TW202327601A

TW202327601A - 芳胺類衍生物及其製備方法和醫藥用途

Info

Publication number: TW202327601A
Application number: TW111142262A
Authority: TW
Inventors: 閆旭; 田衛學; 陳士柱; 殷惠軍
Original assignee: 大陸商中國醫藥研究開發中心有限公司
Priority date: 2021-11-05
Filing date: 2022-11-04
Publication date: 2023-07-16
Also published as: CN116472047A; WO2023078241A1

Abstract

本發明關於芳胺類衍生物及其製備方法和醫藥用途。具體地，本發明關於通式(I)所示的化合物，其製備方法，含有其的醫藥組成物，以及其作為Toll樣受體(TLR)激動劑用於治療與TLR8活性相關的疾病的用途。通式(I)中的各基團的定義與說明書中的定義相同。

Description

芳胺類衍生物及其製備方法和醫藥用途

本發明關於芳胺類衍生物及其製備方法和醫藥用途。具體地，本發明關於通式(I)所示的化合物，其製備方法，含有其的醫藥組成物，以及其作為Toll樣受體(TLR)激動劑用於治療與TLR8活性相關的疾病的用途。

Toll樣受體(TLR)是一類模式識別受體，可以識別微生物並對其產生應答。TLR家族成員在免疫系統中起著重要作用，既是參與先天免疫的重要元件，也是連接先天免疫和特異性免疫的橋樑。該受體可以特異性地識別微生物，並啟動免疫應答。

TLR均為I型跨膜糖蛋白，由富含16-28個亮胺酸的重複序列(LRR)的胞外結構域、跨膜結構域和胞質Toll/IL-1受體(TIR)結構域組成。X射線晶體衍射分析確定TLR LRR結構域均為馬蹄狀結構。至今在人類已發現11個成員，其中TLR1、2、4、5、6、10和11位於細胞表面，TLR3、7、8、9位於胞內體膜上。TLR8與TLR7在種系發生上彼此接近並且具有高度的序列同源性，並位於相鄰的X染色體上(Xp22)。當TLR的LRR與配體結合後，TIR結構域構象發生改變，隨後觸發TLR信號通路的激活。TLR的TIR結構域可以募集多種信號分子，包括腫瘤壞死因子受體相關因子6和髓樣分化因子88(MyD88)等。其中TLR8依賴MyD88信號通路，誘導激活蛋白酶-1(AP-1)和核因子κB(NF-κB)轉移到核內，誘導核內相關基因的表達，分泌趨化因子和炎症因子等，發揮轉錄調控的作用。此外，TLR8還可以激活絲裂原活化的蛋白激酶(MAPK)信號通路，包括p38、ERK和JNK等，主要參與細胞增殖、細胞分化、細胞轉化和細胞凋亡等的調節，與炎症和腫瘤等多種疾病密切相關(免疫學雜誌，2017，33，813)。

B型肝炎病毒(HBV)是一種顆粒狀的雙鏈DNA病毒。激活TLR8可以有效地抑制體內和體外B型肝病毒複製，因此成為開發治療慢性B型肝炎病毒的靶點。研究發現TLR8激動劑ssRNA40可以選擇性地激活肝周的先天免疫細胞產生大量的IFN-γ從而抑制B型肝病毒複製，從而有潛力用作肝炎病毒感染的治療。利用TLR8激動劑刺激PBMC後發現可以誘導高水平的IFN-γ和TNF-α的產生，從而抑制HBV複製(Current Opinion in Virology，2018，30，9)。

TLR不但表達於免疫細胞上，還可在各種腫瘤細胞中表達，參與腫瘤免疫監視，對腫瘤的生長發揮不同的作用。其中TLR8激活後增強自然殺傷細胞(NK cells)的活性，並提高抗體依賴的細胞調節的細胞毒性(ADCC)以及誘導Th1極化。TLR8激動劑在癌症治療中作為一種有潛力的佐劑，目的在於誘導針對腫瘤細胞的特異性免疫應答，提高已獲批准的單株抗體療法臨床療效，尤其是在ADCC降低的個體。

鑒於TLR-8激動劑具有治療多種疾病的重要潛力，臨床上對於活性強、選擇性高的新型TLR-8激動劑具有迫切需求。

本發明人經過潛心研究，設計合成了一系列芳胺類化合物，其顯示出優異的TLR8激動活性，可以開發為治療與TLR8相關的疾病的藥物。

因此，本發明的目的是提供一種通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，

其中，

X₁為CR¹或N；

X₂為CR²或N；

X₃為CR³或N；

X₄為CR⁴或N；

L選自一個鍵、-(CH₂)_v-、-C(O)(CH₂)_t-或-(CH₂)_tC(O)-；

R¹選自氫、鹵素、胺基、硝基、氰基、羥基、巰基、羧基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基；

R²選自氫、鹵素、氰基、側氧基、烷基、烯基、炔基、-OR^a、-SR^a、-NR^aR^b、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基視需要進一步被一個或多個Q₁基團所取代；

R³選自氫、鹵素、氰基、側氧基、烷基、烯基、炔基、-OR^a、-SR^a、-NR^aR^b、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基視需要進一步被一個或多個Q₂基團所取代；

R⁴選自氫、鹵素、胺基、硝基、氰基、羥基、巰基、羧基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基；

R⁵和R⁶各自獨立地選自氫、烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基；其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基視需要進一步被選自氘代、鹵素、硝基、氰基、側氧基、烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-OR^a、-SR^a、-NR^aR^b、-C(O)R^a、-O(O)CR^a、-C(O)OR^a、-C(O)NR^aR^b、-NR^aC(O)R^b、-S(O)_nR^a、-S(O)_nNR^aR^b和-NR^aS(O)_nR^b的一個或多個基團取代；

Q₁和Q₂各自獨立地選自鹵素、硝基、氰基、側氧基、烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-OR^a、-SR^a、-(CH₂)_v-NR^aR^b、-NR^aR^b、-C(O)R^a、-O(O)CR^a、-C(O)OR^a、-C(O)NR^aR^b、-NR^aC(O)R^b、-S(O)_nR^a、-S(O)_nNR^aR^b和-NR^aS(O)_nR^b，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基視需要進一步被選自鹵素、胺基、硝基、氰基、羧基、酯基、側氧基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-OR^c、-SR^c、-(CH₂)_v-OR^c、-(CH₂)_v-NR^cR^d、-NR^cR^d、-C(O)R^c、-O(O)CR^c、-C(O)OR^c、-C(O)NR^cR^d、-NR^cC(O)R^d、-S(O)_nR^a、-S(O)_nNR^cR^d和-NR^cS(O)_nR^d的一個或多個基團取代；

R^a和R^b各自獨立地選自氫、鹵素、羥基、硝基、氰基、側氧、烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基視需要進一步被選自鹵素、胺基、硝基、氰基、羧基、酯基、側氧基、烷基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-OR^c、 -SR^c、-(CH₂)_v-OR^c、-(CH₂)_v-NR^cR^d、-NR^cR^d、-C(O)R^c、-O(O)CR^c、-C(O)OR^c、-C(O)NR^cR^d、-NR^cC(O)R^d、-S(O)_nR^a、-S(O)_nNR^cR^d和-NR^cS(O)_nR^d中的一個或多個基團取代；

或者R^a和R^b與他們連接的氮原子一起形成含氮雜環基，該含氮雜環基除了N之外，視需要進一步含有選自N、O、S的一個或多個雜原子，該含氮雜環基視需要進一步被選自鹵素、硝基、氰基、側氧基、羧基、酯基、烷基、鹵烷基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-OR^c、-SR^c、-(CH₂)_v-OR^c、-(CH₂)_v-NR^cR^d、-NR^cR^d、-C(O)R^c、-O(O)CR^c、-C(O)OR^c、-C(O)NR^cR^d、-NR^cC(O)R^d、-S(O)_nR^a、-S(O)_nNR^cR^d和-NR^cS(O)_nR^d的一個或多個基團取代；

R^c和R^d各自獨立地選自氫、鹵素、羥基、硝基、氰基、側氧、烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基視需要進一步被選自鹵素、胺基、硝基、氰基、羥基、巰基、羧基、酯基、側氧基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個基團取代；

或者R^c和R^d與他們連接的氮原子一起形成含氮雜環基，該含氮雜環基除了N之外，視需要進一步含有選自N、O、S的一個或多個雜原子，該含氮雜環基視需要進一步被選自鹵素、硝基、氰基、側氧基、羥基、巰基、羧基、酯基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

n為1或2；

v為1至6的整數；

t為0至6。

在一個具體的實施方案中，根據本發明所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，其為通式(II)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，

其中，X₁、X₂、X₃、L、R⁴、R⁵、R⁶如通式(I)所定義。

在另一個具體的實施方案中，根據本發明所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，其為通式(III)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，

其中，L、R¹、R³、R⁴、R⁵、R⁶如通式(I)所定義。

在另一個具體的實施方案中，根據本發明所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，其為通式(IV)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，

其中，L、R¹、R²、R⁴、R⁵、R⁶如通式(I)所定義。

在另一個具體的實施方案中，根據本發明所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，其為通式(V)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，

其中，L、R²、R⁴、R⁵、R⁶如通式(I)所定義。

在另一個具體的實施方案中，根據本發明所述的通式(I)~(V)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，其中，

L選自一個鍵或-C(O)-；較佳一個鍵。

L選自-(CH₂)_v-；v為1或2，較佳1。

在另一個具體的實施方案中，根據本發明所述的通式(I)~(V)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，其為通式(I-1)、(II-1)、(III-1)、(IV-1)、(V-1)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，

其中，X₁、X₂、X₃、X₄、R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶如通式(I)所定義。

在另一個具體的實施方案中，根據本發明所述的通式(I)~(V)或通式(I-1)、(II-1)、(III-1)、(IV-1)、(V-1)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，其中，

R³選自氫、鹵素、C₁-C₆烷基、C₆-C₁₀芳基和5至10員雜芳基，其中該C₁-C₆烷基、C₆-C₁₀芳基和5至10員雜芳基視需要進一步被一個或多個Q₂基團所取代；

Q₂選自鹵素、C₁-C₆烷基、4-6員雜環基、C₆-C₁₀芳基、5至10員雜芳基、-NR^aR^b，其中該C₆-C₁₀芳基和5至10員雜芳基視需要進一步被選自鹵素、C₁-C₆烷基、-(CH₂)_v-NR^cR^d的一個或多個基團取代；

R^a和R^b各自獨立地選自氫、C₁-C₆烷基；

或者R^a和R^b與他們連接的氮原子一起形成4-6員含氮雜環基，該4-6員含氮雜環基除了N之外，視需要進一步含有選自N、O、S的一個或多個雜原子，該4-6員含氮雜環基視需要進一步被選自側氧基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆鹵烷基、C₃-C₆環烷基、-OR^c、-SR^c、-(CH₂)_v-OR^c、-NR^cR^d的一個或多個基團取代；

R^c和R^d各自獨立地選自氫、C₁-C₆烷基；

或者R^c和R^d與他們連接的氮原子一起形成4-6員含氮雜環基，該4-6員含氮雜環基除了N之外，視需要進一步含有選自N、O、S的一個或多個雜原子，該4-6員含氮雜環基視需要進一步被選自鹵素、C₁-C₆烷基的一個或多個基團取代；

v為1至6的整數。

在另一個具體的實施方案中，根據本發明所述的通式(I)~(V)或通式(I-1)、(II-1)、(III-1)、(IV-1)、(V-1)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，其中，R³選自氫、鹵素、C₁-C₆烷基，較佳氫。

R³選自C₆-C₁₀芳基和5至10員雜芳基，較佳苯基或5-6員雜芳基；其中該C₆-C₁₀芳基和5至10員雜芳基視需要進一步被一個或多個Q₂基團所取代；

Q₂選自鹵素、C₁-C₆烷基、4-6員雜環基、C₆-C₁₀芳基、5至10員雜芳基、-NR^aR^b，其中該C₆-C₁₀芳基和5至10員雜芳基視需要進一步被選自鹵素、C₁-C₆烷基的一個或多個基團取代；

R^a和R^b各自獨立地選自氫、C₁-C₆烷基；

R^c和R^d各自獨立地選自氫、C₁-C₆烷基；

或者R^c和R^d與他們連接的氮原子一起形成4-6員含氮雜環基，該4-6員含氮雜環基除了N之外，視需要進一步含有選自N、O、S的一個或多個雜原子，該4-6員含氮雜環基視需要進一步被選自鹵素、C₁-C₆烷基的一個或多個基團取代v為1至6的整數，較佳1或2。

R³選自5至10員雜芳基，較佳5或6員雜芳基，更佳吡啶基、嘧啶基、咪唑基、吡唑基、吡咯基、吡啶并咪唑基、吡啶并吡咯基、吡啶并吡唑基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、苯并吡咯基；該雜芳基視需要進一步被一個或多個Q₂基團所取代；

Q₂選自鹵素、C₁-C₆烷基、C₆-C₁₀芳基較佳苯基、5至10員雜芳基較佳5或6員雜芳基，其中該芳基和雜芳基視需要進一步被選自鹵素、C₁-C₆烷基的一個或多個基團取代。

Q₂選自鹵素、C₁-C₆烷基、4-6員雜環基或-NR^aR^b，較佳-NR^aR^b；

R^a和R^b各自獨立地選自氫、C₁-C₆烷基；

R^c和R^d各自獨立地選自氫、C₁-C₆烷基；

R³選自C₆-C₁₀芳基，較佳苯基；該芳基視需要進一步被Q₂基團所取代；

Q₂選自5或6員雜芳基，其中該5或6員雜芳基視需要進一步被選自鹵素、C₁-C₆烷基的一個或多個基團取代。

R³選自C₁-C₆烷基，較佳甲基；該C₁-C₆烷基視需要進一步被Q₂基團所取代；

Q₂選自C₆-C₁₀芳基，較佳苯基，其中該C₆-C₁₀芳基視需要進一步被-(CH₂)_v-NR^cR^d取代；

R^c和R^d與他們連接的氮原子一起形成4-6員含氮雜環基，該4-6員含氮雜環基除了N之外，視需要進一步含有選自N、O、S的一個或多個雜原子，該4-6員含氮雜環基視需要進一步被選自鹵素、C₁-C₆烷基的一個或多個基團取代；

v為1至6的整數，較佳1或2。

在另一個具體的實施方案中，根據本發明該通式(I)~(V)或通式(I-1)、(II-1)、(III-1)、(IV-1)、(V-1)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，其中，

R²選自氫、鹵素、C₁-C₆烷基、-NR^aR^b，該C₁-C₆烷基視需要進一步被Q₁取代；

Q₁選自C₆-C₁₀芳基、5至10員雜芳基，其中該C₆-C₁₀芳基和5至10員雜芳基視需要進一步被選自鹵素、C₁-C₆烷基、-(CH₂)_v-NR^cR^d的一個或多個基團取代；

R^a、R^b各自獨立地選自氫、C₁-C₆烷基；

R^c和R^d各自獨立地選自氫、C₁-C₆烷基；

v為1至6的整數，較佳1或2。

在另一個具體的實施方案中，根據本發明所述的通式(I)~(V)或通式(I-1)、(II-1)、(III-1)、(IV-1)、(V-1)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，其中，R²選自氫、鹵素、C₁-C₆烷基、-NR^aR^b；

R^a、R^b各自獨立地選自氫、C₁-C₆烷基。

R²選自C₁-C₆烷基，較佳甲基；該C₁-C₆烷基視需要進一步被Q₂基團所取代；

v為1至6的整數，較佳1或2。

在另一個具體的實施方案中，根據本發明所述的通式(I)~(V)或通式(I-1)、(II-1)、(III-1)、(IV-1)、(V-1)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，其中，R¹選自氫、鹵素、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆鹵烷基、C₁-C₆鹵烷氧基；較佳，R¹為氫或鹵素。

在另一個具體的實施方案中，根據本發明所述的通式(I)~(V)或通式(I-1)、(II-1)、(III-1)、(IV-1)、(V-1)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，其中，R⁴選自氫、鹵素、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆鹵烷基、C₁-C₆鹵烷氧基；較佳，R⁴為氫或鹵素。

R⁵和R⁶各自獨立地選自氫和C₁-C₁₂烷基，該C₁-C₁₂烷基視需要進一步被選自氘代、-OR^a、-SR^a、-NR^aR^b的一個或多個基團取代；

R^a選自氫、C₁-C₆烷基；

R^b選自氫、C₁-C₆烷基、C₃-C₆環烷基和5至7員雜環基；

較佳地，R⁵為氫，R⁶為C₁-C₁₂烷基，該C₁-C₁₂烷基視需要進一步被選自氘代、-OH的一個或多個基團取代。

本發明的典型化合物，包括但不限於：

或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽。

本發明進一步提供一種製備根據本發明所述的通式(III-1)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽的方法，其包括以下步驟：

式A3的化合物與硼酸或硼酸頻哪醇酯化合物藉由金屬催化的交叉偶聯反應(例如Suzuki偶聯)得到式A4的化合物；然後，用合適的酸(例如三氟乙酸)脫保護基，得到通式(III-1)所示的化合物；催化劑如Pd(PPh₃)₄、K₂CO₃、Cs₂CO₃；

或者，

式A7的化合物與硼酸或硼酸頻哪醇酯化合物藉由金屬催化的交叉偶聯反應(例如Suzuki偶聯)，得到通式(III-1)所示的化合物；催化劑如Pd(PPh₃)₄、K₂CO₃、Cs₂CO₃；

其中，R¹、R³、R⁴、R⁵、R⁶如通式(III-1)所定義。

本發明進一步提供一種製備根據本發明所述的通式(IV-1)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽的方法，其包括以下步驟：

式B3的化合物與硼酸或硼酸頻哪醇酯化合物藉由金屬催化的交叉偶聯反應(例如Suzuki偶聯)得到式B4的化合物；然後，用合適的酸(例如三氟乙酸)脫保護基，得到通式(IV-1)所示的化合物；催化劑如Pd(PPh₃)₄、K₂CO₃、Cs₂CO₃；

或者，

式B7的化合物與硼酸或硼酸頻哪醇酯化合物藉由金屬催化的交叉偶聯反應(例如Suzuki偶聯)，得到通式(IV-1)所示的化合物；催化劑如Pd(PPh₃)₄、K₂CO₃、Cs₂CO₃；

其中，R¹、R²、R⁴、R⁵、R⁶如通式(IV-1)所定義。

本發明進一步提供一種製備根據本發明該通式(V-1)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽的方法，其包括以下步驟：

式C3的化合物與硼酸或硼酸頻哪醇酯化合物藉由金屬催化的交叉偶聯反應(例如Suzuki偶聯)得到式C4的化合物；然後，用合適的酸(例如三氟乙酸)脫保護基，得到通式(V-1)所示的化合物；催化劑如Pd(PPh₃)₄、K₂CO₃、Cs₂CO₃；

或者，可以藉由以下方案6製備通式(V-1)所示的化合物：

式C7的化合物與硼酸或硼酸頻哪醇酯化合物或R²Y化合物藉由金屬催化的交叉偶聯反應(例如Suzuki偶聯)，得到通式(V-1)所示的化合物；催化劑如Pd(PPh₃)₄、K₂CO₃、Cs₂CO₃；

其中，R²、R⁴、R⁵、R⁶如通式(V-1)所定義。

本發明進一步提供一種醫藥組成物，其包含根據本發明所述的通式化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，以及藥學上可接受的載體或賦形劑。

本發明進一步涉及根據本發明所述的通式化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽或包含其的醫藥組成物在製備TLR8激動劑中的用途。

本發明進一步涉及根據本發明所述的通式化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽或包含其的醫藥組成物在製備預防或治療TLR8相關疾病的藥物中的用途，該疾病可以為病毒感染性疾病或惡性腫瘤，該病毒感染性疾病例如B型病毒性肝炎、HIV病毒感染，該惡性腫瘤例如乳腺癌、宮頸癌、結腸癌、肺癌、胃癌、直腸癌、胰腺癌、腦癌、皮膚癌、口腔癌、前列腺癌、骨癌、腎癌、卵巢癌、膀胱癌、肝癌、輸卵管腫瘤、卵巢瘤、腹膜腫瘤、黑色素瘤、實體瘤、神經膠質瘤、神經膠母細胞瘤、肝細胞癌、乳突腎性瘤、頭頸部腫瘤、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤和非小細胞肺癌。

本發明進一步涉及一種根據本發明所述的通式化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽或包含其的醫藥組成物，其用作TLR8激動劑。

本發明進一步涉及一種根據本發明所述的通式化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽或包含其的醫藥組成物，其用於預防或治療TLR8相關疾病，該疾病可以為病毒感染性疾病或惡性腫瘤，該病毒感染性疾病例如B型病毒性肝炎、HIV病毒感染，該惡性腫瘤例如乳腺癌、宮頸癌、結腸癌、肺癌、胃癌、直腸癌、胰腺癌、腦癌、皮膚癌、口腔癌、前列腺癌、骨癌、腎癌、卵巢癌、膀胱癌、肝癌、輸卵管腫瘤、卵巢瘤、腹膜腫瘤、黑色素瘤、實體瘤、神經膠質瘤、神經膠母細胞瘤、肝細胞癌、乳突腎性瘤、頭頸部腫瘤、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤和非小細胞肺癌。

本發明進一步涉及一種激動TLR8的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的根據本發明所述的通式化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽或包含其的醫藥組成物。

本發明進一步涉及一種用於預防或治療TLR8相關疾病的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的根據本發明所述的通式化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽或包含其的醫藥組成物；該疾病可以為病毒感染性疾病或惡性腫瘤，該病毒感染性疾病例如B型病毒性肝炎、HIV病毒感染，該惡性腫瘤例如乳腺癌、宮頸癌、結腸癌、肺癌、胃癌、直腸癌、胰腺癌、腦癌、皮膚癌、口腔癌、前列腺癌、骨癌、腎癌、卵巢癌、膀胱癌、肝癌、輸卵管腫瘤、卵巢瘤、腹膜腫瘤、黑色素瘤、實體瘤、神經膠質瘤、神經膠母細胞瘤、肝細胞癌、乳突腎性瘤、頭頸部腫瘤、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤和非小細胞肺癌。

按照本發明所屬領域的常規方法，本發明化合物可以與鹼或者酸生成藥學上可接受的鹼式加成鹽或酸式加成鹽。該鹼包括無機鹼和有機鹼，可接受的有機鹼包括二乙醇胺、乙醇胺、N-甲基葡糖胺、三乙醇胺、胺丁三醇等，可接受的無機鹼包括氫氧化鋁、氫氧化鈣、氫氧化鉀、碳酸鈉和氫氧化鈉等。該酸包括無機酸和有機酸，可接受的無機酸包括鹽酸、硫酸、硝酸、磷酸、氫溴酸等。可接受的有機酸包括乙酸、三氟乙酸、甲酸、抗壞血酸等。

含活性成分的醫藥組成物可以是適用於口服的形式，例如片劑、糖錠劑、錠劑、水或油混懸液、可分散粉末或顆粒、乳液、硬或軟膠囊，或糖漿劑或酏劑。可按照本領域任何已知製備藥用組成物的方法製備口服組成物，此類組成物可含有一種或多種選自以下的成分：甜味劑、矯味劑、著色劑和防腐劑，以提供悅目和可口的藥用製劑。片劑含有活性成分和用於混合的適宜製備片劑的無毒的可藥用的賦形劑。這些賦形劑可以是惰性賦形劑，如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；造粒劑和崩解劑，例如微晶纖維素、交聯羧甲基纖維素鈉、玉米澱粉或藻酸；黏合劑，例如澱粉、明膠、聚乙烯吡咯烷酮或阿拉伯膠；和潤滑劑，例如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石粉。這些片劑可以不包衣或可藉由掩蓋藥物的味道或在胃腸道中延遲崩解和吸收，因而在較長時間內提供緩釋作用的已知技術將其包衣。例如，可使用水溶性味道掩蔽物質，例如羥丙基甲基纖維素或羥丙基纖維素，或延長時間物質例如乙基纖維素、醋酸丁酸纖維素。

