TW202417623A - Ａｔｘｎ２ ｒｎａ干擾劑 - Google Patents

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谷博彰
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Abstract

本發明提供ATXN2 RNAi藥劑及包含ATXN2 RNAi藥劑之組合物。本文亦提供使用ATXN2 RNAi藥劑或包含ATXN2 RNAi藥劑之組合物減少ATXN2表現及/或治療個體中之ATXN2相關神經疾病的方法。

Description

ATXN2　RNA干擾劑
共濟失調蛋白-2係由基因ATXN2 (亦稱為ATX2、SCA2、TNRC13)編碼。ATXN2基因包括CAG三核苷酸重複序列，從而在共濟失調蛋白-2蛋白之N端區中產生聚麩醯胺酸(polyQ)延伸。超過90%之正常個體具有含有22個polyQ重複序列之ATXN2對偶基因。ATXN2中超過22個重複序列之CAG擴增與某些神經退化性疾病相關。
脊髓小腦性失調症2 (SCA2)係由ATXN-2中31個或更多的重複序列之CAG擴增所引起。最常見的SCA2相關ATXN2對偶基因具有37至39個CAG重複序列；更長CAG重複序列擴增與SCA2之早期發作相關。SCA2為一種常染色體顯性神經退化性疾病，其特徵為小腦、腦幹及/或脊髓中之神經元的進行性變性。患有SCA2之患者顯示進行性步態不協調且通常手、言語及眼球運動協調性較差，可能係由小腦退化以及腦幹及脊髓之不同程度受累所引起。ATXN2基因中之中度CAG擴增(23個或更多個重複序列，但低於SCA2之臨限值)亦與肌肉萎縮性側索硬化(ALS)相關。
RNA干擾(RNAi)為一種高度保守調節機制，其中RNA分子參與雙股RNA分子(dsRNA)對基因表現之序列特異性抑制(Fire等人, Nature 391: 806-811, 1998)。
仍需要可抑制或調整ATXN2之表現的治療劑，以用於例如利用RNAi來治療ATXN2相關神經疾病，諸如SCA2或ALS。
本文提供ATXN2 RNAi藥劑及包含ATXN2 RNAi藥劑之組合物。本文亦提供使用ATXN2 RNAi藥劑或包含ATXN2 RNAi藥劑之組合物減少ATXN2表現及/或治療個體中之ATXN2相關神經疾病的方法。
在一個態樣中，本文提供ATXN2 RNAi藥劑，其包含有義股及反義股，其中有義股及反義股形成雙螺旋體，其中有義股及反義股包含選自由以下組成之群的一對核酸序列： (a)        該有義股包含與SEQ ID NO: 1具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 2具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (b)       該有義股包含與SEQ ID NO: 3具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 4具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (c)        該有義股包含與SEQ ID NO: 5具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 6具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (d)       該有義股包含與SEQ ID NO: 7具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 8具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (e)        該有義股包含與SEQ ID NO: 9具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 10具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (f)        該有義股包含與SEQ ID NO: 11具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 12具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (g)       該有義股包含與SEQ ID NO: 13具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 14具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (h)       該有義股包含與SEQ ID NO: 15具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 16具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (i)        該有義股包含與SEQ ID NO: 17具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 18具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (j)        該有義股包含與SEQ ID NO: 19具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 20具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (k)       該有義股包含與SEQ ID NO: 21具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 22具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (l)        該有義股包含與SEQ ID NO: 23具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 24具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (m)      該有義股包含與SEQ ID NO: 25具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 26具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (n)       該有義股包含與SEQ ID NO: 27具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 28具有至少95%序列一致性之第二核酸序列；及 (o)       該有義股包含與SEQ ID NO: 29具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 30具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； 其中視情況地，該有義股及該反義股之一或多個核苷酸獨立地為經修飾之核苷酸，且其中視情況地，該有義股及該反義股之一或多個核苷酸間鍵聯為經修飾之核苷酸間鍵聯。
在一些實施例中，本文所描述之ATXN2 RNAi藥劑之有義股及反義股包含選自由以下組成之群的一對核酸序列： (a)        該有義股包含SEQ ID NO: 1之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 2之第二核酸序列； (b)       該有義股包含SEQ ID NO: 3之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 4之第二核酸序列； (c)        該有義股包含SEQ ID NO: 5之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 6之第二核酸序列； (d)       該有義股包含SEQ ID NO: 7之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 8之第二核酸序列； (e)        該有義股包含SEQ ID NO: 9之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 10之第二核酸序列； (f)        該有義股包含SEQ ID NO: 11之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 12之第二核酸序列； (g)       該有義股包含SEQ ID NO: 13之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 14之第二核酸序列； (h)       該有義股包含SEQ ID NO: 15之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 16之第二核酸序列； (i)        該有義股包含SEQ ID NO: 17之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 18之第二核酸序列； (j)        該有義股包含SEQ ID NO: 19之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 20之第二核酸序列； (k)       該有義股包含SEQ ID NO: 21之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 22之第二核酸序列； (l)        該有義股包含SEQ ID NO: 23之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 24之第二核酸序列； (m)      該有義股包含SEQ ID NO: 25之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 26之第二核酸序列； (n)       該有義股包含SEQ ID NO: 27之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 28之第二核酸序列；及 (o)       該有義股包含SEQ ID NO: 29之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 30之第二核酸序列， 其中視情況地，該有義股及該反義股之一或多個核苷酸獨立地為經修飾之核苷酸，且其中視情況地，該有義股及該反義股之一或多個核苷酸間鍵聯為經修飾之核苷酸間鍵聯。
在一些實施例中，本文所描述之ATXN2 RNAi藥劑可包含有義股，該有義股包含與SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29具有1、2或3個差異之序列。在一些實施例中，本文所描述之ATXN2 RNAi藥劑可包含反義股，該反義股包含與SEQ ID NO: 2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30具有1、2或3個差異之序列。
本文所描述之ATXN2 RNAi藥劑可包括修飾。可對有義股及/或反義股之一或多個核苷酸或對核苷酸間鍵聯進行修飾。在一些實施例中，有義股之一或多個核苷酸為經修飾之核苷酸。在一些實施例中，有義股之各核苷酸為經修飾之核苷酸。在一些實施例中，反義股之一或多個核苷酸為經修飾之核苷酸。在一些實施例中，反義股之各核苷酸為經修飾之核苷酸。在一些實施例中，經修飾之核苷酸為經2'-氟修飾之核苷酸、經2'-O-甲基修飾之核苷酸或經2'-O-烷基修飾之核苷酸。在一些實施例中，有義股在自有義股之5'端的位置7、9、10及11處具有四個經2'-氟修飾之核苷酸。在一些實施例中，有義股之除位置7、9、10及11以外之位置處的核苷酸為經2'-O-甲基修飾之核苷酸。在一些實施例中，反義股在自反義股之5'端的位置2、6、14及16處具有四個經2'-氟修飾之核苷酸。在一些實施例中，反義股之除位置2、6、14及16以外之位置處的核苷酸為經2'-O-甲基修飾之核苷酸。在一些實施例中，來自反義股之5'端的第一核苷酸為具有磷酸酯類似物(例如5'-乙烯基膦酸酯)的經修飾之核苷酸。在一些實施例中，有義股例如在位置9、10或11處具有無鹼基部分或反向無鹼基部分。在一些實施例中，有義股及反義股具有一或多個經修飾之核苷酸間鍵聯，例如硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，有義股具有四個或五個硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，反義股具有四個或五個硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，有義股具有四個硫代磷酸酯鍵聯，且反義股具有四個硫代磷酸酯鍵聯。
在一些實施例中，本文提供ATXN2 RNAi藥劑，其包含有義股及反義股，其中有義股及反義股形成雙螺旋體，其中有義股及反義股包含選自由以下組成之群的一對核酸序列： (a)        該有義股包含SEQ ID NO: 31之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 32之第二核酸序列； (b)       該有義股包含SEQ ID NO: 33之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 34之第二核酸序列； (c)        該有義股包含SEQ ID NO: 35之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 36之第二核酸序列； (d)       該有義股包含SEQ ID NO: 37之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 38之第二核酸序列； (e)        該有義股包含SEQ ID NO: 39之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 40之第二核酸序列； (f)        該有義股包含SEQ ID NO: 41之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 42之第二核酸序列； (g)       該有義股包含SEQ ID NO: 43之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 44之第二核酸序列； (h)       該有義股包含SEQ ID NO: 45之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 46之第二核酸序列； (i)        該有義股包含SEQ ID NO: 47之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 48之第二核酸序列； (j)        該有義股包含SEQ ID NO: 49之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 50之第二核酸序列； (k)       該有義股包含SEQ ID NO: 51之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 52之第二核酸序列； (l)        該有義股包含SEQ ID NO: 53之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 54之第二核酸序列； (m)      該有義股包含SEQ ID NO: 55之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 56之第二核酸序列； (n)       該有義股包含SEQ ID NO: 57之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 58之第二核酸序列；及 (o)       該有義股包含SEQ ID NO: 59之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 60之第二核酸序列。
在一些實施例中，本文所描述之ATXN2 RNAi藥劑可包含有義股，該有義股包含與SEQ ID NO: 31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59具有1、2或3個差異之序列。在一些實施例中，本文所描述之ATXN2 RNAi藥劑可包含反義股，該反義股包含與SEQ ID NO: 32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60具有1、2或3個差異之序列。
在一些實施例中，本文提供ATXN2 RNAi藥劑，其包含有義股及反義股，其中有義股及反義股形成雙螺旋體，其中有義股及反義股具有選自由以下組成之群的一對核酸序列： (a)     該有義股由SEQ ID NO: 31之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 32之第二核酸序列組成； (b)    該有義股由SEQ ID NO: 33之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 34之第二核酸序列組成； (c)     該有義股由SEQ ID NO: 35之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 36之第二核酸序列組成； (d)    該有義股由SEQ ID NO: 37之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 38之第二核酸序列組成； (e)     該有義股由SEQ ID NO: 39之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 40之第二核酸序列組成； (f)     該有義股由SEQ ID NO: 41之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 42之第二核酸序列組成； (g)    該有義股由SEQ ID NO: 43之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 44之第二核酸序列組成； (h)    該有義股由SEQ ID NO: 45之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 46之第二核酸序列組成； (i)     該有義股由SEQ ID NO: 47之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 48之第二核酸序列組成； (j)     該有義股由SEQ ID NO: 49之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 50之第二核酸序列組成； (k)    該有義股由SEQ ID NO: 51之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 52之第二核酸序列組成； (l)     該有義股由SEQ ID NO: 53之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 54之第二核酸序列組成； (m)    該有義股由SEQ ID NO: 55之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 56之第二核酸序列組成； (n)    該有義股由SEQ ID NO: 57之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 58之第二核酸序列組成；及 (o)    該有義股由SEQ ID NO: 59之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 60之第二核酸序列組成。
在一些實施例中，ATXN2 RNAi藥劑之有義股具有與有義股之3'端結合的遞送部分。在一些實施例中，ATXN2 RNAi藥劑之有義股具有與有義股之核苷酸結合的遞送部分。在一些實施例中，遞送部分為α-生育酚、膽固醇或棕櫚酸。在一些實施例中，遞送部分經由連接子(例如表5之連接子)與有義股之3'端結合。
在另一態樣中，本文提供式(I)之ATXN2 RNAi藥劑：R-L-D，其中R為包含有義股及反義股之雙股RNA (dsRNA)，其中有義股及反義股形成雙螺旋體；其中D為用於將dsRNA遞送至細胞中的遞送構件；且其中L為用於將dsRNA連接至遞送構件的連接構件或視情況不存在，其中有義股及反義股包含選自由以下組成之群的一對核酸序列： (a)        該有義股包含SEQ ID NO: 1之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 2之第二核酸序列； (b)       該有義股包含SEQ ID NO: 3之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 4之第二核酸序列； (c)        該有義股包含SEQ ID NO: 5之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 6之第二核酸序列； (d)       該有義股包含SEQ ID NO: 7之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 8之第二核酸序列； (e)        該有義股包含SEQ ID NO: 9之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 10之第二核酸序列； (f)        該有義股包含SEQ ID NO: 11之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 12之第二核酸序列； (g)       該有義股包含SEQ ID NO: 13之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 14之第二核酸序列； (h)       該有義股包含SEQ ID NO: 15之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 16之第二核酸序列； (i)        該有義股包含SEQ ID NO: 17之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 18之第二核酸序列； (j)        該有義股包含SEQ ID NO: 19之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 20之第二核酸序列； (k)       該有義股包含SEQ ID NO: 21之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 22之第二核酸序列； (l)        該有義股包含SEQ ID NO: 23之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 24之第二核酸序列； (m)      該有義股包含SEQ ID NO: 25之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 26之第二核酸序列； (n)       該有義股包含SEQ ID NO: 27之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 28之第二核酸序列；及 (o)       該有義股包含SEQ ID NO: 29之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 30之第二核酸序列， 其中視情況地，該有義股及該反義股之一或多個核苷酸獨立地為經修飾之核苷酸，且其中視情況地，該有義股及該反義股之一或多個核苷酸間鍵聯為經修飾之核苷酸間鍵聯。
在一些實施例中，本文提供式(I)之ATXN2 RNAi藥劑：R-L-D，其中R為包含有義股及反義股之dsRNA，其中有義股及反義股形成雙螺旋體；其中D為遞送部分；且其中L為連接子或視情況不存在，其中有義股及反義股包含選自由以下組成之群的一對核酸序列： (a)        該有義股包含SEQ ID NO: 1之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 2之第二核酸序列； (b)       該有義股包含SEQ ID NO: 3之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 4之第二核酸序列； (c)        該有義股包含SEQ ID NO: 5之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 6之第二核酸序列； (d)       該有義股包含SEQ ID NO: 7之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 8之第二核酸序列； (e)        該有義股包含SEQ ID NO: 9之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 10之第二核酸序列； (f)        該有義股包含SEQ ID NO: 11之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 12之第二核酸序列； (g)       該有義股包含SEQ ID NO: 13之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 14之第二核酸序列； (h)       該有義股包含SEQ ID NO: 15之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 16之第二核酸序列； (i)        該有義股包含SEQ ID NO: 17之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 18之第二核酸序列； (j)        該有義股包含SEQ ID NO: 19之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 20之第二核酸序列； (k)       該有義股包含SEQ ID NO: 21之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 22之第二核酸序列； (l)        該有義股包含SEQ ID NO: 23之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 24之第二核酸序列； (m)      該有義股包含SEQ ID NO: 25之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 26之第二核酸序列； (n)       該有義股包含SEQ ID NO: 27之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 28之第二核酸序列；及 (o)       該有義股包含SEQ ID NO: 29之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 30之第二核酸序列， 其中視情況地，該有義股及該反義股之一或多個核苷酸獨立地為經修飾之核苷酸，且其中視情況地，該有義股及該反義股之一或多個核苷酸間鍵聯為經修飾之核苷酸間鍵聯。
在一些實施例中，式(I)之RNAi藥劑中之有義股及反義股包含選自由以下組成之群的一對核酸序列： (a)        該有義股包含SEQ ID NO: 31之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 32之第二核酸序列； (b)       該有義股包含SEQ ID NO: 33之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 34之第二核酸序列； (c)        該有義股包含SEQ ID NO: 35之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 36之第二核酸序列； (d)       該有義股包含SEQ ID NO: 37之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 38之第二核酸序列； (e)        該有義股包含SEQ ID NO: 39之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 40之第二核酸序列； (f)        該有義股包含SEQ ID NO: 41之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 42之第二核酸序列； (g)       該有義股包含SEQ ID NO: 43之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 44之第二核酸序列； (h)       該有義股包含SEQ ID NO: 45之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 46之第二核酸序列； (i)        該有義股包含SEQ ID NO: 47之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 48之第二核酸序列； (j)        該有義股包含SEQ ID NO: 49之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 50之第二核酸序列； (k)       該有義股包含SEQ ID NO: 51之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 52之第二核酸序列； (l)        該有義股包含SEQ ID NO: 53之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 54之第二核酸序列； (m)      該有義股包含SEQ ID NO: 55之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 56之第二核酸序列； (n)       該有義股包含SEQ ID NO: 57之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 58之第二核酸序列； (o)       該有義股包含SEQ ID NO: 59之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 60之第二核酸序列。
