TW202344250A - 治療癌症之方法 - Google Patents

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史考特 波柯
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Abstract

本文描述了治療Mcl-1依賴性癌症之方法。該等方法可以包括確定癌症是否為Bfl-1陽性，以及如果癌症為Bfl-1陽性，則向患者投與CDK9的抑制劑。

Description

治療癌症之方法
骨髓細胞白血病1（Mcl-1）係BCL-2蛋白家族的重要抗凋亡成員和細胞存活之主要調節因子。已經在多種癌症類型中觀察到MCL1基因的擴增和/或Mcl-1蛋白的過表現，並且通常涉及腫瘤發展。事實上，MCL1係人類癌症中最常被擴增的基因之一。在許多惡性腫瘤中，Mcl-1係關鍵的存活因子，並且已經顯示其介導對多種抗癌劑的耐藥性。
Mcl-1藉由與促凋亡蛋白（如Bim、Noxa、Bak和Bax）結合並中和其死亡誘導活性來促進細胞存活。因此，Mcl-1抑制會釋放該等促凋亡蛋白，通常導致依賴於Mcl-1而存活的腫瘤細胞中的細胞凋亡之誘導。
與Mcl-1一樣，Bfl-1也屬於抗凋亡蛋白的BCL-2家族。
細胞周期蛋白依賴性蛋白激酶（CDK）代表在結合至細胞周期蛋白調節配偶體上時變得有活性的絲胺酸/蘇胺酸蛋白激酶的家族。CDK/細胞周期蛋白複合物被首先鑒定為細胞週期進程的調節因子。CDK/細胞周期蛋白複合物也涉及轉錄和mRNA的處理。CDK9/PTEFb（正性轉錄延伸因子b）主要在Ser-2位點磷酸化RNA聚合酶II（RNAP II）大亞基的羧基末端結構域（CTD），調節轉錄延伸。抑制CDK9和轉錄抑制導致短壽命mRNA轉錄物和相關蛋白（包括Mcl-1和c-myc）的快速耗竭，導致誘導高度依賴該等存活蛋白的癌細胞的細胞凋亡。
對如下方法存在需求，該等方法用來確定哪些癌症、從而確定哪些患者易受改變抗凋亡蛋白（例如像Mcl-1和Bfl‑1）水平的治療的影響。
在一方面，提供了治療患者中Mcl-1依賴性癌症之方法，該方法包括藉由獲得或已經獲得該患者之生物樣本；並進行或已進行測定以測量Bfl-1的表現水平來確定該癌症是否為Bfl-1陽性；以及如果該癌症係Bfl-1陽性，則向該患者投與CDK9的抑制劑，從而增加癌症細胞凋亡；其中投與CDK9的抑制劑後，Bfl-1陽性癌症癌症細胞凋亡的增加比Bfl-1陰性癌症癌症細胞凋亡的增加要大，和/或投與Mcl-1抑制劑後，Bfl-1陽性癌症癌症細胞凋亡的增加比Bfl-1陰性癌症癌症細胞凋亡的增加要少。
在另一個方面，提供了CDK9的抑制劑用於治療Mcl-1依賴性癌症之用途，其中該癌症已被確定為Bfl-1陽性。
在另一個方面，提供了Mcl-1抑制劑用於治療Mcl-1依賴性癌症的用途，其中該癌症已被確定為Bfl-1陰性。
其他特徵、目的和優點將從說明書和附圖以及申請專利範圍中顯而易見。
本文描述了治療Mcl-1依賴性癌症之方法。該等方法通常涉及識別與其他Mcl-1依賴性癌症相比，那些對CDK9抑制敏感性增加和/或對Mcl-1抑制敏感性降低的Mcl-1依賴性癌症。
不希望受到特定機制的束縛，在一些Mcl-1依賴性癌症中，完全的細胞凋亡反應可能需要抑制和/或耗竭不止一種抗凋亡蛋白。因為CDK9的抑制可以減少包括Mcl-1在內的其他抗凋亡蛋白（例如像Bfl-1）的表現，所以一些Mcl-1依賴性癌症對CDK9的抑制劑的敏感性可以高於對Mcl-1抑制劑的敏感性。
