TW202415409A - Msln抗體藥物複合體 - Google Patents

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Abstract

本發明涉及抗體藥物複合體，其中所述抗體為特異性結合MSLN的抗體或其抗原結合片段。本發明還涉及包含該抗體藥物複合體的藥物組合物以及利用該抗體藥物複合體及其藥物組合物治療癌症的方法。

Description

MSLN抗體藥物複合體
本發明屬於標靶療法領域，具體涉及抗體藥物複合體領域。
間皮素(mesothelin；MSLN)是一種細胞表面分子，作為71kD前驅物蛋白表現，並被進一步加工成40kD醣蛋白，即被細胞表面的醣基磷脂醯肌醇(glycophosphatidylinositol；GPI)錨定在細胞表面。MSLN在正常組織中的表現非常有限。它在沿著胸膜、心包及腹膜的間皮細胞中表現，在這些部位似乎在細胞黏附中發揮作用(Chang et al. (1996) PNAS 93:136-140)。可溶性切割的MSLN也被提出在巨核細胞刺激中發揮作用，但小鼠中的剔除並未顯示出任何發育缺陷，因此其生物學作用尚不清楚(Yamaguchi et al. (1994) J Biol Chem. 269(2):805-8; Bera et al. (2000) Mol Cell Biol. 20(8):2902-6)。
相反，MSLN在一些人類癌症中高度表現，包括幾乎所有間皮瘤及胰腺癌，以及大約70%的卵巢癌及50%的肺腺癌(Hassan及Ho (2008) Eur. J. Cancer 44:46-53; Miettinen及Sarlomo-Rikala (2003) Am. J. Surg. Pathol. 27:150-8; Ordonez (2003) Am. J. Surg. Pathol. 27:1418-1428; Ho et al. (2007) Clin. Cancer Res. 13:1571-5)。MSLN的高表現水準使其成為標靶療法的有吸引力的候選者，它在促進腫瘤增殖及侵襲方面發揮著重要作用(Servais et al. (2012) Clin. Cancer Res. 18(9):2478-2489)。
MSLN與MUC16相互作用，介導細胞黏附，在卵巢癌細胞腹膜植入中發揮重要作用，並增加胰腺癌細胞的運動性及侵襲性(Rump et al. (2004) J Biol Chem. 279(10):9190-8; Gubbels et al. (2006) Mol Cancer 5(1):50; Coehlo et al. Expert Rev Anticancer Ther. 18(2):177-186; Chen et al. (2013) Sci Rep. 3:1870)。尤其是胰腺腫瘤在患者感覺到任何疾病症狀之前往往進展太快，平均生存時間很短。這種預後很差，因為腫瘤通常無法(完全)手術切除，並且已經轉移。化療也不能顯著提高生存時間或治癒率。然而，儘管科學家們進行了多次嘗試，但單純的標靶MSLN的抗體依然在有效性上有所缺陷，從而並不能成為優秀的標靶治療手段。目前開發最快也是最著名的抗間皮素單株抗體(Amatuximab)，其在臨床實驗中的表現依然不盡如人意(Baldo andCecco (2017) Onco. Targets Ther. 10:5337-5353; Nicolaides et al. (2018) Cancer Biology & Therapy 19(7):622-630) 。
為進一步解決這一困境，抗體藥物複合體（antibody drug conjugate；ADC）被引入了MSLN標靶治療。較之於傳統抗體，針對MSLN的抗體藥物複合體因為同時具有抗體的標靶性以及小分子藥物的高效性，具有更佳的腫瘤殺傷療效。目前本領域中進展最快的抗體藥物複合體為Bayer開發的Anetumab ravtansine（雷星-阿奈妥單抗），其臨床I期資料展現了較好的安全性與有效性，目前正在多個MSLN高表現瘤種中進行試驗。因此，本領域對於針對MSLN的標靶療法存在迫切需要。然而近年來ADC藥物本身發展迅速，很多更佳的連接子-毒素被不斷的開發出來。而Anetumab ravtansine中使用的較為傳統的不可降解連接子以及DM4毒素都存在藥物毒性高、安全窗口窄、靶器官藥物有效釋放率較低等問題（WO 2010/124797 Al）。同時，由於MSLN本身會在近膜位點被多種蛋白酶剪切，從而產生游離MSLN（可溶性MSLN、sMSLN）（Mol Cancer Ther; 15(7) July 2016）。這部分游離的MSLN的序列與膜上的MSLN高度相似，因此會被大部分針對MSLN的治療性抗體所識別，包括Anetumab，Amatuximab。實驗證明，游離的MSLN會競爭性的與MSLN抗體結合，從而影響MSLN標靶治療的效果。
由此，本領域目前急需開發出一種更佳的針對MSLN的抗體藥物複合體，一方面能展示出更好的抗腫瘤療效，更佳的血漿穩定性；另一方面其抑制腫瘤效果受游離MSLN的影響較小。
本發明提供了一種抗MSLN抗體的藥物複合體以及其用於治療癌症的用途。
在第一方面，本發明提供了一種抗體藥物複合體，其為式(I)化合物或其互變異構體、立體異構體或藥學上可接受的鹽： Ab-[S-X-(Y) n-Z-E-D] q(I) 其中， Ab為特異性結合間皮素(MSLN)的抗體或其抗原結合片段； S為連接Ab及X的硫鍵； X選自3-10元環烷基、5-10元雜環基、C 6-10芳基或5-10元雜芳基； X任選地被1個、2個、3個、4個或5個R*取代； R*選自H、氘、鹵素、CN、NO 2、OH、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 2-6烯基或C 2-6炔基； Y為-Y 1-Y 2-Y 3-，Y經由Y 1與X相連，經由Y 3與Z相連； 其中， Y 1選自-C(O)-、-C(O)O-、-OC(O)-、-C(O)NH-、C 2-6烯基、C 2-6炔基、3-10元環烷基、5-10元雜環基、C6-10芳基或5-10元雜芳基； Y 2為鍵，或者為C 1-6亞烷基； Y 3選自-C(O)-、-OC(O)-或-NHC(O)-； Y任選地被1個、2個、3個、4個或5個R#取代； R#選自H、氘、鹵素、CN、NO 2、OH、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 2-6烯基或C 2-6炔基； Z為包含2至8個胺基酸的肽；較佳為二肽、三肽或四肽； E不存在，或者為任選地連接Z及D的間隔子單元； D為生物活性分子藥物或其衍生物 n選自0、1、2、3、4或5，較佳為0、1、2或3； q選自1至10的整數，較佳為8。
在一些實施方案中，所述抗體藥物複合體為式(II)化合物或其互變異構體、立體異構體或藥學上可接受的鹽： (II) 其中， Ab為抗MSLN抗體； R 1及R 2獨立地選自C 1-6烷基，較佳為C 1-4烷基； D為 、 或 ； q為選自1-10的整數，例如選自4、5、6、7、8、9或10，較佳為8。
在一些實施方案中，所述的抗體藥物複合體為以下化合物或其互變異構體、立體異構體或藥學上可接受的鹽： Ab為抗MSLN抗體； q為選自1-10的整數，例如選自4、5、6、7、8、9或10，較佳為8。
在一些實施方案中，所述的抗體藥物複合體為以下化合物或其互變異構體、立體異構體或藥學上可接受的鹽： Ab為抗MSLN抗體； q為選自1-10的整數，例如選自4、5、6、7、8、9或10，較佳為8。
在一些實施方案中，所述的抗體藥物複合體為以下化合物或其互變異構體、立體異構體或藥學上可接受的鹽： Ab為抗MSLN抗體； q為選自1-10的整數，例如選自4、5、6、7、8、9或10，較佳為8。
在一些實施方案中，所述的抗體藥物複合體為以下化合物或其互變異構體、立體異構體或藥學上可接受的鹽： Ab為抗MSLN抗體； q為選自1-10的整數，例如選自4、5、6、7、8、9或10，較佳為8。
在一些實施方案中，所述的抗體藥物複合體為以下化合物或其互變異構體、立體異構體或藥學上可接受的鹽： ， 其中，Ab為抗MSLN抗體； q為選自1-10的整數，例如選自4、5、6、7、8、9或10，較佳為8。
在一些實施方案中，本發明的抗體藥物複合體中的Ab為特異性結合間皮素(MSLN)的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，並且其中 (1) 所述VH包含具有序列識別號: 24所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 27所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (2) 所述VH包含具有序列識別號: 25所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 28所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (3) 所述VH包含具有序列識別號: 26所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 27所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (4) 所述VH包含具有序列識別號: 24所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 29所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (5) 所述VH包含具有序列識別號: 24所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 30所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (6) 所述VH包含具有序列識別號: 24所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 31所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (7) 所述VH包含具有序列識別號: 24所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 32所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (8) 所述VH包含具有序列識別號: 24所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 33所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (9) 所述VH包含具有序列識別號: 25所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 29所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (10) 所述VH包含具有序列識別號: 63所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 67所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (11) 所述VH包含具有序列識別號: 64所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 67所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (12) 所述VH包含具有序列識別號: 65所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 67所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (13) 所述VH包含具有序列識別號: 65所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 68所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (14) 所述VH包含具有序列識別號: 63所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 68所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (15) 所述VH包含具有序列識別號: 66所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 67所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (16) 所述VH包含具有序列識別號: 64所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 69所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (17) 所述VH包含具有序列識別號: 66所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 69所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (18) 所述VH包含具有序列識別號: 63所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 69所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3；或 (19) 所述VH包含具有序列識別號: 65所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 69所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3。
在一些實施方案中，本發明的抗體藥物複合體中的Ab為特異性結合間皮素(MSLN)的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中 (1) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 2所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 4所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 6所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 9所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 11所示的胺基酸序列，LCDR3包含   序列識別號: 13所示的胺基酸序列； (2) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 15所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 16所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 6所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 9所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 11所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 18所示的胺基酸序列； (3) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 15所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 17所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 6所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 9所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 11所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 13所示的胺基酸序列； (4) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 2所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 4所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 6所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 9所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 11所示的胺基酸序列，LCDR3包含   序列識別號: 19所示的胺基酸序列； (5) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 2所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 4所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 6所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 9所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 11所示的胺基酸序列，LCDR3包含   序列識別號: 20所示的胺基酸序列； (6) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 2所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 4所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 6所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 9所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 11所示的胺基酸序列，LCDR3包含   序列識別號: 21所示的胺基酸序列； (7) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 2所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 4所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 6所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 9所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 11所示的胺基酸序列，LCDR3包含   序列識別號: 22所示的胺基酸序列； (8) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 2所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 4所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 6所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 9所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 11所示的胺基酸序列，LCDR3包含   序列識別號: 23所示的胺基酸序列； (9) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 15所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 16所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 6所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 9所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 11所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 19所示的胺基酸序列； (10) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 45所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 47所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 49所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 52所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 54所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 56所示的胺基酸序列； (11) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 58所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 47所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 49所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 52所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 54所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 56所示的胺基酸序列； (12) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 58所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 59所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 49所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 52所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 54所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 56所示的胺基酸序列； (13) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 58所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 59所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 49所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 61所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 54所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 56所示的胺基酸序列； (14) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 45所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 47所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 49所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 61所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 54所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 56所示的胺基酸序列； (15) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 58所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 60所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 49所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 52所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 54所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 56所示的胺基酸序列； (16) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 58所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 47所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 49所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 62所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 54所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 56所示的胺基酸序列； (17) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 58所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 60所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 49所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 62所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 54所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 56所示的胺基酸序列； (18) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 45所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 47所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 49所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 62所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 54所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 56所示的胺基酸序列；或 (19) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 58所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 59所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 49所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 62所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 54所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 56所示的胺基酸序列。
在一些實施方案中，本發明的抗體藥物複合體中的Ab為特異性結合間皮素(MSLN)的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體包含VH及VL，其中 (1) 所述VH包含與序列識別號: 24具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 27具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (2) 所述VH包含與序列識別號: 25具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 28具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (3) 所述VH包含與序列識別號: 26具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 27具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (4) 所述VH包含與序列識別號: 24具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 29具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (5) 所述VH包含與序列識別號: 24具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 30具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (6) 所述VH包含與序列識別號: 24具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 31具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (7) 所述VH包含與序列識別號: 24具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 32具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (8) 所述VH包含與序列識別號: 24具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 33具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (9) 所述VH包含與序列識別號: 25具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 29具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (10) 所述VH包含與序列識別號: 63具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 67具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (11) 所述VH包含與序列識別號: 64具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 67具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (12) 所述VH包含與序列識別號: 65具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 67具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (13) 所述VH包含與序列識別號: 65具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 68具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (14) 所述VH包含與序列識別號: 63具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 68具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (15) 所述VH包含與序列識別號: 66具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 67具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (16) 所述VH包含與序列識別號: 64具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 69具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (17) 所述VH包含與序列識別號: 66具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 69具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (18) 所述VH包含與序列識別號: 63具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 69具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列；或 (19) 所述VH包含與序列識別號: 65具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 69具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列。
在一些實施方案中，本發明的抗體藥物複合體中的Ab為特異性結合間皮素(MSLN)的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體包含重鏈(HC)及輕鏈(LC)，並且其中： (1) 所述HC包含與序列識別號: 34具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 37具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (2) 所述HC包含與序列識別號: 35具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 38具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (3) 所述HC包含與序列識別號: 36具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 37具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (4) 所述HC包含與序列識別號: 34具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 39具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (5) 所述HC包含與序列識別號: 34具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 40具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (6) 所述HC包含與序列識別號: 34具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 41具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (7) 所述HC包含與序列識別號: 34具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 42具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (8) 所述HC包含與序列識別號: 34具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 43具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (9) 所述HC包含與序列識別號: 35具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 39具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (10) 所述HC包含與序列識別號: 70具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 74具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (11) 所述HC包含與序列識別號: 71具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 74具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (12) 所述HC包含與序列識別號: 72具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 74具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (13) 所述HC包含與序列識別號: 72具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 75具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (14) 所述HC包含與序列識別號: 70具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 75具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (15) 所述HC包含與序列識別號: 73具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 74具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (16) 所述HC包含與序列識別號: 71具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 76具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (17) 所述HC包含與序列識別號: 73具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 76具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (18) 所述HC包含與序列識別號: 70具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 76具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列；或 (19) 所述HC包含與序列識別號: 72具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 76具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列。
在一些實施方案中，本發明的抗體藥物複合體包含特異性結合間皮素(MSLN)的抗體，所述抗體是嵌合抗體、人源化抗體或人抗體。
在一些實施方案中，本發明的抗體藥物複合體包含特異性結合間皮素的抗原結合片段，其中所述抗原結合片段選自Fab、Fab’、F(ab') 2、Fd、Fd’、Fv、scFv及ds-scFv。
在一些實施方案中，本發明的抗體藥物複合體包含特異性結合間皮素的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體是單株抗體、雙特異性抗體或多特異性抗體。
在第二方面，本發明提供了一種藥物組合物，其包含本發明的抗體藥物複合體，以及任選的藥學上可接受的載體或賦形劑。
在一些實施方案中，本發明的藥物組合物還包含第二治療劑，所述第二治療劑選自化療劑、單株抗體藥物、雙/多特異性抗體藥物、重組蛋白藥物、核苷酸藥物（siRNA、反義寡核苷酸）、小分子藥物、免疫調節藥物及細胞治療藥物。
在第三方面，本發明提供了一種治療受試者中的癌症的方法，其包括向所述受試者施用有效量的本發明的抗體藥物複合體或本發明的藥物組合物。在一些實施方案中，所述癌症選自結腸癌、間皮瘤、卵巢癌、肺癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌、前列腺癌、鱗狀細胞癌及膽管癌。在一些實施方案中，本發明的方法還包括向所述受試者施用第二治療劑。在一些實施方案中，所述第二治療劑選自化療劑、單株抗體藥物、雙/多特異性抗體藥物、重組蛋白藥物、核苷酸藥物（siRNA、反義寡核苷酸）、小分子藥物、免疫調節藥物及細胞治療藥物。
在第四方面，本發明提供了本發明的抗體藥物複合體或本發明的藥物組合物，其用於治療癌症。在一些實施方案中，所述癌症選自結腸癌、間皮瘤、卵巢癌、肺癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌、前列腺癌、鱗狀細胞癌及膽管癌。在一些實施方案中，本發明的抗體或本發明的藥物組合物用於與第二治療劑組合使用。在一些實施方案中，所述第二治療劑選自化療劑、單株抗體藥物、雙/多特異性抗體藥物、重組蛋白藥物、核苷酸藥物（siRNA、反義寡核苷酸）、小分子藥物、免疫調節藥物及細胞治療藥物。
在第五方面，本發明提供了本發明的抗體藥物複合體或本發明的藥物組合物在製備用於治療癌症的藥物中的用途。在一些實施方案中，所述癌症選自結腸癌、間皮瘤、卵巢癌、肺癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌、前列腺癌、鱗狀細胞癌、及膽管癌。在一些實施方案中，所述藥物用於與第二治療劑組合使用。在一些實施方案中，所述第二治療劑選自化療劑、單株抗體藥物、雙/多特異性抗體藥物、重組蛋白藥物、核苷酸藥物（siRNA、反義寡核苷酸）、小分子藥物、免疫調節藥物及細胞治療藥物。
發明詳述 經由結合附圖對以下實施例的詳細描述，從下文中將更清楚地理解本發明的上述特徵及優點以及其其它特徵及優點。
本文參考附圖描述的實施方案是解釋性的、說明性的，並用於一般性地理解本發明。實施例不應被解釋為限制本發明的範圍。
定義
