TW202334240A

TW202334240A - 治療進行性慢性間質性肺部疾病之方法

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Publication number: TW202334240A
Application number: TW111143855A
Authority: TW
Inventors: 提摩西史考特強生; 伊恩特羅洛普詹姆士; 帕特里夏Ｊ席姆; 湯瑪士亨利薩切爾
Original assignee: 比利時商Ｕｃｂ生物製藥公司
Priority date: 2021-11-18
Filing date: 2022-11-17
Publication date: 2023-09-01
Also published as: IL312800A; AR127712A1; MX2024006093A; WO2023089042A1; CN118354792A; AU2022393224A1; EP4433163A1; KR20240110631A; CA3238305A1; CO2024006326A2

Abstract

本發明係關於一種阻斷轉醯胺酶之酶活性的抗轉麩醯胺酸酶2型抗體，其用於治療進行性慢性間質性肺部疾病，諸如特發性肺纖維化(IPF)。

Description

治療進行性慢性間質性肺部疾病之方法

組織轉麩醯胺酸酶或轉麩醯胺酸酶2型(TG2)係經由ε(γ-麩胺醯基)離胺酸二肽鍵在蛋白質之間形成交聯的酶。TG2之表現升高導致與包括各種類型之組織疤痕及纖維化在內之若干病理學相關的異常蛋白質交聯、若干腦部病症中神經原纖維纏結之形成及一些癌症對化學療法之抗性。已揭示可治療TG2介導之病症的各種TG2抑制劑，諸如小分子、緘默化RNA或抗體(例如Siegel等人, 2007；Wang等人, 2020；WO2006100679；WO2012146901；或WO2013175229)。

進行性慢性間質性肺部疾病包括特發性肺纖維化(IPF)，IPF係以肺間質中疤痕組織沉積引起肺泡膜變厚，肺功能之進行性下降且最終導致死亡為特徵。診斷患有IPF之後的總體預後典型地較差，因為該疾病會穩步進展，最終導致死亡。

TG2及LOXL2之水平增加與進行性慢性間質性肺部疾病，諸如特發性肺纖維化相關(Olsen等人, 2011；Olsen等人, 2020；Philp等人, 2018)。IPF衍生性纖維母細胞中TG2之過度表現或過度活性引起細胞外基質(ECM)中蛋白質之間ε(γ-麩胺醯基)離胺酸交聯的增加。在博萊黴素(bleomycin)治療之動物中，在纖維化誘導期間經由使用小抑制劑或使用基因剔除小鼠操作TG2及LOXL2將減少肺部發炎及纖維化(參見Olsen等人, 2011；Olsen等人, 2014；Raghu 2017；Vaidya等人, 2017；Philp等人, 2018)。舉例而言，纖維母細胞黏著及增殖分析顯示，TG2與胱胺(一種泛TG抑制劑)共培育將消除與TG2相關聯之黏著增加(參見Philp 2018)。儘管TG2交聯活性在纖維化重塑中之主要作用看來係藉由在細胞外基質(ECM)蛋白質中蛋白酶抗性分子內交聯之加入及TGFβ1之局部活化來減慢ECM之轉化，但亦有一些新出現的證據表明，在肺細胞中，先前認為的TG2在細胞黏著中之非酶作用可藉由阻斷轉醯胺活性，例如藉由在活體外使用胱胺減少肺部纖維母細胞黏著來調節。

有兩種經批准之療法，即吡非尼酮(pirfenidone)(其顯示部分地經由調節包括膠原蛋白合成在內之TGFβ1相關路徑來起作用)及尼達尼布(nintedanib)(靶向多種酪胺酸激酶)，可有效減慢一些患者之疾病的進展，且迫切地需要另外的治療選擇(Margaritopoulos等人, 2016)。然而，仍需要進一步鑑別用於治療及預防進行性慢性間質性肺部疾病，諸如IPF，以及用於治療患有與COVID感染相關之肺纖維化的個體或預防罹患COVID感染之患者發展肺纖維化的有效療法。

本發明之目的係提供一種特異性抗轉麩醯胺酸酶2(抗TG2)抗體，其用於治療進行性慢性間質性肺部疾病，諸如特發性肺纖維化(IPF)，或用於預防進行性慢性間質性肺部疾病，諸如特發性肺纖維化(IPF)之發展。或者，本發明提供一種特異性抗轉麩醯胺酸酶2(抗TG2)抗體，其用於治療患有與COVID感染相關之肺纖維化的個體或預防罹患COVID感染之患者發展肺纖維化。

在第二態樣中，本發明提供一種治療進行性慢性間質性肺部疾病或預防進行性慢性間質性肺部疾病之發展的方法，其包含投予治療有效量之抗TG2抗體。或者，本發明提供一種治療患有與COVID感染相關之肺纖維化的個體或預防罹患COVID感染之患者發展肺纖維化的方法，其包含投予治療有效量之抗TG2抗體。

在第三態樣中，本發明係關於抗TG2抗體之用途，該抗體用於製造供治療進行性慢性間質性肺部疾病或預防進行性慢性間質性肺部疾病，諸如特發性肺纖維化(IPF)之發展用的藥劑。或者，本發明係關於抗TG2抗體的用途，該抗體用於製造供治療患有與COVID感染相關之肺纖維化的個體或預防罹患COVID感染之患者發展肺纖維化用的藥劑。定義

全部文獻意欲作為整體的揭示內容，且應理解，即使在此文獻的同一個句子或段落或部分中沒有一起找到特徵組合，仍然涵蓋本文所描述之特徵的所有組合。對於用「一個」或「一種」描述或主張的本發明之各態樣，應理解，除非上下文明確要求更嚴格之含義，否則此等術語表示「一或多個(種)」。除非上下文另外明確要求，否則術語「或」應理解為涵蓋替代項目或組合的項目。若將本發明之態樣描述為「包含(comprising)」一特徵，則亦涵蓋「由該特徵組成」或「基本上由該特徵組成」的具體例。

-術語「組織轉麩醯胺酸酶」、「轉麩醯胺酸酶2型」或「TG2」係指經由ε(γ-麩胺醯基)離胺酸二肽鍵在蛋白質之間形成交聯的酶。TG2係指典型地具有如UniProt條目P21980中所示之胺基酸序列(SEQ ID NO:41)的蛋白質，亦即人類TG2。術語「TG2」亦可指這樣一種蛋白質，該蛋白質係(a)相對於SEQ ID NO: 41之胺基酸序列具有一或多個胺基酸取代、修飾、缺失或插入且保持TG2之活性的衍生物，或(b)其變異體，此類變異體典型地與SEQ ID NO: 41保持至少約75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%或95%一致性(或甚至與SEQ ID NO: 41保持約96%、97%、98%或99%一致性)。蛋白質TG2係由基因Tgm2編碼。

-如本文所使用，術語「抗TG2抗體」意欲為結合TG2且阻斷其轉醯胺酶活性以防止交聯的抗體分子。該等抗體之實例描述於WO2013175229中。不受任何限制，可根據本發明使用之抗TG2抗體包含例如SEQ ID NO: 24中所定義之輕鏈可變區及如SEQ ID NO: 37中所定義之重鏈可變區。

-如本文所使用，術語「抗體」包括但不限於單株抗體、多株抗體及藉由此項技術中已知之重組技術產生的重組抗體。「抗體」包括任何物種之抗體；諸如任何同型之人類抗體，包括IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgG4、IgE、IgD及製造為具有此基本結構之二聚體形式的抗體，包括IgGA1、IgGA2，或五聚體諸如IgM，及其經修飾之變異體；非人類靈長類動物抗體，例如來自黑猩猩、狒狒、恆河猴或食蟹獼猴之抗體；嚙齒動物抗體，例如來自小鼠或大鼠之抗體；兔、山羊或馬抗體；駱駝抗體(例如來自駱駝或羊駝之抗體，諸如Nanobodies ^TM)及其衍生物；鳥類物種之抗體，諸如雞抗體；或魚類物種之抗體，諸如鯊魚抗體。術語「抗體」亦指「嵌合」抗體，其中至少一個重鏈及/或輕鏈抗體序列之第一部分係來自第一物種且該重鏈及/或輕鏈抗體序列之第二部分係來自第二物種。本文中感興趣之嵌合抗體包括「靈長類化」抗體，其包含來源於非人類靈長類動物(例如舊大陸猴(Old World Monkey)，諸如狒狒、恆河猴或食蟹獼猴)之可變域抗原結合序列及人類恆定區序列。「人類化」抗體係含有來源於非人類抗體之序列的嵌合抗體。在很大程度上，人類化抗體係人類抗體(接受者抗體)，其中來自接受者之高變區的殘基經來自具有所希望之特異性、親和力及活性的諸如小鼠、大鼠、兔、雞或非人類靈長類動物之類非人類物種(供體抗體)之高變區[或互補決定區(CDR)]的殘基置換。在大部分情況下，人類(接受者)抗體中在CDR外部，亦即在構架區(FR)中的殘基另外被相應非人類殘基置換。

