TW202417485A - 抗ｐｖｒｉｇ抗體及使用方法 - Google Patents

抗ｐｖｒｉｇ抗體及使用方法 Download PDF

Info

Publication number
TW202417485A
TW202417485A TW112130034A TW112130034A TW202417485A TW 202417485 A TW202417485 A TW 202417485A TW 112130034 A TW112130034 A TW 112130034A TW 112130034 A TW112130034 A TW 112130034A TW 202417485 A TW202417485 A TW 202417485A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
seq
amino acid
acid sequence
sequence shown
antibody
Prior art date
Application number
TW112130034A
Other languages
English (en)
Inventor
唐曉燕
李丹
錢夢然
吉如月
潘潔
陳欣
蔣磊
丁曉
李慧
宋兢
孫建
易美琪
Original Assignee
英屬開曼群島商百濟神州有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 英屬開曼群島商百濟神州有限公司 filed Critical 英屬開曼群島商百濟神州有限公司
Publication of TW202417485A publication Critical patent/TW202417485A/zh

Links

Abstract

提供了抗PVRIG抗體及其抗原結合片段，以及相關的組成物和方法。本揭露的抗體結合人PVRIG受體並且能阻斷一個細胞上的PVRL2配體與免疫細胞上的PVRIG之間的相互作用。

Description

抗PVRIG抗體及使用方法
本文揭露了包含抗PVRIG抗體或其抗原結合片段的組成物，以及用於治療癌症和對PVRIG/PVRL2拮抗有響應的其他障礙的相關方法。
提供了人源化、小鼠或嵌合抗PVRIG單株抗體。該等抗體以優化的結合動力學與人糖基化和非糖基化PVRIG結合，它們破壞人PVRIG-PVRL2相互作用，並可用於各種治療和預防方法。本揭露包括分離的抗體及其衍生物和片段、包含一或多種人源化或嵌合抗PVRIG單株抗體的藥物配製物；以及產生該等單株抗體的細胞系。還提供了抗體的胺基酸和核苷酸序列。
阻斷CTLA4或PD-1/PD-L1等抑制性檢查點蛋白的免疫檢查點抑制劑對抗癌療法的發展產生了重大影響。在臨床上，多種針對PD-1或PD-L1的免疫檢查點抑制劑已獲得批准並取得成功，例如納武單抗和派姆單抗。然而，對另外檢查點抑制劑的需求仍然未得到滿足，因為臨床結果表明，患者之間的響應可能有所不同，並且可能產生耐藥性。
脊髓灰白質炎病毒受體相關免疫球蛋白結構域蛋白（PVRIG，也稱為CD112R）因其第二外顯子與脊髓灰白質炎病毒受體可變免疫球蛋白結構域（PVR/CD155）之間觀察到的同源性而命名。PVRIG係一種表現於T細胞和自然殺手（NK）細胞表面的共抑制受體。該受體蛋白包括單個胞外IgV結構域、一個跨膜結構域、和具有ITIM樣模體的長胞內結構域。PVRIG係配體PVRL2的高親和力受體，PVRL2也稱為脊髓灰白質炎病毒受體相關2（PVRL2）、黏連蛋白-2和CD112。PVRL2在抗原呈現細胞（APC）和腫瘤細胞上上調，並且係PVRIG的高親和力配體（Zhu等人, 213(2), 167-176）。
PVRIG在免疫細胞活化中發揮著重要作用，因為PVRIG與其配體之間的相互作用會抑制NK和T細胞對癌症的響應強度。PVRL2與PVRIG受體結合，向免疫細胞傳遞抑制訊息。主要臨床候選物干擾這種抑制訊息，以重新建立免疫系統的抗癌能力。全人抗PVRIG治療抗體的擬議適應症係作為PVRL2表現水平高的癌組織中的檢查點抑制劑。這包括肺癌、腎癌、卵巢癌、前列腺癌和子宮內膜癌等。（Whelan等人, 2019 Immunol Res.[ 免疫學研究 ]2019;7:257-68； Turnis等人, 2015 Eur. J. Immunol.[ 免疫學雜誌 ]2015;45:1892-905）。
由於免疫調節很複雜，多種免疫檢查點抑制劑可能被證明是有益的。事實證明，PVRIG和TIGIT抗體無論是作為單一藥劑還是聯合使用都能使NK細胞響應敏感（Xu等人, 2017 Cancer Immunol Immunother [ 癌症免疫學與免疫療法 ]66:1367-75）。另據報導，抗PVRIG、抗TIGIT和抗PD1抗體的三重組合導致INF-γ產量的更大增加和CD8 +T細胞功能的增加。（Whelan等人, 2019 Immunol Res.[ 免疫學研究 ]2019;7:257-68）。
本揭露提供了抗PVRIG抗體，其顯示出用於治療受試者（例如人）的疾病（例如癌症）的各種期望特徵。
本揭露涵蓋以下實施方式。
本揭露關於特異性結合PVRIG的抗PVRIG抗體及其抗原結合片段。
在某些實施方式中，本揭露關於抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段特異性結合人PVRIG的胺基酸41至胺基酸171（SEQ ID NO:154）。
在某些實施方式中，本揭露關於結合人PVRIG的抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段包含： (i) 三個重鏈CDR： HCDR1，其包含如SEQ ID NO:44所示的胺基酸序列， HCDR2，其包含如SEQ ID NO:45所示的胺基酸序列， HCDR3，其包含如SEQ ID NO:46所示的胺基酸序列，和 三個輕鏈CDR： LCDR1，其包含如SEQ ID NO:47所示的胺基酸序列， LCDR2，其包含如SEQ ID NO:48所示的胺基酸序列， LCDR3，其包含如SEQ ID NO:49所示的胺基酸序列； (ii) 三個重鏈CDR： HCDR1，其包含如SEQ ID NO:34所示的胺基酸序列， HCDR2，其包含如SEQ ID NO:35所示的胺基酸序列， HCDR3，其包含如SEQ ID NO:36所示的胺基酸序列，和 三個輕鏈CDR： LCDR1，其包含如SEQ ID NO:37所示的胺基酸序列， LCDR2，其包含如SEQ ID NO:38所示的胺基酸序列， LCDR3，其包含如SEQ ID NO:39所示的胺基酸序列； (iii) 三個重鏈CDR： HCDR1，其包含如SEQ ID NO:14所示的胺基酸序列， HCDR2，其包含如SEQ ID NO:15所示的胺基酸序列， HCDR3，其包含如SEQ ID NO:16所示的胺基酸序列，和 三個輕鏈CDR： LCDR1，其包含如SEQ ID NO:17所示的胺基酸序列， LCDR2，其包含如SEQ ID NO:18所示的胺基酸序列， LCDR3，其包含如SEQ ID NO:19所示的胺基酸序列； (iv) 三個重鏈CDR： HCDR1，其包含如SEQ ID NO:4所示的胺基酸序列， HCDR2，其包含如SEQ ID NO:5所示的胺基酸序列， HCDR3，其包含如SEQ ID NO:6所示的胺基酸序列，和 三個輕鏈CDR： LCDR1，其包含如SEQ ID NO:7所示的胺基酸序列， LCDR2，其包含如SEQ ID NO:8所示的胺基酸序列， LCDR3，其包含如SEQ ID NO:9所示的胺基酸序列； (v) 三個重鏈CDR： HCDR1，其包含如SEQ ID NO:24所示的胺基酸序列， HCDR2，其包含如SEQ ID NO:25所示的胺基酸序列， HCDR3，其包含如SEQ ID NO:26所示的胺基酸序列，和 三個輕鏈CDR： LCDR1，其包含如SEQ ID NO:27所示的胺基酸序列， LCDR2，其包含如SEQ ID NO:28所示的胺基酸序列， LCDR3，其包含如SEQ ID NO:29所示的胺基酸序列； (vi) 三個重鏈CDR： HCDR1，其包含如SEQ ID NO:54所示的胺基酸序列， HCDR2，其包含如SEQ ID NO:55所示的胺基酸序列， HCDR3，其包含如SEQ ID NO:56所示的胺基酸序列，和 三個輕鏈CDR： LCDR1，其包含如SEQ ID NO:57所示的胺基酸序列， LCDR2，其包含如SEQ ID NO:58所示的胺基酸序列， LCDR3，其包含如SEQ ID NO:59所示的胺基酸序列； (vii) 三個重鏈CDR： HCDR1，其包含如SEQ ID NO:64所示的胺基酸序列， HCDR2，其包含如SEQ ID NO:65所示的胺基酸序列， HCDR3，其包含如SEQ ID NO:66所示的胺基酸序列，和 三個輕鏈CDR： LCDR1，其包含如SEQ ID NO:67所示的胺基酸序列， LCDR2，其包含如SEQ ID NO:68所示的胺基酸序列， LCDR3，其包含如SEQ ID NO:69所示的胺基酸序列； (viii) 三個重鏈CDR： HCDR1，其包含如SEQ ID NO:74所示的胺基酸序列， HCDR2，其包含如SEQ ID NO:75所示的胺基酸序列， HCDR3，其包含如SEQ ID NO:76所示的胺基酸序列，和 三個輕鏈CDR： LCDR1，其包含如SEQ ID NO:77所示的胺基酸序列， LCDR2，其包含如SEQ ID NO:78所示的胺基酸序列， LCDR3，其包含如SEQ ID NO:79所示的胺基酸序列； (ix) 三個重鏈CDR： HCDR1，其包含如SEQ ID NO:84所示的胺基酸序列， HCDR2，其包含如SEQ ID NO:85所示的胺基酸序列， HCDR3，其包含如SEQ ID NO:86所示的胺基酸序列，和 三個輕鏈CDR： LCDR1，其包含如SEQ ID NO:87所示的胺基酸序列， LCDR2，其包含如SEQ ID NO:88所示的胺基酸序列， LCDR3，其包含如SEQ ID NO:89所示的胺基酸序列； (x) 三個重鏈CDR： HCDR1，其包含如SEQ ID NO:94所示的胺基酸序列， HCDR2，其包含如SEQ ID NO:95所示的胺基酸序列， HCDR3，其包含如SEQ ID NO:96所示的胺基酸序列，和 三個輕鏈CDR： LCDR1，其包含如SEQ ID NO:97所示的胺基酸序列， LCDR2，其包含如SEQ ID NO:98所示的胺基酸序列， LCDR3，其包含如SEQ ID NO:99所示的胺基酸序列； (xi) 三個重鏈CDR： HCDR1，其包含如SEQ ID NO:104所示的胺基酸序列， HCDR2，其包含如SEQ ID NO:105所示的胺基酸序列， HCDR3，其包含如SEQ ID NO:106所示的胺基酸序列，和 三個輕鏈CDR： LCDR1，其包含如SEQ ID NO:107所示的胺基酸序列， LCDR2，其包含如SEQ ID NO:108所示的胺基酸序列， LCDR3，其包含如SEQ ID NO:109所示的胺基酸序列； (xii) 三個重鏈CDR： HCDR1，其包含如SEQ ID NO:114所示的胺基酸序列， HCDR2，其包含如SEQ ID NO:115所示的胺基酸序列， HCDR3，其包含如SEQ ID NO:116所示的胺基酸序列，和 三個輕鏈CDR： LCDR1，其包含如SEQ ID NO:117所示的胺基酸序列， LCDR2，其包含如SEQ ID NO:118所示的胺基酸序列， LCDR3，其包含如SEQ ID NO:119所示的胺基酸序列； (xiii) 三個重鏈CDR： HCDR1，其包含如SEQ ID NO:124所示的胺基酸序列， HCDR2，其包含如SEQ ID NO:125所示的胺基酸序列， HCDR3，其包含如SEQ ID NO:126所示的胺基酸序列，和 三個輕鏈CDR： LCDR1，其包含如SEQ ID NO:127所示的胺基酸序列， LCDR2，其包含如SEQ ID NO:128所示的胺基酸序列， LCDR3，其包含如SEQ ID NO:129所示的胺基酸序列； (xiv) 三個重鏈CDR： HCDR1，其包含如SEQ ID NO:134所示的胺基酸序列， HCDR2，其包含如SEQ ID NO:135所示的胺基酸序列， HCDR3，其包含如SEQ ID NO:136所示的胺基酸序列，和 三個輕鏈CDR： LCDR1，其包含如SEQ ID NO:137所示的胺基酸序列， LCDR2，其包含如SEQ ID NO:138所示的胺基酸序列， LCDR3，其包含如SEQ ID NO:139所示的胺基酸序列； (xv) 三個重鏈CDR： HCDR1，其包含如SEQ ID NO:144所示的胺基酸序列， HCDR2，其包含如SEQ ID NO:145所示的胺基酸序列， HCDR3，其包含如SEQ ID NO:146所示的胺基酸序列，和 三個輕鏈CDR： LCDR1，其包含如SEQ ID NO:147所示的胺基酸序列， LCDR2，其包含如SEQ ID NO:148所示的胺基酸序列， LCDR3，其包含如SEQ ID NO:149所示的胺基酸序列；或 (xvi) 三個重鏈CDR： HCDR1，其包含如SEQ ID NO:187所示的胺基酸序列， HCDR2，其包含如SEQ ID NO:188所示的胺基酸序列， HCDR3，其包含如SEQ ID NO:46所示的胺基酸序列，和 三個輕鏈CDR： LCDR1，其包含如SEQ ID NO:47所示的胺基酸序列， LCDR2，其包含如SEQ ID NO:48所示的胺基酸序列， LCDR3，其包含如SEQ ID NO:49所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，本揭露關於抗體或抗原結合片段，該抗體或抗原結合片段包含：
(i) 包含與SEQ ID NO:50至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含與SEQ ID NO:51至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）；
(ii) 包含與SEQ ID NO: 40至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含與SEQ ID NO: 41至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）；
(iii) 包含與SEQ ID NO: 20至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含與SEQ ID NO: 21至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）；
(iv) 包含與SEQ ID NO: 10至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含與SEQ ID NO: 11至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）；
(v) 包含與SEQ ID NO: 30至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含與SEQ ID NO: 31至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）；
(vi) 包含與SEQ ID NO: 60至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含與SEQ ID NO: 61至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）；
(vii) 包含與SEQ ID NO: 70至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含與SEQ ID NO: 71至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）；
(viii) 包含與SEQ ID NO: 80至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含與SEQ ID NO: 81至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）；
(ix) 包含與SEQ ID NO: 90至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含與SEQ ID NO: 91至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）；
(x) 包含與SEQ ID NO: 100至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含與SEQ ID NO: 101至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）；
(xi) 包含與SEQ ID NO: 110至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含與SEQ ID NO: 111至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）；
(xii) 包含與SEQ ID NO: 120至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含與SEQ ID NO: 121至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）；
(xiii) 包含與SEQ ID NO: 130至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含與SEQ ID NO: 131至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）；
(xiv) 包含與SEQ ID NO: 140至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含與SEQ ID NO: 141至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）；或
(xv) 包含與SEQ ID NO: 150至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含與SEQ ID NO: 151至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）。
在某些實施方式中，本揭露關於抗體或其抗原結合片段，其中SEQ ID No:50和51、SEQ ID No:40和41、SEQ ID No:20和21、SEQ ID No:10和11、SEQ ID No:30和31、SEQ ID No:60和61、SEQ ID No:70和71、SEQ ID No:80和81、SEQ ID No:90和91、SEQ ID No:100和101、SEQ ID No:110和111、SEQ ID No:120和121、SEQ ID No:130和131、SEQ ID No:140和141或SEQ ID No:150和151內已被插入、缺失或取代1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個或10個胺基酸。
在某些實施方式中，本揭露關於抗體或其抗原結合片段，其包含：
(i) 包含如SEQ ID NO:50所示胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含如SEQ ID NO:51所示胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）；
(ii) 包含如SEQ ID NO:40所示胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含如SEQ ID NO:41所示胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）；
(iii) 包含如SEQ ID NO:20所示胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含如SEQ ID NO:21所示胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）；
(iv) 包含如SEQ ID NO:10所示胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含如SEQ ID NO:11所示胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）；
(v) 包含如SEQ ID NO:30所示胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含如SEQ ID NO:31所示胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）；
(vi) 包含如SEQ ID NO:60所示胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含如SEQ ID NO:61所示胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）；
(vii) 包含如SEQ ID NO:50所示胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含如SEQ ID NO:51所示胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）；
(viii) 包含如SEQ ID NO:70所示胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含如SEQ ID NO:71所示胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）；
(ix) 包含如SEQ ID NO:80所示胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含如SEQ ID NO:81所示胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）；
(x) 包含如SEQ ID NO:90所示胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含如SEQ ID NO:91所示胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）；
(xi) 包含如SEQ ID NO:100所示胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含如SEQ ID NO:101所示胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）；
(xii) 包含如SEQ ID NO:110所示胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含如SEQ ID NO:111所示胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）；
(xiii) 包含如SEQ ID NO:120所示胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含如SEQ ID NO:121所示胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）；
(xiv) 包含如SEQ ID NO:140所示胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含如SEQ ID NO:141所示胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）；
(xv) 包含如SEQ ID NO:150所示胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含如SEQ ID NO:151所示胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）。
在某些實施方式中，本揭露關於抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段包含在包含SEQ ID NO:154的S27、S31、L32、H52、F99、K95、P100、E101、S103和E105的表位處特異性結合人PVRIG的抗原結合結構域。在某些實施方式中，本揭露關於抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段包含在包含SEQ ID NO:154的F99的表位處特異性結合人PVRIG的抗原結合結構域。
在某些實施方式中，本揭露關於抗體或其抗原結合片段，其包含：包含如SEQ ID NO:189所示胺基酸序列的重鏈以及包含如SEQ ID NO:190所示胺基酸序列的輕鏈。
在某些實施方式中，本揭露關於抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合部分與參考抗體或其參考抗原結合部分交叉競爭結合PVRIG，該參考抗體或其參考抗原結合部分包含本文揭露的任何抗體或抗原結合片段。
在某些實施方式中，本揭露關於抗體或其抗原結合片段，其中該抗體結合PVRIG上的不連續表位。
在某些實施方式中，本揭露關於抗體或其抗原結合片段，其中該抗體結合PVRIG上的不連續表位，其中該不連續表位包含人PVRIG的胺基酸殘基S27、S31和L32，該人PVRIG包含SEQ ID NO:154。
在某些實施方式中，本揭露關於抗體或其抗原結合片段，其中該不連續表位進一步包含含有SEQ ID NO:154的人PVRIG的胺基酸殘基H52、K95、F99、P100、E101、S103和E105。
在某些實施方式中，本揭露關於抗體或其抗原結合片段，其中該抗體係單株抗體、嵌合抗體、人源化抗體、人工程改造抗體、單鏈抗體（scFv）、Fab片段、Fab'片段或F(ab′) 2片段。
在某些實施方式中，本揭露關於抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段具有減少的糖基化或無糖基化或者係低岩藻糖基化的。在一些實施方式中，相對於未修飾的抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段具有減少的糖基化或無糖基化，或者係低岩藻糖基化的。
在某些實施方式中，本揭露關於抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含增加的二等分GlcNac結構。在一些實施方式中，相對於未修飾的抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段具有增加的二等分GlcNac結構。
在某些實施方式中，本揭露關於抗體或其抗原結合片段，其中Fc結構域係IgG1的Fc結構域。
在某些實施方式中，本揭露關於藥物組成物，其包含如本文揭露的抗體或其抗原結合片段和藥學上可接受的載劑。
在某些實施方式中，本揭露關於編碼本文揭露的抗體或抗原結合片段的分離的核酸。
在某些實施方式中，本揭露關於包含本文揭露的所述核酸的載體。
在某些實施方式中，本揭露關於包含本文揭露的所述核酸或本文揭露的所述載體的宿主細胞。
在某些實施方式中，本揭露關於用於產生抗體或其抗原結合片段的方法，該方法包括在培養基中培養所述宿主細胞並從所述培養基回收該抗體或其抗原結合片段。
在某些實施方式中，本揭露關於藉由所述方法產生的包含抗人PVRIG抗體或其抗原結合片段的純化的組成物。
在某些實施方式中，本揭露關於套組（kit），其包含本文揭露的抗體或其抗原結合片段和使用本文揭露的抗體或其抗原結合片段（例如，選自BGA38、BGA381、BGA382、BGA383和BGA384的抗體或其抗原結合片段）的說明書。
在某些實施方式中，本揭露關於一種套組，其中抗體或其抗原結合片段與PVRIG複合，藉由包括酶聯免疫吸附測定（ELISA）、放射免疫測定（RIA）和/或西方墨點法的測定來檢測。
在某些實施方式中，本揭露關於治療癌症之方法，其包括向有需要的患者投與有效量的本文描述的所述藥物組成物或本文描述的所述純化的組成物。
在某些實施方式中，本揭露關於治療癌症之所述方法，其中癌症選自由以下組成之群組：表現PVRL2的癌症，PVRL2累積的癌症，中樞神經系統腫瘤，間皮瘤，淋巴瘤，白血病，骨髓瘤，肉瘤和膀胱癌、胃癌、子宮癌/子宮頸癌、前列腺癌、睪丸癌、食道癌、腸癌、結腸癌、胰臟癌、乳癌、頭頸癌、腎癌、肝癌、肺癌、生殖細胞癌、骨癌、肝癌、甲狀腺癌、卵巢癌和皮膚癌及其轉移。
在某些實施方式中，抗體或抗原結合片段與另一種治療劑組合投與。
在某些實施方式中，治療劑係化療劑。
在某些實施方式中，治療劑係免疫檢查點抑制劑。
在某些實施方式中，免疫檢查點抑制劑係抗PD1抗體。
在某些實施方式中，抗PD1抗體係BGB-A317。
在某些實施方式中，免疫檢查點抑制劑係抗TIGIT抗體。
在某些實施方式中，抗TIGIT抗體係BGB-A1217。
在某些實施方式中，免疫檢查點抑制劑包含BGB-A317和A1217的組合。
在某些實施方式中，本揭露關於刺激受試者中的免疫響應之方法，該方法包括向該受試者投與所述藥物組成物或所述純化的組成物。
在某些實施方式中，投與步驟增加受試者中抗體依賴性的胞啃作用或效應T細胞響應。在一些實施方式中，相對於投與包含Fc結構域中的一或多個突變的抗體或其抗原結合片段，投與本文所述之抗體或其抗原結合片段的步驟導致受試者中抗體依賴性胞啃作用或效應T細胞響應的增加。
在某些實施方式中，本揭露關於一種誘導PVRIG從供體細胞到受體細胞的胞啃作用之方法，該方法包括使供體細胞與本文揭露的抗體或抗原結合片段接觸一段時間，該時間足以誘導從供體細胞到受體細胞的胞啃作用。
在某些實施方式中，本揭露關於活化NK細胞之方法，該方法包括向有需要的患者投與有效量的所述藥物組成物或所述純化的組成物。
在所述方法的某些實施方式中，患者患有癌症並且針對所述癌症的免疫響應被刺激。
在某些另外的實施方式中，癌症選自由以下組成之群組：表現PVRL2的癌症，PVRL2累積的癌症，中樞神經系統腫瘤，間皮瘤，淋巴瘤，白血病，骨髓瘤，肉瘤和膀胱癌、胃癌、子宮癌/子宮頸癌、前列腺癌、睪丸癌、食道癌、腸癌、結腸癌、胰臟癌、乳癌、頭頸癌、腎癌、肝癌、肺癌、生殖細胞癌、骨癌、肝癌、甲狀腺癌、卵巢癌和皮膚癌及其轉移。
縮寫
如在整個說明書和所附申請專利範圍中所使用的，以下縮寫適用：
API 活性藥物成分
BOR 最佳總體響應
BID 每天兩次，每次一個劑量
CDR 臨床受益率
CDR 免疫球蛋白中的互補決定區
CHO 中國倉鼠卵巢
CR 完全響應
DCR 疾病控制率
DFS 無病生存
DLT 劑量限制性毒性
DOR 響應持續時間
DS 原料藥
DSDR 持久的穩定疾病率
CI 信賴區間
EC50 導致50%功效或結合的濃度
ELISA 酶聯免疫吸附測定
FFPE 福馬林固定，石蠟包埋
FR 框架區
HC 重鏈
HNSCC 頭頸部鱗狀細胞癌
HP-HIC 高效疏水交互作用層析
HP-IEX 高效離子交換層析
HP-SEC 高效粒徑排阻層析
IC50 導致50%抑制的濃度
IgG 免疫球蛋白 G
IV 靜脈內
IHC 免疫組織化學或免疫組織化學的
MTD 最大耐受劑量
mAb 單株抗體
NCBI 美國國家生物技術資訊中心
NSCLC 非小細胞肺癌
NCI 美國國立癌症研究所
ORR 客觀響應率
OS 總生存期
PCR 聚合酶鏈反應
PD 進行性疾病
PD-1 計畫性死亡1
PD-L1 計畫性死亡1配體1
PR 部分響應
RECIST 實性瘤響應評估標準
SD 穩定疾病
TPI 毒性概率區間
SWFI 無菌注射用水
TNBC 三陰性乳癌
VH 免疫球蛋白重鏈可變區
VK 免疫球蛋白κ輕鏈可變區
VL 免疫球蛋白輕鏈可變區
v/v 體積/體積
w/v 重量/體積
定義
為了更容易理解本揭露，下面首先定義某些術語。在整個說明書中闡述了以下術語和其他術語的附加定義。
儘管本文示出並描述了本揭露的各種實施方式和方面，但是對於熟悉該項技術者而言顯而易見的是，該等實施方式和方面僅以示例的方式提供。在不背離本文所揭露的內容的情況下，熟悉該項技術者將想到許多變化、改變和替代。應當理解，在實踐本揭露時可以採用本文揭露或描述的實施方式的各種替代方案。
在此使用的小節標題僅是為了編排之目的並且不應該被解釋為對所述主題進行限制。本申請中引用的所有文件或文件的部分，包括但不限於專利、專利申請、文章、書籍、手冊和論文，特此明確地出於任何目的藉由引用以其整體併入。
除非另外定義，否則本文所用的全部技術和科學術語具有與本揭露所屬領域的普通技術者通常所理解的相同的含義。例如，Juo, The Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology [ 生物醫學和分子生物學簡明詞典 ], 第2版., (2001), CRC出版社； The Dictionary of Cell & Molecular Biology[細胞和分子生物學詞典], 第5版, (2013), Academic Press[學術出版社]；和「The Oxford Dictionary of Biochemistry and Molecular Biology [牛津生物化學和分子生物學詞典],」 Cammack等人編輯,第2版, (2006), Oxford University Press[牛津大學出版社]，為熟悉該項技術者提供了本揭露中使用的許多術語的通用詞典。另外的分子生物學中常用術語的定義可以在以下中找到：Benjamin Lewin, Genes V[基因V], 牛津大學出版社出版, 1994 (ISBN 0-19 854287-9)；Kendrew等人 (編輯.), The Encyclopedia of Molecular Biology[分子生物學百科全書], 由布萊克威爾科學公司（Blackwell Science Ltd.）出版, 1994 (ISBN 0-632-02182-9)；和Robert A. Meyers (編輯), Molecular Biology and Biotechnology: A Comprehensive Desk Reference[分子生物學和生物技術：綜合案頭參考], 由VCH出版公司（VCH Publishers, Inc.）出版, 1995 (ISBN 1-56081-569-8)。
術語「脊髓灰白質炎病毒受體相關的含有免疫球蛋白結構域的蛋白質」或「PVRIG」或「CD112R」係指細胞受體。人PVRIG的胺基酸序列（SEQ ID NO:1）還可在登錄號Q6DKI7（PVRIG_人）或NM_024070處找到。石蟹獼猴（「Cyno」）PVRIG的胺基酸序列（SEQ ID NO:2）還可以在登錄號A0A2K5WVV8_MACFA或XM_005549224處找到。 MRTEAQVPALQPPEPGLEGAMGHRTLVLPWVLLTLCVTAGTPEVWVQVRMEATELSSFTIRCGFLGSGSISLVTVSWGGPNGAGGTTLAVLHPERGIRQWAPARQARWETQSSISLILEGSGASSPCANTTFCCKFASFPEGSWEACGSLPPSSDPGLSAPPTPAPILRADLAGILGVSGVLLFGCVYLLHLLRRHKHRPAPRLQPSRTSPQAPRARAWAPSQASQAALHVPYATINTSCRPATLDTAHPHGGPSWWASLPTHAAHRPQGPAAWASTPIPARGSFVSVENGLYAQAGERPPHTGPGLTLFPDPRGPRAMEGPLGVR（SEQ ID NO:1） MRTEAQVLALQSPEPGLEGAMGRRTLALPWVLLTLCVTAGTPEVWVQVQMEATELSSFTVHCGFLGPGSISLVTVSWGGPDGAGGTKLAVLHPELGTRQWAPARQARWETQSSISLALEDSGASSPFANTTFCCKFASFPEGSWESCGSLPPSSDPGLSAPPTPVPILRADLAGILGLSGVLLFGCGYLLHLLRRQKHRPTPRLQPSHTNSQALTAQAWAPSQASQAALHDPYATINTSFCPATLDTAHPNGWASLPTHAAHQPQGPAASASTPILARGSFVSVENGLYTQAGERPPHTGPGLTLFPDCRGPRAVEGRFGVR（SEQ ID NO:2）
PVRIG的配體被稱為「脊髓灰白質炎病毒受體相關蛋白2」（PVRL2）、「皰疹病毒進入介質B」（HveB）或「黏連蛋白-2」，胺基酸序列可在NP_002847（SEQ ID NO:3）處找到。 MARAAALLPSRSPPTPLLWPLLLLLLLETGAQDVRVQVLPEVRGQLGGTVELPCHLLPPVPGLYISLVTWQRPDAPANHQNVAAFHPKMGPSFPSPKPGSERLSFVSAKQSTGQDTEAELQDATLALHGLTVEDEGNYTCEFATFPKGSVRGMTWLRVIAKPKNQAEAQKVTFSQDPTTVALCISKEGRPPARISWLSSLDWEAKETQVSGTLAGTVTVTSRFTLVPSGRADGVTVTCKVEHESFEEPALIPVTLSVRYPPEVSISGYDDNWYLGRTDATLSCDVRSNPEPTGYDWSTTSGTFPTSAVAQGSQLVIHAVDSLFNTTFVCTVTNAVGMGRAEQVIFVRETPNTAGAGATGGIIGGIIAAIIATAVAATGILICRQQRKEQTLQGAEEDEDLEGPPSYKPPTPKAKLEAQEMPSQLFTLGASEHSPLKTPYFDAGASCTEQEMPRYHELPTLEERSGPLHPGATSLGSPIPVPPGPPAVEDVSLDLEDEEGEEEEEYLDKINPIYDALSYSSPSDSYQGKGFVMSRAMYV（SEQ ID NO:3）
如本文所用，包括所附申請專利範圍，除非上下文另外明確說明，否則如「一個/一種（a）」、「一個/一種（an）」和「該」在內的詞語的單數形式包括它們相應的複數指代。除非上下文另外明確說明，否則術語「或」意指術語「和/或」並且可與術語「和/或」互換使用。此外，在本文使用的情況下，術語「和/或」應當被視為連同或不連同彼此的兩個指定特徵或組分中的每一個的特定揭露。因此，本文中諸如「A和/或B」之類的短語中使用的術語「和/或」旨在包括A和B；A或B；A（單獨）；和B（單獨）。同樣，諸如「A、B和/或C」之類的短語中使用的術語「和/或」旨在涵蓋以下各個方面：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A（單獨）；B（單獨）；和C（單獨）。
本文使用的術語「例如」和「即」，僅僅是作為實例使用，而沒有限制的意圖，並且不應該被解釋為僅指說明書中明確列舉的那些項。
除非具體說明或從上下文中明顯看出，否則如本文所用，術語「約」係指在如由熟悉該項技術者所確定的特定值或組成的可接受誤差範圍內的值或組成，這將部分取決於如何測量或確定該值或組成，即，測量系統的局限性。例如，「約」或「基本上包含」可以意指在本領域實踐的一個或多於一個標準差之內。「約」或「基本上包含」可以表示高達10%（ 即，± 10%）的範圍。因此，「約」可以理解為比規定值大或小10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%、0.1%、0.05%、0.01%或0.001%之內。例如，約5 mg可包括4.5 mg至5.5 mg之間的任何量。此外，特別是對於生物系統或過程，該等術語可以表示高達一個數量級或高達5倍的值。當在本揭露中提供特定值或組成時，除非另有說明，否則「約」或「基本上包含」的含義應當被假定在該特定值或組成的可接受的誤差範圍內。
在本文中範圍可以表現為從「約」一個具體值，和/或至「約」其他具體值。當表現這樣的範圍時，另一種情況包括從一個具體值和/或到另一個具體值。類似地，當藉由使用先行詞「約」將值表現為近似值時，將理解該特定值形成另一種情況。將進一步理解，每個範圍的端點相對於其他端點均為重要的，並且獨立於其他端點。如本文所述，除非另有指示，否則任何濃度範圍、百分比範圍、比率範圍或整數範圍應理解為包括所述範圍內的任何整數的值，並且在適當時包括其分數（如整數的十分之一和百分之一）。
本文使用的單位、前綴和符號均使用國際單位制（SI）接受的形式提供。數字範圍包括定義該範圍的數字。
術語「至少」、「多於」、「或更多」等，例如「至少一個」被理解為包括但不限於比所述值多至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149或150、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000或更多。還包括其間的任何更大的數字或分數。相反，術語「不超過」包括小於規定值的每個值。例如，「不超過100個核苷酸」包括100、99、98、97、96、95、94、93、92、91、90、89、88、87、86、85、84、83、82、81、80、79、78、77、76、75、74、73、72、71、70、69、68、67、66、65、64、63、62、61、60、59、58、57、56、55、54、53、52、51、50、49、48、47、46、45、44、43、42、41、40、39、38、37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1和0個核苷酸。還包括其間的任何更小的數字或分數。術語「多個」、「至少兩個」、「兩個或更多個」、「至少第二個」等應理解為包括但不限於至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149或150、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000個或更多個。還包括其間的任何更大的數字或分數。
當應用於動物、人、實驗受試者、細胞、組織、器官或生物流體時，「投與」意指外源性藥物、治療劑、診斷劑或組成物與該動物、人、受試者、細胞、組織、器官或生物流體接觸。細胞的處理涵蓋試劑與細胞的接觸以及試劑與流體的接觸，其中該流體與細胞接觸。術語「受試者」或「患者」係指需要療法或參與臨床試驗、流行病學研究或用作對照的任何單一受試者，並且包括任何生物體，較佳的是動物，更較佳的是哺乳動物（例如，大鼠、小鼠、狗、貓、馬、牛），並且最較佳的是人。
本文揭露的配製物的示例性投與途徑包括靜脈內、肌內、皮下、腹膜內、脊髓或其他腸胃外投與途徑，例如藉由注射、輸注或藉由注射器輸注系統。短語「腸胃外投與」意指除了腸道和局部投與以外的投與方式，通常藉由注射投與，並且包括但不限於靜脈內、肌肉內、動脈內、鞘內、淋巴內、病灶內、囊內、眶內、心內、皮內、腹膜內、經氣管、皮下、表皮下、關節內、囊下、蛛網膜下、脊柱內、硬腦膜外以及胸骨內注射和輸注以及體內電穿孔。在一些實施方式中，配製物通過非腸胃外途徑投與，例如口服。其他非腸胃外途徑包括局部、表皮或黏膜投與途徑，例如鼻內、陰道、直腸、舌下或局部。投與還可以例如一次、多次和/或在一或多個延長的時期內進行。
如本文所用的術語「親和力」係指抗體與抗原之間相互作用的強度。抗體的可變區通過非共價力與抗原在多個位點相互作用。通常，相互作用越多，親和力越強。
「親和力成熟」抗體係指在一或多個超變區（HVR）中具有一或多個改變的抗體，相比之下，親本抗體不具有此類改變，此類改變導致抗體對抗原的親和力提高。
術語「藥劑」可以指任何類別的分子或實體，包括或多個分子或實體，其中任何一個可為例如多肽、核酸、糖、脂質、小分子、金屬、細胞或生物體（例如，其級分或提取物）或其組分。在一些實施方式中，可以以分離的或純的形式使用藥劑。在一些實施方式中，可以以粗製或不純的形式使用藥劑。在一些實施方式中，藥劑可以作為群體、集合或文庫提供，例如可以對其進行篩選以鑒定或表徵其中存在的成員。
術語「同種異體」係指源自一個個體的任何材料，然後將其引入同一物種的另一個個體，例如，同種異體NK或T細胞移植。
術語「胺基酸」係指天然存在的和合成的胺基酸，以及以類似於天然存在的胺基酸的方式起作用的胺基酸類似物和胺基酸模擬物。天然存在的胺基酸係由遺傳密碼編碼的那些胺基酸，以及後來被修飾的那些胺基酸，例如羥脯胺酸、γ-羧基麩胺酸和O-磷酸絲胺酸。胺基酸類似物係指與天然存在的胺基酸具有相同基本化學結構（即與氫結合的α碳、羧基、胺基和R基團，例如高絲胺酸、正白胺酸、甲硫胺酸亞碸、甲硫胺酸甲基鋶）的化合物。此類類似物具有經修飾的R基團（例如，正白胺酸）或經修飾的肽主鏈，但保留與天然存在的胺基酸相同的基本化學結構。胺基酸模擬物係指結構不同於胺基酸的一般化學結構，但以類似於天然存在的胺基酸的方式起作用的化學化合物。術語「非天然存在的胺基酸」和「非天然胺基酸」係指在自然界中不存在的胺基酸類似物、合成的胺基酸和胺基酸模擬物。
胺基酸在本文中可以用它們眾所周知的三字母符號或IUPAC-IUB生化命名委員會推薦的單字母符號來表示。同樣，核苷酸可以用它們通常被接受的單字母代碼來指代。
具有側鏈的胺基酸殘基的家族已在本領域中進行了定義。該等家族包括具有以下側鏈的胺基酸：鹼性側鏈（例如離胺酸、精胺酸、組胺酸），酸性側鏈（例如天冬胺酸、麩胺酸），不帶電荷的極性側鏈（例如甘胺酸、天冬醯胺、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸、色胺酸），非極性側鏈（例如丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸），β-分支側鏈（例如蘇胺酸、纈胺酸、異白胺酸）以及芳族側鏈（例如酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、組胺酸）。在某些實施方式中，抗體或其抗原結合分子的一或多個CDR內或一或多個框架區內的一或多個胺基酸殘基可以被具有相似側鏈的胺基酸殘基替換。
示例性胺基酸分類總結於下表1和表2中：
[ 表 1]
胺基酸 3字母 1字母 特性 特性 指數
丙胺酸 Ala A 非極性 中性 1.8
精胺酸 Arg R 極性 陽性 -4.5
天冬醯胺 Asn N 極性 中性 -3.5
天冬胺酸 Asp D 極性 陰性 -3.5
半胱胺酸 Cys C 非極性 中性 2.5
麩胺酸 Glu E 極性 陰性 -3.5
麩醯胺酸 Gln Q 極性 中性 -3.5
甘胺酸 Gly G 非極性 中性 -0.4
組胺酸 His H 極性 陽性 -3.2
異白胺酸 Ile I 非極性 中性 4.5
白胺酸 Leu L 非極性 中性 3.8
離胺酸 Lys K 極性 陽性 -3.9
甲硫胺酸 Met M 非極性 中性 1.9
苯丙胺酸 Phe F 非極性 中性 2.8
脯胺酸 Pro P 非極性 中性 -1.6
絲胺酸 Ser S 極性 中性 -0.8
蘇胺酸 Thr T 極性 中性 -0.7
色胺酸 Trp W 非極性 中性 -0.9
酪胺酸 Tyr Y 極性 中性 -1.3
纈胺酸 Val V 非極性 中性 4.2
  [ 表 2]  
   
