TW202342111A - 氣體奈米/微泡組合物及其用途 - Google Patents

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Abstract

本發明提供針對某些成像及治療性超音波用途最佳化之氣泡群體、製備此類群體之方法及其使用方法。

Description

氣體奈米/微泡組合物及其用途
可藉由劇烈振盪容納脂質調配物(諸如脂質懸浮液及氣體)之容器來形成經脂質囊封之氣泡。如此形成之氣泡已用於成像應用中。
本發明涵蓋經脂質囊封之氣泡之最佳化群體、製備此類群體之方法及在多種治療應用中以及在成像應用(諸如診斷成像應用)中與超音波組合使用此類群體之方法。此等群體可包含奈米氣泡及/或微泡，且出於簡潔起見，其在本文中被稱作奈米/微泡群體。某些治療及/或成像(例如診斷成像)超音波應用之功效可使用本發明提供之奈米/微泡群體改良。所揭示之製備方法涉及使用經最佳化之活化準則及/或獨特的脂質調配物來形成選擇性富集之奈米/微泡群體。各經最佳化之群體可使用獨特的活化參數，包括例如活化時間及活化速度及/或獨特的調配物來製備。
本文所提供之奈米/微泡群體在治療學上可與超音波一起使用。此等方法涵蓋奈米/微泡吸收超音波能量且接著膨脹並壓縮(例如在穩定空化的情況下)或破裂(例如在慣性空化的情況下)。奈米/微泡膨脹及壓縮或破裂之程度部分地受超音波頻率(波頻率)及峰值壓力差以及奈米/微泡大小(通常按直徑量測)及組成影響。在造成破壞之情況下(在慣性空化之情況下)或在未造成破壞之情況下(在穩定空化之情況下)誘發奈米/微泡共振之超音波頻率及壓力會在局部環境中賦予破壞性能量，該破壞性能量又可觸發多種預期結果，諸如血栓毀壞及後續血流恢復、血腦障壁(BBB)破壞、腫瘤毀壞、器官血流改良等。此外，在慣性空化之情況下，奈米/微泡可用於將治療劑遞送至所關注區域，包括例如腦癌或實體癌症。經脂質囊封之氣體微泡已廣泛用於對比增強超音波(CEU)成像中。本文所提供之一些奈米/微泡群體，包括富含直徑為約2微米至約6微米、或約6微米至約10微米、或約2微米至約10微米之微泡的一些奈米/微泡群體，亦可與超音波一起用於成像應用中，諸如過去已使用傳統超音波對比劑(UCA)之成像應用。此等成像應用包括(但不限於)心血管成像(例如，在次最佳心臟超音波檢查之情況下使用UCA，以便對左心室腔造影且改良對左心室心內膜邊界之劃定)。由於此等較大微泡之比例增加，本文所提供之富集某些微泡(例如直徑為約2微米至約6微米、或約6微米至約10微米之微泡)之群體可提供比先前可能的成像品質更好的成像品質。
本發明進一步提供經最佳化以與超音波(包括2.25 MHz範圍內之低頻超音波及7.5 MHz範圍內之高頻超音波)組合用於治療用途的經脂質囊封之氣體奈米/微泡群體。此等經最佳化之群體的大小及濃度概況與先前針對成像(例如診斷)及治療應用製得及使用之大小及濃度概況不同。
因此，本文所提供之某些成像及治療方法涉及使用視情況以特定速率及/或劑量投與的經改良之奈米/微泡群體(特別是調配物)，以及經最佳化之超音波頻率、機械指數(MI)、脈衝持續時間及/或超音波應用之數目及/或時序。
因此，在一個態樣中，本發明提供一種包含經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體之組合物，其中75%或更多的經脂質囊封之全氟化碳氣泡為直徑在約100奈米至小於或約1微米範圍內之奈米氣泡，且其中經脂質囊封之全氟化碳氣泡包含DPPC及PEG-DPPE。在一些實施例中，約80%或更多的經脂質囊封之全氟化碳氣泡為直徑在約100奈米至小於或約1微米範圍內之奈米氣泡。組合物可包含每毫升7.0×10 9至2.5×10 10個此類奈米氣泡，或每毫升1×10 10至2.5×10 10個此類奈米氣泡。
在此態樣及其他態樣之一些實施例中，經脂質囊封之全氟化碳氣泡包含莫耳%比率視情況為約10比約82比約8 (包括10:82:8)之DPPA、DPPC及PEG-DPPE，或其中脂質調配物包含莫耳%比率視情況為約10比約82比約8 (包括10:82:8)之DPPE、DPPC及PEG-DPPE。在此態樣及其他態樣之一些實施例中，PEG-DPPE為PEG5000-DPPE。在此態樣及其他態樣之一些實施例中，PEG-DPPE為MPEG5000-DPPE。在此態樣及其他態樣之一些實施例中，經脂質囊封之全氟化碳氣泡為經脂質囊封之全氟丙烷氣泡。
在此態樣及其他態樣之一些實施例中，經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體存在於包含DPPA、DPPC及PEG-DPPE、甘油、丙二醇及小於或等於5%的水(v/v)之非水性脂質溶液中，或其中經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體存在於包含DPPE、DPPC及PEG-DPPE、甘油、丙二醇及小於或等於5%的水(v/v)的非水性脂質溶液中。在此態樣及其他態樣之一些實施例中，脂質以約3.75 mg/ml之組合濃度存在。在此態樣及其他態樣之一些實施例中，脂質以約2.5 mg/ml之組合濃度存在。
在此態樣及其他態樣之一些實施例中，經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體存在於包含甘油及丙二醇的水性脂質懸浮液中。在此態樣及其他態樣之一些實施例中，脂質懸浮液具有約0.75 mg/ml之組合脂質濃度。
在此態樣及其他態樣之一些實施例中，經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體缺乏DPPA。
在另一態樣中，本發明提供一種形成經脂質囊封之全氟化碳氣泡之方法，其包含在全氟化碳氣體存在下，以足以產生經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體之振盪速率及振盪時間來活化包含DPPC及PEG-DPPE、甘油及丙二醇之脂質調配物，其中75%或更多的氣泡為直徑在約100奈米至約1微米範圍內之奈米氣泡。約80%或更多的經脂質囊封之全氟化碳氣泡可為直徑在約100奈米至約1微米範圍內之奈米氣泡。
在此態樣及其他態樣之一些實施例中，脂質調配物包含莫耳%比率視情況為約10比約82比約8 (包括10:82:8)之DPPA、DPPC及PEG-DPPE，或其中脂質調配物包含莫耳%比率視情況為約10比約82比約8 (包括10:82:8)之DPPE、DPPC及PEG-DPPE。在此態樣及其他態樣之一些實施例中，全氟化碳氣體為全氟丙烷氣體。
在一些實施例中，以約6000 rpm之振盪速率將脂質調配物活化持續約50秒至約90秒之振盪時間。在一些實施例中，以約6000 rpm之振盪速率將脂質調配物活化持續約50秒、約60秒、約75秒或約90秒之振盪時間。
在此態樣及其他態樣之一些實施例中，脂質調配物存在於內部體積為約3.8 ml且包含約0.35 ml脂質調配物及約3.45 ml氣體的Wheaton 2 mL玻璃小瓶中，或其中脂質調配物存在於內部體積為約3.8 ml且包含約0.52 ml脂質調配物及約3.28 ml氣體的Wheaton 2 mL玻璃小瓶中。在此態樣及其他態樣之一些實施例中，脂質調配物存在於內部體積為約3.8 ml的2 mL玻璃小瓶中，其中約9%的內部體積係被活化之前的脂質調配物佔據的脂質，或其中約14%的內部體積被活化之前的脂質調配物佔據。在此等實施例中，脂質調配物可為非水性脂質調配物。
在此態樣及其他態樣之一些實施例中，脂質調配物為包含DPPA、DPPC及PEG-DPPE、甘油及丙二醇之水性脂質懸浮液，或其中脂質調配物為包含DPPE、DPPC及PEG-DPPE、甘油及丙二醇之水性脂質懸浮液。在此態樣及其他態樣之一些實施例中，脂質調配物具有約0.75 mg/ml之組合脂質濃度。
在一些實施例中，在氣體的存在下，以約4530 rpm之振盪速率將脂質調配物活化持續約90秒之振盪時間。在一些實施例中，在氣體的存在下，以約6000 rpm之振盪速率將脂質調配物活化持續約20秒至約25秒之振盪時間。在一些實施例中，在氣體的存在下，以約6000 rpm之振盪速率將脂質調配物活化持續約20秒或約25秒之振盪時間。
在一些實施例中，脂質調配物缺乏DPPA。
本發明提供根據任一前述方法形成的經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體。
在另一態樣中，本發明提供一種治療患有病狀之個體的方法，其包含：向患有病狀之個體投與有效量的經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體，其中該群體中75%或更多的氣泡為直徑在約100奈米至約1微米範圍內之奈米氣泡，且其中經脂質囊封之全氟化碳氣泡包含DPPC及PEG-DPPE；及向該個體的受病狀影響之區域施加超音波能量。
在另一態樣中，本發明提供對促進個體內之組織灌注之方法的改良，該方法包含使個體暴露於治療性超音波，該改良包含在暴露於治療性超音波之前及/或期間向該個體投與經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體，其中該群體中75%或更多的氣泡係直徑在約100奈米至約1微米範圍內的奈米氣泡。
在此態樣及其他態樣之一些實施例中，病狀為存在血栓/血液凝塊、血管阻塞、視網膜靜脈阻塞、腫瘤、勃起功能障礙、阿茲海默症(Alzheimer's disease)、帕金森氏病(Parkinson's disease)。在此態樣及其他態樣之一些實施例中，該病狀為受益於破壞血腦障壁(BBB)之病狀，視情況其中病狀特異性治療劑亦係在氣泡群體之前、期間及/或之後及/或在暴露於治療性超音波之前、期間及/或之後向個體投與。
在此態樣及其他態樣之一些實施例中，經脂質囊封之全氟化碳奈米氣泡在施加超音波能量之後經歷活體內穩定空化。在此態樣及其他態樣之一些實施例中，視情況由所發射之寬頻射頻偵測及/或量測，經脂質囊封之全氟化碳奈米氣泡在施加超音波能量之後經歷活體內慣性空化。
上述氣泡群體中之任一者可用於治療此等病狀。
在另一態樣中，本發明提供一種包含經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體之組合物，其中該群體中15%或更多的微泡的直徑為約2微米至小於或約6微米，且其中經脂質囊封之全氟化碳氣泡包含DPPC及PEG-DPPE。在一些實施例中，該群體中約20%或更多的經脂質囊封之全氟化碳氣體微泡的直徑為約2微米至小於或約6微米。此等組合物可包含每毫升約0.24×10 9個至2.44×10 9個此類氣泡。
在一些實施例中，經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體存在於包含DPPA、DPPC及PEG-DPPE、甘油、丙二醇及小於或等於5%的水(v/v)的非水性脂質溶液中，或其中經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體存在於包含DPPE、DPPC及PEG-DPPE、甘油、丙二醇及小於或等於5%的水(v/v)的非水性脂質溶液中。
在一些實施例中，經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體存在於包含甘油及丙二醇的水性脂質懸浮液中。
在一些實施例中，經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體展現2.25 MHz超音波頻率之聲學衰減，其在大於約1、視情況大於約1.2的範圍內，視情況在約1至約1.7的範圍內。
在另一態樣中，本發明提供一種形成經脂質囊封之全氟化碳氣泡之方法，其包含在全氟化碳氣體存在下，以足以產生經脂質囊封之全氟化碳氣體微泡群體之振盪速率及振盪時間來活化包含DPPC及PEG-DPPE、甘油及丙二醇之脂質調配物，其中15%或更多的微泡的直徑為約2微米至小於或約6微米。
在一些實施例中，約20%或更多的經脂質囊封之全氟化碳氣體微泡的直徑為約2微米至小於或約6微米。
在一些實施例中，脂質調配物為包含DPPA、DPPC及PEG-DPPE、甘油及丙二醇以及小於或等於5%的水(v/v)之非水性脂質溶液，或其中脂質調配物為包含DPPE、DPPC及PEG-DPPE、甘油及丙二醇以及小於或等於5%的水(v/v)之非水性脂質溶液。
在一些實施例中，以約6000 rpm之振盪速率將脂質調配物活化持續約75秒至約90秒之振盪時間。在一些實施例中，以約6000 rpm之振盪速率將脂質調配物活化持續約75秒或約90秒之振盪時間。
在一些實施例中，脂質調配物存在於內部體積為約3.8 ml的Wheaton 2 mL玻璃小瓶中，且其中該小瓶含有約0.35 ml脂質調配物及約3.45 ml氣體，或其中該小瓶含有約0.52 ml脂質調配物及約3.28 ml氣體。在一些實施例中，脂質調配物存在於內部體積為約3.8 ml的Wheaton 2 mL玻璃小瓶中，其中該小瓶約9%的內部體積被活化之前的脂質調配物佔據，或其中該小瓶約14%的內部體積被活化之前的脂質調配物佔據。
在一些實施例中，在活化之前，將呈相同體積比例的丙二醇及甘油之溶液與脂質調配物組合。
在一些實施例中，以約6000 rpm之振盪速率將脂質調配物活化持續約60秒之振盪時間。
在一些實施例中，脂質調配物為包含DPPA、DPPC、PEG-DPPE、甘油及丙二醇之水性脂質懸浮液，或其中脂質調配物為包含DPPE、DPPC、PEG-DPPE、甘油及丙二醇之水性脂質懸浮液。
在一些實施例中，以約6000 rpm之振盪速率將脂質調配物活化持續約30秒之振盪時間。
本發明亦提供根據任一前述方法形成的經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體。
在另一態樣中，本發明提供一種治療患有病狀之個體的方法，其包含：向患有病狀之個體投與有效量的經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體，其中該群體中15%或更多的微泡之直徑為約2微米至小於或約6微米，且其中經脂質囊封之全氟化碳氣泡包含DPPC及PEG-DPPE；及向該個體的受該病狀影響之區域施加視情況在約1至約10 MHz之頻率下的超音波能量。
在另一態樣中，本發明提供一種改良治療性或診斷性超音波之方法，該改良包含在暴露於視情況處於約1至約10 MHz之頻率下的超音波之前或期間向個體投與經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體，其中該群體中15%或更多微泡之直徑在約2微米至小於或約6微米範圍內。在一些實施例中，約20%或更多的經脂質囊封之全氟化碳氣體微泡的直徑為約2微米至小於或約6微米。
在此態樣及其他態樣之一些實施例中，病狀為心動脈粥樣硬化、心肌梗塞、血管阻塞、中風、周邊動脈疾病。
在此態樣及其他態樣之一些實施例中，視情況藉由諧波頻率發射所偵測及/或量測，在施加超音波能量之後，經脂質囊封之全氟碳氣泡經歷活體內穩定空化。在此態樣及其他態樣之一些實施例中，視情況藉由寬頻發射偵測及/或量測，在施加超音波能量之後，經脂質囊封之全氟化碳氣泡經歷活體內慣性空化。