此外，人類化抗體可包含在接受者抗體或供體抗體中未發現之殘基。此等修飾用於進一步優化抗體特性。人類化降低非人類抗體在人體中之免疫原性，由此促進抗體在人類疾病治療中的應用。人類化抗體及若干產生人類化抗體之不同技術係此項技術中熟知的。術語「抗體」亦指人類抗體，其可作為人類化之替代選擇而產生。舉例而言，可產生在免疫接種後能夠在無內源性鼠類抗體產生之情況下產生完全人類抗體譜系的轉殖基因動物(例如小鼠)。其他用於在活體外獲得人類抗體/抗體片段的方法係基於呈現技術，諸如噬菌體呈現或核糖體呈現技術，其中使用至少部分地以人工方式或自供體之免疫球蛋白可變(V)域基因譜系產生的重組DNA庫。用於產生人類抗體的噬菌體及核糖體呈現技術係此項技術中熟知的。人類抗體亦可由經分離之人類B細胞產生，該等人類B細胞用感興趣抗原離體免疫接種且隨後融合而產生融合瘤，接著可篩選此等融合瘤以產生最佳人類抗體。術語「抗體」係指醣基化抗體及非醣基化抗體兩者。另外，如本文所使用，術語「抗體」不僅係指全長抗體，而且亦指抗體片段，更特定言之，指其抗原結合片段。抗體之片段包含至少一個如此項技術中所知的重鏈或輕鏈免疫球蛋白域且結合至一或多個抗原。根據本發明之抗體片段的實例包括Fab、經修飾之Fab、Fab'、經修飾之Fab'、F(ab')2、Fv、Fab-Fv、Fab-dsFv、Fab-Fv-Fv、scFv及雙scFv片段。該片段亦可為雙功能抗體、三鏈抗體(tribody)、三功能抗體、四功能抗體、微型抗體、單域抗體(dAb，諸如sdAb)、VL、VH、VHH或駱駝抗體(例如來自駱駝或羊駝之抗體，諸如Nanobody ^TM)及VNAR片段。根據本發明之抗原結合片段亦可包含連接至一個或兩個scFv或dsscFv之Fab，各scFv或dsscFv結合相同或不同的目標(例如一個scFv或dsscFv結合治療目標且一個scFv或dsscFv藉由結合例如白蛋白來增加半衰期)。此類抗體片段之實例係FabdsscFv(又稱為BYbe®)或Fab-(dsscFv)2(又稱為TrYbe®，參見例如WO2015/197772)。上文所定義之抗體分子，包括其抗原結合片段在內，皆為此項技術中已知的。

-術語「抗原決定基」係指抗原中被抗體所結合的區域。抗原決定基可定義為結構性或功能性的。功能性抗原決定基一般為結構性抗原決定基之子集且具有直接促成相互作用之親和力的殘基。抗原決定基亦可為構形抗原決定基，亦即，由非線性胺基酸構成。在某些具體例中，抗原決定基可包括決定子，其為分子之化學活性表面基團，諸如胺基酸、糖側鏈、磷醯基或磺醯基；且在某些具體例中，可具有特定三維結構特徵及/或比電荷特徵。

-術語「治療(treating)」疾病病況或疾病病況之「治療(treatment)」包括：(i)抑制疾病病況，亦即停滯疾病病況或其臨床症狀之發展；或(ii)減輕疾病病況，亦即引起疾病病況或其臨床症狀之暫時性或持久性消退。

-術語「預防(preventing)」疾病病況或疾病病況之「預防(prevention)」包括使疾病病況之臨床症狀在可能暴露於或易患該疾病病況但尚未經歷或呈現該疾病病況之症狀的個體體內不發展。

本發明係基於發明人發現總TG2 mRNA及總TG2蛋白質在IPF患者之肺組織中增加。TG2與膠原蛋白水平增加相關，膠原蛋白水平與肺功能降低相關。亦發現，缺乏TG2之小鼠(稱為基因剔除或KO小鼠)被保護而免於在用博萊黴素(引起肺纖維化且作為廣泛使用之肺纖維化動物模型的藥物)誘發之後間質性肺纖維化之發展及隨後肺功能之損失。接著，發明人能夠意外地展示，不僅抗TG2抗體可在活體外分析中減少人類初代IPF細胞之ECM沉積，而且抗TG2抗體(抑制TG2之細胞外蛋白質交聯活性)當預防性給予時明顯減少活體內肺纖維化(在兔肺矽粉沉著病模型中)，且當在纖維化起始之後28天開始給予時停滯纖維化之進一步進展。另外，發明人意外地表示，TG2在來自死於COVID-19感染(由SARS-Cov2病毒引起)之患者之解剖肺樣本中上調，且有大量基質沉積之跡象。

本發明之主要目的係一種用於治療進行性慢性間質性肺部疾病或預防進行性慢性間質性肺部疾病之發展的抗轉麩醯胺酸酶2(抗TG2)抗體。舉例而言，根據本發明使用之抗TG2抗體可包含以下序列： (i) KASQDINSYLT(LCDR1；SEQ ID NO. 1)；LVNRLVD(LCDR2；SEQ ID NO. 2)；LQYDDFPYT(LCDR3；SEQ ID NO. 3)；THAMS(HCDR1；SEQ ID NO. 4)；TISSGGRSTYYPDSVKG(HCDR2；SEQ ID NO. 5)；及LISTY(HCDR3；SEQ ID NO. 6)；或 (ii) KASQDINSYLT(LCDR1；SEQ ID NO. 1)；LTNRLMD(LCDR2；SEQ ID NO. 7)；LQYVDFPYT(LCDR3；SEQ ID NO. 8)；SSAMS(HCDR1；SEQ ID NO. 9)；TISSGGRSTYYPDSVKG(HCDR2；SEQ ID NO. 5)；及LISPY(HCDR3；SEQ ID NO. 10)； (iii) KASQDINSYLT(LCDR1；SEQ ID NO. 1)；RTNRLFD(LCDR2；SEQ ID NO. 11)；LQYDDFPYT(LCDR3；SEQ ID NO. 3)；SSAMS(HCDR1)；TISVGGGKTYYPDSVKG(HCDR2；SEQ ID NO. 9)；及LISLY(HCDR3；SEQ ID NO. 12)，或 (iv)與根據(i)至(iii)中之任一者的抗體競爭。

本發明亦提供一種治療進行性慢性間質性肺部疾病或預防進行性慢性間質性肺部疾病之發展的方法，其包含投予治療有效量之抗轉麩醯胺酸酶2(抗TG2)抗體。舉例而言，在此類方法中可投予之抗TG2可包含以下序列： (i) KASQDINSYLT(LCDR1；SEQ ID NO. 1)；LVNRLVD(LCDR2；SEQ ID NO. 2)；LQYDDFPYT(LCDR3；SEQ ID NO. 3)；THAMS(HCDR1；SEQ ID NO. 4)；TISSGGRSTYYPDSVKG(HCDR2；SEQ ID NO. 5)；及LISTY(HCDR3；SEQ ID NO. 6)；或 (ii) KASQDINSYLT(LCDR1；SEQ ID NO. 1)；LTNRLMD(LCDR2；SEQ ID NO. 7)；LQYVDFPYT(LCDR3；SEQ ID NO. 8)；SSAMS(HCDR1；SEQ ID NO. 9)；TISSGGRSTYYPDSVKG(HCDR2；SEQ ID NO. 5)；及LISPY(HCDR3；SEQ ID NO. 10)； (iii) KASQDINSYLT(LCDR1；SEQ ID NO. 1)；RTNRLFD(LCDR2；SEQ ID NO. 11)；LQYDDFPYT(LCDR3；SEQ ID NO. 3)；SSAMS(HCDR1)；TISVGGGKTYYPDSVKG(HCDR2；SEQ ID NO. 9)；及LISLY(HCDR3；SEQ ID NO. 12)，或 (iv)與根據(i)至(iii)中之任一者的抗體競爭。

亦描述抗轉麩醯胺酸酶2(抗TG2)抗體的用途，該抗體用於製造供治療進行性慢性間質性肺部疾病或預防進行性慢性間質性肺部疾病之發展用的藥劑。舉例而言，根據本發明使用之抗TG2可包含以下序列： (i) KASQDINSYLT(LCDR1；SEQ ID NO. 1)；LVNRLVD(LCDR2；SEQ ID NO. 2)；LQYDDFPYT(LCDR3；SEQ ID NO. 3)；THAMS(HCDR1；SEQ ID NO. 4)；TISSGGRSTYYPDSVKG(HCDR2；SEQ ID NO. 5)；及LISTY(HCDR3；SEQ ID NO. 6)；或 (ii) KASQDINSYLT(LCDR1；SEQ ID NO. 1)；LTNRLMD(LCDR2；SEQ ID NO. 7)；LQYVDFPYT(LCDR3；SEQ ID NO. 8)；SSAMS(HCDR1；SEQ ID NO. 9)；TISSGGRSTYYPDSVKG(HCDR2；SEQ ID NO. 5)；及LISPY(HCDR3；SEQ ID NO. 10)； (iii) KASQDINSYLT(LCDR1；SEQ ID NO. 1)；RTNRLFD(LCDR2；SEQ ID NO. 11)；LQYDDFPYT(LCDR3；SEQ ID NO. 3)；SSAMS(HCDR1)；TISVGGGKTYYPDSVKG(HCDR2；SEQ ID NO. 9)；及LISLY(HCDR3；SEQ ID NO. 12)或 (iv)與根據(i)至(iii)中之任一者的抗體競爭。

本發明之另一目的係用於治療患有與COVID感染相關之肺纖維化的個體或預防罹患COVID感染之患者發展肺纖維化的抗轉麩醯胺酸酶2(抗TG2)抗體。舉例而言，根據本發明使用之抗TG2抗體可包含以下序列： (i) KASQDINSYLT(LCDR1；SEQ ID NO. 1)；LVNRLVD(LCDR2；SEQ ID NO. 2)；LQYDDFPYT(LCDR3；SEQ ID NO. 3)；THAMS(HCDR1；SEQ ID NO. 4)；TISSGGRSTYYPDSVKG(HCDR2；SEQ ID NO. 5)；及LISTY(HCDR3；SEQ ID NO. 6)；或 (ii) KASQDINSYLT(LCDR1；SEQ ID NO. 1)；LTNRLMD(LCDR2；SEQ ID NO. 7)；LQYVDFPYT(LCDR3；SEQ ID NO. 8)；SSAMS(HCDR1；SEQ ID NO. 9)；TISSGGRSTYYPDSVKG(HCDR2；SEQ ID NO. 5)；及LISPY(HCDR3；SEQ ID NO. 10)； (iii) KASQDINSYLT(LCDR1；SEQ ID NO. 1)；RTNRLFD(LCDR2；SEQ ID NO. 11)；LQYDDFPYT(LCDR3；SEQ ID NO. 3)；SSAMS(HCDR1)；TISVGGGKTYYPDSVKG(HCDR2；SEQ ID NO. 9)；及LISLY(HCDR3；SEQ ID NO. 12)，或 (iv)與根據(i)至(iii)中之任一者的抗體競爭。