  不明確的胺基酸 3字母 1字母  
   
  天冬醯胺或天冬胺酸 Asx B  
  麩醯胺酸或麩胺酸 Glx Z  
  白胺酸或異白胺酸 Xle J  
  未指定或未知的胺基酸 Xaa X  
對於胺基酸序列，熟悉該項技術者將認識到對核酸、肽、多肽或蛋白序列的單獨取代、缺失或添加（其改變、添加或缺失編碼序列中的單個胺基酸或一小部分胺基酸）係「保守修飾的變體」，其中改變導致胺基酸被化學上相似的胺基酸取代。此類保守修飾的變體係多態變體、種間同系物和等位基因的補充，並且不排除其。
最常見的交換係異白胺酸/纈胺酸、酪胺酸/苯丙胺酸、天冬胺酸/麩胺酸、離胺酸/精胺酸、甲硫胺酸/白胺酸、天冬胺酸/天冬醯胺、麩胺酸/麩醯胺酸、白胺酸/異白胺酸、甲硫胺酸/異白胺酸、蘇胺酸/絲胺酸、色胺酸/苯丙胺酸、酪胺酸/組胺酸、酪胺酸/色胺酸、麩醯胺酸/精胺酸、組胺酸/天冬醯胺、組胺酸/麩醯胺酸、離胺酸/天冬醯胺、離胺酸/麩醯胺酸、離胺酸/麩胺酸、苯丙胺酸/白胺酸、苯丙胺酸/甲硫胺酸、絲胺酸/丙胺酸、絲胺酸/天冬醯胺、纈胺酸/白胺酸和纈胺酸/甲硫胺酸。以下八組各自含有可被視為彼此保守取代的示例性胺基酸（參見例如，Creighton, Proteins (1984)）。 1) 丙胺酸（A）、甘胺酸（G）； 2) 天冬胺酸（D）、麩胺酸（E）； 3) 天冬醯胺（N）、麩醯胺酸（Q）； 4) 精胺酸（R）、離胺酸（K）； 5) 異白胺酸（I）、白胺酸（L）、甲硫胺酸（M）、纈胺酸（V）； 6) 苯丙胺酸（F）、酪胺酸（Y）、色胺酸（W）； 7) 絲胺酸（S）、蘇胺酸（T）；以及 8) 半胱胺酸（C）、甲硫胺酸（M） [ 表 3]- 各個示例性保守胺基酸取代
原始殘基 保守取代
Ala（A） Gly；Ser
Arg（R） Lys，His
Asn（N） Gln；His
Asp（D） Glu；Asn
Cys（C） Ser；Ala
Gln（Q） Asn
Glu（E） Asp；Gln
Gly（G） Ala
His（H） Asn；Gln
Ile（I） Leu；Val
Leu（L） Ile；Val
Lys（K） Arg；His
Met（M） Leu；Ile；Tyr
Phe（F） Tyr；Met；Leu
Pro（P） Ala
Ser（S） Thr
Thr（T） Ser
Trp（W） Tyr；Phe
Tyr（Y） Trp；Phe
Val（V） Ile；Leu
在一些實施方式中，可以存在至少1個、至少2個、至少3個、至少4個、至少5個、至少6個、至少7個、至少8個、至少9個、至少10個、至少15個、至少20個、至少25個、至少30個、至少35個、或至少40個保守取代。在一些實施方式中，可以存在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35或40個保守取代。因此，「保守胺基酸取代」係指蛋白質中的胺基酸被具有相似特徵（例如，電荷、側鏈大小、疏水性/親水性、主鏈構形和剛度等）的其他胺基酸取代，使得該等改變可以經常進行而不改變蛋白質的生物學活性或其他期望特性，例如抗原親和力和/或特異性。熟悉該項技術者認識到，通常，多肽的非必需區域中的單個胺基酸取代基本上不會改變生物學活性（參見，例如，Watson 等人, （1987） Molecular Biology of the Gene [ 基因分子生物學 ], 本傑明/卡明斯出版公司（The Benjamin/Cummings Pub. Co.）, 第224頁（第4版））。另外，結構或功能上相似的胺基酸的取代不太可能破壞生物活性。
如本文所用的術語「抗癌劑」係指可用於治療細胞增殖性障礙（如癌症）的任何藥劑，包括但不限於細胞毒性劑、化療劑、放射療法和放射治療劑、靶向性抗癌劑、和免疫治療劑，包括細胞療法。
抗體係大而複雜的分子（分子量約150,000或約1320個胺基酸），具有複雜的內部結構。術語「抗體」（Ab）包括但不限於特異性結合抗原的糖蛋白免疫球蛋白。一般而言，抗體係大而複雜的分子（分子量約150,000或約1320個胺基酸），具有複雜的內部結構。抗體或其抗原結合分子可包含藉由二硫鍵互連的至少兩條重（H）鏈和兩條輕（L）鏈。每條H鏈包含重鏈可變區（本文縮寫為HCVR或VH）和重鏈恒定區。重鏈恒定區包含三個恒定結構域：CH1、CH2和CH3。每條輕鏈包含輕鏈可變區（本文縮寫為LCVR或VL）和輕鏈恒定區。如本文所用的術語「抗體」係指免疫球蛋白家族的多肽，其可以非共價地、可逆地和以特異性方式結合相應的抗原。
輕鏈和重鏈可變區在3維空間中聚集在一起，形成結合抗原（例如細胞表面上的受體）的可變區。每個輕鏈/重鏈（VL/VH）對的可變區形成抗體結合位點。一般而言，完整抗體具有兩個結合位點。除了在雙功能或雙特異性抗體中，兩個結合位點通常在一級序列中係相同的。
如下文將更詳細介紹的，在每個輕鏈或重鏈可變區內，存在三個短區段（平均長度10個胺基酸），稱為互補決定區（「CDR」）。抗體可變結構域中的六個CDR（三個來自輕鏈，三個來自重鏈）在3維空間中折疊在一起，形成對接到靶抗原上的實際抗體結合位點。本文提供的術語「LCDR1」、「LCDR2」和「LCDR3」係指抗體的可變輕（L）鏈的互補決定區（CDR）1、2和3。在實施方式中，本文提供的可變輕鏈在N末端至C末端方向上包括LCDR1、LCDR2和LCDR3。同樣，本文提供的術語「HCDR1」、「HCDR2」和「HCDR3」係指抗體可變重（H）鏈的互補決定區（CDR）1、2和3。在某些實施方式中，本文提供的可變重鏈在N末端至C末端方向上包括HCDR1、HCDR2和HCDR3。如下文進一步詳述，CDR的位置和長度已由Kabat, E.等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest[免疫學目的蛋白的序列], U.S. Department of Health and Human Services [美國衛生與公眾服務部], 1983, 1987精確定義。天然產生的抗體也被糖基化，例如，在CH2結構域上。
可變區中不包含在CDR中的部分稱為框架（「FR」），其形成CDR的環境。因此，互補決定區（CDR）散佈有更保守的區域，即，框架區。因此，每個VH和VL包含三個CDR和四個FR，以下列順序從胺基末端到羧基末端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。雖然重鏈和輕鏈的可變區包含與抗原相互作用的結合結構域，但抗體的恒定區可以介導免疫球蛋白與宿主組織或因子（包括免疫系統的各種細胞（例如，效應細胞）以及經典補體系統的第一組分（Clq））的結合。
[ 表 4]- CDR編號
環 Kabat AbM Chothia Contact
L1 L24--L34 L24--L34 L24--L34 L30--L36
L2 L50--L56 L50--L56 L50--L56 L46--L55
L3 L89--L97 L89--L97 L89--L97 L89--L96
H1 H31--H35B H26--H35B H26--H32 . . . 34 H30--H35B
（Kabat編號）
H1 H31--H35 H26--H35 H26--H32 H30--H35
（Chothia編號）
H2 H50--H65 H50--H58 H52--H56 H47--H58
H3 H95--H102 H95--H102 H95--H102 H93--H101
在某些方面，抗體的CDR可以根據Chothia編號方案確定，其指的是免疫球蛋白結構環的位置（ 參見， 例如，Chothia C. & Lesk A.M., (1987), J Mol Biol[分子生物學雜誌] 196: 901-917；Al-Lazikani B.等人, (1997) J Mol Biol [ 分子生物學雜誌 ]273: 927-948；Chothia C.等人, (1992) J Mol Biol [ 分子生物學雜誌 ]227: 799-817；Tramontano A.等人, (1990) J Mol Biol [ 分子生物學雜誌 ]215(1): 175-82；和美國專利案號7,709,226）。通常，當使用Kabat編號規則時，Chothia CDR-H1環存在於重鏈胺基酸26至32、33或34處，Chothia CDR-H2環存在於重鏈胺基酸52至56處，且Chothia CDR-H3環存在於重鏈胺基酸95至102處，而Chothia CDR-L1環存在於輕鏈胺基酸24至34處，Chothia CDR-L2環存在於輕鏈胺基酸50至56處，Chothia CDR-L3環存在於輕鏈胺基酸89至97處。當使用Kabat編號規則進行編號時，Chothia CDR-HI環的末端根據環的長度在H32和H34之間變化（這係因為Kabat編號方案將插入置於H35A和H35B處；如果35A和35B都不存在，則環在32處結束；如果僅存在35A，則環在33處結束；如果35A和35B都存在，則環在34處結束）。在具體的實施方式中，本文所述之抗體的CDR已根據Chothia編號方案確定。
常用的CDR有多種定義：Kabat編號、Chothia編號、AbM編號或contact編號。AbM定義係牛津分子公司（Oxford Molecular）的AbM抗體建模軟體使用的兩者之間的折衷。contact定義係基於對可用的複雜晶體結構的分析。
CDR和框架區的位置可以使用本領域熟知的多種定義確定，例如Kabat、Chothia、AbM和IMGT（參見，例如Johnson等人, Nucleic Acids Res. [核酸研究], 29:205-206 (2001)；Chothia和Lesk, J. Mol. Biol. [分子生物學雜誌], 196:901-917 (1987)；Chothia等人, Nature[自然], 342:877-883 (1989)；Chothia等人, J. Mol. Biol.[分子生物學雜誌], 227:799-817 (1992)；Al-Lazikani等人, J. Mol. Biol.[分子生物學雜誌], 273:927-748 (1997)）、ImMunoGenTics（IMGT）編號（Lefranc, M.-P., The Immunologist [免疫學者], 7, 132-136 (1999)；Lefranc, M.P. 等人, Dev. Comp. Immunol.[發展與比較免疫學], 27, 55-77 (2003)（「IMGT」編號方案））。抗原結合位點的定義還在以下文獻中描述：Ruiz等人, Nucleic Acids Res. [ 核酸研究 ], 28:219-221 (2000)；和Lefranc, M. P., Nucleic Acids Res.[核酸研究], 29:207-209 (2001)；MacCallum等人, J. Mol. Biol.[ 分子生物學雜誌 ], 262:732-745 (1996)；和Martin等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA[美國國家科學院院刊], 86:9268-9272 (1989)；Martin等人, Methods Enzymol. [酶學方法], 203:121-153 (1991)；和Rees等人, 在Sternberg M. J. E.（編）, Protein Structure Prediction[蛋白質結構預測], Oxford University Press [牛津大學出版社], 牛津, 141-172 (1996)中。
例如，根據Kabat，重鏈可變結構域（VH）中的CDR胺基酸殘基編號為31-35（HCDR1）、50-65（HCDR2）和95-102（HCDR3）；並且輕鏈可變結構域（VL）中的CDR胺基酸殘基編號為24-34（LCDR1）、50-56（LCDR2）和89-97（LCDR3）。根據Chothia，VH中的CDR胺基酸編號為26-32（HCDR1）、52-56（HCDR2）和95-102（HCDR3）；VL中的胺基酸殘基編號為26-32（LCDR1）、50-52（LCDR2）和91-96（LCDR3）。藉由結合Kabat和Chothia的CDR定義，CDR由人VH中的胺基酸殘基26-35（HCDR1）、50-65（HCDR2）和95-102（HCDR3）以及人VL中的胺基酸殘基24-34（LCDR1）、50-56（LCDR2）和89-97（LCDR3）組成。根據IMGT，VH中的CDR胺基酸殘基編號為大約26-35（HCDR1）、51-57（HCDR2）和93-102（HCDR3），VL中的CDR胺基酸殘基編號為大約27-32（LCDR1）、50-52（LCDR2）和89-97（LCDR3）（編號根據Kabat）。根據IMGT，可以使用程式IMGT/DomainGapAlign確定抗體的CDR區。
當根據CDR的某個定義（例如Kabat）認為抗體包含CDR時，該定義規定了抗體中存在的CDR殘基的最小數量（即Kabat CDR）。它不排除還存在屬於另一個常規CDR定義但在指定定義之外的其他殘基的事實。例如，包含由Kabat定義的CDR的抗體除了其他可能性之外，還包括其中CDR包含Kabat CDR殘基而不包含其他CDR殘基的抗體，以及其中HCDR1係複合的Chothia-Kabat HCDR1而其他CDR包含Kabat CDR殘基且不包含基於其他定義的另外CDR殘基的抗體。
在一些情況下，CDR與參考抗體（例如，本揭露的抗體）中發現的CDR和/或本揭露中提供的CDR的序列基本上相同。在一些實施方式中，CDR與參考CDR（例如，本揭露中提供的CDR）基本上相同，因為與參考CDR相比，它或者在序列上相同，或者包含1、2、3、4或5個（例如1-5個）胺基酸取代。在一些實施方式中，CDR與參考CDR基本相同，因為它顯示出與參考CDR至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的序列同一性（例如，85-90%、85-95%、85-100%、90-95%、90-100%或95-100%）。在一些實施方式中，CDR與參考CDR基本相同，因為它顯示與參考CDR至少96%、96%、97%、98%、99%或100%的序列同一性。在一些實施方式中，CDR與參考CDR基本相同，因為與參考CDR相比，CDR內的一個胺基酸被缺失、添加或取代，同時CDR的胺基酸序列在其他方面與參考CDR的胺基酸序列完全相同。在一些實施方式中，CDR與參考CDR基本相同，因為與參考CDR相比，CDR內的2、3、4或5個（例如2-5）個胺基酸被缺失、添加或取代，同時CDR的胺基酸序列在其他方面與參考CDR完全相同。在各種實施方式中，抗原結合片段結合與參考抗體相同的抗原。
術語「抗PVRIG抗體」和「結合PVRIG的抗體」係指能夠以足夠的親和力結合PVRIG的抗體，使得該抗體可用作靶向PVRIG的診斷劑和/或治療劑。在一個實施方式中，抗PVRIG抗體與不相關的非PVRIG蛋白的結合程度小於所測量的抗體與PVRIG的結合的約10%，例如藉由放射免疫測定（RIA）。在某些實施方式中，結合PVRIG的抗體具有≤ 1 M、≤ 100 nM、≤ 10 nM、≤ 5 nm、≤ 4 nM、≤ 3 nM、≤ 2 nM、≤ 1 nM、≤ 0.1 nM、≤ 0.01 nM或≤ 0.001 nM（ 例如10 -8M或更少， 例如從10 -8M到10 -13M， 例如，從10 -9M到10 -13M）的解離常數（ K D）。
術語「抗體」進一步包括但不限於單株抗體、人抗體、人源化抗體、嵌合抗體和抗獨特型（抗Id）抗體。抗體可以包括，例如，單株抗體、重組產生的抗體、單特異性抗體、多特異性抗體（包括雙特異性抗體）、人抗體、工程改造的抗體、人源化抗體、嵌合抗體、免疫球蛋白、合成的抗體、包含兩個重鏈和兩個輕鏈分子的四聚體抗體、抗體輕鏈單體、抗體重鏈單體、抗體輕鏈二聚體、抗體重鏈二聚體、抗體輕鏈-抗體重鏈對、內抗體、抗體融合體（本文有時稱為「抗體軛合物」）、異軛合物抗體、單結構域抗體、單價抗體、單鏈抗體或單鏈Fv（scFv）、駱駝化抗體、親和體、Fab片段、F(ab')2片段、二硫鍵連接的Fv（sdFv）、抗獨特型（抗Id）抗體（包括，例如，抗抗Id抗體）、微抗體、結構域抗體、合成的抗體（本文有時稱為「抗體模擬物」）、以及上述任意的抗原結合片段。在某些實施方式中，本文描述的抗體係指多株抗體群體。抗體還可包含例如Fab'片段、Fd'片段、Fd片段、分離的CDR、單鏈Fv、多肽-Fc融合體、單結構域抗體（例如，鯊魚單結構域抗體諸如IgNAR或其片段）、駱駝抗體、單鏈或串聯雙抗體（TandAb ®）、Anticalins ®、Nanobodies ®微型抗體、BiTE ®、錨蛋白重複蛋白或DARPINs ®、Avimers ®、DART、TCR樣抗體、Adnectins ®、Affilins ®、Trans-Bodies ®、Affibodies ®、TrimerX ®、MicroProteins、Fynomers ®、Centyrins ®和KALBITOR ®。
免疫球蛋白可衍生自任何公知的同種型，包括但不限於IgA、分泌性IgA、IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY。IgG亞類亦為熟悉該項技術者眾所周知的，並且包括但不限於人IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。術語「抗體」和「免疫球蛋白」或「Ig」在本文中可以互換使用。
術語「抗體」包括完整抗體及其結合片段。通常，片段與衍生它們的完整抗體競爭與靶標的特異性結合。片段包括單獨的重鏈、輕鏈Fab、Fab'、F(ab′)2、Fv片段和單結構域抗體。單（可變）結構域抗體包括常規抗體中與其VL配偶體分離的VH區（或反之亦然）（Ward等人，1989， Nature[自然] 341: 544-546）以及來自諸如駱駝科或軟骨魚（例如，鉸口鯊）的VH區（有時稱為VHH），其中VH區與VL區無關聯（參見，例如，WO 9404678）。例如，來自駱駝科的天然單可變區抗體包括VHH可變區以及CH2和CH3恒定區。單結構域抗體可以藉由與常規抗體類似的方法進行人源化。Dab類型的抗體通常從人來源的抗體中獲得。奈米抗體類型的抗體源自駱駝科或鯊魚，並且可以進行人源化。片段可以藉由重組DNA技術產生，或者藉由完整免疫球蛋白的酶促或化學分離產生。術語「抗體」還包括雙特異性、三特異性和多特異性抗體。例如，雙特異性或雙功能抗體係具有兩個不同重/輕鏈對和兩個不同結合位點的人工雜交抗體（參見，例如，Songsivilai和Lachmann, Clin. Exp. Immunol.[臨床與實驗免疫學], 79:315-321 (1990)；Kostelny等人, J. Immunol.[ 免疫學雜誌 ], 148:1547-53 (1992)）。
抗體可以存在，例如，作為完整的免疫球蛋白或藉由用各種肽酶消化產生的許多特徵良好的片段。例如，胃蛋白酶在鉸鏈區二硫鍵下方消化抗體，產生F(ab)′2，Fab的二聚體，其本身係藉由二硫鍵與VH-CH1連接的輕鏈。F(ab)'2可以在溫和條件下還原以破壞鉸鏈區的二硫鍵，從而將F(ab)'2二聚體轉化為Fab'單體。Fab'單體本質上係具有部分鉸鏈區的Fab（ 參見 Fundamental Immunology[ 基礎免疫學]（Paul編輯，第3版，1993）。雖然各種抗體片段係根據完整抗體的消化來定義的，但熟悉該項技術者將理解，此類片段可以化學地或藉由使用重組DNA方法從頭合成。因此，如本文所用，術語抗體還包括藉由修飾完整抗體產生的抗體片段，或使用重組DNA方法（例如，單鏈Fv）重新合成的抗體片段，或使用噬菌體展示文庫鑒定的抗體片段（參見，例如，McCafferty等人(1990)）。
「抗原」係指激發免疫響應或能夠被抗體或抗原結合分子結合的任何分子。免疫響應可以涉及抗體產生或特定免疫活性細胞的活化或兩者。熟悉該項技術者將容易理解任何大分子，包括實際上所有蛋白質或肽，都可以充當抗原。抗原可以內源表現，即，由基因組DNA表現，或者可以重組表現。抗原可為特定組織（例如癌細胞）特異性的，也可為廣泛表現的。此外，較大分子的片段可以充當抗原。在一個實施方式中，抗原係腫瘤抗原。在一個具體實施方式中，抗原係PVRIG的全部或片段。
「抗原結合分子」、「抗原結合部分」或「抗體片段」係指包含該分子所源自的抗體的抗原結合部分（例如，CDR）的任何分子。抗體片段之實例包括但不限於Fab、Fab'、F(ab′)2和Fv片段、dAb、線性抗體、scFv抗體和由抗原結合分子形成的多特異性抗體。肽體（即，包含肽結合結構域的Fc融合分子）係合適的抗原結合分子的另一個實例。在一些實施方式中，抗原結合分子結合腫瘤細胞上的抗原。在某些實施方式中，抗原結合分子結合PVRIG。在進一步的實施方式中，抗原結合分子係特異性結合抗原的抗體片段，包括其一或多個互補決定區（CDR）。在另外的實施方式中，抗原結合分子係單鏈可變片段（scFv）。
除非另有說明，否則「抗原結合片段」意指抗體的抗原結合片段，即保留與全長抗體結合的抗原特異性結合的能力的抗體片段，例如保留一或多個CDR區的片段。抗原結合片段之實例包括但不限於Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段；雙抗體；線性抗體；單鏈抗體分子，例如，單鏈Fv（ScFv）；奈米抗體以及從抗體片段形成的多特異性抗體。在一些實施方式中，抗原結合分子結合腫瘤細胞上的抗原。在某些實施方式中，抗原結合分子結合PVRIG。
抗原結合片段可以藉由任何方式產生。例如，在一些實施方式中，抗原結合片段可以藉由完整抗體的片段化以酶法或化學法產生。在一些實施方式中，抗原結合片段可以重組產生（即，藉由工程改造的核酸序列的表現）。在一些實施方式中，抗原結合片段可以完全或部分合成地產生。在一些實施方式中，抗原結合片段可以具有至少約50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190或更多個胺基酸的長度；在一些實施方式中，至少約200個胺基酸（例如，50-100、50-150、50-200或100-200個胺基酸）。
「抗原呈現細胞」或「APC」係指加工抗原並將其呈遞給T細胞的細胞。示例性APC包括樹突細胞、巨噬細胞、B細胞、某些活化的上皮細胞和能夠進行TCR刺激和適當的T細胞共刺激的其他細胞類型。
如本文所用，「抗腫瘤效應」係指一種生物效應，其可以表現為腫瘤體積減小、腫瘤細胞數量減少、腫瘤細胞增殖減少、轉移數量減少、總生存期或無進展生存期增加、預期壽命的增加或與腫瘤相關的各種生理症狀的改善。
「抗腫瘤響應」當指接受治療方案（例如本文所述之療法）治療的癌症患者時，表示至少一種積極的治療效果，例如減少的癌細胞數量、減小的腫瘤大小、降低的癌細胞浸潤到周圍器官的速率、降低的腫瘤轉移或腫瘤生長速率或無進展存活。癌症的積極治療效果可以通過多種方式測量（參見，例如，Weber, W.A. 「Assessing tumor response to therapy.[評估腫瘤對治療的響應]」 Journal of nuclear medicine50.Suppl 1 [核醫學雜誌50 增刊1] (2009): 1S-10S）；Eisenhauer等人，同上）。在一些實施方式中，使用RECIST 1.1標準、二維irRC或單維irRC評估對本文所述療法的抗腫瘤響應。在一些實施方式中，抗腫瘤響應係SD、PR、CR、PFS或DFS中的任一種。
如果一個事件或實體的存在、水平和/或形式與另一個事件或實體的存在、水平和/或形式相關，則兩個事件或實體彼此「關聯」。例如，如果實體（例如，多肽、基因特徵、代謝物、微生物等）的存在、水平和/或形式與疾病、障礙或病症的發病率和/或易感性有關（例如，跨相關群體），則該實體被認為與該疾病、障礙或病症相關。例如，如果兩個或更多個實體直接或間接相互作用，使得其在物理上彼此接近和/或保持彼此接近（例如，結合），則其在物理上彼此「相關聯」。在另外的實例中，物理上彼此相關聯的兩個或更多個實體彼此共價連接或聯接，或例如藉由氫鍵、凡得瓦相互作用、疏水性相互作用、磁性和其組合非共價相關聯。
B細胞在體液免疫（涉及抗體）中起主要作用。B細胞產生抗體並發揮抗原呈現細胞（APC）的作用，藉由抗原相互作用活化後轉變為記憶B細胞。在哺乳動物中，未成熟的B細胞在骨髓中形成，因此得名。
術語「結合」通常指兩個或更多個實體之間的非共價關聯。直接結合涉及實體或部分之間的物理接觸。「間接」結合涉及藉由與一或多個中間實體的物理接觸的物理交互。可以在各種情況中的任何一種情況下評估兩個或更多個實體之間的結合，例如，孤立地或在更複雜的系統的情況下（例如，在與載劑實體和/或在生物系統諸如細胞中共價地或以其他方式相關聯時）研究相互作用的實體或部分。
「結合親和力」總體上係指分子（例如，抗體）的單個結合位點與其結合配偶體（partner）（例如，抗原）之間的非共價相互作用的總和的強度。結合親和力可以以本領域已知的多種方式測量和/或表述，包括但不限於平衡解離常數（K D）和平衡締合常數（ K A）。一般來說，分子X對其配偶體Y的親和力可以用平衡解離常數（ K D）表示。
術語「緩衝液」涵蓋將本揭露的組成物的溶液pH維持在可接受的範圍內的那些藥劑。
本文中的術語「癌症」或「腫瘤」具有如本領域理解的最廣泛的含義，並且係指哺乳動物中典型地以不受調控的細胞生長為特徵的生理病症。在本揭露的上下文中，癌症不限於某個類型或位置。
一般來說，「癌症」係指以體內異常細胞不受控制的生長為特徵的一大類各種疾病。不受控制的細胞分裂和生長導致惡性腫瘤的形成，其侵入鄰近組織，也可能通過淋巴系統或血流轉移到身體的遠處部位。
「癌症」或「癌組織」可以包括腫瘤。可以藉由本揭露的方法治療的癌症之實例包括但不限於免疫系統的癌症，包括淋巴瘤、白血病、骨髓瘤和其他白血球惡性腫瘤。在一些實施方式中，本揭露的方法可用於減小衍生自以下的腫瘤的腫瘤大小：例如，骨癌、胰臟癌、皮膚癌、頭部或頸部癌症、皮膚或眼內惡性黑色素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛門區域的癌症、胃癌、睪丸癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮內膜癌、子宮頸癌、陰道癌、外陰癌、多發性骨髓瘤、霍奇金病、非何杰金氏淋巴瘤（NHL）、原發性縱膈腔大B細胞淋巴瘤（PMBC）、彌漫性大B細胞淋巴瘤（DLBCL）、濾泡性淋巴瘤（FL）、轉化性濾泡性淋巴瘤、脾臟緣帶淋巴瘤（SMZL）、食道癌、小腸癌、內分泌系統癌症、甲狀腺癌、甲狀旁腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、慢性或急性白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性淋巴母細胞白血病（ALL）（包括非T細胞ALL）、慢性淋巴球白血病（CLL）、兒童實性瘤、淋巴球淋巴瘤、膀胱癌、腎癌或輸尿管癌、腎盂癌、中樞神經系統（CNS）腫瘤、原發性CNS淋巴瘤、腫瘤血管生成、脊柱軸腫瘤、腦幹神經膠質瘤、垂體腺瘤、卡波西肉瘤、表皮樣癌、鱗狀細胞癌、T細胞淋巴瘤、環境誘發的癌症（包括石棉誘發的癌症）、其他B細胞惡性腫瘤、以及所述癌症的組合。在一個具體的實施方式中，癌症係多發性骨髓瘤。特定的癌症可以對化學療法或放射療法有響應，或者該癌症可為難治性的。難治性癌症係指無法通過外科手術干預的癌症，並且該癌症最初對化療或放射治療沒有響應，或者隨著時間的推移而變得沒有響應。癌症進一步包括兩線或更多線全身療法後的復發性或難治性大B細胞淋巴瘤，包括未另外指定的彌漫性大B細胞淋巴瘤（DLBCL）、兩線或更多線全身療法後的原發性縱膈腔大B細胞淋巴瘤、高級別B細胞淋巴瘤和濾泡性淋巴瘤引起的DLBCL。
「生物治療劑」係指在支持腫瘤維持和/或生長或抑制抗腫瘤免疫響應的任何生物通路中阻斷配體/受體傳訊的生物分子，例如抗體或融合蛋白。
「化療劑」係指可以導致癌細胞死亡，或干擾癌細胞的生長、分裂、修復和/或功能的化學或生物物質。化療劑的類別包括但不限於：微管抑制劑，例如，紫杉烷類（紫杉醇、多西他賽）和長春花生物鹼（長春新鹼、長春花鹼、長春瑞濱）；抗代謝藥（5-氟尿嘧啶、卡培他濱、吉西他濱）和抗葉酸藥（胺甲喋呤、培美曲塞）；激酶抑制劑（克唑替尼、厄洛替尼、舒尼替尼）；拓樸異構酶抑制劑（德魯替康、托泊替康、伊立替康、蒽環類、依托泊苷）；細胞週期獨立藥物，例如，鉑化合物和類似物（奧沙利鉑）、三氮烯、烷化劑（環磷醯胺）、紡錘體毒植物生物鹼（多柔比星）、細胞毒性/抗腫瘤抗生素（博萊黴素、光神黴素、絲裂黴素）、光敏劑、抗雌激素和選擇性雌激素受體調節劑（SERM）、抗黃體素、雌激素受體下調劑（ERD）、雌激素受體拮抗劑、促黃體激素釋放激素促效劑、抗雄激素、芳香酶抑制劑、EGFR抑制劑、VEGF抑制劑和抑制與異常細胞增殖或腫瘤生長有關的基因表現的反義寡核苷酸。在早期線環境下針對某些癌症（諸如結腸癌）的當前護理標準（SOC）治療包括基於氟嘧啶、奧沙利鉑和伊立替康聯合或序貫使用的化療，可選擇靶向血管內皮生長因子（VEGF）的單株抗體（例如，貝伐珠單抗、ziv-阿柏西普）或靶向血管內皮生長因子受體的單株抗體（例如，雷莫蘆單抗），以及在患有Ras野生型腫瘤的患者中，靶向表皮生長因子（EGF）受體的單株抗體（例如，西妥昔單抗、帕尼單抗）。對於二線以外接受過大量預先治療的患者來說，治療選擇尤其有限，並且相關的毒性可能很嚴重。
如本文所用，對於諸如揭露的抗PVRIG抗體和抗PD-1抗體替雷利珠單抗等藥劑，「共同投與」意指投與藥劑以具有重疊的治療活性，並且不一定意指該等藥劑被同時投與於受試者。該等藥劑在投與之前可以或可以不進行物理組合。在一個實施方式中，將藥劑同時或大約同時投與於受試者。例如，抗PVRIG抗體和抗PD-1抗體可以包含在單獨的小瓶中，當在液體溶液中時，可以將其混合到相同的靜脈內輸注袋或注射裝置中，並且同時投與於患者。
如本文所用，「共同配製（co-formulated或co-formulation或coformulation或coformulated）」係指配製在一起並作為組合產品儲存在單個小瓶或容器中（例如注射裝置），而不是單獨配製和儲存然後在投與前混合或單獨投與的至少兩種不同的抗體或其抗原結合片段。在一個實施方式中，共配製物含有兩種不同的抗體或其抗原結合片段。
「組合療法」係指其中受試者同時暴露於兩個或更多個治療方案（例如，兩個或更多個治療部分）的那些情況。在一些實施方式中，兩個或更多個方案可以同時投與；在一些實施方式中，此類方案可以順序投與（例如，第一方案的所有「劑量」在第二方案的任何劑量的投與之前投與）；在一些實施方式中，此類藥劑以重疊給藥方案投與。在一些實施方式中，組合療法的「投與」可以涉及向接受組合中的一或多個藥劑或方式的受試者投與一或多個其他藥劑或方式。為了清楚起見，組合療法不需要將單獨的藥劑在單個組成物中一起投與（或甚至必要地同時），但是在一些實施方式中，兩種或更多種藥劑或其活性部分可以在組合組成物中或者甚至是在組合化合物中一起投與（例如，作為單個化學複合物或共價實體的一部分）。這樣的投與也涵蓋在多個容器中或在每種活性成分的獨立容器（例如，膠囊、粉末和液體）中共同投與。可以將粉末和/或液體在投與之前重構或稀釋到所期望的劑量。因此，短語「與…組合」意指將抗PVRIG抗體在投與另外的治療劑的同時、就在該投與前或就在該投與後投與於受試者。在某些實施方式中，將抗PVRIG抗體作為與另外的治療劑的共同配製物來投與。
如本文所使用的術語「比較窗口」包括對多個連續或不連續位置中的任意一個的區段的引用，其範圍可以從10到600個位置。在一些情況下，比較窗口可包括總比對的任何子集，即一級序列中的連續位置、三級空間中的相鄰位置（但在一級序列中不連續）、或比對中1個至所有殘基的任何其他子集。在一些情況下，比較窗口可包括至少10、20、50、100、200、300、400、500或600個位置。在一些情況下，比較窗口可包括至多10、20、50、100、200、300、400、500或600個位置。在一些情況下，比較窗口可包括至少50個至200個位置，或至少100個至至少150個位置，其中在對兩個序列進行最佳比對後，可以將序列與具有相同連續或非連續位置數的參考序列進行比較。
貫穿本說明書，「包含（comprise）」一詞或變化形式（例如「包含了（comprises）」或「包含著（comprising）」）應被理解為意指包括所陳述的要素、整體或步驟，或者多個要素、整體或步驟的群組，但不排除任何其他要素、整體或步驟，或者多個要素、整體或步驟的群組。應當理解，無論在本文中將多方面用語言「包含」來描述的情況如何，還提供以「由……組成」和/或「本質上由……組成」的術語描述的另外相似方面。
術語「恒定區」和「恒定結構域」可互換並且具有本領域常見的含義。恒定區係抗體部分，例如，輕鏈和/或重鏈的羧基末端部分，該抗體部分不直接參與抗體與抗原的結合，但是可以表現出各種效應子功能，諸如與Fc受體的相互作用。免疫球蛋白分子的恒定區通常具有相對於免疫球蛋白可變結構域更保守的胺基酸序列。
「Chothia」在本文中係指在Al-Lazikani等人, JMB 273: 927-948（1997）中描述的抗體編號系統。
在整個說明書和申請專利範圍中以包括性含義使用「包含（comprising）」或變型，例如「包含（comprise）」、「包含（comprises）」或「包含（comprised of）」，該包括性含義即指定所闡述特徵的存在，但不排除其他特徵的存在或添加，該其他特徵的存在或添加可能實質性增強本發明之任何實施方式的操作或效用，除非上下文中由於表現語言或必要的暗示另有要求。
「保守修飾的變體」或「保守取代」係指蛋白質中的胺基酸被具有相似特徵（例如，電荷、側鏈大小、疏水性/親水性、主鏈構形和剛度等）的其他胺基酸取代，使得該等改變可以經常進行而不改變蛋白質的生物學活性或其他期望特性，例如抗原親和力和/或特異性。熟悉該項技術者認識到，通常，多肽的非必需區域中的單個胺基酸取代基本上不會改變生物學活性（參見，例如，Watson 等人, （1987）Molecular Biology of the Gene [基因分子生物學], 本傑明/卡明斯出版公司（The Benjamin/Cummings Pub. Co.）, 第224頁（第4版））。另外，結構或功能上相似的胺基酸的取代不太可能破壞生物活性。示例性保守取代列於下表3中。
「接觸」按照其一般的含義使用，並且係指使至少兩個不同的種類（例如，化合物（包括生物分子）或細胞）變得足夠近以反應、相互作用或物理接觸的過程。因此，術語「接觸」可以包括允許兩種物質反應、相互作用或物理接觸，其中兩種物質可為例如本文所述之抗PVRIG抗體和PVRIG抗原。在某些實施方式中，接觸包括例如允許本文所述之抗PVRIG抗體與PVRIG抗原相互作用。
「對應於」可用於通過與適當的參考分子或組成物比較來指定分子或組成物中的結構元件的位置/身份。例如，在一些實施方式中，聚合物中的單體殘基（例如，多肽中的胺基酸殘基或多核苷酸中的核酸殘基）可以被鑒定為「對應於」合適的參考聚合物中的殘基。例如，為簡單起見，可以使用基於參考相關多肽的規範編號系統來指定多肽中的殘基，使得「對應於」例如位置100處的殘基的胺基酸實際上不一定是胺基酸鏈中的第100個胺基酸，前提是它對應於參考多肽中位置100處的殘基。可以使用各種序列比對策略，包括軟體程式，例如BLAST、CS-BLAST、CUDASW ++、DIAMOND、FASTA、GGSEARCH/GLSEARCH、Genoogle、HMMER、HHpred/HHsearch、IDF、Infernal、KLAST、USEARCH、parasail、PSI-BLAST、PSI-Search、ScalaBLAST、Sequilab、SAM、SSEARCH、SWAPHI、SWAPHI-LS、SWIMM或SWIPE，其可用於例如根據本揭露鑒定多肽和/或核酸中的「相應」殘基。
術語「相應的人種系序列」係指編碼人可變區胺基酸序列或亞序列的核酸序列，與由人種系免疫球蛋白可變區序列編碼的所有其他已知可變區胺基酸序列相比，其與參考可變區胺基酸序列或亞序列具有最高確定的胺基酸序列同一性。相應的人種系序列也可以指與所有其他評估的可變區胺基酸序列相比，與參考可變區胺基酸序列或亞序列具有最高胺基酸序列同一性的人可變區胺基酸序列或亞序列。相應的人種系序列可以僅是框架區，僅互補決定區，框架和互補決定區，可變區段（如上定義），或包含可變區的序列或亞序列的其他組合。可以使用本文所述之方法確定序列同一性，例如使用BLAST、ALIGN或本領域已知的另一種比對演算法比對兩個序列。相應的人種系核酸或胺基酸序列可以與參考可變區核酸或胺基酸序列具有至少約90%、91、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性。此外，如果抗體含有恒定區，則恒定區也源自這樣的人序列，例如人種系序列，或人種系序列的突變形式或含有源自人框架序列分析的共通框架序列的抗體，例如如Knappik等人, J. Mol. Biol. [分子生物學雜誌] 296:57-86, 2000中所述。
術語「交叉競爭」係指抗體或其抗原結合片段交叉競爭結合抗原的能力，其表明該等抗體或其抗原結合片段與抗原上的相同表位區結合，並立體地阻礙其他交叉競爭抗體或其抗原結合片段與該特定表位區的結合。由於此類交叉競爭抗體或其抗原結合片段與PVRIG上相同表位區域的結合，因此預期此類交叉競爭抗體或其抗原結合片段具有與本文揭露的抗PVRIG抗體非常相似的功能特性。交叉競爭抗體或其抗原結合片段可以基於其在標準結合測定例如BIAcore分析（百普賽斯公司（Acro Biosystems））、ELISA測定或流式細胞術中與本文揭露的抗PVRIG抗體交叉競爭的能力而容易地鑒定。
如果抗原與第一結合分子、抗體或其抗原結合分子之間的相互作用阻斷、限制、抑制或以其他方式降低參考結合分子、參考抗體或其抗原結合分子與抗原相互作用的能力，則抗原結合分子、抗體或其抗原結合分子與參考抗體或其抗原結合分子「交叉競爭」。交叉競爭可為完全的，例如，結合分子與抗原的結合完全阻斷參考結合分子結合抗原的能力，或者其可為部分的，例如，結合分子與抗原的結合降低參考結合分子結合抗原的能力。在某些實施方式中，與參考抗原結合分子交叉競爭的抗原結合分子結合與參考抗原結合分子相同或重疊的表位。在其他實施方式中，與參考抗原結合分子交叉競爭的抗原結合分子結合與參考抗原結合分子不同的表位。可以使用許多類型的競爭性結合測定來測定一種抗原結合分子是否與另一種抗原結合分子競爭，例如：固相直接或間接放射免疫測定（RIA）；固相直接或間接酶免疫測定（EIA）；夾心競爭測定（Stahli等人, 1983, Methods in Enzymology [酶學方法] 9:242-253）；固相直接生物素-卵白素EIA（Kirkland等人, 1986, J. Immunol.[ 免疫學雜誌 ]137:3614-3619）；固相直接標記測定、固相直接標記夾層測定（Harlow和Lane, 1988, Antibodies, A Laboratory Manual [抗體，實驗室手冊], Cold Spring Harbor Press [冷泉港出版社]）；使用1-125標記的直接固相標記RIA（Morel等人, 1988, Molec. Immunol. [分子免疫學] 25:7-15）；固相直接生物素-卵白素EIA（Cheung等人, 1990, Virology [病毒學] 176:546-552）；和直接標記的RIA（Moldenhauer等人, 1990, Scand. J. Immunol.[斯堪的納維亞免疫學雜誌] 32:77-82）。
如本文所用，「細胞介素」係指由一個細胞響應於與特定抗原接觸而釋放的非抗體蛋白，其中細胞介素與第二細胞相互作用以介導第二細胞中的反應。細胞介素可由細胞內源表現或投與於受試者。免疫細胞（包括巨噬細胞、B細胞、T細胞和肥大細胞）可以釋放細胞介素來傳播免疫響應。細胞介素可以在受體細胞中誘導各種反應。細胞介素可包括穩態細胞介素、趨化因子、促炎細胞介素、效應子和急性期蛋白。例如，穩態細胞介素，包括介白素IL-7和IL-15，可促進免疫細胞生存和增殖，並且促炎細胞介素可促進炎症響應。穩態細胞介素之實例包括但不限於IL-2、IL-4、IL-5、IL-7、IL-10、IL-12p40、IL-12p70、IL-15和干擾素（IFN）γ。促炎細胞介素之實例包括但不限於IL-1a、IL-1b、IL-6、IL-13、IL-17a、腫瘤壞死因子（TNF）-α、TNF-β、纖維母細胞生長因子（FGF）2、顆粒性白血球巨噬細胞群落刺激因子（GM-CSF）、可溶性細胞間黏附分子1（sICAM-1）、可溶性血管黏附分子1（sVCAM-1）、血管內皮生長因子（VEGF）、VEGF-C、VEGF-D和胎盤生長因子（PLGF）。效應子之實例包括但不限於顆粒酶A、顆粒酶B、可溶性Fas配體（sFasL）和穿孔素。急性期蛋白之實例包括但不限於C反應蛋白（CRP）和血清澱粉樣蛋白A（SAA）。
術語「結構域」係指實體的一部分。在一些實施方式中，「結構域」與實體的結構和/或功能特徵相關聯，例如，使得當該結構域與其親本實體的其餘部分物理分離時，其基本上或完全保留該結構和/或功能特徵。在一些實施方式中，結構域可以包括實體的一部分，該實體在與該（親本）實體分離並與不同的（接收）實體連接或聯接時，基本上保留和/或賦予接收實體一或多個例如在親本實體中表徵它的結構和/或功能特徵。在一些實施方式中，結構域係分子的一部分（例如，小分子、碳水化合物、脂質、核酸或多肽）。在一些實施方式中，結構域係多肽的一部分；在一些此類實施方式中，結構域的特徵在於結構元件（例如，胺基酸序列或序列模體、α-螺旋特徵、β-片特徵、捲曲螺旋特徵、無規捲曲特徵、等），和/或功能特徵（例如，結合活性、酶促活性、折疊活性、傳訊活性、等）。
「DCR」或「疾病控制率」係指CR + PR + SD。
可以將PVRL2 mRNA的表現水平與定量RT-PCR中經常使用的一或多種參考基因的mRNA表現水平進行比較。在一些實施方式中，基於與適當對照的PVRL2表現水平（蛋白質和/或mRNA）的比較，惡性細胞和/或腫瘤內浸潤性免疫細胞的PVRL2表現水平（蛋白質和/或mRNA）被確定為「過表現」或「升高」。例如，對照PVRL2蛋白或mRNA表現水平可為在相同類型的非惡性細胞中或在來自匹配的正常組織的切片中定量的水平。在一些較佳的實施方式中，如果樣本中的PVRL2蛋白（和/或PVRL2 mRNA）比對照中的至少高10%、20%或30%，則確定腫瘤樣本中的PVRL2表現升高。
術語「劑型」可用於指用於向受試者投與的活性劑（例如，抗原結合系統或抗體）的物理離散單位。通常，每個這樣的單位含有預定量的活性劑。在一些實施方式中，這種量係適合於根據已經確定在投與給相關群體時與期望或有益結果有關的給藥方案投與的單位劑量（或其完整分數）。投與給受試者的治療性組成物或藥劑的總量由一名或多名執業醫師確定，並且可以涉及投與多於一個劑型。
術語「給藥方案」可用於指單獨向受試者投與的一組一或多個單位劑量。在一些實施方式中，給定的治療劑具有推薦的給藥方案，其可以涉及一或多個劑量。在一些實施方式中，給藥方案包括多個劑量，每個劑量在時間上與其他劑量分開。在一些實施方式中，給藥方案包括多個劑量並且連續劑量彼此間隔相等長度的時間段；在一些實施方式中，給藥方案包括多個劑量並且連續劑量彼此間隔至少兩個不同長度的時間段。在一些實施方式中，給藥方案內的所有劑量具有相同的單位劑量。在一些實施方式中，給藥方案內的不同給藥具有不同的量。在一些實施方式中，給藥方案包含呈第一給藥量的第一次給藥，接著是呈不同於第一給藥量的第二給藥量的一次或多次其他給藥。在一些實施方式中，定期調整給藥方案以實現期望的或有益的結果。
「持久的穩定疾病率」係指約23週內疾病穩定（SD），其中SD係指癌症的範圍或嚴重程度既不減少也不增加。
EC50係抗體效力的量度。EC50的單位以濃度給出，以莫耳單位（M）表示，其中1 M相當於1 mol/L。因此，EC50係獲得50%結合飽和度所需的抗體或其抗原結合片段的莫耳濃度。
「效應細胞」係指表現一或多個Fc受體並介導一或多個效應子功能的免疫系統細胞。在一些實施方式中，效應細胞可包括但不限於單核細胞、巨噬細胞、嗜中性白血球、樹突細胞、嗜酸性球、肥大細胞、血小板、大顆粒淋巴球、蘭格漢氏細胞、自然殺手（NK）細胞、T淋巴球和B淋巴球中的一或多種。效應細胞可為任何生物體的細胞，包括但不限於人、小鼠、大鼠、兔和猴。
如本文所用，「洗脫溶液」係指用於從固定相洗脫目的抗體或抗原結合片段的溶液。洗脫溶液可包含一或多種鹽或緩衝物質。洗脫溶液的鹽、緩衝物質、pH或電導率中的一或多種的存在使得抗體或抗原結合片段從固定相洗脫。
「效應子功能」係指抗體Fc區與Fc受體或配體相互作用的生物學結果。效應子功能包括但不限於抗體依賴性細胞介導的細胞毒性（ADCC）、抗體依賴性細胞介導的吞噬作用（ADCP）和補體介導的細胞毒性（CMC）。效應子功能可為抗原結合依賴性的、抗原結合非依賴性的、或兩者。ADCC係指免疫效應細胞裂解抗體結合的靶細胞。在不希望受任何理論約束的情況下，ADCC通常被理解為涉及攜帶Fc受體（FcR）的效應細胞識別並隨後殺傷抗體包被的靶細胞（例如，在其表面上表現與抗體結合的抗原的細胞）。介導ADCC的效應細胞可包括免疫細胞，包括但不限於自然殺手（NK）細胞、巨噬細胞、嗜中性白血球、嗜酸性球中的一或多種。
「表位」係抗原決定簇。該等係具有抗原性的分子上的特定化學基團或肽序列，即，可引發特異性免疫響應。抗體特異性結合多肽（例如PVRIG）上的特定抗原表位。因此，抗體的表位係抗體結合的抗原區域。如果兩種抗體各自競爭性地抑制（阻斷）另一種抗體與抗原的結合，則兩種抗體結合相同或重疊的表位。也就是說，1 ×、5 ×、10 ×、20 ×或100 ×過量的一種抗體抑制另一種抗體的結合至少30%，但較佳的是50%、75%、90%或甚至99%，如在競爭性結合測定中測量（例如，Junghans等人, Cancer Res.[癌症研究] 50:1495, 1990）。可替代地，如果減少或消除一種抗體的結合的抗原中的基本上全部胺基酸突變減少或消除了另一抗體的結合，則兩種抗體具有相同的表位。如果一些減少或消除一種抗體的結合的胺基酸突變減少或消除另一抗體的結合，則兩種抗體具有「重疊表位」。
如本揭露中所使用的，術語「表位」意指免疫原（例如，任何初級免疫原）上的任何抗原決定簇，抗體通過抗原結合位點與其結合。抗原上的決定簇或抗原決定簇通常由以下組成：分子例如胺基酸或糖側鏈的化學活性表面分組，並且通常具有具體的三維結構特徵、以及具體的電荷特徵。在一些情況下，表位可為抗原上表面暴露的殘基和/或碳水化合物部分的區域。在一些情況下，面積範圍為100 Å - 1500 Å。
因此，「表位」係本領域的術語並且指抗體可以特異性結合的抗原的局部區域。表位可為例如多肽的連續胺基酸（線性或連續表位），或者表位可為例如來自一或多個多肽的兩個或更多個非連續區聚集在一起（構形、非線性、間斷或非連續表位）。在某些實施方式中，抗體結合的表位可以藉由例如以下確定：NMR光譜、X射線繞射晶體學研究、ELISA測定、氫/氘交換與質譜聯用（例如，液相層析電灑質譜）、基於陣列的寡肽掃描測定、和/或誘變作圖（例如，定點誘變作圖）。對於X射線晶體學，可以使用本領域已知的任何方法來完成結晶（ 例如，Giegé R等人, (1994) Acta Crystallogr D. Biol Crystallogr[晶體學報D節生物晶體學] 50(Pt 4): 339-350；McPherson A. (1990) Eur J Biochem[歐洲生物化學雜誌] 189: 1-23；Chayen N.E.(1997) Structure[結構] 5: 1269-1274；McPherson A. (1976) J Biol Chem[生物化學雜誌] 251: 6300-6303）。抗體: 抗原晶體可以使用眾所周知的X射線繞射技術進行研究，並且可以使用電腦軟體如X-PLOR進行精製（耶魯大學, 1992, 由分子模擬公司（Molecular Simulations, Inc.）發行；參見，例如，Meth Enzymol [酶學方法] (1985) 第114卷和第115卷, Wyckoff H.W.等人編輯；U.S. 2004/0014194）和BUSTER（Bricogne G.（1993） Acta Crystallogr D Biol Crystallogr[晶體學報D生物晶體學]49（Pt 1）: 37-60；Bricogne G. (1997) Meth Enzymol [ 酶學方法 ]276A: 361-423, Carter C. W編輯；Roversi P.等人, (2000) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr[ 晶體學報 D 節生物晶體學 ]56(Pt 10): 1316-1323）。誘變作圖研究可以使用熟悉該項技術者已知的任何方法來完成。 參見，例如， Champe M.等人, (1995) J Biol Chem[生物化學雜誌] 270: 1388-1394和Cunningham B C和Wells J.A. (1989) Science[科學] 244: 1081-1085描述了誘變技術，包括丙胺酸掃描誘變技術。
術語「平衡解離常數（ K D）」係指解離速率常數（ k off （kd），時間 -1）除以締合速率常數（ k on （ka），時間 -1，M -l）。k on 和k off 可以藉由熟悉該項技術者已知的技術來確定，例如BIACORE ®或KinExA。因此，解離常數（ K D）係給定抗體（例如抗PVRIG抗體或其抗原結合片段）的濃度，在此濃度下PVRIG靶表位的一半可用結合位點在平衡系統中被佔據。莫耳濃度的 K D越小，抗體對其靶抗原表現出的親和力越大。平衡解離常數可以使用本領域任何已知的方法測量。本揭露的抗體通常將具有小於約10 -7或10 -8M，例如小於約10 -9M或10 -10M，在一些方面，小於約10 -11M、10 -12M或10 -13M的平衡解離常數。
在具體的實施方式中，本文提供了抗體或其抗原結合片段，與另一物種的靶抗原（例如，非人PVRIG）相比，該抗體或其抗原結合片段以更高的親和力結合至靶人抗原（例如，人PVRIG）。在一些實施方式中，本文提供了抗體或其抗原結合片段，與另一物種的一個或兩個靶抗原（例如，非人PVRIG、非人PVRIG或兩者）相比，該抗體或其抗原結合片段以更高的親和力結合至人PVRIG。在某些實施方式中，本文提供了抗體或其抗原結合片段，與另一物種的靶抗原相比，該抗體或其抗原結合片段以高5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%或更高的親和力結合至靶人抗原，例如，人PVRIG，如藉由例如放射免疫測定、表面電漿共振或動力學排阻測定所測量的。在某些實施方式中，本文提供了抗體或其抗原結合片段，與另一物種的一個或兩個靶抗原相比，該抗體或其抗原結合片段以高5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%或更高的親和力結合至人PVRIG，如藉由例如放射免疫測定、表面電漿共振或動力學排阻測定所測量的。在具體的實施方式中，與本文所述之結合至靶人抗原的抗體或其抗原結合片段與人抗原的結合相比，該抗體或其抗原結合片段與另一物種的靶抗原的結合將低10%、15%或20%，如藉由例如放射免疫測定、表面電漿共振或動力學排阻測定所測量的。
在一個具體實施方式中，與抗原特異性地結合的分子與抗原結合的 K A比分子與另一種抗原結合時的K A大至少2個對數、2.5個對數、3個對數、4個對數或更大。結合可以包括與結合模體、抗體或其抗原結合片段與非靶標的（即，非靶標）實體的關聯相比，結合模體、抗體或抗原結合系統與結合模體、抗體或抗原結合系統的靶標的優先關聯。
在進一步的實施方式中，如果與結合模體、抗體或其抗原結合片段與非靶標的結合相比，結合模體、抗體或其抗原結合片段與靶標之間的結合大於2倍、大於5倍、大於10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或大於100倍，則該結合模體、抗體、其抗原結合片段或抗原結合系統選擇性地結合靶標。在一些實施方式中，如果結合親和力小於約10 -5M、小於約10 -6M、小於約10 -7M、小於約10 -7M、或小於約10 -9M，則結合模體、抗體或其抗原結合片段選擇性結合靶標。
在另一個實施方式中，特異性結合抗原的分子以約1 × 10 -7M的解離常數（ K D）結合。在一些實施方式中，當 K D為約1 × 10 -9M至約5 × 10 -9M時，抗原結合分子以「高親和力」特異性結合抗原。在一些實施方式中，當 K D為1 × 10 -10M至約5 × 10 -10M時，抗原結合分子以「非常高親和力」特異性結合抗原。在一個實施方式中，抗原結合分子的 K D為10 -9M。在一個實施方式中，解離速率小於約1 × 10 -5。在其他實施方式中，抗原結合分子以約1 × 10 -7M與約1 × 10 -13M之間的 K D結合人PVRIG。在又一實施方式中，抗原結合分子以約1 × 10 -10M至約5 × 10 -10M的 K D結合人PVRIG。在一些實施方式中，抗原結合分子以約1 × 10 -7M與約1 × 10 -13M之間的 K D結合人PVRIG。在又一實施方式中，抗原結合分子以約1 × 10 -10M至約5 × 10 -10M的 K D結合人PVRIG。
術語「賦形劑」係指可以包含在組成物中的藥劑，例如用於提供或有助於所期望的稠度或穩定效果。在一些實施方式中，合適的賦形劑可包括例如澱粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、大米、麵粉、白堊、矽膠、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、滑石、氯化鈉、脫脂奶粉、甘油、丙稀、乙二醇、水、乙醇等。
「胞外結構域」（或「ECD」）係指當多肽存在於細胞膜中時，被理解為多肽的駐留在細胞膜外部的胞外空間中的一部分。
如本文所用，術語「補料分批培養」係指培養細胞之方法，其中在培養過程中向培養物提供另外的營養物。補料分批培養通常在某個時刻停止並收穫培養基中的細胞和/或組分。產品積累並保留在生物反應器中直到運行結束。
如本文所用，「收穫」抗體或抗原結合片段涉及將抗體或抗原結合片段從可包括宿主細胞、細胞聚集體和/或裂解的細胞片段的顆粒物質中分離出來，形成基本上不含宿主細胞和細胞碎片的無細胞級分，即，無細胞「滲透物」。例如，藉由離心、深度過濾和/或微量過濾從細胞培養液中除去此類細胞和細胞碎片。例如，為了製備無細胞滲透物，可以採用中空纖維膜或一系列過濾步驟，例如深度過濾。
