TW202419625A - 具備凍融抗性的酵母菌、其製備方法及其應用 - Google Patents
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Abstract
本發明係提供一種具備凍融抗性的酵母菌,其中內源性
NTH1基因及
HSP12基因被剔除。本發明亦提供其製備方法以及將其用於製造麵團的應用。
Description
本案係關於一種具備凍融抗性的酵母菌。具體而言,係關於一種藉由剔除酵母菌(
Saccharomyces cerevisiae)中的
NTH1基因及
HSP12基因所得的具備凍融抗性的酵母菌、其製備方法及其應用。
近年來在麵包業界為了節省人工與時間、提升產品多樣性、維持產品穩定性,在運輸時確保產品不變質,並且提升產品的儲藏時間,將麵團冷凍保存是十分有效的解決方案。此外,冷凍麵團只要透過簡單的解凍、發酵及烘焙的過程即可提供新鮮的麵包給消費者,因此製作冷凍麵團為發展的主要趨勢之一。冷凍麵團市場規模2020年為63.877億美元,預估2026年將達到75.446億美元,複合年均成長率可達4.3%,由此可知,冷凍麵團未來還有很大的發展空間。
然而,在製造冷凍麵團時,其中所包含的酵母菌在經過冷凍及解凍過程中很容易受到冷凍傷害,繼而導致酵母菌產氣能力下降、甚至死亡,致使麵團在解凍後無法膨發,使後續麵包製作時無法達到品質要求。因此急需開發增強抗凍能力之酵母菌。
為達成上述目的,本案係提供一種酵母菌(
Saccharomyces cerevisiae),其中該酵母菌的內源性
NTH1基因及
HSP12基因被剔除。
較佳地,該內源性
NTH1基因及
HSP12基因係透過CRISPR-Cpf1剔除。
較佳地,該酵母菌為雙倍體酵母菌。
較佳地,其中細胞內海藻糖含量為 112.9 ± 5.4 mg/g CDW (cell dry weight)。
較佳地,該酵母菌於民國111年10月4日寄存於中華民國食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心,寄存編號為BCRC920129。
為達成所請發明的另一目的,本案另提供一種增加酵母菌的凍融抗性的方法,包含下列步驟:(a)剔除一酵母菌之
NTH1基因及
HSP12基因,以得到一轉殖酵母菌;以及(b)培養該轉殖酵母菌。
較佳地,係透過CRISPR-Cpf1剔除該酵母菌之
NTH1基因及
HSP12基因。
為達成所請發明的一目的,本案提供一種麵團,其包含前述之酵母菌。
為達成所請發明的又一目的,本發明再提供一種製造冷凍麵團的方法,包含使用前述之酵母菌製備麵團,以及冷凍該麵團。
以下係參照相關圖式以詳細描述實施例。然而,該些實施例可用不同型態來實現,但這並非實施或運用本案所請發明之具體實施例的唯一形式,故不應理解成對上述實施例之限制。實施方式中涵蓋了多個具體實施例的特徵以及用以建構與操作這些具體實施例的方法步驟與其順序。然而,亦可利用其他具體實施例來達成相同或均等的功能與步驟順序。相反的,提供該些實施例係讓本說明書可徹底且完整揭露,以充分地向本發明所屬技術領域中具有通常知識者完全表達本發明之精神。圖式中相似的元件符號係指相似的元件。在以下的敘述中,將不會詳細描述習知的功能或結構,以不贅述實施例中不必要的細節。
除非另有定義,本文所用之所有技術用詞與術語均與本發明所屬技術領域中具有通常知識者所通常理解的意義相同。在發生衝突的情況下,以包括定義在內之本說明書為準。
在不和上下文衝突的情形下,本說明書所用的單數名詞涵蓋該名詞的複數型;而所用的複數名詞時亦涵蓋該名詞的單數型。此外,在本說明書與申請專利範圍中,「至少一」與「一或更多」等表述方式的意義相同,兩者都代表包含了一、二、三或更多。
