TW202327570A - 蒽環黴素衍生接合劑、抗體-藥物結合物及方法 - Google Patents

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Abstract

本發明提供蒽環黴素-接合劑，其用於製備治療性抗體-藥物結合物(ADC)化合物。 本發明亦提供具有針對癌細胞之生物活性的治療性抗體-藥物結合物(ADC)化合物，其包含蒽環黴素藥物部分。該等化合物可抑制哺乳動物中之腫瘤生長且可用於治療人類癌症患者。 本發明之態樣包括該等蒽環黴素-接合劑及該等抗體-藥物結合物化合物之製造方法、製備方法、合成方法、結合方法及純化方法。

Description

蒽環黴素衍生接合劑、抗體-藥物結合物及方法
本發明提供蒽環黴素-接合劑，其用於製備治療性抗體-藥物結合物(ADC)化合物。
本發明亦提供治療性抗體-藥物結合物(ADC)化合物，其包含蒽環黴素藥物部分，具有針對癌細胞之生物活性。該等化合物可抑制哺乳動物中之腫瘤生長且可用於治療人類癌症患者。
本發明之態樣包括該等藥物-接合劑及抗體-藥物結合物化合物之製造方法、製備方法、合成方法、結合方法及純化方法。
蒽環黴素為顯示細胞毒性活性之抗生素化合物。若干研究表明蒽環黴素可藉由多種不同機制起作用來殺死細胞，該等機制包括：1)嵌入細胞之DNA，由此抑制DNA依賴性核酸合成；2)產生自由基，其隨後與細胞大分子反應以對細胞造成損害，或3)與細胞膜相互作用[參見例如C. Peterson等人, 「Transport and storage of Anthracycline in experimental systems and human leukemia」 in Anthracycline Antibiotics In Cancer Therapy (1982), 第132-146頁；及N.R. Bachur, 「Free Radical Damage」 id. 第97-102頁]。因其細胞毒性活性，蒽環黴素已用於治療許多癌症，諸如白血病、乳癌、肺癌、卵巢腺癌及肉瘤[參見例如P.H- Wiernik, Anthracycline: Current Status And New Developments (1980), 第11頁中]。常用蒽環黴素包括小紅莓(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、艾達黴素(idarubicin)及柔紅黴素(daunomycin)。
小紅莓及道諾黴素(daunorubicin)之N-嗎啉基類似物藉由醣苷胺基環化形成，具有更強效力(Acton等人(1984) J. Med. Chem. 638- 645; WO9802446; US 4464529; US 4672057; US 5304687)。
儘管此等化合物可用於治療贅瘤及其他疾病狀態，其中設法消除選定細胞群體，但其治療功效通常受到與其投與相關之劑量依賴性毒性的限制。
在臨床中使用蒽環黴素衍生物之限制包括腫瘤中積聚不足、心臟毒性、輸注時間長、過度表現膜轉運體之癌細胞耐受性，及諸如腹瀉及骨髓抑制之劑量限制副作用(Int. J. Nanomedicine, 2007; 2(4): 567-83; Med. Sci. Monit. 2000; 6(2); Adriamycin Review, 第123-131頁, Mediokon, Belgium: European Press, 1975; Ann Intern Med.1982; 96(2): 133-139)。
細胞毒性藥物與能夠承載藥物之分子藥物結合，由此改良腫瘤靶向或能夠改變其藥物動力學特性，係為解決上述問題而採取之策略之一(Xie等人(2006) Expert. Opin. Biol. Ther. 6(3):281-291; Kovtun等人(2006) Cancer Res. 66(6):3214-3121)。
已報導細胞毒性藥物(載荷藥物(payload))與蛋白質、肽、適體、聚合物或奈米粒子之結合的不同實例，其使得靶向遞送更佳、改良溶解性且在一些情況下改良其他藥物動力學特性，諸如增加藥物之半衰期或局部濃度，及改良藥物效能。事實上，根據與細胞毒性劑結合之特定分子的性質，所得結合物在溶解度、細胞滲透性、活體內治療窗、控制釋放、到達目標之能力等方面具有改良特徵。
在此預期中，抗體與細胞毒性劑結合，由此產生抗體藥物結合物(ADC)，為發現新藥物之新興方法之一。
此方法結合抗體特異性及化學結合之高細胞毒性劑之細胞殺滅活性。ADC結構中之抗體充當靶向劑及奈米級載體以將治療劑量之細胞毒性負荷遞送至所需腫瘤細胞中。
蒽環黴素衍生物與抗體之結合物已在例如國際專利申請案WO2009/099741及WO2010/009124中揭示。已製備及研究道諾黴素及小紅莓之免疫結合物及前藥(Kratz等人(2006) Current Med. Chem. 13:477-523；Jeffrey等人(2006) Bioorganic & Med. Chem. Letters 16:358-362)。抗體-藥物結合物BR96-小紅莓與腫瘤相關抗原路易斯-Y (Lewis-Y)特異性反應且已在I及II期研究中評估(Saleh等人(2000) J. Clin. Oncology 18:2282-2292；Ajani等人(2000) Cancer Jour. 6:78-81；Tolcher等人(1999) J. Clin. Oncology 17:478-484)。
然而，作為潛在靶向遞送系統之ADC必須跨越所有障礙，包括血液循環、抗原結合、內化、載荷藥物釋放及最終載荷藥物作用。細胞毒性載荷藥物之脫靶釋放被認為係造成此類藥物毒性增加之問題之一，由此阻礙其臨床發展(Avicenna J Med Biotechnol. 2019年1月至3月; 11(1): 3-23.及K. R. Kozak (2020))。
出於此原因，對開發適合與不同類型之分子結合，顯示功效與毒性之間的良好平衡的功能化細胞毒性劑的需求愈來愈大。
吾等現已發現，當在生物分析中如此測試時顯示中等細胞毒性活性的功能化蒽環黴素衍生物，當與抗體結合由此形成相應ADC時，出乎意料地顯示極佳細胞毒性活性及極佳安全概況。因此，新ADC可用於治療癌症及其他病變。
定義 「蒽環黴素藥物」或「蒽環黴素衍生物藥物」為具有細胞毒性活性之式(II)化合物。
「蒽環黴素-接合劑」 (Ant-L)為包含蒽環黴素藥物或蒽環黴素衍生物藥物的化合物，其共價連接至包括反應性官能基之接合體部分。蒽環黴素-接合劑宜用於藉由與載體部分反應來製備蒽環黴素-藥物結合物。
「蒽環黴素衍生物結合物」或「蒽環黴素-藥物結合物」為包含經由接合體共價連接至載體部分(包括抗體、蛋白或肽)之蒽環黴素衍生物藥物的化合物。蒽環黴素衍生物結合物化合物包括抗體-藥物結合物(ADC)化合物。
「接合體」或「連接」為包含共價鍵或原子鏈的化學部分，該共價鍵或原子鏈共價連接至「蒽環黴素藥物」或「蒽環黴素-藥物衍生物」 (Ant)以形成蒽環黴素-接合劑(Ant-L)。
本文中之術語「抗體」以最廣泛意義使用且尤其涵蓋單株抗體、多株抗體、二聚體、多聚體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)及抗體片段，只要其展現所需生物活性即可(Miller等人(2003) Jour. of Immunology 170:4854-4861)。抗體可為鼠類、人類、人類化、嵌合或來源於其他物種。抗體為藉由免疫系統生成的蛋白，其能夠識別且結合至特異性抗原。(Janeway, C., Travers, P., Walport, M., Shlomchik (2001) Immuno Biology, 第五版, Garland Publishing, New York)。目標抗原一般具有諸多由多個抗體上之CDR識別之結合位點(亦稱為抗原決定基)。特異性結合至不同抗原決定基之各抗體具有不同結構。由此，一個抗原可具有一個以上對應的抗體。抗體包括全長免疫球蛋白分子或全長免疫球蛋白分子之免疫活性部分，亦即含有免疫特異性結合所關注的目標或其部分之抗原的抗原結合位點之分子，此類目標包括但不限於癌細胞或產生與自體免疫疾病相關的自體免疫抗體之細胞。免疫球蛋白可為免疫球蛋白分子之任何類型(例如IgG、IgE、IgM、IgD及IgA)、類別(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)或子類別。免疫球蛋白可源自任何物種，包括人類、鼠類或兔來源。
「ErbB受體」係一種受體蛋白酪胺酸激酶，其屬於ErbB受體家族，其為細胞生長、分化及存活之重要介質。ErbB受體家族包括四個不同成員，包括表皮生長因子受體(EGFR、ErbB1或HER1)、HER2 (ErbB2或p185 neu)、HER3 (ErbB3)及HER4 (ErbB4或tyro2)。ErbB受體一般將包含細胞外域，其可結合ErbB配體；親脂性跨膜域；保守的細胞內酪胺酸激酶域；及含有若干可磷酸化之酪胺酸殘基的羧基末端信號傳導域。ErbB受體可為「天然序列」 ErbB受體或其「胺基酸序列變體」。ErbB受體可為天然序列人類ErbB受體。因此，「ErbB受體家族之成員」為EGFR (ErbB1)、ErbB2、ErbB3、ErbB4或目前已知或將來待鑑別之任何其他ErbB受體。序列一致性篩選已引起兩個其他ErbB受體家族成員之鑑別；ErbB3 (US 5183884; US 5480968; Kraus等人(1989) PNAS (USA) 86:9193-9197)及ErbB4 (EP 599274; Plowman等人(1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:1746-1750; 及Plowman等人(1993) Nature 366:473-475)。此等兩者受體至少在一些乳癌細胞株上顯示表現增加。抗ErbB2抗體已經表徵(US 5677171; US 5821337; US 6054297; US 6165464; US 6407213; US 6719971; US 6800738)。
「載體部分」來源於多株及單株抗體、天然或合成來源之蛋白或肽。載體部分可用於與式(I)之蒽環黴素-藥物試劑結合。載體部分可源自針對腫瘤相關抗原產生之多株抗體；或源自結合至優先或選擇性地在腫瘤細胞群體上表現之抗原的單株抗體；或源自優先或選擇性結合至腫瘤細胞之天然或重組肽或蛋白或生長因子；或源自天然或合成聚合載體，諸如聚離胺酸、聚麩胺酸、聚天冬胺酸及其類似物及衍生物，或諸如聚葡萄糖或其他聚合碳水化合物類似物及其衍生物；或源自合成共聚物，諸如源自N-(2-羥基丙基)甲基丙烯醯胺(HPMA)，參見：J. Kopecek, Macromolecules. H. Benoit & P. Rempp編: 505-520 (1982) Pergamon Press. Oxford, England；或源自聚(胺基酸)共聚物，諸如聚(GluNa、Ala、Tyr)，其可用作肺組織之靶向藥物載體R. Duncan等人, Journal of Bioactive and Compatible Polymers, 第4卷, 1989年7月。
如本文所使用，術語載荷藥物係指來源於抗體藥物結合物(ADC)之化學或生物化學降解的任何化學結構，該抗體藥物結合物包含具有細胞毒性活性之蒽環黴素殘基。尤其較佳為式(II)之載荷藥物。
如本文所用之術語「單株抗體」係指自一群實質上均質之抗體獲得的抗體，亦即包含該群體之個別抗體除了以少量存在的有可能天然存在之突變外為相同的。單株抗體針對單一抗原位點具高度特異性。此外，與包括針對不同決定子(抗原決定基)的不同抗體之多株抗體製劑相反，各單株抗體針對抗原上之單個決定子。除其特異性以外，單株抗體亦為有利的，在於其可藉由其他抗體未經污染地合成。修飾語「單株」指示抗體之特徵為自實質上均質之抗體群體獲得，且不應理解為需要藉由任何特定方法來產生該抗體。例如，根據本發明使用之單株抗體可藉由首先由Kohler等人(1975) Nature256:495描述之融合瘤方法來製得或可藉由重組DNA方法(參見US 4816567)來製得。單株抗體亦可使用以下文獻中所描述之技術自噬菌體抗體庫分離：Clackson等人(1991) Nature, 352:624-628；Marks等人(1991) J. Mol. Biol., 222:581-597。
本文中之單株抗體特定地包括「嵌合」抗體，其中重鏈及/或輕鏈之一部分與源自特定物種或屬於特定抗體類別或子類別之抗體之對應序列一致或同源，而鏈之其餘部分與源自另一物種或屬於另一抗體類別或子類別之抗體以及此類抗體之片段之對應序列一致或同源，只要其展現所需生物活性即可(US 4816567; 及Morrison等人(1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA ,81:6851-6855)。嵌合抗體包括「靈長類化」抗體，該等靈長類化抗體包含源自非人類靈長類(例如舊世界猴或猿)之可變域抗原結合序列及人類恆定區序列。
「抗體片段」包含全長抗體之一部分，一般為其抗原結合區或可變區。抗體片段之實例包括Fab、Fab'；F(ab') 2及Fv片段；雙功能抗體；線性抗體；由Fab表現庫產生之片段；抗個體基因型(抗Id)抗體、CDR (互補決定區)及以上中之任一者之抗原決定基-結合片段，其免疫特異性結合至癌細胞抗原、病毒抗原或微生物抗原、單鏈抗體分子；及由抗體片段形成之多特異性抗體。
術語「胺基酸側鏈」包括發現於以下中之彼等基團：(i)天然存在之胺基酸，諸如丙胺酸、精胺酸、天冬醯胺、天冬胺酸、半胱胺酸、麩醯胺酸、麩胺酸、甘胺酸、組胺酸、異白胺酸、白胺酸、離胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、脯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、色胺酸、酪胺酸及纈胺酸；(ii)次要胺基酸，諸如鳥胺酸及瓜胺酸；(iii)非天然D-胺基酸、β-胺基酸、天然存在胺基酸之合成類似物及衍生物；及(iv)所有對映異構體、非對映異構體、異構體富集、同位素標記、保護形式及其外消旋混合物。
對於術語「直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基」，吾等意欲該等基團中之任一者，諸如甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基、三級丁基。