本發明亦提供一種治療患有與COVID感染相關之肺纖維化之患者或預防罹患COVID感染之患者發展肺纖維化的方法，其包含投予治療有效量之抗轉麩醯胺酸酶2(抗TG2)抗體的步驟。舉例而言，在此類方法中可投予之抗TG2可包含以下序列： (i) KASQDINSYLT(LCDR1；SEQ ID NO. 1)；LVNRLVD(LCDR2；SEQ ID NO. 2)；LQYDDFPYT(LCDR3；SEQ ID NO. 3)；THAMS(HCDR1；SEQ ID NO. 4)；TISSGGRSTYYPDSVKG(HCDR2；SEQ ID NO. 5)；及LISTY(HCDR3；SEQ ID NO. 6)；或 (ii) KASQDINSYLT(LCDR1；SEQ ID NO. 1)；LTNRLMD(LCDR2；SEQ ID NO. 7)；LQYVDFPYT(LCDR3；SEQ ID NO. 8)；SSAMS(HCDR1；SEQ ID NO. 9)；TISSGGRSTYYPDSVKG(HCDR2；SEQ ID NO. 5)；及LISPY(HCDR3；SEQ ID NO. 10)； (iii) KASQDINSYLT(LCDR1；SEQ ID NO. 1)；RTNRLFD(LCDR2；SEQ ID NO. 11)；LQYDDFPYT(LCDR3；SEQ ID NO. 3)；SSAMS(HCDR1)；TISVGGGKTYYPDSVKG(HCDR2；SEQ ID NO. 9)；及LISLY(HCDR3；SEQ ID NO. 12)，或 (iv)與根據(i)至(iii)中之任一者的抗體競爭。

亦描述抗轉麩醯胺酸酶2(抗TG2)抗體的用途，該抗體用於製造供治療患有與COVID感染相關之肺纖維化的個體或預防罹患COVID感染之個體發展肺纖維化用的藥劑。舉例而言，根據本發明使用之抗TG2可包含以下序列： (i) KASQDINSYLT(LCDR1；SEQ ID NO. 1)；LVNRLVD(LCDR2；SEQ ID NO. 2)；LQYDDFPYT(LCDR3；SEQ ID NO. 3)；THAMS(HCDR1；SEQ ID NO. 4)；TISSGGRSTYYPDSVKG(HCDR2；SEQ ID NO. 5)；及LISTY(HCDR3；SEQ ID NO. 6)；或 (ii) KASQDINSYLT(LCDR1；SEQ ID NO. 1)；LTNRLMD(LCDR2；SEQ ID NO. 7)；LQYVDFPYT(LCDR3；SEQ ID NO. 8)；SSAMS(HCDR1；SEQ ID NO. 9)；TISSGGRSTYYPDSVKG(HCDR2；SEQ ID NO. 5)；及LISPY(HCDR3；SEQ ID NO. 10)； (iii) KASQDINSYLT(LCDR1；SEQ ID NO. 1)；RTNRLFD(LCDR2；SEQ ID NO. 11)；LQYDDFPYT(LCDR3；SEQ ID NO. 3)；SSAMS(HCDR1)；TISVGGGKTYYPDSVKG(HCDR2；SEQ ID NO. 9)；及LISLY(HCDR3；SEQ ID NO. 12)，或 (iv)與根據(i)至(iii)中之任一者的抗體競爭。

在作為整體的本發明之上下文中，慢性進行性肺纖維化疾病以個體之樣本中標誌物增加為特徵，其中該標誌物係例如以下中之任一者：TG2活性、TG2表現(諸如編碼TG2之mRNA或TG2抗原增加)、TG2之輸出或其任何組合，且其中該個體之樣本係與該疾病相關之細胞或組織(例如肺細胞或肺組織)。該標誌物之增加可在與該疾病相關之細胞/組織中藉由任何手段測定。一名個體之樣本中標誌物之增加典型地係藉由將該個體之樣本中該標誌物之水平與相同組織類型之正常細胞中相同標誌物之水平(亦即，基礎水平；例如基礎TG2活性、基礎表現水平(mRNA水平及/或蛋白質水平)及/或TG2輸出之基礎水平)相比較來測定。至少一個標誌物之水平相較於該標誌物之基礎水平等於或高於10%、等於或高於15%、等於或高於20%、等於或高於25%或甚至等於或高於30%的個體之樣本將被視為呈現該標誌物增加。舉例而言，TG2表現增加(或者稱為TG2過度表現)可經由測定患者之肺細胞中TG2 mRNA之量來測定。因此，慢性進行性肺纖維化細胞/組織可例如以個體之肺細胞中TG2 mRNA之量相較於來自相同組織類型之正常細胞中的量增加(表示過度表現)為特徵。相較於基礎水平，TG2 mRNA之表現可增加任何量，諸如等於或高於10%、等於或高於15%、等於或高於20%、等於或高於25%或甚至等於或高於30%。mRNA之量可使用任何已知方法，諸如定量反轉錄聚合酶鏈反應(qRT-PCR)、即時qRT-PCR、quantigene分析(Affymetrix/Thermo Fisher)、北方印漬術(northern blotting)或使用微陣列、RNA定序及各種類型之原位雜交(例如RNAscope)量測。或者，過度表現可經由測定患者之肺細胞中TG2抗原之量來測定。因此，慢性進行性肺纖維化細胞可例如以個體之肺細胞中TG2蛋白質(或TG2抗原)之量諸如相較於來自相同組織類型之正常細胞中的量增加(表示過度表現)為特徵。相較於基礎水平，TG2蛋白質之表現可增加任何量，諸如等於或高於10%、等於或高於15%、等於或高於20%、等於或高於25%或甚至等於或高於30%。蛋白質之量可使用任何已知方法，諸如免疫組織化學、西方印漬術、質譜法或螢光活化細胞分選(FACS)，包括藉由使用本發明之抗TG2抗體量測。用於測定表現之臨限值可取決於所用技術而變化且可針對免疫組織化學分數驗證。或者，慢性進行性肺纖維化細胞可以個體之肺細胞中之TG2活性相較於來自相同組織類型之正常細胞中的活性增加為特徵。相較於基礎水平，TG2活性可增加任何量，諸如等於或高於10%、等於或高於15%、等於或高於20%、等於或高於25%或甚至等於或高於30%。TG2活性可使用任何已知方法，諸如經由冷凍生檢(TG ISA)、在呼出氣冷凝液(EBC)或支氣管肺泡灌洗液(BALF)中量測。

因此，根據本發明使用之抗TG2抗體、治療或預防方法或抗TG2之用途，例如用於治療或預防個體之進行性慢性間質性肺部疾病或用於治療/預防與COVID感染相關之肺纖維化，可包含以下步驟：(a)量測來自個體之樣本(例如肺細胞)中的TG2表現、TG2活性或TG2輸出；(b)將自a)獲得的量測結果與正常細胞/組織(諸如肺細胞)中之相應量測值相比較；且c)若觀察到表現增加(亦即，TG2過度表現)、活性增加或輸出增加，則向該患者投予抗TG2抗體，由此治療或預防進行性慢性間質性肺部疾病或與COVID感染相關之肺纖維化。在步驟a)中量測的TG2表現可為mRNA或蛋白質之量，且該增加可為如上文所論述之表現的任何增加。不需要在每次進行比較時皆獲得正常細胞/組織中之相應量測值。該相應量測值可在打算比較之前的任何時間獲得且可為正常細胞/組織中之平均TG2表現或TG2活性。

在作為整體之本發明的上下文中，進行性慢性間質性肺部疾病係選自由以下組成之群：特發性肺纖維化(IPF)、脫屑性間質性肺炎(DIP)、急性間質性肺炎(AIP；或者稱為漢曼-里奇二氏症候群(Hamman-Rich syndrome))、過敏性肺炎(HSP)、非特異性間質性肺炎(NSIP)、呼吸性細支氣管炎相關間質性肺部疾病(RB-ILD)、隱源性組織化肺炎(COP；或者稱為阻塞性細支氣管炎合併組織化肺炎或BOOP)、類肉瘤病、石棉沉著病及淋巴球性間質性肺炎(LIP)。較佳地，進行性慢性間質性肺部疾病係選自由特發性肺纖維化(IPF)組成之群。

在作為整體的本發明之上下文中，抗TG2抗體較佳地結合至轉麩醯胺酸酶2型(TG2)之核心區內的抗原決定基並抑制TG2活性，其中該核心區由TG2(例如SEQ ID No. 41)之胺基酸143至473組成，且其中受抑制的TG2活性係經N-ε(γ-麩胺醯基)離胺酸異肽鍵進行的離胺酸及麩醯胺酸之TG2交聯。甚至較佳地，該抗體結合至包含TG2(例如SEQ ID No. 41)之胺基酸304至326或由其組成的區域或此區域之部分。該抗體可包含完整抗體或由完整抗體組成。或者，其可包含抗原結合片段或由抗原結合片段組成，該抗原結合片段諸如(但不限於)：Fv片段(例如單鏈Fv片段或二硫鍵結之Fv片段)；Fab片段；及Fab樣片段(例如Fab'片段或F(ab)2片段)、單域抗體(或如本文所定義或技術人員已知之任何其他片段)。較佳地，欲根據本發明整體使用之抗TG2抗體(亦參見表A)： a)包含選自由以下組成之群的6個CDR： (i) KASQDINSYLT(LCDR1；SEQ ID NO. 1)；LVNRLVD(LCDR2；SEQ ID NO. 2)；LQYDDFPYT(LCDR3；SEQ ID NO. 3)；THAMS(HCDR1；SEQ ID NO. 4)；TISSGGRSTYYPDSVKG(HCDR2；SEQ ID NO. 5)；及LISTY(HCDR3；SEQ ID NO. 6)；或 (ii) KASQDINSYLT(LCDR1；SEQ ID NO. 1)；LTNRLMD(LCDR2；SEQ ID NO. 7)；LQYVDFPYT(LCDR3；SEQ ID NO. 8)；SSAMS(HCDR1；SEQ ID NO. 9)；TISSGGRSTYYPDSVKG(HCDR2；SEQ ID NO. 5)；及LISPY(HCDR3；SEQ ID NO. 10)；或 (iii) KASQDINSYLT(LCDR1；SEQ ID NO. 1)；RTNRLFD(LCDR2；SEQ ID NO. 11)；LQYDDFPYT(LCDR3；SEQ ID NO. 3)；SSAMS(HCDR1)；TISVGGGKTYYPDSVKG(HCDR2；SEQ ID NO. 9)；及LISLY(HCDR3；SEQ ID NO. 12)。 b)包含具有如SEQ ID NO: 13至SEQ ID No. 27中之任一者中所定義之序列的輕鏈可變域及具有如SEQ ID NO: 28至SEQ ID No. 40中之任一者中所定義之序列的重鏈可變域， c)包含與如SEQ ID NO: 13至SEQ ID No. 27中之任一者中所定義之序列具有至少80%一致性或相似性、較佳地至少90%一致性或相似性、或較佳地至少95%一致性或相似性的輕鏈可變域，及與如SEQ ID NO: 28至SEQ ID No. 40中之任一者中所定義之序列具有至少80%一致性或相似性、較佳地至少90%一致性或相似性、或較佳地至少95%一致性或相似性的重鏈可變域， d)與如以上a)、b)或c)中所定義之抗體競爭結合至包含TG2(例如SEQ ID NO. 41)之胺基酸304至326或由其組成之抗原決定基或此區域之部分。表A – 胺基酸序列