術語「治療（treat、treating、treatment）」係指至少部分地減輕、抑制、預防和/或改善症狀、障礙、或疾病（如癌症）。術語「癌症的治療」或「癌細胞的治療」包括體外治療和體內治療兩者（包括在溫血動物（如人類）中）。癌細胞的治療的有效性能以多種方式進行評估，該等方式包括但不限於：抑制癌細胞增殖（包括逆轉癌症生長）；促進癌細胞死亡（例如，藉由促進細胞凋亡或另一種細胞死亡機制）；改善症狀；治療響應的持續時間；延緩疾病的發展；和延長存活。
也可以關於與治療相關的副作用的性質和程度來評估治療。此外，有效性可以藉由生物標誌物（如已知與特定生物學現象相關的蛋白的表現水平或磷酸化水平）來評估。有效性的其他評估方式係熟悉該項技術者已知的。
如本文使用的，「Mcl-1依賴性癌症」係指Mcl-1耗竭或抑制引起足以證明臨床有益效果的癌細胞凋亡增加的癌症。細胞凋亡可以藉由多種方法進行評估（如細胞死亡、裂解的半胱天冬酶的增加、或本領域中已知的其他方法）。
如本文使用的，「Bfl-1陽性」係指癌症、癌細胞或癌細胞系表現Bfl-1蛋白。相反，「Bfl-1陰性」係指癌症、癌細胞或癌細胞系不表現Bfl-1蛋白。對於給定的癌症、癌細胞或癌細胞系，可以藉由例如西方墨點法來確定Bfl-1的表現狀態。
如本文使用的，術語「CDK9的抑制劑」係指能夠抑制CDK9（並且可選地，能夠抑制一種或多種其他CDK）的化合物。抑制包括CDK9在內的一種或多種CDK的化合物係CDK9的非選擇性抑制劑，即使該化合物的主要目標不是CDK9。例如，迪那西利（dinaciclib）抑制多個CDK（包括CDK9）。因此，如本文中作為術語使用的，迪那西利係CDK9的非選擇性抑制劑。CDK9的選擇性抑制劑係抑制CDK9的化合物，並且對其他CDK具有很少或沒有抑制活性。因此，如本文使用的「CDK9的抑制劑」包括CDK9的非選擇性抑制劑和選擇性抑制劑兩者。
CDK9的抑制劑包括例如AZD4573、BAY-1251152、BAY-1143572、CYC065、阿沃西地（alvocidib）、AT7519、沃盧西利（voruciclib）、洛尼西利（roniciclib）、和迪那西利。CDK9的選擇性抑制劑包括AZD4573、BAY-1251152、和BAY-1143572。CDK9的非選擇性抑制劑包括CYC065、阿沃西地、AT7519、沃盧西利、洛尼西利、和迪那西利。
AZD4573（選擇性CDK9抑制劑）也稱為(1S,3R)-3-乙醯胺基-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氫-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)環己烷甲醯胺，具有以下式： 並且描述於例如WO 2017/001354中（藉由援引以其全文併入）。
如本文使用的，術語「Mcl-1抑制劑」係指能夠藉由與Mcl-1結合而抑制Mcl-1的化合物。如本文使用的，術語「Mcl-1抑制劑」排除了藉由例如限制Mcl-1蛋白的表現間接影響Mcl-1的化合物。因此，如本文使用的術語，CDK9的抑制劑不會被認為係Mcl-1抑制劑。Mcl-1抑制劑的一個說明性實例係AZD5991： 如描述於美國專利第9,840,518號中（藉由援引以其全文併入）。
Mcl-1依賴性的癌細胞系對如Mcl-1抑制劑和CDK9的抑制劑等治療的敏感性可以變化。在一組Mcl-1依賴性癌細胞系中，出乎意料地發現，與Bfl-1陰性細胞系相比，Bfl-1陽性細胞系趨於顯示降低的對Mcl-1抑制的敏感性、增加的對CDK9抑制的敏感性、或者兩者。因此，與Mcl-1的抑制劑相比，Bfl-1陽性細胞系對CDK9的抑制劑具有更高的相對敏感性。以這種方式，Bfl-1可以用來區分不同的Mcl-1依賴性癌症以識別那些可能對CDK9的抑制劑敏感的Mcl-1依賴性癌症（即使其對Mcl-1抑制劑不敏感）。