在此態樣及其他態樣之一些實施例中，經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體在2.25 MHz超音波頻率下具有大於約1.0之聲學衰減。在此態樣及其他態樣之一些實施例中，經脂質囊封之全氟化碳氣體微球群體在2.25 MHz超音波頻率下具有約1.0至約1.5或約1.0至約2.0之聲學衰減。
在另一態樣中，本發明提供一種包含經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體之組合物，其中該群體中4%或更多的微泡之直徑為約6微米至約10微米，且其中經脂質囊封之全氟化碳氣泡包含DPPC及PEG-DPPE。在一些實施例中，該群體中約10%或更多的經脂質囊封之全氟化碳氣體微泡的直徑為約6微米至約10微米。此等組合物可包含每毫升約0.1×10 8至0.32×10 8個此類氣泡。
在一些實施例中，經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體展現2.25 MHz超音波頻率之聲學衰減，其在大於約1、視情況大於約1.2的範圍內，視情況在約1至約1.7的範圍內。
在一些實施例中，經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體缺乏DPPA。
在另一態樣中，本發明提供一種形成經脂質囊封之全氟化碳氣泡之方法，其包含在全氟化碳氣體存在下，以足以產生經脂質囊封之全氟化碳氣體微泡群體之振盪速率及振盪時間來活化包含DPPC及PEG-DPPE、甘油及丙二醇之脂質調配物，其中4%或更多的微泡的直徑為約6微米至約10微米。在一些實施例中，約10%或更多的經脂質囊封之全氟化碳氣體微泡的直徑為約6微米至約10微米。
在一些實施例中，脂質調配物為包含DPPA、DPPC及PEG-DPPE、甘油及丙二醇以及小於或等於5%的水(v/v)之非水性脂質溶液，或其中脂質調配物為包含DPPA、DPPC及PEG-DPPE、甘油及丙二醇以及小於或等於5%的水(v/v)之非水性脂質溶液。
在一些實施例中，脂質調配物存在於內部體積為約3.8 ml的Wheaton 2 mL玻璃小瓶中，且其中該小瓶含有約0.35 ml脂質調配物及約3.45 ml氣體，或其中該小瓶含有約0.52 ml脂質調配物及約3.28 ml氣體。
在一些實施例中，脂質調配物存在於內部體積為約3.8 ml的Wheaton 2 mL玻璃小瓶中，其中該小瓶約9%的內部體積被活化之前的脂質調配物佔據，或其中該小瓶約14%的內部體積被活化之前的脂質調配物佔據。
在一些實施例中，以約6000 rpm之振盪速率將脂質調配物活化持續約60秒之振盪時間。
在一些實施例中，脂質調配物為包含DPPA、DPPC、PEG-DPPE、甘油及丙二醇之水性脂質懸浮液，或其中脂質調配物為包含DPPE、DPPC、PEG-DPPE、甘油及丙二醇之水性脂質懸浮液。
在另一態樣中，本發明提供一種治療患有病狀之個體的方法，其包含：向患有病狀之個體投與有效量的經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體，其中該群體中4%或更多的微泡之直徑為約6微米至約10微米，且其中經脂質囊封之全氟化碳氣泡包含DPPC及PEG-DPPE；及向該個體的受該病狀影響之區域施加處於約1至約10 MHz之頻率下的超音波能量。
在另一態樣中，本發明提供一種改良治療性或診斷性超音波之方法，該改良包含在暴露於處於約1至約10 MHz之頻率下的超音波之前或期間向個體投與經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體，其中該群體中4%或更多的微泡之直徑在約6微米至約10微米範圍內。在一些實施例中，其中10%或更多的經脂質囊封之全氟化碳氣體微泡的直徑為約6微米至約10微米。
在此態樣及其他態樣之一些實施例中，病狀為心動脈粥樣硬化、心肌梗塞、血管阻塞、中風、周邊動脈疾病。
在一些實施例中，經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體具有2.25 MHz超音波頻率的大於約1.0之聲學衰減。
在一些實施例中，經脂質囊封之全氟化碳氣體微球群體具有2.25 MHz超音波頻率的約1.0至約1.5或約1.0至約2.0之聲學衰減。
在另一態樣中，本發明提供一種對個體進行超音波成像之方法，其包含向個體投與藉由任一前述方法製得的任一前述經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體或任一經脂質囊封之全氟化碳氣泡；施加處於約1至約10 MHz範圍內之頻率下的超音波能量；及獲得個體或個體之區域的超音波影像。
在一些實施例中，全氟化碳氣體為全氟丙烷氣體。
在一些實施例中，超音波能量的頻率為約1.25 MHz或約2.25 MHz。
在另一態樣中，本發明提供一種形成經脂質囊封之全氟化碳氣泡之方法，該方法包含在全氟化碳氣體存在下，以約6000 rpm之振盪速率將包含小於或等於5%的水(v/v)、DPPC、PEG-DPPE、甘油、丙二醇及DPPA或DPPE的非水性脂質調配物活化持續約30至約90秒，視情況持續約50、約60、約75或約90秒，由此形成經脂質囊封之全氟丙烷氣體微球群體。
在一些實施例中，脂質調配物及氣體存在於小瓶(視情況為2 mL小瓶)中，且脂質調配物佔該小瓶之內部體積的約9%或約14%。
在另一態樣中，本發明提供一種形成經脂質囊封之全氟化碳氣泡之方法，該方法包含在全氟化碳氣體存在下，以約4950 rpm之振盪速率將包含小於或等於5%的水(v/v)、DPPC、PEG-DPPE、甘油、丙二醇及DPPA或DPPE之非水性脂質調配物活化持續約125秒，由此形成經脂質囊封之全氟丙烷氣體微球群體。在一些實施例中，脂質調配物及氣體存在於小瓶(視情況為2 mL小瓶)中，且脂質調配物佔該小瓶之內部體積的約9%或約14%。
在另一態樣中，本發明提供一種形成經脂質囊封之全氟化碳氣泡之方法，該方法包含在全氟化碳氣體存在下，以約6000 rpm之振盪速率將包含DPPC及PEG-DPPE、及甘油及丙二醇以及DPPA或DPPE的水性脂質調配物活化持續約5至約90秒，視情況持續約5、約10、約20、約25、約30、約40、約45、約50、約55、約60、約70、約80或約90秒，由此形成經脂質囊封之全氟丙烷氣體微球群體。
在另一態樣中，本發明提供一種形成經脂質囊封之全氟化碳氣泡之方法，該方法包含在全氟化碳氣體存在下，以約4530 rpm之振盪速率將包含DPPC及PEG-DPPE、及甘油及丙二醇以及DPPA或DPPE的水性脂質調配物活化持續約90秒，由此形成經脂質囊封之全氟丙烷氣體微球群體。
在另一態樣中，本發明提供一種形成經脂質囊封之全氟化碳氣泡之方法，該方法包含在全氟化碳氣體存在下，以約4530 rpm之振盪速率將包含DPPC及PEG-DPPE、及甘油及丙二醇以及DPPA或DPPE的水性脂質調配物活化持續約10至約20秒，由此形成經脂質囊封之全氟丙烷氣體微球群體。
將在本文中更詳細地論述本發明之此等及其他態樣及實施例。
本發明提供具有經改良之治療及成像特性之奈米/微泡組合物、製備此類組合物之方法(包括待用於此類製備方法中之特定裝置)，以及在治療及成像應用中之使用方法。該等製備方法產生與超音波一起用於多種治療應用及/或多種成像應用中的經最佳化之奈米/微泡組合物。不同治療應用可能需要不同的經最佳化之奈米/微泡組合物。已出乎意料地發現，此類經最佳化之奈米/微泡組合物可藉由對脂質調配物(諸如脂質溶液及脂質懸浮液)及/或特定活化參數的特定操縱而產生。作為一實例，某些本文提供之經最佳化之奈米/微泡組合物可使用獨特脂質調配物活化參數(包括活化時間及活化速度(或速率))以及對脂質調配物之獨特操縱來製備。 奈米 / 微泡群體
本文提供之奈米/微泡群體係由其大小及濃度概況、其聲學衰減特性及/或其製備方法定義。其在治療性超音波應用中之效用部分地視其大小及/或聲學衰減概況而定。
如本文所用，奈米/微泡群體之大小概況意謂該群體中具有特定大小之氣泡的比例。在一些情況下，大小概況可包括不同大小的氣泡之比例。下文描述由其大小概況限定之某些奈米/微泡群體。
本發明之一個態樣提供經脂質囊封之氣泡群體，其中約75%或更多的經脂質囊封之氣泡為直徑在約100奈米至小於或約1微米範圍內(亦即如本文所預期，直徑為約100奈米至小於或約1微米)的奈米氣泡。在一些情況下，直徑係在約200奈米至小於或約1微米、或約300奈米至小於或約1微米、或約500奈米至小於或約1微米範圍內。在相關情況中，直徑範圍之上端小於1微米、或約950奈米、或約900奈米、或約850奈米、或約800奈米、或約750奈米、或約700奈米。涵蓋此等下端及上端之任何組合，包括(但不限於)約200奈米至約800奈米、或約500奈米至小於1微米。因此，作為一實例，75%或更多的經脂質囊封之氣泡可為直徑在約100奈米至小於或約1微米範圍內或在約200奈米至約800奈米範圍內之奈米氣泡。本發明涵蓋所有其他下端及上端組合。
此類群體可稱為富集直徑在前述範圍中之任一者中的經脂質囊封之氣泡。因此，認為經脂質囊封之氣泡群體(其中約75%或更多的經脂質囊封之氣泡的直徑在約100奈米至小於或約1微米範圍內)富集直徑在約100奈米至小於或約1微米範圍內的經脂質囊封之氣泡。此等富集群體中約75%、約80%、約85%、約90%、約95%或更多的經脂質囊封之氣泡的直徑可在約100奈米至小於或約1微米的範圍內，或在任何其他指定範圍內，包括(例如)約200奈米至小於或約1微米之範圍、或約300奈米至小於或約1微米之範圍、或約400奈米至小於或約1微米之範圍、或約500奈米至小於或約1微米之範圍，包括具有小於1微米、或約950微米、或約900奈米、或約850奈米、或約800奈米、或約750奈米、或約700奈米的前述下端及上端的範圍。
如下文所論述，奈米氣泡富集群體(相對於先前技術群體)可用於新的治療應用中或可改良現有治療應用之治療功效。
本發明之另一態樣提供經脂質囊封之氣泡群體，其中該群體中約15%或更多的經脂質囊封之氣泡的直徑在約2微米至小於或約6微米範圍內(亦即，如本文所預期，直徑為約1微米至小於或約6微米)。在一些情況下，直徑係在約2.5微米至小於或約6微米、或約3微米至小於或約6微米、或約3.5微米至小於或約6微米範圍內。在相關情況中，直徑範圍之上端為小於6微米、或約5.5微米、或約5微米、或約4.5微米、或約4微米。涵蓋此等下端及上端之任何組合。因此，作為實例，該群體中15%或更多的經脂質囊封之氣體微泡的直徑可在約2微米至小於6微米的範圍內或在約2微米至約5.5微米的範圍內。本發明涵蓋所有其他下端及上端組合。
此類群體可稱為富集直徑在前述範圍中之任一者中的經脂質囊封之氣體微泡。因此，認為經脂質囊封之氣泡群體(其中該群體中約15%或更多的經脂質囊封之氣體微泡的直徑在約2微米至小於或約6微米的範圍內)富集直徑在約2微米至小於或約6微米範圍內的經脂質囊封之氣泡。此等富集群體中約15%、約20%、約25%、約30%、約35%或更多的經脂質囊封之氣體微泡的直徑可在約2微米至小於或約6微米的範圍內，或在任何其他指定範圍內，包括(例如)約2.5微米至小於或約6微米之範圍、或約3微米至小於或約6微米之範圍、或約3.5微米至小於或約6微米之範圍，包括具有小於6微米、或約5.5微米、或約5微米、或約4.5微米、或約4微米的前述下端及上端的範圍。
如下文所論述，在約2至約6微米直徑範圍內的富集微泡之微泡群體(相對於先前技術群體)可用於新的治療或成像應用中或可改良現有治療或成像應用之功效。本發明之另一態樣提供經脂質囊封之氣泡群體，其中該群體中約4%或更多的經脂質囊封之氣體微泡的直徑在約6微米至約10微米範圍內(亦即，如本文所預期，直徑為約6微米至約10微米)。在一些情況下，直徑係在約6.5微米至約10微米、或約7微米至約10微米、或約8微米至約10微米的範圍內。在相關情況中，直徑範圍之上端為約9.5微米、或約9.0微米、或約8.5微米、或約8.0微米、或約7.5微米。涵蓋此等下端及上端之任何組合。因此，作為一實例，該群體中約4%或更多的經脂質囊封之氣體微泡的直徑可在約6微米至約10微米範圍內或在約6微米至約9.5微米範圍內。本發明涵蓋所有其他下端及上端組合。
此類群體可稱為富集直徑在前述範圍中之任一者中的經脂質囊封之氣體微泡。因此，認為經脂質囊封之氣泡群體(其中該群體中約4%或更多的經脂質囊封之氣體微泡的直徑在約6微米至約10微米的範圍內)富集直徑在約6微米至約10微米範圍內的經脂質囊封之氣泡。此等富集群體中約4%、約5%、約7%、約10%、約12%或更多的經脂質囊封之氣體微泡的直徑可在約6微米至約10微米的範圍內，或在任何其他指定範圍內，包括(例如)約6.5微米至約10微米之範圍、或約7微米至約10微米之範圍、或約7.5微米至約10微米之範圍，包括具有約9.5微米、或約9微米、或約8.5微米、或約8微米、或約7.5微米的前述下端及上端的範圍。
如下文所論述，在約6至約10微米直徑範圍內的富集微泡之微泡群體(相對於先前技術群體)可用於新的治療或成像應用中或可改良現有治療或成像應用之功效。 水性及非水性脂質調配物
用於形成本發明之氣體奈米/微泡之脂質調配物可為非水性脂質調配物，其經定義為具有小於或等於5%的水(w/w)。此等非水性脂質調配物在本文中有時可稱為脂質溶液。或者，脂質調配物可為水性脂質調配物，其定義為具有大於5%之水(w/w)。此等水性脂質調配物在本文中有時可稱為脂質懸浮液。兩種類型之脂質調配物可如本文中所描述來活化。奈米/微泡富集群體可使用水性脂質調配物或非水性脂質調配物以及氣體形成。
適合之脂質調配物包括一種、兩種、三種或更多種脂質。適合之脂質提供於下文中。更多此類脂質中之一者可結合至聚乙二醇(PEG)。
水性脂質調配物之一個實例包含水溶液中呈10:82:8莫耳%比率之脂質DPPA、DPPC及MPEG5000-DPPE及約0.75 mg/ml之組合脂質濃度，以及丙二醇及甘油。在全氟丙烷氣體(亦稱為八氟丙烷(perflutren/octafluoropropane))存在下以4530 rpm活化此水性脂質調配物45秒，產生約10 10個奈米氣泡及約5×10 9個微泡。在活化此水性脂質調配物後產生的約66%氣泡為奈米氣泡。約4%之所形成微泡的直徑在約2至約6微米範圍內。
其他水性脂質調配物類似於前述調配物，但其脂質概況不同。舉例而言，在一些水性脂質調配物中，DPPA、DPPC及DPPE可以約77至約90莫耳% DPPC、約5至約15莫耳% DPPA及約5至約15莫耳% DPPE (包括DPPE-MPEG5000，諸如MPEG5000-DPPE)之莫耳百分比使用。類似比率亦可用於非水脂質調配物中。