藉由使用此項技術中已知之常規方法，可以容易地確定抗體是否結合至與另一抗體相同之抗原決定基或與另一抗體競爭結合。舉例而言，為確定測試抗體是否結合至與本發明之參考抗體相同之抗原決定基，使參考抗體在飽和條件下結合至蛋白質或肽。接著，評估測試抗體結合至該蛋白質或肽的能力。若在該蛋白質或肽與參考抗體飽和結合之後，測試抗體能夠結合至該蛋白質或肽，則可得出以下結論：該測試抗體結合至與參考抗體不同的抗原決定基。另一方面，若在蛋白質或肽與參考抗體飽和結合之後，測試抗體不能結合至蛋白質或肽，則該測試抗體可結合至與本發明之參考抗體所結合之抗原決定基相同的抗原決定基。為確定抗體是否與參考抗體競爭結合，將上述結合方法以兩個取向執行。在第一取向中，使參考抗體在飽和條件下與蛋白質/肽結合，隨後評估測試抗體與該蛋白質/肽分子之結合。在第二取向中，使測試抗體在飽和條件下與蛋白質/肽結合，隨後評估參考抗體與該蛋白質/肽之結合。若在兩個取向中，僅第一(飽和)抗體能夠結合至該蛋白質/肽，則得出結論，測試抗體與參考抗體競爭結合至該蛋白質/肽。熟諳本技藝者應瞭解，與參考抗體競爭結合之抗體未必結合至與參考抗體相同之抗原決定基，但可藉由結合重疊或相鄰抗原決定基而在空間上阻斷參考抗體之結合。

若兩種抗體中之一者競爭性抑制(阻斷)另一者與抗原之結合，則該兩種抗體結合至相同或重疊的抗原決定基。亦即，根據競爭結合分析所量測，1倍、5倍、10倍、20倍或100倍過量的一種抗體將另一種抗體之結合抑制至少50%、75%、90%或甚至99%。或者，若抗原中減少或消除一種抗體之結合的基本上所有胺基酸突變皆減少或消除另一種抗體之結合，則該兩種抗體具有相同抗原決定基。若減少或消除一種抗體之結合的一些胺基酸突變減少或消除另一種抗體之結合，則兩種抗體具有重疊的抗原決定基。

接著，可進行另外的常規實驗(例如肽突變及結合分析)以證實所觀察到的測試抗體結合之缺乏實際上係由結合至與參考抗體相同之抗原決定基引起，還是空間阻斷(或另一現象)造成所觀察到之結合的缺乏。此類實驗可使用ELISA、RIA、表面電漿子共振、流式細胞測量術或此項技術中可用之任何其他定量或定性抗體結合分析來進行。

任何個體均可根據本發明治療。個體較佳為人類。然而，個體可為另一哺乳動物類動物，諸如非人類靈長類動物、馬、牛、綿羊、豬、犬、貓、兔、大鼠、小鼠、天竺鼠或倉鼠。或者，術語患者可以無差別地使用以代替個體。

根據本發明之任何抗TG2抗體均可加入適於以任何方式投予個體的醫藥組成物中，投予方式諸如(但不限於)表面、鼻內、皮內、靜脈內、皮下或肌肉內投予。典型地，該醫藥組成物包含抗TG2抗體及一或多種醫藥學上可接受之佐劑及/或載劑。因此，本文亦描述用於治療進行性慢性間質性肺部疾病諸如特發性肺纖維化(IPF)的醫藥組成物，其中該醫藥組成物包含抗TG2抗體及一或多種醫藥學上可接受之佐劑及/或載劑。根據本發明之醫藥組成物可為套組之一部分，該套組附有使用說明書，包括有關向有需要之個體靜脈內、皮下或肌肉內投藥之指導及可選擇之裝置。

如本文所使用，「醫藥學上可接受之載劑」包括在生理學上相容且適於投予個體以用於本文所描述之方法及用途的任何及所有溶劑、分散介質、包衣、抗細菌劑及抗真菌劑、等張劑及吸收延遲劑，以及類似物。醫藥學上可接受之載劑的實例包括水、鹽水、磷酸鹽緩衝鹽水、右旋糖、甘油、乙醇及類似物中之一或多者，以及其組合。取決於投予途徑或調配物之類型(諸如液體、冷凍乾燥或噴霧乾燥之調配物)，等張劑可被加入組成物中，例如糖；多元醇，諸如甘露糖醇、山梨糖醇；或氯化鈉。醫藥學上可接受之載劑可進一步包含極少量之輔助物質，諸如潤濕劑或乳化劑、防腐劑或緩衝劑，由此可增加抗體或抗體部分之保存期限或有效性。

根據本發明之醫藥組成物可呈多種形式。此等包括例如液體溶液(例如可注射溶液及可輸注溶液)、分散液或懸浮液、粉末及脂質體。較佳形式取決於預定投予模式及治療應用。典型的較佳組成物係呈可注射溶液或可輸注溶液形式，諸如與用於使人類經其他抗體被動免疫之組成物類似的組成物。

根據本發明之抗TG2抗體的適合劑量可由熟練醫療從業人員確定。本發明之醫藥組成物中活性成分之實際劑量水平可變化，以便獲得有效實現特定患者、組成物及投予模式所希望之治療反應且對患者無毒的活性成分之量。所選劑量水平將取決於多種藥物動力學因素，包括投予途徑；投予時間；抗體之排泄速率；治療持續時間；與特定抗體組合使用的其他藥物、化合物及/或材料；所治療之患者的年齡、性別、體重、病狀、一般健康狀況及先前病史。

適合劑量可例如在每公斤待治療患者之體重約0.01 pg至約1000 mg，典型地每公斤體重約0.1 pg至約100 mg範圍內。劑量方案可經調整以提供最佳的所希望之反應(例如治療反應)。舉例而言，可投予單次劑量，或可隨時間投予若干分次劑量。如本文所使用，單位劑型係指適合作為單一劑量用於待治療之個體的物理離散單元；各單元含有經計算以與所需醫藥載劑結合產生所希望之治療作用的預定量之活性化合物。投予可按單次或多次劑量進行。多次劑量可經由相同或不同途徑且向相同或不同位置投予。在作為整體之本發明的上下文中，抗TG2抗體可與一種或其他多種其他治療劑共同投予。兩種或更多種藥劑之組合投予可按多種不同方式達成。其可一起以單一組成物形式投予，或其可作為組合療法之部分以獨立組成物形式投予。舉例而言，一種可在另一種之前或分開、之後或依序、或並行或同時投予。實施例材料

抗TG2抗體：以下實施例中使用的抗TG2 mAb包含如SEQ ID NO: 25中所定義之輕鏈可變區及如SEQ ID NO: 38中所定義之重鏈可變區。其為原始BB7之兔化(rabbitised)形式且本文在以下實施例中命名為rbBB7。

贊匹利單抗(Zampilimab，又稱為UCB7858；來源於抗體DC1)，即具有根據SEQ ID No. 24之可變輕鏈及根據SEQ ID NO: 37之可變重鏈的抗TG2抗體，係特異性結合人類TG2之人類化抗體。為了能夠模擬其對動物模型，諸如兔之影響，rbBB7被開發出來。經顯示，贊匹利單抗/DC1及rbBB7/BB7以類似方式行為表現。其在TG2芯中結合至相同的抗原決定基(SEQ ID No. 41之aa 313-325)，針對人類TG2具有幾乎相同的IC50(0.25 nM相對於0.3 nM)及Kd(＜50 pm相對於＜60 pm)且在活體外基於細胞之分析中同等地抑制ECM積累。唯一值得注意的差異在於贊匹利單抗針對兔TG2之IC50較低(103 nM相對於8 nM)。因此，由以下使用rbBB7之實施例得到的發現完全適用於贊匹利單抗及任何其他抗TG2抗體，諸如本文所描述之抗體。實施例1-IPF中之膠原蛋白及TG2表現情況

本研究之目的係確定膠原蛋白及TG2表現之存在是否與人類患者之肺纖維化相關。方法

人體組織：肺部生物檢體樣本係獲自NIH及羅徹斯特大學(University of Rochester)。對來自10名非纖維化患者及10名IPF患者之樣本進行分析。

組織樣本之製備：對福馬林固定、石蠟包埋之人類樣本進行連續切片及染色以將纖維化範圍與TG2相關。執行染色以評估纖維化，纖維化係藉由膠原蛋白含量以及轉麩醯胺酸酶2型(TG2)mRNA及蛋白質表現量測。

天狼星紅染色 ( PSR ) ：將樣本切片用天狼星紅染色，天狼星紅將膠原蛋白原纖維染色成亮紅色，而非膠原蛋白區域染色成粉色或黃褐色。使用Zeiss Axio Z.1掃描儀，利用Zeiss Zen 2.6(Blue版)軟體獲得全載玻片掃描。將影像使用Definiens Tissue Studio軟體，使用多相分析進行處理。影像處理產生該組織之遮罩(mask)以將各區域標識為病變(活動性纖維化)、實質(纖維化前期)、白空間或氣道膠原蛋白。在各遮罩內，陽性PSR染色百分比計算如下： ([遮罩面積%]×[遮罩內之陽性染色%])/100=區域中之膠原蛋白%

