TW202421650A - 雙特異性分子穩定組成物 - Google Patents

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TW202421650A
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蔚 戚
欣蒂 任
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美商安進公司
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Abstract

本發明提供了藥物組成物，其包含濃度增加的雙特異性抗原結合分子，其中該組成物包含至少一種緩衝劑、至少一種糖；和選自乙二胺四乙酸（EDTA）、二乙烯三胺五乙酸（DTPA）和檸檬酸的至少一種穩定劑，以便即使在較高濃度下也能穩定雙特異性抗原結合劑。

Description

雙特異性分子穩定組成物
本發明關於生物技術的各個方面，特別地關於提供雙特異性分子的穩定組成物。
由於商業規模純化方法的進步，因此可以在首次製造時以高純度獲得基於蛋白質的藥物，如重組蛋白。然而，蛋白質僅臨界穩定（marginally stable）並且甚至在上游製造過程中，極易受到化學和物理降解二者的影響。化學降解係指關於共價鍵的修飾，例如脫醯胺化、氧化、裂解或形成新的二硫橋鍵、水解、異構化或去糖基化。物理降解包括蛋白質去折疊、對表面的不希望的吸附、和聚集。處理該等物理和化學不穩定性係蛋白質藥物開發中最具挑戰性的任務之一（Chi等人, Pharm Res [藥物研究], 第20卷, 第9期, 2003年9月, 第1325-1336頁, Roberts, Trends Biotechnol. [生物技術趨勢] 2014年7月;32(7):372-80）。
因此，儘管製造方面取得了進展，但新的基於蛋白質的藥物需要合適的配製物，以避免產品品質影響如蛋白質聚集。這會影響製造、儲存和投與。
這種新的基於蛋白質的藥物包括例如雙特異性（單株）抗體。雙特異性抗體係可以同時與兩種不同類型抗原結合的人工蛋白。它們以幾種結構形式為人所知，目前已經探索了癌症免疫療法和藥物遞送的應用（Fan, Gaowei; Wang, Zujian; Hao, Mingju; Li, Jinming (2015). 「Bispecific antibodies and their applications [雙特異性抗體及其應用]」.Journal of Hematology & Oncology [血液學與腫瘤學雜誌].8: 130）。
一般來講，可用於免疫腫瘤學的雙特異性分子可以是抗原結合多肽如可以是IgG樣的抗體，即全長雙特異性抗體，或不是全長抗原結合分子的非IgG樣雙特異性抗體。全長雙特異性抗體典型地保留具有兩個Fab臂和一個Fc區的傳統單株抗體（mAb）結構，不同的是兩個Fab位點結合不同抗原。非全長雙特異性抗體缺乏整個Fc區。該等包括化學連接的Fab、僅由Fab區組成、以及各種類型的二價和三價單鏈可變片段（scFv）。還存在模擬兩種抗體的可變結構域的融合蛋白。這樣的形式的一個實例係BiTE ®（雙特異性T細胞接合器）分子（Yang, Fa; Wen, Weihong; Qin, Weijun (2016). 「Bispecific Antibodies as a Development Platform for New Concepts and Treatment Strategies[雙特異性抗體作為新概念和治療策略的開發平臺]」.International Journal of Molecular Sciences[國際分子科學雜誌].18 (1): 48）。
示例性雙特異性分子（如BiTE ®抗原結合分子）係由兩個柔性連接的抗體衍生的結合結構域製備的重組蛋白構建體。BiTE ®抗原結合分子的一個結合結構域對靶細胞上選擇的腫瘤相關表面抗原係特異性的；第二結合結構域對CD3（T細胞上的T細胞受體複合物的亞基）具有特異性。藉由其特定設計，BiTE ®抗原結合分子獨特地適合於將T細胞與靶細胞瞬時連接，並且同時強有力地活化T細胞對靶細胞的固有溶細胞潛力。以AMG 103和AMG 110開發進入臨床的第一代BiTE ®抗原結合分子（參見WO 99/54440和WO 2005/040220）的重要進一步開發係提供在CD3ε鏈的N末端結合背景獨立表位（context independent epitope）的雙特異性抗原結合分子（WO 2008/119567）。與該選擇的表位結合的BiTE ®抗原結合分子不僅顯示出對人和普通狨（ Callithrix jacchus）、棉冠獠狨（ Saguinus oedipus）或松鼠猴（ Saimirisciureus）CD3ε鏈的跨物種特異性，而且由於識別該特異性表位（而不是先前描述的雙特異性T細胞接合分子中CD3結合物的表位）而不會非特異性地活化T細胞至與對於前一代T細胞接合抗體所觀察到的程度相同的程度。T細胞活化的這種減少與患者中被鑒定為副作用的風險的較少或減少的T細胞再分佈相關。
目前，為避免聚集，如HMW（高分子量）物質形成，約1至5 mg/mL（即0.1%至0.5%（w/v））係雙特異性抗原結合分子（如與單鏈Fc軛合的BiTE ®（雙特異性T細胞接合器）分子（scFc BiTE ®分子））在液體（重構）藥物組成物中的典型濃度。這樣的液體組成物典型地凍乾用於儲存，並且重構用於向患者投與（典型地藉由輸注）。然而，為了在有限的體積內滿足所需劑量（例如用於皮下投與），需要更高濃度的雙特異性抗原結合分子。此外，更高的雙特異性抗原結合分子濃度意味著在例如開發和製造中減少的緩衝液體積、更少的資源和更少的能量消耗。因此，需要提供降低聚集風險的方法，以獲得雙特異性抗原結合分子的穩定高濃度配製物。
令人驚訝的是，包含選自乙二胺四乙酸（EDTA）、二乙烯三胺五乙酸（DTPA）和檸檬酸的穩定劑（其中該穩定劑較佳的是以0.005%至0.25%（w/v），較佳的是0.01%至0.2%（w/v）的範圍內的濃度存在）的液體藥物組成物確保在約8至35 mg/ml的較高濃度下雙特異性抗原結合分子產品品質改善，因此促進 (i.) 在有限的體積內的更高劑量導致需要高濃度穩定藥物的藥物應用，如向有需要的患者皮下投與，以及 (ii.) 包含雙特異性抗原結合分子（如scFc BiTE ®分子）的液體、凍乾和重構藥物組成物的生產和儲存消耗更少的資源。
因此，在一方面，在本發明之上下文中設想提供 液體藥物組成物，其包含 (a) 包含至少三個結構域的雙特異性抗原結合分子，其中： •   第一結構域與靶細胞表面抗原結合，其中該靶細胞表面抗原係腫瘤抗原； •   第二結構域與人和/或獼猴CD3鏈的細胞外表位結合；並且 •   第三結構域包含兩個多肽單體，每個多肽單體包含鉸鏈、CH2結構域和CH3結構域，其中所述兩個多肽單體經由肽連接子（linker）彼此融合，並且其中所述第三結構域按胺基至羧基順序包含： 鉸鏈-CH2-CH3-連接子-鉸鏈-CH2-CH3； 其中該雙特異性抗原結合分子的濃度係8至35 mg/ml； (b) 至少一種緩衝劑； (c) 至少一種糖；以及 (d) 選自乙二胺四乙酸（EDTA）、二乙烯三胺五乙酸（DTPA）和檸檬酸的至少一種穩定劑，其中該穩定劑以0.005%至0.25%（w/v），較佳的是0.01%至0.2%（w/v）的範圍內的濃度存在； 並且其中該藥物組成物的pH在4.0至6.0的範圍內。
根據所述方面，還設想雙特異性抗原結合分子係單鏈分子。
根據所述方面，還設想雙特異性抗原結合分子的半衰期延長。
根據所述方面，還設想雙特異性抗原結合分子的第三結構域中CH2結構域的Kabat位置314處的糖基化位點藉由N314X取代被去除，其中X係除Q之外的任何胺基酸。
根據所述方面，還設想第三結構域的所述多肽單體中的每一個具有與選自由SEQ ID NO: 17-24組成之群組的序列同一性為至少90%的胺基酸序列，或具有選自由SEQ ID NO: 17-24組成之群組的胺基酸序列。
根據所述方面，還設想CH2結構域包含結構域內半胱胺酸二硫橋。
根據所述方面，還設想腫瘤抗原選自由以下組成之群組：CDH19、CDH3、MSLN、DLL3、FLT3、EGFRvIII、BCMA、PSMA、CD33、CD19、CD20、CLDN18.2、MUC17、EpCAM、CD70和CLDN6。
根據所述方面，還設想第二結構域係人和/或獼猴CD3ε鏈的細胞外表位。
根據所述方面，還設想 (i) 第一結構域包含兩個抗體可變結構域，並且第二結構域包含兩個抗體可變結構域； (ii)       第一結構域包含一個抗體可變結構域，並且第二結構域包含兩個抗體可變結構域； (iii)      第一結構域包含兩個抗體可變結構域，並且第二結構域包含一個抗體可變結構域；或者 (iv)      第一結構域包含一個抗體可變結構域，並且第二結構域包含一個抗體可變結構域。
根據所述方面，還設想抗體構建體按胺基至羧基順序包含： (a) 第一結構域； (b) 肽連接子，該肽連接子具有選自由SEQ ID NO: 187-189組成之群組的胺基酸序列； (c) 第二結構域； (d) 肽連接子，該肽連接子具有選自由以下組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID NO: 187、188、189、195、196、197和198； (e) 第三結構域的第一多肽單體； (f) 肽連接子，該肽連接子具有選自由以下組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID NO: 191、192、193和194；以及 (g) 第三結構域的第二多肽單體。
根據所述方面，還設想構建體的第一結合結構域包含含有選自由以下組成之群組的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的VH區和含有選自由以下組成之群組的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的VL區： (a) 如SEQ ID NO: 4中所描繪的CDR-H1、如SEQ ID NO: 5中所描繪的CDR-H2、如SEQ ID NO: 6中所描繪的CDR-H3、如SEQ ID NO: 1中所描繪的CDR-L1、如SEQ ID NO: 2中所描繪的CDR-L2和如SEQ ID NO: 3中所描繪的CDR-L3， (b) 如SEQ ID NO: 29中所描繪的CDR-H1、如SEQ ID NO: 30中所描繪的CDR-H2、如SEQ ID NO: 31中所描繪的CDR-H3、如SEQ ID NO: 34中所描繪的CDR-L1、如SEQ ID NO: 35中所描繪的CDR-L2和如SEQ ID NO: 36中所描繪的CDR-L3， (c) 如SEQ ID NO: 42中所描繪的CDR-H1、如SEQ ID NO: 43中所描繪的CDR-H2、如SEQ ID NO: 44中所描繪的CDR-H3、如SEQ ID NO: 45中所描繪的CDR-L1、如SEQ ID NO: 46中所描繪的CDR-L2和如SEQ ID NO: 47中所描繪的CDR-L3， (d) 如SEQ ID NO: 53中所描繪的CDR-H1、如SEQ ID NO: 54中所描繪的CDR-H2、如SEQ ID NO: 55中所描繪的CDR-H3、如SEQ ID NO: 56中所描繪的CDR-L1、如SEQ ID NO: 57中所描繪的CDR-L2和如SEQ ID NO: 58中所描繪的CDR-L3， (e) 如SEQ ID NO: 65中所描繪的CDR-H1、如SEQ ID NO: 66中所描繪的CDR-H2、如SEQ ID NO: 67中所描繪的CDR-H3、如SEQ ID NO: 68中所描繪的CDR-L1、如SEQ ID NO: 69中所描繪的CDR-L2和如SEQ ID NO: 70中所描繪的CDR-L3， (f) 如SEQ ID NO: 83中所描繪的CDR-H1、如SEQ ID NO: 84中所描繪的CDR-H2、如SEQ ID NO: 85中所描繪的CDR-H3、如SEQ ID NO: 86中所描繪的CDR-L1、如SEQ ID NO: 87中所描繪的CDR-L2和如SEQ ID NO: 88中所描繪的CDR-L3， (g) 如SEQ ID NO: 94中所描繪的CDR-H1、如SEQ ID NO: 95中所描繪的CDR-H2、如SEQ ID NO: 96中所描繪的CDR-H3、如SEQ ID NO: 97中所描繪的CDR-L1、如SEQ ID NO: 98中所描繪的CDR-L2和如SEQ ID NO: 99中所描繪的CDR-L3， (h) 如SEQ ID NO: 105中所描繪的CDR-H1、如SEQ ID NO: 106中所描繪的CDR-H2、如SEQ ID NO: 107中所描繪的CDR-H3、如SEQ ID NO: 109中所描繪的CDR-L1、如SEQ ID NO: 110中所描繪的CDR-L2和如SEQ ID NO: 111中所描繪的CDR-L3， (i) 如SEQ ID NO: 115中所描繪的CDR-H1、如SEQ ID NO: 116中所描繪的CDR-H2、如SEQ ID NO: 117中所描繪的CDR-H3、如SEQ ID NO: 118中所描繪的CDR-L1、如SEQ ID NO: 119中所描繪的CDR-L2和如SEQ ID NO: 120中所描繪的CDR-L3， (j) 如SEQ ID NO: 126中所描繪的CDR-H1、如SEQ ID NO: 127中所描繪的CDR-H2、如SEQ ID NO: 128中所描繪的CDR-H3、如SEQ ID NO: 129中所描繪的CDR-L1、如SEQ ID NO: 130中所描繪的CDR-L2和如SEQ ID NO: 131中所描繪的CDR-L3， (k) 如SEQ ID NO: 137中所描繪的CDR-H1、如SEQ ID NO: 138中所描繪的CDR-H2、如SEQ ID NO: 139中所描繪的CDR-H3、如SEQ ID NO: 140中所描繪的CDR-L1、如SEQ ID NO: 141中所描繪的CDR-L2和如SEQ ID NO: 142中所描繪的CDR-L3， (l) 如SEQ ID NO: 152中所描繪的CDR-H1、如SEQ ID NO: 153中所描繪的CDR-H2、如SEQ ID NO: 154中所描繪的CDR-H3、如SEQ ID NO: 155中所描繪的CDR-L1、如SEQ ID NO: 156中所描繪的CDR-L2和如SEQ ID NO: 157中所描繪的CDR-L3， (m)      如SEQ ID NO: 167中所描繪的CDR-H1、如SEQ ID NO: 168中所描繪的CDR-H2、如SEQ ID NO: 169中所描繪的CDR-H3、如SEQ ID NO: 170中所描繪的CDR-L1、如SEQ ID NO: 171中所描繪的CDR-L2和如SEQ ID NO: 172中所描繪的CDR-L3， (n) 如SEQ ID NO: 203中所描繪的CDR-H1、如SEQ ID NO: 204中所描繪的CDR-H2、如SEQ ID NO: 205中所描繪的CDR-H3、如SEQ ID NO: 206中所描繪的CDR-L1、如SEQ ID NO: 207中所描繪的CDR-L2和如SEQ ID NO: 208中所描繪的CDR-L3； (o) 如SEQ ID NO: 214中所描繪的CDR-H1、如SEQ ID NO: 215中所描繪的CDR-H2、如SEQ ID NO: 216中所描繪的CDR-H3、如SEQ ID NO: 217中所描繪的CDR-L1、如SEQ ID NO: 218中所描繪的CDR-L2和如SEQ ID NO: 219中所描繪的CDR-L3； (p) 如SEQ ID NO: 226中所描繪的CDR-H1、如SEQ ID NO: 227中所描繪的CDR-H2、如SEQ ID NO: 228中所描繪的CDR-H3、如SEQ ID NO: 229中所描繪的CDR-L1、如SEQ ID NO: 230中所描繪的CDR-L2和如SEQ ID NO: 231中所描繪的CDR-L3； (q) 如SEQ ID NO: 238中所描繪的CDR-H1、如SEQ ID NO: 239中所描繪的CDR-H2、如SEQ ID NO: 240中所描繪的CDR-H3、如SEQ ID NO: 241中所描繪的CDR-L1、如SEQ ID NO: 242中所描繪的CDR-L2和如SEQ ID NO: 243中所描繪的CDR-L3；以及 (r) 如SEQ ID NO: 248中所描繪的CDR-H1、如SEQ ID NO: 249中所描繪的CDR-H2、如SEQ ID NO: 250中所描繪的CDR-H3、如SEQ ID NO: 251中所描繪的CDR-L1、如SEQ ID NO: 252中所描繪的CDR-L2和如SEQ ID NO: 253中所描繪的CDR-L3。
根據所述方面，還設想雙特異性抗原結合分子的濃度係10至35或15至31 mg/ml，更較佳的是20至30 mg/ml或25至30 mg/ml。
根據所述方面，還設想EDTA的濃度在0.01%至0.2%（w/V）的範圍內，較佳的是在0.01%至0.16%（w/V）的範圍內，更較佳的是0.04%（w/V）。
根據所述方面，還設想至少一種緩衝劑係選自由以下組成之群組的酸：乙酸鹽、麩胺酸鹽、檸檬酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、組胺酸、磷酸鹽、2-(N-𠰌啉代)乙磺酸鹽或其組合，較佳的是麩胺酸鹽。
根據所述方面，還設想至少一種緩衝劑以5至200 mM的濃度範圍，更較佳的是以10至50 mM的濃度範圍，較佳的是以15 mM存在。
根據所述方面，還設想至少一種糖選自由以下組成之群組：單糖、二糖、環狀多糖、糖醇、線性支鏈葡聚糖或線性非支鏈葡聚糖。
根據所述方面，還設想二糖選自由以下組成之群組：蔗糖和海藻糖及其組合，較佳的是蔗糖。
根據所述方面，還設想糖醇選自由以下組成之群組：甘露醇和山梨醇及其組合。
根據所述方面，還設想至少一種糖以1%至15%（w/V）的範圍內的濃度，較佳的是以8%至12%（w/V）的濃度範圍如8%（w/V）存在。
根據所述方面，還設想進一步包含選自由以下組成之群組的至少一種表面活性劑：聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯80、泊洛沙姆（poloxamer）188、普朗尼克（pluronic）F68、曲拉通（triton）X-100、聚氧乙烯、PEG 3350、PEG 4000及其組合。
根據所述方面，還設想組成物包含至少一種表面活性劑，該至少一種表面活性劑的濃度在0.004%至0.5%（w/V）的範圍內，較佳的是在0.01%至0.1%（w/V）的範圍內。
根據所述方面，還設想組成物的pH在4.0至5.3，較佳的是4.2至5.2，更較佳的是4.3至4.6的範圍內。
根據所述方面，還設想藥物組成物具有在150至500 mOsm的範圍內的滲透壓。
根據所述方面，還設想藥物組成物進一步包含選自由以下組成之群組的賦形劑：一種或多種多元醇，較佳的是羥丙基-ß-環糊精；和一種或多種胺基酸，較佳的是苯丙胺酸，但較佳的是不是精胺酸、脯胺酸和色胺酸。
根據所述方面，還設想所述一種或多種賦形劑以0.1%至15%（w/V）的濃度範圍存在。
根據所述方面，還設想組成物包含 (a) 根據本發明之雙特異性抗原結合分子，其濃度在8至35 mg/ml，較佳的是15至30 mg/ml的範圍內， (b) 15 mM麩胺酸鹽或乙酸鹽， (c) 8%（w/V）蔗糖或8%（w/V）蔗糖和1%（w/V）羥丙基-β-環糊精， (d) 視需要0.01%（w/V）聚山梨醇酯80 並且其中液體藥物組成物的pH係4.0至5.2，較佳的是4.2至4.6或4.3至4.6的範圍內的任何值。
根據另一方面，還設想固體藥物組成物可藉由凍乾本發明之液體藥物組成物獲得。
根據另一方面，還設想液體藥物組成物可藉由用藥學上可接受的液體重構根據本發明之固體藥物組成物獲得。
根據另一方面，還設想本發明之藥物組成物用於在治療疾病，較佳的是增殖性疾病如癌症中使用，較佳的是藉由靜脈內或皮下投與。
根據另一方面，還設想本發明之液體藥物組成物用於減少儲存期間高分子量物質（HMWS）的形成，其中如果該液體藥物組成物儲存在4°C或低於4°C，較佳的是在-30°C或低於-30°C，則HMWS的量保持低於5%，較佳的是低於3%或2%。
為了增加遞送雙特異性抗原結合分子（如半衰期延長的（HLE）scFc BiTE®分子）的便利性，強烈希望提供皮下液體配製物。然而，通常需要高濃度配製物來滿足有限的體積內所需的劑量。與高達70 mg/ml的mAb的典型濃度不同，將雙特異性抗原結合分子典型地以約1至5 mg/ml（0.1至0.5%（w/v））的最終重構濃度進行凍乾。此外，與mAb相比，人工雙特異性抗原結合分子在產品製造、儲存以及用於投與期間更容易發生聚集。在液體藥物組成物中配製濃度高於約5 mg/ml（w/v）的雙特異性抗原結合分子並最小化不希望的聚集係具有挑戰性的。
因此，令人驚訝的是，濃度顯著高於5 mg/ml且高達約35 mg/ml的雙特異性抗原結合分子（如HLE BiTE®分子）係穩定的，即發現該等雙特異性抗原結合分子在關於pH、孵育溫度和時間段的相同測試條件下，相對於配製物對照，在優化的配製物中顯示出顯著更低的%HMW。例如，分別對於DLL3xCD3、MUC17xCD3和BCMAxCD3雙特異性抗原結合分子，與對照配製物相比，具有螯合特性的穩定劑如EDTA（乙二胺四乙酸）在4週內顯著降低了%HMW。為了說明，在時間t = 0時，27 mg/m且pH 5.2的BCMAxCD3雙特異性抗原結合分子在用EDTA作為穩定劑時顯示出約2%的HMW，而不含EDTA、ETPA或檸檬酸等的藥物組成物顯示出約12%的HMW。其他測試的賦形劑（如羥丙基-ß-環糊精（HpbCD）和胺基酸苯丙胺酸（Phe）在某些條件（特別是pH接近4而不是5）下也顯示出一定的%HMW緩解，但低於具有螯合特性的穩定劑。另一方面，Arg HCl藉由增加%HMW來促進聚集。與不含（潛在）穩定劑的對照緩衝液相比，其他測試的賦形劑（如Trp和Pro）似乎對%HMW沒有影響。
本發明首次表明，提供僅藉由添加一種選擇的穩定劑而優化的配製物可以降低液體形式中這樣高濃度的各種雙特異性抗原結合分子的%HMW，並且該等雙特異性抗原結合分子可以用於額外的投與目的，並且與常規的mAb相比，可以克服雙特異性抗原結合分子的濃度相關的穩定性缺點。
在本發明之上下文中，藉由添加穩定劑，較佳的是EDTA、DFPA或檸檬酸，令人驚訝地實現了將雙特異性抗原結合分子穩定在高於5 mg/ml的濃度，如這樣的分子（例如，BiTE分子）典型地實現的濃度，即8 mg/ml及以上，例如8、9、10、11、12、13、14 mg/ml，較佳的是甚至在15至35 mg/ml，即15、16、17、18、19、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34或35 mg/ml。這係令人驚訝的，因為除了作為螯合劑的能力之外，螯合劑（如EDTA）以前還被用於減少mAb中的氧化應激。雖然氧化作為所討論的分子的化學修飾可能有助於所述分子的變化，但蛋白質聚集係一種複雜的現象，可能藉由不同的機制經歷不同的途徑。本發明之雙特異性抗原結合分子未配製在包含本文所述穩定劑的藥物組成物中時，確實顯示出隨時間增加的%HMWS，如藉由SE-UHPLC測定的（參見表1）。然而，在根據本發明之雙特異性抗原結合分子中沒有觀察到脫醯胺化（例如N350和N353）或氧化（例如在甲硫胺酸位置M281處）方面的化學修飾。不希望受理論的束縛，穩定化的基本原理在於具有螯合性質的穩定劑與CD3結合結構域的相互作用。如藉由差示掃描螢光測定法（DSF）測量（即鑒定結合並穩定純化蛋白質的低分子量配體的典型快速篩選方法）所確定的，本發明之雙特異性抗原結合分子的融合溫度Tm典型地在穩定劑（如EDTA）存在下升高，表明CD3結合結構域的構象穩定性增加。因此，本發明之分子（如SEQ ID NO: 104和SEQ ID NO: 258，其具有甚至不同的CD3結合結構域，在序列表（表5）中分別縮寫為I2C和I2E）均藉由本發明具有螯合性質的穩定劑（如EDTA）穩定化。 [表1]：在沒有隨時間發生化學修飾的情況下，示例性雙特異性抗原結合分子隨時間形成%HMW的概述。•
在本發明之上下文中，HMWS主要是二聚體，其具有相似的單體構象，並且可以被認為係天然狀態二聚體。在本發明之上下文中理解的HMWS係高度可逆的，即對於多個雙特異性抗原結合分子，在25°C下解凍後保持24小時後，二聚體將解離成單體。如示例性表1所示，HMWS增加，而化學修飾（Met氧化或脫醯胺化）沒有相應增加。
有利地，本發明之藥物組成物能夠在更高濃度下甚至在更高的pH值下穩定雙特異性抗原結合分子如HLE BiTE分子，這對於特定的投與環境（其中藥物組成物的過低pH值係不可行的或者其中特定雙特異性抗原結合分子的穩定性需要比約4稍高的pH值，例如4.6或5.2）可能是有益的。
雙特異性抗原結合分子濃度可在8至35 mg/ml，較佳的是15至30 mg/ml的範圍內。穩定劑如EDTA的濃度可以在約0.005%至0.25%（w/v）的範圍內，其中根據適用的指南，認為上限對人投與係安全的。EDTA可以以鹽的形式存在，例如EDTA二鈉、依地酸鈣鈉（sodium calcium edetate）和EDTA四鈉，較佳的是EDTA二鈉。
根據本發明之雙特異性抗原結合分子如ScFc-BiTE®分子典型地含有Fc區，該等雙特異性抗原結合分子的大小、pI和疏水性與IgG抗體的相應區域類似。IgG抗體從宿主細胞蛋白（HCP）、其他生物反應器雜質和試劑、高分子量（HMW）物質或聚集物、低分子量物質或剪切物中的一般下游加工係本領域已知的（Shukla等人 2006）。這樣的下游加工已適於純化雙特異性抗原結合分子如scFc-BITE®，該加工典型地包括以下步驟：細胞培養物收穫；蛋白A層析法；過濾病毒失活；第二柱層析精製步驟或兩個，例如CEX；病毒過濾；UF/DF
術語「抗體產物」係指「分泌的蛋白」或「分泌的重組蛋白」，並且是指在哺乳動物細胞中翻譯時最初含有至少一個分泌訊息序列，並且至少部分地藉由酶促切割哺乳動物細胞中的分泌訊息序列，將其至少部分地分泌到細胞外空間（例如，液體培養基）中的蛋白（例如重組蛋白）。熟練的從業人員將理解，「分泌的」蛋白質無需完全從細胞中解離，就可以認為係分泌的蛋白。
術語雙特異性抗體產物涵蓋雙特異性抗體，如全長例如基於IgG的抗體及其片段，在本文中典型地稱為雙特異性抗原結合分子。
術語「抗原結合分子」係指其中結構和/或功能基於抗體（例如全長或完整免疫球蛋白分子）的結構和/或功能和/或從抗體或其片段的可變重鏈（VH）和/或可變輕鏈（VL）結構域中提取的分子。因此，抗原結合分子能夠與其特異性靶標或抗原結合。此外，根據本發明之抗原結合分子的結合結構域包含允許靶結合的抗體的最小結構要求。這種最小要求可以例如藉由至少三個輕鏈CDR（即VL區的CDR1、CDR2和CDR3）和/或三個重鏈CDR（即VH區的CDR1、CDR2和CDR3），較佳的是全部六個CDR的存在來定義。定義抗體的最小結構要求的可替代方法係分別定義特異性靶結構內的抗體表位、構成表位區（表位簇）的靶蛋白的蛋白結構域或藉由參考與所定義抗體的表位競爭的特異性抗體。根據本發明之構建體所基於的抗體包括例如單株抗體、重組抗體、嵌合抗體、去免疫抗體、人源化抗體和人抗體。
根據本發明之抗原結合分子的結合結構域可以例如包含以上提到的CDR組。較佳的是，那些CDR包含在抗體輕鏈可變區（VL）和抗體重鏈可變區（VH）的框架中；然而，它不一定包含兩者。例如，Fd片段具有兩個VH區並且通常保留完整抗原結合結構域的一些抗原結合功能。抗體片段、抗體變體或結合結構域的形式的另外實例包括 (1) Fab片段，一種具有VL、VH、CL和CH1結構域的單價片段；(2) F(ab') 2片段，一種具有由二硫橋在鉸鏈區連接的兩個Fab片段的二價片段；(3) 具有兩個VH和CH1結構域的Fd片段；(4) 具有抗體的單臂的VL和VH結構域的Fv片段；(5) 具有VH結構域的dAb片段（Ward等人, (1989) Nature[自然] 341 :544-546）；(6) 經分離的互補決定區（CDR），和 (7) 單鏈Fv（scFv），後者係較佳的（例如，衍生自scFV文庫）。根據本發明之抗原結合分子的實施方式的實例例如描述於以下中：WO 00/006605、WO 2005/040220、WO 2008/119567、WO 2010/037838、WO 2013/026837、WO 2013/026833、US 2014/0308285、US 2014/0302037、WO 2014/144722、WO 2014/151910和WO 2015/048272。
另外，在「結合結構域」或「結合的結構域」的定義內係全長抗體的片段，如VH、VHH、VL、(s)dAb、Fv、Fd、Fab、Fab’、F(ab')2或「r IgG」（「半抗體」）。根據本發明之抗原結合分子還可以包含修飾的抗體片段，也稱為抗體變體，如scFv、二-scFv或雙(二)-scFv、scFv-Fc、scFv-拉鍊、scFab、Fab 2、Fab 3、雙抗體、單鏈雙抗體、串聯雙抗體（Tandab）、串聯二-scFv、串聯三-scFv）、「多抗體」（如三抗體或四抗體）以及僅包含一個可變結構域（可以是VHH、VH或VL，獨立於其他V區或結構域特異性地結合抗原或表位）的單結構域抗體，如奈米抗體或單可變結構域抗體。
如本文使用的，術語「單鏈Fv」、「單鏈抗體」或「scFv」係指單多肽鏈抗體片段，該等抗體片段包含來自重鏈和輕鏈的可變區，但缺乏恒定區。一般來講，單鏈抗體在VH與VL結構域之間進一步包含多肽連接子，該多肽連接子使得其形成所希望的將允許抗原結合的結構。單鏈抗體詳細論述於以下中：Pluckthun, The Pharmacology of Monoclonal Antibodies [單株抗體的藥理學], 第113卷, Rosenburg和Moore編輯Springer-Verlag [施普林格出版社], 紐約, 第269-315頁 (1994)。產生單鏈抗體的各種方法係已知的，該等方法包括以下中所描述的那些：美國專利案號4,694,778和5,260,203；國際專利申請公開案號WO 88/01649；Bird (1988) Science [科學] 242:423-442；Huston等人 (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA [美國國家科學院院刊] 85:5879-5883；Ward等人 (1989) Nature [自然] 334:54454；Skerra等人 (1988) Science [科學] 242:1038-1041。在具體的實施方式中，單鏈抗體還可以是雙特異性的、多特異性的、人和/或人源化的和/或合成的。
此外，術語「抗原結合分子」的定義包括單價、二價和多價（polyvalent/multivalent）構建體，並且因此包括僅與兩個抗原結構特異性結合的雙特異性構建體，以及藉由不同的結合結構域特異性結合超過兩個（例如三個、四個或更多個）抗原結構的多特異性（polyspecific/multispecific）構建體。此外，術語「抗原結合分子」的定義包括由僅一條多肽鏈組成的分子以及由多於一條多肽鏈組成的分子，該等鏈可以是相同的（同二聚體、同三聚體或同寡聚體）或不同（異二聚體、異三聚體或異寡聚體）。以上鑒定的抗體和變體或其衍生物的實例尤其描述於Harlow和Lane, Antibodies a laboratory manual [抗體：實驗室手冊], CSHL Press [冷泉港實驗室出版社] (1988)和Using Antibodies: a laboratory manual [使用抗體：實驗室手冊], CSHL Press [冷泉港實驗室出版社] (1999)，Kontermann和Dübel, Antibody Engineering [抗體工程], Springer [施普林格出版社], 第2版 2010以及Little, Recombinant Antibodies for Immunotherapy [用於免疫療法的重組抗體], Cambridge University Press [劍橋大學出版社] 2009。
如本文使用的，術語「多肽」描述了一組分子，該等分子通常由超過30個胺基酸組成。多肽可以進一步形成多聚體，如二聚體、三聚體和更高級的寡聚體，即由多於一種多肽分子組成。形成此類二聚體、三聚體等的多肽分子可以是相同的或不相同的。因此，這種多聚體的相應高序結構稱為同或異二聚體、同或異三聚體等。異多聚體的實例係抗體分子，其天然存在的形式由兩條相同的多肽輕鏈和兩條相同的多肽重鏈組成。術語「肽」、「多肽」和「蛋白質」也是指天然修飾的肽/多肽/蛋白質，其中修飾係例如藉由翻譯後修飾（如糖基化、乙醯化、磷酸化等）來實現。當在本文中提及時，「肽」、「多肽」或「蛋白質」也可以是化學修飾的，如聚乙二醇化。此類修飾在本領域中是熟知的並且在下文描述。
如本文使用的，術語「雙特異性」係指「至少雙特異性」的抗原結合分子，即其至少包含第一結合結構域和第二結合結構域，其中第一結合結構域與一種抗原或靶（例如靶細胞表面抗原）結合，並且第二結合結構域與另一抗原或靶（例如CD3）結合。因此，根據本發明之抗原結合分子對至少兩種不同抗原或靶標具有特異性。例如，第一結構域較佳的是不與本文所述之物種中的一種或多種的CD3ε的細胞外表位結合。術語「靶細胞表面抗原」係指由細胞表現的抗原結構，其存在於細胞表面，使得其可接近如本文所述之抗原結合分子。其可以是蛋白質，較佳的是蛋白質的細胞外部分，或碳水化合物結構，較佳的是蛋白質的碳水化合物結構，如糖蛋白。其較佳的是腫瘤抗原。術語本發明之「雙特異性抗原結合分子」還涵蓋多特異性抗原結合分子，如三特異性抗原結合分子，後者包括三個結合結構域，或者具有多於三種（例如，四種、五種……）特異性的構建體。
鑒於根據本發明之抗原結合分子係（至少）雙特異性的，它們不是天然存在的，並且它們明顯不同於天然存在的產品。因此，「雙特異性」抗原結合分子或免疫球蛋白係含有具有不同特異性的至少兩個不同結合面的人工雜交抗體或免疫球蛋白。雙特異性抗原結合分子可以藉由多種方法（包括雜交瘤的融合或Fab'片段的連接）來產生。參見，例如Songsivilai和Lachmann, Clin. Exp. Immunol.[臨床實驗免疫學] 79:315-321 (1990)。
本發明之抗原結合分子的至少兩種結合結構域和可變結構域（VH/VL）可以包含或可以不包含肽連接子（間隔肽）。根據本發明，術語「肽連接子」包含胺基酸序列，本發明之抗原結合分子的一個（可變和/或結合）結構域和另一個（可變和/或結合）結構域的胺基酸序列藉由該胺基酸序列彼此連接。肽連接子也可用於將第三結構域與本發明之抗原結合分子的其他結構域融合。這種肽連接子的基本技術特徵在於它不包含任何聚合活性。合適的肽連接子係在美國專利4,751,180和4,935,233或WO 88/09344中描述的那些。肽連接子也可用於將其他結構域或模組或區（如半衰期延長的結構域）附接到本發明之抗原結合分子。
本發明之抗原結合分子較佳的是為「體外生成的抗原結合分子」。此術語係指根據上述定義的抗原結合分子，其中在非免疫細胞選擇中生成全部或部分可變區（例如，至少一個CDR），例如體外噬菌體展示、蛋白質晶片或可以測試候選序列結合抗原的能力的任何其他方法。因此，這個術語較佳的是排除僅由動物免疫細胞中的基因組重排產生的序列。「重組抗體」係藉由使用重組DNA技術或基因工程制得的抗體。
如本文使用的，術語「單株抗體」（mAb）或單株抗原結合分子係指從基本上均質的抗體群體獲得的抗體，即，除了可能少量存在的可能的天然存在的突變和/或翻譯後修飾（例如，異構化、醯胺化）以外，構成該群體的單獨抗體係相同的。與典型地包括針對不同決定簇（或表位）的不同抗體的常規（多株）抗體製劑相比，單株抗體針對抗原上的單一抗原側或決定簇具有高度特異性。除了它們的特異性之外，單株抗體還在它們藉由雜交瘤培養合成，因此不被其他免疫球蛋白污染方面係有優勢的。修飾語「單株」指示獲自實質上均質的抗體群體的抗體的特徵，並且不應理解為要求藉由任何特定方法產生抗體。
對於單株抗體的製備，可以使用提供由連續細胞系培養物產生的抗體的任何技術。例如，有待使用的單株抗體可以藉由Koehler等人, Nature [自然], 256: 495 (1975)首次描述的雜交瘤方法，或可以藉由重組DNA方法（參見，例如美國專利案號4,816,567）製備。用於產生人單株抗體的另外技術的實例包括三源雜交瘤技術、人B細胞雜交瘤技術（Kozbor, Immunology Today [今日免疫學] 4 (1983), 72）和EBV-雜交瘤技術（Cole等人, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy [單株抗體和癌症治療], Alan R. Liss公司 (1985), 77-96）。
然後可以使用標準方法（如酶聯免疫吸附測定（ELISA）和表面電漿共振（BIACORE™）分析）篩選雜交瘤，以鑒定一種或多種產生與指定抗原特異性結合的抗體的雜交瘤。任何形式的相關抗原均可以用作免疫原，例如重組抗原、天然存在形式、其任何變體或片段以及其抗原肽。如在BIAcore系統中使用的表面電漿共振可以用於增加與靶細胞表面抗原的表位結合的噬菌體抗體的效率（Schier, Human Antibodies Hybridomas [人抗體雜交瘤] 7 (1996), 97-105；Malmborg, J. Immunol. Methods [免疫學方法雜誌] 183 (1995), 7-13）。
另一種製備單株抗體的示例性方法包括篩選蛋白質表現文庫，例如噬菌體展示或核糖體展示文庫。噬菌體展示例如描述於以下中：Ladner等人, 美國專利案號5,223,409；Smith (1985) Science [科學] 228:1315-1317、Clackson等人, Nature [自然], 352: 624-628 (1991)和Marks等人, J. Mol. Biol. [分子生物學雜誌], 222: 581-597 (1991)。
除了使用展示文庫之外，還可以使用相關抗原來免疫非人動物，例如齧齒動物（如小鼠、倉鼠、兔或大鼠）。在一個實施方式中，非人動物包括人免疫球蛋白基因的至少一部分。例如，可能利用人Ig（免疫球蛋白）基因座的大片段來工程化小鼠抗體產生缺陷的小鼠品系。使用雜交瘤技術，可以產生並選擇衍生自具有所希望的特異性的基因的抗原特異性單株抗體。參見，例如，XENOMOUSE™、Green等人 (1994) Nature Genetics [自然遺傳學] 7:13-21、US 2003-0070185、WO 96/34096和WO 96/33735。
單株抗體也可以獲自非人動物，並且然後使用本領域中已知的重組DNA技術進行修飾，例如人源化、去免疫、呈現嵌合等。修飾的抗原結合分子的實例包括非人抗體的人源化變體，「親和力成熟」抗體（參見，例如Hawkins等人 J. Mol. Biol. [分子生物學雜誌] 254, 889-896 (1992)和Lowman等人, Biochemistry [生物化學] 30, 10832- 10837 (1991)）和具有改變的一種或多種效應功能的抗體突變體（參見，例如美國專利5,648,260、Kontermann和Dübel (2010), 上述引文和Little (2009),上述引文）。
在免疫學中，親和力成熟係這樣的過程：藉由該過程，在免疫應答的過程中B細胞產生與抗原的親和力增加的抗體。反復暴露於相同的抗原後，宿主會產生親和力依次更大的抗體。如天然原型一樣，體外親和力成熟係基於突變和選擇的原則。體外親和力成熟已經成功地用於優化抗體、抗原結合分子和抗體片段。使用輻射、化學誘變劑或易錯PCR在CDR內引入隨機突變。此外，遺傳多樣性可以藉由鏈改組來增加。使用展示方法（如噬菌體展示）進行兩輪或三輪突變和選擇通常產生具有在低納莫耳範圍內的親和力的抗體片段。
抗原結合分子的較佳的類型的胺基酸取代變異包括取代親本抗體（例如人源化或人抗體）的一個或多個高變區殘基。一般來講，選擇用於進一步開發的一種或多種所得變體相對於產生它們的親本抗體將具有改善的生物特性。用於產生此類取代變體的便利方式關於使用噬菌體展示的親和力成熟。簡而言之，將若干個高變區側端（例如6-7個側端）突變以在每個側端產生所有可能的胺基酸取代。由此產生的抗體變體以單價方式從絲狀噬菌體顆粒展示為與每個顆粒內包裝的M13的基因III產物的融合物。然後如本文所揭露那樣篩選噬菌體展示的變體的生物活性（例如結合親和力）。為了鑒定用於修飾的候選高變區側端，可以進行丙胺酸掃描誘變以鑒定對抗原結合有顯著貢獻的高變區殘基。可替代地或另外，分析抗原-抗體複合物的晶體結構以鑒定結合結構域與例如人靶細胞表面抗原之間的接觸點可能是有利的。根據本文闡述的技術，此類接觸殘基和相鄰殘基係用於取代的候選者。一旦產生了此類變體，就如本文所述對這組變體進行篩選，並且可以選擇在一種或多種相關測定中具有優異特性的抗體用於進一步的開發。