雖然用以界定本發明較廣範圍的數值範圍與參數皆是約略的數值,此處已盡可能精確地呈現具體實施例中的相關數值。然而,任何數值本質上不可避免地含有因個別測試方法所致的標準偏差。在此處,「約」通常係指實際數值在一特定數值或範圍的正負10%、5%、1%或0.5%之內。或者是,「約」一詞代表實際數值落在平均值的可接受標準誤差之內,視本發明所屬技術領域中具有通常知識者的考量而定。除了實施例之外,或除非另有明確的說明,當可理解本文中所用的所有範圍、數量、數值與百分比(例如用以描述材料用量、時間長短、溫度、操作條件、數量比例及其他相似者)均經過「約」的修飾。因此,除非另有相反的說明,本說明書與申請專利範圍所揭示的數值參數皆為約略的數值,且可視需求而更動。至少應將這些數值參數理解為所指出的有效位數與套用一般進位法所得到的數值。在此處,將數值範圍表示成由一端點至另一段點或介於二端點之間;除非另有說明,此處所述的數值範圍皆包含端點。
以下藉由實施例配合實施例說明本案所請發明的具體技術特徵。
根據一實施例,係透過基因編輯系統剔除酵母菌(
Saccharomyces cerevisiae)中的
NTH1基因及
HSP12基因,以製備本案所請的酵母菌。在此實施例中,基因編輯系統係可採用現行技術的任意基因編輯系統,例如鋅指核酸酶(ZFNs)、類轉錄活化因子核酸酶(TALEN)和常間回文重複序列叢集(CRISPR) 或大範圍核酸酶等。較佳地,係選用CRISPR進行
NTH1基因及
HSP12基因剔除。另一方面,該酵母菌可為單倍體酵母菌或雙倍體酵母菌。根據本案的另一實施例,在剔除
NTH1基因及
HSP12基因後,該酵母菌的細胞內海藻醣含量為80至140 mg/g CDW,較佳地為112.9 ± 5.4 mg/g CDW。
在一較佳的實施態樣中,該酵母菌在民國111年10月4日寄存於中華民國食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心,寄存編號為BCRC920129。
根據本案的另一實施例,係提供一種增加酵母菌凍融抗性的方法,包含(a)剔除酵母菌之
NTH1基因及
HSP12基因,以得到轉殖酵母菌;以及(b)培養該轉殖酵母菌。較佳地,係使用CRISPR-Cpf1系統剔除酵母菌之
NTH1基因及
HSP12基因。
根據本案的又一實施例,係提供一種麵團,麵團包含澱粉、水以及依據前述實施例所得到的剔除酵母菌之
NTH1基因及
HSP12基因的酵母菌。在一實施態樣中,澱粉較佳地可為小麥粉、大麥粉、米粉、木薯粉、馬鈴薯粉、蕎麥粉、畫眉草粉、大豆粉、高粱粉等,更佳地為小麥粉。前述麵團可進一步包含酵母活化劑(yeast food)、油脂類、糖類、乳製品、蛋製品、鹽類、膨脹劑、乳化劑、酵素類、調味料、保存料、蛋白質、胺基酸及香料中的一種或多種。
根據本案的另一實施例,係提供一種冷凍麵團的製造方法,係包含使用前述的剔除酵母菌之
NTH1基因及
HSP12基因的酵母菌混合澱粉、水等材料,經攪拌混合後得到麵團,以及冷凍該麵團。由於該麵團中含有經編輯的酵母菌,可以具有較佳的抗凍融能力,在冷凍麵團解凍後仍可以具有較佳的膨發能力。
以下以具體實施例說明本案的技術特徵。
作為細菌免疫防禦系統的常間回文重複序列叢集(CRISPR)已被開發用於各種生物體中的基因組編輯工具。第2類(class II)CRISPR系統系統已廣泛用於基因組編輯,因為單鏈嚮導RNA(sgRNA)的序列要求具有固有的簡單性和靈活性。使用來自化膿性鏈球菌的Cas9核酸內切酶,含有目標序列20bp互補序列的sgRNA可以引導Cas9靶向具有原型間隔區相鄰基序(PAM)的DNA以產生雙鏈斷裂。DNA斷裂的致死細菌(lethal bacteria)更偏好透過與同源DNA模板進行同源重組來修復。
而Cpf1是第2類CRISPR系統的RNA引導的核酸內切酶,它切割具有不同於Cas9特徵的標靶DNA,例如利用富含T的PAM,由一個單一的引導crRNA,並在黏性末端切割,作為Cas9的替代品進行基因組編輯。
本案使用視覺識別模型在釀酒酵母中生成了CRISPR-Cpf1基因組編輯系統,該模型在
