胺(DEA)脱保护后得到化合物7(参见例如方案8)。19的制备可以通过在室温下用Fmoc-His-OH在THF中处理4当量的1H-苯并三唑和1当量的亚硫酰氯的混合物约2小时来进行。可以滤除反应期间形成的白色沉淀，以及可以在减压下完全除去溶剂。获得的残余物可以溶解在最小量的DCM中，以及可以随后用于下一反应，其顺利进行以得到被保护的Fmoc-His-Pro-(D)-Ala-OBn。在一些实施方式中，可以使用Boc-His-OH，因为其成本低并且可以在酸性条件下进行脱保护。在一些实施方式中，化合物7可以使用Boc-His-OH制备。DCC/HOBt的使用提供了其他选择。在一些实施方式中，经由HCl/EtOAc的Boc-脱保护可用于产生7，产率为约90-100％。

方案8：化合物7的合成

在一些实施方式中，使用DCC/HOBt和O,N-TMS-氨基酸的偶联可用于六肽3的延伸合成(参见例如方案9)。Boc-Val-Tyr-Ile-OH 5可以通过DCC/HOBt在DMF中活化并与新鲜制备的Bis-TMS-His-Pro-(D)-Ala-OBn 21偶联以提供受保护的六肽，使用EtOAc中的HCl可使该六肽脱保护，以得到化合物3。将所得产物3(H-Val(HCl)-Tyr-Ile-His-Pro-(D)-Ala-OBn)转变为可直接用于偶联的三-TMS-六肽可以在Et₃N和TMSCl的存在下在DCM中进行(方案10)。

在一些实施方式中，合成的最终偶联步骤起始于加入1当量的酸(例如HCl)以使胍去活化并转化为单盐酸盐(方案10)。在一些实施方式中，DCC/HOBt可以在这些条件下使用来以约35-50％的产率得到偶联产物2。在一些实施方式中，通过该方法产生的精氨酸的盐也可以携带到最后以得到终产物的相应盐。所得的偶联产物可以在醇(例如甲醇)和酸(例如AcOH)中进行催化氢化，以提供结晶后良好产率和高纯度的最终肽SEQ ID NO:1。

方案9：化合物3的合成

方案10

在一些实施方式中，化合物8可以通过类似于4的合成的两个短步骤容易地获得，并且如本文所述的分离为白色粉末(总产率85-95％)。在一些实施方式中，Z-Sar-Arg(NO₂)-OH可以通过在DMF中的DCC和HOBt的组合来而被活化(参见例如下面的方案11)。在一些实施方式中，搅拌约2小时后，可以加入化合物6，然后加入Et₃N并搅拌约12-18小时。反应混合物可用5％的酸(例如HCl)淬灭并用EtOAc萃取。在一些实施方式中，有机层可以用饱和盐(例如NaCl)溶液洗，用硫酸钠干燥，并减压浓缩，以提供9(例如，使用MeOH:EtOAc结晶后，产率为75-90％)。在一些实施方式中，然后可以如本文所述的和如方案11所示的继续化合物1(SEQ ID NO:1)的制备。

方案11

根据本文所述的方法制备的化合物(例如，分子式1或分子式1A)可以用于例如药物组合物和制剂中。药物组合物可以通过使用一种或多种生理学上可接受的载体或赋形剂的标准技术来配制。在一些实施方式中，制剂可以含有缓冲剂和/或防腐剂。化合物及其生理学上可接受的盐和溶剂化物可以配制用于通过任何合适的途径给药，包括在包含一种或多种药学上可接受的载体(carriers)的负载体(vehicles)中通过吸入、局部、鼻腔、口服、肠胃外(例如静脉内、腹膜内、膀胱内或鞘内)或直肠(给药)，其比例由肽的溶解性和化学性质、选择的给药途径和标准生物学实践确定。

根据一些实施方式，提供了包含有效量的一种或多种根据本文所述方法制备的化合物连同例如药学上可接受的稀释剂、防腐剂、增溶剂、乳化剂、佐剂和/或其他载体的药物组合物。这样的组合物包括各种缓冲剂含量(例如TRIS或其他胺、碳酸盐、磷酸盐、氨基酸、例如甘氨酰胺盐酸盐(尤其是在生理pH范围内)、N-甘氨酰甘氨酸、磷酸钠或磷酸钾(二盐或三盐)等或TRIS-HCl或乙酸盐)、各种pH和离子强度的稀释剂；添加剂，诸如洗剂和增溶剂(例如表面活性剂如普朗尼克、吐温20、吐温80(聚山梨酯80)、聚氧乙烯蓖麻油、诸如聚乙二醇、丙二醇等的多元醇)，抗氧化剂(例如抗坏血酸、焦亚硫酸钠)和防腐剂(例如硫柳汞、苄醇、尼泊金酯等)和填充物质(例如，诸如蔗糖、乳糖、甘露醇的糖类，诸如聚乙烯吡咯烷酮或葡聚糖的聚合物等)；和/或将材料掺入聚合化合物(例如聚乳酸、聚羟基乙酸等)的颗粒制剂中或掺入脂质体中。也可以使用透明质酸。这样的组合物可用于影响本发明化合物的物理状态、稳定性、体内释放速率和体内清除速率。参见例如Remington's PharmaceuticalSciences,18th Ed.(1990,Mack Publishing Co.,Easton,Pa.18042)pages 1435-1712(《Remington药物科学》，第18版，(1990，Mack出版公司，伊斯顿，宾州，18042)第1435-1712页)，其通过引用并入本文。组合物可以例如以液体形式制备，或者可以是干燥粉末，例如冻干的形式。给药此类组合物的具体方法在下文中描述。组合物也可以被结晶或沉淀。结晶或沉淀方法的示例可以例如在2014年2月7日提交的美国临时申请号61/936,914和2015年2月6日提交的美国申请14/616,487中找到，每个申请的全部内容通过引用并入本文。

