TW202413343A

TW202413343A - ５－（２－（４－（４－氟－２－甲基－１ｈ－吲哚－５－基氧基）－６－甲氧基喹啉－７－基氧基）乙基）－５－氮雜螺［２．４］－庚－７－醇之結晶、磷酸鹽及其對映體之生物活性

Info

Publication number: TW202413343A
Application number: TW112121759A
Authority: TW
Inventors: 國慶保羅陳; 李哲; 李瑩胤; 齊莉莎; 郁婷婷
Original assignee: 美商愛德程醫藥有限公司
Priority date: 2022-06-10
Filing date: 2023-06-09
Publication date: 2024-04-01

Abstract

本發明係關於5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇(化合物A)之穩定結晶型態(化合物A-Xln)；其磷酸鹽(化合物A-P)及磷酸鹽穩定結晶型態(化合物A-P-Xln)；以及其對映體(化合物 R-A、化合物 S-A)的生物活性及製備。此外，也研究了其抗癌活性、穩定性、手性、溶解度及治療適應症。

Description

5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇之結晶、磷酸鹽及其對映體之生物活性

本揭露係關於5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇(化合物A)之穩定結晶型態(化合物A-Xln)；其磷酸鹽(化合物A-P)及磷酸鹽穩定結晶型態(化合物A-P-Xln)；以及其對映體(化合物 R-A、化合物 S-A)的生物活性及製備。

蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase, PTK)是一系列酶，其催化將磷酸基團從三磷酸核苷(通常是ATP)轉移到蛋白質氨基酸殘基的磷酸化過程。此磷酸化過程可以激活磷酸化蛋白質。因此，PTK發揮「開關」的作用，通過控制從細胞外通過膜到內部細胞質甚至細胞核的信號級聯(signal cascades)來調節許多細胞功能。

本文公開的一些實施例涉及具有改善穩定性的PTK抑制劑。這些抑制劑可用於治療PTK介導的失調及疾病。例如，根據其在不同細胞外結構域的位置，PTK可分為表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor, EGFR)、血小板源性生長因子受體(platelet-derived growth factor receptor, PDGFR)、血管內皮生長因子受體(vascular endothelial growth factor receptor, VEGFR)、成纖維細胞生長因子受體(fibroblast growth factor receptor, FGFR)等。大量研究表明，正常細胞通常表現出低活性的PTK或無活性，而許多腫瘤細胞，特別是膠質瘤及癌，則具有PTK過度表達的特徵。顯然，PTK的異常活躍與腫瘤細胞的生長和血管生成過程密切相關。

干擾或阻斷PTK的活性可以通過抑制細胞信號轉導的方式顯著抑制腫瘤細胞的生長。因此，通過PTK抑制劑抑制PTK表達的靶向治療已成為廣泛接受的治療方法。

新型PTK抑制劑5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇(化合物A)具有抑制多種蛋白酪氨酸激酶(PTK)活性的潛力，其包含但不限於VEGFr、EGFr、c-kit、PDGF、FGF、SRC、Aurora B等。5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇(化合物A)的合成路徑已公開於專利WO2010021918中。

本發明的一些實施例涉及一種5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇的穩定結晶型態(化合物A-Xln)。

在一些實施例中，5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇的穩定結晶型態是透過包含兩個再結晶步驟的方法製成。

在一些實施例中，5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇的穩定結晶型態是透過包含使用高沸點溶劑或混合後具有高沸點的混合溶劑進行再結晶步驟的方法製成。

在一些實施例中，5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇的穩定結晶型態是透過包含使用低沸點溶劑或混合後具有低沸點的混合溶劑進行再結晶步驟的方法製成。

在一些實施例中，5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇的穩定結晶型態是透過包含第一再結晶步驟以及第二再結晶步驟的方法製成。

在一些實施例中，5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇的穩定結晶型態是由包含：使用高沸點溶劑或混合後具有高沸點的混合溶劑的第一再結晶步驟，以及使用低沸點溶劑或混合後具有低沸點的混合溶劑的第二再結晶步驟的方法製成。在一些實施例中，該高沸點溶劑為DMF且該低沸點溶劑為EtOH。

本發明的一些實施例涉及一種5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇的結晶型態，其表現出以下至少一種特性：DSC熔點範圍(Endo)：240-260 °C且峰值溫度範圍：244-254 °C；更具體地，DSC熔點範圍(Endo)：247-253 °C且峰值溫度為249 °C，如圖2所示；或TGA熱分析圖顯示為非溶劑化材料且在250 °C以上時有重量損失，如圖3所示。

本發明的一些實施例涉及一種5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇的結晶型態，其具有如圖4所示的XRPD圖案。

本發明的一些實施例涉及一種5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇的結晶型態，其XRPD圖案包含14個特徵峰，其強度%大於10%且以d值及角度表示如下：

NO.	角度	d值	強度	強度%
1	8.899	9.9286	74540	12.04
2	9.927	8.9032	235708	38.08
5	14.938	5.9257	159717	25.80
6	15.374	5.7587	104484	16.88
7	16.104	5.4991	93019	15.03
8	16.558	5.3495	619004	100.00
11	18.492	4.7942	87559	14.15
13	19.912	4.4553	118882	19.21
14	20.445	4.3403	180671	29.19
15	21.511	4.1275	348507	56.30
19	23.859	3.7265	69270	11.19
20	24.314	3.6577	67756	10.95
21	24.590	3.6172	93287	15.07
23	25.952	3.4305	86263	13.94

本發明的一些實施例涉及一種5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇的結晶型態，其具有如圖11所示的XRPD圖案。

本發明的一些實施例涉及一種5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇的結晶型態，其XRPD圖案包含43個特徵峰，其所有強度%均以d值及角度表示如下：

NO.	角度	d值	強度	強度%
1	8.899	9.9286	74540	12.04
2	9.927	8.9032	235708	38.08
3	11.586	7.6312	14908	2.41
4	13.145	6.7299	3511	0.57
5	14.938	5.9257	159717	25.80
6	15.374	5.7587	104484	16.88
7	16.104	5.4991	93019	15.03
8	16.558	5.3495	619004	100.00
9	17.327	5.1137	22260	3.60
10	17.820	4.9734	20322	3.28
11	18.492	4.7942	87559	14.15
12	18.809	4.7140	21872	3.53
13	19.912	4.4553	118882	19.21
14	20.445	4.3403	180671	29.19
15	21.511	4.1275	348507	56.30
16	22.004	4.0362	14250	2.30
17	22.499	3.9485	3195	0.52
18	23.188	3.8327	51679	8.35
19	23.859	3.7265	69270	11.19
20	24.314	3.6577	67756	10.95
21	24.590	3.6172	93287	15.07
22	25.171	3.5350	1707	0.28
23	25.952	3.4305	86263	13.94
24	26.464	3.3652	53165	8.59
25	26.841	3.3188	20232	3.27
26	27.217	3.2738	6582	1.06
27	27.648	3.2237	46760	7.55
28	28.457	3.1339	54339	8.78
29	29.310	3.0446	1984	0.32
30	29.856	2.9901	4264	0.69
31	30.212	2.9557	18700	3.02
32	31.202	2.8642	26858	4.34
33	31.632	2.8262	24054	3.89
34	32.837	2.7252	55773	9.01
35	33.430	2.6782	39092	6.32
36	35.185	2.5485	6426	1.04
37	36.092	2.4865	16774	2.71
38	36.865	2.4361	20105	3.25
39	38.167	2.3560	16104	2.60
40	39.409	2.2845	5045	0.82
41	40.888	2.2053	5238	0.85
42	41.720	2.1632	8720	1.41
43	42.886	2.1070	9964	1.61

在一些實施例中，5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇的結晶型態相較於非晶型態，提高了更好的穩定性及/或溶解度。

在一些實施例中，5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇的穩定結晶型態為藥學上可接受的鹽。在一些實施例中，5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇的穩定結晶型態為磷酸鹽。

在一些實施例中，該磷酸鹽的製備方法包含中和一磷酸溶液於一溶劑或混合溶劑中的步驟，以及再結晶的步驟。

在一些實施例中，中和及/或再結晶是在作為溶劑的EtOH中進行。

在一些實施例中，5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇的磷酸鹽具有以下至少一種特性：DSC熔點範圍(Endo)：221-235 °C且峰值溫度為229 °C，如圖9所示；以及TGA顯示在約30-60 °C時有輕微的重量損失，且在210 °C以上有顯著的重量損失，如圖10所示。

在一些實施例中，5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇的磷酸鹽包含如圖11所示的XRPD圖案。XRPD結果包含以下所有特徵峰，其所有強度%均以d值及角度表示如下：

NO.	角度	d值	強度	強度%
1	5.268	16.760	83.1	26.6
2	7.139	12.372	251.0	80.6
3	9.805	9.014	94.9	30.4
4	10.455	8.455	119.0	38.2
5	11.799	7.494	98.1	31.4
6	12.417	7.123	181.0	58.1
7	12.669	6.982	225.0	72.0
8	13.672	6.472	280.0	89.8
9	14.307	6.186	136.0	43.5
10	15.546	5.695	137.0	44.0
11	16.064	5.513	181.0	58.1
12	16.719	5.298	312.0	100.0
13	17.495	5.065	135.0	43.4
14	18.035	4.915	136.0	43.7
15	18.802	4.716	153.0	48.9
16	19.530	4.542	285.0	91.3
17	21.095	4.208	200.0	64.1
18	22.535	3.942	138.0	44.2
19	23.426	3.794	294.0	94.3
20	25.916	3.435	114.0	36.6
21	26.577	3.351	144.0	46.3

本發明的一些實施例涉及一種具有5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇所表示之結構的化合物、其穩定結晶型態、其鹽型態、及/或其穩定結晶鹽型態用於抑制蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinases, PTKs)之用途。在一些實施例中，PTK是選自但不限於：FGFR1(h)、FGFR2(h)、FGFR3(h)、Flt1(h) (VEGFr1)、Flt4(h) (VEGFr3)、KDR(h) (VEGFr2)、Aurora-B PDGFRα(h)、PDGFRα(h)以及PDGFRβ(h)。在一些實施例中，其鹽型態為磷酸鹽型態。

本發明的一些實施例涉及一種具有5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇所表示之結構的化合物、其穩定結晶型態、其鹽型態、及/或其穩定結晶鹽型態，其中該化合物係抑制胰腺、前列腺、肉瘤、甲狀腺、結腸、卵巢、血液、乳腺、腦、NSCLC、SCLC、肝、腎、結腸、子宮頸及胃的常見癌細胞株，包含PANC-1、NCI-H157、MDA-MB-231、Hela、PC-3、BEL7404、MKN45、石川(Ishikawa)、Saos-2、SKOV3、SW579、NCI-H1436、Bel-7402、U87及HCT116，但不限於此。在一些實施例中，其鹽型態為磷酸鹽型態。