也可用其中活性成分與惰性固體稀釋劑例如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土混合的硬明膠膠囊，或其中活性成分與水溶性載體例如聚乙二醇或油溶媒例如花生油、液體石蠟或橄欖油混合的軟明膠膠囊提供口服製劑。

水混懸液含有活性物質和用於混合的適宜製備水混懸液的賦形劑。此類賦形劑是懸浮劑，例如羧基甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮和阿拉伯膠；分散劑或濕潤劑，可以是天然產生的磷脂例如卵磷脂，或烯化氧與脂肪酸的縮合產物，例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或環氧乙烷與長鏈脂肪醇的縮合產物，例如十七碳亞乙基氧基鯨蠟醇(heptadeca乙基ene氧基cetanol)，或環氧乙烷與由脂肪酸和己糖醇衍生的部分酯的縮合產物，例如聚環氧乙烷山梨醇單油酸酯，或環氧乙烷與由脂肪酸和己糖醇酐衍生的偏酯的縮合產物，例如聚環氧乙烷脫水山梨醇單油酸酯。水混懸液也可以含有一種或多種防腐劑例如尼泊金乙酯或尼泊金正丙酯、一種或多種著色劑、一種或多種矯味劑和一種或多種甜味劑，例如蔗糖、糖精或阿司帕坦。

油混懸液可藉由使活性成分懸浮於植物油如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油，或礦物油例如液體石蠟中配製而成。油混懸液可含有增稠劑，例如蜂蠟、硬石蠟或鯨蠟醇。可加入上述的甜味劑和矯味劑，以提供可口的製劑。可藉由加入抗氧化劑例如丁羥茴醚或α-生育酚保存這些組成物。

藉由加入水，適用於製備水混懸液的可分散粉末和顆粒可以提供活性成分和用於混合的分散劑或濕潤劑、懸浮劑或一種或多種防腐劑。適宜的分散劑或濕潤劑和懸浮劑如上所述。也可加入其他賦形劑例如甜味劑、矯味劑和著色劑。藉由加入抗氧化劑例如抗壞血酸保存這些組成物。

本發明的醫藥組成物也可以是水包油乳劑的形式。油相可以是植物油例如橄欖油或花生油，或礦物油例如液體石蠟或其混合物。適宜的乳化劑可以是天然產生的磷脂，例如大豆卵磷脂，和由脂肪酸和己糖醇酐衍生的酯或偏酯，例如山梨坦單油酸酯，和該偏酯和環氧乙烷的縮合產物，例如聚環氧乙烷山梨醇單油酸酯。乳劑也可以含有甜味劑、矯味劑、防腐劑和抗氧劑。可用甜味劑例如甘油、丙二醇、山梨醇或蔗糖配製的糖漿和酏劑。此類製劑也可含有緩和劑、防腐劑、著色劑和抗氧劑。

本發明的醫藥組成物可以是無菌注射水溶液形式。可以使用的可接受的溶媒和溶劑有水、林格氏液和等滲氯化鈉溶液。無菌注射製劑可以是其中活性成分溶於油相的無菌注射水包油微乳。例如將活性成分溶於大豆油和卵磷脂的混合物中。然後將油溶液加入水和甘油的混合物中處理形成微乳。可藉由局部大量注射，將注射液或微乳注入患者的血流中。或者，最好按可保持本發明化合物恆定循環濃度的方式給予溶液和微乳。為保持這種恆定濃度，可使用連續靜脈內遞藥裝置。

本發明的醫藥組成物可以是用於肌內和皮下給藥的無菌注射水或油混懸液的形式。可按已知技術，用上述那些適宜的分散劑或濕潤劑和懸浮劑配製該混懸液。無菌注射製劑也可以是在無毒腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑中製備的無菌注射溶液或混懸液，例如在1,3-丁二醇中製備的溶液。此外，可方便地用無菌固定油作為溶劑或懸浮介質。為此目的，可使用包括合成甘油單或二酯在內的任何調和固定油。此外，脂肪酸例如油酸也可以製備注射劑。

可按用於直腸給藥的栓劑形式給予本發明化合物。可藉由將藥物與在普通溫度下為固體但在直腸中為液體，因而在直腸中會溶化而釋放藥物的適宜的無刺激性賦形劑混合來製備這些醫藥組成物。此類物質包括可可脂、甘油明膠、氫化植物油、各種分子量的聚乙二醇和聚乙二醇的脂肪酸酯的混合物。

所屬技術領域具有通常知識者熟知，藥物的給藥劑量依賴於多種因素，包括但並非限定於以下因素：所用特定化合物的活性、病人的年齡、病人的體重、病人的健康狀況、病人的行被、病人的飲食、給藥時間、給藥方式、排泄的速率、藥物的組合等。另外，最佳的治療方式如治療的模式、通式化合物的日用量或可藥用的鹽的種類可以根據傳統的治療方案來驗證。

本發明可以含有通式化合物，及其藥學上可接受的鹽、水合物或溶劑化物作為活性成分，與藥學上可接受的載體或賦型劑混合製備成組成物，並製備成臨床上可接受的劑型。本發明的衍生物可以與其他活性成分組合使用，只要它們不產生其他不利的作用，例如過敏反應等。本發明化合物可作為唯一的活性成分，也可以與其它治療與酪胺酸激酶活性相關的疾病的藥物聯合使用。聯合治療藉由將各個治療組分同時、分開或相繼給藥來實現。

術語說明

除非有相反陳述，在說明書和申請專利範圍中使用的術語具有下述含義。

術語“烷基”指飽和脂肪族烴基團，其為包含1至20個碳原子的直鏈或支鏈基團，較佳含有1至12個碳原子的烷基，更佳含有1至6個碳原子的烷基。非限制性實例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第三丁基、第二丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基，及其各種支鏈異構體等。更佳的是含有1至6個碳原子的低級烷基，非限制性實施例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第三丁基、第二丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代的或非取代的，當被取代時，取代基可以在任何可使用的連接點上被取代，該取代基較佳為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、側氧基、羧基或羧酸酯基。

術語“烯基”指由至少由兩個碳原子和至少一個碳-碳雙鍵組成的如上定義的烷基，例如乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-、2-或3-丁烯基等。烯基可以是取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基。

術語“炔基”指由至少由兩個碳原子和至少一個碳-碳三鍵組成的如上定義的烷基，例如乙炔基、丙炔基、丁炔基等。炔基可以是取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基。

術語“環烷基”指飽和或部分不飽和單環或多環環狀烴取代基，環烷基環包含3至20個碳原子，較佳包含3至12個碳原子，更佳包含3至10個碳原子，進一步佳包含3至8個碳原子，最佳包含3至6個碳原子。單環環烷基的非限制性實例包括環丙基、環丁基、環戊基、環戊烯基、環己基、環己烯基、環己二烯基、環庚基、環庚三烯基、環辛基等；多環環烷基包括螺環、稠環和橋環的環烷基。

術語“螺環烷基”指5至20員的單環之間共用一個碳原子(稱螺原子)的多環基團，其可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子系統。較佳為6至14員，更佳為7至10員。根據環與環之間共用螺原子的數目將螺環烷基分為單螺環烷基、雙螺環烷基或多螺環烷基，較佳為單螺環烷基和雙螺環烷基。更佳為4員/4員、4員/5員、4員/6員、5員/5員或5員/6員單螺環烷基。螺環烷基的非限制性實例包括：

術語“稠環烷基”指5至20員，系統中的每個環與體系中的其他環共享毗鄰的一對碳原子的全碳多環基團，其中一個或多個環可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子系統。較佳為6至14員，更佳為7至10員。根據組成環的數目可以分為雙環、三環、四環或多環稠環烷基，較佳為雙環或三環，更佳為5員/5員或5員/6員雙環烷基。稠環烷基的非限制性實例包括：

術語“橋環烷基”指5至20員，任意兩個環共用兩個不直接連接的碳原子的全碳多環基團，其可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子系統。較佳為6至14員，更佳為7至10員。根據組成環的數目可以分為雙環、三環、四環或多環橋環烷基，較佳為雙環、三環或四環，更佳為雙環或三環。橋環烷基的非限制性實例包括：

該環烷基環可以稠合於芳基、雜芳基或雜環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為環烷基，非限制性實例包括茚滿基、四氫萘基、苯并環庚烷基等。環烷基可以是視需要取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、側氧基、羧基或羧酸酯基。

術語“雜環基”指飽和或部分不飽和單環或多環環狀烴取代基，其包含3至20個環原子，其中一個或多個環原子為選自氮、氧或S(O)_m(其中m是整數0至2)的雜原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的環部分，其餘環原子為碳。較佳包含3至12個環原子，其中1~4個是雜原子；最佳包含3至8個環原子，其中1~3個是雜原子；最佳包含5至7個環原子，其中1~2或1~3個是雜原子。單環雜環基的非限制性實例包括吡咯烷基、咪唑烷基、四氫呋喃基、四氫噻吩基、二氫咪唑基、二氫呋喃基、二氫吡唑基、二氫吡咯基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、硫嗎啉基、高哌嗪基、吡喃基等，較佳1、2、5-噁二唑基、吡喃基或嗎啉基。多環雜環基包括螺環、稠環和橋環的雜環基。

術語“螺雜環基”指5至20員的單環之間共用一個原子(稱螺原子)的多環雜環基團，其中一個或多個環原子為選自氮、氧或S(O)_m(其中m是整數0至2)的雜原子，其餘環原子為碳。其可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子系統。較佳為6至14員，更佳為7至10員。根據環與環之間共用螺原子的數目將螺雜環基分為單螺雜環基、雙螺雜環基或多螺雜環基，較佳為單螺雜環基和雙螺雜環基。更佳為4員/4員、4員/5員、4員/6員、5員/5員或5員/6員單螺雜環基。螺雜環基的非限制性實例包括：

術語“稠雜環基”指5至20員，系統中的每個環與體系中的其他環共享毗鄰的一對原子的多環雜環基團，一個或多個環可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子系統，其中一個或多個環原子為選自氮、氧或S(O)_m(其中m是整數0至2)的雜原子，其餘環原子為碳。較佳為6至14員佳為7至10員。根據組成環的數目可以分為雙環、三環、四環或多環稠雜環基，較佳為雙環或三環，更佳為5員/5員或5員/6員雙環稠雜環基。稠雜環基的非限制性實例包括：

術語“橋雜環基”指5至14員，任意兩個環共用兩個不直接連接的原子的多環雜環基團，其可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子系統，其中一個或多個環原子為選自氮、氧或S(O)_m(其中m是整數0至2)的雜原子，其餘環原子為碳。較佳為6至14員，更佳為7至10員。根據組成環的數目可以分為雙環、三環、四環或多環橋雜環基，較佳為雙環、三環或四環，更佳為雙環或三環。橋雜環基的非限制性實例包括：

該雜環基環可以稠合於芳基、雜芳基或環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為雜環基，其非限制性實例包括：

和

等。

雜環基可以是視需要取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、側氧基、羧基或羧酸酯基。

術語“芳基”指具有共軛的π電子體系的6至14員全碳單環或稠合多環(也就是共享毗鄰碳原子對的環)基團，較佳為6至10員，例如苯基和萘基。更較佳苯基。該芳基環可以稠合於雜芳基、雜環基或環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為芳基環，其非限制性實例包括：

芳基可以是取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、羧基或羧酸酯基。

術語“雜芳基”指包含1至4個雜原子、5至14個環原子的雜芳族體系，其中雜原子選自氧、硫和氮。雜芳基較佳為5至10員，含1至3個雜原子；更佳為5員或6員，含1至2個雜原子；較佳例如咪唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡唑基、噁唑基、吡咯基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、噻二唑、吡嗪基等，較佳為咪唑基、噻唑基、吡唑基或嘧啶基、噻唑基；更佳吡唑基或噻唑基。該雜芳基環可以稠合於芳基、雜環基或環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為雜芳基環，其非限制性實例包括：

雜芳基可以是視需要取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、羧基或羧酸酯基。

術語“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(非取代的環烷基)，其中烷基的定義如上所述。烷氧基的非限制性實例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、環丙氧基、環丁氧基、環戊氧基、環己氧基。烷氧基可以是視需要取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、羧基或羧酸酯基。

術語“鹵烷基”指被一個或多個鹵素取代的烷基，其中烷基如上所定義。

術語“鹵烷氧基”指被一個或多個鹵素取代的烷氧基，其中烷氧基如上所定義。

術語“羥烷基”指被一個或多個羥基取代的烷基，其中烷基如上所定義。

術語“羥基”指-OH基團。

術語“鹵素”指氟、氯、溴或碘。

術語“胺基”指-NH₂。

術語“氰基”指-CN。

術語“硝基”指-NO₂。

術語“側氧基”指=O。

術語“羧基”指-C(O)OH。

術語“巰基”指-SH。

術語“酯基”指-C(O)O(烷基)或-C(O)O(環烷基)，其中烷基和環烷基如上所定義。

術語“醯基”指含有-C(O)R基團的化合物，其中R為烷基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基。

“視需要”或“視需要地”意味著隨後所描述的事件或環境可以但不必發生，該說明包括該事件或環境發生或不發生的場合。例如，“視需要被烷基取代的雜環基團”意味著烷基可以但不必須存在，該說明包括雜環基團被烷基取代的情形和雜環基團不被烷基取代的情形。

“取代的”指基團中的一個或多個氫原子，較佳為最多5個，更佳為1~3個氫原子彼此獨立地被相應數目的取代基取代。不言而喻，取代基僅處在它們的可能的化學位置，本領域技術人員能夠在不付出過多努力的情況下確定(藉由實驗或理論)可能或不可能的取代。例如，具有游離氫的胺基或羥基與具有不飽和(如烯屬)鍵的碳原子結合時可能是不穩定的。

“醫藥組成物”表示含有一種或多種本文所述化合物或其生理學上/可藥用的鹽或前體藥物與其他化學組分的混合物，以及其他組分例如生理學/可藥用的載體和賦形劑。醫藥組成物的目的是促進對生物體的給藥，利於活性成分的吸收進而發揮生物活性。

“可藥用鹽”是指本發明化合物的鹽，這類鹽用於哺乳動物體內時具有安全性和有效性，且具有應有的生物活性。

本發明化合物的合成方法

為了完成本發明的目的，本發明採用如下合成方案製備本發明的通式(I)化合物。

當通式(I)所示的化合物為通式(III-1)所示的化合物時，藉由以下方案1製備通式(III-1)所示的化合物：

方案1

在室溫，合適的鹼(例如DIEA)存在下，式A1的化合物藉由與親核性胺的反應，得到式A2的化合物；然後，在加熱條件下，式A2的化合物與2,4-二甲氧基苄胺反應，得到式A3的化合物；式A3的化合物可以藉由金屬催化(例如Pd(PPh₃)₄、K₂CO₃、Cs₂CO₃)的交叉偶聯反應(例如Suzuki偶聯)與硼酸或硼酸頻哪醇酯化合物反應，得到式A4的化合物；用合適的酸(例如三氟乙酸)脫保護基，得到通式(III-1)所示的化合物；

其中，R¹、R³、R⁴、R⁵、R⁶如通式(III-1)所定義。

或者，可以藉由以下方案2製備通式(III-1)所示的化合物：

方案2

式A6的化合物與親核性胺在縮合劑(例如BOP)存在下反應，得到偶聯產物式A7的化合物；式A7的化合物可以藉由金屬催化(例如Pd(PPh₃)₄、K₂CO₃、Cs₂CO₃)的交叉偶聯反應(例如Suzuki偶聯)與硼酸或硼酸頻哪醇酯化合物反應，得到通式(III-1)所示的化合物；

其中，R¹、R³、R⁴、R⁵、R⁶如通式(III-1)所定義。

當通式(I)所示的化合物為通式(IV-1)所示的化合物時，藉由以下方案3製備通式(IV-1)所示的化合物：

方案3

在室溫，合適的鹼(例如DIEA)存在下，式B1的化合物藉由與親核性胺的反應，得到式B2的化合物；然後，在加熱條件下，式B2的化合物與2,4-二甲氧基苄胺反應，得到式B3的化合物；式B3的化合物可以藉由金屬催化(例如Pd(PPh₃)₄、K₂CO₃、Cs₂CO₃)的交叉偶聯反應(例如Suzuki偶聯)與硼酸或硼酸頻哪醇酯化合物反應，得到式B4的化合物；用合適的酸(例如三氟乙酸)脫保護基，得到通式(IV-1)所示的化合物；

其中，R¹、R²、R⁴、R⁵、R⁶如通式(IV-1)所定義。

或者，可以藉由以下方案4製備通式(IV-1)所示的化合物：

方案4

式B6的化合物與親核性胺在縮合劑(例如BOP)存在下反應，得到偶聯產物式B7的化合物；式B7的化合物可以藉由金屬催化(例如Pd(PPh₃)₄、K₂CO₃、Cs₂CO₃)的交叉偶聯反應(例如Suzuki偶聯)與硼酸或硼酸頻哪醇酯化合物反應，得到通式(IV-1)所示的化合物；

其中，R¹、R²、R⁴、R⁵、R⁶如通式(IV-1)所定義。

當通式(I)所示的化合物為通式(V-1)所示的化合物時，藉由以下方案5製備通式(V-1)所示的化合物：

方案5

在室溫，合適的鹼(例如DIEA)存在下，式C1的化合物藉由與親核性胺的反應，得到式C2的化合物；然後，在加熱條件下，式C2的化合物與2,4-二甲氧基苄胺反應，得到式C3的化合物；式C3的化合物可以藉由金屬催化(例如Pd(PPh₃)₄、K₂CO₃、Cs₂CO₃)的交叉偶聯反應(例如Suzuki 偶聯)與硼酸或硼酸頻哪醇酯化合物反應，得到式C4的化合物；用合適的酸(例如三氟乙酸)脫保護基，得到通式(V-1)所示的化合物；

其中，R²、R⁴、R⁵、R⁶如通式(V-1)所定義。

或者，可以藉由以下方案6製備通式(V-1)所示的化合物：

方案6

式C6的化合物與親核性胺在縮合劑(例如BOP)存在下反應，得到偶聯產物式C7的化合物；式C7的化合物可以藉由金屬催化(例如Pd(PPh₃)₄、K₂CO₃、Cs₂CO₃)的交叉偶聯反應(例如Suzuki偶聯)與硼酸或硼酸頻哪醇酯化合物反應，得到通式(V-1)所示的化合物；

其中，R²、R⁴、R⁵、R⁶如通式(V-1)所定義。

圖1為實施例52化合物在食蟹猴血清中的參數圖。

進一步藉由實施例來理解本發明的化合物及其製備，這些實施例說明了一些製備或使用該化合物的方法。然而，要理解的是，這些實施例不限制本發明。現在已知的或進一步開發的本發明的變化被認為落入本文中描述的和要求保護的本發明範圍之內。

本發明化合物是利用便利的起始原料和通用的製備步驟來完成製備的。本發明給出了典型的或傾向性的反應條件，諸如反應溫度、時間、溶劑、壓力、反應物的莫耳比。但是除非特殊說明，其他反應條件也能採納。優化條件可能隨著具體的反應物或溶劑的使用而改變，但在通常情況下，反應優化步驟和條件都能得到確定。

另外，本發明中可能用到了一些保護基團來保護某些官能團避免不必要的反應。適宜於各種官能團的保護基以及它們的保護或脫保護條件已經為本領域技術人員廣泛熟知。例如T.W.Greene和G.M.Wuts的《有機製備中的保護基團》(第3版,Wiley,New York,1999和書中的引用文獻)詳細描述了大量的保護基團的保護或脫保護。

化合物和中間體的分離和純化依據具體的需求採取適當的方法和步驟，例如過濾、萃取、蒸餾、結晶、管柱層析、製備薄層板色譜、製備高效液相色譜或上述方法的混合使用。其具體使用方法可參閱本發明描述的實例。當然，其他類似的分離和純化手段也是可以採用的。可以使用常規方法(包括物理常數和波譜數據)對其進行表徵。

化合物的結構是藉由核磁共振(NMR)或/和質譜(MS)來確定的。NMR位移以10^-6(ppm)的單位給出。NMR的測定是用Brukerdps 300型核磁儀，測定溶劑為氘代二甲基亞碸(DMSO-d ₆)、氘代氯仿(CDCl₃)、氘代甲醇(CD₃OD)、內標為四甲基矽烷(TMS)。

MS的測定用LC(Waters 2695)/MS(Quattro Premier x E)質譜儀(生產商：沃特世)(Photodiode Array Detector)。

製備液相色譜法使用lc6000高效液相色譜儀(生產商：創新通恒)。色譜管柱為Daisogel C18 10μm 100A(30mm×250mm)，流動相：乙腈/水。

薄層色譜法(TLC)使用青島海洋化工GF254矽膠板，反應監測用薄層色譜法使用的矽膠板採用的規格是0.20mm~0.25mm，製備薄層色譜法使用的矽膠板採用的規格是0.5mm。

矽膠管柱層析色譜法使用青島海洋矽膠100~200目、200~300目和300~400目矽膠為載體。

本發明的已知的起始原料可以採用或按照本領域已知的方法來合成，或可購買自網化商城、北京偶合、Sigma、百靈威、易世明、上海書亞、上海伊諾凱、安耐吉化學、上海畢得等公司。

實施例中無特殊說明，反應能夠均在氮氣氛下進行。

氬氣氛或氮氣氛是指反應瓶連接一個約1L容積的氬氣或氮氣氣球。

反應溶劑，有機溶劑或惰性溶劑各自表述為使用的該溶劑在所描述的反應條件下不參與反應，包括，如苯、甲苯、乙腈、四氫呋喃(THF)、二甲基甲醯胺(DMF)、氯仿、二氯甲烷、乙醚、甲醇、氮-甲基吡咯碄酮(NMP)、吡啶等。實施例中無特殊說明，溶液是指水溶液。

本發明中所描述的化學反應一般在常壓下進行。反應溫度在-78℃至200℃之間。反應時間和條件為，例如，一個大氣壓下，-78℃至200℃之間，大約1至24小時內完成。如果反應過夜，則反應時間一般為16小時。實施例中無特殊說明，反應的溫度為室溫，為20℃~30℃。

除非另行定義，文中所使用的所有專業與科學用語與本領域熟練人員所熟悉的意義相同。此外，任何與所記載內容相似或均等的方法及材料皆可應用於本發明方法中。

實施例1：(R)-2-((2-胺基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(1)的製備

步驟1：1-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)丙-2-酮(1b)的製備

於室溫，將羥基丙酮1a(100g，1.35mol)溶於二氯甲烷(DCM)(1L)中。將溶液降溫至0℃，依次加入咪唑(175g，2.57mol)和第三丁基二甲基氯矽烷(TBDMSCl)(245g，1.63mol)。反應液在0℃攪拌1小時，然後緩慢升至室溫，繼續攪拌12小時。反應完全後，將反應液用水洗滌(3×1L)，有機相減壓濃縮，得淡黃色液體化合物1b(200g,78.7%)。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：4.15(s,2H),2.17(s,3H),0.93(s,9H),0.09(s,6H)。