化學定義 下面更詳細地描述具體官能團及化學術語的定義。
當列出數值範圍時，既定包括每個值及在所述範圍內的子範圍。例如“C 1-6烷基”包括C 1、C 2、C 3、C 4、C 5、C 6、C 1-6、C 1-5、C 1-4、C 1-3、C 1-2、C 2-6、C 2-5、C 2-4、C 2-3、C 3-6、C 3-5、C 3-4、C 4-6、C 4-5及C 5-6烷基。
“C 1-6烷基”是指具有1至6個碳原子的直鏈或支鏈飽和烴基團。在一些實施方案中，C 1-4烷基及C 1-2烷基是較佳的。C 1-6烷基的例子包括：甲基(C 1)、乙基(C 2)、正丙基(C 3)、異丙基(C 3)、正丁基(C 4)、叔丁基(C 4)、仲丁基(C 4)、異丁基(C 4)、正戊基(C 5)、3-戊基(C 5)、戊基(C 5)、新戊基(C 5)、3-甲基-2-丁基(C 5)、叔戊基(C 5)及正己基(C 6)。術語“C 1-6烷基”還包括雜烷基，其中一或多個(例如，1、2、3或4個)碳原子被雜原子(例如，氧、硫、氮、硼、矽、磷)替代。烷基基團可以被一或多個取代基任選取代，例如，被1至5個取代基、1至3個取代基或1個取代基取代。通常烷基縮寫包括：Me(-CH 3)、Et(-CH 2CH 3)、iPr(-CH(CH 3) 2)、nPr(-CH 2CH 2CH 3)、n-Bu(-CH 2CH 2CH 2CH 3)或i-Bu(-CH 2CH(CH 3) 2)。
“C 2-6烯基”是指具有2至6個碳原子及至少一個碳碳雙鍵的直鏈或支鏈烴基團。在一些實施方案中，C 2-4烯基是較佳的。C 2-6烯基的例子包括：乙烯基(C 2)、1-丙烯基(C 3)、2-丙烯基(C 3)、1-丁烯基(C 4)、2-丁烯基(C 4)、丁二烯基(C 4)、戊烯基(C 5)、戊二烯基(C 5)、己烯基(C 6)，等等。術語“C 2-6烯基”還包括雜烯基，其中一或多個(例如，1、2、3或4個)碳原子被雜原子(例如，氧、硫、氮、硼、矽、磷)替代。烯基基團可以被一或多個取代基任選取代，例如，被1至5個取代基、1至3個取代基或1個取代基取代。
“C 2-6炔基”是指具有2至6個碳原子、至少一個碳-碳三鍵以及任選地一個或多個碳-碳雙鍵的直鏈或支鏈烴基團。在一些實施方案中，C 2-4炔基是較佳的。C 2-6炔基的例子包括但不限於：乙炔基(C 2)、1-丙炔基(C 3)、2-丙炔基(C 3)、1-丁炔基(C 4)、2-丁炔基(C 4)，戊炔基(C 5)、己炔基(C 6)，等等。術語“C 2-6炔基”還包括雜炔基，其中一或多個(例如，1、2、3或4個)碳原子被雜原子(例如，氧、硫、氮、硼、矽、磷)替代。炔基基團可以被一或多個取代基任選取代，例如，被1至5個取代基、1至3個取代基或1個取代基取代。
“C 0-6亞烷基”是指化學鍵或“C 1-6亞烷基”。
“C 1-6亞烷基”是指除去C 1-6烷基的另一個氫而形成的二價基團，並且可以是取代或未取代的。在一些實施方案中，C 1-4亞烷基、C 2-4亞烷基及C 1-3亞烷基是較佳的。未取代的所述亞烷基包括但不限於：亞甲基(-CH 2-)、亞乙基(-CH 2CH 2-)、亞丙基(-CH 2CH 2CH 2-)、亞丁基(-CH 2CH 2CH 2CH 2-)、亞戊基(-CH 2CH 2CH 2CH 2CH 2-)、亞己基(-CH 2CH 2CH 2CH 2CH 2CH 2-)，等等。示例性的取代的所述亞烷基，例如，被一個或多個烷基(甲基)取代的所述亞烷基，包括但不限於：取代的亞甲基(-CH(CH 3)-、-C(CH 3) 2-)、取代的亞乙基(-CH(CH 3)CH 2-、-CH 2CH(CH 3)-、-C(CH 3) 2CH 2-、-CH 2C(CH 3) 2-)、取代的亞丙基(-CH(CH 3)CH 2CH 2-、-CH 2CH(CH 3)CH 2-、-CH 2CH 2CH(CH 3)-、-C(CH 3) 2CH 2CH 2-、-CH 2C(CH 3) 2CH 2-、-CH 2CH 2C(CH 3) 2-)，等等。
“鹵代”或“鹵素”是指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)及碘(I)。
因此，“C 1-6鹵代烷基”是指上述“C 1-6烷基”，其被一個或多個鹵素基團取代。在一些實施方案中，C 1-4鹵代烷基是特別較佳的，更佳選C 1-2鹵代烷基。示例性的所述鹵代烷基包括但不限於：-CF 3、-CH 2F、-CHF 2、-CHFCH 2F、-CH 2CHF 2、-CF 2CF 3、-CCl 3、-CH 2Cl、-CHCl 2、2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基，等等。鹵代烷基基團可以在任何可用的連接點上被取代，例如，1至5個取代基、1至3個取代基或1個取代基。
“C 3-10環烷基”是指具有3至10個環碳原子及零個雜原子的非芳香環烴基團。在一些實施方案中，“C 3-10環烷基”是飽和的環。在另一些實施方案中，“C 3-10環烷基”可以是不飽和的環，例如包括1個、2個、3個或更多不飽和鍵，例如烯鍵及炔鍵。在一些實施方案中，C 3-7環烷基及C 3-6環烷基是特別較佳的，更佳選C 5-6環烷基。環烷基還包括其中上述環烷基環與一個或多個芳基或雜芳基稠合的環體系，其中連接點在環烷基環上，且在這樣的情況中，碳的數目繼續表示環烷基體系中的碳的數目。示例性的所述環烷基包括但不限於：環丙基(C 3)、環丙烯基(C 3)、環丁基(C 4)、環丁烯基(C 4)、環戊基(C 5)、環戊烯基(C 5)、環己基(C 6)、環己烯基(C 6)、環已二烯基(C 6)、環庚基(C 7)、環庚烯基(C 7)、環庚二烯基(C 7)、環庚三烯基(C 7)，等等。環烷基基團可以被一或多個取代基任選取代，例如，被1至5個取代基、1至3個取代基或1個取代基取代。
“3-10元雜環基”是指具有環碳原子及1至5個環雜原子的3至10元非芳香環系的基團，其中，每個雜原子獨立地選自氮、氧、硫、硼、磷及矽。在包含一個或多個氮原子的雜環基中，只要化合價允許，連接點可為碳或氮原子。在一些實施方案中，較佳5-10元雜環基，其為具有環碳原子及1至5個環雜原子的3至10元非芳香環系；在一些實施方案中，較佳3-7元雜環基，其為具有環碳原子及1至4個環雜原子的3至7元非芳香環系；較佳3-6元雜環基，其為具有環碳原子及1至3個環雜原子的3至6元非芳香環系；較佳4-8元雜環基，其為具有環碳原子及1至3個環雜原子的4至8元非芳香環系；更佳選5-6元雜環基，其為具有環碳原子及1至3個環雜原子的5至6元非芳香環系。雜環基還包括其中上述雜環基環與一個或多個環烷基稠合的環體系，其中連接點在環烷基環上，或其中上述雜環基環與一個或多個芳基或雜芳基稠合的環體系，其中連接點在雜環基環上；且在這樣的情況下，環成員的數目繼續表示在雜環基環體系中環成員的數目。示例性的包含一個雜原子的3元雜環基包括但不限於：氮雜環丙烷基、氧雜環丙烷基、硫雜環丙烷基(thiorenyl)。示例性的含有一個雜原子的4元雜環基包括但不限於：氮雜環丁烷基、氧雜環丁烷基及硫雜環丁烷基。示例性的含有一個雜原子的5元雜環基包括但不限於：四氫呋喃基、二氫呋喃基、四氫噻吩基、二氫噻吩基、吡咯烷基、二氫吡咯基及吡咯基-2,5-二酮。示例性的包含兩個雜原子的5元雜環基包括但不限於：二氧雜環戊烷基、氧硫雜環戊烷基(oxaslfuranyl)、二硫雜環戊烷基(disulfuranyl)及噁唑烷-2-酮。示例性的包含三個雜原子的5元雜環基包括但不限於：三唑啉基、噁二唑啉基及噻二唑啉基。示例性的包含一個雜原子的6元雜環基包括但不限於：呱啶基、四氫吡喃基、二氫吡啶基及硫雜環己烷基(thianyl)。示例性的包含兩個雜原子的6元雜環基包括但不限於：呱嗪基、嗎啉基、二硫雜環己烷基、二噁烷基。示例性的包含三個雜原子的6元雜環基包括但不限於：六氫三嗪基(triazinanyl)。示例性的含有一個雜原子的7元雜環基包括但不限於：氮雜環庚烷基、氧雜環庚烷基及硫雜環庚烷基。示例性的與C 6芳基環稠合的5元雜環基(在本文中也稱作5,6-雙環雜環基)包括但不限於：二氫吲哚基、異二氫吲哚基、二氫苯並呋喃基、二氫苯並噻吩基、苯並噁唑啉酮基，等等。示例性的與C 6芳基環稠合的6元雜環基(本文還指的是6,6-雙環雜環基)包括但不限於：四氫喹啉基、四氫異喹啉基，等等。雜環基基團可以被一或多個取代基任選取代，例如，被1至5個取代基、1至3個取代基或1個取代基取代。
“C 6-10芳基”是指具有6-10個環碳原子及零個雜原子的單環或多環的(例如，雙環) 4n+2芳族環體系(例如，具有以環狀排列共用的6或10個π電子)的基團。在一些實施方案中，芳基具有六個環碳原子(“C 6芳基”；例如，苯基)。在一些實施方案中，芳基具有十個環碳原子(“C 10芳基”；例如，萘基，例如，1-萘基及2-萘基)。芳基還包括其中上述芳基環與一個或多個環烷基或雜環基稠合的環系統，而且連接點在所述芳基環上，在這種情況下，碳原子的數目繼續表示所述芳基環系統中的碳原子數目。芳基基團可以被一或多個取代基任選取代，例如，被1至5個取代基、1至3個取代基或1個取代基取代。
“5-10元雜芳基”是指具有環碳原子及1-4個環雜原子的5-10元單環或雙環的4n+2芳族環體系(例如，具有以環狀排列共用的6或10個π電子)的基團，其中每個雜原子獨立地選自氮、氧及硫。在含有一個或多個氮原子的雜芳基中，只要化合價允許，連接點可以是碳或氮原子。雜芳基雙環系統在一個或兩個環中可以包括一個或多個雜原子。雜芳基還包括其中上述雜芳基環與一個或多個環烷基或雜環基稠合的環系統，而且連接點在所述雜芳基環上，在這種情況下，碳原子的數目繼續表示所述雜芳基環系統中的碳原子數目。在一些實施方案中，“5-10元雜芳基”是飽和的環。在另一些實施方案中，“5-10元雜芳基”可以是不飽和的環，例如包括1個、2個、3個或更多不飽和鍵，例如烯鍵及炔鍵。在一些實施方案中，5-6元雜芳基是特別較佳的，其為具有環碳原子及1-4個環雜原子的5-6元單環或雙環的4n+2芳族環體系。示例性的含有一個雜原子的5元雜芳基包括但不限於：吡咯基、呋喃基及噻吩基。示例性的含有兩個雜原子的5元雜芳基包括但不限於：咪唑基、吡唑基、噁唑基、異噁唑基、噻唑基及異噻唑基。示例性的含有三個雜原子的5元雜芳基包括但不限於：三唑基、噁二唑基(例如，1,2,4-噁二唑基)及噻二唑基。示例性的含有四個雜原子的5元雜芳基包括但不限於：四唑基。示例性的含有一個雜原子的6元雜芳基包括但不限於：吡啶基。示例性的含有兩個雜原子的6元雜芳基包括但不限於：噠嗪基、嘧啶基及吡嗪基。示例性的含有三個或四個雜原子的6元雜芳基分別包括但不限於：三嗪基及四嗪基。示例性的含有一個雜原子的7元雜芳基包括但不限於：氮雜環庚三烯基、氧雜環庚三烯基及硫雜環庚三烯基。示例性的5,6-雙環雜芳基包括但不限於：吲哚基、異吲哚基、吲唑基、苯並三唑基、苯並噻吩基、異苯並噻吩基、苯並呋喃基、苯並異呋喃基、苯並咪唑基、苯並噁唑基、苯並異噁唑基、苯並噁二唑基、苯並噻唑基、苯並異噻唑基、苯並噻二唑基、茚嗪基及嘌呤基。示例性的6,6-雙環雜芳基包括但不限於：萘啶基、喋啶基、喹啉基、異喹啉基、噌琳基、喹喔啉基、酞嗪基及喹唑啉基。雜芳基基團可以被一或多個取代基任選取代，例如，被1至5個取代基、1至3個取代基或1個取代基取代。
上文定義的烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基及雜芳基等基團除去另一個氫而形成的二價基團統稱為“亞基”。環烷基、雜環基、芳基及雜芳基等成環的基團統稱為“環基”。
本文定義的烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基及雜芳基等為任選取代的基團。
示例性的碳原子上的取代基包括但不局限於：鹵素、-CN、-NO 2、-N 3、-SO 2H、-SO 3H、-OH、-OR aa、-ON(R bb) 2、-N(R bb) 2、-N(R bb) 3 +X -、-N(OR cc)R bb、-SH、-SR aa、-SSR cc、-C(=O)R aa、-CO 2H、-CHO、-C(OR cc) 2、-CO 2R aa、-OC(=O)R aa、-OCO 2R aa、-C(=O)N(R bb) 2、-OC(=O)N(R bb) 2、-NR bbC(=O)R aa、-NR bbCO 2R aa、-NR bbC(=O)N(R bb) 2、-C(=NR bb)R aa、-C(=NR bb)OR aa、-OC(=NR bb)R aa、-OC(=NR bb)OR aa、-C(=NR bb)N(R bb) 2、-OC(=NR bb)N(R bb) 2、-NR bbC(=NR bb)N(R bb) 2、-C(=O)NR bbSO 2R aa、-NR bbSO 2R aa、-SO 2N(R bb) 2、-SO 2R aa、-SO 2OR aa、-OSO 2R aa、-S(=O)R aa、-OS(=O)R aa、-Si(R aa) 3、-OSi(R aa) 3、-C(=S)N(R bb) 2、-C(=O)SR aa、-C(=S)SR aa、-SC(=S)SR aa、-SC(=O)SR aa、-OC(=O)SR aa、-SC(=O)OR aa、-SC(=O)R aa、-P(=O) 2R aa、-OP(=O) 2R aa、-P(=O)(R aa) 2、-OP(=O)(R aa) 2、-OP(=O)(OR cc) 2、-P(=O) 2N(R bb) 2、-OP(=O) 2N(R bb) 2、-P(=O)(NR bb) 2、-OP(=O)(NR bb) 2、-NR bbP(=O)(OR cc) 2、-NR bbP(=O)(NR bb) 2、-P(R cc) 2、-P(R cc) 3、-OP(R cc) 2、-OP(R cc) 3、-B(R aa) 2、-B(OR cc) 2、-BR aa(OR cc)、烷基、鹵代烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基及雜芳基，其中，每個烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基及雜芳基獨立地被0、1、2、3、4或5個R dd基團取代； 或者在碳原子上的兩個偕氫被基團=O、=S、=NN(R bb) 2、=NNR bbC(=O)R aa、=NNR bbC(=O)OR aa、=NNR bbS(=O) 2R aa、=NR bb或=NOR cc取代； R aa的每個獨立地選自烷基、鹵代烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基及雜芳基，或者兩個R aa基團結合以形成雜環基或雜芳基環，其中，每個烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基及雜芳基獨立地被0、1、2、3、4或5個R dd基團取代； R bb的每個獨立地選自：氫、-OH、-OR aa、-N(R cc) 2、-CN、-C(=O)R aa、-C(=O)N(R cc) 2、-CO 2R aa、-SO 2R aa、-C(=NR cc)OR aa、-C(=NR cc)N(R cc) 2、-SO 2N(R cc) 2、-SO 2R cc、-SO 2OR cc、-SOR aa、-C(=S)N(R cc) 2、-C(=O)SR cc、-C(=S)SR cc、-P(=O) 2R aa、-P(=O)(R aa) 2、-P(=O) 2N(R cc) 2、-P(=O)(NR cc) 2、烷基、鹵代烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基及雜芳基，或者兩個R bb基團結合以形成雜環基或雜芳基環，其中，每個烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基及雜芳基獨立地被0、1、2、3、4或5個R dd基團取代； R cc的每個獨立地選自氫、烷基、鹵代烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基及雜芳基，或者兩個R cc基團結合以形成雜環基或雜芳基環，其中，每個烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基及雜芳基獨立地被0、1、2、3、4或5個R dd基團取代； R dd的每個獨立地選自：鹵素、-CN、-NO 2、-N 3、-SO 2H、-SO 3H、-OH、-OR ee、-ON(R ff) 2、-N(R ff) 2、-N(R ff) 3 +X -、-N(OR ee)R ff、-SH、-SR ee、-SSR ee、-C(=O)R ee、-CO 2H、-CO 2R ee、-OC(=O)R ee、-OCO 2R ee、-C(=O)N(R ff) 2、-OC(=O)N(R ff) 2、-NR ffC(=O)R ee、-NR ffCO 2R ee、-NR ffC(=O)N(R ff) 2、-C(=NR ff)OR ee、-OC(=NR ff)R ee、-OC(=NR ff)OR ee、-C(=NR ff)N(R ff) 2、-OC(=NR ff)N(R ff) 2、-NR ffC(=NR ff)N(R ff) 2、-NR ffSO 2R ee、-SO 2N(R ff) 2、-SO 2R ee、-SO 2OR ee、-OSO 2R ee、-S(=O)R ee、-Si(R ee) 3、-OSi(R ee) 3、-C(=S)N(R ff) 2、-C(=O)SR ee、-C(=S)SR ee、-SC(=S)SR ee、-P(=O) 2R ee、-P(=O)(R ee) 2、-OP(=O)(R ee) 2、-OP(=O)(OR ee) 2、烷基、鹵代烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基，其中，每個烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基及雜芳基獨立地被0、1、2、3、4或5個R gg基團取代，或者兩個偕R dd取代基可結合以形成=O或=S； R ee的每個獨立地選自烷基、鹵代烷基、烯基、炔基、環烷基、芳基、雜環基及雜芳基，其中，每個烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基及雜芳基獨立地被0、1、2、3、4或5個R gg基團取代； R ff的每個獨立地選自氫、烷基、鹵代烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基及雜芳基，或者兩個R ff基團結合形成雜環基或雜芳基環，其中，每個烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基及雜芳基獨立地被0、1、2、3、4或5個R gg基團取代； R gg的每個獨立地是：鹵素、-CN、-NO 2、-N 3、-SO 2H、-SO 3H、-OH、-OC 1-6烷基、-ON(C 1-6烷基) 2、-N(C 1-6烷基) 2、-N(C 1-6烷基) 3 +X -、-NH(C 1-6烷基) 2 +X -、-NH 2(C 1-6烷基) +X -、-NH 3 +X -、-N(OC 1-6烷基)(C 1-6烷基)、-N(OH)(C 1-6烷基)、-NH(OH)、-SH、-SC 1-6烷基、-SS(C 1-6烷基)、-C(=O)(C 1-6烷基)、-CO 2H、-CO 2(C 1-6烷基)、-OC(=O)(C 1-6烷基)、-OCO 2(C 1-6烷基)、-C(=O)NH 2、-C(=O)N(C 1-6烷基) 2、-OC(=O)NH(C 1-6烷基)、-NHC(=O)(C 1-6烷基)、-N(C 1-6烷基)C(=O)(C 1-6烷基)、-NHCO 2(C 1-6烷基)、-NHC(=O)N(C 1-6烷基) 2、-NHC(=O)NH(C 1-6烷基)、-NHC(=O)NH 2、-C(=NH)O(C 1-6烷基)、-OC(=NH)(C 1-6烷基)、-OC(=NH)OC 1-6烷基、-C(=NH)N(C 1-6烷基) 2、-C(=NH)NH(C 1-6烷基)、-C(=NH)NH 2、-OC(=NH)N(C 1-6烷基) 2、-OC(NH)NH(C 1-6烷基)、-OC(NH)NH 2、-NHC(NH)N(C 1-6烷基) 2、-NHC(=NH)NH 2、-NHSO 2(C 1-6烷基)、-SO 2N(C 1-6烷基) 2、-SO 2NH(C 1-6烷基)、-SO 2NH 2、-SO 2C 1-6烷基、-SO 2OC 1-6烷基、-OSO 2C 1-6烷基、-SOC 1-6烷基、-Si(C 1-6烷基) 3、-OSi(C 1-6烷基) 3、-C(=S)N(C 1-6烷基) 2、C(=S)NH(C 1-6烷基)、C(=S)NH 2、-C(=O)S(C 1-6烷基)、-C(=S)SC 1-6烷基、-SC(=S)SC 1-6烷基、-P(=O) 2(C 1-6烷基)、-P(=O)(C 1-6烷基) 2、-OP(=O)(C 1-6烷基) 2、-OP(=O)(OC 1-6烷基) 2、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、C 3-C 7環烷基、C 6-C 10芳基、C 3-C 7雜環基、C 5-C 10雜芳基；或者兩個偕R gg取代基可結合形成=O或=S；其中，X -為反離子。
示例性的氮原子上取代基包括但不局限於：氫、-OH、-OR aa、-N(R cc) 2、-CN、-C(=O)R aa、-C(=O)N(R cc) 2、-CO 2R aa、-SO 2R aa、-C(=NR bb)R aa、-C(=NR cc)OR aa、-C(=NR cc)N(R cc) 2、-SO 2N(R cc) 2、-SO 2R cc、-SO 2OR cc、-SOR aa、-C(=S)N(R cc) 2、-C(=O)SR cc、-C(=S)SR cc、-P(=O) 2R aa、-P(=O)(R aa) 2、-P(=O) 2N(R cc) 2、-P(=O)(NR cc) 2、烷基、鹵代烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基及雜芳基，或者連接至氮原子的兩個R cc基團結合形成雜環基或雜芳基環，其中，每個烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基及雜芳基獨立地被0、1、2、3、4或5個R dd基團取代，且其中R aa、R bb、R cc及R dd如上所述。
其他定義 在本說明書的描述中，參考術語“一個實施方案”、“一些實施方案”、“示例”、“具體示例”、或“一些示例”等的描述意指結合該實施例或示例描述的具體特徵、結構、材料或者特點包含於本發明的至少一個實施方案或示例中。在本說明書中，對上述術語的示意性表述不必須針對的是相同的實施方案或示例。而且，描述的具體特徵、結構、材料或者特點可以在任一個或多個實施方案或示例中以合適的方式結合。此外，在不相互矛盾的情況下，發明所屬技術領域中具有通常知識者可以將本說明書中描述的不同實施方案或示例以及不同實施方案或示例的特徵進行結合及組合。
除非另有說明或者上下文中有明顯的衝突，本文所使用的冠詞“一”、“一個(種)”及“所述”旨在包括“至少一個”或 “一個或多個”。因此，本文所使用的這些冠詞是指一個或多於一個(即至少一個)賓語的冠詞。例如，“一組分”指一個或多個組分，即可能有多於一個的組分被考慮在所述實施方案的實施方式中採用或使用。
除非另有指示或定義，否則術語“包含”及其變體(如“包括”及“具有”)應理解為包含所述元素或步驟或一組元素或步驟，但不排除任何其他元素或步驟或其它組的元素或步驟。術語“包含”涵蓋“包括”以及“由…組成”的含義，例如，“包含”X的組合物可以排他性地僅由X組成，或者可以包括額外的成分，例如該組合物可以由X+Y組成。
關於數值x的術語“約”是可選的，並且表示例如x+10%或x±5%。
“立體異構體”是指具有相同化學構造，但原子或基團在空間上排列方式不同的化合物。立體異構體包括對映異構體、非對映異構體、構象異構體(旋轉異構體)、幾何異構體(順/反)異構體、阻轉異構體，等等。
“掌性”是具有與其鏡像不能重疊性質的分子；而“非掌性”是指與其鏡像可以重疊的分子。
“對映異構體”是指一個化合物的兩個不能重疊但互成鏡像關係的異構體。
“非對映異構體”是指有兩個或多個掌性中性並且其分子不互為鏡像的立體異構體。非對映異構體具有不同的物理性質，如熔點、沸點、光譜性質及反應性。非對映異構體混合物可經由高分辨分析操作如電泳及層析，例如HPLC來分離。
本發明所使用的立體化學定義及規則一般遵循S.P.Parker，Ed.，McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill Book Company，New York；and Eliel，E.and Wilen，S.，“Stereochemistry of Organic Compounds”，John Wiley & Sons，Inc.，New York，1994。
許多有機化合物以光學活性形式存在，即它們具有使平面偏振光的平面發生旋轉的能力。在描述光學活性化合物時，使用首碼D及L或 R及 S來表示分子關於其一個或多個掌性中心的絕對構型。首碼 d及 l或(+)及(-)是用於指定化合物所致平面偏振光旋轉的符號，其中(-)或 l表示化合物是左旋的。首碼為(+) 或 d的化合物是右旋的。一種具體的立體異構體是對映異構體，這種異構體的混合物稱作對映異構體混合物。對映異構體的50:50 混合物稱為外消旋混合物或外消旋體，當在化學反應或過程中沒有立體選擇性或立體特異性時，可出現這種情況。
本發明公開化合物的任何不對稱原子(例如，碳等)都可以以外消旋或對映體富集的形式存在，例如( R)-、( S)-或( R, S)-構型形式存在。在某些實施方案中，各不對稱原子在( R)-或( S)-構型方面具有至少50%對映體過量，至少60%對映體過量，至少70%對映體過量，至少80%對映體過量，至少90%對映體過量，至少95%對映體過量，或至少99%對映體過量。
依據起始物料及方法的選擇，本發明化合物可以以可能的異構體中的一個或它們的混合物，例如外消旋體及非對應異構體混合物(這取決於不對稱碳原子的數量)的形式存在。光學活性的 ( R)-或( S)-異構體可使用掌性合成子或掌性試劑製備，或使用通常技術拆分。如果化合物含有一個雙鍵，取代基可能為E或Z構型；如果化合物中含有二取代的環烷基，環烷基的取代基可能有順式或反式構型。
所得的任何立體異構體的混合物可以依據組分物理化學性質上的差異被分離成純的或基本純的幾何異構體，對映異構體，非對映異構體，例如，經由層析法及/或分步結晶法。
可以用已知的方法將任何所得終產物或中間體的外消旋體經由發明所屬技術領域中具有通常知識者熟悉的方法拆分成光學對映體，如，經由對獲得的其非對映異構的鹽進行分離。外消旋的產物也可以經由掌性層析來分離，如，使用掌性吸附劑的高效液相層析(HPLC)。特別地，對映異構體可以經由不對稱合成製備，例如，可參考Jacques, et al., Enantiomers, Racemates及Resolutions (Wiley Interscience, New York, 1981)； Principlesof Asymmetric Synthesis(2 ndEd. Robert E. Gawley, Jeffrey Aubé, Elsevier, Oxford, UK, 2012)；Eliel, E.L. Stereochemistry of Carbon Compounds (McGraw-Hill, NY, 1962)；Wilen, S.H. Tables of Resolving Agents及Optical Resolutions p. 268 (E.L. Eliel, Ed., Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame, IN 1972)；Chiral Separation Techniques: A Practical Approach (Subramanian, G. Ed., Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim, Germany, 2007)。
術語“互變異構體”或“互變異構形式”是指具有不同能量的可經由低能障(low energy barrier) 互相轉化的結構異構體。若互變異構是可能的 (如在溶液中)，則可以達到互變異構體的化學平衡。例如，質子互變異構體(protontautomer) (也稱為質子轉移互變異構體 (prototropic tautomer)) 包括經由質子遷移來進行的互相轉化，如酮-烯醇異構化及亞胺-烯胺異構化。價鍵互變異構體(valence tautomer)包括經由一些成鍵電子的重組來進行的互相轉化。酮-烯醇互變異構的具體實例是戊烷-2,4-二酮及4-羥基戊-3-烯-2-酮互變異構體的互變。互變異構的另一個實例是酚-酮互變異構。酚-酮互變異構的一個具體實例是吡啶-4-醇及吡啶-4(1 H)-酮互變異構體的互變。除非另外指出，本發明化合物的所有互變異構體形式都在本發明的範圍之內。
本發明所使用的“藥學上可接受的鹽”是指本發明的化合物的有機鹽及無機鹽。藥學上可接受的鹽在所屬領域是為我們所熟知的，如文獻：S. M. Berge et al., describe pharmaceutically acceptable salts in detail in J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66: 1-19. 所記載的。藥學上可接受的無毒的酸形成的鹽包括，但並不限於，與胺基基團反應形成的無機酸鹽有鹽酸鹽，氫溴酸鹽，磷酸鹽，硫酸鹽，高氯酸鹽，及有機酸鹽如乙酸鹽，草酸鹽，馬來酸鹽，酒石酸鹽，檸檬酸鹽，琥珀酸鹽，丙二酸鹽，或經由書籍文獻上所記載的其他方法如離子交換法來得到這些鹽。其他藥學上可接受的鹽包括己二酸鹽，藻酸鹽，抗壞血酸鹽，天冬胺酸鹽，苯磺酸鹽，苯甲酸鹽，重硫酸鹽，硼酸鹽，丁酸鹽，樟腦酸鹽，樟腦磺酸鹽，環戊基丙酸鹽，二葡萄糖酸鹽，十二烷基硫酸鹽，乙磺酸鹽，甲酸鹽，反丁烯二酸鹽，葡庚糖酸鹽，甘油磷酸鹽，葡萄糖酸鹽，半硫酸鹽，庚酸鹽，己酸鹽，氫碘酸鹽，2-羥基-乙磺酸鹽，乳糖醛酸鹽，乳酸鹽，月桂酸鹽，月桂基硫酸鹽，蘋果酸鹽，丙二酸鹽，甲磺酸鹽，2-萘磺酸鹽，煙酸鹽，硝酸鹽，油酸鹽，棕櫚酸鹽，撲酸鹽，果膠酸鹽，過硫酸鹽，3-苯基丙酸鹽，苦味酸鹽，特戊酸鹽，丙酸鹽，硬脂酸鹽，硫氰酸鹽，對甲苯磺酸鹽，十一酸鹽，戊酸鹽，等等。經由適當的鹼得到的鹽包括鹼金屬，鹼土金屬，銨及N +(C 1-C 4烷基) 4的鹽。本發明也擬構思了任何所包含N的基團的化合物所形成的季銨鹽。水溶性或油溶性或分散產物可以經由季銨化作用得到。鹼金屬或鹼土金屬鹽包括鈉，鋰，鉀，鈣，鎂，等等。藥學上可接受的鹽進一步包括適當的、無毒的銨，季銨鹽及抗平衡離子形成的胺陽離子，如鹵化物，氫氧化物，羧化物，硫酸化物，磷酸化物，硝酸化物，C 1-8磺酸化物及芳香磺酸化物。
除非另有指示或定義，否則所使用的所有術語具有其在本領域中通常的含義，這對發明所屬技術領域中具有通常知識者來說是清楚的。例如，參考標準手冊，如Leuenberger, H.G.W, Nagel, B.及Klbl, H. eds., "A multilingual glossary of biotechnological terms: (IUPAC Recommendations)", Helvetica Chimica Acta (1995), CH-4010 Basel, Switzerland; Sambrook et al, "Molecular Cloning: A Laboratory Manual" (2nd Ed.), Vols. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989); F. Ausubel et al, eds., "Current protocols in molecular biology", Green Publishing及Wiley InterScience, New York (1987); Roitt et al., "Immunology (6th Ed.), Mosby/Elsevier, Edinburgh (2001);及Janeway et al., "Immunobiology" (6th Ed.), Garland Science Publishing/Churchill Livingstone, New York (2005)。
本發明所使用的術語“受試者”是指動物。典型地所述動物是哺乳動物。受試者，例如也指靈長類動物 (例如人類，男性或女性)、牛、綿羊、山羊、馬、犬、貓、兔、大鼠、小鼠、魚、鳥等。在某些實施方案中，所述受試者是靈長類動物。在其他實施方案中，所述受試者是人。
本發明所使用的術語“患者”是指人(包括成人及兒童)或者其他動物。在一些實施方案中，“患者”是指人。
術語“抗體藥物複合體”、“抗體-藥物複合體”、“抗體複合體”、“複合體”、“免疫複合體”及“ADC”可以互換使用，是指共價連接至藥物的抗體或其抗原結合片段。所述藥物通常為例如小分子藥物、毒素、細胞毒性劑、治療劑等。
如本文所用，術語“抗體”是指能夠特異性結合特定抗原的免疫球蛋白分子。抗體通常包括重鏈及輕鏈，重鏈包含重鏈可變區及重鏈恆定區，輕鏈包含輕鏈可變區及輕鏈恆定區。抗體重鏈及輕鏈的可變區包含與抗原相互作用的結合域。抗體的恆定區可介導免疫球蛋白與宿主組織或因子結合，宿主組織或因子包括免疫系統的多種細胞(如效應細胞)及補體系統的成分(如C1q)。大多數抗體具有重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，它們共同構成抗體中與抗原結合的部分。
“輕鏈可變區”(VL)或“重鏈可變區”(VH)均包含被三個“互補決定區”或“CDR”間隔的四個“框架”區。框架區用於對齊CDR以使CDR與抗原表位特異性結合。CDR包括主要負責抗原結合的胺基酸殘基。從胺基末端到羧基末端，VL及VH結構域均包含以下框架(FR)區及CDR區：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4。VL域的CDR1、CDR2及CDR3在本文中也分別稱為LCDR1、LCDR2及LCDR3；VH域的CDR1、CDR2及CDR3在本文中也分別稱為HCDR1、HCDR2及HCDR3。
對每個VL及VH域的胺基酸分配符合CDR的任何通常定義。通常定義包括Kabat定義(Kabat，Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1987及1991))、Chothia定義(Chothia & Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917, 1987; Chothia et al., Nature 342:878-883, 1989)；Chothia-Kabat CDR的複合(也稱為Chothia及Kabat組合CDR)，其中每個CDR是Chothia CDR及Kabat CDR的複合；AbM定義，其由牛津分子抗體建模軟體使用；以及Martin等人的接觸定義(以上通常CDR定義系統參見world wide web bioinfo.org.uk/abs)。Kabat提供了一種廣泛使用的編號系統(Kabat編號系統)，其中不同重鏈之間的對應殘基或不同輕鏈之間的對應殘基被分配相同的編號。
本發明涉及根據這些編號系統中的任何一個定義的CDR，儘管較佳實施方案涉及Chothia及Kabat組合定義的CDR。
表1. 本發明的抗體的CDR定義方法(參見http://bioinf.org.uk/abs/)
   Kabat Chothia 組合
LCDR1 L24-L34 L24-L34 L24-L34
LCDR2 L50-L56 L50-L56 L50-L56
LCDR3 L89-L97 L89-L97 L89-L97
HCDR1 H31-H35 H26-H32 H26-H35
HCDR2 H50-H65 H52-H56 H50-H65
HCDR3 H95-H102 H95-H102 H95-H102
在表1中，Laa-Lbb可以指從抗體輕鏈的N-末端開始的從位置aa(根據Chothia編號系統)到位置bb(根據Chothia編號系統)的胺基酸序列；Haa-Hbb可以指從抗體重鏈的N-末端開始的從位置aa(根據Chothia編號系統)到位置bb(根據Chothia編號系統)的胺基酸序列。例如，L24-L34可以指從抗體輕鏈的N-末端開始的從位置24到位置34的胺基酸序列(根據Chothia編號系統)；H26-H32可指從抗體重鏈的N-末端開始的從位置26到位置32的胺基酸序列(根據Chothia編號系統)。
本文中使用的術語“抗體”應理解為其最廣泛的含義，其包括單株抗體(包括全長單株抗體)、多株抗體、抗體片段及包含至少兩個不同抗原結合區的多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)。抗體可以包含額外的修飾，例如非天然胺基酸、Fc區中的突變及醣基化位點的突變。抗體還可包括轉譯後修飾的抗體、包含抗體的抗原決定位的融合蛋白、及包含對抗原識別位點的任何其他修飾的免疫球蛋白分子，只要這些抗體表現出所需的生物活性。
如本文所用，術語抗體的“抗原結合片段”是指保留特異性結合抗原(例如MSLN)能力的抗體的一個或多個片段。已經證明，全長抗體的片段可以實現抗體的抗原結合功能。
包含在術語抗體的“抗原結合部分”內的抗原結合片段的示例包括(i) Fab片段，由VL、VH、CL及CH1結構域組成的單價片段；(ii) F(ab’)2片段，由在鉸鏈區域經由雙硫鍵連接的兩個Fab片段組成的二價片段；(iii) Fab’片段，其本質上是具有部分鉸鏈區的Fab(見FUNDAMENTALIMMUNOLOGY (Paul ed., 3.sup.rd ed. 1993))；(iv)由VH及CH1結構域組成的Fd片段；(v) 具有VH及CH1結構域以及CH1結構域C端的一個或多個半胱胺酸殘基的Fd’片段；(vi) 由抗體單臂的VL及VH結構域組成的Fv片段，(vii) dAb片段(Ward et al., (1989) Nature 341:544-546)，其由VH結構域組成；(viii) 分離的互補決定區(CDR)；及(ix) 奈米抗體(nanobody)，其包含一個可變域及兩個恆定域的一個重鏈可變區。此外，儘管Fv片段的兩個結構域VL及VH由單獨分開的基因編碼，但它們可以使用重組方法經由合成的連接子連接，該合成的連接子使它們成為單個蛋白質鏈，其中VL及VH區域配對形成單價分子(稱為單鏈Fv(scFv))；例如，見Bird et al. (1988) Science 242:423-426;及Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883)。此類單鏈抗體也包含在術語抗體的 “抗原結合片段”中。此外，該術語還包括包含一對串聯Fd片段(VH-CH1-VH-CH1)的“線性抗體”，其與互補輕鏈多肽一起形成抗原結合區，以及保留抗原結合活性的任何前述片段的修飾形式。
這些抗原結合片段可以使用發明所屬技術領域中具有通常知識者已知的通常技術獲得，並且以與完整抗體相同的方式篩選片段以供使用。
如本文所用，術語“結合”或“特異性結合”是指兩個分子之間的非隨機結合反應，例如抗體與其標靶抗原之間的非隨機結合反應。抗體的結合特異性可以基於親和力(affinity)及/或結合性(avidity)來確定。親和力由抗原與抗體平衡解離常數(K D)表示，是衡量抗原決定位(表位)與抗體上抗原結合位點之間結合強度的指標：K D值越小，抗原決定位(表位)與抗體之間的結合強度越強。或者，親和力也可以表示為親和力常數(KA)，即1/K D。
結合性是衡量抗體及相關抗原之間結合強度的指標。結合性與抗原決定位(表位)與其在抗體上的抗原結合位點之間的親和力以及抗體上存在的相關結合位點的數量有關。通常，抗體將以10 -5至10 -12M或更小的解離常數(KD)結合，較佳10 -7至10 -12M或更小，更佳選10 -8至10 -12M，及/或以至少10 7M -1、較佳至少10 8M -1、更佳選至少10 9M -1，例如至少10 12M -1的結合親和力結合。任何大於10 -4M的KD值通常被認為是非特異性結合。抗體與抗原或抗原決定位的特異性結合可以以已知的任何適當檢測方式確定，包括例如Scatchard分析及/或競爭性結合測定，例如放射免疫測定(radioimmunoassays；RIA)、酶免疫測定(enzyme immunoassays；EIA)、生物層干涉測定(bio-layer interferometry； BLI)及三明治競爭測定，以及本領域已知的其不同變體。
術語“k on”或“k a”是指抗體與抗原締合形成抗體/抗原複合物的締合速率常數。可以使用標準測定，例如Biacore或ELISA測定來測定此速率。
術語“k off”或“k d”是指抗體從抗體/抗原複合物解離的解離速率常數。可以使用標準測定，例如Biacore或ELISA測定來測定此速率。
術語“K D”是指特定抗體-抗原相互作用的平衡解離常數。K D由k a/k d算得。可以使用標準測定，例如Biacore或ELISA測定來測定速率。本申請的複合體中的抗體或其抗原結合片段可以在平衡解離常數(K D≤1mM、≤100nM或≤10nM或其間的任何量結合於標靶抗原。
如本文所用，術語“序列同一性”是指兩個序列(胺基酸)在對齊中的相同位置具有相同殘基的程度。例如，“一個胺基酸序列與序列識別號: Y X%相同”指的是該胺基酸序列與序列識別號: Y的具有X%同一性，並詳細表示為該胺基酸序列中的X%的殘基與序列識別號: Y中公開的序列殘基相同。通常，電腦程式用於此類計算。比較及對齊序列對的示例性程式包括ALIGN (Myers及Miller, 1988)、FASTA (Pearson及Lipman, 1988; Pearson, 1990)及gapped BLAST (Altschul et al., 1997)、BLASTP、BLASTN或GCG (Devereux et al., 1984)。
此外，在確定兩個胺基酸序列之間的序列同一性程度時，發明所屬技術領域中具有通常知識者可以考慮所謂的“保守”胺基酸替換，通常可以描述為這樣的胺基酸替換，其中一個胺基酸殘基被具有類似化學結構的另一個胺基酸殘基替換，並且對多肽的功能、活性或其他生物特性幾乎沒有影響或基本上沒有影響。此類保守胺基酸替換在本領域中是眾所周知的。
特別較佳的保守替換如下：Ala替換為Gly或Ser; Arg替換為Lys; Asn替換為Gln或替換為His; Asp替換為Glu; Cys替換為Ser; Gln替換為Asn; Glu替換為Asp; Gly替換為Ala或替換為Pro; His替換為Asn或替換為Gln; Ile替換為Leu或替換為Val; Leu替換為Ile或替換為Val; Lys替換為Arg,替換為Gln或替換為Glu; Met替換為Leu,替換為Tyr或替換為Ile; Phe替換為Met,替換為Leu或替換為Tyr; Ser替換為Thr; Thr替換為Ser; Trp替換為Tyr; Tyr替換為Trp; and/or Phe替換為Val,替換為Ile或替換為Leu。
術語“MSLN抗體”、“抗MSLN抗體”或“特異性結合MSLN的抗體”是指特異性結合MSLN的任何形式的抗體或其片段，且涵蓋單株抗體(包括全長單株抗體)、多株抗體及生物功能抗體片段，只要所述片段特異性結合MSLN即可。
如本文關於抗體或抗原結合片段所用，“內化”是指在結合於細胞時，能夠經由細胞脂質雙層膜至內部隔室(即“內化”)，較佳至細胞中的降解隔室中的抗體或抗原結合片段。
術語“治療劑”、“藥物”或“藥物部分”是指能夠調節生物過程及/或具有生物活性的藥劑。
術語“細胞毒性劑”是指主要經由干擾細胞的表現活性及/或功能而引起細胞死亡的物質。細胞毒性劑的實例包括(但不限於)抗有絲分裂劑，例如艾日布林、奧瑞他汀(auristatin)(例如單甲基奧瑞他汀E(MMAE)。
術語“抗體:藥物比率”或“藥物抗體比率”或“DAR(Drug-Antibody Ratio)”是指每一抗體所連藥物部分的數目，即藥物負載。
如本文所使用的，術語“治療”是指為了獲得效果而施用藥劑或執行程序。就完全或部分預防疾病或其症狀而言，該作用可以是預防性的，及/或就實現疾病及/或疾病症狀的部分或完全治癒而言，該作用可以是治療性的。本文所用的“治療”可包括對哺乳動物，特別是人類的疾病或 障礙(例如癌症)的治療，並包括：(a)防止疾病或疾病症狀發生在可能易患該疾病但尚未被診斷為患有該疾病的受試者身上(例如，包括可能與原發疾病相關或由原發疾病引起的疾病)；(b)抑制該疾病，即阻止其發展；及(c)緩解疾病，即導致疾病消退。治療可指癌症治療、改善或預防成功的任何指標，包括任何客觀或主觀參數，如緩解；緩解減輕症狀或使患者更能忍受疾病狀況。因此，術語“治療”包括施用本文公開的ADC或組合物以預防或延遲、緩解或阻止或抑制與疾病(例如癌症)相關的症狀或狀況的發展。術語“治療效果”是指減少、消除或預防受試者的疾病、疾病症狀或疾病副作用。