本發明的一些實施例涉及一種藥物組合物，其包含如上述或本文中之化合物為其活性成分，以及藥學上可接受的載體及/或藥學上可接受的賦形劑。

本發明的一些實施例涉及一種藥物組合物，其包含5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇的穩定結晶游離鹼型態，或磷酸鹽的穩定結晶型態，以及藥學上可接受的載體。

本發明的一些實施例涉及一種治療腫瘤疾病的方法，包含對有需要的個體施用上述或本文中定義的化合物、或包含該化合物及藥學上可接受的賦形劑的藥物組合物。在一些實施例中，該方法更包含施用額外的藥劑，該額外的藥劑為化療化合物及/或免疫治療劑。在一些實施例中，所述腫瘤疾病是實體瘤，選自肺腫瘤、腎腫瘤、結直腸腫瘤、胃腫瘤、黑素瘤、頭/頸腫瘤、甲狀腺腫瘤、胰腺腫瘤、肝癌、前列腺癌、膀胱癌、腦癌、肉瘤、乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌和子宮內膜癌；以及血癌，選自ALL、CLL、AML、CML和多發性骨髓瘤，尤其是在治療小細胞肺癌(SCLC)、非小細胞肺癌(NSCLC)和卵巢癌的人類臨床研究中。本發明的一些實施例涉及一種治療腫瘤疾病的方法，其中聯合化療劑係選自鉑基或紫杉烷基或拓撲異構酶1抑制劑或生物鹼或烷化劑。在一些實施例中，該化療劑係選自順鉑、卡鉑、紫杉醇或順鉑/紫杉醇或卡鉑/紫杉醇或卡鉑/依托泊苷或託泊替康、伊立替康或洛莫司汀。在一些實施例中，免疫治療劑是選自包含nivolumab、pembrolizumab、ipilimumab、blinatumomab、elotuzumab、daratumumab、cemiplimab、avelumab、durvalumab、atezolizumab、toripalimab、sintilimab、camrelizumab、tislelizumab、AK104、penpulimab、KN035、CS1001、talimogene laherparepvec的PD-1或PD-L1抗體，但不限於此。

本發明的一些實施例涉及化合物5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇(化合物A)、其穩定結晶型態(化合物A-Xln)以及非晶型態(化合物A-Amp)、其自磷酸鹽(化合物A-P)結晶的穩定結晶型態(化合物A-P-Xln)；以及任何上述磷酸鹽或結晶的對映體(兩種手性異構體)(例如，化合物 R-A、化合物 S-A、化合物 R-A-Xln、化合物 S-A-Xln、化合物 R-A-P-Xln、化合物 S-A-P-Xln)。化合物A係由以下結構表示：化合物A

以下說明提供了內容和範例，但不應被解釋為限制本說明書或要求本說明書優先權的任何其他申請中所附之請求項所涵蓋的發明範圍。沒有任何單一組件(包括一方法步驟)或組件集合(例如多個步驟)是必要的或不可缺少的。在本說明書的任何實施例中說明及/或示出的任何特徵、結構、部件、材料、步驟或方法可以與本說明書中其他實施例中說明及/或示出的任何特徵、結構、部件、材料、步驟或方法一起使用或作為替代。

除非另有明確說明，否則本申請及其變體中使用的術語和短語，尤其是所附申請專利範圍中的術語和短語，應當被解釋為開放性的而不是限制性的。作為前述的範例，術語「包括」應理解為意指「包括但不限於」、「包括但非限定」等；本文使用的術語「包含」係與「包括」、「含有」或「其特徵為」同義，並且是包容性的或開放性的，並且不排除額外的、未列舉的元件或方法步驟；術語「具有」應解釋為「至少具有」；術語「範例」用於提供討論中的項目的例示性實例，而不是其詳盡的或限制性的列表；諸如「優選」、「較佳」、「期望」或「理想」等術語以及類似含義的詞語的使用不應被理解為暗示某些特徵對於本發明的結構或功能是關鍵的、必要的或至為重要的，而是僅僅旨在強調可以或不可以在本發明的特定實施例中使用的替代或附加特徵。另外，術語「包含」應與短語「至少具有」或「至少包括」同義地解釋。當在流程的說明中使用時，術語「包括」意味著該流程至少包括所列舉的步驟，但可以包括另外的步驟。當在化合物、組合物或裝置的說明中使用時，術語「包含」是指化合物、組合物或裝置至少包括所列舉的特徵或組分，但也可以包括另外的特徵或組分。同樣地，與連詞「以及(and)」鏈接的一組項目不應被理解為要求這些項目中的每一個都出現在該組中，而應被理解為「及/或」，除非另有明確說明。同樣地，與連詞「或(or)」鏈接的一組項目不應被理解為要求該組之間相互排斥，而應被理解為「及/或」，除非另有明確說明。

另外，短語「基本上由......組成」將被理解為包括具體列舉的那些元件以及那些不會實質上影響所要求保護的技術的基本和新穎特徵的附加元件。短語「由......組成」則排除任何未指定的元件。

本文使用的章節標題僅用於組織目的，不應被解釋為限制所描述的主題。在一個標題(例如組合物)下公開的特徵可以與在不同標題(例如一種治療方法)下公開的特徵組合使用。除非另有定義，本文使用的所有技術和科學術語具有與本領域普通技術人員通常理解的相同含義。應當注意的是，當描述本公開的某些特徵或方面時，特定術語的使用不應被視為暗示該術語在本文中被重新定義為限於包括與本公開的特徵或方面相關的任何特定特徵。

當提及各種特徵時，可以使用術語「或包括及/或跨越前述值的範圍」。這些術語(及其變體)旨在包括包含或跨越任何前述值的任何範圍。例如，關於溫度，溫度可表達為「等於或至少約：40°C、50°C、60°C、70°C、或包括及/或跨越前述值的範圍」。這種說法不僅包括所提供的特定溫度和超過該溫度的範圍(例如，等於或至少約40°C、等於或至少約50°C、等於或至少約60°C、以及等於至或至少約70°C)，而且還包括跨越這些值的溫度範圍(例如，從40°C至50°C、從40°C至60°C、從40°C至70°C、從50°C至60°C、50°C至70°C、或60°C至70°C)。類似地，關於溫度，該溫度可表達為「等於或小於約：40°C、50°C、60°C、70°C，或包括及/或跨越上述值的範圍」。這種說法不僅包括所提供的特定溫度和低於該值的範圍(例如，等於或小於約40°C、等於或小於約50°C、等於或小於約60°C、以及等於至或小於約70 °C)，而且還包括跨越這些值的溫度範圍(例如，從40°C至50°C、從40°C至60°C、從40°C至70°C、從50°C至60°C、從50°C至70°C、或60°C至70°C)。

術語「藥學上可接受的載體」或「藥學上可接受的賦形劑」包括任何和所有溶劑、分散介質、包衣、抗細菌劑和抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑等。藥物活性物質的此類介質和試劑的使用是本領域眾所周知的。除非任何常規介質或試劑與活性成分不相容，否則考慮其在治療組合物中的使用。另外，可以包括各種佐劑，例如本領域常用的佐劑。例如，Gilman等人(Eds.)(1990)描述了在藥物組合物中包含各種組分的考慮因素；Goodman和Gilman的：The Pharmacological Basis of Therapeutics，第8版，Pergamon Press，其全部內容通過引用併入本文。

在一些實施例中，本文中治療的「患者」或「受試者」是人類患者，儘管應當理解當前公開的主題原則上表明其對於所有脊椎動物物種都是有效的，包括哺乳動物，其旨在包括於術語「受試者」和「患者」中。合適的受試者通常是哺乳動物受試者。本文描述的主題可用於研究以及獸醫和醫學應用。本文所用的術語「哺乳動物」包括但不限於人類、非人類靈長類動物、牛、綿羊、山羊、豬、馬、貓、狗、兔、囓齒動物(例如大鼠或小鼠)、猴等。人類受試者包括新生兒、嬰兒、青少年、成人和老年受試者。

本文所用的術語「治療有效量」是指向患有病症、疾病或病痛的受試者賦予調節效果的治療劑的量，調節效果例如可以是有益效果，包括改善在受試者的狀況下(例如，調節一種或多種症狀)，延遲或減少狀況的進展，預防或延遲病症的發作，及/或臨床參數、疾病或病症的改變等。例如，在一些實施方案中，有效量可指將受試者的病症改善至少5%，例如至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少100%。所公開主題的活性組合物中的活性成分和試劑的實際劑量水平可以變化，以便施用有效實現特定受試者及/或應用的期望反應的活性劑的量。所選擇的劑量水平將取決於多種因素，包括但不限於組合物的活性、製劑、施用途徑、與其他藥物或治療的組合、所治療病症的嚴重程度、以及身體狀況和之前接受的治療，以及正在接受治療的受試者的病史。本文考慮了有效劑量的決定和調整，以及對何時與如何進行此類調整的評估。術語「治療有效量」可以指足以預防癌症擴散或逆轉癌症的治療量。

化合物

本發明的一些實施例涉及治療化合物(例如治療劑)。一些實施例涉及5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇(化合物A)、其結晶型態(化合物A-Xln)、其磷酸鹽(化合物A-P)的穩定結晶型態(化合物A-P-Xln)以及前述任一者的對映體(例如，化合物 R-A、化合物 S-A、化合物 R-A-Xln、化合物 S-A-Xln、化合物 R-A-P-Xln、化合物 S-A-P-Xln)，其各自可為治療化合物。在一些實施例中，化合物A名稱中的S表示S構型，而化合物A名稱中的R表示R構型。化合物A的兩種對映體化合物 R-A及化合物 S-A進一步分別由以下結構表示：


(S)-5-(2-((4-((4-fluoro-2-methyl-1H-indol-5-yl)oxy)-6-methoxyquinolin-7-yl)oxy)ethyl)-5-azaspiro[2.4]heptan-7-ol	(R)-5-(2-((4-((4-fluoro-2-methyl-1H-indol-5-yl)oxy)-6-methoxyquinolin-7-yl)oxy)ethyl)-5-azaspiro[2.4]heptan-7-ol

在一些實施例中，提供了化合物A的結晶型態。在一些實施例中，化合物A的結晶型態是游離鹼型態(free base form)。在一些實施例中，該結晶型態表示為化合物A-Xln。在一些實施例中，該結晶型態的特徵為在XRPD圖案中的一個或多個峰。在一些實施例中，該結晶型態的特徵為XRPD峰所在的角度選自8.899、9.927、11.586、13.145、14.938、15.374、16.104、16.558、17.327、17.820、18.492、18.809、19.912、20.445、21.511、22.004、22.499、23.188、23.859、24.314、24.590、25.171、25.952、26.464、26.841、27.217、27.648、28.457、29.310及29.856中的一個或多個，或上述任意的組合。在一些實施例中，該結晶型態的特徵為在角度選自8.899、9.927、14.938、15.374、16.104、16.558、18.492、19.912、20.445、21.511、23.859、24.314、24.590及25.952中的一個或多個，或上述任意組合的XRPD峰具有超過10%的強度。在一些實施例中，該結晶型態的特徵為在角度選自9.927、14.938、16.558、20.445及21.511中的一個或多個，或上述任意組合的XRPD峰具有超過20%的強度。