ADE2基因被剔除時呈現紅色菌落。在本案一實施例中,透過CRISPR-Cpf1構建了海藻醣酶基因
NTH1基因及/或熱休克蛋白
HSP12基因缺失的麵包酵母菌株,以研究細胞內海藻醣的含量及結凍、融解後的細胞活力。最後,用編輯後的酵母菌株製備麵團,並分析了該冷凍麵團的發酵能力。
材料與方法
菌株和質體
本研究中使用的野生型酵母菌BCRC21447來自生物資源收集和研究中心,其分離自荷蘭鹿特丹。質體載體pUDC175和pUDE710由Jean-Marc Daran博士生成(Addgene質體#103019和#103020)。本案中使用的酵母菌和質體的遺傳特性總結在表1中。
表1
菌株或質體 | 特徵 | 參考資料或來源 |
S. cerevisiaeBCRC21447 | MATa /a工業啤酒酵母 | 生物資源收集與研究中心 |
S. cerevisiaeΔ nth1 | MATa /a, Δ nth1+pBCoN1 | 本申請 |
S. cerevisiaeΔ hsp12 | MATa /a, Δ hsp12+pBCoH1 | 本申請 |
S. cerevisiaeΔ nth1/Δ hsp12 | MATa /a, Δ nth1Δ hsp12+pBCoNH1 | 本申請 |
培養基和生長條件
DNA擴增的大腸桿菌Top10菌株在LB培養基(10g/L胰蛋白腖、5g/L酵母萃取物和10g/L NaCl)中於37℃生長。酵母菌在30°C的YPD培養基(1%酵母萃取物、2%蛋白腖和2%葡萄糖)中生長。當需要篩選時,針對大腸桿菌添加100mg/L胺芐青黴素和針對酵母菌添加200mg/L G418的抗生素。
質體構建
使用DNA微量製備試劑盒(D4301,Zymo Research Corp.)從酵母菌BCRC21447中分離酵母基因組DNA。本研究中使用的引子購自Genomics BioSci &Tech. Co., Ltd.。質體pBCoN1用於表現
FnCpf1盒,含有crRNA序列crNTH1.2靶向基因,用於
NTH1基因缺失。質體pBCoH1用於表現
FnCpf1盒,含有crRNA序列crHSP12.1靶向基因,用於剔除
HSP12基因。質體pBCoNH1用於表現
FnCpf1盒,並分別含有crRNA序列crNTH1.2和crHSP12.1靶向基因,用於剔除
NTH1和
HSP12基因。
crRNA序列由CHOPCHOP網站(http://chopchop.cbu.uib.no/)設計,基於以下原則:(1)crRNA的
FnCpf1的PAM序列為5'-TTTV-3'(V=A/G/C),(2)直接重複序列(DR)的長度為19nt,並且(3)crRNA在5'和3'末端有兩個DR。
酵母中的轉化和基因組編輯
使用醋酸鋰方案進行所有酵母菌轉化。合成的同源DNA模板包含目標基因上游和下游60bp的DNA(表2)。寡核苷酸購自Integrated DNA Technologies(IDT) Inc.。因為
ADE2基因對腺嘌呤生物合成至關重要,其缺失會導致腺嘌呤營養缺陷和紅色菌落,故對
ADE2的基因組編輯產生可見的著色菌落。
NTH1基因和
HSP12基因的基因組編輯透過使用nth1CK1/nth1CK2和hsp12CK1/hsp12CK2引子組的菌落PCR分析和DNA測序得到證實。本案編輯後的菌株在其於外表特徵則與編輯前一般無異。
表2
基因 | 目標序列 | PAM | 菌落 PCR 的引子序列 | ssDNA模板序列 |
NTH1 | CACATAGCTGAAGTTGTTATAGAAT(SEQ ID No. 7) | TTTC | F: GACAGGAGCATCGTGTAGGA (SEQ ID No. 1) R: CTACCTAGGAGCGGCCAA(SEQ ID No. 2) | CTATAGTCCATAGAGGTTTCTTTCTTGAGGCCTTAAACTGCTAAAGAATGATATTGGTGGTGATAATCTTCTTTGACGGCCTTGGGCTACCGGTCCTTGGCTTGTATTAACTTGACTCAT(SEQ ID No. 5) |