術語“癌症”是指哺乳動物中細胞群體的特徵為不受調控的細胞生長的生理病狀。
“腫瘤相關抗原”是指與正常細胞相比在癌細胞中差異表現的抗原。腫瘤相關抗原因此可用於標靶癌細胞。
“藥物組合物”是指呈允許施用並隨後提供活性成分的所欲生物活性及/或實現治療作用的形式且不含毒性為製劑所投受試者無法接受的其它組分的製劑。藥物組合物可以為無菌的。
“藥物賦形劑”包含例如佐劑、載體、pH調整及緩衝劑、張力調整劑、潤濕劑、防腐劑等物質。
“藥學上可接受”意指在可靠的醫學判斷範圍內，適合與人及低等動物的組織接觸而沒有過度毒性、刺激性、變態反應等等，並且與合理的益處/危險比例相稱。
如本文中公開的ADC的“有效量”為足夠執行特別說明的目的，例如在施用後產生治療作用，例如降低腫瘤生長速率或腫瘤體積、減少癌症症狀或治療功效的一些其它症狀的量。有效量可以用關於所述目的的習知方式測定。術語“治療有效量”是指有效治療受試者的疾病或病症的ADC的量。在癌症情況下，治療有效量的ADC可以減少癌細胞數目，減小腫瘤尺寸，抑制(例如減慢或終止)腫瘤轉移，抑制(例如減慢或終止)腫瘤生長，及/或減輕一種或多種症狀。“預防有效量”是指在必需的劑量下及時間段內有效實現預防結果所需的量。通常，因為在患病前或在疾病早期，預防劑量用於受試者中，所以預防有效量將小於治療有效量。
現在更加詳細描述本發明的某些實施方案，其實例由隨附的結構式及化學式說明。本發明意圖涵蓋所有的替代、修改及等同技術方案，它們均包括在如申請專利範圍定義的本發明範圍內。發明所屬技術領域中具有通常知識者應認識到，許多與本文所述類似或等同的方法及材料能夠用於實踐本發明。本發明絕不限於本文所述的方法及材料。在所結合的文獻、專利及類似材料的一篇或多篇與本申請不同或相矛盾的情況下(包括但不限於所定義的術語、術語應用、所描述的技術，等等)，以本申請為准。
應進一步認識到，本發明的某些特徵，為清楚可見，在多個獨立的實施方案中進行了描述，但也可以在單個實施方案中以組合形式提供。反之，本發明的各種特徵，為簡潔起見，在單個實施方案中進行了描述，但也可以單獨或以任意適合的子組合提供。
除非另外說明，本發明所使用的所有科技術語具有與發明所屬技術領域中具有通常知識者的通常理解相同的含義。本發明涉及的所有專利及公開出版物經由引用方式整體併入本發明。
除非另外說明，應當應用本文所使用得下列定義。出於本發明的目的，化學元素與元素週期表CAS版，及《化學和物理手冊》，第75版，1994一致。此外，有機化學一般原理可參考"Organic Chemistry", Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito: 1999, 及 "March's Advanced Organic Chemistry” by Michael B. Smith及Jerry March, John Wiley & Sons, New York: 2007中的描述，其全部內容經由引用併入本文。
具體實施方式 提供下面的實施方式以進一步闡述本發明。應理解，這些實施方式僅用於舉例說明本發明，而不用於限制本發明的範圍。
在一個實施方案中，本發明涉及MSLN抗體藥物複合體，其為式(I)化合物或其互變異構體、立體異構體或藥學上可接受的鹽： Ab-[S-X-(Y) n-Z-E-D] q(I) 其中， Ab為特異性結合間皮素(MSLN)抗體或其抗原結合片段; S為連接Ab及X的硫鍵； X選自C 3-10環烷基、5-10元雜環基、C 6-10芳基或5-10元雜芳基； X任選地被1個、2個、3個、4個或5個R*取代； R*選自H、氘、鹵素、CN、NO 2、OH、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 2-6烯基或C 2-6炔基； Y為-Y 1-Y 2-Y 3-，Y經由Y 1與X相連，經由Y 3與Z相連； 其中， Y 1選自-C(O)-、-C(O)O-、-OC(O)-、-C(O)NH-、C 2-6烯基、C 2-6炔基、3-10元環烷基、5-10元雜環基、C6-10芳基或5-10元雜芳基； Y 2為鍵，或者為C 1-6亞烷基； Y 3選自-C(O)-、-OC(O)-或-NHC(O)-； Y任選地被1個、2個、3個、4個或5個R#取代； R#選自H、氘、鹵素、CN、NO 2、OH、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 2-6烯基或C 2-6炔基； Z為包含2至8個胺基酸的肽；較佳為二肽、三肽或四肽； E不存在，或者為任選地連接Z及D的間隔子單元； D為生物活性分子藥物或其衍生物 n選自0、1、2、3、4或5，較佳為0、1、2或3； q選自1至10的整數，較佳為8。
Ab 在一個具體實施方式中，Ab為MSLN抗體；在另一個具體實施方式中，Ab為MSLN抗原結合片段。
X 在一個具體實施方式中，X為C 3-10環烷基；在另一個具體實施方式中，X為5-10元雜環基；在另一個具體實施方式中，X為C 6-10芳基；在另一個具體實施方式中，X為5-10元雜芳基；在另一個具體實施方式中，X為5-6元雜芳基。
在一個具體實施方式中，X為亞嘧啶基，例如 。
在一個具體實施方式中，X未被取代；在另一個具體實施方式中，X被1個R*取代；在另一個具體實施方式中，X被2個R*取代；在另一個具體實施方式中，X被3個R*取代；在另一個具體實施方式中，X被4個R*取代；在另一個具體實施方式中，X被5個R*取代。
Y 在一個具體實施方式中，Y為-Y 1-Y 2-Y 3-，Y經由Y 1與X相連，經由Y 3與Z相連。
在一個具體實施方式中，Y為 。
在一個具體實施方式中，Y未被取代；在另一個具體實施方式中，Y被1個R#取代；在另一個具體實施方式中，Y被2個R#取代；在另一個具體實施方式中，Y被3個R#取代；在另一個具體實施方式中，Y被4個R#取代；在另一個具體實施方式中，Y被5個R#取代。
Y 1在一個具體實施方式中，Y 1為-C(O)-；在另一個具體實施方式中，Y 1為-C(O)O-；在另一個具體實施方式中，Y 1為-OC(O)-；在另一個具體實施方式中，Y 1為-C(O)NH-；在另一個具體實施方式中，Y 1為C 2-6烯基；在另一個具體實施方式中，Y 1為C 2-4烯基；在另一個具體實施方式中，Y 1為C 2-6炔基；在另一個具體實施方式中，Y 1為C 2-4炔基；在另一個具體實施方式中，Y 1為C 3-10環烷基；在另一個具體實施方式中，Y 1為5-10元雜環基；在另一個具體實施方式中，Y 1為C 6-10芳基；在另一個具體實施方式中，Y 1為5-10元雜芳基。
Y 2在一個具體實施方式中，Y 2為鍵；在另一個具體實施方式中，Y 2為C 1-6亞烷基；在另一個具體實施方式中，Y 2為C 1-4亞烷基。
Y 3在一個具體實施方式中，Y 3為-C(O)-；在另一個具體實施方式中，Y 3為-OC(O)-；在另一個具體實施方式中，Y 3為-NHC(O)-。
Z 在一個具體實施方式中，Z為連接子肽，其包含2至8個胺基酸的肽；較佳為二肽、三肽或四肽。
在一些實施方案中，Z為可裂解肽。在一些實施方案中，可裂解肽能夠由酶裂解。在一些實施方案中，可裂解肽能夠由腫瘤相關的蛋白酶裂解。在一些實施方案中，可裂解肽能夠由溶體酶裂解。在一些實施方案中，可裂解肽能夠由組織蛋白酶裂解。在一些實施方案中，可裂解肽可以由溶體半胱胺酸組織蛋白酶(例如組織蛋白酶B、C、F、H、K、L、O、S、V、X或W)裂解。在一些實施方案中，可裂解肽能夠由組織蛋白酶B裂解。能夠由組織蛋白酶B裂解的一種示例性二肽為纈胺酸-瓜胺酸(Val-Cit) (Dubowchik等人(2002) Bioconjugate Chem. 13:855-69)。
在一個具體實施方式中，Z選自val-cit、val-cit-gly、gly-gly、gly-gly-gly、gly-gly-gly-gly、val-gly-gly、val-gln-gly、val-glu-gly、phe-lys-gly、leu-lys-gly、gly-val-lys-gly、val-lys-gly-gly、val-lys-gly、val-lys-ala、val-lys-leu、leu-leu-gly、gly-gly-phe-gly、gly-gly-phe-gly-gly、val-gly、val-lys-β-ala或經取代修飾的上述二肽、三肽、四肽。
在一個具體實施方式中，Z為 ，其中，R 1及R 2獨立地選自H、氘、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 2-6烯基或C 2-6炔基。
在一個具體實施方式中，Z為 ，其中，R 1及R 2獨立地選自H、氘、鹵素或C 1-6烷基，較佳H或C 1-4烷基。
E E不存在，或者為任選地連接Z及D的間隔子單元；E不存在或選自-NH-C 1-6亞烷基-或-O-C 1-6亞烷基-，所述-NH-C 1-6亞烷基及-O-C 1-6亞烷基-可任選地被選自H、鹵素、C 1-6烷基及C 1-6鹵代烷基中的1個、2個或3個取代基所取代； 較佳地，E不存在或為-NH-C 1-4亞烷基-，所述-NH-C 1-4亞烷基-可任選地被選自H、鹵素、C 1-4烷基及C 1-4鹵代烷基中的1個、2個或3個取代基所取代； 更佳選地，E為-NH-(CH 2) 1-4-，例如-NH-CH 2-。
在一些實施方案中，E可以為連接Z及D的間隔子單元。間隔子可以是促進X-Y-Z與喜樹鹼衍生物附連的官能團，或者其可提供附加的結構組分以進一步促進喜樹鹼衍生物從複合體的釋放。
D 在一個具體實施方式中，D為生物活性分子藥物或其衍生物。
在一個具體實施方式中，D選自：金屬配合物；醣肽類抗生素；DNA拓撲異構酶抑制劑；干擾DNA合成藥物；作用於結構蛋白的藥物；腫瘤訊號路徑抑制劑；蛋白酶體抑制劑；組蛋白去乙醯化酶抑制劑；腫瘤新生血管生成抑制劑；細胞週期蛋白抑制劑；絲胺酸/蘇胺酸激酶抑制劑、酪胺酸激酶抑制劑、天冬胺酸激酶抑制劑或組胺酸激酶抑制劑；以及其它抑制腫瘤細胞生長、促進腫瘤細胞凋亡或壞死的活性物質。
在一個具體實施方式中，D選自：奧沙利鉑(oxaliplatin)；博來黴素(bleomycin)或平陽黴素(pingyangmycin)；喜樹鹼、喜樹鹼衍生物(如羥基喜樹鹼、9-胺基喜樹鹼等)、SN-38、伊立替康(irinotecan)、拓撲替康(topotecan)、貝洛替康(belotecan)或盧比替康(lurbinectedin)，放線菌素D(actinomycin D)、多柔比星(doxorubicin)、多卡米星(duocarmycin)，柔紅黴素(Dau orubicin)、米托蒽醌、鬼臼毒素(podophyllotoxin)或依託泊苷(etoposide)；甲胺蝶呤、5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷(arabinoside)、吉西他濱(gemcitabine)、巰嘌呤(mercaptopurine)、噴司他丁(pentostatin)、氟達拉濱(fludarabine)、克拉屈濱(cladribine)或奈拉濱(nelarabine)；長春花生物鹼 (vinca alkaloid) 類、長春新鹼(vincristine)、長春鹼(Vinblastine)、紫杉醇(paclitaxel)、多西他賽(docetaxeol)或卡巴他賽(cabazitaxel)；美登素(maytansine)衍生物；卡奇黴素(calicheamicin)衍生物；奧瑞他汀(auristatin)衍生物；吡咯並苯二氮卓類二聚體衍生物；美法侖(melphalan)；絲裂黴素C(mitomycin C)；或者苯丁酸氮芥。
在一個具體實施方式中，D為 ; 其中， R D不存在，或者選自-NH-或-O-； L D選自-C 0-6亞烷基-O-C 0-6亞烷基-或-C 0-6亞烷基-O-C 0-6亞烷基-C(O)NH-CHR D4-； R D1及R D2獨立地選自H、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基或C 1-6烷氧基；或者，R D1、R D2及他們連接的碳原子一起形成C 3-7環烷基或3-7元雜環基，較佳為5-6元雜環基； R D3及R D4獨立地選自H、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基或C 1-6烷氧基；或者，R D3、R D4與他們連接的碳原子一起形成C 5-10環烷基或5-10元雜環基，較佳為C 5-6環烷基。
在一個具體實施方式中，D選自： 。
R* 在一個具體實施方式中，R*為H；在另一個具體實施方式中，R*為氘；在另一個具體實施方式中，R*為鹵素；在另一個具體實施方式中，R*為CN；在另一個具體實施方式中，R*為NO 2；在另一個具體實施方式中，R*為OH；在另一個具體實施方式中，R*為C 1-6烷基；在另一個具體實施方式中，R*為C 1-4烷基；在另一個具體實施方式中，R*為C 1-6鹵代烷基；在另一個具體實施方式中，R*為C 1-4鹵代烷基；在另一個具體實施方式中，R*為C 2-6烯基；在另一個具體實施方式中，R*為C 2-4烯基；在另一個具體實施方式中，R*為C 2-6炔基；在另一個具體實施方式中，R*為C 2-4炔基。
R# 在一個具體實施方式中，R#為H；在另一個具體實施方式中，R#為氘；在另一個具體實施方式中，R#為鹵素；在另一個具體實施方式中，R#為CN；在另一個具體實施方式中，R#為NO 2；在另一個具體實施方式中，R#為OH；在另一個具體實施方式中，R#為C 1-6烷基；在另一個具體實施方式中，R#為C 1-4烷基；在另一個具體實施方式中，R#為C 1-6鹵代烷基；在另一個具體實施方式中，R#為C 1-4鹵代烷基；在另一個具體實施方式中，R#為C 2-6烯基；在另一個具體實施方式中，R#為C 2-4烯基；在另一個具體實施方式中，R#為C 2-6炔基；在另一個具體實施方式中，R#為C 2-4炔基。
n 在一個具體實施方式中，n為0；在另一個具體實施方式中，n為1；在另一個具體實施方式中，n為2；在另一個具體實施方式中，n為3；在另一個具體實施方式中，n為4；在另一個具體實施方式中，n為5。
q 在一個具體實施方式中，q選自1至10的整數；在另一個具體實施方式中，q為1；在另一個具體實施方式中，q為2；在另一個具體實施方式中，q為3；在另一個具體實施方式中，q為4；在另一個具體實施方式中，q為5；在另一個具體實施方式中，q為6；在另一個具體實施方式中，q為7；在另一個具體實施方式中，q為8；在另一個具體實施方式中，q為9；在另一個具體實施方式中，q為10。
以上任一具體實施方案中的任一技術方案或其任意組合，可以與其它具體實施方案中的任一技術方案或其任意組合進行組合。例如，Ab的任一技術方案或其任意組合，可以與X、Y、Y 1、Y 2、Y 3、Z、E、D、R*、R#、n及q等的任一技術方案或其任意組合進行組合。本發明旨在包括所有這些技術方案的組合，限於篇幅，不再一一列出。
在更具體的實施方案中，本發明提供了上述式(I)的MSLN抗體藥物複合體，其中， X選自C 6-10芳基或5-10元雜芳基； X任選地被1個、2個、3個、4個或5個R*取代； R*選自H、氘、鹵素、CN、NO 2、OH、C 1-6烷基； 較佳地， X為5-6元雜芳基； X任選地被1個、2個或3個R*取代； R*選自H、氘、鹵素或C 1-4烷基； 更較佳地， X為亞嘧啶基，例如 。
在更具體的實施方案中，本發明提供了上述式(I)的MSLN抗體藥物複合體，其中， Y為-Y 1-Y 2-Y 3-，Y經由Y 1與X相連，經由Y 3與Z相連； 其中， Y 1選自C 2-6烯基或C 2-6炔基； Y 2為鍵，或者為C 1-6亞烷基； Y 3選自-C(O)-或-NHC(O)-； Y任選地被1個、2個、3個、4個或5個R#取代； R#選自H、氘、鹵素、CN、NO 2、OH、C 1-6烷基； 較佳地， Y為-Y 1-Y 2-Y 3-，Y經由Y 1與X相連，經由Y 3與Z相連； 其中， Y 1選自C 2-4烯基或C 2-4炔基； Y 2為C 1-4亞烷基； Y 3為-C(O)-； Y任選地被1個、2個或3個R#取代； R#選自H、氘、鹵素或C 1-4烷基； 更較佳地， Y為 。
在更具體的實施方案中，本發明提供了上述式(I)的MSLN抗體藥物複合體，其中， Z選自val-cit、val-cit-gly、gly-gly、gly-gly-gly、gly-gly-gly-gly、val-gly-gly、val-gln-gly、val-glu-gly、phe-lys-gly、leu-lys-gly、gly-val-lys-gly、val-lys-gly-gly、val-lys-gly、val-lys-ala、val-lys-leu、leu-leu-gly、gly-gly-phe-gly、gly-gly-phe-gly-gly、val-gly、val-lys-β-ala或經取代修飾的上述二肽、三肽、四肽； 較佳地， Z為 ； R 1及R 2獨立地選自H、氘、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 2-6烯基或C 2-6炔基； 更較佳地， Z為 ； R 1及R 2獨立地選自H、氘、鹵素或C 1-6烷基，較佳H或C 1-4烷基。
在更具體的實施方案中，本發明提供了上述式(I)的MSLN抗體藥物複合體，其中， E不存在或選自-NH-C 1-6亞烷基-或-O-C 1-6亞烷基-，所述-NH-C 1-6亞烷基及-O-C 1-6亞烷基-可任選地被選自H、鹵素、C 1-6烷基及C 1-6鹵代烷基中的1個、2個或3個取代基所取代； 較佳地，E不存在或為-NH-C 1-4亞烷基-，所述-NH-C 1-4亞烷基-可任選地被選自H、鹵素、C 1-4烷基及C 1-4鹵代烷基中的1個、2個或3個取代基所取代； 更較佳地，E為-NH-(CH 2) 1-4-，例如-NH-CH 2-。
在更具體的實施方案中，本發明提供了上述式(I)的MSLN抗體藥物複合體，其中， D選自金屬配合物；醣肽類抗生素；DNA拓撲異構酶抑制劑；干擾DNA合成藥物；作用於結構蛋白的藥物；腫瘤訊號路徑抑制劑；蛋白酶體抑制劑；組蛋白去乙醯化酶抑制劑；腫瘤新生血管生成抑制劑；細胞週期蛋白抑制劑；絲胺酸/蘇胺酸激酶抑制劑、酪胺酸激酶抑制劑、天冬胺酸激酶抑制劑或組胺酸激酶抑制劑；以及其它抑制腫瘤細胞生長、促進腫瘤細胞凋亡或壞死的活性物質； 較佳地， D選自奧沙利鉑；博來黴素或平陽黴素；喜樹鹼、喜樹鹼衍生物(如羥基喜樹鹼、9-胺基喜樹鹼等)、SN-38、伊立替康、拓撲替康、貝洛替康或盧比替康，放線菌素D、多柔比星、多卡米星，柔紅黴素、米托蒽醌、鬼臼毒素或依託泊苷；甲胺蝶呤、5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、吉西他濱、巰嘌呤、噴司他丁、氟達拉濱、克拉屈濱或奈拉濱；長春花生物鹼類、長春新鹼、長春鹼、紫杉醇、多西他賽或卡巴他賽；美登素衍生物；卡奇黴素衍生物；奧瑞他汀衍生物；吡咯並苯二氮卓類二聚體衍生物；美法侖；絲裂黴素C；或者苯丁酸氮芥； 更較佳地， D為 ; 其中， R D不存在，或者選自-NH-或-O-； L D選自-C 0-6亞烷基-O-C 0-6亞烷基-或-C 0-6亞烷基-O-C 0-6亞烷基-C(O)NH-CHR D4-； R D1及R D2獨立地選自H、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基或C 1-6烷氧基；或者，R D1、R D2及他們連接的碳原子一起形成C 3-7環烷基或3-7元雜環基，較佳為5-6元雜環基； R D3及R D4獨立地選自H、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基或C 1-6烷氧基；或者，R D3、R D4與他們連接的碳原子一起形成C 5-10環烷基或5-10元雜環基，較佳為C 5-6環烷基； 更較佳地， D選自： 、 或 。
在更具體的實施方案中，本發明提供了上述式(I)的MSLN抗體藥物複合體，其中， X選自C 6-10芳基或5-10元雜芳基； X任選地被1個、2個、3個、4個或5個R*取代； R*選自H、氘、鹵素、CN、NO 2、OH、C 1-6烷基； Y為-Y 1-Y 2-Y 3-，Y經由Y 1與X相連，經由Y 3與Z相連； 其中， Y 1選自C 2-6烯基或C 2-6炔基； Y 2為鍵，或者為C 1-6亞烷基； Y 3選自-C(O)-或-NHC(O)-； Y任選地被1個、2個、3個、4個或5個R#取代； R#選自H、氘、鹵素、CN、NO 2、OH或C 1-6烷基； Z選自val-cit、val-cit-gly、gly-gly、gly-gly-gly、gly-gly-gly-gly、val-gly-gly、val-gln-gly、val-glu-gly、phe-lys-gly、leu-lys-gly、gly-val-lys-gly、val-lys-gly-gly、val-lys-gly、val-lys-ala、val-lys-leu、leu-leu-gly、gly-gly-phe-gly、gly-gly-phe-gly-gly、val-gly、val-lys-β-ala或經取代修飾的上述二肽、三肽、四肽； E不存在或選自-NH-C 1-6亞烷基-或-O-C 1-6亞烷基-，所述-NH-C 1-6亞烷基及-O-C 1-6亞烷基-可任選地被選自H、鹵素、C 1-6烷基及C 1-6鹵代烷基中的1個、2個或3個取代基所取代； D選自金屬配合物；醣肽類抗生素；DNA拓撲異構酶抑制劑；干擾DNA合成藥物；作用於結構蛋白的藥物；腫瘤訊號路徑抑制劑；蛋白酶體抑制劑；組蛋白去乙醯化酶抑制劑；腫瘤新生血管生成抑制劑；細胞週期蛋白抑制劑；絲胺酸/蘇胺酸激酶抑制劑、酪胺酸激酶抑制劑、天冬胺酸激酶抑制劑或組胺酸激酶抑制劑；以及其它抑制腫瘤細胞生長、促進腫瘤細胞凋亡或壞死的活性物質。
在更具體的實施方案中，本發明提供了上述式(I)的MSLN抗體藥物複合體，其中， X為5-6元雜芳基； X任選地被1個、2個或3個R*取代； R*選自H、氘、鹵素或C 1-4烷基； Y為-Y 1-Y 2-Y 3-，Y經由Y 1與X相連，經由Y 3與Z相連； 其中， Y 1選自C 2-4烯基或C 2-4炔基； Y 2為C 1-4亞烷基； Y 3為-C(O)-； Y任選地被1個、2個或3個R#取代； R#選自H、氘、鹵素或C 1-4烷基； Z為 ； E不存在或為-NH-C 1-4亞烷基-，所述-NH-C 1-4亞烷基-可任選地被選自H、鹵素、C 1-4烷基及C 1-4鹵代烷基中的1個、2個或3個取代基所取代； R 1及R 2獨立地選自H、氘、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 2-6烯基或C 2-6炔基； D選自奧沙利鉑；博來黴素或平陽黴素；喜樹鹼、喜樹鹼衍生物(如羥基喜樹鹼、9-胺基喜樹鹼等)、SN-38、伊立替康、拓撲替康、貝洛替康或盧比替康，放線菌素D、多柔比星、多卡米星，柔紅黴素、米托蒽醌、鬼臼毒素或依託泊苷；甲胺蝶呤、5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、吉西他濱、巰嘌呤、噴司他丁、氟達拉濱、克拉屈濱或奈拉濱；長春花生物鹼類、長春新鹼、長春鹼、紫杉醇、多西他賽或卡巴他賽；美登素衍生物；卡奇黴素衍生物；奧瑞他汀衍生物；吡咯並苯二氮卓類二聚體衍生物；美法侖；絲裂黴素C；或者苯丁酸氮芥； 較佳地， D為 ; 其中， R D不存在，或者選自-NH-或-O-； L D選自-C 0-6亞烷基-O-C 0-6亞烷基-或-C 0-6亞烷基-O-C 0-6亞烷基-C(O)NH-CHR D4-； R D1及R D2獨立地選自H、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基或C 1-6烷氧基；或者，R D1、R D2及他們連接的碳原子一起形成C 3-7環烷基或3-7元雜環基，較佳為5-6元雜環基； R D3及R D4獨立地選自H、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基或C 1-6烷氧基；或者，R D3、R D4與他們連接的碳原子一起形成C 5-10環烷基或5-10元雜環基，較佳為C 5-6環烷基。
在更具體的實施方案中，本發明提供了上述式(I)的MSLN抗體藥物複合體，其中， X為亞嘧啶基，較佳為 ； Y為 ； Z為 ； R 1及R 2獨立地選自H、氘、鹵素、C 1-6烷基，較佳H或C 1-4烷基； E為-NH-CH 2-； D選自： 、 或 ； n選自1、2或3，較佳為1； q選自4、5、6、7、8、9或10，較佳為8。
在更具體的實施方案中，本發明提供了MSLN抗體藥物複合體，其中，所述MSLN抗體藥物複合體式(II)化合物或其互變異構體、立體異構體或藥學上可接受的鹽： (II) 其中， Ab為抗MSLN抗體； R 1及R 2獨立地選自C 1-6烷基，較佳為C 1-4烷基； D選自： 、 或 ； q選自1-10的整數，較佳選自4、5、6、7、8、9或10，最佳為8。
抗MSLN抗體 本發明的抗體藥物複合體中的特異性結合MSLN的抗體包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，並且其中 (1) 所述VH包含具有序列識別號: 24所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 27所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (2) 所述VH包含具有序列識別號: 25所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 28所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (3) 所述VH包含具有序列識別號: 26所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 27所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (4) 所述VH包含具有序列識別號: 24所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 29所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (5) 所述VH包含具有序列識別號: 24所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 30所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (6) 所述VH包含具有序列識別號: 24所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 31所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (7) 所述VH包含具有序列識別號: 24所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 32所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (8) 所述VH包含具有序列識別號: 24所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 33所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (9) 所述VH包含具有序列識別號: 25所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 29所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (10) 所述VH包含具有序列識別號: 63所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 67所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (11) 所述VH包含具有序列識別號: 64所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 67所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (12) 所述VH包含具有序列識別號: 65所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 67所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (13) 所述VH包含具有序列識別號: 65所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 68所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (14) 所述VH包含具有序列識別號: 63所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 68所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (15) 所述VH包含具有序列識別號: 66所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 67所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (16) 所述VH包含具有序列識別號: 64所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 69所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (17) 所述VH包含具有序列識別號: 66所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 69所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (18) 所述VH包含具有序列識別號: 63所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 69所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3；或 (19) 所述VH包含具有序列識別號: 65所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 69所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3。
在一些實施方案中，LCDR 1-3及HCDR 1-3由EU Kabat定義/編號系統定義。在一些實施方案中，LCDR 1-3及HCDR 1-3由Chothia定義/編號系統定義。在一些實施方案中，LCDR 1-3及HCDR 1-3由AbM定義/編號系統定義。在一些較佳實施方案中，LCDR 1-3及HCDR 1-3由Kabat及Chothia組合編號系統定義。
在一些實施方案中，本發明的抗體藥物複合體中的Ab為特異性結合間皮素(MSLN)的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中 (1) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 2所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 4所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 6所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 9所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 11所示的胺基酸序列，LCDR3包含   序列識別號: 13所示的胺基酸序列； (2) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 15所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 16所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 6所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 9所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 11所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 18所示的胺基酸序列； (3) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 15所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 17所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 6所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 9所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 11所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 13所示的胺基酸序列； (4) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 2所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 4所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 6所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 9所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 11所示的胺基酸序列，LCDR3包含   序列識別號: 19所示的胺基酸序列； (5) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 2所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 4所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 6所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 9所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 11所示的胺基酸序列，LCDR3包含   序列識別號: 20所示的胺基酸序列； (6) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 2所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 4所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 6所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 9所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 11所示的胺基酸序列，LCDR3包含   序列識別號: 21所示的胺基酸序列； (7) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 2所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 4所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 6所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 9所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 11所示的胺基酸序列，LCDR3包含   序列識別號: 22所示的胺基酸序列； (8) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 2所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 4所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 6所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 9所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 11所示的胺基酸序列，LCDR3包含   序列識別號: 23所示的胺基酸序列； (9) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 15所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 16所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 6所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 9所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 11所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 19所示的胺基酸序列； (10) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 45所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 47所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 49所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 52所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 54所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 56所示的胺基酸序列； (11) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 58所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 47所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 49所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 52所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 54所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 56所示的胺基酸序列； (12) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 58所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 59所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 49所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 52所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 54所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 56所示的胺基酸序列； (13) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 58所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 59所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 49所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 61所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 54所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 56所示的胺基酸序列； (14) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 45所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 47所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 49所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 61所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 54所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 56所示的胺基酸序列； (15) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 58所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 60所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 49所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 52所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 54所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 56所示的胺基酸序列； (16) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 58所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 47所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 49所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 62所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 54所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 56所示的胺基酸序列； (17) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 58所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 60所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 49所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 62所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 54所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 56所示的胺基酸序列； (18) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 45所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 47所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 49所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 62所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 54所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 56所示的胺基酸序列；或 (19) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 58所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 59所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 49所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 62所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 54所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 56所示的胺基酸序列。