病變及實質的區域中之膠原蛋白%的總和表示生物檢體內非氣道膠原蛋白的總體百分比。

TG2 蛋白質表現 ：使用自動染色平台Leica Bond RX，使用脫蠟染色方案(Bond脫蠟溶液，在72℃，30分鐘)、H1(20)抗原修復(100℃，用Bond ER溶液1)及DAB 30分鐘標誌物偵測(使用小鼠抗TG2抗體DH2(UCB，內部抗體)，83 ng/ml)執行TG2之免疫組織化學分析。染色係使用多相面積分析，以Definiens tissue studio軟體定量。

TG2 mRNA ：TG2 mRNA係使用RNAscope原位雜交(ISH)分析，在福馬林固定、石蠟包埋(FFPE)之組織中評估，該ISH分析係在Leica Bond RX處理器上，根據製造商說明書利用RNAscope 2.5 LS試劑套組Red(Advanced Cell Diagnostics)及Leica Bond聚合物優化紅色偵測套組(Polymer Refine Red Detection Kit)執行的。組織品質係藉由對持家基因智人泛蛋白C mRNA之mRNA執行RNAscope分析來評估。將5 μm厚度之切片放至Superfrost Plus Gold載玻片上，並使其在37℃下乾燥隔夜，隨後進行Leica Bond RX factory「烘烤及脫蠟(Bake and Dewax)」方案。

將載玻片不經任何預處理而置放於Leica BOND RX之染色托架上且在60℃下，在適當位置烘烤，且接著脫蠟，隨後使用乙醇再水合。熱誘導之RNA修復係藉由以下方式進行：在95℃下，在修復緩衝液ER2(pH9，AR9640 Leica)中培育15分鐘，隨後用蛋白酶處理(Advanced Cell Diagnostics)15分鐘並在預處理之間用蒸餾水沖洗兩次進行過氧化酶阻斷。簡言之，靶向相關基因體核蛋白基因之20 ZZ探針對係由Advanced Cell Diagnostics設計(目標核苷酸目標160-2563)及合成。使切片暴露於ISH目標探針並在42℃培育2小時。Hs-TGM2(Advanced Cell Diagnostics)。對於各操作，使用針對細菌基因DapB mRNA之探針作為陰性對照。沖洗之後，將ISH信號使用公司提供的前置放大器及與鹼性磷酸酶(AP)結合之放大器擴增，並與紅色受質-色原體溶液一起在室溫下培育10分鐘。接著，用蘇木精對切片進行對比染色，空氣乾燥，隨後封於Ecomount永久性封固劑(Biocare)中。在Olympus載玻片掃描儀上獲取影像並由成像專業公司Oracle Bio使用Halo影像分析軟體，針對TG2 mRNA染色呈陽性的細胞數目及各細胞內之染色強度(探針數目)定量。結果

膠原蛋白之存在 ( 圖 1) ：使用天狼星紅(PSR)染色觀測膠原蛋白。全生物檢體掃描展示相較於非纖維化樣本，IPF生物檢體中有較緻密之組織及較小的氣腔(air space)，不過，此等「非纖維化」對照中有一些明顯發生部分重塑(照片未示出)。在組織內界定四個區域：(1)活動性纖維化病變區域係基於高密度紅色膠原蛋白原纖維指定；(2)總實質係由以不含膠原蛋白之組織的粉色或黃色染色佔主導之區域中的低密度紅色膠原蛋白原纖維界定；(3)氣腔係由載玻片組織周圍內以白色隔開或未染色之區域界定；及(4)氣道膠原蛋白係以氣道周圍之緻密膠原蛋白區域界定(此係肺部組織病理學的正常特徵且預期在纖維化疾病下無較大變化)。

IPF切片與非IPF切片之比較展示病變大小及高密度膠原蛋白面積增加，以及氣腔及實質面積減小。組織內非氣道膠原蛋白百分比亦顯著增加(圖1A/B)。

TG2 表現 ( 圖 2 及圖 3)組織轉麩醯胺酸酶2係由基因Tgm2編碼。相應mRNA之定量指示IPF生物檢體的單位面積中TG2 mRNA呈陽性之細胞之數目的總體顯著增加(圖2A)。亦藉由再分每個細胞表現低、中等及高TG2 RNA之細胞對每個細胞之探針數目定量(圖2B)。相較於非纖維化組，IPF組中有高TG2-mRNA表現之細胞的數目明顯增加3倍。

針對TG2之免疫組織化學染色鑑別出組織內蛋白質表現之定位。觀察結果顯示非纖維化組織中定位於上皮細胞的TG2陽性染色及IPF樣本中定位於纖維化區域的較強染色。相較於非纖維化樣本，在IPF樣本中之全生物檢體內展示TG2陽性染色面積之42%增加(圖3A)。如圖3B中所示，經PSR染色測定，用力肺活量(FVC)降低明顯與非氣道膠原蛋白之百分比相關(圓形；P=0.0128，R2=0.5597)。FVC降低亦與SHG偵測到的膠原蛋白相關，但此關聯並不顯著(三角形，P=0.0983，R ²=0.3043)。實施例1之結論

總肺部膠原蛋白在IPF組織中明顯增加且與肺功能降低相關(R ²0.56，p=0.01)，與預期之疾病表型及先前的報告一致。在IPF肺組織中，在經固定之樣本中可偵測的TG2 mRNA表現及TG2蛋白質增加。實施例2-基因剔除動物模型

先前已顯示，TG2基因剔除小鼠被保護而免於在間質性肺部疾病之肺博萊黴素模型中發生纖維化重塑(Olsen等人, 2011)。然而，當TG2減少時，仍絕對需要將組織學保護與肺功能益處相關聯。方法

所有動物程序均根據被批准之認證進行。

野生型小鼠及 TG2 基因剔除小鼠 ：用於此等實驗之小鼠為商業上購買的雄性或雌性C57BL/6J(The Jackson Laboratories，n=20)或內部飼養的TG2基因剔除小鼠(n=21)。TG2基因剔除小鼠係利用Cre介導之重組移除Tgm2基因之外顯子6-8的Tgm2tm1.1Rmgr品系(Victor Chang Institute)。隨後，該品系與C56BL/6J回交至少10代，此係藉由基因體掃描驗證。

博萊黴素模型 ：小鼠在異氟烷麻醉下，藉由口咽吸入接受於40 l鹽水中之2 U/kg博萊黴素(Fresenius Kabi)或僅接受40 l鹽水。21天之後，根據符合美國獸醫協會安樂死小組(Panel on Euthanasia of the American Veterinary Medical Association)最新指南的方法對小鼠實施安樂死。將心臟及肺整體取出。將右支氣管結紮起來，並將右肺葉在液氮中速凍。用2%低熔點瓊脂糖使左肺膨脹並將其置放於10%中性緩衝福馬林中，或用中性緩衝福馬林使左肺膨脹且接著將其置放於福馬林中隔夜。

組織學：將小鼠肺塊固定於10%中性緩衝福馬林中隔夜，接著轉移至70%乙醇中，直至包埋於石蠟中。藉由標準方法，用H&E、馬森氏三色染色法或天狼星紅對5微米切片染色。對於一些實驗，膠原蛋白染色係用Oracle Definiens Tissue studio軟體定量。

肺功能測試：對於肺功能測試，將小鼠麻醉，對氣管插管，並將小鼠連接至附接於FlexiVent儀器(SciReq)之呼吸器。用腹膜內(i.p.)投予之2 mg/kg維庫溴銨(vecuronium bromide)使小鼠麻痹以防止自發呼吸工作，且執行一系列用於導出肺功能參數之強制通氣操作，通常持續約10分鐘。將小鼠自呼吸器移開，實施安樂死並收集組織。

RNA 定量：在實施安樂死時，將右中肺葉在液氮中急驟冷凍並在-80℃儲存，直至RNA純化。RNA係使用Qiazol萃取並用子彈式摻合機(bullet blender)粉碎組織，隨後根據製造商之方案，用RNAeasy套組(Qiagen)純化進行純化。cDNA之反轉錄係用iScript Supermix(Bio-Rad)完成。即時PCR係用1 ng樣本cDNA，以及預先驗證的靶向COL1A1、COL3A1、纖維結合蛋白及Tgm2之兔引子以及GADPH(持家基因)完成。結果：

肺部膠原蛋白表現 ( 圖 4 及圖 5) ：肺部膠原蛋白之二次諧波產生評估(圖4)證實先前關於博萊黴素治療後TG2 KO小鼠體內膠原蛋白水平增加相較於野生型C56BL/6小鼠中減少的細胞化學染色評估(Olson等人, 2011)。然而，TG2缺乏引起間質膠原蛋白基因表現的有限且顯著之減少，該減少超過根據當前對TG2在纖維化中之作用機制的理解實際預期的減少(圖5)。

博萊黴素治療之後的肺功能 ( 圖 6) ：在組織收集之前，用FlexiVent設備量測小鼠之肺功能。獲取呼吸系統對強制通氣之兩個阻力量測值。第一個量測值，即Rrs或總阻力係整個呼吸系統對強制通氣的阻力。C57BL/6小鼠之Rrs回應於博萊黴素明顯增加，但TG2 KO小鼠之較小增加並不顯著且明顯小於C57BL/6小鼠之Rrs(圖6A)。第二個量測值，即Rn或牛頓阻力係對有多少總系統阻力係由氣道阻力(諸如哮喘中變窄的氣道)變化引起的估計。在野生型小鼠及TG2 KO小鼠中，牛頓阻力皆不受博萊黴素影響(圖6A)。假設胸壁亦不受博萊黴素影響，則野生型小鼠與KO小鼠之間Rrs的明顯差異必然由實質肺組織之阻力變化(亦即，間質性肺部疾病)引起。