当缓冲剂包括在制剂中时，缓冲剂可以选自由乙酸钠、碳酸钠、柠檬酸盐、甘氨酰甘氨酸、组氨酸、甘氨酸、赖氨酸、精氨酸、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸钠和三(羟甲基)-氨基甲烷或其混合物组成的组。这些特定缓冲剂中的每一种构成了一个替代实施方式。在一些实施方式中，缓冲剂是甘氨酰甘氨酸、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸钠或其混合物。

当药学上可接受的防腐剂包括在本发明的制剂中时，防腐剂选自由苯酚、间甲基苯酚、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、2-苯氧基乙醇、对羟基苯甲酸丁酯、2-苯基乙醇、苄醇、氯丁醇和硫柳汞或其混合物组成的组。这些特定防腐剂中的每一种构成了一个替代实施方式。在一些实施方式中，防腐剂是苯酚或间甲基苯酚。

在一些实施方式中，防腐剂是以从约0.1mg/ml至约50mg/ml的浓度，约0.1mg/ml至约25mg/ml的浓度，或约0.1mg/ml至约10mg/ml的浓度存在。

在药物组合物中使用防腐剂是本领域技术人员所熟知的。为了方便起见，参考了Remington:The Science and Practice of Pharmacy,19th edition,1995(《Remington：药学科学和实践》，第19版，1995)。

在一些实施方式中，制剂可以进一步包含螯合剂，其中螯合剂可以选自乙二胺四乙酸(EDTA)盐、柠檬酸盐和天冬氨酸盐及其混合物。这些特定螯合剂中的每一种构成了一个替代实施方式。

在一些实施方式中，螯合剂以0.1mg/ml至5mg/ml的浓度存在。在一些实施方式中，螯合剂以0.1mg/ml至2mg/ml的浓度存在。在一些实施方式中，螯合剂以2mg/ml至5mg/ml的浓度存在。

在药物组合物中使用螯合剂是本领域技术人员所熟知的。为了方便起见，参考了Remington:The Science and Practice of Pharmacy,19th edition,1995(《Remington：药学科学和实践》，第19版，1995)。

在一些实施方式中，制剂可以进一步包含选自由高分子量聚合物或低分子量化合物组成的组的稳定剂，其中这样的稳定剂包括但不限于聚乙二醇(例如PEG 3350)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素、不同的盐(例如氯化钠)、L-甘氨酸、L-组氨酸、咪唑、精氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、天冬氨酸、色氨酸、苏氨酸及其混合物。这些特定稳定剂中的每一种构成了一个替代实施方式。在一些实施方式中，稳定剂选自由L-组氨酸、咪唑和精氨酸组成的组。

在一些实施方式中，高分子量聚合物以0.1mg/ml至50mg/ml的浓度存在。在一些实施方式中，高分子量聚合物以0.1mg/ml至5mg/ml的浓度存在。在一些实施方式中，高分子量聚合物以5mg/ml至10mg/ml的浓度存在。在一些实施方式中，高分子量聚合物以10mg/ml至20mg/ml的浓度存在。在一些实施方式中，高分子量聚合物以20mg/ml至30mg/ml的浓度存在。在一些实施方式中，高分子量聚合物以30mg/ml至50mg/ml的浓度存在。

在一些实施方式中，低分子量化合物以0.1mg/ml至50mg/ml的浓度存在。在一些实施方式中，低分子量化合物以0.1mg/ml至5mg/ml的浓度存在。在一些实施方式中，低分子量化合物以5mg/ml至10mg/ml的浓度存在。在一些实施方式中，低分子量化合物以10mg/ml至20mg/ml的浓度存在。在一些实施方式中，低分子量化合物以20mg/ml至30mg/ml的浓度存在。在一些实施方式中，低分子量化合物以30mg/ml至50mg/ml的浓度存在。

在药物组合物中使用稳定剂是本领域技术人员所熟知的。为了方便起见，参考了Remington:The Science and Practice of Pharmacy,19th edition,1995(《Remington：药学科学和实践》，第19版，1995)。

在一些实施方式中，本发明的制剂可以进一步包含表面活性剂，其中表面活性剂可以选自由去污剂，乙氧基化蓖麻油，聚乙二醇化甘油酯，乙酰化单酸甘油酯，脱水山梨糖醇脂肪酸酯，泊洛沙姆诸如188和407，聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯，聚氧乙烯衍生物诸如烷基化和烷氧基化衍生物(吐温，例如吐温-20或吐温-80)，单酸甘油酯或其乙氧基化衍生物，甘油二酸酯或其聚氧乙烯衍生物，甘油，胆酸或其衍生物，卵磷脂，醇和磷脂，甘油磷脂(卵磷脂、脑磷脂、磷脂酰丝氨酸)，甘油糖脂(半乳糖吡喃糖苷)，鞘磷脂(神经鞘磷脂)和神经鞘糖脂(神经酰胺，神经节苷脂)，DSS(多库酯钠、多库酯钙、多库酯钾，SDS(十二烷基硫酸钠或月桂基硫酸钠)，二棕榈酰磷脂酸，辛酸钠，胆汁酸及其盐和甘氨酸或牛磺酸缀合物，熊去氧胆酸，胆酸钠，脱氧胆酸钠，牛磺胆酸钠，甘氨胆酸钠，N-十六烷基-N,N-二甲基-3-铵-1-丙烷磺酸盐，阴离子(烷基-芳基磺酸盐)一价表面活性剂，棕榈酰溶血磷脂酰基-L-丝氨酸，溶血磷脂(例如，乙醇胺、胆碱、丝氨酸或苏氨酸的1-酰基-sn-甘油基-3-磷酸酯)，溶血磷脂酰和磷脂酰胆碱的烷基、烷氧基(烷基酯)、烷氧基(烷基醚)衍生物(例如溶血磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱的月桂酰或肉豆蔻酰的衍生物，对极性头部基团的修饰，即胆碱、乙醇胺、磷脂酸、丝氨酸、苏氨酸、甘油、肌醇，以及带正电荷的DODAC、DOTMA、DCP、BISHOP，溶血磷脂酰丝氨酸和溶血磷脂酰苏氨酸)、两性离子表面活性剂(例如N-烷基-N,N-二甲基铵-1-丙磺酸盐、3-胆酰胺基-1-丙基二甲基铵-1-丙磺酸盐、十二烷基磷酸胆碱、肉豆蔻酰溶血磷脂酰胆碱、鸡卵裂卵磷脂)，阳离子表面活性剂(季铵碱)(例如十六烷基-三甲基溴化铵、氯化十六烷基吡啶鎓)，非离子表面活性剂，聚环氧乙烷/聚环氧丙烷嵌段共聚物(Pluronics/Tetronics、Triton X-100、十二烷基β-D-吡喃葡萄糖苷)或聚合物表面活性剂(吐温-40、吐温-80、Brij-35)，梭链孢酸衍生物(例如牛磺二氢梭链孢酸钠等)，长链脂肪酸及其盐C6-C12(例如油酸和辛酸)，酰基肉碱和衍生物，赖氨酸、精氨酸或组氨酸的Nα-酰化衍生物或者赖氨酸或精氨酸的侧链酰化衍生物，包含赖氨酸、精氨酸或组氨酸与和一个中性或酸性氨基酸的任意组合的二肽的Nα-酰化衍生物，包含一个中性氨基酸和两个带电荷的氨基酸的任意组合的三肽的Nα-酰化衍生物，或者表面活性剂可以选自咪唑啉衍生物或其混合物组成的组。这些特定表面活性剂中的每一种构成本发明的一个替代实施方式。