在另一態樣中，本文提供醫藥組合物，其包含本文所描述之ATXN2 RNAi藥劑及醫藥學上可接受之載劑。本文亦提供醫藥組合物，其包含用於減少細胞中之ATXN2表現的構件及醫藥學上可接受之載劑。
在另一態樣中，本文提供減少有需要之患者中之ATXN2表現的方法，且此類方法包含向患者投與有效量之本文所描述之ATXN2 RNAi藥劑或醫藥組合物。
在另一態樣中，本文提供治療有需要之患者中之ATXN2相關神經疾病的方法，且此類方法包含向患者投與有效量之本文所描述之ATXN2 RNAi藥劑或醫藥組合物。
本文亦提供減少細胞(例如神經元)中之ATXN2表現之方法，且此類方法可包括將本文所描述之ATXN2 RNAi藥劑引入細胞中；及培育細胞持續足以使ATXN2 mRNA降解之時間，由此減少細胞中之ATXN2表現。
在另一態樣中，本文提供ATXN2 RNAi藥劑或包含ATXN2 RNAi藥劑之醫藥組合物，其係用於減少ATXN2表現。本文亦提供ATXN2 RNAi藥劑或包含ATXN2 RNAi藥劑之醫藥組合物，其係用於療法中。亦提供ATXN2 RNAi藥劑或包含ATXN2 RNAi藥劑之醫藥組合物，其係用於治療ATXN2相關神經疾病。本文亦提供ATXN2 RNAi藥劑之用途，其係用於製造用以治療ATXN2相關神經疾病之藥劑。
本申請案主張2022年6月24日申請之美國臨時申請案序列號63/355,305在35 U.S.C. §119(e)下之權利；其揭示內容以引用之方式併入本文中。 序列表
本申請案係與ST.26 XML格式之序列表一起提交。該序列表以標題為「30344v2」之檔案形式提供，創建於2023年6月7日且大小為412千位元組。ST.26 XML格式之序列表資訊以全文引用之方式併入本文中。
本文提供ATXN2 RNAi藥劑及包含ATXN2 RNAi藥劑之組合物。本文亦提供使用ATXN2 RNAi藥劑或包含ATXN2 RNAi藥劑之組合物減少ATXN2表現及/或治療個體中之ATXN2相關神經疾病的方法。
在一些實施例中，本文提供包含有義股及反義股之ATXN2 RNAi藥劑，且有義股及反義股形成雙螺旋體。反義股與ATXN2 mRNA之一個區域互補。在另一實施例中，有義股及反義股之長度各自為15至30個核苷酸，例如長度為20至25個核苷酸。在一些實施例中，本文提供ATXN2 RNAi藥劑，其包含具有21個核苷酸之有義股及具有23個核苷酸之反義股。在一些實施例中，ATXN2 RNAi藥劑之有義股及反義股可在5'端或3'端具有突出端(亦即5'突出端或3'突出端)。舉例而言，有義股及反義股可具有1至5個核苷酸或1至3個核苷酸之5'突出端或3'突出端。在一些實施例中，反義股包含兩個核苷酸之3'突出端。在一些實施例中，ATXN2 RNAi藥劑之有義股及反義股序列提供於表1中。
本文提供ATXN2 RNAi藥劑，其包含有義股及反義股，其中有義股及反義股形成雙螺旋體，其中有義股及反義股包含選自由以下組成之群的一對核酸序列： (a)        該有義股包含與SEQ ID NO: 1具有至少90%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 2具有至少90%序列一致性之第二核酸序列； (b)       該有義股包含與SEQ ID NO: 3具有至少90%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 4具有至少90%序列一致性之第二核酸序列； (c)        該有義股包含與SEQ ID NO: 5具有至少90%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 6具有至少90%序列一致性之第二核酸序列； (d)       該有義股包含與SEQ ID NO: 7具有至少90%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 8具有至少90%序列一致性之第二核酸序列； (e)        該有義股包含與SEQ ID NO: 9具有至少90%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 10具有至少90%序列一致性之第二核酸序列； (f)        該有義股包含與SEQ ID NO: 11具有至少90%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 12具有至少90%序列一致性之第二核酸序列； (g)       該有義股包含與SEQ ID NO: 13具有至少90%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 14具有至少90%序列一致性之第二核酸序列； (h)       該有義股包含與SEQ ID NO: 15具有至少90%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 16具有至少90%序列一致性之第二核酸序列； (i)        該有義股包含與SEQ ID NO: 17具有至少90%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 18具有至少90%序列一致性之第二核酸序列； (j)        該有義股包含與SEQ ID NO: 19具有至少90%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 20具有至少90%序列一致性之第二核酸序列； (k)       該有義股包含與SEQ ID NO: 21具有至少90%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 22具有至少90%序列一致性之第二核酸序列； (l)        該有義股包含與SEQ ID NO: 23具有至少90%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 24具有至少90%序列一致性之第二核酸序列； (m)      該有義股包含與SEQ ID NO: 25具有至少90%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 26具有至少90%序列一致性之第二核酸序列； (n)       該有義股包含與SEQ ID NO: 27具有至少90%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 28具有至少90%序列一致性之第二核酸序列；及 (o)       該有義股包含與SEQ ID NO: 29具有至少90%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 30具有至少90%序列一致性之第二核酸序列； 其中視情況地，該有義股及該反義股之一或多個核苷酸獨立地為經修飾之核苷酸，且其中視情況地，該有義股及該反義股之一或多個核苷酸間鍵聯為經修飾之核苷酸間鍵聯。
本文提供ATXN2 RNAi藥劑，其包含有義股及反義股，其中有義股及反義股形成雙螺旋體，其中有義股及反義股包含選自由以下組成之群的一對核酸序列： (a)        該有義股包含與SEQ ID NO: 1具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 2具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (b)       該有義股包含與SEQ ID NO: 3具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 4具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (c)        該有義股包含與SEQ ID NO: 5具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 6具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (d)       該有義股包含與SEQ ID NO: 7具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 8具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (e)        該有義股包含與SEQ ID NO: 9具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 10具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (f)        該有義股包含與SEQ ID NO: 11具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 12具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (g)       該有義股包含與SEQ ID NO: 13具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 14具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (h)       該有義股包含與SEQ ID NO: 15具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 16具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (i)        該有義股包含與SEQ ID NO: 17具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 18具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (j)        該有義股包含與SEQ ID NO: 19具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 20具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (k)       該有義股包含與SEQ ID NO: 21具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 22具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (l)        該有義股包含與SEQ ID NO: 23具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 24具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (m)      該有義股包含與SEQ ID NO: 25具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 26具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (n)       該有義股包含與SEQ ID NO: 27具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 28具有至少95%序列一致性之第二核酸序列；及 (o)       該有義股包含與SEQ ID NO: 29具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 30具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； 其中視情況地，該有義股及該反義股之一或多個核苷酸獨立地為經修飾之核苷酸，且其中視情況地，該有義股及該反義股之一或多個核苷酸間鍵聯為經修飾之核苷酸間鍵聯。 表 1. ATXN2 RNAi 藥劑之核酸序列
ATXN2 RNAi藥劑編號 有義股(5'至3') SEQ ID NO 反義股(5'至3') SEQ ID NO 人類ATXN2轉錄物ENST00000608853.5之反義股標靶區之起始位置
1 CGAAACGUGAAGAAAUAAUGA 1 UCAUUAUUUCUUCACGUUUCGGC 2 793
2 CCUAAACGCAUGUCUUCAGAA 3 UUCUGAAGACAUGCGUUUAGGCA 4 1671
3 GAGAUGCUUUUACUGACUCUA 5 UAGAGUCAGUAAAAGCAUCUCUU 6 886
4 AAACGUGAAGAAAUAAUGGAA 7 UUCCAUUAUUUCUUCACGUUUCG 8 795
5 GCUCCUGUCUCUACUAUGCCA 9 UGGCAUAGUAGAGACAGGAGCUG 10 1653
6 UGGUUCUCCAGCUCCUGUCUA 11 UAGACAGGAGCUGGAGAACCAUG 12 1643
7 GCCUAAACGCAUGUCUUCAGA 13 UCUGAAGACAUGCGUUUAGGCAU 14 1670
8 UUAUCAGUCUCAGCAUCCUCA 15 UGAGGAUGCUGAGACUGAUAAUG 16 3008
9 UCUCCAGCUCCUGUCUCUACA 17 UGUAGAGACAGGAGCUGGAGAAC 18 1674
10 GCUCAUGGUUCUCCAGCUCCA 19 UGGAGCUGGAGAACCAUGAGCAG 20 1638
11 CAGUCAGGUCCCAACUCUCUA 21 UAGAGAGUUGGGACCUGACUGGU 22 1539
12 GAGUAGUUAAUGGAGGUGUUA 23 UAACACCUCCAUUAACUACUCUU 24 1468
13 AGUCAGGUCCCAACUCUCUUA 25 UAAGAGAGUUGGGACCUGACUGG 26 1540
14 CCCACCUUCUCGCUACCAGUA 27 UACUGGUAGCGAGAAGGUGGGCG 28 1523
15 CAAGACAUAUAGAGCAGUACA 29 UGUACUGCUCUAUAUGUCUUGGC 30 2819
在一些實施例中，本文所描述之ATXN2 RNAi藥劑之有義股及反義股包含選自由以下組成之群的一對核酸序列： (a)        該有義股包含SEQ ID NO: 1之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 2之第二核酸序列； (b)       該有義股包含SEQ ID NO: 3之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 4之第二核酸序列； (c)        該有義股包含SEQ ID NO: 5之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 6之第二核酸序列； (d)       該有義股包含SEQ ID NO: 7之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 8之第二核酸序列； (e)        該有義股包含SEQ ID NO: 9之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 10之第二核酸序列； (f)        該有義股包含SEQ ID NO: 11之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 12之第二核酸序列； (g)       該有義股包含SEQ ID NO: 13之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 14之第二核酸序列； (h)       該有義股包含SEQ ID NO: 15之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 16之第二核酸序列； (i)        該有義股包含SEQ ID NO: 17之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 18之第二核酸序列； (j)        該有義股包含SEQ ID NO: 19之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 20之第二核酸序列； (k)       該有義股包含SEQ ID NO: 21之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 22之第二核酸序列； (l)        該有義股包含SEQ ID NO: 23之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 24之第二核酸序列； (m)      該有義股包含SEQ ID NO: 25之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 26之第二核酸序列； (n)       該有義股包含SEQ ID NO: 27之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 28之第二核酸序列；及 (o)       該有義股包含SEQ ID NO: 29之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 30之第二核酸序列， 其中視情況地，該有義股及該反義股之一或多個核苷酸獨立地為經修飾之核苷酸，且其中視情況地，該有義股及該反義股之一或多個核苷酸間鍵聯為經修飾之核苷酸間鍵聯。
本文所描述之ATXN2 RNAi藥劑可包括修飾。可對有義股及/或反義股之一或多個核苷酸或對核苷酸間鍵聯進行修飾，該等核苷酸間鍵聯為有義股或反義股中之兩個核苷酸之間的鍵。舉例而言，核糖或去氧核糖之一些2'-修飾可增加RNA或DNA穩定性及半衰期。此類2'-修飾可為2'-氟、2'-O-甲基(亦即，2'-甲氧基)、2'-O-烷基或2'-O-甲氧基乙基(2'-O-MOE)。
在一些實施例中，有義股及/或反義股之一或多個核苷酸獨立地為經修飾之核苷酸，此意謂有義股及反義股可具有不同的經修飾之核苷酸。在一些實施例中，有義股之一或多個核苷酸為經修飾之核苷酸。在一些實施例中，有義股之各核苷酸為經修飾之核苷酸。在一些實施例中，反義股之一或多個核苷酸為經修飾之核苷酸。在一些實施例中，反義股之各核苷酸為經修飾之核苷酸。在一些實施例中，經修飾之核苷酸為經2'-氟修飾之核苷酸、經2'-O-甲基修飾之核苷酸或經2'-O-烷基修飾之核苷酸。在一些實施例中，有義股及反義股之各核苷酸獨立地為經修飾之核苷酸，例如經2'-氟修飾之核苷酸、經2'-O-甲基修飾之核苷酸或經2'-O-烷基修飾之核苷酸。
在一些實施例中，有義股例如在自有義股之5'端的位置7、9、10及11處具有四個經2'-氟修飾之核苷酸。在一些實施例中，有義股之除位置7、9、10及11以外之位置處的核苷酸為經2'-O-甲基修飾之核苷酸。在一些實施例中，反義股例如在自反義股之5'端的位置2、6、14及16處具有四個經2'-氟修飾之核苷酸。在一些實施例中，反義股之除位置2、6、14及16以外之位置處的核苷酸為經2'-O-甲基修飾之核苷酸。
在一些實施例中，經修飾之核苷酸為經2'-O-烷基修飾之核苷酸，其可充當遞送部分。在一些實施例中，經2'-O-烷基修飾之核苷酸為2'-O-十六基尿苷、2'-O-十六基胞苷、2'-O-十六基鳥嘌呤或2'-O-十六基腺苷。在一些實施例中，2'-O-十六基尿苷、2'-O-十六基胞苷、2'-O-十六基鳥嘌呤或2'-O-十六基腺苷為有義股中之經修飾之核苷酸。
在一些實施例中，來自反義股之5'端的第一核苷酸為具有磷酸酯類似物(例如5'-乙烯基膦酸酯(5'-VP))的經修飾之核苷酸。
在一些實施例中，有義股例如在位置9、10或11處具有無鹼基部分或反向無鹼基部分，例如展示於表3中之部分。
在一些實施例中，有義股及反義股具有一或多個經修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，經修飾之核苷酸間鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，有義股具有四個或五個硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，反義股具有四個或五個硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，有義股及反義股各自具有四個或五個硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，有義股具有四個硫代磷酸酯鍵聯，且反義股具有四個硫代磷酸酯鍵聯。
在另一態樣中，本文提供ATXN2 RNAi藥劑，其包含有義股及反義股，其中有義股及反義股形成雙螺旋體，其中有義股及反義股包含選自由以下組成之群的一對核酸序列： (a)        該有義股包含SEQ ID NO: 31之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 32之第二核酸序列； (b)       該有義股包含SEQ ID NO: 33之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 34之第二核酸序列； (c)        該有義股包含SEQ ID NO: 35之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 36之第二核酸序列； (d)       該有義股包含SEQ ID NO: 37之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 38之第二核酸序列； (e)        該有義股包含SEQ ID NO: 39之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 40之第二核酸序列； (f)        該有義股包含SEQ ID NO: 41之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 42之第二核酸序列； (g)       該有義股包含SEQ ID NO: 43之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 44之第二核酸序列； (h)       該有義股包含SEQ ID NO: 45之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 46之第二核酸序列； (i)        該有義股包含SEQ ID NO: 47之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 48之第二核酸序列； (j)        該有義股包含SEQ ID NO: 49之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 50之第二核酸序列； (k)       該有義股包含SEQ ID NO: 51之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 52之第二核酸序列； (l)        該有義股包含SEQ ID NO: 53之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 54之第二核酸序列； (m)      該有義股包含SEQ ID NO: 55之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 56之第二核酸序列； (n)       該有義股包含SEQ ID NO: 57之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 58之第二核酸序列；及 (o)       該有義股包含SEQ ID NO: 59之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 60之第二核酸序列。
在一些實施例中，本文提供ATXN2 RNAi藥劑，其包含有義股及反義股，其中有義股及反義股形成雙螺旋體，其中有義股及反義股具有選自由以下組成之群的一對核酸序列： (a)     該有義股由SEQ ID NO: 31之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 32之第二核酸序列組成； (b)    該有義股由SEQ ID NO: 33之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 34之第二核酸序列組成； (c)     該有義股由SEQ ID NO: 35之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 36之第二核酸序列組成； (d)    該有義股由SEQ ID NO: 37之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 38之第二核酸序列組成； (e)     該有義股由SEQ ID NO: 39之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 40之第二核酸序列組成； (f)     該有義股由SEQ ID NO: 41之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 42之第二核酸序列組成； (g)    該有義股由SEQ ID NO: 43之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 44之第二核酸序列組成； (h)    該有義股由SEQ ID NO: 45之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 46之第二核酸序列組成； (i)     該有義股由SEQ ID NO: 47之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 48之第二核酸序列組成； (j)     該有義股由SEQ ID NO: 49之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 50之第二核酸序列組成； (k)    該有義股由SEQ ID NO: 51之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 52之第二核酸序列組成； (l)     該有義股由SEQ ID NO: 53之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 54之第二核酸序列組成； (m)    該有義股由SEQ ID NO: 55之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 56之第二核酸序列組成； (n)    該有義股由SEQ ID NO: 57之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 58之第二核酸序列組成；及 (o)    該有義股由SEQ ID NO: 59之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 60之第二核酸序列組成。 表 2 ： 具有修飾之 ATXN2 RNAi 藥劑
ATXN2 RNAi 藥劑編號 股 自5 ' 至3 ' 端之序列 SEQ ID NO
16 S mC*mG*mAmAmAmCfGmUfGfAfAmGmAmAmAmUmAmAmU*mG*mA 31
AS PmU*fC*mAmUmUfAmUmUmUmCmUmUmCfAmCfGmUmUmUmCmG*mG*mC 32
17 S mC*mC*mUmAmAmAfCmGfCfAfUmGmUmCmUmUmCmAmG*mA*mA 33
AS PmU*fU*mCmUmGfAmAmGmAmCmAmUmGfCmGfUmUmUmAmGmG*mC*mA 34
18 S mG*mA*mGmAmUmGfCmUfUfUfUmAmCmUmGmAmCmUmC*mU*mA 35
AS PmU*fA*mGmAmGfUmCmAmGmUmAmAmAfAmGfCmAmUmCmUmC*mU*mU 36
19 S mA*mA*mAmCmGmUfGmAfAfGfAmAmAmUmAmAmUmGmG*mA*mA 37
AS PmU*fU*mCmCmAfUmUmAmUmUmUmCmUfUmCfAmCmGmUmUmU*mC*mG 38
20 S mG*mC*mUmCmCmUfGmUfCfUfCmUmAmCmUmAmUmGmC*mC*mA 39
AS PmU*fG*mGmCmAfUmAmGmUmAmGmAmGfAmCfAmGmGmAmGmC*mU*mG 40