順應性係描述呼吸系統可擴張之容易性。在纖維化中，由於肺部變硬，疤痕化且不易於擴展，故順應性典型地降低。動態順應性係在腹式呼吸期間量測。因為小鼠無法根據命令屏住其呼吸，所以靜態順應性係在人類患者深呼吸後屏氣操作期間量測，Flexivent儀器量測在利用呼吸器單次深度充氣期間的準靜態順應性(因為老鼠無法根據命屏住其呼吸)。博萊黴素在C57BL/6小鼠中引起動態順應性及準靜態順應性之顯著損失(圖6B)。TG2 KO小鼠亦經歷順應性降低，但相對於C57BL/6而言，此降低得以保持且其僅損失C57BL/6小鼠約一半之順應性。

PV環面積反映強制通氣操作使肺泡複張以進行呼吸的能力；較小的PV環面積指示較小的可複張肺泡容積。K量測PV環之放氣支的曲率；K減小表明在呼吸之後更快速的初始放氣，此與彈性硬度增加一致(肺部在充氣時不會伸展很大，因此其在放氣時塌陷更快)。C57BL/6小鼠之K PV曲線及PV環面積回應於博萊黴素皆有顯著下降(圖6C)。相比之下，TG2 KO小鼠被保護而免於發生此下降，其中任一者皆無顯著降低。

彈性量將量測肺組織之彈性硬度且為順應性之倒數。Ers係總呼吸系統之彈性量且包括來自組織、胸壁及氣道之貢獻，而H僅為組織之彈性量，由兩個不同的肺組織數學模型計算。相對於鹽水治療之小鼠，博萊黴素明顯增加C57BL/6小鼠之肺組織的彈性硬度，但不增加TG2 KO小鼠之肺組織的彈性硬度(圖6E)。總系統彈性量(Ers)之此種變化係歸於肺組織之變化，和與組織彈性量(H)相關之發現相符。

總之，對用於評估呼吸功能之所有參數，TG2 KO小鼠在間質性肺部疾病之博萊黴素模型中在功能上得到保護。與野生型小鼠相比較，其總阻力沒有增加，彈性硬度沒有增加且壓力容積環沒有損失，且順應性損失明顯減少。實施例2之結論：

發現在博萊黴素誘發之肺部間質纖維化之後，TG2 KO小鼠被保護而免於肺功能損失。保護之量值特別出人意料。在博萊黴素存在下，C57BL/6小鼠展現降低之順應性、增加之彈性硬度、增加之組織抗性及減小之氣腔複張，全部與人類IPF及其他纖維化ILD一致。相反，TG2 KO小鼠被保護而免於受此等影響，且未顯示氣腔複張或阻力之變化，以及順應性之約不到50%降低及彈性量增加。此等出人意料且令人激動之結果展示TG2缺乏不僅對組織之組織學具有保護作用，而且以及最重要的是對肺功能亦具有保護作用。實施例3-活體外抑制抗TG2抗體之活性方法

刮傷傷口實驗 ：將初代肺纖維母細胞在補充有鈣之ATCC RPE培養基中培養7天。一些細胞未經處理且一些如所指示的用1 ng/ml TGFβ處理。刮傷單層且立即、在1小時後或3小時後添加250 M的TG2受質5-BP。接著，將細胞收集起來，洗滌並在添加5-BP(全細胞封固劑)之後1小時，固定於甲醇中。藉由抗體染色偵測纖維結合蛋白且用HRP-鏈黴抗生物素蛋白偵測TG2活性以偵測5-BP標記。對刮傷邊界處及遠離刮傷之細胞層中螢光信號之強度進行定量。在所用較短培育時間下，5-BP僅偵測細胞外或細胞表面TG2活性且不偵測細胞內活性。結果

刮傷分析中 TG2 活性之定量及抑制 ( 圖 7) ：在未處理狀態及TGFβ1處理狀態下，對來自不同人類供體之8個細胞初代細胞株(3個非纖維化或5個IPF)執行刮傷分析。藉由以原始螢光強度觀測的細胞外基質中轉麩醯胺酸酶受質5-生物素化戊胺(5BP)之加入量所展示，TG2活性在刮傷後迅速地升高(圖7A左圖)。然而，使用定時投予該受質且在投予受質5BP後1小時停止研究，此活化被證實為短暫的，且所有活性在刮傷之1小時內喪失，且在刮傷後1小時施用5BP時無活性記錄(圖7A中間圖及右圖)。正如預期，IPF細胞株表現之纖維結合蛋白要比非纖維化細胞株表現得多。纖維化細胞株及非纖維化細胞株顯示在刮傷之後TG2活性增加，且IPF細胞株具有明顯高於非纖維化細胞株之活性。TG2活化被TGFβ增強且該活化在IPF纖維母細胞中要大於非纖維化纖維母細胞中(圖7B)。此係一個重要發現，涉及TG2在IPF中之作用。投予TG2抑制性抗體(rbBB7)能夠完全阻斷沿刮傷之TG活性升高，由此證實活性增加僅歸因於TG2且TG2回應於受傷而在細胞外升高。實施例3之結論：

培養物中之初代人類肺纖維母細胞將TG2輸出至細胞外空間中，但其無活性，除非因刮傷傷口而活化。活化係短暫的，持續不到1小時。相較於非纖維化纖維母細胞，來自患有IPF之供體的纖維母細胞輸出較高的TG2活性。此活性可完全受rbBB7抑制。此資料提供IPF中活化之TG2可用諸如rbBB7或贊匹利單抗之類抗TG2抗體抑制的證據。此資料構成初代人類肺細胞中贊匹利單抗之抗纖維化反應。實施例4-活體內抑制抗TG2抗體之活性方法

用 rbBB7 、媒劑或對照抗體治療進行之干預研究 ：總體研究設計(圖8)使用45隻動物(兔)，使用10 mg二氧化矽滴注，其中預防性治療臂及治療性治療臂操作超過56天。 • 5隻兔接受鹽水且在第56天收集(健康組)。 • 10隻兔接受二氧化矽且在第28天收集(在開始治療性治療時疾病之水平) • 10隻兔接受二氧化矽且在第28天用rbBB7(100 mg/kg)開始治療並在第56天收集(治療性給藥) • 10隻兔在滴注二氧化矽(亦即，在第-1天治療)之前1天用rbBB7(100 mg/kg)開始治療並在第56天收集(預防性給藥) • 5隻兔接受二氧化矽且在滴注二氧化矽之前1天用rb922對照抗體(100 mg/kg)開始治療，並在第56天收集(對照抗體)。 • 5隻兔接受二氧化矽且在滴注二氧化矽之前一天用媒劑開始治療，並在第56天收集(媒劑對照)

若抗體對照及媒劑對照之間無差異，則設計將允許抗體對照及媒劑對照之組合以形成有10隻動物之未治療組。每5天將rbBB7、rb922對照抗體或媒劑皮下注射至兔之頸背中。在注射之前，對兔稱重並相應地調整所注射之抗體體積以得到100 mg/kg劑量。對接受對照媒劑之兔給予相同體積之媒劑，若其一直接受抗體，則其將基於其體重接受相同體積之媒劑。兔之平均起始體重係2.5 kg且在56天結束時的平均體重係3.2 kg。

藥物動力學：每5天或10天，自用rbBB7治療之兔抽取血液。第一次抽血係在第一次rbBB7注射之後5天進行。每隻兔最多取樣四次以最大限度地降低動物之風險，血液抽取始終在即將進行rbBB7之下一次計劃注射之前執行以計算最低(最小)暴露值。預防性給藥(自第-1天起，曲線A及B)及治療性給藥(第26天至第56天，曲線C及D)係以2個獨立的操作執行且因此個別地繪製。使血液在室溫下凝結45分鐘，接著以300×g離心15分鐘。傾析出血清並將其在-80℃冷凍儲存。使用質譜對血清中之rbBB7定量。

組織處理 ：經由氣管用30%於PBS中之蔗糖作為低溫保護劑對肺進行充氣，且使其對切割刀片產生某種抵抗力，因此其不容易撕裂或壓碎。將右下肺葉置放於定製塊中並切成5-6塊，各自具有約4 mm厚度。將中心塊置放於10%福馬林中，保持24小時，接著轉移至70%乙醇中，並處理以用於組織學分析。將左側切片及右側切片(中心及遠端切片)在-80℃冷凍以供隨後分析。

組織學及分析：將福馬林固定之肺切片處理為單塊形式並包埋於單個大石蠟塊中。對切片進行切割並用H&E、三色染色法及天狼星紅(PSR)染色，並在Olympus或Zeiss載玻片掃描儀上成像。對於膠原蛋白定量，使用多相分析，使用Definiens Tissue studio軟體對PSR全載玻片影像進行處理。軟體運行演算法以基於細胞密度及未染色氣腔之損失來鑑別「病變」及非病變/不受影響之實質)區域。接著，將病變區域及非病變區域中之膠原蛋白(亮紅色染色之纖維)以總區域面積之百分比定量。使用多光子顯微術/二次諧波產生(SHG)重複相同石蠟切片之分析，使用Genesis 200掃描儀對膠原蛋白定量。SHG顯微術係雙光子(2P)顯微術之變化形式，其可在無外源標記情況下偵測原纖維膠原蛋白。形成原纖維之膠原蛋白包括13型、5型、11型、24型及27型膠原蛋白。若干此等原纖維膠原蛋白，諸如I型、III型及V型原纖維膠原蛋白係肺纖維化之關鍵參與者(Kottmann等人, 2015)。

TG2 抗原及活性免疫組織化學：根據標準方案，藉由對肺組織之冷凍切片(在收集時用30%蔗糖膨脹且接著急凍)進行免疫染色來偵測TG2抗原。如先前所描述，使用轉麩醯胺酸酶原位活性(TG ISA)分析，使用生物素化屍胺之加入量來量測肺組織之冷凍切片的轉醯胺酶(交聯)活性。使用蔗糖使肺膨脹會干擾此分析，且移除蔗糖所需之額外洗滌循環將明顯降低所量測之TG活性。儘管絕對TG2活性低於不利用蔗糖之類似實驗中的活性，但各組之間的相對差異應為相同的，因為所有組織均以相同方式處理。結果

利用 rbBB7 之 干預研究 ：45隻動物中有43隻成功地完成實驗方案(有兩隻兔在初始二氧化矽滴注期間死亡，此可能由麻醉作用引起)。在rbBB7治療之兔中未觀察到不利影響。其顯示出與對照兔類似的體重增加(資料未示出)且未發生與重複注射治療性抗體有關的任何身體問題。