本發明之單株抗體和抗原結合分子具體包括「嵌合」抗體（免疫球蛋白），其中重鏈和/或輕鏈的一部分與衍生自特定物種或屬於特定抗體類別或亞類的抗體中的相應序列相同或同源，而一個或多條鏈的其餘部分與衍生自另一物種或屬於另一抗體類別或亞類的抗體中的相應序列相同或同源，以及此類抗體的片段，只要它們展現出所需生物活性即可（美國專利案號4,816,567；Morrison等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA [美國國家科學院院刊] 81: 6851-6855 (1984)）。本文感興趣的嵌合抗體包括「靈長類化」抗體，該等抗體包含衍生自非人靈長類動物（例如，舊大陸猴、猿等）的可變結構域抗原結合序列和人恒定區序列。已經描述了多種用於製備嵌合抗體的方法。參見，例如，Morrison等人, Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A. [美國國家科學院院刊] 81:6851 , 1985；Takeda等人, Nature [自然] 314:452, 1985；Cabilly等人, 美國專利案號4,816,567；Boss等人, 美國專利案號4,816,397；Tanaguchi等人, EP 0171496；EP 0173494；和GB 2177096。
抗體、抗原結合分子、抗體片段或抗體變體還可以藉由例如WO 98/52976或WO 00/34317中揭露的方法特定地缺失人T細胞表位（稱為「去免疫」的方法）來進行修飾。簡而言之，可以針對與II類MHC結合的肽分析抗體的重鏈和輕鏈可變結構域；該等肽代表潛在的T細胞表位（如WO 98/52976和WO 00/34317中所定義）。為了檢測潛在T細胞表位，可以應用稱為「肽穿線」的電腦建模方法，並且此外針對VH和VL序列中存在的模體，可以搜索人MHC Il類結合肽的數據庫，如WO 98/52976和WO 00/34317中所述。該等模體與18種主要的MHC Il類DR同種異型中的任一種結合，並且因此構成潛在T細胞表位。檢測到的潛在T細胞表位可以藉由取代可變結構域中的少量胺基酸殘基，或者較佳的是藉由單個胺基酸取代來消除。典型地，進行保守取代。通常但不排他地，可以使用與人種系抗體序列中的位置共有的胺基酸。人種系序列例如揭露於以下中：Tomlinson等人 (1992) J. MoI.Biol. [分子生物學雜誌] 227:776-798；Cook, G.P.等人 (1995) Immunol. Today [當代免疫]第16 (5)卷: 237-242；和Tomlinson等人 (1995) EMBO J. [歐洲分子生物學學會雜誌] 14: 14:4628-4638。V BASE目錄提供了人免疫球蛋白可變區序列的綜合目錄（由Tomlinson, LA.等人 MRC Centre for Protein Engineering [MRC蛋白質工程中心], Cambridge, UK [英國劍橋] 編譯）。該等序列可以用作人序列的來源，例如用於框架區和CDR。也可以使用共有的人框架區，例如如美國專利案號6,300,064中所述。
「人源化」抗體、抗原結合分子、其變體或片段（如Fv、Fab、Fab'、F(ab')2或抗體的其他抗原結合子序列）係大多數人序列的抗體或免疫球蛋白，其含有一個或多個源自非人免疫球蛋白的最小序列。對於大部分來說，人源化抗體係人免疫球蛋白（受體抗體），其中來自受體的高變區（也稱為CDR）的殘基被來自非人（例如齧齒動物）物種（供體抗體）（如小鼠、大鼠、倉鼠或兔）的具有所希望的特異性、親和力和能力的高變區的殘基替換。在一些情況下，人免疫球蛋白的Fv框架區(FR)殘基被相應的非人類殘基替換。此外，如本文使用的，「人源化抗體」還可以包括在受體抗體或供體抗體中均未發現的殘基。進行該等修飾以進一步改善和優化抗體性能。人源化抗體還可以包含典型地是人免疫球蛋白的免疫球蛋白恒定區（Fc）的至少一部分。對於更多的細節，參見Jones等人, Nature [自然], 321: 522-525 (1986)；Reichmann等人, Nature [自然], 332: 323-329 (1988)；和Presta, Curr.Op.Struct.Biol. [結構生物學新見], 2: 593-596 (1992)。
人源化抗體或其片段可以藉由用人Fv可變結構域的等效序列替換不直接參與抗原結合的Fv可變結構域的序列來產生。用於產生人源化抗體或其片段的示例性方法由以下提供：Morrison (1985) Science [科學] 229:1202-1207；Oi等人 (1986) BioTechniques [生物技術] 4:214；以及US 5,585,089；US 5,693,761；US 5,693,762；US 5,859,205；以及US 6,407,213。那些方法包括分離、操縱和表現編碼來自重鏈或輕鏈中的至少一者的全部或部分免疫球蛋白Fv可變結構域的核酸序列。此類核酸可以獲自如上所述之產生針對預定靶的抗體的雜交瘤，以及其他來源。然後可以將編碼人源化抗體分子的重組DNA選殖到適當的表現載體中。
人源化抗體還可以使用轉基因動物（如表現人重鏈和輕鏈基因但不能表現內源性小鼠免疫球蛋白重鏈和輕鏈基因的小鼠）產生。Winter描述了可用於製備本文所述之人源化抗體的示例性CDR移植方法（美國專利案號5,225,539）。特定人抗體的全部CDR可以用至少一部分非人CDR替換，或者僅一些CDR可以用非人CDR替換。僅需要替換用於將人源化抗體與預定抗原結合所需的CDR數量。
可以藉由引入保守取代、共有序列取代、種系取代和/或回復突變來優化人源化抗體。此類改變的免疫球蛋白分子可以藉由本領域已知的幾種技術中的任何一種來製備（例如，Teng等人, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.[美國國家科學院院刊], 80: 7308-7312, 1983；Kozbor等人, Immunology Today [今日免疫學], 4: 7279, 1983；Olsson等人, Meth. Enzymol.[酶學方法], 92: 3-16, 1982，以及EP 239 400）。
術語「人抗體」、「人抗原結合分子」和「人結合結構域」包括抗體、抗原結合分子和具有抗體區域（如可變區和恒定區）的結合結構域或基本上對應於本領域已知的人種系免疫球蛋白序列的結構域，該人種系免疫球蛋白序列包括例如Kabat等人 (1991)（在上述引文中）描述的那些。本發明之人抗體、抗原結合分子或結合結構域可以包括例如在CDR中、並且特別是在CDR3中不由人種系免疫球蛋白序列編碼的胺基酸殘基（例如，藉由體外隨機或側特異性誘變或藉由體內體細胞突變引入的突變）。人抗體、抗原結合分子或結合結構域可以具有至少一個、兩個、三個、四個、五個或更多個被胺基酸殘基替代的位置，該胺基酸殘基不由人種系免疫球蛋白序列編碼。然而，如本文使用的人抗體、抗原結合分子和結合結構域的定義還涵蓋「完全人抗體」，該等完全人抗體僅包含非人工和/或遺傳改變的人抗體序列，如可藉由使用例如Xenomouse技術或系統衍生的那些。較佳的是，「完全人抗體」不包括不由人種系免疫球蛋白序列編碼的胺基酸殘基。
在一些實施方式中，本發明之抗原結合分子係「分離的」或「基本上純的」抗原結合分子。在用於描述本文揭露的抗原結合分子時，「分離的」或「基本上純的」意味著抗原結合分子已經從其產生環境的組分鑒定、分離和/或回收。較佳的是，抗原結合分子不含來自其生產環境的所有其他組分或基本上不與來自其生產環境的所有其他組分相關。其產生環境的污染組分，如由重組轉染細胞產生的污染組分，係典型地干擾多肽的診斷或治療用途的物質，並且可以包括酶、激素和其他蛋白質或非蛋白質溶質。抗原結合分子可以例如占給定樣本中總蛋白質的按重量計至少約5%或至少約50%。應理解，根據情況，分離的蛋白質可以占總蛋白質含量的5重量%至99.9重量%。藉由使用誘導型啟動子或高表現啟動子，能以顯著更高的濃度製備多肽，以使得它以增加的濃度水平製備。該定義包括在本領域已知的多種生物和/或宿主細胞中產生抗原結合分子。在較佳的實施方式中，將抗原結合分子 (1) 純化至足以藉由使用旋轉杯定序儀獲得至少15個N末端或內部胺基酸序列殘基的程度，或 (2) 藉由SDS-PAGE在非還原或還原條件下使用考馬斯藍或較佳的是銀染色來純化至均勻。然而，通常藉由至少一個純化步驟來製備分離的抗原結合分子。
術語「結合結構域」關於本發明表徵了（特異性地）結合/相互作用/識別靶分子（抗原）（例如分別為CD33和CD3）上的給定靶表位或給定靶側端的結構域。第一結合結構域（識別例如CD33）的結構和功能以及較佳的是還有第二結合結構域（例如識別CD3）的結構和/或功能係基於抗體，例如全長或完整免疫球蛋白分子的結構和/或功能，和/或係從抗體或其片段的可變重鏈（VH）和/或可變輕鏈（VL）結構域中提取。較佳的是，第一結合結構域的特徵在於存在三個輕鏈CDR（即VL區的CDR1、CDR2和CDR3）和/或三個重鏈CDR（即VH區的CDR1、CDR2和CDR3）。第二結合結構域較佳的是還包含允許靶結合的抗體的最小結構要求。更較佳的是，第二結合結構域包含至少三個輕鏈CDR（即VL區的CDR1、CDR2和CDR3）和/或三個重鏈CDR（即VH區的CDR1、CDR2和CDR3）。設想第一結合結構域和/或第二結合結構域係藉由噬菌體展示或文庫篩選方法產生或可獲得的，而不是藉由將CDR序列從預先存在的（單株）抗體移植到支架中產生或可獲得的。
根據本發明，結合結構域呈一種或多種多肽的形式。此類多肽可以包括蛋白質部分和非蛋白質部分（例如化學連接子或化學交聯劑，如戊二醛）。蛋白質（包括其片段、較佳的是生物活性片段和通常具有少於30個胺基酸的肽）包含經由共價肽鍵彼此偶聯的兩個或更多個胺基酸（產生胺基酸鏈）。
如本文使用的，術語「多肽」描述了一組分子，該等分子通常由超過30個胺基酸組成。多肽可以進一步形成多聚體，如二聚體、三聚體和更高級的寡聚體，即由多於一種多肽分子組成。形成此類二聚體、三聚體等的多肽分子可以是相同的或不相同的。因此，這種多聚體的相應高序結構稱為同或異二聚體、同或異三聚體等。異多聚體的實例係抗體分子，其天然存在的形式由兩條相同的多肽輕鏈和兩條相同的多肽重鏈組成。術語「肽」、「多肽」和「蛋白質」也是指天然修飾的肽/多肽/蛋白質，其中修飾係例如藉由翻譯後修飾（如糖基化、乙醯化、磷酸化等）來實現。當在本文中提及時，「肽」、「多肽」或「蛋白質」也可以是化學修飾的，如聚乙二醇化。此類修飾在本領域中是熟知的並且在下文描述。
較佳的是，結合靶細胞表面抗原的結合結構域和/或結合CD3ε的結合結構域係人結合結構域。包含至少一種人結合結構域的抗體和抗原結合分子避免了與具有非人如齧齒動物（例如鼠、大鼠、倉鼠或兔）可變區和/或恒定區的抗體或抗原結合分子相關的一些問題。這種齧齒動物來源的蛋白質的存在可以導致抗體或抗原結合分子的快速清除，或者可以導致患者生成針對抗體或抗原結合分子的免疫應答。為了避免使用齧齒動物衍生的抗體或抗原結合分子，可以藉由將人抗體功能引入到齧齒動物中以使齧齒動物產生完全人抗體來產生人或完全人抗體/抗原結合分子。
在YAC中選殖和重組兆鹼基大小的人基因座並將它們引入到小鼠種系中的能力為闡明非常大或粗略定位的基因座的功能組分以及產生有用的人疾病模型提供了強有力的方法。此外，使用這種技術將小鼠基因座取代為其人等效物可以提供關於人基因產物在發育過程中的表現和調控、其與其他系統的通信以及其參與疾病誘導和進展的獨特見解。
這種策略的重要實際應用係小鼠體液免疫系統的「人源化」。將人免疫球蛋白（Ig）基因座引入到其中內源性Ig基因已經失活的小鼠中提供了研究抗體的程式化表現和組裝的根本機制以及其在B細胞發育中的作用的機會。此外，這種策略可以為完全人單株抗體（mAb）的產生提供理想來源-這係有助於實現抗體療法在人疾病中的前景的重要里程碑。預期完全人抗體或抗原結合分子將小鼠或小鼠衍生的mAb所固有的免疫原性和變應性應答最小化，並且由此增加投與的抗體/抗原結合分子的功效和安全性。可以預期使用完全人抗體或抗原結合分子在治療需要重複化合物投與的慢性和復發性人類疾病如炎症、自體免疫和癌症方面提供了顯著優勢。
實現這一目標的一種方法係用人Ig基因座的大片段工程化小鼠抗體產生缺陷的小鼠品系，預期這種小鼠在不存在小鼠抗體的情況下將產生大的人抗體組庫。大的人Ig片段將保持大的可變基因多樣性以及對抗體產生和表現的適當調控。藉由利用小鼠機構實現抗體多樣化和選擇以及缺乏對人蛋白質的免疫耐受性，在該等小鼠品系中再生的人抗體組庫應產生針對任何感興趣的抗原（包括人抗原）的高親和力抗體。使用雜交瘤技術，可以容易地產生和選擇具有所希望特異性的抗原特異性人mAb。結合第一種XenoMouse小鼠品系的產生證明了這個一般策略（參見Green等人 Nature Genetics [自然遺傳學] 7:13-21 (1994)）。用酵母人工染色體（YAC）工程化XenoMouse品系，該等酵母人工染色體分別含有人重鏈基因座和κ輕鏈基因座的245 kb和190 kb大小的種系構型片段，該等片段含有核心可變區和恒定區序列。證明含有人Ig的YAC與小鼠系統相容以重排和表現抗體，並且能夠取代失活的小鼠Ig基因。這藉由其誘導B細胞發育、產生完全人抗體的成人樣人組庫和產生抗原特異性人mAb的能力來證明。該等結果還表明，引入含有更多數量的V基因、另外的調控元件和人Ig恒定區的更大部分的人Ig基因座可以實質上再現作為對感染和免疫的人體液應答的特徵的完整組庫。Green等人的工作最近擴展到藉由分別引入兆鹼基大小的人重鏈基因座和κ輕鏈基因座的種系構型YAC片段來引入大於大約80%的人抗體組庫。參見Mendez等人 Nature Genetics [自然遺傳學] 15:146-156 (1997)和美國專利申請序號08/759,620。
XenoMouse小鼠的產生進一步論述和描繪於以下中：美國專利申請序號07/466,008、序號07/610,515、序號07/919,297、序號07/922,649、序號08/031,801、序號08/112,848、序號08/234,145、序號08/376,279、序號08/430,938、序號08/464,584、序號08/464,582、序號08/463,191、序號08/462,837、序號08/486,853、序號08/486,857、序號08/486,859、序號08/462,513、序號08/724,752和序號08/759,620；和美國專利案號6,162,963、6,150,584、6,114,598、6,075,181和5,939,598以及日本專利案號3 068 180 B2、3 068 506 B2、和3 068 507 B2。還參見Mendez等人 Nature Genetics [自然遺傳學] 15:146-156 (1997) 和Green和Jakobovits J. Exp. Med. [實驗醫學雜誌] 188:483-495 (1998)、EP 0 463 151 B1、WO 94/02602、WO 96/34096、WO 98/24893、WO 00/76310和WO 03/47336。
在一個可替代的方法中，包括真藥物國際公司（GenPharm International, Inc.）的其他公司利用了「微基因座」方法。在微基因座方法中，藉由包含來自Ig基因座的碎片（單獨的基因）來模擬外源性Ig基因座。因此，將一個或多個VH基因、一個或多個DH基因、一個或多個JH基因、mu恒定區和第二恒定區（較佳的是γ恒定區）形成為用於插入到動物中的構建體。該方法描述於以下中：Surani等人的美國專利案號5,545,807和美國專利案號5,545,806；5,625,825；5,625,126；5,633,425；5,661,016；5,770,429；5,789,650；5,814,318；5,877,397；5,874,299；和6,255,458（各自為Lonberg和Kay）、Krimpenfort和Berns的美國專利案號5,591,669和6,023.010、Berns等人的美國專利案號5,612,205；5,721,367；和5,789,215、以及Choi和Dunn的美國專利案號5,643,763、以及真藥物(GenPharm)國際美國專利申請序號07/574,748、序號07/575,962、序號07/810,279、序號07/853,408、序號07/904,068、序號07/990,860、序號08/053,131、序號08/096,762、序號08/155,301、序號08/161,739、序號08/165,699、序號08/209,741。還參見EP 0 546 073 B1、WO 92/03918、WO 92/22645、WO 92/22647、WO 92/22670、WO 93/12227、WO 94/00569、WO 94/25585、WO 96/14436、WO 97/13852和WO 98/24884以及美國專利案號5,981,175。進一步參見Taylor等人 (1992)、Chen等人 (1993)、Tuaillon等人(1993)、Choi等人 (1993)、Lonberg等人 (1994)、Taylor等人 (1994)、和Tuaillon等人 (1995)、Fishwild等人 (1996)。
Kirin也展示了從藉由微細胞融合引入大段染色體或整個染色體的小鼠產生人抗體。參見歐洲專利申請案號773 288和843 961。Xenerex Biosciences正在開發用於人抗體的潛在產生的技術。在這種技術中，用人淋巴細胞（例如B和/或T細胞）重構SCID小鼠。然後將小鼠用抗原免疫並且可產生針對抗原的免疫應答。參見美國專利案號5,476,996；5,698,767；和5,958,765。
人抗小鼠抗體（HAMA）應答已經導致該行業製備嵌合或其他人源化抗體。然而，預期特別是在抗體的長期或多劑量利用中會觀察到某些人抗嵌合抗體（HACA）應答。因此，期望提供包含針對靶細胞表面抗原的人結合結構域和針對CD3ε的人結合結構域的抗原結合分子，以消除HAMA或HACA應答的問題和/或效應。
術語「與……（特異性）結合」、「（特異性）識別」、「（特異性）針對」和「與……（特異性）反應」意指根據本發明，結合結構域與靶分子（抗原）（此處：分別為靶細胞表面抗原和CD3ε）上的給定表位或給定靶側端相互作用或特異性相互作用。
術語「表位」係指結合結構域（如抗體或免疫球蛋白，或抗體或免疫球蛋白的衍生物、片段或變體）特異性結合的抗原上的一側。「表位」係抗原性的，並且因此術語表位在本文中有時也稱為「抗原結構」或「抗原決定簇」。因此，結合結構域係「抗原相互作用側」。所述結合/相互作用也被理解為定義「特異性識別」。
「表位」可以藉由連續的胺基酸或藉由蛋白質的三級折疊並置的非連續胺基酸形成。「線性表位」係這樣的表位，其中胺基酸一級序列包含所識別表位。線性表位典型地在獨特的序列中包括至少3個或至少4個、且更通常地至少5個或至少6個或至少7個，例如約8個至約10個胺基酸。
與線性表位相反，「構象表位」係這樣的表位，其中構成表位的胺基酸的一級序列不是所識別表位的唯一限定組分（例如，其中胺基酸的一級序列不一定被結合結構域識別的表位）。典型地，構象表位包含相對於線性表位增加數量的胺基酸。關於構象表位的識別，結合結構域識別抗原、較佳的是肽或蛋白質或其片段的三維結構（在本發明之上下文中，一個結合結構域的抗原結構包括於靶細胞表面抗原蛋白質內）。例如，當蛋白質分子折疊以形成三維結構時，形成構象表位的某些胺基酸和/或多肽骨架並置，使得抗體能夠識別表位。確定表位構象的方法包括但不限於x射線晶體學、二維核磁共振（2D-NMR）光譜學和定點自旋標記和電子順磁共振（EPR）光譜學。
以下描述了用於表位定位的方法：當人靶細胞表面抗原蛋白中的區（連續胺基酸區段）用非人和非靈長類動物靶細胞表面抗原（例如，小鼠靶細胞表面抗原，但是其他如雞、大鼠、倉鼠、兔等也是可能的）的其相應區交換/替換時，預期發生結合結構域結合的降低，除非結合結構域對於所用的非人、非靈長類動物靶細胞表面抗原具有交叉反應性。相比於與人靶細胞表面抗原蛋白中的相應區的結合，所述降低較佳的是為至少10%、20%、30%、40%或50%；更較佳的是至少60%、70%或80%，並且最較佳的是90%、95%或甚至100%，由此將與人靶細胞表面抗原蛋白中相應區的結合設定為100%。設想上述人靶細胞表面抗原/非人靶細胞表面抗原嵌合體在CHO細胞中表現。還設想人靶細胞表面抗原/非人靶細胞表面抗原嵌合體與不同膜結合蛋白（如EpCAM）的跨膜結構域和/或細胞質結構域融合。
在用於表位定位的可替代或另外的方法中，可以產生若干種截短形式的人靶細胞表面抗原細胞外結構域，以確定由結合結構域識別的特定區域。在該等截短形式中，從N末端開始逐步缺失不同的細胞外靶細胞表面抗原結構域/亞結構域或區域。設想截短的靶細胞表面抗原形式可以在CHO細胞中表現。還設想截短的靶細胞表面抗原形式可以與不同膜結合蛋白（如EpCAM）的跨膜結構域和/或細胞質結構域融合。還設想截短的靶細胞表面抗原形式可在其N末端涵蓋訊息肽結構域，例如衍生自小鼠IgG重鏈訊息肽的訊息肽。進一步設想，截短的靶細胞表面抗原形式可以在其N末端（在訊息肽後）涵蓋v5結構域，其允許驗證它們在細胞表面上的正確表現。預期不再涵蓋由結合結構域識別的靶細胞表面抗原區域的那些截短的靶細胞表面抗原形式發生結合的降低或喪失。結合降低較佳的是為至少10%、20%、30%、40%、50%；更較佳的是至少60%、70%、80%，並且最較佳的是90%、95%或甚至100%，由此將與整個人靶細胞表面抗原蛋白（或其細胞外區域或結構域）的結合設定為100。
確定靶細胞表面抗原的特定殘基對抗原結合分子或結合結構域的識別的貢獻的另一種方法係丙胺酸掃描（參見，例如Morrison KL和Weiss GA.Cur Opin Chem Biol. [化學生物學新見] 2001年6月; 5(3):302-7），其中有待分析的每個殘基例如經由定點誘變被丙胺酸替代。丙胺酸的使用係因為其具有非巨大的、化學惰性的甲基官能基，但仍然模仿許多其他胺基酸所具有的二級結構參考。在需要保守突變殘基的大小的情形下，有時可以使用巨大的胺基酸（如纈胺酸或白胺酸）。丙胺酸掃描係一項已經使用了很長一段時間的成熟技術。
結合結構域與表位或包含表位的區域之間的相互作用意味著結合結構域對特定蛋白或抗原（此處：分別為靶細胞表面抗原和CD3）上的表位/包含表位的區域表現出可觀的親和力，並且通常與靶細胞表面抗原或CD3以外的蛋白質或抗原不表現出顯著反應性。「可觀的親和力」包括以約10 -6M（KD）或更強的親和力結合。較佳的是，在結合親和力為約10 -12至10 -8M、10 -12至10 -9M、10 -12至10 -10M、10 -11至10 -8M，較佳的是為約10 -11至10 -9M時，將結合視為特異性的。結合結構域是否與靶標特異性反應或結合尤其可以藉由以下方式容易地測試：比較所述結合結構域與靶蛋白或抗原的反應和所述結合結構域與靶細胞表面抗原或CD3以外的蛋白質或抗原的反應。較佳的是，本發明之結合結構域基本上或實質上不結合除靶細胞表面抗原或CD3以外的蛋白質或抗原（即，第一結合結構域較佳的是不能結合除靶細胞表面抗原以外的蛋白質，並且第二結合結構域不能結合除CD3以外的蛋白質）。根據本發明之抗原結合分子的設想特徵係與其他HLE形式相比具有優異的親和力特徵。因此，這種優異的親和力表明體內半衰期延長。根據本發明之抗原結合分子的較長半衰期可以減少投與的持續時間和頻率，這典型地有助於改善患者依從性。這係特別重要的，因為本發明之抗原結合分子對高度虛弱或甚至多重性癌症患者特別有益。
術語「基本上/實質上不結合」或「不能結合」意指本發明之結合結構域不結合除靶細胞表面抗原或CD3以外的蛋白質或抗原，即與除靶細胞表面抗原或CD3以外的蛋白質或抗原不顯示超過30%，較佳的是不超過20%，更較佳的是不超過10%，特別較佳的是不超過9%、8%、7%、6%或5%的反應性，由此將與靶細胞表面抗原或CD3的結合分別設定為100%。
據信特異性結合係藉由結合結構域和抗原的胺基酸序列中的特定模體實現的。因此，由於其一級、二級和/或三級結構以及所述結構的二次修飾，因此實現了結合。抗原相互作用側端與其特異性抗原的特異性相互作用可以導致所述側端與抗原的簡單結合。此外，抗原相互作用側端與其特異性抗原的特異性相互作用可以可替代地或另外地導致信號的引發，例如由於誘導抗原構象的變化、抗原的寡聚化等。
術語「可變」係指抗體或免疫球蛋白結構域表現出其序列可變性並且參與確定特定抗體的特異性和結合親和力的部分（即「一個或多個可變結構域」）。可變重鏈（VH）和可變輕鏈（VL）的配對一起形成單個抗原結合側端。
可變性在整個抗體的可變結構域中並不均勻分佈；它集中在重鏈可變區和輕鏈可變區中的每一個的子結構域中。該等子結構域被稱為「高變區」或「互補決定區」（CDR）。可變結構域的更保守的（即非高變）部分被稱為「框架」區（FRM或FR），並且為三維空間中的六個CDR提供支架以形成抗原結合表面。天然存在的重鏈和輕鏈的可變結構域各自包含四個FRM區域（FR1、FR2、FR3和FR4），這四個FRM區域主要使用β-折疊構型，藉由三個高變區連接，這三個高變區形成連接β-折疊結構的環，並且在一些情況下形成β-折疊結構的一部分。每條鏈中的高變區藉由FRM緊密靠近在一起，並與來自另一條鏈的高變區一起有助於抗原結合側端的形成（參見Kabat等人, 上述引文）。
術語「CDR」及其複數「CDR」係指其中三個構成輕鏈可變區的結合特徵（CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3）並且三個構成重鏈可變區的結合特徵（CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3）的互補決定區。CDR含有大部分負責抗體與抗原特異性相互作用的殘基，並且因此有助於抗體分子的功能活性：它們係抗原特異性的主要決定簇。
準確定義的CDR邊界和長度受制於不同的分類和編號系統。因此，CDR可以藉由Kabat、Chothia、contact或任何其他邊界定義（包括本文所述之編號系統）來引用。儘管有不同的邊界，但該等系統中的每一者在構成可變序列內所謂的「高變區」的方面具有一定程度的重疊。因此，根據該等系統的CDR定義可以相對於相鄰框架區在長度和邊界區域方面不同。參見，例如Kabat（一種基於跨物種序列可變性的方法）、Chothia（一種基於抗原-抗體複合物的晶體學研究的方法）和/或MacCallum（Kabat等人, 上述引文；Chothia等人, J. MoI.Biol [分子生物學雜誌], 1987, 196: 901-917；和MacCallum等人, J. MoI.Biol [分子生物學雜誌], 1996, 262: 732）。表徵抗原結合側端的又另一標準係由牛津大學分子公司（Oxfbrd Molecular）的AbM抗體建模軟體使用的AbM定義。參見例如，Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains [抗體可變結構域的蛋白質序列和結構分析]在：Antibody Engineering Lab Manual [抗體工程實驗室手冊]（編輯：Duebel, S.和Kontermann, R.，施普林格出版社（Springer-Verlag），海德爾堡）。就兩種殘基鑒定技術定義重疊區而非相同區而言，可以將它們組合以定義雜合CDR。然而，根據所謂的Kabat系統進行編號係較佳的。
典型地，CDR形成可以分類為規範結構的環結構。術語「規範結構」係指由抗原結合（CDR）環所使用的主鏈構象。從比較結構研究中，已經發現六個抗原結合環中的五個僅具有有限的可用構象組庫。每個規範結構可以藉由多肽骨架的扭轉角來表徵。因此，抗體之間的對應環可具有非常類似的三維結構，但環中大部分具有高胺基酸序列變異性（Chothia和Lesk, J. MoI. Biol. [分子生物學雜誌], 1987, 196: 901；Chothia等人, Nature [自然], 1989, 342: 877；Martin和Thornton, J. MoI. Biol [分子生物學雜誌], 1996, 263: 800）。此外，所使用的環結構與其周圍的胺基酸序列之間存在關係。特定規範類別的構象由環的長度和位於環內以及保守框架內（即，環外）關鍵位置的胺基酸殘基決定。因此，可以基於該等關鍵胺基酸殘基的存在來進行對特定規範類別的分配。
術語「規範結構」還可以包括關於抗體的線性序列的考慮因素，例如，如藉由Kabat（Kabat等人, 上述引文）編目的。Kabat編號方案（系統）係以一致方式對抗體可變結構域的胺基酸殘基進行編號的廣泛使用的標準，並且是本發明應用的較佳的方案，也如本文其他地方所提及。另外的結構考慮因素也可以用於確定抗體的規範結構。例如，Kabat編號未完全反映的那些差異可以藉由Chothia等人的編號系統來描述，和/或藉由其他技術（例如結晶學和二維或三維計算建模）來揭示。因此，可以將給定的抗體序列置於規範類別中，該類別尤其允許鑒定適當的基礎結構（chassis）序列（例如，基於在文庫中包括多種規範結構的期望）。文獻中描述了抗體胺基酸序列的Kabat編號和如由Chothia等人，上述引文所述之結構考慮因素以及其對解釋抗體結構的規範方面的意義。不同類別的免疫球蛋白的亞單位結構和三維構型在本領域中是熟知的。有關抗體結構的綜述，參見Antibodies: A Laboratory Manual [抗體：實驗室手冊], Cold Spring Harbor Laboratory [冷泉港實驗室], Harlow等人編輯, 1988。
輕鏈的CDR3以及特別是重鏈的CDR3可以構成輕鏈可變區和重鏈可變區內抗原結合中最重要的決定簇。在一些抗原結合分子中，重鏈CDR3似乎構成抗原與抗體之間主要的接觸區域。其中單獨改變CDR3的體外選擇方案可以用於改變抗體的結合特性或確定哪些殘基有助於抗原的結合。因此，CDR3典型地是抗體結合側端內分子多樣性的最大來源。例如，H3可以短至兩個胺基酸殘基或多於26個胺基酸。
在經典的全長抗體或免疫球蛋白中，每條輕（L）鏈藉由一個共價二硫鍵與重（H）鏈連接，而兩條H鏈藉由一個或多個二硫鍵彼此連接，這取決於H鏈同種型。最靠近VH的CH結構域通常命名為CH1。恒定（「C」）結構域不直接參與抗原結合，但表現出各種效應子功能，如抗體依賴性、細胞介導的細胞毒性和補體活化。抗體的Fc區包括在重鏈恒定結構域內，並且例如能夠與位於細胞表面的Fc受體相互作用。
組裝和體細胞突變後的抗體基因的序列高度改變，並且估計該等改變的基因編碼10 10種不同抗體分子（Immunoglobulin Genes [免疫球蛋白基因], 第2版,Jonio等人編輯, Academic Press [學術出版社], San Diego, CA [加利福尼亞州聖地牙哥], 1995）。因此，免疫系統提供了免疫球蛋白組庫。術語「組庫」係指完全或部分衍生自至少一種編碼至少一種免疫球蛋白的序列的至少一種核苷酸序列。一種或多種序列可以藉由重鏈的V、D和J區段以及輕鏈的V和J區段的體內重排來產生。可替代地，一種或多種序列可以應答於發生重排，例如體外刺激而從細胞產生。替代性地，一種或多種序列的一部分或全部可以藉由DNA剪接、核苷酸合成、誘變和其他方法獲得，參見例如美國專利5,565,332。組庫可以僅包括一種序列或可以包括多種序列，包括遺傳多樣性集合中的序列。
術語「Fc部分」或「Fc單體」關於本發明意指包含至少一個具有CH2結構域功能的結構域和至少一個具有免疫球蛋白分子的CH3結構域功能的結構域的多肽。從術語「Fc單體」顯而易見，包含那些CH結構域的多肽係「多肽單體」。Fc單體可以是至少包含排除重鏈的第一恒定區免疫球蛋白結構域（CH1）的免疫球蛋白恒定區的片段，但至少保持一個CH2結構域的功能部分和一個CH3結構域的功能部分的多肽，其中CH2結構域在CH3結構域的胺基末端。在這個定義的較佳的方面中，Fc單體可以是包含Ig-Fc鉸鏈區、CH2區和CH3區的一部分的多肽恒定區，其中鉸鏈區在CH2結構域的胺基末端。設想本發明之鉸鏈區促進二聚化。例如但不限於，此類Fc多肽分子可以藉由木瓜蛋白酶消化免疫球蛋白區（當然產生兩個Fc多肽的二聚體）獲得。在這個定義的另一方面中，Fc單體可以是包含CH2區和CH3區的一部分的多肽區。例如但不限於，此類Fc多肽分子可以藉由胃蛋白酶消化免疫球蛋白分子獲得。在一個實施方式中，Fc單體的多肽序列基本上類似於以下的Fc多肽序列：IgG 1Fc區、IgG 2Fc區、IgG 3Fc區、IgG 4Fc區、IgM Fc區、IgA Fc區、IgD Fc區和IgE Fc區。（參見，例如Padlan, Molecular Immunology [分子免疫學], 31(3), 169-217 (1993)）。因為免疫球蛋白之間存在一些變化，並且僅為了清楚起見，所以Fc單體係指IgA、IgD和IgG的最後兩個重鏈恒定區免疫球蛋白結構域，以及IgE和IgM的最後三個重鏈恒定區免疫球蛋白結構域。如上所提及，Fc單體還可以包括在該等結構域的N末端的柔性鉸鏈。對於IgA和IgM，Fc單體可以包括J鏈。對於IgG，Fc部分包含免疫球蛋白結構域CH2和CH3以及前兩個結構域與CH2之間的鉸鏈。儘管Fc部分的邊界可以改變，但包含功能鉸鏈、CH2和CH3結構域的人IgG重鏈Fc部分的實例可以定義為例如包含殘基D231（鉸鏈結構域的殘基-對應於下表1中的D234）至CH3結構域的羧基末端的P476，分別地L476（對於IgG 4），其中根據Kabat編號。經由肽連接子彼此融合的兩個Fc部分或Fc單體定義本發明之抗原結合分子的第三結構域，該第三結構域也可以被定義為scFc結構域。
在本發明之一個實施方式中，設想如本文揭露的scFc結構域，即對應地彼此融合的Fc單體僅包含在抗原結合分子的第三結構域中。 根據本發明，可以使用表1中列出的Kabat編號藉由類推來鑒定IgG鉸鏈區。根據上述，設想本發明之鉸鏈結構域/區域包含根據Kabat編號的對應於D234至P243的IgG 1序列拉伸物的胺基酸殘基。同樣設想，本發明之鉸鏈結構域/區域包含或由IgG1鉸鏈序列DKTHTCPPCP（SEQ ID NO: 182）組成（對應於如下表1所示的拉伸物D234至P243-也設想所述序列的變異，只要鉸鏈區仍然促進二聚化）。在本發明較佳的實施方式中，抗原結合分子的第三結構域中CH2結構域的Kabat位置314處的糖基化位點藉由N314X取代被去除，其中X係除Q之外的任何胺基酸。所述取代較佳的為N314G取代。在更較佳的實施方式中，所述CH2結構域另外包含以下取代（根據Kabat的位置）：V321C和R309C（該等取代在Kabat位置309和321處引入結構域內半胱胺酸二硫橋）。 還設想本發明之抗原結合分子的第三結構域按胺基至羧基順序包含以下或由以下組成：DKTHTCPPCP（SEQ ID NO: 182）（即鉸鏈）-CH2-CH3-連接子-DKTHTCPPCP（SEQ ID NO: 182）（即鉸鏈）-CH2-CH3。在較佳的實施方式中，上述抗原結合分子的肽連接子的特徵在於胺基酸序列Gly-Gly-Gly-Gly-Ser，即Gly 4Ser（SEQ ID NO: 187），或其聚合物，即(Gly 4Ser)x，其中x為5或更大的整數（例如5、6、7、8等或更大），較佳的為6（(Gly4Ser)6）。所述構建體可以進一步包含上述取代N314X，較佳的是N314G和/或另外的取代V321C和R309C。在如上文所定義的本發明之抗原結合分子的較佳的實施方式中，設想第二結構域結合人和/或獼猴CD3ε鏈的細胞外表位。 [表2]：鉸鏈區的胺基酸殘基的Kabat編號
鉸鏈的 IMGT 編號 IgG 1 胺基酸翻譯 Kabat 編號
1 I 226
2 P 227
3 K 228
4 S 232
5 C 233
6 D 234
7 K 235
8 T 236
9 H 237
10 T 238
11 C 239
12 P 240
13 P 241
14 C 242
15 P 243
在本發明之另外實施方式中，鉸鏈結構域/區域包含或由以下組成：IgG2亞型鉸鏈序列ERKCCVECPPCP（SEQ ID NO: 183）、IgG3亞型鉸鏈序列ELKTPLDTTHTCPRCP（SEQ ID NO: 184）或ELKTPLGDTTHTCPRCP（SEQ ID NO: 185）和/或IgG4亞型鉸鏈序列ESKYGPPCPSCP（SEQ ID NO: 186）。IgG1亞型鉸鏈序列可以是以下一種EPKSCDKTHTCPPCP（如表1和SEQ ID NO: 183中所示）。因此，在本發明之上下文中也設想了該等核心鉸鏈區。
IgG CH2和IgG CD3結構域的位置和序列可以使用表2中列出的Kabat編號藉由類推來鑒定： [表3]：IgG CH2和CH3區域的胺基酸殘基的Kabat編號
IgG 亞型 CH2 aa 翻譯 CH2 Kabat 編號 CH3 aa 翻譯 CH3 Kabat 編號
IgG 1 AP E… … KAK 244… …360 GQP…… P GK 361… …478
IgG 2 AP P… … KTK 244… …360 GQP…… P GK 361… …478
IgG 3 AP E… … KTK 244… …360 GQP…… P GK 361… …478
IgG 4 AP E… … KAK 244… …360 GQP…… L GK 361… …478
在本發明之一個實施方式中，使第一或兩個Fc單體的CH3結構域中粗體強調的胺基酸殘基缺失。
第三結構域的多肽單體（「Fc部分」或「Fc單體」）彼此融合的肽連接子較佳的是包含至少25個胺基酸殘基（25、26、27、28、29、30等）。更較佳的是，這個肽連接子包含至少30個胺基酸殘基（30、31、32、33、34、35等）。還較佳的是，連接子包含至多40個胺基酸殘基、更較佳的是至多35個胺基酸殘基、最較佳的是恰好30個胺基酸殘基。這樣的肽連接子的較佳的實施方式的特徵在於胺基酸序列Gly-Gly-Gly-Gly-Ser，即Gly 4Ser（SEQ ID NO: 187），或其聚合物，即(Gly 4Ser)x，其中x為5或更大的整數（例如6、7或8）。較佳的是，整數為6或7，更較佳的是整數為6。
在使用連接子來將第一結構域與第二結構域融合或將第一結構域或第二結構域與第三結構域融合的情況下，該連接子較佳的是具有足以確保第一結構域和第二結構域中的每一者均可以彼此獨立地保留其差異結合特異性的長度和序列。對於連接本發明之抗原結合分子中至少兩個結合結構域（或兩個可變結構域）的肽連接子，較佳的那些僅包含少量胺基酸殘基例如12個胺基酸殘基或更少的肽連接子。因此，12、11、10、9、8、7、6或5個胺基酸殘基的肽連接子係較佳的。設想的具有少於5個胺基酸的肽連接子包含4、3、2或1個胺基酸，其中富含Gly的連接子係較佳的。用於融合第一結構域和第二結構域的肽連接子的較佳的實施方式在SEQ ID NO:1中描繪。用於融合第二結構域和第三結構域的肽連接子的較佳的連接子實施方式係(Gly) 4-連接子，分別為G 4-連接子。
在上述一種「肽連接子」的上下文中特別較佳的「單一」胺基酸係Gly。因此，所述肽連接子可以由單一胺基酸Gly組成。在本發明之較佳的實施方式中，肽連接子的特徵在於胺基酸序列Gly-Gly-Gly-Gly-Ser，即Gly 4Ser（SEQ ID NO: 187），或其聚合物，即(Gly 4Ser)x，其中x為1或更大的整數（例如2或3）。較佳的連接子在SEQ ID No: 1至12中描繪。包括不促進二級結構的所述肽連接子的特徵係本領域中已知的並且描述於例如Dall’Acqua等人（Biochem. [生物化學] (1998) 37, 9266-9273）、Cheadle等人（Mol Immunol [分子免疫學] (1992) 29, 21-30）以及Raag和Whitlow（FASEB [美國實驗生物學聯合會會誌] (1995) 9(1), 73-80）中。此外不促進任何二級結構的肽連接子係較佳的。所述結構域彼此的連接可以例如藉由基因工程提供，如實例中所述。用於製備融合的且可操作地連接的雙特異性單鏈構建體並在哺乳動物細胞或細菌中表現它們的方法係本領域中熟知的（例如WO 99/54440或Sambrook等人, Molecular Cloning: A Laboratory Manual [分子選殖：實驗室手冊], Cold Spring Harbor Laboratory Press [冷泉港實驗室出版社], Cold Spring Harbor, New York [紐約冷泉港], 2001）。
在本發明之抗原結合分子的較佳的實施方式中，第一結構域和第二結構域以選自由以下組成之群組的形式形成抗原結合分子：(scFv) 2、scFv-單結構域mAb、雙抗體和該等形式中的任一種的寡聚體。
根據特別較佳的實施方式，並如所附實例所記載，本發明之抗原結合分子的第一結構域和第二結構域係「雙特異性單鏈抗原結合分子」、更較佳的是雙特異性「單鏈Fv」(scFv)。儘管Fv片段的兩個結構域VL和VH由獨立的基因編碼，但使用重組方法可以將他們藉由合成連接子接合，如上文所述，該合成連接子使它們能夠制得為單條蛋白質鏈，其中VL和VH區配對以形成單價分子；參見，例如Huston等人 (1988) Proc. Natl. Acad. Sci USA [美國國家科學院院刊] 85:5879-5883。使用熟悉該項技術者已知的常規技術獲得該等抗體片段，並且按照與完整或全長抗體相同的方式評價片段的功能。因此，單鏈可變片段（scFv）係免疫球蛋白的重鏈（VH）和輕鏈（VL）可變區的融合蛋白，通常利用約10至約25個胺基酸，較佳的是約15至20個胺基酸的短連接子肽連接。連接子通常富含甘胺酸以獲得柔韌性，以及富含絲胺酸或蘇胺酸以獲得溶解性，並且可以連接VH的N末端和VL的C-末端，或反之亦然。儘管去除了恒定區並引入了連接子，但該蛋白質保留了原始免疫球蛋白的特異性。