步驟2：(S,E)-N-(1-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)丙-2-亞基)-2-甲基丙-2-磺醯胺(1c)的製備

於室溫，將化合物1b(200g，1.06mol)和S-第三丁基亞磺醯胺(129g，1.06mol)溶於四氫呋喃(3.6L)中。反應液滴加入原鈦酸四異丙酯(800mL，2.66mol)。反應液在70℃攪拌12小時。反應完成後，冷卻至室溫。將反應液減壓濃縮，將所得棕色液體加入冰水(1L)，過濾除去產生的固體，加入乙酸乙酯(3×500mL)萃取，合併的有機相用飽和食鹽水(500mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。所得棕色油狀粗品用矽膠管柱層析色譜法分離純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚=3%-20%)，得棕黃色液體化合物1c(50g，16.1%)。

¹H NMR(300MHz，氯仿-d)δ 4.23(s,2H),2.32(s,3H),1.23(s,9H),0.90(s,9H),0.07(s,6H)。

LC-MS：m/z 292.2[M+H]⁺。

步驟3：(S)-N-((R)-1-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-甲基己-2-基)-2-甲基丙-2-磺醯胺(1d)的製備

於室溫，在氮氣氛下，將化合物1c(50g，0.171mol)溶於甲苯(500mL)。反應液在-78℃滴加入三甲基鋁的庚烷溶液(207mL，1mol/L，0.21mol)，滴加完畢後，繼續攪拌0.5小時。然後在-78℃再滴加正丁基鋁的正己烷溶液(102mL,2.5mol/L,0.26mol)，滴加完畢後，在-78℃攪拌4小時。反應完畢後，加水(500mL)淬滅，過濾，加入乙酸乙酯(3×200mL)萃取，合併的有機相用飽和食鹽水(300mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。所得黃色粗品用矽膠管柱層析色譜法分離純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚=7%-10%)，得到黃色液體化合物1d(26g,43.4%)。

¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 3.66(s,1H),3.51(d,J=9.4Hz,1H),3.32(d,J=9.4Hz,1H),1.72-1.62(m,2H),1.35-1.24(m,4H),1.18(s,9H),1.14(s,3H),0.92-0.87(m,12H),0.05(s,3H),0.05(s,3H)。

LC-MS：m/z 350.3[M+H]⁺。

步驟4：(R)-1-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-甲基己-2-胺(1e)的製備

於室溫，將化合物1d(26g，0.074mol)溶於四氫呋喃(250mL)和水(50mL)中，反應液加入碘單質(3.78g，0.015mol)，在50℃攪拌過夜。反應完畢後，加水(200mL)稀釋，反應液減壓除去四氫呋喃，加入乙酸乙酯(4×200mL)萃取，合併的有機相依次用硫代硫酸鈉溶液(400mL)和飽和食鹽水(400mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到棕色油狀液體化合物1e(15g,82.1%)，其未經純化直接用於下一步。

¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 3.30(q,J=9.4Hz,2H),1.54(s,2H),1.40-1.20(m,6H),0.98(s,3H),0.93-0.87(m,12H),0.04(s,6H)。

LC-MS：m/z 246.2[M+H]⁺。

步驟5：2,4-二氯吡啶并[4,3-d]嘧啶(1g)的製備

在室溫下，將吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮1f(50mg，0.31mmol)溶於三氯氧磷(1.5ml)中，然後緩慢加入N,N-二異丙基乙胺(DIEA)(356mg，2.75mmol)，反應液升溫至100℃並攪拌4小時。反應完畢，將反應液冷卻至室溫，用冰水(30mL)稀釋，快速用乙酸乙酯(3×8mL)萃取，有機相合併後用飽和食鹽水(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，所得化合物1g的乙酸乙酯溶液直接用於下步反應。

LC-MS：m/z 200.0[M+H]⁺。

步驟6：(R)-N-((1-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-甲基己-2-基)-2-氯吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(1h)的製備

於室溫，在上述1g的乙酸乙酯溶液中加入(R)-1-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-甲基己-2-胺1e(90.4mg，0.37mmol)和N,N-二異丙基乙胺(198mg，1.53mmol)。反應液在室溫攪拌4小時。反應完畢，反應液用水(30mL)稀釋，再用乙酸乙酯(3×30mL)萃取，有機相合併後用飽和食鹽水(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。將所得粗品用矽膠管柱層析色譜法純化(石油醚：乙酸乙酯=1：1)。所得產品經減壓濃縮，得黃色油狀化合物1h(16mg，12.7%)。

LC-MS：m/z 409.2[M+H]⁺。

步驟7：(R)-N ⁴-(1-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-甲基己-2-基)-N ²-(2,4-二甲氧基苄基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4-二胺(1i)的製備

於室溫，將化合物1h(16mg，0.039mmol)與2,4-二甲氧基苄胺(DMB-NH₂)(45.7mg，0.274mmol)溶於二噁烷(1mL)，然後將N,N-二異丙基乙胺(15mg,0.117mmol)加入體系。反應液在100℃攪拌4小時。反應完畢，將反應冷卻至室溫，用水(30mL)稀釋，再用乙酸乙酯(3×30mL)萃取，有機相合併後用飽和食鹽水(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。將所得粗品用矽膠管柱層析色譜法純化(石油醚：乙酸乙酯=1：1)。所得產品經減壓濃縮，得黃色油狀化合物1i(14mg，66.7%)。

LC-MS：m/z 540.3[M+H]⁺。

步驟8：(R)-2-((2-胺基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(1)的製備

於室溫，將化合物1i(14mg,0.027mmol)溶於三氟乙酸(TFA)(1mL)，於40℃攪拌過夜。反應完全後，反應液減壓濃縮，加入飽和碳酸氫鈉溶液(20mL)稀釋，再用乙酸乙酯(3×30mL)萃取，有機相合併後用飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。所得粗品用製備型色譜管柱分離純化(管柱型：XBridge Shield RP18 OBD管柱，5um，19*150mm；流動相A：水(10mmol/L碳酸氫銨)，流動相B：乙腈；流速：25mL/min；梯度：在8分鐘內18%-35%乙腈；檢測波長：220nm)，得到白色固體化合物1(3.4mg，44%)。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 9.04(s,1H),8.24(d,J=6.0Hz,1H),7.03(d,J=5.9Hz,1H),3.97(d,J=11.2Hz,1H),3.62(d,J=11.2Hz,1H),2.24-2.07(m,1H),1.74-1.58(m,1H),1.37(s,3H),1.32-1.16(m,4H),0.80(t,J=7.0Hz,3H)。

LC-MS：m/z 276.2[M+H]⁺。

實施例2：(R)-2-((2-胺基-7-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(2)的製備

步驟1：4-胺基-6-氯煙醯胺(2b)的製備

於室溫，將4-胺基-6-氯煙酸2a(1.00g，5.795mmol)溶於1,4-二噁烷(15mL)中，緩慢滴加氯化亞碸(8mL)，反應液於90℃攪拌反應2小時。反應液減壓濃縮，殘留物用四氫呋喃(THF)(5mL)稀釋。於室溫，向上述反應液中緩慢滴加氨水(10mL)，並繼續攪拌1小時。所得混合物經減壓濃縮得到黃色固體化合物2b(961mg，96.65%)。

LC-MS：m/z 172.0[M+H]⁺。

步驟2：7-氯吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(2c)的製備

於室溫，將化合物2b(961mg，5.60mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(DMF)(10mL)中，依次加入N,N-羰基二咪唑(CDI)(3.63g，22.39mmol)和1,8-二氮雜二環十一碳-7-烯(DBU)(2.13g，13.99mmol)，反應液於80℃攪拌反應1小時。反應完畢後，加水(30mL)淬滅，反應液用稀鹽酸調節pH至4，加入乙酸乙酯(3×40mL)萃取，合併的有機相用飽和食鹽水(100mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到暗黃色固體化合物2c(910mg，82.23%)。

LC-MS：m/z 198.0[M+H]⁺。

步驟3：2,4,7-三氯吡啶并[4,3-d]嘧啶(2d)的製備

於0℃，將化合物2c(457mg,2.31mmol)與三氯氧磷(5mL)混合，緩慢滴加N,N-二異丙基乙胺(1.49g,11.53mmol)。反應液在100℃攪拌反應2小時。反應完畢後，將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，得黑色油狀粗品化合物2d(540mg，粗品)，其未經純化直接用於下一步。

LC-MS：m/z 233.9[M+H]⁺。

步驟4：(R)-N-((1-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-甲基己-2-基)-2,7-二氯吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(2e)的製備

於室溫，將化合物2d(540mg，2.30mmol)溶於1,4-二噁烷(5mL)，依次加入(R)-1-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-甲基己-2-胺1e(1.13g，4.61mmol)和N,N-二異丙基乙胺(2.98g，23.03mmol)，室溫反應1.5小時。反應完全後，反應液加水(30mL)稀釋，用乙酸乙酯(3×30mL)萃取，合併的有機相用飽和食鹽水(100mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得粗品用矽膠管柱層析色譜法分離純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚=0-5%)，得到黃色油狀化合物2e(367mg，35.93%)。

LC-MS：m/z 443.2[M+H]⁺。

步驟5：(R)-N ⁴-(1-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-甲基己-2-基)-7-氯-N ²-(2,4-二甲氧基苄基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4-二胺(2f)的製備

於室溫，將化合物2e(367mg，0.83mmol)溶於1,4-二噁烷(5mL)，依次加入2,4-二甲氧基苄胺(969mg，5.80mmol)和N,N-二異丙基乙胺(321mg，2.48mmol)。反應液於100℃攪拌反應過夜。反應完全後，冷卻至室溫。反應液加水(20mL)稀釋，再用二氯甲烷(3×20mL)萃取，有機相合併後用飽和氯化銨溶液(2×30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得粗品用矽膠管柱層析色譜法分離純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚=0-8%)，得到淡黃色固體化合物2f(374mg，78.70%)。

LC-MS：m/z 574.3[M+H]⁺。

步驟6：(R)-N ⁴-(1-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-甲基己-2-基)-N ²-(2,4-二甲氧基苄基)-7-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4-二胺(2g)的製備

於室溫，將化合物2f(204mg，0.36mmol)溶於1,4-二噁烷(2mL)和水(0.4mL)，依次加入2-(4-甲基哌嗪-1-基)嘧啶-5-硼酸頻那醇酯(CAS：942922-07-8)(2h)(264mg，1.05mmol)、碳酸鉀(148mg，1.07mmol)和[1,1’-雙(二苯基磷基)二茂鐵]二氯化鈀(Pd(dppf)Cl₂)(26mg，0.036mmol)。反應液在氮氣氛下於95℃攪拌過夜。反應完全後，冷卻至室溫，加水(20mL)稀釋，用乙酸乙酯(3×20mL)萃取，合併的有機相用飽和食鹽水(40mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得粗品用製備薄層色譜法分離純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚=1：2)，得黃色油狀化合物2g(33mg，12.97%)。

LC-MS：m/z 716.4[M+H]⁺。

步驟7：(R)-2-((2-胺基-7-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(2)的製備

於室溫，將化合物2g(33mg，0.046mmol)溶於三氟乙酸(1mL)。反應液於40℃攪拌過夜。反應完全後，反應液減壓濃縮，所得粗品用製備薄層色譜法分離純化(流動相：二氯甲烷/甲醇/三乙胺=100：20：1)，得到類白色固體化合物2(6.4mg，28.66%)。

¹H NMR(300MHz，甲醇-d ₄)δ 9.19(d,J=0.7Hz,1H),8.96(s,2H),7.40(d,J=0.7Hz,1H),4.09(d,J=11.2Hz,1H),3.96(t,J=5.2Hz,4H),3.75(d,J=11.3Hz,1H),2.55(t,J=5.2Hz,4H),2.37(s,3H),2.31-2.20(m,1H),1.86-1.72(m,1H),1.50(s,3H),1.42-1.32(m,4H),0.96-0.89(m,3H)。

LC-MS：m/z 452.2[M+H]⁺。

實施例3：(R)-2-((2-胺基-7-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(3)的製備

與實施例2的製備方法相同，除了將化合物2-(4-甲基哌嗪-1-基)嘧啶-5-硼酸頻那醇酯(2h)替換為2-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-5-硼酸頻那醇酯(CAS：918524-63-7)(3b)，所得粗品用製備型色譜管柱分離純化(管柱型：SunFire Prep C18 OBD管柱，5um，19*150mm；流動相A：水(0.1%的甲酸)，流動相B：乙腈；流速：25mL/min；梯度：在8分鐘內6%-17%乙腈；檢測波長：220nm)，得到化合物3的甲酸鹽。

¹H NMR(300MHz，甲醇-d ₄)δ 9.41(s,1H),8.95(d,J=2.0Hz,1H),8.35(d,J=8.9Hz,1H),7.68(s,1H),7.07(d,J=8.8Hz,1H),4.21(d,J=11.4Hz,1H),4.13-3.88(m,4H),3.74(d,J=11.3Hz,1H),3.45-3.35(m,4H),2.96(s,3H),2.38-2.18(m,1H),1.87-1.72(m,1H),1.56(s,3H),1.49-1.29(m,4H),1.02-0.87(m,3H)。

LC-MS：m/z 451.3[M+H]⁺。

實施例4：(R)-2-((2-胺基-7-(5-甲基-6-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(4)的製備

步驟1：(5-甲基-6-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)硼酸(4b)的製備

於室溫，將化合物1-(5-溴-3-甲基吡啶-2-基)-4-甲基哌嗪4a(500mg，1.85mmol)溶於1,4-二噁烷(10.0mL)中，依次加入聯硼酸頻那醇酯(B₂(Pin)₂)(705mg，2.78mmol)、醋酸鉀(545mg，5.55mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀二氯甲烷(151mg，0.19mmol)。反應液在氮氣氛下，在80℃攪拌3小時。反應完全後，反應液用水(20mL)稀釋，再用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，所得水相減壓濃縮，粗品用反相管柱層析色譜法分離純化(管柱型：艾傑爾C18管柱；流動相A：水(0.1%的甲酸)，流動相B：乙腈；流速：60mL/min；梯度：在10分鐘內5%-20%乙腈；檢測波長：220/254nm)，得到灰白色的固體化合物4b(370mg,85.04%)。

LC-MS：m/z 236.1[M+H]⁺。

其餘步驟與實施例2的製備方法相同，除了將化合物2-(4-甲基哌嗪-1-基)嘧啶-5-硼酸頻那醇酯(2h)替換為(5-甲基-6-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)硼酸(4b)，所得粗品用製備型色譜管柱分離純化(管柱型：XBridge Prep C18 OBD管柱，5um，19*150mm；流動相A：水(10mmol/L碳酸氫銨)，流動相B：乙腈；流速：25mL/min；梯度：在8分鐘內22%-46%乙腈；檢測波長：254/220nm)，製得化合物4。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 9.19(d,J=0.7Hz,1H),8.69(d,J=2.4Hz,1H),8.13-8.08(m,1H),7.44(d,J=0.7Hz,1H),4.07(d,J=11.2Hz,1H),3.74(d,J=11.2Hz,1H),3.34-3.23(m,4H),2.75-2.61(m,4H),2.39(s,3H),2.39(s,3H),2.30-2.18(m,1H),1.83-1.72(m,1H),1.48(s,3H),1.42-1.30(m,4H),0.94-0.86(m,3H)。

LC-MS：m/z 465.2[M+H]⁺。

實施例5：(R)-2-((2-胺基-7-(6-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(5)的製備

與實施例2的製備方法相同，除了將化合物2-(4-甲基哌嗪-1-基)嘧啶-5-硼酸頻那醇酯(2h)替換為6-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-硼酸(CAS：1150114-75-2)(5b)，所得粗品用製備型色譜管柱分離純化(管柱型：SunFire Prep C18 OBD管柱，5um，19*150mm；流動相A：水(0.1%的甲酸)，流動相B：乙腈；流速：25mL/min；梯度：在8分鐘內7%-21%乙腈；檢測波長：220nm)，製得化合物5的甲酸鹽。

¹H NMR(300MHz，甲醇-d ₄)δ 9.36(s,1H),8.80(d,J=1.9Hz,1H),8.33-8.15(m,1H),7.54(s,1H),6.67(d,J=8.9Hz,1H),4.21(d,J=11.3Hz,1H),3.75(d,J=11.4Hz,1H),3.64-3.48(m,4H),2.38-2.20(m,1H),2.18-2.01(m,4H),1.88-1.70(m,1H),1.56(s,3H),1.50-1.25(m,4H),1.03-0.88(m,3H)。

LC-MS：m/z 422.2[M+H]⁺。

實施例6：(R)-2-((2-胺基-7-(6-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(6)的製備

與實施例2的製備方法相同，除了將化合物2-(4-甲基哌嗪-1-基)嘧啶-5-硼酸頻那醇酯(2h)替換為2-(哌啶-1-基)吡啶-5-硼酸頻那醇酯(CAS：852228-08-1)(6b)，所得粗品用製備型色譜管柱分離純化(管柱型：SunFire Prep C18 OBD管柱，5um，19*150mm；流動相A：水(0.1%的甲酸)，流動相B：乙腈；流速：25mL/min；梯度：在8分鐘內13%-29%乙腈；檢測波長：220nm)，製得化合物6的甲酸鹽。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 9.35(s,1H),8.82(d,J=2.3Hz,1H),8.20(dd,J=9.1,2.5Hz,1H),7.54(s,1H),6.90(d,J=9.1Hz,1H),4.18(d,J=11.3Hz,1H),3.72(d,J=11.3Hz,1H),3.70-3.64(m,4H),2.34-2.19(m,1H),1.84-1.70(m,3H),1.70-1.61(m,4H),1.53(s,3H),1.45-1.29(m,4H),0.98-0.87(m,3H)。

LC-MS：m/z 436.4.1[M+H]⁺。

實施例7：(R)-2-((2-胺基-7-(6-(4-羥基哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇甲酸鹽(7)的製備

與實施例2的製備方法相同，除了將化合物2-(4-甲基哌嗪-1-基)嘧啶-5-硼酸頻那醇酯(2h)替換為6-(4-羥基哌啶-1-基)吡啶-3-硼酸頻那醇酯(CAS：1251948-86-3)(7b)，所得粗品用製備型色譜管柱分離純化(管柱型：XBridge Shield RP18 OBD管柱，5um，19*150mm；流動相A：水(0.1%的甲酸)，流動相B：乙腈；流速：25mL/min；梯度：在8分鐘內10%-32%乙腈；檢測波長：254nm)，製得化合物7的甲酸鹽。

¹H NMR(300MHz，甲醇-d ₄)δ 9.35(d,J=1.6Hz,1H),8.85(d,J=2.3Hz,1H),8.22(d,J=8.9Hz,1H),7.56(s,1H),6.95(d,J=9.2Hz,1H),4.30-4.12(m,3H),4.00-3.84(m,1H),3.74(d,J=11.3Hz,1H),3.32-3.23(m,2H),2.37-2.20(m,1H),2.04-1.91(m,2H),1.88-1.71(m,1H),1.65-1.48(m,5H),1.46-1.23(m,4H),1.02-0.88(m,3H)。

LC-MS：m/z 452.2[M+H]⁺。

實施例8：(R)-2-((2-胺基-7-(咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(8)的製備

與實施例2的製備方法相同，除了將化合物2-(4-甲基哌嗪-1-基)嘧啶-5-硼酸頻那醇酯(2h)替換為咪唑并[1,2-a]吡啶-6-硼酸頻那醇酯(CAS：1204742-76-6)(8b)，所得粗品用製備型色譜管柱分離純化(管柱型：SunFire Prep C18 OBD管柱，5um，19*150mm；流動相A：水(0.1%的甲酸)，流動相B：乙腈；流速：25mL/min；梯度：在8分鐘內7%-15%乙腈；檢測波長：254nm)，製得化合物8的甲酸鹽。

¹H NMR(300MHz，甲醇-d ₄)δ 9.46(s,1H),9.41(s,1H),8.20-8.12(m,1H),8.07(s,1H),7.87-7.68(m,3H),4.23(d,J=11.4Hz,1H),3.76(d,J=11.4Hz,1H),2.38-2.21(m,1H),1.90-1.74(m,1H),1.58(s,3H),1.50-1.27(m,4H),1.03-0.88(m,3H)。

LC-MS：m/z 392.3[M+H]⁺。

實施例9：(R)-2-((2-胺基-7-(6-(4-環丙基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(9)的製備

步驟1：2-胺基-7-氯吡啶并[4,3-d]嘧啶-4(3H)-酮(9b)的製備

於室溫，將4,6-二氯煙酸9a(5.0g，26.04mmol)和鹽酸胍(2.74g，28.646mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(100mL)中，反應液中依次加入碳酸銫(16.97g,52.084mmol)和碘化亞銅(0.99g,5.208mmol)。反應液在氮氣氛下，110℃攪拌過夜。反應完畢後，將反應液中固體過濾除去，濾液減壓濃縮。所得殘留物加入飽和碳酸鈉溶液，用正丁醇(5×50mL)萃取。合併的有機相用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到類白色至淡綠色固體化合物9b(4.2g，82.04%)。

LC-MS：m/z 197.0[M+H]⁺。

步驟2：(R)-2-((2-胺基-7-氯吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(9c)的製備

於室溫，將化合物9b(500.00mg，2.543mmol)、(R)-2-胺基-2-甲基己-1-醇(500.61mg，3.815mmol)、卡特縮合劑(BOP)(1462.34mg，3.306mmol)、1,8-二氮雜二環十一碳-7-烯(DBU)(1161.58mg，7.629mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(8mL)中。反應液在氮氣氛下於室溫攪拌過夜。反應完畢後，加水(50mL)淬滅反應，體系中加入乙酸乙酯(3×40mL)萃取，合併的有機相用飽和食鹽水(50mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得粗品用矽膠管柱層析色譜法分離純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚=1：1)，得黃色半固體化合物9c(200mg，22.84%)。

LC-MS：m/z 310.1[M+H]⁺。

步驟3：2-(4-環丙基哌嗪-1-基)吡啶-5-硼酸頻那醇酯(9d)的製備

於室溫，將6-氯吡啶-3-硼酸頻那醇酯(50mg,0.209mmol)溶於二甲基亞碸(1mL)中，反應液中加入1-環丙基哌嗪(52.69mg,0.418mmol)，在氮氣氛下，150℃攪拌3小時。反應完畢後，加水(20mL)淬滅反應，體系中加入乙酸乙酯(3×20mL)萃取，合併的有機相用飽和食鹽水(40mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得棕色固體化合物9d(72mg，粗品)，其未經純化直接用於下一步。

LC-MS：m/z 330.2[M+H]⁺。

步驟4：(R)-2-((2-胺基-7-(6-(4-環丙基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(9)的製備

於室溫，將化合物9c(32.00mg，0.103mmol)和化合物9d(68.02mg，0.206mmol)溶於1,4-二噁烷(1mL)和水(0.1mL)，依次加入碳酸鉀(42.83mg，0.309mmol)和[1,1’-雙(二苯基磷基)二茂鐵]二氯化鈀(16.83mg，0.021mmol)。在氮氣氛下，將反應液於95℃攪拌過夜。反應完全後，冷卻至室溫，加水(10mL)稀釋，用乙酸乙酯(3×20mL)萃取，合併的有機相用飽和食鹽水(50mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得粗品用製備薄層色譜法分離純化(流動相：乙酸乙酯/三乙胺=20：1)，得黃色油狀粗品。產品進一步經製備型色譜管柱分離純化(管柱型：XSelect CSH Prep C18 OBD管柱，5um，19*150mm；流動相A：水(0.05%氨水)，流動相B：乙腈；流速：25mL/min；梯度：在8分鐘內32%-52%乙腈；檢測波長：254/220nm)，得到類白色固體化合物9(17.5mg，35.55%)。