藥物動力學 ( 圖 9) ：第一次rbBB7注射之後5天(二氧化矽後第4天，最低PK之第一個樣本)，血清水平之平均值為395 g/ml。到下一個取樣點(第19天)，rbBB7水平在700 g/ml範圍內且維持600-700 g/ml之穩態平均值(當在前一次注射後5天在最低值量測時)。在56天內抗體水平無顯著下降，此可能指示過敏反應或抗-抗體反應之發生。預期此等水平在兔模型中為治療性的。取樣並非在每次治療後皆進行，以便減少對動物之壓力。

纖維化之組織學分析 ( 圖 10) ：經H&E或天狼星紅染色之兔肺切片展示經二氧化矽治療之兔中纖維化之存在(圖像未示出)。為定量纖維化之程度，對PSR染色之切片執行Definiens影像分析。該軟體對僅病變區域內及整個肺葉內(亦即，正常實質或非病變區域加病變區域)內之膠原蛋白(紅色)染色定量(圖像未示出)。觀察全肺葉染色，到28天時PSR染色無明顯變化，但第28天與第56天之間平均增加35%(圖10A)。觀察到rbBB7在減少膠原蛋白之量中的顯著治療作用。若觀察到全肺葉染色，則保護性給藥組及治療性給藥組中膠原蛋白之增加有50%減少，不過，此僅在保護性方案中達到顯著程度。有關僅病變之膠原蛋白PSR染色的評估亦顯示第28天與第56天之間膠原蛋白之92%增加的明顯減少，其中治療臂及保護臂中分別有58%及48%之顯著降低(圖10B)。

藉由二次諧波產生 (SHG) 顯微術分析膠原蛋白含量 ( 圖 11) ：使用SHG偵測經二氧化矽治療之肺葉中的總原纖維膠原蛋白。對兔肺組織切片進行掃描，並對膠原蛋白定量。SHG在二氧化矽滴注後第28天未偵測到膠原蛋白增加且可反映膠原蛋白可能未成熟到足以藉由SHG偵測。然而，二氧化矽滴注後第28天與第56天之間可偵測之原纖維膠原蛋白的水平超過兩倍。用rbBB7治療明顯地減少早期治療組及晚期治療組中之膠原蛋白積累。使用SHG可偵測之膠原蛋白的平均水平作為基線，兩個治療臂中有52%降低，不過，僅保護性治療組達到顯著程度。

TG2 活性之變化 ( 圖 12) ：由冷凍肺切片中之一者製備冷凍切片，並量測TG2抗原及活性。TG2抗原水平未因二氧化矽滴注而變化且不受rbBB7治療影響(圖12A)。儘管使用呈流體形式之蔗糖使肺部膨脹會明顯損害TG ISA分析，但在二氧化矽治療情況下，在二氧化矽滴注後第28天及第56天TG活性明顯增加2.3倍。RbBB7使兩個二氧化矽組中的TG2活性降低(圖12B)。治療性給藥臂中之45%降低並未達到顯著程度(可能歸因於較高水平的變化性)，但保護臂中之85%降低係顯著的且與正常肺部中之水平相當。實施例4之結論

本實施例出人意料地發現1)早期預防性治療(在二氧化矽滴注之前一天起始，每5天給予療法)及晚期治療(在二氧化矽滴注之後28天開始，每5天給予療法)皆有效減少組織學纖維化；且2)只能靶向細胞外TG2之抗體抑制劑以及總TG2基因剔除(在小鼠模型中)能夠保護動物免於纖維化，指示肺纖維化主要歸因於細胞外TG2活性。纖維化減少係獨立地藉由分析肺組織中之膠原蛋白的兩種方法(PSR染色及SHG顯微術)證實。抗TG2抗體亦阻斷TG2酶活性，此係在冷凍肺切片中偵測到。換言之，抗TG2抗體(其抑制TG2之細胞外蛋白質交聯活性)當預防性給予時，能夠明顯減弱兔矽粉沉著病模型中之肺纖維化，且當在肺部重塑起始之後28天開始給予時，停止纖維化之進一步進展。實施例5-TG2在COVID-19感染中上調方法

人體組織：肺組織樣本係獲自Tissue Solutions Ltd。對來自22名死於COVID-19感染之患者的樣本以及正常肺部及IPF患者之6份組織樣本進行分析。患有包括慢性阻塞性肺病(COPD)在內之已知肺部疾病的患者不包括在內。

組織樣本之製備：對福馬林固定、石蠟包埋之人類樣本進行連續切片並執行染色以評估轉麩醯胺酸酶2型(TG2)mRNA表現情況。

TG2 mRNA(RNAscope) ：使用與實施例1中詳述之方案類似的方案。結果

如圖13及圖14中所示，相較於正常肺組織中之表現，TG2 mRNA表現在獲自死於COVID-19之患者的解剖組織樣本中明顯上調(P＜0.05)。僅包括IPF樣本作為參考。此高表現伴隨大量基質沉積之跡象(天狼星紅染色-資料未顯示)。實施例5之結論

發明人表示，在發生重度SARS-cov2病毒感染之肺組織的發炎性反應及重塑期間，TG2在來自死於COVID-19感染之患者的大部分解剖肺樣本中有較高表現。預期抗TG2抗體，諸如贊匹利單抗，不僅可在COVID疾病之急性期間且亦在長期慢性期時減慢重塑。參考文獻

1) Siegel et al., 2007, Pharmacol. Ther., 115(2): 232-245 2) Wang et al., 2020, 3 Biotech., 10:287 3) WO2006100679, 4) WO2012146901 5) WO2013175229 6) Olsen et al., 2011, Am. J. Respir. Crit. Care Med., 184: 699-707 7) Olsen 2020, Am. J. Respir. Crit. Care Med., 201:A1963 8) Philp et al., 2018, Am. J. Resp. Cell Mol. Biol., 58(5): 594-603 9) Olsen et al., 2014, Am. J. Resp. Cell Mol. Biol., 50(4):737-747 10) Raghu, 2017, Eur. Respir. Rev. 2017；26: 170071 11) Vaidya et al., 2017, Curr. Med. Chem., 24: 1-20 12) Margaritopoulos et al., 2016, Core Evidence,11 : 11-22 13) WO2015/197772 14) Kottmann et al., 2015, Resp. Res., 16:61

圖1：膠原蛋白染色在來自IPF患者之肺部生物檢體中升高。(A)針對與成熟疤痕組織相關之緻密膠原蛋白纖維天狼星紅(Picosirius red)染色呈陽性的組織切片之面積百分比。(B)總組織切片內非氣道膠原蛋白之百分比。非纖維化(需要肺部生物檢體且未患ILD之患者)用作對照樣本(n=8)。IPF/UIP樣本一起求平均值(n=9)。*p＜0.05，藉由不成對、2邊t檢定測定。

圖2：TG2 mRNA(RNAscope)在IPF患者生物檢體中升高。福馬林固定的石蠟包埋之肺組織樣本之Tgm2表現係使用原位雜交技術RNAScope探測。紅色/粉色染色表示Tgm2 mRNA轉錄本。(A)：生物檢體內Tgm2陽性細胞之總數。(B)：藉由染色強度呈現之Tgm2陽性細胞。染色強度表示為1+(1-6個探針/細胞)、2+(7-13個探針/細胞)及3+(≥14個探針/細胞)(p＜0.015)。所分析的10個「非纖維化」生物檢體中僅2個被顯示出來，而其他生物檢體未通過RNA品質QC檢查。

圖3：(A) TG2抗原在IPF患者生物檢體中升高。對來自非纖維化樣本及IPF樣本的石蠟固定之切片上的TG2免疫組織化學染色進行分析且藉由高內涵影像分析計算染色面積之百分比。對非纖維化樣本(n=7)及IPF/UIP樣本(n=10)求平均值。p=0.03，藉由不成對、2邊t檢定測定。(B)使用用力肺活量(forced vital capacity)作為預測(FVC)之百分比對患者進行肺功能量測(n=10)。在FVC與膠原蛋白之間執行線性回歸(藉由PSR染色確定，參見圓形；P=0.0128，R2=0.5597，以及藉由SHG測定，參見三角形，P=0.0983，R2=0.3043)。

圖4：經在間質性肺部疾病之博萊黴素模型中二次諧波產生顯微術，亦即SHG所量測，基因剔除(KO)小鼠被保護而免於膠原蛋白增加。(A)：野生型小鼠及TG2 KO小鼠中間質性膠原蛋白之面積百分比。(B)：野生型小鼠及TG2 KO小鼠之肺部間質性膠原蛋白回應於博萊黴素的倍數增加。(n=9-12)。

圖5：TG2基因剔除小鼠在間質性肺部疾病之博萊黴素模型中未出現關鍵間質性膠原蛋白之mRNA升高(RT QPCR)。N=5隻小鼠/組。變異數分析結合圖基事後檢驗(Tukey post-test)。

圖6：TG2基因剔除小鼠在間質性肺部疾病之博萊黴素模型中保留肺功能。(A)：阻力(Rrs=呼吸系統阻力(總)；Rn=牛頓(氣道)阻力)。(B)：順應性(Crs=動態順應性(呼吸系統順應性)；Cst=準靜態順應性)。(C)：壓力容積環(K=PV環之放氣支的曲率；PV=壓力-容積)。(E)：彈性量(Ers=呼吸系統之彈性量(總)；H=組織彈性量)；**P＜0.01，***P＜0.001，藉由變異數分析結合圖基事後檢驗測定。

圖7：(A)：自TGFβ1刺激之細胞得到的代表性影像，顯示在刮傷之後立即添加(左圖)、1小時之後添加(中心圖)及3小時之後添加(右圖)標記時5-BP之加入情況(亦即，轉麩醯胺酸酶活性)，展示活性在刮傷後第一個小時內喪失。(B)：纖維結合蛋白及TG2活性係在非纖維化(NF)纖維母細胞以及利用及不利用TGFβ1處理之纖維化(F)纖維母細胞的細胞層(遠離刮傷)中及刮傷邊界處定量。5-BP係在引入刮傷傷口之後立即添加且在1小時之後固定細胞。各點表示單個孔中之染色。P值如所示。(C)：將TGFβ1處理之肺部纖維母細胞單層刮傷，且隨後立即如上文所描述添加5-BP並用媒劑(左圖)或TG2抑制性抗體300μM rbBB7(右圖)處理。rbBB7完全抑制5-BP之加入，此係藉由不存在染色顯示。