在一個實施方式中，提供了治療患者中Mcl-1依賴性癌症之方法，該方法包括藉由獲得或已經獲得患者的生物樣本，並且進行或者已經進行測定來測量Bfl-1的表現水平來確定該癌症是否為Bfl-1陽性；以及如果該癌症係Bfl-1陽性，則向該患者投與CDK9的抑制劑，從而增加癌症細胞凋亡；其中投與CDK9的抑制劑後，Bfl-1陽性癌症癌症細胞凋亡的增加比Bfl-1陰性癌症癌症細胞凋亡的增加要大，和/或投與Mcl-1抑制劑後，Bfl-1陽性癌症癌症細胞凋亡的增加比Bfl-1陰性癌症癌症細胞凋亡的增加要少。
在一個實施方式中,提供了增加Mcl-1依賴性癌症中癌症細胞凋亡之方法，該方法包括藉由獲得或已經獲得患者的生物樣本，並且進行或者已經進行測定來測量Bfl-1的表現水平來確定該癌症是否為Bfl-1陽性；以及如果該癌症係Bfl-1陽性，則向該患者投與CDK9的抑制劑，從而增加癌症細胞凋亡；其中投與CDK9的抑制劑後，Bfl-1陽性癌症癌症細胞凋亡的增加比Bfl-1陰性癌症癌症細胞凋亡的增加要大，和/或投與Mcl-1抑制劑後，Bfl-1陽性癌症癌症細胞凋亡的增加比Bfl-1陰性癌症癌症細胞凋亡的增加要少。
在一個實施方式中，提供了降低Mcl-1依賴性癌症中一種或多種抗凋亡蛋白水平之方法，該方法包括藉由獲得或已經獲得患者的生物樣本，並且進行或者已經進行測定來測量Bfl-1的表現水平來確定該癌症是否為Bfl-1陽性；以及如果該癌症係Bfl-1陽性，則向該患者投與CDK9的抑制劑，從而增加癌症細胞凋亡；其中投與CDK9的抑制劑後，Bfl-1陽性癌症癌症細胞凋亡的增加比Bfl-1陰性癌症癌症細胞凋亡的增加要大，和/或投與Mcl-1抑制劑後，Bfl-1陽性癌症癌症細胞凋亡的增加比Bfl-1陰性癌症癌症細胞凋亡的增加要少。
在上述實施方式的每一個中，該方法可以進一步包括如果癌症為Bfl-1陰性，則向患者投與Mcl-1抑制劑。CDK9的抑制劑可以是CDK9的選擇性抑制劑。CDK9的抑制劑可以是AZD4573。癌症可選自彌漫性大B細胞淋巴瘤（DLBCL）、套膜細胞淋巴瘤、慢性淋巴球性白血病、小慢性淋巴球性白血病、華氏巨球蛋白血症（Waldentröm’s macroglobulinemia）、邊緣區淋巴瘤、慢性移植物抗宿主病、濾泡性淋巴瘤、和急性淋巴母細胞白血病。如本文使用的，DLBCL包括活化的B細胞DLBCL（ABC-DLBCL）和生發中心B細胞DLBCL（GCB-DLBCL）。該癌症可以是淋巴瘤。該癌症可以是彌漫性大B細胞淋巴瘤（DLBCL）。該癌症可以是活化的B細胞彌漫性大B細胞淋巴瘤（ABC-DLBCL）。Mcl-1抑制劑可以是AZD5991。
在一個實施方式中，提供了CDK9的抑制劑用於治療Mcl-1依賴性癌症的用途，其中該癌症已被確定為Bfl-1陽性。CDK9的抑制劑可以是CDK9的選擇性抑制劑。CDK9的抑制劑可以是AZD4573。
在一個實施方式中，提供了Mcl-1抑制劑用於治療Mcl-1依賴性癌症的用途，其中該癌症已確定為Bfl-1陰性。Mcl-1抑制劑可以是AZD5991。
在一個實施方式中，提供了治療患者中淋巴瘤之方法，該方法包括藉由獲得或已經獲得患者的生物樣本，並且進行或者已經進行測定來測量Bfl-1的表現水平來確定該淋巴瘤是否為Bfl-1陽性；以及如果該淋巴瘤係Bfl-1陽性，則向患者投與CDK9的抑制劑，從而增加癌症細胞凋亡；其中投與CDK9的抑制劑後，Bfl-1陽性淋巴瘤癌症細胞凋亡的增加比Bfl-1陰性淋巴瘤癌症細胞凋亡的增加要大，和/或投與Mcl-1抑制劑後，Bfl-1陽性淋巴瘤癌症細胞凋亡的增加比Bfl-1陰性淋巴瘤癌症細胞凋亡的增加要少。