對於術語「直鏈或分支鏈C 1-C 4羥基烷基」，吾等意欲該等基團中之任一者，諸如2-羥基乙基、3-羥基丙基、2-羥基丙基、4-羥基丁基、3-羥基丁基、2-羥基丁基。
對於術語「鹵素」，吾等意欲氟、氯、溴或碘。
對於術語「直鏈或分支鏈C 1-C 4鹵烷基」，吾等意欲經一個或超過一個鹵素原子取代之上文所定義之C 1-C 4烷基中之任一者，諸如三氟甲基及三氟乙基。
如本文所使用之術語「雜環基」係指飽和或不飽和非芳族5員至7員碳環，其中1至3個碳原子經選自氮、氧及硫之雜原子置換，其中該等雜原子可彼此直接連接，氮及硫可視情況經氧化，氮可視情況經四級銨化或攜帶取代基。雜環基之非限制性實例為例如哌啶基、哌𠯤基、㗁唑啶基、4-甲基哌𠯤基、4-乙基哌𠯤基、二氮雜卓基等。
如本文所使用之術語「芳基」係指具有1至2個環部分之碳環烴，其藉由單鍵彼此稠合或連接，其中至少一個環為芳族。根據本發明之芳基之實例為例如苯基、聯二苯、α-或β-萘基、二氫萘基及其類似者。
術語「碳環」係指3員至7員全碳單環，其可含有一或多個雙鍵，但不具有完全共軛π-電子系統。
碳環之實例不限於環丙基、環丁基、環戊基、環戊烯基、環己烷基、環己烯基及環己二烯基。
術語「脫離基」係指在取代反應中可經另一基團取代的基團。此類脫離基為此項技術中熟知的且實例包括但不限於鹵化物(氟化物、氯化物、溴化物及碘化物)、疊氮化合物、磺酸鹽(例如視情況經取代之C 1-C 6烷基磺酸鹽，諸如甲磺酸鹽及三氟甲烷磺酸鹽；或視情況經取代之C 7-C 12烷基苯磺酸鹽，諸如對甲苯磺酸鹽)、丁二醯亞胺-N-氧化物、對硝基苯氧化物、五氟苯氧化物、四氟苯氧化物、羧酸鹽、胺基羧酸鹽(胺基甲酸鹽)及烷氧基羧酸鹽(碳酸鹽)。對於飽和碳之取代，鹵化物及磺酸鹽為較佳脫離基。對於羰基碳之取代，例如鹵化物、丁二醯亞胺-N-氧化物、對硝基苯氧化物、五氟苯氧化物、四氟苯氧化物、羧酸鹽或烷氧基羧酸鹽(碳酸鹽)可用作脫離基。術語「脫離基」亦指由於消除反應例如電子級聯反應或螺環化反應而被消除之基團。在此情況下，例如鹵化物、磺酸鹽、疊氮化合物、胺基羧酸鹽(胺基甲酸鹽)或烷氧基羧酸鹽(碳酸鹽)可用作脫離基。
熟習此項技術者已知一化學官能基至另一官能基之轉化可能需要必須保護含有此類官能基之化合物中之一或多個反應性中心以避免不良副反應。此類反應性中心之保護及隨後在合成轉化結束時之脫除保護基可按照文獻中所描述之標準程序來完成(參見例如Green, Theodora W.及Wuts, Peter G.M. - Protective Groups in Organic Synthesis, 第三版, John Wiley & Sons Inc., New York (NY), 1999)。
因此，術語「保護基」係指用於在化學合成中保護此類反應性中心之基團，例如羥基(-OH)、胺基(-NH)、硫醇基(-SH)、羰基(-C=O)、羧基(-COOH)。保護基之實例為文獻中所報告之彼等保護基(參見例如，同上)。
術語「氮保護基」係指與氮原子形成胺基甲酸鹽、醯胺、環醯亞胺、 N-烷基及 N-芳基胺的基團。此類保護基為此項技術中熟知的(參見例如，同上)。胺基甲酸酯保護基之非限制性實例為例如胺基甲酸甲酯及胺基甲酸乙酯、胺基甲酸9-茀甲酯(Fmoc)、胺基甲酸2,2,2-三氯乙酯(Troc)、胺基甲酸三級丁酯(BOC)、胺基甲酸乙烯酯(Voc)、胺基甲酸烯丙酯(Alloc)、胺基甲酸苯甲酯(Cbz)、對硝基苯甲基及其類似基團。醯胺之非限制性實例為例如 N-三氯乙醯胺、 N-三氟乙醯胺(TFA)及類似者。環醯亞胺保護基之非限制性實例為例如 N-鄰苯二甲醯亞胺、 N-二硫代琥珀醯亞胺(Dts)及其類似物。 N-烷基及 N-芳基保護基之非限制性實例為例如 N-烯丙胺、 N-苯甲胺及其類似基團。
術語「羥基保護基」係指與氧原子形成醚、酯、環縮醛或縮酮之基團。此類保護基為此項技術中熟知的(參見例如，同上)。醚保護基之非限制性實例為例如烷基醚及苯甲基醚，諸如甲氧基甲基醚(MOM-OR)、四氫哌喃基醚(THP-OR)、烯丙醚(Allyl-OR)、苯甲基醚(Bn-OR)、三苯甲基醚(Tr-OR)及其類似物，或矽基醚，諸如三甲基矽基醚(TMS-OR)、三級丁基二甲基矽基醚(TBS-OR或TBDMS-OR)、三級丁基二苯基矽基醚(TBDPS-OR)、二苯基甲基矽基醚(DPMS-OR)及其類似基團。酯保護基之非限制性實例為例如三氟乙酸酯、苯甲酸酯(Bz-OR)及碳酸酯，諸如碳酸乙酯及其類似者。環縮醛或縮酮保護基之非限制性實例為例如亞甲基縮醛、亞乙基縮醛、甲氧基亞甲基縮醛及其類似物。
術語「活性酯」係指酯部分之烷氧基為良好脫離基之官能基。此類烷氧基之實例包括但不限於丁二醯亞胺基- N-氧化物(NHS酯)、對硝基苯氧化物、五氟苯氧化物、四氟苯氧化物、1-羥基苯并三唑及1-羥基-7-氮雜苯并三唑，及具有相當脫離能力之基團。基於烷基之未經取代之烷氧基諸如甲氧基、乙氧基、異丙氧基及三級丁氧基並不符合良好脫離基之條件，因此甲基、乙基、異丙基及三級丁酯不被視為活性酯。
術語「拉電子基團」係指通常藉由共振或感應效應自相鄰原子向其自身吸取電子密度之原子基團。非限制性實例為鹵素、三氟甲基、硝基(NO 2)及腈(CN)。
術語「親核體」係指攜帶親核基之分子。術語「親核基」係指向親電子基提供電子對以在化學反應中形成化學鍵的物質。此類親核基之實例包括但不限於鹵素、胺、亞硝酸鹽、疊氮化合物、羥基、烷氧基陰離子、羧酸根陰離子、硫醇、硫醇鹽等。
術語「親電子基」係指接受來自親核基之電子對以在化學反應中形成化學鍵的物質。此類親電子基之實例包括但不限於酯、醛、醯胺、酮等。
術語「非天然D-胺基酸」係指天然存在之胺基酸之D-立體異構體(L-立體異構體)。
本發明之第一目的為提供一種式(I)之蒽環黴素接合劑，其包含共價連接至接合體(L)之蒽環黴素藥物(Ant) 其中： Ant為式(II)之蒽環黴素藥物部分： 其中： X為O或NH，及 A為選自由(IIIa)-(IIIe)組成之群的雜環(Het)或碳環(Cb)： 其中： R獨立地為氫或直鏈或分支鏈(C 1-C 6)烷基； n為0至6的整數； L為式(VI)之接合體： 其中： W獨立地為空值或選自由(Va)-(Vc)組成之群的自我分解型系統： 其中： R1及 R2各自獨立地為氫、鹵素、甲基、乙基或直鏈或分支鏈C 1-C 4羥烷基； PE獨立地為空值或由天然L-胺基酸與非天然D-胺基酸之任何組合組成之二肽或三肽部分。 RM為選自由(VIa)-(VIc)組成之群的反應性部分： 其中： R3及 R4各自獨立地為氫、鹵素、甲基、乙基、直鏈或分支鏈C 1-C 4羥烷基、直鏈或分支鏈C 1-C 4鹵烷基，或R3及R4結合在一起形成3員至6員碳環； R5為氫、C 1-C 3烷基或包含NO 2或CN基團的拉電子基團； r為0至7之整數；或其醫藥學上可接受之鹽。
在式(I)化合物中，自我分解型系統 W以穩定方式將式(II)之蒽環黴素衍生物藥物之部分 A連接至 PE-RM殘基，或當 PE為空值時連接至 RM部分。
RM與基團 PE之連接原子之間鍵聯；或 W，當 PE為空值時；或 A，當 W及 PE兩者均為空值時，可形成醯胺、酯或硫酯基團。
較佳式(I)之蒽環黴素-接合劑為以下化合物，其中： A為選自由以下組成之群的雜環或碳環基： 其中： R為直鏈或分支鏈(C 1-C 6)烷基； L為式(VI)之接合體，其中 W為基團(Va')或(Vb')： PE為由以下胺基酸之任何組合組成之二肽或三肽部分：甘胺酸、丙胺酸、白胺酸、纈胺酸、瓜胺酸、苯丙胺酸，其中C端胺基酸殘基連接至 W，且N端胺基酸殘基連接至 RM。 RM為選自(VIa)-(VIc)之基團： 其中： R3、 R4及 R5為氫； r較佳為3至5之整數。
更佳式(I)之蒽環黴素-接合劑為以下化合物，其中： A為選自由(IIIa')、(IIIa'')、(IIIb')及(IIIc')組成之群的雜環基； 其中： R為直鏈(C 1-C 6)烷基； W為基團(Va')或(Vb')： PE為選自纈胺酸-丙胺酸及纈胺酸-瓜胺酸之二肽或三肽苯丙胺酸-白胺酸-甘胺酸 其中： C端胺基酸殘基連接至 W且N端胺基酸殘基連接至 RM； RM為選自基團(VIa)-(VIc)之反應性部分： 其中： R3、 R4及 R5為氫，及 r為3至5之整數；
其他更佳式(I)之蒽環黴素-接合劑為以下化合物，其中： A為選自由(IIIa')、(IIIa'')、(IIIb')及(IIIc')組成之群的雜環基； 其中： R為直鏈(C 1-C 6)烷基；及 L為選自由(IVa)-(IVc)組成之群的接合體： 其中： r為3至5之整數。
較佳特定式(I)之蒽環黴素-接合劑化合物或其醫藥學上可接受之鹽為下列化合物： [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]-5-脲基-戊醯基]胺基]苯基]甲基4-[甲基-[2-側氧基-2-[(2S,4S)-2,5,12-三羥基-6-亞胺基-7-甲氧基-4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10-甲氧基-6-甲基-5,8,11-三氧雜-1-氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-4-基]氧基]-11-側氧基-3,4-二氫-1H-并四苯-2-基]乙基]胺基]哌啶-1-羧酸酯(化合物1)； [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]丙醯基]胺基]苯基]甲基4-[甲基-[2-側氧基-2-[(2S,4S)-2,5,12-三羥基-6-亞胺基-7-甲氧基-4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10-甲氧基-6-甲基-5,8,11-三氧雜-1-氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-4-基]氧基]-11-側氧基-3,4-二氫-1H-并四苯-2-基]乙基]胺基]哌啶-1-羧酸酯(化合物2)； [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]-5-脲基-戊醯基]胺基]苯基]甲基4-[2-側氧基-2-[(2S,4S)-2,5,12-三羥基-6-亞胺基-7-甲氧基-4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10-甲氧基-6-甲基-5,8,11-三氧雜-1-氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-4-基]氧基]-11-側氧基-3,4-二氫-1H-并四苯-2-基]乙基]哌𠯤-1-羧酸酯(化合物3)； [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]丙醯基]胺基]苯基]甲基4-[2-側氧基-2-[(2S,4S)-2,5,12-三羥基-6-亞胺基-7-甲氧基-4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10-甲氧基-6-甲基-5,8,11-三氧雜-1-氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-4-基]氧基]-11-側氧基-3,4-二氫-1H-并四苯-2-基]乙基]哌𠯤-1-羧酸酯(化合物4)； [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]-5-脲基-戊醯基]胺基]苯基]甲基N-甲基-N-[1-[2-側氧基-2-[(2S,4S)-2,5,12-三羥基-6-亞胺基-7-甲氧基-4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10-甲氧基-6-甲基-5,8,11-三氧雜-1-氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-4-基]氧基]-11-側氧基-3,4-二氫-1H-并四苯-2-基]乙基]-4-哌啶基]胺甲酸酯(化合物5)； [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]丙醯基]胺基]苯基]甲基N-甲基-N-[1-[2-側氧基-2-[(2S,4S)-2,5,12-三羥基-6-亞胺基-7-甲氧基-4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10-甲氧基-6-甲基-5,8,11-三氧雜-1-氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-4-基]氧基]-11-側氧基-3,4-二氫-1H-并四苯-2-基]乙基]-4-哌啶基]胺甲酸酯(化合物6)； [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]-5-脲基-戊醯基]胺基]苯基]甲基4-[甲基-[2-側氧基-2-[(2S,4S)-2,5,12-三羥基-7-甲氧基-4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10-甲氧基-6-甲基-5,8,11-三氧雜-1-氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-4-基]氧基]-6,11-二側氧基-3,4-二氫-1H-并四苯-2-基]乙基]胺基]哌啶-1-羧酸酯(化合物7)； [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]丙醯基]胺基]苯基]甲基4-[甲基-[2-側氧基-2-[(2S,4S)-2,5,12-三羥基-7-甲氧基-4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10-甲氧基-6-甲基-5,8,11-三氧雜-1-氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-4-基]氧基]-6,11-二側氧基-3,4-二氫-1H-并四苯-2-基]乙基]胺基]哌啶-1-羧酸酯(化合物8)； [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]-5-脲基-戊醯基]胺基]苯基]甲基4-[2-側氧基-2-[(2S,4S)-2,5,12-三羥基-7-甲氧基-4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