雙特異性單鏈抗原結合分子在本領域中是已知的並描述於以下中：WO 99/54440；Mack, J. Immunol. [免疫學雜誌] (1997), 158, 3965-3970；Mack, PNAS [美國國家科學院院刊], (1995), 92, 7021-7025；Kufer, Cancer Immunol. Immunother. [癌症免疫學免疫治療], (1997), 45, 193-197；Löffler, Blood [血液], (2000), 95, 6, 2098-2103；Brühl, Immunol. [免疫學], (2001), 166, 2420-2426；Kipriyanov, J. Mol. Biol. [分子生物學雜誌], (1999), 293, 41-56。描述的用於產生單鏈抗體的技術（尤其參見美國專利4,946,778；Kontermann和Dübel (2010), 上述引文和Little (2009), 上述引文）可以適用於產生特異性識別一種或多種所選擇的靶標的單鏈抗原結合分子。
二價（bivalent）（也稱為雙價（divalent））或雙特異性單鏈可變片段（具有形式(scFv) 2的二-scFv或雙-scFv）可以藉由連接兩個scFv分子（例如利用如上文所述之連接子）來工程化。如果這兩個scFv分子具有相同的結合特異性，則所得(scFv) 2分子將較佳的是稱為二價的（即，對於相同的靶表位具有兩個價）。如果兩個scFv分子具有不同的結合特異性，則所得(scFv) 2分子將較佳的是稱為雙特異性的。連接可以藉由產生具有兩個VH區和兩個VL區的單條肽鏈從而產生串聯scFv來進行（參見例如，Kufer P.等人, (2004) Trends in Biotechnology [生物技術趨勢] 22(5):238-244）。另一種可能性係產生具有連接子肽的scFv分子，該等連接子肽對於兩個可變區來說太短以致於不能折疊在一起（例如約五個胺基酸），從而迫使scFv二聚化。這種類型被稱為雙抗體（參見例如，Hollinger, Philipp等人, (1993年7月) Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America [美國國家科學院院刊] 90 (14): 6444-8）。
根據本發明，第一結構域、第二結構域或第一結構域和第二結構域可以包含單結構域抗體，分別地單結構域抗體的可變結構域或至少CDR。單結構域抗體僅包含一個（單體）抗體可變結構域，該抗體可變結構域能夠獨立於其他V區或結構域而選擇性結合特定抗原。第一單結構域抗體係從駱駝中發現的重鏈抗體工程化而來，並且該等被稱為V HH片段。軟骨魚類也具有重鏈抗體（IgNAR），可以從該等重鏈抗體中獲得稱為V NAR片段的單結構域抗體。可替代的方法係將來自常見免疫球蛋白，例如來自人或齧齒動物的二聚體可變結構域分裂成單體，因此獲得作為單結構域Ab的VH或VL。儘管對單結構域抗體的大多數研究目前皆為基於重鏈可變結構域，但是也已經顯示衍生自輕鏈的奈米抗體特異性結合靶表位。單結構域抗體的實例係所謂的sdAb、奈米抗體或單可變結構域抗體。
因此，(單結構域mAb) 2係由（至少）兩種單結構域單株抗體構成的單株抗原結合分子，該等單結構域單株抗體單獨地選自包含V H、V L、V HH和V NAR的組。連接子較佳的是呈肽連接子的形式。類似地，「scFv單結構域mAb」係由如上所述之至少一種單結構域抗體和如上所述之一種scFv分子構成的單株抗原結合分子。同樣，連接子較佳的是呈肽連接子的形式。
可以在競爭測定（如競爭性ELISA或基於細胞的競爭測定）中確定抗原結合分子是否競爭與另一給定抗原結合分子的結合。也可以使用抗生物素蛋白偶聯的微粒（珠粒）。與抗生物素蛋白塗覆的ELISA板類似，當與生物素化蛋白質反應時，該等珠粒中的每一個都可用作可在其上進行測定的底物。將抗原塗覆在珠粒上，並且然後用第一抗體預塗覆。添加第二抗體並且確定任何另外的結合。用於讀出的可能手段包括流動式細胞測量術。
T細胞或T淋巴細胞係在細胞介導的免疫中發揮核心作用的一類淋巴細胞（其本身係一類白血球）。有若干個T細胞亞組，每個亞組具有不同的功能。T細胞可以藉由細胞表面上存在T細胞受體（TCR）而與其他淋巴細胞（諸如B細胞和NK細胞）區分開。TCR負責識別與主要組織相容性複合物（MHC）分子結合的抗原，並且由兩種不同的蛋白質鏈構成。在95%的T細胞中，TCR由阿爾法（α）和貝塔（β）鏈組成。當TCR與抗原肽和MHC（肽/MHC複合物）接合時，T淋巴細胞藉由一系列由相關酶、共受體、特化銜接分子和活化或釋放的轉錄因子介導的生物化學事件而被活化。
CD3受體複合物係一種蛋白質複合物，並且由四條鏈構成。在哺乳動物中，複合物含有CD3γ（伽馬）鏈、CD3δ（德爾塔）鏈和兩條CD3ε（伊蒲賽龍）鏈。該等鏈與T細胞受體（TCR）和所謂的ζ（zeta）鏈締合以形成T細胞受體CD3複合物並在T淋巴細胞中生成活化信號。CD3γ（伽馬）、CD3δ（德爾塔）和CD3ε（伊蒲賽龍）鏈係含有單一細胞外免疫球蛋白結構域的免疫球蛋白超家族的高度相關的細胞表面蛋白。CD3分子的細胞內尾含有對於TCR的信號傳導能力所必需的單一保守模體，稱為基於免疫受體酪胺酸的活化模體或簡稱ITAM。CD3ε分子係多肽，該多肽在人中由位於染色體11上的 CD3E基因編碼。CD3ε的最較佳的表位包括在人CD3ε細胞外結構域的胺基酸殘基1-27內。設想根據本發明之抗原結合分子典型地且有利地顯示較少的非特異性T細胞活化，這在特異性免疫療法中是不希望的。這意味著副作用的風險降低。
經由多特異性、至少雙特異性抗原結合分子募集T細胞對靶細胞的重定向裂解關於溶細胞突觸形成以及穿孔素和顆粒酶的遞送。接合的T細胞能夠連續靶細胞裂解，並且不受干擾肽抗原加工和呈遞或選殖T細胞分化的免疫逃逸機制的影響；參見例如，WO 2007/042261。
可以以各種方式測量由本發明之抗原結合分子介導的細胞毒性。效應細胞可以是例如刺激的富集的（人）CD8陽性T細胞或未刺激的（人）外周血單核細胞（PBMC）。如果靶細胞係獼猴起源的或表現的或用第一結構域結合的獼猴靶細胞表面抗原轉染，則效應細胞也應係獼猴起源的，如獼猴T細胞系，例如4119LnPx。靶細胞應表現靶細胞表面抗原（至少細胞外結構域），例如人或獼猴靶細胞表面抗原。靶細胞可以是用靶細胞表面抗原（例如人或獼猴靶細胞表面抗原）穩定或瞬時轉染的細胞系（如CHO）。可替代地，靶細胞可以是靶細胞表面抗原陽性天然表現細胞系。對於在細胞表面上表現較高水平的靶細胞表面抗原的靶細胞系，預期EC 50值通常較低。效應細胞與靶細胞（E : T）比率通常為約10 : 1，但也可以改變。靶細胞表面抗原xCD3雙特異性抗原結合分子的細胞毒活性可以在 51Cr-釋放測定（約18小時的孵育時間）或在基於FACS的細胞毒性測定（約48小時的孵育時間）中測量。也可能對測定孵育時間（細胞毒性反應）進行修改。其他測量細胞毒性的方法對熟悉該項技術者來說係熟知的，並且包括MTT或MTS測定、基於ATP的測定（包括生物發光測定）、磺基羅丹明B（SRB）測定、WST測定、選殖生成測定和ECIS技術。
較佳的是在基於細胞的細胞毒性測定中測量由本發明之靶細胞表面抗原xCD3雙特異性抗原結合分子介導的細胞毒活性。其也可以在 51Cr-釋放測定中測量。該細胞毒活性由EC 50值表示，其對應於半數最大有效濃度（誘導在基線與最大值中間的細胞毒性反應的抗原結合分子的濃度）。較佳的是，靶細胞表面抗原xCD3雙特異性抗原結合分子的EC 50值≤ 5000 pM或≤ 4000 pM、更較佳的是≤ 3000 pM或≤ 2000 pM、甚至更較佳的是≤ 1000 pM或≤ 500 pM、甚至更較佳的是≤ 400 pM或≤ 300 pM、甚至更較佳的是≤ 200 pM、甚至更較佳的是≤ 100 pM、甚至更較佳的是≤ 50 pM、甚至更較佳的是≤ 20 pM或≤ 10 pM、並且最較佳的是≤ 5 pM。
上述給定的EC 50值可以在不同的測定中測量。熟悉該項技術者知道，當使用刺激/富集的CD8 +T細胞作為效應細胞時，與未刺激的PBMC相比，可以預期EC 50值較低。此外可以預期，與低靶表現大鼠相比，當靶細胞表現大量靶細胞表面抗原時，EC 50值較低。例如，當使用刺激/富集的人CD8 +T細胞作為效應細胞（並且使用靶細胞表面抗原轉染的細胞如CHO細胞或靶細胞表面抗原陽性人細胞系作為靶細胞）時，靶細胞表面抗原xCD3雙特異性抗原結合分子的EC 50值較佳的是≤ 1000 pM、更較佳的是≤ 500 pM、甚至更較佳的是≤ 250 pM、甚至更較佳的是≤ 100 pM、甚至更較佳的是≤ 50 pM、甚至更較佳的是≤ 10 pM、並且最較佳的是≤ 5 pM。當使用人PBMC作為效應細胞時，靶細胞表面抗原xCD3雙特異性抗原結合分子的EC 50值較佳的是≤ 5000 pM或≤ 4000 pM（特別是當靶細胞係靶細胞表面抗原陽性人細胞系時）、更較佳的是≤ 2000 pM（特別是當靶細胞係靶細胞表面抗原轉染的細胞如CHO細胞時）、更較佳的是≤ 1000 pM或≤ 500 pM、甚至更較佳的是≤ 200 pM、甚至更較佳的是≤ 150 pM、甚至更較佳的是≤ 100 pM、並且最較佳的是≤ 50 pM或更低。當使用獼猴T細胞系如LnPx4119作為效應細胞並且使用獼猴靶細胞表面抗原轉染的細胞系如CHO細胞作為靶細胞系時，靶細胞表面抗原xCD3雙特異性抗原結合分子的EC 50值較佳的是≤ 2000 pM或≤ 1500 pM、更較佳的是≤ 1000 pM或≤ 500 pM、甚至更較佳的是≤ 300 pM或≤ 250 pM、甚至更較佳的是≤ 100 pM、並且最較佳的是≤ 50 pM。
較佳的是，本發明之靶細胞表面抗原xCD3雙特異性抗原結合分子不誘導/介導溶解或基本上不誘導/介導靶細胞表面抗原陰性細胞如CHO細胞的溶解。術語「不誘導溶解」、「基本上不誘導溶解」、「不介導溶解」或「基本不介導溶解」意指本發明之抗原結合分子不誘導或介導超過30%，較佳的是不超過20%，更較佳的是不超過10%，特別較佳的是不超過9%、8%、7%、6%或5%的靶細胞表面抗原陰性細胞的溶解，由此將靶細胞表面抗原陽性人細胞系的溶解設定為100%。這通常適用於濃度高達500 nM的抗原結合分子。熟悉該項技術者知道如何毫不費力地測量細胞溶解。此外，本說明書教導了如何測量細胞溶解的具體說明。
單個的靶細胞表面抗原xCD3雙特異性抗原結合分子的單體與二聚體同種型之間細胞毒活性的差異稱為「效能間隙」。該效能間隙可以例如計算為分子的單體與二聚體形式的EC 50值之間的比率。本發明之靶細胞表面抗原xCD3雙特異性抗原結合分子的效能間隙較佳的是≤ 5、更較佳的是≤ 4、甚至更較佳的是≤ 3、甚至更較佳的是≤ 2、並且最較佳的是≤ 1。
本發明之抗原結合分子的一種或多種第一和/或第二（或任何其他）結合結構域較佳的是對靈長類動物的哺乳動物目成員具有跨物種特異性。跨物種特異性CD3結合結構域例如描述於WO 2008/119567中。根據一個實施方式，除了分別與人靶細胞表面抗原和人CD3結合之外，第一結合結構域和/或第二結合結構域還將與靈長類動物的靶細胞表面抗原/CD3結合，該等靈長類動物包括（但不限於）新大陸靈長類動物（如普通狨、棉冠獠狨或松鼠猴）、舊大陸靈長類動物（如狒狒和獼猴）、長臂猿和非人類人亞科。
在本發明之抗原結合分子的一個實施方式中，第一結構域與人靶細胞表面抗原結合並進一步與獼猴靶細胞表面抗原（如食蟹獼猴的靶細胞表面抗原）結合，並且更較佳的是，與在表面獼猴細胞上表現的獼猴靶細胞表面抗原結合。第一結合結構域對獼猴靶細胞表面抗原的親和力較佳的是≤ 15 nM、更較佳的是≤ 10 nM、甚至更較佳的是≤ 5 nM，甚至更較佳的是≤ 1 nM、甚至更較佳的是≤ 0.5 nM、甚至更較佳的是≤ 0.1 nM、並且最較佳的是≤ 0.05 nM或甚至≤ 0.01 nM。
較佳的是，根據本發明之抗原結合分子對結合獼猴靶細胞表面抗原對人靶細胞表面抗原[ma靶細胞表面抗原:hu靶細胞表面抗原]的親和力間隙（如例如藉由BiaCore或藉由Scatchard分析確定）＜ 100、較佳的是＜ 20、更較佳的是＜ 15、進一步較佳的是＜ 10、甚至更較佳的是＜ 8、更較佳的是＜ 6並且最較佳的是＜ 2。根據本發明之抗原結合分子對結合獼猴靶細胞表面抗原對人靶細胞表面抗原的親和力間隙的較佳的範圍在0.1與20之間、更較佳的是在0.2與10之間、甚至更較佳的是在0.3與6之間、甚至更較佳的是在0.5與3之間或在0.5與2.5之間、並且最較佳的是在0.5與2之間或在0.6與2之間。
本發明之抗原結合分子的第二（結合）結構域與人CD3ε和/或獼猴CD3ε結合。在較佳的實施方式中，第二結構域進一步與普通狨、棉冠獠狨或松鼠猴CD3ε結合。普通狨和棉冠獠狨兩者均是屬於狨亞科（ Callitrichidae）的新大陸靈長類動物，而松鼠猴係屬於懸猴科（ Cebidae）的新大陸靈長類動物。
對於本發明之抗原結合分子較佳的是，與人和/或獼猴CD3的細胞外表位結合的第二結構域包含含有選自以下的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的VL區： (a) 如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 27中所描繪的CDR-L1、如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 28中所描繪的CDR-L2和如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 29中所描繪的CDR-L3； (b) 如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 117中所描繪的CDR-L1、如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 118中所描繪的CDR-L2和如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 119中所描繪的CDR-L3；以及 I   如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 153中所描繪的CDR-L1、如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 154中所描繪的CDR-L2和如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 155中所描繪的CDR-L3。
在本發明之抗原結合分子的同樣較佳的實施方式中，與人和/或獼猴CD3ε鏈的細胞外表位結合的第二結構域包含含有選自以下的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的VH區： (a) 如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 12中所描繪的CDR-H1、如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 13中所描繪的CDR-H2和如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 14中所描繪的CDR-H3； (b) 如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 30中所描繪的CDR-H1、如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 31中所描繪的CDR-H2和如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 32中所描繪的CDR-H3； I   如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 48中所描繪的CDR-H1、如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 49中所描繪的CDR-H2和如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 50中所描繪的CDR-H3； (d) 如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 66中所描繪的CDR-H1、如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 67中所描繪的CDR-H2和如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 68中所描繪的CDR-H3； I   如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 84中所描繪的CDR-H1、如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 85中所描繪的CDR-H2和如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 86中所描繪的CDR-H3； (f) 如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 102中所描繪的CDR-H1、如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 103中所描繪的CDR-H2和如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 104中所描繪的CDR-H3； (g) 如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 120中所描繪的CDR-H1、如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 121中所描繪的CDR-H2和如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 122中所描繪的CDR-H3； (h) 如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 138中所描繪的CDR-H1、如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 139中所描繪的CDR-H2和如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 140中所描繪的CDR-H3； (i) 如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 156中所描繪的CDR-H1、如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 157中所描繪的CDR-H2和如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 158中所描繪的CDR-H3；以及 (j) 如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 174中所描述的CDR-H1、如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 175中所描述的CDR-H2和如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 176中所描述的CDR-H3。
在本發明之抗原結合分子的較佳的實施方式中，將上述三組VL CDR與第二結合結構域內的上述十組VH CDR組合以形成（30）組，每組包含CDR-L 1-3和CDR-H 1-3。
對於本發明之抗原結合分子較佳的是，與CD3結合的第二結構域包含選自由以下組成之群組的VL區：如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 17、21、35、39、53、57、71、75、89、93、107、111、125、129、143、147、161、165、179或183中所描繪的或SEQ ID NO: 200中所描繪的VL區。
同樣較佳的是，與CD3結合的第二結構域包含選自由以下組成之群組的VH區：如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 15、19、33、37、51、55、69、73、87、91、105、109、123、127、141、145、159、163、177或181中所描繪的或SEQ ID NO: 201中所描繪的VH區。
最較佳的是，本發明之抗原結合分子的特徵在於與CD3結合的第二結構域包含選自由以下組成之群組的VL區和VH區： (a) 如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 17或21中所描繪的VL區和如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 15或19中所描繪的VH區； (b) 如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 35或39中所描繪的VL區和如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 33或37中所描繪的VH區； I   如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 53或57中所描繪的VL區和如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 51或55中所描繪的VH區； (d) 如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 71或75中所描繪的VL區和如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 69或73中所描繪的VH區； I   如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 89或93中所描繪的VL區和如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 87或91中所描繪的VH區； (f) 如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 107或111中所描繪的VL區和如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 105或109中所描繪的VH區； (g) 如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 125或129中所描繪的VL區和如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 123或127中所描繪的VH區； (h) 如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 143或147中所描繪的VL區和如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 141或145中所描繪的VH區； (i) 如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 161或165中所描繪的VL區和如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 159或163中所描繪的VH區； (j) 如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 179或183中所描繪的VL區和如WO 2008/119567的SEQ ID NO: 177或181中所描繪的VH區；以及 (k) 如WO 2022/096716的SEQ ID NO: 60中所描繪的VL區和如WO 2022/096716的SEQ ID NO: 59中所描繪的VH區。
關於本發明之抗原結合分子還較佳的是，與CD3結合的第二結構域包含如SEQ ID NO: 200中所描繪的VL區和如SEQ ID NO: 201中所描繪的VH區。
根據本發明之抗原結合分子的較佳的實施方式，第一結構域和/或第二結構域具有以下形式：VH區和VL區的對係呈單鏈抗體（scFv）的形式。VH和VL區以VH-VL或VL-VH的順序排列。較佳的是，VH區位於連接子序列的N末端，並且VL區位於連接子序列的C末端。
本發明之上述抗原結合分子的較佳的實施方式的特徵在於與CD3結合的第二結構域包含選自由以下組成之群組的胺基酸序列：WO 2008/119567的SEQ ID No: 23、25、41、43、59、61、77、79、95、97、113、115、131、133、149、151、167、169、185或187或在SEQ ID NO: 202中所描繪的（本文中稱為I2C），或者該第二結構域按N-末端至C-末端順序由以下組成：(i.) 如WO 2022/096716的SEQ ID NO: 59中所描繪的VH區，(ii.)SEQ ID NO 189，以及 (iii.)如WO 2022/096716的SEQ ID NO: 60中所描繪的VL區（本文中稱為I2E）。如本文所討論的，不希望受理論束縛，根據本發明之穩定劑典型地與第二結構域（即CD3結合結構域）相互作用並使其穩定，儘管所述第二結構域的實例之間，例如I2C和I2E之間存在結構差異。
抗原結合分子的共價修飾也包括在本發明之範圍內，並且通常但不總是在翻譯後進行。例如，藉由使抗原結合分子的特定胺基酸殘基與能夠與選擇的側鏈或N末端或C末端殘基反應的有機衍生劑反應，將抗原結合分子的幾種類型的共價修飾引入分子中。
半胱胺醯殘基最常見地與α-鹵代乙酸酯（和相應的胺），如氯乙酸或氯乙醯胺反應，以得到羧甲基或羧醯胺甲基衍生物。半胱胺醯殘基還可以藉由與溴三氟丙酮、α-溴-β-(5-咪唑基)丙酸、磷酸氯乙醯酯、N-烷基馬來醯亞胺、3-硝基-2-吡啶基二硫化物、甲基2-吡啶基二硫化物、對氯汞苯甲酸酯、2-氯汞-4-硝基苯酚或氯-7-硝基苯并-2-氧雜-1,3-二唑反應來衍生出。
組胺醯殘基係藉由在pH 5.5-7.0下與焦碳酸二乙酯反應衍生出，因為這種製劑對組胺醯側鏈具有相對特異性。對溴苯甲醯甲基溴也是有用的；較佳的是在0.1 M二甲胂酸鈉中在pH 6.0下進行反應。賴胺醯殘基和胺基末端殘基與琥珀酸酐或其他羧酸酐反應。用該等藥劑衍生化具有逆轉賴胺醯殘基的電荷的效應。用於衍生含α-胺基的殘基的其他適合試劑包括亞胺酸酯，如甲基吡啶亞胺甲酯；磷酸吡哆醛；吡哆醛；硼氫化氯；三硝基苯磺酸；O-甲基異脲；2,4-戊二酮；以及轉胺酶催化的與乙醛酸鹽的反應。
精胺醯殘基藉由與一種或若干種常規試劑（其中苯甲醯甲醛、2,3-丁二酮、1,2-環己二酮和茚三酮）反應而被修飾。由於胍官能基的高pKa，因此精胺酸殘基的衍生化要求反應在鹼性條件下進行。此外，該等試劑可以與離胺酸基團以及精胺酸ε-胺基基團反應。
可以對酪胺醯殘基進行特定修飾，特別感興趣的是藉由與芳族重氮化合物或四硝基甲烷反應將光譜標記引入到酪胺醯殘基中。最常見地，將N-乙醯基咪唑和四硝基甲烷分別用於形成O-乙醯基酪胺醯物質和3-硝基衍生物。使用 125I或 131I碘化酪胺醯殘基以製備用於放射免疫測定的標記蛋白質，上述氯胺T法係適合的。
羧基側基團（天冬胺醯基或穀胺醯基）藉由與碳二亞胺（R’—N=C=N–R’）反應而選擇性地修飾，其中R和R'視需要為不同的烷基基團，例如1-環己基-3-(2-𠰌啉基-4-乙基)碳二亞胺或1-乙基-3-(4-氮鎓-4,4-二甲基戊基)碳二亞胺。此外，天冬胺醯殘基和穀胺醯殘基藉由與銨離子反應轉化為天冬醯胺醯殘基和麩醯胺酸醯殘基。
用雙功能劑衍生化可用於將本發明之抗原結合分子交聯到水不溶性載體基質或表面以用於多種方法中。常用的交聯劑包括例如1,1-雙(重氮乙醯基)-2-苯基乙烷、戊二醛、N-羥基琥珀醯亞胺酯（例如與4-疊氮基水楊酸的酯）、同雙官能亞胺酸酯，包括二琥珀醯亞胺酯，如3,3'-二硫代雙(琥珀醯亞胺基丙酸酯)、和雙官能馬來醯亞胺，如雙-N-馬來醯亞胺-1,8-辛烷。衍生劑如3-[(對疊氮基苯基)二硫代]丙醯亞胺酸甲酯產生能夠在光存在下形成交聯的可光活化中間體。替代性地，反應性水不溶性基質如溴化氰活化的碳水化合物和反應性底物，如美國專利案號3,969,287；3,691,016；4,195,128；4,247,642；4,229,537；和4,330,440所述，用於蛋白質固定。
麩醯胺酸醯殘基和天冬醯胺醯殘基通常分別脫醯胺成相應的穀胺醯殘基和天冬胺醯殘基。可替代地，該等殘基在弱酸性條件下脫醯胺。該等殘基的任一形式都屬於本發明之範圍。
其他修飾包括對脯胺酸和離胺酸的羥基化、對絲胺醯或蘇胺醯殘基的羥基的磷酸化、對離胺酸、精胺酸和組胺酸側鏈的α-胺基的甲基化（T. E. Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties [蛋白質：結構和分子特性], W. H. Freeman & Co. [W.H.弗裡曼公司], San Francisco [三藩市], 1983, 第79-86頁）、對N末端胺的乙醯化和對任何C末端羧基的醯胺化。
包括在本發明範圍內的另一種類型的抗原結合分子的共價修飾包括改變蛋白質的糖基化模式。如本領域中已知的，糖基化模式可以取決於蛋白質的序列（例如，下文論述的特定糖基化胺基酸殘基的存在或不存在）或其中產生蛋白質的宿主細胞或生物體。下面論述特定的表現系統。
多肽的糖基化典型地是N-連接或O-連接的。N-連接係指碳水化合物部分連接至天冬醯胺殘基的側鏈。三肽序列天冬醯胺-X-絲胺酸和天冬醯胺-X-蘇胺酸（其中X為除脯胺酸以外的任何胺基酸）係將碳水化合物部分酶促連接至天冬醯胺側鏈的識別序列。因此，在多肽中該等三肽序列中的任一個的存在產生潛在的糖基化位點。O-連接糖基化係指將糖N-乙醯半乳糖胺、半乳糖或木糖中的一種連接至羥基胺基酸，最常見的是絲胺酸或蘇胺酸，儘管也可使用5-羥基脯胺酸或5-羥基離胺酸。
在抗原結合分子中添加糖基化位點通常藉由改變胺基酸序列，以使其含有上述三肽序列（對於N-連接的糖基化位點）中的一個或多個來實現。還可以藉由向起始序列（對於O-連接的糖基化位點）添加或取代為一個或多個絲胺酸或蘇胺酸殘基來作出改變。為了方便起見，較佳的是藉由DNA水平的變化來改變抗原結合分子的胺基酸序列，特別是藉由使在預選的鹼基處編碼多肽的DNA突變，使得生成將翻譯為所需胺基酸的密碼子。
增加抗原結合分子上的碳水化合物部分的數量的另一種手段係藉由將糖苷化學或酶促偶聯至蛋白質。該等程序的有利之處在於它們不需要在具有用於N-和O-連接的糖基化的糖基化能力的宿主細胞中產生蛋白質。取決於所使用的偶聯方式，一種或多種糖可連接至 (a) 精胺酸和組胺酸，(b) 游離羧基，(c) 游離巰基，如半胱胺酸的那些，(d) 游離羥基，如絲胺酸、蘇胺酸或羥基脯胺酸的那些，I 芳香族殘基，如苯丙胺酸、酪胺酸或色胺酸的那些，或 (f) 麩醯胺酸的醯胺基團。該等方法描述於WO 87/05330以及Aplin和Wriston, 1981, CRC Crit. Rev. Biochem. [CRC生物化學關鍵評論], 第259-306頁中。
存在於起始抗原結合分子上的碳水化合物部分的去除可以藉由化學或酶促完成。化學去糖基化要求將蛋白質暴露於化合物三氟甲磺酸，或等效化合物。該處理導致除連接糖（N-乙醯葡糖胺或N-乙醯半乳糖胺）以外的大多數或所有糖裂解，同時使多肽保持完整。化學去糖基化由Hakimuddin等人, 1987, Arch.Biochem. Biophys. [生物化學與生物物理學集刊] 259:52和Edge等人, 1981, Anal.Biochem. [分析生物化學] 118:131描述。多肽上碳水化合物部分的酶促裂解可以藉由使用多種內切糖苷酶和外切糖苷酶實現，如由Thotakura等人, 1987, Meth. Enzymol. [酶學方法]138:350所述之。可以藉由使用化合物衣黴素防止潛在糖基化位點處的糖基化，如由Duskin等人, 1982, J. Biol. Chem.[生物化學雜誌] 257:3105所述之。衣黴素阻斷蛋白質-N-糖苷鍵的形成。
本文中還考慮了抗原結合分子的其他修飾。例如，抗原結合分子的另一種類型的共價修飾包括以美國專利案號4,640,835、4,496,689、4,301,144、4,670,417、4,791,192或4,179,337中示出的方式將抗原結合分子連接至各種非蛋白質聚合物，包括但不限於各種多元醇，例如聚乙二醇、聚丙二醇、聚氧化烯或聚乙二醇和聚丙二醇的共聚物。另外，如本領域已知的，胺基酸取代可以在抗原結合分子內的不同位置進行，例如以便促進聚合物如PEG的添加。
在一些實施方式中，本發明之抗原結合分子的共價修飾包括添加一種或多種標記。標記基團可以經由各種長度的間隔臂與抗原結合分子偶聯，以減少潛在的空間位阻。用於標記蛋白質的各種方法在本領域中是已知的並且可以用於進行本發明。術語「標記」或「標記基團」係指任何可檢測的標記。一般來講，標記屬於多種類別，這取決於將檢測它們的測定 - 以下實例包括但不限於： a)  同位素標記，該等同位素標記可以是放射性同位素或重同位素，如放射性同位素或放射性核素（例如 3H、 14C、 15N、 35S、 89Zr、 90Y、 99Tc、 111In、 125I、 131I） b) 磁性標記（例如磁性顆粒） c)  氧化還原活性部分 d) 光學染料（包括但不限於，生色團、磷光體和螢光團），如螢光基團（例如FITC、羅丹明、鑭系元素磷光體）、化學發光基團和螢光團，該等螢光團可以是「小分子」螢光劑或蛋白質螢光劑 e)  酶促基團（例如辣根過氧化物酶、β-半乳糖苷酶、螢光素酶、鹼性磷酸酶） f)  生物素化基團 g) 由第二報導子識別的預定多肽表位（例如，白胺酸拉鍊對序列、第二抗體的結合側、金屬結合結構域、表位標籤等）
「螢光標記」意指可以經由其固有的螢光特性檢測到的任何分子。適合的螢光標記包括但不限於螢光素、羅丹明、四甲基羅丹明、伊紅、赤蘚紅、香豆素、甲基-香豆素、芘、孔雀石綠、二苯乙烯、螢光黃、瀑布藍J、德克薩斯紅、IAEDANS、EDANS、BODIPY FL、LC紅640、Cy5、Cy5.5、LC紅705、俄勒岡綠、Alexa-Fluor染料（Alexa Fluor 350、Alexa Fluor 430、Alexa Fluor 488、Alexa Fluor 546、Alexa Fluor 568、Alexa Fluor 594、Alexa Fluor 633、Alexa Fluor 660、Alexa Fluor 680）、瀑布藍、瀑布黃和R-藻紅蛋白（PE）（俄勒岡州尤金市的分子探針公司（Molecular Probes, Eugene, OR））、FITC、羅丹明和德克薩斯紅（伊利諾州羅克福德的皮爾斯公司（Pierce, Rockford, IL））、Cy5、Cy5.5、Cy7（賓夕法尼亞州匹茲堡市的阿默舍姆生命科學公司（Amersham Life Science, Pittsburgh, PA））。適合的光學染料（包括螢光團）描述於Richard P. Haugland的Molecular Probes Handbook [分子探針手冊]中。
合適的蛋白質螢光標記還包括但不限於，綠色螢光蛋白，包括GFP的Renilla、Ptilosarcus、或Aequorea種類（Chalfie等人, 1994, Science[科學] 263:802-805）、EGFP（Clontech實驗室公司（Clontech Laboratories, Inc.），Genbank登錄號U55762）、藍色螢光蛋白（BFP，量子生物技術公司（Quantum Biotechnologies, Inc.），加拿大魁北克省蒙特利爾市邁松納夫大道西1801號第8層（郵編：H3H 1J9）（1801 de Maisonneuve Blvd. West, 8th Floor, Montreal, Quebec, Canada H3H 1J9）；Stauber, 1998, Biotechniques[生物技術] 24:462-471；Heim等人, 1996, Curr.Biol. [當代生物學] 6:178-182）、增強型黃色螢光蛋白（EYFP，克羅泰克實驗室有限公司）、螢光素酶（Ichiki等人, 1993, J. Immunol. [免疫學雜誌] 150:5408-5417）、β半乳糖苷酶（Nolan等人, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. [美國國家科學院院刊] 85:2603-2607）和海腎（Renilla）（WO 92/15673、WO 95/07463、WO 98/14605、WO 98/26277、WO 99/49019、美國專利案號5,292,658；5,418,155；5,683,888；5,741,668；5,777,079；5,804,387；5,874,304；5,876,995；5,925,558）。
本發明之抗原結合分子還可以包含另外的結構域，該等結構域例如有助於分離分子或關於該分子的適應性藥物動力學分佈。有助於分離抗原結合分子的結構域可以選自肽模體或輔助性地引入的部分，該等部分可以在分離方法（例如分離柱）中捕獲。此類另外的結構域的非限制性實施方式包括稱為Myc-標籤、HAT-標籤、HA-標籤、TAP-標籤、GST-標籤、幾丁質結合結構域（CBD-標籤）、麥芽糖結合蛋白（MBP-標籤）、Flag-標籤、Strep-標籤以及其變體（例如StrepII-標籤）和His-標籤的肽模體。以鑒定的CDR為特徵的本文揭露的所有抗原結合分子都可以包含His-標籤結構域，該His-標籤結構域通常稱為分子的胺基酸序列中的連續His殘基重複序列、較佳的是5個、且更較佳的是6個His殘基（六組胺酸）。His標記可以位於例如在抗原結合分子的N末端或C末端，較佳的是位於C末端。最較佳的是，六組胺酸標記（HHHHHH）（SEQ ID NO: 199）經由肽鍵與根據本發明之抗原結合分子的C末端連接。另外，PLGA-PEG-PLGA的軛合物系統可以與聚組胺酸標籤組合用於緩釋應用和改善的藥物動力學分佈。
還考慮了本文所述之抗原結合分子的胺基酸序列修飾。例如，可能需要改善抗原結合分子的結合親和力和/或其他生物學特性。抗原結合分子的胺基酸序列變體係藉由將適當核苷酸變化引入抗原結合分子核酸中或藉由肽合成來製備。所有下面描述的胺基酸序列修飾均應產生仍然保留未修飾的親本分子的所希望生物活性（與靶細胞表面抗原和CD3結合）的抗原結合分子。
術語「胺基酸」或「胺基酸殘基」典型地是指具有其本領域公認的定義的胺基酸，如選自由以下組成之群組的胺基酸：丙胺酸（Ala或A）；精胺酸（Arg或R）；天冬醯胺（Asn或N）；天冬胺酸（Asp或D）；半胱胺酸（Cys或C）；麩醯胺酸（Gin或Q）；麩胺酸（Giu或E）；甘胺酸（Giy或G）；組胺酸（His或H）；異白胺酸（He或I）；白胺酸（Leu或L）；離胺酸（Lys或K）；甲硫胺酸（Met或M）；苯丙胺酸（Phe或F）；脯胺酸（Pro或P）；絲胺酸（Ser或S）；蘇胺酸（Thr或T）；色胺酸（Trp或W）；酪胺酸（Tyr或Y）；以及纈胺酸（Val或V），儘管可以根據需要使用修飾的、合成的或稀有的胺基酸。一般來講，胺基酸可以分組為具有非極性側鏈（例如Ala、Cys、He、Leu、Met、Phe、Pro、Val）；具有帶負電的側鏈（例如Asp、Giu）；具有帶正電的側鏈（例如Arg、His、Lys）；或具有不帶電的極性側鏈（例如Asn、Cys、Gin、Giy、His、Met、Phe、Ser、Thr、Trp和Tyr）。
胺基酸修飾包括例如抗原結合分子的胺基酸序列內的殘基的缺失和/或插入和/或取代。進行缺失、插入和取代的任何組合以達到最終構建體，條件係最終的構建體具有所希望的特徵。胺基酸變化還可能改變抗原結合分子的翻譯後加工，例如改變糖基化位點的數目或位置。
例如，可以在每個CDR中插入、取代或缺失1、2、3、4、5或6個胺基酸（當然，取決於其長度），而可以在每個FR中插入、取代或缺失1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或25個胺基酸。較佳的是，抗原結合分子中的胺基酸序列插入物包括與含有上百或更多個殘基的多肽的在1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個殘基的長度範圍內的胺基酸和/或羧基末端融合物，以及單個或多個胺基酸殘基的序列內插入物。相應的修飾也可以在本發明之抗原結合分子的第三結構域內進行。本發明之抗原結合分子的插入變體包括與酶的抗原結合分子的N末端或C末端的融合物或與多肽的融合物。
取代誘變最感興趣的位點包括（但不限於）重鏈和/或輕鏈的CDR，特別是高變區，但也考慮重鏈和/或輕鏈的FR改變。取代較佳的是如本文所述之保守取代。較佳的是，可以在CDR中取代1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸，而可以在框架區（FR）中取代1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或25個胺基酸，這取決於CDR或FR的長度。例如，如果CDR序列涵蓋6個胺基酸，則設想該等胺基酸中的1個、2個或3個被取代。類似地，如果CDR序列涵蓋15個胺基酸，則設想該等胺基酸中的1個、2個、3個、4個、5個或6個被取代。