在一個實施方式中，提供了治療患者中活化B細胞彌漫性大B細胞淋巴瘤（ABC-DLBCL）之方法，該方法包括藉由獲得或已經獲得患者的生物樣本，並且進行或者已經進行測定來測量Bfl-1的表現水平來確定該癌症是否為Bfl-1陽性；以及如果該淋巴瘤係Bfl-1陽性，則向患者投與CDK9的抑制劑，從而增加癌症細胞凋亡；其中投與CDK9的抑制劑後，Bfl-1陽性淋巴瘤癌症細胞凋亡的增加比Bfl-1陰性淋巴瘤癌症細胞凋亡的增加要大，和/或投與Mcl-1抑制劑後，Bfl-1陽性淋巴瘤癌症細胞凋亡的增加比Bfl-1陰性淋巴瘤癌症細胞凋亡的增加要少。 實例 1 ：與 Mcl-1 抑制相比，淋巴瘤模型的子集顯示對 CDK9 抑制的增強的敏感性
與Mcl-1抑制相比，淋巴瘤細胞系的子集顯示對CDK9抑制的增強的敏感性。在6小時的半胱天冬酶激活測定中，用選擇性CDK9抑制劑（AZD4573）或選擇性Mcl-1抑制劑（AZD5991）處理33個淋巴瘤細胞系（如圖2A所示）。基於半胱天冬酶EC 50，與AZD5991相比，用AZD4573處理的33個細胞系中的7個展示對CDK9抑制的大於20倍的增強的敏感性。此外，在該等模型的子集中，與Mcl-1抑制相比，響應於CDK9抑制的半胱天冬酶激活幅度明顯增大。
方法：將33個彌漫性大B細胞（DLBCL）和套膜細胞淋巴瘤（MCL）細胞系接種到用10點、½對數滴定預添加AZD4573或AZD5991的384孔板中並孵育6小時。孵育後，按照製造商的方案，使用Caspase-Glo 3/7（美國普洛麥格公司（Promega））測量裂解的半胱天冬酶。使用基因數據庫（GeneData）篩選器和Spotfire分析數據。
結果顯示在圖1A-1B：淋巴瘤模型對CDK9和Mcl-1抑制劑的藥理反應中。圖1A係比較一組33個細胞系上AZD4573和AZD5991半胱天冬酶pEC 50值的散點圖。實線和虛線分別展示1:1或1:10 y = x軸單位。與AZD5991處理相比，響應於AZD4573處理的用紅色突出顯示/用箭頭表示的細胞系在半胱天冬酶EC 50中具有 ＞ 20x的更有效轉移。圖1B為複合孵育6小時後，對應的AZD4573和AZD5991半胱天冬酶最大效應的散點圖。用紅色突出顯示/用箭頭表示的細胞系符合響應於AZD4573處理的 ＞ 50%最大效應和響應於AZD5991治療的 ＜ 50%最大效應的標準。 實例 2 ：表現 Bfl-1 的淋巴瘤模型對 CDK9 抑制高度敏感，而對 Mcl-1 抑制較不敏感
評估了Bcl2家族成員的蛋白表現以説明理解為什麼淋巴瘤模型的子集與Mcl-1抑制相比對CDK9抑制具有增強的敏感性。在評估的淋巴瘤細胞系（n = 33）的超過20%中鑒定Bfl-1表現，其中大多數表現細胞系屬於ABC-DLBCL淋巴瘤亞型。當基於沒有表現Bfl-1（n = 25）對細胞系進行聚類時，AZD5991與AZD4573之間的幾何平均半胱天冬酶EC 50差異只有4倍。有趣的是，在表現Bfl-1的細胞系（n = 8）中，AZD5991與AZD4573之間半胱天冬酶EC 50的差異顯著增加22倍。在應用中值半胱天冬酶EC 50時也觀察到相似的趨勢。
方法：並行產生來自33個淋巴瘤細胞系的細胞裂解物，以評估促存活Bcl2家族成員的蛋白表現。使用BCA蛋白測定套組（kit）對細胞裂解物的蛋白濃度進行歸一化處理，並根據標準方案進行西方墨點法。Bfl-1表現的陽性細胞系對照（TMD8）被用來對該組中的其他細胞系進行歸一化。AZD4573和AZD5991各自的中值和幾何平均半胱天冬酶EC 50分別從基於高和低Bfl-1表現聚類的細胞系中計算。