HSP12 | GGCAGAGTCGTGGACACCTTGGAAG(SEQ ID No. 8) | TTTC | F: CCCACAAACACAGACCAGAA(SEQ ID No. 3) R: CGCGGAAATTGATGACGAA(SEQ ID No. 4) | ATGTCTGACGCAGGTAGAAAAGGATTCGGTGAAAAAGCTTCTGAAGCTTTGAAGCCAGACGATGCCGTCGAATATGTTTCCGGTCGTGTCCACGGTGAAGAAGACCCAACCAAGAAGTAA(SEQ ID No. 6) |
細胞內海藻醣含量的測定
酵母細胞的胞內海藻醣的萃取方法簡述如下。透過離心收穫酵母細胞並用蒸餾水洗滌兩次。用4mL的5%(w/v)冷三氯乙酸從0.1g細胞沉澱中萃取海藻醣45分鐘,同時搖動。再重複一次萃取,合併兩次萃取的上清液,用海藻醣測定試劑盒(K-TREH,Megazyme Ltd.)測定海藻醣含量。細胞乾重是透過在85°C下將新鮮酵母細胞乾燥過夜來測定的。
細胞活力的測定
對於凍融後的反應,酵母細胞在30°C的YPD培養基中培養並在靜止期收穫。在使用血球細胞計數器透過台盼藍染色對活細胞進行顯微鏡計數後,將細胞等分到冷凍管中並在-20°C下冷凍不同的時間段。將冷凍細胞樣品在30°C解凍30分鐘後計數細胞數。根據冷凍前後的活細胞數計算存活率。
膨發能力
的測定
麵團的複合物是10克小麥粉、5毫升水、1.25克糖、0.25克鹽和0.1毫升的新鮮酵母細胞(0.3克/毫升)。將所有材料混合均勻,將每個麵團放入50mL量筒中。於3小時內每30分鐘記錄一次麵團的高度。用新鮮酵母樣品製備一組麵團作為陽性對照,而製備另一組沒有任何酵母樣品作為陰性對照的麵團。具有所請酵母菌的實驗組麵團在-20°C下儲存7或21天。冷凍麵團在30°C解凍30分鐘,然後測試發酵能力。從發酵前後量筒的刻度面測量麵團的高度,計算淨增加高度。
統計分析
所有實驗至少單獨進行3次,報告的數據為平均值±SD。學生t檢驗證實了編輯菌株和親本菌株之間的差異。
p<0.05的差異被認為具有統計學意義。
結果
藉由
CRISPR-Cpf1
產生
NTH1
基因缺失菌株及
HSP12
基因缺失菌株
為更理解本案發明之內容,以下請參考圖1配合說明。圖1係為CRISPR-Cpf1基因組編輯系統剪切片段的示意圖。上圖顯示了在釀酒酵母系統中使用CRISPR-Cpf1的(A)
NTH1基因和(B)
HSP12基因的相對位置。下圖顯示的DNA測序光譜適用於(A)∆
NTH1菌株;和(B)∆
HSP12菌株。並同時請參考圖2。圖2係為基因組編輯菌株經菌落PCR分析的瓊脂糖凝膠電泳結果圖。PCR擴增含有(A)透過nth1CK1/nth1CK2引子組擴增的
NTH1基因的DNA,及(B)透過hsp12CK1/hsp12CK2引子組擴增的
HSP12基因的DNA。泳道1:DNA標示物;泳道2:野生型菌株;泳道3~4:∆
nth1菌株;泳道5~6:∆
hsp12菌株;泳道7~10:
NTH1基因及
HSP12基因雙缺失菌株。
為了提高酵母菌在麵團中長時間冷凍後的烘焙能力,使用CRISPR-Cpf1基因組編輯系統部分剔除了釀酒酵母的
NTH1基因及
HSP12基因。本研究產生了
NTH1基因(以下標記為∆
nth1)缺失菌株、
HSP12基因缺失(以下標記為∆
hsp12)菌株以及
NTH1基因和
HSP12基因雙缺失菌株。與WT菌株相比,∆
nth1菌株的PCR分析表明,產物的大小缺失為2,136bp。同樣,與WT菌株相比,∆
hsp12菌株的PCR分析表明,大小缺失為210bp的產物較低。∆
nth1/∆
hsp12菌株透過PCR分析證實兩個基因都被剔除(圖2)。
NTH1
基因剔除與海藻醣含量相關性試驗
此試驗檢測透過剔除