在药物组合物中使用表面活性剂是本领域技术人员所熟知的。为了方便起见，参考了Remington：The Science and Practice of Pharmacy,19th edition,1995(《Remington：药学科学和实践》，第19版，1995)。

药学上可接受的甜味剂优选地包含至少一种强甜味剂，例如糖精、糖精钠或糖精钙、阿斯巴甜、乙酰磺胺酸钾、环拉酸钠、阿力甜、二氢查耳酮甜味剂、莫内林、甜菊苷或三氯蔗糖(4,1',6'-三氯-4,1',6'-三去氧半乳蔗糖)，优选糖精、糖精钠或糖精钙以及任选的一种填充型甜味剂，例如山梨糖醇、甘露醇、果糖、蔗糖、麦芽糖、异麦芽酮糖醇、葡萄糖、氢化葡萄糖浆、木糖醇、焦糖或蜜糖。

强烈的甜味剂方便地以低浓度使用。例如，在糖精钠的情况下，浓度可以基于最终制剂的总体积在0.04％至0.1％(w/v)的范围，以及在低剂量制剂中优选为约0.06％，在高剂量制剂中优选为约0.08％。填充型甜味剂可有效地以约10％至约35％(w/v)，优选约10％至15％(w/v)的更大量使用。

本发明的制剂可以通过常规技术制备，例如，如Remington's PharmaceuticalSciences，1985或Remington：The Science and Practice of Pharmacy，19th edition，1995(《Remington药物科学》，1985或《Remington：药学科学和实践》，第19版，1995)中描述的，其中医药工业的这些常规技术涉及适当地溶解和混合各成分以得到所需的终产物。

本文所述的化合物也可以通过本领域已知的任何方法给药。例如，给药可以是透皮、肠胃外、静脉内、动脉内、皮下、肌内、颅内、眼眶内、眼内、心室内、囊内、脊柱内、脑池内、腹膜内、脑室内、鞘内、鼻内、气雾剂，通过栓剂，或口服给药。在一些实施方式中，本文制备的化合物的药物组合物可以用于注射给药，或用于口服、肺部、鼻部、经皮、眼部给药。

对于口服给药，肽或其治疗上可接受的盐可以配制成单位剂型，诸如胶囊或片剂。片剂或胶囊可以通过常规手段用药学上可接受的赋形剂制备，包括粘结剂，例如预胶化的玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素；填料，例如乳糖，微晶纤维素或磷酸氢钙；润滑剂，例如硬脂酸镁、滑石或二氧化硅；崩解剂，例如马铃薯淀粉或淀粉羟乙酸钠；或润湿剂，例如十二烷基硫酸钠。片剂可以通过本领域熟知的方法包衣。用于口服给药的液体制剂可以采取例如溶液、糖浆或混悬液的形式，或者它们可以作为一种干产品存在，在使用前用水或其他合适的负载体配制。这样的液体制剂可以通过常规手段用药学上可接受的添加剂制备，例如悬浮剂，例如山梨醇糖浆、纤维素衍生物或氢化食用脂肪；乳化剂，例如卵磷脂或阿拉伯胶；非水性负载体，例如杏仁油、油酯、乙醇或分馏的植物油；以及防腐剂，例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸。制剂还可以适当地含有缓冲剂盐、调味剂、着色剂和/或甜味剂。如果需要，可以适当地配制用于口服给药的制剂，以得到活性化合物的受控释放。该化合物也可以用环糊精或其他大分子制备以促进口腔吸收。

对于局部给药，可将肽配制在含有0.1％至10％或0.5％至5％的活性化合物的药学上可接受的负载体中。这样的制剂可以是霜剂、洗剂、舌下片剂、气溶胶和/或乳剂的形式，以及可以包含在本领域中为此目的常规的基质或储库型的透皮或口腔贴片中。

对于胃肠外给药，本发明的化合物通过静脉内、皮下或肌内注射，在具有药学上可接受的负载体或载体的组合物中给药。化合物可以配制成用于通过注射(例如通过推注或连续输注)的肠胃外给药。用于注射的制剂可以以单位剂型存在，例如，在安瓿或多剂量容器中，加入防腐剂。组合物可以采取在油性或水性负载体中的悬浮液，溶液或乳液的形式，以及可以含有配制剂，例如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。或者，活性成分可以是粉末形式，用于在使用前用合适的负载体例如无菌无热原水配制。