在一些實施方案中，CDR經由Kabat Chothia組合系統確定。
在一些實施方案中，本發明的抗體藥物複合體中的Ab為特異性結合間皮素(MSLN)的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體包含VL及VH，其中 (1) 所述VH包含與序列識別號: 24具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 27具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (2) 所述VH包含與序列識別號: 25具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 28具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (3) 所述VH包含與序列識別號: 26具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 27具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (4) 所述VH包含與序列識別號: 24具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 29具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (5) 所述VH包含與序列識別號: 24具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 30具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (6) 所述VH包含與序列識別號: 24具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 31具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (7) 所述VH包含與序列識別號: 24具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 32具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (8) 所述VH包含與序列識別號: 24具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 33具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (9) 所述VH包含與序列識別號: 25具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 29具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (10) 所述VH包含與序列識別號: 63具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 67具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (11) 所述VH包含與序列識別號: 64具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 67具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (12) 所述VH包含與序列識別號: 65具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 67具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (13) 所述VH包含與序列識別號: 65具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 68具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (14) 所述VH包含與序列識別號: 63具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 68具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (15) 所述VH包含與序列識別號: 66具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 67具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (16) 所述VH包含與序列識別號: 64具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 69具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (17) 所述VH包含與序列識別號: 66具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 69具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (18) 所述VH包含與序列識別號: 63具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 69具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列；或 (19) 所述VH包含與序列識別號: 65具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 69具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列。
在一些實施方案中，VL包含經由插入、刪除及/或替換其中一個或多個胺基酸而形成的序列識別號: 27-33及67-69中任何一個所示的胺基酸序列的功能變體，前提是包含功能變體的VL的抗體保留與MSLN結合的能力。在一些實施方案中，VH包含經由插入、刪除及/或替換其中一個或多個胺基酸形成的序列識別號: 24-26及63-66中任何一個所示的胺基酸序列的功能變體，前提是包含功能變體的VH的抗體保留與MSLN結合的能力。
功能變體包含與親本多肽的胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、至少99.1%、至少99.2%、至少99.3%、至少99.4%、至少99.5%、至少99.6%、至少99.7%、至少99.8%或至少99.9%的序列同源性的胺基酸序列或由其組成。例如，序列識別號: 27-33及67-69中任一個的功能變體包含分別與序列識別號: 27-33及67-69具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、至少99.1%、至少99.2%、至少99.3%、至少99.4%、至少99.5%、至少99.6%、至少99.7%、至少99.8%或至少99.9%的序列同一性的胺基酸序列或由其組成。序列識別號: 24-26及63-66中任一個的功能變體包含分別與序列識別號: 24-26及63-66具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、至少99.1%、至少99.2%、至少99.3%、至少99.4%、至少99.5%、至少99.6%、至少99.7%、至少99.8%或至少99.9%的序列同一性的胺基酸序列或由其組成。
在功能變體的上下文中，插入、刪除及/或替換的胺基酸的數量較佳不超過親本胺基酸序列中胺基酸總數的40%，更佳選不超過35%，更佳選1-33%，更佳選5-30%，更佳選10-25%，更佳選15-20%。例如，插入、刪除及/或替換的胺基酸的數量可以是1-20、較佳1-10、更佳選1-7、更佳選1-5及最較佳1-2。在較佳實施方案中，插入、刪除及/或替換的胺基酸的數量為1、2、3、4、5、6或7。
在一些實施方案中，插入、刪除及/或替換可以在框架(FR)區執行，例如在FR1、FR2、FR3及/或FR4。
在較佳實施方案中，VL包含如序列識別號: 27中所示的胺基酸序列，VH包含如序列識別號: 24中所示的胺基酸序列；或VL包含如序列識別號: 28所示的胺基酸序列，VH包含如序列識別號: 25所示的胺基酸序列；或VL包含如序列識別號: 27所示的胺基酸序列，VH包含如序列識別號: 26所示的胺基酸序列；或VL包含如序列識別號: 29所示的胺基酸序列，VH包含如序列識別號: 24所示的胺基酸序列；或VL包含如序列識別號: 30中所示的胺基酸序列，VH包含如序列識別號: 24中所示的胺基酸序列；或VL包含如序列識別號: 31所示的胺基酸序列，VH包含如序列識別號: 24所示的胺基酸序列；或VL包含如序列識別號: 32所示的胺基酸序列，VH包含如序列識別號: 24所示的胺基酸序列；或VL包含如序列識別號: 33所示的胺基酸序列，VH包含如序列識別號: 24所示的胺基酸序列；或VL包含如序列識別號: 29所示的胺基酸序列，VH包含如序列識別號: 25所示的胺基酸序列；或VL包含如序列識別號: 67所示的胺基酸序列，VH包含如序列識別號: 63所示的胺基酸序列；或VL包含如序列識別號: 67所示的胺基酸序列，VH包含如序列識別號: 64所示的胺基酸序列；或VL包含如序列識別號:67所示的胺基酸序列，VH包含如序列識別號:65所示的胺基酸序列；或VL包含如序列識別號: 68所示的胺基酸序列，VH包含如序列識別號: 65所示的胺基酸序列；或VL包含如序列識別號: 68所示的胺基酸序列，VH包含如序列識別號: 63所示的胺基酸序列；或VL包含如序列識別號: 67所示的胺基酸序列，VH包含如序列識別號: 66所示的胺基酸序列；或VL包含如序列識別號: 69中所示的胺基酸序列，VH包含如序列識別號: 64中所示的胺基酸序列；或VL包含如序列識別號: 69中所示的胺基酸序列，VH包含如序列識別號: 66中所示的胺基酸序列；或VL包含如序列識別號: 69所示的胺基酸序列，VH包含如序列識別號: 63所示的胺基酸序列；或VL包含如序列識別號: 69所示的胺基酸序列，VH包含如序列識別號: 65所示的胺基酸序列。
在一些實施方案中，本發明的抗體藥物複合體中的Ab為特異性結合間皮素(MSLN)的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體包含重鏈(HC)及輕鏈(LC)，並且其中： (1) 所述HC包含與序列識別號: 34具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 37具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (2) 所述HC包含與序列識別號: 35具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 38具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (3) 所述HC包含與序列識別號: 36具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 37具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (4) 所述HC包含與序列識別號: 34具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 39具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (5) 所述HC包含與序列識別號: 34具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 40具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (6) 所述HC包含與序列識別號: 34具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 41具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (7) 所述HC包含與序列識別號: 34具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 42具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (8) 所述HC包含與序列識別號: 34具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 43具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (9) 所述HC包含與序列識別號: 35具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 39具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (10) 所述HC包含與序列識別號: 70具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 74具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (11) 所述HC包含與序列識別號: 71具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 74具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (12) 所述HC包含與序列識別號: 72具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 74具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (13) 所述HC包含與序列識別號: 72具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 75具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (14) 所述HC包含與序列識別號: 70具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 75具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (15) 所述HC包含與序列識別號: 73具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 74具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (16) 所述HC包含與序列識別號: 71具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 76具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (17) 所述HC包含與序列識別號: 73具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 76具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (18) 所述HC包含與序列識別號: 70具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 76具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列；或 (19) 所述HC包含與序列識別號: 72具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 76具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列。
在一些實施方案中，輕鏈包含經由插入、刪除及/或替換其中一個或多個胺基酸而形成的序列識別號: 37-43及74-76中任何一個所示的胺基酸序列的功能變體，前提是包含功能變體的輕鏈的抗體保留與MSLN結合的能力。在一些實施方案中，重鏈包含經由插入、刪除及/或替換其中一個或多個胺基酸形成的序列識別號: 34-36及70-73中任何一個所示的胺基酸序列的功能變體，前提是包含功能變體的VH的抗體保留與MSLN結合的能力。
例如，序列識別號 :37-43及74-76中任一個的功能變體包含與序列識別號: 37-43及74-76具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、至少99.1%、至少99.2%、至少99.3%、至少99.4%、至少99.5%、至少99.6%、至少99.7%、至少99.8%或至少99.9%的序列同一性的胺基酸序列或由其組成。例如，序列識別號 : 34-36及70-73中任一個的功能變體包含與序列識別號: 34-36及70-73具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、至少99.1%、至少99.2%、至少99.3%、至少99.4%、至少99.5%、至少99.6%、至少99.7%、至少99.8%或至少99.9%的序列同一性的胺基酸序列或由其組成。
在一些實施方案中，插入、刪除及/或替換的胺基酸的數量較佳不超過親本胺基酸序列中胺基酸總數的40%，更較佳不超過35%，更較佳1-33%，更較佳5-30%，更較佳10-25%，更較佳15-20%。例如，插入、刪除及/或替換的胺基酸的數量可以是1-50，較佳1-20，更較佳1-10，仍然更較佳1-5。在較佳實施方案中，插入、刪除及/或替換的胺基酸的數量為1、2、3、4、5、6或7。
在一些實施方案中，插入、刪除及/或替換可以在框架(FR)區執行，例如，在FR1、FR2、FR3及/或FR4；及/或恆定區，例如CL、CH1、CH2及/或CH3。
在一些實施方案中，一個或多個胺基酸的取代可以是一個或多個胺基酸的保守替換。保守替換的示例如上所述。
在較佳實施方案中，輕鏈包含如序列識別號: 37所示的胺基酸序列，重鏈包含如序列識別號: 34所示的胺基酸序列；或輕鏈包含如序列識別號: 38所示的胺基酸序列，重鏈包含如序列識別號: 35所示的胺基酸序列；或輕鏈包含如序列識別號: 37所示的胺基酸序列，重鏈包含如序列識別號: 36所示的胺基酸序列；或輕鏈包含如序列識別號: 39所示的胺基酸序列，重鏈包含如序列識別號: 34所示的胺基酸序列；或輕鏈包含如序列識別號: 40所示的胺基酸序列，重鏈包含如序列識別號: 34所示的胺基酸序列；或輕鏈包含如序列識別號: 41所示的胺基酸序列，重鏈包含如序列識別號: 34所示的胺基酸序列；或輕鏈包含如序列識別號: 42所示的胺基酸序列，重鏈包含如序列識別號: 34所示的胺基酸序列；或輕鏈包含如序列識別號: 43所示的胺基酸序列，重鏈包含如序列識別號: 34所示的胺基酸序列；或輕鏈包含如序列識別號: 39所示的胺基酸序列，重鏈包含如序列識別號: 35所示的胺基酸序列；或輕鏈包含如序列識別號: 74所示的胺基酸序列，重鏈包含如序列識別號: 70所示的胺基酸序列；或輕鏈包含如序列識別號: 74所示的胺基酸序列，重鏈包含如序列識別號: 71所示的胺基酸序列；或輕鏈包含如序列識別號: 74所示的胺基酸序列，重鏈包含如序列識別號: 72所示的胺基酸序列；或輕鏈包含如序列識別號: 75所示的胺基酸序列，重鏈包含如序列識別號: 72所示的胺基酸序列；或輕鏈包含如序列識別號: 75所示的胺基酸序列，重鏈包含如序列識別號: 70所示的胺基酸序列；或輕鏈包含如序列識別號: 74所示的胺基酸序列，重鏈包含如序列識別號: 73所示的胺基酸序列；或輕鏈包含如序列識別號: 76所示的胺基酸序列，重鏈包含如序列識別號: 71所示的胺基酸序列；或輕鏈包含如序列識別號: 76所示的胺基酸序列，重鏈包含如序列識別號: 73所示的胺基酸序列；或輕鏈包含如序列識別號: 76所示的胺基酸序列，重鏈包含如序列識別號: 70所示的胺基酸序列；或輕鏈包含如序列識別號: 76所示的胺基酸序列，重鏈包含如序列識別號: 72所示的胺基酸序列。
在一些實施方案中，抗體包含Fc區域。在一些實施方案中，Fc區域可以是任何同型，包括但不限於IgG1、IgG2、IgG3及IgG4，並且可以包含一個或多個突變或修飾。在一個實施方案中，Fc區為IgG1同種型或由其衍生，可選地具有一個或多個突變或修飾。在一個實施方案中，Fc區域為人IgG1 Fc。
在一個實施方案中，Fc區域缺乏效應子功能。例如，Fc區域可以是IgG1同種型，或非IgG1型，例如IgG2、IgG3或IgG4，其已發生突變，使得介導效應子功能(例如ADCC)的能力已降低或甚至消除。例如，Dall'Acqua WF et al., J Immunol. 177(2):1129-1138 (2006)及Hezareh M, J Virol.; 75(24):12161-12168 (2001). 在一些實施方案中，抗體的Fc區域包含具有L234A、L235A及G237A突變的野生型IgG1 Fc。
在一些實施方案中，抗體在一個或多個轉譯後修飾位點處突變。在一個實施方案中，Fc區域包括移除Asn連接醣基化的受體位點的突變，或被操縱以消除抗體的效應子功能。
轉譯後修飾(PTM)廣泛存在於哺乳動物細胞表現的蛋白質中。除了抗體中保守的PTM位點，例如IgG1抗體CH2結構域上保守的N-醣基化位點外，抗體的抗原結合位元點(即CDR區域)內出現的其他PTM位點可能會降低抗原結合活性或降低化學穩定性。例如，脫醯胺或異構化可能使分子不穩定及不均勻。為了減少序列易感性，可以經由突變去除PTM基序。經由PTM基序的存在掃描VH或VL序列，例如異構化基序(例如DG)。然後將“熱點”殘基(例如DG基序中的D或g)突變為種系序列中的對應殘基或具有類似生物物理性質的其他殘基。
在一些實施方案中，本發明的抗體藥物複合體包含特異性結合間皮素(MSLN)的抗體，所述抗體是嵌合抗體、人源化抗體或人抗體。在一些實施方案中，本發明的抗體藥物複合體包含特異性結合間皮素(MSLN)的抗體，所述抗體為選自IgG、IgA、IgM、IgE及IgD的同種型。在一些實施方案中，本發明的抗體藥物複合體包含特異性結合間皮素(MSLN)的抗體，所述抗體為選自IgG1、IgG2、IgG3及IgG4的亞型。
在一些實施方案中，本發明的抗體藥物複合體包含特異性結合間皮素的抗原結合片段，其中所述抗原結合片段選自Fab、Fab’、F(ab') 2、Fd、Fd’、Fv、scFv、ds-scFv及dAb。
在一些實施方案中，本發明的抗體藥物複合體包含特異性結合間皮素的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體是單株抗體、雙特異性抗體或多特異性抗體。
在一些實施方案中，本發明的抗體藥物複合體包含特異性結合間皮素的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體是單價的、雙價的、或多價的。
在一些實施方案中，本發明的抗體藥物複合體包含特異性結合間皮素的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段附接至螢光標記或、放射性標記或細胞毒性劑。
在一些實施方案中，本發明的抗體藥物複合體包含特異性結合間皮素的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體是雙特異性抗體，所述雙特異性抗體還包含第二抗原結合區，所述第二抗原結合區特異性結合腫瘤相關抗原、免疫細胞抗原或免疫檢查點分子。
在一些實施方案中，本發明的抗體藥物複合體為以下化合物或其互變異構體、立體異構體或藥學上可接受的鹽： Ab為抗MSLN抗體； q為選自1-10的整數，例如選自4、5、6、7、8、9或10，較佳為8。
在一些實施方案中，本發明的抗體藥物複合體為以下化合物或其互變異構體、立體異構體或藥學上可接受的鹽： Ab為抗MSLN抗體； q為選自1-10的整數，例如選自4、5、6、7、8、9或10，較佳為8。
在一些實施方案中，本發明的抗體藥物複合體為以下化合物或其互變異構體、立體異構體或藥學上可接受的鹽： Ab為抗MSLN抗體； q為選自1-10的整數，例如選自4、5、6、7、8、9或10，較佳為8。
在一些實施方案中，本發明的抗體藥物複合體為以下化合物或其互變異構體、立體異構體或藥學上可接受的鹽： Ab為抗MSLN抗體； q為選自1-10的整數，例如選自4、5、6、7、8、9或10，較佳為8。
在一些實施方案中，本發明的抗體藥物複合體為以下化合物或其互變異構體、立體異構體或藥學上可接受的鹽： ， 其中，Ab為抗MSLN抗體； q為選自1-10的整數，例如選自4、5、6、7、8、9或10，較佳為8。
在一些較佳的實施方案中，所述MSLN抗體包含重鏈(HC)及輕鏈(LC)，並且其中： (1) 所述HC包含如序列識別號: 34所示的胺基酸序列，並且所述LC包含如序列識別號: 37所示的胺基酸序列； (2) 所述HC包含如序列識別號: 34所示的胺基酸序列，並且所述LC包含如序列識別號: 43所示的胺基酸序列； (3) 所述HC包含如序列識別號: 70所示的胺基酸序列，並且所述LC包含如序列識別號: 74所示的胺基酸序列；或 (4) 所述HC包含如序列識別號: 72所示的胺基酸序列，並且所述LC包含如序列識別號: 76所示的胺基酸序列。
雙特異性抗體 在一些實施方案中，本發明的抗體藥物複合體中的抗體可以是雙特異性抗體或多特異性抗體。在一些實施方案中，本發明的抗體藥物複合體中的抗體是雙特異性抗體，其包含特異性結合MSLN的抗體或其抗原結合片段，並且還包含結合第二抗原的第二抗原結合區。在一些實施方案中，第二抗原可以是腫瘤相關抗原、免疫檢查點分子或免疫細胞抗原。
本領域中已經鑑定了許多與特定癌症相關的腫瘤相關抗原。在一些實施方案中，腫瘤相關抗原是可刺激明顯的腫瘤特異性免疫反應的抗原。這些抗原中的一些由正常細胞編碼，但不一定由正常細胞表現。這些抗原可以被描述為在正常細胞中通常沉默(即不表現)的抗原，僅在某些分化階段表現的抗原，以及隨時間表現的抗原，例如胚胎及胎兒抗原。其他癌症抗原由突變細胞基因編碼，例如癌基因(例如啟動的ras癌基因)、抑制基因(例如突變的p53)及由內部缺失或染色體易位產生的融合蛋白。其他癌症抗原可以由病毒基因編碼，例如攜帶RNA及DNA的腫瘤病毒。許多其他腫瘤相關抗原及針對它們的抗體是已知的及/或商用的，並且也可以由發明所屬技術領域中具有通常知識者生產。
在一些實施方案中，雙特異性抗體包含包含第一抗原結合區及第二抗原結合區以及任選的Fc區的單個多肽鏈。
藥物組合物 在第二方面，本發明提供了藥物組合物，其包含本發明的第一方面所述的抗體藥物複合體，以及任選的藥學上可接受的載體或賦形劑。
本發明提供包含本發明的抗體藥物複合體的藥物組合物。在一些實施方案中，藥物組合物進一步包含藥學上可接受的載體。術語“藥學上可接受的載體”包括生理上相容的任何及所有溶劑、緩衝液、分散介質、塗料、抗菌劑及抗真菌劑、等滲劑及吸收延遲劑等。較佳地，載體適合於靜脈、肌肉內、皮下、腸外、脊髓或表皮給藥(例如經由注射或輸注)。例如，在一些實施方案中，用於靜脈給藥的組合物通常是無菌等滲水緩衝液中的溶液。
本發明的藥物組合物經配製以與其預期給藥途徑相容。給藥途徑的示例包括胃腸外給藥，例如靜脈注射、皮內給藥、皮下給藥、口服給藥(例如吸入)、經皮給藥(即局部給藥)、經黏膜給藥及直腸給藥。用於腸外、皮內或皮下應用的溶液或懸浮液可包括以下成分：無菌稀釋劑，如注射用水、鹽水、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶劑；抗菌劑，如苯甲醇或對羥基苯甲酸甲酯；抗壞血酸或亞硫酸氫鈉等抗氧化劑；螯合劑，如乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic acid；EDTA)；緩衝液，如醋酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽，以及用於調節張力的試劑，如氯化鈉或葡萄糖。pH值可以用酸或鹼調節，如鹽酸或氫氧化鈉。腸外製劑可以封裝在安瓿、一次性注射器或玻璃或塑膠製成的多劑量瓶中。
治療方法 在第三方面，本發明提供了治療受試者中的癌症的方法，其包括向所述受試者施用有效量的本發明的第一方面所述的抗體藥物複合體或第二方面所述的藥物組合物。本文提供的抗體藥物複合體可用於減緩或抑制間皮素陽性癌症的進展，或抑制間皮素陽性癌症的轉移。在這些應用中，向受試者施用治療有效量的組合物，其量足以抑制癌細胞的生長、複製或轉移，或抑制癌症的跡象或症狀。合適的受試者可能包括被診斷患有表現間皮素的癌症的受試者，例如結腸癌、間皮瘤、卵巢癌、肺癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌、前列腺癌、鱗狀細胞癌、及膽管癌。
本文公開的抗體藥物複合體的施用還可以與其它抗癌劑或治療性治療(例如腫瘤的外科切除術)組合施用。任何合適的抗癌劑均可與本文所公開的抗體藥物複合體組合施用。示例性抗癌劑包括但不限於化療劑，例如有絲分裂抑制劑、烷基化劑、抗代謝劑、生長因子抑制劑、細胞週期抑制劑、酶、拓撲異構酶抑制劑、抗存活劑、生物反應調節劑、抗激素(例如抗雄激素)及抗血管生成劑。其他抗癌治療包括放射治療及其他針對癌細胞的抗體。
應用於治療某些類型癌症的另一種常見治療方法是手術治療，例如轉移性腫瘤的手術切除。治療的另一個例子是放射治療，例如向腫瘤部位施用放射性物質或能量(例如外粒子術治療)，以幫助在手術切除之前根除腫瘤或縮小腫瘤。
在第四方面，本發明提供了本發明的抗體藥物複合體或本發明的藥物組合物，其用於治療癌症。在一些實施方案中，所述癌症選自結腸癌、間皮瘤、卵巢癌、肺癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌、前列腺癌、鱗狀細胞癌、及膽管癌。在一些實施方案中，本發明的抗體或本發明的藥物組合物用於與第二治療劑組合使用。在一些實施方案中，所述第二治療劑選自抗體、化療劑、siRNA、反義寡核苷酸、多肽及小分子藥物。
在第五方面，本發明提供了本發明的抗體藥物複合體或本發明的藥物組合物在製備用於治療癌症的藥物中的用途。在一些實施方案中，所述癌症選自結腸癌、間皮瘤、卵巢癌、肺癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌、前列腺癌、鱗狀細胞癌、及膽管癌。在一些實施方案中，所述藥物用於與第二治療劑組合使用。在一些實施方案中，所述第二治療劑選自抗體、化療劑、siRNA、反義寡核苷酸、多肽及小分子藥物。
實施例
實施例1. 初始抗體及變體製備 為獲得 MSLN 特異性抗體，經由不同的方法對Harbour H2L2 轉基因小鼠 (https://harbourantibodies.com/)進行免疫。經由免疫產生了許多結合 MSLN 細胞外 (ECD) 蛋白及 MSLN 表現細胞如 COV644 細胞（表現MSLN 的卵巢上皮-黏液癌細胞系）的抗體。
具體而言，使用重組人 MSLN ECD His-tag 蛋白 (Acro Biosystem, Catalog #MSN-H5223) 或重組食蟹猴 MSLN ECD His-tag 蛋白 (具有序列識別號: 77所示的胺基酸序列)作為免疫原免疫Harbor H2L2轉基因小鼠。
利用Beacon® Optofluidic 系統進行單個 B 細胞篩選，從單個漿細胞中獲得抗體的重鏈及輕鏈序列。一般程序包括從單個漿細胞裂解物中提取及純化總 RNA，反轉錄合成 cDNA，擴增及純化cDNA，擴增編碼抗體重鏈及輕鏈的 DNA 序列，選殖及轉染，以及 Sanger 測序。對獲得的序列進行唯一性及聚類分析，然後合成編碼抗體重鏈及輕鏈配對的DNA序列。獲得初始抗體PR300159 及 PR300186。
經由 PTM（轉譯後修飾） 去除程序進一步優化抗 MSLN 抗體 PR300159 及 PR300186 的 VH 及 VL 序列。從 PR300159 及 PR300186 中去除 PTM 獲得的設計變體顯示在表 2 中。這些抗 MSLN 抗體的胺基酸序列顯示在表 3至表6中。 PR300159-1、PR300159-3、PR300159-4、PR300159-5 、PR300159-6、PR300159-7、PR300159-8 及 PR300159-9 是從 PR300159 衍生的去除 PTM 的抗體。PR300186-2、PR300186-3、PR300186-4、PR300186-5、PR300186-6、PR300186-7、PR300186-8、PR300186-9 及 PR300186-10 是從 PR300186 衍生的去除 PTM 的抗體。
表2. PR300159及PR300186衍生PTM變體
親本抗體 變體抗體 突變位點 Fc
PR300159 PR300159-1 重鏈 G33A及D54E 輕鏈N92S hIgG1 Fc
PR300159-3 重鏈G33A及G55A hIgG1 Fc
PR300159-4 輕鏈S93A hIgG1 Fc
PR300159-5 輕鏈N92Q hIgG1 Fc
PR300159-6 輕鏈S93T hIgG1 Fc
PR300159-7 輕鏈N92T hIgG1 Fc
PR300159-8 輕鏈N92A hIgG1 Fc
PR300159-9 重鏈G33A及D54E 輕鏈S93A hIgG1 Fc
PR300186 PR300186-2 重鏈N30Q hIgG1 Fc
PR300186-3 重鏈N30Q及N58Q hIgG1 Fc
PR300186-4 重鏈N30Q及N58Q 輕鏈N30Q hIgG1 Fc
PR300186-5 輕鏈N30Q hIgG1 Fc
PR300186-6 重鏈N30Q及S59A hIgG1 Fc
PR300186-7 重鏈N30Q 輕鏈S31A hIgG1 Fc
PR300186-8 重鏈N30Q及S59A 輕鏈S31A hIgG1 Fc
PR300186-9 輕鏈S31A hIgG1 Fc
PR300186-10 重鏈 N30Q 及N58Q 輕鏈S31A hIgG1 Fc
表3. 抗體的重鏈及輕鏈的胺基酸序列
殖株 重鏈 SEQ ID   NO 輕鏈 序列識別號
PR300159 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSDGMNWVRQAPGKGLEWVAVIWNDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGPLWPLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 34 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYCQQYNSYSRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 37
PR300159-1 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSDAMNWVRQAPGKGLEWVAVIWNEGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGPLWPLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 35 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYCQQYSSYSRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 38
PR300159-3 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSDAMNWVRQAPGKGLEWVAVIWNDASNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGPLWPLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 36 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYCQQYNSYSRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 37
PR300159-4 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSDGMNWVRQAPGKGLEWVAVIWNDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGPLWPLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 34 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYCQQYNAYSRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 39
PR300159-5 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSDGMNWVRQAPGKGLEWVAVIWNDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGPLWPLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 34 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYCQQYQSYSRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 40
PR300159-6 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSDGMNWVRQAPGKGLEWVAVIWNDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGPLWPLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 34 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYCQQYNTYSRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 41
PR300159-7 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSDGMNWVRQAPGKGLEWVAVIWNDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGPLWPLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 34 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYCQQYTSYSRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 42
PR300159-8 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSDGMNWVRQAPGKGLEWVAVIWNDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGPLWPLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 34 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYCQQYASYSRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 43
PR300159-9 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSDAMNWVRQAPGKGLEWVAVIWNEGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGPLWPLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 35 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYCQQYNAYSRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 39
PR300186 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSINNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTNSNPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 70 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVNSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 74