用於鑒定作為誘變較佳的位置的抗原結合分子的某些殘基或區域的有用方法稱為「丙胺酸掃描誘變」，如Cunningham和Wells在Science [科學], 244: 1081-1085 (1989)中所述。此處，鑒定抗原結合分子內的殘基或靶殘基基團（例如帶電殘基如arg、asp、his、lys和glu），並將其用中性或帶負電的胺基酸（最較佳的是丙胺酸或聚丙胺酸）替代以影響胺基酸與表位的相互作用。
然後藉由在取代位點處或為取代位點引入進一步的或其他變體來精煉那些展示對取代具有功能敏感性的胺基酸位置。因此，雖然用於引入胺基酸序列變化的位點或區域係預定的，但突變本身的性質無需預定。例如，為了分析或優化給定位點處突變的性能，可以在靶密碼子或區域處實施丙胺酸掃描或隨機誘變，並且篩選所表現的抗原結合分子變體以獲得所需活性的最優組合。用於在具有已知序列的DNA中的預定位點進行取代突變的技術係熟知的，例如，M13引物誘變和PCR誘變。使用抗原結合活性（如靶細胞表面抗原或CD3結合）的測定來篩選突變體。
一般來講，如果胺基酸在重鏈和/或輕鏈的一個或多個或所有CDR中被取代，則較佳的是，之後獲得的「取代的」序列與「初始」CDR序列具有至少60%或65%、更較佳的是70%或75%、甚至更較佳的是80%或85%並且特別較佳的是90%或95%同一性。這意指該取代取決於CDR的長度與「取代」序列的相同程度。例如，具有5個胺基酸的CDR較佳的是與其取代序列80%相同，以便取代至少一個胺基酸。因此，抗原結合分子的CDR可以與其經取代序列具有不同程度的同一性，例如，CDRL1可以具有80%同一性，而CDRL3可具有90%同一性。
較佳的取代（或替代）係保守取代。然而，只要抗原結合分子保留其經由第一結構域與靶細胞表面抗原結合並且經由第二結構域與CD3，分別地CD3ε結合的能力和/或其CDR與之後取代的序列具有同一性（與「原始」CDR序列具有至少60%或65%，更較佳的是70%或75%，甚至更較佳的是80%或85%並且特別較佳的是90%或95%同一性），則設想出任何取代（包括非保守取代或來自下表3中列出的「示例性取代」的一個或多個）。
保守取代示於表3中「較佳的取代」標題之下。如果這樣的取代導致生物活性變化，則可以將在表3中命名為「示例性取代」的、或如在下文進一步參考胺基酸類別所述之更多實質性變化引入，並且篩選所希望的特徵。 [表4]：胺基酸取代
原始的 示例性取代 較佳的取代
Ala（A） val、leu、ile Val
Arg I lys、gln、asn Lys
Asn（N） gln、his、asp、lys、arg Gln
Asp（D） glu、asn Glu
Cys I ser、ala Ser
Gln（Q） asn、glu Asn
Glu I asp、gln Asp
Gly（G） Ala Ala
His（H） asn、gln、lys、arg Arg
Ile（I） leu、val、met、ala、phe Leu
Leu（L） 正白胺酸、ile、val、met、ala Ile
Lys（K） arg、gln、asn Arg
Met（M） leu、phe、ile Leu
Phe（F） leu、val、ile、ala、tyr Tyr
Pro（P） Ala Ala
Ser（S） Thr Thr
Thr（T） Ser Ser
Trp（W） tyr、phe Tyr
Tyr（Y） trp、phe、thr、ser Phe
Val（V） ile、leu、met、phe、ala Leu
本發明之抗原結合分子的生物學特性的實質性修飾係藉由以下方式來完成：選擇在維持以下的效應方面顯著不同的取代：(a) 取代區域中的多肽骨架的結構，例如呈片層或螺旋構象；(b) 分子在靶位點的電荷或疏水性；或 (c) 側鏈體積。基於共同的側鏈特性將天然存在的殘基分組：(1) 疏水性：正白胺酸、met、ala、val、leu、ile；(2) 中性親水性：cys、ser、thr、asn、gln；(3) 酸性：asp、glu；(4) 鹼性：his、lys、arg；(5) 影響鏈取向的殘基：gly、pro；以及 (6) 芳香族的：trp、tyr、phe。
非保守性取代將需要將該等類別中一類別的成員換成另一類別。任何不參與維持抗原結合分子的適當構象的半胱胺酸殘基可以通常被絲胺酸取代，以改善分子的氧化穩定性並防止異常交聯。相反，可以將一個或多個半胱胺酸鍵添加至抗體以改善其穩定性（特別是在抗體係抗體片段（如Fv片段）的情況下）。
對於胺基酸序列，藉由使用本領域已知的標準技術確定序列同一性和/或相似性，包括但不限於，Smith和Waterman, 1981, Adv. Appl. Math.[高級應用數學] 2:482的局部序列同一性演算法、Needleman和Wunsch, 1970, J. Mol. Biol.[分子生物學雜誌] 48:443的序列同一性比對演算法、Pearson和Lipman, 1988, Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A.[美國國家科學院院刊] 85:2444的相似性方法的檢索、該等演算法的電腦化實現（威斯康辛遺傳學套裝軟體（Wisconsin Genetics Software Package）中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA，遺傳學電腦集團（Genetics Computer Group），威斯康辛州麥德遜575科學大道（575 Science Drive, Madison, Wis.））、Devereux等人, 1984, Nucl. Acid Res.[核酸研究] 12:387-395所述之最佳匹配序列程式，較佳的是使用預設設置，或藉由檢查。較佳的是，藉由FastDB基於以下參數計算同一性百分比：錯配罰分為1；空位罰分為1；空位大小罰分為0.33；以及連接罰分為30，「Current Methods in Sequence Comparison and Analysis [序列比較和分析的當前方法]」, Macromolecule Sequencing and Synthesis [大分子定序與合成], Selected Methods and Applications [所選擇的方法與應用], 第127-149頁 (1988), Alan R. Liss公司。
有用的演算法的實例係PILEUP。PILEUP使用漸進式成對比對從一組相關序列中創建多序列比對。它還可以繪製顯示用於創建比對的聚類關係的樹狀圖。PILEUP使用Feng和Doolittle, 1987, J.Mol. Evol. [分子進化雜誌]35:351-360的漸進式比對方法的簡單化；該方法類似於Higgins和Sharp, 1989, CABIOS5:151-153所述之方法。有用的PILEUP參數包括3.00的預設空位權重、0.10的預設空位長度權重和加權末端空位。
有用的演算法的另一實例係BLAST演算法，描述於以下中：Altschul等人, 1990, J.Mol. Biol. [分子生物學雜誌] 215:403-410；Altschul等人, 1997, NucleicAcids Res. [核酸研究] 25:3389-3402；和Karin等人, 1993, Proc.Natl. Acad. Sci. U.S.A. [美國國家科學院院刊] 90:5873-5787。特別有用的BLAST程式係從Altschul等人, 1996, Methodsin Enzymology [酶學方法] 266:460-480獲得的WU-BLAST-2程式。WU-BLAST-2使用若干個搜索參數，其中大部分都設定為預設值。將可調整參數設置為以下值：重疊間隔= 1，重疊分數= 0.125，字閾值（T）= II。HSP S和HSP S2參數係動態值，並且由程式本身根據特定序列的組成和特定數據庫的組成來確立，根據該特定數據庫來搜索感興趣的序列；然而，可以調整該等值以增加靈敏度。
另外有用的演算法係由Altschul等人, 1993, Nucl. Acids Res.[核酸研究] 25:3389-3402報導的空位BLAST。空位BLAST使用BLOSUM-62取代評分；閾值T參數設定為9；觸發非空位擴展的按兩下方法，對k的空位長度收取10+k的成本；Xu設定為16，並且Xg設定為40（用於數據庫搜索階段）以及67（用於演算法的輸出階段）。空位比對由對應於約22比特的評分觸發。
一般來講，各個變體CDR或VH/VL序列之間的胺基酸同源性、相似性或同一性與本文描繪的序列係至少60%，並且更典型地具有至少65%或70%，更較佳的是至少75%或80%，甚至更較佳的是至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%和幾乎100%的較佳的是增加的同源性或同一性。以類似的方式，相對於本文鑒定的結合蛋白的核酸序列的「核酸序列同一性百分比（%）」定義為候選序列中與抗原結合分子的編碼序列中的核苷酸殘基相同的核苷酸殘基的百分比。具體方法利用設定為預設參數的WU-BLAST-2的BLASTN模組，重疊間隔和重疊分數分別設定為1和0.125。
一般來講，編碼各個變體CDR或VH/VL序列的核苷酸序列與本文描繪的核苷酸序列之間的核酸序列同源性、相似性或同一性係至少60%，並且更典型地具有至少65%、70%、75%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%和幾乎100%的較佳的是增加的同源性或同一性。因此，「變體CDR」或「變體VH/VL區」係與本發明之親本CDR/VH/VL具有指定的同源性、相似性或同一性，並且共用生物功能，包括但不限於親本CDR或VH/VL的特異性和/或活性的至少60%、65%、70%、75%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%。
在一個實施方式中，根據本發明之抗原結合分子對人種系的同一性百分比≥ 70%或≥ 75%，更較佳的是≥ 80%或≥ 85%，甚至更較佳的是≥ 90%，並且最較佳的是≥ 91%、≥ 92%、≥ 93%、≥ 94%、≥ 95%或甚至≥ 96%。與人抗體種系基因產物的同一性被認為係降低治療期間治療性蛋白引發患者中針對藥物的免疫應答的風險的重要特徵。Hwang和Foote（「Immunogenicity of engineered antibodies [工程化抗體的免疫原性]」; Methods [方法] 36 (2005) 3-10）證明了藥物抗原結合分子的非人部分的減少導致治療期間患者中誘導抗藥物抗體的風險降低。藉由比較無數臨床評價的抗體藥物和對應的免疫原性數據，顯示以下趨勢：抗體的V區的人源化使得蛋白質免疫原性（平均5.1%的患者）比攜帶未改變的非人V區的抗體（平均23.59%的患者）更低。因此，對於抗原結合分子形式的基於V區的蛋白質治療劑，期望具有與人序列的更高程度的同一性。出於確定種系同一性的目的，可以使用Vector NTI軟體將VL的V區與人種系V區段和J區段（http://vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk/）的胺基酸序列進行比對並且藉由將相同的胺基酸殘基除以VL的胺基酸殘基總數計算胺基酸序列（以百分比計）。對於VH區段（http://vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk/）同樣適用的，只是由於VH CDR3的高度多樣性和缺少現有人種系VH CDR3比對配偶體，因此可以排除VH CDR3。然後可以使用重組技術來增加與人抗體種系基因的序列同一性。
在進一步實施方式中，本發明之雙特異性抗原結合分子在標準研究規模條件下，例如在標準的兩步純化製程中表現出高單體產量。較佳的是，根據本發明之抗原結合分子的單體產率為≥ 0.25 mg/L上清液、更較佳的是≥ 0.5 mg/L、甚至更較佳的是≥ 1 mg/L、以及最較佳的是≥ 3 mg/L上清液。
同樣地，可以確定抗原結合分子的二聚體抗原結合分子同種型的產率，並由此確定單體百分比（即，單體:(單體+二聚體)）。單體和二聚體抗原結合分子的生產力和計算的單體百分比可以例如在來自滾瓶中的標準化研究規模生產的培養上清液的SEC純化步驟中獲得。在一個實施方式中，抗原結合分子的單體百分比≥ 80%、更較佳的是≥ 85%、甚至更較佳的是≥ 90%、以及最較佳的是≥ 95%。
在一個實施方式中，抗原結合分子的較佳的血漿穩定性（具有血漿的EC50與無血漿的EC50的比率）≤ 5或≤ 4、更較佳的是≤ 3.5或≤ 3、甚至更較佳的是≤ 2.5或≤ 2、以及最較佳的是≤ 1.5或≤ 1。抗原結合分子的血漿穩定性可以藉由將構建體在37°C下在人血漿中孵育24小時、之後在 51鉻釋放細胞毒性測定中測定EC50來測試。細胞毒性測定中的效應細胞可以為刺激的富集的人CD8陽性T細胞。靶細胞可以是例如用人靶細胞表面抗原轉染的CHO細胞。效應細胞與靶細胞（E:T）比率可以選擇為10 : 1。用於此目的的人血漿庫來源於由EDTA塗覆的注射器收集的健康供體的血液。藉由離心去除細胞組分，並且收集上層血漿相並隨後彙集。作為對照，在RPMI-1640培養基中的細胞毒性測定之前立即稀釋抗原結合分子。血漿穩定性計算為EC50（血漿孵育後）與EC50（對照）的比率。
此外，較佳的是本發明之抗原結合分子的單體到二聚體的低轉化率。可以在不同條件下測量轉化並且藉由高性能尺寸排阻層析法進行分析。例如，抗原結合分子的單體同種型的孵育可以在37°C以及例如100 μg/ml或250 μg/ml的濃度下在孵育箱中進行7天。在該等條件下，較佳的是本發明之抗原結合分子顯示二聚體百分比≤ 5%、更較佳的是≤ 4%、甚至更較佳的是≤ 3%、甚至更較佳的是≤ 2.5%、甚至更較佳的是≤ 2%、甚至更較佳的是≤ 1.5%以及最較佳的是≤ 1%或≤ 0.5%或甚至0%。
還較佳的是，本發明之雙特異性抗原結合分子在多次冷凍/解凍循環後呈現非常低的二聚體轉化率。例如，將抗原結合分子單體在例如通用配製緩衝液中調整至濃度為250 μg/ml，並且進行三個冷凍/解凍循環（在-80°C下冷凍30 min，之後在室溫下解凍30 min），之後進行高性能SEC以確定已經轉化成二聚體抗原結合分子的最初單體抗原結合分子的百分比。較佳的是，雙特異性抗原結合分子的二聚體百分比≤ 5%、更較佳的是≤ 4%、甚至更較佳的是≤ 3%、甚至更較佳的是≤ 2.5%、甚至更較佳的是≤ 2%、甚至更較佳的是≤ 1.5%以及最較佳的是≤ 1%或甚至≤ 0.5%，例如在三次冷凍/解凍循環後。
本發明之雙特異性抗原結合分子較佳的是顯示出聚集溫度≥ 45°C或≥ 50°C、更較佳的是≥ 52°C或≥ 54°C、甚至更較佳的是≥ 56°C或≥ 57°C、以及最較佳的是≥ 58°C或≥ 59°C的有利熱穩定性。熱穩定性參數可以根據抗體聚集溫度如下確定：將濃度為250 μg/ml的抗體溶液轉移到一次性比色杯中並置於動態光散射（DLS）裝置中。將樣本以0.5°C/min的加熱速率從40°C加熱至70°C，恒定獲取測量的半徑。使用指示蛋白質和聚集物熔融的半徑增加來計算抗體的聚集溫度。
替代性地，可以藉由差示掃描量熱法（DSC）確定溫度熔融曲線以確定抗原結合分子的固有生物物理學蛋白質穩定性。該等實驗使用微凱爾有限公司（MicroCal LLC）（美國麻塞諸塞州的北安普頓（Northampton, MA, U.S.A））VP-DSC裝置進行。與僅含有配製緩衝液的樣本相比，含有抗原結合分子的樣本的能量吸收記錄為20°C至90°C。例如在SEC運行緩衝液中將抗原結合分子調整至終濃度為250 μg/ml。為了記錄相應熔融曲線，逐步升高整個樣本溫度。在每個溫度T下，記錄樣本和配製緩衝液參考物的能量攝取。將樣本的能量攝取Cp（千卡/莫耳/°C）減去參考物的差針對相應溫度作圖。熔融溫度被定義為第一次最大能量攝取時的溫度。
還設想本發明之靶細胞表面抗原xCD3雙特異性抗原結合分子具有≤ 0.2、較佳的是≤ 0.15、更較佳的是≤ 0.12、甚至更較佳的是≤ 0.1並且最較佳的是≤ 0.08的濁度（如在將純化的單體抗原結合分子濃縮至2.5 mg/ml並過夜孵育後藉由OD340測量的）。
進一步設想本發明之雙特異性抗原結合分子顯示出治療功效或抗腫瘤活性。這可以例如在以下晚期人腫瘤異種移植模型的實例中揭露的研究中評估：
熟悉該項技術者知道如何修改或調整該研究的某些參數，例如注射的腫瘤細胞的數量、注射位點、移植的人T細胞的數量、有待投與的雙特異性抗原結合分子的量以及時間線，同時仍然獲得有意義且可再現的結果。較佳的是，腫瘤生長抑制T/C[%] ≤ 70或≤ 60、更較佳的是≤ 50或≤ 40、甚至更較佳的是≤ 30或≤ 20以及最較佳的是≤ 10或≤ 5或甚至≤ 2.5。
在本發明之抗原結合分子的較佳的實施方式中，抗原結合分子係單鏈抗原結合分子。
此外，在本發明之抗原結合分子的較佳的實施方式中，所述第三結構域按胺基至羧基順序包含： 鉸鏈-CH2-CH3-連接子-鉸鏈-CH2-CH3。
另外，在本發明之一個實施方式中，第三結構域的一個或較佳的是每個（兩個）多肽單體的CH2結構域包含結構域內半胱胺酸二硫橋。如本領域所知，術語「半胱胺酸二硫橋」係指具有一般結構 R –S–S–R 的官能基。該連接也稱為SS鍵或二硫鍵，並且藉由半胱胺酸殘基的兩個硫醇基團偶聯衍生。對於本發明之抗原結合分子，特別較佳的是將在成熟抗原結合分子中形成半胱胺酸二硫橋的半胱胺酸引入對應於309和321（Kabat編號）的CH2結構域的胺基酸序列。
在本發明之一個實施方式中，去除CH2結構域的Kabat位置314中的糖基化位點。較佳的是藉由N314X取代實現糖基化位點的去除，其中X係除Q之外的任何胺基酸。所述取代較佳的是為N314G取代。在更較佳的實施方式中，所述CH2結構域另外包含以下取代（根據Kabat的位置）：V321C和R309C（該等取代在Kabat位置309和321處引入結構域內半胱胺酸二硫橋）。
假定與本領域中已知的雙特異性異Fc抗原結合分子相比（圖1b）本發明之抗原結合分子的較佳的特徵例如可以尤其關於在CH2結構域中引入上述修飾。因此，對於本發明之構建體較佳的是，本發明之抗原結合分子的第三結構域中的CH2結構域在Kabat位置309和321處包含結構域內半胱胺酸二硫橋和/或Kabat位置314處的糖基化位點藉由上述N314X取代去除，較佳的是藉由N314G取代被去除。
在本發明之進一步較佳的實施方式中，本發明之抗原結合分子的第三結構域中的CH2結構域在Kabat位置309和321處包含結構域內半胱胺酸二硫橋，並且Kabat位置314處的糖基化位點藉由N314G取代被去除。
在一個實施方式中，本發明提供了抗原結合分子，其中： (182)   第一結構域包含兩個抗體可變結構域，並且第二結構域包含兩個抗體可變結構域； (ii)       第一結構域包含一個抗體可變結構域，並且第二結構域包含兩個抗體可變結構域； (iii)      第一結構域包含兩個抗體可變結構域，並且第二結構域包含一個抗體可變結構域；或者 (iv)      第一結構域包含一個抗體可變結構域，並且第二結構域包含一個抗體可變結構域。
因此，第一結構域和第二結構域可以是各自包含兩個抗體可變結構域（如VH和VL結構域）的結合結構域。此類包含兩個抗體可變結構域的結合結構域的實例在上文進行了描述並且包括例如上文所述之Fv片段、scFv片段或Fab片段。可替代地，該等結合結構域中的一個或兩個可以僅包含單一可變結構域。這種單結構域結合結構域的實例在上文進行了描述並且包括例如奈米抗體或僅包含一個可變結構域的單一可變結構域抗體，該一個可變結構域可以是獨立於其他V區或結構域特異性結合抗原或表位的VHH、VH或VL。
在本發明之抗原結合分子的較佳的實施方式中，第一結構域和第二結構域經由肽連接子與第三結構域融合。較佳的肽連接子已在上文描述並且特徵在於胺基酸序列Gly-Gly-Gly-Gly-Ser，即Gly 4Ser（SEQ ID NO: 187），或其聚合物，即(Gly 4Ser)x，其中x為1或更大的整數（例如2或3）。用於第一結構域和第二結構域與第三結構域融合的特別較佳的連接子在SEQ ID No: 1中描繪。
在較佳的實施方式中，本發明之抗原結合分子的特徵在於按胺基至羧基順序包含： (a) 第一結構域； (b) 肽連接子，該肽連接子具有選自由SEQ ID No: 187-189組成之群組的胺基酸序列； I   第二結構域； (d) 肽連接子，該肽連接子具有選自由以下組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID NO: 187、188、189、195、196、197和198； I   第三結構域的第一多肽單體； (f) 肽連接子，該肽連接子具有選自由以下組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID No: 191、192、193和194；以及 (g) 第三結構域的第二多肽單體。
在本發明之一個方面中，由第一結構域結合的靶細胞表面抗原係腫瘤抗原、對免疫障礙特異的抗原或病毒抗原。如本文使用的術語「腫瘤抗原」可以理解為呈遞在腫瘤細胞上的那些抗原。該等抗原可以呈遞在具有細胞外部分的細胞表面上，該細胞外部分通常與分子的跨膜和細胞質部分組合。該等抗原有時只能由腫瘤細胞呈遞，而從來不能由正常細胞呈遞。與正常細胞相比，腫瘤抗原可以只在腫瘤細胞上表現或者可以代表腫瘤特異性突變。在這種情況下，它們被稱為腫瘤特異性抗原。更常見的是由腫瘤細胞和正常細胞呈遞的抗原，並且它們被稱為腫瘤相關抗原。與正常細胞相比，該等腫瘤相關抗原可以過表現，或者由於腫瘤組織的結構與正常組織相比較不緊密，因此係腫瘤細胞中的抗體結合可接近的。本文使用的腫瘤抗原的非限制性實例係CDH19、MSLN、DLL3、FLT3、EGFRvIII、CD33、CD19、MUC17、CLDN18.2、CDH3、CD70、BCMA和PSMA。
在本發明之上下文中，對免疫障礙特異的其他靶細胞表面抗原包括例如TL1A和TNF-α。所述靶較佳的是藉由本發明之雙特異性抗原結合分子解決，其較佳的是全長抗體。在一個非常較佳的實施方式中，本發明之抗體係異源IgG抗體。
在本發明之抗原結合分子的較佳的實施方式中，腫瘤抗原，較佳的是腫瘤抗原選自由以下組成之群組：CDH19、MSLN、DLL3、FLT3、EGFRvIII、CD33、CD19、MUC17、CLDN18.2、CDH3、CD70、BCMA和PSMA。
在本發明之一個方面中，抗原結合分子按胺基至羧基順序包含： (a) 第一結構域，該第一結構域具有選自由以下組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID No: 7、8、17、27、28、37、38、39、40、41、48、49、50、51、52、59、60、61、62、63、64、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、89、90、91、92、93、100、101、102、103、104、113、114、121、122、123、124、125、131、132、133、134、135、136、143、144、145、146、147、148、149、150、151、158、159、160、161、162、163、164、165、166、173、174、175、176、177、178、179、180、181、223、235和246， (b) 肽連接子，該肽連接子具有選自由SEQ ID No: 187-189組成之群組的胺基酸序列； I   第二結構域，該第二結構域具有選自由以下SEQ ID No組成之群組的胺基酸序列：WO 2008/119567的SEQ ID No: 23、25、41、43、59、61、77、79、95、97、113、115、131、133、149、151、167、169、185或187或SEQ ID NO: 202； (d) 肽連接子，該肽連接子具有選自由以下組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID No: 187、188、189、195、196、197和198； I   第三結構域的第一多肽單體，該第一多肽單體具有選自由以下組成之群組的多肽序列：WO 2017/134140的SEQ ID No: 17-24； (f) 肽連接子，該肽連接子具有選自由以下組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID No: 191、192、193和194；以及 (g) 第三結構域的第二多肽單體，該第二多肽單體具有選自由以下組成之群組的多肽序列：WO 2017/134140的SEQ ID No: 17-24。
在一方面，本發明之雙特異性抗原結合分子的特徵在於具有選自由以下組成之群組的胺基酸序列並且針對相應靶細胞表面抗原： (a) SEQ ID No: 39至41；    CD33 (b) SEQ ID No: 48至52中的每一個；     EGFRvIII (c) SEQ ID No: 59至64中的每一個；     MSLN (d) SEQ ID No: 71至82中的每一個  CDH19 (e) SEQ ID No: 100至104中的每一個     DLL3 (f) SEQ ID No: 7、8、17、113和114     CD19 (g) SEQ ID No: 89至93中的每一個  FLT3 (h) SEQ ID No: 121至125中的每一個     CDH3 (i) SEQ ID No: 132至136中的每一個     BCMA (j) SEQ ID No: 143至151、158至166和173至181中的每一個 PSMA (k) SEQ ID NO 213       MUC17 (l) SEQ ID NO: 225和237中的每一個    CLDN18.2 (m) SEQ ID No: 248            CD70，以及 (n) SEQ ID NO 258和261   CLDN 6
本發明進一步提供了編碼本發明之抗原結合分子的多核苷酸/核酸分子。多核苷酸係由共價鍵合在鏈中的13個或更多個核苷酸單體構成的生物聚合物。DNA（如cDNA）和RNA（如mRNA）係具有不同生物功能的多核苷酸的實例。核苷酸係充當核酸分子如DNA或RNA的單體或亞單位的有機分子。核酸分子或多核苷酸可以為雙股和單股的、線性的和圓形的。它較佳的是包含在載體中，該載體較佳的是包含在宿主細胞中。例如，所述宿主細胞在用本發明之載體或多核苷酸轉化或轉染後能夠表現抗原結合分子。出於此目的，多核苷酸或核酸分子與控制序列可操作地連接。
遺傳密碼係將遺傳物質（核酸）內編碼的資訊翻譯成蛋白質的一組規則。活細胞中的生物解碼係藉由以由mRNA指定的順序連接胺基酸的核糖體，使用tRNA分子攜帶胺基酸並一次讀出mRNA三個核苷酸來完成。該密碼定義了該等核苷酸三聯體的序列（稱為密碼子）如何指定在蛋白質合成期間接下來將添加哪種胺基酸。除了一些例外，核酸序列中的三核苷酸密碼子指定單一胺基酸。因為絕大多數基因都使用完全相同的密碼進行編碼，所以該特定密碼通常稱為規範或標準遺傳密碼。雖然遺傳密碼決定給定編碼區的蛋白質序列，但其他基因組區可能會影響該等蛋白質產生的時間和地點。
此外，本發明提供了載體，該載體包含本發明之多核苷酸/核酸分子。載體係用作將（外來）遺傳物質轉移到細胞中的媒介物的核酸分子。術語「載體」涵蓋但不限於質體、病毒、黏粒和人工染色體。一般來講，工程化載體包含複製起點、多株位點和選擇性標記。載體本身通常是核苷酸序列，該核苷酸序列通常是包含插入物（轉基因）和充當載體的「骨架」的更大序列的DNA序列。除轉基因插入物和骨架外，現代載體可涵蓋其他特徵：啟動子、遺傳標記、抗生素抗性、報告基因、靶向序列、蛋白質純化標籤。稱為表現載體（表現構建體）的載體尤其用於在靶細胞中表現轉基因，並且通常具有控制序列。
術語「控制序列」係指在特定宿主生物體中表現可操作連接的編碼序列所必需的DNA序列。例如，適用於原核生物的控制序列包括啟動子、視需要的操縱子序列和核糖體結合側。已知真核細胞利用啟動子、聚腺苷酸化信號和增強子。
當核酸與另一核酸序列處於功能關係時，該核酸係「可操作地連接的」。例如，如果將前序列或分泌前導序列的DNA表現為參與多肽分泌的前蛋白，則該前序列或分泌前導序列的DNA可操作地連接至該多肽的DNA；如果啟動子或增強子影響編碼序列的轉錄，則該啟動子或增強子可操作地連接至該序列；或者如果核糖體結合側被定位成使得有助於翻譯，則該核糖體結合側可操作地連接至編碼序列。一般來講，「可操作地連接」意指所連接的DNA序列係連續的，並且在分泌性前導序列的情形下是連續的並處於閱讀相（reading phase）中。然而，增強子不必是連續的。連接藉由在方便的限制性位點進行接合來完成。如果不存在此類位點，則根據常規實踐使用合成的寡核苷酸銜接子或連接子。
「轉染」係有意將核酸分子或多核苷酸（包括載體）引入到靶細胞中的過程。該術語主要用於真核細胞中的非病毒方法。轉導通常用於描述病毒介導的核酸分子或多核苷酸的轉移。動物細胞的轉染典型地關於打開細胞膜中的瞬時孔或「洞」，以允許攝取物質。轉染可以使用磷酸鈣，藉由電穿孔，藉由細胞擠壓或藉由將陽離子脂質與物質混合以產生脂質體（該等脂質體與細胞膜融合並將其貨物存放在內部）來進行。
術語「轉化」用於描述核酸分子或多核苷酸（包括載體）向細菌中，以及向非動物真核細胞（包括植物細胞）中的非病毒轉移。因此，轉化係細菌或非動物真核細胞的基因改變，該基因改變係因藉由一個或多個細胞膜從其周圍直接攝取並隨後併入外源遺傳物質（核酸分子）而產生。轉化可以藉由人為手段來實現。為了使轉化發生，細胞或細菌必須處於感受態，這可能作為對如饑餓和細胞密度的環境條件的時間限制應答而發生。
此外，本發明提供了宿主細胞，該宿主細胞用本發明之多核苷酸/核酸分子或載體轉化或轉染。如本文使用的，術語「宿主細胞」或「受體細胞」旨在包括可以是或已經係載體、外源核酸分子和編碼本發明之抗原結合分子的多核苷酸的受體；和/或抗原結合分子本身的受體的任何單獨細胞或細胞培養物。藉由轉化、轉染等方式將相應物質引入到細胞中。術語「宿主細胞」還旨在包括單細胞的後代或潛在後代。因為某些修飾可能由於天然的、意外的或有意的突變或由於環境影響而在後代中發生，所以這種後代事實上可能與親本細胞不完全相同（在形態或基因組或全部DNA補體中），但仍包括在如本文使用術語的範圍內。適合的宿主細胞包括原核細胞或真核細胞，並且還包括但不限於細菌、酵母細胞、真菌細胞、植物細胞和動物細胞，如昆蟲細胞和哺乳動物細胞，例如鼠、大鼠、獼猴或人。
本發明之抗原結合分子可以在細菌中產生。表現後，將本發明之抗原結合分子從大腸桿菌細胞糊中以可溶性級分分離，並且可以藉由例如親和層析法和/或尺寸排除來純化。最終純化可以類似於用於純化例如在CHO細胞中表現的抗體的方法進行。
除了原核生物之外，真核微生物（如絲狀真菌或酵母）係本發明之抗原結合分子的合適的植株或表現宿主。釀酒酵母（ Saccharomyces cerevisiae）或普通麵包酵母係低等真核宿主微生物中最常用的。然而，許多其他屬、物種和菌株通常是可獲得的並且可用於本文中，如粟酒裂殖酵母（ Schizosaccharomyces pombe）；克魯維酵母屬（Kluyveromyce）宿主，如乳酸克魯維酵母（ K. lactis）、脆壁克魯維酵母（ K. fragilis）（ATCC 12424）、保加利亞克魯維酵母（ K. bulgaricus）（ATCC 16045）、威克克魯維酵母（ K. wickeramii）（ATCC 24178）、瓦爾提魯維酵母（ K. waltii）（ATCC 56500）、果蠅克魯維酵母（ K. drosophilarum）（ATCC 36906）、耐熱克魯維酵母（ K. thermotolerans）和馬克斯克魯維酵母（ K. marxianus）；耶氏酵母屬（EP 402 226）；畢赤酵母（EP 183 070）；假絲酵母屬；瑞氏木黴（EP 244 234）；粗糙脈孢菌；許旺酵母屬（Schwanniomyces），如西方許旺酵母（ Schwanniomycesoccidentalis）；和絲狀真菌，如脈孢菌屬（Neurospora）、青黴屬（Penicillium）、彎頸黴屬（Tolypocladium）；和麯黴屬（Aspergillus）宿主，如構巢麯黴（ A. nidulans）和黑麯黴（ A. niger）。
用於表現本發明之糖基化抗原結合分子的合適宿主細胞源自多細胞生物。無脊椎動物細胞的實例包括植物細胞和昆蟲細胞。已經鑒定了來自如草地貪夜蛾（ Spodopterafrugiperda）（毛蟲）、埃及伊蚊（ Aedesaegypti）（蚊子）、白紋伊蚊（Aedes albopictus）（蚊子）、黑腹果蠅（ Drosophilamelanogaster）（果蠅）和家蠶（ Bombyxmori）的宿主的許多桿狀病毒株和變體以及相應的許可性昆蟲宿主細胞。用於轉染的多種病毒株係公眾可獲得的，例如苜蓿銀紋夜蛾（ Autographacalifornica）NPV的L-1變體和家蠶NPV的Bm-5株，並且根據本發明，此類病毒可以用作本文的病毒，特別是用於轉染草地貪夜蛾細胞。
棉花、玉米、馬鈴薯、大豆、矮牽牛、番茄、阿拉伯芥和煙草的植物細胞培養物也可以用作宿主。可用於在植物細胞培養物中產生蛋白質的選殖和表現載體係熟悉該項技術者已知的。參見例如Hiatt等人, Nature [自然] (1989) 342: 76-78；Owen等人 (1992) Bio/Technology [生物技術] 10: 790-794；Artsaenko等人 (1995) The Plant J [植物雜誌] 8: 745-750；以及Fecker等人 (1996) Plant Mol Biol [植物分子生物學] 32: 979-986。
然而，對脊椎動物細胞的興趣最大，並且脊椎動物細胞在培養物（組織培養物）中的繁殖已成為常規程序。有用的哺乳動物宿主細胞系的實例係由SV40（COS-7，ATCC CRL 1651）轉化的猴腎CV1系；人胚胎腎系（293細胞或亞選殖用於在懸浮培養中生長的293細胞，Graham等人, J. Gen Virol.[普通病毒學雜誌] 36 : 59 (1977)）；幼倉鼠腎細胞（BHK，ATCC CCL 10）；中國倉鼠卵巢細胞/-DHFR（CHO，Urlaub等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA [美國國家科學院院刊] 77: 4216 (1980)）；小鼠塞托利細胞（TM4, Mather, Biol. Reprod.[生殖生物學]23: 243-251 (1980)）；猴腎細胞（CVI ATCC CCL 70）；非洲綠猴腎細胞（VERO-76，ATCC CRL1587）；人宮頸癌細胞（HELA，ATCC CCL 2）；犬腎細胞（MDCK，ATCC CCL 34）；布法羅大鼠肝細胞（BRL 3A，ATCC CRL 1442）；人肺細胞（W138，ATCC CCL 75）；人肝細胞（Hep G2,1413 8065）；小鼠乳房腫瘤（MMT 060562，ATCC CCL5 1）；TRI細胞（Mather等人, Annals N. Y Acad. Sci. [紐約科學院年刊] (1982) 383: 44-68）；MRC 5細胞；FS4細胞；和人肝癌細胞系（Hep G2）。
在進一步實施方式中，本發明提供了一種用於生產本發明之抗原結合分子的方法，所述方法包括在允許表現本發明之抗原結合分子的條件下培養本發明之宿主細胞，並從培養物中回收所產生的抗原結合分子。
如本文使用的，術語「培養」係指細胞在適合的條件下在培養基中的體外維持、分化、生長、增殖和/或繁殖。術語「表現」包括關於產生本發明之抗原結合分子的任何步驟，包括但不限於轉錄、轉錄後修飾、翻譯、翻譯後修飾和分泌。
當使用重組技術時，抗原結合分子可以在細胞內、在周質空間中產生或直接分泌到培養基中。若在細胞內產生抗原結合分子，則作為第一個步驟，例如藉由離心或超濾來移除宿主細胞或溶解片段的顆粒狀碎片。Carter等人, Bio/Technology [生物/技術] 10: 163-167 (1992)描述了用於分離分泌到大腸桿菌周質空間的抗體的程序。簡而言之，細胞糊在乙酸鈉（pH 3.5）、EDTA和苯甲基磺醯氟（PMSF）的存在下經約30分鐘解凍。可以藉由離心去除細胞碎片。在將抗體分泌到培養基中的情況下，通常首先使用可商購的蛋白質濃縮濾器，例如Amicon或Millipore Pellicon超濾單元對來自此類表現系統的上清液進行濃縮。任何前述步驟中可以包括蛋白酶抑制劑（如PMSF）以抑制蛋白水解，並且可以包括抗生素以防止外來污染物的生長。
可以使用例如羥磷灰石層析法、凝膠電泳、透析和親和層析法回收或純化由宿主細胞製備的本發明之抗原結合分子。取決於要回收的抗體，也可使用其他用於蛋白質純化的技術，如在離子交換柱上分級分離、乙醇沈澱、反相HPLC、在二氧化矽上進行的層析法、在肝素SEPHAROSE TM上進行的層析法、在陰離子或陽離子交換樹脂（如聚天冬胺酸柱）上進行的層析法、層析聚焦、SDS-PAGE、以及硫酸銨沈澱。在本發明之抗原結合分子包含CH3結構域的情況下，Bakerbond ABX樹脂（新澤西州菲力浦斯堡的馬林克羅特貝克有限公司（J.T. Baker, Phillipsburg, NJ））可用於純化。
親和層析法係較佳的純化技術。親和配體所連接的基質最常為瓊脂糖，但其他基質也是可用的。在機械上穩定的基質如可控多孔玻璃或聚(苯乙烯二乙烯基)苯允許比用瓊脂糖可以實現的更快的流速和更短的處理時間。
此外，本發明提供了藥物組成物，其包含本發明之抗原結合分子或根據本發明之製程產生的抗原結合分子。對於本發明之藥物組成物，較佳的是抗原結合分子的均一性≥ 80%、更較佳的是≥ 81%、≥ 82%、≥ 83%、≥ 84%或≥ 85%、進一步較佳的是≥ 86%、≥ 87%、≥ 88%、≥ 89%或≥ 90%、更較佳的是≥ 91%、≥ 92%、≥ 93%、≥ 94%或≥ 95%以及最較佳的是≥ 96%、≥ 97%、≥ 98%或≥ 99%。
如本文使用的，術語「藥物組成物」關於適合投與給患者，較佳的是人患者的組成物。本發明特別較佳的藥物組成物較佳的是以治療有效量包含一種或多種的一個或多個本發明之抗原結合分子。較佳的是，藥物組成物進一步包含一種或多種（藥學上有效的）載劑、穩定劑、賦形劑、稀釋劑、增溶劑、表面活性劑、乳化劑、防腐劑和/或佐劑的適合配製物。組成物的可接受成分較佳的是在所使用的劑量和濃度下是對接受者無毒性的。本發明之藥物組成物包括但不限於液體、冷凍和凍乾組成物。
本發明組成物可以包含藥學上可接受的載劑。一般來講，如本文使用的，「藥學上可接受的載劑」意指與藥物投與，特別是腸胃外投與相容的任何和所有的水性和非水性溶液、無菌溶液、溶劑、緩衝液（例如磷酸鹽緩衝鹽水（PBS）溶液）、水、懸浮液、乳液（如油/水乳液）、各物種型的潤濕劑、脂質體、分散介質和包衣。此類介質和藥劑在藥物組成物中的使用在本領域中是熟知的，並且包含此類載劑的組成物可以藉由熟知的常規方法配製。
某些實施方式提供了包含本發明之抗原結合分子和另外的一種或多種賦形劑（如本章節和本文其他地方說明性地描述的那些賦形劑）的藥物組成物。在這方面，賦形劑在本發明中可用於多種目的，如調整配製物的物理、化學或生物特性，如調整黏度和/或本發明之方法以改善有效性和/或穩定此類配製物和方法，以對抗由於例如在製造、運輸、儲存、使用前準備、投與和之後過程中發生的壓力而導致的降解和腐壞。
在某些實施方式中，藥物組成物可以含有用於改變、保持或保存組成物的以下方面的目的的配製物質：例如pH、滲透壓、黏度、澄清度、顏色、等滲性、氣味、無菌性、穩定性、溶解或釋放速率、吸附性或滲透性（參見REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES [雷明登氏藥學全書], 第18"版, (A.R. Genrmo編輯), 1990, Mack Publishing Company [馬克出版公司]）。在此類實施方式中，適合的配製物質可以包括但不限於： •   胺基酸，例如甘胺酸、丙胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、蘇胺酸、脯胺酸、2-苯丙胺酸，包括帶電荷的胺基酸，較佳的是離胺酸、乙酸離胺酸、精胺酸、麩胺酸鹽和/或組胺酸 •   抗微生物劑，例如抗細菌劑和抗真菌劑 •   抗氧化劑，例如抗壞血酸、甲硫胺酸、亞硫酸鈉或亞硫酸氫鈉； •   緩衝液、緩衝系統和緩衝劑，用於將組成物保持在生理pH值或稍更低的pH值；緩衝液的實例係硼酸鹽、碳酸氫鹽、Tris-HCl、檸檬酸鹽、磷酸鹽或其他有機酸、琥珀酸鹽、磷酸鹽和組胺酸；例如約pH 7.0-8.5的Tris緩衝液； •   非水性溶劑，如丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄欖油、和可注射用有機酯如油酸乙酯； •   水性載劑包括水、醇/水性溶液、乳液或懸浮液，包括鹽水和緩衝的介質； •   生物可降解聚合物，例如聚酯； •   增積劑，例如甘露醇或甘胺酸； •   螯合劑，例如乙二胺四乙酸（EDTA）； •   等滲劑和吸收延遲劑； •   錯合劑，例如咖啡因、聚乙烯吡咯啶酮、β-環糊精或羥丙基-β-環糊精； •   填充劑； •   單糖；二糖；和其他碳水化合物（如葡萄糖、甘露糖或糊精）；碳水化合物可以是非還原糖，較佳的是海藻糖、蔗糖、八硫酸鹽、山梨醇或木糖醇； •   （低分子量）蛋白質、多肽或蛋白質載劑，例如人或牛血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白，較佳的是人來源的； •   著色劑和調味劑； •   含硫還原劑，如麩胱甘肽、硫辛酸、硫代乙酸鈉、硫代甘油、[α]-一硫代甘油和硫代硫酸鈉 •   稀釋劑； •   乳化劑； •   親水聚合物，例如聚乙烯吡咯啶酮； •   成鹽平衡離子，例如鈉； •   防腐劑，例如抗微生物劑、抗氧化劑、螯合劑、惰性氣體等；實例係：苯紮氯銨、苯甲酸、水楊酸、硫柳汞、苯乙醇、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、氯己定、山梨酸或過氧化氫； •   金屬複合物，如Zn-蛋白質複合物； •   溶劑和共溶劑（如甘油、丙二醇或聚乙二醇）； •   糖和糖醇，例如海藻糖、蔗糖、八硫酸鹽、甘露醇、山梨醇或木糖醇水蘇糖、甘露糖、山梨糖、木糖、核糖、肌糖（myoinisitose）、半乳糖、乳糖醇、核糖醇、肌肉肌醇（myoinisitol）、半乳糖醇、甘油、環多醇（例如肌醇）、聚乙二醇；和多元糖醇； •   懸浮劑； •   表面活性劑或潤濕劑，如普朗尼克、PEG、脫水山梨糖醇酯、聚山梨醇酯（如聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯）、曲拉通、胺丁三醇、卵磷脂、膽固醇、泰洛沙星（tyloxapal）；表面活性劑可以是洗滌劑，較佳的是分子量＞ 1.2 KD，和/或聚醚，較佳的是分子量＞ 3 KD；較佳的洗滌劑的非限制性實例係吐溫20、吐溫40、吐溫60、吐溫80和吐溫85；較佳的聚醚的非限制性實例係PEG 3000、PEG 3350、PEG 4000和PEG 5000； •   穩定性增強劑，例如蔗糖或山梨醇； •   張力增強劑，例如鹼金屬鹵化物，較佳的是氯化鈉或氯化鉀；甘露醇山梨醇； •   腸胃外遞送媒介物，包括氯化鈉溶液、林格氏右旋糖、右旋糖和氯化鈉、乳酸林格氏液或不揮發性油； •   靜脈內遞送媒介物，包括流體和營養補充物、電解質補充物（如基於林格氏右旋糖的那些）。