在一些實施例中，化合物A-Xln的DSC熔點範圍的特徵為其熔點範圍小於等於約245°C、250°C、255°C，或包括及/或跨越前述值的範圍。在一些實施例中，化合物A-Xln的DSC熔點範圍的特徵為其熔點在249°C。

在一些實施例中，化合物A-Xln的TGA峰值重量損失範圍小於等於約245°C、250°C、255°C，或包括及/或跨越前述值的範圍。在一些實施例中，化合物A-Xln的TGA峰值重量損失出現在249°C。

在一些實施例中，提供了化合物A的鹽的結晶型態。在一些實施例中，該結晶型態表示為化合物A-P-Xln。在一些實施例中，該結晶型態的特徵為在XRPD圖案中的一個或多個峰。在一些實施例中，該結晶型態的特徵為XRPD峰所在的角度選自5.268、7.139、9.805、10.455、11.799、12.417、12.669、13.672、14.307、15.546、16.064、16.719、17.495、18.035、18.802、19.530、21.095、22.535、23.426、25.916以及26.577中的一個或多個，或上述任意的組合。在一些實施例中，該結晶型態的特徵為在角度選自7.139、12.417、12.669、13.672、16.064、16.719、19.530、21.095以及23.426中的一個或多個，或上述任意組合的XRPD峰具有超過50%的強度。在一些實施例中，該結晶型態的特徵為在角度選自7.139、13.672、19.530以及23.426中的一個或多個，或上述任意組合的XRPD峰具有超過80%的強度。

在一些實施例中，化合物A-P-Xln的DSC熔點範圍的特徵為其熔點範圍小於等於約220°C、225°C、230°C、235°C、240°C、245°C，或包括及/或跨越前述值的範圍。在一些實施例中，化合物A-P-Xln的DSC熔點範圍的特徵為其熔點在229°C。

在一些實施例中，化合物A-P-Xln的TGA峰值重量損失範圍小於等於約205°C、210°C、215°C、220°C、225°C、230°C，或包括及/或跨越前述值的範圍。在一些實施例中，化合物A-P-Xln的TGA峰值重量損失出現在210°C。

結晶型態之製備方法

本發明的一些實施例涉及從5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇(化合物A)的非晶型態(化合物A-Amp)製備化合物A的穩定結晶型態，例如化合物A-Xln、化合物 S-A-Xln、化合物 R-A-Xln、化合物A-P-Xln、化合物 S-A-P-Xln、或化合物 R-A-P-Xln的製備方法。在一些實施例中，化合物A的穩定結晶型態的製備方法包含一或多個結晶及/或再結晶步驟。

在一些實施例中，化合物A的穩定結晶型態(例如，化合物A-Xln、化合物 S-A-Xln、化合物 R-A-Xln、化合物A-P-Xln、化合物 S-A-P-Xln、或化合物 R-A-P-Xln)的製備包含至少一再結晶步驟。在一些實施例中，化合物A-Xln的製備方法包含多於一個再結晶步驟(例如，2步驟、3步驟、4步驟等)。在一些實施例中，化合物A的穩定結晶型態(例如，化合物A-Xln、化合物 S-A-Xln、化合物 R-A-Xln、化合物A-P-Xln、化合物 S-A-P-Xln、或化合物 R-A-P-Xln)的製備包含至少兩個再結晶步驟(例如，兩個再結晶步驟)。在其他實施例中，製備方法只包含單一再結晶步驟。

在一些實施例中，本文揭露的化合物A的穩定結晶型態(例如，化合物A-Xln、化合物A-P-Xln)的製備可包含在一高沸點溶劑中進行的再結晶步驟。在一些實施例中，高沸點溶劑為具有沸點等於或至少為100°C、110°C、120°C、130°C、140°C、150°C、160°C、170°C、180°C、190°C、200°C、250°C，或包括及/或跨越前述值的範圍的溶劑(或混合溶劑)。在一些實施例中，在此再結晶步驟之後，可獲取化合物A-Xln的一或多個穩定型態。在一些實施例中，為了獲取化合物A-P-Xln、化合物 S-A-P-Xln、或化合物 R-A-P-Xln的穩定型態，可執行額外的再結晶步驟。

在一些實施例中，本文揭露的化合物A的穩定結晶型態(例如，化合物A-Xln、化合物 S-A-Xln、化合物 R-A-Xln、化合物A-P-Xln、化合物 S-A-P-Xln、或化合物 R-A-P-Xln)的製備可包含在一低沸點溶劑(或選擇的溶劑之混合物)中進行的再結晶步驟。在一些實施例中，低沸點溶劑為具有沸點等於或小於30°C、40°C、50°C、60°C、70°C、80°C、90°C、＜100°C，或包括及/或跨越前述值的範圍的溶劑(或混合溶劑)。

在一些實施例中，當至少使用兩個結晶步驟來製備化合物A的穩定結晶型態時，其中一個步驟可包含在一高沸點溶劑(例如具有高沸點的溶劑或混合後具有高沸點的混合溶劑)中進行的再結晶步驟，而另一個可包含在一低沸點溶劑(例如具有低沸點的溶劑或混合後具有低沸點的混合溶劑)中進行的再結晶步驟。在一些實施例中，當使用多個再結晶步驟時，最初的再結晶步驟可使用一高沸點溶劑(或選擇的溶劑之混合物，包含高沸點溶劑及另一個具有或不具有高沸點的溶劑)進行。在一些實施例中，當使用兩個以上的再結晶步驟時，第二個再結晶步驟可使用一低沸點溶劑(或選擇的溶劑之混合物，包含低沸點溶劑及另一個具有或不具有低沸點的溶劑)進行。

或者，在低沸點溶劑進行的再結晶也可先於在高沸點溶劑進行的再結晶。

如本文別處所述，在使用混合溶劑時，當混合物本身俱有高沸點時，該些組成的混合物仍可被視為「高沸點溶劑」。同樣地，在使用混合溶劑時，當混合物本身俱有低沸點時，該些組成的混合物仍可被視為「低沸點溶劑」。

在一些實施例中，用於製備5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇(化合物A)的穩定結晶型態(化合物A-Xln)的高沸點溶劑(例如用於最初的再結晶步驟)係選自但不限於DMF、DMA、NMP、前述任意溶劑的混合物、或其他。在一些實施例中，用於製備5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇(化合物A)的穩定結晶型態(化合物A-Xln)的低沸點溶劑(例如用於第二再結晶步驟)係選自但不限於MeOH、EtOH、IPA、前述任意溶劑的混合物、或其他。

在一些實施例中，於製備5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇(化合物A)的穩定結晶型態時，用於最初的再結晶步驟的高沸點溶劑為DMF且用於第二再結晶步驟的低沸點溶劑為EtOH。

藥物的不同結晶型態具有不同的物理和化學性質(如穩定性、溶解度、溶出率、生物利用率等)，從而導致藥物的有效性、安全性或品質存在差異。在一些實施例中，可以進行一項或多項穩定性測試及/或溶出測試。目前已發現相較於非晶型態的化合物A-Amp，結晶型態的化合物A-Xln具有更好的穩定性和溶出率。

在一些實施例中，如本文別處所記載，本公開涉及製備5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇(化合物A)的鹽型態的方法，包括化合物A的藥學上可接受的鹽的化合物。「藥學上可接受的鹽」的概念包括但不限於由無機酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等形成的酸加成鹽；或由以下有機酸形成的酸加成鹽，例如1-羥基-2-萘甲酸、2,2-二氯乙酸、2-羥基乙磺酸、2-酮戊二酸、4-乙酰氨基苯甲酸、4-氨基水楊酸、乙酸、己二酸酸、抗壞血酸(L)、天冬氨酸(L)、苯磺酸、苯甲酸、樟腦酸(+)、樟腦-10-磺酸(+)、癸酸(癸酸)、己酸(己酸)、辛酸(辛酸)、碳酸、肉桂酸、檸檬酸、環己基氨基磺酸、十二烷基硫酸、乙烷-1,2-二磺酸、乙磺酸、甲酸、富馬酸、半乳糖二酸、龍膽酸、葡庚糖酸(D)、葡萄糖酸(D)、葡萄醣醛酸(D)、谷氨酸、戊二酸、甘油磷酸、乙醇酸、馬尿酸、異丁酸、乳酸(DL)、乳糖酸、月桂酸、馬來酸、蘋果酸(-L)、丙二酸、扁桃酸(DL)、甲磺酸、1,5-萘二磺酸、2-萘磺酸、菸酸、油酸、草酸、棕櫚酸、雙羥萘酸、磷酸、丙酸、焦谷氨酸(-L)、水楊酸、癸二酸、硬脂酸、琥珀酸、酒石酸(+L)、硫氰酸、甲苯磺酸(對位)、十一烯酸等。

本發明的一些實施例涉及製備5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇的鹽及/或穩定結晶鹽型態。本發明的一些實施例涉及製備5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇的磷酸鹽(化合物A-P)及/或穩定結晶磷酸鹽型態(化合物A-P-Xln)。

在一些實施例中，用於製備5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇(化合物A)的穩定結晶磷酸鹽型態(化合物A-P-Xln)的方法包含在一溶劑(或混合溶劑)中對化合物A及磷酸的溶液進行一中和步驟。在一些實施例中，化合物A-P的再結晶是在一溶劑(或混合溶劑)中進行。

在一些實施例中，於製備5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇(化合物A)的穩定結晶磷酸鹽型態(化合物A-P-Xln)時，用於中和步驟及/或再結晶步驟的溶劑為EtOH。

在一些實施例中，如本文別處所記載，化合物A-Xln、化合物 S-A-Xln、或化合物 R-A-Xln可透過使用單一的再結晶步驟(例如，於高沸點溶劑或混合溶劑中)來製備。在一些實施例中，化合物A係在高沸點溶劑中被加熱。在一些實施例中，高沸點溶劑的一部分被移除(包含在真空下)。在一些實施例中，可將溶液靜置(例如，冷卻)，此時結晶形成。在一些實施例中，收集該些結晶。

在一些實施例中，化合物A-P-Xln、化合物 S-A-P-Xln、或化合物 R-A-P-Xln可使用後述再結晶步驟來製備。在一些實施例中，舉例而言，化合物A-P-Xln、化合物 S-A-P-Xln、或化合物 R-A-P-Xln是透過在第二再結晶的溶劑(例如，低沸點溶劑)中加入磷酸(例如，過量磷酸)來製備。在一些實施例中，化合物A係在溶劑(例如，該低沸點溶劑)中被加熱。在一些實施例中，溶劑的一部分被移除(包含在真空下)。在一些實施例中，可將溶液靜置(例如，冷卻)，此時結晶形成。在一些實施例中，收集該些結晶。在一些實施例中，當使用過量磷酸時，部分的磷酸會被中和。