PR300186-2 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIQNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTNSNPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 71 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVNSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 74
PR300186-3 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIQNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTQSNPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 72 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVNSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 74
PR300186-4 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIQNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTQSNPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 72 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVQSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 75
PR300186-5 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSINNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTNSNPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 70 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVQSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 75
PR300186-6 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIQNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTNANPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 73 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVNSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 74
PR300186-7 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIQNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTNSNPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 71 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVNANLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 76
PR300186-8 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIQNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTNANPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 73 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVNANLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 76
PR300186-9 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSINNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTNSNPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 70 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVNANLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 76
PR300186-10 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIQNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTQSNPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 72 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVNANLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 76
表4. 本發明的抗體的重鏈可變區及輕鏈可變區的胺基酸序列
殖株 重鏈可變區 SEQ ID   NO 輕鏈可變區 SEQ ID   NO
PR300159 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSDGMNWVRQAPGKGLEWVAVIWNDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGPLWPLDYWGQGTLVTVSS 24 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYCQQYNSYSRTFGQGTKVEIK 27
PR300159-1 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSDAMNWVRQAPGKGLEWVAVIWNEGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGPLWPLDYWGQGTLVTVSS 25 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYCQQYSSYSRTFGQGTKVEIK 28
PR300159-3 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSDAMNWVRQAPGKGLEWVAVIWNDASNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGPLWPLDYWGQGTLVTVSS 26 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYCQQYNSYSRTFGQGTKVEIK 27
PR300159-4 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSDGMNWVRQAPGKGLEWVAVIWNDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGPLWPLDYWGQGTLVTVSS 24 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYCQQYNAYSRTFGQGTKVEIK 29
PR300159-5 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSDGMNWVRQAPGKGLEWVAVIWNDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGPLWPLDYWGQGTLVTVSS 24 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYCQQYQSYSRTFGQGTKVEIK 30
PR300159-6 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSDGMNWVRQAPGKGLEWVAVIWNDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGPLWPLDYWGQGTLVTVSS 24 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYCQQYNTYSRTFGQGTKVEIK 31
PR300159-7 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSDGMNWVRQAPGKGLEWVAVIWNDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGPLWPLDYWGQGTLVTVSS 24 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYCQQYTSYSRTFGQGTKVEIK 32
PR300159-8 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSDGMNWVRQAPGKGLEWVAVIWNDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGPLWPLDYWGQGTLVTVSS 24 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYCQQYASYSRTFGQGTKVEIK 33
PR300159-9 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSDAMNWVRQAPGKGLEWVAVIWNEGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGPLWPLDYWGQGTLVTVSS 25 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYCQQYNAYSRTFGQGTKVEIK 29
PR300186 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSINNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTNSNPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSS 63 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVNSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIK 67
PR300186-2 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIQNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTNSNPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSS 64 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVNSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIK 67
PR300186-3 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIQNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTQSNPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSS 65 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVNSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIK 67
PR300186-4 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIQNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTQSNPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSS 65 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVQSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIK 68
PR300186-5 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSINNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTNSNPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSS 63 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVQSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIK 68
PR300186-6 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIQNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTNANPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSS 66 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVNSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIK 67
PR300186-7 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIQNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTNSNPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSS 64 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVNANLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIK 69
PR300186-8 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIQNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTNANPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSS 66 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVNANLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIK 69
PR300186-9 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSINNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTNSNPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSS 63 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVNANLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIK 69
PR300186-10 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIQNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTQSNPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSS 65 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVNANLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIK 69
表5. 抗體的HCDR1至HCDR3的胺基酸序列(根據Combined 編碼規則)
Ab 序列識別號: 　 HFWR1 序列識別號: 　 HCDR1 序列識別號: 　 HFWR2 序列識別號: 　 HCDR2 序列識別號: 　 HFWR3 序列識別號: 　 HCDR3 序列識別號: 　 HFWR4
PR300159 1 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAAS 2 GFTFSSDGMN 3 WVRQAPGKGLEWVA 4 VIWNDGSNKYYADSVKG 5 RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR 6 DRGPLWPLDY 7 WGQGTLVTVSS
PR300159-1 1 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAAS 15 GFTFSSDAMN 3 WVRQAPGKGLEWVA 16 VIWNEGSNKYYADSVKG 5 RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR 6 DRGPLWPLDY 7 WGQGTLVTVSS
PR300159-3 1 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAAS 15 GFTFSSDAMN 3 WVRQAPGKGLEWVA 17 VIWNDASNKYYADSVKG 5 RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR 6 DRGPLWPLDY 7 WGQGTLVTVSS
PR300159-4 1 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAAS 2 GFTFSSDGMN 3 WVRQAPGKGLEWVA 4 VIWNDGSNKYYADSVKG 5 RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR 6 DRGPLWPLDY 7 WGQGTLVTVSS
PR300159-5 1 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAAS 2 GFTFSSDGMN 3 WVRQAPGKGLEWVA 4 VIWNDGSNKYYADSVKG 5 RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR 6 DRGPLWPLDY 7 WGQGTLVTVSS
PR300159-6 1 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAAS 2 GFTFSSDGMN 3 WVRQAPGKGLEWVA 4 VIWNDGSNKYYADSVKG 5 RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR 6 DRGPLWPLDY 7 WGQGTLVTVSS
PR300159-7 1 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAAS 2 GFTFSSDGMN 3 WVRQAPGKGLEWVA 4 VIWNDGSNKYYADSVKG 5 RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR 6 DRGPLWPLDY 7 WGQGTLVTVSS
PR300159-8 1 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAAS 2 GFTFSSDGMN 3 WVRQAPGKGLEWVA 4 VIWNDGSNKYYADSVKG 5 RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR 6 DRGPLWPLDY 7 WGQGTLVTVSS
PR300159-9 1 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAAS 15 GFTFSSDAMN 3 WVRQAPGKGLEWVA 16 VIWNEGSNKYYADSVKG 5 RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR 6 DRGPLWPLDY 7 WGQGTLVTVSS
PR300186 44 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVS 45 GGSINNYYWS 46 WVRQPPGKGLEWIG 47 YIFYSGSTNSNPSLKS 48 RVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR 49 EVGRIAVAGWFFDL 50 WGRGTLVTVSS
PR300186-2 44 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVS 58 GGSIQNYYWS 46 WVRQPPGKGLEWIG 47 YIFYSGSTNSNPSLKS 48 RVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR 49 EVGRIAVAGWFFDL 50 WGRGTLVTVSS
PR300186-3 44 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVS 58 GGSIQNYYWS 46 WVRQPPGKGLEWIG 59 YIFYSGSTQSNPSLKS 48 RVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR 49 EVGRIAVAGWFFDL 50 WGRGTLVTVSS
PR300186-4 44 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVS 58 GGSIQNYYWS 46 WVRQPPGKGLEWIG 59 YIFYSGSTQSNPSLKS 48 RVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR 49 EVGRIAVAGWFFDL 50 WGRGTLVTVSS
PR300186-5 44 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVS 45 GGSINNYYWS 46 WVRQPPGKGLEWIG 47 YIFYSGSTNSNPSLKS 48 RVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR 49 EVGRIAVAGWFFDL 50 WGRGTLVTVSS
PR300186-6 44 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVS 58 GGSIQNYYWS 46 WVRQPPGKGLEWIG 60 YIFYSGSTNANPSLKS 48 RVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR 49 EVGRIAVAGWFFDL 50 WGRGTLVTVSS
PR300186-7 44 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVS 58 GGSIQNYYWS 46 WVRQPPGKGLEWIG 47 YIFYSGSTNSNPSLKS 48 RVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR 49 EVGRIAVAGWFFDL 50 WGRGTLVTVSS
PR300186-8 44 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVS 58 GGSIQNYYWS 46 WVRQPPGKGLEWIG 60 YIFYSGSTNANPSLKS 48 RVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR 49 EVGRIAVAGWFFDL 50 WGRGTLVTVSS
PR300186-9 44 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVS 45 GGSINNYYWS 46 WVRQPPGKGLEWIG 47 YIFYSGSTNSNPSLKS 48 RVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR 49 EVGRIAVAGWFFDL 50 WGRGTLVTVSS
PR300186-10 44 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVS 58 GGSIQNYYWS 46 WVRQPPGKGLEWIG 59 YIFYSGSTQSNPSLKS 48 RVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR 49 EVGRIAVAGWFFDL 50 WGRGTLVTVSS
表6. 抗體的LCDR1至LCDR3的胺基酸序列(根據Combined 編碼規則)
Ab 序列識別號:　 LFWR1 序列識別號:　 LCDR1 　序列識別號: LFWR2 序列識別號:　 LCDR2 　序列識別號: LFWR3 　序列識別號: LCDR3 序列識別號:　 LFWR4
PR300159 8 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITC 9 RASQSISRWLA 10 WYQQKPGKAPKLLIY 11 KASSLES 12 GVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYC 13 QQYNSYSRT 14 FGQGTKVEIK
PR300159-1 8 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITC 9 RASQSISRWLA 10 WYQQKPGKAPKLLIY 11 KASSLES 12 GVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYC 18 QQYSSYSRT 14 FGQGTKVEIK
PR300159-3 8 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITC 9 RASQSISRWLA 10 WYQQKPGKAPKLLIY 11 KASSLES 12 GVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYC 13 QQYNSYSRT 14 FGQGTKVEIK
PR300159-4 8 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITC 9 RASQSISRWLA 10 WYQQKPGKAPKLLIY 11 KASSLES 12 GVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYC 19 QQYNAYSRT 14 FGQGTKVEIK
PR300159-5 8 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITC 9 RASQSISRWLA 10 WYQQKPGKAPKLLIY 11 KASSLES 12 GVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYC 20 QQYQSYSRT 14 FGQGTKVEIK
PR300159-6 8 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITC 9 RASQSISRWLA 10 WYQQKPGKAPKLLIY 11 KASSLES 12 GVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYC 21 QQYNTYSRT 14 FGQGTKVEIK
PR300159-7 8 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITC 9 RASQSISRWLA 10 WYQQKPGKAPKLLIY 11 KASSLES 12 GVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYC 22 QQYTSYSRT 14 FGQGTKVEIK
PR300159-8 8 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITC 9 RASQSISRWLA 10 WYQQKPGKAPKLLIY 11 KASSLES 12 GVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYC 23 QQYASYSRT 14 FGQGTKVEIK
PR300159-9 8 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITC 9 RASQSISRWLA 10 WYQQKPGKAPKLLIY 11 KASSLES 12 GVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYC 19 QQYNAYSRT 14 FGQGTKVEIK
PR300186 51 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSC 52 RASQSVNSNLA 53 WYQQKPGQAPRLLIY 54 GASTRAT 55 GIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC 56 QQYNNWPLT 57 FGQGTRLEIK
PR300186-2 51 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSC 52 RASQSVNSNLA 53 WYQQKPGQAPRLLIY 54 GASTRAT 55 GIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC 56 QQYNNWPLT 57 FGQGTRLEIK
PR300186-3 51 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSC 52 RASQSVNSNLA 53 WYQQKPGQAPRLLIY 54 GASTRAT 55 GIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC 56 QQYNNWPLT 57 FGQGTRLEIK
PR300186-4 51 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSC 61 RASQSVQSNLA 53 WYQQKPGQAPRLLIY 54 GASTRAT 55 GIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC 56 QQYNNWPLT 57 FGQGTRLEIK
PR300186-5 51 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSC 61 RASQSVQSNLA 53 WYQQKPGQAPRLLIY 54 GASTRAT 55 GIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC 56 QQYNNWPLT 57 FGQGTRLEIK
PR300186-6 51 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSC 52 RASQSVNSNLA 53 WYQQKPGQAPRLLIY 54 GASTRAT 55 GIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC 56 QQYNNWPLT 57 FGQGTRLEIK
PR300186-7 51 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSC 62 RASQSVNANLA 53 WYQQKPGQAPRLLIY 54 GASTRAT 55 GIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC 56 QQYNNWPLT 57 FGQGTRLEIK
PR300186-8 51 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSC 62 RASQSVNANLA 53 WYQQKPGQAPRLLIY 54 GASTRAT 55 GIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC 56 QQYNNWPLT 57 FGQGTRLEIK
PR300186-9 51 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSC 62 RASQSVNANLA 53 WYQQKPGQAPRLLIY 54 GASTRAT 55 GIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC 56 QQYNNWPLT 57 FGQGTRLEIK
PR300186-10 51 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSC 62 RASQSVNANLA 53 WYQQKPGQAPRLLIY 54 GASTRAT 55 GIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC 56 QQYNNWPLT 57 FGQGTRLEIK
實施例2. 抗體與人及食蟹猴MSLN蛋白的結合活性 將人MSLN(Acro Biosystems，目錄號：MSN-H5223)或食蟹猴MSLN蛋白(Harbourbiomed，批號：2019072202)在PBS中稀釋至1µg/mL的濃度。每孔向ELISA微孔盤中添加100µl稀釋的人MSLN或食蟹猴MSLN，並在4℃下培養過夜。用ELISA阻斷液(含有2%w/v BSA，0.05%(v/v)吐溫-20，pH 7.4 PBS緩衝液)37℃下阻斷平盤持續1小時，然後洗滌平盤並且與稀釋的抗MSLN抗體(PR300186、PR300186-2、PR300186-3、PR300186-4、PR300186-5、PR300186-6、PR300186-7、PR300186-8、PR300186-9及PR300186-10)(以15µg/mL)(100nM, 10倍稀釋，8個點)在37℃下培育1小時。然後洗滌平盤，用HRP綴合的山羊抗人IgG(H+L)抗體(Jackson，Cat:109-035-088)在37°C下培育1小時。添加100µL 3,3′,5,5′-四甲基聯苯胺(TMB) 底物(Biopanda，目錄：TMB-S-003)，並將平盤在室溫下培育15分鐘。添加100µL ELISA終止溶液(Solarbio，Cat#：C1058)終止反應，並經由ELISA平盤讀取器(Molecular Devices, Spectra max 384 plus)測定450 nm處的光密度(OD450nm)。
PR300186、PR300186-2、PR300186-3、PR300186-4、PR300186-5、PR300186-6、PR300186-7、PR300186-8、PR300186-9及PR300186-10與人MSLN蛋白的結合活性結果如圖1及表7所示，與食蟹猴MSLN蛋白的結合活性結果如圖2及表7所示。結果表明，所有這些抗體對人及食蟹猴MSLN蛋白均具有良好的結合活性。
表7. 本發明的抗體與人MSLN蛋白及食蟹猴MSLN蛋白的結合活性
抗體 人MSLN 食蟹猴MSLN
EC50 (nM) Span EC50 (nM) Span
PR300186 0.12 3.42 0.05 2.33
PR300186-2 0.14 3.36 0.05 2.43
PR300186-3 0.10 3.25 0.05 2.36
PR300186-4 0.18 3.47 0.07 2.53
PR300186-5 0.22 3.61 0.07 2.70
PR300186-6 0.21 3.66 0.07 2.67
PR300186-7 0.14 3.85 0.04 2.24
PR300186-8 0.13 3.87 0.04 2.18
PR300186-9 0.11 3.85 0.05 2.19
PR300186-10 0.10 3.71 0.04 2.19
實施例3. MSLN抗體與表現MSLN的細胞的結合活性 經由流式細胞術檢測重組抗MSLN抗體(PR300159、PR300159-1、PR300159-3、PR300159-5、PR300159-6、PR300159-8、PR300159-9、PR300186、PR300186-2、PR300186-3、PR300186-4、PR300186-5、PR300186-6、PR300186-7、PR300186-8、PR300186-9或PR300186-10)與COV644細胞系(ECACC，目錄號：07071908)的結合。簡言之，抗MSLN抗體在染色緩衝液(含2%FBS的PBS)中序列稀釋。將50µL稀釋抗體溶液添加到含有1-2×10 5個細胞的50µL細胞懸浮液中，並在4℃下培育1小時。用染色緩衝液(含2%FBS的PBS)洗滌細胞兩次，並將100µL 1:1000稀釋螢光標記的抗人IgG抗體(Alexa Fluor® 488 親和純山羊抗人IgG(H+L), Jackson ImmunoResearch, 目錄號：109-545-088)添加到每個孔中。在4℃下培育1小時後，用染色緩衝液洗滌細胞兩次，並進行流式細胞術。
如圖3及表8所示， PR300159、PR300159-1、PR300159-3、PR300159-5、PR300159-6、PR300159-8及PR300159-9都對COV644細胞具有較高親和力。
表8. 經由FACS檢測的抗體與細胞表面MSLN的結合活性
抗體 COV644
EC50 (nM) TOP (MFI)
PR300159 1.99 2072495
PR300159-1 1.64 2340478
PR300159-3 2.14 2062034
PR300159-5 2.75 2127765
PR300159-6 4.07 2189544
PR300159-8 2.33 2153079
PR300159-9 8.25 1561284
如圖4所示，PR300186、PR300186-2、PR300186-3、PR300186-4、PR300186-5、PR300186-6、PR300186-7、PR300186-8、PR300186-9及PR300186-10均對COV644細胞具有較高親和力。
實施例4. 抗體被表現MSLN細胞內化的測定 在本實施例中，使用pHAb Amine Reactive Dye (Promega, Cat # G9841)來確定抗MSLN抗體在不同腫瘤細胞上的內化效率。pHAb染料是一種pH感測器染料，在pH值大於7時具有非常低的螢光，當溶液的pH值變低時，螢光顯著增加。用pHAb染料標記的抗體在中性pH條件下結合細胞外膜時，檢測不到螢光或極低螢光。pHAb染料標記的抗體被細胞內化後，在細胞的內體及溶體中的低pH環境下，檢測到較強的螢光。
抗體用pHAb染料標記，按照套組說明書計算DAR值。pHAb染料標記的抗體與COV644在4℃(此溫度下抗體內化活性很低，用作背景對照)或37℃培育24小時。然後檢測到激發光值(Ex)在532nm，發射光值(Em)在560nm處的螢光。抗體內化結果的計算方式為：37℃下的螢光強度減去4℃下背景下的螢光強度，再除以抗體綴合染料的DAR值。螢光值越高值表示抗體在細胞上的內化效率越高。
如圖5至圖6及表9中的結果所示，PR300159、PR300159-1、PR300159-3、PR300159-4、PR300159-5、PR300159-6、PR300159-7、PR300159-8、PR300159-9以及PR300186、PR300186-3、PR300186-9、PR300186-10均顯示出較好的內化活性。
表9. 抗體被MSLN表現細胞內化的結果
抗體 內化
FLU
PR300159 22214
PR300159-1 13720
PR300159-3 9180
PR300159-4 20888
PR300159-5 20912
PR300159-6 17753
PR300159-7 22440
PR300159-8 21172
PR300159-9 8299
PR300186 6049
PR300186-3 7042
PR300186-9 8069
PR300186-10 8219
實施例5. PR300159-8及PR300186-10在不同腫瘤細胞上的結合活性實驗 經由流式細胞術檢測PR300159-8及PR300186-10抗體在以下多種腫瘤細胞上的結合活性：乳腺癌細胞株COV644 (ECACC, 07071908)、OVCAR3 (ATCC, HTB-161)及SKOV3 (ATCC，HTB77)；肺癌細胞株NCl-H226 (ATCC, CRL5826)、HCl-H1568 (ATCC, CRL5876)；胰腺癌細胞株HPAC (ATCC, CRL2199)及CAPAN2 (ATCC, HTB80)；及胃癌細胞株MKN45 (CCTCC; GDC0220)。