¹H NMR(300MHz，甲醇-d ₄)δ 9.18(d,J=0.7Hz,1H),8.77(d,J=2.4Hz,1H),8.17(dd,J=9.0,2.5Hz,1H),7.41(d,J=0.8Hz,1H),6.95(d,J=9.1Hz,1H),4.08(d,J=11.3Hz,1H),3.75(d,J=11.3Hz,1H),3.70-3.60(m,4H),2.84-2.75(m,4H),2.36-2.19(m,1H),1.85-1.69(m,2H),1.50(s,3H),1.43-1.32(m,4H),0.98-0.88(m,3H),0.60-0.47(m,4H)。

LC-MS：m/z 477.4[M+H]⁺。

實施例10：(R)-4-(5-(2-胺基-4-((1-羥基-2-甲基己-2-基)胺基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-7-基)吡啶-2-基)-1-甲基哌嗪-2-酮(10)的製備

與實施例9的製備方法相同，除了將1-環丙基哌嗪替換為1-甲基哌嗪-2-酮，製得化合物10。

¹H NMR(300MHz，甲醇-d ₄)δ 9.20(s,1H),8.82(d,J=2.4Hz,1H),8.22(dd,J=8.9,2.5Hz,1H),7.43(s,1H),6.95(d,J=9.0Hz,1H),4.26(s,2H),4.09(d,J=11.3Hz,1H),4.02-3.94(m,2H),3.75(d,J=11.3Hz,1H),3.61-3.53(m,2H),3.06(s,3H),2.34-2.19(m,1H),1.87-1.71(m,1H),1.50(s,3H),1.45-1.31(m,4H),0.99-0.87(m,3H)。

LC-MS：m/z 465.1[M+H]⁺。

實施例11：(R)-2-((2-胺基-7-(6-(4-乙基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(11)的製備

與實施例9的製備方法相同，除了將化合物1-環丙基哌嗪替換為1-乙基哌嗪，製得化合物11。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 9.16(s,1H),8.76(d,J=2.4Hz,1H),8.15(dd,J=9.0,2.5Hz,1H),7.39(s,1H),6.94(d,J=9.0Hz,1H),4.06(d,J=11.3Hz,1H),3.73(d,J=11.2Hz,1H),3.71-3.64(m,4H),2.63(t,J=5.0Hz,4H),2.53(q,J=7.2Hz,2H),2.32-2.18(m,1H),1.84-1.71(m,1H),1.48(s,3H),1.44-1.30(m,4H),1.17(t,J=7.3Hz,3H),0.91(t,J=6.9Hz,3H)。

LC-MS：m/z 465.2[M+H]⁺。

實施例12：(R)-2-((2-胺基-7-(6-(4-異丙基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(12)的製備

與實施例9的製備方法相同，除了將化合物1-環丙基哌嗪替換為1-異丙基哌嗪，製得化合物12。

¹H NMR(300MHz，甲醇-d ₄)δ 9.18(d,J=0.7Hz,1H),8.78(d,J=2.4Hz,1H),8.17(dd,J=9.0,2.5Hz,1H),7.41(d,J=0.7Hz,1H),6.96(d,J=9.1Hz,1H),4.08(d,J=11.3Hz,1H),3.75(d,J=11.3Hz,1H),3.72-3.65(m,4H),2.83-2.77(m,1H),2.74(t,J=5.2Hz,4H),2.33-2.19(m,1H),1.84-1.70(m,1H),1.50(s,3H),1.45-1.31(m,4H),1.16(d,J=6.5Hz,6H),0.99-0.89(m,3H)。

LC-MS：m/z 479.2[M+H]⁺。

實施例13：(R)-2-((2-胺基-7-(6-(4-(2-甲氧基乙基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(13)的製備

與實施例9的製備方法相同，除了將化合物1-環丙基哌嗪替換為1-(2-甲氧基乙基)哌嗪，製得化合物13。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 9.16(s,1H),8.75(d,J=2.5Hz,1H),8.15(dd,J=9.0,2.5Hz,1H),7.39(s,1H),6.93(d,J=9.0Hz,1H),4.07(d,J=11.3Hz,1H),3.73(d,J=11.3Hz,1H),3.67(t,J=5.2Hz,4H),3.60(t,J=5.5Hz,2H),3.37(s,3H),2.71-2.62(m,6H),2.32-2.17(m,1H),1.83-1.71(m,1H),1.48(s,3H),1.42-1.30(m,4H),0.91(t,J=6.9Hz,3H)。

LC-MS：m/z 495.3[M+H]⁺。

實施例14：(2R)-2-((2-胺基-7-(6-(3,4-二甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(14)的製備

與實施例9的製備方法相同，除了將化合物1-環丙基哌嗪替換為1,2-二甲基哌嗪，製得化合物14。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 9.19-9.13(m,1H),8.75(d,J=2.5Hz,1H),8.19-8.10(m,1H),7.42-7.34(m,1H),6.94(d,J=9.1Hz,1H),4.31-4.17(m,2H),4.06(d,J=11.3Hz,1H),3.73(d,J=11.3Hz,1H),3.18-3.05(m,1H),3.01-2.89(m,1H),2.80-2.66(m,1H),2.44-2.32(m,4H),2.32-2.18(m,2H),1.83-1.70(m,1H),1.48(s,3H),1.43-1.26(m,4H),1.19(d,J=6.3Hz,3H),0.91(d,J=6.9Hz,3H)。

LC-MS：m/z 465.5[M+H]⁺。

實施例15：(2R)-2-((2-胺基-7-(4-甲基-6-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(15)的製備

與實施例9的製備方法相同，除了將化合物6-氯吡啶-3-硼酸頻那醇酯替換為4-甲基-6-氯吡啶-3-硼酸頻那醇酯，並將1-環丙基哌嗪替換為1-甲基哌嗪，製得化合物15。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 9.18(s,1H),8.12(s,1H),7.13(s,1H),6.78(s,1H),4.08(d,J=11.3Hz,1H),3.73(d,J=11.3Hz,1H),3.65-3.58(m,4H),2.59(t,J=5.1Hz,4H),2.37(s,3H),2.34(s,3H),2.30-2.20(m,1H),1.82-1.70(m,1H),1.48(s,3H),1.40-1.30(m,4H),0.97-0.87(m,3H)。

LC-MS：m/z 465.4[M+H]⁺。

實施例16：(R)-2-((2-胺基-7-(2-甲基-6-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(16)的製備

與實施例9的製備方法相同，除了將化合物6-氯吡啶-3-硼酸頻那醇酯替換為2-甲基-6-氯吡啶-3-硼酸頻那醇酯，並將1-環丙基哌嗪替換為1-甲基哌嗪，製得化合物16。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 9.16(s,1H),7.60(d,J=8.7Hz,1H),7.12(s,1H),6.72(d,J=8.7Hz,1H),4.08(d,J=11.2Hz,1H),3.73(d,J=11.2Hz,1H),3.68-3.57(m,4H),2.57(t,J=5.1Hz,4H),2.43(s,3H),2.35(s,3H),2.31-2.20(m,1H),1.82-1.70(m,1H),1.48(s,3H),1.41-1.27(m,4H),0.91(t,J=6.9Hz,3H)。

LC-MS：m/z 465.4[M+H]⁺。

實施例17：(R)-2-((2-胺基-7-(4-氟-6-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(17)的製備

步驟1：1-(4-氟吡啶-2-基)-4-甲基哌嗪(17a)的製備

於室溫，將2-溴-4-氟吡啶(400mg，2.273mmol)和N-甲基哌嗪溶於甲苯(10.0mL)中，然後依次加入Rac-BINAP-Pd-G3(225.56mg，0.227mmol)和碳酸銫(2962.20mg，9.092mmol)。反應液在氮氣氛下在95℃攪拌過夜。反應完全後，反應液用水(30mL)稀釋，再用乙酸乙酯(3×20mL)萃取，有機相合併後用飽和食鹽水(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。粗品用管柱層析色譜法分離純化(流動相：石油醚/乙酸乙酯=2：1)，得到深黃色油狀化合物17a(119mg,26.82%)。

LC-MS：m/z 196.1[M+H]⁺。

步驟2：1-(5-溴-4-氟吡啶-2-基)-4-甲基哌嗪(17b)的製備

於室溫，將化合物1-(4-氟吡啶-2-基)-4-甲基哌嗪17a(119mg，0.610mmol)溶於乙腈(ACN)(3mL)中，加入N-溴丁二醯亞胺(NBS)(130.18mg，0.732mmol)，在氮氣氛下於室溫避光反應過夜。反應完全後減壓濃縮，殘留物中加入水(10mL)稀釋，再用乙酸乙酯(3×10mL)萃取，有機相合併後用飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。粗品用管柱層析色譜法分離純化(流動相：石油醚/乙酸乙酯=2：1)，得到橘黃色半固體化合物17b(166mg，99.35%)。

LC-MS：m/z 274.0[M+H]⁺。

步驟3：2-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氟吡啶-5-硼酸(17c)的製備

於室溫，將化合物1-(5-溴-4-氟吡啶-2-基)-4-甲基哌嗪17b(166mg，0.606mmol)溶於1,4-二噁烷(3.0mL)中，然後依次加入聯硼酸頻那醇酯(230.65mg，0.909mmol)、醋酸鉀(178.29mg，1.818mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀二氯甲烷(98.66mg，0.121mmol)，反應液在氮氣氛下於80℃攪拌過夜。反應完全後，反應液用水(10mL)稀釋，再用乙酸乙酯(2×10mL)萃取，所得水相減壓濃縮，得到棕色固體化合物17c(150mg，粗品)，其未經純化直接用於下一步。

LC-MS：m/z 240.1[M+H]⁺。

其餘步驟與實施例9相同，除了將2-(4-環丙基哌嗪-1-基)吡啶-5-硼酸頻那醇酯(9d)替換為2-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氟吡啶-5-硼酸(17c)，製得化合物17。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 9.08(s,1H),8.58(d,J=11.4Hz,1H),7.30(d,J=1.0Hz,1H),6.57(d,J=14.8Hz,1H),3.97(d,J=11.3Hz,1H),3.63(d,J=11.3Hz,1H),3.57(t,J=5.2Hz,4H),2.46(t,J=5.1Hz,4H),2.26(s,3H),2.21-2.08(m,1H),1.72-1.60(m,1H),1.38(s,3H),1.32-1.18(m,4H),0.81(t,J=6.9Hz,3H)。

LC-MS：m/z 469.3[M+H]⁺。

實施例18：(R)-2-((2-胺基-7-(6-(4-(二甲胺基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(18)的製備

與實施例9的製備方法相同，除了將1-環丙基哌嗪替換為4-二甲胺基哌啶，製得化合物18。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 9.15(s,1H),8.73(s,1H),8.12(dd,J=8.9,2.2Hz,1H),7.37(s,1H),6.94(d,J=9.1Hz,1H),4.50(d,J=13.5Hz,2H),4.06(d,J=11.3Hz,1H),3.73(d,J=11.3Hz,1H),2.93(t,J=12.9Hz,2H),2.53(s,1H),2.41-2.30(m,6H),2.30-2.18(m,1H),2.06-1.94(m,2H),1.83-1.71(m,1H),1.61-1.44(m,5H),1.42-1.26(m,4H),0.91(t,J=6.9Hz,3H)。

LC-MS：m/z 479.3[M+H]⁺。

實施例19：(R)-2-((2-胺基-7-(6-(4-(2-羥乙基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(19)的製備

與實施例9的製備方法相同，除了將1-環丙基哌嗪替換為N-羥乙基哌嗪，製得化合物19。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 9.31(s,1H),8.86(s,1H),8.25(d,J=8.9Hz,1H),7.57-7.50(m,1H),6.99(d,J=9.0Hz,1H),4.14(d,J=11.3Hz,1H),3.91-3.76(m,6H),3.72(d,J=11.3Hz,1H),3.08-2.97(m,4H),2.97-2.87(m,2H),2.32-2.20(m,1H),1.82-1.72(m,1H),1.52(s,3H),1.43-1.28(m,4H),0.92(t,J=6.9Hz,3H)。

LC-MS：m/z 481.4[M+H]⁺。

實施例20：(R)-2-((2-胺基-7-(6-(4-丙基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(20)的製備

步驟1：2-(4-丙基哌嗪-1-基)吡啶-5-硼酸頻那醇酯(20a)的製備

於室溫，將1-正丙基哌嗪二溴酸鹽(484.39mg，1.670mmol)、碳酸鉀(464.99mg，3.340mmol)溶於二甲基亞碸(5mL)中，加入2-氯吡啶-5-硼酸頻那醇酯(200mg,0.835mmol)，在氮氣氛下，150℃攪拌2小時。反應完畢後，加水(30mL)淬滅反應，體系中加入乙酸乙酯(3×15mL)萃取，合併的有機相用飽和食鹽水(15mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得棕黃色液體化合物20a(549mg，粗品)，其未經純化直接用於下一步。

LC-MS：m/z 332.2[M+H]⁺。

其餘步驟與實施例9相同，除了2-(4-環丙基哌嗪-1-基)吡啶-5-硼酸頻那醇酯(9d)替換為2-(4-丙基哌嗪-1-基)吡啶-5-硼酸頻那醇酯(20a)，製得化合物20。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 9.16(s,1H),8.75(d,J=2.4Hz,1H),8.15(dd,J=9.0,2.5Hz,1H),7.39(s,1H),6.93(d,J=9.0Hz,1H),4.06(d,J=11.3Hz,1H),3.73(d,J=11.3Hz,1H),3.67(t,J=5.1Hz,4H),2.63(t,J=5.1Hz,4H),2.48-2.36(m,2H),2.31-2.18(m,1H),1.83-1.70(m,1H),1.69-1.53(m,2H),1.48(s,3H),1.42-1.28(m,4H),0.96(t,J=7.4Hz,3H),0.91(t,J=6.9Hz,3H)。

LC-MS：m/z 479.3[M+H]⁺。

實施例21：(R)-2-((2-胺基-7-(6-(4-(2,2-二氟乙基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(21)的製備

與實施例20的製備方法相同，除了將1-正丙基哌嗪二溴酸鹽替換為1-(2,2-二氟乙基)哌嗪鹽酸鹽，製得化合物21。

¹H NMR(300MHz，甲醇-d ₄)δ 9.28(s,1H),8.82(s,1H),8.21(d,J=8.8Hz,1H),7.50(s,1H),6.94(d,J=8.9Hz,1H),6.05(tt,J=55.9,4.3Hz,1H),4.15(d,J=11.3Hz,1H),3.75(d,J=11.3Hz,1H),3.70(t,J=5.1Hz,4H),2.84(td,J=15.2,4.3Hz,2H),2.75(t,J=5.0Hz,4H),2.36-2.17(m,1H),1.88-1.70(m,1H),1.53(s,3H),1.47-1.26(m,4H),1.00-0.87(m,3H)。

LC-MS：m/z 501.4[M+H]⁺。

實施例22：(R)-2-((2-胺基-7-(6-(4-(2-氟乙基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(22)的製備

步驟1：2-(4-(2-氟乙基)哌嗪-1-基)吡啶-5-硼酸頻那醇酯(22a)的製備

於室溫，將2-氯吡啶-5-硼酸頻那醇酯(150mg，0.626mmol)和1-(2-氟乙基)哌嗪二鹽酸鹽(256.90mg,1.252mmol)溶於二甲基亞碸(2mL)中，加入N,N-二異丙基乙胺(323.77mg,2.504mmol)，在氮氣氛下，150℃攪拌2小時。反應完畢後，加水(20mL)淬滅反應，體系中加入乙酸乙酯(3×20mL)萃取，合併的有機相用飽和食鹽水(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得棕色半固體化合物22a(198mg，粗品)，其未經純化直接用於下一步。

LC-MS：m/z 336.2[M+H]⁺。

其餘步驟與實施例9相同，除了將2-(4-環丙基哌嗪-1-基)吡啶-5-硼酸頻那醇酯(9d)替換為2-(4-(2-氟乙基)哌嗪-1-基)吡啶-5-硼酸頻那醇酯(22a)，製得化合物22。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 9.19(s,1H),8.72(d,J=2.4Hz,1H),8.11(dd,J=9.0,2.5Hz,1H),7.41(s,1H),6.83(d,J=9.1Hz,1H),4.66-4.56(m,1H),4.54-4.44(m,1H),4.05(d,J=11.4Hz,1H),3.68-3.56(m,5H),2.79-2.72(m,1H),2.71-2.66(m,1H),2.62(t,J=5.1Hz,4H),2.25-2.09(m,1H),1.75-1.61(m,1H),1.42(s,3H),1.35-1.16(m,4H),0.82(t,J=6.9Hz,3H)。

LC-MS：m/z 483.4[M+H]⁺。

實施例23：(R)-2-((2-胺基-7-(6-(4-(2,2,2-三氟乙基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(23)的製備

與實施例22的製備方法相同，除了1-(2-氟乙基)哌嗪二鹽酸鹽替換為1-(2,2,2-三氟乙基)哌嗪二鹽酸鹽，製得化合物23。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 9.30(s,1H),8.82(d,J=2.4Hz,1H),8.25-8.16(m,1H),7.52(s,1H),6.93(d,J=9.0Hz,1H),4.15(d,J=11.3Hz,1H),3.76-3.65(m,5H),3.14(q,J=9.8Hz,2H),2.80(t,J=5.1Hz,4H),2.33-2.19(m,1H),1.83-1.71(m,1H),1.52(s,3H),1.41-1.32(m,4H),0.92(t,J=6.9Hz,3H).。

LC-MS：m/z 519.5[M+H]⁺。

實施例24：(R)-2-((2-胺基-7-(6-(4-丙基哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(24)的製備

與實施例22的製備方法相同，除了將1-(2-氟乙基)哌嗪二鹽酸鹽替換為4-正丙基哌啶鹽酸鹽，製得化合物24。

¹H NMR(300MHz，甲醇-d ₄)δ 9.16(s,1H),8.73(d,J=2.4Hz,1H),8.12(dd,J=9.0,2.6Hz,1H),7.39(s,1H),6.92(d,J=9.2Hz,1H),4.47-4.35(m,2H),4.08(d,J=11.2Hz,1H),3.75(d,J=11.3Hz,1H),3.00-2.87(m,2H),2.32-2.20(m,1H),1.89-1.76(m,3H),1.67-1.54(m,1H),1.50(s,3H),1.48-1.19(m,10H),1.00-0.89(m,6H)。

LC-MS：m/z 478.5[M+H]⁺。

實施例25：(R)-2-((2-胺基-7-(6-(3-乙氧基氮雜環丁烷-1-基)吡啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(25)的製備

與實施例22的製備方法相同，除了將1-(2-氟乙基)哌嗪二鹽酸鹽替換為3-乙氧基氮雜環丁烷鹽酸鹽，製得化合物25。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 9.15(s,1H),8.68(d,J=2.4Hz,1H),8.14(dd,J=8.8,2.4Hz,1H),7.36(s,1H),6.53(d,J=8.8Hz,1H),4.53-4.45(m,1H),4.35-4.27(m,2H),4.05(d,J=11.2Hz,1H),3.96-3.88(m,2H),3.73(d,J=11.3Hz,1H),3.54(q,J=7.0Hz,2H),2.30-2.18(m,1H),1.83-1.70(m,1H),1.47(s,3H),1.42-1.30(m,4H),1.23(t,J=7.0Hz,3H),0.91(t,J=6.9Hz,3H)。

LC-MS：m/z 452.5[M+H]⁺。

實施例26：(R)-2-((2-胺基-7-(6-(4-乙氧基哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(26)的製備

與實施例22的製備方法相同，除了將1-(2-氟乙基)哌嗪二鹽酸鹽替換為4-乙氧基哌啶，製得化合物26。

¹H NMR(300MHz，甲醇-d ₄)δ 9.17(s,1H),8.75(d,J=2.4Hz,1H),8.14(dd,J=9.0,2.5Hz,1H),7.39(s,1H),6.95(d,J=9.2Hz,1H),4.63 -4.59(m,1H),4.19-4.11(m,1H),4.07(d,J=11.5Hz,1H),3.75(d,J=11.2Hz,1H),3.68-3.54(m,3H),2.32-2.14(m,1H),2.09-1.94(m,2H),1.86-1.74(m,1H),1.68-1.54(m,2H),1.49(s,3H),1.44-1.27(m,6H),1.22(t,J=7.0Hz,3H),0.97-0.88(m,3H)。

LC-MS：m/z 480.1[M+H]⁺。

實施例27：(R)-2-((2-胺基-7-(6-(3-(二丙胺基)氮雜環丁烷-1-基)吡啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(27)的製備

與實施例22的製備方法相同，除了將1-(2-氟乙基)哌嗪二鹽酸鹽替換為N,N-二丙基氮雜環丁烷-3-胺，製得化合物27。

¹H NMR(300MHz，甲醇-d ₄)δ 9.18(s,1H),8.74-8.68(m,1H),8.17(dd,J=8.8,2.4Hz,1H),7.39(s,1H),6.57(d,J=8.8Hz,1H),4.21(t,J=7.8Hz,2H),4.08(d,J=11.3Hz,1H),4.01-3.91(m,2H),3.87-3.78(m,1H),3.75(d,J=11.3Hz,1H),2.60-2.46(m,4H),2.34-2.16(m, 1H),1.87-1.71(m,1H),1.62-1.51(m,4H),1.50(s,3H),1.44-1.32(m,4H),1.01-0.87(m,9H)。

LC-MS：m/z 507.4[M+H]⁺。

實施例28：(R)-2-((2-胺基-7-(6-(4-二乙胺基哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(28)的製備

與實施例9的製備方法相同，除了將1-環丙基哌嗪替換為4-二乙胺基哌啶，製得化合物28。

¹H NMR(300MHz，甲醇-d ₄)δ 9.37(s,1H),8.87(d,J=2.4Hz,1H),8.26(dd,J=9.1,2.5Hz,1H),7.62(s,1H),7.03(d,J=9.1Hz,1H),4.74-4.54(m,overlapped with solvent,2H),4.17(d,J=11.4Hz,1H),3.78-3.65(m,2H),3.31-3.24(m,overlapped with solvent,4H),3.07(t,J=12.7Hz,2H),2.31-2.15(m,3H),1.91-1.71(m,3H),1.55(s,3H),1.49-1.27(m,10H),1.02-0.86(m,3H)。

LC-MS：m/z 507.5[M+H]⁺。

實施例29：(R)-2-((2-胺基-7-(6-(3-(二乙胺基)氮雜環丁烷-1-基)吡啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(29)的製備

與實施例22的製備方法相同，除了將1-(2-氟乙基)哌嗪二鹽酸鹽替換為3-(二乙胺基)氮雜環丁烷二鹽酸鹽，製得化合物29。

¹H NMR(300MHz，甲醇-d ₄)δ 9.17(d,J=0.7Hz,1H),8.71(d,J=2.4Hz,1H),8.17(dd,J=8.8,2.4Hz,1H),7.39(d,J=0.7Hz,1H),6.58(d,J=8.8Hz,1H),4.23(t,J=7.8Hz,2H),4.08(d,J=11.3Hz,1H),4.03-3.92(m,2H),3.87-3.78(m,1H),3.75(d,J=11.2Hz,1H),2.67(q,J=7.2Hz,4H),2.35-2.18(m,1H),1.88-1.71(m,1H),1.50(s,3H),1.43-1.28(m,4H),1.10(t,J=7.2Hz,6H),0.93(t,J=6.9Hz,3H)。