21 S mU*mG*mGmUmUmCfUmCfCfAfGmCmUmCmCmUmGmUmC*mU*mA 41
AS PmU*fA*mGmAmCfAmGmGmAmGmCmUmGfGmAfGmAmAmCmCmA*mU*mG 42
22 S mG*mC*mCmUmAmAfAmCfGfCfAmUmGmUmCmUmUmCmA*mG*mA 43
AS PmU*fC*mUmGmAfAmGmAmCmAmUmGmCfGmUfUmUmAmGmGmC*mA*mU 44
23 S mU*mU*mAmUmCmAfGmUfCfUfCmAmGmCmAmUmCmCmU*mC*mA 45
AS PmU*fG*mAmGmGfAmUmGmCmUmGmAmGfAmCfUmGmAmUmAmA*mU*mG 46
24 S mU*mC*mUmCmCmAfGmCfUfCfCmUmGmUmCmUmCmUmA*mC*mA 47
AS PmU*fG*mUmAmGfAmGmAmCmAmGmGmAfGmCfUmGmGmAmGmA*mA*mC 48
25 S mG*mC*mUmCmAmUfGmGfUfUfCmUmCmCmAmGmCmUmC*mC*mA 49
AS PmU*fG*mGmAmGfCmUmGmGmAmGmAmAfCmCfAmUmGmAmGmC*mA*mG 50
26 S mC*mA*mGmUmCmAfGmGfUfCfCmCmAmAmCmUmCmUmC*mU*mA 51
AS PmU*fA*mGmAmGfAmGmUmUmGmGmGmAfCmCfUmGmAmCmUmG*mG*mU 52
27 S mG*mA*mGmUmAmGfUmUfAfAfUmGmGmAmGmGmUmGmU*mU*mA 53
AS PmU*fA*mAmCmAfCmCmUmCmCmAmUmUfAmAfCmUmAmCmUmC*mU*mU 54
28 S mA*mG*mUmCmAmGfGmUfCfCfCmAmAmCmUmCmUmCmU*mU*mA 55
AS PmU*fA*mAmGmAfGmAmGmUmUmGmGmGfAmCfCmUmGmAmCmU*mG*mG 56
29 S mC*mC*mCmAmCmCfUmUfCfUfCmGmCmUmAmCmCmAmG*mU*mA 57
AS PmU*fA*mCmUmGfGmUmAmGmCmGmAmGfAmAfGmGmUmGmGmG*mC*mG 58
30 S mC*mA*mAmGmAmCfAmUfAfUfAmGmAmGmCmAmGmUmA*mC*mA 59
AS PmU*fG*mUmAmCfUmGmCmUmCmUmAmUfAmUfGmUmCmUmUmG*mG*mC 60
縮寫-「m」表示2'-OMe；「f」表示2'-氟；「*」表示硫代磷酸酯鍵聯；「P」表示5'-磷酸酯；「S」意謂有義股；「AS」意謂反義股。 表 3 . 無鹼基部分及反向無鹼基 ( iAb ) 部分
結構
1 (無鹼基)
2 (iAb)
在一些實施例中，ATXN2 RNAi藥劑之有義股具有與有義股之3'端結合的遞送部分。在一些實施例中，ATXN2 RNAi藥劑之有義股具有與有義股之核苷酸結合的遞送部分。遞送部分可促進RNAi藥劑進入細胞中。在一些實施例中，遞送部分為α-生育酚、膽固醇或棕櫚酸(參見表4)。在一些實施例中，遞送部分為用於將RNAi藥劑遞送至細胞中的已知遞送部分。將遞送部分置放於RNAi藥劑上需要克服AGO2 (阿戈納特-2 (Argonaute-2))之潛在的低效負載，或RNA誘導型緘默化複合物(RISC)活性之其他阻礙。
在一些實施例中，遞送部分經由連接子與有義股之3'端結合。在一些實施例中，連接子係選自表5之連接子1、連接子2、連接子3或連接子4。其他適合之連接子為此項技術中已知的。例示性連接子-遞送部分對展示於表6中。在一些實施例中，ATXN2 RNAi藥劑具有表6之連接子-遞送部分對。
在一些實施例中，遞送部分與有義股之核苷酸結合。在此情況下，遞送部分為位於有義股中之經修飾之核苷酸。在一些實施例中，經修飾之核苷酸為2'-O-十六基尿苷、2'-O-十六基胞苷、2'-O-十六基鳥嘌呤或2'-O-十六基腺苷(表4)。 表 4 . 遞送部分
遞送部分 結構
1 α - 生育酚
2 棕櫚酸
3 Uhd ( 2 '- O - 十六基尿苷 )
4 Ahd ( 2 '- O - 十六基腺苷 )
5 Chd ( 2 '- O - 十六基胞苷 )
6 Ghd ( 2 '- O - 十六基鳥嘌呤 )
7 膽固醇
表 5 . 連接子
連接子 結構
1 Teg (四乙二醇)連接子
2 哌啶醇-PEG連接子
3 Teg (四乙二醇)連接子PS
4 哌啶醇-PEG連接子PS
表 6 . 連接子遞送部分對 ( LDP )
LDP 連接子 遞送部分
1 Teg (四乙二醇)連接子 α-生育酚
2 哌啶醇-PEG連接子 α-生育酚
3 哌啶醇-PEG連接子 棕櫚酸
4 無 Uhd
  
5 無 Ahd
6 無 Chd
7 無 Ghd
8 Teg (四乙二醇)連接子 膽固醇
在另一態樣中，本文提供式(I)之ATXN2 RNAi藥劑：R-L-D，其中R為包含有義股及反義股之雙股RNA (dsRNA)，其中有義股及反義股形成雙螺旋體；其中D為用於將dsRNA遞送至細胞中的遞送構件；且其中L為用於將dsRNA連接至遞送構件的連接構件或視情況不存在，其中有義股及反義股包含選自由以下組成之群的一對核酸序列： (a)        該有義股包含SEQ ID NO: 1之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 2之第二核酸序列； (b)       該有義股包含SEQ ID NO: 3之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 4之第二核酸序列； (c)        該有義股包含SEQ ID NO: 5之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 6之第二核酸序列； (d)       該有義股包含SEQ ID NO: 7之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 8之第二核酸序列； (e)        該有義股包含SEQ ID NO: 9之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 10之第二核酸序列； (f)        該有義股包含SEQ ID NO: 11之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 12之第二核酸序列； (g)       該有義股包含SEQ ID NO: 13之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 14之第二核酸序列； (h)       該有義股包含SEQ ID NO: 15之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 16之第二核酸序列； (i)        該有義股包含SEQ ID NO: 17之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 18之第二核酸序列； (j)        該有義股包含SEQ ID NO: 19之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 20之第二核酸序列； (k)       該有義股包含SEQ ID NO: 21之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 22之第二核酸序列； (l)        該有義股包含SEQ ID NO: 23之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 24之第二核酸序列； (m)      該有義股包含SEQ ID NO: 25之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 26之第二核酸序列； (n)       該有義股包含SEQ ID NO: 27之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 28之第二核酸序列；及 (o)       該有義股包含SEQ ID NO: 29之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 30之第二核酸序列， 其中視情況地，該有義股及該反義股之一或多個核苷酸獨立地為經修飾之核苷酸，且其中視情況地，該有義股及該反義股之一或多個核苷酸間鍵聯為經修飾之核苷酸間鍵聯。
在一些實施例中，本文提供式(I)之ATXN2 RNAi藥劑：R-L-D，其中R為包含有義股及反義股之dsRNA，其中有義股及反義股形成雙螺旋體；其中D為遞送部分；且其中L為連接子或視情況不存在，其中有義股及反義股包含選自由以下組成之群的一對核酸序列： (a)        該有義股包含SEQ ID NO: 1之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 2之第二核酸序列； (b)       該有義股包含SEQ ID NO: 3之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 4之第二核酸序列； (c)        該有義股包含SEQ ID NO: 5之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 6之第二核酸序列； (d)       該有義股包含SEQ ID NO: 7之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 8之第二核酸序列； (e)        該有義股包含SEQ ID NO: 9之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 10之第二核酸序列； (f)        該有義股包含SEQ ID NO: 11之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 12之第二核酸序列； (g)       該有義股包含SEQ ID NO: 13之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 14之第二核酸序列； (h)       該有義股包含SEQ ID NO: 15之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 16之第二核酸序列； (i)        該有義股包含SEQ ID NO: 17之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 18之第二核酸序列； (j)        該有義股包含SEQ ID NO: 19之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 20之第二核酸序列； (k)       該有義股包含SEQ ID NO: 21之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 22之第二核酸序列； (l)        該有義股包含SEQ ID NO: 23之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 24之第二核酸序列； (m)      該有義股包含SEQ ID NO: 25之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 26之第二核酸序列； (n)       該有義股包含SEQ ID NO: 27之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 28之第二核酸序列；及 (o)       該有義股包含SEQ ID NO: 29之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 30之第二核酸序列， 其中視情況地，該有義股及該反義股之一或多個核苷酸獨立地為經修飾之核苷酸，且其中視情況地，該有義股及該反義股之一或多個核苷酸間鍵聯為經修飾之核苷酸間鍵聯。
在一些實施例中，式(I)之RNAi藥劑中之有義股及反義股包含選自由以下組成之群的一對核酸序列： (a)        該有義股包含SEQ ID NO: 31之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 32之第二核酸序列； (b)       該有義股包含SEQ ID NO: 33之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 34之第二核酸序列； (c)        該有義股包含SEQ ID NO: 35之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 36之第二核酸序列； (d)       該有義股包含SEQ ID NO: 37之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 38之第二核酸序列； (e)        該有義股包含SEQ ID NO: 39之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 40之第二核酸序列； (f)        該有義股包含SEQ ID NO: 41之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 42之第二核酸序列； (g)       該有義股包含SEQ ID NO: 43之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 44之第二核酸序列； (h)       該有義股包含SEQ ID NO: 45之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 46之第二核酸序列； (i)        該有義股包含SEQ ID NO: 47之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 48之第二核酸序列； (j)        該有義股包含SEQ ID NO: 49之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 50之第二核酸序列； (k)       該有義股包含SEQ ID NO: 51之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 52之第二核酸序列； (l)        該有義股包含SEQ ID NO: 53之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 54之第二核酸序列； (m)      該有義股包含SEQ ID NO: 55之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 56之第二核酸序列； (n)       該有義股包含SEQ ID NO: 57之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 58之第二核酸序列； (o)       該有義股包含SEQ ID NO: 59之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 60之第二核酸序列。
在一些實施例中，式(I)之RNAi藥劑中之有義股及反義股具有選自由以下組成之群的一對核酸序列： (a)     該有義股由SEQ ID NO: 31之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 32之第二核酸序列組成； (b)    該有義股由SEQ ID NO: 33之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 34之第二核酸序列組成； (c)     該有義股由SEQ ID NO: 35之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 36之第二核酸序列組成； (d)    該有義股由SEQ ID NO: 37之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 38之第二核酸序列組成； (e)     該有義股由SEQ ID NO: 39之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 40之第二核酸序列組成； (f)     該有義股由SEQ ID NO: 41之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 42之第二核酸序列組成； (g)    該有義股由SEQ ID NO: 43之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 44之第二核酸序列組成； (h)    該有義股由SEQ ID NO: 45之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 46之第二核酸序列組成； (i)     該有義股由SEQ ID NO: 47之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 48之第二核酸序列組成； (j)     該有義股由SEQ ID NO: 49之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 50之第二核酸序列組成； (k)    該有義股由SEQ ID NO: 51之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 52之第二核酸序列組成； (l)     該有義股由SEQ ID NO: 53之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 54之第二核酸序列組成； (m)    該有義股由SEQ ID NO: 55之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 56之第二核酸序列組成； (n)    該有義股由SEQ ID NO: 57之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 58之第二核酸序列組成；及 (o)    該有義股由SEQ ID NO: 59之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 60之第二核酸序列組成。
在一些實施例中，遞送構件或遞送部分與有義股之3'端結合。在一些實施例中，遞送構件或遞送部分與有義股之核苷酸結合。在一些實施例中，遞送構件或遞送部分為棕櫚酸、膽固醇或α-生育酚。在一些實施例中，連接構件或連接子係選自由以下組成之群：表5之連接子1、連接子2、連接子3及連接子4。
ATXN2 RNAi藥劑之有義股及反義股可使用此項技術中已知之任何核酸聚合方法合成，例如採用胺基亞磷酸酯化學方法(例如Current Protocols in Nucleic Acid Chemistry, Beaucage, S.L.等人(編輯), John Wiley & Sons, Inc., New York, NY, USA)、H-膦酸酯、磷酸三酯化學之固相合成，或酶促合成。可使用自動化商業合成器，例如來自LGC Biosearch Technologies之MerMade™ 12，或來自BioAutomation或Applied Biosystems之其他合成器。可使用諸如苯乙醯基二硫化物或DDTT (((二甲基胺基亞甲基)胺基)-3H-1,2,4-二噻唑啉-3-硫酮)之硫化試劑來引入硫代磷酸酯鍵聯。熟知使用類似技術及市售的經修飾之胺基酸酯及受控微孔玻璃(CPG)產品來合成經修飾之寡核苷酸或結合之寡核苷酸。
可使用純化方法以自最終寡核苷酸產物移除非所需雜質。用於單股寡核苷酸之常用純化技術包括：反相離子對高效液相層析法(RP-IP-HPLC)、毛細管凝膠電泳法(CGE)、陰離子交換HPLC (AX-HPLC)及尺寸排阻層析法(SEC)。在純化之後，寡核苷酸可藉由質譜法進行分析且藉由分光光度學在260 nm之波長下進行定量。接著可將有義股及反義股黏接以形成雙螺旋體。
在另一態樣中，本文提供醫藥組合物，其包含本文所描述之ATXN2 RNAi藥劑及醫藥學上可接受之載劑。本文亦提供醫藥組合物，其包含用於減少細胞中之ATXN2表現的構件及醫藥學上可接受之載劑。此類醫藥組合物亦可包含一或多種醫藥學上可接受之賦形劑、稀釋劑或載劑。醫藥組合物可藉由此項技術中熟知之方法(例如Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 第23版(2020), A. Loyd等人, Academic Press)來製備。
在另一態樣中，本文提供減少細胞(例如神經元)中之ATXN2表現之方法，此類方法可包括將本文所描述之ATXN2 RNAi藥劑引入細胞中；及培育細胞持續足以使ATXN2 mRNA降解之時間，由此減少細胞中之ATXN2表現。可使用此項技術中已知之方法，例如轉染、電穿孔、顯微注射，或經由天然輸送機制由細胞吸收來將ATXN2 RNAi藥劑引入細胞(例如神經元)中。
在另一態樣中，本文提供減少有需要之患者中之ATXN2表現的方法，且此類方法包含向患者投與有效量之本文所描述之ATXN2 RNAi藥劑或醫藥組合物。
在另一態樣中，本文提供治療有需要之患者中之ATXN2相關神經疾病的方法，且此類方法包含向患者投與有效量之本文所描述之ATXN2 RNAi藥劑或醫藥組合物。ATXN2基因中之異常CAG三核苷酸擴增與脊髓小腦性失調症2型(SCA2)及肌肉萎縮性側索硬化(ALS)相關。在另一態樣中，已知共濟失調蛋白-2係TAR DNA結合蛋白(TDP-43)之異常聚集介導之毒性所需的，咸信TAR DNA結合蛋白為95%散發性及家族性肌肉萎縮性側索硬化病例之驅動因素。例示性ATXN2相關神經疾病包括(但不限於)脊髓小腦性失調症2型(SCA2)、肌肉萎縮性側索硬化(ALS)、原發性側索硬化(PLS)、帕金森氏症(Parkinson's disease)、阿茲海默氏症(Alzheimer's disease)、額顳葉變性(FTLD)、進行性肌萎縮(PMA)、多系統蛋白質病、佩里病(Perry disease)及TDP-43蛋白質病，例如與異常TDP-43聚集相關之神經疾病(de Boer等人, 2021, J Neurol. Neurosurg. Psychiatry. 2020年11月11日; 92(1):86-95)。
可向患者鞘內、腦室內或經由腦池內注射投與ATXN2 RNAi藥劑。在一些實施例中，向患者鞘內，例如經由導管或直接注射至鞘內空間投與ATXN2 RNAi藥劑。
可調整RNAi給藥方案以提供最佳的所需反應(例如治療反應)。舉例而言，可投與單次推注，可隨時間分若干次投與分次劑量，或可根據治療情況之緊急需要所指示而按比例減少或增加劑量。
劑量值可隨待緩解之病狀的類型及嚴重程度而變化。亦應理解，對於任何特定個體，具體給藥方案應根據個體需要及投與組合物或監督組合物之投與之人員的專業判斷而隨時間調整。
在另一態樣中，本文提供ATXN2 RNAi藥劑或包含ATXN2 RNAi藥劑之醫藥組合物，其係用於減少ATXN2表現。本文亦提供ATXN2 RNAi藥劑或包含ATXN2 RNAi藥劑之醫藥組合物，其係用於療法中。本文亦提供ATXN2 RNAi藥劑或包含ATXN2 RNAi藥劑之醫藥組合物，其係用於治療ATXN2相關神經疾病。本文亦提供ATXN2 RNAi藥劑之用途，其係用於製造用以治療ATXN2相關神經疾病之藥劑。
如本文所用，除非本文中另外指示或與上下文明顯矛盾，否則本發明之上下文中(尤其在申請專利範圍之上下文中)所用的術語「一(a)」、「一(an)」、「該」及類似術語應解釋為涵蓋單數及複數兩者。
如本文所用，術語「烷基」意謂飽和直鏈或分支鏈單價烴基，其含有指定數目之碳原子。舉例而言，「C 1-C 20烷基」意謂具有1至20個呈直鏈或分支鏈排列之碳原子的基團。
如本文所用，「反義股」意謂與標靶序列之一區域互補的單股寡核苷酸。同樣地且如本文所用，「有義股」意謂與反義股之一區域互補的單股寡核苷酸。
如本文所用，「互補」意謂允許兩個核苷酸彼此形成鹼基對的兩個核苷酸之間(例如兩個相對核酸上或單一核酸股(例如髮夾)之相對區上)的結構關係。舉例而言，與相對核酸之嘧啶核苷酸互補的一個核酸之嘌呤核苷酸可藉由彼此形成氫鍵而鹼基配對在一起。互補核苷酸可以沃森-克里克方式(Watson-Crick manner)或以允許形成穩定雙螺旋體之任何其他方式鹼基配對。同樣地，如本文所描述，兩個核酸可具有多個核苷酸之區域，該多個核苷酸彼此互補形成互補之區域。
如本文所用，「遞送部分」係指有助於寡核苷酸或RNAi藥劑進入細胞中之化學部分。遞送部分可為脂質、膽固醇、維生素E、碳水化合物、胺糖或多肽。在一些實施例中，遞送部分為α-生育酚、膽固醇或棕櫚酸。
如本文所用，關於核酸或寡核苷酸之「雙螺旋體」意謂經由核苷酸之兩個反向平行序列之互補鹼基配對(亦即，在相反方向上)形成的結構，無論其由兩個單獨的核酸股形成或由單個摺疊股(例如經由髮夾)形成。
「有效量」係指(對於時段而言及對於投與方式而言)實現所期望治療結果所必需之量。RNAi藥劑之有效量可根據諸如個體之疾病狀態、年齡、性別及體重以及RNAi藥劑在個體中引起所需反應之能力的因素而變化。有效量亦為其中RNAi藥劑之治療有益作用超過其任何有毒或有害作用的量。
術語「減弱」或「表現減弱」係指在試劑(例如RNAi藥劑)治療後基因之mRNA或蛋白質表現減少。
如本文所用，「經修飾之核苷酸間鍵聯」意謂當與具有磷酸二酯鍵之參考核苷酸間鍵聯比較時，具有一或多個化學修飾之核苷酸間鍵聯。經修飾之核苷酸間鍵聯可為非天然存在之鍵聯。在一些實施例中，經修飾之核苷酸間鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯。
如本文所用，「經修飾之核苷酸」係指當與對應參考核苷酸比較時具有一或多個化學修飾之核苷酸，該對應參考核苷酸係選自：腺嘌呤核糖核苷酸、鳥嘌呤核糖核苷酸、胞嘧啶核糖核苷酸、尿嘧啶核糖核苷酸、腺嘌呤去氧核糖核苷酸、鳥嘌呤去氧核糖核苷酸、胞嘧啶去氧核糖核苷酸及胸苷去氧核糖核苷酸。經修飾之核苷酸可在其糖、核鹼基及/或磷酸酯基中具有例如一或多個化學修飾。或者或另外，經修飾之核苷酸可具有一或多個與對應參考核苷酸結合之化學部分。在一些實施例中，經修飾之核苷酸為經2'-氟修飾之核苷酸、經2'-O-甲基修飾之核苷酸或經2'-O-烷基修飾之核苷酸。在一些實施例中，經修飾之核苷酸具有磷酸酯類似物，例如5'-乙烯基膦酸酯。在一些實施例中，經修飾之核苷酸例如在位置9、10或11處具有無鹼基部分或反向無鹼基部分，例如展示於表3中之部分。
如本文所用，「核苷酸」意謂具有連接至磷酸酯基之核苷(核鹼基，例如腺嘌呤、胞嘧啶、鳥嘌呤、胸腺嘧啶或尿嘧啶及戊糖(例如核糖或2'-去氧核糖))的有機化合物。「核苷酸」可充當諸如去氧核糖核酸(DNA)及核糖核酸(RNA)之核酸聚合物之單體單元。
如本文所用，「寡核苷酸」意謂經連接之核苷酸之聚合物，其中各核苷酸可經修飾或未經修飾。寡核苷酸之長度通常小於約100個核苷酸。
如本文所用，「突出端」意謂自雙股寡核苷酸之雙螺旋結構突出的一或多個未配對之核苷酸。突出端可包括自雙股寡核苷酸之5'端或3'端處的雙螺旋區延伸的一或多個未配對之核苷酸。突出端可為雙股寡核苷酸之反義股或有義股上的3'或5'突出端。
如本文所用，術語「患者」係指人類患者。
如本文所用，「磷酸酯類似物」意謂模擬磷酸酯基之靜電及/或空間特性的化學部分。在一些實施例中，磷酸酯類似物代替通常易受酶促移除影響的5'-磷酸酯位於寡核苷酸之5'端核苷酸處。5'磷酸酯類似物可包括耐磷酸酯酶鍵聯。磷酸酯類似物之實例包括5'亞甲基膦酸酯(5'-MP)及5'-(E)-乙烯基膦酸酯(5'-VP)。在一些實施例中，磷酸酯類似物為5'-VP。
相對於參考核酸序列之術語「序列一致性%」或「序列一致性百分比」定義為在最佳比對序列且視需要引入間隙或突出端以實現最大序列一致性百分比之後，候選序列中之與參考核酸序列中之核苷酸、核苷或核鹼基一致的核苷酸、核苷或核鹼基之百分比。出於測定核酸序列一致性百分比之目的進行之比對可以此項技術中之技能範圍內的各種方式實現，例如使用公開可用的電腦軟體程式，例如Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel等人編, 1987, 增刊30, 章節7.7.18, 表7.7.1)中所描述之電腦軟體程式，且包括BLAST、BLAST-2、ALIGN、Megalign (DNASTAR)、Clustal W2.0或Clustal X2.0軟體。熟習此項技術者可確定適用於量測比對之參數，包括在所比較之序列全長內達成最大比對所需之任何演算法。「序列一致性」之百分比可藉由在比較窗內比較兩個最佳比對序列來確定，其中與參考序列(其不包含添加或缺失)相比，比較窗中核酸序列之片段可包含添加或缺失(例如間隔或突出端)以實現兩個序列之最佳比對。百分比可藉由以下方式計算：測定兩個序列中出現一致核苷酸、核苷或核鹼基之位置數以得到匹配位置數，將匹配位置數除以比較窗中之位置總數，且將結果乘以100以得到序列一致性百分比。輸出為標的序列相對於查詢序列之一致性百分比。
如本文所用，「RNAi」、「RNAi藥劑」、「iRNA」、「iRNA藥劑」及「RNA干擾劑」意謂藉由RNA干擾，例如經由RNA誘導型緘默化複合物(RISC)路徑介導標靶mRNA之序列特異性降解的藥劑。在一些實施例中，RNAi藥劑具有有義股及反義股，且有義股及反義股形成雙螺旋體(例如雙股RNA)。在一些實施例中，有義股具有與有義股之3'端或有義股之核苷酸結合的遞送部分。
如本文所用，「股」係指經由核苷酸間鍵聯(例如磷酸二酯鍵聯或硫代磷酸酯鍵聯)連接在一起的核苷酸之單一連續序列。股可具有兩個自由端(例如5'端及3'端)。
如本文所用，「ATXN2」 (亦稱為ATX2、SCA2、TNRC13)係指人類ATXN2 mRNA轉錄物。人類ATXN2 mRNA同功異型物1之核苷酸序列可見於NM_002973.4： 。
人類ATXN2蛋白質同功異型物1之對應胺基酸序列可見於NP_002964.4： 。