10-甲氧基-6-甲基-5,8,11-三氧雜-1-氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-4-基]氧基]-6,11-二側氧基-3,4-二氫-1H-并四苯-2-基]乙基]哌𠯤-1-羧酸酯(化合物9)； [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]丙醯基]胺基]苯基]甲基4-[2-側氧基-2-[(2S,4S)-2,5,12-三羥基-7-甲氧基-4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10-甲氧基-6-甲基-5,8,11-三氧雜-1-氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-4-基]氧基]-6,11-二側氧基-3,4-二氫-1H-并四苯-2-基]乙基]哌𠯤-1-羧酸酯(化合物10)； [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]-5-脲基-戊醯基]胺基]苯基]甲基N-甲基-N-[1-[2-側氧基-2-[(2S,4S)-2,5,12-三羥基-7-甲氧基-4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10-甲氧基-6-甲基-5,8,11-三氧雜-1-氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-4-基]氧基]-6,11-二側氧基-3,4-二氫-1H-并四苯-2-基]乙基]-4-哌啶基]胺甲酸酯(化合物11)； [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]丙醯基]胺基]苯基]甲基N-甲基-N-[1-[2-側氧基-2-[(2S,4S)-2,5,12-三羥基-7-甲氧基-4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10-甲氧基-6-甲基-5,8,11-三氧雜-1-氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-4-基]氧基]-6,11-二側氧基-3,4-二氫-1H-并四苯-2-基]乙基]-4-哌啶基]胺甲酸酯(化合物12)； [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]-5-脲基-戊醯基]胺基]苯基]甲基4-[2-側氧基-2-[(2S,4S)-2,5,12-三羥基-6-亞胺基-7-甲氧基-4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10-甲氧基-6-甲基-5,8,11-三氧雜-1-氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-4-基]氧基]-11-側氧基-3,4-二氫-1H-并四苯-2-基]乙基]-1,4-二氮𠰢-1-羧酸酯(化合物13)； [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]丙醯基]胺基]苯基]甲基4-[2-側氧基-2-[(2S,4S)-2,5,12-三羥基-6-亞胺基-7-甲氧基-4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10-甲氧基-6-甲基-5,8,11-三氧雜-1-氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-4-基]氧基]-11-側氧基-3,4-二氫-1H-并四苯-2-基]乙基]-1,4-二氮𠰢-1-羧酸酯(化合物14)； [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]-5-脲基-戊醯基]胺基]苯基]甲基4-[2-側氧基-2-[(2S,4S)-2,5,12-三羥基-7-甲氧基-4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10-甲氧基-6-甲基-5,8,11-三氧雜-1-氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-4-基]氧基]-6,11-二側氧基-3,4-二氫-1H-并四苯-2-基]乙基]-1,4-二氮𠰢-1-羧酸酯(化合物15)，及 [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]丙醯基]胺基]苯基]甲基4-[2-側氧基-2-[(2S,4S)-2,5,12-三羥基-7-甲氧基-4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10-甲氧基-6-甲基-5,8,11-三氧雜-1-氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-4-基]氧基]-6,11-二側氧基-3,4-二氫-1H-并四苯-2-基]乙基]-1,4-二氮𠰢-1-羧酸酯(化合物16)。
在式(I)之蒽環黴素-接合劑中， Ant與接合體 L之間的鍵，或接合體本身之 W與 PE或 PE與 RM之間的一或多個共價鍵，在細胞外部(亦即細胞外)可為穩定的，或其可藉由酶活性、水解或其他代謝條件裂解，由此釋放蒽環黴素載荷藥物，即顯示細胞毒性活性之化合物。
熟習此項技術者清楚，當鍵裂解時，根據裂解類型反應，所涉及原子之價數經氫原子或經OH基團還原。因此，在不限制本發明之範疇的情況下，當式(I)化合物中之 Ant-L鍵裂解時，所釋放之蒽環黴素載荷藥物為式(II)化合物，其中， A為選自由以下組成之群的雜環或碳環基： 其中： Het、 Cb、 R及 n如上文所定義。
式(I)之蒽環黴素接合劑為包含反應性官能基之化合物(RM部分)，該反應性官能基可與載體部分反應，由此形成蒽環黴素藥物結合物。當載體部分為抗體(Ab)時，結合物為抗體-藥物結合物(ADC)。
本發明之第二目標為提供式(Ia)之抗體-藥物結合物(ADC)： 其中： Ab包括與給定目標細胞群體相關之受體、抗原或其他接受部分結合或反應性締合或複合的任何單元、類型或類別之抗體； m(藥物負載)為1至8之整數； Ant-L為式(I)之蒽環黴素-接合劑，其中接合體 L之 RM部分與抗體(Ab)之半胱胺酸硫醇或胺(例如N端或胺基酸側鏈，諸如離胺酸)反應，由此形成式(Ia)之抗體藥物結合物。為了清楚起見， RM與抗體 Ab之間鍵聯，因此形成式(Ia)之抗體-藥物結合物，報告如下： 其中： 虛線表示 RM殘基與 PE之連接點；或與 W，當 PE為空值時；或與式(II)之蒽環黴素藥物之 A，當 W及 PE均為空值時； R3及 R4如上文所定義； r為0至7之整數；及 m為如上文所定義；或其醫藥學上可接受之鹽。
對於式(Ia)化合物，蒽環黴素藥物與抗體之比率或藥物負載由 m表示。藥物負載值 m為1至8。式(Ia)化合物包括各種負載及所連接之抗體-藥物結合物之所有混合物，其中1、2、3、4、5、6、7或8個藥物部分共價連接至抗體；較佳地， m為1、2、3或4。
較佳式(Ia)之ADC為以下化合物，其中： Ant-L為選自化合物1至16之蒽環黴素-接合劑，及 m及 Ab如上文所定義。
更佳式(Ia)之ADC為以下化合物，其中： Ab為結合至一或多個腫瘤相關ErbB2抗原或細胞表面ErbB2受體之抗體，及 Ant-L及 m如上文所定義。
其他更佳式(Ia)之ADC為以下化合物，其中： Ab為曲妥珠單抗(Trastuzumab，TRZ)
最佳式(Ia)之ADC為選自由化合物(Ia I)-(Ia XVI)組成之群的化合物： 其中m為1至8之整數。較佳地， m為2至6之整數。
連接接合體(L)之部分W、PE及RM的 Ant-L鍵及/或 L-Ab鍵及/或共價鍵在細胞外部(亦即細胞外)可為穩定的，或其可藉由酶活性、水解或其他代謝條件裂解。
該等鍵較佳在細胞外為穩定的。在轉運或遞送至細胞中之前，抗體-藥物結合物(ADC)較佳為穩定的且保持完好，亦即抗體保持連接至藥物部分。接合體在目標細胞外為穩定的且可在細胞內以一定有效速率裂解。有效接合體將：(i)保持抗體之特異性結合特性；(ii)使結合物或蒽環黴素載荷藥物細胞內遞送；(iii)保持穩定及完整，亦即不裂解，直至結合物已遞送或轉運至其目標位點；及(iv)維持蒽環黴素載荷藥物之細胞毒性、細胞殺死效果或細胞生長抑制作用。ADC之穩定性可藉由諸如質譜、HPLC及分離/分析技術LC/MS之標準分析技術來量測。
本發明之ADC以及式(I)之蒽環黴素-藥物為新化合物，其特徵在於其包含部分(A)，該部分包含兩個二級或三級胺官能基，其在其他參數中特別嚴重影響分子之極性及溶解性，且因此影響其藥物動力學特性。可推測，若自ADC之載荷藥物發生非特異性釋放，則存在載荷藥物結構上之可質子化部分(如在本發明之化合物中)即可防止釋放的細胞毒性載荷藥物被動擴散至細胞中，由此降低非特異性毒性且改良ADC之安全概況。
從化學結構觀點及化學物理特性兩者，ADC結構中之新(A)部分的特性使本發明之結構與先前技術之結構有很大程度上的區分。
藥物負載在式(Ia)之抗體-藥物結合物分子中，藥物負載由 m表示。藥物負載可為每個抗體(Ab) 1至8個蒽環黴素藥物(Ant)範圍內，亦即其中1、2、3、4、5、6、7或8個蒽環黴素藥物部分經由接合體(L)共價連接至抗體；較佳 m可在2至6範圍內。在由結合反應製備ADC時，每個抗體之蒽環黴素藥物之平均數目可藉由諸如質譜分析、ELISA分析、電泳及HPLC之習知方式表徵。亦可以 m測定ADC之定量分佈。藉由ELISA，可測定ADC之特定製備中 m之平均值(Hamblett等人(2004) Clin. Cancer Res. 10:7063-7070；Sanderson等人(2005) Clin. Cancer Res. 11:843-852)。然而， m(蒽環黴素藥物)值之分佈無法藉由抗體-抗原結合及ELISA之偵測界限來辨別。此外，用於偵測抗體-藥物結合物之ELISA分析無法確定蒽環黴素藥物部分與抗體，諸如重鏈或輕鏈片段或特定胺基酸殘基之連接位置。在一些情況下，可藉由諸如逆相HPLC或電泳之方式，從具有其他藥物負載之ADC分離、純化及表徵其中 m為特定值之均質ADC。
對於一些抗體-藥物結合物， m可能受到抗體上之連接位點之數目的限制。例如，抗體可具有僅僅一個或若干個半胱胺酸硫醇基或可具有僅僅一個或若干個充分反應性硫醇基，經由硫醇基可連接有接合體。較高藥物負載(例如 m＞6)可能引起某些抗體-藥物結合物之凝聚、不可溶性、毒性、或喪失細胞滲透性。
通常，在結合反應期間結合至抗體之藥物部分會少於理論最大值。抗體可能含有例如許多不與蒽環黴素-接合劑(Ant-L)反應的離胺酸殘基。僅僅最具反應性的離胺酸基團可與胺反應性接合劑反應。此外，僅僅最具反應性半胱胺酸硫醇基可與硫醇反應性接合劑反應。一般而言，抗體即使有，也不會含有許多可連接至藥物部分的游離且反應性的半胱胺酸硫醇基。化合物之抗體中的大多數半胱胺酸硫醇殘基以二硫橋鍵之形式存在且必須在部分或完全還原條件下使用諸如二硫蘇糖醇(DTT)或TCEP之還原劑來還原。另外，抗體必須經受變性條件以曝露諸如離胺酸或半胱胺酸之反應性親核基。ADC之負載(藥物/抗體比率)可依數種不同方式控制，包括：(i)限制蒽環黴素-接合劑(Ant-L)之莫耳過量，(ii)限制結合反應時間或溫度，及(iii)針對半胱胺酸硫醇修飾之部分或限制性還原條件。
半胱胺酸胺基酸可在抗體中之反應性位點經工程改造且不形成鏈內或分子間二硫鍵(US 7521541)。經工程改造之半胱胺酸硫醇可與具有硫醇反應性親電子基的本發明之蒽環黴素-接合劑(Ant-L) (諸如式(VIa)或(VIb)化合物)反應以形成具有經半胱胺酸工程改造之抗體及蒽環黴素衍生物藥物部分的ADC。由此可設計、控制且已知藥物部分之位置。由於經工程改造之半胱胺酸硫醇基通常與蒽環黴素-接合劑以高產率反應，故可控制藥物負載。藉由重鏈或輕鏈上之單個位點處的取代來工程改造IgG抗體以引入半胱胺酸胺基酸獲得對稱抗體上之兩個新半胱胺酸。可達成接近2之藥物負載且結合產物ADC接近均質性。
若抗體之超過一個親核或親電子基與蒽環黴素-接合劑(Ant-L)反應，則所得產物為具有連接至抗體之例如1、2、3等的分佈的蒽環黴素藥物部分的ADC化合物的混合物。諸如聚合逆相(PLRP)及疏水相互作用(HIC)之液相層析法可依據藥物負載值分離混合物中之化合物。可分離具有單一藥物負載值 m之ADC製備物，然而此等單一負載值ADC仍可為異質混合物，因為藥物部分可經由接合體連接於抗體上之不同位點。
因此，本發明之ADC組合物包括ADC化合物之混合物，其中抗體具有一或多個蒽環黴素衍生物藥物部分且其中蒽環黴素藥物部分可在不同胺基酸殘基處連接至抗體。
本發明之式(Ia)結合物為有用治療劑，因為其含有可裂解鍵，其在水解時或「活體內」酶促裂解時釋放蒽環黴素載荷藥物。
眾所周知，與正常組織相比，惡性腫瘤中之糖酵解速率較高。此引起乳酸之產量增加且因此腫瘤中之pH降低，參見：H. M. Rauen等人, Z. Naturforsch, Teil B, 23 (1968) 1461。本發明提供化合物之兩個水平之作用特異性，第一個構成藉由抗原識別腫瘤組織中結合物的優先定位，且第二個構成藉由優先酸性裂解腫瘤組織中呈其活性形式之藥物的優先釋放。雖然不限制本發明之組合物或方法之範疇或效用，但本文所描述之接合體可在局部或全身性酸性條件下活體內裂解，由此將靶向抗體與蒽環黴素載荷藥物分離。
本發明亦提供經由由標準合成轉化組成之製程製備的式(Ia)之蒽環黴素結合物及蒽環黴素藥物試劑(I)，及其異構體、互變異構體、水合物、溶劑合物、複合物、代謝物及N-氧化物的合成方法。
本發明亦提供式(I)之蒽環黴素-接合劑化合物作為合成中間物用於製備式(Ia)之抗體-藥物結合物化合物的用途。
本發明亦提供式(II)之蒽環黴素衍生物作為合成中間物用於製備式(I)之蒽環黴素-接合劑化合物的用途。
此外，本發明提供一種醫藥組合物，其包含治療有效量之如上文所定義之式(Ia)衍生物或其醫藥學上可接受之鹽及至少一種醫藥學上可接受之賦形劑、載劑或稀釋劑。