LC-MS：m/z 479.4[M+H]⁺。

實施例30：(R)-2-((2-胺基-7-(2-(4-(2-氟乙基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(30)的製備

步驟1：2-(4-(2-氟乙基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-硼酸(30a)的製備

於室溫，將2-氯嘧啶-5-硼酸(148mg,0.935mmol)和1-(2-氟乙基)哌嗪二鹽酸鹽(209.92mg,1.029mmol)溶於乙醇(2mL)中，反應液中加入三乙胺(331.02mg,3.271mmol)，在氮氣氛下，75℃攪拌1小時。反應完畢後，反應液降至室溫後減壓濃縮，得黃色固體化合物30a(260mg，粗品)，其未經純化直接用於下一步。

LC-MS：m/z 255.1[M+H]⁺。

其餘步驟與實施例9的相同，除了將化合物2-(4-環丙基哌嗪-1-基)吡啶-5-硼酸頻那醇酯(9d)替換為(30a)，製得化合物30。

¹H NMR(300MHz，甲醇-d ₄)δ 9.22(s,1H),8.98(s,2H),7.44(s,1H),4.76-4.71(m,1H),4.59-4.55(m,1H),4.11(d,J=11.2Hz,1H),3.97(t,J=5.1Hz,4H),3.75(d,J=11.3Hz,1H),2.87-2.82(m,1H),2.78-2.73(m,1H),2.72-2.64(m,4H),2.34-2.19(m,1H),1.86-1.71(m,1H),1.51(s,3H),1.46-1.27(m,4H),0.93(t,J=6.9Hz,3H)。

LC-MS：m/z 484.3[M+H]⁺。

實施例31：(R)-2-((2-胺基-7-(2-(4-丙基哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(31)的製備

與實施例30的製備方法相同，除了將1-(2-氟乙基)哌嗪二鹽酸鹽替換為1-正丙基哌嗪二溴酸鹽，製得化合物31。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 9.18(d,J=0.7Hz,1H),8.95(s,2H),7.39(d,J=0.8Hz,1H),4.07(d,J=11.3Hz,1H),3.99-3.89(m,4H),3.73(d,J=11.3Hz,1H),2.60(t,J=5.0Hz,4H),2.46-2.38(m,2H),2.30-2.19(m,1H),1.83-1.71(m,1H),1.66-1.54(m,2H),1.48(s,3H),1.41-1.26(m,4H),0.96(t,J=7.4Hz,3H),0.91(t,J=7.0Hz,3H)。

LC-MS：m/z 480.4[M+H]⁺。

實施例32：(R)-2-((2-胺基-7-(2-(4-異丙基哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(32)的製備

與實施例30的製備方法相同，除了將1-(2-氟乙基)哌嗪二鹽酸鹽替換為1-異丙基哌嗪，製得化合物32。

¹H NMR(300MHz，甲醇-d ₄)δ 9.19(s,1H),8.96(s,2H),7.41(s,1H),4.09(d,J=11.3Hz,1H),3.99-3.92(m,4H),3.75(d,J=11.3Hz,1H),2.83-2.74(m,1H),2.68(t,J=5.2Hz,4H),2.32-2.20(m,1H),1.85-1.71(m,1H),1.50(s,3H),1.44-1.26(m,4H),1.16(s,3H),1.14(s,3H),0.93(t,J=6.9Hz,3H)。

LC-MS：m/z 480.3[M+H]⁺。

實施例33：(R)-2-((2-胺基-7-(2-(4-(二甲胺基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(33)的製備

與實施例30的製備方法相同，除了將1-(2-氟乙基)哌嗪二鹽酸鹽替換為4-二甲胺基哌啶，製得化合物33。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 9.17(s,1H),8.92(s,2H),7.38(s,1H),4.67-4.54(m,2H),4.07(d,J=11.3Hz,1H),3.73(d,J=11.3Hz,1H),2.96(t,J=12.9Hz,2H),2.71-2.55(m,1H),2.37(s,6H),2.30-2.18(m,1H),2.07-1.96(m,2H),1.82-1.70(m,1H),1.47(s,3H),1.44-1.24(m,6H),0.91(t,J=6.7Hz,3H)。

LC-MS：m/z 480.4[M+H]⁺。

實施例34：(R)-2-((2-胺基-7-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(34)的製備

與實施例9的製備方法相同，除了將2-(4-環丙基哌嗪-1-基)吡啶-5-硼酸頻那醇酯(9d)替換為4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯硼酸頻那醇酯(CAS：747413-21-4)(34a)，製得化合物34。

¹H NMR(300MHz，甲醇-d ₄)δ 9.15(s,1H),7.95-7.84(m,2H),7.42(s,1H),7.14-7.03(m,2H),4.07(d,J=11.3Hz,1H),3.75(d,J=11.3Hz,1H),3.36-3.33(m,4H),2.65(t,J=5.1Hz,4H),2.38(s,3H),2.33-2.19(m,1H),1.87-1.71(m,1H),1.49(s,3H),1.45-1.28(m,4H),0.93(t,J=6.8Hz,3H)。

LC-MS：m/z 450.2[M+H]⁺。

實施例35：(R)-2-((2-胺基-7-(1-(1-甲基哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(35)的製備

與實施例9的製備方法相同，除了將2-(4-環丙基哌嗪-1-基)吡啶-5-硼酸頻那醇酯(9d)替換為(1-甲基哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-硼酸頻那醇酯(CAS：1323919-64-7)(35a)，製得化合物35。

¹H NMR(300MHz，甲醇-d ₄)δ 9.11(s,1H),8.31(s,1H),8.08(s,1H),7.31(s,1H),4.36-4.18(m,1H),4.08(d,J=11.3Hz,1H),3.74(d,J=11.3Hz,1H),3.13-2.97(m,2H),2.37(s,3H),2.34-2.06(m,7H),1.86-1.69(m,1H),1.49(s,3H),1.45-1.27(m,4H),0.93(t,J=6.9Hz,3H)。

LC-MS：m/z 439.2[M+H]⁺。

實施例36：(R)-2-((2-胺基-7-(1-(四氫吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(36)的製備

與實施例9的製備方法相同，除了將2-(4-環丙基哌嗪-1-基)吡啶-5-硼酸頻那醇酯(9d)替換為1-(四氫吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-硼酸頻那醇酯(CAS：1040377-03-4)(36a)，製得化合物36。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 9.14(s,1H),8.32(s,1H),8.08(s,1H),7.32(s,1H),4.54-4.42(m,1H),4.14-4.03(m,3H),3.72(d,J=11.3Hz,1H),3.65-3.54(m,2H),2.32-2.19(m,1H),2.17-2.06(m,4H),1.83-1.69(m,1H),1.48(s,3H),1.44-1.25(m,4H),0.91(t,J=7.0Hz,3H)。

LC-MS：m/z 426.2[M+H]⁺。

實施例37：(R)-2-((2-胺基-7-(4-(3-吡啶基)苯基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(37)的製備

與實施例9的製備方法相同，除了將2-(4-環丙基哌嗪-1-基)吡啶-5-硼酸頻那醇酯(9d)替換為4-(3-吡啶基)苯硼酸頻那醇酯(CAS：929203-04-3)(37a)，製得化合物37。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 9.14(s,1H),8.80(d,J=2.4Hz,1H),8.45(dd,J=4.9,1.6Hz,1H),8.13-8.06(m,1H),8.06-7.99(m,2H),7.79-7.69(m,2H),7.52-7.42(m,2H),3.99(d,J=11.3Hz,1H),3.65(d,J=11.3Hz,1H),2.22-2.09(m,1H),1.74-1.62(m,1H),1.40(s,3H),1.34-1.21(m,4H),0.82(t,J=6.9Hz,3H)。

LC-MS：m/z 429.3[M+H]⁺。

實施例38：(R)-2-((2-胺基-7-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(38)的製備

步驟1：(R)-4-(5-(2-胺基-4-((1-羥基-2-甲基己-2-基)胺基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-7-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸第三丁酯(38b)的製備

與實施例9的步驟4相同，除了將2-(4-環丙基哌嗪-1-基)吡啶-5-硼酸頻那醇酯(9d)替換為4-[4-(N-Boc)哌嗪-1-基]苯硼酸頻那醇酯(CAS：496786-98-2)(38a)，製得化合物38b。

步驟2：(R)-2-((2-胺基-7-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(38)的製備

於室溫，將化合物38b(50mg，0.093mmol)溶於二氯甲烷(1mL)中，反應液加入中加入三氟乙酸(1mL)，在氮氣氛下，室溫攪拌2小時。反應完畢後，反應液減壓濃縮後經製備薄層色譜法分離純化(流動相：二氯甲烷/甲醇=10：1)得粗品。粗品進一步經製備型色譜管柱分離純化(管柱型：Gemini-NX C18 AXAI Packed管柱，5um，21.2*150mm；流動相A：水(0.05%氨水)，流動相B：乙腈；流速：25mL/min；梯度：在8分鐘內23%-41%乙腈；檢測波長：254/220nm)，得到類白色固體化合物38(2.1mg,4.76%)。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 9.15(d,J=0.7Hz,1H),8.75(dd,J=2.6,0.7Hz,1H),8.14(dd,J=9.0,2.5Hz,1H),7.38(d,J=0.7Hz,1H),6.92(d,J=9.0Hz,1H),4.06(d,J=11.3Hz,1H),3.73(d,J=11.3Hz,1H),3.64-3.58(m,4H),2.98-2.90(m,4H),2.30-2.22(m,1H),1.83-1.71(m,1H),1.48(s,3H),1.40-1.32(m,4H),0.94-0.90(m,3H)。

LC-MS：m/z 437.3[M+H]⁺。

實施例39：(R)-2-((7-([2,3’-聯吡啶]-5-基)-2-胺基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(39)的製備

步驟1：5-溴-2,3’-聯吡啶(39a)的製備

於室溫，將3-吡啶硼酸(500.09mg，4.069mmol)和5-溴2-碘吡啶(1050mg，3.699mmol)溶於1,4-二噁烷(10.0mL)中，依次加入碳酸鉀(1533.49mg，11.097mmol)和四(三苯基膦)鈀(427.39mg，0.37mmol)，反應液在氮氣氛下，在80℃攪拌過夜。反應完全後，反應液用水(30mL)稀釋，再用乙酸乙酯(3×30mL)萃取，有機相合併後用飽和食鹽水(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。粗品用管柱層析色譜法分離純化(流動相：石油醚/乙酸乙酯=4：1)，得到黃色固體化合物39a(148mg,17.02%)。

LC-MS：m/z 235.0[M+H]⁺。

步驟2：2,3’-聯吡啶-5-硼酸(39b)的製備

於室溫，將化合物39a(148mg，0.63mmol)溶於1,4-二噁烷(3.0mL)中，反應液中依次加入聯硼酸頻那醇酯(239.81mg，0.944mmol)、醋酸鉀(185.36mg，1.889mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀二氯甲烷絡合物(51.29mg，0.063mmol)，反應液在氮氣氛下，在80℃攪拌3小時。反應完全後，反應液用水(10mL)稀釋，再用乙酸乙酯(3×10mL)萃取，有機相合併後用飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到棕色固體化合物39b(314mg，粗品)，其未經純化直接用於下一步。

LC-MS：m/z 201.1[M+H]⁺。

其餘步驟與實施例9相同，除了將化合物2-(4-環丙基哌嗪-1-基)吡啶-5-硼酸頻那醇酯(9d)替換為2,3’-聯吡啶-5-硼酸(39b)，製得化合物39。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 9.33-9.30(m,1H),9.29-9.24(m,2H),8.62(dd,J=4.9,1.6Hz,1H),8.56-8.48(m,2H),8.10(d,J=8.4Hz,1H),7.63-7.57(m,2H),4.09(d,J=11.3Hz,1H),3.74(d,J=11.3Hz,1H),2.31-2.22(m,1H),1.83-1.73(m,1H),1.50(s,3H),1.43-1.28(m,4H),0.92(t,J=7.0Hz,3H)。

LC-MS：m/z 430.3[M+H]⁺。

實施例40：(R)-2-((7-([2,4’-聯吡啶]-5-基)-2-胺基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(40)的製備

與實施例39的製備方法相同相同，除了將3-吡啶硼酸替換為4-吡啶硼酸，製得化合物40。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 9.35(d,J=2.2Hz,1H),9.29(s,1H),8.72-8.66(m,2H),8.55(dd,J=8.3,2.3Hz,1H),8.19(d,J=8.2Hz,1H),8.17-8.13(m,2H),7.63(s,1H),4.10(d,J=11.4Hz,1H),3.74(d,J=11.3Hz,1H),2.33-2.21(m,1H),1.83-1.71(m,1H),1.50(s,3H),1.43-1.29(m,4H),0.92(t,J=6.9Hz,3H)。

LC-MS：m/z 430.4[M+H]⁺。

實施例41：(R)-2-((2-胺基-7-(6’-甲基-[2,3’-聯吡啶]-5-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(41)的製備

與實施例39的製備方法相同，除了將化合物3-吡啶硼酸替換為6-甲基吡啶-3-硼酸，製得化合物41。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 9.38(s,1H),9.25(s,1H),9.02(s,1H),8.46(d,J=7.9Hz,1H),8.34(d,J=8.0Hz,1H),7.96(d,J=7.9Hz,1H),7.66(s,1H),7.40(d,J=8.0Hz,1H),4.18(d,J=11.4Hz,1H),3.76(d,J=11.4Hz,1H),2.59(s,3H),2.33-2.19(m,1H),1.85-1.71(m,1H),1.54(s,3H),1.47-1.24(m,4H),0.93(t,J=6.9Hz,3H)。

LC-MS：m/z 444.3[M+H]⁺。

實施例42：(R)-2-((7-([2,2’-聯吡啶]-5-基)-2-胺基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(42)的製備

與實施例39的製備方法相同，除了將化合物5-溴-2,3’-聯吡啶(39a)替換為5-溴-2,2’-聯吡啶(42a)，製得化合物42。

¹H NMR(300MHz,Methanol-d ₄)δ 9.35-9.25(m,2H),8.75-8.65(m,1H),8.60-8.51(m,1H),8.51-8.39(m,2H),8.00(t,J=7.5Hz,1H),7.65(s,1H),7.56-7.43(m,1H),4.12(d,J=11.3Hz,1H),3.77(d, J=11.3Hz,1H),2.37-2.17(m,1H),1.88-1.73(m,1H),1.52(s,3H),1.47-1.30(m,4H),0.94(t,J=6.8Hz,3H)。

LC-MS：m/z 430.1[M+H]⁺。

實施例43：(R)-2-((2-胺基-7-(4-(吡咯烷-1-基甲基)苄基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(43)的製備

步驟1：(R)-N ⁴-(1-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-甲基己-2-基)-7-(4-氯苄基)-N ²-(2,4-二甲氧基苄基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4-二胺(43a)的製備

於室溫，將化合物2f(150mg，0.26mmol)溶於1,4-二噁烷(2mL)和水(0.5mL)，依次加入4-氯苄基硼酸頻那醇酯(CAS：475250-49-8)(43b)(264mg，1.05mmol)、碳酸鉀(255mg，1.83mmol)和四(三苯基膦)鈀(60mg，0.052mmol)。反應液在氮氣氛下於95℃攪拌3小時。反應完成後，反應液加水(15mL)稀釋，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取，有機相合併後用飽和食鹽水(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得粗品用製備薄層色譜法分離純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚=1：2)得到橙色油狀化合物43a(92mg,53.01%)。

LC-MS：m/z 664.3[M+H]⁺。

步驟2：(R)-N ⁴-(1-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-甲基己-2-基)-N ²-(2,4-二甲氧基苄基)-7-(4-(吡咯烷-1-基甲基)苄基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4-二胺(43c)的製備

於室溫，將化合物43a(92mg，0.14mmol)溶於1,4-二噁烷(2mL)和水(0.5mL)，依次加入(1-吡咯烷基甲基)三氟硼酸鉀(37mg,0.19mmol)、碳酸鉀(57.8mg，0.41mmol)和XPhos Pd G3(11.7mg，0.014mmol)。反應液在氮氣氛下於100℃攪拌過夜。反應完全後，反應液加水(15mL)稀釋，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取，有機相合併後用飽和食鹽水(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得粗品用製備薄層色譜法分離純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚=1：2)得到橙色油狀化合物43b(33mg,33.4%)。

LC-MS：m/z 713.4[M+H]⁺。

步驟3：(R)-2-((2-胺基-7-(4-(吡咯烷-1-基甲基)苄基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(43)的製備

於室溫，將化合物43b(33mg,0.046mmol)溶於二氯甲烷(1mL)，緩慢滴加三氟乙酸(1mL)。反應液於40℃攪拌反應過夜。反應完成後，反應液減壓濃縮，所得粗品用製備型色譜管柱分離純化(管柱型：XBridge Shield RP18 OBD管柱，5um，19*150mm；流動相A：水 (10mmol/L碳酸氫銨)，流動相B：乙腈；流速：25mL/min；梯度：在8分鐘內11%-47%乙腈；檢測波長：254/220nm)，得到白色固體化合物43(1.6mg，7.41%)。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 8.97(s,1H),7.26-7.16(m,4H),6.79(s,1H),4.50(s,2H),4.02(s,2H),3.95(d,J=11.2Hz,1H),3.60(d,J=11.3Hz,1H),3.42-3.34(m,2H),3.08-2.99(m,2H),2.19-2.08(m,1H),1.82-1.72(m,4H),1.68-1.59(m,1H),1.35(s,3H),1.31-1.19(m,4H),0.80(t,J=6.9Hz,3H)。

LC-MS：m/z 449.3[M+H]⁺。

實施例44：N ⁴-丙基吡啶并[3,4-d]嘧啶-2,4-二胺(44)的製備

步驟1：2-胺基吡啶并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(44b)的製備

於室溫，將3-溴異煙酸44a(5.0g，24.75mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(120mL)中，依次加入碳酸銫(16.1g，49.50mmol)、碘化亞銅(0.94g，4.95mmol)、鹽酸胍(2.60g，27.23mmol)，反應液在氮氣氛下110℃攪拌過夜。反應完畢後，將體系中固體過濾，濾渣用甲醇洗滌(3×100mL)。將收集到的濾液減壓濃縮，粗品用矽膠管柱層析色譜法純化(流動相：甲醇/二氯甲烷=20%-30%)，得到淡黃色固體化合物44b(3.2g，79.4%)。

LC-MS：m/z 163.1[M+H]⁺。

步驟2：N ⁴-丙基吡啶并[3,4-d]嘧啶-2,4-二胺(44)的製備

於室溫，將化合物44b(40mg，0.247mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(3mL)中，依次加入卡特縮合劑(BOP)(218mg，0.494mmol)、1,8-二氮雜二環十一碳-7-烯(DBU)(75.1mg，0.494mmol)、正丙胺(29.2mg，0.494mmol)，反應液在氮氣氛下，於室溫反應4小時。反應完畢後，加入水(10mL)淬滅，用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。有機相合併後用飽和食鹽水(2×20mL)洗滌。有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮得粗品。粗品用製備型反相色譜管柱純化(管柱型：XBridge Shield RP18 OBD管柱，5um，19*150mm；流動相A：水(10mmol/L碳酸氫銨)，流動相B：乙腈；流速：25mL/min；梯度：在8分鐘內47%-53%乙腈；檢測波長：254/220nm)，得白色固體化合物44(10.2mg，20.8%)。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 8.50(s,1H),8.06(d,J=5.6Hz,1H),7.69(d,J=5.7Hz,1H),3.49-3.41(m,2H),1.70-1.57(m,2H),0.90(t,J=7.4Hz,3H)。

LC-MS：m/z 204.2[M+H]⁺。

實施例45：N ⁴-正丁基吡啶并[3,4-d]嘧啶-2,4-二胺(45)的製備

與實施例44的製備方法相同，除了將正丙胺替換為正丁胺，製得化合物45。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 8.50(d,J=0.9Hz,1H),8.06(d,J=5.6Hz,1H),7.69(dd,J=5.6,0.9Hz,1H),3.49(t,J=7.3Hz,2H),1.67-1.55(m,2H),1.41-1.29(m,2H),0.89(t,J=7.4Hz,3H)。

LC-MS：m/z 218.2[M+H]⁺。

實施例46：N ⁴-正戊基吡啶并[3,4-d]嘧啶-2,4-二胺(46)的製備

與實施例44的製備方法相同，除了將正丙胺替換為正戊胺，製得化合物46。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 8.50(d,J=0.9Hz,1H),8.06(dd,J=5.6,0.8Hz,1H),7.69(dd,J=5.6,0.9Hz,1H),3.51-3.44(m,2H),1.69-1.56(m,2H),1.37-1.25(m,4H),0.91-0.78(m,3H)。

LC-MS：m/z 232.2[M+H]⁺。

實施例47：2-((2-胺基吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)胺基)-1-戊醇(47)的製備

與實施例44的製備方法相同，除了將正丙胺替換為DL-2-胺基-1-戊醇，製得化合物47。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 8.50(s,1H),8.07(d,J=5.7Hz,1H),7.80(dd,J=5.6,0.9Hz,1H),4.47-4.39(m,1H),3.58(dd,J=5.4,1.4Hz,2H),1.68-1.51(m,2H),1.43-1.28(m,2H),0.88(t,J=7.3Hz,3H)。

LC-MS：m/z 248.2[M+H]⁺。

實施例48：2-((2-胺基吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)胺基)-1-己醇(48)的製備

與實施例44的製備方法相同，除了將正丙胺替換為DL-2-胺基-1-己醇，製得化合物48。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 8.51(d,J=0.9Hz,1H),8.07(d,J=5.6Hz,1H),7.80(dd,J=5.6,0.9Hz,1H),4.45-4.37(m,1H),3.58(dd,J=5.4,1.1Hz,2H),1.73-1.62(m,1H),1.62-1.51(m,1H),1.51-1.40(m,1H),1.36-1.22(m,3H),0.85-0.78(m,3H)。

LC-MS：m/z 262.2[M+H]⁺。

實施例49：(R)-2-((2-胺基吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基丁-1-醇(49)的製備

與實施例44的製備方法相同，除了將正丙胺替換為(R)-2-胺基-2-甲基丁-1-醇(49a)，製得化合物49。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 8.79(s,1H),8.53(d,J=5.6Hz,1H),8.19(d,J=5.6Hz,1H),4.16(d,J=11.4Hz,1H),3.73(d,J=11.4Hz,1H),2.37-2.22(m,1H),1.89-1.73(m,1H),1.52(s,3H),0.93(t,J=7.5Hz,3H)。

LC-MS：m/z 248.3[M+H]⁺。

實施例50：(R)-2-((2-胺基吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基戊-1-醇(50)的製備

與實施例44的製備方法相同，除了將正丙胺替換為(R)-2-胺基-2-甲基戊-1-醇(50a)，製得化合物50。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 8.59(d,J=0.9Hz,1H),8.16(d,J=5.6Hz,1H),7.90(dd,J=5.6,0.9Hz,1H),4.05(d,J=11.4Hz,1H),3.73 (d,J=11.3Hz,1H),2.23-2.13(m,1H),1.81-1.69(m,1H),1.47(s,3H),1.44-1.28(m,2H),0.94(t,J=7.3Hz,3H)。

LC-MS：m/z 262.2[M+H]⁺。

實施例51：(R)-2-((2-胺基吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基庚-1-醇(51)的製備