人類ATXN2同功異型物2 mRNA序列可見於NM_001310121.1 (SEQ ID NO: 63)；且對應蛋白質序列可見於NP_001297050.1 (SEQ ID NO: 64)。
人類ATXN2同功異型物3 mRNA序列可見於NM_001310123.1 (SEQ ID NO: 65)；且對應蛋白質序列可見於NP_001297052.1 (SEQ ID NO: 66)。
人類ATXN2同功異型物4 mRNA序列可見於NM_001372574.1 (SEQ ID NO: 67)；對應蛋白質序列可見於NP_001359503.1 (SEQ ID NO: 68)。
另一種人類ATXN2同功異型物(包括UTR) mRNA序列(SEQ ID NO: 69)及對應蛋白質序列(SEQ ID NO: 70)可見於ENST00000608853.5。
如本文所用，「ATXN2相關神經疾病」意謂與異常ATXN2表現、活性或功能、ATXN2基因中之CAG重複或聚麩醯胺酸擴增或異常TDP-43聚集相關之神經疾病。
如本文所用，「個體」意謂哺乳動物，包括貓、犬、小鼠、大鼠、黑猩猩、猿、猴及人類。個體較佳為人類。
如本文所用，「治療(treatment)」或「治療(treating)」係指可減緩、控制、延遲或停止本文所揭示之病症或疾病之進展，或改善病症或疾病症狀的所有方法，但未必指示完全消除所有病症或疾病症狀。治療包括投與蛋白質或核酸或載體或組合物以用於治療患者(尤其人類)中之疾病或病狀。 實例 實例 1. 連接子 - 遞送部分對之合成
某些縮寫定義如下：「ACN」係指乙腈；「AEX」係指陰離子交換；「C/D」係指裂解及脫保護；「CPG」係指受控微孔玻璃；「DCM」係指二氯甲烷；「DEA」係指二乙胺；「DIEA」係指N,N-二異丙基乙胺；「DMAP」係指4-二甲基胺基吡啶；「DMF」係指二甲基甲醯胺；「DMSO」係指二甲亞碸；「DMTCl」係指氯化4,4'-二甲氧基三苯甲基；「ES/MS」係指電噴霧質譜法；「EtOAc」係指乙酸乙酯；「EtOH」係指乙醇及乙基醇；「HBTU」係指3-[雙(二甲基胺基)甲基鎓基]-3H-苯并三唑-1-氧化物六氟磷酸鹽；「HOBt」係指1-羥基苯并三唑；「IP-RP」係指離子對反相；「LCAA CPG」係指長鏈烷基胺受控微孔玻璃；「LC/MS」係指液相層析-質譜法；「MeOH」係指甲醇及甲基醇；「MPA」係指移動相A；「MPB」係指移動相B；「MWCO」係指分子量截止值；「NMR」係指核磁共振；「PBS」為磷酸鹽緩衝生理鹽水；「PEG」係指聚乙二醇；「PVDF」係指聚偏二氟乙烯；「RP」係指反相；「RPM」係指轉/分鐘；「siRNA」係指小干擾核糖核酸；「TEA」係指三乙胺；「THF」係指四氫呋喃；「TLC」係指薄層層析(thin line chromatography)；「TMP」係指2,2,6,6-四甲基哌啶；「UPLC」係指超高效液相層析法；且「UV」係指紫外線。 流程 1
流程1步驟A描繪使用適當鹼(諸如DMAP)於適合溶劑(諸如DCM)中使化合物(1)與(2)偶合，得到化合物(3)。步驟B展示在鹼(諸如碳酸鉀)存在下及在溶劑系統(諸如水及THF)中使化合物(3)與1-胺基-3,6,9,12-四氧雜十五烷-15-酸偶合，得到化合物(4)。 流程 2
流程2步驟A描繪使用三苯基膦及偶氮二甲酸二異丙酯的於溶劑(諸如THF)中之化合物(5)與1-羥基-3,6,9,12-四氧雜十五烷-15-酸三級丁酯之間的光延反應(Mitsunobu reaction)，得到化合物(6)。步驟B展示使用酸(諸如HCl)於溶劑(諸如1,4-二㗁烷)中對化合物(6)進行酸性脫保護，得到化合物(7)。 流程 3
流程3步驟A描繪使用DMTCl與適合鹼(諸如DIEA)於溶劑(諸如DCM)中對化合物(8)進行保護，得到化合物(9)。步驟B展示使用HBTU及HOBt以及TMP的於溶劑(諸如DCM)中之化合物(9)與哌啶-4-基甲醇之間的醯胺偶合，得到化合物(10)。在步驟C中展示用含20%哌啶之DMF對化合物(10)進行脫保護，得到化合物(11)。 流程 4
流程4步驟A描繪使用標準偶合試劑(諸如HBTU及HOBt)及鹼(諸如DIEA)的於溶劑(諸如DMF)中之化合物(11)與化合物(4)或化合物(7)之間的醯胺偶合，得到化合物(12)。熟習此項技術者將認識到可用於進行此醯胺偶合之多種條件。步驟B展示使用鹼(諸如TEA)及催化性DMAP於溶劑(諸如DCM)中使化合物(12)與丁二酸酐偶合，得到化合物(13)。步驟C展示使用HBTU及鹼(諸如DIEA)於溶劑(諸如ACN)中使化合物(13)與胺基LCAA CPG醯胺偶合，隨後進行多步驟處理，得到化合物(14)。 製備 1棕櫚酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯
將棕櫚酸(2.00 g，7.80 mmol)添加至1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(1.79 g，9.36 mmol)及DMAP (0.19 g，1.56 mmol)於DCM (31 mL)中之溶液中。在環境溫度下攪拌混合物5分鐘，接著添加N-羥基丁二醯亞胺(0.99 g，8.58 mmol)且在環境溫度下攪拌18小時。在真空中濃縮且用含0至80% EtOAc之己烷之梯度溶離經由矽膠急驟層析純化所得粗物質，得到呈白色固體狀之標題化合物(2.65 g，96%)。 1H NMR (DMSO- d 6) δ 2.81 (s, 4H), 2.66 (t, 2H), 1.62 (m, 2H), 1.25 (br s, 24H), 0.87 (t, 3H)。 製備 23-[2-[2-[2-[2-(十六醯基胺基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸
將1-胺基-3,6,9,12-四氧雜十五烷-15-酸(0.14 g，0.53 mmol)添加至碳酸鉀(0.14 g，1.00 mmol)於THF (1 mL)及水(2 mL)中之溶液中。添加棕櫚酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(0.18 g，0.51 mmol)且在環境溫度下攪拌反應物18小時。用水(30 mL)淬滅反應物且用1N HCl水溶液將pH調節至約3。形成沈澱物且藉由真空過濾收集，得到呈白色固體狀之標題化合物(0.19 g，74%)。ES/MS m/z504 (M+H)。 製備 33-[2-[2-[2-[2-[(2R)-2,5,7,8-四甲基-2-[(4R,8R)-4,8,12-三甲基十三基]𠳭烷-6-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸三級丁酯
於THF (28.0 mL)中合併(2R)-2,5,7,8-四甲基-2-[(4R,8R)-4,8,12-三甲基十三基]𠳭烷-6-醇(3.00 g，6.90 mmol)、1-羥基-3,6,9,12-四氧雜十五烷-15-酸三級丁酯(2.50 g，7.60 mmol)及三苯基膦(2.00 g，7.60 mmol)，且在5分鐘內逐滴添加偶氮二甲酸二異丙酯(1.50 mL，7.60 mmol)。在60℃下加熱混合物16小時。將混合物冷卻至環境溫度，添加矽膠且在真空中濃縮，得到灰白色固體。用0至40% EtOAc/己烷溶離經由矽膠急驟層析純化混合物，得到呈油狀之標題化合物(3.33 g，66%)。 1H NMR (CDCl 3): 3.84 (s, 4H), 3.77-3.71 (m, 13H), 2.59 (t, J= 6.8 Hz, 2H), 2.52 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 2.20-2.20 (m, 3H), 2.15-2.12 (m, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.87-1.73 (m, 2H), 1.58-1.51 (m, 4H), 1.47 (s, 9H), 1.35-1.27 (m, 21H), 0.90-0.86 (m, 12H)。 製備 43-[2-[2-[2-[2-[(2R)-2,5,7,8-四甲基-2-[(4R,8R)-4,8,12-三甲基十三基]𠳭烷-6-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸
將3-[2-[2-[2-[2-[(2R)-2,5,7,8-四甲基-2-[(4R,8R)-4,8,12-三甲基十三基]𠳭烷-6-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸三級丁酯(3.33 g，4.53 mmol)溶解於含4 M HCl之二㗁烷(22.6 mL，90.6 mmol)中且在環境溫度下攪拌16小時。在減壓下移除溶劑，得到呈灰白色固體狀之標題化合物(3.08 g，100%)。ES/MS m/z 678.0 (M-H)。 製備 5(2S)-3-[雙(4-甲氧苯基)-苯基-甲氧基]-2-(9H-茀-9-基甲氧基羰基胺基)丙酸
在0℃下在惰性氛圍下將DIEA (64 mL，0.366 mol)添加至(2S)-2-(9H-茀-9-基甲氧基羰基胺基)-3-羥基-丙酸(40 g，0.122 mol)於無水DCM (400 mL)中之攪拌溶液中。向此混合物中緩慢添加DMTCl (49.6 g，0.146 mol)於DCM (200 mL)中之溶液。使其升溫至環境溫度且攪拌16小時。此後，用水稀釋反應混合物且用DCM萃取。將有機物經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。用10% EtOAc/己烷洗滌粗殘餘物且在真空中乾燥，得到呈淡棕色固體狀之粗標題化合物(62 g，粗物質)。TLC: 5% MeOH/CH 2Cl 2( R f : 0.5) UV, 254 nM。 製備 6N-[(1S)-1-[[雙(4-甲氧基苯基)-苯基-甲氧基]甲基]-2-[4-(羥基甲基)-1-哌啶基]-2-側氧基-乙基]胺基甲酸9H-茀-9-基甲酯
在0℃下在惰性氛圍下，將HBTU (78.3 g，0.206 mol)、HOBt (27.9 g，0.206 mol)及哌啶-4-基甲醇(15.4 g，0.134 mol)以及TMP (15 mL，0.113 mol)相繼緩慢添加至(2S)-3-[雙(4-甲氧基苯基)-苯基-甲氧基]-2-(9H-茀-9-基甲氧基羰基胺基)丙酸(62 g，0.103 mol)於DCM (750 mL)中之攪拌溶液中。使所得反應混合物達到環境溫度且攪拌4小時。此後，用水稀釋混合物且用DCM萃取。將有機物經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。用20%至40% EtOAc/己烷及1% MeOH/DCM溶離經由矽膠急驟層析純化所得殘餘物，得到標題化合物(40 g，52%，經兩個步驟)。 1H NMR(DMSO-d 6) δ 7.88 (br d, J= 7.5 Hz, 2H), 7.79 - 7.59 (m, 3H), 7.45 - 7.12 (m, 13H), 6.92 - 6.76 (m, 4H), 4.79 - 4.44 (m, 2H), 4.32 (br d, J= 11.4 Hz, 2H), 4.20 (br s, 2H), 3.71 (s, 6H), 3.21 (br s, 4H), 2.99 - 2.79 (m, 1H), 2.69 ( br s, 2H), 1.81 - 1.43 (m, 3H), 1.08 - 0.73 (m, 2H)。 製備 7(2S)-2-胺基-3-[雙(4-甲氧基苯基)-苯基-甲氧基]-1-[4-(羥基甲基)-1-哌啶基]丙-1-酮
在0℃下在惰性氛圍下，將20%哌啶於DMF中之溶液(400 mL)緩慢添加至N-[(1S)-1-[[雙(4-甲氧基苯基)-苯基-甲氧基]甲基]-2-[4-(羥甲基)-1-哌啶基]-2-側氧基-乙基]胺基甲酸9H-茀-9-基甲酯(40 g，0.055 mol)中。使混合物升溫至環境溫度且攪拌1小時。此後，用水稀釋混合物且用EtOAc萃取。將有機物經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。用1至8% MeOH/DCM溶離經由矽膠急驟層析純化所得殘餘物，得到呈灰白色固體狀之標題化合物(13 g，47%)。ES/MS m/z1009.5 (2M+H)。 製備 8N-[2-[2-[2-[2-[3-[[(1S)-1-[[雙(4-甲氧基苯基)-苯基-甲氧基]甲基]-2-[4-(羥基甲基)-1-哌啶基]-2-側氧基-乙基]胺基]-3-側氧基-丙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙基]十六醯胺
於DMF (9.84 mL)中合併3-[2-[2-[2-[2-(十六醯基胺基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸(496 mg，0.984 mmol)、HOBt (146 mg，1.08 mmol)、HBTU (410 mg，1.08 mmol)及DIEA (1.03 mL，5.90 mmol)，且在環境溫度下攪拌10分鐘。將(2S)-2-胺基-3-[雙(4-甲氧基苯基)-苯基-甲氧基]-1-[4-(羥基甲基)-1-哌啶基]丙-1-酮(546 mg，1.08 mmol)添加至混合物中，且在環境溫度下攪拌16小時。將混合物分配於EtOAc與飽和氯化鈉水溶液之間。分離各層且用飽和氯化鈉水溶液洗滌有機物。將有機物經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。用0至10% MeOH/DCM溶離藉由矽膠急驟層析純化所得殘餘物，得到呈油狀之標題化合物(327 mg，34%)。1H NMR (DMSO-d 6) 8.21 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.80 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 7.37-7.28 (m, 4H), 7.23-7.20 (m, 5H), 6.88 (d, J= 8.3 Hz, 4H), 5.06-5.02 (m, 1H), 4.51-4.49 (m, 1H), 4.45-4.40 (m, 1H), 3.97-3.93 (m, 1H), 3.74 (s, 5H), 3.63-3.56 (m, 2H), 3.49-3.48 (m, 4H), 3.47-3.45 (m, 7H), 3.40-3.35 (m, 2H), 3.30 (s, 1H), 3.23-3.13 (m, 7H), 2.41-2.33 (m, 2H), 2.04 (t, J= 7.4 Hz, 2H), 1.74-1.69 (m, 3H), 1.51-1.44 (m, 2H), 1.26-1.24 (m, 24H), 1.00-0.97 (m, 1H), 0.88-0.82 (m, 5H)。 製備 94-[[1-[(2S)-3-[雙(4-甲氧基苯基)-苯基-甲氧基]-2-[3-[2-[2-[2-[2-(十六醯基胺基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙醯基胺基]丙醯基]-4-哌啶基]甲氧基]-4-側氧基-丁酸
於DCM (6.46 mL)中合併N-[2-[2-[2-[2-[3-[[(1S)-1-[[雙(4-甲氧基苯基)-苯基-甲氧基]甲基]-2-[4-(羥基甲基)-1-哌啶基]-2-側氧基-乙基]胺基]-3-側氧基-丙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙基]十六醯胺(320 mg，0.323 mmol)、DMAP (120 mg，0.969 mmol)、TEA (225 µL，1.62 mmol)及丁二酸酐(64.7 mg，0.646 mmol)，且在環境溫度下攪拌混合物16小時。用0%至40% MeOH/DCM溶離經由矽膠急驟層析直接純化混合物，得到呈無色油狀之標題化合物(279 mg，79%)。 1H NMR (DMSO-d 6) 12.65-12.64 (m, 1H), 8.24-8.19 (m, 1H), 7.80 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 7.37-7.28 (m, 4H), 7.24-7.20 (m, 5H), 6.88 (d, J= 8.6 Hz, 4H), 5.05-5.01 (m, 1H), 4.44-4.40 (m, 1H), 3.97-3.95 (m, 3H), 3.74 (s, 6H), 3.61-3.56 (m, 2H), 3.49-3.45 (m, 11H), 3.38 (t, J= 5.9 Hz, 3H), 3.22-3.14 (m, 6H), 2.48-2.31 (m, 7H), 2.04 (t, J= 7.4 Hz, 2H), 1.90-1.87 (m, 5H), 1.24 (s, 23H), 0.98-0.96 (m, 1H), 0.87-0.82 (m, 4H)。 製備 104-[[1-[(2S)-3-[雙(4-甲氧基苯基)-苯基-甲氧基]-2-[3-[2-[2-[2-[2-[(2R)-2,5,7,8-四甲基-2-[(4R,8R)-4,8,12-三甲基十三基]𠳭烷-6-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙醯基胺基]丙醯基]-4-哌啶基]甲氧基]-4-側氧基-丁酸
於DMF (18.0 mL)中合併3-[2-[2-[2-[2-[(2R)-2,5,7,8-四甲基-2-[(4R,8R)-4,8,12-三甲基十三基]𠳭烷-6-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸(1.20 g，1.80 mmol)、HOBt (260 mg，1.90 mmol)、HBTU (740 mg，1.90 mmol)及DIEA (1.80 mL，11.0 mmol)，且在環境溫度下攪拌10分鐘。將(2S)-2-胺基-3-[雙(4-甲氧基苯基)-苯基-甲氧基]-1-[4-(羥基甲基)-1-哌啶基]丙-1-酮(980 mg，1.90 mmol)添加至混合物中，且在環境溫度下攪拌16小時。將混合物分配於EtOAc與飽和氯化鈉水溶液之間。分離各層且用飽和氯化鈉水溶液洗滌有機物。將有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。用0至10% MeOH/DCM溶離藉由矽膠急驟層析純化所得殘餘物，得到呈黃色油狀之N-[(1S)-1-[[雙(4-甲氧基苯基)-苯基-甲氧基]甲基]-2-[4-(羥基甲基)-1-哌啶基]-2-側氧基-乙基]-3-[2-[2-[2-[2-[(2R)-2,5,7,8-四甲基-2-[(4R,8R)-4,8,12-三甲基十三基]𠳭烷-6-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙烯醯胺。
於DCM (24.9 mL)中合併N-[(1S)-1-[[雙(4-甲氧基苯基)-苯基-甲氧基]甲基]-2-[4-(羥基甲基)-1-哌啶基]-2-側氧基-乙基]-3-[2-[2-[2-[2-[(2R)-2,5,7,8-四甲基-2-[(4R,8R)-4,8,12-三甲基十三基]𠳭烷-6-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙烯醯胺(1.45 g，1.24 mmol)、DMAP (456 mg，3.73 mmol)、TEA (867 µL，6.22 mmol)及丁二酸酐(249 mg，2.49 mmol)，且在環境溫度下攪拌16小時。在真空中濃縮且用0至40% MeOH/DCM溶離經由矽膠急驟層析純化所得殘餘物，得到呈油狀之標題化合物(1.36 g，60%)。ES/MS m/z  1264.4 (M-H)。 製備 11CPG上之[[4-[[1-[(2S)-3-[雙(4-甲氧基苯基)-苯基-甲氧基]-2-[3-[2-[2-[2-[2-(十六醯基胺基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙醯基胺基]丙醯基]-4-哌啶基]甲氧基]-4-側氧基-丁醯基]胺基]
將4-[[1-[(2S)-3-[雙(4-甲氧基苯基)-苯基-甲氧基]-2-[3-[2-[2-[2-[2-(十六醯基胺基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙醯基胺基]丙醯基]-4-哌啶基]甲氧基]-4-側氧基-丁酸(270 mg，0.248 mmol)溶解於ACN (12.5 mL)中，且將溶液轉移至燒結玻璃滴液漏斗中。將DIEA (150 µL，0.860 mmol)及HBTU (190 mg，0.500 mmol)添加至溶液中且在環境溫度下振盪混合物10分鐘。將天然胺基LCAA CPG 500Å (1.92 g，129 µmol/g)添加至溶液中且在環境溫度下以500 RPM振盪混合物16小時。將CPG瀝乾且在氮氣下乾燥5分鐘。用DCM (50 mL)、10% MeOH/DCM (50 mL)且接著用乙醚(50 mL)洗滌CPG。將CPG在氮氣下乾燥30分鐘且接著再懸浮於吡啶(15 mL)中。添加乙酸酐(3.30 mL，35.0 mmol)及TEA (0.50 mL)且在環境溫度下以500 RPM振盪混合物2小時。將CPG瀝乾且在氮氣下乾燥5分鐘。用DCM (50 mL)、10% MeOH/DCM (50 mL)且接著用乙醚(50 mL)洗滌CPG。將CPG在氮氣下乾燥45分鐘且在505 nm下測定配位體負載，得到標題化合物(1.92 g，75.5 µmol/g)。 製備 12CPG上之[[4-[[1-[(2S)-3-[雙(4-甲氧基苯基)-苯基-甲氧基]-2-[3-[2-[2-[2-[2-[(2R)-2,5,7,8-四甲基-2-[(4R,8R)-4,8,12-三甲基十三基]𠳭烷-6-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙醯基胺基]丙醯基]-4-哌啶基]甲氧基]-4-側氧基-丁醯基]胺基]
以基本上與製備11類似之方式自4-[[1-[(2S)-3-[雙(4-甲氧基苯基)-苯基-甲氧基]-2-[3-[2-[2-[2-[2-[(2R)-2,5,7,8-四甲基-2-[(4R,8R)-4,8,12-三甲基十三基]𠳭烷-6-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙醯基胺基]丙醯基]-4-哌啶基]甲氧基]-4-側氧基-丁酸製備標題化合物。在505 nm下測定配位體負載，得到標題化合物(4.01 g，66.9 µmol/g)。 製備 133-[[(2R,3R,4R,5R)-2-[[雙(4-甲氧基苯基)-苯基-甲氧基]甲基]-4-十六烷氧基-5-(2-羥基-4-側氧基-嘧啶-1-基)THF-3-基]氧基-(二異丙基胺基)磷烷基]氧基丙腈
根據WO2019217459中所描述之方案製備標題化合物。 1H NMR (CD 3CN)δ 7.86-7.73 (m, 1H), 7.51-7.43 (m, 2H), 7.40-7.23 (m, 7H), 6.95-6.87 (m, 4H), 5.90-5.84 (m, 1H), 5.29-5.21 (m, 1H), 4.54-4.40 (m, 1H), 4.21-4.13 (m, 1H), 4.10-3.56 (m, 13H), 3.50-3.34 (m, 2H), 2.75-2.62 (m, 1H), 2.55 (t, J= 6.0 Hz, 1H), 1.66-1.51 (m, 2H), 1.40-1.14 (m, 35H), 1.08 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 0.91 (t, J= 6.8 Hz, 3H)。 31P NMR (CD 3CN): 149.6, 149.2。 製備 14N-[9-[(2R,3R,4R,5R)-5-[[雙(4-甲氧基苯基)-苯基-甲氧基]甲基]-4-[2-氰基乙氧基-(二異丙基胺基)磷烷基]氧基-3-十六烷氧基-四氫呋喃-2-基]嘌呤-6-基]苯甲醯胺
根據WO2019217459中所描述之方案製備標題化合物。 1H-NMR (CD 3CN) δ 9.37 (s, 1H), 8.57 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 8.27 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 7.99 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.61 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.52 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.42 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 7.34 - 7.16 (m, 7H), 6.85 - 6.77 (m, 4H), 6.1 1 (dd, J = 5.0, 2.5 Hz, 1H), 4.80 (m, 1H), 4.69 (m, 1H), 4.32 (m, 1H), 3.97 - 3.78 (m, 1H), 3.74 (d, J = 3.1 Hz, 7H), 3.64 (m, 4H), 3.56 - 3.40 (m, 2H), 3.33 (m, 1H), 2.73 - 2.59 (m, 1H), 2.50 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 1.52 - 1.45 (m, 2H), 1.33 - 1.12 (m, 37H), 1.09 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.87 (t, J = 6.8 Hz, 3H)。 31P NMR (CD 3CN) δ 151.19, 150.78。 製備 15N-[1-[(2R,3R,4R,5R)-5-[[雙(4-甲氧基苯基)-苯基-甲氧基]甲基]-4-[2-氰基乙氧基-(二異丙基胺基)磷烷基]氧基-3-十六烷氧基-四氫呋喃-2-基]-2-側氧基-嘧啶-4-基]乙醯胺
根據WO2019217459中所描述之方案製備標題化合物。 1H-NMR (CD 3CN) δ 9.15 (s, 1H), 8.46 (dd, J = 7.5 Hz, 1H), 7.95 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.63 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.57 - 7.41 (m, 5H), 7.41 - 7.31 (m, 6H), 7.28 (m, 1H), 7.04 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 6.90 (t, J = 7.9 Hz, 4H), 5.90 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.51 (m, 1H), 4.20 (dd, J = 10.6, 8.1 Hz, 1H), 4.04 (dd, J = 31.3, 4.6 Hz, 1H), 3.91 - 3.81 (m, 2H), 3.79 (d, J = 3.1 Hz, 6H), 3.74 (m, 2H), 3.69 - 3.41 (m, 6H), 2.67 - 2.59 (m, 1H), 2.54 - 2.48 (m, 1H), 1.58 (m, 2H), 1.36 (m, 2H), 1.25 (d, J = 4.7 Hz, 26H), 1.21 - 1.09 (m, 10H), 1.04 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.87 (t, J = 6.8 Hz, 3H)。 31P NMR (CD 3CN) δ 151.10, 150.19。 製備 16N-[9-[(2R,3R,4R,5R)-5-[[雙(4-甲氧基苯基)-苯基-甲氧基]甲基]-4-[2-氰基乙氧基-(二異丙基胺基)磷烷基]氧基-3-十六烷氧基-四氫呋喃-2-基]-6-側氧基-1H-嘌呤-2-基]-2-甲基-丙醯胺 根據WO2019217459中所描述之方案製備標題化合物。
1H-NMR (CDCl 3) δ 12.01-11.96 (m, 1H), 7.82-7.78 (m, 1H), 7.59-7.53 (m, 1H), 7.47-7.42 (m, 1H), 7.41-7.37 (m, 2H), 7.34-7.29 (m, 2H), 7.27-7.22 (m, 3H), 6.85-6.80 (m, 4H), 5.99-5.82 (m, 1H), 4.40-4.36 (m, 1H), 4.17-4.11 (m, 1H), 3.80-3.77 (m, 6H), 3.76-3.68 (m, 6H), 3.22-3.17 (m, 1H), 2.84-2.79 (m, 1H), 1.60-1.54 (m, 4H), 1.35-1.30 (m, 6H), 1.27 (s, 19H), 1.24-1.15 (m, 13H), 1.06-1.03 (m, 5H), 0.93-0.88 (m, 6H), 0.74-0.70 (m, 1H)。 31P NMR (CDCl 3) δ 150.20, 149.92。 實例 2 . ATXN2 RNAi 藥劑之合成
經由MerMade™ 12 (LGC Biosearch Technologies)在固體支撐物上合成RNA雙螺旋體之單股(有義及反義)。有義股及反義股之序列展示於表2中。以5、10、25或50 µmol規模經由胺基亞磷酸酯化學方法合成寡核苷酸。
對於有義股，固體支撐物之類型為通用CPG：(3'-哌啶醇-PEG-棕櫚酸酯)及(3'-哌啶醇-PEG-生育酚)為內部合成的(參見實例1)，而Universal UnyLinker (Chemgenes，目錄號AT273-27)及3'Teg-生育酚(LGC Biosearch Technologies，目錄號BG7-1190)為商購的。對於所有反義股，利用市售標準支撐物mA。在寡核苷酸合成中使用標準試劑(表7)，其中使用含0.1 M氫化黃原素(xanthane hydride)之吡啶作為硫化試劑且使用含20% DEA之ACN作為合成後輔助洗滌劑。所有單體(表8)在ACN中以0.1 M製備且含有分子篩捕集袋。