含有本發明之化合物的醫藥組合物通常遵循習知方法進行製備，且以適合的醫藥學形式投與。例如，固體經口形式連同活性化合物一起可含有稀釋劑，例如乳糖、右旋糖、蔗糖、纖維素、玉米澱粉或馬鈴薯澱粉；潤滑劑，例如二氧化矽、滑石、硬脂酸、硬脂酸鎂或硬脂酸鈣及/或聚乙二醇；結合劑，例如澱粉、阿拉伯膠、明膠甲基纖維素、羧甲基纖維素或聚乙烯吡咯啶酮；崩解劑，例如澱粉、海藻酸、海藻酸鹽或羥基乙酸澱粉鈉；發泡混合物；染料；甜味劑；潤濕劑，諸如卵磷脂、聚山梨醇酯、月桂基磺酸酯；及一般用於醫藥調配物中之無毒且藥理學上無活性的物質。此等醫藥製劑可以已知方式，例如藉由混合、成粒、製錠、裹糖衣或膜包覆製程來製造。
用於經口投與之液體分散劑可為例如糖漿、乳液及懸浮液。作為一實例，糖漿作為載劑可含有蔗糖，或蔗糖與甘油及/或甘露糖醇及山梨糖醇。
懸浮液及乳液作為載劑之實例可含有天然膠、瓊脂、海藻酸鈉、果膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素或聚乙烯醇。用於肌內注射之懸浮液或溶液可連同活性化合物一起含有醫藥學上可接受之載劑，例如無菌水、橄欖油、油酸乙酯、二醇(例如丙二醇)及視需要適合量之利多卡因鹽酸鹽(lidocaine hydrochloride)。用於靜脈內注射或輸注之溶液作為載劑可含有無菌水，或較佳地，該等溶液可呈無菌、水性、等張、生理食鹽水溶液形式，或其可含有丙二醇作為載劑。栓劑連同活性化合物一起可含有醫藥學上可接受之載劑，例如可可脂、聚乙二醇、聚氧化乙烯脫水山梨糖醇脂肪酸酯界面活性劑或卵磷脂。
本發明進一步提供一種醫藥組合物，其包含治療有效量之式(Ia)衍生物及一或多種化學治療劑。
本發明亦提供一種醫藥組合物，其包含治療有效量之式(Ia)衍生物，其與已知抗癌治療(諸如輻射療法或化學療法)組合，與細胞抑制劑或細胞毒性劑、抗生素類藥劑、烷基化劑、抗代謝劑、激素劑、免疫劑、干擾素類藥劑、環加氧酶抑制劑(例如COX-2抑制劑)、基質金屬蛋白酶抑制劑、端粒酶抑制劑、酪胺酸激酶抑制劑、抗生長因子受體劑、抗HER2劑、抗EGFR劑、抗血管生成劑(例如血管生成抑制劑)、法呢基轉移酶抑制劑、ras-raf信號轉導路徑抑制劑、細胞週期抑制劑、其他cdks抑制劑、微管蛋白結合劑、拓樸異構酶I抑制劑、拓樸異構酶II抑制劑及其類似者結合。
另外，本發明提供一種產物，其包含如上文所定義之式(Ia)衍生物或其醫藥學上可接受之鹽及一或多種化學治療劑作為組合製劑以在抗癌療法中同時、分開或依序使用。
若調配為固定劑量，則此類組合產物採用下文所描述劑量範圍內的本發明之化合物及經批准之劑量範圍內的另一醫藥活性劑。
當組合調配物不適當時，可與已知抗癌劑一起依序使用式(Ia)化合物。
適用於向哺乳動物(例如向人類)投與之本發明之式(Ia)化合物可藉由常見途徑投與，且劑量水平視年齡、體重、患者病狀及投與途徑而定。
例如，靜脈內投與式(Ia)化合物所適用之適合劑量可在每天每劑約0.1至約10 mg/kg範圍內。本發明之化合物可以多種劑型投與，例如以錠劑、膠囊、糖或膜包衣錠劑、液體溶液或懸浮液之形式經口投與；以栓劑之形式經直腸投與；非經腸投與，例如皮下、肌內或經由靜脈內及/或鞘內及/或脊椎內注射或輸注投與。
在又一態樣中，本發明提供一種如上文所定義之式(Ia)衍生物或其醫藥學上可接受之鹽，其可用作藥劑。
本發明亦提供一種如上文所定義之式(Ia)衍生物，其用於治療癌症、細胞增殖病症及病毒感染之方法中。
較佳地，如上文所定義之式(Ia)衍生物用於治療特定類型之癌症的方法，該等癌症諸如但不限於：癌瘤，包括膀胱癌、乳癌、大腸癌、腎癌、肝癌、肺癌(包含小細胞肺癌)、食道癌、膽囊癌、卵巢癌、胰臟癌、胃癌、子宮頸癌、甲狀腺癌、前列腺癌及皮膚癌(包含鱗狀細胞癌)；淋巴譜系之造血腫瘤，包括白血病、急性淋巴細胞白血病、急性淋巴母細胞白血病、B細胞淋巴瘤、T細胞淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma)、非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma)、毛狀細胞淋巴瘤及伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)；骨髓譜系之造血腫瘤，包括急性及慢性骨髓性白血病、骨髓發育不良症候群及前髓細胞性白血病；間葉來源之腫瘤，包括纖維肉瘤及橫紋肌肉瘤；中樞及周邊神經系統之腫瘤，包括星形細胞瘤、神經母細胞瘤、神經膠質瘤及神經鞘瘤；及其他腫瘤，包括黑色素瘤、精原細胞瘤、畸胎上皮癌、骨肉瘤、著色性乾皮病、角化棘皮瘤(keratoxanthoma)、甲狀腺濾泡癌、卡波西肉瘤(Kaposi's sarcoma)及間皮瘤。
此外，如上文所定義之式(Ia)衍生物用於治療特定細胞增殖病症之方法，該等細胞增殖病症諸如良性前列腺增生、家族性腺瘤性息肉病(FAP)、神經纖維瘤、牛皮癬、與動脈粥樣硬化相關之血管平滑肌細胞增殖、肺纖維化、關節炎、絲球體腎炎及手術後狹窄及再狹窄。
此外，如上文所定義之式(Ia)衍生物用於抑制腫瘤血管生成及轉移之方法中，以及治療器官移植排斥及宿主抗移植物疾病之方法中。
本發明亦提供一種用於治療癌症之方法，其包含向有需要之哺乳動物投與有效量的如上文所定義之式(Ia)衍生物。有需要之哺乳動物可為例如人類。
此外，本發明提供如上文所定義之式(Ia)衍生物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造用於治療癌症、細胞增殖病症及病毒感染之藥劑。
最後，本發明提供如上文所定義之蒽環黴素藥物試劑(I)之用途，其用於製備結合物。
如上文所定義之式(I)之蒽環黴素藥物試劑可根據下文在流程A中所描述之通用合成製程製備。
流程 A 因此，該製程涵蓋以下步驟： 步驟 1)使式(VII)化合物： 其中 X為O或NH，與適合之試劑反應以引入選自甲磺酸酯、甲苯磺酸酯及鹵素之脫離基 M，得到式(VIII)化合物 步驟 2)由此獲得之式(VIII)化合物： 其中 X及 M如上文在步驟1中所定義，與適合的式(IX)之雜環或碳環中間物反應： 其中 A為選自由(IIIa)-(IIIe)組成之群的雜環或碳環，其中： R獨立地為氫、經取代之直鏈或分支鏈(C 1-C 6)烷基，且 n為0至6之整數。 步驟 3)使所得式(X)化合物： 其中 X及 A如上文在步驟1及步驟2中所定義，藉由與適合酸反應而脫除保護基，得到式(II)化合物。 步驟 4)所得化合物(II)： 其中 X及 A如上文在步驟1及步驟2中所定義，與適合的式(XI)之活化化合物反應： 其中 W獨立地為空值或選自式(Va)-(Vc)之基團， PE為空值或如上文所定義之二肽或三肽部分，且 RM為選自式(VIa)-(VIc)之視情況存在之反應性部分，得到化合物(I)。
根據 步驟 1)，引入脫離基之式(VII)化合物之反應可以此項技術中廣泛已知之多種方式及實驗條件進行。特定言之，反應可在有機溶劑(較佳DCM)中，在室溫或低於室溫下，在適合鹼(較佳DMAP、三甲基吡啶或吡啶)存在下，使用甲磺酸酐進行，持續時間在約30分鐘至約24小時範圍內變化。
根據 步驟 2)，式(VIII)化合物與式(IX)化合物之反應可以多種方式實現。此反應可在適合有機溶劑，較佳DCM、丙酮或THF中，在室溫至40℃範圍內之溫度下進行且持續時間在約30分鐘至約24小時範圍內。
根據 步驟 3)，式(X)化合物上胺基甲酸酯保護基之移除可以多種方式及實驗條件完成，該等方式及實驗條件為此項技術中廣泛已知的(參見例如Protective Groups in Organic Synthesis; Theodora W. Greeen, Peter G. M. Wuts第4版)。可採用以下酸性條件：氯化氫、乙酸、三氟乙酸、三氯乙酸或二氯乙酸於諸如四氫呋喃或二氯甲烷之溶劑中，在室溫或低於室溫下。
根據 步驟 4)，式(II)之化合物與式(XI)之化合物之反應可以多種方式及實驗條件完成，該等方式及實驗條件在此項技術中廣泛已知用於製備胺基甲酸酯。反應可在適合的有機溶劑(較佳DMF)中，在適合鹼(較佳TEA或DIPEA)存在下，在室溫至100℃範圍內之溫度下進行且持續時間在約1小時至約24小時變化。
通式(VII)化合物，其中 X為O原子，為市售的或可用已知方法製備。
通式(VII)化合物，其中 X為NH ，可如文獻中所描述來製備(D. Holte等人, Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 30 (2020), 127640)。
通式(IX)化合物，其中 A為選自由(IIIa)-(IIIe)組成之群的雜環或碳環，可如下文實驗部分中所描述或以市售中間物為起始物經由此項技術中廣泛已知之程序及實驗條件來製備。
式(XI)化合物為市售的或可藉由已知方法製備。
根據上述所有內容，熟習此項技術者應清楚，攜帶可藉由根據此項技術中熟知的方法進行操作而進一步衍生為另一官能基之官能基，由此產生其他式(I)化合物的任何式(I)化合物均意欲包含於本發明之範疇內。
當根據上述製程之變體中之任一者製備通式(I)化合物時，起始材料、試劑或其中間物內且可能引起不合需要的副反應之視情況選用之官能基需要根據習知技術適當地保護(參見例如，Green, Theodora W.及Wuts, Peter G.M. - Protective Groups in Organic Synthesis, 第三版, John Wiley & Sons Inc., New York (NY), 1999)。同樣，使此等起始材料、試劑或其中間物轉化為自由脫除保護基化合物可根據已知程序來進行。
每一通式之化合物可根據如報導於實驗部分中的文獻中之熟知的方法而進一步轉化為相同通式之其他化合物。
根據用於製備式(I)化合物之製程的任何變體，起始材料及任何其他反應物為已知的，或易於根據已知方法進行製備。
最終化合物可使用例如層析及/或結晶以及鹽形成之習知程序分離且純化。
式(Ia)之ADC可藉由若干途徑，採用熟習此項技術者已知之有機化學反應、條件及試劑製備，包括：(1)抗體之親核基或親電子基與二價接合劑反應，經由共價鍵形成抗體-接合體中間物Ab-L，隨後與活化藥物部分試劑反應；及(2)藥物部分試劑之親核基或親電子基與接合劑反應，經由共價鍵形成藥物-接合劑Ant-L，隨後與抗體之親核基或親電子基反應。結合方法(1)及(2)可與多種抗體、藥物部分及接合體一起採用以製備式(Ia)之抗體-藥物結合物。
抗體上之親核基包括但不限於：(i) N端胺基；(ii)側鏈胺基，例如離胺酸；(iii)側鏈硫醇基，例如半胱胺酸；及(iv)糖羥基或胺基，其中抗體經糖基化。胺、硫醇及羥基為親核性的且能夠與接合體部分及接合劑上之親電子基反應形成共價鍵，該等親電子基包括：(i)活性酯，諸如NHS酯、HOBt酯、鹵基甲酸酯及酸鹵化物；(ii)烷基及苯甲基鹵化物，諸如鹵乙醯胺；(iii)醛、酮、羧基及順丁烯二醯亞胺基。某些抗體具有可還原鏈間二硫鍵，亦即半胱胺酸橋鍵。藉由使用諸如DTT (克萊蘭氏(Cleland's)試劑，二硫蘇糖醇)或TCEP (三(2-羧基乙基)膦氫氯化物；Getz等人(1999) Anal. Biochem. 第273卷:73-80; Soltec Ventures, Beverly, MA)之還原劑處理可使得抗體變為反應性以與接合劑結合。理論上各半胱胺酸二硫橋鍵將由此形成兩個反應性巰基親核體。可經由離胺酸與2-亞胺基硫雜環戊烷(妥特試劑(Traut's reagent))之反應將其他親核基引入至抗體中，使得胺轉化為硫醇。
抗體-藥物結合物亦可藉由修飾抗體以引入親電性部分而產生，該等親電性部分可與接合劑或藥物上之親核性取代基反應。糖基化抗體之糖可經例如過碘酸鹽氧化試劑氧化，形成醛或酮基，該等基團可與接合劑或藥物部分之胺基反應。所得亞胺希夫鹼(Schiff base)基團可形成穩定鍵聯，或可經還原，例如藉由硼氫化物試劑還原，形成穩定的胺鍵聯。在一個實施例中，糖基化抗體之碳水化合物部分與半乳糖氧化酶或偏過碘酸鈉反應可在蛋白中產生羰基(醛及酮基)，該等基團可與藥物上之適當基團反應(Hermanson, G.T. (1996) Bioconjugate Techniques; Academic Press: New York, 第234-242頁)。在另一實施例中，含有N端絲胺酸或蘇胺酸殘基之蛋白可與偏過碘酸鈉反應，產生醛代替第一胺基酸。(Geoghegan & Stroh, (1992) Bioconjugate Chem. 3:138-146; US 5362852)。此類醛可與藥物部分或接合體親核體反應。
同樣，藥物部分上之親核基包括但不限於：能夠與接合體部分及接合劑上之親電子基反應形成共價鍵的胺、硫醇、羥基、醯肼、肟、肼、硫半卡巴肼、肼羧酸酯及芳基醯肼基團，該等親電子基包括：(i)活性酯，諸如NHS酯、HOBt酯、鹵基甲酸酯及酸鹵化物；(ii)烷基及苯甲基鹵化物，諸如鹵乙醯胺；(iii)醛、酮、羧基及順丁烯二醯亞胺基。反應性親核基可藉由標準官能基相互轉化引入蒽環黴素衍生物化合物。例如，羥基可藉由光延型反應(Mitsunobu-type reaction)轉化為硫醇基，形成經硫醇修飾之藥物化合物。
如上文所定義之式(Ia)之抗體藥物結合物可根據下文實驗部分中所描述之通用合成製程製備。
如上文所定義之通式(Ia)化合物可轉化為醫藥學上可接受之鹽。式(Ia)化合物之醫藥學上可接受之鹽亦包括無機或有機鹼，例如鹼金屬或鹼土金屬，尤其鈉、鉀、鈣、銨或鎂氫氧化物、碳酸酯或碳酸氫酯、非環或環胺之鹽。
式(Ia)化合物之醫藥學上可接受之鹽包括無機或有機酸，例如，硝酸、氫氯酸、氫溴酸、硫酸、高氯酸、2020磷酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、乙醇酸、反丁烯二酸、乳酸、草酸、丙二酸、蘋果酸、順丁烯二酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、杏仁酸、甲磺酸、羥乙基磺酸及水楊酸之鹽。
如上文所定義之式(Ia)化合物或其醫藥學上可接受之鹽可隨後與醫藥學上可接受之載體或稀釋劑一起調配，得到醫藥組合物。
根據上文所描述之合成製程來合成通式(I)化合物可以逐步方式進行，其中在進行後續反應之前，視需要藉由例如管柱層析之標準純化技術來分離及純化各中間物。替代地，可以如此項技術中已知的所謂「一鍋式(one-pot)」程序進行合成序列之兩個或更多個步驟，其中僅分離及純化自兩個或更多個步驟產生之化合物。
若立體對稱中心或另一異構中心之形式存在於本發明之化合物中，則包括對映異構體及非對映異構體的此類一或多種異構體之所有形式均意欲涵蓋於本文中。含有立體對稱中心之化合物可用作可使用熟知技術分離的外消旋混合物、對映異構性富集混合物，或外消旋混合物，且可單獨使用個別對映異構體。此類分離程序包含標準層析技術，包括使用對掌性固定相之層析或結晶。用於分離含有一或多個不對稱中心之化合物的通用方法例如報導於Jacques, Jean；Collet, André；Wilen, Samuel H., Enantiomers, Racemates, and Resolutions, John Wiley & Sons Inc., New York (NY), 1981中。