本文所述之材料或實體的「片段」或「部分」具有包含整體（例如，物理實體或抽象實體）的離散部分的結構。在一些實施方式中，片段缺少在整體中發現的一或多個部分。在一些實施方式中，片段包含以下或由以下組成：整體中發現的特徵結構元件、結構域或部分。在一些實施方式中，聚合物片段包含以下或由以下組成：整體聚合物中發現的至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500或更多個單體單元（例如，殘基）。在一些實施方式中，聚合物片段包含以下或由以下組成：在整體聚合物中發現的約至少5%、10%、15%、20%、25%、30%、25%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或更多的單體單元（例如，殘基）（例如，85%-90%、85%-95%、85%-100%、90%-95%、90%-100%或95%-100%）。在一些實施方式中，整體材料或實體可以被稱為片段的「母體」。
「Fab」係指「片段抗原結合區」，其係抗體上與抗原結合的區域。它由重鏈和輕鏈各自的一個恒定結構域和一個可變結構域構成。可變結構域包含互補位（抗原結合位點），其包含位於單體胺基末端的一組六（6）個互補決定區。Y形結構的每個臂都結合抗原上的表位。木瓜蛋白酶可用於將免疫球蛋白單體切割成兩個Fab片段和Fc片段。相反，胃蛋白酶在鉸鏈區下方切割，產生F(ab′)2片段和pFc'片段（Janeway, C.A., Jr.等人 2001）。
術語「框架」或「框架區」或「FR」係指插入CDR之間的胺基酸序列。框架區用於對齊CDR以特異性結合抗原的表位（即，將CDR保持在適合抗原結合的方向）。因此，短語「框架區殘基」意指除了本文定義為CDR殘基的高變區殘基之外的那些可變結構域殘基。框架區包括可變輕框架區和可變重框架區。
術語「融合多肽」或「融合蛋白」通常指包含至少兩個區段的多肽。一般而言，含有至少兩個此類區段的多肽被認為是融合多肽，條件是這兩個區段係這樣的部分：(1) 本質上不包含在同一肽中；和/或 (2) 先前未在單個多肽中相互連接或聯接；和/或 (3) 已通過人工作用相互連接或聯接。
術語「基因產物」或「表現產物」通常係指從基因轉錄的RNA（加工前和/或加工後）或由基因轉錄的RNA編碼的多肽（修飾前和/或修飾後）。
當用於指代抗體時，基於恒定結構域的胺基酸序列，術語「重鏈」可以指任何不同的類型，例如，alpha（α）、delta（δ）、epsilon（ε）、γ（γ）和mu（μ），該等類型分別產生IgA、IgD、IgE、IgG和IgM類抗體，包括IgG的亞類，例如，IgG 1、IgG 2、IgG 3和IgG 4。
術語「異源」意指來自除天然存在的序列之外的任何來源。例如，異源核苷酸序列係指與野生型人共刺激蛋白編碼序列不同的核苷酸序列。
如本文所用，「宿主細胞」指用於生產由表現載體編碼的重組蛋白或繁殖導入宿主細胞的表現載體的任何生物體的任何細胞。「哺乳動物重組宿主細胞」指包含異源表現載體的哺乳動物宿主細胞，該異源表現載體可以整合或不整合到宿主細胞染色體中。「細菌重組宿主細胞」指包含異源表現載體的細菌宿主細胞，該異源表現載體可以整合或不整合到宿主細胞染色體中。
本文中的術語「人抗體」意指僅包含人免疫球蛋白蛋白質序列的抗體。產生的可變結構域和恒定結構域序列可以被組裝，或衍生自人免疫球蛋白序列，或與其不可區分的序列。如果在小鼠、小鼠細胞或源自小鼠細胞的融合瘤中產生，人抗體可以包含鼠碳水化合物鏈。類似地，「小鼠抗體」或「大鼠抗體」意指分別僅包含小鼠或大鼠免疫球蛋白蛋白質序列的抗體。
在一些實施方式中，抗體（或抗體組分）可以被認為是「人的」，即使它們的胺基酸序列包含不由人種系免疫球蛋白序列編碼的殘基或元件（例如，藉由體外隨機或位點特異性誘變引入或藉由體內體細胞突變引入的變異）。
術語「人源化」或「人源化抗體」意指含有來自非人（例如鼠）抗體以及人抗體的序列的抗體形式。此類抗體含有源自非人免疫球蛋白的最小序列。通常，人源化抗體將包含基本上至少一個、並且典型地兩個可變結構域的全部，其高變環的全部或基本上全部對應於非人類免疫球蛋白的那些，並且FR的全部或基本上全部係人類免疫球蛋白序列的那些。人源化抗體還將視需要包含免疫球蛋白恒定區（Fc）的至少一部分，典型地是人免疫球蛋白的至少一部分。當有必要區分人源化抗體與親本齧齒動物抗體時，將前綴「hum」、「hu」、「Hu」或「h」添加到抗體殖株名稱中。人源化形式的齧齒動物抗體會通常包含親本齧齒動物抗體的相同CDR序列，但是可包括某些胺基酸取代以增加親和力，增加人源化抗體的穩定性，除去翻譯後修飾或出於其他原因。在一些實施方式中，「人源化」抗體包含基本上具有人框架結構域的胺基酸序列的一或多個框架結構域，以及基本上具有如非人抗體的互補決定區的胺基酸序列的一或多個互補決定區。在一些實施方式中，人源化抗體包含免疫球蛋白恒定區（Fc）的至少一部分，通常是人免疫球蛋白恒定結構域的至少一部分。在一些實施方式中，人源化抗體可以包含人重鏈恒定結構域的CH1、鉸鏈、CH2、CH3和視需要的CH4區。
產生單株抗體的融合瘤可以在體外或在體內培養。高效價的單株抗體可以在體內產生中獲得，其中將來自單個融合瘤的細胞腹膜內注射到小鼠中，例如原始引發的Balb/c小鼠，以產生含有高濃度所需抗體的腹水。可以使用熟悉該項技術者熟知的柱層析方法從這樣的腹水，或從培養物上清液中純化同種型IgM或IgG的單株抗體。
術語「高變區」意指抗體中負責抗原結合的胺基酸殘基。高變區包含來自「CDR」（例如輕鏈可變結構域中的LCDR1、LCDR2和LCDR3以及重鏈可變結構域中的HCDR1、HCDR2和HCDR3）的胺基酸殘基。
IC50係抗體效力的量度。IC50的單位以濃度給出，以莫耳單位（M）表示，其中1 M相當於1 mol/L。因此，IC50係獲得特定生物學或生化功能的50%抑制所需的抗體或其抗原結合片段的莫耳濃度。
術語「同一性」係指聚合物分子之間的總體相關性，例如，核酸分子之間（例如，DNA分子和/或RNA分子）和/或多肽分子之間。術語「相同」或「同一性百分比」係針對一對比對的胺基酸或核酸序列確定的數值得分。同一性百分比衡量兩個序列之間相同殘基（「同一性」）的數量與跨「比較窗口」的比對長度的關係。該數值顯示兩個序列之間相同的胺基酸殘基或核苷酸的百分比，並表明一級結構的相似程度。
用於計算兩個提供的多肽序列之間的百分比同一性的方法係已知的。例如，兩個核酸或多肽序列的同一性百分比的計算可以藉由為了最佳比較目的而對兩個序列進行比對來進行（例如，可以在第一序列和第二序列中的一個或兩個中引入缺口以實現最佳比對，並且出於比較目的，可以忽略不相同的序列）。然後比較相應位置的核苷酸或胺基酸。當第一序列中的一個位置被與第二序列中相應位置相同的殘基（例如，核苷酸或胺基酸）佔據時，則分子在該位置係相同的。兩個序列之間的同一性百分比係這兩個序列共有的相同位置數目的函數，視需要考慮缺口數、每個缺口的長度，它們需要被引入以進行兩個序列的最佳比對。序列的比較或比對以及兩個序列之間百分比同一性的確定可以使用數學演算法來完成，例如BLAST（基本局部比對搜索工具）。在一些實施方式中，如果聚合分子的序列係至少25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%相同（例如，85%-90%、85%-95%、85%-100%、90%-95%、90%-100%，或95%-100%），則認為它們彼此「同源」。
為了計算百分比同一性，被比較的序列通常以給出序列之間最大匹配的方式比對。對於序列比較，通常一個序列用作參考序列，測試序列可以與該參考序列進行比較。當使用序列比較演算法時，可以將測試序列和參考序列輸入電腦中，必要時可以指定子序列坐標，並可以指定序列演算法程式參數。多肽可被認為與第二多肽相同或基本相同，例如，其中兩個肽僅因保守取代而不同。用於比較的序列比對方法係本領域熟知的。
可用於確定百分比同一性的電腦程式的一個實例係GCG套裝程式，其包括GAP（Devereux等人 ,1984, Nucl. Acid Res.[核酸研究] 12:387；Genetics Computer Group, University of Wisconsin, Madison, Wis.[遺傳學電腦組，威斯康辛大學，麥迪森，威斯康辛州]）。電腦演算法GAP係用來比對其百分比序列同一性待確定的兩個多肽或多核苷酸。比對序列以使它們各自的胺基酸或核苷酸達到最佳匹配（提供演算法確定的「匹配範圍」）。在某些實施方式中，該演算法還使用標準比較矩陣（關於PAM 250比較矩陣，參見Dayhoff等人, 1978, Atlas of Protein Sequence and Structure[蛋白質序列和結構圖集] 5:345-352；關於BLOSUM 62比較矩陣，參見Henikoff等人, 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.[美國國家科學院院刊] 89:10915-10919）。其他演算法也可用於比較胺基酸或核酸序列，包括商業電腦程式中可用的那些演算法，例如用於核苷酸序列的BLASTN和用於胺基酸序列的BLASTP、缺口BLAST和PSI-BLAST。示例性的此類程式描述於Altschul等人, 「Basic local alignment search tool[基本局部比對搜索工具],」 J. Mol. Biol.[ 分子生物學雜誌 ], 215(3): 403-410, 1990 ；Altschul等人, Methods in Enzymology[酶學方法]；Altschul等人, 「Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs [缺口BLAST和PSI-BLAST:新一代蛋白質數據庫搜索程式],」 Nucleic Acids Res.[核酸研究] 25:3389-3402, 1997；Baxevanis等人, Bioinformatics: A Practical Guide to the Analysis of Genes and Proteins[生物資訊學:基因和蛋白質分析的實用指南], Wiley[威利出版社], 1998；和Misener等人, (編輯), Bioinformatics Methods and Protocols[生物資訊學方法與方案] (Molecular Biology [分子生物學方法],第132卷中的方法), Humana Press [胡馬納出版社], 1999。
除了鑒定相似序列之外，上述程式通常還提供相似程度的指示。在一些實施方式中，如果兩個序列的相應殘基的至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或更多在相關的殘基區段上相似和/或相同（例如，85%-90%、85%-95%、85%-100%、90%-95%、90%-100%或95%-100%），則認為它們基本相似。在一些實施方式中，相關區段係完整的序列。在一些實施方式中，相關區段為至少10個、至少15個、至少20個、至少25個、至少30個、至少35個、至少40個、至少45個、至少50個、至少55個、至少60個、至少65個、至少70個、至少75個、至少80個、至少85個、至少90個、至少95個、至少100個、至少125個、至少150個、至少175個、至少200個、至少225個、至少250個、至少275個、至少300個、至少325個、至少350個、至少375個、至少400個、至少425個、至少450個、至少475個、至少500個或更多個殘基。具有顯著序列相似性的序列可為彼此的同源物。
「免疫病症」或「免疫障礙」包括例如病理性炎症、炎性障礙和自體免疫障礙或疾病。「免疫病症」還指感染、持續感染和增殖病症，例如癌症、腫瘤和血管生成，包括抵抗免疫系統根除的感染、腫瘤和癌症。「癌性病症」包括，例如，癌症、癌細胞、腫瘤、血管生成和癌前病症例如發育不良。
可以通過多種方式來衡量癌症的積極治療效果（參見, W. A Weber, J Nucl. Med.[ 核醫學雜誌 ]50: I S-lOS (2009)）。衡量功效的一種常見方法係T/C比，即在指定時間對照小鼠與治療小鼠的腫瘤體積之比，其中T/C（%） = 治療組腫瘤體積中值/對照組腫瘤體積中值 x 100。關於腫瘤生長抑制，根據NCI標準，T/C ≤ 42%係最小水平的抗腫瘤活性。T/C ＜ 10%被認為是高抗腫瘤活性水平。在一些實施方式中，藉由投與本揭露的組成物實現的治療係無進展生存期（PFS）、無病生存期（DFS）或總生存期（OS）中的任一種。PFS，也稱為「腫瘤進展時間」指的是在治療期間和治療後癌症不生長的時間長度，並且包括患者經歷完全緩解或部分緩解的時間量，以及患者經歷過疾病穩定的時間量。DFS係指在治療期間和治療後患者保持無病的時間長度。OS係指與原初或未治療的個體或患者相比預期壽命的延長。雖然本揭露的組成物、治療方法和用途的實施方式可能無法有效地在每個患者中實現積極治療效果，它應在統計學上顯著數量的受試者中實現積極治療效果，如本領域已知的任何統計測試所確定的，例如學生t檢驗、chi2檢驗、根據曼（Mann）和惠特尼（Whitney）進行的U檢驗、克魯斯卡爾-沃利斯（Kruskal-Wallis）檢驗（H檢驗）、喬卡契爾-特波斯特拉（Jonckheere-Terpstra）檢驗和威爾科克森（Wilcoxon）檢驗。
「免疫響應」係指免疫系統的細胞（例如，T淋巴球、B淋巴球、自然殺手（NK）細胞、巨噬細胞、嗜酸性球、肥大細胞、樹突細胞和嗜中性白血球）和由該等細胞或肝臟產生的可溶性大分子的（包括抗體、細胞介素和補體）作用，其導致選擇性靶向、結合、破壞和/或消除脊椎動物體內的入侵病原體、感染病原體的細胞或組織、癌細胞或其他異常細胞，或者在自體免疫或病理性炎症的情況下，正常人細胞或組織。
術語「免疫特異性結合」、「免疫特異性識別」、「特異性結合」和「特異性識別」係抗體上下文中的類似術語並且指與抗原（例如表位或免疫複合物）結合的分子，這樣的理解如熟悉該項技術者所理解的那樣。例如，特異性結合抗原的分子可以結合其他肽或多肽，通常具有較低的親和力，如藉由例如免疫測定、BIACORE ®、KinExA 3000儀器（三迪尼儀器公司（Sapidyne Instruments, Boise, Id.））或本領域已知的其他測定確定的。因此，在某些指定的免疫測定條件下，抗體或其抗原結合片段與特定抗原特異性結合係背景水平的至少兩（2）倍，並且不以顯著量與樣本中存在的其他抗原特異性結合。在另一方面，在指定的免疫測定條件下，抗體或其抗原結合片段與特定抗原的特異性結合係背景結合水平的至少十（10）倍，並且不以顯著量與樣本中存在的其他抗原特異性結合。
術語「免疫療法」係指藉由包括誘導、增強、抑制或以其他方式改變免疫響應之方法，對患有疾病或有患病或復發風險的受試者進行治療。免疫療法之實例包括但不限於T細胞和NK細胞療法。T細胞和NK細胞療法可包括過繼細胞療法、腫瘤浸潤淋巴球（TIL）免疫療法、自體細胞療法、工程改造自體細胞療法（eACT™）以及同種異體T和NK細胞移植。
術語「改善」、「增加」、「抑制」和「減少」表示相對於基線或其他參考測量值的值。在一些實施方式中，適當的參考測量結果可以包括在不存在（例如，之前和/或之後）藥劑或治療的情況下，或者在存在適當的相當的參考藥劑的情況下，在其他方面相當的條件下的某個系統中（例如，在單個個體中）的測量結果。在一些實施方式中，適當的參考測量可包括在已知或預期在存在相關藥劑或治療的情況下以可比較的方式響應的可比系統中的測量。
術語「體外」係指在人工環境中發生的事件，例如在試管、反應容器、細胞培養物等中，而不是在多細胞生物體內。術語「體外細胞」係指離體培養的任何細胞。特別地，體外細胞可以包括T細胞。術語「體內」係指在多細胞生物體（例如人或非人動物）內發生的事件。
術語「分離的」係指這樣的物質：(1) 已經與至少一些組分中分離，該等組分在早期曾與該物質相關聯，或者該物質將以其他方式與該等組分相關聯；和/或 (2) 存在於包含有限或限定量或濃度的一或多種已知或未知污染物的組成物中。在一些實施方式中，分離的物質可以與約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或多於約99%（例如，85-90%、85-95%、85-100%、90-95%、90-100%或95-100%）在早期曾與該物質相關聯合的其他非物質組分（例如，與該物質先前相關聯或將以其他方式相關聯的其他組分或污染物）分離。在某些情況下，如果一種物質存在於包含有限或降低量或濃度的相同或相似類型的分子的組成物中，則該物質係分離的。例如，在某些情況下，如果核酸、DNA或RNA物質存在於包含有限或降低量或濃度的非物質核酸、DNA或RNA分子的組成物中，則該核酸、DNA或RNA物質係分離的。例如，在某些情況下，如果多肽物質存在於包含有限或降低量或濃度的非物質多肽分子的組成物中，則該多肽物質係分離的。在某些實施方式中，量可為，例如，相對於組成物中存在的所期望物質之量測量的量。在某些實施方式中，有限量可為不超過組成物中物質之量的100%的量，例如不超過組成物中物質之量的1%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或95%（例如，85-90%、85-95%、85-100%、90-95%、90-100%或95-100%）。在某些情況下，組成物對於所選物質而言係純的或基本上純的。在一些實施方式中，分離的物質為約80%、約85%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%、或大於約99%純的（例如，85%-90%、85%-95%、85%-100%、90%-95%、90%-100%、或95%-100%）。
「同種型」係指由重鏈恒定區基因編碼的抗體類別或亞類（例如，IgM或IgG1）。因此，術語「抗體」包括例如天然存在的和非天然存在的抗體；單株和多株抗體；嵌合和人源化抗體；人或非人抗體；全合成抗體；和單鏈抗體。非人抗體可以藉由重組方法人源化以降低其在人體中的免疫原性。在沒有明確說明的情況下，並且除非上下文另有指示，否則術語「抗體」還包括上述免疫球蛋白中的任一種的抗原結合片段或抗原結合部分，並且包括單價和二價片段或部分，以及單鏈Ab。
術語「Kabat編號」和類似術語係本領域公認的並且係指抗體或其抗原結合分子的重鏈和輕鏈可變區中的胺基酸殘基的編號系統。在某些方面，抗體的CDR可以根據Kabat編號系統（參見，例如，Kabat E.A.和Wu T.T. (1971) Ann NY Acad Sci[紐約學術科學年刊] 190: 382-391和Kabat E.A.等人, (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest[免疫學目的蛋白的序列],第5版, 美國衛生與公眾服務部（U.S. Department of Health and Human Services）, NIH出版號 91-3242）。使用Kabat編號系統，抗體重鏈分子內的CDR通常存在於胺基酸位置31至35（其在35之後視需要可以包括一個或兩個額外的胺基酸（在Kabat編號方案中被稱為35A和35B））（CDR1）、胺基酸位置50至65（CDR2）以及胺基酸位置95至102（CDR3）處。使用Kabat編號系統，抗體輕鏈分子內的CDR通常存在於胺基酸位置24至34（CDR1）、胺基酸位置50至56（CDR2）和胺基酸位置89至97（CDR3）。在具體的實施方式中，本文所述之抗體的CDR已根據Kabat編號方案確定。
術語「輕鏈」當用於指代抗體時可以指任何不同類型，例如基於恒定結構域的胺基酸序列的kappa（κ）或lambda（λ）。輕鏈胺基酸序列係本領域眾所周知的。在具體實施方式中，輕鏈係人輕鏈。
「連接子」（L）或「連接子結構域」或「連接子區域」係指長度為約1至100個胺基酸的寡肽或多肽區域，其將本揭露的抗原結合片段的任何結構域/區域連接在一起。連接子可由甘胺酸和絲胺酸等柔性殘基構成，以便相鄰的蛋白質結構域可以相對於彼此自由移動。當需要確保兩個相鄰結構域不會相互空間干擾時，可以使用較長的連接子。兩個scFv可以藉由(G4S) X 3（乘以三）連接，其中單個G4S區段係GGGGS（SEQ ID NO:186）。
「負荷劑量」係在療程開始時給予的藥物的初始較高劑量，然後降至較低的維持劑量。
術語「淋巴球」包括自然殺手（NK）細胞、T細胞或B細胞。NK細胞係一種細胞毒性（細胞有毒性）淋巴球，其代表固有免疫系統的主要組成部分。NK細胞通過細胞凋亡或計畫性細胞死亡的細胞溶解過程排斥腫瘤和病毒感染的細胞。NK細胞被稱為「自然殺手」，因為它們不需要活化即可殺傷細胞。
本文中的術語「單株抗體」或「mAb」或「Mab」意指基本上同質的抗體的群體，即，除了可能少量存在的可能天然發生的突變外，該群體中包含的抗體分子在胺基酸序列上係相同的。相比之下，常規（多株）抗體製劑典型地包括在其可變結構域中包含不同胺基酸序列的多種不同抗體，特別地其互補決定區（CDR），它們通常對不同的表位具有特異性。修飾語「單株」指示獲得自基本上均質的抗體群體的抗體的特徵並且不應理解為要求藉由任何具體方法產生抗體。單株抗體（mAb）可以藉由熟悉該項技術者已知的方法獲得（ 參見，例如，Kohler等人, Nature [ 自然 ]1975 256:495-497；美國專利案號4,376,110；Ausubel等人 ,Current Protocols in Molecular Biology [分子生物學現代方法] 1992；Harlow等人 , Antibodies: A Laboratory Manual [ 抗體：實驗室手冊 ], Cold spring Harbor Laboratory[冷泉港實驗室] 1988；和Colligan等人, Current Protocols in Immunology [ 當代免疫學方案 ]1993）。
自然殺手（NK）細胞可介導針對腫瘤細胞的有效細胞毒性，與T細胞不同，自然殺手（NK）細胞在同種異體環境中缺乏引起移植物抗宿主病（GVHD）的潛力。NK細胞可以作為現成的細胞療法產品直接用於臨床（Daher等人, 2018）。
術語「中和」係指與配體結合並防止或降低該配體的生物效應的抗原結合分子、scFv、抗體或其片段。在一些實施方式中，抗原結合分子、scFv、抗體或其片段直接阻斷配體上的結合位點或以其他方式通過間接手段（諸如配體中的結構或能量改變）改變配體的結合能力。在一些實施方式中，抗原結合分子、scFv、抗體或其片段阻止與其結合的蛋白質發揮生物學功能。
術語「核酸」在本文中可與術語「多核苷酸」互換使用，並且係指單股或雙股形式的去氧核糖核苷酸或核糖核苷酸及其聚合物。該術語涵蓋含有已知的核苷酸類似物或經修飾的主鏈殘基或連接的核酸，它們係合成的，天然存在的和非天然存在的，具有與參考核酸相似的結合特性，並且以與參考核苷酸相似的方式代謝。此類類似物之實例包括但不限於硫代磷酸酯、胺基磷酸酯、甲基膦酸酯、手性甲基膦酸酯、2-O-甲基核糖核苷酸、肽-核酸（PNA）。因此，術語「核酸」係指任何核苷酸聚合鏈。核酸可為DNA、RNA或其組合。在一些實施方式中，核酸包含一或多個天然核酸殘基。在一些實施方式中，核酸包含一或多個核酸類似物。在一些實施方式中，藉由從天然來源分離、藉由基於互補模板的聚合的酶促合成（體內或體外）、在重組細胞或系統中複製以及化學合成中的一或多種來製備核酸。在一些實施方式中，核酸長度係至少3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、20、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、600、700、800、900、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000或更多個殘基（例如，20至100、20到500、20至1000、20至2000、或20至5000或更多個殘基）。在一些實施方式中，核酸係部分或全部單股的；在一些實施方式中，核酸係部分或全部雙股的。在一些實施方式中，核酸具有包含編碼多肽或者係編碼多肽的序列的互補體的至少一個元件的核苷酸序列。
「可操作地連接」係指一種並列關係，其中如此描述的組分處於允許它們以其預期方式發揮功能的關係中。例如，與功能元件「可操作地連接」的轉錄控制元件以這樣的方式關聯：在與控制元件相容的條件下實現功能元件的表現和/或活性。在核酸的上下文中，術語「可操作地連接」係指兩個或更多個多核苷酸（例如DNA）區段之間的功能關係。通常，它係指轉錄調節序列與轉錄序列的功能關係。例如，啟動子或強化子序列如果在合適的宿主細胞或其他表現系統中刺激或調節編碼序列的轉錄，則可操作地連接至編碼序列。通常，可操作地連接至轉錄序列的啟動子轉錄調節序列與轉錄序列在物理上鄰接，即它們係順式作用的。然而，一些轉錄調節序列（如強化子）不需要在物理上鄰接或緊鄰它們增強其轉錄的編碼序列。
術語「肽」、「多肽」和「蛋白質」可互換地使用，並且係指包含由肽鍵共價連接地胺基酸殘基的化合物。蛋白質或肽含有至少兩個胺基酸，並且對可構成蛋白質或肽序列的胺基酸的最大數目沒有限制。多肽包括包含由肽鍵彼此相連的兩個或更多個胺基酸的任何肽或蛋白質。如本文所用，該術語係指短鏈，例如其在本領域中通常也稱為肽、寡肽和寡聚體，並且還係指較長的鏈，其在本領域中通常稱為蛋白質，存在有很多類型的蛋白質。「多肽」包括例如生物活性片段、基本上同源的多肽、寡肽、同源二聚體、異源二聚體、多肽的變體、經修飾的多肽、衍生物、類似物、融合蛋白等。多肽包括天然肽、重組肽、合成肽或其組合。
術語「肽基」和「肽基部分」係指單價肽。
「PVRL2表現陽性」或「PD-L1表現陽性」係指腫瘤比例評分、單核炎症密度評分或組合陽性評分至少1%；或與適當的對照相比，腫瘤內的惡性細胞和/或浸潤性免疫細胞的PVRL2表現或PD-L1表現（蛋白質和/或mRNA）水平升高。
術語「藥物組成物」係指含有藥學上可接受的賦形劑的製劑，該藥學上可接受的賦形劑的形式使得活性成分有效，並且不含對投與該組成物的受試者有毒的另外組分。在一些實施方式中，藥物組成物可以配製用於以固體或液體形式投與，包括但不限於適合於以下的形式：口服投與，例如，灌服劑（水性或非水性溶液或懸浮液）、片劑，例如用於口腔、舌下和全身吸收的那些片劑、丸劑、粉劑、顆粒劑、用於舌頭的糊劑；腸胃外投與，例如藉由皮下、肌內、靜脈內或硬膜外注射，例如作為無菌溶液或懸浮液、或緩釋配製物；局部投與，例如作為乳膏劑、軟膏劑或控釋貼劑或噴霧劑投與於皮膚、肺或口腔；陰道內或直腸內，例如作為子宮托、乳膏或泡沫；舌下；眼用；透皮；或鼻、肺和其他黏膜表面。在一些方面，本揭露提供了組成物，例如藥學上可接受的組成物，其包括與至少一種藥學上可接受的賦形劑一起配製的本文所述之抗PVRIG抗體。
術語「藥學上可接受的」係指當投與給接受者時，對接受者無害的分子或組成物，或者對接受者有益的效果超過了任何有害的效果。
可用作藥學上可接受的載劑的材料的一些實例包括：糖，例如乳糖、葡萄糖及蔗糖；澱粉，例如玉米澱粉和馬鈴薯澱粉；纖維素及其衍生物，例如羧基甲基纖維素鈉、乙基纖維素和乙酸纖維素；粉末狀黃蓍膠；麥芽；明膠；滑石；賦形劑，例如可可脂和栓劑蠟；油，例如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油和大豆油；二醇，例如丙二醇；多元醇，例如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；酯，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；瓊脂；緩衝劑，例如氫氧化鎂和氫氧化鋁；海藻酸；無熱原水；等滲鹽水；林格氏溶液；乙醇；pH緩衝溶液；聚酯、聚碳酸酯和/或聚酐；以及藥物配製物中使用的其他無毒相容性物質。
術語「藥學上可接受的賦形劑」包括生理學上相容的任何和所有溶劑、分散介質、等滲劑和吸收延遲劑等。賦形劑可適於靜脈內、肌內、皮下、腸胃外、直腸、脊柱或表皮投與（例如藉由注射或輸注）。
本文揭露的組成物可為多種形式。該等包括例如液體、半固體和固體劑型，如液體溶液（例如可注射和輸注溶液）、分散液或懸浮液、脂質體和栓劑。合適的形式取決於預期的投與方式和治療應用。典型的合適組成物係可注射或輸注溶液的形式。一種合適的投與方式係腸胃外（例如靜脈內、皮下、腹膜內、肌內）。在一些實施方式中，抗體藉由靜脈內輸注或注射來投與。在某些實施方式中，抗體藉由肌內或皮下注射來投與。在一些實施方式中，抗體藉由注射器輸注系統投與。
如本文所用，「純化」目的抗體或抗原結合片段或「純化的組成物」係指藉由從組成物中除去（完全或部分地）至少一種雜質來增加組成物中抗體或抗原結合片段的純度。雜質可為宿主細胞組分，例如血清、蛋白質或核酸、細胞碎片、生長培養基或抗體聚集體。該術語並不旨在指完全不存在此類生物分子或不存在水、緩衝液或鹽或包含抗體或抗原結合片段的藥物組成物的組分。
「RECIST 1.1響應標準」係指在Eisenhauer等人, Eur. J Cancer[ 歐洲癌症雜誌 ]45:228-247 (2009)中針對靶病變或非靶病變所列出的定義，根據測量響應的情況而定。
術語「降低」和「減少」在本文中可互換使用，並且表示小於原始的任何變化。「降低」和「減少」係相對術語，需要對測量前和測量後進行比較。「降低」和「減少」包括完全耗盡。
術語「參考」描述了與之進行比較的標準或對照。例如，在一些實施方式中，將目的藥劑、動物、個體、群體、樣本、序列或值與作為藥劑、動物、個體、群體、樣本、序列或值的參考或對照進行比較。在一些實施方式中，與目的測試、測量或確定基本上同時地測試、測量和/或確定參考或對照。在一些實施方式中，參考或對照係歷史參考或對照，視需要體現在有形介質中。一般來說，參考或對照係在與評估條件或環境相當的條件或環境下確定或表徵的。當存在足夠相似性，以證明對所選參考或對照的依賴和/或與所選參考或對照的比較時。
「調節性T細胞」（「Treg」、「Treg細胞」或「Treg」）係指參與控制某些免疫活動（，例如自體免疫、過敏和感染響應）的CD4 +T淋巴球譜系。Treg可以藉由生物標誌物CD4、CD25和Foxp3的表現以及CD127的低表現來鑒定。天然存在的Treg細胞通常約占周圍CD4 +T淋巴球的5%-10%。然而，腫瘤微環境中的Treg細胞（即，腫瘤浸潤性Treg細胞）可能占CD4 +T淋巴球群體總數的20%-30%。
當提及對用本文所述之療法治療有特異性抗腫瘤響應時，「響應患者」係指該患者表現出抗腫瘤響應。
術語「樣本」通常係指從目的來源獲得或衍生的材料的等分試樣。在一些實施方式中，目的來源係生物或環境來源。在一些實施方式中，目的來源可以包括細胞或生物體，例如細胞群、組織或動物（例如，人）。在一些實施方式中，目的來源包含生物組織或體液。在一些實施方式中，生物組織或流體可以包含羊水、前房液、腹水、膽汁、骨髓、血液、母乳、腦脊液、耵聹、乳糜、食糜（chime）、前列腺液、內淋巴、滲出物、排泄物、胃酸、胃液、淋巴、黏液、心包液、外淋巴、腹膜液、肋膜液、膿、發炎性分泌物、唾液、皮脂、精液、血清、包皮垢、痰、滑液、汗液、眼淚、尿液、陰道分泌物、玻璃狀液、嘔吐物、和/或其組合或一或多種組分。在一些實施方式中，生物流體可以包含細胞內流體、細胞外流體、血管內流體（血漿）、間質流體、淋巴液和/或細胞透過液。在一些實施方式中，生物流體可以包含植物分泌物。在一些實施方式中，可以例如藉由抽吸、生檢（例如，細針或組織生檢）、拭子（例如，口腔、鼻、皮膚或陰道拭子）、刮擦、手術、洗滌或灌洗（例如，支氣管肺泡、導管、鼻、眼、口腔、子宮、陰道或其他洗滌或灌洗）來獲得生物組織或樣本。在一些實施方式中，生物樣本包含獲得自個體的細胞。在一些實施方式中，樣本係藉由任何適當的手段直接從目的來源獲得的「初級樣本」。在一些實施方式中，從上下文可以清楚地看出，術語「樣本」係指藉由處理原始樣本（例如，藉由去除原始樣本的一或多種組分和/或藉由向原始樣本中添加一或多種藥劑）獲得的製劑。這種「經加工的樣本」可以包含例如核酸或蛋白質，該等核酸或蛋白質提取自樣本或藉由使初級樣本經受如擴增或核酸的反轉錄、分離和/或某些組分的純化等一或多種技術而獲得。
術語「癌症階段」係指對癌症進展水平的定性或定量評估。在一些實施方式中，用於確定癌症分期的標準可以包括但不限於癌症位於身體的何處、腫瘤大小、癌症是否已經擴散到淋巴結、癌症是否已經擴散到身體的一或多個不同部位，等中的一或多個。在一些實施方式中，可以使用所謂的TNM系統對癌症進行分期，根據該系統，T係指主要腫瘤（通常稱為原發性腫瘤）的大小和範圍；N係指有癌症的附近淋巴結的數量；並且M係指癌症是否已經轉移。在一些實施方式中，癌症可被稱為0期（存在異常細胞但尚未擴散到附近組織，也稱為原位癌或CIS；CIS不是癌症，但可能會變成癌症）、I-III期（存在癌症；數字越高，腫瘤越大，並且擴散到附近組織的程度也越高）或IV期（癌症已擴散到內臟器官和/或身體的遠端部分）。在一些實施方式中，癌症可以被分配至選自由以下組成之群組的期： 原位；局部性（癌症局限在它開始的地方，沒有擴散的跡象）；區域性（癌症已擴散到附近的淋巴結、組織或器官）：遠處（癌症已擴散到身體的遠處部位）；以及未知（沒有足夠的資訊來確定期）。
如本文所用，「刺激」係指由刺激分子與其同源配體的結合誘導的初級響應，其中該結合介導訊息轉導事件。「刺激分子」係T細胞上的分子，例如，T細胞受體（TCR）/CD3複合物，其與抗原呈現細胞上存在的同源刺激配體特異性結合。「刺激配體」係當存在於抗原呈現細胞（例如，APC、樹突狀細胞、B細胞等）上時，可與NK細胞、B細胞或T淋巴球上的刺激分子特異性結合的配體，從而介導免疫細胞的初級響應，包括但不限於活化、免疫響應的起始、增殖等。
在本揭露的上下文中，術語「受試者」係哺乳動物，例如，靈長類動物，較佳的是高等靈長類動物，例如人（例如，患有本文所述之障礙或處於患上本文所述之障礙的風險中的患者）。
一般來說，如果兩個序列在相應位置含有保守胺基酸取代，則通常認為它們「基本上相似」。例如，某些胺基酸通常被分類為「疏水性」或「親水性」胺基酸，和/或具有「極性」或「非極性」側鏈。將一個胺基酸替換為另一個相同類型的胺基酸可被視為「保守」取代。
「持續響應」係指在停止使用本文所述之治療劑或藥劑組合的治療後持續的治療效果。在一些實施方式中，持續響應的持續時間至少與治療持續時間相同，或者比治療持續時間長至少1.5、2.0、2.5或3倍。
T細胞在細胞介導的免疫中發揮重要作用（不涉及抗體）。胸腺係免疫系統的一個特化器官，主要負責T細胞的成熟。T細胞有六種類型，即：輔助T細胞（例如，CD4 +細胞）、細胞毒性T細胞（也稱為TC、細胞毒性T淋巴球、CTL、T殺手細胞、溶細胞T細胞、CD8 +T細胞或殺傷性T細胞）、記憶T細胞（(i) 幹記憶T SCM細胞，如初始細胞，係CD45RO-、CCR7 +、CD45RA +、CD62L +（L-選擇素）、CD27 +、CD28 +和IL-7Rα +，但它們也表現大量的CD95、CXCR3和LFA-1，並顯示出許多記憶細胞特有的功能屬性）；(ii) 中樞記憶T CM細胞表現L-選擇素和CCR7，它們分泌IL-2，但不分泌IFNγ或IL-4，以及 (iii) 效應記憶TEM細胞不表現L-選擇素或CCR7，但產生效應細胞介素，如IFNγ和IL-4）、調節性T細胞（Treg、抑制性T細胞或CD4 +CD25 +調節性T細胞），自然殺手T細胞（NKT）和ΓδT細胞。
「靶標」係由結合模體、抗原結合系統或結合劑結合（例如抗體）的任何分子。在一些實施方式中，靶標係本揭露的抗原或表位。
短語「治療劑」可以指當投與於生物體時引發期望的藥理學作用的任何藥劑。在一些實施方式中，如果藥劑在整個合適群體中表現出統計學上顯著的作用，則認為該藥劑係治療劑。在一些實施方式中，合適群體可為模型生物體或人受試者的群體。在一些實施方式中，適當的群體可以由各種標準（諸如某些年齡組、性別、遺傳背景、預先存在的臨床病症、生物標誌物的存在與否等）限定。在一些實施方式中，治療劑係可以用於對疾病、障礙和/或病症的一或多種症狀或特徵進行減輕、改善、緩解、抑制、預防、延遲其發作、降低其嚴重程度和/或降低其發病率的物質。在一些實施方式中，「治療劑」係在可以被銷售投與於人之前已經或需要被政府機構批准的藥劑。在一些實施方式中，「治療劑」係需要藥物處方才能投與於人的藥劑。
治療劑（例如，抗體）的「治療有效量」、「有效劑量」、「有效量」或「治療有效劑量」係當單獨使用或與另一種治療劑組合使用時，保護受試者免於疾病發作或促進疾病消退的任何量，該疾病消退藉由疾病症狀的嚴重程度降低、無疾病症狀期的頻率和持續時間增加或預防因疾病折磨引起的損害或殘疾來證實。治療劑促進疾病消退的能力可以使用熟練的技術者已知的多種方法，諸如在臨床試驗期間的人受試者中、在可預測人中的功效的動物模型系統中或藉由在體外測定中測定藥劑的活性來評估。「治療有效量」可以隨抗體、疾病、障礙、和/或疾病或障礙的症狀、疾病、障礙、和/或疾病或障礙的症狀的嚴重程度、待治療的受試者的年齡、和/或待治療的受試者的體重而變化。在任何給定情況下的合適量對於熟悉該項技術者而言係顯而易見的，或者可以藉由常規實驗確定。在組合療法的情況下，「治療有效量」係指用於有效治療疾病、障礙或病症的組成對象的總量。
「組織切片」係指組織樣本的單個部分或片段，例如，從正常組織或腫瘤的樣本切下的組織薄片。
術語「轉導」和「轉導的」係指藉由病毒載體將外源DNA引入細胞的過程（Jones等人, 1998, Genetics: principles and analysis[ 遺傳學 : 原理和分析 ], Boston: Jones & Bartlett Publ.[波士頓:鐘斯和巴特利特出版社]）。在一些實施方式中，載體係反轉錄病毒載體、DNA載體、RNA載體、腺病毒載體、桿狀病毒載體、愛潑斯坦巴爾病毒（Epstein Barr virus）載體、乳多空病毒載體、牛痘病毒載體、單純皰疹病毒載體、腺病毒相關載體、慢病毒載體或其任何組合。
「轉化」係指將外源DNA引入宿主細胞的任何過程。轉化可以使用各種方法在自然或人工條件下發生。可以使用用於將外源核酸序列插入原核或真核宿主細胞中的任何已知方法來實現轉化。在一些實施方式中，基於待轉化的宿主細胞和/或待插入的核酸來選擇一些轉化方法。轉化方法可包括但不限於病毒感染、電穿孔和脂轉染。在一些實施方式中，「轉化的」細胞係穩定轉化的，因為插入的DNA能夠作為自主複製質體或作為宿主染色體的一部分進行複製。在一些實施方式中，轉化的細胞可以表現引入的核酸。
如本文所用，「治療」或「進行治療」癌症係指將本揭露的組成物投與於具有免疫病症或癌病症或被診斷患有癌症或病原體感染（例如病毒、細菌、真菌）的受試者，以實現至少一種積極的治療效果，例如減少的癌細胞數量、減小的腫瘤大小、降低的癌細胞浸潤到周圍器官的速率或降低的腫瘤轉移或腫瘤生長速率。「治療」可能包括以下中的一或多項：誘導/增加抗腫瘤免疫反應，刺激對病原體、毒素和/或自身抗原的免疫反應，刺激對病毒感染的免疫反應，減少一或多種腫瘤標誌物的數量，停止或延遲腫瘤或血癌的生長或與PVRIG與其配體PVRL2結合相關的疾病（「PVRIG相關疾病」）如癌症的進展，穩定PVRIG相關疾病，抑制腫瘤細胞的生長或存活，消除或減小一或多種癌性病灶或腫瘤的大小，降低一或多種腫瘤標誌物的水平，改善、消除PVRIG相關疾病的臨床表現，降低PVRIG相關疾病如癌症的臨床症狀的嚴重程度或持續時間，相對於相似的未治療患者的預期存活時間延長患者的存活時間，誘導癌性病症或其它PVRIG相關疾病的完全或部分緩解。
術語「治療方案」、「給藥程序」和「給藥方案」可互換使用，係指本發明組合中每種治療劑的投與劑量和時間安排。
當應用於診斷患有或懷疑患有癌症的受試者時，「腫瘤」係指任何大小的惡性或潛在惡性腫瘤或組織塊，包括原發性腫瘤和繼發性腫瘤。實性瘤係通常不包含囊腫或液體區域的異常生長或組織塊。不同類型的實性瘤因形成它們的細胞類型而命名。實性瘤之實例係肉瘤、上皮癌和30種淋巴瘤。白血病（血液癌症）通常不會形成實性瘤（美國國家癌症研究所，癌症術語詞典）。
「腫瘤負荷」也稱為「腫瘤負載」，係指整個體內分佈的腫瘤物質的總量。腫瘤負荷係指整個體內癌細胞的總數或一或多個腫瘤的總大小，包括淋巴結和骨髓。腫瘤負荷可以藉由本領域已知的多種方法來確定，例如藉由從受試者移除後例如使用卡尺或在體內使用成像技術（例如超音波、骨掃描、電腦斷層掃描（CT）或磁共振成像（MRI）掃描）測量一或多個腫瘤的尺寸。
術語「腫瘤大小」係指腫瘤的總大小，其可以測量為腫瘤的長度和寬度。腫瘤大小可以藉由本領域已知的多種方法來確定，例如藉由從受試者移除後例如使用卡尺或在體內使用成像技術（例如骨掃描、超音波、CT或MRI掃描）測量一或多個腫瘤的尺寸。
「一維irRC」指Nishino等人, Developing a Common Language for Tumor Response to Immunotherapy: Immune-related Response Criteria using Unidimensional measurements.[開發用於免疫治療的腫瘤反應的通用語言：使用一維測量的免疫相關響應標準] Clin Cancer Res.[臨床癌症研究] 2013;19(14):3936-3943中描述的一組標準。該等標準利用了每個病變的最長直徑（cm）。術語「腫瘤大小」係指腫瘤的總大小，其可以測量為腫瘤的長度和寬度。腫瘤大小可以藉由本領域已知的多種方法來確定，例如藉由從受試者移除後例如使用卡尺或在體內使用成像技術（例如骨掃描、超音波、CT或MRI掃描）測量一或多個腫瘤的尺寸。
「腫瘤比例得分（TPS）」係指在細胞膜上以任何強度（弱、中或強）表現PD-L1或另一種腫瘤抗原（例如PVRL2）的腫瘤細胞的百分比。線性部分或完整細胞膜染色被解釋為PD-L1或其他目的抗原（例如PVRL2）呈陽性。
本文使用的術語「可變區」或「可變結構域」係指IgG鏈的片段，其在不同抗體之間在序列上係可變的。通常，它延伸至輕鏈中的Kabat殘基109和重鏈中的殘基113。序列的變異性集中在稱為互補決定區（CDR）的區域，而可變結構域中高度保守的區域稱為框架區（FR）。不希望受任何特定機制或理論的束縛，認為輕鏈和重鏈的CDR主要負責抗體與抗原的相互作用和特異性。在某些實施方式中，可變區係人可變區。在某些實施方式中，可變區包含齧齒動物或鼠類CDR和人框架區（FR）。在特別的實施方式中，可變區係靈長類動物（例如，非人靈長類動物）可變區。在某些實施方式中，可變區包含齧齒動物或鼠類CDR和靈長類動物（例如，非人靈長類動物）框架區（FR）。
術語「載體」指經修飾以包含或摻入所提供的核酸序列的受體核酸分子。一種類型的載體係「質體」，它係指可以連接另外DNA的環狀雙股DNA分子。載體的另一種類型係病毒載體，其中可以將另外的DNA區段連接到病毒基因組中。某些載體能夠在引入它們的宿主細胞中自主複製（例如，具有細菌複製起點的細菌載體和游離型哺乳動物載體）。可以將其他載體（例如非游離型哺乳動物載體）在引入宿主細胞後整合到宿主細胞的基因組中，從而與宿主基因組一起複製。此外，某些載體包含指導它們可操作地連接的插入基因表現的序列。此類載體在本文中可稱為「表現載體」。標準技術可用於載體的工程改造，參見例如，Sambrook等人, Molecular Cloning: A Laboratory Manual[分子選殖：實驗室手冊]（第2版，冷泉港實驗室出版社（Cold Spring Harbor Laboratory Press），冷泉港（Cold Spring Harbor），紐約州(1989)），出於任何目的將其藉由引用結合在此。
術語「VL」、「LCVR」和「VL結構域」可互換使用，指抗體或其抗原結合分子的輕鏈可變區。
術語「VH」、「HCVR」和「VH結構域」可互換使用，指抗體或其抗原結合分子的重鏈可變區。
本文揭露了特異性結合人PVRIG的人源化單株抗體及其抗原結合片段。某些共同的結構特徵對於實現所要求保護的與人PVRIG特異性結合的功能至關重要。圖19和20的比對中顯示了CDR（該等CDR顯示CDR的組合中的哪個殘基子集對於所描述的與人PVRIG特異性結合的功能係必不可少的）的結構一致性。來自比對的資訊為技術者提供了關於如何鑒定落入要求保護的功能類內的其他種類的指導。所揭露的所要求保護的CDR以及全長可變重鏈和輕鏈結合區的詳細比對反映了所要求保護的類的全部多樣性。
在某些實施方式中，與SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:50的胺基酸序列具有至少82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%胺基酸序列同一性的HCVR序列含有相對於參考序列的取代（例如，保守取代）、插入或缺失，但包含該序列的抗PVRIG抗體或其抗原結合片段保留特異性結合至PVRIG的能力。在某些實施方式中，SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:50中總共1至10個胺基酸已被取代、插入和/或缺失。在某些實施方式中，SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:50中總共1至5個胺基酸已被取代、插入和/或缺失。在某些實施方式中，取代、插入或缺失發生在CDR外部的區域（即在FR中）。
在某些實施方式中，與SEQ ID NO:21或SEQ ID NO:51的胺基酸序列具有至少83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%胺基酸序列同一性的LCVR序列含有相對於參考序列的取代（例如，保守取代）、插入或缺失，但包含該序列的抗PVRIG抗體或其抗原結合片段保留特異性結合至PVRIG的能力。在某些實施方式中，SEQ ID NO:21或SEQ ID NO:51中總共1至10個胺基酸已被取代、插入和/或缺失。在某些實施方式中，SEQ ID NO:21或SEQ ID NO:51中總共1至5個胺基酸已被取代、插入和/或缺失。在某些實施方式中，取代、插入或缺失發生在CDR外部的區域（即在FR中）。
本文揭露的結構共通序列旨在指導熟悉該項技術者如何預測屬於所要求保護的與PVRIG特異性結合的結構/功能類的其他種類。發明人已經揭露了與所列舉的功能相關的一類抗體或其抗原結合片段的共同結構特徵。共同的結構特徵被揭露為代表所要求保護的類的全部變化的種類。
如本文所用，「BGA384的變體」意指包含重鏈和輕鏈序列的單株抗體，該等重鏈和輕鏈序列與BGA384中的重鏈和輕鏈序列基本上相同，不同之處在於，在位於輕鏈CDR外部的位置處具有三個、兩個或一個保守胺基酸取代以及在位於重鏈CDR外部的位置處具有六個、五個、四個、三個、兩個或一個保守胺基酸取代，例如，變體位置位於FR區或恒定區中，並且視需要具有重鏈的C末端離胺酸殘基的缺失。換句話說，BGA384和BGA384變體包含相同的CDR序列，但是由於在其全長輕鏈和重鏈序列中分別在不超過三個或六個其他位置處具有保守胺基酸取代而彼此不同。BGA384變體在以下特性方面與BGA384基本相同：與PVRIG的結合親和力以及阻斷PVRIG與PVRL2結合的能力。
本揭露提供了特異性結合人PVRIG的抗體、抗原結合片段。此外，本揭露提供了具有期望的藥物動力學特徵和其他期望的屬性的抗體，其因此可用於降低癌症的可能性或治療癌症。本揭露進一步提供了包含抗體的藥物組成物以及製備和使用此類藥物組成物用於預防和治療癌症和相關障礙之方法。在一些實施方式中，本文所述之抗PVRIG抗體或其抗原結合片段增強T細胞活化，例如，相對於參考抗PVRIG抗體或其抗原結合片段（例如，AB-407係針對小鼠PVRIG的嵌合單株抗體）。在一些實施方式中，本文所述之抗PVRIG抗體或其抗原結合片段相對於參考抗PVRIG抗體或其抗原結合片段（例如AB-407）增強NK細胞活化。在一些實施方式中，本文所述之抗PVRIG抗體或其抗原結合片段增強本文所述之免疫細胞的IFN-γ產生，例如，相對於參考抗PVRIG抗體或其抗原結合片段（例如，AB-407）。在一些實施方式中，本文所述之抗PVRIG抗體或其抗原結合片段與本文所述之一或多種免疫檢查點抑制劑（例如，抗PD-1抗體或其抗原結合片段或抗TIGIT抗體或其抗原結合片段中的一者或兩者）的組合減少免疫效應細胞的耗竭，例如，相對於單獨的每種藥劑（例如，AB-407）。 抗 PVRIG 抗體
本揭露提供了特異性結合PVRIG的抗體或其抗原結合片段。本揭露的抗體或抗原結合片段包括但不限於如下所述產生的抗體或其抗原結合片段。
本揭露提供了特異性結合PVRIG的抗體或抗原結合片段，其中所述抗體或抗體片段（例如，抗原結合片段）包含VH結構域，該VH結構域包含SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:90，SEQ ID NO:100、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:120、SEQ ID NO:130、SEQ ID NO:140或SEQ ID NO:150的胺基酸序列（表5）。本揭露還提供了特異性結合PVRIG的抗體或抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段包含含有表5中列出的HCDR中任一個的胺基酸序列的HCDR。在一方面，本揭露提供了與PVRIG特異性結合的抗體或抗原結合片段，其中所述抗體包含（或可替代地，由其組成）含有表5中列出的HCDR中任一個的胺基酸序列的一個、兩個、三個或更多個HCDR。
本揭露提供了特異性結合PVRIG的抗體或抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段包含VL結構域，該VL結構域包含SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:91，SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:141或SEQ ID NO:151的胺基酸序列（表5）。本揭露還提供了特異性結合PVRIG的抗體或抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段包含含有表5中列出的LCDR中任一個的胺基酸序列的LCDR。特別地，本揭露提供特異性結合PVRIG的抗體或抗原結合片段，所述抗體或抗原結合片段包含（或可替代地，由其組成）一個、兩個、三個或更多個LCDR，該等LCDR包含表5中所列的任一個LCDR的胺基酸序列。
因為特異性結合係用彼此具有低至82%序列同一性的重鏈和輕鏈可變區實現的，所以對於針對具有重鏈可變區（HCVR）的一類抗體的請求項存在結構支持，該重鏈可變區包括與SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:50具有至少82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的胺基酸序列，和包含與SEQ ID NO:21或SEQ ID NO:51具有至少82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的胺基酸序列的輕鏈可變區（LCVR）。
本揭露還提供了編碼特異性結合PVRIG的抗體的VH、VL、全長重鏈和全長輕鏈的核酸序列。可以優化此類核酸序列以在哺乳動物細胞中表現。
[ 表 5]
抗 PVRIG 抗體序列
抗體 SEQ ID NO 序列
BGA38 SEQ ID NO:4 HCDR1（Kabat） DYWMY
SEQ ID NO:5 HCDR2（Kabat） TIDTSDHKTSYNQKFRG
SEQ ID NO:6 HCDR3（Kabat） DFIITVNYPVVDY
SEQ ID NO:7 LCDR1（Kabat） SAGSSVNYMH
SEQ ID NO:8 LCDR2（Kabat） STSNLAS
SEQ ID NO:9 LCDR3（Kabat） QQRSSLPFT
SEQ ID NO:10 VH AA EVQLQESGAEHVMPGASVKMSCKAAGYTFTDYWMYWVKQRPGQGLEWIGTIDTSDHKTSYNQKFRGKATLTVDESSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARDFIITVNYPVVDYWGQGTSVTVSS
SEQ ID NO:11 VL AA QNVLTQSPAIMSASPGEKVTITCSAGSSVNYMHWFQQKPGTSPKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQRSSLPFTFGSGTKLEIK
SEQ ID NO:12 VH DNA GAGGTGCAGCTGCAAGAGAGCGGCGCCGAGCACGTGATGCCCGGCGCCTCCGTGAAGATGAGCTGCAAGGCCGCCGGCTACACCTTCACCGACTACTGGATGTACTGGGTGAAGCAGAGACCCGGCCAAGGCCTGGAGTGGATCGGCACCATCGACACAAGCGACCACAAGACAAGCTACAATCAGAAGTTCAGAGGCAAGGCCACCCTGACCGTGGACGAGAGCAGCAGCACCGCCTACATGCAGCTGAGCAGCCTGACAAGCGAGGACAGCGCCGTGTACTACTGCGCTAGAGACTTCATCATCACCGTGAACTACCCCGTGGTGGACTACTGGGGCCAAGGCACAAGCGTGACCGTGAGCAGC
SEQ ID NO:13 VL DNA CAGAACGTGCTGACACAGAGCCCCGCCATCATGAGCGCCTCCCCCGGCGAGAAGGTGACCATCACCTGCAGCGCCGGCAGCAGCGTGAACTACATGCACTGGTTTCAGCAGAAGCCCGGCACAAGCCCCAAGCTGTGGATCTACAGCACAAGCAACCTGGCCTCCGGCGTGCCCGCTAGATTCAGCGGCAGCGGCAGCGGGACAAGCTACAGCCTGACCATCAGCAGAATGGAGGCCGAGGACGCCGCCACCTACTACTGTCAGCAGAGAAGCAGCCTGCCCTTCACCTTCGGCAGCGGCACCAAGCTGGAGATCAAG
           