圖8：兔肺矽粉沉著病研究計劃。在刮傷之後，利用支氣管鏡將鹽水或二氧化矽遞送至紐西蘭白兔(New Zealand white rabbit)之右肺下葉。6個實驗組被定義。5隻動物(第1組)僅遞送鹽水且繼續操作56天，作為「健康對照」組。40隻動物遞送二氧化矽。10隻動物(第2組)在28天之後停止以用作在開始治療性給藥時疾病之量度。10隻動物用媒劑(第3組，n=5)或對照IgG rb922(第4組，n=5)治療且操作56天，作為「未治療」對照。(由媒劑組與對照IgG組得到的結果基本上類似且該等組合併成有10隻未治療對照的單個組。)10隻動物在第28天至第56天用TG2抑制性兔抗體rbBB7治療(第5組)作為治療性給藥臂(arm)，且10隻動物在第1天至第56天用rbBB7治療，作為「預防性」給藥臂。rbBB7係每5天施用。末端分析由以下組成：TG2活性(TG ISA)、TG2抗原(TG2 Ant)、天狼星紅染色(PSR)、馬森氏三色染色法(Masson's Trichrome，MT)染色、肺部膠原蛋白(HG)之二次諧波產生定量及各種傳訊RNA(mRNA)。

圖9：兔矽粉沉著病模型中之rbBB7血清暴露。預防性給藥(自第1天起，曲線A及B)及治療性給藥(第26天至第56天，曲線C及D)係以2個獨立的操作執行且因此個別地繪製。

圖10：在兔ILD矽粉沉著病模型中，當藉由天狼星紅染色量測時，rbBB7減少總肺部膠原蛋白。膠原蛋白係在「實質」(不包括大氣道，含有預先存在的與疾病過程無關之膠原蛋白)中(A)及活動性纖維化病變內(B)測定。二氧化矽d28組及二氧化矽d56組分別在第28天或第56天停止且未用藥理藥劑治療，即未接受任何物質(d28)或接受媒劑/對照IgG(d56)。二氧化矽+rbBB7(d28-d56)係在第28天至第56天接受rbBB7的治療性給藥組。二氧化矽+rbBB7(第1天至第56天)係自二氧化矽輸注之前1天接受rbBB7之預防性給藥組。每個點表示一隻兔。所顯示的各組之間之統計資料係單因素司徒頓t檢定(Students t-tests)且展示預防臂及治療臂中纖維化皆減少。當藉由變異數分析進行分析時，總體治療作用係顯著的(對於病變中之膠原蛋白，p=0.002；且對於實質中之膠原蛋白，p=0.0037)。

圖11：在兔ILD矽粉沉著病模型中，當藉由二次諧波產生顯微術(SHG)量測時，rbBB7減少總肺部膠原蛋白。二氧化矽d28組及二氧化矽d56組分別在第28天或第56天停止且未用藥理藥劑治療，即未接受任何物質(d28)或接受媒劑/對照IgG(d56)。二氧化矽+rbBB7(d28-d56)係在第28天至第56天接受rbBB7的治療性給藥組。二氧化矽+rbBB7(第1天至第56天)係自二氧化矽輸注之前1天接受rbBB7之預防性給藥組。各點表示一隻兔。所顯示的各組之間之統計資料係單因素司徒頓t檢定且展示預防臂及治療臂中纖維化皆減少。

圖12：rbBB7阻斷兔矽粉沉著病模型中之TG2活性。TG2抗原(A)及細胞外TG原位(ISA)活性(B)係在圖11中所描述之研究中，在動物終止時分別使用肺切片之高內涵影像分析量測，該等肺切片針對TG2抗原係使用免疫螢光染色或針對TG2活性藉由加入螢光染料標記之屍胺染色。染色係以細胞核DAPI染色界定的組織區域之百分比定量。*=P＜0.05，藉由變異數分析測定。資料展示TG2抗原水平無變化，但二氧化矽組中TG活性明顯增加，該TG活性在治療性給藥臂中減少且在預防性給藥組中明顯減少。

圖13：TG2 mRNA(RNAscope)在來自死於COVID-19感染(由SARS-Cov2病毒引起)之患者的解剖肺樣本中上調。福馬林固定的石蠟包埋之肺組織樣本之Tgm2表現係使用原位雜交技術RNAScope探測。黑色點/染色表示Tgm2 mRNA轉錄本。TG2 mRNA表現係以正常肺組織與IPF肺組織比較。

圖14：解剖Covid肺中之Tgm2表現情況。Tgm2表現係在來自正常、IPF及死於COVID感染之個體的肺組織中評估。表現係以針對Tgm2染色的組織切片之面積百分比計算。相較於健康對照組織，解剖COVID組織中的Tgm2明顯升高，*=P＜0.05，藉由變異數分析測定。

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Claims

一種用於治療患有進行性慢性間質性肺部疾病之個體或預防進行性慢性間質性肺部疾病之發展的抗轉麩醯胺酸酶2(抗TG2)抗體。
如請求項1所使用之抗TG2抗體，其中，該肺部疾病係選自由以下組成之群：特發性肺纖維化(IPF)、脫屑性間質性肺炎(DIP)、急性間質性肺炎(AIP；或者稱為漢曼-里奇二氏症候群(Hamman-Rich syndrome))、過敏性肺炎(HSP)、非特異性間質性肺炎(NSIP)、呼吸性細支氣管炎相關間質性肺部疾病(RB-ILD)、隱源性組織化肺炎(COP；或者稱為阻塞性細支氣管炎合併組織化肺炎或BOOP)、類肉瘤病、石棉沉著病及淋巴球性間質性肺炎(LIP)。
一種用於治療患有與COVID感染相關之肺纖維化的個體或預防罹患COVID感染之個體發展肺纖維化的抗轉麩醯胺酸酶2(抗TG2)抗體。
如前述請求項中任一項所使用之抗TG2抗體，其中，該肺部疾病或該肺纖維化係以個體之樣本中標誌物增加為特徵，該標誌物係選自以下之群：TG2活性、編碼TG2之mRNA、TG2抗原、TG2之輸出增強或其任何組合。
如前述請求項中任一項所使用之抗TG2抗體，其中，該抗體結合至轉麩醯胺酸酶2型(TG2)之核心區內的抗原決定基且抑制TG2活性，其中該核心區由TG2之胺基酸143至473組成，且其中受抑制之TG2活性係以N-ε(γ-麩胺醯基)離胺酸異肽鍵使離胺酸及麩醯胺酸進行TG2交聯。
如前述請求項中任一項所使用之抗TG2抗體，其中，該抗體或其抗原結合片段： a. 包含完整抗體或由完整抗體組成，或 b. 包含抗原結合片段或由抗原結合片段組成。
如前述請求項中任一項所使用之抗TG2抗體，其中，該抗體包含以下序列： (i) KASQDINSYLT(LCDR1；SEQ ID NO. 1)；LVNRLVD(LCDR2；SEQ ID NO. 2)；LQYDDFPYT(LCDR3；SEQ ID NO. 3)；THAMS(HCDR1；SEQ ID NO. 4)；TISSGGRSTYYPDSVKG(HCDR2；SEQ ID NO. 5)；及LISTY(HCDR3；SEQ ID NO. 6)；或 (ii) KASQDINSYLT(LCDR1；SEQ ID NO. 1)；LTNRLMD(LCDR2；SEQ ID NO. 7)；LQYVDFPYT(LCDR3；SEQ ID NO. 8)；SSAMS(HCDR1；SEQ ID NO. 9)；TISSGGRSTYYPDSVKG(HCDR2；SEQ ID NO. 5)；及LISPY(HCDR3；SEQ ID NO. 10)；或 (iii) KASQDINSYLT(LCDR1；SEQ ID NO. 1)；RTNRLFD(LCDR2；SEQ ID NO. 11)；LQYDDFPYT(LCDR3；SEQ ID NO. 3)；SSAMS(HCDR1)；TISVGGGKTYYPDSVKG(HCDR2；SEQ ID NO. 9)；及LISLY(HCDR3；SEQ ID NO. 12)。
如前述請求項中任一項所使用之抗TG2抗體，其中，該抗體包含： a)具有SEQ ID NO: 13至SEQ ID NO.27中之任一者中所定義之序列的輕鏈可變域及具有SEQ ID NO: 28至SEQ ID NO.40中之任一者中所定義之序列的重鏈可變域， b)與SEQ ID NO: 13至SEQ ID NO.27中之任一者中所定義之序列具有至少80%一致性或相似性、較佳地至少90%一致性或相似性、或較佳地至少95%一致性或相似性的輕鏈可變域，以及與SEQ ID NO: 28至SEQ ID NO.40中之任一者中所定義之序列具有至少80%一致性或相似性、較佳地至少90%一致性或相似性、或較佳地至少95%一致性或相似性的重鏈可變域。
如請求項1至6中任一項所使用之抗TG2抗體，其中，該抗體與請求項7及8中任一項之抗體競爭結合至TG2。
一種治療患有進行性慢性間質性肺部疾病之個體或預防個體發展進行性慢性間質性肺部疾病的方法，其包含向該個體投予治療有效量之抗TG2抗體。
一種治療患有與COVID感染相關之肺纖維化的個體或預防罹患COVID感染之個體發展肺纖維化的方法，其中，該方法包含向該個體投予治療有效量之抗TG2抗體的步驟。
一種抗轉麩醯胺酸酶2(TG2)抗體用於製造治療患有進行性慢性間質性肺部疾病之個體或預防進行性慢性間質性肺部疾病之發展用的藥劑之用途。
一種抗轉麩醯胺酸酶2(TG2)抗體用於製造治療患有與COVID感染相關之肺纖維化的個體或預防罹患COVID感染之個體發展肺纖維化用的藥劑之用途。