在45℃下對寡核苷酸進行裂解及脫保護(C/D)持續20小時。使用氫氧化氨(28至30%，冷)自CPG對有義股進行C/D，而對於反義股，則使用含3% DEA之氫氧化氨(28至30%，冷)。當所得質量資料證實序列身分時，藉由IP-RP LCMS確定C/D完成。視規模而定，經由0.45 μm PVDF無注射器過濾器、0.22 μm PVDF Steriflip®真空過濾或0.22 μm PVDF Stericup® Quick release過濾CPG。用30% ACN/不含RNAse之水或30% EtOH/不含RNAse之水反洗滌/沖洗CPG，接著經由相同過濾裝置過濾且與第一濾液合併。將此操作重複兩次。接著將物質均勻地分配至50 mL法爾康管(falcon tube)中，以經由Genevac™移除有機物。在濃縮之後，將粗寡核苷酸用不含RNAse之水稀釋回合成規模，且藉由0.45 µm PVDF無注射器過濾器、0.22 µm PVDF Steriflip®真空過濾或0.22 µm PVDF Stericup® Quick release過濾。
使用陰離子交換(AEX)或反相(RP)，即source 15Q-RP管柱經由AKTA™ Pure純化系統來純化粗寡核苷酸。對於AEX，使用ES Industry Source™ 15Q管柱且將管柱溫度維持在65℃，其中MPA：20 mM NaH 2PO 4、15% ACN，pH 7.4，且MPB：20 mM NaH 2PO 4、1 M NaBr、15% ACN，pH 7.4。對於RP，使用Source™ 15Q-RP管柱，其中MPA：含10% ACN之50 mM NaOAc，且MPB：含80% ACN之50 mM NaOAc。在所有情況下，將含有大於85%之質量純度且不含＞5%之雜質的溶離份合併。
使用15 mL 3K MWCO離心旋轉管在3500 xg下將經純化之寡核苷酸去鹽約30分鐘。用不含RNAse之水沖洗寡核苷酸直至溶析液導電率達到＜100 usemi/cm。在去鹽完成之後，添加2至3 mL之不含RNAse之水，接著抽吸10次，將殘留物轉移至50 mL法爾康管中，重複此操作直至經由nanodrop量測過濾器上之化合物的濃度證實寡核苷酸已完全轉移。隨後經由15 mL 100K MWCO離心旋轉管在3500 xg下對最終寡核苷酸進行2次奈米過濾持續2分鐘。分析最終去鹽寡核苷酸之濃度(A260下之nano drop結果)，藉由IP-RP LCMS表徵質量純度且藉由UPLC表徵UV純度。
對於雙螺旋體之製備，將等莫耳量之有義股及反義股合併且在65℃下加熱10分鐘，接著經40分鐘緩慢冷卻至環境溫度。藉由UPLC分析確認雙螺旋體之完整性，且使用IP-RP藉由LCMS來表徵。所有雙螺旋體經奈米過濾，接著經由Charles River Endosafe® Cartridge Device量測內毒素水平，得到結合之RNAi的最終化合物(表9)。對於活體內分析，將適量之雙螺旋體冷凍乾燥，接著在1×PBS中復原以用於嚙齒動物研究及在CSF中復原以用於非人類靈長類動物研究。 表 7 - 寡核苷酸合成試劑
試劑
活化劑溶液(含0.5 M ETT之ACN)
蓋帽劑A (Cap A) (含乙酸酐、吡啶之THF，1:1:8)
蓋帽劑B (含1-甲基咪唑之THF，16:84)
氧化溶液(含0.02 M碘之THF/吡啶/水，70:20:10)
解封溶液，含3% TCA之DCM (w/v)
乙腈(脫水溶劑，最多10 ppm水)
氫化黃原素(0.1 M於吡啶中)
二乙胺(20%於乙腈中)
表 8 - 胺基亞磷酸酯
胺基亞磷酸酯 縮寫 供應商 目錄號 CAS
DMT-2'-F-A(Bz)-CE胺基磷酸酯(phosphoamidite) fA Hongene PD1-001 136834-22-5
DMT-2'-F-C(Ac)-CE胺基磷酸酯 fC Hongene PD3-001 159414-99-0
DMT-2'-F-G(iBu)-CE胺基磷酸酯 fG Hongene PD2-002 144089-97-4
DMT-2'-F-U-CE胺基磷酸酯 fU Hongene PD5-001 146954-75-8
DMT-2'-O-Me-A(Bz)-CE胺基磷酸酯 mA Hongene PR1-001 110782-31-5
DMT-2'-O-Me-C(Ac)-CE胺基磷酸酯 mC Hongene PR3-001 199593-09-4
DMT-2'-O-Me-G(iBu)-CE胺基磷酸酯 mG Hongene PR2-002 150780-67-9
DMT-2'-O-Me-U-CE胺基磷酸酯 mU Hongene PR5-001 110764-79-9
5'雙(POM)磷酸乙烯酯-2'-Ome-U3'CE亞磷醯胺(phosphoroamidite) POM-VPmU Hongene PR5-032 BVPMUP23B2A1
反向無鹼基亞磷醯胺 iAb Chemgenes ANP-1422 401813-16-9
無鹼基亞磷醯胺 Ab Chemgenes ANP-7058 129821-76-7
Uhd Uhd Lilly  
Chd Chd Lilly      
Ahd Ahd Lilly      
Ghd Ghd Lilly      
表 9 - 結合之 ATXN2 RNAi 藥劑
結合之 RNAi 藥劑編號 股 LDP* MW 計算值 ( g / mol ) MW 觀測值 ( g / mol )
1 S: SEQ ID NO: 31 8 7880.8 7880.8
AS: SEQ ID NO: 32    7578.9 7579.2
2 S:SEQ ID NO: 33 8 7706.6 7706.5
AS: SEQ ID NO: 34    7767.1 7766.5
3 S:SEQ ID NO: 35 8 7701.6 7702.4
AS: SEQ ID NO: 36    7735.1 7734.5
4 S:SEQ ID NO: 37 8 7904.8 7905.6
AS: SEQ ID NO: 38    7539.8 7539.2
5 S:SEQ ID NO: 39 8 7612.5 7613.7
AS: SEQ ID NO: 40    7908.2 7908.7
6 S:SEQ ID NO: 41 8 7629.5 7630.4
AS: SEQ ID NO: 42    7891.2 7891.2
7 S:SEQ ID NO: 43 8 7722.6 7723.1
AS: SEQ ID NO: 44    7767.1 7766.5
8 S:SEQ ID NO: 45 8 7620.5 7621.6
AS: SEQ ID NO: 46    7870.2 7870.4
9 S:SEQ ID NO: 47 8 7572.5 7572.7
AS: SEQ ID NO: 48    7931.3 7931.3
10 S:SEQ ID NO: 49 8 7651.5 7651.3
AS: SEQ ID NO: 50    7907.2 7906.5
11 S:SEQ ID NO: 51 8 7658.6 7658.5
AS: SEQ ID NO: 52    7862.2 7862.5
12 S:SEQ ID NO: 53 8 7884.7 7885.7
AS: SEQ ID NO: 54    7552.0 7552.9
13 S:SEQ ID NO: 55 8 7659.6 7659.3
AS: SEQ ID NO: 56    7885.2 7885.8
14 S:SEQ ID NO: 57 8 7594.6 7594.5
AS: SEQ ID NO: 58    7940.4 7940.4
15 S:SEQ ID NO: 59 8 7816.8 7816.9
AS: SEQ ID NO: 60    7657.9 7658.2
「S」意謂有義股；「AS」意謂反義股。* LDP連接至有義股之3'端。 實例 3 . ATXN2 RNAi 藥劑之表徵
活體外測試所選ATXN2 RNAi藥劑在經培養之細胞中之ATXN2抑制，該等經培養之細胞包括SH-SY5Y細胞、小鼠初代皮質神經元及/或人類誘導之多能幹細胞(hiPSC)。 材料及方法
SH - SY5Y 細胞培養及 RNAi 處理 及分析 ：SH-SY5Y細胞(ATCC CRL-2266)係衍生自SK-N-SH神經母細胞瘤細胞株(Ross, R. A.等人, 1983. J Natl Cancer Inst 71, 741-747)。基礎培養基係由ATCC調配之伊格爾氏最低必需培養基(Eagle's Minimum Essential Medium)(目錄號30-2003)與F12培養基之1:1混合物構成。完全生長培養基補充有10%胎牛血清、1×胺基酸、1×碳酸氫鈉及1×青黴素-鏈黴素(Gibco)，且將細胞在37℃下在5% CO 2之潮濕氛圍中培育。在第一天，將SH-SY5Y細胞塗佈於經纖維結合蛋白塗佈之96孔組織培養盤中且使其附著隔夜。在第二天，移除完全培養基且更換為含RNAi藥劑的無血清培養基。將細胞與RNAi藥劑一起培育72小時，隨後分析基因表現。使用Cells-to-C T套組遵循製造商方案(ThermoFisher A35377)來量測經RNAi處理之SH-SY5Y細胞中之基因表現之變化的分析。經預設計之基因表現分析(以20×混合物形式供應)係選自Applied Bio-systems (Foster City, CA, USA)。用cDNA之一系列稀釋物表徵此等分析(ThermoFisher Hs00240906_m1 ATXN2及ThermoFisher Hs99999905_m1 GAPDH)之效率。在MicroAmp Optical 384孔反應盤中使用QuantStudio 7 Flex系統進行RT-QPCR。使用管家基因GAPDH之δ-δ CT標準化方法以測定相對基因表現量。使用GraphPad Prism v9.0以四參數邏輯擬合來測定IC50。
小鼠初代皮質神經元 ( MCN ) 培養及 RNAi 處理及分析 ：在E18自野生型C57BL6小鼠胚胎分離小鼠初代皮質神經元。將細胞以40k個細胞/孔之密度塗於經聚-D-離胺酸塗佈之96孔盤中，且在37℃下在組織培養恆溫箱中，在具有5% CO 2之潮濕腔室中在含有1%抗生素/抗黴菌素(Corning)之NbActiv1 (BrainBits, LLC)中培養7天。在第7天，自各孔移除一半培養基，且添加含2倍濃度之RNAi的具有2% FBS之培養基以作為CRC進行處理且與細胞一起培育額外7、14或21天。每7天用新鮮培養基更換一半的培養基。在RNAi處理結束時，使用TaqMan Fast Advanced Cell-to-CT套組進行RT-qPCR以定量ATXN2 mRNA水平。特定言之，溶解細胞，在Mastercycler X50a (Eppendorf)上產生cDNA，且在QuantStudio 7 Flex Real-Time PCR System (Applied Biosystems)上進行qPCR。使用各別探針藉由β-肌動蛋白(ThermoFisher，Mm02619580_g1)將α-突觸核蛋白(ThermoFisher，Mm00447333_m1)基因表現量標準化。
人類誘導之多能幹細胞源性神經元 ( hiPSC 神經元 ) 培養及 RNAi 處理及分析：多西環素(doxycycline)誘導型神經元素2 (NGN2)人類誘導之多能幹細胞(hiPSC)係由Bioneer為Eli Lilly研發。hiPSC經多西環素誘導三天(DIV3)以引發神經元分化，且以30k/孔塗於96孔PDL及層連結蛋白塗佈之盤上且在培育箱(37℃/5% CO2)中，在由DMEM/F12 (Life Technologies 11330-057)、Neurobasal培養基(Gibco 15240062)、抗生素、補充劑、生長因子及多西環素組成之神經元分化培養基(NDM)中生長。每七天進行細胞之半飼餵(half-fed)，且在DIV21時，將RNAi藥劑在NDM中連續稀釋，且藉由抽吸75 μL且根據稀釋度添加75 μL 2×RNAi濃度以獲得1×RNAi之最終濃度來用RNAi處理細胞。在處理之後每七天藉由移除一半培養基及添加回新鮮NDM將細胞半飼餵。在DIV35 (14天後)或DIV42 (21天後)時收集細胞溶解物，且使用TaqMan Fast Advanced Cells-to-C T套組(ThermoFisher，A35377)進行RT-qPCR並使用ATXN2探針作為所關注之基因(ThermoFisher，Hs00240907_m1)及ACTb探針作為管家基因(ThermoFisher，Hs99999903_m1)以測定mRNA減弱。 結果
表10概述人類SH-SY5Y細胞、小鼠初代皮質神經元(MCN)及hiPSC神經元中ATXN2 mRNA之減弱百分比及SARM RNAi藥劑之IC50。所測試之ATXN2 RNAi藥劑在人類SH-SY5Y細胞中實現ATXN2 mRNA減弱。 表 10 . 所選擇 ATXN2 RNAi 藥劑之活體外活性
RNAi 藥劑 SHSY5Y ，3 天 IC50 (nM) SHSY5Y ，3 天 1 μm 下 ATXN2 之減弱 ( KD )% MCN ，7 天 IC50 (nM) MCN ， 7 天 1 μm 下 ATXN2 之減弱 ( KD )% hiPSC 神經元， 21 天 IC50 (nM) hiPSC 神經元 ，21 天 1 μm 下ATXN2 之減弱 (KD )%
結合之RNAi藥劑編號1 29.34 70.66 18.2 83 17.93 67.5
結合之RNAi藥劑編號2 32.26 67.74 11.4 72 62.43 75.8
結合之RNAi藥劑編號3 32.42 67.58 47.4 81 25.2 62.5
結合之RNAi藥劑編號4 34.53 65.47 167.9 76 50.68 72.6
結合之RNAi藥劑編號5 34.67 65.33 11.8 68 45.53 80.5
結合之RNAi藥劑編號6 34.80 65.20 15.2 63 51.68 68.2
結合之RNAi藥劑編號7 35.64 64.36 12.5 70 20.35 83.4
結合之RNAi藥劑編號8 37.20 62.80 18.6 61 137.9 51
結合之RNAi藥劑編號9 37.72 62.28 12.4 67 8.72 44.4
結合之RNAi藥劑編號10 37.76 62.24 17.3 71 80.86 66.7
結合之RNAi藥劑編號11 39.34 60.66 61.5 73 43.9 57.4
結合之RNAi藥劑編號12 39.59 60.41 14.3 78 97.62 56.7
結合之RNAi藥劑編號13 39.59 60.41 126.4 70 35.61 63.1
結合之RNAi藥劑編號14 39.60 60.40 108.2 7 1134 31.1
結合之RNAi藥劑編號15 42.28 57.72 57.3 47 61.67 65.4
實例 4 . 所選擇 RNAi 藥劑在小鼠中之活體內表徵
在野生型C56BL/6N小鼠中研究RNAi藥劑之功效。使六隻小鼠接受30 µg RNAi藥劑或PBS (磷酸鹽緩衝生理鹽水)的腦室內(ICV)注射且在注射後第21天處死。藉由定量PCR (qPCR)量測及分析小鼠脊髓及腦中之ATXN2 mRNA表現。結果展示於表11中。 表 11 . 小鼠中 ATXN2 mRNA 之減弱 ( KD ) 百分比
結合之 RNAi 藥劑編號 小鼠ICV ，8 天 額葉皮質 KD % 小鼠ICV ，8 天 腦幹 KD % 小鼠ICV ，8 天 腰脊髓KD % 小鼠ICV ，8 天 小腦 KD %
1 8 20 42 29
2 22 32 26 25
3 7 27 20 17
4 0 11 18 0
5 18 12 13 25
6 0 26 14 0
7 26 35 36 17
8 4 16 1 0
9 9 28 26 17
10 33 34 35 28
11 31 45 56 53
12 9 19 13 17
13 0 18 18 27
14 0 0 2 6
15 0 6 16 18
序列表
SEQ ID NO 序列
1 CGAAACGUGAAGAAAUAAUGA
2 UCAUUAUUUCUUCACGUUUCGGC
3 CCUAAACGCAUGUCUUCAGAA
4 UUCUGAAGACAUGCGUUUAGGCA
5 GAGAUGCUUUUACUGACUCUA
6 UAGAGUCAGUAAAAGCAUCUCUU
7 AAACGUGAAGAAAUAAUGGAA
8 UUCCAUUAUUUCUUCACGUUUCG
9 GCUCCUGUCUCUACUAUGCCA
10 UGGCAUAGUAGAGACAGGAGCUG
11 UGGUUCUCCAGCUCCUGUCUA
12 UAGACAGGAGCUGGAGAACCAUG
13 GCCUAAACGCAUGUCUUCAGA
14 UCUGAAGACAUGCGUUUAGGCAU
15 UUAUCAGUCUCAGCAUCCUCA
16 UGAGGAUGCUGAGACUGAUAAUG
17 UCUCCAGCUCCUGUCUCUACA
18 UGUAGAGACAGGAGCUGGAGAAC
19 GCUCAUGGUUCUCCAGCUCCA
20 UGGAGCUGGAGAACCAUGAGCAG
21 CAGUCAGGUCCCAACUCUCUA
22 UAGAGAGUUGGGACCUGACUGGU
23 GAGUAGUUAAUGGAGGUGUUA
24 UAACACCUCCAUUAACUACUCUU
25 AGUCAGGUCCCAACUCUCUUA
26 UAAGAGAGUUGGGACCUGACUGG
27 CCCACCUUCUCGCUACCAGUA
28 UACUGGUAGCGAGAAGGUGGGCG
29 CAAGACAUAUAGAGCAGUACA
30 UGUACUGCUCUAUAUGUCUUGGC
31 mC*mG*mAmAmAmCfGmUfGfAfAmGmAmAmAmUmAmAmU*mG*mA
32 PmU*fC*mAmUmUfAmUmUmUmCmUmUmCfAmCfGmUmUmUmCmG*mG*mC
33 mC*mC*mUmAmAmAfCmGfCfAfUmGmUmCmUmUmCmAmG*mA*mA
34 PmU*fU*mCmUmGfAmAmGmAmCmAmUmGfCmGfUmUmUmAmGmG*mC*mA
35 mG*mA*mGmAmUmGfCmUfUfUfUmAmCmUmGmAmCmUmC*mU*mA
36 PmU*fA*mGmAmGfUmCmAmGmUmAmAmAfAmGfCmAmUmCmUmC*mU*mU
37 mA*mA*mAmCmGmUfGmAfAfGfAmAmAmUmAmAmUmGmG*mA*mA
38 PmU*fU*mCmCmAfUmUmAmUmUmUmCmUfUmCfAmCmGmUmUmU*mC*mG
39 mG*mC*mUmCmCmUfGmUfCfUfCmUmAmCmUmAmUmGmC*mC*mA
40 PmU*fG*mGmCmAfUmAmGmUmAmGmAmGfAmCfAmGmGmAmGmC*mU*mG
41 mU*mG*mGmUmUmCfUmCfCfAfGmCmUmCmCmUmGmUmC*mU*mA
42 PmU*fA*mGmAmCfAmGmGmAmGmCmUmGfGmAfGmAmAmCmCmA*mU*mG
43 mG*mC*mCmUmAmAfAmCfGfCfAmUmGmUmCmUmUmCmA*mG*mA
44 PmU*fC*mUmGmAfAmGmAmCmAmUmGmCfGmUfUmUmAmGmGmC*mA*mU
45 mU*mU*mAmUmCmAfGmUfCfUfCmAmGmCmAmUmCmCmU*mC*mA
46 PmU*fG*mAmGmGfAmUmGmCmUmGmAmGfAmCfUmGmAmUmAmA*mU*mG
47 mU*mC*mUmCmCmAfGmCfUfCfCmUmGmUmCmUmCmUmA*mC*mA
48 PmU*fG*mUmAmGfAmGmAmCmAmGmGmAfGmCfUmGmGmAmGmA*mA*mC
49 mG*mC*mUmCmAmUfGmGfUfUfCmUmCmCmAmGmCmUmC*mC*mA
50 PmU*fG*mGmAmGfCmUmGmGmAmGmAmAfCmCfAmUmGmAmGmC*mA*mG
51 mC*mA*mGmUmCmAfGmGfUfCfCmCmAmAmCmUmCmUmC*mU*mA
52 PmU*fA*mGmAmGfAmGmUmUmGmGmGmAfCmCfUmGmAmCmUmG*mG*mU
53 mG*mA*mGmUmAmGfUmUfAfAfUmGmGmAmGmGmUmGmU*mU*mA
54 PmU*fA*mAmCmAfCmCmUmCmCmAmUmUfAmAfCmUmAmCmUmC*mU*mU
55 mA*mG*mUmCmAmGfGmUfCfCfCmAmAmCmUmCmUmCmU*mU*mA
56 PmU*fA*mAmGmAfGmAmGmUmUmGmGmGfAmCfCmUmGmAmCmU*mG*mG
57 mC*mC*mCmAmCmCfUmUfCfUfCmGmCmUmAmCmCmAmG*mU*mA
58 PmU*fA*mCmUmGfGmUmAmGmCmGmAmGfAmAfGmGmUmGmGmG*mC*mG
59 mC*mA*mAmGmAmCfAmUfAfUfAmGmAmGmCmAmGmUmA*mC*mA
60 PmU*fG*mUmAmCfUmGmCmUmCmUmAmUfAmUfGmUmCmUmUmG*mG*mC
61        1 AGAGCTCGCC TCCCTCCGCC TCAGACTGTT TTGGTAGCAA CGGCAACGGC GGCGGCGCGT        61 TTCGGCCCGG CTCCCGGCGG CTCCTTGGTC TCGGCGGGCC TCCCCGCCCC TTCGTCGTCC       121 TCCTTCTCCC CCTCGCCAGC CCGGGCGCCC CTCCGGCCGC GCCAACCCGC GCCTCCCCGC       181 TCGGCGCCCG CGCGTCCCCG CCGCGTTCCG GCGTCTCCTT GGCGCGCCCG GCTCCCGGCT       241 GTCCCCGCCC GGCGTGCGAG CCGGTGTATG GGCCCCTCAC CATGTCGCTG AAGCCCCAGC       301 AGCAGCAGCA GCAGCAGCAG CAGCAGCAGC AGCAGCAACA GCAGCAGCAG CAGCAGCAGC       361 AGCAGCCGCC GCCCGCGGCT GCCAATGTCC GCAAGCCCGG CGGCAGCGGC CTTCTAGCGT       421 CGCCCGCCGC CGCGCCTTCG CCGTCCTCGT CCTCGGTCTC CTCGTCCTCG GCCACGGCTC       481 CCTCCTCGGT GGTCGCGGCG ACCTCCGGCG GCGGGAGGCC CGGCCTGGGC AGAGGTCGAA       541 ACAGTAACAA AGGACTGCCT CAGTCTACGA TTTCTTTTGA TGGAATCTAT GCAAATATGA       601 GGATGGTTCA TATACTTACA TCAGTTGTTG GCTCCAAATG TGAAGTACAA GTGAAAAATG       661 GAGGTATATA TGAAGGAGTT TTTAAAACTT ACAGTCCGAA GTGTGATTTG GTACTTGATG       721 CCGCACATGA GAAAAGTACA GAATCCAGTT CGGGGCCGAA ACGTGAAGAA ATAATGGAGA       781 GTATTTTGTT CAAATGTTCA GACTTTGTTG TGGTACAGTT TAAAGATATG GACTCCAGTT       841 ATGCAAAAAG AGATGCTTTT ACTGACTCTG CTATCAGTGC TAAAGTGAAT GGCGAACACA       901 AAGAGAAGGA CCTGGAGCCC TGGGATGCAG GTGAACTCAC AGCCAATGAG GAACTTGAGG       961 CTTTGGAAAA TGACGTATCT AATGGATGGG ATCCCAATGA TATGTTTCGA TATAATGAAG      1021 AAAATTATGG TGTAGTGTCT ACGTATGATA GCAGTTTATC TTCGTATACA GTGCCCTTAG      1081 AAAGAGATAA CTCAGAAGAA TTTTTAAAAC GGGAAGCAAG GGCAAACCAG TTAGCAGAAG      1141 AAATTGAGTC AAGTGCCCAG TACAAAGCTC GAGTGGCCCT GGAAAATGAT GATAGGAGTG      1201 AGGAAGAAAA ATACACAGCA GTTCAGAGAA ATTCCAGTGA ACGTGAGGGG CACAGCATAA      1261 ACACTAGGGA AAATAAATAT ATTCCTCCTG GACAAAGAAA TAGAGAAGTC ATATCCTGGG      1321 GAAGTGGGAG ACAGAATTCA CCGCGTATGG GCCAGCCTGG ATCGGGCTCC ATGCCATCAA      1381 GATCCACTTC TCACACTTCA GATTTCAACC CGAATTCTGG TTCAGACCAA AGAGTAGTTA      1441 ATGGAGGTGT TCCCTGGCCA TCGCCTTGCC CATCTCCTTC CTCTCGCCCA CCTTCTCGCT      1501 ACCAGTCAGG TCCCAACTCT CTTCCACCTC GGGCAGCCAC CCCTACACGG CCGCCCTCCA      1561 GGCCCCCCTC GCGGCCATCC AGACCCCCGT CTCACCCCTC TGCTCATGGT TCTCCAGCTC      1621 CTGTCTCTAC TATGCCTAAA CGCATGTCTT CAGAAGGGCC TCCAAGGATG TCCCCAAAGG      1681 CCCAGCGACA TCCTCGAAAT CACAGAGTTT CTGCTGGGAG GGGTTCCATA TCCAGTGGCC      1741 TAGAATTTGT ATCCCACAAC CCACCCAGTG AAGCAGCTAC TCCTCCAGTA GCAAGGACCA      1801 GTCCCTCGGG GGGAACGTGG TCATCAGTGG TCAGTGGGGT TCCAAGATTA TCCCCTAAAA      1861 CTCATAGACC CAGGTCTCCC AGACAGAACA GTATTGGAAA TACCCCCAGT GGGCCAGTTC      1921 TTGCTTCTCC CCAAGCTGGT ATTATTCCAA CTGAAGCTGT TGCCATGCCT ATTCCAGCTG      1981 CATCTCCTAC GCCTGCTAGT CCTGCATCGA ACAGAGCTGT TACCCCTTCT AGTGAGGCTA      2041 AAGATTCCAG GCTTCAAGAT CAGAGGCAGA ACTCTCCTGC AGGGAATAAA GAAAATATTA      2101 AACCCAATGA AACATCACCT AGCTTCTCAA AAGCTGAAAA CAAAGGTATA TCACCAGTTG      2161 TTTCTGAACA TAGAAAACAG ATTGATGATT TAAAGAAATT TAAGAATGAT TTTAGGTTAC      2221 AGCCAAGTTC TACTTCTGAA TCTATGGATC AACTACTAAA CAAAAATAGA GAGGGAGAAA      2281 AATCAAGAGA TTTGATCAAA GACAAAATTG AACCAAGTGC TAAGGATTCT TTCATTGAAA      2341 ATAGCAGCAG CAACTGTACC AGTGGCAGCA GCAAGCCGAA TAGCCCCAGC ATTTCCCCTT      2401 CAATACTTAG TAACACGGAG CACAAGAGGG GACCTGAGGT CACTTCCCAA GGGGTTCAGA      2461 CTTCCAGCCC AGCATGTAAA CAAGAGAAAG ACGATAAGGA AGAGAAGAAA GACGCAGCTG      2521 AGCAAGTTAG GAAATCAACA TTGAATCCCA ATGCAAAGGA GTTCAACCCA CGTTCCTTCT      2581 CTCAGCCAAA GCCTTCTACT ACCCCAACTT CACCTCGGCC TCAAGCACAA CCTAGCCCAT      2641 CTATGGTGGG TCATCAACAG CCAACTCCAG TTTATACTCA GCCTGTTTGT TTTGCACCAA      2701 ATATGATGTA TCCAGTCCCA GTGAGCCCAG GCGTGCAACC TTTATACCCA ATACCTATGA      2761 CGCCCATGCC AGTGAATCAA GCCAAGACAT ATAGAGCAGT ACCAAATATG CCCCAACAGC      2821 GGCAAGACCA GCATCATCAG AGTGCCATGA TGCACCCAGC GTCAGCAGCG GGCCCACCGA      2881 TTGCAGCCAC CCCACCAGCT TACTCCACGC AATATGTTGC CTACAGTCCT CAGCAGTTCC      2941 CAAATCAGCC CCTTGTTCAG CATGTGCCAC ATTATCAGTC TCAGCATCCT CATGTCTATA      3001 GTCCTGTAAT ACAGGGTAAT GCTAGAATGA TGGCACCACC AACACACGCC CAGCCTGGTT      3061 TAGTATCTTC TTCAGCAACT CAGTACGGGG CTCATGAGCA GACGCATGCG ATGTATGCAT      3121 GTCCCAAATT ACCATACAAC AAGGAGACAA GCCCTTCTTT CTACTTTGCC ATTTCCACGG      3181 GCTCCCTTGC TCAGCAGTAT GCGCACCCTA ACGCTACCCT GCACCCACAT ACTCCACACC      3241 CTCAGCCTTC AGCTACCCCC ACTGGACAGC AGCAAAGCCA ACATGGTGGA AGTCATCCTG      3301 CACCCAGTCC TGTTCAGCAC CATCAGCACC AGGCCGCCCA GGCTCTCCAT CTGGCCAGTC      3361 CACAGCAGCA GTCAGCCATT TACCACGCGG GGCTTGCGCC AACTCCACCC TCCATGACAC      3421 CTGCCTCCAA CACGCAGTCG CCACAGAATA GTTTCCCAGC AGCACAACAG ACTGTCTTTA      3481 CGATCCATCC TTCTCACGTT CAGCCGGCGT ATACCAACCC ACCCCACATG GCCCACGTAC      3541 CTCAGGCTCA TGTACAGTCA GGAATGGTTC CTTCTCATCC AACTGCCCAT GCGCCAATGA      3601 TGCTAATGAC GACACAGCCA CCCGGCGGTC CCCAGGCCGC CCTCGCTCAA AGTGCACTAC      3661 AGCCCATTCC AGTCTCGACA ACAGCGCATT TCCCCTATAT GACGCACCCT TCAGTACAAG      3721 CCCACCACCA ACAGCAGTTG TAAGGCTGCC CTGGAGGAAC CGAAAGGCCA AATTCCCTCC      3781 TCCCTTCTAC TGCTTCTACC AACTGGAAGC ACAGAAAACT AGAATTTCAT TTATTTTGTT      3841 TTTAAAATAT ATATGTTGAT TTCTTGTAAC ATCCAATAGG AATGCTAACA GTTCACTTGC      3901 AGTGGAAGAT ACTTGGACCG AGTAGAGGCA TTTAGGAACT TGGGGGCTAT TCCATAATTC      3961 CATATGCTGT TTCAGAGTCC CGCAGGTACC CCAGCTCTGC TTGCCGAAAC TGGAAGTTAT      4021 TTATTTTTTA ATAACCCTTG AAAGTCATGA ACACATCAGC TAGCAAAAGA AGTAACAAGA      4081 GTGATTCTTG CTGCTATTAC TGCTAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAATCAAG ACTTGGAACG      4141 CCCTTTTACT AAACTTGACA AAGTTTCAGT AAATTCTTAC CGTCAAACTG ACGGATTATT      4201 ATTTATAAAT CAAGTTTGAT GAGGTGATCA CTGTCTACAG TGGTTCAACT TTTAAGTTAA      4261 GGGAAAAACT TTTACTTTGT AGATAATATA AAATAAAAAC TTAAAAAAAA TTTAAAAAAT      4321 AAAAAAAGTT TTAAAAACTG A