藥物組合物

在一些實施例中，提供一種藥物組合物。在一些實施例中，該藥物組合物包含如本文別處所記載的化合物A的穩定結晶型態或化合物A的鹽的穩定結晶型態以及藥學上可接受的載體。在一些實施例中，該藥物組合物包含如本文別處所記載的化合物A的穩定結晶型態或化合物A的鹽的穩定結晶型態以及藥學上可接受的賦形劑。

在一些實施例中，提供一種藥物組合物的製備方法，該藥物組合物包含5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇的穩定結晶型態(化合物A-P-Xln)、或5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇的磷酸鹽(化合物A-P)或穩定結晶磷酸鹽型態(化合物A-P-Xln)、以及藥學上可接受的載體或賦形劑。在一些實施例中，載體或賦形劑(或兩者)係與化合物A-Xln或化合物A-P-Xln混合。

治療方法

在一些實施例中，提供一種治療方法。在一些實施例中，該方法包含獲取一藥物組合物，該藥物組合物包含5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇的穩定結晶型態(化合物A-P-Xln)、或5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇的磷酸鹽(化合物A-P)或穩定結晶磷酸鹽型態(化合物A-P-Xln)。在一些實施例中，該方法包含對患有疾病的患者施用化合物A-Xln、化合物A-P、或化合物A-P-Xln。在一些實施例中，該疾病為腫瘤性疾病(neoplastic disease)。

在一些實施例中，化合物A-Xln、化合物A-P、或化合物A-P-Xln係包括化合物A-Xln、化合物A-P、或化合物A-P-Xln其中之一的單一手性異構體。在一些實施例中，進行該手性異構體的製備方法。在一些實施例中，為了將5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇(化合物A)的對映體(兩種手性異構體，化合物 R-A，化合物 S-A)彼此分開，使用具有手性柱的製備型HPLC。在一些實施例中，手性異構體可接著被再結晶(及/或結晶化)，如本文別處所記載。

本發明的一些實施例涉及一種5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇的穩定結晶型態化合物A-Xln，或一磷酸鹽或穩定結晶磷酸鹽型態，或5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇的兩種手性異構體(化合物 R-A、化合物 S-A)用於製造用於治療腫瘤疾病的方法之藥物的用途。一些實施例涉及治療選自肺癌、腎癌、結直腸癌、胃癌、黑素瘤、頭/頸癌、甲狀腺癌、胰腺癌、肝癌、前列腺癌、膀胱癌的疾病的方法，腦癌、肉瘤、乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌、子宮內膜癌，特別是小細胞肺癌(SCLC)、非小細胞肺癌(NSCLC)及卵巢癌；由上述任何一種或多種引起的腫瘤、血癌(選自ALL、CLL、AML、CML和多發性骨髓瘤)及其組合。在一些實施例中，該治療方法包含施用5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇的穩定結晶型態化合物A-Xln，或一磷酸鹽或穩定結晶磷酸鹽型態，或5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇的兩種手性異構體(化合物 R-A、化合物 S-A)。

本發明的一些實施例涉及一種5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇的穩定結晶型態或鹽類或穩定結晶鹽型態或兩種手性異構體(化合物 R-A、化合物 S-A)用於單一療法或與額外的化療藥物組合的方法。在一些實施例中，額外的化療藥物選自鉑類或紫杉烷類藥物。

在一些實施例中，該療方法包括選擇患有包含實體瘤的所選疾病的患者。在一些實施例中，該治療方法包括選擇患有選自肺癌、腎癌、結腸直腸癌、胃癌、黑素瘤、頭/頸癌、甲狀腺癌、胰腺癌、肝癌的疾病的患者，前列腺癌、膀胱癌、腦癌、肉瘤、乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌、子宮內膜癌，尤其是小細胞肺癌(SCLC)、非小細胞肺癌(NSCLC)和卵巢癌；由上述任何一種或多種引起的腫瘤、血癌(選自ALL、CLL、AML、CML和多發性骨髓瘤)及其組合。在一些實施例中，該方法包含對患者施用一治療劑量的5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇的穩定結晶型態，或一磷酸鹽或穩定結晶磷酸鹽型態，或5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇的兩種手性異構體(化合物 R-A、化合物 S-A)。

在一些實施例中，對需要治療的患者(例如，患有本文公開的疾病的受試者)施用一有效劑量的化合物A-Xln、化合物A-P、及/或化合物A-P-Xln。在一些實施例中，對需要治療的患者(例如，患有本文公開的疾病的受試者)施用一有效劑量的化合物A-Xln、化合物A-P、及/或化合物A-P-Xln。

本發明的一些實施例涉及一種5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇的穩定結晶型態或鹽類或穩定結晶鹽型態或兩種手性異構體(化合物 R-A、化合物 S-A)用於單一療法或與免疫療法藥物組合的方法。在一些實施例中，免疫療法藥物係選自PD-1、PD-L1、溶瘤病毒療法、雙特異性T細胞接合劑(BiTE)和基於嵌合抗原受體(CAR)T細胞療法的試劑，其包括但不限於nivolumab、pembrolizumab、ipilimumab、blinatumomab、elotuzumab、daratumumab、cemiplimab、avelumab、durvalumab、atezolizumab、toripalimab、sintilimab、camrelizumab、tislelizumab、AK104、penpulimab、KN035、CS1001、talimogene laherparepvec。在一些實施例中，該組合用於治療本文中別處公開的疾病或病症。例如，用於治療選自肺癌、腎癌、結直腸癌、胃癌、黑素瘤、頭頸癌、甲狀腺癌、胰腺癌、肝癌、前列腺癌、膀胱癌、腦癌、肉瘤、乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌和子宮內膜癌的實體瘤中；以及血癌，選自ALL、CLL、AML、CML和多發性骨髓瘤。

為了測試生物活性，將化合物A或化合物A-Xln的PTK抑制活性與市售藥物舒尼替尼(Sunitinib)進行比較。體外酪氨酸激酶抑制活性可通過商業資源測量。其中一些測試也可以與Eurofin或Reaction Biology簽訂合約進行篩選。

對於激酶抑制測試，受體酪氨酸激酶係選自FGFR1(h)、FGFR2(h)、FGFR3(h)、Flt1(h)(VEGFr1)、Flt4(h)(VEGFr3)、KDR(h)(VEGFr2)、Aurora-B、PDGFRα(h)及PDGFRβ(h)。化合物A對所有靶標均表現出抑制作用，IC50值範圍為亞納摩爾至微摩爾級。與市售藥物舒尼替尼相比，化合物A表現出更高的抑制功效。

通過體外MTT法測試化合物A-Xln、化合物A-P-Xln及兩種手性異構體(化合物 R-A、化合物 S-A)對癌細胞株的抑制作用。癌細胞株係選自PANC-1、NCI-H157、MDA-MB-231、Hela、PC-3、BEL7404、MKN45、Ishikawa、Saos-2、SKOV3、SW579及HCT116細胞株。IC50值為微摩爾級。

以下實施例進一步說明本發明，但不應被解釋為以任何方式限制其範圍。

縮寫和定義

為了便於參考，使用了以下縮寫詞並具有如下含義。

EtOH：乙醇，MeOH：甲醇，IPA：異丙醇，EtOAc：乙酸乙酯，DCM：二氯甲烷，DMF： N,N-二甲基甲酰胺，DMA： N,N-二甲基乙酰胺，NMP： N-甲基-2-吡咯烷酮，RT：室溫溫度，Temp：溫度，eq：當量，g：克，mg：毫克，ml：毫升，min：分鐘。API：活性藥物成分。DSC：差示掃描量熱法，TGA：熱重分析，XRPD：X射線粉末衍射，Exo：放熱，Endo：吸熱。ALL：急性淋巴細胞或淋巴細胞白血病，CLL：慢性淋巴細胞或淋巴細胞白血病，AML：急性髓性或髓性白血病，CML：慢性髓性或髓性白血病。IC50：半數最大抑制濃度，即細胞培養基中抑制蛋白質轉運活性50%所需的抑制劑濃度。MTT：3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基溴化四唑。

實例1：結晶型態5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇(化合物A-Xln)的製備

對根據與WO2010021918類似地製備的粗化合物A(18g)中得到化合物A的DSC主峰在245.99°C的無定形固體(化合物A-Amp)。將DMF(180ml)添加到混合物中。在120°C下攪拌直至固體溶解。過濾熱溶液並將濾液在真空下濃縮至約一半體積並進一步冷卻至室溫。過濾沉澱物並用少量DMF洗滌濾餅，隨後用一些水洗滌。然後將濾餅與乙醇(4升)混合併加熱至溶解。將溶液真空濃縮至約一半體積並進一步冷卻至室溫。過濾沉澱物並在烘箱中乾燥，得到作為所需產物的穩定晶體(化合物A-Xln)，其在248.79°C下僅具有一個DSC峰。

化合物A的非晶型態(化合物A-Amp)的DSC圖如圖1的繪圖部分所示。

化合物A的結晶型態(化合物A-Xln)的DSC、TGA、XRPD及 ¹H-NMR圖分別如圖2、圖3、圖4和圖5的繪圖部分所示。

MS: (M+H ⁺)/z 478;

¹H-NMR(DMSO-d ₆) δ ppm: 0.37-0.39(m, 1H), 0.50-0.57(m, 2H), 0.82-0.85(m, 1H) 2.43(s, 3H), 2.54-2.59(d, 2H), 3.11-3.13(d, 1H), 3.26(s, 2H), 3.42-3.46(m, 1H), 3.82-3.84(t, 1H), 3.98(s, 3H), 4.39(t, 2H), 6.28(s, 2H), 6.35-6.36(d, 1H), 6.98-7.02(t, 1H), 7.22-7.24(d, 1H), 7.48(s, 1H), 7.62(s, 1H), 8.43-8.46(d, 1H), 11.42(s, 1H).