水性脂質調配物之另一實例包含磷脂醯膽鹼(PC)、磷脂醯乙醇胺(PE)及二軟脂醯基磷脂醯乙醇胺(DPPE)，且具體而言，缺乏DPPA。PE可為PE-PEG及/或DPPE可為DPPE-PEG。舉例而言，脂質調配物可包含脂質DPPC、DPPE及DPPE-PEG。其可以82:10:8 (DPPC: DPPE:DPPE-PEG)之莫耳百分比比率存在。此等脂質可以包括約77至約90莫耳% DPPC、約5至約15莫耳% DPPE及約5至約15莫耳% DPPE-PEG之其他莫耳百分比使用。組合脂質濃度可在約0.75 mg/ml至約1.5 mg/ml範圍內。此等脂質可懸浮於丙二醇、甘油及生理食鹽水或其任何組合中。可在全氟化碳氣體(諸如八氟丙烷)或任何其他適合的氣體存在下活化此等調配物。
非水性脂質調配物之一個實例包含呈10:82:8莫耳%比率之DPPA、DPPC及MPEG5000-DPPE，以及約3.75 mg/ml於丙二醇及甘油以及小於或等於5%的水(w/w)中之組合脂質濃度。在全氟丙烷氣體存在下以4950 rpm活化此非水性脂質調配物45秒，產生約3×10 9個奈米氣泡及約2.5-3×10 9個奈米氣泡。在活化此脂質調配物後產生的約50%氣泡為奈米氣泡。約12%之所形成微泡的直徑在約2微米至小於或約6微米範圍內，且約1.2%之所形成微泡的直徑在約6微米至約10微米範圍內。
其他非水性脂質調配物描述於公開PCT申請案PCT/US2015/067615中，其全部內容以引用的方式併入本文中。
非水性脂質調配物之另一實例包含磷脂醯膽鹼(PC)、磷脂醯乙醇胺(PE)及二軟脂醯基磷脂醯乙醇胺(DPPE)，且視情況乏DPPA。PE可為PE-PEG及/或DPPE可為DPPE-PEG。舉例而言，脂質調配物可包含脂質DPPC、DPPE及DPPE-PEG。其可以82:10:8 (DPPC:DPPE:DPPE-PEG)之莫耳百分比比率存在。此等脂質可以包括約77至約90莫耳% DPPC、約5至約15莫耳% DPPE及約5至約15莫耳% DPPE-PEG之其他莫耳百分比使用。組合脂質濃度可在約0.75 mg/ml至約1.5 mg/ml範圍內。此等脂質可懸浮於丙二醇、甘油或丙二醇及甘油中。可在全氟化碳氣體(諸如八氟丙烷)或任何其他適合的氣體存在下活化此等調配物。
非水性脂質調配物可包含丙二醇或甘油或丙二醇及甘油中之脂質，其限制條件為含水量小於或約為5重量% (亦即，水之重量與脂質與丙二醇及/或甘油之組合的重量的比)。在一些情況下，非水性脂質調配物包含小於5%的水(w/w)、1至4%的水(w/w)、1至3%的水(w/w)、2至3%的水(w/w)或1至2%的水(w/w)。在一些情況下，非水性脂質調配物包含小於1%的水(w/w)。含水量可在製造結束時(及在長期儲存之前)量測或其可在儲存之後(包括長期儲存及正好在使用之前)量測。
脂質調配物亦可不含鹽(亦即，除脂質相對離子外，其不含任何鹽)。更具體而言，且作為一實例，諸如DPPA及DPPE之脂質通常以鈉鹽的形式提供。如本文所用，無鹽脂質調配物可包含此類相對離子(例如，若使用DPPA及/或DPPE，則包含鈉)，但其不含其他離子。在一些情況下，非水性脂質調配物不含氯化鈉或氯化物。
脂質調配物可包含緩衝液。該緩衝液可為乙酸鹽緩衝液、苯甲酸鹽緩衝液、水楊酸鹽緩衝液、二乙醇胺緩衝液、三乙醇胺緩衝液、硼酸鹽緩衝液、碳酸鹽緩衝液、麩胺酸鹽緩衝液、丁二酸鹽緩衝液、蘋果酸鹽緩衝液、酒石酸鹽緩衝液、戊二酸鹽緩衝液、烏頭緩衝液、檸檬酸鹽緩衝液、乳酸鹽緩衝液、甘油酸鹽緩衝液、葡糖酸鹽緩衝液或tris緩衝液，但其不限於此。在一些情況下，非磷酸鹽緩衝液由於其在非水性溶劑(諸如丙二醇及/或甘油)中之溶解概況而可為較佳的。在一些情況下，可使用磷酸鹽緩衝液(例如，在添加生理食鹽水或其他水性稀釋劑之後或同時使用)。
在一些實施例中，非水性脂質調配物包含以下、由以下組成或基本上由以下組成：(a)一或多種脂質、(b)丙二醇或甘油或丙二醇及甘油以及(c)非磷酸鹽緩衝液。
在一些情況下，脂質調配物中之脂質濃度的範圍可為約0.1 mg至約20 mg/mL，包括約0.6 mg至約10 mg/mL及約0.6 mg至約7.5 mg/mL。在一些實施例中，脂質濃度的範圍可為每毫升約0.75 mg至約7.5 mg脂質，包括每毫升約0.75 mg至約3.75 mg脂質，或每毫升約0.75 mg至約2.5 mg脂質，或每毫升約2.5 mg至約7.5 mg脂質，或每毫升約3.75 mg至約7.5 mg脂質，或每毫升約2.5 mg至約3.75 mg脂質。在一些情況下，脂質濃度為每毫升約2 mg至約4 mg，或每毫升約2.5 mg至約3.75 mg，或每毫升約3.75 mg至約7.5 mg總脂質。
舉例而言，非水性脂質調配物中之脂質濃度的範圍可為每毫升丙二醇及/或甘油(經組合)約0.1 mg至約10 mg脂質，包括每毫升丙二醇及/或甘油(經組合)約1 mg至約5 mg脂質，或每毫升丙二醇及/或甘油(經組合)約2 mg至約4 mg脂質，或每毫升丙二醇及/或甘油(經組合)約2.5 mg至約3.75 mg脂質。
作為另一實例，水性脂質調配物中之脂質濃度的範圍可為每毫升約0.1 mg至約10 mg脂質，包括每毫升約0.1 mg至約5 mg脂質，或每毫升約0.3 mg至約1 mg脂質，或每毫升約0.5 mg至約1 mg脂質/mL，或每毫升約0.75 mg脂質。
在投與之前，奈米/微泡可用水性稀釋劑稀釋，且此類水性稀釋劑可包含諸如(但不限於)氯化鈉之鹽，且因此可視為生理食鹽水或生理食鹽水溶液。
水性稀釋劑可包含諸如磷酸塩緩衝液之緩衝液，且因此可被視為經緩衝水性稀釋劑。水性稀釋劑可為經緩衝生理食鹽水溶液。
非水性脂質調配物可包含緩衝液，諸如非磷酸鹽緩衝液，其實例提供於本文中。脂質調配物及水性稀釋劑均可包含緩衝液。在典型實施例中，脂質調配物或水性稀釋劑包含緩衝液，但二者並非皆如此。緩衝液濃度將取決於所使用緩衝液的類型而變化，其將會被一般技術人員理解且在其技術範圍內進行判定。脂質調配物中之緩衝液濃度可在約1 mM至約100 mM範圍內。在一些情況下，緩衝液濃度可為約1 mM至約50 mM，或約1 mM至約20 mM，或約1 mM至約10 mM，或約1 mM至約5 mM，包括約5 mM。
在一些實施例中，水性稀釋劑包含甘油、諸如磷酸塩緩衝液之緩衝液、鹽及水。此類水性稀釋劑可與缺乏甘油之非水性脂質調配物一起使用。在一些實施例中，脂質調配物進一步包含呈8:1之重量比的生理食鹽水(經組合之鹽與水)與甘油。
在一些實施例中，水性稀釋劑包含丙二醇、諸如磷酸塩緩衝液之緩衝液、鹽及水。此類水性稀釋劑可與缺乏丙二醇之非水性脂質調配物一起使用。
在一些實施例中，水性稀釋劑包含諸如磷酸塩緩衝液之緩衝液、鹽及水。此類水性稀釋劑可與包含丙二醇及甘油二者之非水性脂質調配物一起使用。
通常待經靜脈內投與至個體(包括人類個體)的奈米/微泡群體之pH可在4至8範圍內或4.5至7.5範圍內。在一些情況下，pH可在約6至約7.5的範圍內，或在6.2至約6.8的範圍內。在又其他情況中，pH可為約6.5 (例如，6.5 +/- 0.5或+/- 0.3)。在一些情況下，pH可在5至6.5的範圍內，或在5.2至6.3的範圍內，或在5.5至6.1的範圍內，或在5.6至6的範圍內或在5.65至5.95的範圍內。在又另一情況中，pH可在約5.7至約5.9 (例如範圍之任一端或兩端+/- 0.1或+/- 0.2或+/- 0.3)範圍內。在另一情況中，pH可為約5.8 (例如，5.8  +/-  0.15或5.8 +/- 0.1)。 形成、活化奈米 / 微泡富集群體之方法
藉由活化脂質調配物(諸如脂質溶液或脂質懸浮液)製備本發明之經脂質囊封之氣體奈米/微泡。活化係一種使容納於諸如小瓶之容器中之脂質調配物在所關注之氣體存在下經物理攪拌(例如劇烈震盪)以形成經脂質囊封之氣體奈米/微泡的過程。
本發明提供藉由以充足速率且持續充足時間獨特地活化脂質調配物來形成適合奈米/微泡群體之方法。已發現，本文提供之經最佳化的奈米/微泡群體係使用特定活化參數自脂質調配物獲得。此等特定活化參數中之一些明顯地不同於用於形成微泡以供診斷性超音波應用之現有脂質調配物的活化參數。
作為一個實例，已發現本文提供之非水性脂質調配物必須在較高速度(或速率)下活化較長一段時間以產生本發明之某些經富集奈米/微泡群體。舉例而言，當以4950 rpm活化45秒時，此等非水性脂質調配物中之某些會產生微泡以用於診斷性超音波應用。然而，為了產生某些本文所提供之奈米/微泡群體，實例2中所提供之此等調配物之實例必須在顯著較高速率下(包括在約6000 rpm下)活化較長時間，範圍為約50至約90秒，包括約75至約90秒。
因此，某些經富集奈米/微泡群體可如下形成：藉由以6000 rpm +/- 10%或+/- 5%或+/- 1%之振盪速率，及/或以在約5000 rpm至約7000 rpm、或約5500 rpm至約6500 rpm、或約5800 rpm至約6200 rpm、或約5900至約6100 rpm、或約5950 rpm至約6050 rpm範圍內之振盪速率活化諸如實例2中所描述之非水性調配物持續約50秒至約90秒之振盪時間。在一些情況下，振盪速率為6000 rpm。
類似地，某些經富集奈米/微泡群體可如下形成：藉由以前述振盪速率中之任一者活化非水性調配物持續以下範圍內之振盪時間：40至100秒、或45至95秒、或46至94秒、或47至93秒、或48至92秒、或49至91秒、或40至100秒，包括(但不限於) 40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、60、65、70、75、80、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95及100秒。在其他實施例中，振盪時間可在70至95秒範圍內，包括71至94秒、72至93秒、73至92秒、74至91秒、或75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89或90秒。本發明涵蓋由選自此等時間之下限及上限限定之任何範圍。
此外，出乎意料地發現，當此等非水性脂質調配物(諸如實例2中所描述之非水脂質調配物)佔容器內部體積之約9%且氣體佔容器內部體積之約91%時(如實例中所描述且表示為DEFINITY RT 1.5×或DEFINITY RT 1× + 0.5×)，則最佳振盪速度為約6000 rpm且最佳振盪時間為約60秒。振盪速度(或速率，因為該等術語可互換使用)的範圍可為6000 rpm +/- 10%或+/- 5%或+/- 1%，及/或約5000 rpm至約7000 rpm、或約5500 rpm至約6500 rpm、或約5800 rpm至約6200 rpm、或約5900 至約6100 rpm、或約5950 rpm至約6050 rpm。在一些情況下，振盪速率為6000 rpm。振盪時間的範圍可為55至65秒、56至64秒、57至63秒、58至62秒、59至61秒，或其可為60秒。
甚至更出人意料地，根據此等參數活化之此等特定調配物產生其中27至56%的微泡之直徑在約2微米至小於或約6微米範圍內之群體。在沒有另外的分離程序的情況下，此前尚未報導此類富集之微泡群體。
某些活化參數導致兩個微泡亞群體之富集。一些此等奈米/微泡群體富集直徑在約2微米至小於或約6微米範圍內之微泡且富集直徑在約6微米至約10微米範圍內之微泡。舉例而言，將約6000 rpm之振盪速率及約60秒之振盪時間應用於非水性脂質調配物(諸如實例2中所描述之非水性脂質調配物，其佔容器內部體積之約9%且氣體佔容器內部體積之約91% (如實例中所描述))，從而產生富集直徑在約2微米至約6微米範圍內且在約6微米至約10微米範圍內之微泡的群體。振盪速率之範圍可為6000 rpm +/- 10% 或+/- 5%或+/- 1%及/或約5000 rpm至約7000 rpm、或約5500 rpm至約6500 rpm、或約5800 rpm至約6200 rpm、或約5900至約6100 rpm、或約5950 rpm至約6050 rpm。在一些情況下，振盪速率為6000 rpm。振盪時間的範圍可為55至65秒、56至64秒、57至63秒、58至62秒、59至61秒，或其可為60秒。
將約6000 rpm之振盪速率及約90秒之振盪時間應用於另一非水性脂質調配物(諸如實例2中所描述之非水性脂質調配物)，使得奈米氣泡群體富集以及直徑在約2微米至約6微米範圍內之微泡群體富集。振盪速率之範圍可為6000 rpm +/- 10%或+/- 5%或+/- 1%及/或約5000 rpm至約7000 rpm、或約5500 rpm至約6500 rpm、或約5800 rpm至約6200 rpm、或約5900至約6100 rpm、或約5950 rpm至約6050 rpm。在一些情況下，振盪速率為6000 rpm。振盪時間的範圍可為85至95秒、86至94秒、87至93秒、88至92秒、89至91秒，或其可為90秒。作為另一實例，已發現本文提供之水性脂質調配物，諸如實例1中所描述之水性脂質調配物，亦必須活化較長一段時間或以較高速度(或速率)活化，以產生本發明之某些富集奈米/微泡群體。舉例而言，當以4530 rpm活化45秒時，某些水性脂質調配物會產生微泡以用於診斷性超音波應用。然而，為了產生本文所提供之奈米/微泡群體，此等水性調配物必須在顯著較高速率下(包括約6000 rpm)活化較短時間，範圍為約20至約30秒。以約6000 rpm活化此等脂質調配物約30秒，得到富集直徑在約2微米至約6微米範圍內之微泡的群體。以約6000 rpm活化此等脂質調配物約20至25秒，得到奈米氣泡富集群體。振盪速率之範圍可為6000 rpm +/- 10% 或+/- 5%或+/- 1%及/或約5000 rpm至約7000 rpm、或約5500 rpm至約6500 rpm、或約5800 rpm至約6200 rpm、或約5900至約6100 rpm、或約5950 rpm至約6050 rpm。在一些情況下，振盪速率為6000 rpm。振盪時間的範圍可為15至35秒、16至34秒、17至33秒、18至32秒、19至31秒，或其可為20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30秒。
或者，此等相同水性脂質調配物(實例1)可使用較低速率活化顯著較長時間(例如以約4530 rpm活化約90秒)，以產生奈米氣泡富集群體。振盪速率的範圍可為4930 +/- 10%或+/- 5%或+/- 1%及/或約4000至約5000 rpm、或約4100至約4900 rpm、或約4200至約4800 rpm、或約4300至約4700 rpm、或約4400至約4600 rpm、或約4500至約4600 rpm、或約4500至約4550 rpm、或約4530 rpm。振盪時間的範圍可為85至95秒、或86至94秒、或87至93秒、或88至92秒、或89至91秒，或其可為90秒。
此等相同水性脂質調配物(實例1)可以較高振盪速率活化較短時間(例如，以約6000 rpm活化約30秒)，以便產生直徑在約2微米至約6微米範圍內之富集微泡之群體。振盪速率之範圍可為6000 rpm +/- 10%或+/- 5%或+/- 1%及/或約5000 rpm至約7000 rpm、或約5500 rpm至約6500 rpm、或約5800 rpm至約6200 rpm、或約5900至約6100 rpm、或約5950 rpm至約6050 rpm。在一些情況下，振盪速率為6000 rpm。振盪時間的範圍可為25至35秒、26至34秒、27至33秒、28至32秒、29至31秒，或其可為30秒。