結果顯示在圖2A-2B：Bfl-1蛋白在淋巴瘤模型中的表現中。圖2A顯示了33個淋巴瘤細胞系中Bfl-1蛋白表現的評估。條顏色代表淋巴瘤亞型。藉由西方墨點法檢測，穿過虛線的條為陽性Bfl-1表現。該比例與TMD8細胞系對照的表現有關。圖2B顯示33個淋巴瘤模型中AZD4573和AZD5991的半胱天冬酶幾何平均和中值EC 50。根據陽性或陰性的Bfl-1表現將表分組。對每個細胞系類別列出了AZD5991與AZD4573之間的EC 50差異倍數。 實例 3 ： Bfl-1 在淋巴瘤細胞系中係由暫態 AZD4573 處理調控的不穩定的蛋白
由於發現Bfl-1表現與CDK9抑制敏感性的增強呈正相關，因此，推測CDK9抑制在淋巴瘤細胞系中除了靶向Mcl-1外，還靶向Bfl-1。將ABC-DLBCL細胞系OCILY10用AZD4573的連續稀釋物處理，並且免疫印跡檢測其下游靶蛋白。近端CDK9生物標誌物（pSer2-RNAP2）被AZD4573以劑量依賴的方式抑制。當AZD4573的濃度抑制近端CDK9生物標誌物時，發現了Mcl-1和Bfl-1蛋白的等效降低。藉由用環己醯亞胺處理OCILY10細胞證實Bfl-1係不穩定蛋白，表明Bfl-1的半衰期小於1小時（與Mcl-1相似）。其他Bcl2家族蛋白的半衰期均大於9小時。
在用100 nM AZD4573處理的OCILY10細胞中也觀察到CDK9抑制的時間依賴性響應。向細胞給藥後30分鐘，pSer2-RNAP2的表現被抑制 ＞ 80%，而 Mcl1和 Bfl1mRNA的表現在2小時降至同等水平，隨後在4小時，Mcl-1和Bfl-1蛋白的表現降低。在6小時時檢測到裂解的半胱天冬酶。用AZD4573處理6 h後，較長壽蛋白Bcl2、Bcl-xL和Bcl-W的表現保持相對不變。我們在另外的ABC-DLBCL細胞系（TMD8）中觀察到AZD4573處理後Bfl-1和Mcl-1的相似結果。
方法：將ABC-DLBCL細胞系OCILY10用9pt、½對數劑量反應的AZD4573處理6 h，並收穫細胞以用於產生蛋白裂解物。還將該等細胞用在100 nM的AZD4573在6小時內的不同時間點進行處理。在每個時間點（0、0.5、1、2、4、6小時）收穫細胞，分別用於mRNA分離或產生蛋白裂解物。將mRNA轉化為cDNA，並且使用 Mcl1和 Bcl2a1引物按照標準方案進行PCR序列擴增。使用BCA蛋白檢測套組對蛋白裂解物的蛋白濃度進行歸一化，並根據標準方案進行西方墨點法。為了確保達到預期的靶接合，針對CDK9（pSer2-RNAPolII）的近端生物標誌物，以及Mcl-1和Bfl-1來檢測墨點。為了測定誘導細胞凋亡的時間，評估了裂解的半胱天冬酶-3。上樣對照（黏著斑蛋白（vinculin））也用於歸一化。
並行產生來自33個DLBCL和MCL淋巴瘤細胞系的細胞裂解物，以評估促存活Bcl2家族成員的蛋白表現。使用BCA蛋白測定套組對細胞裂解物的蛋白濃度進行歸一化處理，並根據標準方案進行西方墨點法。使用來自TMD8細胞的陽性對照細胞裂解物，採用對照以確保西方墨點法測定中蛋白（GAPDH）的相等上樣和相等表現。
為估計Bcl2家族蛋白的半衰期，用10 µg/mL的環己醯亞胺處理OCILY10細胞以中止新蛋白合成。在環己醯亞胺處理後不同的時間點（0、1、3、6、9、24小時）收穫1e^6個細胞，用於產生蛋白裂解物。