在化合物具有不飽和碳-碳雙鍵之情況下，順式(Z)及反式(E)異構體兩者皆在本發明之範疇內。
在化合物可以互變異構形式存在之情況下，無論以平衡形式存在或主要以一種形式存在，考慮各形式包括於本發明內。
實驗部分本文中所使用之簡潔形式及縮寫具有以下含義： g (公克)                                             mg (毫克) mL (毫升)                                          μL (微升) mM (毫莫耳)                                      mmol (毫莫耳) μM (微莫耳濃度)                                MHz (兆赫茲) h 小時                                               Hz (赫茲) mm (公釐)                                          ppm (百萬分之一) cm (公分)                                          min (分鐘) μm (微米)                                           M (莫耳) nM (奈莫耳)                                       TRZ (曲妥珠單抗) FBS (胎牛血清)                                  HRMS (高解析度質譜) BSA (牛血清白蛋白)                           DTT (二硫蘇糖醇) NADPH (菸醯胺腺嘌呤二核苷酸磷酸) Rt (滯留時間) 2-HG (2-羥基戊二酸)                          KOtBu (三級丁醇鉀) rt (室溫)                                             TEA (三乙胺) DMAP (4-二甲基胺基吡啶)                 DCA (2,2二氯乙酸) TFA (三氟乙酸)                                  Na 2SO 4(硫酸鈉) Et 2O (二乙醚)                                     NaHCO 3(酸性碳酸鈉) AcOH (乙酸)                                      ESI (電噴霧電離) Na 2CO 3(碳酸鈉)                                K 2CO 3(碳酸鉀) Cs 2CO 3(碳酸銫)                                 K 3PO 4(磷酸鉀) LiOH (氫氧化鋰)                                NaOH (氫氧化鈉) KOH (氫氧化鉀) p-TsOH (對甲苯磺酸) EtOAc (乙酸乙酯)                              LiHMDS (雙(三甲基矽基)胺基鋰) NMP (N-甲基-2-吡咯啶酮)                  NaH (氫化鈉) DMA (N,N-二甲基乙醯胺)                  KH (氫化鉀) DMF (N,N-二甲基甲醯胺)                   DCM (二氯甲烷) DIPEA (N,N-二異丙基-N-乙胺)           hex (己烷) THF (四氫呋喃)                                  DMSO (二甲亞碸) MeOH (甲醇)                                      ACN (乙腈) EtOH (乙醇)                                       Bn (苯甲基) -OMs (甲磺酸鹽)                                -OTs (甲苯磺酸鹽) HOBT ( N-羥基-苯并三唑)                  DCC ( 1,3-二環己基碳化二亞胺) NMR (核磁共振)                                 MS (質譜分析) m/z (質荷比)                                       LC (液相層析) MgCl 2(氯化鎂)                                  TLC (薄層層析) ADC (抗體藥物結合物)                       TCEP (三(2-羧基乙基)膦) DAR (藥物與抗體之比)                       PBS (磷酸鹽緩衝生理食鹽水) SDS-PAGE (十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳) PLRP LC/MS (聚合逆相液相層析/質譜分析) HPLC-MS (高效液相層析-質譜分析) EDCI ( 1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽) TBTU ( N,N,N',N'-四甲基-O-(苯并三唑-1-基)-四氟硼酸) RP-HPLC (逆相高效液相層析)
藥理學如下所描述評估式(Ia)之ADC之製備及細胞毒性評估。
ADC 製備 ( 通用程序 )ADC製備已藉由將抗體曲妥珠單抗TRZ與式(I)化合物經由鏈間二硫橋鍵部分還原及後續游離半胱胺酸殘基之衍生化結合來進行。
特定言之，TRZ使用1.9至2.3莫耳當量的還原劑參(2-羧基乙基)膦(TCEP)在0至20℃之溫度範圍內在極性有機溶劑(較佳DMA、CH 3CN及/或DMSO)中處理2至20個小時。
最終用1 mM半胱胺酸淬滅過量化合物(I)且使用脫鹽管柱純化所得結合物(Ia)。
式(Ia)之所有ADC已藉由還原及非還原條件之SDS-PAGE分析、尺寸排阻層析(SEC)、PLRP LC/MS及疏水相互作用層析(HIC)表徵。
平均DAR已藉由PLRP LC分析獲得之不同波長下的UV吸光度來計算。
增殖分析將細胞以2000-4000個細胞/孔之最終密度接種於96孔盤中之適當培養基加10%FBS中。24至48小時後，一式兩份用系列化合物(Ia)稀釋液處理細胞。144小時後使用Cell Titer Glo分析(Promega)量測細胞存活率。使用S形擬合軟體(Assay Explorer MDL)計算IC 50。實驗至少重複2次(n≥2)。
特定言之，已評估下文所描繪之ADC的細胞毒性( 表 1)。
活體內功效實驗在人類移植腫瘤之動物模型中評估ADC化合物之治療效果。
無胸腺CD-1 nu/nu雌性小鼠(5或7週齡)購自查爾斯河實驗室(Charles River Laboratories) (Calco, Italy)且視需要在病原體限制條件下維持在22-24℃。在使用前對籠子、寢具及食物進行高壓滅菌。為小鼠任意提供標準飲食及水，且在開始實驗前適應2週。涉及小鼠之殼體及所有程序均根據意大利衛生部之機構動物護理及使用委員會(Institutional Animal Care and Use Committee)批准之協定(授權號292/2017-PR)進行。
異種移植物藉由將200 µl PBS中之106個HCC1954 HER2+人類乳癌細胞(ATCC)皮下注射至小鼠右側腹產生。當異種移植物變得可觸知(大約150 mm 3)時，將動物分組(8隻小鼠/組)，為各組提供類似的腫瘤尺寸範圍。在細胞接種後第8天，處理組接受指定劑量之曲妥珠單抗或ADC於PBS中之靜脈內注射(單次投藥)，而對照組(媒劑)僅接受PBS。腫瘤體積藉由測徑規每週監測且使用下式計算：腫瘤體積(mm 3) = (長度×寬度 2)/2。當腫瘤不再可觸知時，認為小鼠無腫瘤。在觀察期期間對動物稱重且基於體重降低評估毒性。
下 表 1顯示HCC1954及NCI-N87細胞株中之式(Ia)之ADC化合物的細胞毒性活性(IC50 nM)，而 圖 1及 表 2顯示本發明之ADC化合物(Ia iv)在HCC1954異種移植模型上的活體內活性資料。 表 1
細胞株 ADC (Ia III) IC 50(nM) ADC (Ia IV) IC 50(nM) ADC (Ia X) IC 50(nM) ADC (Ia XII) IC 50(nM) ADC (Ia XVI) IC 50(nM)
HCC1954 (HER++) 0.106 0.188 0.02 0.033 0.082
NCI-N87 (HER++) 0.062 0.111 0.015 0.009 0.064
圖 1 表 2
化合物 劑量mg/Kg Tox 第113天之無腫瘤動物
ADC (Ia IV) 1 0/8 0/8
ADC (Ia IV) 5 0/8 5/8
ADC (Ia IV) 10 0/8 8/8
在皮下接種於無胸腺裸鼠的HCC1954之異種移植模型(人類乳癌細胞株，ErbB2+)中測試ADC (Ia IV)。在腫瘤注射及隨機分組(8隻動物/組，平均腫瘤體積：0.18 cm3)後八天，靜脈內投與兩種ADC (單一治療)。以1、5或10 mg/Kg投與ADC (IaI V)，顯示劑量依賴性腫瘤生長抑制，在任何劑量下均無明顯毒性作用：在實驗結束時(113天)，0/8隻動物在1 mg/Kg下無腫瘤，而在5 mg/Kg及10 mg/Kg下分別發現5/8及8/8隻小鼠無腫瘤。
此等資料顯示ADC (Ia IV)具有顯著治療指數，顯示8/8隻動物中之腫瘤根除及在10 mg/kg下之良好耐受性，因此表明本發明之ADC可用於治療癌症。
製備式 (I) 化合物對於視情況呈醫藥學上可接受之鹽形式之本發明之任何特定式(I)化合物的參考，參見實驗部分及申請專利範圍。參考以下實例，使用本文中所描述之方法或此項技術中所熟知的其他方法來合成本發明之化合物。為了更好地說明本發明而不對其構成任何限制，給出以下實例。如本文所使用，方法、方案及實例中所使用之符號及定則係與例如 美國化學學會 期刊( Journal of the American Chemical Society)或 生物化學期刊( Journal of Biological Chemistry)的當代科學文獻中所使用之彼等符號及定則一致。
化合物名稱為IUPAC名稱，其藉由使用Biovia Draw 2020 (藉由Dassault Systemes)產生。
除非另外指出，否則包括諸如DMF、THF、DCM之最佳等級無水溶劑的所有材料皆自市售供應商獲得，且不經進一步純化即使用。涉及空氣或濕度敏感性化合物之所有反應皆在氮氣或氬氣氛圍下執行。
通用純化及分析方法在矽膠(Merck等級9395, 60A)上進行急驟層析。
HPLC LCQ 方法對配備有電噴霧(ESI)離子源之LCQ DecaXP (Thermo, San Jose, US)離子阱儀器進行HPLC-MS/UV分析。質譜儀連接至具有UV光二極體陣列偵測器(UV偵測215-400 nm)之Surveyor HPLC系統(Thermo, San Jose, US)。使用Waters XSelect CSH C18管柱50×4.6 mm、3.5 μm粒度。移動相A為乙酸銨5 mM緩衝液(pH 4.5，乙酸):乙腈95:5，而移動相B為乙酸銨5 mM緩衝液(pH 4.5，乙酸):乙腈5:95。在7分鐘內梯度自0至100% B，保持100% B 2分鐘。流動速率1 mL/min。注射體積10 μL。滯留時間(HPLC室溫)以分鐘為單位給出。全掃描，質量範圍為50至1200 amu。經加熱之毛細管溫度為200℃且噴霧電壓值設定為4kV。質量以m/z比給出。
藉由使用Xcalibur 1.4 SR1軟體(Thermo)進行儀器控制、資料獲取及處理。
HPLC LCT 方法HPLC-MS/UV分析及高解析度質譜(HRMS)係在配備有Waters PDA UV偵測器2996之A Waters Alliance LC 2795及由Waters Reagent Manager液體泵支援之TOF Waters LCT Premier XE質量偵測器(ESI界面)上進行。該分析係基於通用梯度逆相層析，其允許在同一運行中經測定及確認化合物之預期精確質量來補充識別-純度分析。藉由在線上連續ESI(+) Full Scan MS偵測完成化合物識別，以216-400 nm處積分LC/UV跡線之相對「面積百分比」測得樣品純度。液體層析配備有恆溫在50℃之Waters XBridge CSH C18管柱(3.0×30 mm，3.5 μm粒度)。替代地，使用Supelco column Ascentis Express C18 (2.7×30mm×3μm)。
移動相A為含0.05% w/v甲酸之高純水，而移動相B為含有0.035% w/v甲酸之MeOH/iPrOH/H2O之70/25/5 (v/v/v)混合物。在17.5分鐘內梯度自0至100% B，保持100% B 5分鐘。流動速率0.8 mL/min，注射體積4 μL。ESI源在100℃、2.5 kV毛細管電壓、60 V錐口、350℃下之600 L/hr氮氣去溶劑化流動及10 L/hr氮氣錐口流動下運行。「正常」Zfocus設定為140。分析儀通常在7200 V飛行套管下經最佳化。
為了獲得高解析度質譜，將來自HPLC管柱之溶離劑分離且將25 μL/min與100 mL/min之含有0.01% w/v甲酸及來自Waters Reagent Manager泵之80 nM曲美普林(Trimethoprim)的MeOH/iPrOH/H2O之30/10/60 (v/v/v)混合物的物料流混合，隨後進入MS源。選擇曲美普林作為穩定、可溶且適合的參考化合物用於實時單點質量校正。在「W」模式下以2 Hz取樣率進行ES(+)全掃描取得80-1200 amu質量中心數據。由嵌入LCT之PC提供實時數據質量中心定位及基於曲美普林之實時質量校正兩者。H+參考質量為291.1452 Da。取得適當強度MS光譜(40至2000個分析物計數)平均值，獲得最終結果。