本文所提供之一些製備方法涉及使用2 mL小瓶作為容納脂質調配物及氣體之容器。在一些情況下，小瓶含有約1.76 ml水性脂質調配物及約2.04 ml氣體。因此，脂質調配物佔總內部體積之約46% (亦即，脂質調配物之體積佔總內部體積之百分比)且氣體佔總內部體積之約54% (亦即，氣體體積佔總內部體積之百分比)。
本文所提供之一些製備方法涉及使用2 mL小瓶作為容納較小體積之非水性脂質調配物以及氣體的容器。舉例而言，總內部體積為約3.8 ml之小瓶可含有約0.35 ml非水性脂質調配物及約3.45 ml氣體。因此，脂質調配物佔總內部體積之約9%且氣體佔總內部體積之約91%。
另一實例涉及總內部體積為約3.8 ml之小瓶，其含有約0.52 ml非水性脂質調配物及約3.28 ml氣體。因此，脂質調配物佔總內部體積之約14%且氣體佔總內部體積之約86%。此等後面的調配物之實例描述於實例中且表示為DEFINITY-RT 1.5×及DEFINITY-RT 1×+0.5×。出人意料地發現，此脂質調配物與氣體體積比(14%至86%)在產生富集大小在約2微米至約10微米範圍內(包括約2微米至小於或約6微米及約6微米至約10微米)的氣泡群體時為有用的。亦出人意料的是，此效應明顯不視脂質濃度而定，因為將濃度降低33% (例如，自約3.75 mg/ml降低至約2.5 mg/ml)沒有影響，其限制條件為脂質調配物體積與氣體體積的比保持恆定。
因此，視期望的富集而定，且與本文(包括實例)所提供之教示一致，本文所提供之脂質調配物可以多種方式且使用多種振盪速率/速度及振盪時間組合來活化。
水性脂質調配物，諸如(但不限於)實例1中所描述之水性脂質調配物，可以約4530 rpm活化約10、約20、約30、約40、約50、約60、約70、約75、約80或約90秒。
或者，水性脂質調配物可以約6000 rpm活化約5至30秒，包括(但不限於)約5、約10、約15、約20、約25或約30秒。
非水性脂質調配物，諸如(但不限於)實例2中所描述之非水脂質調配物，可以約4950 rpm活化約10至約90秒，包括(但不限於)約10、約20、約30、約40、約50、約60、約70、約75、約80、約90秒或約120秒。
非水性脂質調配物，諸如(但不限於)實例2中所描述之非水脂質調配物，可以約6000 rpm活化約10至約90秒，包括(但不限於)約10、約20、約30、約40、約50、約60、約70、約75、約80或約90秒。
非水性脂質調配物，諸如(但不限於)實例2中所描述且以1.5×填充體積(相對於實例2中所描述之填充體積)提供之非水性脂質調配物，可以約6000 rpm活化約40秒、45秒、50秒、55秒、60秒、65秒、70秒、75秒或80秒。在一些情況下，其係以約6000 rpm活化約60秒。
非水性脂質調配物，諸如(但不限於)實例2中所描述且以1×填充體積加上無脂質基質之0.5×填充體積(相對於實例2中所描述之填充體積)提供之非水性脂質調配物，可以約6000 rpm活化約40秒、45秒、50秒、55秒、60秒、65秒、70秒、75秒或80秒。在一些情況下，其係以約6000 rpm活化約60秒。 治療應用
除了本發明之某些奈米/微泡群體用於增強對比成像之預期用途外，本發明亦涵蓋此等奈米/微泡群體在治療應用中之用途。此等群體可在人類或非人類個體中活體內或活體外使用。因此，本文所提供之奈米/微泡群體可用於成像目的、治療目的或用於組合診斷及治療目的。
如本文所描述來活化脂質調配物，以形成足夠數目之奈米/微泡，其又視情況稀釋至較大體積中，且以一或多次彈丸注射或藉由連續輸注投與。投與通常為靜脈內注射。隨後在其不久之後進行治療性超音波。超音波可被引導至身體之任何區域，包括(但不限於)心臟、血管、心血管系統、肝、腎、陰莖及頭部。
本發明之主體包括(但不限於)人類及動物。在一些情況下，人類為較佳的。動物包括伴生動物，諸如狗及貓；及農業或獎金動物，諸如(但不限於)公牛及馬。
奈米/微泡群體係以有效量投與。有效量將為便於或引起預期的活體內反應及/或應用的量。本文所提供之治療方法意欲部分或完全治療病狀。
本發明進一步涵蓋本文所提供之經富集奈米/微泡群體連同超音波一起在治療應用中之用途。超音波先前已用於或預期用於治療應用中。如本文所提供，組合超音波與奈米/微泡可提供另外的益處，可能伴以超音波之較少不利影響。
當單獨使用時，假設超音波具有多種不同作用機制，包括(例如)加熱目標組織、機械破壞及其類似者。在一些實施例中，組織之加熱可為非期望效果。
充氣奈米/微泡與超音波一起使用亦可具有多種作用機制。一個特定作用機制為空化。在所投與之奈米/微泡收超音波能量且又經歷許多機械變化時發生空化。在一些情況下，由奈米/微泡吸收之能量係釋放自奈米/微泡，且隨後被周圍組織吸收。在穩定空化的情況下，微球可經歷一或多個膨脹及收縮循環，而不會最終破裂。在慣性空化之情況下，微球破裂。是否發生穩定或慣性空化視多種因素而定，包括超音波之能量位準、預期用途之位置及奈米/微泡之性質或組成。
對於一些治療應用，穩定孔化足以實現所需臨床益處。對於其他治療應用，需要慣性空化以實現所需臨床益處。舉例而言，若微球用作遞送媒劑，則為了最大效應，微球體應破裂以便在活體內釋放其負荷。
超音波能量可自外部或內部施加。外部施加之超音波在大部分情形中為較佳的，因為其侵襲性較低(即使有的話)。可在目標組織為深層組織之一些情況中使用內部施加之超音波，及/或外部施加之超音波可在介入組織中引起不利影響。可藉由將超音波換能器緊鄰個體之外表面(諸如皮膚)或面朝外的凹腔(諸如口腔)等置放而自外部施加超音波。可藉由將超音波換能器引入至個體之身體(通常在探針上)自內部施加超音波。實例可為能夠行進通過循環系統之心血管探針。
可受益於奈米/微泡與超音波能量之組合使用的條件描述如下。典型超音波頻率對於更深層組織(諸如腎臟及心臟)而言在約1至6 MHz範圍內，且對於淺表組織(諸如頸動脈及乳房)而言在7至10 MHz範圍內。
超音波血栓溶解術(sonothrombolysis)係指使用超音波溶解或降解血栓。超音波之功效可藉由將其與本發明之奈米/微泡組合來增強。將受益於超音波血栓溶解術之血管栓塞疾病包括急性心肌梗塞(例如ST上升型心肌梗塞)、肺血栓栓塞、深層靜脈栓塞、視網膜靜脈栓塞(連同眼科超音波)、周邊動脈疾病、心臟動脈粥樣硬化、微血管阻塞或血栓形成，及中風。本文所提供之組合療法亦可用於治療腎結石。
可用超音波、奈米/微泡及治療劑(諸如尿激酶或t-PA)之組合治療經歷血栓栓塞事件之患者。
用於此等適應症之奈米/微泡可靶向身體之特定區域或特定結構，諸如血栓。作為一實例，奈米/微泡可藉由與特異性結合於血小板醣蛋白IIb/IIIa之Arg-Gly-Asp (RGD)肽結合而靶向血栓。參見Ma等人的Bioconjugate Chemistry, 2020, 31:369-374的關於標記方法之描述。本文所提供之奈米氣泡富集群體以及微泡富集群體可用於此治療應用中。超音波頻率可為約1.3 MHz。該方法可用超音波治療探針C5-1s進行。
聲致穿孔法(sonoporation)係指使用超音波，通常以可逆方式增加細胞膜、血管系統及血腦障壁(BBB)之滲透性。藉由將治療劑與奈米/微泡共投與，或投與結合至治療劑之奈米/微泡且施加超音波，有可能增加膜、障壁或血管系統之滲透性以便將治療劑遞送至特定身體區域。將受益於此組合方法之病狀包括心血管疾病、實體腫瘤(諸如神經膠母細胞瘤)及神經退化性疾病，諸如阿茲海默症及帕金森氏病。奈米氣泡及微泡均將均適用於此等應用。奈米氣泡可具有能夠根據其較小大小被動地外滲至組織(諸如來自循環系統之腫瘤)中的附加優點。另外，腫瘤通常具有滲漏血管系統。可在諸如1至10 MHz之非共振頻率下使用奈米氣泡。聲致穿孔法亦可用於使缺氧腫瘤對輻射療法敏感。
本發明亦涵蓋藥物遞送方法。如上文所提及，治療劑可在投與奈米/微泡群體及施加超音波之前、期間或之後投與。此等藥劑可與奈米/微泡分開或其可攜帶於奈米/微泡之內腔中，或其可連接至奈米/微泡之表面，或其可包埋於奈米/微泡之脂質殼層中。因此，此等藥物遞送應用中之一些可為靶向應用且一些可非靶向的。待遞送之藥劑包括核酸、蛋白質、細胞、細胞片段，諸如胞泌體。
其他應用包括將氧遞送至腫瘤以便使得此類腫瘤對輻射治療敏感。
其他應用包括結締組織病症，諸如(但不限於) 佩羅尼氏病(Peyronie's disease)以及肌腱炎、滑囊炎。待治療之其他病狀包括子宮纖維瘤消融、白內障去除、手術組織切割及止血、骨折癒合、梅尼爾氏症(Meniere's disease) (由於前庭神經毀壞引起)、青光眼、腹腔鏡組織消融。本文所提供之氣泡與超音波之組合使用可用作神經手術、超音波輔助式免疫療法、超音波輔助式神經調節之一部分。
特徵為大或小血管中之血流減少或組織灌注減少的其他病狀亦將受益於本文提供之經富集氣泡群體與超音波之組合使用。實例包括視網膜靜脈阻塞、冠狀動脈阻塞、心臟動脈粥樣硬化、周邊動脈疾病(及伴隨肢體搶救)及受益於周邊血液流動增強之其他病狀(例如鐮狀細胞疾病)、動脈粥樣硬化，包括例如在球囊血管造影之後去除或破壞動脈粥樣硬化斑、動脈硬化、勃起功能障礙、狹窄及再狹窄。此等方法亦可用於維持血管通路，例如用於長期透析治療，尤其涉及頭靜脈中之動靜脈瘺管之產生及/或維持，包括(例如)頭肱瘺管(例如去除或破壞結塊、血栓、狹窄及其類似者)。
本文所提供之氣泡群體亦可用於增強高強度聚焦式超音波(HiFu)。
成像應用包括深層組織成像，諸如(但不限於)心臟成像、腎臟成像、肝臟成像。成像應用亦包括乳房成像，即疑似具有生長物(諸如腫瘤)之身體之任何組織或區域之成像。此等成像應用亦可涉及都卜勒超音波成像之增強。
臨床超音波參數及適合系統為此項技術中已知的。實例包括EPIQ、Philips Sonos 7500、EKOS系統(EKOS內波灌注導管系統，EKOS公司)、經批准通過之超音波血栓溶解裝置。 勃起功能障礙
在另一態樣中，本發明提供使用超音波與氣泡之組合來治療勃起功能障礙(ED) (包括血管生成ED)之方法。氣泡可為本文提供之富集群體或其可為用於診斷性超音波之微泡群體，諸如存在於經活化DEFINITY中之彼等微泡群體。
勃起功能障礙(ED)不能至少在某些時間實現或維持勃起以獲得令人滿意的性功能(Yafi等人， Nat. Rev. Disease Primers, 2, 文章編號：16003 (2016))。ED與年齡正相關；同一研究發現，6.5%年齡20至29的男性報告有ED經歷，而77.5%年齡超過75歲的男性亦有ED經歷。
ED在受影響個體中發生的程度不同；嚴重程度係藉由勃起功能國際指數(IIEF-5)評估，其為五項問卷(Rhoden, International Journal of Impotence Research, 14, 245-250 (2002))。IIEF-5評分1至7指示嚴重ED，8至11指示中度ED，12至16指示輕度ED，17至21指示輕度ED，且22至25指示無ED。
ED之生理學病因分成內分泌及非內分泌病因。內分泌病因與激素問題相關，尤其是血清睪固酮減少。最常見非內分泌病因係血管生成，其為與血液供應相關之病症。
具有血管生成風險因素(包括(但不限於)冠狀動脈疾病(CAD)、高血壓、血脂異常、煙霧病(smoking)及糖尿病)及沒有精神性、泌尿生殖器、內分泌或神經性ED病因之風險因素之個體的ED被認為具有血管生成ED (Yavuzgil等人， Int. J. Cardiol.(2005) 103: 19-26)。血流亦可藉由陰莖都卜勒超音波評估(Koca等人，J Sex Med. (2010) 7(12): 3997-4002)。
組合氣泡/超音波療法可輔以用於治療ED之治療劑的投與。一種常見的醫藥治療方法，即PDE5抑制劑(諸如西地那非(sildenafil)、伐地那非(vardenafil)、他達拉非(tadalafil)及阿伐那非(avanafil))，抑制PDE5，從而使促進陰莖陽莖的信號積聚。PDE5抑制劑係有效的，但可能干擾其他藥物療法(諸如含硝酸鹽藥物療法)。當與氣泡/超音波組合療法一起使用時，有可能使用低於治療劑量之此等PDE5抑制劑。
因此，在一個態樣中，本發明提供治療有需要個體之ED的方法。在一些實施例中，基於IIEF-5問卷評分識別個體。在一實施例中，個體已得到指示嚴重ED的評分(1至7)。在一些實施例中，個體已得到指示嚴重或中度ED的評分(11或更低)。在一些實施例中，個體已得到指示嚴重、中度或輕度至中度ED的評分(16或更低)。在一些實施例中，個體已得到指示至少輕度ED的評分(21或更低)。隨後向個體投與氣泡群體(諸如存在於經活化DEFINITY中之彼等氣泡群體)或本文所描述之任一富集群體。在一實施例中，個體經過一次治療。在一實施例中，個體經過兩次治療。在一實施例中，個體經過至少3次治療。
在一些實施例中，個體在治療之後得到較高的IIEF-5評分(指示不太嚴重的ED)。在一些實施例中，個體得到高於3分、高於4分、高於5分、高於6分、高於7分、高於8分、高於9分、高於10分或高出10分以上之IIEF-5評分。
在一些實施例中，藉由血管生成風險因素之存在進一步識別個體。在一些實施例中，個體患有冠狀動脈疾病(CAD)、高血壓、血脂異常、煙霧病或糖尿病。在一些實施例中，個體患有選自以下之兩種或更多種病症：冠狀動脈疾病(CAD)、高血壓、血脂異常、煙霧病及糖尿病。 大體活化
可藉由在氣體存在下劇烈振盪脂質調配物來達成活化。如本文所使用，劇烈振盪係指攪動調配物(無論係水性抑或非水性)的運動，以使得氣體自容器(例如，小瓶)內的局部周圍環境引入至調配物中。攪動調配物及導致氣體引入的任何類型之運動可用於振盪。振盪必須具有足夠的力量以允許在一段時間後形成泡沫。
通常僅在投與個體之前進行活化，且因此藉由終端使用者或中間商而非脂質調配物之供應商或製造商進行活化。脂質調配物通常提供於小瓶中，其最低限度地容納脂質調配物及頂隙氣體。在氣體存在下劇烈振盪脂質調配物導致形成可用於治療應用中之經脂質囊封之充氣奈米/微泡。如本文所使用，「充氣」意指奈米微泡包含其內腔中之氣體，諸如全氟化碳氣體，包括(但不限於)八氟丙烷(全氟丙烷)氣體。囊封氣體之脂質殼層可排列為單層或雙層，包括單層或多層雙層。
脂質調配物通常提供於諸如具有所關注頂隙氣體之小瓶的容器中。容器可由任何材料製成，包括(但不限於)玻璃或塑膠。玻璃可為醫藥級玻璃。容器可使用諸如橡膠擋止器之擋止器密封。
在本發明之上下文中將理解，容器之內部體積可被脂質調配物及氣體佔據。容器可基於其液體填充體積進行限定，該液體填充體積係指通常置放於容器中之液體(例如脂質調配物)的體積。液體填充體積不同於且通常低於容器之整個內部體積。當容器由本文中之體積量測限定時，應理解，此係指液體填充體積。舉例而言，0.5至10 mL容器為液體填充體積為0.5至10 mL之容器。適合之容器及其對應液體填充容積及內部體積之實例如下：具有2.9 mL內部體積之Schott 2 mL(液體填充體積)小瓶；具有4.5 mL內部體積之Schott 3 mL (液體填充體積)小瓶；及具有1.2 mL內部體積之Wheaton 1 mL (液體填充體積) v小瓶。