PR300159-8及PR300186-10抗體在染色緩衝液(含2% FBS的PBS)中序列稀釋。將稀釋後的抗體液50µL加入含1-2 ×10 5細胞的細胞懸液50µL中，4℃培育1小時。細胞用緩衝液(含2% 胎牛血清的PBS)沖洗兩次，每孔加入100 µL螢光標記抗人IgG抗體(Alexa Fluor®488親和純山羊抗人IgG(H+L)，Jackson ImmunoResearch, Catalog 109-545-088)。4°C培育1小時後，用緩衝液洗滌細胞兩次，進行流式細胞儀檢測。
實驗結果見表10，實驗結果表明，PR300159-8抗體在不同的腫瘤細胞上均有較好的結合活性。抗體PR300159-8的結合活性高於PR300186-10。
表10. PR300159-8及PR300186-10在多種腫瘤細胞上的結合活性
細胞系 PR300159-8 PR300186-10
EC50 (nM) TOP (MFI) EC50 (nM) TOP (MFI)
NCIH1568 0.54 267401 135.60 168430
NCIH226 0.20 835313 1.66 614535
COV644 0.71 1884412 2.14 1101682
OVCAR3 33.22 653501 弱結合 75446
SKOV3 0.59 97669 弱結合 41733
MKN45 0.1 173076 弱結合 119565
HPAC 0.36 359012 12.45 239746
CAPAN2 0.60 85162 無結合 無結合
實施例6. PR300159-8及PR300186-10抗體在多種腫瘤細胞上的內化活性實驗 用流式細胞術檢測PR300159-8及PR300186-10抗體在以下多種腫瘤細胞上的內化效率：乳腺癌細胞株COV644 (ECACC, 07071908)； 肺癌細胞株NCl-H226 (ATCC，CRL5826)；及胰腺癌細胞株HPAC (ATCC，CRL2199)。
在本實施例中，使用pHAb Amine Reactive Dye (Promega, Cat # G9841)來確定抗MSLN抗體在不同腫瘤細胞上的內化效率。pHAb染料是一種pH感測器染料，在pH值大於7時具有非常低的螢光，當溶液的pH值變低時，螢光顯著增加。用pHAb染料標記的抗體在中性pH條件下結合細胞外膜時，檢測不到螢光或極低螢光。pHAb染料標記的抗體被細胞內化後，在細胞的內體及溶體中的低pH環境下，檢測到較強的螢光。
抗體用pHAb染料標記，按照套組說明書計算DAR值。pHAb染料標記的抗體與COV644在4℃ (此溫度下抗體內化活性很低，用作背景對照)或37℃培育24小時。然後檢測到激發光值(Ex)在532nm，發射光值(Em)在560nm處的螢光。抗體內化結果的計算方式為：37℃下的螢光強度減去4℃下背景下的螢光強度，再除以抗體綴合染料的DAR值。螢光值越高值表示抗體在細胞上的內化效率越高。
如圖7、圖8及圖9的結果表明，PR300159-8及PR300186-10在COV644、NCl-H226及HPAC細胞上均有較好的內化活性, 抗體PR300159-8的細胞內化活性高於PR300186-10。
實施例7. 生物活性分子及合成“藥物-連接體化合物”過程使用的中間體的合成 實施例7.1：(S)-7-乙基-7-羥基-14-(3-羥基丙基)-10,13-二氫-11H-[1,3]二氧雜環戊烷並[4,5-g]吡喃並[3',4':6,7]吲哚嗪並[1,2-b]喹啉-8,11(7H)-二酮(A1)的合成 步驟一：(S)-14-(3-氯丙基)-7-乙基-7-羥基-10,13-二氫-11H-[1,3]二氧雜環戊烷並[4,5-g]吡喃並[3',4':6,7]吲哚嗪並[1,2-b]喹啉-8,11(7H)-二酮(A1B)的合成 冰浴條件下，向化合物( S)-7-乙基-7-羥基-10,13-二氫-11H-[1,3]二氧雜環戊烷[4,5-g]吡喃並[3',4'：6,7]吲哚嗪並[1,2-b]喹啉-8,11(7H)-二酮(A1A，500 mg)的75%硫酸溶液(5 mL)中加入七水合硫酸亞鐵(570 mg七水合硫酸亞鐵溶於1mL水中)，及4,4-二甲氧基氯丁烷(3.89 g)，反應液攪拌三分鐘後滴加雙氧水(29%，2.5 mL)。反應液在0 oC下攪拌反應5分鐘後升至室溫，並攪拌反應3小時。反應液加入水(50 mL)稀釋，乙酸乙酯(80 mL×2)萃取，有機相用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗產品，粗產品用C18柱(乙腈/0.05%甲酸的水溶液：5%-60%)進一步純化得到目標化合物A1B(黃色固體，400 mg，收率：67%)。
LCMS(液相層析質譜儀(liquid chromatography mass spectrometry)) (電灑游離法(electrospray ionization；ESI)) [M+H] +：468.9； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.65 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 6.50 (s, 1H), 6.30 (s, 2H), 5.42 (s, 2H), 5.26 (s, 2H), 3.81 (d, J= 5.9 Hz, 2H), 3.22 (s, 2H), 1.98 (d, J= 6.7 Hz, 4H), 0.88 (t, J= 7.2 Hz, 3H)。
步驟二：(S)-7-乙基-7-羥基-14-(3-羥基丙基)-10,13-二氫-11H-[1,3]二氧雜環戊烷並[4,5-g]吡喃並[3',4':6,7]吲哚嗪並[1,2-b]喹啉-8,11(7H)-二酮(A1)的合成 將化合物(S)-14-(3-氯丙基)-7-乙基-7-羥基-10,13-二氫-11H-[1,3]二氧雜環戊烷並[4,5-g]吡喃並[3',4':6,7]吲哚嗪並[1,2-b]喹啉-8,11(7H)-二酮(A1B，100 mg，0.213 mmol)溶於10%硫酸(5 mL)溶液中，反應在110°C下反應48小時。向反應液中加入飽和碳酸氫鈉(30 mL)溶液，用二氯甲烷(10 mL X 5)萃取，無水硫酸鈉乾燥，抽濾，減壓濃縮得到粗產品。經高效液相製備純化(乙腈/水含0.05%甲酸)得到(S)-7-乙基-7-羥基-14-(3-羥基丙基)-10,13-二氫-11H-[1,3]二氧雜環戊烷並[4,5-g]吡喃並[3',4':6,7]吲哚嗪並[1,2-b]喹啉-8,11(7H)-二酮(A1，1.78 mg)。
LCMS (ESI) [M+H] +：451.0； 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ 7.63 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 6.48 (s, 1H), 6.28 (s, 2H), 5.47 – 5.37 (m, 2H), 5.32 – 5.19 (m, 2H), 3.51 – 3.46 (m, 2H), 3.17 – 3.13 (m, 2H), 1.92 – 1.76 (m, 4H), 0.90 – 0.84 (m, 3H)。
實施例7.2：(S)-4-乙基-8-氟-4-羥基-11-(3-羥基丙基)-9-甲基-1,12-二氫-14H-吡喃並[3',4':6,7]吲哚嗪並[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(A2)的合成 步驟一： 0°C下，向化合物A2A(10 g)的1,2-二氯乙烷(200 mL)溶液中滴加1mol/L三氯化硼(96 mL)，加入4-氯丁腈(9.9 g)。80 ℃下攪拌反應2小時。反應液降至室溫，加入2 mol/L鹽酸 (90 mL)並在80 ℃下回流攪拌0.5 小時。反應液降至室溫,加入少量水稀釋，用二氯甲烷(200 mL X 3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，抽濾，濃縮得到粗品，粗產品經柱層析分離純化 (石油醚：乙酸乙酯=10/1)得到目標化合物A2B(4 g)。
LCMS (ESI) [M+H] +：230.0。 步驟二： 向化合物A2B(50 mg)中加入(S)-4-乙基-4-羥基-7,8-二氫-1H-吡喃並[3,4-f]吲哚嗪-3,6,10(4H)-三酮(A2C，35 mg)，一水合對甲苯磺酸(41.4 mg)，二氯甲烷(30 mL)，溶液澄清混勻後減壓濃縮，用油泵抽至真空，反應在120°C真空下反應3小時。LCMS顯示反應完全。將反應液降至室溫，加入水(20 mL)，用二氯甲烷(20 mL X 3)萃取。合併有機相依次並無水硫酸鈉乾燥、過濾，濾液減壓濃縮得到粗產品。粗產品經柱層析分離純化 (二氯甲烷比甲醇=20比1)得到目標化合物A2D(80 mg)為白色固體。
LCMS (ESI) [M+H] +：457.0。 步驟三： 將化合物A2D(75 mg)溶於六甲基磷醯三胺，加入純水(0.8 mL)反應液在100 oC下攪拌72小時。LCMS檢測反應完成。經製備層析(0.01% TFA in water，MeCN)純化得到目標化合物A2(10 mg)。
LCMS (ESI) [M+H] +：439.2； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.22 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.87 (d, J= 10.9 Hz, 1H), 7.31 (s, 1H), 6.50 (s, 1H), 5.43 (s, 2H), 5.30 (s, 2H), 4.67 (t, J= 4.9 Hz, 1H), 3.55 – 3.47 (m, 2H), 3.28 – 3.20 (m, 2H), 2.51 (s, 3H), 1.93 – 1.81 (m, 4H), 0.88 (t, J= 7.3 Hz, 3H)。
實施例7.3： (S)-2-胺基-N-((3-(7-乙基-7-羥基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氫-10H-[1,3]二氧雜環戊烷並[4,5-g]吡喃並[3',4':6,7]吲哚嗪並[1,2-b]喹啉-14-基)丙氧基)甲基)乙醯胺(B1)的合成 步驟一：將化合物B1A(368 mg)，化合物A1(440 mg)及對甲苯磺酸吡啶鹽(PPTS)(25 mg)在二氯甲烷(20 mL)中回流20小時，然後用碳酸氫鈉水溶液及鹽酸水溶液分別洗滌，減壓除去有機溶劑，得到粗產物，粗產品經柱層析分離純化 (二氯甲烷：甲醇=10/1)得到目標化合物化合物B1B(240 mg)。
LCMS (ESI) [M+H] +：759.5。 步驟二：將化合物B1B(240 mg)溶於DMF(5 mL)，加入呱啶(1 mL)，化合物攪拌20分鐘，溶於減壓除去低沸點組分，殘留物直接用於下步合成。少量粗產物經反相層析(乙腈/0.05%FA的水溶液: 5%到50%) 純化後得目標化合物B1。
ESI-MS (m/z): 537.4 [M+H] +； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.13 (t, 1H)，8.04 (br, 2H), 7.58(s，1H)，7.51(s，1H)，7.25(s，1H)，6.29(s，2H)，5.43(S，2H)，5.21(s, 2H)，4.65(d，2H)，3.63(m，2H)，3.53(m，2H)，3.11(m，2H)，1.87(m，4H)，0.88(t，3H)。
實施例7.4：(S)-2-胺基-N-((3-(4-乙基-8-氟-4-羥基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氫-1H-吡喃並[3',4':6,7]吲哚嗪並[1,2-b]喹啉-11-基)丙氧基)甲基)乙醯胺(B2)的合成 步驟一： 將化合物A2 (160 mg, 0.365 mmol) 溶在N,N-二甲基甲醯胺 (3 mL) 中，加入(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)胺基)乙醯胺基)甲基乙酸酯 (B2A，672 mg, 1.83 mmol)，然後加入HCl-乙酸乙酯 (0.073 mL, 3M) 於反應液中，反應液在室溫下攪拌過夜。LCMS檢測反應完成。該反應液直接經反相層析(乙腈/0.05%FA的水溶液: 5%到50%) 純化後得目標化合物B2B (80 mg, 收率29.0%)為白色固體。
LCMS (ESI) [M+H] += 747.4； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.74 (t, J= 6.4 Hz, 1H), 8.28 – 8.17 (m, 1H), 7.99 – 7.88 (m, 3H), 7.73 (d, J= 7.3 Hz, 2H), 7.63 (t, J= 5.7 Hz, 1H), 7.44 (t, J= 7.4 Hz, 2H), 7.35 (t, J= 7.2 Hz, 3H), 6.58 (s, 1H), 5.48 (s, 2H), 5.29 (s, 2H), 4.66 (d, J= 6.3 Hz, 2H), 4.32 (d, J= 6.9 Hz, 2H), 4.26 (d, J= 6.1 Hz, 1H), 3.71 (d, J= 5.8 Hz, 2H), 3.57 (t, J= 5.7 Hz, 2H), 3.29 – 3.20 (m, 2H), 2.55 (s, 3H), 2.00 – 1.86 (m, 4H), 0.93 (t, J= 7.2 Hz, 3H). 步驟二：B2B(240 mg)溶於DMF(5 mL)，加入呱啶(1 mL)，化合物攪拌20分鐘，溶於減壓除去低沸點組分，殘留物直接用於下步合成。
ESI-MS (m/z): 525.2 [M+H] +。 少量粗產物經反相層析(乙腈/0.05%FA的水溶液: 5%到50%) 純化後得目標化合物B2。
ESI-MS (m/z): 525.1 [M+H] +; 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.13 (t, J= 6.6 Hz, 1H), 8.21 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 8.02 (brs, 2H), 7.89 (d, J= 10.8 Hz, 1H), 7.32 (s, 1H), 6.54 (s, 1H), 5.44 (s, 2H), 5.28 (s, 2H), 4.66 (d, J= 6.5 Hz, 2H), 3.64 (s, 2H), 3.53 (t, J= 6.1 Hz, 2H), 3.25-3.18 (m, 2H), 2.52 (s, 3H), 1.98-1.84 (m, 4H), 0.88 (t, J= 7.3 Hz, 3H)。
實施例7.5：N 6,N 6-二甲基-N 2-((6-(2-(甲磺醯基)嘧啶-5-基)己-5-炔醯基)- L-纈胺酸)-L-胺離胺酸(C1)的合成 將6-(2-(甲磺醯基)嘧啶-5-基)己-5-炔酸 (268 mg), 化合物C1A (328 mg)， 三乙胺 (322 mg) 溶於N, N-二甲基甲醯胺 (5 mL)。然後再加入1-羥基苯並三唑(HOBT，162 mg)及1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDCI，229 mg)，反應液室溫攪拌16小時，反應液直接經過C18柱反相(乙腈及0.05%的甲酸水溶液體系)提純得到目標化合物N 6,N 6-二甲基-N 2-((6-(2-(甲磺醯基)嘧啶-5-基)己-5-炔醯基)-L-纈胺酸)-L-胺離胺酸(C1，白色固體，327 mg)。
LCMS (ESI) [M+H] +：524.4。 1H NMR (400 MHz, ) δ 9.13 (s, 2H), 7.95 (t, J= 8.8 Hz, 2H), 4.21 (dd, J= 8.8, 6.9 Hz, 1H), 4.08 – 4.03 (m, 1H), 3.41 (s, 3H), 2.55 (t, J= 7.0 Hz, 2H), 2.42 – 2.32 (m, 4H), 2.27 (s, 6H), 1.98 (dd, J= 13.6, 6.8 Hz, 1H), 1.86 – 1.77 (m, 2H), 1.74 – 1.55 (m, 2H), 1.47 – 1.37 (m, 2H), 1.31 – 1.23 (m, 2H), 0.85 (dd, J= 12.8, 6.8 Hz, 6H)。
實施例7.6：N 6,N 6-二乙基-N 2-((6-(2-(甲磺醯基)嘧啶-5-基)己-5-炔醯基)-L-纈胺酸)-L-胺離胺酸(C2)的合成 步驟一： 將化合物C2A(5.0 g, 12.05 mmol)溶在二氯甲烷(100 mL)中，向反應液中加入乙醛(3.2 g, 72.3 mmol)，室溫下攪拌反應10分鐘，再向反應液中加入三乙醯氧基硼氫化鈉(12.8 g, 60.25 mmol)，反應在室溫下攪拌反應1小時。LCMS顯示反應完全。向反應液中加入氯化銨飽和水溶液攪拌一個小時，旋乾，過濾後濾液用C18柱反向分離純化(乙腈比0.05%的甲酸水溶液: 5%到55%)得到目標化合物C2B (4.57 g, 收率82.0%)為白色固體。
LCMS (ESI) [M+H] += 436.4; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.70 (d, J= 7.0 Hz, 1H), 7.41 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 7.38 – 7.26 (m, 5H), 5.08 – 4.99 (m, 2H), 4.00 (dd, J= 12.6, 6.5 Hz, 1H), 3.86 (dd, J= 8.6, 6.8 Hz, 1H), 2.74 (dd, J= 14.0, 6.9 Hz, 4H), 2.64 – 2.54 (m, 2H), 2.05 – 1.94 (m, 1H), 1.72 – 1.52 (m, 2H), 1.52 – 1.38 (m, 2H), 1.38 – 1.18 (m, 2H), 1.04 (t, J= 7.1 Hz, 6H), 0.87 – 0.81 (m, 6H)。
步驟二： 室溫下，將化合物C2B(1.6 g，3.68 mmol)溶於甲醇(80 mL)中，然後向反應液中加入Pd/C(0.16 g)，氫氣下室溫下攪拌反應12小時。LCMS顯示反應完成。將反應液過濾，濾液減壓濃縮得到目標化合物C2C(900 mg, 收率82%)為米白色固體。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.04 (br s, 1H), 4.02 – 3.99 (m, 1H), 3.10 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 2.65 (q, J= 7.1 Hz, 4H), 2.55 – 2.51 (m, 2H), 2.06 – 1.93 (m, 1H), 1.73 – 1.54 (m, 2H), 1.47 – 1.38 (m, 2H), 1.30 – 1.21 (m, 2H), 1.01 (t, J= 7.1 Hz, 6H), 0.89 (d, J= 6.9 Hz, 3H), 0.79 (d, J= 6.8 Hz, 3H)。
步驟三： 將化合物6-(2-(甲磺醯基)嘧啶-5-基)己-5-炔酸 (268 mg, 1 mmol)溶於DMF(8 mL)中，依次加入HATU(380 mg, 1 mmol)及三乙胺(322 mg, 2.5 mmol)，室溫攪拌20分鐘後加入化合物C2C(301 mg, 1 mmol)，室溫繼續攪拌30分鐘。LCMS檢測反應完成後，反應液直接經過C18柱反相(乙腈及0.05%的甲酸水溶液體系)提純得到目標化合物C2 (280 mg，收率51%)為白色固體。
LCMS (ESI) [M+H] += 552.3； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.13 (s, 2H), 7.95 (d, J= 8.9 Hz, 1H), 7.86 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 4.18 (dd, J= 8.8, 6.8 Hz, 1H), 4.02 (dd, J= 12.8, 7.2 Hz, 1H), 3.41 (s, 3H), 2.74 – 2.69 (m, 4H), 2.62 – 2.52 (m, 4H), 2.44 – 2.29 (m, 2H), 2.04 – 1.94 (m, 1H), 1.86 – 1.77 (m, 2H), 1.72 – 1.54 (m, 2H), 1.51 – 1.39 (m, 2H), 1.33 – 1.23 (m, 2H), 1.02 (t, J= 7.2 Hz, 6H), 0.87 – 0.82 (m, 6H)。
實施例7.7：N 6,N 6-二丙基-N 2-((6-(2-(甲磺醯基)嘧啶-5-基)己-5-炔醯基)- L-纈胺酸)-L-胺離胺酸(C3)的合成 步驟一： 將化合物C2A(5.0 g，12 mmol)溶在二氯甲烷(100 mL)中，向反應液中加入正丙醛(4.2 g，72.3 mmol)，室溫下攪拌反應10分鐘，再向反應液中加入三乙醯氧基硼氫化鈉(12.8 g， 60.25 mmol)，反應在室溫下攪拌反應1小時。LCMS顯示反應完全。向反應液中加入氯化銨飽和水溶液攪拌一個小時，旋乾，過濾後濾液用C18柱反向分離純化(乙腈比0.05%的甲酸水溶液：5%到55%)得到目標化合物C3A (4.57 g, 收率82.0%)為白色固體。
LCMS (ESI) [M+H] += 464.0； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.81 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 7.38 – 7.28 (m, 5H), 5.04 (d, J= 1.7 Hz, 2H), 4.12 – 4.02 (m, 1H), 3.94 – 3.82 (m, 1H), 2.65 – 2.52 (m, 6H), 2.06 – 1.94 (m, 1H), 1.76 – 1.64 (m, 1H), 1.64 – 1.53 (m, 1H), 1.52 – 1.40 (m, 6H), 1.34 – 1.18 (m, 2H), 0.92 – 0.80 (m, 12H)。
步驟二： 室溫下，將化合物C3A(2.0 g，4.32 mmol)溶於甲醇(80 mL)中，然後向反應液中加入Pd/C(0.16 g)，氫氣下室溫下攪拌反應12小時。LCMS顯示反應完成。將反應液過濾，濾液減壓濃縮得到目標化合物C3B(1.2 g，收率85.5%)為白色固體。
步驟三： 將化合物6-(2-(甲磺醯基)嘧啶-5-基)己-5-炔酸 (100 mg, 0.373 mmol)， 溶於N, N-二甲基甲醯胺 (1 mL)， 然後加入HATU (142 mg, 0.373 mmol)，N,N-二異丙基乙胺(N,N-diisopropylethylamine；DIPEA) (120 mg, 0.93 mmol)，該體系攪拌30分鐘，然後加入化合物C3B (122 mg，0.371 mmol)，反應液室溫攪拌1小時，LCMS檢測反應完成後，反應液直接經過C18柱反相(乙腈及0.05%的甲酸水溶液體系)提純得到目標化合物N 6,N 6-二丙基-N 2-((6-(2-(甲磺醯基)嘧啶-5-基)己-5-炔醯基)- L-纈胺酸)-L-胺離胺酸(C3，50 mg，收率28%)為淡黃色固體。
LCMS (ESI) [M+H] += 580.0； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.24 (s, 2H), 7.98 – 7.93 (m, 2H), 4.24 – 4.16 (m, 1H), 4.10 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 3.41 (s, 3H), 2.79 – 2.64 (m, 6H), 2.55 (t, J= 7.1 Hz, 2H), 2.45 – 2.26 (m, 2H), 2.06 – 1.91 (m, 1H), 1.89 – 1.78 (m, 2H), 1.76 – 1.66 (m, 1H), 1.64 – 1.57 (m, 1H), 1.57 – 1.42 (m, 6H), 1.37 – 1.24 (m, 2H), 0.93 – 0.78 (m, 12H)。
實施例7.8：N 6,N 6-二丁基-N 2-((6-(2-(甲磺醯基)嘧啶-5-基)己-5-炔醯基)- L-纈胺酸)-L-胺離胺酸(C4)的合成 步驟一： 將化合物C2A(10.0 g)溶在二氯甲烷(200 mL)溶液中，向反應液中加入正丁醛(10.4 g)，室溫下攪拌反應10分鐘，再向反應液中分批次加入三乙醯氧基硼氫化鈉(25.6 g)，反應在室溫下攪拌反應1小時。LCMS顯示反應完全。向反應液中加入氯化銨飽和水溶液攪拌一個小時，旋乾，過濾後濾液用C18柱反向分離純化(乙腈比0.05%的甲酸水溶液: 5%到55%)得到目標化合物C4A (4.9 g)為白色固體。
LCMS (ESI) [M+H] += 492.7； 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.35 – 7.30 (m, 5H), 5.14 – 5.08 (m, 2H), 4.33 – 4.30 (m, 1H), 4.14 – 4.12 (m, 1H), 2.94 – 2.80 (m, 6H), 2.13 – 2.11 (m, 1H), 1.85 – 1.82 (m, 2H), 1.58 – 1.55 (m, 4H), 1.40 – 1.22 (m, 8H), 0.98 – 0.87 (m, 12H)。
步驟二： 室溫下，將化合物C4A(5.0 g)溶於甲醇(100 mL)溶液中，然後向反應液中加入Pd/C(10%，1 g)，氫氣下攪拌反應12小時。LCMS顯示反應完成。將反應液過濾，濾液減壓濃縮得到目標化合物C4B(3.68 g)為白色固體。
LCMS (ESI) [M+H] += 358.3。
步驟三： 將化合物6-(2-(甲磺醯基)嘧啶-5-基)己-5-炔酸 (1.0 g) 溶於N, N-二甲基甲醯胺 (15 mL), 然後依次加入N,N-二異丙基乙胺 (1.2 g)，HATU (1.4 g)，反應攪拌30分鐘，然後加入化合物C4B (1.3 g)，反應液室溫攪拌1小時，LCMS檢測反應完成後，反應液，反應液直接經製備層析(0.01% 三氟乙酸水溶液, 乙腈)純化得到目標化合物N 6,N 6-二丁基-N 2-((6-(2-(甲磺醯基)嘧啶-5-基)己-5-炔醯基)- L-纈胺酸)-L-胺離胺酸(C4，500 mg)為黃色固體。
LCMS (ESI) [M+H] += 608.7； 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.37 (s, 1H), 9.13 (s, 2H), 8.19 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 7.92 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 4.25 – 4.20 (m, 1H), 4.20 – 4.13 (m, 1H), 3.42 (s, 3H), 3.06 – 2.99 (m, 6H), 2.57 – 2.53 (m, 2H), 2.41 – 2.30 (m, 2H), 1.99 – 1.95 (m, 2H), 1.87 – 1.79 (m, 2H), 1.78 – 1.71 (m, 1H), 1.62 – 1.56 (m, 4H), 1.34 – 1.32 (m, 8H), 0.94 – 0.85 (m, 12H)。
實施例8. 藥物-連接體化合物合成 實施例8.1：N-((11S,14S)-11-(4-(二正丙基胺基)丁基)-1-((S)-7-乙基-7-羥基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氫-10H-[1,3]二氧雜環戊烷並[4,5-g]吡喃並[3',4':6,7]吲哚嗪並[1,2-b]喹啉-14-基)-15-甲基-7,10,13-三氧代-4-氧雜-6,9,12-三氮雜十六烷-14-基)-6-(2-(甲磺醯基)嘧啶-5-基)己-5-炔醯胺(DL-01) 將化合物C3 (43 mg, 0.074 mmol)，化合物B1 (40 mg，0.075 mmol)，溶於N, N-二甲基甲醯胺 (1 mL)，然後依次加入HBTU (Hexafluorophosphate Benzotriazole Tetramethyl Uronium)(28 mg, 0.075 mmol)，N,N-二異丙基乙胺 (24 mg, 0.187 mmol)，反應液室溫攪拌1小時，LCMS檢測反應完成後，反應液直接經製備層析(0.01% 三氟乙酸水溶液, 乙腈)純化得到目標化合物(DL-01，8.5 mg, 收率10%)為黃色固體。
LCMS (ESI) [M+H] += 1098.6； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.10 (s, 2H), 9.03 (s, 1H), 8.64 (t, J= 6.4 Hz, 1H), 8.19 (t, J= 5.9 Hz, 1H), 8.08 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 7.92 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 6.49 (s, 1H), 6.29 (s, 2H), 5.42 (s, 2H), 5.24 (s, 2H), 4.66 – 4.52 (m, 2H), 4.31 – 4.21 (m, 1H), 4.19 – 4.10 (m, 1H), 3.74 (d, J= 5.5 Hz, 2H), 3.49 – 3.48 (m, 2H), 3.40 (s, 3H), 3.15 – 3.06 (m, 2H), 3.02 – 2.95 (m, 6H), 2.59 – 2.52 (m, 3H), 2.41 – 2.29 (m, 2H), 2.05 – 1.90 (m, 2H), 1.91 – 1.77 (m, 6H), 1.63 – 1.57 (m, 6H), 1.31 – 1.29 (m, 2H), 0.92 – 0.80 (m, 15H)。 實施例8.2：N-((11S,14S)-11-(4-(二乙基胺基)丁基)-1-((S)-7-乙基-7-羥基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氫-10H-[1,3]二氧雜環戊烷並[4,5-g]吡喃並[3',4':6,7]吲哚嗪並[1,2-b]喹啉-14-基)-15-甲基-7,10,13-三氧代-4-氧雜-6,9,12-三氮雜十六烷-14-基)-6-(2-(甲磺醯基)嘧啶-5-基)己-5-炔醯胺(DL-02) 將化合物C2 (40 mg, 0.075 mmol)，化合物B1 (41 mg, 0.075 mmol) 溶於DMF (1 mL)，然後再加入HOBt (15.2 mg, 0.113 mmol)及1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽 (21.5 mg, 0.113 mmol)，然後再加入三乙胺 (23 mg, 0.225mmol) 加完後反應液室溫攪拌16小時，LCMS檢測反應完成後，將反應液濃縮得粗產品，粗產品經製備層析(0.01% TFA in water, MeCN) 純化得到目標化合物N-((11S,14S)-11-(4-(二乙基胺基)丁基)-1-((S)-7-乙基-7-羥基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氫-10H-[1,3]二氧雜環戊烷並[4,5-g]吡喃並[3',4':6,7]吲哚嗪並[1,2-b]喹啉-14-基)-15-甲基-7,10,13-三氧代-4-氧雜-6,9,12-三氮雜十六烷-14-基)-6-(2-(甲磺醯基)嘧啶-5-基)己-5-炔醯胺 (16 mg, 收率20%)為黃色固體。
LCMS (ESI) [M+H] += 1070.6； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.13 – 9.08 (m, 2H), 9.01 (s, 1H), 8.64 (t, J= 6.5 Hz, 1H), 8.20 (t, J= 5.7 Hz, 1H), 8.09 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 7.92 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 6.50 (s, 1H), 6.29 (s, 2H), 5.43 (s, 2H), 5.24 (s, 2H), 4.65 – 4.53 (m, 2H), 4.26 (d, J= 6.5 Hz, 1H), 4.20 – 4.10 (m, 1H), 3.74 (d, J= 5.5 Hz, 2H), 3.50 (t, J= 5.8 Hz, 2H), 3.41 (s, 3H), 3.14 – 3.07 (m, 6H), 2.98 (s, 2H), 2.55 (d, J= 7.3 Hz, 2H), 2.41 – 2.29 (m, 2H), 2.03 – 1.89 (m, 2H), 1.89 – 1.77 (m, 7H), 1.61 – 1.56 (m, 2H), 1.32 (s, 2H), 1.16 (t, J= 7.2 Hz, 6H), 0.91 – 0.78 (m, 9H)。
實施例8.3：N-((11S,14S)-11-(4-(二甲基胺基)丁基)-1-((S)-7-乙基-7-羥基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氫-10H-[1,3]二氧雜環戊烷並[4,5-g]吡喃並[3',4':6,7]吲哚嗪並[1,2-b]喹啉-14-基)-15-甲基-7,10,13-三氧代-4-氧雜-6,9,12-三氮雜十六烷-14-基)-6-(2-(甲磺醯基)嘧啶-5-基)己-5-炔醯胺(DL-03) 將化合物B1 (100 mg, 0.186 mmol)，化合物N 6,N 6-二甲基-N 2-((6-(2-(甲磺醯基)嘧啶-5-基)己-5-炔醯基)-L-纈胺酸)-L-胺離胺酸 (C1，100 mg， 0.191 mmol) 溶於DMF (2 mL)。然後再加入1-羥基苯並三唑(38 mg, 0.280 mmol)及1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(53 mg, 0.280 mmol), 然後再加入三乙胺 (56 mg, 0.559mmol) 加完後反應液室溫攪拌16小時，LCMS檢測反應完成後，將反應液經製備 層析(0.01% TFA in water, MeCN)純化得到目標化合物N-((11S,14S)-11-(4-(二甲基胺基)丁基)-1-((S)-7-乙基-7-羥基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氫-10H-[1,3]二氧雜環戊烷並[4,5-g]吡喃並[3',4':6,7]吲哚嗪並[1,2-b]喹啉-14-基)-15-甲基-7,10,13-三氧代-4-氧雜-6,9,12-三氮雜十六烷-14-基)-6-(2-(甲磺醯基)嘧啶-5-基)己-5-炔醯胺 (DL-03，20 mg, 收率10%)為黃色固體。
LCMS (ESI) [M+H] += 1042.5; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.28 (s, 1H, TFA), 9.10 (s, 2H), 8.64 (br s, 1H), 8.19 (br s, 1H), 8.09 (d, J= 6.4 Hz, 1H), 7.92 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 6.50 (s, 1H), 6.29 (s, 2H), 5.43 (s, 2H), 5.24 (s, 2H), 4.67 – 4.52 (m, 2H), 4.30 – 4.10 (m, 2H), 3.74 (br s, 2H), 3.50 (br s, 2H), 3.41 (s, 3H), 3.17 – 3.07 (m, 2H), 3.04 – 2.91 (m, 2H), 2.75 (s, 6H), 2.46 – 2.24 (m, 3H), 2.04 – 1.66 (m, 9H), 1.63 – 1.46 (m, 3H), 1.32 – 1.29 (m, 2H), 0.87 – 0.82 (m, 9H)。
實施例8.4：N-((11S,14S)-11-(4-(二丁基胺基)丁基)-1-((S)-4-乙基-8-氟-4-羥基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氫-1H-吡喃並[3',4':6,7]吲哚嗪並[1,2-b]喹啉-11-基)-15-甲基-7,10,13-三氧代-4-氧雜-6,9,12-三氮雜十六烷-14-基)-6-(2-(甲磺醯基)嘧啶-5-基)己-5-炔醯胺(DL-04) 將化合物C4(50 mg，0.08mmol)，化合物B2(43 mg，0.08mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(1.5 mL)，然後依次加入DIPEA(26 mg，0.21mmol)，HBTU(31 mg，0.08mmol)，室溫攪拌反應1小時。LCMS檢測反應完成，反應液直接經由高效製備 (0.01% 三氟乙酸的水溶液, 乙腈)分離純化得到目標化合物DL-04(13.57 mg)為黃色固體。
LCMS (ESI) [M+H] += 1114.6； 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.09 (s, 2H), 9.05 (s, 1H, TFA), 8.64 (t, J= 7.2 Hz, 1H), 8.23 – 8.16 (m, 2H), 8.07 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 7.93 – 7.85 (m, 2H), 7.32 (s, 1H), 6.52 (s, 1H), 5.44 (s, 2H), 5.29 (s, 2H), 4.61 - 4.59 (m, 2H), 4.24 – 4.22 (m, 1H), 4.19 – 4.10 (m, 1H), 3.73 – 3.70 (m, 2H), 3.50 (s, 3H), 3.21 – 3.18 (m, 6H), 3.00 – 2.98 (m, 8H), 2.54 (s, 3H), 1.97 – 1.78 (m, 7H), 1.56 – 1.52 (m, 8H), 1.36 – 1.25 (m, 6H), 0.93 – 0.78 (m, 15H)。
實施例8.5： N-((10S,13S)-10-(4-( N,N-二甲基胺基)丁基)-1-(((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯並[de] 吡喃並[3',4':6,7]吲哚嗪並[1,2-b]喹啉-1-基)胺基)-14-甲基-1,6,9,12-四氧代-3-氧雜-5,8,11-三氮雜十五烷-13-基)-6-(2-(甲磺醯基)嘧啶-5-基)己-5-炔醯胺(DL-05) 將化合物N 6,N 6-二甲基-N 2-((6-(2-(甲磺醯基)嘧啶-5-基)己-5-炔醯基)- L-纈胺酸)-L-胺離胺酸 (C1，52.3 mg) 溶於N, N-二甲基甲醯胺 (2 mL)，然後再依次加入HBTU(38 mg, 0.10 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(26 mg, 0.20 mmol)，加完後反應液室溫攪拌30分鐘，然後加入化合物2-胺基-N-((2-(((1S，9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氫-1H，12H-苯並[de]吡喃並[3',4'：6,7]吲哚嗪並[1,2-b]喹啉-1-基)胺基)-2-氧代乙氧基)甲基)乙醯胺 (DL-05A，根據CN104755494A中第147-148頁報導的相同方法製備的，63 mg), LCMS檢測反應完成後，反應液直接經製備層析(0.01% 三氟乙酸水溶液, 乙腈)純化得到目標化合物N-((10S,13S)-10-(4-( N,N-二甲基胺基)丁基)-1-(((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯並[de]吡喃並[3',4':6,7]吲哚嗪並[1,2-b]喹啉-1-基)胺基)-14-甲基-1,6,9,12-四氧代-3-氧雜-5,8,11-三氮雜十五烷-13-基)-6-(2-(甲磺醯基)嘧啶-5-基)己-5-炔醯胺DL-05(8.1 mg，收率7%)。
LCMS (ESI) [M+H] += 1085.5； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.31 (s, 1H), 9.11 (s, 2H), 8.72 (t, J= 6.8 Hz, 1H), 8.51 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 8.19 (t, J= 6.8 Hz, 1H), 8.10 (d, J= 7.1 Hz, 1H), 7.91 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.79 (d, J= 10.9 Hz, 1H), 7.32 (s, 1H), 6.53 (s, 1H), 5.63 – 5.54 (m, 1H), 5.42 (s, 2H), 5.20 (s, 2H), 4.68 – 4.58 (m, 2H), 4.26 – 4.12 (m, 2H), 4.01 (s, 2H), 3.73 (d, J= 5.4 Hz, 2H), 3.20 – 3.10 (m, 2H), 3.05 – 2.95 (m, 2H), 2.76 (d, J= 4.7 Hz, 6H), 2.55 – 2.53 (m, 2H), 2.42 – 2.28 (m, 6H), 2.21 – 2.13 (m, 2H), 2.02 – 1.77 (m, 6H), 1.76 – 1.62 (m, 2H), 1.62 – 1.51 (m, 3H), 1.37 – 1.21 (m, 2H), 0.90 – 0.80 (m, 9H)。
實施例9. 抗MSLN抗體-藥物複合體的製備 抗體藥物複合體PR300159-B81、PR300159-8-B81、PR300186-B81或PR300186-10-B81樣品製備 (III) Ab為抗MSLN抗體PR300159、PR300159-8、PR300186或PR300186-10。
將30 mg抗MSLN抗體PR300159-8或PR300186-10用稀釋液(20 mM PB，pH 7.5)稀釋，加入終濃度為5mM的依地酸鈉溶液，混勻；加入抗體5.5倍當量的TCEP(三(羧乙基)膦(T ris-(2-Carboxyethyl)phosphine；TCEP))溶液，混勻，室溫放置60分鐘；向上述溶液體系加入抗體12倍當量的溶解於二甲基亞碸中的DL-01，混勻，室溫靜置2小時，得到綴合後樣品，反應結束後使用30KDa的超濾管將樣品置換到pH為6.0的20mM組胺酸緩衝液中並去除低分子物質，最後將樣品濃縮以獲得含有抗MSLN抗體PR300159-8或PR300186-10的ADC複合體的溶液，分別命名為PR300159-B81、PR300159-8-B81、PR300186-B81及PR300186-10-B81。利用實施例10的質譜法測定DAR值為8.0。