結果顯示在圖3A-3D.淋巴瘤細胞系中藉由AZD4573處理對Bfl-1的抑制中：圖3A：將OCILY10細胞用劑量反應的AZD4573處理6小時，並後用西方墨點法進行評估。圖3B：對於指定的時間點，將OCILY10細胞用10 µg/mL的環己醯亞胺處理，並進行免疫印跡以檢測Bcl2家族蛋白表現。圖3C：用100 nM AZD4573處理後在OCILY10細胞中Bfl-1轉錄本和蛋白調節隨時間變化的動力學。圖3D：來自TMD8細胞（用100 nM AZD4573處理指定的時間點，並評估Mcl-1、Bfl-1和裂解的半胱天冬酶的蛋白調節）的免疫印跡數據。 實例 4 ：表現 Bfl-1 的淋巴瘤細胞系依賴於多種 Bcl-2 家族蛋白以存活
如以下描述確定淋巴瘤細胞對Bfl-1的單基因依賴性（使用siRNA）。在OCILY10和TMD8細胞系中，敲除 ＞ 80%的靶向Bfl-1的siRNA後，內源性細胞凋亡生物標誌物裂解的PARP的表現相對於打亂的對照沒有增加。然而，當將Bfl-1敲低細胞用AZD5991處理並再評估裂解的半胱天冬酶時，在OCILY10和TMD8細胞系中均實現最大水平的細胞凋亡（從平均45%上升到超過90%），表型模擬了響應於經由AZD4573進行暫態CDK9抑制實現的最大半胱天冬酶激活的相似幅度。
方法：OCILY10和TMD8細胞在對數生長期生長，並以1x10^6個細胞/mL在12孔板（Dharmacon B-005000）中在無血清siRNA遞送培養基中鋪板。將靶向Bfl-1或打亂的陰性對照（NTC）的siRNA SMARTpool以0.1或0.5 µM添加到各自的孔中持續24小時（Dharmacon Bcl2a1-597，NTC-D-001910-01）。將2 mL細胞培養基添加到所有轉染的孔中，並轉移到6孔板中持續另外的48小時。收集轉染的細胞，藉由西方墨點法評估Bfl-1蛋白敲低及裂解的半胱天冬酶-3。還將轉染後的細胞接種於用8點滴定預添加AZD4573或AZD5991的384孔板上並孵育6小時。按照製造商的方案，使用Caspase-Glo 3/7（美國普洛麥格公司）測量板的裂解的半胱天冬酶激活。
結果顯示在圖4A-4B.淋巴瘤模型中Bfl-1依賴性中：圖4A：免疫印跡顯示轉染Bfl-1 siRNA後，OCILY10和TMD8細胞裂解物中Bfl-1和裂解的PARP的表現。圖4B：圖表顯示，在Bfl-1敲低條件下，對於AZD5991處理OCILY10和TMD8細胞系中的半胱天冬酶激活呈劑量依賴性增加。 實例 5 ： AZD4573 在 ABC-DLBCL 細胞系中展示穩健的抗腫瘤活性
評估CDK9抑制對Bfl-1體內表現的作用。與Mcl-1抑制相比，ABC-DLBCL異種移植物OCILY10和TMD8的AZD4573間歇給藥引起穩健的腫瘤消退（TGI分別為198%和184%）。AZD4573介導的抗腫瘤活性與pSer2-RNAPII、Mcl-1和Bfl-1的藥效學降低有關，其次與半胱天冬酶激活有關。
方法：將AZD4573以二甲基乙醯胺（DMA）/聚乙二醇400（PEG 400）/1% w/v吐溫80溶液2/30/68進行配製，並以15 mg/kg腹腔內（ip）給藥，第1天和第2天中以2小時間隔BID給藥後停止給藥5天。
將AZD5991在30% HPBCD（羥基-丙基-β-環糊精）中以注射用水配製用於靜脈內使用，調節pH為9.0-9.5，直到濃度高達20 mg/mL（基於親本形式）。以60mg /kg的劑量每週一次尾靜脈注射AZD5991。
將5 × 10 6個OCILy10腫瘤細胞或10 × 10 6個TMD8腫瘤細胞以含有50%基質膠的0.1 mL體積皮下注射至C.B.-17 SCID雌性小鼠的右脅腹中。