对于通过注射给药，优选在无菌水性负载体中的溶液中使用化合物，负载体还可以含有其他溶质，诸如缓冲剂或防腐剂以及足够量的药学上可接受的盐或葡萄糖，以使得溶液等渗。在一些实施方式中，本发明的药物组合物可以与药学上可接受的载体一起配制以提供用于可注射给药的无菌溶液或悬浮液。特别地，可注射物可以制备成常规形式，作为液体溶液或悬浮液，适合于在注射前在液体中的溶液或悬浮液的固体形式或作为乳液。合适的赋形剂是，例如水、盐水、右旋糖、甘露醇、乳糖、卵磷脂、白蛋白、谷氨酸钠、半胱氨酸盐酸盐等。此外，如果需要，可注射的药物组合物可含有少量无毒辅助物质，例如润湿剂、pH缓冲剂等。如果需要，可以使用吸收促进剂(例如脂质体)。合适的药物载体描述于E.W.Martin的“Remington's pharmaceutical Sciences”(《Remington药物科学》)。

对于通过吸入给药，化合物可以方便地以来自加压包装或喷雾器的气溶胶喷雾剂形式递送，使用合适的推进剂，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合适的气体。在加压气溶胶的情况下，可以通过提供递送计量的量的阀门来确定剂量单位。用于吸入器或吹入器中的胶囊和弹药型制剂例如明胶，可以配制为含有化合物和合适的粉末基质(例如乳糖或淀粉)的粉末混合物。对于鼻内给药，本发明的化合物可以，例如作为液体喷雾剂、作为粉末或以滴剂的形式使用。

化合物还可以配制成直肠组合物，例如栓剂或保留灌肠剂，例如含有常规栓剂基质，例如可可脂或其他甘油酯。

此外，化合物可以配制为储库制剂(depot preparation)。这种长效制剂可以通过植入(例如皮下或肌内)或通过肌内注射给药。因此，例如，化合物可以用合适的聚合物或疏水材料(例如作为在一种可接受的油中的乳液)或离子交换树脂配制，或者配制成微溶衍生物，例如微溶盐。

如果需要，组合物可以存在于包装或分配器装置中，其可以含有一个或多个含活性成分的单位剂型。包装可以例如包括金属或塑料箔，例如泡罩包装。包装或分配器装置可以附有给药说明书。

根据本文所述方法制备的化合物可以以治疗有效剂量给药至患者，以预防、治疗或控制全部或部分由本发明的GPCR-配体相互作用介导的疾病和病症。包含一种或多种本文所述的化合物的药物组合物可用足以在患者体内引起有效的保护性或治疗性反应的量给药至患者。足以实现这一点的量被定义为“治疗有效剂量”。该剂量将由所用的特定化合物的功效和受试者的状况以及体重或待治疗区域的表面积来确定。剂量的大小也将由在具体受试者体内给药具体化合物或载体时伴随的任何不良作用的存在、性质和程度决定。

这些化合物的毒性和治疗效果可以通过细胞培养或实验动物中的标准药学程序来确定，例如通过确定LD50(对50％群体致死的剂量)和ED50(在50％的种群中的治疗有效剂量)。毒性和治疗效果之间的剂量比是治疗指数，并且可以表示为比率，LD50/ED50。显示高治疗指数的化合物是优选的。尽管可以使用表现出毒性副作用的化合物，但应当注意设计将这些化合物靶向到受影响组织的位置的递送系统，以最小化对正常细胞的潜在损害，从而减少副作用。

从细胞培养测定和动物研究获得的数据可用于制定用于人的剂量范围。这种化合物的剂量优选在落在包括具有很少毒性或没有毒性的ED50的循环浓度范围内。剂量可以在该范围内变化，取决于所使用的剂型和给药途径。对于本发明方法中使用的任何化合物，治疗有效剂量可以最初从细胞培养测定中估计。可在动物模型中制定一个剂量以达到一个包括如细胞培养中确定的IC50的循环血浆浓度范围(达到症状半数最大抑制率的测试化合物的浓度)。这样的信息可以用于更准确地确定人体中的有用剂量。血浆中的水平可以例如通过高效液相色谱(HPLC)测定。总体而言，对于一个典型受试者，调节剂的剂量当量为约1ng/kg至10mg/kg。

本发明的化合物和/或其药学上可接受的盐的给药的量和频率将根据主治临床医生考虑诸如病人的年龄、病症和体型以及治疗的症状严重程度的判断而调节。普通技术的医生或兽医可以容易地确定和开出预防、对抗或阻止病症发展所需的药物的有效量。通常，预计有效量将是0.001mg/kg体重至10mg/kg体重，特别是0.01mg/kg体重至1mg/kg体重。更具体地，预计有效量将是通过静脉内给药0.01微克/kg体重/分钟至100微克/kg体重/分钟连续地输注12小时至14天。在一天之中以适当的间隔将所需剂量给药为两个、三个、四个或更多个亚剂量可能是合适的。所述亚剂量可以配制为单位剂型，例如每单位剂型含有0.01mg至500mg，特别是0.1mg至200mg的活性成分。

在一些实施方式中，药物制剂为单位剂型的形式。在这种形式中，将制剂细分为适合大小的含有适量活性组分的单位剂量，例如达到所需目的的有效量。在单位剂量制剂中活性化合物的量可以根据具体应用从约0.01mg至约1000mg，优选从约0.01mg至约750mg，更优选从约0.01mg至约500mg，以及最优选从约0.01mg至约250mg改变或调整。所用的实际剂量可以根据患者的需要和所治疗病症的严重程度而改变。对于具体情况的适当剂量方案的确定处于本领域的技术范围内。为了方便起见，可以根据需要将一天中的总剂量分成几部分并以这几部分给药。