BGA381 SEQ ID NO:14 HCDR1（Kabat） DYWIY
SEQ ID NO:15 HCDR2（Kabat） TIDTSDHKTSYNQKFRG
SEQ ID NO:16 HCDR3（Kabat） DFIITVNYPVVDY
SEQ ID NO:17 LCDR1（Kabat） SAGSSVNYMH
SEQ ID NO:18 LCDR2（Kabat） STSNLAS
SEQ ID NO:19 LCDR3（Kabat） QQRSSLPFT
SEQ ID NO:20 VH AA EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYWIYWVRQAPGQGLEWMGTIDTSDHKTSYNQKFRGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARDFIITVNYPVVDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:21 VL AA QIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSAGSSVNYMHWFQQKPGQAPRLLIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSLPFTFGQGTKLEIK
SEQ ID NO:22 VH DNA GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAGAAGCCCGGCGCTAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCTAGCGGCTACACCTTCACCGACTACTGGATCTACTGGGTGAGACAAGCCCCCGGCCAAGGCCTGGAGTGGATGGGCACCATCGACACAAGCGACCACAAGACAAGCTACAATCAGAAGTTCAGAGGCAGAGTGACCATGACAAGAGACACAAGCACAAGCACCGTGTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGAAGCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCTAGAGACTTCATCATCACCGTGAACTACCCCGTGGTGGACTACTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGC
SEQ ID NO:23 VL DNA CAGATCGTGCTGACACAGAGCCCCGCCACCCTGAGCCTGAGCCCCGGCGAAAGAGCCACCCTGAGCTGCAGCGCCGGCAGCAGCGTGAACTACATGCACTGGTTTCAGCAGAAGCCCGGCCAAGCCCCTAGACTGCTGATCTACAGCACAAGCAACCTGGCTAGCGGCGTGCCCGCTAGATTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTACACCCTGACCATCAGCAGCCTGGAGCCCGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGTCAGCAGAGAAGCAGCCTGCCCTTCACCTTCGGCCAAGGCACCAAGCTGGAGATCAAG
           
BGA382 SEQ ID NO:24 HCDR1（Kabat） DYWIY
SEQ ID NO:25 HCDR2（Kabat） TIDTSDHKTSYNQKFRG
SEQ ID NO:26 HCDR3（Kabat） DFIITVNYPVVDY
SEQ ID NO:27 LCDR1（Kabat） SAGSSVNYLH
SEQ ID NO:28 LCDR2（Kabat） STSNLAS
SEQ ID NO:29 LCDR3（Kabat） QQRSSLPFT
SEQ ID NO:30 VH AA EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYWIYWVRQAPGQGLEWMGTIDTSDHKTSYNQKFRGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARDFIITVNYPVVDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:31 VL AA QNVLTQSPATLSLSPGERATLSCSAGSSVNYLHWFQQKPGQAPRLLIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSLPFTFGQGTKLEIK
SEQ ID NO:32 VH DNA GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAGAAGCCCGGCGCTAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCTAGCGGCTACACCTTCACCGACTACTGGATCTACTGGGTGAGACAAGCCCCCGGCCAAGGCCTGGAGTGGATGGGCACCATCGACACAAGCGACCACAAGACAAGCTACAATCAGAAGTTCAGAGGCAGAGTGACCATGACAAGAGACACAAGCACAAGCACCGTGTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGAAGCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCTAGAGACTTCATCATCACCGTGAACTACCCCGTGGTGGACTACTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGC
SEQ ID NO:33 VL DNA CAGAACGTGCTGACACAGAGCCCCGCCACCCTGAGCCTGAGCCCCGGCGAAAGAGCCACCCTGAGCTGCAGCGCCGGCAGCAGCGTGAACTACCTGCACTGGTTTCAGCAGAAGCCCGGCCAAGCCCCTAGACTGCTGATCTACAGCACAAGCAACCTGGCTAGCGGCGTGCCCGCTAGATTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTACACCCTGACCATCAGCAGCCTGGAGCCCGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGTCAGCAGAGAAGCAGCCTGCCCTTCACCTTCGGCCAAGGCACCAAGCTGGAGATCAAG
           
BGA383 SEQ ID NO:34 HCDR1（Kabat） DYWIY
SEQ ID NO:35 HCDR2（Kabat） TIDTSDAKTSYNQKFRG
SEQ ID NO:36 HCDR3（Kabat） DFIITVNYPVVDY
SEQ ID NO:37 LCDR1（Kabat） SAGSSVNYMH
SEQ ID NO:38 LCDR2（Kabat） STSNLAS
SEQ ID NO:39 LCDR3（Kabat） QQRSSLPFT
SEQ ID NO:40 VH AA EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYWIYWVRQAPGQGLEWMGTIDTSDAKTSYNQKFRGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARDFIITVNYPVVDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:41 VL AA QIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSAGSSVNYMHWFQQKPGQAPRLLIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSLPFTFGQGTKLEIK
SEQ ID NO:42 VH DNA GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAGAAGCCCGGCGCTAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCTAGCGGCTACACCTTCACCGACTACTGGATCTACTGGGTGAGACAAGCCCCCGGCCAAGGCCTGGAGTGGATGGGCACCATCGACACAAGCGACGCCAAGACAAGCTACAATCAGAAGTTCAGAGGCAGAGTGACCATGACAAGAGACACAAGCACAAGCACCGTGTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGAAGCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCTAGAGACTTCATCATCACCGTGAACTACCCCGTGGTGGACTACTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGC
SEQ ID NO:43 VL DNA CAGAACGTGCTGACACAGAGCCCCGCCACCCTGAGCCTGAGCCCCGGCGAAAGAGCCACCCTGAGCTGCAGCGCCGGCAGCAGCGTGAACTACCTGCACTGGTTTCAGCAGAAGCCCGGCCAAGCCCCTAGACTGCTGATCTACAGCACAAGCAACCTGGCTAGCGGCGTGCCCGCTAGATTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTACACCCTGACCATCAGCAGCCTGGAGCCCGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGTCAGCAGAGAAGCAGCCTGCCCTTCACCTTCGGCCAAGGCACCAAGCTGGAGATCAAG
           
BGA384 SEQ ID NO:44 HCDR1（Kabat） DYWIY
SEQ ID NO:187 HCDR1（Chothia） GYTFTDY
SEQ ID NO:45 HCDR2（Kabat） TIDTSEHKTSYNQKFRG
SEQ ID NO:188 HCDR2（Chothia） DTSEHK
SEQ ID NO:46 HCDR3（Kabat/Chothia） DFIITVNYPVVDY
SEQ ID NO:47 LCDR1（Kabat/Chothia） SAGSSVNYMH
SEQ ID NO:48 LCDR2（Kabat/Chothia） STSNLAS
SEQ ID NO:49 LCDR3（Kabat/Chothia） QQRSSLPFT
SEQ ID NO:50 VH AA EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYWIYWVRQAPGQGLEWMGTIDTSEHKTSYNQKFRGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARDFIITVNYPVVDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:51 VL AA QIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSAGSSVNYMHWFQQKPGQAPRLLIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSLPFTFGQGTKLEIK
SEQ ID NO:189 HC AA EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYWIYWVRQAPGQGLEWMGTIDTSEHKTSYNQKFRGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARDFIITVNYPVVDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:190 LC ACC QIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSAGSSVNYMHWFQQKPGQAPRLLIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSLPFTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:52 VH DNA GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAGAAGCCCGGCGCTAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCTAGCGGCTACACCTTCACCGACTACTGGATCTACTGGGTGAGACAAGCCCCCGGCCAAGGCCTGGAGTGGATGGGCACCATCGACACAAGCGAGCACAAGACAAGCTACAATCAGAAGTTCAGAGGCAGAGTGACCATGACAAGAGACACAAGCACAAGCACCGTGTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGAAGCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCTAGAGACTTCATCATCACCGTGAACTACCCCGTGGTGGACTACTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGC
SEQ ID NO:53 VL DNA CAGAACGTGCTGACACAGAGCCCCGCCACCCTGAGCCTGAGCCCCGGCGAAAGAGCCACCCTGAGCTGCAGCGCCGGCAGCAGCGTGAACTACCTGCACTGGTTTCAGCAGAAGCCCGGCCAAGCCCCTAGACTGCTGATCTACAGCACAAGCAACCTGGCTAGCGGCGTGCCCGCTAGATTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTACACCCTGACCATCAGCAGCCTGGAGCCCGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGTCAGCAGAGAAGCAGCCTGCCCTTCACCTTCGGCCAAGGCACCAAGCTGGAGATCAAG
           
BGA86 SEQ ID NO:54 HCDR1（Kabat） SYGMS
SEQ ID NO:55 HCDR2（Kabat） EISSGGTYTYYPDTVTG
SEQ ID NO:56 HCDR3（Kabat） GDPFGY
SEQ ID NO:57 LCDR1（Kabat） KASQDVMTAVA
SEQ ID NO:58 LCDR2（Kabat） STSYRFT
SEQ ID NO:59 LCDR3（Kabat） QQHYSTPRT
SEQ ID NO:60 VH AA EVQLQESGGGSVKPGGSLQLSCAASGFTFSSYGMSWIRQSPEKKLEWVAEISSGGTYTYYPDTVTGRFTISRDNAKNTLYLEMSSLRSEDTAMYYCARGDPFGYWGQGTLVTVSA
SEQ ID NO:61 VL AA DVVMTQSHKFVSTSVGGRVSITCKASQDVMTAVAWYQQKPGQSPKLLIYSTSYRFTGVPDRFTGSGSGTDFTLTINGVQAEDLAVYSCQQHYSTPRTFGGGTKLEIK
SEQ ID NO:62 VH DNA GAGGTGCAGCTGCAAGAGTCCGGCGGGGGCAGCGTGAAGCCTGGGGGCTCCCTGCAGCTGAGCTGCGCCGCCTCCGGCTTCACCTTCAGCAGCTACGGCATGAGCTGGATCAGACAGAGCCCCGAGAAGAAGCTGGAGTGGGTGGCCGAGATCAGCAGCGGCGGCACCTACACCTACTACCCCGACACCGTGACCGGCAGATTCACCATCAGCAGAGACAACGCCAAGAACACCCTGTACCTGGAGATGAGCAGCCTGAGAAGCGAGGACACCGCCATGTACTACTGCGCTAGAGGCGACCCCTTCGGCTACTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACCGTGAGCGCC
SEQ ID NO:63 VL DNA GACGTGGTGATGACACAGAGCCACAAGTTCGTGAGCACAAGCGTGGGCGGCAGAGTGAGCATCACCTGCAAGGCCTCCCAAGACGTGATGACCGCCGTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGGCAGAGCCCCAAGCTGCTGATCTACAGCACAAGCTACAGATTCACCGGCGTGCCCGACCGGTTCACCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAACGGCGTGCAAGCCGAGGACCTGGCCGTGTACAGCTGTCAGCAGCACTACAGCACCCCTAGAACCTTCGGCGGGGGCACCAAGCTGGAGATCAAG
           
BGA861 SEQ ID NO:64 HCDR1（Kabat） SYGIS
SEQ ID NO:65 HCDR2（Kabat） EISSGGTYTYYPDTVTG
SEQ ID NO:66 HCDR3（Kabat） GDPFGY
SEQ ID NO:67 LCDR1（Kabat） KASQDVMTAVA
SEQ ID NO:68 LCDR2（Kabat） STSYRFT
SEQ ID NO:69 LCDR3（Kabat） QQHYSTPRT
SEQ ID NO:70 VH AA EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYGISWVRQAPGKGLEWVSEISSGGTYTYYPDTVTGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCARGDPFGYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:71 VL AA DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVMTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSTSYRFTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYSTPRTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO:72 VH DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAATCCGGCGGGGGCCTGGTGAAACCCGGCGGCAGCCTGAGACTGAGCTGCGCCGCTAGCGGCTTCACCTTCAGCAGCTACGGCATCAGCTGGGTGAGACAAGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCGAGATCAGCAGCGGCGGCACCTACACCTACTACCCCGACACCGTGACCGGCAGATTCACCATCAGCAGAGACAACGCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAGCAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCTAGAGGCGACCCCTTCGGCTACTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGC
SEQ ID NO:73 VL DNA GACATTCAGATGACACAGAGCCCTAGCAGCCTGTCCGCTAGCGTGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGCAAGGCTAGCCAAGACGTGATGACCGCCGTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACAGCACAAGCTACAGATTCACCGGCGTGCCTAGCAGATTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGTCAGCAGCACTACAGCACCCCTAGAACCTTCGGCGGGGGCACCAAGGTGGAGATCAAG
           
BGA862 SEQ ID NO:74 HCDR1（Kabat） SYGLS
SEQ ID NO:75 HCDR2（Kabat） EISSGGTYTYYPDTVTG
SEQ ID NO:76 HCDR3（Kabat） GDPFGY
SEQ ID NO:77 LCDR1（Kabat） KASQDVMTAVA
SEQ ID NO:78 LCDR2（Kabat） STSYRFT
SEQ ID NO:79 LCDR3（Kabat） QQHYSTPRT
SEQ ID NO:80 VH AA EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYGLSWVRQAPGKGLEWVSEISSGGTYTYYPDTVTGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCARGDPFGYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:81 VL AA DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVMTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSTSYRFTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYSTPRTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO:82 VH DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAATCCGGCGGGGGCCTGGTGAAACCCGGCGGCAGCCTGAGACTGAGCTGCGCCGCTAGCGGCTTCACCTTCAGCAGCTACGGCCTCAGCTGGGTGAGACAAGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCGAGATCAGCAGCGGCGGCACCTACACCTACTACCCCGACACCGTGACCGGCAGATTCACCATCAGCAGAGACAACGCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAGCAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCTAGAGGCGACCCCTTCGGCTACTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGC
SEQ ID NO:83 VL DNA GACATTCAGATGACACAGAGCCCTAGCAGCCTGTCCGCTAGCGTGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGCAAGGCTAGCCAAGACGTGATGACCGCCGTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACAGCACAAGCTACAGATTCACCGGCGTGCCTAGCAGATTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGTCAGCAGCACTACAGCACCCCTAGAACCTTCGGCGGGGGCACCAAGGTGGAGATCAAG
           
BGA12 SEQ ID NO:84 HCDR1（Kabat） DYAMH
SEQ ID NO:85 HCDR2（Kabat） VVLTHNDNTNYNQKFKA
SEQ ID NO:86 HCDR3（Kabat） EVYYDFDDGNYFPMDY
SEQ ID NO:87 LCDR1（Kabat） KSSQSLLYSDNQKNYLA
SEQ ID NO:88 LCDR2（Kabat） WASTRES
SEQ ID NO:89 LCDR3（Kabat） QQYYSYHT
SEQ ID NO:90 VH AA QVQLQQSGPEVVRPGVSVKISCKGSGYTFTDYAMHWVKQSHGKSLEWIGVVLTHNDNTNYNQKFKAKATMTVDRSSSTAYMELARLTSEDSAIYYCAREVYYDFDDGNYFPMDYWGQGTSVTVSS
SEQ ID NO:91 VL AA DIVMSQSPSSLAVSVGEKVTMSCKSSQSLLYSDNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPVRFTGSGSGTDFTLTISSVKAEDLAVYYCQQYYSYHTFGGGTKLEIK
SEQ ID NO:92 VH DNA GGATCCGCCACCATGGAGTTTGGGCTGAGCTGGCTTTTTCTTGTCGCGATTCTTAAGGGTGTCCAGTGCCAAGTGCAGCTGCAGCAGAGCGGCCCCGAGGTGGTGAGACCCGGCGTGAGCGTGAAGATCAGCTGCAAGGGCAGCGGCTACACCTTCACCGACTACGCCATGCACTGGGTGAAGCAGAGCCACGGCAAGAGCCTGGAGTGGATCGGCGTGGTGCTGACCCACAACGACAACACCAACTACAATCAGAAGTTCAAGGCCAAGGCCACCATGACCGTGGACAGAAGCAGCAGCACCGCCTACATGGAGCTGGCTAGACTGACAAGCGAGGACAGCGCCATCTACTACTGCGCTAGAGAGGTGTACTACGACTTCGACGACGGCAACTACTTCCCCATGGACTACTGGGGCCAAGGCACAAGCGTGACCGTGAGCAGC
SEQ ID NO:93 VL DNA GACATCGTGATGAGCCAAAGCCCCTCCTCCCTGGCCGTGAGCGTGGGCGAGAAGGTGACCATGAGCTGCAAGAGCAGCCAAAGCCTGCTGTACAGCGACAATCAGAAGAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGGCAGAGCCCCAAACTCCTGATCTACTGGGCTAGCACAAGAGAGAGCGGCGTGCCCGTGAGATTCACCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCGTGAAGGCCGAGGACCTGGCCGTGTACTACTGTCAGCAGTACTACAGCTACCACACCTTCGGCGGGGGCACCAAGCTGGAGATCAAG
           