在一些實施例中，容器為0.5至10 mL容器，諸如1至5 mL容器，或1 mL或2 mL容器。容器可為小瓶，諸如玻璃小瓶。適合的容器之實例為實際內部體積約3.8 ml的Wheaton 2 ml玻璃小瓶(可購自例如Nipro，目錄號2702，B33BA，2cc，13 mm，I型，燧石導管小瓶)。
在引入脂質調配物之前，小瓶可預填充有所關注氣體，諸如八氟丙烷氣體，或可首先向小瓶中引入脂質調配物，接著引入氣體(例如經由稱為頂隙氣體交換之過程)。容器較佳地為無菌的及/或在引入脂質調配物及/或氣體之後進行滅菌，如所公開PCT申請WO99/36104中所描述。
在一些實施例中，容器為平底容器，諸如平底小瓶。適合之小瓶包括平底硼矽酸鹽小瓶，包括Wheaton小瓶。在一些實施例中，容器為非平底容器或小瓶。在一些實施例中，容器為V底容器，諸如V底小瓶。在一些實施例中，容器為圓底容器，諸如圓底小瓶。在一些實施例中，容器具有收縮壁，使得其底部表面積(或底部表面直徑)小於其頂部(開口)表面積(或直徑)或小於其間(例如，本體直徑)之任何直徑。為了清楚起見，V底容器或小瓶具有收縮壁，且其底部表面積明顯地小於任何其頂部或本體表面積。
在一些實施例中，容器為注射器。脂質調配物可提供於預填充注射器中，視情況與氣體實體接觸。在一些實施例中，容器為單腔室容器，諸如小瓶。
活化可產生每毫升脂質調配物至少1×10 7個微球、每毫升脂質調配物至少5×10 7個微球、每毫升脂質調配物至少7.5×10 7個微球、每毫升脂質調配物至少1×10 8個微球、每毫升脂質調配物至少1×10 9個微球、或每毫升脂質調配物至少5×10 9個微球、每毫升脂質調配物至少10 10個微球、或每毫升脂質調配物至少1.5×10 10個微球。
可藉由渦漩(諸如藉由渦流)、左右或上下運動振盪。此外，可組合不同類型之運動。可藉由振盪固持水性或非水性脂質溶液的容器(例如，小瓶)，或藉由在不振盪容器(例如，小瓶)自身的情況下振盪容器(例如，小瓶)內的水性或非水性溶液進行振盪。藉由機器進行振盪以便使過程標準化。機械振盪器為此項技術中已知的，且其振盪機構或構件可用於本發明之裝置中。實例包括諸如彼等用於牙科應用之混汞提金器。振盪涵蓋每分鐘至少4000、至少4500、至少5000、至少5500、至少6000或更多次振盪動作。
可藉由存在於水性或非水性溶液頂部之泡沫偵測活化時之充氣微球之形成，且溶液變白。
在低於凝膠狀態至液晶狀態的溫度(所採用之脂質之相變溫度)下進行活化。「凝膠狀態至液晶狀態相變溫度」意指在脂質層(諸如脂質單層或雙層)將自凝膠狀態轉化至液晶狀態之溫度。此轉變描述於(例如) Chapman等人，J. Biol. Chem. 1974 249, 2512-2521中。各種脂質之凝膠狀態至液晶狀態相變溫度對熟習此項技術者將容易地顯而易見，且描述於(例如) Gregoriadis編，Liposome Technology, 第I卷, 1至18 (CRC Press，1984)及Derek Marsh, CRC Handbook of Lipid Bilayers (CRC Press，Boca Raton, Fla. 1990)，第139頁中。
鑒於本發明，熟習此項技術者將理解脂質或脂質微球可在正經受本文所提供之方法之前或之後進行操縱。舉例而言，在振盪完成之後，可將充氣微球自其容器(例如，小瓶)中抽取出來。抽取可如下實現：藉由將注射器之針或無針尖端(亦即PINSYNC)插入容器中(適當時包括插入至泡沫中)；及藉由抽拉柱塞或藉由添加水性液體混合物將預定量之液體抽吸至注射器筒體中，及藉由抽拉柱塞將預定量之液體抽吸至注射器筒體中。
活化後，奈米/微泡可在其容器中或自容器抽取後用生理食鹽水稀釋。
微球直徑通常使用此項技術中已知且可用之儀器量測，包括(但不限於) Malvern FPIA-3000 Sysmex粒徑分析儀。 裝置
本文亦提供促進奈米/微泡群體之適當及精確製備的方法及構件(例如裝置)。此等方法及構件降低不當製備此類群體之風險。未適當且精確製備之氣泡/微泡群體可能導致具有過少充氣奈米/微泡，從而降低治療功效。可使用能夠獨特地識別且獨特地活化不同脂質調配物之裝置達成適當識別且由此適當活化脂質調配物。
調配物之識別及/或不同調配物之間的區分可以多種方式達成。舉例而言，裝置可與能夠讀取調配物容器(例如，小瓶)上的標籤的掃描儀一起使用。在其他情況下，可使用辨識容納調配物之容器之形狀及大小的裝置實現不同調配物之間的識別及/或區分。此等後面的裝置可包含單個固持器或其可包含兩個或更多個固持器。
根據一個態樣，裝置接收固持調配物之容器，識別調配物且取決於偵測到的調配物之標識而執行不同動作。裝置使某些動作與各調配物相關，例如，參考內部或基於雲端之查找表。在識別某一調配物之後，該裝置較佳地以完全自動方式執行活化該調配物所需之動作。
可基於偵測到的調配物執行多種不同動作。在一些實施例中，裝置振盪小瓶且相應地振盪調配物。在一些實施例中，裝置取決於偵測到的調配物執行特定振盪持續時間、模式及/或速率。不同振盪模式之實例包括(但不限於)：左右往復運動、上下往復運動、振動、自旋運動、八字形路徑、環形路徑及來回傾斜(例如，旋轉容器一些角度及反向動作)。舉例而言，在一個說明性實施例中，裝置將約60秒之振盪持續時間與調配物類型「A」相關聯且將約90秒之振盪持續時間與調配物類型「B」相關聯。當裝置偵測到調配物類型「A」時，裝置自動地振盪調配物約60秒，而不要求使用者輸入振盪時間。當裝置偵測到調配物類型「B」時，裝置自動地振盪調配物約90秒。應瞭解，其他動作可與經識別及偵測之調配物相關聯。
在一些實施例中，容納脂質調配物之容器包括指示調配物類型之指示符，且裝置包括讀取指示符以偵測調配物類型之偵測器。指示符可為機器或裝置可讀之指示符。機器或裝置可讀指示符之實例包括磁性條、晶片/微晶片、條碼(包括線性、矩陣及2D條碼)、無線射頻識別(RFID)標籤、可藉由色彩偵測識別的色彩標記及類似者。諸如線性條碼之條碼可為符合或滿足均勻碼委員會標準(Uniform Code Council standard)或保健業商務通信委員會標準(Health Industry Business Communications Council standard)之條碼。此類指示符又可(例如)自諸如磁條閱讀機、晶片閱讀機、條碼掃描儀或閱讀機、RFID標籤閱讀機及類似者之裝置讀取。幾乎已用於驗證及/或「追蹤及跟蹤(track and trace)」目的之任何標記技術可與本文提供之容器結合使用。
指示符可定位於樣本容器之任何適合的部分(諸如容器之本體或帽)上。在一些實施例中，指示符與樣本容器一體成型或另外與樣本容器之部分一體成型。舉例而言，指示符可為彩色帽或樣本容器上諸如突起或凹痕之實體特徵。在其他實施例中，指示符經由(例如)黏著劑、磁體、鉤環型扣件、諸如在固持標籤後滑動指示符之機械配置或任何其他適合的附接配置附接至容器。
指示符可向終端使用者或容器之中間處理商提供多種資訊，包括(但不限於)其中所含之調配物之來源及/或生產商，包括(例如)製作調配物及/或生產調配物之組分的公司或子公司名稱、調配物製作日期、製作調配物之實體地點、容器之運送日期、容器之處理(包括例如其是否儲存於遠端地點以及此類儲存之條件及長度)、容器輸送日期、輸送方式、由FDA規定的國家藥物藥碼(NDC)、容器之內容物、劑量及使用方法(包括投與途徑)等。
指示符可用於一或多種目的，包括(例如)容器及其中所含之調配物之驗證。驗證意謂識別或標記作為由經授權方發端及製作之容器之能力，且其允許終端使用者或其他方識別自另一未經授權方發端的容器及調配物。指示符亦可用於追蹤及跟蹤容器。此特徵可用於在生產後跟隨容器及其中所含之調配物及達到投與個體之點。就此而言，在彼時間段期間之容器之移動可儲存於資料庫中，且視情況地，此資料庫可由終端使用者存取以確保調配物之完整性。
指示符亦可為經組合指示符，期望其可含有使用兩種不同模式讀取的資訊。舉例而言，指示符可含有對眼睛可見明顯及可理解的資訊(例如，其可以詞語列舉生產商之名稱)及機器可讀之其他資訊，諸如RFID嵌入式或條碼嵌入式資訊。
指示符亦可為雙重用途指示符，期望其可用於兩種或更多種目的。舉例而言，指示符可含有識別調配物之資訊及識別製造商及/或製造日期之其他資訊。此資訊可以相同格式或使用不同格式(例如，一者可提供於RFID指示符中，且另一者可提供於條碼標記中)傳達。
根據一些實施例，識別及致動裝置包括經配置以固持包含脂質調配物及氣體之容器的固持器，及經配置以使固持器以至少一種速度振盪的振盪構件。振盪構件包括經配置以經由傳動裝置驅動固持器移動的馬達，其中傳動裝置之至少一部分經配置以防止在UCA調配物之活化期間滑動。
該傳動裝置可經配置以產生摩擦力及/或運動阻力。該傳動裝置可包括齒形帶、傳動鏈、O形環及齒輪箱中之至少一者。該傳動裝置可包括具有第一齒形輪及第二齒形輪之齒輪，該第一齒形輪可附接至固持器，且該第二齒形輪可附接至馬達。在此類實施例中，齒形帶經配置以與第一齒形輪及第二齒形輪中之每一者嚙合。該第一齒形輪可圍繞可附接至固持器之心軸的一部分定位，且該第二齒形輪可圍繞馬達之一部分(諸如軸)定位。該第一齒形輪及該第二齒形輪可實質上彼此平行。該第一齒形輪及該第二齒形輪亦可實質上彼此共面。
該傳動裝置亦可包括第一O形環及第二O形環，其中該第一O形環定位於該第一齒形輪之第一側邊上，且該第二O形環定位於該第一齒形輪之第二側邊上。在一些實施例中，該第一O環形環及該第二O形環中之每一者及該第一齒形輪圍繞該心軸定位。
該傳動裝置可包括第一及第二異形輪，諸如具有鏈齒排或嵌齒之鏈輪。如上所述，該第一輪可附接至固持器，且該第二輪可附接至馬達。在一些實施例中，該第一輪及該第二輪與鏈條、軌道或具有穿孔或凹痕之另一材料嚙合。舉例而言，鏈齒排可與鏈條、軌道或具有穿孔或凹痕之其他材料嚙合。
另一適合之識別及活化裝置包括經配置以固持包含脂質調配物之容器的固持器、經配置以識別容器中之脂質調配物的識別構件，及經配置以使固持器以至少一種速度振盪的振盪構件，其中該振盪構件包括經配置以經由傳動裝置驅動固持器移動的馬達，其中該傳動裝置包括齒形、穿孔、齒紋帶或軌道、傳動鏈及齒輪箱中之至少一者。
該傳動裝置可包括具有第一齒形輪及第二齒形輪之齒輪，該第一齒形輪可附接至固持器，且該第二齒形輪可附接至馬達。該齒形、穿孔、齒紋帶或軌道可經配置以與該第一齒形輪及該第二齒形輪中之每一者嚙合。該傳動裝置可包括分別可附接至馬達及固持器的第一及第二異形輪，諸如鏈輪。齒形、穿孔、齒紋帶或軌道或其他材料(例如，傳動鏈)可經配置以與第一輪及第二輪中之每一者嚙合。
前述設備或裝置中之每一者可進一步包括外殼，振盪構件安置於該外殼中。其亦可包括經配置以識別小瓶中之脂質調配物之第一識別構件。第一識別構件可包括RFID閱讀機、微晶片閱讀機及條碼掃描儀中之至少一者。第一識別構件亦可包括至少一個天線。
固持器可包括振盪器臂。馬達可包括直流(DC)馬達，諸如無刷DC馬達。
至少一種速度可為預定的。該至少一種速度可由該設備預設。該至少一種速度可小於約4530 rpm或其可為約6000 rpm。設備可經配置而以兩種或更多種速度振盪固持器，其中兩種或更多種速度在約4530 rpm至約6000 rpm之間。
識別構件可進一步經配置以識別容器中之脂質調配物之振盪速度。識別構件可經配置以藉由讀取容器上之指示符來識別調配物之調配物及/或振盪速度。 脂質
本文所提供之脂質調配物可包含一種且通常超過一種脂質。如本文所使用，「脂質」或「總脂質」或「經組合脂質」」意謂脂質之混合物。
脂質可以其個別固態(例如，粉末)形式提供。或者，脂質可提供作為脂質摻合物。製得脂質摻合物之方法包括美國專利第8,084,056號及公開的PCT申請WO 99/36104中所描述之方法。如本文所使用，脂質摻合物意欲表示已經摻合從而產生比另外可藉由將脂質以其個別粉末形式進行簡單混合而獲得的混合物更均質的脂質混合物的兩種或更多種脂質。脂質摻合物大體上呈粉末形式。脂質摻合物可使用有機溶劑經由水性懸浮液凍乾製程或有機溶劑溶解沈澱製程製作。在水性懸浮液凍乾製程中，使所需脂質在高溫下懸浮於水中，且接著藉由凍乾進行濃縮。美國專利第8,084,056號及公開PCT申請WO 99/36104之內容係關於產生脂質摻合物之方法，其以引用方式併入本文中。
或者，脂質可以個別粉末形式提供，該等粉末一起溶解或個別地直接溶解於丙二醇、甘油或丙二醇/甘油中以形成非水性脂質調配物或形成水性脂質調配物之前驅體。
脂質可為陽離子、陰離子或中性脂質。脂質可屬於天然、合成或半合成起源，包括(例如)脂肪酸、氟化脂質、中性脂肪、磷脂、油、氟化油、醣脂、表面活性劑(界面活性劑及含氟界面活性劑)、脂族醇、蠟、萜類及類固醇。
至少一種脂質可為磷脂。如本文所使用，磷脂為含有具有極性(親水性)磷酸頭基的油性(疏水性)烴鏈的脂肪物質。磷脂具有兩親媒性。
較佳地，所有脂質皆為磷脂，其實例包括(但不限於)磷脂醯膽鹼；1,2-二軟脂醯基-sn-甘油-3-磷脂醯膽鹼(DPPC)；磷脂酸；1,2-二軟脂醯基-sn-甘油-3-磷脂酸(DPPA)；磷脂醯乙醇胺；及1,2-二軟脂醯基-sn-甘油-3-磷脂醯乙醇胺(DPPE)。DPPA及DPPE可以單鈉鹽形式提供。
在一些情況下，一或多種脂質可經修飾。舉例而言，脂質可與諸如以下之聚合物結合：幾丁質、玻尿酸、聚乙烯吡咯啶酮或聚乙二醇(PEG)。與PEG結合之脂質在本文中被稱作聚乙二醇化脂質。較佳地，聚乙二醇化脂質為DPPE-PEG或DSPE-PEG。
脂質與諸如PEG之聚合物的結合可藉由多種鍵或鍵聯實現，諸如(但不限於)醯胺、胺基甲酸酯、胺、酯、醚、硫醚、硫代醯胺及二硫(硫酯)鍵聯。
PEG上之端基可為(但不限於)羥基-PEG (HO-PEG) (或其反應性衍生物)、羧基-PEG (COOH-PEG)、甲氧基-PEG (MPEG)或另一低碳烷基，例如，如同異丙氧基PEG或三級丁氧基PEG、胺基PEG (NH2PEG)或硫醇(SH-PEG)。
PEG之分子量可在約500至約10000的範圍內變化，包括自約1000至約7500，及自約1000至約5000。在一些重要的實施例中，PEG之分子量為約5000。因此，DPPE-PEG5000或DSPE-PEG5000係指其上附著有分子量為約5000之PEG聚合物的DPPE或DSPE。
相對於脂質溶液中脂質之總量的聚乙二醇化脂質之百分比(以莫耳計)處於或介於約2%至約20%之間。在各種實施例中，相對於脂質之總量的聚乙二醇化脂質之百分比處於或介於5莫耳百分比至約15莫耳百分比之間。