62         1 MSLKPQQQQQ QQQQQQQQQQ QQQQQQQQPP PAAANVRKPG GSGLLASPAA APSPSSSSVS        61 SSSATAPSSV VAATSGGGRP GLGRGRNSNK GLPQSTISFD GIYANMRMVH ILTSVVGSKC       121 EVQVKNGGIY EGVFKTYSPK CDLVLDAAHE KSTESSSGPK REEIMESILF KCSDFVVVQF       181 KDMDSSYAKR DAFTDSAISA KVNGEHKEKD LEPWDAGELT ANEELEALEN DVSNGWDPND       241 MFRYNEENYG VVSTYDSSLS SYTVPLERDN SEEFLKREAR ANQLAEEIES SAQYKARVAL       301 ENDDRSEEEK YTAVQRNSSE REGHSINTRE NKYIPPGQRN REVISWGSGR QNSPRMGQPG       361 SGSMPSRSTS HTSDFNPNSG SDQRVVNGGV PWPSPCPSPS SRPPSRYQSG PNSLPPRAAT       421 PTRPPSRPPS RPSRPPSHPS AHGSPAPVST MPKRMSSEGP PRMSPKAQRH PRNHRVSAGR       481 GSISSGLEFV SHNPPSEAAT PPVARTSPSG GTWSSVVSGV PRLSPKTHRP RSPRQNSIGN       541 TPSGPVLASP QAGIIPTEAV AMPIPAASPT PASPASNRAV TPSSEAKDSR LQDQRQNSPA       601 GNKENIKPNE TSPSFSKAEN KGISPVVSEH RKQIDDLKKF KNDFRLQPSS TSESMDQLLN       661 KNREGEKSRD LIKDKIEPSA KDSFIENSSS NCTSGSSKPN SPSISPSILS NTEHKRGPEV       721 TSQGVQTSSP ACKQEKDDKE EKKDAAEQVR KSTLNPNAKE FNPRSFSQPK PSTTPTSPRP       781 QAQPSPSMVG HQQPTPVYTQ PVCFAPNMMY PVPVSPGVQP LYPIPMTPMP VNQAKTYRAV       841 PNMPQQRQDQ HHQSAMMHPA SAAGPPIAAT PPAYSTQYVA YSPQQFPNQP LVQHVPHYQS       901 QHPHVYSPVI QGNARMMAPP THAQPGLVSS SATQYGAHEQ THAMYACPKL PYNKETSPSF       961 YFAISTGSLA QQYAHPNATL HPHTPHPQPS ATPTGQQQSQ HGGSHPAPSP VQHHQHQAAQ      1021 ALHLASPQQQ SAIYHAGLAP TPPSMTPASN TQSPQNSFPA AQQTVFTIHP SHVQPAYTNP      1081 PHMAHVPQAH VQSGMVPSHP TAHAPMMLMT TQPPGGPQAA LAQSALQPIP VSTTAHFPYM      1141 THPSVQAHHQ QQL
63         1 CCCGAGAAAG CAACCCAGCG CGCCGCCCGC TCCTCACGTG TCCCTCCCGG CCCCGGGGCC        61 ACCTCACGTT CTGCTTCCGT CTGACCCCTC CGACTTCCGA GGTCGAAACA GTAACAAAGG       121 ACTGCCTCAG TCTACGATTT CTTTTGATGG AATCTATGCA AATATGAGGA TGGTTCATAT       181 ACTTACATCA GTTGTTGGCT CCAAATGTGA AGTACAAGTG AAAAATGGAG GTATATATGA       241 AGGAGTTTTT AAAACTTACA GTCCGAAGTG TGATTTGGTA CTTGATGCCG CACATGAGAA       301 AAGTACAGAA TCCAGTTCGG GGCCGAAACG TGAAGAAATA ATGGAGAGTA TTTTGTTCAA       361 ATGTTCAGAC TTTGTTGTGG TACAGTTTAA AGATATGGAC TCCAGTTATG CAAAAAGAGA       421 TGCTTTTACT GACTCTGCTA TCAGTGCTAA AGTGAATGGC GAACACAAAG AGAAGGACCT       481 GGAGCCCTGG GATGCAGGTG AACTCACAGC CAATGAGGAA CTTGAGGCTT TGGAAAATGA       541 CGTATCTAAT GGATGGGATC CCAATGATAT GTTTCGATAT AATGAAGAAA ATTATGGTGT       601 AGTGTCTACG TATGATAGCA GTTTATCTTC GTATACAGTG CCCTTAGAAA GAGATAACTC       661 AGAAGAATTT TTAAAACGGG AAGCAAGGGC AAACCAGTTA GCAGAAGAAA TTGAGTCAAG       721 TGCCCAGTAC AAAGCTCGAG TGGCCCTGGA AAATGATGAT AGGAGTGAGG AAGAAAAATA       781 CACAGCAGTT CAGAGAAATT CCAGTGAACG TGAGGGGCAC AGCATAAACA CTAGGGAAAA       841 TAAATATATT CCTCCTGGAC AAAGAAATAG AGAAGTCATA TCCTGGGGAA GTGGGAGACA       901 GAATTCACCG CGTATGGGCC AGCCTGGATC GGGCTCCATG CCATCAAGAT CCACTTCTCA       961 CACTTCAGAT TTCAACCCGA ATTCTGGTTC AGACCAAAGA GTAGTTAATG GAGGTGTTCC      1021 CTGGCCATCG CCTTGCCCAT CTCCTTCCTC TCGCCCACCT TCTCGCTACC AGTCAGGTCC      1081 CAACTCTCTT CCACCTCGGG CAGCCACCCC TACACGGCCG CCCTCCAGGC CCCCCTCGCG      1141 GCCATCCAGA CCCCCGTCTC ACCCCTCTGC TCATGGTTCT CCAGCTCCTG TCTCTACTAT      1201 GCCTAAACGC ATGTCTTCAG AAGGGCCTCC AAGGATGTCC CCAAAGGCCC AGCGACATCC      1261 TCGAAATCAC AGAGTTTCTG CTGGGAGGGG TTCCATATCC AGTGGCCTAG AATTTGTATC      1321 CCACAACCCA CCCAGTGAAG CAGCTACTCC TCCAGTAGCA AGGACCAGTC CCTCGGGGGG      1381 AACGTGGTCA TCAGTGGTCA GTGGGGTTCC AAGATTATCC CCTAAAACTC ATAGACCCAG      1441 GTCTCCCAGA CAGAACAGTA TTGGAAATAC CCCCAGTGGG CCAGTTCTTG CTTCTCCCCA      1501 AGCTGGTATT ATTCCAACTG AAGCTGTTGC CATGCCTATT CCAGCTGCAT CTCCTACGCC      1561 TGCTAGTCCT GCATCGAACA GAGCTGTTAC CCCTTCTAGT GAGGCTAAAG ATTCCAGGCT      1621 TCAAGATCAG AGGCAGAACT CTCCTGCAGG GAATAAAGAA AATATTAAAC CCAATGAAAC      1681 ATCACCTAGC TTCTCAAAAG CTGAAAACAA AGGTATATCA CCAGTTGTTT CTGAACATAG      1741 AAAACAGATT GATGATTTAA AGAAATTTAA GAATGATTTT AGGTTACAGC CAAGTTCTAC      1801 TTCTGAATCT ATGGATCAAC TACTAAACAA AAATAGAGAG GGAGAAAAAT CAAGAGATTT      1861 GATCAAAGAC AAAATTGAAC CAAGTGCTAA GGATTCTTTC ATTGAAAATA GCAGCAGCAA      1921 CTGTACCAGT GGCAGCAGCA AGCCGAATAG CCCCAGCATT TCCCCTTCAA TACTTAGTAA      1981 CACGGAGCAC AAGAGGGGAC CTGAGGTCAC TTCCCAAGGG GTTCAGACTT CCAGCCCAGC      2041 ATGTAAACAA GAGAAAGACG ATAAGGAAGA GAAGAAAGAC GCAGCTGAGC AAGTTAGGAA      2101 ATCAACATTG AATCCCAATG CAAAGGAGTT CAACCCACGT TCCTTCTCTC AGCCAAAGCC      2161 TTCTACTACC CCAACTTCAC CTCGGCCTCA AGCACAACCT AGCCCATCTA TGGTGGGTCA      2221 TCAACAGCCA ACTCCAGTTT ATACTCAGCC TGTTTGTTTT GCACCAAATA TGATGTATCC      2281 AGTCCCAGTG AGCCCAGGCG TGCAACCTTT ATACCCAATA CCTATGACGC CCATGCCAGT      2341 GAATCAAGCC AAGACATATA GAGCAGTACC AAATATGCCC CAACAGCGGC AAGACCAGCA      2401 TCATCAGAGT GCCATGATGC ACCCAGCGTC AGCAGCGGGC CCACCGATTG CAGCCACCCC      2461 ACCAGCTTAC TCCACGCAAT ATGTTGCCTA CAGTCCTCAG CAGTTCCCAA ATCAGCCCCT      2521 TGTTCAGCAT GTGCCACATT ATCAGTCTCA GCATCCTCAT GTCTATAGTC CTGTAATACA      2581 GGGTAATGCT AGAATGATGG CACCACCAAC ACACGCCCAG CCTGGTTTAG TATCTTCTTC      2641 AGCAACTCAG TACGGGGCTC ATGAGCAGAC GCATGCGATG TATGCATGTC CCAAATTACC      2701 ATACAACAAG GAGACAAGCC CTTCTTTCTA CTTTGCCATT TCCACGGGCT CCCTTGCTCA      2761 GCAGTATGCG CACCCTAACG CTACCCTGCA CCCACATACT CCACACCCTC AGCCTTCAGC      2821 TACCCCCACT GGACAGCAGC AAAGCCAACA TGGTGGAAGT CATCCTGCAC CCAGTCCTGT      2881 TCAGCACCAT CAGCACCAGG CCGCCCAGGC TCTCCATCTG GCCAGTCCAC AGCAGCAGTC      2941 AGCCATTTAC CACGCGGGGC TTGCGCCAAC TCCACCCTCC ATGACACCTG CCTCCAACAC      3001 GCAGTCGCCA CAGAATAGTT TCCCAGCAGC ACAACAGACT GTCTTTACGA TCCATCCTTC      3061 TCACGTTCAG CCGGCGTATA CCAACCCACC CCACATGGCC CACGTACCTC AGTGCGCCAG      3121 TGAGGCTCTG GCAAGGTGTG GGCTAGAGAT GCGACTCAGT TGGATCTATC TCTCAGAAGG      3181 CTACCTTGCT CATGTACAGT CAGGAATGGT TCCTTCTCAT CCAACTGCCC ATGCGCCAAT      3241 GATGCTAATG ACGACACAGC CACCCGGCGG TCCCCAGGCC GCCCTCGCTC AAAGTGCACT      3301 ACAGCCCATT CCAGTCTCGA CAACAGCGCA TTTCCCCTAT ATGACGCACC CTTCAGTACA      3361 AGCCCACCAC CAACAGCAGT TGTAAGGCTG CCCTGGAGGA ACCGAAAGGC CAAATTCCCT      3421 CCTCCCTTCT ACTGCTTCTA CCAACTGGAA GCACAGAAAA CTAGAATTTC ATTTATTTTG      3481 TTTTTAAAAT ATATATGTTG ATTTCTTGTA ACATCCAATA GGAATGCTAA CAGTTCACTT      3541 GCAGTGGAAG ATACTTGGAC CGAGTAGAGG CATTTAGGAA CTTGGGGGCT ATTCCATAAT      3601 TCCATATGCT GTTTCAGAGT CCCGCAGGTA CCCCAGCTCT GCTTGCCGAA ACTGGAAGTT      3661 ATTTATTTTT TAATAACCCT TGAAAGTCAT GAACACATCA GCTAGCAAAA GAAGTAACAA      3721 GAGTGATTCT TGCTGCTATT ACTGCTAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAATCA AGACTTGGAA      3781 CGCCCTTTTA CTAAACTTGA CAAAGTTTCA GTAAATTCTT ACCGTCAAAC TGACGGATTA      3841 TTATTTATAA ATCAAGTTTG ATGAGGTGAT CACTGTCTAC AGTGGTTCAA CTTTTAAGTT      3901 AAGGGAAAAA CTTTTACTTT GTAGATAATA TAAAATAAAA ACTTAAAAAA AATTTAAAAA      3961 ATAAAAAAAG TTTTAAAAAC TGAAAAAAAA AAA
64         1 MRMVHILTSV VGSKCEVQVK NGGIYEGVFK TYSPKCDLVL DAAHEKSTES SSGPKREEIM        61 ESILFKCSDF VVVQFKDMDS SYAKRDAFTD SAISAKVNGE HKEKDLEPWD AGELTANEEL       121 EALENDVSNG WDPNDMFRYN EENYGVVSTY DSSLSSYTVP LERDNSEEFL KREARANQLA       181 EEIESSAQYK ARVALENDDR SEEEKYTAVQ RNSSEREGHS INTRENKYIP PGQRNREVIS       241 WGSGRQNSPR MGQPGSGSMP SRSTSHTSDF NPNSGSDQRV VNGGVPWPSP CPSPSSRPPS       301 RYQSGPNSLP PRAATPTRPP SRPPSRPSRP PSHPSAHGSP APVSTMPKRM SSEGPPRMSP       361 KAQRHPRNHR VSAGRGSISS GLEFVSHNPP SEAATPPVAR TSPSGGTWSS VVSGVPRLSP       421 KTHRPRSPRQ NSIGNTPSGP VLASPQAGII PTEAVAMPIP AASPTPASPA SNRAVTPSSE       481 AKDSRLQDQR QNSPAGNKEN IKPNETSPSF SKAENKGISP VVSEHRKQID DLKKFKNDFR       541 LQPSSTSESM DQLLNKNREG EKSRDLIKDK IEPSAKDSFI ENSSSNCTSG SSKPNSPSIS       601 PSILSNTEHK RGPEVTSQGV QTSSPACKQE KDDKEEKKDA AEQVRKSTLN PNAKEFNPRS       661 FSQPKPSTTP TSPRPQAQPS PSMVGHQQPT PVYTQPVCFA PNMMYPVPVS PGVQPLYPIP       721 MTPMPVNQAK TYRAVPNMPQ QRQDQHHQSA MMHPASAAGP PIAATPPAYS TQYVAYSPQQ       781 FPNQPLVQHV PHYQSQHPHV YSPVIQGNAR MMAPPTHAQP GLVSSSATQY GAHEQTHAMY       841 ACPKLPYNKE TSPSFYFAIS TGSLAQQYAH PNATLHPHTP HPQPSATPTG QQQSQHGGSH       901 PAPSPVQHHQ HQAAQALHLA SPQQQSAIYH AGLAPTPPSM TPASNTQSPQ NSFPAAQQTV       961 FTIHPSHVQP AYTNPPHMAH VPQCASEALA RCGLEMRLSW IYLSEGYLAH VQSGMVPSHP      1021 TAHAPMMLMT TQPPGGPQAA LAQSALQPIP VSTTAHFPYM THPSVQAHHQ QQL
65         1 CCCGAGAAAG CAACCCAGCG CGCCGCCCGC TCCTCACGTG TCCCTCCCGG CCCCGGGGCC        61 ACCTCACGTT CTGCTTCCGT CTGACCCCTC CGACTTCCGA TTTCTTTTGA TGGAATCTAT       121 GCAAATATGA GGATGGTTCA TATACTTACA TCAGTTGTTT GTGATTTGGT ACTTGATGCC       181 GCACATGAGA AAAGTACAGA ATCCAGTTCG GGGCCGAAAC GTGAAGAAAT AATGGAGAGT       241 ATTTTGTTCA AATGTTCAGA CTTTGTTGTG GTACAGTTTA AAGATATGGA CTCCAGTTAT       301 GCAAAAAGAG ATGCTTTTAC TGACTCTGCT ATCAGTGCTA AAGTGAATGG CGAACACAAA       361 GAGAAGGACC TGGAGCCCTG GGATGCAGGT GAACTCACAG CCAATGAGGA ACTTGAGGCT       421 TTGGAAAATG ACGTATCTAA TGGATGGGAT CCCAATGATA TGTTTCGATA TAATGAAGAA       481 AATTATGGTG TAGTGTCTAC GTATGATAGC AGTTTATCTT CGTATACAGT GCCCTTAGAA       541 AGAGATAACT CAGAAGAATT TTTAAAACGG GAAGCAAGGG CAAACCAGTT AGCAGAAGAA       601 ATTGAGTCAA GTGCCCAGTA CAAAGCTCGA GTGGCCCTGG AAAATGATGA TAGGAGTGAG       661 GAAGAAAAAT ACACAGCAGT TCAGAGAAAT TCCAGTGAAC GTGAGGGGCA CAGCATAAAC       721 ACTAGGGAAA ATAAATATAT TCCTCCTGGA CAAAGAAATA GAGAAGTCAT ATCCTGGGGA       781 AGTGGGAGAC AGAATTCACC GCGTATGGGC CAGCCTGGAT CGGGCTCCAT GCCATCAAGA       841 TCCACTTCTC ACACTTCAGA TTTCAACCCG AATTCTGGTT CAGACCAAAG AGTAGTTAAT       901 GGAGGTGTTC CCTGGCCATC GCCTTGCCCA TCTCCTTCCT CTCGCCCACC TTCTCGCTAC       961 CAGTCAGGTC CCAACTCTCT TCCACCTCGG GCAGCCACCC CTACACGGCC GCCCTCCAGG      1021 CCCCCCTCGC GGCCATCCAG ACCCCCGTCT CACCCCTCTG CTCATGGTTC TCCAGCTCCT      1081 GTCTCTACTA TGCCTAAACG CATGTCTTCA GAAGGGCCTC CAAGGATGTC CCCAAAGGCC      1141 CAGCGACATC CTCGAAATCA CAGAGTTTCT GCTGGGAGGG GTTCCATATC CAGTGGCCTA      1201 GAATTTGTAT CCCACAACCC ACCCAGTGAA GCAGCTACTC CTCCAGTAGC AAGGACCAGT      1261 CCCTCGGGGG GAACGTGGTC ATCAGTGGTC AGTGGGGTTC CAAGATTATC CCCTAAAACT      1321 CATAGACCCA GGTCTCCCAG ACAGAACAGT ATTGGAAATA CCCCCAGTGG GCCAGTTCTT      1381 GCTTCTCCCC AAGCTGGTAT TATTCCAACT GAAGCTGTTG CCATGCCTAT TCCAGCTGCA      1441 TCTCCTACGC CTGCTAGTCC TGCATCGAAC AGAGCTGTTA CCCCTTCTAG TGAGGCTAAA      1501 GATTCCAGGC TTCAAGATCA GAGGCAGAAC TCTCCTGCAG GGAATAAAGA AAATATTAAA      1561 CCCAATGAAA CATCACCTAG CTTCTCAAAA GCTGAAAACA AAGGTATATC ACCAGTTGTT      1621 TCTGAACATA GAAAACAGAT TGATGATTTA AAGAAATTTA AGAATGATTT TAGGTTACAG      1681 CCAAGTTCTA CTTCTGAATC TATGGATCAA CTACTAAACA AAAATAGAGA GGGAGAAAAA      1741 TCAAGAGATT TGATCAAAGA CAAAATTGAA CCAAGTGCTA AGGATTCTTT CATTGAAAAT      1801 AGCAGCAGCA ACTGTACCAG TGGCAGCAGC AAGCCGAATA GCCCCAGCAT TTCCCCTTCA      1861 ATACTTAGTA ACACGGAGCA CAAGAGGGGA CCTGAGGTCA CTTCCCAAGG GGTTCAGACT      1921 TCCAGCCCAG CATGTAAACA AGAGAAAGAC GATAAGGAAG AGAAGAAAGA CGCAGCTGAG      1981 CAAGTTAGGA AATCAACATT GAATCCCAAT GCAAAGGAGT TCAACCCACG TTCCTTCTCT      2041 CAGCCAAAGC CTTCTACTAC CCCAACTTCA CCTCGGCCTC AAGCACAACC TAGCCCATCT      2101 ATGGTGGGTC ATCAACAGCC AACTCCAGTT TATACTCAGC CTGTTTGTTT TGCACCAAAT      2161 ATGATGTATC CAGTCCCAGT GAGCCCAGGC GTGCAACCTT TATACCCAAT ACCTATGACG      2221 CCCATGCCAG TGAATCAAGC CAAGACATAT AGAGCAGTAC CAAATATGCC CCAACAGCGG      2281 CAAGACCAGC ATCATCAGAG TGCCATGATG CACCCAGCGT CAGCAGCGGG CCCACCGATT      2341 GCAGCCACCC CACCAGCTTA CTCCACGCAA TATGTTGCCT ACAGTCCTCA GCAGTTCCCA      2401 AATCAGCCCC TTGTTCAGCA TGTGCCACAT TATCAGTCTC AGCATCCTCA TGTCTATAGT      2461 CCTGTAATAC AGGGTAATGC TAGAATGATG GCACCACCAA CACACGCCCA GCCTGGTTTA      2521 GTATCTTCTT CAGCAACTCA GTACGGGGCT CATGAGCAGA CGCATGCGAT GTATGTTTCC      2581 ACGGGCTCCC TTGCTCAGCA GTATGCGCAC CCTAACGCTA CCCTGCACCC ACATACTCCA      2641 CACCCTCAGC CTTCAGCTAC CCCCACTGGA CAGCAGCAAA GCCAACATGG TGGAAGTCAT      2701 CCTGCACCCA GTCCTGTTCA GCACCATCAG CACCAGGCCG CCCAGGCTCT CCATCTGGCC      2761 AGTCCACAGC AGCAGTCAGC CATTTACCAC GCGGGGCTTG CGCCAACTCC ACCCTCCATG      2821 ACACCTGCCT CCAACACGCA GTCGCCACAG AATAGTTTCC CAGCAGCACA ACAGACTGTC      2881 TTTACGATCC ATCCTTCTCA CGTTCAGCCG GCGTATACCA ACCCACCCCA CATGGCCCAC      2941 GTACCTCAGG CTCATGTACA GTCAGGAATG GTTCCTTCTC ATCCAACTGC CCATGCGCCA      3001 ATGATGCTAA TGACGACACA GCCACCCGGC GGTCCCCAGG CCGCCCTCGC TCAAAGTGCA      3061 CTACAGCCCA TTCCAGTCTC GACAACAGCG CATTTCCCCT ATATGACGCA CCCTTCAGTA      3121 CAAGCCCACC ACCAACAGCA GTTGTAAGGC TGCCCTGGAG GAACCGAAAG GCCAAATTCC      3181 CTCCTCCCTT CTACTGCTTC TACCAACTGG AAGCACAGAA AACTAGAATT TCATTTATTT      3241 TGTTTTTAAA ATATATATGT TGATTTCTTG TAACATCCAA TAGGAATGCT AACAGTTCAC      3301 TTGCAGTGGA AGATACTTGG ACCGAGTAGA GGCATTTAGG AACTTGGGGG CTATTCCATA      3361 ATTCCATATG CTGTTTCAGA GTCCCGCAGG TACCCCAGCT CTGCTTGCCG AAACTGGAAG      3421 TTATTTATTT TTTAATAACC CTTGAAAGTC ATGAACACAT CAGCTAGCAA AAGAAGTAAC      3481 AAGAGTGATT CTTGCTGCTA TTACTGCTAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAT CAAGACTTGG      3541 AACGCCCTTT TACTAAACTT GACAAAGTTT CAGTAAATTC TTACCGTCAA ACTGACGGAT      3601 TATTATTTAT AAATCAAGTT TGATGAGGTG ATCACTGTCT ACAGTGGTTC AACTTTTAAG      3661 TTAAGGGAAA AACTTTTACT TTGTAGATAA TATAAAATAA AAACTTAAAA AAAATTTAAA      3721 AAATAAAAAA AGTTTTAAAA ACTGAAAAAA AAAAA