BGA121 SEQ ID NO:94 HCDR1（Kabat） DYAMH
SEQ ID NO:95 HCDR2（Kabat） VVLTHNDNTNYNQKFKA
SEQ ID NO:96 HCDR3（Kabat） EVYYDFDDGNYFPMDY
SEQ ID NO:97 LCDR1（Kabat） KSSQSLLYSDNQKNYLA
SEQ ID NO:98 LCDR2（Kabat） WASTRES
SEQ ID NO:99 LCDR3（Kabat） QQYYSYHT
SEQ ID NO:100 VH AA QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYAMHWVRQAPGQSLEWMGVVLTHNDNTNYNQKFKARVTMTVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAREVYYDFDDGNYFPMDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:101 VL AA DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSDNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSYHTFGGGTKLEIK
SEQ ID NO:102 VH DNA CAAGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAGAAGCCCGGCGCTAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCTAGCGGCTACACCTTCACCGACTACGCCATGCACTGGGTGAGACAAGCCCCCGGGCAGAGCCTGGAGTGGATGGGCGTGGTGCTGACCCACAACGACAACACCAACTACAATCAGAAGTTCAAGGCTAGAGTGACCATGACCGTGGACACATCCGCCAGCACCGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGAAGCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCTAGAGAGGTGTACTACGACTTCGACGACGGCAACTACTTCCCCATGGACTACTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGC
SEQ ID NO:103 VL DNA GACATCGTGATGACACAGAGCCCCGACAGCCTGGCCGTGAGCCTGGGCGAGAGAGCCACCATCAACTGCAAGAGCAGCCAAAGCCTGCTGTACAGCGACAATCAGAAGAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGGCAGCCCCCCAAGCTGCTGATCTACTGGGCTAGCACAAGAGAGAGCGGCGTGCCCGACAGATTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAAGCCGAGGACGTGGCCGTGTACTACTGTCAGCAGTACTACAGCTACCACACCTTCGGCGGGGGCACCAAGCTGGAGATCAAG
           
BGA122 SEQ ID NO:104 HCDR1（Kabat） DYAMH
SEQ ID NO:105 HCDR2（Kabat） VVLTHNDNTNYNQKFKA
SEQ ID NO:106 HCDR3（Kabat） EVYYDFDDGNYFPMDY
SEQ ID NO:107 LCDR1（Kabat） KSSQSLLYSDNQKNYLA
SEQ ID NO:108 LCDR2（Kabat） WASTRES
SEQ ID NO:109 LCDR3（Kabat） QQYYSYHT
SEQ ID NO:110 VH AA QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYAMHWVRQAPGQSLEWMGVVLTHNDNTNYNQKFKARVTMTVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAREVYYDFDDGNYFPMDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:111 VL AA DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSDNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSYHTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO:112 VH DNA CAAGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAGAAGCCCGGCGCTAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCTAGCGGCTACACCTTCACCGACTACGCCATGCACTGGGTGAGACAAGCCCCCGGGCAGAGCCTGGAGTGGATGGGCGTGGTGCTGACCCACAACGACAACACCAACTACAATCAGAAGTTCAAGGCTAGAGTGACCATGACCGTGGACACATCCGCCAGCACCGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGAAGCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCTAGAGAGGTGTACTACGACTTCGACGACGGCAACTACTTCCCCATGGACTACTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGC
SEQ ID NO:113 VL DNA GACATCGTGATGACACAGAGCCCCGACAGCCTGGCCGTGAGCCTGGGCGAGAGAGCCACCATCAACTGCAAGAGCAGCCAAAGCCTGCTGTACAGCGACAATCAGAAGAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGGCAGAGCCCCAAGCTGCTGATCTACTGGGCTAGCACAAGAGAGAGCGGCGTGCCCGACAGATTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAAGCCGAGGACGTGGCCGTGTACTACTGTCAGCAGTACTACAGCTACCACACCTTCGGCGGGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGC
           
BGA50 SEQ ID NO:114 HCDR1（Kabat） GYFLN
SEQ ID NO:115 HCDR2（Kabat） RISPYNGDTFYNQKFKG
SEQ ID NO:116 HCDR3（Kabat） GRSGSFTLFYAMDY
SEQ ID NO:117 LCDR1（Kabat） KSSQSLFHSGNQKNYLA
SEQ ID NO:118 LCDR2（Kabat） WASTRES
SEQ ID NO:119 LCDR3（Kabat） QQYYSYPIT
SEQ ID NO:120 VH AA EVQLQQSGPEPVKPGASVKISCKASGYSFTGYFLNWVKQSHGKSLEWIGRISPYNGDTFYNQKFKGKATLTVDKSSSTAHMELLSLTSEDSAVYYCGRSGSFTLFYAMDYWGQGTSVTVSS
SEQ ID NO:121 VL AA DIVMSQSPSSLAVSVGENITMTCKSSQSLFHSGNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSETDFTLTISSVKAEDLAVYFCQQYYSYPITFGAGTKLELK
SEQ ID NO:122 VH DNA GAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGACCTGAACCGGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGATATCCTGCAAGGCTTCTGGTTACTCATTTACTGGCTACTTTTTGAACTGGGTGAAGCAGAGCCATGGAAAGAGCCTTGAGTGGATTGGACGTATTAGTCCTTACAATGGTGATACTTTCTACAACCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACATTGACTGTAGACAAATCCTCTAGCACAGCCCACATGGAGCTCCTGAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCAGTCTATTATTGTGGAAGATCGGGTTCCTTCACTCTTTTCTATGCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO:123 VL DNA GACATTGTGATGTCACAGTCTCCATCCTCCCTAGCTGTGTCAGTTGGAGAGAATATTACTATGACCTGCAAGTCCAGTCAGAGCCTTTTCCATAGTGGCAATCAAAAGAACTACTTGGCCTGGTACCAGCAGAAACCAGGGCAGTCTCCTAAACTGCTGATTTACTGGGCATCCACTAGGGAATCTGGGGTCCCTGATCGCTTCACAGGCAGTGGATCTGAGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTGTGAAGGCTGAAGACCTGGCAGTTTATTTCTGTCAGCAATATTATAGCTATCCTATCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAA
           
BGA501 SEQ ID NO:124 HCDR1（Kabat） GYFLN
SEQ ID NO:125 HCDR2（Kabat） RISPYQGDTFYNQKFKG
SEQ ID NO:126 HCDR3（Kabat） GRSGSFTLFYAIDY
SEQ ID NO:127 LCDR1（Kabat） KSSQSLFHSGNQKNYLA
SEQ ID NO:128 LCDR2（Kabat） WASTRES
SEQ ID NO:129 LCDR3（Kabat） QQYYSYPIT
SEQ ID NO:130 VH AA QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTGYFLNWVRQAPGQGLEWIGRISPYQGDTFYNQKFKGRVTMTTDKSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCGRSGSFTLFYAIDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:131 VL AA DIVMTQSPSSLAVSLGERATINCKSSQSLFHSGNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSYPITFGQGTKLEIK
SEQ ID NO:132 VH DNA CAAGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAGAAGCCCGGCGCTAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCTAGCGGCTACAGCTTCACCGGCTACTTCCTGAACTGGGTGAGACAAGCCCCCGGCCAAGGCCTGGAGTGGATCGGCAGAATCAGCCCCTACCAAGGCGACACCTTCTACAATCAGAAGTTCAAGGGCAGAGTGACCATGACCACCGACAAGAGCACAAGCACCGCCTACATGGAGCTGAGAAGCCTGAGAAGCGACGACACCGCCGTGTACTACTGCGGCAGAAGCGGCAGCTTCACCCTGTTCTACGCCATCGACTACTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACCGTGAGCA   
SEQ ID NO:133 VL DNA GACATCGTGATGACACAGAGCCCTAGCAGCCTGGCCGTGAGCCTGGGCGAGAGAGCCACCATCAACTGCAAGAGCAGCCAAAGCCTGTTCCACAGCGGCAATCAGAAGAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGGCAGAGCCCCAAGCTGCTGATCTACTGGGCTAGCACAAGAGAGAGCGGCGTGCCCGACAGATTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAAGCCGAGGACGTGGCCGTGTACTACTGTCAGCAGTACTACAGCTACCCCATCACCTTCGGCCAAGGCACCAAGCTGGAGATCAAG
           
BGA502 SEQ ID NO:134 HCDR1（Kabat） GYFLN
SEQ ID NO:135 HCDR2（Kabat） RISPYQGDTFYNQKFKG
SEQ ID NO:136 HCDR3（Kabat） GRSGSFTLFYALDY
SEQ ID NO:137 LCDR1（Kabat） KSSQSLFHSGNQKNYLA
SEQ ID NO:138 LCDR2（Kabat） WASTRES
SEQ ID NO:139 LCDR3（Kabat） QQYYSYPIT
SEQ ID NO:140 VH AA QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTGYFLNWVRQAPGQGLEWIGRISPYQGDTFYNQKFKGRVTMTTDKSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCGRSGSFTLFYALDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:141 VL AA DIVMTQSPSSLAVSLGERATINCKSSQSLFHSGNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSYPITFGQGTKLEIK
SEQ ID NO:142 VH DNA CAAGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAGAAGCCCGGCGCTAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCTAGCGGCTACAGCTTCACCGGCTACTTCCTGAACTGGGTGAGACAAGCCCCCGGCCAAGGCCTGGAGTGGATCGGCAGAATCAGCCCCTACCAAGGCGACACCTTCTACAATCAGAAGTTCAAGGGCAGAGTGACCATGACCACCGACAAGAGCACAAGCACCGCCTACATGGAGCTGAGAAGCCTGAGAAGCGACGACACCGCCGTGTACTACTGCGGCAGAAGCGGCAGCTTCACCCTGTTCTACGCCATCGACTACTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGC   
SEQ ID NO:143 VL DNA GACATCGTGATGACACAGAGCCCTAGCAGCCTGGCCGTGAGCCTGGGCGAGAGAGCCACCATCAACTGCAAGAGCAGCCAAAGCCTGTTCCACAGCGGCAATCAGAAGAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGGCAGAGCCCCAAGCTGCTGATCTACTGGGCTAGCACAAGAGAGAGCGGCGTGCCCGACAGATTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAAGCCGAGGACGTGGCCGTGTACTACTGTCAGCAGTACTACAGCTACCCCATCACCTTCGGCCAAGGCACCAAGCTGGAGATCAAG
           
BGA503 SEQ ID NO:144 HCDR1（Kabat） GYFLN
SEQ ID NO:145 HCDR2（Kabat） RISPYQGDTFYNQKFKG
SEQ ID NO:146 HCDR3（Kabat） GRSGSFTLFYALDY
SEQ ID NO:147 LCDR1（Kabat） KSSQSLFHSGNQKNYLA
SEQ ID NO:148 LCDR2（Kabat） WASTRES
SEQ ID NO:149 LCDR3（Kabat） QQYYSYPIT
SEQ ID NO:150 VH AA QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTGYFLNWVRQAPGQGLEWIGRISPYQGDTFYNQKFKGRVTMTVDKSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCGRSGSFTLFYALDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:151 VL AA DIVMTQSPSSLAVSLGERATINCKSSQSLFHSGNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSYPITFGQGTKLEIK
SEQ ID NO:152 VH DNA CAAGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAGAAGCCCGGCGCTAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCTAGCGGCTACAGCTTCACCGGCTACTTCCTGAACTGGGTGAGACAAGCCCCCGGCCAAGGCCTGGAGTGGATCGGCAGAATCAGCCCCTACCAAGGCGACACCTTCTACAATCAGAAGTTCAAGGGCAGAGTGACCATGACCGTGGACAAGAGCACAAGCACCGCCTACATGGAGCTGAGAAGCCTGAGAAGCGACGACACCGCCGTGTACTACTGCGGCAGAAGCGGCAGCTTCACCCTGTTCTACGCCCTGGACTACTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGC
SEQ ID NO:153 VL DNA GACATCGTGATGACACAGAGCCCTAGCAGCCTGGCCGTGAGCCTGGGCGAGAGAGCCACCATCAACTGCAAGAGCAGCCAAAGCCTGTTCCACAGCGGCAATCAGAAGAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGGCAGAGCCCCAAGCTGCTGATCTACTGGGCTAGCACAAGAGAGAGCGGCGTGCCCGACAGATTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAAGCCGAGGACGTGGCCGTGTACTACTGTCAGCAGTACTACAGCTACCCCATCACCTTCGGCCAAGGCACCAAGCTGGAGATCAAG
表位和結合相同表位的抗體的鑒定
本揭露提供了結合人PVRIG表位的抗體及其抗原結合片段。在某些方面，抗體和抗原結合片段可以結合PVRIG的相同表位。
本揭露還提供了與表5中描述的抗PVRIG抗體相同的表位結合的抗體及其抗原結合片段。因此，另外的抗體及其抗原結合片段可以基於它們在結合測定中與其他抗體交叉競爭（例如，以統計學顯著的方式競爭性抑制其結合）的能力來鑒定。測試抗體抑制本揭露的抗體及其抗原結合片段結合PVRIG的能力證明測試抗體可與該抗體或其抗原結合片段競爭結合PVRIG。不受任何一種理論的束縛，這樣的抗體可以結合PVRIG上的與其競爭的抗體或其抗原結合片段相同或相關（例如，在結構上相似或在空間上鄰近）的表位。在某些方面，結合PVRIG上的與本揭露的抗體或其抗原結合片段相同的表位的抗體係人或人源化單株抗體。這種人或人源化單株抗體可以如本文所述製備和分離。 對 Fc 區框架的進一步改變
在其他方面，藉由用不同的胺基酸殘基替換至少一個胺基酸殘基來改變Fc區，以改變抗體的效應子功能。例如，可以用不同的胺基酸殘基替換一或多個胺基酸，使得抗體對效應子配體具有改變的親和力，但保留親本抗體的抗原結合能力。親和力改變的效應子配體可為例如Fc受體或補體的C1組分。此方法描述於例如Winter等人的美國專利案號5,624,821和5,648,260中。
在另一方面，可以用一或多個不同的胺基酸殘基替換一或多個胺基酸殘基，使得抗體具有改變的C1q結合和/或降低的或消除的補體依賴性細胞毒性（CDC）。此方法描述於例如Idusogie等人的美國專利案號6,194,551中。
另一方面，改變一或多個胺基酸殘基從而改變抗體固定補體的能力。此方法描述於例如Bodmer等人的公開WO 94/29351中。在特定的方面，本揭露的抗體或其抗原結合片段的一或多個胺基酸被IgG1亞類和κ同種型的一或多個同種異型胺基酸殘基替代。同種異型胺基酸殘基還包括但不限於IgG1、IgG2和IgG3亞類的重鏈恒定區以及κ同種型的輕鏈恒定區，如Jefferis等人, MAbs [單株抗體] 1:332-338 (2009) 所述。
在又另一個方面，修飾抗體的糖基化。例如，可以製備無糖基化抗體（即，抗體缺乏或具有降低的糖基化）。可以改變糖基化以例如增加抗體對「抗原」的親和力。這種碳水化合物修飾可以藉由例如改變抗體序列內的一或多個糖基化位點來實現。例如，可以進行一或多個胺基酸取代，其導致消除一或多個可變區框架糖基化位點，從而消除該位點的糖基化。這種無糖基化可以增加抗體對抗原的親和力。此方法描述於例如Co等人的美國專利案號5,714,350和6,350,861中。
另外或可替代地，可以製備具有改變的糖基化類型的抗體，如具有減少量的岩藻糖基殘基的低岩藻糖基化抗體或具有增加的二等分GlcNac結構的抗體。已經證明這種改變的糖基化模式增加抗體的ADCC能力。這種碳水化合物修飾可藉由例如在具有改變的糖基化途徑的宿主細胞中表現抗體來實現。具有改變的糖基化途徑的細胞已經在本領域中描述並且可以用作宿主細胞，在其中表現重組抗體從而產生具有改變的糖基化的抗體。例如，Hang等人的EP 1,176,195描述了具有功能性破壞的FUT8基因的細胞系，其編碼岩藻糖基轉移酶，使得在這種細胞系中表現的抗體表現出低岩藻糖基化。Presta的公開WO 03/035835描述了變體CHO細胞系Lecl3細胞，其具有降低的將岩藻糖連接至Asn（297）-連接的碳水化合物的能力，也導致在該宿主細胞中表現的抗體的低岩藻糖基化（也參見Shields等人, (2002) J. Biol. Chem.[生物化學雜誌] 277:26733-26740）。Umana等人的WO 99/54342描述了被工程改造以表現糖蛋白修飾的糖基轉移酶（例如，β(1,4)-N乙醯胺基葡萄糖轉移酶III（GnTIII））的細胞系，使得在工程改造的細胞系中表現的抗體表現出增加的二等分GlcNac結構，這導致抗體的ADCC活性增加（還參見Umana等人, Nat. Biotech.[自然生物技術] 17:176-180, 1999）。
在另一方面，如果所需的ADCC降低，許多先前的報導顯示人抗體亞類IgG4僅具有適度的ADCC並且幾乎沒有CDC效應子功能（Moore G L等人, 2010 MAbs [單株抗體], 2:181-189）。然而，發現天然IgG4在應激條件下（如在酸性緩衝液中或在升高的溫度下）較不穩定（Angal, S. 1993 Mol Immunol [分子免疫學], 30:105-108；Dall'Acqua, W.等人, 1998 Biochemistry [生物化學], 37:9266-9273；Aalberse等人, 2002 Immunol [免疫學], 105:9-19）。降低的ADCC可以藉由將抗體可操作地連接至用降低FcγR結合或C1q結合活性的改變的組合工程改造的IgG4 Fc，從而降低或消除ADCC和CDC效應子功能來實現。考慮到抗體作為生物藥物的物理化學特性，IgG4的較不期望的固有特性之一係其兩條重鏈在溶液中動態分離以形成半抗體，這導致通過稱為「Fab臂交換」的過程在體內產生雙特異性抗體（Van der Neut Kolfschoten M等人, 2007 Science [科學], 317:1554-157）。228位（EU編號系統）絲胺酸突變為脯胺酸表現出對IgG4重鏈分離的抑制作用（Angal, S. 1993 Mol Immunol [分子免疫學], 30:105-108；Aalberse等人, 2002 Immunol [免疫學], 105:9-19）。據報導，鉸鏈區和γFc區中的一些胺基酸殘基對抗體與Fcγ受體的相互作用具有影響（Chappel S M等人, 1991 Proc. Natl. Acad. Sci. USA [美國國家科學院院刊], 88:9036-9040；Mukherjee, J.等人, 1995 FASEB J [美國實驗生物學學會聯合會雜誌], 9:115-119；Armour, K. L.等人, 1999 Eur J Immunol [歐洲免疫學雜誌], 29:2613-2624；Clynes, R. A.等人, 2000 Nature Medicine [自然醫學], 6:443-446；Arnold J. N., 2007 Annu Rev immunol [免疫學年鑒], 25:21-50）。此外，在人群中一些罕見的IgG4同種型也可引起不同的物理化學特性（Brusco, A.等人, 1998 Eur J Immunogenet [歐洲免疫遺傳學雜誌], 25:349-55；Aalberse等人, 2002 Immunol [免疫學], 105:9-19）。為了產生具有低ADCC和CDC但具有良好穩定性的PVRIG抗體，可以修飾人IgG4的鉸鏈區和Fc區並引入許多改變。該等經修飾的IgG4 Fc分子可在SEQ ID NO:83-88，Li等人的美國專利案號8,735,553中找到。 PVRIG 抗體生產
抗PVRIG抗體及其抗原結合片段可藉由本領域已知的任何方式產生，包括但不限於抗體四聚體的重組表現、化學合成和酶消化，而全長單株抗體可藉由例如融合瘤或重組產生獲得。重組表現可以來自本領域已知的任何合適的宿主細胞，例如哺乳動物宿主細胞、細菌宿主細胞、酵母宿主細胞、昆蟲宿主細胞等。 蛋白表現
一般而言，本揭露用於製造要求保護的抗PVRIG抗體之方法涉及培養分泌抗體的哺乳動物細胞。此類培養的哺乳動物細胞通常藉由涉及瞬時或穩定轉染的重組DNA技術來製備。可以使用陽離子脂質、聚乙烯亞胺、Lipofectamine TM或ExpiFectamine TM或電穿孔將來自該選殖步驟的彙集質體構建體（表現載體）轉染到多個宿主細胞（例如，哺乳動物、HEK 293或CHO、細菌、昆蟲、酵母細胞）中，以進行表現。技術者知道許多合適的轉染方法以實現重組抗體的表現。 上游細胞培養過程
用於生產本揭露的抗體的宿主細胞可以在多種類型的細胞培養基中培養。例如CD-CHO液體或CD-CHO AGT™粉末（生命技術公司（Life Technologies））、Ham's FlO（西格瑪公司（Sigma））、最小必需培養基（（MEM），（西格瑪公司）、RPMI-1640（西格瑪公司）和杜爾貝科修飾型伊戈爾（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）培養基（（DMEM），西格瑪公司））的市售培養基適用於培養宿主細胞。此外，Ham等人, Meth. Enz.[酶學方法] 58: 44 (1979)、Barnes等人, Anal. Biochem.[分析化學] 102: 255 (1980)、美國專利案號4,767,704；4,657,866；4,927,762；4,560,655；或5,122,469；WO 90103430；WO 87/00195；或美國專利註冊號30,985中描述的任何培養基可用作宿主細胞的培養基。該等培養基中的任何一種都可以根據需要以熟悉該項技術者已知的適當濃度補充其他成分。例如激素和/或其他生長因子（如胰島素、轉鐵蛋白、或表皮生長因子）、鹽類（例如氯化鈉、碳酸氫鈉、鈣、鐵、鉀、鋅、硫酸銅、錳、鎂、和磷酸鹽）、核苷酸（如腺苷、腺嘌呤、胸苷、胞苷、鳥苷、尿苷、嘌呤）、任何胺基酸（酪胺酸、半胱胺酸、胱胺酸、麩胺酸）、維生素或補充劑（膽鹼、肌醇、硫胺素、葉酸、生物素、鈣、菸鹼醯胺、對胺基苯甲酸、吡哆醇、核黃素、胸苷、氰鈷胺素、丙酮酸鹽、硫辛酸、亞麻油酸、亞硒酸鹽、甘胺酸、腐胺、乙醇胺）、選擇劑（其賦予針對選擇性標誌物的抗性或存活，該等選擇性標誌物如抗生素（如遺傳黴素、新黴素（neomycin）、潮黴素B、嘌呤黴素、吉歐黴素、Gentamycin™））、微量元素（定義為通常以微莫耳範圍內的最終濃度存在的無機化合物）、和葡萄糖、半乳糖或等效能量來源，使得培養基中或培養基上細胞的生理條件促進宿主細胞表現目的蛋白。在一個實施方式中，可以添加非離子界面活性劑、例如2-10 g/L的Kolliphor ®Pl88，以保持高細胞密度和活力。 參見Xu等人, Bioprocess Biosyst Eng [生物製程生物系統工程] (2017) 40: 1317-1326。在另一個實施方式中，細胞培養基中的銅濃度為10-35 ppb。培養基較佳的是無血清。在一些實施方式中，水性介質係液體，使得宿主細胞在液體介質內的細胞懸浮液中培養。
培養條件，例如溫度（對於哺乳動物細胞，通常為約37° ± 1°C）、pH（通常但不一定，細胞培養基維持在約pH 6.5-7.5的範圍內）、氧合作用等等，對於普通技術者來說係顯而易見的。在一個實施方式中，溶解氧水平為約15%-100%，並且pH為約6.7-7.3。
隨著時間的推移，以及整個培養容器（即，生物反應器）中從一個位置到另一個位置，溫度、pH和其他培養條件可能會有微小變化，因此該等參數存在一個操作範圍。（另請參見例如，Oguchi等人, pH Condition in temperature shift cultivation enhances cell longevity and specific hMab productivity in CHO culture [溫度變化培養的pH條件可提高CHO培養的細胞壽命和特異性hMab產量], Cytotechnology.[細胞技術] 52(3): 199-207 (2006)；Al-Fageeh等人, The cold-shock response in cultured mammalian cells: Harnessing the response for the improvement of recombinant protein production [培養哺乳動物細胞的冷休克反應：利用這種反應改善重組蛋白的生產], Biotechnol. Bioeng.[ 生物技術與 生物工程] 93:829-835 (2006)；Marchant, R.J.等人, Metabolic rates, growth phase, and mRNA levels influence cell-specific antibody production levels from in vitrocultured mammalian cells at sub-physiological temperatures [代謝率、生長期和mRNA水平影響亞生理溫度下體外培養的哺乳動物細胞的細胞特異性抗體產生水平], Mol. Biotechnol.[分子生物技術] 39:69-77 (2008))。
在培養轉染或轉化的宿主細胞後，本揭露的抗PVRIG抗體直接分泌到細胞培養基中（藉由使用適當的分泌指導訊息肽）並從中收穫。
本揭露進一步提供了編碼本文所述抗體的多核苷酸，例如編碼包含本文所述之互補決定區的重鏈或輕鏈可變區或區段的多核苷酸。在一些方面，編碼重鏈可變區的多核苷酸與選自由SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:112、SEQ ID NO:122、或SEQ ID NO:132組成之群組的多核苷酸具有至少85%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%核酸序列同一性。在一些方面，編碼輕鏈可變區的多核苷酸與選自由SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:123、或SEQ ID NO:133組成之群組的多核苷酸具有至少85%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%核酸序列同一性。
本揭露的多核苷酸可以編碼抗PVRIG抗體的可變區序列。它們還可以編碼抗體的可變區和恒定區。一些多核苷酸序列編碼包含示例性抗PVRIG抗體之一的重鏈和輕鏈的可變區的多肽。
本揭露還提供了用於產生抗PVRIG抗體的表現載體和宿主細胞。表現載體的選擇取決於表現載體的預期宿主細胞。通常，表現載體包含可操作地連接到編碼抗PVRIG抗體鏈或抗原結合片段的多核苷酸的啟動子和其他調節序列（例如，強化子）。在一些方面，除了在誘導條件的控制下，使用誘導型啟動子來防止插入序列的表現。誘導型啟動子包括例如阿拉伯糖、lacZ、金屬硫蛋白啟動子或熱激啟動子。可以在非誘導條件下、而不在偏向宿主細胞更好耐受其表現產物的編碼序列的群體的情況下擴大經轉化的生物體的培養。除啟動子外，其他調節元件也可為有效表現抗PVRIG抗體或抗原結合片段所需要或期望的。該等元件典型地包括ATG起始密碼子和相鄰的核糖體結合位點或其他序列。此外，藉由包含適合於使用中的細胞系統的強化子，可以提高表現效率（參見例如，Scharf等人, Results Probl.Cell Differ. [細胞分化中的結果和問題]20:125, 1994；以及Bittner等人, Meth. Enzymol. [酶學方法], 153:516, 1987）。例如，SV40強化子或CMV強化子可以用來增加哺乳動物宿主細胞中的表現。
用於攜帶並表現抗PVRIG抗體鏈的宿主細胞可為原核或真核的。大腸桿菌係一種可用於選殖和表現本揭露多核苷酸的原核宿主。其他適用的微生物宿主包括桿菌，如枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis），和其他腸桿菌科（enterobacteriaceae），如沙門氏菌屬（Salmonella）、沙雷氏菌屬（Serratia）和各種假單胞菌屬（Pseudomonas）物種。在該等原核宿主中，還可以製備表現載體，其典型地含有與宿主細胞相容的表現控制序列（例如，複製起點）。此外，將存在任何數量的多種熟知的啟動子，如乳糖啟動子系統、色胺酸（trp）啟動子系統、β-內醯胺酶啟動子系統或來自噬菌體λ的啟動子系統。啟動子典型地視需要用操縱子序列控制表現，並具有核糖體結合位點序列等，用於啟動和完成轉錄和翻譯。其他微生物如酵母也可用於表現抗PVRIG多肽。也可以使用昆蟲細胞與桿狀病毒載體的組合。
在其他方面，哺乳動物宿主細胞用於表現和產生本揭露的抗PVRIG多肽。例如，它們可為表現內源性免疫球蛋白基因的融合瘤細胞系或攜帶外源性表現載體的哺乳動物細胞系。該等包括任何正常死亡或正常或異常永生化動物或人細胞。例如，已經開發了幾種能夠分泌完整免疫球蛋白的合適宿主細胞系，包括CHO細胞系、各種COS細胞系、HEK 293細胞、骨髓瘤細胞系、轉化的B細胞和融合瘤。使用哺乳動物組織細胞培養物來表現多肽一般在例如Winnacker, From Genes to Clones [從基因到殖株], VCH出版社, 紐約州紐約市, 1987中討論。用於哺乳動物宿主細胞的表現載體可包括表現控制序列，如複製起點、啟動子和強化子（參見例如，Queen等人, Immunol. Rev. [免疫學評論] 89:49-68, 1986），以及必要的處理資訊位點，如核糖體結合位點、RNA剪接位點、多腺苷酸化位點和轉錄終止子序列。該等表現載體通常含有衍生自哺乳動物基因或哺乳動物病毒的啟動子。合適的啟動子可為組成型的、細胞類型特異性的、階段特異性的、和/或可調控的或可調節的。有用的啟動子包括但不限於金屬硫蛋白啟動子、組成型腺病毒主要晚期啟動子、地塞米松誘導型MMTV啟動子、SV40啟動子、MRP polIII啟動子、組成型MPSV啟動子、四環素誘導型CMV啟動子（如人立即早期CMV啟動子）、組成型CMV啟動子和本領域已知的啟動子-強化子組合。 下游過程
來自上游過程的本揭露的組成物可以進一步經歷連續或半連續下游純化、或下游分批純化過程，以進一步純化抗體或抗原結合片段組成物。
在純化過程中，固定相係可以固定一或多種配體的任何表面。固定相可為懸浮液、離散顆粒的不連續相、板、感測器、晶片、膠囊、盒、樹脂、珠、整料、凝膠、膜或膜吸附劑，等。固定相各相可以填充到純化柱中（例如，填充有樹脂珠）。用於形成固定相的材料之實例包括機械穩定的基質，例如多孔或無孔珠、無機材料（例如，多孔二氧化矽、可控孔徑玻璃（CPG）和羥基磷灰石）、合成有機聚合物（例如，聚丙烯醯胺、聚甲基丙烯酸甲酯、聚(苯乙烯二乙烯基)苯、聚丙烯醯胺、陶瓷顆粒和上述任意的衍生物）和多糖（例如，纖維素、瓊脂糖和葡聚糖）。 參見Jansson, J. C.; Ryden, L. Protein Purification [ 蛋白質純化 ];Wiley[威利出版社]: 紐約, 1998。
親和層析基於目的分子與樹脂官能基之間的高度特異性相互作用（例如抗原與抗體、酶與底物、受體與配體、或蛋白質與核酸之間的相互作用）來分離分子 。一些常用的親和層析樹脂包括純化抗體的蛋白A或蛋白G樹脂、純化生物素/卵白素及其衍生物的卵白素生物素樹脂、純化GST標記的重組蛋白的麩胱甘肽樹脂、分離血漿凝固蛋白的肝素樹脂、純化與金屬離子特異性相互作用的蛋白的IMAC樹脂等。每種親和層析的操作條件取決於相互作用的機制和影響相互作用的因素。商業親和層析樹脂包括但不限於MabSelect Sure、UNOsphere SUPrA TM、Affi-Gel ®和Affi-Prep ®。在一個實施方式中，親和層析步驟係以結合和洗脫模式進行的蛋白A層析。在一個實施方式中，用蛋白A親和層析純化收穫的細胞培養液，包括以下步驟： a) 將HCCF結合到固定相上；以及 b) 用洗脫溶液從蛋白A固定相上洗脫抗體或抗原結合片段。
在一個實施方式中，在步驟 (a) 之前，用平衡溶液平衡固定相。在一個實施方式中，一或多種雜質存在於步驟a) 的流過物中。在該方法的另一方面，在步驟a) 之後但在步驟b) 之前，該方法進一步包括用一或多種洗滌溶液洗滌固定相的步驟。在一個實施方式中，從洗滌步驟中除去一或多種雜質。在一個實施方式中，洗滌溶液或洗脫溶液包含鹽，較佳的是單價金屬離子鹽，例如NaCl或KCl。在一個實施方式中，洗滌溶液包含約400-600 mM NaCl或KCl。在一個實施方式中，洗滌或洗脫溶液的pH為約6-7。在一個實施方式中，洗滌或洗脫溶液的pH為約6.5。在另一個實施方式中，洗脫溶液包含約5-50 mM乙酸鈉。在另一個實施方式中，洗脫溶液包含約5-30 mM乙酸鈉。在另一個實施方式中，洗脫溶液包含約20 mM乙酸鈉。在另一個實施方式中，洗脫溶液具有約3-4的pH。 純化的組成物
本揭露提供了一種包含抗人PVRIG抗體或其抗原結合片段的組成物，其中該抗人PVRIG抗體或其抗原結合片段包含輕鏈可變區和重鏈可變區，該輕鏈可變區包含選自表5中列出的組的三個輕鏈CDR，該重鏈可變區包含選自表5中列出的組的三個重鏈CDR。 治療方法
本揭露的抗體或抗原結合片段可用於多種應用，包括但不限於治療PVRIG相關障礙或疾病之方法。在一方面，PVRIG相關障礙或疾病係癌症。
在一方面，本揭露提供了治療癌症之方法。在某些方面，該方法包括向有需要的患者投與有效量的抗PVRIG抗體或抗原結合片段。癌症可以包括但不限於表現PVRL2的癌症、PVRL2累積的癌症以及以下的癌症及其轉移：結腸和直腸（例如，結腸癌和直腸癌）、肛門（包括肛管和肛腸腹膜）和下胃腸道；胃（例如，胃腸道間質、腺癌和類癌）、胸膜、小腸和大腸；前列腺癌，包括去勢抵抗性前列腺癌（CRPC）；肝細胞癌，包括肝癌和肝內膽管癌、膽囊癌和其他膽道癌（例如，膽管肉瘤），胰臟癌（例如，胰臟腺癌），呼吸系統癌，包括喉癌和食管癌（例如，食管鱗狀細胞癌或食管腺癌），支氣管和肺（間皮瘤，非小細胞肺癌（NSCLC），例如，肺鱗狀細胞癌或肺腺癌），以及其他呼吸器官；皮膚（包括基底和鱗狀）、皮膚和非上皮皮膚的黑色素瘤；腺體（唾液腺和黏液腺）；乳癌（例如，激素受體陽性乳癌、雌激素受體和黃體素受體陰性乳癌、三陰性乳癌（TNBC）和PRLR陽性（PRLR +）乳癌）；泌尿生殖系統，包括子宮、子宮頸、子宮體、卵巢（例如，漿液性腫瘤、黏液性腫瘤、透明細胞腫瘤、子宮內膜樣腫瘤、移行細胞腫瘤、布蓮約瘤（Brenner tumor）、卵巢癌肉瘤、混合上皮腫瘤、交界性上皮腫瘤、未分化癌腫瘤、輸卵管和腹膜腫瘤）；外陰、陰道、腎盂和其他女性和男性生殖器（包括陰莖、睪丸、輸尿管和其他泌尿器官）的癌症；膀胱癌（例如，膀胱尿道癌）；腎癌（例如，腎細胞癌和腎母細胞瘤）；腦和神經系統，包括星形細胞瘤、神經膠質母細胞瘤、惡性神經膠瘤和惡性周邊神經鞘瘤（MPNST）；甲狀腺癌和其他內分泌癌（例如，乳頭狀癌、濾泡狀癌、髓樣癌和退行性癌）；眼癌和眼眶癌；頭頸部（例如，喉、下咽、唇和口腔）、轉移性鱗狀頸癌、鼻咽、口咽、副鼻腔和鼻腔、唾液腺）；骨骼和關節（例如，骨肉瘤）、軟組織（包括心臟）、例如，卡波西肉瘤，橫紋肌肉瘤和未分化多形性肉瘤，以及其他結締組織（例如，黏液纖維肉瘤和纖維黏液樣肉瘤）；病毒相關癌症、骨髓瘤和B細胞癌，包括何杰金氏淋巴瘤和非何杰金氏淋巴瘤（例如，彌漫性大B細胞淋巴瘤（DLBCL）、濾泡性淋巴瘤、原發性縱隔B細胞淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、移植後淋巴增殖性疾病、緣帶淋巴瘤、瓦登斯特隆巨球蛋白血症和伯基特淋巴瘤）；T細胞癌症，包括間變性大細胞淋巴瘤、周圍T細胞淋巴瘤、血管免疫母細胞淋巴瘤、肝脾T細胞淋巴瘤和結外NK/T細胞淋巴瘤；和白血病，包括急性淋巴母細胞白血病、慢性淋巴球白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病。
除了解剖位置之外，還可以藉由癌症驅動突變（例如BRAF、CTNNB1、EGFR HER2/ERBB2、FGFR2、GNA11、IDH1/2、KIT、KRAS、MAP2K、NRAS、PIK3CA、TP53）的單獨和/或組合來鑒定和治療癌症（Bailey等人、2018. Comprehensive characterization of cancer driver genes and mutations.[癌症驅動基因和突變的綜合表徵] Cell[細胞], 173(2), pp.371-385）。
本文揭露的抗體或抗原結合片段可以藉由任何合適的方式投與，包括腸胃外、肺內和鼻內，並且如果需要用於局部治療、病灶內投與。腸胃外輸注包括肌內、靜脈內、動脈內、腹膜內或皮下投與。給藥可以藉由任何合適的途徑，例如藉由注射，如靜脈內或皮下注射，這部分取決於投與是短暫的還是長期的。本文考慮了多種給藥方案，包括但不限於單次投與或在不同時間點的多次投與、推注投與、和脈衝輸注。
本揭露的抗體或抗原結合片段可以以符合良好醫學實踐的方式配製、給藥和投與。在該上下文中考慮的因素包括治療的特定障礙、治療的特定哺乳動物、個體患者的臨床病症、障礙的原因、藥劑的遞送位點、投與方法、投與方案、和醫療從業者已知的其他因素。抗體不需要但視需要與目前用於預防或治療所研究的障礙的一或多種藥劑一起配製。此類其他藥劑的有效量取決於配製物中存在的抗體的量、障礙或治療的類型、以及上文討論的其他因素。該等通常以與如本文所述相同的劑量和投與途徑使用，或以本文所述劑量的約1%-99%使用，或以經驗/臨床確定為合適的任何劑量和任何途徑使用。
為預防或治療疾病，本揭露的抗體或抗原結合片段的合適的劑量將取決於待治療的疾病的類型、抗體的類型、疾病的嚴重程度和病程、投與抗體是用於預防還是治療目的、先前療法、患者的臨床病史和對抗體的響應、以及主治醫生的判斷。抗體適當地以一次或經一系列治療投與於患者。取決於疾病的類型和嚴重性，約1 μg/kg至100 mg/kg的抗體可為用於向患者投與的初始候選劑量，無論是例如藉由一次或多次分開投與，還是藉由連續輸注。取決於上述因素，一個典型的日劑量可以為約1 μg/kg至100 mg/kg或更多。對於幾天或更長時間內的重複投與，取決於病症，治療通常會持續直到出現疾病症狀的期望抑制。此類劑量可以間歇地投與，例如每週或每三週（例如使得患者接受約兩個至約二十個，或例如約六個劑量的抗體）。投與初始較高負載劑量，隨後投與一或多個較低劑量。但是，其他給藥方案可為有用的。藉由常規技術和測定可以容易地監測該療法的進展。 組合療法
在一方面，本揭露的PVRIG抗體可與其他治療劑組合使用。可與本揭露的PVRIG抗體一起使用的其他治療劑包括但不限於化療劑（例如，紫杉醇或紫杉醇藥劑；（例如，Abraxane ®）、多西他賽；卡鉑；托泊替康；德魯替康；順鉑；伊立替康、多柔比星、來那度胺、5-氮雜胞苷、異環磷醯胺、奧沙利鉑、培美曲塞二鈉、環磷醯胺、依托泊苷、地西他濱、氟達拉濱、長春新鹼、苯達莫司汀、苯丁酸氮芥、白消安、吉西他濱、黴法蘭、噴司他丁、米托蒽醌、培美曲塞二鈉）、酪胺酸激酶抑制劑（例如EGFR抑制劑（例如厄洛替尼）、多激酶抑制劑（例如MGCD265、RGB-286638）、CD-20靶向劑（例如利妥昔單抗、奧法木單抗、RO5072759、LFB-R603）、CD52靶向劑（例如阿侖單抗）、普賴蘇穠、達貝泊汀α、來那度胺、Bcl-2抑制劑（例如奧利默森鈉）、極光激酶抑制劑（例如MLN8237、TAK-901）、蛋白酶體抑制劑（例如硼替佐米）、CD-19靶向劑（例如MEDI-551、MOR208）、MEK抑制劑（例如ABT-348）、JAK-2抑制劑（例如INCB018424）、mTOR抑制劑（例如替西羅莫司、依維莫司）、BCR/ABL抑制劑（例如伊馬替尼）、ET-A受體拮抗劑（例如ZD4054）、TRAIL受體2（TR-2）促效劑（例如CS-1008）、EGEN-001、Polo樣激酶1抑制劑（例如BI 672）。
本揭露的抗PVRIG抗體可與其他治療劑（例如其他免疫檢查點抗體）組合使用。此類免疫檢查點抗體可包括抗PD1抗體。抗PD1抗體可以包括但不限於，揭露於美國專利案號：8,735,553。由默克公司（Merck）揭露的派姆單抗（以前稱為MK-3475）係人源化lgG4-K免疫球蛋白，分子量約為149 kDa，其靶向PD1受體，並且抑制PD1受體配體PD-L1與PD-L2的結合。派姆單抗已被批准用於轉移性黑色素瘤和轉移性非小細胞肺癌（NSCLC）的適應症，並且正在進行用於治療頭頸部鱗狀細胞癌（HNSCC）和難治性何杰金氏淋巴瘤（cHL）的臨床研究。納武單抗（如由百時美施貴寶公司（Bristol-Meyers Squibb）揭露）係全人lgG4-K單株抗體。納武單抗（殖株5C4）揭露於美國專利案號US 8,008,449和WO 2006/121168中。納武單抗被批准用於治療黑色素瘤、肺癌、腎癌、和何杰金氏淋巴瘤。
用於與抗PVRIG抗體組合的其他免疫檢查點抗體可包括抗TIGIT抗體。這種抗TIGIT抗體可以包括但不限於如WO 2019/129261中所揭露的抗TIGIT抗體。 藥物組成物和配製物
還提供了包含抗PVRIG抗體或其抗原結合片段或包含編碼抗PVRIG抗體或抗原結合片段的序列的多核苷酸的組成物，包括藥物配製物。在某些實施方式中，組成物包含與PVRIG結合的一或多種抗體或抗原結合片段，或包含編碼與PVRIG結合的一或多種抗體或抗原結合片段的序列的一或多種多核苷酸。該等組成物還可包含合適的載劑，例如本領域熟知的藥學上可接受的賦形劑，包括緩衝液。
藉由將具有所需純度的這種抗體或抗原結合片段與一或多種視需要的藥學上可接受的載劑混合來製備本文所述之抗PVRIG抗體或抗原結合片段的藥物配製物（Remington’s Pharmaceutical Sciences 16th edition [雷明頓藥物科學第16版], Osol, A.編輯(1980)），呈凍乾配製物或水溶液的形式。藥學上可接受的載劑在所採用的劑量和濃度下通常對接受者無毒，並且包括但不限於：緩衝液，例如磷酸鹽、檸檬酸鹽和其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸和甲硫胺酸；防腐劑（如十八烷基二甲基苄基氯化銨；氯化六甲雙銨；殺藻胺；氯化本索寧；苯酚、丁醇或苯甲醇；對羥基苯甲酸烷基酯，如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；和間甲酚）；低分子量（少於約10個殘基）的多肽；蛋白質，如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，如EDTA；糖，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成鹽反離子，如鈉；金屬錯合物（例如Zn-蛋白錯合物）；和/或非離子型界面活性劑，如聚乙二醇（PEG）。本文的示例性藥學上可接受的載劑還包括間質藥物分散劑，例如可溶性中性活性透明質酸酶糖蛋白（sHASEGP），例如人可溶性PH-20透明質酸酶糖蛋白，例如rHuPH20（HYLENEX ®，百特國際有限公司（Baxter International, Inc.））。在美國專利案號US 7,871,607和2006/0104968中描述了某些示例性sHASEGP和使用方法，包括rHuPH20。在一方面，將sHASEGP與一或多種另外的糖胺聚糖酶如軟骨素酶組合。
示例性凍乾抗體配製物描述於美國專利案號6,267,958中。水性抗體配製物包括美國專利案號6,171,586和WO 2006/044908中描述的那些，後者包括組胺酸-乙酸鹽緩衝液。可以製備緩釋製劑。緩釋製劑的合適實例包括含有該抗體的固體疏水性聚合物的半透性基質，該基質為成形製品的形式，例如膜或微膠囊。用於體內投與的配製物通常是無菌的。無菌可以例如通過無菌過濾膜過濾而容易地實現。 使用方法
本揭露還涉及治療受試者的癌症之方法，該方法包括投與有效量的本揭露所揭露的任何組成物；即，將本文所述之任何組成物投與於受試者。在該方法的一些實施方式中，藉由靜脈內或皮下投與將組成物投與於受試者。
在一些實施方式中，癌症係具有高突變負荷的實性瘤。在一個實施方式中，腫瘤突變負荷（TMB）係 10個突變/兆鹼基，如藉由FDA批准的測試確定的。在一個實施方式中，腫瘤係轉移性的或不可切除的。
在一些實施方式中，癌症選自由以下組成之群組：黑色素瘤、非小細胞肺癌、復發性或難治性經典何杰金氏淋巴瘤、頭頸部鱗狀細胞癌、尿路上皮癌、食道癌、胃癌、DLBCL和肝細胞癌。
在上述治療方法的其他實施方式中，癌症係血紅素惡性腫瘤。在某些實施方式中，血紅素惡性腫瘤係急性淋巴母細胞白血病（ALL）、急性骨髓性白血病（AML）、慢性淋巴球性白血病（CLL）、慢性骨髓性白血病（CML）、DLBCL、EBY陽性DLBCL、原發性縱膈腔大B細胞淋巴瘤、富含T細胞/組織細胞的大B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、何杰金氏淋巴瘤（HL）、套細胞淋巴瘤（MCL）、多發性骨髓瘤（MM）、髓系細胞白血病-1蛋白（Mcl-l）、骨髓化生不良症候群（MDS）、非何杰金氏淋巴瘤（NHL）或小淋巴球淋巴瘤（SLL）。
本文所述之方法和治療中涵蓋惡性腫瘤，例如黑色素瘤、結直腸癌、肝癌、腎癌、胃/食管癌、乳癌、胰臟癌和卵巢癌，該等惡性腫瘤展示與生檢或外科手術材料中存在腫瘤浸潤淋巴球相關的無病生存期和總生存期改善。已知此類癌症亞型易受T淋巴球的免疫控制。另外，包括難治性或復發性惡性腫瘤，其生長可以使用本文所述之抗體來抑制。
在一些實施方式中，將本揭露的組成物投與給患有癌症的受試者，該癌症的特徵在於測試的組織樣本中PVRL2的表現升高，包括：卵巢癌、腎癌、結直腸癌、胰臟癌、乳癌、肝癌、胃癌、食道癌和黑色素瘤。可以受益於抗PVRIG抗體治療的另外的癌症可能包括與病毒（諸如人類免疫不全病毒、A型、B型和C型肝炎病毒、愛潑斯坦巴爾病毒、已知與例如卡波西肉瘤、肝癌、鼻咽癌、淋巴瘤、子宮頸癌、外陰癌、肛門癌、陰莖癌和口腔癌等因果相關的人乳頭瘤病毒）持續感染相關的癌症。
在一個實施方式中，本揭露包括一種治療人患者的癌症之方法，該方法包括向患者投與本文揭露的任何組成物。例如，在一個實施方式中，本揭露包括一種治療人患者的不可切除或轉移性黑色素瘤之方法，該方法包括向該患者投與本揭露的任何組成物。在另一個實施方式中，本揭露包括一種治療人患者的轉移性非小細胞肺癌（NSCLC）之方法，該方法包括向患者投與本揭露的組成物。在具體的進一步實施方式中，患者具有高PVRL2表現的腫瘤，例如腫瘤比例得分（TPS） 50%。在其他實施方式中，患者患有具有PVRL2表現的腫瘤（TPS 1%）。在其他實施方式中，患者先前接受或未接受含鉑化療治療。在具體實施方式中，患者在接受含鉑化療期間或之後出現疾病進展。在一個實施方式中，癌症係轉移性的或III期的。在某些實施方式中，患者患有具有PVRL2表現的腫瘤，具有組合陽性得分（CPS） 1%。在某些實施方式中，患者先前接受過含鉑化療。在某些實施方式中，患者在含鉑化療期間或之後出現疾病進展。在具體實施方式中，患者的腫瘤表現PVRL2，其CPS為 1%。在一個實施方式中，治療與鉑和FU組合。
本揭露的實施方式還包括本文所述之一或多種生物組成物 (i)   用於， (ii)  用作藥物或組成物，或 (iii) 用於製備藥物用於： a.     療法（例如，人體療法）； b.     藥品； c.      誘導或增強抗腫瘤免疫響應； d.     減少患者體內一或多種腫瘤標誌物的數量； e.      阻止或延緩腫瘤或血液癌症的生長； f.      阻止或延緩PVRIG相關疾病的進展； g.     阻止或延緩癌症的進展； h.     PVRIG相關疾病的穩定； i.      抑制腫瘤細胞的生長或生存； j.      消除或減小一或多種癌性病變或腫瘤的大小； k.     降低PVRIG相關疾病的進展、發作或嚴重程度； l.      降低PVRIG相關疾病（例如癌症）臨床症狀的嚴重程度或持續時間； m.    相對於類似的未經治療的患者的預期生存期，延長患者的生存期； n.     誘導癌症病症或其他PVRIG相關疾病的完全或部分緩解；或 o.     癌症的治療。 套組
本揭露尤其提供了包含抗PVRIG抗體或其抗原結合片段以及使用和/或投與說明書的套組（kit）。在一些實施方式中，套組包含至少一種抗PVRIG抗體或其抗原結合片段和藥學上可接受的載劑，以及使用和/或投與的說明書。
還提供了用於本文揭露的各種方法的套組。說明書可以包括向受試者投與本文所述之一或多種藥物組成物以在受試者中實現預期活性的描述。套組可以進一步包括基於鑒定人是否需要治療來選擇適合治療的人的描述。在一些實施方式中，說明書包括向需要治療的受試者投與至少一種抗PVRIG抗體或其抗原結合片段的描述。
與投與一或多個劑量的至少一種抗PVRIG抗體或其抗原結合片段相關的說明書通常包括關於預期治療的劑量、給藥方案和投與途徑的資訊。容器可為單位劑量、散裝包裝（例如，多劑量包裝）或亞單位劑量。在本揭露的套組中提供的說明書通常是在標籤或包裝插頁上的書面說明書。標籤或包裝插頁可表明本文所述之一或多種藥物組成物用於治療以下、延緩以下的發作和/或減輕以下：受試者的疾病、障礙或病症。
在一些實施方式中，本文提供的套組在適當的包裝中。合適的包裝包括但不限於小瓶、瓶子、罐子、柔性包裝等等。還設想了與特定裝置（例如輸注裝置）組合使用的包裝。套組可以具有無菌進入口（例如，該容器可為靜脈內溶液袋或具有可被皮下注射針刺穿的塞子的小瓶）。容器還可以具有無菌的進入口。
套組可以包括另外組分，例如緩衝液和解釋性資訊。套組可包括容器和容器上的或與容器相關聯的標籤或一或多個包裝插頁。在一些實施方式中，本揭露提供了包含上述套組的內容物的製品。 實例 實例 1. 小鼠抗 PVRIG 抗體的產生
為了產生針對PVRIG的抗體，用不同的PVRIG抗原對25隻BALB/C、SJL近交小鼠品系的隊列進行免疫接種，每個隊列都接受包含PVRIG抗原、劑量、注射途徑、佐劑和免疫時間的獨特組合的免疫策略。用hPVRIG-ECD-mFc（百普賽斯公司（Acrobiosystems），PVG-H5253-1 mg，其包含胺基酸Thr 41 - Asp 171（TPEVWVQVRMEATELSSFTIRCGFLGSGSISLVTVSWGGPNGAGGTTLAVLHPERGIRQWAPARQARWETQSSISLILEGSGASSPCANTTFCCKFASFPEGSWEACGSLPPSSDPGLSAPPTPAPILRAD）（SEQ ID NO:154）免疫10隻BALB/C近交小鼠品系。
用hPVRIG-ECD-his（百普賽斯公司，PVG-H52H4-1 mg（500 μg × 2））（其包含PVRIG的胺基酸Thr 41-Asp 171（SEQ ID NO:154））免疫五隻BALB/C近交小鼠品系。用hPVRIG-ECD-his（百普賽斯公司，PVG-H52H4-1 mg（500 μg × 2））（其也使用Thr 41-Asp 171（SEQ ID NO:154）作為免疫原）免疫五隻SJL近交小鼠品系。總共對5個隊列中的5隻動物進行了免疫。動物在0至56天的不同時期接受免疫接種。為了監測免疫響應，通常在21-56天的2-4次免疫接種後，藉由ELISA篩選滴定血清。針對與免疫接種中使用的PVRIG抗原hPVRIG-ECD-his（百普賽斯公司，PVG-H52H4-1 mg（500 μg × 2））（SEQ ID NO:154）結合的抗體來篩選血清。測量每隻動物的PVRIG特異性抗體響應，並選擇具有足夠滴度的抗PVRIG Ig的動物進行4天的最終加強。
從如上所述免疫的小鼠中分離淋巴器官，包括脾臟和淋巴結。藉由基於PEG的融合與衍生自SP2/0的永生化小鼠骨髓瘤細胞融合產生融合瘤。使用補充有HAT的常規1640培養基將所得細胞鋪板於96孔細胞培養板中以選擇融合瘤。此外，如US 2016/0252495A1中所述，直接從不與骨髓瘤細胞融合的抗原陽性B細胞中分離出幾種抗體。 實例 2. 抗 PVRIG 抗體的篩選和選擇
為了產生結合PVRIG的單株抗體，用人PVRIG抗原免疫小鼠，並如實例1中所述產生融合瘤。培養和生長培養基更換10-13天後，從各個孔中收集融合瘤培養物上清液並進行篩選以鑒定具有分泌的PVRIG特異性抗體的孔。所有上清液最初至少針對hPVRIG-ECD-hFc（百普賽斯公司，PVG-H5257）和hPVRIG-ECD-his（百普賽斯公司, PVG-H52H4）進行篩選，其含有胺基酸Thr 41 - Asp 171（SEQ ID NO:154）用於抗體生成中。通過ELISA測量與人PVRIG重組蛋白特異性結合的抗體。對來自5個融合瘤融合體中大約超過23040個培養孔的上清液進行PVRIG抗體結合篩選。簡而言之，將2 μg/mL人PVRIG-His或人PVRIG-hFc包被於96孔ELISA板中，50 μl融合瘤培養物上清液孵育30-60分鐘，洗滌，並用與軛合到山葵過氧化酶（HRP）的抗小鼠IgG Fc或抗人IgG Fc二抗進行檢測。孵育和洗滌後，將板用HRP底物顯色並測量吸光度。
將來自陽性孔的融合瘤轉移至含有新鮮培養基的24孔板中生長2-3天，然後藉由流式細胞術再次篩選以確認抗體與PVRIG表現細胞系的結合和石蟹獼猴（Cyno）PVRIG交叉反應性。此外，還評估了24孔板的融合瘤培養物上清液對PVRIG及其配體PVRL2之間結合的抑制作用。
通過FACS測量抗體在表現PVRIG的細胞系上的結合。簡而言之，將100 μl融合瘤培養物上清液和PVRIG表現細胞（例如CHO或Jurkat）或對照細胞（例如親代CHO）孵育30-60分鐘，洗滌，並與軛合到別藻藍蛋白（APC）的抗小鼠IgG Fc二抗一起孵育用於檢測。孵育和洗滌後，藉由流式細胞術測量螢光。
通過ELISA測量抗體與Cyno PVRIG重組蛋白的結合。簡而言之，將2 μg/mL人PVRIG-His或人PVRIG-hFc包被到96孔ELISA板上，與50 μl融合瘤培養物上清液共孵育30-60分鐘，洗滌，並與軛合到HRP的抗小鼠IgG Fc二抗一起孵育。孵育和洗滌後，將板用HRP底物顯色並測量吸光度。
通過ELISA測量PVRIG與其配體PVRL2之間的結合的抑制。簡言之，將2 μg/mL人PVRIG-His包被於96孔ELISA板中，將50 μl融合瘤培養物上清液與50 μl hPVRL2-hFc（1μg/ml）共孵育30-60分鐘，洗滌，並與軛合到HRP的抗人IgG Fc二抗一起孵育。孵育和洗滌後，將板用HRP底物顯色並測量吸光度。根據該功能能力對抗體進行門控，並且選擇的抗體的數據顯示在下面的實例7中。 實例 3. 選擇的抗 PVRIG 抗體的亞選殖
將選擇的分泌抗PVRIG抗體的融合瘤亞選殖至單株。簡言之，將大約80-100個活的融合瘤細胞鋪在6孔板中的3 ml半固體甲基纖維素培養基（幹細胞技術公司（Stem Cell Technologies））中。7-10天後，將由單細胞產生的作為可見殖株的融合瘤集落轉移至96孔板，用新鮮培養基培養，並使其增殖2-4天。如上文所述藉由ELISA和流式細胞術篩選培養物上清液以確認人和Cyno PVRIG結合。穩定的融合瘤亞殖株在體外培養用於冷凍保存，並提交進行抗體VH和VL基因選殖和定序。 實例 4. 抗 PVRIG 抗體 VH 和 VL 基因選殖和定序
除去上清液後，將亞選殖後選擇的分泌抗PVRIG的融合瘤用100 ml RLT緩衝液（凱傑公司（Qiagen Inc.））在96孔板中裂解。隨後將含有裂解物的mRNA轉移至96孔深孔板中，以藉由標準定序技術（桑格定序和下一代定序）進行mRNA分離、cDNA合成和DNA定序。簡而言之，根據製造商的說明，使用Total RNA Isolation Kit™（新英格蘭實驗室公司（New England Biolabs Inc.））製備細胞裂解物的總RNA。根據製造商的說明，使用Super Script III™第一股合成SuperMix™（英傑公司（Invitrogen））藉由mRNA反轉錄生成cDNA。表5提供了選擇的選殖抗體的一級序列。 實例 5. 嵌合抗 PVRIG 抗體與人和 Cyno PVRIG 重組蛋白結合的 EC50 值
將抗體VH和VL序列選殖到人IgG表現載體中，轉染到293T細胞中進行表現，培養1-14天後，用蛋白A親和純化柱收穫含有抗體的上清液。純化後，使用ELISA測定法表徵與人和Cyno PVRIG重組蛋白的結合EC50，如表6所示。 [ 表 6]
抗體 人PVRIG結合EC50（nM） Cyno PVRIG結合EC50（nM）
BGA38 0.5237 0.2225
BGA86 0.06899 0.04485
BGA50 0.1051 0.02729
BGA12 0.1262 0.03901
實例 6. 嵌合抗 PVRIG 抗體與表現 PVRIG 的細胞結合的 EC50 值
將抗體VH和VL基因選殖到人IgG表現載體中，轉染到293T細胞中進行表現，培養1-14天後，用蛋白A親和純化柱收穫含有抗體的上清液。然後通過FACS測定來表徵純化的抗體與表現人PVRIG的細胞的結合和EC50。該數據如表7所示。 [ 表 7]
抗體 表現PVRIG的細胞結合EC50（nM） 表現PVRIG的細胞結合Emax（MFI）
BGA38 0.059 1039
BGA86 0.038 1033
BGA50 0.273 2611
BGA12 0.050 1177
實例 7. 減少 PVRL2 與 PVRIG 結合的抗 PVRIG 抗體的 IC50 值
將抗體VH和VL基因選殖到人IgG表現載體中，轉染到293T細胞中進行表現，培養1-14天後，用蛋白A親和純化柱收穫含有抗體的上清液。純化後，使用ELISA測定來表徵減少PVRIG及其配體PVRL2之間相互作用的嵌合抗PVRIG抗體的IC50值，如表8所示。 [ 表 8]
抗體 PVRIG/PVRL2阻斷 IC50（nM） PVRIG/PVRL2阻斷 Emax（抑制%）
BGA38 1.502 60.05
BGA86 0.885 97.16
BGA50 1.093 95.35
BGA12 0.15 91.86
實例 8. 嵌合抗 PVRIG 抗體的藉由 SPR 的親和力譜
嵌合抗PVRIG抗體以人IgG1形式生成，並使用BIAcore TMT-200（通用生命科學公司（GE Life Sciences））藉由表面電漿共振（SPR）測定來表徵結合動力學。簡而言之，將小鼠抗人IgG Fc抗體固定在活化的CM5生物感測器晶片（貨號BR100530，通用生命科學公司）上。純化的嵌合抗PVRIG抗體流過晶片表面並被抗人IgG抗體捕獲。然後將人或Cyno PVRIG蛋白的連續稀釋液流過晶片表面，並藉由使用一對一Langmuir結合模型（BIA評估軟體，通用生命科學公司）分析表面電漿共振信號的變化以計算締合速率（ k on）和解離速率（ k off）。將平衡解離常數（ K D）計算為比率 k off /k on。嵌合抗PVRIG抗體的結合親和力譜如下表9和表10所示。 [ 表 9] 針對人 PVRIG 的結合親和力譜
抗體 抗原 ka （ 1/Ms ） kd （ 1/s ） KD (M)
BGA38 人PVRIG 1.52E +06 1.70E-04 1.12E-10
BGA86 人PVRIG 1.34E +07 2.15E-03 1.61E-10
BGA50 人PVRIG 4.45E +6 6.52E-4 1.47E-10
BGA12 人PVRIG 2.29E +07 1.57E-03 6.84E-11
[ 表 10] 針對 Cyno PVRIG 的結合親和力譜
抗體 抗原 ka （ 1/Ms ） kd （ 1/s ） KD (M)
BGA38 Cyno PVRIG 1.44E +06 1.57E-04 1.09E-10
BGA86 Cyno PVRIG 1.97E +06 1.33E-03 6.74E-10
BGA50 Cyno PVRIG 8.05E +6 5.88E_3 7.30E-10
BGA12 Cyno PVRIG 5.61E +04 3.54E-04 6.31E-09
實例 9. 抗 PVRIG 抗體 BGA12 的人源化和工程改造
對於BGA12的人源化，藉由IMGT和NCBI數據庫中的人免疫球蛋白基因數據庫的BLAST分析，搜索人種系IgG基因中與BGA12可變區的cDNA序列具有高度同源性的序列。選擇以高頻率存在於人抗體庫（Glanville，2009 PNAS[美國國家科學院院刊]106:20216-20221）中並且與BGA12高度同源的人IGVH和IGVL基因作為人源化的模板。 [ 表 11]
抗體 SEQ ID NO 序列
BGA38 人框架 SEQ ID NO:155 人IGVH1-46 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAR
SEQ ID NO:156 人 IGVK3-11 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWP
           