在一些實施例中，脂質為1,2-二軟脂醯基-sn-甘油-3-磷脂醯膽鹼(DPPC)、1,2-二軟脂醯基-sn甘油-3-磷脂, 單鈉鹽(DPPA)、及N-(聚乙二醇5000胺甲醯基)-1,2-二軟脂醯基-sn-甘油-3-磷脂醯乙醇胺 , 單鈉鹽(PEG5000-DPPE)。PEG5000-DPPE可為MPEG5000-DPPE或HO-PEG5000-DPPE。在一些實施例中，脂質可為DPPA、DPPC及PEG5000-DPPE中之一者、兩者或全部三者。在一些實施例中，脂質可為DPPC、DPPE及PEG5000-DPPE中之一者、兩者或全部三者。在此等後面的實施例中，脂質可不包括DPPA。PEG5000-DPPE可為MPEG5000-DPPE或HO-PEG5000-DPPE。廣泛多種脂質，如Unger等人的美國專利第5,469,854號中所描述之脂質，可用於本發明中。適合的脂質包括例如脂肪酸；溶血脂質；氟化脂質；磷酸膽鹼，諸如與血小板活化因子(PAF) (Avanti Polar Lipids, Alabaster, Ala.)相關之磷酸膽鹼，包括1-烷基-2-乙醯基-sn-甘油3-磷酸膽鹼及1-烷基-2-羥基-sn-甘油3-磷酸膽鹼；具有飽和及不飽和脂質之磷脂醯膽鹼，包括二油醯基磷脂醯膽鹼、二肉豆蔻醯基-磷脂醯膽鹼、二-十五碳醯基磷脂醯膽鹼、二月桂醯基磷脂醯膽鹼、1,2-二軟脂醯基-sn-甘油-3-磷脂醯膽鹼(DPPC)、二硬脂醯基磷脂醯膽鹼(DSPC)及二花生四烯醯基磷脂醯膽鹼(DAPC)；磷脂醯乙醇胺，諸如二油醯基-磷脂醯乙醇胺、1,2-二軟脂醯基-sn-甘油-3-磷脂醯乙醇胺(DPPE)及二硬脂醯基-磷脂醯乙醇胺(DSPE)；磷脂醯絲胺酸；磷脂醯甘油，包括二硬脂醯基磷脂醯甘油(DSPG)；磷脂醯環己六醇；神經鞘脂質，諸如神經鞘磷脂；醣脂，諸如神經節苷脂GM1及GM2；葡萄糖脂；腦硫脂；醣神經鞘脂；磷脂酸，諸如1,2-二軟脂醯基-sn-甘油-3-磷脂酸(DPPA)及二硬脂醯基磷脂酸(DSPA)；棕櫚酸；硬脂酸；花生四烯酸；及油酸。
其他適合的脂質包括磷脂醯膽鹼，諸如，二油醯基磷脂醯膽鹼、二肉豆蔻醯基磷脂醯膽鹼、二棕櫚醯基磷脂醯膽鹼(DPPC)及二硬脂醯基磷脂醯膽鹼；磷脂醯乙醇胺，諸如二軟脂醯基磷脂醯乙醇胺(DPPE)、二油醯基磷脂醯乙醇胺及N-丁二醯基-二油醯基磷脂醯乙醇胺；磷脂醯絲胺酸；磷脂醯-甘油；神經鞘脂質；醣脂，諸如神經節苷脂GM1；葡萄糖脂；腦硫脂；醣神經鞘脂；磷脂酸，諸如二棕櫚醯基磷脂酸(DPPA)；棕櫚脂肪酸；硬脂脂肪酸；花生四烯脂肪酸；月桂脂肪酸；肉豆蔻脂肪酸；月桂烯脂肪酸；抹香鯨脂肪酸；肉豆蔻油脂肪酸；棕櫚油脂肪酸；芹子脂肪酸；油酸脂肪酸；異月桂脂肪酸；異肉豆蔻脂肪酸；異棕櫚脂肪酸；異硬脂脂肪酸；膽固醇及膽固醇衍生物，諸如膽固醇半丁二酸鹽、膽固醇硫酸鹽及膽固醇基-(4'-三甲銨基)-丁酸鹽；聚氧乙烯脂肪酸酯；聚氧乙烯脂肪酸醇；聚氧乙烯脂肪酸醇醚；聚氧乙烯化脫水山梨糖醇脂肪酸酯；甘油聚乙二醇氧硬脂酸酯；甘油聚乙二醇蓖麻油酸酯；乙氧基化大豆固醇；乙氧基化蓖麻油；聚氧乙烯-聚氧丙烯脂肪酸聚合物；聚氧乙烯脂肪酸硬脂酸酯；12-(((7'-二乙胺基香豆素-3-基)-羰基)-甲胺基)-十八酸；N-[12-(((7'-二乙胺基-香豆素-3-基)-羰基)-甲基-胺基)十八醯基]-2-胺基-棕櫚酸；1,2-二油醯基-sn-甘油；1,2-二軟脂醯基-sn-3-丁二醯基甘油；1,3-二軟脂醯基-2-丁二醯基-甘油；及1-十六烷基-2-軟脂醯基-甘油磷酸乙醇胺及軟脂醯基升半胱胺酸；溴化月桂基三甲銨(月桂基- = 十二烷基-)；溴化鯨蠟基三甲銨(鯨蠟基- = 十六烷基-)；溴化肉豆蔻基三甲銨(肉豆蔻基- = 十四烷基-)；氯化烷基二甲基苯甲基銨，諸如其中烷基為C 12、C 14或C 16烷基；溴化苯甲基二甲基十二烷基銨；氯化苯甲基二甲基十二烷基銨、溴化苯甲基二甲基十六烷基銨；氯化苯甲基二甲基十六烷基銨；溴化苯甲基二甲基十四烷基銨；氯化苯甲基二甲基十四烷基銨；溴化鯨蠟基二甲基乙銨；氯化鯨蠟基二甲基乙銨；溴化鯨蠟基吡啶鎓；氯化鯨蠟基吡啶鎓；氯化N-[1-2,3-二油醯氧基)-丙基]-N,N,N-三甲銨(DOTMA)；1,2-二油醯氧基-3-(三甲銨基)丙烷(DOTAP)；及1,2-二油醯基-e-(4'-三甲銨基)-丁醯基-sn-甘油(DOTB)。
在使用DPPA、DPPC及DPPE的一些實施例中，其莫耳百分比可為約77至90莫耳% DPPC、約5至15莫耳% DPPA及約5至15莫耳% DPPE，包括DPPE-MPEG5000。各脂質之較佳比率包括實例部分中描述之比率，諸如6.0:53.5:40.5之重量%比率(DPPA:DPPC:MPEG5000-DPPE)或10比82比8 (10:82:8)之莫耳%比率(DPPA:DPPC:MPEG5000-DPPE)。 氣體
氣體較佳地實質上不溶於本文提供之脂質溶液中。氣體可為不可溶氟化氣體，諸如六氟化硫或全氟化碳氣體。
全氟化碳氣體之實例包括全氟丙烷、全氟甲烷、全氟乙烷、全氟丁烷、全氟戊烷、全氟己烷。可用於本發明之微球中的氣體之實例描述於美國專利第5,656,211號中且以引用方式併入本文中。在一重要的實施例中，氣體為全氟丙烷。
氣體之實例包括(但不限於)六氟丙酮、異丙基乙炔、丙二烯、四氟丙二烯、三氟化硼、1,2-丁二烯、1,3-丁二烯、1,2,3-三氯丁二烯、2-氟-1,3-丁二烯、2-甲基-1,3丁二烯、六氟-1,3-丁二烯、丁二炔、1-氟丁烷、2-甲基丁烷、十氟丁烷(全氟丁烷)、十氟異丁烷(全氟異丁烷)、1-丁烯、2-丁烯、2-甲基-1-丁烯、3-甲基-1-丁烯、全氟-1-丁烯、全氟-1-丁烯、全氟-2-丁烯、4-苯基-3-丁烯-2-酮、2-甲基-1-丁烯-3-炔、硝酸丁酯、1-丁炔、2-丁炔、2-氯-1,1,1,4,4,4-六氟-丁炔、3-甲基-1-丁炔、全氟-2-丁炔、2-溴-丁醛、碳硼烷、巴豆腈、環丁烷、甲基環丁烷、八氟環丁烷(全氟環丁烷)、全氟異丁烷、3-氯環戊烯、環丙烷、1,2-二甲基環丙烷、1,1-二甲基環丙烷、乙基環丙烷、甲基環丙烷、聯乙炔、3-乙基-3-甲基二氮環丙烷、1,1,1-三氟重氮乙烷、二甲胺、六氟二甲胺、二甲基乙胺、雙-(二甲基膦)胺、2,3-二甲基-2-降冰片烷、全氟-二甲胺、氯化二甲基氧鎓、1,3-二氧雜環戊烷-2-酮、 1,1,1,1,2-四氟乙烷、1,1,1-三氟乙烷、1,1,2,2-四氟乙烷、1,1,2-三氯-1,2,2-三氟乙烷、1,1-二氯乙烷、1,1-二氯-1,2,2,2-四氟乙烷、1,2-二氟乙烷、1-氯-1,1,2,2,2-五氟乙烷、2-氯-1,1-二氟乙烷、1-氯-1,1,2,2-四氟-乙烷、2-氯-1,1-二氟乙烷、氯乙烷、氯五氟乙烷、二氯三氟乙烷、氟乙烷、硝基五氟乙烷、亞硝基五氟乙烷、全氟乙烷、全氟乙胺、乙基乙烯醚、 1,1-二氯乙烯、1,1-二氯-1,2-二氟-乙烯、1,2-二氟乙烯、甲烷、三氟甲烷磺醯氯、三氟甲烷磺醯氟、三氟(五氟硫基)甲烷、溴二氟亞硝基甲烷、溴氟甲烷、溴氯氟甲烷、溴三氟甲烷、氯二氟硝基甲烷、氯二硝基甲烷、氯氟甲烷、氯三氟甲烷、氯二氟甲烷、二溴二氟甲烷、二氯二氟甲烷、二氯氟甲烷、二氟甲烷、二氟碘甲烷、二矽甲烷、氟甲烷、三氟碘甲烷-碘甲烷、硝基三氟甲烷、亞硝基三氟甲烷、四氟甲烷、三氯氟甲烷、三氟甲烷、三氟甲烷次磺醯氯、 2-甲基丁烷、甲基醚、甲基異丙基醚、乳酸甲酯、亞硝酸甲酯、甲硫醚、甲基乙烯基醚、新戊烷、氮氣(N 2)、氧化亞氮、1,2,3-十九烷三甲酸-2-羥基三甲酯、1-壬烯-3-炔、氧氣(O 2)、氧氣17 ( 17O 2)、1,4-戊二烯、正戊烷、十二氟戊烷(全氟戊烷)、十四氟己烷(全氟己烷)、全氟異戊烷、全氟新戊烷、4-胺基-4-甲基-2-戊酮、1-戊烯、{順}2-戊烯、{反}2-戊烯、3-溴-1-戊烯、全氟1-戊烯、四氯鄰苯二甲酸、2,3,6-三甲基哌啶、丙烷、1,1,1,2,2,3-六氟丙烷、1,2-環氧基丙烷、2,2二氟丙烷、2-胺基丙烷、2-氯丙烷、七氟-1-硝基丙烷、七氟-1-亞硝基丙烷、全氟丙烷、丙烯、丙基-1,1,1,2,3,3-六氟-2,3二氯、1-氯丙烯、{反}氯丙烯、2-氯丙烯、3-氟丙烯、全氟丙烯、丙炔、3,3,3-三氟丙炔、3-氟苯乙烯、六氟化硫、十氟化二硫(S 2F 10)、2,4-二胺基甲苯、三氟乙腈、三氟甲基過氧化物、三氟甲基硫化物、六氟化鎢、乙烯基乙炔、乙烯基醚、氖氣、氦氣、氪氣、氙氣(尤其是銣富集之超極化氙氣)、二氧化碳、氦氣及空氣。
氟化氣體(亦即，含有一或多個氟分子之氣體，諸如六氟化硫)、氟碳氣體(亦即，為經氟化碳或氣體的經氟化氣體)，及全氟化碳氣體(亦即，經充分氟化的氟碳氣體，諸如全氟丙烷及全氟丁烷)為較佳的。
由於在生產期間併入空氣，諸如全氟化碳氣體之氣體通常在低於其在室溫下的普通濃度存在。當存在於包含非水性混合物及氣體頂隙之小瓶中時，全氟丙烷之濃度在約一大氣壓壓力下預期為約6.52 mg/mL。如此項技術中已知，由於在生產期間併入空氣，其他氣體之濃度將類似地經稀釋。
氣體，諸如全氟丙烷氣體，可注射至或以其他方式添加至包含脂質調配物之容器(例如，小瓶)中或脂質調配物自身中，以便提供除空氣外之氣體。沒有空氣重之氣體可添加至密封容器中，而比空氣重之氣體可添加至密封或非密封容器中。
熟習此項技術者將理解亦可使用氣態前驅體，隨後藉由溫度或壓力變化將前驅體轉化成氣體。 實例 實例 1.
具有由Lantheus Medical Imaging, Inc.製造的活化之前的水性脂質調配物(亦即脂質懸浮液) DEFINITY ®之小瓶含有以下磷脂：於103.5 mg/mL丙二醇、126.2 mg/mL甘油(亦即丙三醇)及2.34 mg/mL單水合磷酸二氫鈉、2.16 mg/mL七水合磷酸氫二鈉及4.87 mg/mL注射用氯化鈉水溶液之基質中的1,2-二軟脂醯基-sn-甘油-3-磷脂醯膽鹼(DPPC；0.401 mg/mL)、1,2-二軟脂醯基-sn-甘油-3-磷脂酸(DPPA；0.045 mg/mL)，及N-(甲氧基聚乙二醇5000胺甲醯基)-1,2-二軟脂醯基-sn-甘油-3-磷脂醯乙醇胺(MPEG5000 DPPE；0.304 mg/mL)。pH為6.2至6.8。經組合脂質濃度為每毫升調配物0.75 mg脂質。
脂質調配物在2cc (2 mL) Wheaton玻璃小瓶中之體積為大致1.76 mL，該玻璃小瓶的實際內部體積為約3.8 mL且其含有全氟丙烷氣體(PFP，6.52 mg/mL)的頂隙為大致2.04。
市售經FDA批准通過的水性UCA調配物DEFINITY ®(Lantheus Medical Imaging, Inc.)係藉由使用VIALMIX ®對機PFP/脂質調配物進行械振盪(描述於美國專利6,039,557中，其內容特此以引用之方式併入且可用於本發明製程中)來活化。此導致氣體併入至脂質微球中且表示活化產物(參見DEFINITY®處方資訊)。當用生理食鹽水稀釋時，可使用粒徑分析儀(AccuSizer 780或SpetraDyne)分析充氣氣泡之數目及大小分佈。
使用以2.25或7.5 MHz之頻率為中心之寬頻換能器執行聲學衰減分析。 實例 2.
具有由Lantheus Medical Imaging, Inc.製造的活化之前的非水性脂質調配物(亦即脂質懸浮液) DEFINITY RT ®之小瓶含有以下磷脂：於517.5 mg/mL丙二醇、631 mg/mL甘油(亦即丙三醇)、0.370 mg/mL無水醋酸鈉及0.030 mg/mL冰醋酸之基質中的1,2-二軟脂醯基-sn-甘油-3-磷脂醯膽鹼(DPPC；2.005 mg/mL)、1,2-二軟脂醯基-sn-甘油-3-磷脂酸(DPPA；0.225 mg/mL)，及N-(甲氧基聚乙二醇5000胺甲醯基)-1,2-二軟脂醯基-sn-甘油-3-磷脂醯乙醇胺(MPEG5000 DPPE；1.520 mg/mL)。pH為5.2至6.4。經組合脂質濃度為每毫升調配物3.75 mg脂質。
在活化之前，小瓶之頂部隙含有6.52 mg/mL八氟丙烷且黏稠溶液含有3.75 mg/mL脂質調配物。
脂質調配物在2cc (2 mL) Wheaton玻璃小瓶中之體積為大致0.35 mL，該玻璃小瓶的實際內部體積為約3.8 mL且其含有全氟丙烷氣體(PFP，6.52 mg/mL)的頂隙為大致3.45 mL。
可使用VIALMIX ®或VIALMIX-RFID ®進行活化。此導致氣體併入至脂質奈米/微泡中，其表示活化產物。當用生理食鹽水稀釋時，可使用粒徑分析儀(AccuSizer 780或SpetraDyne)分析充氣氣泡之數目及大小分佈。
使用以2.25或7.5 MHz之頻率為中心之寬頻換能器執行聲學衰減分析。 實例 3.
使用經修改以具有對時間及速度參數之可程式化控制的VIALMIX-RFID ®以4530 rpm將具有水性脂質調配物(例如，DEFINITY ®，實例1)之小瓶振盪不同段時間。在振盪之後立即採集樣本且使用Accusizer 780分析氣泡大小分佈。大小分佈不同之氣泡指示伴隨著大致90秒活化最大限度地形成0.5至1 μm微泡(表1)、伴隨45秒活化形成1至2 μm微泡(資料未示出)及伴隨10及20及90秒活化形成2至6 μm微泡(表3)。在各時間點對樣本之聲學衰減的分析表明在45秒時針對7.5 MHz的最大值，其概況匹配1至2 μm微泡數目。類似地，聲學衰減在10及20秒時針對2.25 MHz接近最大值，其概況匹配2至6 μm微泡數目(資料未示出)。 實例 4.
使用經修改以具有對時間及速度參數之可程式化控制的VIALMIX-RFID ®以6000 rpm將具有水性脂質調配物(例如，DEFINITY ®，實例1)之小瓶振盪不同段時間。在振盪之後立即採集樣本且使用Accusizer 780分析氣泡大小分佈。大小分佈不同之氣泡指示伴隨著大致20及25秒活化最大限度地形成0.5至1 μm微泡(表2)、伴隨10至15秒活化形成1至2 μm微泡(資料未示出)及伴隨5、25及30秒活化形成2至6 μm微泡(表4)。在各時間點對樣本之聲學衰減的分析表明在10至15秒時針對7.5 MHz的最大值(資料未示出)，其概況匹配1至2 μm微泡數目。在5秒及25至30秒時針對2.25 MHz的聲學衰減最高(資料未示出)，其概況匹配2至6微米微泡數目。 實例 5.
使用經修改以具有對時間及速度參數之可程式化控制的VIALMIX-RFID ®以4950 rpm將具有非水性脂質調配物(例如，DEFINITY RT ®，實例2)之小瓶振盪不同段時間。在振盪之後立即採集樣本且使用Accusizer 780分析氣泡大小分佈。大小分佈不同之氣泡指示伴隨著大致250秒活化最大限度地形成0.5至1 μm微泡(資料未示出)、伴隨125秒活化形成1至2 μm微泡(資料未示出)及伴隨80秒活化形成2至6 μm微泡(資料未示出)。在各時間點對樣本之聲學衰減的分析表明在100至150秒時針對7.5 MHz的最大值，其概況匹配1至2 μm微泡數目。類似地，聲學衰減在80秒時針對2.25 MHz為最大的，其概況匹配2至6 μm微泡數目(資料未示出)。 實例 6.
使用經修改以具有對時間及速度參數之可程式化控制的VIALMIX-RFID ®以6000 rpm將具有非水性脂質調配物(例如，DEFINITY RT ®，實例2)之小瓶振盪不同段時間。在振盪之後立即採集樣本且使用Accusizer 780分析氣泡大小分佈。大小分佈不同之氣泡指示伴隨著大致50至90秒活化最大限度地形成0.5至1 μm微泡(表2)、伴隨30至40秒活化形成1至2 μm微泡(資料未示出)及伴隨20至90秒活化形成2至6 μm微泡(表4)。在各時間點對樣本之聲學衰減的分析表明在30秒時針對7.5 MHz的最大值(資料未示出)，其概況匹配1至2 μm微泡數目。類似地，聲學衰減在20至90秒時針對2.25 MHz為最大的(表2)，其概況匹配2至6 μm微泡數目。 實例 7.