DSC熔點範圍(Endo)：247-253 °C且峰值溫度為248.79 °C。TGA顯示為非溶劑化材料且在250 °C以上時有重量損失。XRPD圖案包含14個峰的強度%大於10%或43個特徵峰，其所有強度%均以d值及角度表示如下：

XRPD數據：

實例2

根據本發明人在實例1製備5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇(化合物A)的結晶型態的研究經驗，可預計得到如下的化合物A的結晶型態的製備。化合物A的結晶型態(化合物A-Xln)的製備應具有至少一個再結晶步驟，較佳為兩個再結晶步驟。較佳地，最初的再結晶需要相對高沸點的溶劑(或混合溶劑)，其包含但不限於DMF、DMA以及NMP。之後的再結晶步驟需要一種溶劑(或混合溶劑)，其包含但不限於MeOH、EtOH以及IPA。

實例3：5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇(化合物A)的非晶(化合物A-Amp)以及結晶型態(化合物A-Xln)API的穩定性比較

將化合物A的非晶以及結晶型態API樣品置於潔淨的容器中，環境溫度控制在60°C。在第0日、第10日及第30日測試化合物A的非晶型態(化合物A-Amp)和結晶型態(化合物A-Xln)的純度。測量非晶型態和結晶型態API的樣品，並添加適量的稀釋劑並用超聲處理溶解。將濃度控制在0.2mg/ml，並通過帶有230nm UV檢測器的HPLC測定純化情況。結果如下表所示，擬合曲線如圖6所示。A-Xln比A-Amp具有更好的穩定性。

表1：化合物A的非晶以及結晶型態API的穩定性比較

化合物名稱	相關物質	最大雜質降解率（K）	總雜質降解率（K）
0日	高溫60°C，10日	高溫60°C，30日
最大雜質（%）	總雜質（%）	最大雜質（%）	總雜質（%）	最大雜質（%）	總雜質（%）
(化合物A-Amp) API	0.075	0.26	0.191	0.323	0.327	0.583	0.0082	0.0111
(化合物A-Xln) API	0.032	0.078	0.039	0.115	0.063	0.194	0.0011	0.0039

實例4：5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇(化合物A)的非晶(化合物A-Amp)以及結晶型態(化合物A-Xln)片劑的穩定性比較

化合物A的非晶型態及結晶型態(A-Amp或A-Xln)片劑的樣品(10mg或30mg)係按照以下步驟製備且片劑成分如後述：

(1)過篩步驟：將化合物A(A-Amp或A-Xln)、乳糖T80、微晶纖維素(PH101)、羧甲基澱粉鈉分別過80目篩。

(2)製粒步驟：將過篩後的化合物A(A-Amp或A-Xln)、乳糖T80、微晶纖維素、羧甲基澱粉鈉和二氧化矽加入V型混合機中進行混合1。混合1之後，將材料送入滾筒壓實機進行乾式製粒。將乾燥顆粒過24目篩，所得粉末過50目篩，得到所需的細粉，其占顆粒總重量的10%至13%。將過篩的顆粒與預先過篩的硬脂酸鎂混合進行混合2，對最終混合物的含量進行取樣並進行混合測定(8.9%至10.3%)。

(3)壓片步驟：設置壓片機壓製成10mg及30mg後，將最終混合物壓製成片劑。在加工過程中進行過程控制(IPC)測試重量及硬度的變化(重量變化為±6.0%，硬度為7至13 kg/mm ²)。

(4)包衣步驟：按照胃溶性薄膜包衣預混劑：純淨水=15:85(w:w)的比例配製包衣液，且持續攪拌45分鐘。包衣增重約為2%至3%。

(5)包裝步驟：將收集到的片劑進行重量分選處理。受理的片劑收集後用鋁塑泡罩包裝成7片/板。

表2：化合物A藥品的組成(10mg片劑)

成分	品質參考	功能	wt.%	劑量(mg)
化合物A(A-Amp或A-Xln)	In-house	有效成分	9.24	10
乳糖T80	Chp/USP	填充劑	55.42	60
微晶纖維素（PH101）	Chp/USP	填充劑	27.71	30
羧甲基澱粉鈉	Chp/USP	崩解劑	3.69	4
二氧化矽	Chp/USP	潤滑劑	7.11	0.77
硬脂酸鎂	Chp/USP	潤滑劑	0.46	0.5
歐巴代胃溶包衣粉	Chp/USP	包衣	2.77	3
加總	100	108.27

CHP：中國藥典；USP：美國藥典

表3：化合物A藥品的組成(30mg片劑)

成分	品質參考	功能	wt.%	劑量(mg)
化合物A(A-Amp或A-Xln)	In-house	有效成分	9.24	30
乳糖T80	Chp/USP	填充劑	55.42	180
微晶纖維素（PH101）	Chp/USP	填充劑	27.71	90
羧甲基澱粉鈉	Chp/USP	崩解劑	3.69	12
二氧化矽	Chp/USP	潤滑劑	7.11	2.31
硬脂酸鎂	Chp/USP	潤滑劑	0.46	1.5
歐巴代胃溶包衣粉	Chp/USP	包衣	2.77	9
加總	100	324.81

CHP：中國藥典；USP：美國藥典

按照與實例3中所述類似的方案對製備的片劑進行測試，結果列於表4中，擬合曲線如圖7的繪圖部分所示。

表4：化合物A的非晶以及結晶型態片劑的穩定性比較

化合物名稱	相關物質	最大雜質降解率（K）	總雜質降解率（K）
0日	高溫60°C，10日	高溫60°C，30日
最大雜質（%）	總雜質（%）	最大雜質（%）	總雜質（%）	最大雜質（%）	總雜質（%）
(化合物 A-Amp) 片劑	0.265	0.659	0.264	0.689	0.288	0.724	0.0008	0.0021
(化合物A-Xln) 片劑	0.095	0.267	0.104	0.277	0.108	0.31	0.0004	0.0015

表5：化合物A-Xln藥品(DP、片劑)的穩定性，儲存於25°C±2°C /60%RH±5%RH

批次 #	研究開始日	時間點（月）	外觀	溶出	相關物質	分析
最大單一雜質	總雜質
藥力	10 mg
規格	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	標示量的75% amount	≤0.5%	≤1.0%	90.0% - 110.0%
2012 0801	一月 15, 2013	0	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	94.01	0.15	0.67	106.19
3	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	104.88	0.12	0.57	106.80
6	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	99.08	0.16	0.71	101.25
9	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	84.07	0.16	0.78	107.74
12	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	94.45	0.17	0.82	105.68
18	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	88.13	0.22	0.77	108.93
24	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	105.87	0.29	0.97	101.91
36	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	99.15	0.30	0.91	103.49
2012 0802	一月 15, 2013	0	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	96.55	0.10	0.54	106.02
3	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	96.32	0.14	0.62	106.06
6	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	96.98	0.17	0.86	102.06
9	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	83.31	0.17	0.93	104.18
12	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	109.99	0.23	0.88	107.04
18	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	83.87	0.24	0.71	105.22
24	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	101.57	0.43	0.88	99.08
36	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	102.26	0.33	0.91	105.91
2012 0803	一月 15, 2013	0	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	99.07	0.18	0.72	107.43
3	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	100.15	0.14	0.75	106.36
6	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	104.01	0.20	0.89	103.74
		9	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	92.97	0.21	0.89	104.20
12	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	98.62	0.21	0.79	107.95
18	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	89.56	0.27	1.04	107.26
24	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	103.27	0.40	0.85	98.92
36	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	102.75	0.38	1.12	106.25
2016 0501 10	六月14, 2016	0	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	99.26	0.08	0.31	97.60
3	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	93.40	0.08	0.39	99.57
6	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	94.06	0.08	0.42	94.02
9	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	90.82	0.27	0.64	102.74
12	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	90.81	0.15	0.52	98.22
18	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	93.26	0.18	0.57	99.85
24	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	96.70	0.17	0.76	94.84
2016 0502 10	六月14, 2016	0	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	92.51	0.11	0.32	98.36
3	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	91.31	0.14	0.38	98.23
6	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	92.51	0.08	0.39	94.05
9	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	89.55	0.17	0.52	101.55
12	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	90.12	0.11	0.54	98.35
18	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	85.90	0.20	0.64	96.03
24	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	97.94	0.22	0.70	90.29
2016 0503 10	六月14, 2016	0	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	101.86	0.11	0.32	97.37
3	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	93.20	0.14	0.41	99.90
6	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	98.81	0.09	0.36	95.10
9	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	92.31	0.20	0.58	101.20
12	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	95.21	0.17	0.63	98.01
18	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	92.57	0.21	0.70	94.84
24	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	91.17	0.27	0.87	94.22

批次 #	研究開始日	時間點（月）	外觀	溶出	相關物質	分析
最大單一雜質	總雜質
藥力	30 mg
Specifications	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	標示量的75%	≤0.5%	≤1.0%	90.0% - 110.0%
2016 0501 30	六月14, 2016	0	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	98.46	0.09	0.32	96.47
3	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	93.50	0.10	0.41	100.15
6	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	93.69	0.10	0.37	93.96
9	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	90.72	0.26	0.64	100.79
12	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	94.62	0.15	0.61	97.71
18	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	94.80	0.20	0.61	95.32
24	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	94.42	0.25	0.81	94.29
2016 0502 30	六月14, 2016	0	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	100.02	0.10	0.31	97.64
3	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	93.87	0.09	0.42	102.54
6	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	97.54	0.10	0.36	96.47
9	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	94.50	0.19	0.50	101.41
12	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	96.99	0.16	0.68	98.13
18	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	92.57	0.20	0.65	97.26
24	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	93.13	0.20	0.77	95.63
2016 0503 30	六月14, 2016	0	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	96.10	0.09	0.29	96.53
3	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	97.44	0.07	0.39	102.33
6	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	103.30	0.10	0.41	95.16
9	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	88.08	0.20	0.55	100.11
12	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	92.58	0.09	0.46	97.29
18	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	92.47	0.15	0.49	94.74
24	薄衣片劑，除去薄衣顯出灰白色	97.69	0.24	0.97	94.40

實例5：化合物A片劑體外溶出曲線比較

化合物的結晶型態可以改變其物理和化學性質，其中包括影響藥物有效性的溶出速度。溶出速度的測量可以在溶出試驗中完成。將非晶(化合物A-Amp)片劑及結晶(化合物A-Xln)片劑樣品溶解在適當的溶劑(0.1mol鹽酸溶液)中，並以適當的速度攪拌以促進溶解過程(ZRC-8D智能溶出儀50 rpm的速度)。溶出百分比通過UV檢測器波長設置為230 nm的HPLC測定。在5分鐘、10分鐘、20分鐘、30分鐘和45分鐘時採集樣品，實驗結果列於下表中，溶出曲線可見於圖8的繪圖部分。經過實驗數據對比，可以觀察到結晶片劑比非晶片劑溶解得更快。

表6：非晶(化合物A-Amp)片劑10mg規格溶出曲線結果

時間/ min	1	2	3	4	5	6	AVG	RSD
5	35.26%	40.19%	38.57%	34.47%	36.59%	38.55%	37.27%	5.90%
10	70.22%	69.35%	72.56%	70.48%	71.69%	75.44%	71.62%	3.05%
20	83.54%	82.06%	86.68%	91.49%	86.16%	88.32%	86.37%	3.90%
30	84.00%	82.52%	87.16%	91.99%	86.63%	88.81%	86.85%	3.90%
45	94.43%	94.34%	87.43%	91.14%	91.42%	91.22%	91.66%	2.81%