包含本文所述化合物或根据本文所述方法制备的化合物的组合物能用于治疗心血管或心脏疾病，这些疾病例如将有利地响应于血压降低。

在一些实施方式中，提供了用本文所述的化合物治疗心血管疾病的方法。在一些实施方式中，方法包括向受试者或有需要的受试者给药治疗有效量的本文所述的化合物和/或其药学上可接受的盐。在一些实施方式中，方法包括向受试者或有需要的受试者给药治疗有效量的根据本文所述方法制备的SEQ ID.NO.1和/或其药学上可接受的盐。这些心血管疾病包括但不限于：慢性高血压、高血压危象、急性充血性心力衰竭、心绞痛、急性心肌梗死、左心室衰竭、脑血管功能不全、颅内出血、心力衰竭、急性失代偿性心力衰竭(其也可以称为急性心力衰竭)、原发性高血压、术后高血压、高血压性心脏病、高血压性肾病、肾血管性高血压、恶性高血压、肾移植后患者稳定(post-renal transplant patientstabilization)、扩张型心肌病、心肌炎、心脏移植后患者稳定(post-cardiac transplantpatient stabilization)、支架后管理关联病症、神经源性高血压、先兆子痫、腹主动脉瘤和具有血液动力学成分的任何心血管疾病。

在一些实施方式中，心血管疾病是一种急性心血管疾病。在一些实施方式中，急性心血管疾病是急性高血压危象、妊娠毒血症、急性心肌梗死、急性充血性心力衰竭、急性心力衰竭、急性缺血性心脏病、肺动脉高压、术后高血压、偏头痛、视网膜病和术后心脏/瓣膜手术。

在一些实施方式中，提供了治疗与AT1R相关的病毒感染性疾病的方法。在一些实施方式中，方法包括向有需要的受试者给药治疗有效量的I型结晶和/或其药学上可接受的盐。在特定的实施方式中，组合物通过静脉注射给药。

本文所述的化合物已被证明在治疗此类疾病中是有用的。例如，化合物已在美国专利8,486,885，Soergel DG等人，J.Clin.Pharmacol.2013年九月；53(9)：892-9，Violin等人，Trends Cardiovasc.Med.2013年十月；23(7)：242-9，和Violin等人，J.Pharmacol.Exp.Ther.2010年十二月；335(3)：572-9中被证明在治疗此类疾病中是有用的，它们中的每篇的全部内容通过引用并入本文。

实施例

实施例1：Z-Sar-Arg-OH(4)的制备

在0℃下，将吡啶(1.1当量，49.3mmol，3.97ml)和三氟乙酸五氟苯酯(1.2当量，53.8mmol，9.24ml)加入到Z-Sar-OH(10.0g，44.8mmol)的DCM(120ml)溶液中。将反应混合物温热至室温2小时，然后用饱和NH₄Cl(70ml)淬灭，用水(2×70ml)和盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，减压浓缩，以定量的产率得到Z-Sar-OPfp。

在室温下，将L-精氨酸(0.9当量，40.3mmol，7.04g)的50ml水溶液加入到上面制备的粗产物(在235ml乙腈中)中。在浓缩至干前，将反应混合物在室温下搅拌过夜。在浓缩结束时加入40ml的n-BuOH以除去水。将粗混合物溶于50ml的MeOH中并在搅拌下缓慢加入到MTBE(1.5L)中以沉淀产物。过滤并在40℃下真空干燥过夜，得到13.75g(总产率90％以上)：(HPLC纯度＝88.10％)；m/z(ES+)380.42。

实施例2.Boc-Val-Tyr-Ile-OH(5)的制备

向Boc-缬氨酸(1.74g，8mmol)的THF(40ml)溶液中加入N-甲基吗啉(1.1当量，8.8mmol，0.97ml)。将混合物冷却至0℃并加入氯甲酸乙酯(1.1当量，8.8mmol，0.85ml)。将反应在0℃搅拌30分钟。

在另一个容器中，酪氨酸(1.5当量，12.0mmol，2.17g)、三甲基硅氯(3.08当量，36.9mmol，4.68ml)和TEA(3.08当量，36.9mmol，5.13ml)在DCM中回流2.5小时。将所得的溶液冷却并在0℃下加入到先前制备的Boc缬氨酸混合酸酐中。搅拌溶液直到反应完成。将反应用5％HCl(100ml)淬灭并在室温下搅拌30分钟。分离层；水层用DCM(2×50ml)萃取。将合并的有机萃取物用水(100ml)和盐水(50ml)洗，并用无水Na₂SO₄干燥。在真空中蒸发溶剂，并将溶剂交换成THF。

加入N-甲基吗啉(1.1当量，8.69mmol，0.96ml)，将混合物冷却至0℃。加入氯甲酸乙酯(1.1当量，8.69mmol，0.83ml)以形成混合酸酐(在0℃下30分钟)。

在另一个容器中，异亮氨酸(1.5当量，11.84mmol，1.55g)、三甲基硅氯(2.05当量，24.27mmol，3.1ml)和TEA(2.05当量，24.27mmol，3.38ml)在DCM中回流2.5小时。将所得的溶液冷却并在0℃下加入到混合酸酐溶液中。搅拌反应混合物直到反应完成，然后用盐酸水溶液(100ml)淬灭并在室温下搅拌30分钟。分离层；水层用DCM(2×50ml)萃取。将合并的有机萃取物用水(100ml)和盐水(50ml)洗，并用无水Na₂SO₄干燥。在真空中蒸发溶剂，并将溶剂交换成MIBK。

将所得溶液用水洗并将溶剂交换成MIBK。将溶液冷却，导致标题化合物的结晶。通过过滤分离固体，用冷的MIBK洗，并且干燥得到白色固体(从Boc-Val-OH为67％的总产率):(HPLC纯度＝98.4％)；m/z(ES+)494.61