BGA86 人框架 SEQ ID NO:157 人IGVH3-21 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSSSSYIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR
SEQ ID NO:158 人IGVH1-39 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTP
           
BGA12 人框架 SEQ ID NO:159 人IGVH1-3 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYA MHWVRQAPGQRLEWMGWINAGNGNTKYSQKFQGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR
SEQ ID NO:160 人 IGVK4-1 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTP
           
BGA50 人框架 SEQ ID NO:161 人IGVH1-18 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCAR
SEQ ID NO:162 人IGVK4-1 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTP
藉由CDR移植進行人源化（Methods in Molecular Biology [分子生物學方法], 第248卷: Antibody Engineering, Methods and Protocols [抗體工程，方法和方案], Humana Press [胡馬納出版社]，並使用內部開發的表現載體將人源化抗體變體工程改造為人IgG1形式。在首輪人源化中，藉由模擬的3D結構引導框架區中從鼠到人的胺基酸殘基的突變，並將對於維持CDR規範結構具有結構重要性的鼠框架殘基保留在人源化變體中，將其餘的鼠框架殘基逐一反向突變為相應的人框架殘基，以生成多個人源化變體，然後進行純化和表徵，以確定可被人框架殘基替代的鼠框架殘基，同時維持所期望的生物物理和生物化學特性。在第二輪人源化中，將第一輪人源化期間鑒定的關鍵鼠框架殘基組合起來，生成所需版本的人源化BGA12。具體地，將BGA12 VL的CDR移植到人種系可變基因IGVK 4-1的框架中，其中保留1個鼠殘基（S 43），從而產生BGA122的人源化VL序列（SEQ ID NO:111），或不保留鼠殘基，從而產生BGA121的人源化VL序列（SEQ ID NO:101）。BGA12 VH的CDR被移植到人種系可變基因IGVH1-3的框架中，保留3個鼠殘基（S 44 ，M 69 ，V 71），產生BGA121（SEQ ID NO:100）和BGA122（SEQ ID NO:110）的人源化VH序列。
使用內部開發的表現載體將BGA121和BGA122構建成人源化全長抗體形式，該等表現載體分別含有人IgG1和κ鏈的恒定區，具有容易適應的亞選殖位點。藉由將上述兩種構建體共轉染到Expi293™細胞中並藉由蛋白A柱（Cat:17543801，通用生命科學公司）純化來實現BGA121和BGA122的表現和純化。將純化的抗體在PBS中濃縮至0.5-5 mg/mL並以等分試樣儲存在-80°C冰箱中。
對BGA121和BGA122進行了詳細表徵。結果顯示，所有BGA12人源化變體在結合親和力和功能活性（例如抑制PVRL2介導的下游傳訊）方面非常相似。 不同版本 BGA12 的親和力測定
對於親和力測定，抗體被抗人Fc抗體捕獲，並用於基於表面電漿共振（SPR）技術的親和力測定。SPR測定的抗PVRIG抗體的結合譜的結果總結於表12和表13中，BGA121和BGA122顯示與人PVRIG和Cyno PVRIG非常相似的結合譜，並且與親本抗體BGA12相似。Rmax代表配體-分析物對之間相互作用產生的最大可行SPR信號，並以響應單位（RU）表示。 [ 表 12] - 抗 PVRIG 抗體與人 PVRIG 的結合譜
抗體 Ka （ M -1S -1 ） Kd （ S -1 ） KD(M) Rmax
BGA121 2.33E +07 1.22E-03 5.24E-11 32.4
BGA122 4.09E +07 1.99E-03 4.88E-11 38.1
BGA12 2.29E +07 1.57E-03 6.84E-11 43.4
[ 表 13] - 抗 PVRIG 抗體與 Cyno PVRIG 的結合譜
抗體 Ka （ M -1S -1 ） Kd （ S -1 ） KD(M) Rmax
BGA121 3.86E +04 2.89E-04 7.49E-09 42
BGA122 6.28E +04 1.16E-04 1.85E-09 33.1
BGA12 5.61E +04 3.54E-04 6.31E-09 27.9
不同版本的 BGA12 與天然人 PVRIG 的結合活性
為了評估活細胞上抗PVRIG抗體與天然PVRIG的結合活性，Jurkat細胞被工程改造為表現人PVRIG。將表現人PVRIG的Jurkat細胞接種到96孔板中，並與連續稀釋的抗PVRIG抗體一起孵育。將山羊抗人IgG用作二抗，檢測與細胞表面結合的抗體。藉由用GraphPad Prism™將劑量-反應數據與四參數邏輯模型擬合來確定與人天然PVRIG的劑量依賴性結合的EC50值。如圖1所示，所有人源化BGA12抗體均表現出與活細胞上天然人PVRIG的高結合親和力。 抗 PVRIG 抗體降低 PVRIG 與其配體 PVRL2 的相互作用
為了確定抗PVRIG抗體是否可以降低PVRIG-PVRL2信號軸（受體和配體之間的結合相互作用），將帶有His標籤的人PVRIG（hPVRIG-His）蛋白包被在96孔ELISA板上。PVRIG人源化抗體變體的從10 μg/mL開始的連續稀釋液與終濃度為1 μg/mL的PVRL2-生物素混合。如圖2所示，BGA12、BGA121和BGA122抗體以劑量依賴性方式大大降低了PVRIG與PVRL2的結合，且IC50相似。 實例 10. 抗 PVRIG 抗體 BGA38 的人源化和工程改造
對於BGA38抗體的人源化，藉由IMGT和NCBI數據庫中的人免疫球蛋白基因數據庫的BLAST，搜索人種系IgG基因中與BGA38可變區的cDNA序列具有高度同源性的序列。選擇以高頻率存在於人抗體庫（Glanville，2009 PNAS [美國國家科學院院刊]106:20216-20221）中並且與BGA38高度同源的人IGVH和IGVL基因作為人源化的模板。
藉由CDR移植進行人源化（Methods in Molecular Biology, Vol 248: Antibody Engineering, Methods and Protocols [分子生物學方法，第248卷：抗體工程，方法和方案], Humana出版社），並且使用內部開發的表現載體將人源化抗體變體工程改造為人IgG1形式。在首輪人源化中，藉由模擬的3D結構引導框架區中從鼠到人的胺基酸殘基的突變，並將對於維持CDR規範結構具有結構重要性的鼠框架殘基保留在人源化變體中，將其餘的鼠框架殘基逐一反向突變為相應的人框架殘基，以生成多個人源化變體，然後進行純化和表徵，以確定可被人框架殘基替代的鼠框架殘基，同時維持所期望的生物物理和生物化學特性。在第二輪人源化中，將第一輪人源化期間鑒定的關鍵鼠框架殘基組合起來，生成所需版本的人源化BGA38。具體地，將BGA38 VL的CDR移植到人種系可變基因IGVK 3-11的框架中，其中保留4個鼠殘基（Q 1F 36V 58Y 71），從而產生BGA381的人源化VL序列（SEQ ID NO:21），或保留5個鼠殘基（Q 1N 2F 36V 58Y 71），從而產生BGA382的人源化VL序列（SEQ ID NO:31）。將BGA38 VH的CDR移植到人種系可變基因IGVH1-46的框架中，保留1個鼠殘基（Q 1 ，），產生BGA381（SEQ ID NO:20）和BGA382（SEQ ID NO:30）、BGA383（SEQ ID NO:40）和BGA384（SEQ ID NO:50）的人源化VH序列。
使用內部開發的表現載體將BGA381-BGA384構建為人全長抗體形式，該等表現載體分別含有人IgG1和κ鏈的恒定區，具有容易適應的亞選殖位點。藉由將VH和VL構建體共轉染到Expi293™細胞中並藉由蛋白A柱（Cat:17543801，通用生命科學公司）純化來實現BGA381、BGA382、BGA383和BGA384的表現和製備。將純化的抗體在PBS中濃縮至0.5-5 mg/mL並以等分試樣儲存在-80°C冰箱中。
BGA38人源化抗體變體經過進一步工程改造，去除了CDR中的一或多個翻譯後修飾（PTM）位點，以改善用於人治療用途的分子和生物物理特性。考慮因素包括胺基酸組成、熱穩定性（Tm）、表面疏水性和等電子點（PI），同時保持抗體功能。
總之，人源化單株抗體BGA381、BGA382、BGA383和BGA384的工程改造版本衍生自上述過程，並進行了詳細表徵。結果顯示，所有BGA38人源化變體都表現出類似的有效結合親和力和功能活性，例如抑制PVRL2介導的下游傳訊。 不同版本的 BGA38 的親和力測定
對於親和力測定，抗PVRIG抗體被抗人Fc抗體捕獲，並用於基於表面電漿共振（SPR）技術的親和力測定。SPR測定的抗PVRIG抗體的結合譜的結果總結於表14和表15中，BGA381、BGA382、BGA383和BGA384顯示與人PVRIG和Cyno PVRIG非常相似的結合譜，與親本抗體BGA38相似。 [ 表 14] - 抗 PVRIG 抗體與人 PVRIG 的結合譜
抗體 Ka （ M -1S -1 ） Kd （ S -1 ） KD(M) Rmax
BGA38 3.89e +6 1.75e-4 4.50e-11 35.5
BGA381 4.40e +6 3.11e-4 7.07e-11 39.9
BGA382 3.26e +6 2.11e-4 6.46e-11 42.0
BGA383 6.51e +6 6.49e-4 9.98e-11 34.4
BGA384 1.18e +6 3.04e-4 2.58e-10 67.4
[ 表 15] - 抗 PVRIG 抗體與 Cyno PVRIG 的結合譜
抗體 Ka （ M -1S -1 ） Kd （ S -1 ） KD(M) Rmax
BGA38 4.15e +6 2.10e-4 5.07e-11 34.7
BGA381 4.98e +6 3.67e-4 7.38e-11 42.7
BGA382 4.70e +6 2.43e-4 5.18e-11 49.4
BGA383 5.25e +6 3.45e-4 6.58e-11 36.3
BGA384 5.99e +6 3.66e-4 6.10e-11 34.6
不同版本的 BGA38 與天然人 PVRIG 的結合活性
為了評估活細胞上抗PVRIG抗體與天然PVRIG的結合活性，Jurkat細胞被工程改造為表現人PVRIG。將表現PVRIG的Jurkat細胞接種到96孔板中，並與連續稀釋的抗PVRIG抗體一起孵育。將山羊抗人IgG用作二抗來檢測抗體與細胞表面的結合。藉由用GraphPad Prism™將劑量-反應數據與四參數邏輯模型擬合來確定與人天然PVRIG的劑量依賴性結合的EC50值。如圖3所示，所有人源化BGA38抗體均表現出與活細胞上天然PVRIG的高結合親和力。 不同版本的 BGA38 與天然 Cyno PVRIG 的結合活性
為了評估活細胞上抗PVRIG抗體與天然Cyno PVRIG的結合活性，HEK293細胞被工程改造為表現Cyno PVRIG。將用Cyno PVRIG轉染的HEK293細胞接種到96孔板中，並與抗PVRIG抗體的連續稀釋液一起孵育。將山羊抗人IgG用作二抗來檢測抗體與細胞表面的結合。藉由用GraphPad Prism™將劑量-反應數據與四參數邏輯模型擬合來確定與Cyno天然PVRIG的劑量依賴性結合的EC50值。如圖4所示，所有人源化BGA38抗體均表現出與活細胞上天然Cyno PVRIG的高結合親和力。 抗 PVRIG 抗體降低 PVRIG 與其配體 PVRL2 的相互作用
為了確定抗PVRIG抗體是否可以降低PVRIG-PVRL2相互作用，將hPVRIG-His標記蛋白包被在96孔ELISA板上。PVRIG人源化抗體變體的從10 μg/mL開始的連續稀釋液與終濃度為1 μg/mL的PVRL2-生物素混合。如圖5A-B所示，所有人源化BGA38抗體以劑量依賴性方式大大降低了PVRIG與PVRL2的結合，且IC50相似。 實例 11. 抗 PVRIG 抗體 BGA86 的人源化和工程改造
對於BGA86抗體的人源化，藉由IMGT和NCBI數據庫中的人免疫球蛋白基因數據庫的BLAST，搜索人種系IgG基因中與BGA86可變區的cDNA序列具有高度同源性的序列。選擇以高頻率存在於人抗體庫（Glanville，2009 PNAS [美國國家科學院院刊]106:20216-20221）中並且與BGA86高度同源的人IGVH和IGVL基因作為人源化的模板。
藉由CDR移植進行人源化（Methods in Molecular Biology, Vol 248: Antibody Engineering, Methods and Protocols [分子生物學方法，第248卷：抗體工程，方法和方案], Humana出版社），並且使用內部開發的表現載體將人源化抗體變體工程改造為人IgG1形式。在首輪人源化中，藉由模擬的3D結構引導框架區中從鼠到人的胺基酸殘基的突變，並將對於維持CDR規範結構具有結構重要性的鼠框架殘基保留在人源化變體之一中，將其餘的鼠框架殘基逐一反向突變為相應的人框架殘基，以生成多個人源化變體，然後進行純化和表徵，以確定可被人框架殘基替代的鼠框架殘基，同時維持所期望的生物物理和生物化學特性。在第二輪人源化中，將第一輪人源化期間鑒定的關鍵鼠框架殘基組合起來，生成所需版本的人源化BGA86。具體地，將BGA86 VL的CDR移植到人種系可變基因IGVK 1-39的框架中，不保留鼠殘基，產生BGA86的人源化VL序列（SEQ ID NO:61）。BGA86 VH的CDR被移植到人種系可變基因IGVH3-21的框架中，保留2個鼠殘基（T 77 ，S 82A），產生BGA86（SEQ ID NO:60）的人源化VH序列。
使用內部開發的表現載體將人源化BGA86抗體變體構建為人全長抗體形式，該等表現載體分別含有人IgG1和κ鏈的恒定區，具有容易適應的亞選殖位點。藉由將上述兩種構建體共轉染到Expi293™細胞中並藉由蛋白A柱（Cat:17543801，通用生命科學公司）純化來實現人源化BGA86變體的表現和製備。將純化的抗體在PBS中濃縮至0.5-5 mg/mL並以等分試樣儲存在-80°C冰箱中。
BGA86人源化抗體變體經過進一步工程改造，去除了CDR中的一或多個翻譯後修飾（PTM）位點，以改善用於人治療用途的分子和生物物理特性。考慮因素包括胺基酸組成、熱穩定性（Tm）、表面疏水性和等電子點（pI），同時保持抗體功能。
人源化單株抗體BGA861和BGA862的工程改造版本衍生自上述過程，並進行了詳細表徵。結果顯示，所有BGA86人源化變體在結合親和力和功能活性（例如抑制PVRIG/PVRL2信號軸和干擾PVRIG介導的下游傳訊）方面非常相似。 不同版本的 BGA86 的親和力測定
對於親和力測定，抗體被抗人Fc抗體捕獲，並用於基於表面電漿共振（SPR）技術的親和力測定。抗PVRIG抗體的SPR測定的結合譜的結果總結於表16和表17中。BGA861和BGA862顯示出與人PVRIG和Cyno PVRIG非常相似的結合譜，並且與親本抗體BGA86相似。 [ 表 16] - 抗 PVRIG 抗體與人 PVRIG 的結合譜
抗體 Ka （ M -1S -1 ） Kd （ S -1 ） KD(M) Rmax
BGA86 2.54e +6 7.72e-4 3.04e-10 45.4
BGA861 1.48e +6 9.54e-4 6.45e-10 46.7
BGA862 2.41e +6 2.16e-3 8.98e-10 48.7
[ 表 17] - 抗 PVRIG 抗體與 Cyno PVRIG 的結合譜
抗體 Ka （ M -1S -1 ） Kd （ S -1 ） KD(M) Rmax
BGA86 3.08e +6 1.70e-3 5.52e-10 38.8
BGA861 2.18e +6 2.21e-3 1.01e-9 38.1
BGA862 2.23e +6 4.83e-3 2.16e-9 44.2
不同版本的 BGA86 抗體與天然人 PVRIG 的結合活性
為了評估活細胞上抗PVRIG抗體與天然PVRIG的結合活性，Jurkat細胞被工程改造為表現人PVRIG。將表現hPVRIG的Jurkat細胞接種到96孔板中，並與連續稀釋的抗PVRIG抗體一起孵育。將山羊抗人IgG用作二抗，檢測與細胞表面結合的抗體。藉由用GraphPad Prism™將劑量-反應數據與四參數邏輯模型擬合來確定與人天然PVRIG的劑量依賴性結合的EC50值。如圖6所示，所有人源化BGA86抗體均表現出與活細胞上天然PVRIG的高結合親和力。 不同版本的 BGA86 抗體與天然 Cyno PVRIG 的結合活性
為了評估活細胞上抗PVRIG抗體與天然Cyno PVRIG的結合活性，HEK293細胞被工程改造為表現Cyno PVRIG。將表現PVRIG的HEK293細胞接種於96孔板中，並與抗PVRIG抗體的連續稀釋液一起孵育。將山羊抗人IgG用作二抗來檢測抗體與細胞表面的結合。藉由用GraphPad Prism™將劑量-反應數據與四參數邏輯模型擬合來確定與Cyno天然PVRIG的劑量依賴性結合的EC50值。如圖7所示，所有人源化BGA86抗體均表現出與活細胞上天然Cyno PVRIG的高結合親和力。 抗 PVRIG 抗體阻斷 PVRIG 與其配體 PVRL2 的相互作用
為了確定抗PVRIG抗體是否可以降低PVRIG-PVRL2相互作用，將hPVRIG-His標記蛋白包被在96孔ELISA板上。PVRIG人源化抗體變體的從10 μg/mL開始的連續稀釋液與終濃度為1 μg/mL的PVRL2-生物素混合。如圖8所示，所有人源化BGA86抗體以劑量依賴性方式大大降低了PVRIG與PVRL2的結合，且IC50相似。 實例 12. 抗 PVRIG 抗體 BGA50 的人源化和工程改造
對於BGA50的人源化，藉由IMGT和NCBI數據庫中的人免疫球蛋白基因數據庫的BLAST分析，搜索人種系IgG基因中與BGA50可變區的cDNA序列具有高度同源性的序列。選擇以高頻率存在於人抗體庫（Glanville，2009 PNAS [美國國家科學院院刊]106:20216-20221）中並且與BGA50高度同源的人IGVH和IGVL基因作為人源化的模板。
藉由CDR移植進行人源化（Methods in Molecular Biology, Vol 248: Antibody Engineering, Methods and Protocols [分子生物學方法，第248卷：抗體工程，方法和方案], Humana出版社），並且使用內部開發的表現載體將人源化抗體變體工程改造為人IgG1形式。在首輪人源化中，藉由模擬的3D結構引導框架區中從鼠到人的胺基酸殘基的突變，並將對於維持CDR規範結構具有結構重要性的鼠框架殘基保留在人源化變體之一中，將其餘的鼠框架殘基逐一反向突變為相應的人框架殘基，以生成多個人源化變體，然後進行純化和表徵，以確定可被人框架殘基替代的鼠框架殘基，同時維持它們的生物物理和生物化學特性。在第二輪人源化中，將第一輪人源化期間鑒定的關鍵鼠框架殘基組合起來，生成所需版本的人源化BGA50。具體地，將BGA50 VL的CDR移植到人種系可變基因IGVK 4-1的框架中，保留1個鼠殘基（S 43），產生BGA501（SEQ ID NO:131）、BGA502（SEQ ID NO:141）、BGA503（SEQ ID NO:151）的人源化VL序列。BGA50 VH的CDR被移植到人種系可變基因IGVH1-18的框架中，保留3或4個鼠殘基（S 28、I 48、K 73、V 71），產生BGA501（SEQ ID NO:130）、BGA502（SEQ ID NO:140）和BGA503（SEQ ID NO:150）的人源化VH序列。
使用內部開發的表現載體將BGA501、BGA502和BGA503構建為人全長抗體形式，該等表現載體分別含有人IgG1和κ鏈的恒定區，具有容易適應的亞選殖位點。藉由將上述VH和VL構建體共轉染到Expi293™細胞中並藉由蛋白A柱（Cat:17543801，通用生命科學公司）純化來實現BGA50變體的表現和製備。將純化的抗體在PBS中濃縮至0.5-5 mg/mL並以等分試樣儲存在-80°C冰箱中。
藉由去除CDR中的翻譯後修飾（PTM）位點，對BGA50人源化抗體變體進行了進一步工程改造，以改善用於人治療用途的分子和生物物理特性。考慮因素包括胺基酸組成、熱穩定性（Tm）、表面疏水性和等電子點（PI），同時保持抗體功能。
人源化單株抗體BGA501、BGA502和BGA503的工程改造版本衍生自上述突變過程，並進行了詳細表徵。結果顯示，所有BGA50人源化變體在結合親和力和功能活性（例如抑制PVRL2介導的下游傳訊）方面非常相似。 不同版本的 BGA50 的親和力測定
對於親和力測定，抗體被抗人Fc抗體捕獲，並用於基於表面電漿共振（SPR）技術的親和力測定。SPR測定的抗PVRIG抗體的結合譜的結果總結於表18和表19中，BGA501、BGA502和BGA503顯示與人PVRIG和Cyno PVRIG非常相似的結合譜，並且與親本抗體BGA50相似。 [ 表 18] - 抗 PVRIG 抗體與人 PVRIG 的結合譜
抗體 Ka （ M -1S -1 ） Kd （ S -1 ） KD(M) Rmax
BGA50 5.72e +6 5.19e-4 9.07e-11 35.9
BGA501 3.21e +6 4.36e-4 1.36e-10 46.9
BGA502 4.71e +6 4.86e-4 1.03e-10 62.6
BGA503 3.66e +6 4.38e-4 1.20e-10 51.2
[ 表 19] - 抗 PVRIG 抗體 Cyno PVRIG 的結合譜
抗體 Ka （ M -1S -1 ） Kd （ S -1 ） KD(M) Rmax
BGA50 9.21e +6 3.20e-3 3.47e-10 35.4
BGA501 6.27e +6 2.67e-3 4.26e-10 44.1
BGA502 6.16e +6 2.66e-3 4.33e-10 58.4
BGA503 7.44e +6 2.94e-3 3.96e-10 49.8
不同版本的 BGA50 與天然人 PVRIG 的結合活性
為了評估活細胞上抗PVRIG抗體與天然人PVRIG的結合活性，Jurkat細胞被工程改造為表現人PVRIG。將表現人PVRIG的Jurkat細胞接種到96孔板中，並與連續稀釋的抗PVRIG抗體一起孵育。將山羊抗人IgG用作二抗來檢測抗體與細胞表面的結合。藉由用GraphPad Prism™將劑量-反應數據與四參數邏輯模型擬合來確定與人天然PVRIG的劑量依賴性結合的EC50值。如圖9所示，所有人源化BGA50抗體均表現出與活細胞上天然PVRIG的高結合親和力。 不同版本的 BGA50 與天然 Cyno PVRIG 的結合活性
評估活細胞上抗PVRIG抗體與天然Cyno PVRIG的結合活性。HEK293細胞被工程改造為表現Cyno PVRIG。將表現Cyno PVRIG的HEK293細胞接種於96孔板中，並與抗PVRIG抗體的連續稀釋液一起孵育。將山羊抗人IgG用作二抗，檢測與細胞表面結合的抗體。藉由用GraphPad Prism™將劑量-反應數據與四參數邏輯模型擬合來確定與Cyno天然PVRIG的劑量依賴性結合的EC50值。如圖10所示，所有人源化BGA50抗體均表現出與活細胞上天然Cyno PVRIG的高結合親和力。 抗 PVRIG 抗體降低 PVRIG 與其配體 PVRL2 的相互作用
為了進一步確定抗PVRIG抗體是否可以減少PVRIG-PVRL2結合相互作用，將hPVRIG-His標記的蛋白包被在96孔ELISA板上，並將PVRIG人源化抗體變體的從10 μg/mL開始的連續稀釋液與終濃度為1 μg/mL的PVRL2-生物素混合。如圖11所示，所有人源化BGA50抗體以劑量依賴性方式大大降低了PVRIG與PVRL2的結合，且IC50相似。 實例 13.Jurkat/NFAT- 螢光素酶報告子 /hPVRIG 測定中 PVRIG 抗體的 T 細胞活化功能
使用Jurkat/NFAT螢光素酶報告子/hPVRIG測定法測定PVRIG抗體通過PVIRG/PVRL2阻斷來誘導T細胞活化的能力，如下所述。 Jurkat/NFAT- 螢光素酶報告子 /hPVRIG 和 A549 共培養測定
Jurkat/NFAT-螢光素酶報告子/hPVRIG係藉由穩定轉染含有螢光素酶報告子和人PVRIG的表現構建體從Jurkat細胞產生的。將A549細胞（5 x 10 4個細胞/孔）與Jurkat/NFAT-螢光素酶報告子/hPVRIG細胞（5 x 10 4個細胞/孔）在5 ng/ml DN001存在下共培養，DN001係一種內部純化的抗CD3 x NKG2D雙特異性抗體，其結合Jurkat/NFAT-螢光素酶報告子/hPVRIG細胞上的CD3和A549上的NKG2D配體，並向Jurkat/NFAT-螢光素酶報告子/hPVRIG細胞提供刺激訊息。對於這種混合物，將在96孔平底板中連續稀釋的PVRIG抗體孵育過夜。NFAT傳訊使用One-glo™螢光素酶測定系統（普洛麥格公司（Promega））進行測量。
結果：如圖12A-C所示，BGA12、BGA50、BGA38和BGA86以劑量依賴性方式增強Jurkat/NFAT-螢光素酶報告子/hPVRIG活化。BGA12、BGA50和BGA38相對於參考抗體表現出優異的活性，BGA86表現出與參考抗體相當的活性。人源化後，如圖12D-G所示，BGA122、BGA501、BGA381、BGA383和BGA384以劑量依賴性方式活化Jurkat/NFAT-螢光素酶報告子/hPVRIG。與參考抗體相比，BGA122、BGA381、BGA383和BGA384引發了更強的最大響應。 Jurkat/NFAT- 螢光素酶報告子 /hPVRIG + THP1/OS8 低測定
THP1/OS8 （低）細胞（5 x 10 4個細胞/孔）與Jurkat/NFAT-螢光素酶報告子/hPVIRG（5 x 10 4個細胞/孔）在連續稀釋的PVRIG抗體存在下在96孔平底板中共培養過夜。NFAT傳訊使用One-glo™螢光素酶測定系統（普洛麥格公司）進行測量。所用抗體的Fc要麼是具有正常功能的野生型（WT），要麼是ADCC和補體結合減少的Fc緘默版本（MT）。
結果：如圖13A-C所示，BGA38-WT、BGA86-WT和BGA50-WT以劑量依賴性方式增強Jurkat/NFAT-螢光素酶報告子/hPVRIG活化。人源化後，如圖13D-G所示，BGA122-WT、BGA381-WT/MF、BGA501-WT/MF和BGA384 WT/MF也劑量依賴性地活化Jurkat/NFAT-螢光素酶報告子/hPVRIG。此外，通過比較BGA381、BGA501和BGA384的Fc有效版本和Fc緘默版本，證明Fc功能可以增加活性。 實例 14. 抗 PVRIG 抗體活化 CMV 抗原特異性人 T 細胞
使用識別人CMV pp65肽（NLVPMVATV（SEQ ID NO:185）），胺基酸495-503，HLA-A2.1限制性）的天然來源的T細胞進一步評估PVRIG抗體的功能活性（Boeckh等人, 2011 J Clin Invest.[臨床研究雜誌]121:1673-80）。簡而言之，用1 μg/mL CMV pp65肽、2 ng/mL IL-2和10 ng/mL IL-7刺激HLA-A*0201 PBMC（供體Z0052）8天，其中在第3天和第5天添加IL-2和IL-7。然後將細胞在含有500 IU/mL IL-2的培養基中靜置1天。將HCT116細胞（ATCC CCL-247）（人結直腸癌細胞系）用0.01 μg/mL CMV pp65肽在37℃脈衝1小時並洗滌。然後將PBMC與CMV pp65肽脈衝的HCT116細胞在0.5或5 μg/ml PVRIG抗體存在下共培養過夜。藉由ELISA測量人IFN-γ。使用WO 2016134333中揭露的抗PVRIG抗體7.518和US 20200040081中揭露的抗PVRIG抗體Surface 35作為對照。
結果：如圖14A和14B所示，BGA12、BGA86、BGA50和BGA38促進IFN-γ產生。人源化後，如圖14C和14D所示，BGA381以劑量依賴性方式引發IFN-γ產生。 實例 15.PVRIG 抗體與其他免疫檢查點抗體組合使用
將HLA-A*0201 PBMC用1 μg/mL CMV pp65肽NLVPMVATV（SEQ ID NO:185）、2 ng/mL IL-2和10 ng/mL IL-7刺激8天，其中在第3天和第5天添加IL-2和IL-7。然後將細胞在含有500 IU/mL IL-2的培養基中靜置1天。將HCT116細胞（ATCC CCL-247）（人結直腸癌細胞系）用0.02 μg/mL CMV pp65肽在37℃脈衝1小時並洗滌。然後將PBMC與CMV pp65肽脈衝的HCT116細胞在單獨存在5 μg/ml PVRIG抗體或與5 μg/ml抗PD1抗體BGB-A317和/或抗TIGIT抗體BGB-A1217組合的情況下共培養過夜。藉由ELISA測量人IFN-γ。
結果：如圖15A和B所示，與單獨的BGA381或BGB-A317治療相比，BGA381與抗PD-1抗體BGB-A317和/或抗TIGIT抗體BGB-1217的組合顯著增強IFN-γ釋放，這表明PVRIG、TIGIT和PD-1的組合阻斷可以減輕活化後效應細胞的耗竭。
將HLA-A*0201 PBMC用1 μg/mL CMV pp65肽NLVPMVATV（SEQ ID NO:185）、2 ng/mL IL-2和10 ng/mL IL-7刺激8天，其中在第4天和第6天添加IL-2和IL-7。然後將細胞在含有500 IU/mL IL-2的培養基中靜置3天。將HCT116細胞（ATCC CCL-247）（人結直腸癌細胞系）用0.1 ng/mL IFN-γ預處理67小時從而上調PD-L1表現，然後用0.1 μg/mL CMV pp65肽在37℃脈衝1小時並洗滌。然後將PBMC與CMV pp65肽脈衝的HCT116細胞在PD1、TIGIT或PVRIG抗體作為指定濃度的單一藥劑存在下或與1 μg/ml的抗PD1抗體BGB-A317和/或1 μg/ml的抗TIGIT抗體BGB-A1217組合情況下共培養過夜。藉由HTRF（均相時間分辨螢光）測量人IFN-γ。
如圖15C和15D所示，BGA384在CMV抗原特異性記憶回憶測定中表現出顯著的劑量依賴性單一藥劑活性，表現為人IFN-γ釋放增加，與抗PD-1抗體（BGB-A317）或抗TIGIT抗體（BGB-A1217）的雙重組合以及與抗PVRIG抗體、BGB-A317和BGB-A1217的三重組合均充分證明了組合效應，這表明PVRIG、TIGIT和PD-1的共同阻斷以最大化T細胞免疫響應和增強抗腫瘤活性的潛力巨大。 BGB-A317（替雷利珠單抗）揭露於美國專利案號8,735,553。 [ 表 20]
替雷利珠單抗
結構域 SEQ ID NO ： 胺基酸序列
HCDR1 SEQ ID NO:163 GFSLTSYGVH
HCDR1 SEQ ID NO:164 VIYADGSTNYNPSLKS
HCDR3 SEQ ID NO:165 ARAYGNYWYIDV
LCDR1 SEQ ID NO:166 KSSESVSNDVA
LCDR2 SEQ ID NO:167 YAFHRFT
LCDR3 SEQ ID NO:168 HQAYSSPYT
VH SEQ ID NO:169 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLTSYGVHWIRQPPGKGLEWIGVIYADGSTNYNPSLKSRVTISKDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARAYGNYWYIDVWGQGTTVTVSS
VL SEQ ID NO:170 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSESVSNDVAWYQQKPGQPPKLLINYAFHRFTGVPDRFSGSGYGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQAYSSPYTFGQGTKLEIK
IgG4恒定結構域 SEQ ID NO:171 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
重鏈 SEQ ID NO:172 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLTSYGVHWIRQPPGKGLEWIGVIYADGSTNYNPSLKSRVTISKDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARAYGNYWYIDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
輕鏈 SEQ ID NO:173 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSESVSNDVAWYQQKPGQPPKLLINYAFHRFTGVPDRFSGSGYGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQAYSSPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
BGB-A1217（歐司珀利單抗）揭露於WO 2019/129261中。 [ 表 21]
歐司珀利單抗
SEQ ID NO ： 結構域 序列
HCDR1 SEQ ID NO:174 DYYMY
HCDR2 SEQ ID NO:175 YITKGGGSTYYPDSVKG
HCDR3 SEQ ID NO:176 QTNYDFTMDY
LCDR1 SEQ ID NO:177 KASQDVGTSVA
LCDR2 SEQ ID NO:178 WASARHT
LCDR3 SEQ ID NO:179 QQYSSYPLT
VH SEQ ID NO:180 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMYWVRQAPGKGLEWVAYITKGGGSTYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQTNYDFTMDYWGQGTLVTVSS
VL SEQ ID NO:181 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCKASQDVGTSVAWYQQKPGQAPRLLIYWASARHTGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYSSYPLTFGGGTKVEIK
重鏈 SEQ ID NO:182 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMYWVRQAPGKGLEWVAYITKGGGSTYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQTNYDFTMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
輕鏈 SEQ ID NO:183 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCKASQDVGTSVAWYQQKPGQAPRLLIYWASARHTGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYSSYPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
IgG1 WT SEQ ID NO:184 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
實例 16. 抗 PVRIG 抗體活化人 NK 細胞
已知PVRIG在自然殺手（NK）細胞上以相對較高的水平組成型表現，並且PVRIG與其配體之間的相互作用抑制NK細胞介導的細胞毒性。為了確認PVRIG抗體是否可以促進NK細胞介導的細胞毒性，藉由將人原代NK細胞與表現PVRL2的SK-BR-3細胞共培養來確定NK活化測定。簡言之，使用人NK細胞分離套組（美天旎生物技術公司（Mitenyi Biotech），# 130-092-657）藉由陰性選擇分離原代NK細胞，並在含有25 U/ml IL-2的完全培養基中刺激過夜。將預刺激的NK細胞（5 x 10 4個細胞/孔）和SK-BR-3細胞（5 x 10 4個細胞/孔）在96孔板中共培養5小時。藉由流式細胞術測量NK細胞上溶酶體膜蛋白（CD107a）的表現。刺激後NK細胞表面的CD107a顯著上調，並且CD107a表現與細胞介素分泌和NK細胞介導的靶細胞裂解相關。
結果：如圖16A-E所示，抗PVRIG抗體BGA122、BGA381和BGA384以劑量依賴性方式顯著增強NK活化，如藉由流式細胞術測量的CD107a表現的%增加所示。 實例 17. 胞啃作用測定
胞啃作用係細胞表面分子從供體細胞轉移到受體細胞的現象（Joly和Hudrisier, 2003 Nat. Immunol [ 自然免疫學 ]4(9):815 ；Beum等人, 2008 J Immunol[免疫學雜誌] 181(11):8120-8132；Machlenkin等人, 2008 Cancer Res[癌症研究] 68(6):2006-2013；Rossi等人, 2013 Blood[血液] 122(17):3020-3029）。抗體誘導的胞啃作用通過Fcγ受體（FcγR）導致細胞表面受體的下調（Beum等人，2008同上；Beum等人，2011同上）。因此，藉由胞啃作用下調靶受體可能導致傳訊減弱。為了解決這一現象，將Jurkat/NFAT-報告子/hPVRIG細胞與CF633（生物素）標記的BGA381（10 μg/ml）一起孵育並洗滌。然後將Jurkat/NFAT-報告子/hPVRIG細胞（2 x 10 4個細胞/孔）與表現各種FcγR（包括FcγRILAHu1、FcγRIIB和FcγRIIIA）的經生物素標記的HEK細胞共培養過夜。藉由流式細胞術測量PVRIG平均螢光強度（MFI）的變化。
比較了包含與BGA381相同的VL和VH序列的突變IgG1 Fc區和WT對照抗體。如圖17A所示，與陰性對照人IgG處理的細胞相比，BGA381/IgG1 WT而非BGA381/IgG1突變體引起PVRIG表面表現的顯著減少，表明Jurkat/PVRIG細胞上表面PVRIG的減少係FcγR結合依賴性的。
在基於原代細胞的實驗中，T細胞（4 x 10 4個細胞/孔）用作供體細胞。從相同供體分離的單核細胞（8 x 10 4個細胞/孔）用作受體細胞。分別使用泛T細胞分離套組（美天旎生物技術公司，目錄號130-096-535）或單核細胞分離套組（美天旎生物技術公司，目錄號130-096-537）從人PBMC中純化T細胞和單核細胞。將供體細胞與10 μg/mL的經CF633標記的BGA381或經CF633生物素標記的BGA381突變體Fc預孵育30分鐘並洗滌。然後將供體細胞與受體細胞在96孔板中孵育過夜。藉由流式細胞術測量PVRIG MFI的變化。結果：如圖17A和17B所示，BGA381顯著誘導胞啃作用，從T細胞中去除PVRIG。 實例 18.BGA381 Fab 片段的 X 射線晶體結構
BGA381 Fab片段的X射線晶體結構以1.61埃解析度測定（PDB:8JBJ）。從該結構可以明顯看出，BGA381的Asp55位於鬆散有序的結構中（圖18A）。分圖 (A) 係與人PVRIG結合的A538-EH Fab的晶體結構，其中A538-EH重鏈（HC）和輕鏈（LC）區域以黑色和灰色卡通著色，而PVIRG以白色表面著色。分圖 (B) 顯示A538-EH/PVRIG複合物結合表面上的原子相互作用，鑒定A538-EH（線中顯示的互補位殘基）和PVRIG（棒中顯示的表位殘基）的某些關鍵殘基。為了清楚，A538-EH的非CDR區域用白色透明表面中著色的PVRIG去除。藉由丙胺酸掃描誘變將底線殘基鑒定為功能上重要的表位殘基。圖 (C) 顯示A538-EH內F99 PVRIG和P100 PVRIG的周圍殘基顯示強調該等殘基之間對於PVRIG結合至關重要的相互作用。F99PVRIG和P100PVRIG用帶底線的較大文本突出顯示。
基於A538-EH/PVRIG複合物的晶體結構，確定了被A538-EH接觸的PVRIG的殘基（即，被A538-EH結合的PVRIG的表位殘基）和被PVRIG接觸的A538-EH的殘基（即，被PVRIG接觸的A538-EH的互補位殘基）。下文表21.A和表21.B示出了PVRIG的殘基以及與之接觸的A538-EH的重鏈或輕鏈殘基，如使用3.7 Å的接觸距離（在該點處凡得瓦（非極性）相互作用力最高）嚴格性所評估的。 [ 表 21.A].PVRIG 的表位殘基及其在 A538-EH 的重鏈上相應的互補位殘基
PVRIG    A538-EH 重鏈   
His 52 Glu 55
Lys 95 Ile 101
Phe 99 Trp 33
      Thr 50
      Asp 52
      Lys 57
      Thr 58
Pro 100 Trp 33
      Ser 59
Gly 102 Trp 33
Ser 103 Trp 33
      Ile 101
      Ile 102
Trp 104 Ile 102
Glu 105 Ile 102
      Thr 103
Ala 106 Asn 105
Cys 107 Asn 105
[ 表 21.B].PVRIG 的表位殘基及其在 A538-EH 的輕鏈上相應的互補位殘基
PVRIG    A538-EH 輕鏈   
Ser 27 Asn 30
Pro 100 Arg 90
      Phe 95
Glu 101 Tyr 31
      Arg 90
實例 19.BGA384 的結合活性 BGA384 的靶點結合活性和特異性