66         1 MRMVHILTSV VCDLVLDAAH EKSTESSSGP KREEIMESIL FKCSDFVVVQ FKDMDSSYAK        61 RDAFTDSAIS AKVNGEHKEK DLEPWDAGEL TANEELEALE NDVSNGWDPN DMFRYNEENY       121 GVVSTYDSSL SSYTVPLERD NSEEFLKREA RANQLAEEIE SSAQYKARVA LENDDRSEEE       181 KYTAVQRNSS EREGHSINTR ENKYIPPGQR NREVISWGSG RQNSPRMGQP GSGSMPSRST       241 SHTSDFNPNS GSDQRVVNGG VPWPSPCPSP SSRPPSRYQS GPNSLPPRAA TPTRPPSRPP       301 SRPSRPPSHP SAHGSPAPVS TMPKRMSSEG PPRMSPKAQR HPRNHRVSAG RGSISSGLEF       361 VSHNPPSEAA TPPVARTSPS GGTWSSVVSG VPRLSPKTHR PRSPRQNSIG NTPSGPVLAS       421 PQAGIIPTEA VAMPIPAASP TPASPASNRA VTPSSEAKDS RLQDQRQNSP AGNKENIKPN       481 ETSPSFSKAE NKGISPVVSE HRKQIDDLKK FKNDFRLQPS STSESMDQLL NKNREGEKSR       541 DLIKDKIEPS AKDSFIENSS SNCTSGSSKP NSPSISPSIL SNTEHKRGPE VTSQGVQTSS       601 PACKQEKDDK EEKKDAAEQV RKSTLNPNAK EFNPRSFSQP KPSTTPTSPR PQAQPSPSMV       661 GHQQPTPVYT QPVCFAPNMM YPVPVSPGVQ PLYPIPMTPM PVNQAKTYRA VPNMPQQRQD       721 QHHQSAMMHP ASAAGPPIAA TPPAYSTQYV AYSPQQFPNQ PLVQHVPHYQ SQHPHVYSPV       781 IQGNARMMAP PTHAQPGLVS SSATQYGAHE QTHAMYVSTG SLAQQYAHPN ATLHPHTPHP       841 QPSATPTGQQ QSQHGGSHPA PSPVQHHQHQ AAQALHLASP QQQSAIYHAG LAPTPPSMTP       901 ASNTQSPQNS FPAAQQTVFT IHPSHVQPAY TNPPHMAHVP QAHVQSGMVP SHPTAHAPMM       961 LMTTQPPGGP QAALAQSALQ PIPVSTTAHF PYMTHPSVQA HHQQQL
67         1 AGAGCTCGCC TCCCTCCGCC TCAGACTGTT TTGGTAGCAA CGGCAACGGC GGCGGCGCGT        61 TTCGGCCCGG CTCCCGGCGG CTCCTTGGTC TCGGCGGGCC TCCCCGCCCC TTCGTCGTCC       121 TCCTTCTCCC CCTCGCCAGC CCGGGCGCCC CTCCGGCCGC GCCAACCCGC GCCTCCCCGC       181 TCGGCGCCCG CGCGTCCCCG CCGCGTTCCG GCGTCTCCTT GGCGCGCCCG GCTCCCGGCT       241 GTCCCCGCCC GGCGTGCGAG CCGGTGTATG GGCCCCTCAC CATGTCGCTG AAGCCCCAGC       301 AGCAGCAGCA GCAGCAGCAG CAGCAGCAGC AGCAGCAACA GCAGCAGCAG CAGCAGCAGC       361 AGCAGCCGCC GCCCGCGGCT GCCAATGTCC GCAAGCCCGG CGGCAGCGGC CTTCTAGCGT       421 CGCCCGCCGC CGCGCCTTCG CCGTCCTCGT CCTCGGTCTC CTCGTCCTCG GCCACGGCTC       481 CCTCCTCGGT GGTCGCGGCG ACCTCCGGCG GCGGGAGGCC CGGCCTGGGC AGAGGTCGAA       541 ACAGTAACAA AGGACTGCCT CAGTCTACGA TTTCTTTTGA TGGAATCTAT GCAAATATGA       601 GGATGGTTCA TATACTTACA TCAGTTGTTG GCTCCAAATG TGAAGTACAA GTGAAAAATG       661 GAGGTATATA TGAAGGAGTT TTTAAAACTT ACAGTCCGAA GTGTGATTTG GTACTTGATG       721 CCGCACATGA GAAAAGTACA GAATCCAGTT CGGGGCCGAA ACGTGAAGAA ATAATGGAGA       781 GTATTTTGTT CAAATGTTCA GACTTTGTTG TGGTACAGTT TAAAGATATG GACTCCAGTT       841 ATGCAAAAAG AGATGCTTTT ACTGACTCTG CTATCAGTGC TAAAGTGAAT GGCGAACACA       901 AAGAGAAGGA CCTGGAGCCC TGGGATGCAG GTGAACTCAC AGCCAATGAG GAACTTGAGG       961 CTTTGGAAAA TGACGTATCT AATGGATGGG ATCCCAATGA TATGTTTCGA TATAATGAAG      1021 AAAATTATGG TGTAGTGTCT ACGTATGATA GCAGTTTATC TTCGTATACA GTGCCCTTAG      1081 AAAGAGATAA CTCAGAAGAA TTTTTAAAAC GGGAAGCAAG GGCAAACCAG TTAGCAGAAG      1141 AAATTGAGTC AAGTGCCCAG TACAAAGCTC GAGTGGCCCT GGAAAATGAT GATAGGAGTG      1201 AGGAAGAAAA ATACACAGCA GTTCAGAGAA ATTCCAGTGA ACGTGAGGGG CACAGCATAA      1261 ACACTAGGGA AAATAAATAT ATTCCTCCTG GACAAAGAAA TAGAGAAGTC ATATCCTGGG      1321 GAAGTGGGAG ACAGAATTCA CCGCGTATGG GCCAGCCTGG ATCGGGCTCC ATGCCATCAA      1381 GATCCACTTC TCACACTTCA GATTTCAACC CGAATTCTGG TTCAGACCAA AGAGTAGTTA      1441 ATGGAGGTGT TCCCTGGCCA TCGCCTTGCC CATCTCCTTC CTCTCGCCCA CCTTCTCGCT      1501 ACCAGTCAGG TCCCAACTCT CTTCCACCTC GGGCAGCCAC CCCTACACGG CCGCCCTCCA      1561 GGCCCCCCTC GCGGCCATCC AGACCCCCGT CTCACCCCTC TGCTCATGGT TCTCCAGCTC      1621 CTGTCTCTAC TATGCCTAAA CGCATGTCTT CAGAAGGGCC TCCAAGGATG TCCCCAAAGG      1681 CCCAGCGACA TCCTCGAAAT CACAGAGTTT CTGCTGGGAG GGGTTCCATA TCCAGTGGCC      1741 TAGAATTTGT ATCCCACAAC CCACCCAGTG AAGCAGCTAC TCCTCCAGTA GCAAGGACCA      1801 GTCCCTCGGG GGGAACGTGG TCATCAGTGG TCAGTGGGGT TCCAAGATTA TCCCCTAAAA      1861 CTCATAGACC CAGGTCTCCC AGACAGAACA GTATTGGAAA TACCCCCAGT GGGCCAGTTC      1921 TTGCTTCTCC CCAAGCTGGT ATTATTCCAA CTGAAGCTGT TGCCATGCCT ATTCCAGCTG      1981 CATCTCCTAC GCCTGCTAGT CCTGCATCGA ACAGAGCTGT TACCCCTTCT AGTGAGGCTA      2041 AAGATTCCAG GCTTCAAGAT CAGAGGCAGA ACTCTCCTGC AGGGAATAAA GAAAATATTA      2101 AACCCAATGA AACATCACCT AGCTTCTCAA AAGCTGAAAA CAAAGGTATA TCACCAGTTG      2161 TTTCTGAACA TAGAAAACAG ATTGATGATT TAAAGAAATT TAAGAATGAT TTTAGGTTAC      2221 AGCCAAGTTC TACTTCTGAA TCTATGGATC AACTACTAAA CAAAAATAGA GAGGGAGAAA      2281 AATCAAGAGA TTTGATCAAA GACAAAATTG AACCAAGTGC TAAGGATTCT TTCATTGAAA      2341 ATAGCAGCAG CAACTGTACC AGTGGCAGCA GCAAGCCGAA TAGCCCCAGC ATTTCCCCTT      2401 CAATACTTAG TAACACGGAG CACAAGAGGG GACCTGAGGT CACTTCCCAA GGGGTTCAGA      2461 CTTCCAGCCC AGCATGTAAA CAAGAGAAAG ACGATAAGGA AGAGAAGAAA GACGCAGCTG      2521 AGCAAGTTAG GAAATCAACA TTGAATCCCA ATGCAAAGGA GTTCAACCCA CGTTCCTTCT      2581 CTCAGCCAAA GCCTTCTACT ACCCCAACTT CACCTCGGCC TCAAGCACAA CCTAGCCCAT      2641 CTATGGTGGG TCATCAACAG CCAACTCCAG TTTATACTCA GCCTGTTTGT TTTGCACCAA      2701 ATATGATGTA TCCAGTCCCA GTGAGCCCAG GCGTGCAACC TTTATACCCA ATACCTATGA      2761 CGCCCATGCC AGTGAATCAA GCCAAGACAT ATAGAGCAGG TAAAGTACCA AATATGCCCC      2821 AACAGCGGCA AGACCAGCAT CATCAGAGTG CCATGATGCA CCCAGCGTCA GCAGCGGGCC      2881 CACCGATTGC AGCCACCCCA CCAGCTTACT CCACGCAATA TGTTGCCTAC AGTCCTCAGC      2941 AGTTCCCAAA TCAGCCCCTT GTTCAGCATG TGCCACATTA TCAGTCTCAG CATCCTCATG      3001 TCTATAGTCC TGTAATACAG GGTAATGCTA GAATGATGGC ACCACCAACA CACGCCCAGC      3061 CTGGTTTAGT ATCTTCTTCA GCAACTCAGT ACGGGGCTCA TGAGCAGACG CATGCGATGT      3121 ATGCATGTCC CAAATTACCA TACAACAAGG AGACAAGCCC TTCTTTCTAC TTTGCCATTT      3181 CCACGGGCTC CCTTGCTCAG CAGTATGCGC ACCCTAACGC TACCCTGCAC CCACATACTC      3241 CACACCCTCA GCCTTCAGCT ACCCCCACTG GACAGCAGCA AAGCCAACAT GGTGGAAGTC      3301 ATCCTGCACC CAGTCCTGTT CAGCACCATC AGCACCAGGC CGCCCAGGCT CTCCATCTGG      3361 CCAGTCCACA GCAGCAGTCA GCCATTTACC ACGCGGGGCT TGCGCCAACT CCACCCTCCA      3421 TGACACCTGC CTCCAACACG CAGTCGCCAC AGAATAGTTT CCCAGCAGCA CAACAGACTG      3481 TCTTTACGAT CCATCCTTCT CACGTTCAGC CGGCGTATAC CAACCCACCC CACATGGCCC      3541 ACGTACCTCA GGCTCATGTA CAGTCAGGAA TGGTTCCTTC TCATCCAACT GCCCATGCGC      3601 CAATGATGCT AATGACGACA CAGCCACCCG GCGGTCCCCA GGCCGCCCTC GCTCAAAGTG      3661 CACTACAGCC CATTCCAGTC TCGACAACAG CGCATTTCCC CTATATGACG CACCCTTCAG      3721 TACAAGCCCA CCACCAACAG CAGTTGTAAG GCTGCCCTGG AGGAACCGAA AGGCCAAATT      3781 CCCTCCTCCC TTCTACTGCT TCTACCAACT GGAAGCACAG AAAACTAGAA TTTCATTTAT      3841 TTTGTTTTTA AAATATATAT GTTGATTTCT TGTAACATCC AATAGGAATG CTAACAGTTC      3901 ACTTGCAGTG GAAGATACTT GGACCGAGTA GAGGCATTTA GGAACTTGGG GGCTATTCCA      3961 TAATTCCATA TGCTGTTTCA GAGTCCCGCA GGTACCCCAG CTCTGCTTGC CGAAACTGGA      4021 AGTTATTTAT TTTTTAATAA CCCTTGAAAG TCATGAACAC ATCAGCTAGC AAAAGAAGTA      4081 ACAAGAGTGA TTCTTGCTGC TATTACTGCT AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA ATCAAGACTT      4141 GGAACGCCCT TTTACTAAAC TTGACAAAGT TTCAGTAAAT TCTTACCGTC AAACTGACGG      4201 ATTATTATTT ATAAATCAAG TTTGATGAGG TGATCACTGT CTACAGTGGT TCAACTTTTA      4261 AGTTAAGGGA AAAACTTTTA CTTTGTAGAT AATATAAAAT AAAAACTTAA AAAAAATTTA      4321 AAAAATAAAA AAAGTTTTAA AAACTGA
68         1 MSLKPQQQQQ QQQQQQQQQQ QQQQQQQQPP PAAANVRKPG GSGLLASPAA APSPSSSSVS        61 SSSATAPSSV VAATSGGGRP GLGRGRNSNK GLPQSTISFD GIYANMRMVH ILTSVVGSKC       121 EVQVKNGGIY EGVFKTYSPK CDLVLDAAHE KSTESSSGPK REEIMESILF KCSDFVVVQF       181 KDMDSSYAKR DAFTDSAISA KVNGEHKEKD LEPWDAGELT ANEELEALEN DVSNGWDPND       241 MFRYNEENYG VVSTYDSSLS SYTVPLERDN SEEFLKREAR ANQLAEEIES SAQYKARVAL       301 ENDDRSEEEK YTAVQRNSSE REGHSINTRE NKYIPPGQRN REVISWGSGR QNSPRMGQPG       361 SGSMPSRSTS HTSDFNPNSG SDQRVVNGGV PWPSPCPSPS SRPPSRYQSG PNSLPPRAAT       421 PTRPPSRPPS RPSRPPSHPS AHGSPAPVST MPKRMSSEGP PRMSPKAQRH PRNHRVSAGR       481 GSISSGLEFV SHNPPSEAAT PPVARTSPSG GTWSSVVSGV PRLSPKTHRP RSPRQNSIGN       541 TPSGPVLASP QAGIIPTEAV AMPIPAASPT PASPASNRAV TPSSEAKDSR LQDQRQNSPA       601 GNKENIKPNE TSPSFSKAEN KGISPVVSEH RKQIDDLKKF KNDFRLQPSS TSESMDQLLN       661 KNREGEKSRD LIKDKIEPSA KDSFIENSSS NCTSGSSKPN SPSISPSILS NTEHKRGPEV       721 TSQGVQTSSP ACKQEKDDKE EKKDAAEQVR KSTLNPNAKE FNPRSFSQPK PSTTPTSPRP       781 QAQPSPSMVG HQQPTPVYTQ PVCFAPNMMY PVPVSPGVQP LYPIPMTPMP VNQAKTYRAG       841 KVPNMPQQRQ DQHHQSAMMH PASAAGPPIA ATPPAYSTQY VAYSPQQFPN QPLVQHVPHY       901 QSQHPHVYSP VIQGNARMMA PPTHAQPGLV SSSATQYGAH EQTHAMYACP KLPYNKETSP       961 SFYFAISTGS LAQQYAHPNA TLHPHTPHPQ PSATPTGQQQ SQHGGSHPAP SPVQHHQHQA      1021 AQALHLASPQ QQSAIYHAGL APTPPSMTPA SNTQSPQNSF PAAQQTVFTI HPSHVQPAYT      1081 NPPHMAHVPQ AHVQSGMVPS HPTAHAPMML MTTQPPGGPQ AALAQSALQP IPVSTTAHFP      1141 YMTHPSVQAH HQQQL
69 ATGTCGCTGAAGCCCCAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCAACAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCCGCCGCCCGCGGCTGCCAATGTCCGCAAGCCCGGCGGCAGCGGCCTTCTAGCGTCGCCCGCCGCCGCGCCTTCGCCGTCCTCGTCCTCGGTCTCCTCGTCCTCGGCCACGGCTCCCTCCTCGGTGGTCGCGGCGACCTCCGGCGGCGGGAGGCCCGGCCTGGGCAGAGGTCGAAACAGTAACAAAGGACTGCCTCAGTCTACGATTTCTTTTGATGGAATCTATGCAAATATGAGGATGGTTCATATACTTACATCAGTTGTTGGCTCCAAATGTGAAGTACAAGTGAAAAATGGAGGTATATATGAAGGAGTTTTTAAAACTTACAGTCCGAAGTGTGATTTGGTACTTGATGCCGCACATGAGAAAAGTACAGAATCCAGTTCGGGGCCGAAACGTGAAGAAATAATGGAGAGTATTTTGTTCAAATGTTCAGACTTTGTTGTGGTACAGTTTAAAGATATGGACTCCAGTTATGCAAAAAGAGATGCTTTTACTGACTCTGCTATCAGTGCTAAAGTGAATGGCGAACACAAAGAGAAGGACCTGGAGCCCTGGGATGCAGGTGAACTCACAGCCAATGAGGAACTTGAGGCTTTGGAAAATGACGTATCTAATGGATGGGATCCCAATGATATGTTTCGATATAATGAAGAAAATTATGGTGTAGTGTCTACGTATGATAGCAGTTTATCTTCGTATACAGTGCCCTTAGAAAGAGATAACTCAGAAGAATTTTTAAAACGGGAAGCAAGGGCAAACCAGTTAGCAGAAGAAATTGAGTCAAGTGCCCAGTACAAAGCTCGAGTGGCCCTGGAAAATGATGATAGGAGTGAGGAAGAAAAATACACAGCAGTTCAGAGAAATTCCAGTGAACGTGAGGGGCACAGCATAAACACTAGGGAAAATAAATATATTCCTCCTGGACAAAGAAATAGAGAAGTCATATCCTGGGGAAGTGGGAGACAGAATTCACCGCGTATGGGCCAGCCTGGATCGGGCTCCATGCCATCAAGATCCACTTCTCACACTTCAGATTTCAACCCGAATTCTGGTTCAGACCAAAGAGTAGTTAATGGAGGTGTTCCCTGGCCATCGCCTTGCCCATCTCCTTCCTCTCGCCCACCTTCTCGCTACCAGTCAGGTCCCAACTCTCTTCCACCTCGGGCAGCCACCCCTACACGGCCGCCCTCCAGGCCCCCCTCGCGGCCATCCAGACCCCCGTCTCACCCCTCTGCTCATGGTTCTCCAGCTCCTGTCTCTACTATGCCTAAACGCATGTCTTCAGAAGGGCCTCCAAGGATGTCCCCAAAGGCCCAGCGACATCCTCGAAATCACAGAGTTTCTGCTGGGAGGGGTTCCATATCCAGTGGCCTAGAATTTGTATCCCACAACCCACCCAGTGAAGCAGCTACTCCTCCAGTAGCAAGGACCAGTCCCTCGGGGGGAACGTGGTCATCAGTGGTCAGTGGGGTTCCAAGATTATCCCCTAAAACTCATAGACCCAGGTCTCCCAGACAGAACAGTATTGGAAATACCCCCAGTGGGCCAGTTCTTGCTTCTCCCCAAGCTGGTATTATTCCAACTGAAGCTGTTGCCATGCCTATTCCAGCTGCATCTCCTACGCCTGCTAGTCCTGCATCGAACAGAGCTGTTACCCCTTCTAGTGAGGCTAAAGATTCCAGGCTTCAAGATCAGAGGCAGAACTCTCCTGCAGGGAATAAAGAAAATATTAAACCCAATGAAACATCACCTAGCTTCTCAAAAGCTGAAAACAAAGGTATATCACCAGTTGTTTCTGAACATAGAAAACAGATTGATGATTTAAAGAAATTTAAGAATGATTTTAGGTTACAGCCAAGTTCTACTTCTGAATCTATGGATCAACTACTAAACAAAAATAGAGAGGGAGAAAAATCAAGAGATTTGATCAAAGACAAAATTGAACCAAGTGCTAAGGATTCTTTCATTGAAAATAGCAGCAGCAACTGTACCAGTGGCAGCAGCAAGCCGAATAGCCCCAGCATTTCCCCTTCAATACTTAGTAACACGGAGCACAAGAGGGGACCTGAGGTCACTTCCCAAGGGGTTCAGACTTCCAGCCCAGCATGTAAACAAGAGAAAGACGATAAGGAAGAGAAGAAAGACGCAGCTGAGCAAGTTAGGAAATCAACATTGAATCCCAATGCAAAGGAGTTCAACCCACGTTCCTTCTCTCAGCCAAAGCCTTCTACTACCCCAACTTCACCTCGGCCTCAAGCACAACCTAGCCCATCTATGGTGGGTCATCAACAGCCAACTCCAGTTTATACTCAGCCTGTTTGTTTTGCACCAAATATGATGTATCCAGTCCCAGTGAGCCCAGGCGTGCAACCTTTATACCCAATACCTATGACGCCCATGCCAGTGAATCAAGCCAAGACATATAGAGCAGTACCAAATATGCCCCAACAGCGGCAAGACCAGCATCATCAGAGTGCCATGATGCACCCAGCGTCAGCAGCGGGCCCACCGATTGCAGCCACCCCACCAGCTTACTCCACGCAATATGTTGCCTACAGTCCTCAGCAGTTCCCAAATCAGCCCCTTGTTCAGCATGTGCCACATTATCAGTCTCAGCATCCTCATGTCTATAGTCCTGTAATACAGGGTAATGCTAGAATGATGGCACCACCAACACACGCCCAGCCTGGTTTAGTATCTTCTTCAGCAACTCAGTACGGGGCTCATGAGCAGACGCATGCGATGTATGCATGTCCCAAATTACCATACAACAAGGAGACAAGCCCTTCTTTCTACTTTGCCATTTCCACGGGCTCCCTTGCTCAGCAGTATGCGCACCCTAACGCTACCCTGCACCCACATACTCCACACCCTCAGCCTTCAGCTACCCCCACTGGACAGCAGCAAAGCCAACATGGTGGAAGTCATCCTGCACCCAGTCCTGTTCAGCACCATCAGCACCAGGCCGCCCAGGCTCTCCATCTGGCCAGTCCACAGCAGCAGTCAGCCATTTACCACGCGGGGCTTGCGCCAACTCCACCCTCCATGACACCTGCCTCCAACACGCAGTCGCCACAGAATAGTTTCCCAGCAGCACAACAGACTGTCTTTACGATCCATCCTTCTCACGTTCAGCCGGCGTATACCAACCCACCCCACATGGCCCACGTACCTCAGGCTCATGTACAGTCAGGAATGGTTCCTTCTCATCCAACTGCCCATGCGCCAATGATGCTAATGACGACACAGCCACCCGGCGGTCCCCAGGCCGCCCTCGCTCAAAGTGCACTACAGCCCATTCCAGTCTCGACAACAGCGCATTTCCCCTATATGACGCACCCTTCAGTACAAGCCCACCACCAACAGCAGTTGTAA
70 MSLKPQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQPPPAAANVRKPGGSGLLASPAAAPSPSSSSVSSSSATAPSSVVAATSGGGRPGLGRGRNSNKGLPQSTISFDGIYANMRMVHILTSVVGSKCEVQVKNGGIYEGVFKTYSPKCDLVLDAAHEKSTESSSGPKREEIMESILFKCSDFVVVQFKDMDSSYAKRDAFTDSAISAKVNGEHKEKDLEPWDAGELTANEELEALENDVSNGWDPNDMFRYNEENYGVVSTYDSSLSSYTVPLERDNSEEFLKREARANQLAEEIESSAQYKARVALENDDRSEEEKYTAVQRNSSEREGHSINTRENKYIPPGQRNREVISWGSGRQNSPRMGQPGSGSMPSRSTSHTSDFNPNSGSDQRVVNGGVPWPSPCPSPSSRPPSRYQSGPNSLPPRAATPTRPPSRPPSRPSRPPSHPSAHGSPAPVSTMPKRMSSEGPPRMSPKAQRHPRNHRVSAGRGSISSGLEFVSHNPPSEAATPPVARTSPSGGTWSSVVSGVPRLSPKTHRPRSPRQNSIGNTPSGPVLASPQAGIIPTEAVAMPIPAASPTPASPASNRAVTPSSEAKDSRLQDQRQNSPAGNKENIKPNETSPSFSKAENKGISPVVSEHRKQIDDLKKFKNDFRLQPSSTSESMDQLLNKNREGEKSRDLIKDKIEPSAKDSFIENSSSNCTSGSSKPNSPSISPSILSNTEHKRGPEVTSQGVQTSSPACKQEKDDKEEKKDAAEQVRKSTLNPNAKEFNPRSFSQPKPSTTPTSPRPQAQPSPSMVGHQQPTPVYTQPVCFAPNMMYPVPVSPGVQPLYPIPMTPMPVNQAKTYRAVPNMPQQRQDQHHQSAMMHPASAAGPPIAATPPAYSTQYVAYSPQQFPNQPLVQHVPHYQSQHPHVYSPVIQGNARMMAPPTHAQPGLVSSSATQYGAHEQTHAMYACPKLPYNKETSPSFYFAISTGSLAQQYAHPNATLHPHTPHPQPSATPTGQQQSQHGGSHPAPSPVQHHQHQAAQALHLASPQQQSAIYHAGLAPTPPSMTPASNTQSPQNSFPAAQQTVFTIHPSHVQPAYTNPPHMAHVPQAHVQSGMVPSHPTAHAPMMLMTTQPPGGPQAALAQSALQPIPVSTTAHFPYMTHPSVQAHHQQQL