與實施例44的製備方法相同，除了將正丙胺替換為(R)-2-胺基-2-甲基庚-1-醇(51a)，製得化合物51。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 8.59(s,1H),8.16(d,J=5.6Hz,1H),7.90(d,J=5.3Hz,1H),4.06(d,J=11.3Hz,1H),3.72(d,J=11.3Hz,1H),2.28-2.19(m,1H),1.80-1.72(m,1H),1.47(s,3H),1.34-1.25(m,6H),0.90-0.83(m,3H)。

LC-MS：m/z 290.2[M+H]⁺。

實施例52和實施例53：(R)-2-((2-胺基吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(52)和(S)-2-((2-胺基吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(53)的製備

步驟1：(R)-N-((1-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-甲基己-2-基)-2-氯吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-胺(52b)的製備

於室溫，將2,4-二氯吡啶并[3,4-d]嘧啶52a(100mg，0.50mmol)溶於1,4-二噁烷(2.0mL)中。反應液中依次加入(R)-1-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-甲基己-2-胺(1e)(123mg，0.50mmol)和N,N-二異丙基乙胺(0.26μL，1.49mmol)，於室溫攪拌2小時。反應完全後，冷卻至室溫。反應液用水(20mL)稀釋，再用乙酸乙酯(3×20mL)萃取，有機相合併後用飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。所得粗品用矽膠管柱層析色譜法分離純化(流動相：石油醚/乙酸乙酯=4/1)，得到黃色的油狀化合物52b(110mg，53.79%)。

LC-MS：m/z 409.1[M+H]⁺。

步驟2：(R)-N ⁴-(1-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-甲基己-2-基)-N ²-(2,4-二甲氧基苄基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-2,4-二胺(52c)的製備

於室溫，將化合物52b(110mg,0.27mmol)溶於2,4-二甲氧基苄胺(1.0mL)中。反應液中加入N,N-二異丙基乙胺(140μl，0.80mmol)，於80℃攪拌2小時。反應完全後，冷卻至室溫。反應液用水(20mL)稀釋，再用乙酸乙酯(3×20mL)萃取，有機相合併後用飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。所得粗品用矽膠管柱層析色譜法分離純化(流動相：石油醚/乙酸乙酯=3：2)，得到黃色的油狀化合物52c(114mg，78.53%)。

LC-MS：m/z 508.3[M+H]⁺。

步驟3：(R)-2-((2-胺基吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(52d)的製備

於室溫，將化合物52c(114mg，0.21mmol)溶於二氯甲烷(0.5mL)中。反應液中加入三氟乙酸(0.5mL)，於室溫攪拌12小時。反應完全後，反應液減壓濃縮，所得粗品用製備型色譜管柱分離純化(管柱型：XBridge Shield RP18 OBD管柱，5um，19*150mm；流動相A：水(10mmol/L碳酸氫銨)，流動相B：乙腈；流速：25mL/min；梯度：在8分鐘內20%-38%乙腈；檢測波長：220nm)，得到白色的固體化合物52d(12mg，20.18%)。

¹H NMR(300MHz，甲醇-d ₄)δ 8.61(d,J=0.9Hz,1H),8.18(d,J=5.6Hz,1H),7.92(dd,J=5.6,0.9Hz,1H),4.09(d,J=11.3Hz,1H),3.74(d,J=11.2Hz,1H),2.32-2.18(m,1H),1.86-1.71(m,1H),1.49(s,3H),1.41-1.28(m,4H),0.92(t,J=6.9Hz,3H)。

LC-MS：m/z 275.9[M+H]⁺。

步驟4：(R)-2-((2-胺基吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(52)和(S)-2-((2-胺基吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(53)的製備

化合物52d藉由手性分離(管柱型：OptiChiral A6-5管柱，3*25cm，5um；流動相A：二氧化碳，流動相B：甲醇(0.1%的2M胺甲醇溶液)；流速：50mL/min；梯度：50% B等梯度；檢測波長：220nm)，得到白色的固體產品化合物52，t_R=2.052min，ee值(對映體過量)：100%；和白色的固體產品化合物53，t_R=2.383min，ee值(對映體過量)：92.8%。

化合物52：

¹H NMR(300MHz，甲醇-d ₄)δ 8.61(s,1H),8.17(d,J=5.6Hz,1H),7.91(d,J=5.6Hz,1H),4.08(d,J=11.3Hz,1H),3.74(d,J=11.3Hz,1H),2.33-2.15(m,1H),1.89-1.71(m,1H),1.49(s,3H),1.44-1.21(m,4H),0.98-0.82(m,3H)。

LC-MS：m/z 276.3[M+H]⁺。

化合物53：

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 8.64(s,1H),8.26(d,J=5.6Hz,1H),7.97(d,J=5.6Hz,1H),4.12-4.07(m,1H),3.72(d,J=11.2Hz,1H),2.29-2.17(m,1H),1.82-1.71(m,1H),1.49(s,3H),1.38-1.29(m,4H),0.89(t,J=6.9Hz,3H)。

LC-MS：m/z 276.2[M+H]⁺。

實施例54：2-((2-胺基吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)胺基)-1-庚醇(54)的製備

與實施例52的步驟1至步驟3相同，除了將(R)-1-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-甲基己-2-胺(1e)替換為2-胺基-1-庚醇，製得化合物54。

¹H NMR(300MHz，甲醇-d ₄)δ 8.62(d,J=0.9Hz,1H),8.18(d,J=5.6Hz,1H),7.91(dd,J=5.6,0.9Hz,1H),4.59-4.46(m,1H),3.74-3.68(m,2H),1.87-1.59(m,2H),1.50-1.27(m,6H),0.97-0.84(m,3H)。

LC-MS：m/z 275.9[M+H]⁺。

實施例55：(R)-2-((2-胺基-8-氟吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(55)的製備

步驟1：2-胺基-8-氟吡啶并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(55b)的製備

於室溫，將3-氯-2-氟異煙酸(55a)(1.0g，5.70mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(15mL)中，依次加入碳酸銫(5.57g，17.1mmol)、碳酸胍(1.03g，5.72mmol)、碘化亞銅(217mg,1.14mmol)，反應液在氮氣氛下110℃攪拌4小時。反應完畢後，加水(100mL)淬滅反應，體系中加入氯仿(3×50mL)萃取，合併的有機相用飽和食鹽水(100mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，粗品用矽膠管柱層析色譜法分離純化(流動相：甲醇/二氯甲烷=0-10%)，得淡黃色固體55b(83.9mg,8.2%)。

LC-MS：m/z 181.0[M+H]⁺。

步驟2：(R)-N ⁴-(1-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-甲基己-2-基)-8-氟吡啶并[3,4-d]嘧啶-2,4-二胺(55c)的製備

於室溫，將化合物55b(30mg，0.167mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(5mL)中，依次加入(R)-1-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-甲基己-2-胺(1e)(122mg，0.50mmol)、1,8-二氮雜二環十一碳-7-烯(76.1mg，0.50mmol)、卡特縮合劑(110mg，0.25mmol)，反應液在氮氣氛下於室溫攪拌過夜。反應完畢後，加水(50mL)淬滅反應，體系中加入乙酸乙酯(3×20mL)萃取，合併的有機相用飽和食鹽水(50mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，粗品用矽膠管柱層析色譜法分離純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚=15-30%)，得白色固體化合物55c(10mg,14.7%)。

LC-MS：m/z 408.3[M+H]⁺。

步驟3：(R)-2-((2-胺基-8-氟吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(55)的製備

於室溫，將化合物55c(10mg，0.025mmol)溶於三氟乙酸(2mL)和二氯甲烷(2mL)的混合液中。反應液在45℃攪拌2小時。反應完畢後，反應液減壓濃縮，粗品加水(30mL)稀釋，體系中加入二氯甲烷(3×15mL)萃取，合併的有機相用飽和食鹽水(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮後得粗品，粗品用製備型反相色譜管柱純化(管柱型：XBridge Shield RP18 OBD管柱，5um，19*150mm；流動相A：水(10mmol/L碳酸氫銨)，流動相B：乙腈；流速：25mL/min；梯度：在8分鐘內25%-42%乙腈；檢測波長：254/220nm)，得到白色固體產物55(1.4mg，19.4%)。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 7.69(d,J=5.7Hz,1H),7.59(dd,J=5.7,1.3Hz,1H),3.98(d,J=11.2Hz,1H),3.61(d,J=11.2Hz,1H),2.20-2.06(m,1H),1.72-1.60(m,1H),1.37(s,3H),1.32-1.14(m,4H),0.80(t,J=7.0Hz,3H)。

LC-MS：m/z 293.9[M+H]⁺。

實施例56：(R)-2-((2-胺基-5-氟吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(56)的製備

步驟1：3-胺基-5-氟異煙醯胺(56b)的製備

於室溫，將氨水(30mL)加入3-胺基-5-氟異煙酸甲酯(56a)(900mg，5.29mmol)中。反應於60℃攪拌3小時。反應完畢後，將反應液冷卻至室溫，加入水稀釋反應，向體系中加入乙酸乙酯(3×50mL)萃取，合併的有機相使用飽和食鹽水(50mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得粗品用矽膠管柱層析色譜法分離純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚=1：1)，得黃色固體化合物56b(700mg,84.7%)。

LC-MS：m/z 156.0[M+H]⁺。

步驟2：5-氟吡啶并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(56c)的製備

於室溫，將化合物56b(700mg，4.49mmol)溶於1,4-二噁烷(15mL)中，加入雙光氣(3.09g，15.7mmol)。反應液在120℃攪拌16小時。反應完畢，將反應液冷卻至室溫，加入水淬滅反應後，向體系中加入乙酸乙酯(3×40mL)萃取，合併的有機相使用飽和食鹽水(50mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得粗品用矽膠管柱層析色譜法分離純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚=1：1)，得黃色固體化合物56c(350mg，43.1%)。

LC-MS：m/z 182.0[M+H]⁺。

步驟3：2,4-二氯-5-氟吡啶并[3,4-d]嘧啶(56d)的製備

於0℃，將化合物56c(350mg，1.93mmol)與三氯氧磷(5.0mL)混合，加入N,N-二異丙基乙胺(1.24g，9.65mmol)。反應液在100℃攪拌0.5小時。反應完畢，將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，得褐色粗品化合物56d(70.0mg，16.7%)。

LC-MS：m/z 218.0[M+H]⁺。

步驟4：(R)-N-((1-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-甲基己-2-基)-2-氯-5-氟吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-胺(56e)的製備

於室溫，將化合物56d(70.0mg，0.32mmol)溶於1,4-二噁烷(5.0mL)中。反應液中依次加入(R)-1-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-甲基己-2-胺(1e)(94.4mg，0.39mmol)和N,N-二異丙基乙胺(144mg，1.12mmol)，於室溫反應12小時。反應完全後，反應液用水(15mL)稀釋，再用乙酸乙酯(3×10mL)萃取，有機相合併後用飽和食鹽水(15mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得粗品用製備薄層色譜法分離純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚=1：8)得到棕色油狀化合物56e(55.0mg,40.2%)。

LC-MS：m/z 427.2[M+H]⁺。

步驟5：(R)-N ⁴-(1-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-甲基己-2-基)-N ²-(2,4-二甲氧基苄基)-5-氟吡啶并[3,4-d]嘧啶-2,4-二胺(56f)的製備

於室溫，將化合物56e(55mg，0.13mmol)溶於1,4-二噁烷(5mL)中。反應液中依次加入2,4-二甲氧基苄胺(21mg，0.15mmol)和N,N-二異丙基乙胺(58mg，0.45mmol)，於100℃攪拌16小時。反應完全後，反應液用水(15mL)稀釋，再用乙酸乙酯(3×10mL)萃取，有機相合併後用飽和食鹽水(15mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得粗品用製備薄層色譜法分離純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚=1：10)得到棕色油狀化合物56f(30.0mg,44.3%)。

LC-MS：m/z 558.3[M+H]⁺。

步驟6：(R)-2-((2-胺基-5-氟吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(56)的製備

於室溫，將化合物56f(30mg,0.057mmol)溶於二氯甲烷(3mL)中。反應液中加入三氟乙酸(1mL)，於室溫攪拌3小時。反應完全後，反應液減壓濃縮，加入飽和碳酸氫鈉溶液(10mL)稀釋，再用乙酸乙酯(3×10mL)萃取，有機相合併後用飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。所得粗品用製備型色譜管柱純化 (管柱型：XBridge Shield RP18 OBD管柱，5um，19*150mm；流動相A：水(10mmol/L碳酸氫銨)，流動相B：乙腈；流速：25mL/min；梯度：在8分鐘內25%-45%乙腈；檢測波長：254/220nm)，得到白色固體化合物56(7.30mg,43.7%)。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 8.33(d,J=1.2Hz,1H),7.92(d,J=2.9Hz,1H),3.81(d,J=11.1Hz,1H),3.60(d,J=11.0Hz,1H),2.02-1.88(m,1H),1.87-1.73(m,1H),1.38(s,3H),1.31-1.19(m,4H),0.87-0.77(m,3H)。

LC-MS：m/z 293.9[M+H]⁺。

實施例57：(R)-2-((2-胺基-6-氟吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(57)的製備

步驟1：5-胺基-2-氟異煙醯胺(57b)的製備

於室溫，將5-胺基-2-氟-4-吡啶羧酸57a(1.50g,9.62mmol)溶於氯化亞碸(20mL)中。反應於80℃回流1小時。反應完畢後，直接減壓濃縮，將所得的褐色油狀液體化合物溶於四氫呋喃(5mL)，於0℃緩慢滴加入下氨水(15mL)中，反應液於0℃攪拌1小時。反應完畢後，加入水稀釋反應，向體系中加入乙酸乙酯(3×50mL)萃取，合併的有機相使用飽和食鹽水(100mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得粗品用矽膠管柱層析色譜法分離純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚=1：1)，得黃色固體粗品化合物57b(960mg,64.4%)。

LC-MS：m/z 156.0[M+H]⁺。

其餘步驟與實施例56相同，除了將3-胺基-5-氟異煙醯胺(56b)替換為5-胺基-2-氟異煙醯胺(57b)，製得化合物57。

¹H NMR(300MHz，甲醇-d ₄)δ 8.29(s,1H),7.74(s,1H),4.11(d,J=11.3Hz,1H),3.73(d,J=11.3Hz,1H),2.12-2.01(m,1H),1.68-1.56(m,1H),1.40(s,3H),1.36-1.31(m,4H),0.96-0.86(m,3H)。

LC-MS：m/z 293.9[M+H]⁺。

實施例58：(R)-2-((2-胺基-7-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(58)的製備

步驟1：2-氟-5-碘-4-胺基吡啶(58b)和2-氟-3-碘-4-胺基吡啶(58c)的製備

於室溫，將化合物2-氟-4-胺基吡啶58a(3.0g，26.8mmol)溶於乙醇(100mL)中，依次加入碘(6.79g，26.8mmol)、硫酸銀(8.34g，26.8mmol)，於室溫攪拌16小時。反應完畢後，過濾，濾液直接減壓濃縮得粗品。粗品用矽膠管柱層析色譜法分離純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚=20%-40%)得化合物58b(0.96g，15.0%)和化合物58c(3.10g，48.7%)。

LC-MS：m/z 58b 238.9[M+H]⁺；LC-MS：m/z 58c 238.9[M+H]⁺。

步驟2：4-胺基-6-氟-煙酸甲酯(58d)的製備

於室溫，將化合物58b(2.33g，9.79mmol)溶於甲醇(40mL)中，依次加入三乙胺(0.99g，9.79mmol)、[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(0.72g，0.98mmol)，於一氧化碳20個大氣壓、100℃ 反應6小時。反應完畢後，過濾，濾液直接減壓濃縮得粗品。粗品用矽膠管柱層析純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚=20%-40%)，得淺黃色固體化合物58d(543mg，32.6%)。

LC-MS：m/z 171.0[M+H]⁺。

其餘步驟與實施例56相同，除了將3-胺基-5-氟異煙醯胺(56b)替換為4-胺基-6-氟-煙酸甲酯(58d)，製得化合物58。

LC-MS：m/z 294.2[M+H]⁺。

¹H NMR(300MHz，甲醇-d ₄)δ 7.95(d,J=5.7Hz,1H),7.01(d,J=6.0Hz,1H),3.93(d,J=11.2Hz,1H),3.71(d,J=11.0Hz,1H),2.15-1.83(m,2H),1.50(s,3H),1.44-1.31(m,4H),0.94(t,J=6.5Hz,3H)。

實施例59：(R)-2-((2-胺基-5-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(59)的製備

步驟1：4-胺基-6-氟-煙酸甲酯(59a)的製備

於室溫，將2-氟-3-碘-4-胺基吡啶58c(3.10g，13.0mmol)溶於甲醇(60mL)中，依次加入三乙胺(1.32g，13.0mmol)、[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(1.06g，1.30mmol)，於一氧化碳20個大氣壓、100℃反應6小時。反應完畢後，過濾，濾液直接減壓濃縮得粗品。粗品用矽膠管柱層析純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚=20%-40%)，得淺黃色固體化合物59a(1.6g,72.2%)。

LC-MS：m/z 171.0[M+H]⁺

其餘步驟與實施例56相同，除了將3-胺基-5-氟異煙醯胺(56b)替換為4-胺基-6-氟-煙酸甲酯(59a)，製得化合物59。

LC-MS：m/z 294.2[M+H]⁺。

¹H NMR(300MHz，甲醇-d ₄)δ 7.94(dd,J=6.0,0.8Hz,1H),7.01(dd,J=6.0,1.9Hz,1H),3.93(d,J=11.1Hz,1H),3.71(d,J=11.0Hz,1H),2.14-1.99(m,1H),1.98-1.83(m,1H),1.50(s,3H),1.45-1.25(m,4H),1.02-0.87(m,3H)。

實施例60：2-((2-胺基-6-(4-(吡咯烷-1-基甲基)苄基)吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)胺基)己-1-醇(60)的製備

步驟1：5-胺基-2-氯異煙酸甲酯(60b)的製備

在0℃，將5-胺基-2-氯吡啶-4-羧酸60a(25g，145mmol)溶於甲醇(300mL)中，然後將二氯亞碸(100mL)滴加入上述溶液中(保持反應體系內溫為20-25℃)，滴加完成後，升溫至70℃並攪拌過夜。將反應體系冷卻至室溫。混合液減壓濃縮，所得殘餘物用碳酸氫鈉水溶液打漿兩遍，過濾後濾餅烘乾得到黃色固體化合物60b(16g,59.1%)。

LC-MS：m/z 187.0[M+H]⁺。

步驟2：2-胺基-6-氯吡啶并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(60c)的製備

於室溫，在100mL玻璃瓶中依次加入化合物60b(3.0g,16.1mmol)、氯甲胱鹽酸鹽(3.7g,32.2mmol)、二甲基碸(10g)，反應液升溫至150℃攪拌4小時。反應完畢後，反應液加水(100mL)稀釋，過濾，將所得濾餅用水淋洗2遍，所得濾餅經烘乾得黃色固體化合物60c(3.7g，粗品)。

LC-MS：m/z 197.0[M+H]⁺。

步驟3：2-((2-胺基-6-氯吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)胺基)己-1-醇(60d)的製備

於室溫，將化合物60c(130mg，0.66mmol)與DL-2-胺基-1-己醇(155mg，1.32mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(2mL)，後將卡特縮合劑(351mg，0.79mmol)和1,8-二氮雜二環十一碳-7-烯(302mg，1.98mmol)依次加入體系。反應液在於室溫攪拌4小時。反應完畢，反應液用水(30mL)稀釋，再用乙酸乙酯(3×30mL)萃取，有機相合併後用飽和食鹽水(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。將所得粗品用矽膠管柱層析色譜法純化(流動相：石油醚：乙酸乙酯=1：1)，得黃色油狀化合物60d(120mg,61%)。

LC-MS：m/z 296.1[M+H]⁺。

步驟4：2-((2-胺基-6-(4-氯苄基)吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)胺基)己-1-醇(60e)的製備

於室溫，將化合物60d(120mg，0.41mmol)與4-氯苄基硼酸頻那醇酯(43b)(512mg，2.02mmol)溶於二噁烷(2mL)和水(0.4mL)，然後將碳酸鉀(168mg，1.21mmol)和四(三苯基膦)鈀(93mg，0.081mmol)依次加入體系。反應液在氮氣氛下95℃攪拌4小時。反應完畢，將反應液冷卻至室溫，用水(30mL)稀釋，再用乙酸乙酯(3×30mL)萃取，有機相合併後用飽和食鹽水(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。將所得粗品用矽膠管柱層析色譜法純化(流動相：石油醚：乙酸乙酯=1：1)，得黃色油狀化合物60e(60mg，38.3%)。

LC-MS：m/z 386.2[M+H]⁺。

步驟5：2-((2-胺基-6-(4-(吡咯烷-1-基甲基)苄基)吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)胺基)己-1-醇(60)的製備

於室溫，將化合物60e(60mg，0.155mmol)與(1-吡咯烷基甲基)三氟硼酸鉀(35mg，0.18mmol)溶於二噁烷(1mL)和水(0.2 mL)，然後將Xphos Pd G3(9.9mg，0.012mmol)和碳酸鉀(64mg，0.46mmol)依次加入體系。反應液在氮氣氛下100℃攪拌4小時。反應完畢，將反應液冷卻至室溫，用水(30mL)稀釋，再用乙酸乙酯(3×30mL)萃取，有機相合併後用飽和食鹽水(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得粗品用製備型色譜管柱分離純化(管柱型：XBridge Shield RP18 OBD管柱，5um，19*150mm；流動相A：水(0.1%的甲酸)，流動相B：乙腈；流速：25mL/min；梯度：在8分鐘內6%-18%乙腈；檢測波長：220nm)，得到類白色固體化合物60(19.5mg，26.4%)。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 8.73(s,1H),8.14(s,1H),7.50-7.36(m,4H),4.68-4.55(m,1H),4.32(s,2H),4.26(s,2H),3.79-3.65(m,2H),3.30-3.27(m,2H),2.15-1.99(m,4H),1.83-1.62(m,2H),1.46-1.32(m,4H),0.96-0.88(m,3H)。

LC-MS：m/z 435.2[M+H]⁺。

實施例61：(R)-2-((2-胺基-6-(4-(吡咯烷-1-基甲基)苄基)吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(61)的製備

步驟1：(R)-N ⁴-(1-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-甲基己-2-基)-6-氯吡啶并[3,4-d]嘧啶-2,4-二胺(61a)的製備

於室溫，將化合物60c(300mg，1.52mmol)與(R)-1-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-甲基己-2-胺(1e)(749mg，3.05mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(2mL)，然後將卡特縮合劑(810mg，1.83mmol)和1,8-二氮雜二環十一碳-7-烯(697mg，4.57mmol)依次加入體系。反應液於室溫攪拌4小時。反應完畢，反應液用水(30mL)稀釋，再用乙酸乙酯(3×30mL)萃取，有機相合併後用飽和食鹽水(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。將所得粗品用矽膠管柱層析色譜法純化(流動相：石油醚：乙酸乙酯=1：1)，得黃色油狀化合物61a(102mg,76%)。

LC-MS：m/z 424.2[M+H]⁺。

步驟2：(R)-N ⁴-(1-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-甲基己-2-基)-6-(4-氯苄基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-2,4-二胺(61b)的製備