製備型HPLC設備由配備有SCL-8A系統控制器、兩個LC-8A泵、SPD-6A UV分光光度偵測器及手動Rheodyne噴射系統之Shimadzu HPLC系統組成。藉由Empower 2軟體來提供資料獲取(類比信號)及資料處理。在25℃下使用Waters X-Terra MS RP18 (150×30 mm，10 µm)管柱以15mL/min之流動速率進行純化。移動相A為含0.1% TFA之水/乙腈(95:5)，或替代地，移動相A為含0.05% NH 3之水/乙腈(95:5)，且移動相B為H 2O/乙腈(5:95)；梯度為15分鐘內自10%至90% B，隨後為0.1分鐘內上升至100% B。注射體積最大為500 µL。
在28℃之恆定溫度下，在以400.5 MHz操作及配備有5 mm 1H{ 15N- 31P} z軸PFG間接偵測探頭之Varian INOVA 400光譜儀上，及在以499.7 MHz操作並配備有5 mm 1H{ 13C- 15N}三重共振間接偵測探頭的Varian INOVA 500光譜儀上記錄 1H-NMR光譜。化學位移參考非氘化殘餘溶劑信號(DMSO- d5： 1H為2.50 ppm)。資料報導如下：化學位移(δ)、多重性(s=單重峰，d=二重峰，t=三重峰，q=四重峰，qt=五重峰、br.s=寬單峰，dd=二重峰之二重峰，ddd二重峰之二重峰的二重峰，m=多重峰)、偶合常數( J，Hz)及質子數。
本發明之一些式(I)化合物之合成製備描述於以下實例中。
根據以下實例製備之本發明之化合物亦藉由 1H NMR及/或藉由HPLC/MS分析資料表徵；HPLC/MS資料遵循方法LCQ或LCT中之任一者收集。
實例 A 中間產物 IX [1- 甲基 -1-(4- 苯基苯基 ) 乙基 ] 哌 𠯤 -1- 羧酸酯 向哌𠯤(0.517 g，6 mmol，3當量)於DMF (2.5 mL)中之溶液中添加4-[1-甲基-1-(4-苯基苯基)乙氧基]羰基苯甲酸酯(0.781 g，2 mmol，1當量)。在室溫下攪拌反應物隔夜。HPLC-MS分析顯示標題化合物之存在。將EtOAc添加至混合物中且有機層用水洗滌三次，經Na 2SO 4乾燥，過濾且蒸發至乾燥。殘餘物藉由層析管柱DCM/MeOH (100/5至100/9)純化，得到呈固體狀之標題化合物(0.600 g，1.85 mmol，92%產率)。 1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) δ ppm 1.72 (s, 6 H) 2.57 - 2.75 (m, 5 H) 3.17 (d, J=5.34 Hz, 2 H) 3.37 - 3.51 (m, 2 H) 7.34 - 7.37 (m, 1 H) 7.40 (d, J=8.39 Hz, 2 H) 7.46 (t, J=7.70 Hz, 2 H) 7.60 - 7.68 (m, 4 H) C 20H 24N 2O 2[M+H] +之HRMS (ESI)計算值347.1730，實驗值347.1735
以類似方式操作，但採用適合的經取代之起始物質，獲得以下化合物： [1- 甲基 -1-(4- 苯基苯基 ) 乙基 ] 4-( 甲基胺基 ) 哌啶 -1- 羧酸酯 1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) δ ppm  0.99 - 1.27 (m, 2 H) 1.72 (s, 6 H) 1.75 - 1.90 (m, 2 H) 2.24 (br. s., 1 H) 2.29 (s, 3 H) 2.69 - 3.09 (m, 2 H) 3.10 - 3.50 (m, 1 H) 3.75 (br. s., 1 H) 3.98 (br. s., 1 H) 7.30 - 7.38 (m, 1 H) 7.40 (d, J=8.54 Hz, 2 H) 7.46 (t, J=7.70 Hz, 2 H) 7.62 (d, J=8.54 Hz, 2 H) 7.64 - 7.68 (m, 2 H) C 22H 28N 2O 2[M+H] +之HRMS (ESI)計算值353.2224，實驗值353.2219 [1- 甲基 -1-(4- 苯基苯基 ) 乙基 ] N- 甲基 -N-(4- 哌啶基 ) 胺甲酸酯 1H NMR (600 MHz, DMSO- d6) δ ppm  1.34 - 1.65 (m, 4H) 1.73 (s, 6 H)  2.41 (m, 1H) 2.59-3.09 (m, 6H) 3.72- 3.96 (m, 2H) 7.33 - 7.37 (m, 1 H) 7.38 - 7.42 (m, 2 H) 7.43 - 7.48 (m, 2 H) 7.61 (d, J=8.36 Hz, 2 H) 7.65 (dd, J=8.27, 1.00 Hz, 2 H) C 22H 28N 2O 2[M+H] +之HRMS (ESI)計算值353.2224，實驗值353.2227 [1- 甲基 -1-(4- 苯基苯基 ) 乙基 ] 1,4- 二氮 𠰢 -1- 羧酸酯 1H NMR (600 MHz, DMSO- d6) δ ppm 1.58 (t, J=5.63 Hz, 1 H) 1.73 (s, 6 H) 1.74 - 1.79 (m, 1 H) 2.65 - 2.71 (m, 2 H) 2.75 (t, J=5.81 Hz, 1 H) 2.81 - 2.87 (m, 1 H) 3.20 - 3.25 (m, 1 H) 3.29 - 3.40 (m, 2 H) 3.44 - 3.48 (m, 1 H) 3.52 (t, J=6.09 Hz, 1 H) 7.32 - 7.38 (m, 1 H) 7.39 - 7.44 (m, 2 H) 7.44 - 7.48 (m, 2 H) 7.61 (d, J=7.99 Hz, 2 H) 7.63 - 8.51 (m, 2 H) C 21H 26N 2O 2[M+H] +之HRMS (ESI)計算值339.2067，實驗值339.2071
步驟 1 [2- 側氧基 -2-[(2S,4S)-2,5,12- 三羥基 -6- 亞胺基 -7- 甲氧基 -4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10- 甲氧基 -6- 甲基 -5,8,11- 三氧雜 -1- 氮雜三環 [7.4.0.02,7] 十三烷 -4- 基 ] 氧基 ]-11- 側氧基 -3,4- 二氫 -1H- 并四苯 -2- 基 ] 乙基 ] 甲磺酸酯 (VIII) 向(8S,10S)-6,8,11-三羥基-8-(2-羥基乙醯基)-12-亞胺基-1-甲氧基-10-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10-甲氧基-6-甲基-5,8,11-三氧雜-1-氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-4-基]氧基]-9,10-二氫-7H-并四苯-5-酮(0.025 g，0.039 mmol，1當量)、2,4,6-三甲基吡啶(0.019 g，0.156 mmol，4當量)及4-(二甲胺基)吡啶(0.005 g，0.039 mmol，1當量)於乾燥DCM(5 mL)中之溶液中添加甲磺酸酐(0.027 g，0.156 mmol，4當量)。在室溫下攪拌反應物5小時。HPLC-MS分析顯示標題化合物之存在。將水及DCM添加至混合物中且有機層用水洗滌三次，經Na 2SO 4乾燥，過濾且蒸發至乾燥。將粗產物用Et 2O濕磨且過濾三次，得到呈藍色固體之標題化合物(0.028 g，0.039 mmol，100%產率)。 C 33H 38N 2O 14S [M+H] +之HRMS (ESI)計算值719.2117，實驗值719.2122
以類似方式操作，但採用適合的經取代之起始物質，獲得以下化合物： [2- 側氧基 -2-[(2S,4S)-2,5,12- 三羥基 -7- 甲氧基 -4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10- 甲氧基 -6- 甲基 -5,8,11- 三氧雜 -1- 氮雜三環 [7.4.0.02,7] 十三烷 -4- 基 ] 氧基 ]-6,11- 二側氧基 -3,4- 二氫 -1H- 并 四苯 -2- 基 ] 乙基 ] 甲磺酸酯 (VIII) 紅色固體(0.0035 g，0.0049 mmol，74%產率)。 1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6) δ ppm 1.24 (d, J=6.10 Hz, 3 H) 1.64 - 1.72 (m, 2 H) 2.13 - 2.19 (m, 1 H) 2.27 (d, J=15.50 Hz, 1 H) 2.60 - 2.73 (m, 2 H) 2.90 - 3.11 (m, 2 H) 3.26 (s, 3 H) 3.31 (s, 3 H) 3.35 - 3.41 (m, 1 H) 3.47 - 3.53 (m, 1 H) 3.62 - 3.71 (m, 1 H) 3.94 (d, J=6.35 Hz, 1 H) 4.00 (s, 3 H) 4.12 - 4.20 (m, 1 H) 4.21 - 4.25 (m, 1 H) 4.59 (s, 1 H) 5.02 (br. s., 1 H) 5.24 (t, J=4.27 Hz, 1 H) 5.37 - 5.50 (m, 2 H) 5.58 (s, 1 H) 7.59 - 7.72 (m, 1 H) 7.93 (d, J=4.27 Hz, 2 H) 13.28 (br. s., 1 H) 14.07 (br. s., 1 H) C 33H 37NO 15S [M+H] +之HRMS (ESI)計算值720.1957，實驗值720.1969
步驟 2 [1- 甲基 -1-(4- 苯基苯基 ) 乙基 ]4-[ 甲基 -[2- 側氧基 -2-[(2S,4S)-2,5,12- 三羥基 -6- 亞胺基 -7- 甲氧基 -4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10- 甲氧基 -6- 甲基 -5,8,11- 三氧雜 -1- 氮雜三環 [7.4.0.02,7] 十三烷 -4- 基 ] 氧基 ]-11- 側氧基 -3,4- 二氫 -1H- 并四苯 -2- 基 ] 乙基 ] 胺基 ] 哌啶 -1- 羧酸酯 (X) (X = NH, A = (IIIb ' ) ，其中 R 為甲基 ) 將[2-側氧基-2-[(2S,4S)-2,5,12-三羥基-6-亞胺基-7-甲氧基-4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10-甲氧基-6-甲基-5,8,11-三氧雜-1-氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-4-基]氧基]-11-側氧基-3,4-二氫-1H-并四苯-2-基]乙基]甲磺酸酯(0.028 g，0.039 mmol，1當量)及[1-甲基-1-(4-苯基苯基)乙基]4-(甲胺基)哌啶-1-甲酸酯(0.083 g，0.234 mmol，6當量)溶解於無水DCM (10 mL)中。減壓移除溶劑(旋轉蒸發儀)且再溶解於無水DCM (3 mL)中。溶劑在減壓下移除(旋轉蒸發儀)，且重複溶解及蒸發之序列，直至所述材料([[2-側氧基-2-[(2S,4S)-2,5,12-三羥基-6-亞胺基-7-甲氧基-4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10-甲氧基-6-甲基-5,8,11-三氧雜-1-氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-4-基]氧基]-11-側氧基-3,4-二氫-1H-并四苯-2-基]乙基]甲磺酸酯)不再可由HPLC-MS及/或TLC偵測到。粗物質藉由層析管柱DCM/丙酮(8/2至7/3)純化，得到呈藍色固體狀之標題化合物(0.015 g，0.0154 mmol，39%產率)。 1H NMR (600 MHz, DMSO- d 6) δ ppm 1.19 - 1.27 (m, 5 H) 1.60 - 1.64 (m, 2 H) 1.72 (m, 8 H) 2.05 - 2.11 (m, 1 H) 2.12 - 2.17 (m, 1 H) 2.23 (s, 3 H) 2.56 - 2.60 (m, 1 H) 2.63 - 2.68 (m, 2 H) 2.56 - 2.98 (br..s , 2H) 2.83 - 2.88 (m, 1 H) 2.93 - 2.98 (m, 1 H) 3.29 (s, 3 H) 3.34 (m, 1H) 3.45 - 3.51 (m, 1 H) 3.60 -3.94 (br. S., 2H) 3.62 - 3.68 (m, 1 H) 3.73 - 3.83 (m, 2 H) 3.91 - 3.93 (m, 1 H) 4.12 (s, 3 H) 4.16 (m, J=6.63 Hz, 1 H) 4.23 (d, J=2.00 Hz, 1 H) 4.58 (d, J=1.91 Hz, 1 H) 5.03 (t, J=4.29 Hz, 1 H) 5.37 (s, 1 H) 5.40 (t, J=4.59 Hz, 1 H) 7.31 - 7.36 (m, 1 H) 7.38 - 7.42 (m, 2 H) 7.44 (t, J=7.74 Hz, 2 H) 7.62 (d, J=8.49 Hz, 2 H) 7.63 - 7.67 (m, 3 H) 7.87 (t, J=8.08 Hz, 1 H) 8.08 (dd, J=7.83, 0.98 Hz, 1 H) 9.67 (d, J=4.68 Hz, 1 H) 13.60 (d, J=5.04 Hz, 1 H) 15.89 (br. s., 1 H) C 54H 62N 4O 13[M+H] +之HRMS (ESI)計算值975.4386，實驗值975.4381