实施例3：Val(HCl)-Tyr-Ile-OH(6)的制备

将5当量的HCl的EtOAc溶液缓慢加入到Boc-Val-Tyr-Ile-OH(5)(2.5g，5.075mmol)的EtOAc(12ml)非均相溶液中。将反应混合物搅拌过夜，然后过滤并用MTBE洗，得到2.11g(97％)的标题化合物：(HPLC纯度＝97.8％)；m/z(ES+)394.61

实施例4：H-Pro(HCl)-(D)Ala-OBn的制备

在室温下，将N-甲基吗啉(1.19当量，101.6mmol，11.2ml)加入到Boc-Pro-OH的THF(355ml)溶液中，然后加入氯甲酸乙酯(1.05当量，89.65mmol，8.58ml)。将混浊溶液搅拌30分钟，然后加入H-(D)-Ala-OBn-TsOH(1当量，85.38mmol，30g)和三乙胺(2.2当量，187.84mmol，26.2ml)。在室温下1小时后，反应混合物用水(300ml)淬灭并用DCM(2×200ml)萃取。在用无水Na₂SO₄干燥之前，将合并的有机层用水(100ml)、1M HCl和盐水(50ml)洗。在真空中蒸发溶剂，得到35.41g粗物料。

向粗物料(35.41g)的EtOAc(280ml)溶液中加入1M HCl的EtOAc溶液(8当量)。将混合物搅拌5小时，然后加入MTBE(300ml)，将固体过滤并用MTBE洗，在低真空中央吸尘系统下干燥过夜后得到22.91g(90.84％)的所需产物：m/z(ES+)277.33

实施例5：H-His(HCl)-Pro-(D)-Ala-OBn(7)的制备

在室温下，向Boc-His-OH(1.2当量，7.67mmol，1.96g)的DMF(20ml)溶液中加入DCC(1.32当量，8.44mmol，1.74g)和HOBt(1.32当量，8.44mmol，1.14g)。将反应混合物搅拌3小时，然后加入HCl-Pro-(D)Ala-Obn盐(1当量，6.39mmol，2g)，然后加入Et₃N(2当量，12.78mmol，1.8ml)。3小时后，过滤DCU并用EtOAc洗滤饼。滤液用水、盐水萃取，干燥，减压浓缩，得到3.59g白色固体的粗产物(Boc-His-Pro-(D)-Ala-OBn)；m/z(ES+)514.48。

向粗物料加入EtOAc(45ml)，然后加入1M HCl的EtOAc溶液(5当量)，以产生H-His(HCl)-Pro-(D)-Ala-OBn。将反应混合物搅拌5小时，然后在氮气下过滤并用EtOAc洗。在高真空下在室温下干燥过夜，得到3.03g(总产率94％)：(HPLC纯度＝92％)；m/z(ES+)414.48。

实施例6：Cbz-Sar-Arg(NO₂)-OH(8)的制备

在0℃下，将吡啶(1.1当量，49.3mmol，3.97ml)和三氟乙酸五氟苯酯(1.2当量，53.8mmol，9.24ml)加入到CBz-Sar-OH(10.0g，44.8mmol)的DCM(120ml)溶液中。将反应混合物温热至室温2小时，然后用饱和NH₄Cl(70ml)淬灭，用水(2×70ml)和盐水洗，用Na₂SO₄干燥，减压浓缩，以定量的产率得到Z-Sar-OPfp。

在室温下，将L-Arg(NO₂)-OH(.9当量，40.3mmol，8.84g)的60ml水溶液加入到上面制备的粗产物(在235ml乙腈中)中，随后加入Et₃N(2当量，80.6mmol，11.2ml)并搅拌过夜。将反应混合物真空浓缩以除去乙腈，然后溶于200ml的5％HCl中，并用EtOAc(5×100ml)萃取。将合并的有机萃取物用盐水洗，用Na₂SO₄干燥。在切换到MeOH(60ml)之前真空浓缩，并缓慢加入到1.5L的MTBE中，同时搅拌以沉淀产物。过滤并在40℃下干燥，得到15.12g的白色粉末(88.4％):(HPLC纯度＝99.1％)；m/z(ES+)425.42。

实施例7：Boc-Val-Tyr-Ile-His-Pro-(D)Ala-OBn的制备

将HATU(1当量，3.407mmol，1.295g)加入到Boc-Val-Tyr-Ile-OH(1当量，3.4mmol，1.68g)的7ml的DMF溶液中，然后加入Et₃N(1当量)。将反应混合物在室温下搅拌1小时。

在另一个容器中，将H-His(HCl)-Pro-(D)-Ala-OBn(3.34mmol，1.5g)的15mlDCM溶液、三甲基硅氯(2.1当量，7.01mmol，0.89ml)和TEA(3.5当量，11.69mmol，1.63ml)在DCM中回流2.5小时。将所得溶液冷却并在0℃下加入到上述制备的反应混合物中。将溶液搅拌15小时。将反应用5％HCl淬灭，并在室温下搅拌30分钟。分离层；水层用EtOAc(2×30ml)萃取。将合并的有机萃取物用水、盐水洗，并用无水Na₂SO₄干燥。真空蒸发溶剂，并溶于温热的EtOAc中。冷却结晶，过滤并干燥过夜后得到2.11g(71％)：(HPLC纯度＝100％)；m/z(ES+)890.07。

实施例8：Z-Sar-Arg(HCl)-Val-Tyr-Ile-His-Pro-(D)-Ala-OBn的制备

将1当量HCl的EtOAc溶液加入到Z-Sar-Arg-OH(100mg，0.264mmol)的2ml DMF中，然后在室温下加入DCC(1当量)和HOBt(1当量)。将反应混合物搅拌1小时。