表7：結晶(化合物A-Xln)片劑10mg規格溶出曲線結果

時間/min	1	2	3	4	5	6	AVG	RSD
5	88.79%	88.69%	82.24%	80.02%	85.03%	89.94%	85.79%	4.69%
10	100.99%	98.14%	95.45%	98.40%	97.32%	98.87%	98.19%	1.86%
20	98.82%	95.70%	98.58%	97.03%	95.58%	97.27%	97.16%	1.41%
30	99.36%	96.23%	99.13%	97.56%	96.10%	97.80%	97.70%	1.41%
45	103.53%	96.06%	96.95%	93.98%	96.03%	95.91%	97.08%	3.41%

AVG：平均值；RSD：相對標準偏差。

實例6：5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇之磷酸鹽以及結晶型態(化合物A-P-Xln)的製備

將化合物A(250mg)在回流下溶解於EtOH(110ml)中並向所得溶液中添加1M H ₃PO ₄的EtOH溶液(0.53ml)。將反應物回流1小時並在緩慢攪拌下冷卻至室溫過夜。過濾固體並用EtOH沖洗，進一步在50°C烘箱中乾燥10小時以得到白色固體，為化合物A的磷酸鹽的穩定結晶型態(化合物A-P-Xln)。

化合物A的磷酸鹽結晶(化合物A-P-Xln)的DSC、TGA、XRPD及 ¹H-NMR圖分別如圖9、圖10、圖11和圖12所示。

¹H NMR (DMSO-d ₆) δ ppm: 0.37-0.39 (m, 1H), 0.50-0.57 (m, 2H), 0.82-0.85 (m, 1H) 2.43 (s, 3H), 2.51-2.56 (m, 1H), 2.58-2.60 (d, 1H), 2.72-2.74 (d, 1H), 2.90 (t, 2H), 3.14-3.18 (m, 1H), 3.77-3.82 (m, 1H), 3.97 (s, 3H), 4.24 (t, 2H), 4.60 (s, 1H), 6.28 (s, 1H), 6.33-6.34 (d, 1H), 7.00 (t, 1H), 7.22-7.24 (d, 1H), 7.42 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 8.42-8.43 (d, 1H), 11.42 (s, 1H).

DSC熔點範圍(Endo)：221-235 °C且峰值溫度為229°C。TGA顯示在約30-60 °C時有1.84%的重量損失，且在210 °C以上有顯著的重量損失。XRPD圖案包含21個特徵峰，其所有強度%均以d值及角度表示如下：

表8：化合物A的磷酸鹽的穩定結晶型態(化合物A-P-Xln)的XRPD數據：

NO.	角度	d值	強度	強度 %
1	5.268	16.760	83.1	26.6
2	7.139	12.372	251.0	80.6
3	9.805	9.014	94.9	30.4
4	10.455	8.455	119.0	38.2
5	11.799	7.494	98.1	31.4
6	12.417	7.123	181.0	58.1
7	12.669	6.982	225.0	72.0
8	13.672	6.472	280.0	89.8
9	14.307	6.186	136.0	43.5
10	15.546	5.695	137.0	44.0
11	16.064	5.513	181.0	58.1
12	16.719	5.298	312.0	100.0
13	17.495	5.065	135.0	43.4
14	18.035	4.915	136.0	43.7
15	18.802	4.716	153.0	48.9
16	19.530	4.542	285.0	91.3
17	21.095	4.208	200.0	64.1
18	22.535	3.942	138.0	44.2
19	23.426	3.794	294.0	94.3
20	25.916	3.435	114.0	36.6
21	26.577	3.351	144.0	46.3

實例7

根據本發明人在製備5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇(化合物A)的穩定結晶磷酸鹽型態(化合物A-P-Xln)的研究經驗，可預計得到如下的化合物A的穩定結晶磷酸鹽型態的製備。化合物A的穩定結晶磷酸鹽型態(化合物A-P-Xln)的製備應具有通過磷酸在某種類型的溶劑(或混合溶劑)中的溶液來中和化合物A的步驟以及在某種類型的溶劑(或混合溶劑)中再結晶的步驟。較佳地，此化合物A的穩定結晶磷酸鹽型態(化合物A-P-Xln)應能從一溶劑(或混合溶劑)的再結晶獲得，所述溶劑包括但不限於MeOH、EtOH和IPA。

實例8：對映體(手性異構體)的製備

將化合物A(10mg)溶解於IPA(10ml)中，並將2ml溶液注入具有手性製備柱CHIRALCEL OD 500x50mm的手性HPLC機器中，以流速5ml/min，流動相己烷：IPA：二乙胺(85:15:0.1)，UV 240 nM下進行。總共重複進樣五次，合併收集的部分，進一步蒸發以得到化合物 R-A(旋光度：-23.49，1.3mg)及化合物 S-A(旋光度：+22.51，1.6mg)兩種對映體。

R-A: ¹H-NMR(DMSO-d ₆) δ ppm: 0.34-0.40 (m, 1H), 0.48-0.60 (m, 2H), 0.80-0.87 (m, 1H), 2.42 (s, 3H), 2.59-2.62 (d, 1H), 2.73-2.75 (d, 1H), 2.87-2.92 (m, 1H), 2.89 (t, 2H), 3.14-3.19 (m, 1H), 3.74-3.79 (m, 1H), 3.96 (s, 3H), 4.24 (t, 2H), 6.28 (s, 1H), 6.32-6.33 (d, 1H), 6.99 (t, 1H), 7.20-7.23 (d, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 8.41-8.43 (d, 2H), 11.42 (s, 1H).

S-A: ¹H-NMR(DMSO-d ₆) δ ppm: 0.34-0.41 (m, 1H), 0.49-0.59 (m, 2H), 0.80-0.85 (m, 1H), 2.42 (s, 3H), 2.59-2.62 (d, 1H), 2.73-2.76 (d, 1H), 2.87-2.92 (m, 1H), 2.89 (t, 2H), 3.14-3.19 (m, 1H), 3.74-3.79 (m, 1H), 3.96 (s, 3H), 4.24 (t, 2H), 6.28 (s, 1H), 6.32-6.33 (d, 1H), 6.99 (t, 1H), 7.20-7.23 (d, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 8.41-8.43 (d, 2H), 11.42 (s, 1H).

實例9：激酶抑制

為測試5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇(化合物A-Xln)的生物活性，對抑制激酶FGFR1(h)、FGFR2(h)、FGFR3(h)、Flt1(h) (VEGFr1)、Flt4(h) (VEGFr3)、KDR(h) (VEGFr2)、Aurora-B PDGFRα(h)、PDGFRα(h)、PDGFRβ(h)進行了測試，且IC50值列於下表中。此外，還測試了市售藥物舒尼替尼的激酶抑制作用，並將結果與化合物A-Xln進行比較。

表9：化合物A的激酶抑制與舒尼替尼(Sunitinib)的比較

激酶	IC50 (nM)
Sunitinib	化合物A-Xln
FGFR1(h)	437	4
FGFR2(h)	852	8
FGFR3(h)	314	6
Flt1(h) (VEGFr1)	7	4
Flt4(h) (VEGFr3)	3	2
KDR(h) (VEGFr2)	34	15
Aurora-B	-	47
PDGFRα(h)		160
PDGFRβ(h)		26

-或空白：沒有抑制或無法擬合IC50曲線的化合物活性。

實例10

5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇的磷酸鹽(化合物A-P)的離子色譜分析和水溶性結果列於下表中。

表10：化合物A-P的離子色譜分析和水溶性結果

名稱	水溶解度 (mg/ml)	磷酸 (Ion) 百分比（%）	磷酸 (Ion) 百分比（%）理論值
化合物A-P	0.36	17.35	17.03

實例11

使用上述實例的化合物進行體外MTT(增殖)測定，得到以下抑制結果：

表11：化合物A-Xln抑制結果

	細胞株	IC ₅₀(µM)
化合物A-Xln
卵巢	SKOV3	17.1 ± 0.55
	A2780	2.63 ± 0.27
血液	HL-60	1.98 ± 1.13
	Molt-4	5.53 ± 2.78
	K562	6.37 ± 2.56
	U937	10.0 ± 2.28
乳腺	SKBR3	12.2 ± 2.00
	MDA-MB-231	7.77 ± 0.02
肺	95-D	4.92 ± 2.26
肝	BEL-7402	0.86 ± 0.15
	HepG2	9.12 ± 3.06
	SMMC-7721	8.01 ± 2.53
腎	786-O	10.1 ± 3.97
結腸	HCT-116	11.7 ± 3.69
子宮頸	Hela	11.2 ± 2.71
胃	SGC7901	6.64 ± 0.81

表12：化合物A及化合物A-P對腫瘤細胞株的體外抑制活性

細胞株	PANC-1	NCI-H157	MDA-MB-231	Hela	PC-3	BEL7404
IC50 (µM)	IC50 (µM)	IC50 (µM)	IC50 (µM)	IC50 (µM)	IC50 (µM)
胰腺	肺	乳腺	卵巢	前列腺	卵巢
化合物A-P-Xln	2.75	1.61	3.93	2.36	1.77	1.75
化合物 R-A	5.64	8.11	9.60	6.69	2.75	4.06
化合物 S-A	5.0	7.0	6.60	6.30	5.60	2.38
細胞株	MKN45	Ishikawa	Saos-2	SKOV3	SW579	HCT116
IC50 (µM)	IC50 (µM)	IC50 (µM)	IC50 (µM)	IC50 (µM)	IC50 (µM)
乳腺	子宮內膜	肉瘤	卵巢	甲狀腺	結腸
化合物A-P-Xln	0.13	1.48	2.48	3.09	0.880	0.934
化合物 R-A	0.43	4.61	3.08	3.71	0.906	0.883
化合物 S-A	0.32	4.98	5.35	7.65	0.836	0.980

實例12：化合物A-Xln與針對腫瘤細胞株的化療或免疫療法以及針對各種腫瘤細胞株的體內異種移植模型的體外、體內組合功效

對化合物A-Xln聯合治療MTT測定結果進行了研究。96孔板每孔中加入100μl細胞懸液，濃度為5×104個細胞/ml，置於37°C、5%CO ²培養箱中。24h後，按表13添加化合物A-Xln樣品溶液，雙孔10μl/孔。在37°C、5%CO ²孵育72小時後，每孔加入20μl 5 mg/ml MTT溶液，4小時後加入100μl/孔溶解液。將樣品放入培養箱中，溶解後使用全波長多功能酶標機。測定570nm處的OD值。圖13和14分別示出了化合物A-Xln、抗乳腺癌劑阿那曲唑(Anastrozole)以及來曲唑(Letrozole)、化合物A-Xln與阿那曲唑的組合、以及化合物A-Xln與來曲唑的組合對乳腺癌細胞株MCF7和BT474的增殖抑制作用。