研究期間，每週記錄兩次腫瘤體積（藉由卡尺測量）、動物體重和腫瘤狀況。使用以下公式計算腫瘤體積：長度(mm) x 寬度 (mm) 2x 0.52。對於療效研究，藉由比較對照組與處理組的腫瘤體積的差異來評估從處理起始的生長抑制。當平均腫瘤大小達到約150-180 mm 3時開始給藥。CR = 完全響應。
藥效學測量係按照腫瘤分離的標準方案進行的。使用BCA蛋白測定套組對分離的腫瘤的蛋白裂解物進行歸一化。運行免疫印跡並檢測pSERII-RNAPII和Bcl2家族蛋白的表現。上樣對照（GAPDH）用於確定相等的蛋白上樣。
結果顯示在圖5A-5B中：AZD4573在Bfl-1表現淋巴瘤異種移植物中的體內抗腫瘤活性。圖5A：在OCILY10和TMD8 ABC-DLBCL異種移植物模型中，AZD4573處理導致完全腫瘤消退。圖5B：3個給藥週期後，分別達到的AZD4573和AZD5991療效的匯總表。圖5C：急性AZD4573處理後OCILY10和TMD8模型中Bfl-1的藥效學調節。
其他實施方式在以下申請專利範圍範圍內。
[圖1A-1B]展示了CDK9抑制與Mcl-1抑制相比對一些淋巴瘤細胞系之不同反應。
[圖2]顯示，與對Mcl-1抑制的敏感性相比，Bfl-1表現與對CDK9抑制之相對較高敏感性相關。
[圖3A-3D]顯示，Bfl-1係不穩定蛋白，並且其表現受暫態CDK9抑制之調節。
[圖4A-4B]顯示，表現Bfl-1之淋巴瘤細胞系依賴於多種Bcl-2家族蛋白以存活。
[圖5A-5C]顯示，AZD4573在ABC-DLBCL細胞系中展示穩健的抗腫瘤活性。

Claims (13)

  1. 一種治療患者中Mcl-1依賴性癌症之方法，該方法包括： 藉由獲得 或已經獲得該患者之生物樣本，以及 進行或者已經進行測定來測量Bfl-1的表現水平來確定該癌症是否為Bfl-1陽性；以及 如果該癌症係Bfl-1陽性，則向該患者投與CDK9的抑制劑，從而增加癌症細胞凋亡； 其中投與CDK9的抑制劑後，Bfl-1陽性癌症癌症細胞凋亡的增加比Bfl-1陰性癌症癌症細胞凋亡的增加要大，和/或投與Mcl-1抑制劑後，Bfl-1陽性癌症癌症細胞凋亡的增加比Bfl1陰性癌症癌症細胞凋亡的增加要少。
  2. 如請求項1之方法，該方法進一步包括：如果該癌症為Bfl-1陰性，則向該患者投與Mcl-1抑制劑。
  3. 如請求項1至2中任一項之方法，其中該CDK9的抑制劑係CDK9的選擇性抑制劑。
  4. 如請求項1至3中任一項之方法，其中該CDK9的抑制劑係AZD4573。
  5. 如請求項1至4中任一項之方法，其中該癌症係淋巴瘤。
  6. 如請求項5之方法，其中該癌症係彌漫性大B細胞淋巴瘤（DLBCL）。
  7. 如請求項6之方法，其中該癌症係活化的B細胞彌漫性大B細胞淋巴瘤（ABC-DLBCL）。
  8. 如請求項2至7中任一項之方法，其中該Mcl-1抑制劑係AZD5991。
  9. 一種CDK9的抑制劑用於治療Mcl-1依賴性癌症之用途，其中該癌症已被確定為Bfl-1陽性。
  10. 如請求項9之用途，其中該CDK9的抑制劑係CDK9的選擇性抑制劑。
  11. 如請求項9至10中任一項之用途，其中該CDK9的抑制劑係AZD4573。
  12. 一種Mcl-1抑制劑用於治療Mcl-1依賴性癌症之用途，其中該癌症已被確定為Bfl-1陰性。
  13. 如請求項12項所述之用途，其中該Mcl-1抑制劑係AZD5991。
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