於室溫，將化合物61a(100mg，0.24mmol)與4-氯苄基硼酸頻那醇酯(43b)(297mg，1.17mmol)溶於二噁烷(2mL)和水(0.4 mL)，然後將四(三苯基膦)鈀(54mg，0.04mmol)和碳酸鉀(97mg，0.7mmol)依次加入體系。反應液在氮氣氛下95℃攪拌4小時。反應完畢，將反應液冷卻至室溫，用水(30mL)稀釋，再用乙酸乙酯(3×30mL)萃取，有機相合併後用飽和食鹽水(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。將所得粗品用矽膠管柱層析色譜法純化(流動相：石油醚：乙酸乙酯=1：1)，得黃色油狀化合物61b(62mg，51%)。

LC-MS：m/z 514.3[M+H]⁺。

步驟3：(R)-N ⁴-(1-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-甲基己-2-基)-6-(4-(吡咯烷-1-基甲基)苄基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-2,4-二胺(61c)的製備

於室溫，將化合物61b(60mg，0.12mmol)與(1-吡咯烷基甲基)三氟硼酸鉀(26mg，0.14mmol)溶於二噁烷(1mL)和水(0.2mL)，然後將碳酸鉀(48mg,0.35mmol)和Xphos Pd G3(7.4mg，0.009mmol)依次加入體系。反應液在氮氣氛下100℃攪拌4小時。反應完畢，將反應液冷卻至室溫，用水(30mL)稀釋，再用乙酸乙酯(3×30mL)萃取，有機相合併後用飽和食鹽水(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。將所得粗品用矽膠管柱層析色譜法純化(流動相：石油醚：乙酸乙酯=2：1)，得黃色油狀化合物61c(8mg，12%)。

LC-MS：m/z 563.4[M+H]⁺。

步驟4：(R)-2-((2-胺基-6-(4-(吡咯烷-1-基甲基)苄基)吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(61)的製備

於室溫，將化合物61c(8mg,0.014mmol)溶於二氯甲烷(1.0mL)中。反應液中加入三氟乙酸(0.5mL)，於室溫攪拌1小時。反應完全後，反應液減壓濃縮，加入飽和碳酸氫鈉溶液(10mL)稀釋，再用乙酸乙酯(3×10mL)萃取，有機相合併後用飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。所得粗品用製備型色譜管柱分離純化(管柱型：XBridge Shield RP18 OBD管柱，5um，19*150mm；流動相A：水(0.05%氨水)，流動相B：乙腈；流速：25mL/min；梯度：在8分鐘內30%-65%乙腈；檢測波長：220nm)，得到白色固體化合物61(1.2mg,8.3%)。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 8.73(s,1H),8.24(s,1H),7.42(q,J=8.1Hz,4H),4.32(s,2H),4.26(s,2H),4.17(d,J=11.4Hz,1H),3.70(d,J=11.4Hz,1H),3.30-3.27(m,4H),2.29-2.19(m,1H),2.13-2.01(m,4H),1.83-1.72(m,1H),1.52(s,3H),1.40-1.29(m,4H),0.90(t,J=6.9Hz,3H)。

LC-MS：m/z 449.2[M+H]⁺。

實施例62：(R)-2-((2-胺基-6-(4-((二甲胺基)甲基)苄基)吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(62)的製備

步驟1：(R)-2-((2-胺基-6-氯吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(62a)的製備

於室溫，將化合物60c(300mg，1.56mmol)、(R)-2-胺基-2-甲基己-1-醇(300mg，2.27mmol)、卡特縮合劑(810mg，1.83mmol)、1,8-二氮雜二環十一碳-7-烯(697mg，4.59mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(5mL)中。反應液於室溫攪拌12小時。反應完畢後，加水(20mL)稀釋反應，體系中加入乙酸乙酯(3×30mL)萃取，合併的有機相用飽和食鹽水(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得黃色粗品用矽膠管柱層析色譜法分離純化(流動相：甲醇/二氯甲烷/三乙胺=1/12/0.1)，得黃色固體化合物62a(300mg，62.03%)。

LC-MS：m/z 310.1[M+H]⁺。

步驟2：(R)-2-((2-胺基-6-(4-氯苄基)吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(62b)的製備

於室溫，將化合物62a(150mg，0.48mmol)、4-氯苄基硼酸頻那醇酯(43b)(245mg，0.97mmol)、碳酸鉀(201mg，1.45mmol)、四(三苯基膦)鈀溶於1,4-二噁烷(2mL)和水(0.5mL)中。反應液在氮氣氛下於95℃攪拌12小時。反應完畢後，加水(20mL)稀釋反應，體系中加入乙酸乙酯(3×30mL)萃取，合併的有機相用飽和食鹽水(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得黃色粗品用矽膠管柱層析色譜法分離純化(流動相：甲醇/二氯甲烷/三乙胺=1/13/0.1)，得黃色固體化合物62b(30mg，15.53%)。

LC-MS：m/z 400.2[M+H]⁺。

步驟3：(R)-2-((2-胺基-6-(4-((二甲胺基)甲基)苄基)吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(62)的製備

於室溫，將化合物62b(20mg，0.05mmol)、(二甲胺基甲基)三氟硼酸鉀(165mg，0.08mmol)、碳酸銫(49mg，0.15mmol)、 2-二環己基磷-2,4,6-三異丙基聯苯(5mg，0.01mmol)、醋酸鈀(1mg，0.005mmol)溶於1,4-二噁烷(1mL)和水(0.2mL)。反應液用氮氣置換三次，於100℃攪拌12小時。反應完畢後，加水(20mL)稀釋反應，體系中加入乙酸乙酯(3×30mL)萃取，合併的有機相用飽和食鹽水(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得粗品用製備型色譜管柱分離純化(管柱型：XBridge Shield RP18 OBD管柱，10um，19*250mm；流動相A：水(0.05%氨水)，流動相B：乙腈；流速：25mL/min；梯度：在8分鐘內30%-55%乙腈；檢測波長：254/220nm)。收集產品，冷凍乾燥，得到白色油狀化合物62(1.1mg，5.21%)。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 8.44(d,J=0.8Hz,1H),7.80(d,J=0.8Hz,1H),7.15(s,4H),4.07(s,2H),3.95(d,J=11.3Hz,1H),3.61(d,J=11.2Hz,1H),3.56-3.53(m,1H),3.40(s,2H),2.16(s,6H),2.14-2.07(m,1H),1.72-1.59(m,1H),1.36(s,3H),1.28-1.15(m,4H),0.79(t,J=7.0Hz,3H)。

LC-MS：m/z 423.3[M+H]⁺。

實施例63：(R)-2-((2-胺基-6-甲基吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(63)的製備

於室溫，將化合物62a(50.0mg，0.161mmol)、三甲基環三硼氧烷(50wt%在THF中，60.78mg，0.242mmol)、碳酸銫(157.76mg，0.484mmol)、四(三苯基膦)鈀(37.30mg，0.032mmol)溶於1,4-二噁烷(1.8mL)和水(0.2mL)。反應液在氮氣氛下於100℃攪拌12小時。反應完畢後，反應液減壓濃縮，殘餘物用製備薄層色譜法分離純化(流動相：乙酸乙酯/甲醇=30：1)，所得粗品進一步經製備型色譜管柱分離純化(管柱型：XSelect CSH Prep C18 OBD管柱，5um，19*150mm；流動相A：水(0.1%的甲酸)，流動相B：乙腈；流速：25mL/min；梯度：在8分鐘內10%-22%乙腈；檢測波長：254/220nm)。收集產品，冷凍乾燥，得到黃綠色固體化合物63的甲酸鹽(13.8mg，25.49%)。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 8.88(br s,1H),8.23(s,1H),4.17(d,J=11.3Hz,1H),3.70(d,J=11.3Hz,1H),2.64(s,3H),2.32-2.18(m,1H),1.83-1.71(m,1H),1.53(s,3H),1.42-1.28(m,4H),0.91(t,J=6.9Hz,3H)。

LC-MS：m/z 290.3[M+H]⁺。

實施例64：(R)-2-((2-胺基-6-乙基吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(64)的製備

與實施例63的製備方法相同，除了將化合物三甲基環三硼氧烷替換為乙基硼酸，製得化合物64。

¹H NMR(300MHz，甲醇-d ₄)δ 8.65(s,1H),8.03(s,1H),4.17(d,J=11.3Hz,1H),3.73(d,J=11.3Hz,1H),2.92(q,J=7.6Hz,2H),2.36-2.19(m,1H),1.86-1.71(m,1H),1.53(s,3H),1.41-1.35(m,4H),0.93(t,J=7.1Hz,3H)。

LC-MS：m/z 303.9[M+H]⁺。

實施例65：(R)-2-((2-胺基-6-(二甲胺基)吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(65)的製備

於室溫，將化合物62a(40mg，0.129mmol)、二甲胺鹽酸鹽(15.79mg，0.194mmol)、碳酸銫(168.27mg，0.516mmol)、Pd-PEPPSI-IPent^C1-o-甲基吡啶(CAS 1612891-29-8，10.85mg，0.013mmol)溶於1,4-二噁烷(1.5mL)。反應液在氮氣氛下於90℃攪拌12小時。反應完畢，反應液用水(20mL)稀釋，再用乙酸乙酯(3×20mL)萃取，有機相合併後用飽和食鹽水(40mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。所得粗品經製備型色譜管柱分離純化(管柱型：XBridge Prep C18 OBD管柱，5um，19*150mm；流動相A：水(10mmol/L碳酸氫銨)，流動相B：乙腈；流速：25mL/min；梯度：在8分鐘內25%-40%乙腈；檢測波長：254/220nm)。收集產品，冷凍乾燥，得到黃綠色固體化合物65(2.3mg,5.43%)。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 8.34(d,J=0.9Hz,1H),6.98(d,J=0.9Hz,1H),4.04(d,J=11.3Hz,1H),3.72(d,J=11.3Hz,1H),3.10(s,6H),2.31-2.18(m,1H),1.83-1.72(m,1H),1.47(s,3H),1.43-1.26(m,4H),0.90(t,J=7.1Hz,3H)。

LC-MS：m/z 319.2[M+H]⁺。

實施例66和67：(R)-2-((2-胺基嘧啶并[5,4-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(66)和(R)-2-((6-胺基嘧啶并[5,4-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(67)的製備

步驟1：(R)-N-((1-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-甲基己-2-基)-2,6,8-三氯嘧啶并[5,4-d]嘧啶-4-胺(66b)的製備

於室溫，將化合物2,4,6,8-四氯嘧啶并[5,4-d]嘧啶66a(700mg，2.59mmol)溶於無水四氫呋喃(5mL)中，冷卻至-78℃後，依次加入N,N-二異丙基乙胺(402mg，3.11mmol)、(R)-1-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-甲基己-2-胺(1e)(637mg，2.59mmol)，反應液在氮氣氛下-78℃攪拌1小時。反應完畢後，加水(20mL)淬滅反應，體系中加入乙酸乙酯(3×30mL)萃取，合併的有機相用飽和食鹽水(50mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得粗品66b，為淡黃色固體(510mg，41.1%)。

LC-MS：m/z 478.1[M+H]⁺。

步驟2：(R)-N-((1-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-甲基己-2-基)-2,6-二氯嘧啶并[5,4-d]嘧啶-4-胺(66c)的製備

於室溫，將化合物66b(480mg，1.00mmol)溶於甲醇(5mL)中，依次加入10%鈀碳(48mg，含水量10%)。反應體系在氫氣氛下室溫攪拌1小時。反應完畢後，反應液過濾濃縮得類白色固體化合物66c(300mg,67.3%)。

LC-MS：m/z 444.2[M+H]⁺。

步驟3：(R)-N ⁴-(1-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-甲基己-2-基)-6-氯-N ²-(2,4-二甲氧基苄基)嘧啶并[5,4-d]嘧啶-2,4-二胺(66d)和(R)-N ⁸-(1-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-甲基己-2-基)-6-氯-N ²-(2,4-二甲氧基苄基)嘧啶并[5,4-d]嘧啶-2,8-二胺(67a)的製備

於室溫，將化合物66c(300mg，0.675mmol)溶於1,4-二噁烷(3mL)中，依次加入N,N-二異丙基乙胺(174mg，1.35mmol)和2,4-二甲氧基苄胺(113mg，0.675mmol)。反應體系於100℃攪拌3小時。反應完畢後，加水(20mL)淬滅反應，體系中加入乙酸乙酯(3×20mL)萃取，合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。粗品用矽膠管柱層析色譜法純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚=20%-40%)得66d和67a的混合物，為黃色油狀液體(80mg，21.8%)。

LC-MS：m/z 575.3[M+H]⁺。

步驟4：(R)-N ⁴-(1-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-甲基己-2-基)-N ²-(2,4-二甲氧基苄基)嘧啶并[5,4-d]嘧啶-2,4-二胺(66e)和(R)-N ⁸-(1-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-甲基己-2-基)-N ²-(2,4-二甲氧基苄基)嘧啶并[5,4-d]嘧啶-2,8-二胺(67b)的製備

於室溫，將化合物66d和67a的混合物(80.0mg，0.148mmol)溶於甲醇(3mL)中。加入10%鈀碳(8mg，含水量10%)、甲酸銨(28.0mg，0.444mmol)。反應液於室溫攪拌1小時。反應完畢後，加水(10mL)淬滅反應，體系中加入乙酸乙酯(3×10mL)萃取，合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮後得粗品66e和67b的混合物，為黃色半固體(40.0mg，53.3%)。

LC-MS：m/z 541.3[M+H]⁺。

步驟5：(R)-2-((2-胺基嘧啶并[5,4-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(66)和(R)-2-((6-胺基嘧啶并[5,4-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1-醇(67)的製備

於室溫，將化合物66e和67b的混合物(40mg，0.0787mmol)溶於三氟乙酸(1mL)中。反應液在40℃攪拌4小時。反應完畢後，減壓濃縮後得粗品，粗品用製備型色譜管柱純化(管柱型：XSelect CSH Prep C18 OBD管柱，5um，19*150mm；流動相A：水(0.1%的甲酸)，流動相B：乙腈；流速：25mL/min；梯度：在8分鐘內10%-30%乙腈；檢測波長：254/220nm)，得白色固體66(1.0mg,4.9%)和白色固體67(5.6mg，27.4%)。

化合物66：

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 9.06(s,1H),8.93(s,1H),3.87(d,J=11.2Hz 1H),3.62(d,J=11.2Hz 1H),2.05-1.97(m,1H),1.87-1.81(m,1H),1.45(s,3H),1.29-1.18(m,4H),0.85(t,J=6.8Hz,3H)。

LC-MS：m/z 277.2[M+H]⁺。

化合物67：

¹H NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ 8.74(s,1H),8.13(s,1H),3.83(d,J=11.2Hz 1H),3.61(d,J=11.2Hz 1H),2.02-1.94(m,1H),1.80-1.71(m,1H),1.39(s,3H),1.25-1.15(m,4H),0.82(t,J=6.8Hz,3H)。

LC-MS：m/z 277.2[M+H]⁺。

實施例68：(R)-2-((2-胺基吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1,1-二氘-1-醇(68)的製備

步驟1：(R)-3-甲基-5-苯基-5,6-二氫-2H-1,4-噁嗪-2-酮(68a)的製備

於室溫，將化合物(R)-2-胺基2-苯基乙醇(5g，36.44mmol)、丙酮酸乙酯(4.23g，36.44mmol)溶於三氟乙醇(110mL)中，升溫至 75℃反應16小時。反應完畢後，冷卻至室溫，過濾，濾餅用乙酸乙酯(3×30mL)洗滌。將濾液減壓濃縮，所得黃色粗品用矽膠管柱層析色譜法分離純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚=0-10%)，得白色固體68a(2.4g，34.8%)。

LC-MS：m/z 190.1[M+H]⁺。

步驟2：(3R,5R)-3-丁基-3-甲基-5-苯基嗎啉-2-酮(68b)的製備

於室溫，將化合物68a(2.4g，12.68mmol)溶於乾燥的四氫呋喃(80mL)中，將反應液冷卻至-78℃，在氮氣氛下緩慢滴加三氟化硼乙醚溶液(3.3mL)，保持-78℃反應1.5小時。然後緩慢滴加正丁基氯化鎂的四氫呋喃溶液(13.5mL，2mol/L)，保持-78℃反應2小時。反應完畢後，緩慢升至室溫，加氯化銨水溶液淬滅反應，向體系中加入乙酸乙酯(3×50mL)萃取，合併的有機相使用飽和食鹽水(120mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得棕色油狀粗品用矽膠管柱層析分離純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚=0-5%)，得白色固體68b(1.35g,43.0%)。

LC-MS：m/z 248.2[M+H]⁺。

步驟3：(R)-2-(((R)-2-羥基-1-苯基乙基)胺基)-2-甲基己-1,1-二氘-1-醇(68c)的製備

於室溫，將化合物68b(500mg，2.02mmol)溶於乾燥的四氫呋喃(5mL)中，將反應液置於0℃，加入氘代四氫鋁鋰(169.7mg，4.04mmol)。反應液於室溫攪拌2小時。反應完畢，冰浴下加水淬滅反應，向體系中加入乙酸乙酯(3×6mL)萃取，合併的有機相使用飽和食鹽水(15mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得淡黃色固體68c(360mg,70.3%)。

LC-MS：m/z 254.3[M+H]⁺。

步驟4：(R)-2-胺基-2-甲基己-1,1-二氘-1-醇鹽酸鹽(68d)的製備

於室溫，將化合物68c(360mg，1.42mmol)溶於無水乙醇(5mL)中，加入氫氧化鈀碳(144mg，0.42mmol)和氯化氫的二噁烷溶液(0.5mL，4mol/L)。反應液在70℃氫氣氛下(5atm)反應16小時。反應完畢後，冷卻至室溫，過濾，濾餅用乙醇(3×3mL)洗滌。將濾液減壓濃縮，得黃色粗品。加入水(10mL)，並向體系中加入乙酸乙酯(3×8mL)萃取，水相減壓濃縮，得黃色油狀產品68d(185mg，76.7%)

LC-MS：m/z 134.0[M+H]⁺。

步驟5：(R)-2-((2-胺基吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基己-1,1-二氘-1-醇(68)的製備

於室溫，將化合物68d(90mg,0.67mmol)和2-胺基吡啶[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(44b)(100mg,0.62mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(2mL)，加入卡特縮合劑(327mg,0.74mmol)和1,8-二氮雜二環十一碳-7-烯(282mg，1.85mmol)，於室溫反應16小時。反應完全後，反應液用水(10mL)稀釋，再用乙酸乙酯(3×8mL)萃取，有機相合併後飽和食鹽水(3×15mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮，所得粗品用製備型色譜管柱分離純化(管柱型：XBridge Shield RP18 OBD Column，5um，19*150mm；流動相A：水(0.05%的氨水)，流動相B：乙腈；流速：25mL/min；梯度：在8分鐘內25%-40%乙腈；檢測波長：254/220nm)，得到白色的固體產品68(13.6mg，7.8%)。

¹H NMR(300MHz，甲醇-d ₄)δ 8.61(d,J=0.8Hz,1H),8.18(d,J=5.6Hz,1H),7.92(dd,J=5.7,0.9Hz,1H),2.32-2.16(m,1H),1.85-1.70(m,1H),1.48(s,3H),1.43-1.29(m,4H),0.97-0.86(m,3H)。

LC-MS：m/z 278.4[M+H]⁺。

實施例69：(R)-2-((2-胺基吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-乙基己-1-醇(69)的製備

步驟1：(R)-3-乙基-5-苯基-5,6-二氫-2H-1,4-噁嗪-2-酮(69a)的製備

於室溫，將化合物(R)-2-胺基2-苯基乙醇(4.11g，29.96mmol)、2-側氧丁酸甲酯(3.48g，29.96mmol)溶於三氟乙醇(90mL)中，升溫至75℃反應16小時。反應完畢後，冷卻至室溫，過濾，濾餅用乙酸乙酯(3×30mL)洗滌。將濾液減壓濃縮，所得黃色粗品用矽膠管柱層析分離純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚=0-10%)，得白色固體69a(2.3g,37.8%)。

LC-MS：m/z 204.2[M+H]⁺。

步驟2：(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-5-苯基嗎啉-2-酮(69b)的製備

於室溫，將化合物69a(2.3g，11.32mmol)溶於乾燥的四氫呋喃(75mL)中，將反應液冷卻至-78℃，在氮氣氛下緩慢滴加三氟化硼乙醚溶液(3.0mL)，保持-78℃反應1.5小時。然後緩慢滴加正丁基氯化鎂的四氫呋喃溶液(11.9mL，2mol/L)，保持-78℃反應2小時。反應完畢後，緩慢升至室溫，加氯化銨水溶液淬滅反應，向體系中加入乙酸乙酯(3×50mL)萃取，合併的有機相使用飽和食鹽水(120mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得棕色油狀粗品用矽膠管柱層析分離純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚=0-5%)，得白色固體69b(1.23g,41.6%)。

LC-MS：m/z 262.3[M+H]⁺。

步驟3：(R)-2-乙基-2-(((R)-2-羥基-1-苯基乙基)胺基)己-1-醇(69c)的製備

於室溫，將化合物69b(1.23g,4.71mmol)溶於乾燥的四氫呋喃(10mL)中，將反應液置於0℃，加入硼氫化鋰的四氫呋喃溶液(4.7mL，2mol/L)。反應液於室溫反應2小時。反應完畢，冰浴下加水淬滅反應，向體系中加入乙酸乙酯(3×12mL)萃取，合併的有機相使用飽和食鹽水(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得淡黃色固體69c(1.1g，88.1%)。

LC-MS：m/z 266.2[M+H]⁺。

步驟4：(R)-2-胺基-2-乙基己-1-醇鹽酸鹽(69d)的製備

於室溫，將化合物69c(1.1g,4.15mmol)溶於無水乙醇(20mL)中，加入氫氧化鈀碳(421mg，1.23mmol)和氯化氫的二噁烷溶液(1.5mL，4mol/L)。反應液在70℃氫氣氛下(5atm)反應16小時。反應完畢後，冷卻至室溫，過濾，濾餅用乙醇(3×8mL)洗滌。將濾液減壓濃縮，得黃色粗品。加入水(30mL)，並向體系中加入乙酸乙酯(3×25mL)萃取，水相減壓濃縮，得黃色油狀產品69d(750mg，99.6%)

LC-MS：m/z 146.0[M+H]⁺。

步驟5：(R)-2-((2-胺基吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-乙基己-1-醇(69)的製備

於室溫，將化合物69d(202mg，1.39mmol)和2-胺基吡啶[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(44b)(150mg，0.93mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(3mL)，加入卡特縮合劑(491mg，1.11mmol)和1,8-二氮雜二環十一碳-7-烯(422mg，2.78mmol)，於室溫反應16小時。反應完全後，反應液用水(10mL)稀釋，再用乙酸乙酯(3×8mL)萃取，有機相合併後飽和食鹽水(3×15mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮，所得粗品用製備型色譜管柱分離純化(管柱型：XBridge Shield RP18 OBD Column，5um，19*150mm；流動相A：水(0.05%的氨水)，流動相B：乙腈；流速：25mL/min；梯度：在8分鐘內25%-50%乙腈；檢測波長：254/220nm)，得到白色的固體產品69(16.3mg，6.0%)。

¹H NMR(300MHz，甲醇-d ₄)δ 8.61(d,J=0.8Hz,1H),8.18(d,J=5.6Hz,1H),7.92(dd,J=5.6,0.9Hz,1H),3.94(d,J=1.4Hz,2H),2.15-1.83(m,4H),1.46-1.22(m,4H),0.99-0.85(m,6H)。