表13：兩種乳腺癌細胞株MCF-7及BT474的給藥列表

組別	化合物	實驗時間 (h)	給藥時間
1	化合物A-Xln	72	1日
Letrozole	72	1日
Anastrozole	72	1日
2	化合物A-Xln + Letrozole	72	1日
1日
3	化合物A-Xln + Anastrozole	72	1日
1日

更測試了根據表14的樣品通過化合物A-Xln、抗結腸癌劑5FU/O以及化合物A-Xln與5FU/O的組合對三種結腸癌細胞株HT29、HCT116和colo205的增殖抑制。結果如圖15-17所示。

表14：三種結腸癌細胞株HT29、HCT116及colo205的給藥列表

組別	化合物	實驗時間 (h)	給藥時間
1	化合物A-Xln	72	1日
5-FU/Oxaliplatin	72	1日
2	化合物A-Xln + 5-FU/Oxaliplatin	72	1日
1日
3	化合物A-Xln + 5-FU/Oxaliplatin	72 (化合物A)	1日(化合物A)
48 (5-FU/Oxaliplatin)	2日(5-FU/Oxaliplatin)
4	5-FU/Oxaliplatin + 化合物A-Xln	72 (5-FU/Oxaliplatin)	1日(5-FU/Oxaliplatin)
48 (化合物A)	2日(化合物A)

更測試了化合物A-Xln加上免疫療法，例如抗小鼠PD-1抗體聯合治療的功效。

裸鼠接種鼠結直腸CT26細胞株7天，隨機分為6組，然後用賦形劑、兩個劑量組的化合物A-Xln每日一次、一組每3日一次200μg/小鼠的抗小鼠PD-1(PD-1)、或兩個劑量組的化合物A-Xln與抗PD-1的組合。表15顯示施用各化合物後腫瘤大小的變化。圖18顯示施用化合物A-Xln及抗PD1抗體劑以及化合物A-Xln與抗PD1抗體劑的聯合治療後平均腫瘤體積變化的比較。

組別	給藥途徑	平均腫瘤體積 (mm ³) D0	SEM	平均腫瘤體積 (mm ³) D17	SEM	T/C D17
載體	i.g.	128.5	9.3	2281.8	219.3	-
化合物A-Xln 5mg/kg/Qd	i.g.	127.8	14.1	1625.3	224.8	72.04%
化合物A-Xln 15mg/kg/Qd	i.g.	128.5	15.1	829.0	168.3	36.67%
PD-1 200 μg/小鼠/Q3d	IP	126.5	11.5	1526.8	188.5	67.90%
化合物A-Xln 5mg/kg/Qd + PD-1/200 μg/小鼠/Q3d	i.g./IP	128.3	15.0	1281.7	116.3	56.28%
化合物A-Xln 15mg/kg/Qd + PD-1/200 μg/小鼠/Q3d	i.g./IP	129.0	8.9	521.0	97.2	22.60%

表15：鼠結直腸CT26細胞的給藥清單 D0：首次給藥時間。IP：腹腔注射，例如：胃腸道給藥。Qd：每天一次。Q3d：三天一次。PD-1(抗PD-1)：抗小鼠PD-1抗體

已經在異種移植模型上測試了化合物A-Xln針對各種腫瘤細胞株的體內抗腫瘤功效。

不同腫瘤細胞株(SCLC NCI-H1436、NSCLC 95-D、卵巢SKVO3、腎786-O、肝Bel-7420、腦U87)的動物體內異種移植模型的抗腫瘤活性如下：

將生長良好的腫瘤細胞株腫瘤組織切成3mm的片，每隻裸鼠取一片接種於右側脅腹皮下。將動物分組並按預先設計的劑量給藥。當10-14天後腫瘤大小達到100mm ³以上時開始治療。根據腫瘤的大小，剔除腫瘤過大或過小的動物，將平均腫瘤體積相似的動物分組。然後每天給動物口服給藥，連續14-21天。接種13天后，每週兩次用卡尺測量大直徑a(mm)和小直徑b(mm)。按公式計算各腫瘤體積：TV = ab ²/2，並計算相對腫瘤體積：RTV = Vt/Vo，Vo代表治療第一天的腫瘤體積；Vt代表每個測量日的腫瘤體積。接種後20-30天處死動物並通過解剖提取腫瘤。測定並計算個體體重和腫瘤重量。腫瘤抑制百分比計算為 1-[(TWc-TWt)/(TWc)]×100%，其中TWt代表實驗最後一天治療組的平均腫瘤重量，TWc代表實驗最後一天對照組的平均腫瘤重量。實驗劑量和功效結果顯示在圖19-24中。最佳腫瘤抑制百分比範圍為＞70%至＞100%。

結論是：化合物A-Xln與抗乳腺癌藥物，例如芳香酶抑制劑阿那曲唑及來曲唑聯用，對人類癌細胞，例如乳腺癌細胞株MCF7和BT474的增殖抑制作用被證明增強。

化合物A-Xln與化療劑如抗結腸癌5FU/O的組合對人類癌細胞如結腸癌細胞系HT29、HCT116及colo205的增殖抑制作用被證明有增強。抑制活性在順序給藥中也表現出一些差異，在首先給藥化療劑隨後給藥化合物A的方案中具有更高的活性。

小鼠異種移植模型表現出對癌細胞增殖的聯合抑制作用，例如小鼠結直腸癌細胞株CT26的增殖。化合物A-Xln與抗PD1抗體劑聯合治療對抗癌細胞增殖提供了在體內動物模型中功效增強的有力證據。

化合物A-Xln與免疫治療劑例如PD-1或PD-L1抗體的聯合治療可產生協同臨床療效，所述免疫治療劑例如選自但不限於nivolumab、pembrolizumab、ipilimumab、blinatumomab、elotuzumab、daratumumab、cemiplimab、avelumab、durvalumab、atezolizumab、toripalimab、sintilimab、camrelizumab、tislelizumab、AK104、AK105、Penpulimab、KN035、CS1001、talimogene laherparepvec。各種人類癌細胞系動物異種移植模型已證明化合物A-Xln具有顯著的腫瘤抑制活性，特別是在SCLC、NSCLC、卵巢癌、腎癌、肝癌和腦癌中。

實例13：化合物A-Xln片劑在針對實體瘤如NSCLC、SCLC、卵巢癌、子宮內膜癌、宮頸癌和子宮平滑肌肉瘤的人類臨床試驗

各種癌症患者以90mg或80mg或70mg或60mg或40mg口服化合物A-Xln片劑每天一次，連續28天為一個週期，直至通過RECISIT 1.1評估出現不耐受或疾病進展(PD)。如果觀察到不耐受，每天90 mg可以以10 mg間隔減少至80 mg或70 mg或60或50 mg或40 mg或30 mg或20 mg每天。下面列出了少數具有顯著的意想不到的抗腫瘤活性的代表性患者的治療結果(截止於2022年3月)。≥3線(≥2先前線(prior line))治療的SCLC的非常陽性客觀緩解率(ORR)為＞20%，而對於≥3線(≥2先前線)治療的鉑耐藥性卵巢癌觀察到約20%。對於在1線標準護理(SOC)治療週期結束後接受化合物A-Xln片劑維持治療的SCLC患者有一些療效。對於已接受化合物A-Xln片劑作為2線(前1線)治療選擇的SCLC患者有一些療效。在肉瘤和腦腫瘤中也觀察到了療效。

對象#	病況	PFS (月)	最佳反應 (-%腫瘤減少)	治療線數
20019	NSCLC	25	SD (-20%)	＞3
S01006-A	SCLC	*11	SD (-4.5%)	1 (Mnt)
S02008	SCLC	*5.6	SD (-28.96%)	1 (Mnt)
S08004-B	SCLC	*15	PR (-45.6%)	1
S08008-B	SCLC	7.4	PR (-55.7%)	1
S08011-B	SCLC	9.4	PR (-53.6%)	1
S08012-B	SCLC	9.3	PR (-46.6%)	1
S05001-C	SCLC	*13	PR (-43.5%)	2
S08002-C	SCLC	5.6	PR (-44.8%)	2
S08001-C	SCLC	4.77	PR (-32.1%)	2
S08006-C	SCLC	3.73	PR (-40.2%)	2
S08021-C	SCLC	*2.1	PR (-40.7%)	2
S01013	OC	*1.9	PR (-46.9%)	2
S01003	OC	7.37	PR (-83.5%)	3
S0302008	ULMS	13.1	SD (0%)	3
S0302015	BT	6	SD (-15%)	1

*：疾病無進展時間/仍在研究中。Mnt：維持治療 NSCLC：非小細胞肺癌， SCLC：小細胞肺癌， ULMS：子宮平滑肌肉瘤(Sarcoma)， OC：卵巢癌， BC：腦腫瘤， SD：疾病穩定， PR：部分反應， PFS：無進展生存期

此外，一項已完成的SCLC臨床研究，涉及30名接受過1線治療的患者及30名接受過≥2線治療的患者表現出積極的臨床療效，其無進展生存期(PFS)為B：3.68個月，C：3.62個月，而總生存期(OS)為B：10.39個月，C：＞15個月。他們都比當前歷史報告的先前1線或≥2線治療的可用治療方案要好得多。Kaplan-Meier曲線如圖25和圖26所示。

無

圖1為5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇之非晶(化合物A-Amp)型態的DSC圖。圖2為5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇之結晶型態的DSC圖。圖3為5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇之結晶型態的TGA圖。圖4為5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇之結晶型態的XRPD圖。圖5為5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇之結晶型態的 ¹H-NMR圖譜。圖6為5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇之非晶API及結晶API的穩定性測試。圖7為5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇之非晶片劑及結晶片劑的穩定性測試。圖8為5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇之非晶片劑及結晶片劑的溶出曲線。圖9為5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇之磷酸鹽的結晶型態的DSC圖。圖10為5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇之磷酸鹽的結晶型態的TGA圖。圖11為5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇之磷酸鹽的結晶型態的XRPD圖。圖12為5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇之磷酸鹽的結晶型態的 ¹H-NMR圖譜。圖13係顯示化合物A-Xln、抗乳腺癌劑阿那曲唑以及來曲唑、化合物A-Xln與阿那曲唑的組合、以及化合物A-Xln與來曲唑的組合對乳腺癌細胞株MCF7的增殖抑制作用。圖14係顯示化合物A-Xln、抗乳腺癌劑阿那曲唑以及來曲唑、化合物A-Xln與阿那曲唑的組合、以及化合物A-Xln與來曲唑的組合對乳腺癌細胞株BT474的增殖抑制作用。圖15係顯示化合物A-Xln、抗結腸癌劑5FU/O、以及化合物A-Xln與5FU/O的組合對結腸癌細胞株HT29的增殖抑制作用。圖16係顯示化合物A-Xln、抗結腸癌劑5FU/O、以及化合物A-Xln與5FU/O的組合對結腸癌細胞株HCT116的增殖抑制作用。圖17係顯示化合物A-Xln、抗結腸癌劑5FU/O、以及化合物A-Xln與5FU/O的組合對結腸癌細胞株colo205的增殖抑制作用。圖18係對鼠結直腸CT26細胞株異種移植模型施用化合物A-Xln、抗PD1抗體劑以及化合物A-Xln與抗PD1抗體劑的聯合治療後平均腫瘤體積變化的比較。圖19係化合物A-Xln針對小細胞肺癌NCI-H1436細胞株異種移植模型進行治療後的相對腫瘤體積變化。圖20係化合物A-Xln針對非小細胞肺癌(NSCLC)95D細胞株異種移植模型進行治療後的相對腫瘤體積變化。圖21係化合物A-Xln針對卵巢癌SKOV3細胞株異種移植模型進行治療後的相對腫瘤體積變化。圖22係化合物A-Xln針對腎癌786-O細胞株異種移植模型進行治療後的相對腫瘤體積變化。圖23係化合物A-Xln針對肝癌Bel-7402細胞株異種移植模型進行治療後相對腫瘤體積變化。圖24係化合物A-Xln針對膠質母細胞瘤U87細胞株異種移植模型進行治療治療後的相對腫瘤體積變化。圖25係SCLC患者C組(≥第2先前線，n=30)和B組(=第1先前線，n=30)的Kaplan-Meier無惡化存活期(PFS)分析曲線。圖26係SCLC患者C組(≥第2先前線，n=30)和B組(=第1先前線，n=30)的Kaplan-Meier總存活(OS)分析曲線。