對於熟悉該項技術者來說明顯的是，例如，藥物組成物的不同成分（例如，上文列出的那些）可以具有不同的效應，並且胺基酸可以充當緩衝液、穩定劑和/或抗氧化劑；甘露醇可以充當膨脹劑和/或張力增強劑；氯化鈉可以充當遞送媒介物和/或張力增強劑；等。
設想除了本文定義的本發明之多肽之外，本發明之組成物可以包含另外的生物活性劑，這取決於組成物的預期用途。此類藥劑可以是作用於胃腸系統的藥物、充當細胞抑制劑的藥物、預防高尿酸血症的藥物、抑制免疫反應的藥物（例如皮質類固醇）、調節炎症應答的藥物、作用於循環系統的藥物和/或本領域中已知的藥劑如細胞介素。還設想將本發明之抗原結合分子應用於共療法中，即與另一種抗癌藥物組合。
在某些實施方式中，最佳藥物組成物將由熟悉該項技術者根據例如預期投與途徑、遞送形式和所希望劑量來確定。參見，例如REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES [雷明登氏藥學全書]，同上。在某些實施方式中，這樣的組成物可影響本發明之抗原結合分子的物理狀態、穩定性、體內釋放率及體內清除率。在某些實施方式中，藥物組成物中的主要媒介物或載劑本質上可以是水性的或非水性的。例如，適合的媒介物或載劑可以是注射用水、生理鹽水溶液或人造腦脊液，可能補充有用於腸胃外投與的組成物中常見的其他物質。中性緩衝鹽水或與血清白蛋白混合的鹽水係另外的示例性媒介物。在某些實施方式中，本發明之抗原結合分子組成物可以藉由將具有所希望純度的所選組成成分與視需要配製物（REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES [雷明登氏藥學全書]，同上）以凍乾餅或水性溶液的形式混合來製備用於儲存。此外，在某些實施方式中，可以使用合適的賦形劑如蔗糖將本發明之抗原結合分子配製成凍乾物。
當考慮腸胃外投與時，用於本發明之治療組成物可以以包含本發明之所需抗原結合分子的無熱原、腸胃外可接受的水性溶液的形式提供於藥學上可接受的媒介物中。用於腸胃外注射的特別合適的媒介物係無菌蒸餾水，在該無菌蒸餾水中將本發明之抗原結合分子配製成適當保存的無菌等滲溶液。在某些實施方式中，該製備可以關於用可以提供產物（該產物可以經由儲庫注射來遞送）的受控或持續釋放的藥劑（如可注射微球體、生物可侵蝕顆粒、聚合物化合物（如聚乳酸或聚乙醇酸）、珠粒或脂質體）配製所希望分子。在某些實施方式中，也可以使用透明質酸，該透明質酸具有促進循環持續時間的作用。在某些實施方式中，可使用可植入藥物遞送裝置來引入所希望的抗原結合分子。
另外的藥物組成物對於熟悉該項技術者將是明顯的，包括關於將本發明之抗原結合分子製成持續或控制遞送/釋放配製物的配製物。用於配製各種其他持續或控制遞送方式的技術（如脂質體載劑、生物可侵蝕微粒或多孔珠粒和儲庫注射）也是熟悉該項技術者已知的。參見，例如國際專利申請案號PCT/US93/00829，其描述了用於遞送藥物組成物的多孔聚合物微粒的控制釋放。持續釋放製劑可以包括呈成型製品（例如膜或微膠囊）形式的半透性聚合物基質。持續釋放基質可以包括聚酯、水凝膠、聚交酯（如美國專利案號3,773,919及歐洲專利申請公開案號EP 058481中所揭露）、L-麩胺酸與γ-乙基-L-麩胺酸的共聚物（Sidman等人, 1983, Biopolymers [生物聚合物] 2:547-556）、聚(甲基丙烯酸2-羥基乙基酯)（Langer等人, 1981, J. Biomed.Mater.Res. [生物醫學材料研究雜誌] 15:167-277以及Langer, 1982 Chem. Tech. [化學技術] 12:98-105）、乙烯乙酸乙烯酯（Langer等人, 1981, 同上）或聚-D(-)-3-羥基丁酸（歐洲專利申請公開案號EP 133,988）。持續釋放組成物還可以包括可以藉由本領域中已知的若干種方法中的任一種製備的脂質體。參見，例如Eppstein等人, 1985, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. [美國國家科學院院刊] 82 :3688-3692；歐洲專利申請公開案號EP 036,676；EP 088,046和EP 143,949。
也可以將抗原結合分子包埋在例如藉由凝聚技術或藉由介面聚合製備的微膠囊（例如分別為羥甲基纖維素或明膠-微膠囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊）中，包埋在膠體藥物遞送系統（例如脂質體、白蛋白微球、微乳液、奈米顆粒和奈米膠囊）中或包埋在粗滴乳狀液中。此類技術揭露於Remington's Pharmaceutical Sciences [雷明登氏藥學全書], 第16版, Oslo, A.編輯, (1980)中。
用於體內投與的藥物組成物典型地以無菌製劑提供。滅菌可以藉由無菌濾膜過濾完成。當將組成物凍乾時，可以在凍乾和重構之前或之後使用該方法進行滅菌。用於腸胃外投與的組成物能以凍乾形式或於溶液中儲存。通常將腸胃外組成物置入具有無菌進入口的容器（例如具有可由皮下注射針刺穿的塞子的靜脈內溶液袋或小瓶）中。
本發明之另一方面包括自緩衝的本發明配製物的抗原結合分子，該等配製物可用作藥物組成物，如國際專利申請WO 06138181 A2（PCT/US2006/022599）中所述。有多種關於蛋白質穩定和配製材料以及在這方面有用的方法的論述，例如Arakawa等人, 「Solvent interactions in pharmaceutical formulations [藥物配製物中的溶劑相互作用],」 Pharm Res. [藥物研究] 8(3): 285-91 (1991)；Kendrick等人, 「Physical stabilization of proteins in aqueous solution [蛋白質在水溶液中的物理穩定]」,RATIONAL DESIGN OF STABLE PROTEIN FORMULATIONS: THEORY AND PRACTICE [穩定的蛋白質配製物的合理設計：理論與實踐], Carpenter和Manning編輯Pharmaceutical Biotechnology. [藥物生物技術]13: 61-84 (2002)，和Randolph等人, 「Surfactant-protein interactions [表面活性劑-蛋白質相互作用],」 Pharm Biotechnol. [藥物生物技術] 13: 159-75 (2002)，特別參見關於與根據本發明之自緩衝蛋白配製物的賦形劑及其製備方法有關的部分，尤其是用於獸醫和/或人醫學用途的蛋白質藥物產品和方法。
根據本發明之某些實施方式，可以使用鹽以例如調整配製物的離子強度和/或等滲性和/或改善根據本發明之組成物的蛋白質或其他成分的溶解度和/或物理穩定性。眾所周知，離子可以藉由與蛋白質表面上的帶電荷的殘基結合並藉由遮罩蛋白質中的帶電荷基團和極性基團並降低其靜電相互作用、吸引和排斥相互作用的強度來穩定蛋白質的天然狀態。離子還可以藉由特別地與蛋白質的變性肽鍵（--CONH）結合來穩定蛋白質的變性狀態。此外，與蛋白質中的帶電荷基團和極性基團的離子相互作用還可以減少分子間靜電相互作用，並且從而防止或減少蛋白質聚集和不溶解。
離子種類對蛋白質的作用顯著不同。已經開發了多種對可用於配製根據本發明之藥物組成物的離子及其對蛋白質的作用的分類評級。一個實例係Hofmeister系列，該系列藉由對溶液中蛋白質的構象穩定性的作用來對離子和極性非離子溶質進行評級。穩定溶質稱為「親液的」。不穩定溶質稱為「離液的」。通常使用高濃度的親液劑（例如，＞ 1莫耳硫酸銨）以從溶液中沈澱蛋白質（「鹽析」）。通常使用離液劑來使蛋白質變性和/或溶解（「鹽溶」）。離子對「鹽溶」和「鹽析」的相對有效性限定了其在Hofmeister系列中的位置。
根據本發明之各種實施方式，游離胺基酸作為增積劑、穩定劑和抗氧化劑以及其他標準用途可用於本發明配製物的抗原結合分子中。離胺酸、脯胺酸、絲胺酸和丙胺酸可用於穩定配製物中的蛋白質。甘胺酸可用於凍乾以確保正確的餅結構和特性。在液體配製物和凍乾配製物兩者中，精胺酸均可用於抑制蛋白質聚集。甲硫胺酸可用作抗氧化劑。
多元醇包括糖，例如甘露醇、蔗糖和山梨醇以及多元醇，如例如甘油和丙二醇，並且出於本文論述的目的，包括聚乙二醇（PEG）和相關物質。多元醇係親液的。它們在液體配製物和凍乾配製物兩者中是有用的穩定劑，以保護蛋白質免受物理和化學降解過程的影響。多元醇也可用於調整配製物的張力。在本發明之選擇實施方式中有用的多元醇係甘露醇，甘露醇通常用於確保在凍乾配製物中餅的結構穩定性。它確保了餅的結構穩定性。它通常與凍乾保護劑（例如蔗糖）一起使用。山梨醇和蔗糖係用於調整張力且作為穩定劑以防止在運輸過程中的冷凍-解凍應力或防止在製造過程中製備團塊的較佳的藥劑。還原糖（含有游離醛或酮基團），如葡萄糖和乳糖，可以使表面離胺酸和精胺酸殘基糖基化。因此，它們通常不是根據本發明使用的較佳的多元醇。此外，在這方面，形成此類反應性物質的糖也不是本發明較佳的多元醇，該糖如蔗糖，蔗糖在酸性條件下水解為果糖和葡萄糖並因此產生糖基化。PEG可用於穩定蛋白質並用作冷凍保護劑，並且在這方面可以用於本發明。
本發明之配製物的抗原結合分子的實施方式進一步包含表面活性劑。蛋白質分子可易於吸附在表面上，並且變性以及隨後在空氣-液體、固體-液體和液體-液體介面處聚集。該等效應通常與蛋白質濃度成反比。該等有害的相互作用通常與蛋白質濃度成反比，並且典型地因物理振盪（如在產品運輸和處理過程中產生的物理振盪）而加劇。常規使用表面活性劑來防止、最小化或減少表面吸附。在這方面，本發明中有用的表面活性劑包括聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、脫水山梨醇聚乙氧基化物的其他脂肪酸酯、以及泊洛沙姆188。表面活性劑也常用於控制蛋白質構象穩定性。在這方面使用表面活性劑係蛋白質特異性的，因為任何給定的表面活性劑典型地會穩定一些蛋白質並使其他蛋白質不穩定。
聚山梨醇酯易於氧化降解，並且通常在供應時含有足夠量的過氧化物以引起蛋白質殘基側鏈，尤其是甲硫胺酸的氧化。因此，應謹慎使用聚山梨醇酯，並且在使用時應以其最低有效濃度使用。在這方面，聚山梨醇酯例示了賦形劑應以其最低有效濃度使用的一般規則。
本發明之配製物的抗原結合分子的實施方式進一步包含一種或多種抗氧化劑。藉由保持適當水平的環境氧氣和溫度並避免暴露於光下，可以在某種程度上防止藥物配製物中蛋白質的有害氧化。也可以使用抗氧化賦形劑來防止蛋白質的氧化降解。在這方面，有用的抗氧化劑係還原劑、氧/自由基清除劑和螯合劑。用於根據本發明之治療性蛋白質配製物中的抗氧化劑較佳的是水溶性的並且在整個產品的儲存壽命內保持其活性。在這方面，EDTA係根據本發明之較佳的抗氧化劑。抗氧化劑可以破壞蛋白質。例如，還原劑，如特別是麩胱甘肽 ，可以破壞分子內二硫鍵。因此，選擇用於本發明之抗氧化劑尤其用於消除或足夠降低其本身破壞配製物中的蛋白質的可能性。
根據本發明之配製物可以包含金屬離子，該等金屬離子係蛋白質輔助因子並且是形成蛋白質配位複合物所必需的，如形成某些胰島素懸浮液所必需的鋅。金屬離子也可以抑制降解蛋白質的一些過程。然而，金屬離子也催化降解蛋白質的物理和化學過程。鎂離子（10-120 mM）可用於抑制天冬胺酸異構化為異天冬胺酸。Ca +2離子（高達100 mM）可以增加人去氧核糖核酸酶的穩定性。然而，Mg +2、Mn +2和Zn +2可以使rhDNase去穩定。類似地，Ca +2和Sr +2可以穩定因子VIII，它可以因Mg +2、Mn +2和Zn +2、Cu +2和Fe +2去穩定，並且其聚集可以藉由Al +3離子增加。
本發明之配製物的抗原結合分子的實施方式進一步包含一種或多種防腐劑。當開發關於從同一容器提取超過一次的多劑量腸胃外配製物時，防腐劑係必需的。其主要功能係抑制微生物生長並確保在藥物產品的整個保質期或使用期限內的產品無菌性。常用的防腐劑包括苯甲醇、苯酚和間甲酚。儘管防腐劑在小分子腸胃外使用方面有著悠久的歷史，但包含防腐劑的蛋白質配製物的開發可能具有挑戰性。防腐劑幾乎總是對蛋白質具有不穩定效應（聚集），並且這已成為限制其在多劑量蛋白質配製物中使用的主要因素。迄今為止，大部分蛋白質藥物僅配製用於一次性使用。然而，當多劑量配製物係可能時，它們具有使患者方便的附加優勢和增加的可銷售性。一個良好的實例係人生長激素（hGH），其中防腐配製物的開發已經導致更方便、多次使用的注射筆展示的商業化。至少四種含有hGH的防腐配製物的此類筆裝置目前可在市場上獲得。Norditropin（液體，諾和諾德公司（Novo Nordisk））、Nutropin AQ（液體，基因泰克公司（Genentech））和Genotropin（凍乾的--雙室藥筒，法瑪西亞普強公司（Pharmacia & Upjohn））含有苯酚，而Somatrope（禮來公司（Eli Lilly））用間-甲酚進行配製。在防腐劑型的配製和開發期間需要考慮若干個方面。必須優化藥物產品中有效的防腐劑濃度。這需要以賦予抗微生物有效性而不損害蛋白質穩定性的濃度範圍測試劑型中給定的防腐劑。
正如可以預期的那樣，含有防腐劑的液體配製物的開發比凍乾配製物更具挑戰性。冷凍乾燥的產品可以在沒有防腐劑的情況下凍乾，並且在使用時用含有防腐劑的稀釋劑重構。這縮短了防腐劑與蛋白質接觸的時間，從而顯著最小化相關的穩定性風險。在液體配製物的情況下，應在整個產品保質期（約18至24個月）內保持防腐劑有效性和穩定性。要指出的重要點係，防腐劑有效性應在含有活性藥物和所有賦形劑組分的最終配製物中得到證實。
本文揭露的抗原結合分子也可以配製為脂質體。「脂質體」係由各物種型的脂質、磷脂和/或表面活性劑構成的小囊泡，該小囊泡可用於將藥物遞送至哺乳動物。脂質體的組分通常以雙層形式排列，類似於生物膜的脂質排列。含有抗原結合分子的脂質體藉由本領域已知的方法製備，如Epstein等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA [美國國家科學院院刊], 82: 3688 (1985)；Hwang等人 , Proc. Natl Acad. Sci. USA [美國國家科學院院刊], 77: 4030 (1980)；美國專利案號4,485,045和4,544,545；以及W0 97/38731中所述。具有延長的循環時間的脂質體揭露於美國專利案號5,013,556中。特別有用的脂質體可以藉由反相蒸發方法用包含磷脂醯膽鹼、膽固醇和PEG衍生化磷脂醯乙醇胺（PEG-PE）的脂質組成物產生。使脂質體擠出藉由具有限定孔徑的濾器以產生具有所希望的直徑的脂質體。本發明之抗原結合分子的Fab’片段可以與脂質體經由二硫鍵交換反應軛合，如Martin等人 J. Biol. Chem. [生物化學雜誌] 257: 286-288 (1982)中所述。化學治療劑視需要包含在脂質體內。參見Gabizon等人 J. National Cancer Inst. [國家癌症研究所雜誌] 81 (19) 1484 (1989)。
一旦配製了藥物組成物，可以將它作為溶液、懸浮液、凝膠、乳液、固體、晶體或作為脫水或凍乾粉末儲存在無菌小瓶中。此類配製物能以即用形式或以在投與前重構的形式（例如凍乾形式）儲存。
本文定義的藥物組成物的生物活性可以例如藉由細胞毒性測定來確定，如以下實例、WO 99/54440或由Schlereth等人（Cancer Immunol. Immunother. [癌症免疫學免疫療法]20 (2005), 1-12）所述。如本文使用的，「功效」或「體內功效」係指使用例如標準化NCI應答標準對本發明之藥物組成物治療的應答。使用本發明之藥物組成物的療法的成功或體內功效係指組成物對於其預期用途的有效性，即組成物引起其所希望效應，即耗盡病理細胞（例如腫瘤細胞）的能力。體內功效可以藉由已建立的相應疾病實體的標準方法進行監測，該等方法包括但不限於白血球計數、差異、螢光活化細胞分選法、骨髓抽吸。另外，可以使用各種疾病特異性臨床化學參數和其他建立的標準方法。此外，可以使用電腦輔助斷層掃描、X射線、核磁共振斷層掃描（例如，用於基於美國國家癌症研究所標準的應答評估 [Cheson BD, Horning SJ, Coiffier B, Shipp MA, Fisher RI, Connors JM, Lister TA, Vose J, Grillo-Lopez A, Hagenbeek A, Cabanillas F, Klippensten D, Hiddemann W, Castellino R, Harris NL, Armitage JO, Carter W, Hoppe R, Canellos GP. Report of an international workshop to standardize response criteria for non-Hodgkin's lymphomas. [標準化非何杰金氏淋巴瘤應答標準的國際研討會報告]NCI贊助的國際工作組（NCI Sponsored International Working Group.）J Clin Oncol. [臨床腫瘤學雜誌] 1999年4月; 17(4):1244]）、正電子發射斷層掃描、白血球計數、差異、螢光活化細胞分選法、骨髓抽吸、淋巴結活檢/組織學、以及各種淋巴瘤特異性臨床化學參數（例如，乳酸脫氫酶）和其他建立的標準方法。
開發藥物（如本發明之藥物組成物）的另一主要挑戰係藥物動力學特性的可預測調節。為此，可以建立候選藥物的藥物動力學曲線，即影響特定藥物治療給定病狀的能力的藥物動力學參數的曲線。影響藥物治療某種疾病實體的能力的藥物的藥物動力學參數包括但不限於：半衰期、分佈容量、肝臟首過代謝和血清結合程度。給定藥劑的功效可以受到上文提及的每個參數的影響。具有特定FC模式的本發明抗原結合分子的設想特徵係它們包括例如藥物動力學行為的差異。與「經典」非HLE形式的所述抗原結合分子相比，根據本發明之半衰期延長的靶向抗原結合分子較佳的是顯示出出人意料地增加的體內停留時間。
「半衰期」意指50%的投與藥物藉由生物製程（例如代謝、排泄等）消除的時間。「肝臟首過代謝」意指藥物在首次與肝臟接觸時即在其首次通過肝臟期間代謝的傾向。「分佈體積」意指藥物在身體各個隔室（例如細胞內和細胞外空間、組織和器官等）中的滯留程度，以及藥物在該等隔室內的分佈。「血清結合程度」意指藥物與血清蛋白（如白蛋白）相互作用並結合從而導致藥物生物活性降低或喪失的傾向。
藥物動力學參數還包括對於投與的給定量藥物的生體可用率、滯後時間（T滯後）、Tmax、吸收速率、起效時間和/或Cmax。「生體可用率」意指血液隔室中藥物的量。「滯後時間」意指藥物投與與其在血液或血漿中的檢測和可測量性之間的時間延遲。「Tmax」係藥物達到最大血液濃度之後的時間，並且「Cmax」係用給定藥物獲得的最大血液濃度。達到其生物效應所需的藥物的血液或組織濃度的時間受到所有參數的影響。顯示出跨物種特異性的雙特異性抗原結合分子的藥物動力學參數也描述在例如Schlereth等人的出版物（Cancer Immunol. Immunother. [癌症免疫學與免疫療法] 20 (2005), 1-12）中，該藥物動力學參數可以在如上所述之非黑猩猩靈長類動物的臨床前動物實驗中確定。
在本發明之較佳的方面中，藥物組成物在約-20°C下穩定至少四週。從附加實例中明顯的是，本發明之抗原結合分子的品質對比相應先前技術抗原結合分子的品質可以使用不同的系統進行測試。該等測試被理解為與「ICH Harmonised Tripartite Guideline: Stability Testing of Biotechnological/Biological Products Q5Cand Specifications: Test procedures and Acceptance Criteria for Biotech Biotechnological/Biological Products Q6B[ICH三方協調指南：生物技術/生物產品Q5C的穩定性測試和規格：生物技術/生物產品Q6B的測試程序和驗收標準]」一致，並且因此被選擇來提供穩定性指示曲線，該曲線提供檢測到產品身份、純度和效力變化的確定性。人們普遍接受術語純度係相對術語。由於糖基化、脫醯胺化或其他異質性的效應，因此生物技術/生物產品的絕對純度典型地應藉由超過一種的方法進行評估，並且所匯出的純度值取決於方法。出於穩定性測試的目的，純度測試應集中在確定降解產物的方法上。
為了評估包含本發明之抗原結合分子的藥物組成物的品質，可以藉由例如分析溶液中可溶性聚集體的含量來進行分析（每次尺寸排阻的HMWS）。較佳的是，在約-20°C下穩定至少四週的特徵在於小於約5% HMWS，更較佳的是小於2.5% HMWS，甚至更較佳的是小於1.5% HMWS的含量。
在所附的實例4-12中提供了評估在藥物組成物形式中的本發明之抗原結合分子的穩定性的其他實例。在那些實例中，針對不同藥物配製物中的不同應激條件測試本發明之抗原結合分子的實施方式，並將結果與本領域已知的雙特異性T細胞接合抗原結合分子的其他半衰期延長（HLE）形式進行比較。一般而言，設想與具有不同HLE形式和不具有任何HLE形式（例如「規範」抗原結合分子）的抗原結合分子相比，具有根據本發明之特定FC模式的抗原結合分子典型地均在廣泛範圍的應激條件（如溫度和光應激）下更穩定。所述溫度穩定性可以關於降低的溫度（低於室溫，包括冷凍）和升高的溫度（高於室溫，包括高達或高於體溫的溫度）兩者。如熟悉該項技術者將認識到的，在臨床實踐中難以避免的這種改善的關於應激的穩定性使得抗原結合分子更安全，因為在臨床實踐中將出現較少的降解產物。結果，所述增加的穩定性意味著安全性增加。
一個實施方式提供了本發明之抗原結合分子或根據本發明之方法產生的抗原結合分子，其用於在預防、治療或緩解增殖性疾病、腫瘤性疾病、病毒性疾病或免疫性障礙中使用。
本文所述之配製物可在有需要的患者中用作治療、緩解和/或預防如本文所述之病理醫學病狀的藥物組成物。術語「治療」係指治療性治療和預防性（prophylactic或preventative）措施兩者。治療包括將配製物施加或投與至患有疾病/障礙、疾病/障礙的症狀或患疾病/障礙的傾向的患者的體內、分離的組織或細胞，目的是治癒、痊癒、緩和、減輕、改變、補救、緩解、改善或影響該疾病，該疾病症狀或患該疾病的傾向。
如本文使用的，術語「緩解」係指藉由將根據本發明之抗原結合分子投與至有需要的受試者而對患有如下文所述之腫瘤或癌症或轉移性癌症的患者的疾病狀態的任何改善。這種改善還可以被視為減緩或停止患者的腫瘤或癌症或轉移性癌症的進展。如本文使用的，術語「預防」意指藉由向有需要的受試者投與根據本發明之抗原結合分子，避免患有如下文所述之腫瘤或癌症或轉移性癌症的患者的發病或復發。
術語「疾病」係指將受益於用本文所述之抗原結合分子或藥物組成物治療的任何病狀。這包括慢性和急性障礙或疾病，包括那些使哺乳動物易患所考慮疾病的病理病狀。
「贅生物」係組織的異常生長，通常但不總是形成腫塊。當也形成腫塊時，通常稱之為「腫瘤」。贅生物或腫瘤可以是良性的、潛在惡性的（癌前）、或惡性的。惡性贅生物通常稱為癌症。它們通常侵入並破壞周圍組織，並可能形成轉移，即它們擴散到身體的其他部位、組織或器官。因此，術語「轉移性癌症」涵蓋轉移到原始腫瘤的組織或器官除外的其他組織或器官。淋巴瘤和白血病係淋巴贅生物。出於本發明之目的，它們也涵蓋在術語「腫瘤」或「癌症」中。
術語「病毒性疾病」描述了作為受試者病毒感染的結果的疾病。
如本文使用的，術語「免疫學障礙」根據該術語的常見定義描述免疫學障礙，如自體免疫疾病、超敏反應、免疫缺陷。
在一個實施方式中，本發明提供治療或緩解增殖性疾病、腫瘤性疾病、病毒性疾病或免疫障礙的方法，該方法包括向有需要的受試者投與本發明之抗原結合分子或根據本發明之方法產生的抗原結合分子的步驟。
術語「有需要的受試者」或「需要治療的那些」包括已經患有障礙的那些以及要預防障礙的那些。有需要的受試者或「患者」包括接受預防性或治療性治療的人和其他哺乳動物受試者。
本發明之抗原結合分子通常以生體可用率和持久性的範圍等被設計尤其用於特定的投與途徑和方法、特定的投與劑量和頻率、特定疾病的特定治療。組成物的物質較佳的是以對於投與位點可接受的濃度配製。
因此可以根據本發明設計配製物和組成物以藉由任何適合的投與途徑遞送。在本發明之上下文中，投與途徑包括但不限於 •   局部途徑（如表皮、吸入、鼻、眼、耳（auricular/aural）、陰道、黏膜）； •   腸內途徑（如口服、胃腸道、舌下、唇下部、經頰、直腸）；以及 •   腸胃外途徑（例如靜脈內、動脈內、骨內、肌內、腦內、腦室內、硬膜外、鞘內、皮下、腹膜內、羊膜外、關節內、心內、真皮內、病灶內、子宮內、膀胱內、玻璃體內、經皮、鼻內、經黏膜、滑膜內、管腔內）。
本發明之藥物組成物和抗原結合分子特別適用於腸胃外投與，例如皮下或靜脈內遞送，例如藉由注射如彈丸注射或藉由輸注如連續輸注。藥物組成物可以使用醫療裝置來投與。用於投與藥物組成物的醫療裝置的實例描述在美國專利案號4,475,196；4,439,196；4,447,224；4,447,233；4,486,194；4,487,603；4,596,556；4,790,824；4,941,880；5,064,413；5,312,335；5,312,335；5,383,851；和5,399,163中。
特別地，本發明提供了適合的組成物的不間斷投與。作為非限制性實例，可以藉由患者佩戴的用於計量治療劑進入患者體內的流入的小型泵系統來實現不間斷或實質上不間斷（即連續）的投與。包含本發明之抗原結合分子的藥物組成物可以藉由使用所述泵系統投與。此類泵系統在本領域中通常是已知的，並且通常依賴於含有要輸注的治療劑的藥筒的定期更換。當更換這種泵系統中的藥筒時，可能導致原本不間斷地流入患者體內的治療劑的暫時中斷。在這種情況下，藥筒替換之前的投與階段和藥筒替換之後的投與階段仍將被認為在藥物手段的含義內，並且本發明之方法一起構成這種治療劑的一次「不間斷投與」。
本發明之抗原結合分子的連續或不間斷投與可以藉由流體遞送裝置或小型泵系統進行靜脈內或皮下投與，該流體遞送裝置或小型泵系統包括用於將流體驅出儲器的流體驅動機構和用於致動驅動機構的致動機構。用於皮下投與的泵系統可以包括用於穿透患者皮膚並將適合的組成物遞送到患者體內的針或套管。所述泵系統可以獨立於靜脈、動脈或血管而直接固定或連接到患者皮膚，從而允許泵系統與患者皮膚直接接觸。泵系統可以連接到患者皮膚24小時至數天。泵系統可能尺寸較小，具有小容積的儲器。作為非限制性實例，待投與的適合的藥物組成物的儲器容積可以為0.1至50 ml。
連續投與也可以藉由佩戴在皮膚上的貼片經皮投與，並且以一定間隔進行更換。熟悉該項技術者知道適用於該目的的用於藥物遞送的貼片系統。值得注意的是，經皮投與尤其適合於不間斷投與，因為第一用盡的貼片的更換可以有利地與在將新的第二貼片放置在例如緊鄰第一用盡的貼片的皮膚表面上的同時並在即將移除第一用盡的貼片之前來完成。不會出現流動中斷或電池故障的問題。
如果已將藥物組成物凍乾，則在投與之前首先將凍乾物質在適當液體中重構。可以將凍乾物質在例如抑菌注射用水（BWFI）、生理鹽水、磷酸鹽緩衝鹽水（PBS）或與冷凍乾燥前蛋白質所處於的相同配製物中重構。
本發明之組成物可以以合適的劑量投與至受試者，該合適的劑量可以例如藉由投與漸增劑量的本發明之抗原結合分子（其顯示出對於非黑猩猩靈長類動物例如獼猴的跨物種特異性）的劑量遞增研究來確定。如上所述，顯示出本文所述之跨物種特異性的本發明之抗原結合分子可有利地以相同形式用於非黑猩猩靈長類動物的臨床前試驗中以及作為藥物用於人類。劑量方案將由主治醫師和臨床因素決定。如在醫學領域中熟知的，任何一個患者的劑量取決於許多因素，包括患者體型、體表面積、年齡、待投與的具體化合物、性別、投與時間和途徑、一般健康狀況和同時投與的其他藥物。
術語「有效劑量（effective dose或effective dosage）」定義為足以實現或至少部分實現所希望效應的量。術語「治療有效劑量」定義為足以治癒或至少部分阻止已罹患疾病的患者的疾病及其併發症的量。對此用途有效的量或劑量將取決於有待治療的病狀（適應症）、遞送的抗原結合分子、治療背景和目標、疾病的嚴重程度、先前療法、患者的臨床病史和對治療劑的應答、投與途徑、患者的體型（體重、體表或器官大小）和/或病狀（年齡和一般健康狀況）以及患者自體免疫系統的一般狀態。可以根據主治醫生的判斷調整適當的劑量，以使得它可以一次投與至患者或經一系列投與而投與至患者，並且以便獲得最佳治療效應。
取決於上述因素，典型的劑量範圍可以為從約0.1 µg/kg至高達約30 mg/kg或更高。在具體的實施方式中，劑量範圍可以為從1.0 µg/kg至約20 mg/kg，視需要為從10 µg/kg至高達約10 mg/kg或從100 µg/kg至高達約5 mg/kg。
治療有效量的本發明之抗原結合分子較佳的是導致疾病症狀的嚴重程度降低、疾病無症狀期的頻率或持續時間增加或預防由於疾病痛苦引起的損傷或殘疾。為了治療表現靶細胞抗原的腫瘤，本發明之抗原結合分子的治療有效量，例如抗靶細胞抗原/抗CD3抗原結合分子，相對於未治療的患者較佳的是抑制細胞生長或腫瘤生長至少約20%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、或至少約90%。可以在預測功效的動物模型中評價化合物抑制腫瘤生長的能力。
藥物組成物可以作為單獨的治療劑或與另外的療法（如視需要的抗癌療法，例如其他蛋白質和非蛋白質藥物）組合投與。該等藥物可以與包含如本文定義的本發明之抗原結合分子的組成物同時投與，或者在投與所述抗原結合分子之前或之後分別以時間限定的間隔和劑量投與。
如本文所用的術語「有效和無毒劑量」係指耐受劑量的本發明抗原結合分子，其足夠高以引起病理細胞耗竭、腫瘤消除、腫瘤縮小或疾病穩定而不具有或本質上不具有主要毒性作用。這種有效且無毒的劑量可以例如藉由本領域中描述的劑量遞增研究來確定，並且應低於誘導嚴重不良副作用事件的劑量（劑量限制毒性，DLT）。
如本文使用的，術語「毒性」係指在不良事件或嚴重不良事件中表現的藥物的毒性效應。該等副作用事件可能是指投與後缺乏系統性藥物耐受性和/或缺乏局部耐受性。毒性還可能包括由藥物引起的致畸或致癌效應。
如本文使用的，術語「安全性」、「體內安全性」或「耐受性」定義了藥物的投與而在投與後未立即誘導嚴重不良事件（局部耐受性）以及在藥物的較長投與時段期間未誘導嚴重不良事件。例如，可以在治療和跟蹤期期間以例如有規律的間隔評價「安全性」、「體內安全性」或「耐受性」。測量包括臨床評價，例如器官表現，以及實驗室異常的篩選。可以進行臨床評價，並且根據NCI-CTC和/或MedDRA標準記錄/編碼與正常發現的偏差。器官表現可以包括如過敏/免疫學、血液/骨髓、心律不整、凝血等的標準，如例如不良事件的通用術語標準v3.0（CTCAE）中所述之。可以測試的實驗室參數包括例如血液學、臨床化學、凝血曲線和尿液分析以及其他體液（如血清、血漿、淋巴或脊髓液、液體等）的檢查。因此安全性可以藉由例如身體檢查、成像技術（即超音波波、x射線、CT掃描、磁共振成像（MRI）、其他具有技術裝置的措施（即心電圖術））、生命徵象、藉由測量實驗室參數和記錄不良事件來評估。例如，根據本發明之用途和方法中非黑猩猩靈長類動物中的不良事件可以藉由組織病理學和/或組織化學方法進行檢查。
上述術語也在以下中提及：例如Preclinical safety evaluation of biotechnology-derived pharmaceuticals S6 [生物技術衍生藥物的臨床前安全性評價S6]；ICH Harmonised Tripartite Guideline [ICH三方協調指南]；ICH Steering Committee meeting on July 16, 1997 [1997年7月16日的ICH指導委員會會議]。
最後，本發明提供了包含本發明或根據本發明之方法產生的抗原結合分子的套組（kit）、本發明之藥物組成物、本發明之多核苷酸、本發明之載體和/或本發明之宿主細胞。
在本發明之上下文中，術語「套組」意指兩種或更多種組分（其中一種對應於本發明之抗原結合分子、藥物組成物、載體或宿主細胞）一起包裝在容器、接受器或其他中。因此，套組可以被描述為足以實現某一目標的一組產品和/或器具，其可以作為單一單元銷售。
該套組可以包含具有任何適當的形狀、大小和材料（較佳的是防水，例如塑膠或玻璃）的一個或多個器皿（例如小瓶、安瓿、容器、注射器、瓶子、袋子），該一個或多個器皿含有合適的投與劑量（見上文）的本發明之抗原結合分子或藥物組成物。套組可另外包含使用說明書（例如以單頁或安裝手冊的形式）、用於投與本發明之抗原結合分子的裝置（如注射器、泵、輸注器等）、用於重構本發明之抗原結合分子的裝置和/或用於稀釋本發明之抗原結合分子的裝置。
本發明還提供了用於單劑量投與單元的套組。本發明之套組還可以含有包含乾燥/凍乾的抗原結合分子的第一器皿和包含水性配製物的第二器皿。在本發明之某些實施方式中，提供了含有單室和多室預填充注射器（例如液體注射器和凍乾注射器）的套組。
應指出的是，除非上下文另有明確指明，否則如本文所用，單數形式「一種（a）」、「一種（an）」和「該（the）」包括複數個指示物。因此，例如，對「一種試劑」的提及包括此類不同試劑中的一種或多種，並且對「所述方法」的提及包括提及熟悉該項技術者已知的可以修改或取代本文所述之方法的等效步驟和方法。
除非另外指示，否則在一系列元素前面的術語「至少」應被理解為指該系列中的每一個元素。熟悉該項技術者僅使用常規實驗就將認識到或能夠確定本文所述之本發明之具體實施方式的許多等效物。此類等效物旨在涵蓋在本發明中。
術語「和/或」在本文使用時包括「和」、「或」和「由所述術語連接的要素的全部或任何其他組合」的含義。
如本文使用的，術語「約」或「大約」意指在給定值或範圍的20%內、較佳的是在10%內、並且更較佳的是在5%內。然而，它也包括明確數字，例如約20包括20。
術語「小於」或「大於」包括明確數字。例如，小於20意指小於或等於。類似地，多於或大於分別意指多於或等於/或大於或等於。
貫穿本說明書及其後的申請專利範圍，除非上下文另有要求，否則詞語「包含（comprise）」以及變型如「包含（comprises）」或「包含（comprising）」應當被理解成隱含包括所述整數或步驟或者整數或步驟的組，但不排除任何其他整數或步驟或者整數或步驟的組。當在本文中使用時，術語「包含」可以用術語「含有」或「包括」來取代，或者有時在本文中使用時用術語「具有」取代。
當在本文中使用時，「由……組成」時，排除了在請求項要素中未指定的任何要素、步驟或成分。當在本文中使用時，「基本上由……組成」並不排除不實質性地影響請求項的基本和新穎特徵的材料或步驟。
在本文的每個例子中，術語「包含/包括」、「基本上由……組成」和「由……組成」中的任何一個可以用其他兩個術語中的任一個替代。
應理解，本發明不限於本文所述之特定方法、方案、材料、試劑和物質等，並且因此可以變化。本文使用的術語僅用於描述特定實施方式的目的，而不打算限制僅由請求項限定的本發明之範圍。
本說明書全文中引用的所有出版物和專利（包括所有專利、專利申請、科學出版物、製造商的說明書、說明書等），無論是上文還是下文，均藉由引用整體併入文中。本文沒有任何內容應解釋為承認本發明無權由於先前發明而早於該等揭露內容。藉由引用併入的材料在一定程度上與本說明書發生衝突或不一致時，本說明書將替代任何此類材料。
將從以下實例中獲得對本發明及其優點的更好理解，該等實例僅用於說明目的。該等實例並不打算以任何方式限制本發明之範圍。
實例 1 ：測定蛋白質濃度和 pH 對 BCMAxCD3 、 DLL3xCD3 和 MUC17xCD3 BiTE® 抗原結合分子穩定性的影響所有實驗的材料和方法：藉由基於平板的緩衝液交換系統（Freeslate Core Module 3（CM3）液體處理器（Unchained Lab公司，普萊森頓（Pleasanton），加利福尼亞州）），在三種不同pH值4.4、4.6、5.2下，在24種配製物中以高濃度（≥ 15 mg/mL）製備根據本發明之三種半衰期延長（HLE）的BiTE®分子BCMAxCD3（SEQ ID NO: 136）、DLL3xCD3（SEQ ID NO: 104）和MUC17xCD3（SEQ ID NO: 213）。在壓力腔室中進行微量緩衝液交換過濾，並藉由VolumeCheck讀數器（BioMicroLab公司，康科特（Concord），加利福尼亞州）測量每個孔中的液體體積，文檔1中概述了更多詳細資訊。根據公知標準製備所有試驗中使用的配製物儲備溶液。緩衝液交換完成後，測量pH和濃度，以確保其在目標值之內。製備後，將樣本等分到96孔板中，密封，然後在-30°C、2°C-8°C和40°C下儲存長達4週。然後，在ACQUITY UPLC系統（沃特世公司（Waters），米爾福德（Milford），馬塞諸塞州（MA））上藉由尺寸排阻層析法（SEC）評估樣本的穩定性（以%HMW表示）。將樣本注入Waters BEH200柱，流動相含有250 mM NaCl（pH 6.5）。計算高分子量（HMW）和單體或主峰（MP）的峰面積占總峰面積的百分比。
首先，確定蛋白質濃度和pH對DLL3xCD3雙特異性抗原結合分子的影響。從圖1可以看出（在圖捕獲下顯示的結果），如果藥物組成物中不存在另外的穩定劑，則%HMW隨著濃度和pH的增加而顯著增加。具體而言，在pH 4.4下，隨著蛋白質濃度從4.5 mg/mL增加到30.1 mg/mL，%HMW從0.33%增加到7.97%。在30.1 mg/ml的給定濃度下，HMW%隨著pH的增加而增加，即從pH 4.4增加到5.2，HMW%從3.17%增加到17.26%。因此，%HMW在較高濃度下增加得更明顯，因為從pH 4.4到5.2，在蛋白質濃度為4.5 mg/mL時，%HMW僅從0.33%增加到2.17%，而在30.1 mg/mL時，%HMW從7.97%增加到17.26%。因此，更高蛋白質濃度的配製物在更高的pH值下需要更高的穩定性。
實例 2 ：測定蛋白質濃度、 pH 和各種賦形劑對 BCMAxCD3 、 CD33xCD3 和 DLL3xCD3BiTE® 抗原結合分子穩定性的影響如圖2所示，對於所有代表性的BCMAxCD3雙特異性抗原結合分子（正方形；SEQ ID NO: 136）、CD33xCD3雙特異性抗原結合分子（圓圈，SEQ ID NO: 41）和DLL3xCD3雙特異性抗原結合分子（三角形，SEQ ID NO: 104），pH增加降低了%LMW，但相反增加了%HMW，這與實例1的發現一致。如圖3所示，%LMW隨pH降低，且與濃度無關。%LMW在測試的pH範圍內從超過8%下降到低於5%。測試的賦形劑的範圍，即胺基酸、環糊精和苯甲醇，至少在20 mg/ml（作為根據本發明之高濃度配製物的說明值）的較高雙特異性抗原結合分子濃度下，沒有顯示出對%LMW的顯著影響。
實例 3 ：測定穩定賦形劑 EDTA 相比於 pH 和各種賦形劑對 BCMAxCD3 和 DLL3xCD3 BiTE® 抗原結合分子穩定性的影響
如圖4所示，在約27 mg/ml的液體配製物中，EDTA在4週的過程中維持低水平的%HMW。因此，EDTA和相關的其他螯合劑被確定為顯著降低雙特異性抗原結合分子中%HMW的賦形劑。具體而言，對於BCMAxCD3雙特異性抗原結合分子（SEQ ID NO: 41），本發明之分子在高濃度下可以具有顯著更高的%HMW，例如在濃度為27 mg/ml、不包含另外的穩定劑、且pH為5.2的包含蔗糖和麩胺酸的組成物（參見圖4A中的G52Su）中約為12%。其中，與第0週或第4週（在-30°C、4°C或40°C下）時的對照相比，EDTA在所有測試條件下降低%HMW，例如，對於濃度為27 mg/mL、pH在4.3至5.2範圍內的BCMAxCD3分子，在4°C或-30°C下4週後僅為約2%。ArgHCl已被確定為顯著增加%HMW，例如在4°C下4週後超過20%，這表明EDTA的選擇不是任意的，因為無法預見Arg是否會以不穩定的方式發揮作用，而引起額外的聚集，而EDTA不會。相對於對照，HpbCD輕微降低%HMW，Phe似乎不太有效；而Pro、Trp和苯甲醇在給定的27 mg/ml的高分子濃度下沒有表現出對%HMW顯著的降低作用。獲得了DLL3xCD3雙特異性抗原結合分子（SEQ ID NO: 104）的可比較的結果。