LC-MS：m/z 290.2[M+H]⁺。

生物學試驗

試驗例1：本發明化合物對hTLR8和hTLR7的激動活性

本發明化合物對hTLR8和hTLR7的受體結合活性的體外分析使用從Invivogen公司購買的HEK-Blue^TM hTLR8細胞和HEK-Blue^TM hTLR7細胞。該細胞是在HEK293細胞中共轉染hTLR8或hTLR7基因和一個分泌型的鹼性磷酸酶(SEAP)的報告基因。其中SEAP的基因是放在IFN-β最小啟動子下游，IFN-β最小啟動子是由5個NF-κB和AP-1結合位點組成。用hTLR8或hTLR7的刺激劑會激活NF-κB和AP-1啟動子而產生SEAP，藉由檢測SEAP水平來評價化合物的作用。

試驗試劑：

HEK-Blue hTLR8細胞和HEK-Blue hTLR7細胞(來源於Invivogen公司)

HEK-BlueTM檢測試劑(來源於Invivogen公司)

DMEM培養基(來源於Gibco公司)

胎牛血清(來源於Gibco公司)

Normocin^TM、Zeocin和殺稻瘟菌素(Blasticidine)(來源於Invivogen公司)

試驗過程：

1、收取細胞培養瓶中的細胞，調整細胞密度為2.2×10⁵/mL，用HEK-BlueTM檢測試劑重新懸浮細胞，向384孔板中接種45μL細胞懸液，每孔10000個細胞。

2、化合物板準備：待測化合物從2mM起用DMSO稀釋3倍稀釋10個梯度。取2μL稀釋的化合物加入38μL HEK-BlueTM檢測試劑進行20倍中間稀釋。細胞加0.5% DMSO孔，作為低讀值的陰性對照孔。細胞加1μM GS-9688(參考WO2016141092A1合成路線)孔，作為高讀值的陽性對照孔。

3、取5μL中間稀釋的化合物加入到已接種45μL細胞的384孔板中，對藥物進行10倍稀釋，DMSO的終濃度為0.5%。

4、將含有細胞和化合物的384孔板放入37℃、5% CO₂的培養箱培養16小時。

5、16小時後，取出培養板，使用儀器VICTOR Nivo檢測SEAP在620nm的光吸收。

6、利用GraphPad Prism 8軟體分析數據，得到各化合物的EC₅₀。

求取各濃度以及陽性和陰性對照的數據的平均值。由下式計算活性百分比：

活性%=(化合物讀值-陰性孔讀值)/(陽性孔讀值-陰性孔讀值)×100。

藉由使數據與非線性回歸方程式擬合來計算各化合物的IC₅₀：

Y=最低值+(最高值-最低值)/(1+10^((LogEC₅₀-X)×希爾斜率))；

其中，X為化合物濃度的對數，Y為活性百分比。

本發明化合物對TLR8/TLR7的激動活性見下表1。

結論：本發明化合物能夠選擇性地激活TLR8。

試驗例2：實施例52化合物的吸收機制研究

本實驗藉由檢測受試物在Caco-2細胞模型的滲透係數，考察其可能的滲透和吸收情況，使用LC/MS/MS檢測化合物在測試樣品中的濃度，並計算受試化合物在Caco-2細胞膜的表觀滲透係數(Papp)。Caco-2細胞購自美國典型菌種保藏中心，ATCC^®編號為HTB-37，經過14天左右的培養後，完全匯合並完成分化。測試為雙向給藥，即同時檢測1)化合物由頂端到基底端的轉運速率，2)測定化合物由基底端到頂端的轉運速率。

實驗涉及到的部分主要試劑信息見下表：

1、Caco-2細胞準備

用培養基將Caco-2細胞(美國典型菌種保藏中心，HTB-37)稀釋至6.86×10⁵個細胞/mL，並將50μL細胞懸液加入到96孔Transwell板(Cat.No.3391)的過濾孔中。將細胞培養板在37℃、5% CO₂、95%相對濕度的細胞培養箱中培養14-18天。每隔一天更換一次細胞培養基。

2、細胞單層穩定性評估

評估前移出舊培養基並更換為預熱的新鮮培養基。使用Millicell Epithelial Volt-Ohm測量系統(Millipore，USA)測量跨單層的跨上皮電阻(TEER)。測量完成後將板放回培養箱。

TEER值根據以下公式計算：

TEER測量值(ohms)×膜面積(cm²)=TEER值(ohm‧cm²)

其中TEER值大於230ohm‧cm²，表明Caco-2單層膜合格，可以用於後續測試。

3、製備化合物溶液

準確稱取實施例52化合物，利用DMSO進行溶解製備得到濃度為2mM的儲備溶液，並用HBSS(Gibico，10mM HEPES，pH 7.4)稀釋，得到10μM工作溶液。美托洛爾和地高辛用作對照化合物。

4、進行藥物運輸試驗

試驗前利用預熱的HBSS(10mM HEPES，pH 7.4)清洗單層兩次。然後將培養板置於37℃孵育30分鐘。

確定藥物從頂端到基外側方向的轉運速率：125μ工作溶液添加到Transwell(頂端隔室)中，並立即將50μL樣品從頂端隔室轉移到200μL含有IS(100nM阿普唑侖、200nM咖啡因和100nM甲苯磺丁脲)的新的96孔板作為初始供體樣品(AB)。以1000rpm的速度渦旋10分鐘。用235μL的緩衝液填充接收器板(基底外側隔室)中的孔。

確定藥物從基底外側到根尖方向的轉運速率：將285μL的工作溶液添加到接收器板孔(基底外側隔室)中，並轉移50μL樣品。

將培養板在37℃孵育2小時。孵育結束時，將來自供體側(Ap→B1的頂端隔室，B1→Ap的基底外側隔室)和接收側(Ap→B1的基底外側隔室和B1→Ap的頂端隔室)的50μL樣品轉移到新的96孔板的孔中，然後加入200μL含有IS(100nM阿普唑侖、200nM咖啡因和100nM甲苯磺丁脲)的乙腈。將樣品渦旋10分鐘，轉移50μL樣品到新的96孔板的孔中，然後加入50μL HEPRS和200μL IS。將所有樣品渦旋混合10分鐘，然後以3,220g離心40分鐘。分析之前，將150μL的上清液與適量的超純水混合後並利用LC-MS/MS進行測試分析。

使用以下等式確定表觀滲透率(P_app)：

其中P_app是表觀滲透率(cm/s×10^-6)，dQ/dt是藥物轉運的速率(pmol/秒)，A是膜的表面積(cm²)，D0是初始供體濃度(nM；pmol/cm³)

使用以下等式確定流出比：

其中P_app(B-A)表示基底外側至根尖方向的表觀滲透係數，P_app(A-B)表示根尖至基底外側方向的表觀滲透係數。

試驗結果如表2所示。

結論：實施例52化合物具有較好的滲透係數，外排轉運體受質風險較低。WO2018045144A1的實施例4化合物滲透性較低，而且有較高的外排比率，很有可能是外排轉運體受質。相較而言，本發明化合物實施例52的體外Caco-2測試結果顯示比WO2018045144A1的實施例4化合物有更好的滲透性。

試驗例3：實施例52化合物的大鼠藥物代謝動力學研究

本實驗旨在評價實施例52化合物在大鼠體內靜脈滴注或灌胃給藥後的藥物代謝動力學行為。靜脈滴注給藥：受試化合物配製成0.5毫克/毫升的澄清溶液，溶媒為2%乙醇/40%聚乙二醇300/58% 0.01莫耳的鹽酸；灌胃給藥：受試化合物配製成0.5毫克/毫升的澄清溶液，溶媒為2%乙醇/40%聚乙二醇300/58% 0.01莫耳的鹽酸。

受試化合物在血漿中的濃度由高效液相色譜-串聯質譜(LC-MS/MS)進行測定。採用WinNonlin^TM Version 8.3(Pharsight，Mountain View，CA)藥動學軟體的非房室模型處理血漿和組織濃度，使用線性對數梯形法計算藥動學參數。

實施例52化合物的大鼠藥物代謝動力學相關參數如下表3所示。

實施例52化合物在灌胃給藥5mg/kg劑量下的大鼠組織分佈研究相關參數如下表4所示。

實施例52化合物在灌胃給藥5mg/kg劑量下的大鼠腸生物利用度和肝臟首過研究相關參數如下表5所示。

實施例52化合物靜脈滴注0.5小時給藥劑量1mg/kg下的大鼠排泄研究的相關參數如下表6所示。

結論：實施例52化合物具有較低的全身性口服生物利用度，但具有較高的腸生物利用度，可以特異性的富集肝臟組織，主要藉由腸道進行排泄。

試驗例4：實施例52化合物的食蟹猴藥效學研究

本試驗旨在評價實施例52化合物在雄性食蟹猴體內口服給藥後的藥效學。

口服給藥：受試化合物配製為10mg/mL，溶媒為10%乙醇、40%聚乙二醇300、50%去離子水。將適量的受試化合物稱量在適量的乙醇中，在攪拌和/或超聲作用下使混合物完全溶化。然後在攪拌下加入適當體積的聚乙二醇300。最後，在攪拌下加入適當體積的去離子水，以獲得最終濃度的配方。配方在投藥前和投藥期間將在室溫下攪拌至少10分鐘。

每組每性別各1隻食蟹猴(購自北京協爾鑫生物資源)，每天籠旁觀察2次。於給藥前，給藥後30min、1hr、2hr、4hr、8hr和24 hr，每隻動物每個樣品採集0.3mL血清。血清中的生化指標IL12p40、IFN-α和TNF-α濃度由超敏多因子電化學發光分析儀進行測定。

試驗涉及到的試劑和儀器見下表：

供應商MSD全名：Meso Scale Discovery。

血清細胞因子濃度測試過程為：

1)用包被溶液對U-PLEX 96微孔板進行預孵育，室溫孵育1小時。

2)用300μL 1x清洗緩衝液洗板3次。

3)每個待測孔加入25μL稀釋液(Diluent43)，輕輕拍打板子的側面使Diluent43均勻的分佈在MSD微孔板底部。

4)每孔加入25μL TNF-α、IL-12或INF-α標準品或25μL血清樣品，用封板膜封板室溫震盪孵育1小時。

5)用300ul 1x清洗緩衝液(PBS-0.05%吐溫-20)洗板3次。

6)每孔加50μL檢測抗體溶液，用封板膜封板，室溫下震盪孵育1小時。

7)用300μL 1x清洗緩衝液洗板3次。

8)每孔加150μL MSD GOLD Read Buffer B，用MSD reader(型號：MESO SECTOR S600)讀U-PLEX 96微孔板。

9)利用GraphPad Prism 8軟體分析數據，得到‘細胞因子濃度-時間’曲線下面積(AUC)。

圖1為實施例52化合物在食蟹猴血清中的參數。

由圖1可知，實施例52化合物經10mg/kg口服給藥後，化合物對於食蟹猴血清中IL-12p40有明顯激活作用，但對TNF-α和INF-α影響不大。

Claims

一種通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，

其中，

X₁為CR¹或N；

X₂為CR²或N；

X₃為CR³或N；

X₄為CR⁴或N；

L選自一個鍵、-(CH₂)_v-、-C(O)(CH₂)_t-或-(CH₂)_tC(O)-；

R¹選自氫、鹵素、胺基、硝基、氰基、羥基、巰基、羧基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基；

R²選自氫、鹵素、氰基、側氧基、烷基、烯基、炔基、-OR^a、-SR^a、-NR^aR^b、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基視需要進一步被一個或多個Q₁基團所取代；

R³選自氫、鹵素、氰基、側氧基、烷基、烯基、炔基、-OR^a、-SR^a、-NR^aR^b、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基視需要進一步被一個或多個Q₂基團所取代；

R⁴選自氫、鹵素、胺基、硝基、氰基、羥基、巰基、羧基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基；

R⁵和R⁶各自獨立地選自氫、烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基；其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基視需要進一步被選自氘代、鹵素、硝基、氰基、側氧基、烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-OR^a、-SR^a、-NR^aR^b、-C(O)R^a、-O(O)CR^a、-C(O)OR^a、-C(O)NR^aR^b、-NR^aC(O)R^b、-S(O)_nR^a、-S(O)_nNR^aR^b和-NR^aS(O)_nR^b的一個或多個基團取代；

Q₁和Q₂各自獨立地選自鹵素、硝基、氰基、側氧基、烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-OR^a、-SR^a、-(CH₂)_v-NR^aR^b、-NR^aR^b、-C(O)R^a、-O(O)CR^a、-C(O)OR^a、-C(O)NR^aR^b、-NR^aC(O)R^b、-S(O)_nR^a、-S(O)_nNR^aR^b和-NR^aS(O)_nR^b，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基視需要進一步被選自鹵素、胺基、硝基、氰基、羧基、酯基、側氧基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-OR^c、-SR^c、-(CH₂)_v-OR^c、-(CH₂)_v-NR^cR^d、-NR^cR^d、-C(O)R^c、-O(O)CR^c、-C(O)OR^c、-C(O)NR^cR^d、-NR^cC(O)R^d、-S(O)_nR^a、-S(O)_nNR^cR^d和-NR^cS(O)_nR^d的一個或多個基團取代；

R^a和R^b各自獨立地選自氫、鹵素、羥基、硝基、氰基、側氧、烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基視需要進一步被選自鹵素、胺基、硝基、氰基、羧基、酯基、側氧基、烷基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-OR^c、-SR^c、-(CH₂)_v-OR^c、-(CH₂)_v-NR^cR^d、-NR^cR^d、-C(O)R^c、-O(O)CR^c、-C(O)OR^c、-C(O)NR^cR^d、-NR^cC(O)R^d、-S(O)_nR^a、-S(O)_nNR^cR^d和-NR^cS(O)_nR^d中的一個或多個基團取代；

或者R^a和R^b與他們連接的氮原子一起形成含氮雜環基，該含氮雜環基除了N之外，視需要進一步含有選自N、O、S的一個或多個雜原子，該 ^-含氮雜環基視需要進一步被選自鹵素、硝基、氰基、側氧基、羧基、酯基、烷基、鹵烷基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-OR^c、-SR^c、-(CH₂)_v-OR^c、-(CH₂)_v-NR^cR^d、-NR^cR^d、-C(O)R^c、-O(O)CR^c、-C(O)OR^c、-C(O)NR^cR^d、-NR^cC(O)R^d、-S(O)_nR^a、-S(O)_nNR^cR^d和-NR^cS(O)_nR^d的一個或多個基團取代；

R^c和R^d各自獨立地選自氫、鹵素、羥基、硝基、氰基、側氧、烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基視需要進一步被選自鹵素、胺基、硝基、氰基、羥基、巰基、羧基、酯基、側氧基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個基團取代；

或者R^c和R^d與他們連接的氮原子一起形成含氮雜環基，該含氮雜環基除了N之外，視需要進一步含有選自N、O、S的一個或多個雜原子，該含氮雜環基視需要進一步被選自鹵素、硝基、氰基、側氧基、羥基、巰基、羧基、酯基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

n為1或2；

v為1至6的整數；

t為0至6。
如請求項1所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，其為通式(II)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，

其中，X₁、X₂、X₃、L、R⁴、R⁵、R⁶如請求項1所定義。
如請求項1所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，其為通式(III)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，

其中，L、R¹、R³、R⁴、R⁵、R⁶如請求項1所定義。
如請求項1所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，其為通式(IV)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，

其中，L、R¹、R²、R⁴、R⁵、R⁶如請求項1所定義。
如請求項1所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，其為通式(V)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，

其中，L、R²、R⁴、R⁵、R⁶如請求項1所定義。
如請求項1至5中任一項所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，其中，L選自一個鍵或-C(O)-；較佳一個鍵。
如請求項1至6中任一項所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，其為通式(I-1)、(II-1)、(III-1)、(IV-1)、(V-1)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，

其中，X₁、X₂、X₃、X₄、R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶如請求項1所定義。
如請求項1至3、6至7中任一項所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，

其中，

R³選自氫、鹵素、C₁-C₆烷基、C₆-C₁₀芳基和5至10員雜芳基，其中該C₁-C₆烷基、C₆-C₁₀芳基和5至10員雜芳基視需要進一步被一個或多個Q₂基團所取代；

Q₂選自鹵素、C₁-C₆烷基、4-6員雜環基、C₆-C₁₀芳基、5至10員雜芳基、-NR^aR^b，其中該C₆-C₁₀芳基和5至10員雜芳基視需要進一步被選自鹵素、C₁-C₆烷基、-(CH₂)_v-NR^cR^d的一個或多個基團取代；

R^a和R^b各自獨立地選自氫、C₁-C₆烷基；

或者R^a和R^b與他們連接的氮原子一起形成4-6員含氮雜環基，該4-6員含氮雜環基除了N之外，視需要進一步含有選自N、O、S的一個或多個雜原子，該4-6員含氮雜環基視需要進一步被選自側氧基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆鹵烷基、C₃-C₆環烷基、-OR^c、-SR^c、-(CH₂)_v-OR^c、-NR^cR^d的一個或多個基團取代；

R^c和R^d各自獨立地選自氫、C₁-C₆烷基；

或者R^c和R^d與他們連接的氮原子一起形成4-6員含氮雜環基，該4-6員含氮雜環基除了N之外，視需要進一步含有選自N、O、S的一個或多個雜原子，該4-6員含氮雜環基視需要進一步被選自鹵素、C₁-C₆烷基的一個或多個基團取代；

v為1至6的整數。
如請求項8所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，其中，

R³選自C₆-C₁₀芳基和5至10員雜芳基，較佳苯基或5-6員雜芳基；其中該C₆-C₁₀芳基和5至10員雜芳基視需要進一步被一個或多個Q₂基團所取代；

Q₂選自鹵素、C₁-C₆烷基、4-6員雜環基、C₆-C₁₀芳基、5至10員雜芳基、-NR^aR^b，其中該C₆-C₁₀芳基和5至10員雜芳基視需要進一步被選自鹵素、C₁-C₆烷基的一個或多個基團取代；

R^a和R^b各自獨立地選自氫、C₁-C₆烷基；

或者R^a和R^b與他們連接的氮原子一起形成4-6員含氮雜環基，該4-6員含氮雜環基除了N之外，視需要進一步含有選自N、O、S的一個或多個雜原子，該4-6員含氮雜環基視需要進一步被選自側氧基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆鹵烷基、C₃-C₆環烷基、-OR^c、-SR^c、-(CH₂)_v-OR^c、-NR^cR^d的一個或多個基團取代；

R^c和R^d各自獨立地選自氫、C₁-C₆烷基；

或者R^c和R^d與他們連接的氮原子一起形成4-6員含氮雜環基，該4-6員含氮雜環基除了N之外，視需要進一步含有選自N、O、S的一個或多個雜原子，該4-6員含氮雜環基視需要進一步被選自鹵素、C₁-C₆烷基的一個或多個基團取代v為1至6的整數，較佳1或2。
如請求項1至2、4至7中任一項所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，

其中，R²選自氫、鹵素、C₁-C₆烷基、-NR^aR^b，該C₁-C₆烷基視需要進一步被Q₁取代；

Q₁選自C₆-C₁₀芳基、5至10員雜芳基，其中該C₆-C₁₀芳基和5至10員雜芳基視需要進一步被選自鹵素、C₁-C₆烷基、-(CH₂)_v-NR^cR^d的一個或多個基團取代；

R^a、R^b各自獨立地選自氫、C₁-C₆烷基；

R^c和R^d各自獨立地選自氫、C₁-C₆烷基；

或者R^c和R^d與他們連接的氮原子一起形成4-6員含氮雜環基，該4-6員含氮雜環基除了N之外，視需要進一步含有選自N、O、S的一個或多個雜原子，該4-6員含氮雜環基視需要進一步被選自鹵素、C₁-C₆烷基的一個或多個基團取代；

v為1至6的整數，較佳1或2。
如請求項1至10中任一項所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，

其中，R¹選自氫、鹵素、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆鹵烷基、C₁-C₆鹵烷氧基；較佳，R¹為氫或鹵素。
如請求項1至11中任一項所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，

其中，R⁴選自氫、鹵素、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆鹵烷基、C₁-C₆鹵烷氧基；較佳，R⁴為氫或鹵素。
如請求項1至12中任一項所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，

其中，

R⁵和R⁶各自獨立地選自氫和C₁-C₁₂烷基，該C₁-C₁₂烷基視需要進一步被選自氘代、-OR^a、-SR^a、-NR^aR^b的一個或多個基團取代；

R^a選自氫、C₁-C₆烷基；

R^b選自氫、C₁-C₆烷基、C₃-C₆環烷基和5至7員雜環基；

較佳地，R⁵為氫，R⁶為C₁-C₁₂烷基，該C₁-C₁₂烷基視需要進一步被選自氘代、-OH的一個或多個基團取代。
如請求項1至13中任一項所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，其選自：
一種製備通式(III-1)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽的方法，其包括以下步驟：

式A3的化合物與硼酸或硼酸頻哪醇酯化合物藉由金屬催化的交叉偶聯反應如Suzuki偶聯，得到式A4的化合物；然後，用合適的酸如三氟乙酸脫保護基，得到通式(III-1)所示的化合物；

或者，

式A7的化合物與硼酸或硼酸頻哪醇酯化合物藉由金屬催化的交叉偶聯反應如Suzuki偶聯，得到通式(III-1)所示的化合物；

R¹、R³、R⁴、R⁵、R⁶如請求項7所定義。
一種製備通式(IV-1)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽的方法，其包括以下步驟：

式B3的化合物與硼酸或硼酸頻哪醇酯化合物藉由金屬催化的交叉偶聯反應如Suzuki偶聯，得到式B4的化合物；然後，用合適的酸如三氟乙酸脫保護基，得到通式(IV-1)所示的化合物；

或者，

式B7的化合物與硼酸或硼酸頻哪醇酯化合物藉由金屬催化的交叉偶聯反應如Suzuki偶聯，得到通式(IV-1)所示的化合物；

其中，R¹、R²、R⁴、R⁵、R⁶如請求項7所定義。
一種製備通式(V-1)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽的方法，其包括以下步驟：

式C3的化合物與硼酸或硼酸頻哪醇酯化合物藉由金屬催化的交叉偶聯反應如Suzuki偶聯，得到式C4的化合物；然後，用合適的酸如三氟乙酸脫保護基，得到通式(V-1)所示的化合物；

或者，可以藉由以下方案6製備通式(V-1)所示的化合物：

式C7的化合物與硼酸或硼酸頻哪醇酯化合物藉由金屬催化的交叉偶聯反應如Suzuki偶聯，得到通式(V-1)所示的化合物；

其中，R²、R⁴、R⁵、R⁶如請求項7所定義。
一種醫藥組成物，其包含如請求項1至14中任一項所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，以及藥學上可接受的載體或賦形劑。
一種如請求項1至14中任一項所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽或如請求項18所述的醫藥組成物在製備TLR8激動劑中的用途。
一種如請求項1至14中任一項所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽或如請求項18所述的醫藥組成物在製備預防或治療TLR8相關疾病的藥物中的用途，該疾病較佳病毒感染性疾病和惡性腫瘤，該病毒感染性疾病例如B型病毒性肝炎、HIV病毒感染，該惡性腫瘤例如乳腺癌、宮頸癌、結腸癌、肺癌、胃癌、直腸癌、胰腺癌、腦癌、皮膚癌、口腔癌、前列腺癌、骨癌、腎癌、卵巢癌、膀胱癌、肝癌、輸卵管腫瘤、卵巢瘤、腹膜腫瘤、黑色素瘤、實體瘤、神經膠質瘤、神經膠母細胞瘤、肝細胞癌、乳突腎性瘤、頭頸部腫瘤、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤和非小細胞肺癌。