Claims

一種5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇(化合物A)的穩定結晶型態(化合物A-Xln)，其係透過對非晶型態5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇進行再結晶的方法製成，該方法包含但不局限於使用一高沸點溶劑或混合後具有高沸點的混合溶劑，以及使用一低沸點溶劑或混合後具有低沸點的混合溶劑，其中該高沸點溶劑為DMF且該低沸點溶劑為EtOH。
如請求項1所述之5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇(化合物A)的穩定結晶型態(化合物A-Xln)，其表現出以下至少一種特性： DSC熔點範圍(Endo)：240-260 °C且峰值溫度範圍：244-254 °C；特定的DSC熔點範圍(Endo)：247-253 °C且峰值溫度為249 °C；以及 TGA熱分析圖顯示為非溶劑化材料且在250 °C以上時有重量損失。
如請求項1所述之5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇(化合物A)的穩定結晶型態(化合物A-Xln)，其XRPD圖案包含14個特徵峰，在8.9、9.9、14.9、15.4、16.1、16.6、18.5、19.9、20.4、21.5、23.9、24.3、24.6及26.0度2θ處(degrees two-theta)的強度%大於10%。
如請求項1所述之5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇(化合物A)的穩定結晶型態(化合物A-Xln)，其XRPD圖案包含43個特徵峰，其所有強度%均以d值及角度表示如下。 NO. 角度 d值強度強度% 1 8.899 9.9286 74540 12.04 2 9.927 8.9032 235708 38.08 3 11.586 7.6312 14908 2.41 4 13.145 6.7299 3511 0.57 5 14.938 5.9257 159717 25.80 6 15.374 5.7587 104484 16.88 7 16.104 5.4991 93019 15.03 8 16.558 5.3495 619004 100.00 9 17.327 5.1137 22260 3.60 10 17.820 4.9734 20322 3.28 11 18.492 4.7942 87559 14.15 12 18.809 4.7140 21872 3.53 13 19.912 4.4553 118882 19.21 14 20.445 4.3403 180671 29.19 15 21.511 4.1275 348507 56.30 16 22.004 4.0362 14250 2.30 17 22.499 3.9485 3195 0.52 18 23.188 3.8327 51679 8.35 19 23.859 3.7265 69270 11.19 20 24.314 3.6577 67756 10.95 21 24.590 3.6172 93287 15.07 22 25.171 3.5350 1707 0.28 23 25.952 3.4305 86263 13.94 24 26.464 3.3652 53165 8.59 25 26.841 3.3188 20232 3.27 26 27.217 3.2738 6582 1.06 27 27.648 3.2237 46760 7.55 28 28.457 3.1339 54339 8.78 29 29.310 3.0446 1984 0.32 30 29.856 2.9901 4264 0.69 31 30.212 2.9557 18700 3.02 32 31.202 2.8642 26858 4.34 33 31.632 2.8262 24054 3.89 34 32.837 2.7252 55773 9.01 35 33.430 2.6782 39092 6.32 36 35.185 2.5485 6426 1.04 37 36.092 2.4865 16774 2.71 38 36.865 2.4361 20105 3.25 39 38.167 2.3560 16104 2.60 40 39.409 2.2845 5045 0.82 41 40.888 2.2053 5238 0.85 42 41.720 2.1632 8720 1.41 43 42.886 2.1070 9964 1.61
如請求項1所述之5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇(化合物A)的穩定結晶型態(化合物A-Xln)，其具有基本上如圖4所示的XRPD圖案。
一種如請求項1所述之5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇(化合物A)的結晶型態(化合物A-Xln)的磷酸鹽的穩定結晶型態(化合物A-P-Xln)，其中該磷酸鹽的製備方法包含中和一磷酸溶液於一溶劑或混合溶劑中的步驟，以及再結晶的步驟。
如請求項6所述之化合物，其中該中和及/或再結晶是在EtOH中進行。
如請求項6所述之化合物，其中5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇的該磷酸鹽具有以下至少一種特性： DSC熔點範圍(Endo)：221-235 °C且峰值溫度為229 °C；以及 TGA顯示在約30-60 °C時有輕微的重量損失，且在210 °C以上有顯著的重量損失。
如請求項6所述之化合物，其中5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇的該磷酸鹽的XRPD圖案包含以下所有特徵峰，其所有強度%均以d值及角度表示如下。 NO. 角度 d值強度強度% 1 5.268 16.760 83.1 26.6 2 7.139 12.372 251.0 80.6 3 9.805 9.014 94.9 30.4 4 10.455 8.455 119.0 38.2 5 11.799 7.494 98.1 31.4 6 12.417 7.123 181.0 58.1 7 12.669 6.982 225.0 72.0 8 13.672 6.472 280.0 89.8 9 14.307 6.186 136.0 43.5 10 15.546 5.695 137.0 44.0 11 16.064 5.513 181.0 58.1 12 16.719 5.298 312.0 100.0 13 17.495 5.065 135.0 43.4 14 18.035 4.915 136.0 43.7 15 18.802 4.716 153.0 48.9 16 19.530 4.542 285.0 91.3 17 21.095 4.208 200.0 64.1 18 22.535 3.942 138.0 44.2 19 23.426 3.794 294.0 94.3 20 25.916 3.435 114.0 36.6 21 26.577 3.351 144.0 46.3
一種如請求項1所述之具有5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇所表示之結構的化合物、其穩定結晶型態、其鹽型態、及/或其穩定結晶鹽型態、及/或其對映體用於抑制蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinases, PTKs)之用途。
如請求項10所述之用途，其中該蛋白酪氨酸激酶(PTK)係選自FGFR1(h)、FGFR2(h)、FGFR3(h)、Flt1(h) (VEGFr1)、Flt4(h) (VEGFr3)、KDR(h) (VEGFr2)、Aurora-B PDGFRα(h)、PDGFRα(h)以及PDGFRβ(h)。
一種如請求項1所述之具有5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇所表示之結構的化合物、其穩定結晶型態、其鹽型態、及/或其穩定結晶鹽型態、及/或其對映體，其中該化合物係抑制胰腺、前列腺、肉瘤、甲狀腺、結腸、卵巢、血液、乳腺、腦、NSCLC、SCLC、肝、腎、結腸、子宮頸及胃的常見癌細胞株，包含PANC-1、NCI-H157、MDA-MB-231、Hela、PC-3、BEL7404、MKN45、石川(Ishikawa)、Saos-2、SKOV3、SW579、NCI-H1436、Bel-7402、U87及HCT116。
一種如請求項1所述之具有選自S-5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇及R-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇所表示之結構的化合物、以及其磷酸鹽型態。
一種藥物組合物，其包含如請求項1、6及13中任一項所述之化合物為其活性成分，以及藥學上可接受的載體及/或藥學上可接受的賦形劑。
一種藥物組合物，其含有如請求項1所述之化合物，包含10mg或30mg的5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇(化合物A)的穩定結晶型態(化合物A-Xln)，以及藥學上可接受的載體以形成片劑型態，該載體選自乳糖T80、微晶纖維素(PH101)、羧甲基澱粉鈉、二氧化矽、硬脂酸鎂、以及歐巴代胃溶性包衣粉末。
一種治療腫瘤疾病的方法，包含對有需要的個體施用5-(2-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基喹啉-7-基氧基)乙基)-5-氮雜螺[2.4]-庚-7-醇(化合物A)的穩定結晶型態(化合物A-Xln)或包含穩定結晶型態(化合物A-Xln)及藥學上可接受的賦形劑的藥物組合物。
如請求項16所述之治療方法，其中更包含施用額外的藥劑，該額外的藥劑為化療化合物及/或免疫治療劑。
如請求項17所述之治療方法，其中聯合化療化合物係選自鉑基或紫杉烷基或拓撲異構酶1抑制劑或生物鹼或烷化劑，其係由順鉑、卡鉑、紫杉醇或順鉑/紫杉醇或卡鉑/紫杉醇或卡鉑/依托泊苷或託泊替康、伊立替康或洛莫司汀所組成。
如請求項17所述之治療方法，其中聯合免疫治療劑係選自由nivolumab、pembrolizumab、ipilimumab、blinatumomab、elotuzumab、daratumumab、cemiplimab、avelumab、durvalumab、atezolizumab、toripalimab、sintilimab、camrelizumab、tislelizumab、AK104、AK105、penpulimab、KN035、CS1001、talimogene laherparepvec所組成的PD-1或PD-L1抗體的群組。
如請求項16所述之治療方法，其中所述腫瘤疾病是實體瘤，包含由NSCLC、SCLC、腎腫瘤、結直腸腫瘤、胃腫瘤、黑素瘤、頭/頸腫瘤、甲狀腺腫瘤、胰腺腫瘤、肝癌、前列腺癌、膀胱癌、腦癌、肉瘤、乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌和子宮內膜癌所組的群組；以及血癌，包含由ALL、CLL、AML、CML和多發性骨髓瘤所組的群組。
如請求項16所述之治療方法，其中所述腫瘤疾病是小細胞肺癌、非小細胞肺癌、卵巢癌、腦腫瘤和肉瘤。
如請求項16所述之治療方法，其中所述治療是將化合物A-Xln片劑用於第一線患者維持治療或用於第二線或第三線以上的患者治療。
如請求項16及17所述之治療方法，其中所述治療的劑量為每日90mg或80mg或70mg或60mg或50mg或40mg或30mg或20mg。