實例 4 ： 穩定劑 EDTA 濃度對 MUC17xCD3 雙特異性抗原結合分子的高濃度配製物穩定性的影響如圖5所示，不含另外的穩定劑（「G4Su」）的MUC17xCD3分子（SEQ ID NO: 213）在較高pH下表現出顯著較高的%HMW，即在pH 5下約為6%-7%，而在pH 4.2下約為1%-2%。Arg HCl顯著增加%HMW，即在所有條件下超過約10%。與穩定劑EDTA相比，HpbCD、Phe和Pro的效果較差，%HMW水平與對照相似。與其他賦形劑相比，在第0週或第4週時，穩定劑EDTA降低了所有測試濃度（即0.01%、0.04%和0.16%（w/v））下的%HMW。尤其是在稍高的pH 4.6或5.0下，即在4°C或-30°C下4週後，在包含EDTA（濃度為三種測試濃度中的任何一種）的藥物組成物中僅發現約2%至3%的HMW，而不含穩定劑的藥物組成物表現出接近或超過5%的HMW。 [ 表 5] ：序列表
1. CD19 VL CDR1 人工的 aa KASQSVDYDGDSYLN
2. CD19 VL CDR2 人工的 aa DASNLVS
3. CD19 VL CDR3 人工的 aa QQSTEDPWT
4. CD19 VH CDR1 人工的 aa SYWMN
5. CD19 VH CDR2 人工的 aa QIWPGDGDTNYNGKFKG
6. CD19 VH CDR3 人工的 aa RETTTVGRYYYAMDY
7. CD19 VL 人工的 aa DIQLTQSPASLAVSLGQRATISCKASQSVDYDGDSYLNWYQQIPGQPPKLLIYDASNLVSGIPPRFSGSGSGTDFTLNIHPVEKVDAATYHCQQSTEDPWTFGGGTKLEIK
8. CD19 VH 人工的 aa QVQLQQSGAELVRPGSSVKISCKASGYAFSSYWMNWVKQRPGQGLEWIGQIWPGDGDTNYNGKFKGKATLTADESSSTAYMQLSSLASEDSAVYFCARRETTTVGRYYYAMDYWGQGTTVTVSS
9. CD3 VH CDR1 人工的 aa RYTMH
10. CD3 VH CDR2 人工的 aa YINPSRGYTNYNQKFKD
11. CD3 VH CDR3 人工的 aa YYDDHYCLDY
12. CD3 VL CDR1 人工的 aa RASSSVSYMN
13. CD3 VL CDR2 人工的 aa DTSKVAS
14. CD3 VL CDR3 人工的 aa QQWSSNPLT
15. CD3 VH 人工的 aa DIKLQQSGAELARPGASVKMSCKTSGYTFTRYTMHWVKQRPGQGL     EWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSS
16. CD3 VL 人工的 aa VDDIQLTQSPAIMSASPGEKVTMTCRASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKVASGVPYRFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSSNPLTFGAGTKLELK
17. CD19xCD3 scFv包含連接子和his-標籤 人工的 aa DIQLTQSPASLAVSLGQRATISCKASQSVDYDGDSYLNWYQQIPGQPPKLLIYDASNLVSGIPPRFSGSGSGTDFTLNIHPVEKVDAATYHCQQSTEDPWTFGGGTKLEIKGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELVRPGSSVKISCKASGYAFSSYWMNWVKQRPGQGLEWIGQIWPGDGDTNYNGKFKGKATLTADESSSTAYMQLSSLASEDSAVYFCARRETTTVGRYYYAMDYWGQGTTVTVSSGGGGSDIKLQQSGAELARPGASVKMSCKTSGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSSVEGGSGGSGGSGGSGGVDDIQLTQSPAIMSASPGEKVTMTCRASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKVASGVPYRFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSSNPLTFGAGTKLELKHHHHHH
18. I2C的CDR-L1 人工的 aa GSSTGAVTSGNYPN
19. I2C的CDR-L2 人工的 aa GTKFLAP
20. I2C的CDR-L3 人工的 aa VLWYSNRWV
21. I2C的CDR-H1 人工的 aa KYAMN
22. I2C的CDR-H2 人工的 aa RIRSKYNNYATYYADSVKD
23. I2C的CDR-H3 人工的 aa HGNFGNSYISYWAY
24. I2C的VH 人工的 aa EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSS
25. I2C的VL 人工的 aa QTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
26. I2C的VH-VL 人工的 aa EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
27. E11的CD33 ccVH 人工的 aa QVQLVQSGAEVKKPGESVKVSCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGQCLEWMGWINTYTGEPTYADKFQGRVTMTTDTSTSTAYMEIRNLGGDDTAVYYCARWSWSDGYYVYFDYWGQGTSVTVSS
28. E11的CD33 VH 人工的 aa QVQLVQSGAEVKKPGESVKVSCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGQGLEWMGWINTYTGEPTYADKFQGRVTMTTDTSTSTAYMEIRNLGGDDTAVYYCARWSWSDGYYVYFDYWGQGTSVTVSS
29. E11的CD33 HCDR1 人工的 aa NYGMN
30. E11的CD33 HCDR2 人工的 aa WINTYTGEPTYADKFQG
31. E11的CD33 HCDR3 人工的 aa WSWSDGYYVYFDY
32. E11的CD33 CC VL 人工的 aa DIVMTQSPDSLTVSLGERTTINCKSSQSVLDSSTNKNSLAWYQQKPGQPPKLLLSWASTRESGIPDRFSGSGSGTDFTLTIDSPQPEDSATYYCQQSAHFPITFGCGTRLEIK
33. E11的CD33 VL 人工的 aa DIVMTQSPDSLTVSLGERTTINCKSSQSVLDSSTNKNSLAWYQQKPGQPPKLLLSWASTRESGIPDRFSGSGSGTDFTLTIDSPQPEDSATYYCQQSAHFPITFGQGTRLEIK
34. E11的CD33 LCDR1 人工的 aa KSSQSVLDSSTNKNSLA
35. E11的CD33 LCDR2 人工的 aa WASTRES
36. E11的CD33 LCDR3 人工的 aa QQSAHFPIT
37. E11的CD33 HL CC 人工的 aa QVQLVQSGAEVKKPGESVKVSCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGQCLEWMGWINTYTGEPTYADKFQGRVTMTTDTSTSTAYMEIRNLGGDDTAVYYCARWSWSDGYYVYFDYWGQGTSVTVSSggggsggggsggggsDIVMTQSPDSLTVSLGERTTINCKSSQSVLDSSTNKNSLAWYQQKPGQPPKLLLSWASTRESGIPDRFSGSGSGTDFTLTIDSPQPEDSATYYCQQSAHFPITFGCGTRLEIK
38. E11的CD33 HL 人工的 aa QVQLVQSGAEVKKPGESVKVSCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGQGLEWMGWINTYTGEPTYADKFQGRVTMTTDTSTSTAYMEIRNLGGDDTAVYYCARWSWSDGYYVYFDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPDSLTVSLGERTTINCKSSQSVLDSSTNKNSLAWYQQKPGQPPKLLLSWASTRESGIPDRFSGSGSGTDFTLTIDSPQPEDSATYYCQQSAHFPITFGQGTRLEIK
39. CD33 CC E11 HL x I2C HL雙特異性分子    人工的 aa QVQLVQSGAEVKKPGESVKVSCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGQCLEWMGWINTYTGEPTYADKFQGRVTMTTDTSTSTAYMEIRNLGGDDTAVYYCARWSWSDGYYVYFDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPDSLTVSLGERTTINCKSSQSVLDSSTNKNSLAWYQQKPGQPPKLLLSWASTRESGIPDRFSGSGSGTDFTLTIDSPQPEDSATYYCQQSAHFPITFGCGTRLEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
40. CD33 E11 HL x I2C HL 人工的 aa MGWSCIILFLVATATGVHSQVQLVQSGAEVKKPGESVKVSCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGQGLEWMGWINTYTGEPTYADKFQGRVTMTTDTSTSTAYMEIRNLGGDDTAVYYCARWSWSDGYYVYFDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPDSLTVSLGERTTINCKSSQSVLDSSTNKNSLAWYQQKPGQPPKLLLSWASTRESGIPDRFSGSGSGTDFTLTIDSPQPEDSATYYCQQSAHFPITFGQGTRLEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLHHHHHH
41. CD33 CC x I2C-scFc雙特異性HLE分子 人工的 aa QVQLVQSGAEVKKPGESVKVSCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGQCLEWMGWINTYTGEPTYADKFQGRVTMTTDTSTSTAYMEIRNLGGDDTAVYYCARWSWSDGYYVYFDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPDSLTVSLGERTTINCKSSQSVLDSSTNKNSLAWYQQKPGQPPKLLLSWASTRESGIPDRFSGSGSGTDFTLTIDSPQPEDSATYYCQQSAHFPITFGCGTRLEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
42. EGFRvIIIxCD3-scFc VH CDR1 人工的 aa NYGMH
43. EGFRvIIIxCD3-scFc VH CDR2 人工的 aa VIWYDGSDKYYADSVRG
44. EGFRvIIIxCD3-scFc VH CDR3 人工的 aa DGYDILTGNPRDFDY
45. EGFRvIIIxCD3-scFc VL CDR1 人工的 aa RSSQSLVHSDGNTYLS
46. EGFRvIIIxCD3-scFc VL CDR2 人工的 aa RISRRFS
47. EGFRvIIIxCD3-scFc VL CDR3 人工的 aa MQSTHVPRT
48. EGFRvIII_CCxCD3-scFc VH 人工的 aa QVQLVESGGGVVQSGRSLRLSCAASGFTFRNYGMHWVRQAPGKCLEWVAVIWYDGSDKYYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGYDILTGNPRDFDYWGQGTLVTVSS
49. EGFRvIII_CCxCD3-scFc VL 人工的 aa DTVMTQTPLSSHVTLGQPASISCRSSQSLVHSDGNTYLSWLQQRPGQPPRLLIYRISRRFSGVPDRFSGSGAGTDFTLEISRVEAEDVGVYYCMQSTHVPRTFGCGTKVEIK
50. EGFRvIII_CCxCD3-scFc scFv 人工的 aa QVQLVESGGGVVQSGRSLRLSCAASGFTFRNYGMHWVRQAPGKCLEWVAVIWYDGSDKYYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGYDILTGNPRDFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDTVMTQTPLSSHVTLGQPASISCRSSQSLVHSDGNTYLSWLQQRPGQPPRLLIYRISRRFSGVPDRFSGSGAGTDFTLEISRVEAEDVGVYYCMQSTHVPRTFGCGTKVEIK
51. EGFRvIII_CCxCD3-scFc雙特異性分子 人工的 aa QVQLVESGGGVVQSGRSLRLSCAASGFTFRNYGMHWVRQAPGKCLEWVAVIWYDGSDKYYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGYDILTGNPRDFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDTVMTQTPLSSHVTLGQPASISCRSSQSLVHSDGNTYLSWLQQRPGQPPRLLIYRISRRFSGVPDRFSGSGAGTDFTLEISRVEAEDVGVYYCMQSTHVPRTFGCGTKVEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
52. EGFRvIII_CCxCD3-scFc雙特異性HLE分子 人工的 aa QVQLVESGGGVVQSGRSLRLSCAASGFTFRNYGMHWVRQAPGKCLEWVAVIWYDGSDKYYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGYDILTGNPRDFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDTVMTQTPLSSHVTLGQPASISCRSSQSLVHSDGNTYLSWLQQRPGQPPRLLIYRISRRFSGVPDRFSGSGAGTDFTLEISRVEAEDVGVYYCMQSTHVPRTFGCGTKVEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
53. MSLN_5 VH CDR1 人工的 aa DYYMT
54. MSLN_5 VH CDR2 人工的 aa YISSSGSTIYYADSVKG
55. MSLN_5 VH CDR3 人工的 aa DRNSHFDY
56. MSLN_5 VL CDR1 人工的 aa RASQGINTWLA
57. MSLN_5 VL CDR2 人工的 aa GASGLQS
58. MSLN_5 VL CDR3 人工的 aa QQAKSFPRT
59. MSLN _5 VH 人工的 aa QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMTWIRQAPGKGLEWLSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTAVYYCARDRNSHFDYWGQGTLVTVSS
60. MSLN_5 VL 人工的 aa DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGINTWLAWYQQKPGKAPKLLIYGASGLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAKSFPRTFGQGTKVEIK
61. MSLN_5 scFv 人工的 aa QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMTWIRQAPGKGLEWLSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTAVYYCARDRNSHFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGINTWLAWYQQKPGKAPKLLIYGASGLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAKSFPRTFGQGTKVEIK
62. MSLN_5xI2C0雙特異性 分子 人工的 aa QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMTWIRQAPGKGLEWLSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTAVYYCARDRNSHFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGINTWLAWYQQKPGKAPKLLIYGASGLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAKSFPRTFGQGTKVEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
63. MSLN_5xCD3-scFc雙特異性HLE分子 人工的 aa QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMTWIRQAPGKGLEWLSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTAVYYCARDRNSHFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGINTWLAWYQQKPGKAPKLLIYGASGLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAKSFPRTFGQGTKVEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
64. MSLN_5_CCxCD3-scFc雙特異性HLE分子 人工的 aa qvqlvesggglvkpggslrlscaasgftfsdhymswirqapgkclewfsyisssggiiyyadsvkgrftisrdnaknslylqmnslraedtavyycardvgshfdywgqgtlvtvssggggsggggsggggsdiqmtqspssvsasvgdrvtitcrasqdisrwlawyqqkpgkapkllisaasrlqsgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfaiyycqqaksfprtfgcgtkveiksggggsevqlvesggglvqpggslklscaasgftfnkyamnwvrqapgkglewvarirskynnyatyyadsvkdrftisrddskntaylqmnnlktedtavyycvrhgnfgnsyisywaywgqgtlvtvssggggsggggsggggsqtvvtqepsltvspggtvtltcgsstgavtsgnypnwvqqkpgqaprgliggtkflapgtparfsgsllggkaaltlsgvqpedeaeyycvlwysnrwvfgggtkltvlggggdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpceeqygstyrcvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgkggggsggggsggggsggggsggggsggggsdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpceeqygstyrcvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
65. CDH19 65254.007的CDR-H1 人工的 aa SYGMH
66. CDH19 65254.007的CDR-H2 人工的 aa FIWYEGSNKYYAESVKD
67. CDH19 65254.007的CDR-H3 人工的 aa RAGIIGTIGYYYGMDV
68. CDH19 65254.007的CDR-L1 人工的 aa SGDRLGEKYTS
69. CDH19 65254.007的CDR-L2 人工的 aa QDTKRPS
70. CDH19 65254.007的CDR-L3 人工的 aa QAWESSTVV
71. CDH19 65254.007的VH 人工的 aa QVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAFIWYEGSNKYYAESVKDRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRAGIIGTIGYYYGMDVWGQGTTVTVSS
72. CDH19 65254.007的VL 人工的 aa SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDRLGEKYTSWYQQRPGQSPLLVIYQDTKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWESSTVVFGGGTKLTVLS
73. CDH19 65254.007的VH-VL 人工的 aa QVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAFIWYEGSNKYYAESVKDRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRAGIIGTIGYYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSSYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDRLGEKYTSWYQQRPGQSPLLVIYQDTKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWESSTVVFGGGTKLTVLS
74. CDH19 65254.007 x I2C 人工的 aa QVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAFIWYEGSNKYYAESVKDRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRAGIIGTIGYYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSSYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDRLGEKYTSWYQQRPGQSPLLVIYQDTKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWESSTVVFGGGTKLTVLSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLHHHHHH
75. CDH19 65254.007 x I2C –scFc雙特異性HLE分子 人工的 aa QVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAFIWYEGSNKYYAESVKDRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRAGIIGTIGYYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSSYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDRLGEKYTSWYQQRPGQSPLLVIYQDTKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWESSTVVFGGGTKLTVLSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
76. CDH19 65254.007 x I2C –scFc_delGK雙特異性HLE分子 人工的 aa QVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAFIWYEGSNKYYAESVKDRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRAGIIGTIGYYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSSYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDRLGEKYTSWYQQRPGQSPLLVIYQDTKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWESSTVVFGGGTKLTVLSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
77. CDH19 65254.007_CC x I2C –scFc VH 人工的 aa QVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKCLEWVAFIWYEGSNKYYAESVKDRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRAGIIGTIGYYYGMDVWGQGTTVTVSS
78. CDH19 65254.007_CC x I2C –scFc VL 人工的 aa SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDRLGEKYTSWYQQRPGQSPLLVIYQDTKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWESSTVVFGCGTKLTVL
79. CDH19 65254.007_CC x I2C –scFc scFv 人工的 aa QVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKCLEWVAFIWYEGSNKYYAESVKDRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRAGIIGTIGYYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSSYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDRLGEKYTSWYQQRPGQSPLLVIYQDTKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWESSTVVFGCGTKLTVL
80. CDH19 65254.007_CC x I2C –scFc雙特異性分子 人工的 aa QVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKCLEWVAFIWYEGSNKYYAESVKDRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRAGIIGTIGYYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSSYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDRLGEKYTSWYQQRPGQSPLLVIYQDTKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWESSTVVFGCGTKLTVLSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
81. CDH19 65254.007_CC x I2C –scFc雙特異性HLE分子 人工的 aa QVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKCLEWVAFIWYEGSNKYYAESVKDRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRAGIIGTIGYYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSSYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDRLGEKYTSWYQQRPGQSPLLVIYQDTKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWESSTVVFGCGTKLTVLSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
82. CDH19 65254.007_CC x I2C –scFc_delGK雙特異性HLE分子 人工的 aa QVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKCLEWVAFIWYEGSNKYYAESVKDRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRAGIIGTIGYYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSSYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDRLGEKYTSWYQQRPGQSPLLVIYQDTKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWESSTVVFGCGTKLTVLSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
83. FLT3_7 A8xCD3-scFc VH CDR1 人工的 aa narmgvs
84. FLT3_7 A8xCD3-scFc VH CDR2 人工的 aa hifsndeksystslkn
85. FLT3_7 A8xCD3-scFc VH CDR3 人工的 aa ivgygsgwygffdy
86. FLT3_7 A8xCD3-scFc VL CDR1 人工的 aa rasqgirndlg
87. FLT3_7 A8xCD3-scFc VL CDR2 人工的 aa aastlqs
88. FLT3_7 A8xCD3-scFc VL CDR3 人工的 aa lqhnsyplt
89. FLT3_7 A8xCD3-scFc VH 人工的 aa QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTLSGFSLNNARMGVSWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKNRLTISKDSSKTQVVLTMTNVDPVDTATYYCARIVGYGSGWYGFFDYWGQGTLVTVSS
90. FLT3_ A8-scFc VL 人工的 aa DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPGKAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKVEIK
91. FLT3_7 A8xCD3- scFv 人工的 aa QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTLSGFSLNNARMGVSWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKNRLTISKDSSKTQVVLTMTNVDPVDTATYYCARIVGYGSGWYGFFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPGKAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKVEIK
92. FLT3_7 A8xCD3雙特異性分子 人工的 aa QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTLSGFSLNNARMGVSWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKNRLTISKDSSKTQVVLTMTNVDPVDTATYYCARIVGYGSGWYGFFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPGKAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKVEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
93. FLT3_7 A8xCD3-scFc雙特異性HLE分子 人工的 aa QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTLSGFSLNNARMGVSWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKNRLTISKDSSKTQVVLTMTNVDPVDTATYYCARIVGYGSGWYGFFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPGKAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKVEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
94. VH CDR1 DLL3_1_CC_delGK 人工的 aa SYYWS
95.    VH CDR2 DLL3_1_CC_delGK 人工的    aa YVYYSGTTNYNPSLKS
96. VH CDR3 DLL3_1_CC_delGK 人工的 aa IAVTGFYFDY
97. VL CDR1 DLL3_1_CC_delGK 人工的 aa RASQRVNNNYLA
98. VL CDR2 DLL3_1_CC_delGK 人工的 aa GASSRAT
99. VL CDR3 DLL3_1_CC_delGK 人工的 aa QQYDRSPLT
100.    VH DLL3_1_CC_delGK 人工的 aa QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKCLEWIGYVYYSGTTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASIAVTGFYFDYWGQGTLVTVSS
101. VL DLL3_1_CC_delGK 人工的 aa EIVLTQSPGTLSLSPGERVTLSCRASQRVNNNYLAWYQQRPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYDRSPLTFGCGTKLEIK
102. DLL3_1_CC_delGK 人工的 aa QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKCLEWIGYVYYSGTTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASIAVTGFYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPGTLSLSPGERVTLSCRASQRVNNNYLAWYQQRPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYDRSPLTFGCGTKLEIK
103. DLL3_1_CCxCD3_delGK雙特異性分子 人工的 aa QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKCLEWIGYVYYSGTTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASIAVTGFYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPGTLSLSPGERVTLSCRASQRVNNNYLAWYQQRPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYDRSPLTFGCGTKLEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
104.    DLL3_1_CCxCD3-scFc_delGK雙特異性HLE分子 人工的 aa QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKCLEWIGYVYYSGTTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASIAVTGFYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPGTLSLSPGERVTLSCRASQRVNNNYLAWYQQRPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYDRSPLTFGCGTKLEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
105. VH CDR1 CD19 97-G1RE-C2 人工的 aa SYGMH
106. VH CDR2 CD19 97-G1RE-C2 人工的 aa VISYEGSNKYYAESVKG
107. VH CDR3 CD19 97-G1RE-C2 人工的 aa DRGTIFGNYGLEV
108. VH CD19 97-G1RE-C2 CC 人工的 aa QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKCLEWVAVISYEGSNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRDEDTAVYYCARDRGTIFGNYGLEVWGQGTTVTVSS
109. VL CDR1 CD19 97-G1RE-C2 人工的 aa RSSQSLLHKNAFNYLD
110. VL CDR2 CD19 97-G1RE-C2 人工的 aa LGSNRAS
111. VL CDR3 CD19 97-G1RE-C2 人工的 aa MQALQTPFT
112. VL CD19 97-G1RE-C2 CC 人工的 aa DIVMTQSPLSLPVISGEPASISCRSSQSLLHKNAFNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPFTFGCGTKVDIK
113. CD19 97-G1RE-C2 CC x I2C0 人工的 aa MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARCDIVMTQSPLSLPVISGEPASISCRSSQSLLHKNAFNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPFTFGCGTKVDIKGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKCLEWVAVISYEGSNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRDEDTAVYYCARDRGTIFGNYGLEVWGQGTTVTVSSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
114. CD19 97-G1RE-C2 CC x I2C0-scFc 人工的 aa MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARCDIVMTQSPLSLPVISGEPASISCRSSQSLLHKNAFNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPFTFGCGTKVDIKGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKCLEWVAVISYEGSNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRDEDTAVYYCARDRGTIFGNYGLEVWGQGTTVTVSSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
115. VH CDR1 CDH3 G8A 6-B12 人工的 aa sypin
116. VH CDR2 CDH3 G8A 6-B12 人工的 aa viwtgggtnyassvkg
117. VH CDR3 CDH3 G8A 6-B12 人工的 aa srgvydfdgrgamdy
118. VL CDR1 CDH3 G8A 6-B12 人工的 aa kssqsllyssnqknyfa
119. VL CDR2 CDH3 G8A 6-B12 人工的 aa wastres
120. VL CDR3 CDH3 G8A 6-B12 人工的 aa qqyysypyt
121. VH CDH3 G8A 6-B12 人工的 aa EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSFSSYPINWVRQAPGKGLEWVGVIWTGGGTNYASSVKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAKSRGVYDFDGRGAMDYWGQGTLVTVSS
122. VL CDH3 G8A 6-B12 人工的 aa DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSSNQKNYFAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSYPYTFGQGTKLEIK
123. CDH3 G8A 6-B12 scFv 人工的 aa EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSFSSYPINWVRQAPGKGLEWVGVIWTGGGTNYASSVKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAKSRGVYDFDGRGAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSSNQKNYFAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSYPYTFGQGTKLEIK
124. CDH3 G8A 6-B12 x I2C0雙特異性分子 人工的 aa EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSFSSYPINWVRQAPGKGLEWVGVIWTGGGTNYASSVKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAKSRGVYDFDGRGAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSSNQKNYFAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSYPYTFGQGTKLEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
125. CDH3 G8A 6-B12 x I2C0雙特異性分子HLE 人工的 aa EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSFSSYPINWVRQAPGKGLEWVGVIWTGGGTNYASSVKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAKSRGVYDFDGRGAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSSNQKNYFAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSYPYTFGQGTKLEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
126. BCMA A7 27-C4-G7 CDR1 VH 人工的 aa NHIIH
127. BCMA A7 27-C4-G7 CDR2 VH 人工的 aa YINPYPGYHAYNEKFQG
128. BCMA A7 27-C4-G7 CDR3 VH 人工的 aa DGYYRDTDVLDY
129. BCMA A7 27-C4-G7 CDR1 VL 人工的 aa QASQDISNYLN
130. BCMA A7 27-C4-G7 CDR2 VL 人工的 aa YTSRLHT
131. BCMA A7 27-C4-G7 CDR3 VL 人工的 aa QQGNTLPWT
132. BCMA A7 27-C4-G7 CC (44/100) VH 人工的 aa QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNHIIHWVRQAPGQCLEWMGYINPYPGYHAYNEKFQGRATMTSDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARDGYYRDTDVLDYWGQGTLVTVSS
133. BCMA A7 27-C4-G7 CC (44/100) VL 人工的 aa DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLHTGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLEPEDIATYYCQQGNTLPWTFGCGTKLEIK
134. BCMA A7 27-C4-G7 CC (44/100) scFv 人工的 aa QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNHIIHWVRQAPGQCLEWMGYINPYPGYHAYNEKFQGRATMTSDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARDGYYRDTDVLDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLHTGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLEPEDIATYYCQQGNTLPWTFGCGTKLEIK
135. BCMA A7 27-C4-G7 CC (44/100) x I2C0雙特異性分子 人工的 aa QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNHIIHWVRQAPGQCLEWMGYINPYPGYHAYNEKFQGRATMTSDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARDGYYRDTDVLDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLHTGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLEPEDIATYYCQQGNTLPWTFGCGTKLEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
136. BCMA A7 27-C4-G7 CC (44/100) x I2C0-scFc雙特異性分子HLE 人工的 aa QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNHIIHWVRQAPGQCLEWMGYINPYPGYHAYNEKFQGRATMTSDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARDGYYRDTDVLDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLHTGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLEPEDIATYYCQQGNTLPWTFGCGTKVEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
137. PM 76-B10.17 CC VH CDR1 人工的 aa DYYMY
138. PM 76-B10.17 CC VH CDR2 人工的 aa IISDAGYYTYYSDIIKG
139. PM 76-B10.17 CC VH CDR3 人工的 aa GFPLLRHGAMDY
140. PM 76-B10.17 CC VL CDR1 人工的 aa KASQNVDANVA
141. PM 76-B10.17 CC VL CDR2 人工的 aa SASYVYW
142. PM 76-B10.17 CC VL CDR3 人工的 aa QQYDQQLIT
143. PM 76-B10.17 CC VH 人工的 aa QVQLVESGGGLVKPGESLRLSCAASGFTFSDYYMYWVRQAPGKCLEWVAIISDAGYYTYYSDIIKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLKAEDTAVYYCARGFPLLRHGAMDYWGQGTLVTVSS
144. PM 76-B10.17 CC VL 人工的 aa DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVDANVAWYQQKPGQAPKSLIYSASYVYWDVPSRFSGSASGTDFTLTISSVQSEDFATYYCQQYDQQLITFGCGTKLEIK
145. PM 76-B10.17 CC scFv 人工的 aa QVQLVESGGGLVKPGESLRLSCAASGFTFSDYYMYWVRQAPGKCLEWVAIISDAGYYTYYSDIIKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLKAEDTAVYYCARGFPLLRHGAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVDANVAWYQQKPGQAPKSLIYSASYVYWDVPSRFSGSASGTDFTLTISSVQSEDFATYYCQQYDQQLITFGCGTKLEIK
146. PM 76-B10.17 CC x I2C0雙特異性分子 人工的 aa QVQLVESGGGLVKPGESLRLSCAASGFTFSDYYMYWVRQAPGKCLEWVAIISDAGYYTYYSDIIKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLKAEDTAVYYCARGFPLLRHGAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVDANVAWYQQKPGQAPKSLIYSASYVYWDVPSRFSGSASGTDFTLTISSVQSEDFATYYCQQYDQQLITFGCGTKLEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
147. PM 76-B10.17 CC x I2C0-scFc雙特異性 HLE分子 人工的 aa QVQLVESGGGLVKPGESLRLSCAASGFTFSDYYMYWVRQAPGKCLEWVAIISDAGYYTYYSDIIKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLKAEDTAVYYCARGFPLLRHGAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVDANVAWYQQKPGQAPKSLIYSASYVYWDVPSRFSGSASGTDFTLTISSVQSEDFATYYCQQYDQQLITFGCGTKLEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
148. PM 76-B10.17 CC x I2C0-scFc_delGK雙特異性 HLE分子 人工的 aa QVQLVESGGGLVKPGESLRLSCAASGFTFSDYYMYWVRQAPGKCLEWVAIISDAGYYTYYSDIIKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLKAEDTAVYYCARGFPLLRHGAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVDANVAWYQQKPGQAPKSLIYSASYVYWDVPSRFSGSASGTDFTLTISSVQSEDFATYYCQQYDQQLITFGCGTKLEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
149. PM 76-B10.17 CC x I2C0 CC (103/43)-scFc雙特異性分子 人工的 aa QVQLVESGGGLVKPGESLRLSCAASGFTFSDYYMYWVRQAPGKCLEWVAIISDAGYYTYYSDIIKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLKAEDTAVYYCARGFPLLRHGAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVDANVAWYQQKPGQAPKSLIYSASYVYWDVPSRFSGSASGTDFTLTISSVQSEDFATYYCQQYDQQLITFGCGTKLEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYCGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQCPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
150. PM 76-B10.17 CC x I2C0 CC (103/43)-scFc雙特異性 HLE分子 人工的 aa QVQLVESGGGLVKPGESLRLSCAASGFTFSDYYMYWVRQAPGKCLEWVAIISDAGYYTYYSDIIKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLKAEDTAVYYCARGFPLLRHGAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVDANVAWYQQKPGQAPKSLIYSASYVYWDVPSRFSGSASGTDFTLTISSVQSEDFATYYCQQYDQQLITFGCGTKLEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYCGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQCPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
151. PM 76-B10.17 CC x I2C0 CC (103/43)-scFc_delGK雙特異性 HLE分子 人工的 aa QVQLVESGGGLVKPGESLRLSCAASGFTFSDYYMYWVRQAPGKCLEWVAIISDAGYYTYYSDIIKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLKAEDTAVYYCARGFPLLRHGAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVDANVAWYQQKPGQAPKSLIYSASYVYWDVPSRFSGSASGTDFTLTISSVQSEDFATYYCQQYDQQLITFGCGTKLEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYCGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQCPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
152. PM 76-B10.11 CC VH CDR1 人工的 aa DYYMY
153. PM 76-B10.11 CC VH CDR2 人工的 aa IISDGGYYTYYSDIIKG
154. PM 76-B10.11 CC VH CDR3 人工的 aa GFPLLRHGAMDY
155. PM 76-B10.11 CC VL CDR1 人工的 aa KASQNVDTNVA
156. PM 76-B10.11 CC VL CDR2 人工的 aa SASYVYW
157. PM 76-B10.11 CC VL CDR3 人工的 aa QQYDQQLIT
158. PM 76-B10.11 CC VH 人工的 aa QVQLVESGGGLVKPGESLRLSCAASGFTFSDYYMYWVRQAPGKGLEWVAIISDGGYYTYYSDIIKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLKAEDTAVYYCARGFPLLRHGAMDYWGQGTLVTVSS
159. PM 76-B10.11 CC VL 人工的 aa DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVDTNVAWYQQKPGQAPKSLIYSASYVYWDVPSRFSGSASGTDFTLTISSVQSEDFATYYCQQYDQQLITFGGGTKLEIK
160. PM 76-B10.11 CC scFv 人工的 aa QVQLVESGGGLVKPGESLRLSCAASGFTFSDYYMYWVRQAPGKGLEWVAIISDGGYYTYYSDIIKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLKAEDTAVYYCARGFPLLRHGAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVDTNVAWYQQKPGQAPKSLIYSASYVYWDVPSRFSGSASGTDFTLTISSVQSEDFATYYCQQYDQQLITFGGGTKLEIK
161. PM 76-B10.11 CC x I2C0雙特異性分子 人工的 aa QVQLVESGGGLVKPGESLRLSCAASGFTFSDYYMYWVRQAPGKGLEWVAIISDGGYYTYYSDIIKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLKAEDTAVYYCARGFPLLRHGAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVDTNVAWYQQKPGQAPKSLIYSASYVYWDVPSRFSGSASGTDFTLTISSVQSEDFATYYCQQYDQQLITFGGGTKLEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
162. PM 76-B10.11 CC x I2C0-scFc雙特異性 HLE分子 人工的 aa QVQLVESGGGLVKPGESLRLSCAASGFTFSDYYMYWVRQAPGKGLEWVAIISDGGYYTYYSDIIKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLKAEDTAVYYCARGFPLLRHGAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVDTNVAWYQQKPGQAPKSLIYSASYVYWDVPSRFSGSASGTDFTLTISSVQSEDFATYYCQQYDQQLITFGGGTKLEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
163. PM 76-B10.11 CC x I2C0-scFc_delGK雙特異性 HLE分子 人工的 aa QVQLVESGGGLVKPGESLRLSCAASGFTFSDYYMYWVRQAPGKGLEWVAIISDGGYYTYYSDIIKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLKAEDTAVYYCARGFPLLRHGAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVDTNVAWYQQKPGQAPKSLIYSASYVYWDVPSRFSGSASGTDFTLTISSVQSEDFATYYCQQYDQQLITFGGGTKLEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
164. PM 76-B10.11 CC x I2C0 CC (103/43)-scFc雙特異性分子 人工的 aa QVQLVESGGGLVKPGESLRLSCAASGFTFSDYYMYWVRQAPGKGLEWVAIISDGGYYTYYSDIIKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLKAEDTAVYYCARGFPLLRHGAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVDTNVAWYQQKPGQAPKSLIYSASYVYWDVPSRFSGSASGTDFTLTISSVQSEDFATYYCQQYDQQLITFGGGTKLEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYCGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQCPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
165. PM 76-B10.11 CC x I2C0 CC (103/43)-scFc雙特異性 HLE分子 人工的 aa QVQLVESGGGLVKPGESLRLSCAASGFTFSDYYMYWVRQAPGKGLEWVAIISDGGYYTYYSDIIKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLKAEDTAVYYCARGFPLLRHGAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVDTNVAWYQQKPGQAPKSLIYSASYVYWDVPSRFSGSASGTDFTLTISSVQSEDFATYYCQQYDQQLITFGGGTKLEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYCGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQCPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
166. PM 76-B10.11 CC x I2C0 CC (103/43)-scFc_delGK雙特異性 HLE分子 人工的 aa QVQLVESGGGLVKPGESLRLSCAASGFTFSDYYMYWVRQAPGKGLEWVAIISDGGYYTYYSDIIKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLKAEDTAVYYCARGFPLLRHGAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVDTNVAWYQQKPGQAPKSLIYSASYVYWDVPSRFSGSASGTDFTLTISSVQSEDFATYYCQQYDQQLITFGGGTKLEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYCGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQCPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
167. PM 76-B10.11 CC x I2C0-scFc VH CDR1 人工的 aa DYYMY
168. PM 76-B10.11 CC x I2C0-scFc VH CDR2 人工的 aa IISDGGYYTYYSDIIKG
169. PM 76-B10.11 CC x I2C0-scFc VH CDR3 人工的 aa GFPLLRHGAMDY
170. PM 76-B10.11 CC x I2C0-scFc VL CDR1 人工的 aa KASQNVDTNVA
171. PM 76-B10.11 CC x I2C0-scFc VL CDR2 人工的 aa SASYVYW
172. PM 76-B10.11 CC x I2C0-scFc VL CDR3 人工的 aa QQYDQQLIT
173. PM 76-B10.11 CC x I2C0-scFc VH 人工的 aa QVQLVESGGGLVKPGESLRLSCAASGFTFSDYYMYWVRQAPGKCLEWVAIISDGGYYTYYSDIIKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLKAEDTAVYYCARGFPLLRHGAMDYWGQGTLVTVSS
174. PM 76-B10.11 CC x I2C0-scFc VL 人工的 aa DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVDTNVAWYQQKPGQAPKSLIYSASYVYWDVPSRFSGSASGTDFTLTISSVQSEDFATYYCQQYDQQLITFGCGTKLEIK
175. PM 76-B10.11 CC x I2C0-scFc scFv 人工的 aa QVQLVESGGGLVKPGESLRLSCAASGFTFSDYYMYWVRQAPGKCLEWVAIISDGGYYTYYSDIIKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLKAEDTAVYYCARGFPLLRHGAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVDTNVAWYQQKPGQAPKSLIYSASYVYWDVPSRFSGSASGTDFTLTISSVQSEDFATYYCQQYDQQLITFGCGTKLEIK
176. PM 76-B10.11 CC x I2C0-scFc雙特異性分子 人工的 aa QVQLVESGGGLVKPGESLRLSCAASGFTFSDYYMYWVRQAPGKCLEWVAIISDGGYYTYYSDIIKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLKAEDTAVYYCARGFPLLRHGAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVDTNVAWYQQKPGQAPKSLIYSASYVYWDVPSRFSGSASGTDFTLTISSVQSEDFATYYCQQYDQQLITFGCGTKLEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
177. PM 76-B10.11 CC x I2C0-scFc雙特異性 HLE分子 人工的 aa QVQLVESGGGLVKPGESLRLSCAASGFTFSDYYMYWVRQAPGKCLEWVAIISDGGYYTYYSDIIKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLKAEDTAVYYCARGFPLLRHGAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVDTNVAWYQQKPGQAPKSLIYSASYVYWDVPSRFSGSASGTDFTLTISSVQSEDFATYYCQQYDQQLITFGCGTKLEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
178. PM 76-B10.11 CC x I2C0-scFc_delGK雙特異性 HLE分子 人工的 aa QVQLVESGGGLVKPGESLRLSCAASGFTFSDYYMYWVRQAPGKCLEWVAIISDGGYYTYYSDIIKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLKAEDTAVYYCARGFPLLRHGAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVDTNVAWYQQKPGQAPKSLIYSASYVYWDVPSRFSGSASGTDFTLTISSVQSEDFATYYCQQYDQQLITFGCGTKLEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
179. PM 76-B10.11 CC x I2C0 CC (103/43)-scFc雙特異性分子 人工的 aa QVQLVESGGGLVKPGESLRLSCAASGFTFSDYYMYWVRQAPGKCLEWVAIISDGGYYTYYSDIIKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLKAEDTAVYYCARGFPLLRHGAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVDTNVAWYQQKPGQAPKSLIYSASYVYWDVPSRFSGSASGTDFTLTISSVQSEDFATYYCQQYDQQLITFGCGTKLEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYCGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQCPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
180. PM 76-B10.11 CC x I2C0 CC (103/43)-scFc雙特異性 HLE分子 人工的 aa QVQLVESGGGLVKPGESLRLSCAASGFTFSDYYMYWVRQAPGKCLEWVAIISDGGYYTYYSDIIKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLKAEDTAVYYCARGFPLLRHGAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVDTNVAWYQQKPGQAPKSLIYSASYVYWDVPSRFSGSASGTDFTLTISSVQSEDFATYYCQQYDQQLITFGCGTKLEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYCGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQCPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
181. PM 76-B10.11 CC x I2C0 CC (103/43)-scFc_delGK雙特異性 HLE分子 人工的 aa QVQLVESGGGLVKPGESLRLSCAASGFTFSDYYMYWVRQAPGKCLEWVAIISDGGYYTYYSDIIKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLKAEDTAVYYCARGFPLLRHGAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVDTNVAWYQQKPGQAPKSLIYSASYVYWDVPSRFSGSASGTDFTLTISSVQSEDFATYYCQQYDQQLITFGCGTKLEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYCGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQCPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
182. IgG1鉸鏈 人工的 aa DKTHTCPPCP
183. IgG2亞型鉸鏈 人工的 aa ERKCCVECPPCP
184. IgG3亞型鉸鏈 人工的 aa ELKTPLDTTHTCPRCP
185. IgG3亞型鉸鏈 人工的 aa ELKTPLGDTTHTCPRCP
186. IgG4亞型鉸鏈 人工的 aa ESKYGPPCPSCP
187. G4S連接子 人工的 aa GGGGS
188. (G4S)2連接子 人工的 aa GGGGSGGGGS
189. (G4S)3連接子 人工的 aa GGGGSGGGGSGGGGS
190. (G4S)4連接子 人工的 aa GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS
191. (G4S)5連接子 人工的 aa GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS
192. (G4S)6連接子 人工的 aa GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS
193. (G4S)7連接子 人工的 aa GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS
194. (G4S)8連接子 人工的 aa GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS
195. 肽連接子 人工的 aa PGGGGS
196. 肽連接子 人工的 aa PGGDGS
197. 肽連接子 人工的 aa SGGGGS
198. 肽連接子 人工的 aa GGGG
199. 六組胺酸標籤 人工的 aa HHHHHH
200. CD3e結合物VL 人工的 aa QTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
201. CD3e結合物VH 人工的 aa EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNSYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKGRFTISRDDSKNTAYLQMNSLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYVSWWAYWGQGTLVTVSS
202. CD3e結合物scFv 人工的 aa EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNSYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKGRFTISRDDSKNTAYLQMNSLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYVSWWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
203. MU 8-B7 CC x I2C0-scFc VH CDR1 人工的 aa GYYWS
204. MU 8-B7 CC x I2C0-scFc VH CDR2 人工的 aa DIDASGSTKYNPSLKS
205. MU 8-B7 CC x I2C0-scFc VH CDR3 人工的 aa KKYSTVWSYFDN
206. MU 8-B7 CC x I2C0-scFc VL CDR1 人工的 aa SGDKLGDKYAS
207. MU 8-B7 CC x I2C0-scFc VL CDR2 人工的 aa QDRKRPS
208. MU 8-B7 CC x I2C0-scFc VL CDR3 人工的 aa QAWGSSTAV
209. MU 8-B7 CC x I2C0-scFc VH 人工的 aa QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKCLEWIGDIDASGSTKYNPSLKSRVTISLDTSKNQFSLKLNSVTAADTAVYFCARKKYSTVWSYFDNWGQGTLVTVSS
210. MU 8-B7 CC x I2C0-scFc VL 人工的 aa SYELTQPSSVSVPPGQTASITCSGDKLGDKYASWYQQKPGQSPVLVIYQDRKRPSGVPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWGSSTAVFGCGTKLTVL
211. MU 8-B7 CC x I2C0-scFc scFv 人工的 aa QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKCLEWIGDIDASGSTKYNPSLKSRVTISLDTSKNQFSLKLNSVTAADTAVYFCARKKYSTVWSYFDNWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSSYELTQPSSVSVPPGQTASITCSGDKLGDKYASWYQQKPGQSPVLVIYQDRKRPSGVPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWGSSTAVFGCGTKLTVL
212. MU 8-B7 CC x I2C0-scFc雙特異性分子 人工的 aa QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKCLEWIGDIDASGSTKYNPSLKSRVTISLDTSKNQFSLKLNSVTAADTAVYFCARKKYSTVWSYFDNWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSSYELTQPSSVSVPPGQTASITCSGDKLGDKYASWYQQKPGQSPVLVIYQDRKRPSGVPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWGSSTAVFGCGTKLTVLSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