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Claims (33)

  1. 一種ATXN2 RNAi藥劑，其包含有義股及反義股， 其中該有義股及該反義股形成雙螺旋體， 其中該有義股及該反義股包含選自由以下組成之群的一對核酸序列： (a)     該有義股包含與SEQ ID NO: 1具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 2具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (b)    該有義股包含與SEQ ID NO: 3具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 4具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (c)     該有義股包含與SEQ ID NO: 5具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 6具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (d)    該有義股包含與SEQ ID NO: 7具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 8具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (e)     該有義股包含與SEQ ID NO: 9具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 10具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (f)     該有義股包含與SEQ ID NO: 11具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 12具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (g)    該有義股包含與SEQ ID NO: 13具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 14具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (h)    該有義股包含與SEQ ID NO: 15具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 16具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (i)     該有義股包含與SEQ ID NO: 17具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 18具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (j)     該有義股包含與SEQ ID NO: 19具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 20具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (k)    該有義股包含與SEQ ID NO: 21具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 22具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (l)     該有義股包含與SEQ ID NO: 23具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 24具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (m)該有義股包含與SEQ ID NO: 25具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 26具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； (n)    該有義股包含與SEQ ID NO: 27具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 28具有至少95%序列一致性之第二核酸序列；及 (o)    該有義股包含與SEQ ID NO: 29具有至少95%序列一致性之第一核酸序列，且該反義股包含與SEQ ID NO: 30具有至少95%序列一致性之第二核酸序列； 其中視情況地，該有義股及該反義股之一或多個核苷酸獨立地為經修飾之核苷酸，且 其中視情況地，該有義股及該反義股之一或多個核苷酸間鍵聯為經修飾之核苷酸間鍵聯。
  2. 如請求項1之ATXN2 RNAi藥劑，其中該有義股及該反義股包含選自由以下組成之群的一對核酸序列： (a)     該有義股包含SEQ ID NO: 1之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 2之第二核酸序列； (b)    該有義股包含SEQ ID NO: 3之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 4之第二核酸序列； (c)     該有義股包含SEQ ID NO: 5之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 6之第二核酸序列； (d)    該有義股包含SEQ ID NO: 7之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 8之第二核酸序列； (e)     該有義股包含SEQ ID NO: 9之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 10之第二核酸序列； (f)     該有義股包含SEQ ID NO: 11之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 12之第二核酸序列； (g)    該有義股包含SEQ ID NO: 13之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 14之第二核酸序列； (h)    該有義股包含SEQ ID NO: 15之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 16之第二核酸序列； (i)     該有義股包含SEQ ID NO: 17之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 18之第二核酸序列； (j)     該有義股包含SEQ ID NO: 19之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 20之第二核酸序列； (k)    該有義股包含SEQ ID NO: 21之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 22之第二核酸序列； (l)     該有義股包含SEQ ID NO: 23之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 24之第二核酸序列； (m)    該有義股包含SEQ ID NO: 25之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 26之第二核酸序列； (n)    該有義股包含SEQ ID NO: 27之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 28之第二核酸序列；及 (o)    該有義股包含SEQ ID NO: 29之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 30之第二核酸序列。
  3. 如請求項1之ATXN2 RNAi藥劑，其中該有義股之一或多個核苷酸為經修飾之核苷酸。
  4. 如請求項1之ATXN2 RNAi藥劑，其中該有義股之各核苷酸為經修飾之核苷酸。
  5. 如請求項1之ATXN2 RNAi藥劑，其中該反義股之一或多個核苷酸為經修飾之核苷酸。
  6. 如請求項1之ATXN2 RNAi藥劑，其中該反義股之各核苷酸為經修飾之核苷酸。
  7. 如請求項1之ATXN2 RNAi藥劑，其中該經修飾之核苷酸為經2'-氟修飾之核苷酸、經2'-O-甲基修飾之核苷酸或經2'-O-烷基修飾之核苷酸。
  8. 如請求項7之ATXN2 RNAi藥劑，其中該有義股在自該有義股之5'端的位置7、9、10及11處具有四個經2'-氟修飾之核苷酸。
  9. 如請求項8之ATXN2 RNAi藥劑，其中該有義股之除位置7、9、10及11以外之位置處的核苷酸為經2'-O-甲基修飾之核苷酸。
  10. 如請求項7之ATXN2 RNAi藥劑，其中該反義股在自該反義股之5'端的位置2、6、14、16處具有四個經2'-氟修飾之核苷酸。
  11. 如請求項10之ATXN2 RNAi藥劑，其中該反義股之除位置2、6、14及16以外之位置處的核苷酸為經2'-O-甲基修飾之核苷酸。
  12. 如請求項1之ATXN2 RNAi藥劑，其中該有義股及該反義股具有一或多個經修飾之核苷酸間鍵聯。
  13. 如請求項12之ATXN2 RNAi藥劑，其中該經修飾之核苷酸間鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯。
  14. 如請求項13之ATXN2 RNAi藥劑，其中該有義股具有四個或五個硫代磷酸酯鍵聯。
  15. 如請求項13之ATXN2 RNAi藥劑，其中該反義股具有四個或五個硫代磷酸酯鍵聯。
  16. 如請求項1之ATXN2 RNAi藥劑，其中來自該反義股之5'端的第一核苷酸為具有磷酸酯類似物之經修飾之核苷酸。
  17. 如請求項16之ATXN2 RNAi藥劑，其中該磷酸酯類似物為5'-乙烯基膦酸酯。
  18. 如請求項1之ATXN2 RNAi藥劑，其中該有義股具有無鹼基部分或反向無鹼基部分。
  19. 一種ATXN2 RNAi藥劑，其包含有義股及反義股， 其中該有義股及該反義股形成雙螺旋體， 其中該有義股及該反義股包含選自由以下組成之群的一對核酸序列： (a)     該有義股包含SEQ ID NO: 31之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 32之第二核酸序列； (b)    該有義股包含SEQ ID NO: 33之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 34之第二核酸序列； (c)     該有義股包含SEQ ID NO: 35之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 36之第二核酸序列； (d)    該有義股包含SEQ ID NO: 37之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 38之第二核酸序列； (e)     該有義股包含SEQ ID NO: 39之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 40之第二核酸序列； (f)     該有義股包含SEQ ID NO: 41之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 42之第二核酸序列； (g)    該有義股包含SEQ ID NO: 43之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 44之第二核酸序列； (h)    該有義股包含SEQ ID NO: 45之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 46之第二核酸序列； (i)     該有義股包含SEQ ID NO: 47之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 48之第二核酸序列； (j)     該有義股包含SEQ ID NO: 49之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 50之第二核酸序列； (k)    該有義股包含SEQ ID NO: 51之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 52之第二核酸序列； (l)     該有義股包含SEQ ID NO: 53之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 54之第二核酸序列； (m)該有義股包含SEQ ID NO: 55之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 56之第二核酸序列； (n)    該有義股包含SEQ ID NO: 57之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 58之第二核酸序列； (o)    該有義股包含SEQ ID NO: 59之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 60之第二核酸序列。
  20. 如請求項19之ATXN2 RNAi藥劑，其中該有義股及該反義股具有選自由以下組成之群的一對核酸序列： (a)     該有義股由SEQ ID NO: 31之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 32之第二核酸序列組成； (b)    該有義股由SEQ ID NO: 33之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 34之第二核酸序列組成； (c)     該有義股由SEQ ID NO: 35之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 36之第二核酸序列組成； (d)    該有義股由SEQ ID NO: 37之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 38之第二核酸序列組成； (e)     該有義股由SEQ ID NO: 39之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 40之第二核酸序列組成； (f)     該有義股由SEQ ID NO: 41之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 42之第二核酸序列組成； (g)    該有義股由SEQ ID NO: 43之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 44之第二核酸序列組成； (h)    該有義股由SEQ ID NO: 45之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 46之第二核酸序列組成； (i)     該有義股由SEQ ID NO: 47之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 48之第二核酸序列組成； (j)     該有義股由SEQ ID NO: 49之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 50之第二核酸序列組成； (k)    該有義股由SEQ ID NO: 51之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 52之第二核酸序列組成； (l)     該有義股由SEQ ID NO: 53之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 54之第二核酸序列組成； (m)    該有義股由SEQ ID NO: 55之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 56之第二核酸序列組成； (n)    該有義股由SEQ ID NO: 57之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 58之第二核酸序列組成；及 (o)    該有義股由SEQ ID NO: 59之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 60之第二核酸序列組成。
  21. 如請求項1至20中任一項之ATXN2 RNAi藥劑，其中該有義股具有與該有義股之3'端結合的遞送部分。
  22. 如請求項1至20中任一項之ATXN2 RNAi藥劑，其中該有義股具有與該有義股之核苷酸結合的遞送部分。
  23. 如請求項21之ATXN2 RNAi藥劑，其中該遞送部分經由選自由以下組成之群的連接子與該有義股之3'端結合： 、 、 及 。
  24. 一種式(I)之ATXN2 RNAi藥劑：R-L-D， 其中R為包含有義股及反義股之雙股RNA (dsRNA)，其中該有義股及該反義股形成雙螺旋體； 其中D為遞送部分；且 其中L為連接子或視情況不存在， 其中該有義股及該反義股包含選自由以下組成之群的一對核酸序列： (a)     該有義股包含SEQ ID NO: 1之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 2之第二核酸序列； (b)    該有義股包含SEQ ID NO: 3之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 4之第二核酸序列； (c)     該有義股包含SEQ ID NO: 5之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 6之第二核酸序列； (d)    該有義股包含SEQ ID NO: 7之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 8之第二核酸序列； (e)     該有義股包含SEQ ID NO: 9之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 10之第二核酸序列； (f)     該有義股包含SEQ ID NO: 11之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 12之第二核酸序列； (g)    該有義股包含SEQ ID NO: 13之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 14之第二核酸序列； (h)    該有義股包含SEQ ID NO: 15之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 16之第二核酸序列； (i)     該有義股包含SEQ ID NO: 17之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 18之第二核酸序列； (j)     該有義股包含SEQ ID NO: 19之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 20之第二核酸序列； (k)    該有義股包含SEQ ID NO: 21之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 22之第二核酸序列； (l)     該有義股包含SEQ ID NO: 23之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 24之第二核酸序列； (m)該有義股包含SEQ ID NO: 25之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 26之第二核酸序列； (n)    該有義股包含SEQ ID NO: 27之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 28之第二核酸序列；及 (o)    該有義股包含SEQ ID NO: 29之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 30之第二核酸序列， 其中視情況地，該有義股及該反義股之一或多個核苷酸獨立地為經修飾之核苷酸，且 其中視情況地，該有義股及該反義股之一或多個核苷酸間鍵聯為經修飾之核苷酸間鍵聯。
  25. 如請求項24之ATXN2 RNAi藥劑，其中該有義股及該反義股包含選自由以下組成之群的一對核酸序列： (a)     該有義股包含SEQ ID NO: 31之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 32之第二核酸序列； (b)    該有義股包含SEQ ID NO: 33之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 34之第二核酸序列； (c)     該有義股包含SEQ ID NO: 35之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 36之第二核酸序列； (d)    該有義股包含SEQ ID NO: 37之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 38之第二核酸序列； (e)     該有義股包含SEQ ID NO: 39之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 40之第二核酸序列； (f)     該有義股包含SEQ ID NO: 41之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 42之第二核酸序列； (g)    該有義股包含SEQ ID NO: 43之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 44之第二核酸序列； (h)    該有義股包含SEQ ID NO: 45之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 46之第二核酸序列； (i)     該有義股包含SEQ ID NO: 47之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 48之第二核酸序列； (j)     該有義股包含SEQ ID NO: 49之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 50之第二核酸序列； (k)    該有義股包含SEQ ID NO: 51之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 52之第二核酸序列； (l)     該有義股包含SEQ ID NO: 53之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 54之第二核酸序列； (m)    該有義股包含SEQ ID NO: 55之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 56之第二核酸序列； (n)    該有義股包含SEQ ID NO: 57之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 58之第二核酸序列；及 (o)    該有義股包含SEQ ID NO: 59之第一核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 60之第二核酸序列。
  26. 如請求項24之ATXN2 RNAi藥劑，其中該有義股及該反義股具有選自由以下組成之群的一對核酸序列： (a)     該有義股由SEQ ID NO: 31之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 32之第二核酸序列組成； (b)    該有義股由SEQ ID NO: 33之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 34之第二核酸序列組成； (c)     該有義股由SEQ ID NO: 35之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 36之第二核酸序列組成； (d)    該有義股由SEQ ID NO: 37之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 38之第二核酸序列組成； (e)     該有義股由SEQ ID NO: 39之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 40之第二核酸序列組成； (f)     該有義股由SEQ ID NO: 41之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 42之第二核酸序列組成； (g)    該有義股由SEQ ID NO: 43之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 44之第二核酸序列組成； (h)    該有義股由SEQ ID NO: 45之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 46之第二核酸序列組成； (i)     該有義股由SEQ ID NO: 47之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 48之第二核酸序列組成； (j)     該有義股由SEQ ID NO: 49之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 50之第二核酸序列組成； (k)    該有義股由SEQ ID NO: 51之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 52之第二核酸序列組成； (l)     該有義股由SEQ ID NO: 53之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 54之第二核酸序列組成； (m)    該有義股由SEQ ID NO: 55之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 56之第二核酸序列組成； (n)    該有義股由SEQ ID NO: 57之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 58之第二核酸序列組成；及 (o)    該有義股由SEQ ID NO: 59之第一核酸序列組成，且該反義股由SEQ ID NO: 60之第二核酸序列組成。
  27. 如請求項24之ATXN2 RNAi藥劑，其中該遞送構件或遞送部分與該有義股之3'端結合。
  28. 如請求項24之ATXN2 RNAi藥劑，其中該遞送構件或遞送部分與該有義股之核苷酸結合。
  29. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至28中任一項之ATXN2 RNAi藥劑及醫藥學上可接受之載劑。
  30. 一種減少細胞中之ATXN2表現的活體外方法，該方法包含： 將如請求項1至28中任一項之ATXN2 RNAi藥劑引入該細胞中；及 培育該細胞持續足以使ATXN2 mRNA降解之時間，由此減少該細胞中之ATXN2表現。
  31. 一種如請求項1至28中任一項之ATXN2 RNAi藥劑的用途，其係用於製造用以治療ATXN2相關神經疾病之藥劑。
  32. 如請求項31之用途，其中該ATXN2相關神經疾病係選自脊髓小腦性失調症2型(SCA2)、肌肉萎縮性側索硬化(ALS)、原發性側索硬化(PLS)、帕金森氏症、阿茲海默氏症、額顳葉變性(FTLD)、進行性肌萎縮(PMA)、多系統蛋白質病、佩里病或TDP-43蛋白質病。
  33. 如請求項32之用途，其中該ATXN2相關神經疾病係選自脊髓小腦性失調症2型(SCA2)或肌肉萎縮性側索硬化(ALS)。
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