具有非水性脂質調配物(例如DEFINITY RT ®，實例2)之小瓶為a)未經修改；或b)含有1.5倍非水性脂質調配物之填充體積(亦即1.5×0.35 mL脂質調配物) (稱為DEFINITY-RT 1.5×填充體積，表5)；或c)藉由添加0.5倍填充體積，用單獨的丙二醇/甘油(50:50)基質(亦即0.35 mL脂質調配物及約0.18 mL基質) (稱為DEFINITY-RT 1× + 0.5*，表5)稀釋。可藉由增加非水性脂質溶液之量或出乎意料地僅添加基質來形成較高數目的2至6 μm微泡。此等改變增加2.25 MHz下而非在7.5 MHz下之聲學衰減(表5)。使用Accusizer 780分析氣泡之大小分佈指示，當以6000 rpm下盪60秒時，大部分氣泡小於2 μm (資料未示出)。然而，在基質稀釋的情況下，該分佈含有實質上更多的高於2 μm但小於10 μm的微泡。此分佈使得2.25 MHz下之超音波衰減顯著增加(表5)。 表 1
脂質調配物 振盪速度(RPM) 振盪時間( 秒) 總氣泡濃度(0.5-500 µm) 奈米氣泡%
DEFINITY RT 4950 10 4.24E+08 56.4
DEFINITY RT 4950 20 1.84E+09 54.0
DEFINITY RT 4950 30 3.44E+09 50.8
DEFINITY RT 4950 45 4.44E+09 51.1
DEFINITY RT 4950 45 4.91E+09 50.8
DEFINITY RT 4950 45 7.03E+09 50.8
DEFINITY RT 4950 60 9.37E+09 50.2
DEFINITY RT 4950 75 1.26E+10 49.3
DEFINITY RT 4950 90 1.55E+10 49.7
DEFINITY RT 4950 120 1.98E+10 53.8
DEFINITY 4530 10 2.89E+09 61.0
DEFINITY 4530 20 7.95E+09 61.3
DEFINITY 4530 30 1.14E+10 63.4
DEFINITY 4530 45 1.50E+10 65.3
DEFINITY 4530 45 1.47E+10 66.4
DEFINITY 4530 45 1.78E+10 66.2
DEFINITY 4530 60 1.84E+10 71.4
DEFINITY 4530 75 1.67E+10 71.0
DEFINITY 4530 90 1.16E+10 83.0
表 2
脂質調配物 振盪速度(RPM) 振盪時間( 秒) 總氣泡濃度(0.5-500 µm) 奈米氣泡%
DEFINITY RT 4950 45 4.90E+09 49.87
DEFINITY RT 6000 10 1.97E+09 56.14
DEFINITY RT 6000 15 5.28E+09 54.52
DEFINITY RT 6000 20 7.88E+09 56.23
DEFINITY RT 6000 30 1.72E+10 59.84
DEFINITY RT 6000 40 2.37E+10 68.33
DEFINITY RT 6000 50 2.59E+10 77.92
DEFINITY RT 6000 60 2.62E+10 84.55
DEFINITY RT 6000 60 2.09E+10 88.99
DEFINITY RT 6000 60 2.75E+10 87.57
DEFINITY RT 6000 75 1.99E+10 93.39
DEFINITY RT 6000 90 1.46E+10 93.68
DEFINITY 4530 45 1.19E+10 65.40
DEFINITY 6000 5 5.34E+09 59.16
DEFINITY 6000 10 1.01E+10 62.51
DEFINITY 6000 15 1.30E+10 67.37
DEFINITY 6000 20 1.47E+10 80.69
DEFINITY 6000 20 1.30E+10 76.83
DEFINITY 6000 20 1.32E+10 78.34
DEFINITY 6000 25 1.22E+10 84.53
DEFINITY 6000 30 3.77E+09 71.41
表 3
脂質調配物 振盪速度(RPM) 振盪時間( 秒) 總微泡濃度(1-500 µm) % 2-6 um 微泡
DEFINITY RT 4950 10 1.81E+08 12.6
DEFINITY RT 4950 20 8.31E+08 13.2
DEFINITY RT 4950 30 1.66E+09 14.6
DEFINITY RT 4950 45 2.14E+09 11.6
DEFINITY RT 4950 45 2.38E+09 12.7
DEFINITY RT 4950 45 3.40E+09 12.3
DEFINITY RT 4950 60 4.59E+09 10.8
DEFINITY RT 4950 75 6.30E+09 7.1
DEFINITY RT 4950 90 7.68E+09 4.4
DEFINITY RT 4950 120 8.91E+09 2.3
DEFINITY 4530 10 1.10E+09 13.7
DEFINITY 4530 20 3.01E+09 12.4
DEFINITY 4530 30 4.08E+09 7.2
DEFINITY 4530 45 5.08E+09 4.3
DEFINITY 4530 45 4.81E+09 3.4
DEFINITY 4530 45 5.85E+09 3.9
DEFINITY 4530 60 5.08E+09 3.7
DEFINITY 4530 75 4.70E+09 3.4
DEFINITY 4530 90 1.90E+09 10.6
表 4
脂質調配物 振盪速度(RPM) 振盪時間( 秒) 總微泡濃度(1-500 µm) % 2-6 um 微泡
DEFINITY RT 4950 45 2.42E+09 13.4
DEFINITY RT 6000 10 8.46E+08 5.5
DEFINITY RT 6000 15 2.35E+09 4.5
DEFINITY RT 6000 20 3.37E+09 4.1
DEFINITY RT 6000 30 6.73E+09 2.9
DEFINITY RT 6000 40 7.21E+09 2.4
DEFINITY RT 6000 50 5.42E+09 2.5
DEFINITY RT 6000 60 3.78E+09 4.0
DEFINITY RT 6000 60 2.13E+09 8.5
DEFINITY RT 6000 60 3.16E+09 5.3
DEFINITY RT 6000 75 1.23E+09 19.1
DEFINITY RT 6000 90 8.89E+08 27.5
DEFINITY 4530 45 4.00E+09 4.0
DEFINITY 6000 5 2.14E+09 12.6
DEFINITY 6000 10 3.69E+09 5.8
DEFINITY 6000 15 4.13E+09 5.0
DEFINITY 6000 20 2.72E+09 7.7
DEFINITY 6000 20 2.90E+09 6.6
DEFINITY 6000 20 2.75E+09 6.5
DEFINITY 6000 25 1.82E+09 10.7
DEFINITY 6000 30 1.06E+09 18.5
表 5
脂質 調配物 振盪速度(RPM) 振盪時間( 秒) 填充體積 總濃度(1-500 um) 2≤P＜6 6≤P＜10 % 微泡2-6 % 微泡6-10 2.25 MHz 衰減 7.5 MHz 衰減
DEFINITY RT 4950 45 1X 2.8E+ 09 3.6E+08 3.5E+07 12.8 1.2 0.50 0.49
DEFINITY RT 4950 45 1X 2.5E+ 09 2.7E+08 1.1E+07 10.7 0.4 0.54 0.58
DEFINITY RT 4950 45 1X 2.7E+ 09 3.2E+08 2.0E+07 11.8 0.8 0.52 0.54
DEFINITY RT 4950 45 1X 2.2E+ 09 2.7E+08 2.4E+07 12.4 1.1 0.56 0.57
DEFINITY RT 4950 45 1X 2.7E+ 09 2.8E+08 2.6E+07 10.5 1.0 0.51 0.55
DEFINITY RT 4950 45 1X 2.5E+ 09 2.4E+08 1.9E+07 9.6 0.8 0.57 0.59
DEFINITY RT 4950 45 1X 2.2E+ 09 2.7E+08 1.9E+07 12.4 0.9 0.66 0.59
DEFINITY RT 4950 45 1X 2.5E+ 09 2.9E+08 1.7E+07 11.8 0.7 0.42 0.42
DEFINITY RT 4950 45 1X 2.5E+ 09 3.1E+08 1.5E+07 12.5 0.6 0.50 0.48
DEFINITY RT 4950 45 1.5X 1.3E+ 10 4.1E+08 4.2E+07 3.2 0.3 0.84 1.04
DEFINITY RT 4950 45 1.5X 4.1E+ 09 3.9E+08 2.7E+07 9.4 0.7 0.87 1.12
DEFINITY RT 6000 60 1X 1.1E+ 09 7.0E+07 3.4E+07 6.3 3.1 0.32 0.10
DEFINITY RT 6000 60 1X 3.9E+ 09 1.0E+08 1.3E+07 2.7 0.3 0.33 0.23
DEFINITY RT 6000 60 1.5X 1.0E+ 09 3.7E+08 9.6E+07 36.7 9.6 ＞1.24 0.25
DEFINITY RT 6000 60 1.5X 1.2E+ 09 3.9E+08 8.8E+07 31.7 7.1 ＞1.24 0.40
DEFINITY RT 6000 60 1.5X 1.2E+ 09 3.2E+08 7.2E+07 27.1 6.1 ＞1.24 0.38
DEFINITY RT 6000 60 1.5X 1.0E+ 09 4.4E+08 1.0E+08 42.8 10.1 ＞1.24 0.23
DEFINITY RT 6000 60 1.5X 1.8E+ 09 9.4E+08 9.5E+07 51.7 5.2 ＞1.24 0.32
DEFINITY RT 6000 60 1.5X 1.4E+ 09 6.6E+08 6.3E+07 47.2 4.5 ＞1.24 0.30
DEFINITY RT 6000 60 1.5X 1.3E+ 09 5.7E+08 1.4E+08 42.9 10.2 1.46 0.33
DEFINITY RT 6000 60 1.5X 1.3E+ 09 6.5E+08 1.6E+08 50.4 12.2 1.19 0.30
DEFINITY RT 6000 60 1.5X 1.5E+ 09 6.7E+08 1.1E+08 46.1 7.7 1.22 0.34
DEFINITY RT 6000 60 1.5X 1.8E+ 09 8.4E+08 1.1E+08 46.6 6.2 1.31 0.38
DEFINITY RT 6000 60 1.5X 2.0E+ 09 9.4E+08 8.5E+07 46.3 4.2 1.68 0.39
DEFINITY RT 6000 60 1.5X 1.4E+ 09 7.8E+08 1.2E+08 55.0 8.7 1.58 0.36
DEFINITY RT 6000 60 1X + 0.5* 9.7E+ 08 3.8E+08 8.5E+07 39.5 8.8 ＞1.24 0.22
DEFINITY RT 6000 60 1X + 0.5* 9.5E+ 08 3.5E+08 7.5E+07 36.9 7.9 ＞1.24 0.29
DEFINITY RT 6000 60 1X + 0.5* 7.0E+ 08 3.0E+08 7.4E+07 42.6 10.5 1.12 0.16
DEFINITY RT 6000 60 1X + 0.5* 1.1E+ 09 5.3E+08 8.9E+07 50.4 8.4 ＞1.24 0.23
DEFINITY RT 6000 60 1X + 0.5* 1.1E+ 09 5.7E+08 8.5E+07 51.5 7.6 ＞1.24 0.26
DEFINITY RT 6000 60 1X + 0.5* 1.4E+ 09 6.7E+08 7.6E+07 47.4 5.4 ＞1.24 0.25
DEFINITY RT 6000 60 1X + 0.5* 1.2E+ 09 6.7E+08 9.6E+07 53.9 7.7 1.31 0.27
DEFINITY RT 6000 60 1X + 0.5* 1.2E+ 09 6.7E+08 9.5E+07 55.9 7.9 1.25 0.27
DEFINITY RT 6000 60 1X + 0.5* 1.3E+ 09 6.9E+08 9.0E+07 55.0 7.2 1.09 0.28
*(50/50 PG/G)

Claims (144)

  1. 一種組合物，其包含： 經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體，其中75%或更多的該等經脂質囊封之全氟化碳氣泡為直徑在約100奈米至小於或約1微米範圍內之奈米氣泡，且其中該等經脂質囊封之全氟化碳氣泡包含DPPC及PEG-DPPE，視情況其中該等奈米氣泡以約7.0×10 9至約2.5×10 10個奈米氣泡/毫升或約1×10 10至約2.5×10 10個奈米氣泡/毫升的濃度範圍存在。
  2. 如請求項1之組合物，其中80%或更多的該等經脂質囊封之全氟化碳氣泡為直徑在約100奈米至小於或約1微米範圍內之奈米氣泡。
  3. 如請求項1或2之組合物，其中該等經脂質囊封之全氟化碳氣泡包含莫耳%比率視情況為約10比約82比約8 (包括10:82:8)之DPPA、DPPC及PEG-DPPE，或其中脂質調配物包含莫耳%比率視情況為約10比約82比約8 (包括10:82:8)之DPPE、DPPC及PEG-DPPE。
  4. 如請求項1至3中任一項之組合物，其中PEG-DPPE為PEG5000-DPPE。
  5. 如請求項1至4中任一項之組合物，其中PEG-DPPE為MPEG5000-DPPE。
  6. 如請求項1至5中任一項之組合物，其中該等經脂質囊封之全氟化碳氣泡為經脂質囊封之全氟丙烷氣泡。
  7. 如請求項1至6中任一項之組合物，其中該經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體存在於包含DPPA、DPPC及PEG-DPPE、甘油、丙二醇及小於或等於5%水(v/v)的非水性脂質溶液中，或其中該經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體存在於包含DPPE、DPPC及PEG-DPPE、甘油、丙二醇及小於或等於5%水(v/v)的非水性脂質溶液中。
  8. 如請求項7之組合物，其中該等脂質以約3.75 mg/ml之組合濃度存在。
  9. 如請求項7之組合物，其中該等脂質以約2.5 mg/ml之組合濃度存在。
  10. 如請求項1至6中任一項之組合物，其中該經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體存在於包含甘油及丙二醇的水性脂質懸浮液中。
  11. 如請求項10之組合物，其中該脂質懸浮液具有約0.75 mg/ml之組合脂質濃度。
  12. 如請求項1至11中任一項之組合物，其中該經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體缺乏DPPA。
  13. 一種形成經脂質囊封之全氟化碳氣泡之方法，其包含： 在全氟化碳氣體存在下，以足以產生經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體之振盪速率及振盪時間來活化包含DPPC及PEG-DPPE、甘油及丙二醇之脂質調配物，其中75%或更多的該等氣泡為直徑在約100奈米至約1微米範圍內之奈米氣泡。
  14. 如請求項13之方法，其中80%或更多的該等經脂質囊封之全氟化碳氣泡為直徑在約100奈米至約1微米範圍內之奈米氣泡。
  15. 如請求項13或14之方法，其中該脂質調配物包含莫耳%比率視情況為約10比約82比約8 (包括10:82:8)之DPPA、DPPC及PEG-DPPE，或其中該脂質調配物包含莫耳%比率視情況為約10比約82比約8 (包括10:82:8)之DPPE、DPPC及PEG-DPPE。
  16. 如請求項13至15中任一項之方法，其中PEG-DPPE為PEG5000-DPPE。
  17. 如請求項13至15中任一項之方法，其中PEG-DPPE為MPEG5000-DPPE。
  18. 如請求項13至17中任一項之方法，其中該全氟化碳氣體為全氟丙烷氣體，且該等經脂質囊封之全氟化碳氣泡為經脂質囊封之全氟丙烷氣泡。
  19. 如請求項13至18中任一項之方法，其中該脂質調配物為包含DPPA、DPPC及PEG-DPPE、甘油、丙二醇及小於或等於5%水(v/v)之非水性脂質溶液，或其中該脂質調配物為包含DPPE、DPPC及PEG-DPPE、甘油、丙二醇及小於或等於5%水(v/v)之非水性脂質溶液。
  20. 如請求項19之方法，其中該脂質調配物具有約3.75 mg/ml之組合脂質濃度。
  21. 如請求項19或20之方法，其中以約6000 rpm之振盪速率將該脂質調配物活化持續約50秒至約90秒之振盪時間。
  22. 如請求項19或20之方法，其中以約6000 rpm之振盪速率將該脂質調配物活化持續約50秒、約60秒、約75秒或約90秒之振盪時間。
  23. 如請求項19之方法，其中該脂質調配物具有約2.5 mg/ml之組合脂質濃度。
  24. 如請求項19之方法，其中該脂質調配物係存在於內部體積為約3.8 ml且包含約0.35 ml脂質調配物及約3.45 ml氣體的Wheaton 2 mL玻璃小瓶中，或其中該脂質調配物係存在於內部體積為約3.8 ml且包含約0.52 ml脂質調配物及約3.28 ml氣體的Wheaton 2 mL玻璃小瓶中。
  25. 如請求項19之方法，其中該脂質調配物係存在於內部體積為約3.8 ml的Wheaton 2 mL玻璃小瓶中，其中約9%的該內部體積係被活化之前的脂質調配物佔據的脂質，或其中約14%的該內部體積被活化之前的脂質調配物佔據。
  26. 如請求項13至18中任一項之方法，其中該脂質調配物為包含DPPA、DPPC及PEG-DPPE、甘油及丙二醇之水性脂質懸浮液，或其中該脂質調配物為包含DPPE、DPPC及PEG-DPPE、甘油及丙二醇之水性脂質懸浮液。
  27. 如請求項26之方法，其中該脂質調配物具有約0.75 mg/ml之組合脂質濃度。
  28. 如請求項26或27之方法，其中在氣體的存在下，以約4530 rpm之振盪速率將該脂質調配物活化持續約90秒之振盪時間。
  29. 如請求項26或27之方法，其中在氣體的存在下，以約6000 rpm之振盪速率將該脂質調配物活化持續約20秒至約25秒之振盪時間。
  30. 如請求項26或27之方法，其中在氣體的存在下，以約6000 rpm之振盪速率將該脂質調配物活化持續約20秒或約25秒之振盪時間。
  31. 如請求項13至30中任一項之方法，其中該脂質調配物缺乏DPPA。
  32. 一種經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體，其係根據如請求項13至31中任一項之方法形成。
  33. 一種治療患有病狀之個體的方法，其包含： 向患有病狀之個體投與有效量的經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體，其中該群體中75%或更多的該等氣泡為直徑在約100奈米至約1微米範圍內之奈米氣泡，且其中該等經脂質囊封之全氟化碳氣泡包含DPPC及PEG-DPPE，及 向該個體的受該病狀影響之區域施加超音波能量。
  34. 一種改良個體中之組織灌注的方法，該方法包含使該個體暴露於治療性超音波，該改良包含 在暴露於該治療性超音波之前及/或期間向該個體投與經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體，其中該群體中75%或更多的該等氣泡係直徑在約100奈米至約1微米範圍內的奈米氣泡。
  35. 如請求項33之方法，其中該病狀為存在血栓/血液凝塊、血管阻塞、視網膜靜脈阻塞、腫瘤、勃起功能障礙、阿茲海默症(Alzheimer's disease)、帕金森氏病(Parkinson's disease)。
  36. 如請求項33之方法，其中該病狀為受益於破壞血腦障壁(BBB)之病狀，視情況其中在該氣泡群體之前、期間及/或之後及/或在暴露於該治療性超音波之前、期間及/或之後亦向該個體投與病狀特異性治療劑。
  37. 如請求項33至36中任一項之方法，其中該等經脂質囊封之全氟化碳奈米氣泡在施加該超音波能量之後經歷活體內穩定空化(cavitation)。
  38. 如請求項33至36中任一項之方法，其中視情況由所發射之寬頻射頻偵測及/或量測，該等經脂質囊封之全氟化碳奈米氣泡在施加該超音波能量之後經歷活體內慣性空化。
  39. 如請求項33至38中任一項之方法，其中80%或更多的該等經脂質囊封之全氟化碳氣泡為直徑在約100奈米至約1微米範圍內之奈米氣泡。
  40. 如請求項33至39中任一項之方法，其中該等經脂質囊封之全氟化碳氣泡包含莫耳%比率視情況為約10比約82比約8 (包括10:82:8)之DPPA、DPPC及PEG-DPPE，或其中該脂質調配物包含莫耳%比率視情況為約10比約82比約8 (包括10:82:8)之DPPE、DPPC及PEG-DPPE。
  41. 如請求項33至40中任一項之方法，其中PEG-DPPE為PEG5000-DPPE。
  42. 如請求項33至40中任一項之方法，其中PEG-DPPE為MPEG5000-DPPE。