213. MU 8-B7 CC x I2C0-scFc雙特異性HLE分子 人工的 aa QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKCLEWIGDIDASGSTKYNPSLKSRVTISLDTSKNQFSLKLNSVTAADTAVYFCARKKYSTVWSYFDNWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSSYELTQPSSVSVPPGQTASITCSGDKLGDKYASWYQQKPGQSPVLVIYQDRKRPSGVPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWGSSTAVFGCGTKLTVLSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
214. CL-1 VH CDR1 人工的 aa GYYMH
215. CL-1 VH CDR2 人工的 aa WINPNSGGTKYAQKFQG
216. CL-1 VH CDR3 人工的 aa DRITVAGTYYYYGMDV
217. CL-1 VL CDR1 人工的 aa RASQGVNNWLA
218. CL-1 VL CDR2 人工的 aa TASSLQS
219. CL-1 VL CDR3 人工的 aa QQANSFPIT
220. CL-1 VH 人工的 aa QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQCLEWMGWINPNSGGTKYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARDRITVAGTYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
221. CL-1 VL 人工的 aa DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGVNNWLAWYQQKPGKAPKLLIYTASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTIRSLQPEDFATYYCQQANSFPITFGCGTRLEIK
222. CL-1 scFv 人工的 aa QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQCLEWMGWINPNSGGTKYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARDRITVAGTYYYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGVNNWLAWYQQKPGKAPKLLIYTASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTIRSLQPEDFATYYCQQANSFPITFGCGTRLEIK
223. CL-1 x I2C雙特異性分子 人工的 aa QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQCLEWMGWINPNSGGTKYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARDRITVAGTYYYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGVNNWLAWYQQKPGKAPKLLIYTASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTIRSLQPEDFATYYCQQANSFPITFGCGTRLEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
224. CL-1 x I2C-6His雙特異性分子 -his標籤 人工的 aa QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQCLEWMGWINPNSGGTKYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARDRITVAGTYYYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGVNNWLAWYQQKPGKAPKLLIYTASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTIRSLQPEDFATYYCQQANSFPITFGCGTRLEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLHHHHHH
225. CL-1 x I2C-scFc雙特異性scFc分子 人工的 aa QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQCLEWMGWINPNSGGTKYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARDRITVAGTYYYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGVNNWLAWYQQKPGKAPKLLIYTASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTIRSLQPEDFATYYCQQANSFPITFGCGTRLEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
226. CL-2 VH CDR1 人工的 aa GYYMH
227. CL-2 VH CDR2 人工的 aa WINPNSGGTKYAQKFQG
228. CL-2 VH CDR3 人工的 aa DRITVAGTYYYYGMDV
229. CL-2 VL CDR1 人工的 aa RASQGVNNWLA
230. CL-2VL CDR2 人工的 aa TASSLQS
231. CL-2 VL CDR3 人工的 aa QQANSFPIT
232. CL-2 VH 人工的 aa QVQMVQSGAEVKKHGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQCLEWMGWINPNSGGTKYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARDRITVAGTYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
233. CL-2 VL 人工的 aa DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGVNNWLAWYQQKPGKAPKLLIYTASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTIRSLQPEDFATYYCQQANSFPITFGCGTRLEIK
234. CL-2 scFv 人工的 aa QVQMVQSGAEVKKHGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQCLEWMGWINPNSGGTKYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARDRITVAGTYYYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGVNNWLAWYQQKPGKAPKLLIYTASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTIRSLQPEDFATYYCQQANSFPITFGCGTRLEIK
235. CL-2 x I2C雙特異性分子 人工的 aa QVQMVQSGAEVKKHGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQCLEWMGWINPNSGGTKYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARDRITVAGTYYYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGVNNWLAWYQQKPGKAPKLLIYTASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTIRSLQPEDFATYYCQQANSFPITFGCGTRLEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
236. CL-2 x I2C-6His雙特異性分子 -his標籤 人工的 aa QVQMVQSGAEVKKHGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQCLEWMGWINPNSGGTKYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARDRITVAGTYYYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGVNNWLAWYQQKPGKAPKLLIYTASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTIRSLQPEDFATYYCQQANSFPITFGCGTRLEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLHHHHHH
237. CL-2 x I2C-scFc雙特異性scFc分子 人工的 aa QVQMVQSGAEVKKHGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQCLEWMGWINPNSGGTKYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARDRITVAGTYYYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGVNNWLAWYQQKPGKAPKLLIYTASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTIRSLQPEDFATYYCQQANSFPITFGCGTRLEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
238. CD70 HCDR1 人工的 aa TYAMS
239. CD70 HCDR2 人工的 aa AISGSGGRTFYAESVEG
240. CD70 HCDR3 人工的 aa HDYSNYPYFDY
241. CD70 LCDR1 人工的 aa RASQSVRSTYLA
242. CD70 LCDR2 人工的 aa GASSRAT
243. CD70 LCDR3 人工的 aa QQYGDLPFT
244. CD70 VH 人工的 aa EVQLLESGGGMVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMSWVRQAPGKCLEWVSAISGSGGRTFYAESVEGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKHDYSNYPYFDYWGQGTLVTVSS
245. CD70 VL 人工的 aa EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVRSTYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYSCQQYGDLPFTFGCGTKLEIK
246. CD70 VHVL 人工的 aa EVQLLESGGGMVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMSWVRQAPGKCLEWVSAISGSGGRTFYAESVEGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKHDYSNYPYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVRSTYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYSCQQYGDLPFTFGCGTKLEI
247. CD70 x I2C 人工的 aa EVQLLESGGGMVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMSWVRQAPGKCLEWVSAISGSGGRTFYAESVEGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKHDYSNYPYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVRSTYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYSCQQYGDLPFTFGCGTKLEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTV
248. B6L / CDR-H1 人工的 aa GYYMH
249. B6L / CDR-H2 人工的 aa WINPNSGETNYAQKFQG
250. B6L / CDR-H3 人工的 aa DALIVVAPVTRDYYYYGMDV
251. B6L / CDR-L1 人工的 aa RASQSVSSSYLA
252. B6L / CDR-L2 人工的 aa GASSRAT
253. B6L / CDR-L3 人工的 aa QQYGSSPLT
254. B6L / VH 人工的 aa QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQCLEWMGWINPNSGETNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARDALIVVAPVTRDYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
255. B6L / VL 人工的 aa EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPLTFGCGTKLEIK
256. B6L /SCFV I2E 人工的 aa EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPLTFGCGTKLEIKGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQCLEWMGWINPNSGETNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARDALIVVAPVTRDYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
257. B6L / 雙特異性MOL I2E 人工的 aa EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPLTFGCGTKLEIKGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQCLEWMGWINPNSGETNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARDALIVVAPVTRDYYYYGMDVWGQGTTVTVSSSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAINWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADAVKDRFTISRDDSKNTVYLQMNNLKTEDTAVYYCARAGNFGSSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTITCGSSTGAVTSGNYPNWVQKKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLSGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGSGTKLTVL
258. B6L / HLE-BITE I2E 人工的 aa EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPLTFGCGTKLEIKGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQCLEWMGWINPNSGETNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARDALIVVAPVTRDYYYYGMDVWGQGTTVTVSSSGGGGSLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAINWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADAVKDRFTISRDDSKNTVYLQMNNLKTEDTAVYYCARAGNFGSSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTITCGSSTGAVTSGNYPNWVQKKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLSGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGSGTKLTVLGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
259. B6L / SCFV I2C 人工的 aa EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPLTFGCGTKLEIKGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQCLEWMGWINPNSGETNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARDALIVVAPVTRDYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
260. B6L / 雙特異性MOL I2C 人工的 aa EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPLTFGCGTKLEIKGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQCLEWMGWINPNSGETNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARDALIVVAPVTRDYYYYGMDVWGQGTTVTVSSSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
261. B6L / HLE BITE I2C 人工的 aa EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPLTFGCGTKLEIKGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQCLEWMGWINPNSGETNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARDALIVVAPVTRDYYYYGMDVWGQGTTVTVSSSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
無
[ 圖 1]：圖1示出了根據蛋白質濃度（4.5、18.4和30.1 mg/ml的DLL3xCD3雙特異性抗原結合分子）和pH值（pH 4.4（下部折線）、pH 4.8（中間折線）和pH 5.2（上部折線））藉由尺寸排阻層析法（SEC）分析確定的高分子量（HMW）物質的百分比。液體藥物組成物包含15 mmol麩胺酸、8%（w/v）蔗糖和0.01%（w/v）聚山梨醇酯80，但不含另外的穩定劑如EDTA。HMW物質的百分比隨著pH和蛋白質濃度的增加而顯著增加。
[ 圖 2]：圖2示出了在40°C下儲存4週後，根據pH值（pH 4.1至4.9範圍內的單個值）藉由尺寸排阻層析法（SEC）分析確定的高分子量（HMW）物質和低分子量（LMW）物質的百分比。液體藥物組成物包含20 mg/ml的相應雙特異性抗原結合分子、15 mmol麩胺酸、8%（w/v）蔗糖和0.01%（w/v）聚山梨醇酯80，但不含另外的穩定劑如EDTA。空心符號代表HMW，實心符號代表LMW數據點。正方形代表BCMAxCD3雙特異性抗原結合分子，圓圈代表CD33xCD3雙特異性抗原結合分子，三角形代表DLL3xCD3雙特異性抗原結合分子。HMW物質的百分比隨著pH值的增加而顯著增加，LMW物質的百分比隨著pH值的增加而減少。
[ 圖 3]：圖3示出了在儲存前（t = 0，空心圓圈）和在40°C下儲存4週後（實心圓圈），根據pH值（pH 4.1至4.9範圍內的單個值）藉由尺寸排阻層析法（SEC）分析確定的低分子量（LMW）物質的百分比。液體藥物組成物包含5 mg/ml（深色符號）或20 mg/ml（淺色符號）的相應雙特異性抗原結合分子。每種配製物包含15 mmol麩胺酸和0.01%（w/v）聚山梨醇酯80，此外（從左柱到右柱）：5%（w/v）蔗糖、5%加1%（w/v）羥丙基-ß-環糊精（HpbCD）、蔗糖5%（w/v）加10 mM苯丙胺酸（Phe）、和0.3 M脯胺酸（Pro）。頂行「1」描述DLL3xCD3雙特異性抗原結合分子的結果，中間行「2」描述BCMAxCD3雙特異性抗原結合分子的結果，底行「3」描述CD33xCD3雙特異性抗原結合分子的結果。
[ 圖 4]： 圖 4A示出了根據pH值（對於每組的賦形劑，從左到右pH為4.3（x軸標目中的「4」）、4.6（x軸標目中的「46」）和5.2（x軸標目中的「5」）藉由尺寸排阻層析法（SEC）分析測定的每組四個柱中BCMAxCD3雙特異性抗原結合分子的高分子量（HMW）物質的百分比，這四個柱從左到右分別為：(i.，黑色) 在儲存前（t = 0），(ii.，中等灰色) 在-30°C下儲存2週後，(iii.，淺灰色) 在4°C下儲存4週後，以及 (iv.，深灰色) 在40°C下儲存4週後。液體藥物組成物包含30 mg/ml的BCMAxCD3雙特異性抗原結合分子、15 mmol麩胺酸、8%（w/v）蔗糖和0.01%（w/v）聚山梨醇酯80，四個柱每三聯為一組，從左至右分別為 （a）無另外的穩定劑（對照），(b.，「CD」) 1%（w/v）羥丙基-ß-環糊精（HpbCD），(c.，「Phe」) 50 mM苯丙胺酸，(d.，「EDTA」) 0.04%（w/v）EDTA，(e.，「R」) 50 mM精胺酸，(f.，「Trp」) 20 mM色胺酸，(g.，「Pro」) 50 mM脯胺酸，以及 (h.，「BA」) 0.45%（w/v）苯甲醇。 圖 4B示出了根據pH值（對於每組的賦形劑，從左到右pH為4.3（x軸標目中的「4」）、4.6（x軸標目中的「46」）和5.2（x軸標目中的「5」）藉由尺寸排阻層析法（SEC）分析測定的每組四個柱中DLL3xCD3雙特異性抗原結合分子的高分子量（HMW）物質的百分比，這四個柱從左到右分別為：(i.，黑色) 在儲存前（t = 0），(ii.，中等灰色) 在-30°C下儲存2週後，(iii.，淺灰色) 在4°C下儲存4週後，以及 (iv.，深灰色) 在40°C下儲存4週後。液體藥物組成物包含30 mg/ml的DLL3xCD3雙特異性抗原結合分子、15 mmol麩胺酸、8%（w/v）蔗糖和0.01%（w/v）聚山梨醇酯80，四個柱每三聯為一組，從左至右分別為 （a.）無另外的穩定劑（對照），(b.，「CD」) 1%（w/v）羥丙基-ß-環糊精（HpbCD），(c.，「Phe」) 50 mM苯丙胺酸，(d.，「EDTA」) 0.04%（w/v）EDTA，(e.，「R」) 50 mM精胺酸，(f.，「Trp」) 20 mM色胺酸，(g.，「Pro」) 50 mM脯胺酸，以及 (h.，「BA」) 0.45%（w/v）苯甲醇。
[ 圖 5]：圖5示出了根據pH值（對於每組的賦形劑，從左到右pH為4.2（x軸標目中的「4」）、4.6（x軸標目中的「46」）和5.0（x軸標目中的「5」）藉由尺寸排阻層析法（SEC）分析測定的每組四個柱中MUC17xCD3雙特異性抗原結合分子的高分子量（HMW）物質的百分比，這四個柱從左到右分別為：(i.，黑色) 在儲存前（t = 0），(ii.，中等灰色) 在-30°C下儲存4週後，(iii.，淺灰色) 在4°C下儲存4週後，以及 (iv.，深灰色) 在40°C下儲存4週後。液體藥物組成物包含16 mg/ml的MUC17xCD3雙特異性抗原結合分子、15 mmol麩胺酸、8%（w/v）蔗糖和0.01%（w/v）聚山梨醇酯80，四個柱每三聯為一組，從左至右分別為 （a.）無另外的穩定劑（對照），(b.，「CD」) 1%（w/v）羥丙基-ß-環糊精（HpbCD），(c.，「Phe」) 50 mM苯丙胺酸，(d.，「EDTAAp01」) 0.01%（w/v）EDTA，(e.，「R」) 50 mM精胺酸HCL，(vi.，「EDTAAp04」) 0.04%（w/v）EDTA，(g.，「Pro」) 50 M脯胺酸，以及 (h.，「EDTAAp16」) 0.16%（w/v）EDTA。
無
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Claims (30)

  1. 一種藥物組成物，其較佳的是包含以下的液體藥物組成物： (a)   包含至少三個結構域的雙特異性抗原結合分子，其中： •     第一結構域與靶細胞表面抗原結合，其中該靶細胞表面抗原係腫瘤抗原； •     第二結構域與人和/或獼猴CD3鏈的細胞外表位結合；並且 •     第三結構域包含兩個多肽單體，每個多肽單體包含鉸鏈、CH2結構域和CH3結構域，其中所述兩個多肽單體經由肽連接子彼此融合，並且其中所述第三結構域按胺基至羧基順序包含： 鉸鏈-CH2-CH3-連接子-鉸鏈-CH2-CH3； 其中該雙特異性抗原結合分子的濃度係8至35 mg/ml； (b)   至少一種緩衝劑； (c)   至少一種糖；以及 (d)   選自乙二胺四乙酸（EDTA）、二乙烯三胺五乙酸（DTPA）和檸檬酸的至少一種穩定劑，其中該穩定劑以0.005%至0.25%（w/v），較佳的是0.01%至0.2%（w/v）的範圍內的濃度存在； 並且其中該藥物組成物的pH在4.0至6.0的範圍內。
  2. 如請求項1所述之藥物組成物，其中該雙特異性抗原結合分子係單鏈分子。
  3. 如請求項1所述之藥物組成物，其中該雙特異性抗原結合分子的半衰期延長。
  4. 如請求項1所述之藥物組成物，其中該雙特異性抗原結合分子的第三結構域中CH2結構域的Kabat位置314處的糖基化位點藉由N314X取代被去除，其中X係除Q之外的任何胺基酸。
  5. 如請求項1中任一項所述之藥物組成物，其中該第三結構域的所述多肽單體中的每一個具有與選自由SEQ ID NO: 17-24組成之群組的序列同一性為至少90%的胺基酸序列，或具有選自由SEQ ID NO: 17-24組成之群組的胺基酸序列。
  6. 如請求項1中任一項所述之藥物組成物，其中該CH2結構域包含結構域內半胱胺酸二硫橋。
  7. 如請求項1所述之藥物組成物，其中該腫瘤抗原選自由以下組成之群組：CDH19、CDH3、MSLN、DLL3、FLT3、EGFRvIII、BCMA、PSMA、CD33、CD19、CD20、CLDN18.2、MUC17、EpCAM、CD70和CLDN6。
  8. 如請求項1中任一項所述之藥物組成物，其中該第二結構域係該人和/或該獼猴CD3ε鏈的細胞外表位。
  9. 如請求項1中任一項所述之藥物組成物，其中 (i)    該第一結構域包含兩個抗體可變結構域，並且該第二結構域包含兩個抗體可變結構域； (ii)   該第一結構域包含一個抗體可變結構域，並且該第二結構域包含兩個抗體可變結構域； (iii)  該第一結構域包含兩個抗體可變結構域，並且該第二結構域包含一個抗體可變結構域；或者 (iv)  該第一結構域包含一個抗體可變結構域，並且該第二結構域包含一個抗體可變結構域。
  10. 如請求項1所述之藥物組成物，其中該抗體構建體按胺基至羧基順序包含： (a)   該第一結構域； (b)   肽連接子，該肽連接子具有選自由SEQ ID NO: 187-189組成之群組的胺基酸序列； (c)   該第二結構域； (d)   肽連接子，該肽連接子具有選自由以下組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID NO: 187、188、189、195、196、197和198； (e)   該第三結構域的第一多肽單體； (f)    肽連接子，該肽連接子具有選自由以下組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID NO: 191、192、193和194；以及 (g)   該第三結構域的第二多肽單體。
  11. 如請求項1所述之藥物組成物，其中該構建體的第一結合結構域包含含有選自由以下組成之群組的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的VH區和含有選自由以下組成之群組的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的VL區： (a)   如SEQ ID NO: 4中所描繪的CDR-H1、如SEQ ID NO: 5中所描繪的CDR-H2、如SEQ ID NO: 6中所描繪的CDR-H3、如SEQ ID NO: 1中所描繪的CDR-L1、如SEQ ID NO: 2中所描繪的CDR-L2和如SEQ ID NO: 3中所描繪的CDR-L3， (b)   如SEQ ID NO: 29中所描繪的CDR-H1、如SEQ ID NO: 30中所描繪的CDR-H2、如SEQ ID NO: 31中所描繪的CDR-H3、如SEQ ID NO: 34中所描繪的CDR-L1、如SEQ ID NO: 35中所描繪的CDR-L2和如SEQ ID NO: 36中所描繪的CDR-L3， (c)   如SEQ ID NO: 42中所描繪的CDR-H1、如SEQ ID NO: 43中所描繪的CDR-H2、如SEQ ID NO: 44中所描繪的CDR-H3、如SEQ ID NO: 45中所描繪的CDR-L1、如SEQ ID NO: 46中所描繪的CDR-L2和如SEQ ID NO: 47中所描繪的CDR-L3， (d)   如SEQ ID NO: 53中所描繪的CDR-H1、如SEQ ID NO: 54中所描繪的CDR-H2、如SEQ ID NO: 55中所描繪的CDR-H3、如SEQ ID NO: 56中所描繪的CDR-L1、如SEQ ID NO: 57中所描繪的CDR-L2和如SEQ ID NO: 58中所描繪的CDR-L3， (e)   如SEQ ID NO: 65中所描繪的CDR-H1、如SEQ ID NO: 66中所描繪的CDR-H2、如SEQ ID NO: 67中所描繪的CDR-H3、如SEQ ID NO: 68中所描繪的CDR-L1、如SEQ ID NO: 69中所描繪的CDR-L2和如SEQ ID NO: 70中所描繪的CDR-L3， (f)    如SEQ ID NO: 83中所描繪的CDR-H1、如SEQ ID NO: 84中所描繪的CDR-H2、如SEQ ID NO: 85中所描繪的CDR-H3、如SEQ ID NO: 86中所描繪的CDR-L1、如SEQ ID NO: 87中所描繪的CDR-L2和如SEQ ID NO: 88中所描繪的CDR-L3， (g)   如SEQ ID NO: 94中所描繪的CDR-H1、如SEQ ID NO: 95中所描繪的CDR-H2、如SEQ ID NO: 96中所描繪的CDR-H3、如SEQ ID NO: 97中所描繪的CDR-L1、如SEQ ID NO: 98中所描繪的CDR-L2和如SEQ ID NO: 99中所描繪的CDR-L3， (h)   如SEQ ID NO: 105中所描繪的CDR-H1、如SEQ ID NO: 106中所描繪的CDR-H2、如SEQ ID NO: 107中所描繪的CDR-H3、如SEQ ID NO: 109中所描繪的CDR-L1、如SEQ ID NO: 110中所描繪的CDR-L2和如SEQ ID NO: 111中所描繪的CDR-L3， (i)    如SEQ ID NO: 115中所描繪的CDR-H1、如SEQ ID NO: 116中所描繪的CDR-H2、如SEQ ID NO: 117中所描繪的CDR-H3、如SEQ ID NO: 118中所描繪的CDR-L1、如SEQ ID NO: 119中所描繪的CDR-L2和如SEQ ID NO: 120中所描繪的CDR-L3， (j)    如SEQ ID NO: 126中所描繪的CDR-H1、如SEQ ID NO: 127中所描繪的CDR-H2、如SEQ ID NO: 128中所描繪的CDR-H3、如SEQ ID NO: 129中所描繪的CDR-L1、如SEQ ID NO: 130中所描繪的CDR-L2和如SEQ ID NO: 131中所描繪的CDR-L3， (k)   如SEQ ID NO: 137中所描繪的CDR-H1、如SEQ ID NO: 138中所描繪的CDR-H2、如SEQ ID NO: 139中所描繪的CDR-H3、如SEQ ID NO: 140中所描繪的CDR-L1、如SEQ ID NO: 141中所描繪的CDR-L2和如SEQ ID NO: 142中所描繪的CDR-L3， (l)    如SEQ ID NO: 152中所描繪的CDR-H1、如SEQ ID NO: 153中所描繪的CDR-H2、如SEQ ID NO: 154中所描繪的CDR-H3、如SEQ ID NO: 155中所描繪的CDR-L1、如SEQ ID NO: 156中所描繪的CDR-L2和如SEQ ID NO: 157中所描繪的CDR-L3， (m)  如SEQ ID NO: 167中所描繪的CDR-H1、如SEQ ID NO: 168中所描繪的CDR-H2、如SEQ ID NO: 169中所描繪的CDR-H3、如SEQ ID NO: 170中所描繪的CDR-L1、如SEQ ID NO: 171中所描繪的CDR-L2和如SEQ ID NO: 172中所描繪的CDR-L3， (n)   如SEQ ID NO: 203中所描繪的CDR-H1、如SEQ ID NO: 204中所描繪的CDR-H2、如SEQ ID NO: 205中所描繪的CDR-H3、如SEQ ID NO: 206中所描繪的CDR-L1、如SEQ ID NO: 207中所描繪的CDR-L2和如SEQ ID NO: 208中所描繪的CDR-L3； (o)   如SEQ ID NO: 214中所描繪的CDR-H1、如SEQ ID NO: 215中所描繪的CDR-H2、如SEQ ID NO: 216中所描繪的CDR-H3、如SEQ ID NO: 217中所描繪的CDR-L1、如SEQ ID NO: 218中所描繪的CDR-L2和如SEQ ID NO: 219中所描繪的CDR-L3； (p)   如SEQ ID NO: 226中所描繪的CDR-H1、如SEQ ID NO: 227中所描繪的CDR-H2、如SEQ ID NO: 228中所描繪的CDR-H3、如SEQ ID NO: 229中所描繪的CDR-L1、如SEQ ID NO: 230中所描繪的CDR-L2和如SEQ ID NO: 231中所描繪的CDR-L3； (q)   如SEQ ID NO: 238中所描繪的CDR-H1、如SEQ ID NO: 239中所描繪的CDR-H2、如SEQ ID NO: 240中所描繪的CDR-H3、如SEQ ID NO: 241中所描繪的CDR-L1、如SEQ ID NO: 242中所描繪的CDR-L2和如SEQ ID NO: 243中所描繪的CDR-L3；以及 (r)    如SEQ ID NO: 248中所描繪的CDR-H1、如SEQ ID NO: 249中所描繪的CDR-H2、如SEQ ID NO: 250中所描繪的CDR-H3、如SEQ ID NO: 251中所描繪的CDR-L1、如SEQ ID NO: 252中所描繪的CDR-L2和如SEQ ID NO: 253中所描繪的CDR-L3。
  12. 如請求項1所述之藥物組成物，其中該雙特異性抗原結合分子的濃度係10至35或15至31 mg/ml，更較佳的是20至30 mg/ml或25至30 mg/ml。
  13. 如請求項1所述之藥物組成物，其中EDTA的濃度在0.01%至0.2%（w/v）的範圍內，較佳的是在0.01%至0.16%（w/v）的範圍內，更較佳的是0.04%（w/v）。
  14. 如請求項1所述之藥物組成物，其中該至少一種緩衝劑係選自由以下組成之群組的酸：乙酸鹽、麩胺酸鹽、檸檬酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、組胺酸、磷酸鹽、2-(N-𠰌啉代)乙磺酸鹽或其組合，較佳的是麩胺酸鹽。
  15. 如請求項14所述之藥物組成物，其中該至少一種緩衝劑以5至200 mM的濃度範圍，更較佳的是以10至50 mM的濃度範圍，較佳的是以15 mM存在。
  16. 如請求項1所述之藥物組成物，其中該至少一種糖選自由以下組成之群組：單糖、二糖、環狀多糖、糖醇、線性支鏈葡聚糖或線性非支鏈葡聚糖。
  17. 如請求項16所述之藥物組成物，其中該二糖選自由以下組成之群組：蔗糖和海藻糖及其組合，較佳的是蔗糖。
  18. 如請求項16所述之藥物組成物，其中該糖醇選自由以下組成之群組：甘露醇和山梨醇及其組合。
  19. 如請求項16所述之藥物組成物，其中該至少一種糖以1%至15%（w/v）的範圍內的濃度，較佳的是以8%至12%（w/v）的濃度範圍如8%（w/v）存在。
  20. 如請求項1所述之藥物組成物，其進一步包含選自由以下組成之群組的至少一種表面活性劑：聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、 聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯80、泊洛沙姆188、普朗尼克F68、曲拉通X-100、聚氧乙烯、PEG 3350、PEG 4000及其組合。
  21. 如請求項1所述之藥物組成物，其中該組成物包含至少一種表面活性劑，該至少一種表面活性劑的濃度在0.004%至0.5%（w/V）的範圍內，較佳的是在0.01%至0.1%（w/v）的範圍內。
  22. 如請求項1所述之藥物組成物，其中該組成物的pH在4.0至5.3，較佳的是4.2至5.2，更較佳的是4.3至4.6的範圍內。
  23. 如請求項1所述之藥物組成物，其具有在150至500 mOsm的範圍內的滲透壓。
  24. 如請求項1所述之藥物組成物，其進一步包含選自由以下組成之群組的賦形劑：一種或多種多元醇，較佳的是羥丙基-ß-環糊精；和一種或多種胺基酸，較佳的是苯丙胺酸，但較佳的是不是精胺酸、脯胺酸和色胺酸。
  25. 如請求項24所述之藥物組成物，其中所述一種或多種賦形劑以0.1%至15%（w/v）的濃度範圍存在。
  26. 如請求項1所述之藥物組成物，其中該組成物包含 (a)   如前述請求項中任一項所述之雙特異性抗原結合分子， (b)   15 mM麩胺酸鹽或乙酸鹽， (c)   8%（w/V）蔗糖或8%（w/V）蔗糖和1%（w/V）羥丙基-β-環糊精， (d)   視需要0.01%（w/V）聚山梨醇酯80 並且其中該液體藥物組成物的pH係4.0至5.2，較佳的是4.2至4.6，較佳的是4.3至4.6的範圍內的任何值。
  27. 一種固體藥物組成物，其可藉由凍乾如前述請求項中任一項所述之液體藥物組成物獲得。
  28. 一種液體藥物組成物，其可藉由用藥學上可接受的液體重構如請求項27所述之固體藥物組成物獲得。
  29. 如前述請求項中任一項所述之藥物組成物，用於在治療疾病，較佳的是增殖性疾病中使用。
  30. 如請求項1所述之藥物組成物用於減少儲存期間高分子量物質（HMWS）的形成之用途，其中如果該液體藥物組成物儲存在4°C或低於4°C，較佳的是在-30°C或低於-30°C，則HMWS的量保持低於5%，較佳的是低於3%或2%。
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