抗體藥物複合體PR300159-B71或PR300186-B71樣品製備 (IV) Ab為抗MSLN抗體PR300159或PR300186。
將30 mg抗MSLN抗體PR300159或PR300186用稀釋液(20 mM PB，pH 7.5)稀釋，加入終濃度為5mM的依地酸鈉溶液，混勻；加入抗體5.5倍當量的TCEP溶液，混勻，室溫放置60分鐘；向上述溶液體系加入抗體12倍當量的溶解於二甲基亞碸中的DL-03，混勻，室溫靜置2小時，得到綴合後樣品，反應結束後使用30KDa的超濾管將樣品置換到pH為6.0的20mM組胺酸緩衝液中並去除低分子物質，最後將樣品濃縮以獲得含有抗MSLN抗體PR300159或PR300186的ADC複合體的溶液，分別命名為PR300159-B71及PR300186-B71。利用實施例10的質譜法測定DAR值為8.0。
實施例10. 採用質譜法測定綴合後樣品的DAR值 檢測：對PR300159-8-B81進行LC-MS分子量及DAR值分析，條件如下： 層析條件： 管柱：Xbridge Protein BEH SEC (2.5μm,4.6*150mm) 流動相A：0.1%FA/H 2O; 流動相B：0.1%FA/ACN 柱溫：30℃ 樣品室溫度：8℃ 流速：0.3 mL/min 進樣量：1μL
表11. 層析條件
時間(min) 0 5 7 7.1 10
流動相A 90 20 20 90 90
流動相B 10 80 80 10 10
樣品處理：分別取樣品50 μg，加入1M DTT2μL，加超純水至50μL稀釋至約1.0 mg/mL濃度，混勻，室溫還原30分。
LC/MS型號：UPLC(AB SCIEX)，高分辨質譜儀(AB SCIEX) 質譜條件： Gas1:45；Gas2:45；CUR：30；TEM：450；ISVF：5000；DP：120；CE：12；質量數範圍：600-4000 結果如下表12所示。
表12. 理論分子量及實測分子量
肽鏈 mAb DAR1 DAR2 DAR3
LC 理論值 23485.9 24504.1 25522.3 26540.5
實測值 未檢出 24503.4 未檢出 未檢出
HC 理論值 50544.2 51562.4 52580.6 53598.7
實測值 未檢出 未檢出 未檢出 53598.5
表12中，mAb表示未綴合的單株抗體；LC代表抗體輕鏈；HC代表抗體重鏈；DAR1代表包含輕鏈或重鏈綴合1個毒素分子的複合體；DAR2代表包含輕鏈或重鏈綴合2個毒素分子的複合體；DAR3代表包含輕鏈或重鏈綴合3個毒素分子的複合體；其中，單抗理論分子量以G0F醣型計算。下文中mAb、LC、HC、DAR1、DAR2、DAR3如上說明。
檢測結果顯示，PR300159-8-B81上抗體輕鏈綴合0~1個毒素分子(LC，DAR1)比例分別為0%，100%、重鏈綴合0~3個毒素分子(mAb、DAR1、DAR2、DAR3)的比例分別為0%，0%，0%，100.0%，由此計算PR300159-8-B81及PR300186-10-B81的藥物抗體比率(DAR值)為8.0。
實施例11. HT29-huMSLN野生型細胞株以及HT29-huMSLN突變型細胞株的構建 HT29-huMSLN野生型細胞株(穩定轉染野生型人MSLN)由實驗室製備，具體操作如下。
按密度為5E5/孔將HT-29細胞懸液添加到6孔盤，37℃培養過夜。將編碼人MSLN基因的質粒加入管中，然後加入Opti-MEM（Gibco，貨號31985070）進行稀釋。轉染試劑Lipofectamine3K加入新的管中，同樣使用Opti-MEM進行稀釋，Lipofectamine3K與DNA的比例為3:1，將稀釋的Lipofectamine3K加入到稀釋的質粒中，混勻後室溫培育15min。將上述混合物加入細胞中，輕輕晃動混勻後在37℃培育過夜。之後棄去上清，更換為添加0.3μg/mL G418的新鮮培養基，於37℃培養，每三天更換含G418的新鮮培養基。待細胞長滿後進行FACS驗證，將驗證後的細胞池稀釋到5個細胞/mL，以100μL/孔接種5塊96孔盤，37℃培養14天，挑取單株進行FACS驗證，驗證後將驗證的克隆繼續擴大培養，凍存。
HT29-huMSLN突變型細胞株(穩定轉染突變型人MSLN)由實驗室製備。構建方法同HT29-huMSLN野生型細胞株的構建，轉入人突變的MSLN基因，其中野生型人MSLN基因中的YLVLDLSV突變成GGGGS。
實施例12. HT29-huMSLN野生型2C3細胞以及HT29-huMSLN突變型1A11細胞脫落MSLN的檢測 分別以5×10 5/孔 將HT29-huMSLN野生型2C3細胞以及HT29-huMSLN突變型1A11細胞接種到6孔盤中，第二天，取出培養基，用1mL新鮮培養基替換。每小時收集100 mL培養基，-80℃保存，以用於後續檢測細胞脫落MSLN。
將PR300159稀釋成5μg/mL濃度，加入96孔盤中，每孔100μL，放置於4℃過夜。96孔盤用PBST溶液洗三遍後，加入2% BSA的PBS溶液於37℃放置1小時。稀釋人MSLN蛋白（Acro Biosystems, Catalog # MSN-H522 ），從0.2μg/mL開始2倍稀釋，共稀釋11個點作為標準曲線。將收集的細胞上清，加入96孔盤中，37℃培育1小時。PBST溶液洗三遍後，加入生物素標記的抗MSLN陽性對照抗體PR300175（與PR300159具有不同結合表位，重鏈、輕鏈序列分別如序列識別號: 78及79所示），37℃培育1小時。PBST溶液洗三遍後，加入SA-HRP二抗（5000×稀釋使用）於37℃培育30-60分鐘。PBST溶液洗三遍後，加入TMB顯色液5-15分鐘，然後加入終止液終止顯色。
如圖10所示，相對於HT29-huMSLN野生型2C3細胞株，HT29-huMSLN突變型1A11細胞株只有少量的MSLN的脫落。
實施例13. PR300159-8-B81抗體藥物複合體對表現MSLN細胞的殺傷實驗 以2000個細胞/孔將HT29-huMSLN野生型2C3細胞加入到96孔盤中，然後加入序列稀釋的PR300159-8，hIgG-B81 (與DL-01連接的人IgG對照)及PR300159-8-B81。6天後使用Promega(G7572)CellTiter Glo檢測細胞活力。
如圖11的實驗結果表明，PR300159-8-B81對HT-29-huMSLN顯示明顯的殺傷作用。
實施例14. PR300159-8-B81及PR300186-10-B81抗體藥物複合體的藥代動力學研究 選取6隻雄性SD大鼠，按5 mg/kg的劑量經由静脈注射施用抗體藥物複合體；於給藥前以及給藥後10分鐘、2小時、8小時、24小時(第1天)、第3天、第7天、第10天、第14天、第21天、第28天採集血漿及血清。
收集血漿樣品：將全血放置在含有K2-EDTA的試管中，2-8℃，離心6分鐘，-80℃左右冷凍保存直至分析。
收集血清樣品：將全血静置30分鐘使其凝固，隨後在4℃下以2200 g離心10分鐘並將分離的血清樣品在-80℃下凍存直至分析。
抗體藥物複合體(結合型抗體)的檢測：本實施例採用ELISA方法來定量測定小鼠血清中的抗體藥物複合體的濃度，具體如下。經由包被於96孔盤的小鼠抗毒素分子A1的Fab單株抗體來捕獲小鼠血清中的抗體藥物複合體，然後加入HRP標記的山羊抗人Fc第二抗體來檢測。
總抗體的檢測：本實施例採用ELISA方法來定量測定小鼠血清中的總抗體的濃度。ELISA方法，經由包被於96孔盤的綿羊抗人Fc單株抗體來捕獲小鼠血清中的抗體，然後加入HRP標記的山羊抗人IgG第二抗體來檢測。
毒素分子A1的檢測：本實施例採用LC-MS/MS方法檢測血清中小分子的濃度，取30 μL血漿樣品加入100 μL含0.5 ng/mL 內標 (YL0010098)的乙腈沉澱蛋白，混合物渦旋1分鐘後，離心，取上清進行LC-MS/MS(Waters XEVO TQ-XS)分析。
使用Phoenix WinNonlin軟件7.0版，選用非房室模型(noncompartmental analysis；NCA)對血藥濃度數據進行分析以計算其藥代動力學參數。
表13顯示PR300159-8-B81及PR300186-10-B81藥代動力學參數。結果表明，施用PR300159-8-B81及PR300186-10-B81後，PR300159-8-B81及PR300186-10-B81的總抗體在大鼠體內的半衰期分别為203、232小時，而PR300159-8-B81及PR300186-10-B81的抗體藥物複合體 (ADC)在大鼠體內的半衰期分别為193、250小時。
表13. PR300159-8-B81及PR300186-10-B81的藥代動力學參數
PR300159-8-B81 PR300186-10-B81
抗體藥物複合體 總抗體 毒素分子A1 抗體藥物複合體 總抗體 毒素分子A1
Cmax ng/mL 172101 133958 0.177 114266 107302 0.330
Tmax hr 0.167 0.167 2 0.167 0.167 2
T1/2 hr 193 203 - 250 232 -
AUClast hr*ng/mL 9123190 8737818 0.618 8906196 9561752 0.552
AUCINF hr*ng/mL 9844556 9597927 - 10376761 10758265 -
MRTlast hr 172 179 1.80 208 191 1.19
MRTINF hr 229 249 - 326 282 -
Vss mL/kg 116 130 - 158 131 -
Vz mL/kg 142 153 - 174 156 -
CL mL/hr/kg 0.508 0.522 - 0.482 0.465 -
C0 ng/mL 176823 138257 0.117 117107 109603 0.230
實施例15. PR300159-8-B81及PR300186-10-B81抗體藥物複合體在人、食蟹猴、SD大鼠、ICR小鼠血漿中的穩定性研究 在各種屬(人、食蟹猴、SD大鼠、ICR小鼠)血漿及含1%BSA的PBS中均加入抑菌劑Proclin，ProClin終濃度為0.1%。在37℃下進行無菌操作。用PBS或pH為7的1 mM EDTA緩衝液將抗體藥物複合體的儲備液稀釋至濃度為20 mg/mL的工作液。分別取4μL PR300159-8-B81或PR300186-10-B81的工作液與396 μL各種屬(人、食蟹猴、SD大鼠、或ICR小鼠)血漿或含1%BSA的PBS混合，制得濃度為200 μg/mL PR300159-8-B81、PR300186-10-B81的各種屬血漿樣品，有機溶劑量不大於1%。37℃ 5% CO 2培養箱中培育，封盤封膜，震盪速度80次/分鐘。培育時間為0 小時、4小時、24小時、2天、3天、7天、10天、14天、17天、21天、28天，轉移20 μL血漿樣品，加入沉澱劑(含內標)200 μL，充分混勻沉澱蛋白。所有樣品經蛋白沉澱後，離心取上清液，加水稀釋後使用LC-MS/MS進行分析。
圖12及圖13顯示PR300159-8-B81及PR300186-10-B81在人、食蟹猴、SD大鼠、ICR小鼠血漿及磷酸緩衝液(PBS)中的穩定性結果。
圖12的結果顯示在28天內，PR300159-8-B81中的細胞毒性藥物在人及食蟹猴的血漿中的釋放百分比小於0.5%，在SD大鼠血漿中的釋放百分比小於1.5%，在ICR小鼠血漿中的釋放百分比小於2.5%。
圖13的結果顯示在28天內，PR300186-10-B81中的細胞毒性藥物在人及食蟹猴的血漿中的釋放百分比小於1.0%，在SD大鼠血漿中的釋放百分比小於2.5%，在ICR小鼠血漿中的釋放百分比小於4.0%。
實施例16. 結腸癌HT29-huMSLN野生型細胞株模型 用RPMI-1640(含10%的胎牛血清及0.3mg/mL的G418)培養基，在37℃ 5% CO 2條件下培養HT29-huMSLN野生型2C3細胞, 接種當天收集指數生長期的HT29-huMSLN 野生型2C3細胞。將腫瘤細胞重懸在PBS與Matrigel (1:1) 的混合液中, 然後皮下接種。每隻BALB/c Nude小鼠皮下接種1×10 6個HT29-huMSLN 野生型2C3 細胞。當各組小鼠平均瘤體積在100 mm 3時進行分組給藥，30隻小鼠被隨機分為6組，分組後開始給藥，給藥週期為一周兩次，共進行6次給藥，給藥方式為尾靜脈注射，給藥劑量為5mg/kg體重或1mg/kg體重。開始給藥後，每週稱量體重及瘤體積兩次，瘤體積計算方式為: 腫瘤體積(mm 3)= 0.5×腫瘤長徑×腫瘤短徑 2。給藥後第38天結束實驗觀察，隨後所有小鼠進行安樂死處理。資料分析採用t-test。
圖14顯示PR300159-8-B81、PR300186-10-B81的體內藥效學研究結果。給藥後第38天，溶劑vehicle對照組小鼠的平均腫瘤體積為1131mm 3。hIgG1-B81(5mg/kg)對照組小鼠在給藥後第38天平均腫瘤體積為934mm 3。測試藥PR300159-8-B81(1mg/kg)治療組在給藥後第38天平均腫瘤體積為34 mm 3，相較溶劑對照組有顯著性差異(p值＜0.001)，腫瘤抑制率TGI(tumor growth inhibition value；TGI) 為97(%)。測試藥PR300159-8-B81(5mg/kg)治療組在給藥後第38天小鼠腫瘤完全消除，相較溶劑對照組有顯著性差異(p值＜0.001)，腫瘤抑制率TGI (%)為100%。測試藥PR300186-10-B81(1mg/kg)治療組在給藥後第38天平均腫瘤體積為168 mm 3，相較溶劑對照組有顯著性差異(p值＜0.001)，腫瘤抑制率TGI (%)為85%。測試藥PR300186-10-B81(5mg/kg)治療組在給藥後第38天小鼠腫瘤完全消除，相較溶劑對照組有顯著的腫瘤抑制作用(p值＜0.001)，腫瘤抑制率TGI (%)為100%。
圖15顯示小鼠的體重結果。整個治療給藥期間，動物均表現出良好的藥物耐受，未出現嚴重的體重下降及動物死亡現象。
實施例17. 結腸癌HT29-huMSLN突變型細胞株模型 用RPMI-1640（含10%的胎牛血清及0.3mg/mL的G418）培養基，在37℃ 5% CO 2條件下培養HT29-huMSLN突變型1A11細胞。接種當天收集指數生長期的HT29-huMSLN突變型1A11細胞，每隻BALB/c Nude小鼠皮下接種1×10 6個HT29-huMSLN突變型1A11細胞。腫瘤細胞首先重懸在PBS與Matrigel (1:1) 的混合液中，然後皮下接種。當各組小鼠平均瘤體積在100 mm 3時進行分組給藥，25隻小鼠被分為5組，分組後開始給藥，給藥週期為一周兩次，共進行了6次給藥，給藥方式為尾靜脈注射，給藥劑量為1mg/kg體重或5mg/kg體重。開始給藥後，每週稱量體重及瘤體積兩次，瘤體積計算方式為： 腫瘤體積（mm 3）= 0.5×腫瘤長徑×腫瘤短徑 2。給藥後第32天結束實驗觀察，隨後所有小鼠進行安樂處理。資料分析採用t-test。
圖16顯示PR300159-8-B81、PR300186-10-B81的抗瘤效果研究結果。圖17顯示小鼠的體重結果。
如圖16所示，給藥後後第32天，對照組小鼠的平均腫瘤體積為1109mm 3。測試藥PR300159-8-B81（1mg/kg）治療組在給藥後第32天平均腫瘤體積為60.4 mm 3，相較溶劑對照組有顯著性差異（p值＜0.001），腫瘤抑制率TGI為95%。測試藥PR300159-8-B81（5mg/kg）治療組在給藥後第32天小鼠腫瘤完全消除，相較溶劑對照組有顯著性差異（p值＜0.001），腫瘤抑制率TGI (%)為100%。測試藥PR300186-10-B81（1mg/kg）治療組在給藥後第32天平均腫瘤體積為59.5 mm 3，相較溶劑對照組有顯著性差異（p值＜0.001），腫瘤抑制率TGI (%)為95%。測試藥PR300186-10-B81（5mg/kg）治療組在給藥後第32天小鼠腫瘤完全消除，相較溶劑對照組有顯著的腫瘤抑制作用（p值＜0.001），腫瘤抑制率TGI (%)為100%。由此可見，PR300159-8-B81及PR300186-10-B81在HT29-huMSLN 突變型細胞體內模型中有同等的抗瘤效果。
如圖17所示，整個治療給藥期間，動物均表現出良好的藥物耐受，未出現嚴重的體重下降及動物死亡現象。
實施例18. 卵巢癌COV644模型 用含10%的胎牛血清的RPMI-1640培養基，在37℃ 5% CO 2條件下培養COV644 (ECACC, catalog: 07071908)細胞, 接種當天收集指數生長期的COV644細胞。將腫瘤細胞重懸在PBS與Matrigel (1:1) 的混合液中, 然後皮下接種。每隻BALB/c Nude小鼠皮下接種5×10 6個COV644腫瘤細胞。當各組小鼠平均瘤體積在150 mm 3時進行分組，2隻小鼠被分為5組，分組後開始給藥，給藥周期為一周兩次，共進行5次給藥，給藥方式為尾静脈注射，給藥劑量為1mg/kg體重或5mg/kg體重。開始給藥後，每周稱量體重及瘤體積兩次，瘤體積計算方式為: 腫瘤體積(mm 3)= 0.5×腫瘤長徑×腫瘤短徑 2。給藥後第38天結束實驗觀察，隨後所有小鼠進行安樂死處理。數據分析採用t-test。
圖18顯示PR300159-8-B81、PR300186-10-B81的體內藥效學研究結果。給藥後第38天，溶劑對照組小鼠的平均腫瘤體積為1429 mm 3。測試藥PR300159-8-B81(1mg/kg)治療組在給藥後第38天平均腫瘤體積為993 mm 3，腫瘤抑制率TGI (%)為31%。測試藥PR300159-8-B81(5mg/kg)治療組在給藥後第38天腫瘤完全消除，相較溶劑對照組有顯著性差異(p值＜0.001)，腫瘤抑制率TGI (%)為100%。測試藥PR300186-10-B81(1mg/kg)治療組在給藥後第38天平均腫瘤體積為995 mm 3，腫瘤抑制率TGI (%)為30%。測試藥PR300186-10-B81(5mg/kg)治療組在給藥後第38天該組內4隻小鼠腫瘤完全消除，1隻小鼠腫瘤體積為14 mm 3，該組小鼠平均腫瘤體積為8 mm 3，相較溶劑對照組有顯著的腫瘤抑制作用(p值＜0.001)，腫瘤抑制率TGI (%)為99%。PR300159-8-B81及PR300186-10-B81在COV644體內模型中有同等的抗瘤效果。
圖19顯示小鼠體重結果。整個治療給藥期間，動物均表現出良好的藥物耐受，未出現嚴重的體重下降及動物死亡現象。
實施例19. 卵巢癌OVCAR3模型 用RPMI-1640培養基(含20%的胎牛血清加0.01mg/mL的牛胰島素)，在37℃ 5% CO 2條件下培養OVCAR3細胞, 接種當天收集指數生長期的OVCAR3細胞。將腫瘤細胞重懸在PBS與Matrigel (1:1) 的混合液中, 然後皮下接種。每隻BALB/c Nude小鼠皮下接種1×10 7個CVCAR3腫瘤細胞，當各組小鼠平均瘤體積在200 mm 3時進行分組，35隻小鼠被分為7組，分組後開始給藥，給藥週期為一周兩次，共進行5次給藥，給藥方式為尾靜脈注射，給藥劑量為1mg/kg體重或5mg/kg體重。開始給藥後，每週稱量體重及腫瘤體積兩次，腫瘤體積計算方式為: 腫瘤體積(mm 3)= 0.5×腫瘤長徑×腫瘤短徑 2。給藥後第23天結束實驗觀察，隨後所有小鼠進行安樂死處理。資料分析採用t-test。
其中，PR300159-8-DXD參照trastuzumab deruxtecan(DS-8201,Enhertu)的合成方法（WO2015115091A1）將DS-8201中的trastuzumab替換為PR300159-8由上海睿智化學研究有限公司進行合成。
圖20顯示PR300159-8-DXD、PR300159-8-B81、PR300186-10-B81的體內藥效學研究結果。給藥後第23天，對照組小鼠的平均腫瘤體積為1811 mm 3。測試藥PR300159-8-DXD(1mg/kg)治療組在給藥後第23天平均腫瘤體積為51 mm 3，相較溶劑對照組有顯著性差異(p值為0.001)，腫瘤抑制率TGI (%)為97%。測試藥PR300159-8-DXD(5mg/kg)治療組在給藥後第23天平均腫瘤體積為47 mm 3，相較溶劑對照組有顯著性差異(p值為0.001)，腫瘤抑制率TGI (%)為97%。測試藥PR300159-8-B81(1mg/kg)治療組在給藥後第23天平均腫瘤體積為35mm 3，相較溶劑對照組有顯著性差異(p值為0.001)，腫瘤抑制率TGI (%)為98%。測試藥PR300159-8-B81(5mg/kg)治療組在給藥後第23天平均腫瘤體積為54 mm 3，相較溶劑對照組有顯著性差異(p值為0.001)，腫瘤抑制率TGI (%)為97%。測試藥PR300186-10-B81(1mg/kg)治療組在給藥後第23天平均腫瘤體積為429mm 3，相較溶劑對照組有顯著的腫瘤抑制作用(p值為0.002)，腫瘤抑制率TGI (%)為76%。測試藥PR300186-10-B81(1mg/kg)治療組在給藥後第23天平均腫瘤體積為67mm 3，相較溶劑對照組有顯著的腫瘤抑制作用(p值為0.001)，腫瘤抑制率TGI (%)為96%。PR300159-8-DXD、PR300159-8-B81及PR300186-10-B81在1mg/kg及5mg/kg下均具有顯著的抗腫瘤作用，且PR300186-10-B81具有明顯的劑量依賴性。
圖21顯示小鼠體重結果。整個治療給藥期間，動物均表現出良好的藥物耐受，未出現嚴重的體重下降及動物死亡現象。
實施例20.  卵巢癌SKOV3模型 用含10%的胎牛血清的DMEM培養基，在37℃ 5% CO 2條件下培養SKOV3細胞, 接種當天收集指數生長期的SKOV3細胞。將腫瘤細胞重懸在PBS與Matrigel (1:1) 的混合液中, 然後皮下接種。每隻BALB/c Nude小鼠皮下接種1×10 7個SKOV3腫瘤細胞，當各組小鼠平均瘤體積在200 mm 3時進行分組給藥，42隻小鼠被分為7組，分組後開始給藥，給藥週期為一周兩次，共進行了4次給藥，給藥方式為尾靜脈注射。開始給藥後，每週稱量體重及瘤體積兩次，瘤體積計算方式為: 腫瘤體積(mm 3)= 0.5×腫瘤長徑×腫瘤短徑 2。給藥後第21天結束實驗觀察，隨後所有小鼠進行安樂死處理。資料分析採用t-test。
圖22顯示PR300159-8-B81、PR300186-10-B81的體內藥效學研究結果。給藥後第21天，對照組小鼠的平均腫瘤體積為2011mm 3。測試藥PR300159-8-B81 (1.28mg/kg)治療組在給藥後第21天平均腫瘤體積為657 mm 3，相較溶劑對照組有顯著性差異(p值＜0.001)，腫瘤抑制率TGI (%)為67%。測試藥PR300159-8-B81 (6.4mg/kg)治療組在給藥後第21天平均腫瘤體積為261 mm 3，相較溶劑對照組有顯著性差異(p值＜0.001)，腫瘤抑制率TGI (%)為87%。測試藥PR300159-8-B81 (12.8mg/kg)治療組在給藥後第21天平均腫瘤體積為122 mm 3，相較溶劑對照組有顯著性差異(p值＜0.001)，腫瘤抑制率TGI (%)為94%。測試藥PR300186-10-B81 (0.78mg/kg)治療組在給藥後第21天平均腫瘤體積為1064 mm 3，相較溶劑對照組有顯著的腫瘤抑制作用(p值＜0.001)，腫瘤抑制率TGI (%)為47%。測試藥PR300186-10-B81 (3.9mg/kg)治療組在給藥後第21天平均腫瘤體積為478 mm 3，相較溶劑對照組有顯著的腫瘤抑制作用(p值＜0.001)，腫瘤抑制率TGI (%)為76%。測試藥PR300186-10-B81 (7.8mg/kg)治療組在給藥後第21天平均腫瘤體積為265 mm 3，相較溶劑對照組有顯著的腫瘤抑制作用(p值＜0.001)，腫瘤抑制率TGI (%)為87%。PR300159-8-B81及PR300186-10-B81具有顯著的抗腫瘤作用，且具有明顯的劑量依賴性。
圖23顯示小鼠體重結果。整個治療給藥期間，動物均表現出良好的藥物耐受，未出現嚴重的體重下降及動物死亡現象。
實施例21. 肺癌NCI-H226模型 用含10%的胎牛血清的RPMI-1640培養基，在37℃ 5% CO 2條件下培養NCI-H226細胞, 接種當天收集指數生長期的NCI-H226細胞。腫瘤細胞首先重懸在PBS與Matrigel (1:1) 的混合液中, 然後皮下接種。每隻BALB/c Nude小鼠皮下接種5×10 6NCI-H226腫瘤細胞。當各組小鼠平均瘤體積在150 mm 3時進行分組給藥，55隻小鼠被分為11組，分組後開始給藥，給藥週期為一周兩次，共進行了5次給藥，給藥方式為尾靜脈注射，給藥劑量為1mg/kg體重或5mg/kg體重。開始給藥後，每週稱量體重及腫瘤體積兩次，腫瘤體積計算方式為: 腫瘤體積(mm 3)= 0.5×腫瘤長徑×腫瘤短徑 2。給藥後第28天結束實驗觀察，隨後所有小鼠進行安樂處理。資料分析採用t-test。
其中，BAY-949343為Anetumab ravtansine，是拜耳公司研發的由全人抗MSLN的單株抗體MF-T（anetumab）經由胺基綴合與微管抑制劑美登素DM4相連而成的ADC，連接子為N-琥珀醯亞胺-4-(2-吡啶基二硫代)丁酸酯 (N-succinimidyl-4-(2-pyridyldithio)butanoate；SPDB)，SPDB連接子具有周圍殺傷作用（WO2010124797A1）。BAY-949343由上海睿智化學研究有限公司合成。
圖24及圖25顯示PR300159-8-DXD、BAY-949343、PR300159-8-B81、PR300186-10-B81的體內藥效學研究結果。給藥後第28天，溶劑對照組小鼠的平均腫瘤體積為1535 mm 3。測試藥PR300159-8-DXD (1mg/kg)治療組在給藥後第28天平均腫瘤體積為743 mm 3，相較溶劑對照組有顯著性差異(p值為0.05)，腫瘤抑制率TGI (%)為52%。測試藥PR300159-8-DXD(5mg/kg)治療組在給藥後第28天平均腫瘤體積為460 mm 3，相較溶劑對照組有顯著性差異(p值為0.01)，腫瘤抑制率TGI (%)為70%。測試藥BAY-949343(1mg/kg)治療組在給藥後第28天平均腫瘤體積為497 mm 3，相較溶劑對照組有顯著性差異(p值為0.01)，腫瘤抑制率TGI (%)為68%。測試藥BAY-949343(5mg/kg)治療組在給藥後第28天平均腫瘤體積為253 mm 3，相較溶劑對照組有顯著性差異(p值為0.004)，腫瘤抑制率TGI (%)為84%。測試藥PR300159-8-B81(1mg/kg)治療組在給藥後第28天平均腫瘤體積為556 mm 3，相較溶劑對照組有顯著性差異(p值為0.02)，腫瘤抑制率TGI (%)為64%。測試藥PR300159-8-B81(5mg/kg)治療組在給藥後第28天平均腫瘤體積為164 mm 3，相較溶劑對照組有顯著性差異(p值為0.003)，腫瘤抑制率TGI (%)為89%。測試藥PR300186-10-B81(1mg/kg)治療組在給藥後第28天平均腫瘤體積為526mm 3，相較溶劑對照組有顯著的腫瘤抑制作用(p值為0.01)，腫瘤抑制率TGI (%)為66%。測試藥PR300186-10-B81(5mg/kg)治療組在給藥後第28天平均腫瘤體積為211mm 3，相較溶劑對照組有顯著的腫瘤抑制作用(p值為0.003)，腫瘤抑制率TGI (%)為86%。PR300159-8-B81、PR300186-10-B81及BAY-949343有同等的抗瘤效果，且抗瘤效果均優於PR300159-8-DXD。
圖26及圖27顯示小鼠體重結果。整個治療給藥期間，動物均表現出良好的藥物耐受，未出現嚴重的體重下降及動物死亡現象。
實施例22. PR300159、PR300159-B71、PR300186及PR300186-B71在過表現人間皮素的CHOK1細胞（CHOK1-huMSLN）上的結合活性實驗 用流式細胞術檢測PR300159、PR300186抗體以及PR300159-B71、PR300186-B71抗體藥物複合體（ADC）在CHOK1-huMSLN細胞上的結合活性。
PR300159、 PR300186抗體以及PR300159-B71、PR300186-B71 ADC在緩衝液(含2% FBS的PBS)中序列稀釋。將稀釋後的抗體（30μg/ml）液50µL加入含1-2 ×10 5細胞的細胞懸液50µL中，4℃培育1小時。細胞用緩衝液(含2% 血清的PBS)沖洗兩次，每孔加入100 µL螢光標記抗人IgG抗體(Alexa Fluor®488親和純山羊抗人IgG(H+L)， Jackson ImmunoResearch, Catalog 109-545-088)。4°C培育1小時後，用緩衝液洗滌細胞兩次，進行流式細胞儀檢測。
實驗結果見表14及圖28，實驗結果表明，抗體PR300159及PR300186以及其對應的ADC PR300159-B71及PR300186-B71在細胞上均有相當的結合活性。
表14. 經由FACS檢測抗體或ADC與細胞表面MSLN的結合活性
樣品名 CHOK1-huMSLN
EC50 (nM) TOP (MFI)
PR300159-B71 0.47 3181863
PR300159 0.67 3229451
PR300186-B71 0.48 2474656
PR300186 0.76 2557001
實施例23. PR300159、PR300159-B81、PR300186及PR300186-B81在腫瘤細胞上的結合活性實驗 用流式細胞術檢測PR300159、PR300186抗體以及PR300159-B81、PR300186-B81抗體藥物複合體（ADC）在腫瘤細胞上的結合活性。本實施例中使用的腫瘤細胞為乳腺癌細胞株COV644。
PR300159、 PR300186抗體以及PR300159-B81、PR300186-B81 ADC在緩衝液(含2% FBS的PBS)中序列稀釋。將稀釋後的抗體液50µL加入含1-2 ×10 5個COV644細胞的細胞懸液50µL中，4℃培育1小時。細胞用緩衝液(含2% 血清的PBS)沖洗兩次，每孔加入100 µL螢光標記抗人IgG抗體(Alexa Fluor®488親和純山羊抗人IgG(H+L)， Jackson ImmunoResearch, Catalog 109-545-088)。4°C培育1小時後，用緩衝液洗滌細胞兩次，進行流式細胞儀檢測。
實驗結果見表15及圖29。實驗結果表明，抗體以及其對應的ADC在COV644細胞上均有相當的結合活性。
表15. 抗體及其ADC與COV644細胞的結合活性
樣品名 COV644
EC50 (nM) TOP (MFI)
PR300159-B81 0.90 2263900
PR300159 1.43 2640283
PR300186-B81 ＞100 669007
PR300186 ＞100 890711
實施例24. PR300159、PR300159-B71、PR300186及PR300186-B71在腫瘤細胞上的內吞活性實驗 用流式細胞術檢測PR300159及PR300186抗體以及PR300159-B71及PR300186-B71在腫瘤細胞COV644上的內吞效率。在本實施例中使用的腫瘤細胞為乳腺癌細胞株COV644。
在本實施例中，使用pHAb Amine Reactive Dye (Promega, Cat # G9841)來確定抗MSLN抗體在腫瘤細胞COV644上的內吞效率。pHAb染料是一種pH感測器染料，在pH值大於7時具有非常低的螢光，當溶液的pH值變低時，螢光顯著增加。用pHAb染料標記的抗體在中性pH條件下結合細胞外膜時，檢測不到螢光或極低螢光。pHAb染料標記的抗體被細胞內吞後，在細胞的內體及溶體中的低pH環境下，檢測到較強的螢光。
抗體用pHAb染料標記，按照套組說明書計算DAR值。pHAb染料標記的抗體與COV644在4℃(此溫度下抗體內化活性很低，用作背景對照)或37℃培育24小時。然後檢測到激發光值(Ex)在532nm，發射光值(Em)在560nm處的螢光。抗體內吞結果的計算方式為：37℃下的螢光強度減去4℃下背景下的螢光強度，再除以抗體綴合染料的DAR值。螢光值越高值表示抗體在細胞上的內吞效率越高。
實驗結果見圖30。實驗結果表明，PR300159, PR300159-B71、PR300186及PR300186-B71在腫瘤細胞COV644上均有較好的內吞活性。
實施例25. PR300159、PR300186抗體藥物複合體的對表現MSLN細胞的實驗 接種2000個細胞/孔的HT29-huMSLN到96孔盤中，然後加入序列稀釋的PR300159、PR300159-B71、PR300186、PR300186-B71或hIgG-B71。6天後使用Promega(G7572)CellTiter Glo檢測細胞活力。
實驗結果見圖31。實驗結果表明，PR300159-B71及PR300186-B71 對CHOK1-huMSLN有明顯的殺傷作用。
實施例26. 人卵巢癌COV644模型 用含10%的胎牛血清的RPMI-1640培養基，在37℃ 5% CO 2條件下培養COV644(ECACC, catalog: 07071908)細胞, 接種當天收集指數生長期的COV644細胞，每隻BALB/c Nude小鼠皮下接種5×10 6COV644腫瘤細胞。腫瘤細胞首先重懸在PBS與Matrigel (1:1) 的混合液中, 然後皮下接種。當各組小鼠平均瘤體積在150 mm 3時進行分組給藥，78隻小鼠被分為13組，分組後開始給藥，給藥週期為一周兩次，共進行了5次給藥，給藥方式為尾靜脈注射。開始給藥後，每週稱量體重及瘤體積兩次，瘤體積計算方式為: 腫瘤體積（mm 3）= 0.5×腫瘤長徑×腫瘤短徑 2。給藥後第21天結束實驗觀察，隨後所有小鼠進行安樂處理。資料分析採用t-test。
圖32A及圖32B顯示了PR300159-B71, PR300159-B81, PR300186-B81的體內藥效學研究結果。給藥後第21天，對照組小鼠的平均腫瘤體積為3154.82 mm 3。測試藥IgG-B81（1mg/kg）治療組在給藥後第21天平均腫瘤體積為1508 mm 3，相較溶劑對照組無顯著性差異（p值為0.82），腫瘤抑制率TGI (%)為2.57%。測試藥IgG-B81（5mg/kg）治療組在給藥後第21天平均腫瘤體積為1514.88 mm 3，相較溶劑對照組有顯著性差異（p值＜0.001），腫瘤抑制率TGI (%)為51.98%。測試藥PR300159-B71（1mg/kg）治療組在給藥後第21天平均腫瘤體積為853.97mm 3，相較溶劑對照組有顯著性差異（p值＜0.001），腫瘤抑制率TGI (%)為72.93%。測試藥PR300159-B71（5mg/kg）治療組在給藥後第21天腫瘤完全消除，相較溶劑對照組有顯著性差異（p值＜0.001），腫瘤抑制率TGI (%)為100%。測試藥PR300159-B81（1mg/kg）治療組在給藥後第21天平均腫瘤體積為1356.25mm 3，相較溶劑對照組有顯著性差異（p值＜0.001），腫瘤抑制率TGI (%)為57.01%。測試藥PR300159-B81（5mg/kg）治療組在給藥後第21天腫瘤完全消除，相較溶劑對照組有顯著性差異（p值＜0.001），腫瘤抑制率TGI (%)為100%。測試藥PR300186-B81（1mg/kg）治療組在給藥後第21天平均腫瘤體積為1544.39mm 3，相較溶劑對照組無顯著性差異（p值＜0.001），腫瘤抑制率TGI (%)為51.05%。測試藥PR300186-B81（5mg/kg）治療組在給藥後第21天平均腫瘤體積為500.16mm 3，相較溶劑對照組有顯著性差異（p值＜0.001），腫瘤抑制率TGI (%)為84.15%。PR300159-B71, PR300159-B81及PR300186-B81在COV644體內模型中有較好的抗瘤效果。
整個治療給藥期間，動物均表現出良好的藥物耐受，未出現嚴重的體重下降及動物死亡現象。
無
圖1. 抗體PR300186及其PTM（轉譯後修飾（Post-translational modification；PTM））變體PR300186-2、PR300186-3、PR300186-4、PR300186-5、PR300186-6、PR300186-7、PR300186-8、PR300186-9、PR300186-10與人MSLN蛋白的結合。 圖2. 抗體PR300186及其PTM變體PR300186-2、PR300186-3、PR300186-4、PR300186-5、PR300186-6、PR300186-7、PR300186-8、PR300186-9、PR300186-10與食蟹猴MSLN蛋白的結合。 圖3.  PR300159及其PTM變體PR300159-1、PR300159-3、PR300159-5、PR300159-6、PR300159-8、PR300159-9與COV644細胞的結合。 圖4A-4B.  PR300186及其PTM變體PR300186-2、PR300186-3、PR300186-4、PR300186-5、PR300186-6、PR300186-7、PR300186-8、PR300186-9(圖4A)以及PR300186-10(圖4B)與COV644細胞的結合。 圖5. PR300159及其PTM變體PR300159-1、PR300159-3、PR300159-4、PR300159-5、PR300159-6、PR300159-7、PR300159-8、PR300159-9在COV644細胞的內化。 圖6. PR300186及其PTM變體PR300186-3、PR300186-9、PR300186-10在COV644細胞的內化。 圖7. PR300159-8、PR300186-10在COV644細胞的內化。 圖8. PR300159-8、PR300186-10在NCI-H226細胞的內化。 圖9. PR300159-8、PR300186-10在HPAC細胞的內化。 圖10. HT29-huMSLN野生型2C3細胞株及HT29-huMSLN突變型1A11細胞株的MSLN脫落。 圖11. PR300159-8-B81抗體藥物複合體對表現huMSLN的細胞HT29-huMSLN 的細胞毒性。 圖12. PR300159-8-B81在人、食蟹猴、SD大鼠、ICR小鼠血漿及磷酸緩衝液(Phosphate buffered saline；PBS)中的穩定性結果。 圖13. PR300186-10-B81在人、食蟹猴、SD大鼠、ICR小鼠血漿及磷酸緩衝液(PBS)中的穩定性結果。 圖14.在HT29-huMSLN野生型2C3模型中用不同劑量的PR300159-8-B81及PR300186-10-B81處理後小鼠的腫瘤體積。 圖15. 在HT29-huMSLN野生型2C3模型中用不同劑量的PR300159-8-B81及PR300186-10-B81處理後小鼠的體重。 圖16. 在HT29-huMSLN突變型1A11模型中用不同劑量的PR300159-8-B81及PR300186-10-B81處理後小鼠的腫瘤體積。 圖17. 在HT29-huMSLN突變型1A11模型中用不同劑量的PR300159-8-B81及PR300186-10-B81處理後小鼠的體重。 圖18. 在COV644模型中用不同劑量的PR300159-8-B81及PR300186-10-B81處理後小鼠的腫瘤體積。 圖19. 在COV644模型中用不同劑量的PR300159-8-B81及PR300186-10-B81處理後小鼠的體重。 圖20. 在OVCAR3模型中用不同劑量的PR300159-8-DXD、PR300159-8-B81及PR300186-10-B81處理後小鼠的腫瘤體積。 圖21. 在OVCAR3模型中用不同劑量的PR300159-8-DXD、PR300159-8-B81及PR300186-10-B81處理後小鼠的體重。 圖22. 在SKOV3模型中用不同劑量的PR300159-8-B81及PR300186-10-B81處理後小鼠的腫瘤體積。 圖23. 在SKOV3模型中用不同劑量的PR300159-8-B81及PR300186-10-B81處理後小鼠的體重。 圖24. 在NCI-H226模型中用1mg/kg的PR300159-8-DXD、BAY-949343、PR300159-8-B81及PR300186-10-B81處理後小鼠的腫瘤體積。 圖25. 在NCI-H226模型中用5mg/kg的PR300159-8-DXD、BAY-949343、PR300159-8-B81及PR300186-10-B81處理後小鼠的腫瘤體積。 圖26. 在NCI-H226模型中用1mg/kg的PR300159-8-DXD、BAY-949343、PR300159-8-B81及PR300186-10-B81處理後小鼠的體重變化。 圖27. 在NCI-H226模型中用5mg/kg的PR300159-8-DXD、BAY-949343、PR300159-8-B81及PR300186-10-B81處理後小鼠的體重變化。 圖28. PR300159-B71、PR300159、PR300186-B71及PR300186與CHOK-huMSLN細胞的結合。 圖29. PR300159-B81、PR300159、PR300186-B81及PR300186與COV644細胞的結合。 圖30. PR300159、PR300159-B71、PR300186、PR300186-B71在COV644細胞中的內化。 圖31A-31B. PR300159、PR300159-B71抗體藥物複合體對表現huMSLN的細胞CHOK1-huMSLN 的細胞毒性（圖31A）；及PR300186、PR300186-B71抗體藥物複合體對表現huMSLN的細胞CHOK1-huMSLN 的細胞毒性（圖31B）。 圖32A-32B. 在COV644小鼠腫瘤模型中用不同劑量的PR300159-B71、PR300159-B81及PR300186-B81處理後小鼠的腫瘤體積（圖32A）及體重（圖32B）。
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Claims (25)

  1. 一種抗體藥物複合體，其為式(I)化合物或其互變異構體、立體異構體或藥學上可接受的鹽： Ab-[S-X-(Y) n-Z-E-D] q(I) 其中， Ab為特異性結合間皮素(MSLN)的抗體或其抗原結合片段； S為連接Ab及X的硫鍵； X選自C 3-10環烷基、5-10元雜環基、C 6-10芳基或5-10元雜芳基； X任選地被1個、2個、3個、4個或5個R*取代； R*選自H、氘、鹵素、CN、NO 2、OH、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 2-6烯基或C 2-6炔基； Y為-Y 1-Y 2-Y 3-，Y經由Y 1與X相連，經由Y 3與Z相連； 其中， Y 1選自-C(O)-、-C(O)O-、-OC(O)-、-C(O)NH-、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-10環烷基、5-10元雜環基、C 6-10芳基或5-10元雜芳基； Y 2為鍵，或者為C 1-6亞烷基； Y 3選自-C(O)-、-OC(O)-或-NHC(O)-； Y任選地被1個、2個、3個、4個或5個R#取代； R#選自H、氘、鹵素、CN、NO 2、OH、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 2-6烯基或C 2-6炔基； Z為包含2至8個胺基酸的肽；較佳為二肽、三肽或四肽； E不存在，或者為連接Z及D的間隔子單元； D為生物活性分子藥物或其衍生物； n選自0、1、2、3、4或5，較佳為0、1、2或3； q選自1至10的整數，較佳為8。
  2. 如請求項1的抗體藥物複合體，其中， X選自C 6-10芳基或5-10元雜芳基； X任選地被1個、2個、3個、4個或5個R*取代； R*選自H、氘、鹵素、CN、NO 2、OH、C 1-6烷基； 較佳地， X為5-6元雜芳基； X任選地被1個、2個或3個R*取代； R*選自H、氘、鹵素或C 1-4烷基； 更較佳地， X為亞嘧啶基，例如 。
  3. 如請求項1或2的抗體藥物複合體，其中， Y為-Y 1-Y 2-Y 3-，Y經由Y 1與X相連，經由Y 3與Z相連； 其中， Y 1選自C 2-6烯基或C 2-6炔基； Y 2為鍵，或者為C 1-6亞烷基； Y 3選自-C(O)-或-NHC(O)-； Y任選地被1個、2個、3個、4個或5個R#取代； R#選自H、氘、鹵素、CN、NO 2、OH、C 1-6烷基； 較佳地， Y為-Y 1-Y 2-Y 3-，Y經由Y 1與X相連，經由Y 3與Z相連； 其中， Y 1選自C 2-4烯基或C 2-4炔基； Y 2為C 1-4亞烷基； Y 3為-C(O)-； Y任選地被1個、2個或3個R#取代； R#選自H、氘、鹵素或C 1-4烷基； 更較佳地， Y為 。