在另一个容器中，将H-Val(HCl)-Tyr-Ile-His-Pro-(D)Ala-OBn(1当量，0.264mmol，218mg)，三甲基硅氯(3.1当量，0.82mmol，0.104ml)和TEA(4当量，1.06mmol，0.148ml)在DCM(1.5ml)中回流2.5小时。在0℃下向该反应混合物中加入上面制备的活化的Z-Sar-Arg-OH。将溶液搅拌16小时。将反应用5％HCl淬灭并在室温下搅拌30分钟。分离层；水层用EtOAc/THF 1:1(2×5ml)萃取。将合并的有机萃取物干燥(Na₂SO₄)。真空蒸发溶剂，进行反相柱层析色谱以得到128mg(41％)：(HPLC纯度＝100％)；m/z(ES+)1151.36。

实施例9：SEQ ID NO:1-AcOH(TRV027-AcOH)的制备

向Z-Sar-Arg(HCl)-Val-Tyr-Ile-His-Pro-(D)Ala-OBn(.52g，0.438mmol)的2mlMeOH溶液中加入AcOH(10当量)和20mg的Pd(OH)₂，然后在氢化过夜之前通过H₂气球(3x)用H₂充气。过滤并用MeOH洗，然后浓缩至干。加入水(2ml)，并用EtOAc萃取。将水层(2ml)加热至50℃，然后冷却。将产物过滤并干燥过夜，以得到391mg的产物，为白色固体：(HPLC纯度＝100％)；m/z(ES+)926.09。

实施例10：Z-Sar-Arg(NO₂)-Val-Tyr-Ile-OH(9)的制备

向Z-Sar-Arg(NO₂)-OH(.395g，0.932mmol)的5ml DMF溶液中加入DCC(1当量，0.932mmol，192mg)和HOBt(1当量，0.932mmol)。将反应混合物搅拌1小时，然后加入Val(HCl)-Tyr-Ile-OH(1.02当量，0.951mmol，408mg)和Et₃N(3当量，2.853mmol，0.4ml)。将反应混合物放置过夜，然后用5％HCl(5ml)淬灭，并用EtOAc(3×10ml)萃取。合并的有机萃取物用无水Na₂SO₄干燥。在真空中蒸发溶剂，并溶于最少量的MeOH中。加入EtOAc(作为反溶剂)冷却结晶，过滤并干燥过夜后得到603mg(81％)：(HPLC纯度＝97.1％)；m/z(ES+)800.89。

实施例11：Z-Sar-Arg(NO₂)-Val-Tyr-Ile-His-Pro-(D)Ala-OBn(10)的制备

向Z-Sar-Arg(NO₂)-Val-Tyr-Ile-OH(0.5g，0.626mmol)的3ml DMF溶液中加入DCC(1当量，0.626mmol，129mg)和HOBt(1当量，0.626mmol，102mg)。将反应混合物搅拌2小时，然后加入H-His(HCl)-Pro-(D)-Ala-OBn(1.2当量，0.751mmol，338mg)和Et₃N(2.5当量，1.88mmol，0.26ml)。将反应混合物放置过夜，然后用水(5ml)淬灭，并用EtOAc(3×10ml)萃取。合并的有机萃取物用无水Na₂SO₄干燥。在真空中蒸发溶剂，并溶于最少量的MeOH中。加入EtOAc(作为反溶剂)冷却结晶，过滤并干燥过夜后得到381mg(51％)：(HPLC纯度＝97.1％)；m/z(ES+)1196.35。

实施例12：Z-Sar-Arg(BisCBz)-OH的制备

将Z-Sar-Arg-OH(1.0当量，0.35mmol，133mg)在DCM(6.6ml)中的浆液冷却至0-5℃，并用DIPEA(8当量，2.8mmol，0.49ml)和TMSCl(4当量，1.4mmol，0.18ml)处理。在0-5℃下搅拌反应混合物30分钟的同时形成了澄清溶液。然后在5-10分钟的时间段内滴加氯甲酸苄基酯(3.5当量，1.2mmol，0.17ml)。将混合物温热至室温，并在室温下保持搅拌30分钟，因为LC/MS分析显示了所需产物的形成。然后用冷的1N HCl(20ml)淬灭。分离层；水层用DCM(20ml)萃取。合并的有机萃取物用水(20ml)和盐水(20ml)洗，然后用无水Na₂SO₄干燥。将其减压浓缩至残余物，并进行正相闪式(Combiflash)色谱(己烷中含60％EA)，得到203mg(89％)的白色固体[HPLC纯度＝98.52％；m/z(ES+)647.80]。通过质子NMR(核磁共振氢谱)分析进一步证实产物的结构。

实施例13：Boc-His(Bom)-Pro-(D)Ala-OBn的制备

向BocHis(Bom)OH、H₂N-Pro-D-Ala-OBn.HCl和TEA混合物的DMF溶液中加入HATU。将混合物搅拌2小时。将反应混合物用二氯甲烷稀释并用水洗。使用反相色谱纯化产物以得到BocHis(Bom)-Pro-D-Ala-OBn，为白色固体。m/z(ES+)633。

实施例14：H₂N-His(Bom)-Pro-D-Ala-OBn

将含有HCl(4N)的BocHis(Bom)-Pro-D-Ala-OBn的二氧六环溶液搅拌16小时。将混合物真空浓缩。将残余物重新溶解在温热的氯苯中并冷却使得产物结晶为盐酸盐。通过反相HPLC纯化小部分，以得到H₂N-His(Bom)-Pro-D-Ala-OBn.HOOCCF₃，为白色固体。m/z(ES+):533(M+1)。

实施例15：FmocHis(Trt)-Pro-D-Ala-OBn的制备

向FmocHis(Trt)OH、H₂N-Pro-D-Ala-OBn.HCl和TEA混合物的DMF溶液中加入HATU。将混合物搅拌2小时。将反应混合物用二氯甲烷稀释并用水洗。使用反相色谱纯化产物，以得到FmocHis(Trt)-Pro-D-Ala-OBn，为白色固体。

实施例16：SEQ ID NO:1(分子式1)的制备

根据方案1制备SEQ ID NO:1。

方案1

SEQ ID NO:1也根据方案2制备：

方案2

实施例17：分子式1A的制备。根据方案3制备分子式1A的化合物：

方案3.