藉由無細胞和基於細胞的測定檢查BGA384的結合活性。該等實驗的結果表明，除其他外，BGA384以其高特異性和親和力與其靶蛋白人PVRIG結合，如下節所述。 與重組和天然 PVRIG 結合
藉由酶聯免疫吸附測定（ELISA）檢查BGA384的靶結合活性。
材料和方法：每個ELISA孔包被0.5 μg/mL hPVRIG-mIgG2a，與BGA384和陰性對照、HuIgG和安慰劑一起孵育。BGA384的EC50為8.79 ng/mL。作為陰性對照，人IgG和安慰劑沒有檢測到與hPVRIG-mIgG2a的結合。
對於藉由FACS進行的BGA384結合分析，將過表現HuPVRIG的活Jurkat細胞接種到96孔板中，並與BGA384或陰性對照（HuIgG或DS緩衝液）一起孵育。螢光標記的抗人IgG（H+L）用於檢測抗體與細胞表面的結合活性。BGA384的EC50為26.9 ng/mL；人IgG（HuIgG）和DS緩衝液完全失活。
結果：如圖22A所示，ELISA結果證明BGA384與用重組人抗原PVRIG包被的板顯著結合。BGA384的半數最大有效濃度（EC50）為8.79 ng/mL。安慰劑和人免疫球蛋白G（HuIgG）作為陰性對照，未顯示出可檢測到的與重組PVRIG的結合活性（圖22B）。此外，螢光活化細胞分選（FACS）證實了BGA384與Jurkat細胞表面過表現的天然huPVRIG的結合活性。BGA384以劑量依賴性方式顯示出與過表現huPVRIG的Jurkat細胞的強結合活性，EC50為26.9 ng/mL（圖23A），而安慰劑和HuIgG的陰性對照不與過表現huPVRIG的Jurkat細胞結合（圖23B）。 結合特異性
為了測試BGA384的非特異性結合活性，進行FACS以檢查BGA384與Expi293細胞的結合行為。已知Expi293細胞的人PVRIG表現呈陰性。
材料和方法：將活Expi293細胞接種在96孔板中，並與BGA384或陰性對照（HuIgG或DS緩衝液）一起孵育。螢光標記的抗人IgG（H+L）用於檢測抗體與細胞表面的結合活性。結果顯示兩批BGA384和HuIgG/DS緩衝液陰性對照對Expi293細胞無結合活性。
結果：BGA384和安慰劑/HuIgG的陰性對照顯示對Expi293細胞沒有結合活性，表明BGA384對PVRIG的結合特異性（圖24A-B）。 與人 PVRIG 的結合特異性
人PVRIG蛋白與石蟹獼猴和小鼠PVRIG的胞外結構域胺基酸序列分別有9.9%和36.8%的差異（圖25和表22；來源為人PVRIG，NCBI登錄號：NP_076975；石蟹獼猴PVRIG，NCBI登錄號：XP_005549281；小鼠PVRIG，NP_001365367）。 [ 表 22]：人、石蟹獼猴和鼠PVRIG胞外結構域的同源性百分比
   人PVRIG 石蟹獼猴PVRIG 小鼠PVRIG
人PVRIG 100% 90.1% 63.2%
石蟹獼猴PVRIG - 100% 65.4%
小鼠PVRIG - - 100%
為了測試BGA384的物種交叉反應性，使用人、石蟹獼猴或小鼠PVRIG-His作為測試抗原進行基於Biacore的SPR測定。
材料和方法：進行了BGA384與PVRIG的結合動力學傳感圖。BGA384流過晶片並被固定的抗人Fc結合抗體捕獲。注射特定物種（人/猴/小鼠）的一系列PVRIG稀釋液，並藉由從未注射BGA384的參考流通池中減去響應單位（RU）來計算對PVRIG的結合響應。SPR k off和 k on使用一對一Langmuir結合模型（BIA評估軟體，通用生命科學公司）計算； K D計算為 k off/ k on的比率。在SPR測定中，BGA384沒有檢測到與小鼠PVRIG的結合信號。不受理論的束縛， koff代表受體-配體複合物解離為游離配體和游離受體的時間（以秒為單位），其轉化為生物製劑（例如，本文所述之抗體或其抗原結合片段）在體內的停留時間的量度，停留時間越長越有效（Copeland等人, Nat Rev Drug Discov [ 自然綜述藥物發現 ]5, 730-739, 2006）。
結果：圖26A-C顯示BGA384與人PVRIG（圖26A）、石蟹獼猴PVRIG（圖26B）和小鼠PVRIG（圖26C）結合之傳感圖。BGA384表現出對人PVRIG的高結合親和力， K D為約0.0826 nM（表23）。相比之下，BGA384與石蟹獼猴PVRIG的結合親和力表現出類似的約0.228 nM的 K D（表23）。然而，BGA384沒有表現出與小鼠PVRIG的結合（表23）。 [ 表 23]：SPR測定的BGA384全抗體對不同物種的PVRIG的動力學參數和親和力的比較分析
抗原 抗體 k on （ 1/Ms ） k off （ 1/s ） K D (M)
人PVRIG BGA384/批次#A538-230111-BDS-C1 4.16E + 06 3.44E-04 8.26E-11
石蟹獼猴PVRIG 1.77E + 06 4.03E-04 2.28E-10
小鼠PVRIG ND ND ND
關鍵結合表位
作為受體，PVRIG與PVRL2（也稱為CD112或黏連蛋白-2）結合。阻斷PVRIG-PVRL2傳訊通路會增加T細胞增殖、細胞介素分泌和細胞毒性。BGA384已被證明可以競爭性阻斷PVRL2與PVRIG的結合。人PVRIG與BGA384 Fab複合物的晶體結構已在原子解析度下得到解析。根據該數據，表明PVRIG的17個殘基（E3、G26、S27、S31、L32、H52、K95、A97、F99、P100、E101、G102、S103、W104、E105、A106、C107）直接參與表位-互補位相互作用（由PISA網路伺服器計算：https://www.ebi.ac.uk/pdbe/pisa/）。基於該結構資訊，進行了ELISA實驗，以進一步驗證該等胺基酸對於BGA384與PVRIG的結合是否是必需的或至關重要的。
材料和方法：野生型（wt）和突變型PVRIG-Fc在293G細胞中瞬時表現，並使用Mab Select Sure樹脂親和柱進行純化。然後，使用BGA384在ELISA結合測定中分析該等重組蛋白。相對ELISA讀數藉由針對相同抗體與wt PVRIG的結合信號進行歸一化而得到。所有ELISA結果均使用wt PVRIG結合信號的平均ELISA讀數作為標準進行歸一化。
結果：在PVRIG的該等殘基中，分別成功製備了11個點突變體。分析了PVRIG突變蛋白和wt PVRIG蛋白的BGA384識別和結合。在使用天然wt或突變型PVRIG蛋白的ELISA結合測定中，BGA384幾乎不與F99A單突變體結合，表明F99A係BGA384結合的關鍵表位（圖27和表24）。 [ 表 24] ：
野生型或突變型 PVRIG BGA384
WT -
F99A ***
L32A **
E101A *
S103A *
S31A *
K95A -
S27A -
P100A -
H52A -
E105A -
E3A -
BGA384 在細胞測定中的功能活性BGA384競爭性阻斷PVRIG與PVRL2結合
進行基於蛋白的ELISA分析以評估BGA384的功能活性。在BGA384存在下，將生物素化的人PVRL2（Fc-Avi-tag）與人PVRIG包被的板一起孵育，並藉由鏈黴親和素-HRP檢測與人PVRIG結合的配體。
結果：在該阻斷測定中，配體結合訊息與BGA384抗體濃度成反比，表明BGA384以劑量依賴性方式競爭配體結合（圖28A）。BGA384對配體結合的抑制達到94%，IC50為0.383 μg/mL（圖28B）。 BGA384在基於細胞的測定中顯示出對PVRIG-PVRL2結合的有效阻斷活性
此外，為了在細胞水平上準確評估BGA384對PVRIG-PVRL2結合的阻斷效率，建立了基於細胞的阻斷測定，其中靶PVRIG以游離融合蛋白（人PVRIG-mIgG2a，下文稱為「hPVRIG」）存在，其配體PVRL2在Farage細胞上高度過表現。
材料和方法：藉由使用二抗（抗mIgG2a Fc Ab）檢測人PVRIG與Farage-hPVRL2細胞表面PVRL2的結合，測量BGA384對PVRIG-PVRL2相互作用的競爭性阻斷。在BGA384存在下，將生物素化的人PVRL2（Fc-Avi-tag）與人PVRIG包被的板一起孵育。Farage-hPVRL2細胞用人Fc阻斷劑阻斷，然後與指定濃度的BGA384和300 ng/mL的hPVRIG-mIgG2a在冰上孵育30分鐘。BGA384針對PVRIG-PVRL2結合的競爭能力藉由ELISA測定，使用450 nm（OD450）的吸收值作為讀數。藉由流式細胞術用PE抗小鼠IgG2a抗體檢測結合的人PVRIG。BGA384以劑量依賴性方式表現出針對PVRIG-PVRL2相互作用的阻斷功能（圖29A）。計算BGA384的阻斷效率，IC50為109.4 ng/mL（圖29B）。
結果：該等數據提供證據表明，BGA384有效阻斷PVRIG與細胞表面表現的PVRL2的結合，並以濃度依賴性方式，IC50為109.4 ng/mL。 BGA384促進PVRIG+ Jurkat T細胞中的T細胞活化
為了確定BGA384對T細胞的功能，Jurkat細胞被工程改造為表現人PVRIG和具有活化T細胞核因子（NFAT）響應元件的報告螢光素酶，稱為Jurkat-NFAT-HuPVRIG（JK-NFAT-HuPVRIG）。在該測定中，在作為對照的連續稀釋的BGA384或人IgG存在下，進一步將JK-NFAT-HuPVRIG細胞與T細胞接合劑OS8（抗CD3抗體的膜結合形式）轉染的A549細胞系（稱為A549/OS8-H）共培養。孵育5至6小時後，將Bio-Lite螢光素酶測定試劑添加到板中，並用酶標儀記錄相對光單位（RLU）。
材料和方法：JK-NFAT-HuPVRIG（5 × 104細胞/孔）和A549/OS8-H（1 × 104細胞/孔）在連續稀釋劑BGA384、安慰劑和HuIgG存在下共培養5-6小時。BGA384的EC50為37.74 ng/ml。作為陰性對照，安慰劑和HuIgG沒有功能活性。
結果：BGA384阻斷抑制訊息以增強T細胞活化，如以劑量響應方式增加啟動子驅動的發光所證明的那樣（圖30）。BGA384的EC50為37.74 ng/mL。安慰劑和人IgG沒有表現出活性。 BGA384在CMV記憶回憶測定中促進抗原特異性T細胞活化
使用天然衍生的T細胞評估BGA384的功能活性，該等T細胞識別人巨細胞病毒（CMV）PP65肽（NLVPMVATV，495-503，HLA-A2.1限制性；參見Boeckh和Geballe等人 2011, Whelan等人 2019）。在共培養系統中，健康供體產生的CMV特異性T細胞被用作響應細胞，而CMV抗原pp65脈衝的HCT116/PD-L1細胞（PVRIG配體PVRL2呈陽性）被用作「刺激」細胞。IFN-γ分泌被用作T細胞活化的讀出和PVRIG介導的傳訊通路的抑制的生物標誌物。
材料和方法：將PP65肽刺激的PBMC（來自HLA-A2.1 + 健康供體）與PP65脈衝的HCT116/PD-L1細胞在BGA384或陰性對照HuIgG存在下共培養過夜。藉由HTRF測定培養物上清液中的IFN-γ。
結果：BGA384增強了CMV特異性T細胞以濃度依賴性方式產生IFN-γ的能力（圖31A-C）。 BGA384單獨或與BGB-A317和/或BGB-A1217組合增強CMV特異性T細胞的IFN-γ分泌
BGA384單獨或與BGB-A317（抗PD-1抗體）和/或BGB-A1217（抗TIGIT抗體）組合的功能活性使用識別人CMV PP65肽（NLVPMVATV，495-503，HLA-A2.1-限制性）的天然衍生的T細胞進行評估。在共培養系統中，健康供體產生的CMV特異性T細胞被用作響應細胞，而CMV抗原pp65脈衝的HCT116/PD-L1細胞（PVRIG配體PVRL2、TIGIT配體PVR和PVRL2、以及PD-1配體PD-L1呈陽性）被用作「刺激」細胞。IFN-γ分泌被用作T細胞活化的讀出和PVRIG、TIGIT和PD-1介導的傳訊通路的抑制的生物標誌物。
材料和方法：在5 ug/ml BGA384單獨存在或與5 ug/ml BGB-A317、BGB-A1217組合存在或單獨陰性對照HuIgG存在下，將PP65肽刺激的PBMC（來自HLA-A2.1 + 健康供體）與PP65脈衝的HCT116/PD-L1細胞共培養過夜。藉由HTRF測定培養物上清液中的IFN-γ。3個獨立實驗的結果如圖32A至C所示。
單獨的BGA384增強了CMV特異性T細胞產生IFN-γ的生產率；此外，BGA384與BGB-A317或BGB-A1217的組合比單獨的BGA384、BGB-A317或BGB-A1217更有效（圖32A-C）。此外，BGA384與BGB-A317和BGB-A1217的組合比雙重組合更有效。因此，在臨床前研究中，通過PVRIG、TIGIT和PD-1的三重阻斷觀察到協同T細胞活化和IFN-γ產量增加。不希望受理論束縛，這種協同活性可以支持PVRIG與TIGIT或PD-1之一或兩者組合的阻斷，以增強患者對治療的響應。 BGA384 的效應子受體結合和效應子功能BGA384對人FcγR具有有效結合活性
進行基於Biacore的測定以評估BGA384與FcγR的結合活性。
材料和方法：安慰劑（陰性對照）不含抗體，但具有與BGA384相同的配製。HuIgG（西格瑪公司（Sigma），目錄# I4506）係人IgG的混合物。 K 1（M）值根據動力學常數的比率計算為 K D= k off/ k on。 2（M）值由平衡時一半配體被佔據時的分析物濃度確定。
結果：BGA384對人FcγR及其多態性變體具有有效結合活性，類似於人IgG混合物。安慰劑與所有FcγR均未檢測到結合（表25）。 [ 表 25] ： BGA384與作為補體活化級聯的第一組分的C1q結合
當抗體與C1q形成穩定的相互作用時，經典的補體級聯啟動，這可能導致補體依賴性細胞毒性（CDC），即藉由C1q結合的抗體靶殺手細胞（Arlaud等人，2002）。為了評估BGA384誘導的潛在CDC，藉由ELISA測定了C1q和BGA384之間的直接結合活性。
材料和方法：ELISA板包被逐漸增加量的BGA384、HuIgG（西格瑪公司，目錄# I4506）或安慰劑。人C1q（總共100 μL；8 μg/mL）在抗體包被的孔中孵育。藉由特異性抗C1q單株抗體檢測結合的C1q。450 nm處的ELISA讀數繪製在y軸上。
結果：該等結果表明，BGA384與C1q具有與人IgG混合物類似的強結合，而安慰劑顯示與C1q沒有結合（圖33）。 Fc有效BGA384不誘導針對健康供體的PBMC的ADCC
如前所述，BGA384具有與人FcγR的有效結合活性。抗體可以藉由與FcγR結合來誘導多種效應子功能。重要的Fc受體之一係Fc γ受體IIIA（FcγRIIIA），它介導ADCC（Chen等人2019）。在人中，PVRIG在T細胞和NK細胞上表現，但在B細胞、單核細胞或嗜中性球上不表現（Zhu等人 2016）。為了評估BGA384是否可以誘導針對PVRIG陽性細胞的ADCC，使用來自健康供體的人PBMC細胞作為靶細胞和自體原代NK作為效應細胞進行了共培養測定。在BGA384存在下共培養17小時後，藉由流式細胞術對CD3+CD56-T、CD4+ T、CD8+ T、Treg和CD3-CD56+ NK細胞亞群的絕對計數進行定量。
材料和方法：將健康供體PBMC與自體原代NK細胞在BGA384存在下共培養17小時，藉由流式細胞術對CD3+CD56-T、CD4+ T、CD8+ T、Treg、CD3-CD56+ NK和CD19+ B細胞亞群的絕對計數進行定量。使用利妥昔單抗（抗人CD20抗體）作為陽性對照。具有高CD20表現的CD19+ B細胞如預期被耗盡。IgG作為陰性對照。
BGA384不誘導針對原代人PBMC細胞中的PVRIG陽性細胞的ADCC（圖34）。作為陽性對照，利妥昔單抗以劑量依賴性方式顯著減少CD19+ B細胞的數量，而BGA384或HIgG治療組的數量基本保持不變。該等結果表明，BGA384不誘導針對健康供體的PBMC的ADCC。 BGA384不會在原代免疫細胞中誘導CDC
如前所述，BGA384對C1q蛋白具有完整的結合活性，C1q蛋白係補體C1複合物的亞基，可啟動經典的補體活化途徑（Kenway等人 2015）。然而，BGA384是否會誘導補體活化級聯和補體依賴性細胞毒性，特別是在人原代T細胞中，此前尚未在細胞水平上得到驗證。
材料和方法：將來自健康供體的預活化PBMC與自體血清（15%）和BGA384或對照抗體（0.01至300 μg/mL）一起孵育3天。藉由在反應結束時細胞裂解後從活細胞釋放的三磷酸腺苷的減少測定由CDC導致的細胞死亡。抗HLA-A、-B和-C用作陽性對照。藉由多重檢測酶標儀（PHERAstar® FS，BMG實驗室技術公司（BMG LABTECH GmbH），奧爾滕貝格，德國）記錄發光，並根據相對發光單位（RLU）讀數計算CDC活性，如下所示：% CDC活性 = [(RLU測試 - RLU背景)/(RLU最大值 - RLU背景)] × 100。
結果：BGA384對於PBMC沒有可檢測到的CDC活性（圖35A-C）。相反，陽性對照抗體（抗HLA-A、-B、-C）誘導顯著的CDC活性。據報導，靶密度可能在調節ADCC和CDC中發揮關鍵作用（Van Meerten等人2006；Nijhof等人2016）。該等研究表明，免疫細胞表面上的PVRIG密度不夠高，不足以藉由BGA384發揮顯著的ADCC和CDC作用。 在表現FcγR的THP1/OS8細胞存在的情況下，Fc有效BGA384在Jurkat T細胞中除了阻斷功能外，還可以進一步增加活性
為了研究在表現FcγR的細胞存在的情況下，Fc有效BGA384是否能夠比Fc緘默BGA384（BGA384-MF）促進更強的人T細胞活性，建立了一種基於T細胞活化生物發光細胞的測定。該測定由Jurkat細胞和THP1細胞組成，前者經過基因工程改造以表現由NFAT響應元件（NFAT-RE）和人PVRIG驅動的螢光素酶報告子（Jurkat/NFAT/HuPVRIG），後者為PVRL2和FcγR陽性，並且經過工程改造以表現低水平的T細胞接合劑OS8（THP1/OS8低）。NFAT-RE介導的發光被用作T細胞活化的讀出。
材料和方法：Jurkat/NFAT/HuPVRIG細胞與THP1/OS8低混合物在指定濃度的BGA384或BGA384-MF存在下共培養18小時。hIgG1用作陰性對照。NFAT-RE介導的發光藉由One-glo螢光素酶測定系統套組（普洛麥格公司，REF#E6120）測定。
結果：BGA384活化Jurkat細胞，以劑量依賴性方式產生NFAT-RE介導的發光，同時藉由阻斷PVRIG-PVRL2介導的免疫抑制傳訊來活化TCR/CD3複合物（圖36）。與Fc緘默BGA384相比，Fc有效BGA384可以藉由與THP1上的FcγR結合而具有進一步增加的活性。相比之下，在這種測定條件下，人IgG1不會觸發NFAT-RE介導的發光。 Fc有效BGA384在原代NK細胞中除了阻斷功能外，還可以進一步增加活性
PVRIG和FcγRIIIA都在NK細胞上表現（Zhu等人2016，Bournazos等人2020）。為了確定BGA384是否可以活化NK細胞，將純化的原代NK細胞與SK-BR-3（PVRL2+ 人乳癌細胞系）在BGA384存在的情況下共培養。藉由流式細胞術測量NK細胞脫粒標誌物CD107a來確定NK細胞活化。
材料和方法：在NK活化測定中，從健康供體衍生的PBMC中分離出原代NK細胞，並用25 U/mL重組人IL-2刺激過夜。將預活化的NK細胞與SK-BR-3在抗PVRIG mAb BGA384或BGA384-MF存在下共培養5小時。藉由FACS測定NK細胞上的CD107a表現。
結果：BGA384處理後CD107a+ 細胞在總NK細胞中的百分比以劑量依賴性方式增加（圖37A-D）。此外，與Fc緘默BGA384-MF相比，Fc有效BGA384引發顯著更高的CD107a上調，表明有效Fc在最佳NK活化中發揮著至關重要的作用。 實例 20 ： BGA384 替代抗體的體內藥理學
在C57/B6小鼠的小鼠GL261神經膠質瘤皮下同系模型中檢查了具有不同Fc形式（WT和N297Q突變）的BGA384（AB-407）的抗小鼠PVRIG替代抗體的體內功效（表26）。具有有效Fc的替代抗體在GL261同系模型中顯示出顯著的腫瘤生長抑制（TGI）。該等數據表明BGA384及其有效Fc可以進一步增強體內T細胞和NK細胞抗腫瘤活性。 [ 表 26] ：體內藥理學研究總結
報告編號 標題 動物物種 劑量，方案 值得注意的發現
BGB-A538 (替代物)-IVP-Pha EFC-0001 抗小鼠PVRIG替代抗體AB-407在GL261中的功效 皮下同系模型 C57BL/6 AB-407 WT，1 mg/kg，i.p.，QW 37%（第24天的TGI）
AB-407 WT，5 mg/kg，i.p.，QW 51%（第24天的TGI）
AB-407 WT，15 mg/kg，i.p.，QW 65%（第24天的TGI）
AB-407 MF，1 mg/kg，i.p.，QW 18%（第24天的TGI）
AB-407 MF，5 mg/kg，i.p.，QW 13%（第24天的TGI）
AB-407 MF，15 mg/kg，i.p.，QW 38%（第24天的TGI）
縮寫：AB-407 WT，AB-407 mIgG2a；AB-407 MF，AB-407 mIgG2a-N297Q突變體；i.p.，腹膜內；QW，每週一次；TGI，腫瘤生長抑制。 注：TGI = 1 - [(治療的Tt - 治療的T0)/(安慰劑Tt - 安慰劑T0)]，其中治療的Tt = 時間t時治療的腫瘤體積，治療的T0 = 時間0時治療的腫瘤體積，安慰劑Tt = 時間t時的安慰劑腫瘤體積，以及安慰劑 T0 = 時間0時的安慰劑腫瘤體積。 抗小鼠 PVRIG 替代抗體 AB-407 在 GL261 皮下同系中的功效
在C57BL/6小鼠的小鼠GL261神經膠質瘤皮下同系模型中評估了具有不同小鼠IgG2a Fc結構域的抗小鼠PVRIG替代抗體AB-407的體內功效。AB-407係針對小鼠PVRIG的嵌合單株抗體。AB-407的Fab序列取自抗體BOJ-5G4-F4（揭露於US 10213505B2，其全部內容藉由引用併入本文），Fc為野生型小鼠IgG2a（AB-407 mIgG2a，縮寫為AB-407 WT）或具有N297Q突變的小鼠IgG2a（AB-407 mIgG2a-N297Q，縮寫為AB-407 MF）。N297Q突變導致抗體與Fcγ受體（FcγR）的結合親和力和FcγR介導的效應子功能大大降低。
材料和方法：將GL261腫瘤細胞（1 × 10 7）皮下植入C57BL/6小鼠的右背。腫瘤接種當天，根據體重和接種順序對小鼠進行隨機分組，每組20隻小鼠。從接種第二天開始，用媒劑、AB-407 WT或AB-407 MF（1、5和15 mg/kg，QW）腹膜內處理小鼠32天，顯示第24天截止的數據。每週測量腫瘤體積兩次。數據表示為每組20隻動物的平均腫瘤體積 ± 平均值的標準誤差（SEM）。採用Dunnett多重比較方法的單向ANOVA用於分析治療組與媒劑組之間的對數轉換腫瘤體積（*p ＜ 0.05）。
將GL261腫瘤細胞（1 × 107）皮下植入C57BL/6小鼠的右背。腫瘤接種當天，根據體重和接種順序對小鼠進行隨機分組，每組20隻小鼠。從接種第二天開始，用媒劑、AB-407 WT或AB-407 MF（1、5和15 mg/kg，QW）腹膜內處理小鼠32天，顯示第24天截止的數據。每週測量兩次體重。數據以每組20隻動物的平均體重 ± SEM表示。
在表27中，所有指定參數都在第24天計算。採用Dunnett多重比較方法的單向ANOVA用於分析治療組和媒劑組之間的對數轉換腫瘤體積數據。
結果：每週腹腔內投與1、5和15 mg/kg AB-407 WT，第24天的腫瘤生長抑制（TGI）分別為37%、51%和65%，而對於1、5和15 mg/kg AB-407 MF，第24天的腫瘤生長抑制（TGI）分別為18%、13%和38%（圖38和表27）。15 mg/kg的AB-407 WT治療具有顯著的抗腫瘤效應，但任何劑量的AB-407 MF都沒有顯著的抗腫瘤作用，表明PVRIG抗體與FcγR的結合對於抗腫瘤活性至關重要。在整個研究過程中，所有治療組均未發現動物體重的顯著變化（圖39）或異常臨床體征。
[ 表 27]：AB-407對小鼠GL261皮下同系模型中腫瘤生長的影響
化合物 劑量（ mg/kg ） 治療 N TGI （第 24 天） 平均腫瘤體積（ mm 3 ） （第 24 天） 調整的 p 值相比於媒劑
（第 24 天）
媒劑 0 i.p.，QW 20 N/A 984.8 N/A
AB-407 WT 1 i.p.，QW 20 37% 621.9 0.7000
AB-407 WT 5 i.p.，QW 20 51% 481.2 0.0525
AB-407 WT 15 i.p.，QW 20 65% 347.5 0.0353
AB-407 MF 1 i.p.，QW 20 18% 807.2 1.0000
AB-407 MF 5 i.p.，QW 20 13% 861.4 1.0000
AB-407 MF 15 i.p.，QW 20 38% 612.9 0.9954
縮寫：i.p.，腹膜內；N，每組中的動物數；N/A，不適用；QW，每週一次；TGI，腫瘤生長抑制。 實例 21 ： BGA384 的臨床前研究和毒理學
非臨床藥物動力學
在石蟹獼猴中進行了單劑量靜脈內輸注PK研究，劑量為1、5或20 mg/kg，通過靜脈輸注。重複劑量毒代動力學分析被納入在石蟹獼猴中進行的4週重複劑量毒性研究，如下所述。
給藥方案：總共18隻石蟹獼猴被隨機分為3組（3隻/性別/組），並通過靜脈內輸注以單劑量1、5或20 mg/kg BGA384進行治療。使用經過驗證的ELISA方法測量血清藥物濃度。
結果：單次投與BGA384 1至20 mg/kg後，PK參數方面未觀察到顯著的性別差異。血清濃度以雙指數方式下降。BGA384的t½持續時間平均值為168至270小時；平均Vd ss範圍為49.8至50.6 mL/kg，與典型的單株抗體相似；清除率（CL）緩慢，平均值為0.156至0.191 mL/h/kg；Cmax範圍為31.7至613 μg/mL；以及AUC0-840h範圍為5,090至112,000 h•μg/mL。BGA384的全身暴露量以劑量成比例的方式增加，並在1至20 mg/kg的劑量範圍內表現出線性PK特徵。PK參數如表28所示。 [ 表 28] ：單次投與後BGA384在猴中的藥物動力學參數
劑量水平（ mg/kg ） 性別 C 最大 T 最大 t½ AUC0-840h AUC0- 最後 AUC0-inf CL Vd ss
μg/mL h h h•μg/mL h•μg/mL h•μg/mL mL/h/kg mL/kg
1 雄性 35.1 ± 4.94 4.0 （2.0 - 8.0） 153 (145 - 192) 5100 ± 658 5100 ± 658 5270 ± 771 0.192 ± 0.0271 45.5 ± 1.04
雌性 28.2 ± 4.13 4.0 （2.0 - 4.0） 168（168 - 191） 5070 ± 548 5070 ± 548 5300 ± 547 0.190 ± 0.0185 54.1 ± 5.86
平均值 31.7 ± 5.53 4.0 （2.0 - 8.0） 168 (145 - 192) 5090 ± 542 5090 ± 542 5280 ± 598 0.191 ± 0.0208 49.8 ±6.03
5 雄性 149 ± 11.1 2.0 （0.5 - 4.0） 229 (221 - 329) 33800 ± 5110 33800 ± 5110 38300 ± 8230 0.134 ± 0.0273 48.6 ± 3.04
雌性 150 ± 5.51 4.0 （2.0 - 4.0） 256 (131 - 289) 26800 ± 5230 26500 ± 5680 29300 ± 7560 0.178 ± 0.0428 52.1 ± 9.33
平均值 150 ± 7.87 3.0 （0.5 - 4.0） 243（131 - 329） 30300 ± 6010 30100 ± 6300 33800 ± 8620 0.156 ± 0.0400 50.3 ± 6.50
20 雄性 622 ± 8.08 2.0 （0.5 - 8.0） 311（300 - 400） 136000 ± 10200 136000 ± 10200 160000 ± 20100 0.126 ± 0.0148 51.8 ± 2.12
雌性 604 ± 78.6 4.0 （0.5 - 4.0） 215（56.8 - 239） 87600 ± 17800 87400 ± 18100 92000 ± 22500 0.226 ± 0.0523 49.3 ± 11.3
平均值 613 ± 50.9 3.0 （0.5 - 8.0） 270（56.8 - 400） 112000 ± 29600 112000 ± 29800 126000 ± 41700 0.176 ± 0.0643 50.6 ± 7.39
縮寫：AUC0-inf，從時間0到無窮大的濃度-時間曲線下面積；AUC0-最後，從時間0到最後一個可定量濃度的AUC；AUC0-840h，從時間0到給藥後840小時的AUC；C最大，最大血漿濃度；CL，清除率；t½，半衰期；T最大，達到C最大的時間；Vdss，穩態分佈體積。 毒理學重複劑量研究
在石蟹獼猴中進行了為期四週的重複劑量毒理學研究。
給藥方案：總共48隻石蟹獼猴被分配到4組（6隻/性別/組），並用對照品（BGA384 DS緩衝液）或BGA384 DS氯化鈉注射液（0.9%）以10、30或100 mg/kg藉由30分鐘靜脈內（IV）輸注進行治療（每週一次，第1、8、15、22和29天；總共5個劑量），然後是4週的恢復期。在第一週恢復期後以及第一個（第1天）和第四個（第22天）劑量後評估毒代動力學（TK）譜。分析BGA384水平，並通過臨床觀察、輸注部位觀察、臨床病理學、免疫球蛋白、補體、淋巴球亞群、NK細胞、細胞介素和組織病理學評估來評估免疫毒性。
結果：在整個研究過程中，沒有觀察到動物死亡或垂死。在整個研究過程中在任何劑量水平下，針對神經行為評估、臨床病理學（臨床化學、血液學、凝血和尿液分析）、TBNK淋巴球亞群或細胞介素（TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-5、補體[C3和C4]以及免疫球蛋白[IgM、IgG 和 IgA]），在臨床觀察、投與部位觀察、體重、食物消耗、體溫、心電圖（ECG）、眼底鏡檢查、血壓、呼吸參數、血氧飽和度、功能觀察組合（FOB）中均未發現與測試品相關的變化。
在第一個（第1天）和第四個（第22天）劑量後對TK譜進行表徵。全身暴露似乎按劑量從10至100 mg/kg比例性地增加。沒有發現明顯的性別差異或積累。
總體而言，100 mg/kg被認為是研究條件下的最高非嚴重毒性劑量（HNSTD），在第22天，相應的AUC0-最後和C最大在雄性中分別為384 h•mg/mL和4670 μg/mL，在雌性中分別為477 h•mg/mL和4980 μg/mL。 局部耐受性研究
在石蟹獼猴中的重複劑量毒性研究中，觀察輸注部位並收集以進行顯微鏡評估。在輸注部位沒有發現與測試品相關的值得注意的異常觀察或組織病理學變化。 正常人體組織的組織交叉反應性（TCR）研究
使用經過驗證的免疫組織化學方法在冷凍正常人體組織中評估BGA384的TCR。
材料和方法：來自3個供體總共35種組織類型（每種組織一式三份）用於評估。該研究使用0.5和1.0 μg/mL 生物素-BGA384、0.5和1.0 μg/mL生物素-人IgG1-κ（IgG1同種型對照）和0.01 mol/L磷酸鹽緩衝鹽水（試劑對照）。該方法係分別使用hPVRIG-mIgG2a和人血清白蛋白His標籤的陽性和陰性對照蛋白塗片建立和驗證的。
hPVRIG-mIgG2a的蛋白塗片上觀察到陽性生物素-BGA384染色，染色強度在0.5和1 µg/mL時強，但IgG1同種型對照、PBS或陰性對照中無染色。該等結果表明該測定係特異性的且可重複的。
結果：在正常人體組織中未發現BGA384的特異性染色。 基於人PBMC的細胞介素釋放測定
為了評估BGA384誘導CRS的潛在風險，進行了基於體外PBMC的細胞介素釋放測定。
材料和方法：在此測定中，使用建立的「空氣乾燥」方法（Findlay等人2010）將抗體（BGA384、OKT3（抗CD3單株抗體）或人IgG）包被在聚丙烯96孔板上。然後將來自32名健康供體的PBMC在加有10%胎牛血清的RPMI-1640培養基中在「乾包被」抗體存在下培養22小時。使用人IgG作為同種型對照，安慰劑作為陰性對照，抗CD3單株抗體OKT3作為陽性對照。藉由離心獲得無細胞上清液，並使用多重套組（HCYTOMAG-60K，密理博公司（Millipore））和Luminex 200TM進行測定。分析了一組15種細胞介素/趨化因子（IL-2、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、IFN-γ、IL-4、IL-10、MCP-1/CCL2、MIP-1α/CCL3、IP-10/CXCL10、IL-17A、IL-12p70、IL-13和GM-CSF）。
結果：OKT3（板結合）在來自所有32個供體的人PBMC中誘導顯著量的細胞介素/趨化因子釋放，而安慰劑（陰性對照）誘導很少或沒有細胞介素釋放（圖40-42）。固定化人IgG誘導顯著量的GM-CSF、IL-1β、IL-6、IL-8、MCP-1、MIP-1a和TNF-a，可能是由於NK細胞和單核細胞上FcγR的交聯所致（Roda 等人2006）。
對於GM-CSF、IL-10、IL-12p70、IL-13、IL-17A、IL-1B和TNF-a，固定化的BGA384（100 µg/孔）誘導的釋放明顯低於人IgG（100 µg/孔）和OKT3（1 µg/孔）。對於一些與T細胞活化有關的細胞介素/趨化因子，如IFN-γ、IL-2、IL-4和IP-10，固定化的BGA384（100 µg/孔）誘導的釋放明顯低於OKT3。此外，與BGA384（100 µg/孔）相比，人IgG誘導了顯著更多的IL-6、IL-8和MIP-1A釋放，這可能是由於NK細胞和單核細胞上FcγR的交聯所致。觀察到BGA384對PBMC中MCP-1的選擇性誘導。MCP-1，也稱為CCL2，係主要由單核細胞和巨噬細胞產生的C-C趨化因子（Deshmane等人2009）。它係多效性細胞介素，在多種疾病領域（例如傳染病、癌症和自體免疫巨噬細胞）中發揮著重要作用。此前，在用艾洛珠單抗治療後，在趨化因子釋放測定（CRA）中觀察到MCP-1的穩健誘導，艾洛珠單抗係一種靶向在骨髓瘤細胞上高表現並且在NK和T細胞上弱表現的CS1（SLAM-F7）的單株抗體（Balasa等人 2008）。該響應具有劑量依賴性和Fc依賴性，並且與NK細胞活化水平顯著相關。在1期臨床試驗中給藥時，發現艾洛珠單抗僅誘導多發性骨髓瘤患者血清中趨化因子MCP-1短暫升高。
總之，該等結果表明BGA384引起CRS的風險較低。 基於非臨床數據的臨床劑量的估計
種間PK預測
在用Phoenix® NLME版本8.3（美國新澤西州普林斯頓市的Certara USA公司）進行的PK分析中使用了來自18隻石蟹獼猴的血清濃度-時間譜，該等石蟹獼猴接受了1、5和20 mg/kg的單劑量BGA384（第4.2節）。
具有一級消除的2室模型描述了數據。人PK參數係藉由將相應的石蟹獼猴PK參數乘以體重比（人/猴）換算得到的，並取CL的0.75次方和分佈體積的1.0次方（Mahmood和Balian 1999）。石蟹獼猴PK參數和預計的人PK參數如表29所示。BGA384在不同劑量水平下的模擬人PK譜如圖43所示。預計人終末消除半衰期為18.2天。 [ 表 29] ：石蟹獼猴群體PK參數估計和人預測PK參數
參數 猴 人
估計 %RSE 預測
CL（mL/天/kg） 3.93 5.6 2.55
Q（mL/天/kg） 10.5 14 6.85
Vc（mL/kg） 34.5 6.5 34.5
Vp（mL/kg） 16.7 2.3 16.7
本文引用的參考文獻無意承認該參考文獻係相關的先前技術，也不構成對該等出版物或文獻的內容或日期的任何承認。如果參考文獻提供的要求保護的術語的定義與本說明書中提供的定義相衝突，則本說明書中提供的定義應當用於解釋要求保護的本揭露。
無
圖1顯示了BGA12以及工程改造版本BGA121和BGA122與表現人PVRIG的細胞的結合。 圖2表明BGA12、BGA121和BGA 122抗體以劑量依賴性方式大大降低了PVRIG與PVRL2的結合。 圖3A-B表明BGA38的人源化變體顯示出與hPVRIG-Jurkat的相當的結合。 圖4A-B顯示了BGA38的人源化變體顯示出與Cyno PVRIG-293T的相當的結合。 圖5A-B表明BGA38的人源化變體顯示PVRL2結合的相當的減少。 圖6顯示BGA86的人源化變體顯示出與hPVRIG-Jurkat的相當的結合。 圖7表明BGA86的人源化變體顯示出與Cyno PVRIG-293T細胞的相當的結合。 圖8顯示BGA86的人源化變體顯示PVRL2結合的相當的減少。 圖9顯示BGA50的人源化變體顯示出與hPVRIG-Jurkat的相當的結合。 圖10顯示BGA50的人源化變體顯示出與Cyno PVRIG-293T的相當的結合。 圖11顯示BGA50的人源化變體顯示PVRL2結合的相當的減少。 圖12A-C、12D-F和12G顯示使用抗PVRIG抗體的Jurkat/NFAT和A549共培養測定的結果。 圖13A-C顯示使用抗PVRIG抗體的Jurkat/NFAT/hPVRIG +THP1/OS8低測定的結果。 圖13D-G顯示使用人源化抗PVRIG抗體的Jurkat/NFAT/hPVRIG +THP1/OS8低測定的結果。 圖14A-B顯示抗PVRIG親本抗體對人T細胞的活化。 圖14C-D顯示抗PVRIG人源化抗體對人T細胞的活化。 圖15A-B和15C-D表明抗PVRIG抗體可以與其他免疫檢查點抗體組合使用。 圖16A-E顯示人NK細胞可以被抗PVRIG抗體活化。 圖17A-B顯示當用抗PVRIG抗體處理時細胞的胞啃作用的變化。 圖18顯示與人PVRIG結合的A538-EH Fab的晶體結構。分圖 (A) 係與人PVRIG結合的A538-EH Fab的晶體結構，其中A538-EH重鏈（HC）和輕鏈（LC）區域以黑色和灰色卡通著色，而PVIRG以白色表面著色。分圖 (B) 顯示A538-EH/PVRIG複合物結合表面上的原子相互作用，鑒定A538-EH（線中顯示的互補位殘基）和PVRIG（棒中顯示的表位殘基）的某些關鍵殘基。為了清楚，A538-EH的非CDR區域用白色透明表面中著色的PVRIG去除。藉由丙胺酸掃描誘變將底線殘基鑒定為功能上重要的表位殘基。圖 (C) 顯示A538-EH內F99 PVRIG和P100 PVRIG的周圍殘基顯示強調該等殘基之間對於PVRIG結合至關重要的相互作用。F99PVRIG和P100PVRIG用帶底線的較大文本突出顯示。 圖19係適合用於實踐請求項的重鏈可變區的比對。根據Brown等人(1998)的說法，顯示了覆蓋率（cov）和同一性百分比（pid）。該方案使用已知的胺基酸理化類別（Taylor，1986）藉由同一性和性質突出殘基。如果殘基與堆疊比對中的對應殘基相同，則按顏色排列。比對中顯示了CDR（該等CDR顯示CDR的組合中的哪個殘基子集對於所描述的與人PVRIG特異性結合的功能係必不可少的）的結構一致性。（ 參見MView: A Web compatible database search or multiple alignment viewer[與網路相容的數據庫搜索或多比對檢視器] Bioinformatics[ 生物資訊學 ]14 (4):380-381）。 圖20係顯示適合實施請求項的可變重鏈區的一級胺基酸序列之間的結構相似性和差異的堆疊比對。該等比對顯示了共同的結構特徵，該等特徵對於實現所要求保護的與人PVRIG特異性結合的功能至關重要。 圖21顯示BGA-384的重鏈（A）和輕鏈（B）的胺基酸序列。可變區以大寫字母表示，恒定區以小寫字母表示。互補決定區用粗體（Kabat和Wu 1971）和/或底線（Chothia和Lesk 1987；Chothia和Lesk 1987）突出顯示。 圖22A-B顯示藉由ELISA確定的BGA-384與重組PVRIG的結合。 圖23A-B顯示藉由FACS確定的BGA-384與重組PVRIG的結合。 圖24A-B顯示藉由FACS確定的BGA-384的非特異性結合測試。 圖25顯示人、石蟹獼猴和鼠PVRIG胞外結構域的胺基酸序列比對。 圖26A-C顯示BGA-384與人、石蟹獼猴和小鼠PVRIG結合之傳感圖。 圖27顯示對PVRIG中參與BGA384結合的表位的分析。 圖28A-B顯示藉由ELISA測定進行的針對PVRIG-PVRL2結合的BGA-384阻斷活性。 圖29A-B顯示在基於細胞的測定中針對PVRIG-PVRL2結合的BGA-384阻斷活性。 圖30顯示PVRIG + Jurkat T細胞中BGA-384活性的分析。 圖31A-C顯示共培養物中CMV特異性T細胞響應於BGA-384的IFN-γ分泌。 圖32A-C顯示單獨用BGA-384或與BGB-A317或BGB-A1217之一或兩者組合處理的CMV特異性T細胞的IFN-γ分泌。 圖33顯示藉由ELISA分析BGA384與C1q的結合。 圖34顯示針對用BGA384處理的原代人PBMC細胞的ADCC活性。 圖35A-C顯示BGA384和對照抗體的PBMC的CDC活性。 圖36顯示BGA384活化Jurkat細胞以產生NFAT-RE介導的發光。 圖37A-D顯示在BGA384存在下與SK-BR-3（PVRL2+ 人乳癌細胞系）共培養的原代NK細胞中CD107a+ 細胞的百分比。 圖38顯示每週腹膜內投與BGA384的1、5和15 mg/kg抗小鼠PVRIG替代抗體（AB-407 WT）期間的腫瘤生長抑制（TGI）。 圖39顯示每週腹膜內投與1、5和15 mg/kg AB-407 WT期間的動物體重。 圖40顯示暴露於10 μg/孔和100 μg/孔BGA384（相對於huIgG和OKT3）的PBMC中GM-CSF、IFN-γ、IL-10、IL-12p70、IL-13和IL-17A的細胞介素釋放測定。 圖41顯示暴露於10 μg/孔和100 μg/孔BGA384（相對於huIgG和OKT3）的PBMC中IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8和IP-10/CXCL10的細胞介素釋放測定。 圖42顯示暴露於10 μg/孔和100 μg/孔BGA384（相對於huIgG和OKT3）的PBMC中MCP-1/CCL2、MIP-1α/CCL3和TNF-α的細胞介素釋放測定。 圖43顯示不同劑量水平下BGA384的模擬人PK譜。
TW202417485A_112130034_SEQL.xml