NTH1基因對細胞內海藻醣含量的影響。海藻醣與酵母菌的凍融脅迫耐受性有關。為了檢查不同剔除菌株中的細胞內海藻醣含量,在靜止期(即海藻醣合成特別密集時)收穫細胞。結果表明,∆
nth1菌株的海藻醣含量為104±2.3mg/g 細胞乾重(CDW),為顯著高於野生型菌株45.4±2.3mg/g CDW的2.3倍。然而,在
HSP12基因缺失菌株中海藻醣含量沒有增加。此外,
NTH1基因和
HSP12基因雙缺失菌株的胞內海藻醣含量為112.9±5.4mg/g CDW,顯著高於野生型菌株的2.5倍(表3)。所有∆
nth1菌株(∆
nth1和∆
nth1/∆
HSP12)的海藻醣含量顯著升高。表明
NTH1基因對海藻醣的含量很重要。
表3 編輯菌株的細胞內海藻醣含量
所示值代表至少三個獨立實驗(數值為平均值±標準差)。來自野生型菌株的基因缺失菌株的顯著差異透過學生t檢驗(**
p<0.01)得到證實。
# | 海藻醣含量(mg/g CDW) |
WT | 45.4±2.3 |
Δ NTH1 | 104.0±2.3** |
Δ HSP12 | 44.4±2.5 |
Δ NTH1/Δ HSP12 | 112.9±5.4** |
NTH1
基因缺失及
/
或
HSP12
基因缺失細胞的活力測試
為了研究∆
nth1及/或∆
hsp12菌株的冷凍耐受性,在將添加有不同菌株的麵團冷凍儲存7、14和21天後分析細胞活力。請參考圖3,圖3係為添加有不同菌株的冷凍麵團經冷凍保存後,不同菌株的細胞活力測試結果。
將添加有不同菌株的冷凍麵團冷凍保存7天後,在沒有或有使用30%甘油作為冷凍保護劑的情況下,野生型菌株(WT)的細胞活力分別為42.6±1.58%和74.7±4.26%。然而,在不添加冷凍保護劑的情況下冷凍儲存21天後,它下降到9.15±1.82%。冷凍保存7天和14天後,∆
nth1菌株的細胞活力分別為87.17±8.32%和65.46±6.41%;然而,21天後它急劇下降到19.8±1.85%。從結果顯示,∆
nth1菌株可以在短期冷凍保存中維持細胞活力,但不能長期冷凍保存。冷凍7、14和21天後,∆
hsp12菌株的細胞活力分別為61.05±7.45%、58.39±6.02%和47.81±3.46。冷凍7天後,∆
hsp12菌株的活力低於∆
nth1菌株,但冷凍21天後活力則較佳。此外,冷凍7、14和21天後,雙基因缺失菌株的細胞活力分別為88.35±9.41%、83.33±2.14%和62.87±6.29%。從結果顯示,
NTH1基因和
HSP12基因基因的雙重缺失提高了長期冷凍的細胞活力。這些結果顯示,海藻醣含量與酵母細胞對短期冷凍後的活力呈正相關,而
HSP12基因的缺失使其對長期冷凍的抵抗力更高。
本案構建了包含編碼海藻醣降解酶和膜伴侶基因的雙基因缺失的經編輯菌株,特別是利用高效的CRISPR-Cpf1基因組編輯系統編輯酵母菌。經編輯的酵母菌在冷凍21天後增加了海藻醣含量和細胞活力。酵母菌編輯後的麵團在冷凍後表現出膨發能力,表明特定基因的精確編輯可以提高酵母菌的耐凍性。
冷凍麵團的品質取決於酵母產生二氧化碳的能力和麵包發酵後保留二氧化碳的能力。酵母活力下降被認為是導致麵團品質惡化的主要因素之一。因此,許多研究都集中在產生具有改善生長或更高發酵率的冷凍麵團的酵母菌株。
為了確認麵團加入經編輯酵母菌後的膨發能力,接著請參考圖4,圖4係為麵團冷凍7天及21天後的膨發能力試驗結果。
圖4中(A-D)係為使用的麵包麵團的發酵曲線:(A)野生型菌株酵母;(B)∆
nth1菌株酵母;(C)∆
hsp12菌株酵母;及(D) ∆
nth1/∆
hsp12菌株酵母。麵包麵團的高度係在30℃發酵0至180分鐘後測量。(E)發酵60分鐘後麵團的相對淨高度。資料來自三個獨立的實驗,並表示為平均值±標準差。符號*表示與野生型菌株相比,編輯菌株的統計學顯著差異(**
p<0.01,*
p<0.05,使用學生t檢驗)。
如圖4中A至D所示,野生型菌株酵母在冷凍7、21天後已喪失發酵能力,∆