以類似方式操作，但採用適合的經取代之起始物質(中間物VIII及IX)，獲得以下化合物： [1- 甲基 -1-(4- 苯基苯基 ) 乙基 ] 4-[2- 側氧基 -2-[(2S,4S)-2,5,12- 三羥基 -6- 亞胺基 -7- 甲氧基 -4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10- 甲氧基 -6- 甲基 -5,8,11- 三氧雜 -1- 氮雜三環 [7.4.0.02,7] 十三烷 -4- 基 ] 氧基 ]-11- 側氧基 -3,4- 二氫 -1H- 并 四苯 -2- 基 ] 乙基 ] 哌 𠯤 -1- 羧酸酯 (X) (X = NH, A = (IIIa ' )) 藍色固體(0.016 g，0.017 mmol，60%產率)。 1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) δ ppm 1.21- 1.28 (m, 3 H) 1.59 - 1.66 (m, 2 H) 1.72 (s, 6 H) 2.05 - 2.18 (m, 2 H) 2.36 - 2.49 (m, 4 H) 2.58 - 2.71 (m, 2 H) 2.82 - 2.97 (m, 2 H) 3.18 - 3.38 (m, 5H)  3.31 (s, 3H) 3.47 - 3.55 (m, 2 H) 3.62 - 3.75 (m, 3 H) 3.94 (d, J=7.52 Hz, 1 H) 4.12 (s, 3 H) 4.14 - 4.18 (m, 1 H) 4.24 (d, J=1.82 Hz, 1 H) 4.60 (d, J=1.69 Hz, 1 H) 5.01 - 5.09 (m, 1 H) 5.38 (s, 1 H) 5.41 (t, J=4.41 Hz, 1 H) 7.33 - 7.38 (m, 1 H) 7.40 (d, J=8.43 Hz, 2 H) 7.47 (t, J=7.65 Hz, 2 H) 7.62 (d, J=8.30 Hz, 2 H) 7.66 (d, J=7.65 Hz, 2 H) 7.86 (t, J=7.65 Hz, 1 H) 8.09 (d, J=7.78 Hz, 1 H) 9.67 (br. s., 1 H) 13.59 (br. s., 1 H) 15.90 (br. s., 1 H) C 52H 58N 4O 13[M+H] +之HRMS (ESI)計算值947.4073，實驗值947.4069 [1- 甲基 -1-(4- 苯基苯基 ) 乙基 ] N- 甲基 -N-[1-[2- 側氧基 -2-[(2S,4S)-2,5,12- 三羥基 -6- 亞胺基 -7- 甲氧基 -4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10- 甲氧基 -6- 甲基 -5,8,11- 三氧雜 -1- 氮雜三環 [7.4.0.02,7] 十三烷 -4- 基 ] 氧基 ]-11- 側氧基 -3,4- 二氫 -1H- 并四苯 -2- 基 ] 乙基 ]-4- 哌啶基 ] 胺甲酸酯 (X) (X = NH, A = (IIIc ' ) ，其中 R 為甲基 ) 藍色固體(0.008 g，0.0082 mmol，49%產率)。 1H NMR (600 MHz, DMSO- d6) δ ppm 1.15- 1.42 (m, 7 H) 1.62 -(m, 2 H) 1.72 (s, 6 H) 1.95-2.19 (m, 4 H)  2.52- 3.00 (m, 9 H) 3.30 (s, 3 H) 3.34 - 3.39 (m, 1 H) 3.37 (m, 1 H) 3.47 - 3.75 (m, 4 H) 3.66 (t, J=9.20 Hz, 1 H) 3.91 - 3.95 (m, 1 H) 4.07 - 4.18 (m, 4 H) 4.23 (d, J=1.54 Hz, 1 H) 4.59 (d, J=1.91 Hz, 1 H) 5.05 (br. s., 1 H) 5.40 (br. s., 2 H) 7.31 - 7.43 (m, 3 H) 7.46 (t, J=7.74 Hz, 2 H) 7.54 - 7.68 (m, 5 H) 7.87 (t, J=8.08 Hz, 1 H) 8.04 - 8.11 (m, 1 H) 9.65 (d, J=4.59 Hz, 1 H) 13.56 (d, J=4.54 Hz, 1 H) 15.91 (br. s., 1 H) C 54H 62N 4O 13[M+H] +之HRMS (ESI)計算值975.4386，實驗值975.4390 [1- 甲基 -1-(4- 苯基苯基 ) 乙基 ] 4-[ 甲基 -[2- 側氧基 -2-[(2S,4S)-2,5,12- 三羥基 -7- 甲氧基 -4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10- 甲氧基 -6- 甲基 -5,8,11- 三氧雜 -1- 氮雜三環 [7.4.0.02,7] 十三烷 -4- 基 ] 氧基 ]-6,11- 二側氧基 -3,4- 二氫 -1H- 并四苯 -2- 基 ] 乙基 ] 胺基 ] 哌啶 -1- 羧酸酯 (X) (X = O, A = (IIIb ' ) ，其中 R 為甲基 ) 紅色固體(0.0065 g，0.0067 mmol，51%產率) C 54H 61N 3O 14[M+H] +之HRMS (ESI)計算值976.4226，實驗值976.4229 [1- 甲基 -1-(4- 苯基苯基 ) 乙基 ] 4-[2- 側氧基 -2-[(2S,4S)-2,5,12- 三羥基 -7- 甲氧基 -4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10- 甲氧基 -6- 甲基 -5,8,11- 三氧雜 -1- 氮雜三環 [7.4.0.02,7] 十三烷 -4- 基 ] 氧基 ]-6,11- 二側氧基 -3,4- 二氫 -1H- 并四苯 -2- 基 ] 乙基 ] 哌 𠯤 -1- 羧酸酯 (X) (X = O, A = (IIIa ' )) 紅色固體(0.052 g，0.054 mmol，70%產率)。 C 52H 57N 3O 14[M+H] +之HRMS (ESI)計算值948.3914，實驗值948.3904 [1- 甲基 -1-(4- 苯基苯基 ) 乙基 ] N- 甲基 -N-[1-[2- 側氧基 -2-[(2S,4S)-2,5,12- 三羥基 -7- 甲氧基 -4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10- 甲氧基 -6- 甲基 -5,8,11- 三氧雜 -1- 氮雜三環 [7.4.0.02,7] 十三烷 -4- 基 ] 氧基 ]-6,11- 二側氧基 -3,4- 二氫 -1H- 并四苯 -2- 基 ] 乙基 ]-4- 哌啶基 ] 胺甲酸酯 (X) (X = O, A = (IIIc ' ) ，其中 R 為甲基 ) 紅色固體(0.0033 g，0.0034 mmol，61%產率) 1H NMR (600 MHz, DMSO- d 6) δ ppm 1.25 (m, 3 H) 1.71 - 1.76 (m, 6 H) 1.37 - 1.69 (m, 6 H) 1.96 - 2.23 (m, 4 H) 2.62 - 3.10 (m, 8 H)  3.30 (br. s., 3 H) 3.35 - 3.40 (m, 1 H) 3.47 - 3.53 (m, 1 H) 3.47 - 3.74 (m, 4 H) 3.66 (m, 1 H) 3.93 (d, J=5.45 Hz, 1 H) 3.99 (s, 3 H) 4.17 (d, J=7.13 Hz, 1 H) 4.23 (d, J=1.77 Hz, 1 H) 4.59 (d, J=1.95 Hz, 1 H) 5.00 (br. s., 1 H) 5.23 (br. s., 1 H) 5.47 (br. s., 1 H) 7.31 - 7.38 (m, 1 H) 7.39 (d, J=8.36 Hz, 2 H) 7.46 (t, J=7.74 Hz, 2 H) 7.61 (d, J=8.36 Hz, 2 H) 7.63 - 7.73 (m, 3 H) 7.88 - 7.96 (m, 2 H) 13.28 (br. s., 1 H) 14.06 (br. s., 1 H) C 54H 61N 3O 14[M+H] +之HRMS (ESI)計算值976.4226，實驗值976.4221 [1- 甲基 -1-(4- 苯基苯基 ) 乙基 ] 4-[2- 側氧基 -2-[(2S,4S)-2,5,12- 三羥基 -7- 甲氧基 -4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10- 甲氧基 -6- 甲基 -5,8,11- 三氧雜 -1- 氮雜三環 [7.4.0.02,7] 十三烷 -4- 基 ] 氧基 ]-6,11- 二側氧基 -3,4- 二氫 -1H- 并四苯 -2- 基 ] 乙基 ]-1,4- 二氮 𠰢 -1- 羧酸酯 (X) (X = O, A = (IIIa '' )) 紅色固體(0.0045 g，0.0047 mmol，64%產率) 1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) 　 ppm 1.19 - 1.28 (m, 3 H) 1.66 (m., 3 H) 1.69 - 1.75 (m, 6 H) 1.81 (m, 1 H) 2.04 - 2.26 (m, 2 H) 2.57 - 2.70 (m, 5 H) 2.79 (t, J=5.00 Hz, 1 H) 2.90 - 3.09 (m, 2 H) 3.30 (s, 3 H) 3.26 - 3.34 (m, 2 H) 3.36 (m, 1 H) 3.44 - 3.56 (m, 3 H) 3.66 (m, 1 H) 3.84 - 3.94 (m, 3 H) 3.99 (s, 3 H) 4.18 (m, 1 H) 4.23 (d, J=1.82 Hz, 1 H) 4.58 (d, J=2.00 Hz, 1 H) 4.93 - 5.06 (m, 1 H) 5.23 (m, 1 H) 5.35 - 5.51 (m, 1 H) 7.29 - 7.37 (m, 1 H) 7.38 - 7.49 (m, 4 H) 7.54 - 7.71 (m, 5 H) 7.89 - 7.95 (m, 2 H) 13.27 (br. s., 1 H) 14.03 (s, 1 H) C 53H 59N 3O 14[M+H] +之HRMS (ESI)計算值962.4070，實驗值962.4073
步驟 3 (8S,10S)-6,8,11- 三羥基 -12- 亞胺基 -1- 甲氧基 -10-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10- 甲氧基 -6- 甲基 -5,8,11- 三氧雜 -1- 氮雜三環 [7.4.0.02,7] 十三烷 -4- 基 ] 氧基 ]-8-[2-[ 甲基 (4- 哌啶基 ) 胺基 ] 乙醯基 ]-9,10- 二氫 -7H- 并 四苯 -5- 酮 (II) ( 化合物 17; X = NH, A = (IIIb ' ) ，其中 R 為甲基 ) 在T=0℃下向[1-甲基-1-(4-苯基苯基)乙基]4-[甲基-[2-側氧基-2-[(2S,4S)-2,5,12-三羥基-6-亞胺基-7-甲氧基-4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10-甲氧基-6-甲基-5,8,11-三氧雜-1-氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-4-基]氧基]-11-側氧基-3,4-二氫-1H-并四苯-2-基]乙基]胺基]哌啶-1-羧酸酯(0.0145 g，0.0149 mmol，1當量)於乾燥DCM(4 mL)中之溶液中添加2,2-二氯乙酸(2.0 mL，0.297 mmol，20當量)。將反應物保持在T=0℃下15分鐘，且隨後在室溫下攪拌4小時。TLC分析顯示起始物質完全轉化為標題產物。將反應混合物倒入具有NaHCO 3飽和水溶液的分液漏斗中。用DCM洗滌水層三次，經合併之有機相經Na 2SO 4乾燥，過濾且蒸發至乾燥。粗物質藉由層析管柱DCM/MeOH (95/5至9/1)純化，得到呈藍色固體狀之標題化合物(0.008 g，0.01 mmol，68%產率)。 1H NMR (600 MHz, DMSO- d6) δ ppm 1.23 (m, 3 H) 1.45 - 1.65 (m, 4 H) 1.80 - 1.86 (m, 2 H) 1.92 - 2.0 (m, 2 H)  2.86 (m, 1 H) 2.07 (dd, J=14.76, 6,13  1 H) 2.14 (dd, J=14.76, 3.22 1 H) 2.22 (s, 3 H) 2.59 - 2.69 (m, 2 H) 2.73 (m, 1) 2.82 (m, 2H) 2.92 - 2.98 (m, 1 H) 3.23 - 3.33 (m, 2 H)  3.30(s, 3 H)  3.37 (m, 1 H) 3.49 (m, 1 H) 3.66(m, 1 H) 3.79 (s, 2 H) 3.93 (dd, J=6.34, 1.70 Hz, 1 H) 4.10 - 4.17 (m, 4 H) 4.24 (d, J=2.00 Hz, 1 H) 4.59 (d, J=1.95 Hz, 1 H) 5.01 - 5.05 (m, 1 H) 5.36 (m, 1 H) 5.40 (t, J=4.61 Hz, 1 H) 7.65 (d, J=8.45 Hz, 1 H) 7.88 (t, J=8.08 Hz, 1 H) 8.07 - 8.11 (m, 1 H) 9.68 (d, J=5.00 Hz, 1 H) 13.61 (d, J=5.00 Hz, 1 H) 15.88 (br. s., 1 H) C 38H 48N 4O 11[M+H] +之HRMS (ESI)計算值737.3392，實驗值737.3389