Claims (39)

  1. 一種與人PVRIG結合的抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗體結合片段包含： (i) 三個重鏈CDR： HCDR1，其包含如SEQ ID NO:44所示的胺基酸序列， HCDR2，其包含如SEQ ID NO:45所示的胺基酸序列， HCDR3，其包含如SEQ ID NO:46所示的胺基酸序列，和 三個輕鏈CDR： LCDR1，其包含如SEQ ID NO:47所示的胺基酸序列， LCDR2，其包含如SEQ ID NO:48所示的胺基酸序列， LCDR3，其包含如SEQ ID NO:49所示的胺基酸序列； (ii) 三個重鏈CDR： HCDR1，其包含如SEQ ID NO:34所示的胺基酸序列， HCDR2，其包含如SEQ ID NO:35所示的胺基酸序列， HCDR3，其包含如SEQ ID NO:36所示的胺基酸序列，和 三個輕鏈CDR： LCDR1，其包含如SEQ ID NO:37所示的胺基酸序列， LCDR2，其包含如SEQ ID NO:38所示的胺基酸序列， LCDR3，其包含如SEQ ID NO:39所示的胺基酸序列； (iii) 三個重鏈CDR： HCDR1，其包含如SEQ ID NO:14所示的胺基酸序列， HCDR2，其包含如SEQ ID NO:15所示的胺基酸序列， HCDR3，其包含如SEQ ID NO:16所示的胺基酸序列，和 三個輕鏈CDR： LCDR1，其包含如SEQ ID NO:17所示的胺基酸序列， LCDR2，其包含如SEQ ID NO:18所示的胺基酸序列， LCDR3，其包含如SEQ ID NO:19所示的胺基酸序列； (iv) 三個重鏈CDR： HCDR1，其包含如SEQ ID NO:4所示的胺基酸序列， HCDR2，其包含如SEQ ID NO:5所示的胺基酸序列， HCDR3，其包含如SEQ ID NO:6所示的胺基酸序列，和 三個輕鏈CDR： LCDR1，其包含如SEQ ID NO:7所示的胺基酸序列， LCDR2，其包含如SEQ ID NO:8所示的胺基酸序列， LCDR3，其包含如SEQ ID NO:9所示的胺基酸序列； (v) 三個重鏈CDR： HCDR1，其包含如SEQ ID NO:24所示的胺基酸序列， HCDR2，其包含如SEQ ID NO:25所示的胺基酸序列， HCDR3，其包含如SEQ ID NO:26所示的胺基酸序列，和 三個輕鏈CDR： LCDR1，其包含如SEQ ID NO:27所示的胺基酸序列， LCDR2，其包含如SEQ ID NO:28所示的胺基酸序列， LCDR3，其包含如SEQ ID NO:29所示的胺基酸序列； (vi) 三個重鏈CDR： HCDR1，其包含如SEQ ID NO:54所示的胺基酸序列， HCDR2，其包含如SEQ ID NO:55所示的胺基酸序列， HCDR3，其包含如SEQ ID NO:56所示的胺基酸序列，和 三個輕鏈CDR： LCDR1，其包含如SEQ ID NO:57所示的胺基酸序列， LCDR2，其包含如SEQ ID NO:58所示的胺基酸序列， LCDR3，其包含如SEQ ID NO:59所示的胺基酸序列； (vii) 三個重鏈CDR： HCDR1，其包含如SEQ ID NO:64所示的胺基酸序列， HCDR2，其包含如SEQ ID NO:65所示的胺基酸序列， HCDR3，其包含如SEQ ID NO:66所示的胺基酸序列，和 三個輕鏈CDR： LCDR1，其包含如SEQ ID NO:67所示的胺基酸序列， LCDR2，其包含如SEQ ID NO:68所示的胺基酸序列， LCDR3，其包含如SEQ ID NO:69所示的胺基酸序列； (viii) 三個重鏈CDR： HCDR1，其包含如SEQ ID NO:74所示的胺基酸序列， HCDR2，其包含如SEQ ID NO:75所示的胺基酸序列， HCDR3，其包含如SEQ ID NO:76所示的胺基酸序列，和 三個輕鏈CDR： LCDR1，其包含如SEQ ID NO:77所示的胺基酸序列， LCDR2，其包含如SEQ ID NO:78所示的胺基酸序列， LCDR3，其包含如SEQ ID NO:79所示的胺基酸序列； (ix) 三個重鏈CDR： HCDR1，其包含如SEQ ID NO:84所示的胺基酸序列， HCDR2，其包含如SEQ ID NO:85所示的胺基酸序列， HCDR3，其包含如SEQ ID NO:86所示的胺基酸序列，和 三個輕鏈CDR： LCDR1，其包含如SEQ ID NO:87所示的胺基酸序列， LCDR2，其包含如SEQ ID NO:88所示的胺基酸序列， LCDR3，其包含如SEQ ID NO:89所示的胺基酸序列； (x) 三個重鏈CDR： HCDR1，其包含如SEQ ID NO:94所示的胺基酸序列， HCDR2，其包含如SEQ ID NO:95所示的胺基酸序列， HCDR3，其包含如SEQ ID NO:96所示的胺基酸序列，和 三個輕鏈CDR： LCDR1，其包含如SEQ ID NO:97所示的胺基酸序列， LCDR2，其包含如SEQ ID NO:98所示的胺基酸序列， LCDR3，其包含如SEQ ID NO:99所示的胺基酸序列； (xi) 三個重鏈CDR： HCDR1，其包含如SEQ ID NO:104所示的胺基酸序列， HCDR2，其包含如SEQ ID NO:105所示的胺基酸序列， HCDR3，其包含如SEQ ID NO:106所示的胺基酸序列，和 三個輕鏈CDR： LCDR1，其包含如SEQ ID NO:107所示的胺基酸序列， LCDR2，其包含如SEQ ID NO:108所示的胺基酸序列， LCDR3，其包含如SEQ ID NO:109所示的胺基酸序列； (xii) 三個重鏈CDR： HCDR1，其包含如SEQ ID NO:114所示的胺基酸序列， HCDR2，其包含如SEQ ID NO:115所示的胺基酸序列， HCDR3，其包含如SEQ ID NO:116所示的胺基酸序列，和 三個輕鏈CDR： LCDR1，其包含如SEQ ID NO:117所示的胺基酸序列， LCDR2，其包含如SEQ ID NO:118所示的胺基酸序列， LCDR3，其包含如SEQ ID NO:119所示的胺基酸序列； (xiii) 三個重鏈CDR： HCDR1，其包含如SEQ ID NO:124所示的胺基酸序列， HCDR2，其包含如SEQ ID NO:125所示的胺基酸序列， HCDR3，其包含如SEQ ID NO:126所示的胺基酸序列，和 三個輕鏈CDR： LCDR1，其包含如SEQ ID NO:127所示的胺基酸序列， LCDR2，其包含如SEQ ID NO:128所示的胺基酸序列， LCDR3，其包含如SEQ ID NO:129所示的胺基酸序列； (xiv) 三個重鏈CDR： HCDR1，其包含如SEQ ID NO:134所示的胺基酸序列， HCDR2，其包含如SEQ ID NO:135所示的胺基酸序列， HCDR3，其包含如SEQ ID NO:136所示的胺基酸序列，和 三個輕鏈CDR： LCDR1，其包含如SEQ ID NO:137所示的胺基酸序列， LCDR2，其包含如SEQ ID NO:138所示的胺基酸序列， LCDR3，其包含如SEQ ID NO:139所示的胺基酸序列； (xv) 三個重鏈CDR： HCDR1，其包含如SEQ ID NO:144所示的胺基酸序列， HCDR2，其包含如SEQ ID NO:145所示的胺基酸序列， HCDR3，其包含如SEQ ID NO:146所示的胺基酸序列，和 三個輕鏈CDR： LCDR1，其包含如SEQ ID NO:147所示的胺基酸序列， LCDR2，其包含如SEQ ID NO:148所示的胺基酸序列， LCDR3，其包含如SEQ ID NO:149所示的胺基酸序列；或 (xvi) 三個重鏈CDR： HCDR1，其包含如SEQ ID NO:187所示的胺基酸序列， HCDR2，其包含如SEQ ID NO:188所示的胺基酸序列， HCDR3，其包含如SEQ ID NO:46所示的胺基酸序列，和 三個輕鏈CDR： LCDR1，其包含如SEQ ID NO:47所示的胺基酸序列， LCDR2，其包含如SEQ ID NO:48所示的胺基酸序列， LCDR3，其包含如SEQ ID NO:49所示的胺基酸序列。
  2. 如請求項1所述之抗體或抗原結合片段，該抗體或抗原結合片段包含： (i) 包含與SEQ ID NO:50至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含與SEQ ID NO:51至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）； (ii) 包含與SEQ ID NO:40至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含與SEQ ID NO:41至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）； (iii) 包含與SEQ ID NO:20至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含與SEQ ID NO:21至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）； (iv) 包含與SEQ ID NO:10至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含與SEQ ID NO:11至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）； (v) 包含與SEQ ID NO:30至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含與SEQ ID NO:31至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）； (vi) 包含與SEQ ID NO:60至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含與SEQ ID NO:61至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）； (vii) 包含與SEQ ID NO:70至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含與SEQ ID NO:71至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）； (viii) 包含與SEQ ID NO:80至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含與SEQ ID NO:81至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）； (ix) 包含與SEQ ID NO:90至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含與SEQ ID NO:91至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）； (x) 包含與SEQ ID NO:100至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含與SEQ ID NO:101至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）； (xi) 包含與SEQ ID NO:110至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含與SEQ ID NO:111至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）； (xii) 包含與SEQ ID NO:120至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含與SEQ ID NO:121至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）； (xiii) 包含與SEQ ID NO:130至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含與SEQ ID NO:131至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）； (xiv) 包含與SEQ ID NO:140至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含與SEQ ID NO:141至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）；或 (xv) 包含與SEQ ID NO:150至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含與SEQ ID NO:151至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）。
  3. 如請求項2所述之抗體或抗原結合片段，其中SEQ ID No:50和51、SEQ ID No:40和41、SEQ ID No:20和21、SEQ ID No:10和11、SEQ ID No:30和31、SEQ ID No:60和61、SEQ ID No:70和71、SEQ ID No:80和81、SEQ ID No:90和91、SEQ ID No:100和101、SEQ ID No:110和111、SEQ ID No:120和121、SEQ ID No:130和131、SEQ ID No:140和141或SEQ ID No:150和151內已被插入、缺失或取代1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個或10個胺基酸。
  4. 如請求項1所述之抗體或抗原結合片段，該抗體或抗原結合片段包含： (i) 包含如SEQ ID NO:50所示胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含如SEQ ID NO:51所示胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）； (ii) 包含如SEQ ID NO:40所示胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含如SEQ ID NO:41所示胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）； (iii) 包含如SEQ ID NO:20所示胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含如SEQ ID NO:21所示胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）； (iv) 包含如SEQ ID NO:10所示胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含如SEQ ID NO:11所示胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）； (v) 包含如SEQ ID NO:30所示胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含如SEQ ID NO:31所示胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）； (vi) 包含如SEQ ID NO:60所示胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含如SEQ ID NO:61所示胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）； (vii) 包含如SEQ ID NO:50所示胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含如SEQ ID NO:51所示胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）； (viii) 包含如SEQ ID NO:70所示胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含如SEQ ID NO:71所示胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）； (ix) 包含如SEQ ID NO:80所示胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含如SEQ ID NO:81所示胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）； (x) 包含如SEQ ID NO:90所示胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含如SEQ ID NO:91所示胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）； (xi) 包含如SEQ ID NO:100所示胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含如SEQ ID NO:101所示胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）； (xii) 包含如SEQ ID NO:110所示胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含如SEQ ID NO:111所示胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）； (xiii) 包含如SEQ ID NO:120所示胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含如SEQ ID NO:121所示胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）； (xiv) 包含如SEQ ID NO:140所示胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含如SEQ ID NO:141所示胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）； (xv) 包含如SEQ ID NO:150所示胺基酸序列的重鏈可變區（VH），和包含如SEQ ID NO:151所示胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）。
  5. 如請求項1所述之分離的抗體，其進一步包含在包含SEQ ID NO:154的S27、S31、L32、H52、F99、K95、P100、E101、S103和E105的表位處特異性結合人PVRIG的抗原結合結構域。
  6. 一種分離的人單株抗體或其抗原結合部分，其中該抗體或其抗原結合部分與參考抗體或其參考抗原結合部分交叉競爭結合PVRIG，該參考抗體或其參考抗原結合部分包含如請求項1至5中任一項所述之抗體或抗原結合片段。
  7. 如請求項6所述之抗體，其中該抗體結合PVRIG上的不連續表位。
  8. 如請求項7所述之抗體，其中該抗體結合PVRIG上的不連續表位，其中該不連續表位包含人PVRIG的胺基酸殘基S27、S31和L32，該人PVRIG包含SEQ ID NO:154。
  9. 如請求項8所述之抗體，其中該不連續表位進一步包含人PVRIG的胺基酸殘基H52、K95、F99、P100、E101、S103和E105，該人PVRIG包含SEQ ID NO:154。
  10. 如請求項1至9中任一項所述之抗體或抗原結合片段，該抗體或抗原結合片段係單株抗體、嵌合抗體、人源化抗體、人工程改造抗體、單鏈抗體（scFv）、Fab片段、Fab’片段或F(ab’) 2片段。
  11. 如請求項1至10中任一項所述之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段具有降低的糖基化或無糖基化或係低岩藻糖基化的。
  12. 如請求項1至11中任一項所述之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含增加的二等分GlcNac結構。
  13. 如請求項1至12中任一項所述之抗體或抗原結合片段，其中該Fc結構域係IgG1的Fc結構域。
  14. 一種藥物組成物，該藥物組成物包含如請求項1至13中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，進一步包含藥學上可接受的載劑。
  15. 一種分離的核酸，其編碼如請求項1至13中任一項所述之抗體或抗原結合片段。
  16. 一種載體，其包含如請求項15所述之核酸。
  17. 一種宿主細胞，其包含如請求項15所述之核酸或如請求項16所述之載體。
  18. 一種生產抗體或其抗原結合片段之方法，該方法包括在培養基中培養如請求項17所述之宿主細胞和從該培養基中回收該抗體或抗原結合片段。
  19. 一種純化的組成物，該純化的組成物包含藉由如請求項18所述之方法生產的抗人PVRIG抗體或其抗原結合片段。
  20. 一種套組，其包含如請求項1-13中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，以及使用該抗體或其抗原結合片段的說明書。
  21. 如請求項20所述之套組，其中該抗體或其抗原結合片段與PVRIG形成複合物，該複合物藉由包括酶聯免疫吸附測定（ELISA）、放射免疫測定（RIA）和/或西方墨點法的測定來檢測。
  22. 一種治療癌症之方法，該方法包括向有需要的患者投與有效量的如請求項14所述之藥物組成物或如請求項19所述之純化的組成物。
  23. 如請求項22所述之方法，其中該癌症選自由以下組成之群組：表現PVRL2的癌症，PVRL2累積的癌症，中樞神經系統腫瘤，間皮瘤，淋巴瘤，白血病，骨髓瘤，肉瘤，以及膀胱癌、胃癌、子宮癌/子宮頸癌、前列腺癌、睪丸癌、食道癌、腸癌、結腸癌、胰臟癌、乳癌、頭頸癌、腎癌、肝癌、肺癌、生殖細胞癌、骨癌、肝癌、甲狀腺癌、卵巢癌和皮膚癌及其轉移。
  24. 如請求項23所述之方法，其中該癌症選自由以下組成之群組：子宮內膜癌、卵巢癌和非小細胞肺癌（NSCLC）。
  25. 如請求項23或請求項24所述之方法，其中該抗體或抗原結合片段與至少一種其他治療劑組合投與。
  26. 如請求項25所述之方法，其中該其他治療劑係化療劑。
  27. 如請求項25所述之方法，其中該其他治療劑包含至少一種免疫檢查點抑制劑。
  28. 如請求項27所述之方法，其中該免疫檢查點抑制劑係抗PD1抗體。
  29. 如請求項28所述之方法，其中該抗PD1抗體係BGB-A317。
  30. 如請求項27所述之方法，其中該免疫檢查點抑制劑係抗TIGIT抗體。
  31. 如請求項30所述之方法，其中該抗TIGIT抗體係BGB-A1217。
  32. 如請求項27所述之方法，其中該免疫檢查點抑制劑包含BGB-A317和A1217的組合。
  33. 一種刺激受試者的免疫響應之方法，該方法包括向該受試者投與如請求項14所述之藥物組成物或如請求項19所述之純化的組成物。
  34. 如請求項33所述之方法，其中投與步驟增加該受試者中的抗體依賴性胞啃作用或效應T細胞響應。
  35. 一種誘導PVRIG從供體細胞到受體細胞的胞啃作用之方法，該方法包括使該供體細胞與如請求項1至13中任一項所述之抗體或抗原結合片段接觸足以誘導從該供體細胞到該受體細胞的胞啃作用的時間。
  36. 一種活化NK細胞之方法，該方法包括向有需要的患者投與有效量的如請求項14所述之藥物組成物或如請求項19所述之純化的組成物。
  37. 如請求項36所述之方法，其中該患者患有癌症並且針對所述癌症的免疫響應被刺激。
  38. 如請求項37所述之方法，其中該癌症選自由以下組成之群組：表現PVRL2的癌症，PVRL2累積的癌症，中樞神經系統腫瘤，間皮瘤，淋巴瘤，白血病，骨髓瘤，肉瘤，以及膀胱癌、胃癌、子宮癌/子宮頸癌、前列腺癌、睪丸癌、食道癌、腸癌、結腸癌、胰臟癌、乳癌、頭頸癌、腎癌、肝癌、肺癌、生殖細胞癌、骨癌、肝癌、甲狀腺癌、卵巢癌和皮膚癌及其轉移。
  39. 如請求項38所述之方法，其中該癌症選自由以下組成之群組：子宮內膜癌、卵巢癌、非小細胞肺癌（NSCLC）、胃癌和結直腸癌。
TW112130034A 2022-08-10 2023-08-10 抗ｐｖｒｉｇ抗體及使用方法 TW202417485A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
WOPCT/CN2022/111326 2022-08-10
WOPCT/CN2023/095564 2023-05-22

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW202417485A true TW202417485A (zh) 2024-05-01

Family

ID=

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7425604B2 (ja) 抗ｃｔｌａ４－抗ｐｄ－１二機能性抗体、その医薬組成物および使用
KR102469286B1 (ko) 항-pd1 단일클론 항체, 이의 약제학적 조성물 및 이의 용도
RU2725811C1 (ru) Антитела против 4-1bb человека и их применение
CN107530428B (zh) Icos的抗体
CN111138547A (zh) 针对cd19和cd3的同源二聚体型双特异性抗体及其制备方法和用途
JP2021508676A (ja) 抗ｔｉｇｉｔ抗体並びに治療剤及び診断剤としてのその使用
TWI802633B (zh) 針對pd-1之單域抗體及其變異體
TW201806972A (zh) 雙特異性結合蛋白
KR20170128234A (ko) Ror1에 특이적인 항체 및 키메라 항원 수용체
JP7448586B2 (ja) 抗ｉｃｏｓ抗体
KR20160006168A (ko) 인간화 항-cd134(ox40) 항체 및 이의 용도
JP2015508757A (ja) Ｍｉｃａ結合剤
JP2023517252A (ja) 新規抗ｌｉｌｒｂ４抗体および派生産物
CN111094982A (zh) 用于治疗和诊断癌症的tim-3拮抗剂
CN113330033A (zh) 白细胞免疫球蛋白样受体2中和性抗体
CA3198844A1 (en) Novel anti-lilrb2 antibodies and derivative products
CA3143087A1 (en) Antibodies and methods of use
CN111295395A (zh) 抗体和使用方法
KR20190117467A (ko) IFN-γ-유도성 조절 T 세포 전환가능 항암 (IRTCA) 항체 및 그의 용도
WO2024032700A1 (en) Anti-pvrig antibodies and methods of use
TW202417485A (zh) 抗ｐｖｒｉｇ抗體及使用方法
WO2023143478A1 (en) Novel anti-cd4 and anti-pd-l1 bispecific antibodies
US11787867B2 (en) Anti-GITR antibodies and uses thereof
JP7278623B2 (ja) 抗ｃｄ２７抗体およびその使用
RU2777573C2 (ru) Антитела против 4-1bb человека и их применение