  43. 如請求項33至42中任一項之方法，其中該等經脂質囊封之全氟化碳氣泡為經脂質囊封之全氟丙烷氣泡。
  44. 如請求項33至43中任一項之方法，其中該經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體係根據如技術方案AA1至AA18中任一項之方法形成。
  45. 如請求項33至43中任一項之方法，其中該經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體係如請求項1至12中任一項之組合物。
  46. 一種組合物，其包含： 經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體，其中該群體中15%或更多的微泡的直徑為約2微米至小於或約6微米，及 其中該等經脂質囊封之全氟化碳氣泡包含DPPC及PEG-DPPE，視情況其中直徑為約2微米至小於或約6微米之該等微泡係以約0.24×10 9至約2.44×10 9個氣泡/毫升之濃度範圍存在。
  47. 如請求項46之組合物，其中該群體中20%或更多的該等經脂質囊封之全氟化碳氣體微泡的直徑為約2微米至小於或約6微米。
  48. 如請求項46或47之組合物，其中該等經脂質囊封之全氟化碳氣泡包含莫耳%比率視情況為約10比約82比約8 (包括10:82:8)之DPPA、DPPC及PEG-DPPE，或其中該等經脂質囊封之全氟化碳氣泡包含莫耳%比率視情況為約10比約82比約8 (包括10:82:8)之DPPE、DPPC及PEG-DPPE。
  49. 如請求項46至48中任一項之組合物，其中PEG-DPPE為PEG5000-DPPE。
  50. 如請求項46至49中任一項之組合物，其中PEG-DPPE為MPEG5000-DPPE。
  51. 如請求項46至50中任一項之組合物，其中經脂質囊封之全氟化碳氣泡為經脂質囊封之全氟丙烷氣泡。
  52. 如請求項46至51中任一項之組合物，其中該經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體係存在於包含DPPA、DPPC及PEG-DPPE、甘油、丙二醇及小於或等於5%水(v/v)的非水性脂質溶液中，或其中該經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體係存在於包含DPPE、DPPC及PEG-DPPE、甘油、丙二醇及小於或等於5%水(v/v)的非水性脂質溶液中。
  53. 如請求項46至52中任一項之組合物，其中該等脂質係以約3.75 mg/ml之組合濃度存在。
  54. 如請求項46至52中任一項之組合物，其中該等脂質係以約2.5 mg/ml之組合濃度存在。
  55. 如請求項46至51中任一項之組合物，其中該經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體係存在於包含甘油及丙二醇的水性脂質懸浮液中。
  56. 如請求項55之組合物，其中該脂質懸浮液具有約0.75 mg/ml之組合脂質濃度。
  57. 如請求項46至56中任一項之組合物，其中該經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體展現在大於約1、視情況大於約1.2的範圍內，視情況在約1至約1.7的範圍內之2.25 MHz超音波頻率的聲學衰減。
  58. 如請求項46至57中任一項之組合物，其中該經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體缺乏DPPA。
  59. 一種形成經脂質囊封之全氟化碳氣泡之方法，其包含： 在全氟化碳氣體存在下，以足以產生經脂質囊封之全氟化碳氣體微泡群體的振盪速率及振盪時間來活化包含DPPC及PEG-DPPE、甘油及丙二醇之脂質調配物，其中15%或更多的該等微泡之直徑為約2微米至小於或約6微米。
  60. 如請求項59之方法，其中20%或更多的該等經脂質囊封之全氟化碳氣體微泡的直徑為約2微米至小於或約6微米。
  61. 如請求項59或60之方法，其中該脂質調配物包含莫耳%比率視情況為約10比約82比約8 (包括10:82:8)之DPPA、DPPC及PEG-DPPE，或其中該脂質調配物包含莫耳%比率視情況為約10比約82比約8 (包括10:82:8)之DPPE、DPPC及PEG-DPPE。
  62. 如請求項59至61中任一項之方法，其中PEG-DPPE為PEG5000-DPPE。
  63. 如請求項59至61中任一項之方法，其中PEG-DPPE為MPEG5000-DPPE。
  64. 如請求項59至63中任一項之方法，其中該全氟化碳氣體為全氟丙烷氣體，且該等經脂質囊封之全氟化碳氣泡為經脂質囊封之全氟丙烷氣泡。
  65. 如請求項59至64中任一項之方法，其中該脂質調配物為包含DPPA、DPPC及PEG-DPPE、甘油及丙二醇以及小於或等於5%水(v/v)之非水性脂質溶液，或其中該脂質調配物為包含DPPE、DPPC及PEG-DPPE、甘油及丙二醇以及小於或等於5%水(v/v)之非水性脂質溶液。
  66. 如請求項65之方法，其中該脂質調配物具有約3.75 mg/ml之脂質濃度。
  67. 如請求項65或66之方法，其中以約6000 rpm之振盪速率將該脂質調配物活化持續約75秒至約90秒之振盪時間。
  68. 如請求項65或66之方法，其中以約6000 rpm之振盪速率將該脂質調配物活化持續約75秒或約90秒之振盪時間。
  69. 如請求項65之方法，其中該脂質調配物具有約2.5 mg/ml之脂質濃度。
  70. 如請求項65之方法，其中該脂質調配物係存在於內部體積為約3.8 ml的Wheaton 2 mL玻璃小瓶中，且其中該小瓶含有約0.35 ml脂質調配物及約3.45 ml氣體，或其中該小瓶含有約0.52 ml脂質調配物及約3.28 ml氣體。
  71. 如請求項65之方法，其中該脂質調配物係存在於內部體積為約3.8 ml的Wheaton 2 mL玻璃小瓶中，其中該小瓶約9%的該內部體積被活化之前的脂質調配物佔據，或其中該小瓶約14%的該內部體積被活化之前的脂質調配物佔據。
  72. 如請求項65之方法，其中在活化之前，將呈相同體積比例的丙二醇及甘油之溶液與該脂質調配物組合。
  73. 如請求項69至72中任一項之方法，其中以約6000 rpm之振盪速率將該脂質調配物活化持續約60秒之振盪時間。
  74. 如請求項59至64中任一項之方法，其中該脂質調配物為包含DPPA、DPPC、PEG-DPPE、甘油及丙二醇之水性脂質懸浮液，或其中該脂質調配物為包含DPPE、DPPC、PEG-DPPE、甘油及丙二醇之水性脂質懸浮液。
  75. 如請求項74之方法，其中該脂質調配物具有約0.75 mg/ml之脂質濃度。
  76. 如請求項74或75之方法，其中以約6000 rpm之振盪速率將該脂質調配物活化持續約30秒之振盪時間。
  77. 如請求項59至76中任一項之方法，其中該經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體缺乏DPPA。
  78. 一種經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體，其係根據如請求項59至77中任一項之方法形成。
  79. 一種治療患有病狀之個體的方法，其包含： 向患有病狀之個體投與有效量的經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體，其中該群體中15%或更多的微泡的直徑為約2微米至小於或約6微米，且其中該等經脂質囊封之全氟化碳氣泡包含DPPC及PEG-DPPE，及 向該個體的受該病狀影響之區域施加視情況處於約1至約10 MHz之頻率下的超音波能量。
  80. 一種改良治療性或診斷性超音波之方法，該改良包含 在暴露於視情況處於約1至約10 MHz之頻率下的超音波之前或期間向該個體投與經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體，其中該群體中15%或更多微泡的直徑在約2微米至小於或約6微米範圍內。
  81. 如請求項79之方法，其中該病狀為心動脈粥樣硬化、心肌梗塞、血管阻塞、中風、周邊動脈疾病。
  82. 如請求項79之方法，其中視情況藉由諧波頻率發射所偵測及/或量測，在施加該超音波能量之後，該等經脂質囊封之全氟化碳氣泡經歷活體內穩定空化。
  83. 如請求項79之方法，其中視情況藉由寬頻發射偵測及/或量測，在施加該超音波能量之後，該等經脂質囊封之全氟化碳氣泡經歷活體內慣性空化。
  84. 如請求項79至83中任一項之方法，其中20%或更多的該等經脂質囊封之全氟化碳氣體微泡的直徑為約2微米至小於或約6微米。
  85. 如請求項79至84中任一項之方法，其中該等經脂質囊封之全氟化碳氣泡包含莫耳%比率視情況為約10比約82比約8 (包括10:82:8)之DPPA、DPPC及PEG-DPPE，或其中該脂質調配物包含莫耳%比率視情況為約10比約82比約8 (包括10:82:8)之DPPE、DPPC及PEG-DPPE。
  86. 如請求項79至85中任一項之方法，其中PEG-DPPE為PEG5000-DPPE。
  87. 如請求項79至85中任一項之方法，其中PEG-DPPE為MPEG5000-DPPE。
  88. 如請求項79至87中任一項之方法，其中該等經脂質囊封之全氟化碳氣泡為經脂質囊封之全氟丙烷氣泡。
  89. 如請求項79至88中任一項之方法，其中該經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體係根據如技術方案BB1至BB19中任一項之方法形成。
  90. 如請求項79至89中任一項之方法，其中該經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體在2.25 MHz超音波頻率下具有大於約1.0之聲學衰減。
  91. 如請求項79至89中任一項之方法，其中該經脂質囊封之全氟化碳氣體微球群體在2.25 MHz超音波頻率下具有約1.0至約1.5、或約1.0至約2.0之聲學衰減。
  92. 如請求項79至90中任一項之方法，其中該經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體係如請求項46至58中任一項之組合物。
  93. 一種組合物，其包含： 經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體，其中該群體中4%或更多的微泡的直徑為約6微米至約10微米，及 其中該等經脂質囊封之全氟化碳氣泡包含DPPC及PEG-DPPE，其中直徑在約6微米至約10微米範圍內之該等微泡係以每毫升約0.1×10 8至約0.32×10 8個此類氣泡之濃度範圍存在。
  94. 如請求項93之組合物，其中該群體中10%或更多的該等經脂質囊封之全氟化碳氣體微泡的直徑為約6微米至約10微米。
  95. 如請求項93或94之組合物，其中該等經脂質囊封之全氟化碳氣泡包含莫耳%比率視情況為約10比約82比約8 (包括10:82:8)之DPPA、DPPC及PEG-DPPE，或其中該等經脂質囊封之全氟化碳氣泡包含莫耳%比率視情況為約10比約82比約8 (包括10:82:8)之DPPE、DPPC及PEG-DPPE。
  96. 如請求項93至95中任一項之組合物，其中PEG-DPPE為PEG5000-DPPE。
  97. 如請求項93至96中任一項之組合物，其中PEG-DPPE為MPEG5000-DPPE。
  98. 如請求項93至97中任一項之組合物，其中經脂質囊封之全氟化碳氣泡為經脂質囊封之全氟丙烷氣泡。
  99. 如請求項93至98中任一項之組合物，其中該經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體係存在於包含DPPA、DPPC及PEG-DPPE、甘油、丙二醇及小於或等於5%水(v/v)的非水性脂質溶液中，或其中該經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體係存在於包含DPPE、DPPC及PEG-DPPE、甘油、丙二醇及小於或等於5%水(v/v)的非水性脂質溶液中。
  100. 如請求項93至99中任一項之組合物，其中該等脂質係以約3.75 mg/ml之組合濃度存在。
  101. 如請求項93至99中任一項之組合物，其中該等脂質係以約2.5 mg/ml之組合濃度存在。
  102. 如請求項93至98中任一項之組合物，其中該經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體係存在於包含甘油及丙二醇的水性脂質懸浮液中。
  103. 如請求項102之組合物，其中該等脂質係以約0.75 mg/ml之組合脂質濃度存在。
  104. 如請求項93至103中任一項之組合物，其中該經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體展現在大於約1、視情況大於約1.2的範圍內，視情況在約1至約1.7的範圍內之2.25 MHz超音波頻率的聲學衰減。
  105. 如請求項93至104中任一項之組合物，其中該經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體缺乏DPPA。
  106. 一種形成經脂質囊封之全氟化碳氣泡之方法，其包含： 在全氟化碳氣體存在下，以足以產生經脂質囊封之全氟化碳氣體微泡群體的振盪速率及振盪時間來活化包含DPPC及PEG-DPPE、甘油及丙二醇之脂質調配物，其中4%或更多的該等微泡之直徑為約6微米至約10微米。
  107. 如請求項106之方法，其中10%或更多的該等經脂質囊封之全氟化碳氣體微泡的直徑為約6微米至約10微米。
  108. 如請求項106或107之方法，其中該脂質調配物包含莫耳%比率視情況為約10比約82比約8 (包括10:82:8)之DPPA、DPPC及PEG-DPPE，或其中該脂質調配物包含莫耳%比率視情況為約10比約82比約8 (包括10:82:8)之DPPE、DPPC及PEG-DPPE。
  109. 如請求項106至108中任一項之方法，其中PEG-DPPE為PEG5000-DPPE。
  110. 如請求項106至108中任一項之方法，其中PEG-DPPE為MPEG5000-DPPE。
  111. 如請求項106至110中任一項之方法，其中該全氟化碳氣體為全氟丙烷氣體，且該等經脂質囊封之全氟化碳氣泡為經脂質囊封之全氟丙烷氣泡。
  112. 如請求項106至111中任一項之方法，其中該脂質調配物為包含DPPA、DPPC及PEG-DPPE、甘油及丙二醇及小於或等於5%水(v/v)之非水性脂質溶液，或其中該脂質調配物為包含DPPA、DPPC及PEG-DPPE、甘油及丙二醇以及小於或等於5%水(v/v)之非水性脂質溶液。
  113. 如請求項112之方法，其中該脂質調配物具有約3.75 mg/ml之脂質濃度。
  114. 如請求項112之方法，其中該脂質調配物係存在於內部體積為約3.8 ml的Wheaton 2 mL玻璃小瓶中，且其中該小瓶含有約0.35 ml脂質調配物及約3.45 ml氣體，或其中該小瓶含有約0.52 ml脂質調配物及約3.28 ml氣體。
  115. 如請求項112之方法，其中該脂質調配物係存在於內部體積為約3.8 ml的Wheaton 2 mL玻璃小瓶中，其中該小瓶約9%的該內部體積被活化之前的脂質調配物佔據，或其中該小瓶約14%的該內部體積被活化之前的脂質調配物佔據。
  116. 如請求項112之方法，其中在活化之前，將呈相同體積比例的丙二醇及甘油之溶液與該脂質調配物組合。
  117. 如請求項112之方法，其中該脂質調配物具有約2.5 mg/ml之脂質濃度。
  118. 如請求項114至117中任一項之方法，其中以約6000 rpm之振盪速率將該脂質調配物活化持續約60秒之振盪時間。
  119. 如請求項106至111中任一項之方法，其中該脂質調配物為包含DPPA、DPPC、PEG-DPPE、甘油及丙二醇之水性脂質懸浮液，或其中該脂質調配物為包含DPPE、DPPC、PEG-DPPE、甘油及丙二醇之水性脂質懸浮液。
  120. 如請求項119之方法，其中該脂質調配物具有約0.75 mg/ml之脂質濃度。
  121. 如請求項106至120中任一項之方法，其中該經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體缺乏DPPA。
  122. 一種經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體，其係根據如請求項106至121中任一項之方法形成。
  123. 一種治療患有病狀之個體的方法，其包含： 向患有病狀之個體投與有效量的經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體，其中該群體中4%或更多的微泡的直徑為約6微米至約10微米，且其中該等經脂質囊封之全氟化碳氣泡包含DPPC及PEG-DPPE，及 向該個體的受該病狀影響之區域施加處於約1至約10 MHz之頻率下的超音波能量。
  124. 一種改良治療性或診斷性超音波之方法，該改良包含 在暴露於處於約1至約10 MHz之頻率下的超音波之前或期間向該個體投與經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體，其中該群體中4%或更多微泡的直徑在約6微米至約10微米範圍內。
  125. 如請求項124之方法，其中該病狀為心動脈粥樣硬化、心肌梗塞、血管阻塞、中風、周邊動脈疾病。
  126. 如請求項124之方法，其中該等經脂質囊封之全氟化碳氣泡在施加該超音波能量之後經歷活體內穩定空化。
  127. 如請求項124之方法，其中該等經脂質囊封之全氟化碳氣泡在施加該超音波能量之後經歷活體內慣性空化。
  128. 如請求項124至127中任一項之方法，其中10%或更多的該等經脂質囊封之全氟化碳氣體微泡的直徑為約6微米至約10微米。
  129. 如請求項124至128中任一項之方法，其中該等經脂質囊封之全氟化碳氣泡包含莫耳%比率視情況為約10比約82比約8 (包括10:82:8)之DPPA、DPPC及PEG-DPPE，或其中該脂質調配物包含莫耳%比率視情況為約10比約82比約8 (包括10:82:8)之DPPE、DPPC及PEG-DPPE。
  130. 如請求項124至129中任一項之方法，其中PEG-DPPE為PEG5000-DPPE。
  131. 如請求項124至129中任一項之方法，其中PEG-DPPE為MPEG5000-DPPE。
  132. 如請求項124至131中任一項之方法，其中該等經脂質囊封之全氟化碳氣泡為經脂質囊封之全氟丙烷氣泡。
  133. 如請求項124至132中任一項之方法，其中該經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體係根據如請求項106至121中任一項之方法形成。
  134. 如請求項124至133中任一項之方法，其中該經脂質囊封之全氟化碳氣泡群體具有大於約1.0之2.25 MHz超音波頻率的聲學衰減。
  135. 如請求項124至133中任一項之方法，其中該經脂質囊封之全氟化碳氣體微球群體具有約1.0至約1.5或約1.0至約2.0之2.25 MHz超音波頻率的聲學衰減。
  136. 一種對個體進行超音波成像之方法，其包含： 向個體投與如請求項46至58、78、93至105或122中任一項或藉由如請求項59至77或106至121中任一項之方法製得的經脂質囊封之全氟丙烷氣泡群體， 施加處於約1至約10 MHz範圍中的頻率下的超音波能量， 及獲得該個體或該個體之區域之超音波影像。
  137. 如請求項136之方法，其中該超音波能量的頻率為約1.25 MHz。
  138. 一種形成經脂質囊封之全氟丙烷氣泡之方法，其包含： 在氣體存在下，以約6000 rpm之振盪速率將包含小於或等於5%水(v/v)、DPPC、PEG-DPPE、甘油、丙二醇及DPPA或DPPE之非水性脂質調配物活化持續約30至約90秒，視情況持續約50秒、約60秒、約75秒或約90秒，由此形成經脂質囊封之全氟丙烷氣體微球群體。
  139. 如請求項138之方法，其中該脂質調配物及氣體係存在於小瓶，視情況2 mL小瓶中，且該脂質調配物佔該小瓶之內部體積的約9%或約14%。
  140. 一種形成經脂質囊封之全氟丙烷氣泡之方法，其包含： 在氣體存在下，以約4950 rpm之振盪速率將包含小於或等於5%水(v/v)、DPPC、PEG-DPPE、甘油、丙二醇及DPPA或DPPE之非水性脂質調配物活化約125秒，由此形成經脂質囊封之全氟丙烷氣體微球群體。
  141. 如請求項140之方法，其中該脂質調配物及氣體係存在於小瓶，視情況2 mL小瓶中，且該脂質調配物佔該小瓶之內部體積的約9%或約14%。
  142. 一種形成經脂質囊封之全氟丙烷氣泡之方法，其包含： 以約6000 rpm之振盪速率將包含DPPC及PEG-DPPE、及甘油及丙二醇、以及DPPA或DPPE之水性脂質調配物活化持續約5至約90秒，視情況持續約5秒、約10秒、約20秒、約25秒、約30秒、約40秒、約45秒、約50秒、約55秒、約60秒、約70秒、約80秒或約90秒，由此形成經脂質囊封之全氟丙烷氣體微球群體。
  143. 一種形成經脂質囊封之全氟丙烷氣泡之方法，其包含： 以約4530 rpm之振盪速率將包含DPPC及PEG-DPPE、甘油及丙二醇以及DPPA或DPPE之水性脂質調配物活化約90秒，由此形成經脂質囊封之全氟丙烷氣體微球群體。
  144. 一種形成經脂質囊封之全氟丙烷氣泡之方法，其包含： 以約4530 rpm之振盪速率將包含DPPC及PEG-DPPE、甘油及丙二醇以及DPPA或DPPE之水性脂質調配物活化約10至約20秒，由此形成經脂質囊封之全氟丙烷氣體微球群體。
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