虽然已经通过参考示例性实施方式描绘和描述了实施方式，但是这样的参考并不意味着对范围的限制，并且不应推断出这样的限制。实施方式能够在形式和功能上进行相当多的修改、变更和同等物，正如受益于本公开内容的相关领域的普通技术人员将想到的。本文引用的所有参考文献的全部内容通过引用并入本文。

序列表

<110> 特维娜有限公司(TREVENA, INC.)

纳特·K·戴尔普(DIEP, Nhut K.)

尤里伊·卡尔言(KALYAN, Yuriy)

格雷姆·劳顿(LAWTON, Graham)

马修·荣塞姆(RONSHEIM, Matthew)

周绍红(ZHOU, Shao Hong)

塞巴巴·瑞查(RACHA, Saibaba)

<120> β-抑制蛋白效应物的合成

<130> 138851.01302

<150> US 62/000329

<151> 2014-05-19

<160> 5

<170> PatentIn 3.5版

<210> 1

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (1)..(1)

<223> 肌氨酸

<220>

<221> MOD_RES

<222> (8)..(8)

<223> D-丙氨酸

<400> 1

Xaa Arg Val Tyr Ile His Pro Ala

1 5

<210> 2

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成序列

<220>

<221> MISC_特征

<222> (1)..(1)

<223> R1

<220>

<221> MOD_RES

<222> (7)..(7)

<223> D-丙氨酸

<220>

<221> MISC_特征

<222> (8)..(8)

<223> OR4

<400> 2

Xaa Val Tyr Ile His Pro Ala Xaa

1 5

<210> 3

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成序列

<220>

<221> MOD_RES

<222> (6)..(6)

<223> D-丙氨酸

<220>

<221> MISC_特征

<222> (7)..(7)

<223> OR4

<400> 3

Val Tyr Ile His Pro Ala Xaa

1 5

<210> 4

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成序列

<220>

<221> MISC_特征

<222> (1)..(1)

<223> Z

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> 肌氨酸

<220>

<221> MOD_RES

<222> (9)..(9)

<223> D-丙氨酸

<220>

<221> MISC_特征

<222> (10)..(10)

<223> OR4

<400> 4

Xaa Xaa Arg Val Tyr Ile His Pro Ala Xaa

1 5 10

<210> 5

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成序列

<220>

<221> MISC_特征

<222> (1)..(1)

<223> Z

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> 肌氨酸

<220>

<221> MOD_RES

<222> (3)..(3)

<223> 精氨酸(NO2)

<220>

<221> MOD_RES

<222> (9)..(9)

<223> D-丙氨酸

<220>

<221> MISC_特征

<222> (10)..(10)

<223> OR4

<400> 5

Xaa Xaa Arg Val Tyr Ile His Pro Ala Xaa

1 5 10

Claims (12)

1.一种制备

或其药学上可接受的盐、溶剂化物或其水合物的方法，所述方法包括：

a)使H-His(HCl)-Pro-(D)-Ala-OR₄和Z-Sar-Arg(NO₂)-Val-Tyr-Ile-OH在足以产生Z-Sar-Arg(NO₂)-Val-Tyr-Ile-His-Pro-(D)-Ala-OR₄的条件下接触；以及

b)将Z-Sar-Arg(NO₂)-Val-Tyr-lle-His-Pro-(D)-Ala-OR₄氢化以产生

其中

Z是苄氧羰基；并且

R₄是H、Me、Et、叔丁基、Bn、TMS或其他羧酸保护基。

2.如权利要求1所述的方法，还包括制备H-His(HCl)-Pro-(D)-Ala-OR₄，所述方法包括：

使H-Pro(acid)-(D)-Ala-OR₄和活化的Boc-组氨酸接触以形成Boc-His-Pro-D-Ala-OBn，随后在合适的酸的存在下脱保护，以产生H-His(HCl)-Pro-(D)-Ala-OR₄，

其中：

R₄是H、Me、Et、叔丁基、Bn、TMS或其他羧酸保护基。

3.如权利要求1或2所述的方法，还包括制备R₁-Val-Tyr-Ile-OH，所述方法包括：

使R₃-Val-OH和Tri-TMS-Tyr在足以产生R₃-Val-Tyr-OH的条件下接触；以及

使R₃-Val-Tyr-OH和Di-TMS-Ile在足以产生R₁-Val-Tyr-Ile-OH的条件下接触，

其中R₃和R₁独立地是氮保护基。

4.如权利要求1所述的方法，还包括制备H-Val(HCI)-Tyr-Ile-OH，所述方法包括用HCl处理R₁-Val-Tyr-Ile-OH以产生H-Val(HCl)-Tyr-Ile-OH。

5.如权利要求1所述的方法，还包括制备Z-Sar-Arg(NO₂)-OH，所述方法包括使Z-Sar-OH和H-Arg(NO₂)-OH在足以产生Z-Sar-Arg(NO₂)-OH的条件下接触，其中Z是苄氧羰基。

6.如权利要求1所述的方法，其中R₄是H、Me、Et、叔丁基、Bn、TMS或其他羧酸保护基。

7.如权利要求1所述的方法，其中R₄是Bn。

8.如权利要求2所述的方法，其中所述合适的酸是HCl。

9.如权利要求3所述的方法，其中所述氮保护基选自Cbz、Fmoc、Boc、Alloc和TFA。

10.如权利要求3所述的方法，其中R₁是Cbz。

11.如权利要求3所述的方法，其中R₃是Cbz。

12.如权利要求3所述的方法，其中R₁和R₃是不同的氮保护基。