nth1菌株酵母及∆
hsp12菌株酵母在冷凍7、21天後仍然能進行發酵,其中∆
hsp12菌株酵母的發酵程度略優於∆
nth1菌株酵母。而∆
nth1/∆
hsp12菌株酵母則具有相對最優秀的發酵能力。同樣的結果亦能從圖4中的E能看到,∆
nth1/∆
hsp12菌株酵母的麵團相對淨高度顯著高於其餘麵團。然而,∆
nth1及/或∆
hsp12基因缺失的麵團的發酵能力在120分鐘後有下滑的趨勢。
具有較高海藻醣含量的∆
nth1菌株(表3)可以維持短期冷凍儲存的細胞活力,但不能長期冷凍儲存(圖3)。沒有增加海藻醣含量的∆
hsp12菌株(表3)在短期冷凍儲存中的生存能力低於∆
nth1菌株,但在長期冷凍儲存中生存能力更好(圖3)。
NTH1基因的破壞有助於海藻醣的積累,而
HSP12基因的破壞有助於在冷凍刺激下的長期存活。在這項研究中,我們證明了
NTH1基因及
HSP12基因雙缺失菌株,具有高含量的海藻醣含量和在冷凍條件下的長期活力,其增強了冷凍麵團的發酵能力(圖4的D)。然而,與野生型菌株的新鮮麵團相比(圖4的A),其發酵能力和發酵時間仍有待提高(圖4的D)。
在本揭露內容中,本案採用了基因編輯系統來生成具有精確基因缺失的突變菌株。本案的一較佳實施例係透過同時表現基於兩個基因座編輯的Cpf1和crRNAs來操縱
NTH1基因和
HSP12基因的雙剔除。CRISPR可以高效率且準確地進行基因編輯,無需轉移外源基因。基因組編輯技術可用於改善菌株特性,將促進酵母菌在食品工業中的應用和發展。
無
圖1係為CRISPR-Cpf1基因組編輯系統剪切片段的示意圖。
圖2係為基因組編輯菌株的瓊脂糖凝膠電泳菌落PCR分析。
圖3係為經冷凍保存後,不同菌株的細胞活力測試結果。
圖4係為麵團冷凍7天及21天後的膨發能力試驗結果。
民國111年10月4日寄存於中華民國食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心,寄存編號為BCRC920129
TW202419625A_111141425_SEQL.xml
Claims (10)
- 一種酵母菌( Saccharomyces cerevisiae),其中該酵母菌的內源性 NTH1基因及 HSP12基因被剔除。
- 如請求項1所述之酵母菌,其中該內源性 NTH1基因及 HSP12基因係透過CRISPR-Cpf1剔除。
- 如請求項1或2所述之酵母菌,其為雙倍體酵母菌。
- 如請求項1或2所述之酵母菌,其中細胞內海藻糖含量為80至140 mg/g 細胞乾重。
- 如請求項1或2所述之酵母菌,其於民國111年10月4日寄存於中華民國食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心,寄存編號為BCRC920129。
- 一種增加酵母菌的凍融抗性的方法,包含下列步驟:(a)剔除一酵母菌之 NTH1基因及 HSP12基因,以得到一轉殖酵母菌;以及(b)培養該轉殖酵母菌。
- 如請求項6所述之方法,透過CRISPR-Cpf1剔除該酵母菌之 NTH1基因及 HSP12基因。
- 一種麵團,包含澱粉、水以及如請求項1至5中任一項所述之酵母菌。
- 如請求項8所述之麵團,其中該澱粉為小麥粉、大麥粉、米粉、木薯粉、馬鈴薯粉、蕎麥粉、畫眉草粉、大豆粉或高粱粉。
- 一種冷凍麵團的製造方法,包含使用請求項1至5中任一項所述之酵母菌製備一麵團;以及冷凍該麵團。
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
TWI839924B TWI839924B (zh) | 2024-04-21 |
TW202419625A true TW202419625A (zh) | 2024-05-16 |
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