  4. 如請求項1至3中任一項的抗體藥物複合體，其中， Z選自val-cit、val-cit-gly、gly-gly、gly-gly-gly、gly-gly-gly-gly、val-gly-gly、val-gln-gly、val-glu-gly、phe-lys-gly、leu-lys-gly、gly-val-lys-gly、val-lys-gly-gly、val-lys-gly、val-lys-ala、val-lys-leu、leu-leu-gly、gly-gly-phe-gly、gly-gly-phe-gly-gly、val-gly、val-lys-β-ala或經取代修飾的上述二肽、三肽、四肽； 較佳地， Z為 ； R 1及R 2獨立地選自H、氘、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 2-6烯基或C 2-6炔基； 更較佳地， Z為 ； R 1及R 2獨立地選自H、氘、鹵素或C 1-6烷基，較佳H或C 1-4烷基。
  5. 根據如請求項1-4任一項所述的抗體藥物複合體，其中， E不存在或選自-NH-C 1-6亞烷基-或-O-C 1-6亞烷基-，所述-NH-C 1-6亞烷基及-O-C 1-6亞烷基-可任選地被選自H、鹵素、C 1-6烷基及C 1-6鹵代烷基中的1個、2個或3個取代基所取代； 較佳地，E不存在或為-NH-C 1-4亞烷基-，所述-NH-C 1-4亞烷基-可任選地被選自H、鹵素、C 1-4烷基及C 1-4鹵代烷基中的1個、2個或3個取代基所取代； 更較佳地，E為-NH-(CH 2) 1-4-，例如-NH-CH 2-。
  6. 如請求項1至5中任一項的抗體藥物複合體，其中， D選自金屬配合物；醣肽類抗生素；DNA拓撲異構酶抑制劑；干擾DNA合成藥物；作用於結構蛋白的藥物；腫瘤訊號路徑抑制劑；蛋白酶體抑制劑；組蛋白去乙醯化酶抑制劑；腫瘤新生血管生成抑制劑；細胞週期蛋白抑制劑；絲胺酸/蘇胺酸激酶抑制劑、酪胺酸激酶抑制劑、天冬胺酸激酶抑制劑或組胺酸激酶抑制劑；以及其它抑制腫瘤細胞生長、促進腫瘤細胞凋亡或壞死的活性物質； 較佳地， D選自奧沙利鉑；博來黴素或平陽黴素；喜樹鹼、喜樹鹼衍生物(如羥基喜樹鹼、9-胺基喜樹鹼等)、SN-38、伊立替康、拓撲替康、貝洛替康或盧比替康，放線菌素D、多柔比星、多卡米星，柔紅黴素、米托蒽醌、鬼臼毒素或依託泊苷；甲胺蝶呤、5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、吉西他濱、巰嘌呤、噴司他丁、氟達拉濱、克拉屈濱或奈拉濱；長春花生物鹼類、長春新鹼、長春鹼、紫杉醇、多西他賽或卡巴他賽；美登素衍生物；卡奇黴素衍生物；奧瑞他汀衍生物；吡咯並苯二氮卓類二聚體衍生物；美法侖；絲裂黴素C；或者苯丁酸氮芥； 更較佳地， D為 ; 其中， R D不存在，或者選自-NH-或-O-； L D選自-C 0-6亞烷基-O-C 0-6亞烷基-或-C 0-6亞烷基-O-C 0-6亞烷基-C(O)NH-CHR D4-； R D1及R D2獨立地選自H、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基或C 1-6烷氧基；或者，R D1、R D2及他們連接的碳原子一起形成環，例如C 6-10芳基、6-10元雜芳基、C 3-7環烷基或3-7元雜環基，較佳為5-6元雜環基； R D3及R D4獨立地選自H、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基或C 1-6烷氧基；或者，R D3、R D4與他們連接的碳原子一起形成環，例如C 6-10芳基、5-10元雜芳基、C 5-10環烷基或5-10元雜環基，較佳為C 5-6環烷基； 更較佳， D選自： 、 或 。
  7. 如請求項1至6中任一項的抗體藥物複合體，其中， X選自C 6-10芳基或5-10元雜芳基； X任選地被1個、2個、3個、4個或5個R*取代； R*選自H、氘、鹵素、CN、NO 2、OH、C 1-6烷基； Y為-Y 1-Y 2-Y 3-，Y經由Y 1與X相連，經由Y 3與Z相連； 其中， Y 1選自C 2-6烯基或C 2-6炔基； Y 2為鍵，或者為C 1-6亞烷基； Y 3選自-C(O)-或-NHC(O)-； Y任選地被1個、2個、3個、4個或5個R#取代； R#選自H、氘、鹵素、CN、NO 2、OH或C 1-6烷基； Z選自val-cit、val-cit-gly、gly-gly、gly-gly-gly、gly-gly-gly-gly、val-gly-gly、val-gln-gly、val-glu-gly、phe-lys-gly、leu-lys-gly、gly-val-lys-gly、val-lys-gly-gly、val-lys-gly、val-lys-ala、val-lys-leu、leu-leu-gly、gly-gly-phe-gly、gly-gly-phe-gly-gly、val-gly、val-lys-β-ala或經取代修飾的上述二肽、三肽、四肽； E不存在或選自-NH-C 1-6亞烷基-或-O-C 1-6亞烷基-，所述-NH-C 1-6亞烷基及-O-C 1-6亞烷基-可任選地被選自H、鹵素、C 1-6烷基及C 1-6鹵代烷基中的1個、2個或3個取代基所取代； D選自金屬配合物；醣肽類抗生素；DNA拓撲異構酶抑制劑；干擾DNA合成藥物；作用於結構蛋白的藥物；腫瘤訊號路徑抑制劑；蛋白酶體抑制劑；組蛋白去乙醯化酶抑制劑；腫瘤新生血管生成抑制劑；細胞週期蛋白抑制劑；絲胺酸/蘇胺酸激酶抑制劑、酪胺酸激酶抑制劑、天冬胺酸激酶抑制劑或組胺酸激酶抑制劑；以及其它抑制腫瘤細胞生長、促進腫瘤細胞凋亡或壞死的活性物質。
  8. 如請求項1至7中任一項的抗體藥物複合體，其中， X為5-6元雜芳基； X任選地被1個、2個或3個R*取代； R*選自H、氘、鹵素或C 1-4烷基； Y為-Y 1-Y 2-Y 3-，Y經由Y 1與X相連，經由Y 3與Z相連； 其中， Y 1選自C 2-4烯基或C 2-4炔基； Y 2為C 1-4亞烷基； Y 3為-C(O)-； Y任選地被1個、2個或3個R#取代； R#選自H、氘、鹵素或C 1-4烷基； Z為 ； E不存在或為-NH-C 1-4亞烷基-，所述-NH-C 1-4亞烷基-可任選地被選自H、鹵素、C 1-4烷基及C 1-4鹵代烷基中的1個、2個或3個取代基所取代； R 1及R 2獨立地選自H、氘、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 2-6烯基或C 2-6炔基； D選自奧沙利鉑；博來黴素或平陽黴素；喜樹鹼、喜樹鹼衍生物(如羥基喜樹鹼、9-胺基喜樹鹼等)、SN-38、伊立替康、拓撲替康、貝洛替康或盧比替康，放線菌素D、多柔比星、多卡米星，柔紅黴素、米托蒽醌、鬼臼毒素或依託泊苷；甲胺蝶呤、5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、吉西他濱、巰嘌呤、噴司他丁、氟達拉濱、克拉屈濱或奈拉濱；長春花生物鹼類、長春新鹼、長春鹼、紫杉醇、多西他賽或卡巴他賽；美登素衍生物；卡奇黴素衍生物；奧瑞他汀衍生物；吡咯並苯二氮卓類二聚體衍生物；美法侖；絲裂黴素C；或者苯丁酸氮芥； 較佳地， D為 ; 其中， R D不存在，或者選自-NH-或-O-； L D選自-C 0-6亞烷基-O-C 0-6亞烷基-或-C 0-6亞烷基-O-C 0-6亞烷基-C(O)NH-CHR D4-； R D1及R D2獨立地選自H、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基或C 1-6烷氧基；或者，R D1、R D2及他們連接的碳原子一起形成環，例如C 6-10芳基、5-10元雜芳基、C 3-7環烷基或3-7元雜環基，較佳為5-6元雜環基； R D3及R D4獨立地選自H、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基或C 1-6烷氧基；或者，R D3、R D4與他們連接的碳原子一起形成環，例如C 6-10芳基、5-10元雜芳基、C 5-10環烷基或5-10元雜環基，較佳為C 5-6環烷基。
  9. 如請求項1至8中任一項的抗體藥物複合體，其中， X為亞嘧啶基，較佳為 ； Y為 ； Z為 ； R 1及R 2獨立地選自H、氘、鹵素、C 1-6烷基，較佳H或C 1-4烷基； E為-NH-CH 2-； D選自 、 或 ； n選自1、2或3，較佳為1； q選自4、5、6、7、8、9或10，較佳為8。
  10. 如請求項1至9中任一項的抗體藥物複合體，其中，所述抗體藥物複合體為式(II)化合物或其互變異構體、立體異構體或藥學上可接受的鹽： (II) 其中， Ab為抗MSLN抗體； R 1及R 2獨立地選自C 1-6烷基，較佳為C 1-4烷基； D為 、 或 ； q為選自1-10的整數，例如選自4、5、6、7、8、9或10，較佳為8。
  11. 如請求項1至10中任一項的抗體藥物複合體，其中所述抗體藥物複合體選自以下化合物或其互變異構體、立體異構體或藥學上可接受的鹽： 1) 、 2) 、 3) 、 4) 或 5) ， 其中，Ab為抗MSLN抗體； q為選自1-10的整數，例如選自4、5、6、7、8、9或10，較佳為8。
  12. 如請求項1至11中任一項的抗體藥物複合體，其中所述抗體包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，並且其中 (1) 所述VH包含具有序列識別號: 24所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 27所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (2) 所述VH包含具有序列識別號: 25所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 28所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (3) 所述VH包含具有序列識別號: 26所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 27所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (4) 所述VH包含具有序列識別號: 24所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 29所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (5) 所述VH包含具有序列識別號: 24所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 30所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (6) 所述VH包含具有序列識別號: 24所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 31所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (7) 所述VH包含具有序列識別號: 24所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 32所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (8) 所述VH包含具有序列識別號: 24所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 33所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (9) 所述VH包含具有序列識別號: 25所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 29所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (10) 所述VH包含具有序列識別號: 63所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 67所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (11) 所述VH包含具有序列識別號: 64所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 67所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (12) 所述VH包含具有序列識別號: 65所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 67所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (13) 所述VH包含具有序列識別號: 65所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 68所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (14) 所述VH包含具有序列識別號: 63所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 68所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (15) 所述VH包含具有序列識別號: 66所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 67所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (16) 所述VH包含具有序列識別號: 64所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 69所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (17) 所述VH包含具有序列識別號: 66所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 69所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3； (18) 所述VH包含具有序列識別號: 63所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 69所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3；或 (19) 所述VH包含具有序列識別號: 65所示的胺基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2及HCDR3，並且所述VL包含具有序列識別號: 69所示的胺基酸序列的VL的LCDR1、LCDR2及LCDR3。
  13. 如請求項12的抗體藥物複合體，其中 (1) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 2所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 4所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 6所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 9所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 11所示的胺基酸序列，LCDR3包含   序列識別號: 13所示的胺基酸序列； (2) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 15所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 16所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 6所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 9所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 11所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 18所示的胺基酸序列； (3) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 15所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 17所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 6所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 9所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 11所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 13所示的胺基酸序列； (4) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 2所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 4所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 6所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 9所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 11所示的胺基酸序列，LCDR3包含   序列識別號: 19所示的胺基酸序列； (5) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 2所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 4所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 6所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 9所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 11所示的胺基酸序列，LCDR3包含   序列識別號: 20所示的胺基酸序列； (6) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 2所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 4所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 6所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 9所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 11所示的胺基酸序列，LCDR3包含   序列識別號: 21所示的胺基酸序列； (7) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 2所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 4所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 6所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 9所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 11所示的胺基酸序列，LCDR3包含   序列識別號: 22所示的胺基酸序列； (8) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 2所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 4所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 6所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 9所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 11所示的胺基酸序列，LCDR3包含   序列識別號: 23所示的胺基酸序列； (9) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 15所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 16所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 6所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 9所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 11所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 19所示的胺基酸序列； (10) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 45所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 47所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 49所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 52所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 54所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 56所示的胺基酸序列； (11) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 58所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 47所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 49所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 52所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 54所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 56所示的胺基酸序列； (12) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 58所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 59所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 49所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 52所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 54所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 56所示的胺基酸序列； (13) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 58所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 59所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 49所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 61所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 54所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 56所示的胺基酸序列； (14) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 45所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 47所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 49所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 61所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 54所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 56所示的胺基酸序列； (15) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 58所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 60所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 49所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 52所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 54所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 56所示的胺基酸序列； (16) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 58所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 47所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 49所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 62所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 54所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 56所示的胺基酸序列； (17) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 58所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 60所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 49所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 62所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 54所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 56所示的胺基酸序列； (18) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 45所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 47所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 49所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 62所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 54所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 56所示的胺基酸序列；或 (19) 所述VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1包含序列識別號: 58所示的胺基酸序列，HCDR2包含序列識別號: 59所示的胺基酸序列，HCDR3包含序列識別號: 49所示的胺基酸序列，並且所述VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1包含序列識別號: 62所示的胺基酸序列，LCDR2包含序列識別號: 54所示的胺基酸序列，LCDR3包含序列識別號: 56所示的胺基酸序列。
  14. 如請求項12或13的抗體藥物複合體，其中 (1) 所述VH包含與序列識別號: 24具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 27具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (2) 所述VH包含與序列識別號: 25具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 28具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (3) 所述VH包含與序列識別號: 26具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 27具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (4) 所述VH包含與序列識別號: 24具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 29具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (5) 所述VH包含與序列識別號: 24具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 30具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (6) 所述VH包含與序列識別號: 24具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 31具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (7) 所述VH包含與序列識別號: 24具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 32具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (8) 所述VH包含與序列識別號: 24具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 33具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (9) 所述VH包含與序列識別號: 25具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 29具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (10) 所述VH包含與序列識別號: 63具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 67具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (11) 所述VH包含與序列識別號: 64具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 67具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (12) 所述VH包含與序列識別號: 65具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 67具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (13) 所述VH包含與序列識別號: 65具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 68具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (14) 所述VH包含與序列識別號: 63具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 68具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (15) 所述VH包含與序列識別號: 66具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 67具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (16) 所述VH包含與序列識別號: 64具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 69具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (17) 所述VH包含與序列識別號: 66具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 69具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (18) 所述VH包含與序列識別號: 63具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 69具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列；或 (19) 所述VH包含與序列識別號: 65具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與序列識別號: 69具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列。
  15. 如請求項12-14中任一項所述的抗體藥物複合體，其中所述抗體包含重鏈(HC)及輕鏈(LC)，並且其中： (1) 所述HC包含與序列識別號: 34具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 37具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (2) 所述HC包含與序列識別號: 35具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 38具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (3) 所述HC包含與序列識別號: 36具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 37具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (4) 所述HC包含與序列識別號: 34具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 39具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (5) 所述HC包含與序列識別號: 34具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 40具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (6) 所述HC包含與序列識別號: 34具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 41具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (7) 所述HC包含與序列識別號: 34具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 42具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (8) 所述HC包含與序列識別號: 34具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 43具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (9) 所述HC包含與序列識別號: 35具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 39具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (10) 所述HC包含與序列識別號: 70具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 74具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (11) 所述HC包含與序列識別號: 71具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 74具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (12) 所述HC包含與序列識別號: 72具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 74具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (13) 所述HC包含與序列識別號: 72具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 75具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (14) 所述HC包含與序列識別號: 70具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 75具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (15) 所述HC包含與序列識別號: 73具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 74具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (16) 所述HC包含與序列識別號: 71具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 76具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (17) 所述HC包含與序列識別號: 73具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 76具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列； (18) 所述HC包含與序列識別號: 70具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 76具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列；或 (19) 所述HC包含與序列識別號: 72具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與序列識別號: 76具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性的胺基酸序列。
  16. 如請求項12-15中任一項的抗體藥物複合體，其中所述抗體是嵌合抗體、人源化抗體或人抗體。
  17. 如請求項12-16中任一項的抗體藥物複合體，其中所述抗原結合片段選自Fab、Fab’、F(ab') 2、Fd、Fd’、Fv、scFv及ds-scFv。
  18. 如請求項12-17中任一項的抗體藥物複合體，其中所述抗體是單株抗體、雙特異性抗體或多特異性抗體。
  19. 如請求項1-18中任一項的抗體藥物複合體，其中所述抗體藥物複合體選自以下化合物或其互變異構體、立體異構體或藥學上可接受的鹽： 1) 、 2) 、 3) 、 4) 或 5) ， 其中，Ab為抗MSLN抗體； q為選自1-10的整數，例如選自4、5、6、7、8、9或10，較佳為8； 所述MSLN抗體包含重鏈(HC)及輕鏈(LC)，其中： (1) 所述HC包含如序列識別號: 34所示的胺基酸序列，並且所述LC包含如序列識別號: 37所示的胺基酸序列； (2) 所述HC包含如序列識別號: 34所示的胺基酸序列，並且所述LC包含如序列識別號: 43所示的胺基酸序列； (3) 所述HC包含如序列識別號: 70所示的胺基酸序列，並且所述LC包含如序列識別號: 74所示的胺基酸序列；或 (4) 所述HC包含如序列識別號: 72所示的胺基酸序列，並且所述LC包含如序列識別號: 76所示的胺基酸序列。
  20. 一種藥物組合物，其包含如請求項1-19中任一項所述的抗體藥物複合體，以及任選的藥學上可接受的載體或賦形劑。
  21. 如請求項20的藥物組合物，其中所述組合物還包含第二治療劑，所述第二治療劑選自化療劑、單株抗體藥物、雙/多特異性抗體藥物、重組蛋白藥物、核苷酸藥物（包括siRNA及反義寡核苷酸）、小分子藥物、免疫調節藥物及細胞治療藥物。
  22. 一種治療受試者中的癌症的方法，其包括向所述受試者施用有效量的如請求項1-19所述的抗體藥物複合體或如請求項20或21所述的藥物組合物。
  23. 如請求項22的方法，其中所述癌症選自結腸癌、間皮瘤、卵巢癌、肺癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌、前列腺癌、鱗狀細胞癌、及膽管癌。
  24. 如請求項22或23的方法，其還包括向所述受試者施用第二治療劑。
  25. 如請求項24的方法，其中所述第二治療劑選自化療劑、單株抗體藥物、雙/多特異性抗體藥物、重組蛋白藥物、核苷酸藥物（包括siRNA及反義寡核苷酸）、小分子藥物、免疫調節藥物及細胞治療藥物。
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