以類似方式操作，但採用適合的經取代之起始物質(中間物X)，獲得以下化合物： (8S,10S)-6,8,11- 三羥基 -12- 亞胺基 -1- 甲氧基 -10-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-1 0- 甲氧基 -6- 甲基 -5,8,11- 三氧雜 -1- 氮雜三環 [7.4.0.02,7] 十三烷 -4- 基 ] 氧基 ]-8-(2- 哌 𠯤 -1- 基乙醯基 )-9,10- 二氫 -7H- 并四苯 -5- 酮 (II) ( 化合物 18; X = NH, A = (IIIa ' )) 藍色固體(0.007 g，0.0099 mmol，72%產率)。 1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6) δ ppm 1.24 (d, J=6.59 Hz, 3 H) 1.57 - 1.67 (m, 2 H) 2.02 - 2.09 (m, 1 H) 2.10 - 2.16 (m, 1 H) 2.29 - 2.37 (m, 4 H) 2.57 - 2.64 (m, 1 H) 2.65 - 2.72 (m, 5 H) 2.80 - 2.97 (m, 2 H) 3.31 (s, 3 H) 3.34 (m, 1 H) 3.47 - 3.53 (m, 1 H) 3.57 (d, J=1.10 Hz, 2 H) 3.63 - 3.70 (m, 1 H) 3.93 (d, J=7.87 Hz, 1 H) 4.12 (s, 3 H) 4.14 - 4.19 (m, 1 H) 4.24 (d, J=1.83 Hz, 1 H) 4.60 (d, J=1.65 Hz, 1 H) 5.03 (t, J=4.21 Hz, 1 H) 5.37 (s, 1 H) 5.40 (t, J=4.49 Hz, 1 H) 7.64 (d, J=8.06 Hz, 1 H) 7.87 (t, J=8.15 Hz, 1 H) 8.08 (d, J=7.87 Hz, 1 H) 9.66 (d, J=4.76 Hz, 1 H) 13.58 (d, J=4.76 Hz, 1 H) 15.65 (br. s, 1 H) C 36H 44N 4O 11[M+H] +之HRMS (ESI)計算值709.3080，實驗值709.3066 (8S,10S)-6,8,11- 三羥基 -12- 亞胺基 -1- 甲氧基 -10-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10- 甲氧基 -6- 甲基 -5,8,11- 三氧雜 -1- 氮雜三環 [7.4.0.02,7] 十三烷 -4- 基 ] 氧基 ]-8-[2-[4-( 甲基胺基 )-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ]-9,10- 二氫 -7H- 并四苯 -5- 酮 (II) ( 化合物 19; X = NH, A = (IIIc ' ) ，其中 R 為甲基 ) 藍色固體(0.001 g，0.0014 mmol，19%產率) C 38H 48N 4O 11[M+H] +之HRMS (ESI)計算值737.3392，實驗值737.3399 (7S,9S)-6,9,11- 三羥基 -4- 甲氧基 -7-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10- 甲氧基 -6- 甲基 -5,8,11- 三氧雜 -1- 氮雜三環 [7.4.0.02,7] 十三烷 -4- 基 ] 氧基 ]-9-[2-[ 甲基 (4- 哌啶基 ) 胺基 ] 乙醯基 ]-8,10- 二氫 -7H- 并四苯 -5,12- 二酮 (II) ( 化合物 20; X = O, A = (IIIb ' ) ，其中 R 為甲基 ) 紅色固體(0.0031 g，0.0042 mmol，38%產率) C 38H 47N 3O 12[M+H] +之HRMS (ESI)計算值738.3233，實驗值738.3238 (7S,9S)-6,9,11- 三羥基 -4- 甲氧基 -7-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10- 甲氧基 -6- 甲基 -5,8,11- 三氧雜 -1- 氮雜三環 [7.4.0.02,7] 十三烷 -4- 基 ] 氧基 ]-9-(2- 哌 𠯤 -1- 基乙醯基 )-8,10- 二氫 -7H- 并四苯 -5,12- 二酮 (II) ( 化合物 21; X = O, A = (IIIa ' ) ) 紅色固體(0.011 g，0.016 mmol，86%產率) 1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6) δ ppm 1.24 (d, J=6.59 Hz, 3 H) 1.63 - 1.72 (m, 2 H) 2.08 - 2.16 (m, 1 H) 2.17 - 2.23 (m, 1 H) 2.27 - 2.39 (m, 4 H) 2.58 - 2.73 (m, 6 H) 2.87 - 3.04 (m, 2 H) 3.30(s, 3 H) 3.38(m, 1 H)3.46 - 3.54 (m, 3 H) 3.58 (s, 2 H) 3.64 - 3.70 (m, 1 H) 3.93 (d, J=7.08 Hz, 1 H) 3.99 (s, 3 H) 4.15 - 4.21 (m, 1 H) 4.23 (d, J=1.59 Hz, 1 H) 4.59 (d, J=1.46 Hz, 1 H) 4.99 (t, J=4.33 Hz, 1 H) 5.23 (t, J=4.33 Hz, 1 H) 5.47 (s, 1 H) 7.64 - 7.71 (m, 1 H) 7.89 - 7.95 (m, 2 H) C 36H 43N 3O 12[M+H] +之HRMS (ESI)計算值710.2920，實驗值710.2923 (7S,9S)-6,9,11- 三羥基 -4- 甲氧基 -7-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10- 甲氧基 -6- 甲基 -5,8,11- 三氧雜 -1- 氮雜三環 [7.4.0.02,7] 十三烷 -4- 基 ] 氧基 ]-9-[2-[4-( 甲基胺基 )-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ]-8,10- 二氫 -7H- 并四苯 -5,12- 二酮 (II) ( 化合物 22; X = O, A = (IIIc ' ) ，其中 R 為甲基 ) 紅色固體(0.007 g，0.0095 mmol，93%產率) C 38H 47N 3O 12[M+H] +之HRMS (ESI)計算值738.3233，實驗值738.3229 (7S,9S)-9-[2-(1,4- 二氮雜環庚烷 -1- 基 ) 乙醯基 ]-6,9,11- 三羥基 -4- 甲氧基 -7-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10- 甲氧基 -6- 甲基 -5,8,11- 三氧雜 -1- 氮雜三環 [7.4.0.02,7] 十三烷 -4- 基 ] 氧基 ]-8,10- 二氫 -7H- 并四苯 -5,12- 二酮 (II) ( 化合物 23; X = O, A = (IIIa '' ) ) 紅色固體(0.015 g，0.02 mmol，81%產率) C 37H 45N 3O 12[M+H] +之HRMS (ESI)計算值724.3076，實驗值724.3073
步驟 4 [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 己醯胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 4-[ 甲基 -[2- 側氧基 -2-[(2S,4S)-2,5,12- 三羥基 -6- 亞胺基 -7- 甲氧基 -4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10- 甲氧基 -6- 甲基 -5,8,11- 三氧雜 -1- 氮雜三環 [7.4.0.02,7] 十三烷 -4- 基 ] 氧基 ]-11- 側氧基 -3,4- 二氫 -1H- 并四苯 -2- 基 ] 乙基 ] 胺基 ] 哌啶 -1- 羧酸酯 - 化合物 1 ( 式 (I); X = NH, A = (IIIb ' ) ，其中 R 為甲基 , L = (IVa) ，其中 r 為 5) 向(8S,10S)-6,8,11-三羥基-12-亞胺基-1-甲氧基-10-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10-甲氧基-6-甲基-5,8,11-三氧雜-1-氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-4-基]氧基]-8-[2-[甲基(4-哌啶基)胺基]乙醯基]-9,10-二氫-7H-并四苯-5-酮(0.0038 g，0.0051 mmol，1當量)於DMF (1 mL)中之溶液中添加[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]-5-脲基-戊醯基]胺基]苯基]甲基(4-硝基苯基)碳酸鹽(0.0038 g，0.0051 mmol，1當量)及TEA (0.0026 g，0.0256 mmol，0.0036 mL，5當量)。在室溫下攪拌反應混合物隔夜。溶劑藉由旋轉蒸發儀使用高真空泵蒸發至乾燥。粗物質藉由層析管柱DCM/MeOH (98/2至9/1)純化，得到呈藍色固體狀之標題化合物(0.0065 g，0.0067 mmol，38%產率)。 C 67H 86N 10O 19[M+H] +之HRMS (ESI)計算值1335.6144，實驗值1335.6139
以類似方式操作，但採用適合的經取代之起始物質(中間物XI及XII)，獲得以下化合物： [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 己醯胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ] 丙醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 4-[ 甲基 -[2- 側氧基 -2-[(2S,4S)-2,5,12- 三羥基 -6- 亞胺基 -7- 甲氧基 -4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10- 甲氧基 -6- 甲基 -5,8,11- 三氧雜 -1- 氮雜三環 [7.4.0.02,7] 十三烷 -4- 基 ] 氧基 ]-11- 側氧基 -3,4- 二氫 -1H- 并四苯 -2- 基 ] 乙基 ] 胺基 ] 哌啶 -1- 羧酸酯 - 化合物 2 ( 式 (I); X = NH, A = (IIIb ' ) ，其中 R 為甲基 , L = (IVb) ，其中 r 為 5) 藍色固體(0.002 g，0.0016 mmol，34%產率)。 1H NMR (600 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm  0.80 - 0.83 (m, 3 H) 0.83 - 0.90 (m, 3 H) 1.14 - 1-39 (m, 6 H)1.30 (d, J=7.04 Hz, 3 H) 1.44 - 1.72 (m ,7H) 1.95 (dd, J=13.35, 6.58 Hz, 1 H) 2.06 - 2.20 (m, 4 H) 2.57 - 2.69 (m, 2 H) 2.84 (d, J=18.0 Hz, 1 H) 2.94 (d, J=18.0 Hz, 1 H) 3.29 - 3.38 (m, 8 H ) 3.30 (s, 3H) 3.34 - 3.39 (m, 5 H) 3.50 (m, 1 H) 3.63 - 3.69 (m, 1 H) 3.75 (m, 2 H) 3.87 - 4.03 (m, 2 H) 3.93 (dd, J=6.49 , 1.62Hz, 1 H) 4.15 (m, 2 H) 4.12 (m, 3 H) 4.24 (m, 1 H) 4.34 - 4.43 (m, 1 H) 4.57 - 4.63 (m, 1 H) 4.91 - 5.05 (m, 3 H) 5.33 (s, 1 H) 5.37 - 5.43 (m, 1 H) 6.94 - 7.03 (m, 2 H) 7.25 - 7.32 (m, 2 H) 7.58 (d, J=8.45 Hz, 2 H) 7.64 (d, J=8.40 Hz, 1 H) 7.80 (d, J=8.67 Hz, 1 H) 7.82 - 7.91 (m, 1 H) 8.08 (d, J=7.58 Hz, 1 H) 8.15 (d, J=6.95 Hz, 1 H) 9.52 - 9.72 (m, 1 H) 9.94 (s, 1 H) 13.59 (br. s., 1 H) 15.62 - 16.06 (m, 1 H) C 64H 80N 8O 18[M+H] +之HRMS (ESI)計算值1249.5663，實驗值1249.5658 [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 己醯胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 4-[2- 側氧基 -2-[(2S,4S)-2,5,12- 三羥基 -6- 亞胺基 -7- 甲氧基 -4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10- 甲氧基 -6- 甲基 -5,8,11- 三氧雜 -1- 氮雜三環 [7.4.0.02,7] 十三烷 -4- 基 ] 氧基 ]-11- 側氧基 -3,4- 二氫 -1H- 并四苯 -2- 基 ] 乙基 ] 哌 𠯤 -1- 羧酸酯 - 化合物 3 ( 式 (I); X = NH, A = (IIIa ' ), L = (IVa) ，其中 r 為 5) 藍色固體(0.0037 g，0.0028 mmol，40%產率)。 1H NMR (600 MHz, DMSO- d 6) δ ppm 0.82 (d, J=6.82 Hz, 3 H) 0.85 (d, J=6.82 Hz, 3 H) 1.12 - 1.20 (m, 2 H) 1.23 (d, =6.38 Hz, 3 H) 1.30 - 1.53 (m, 6 H) 1.54 - 1.65 (m, 3 H) 1.65 - 1.74 (m, 1 H) 1.96 (m, 1 H) 2.03 - 2.22 (m, 4 H) 2.40 (br. s., 4 H) 2.62 (m, 1 H) 2.67 (m, 1 H) 2.85 (d, J=18.00, 1 H) 2.90 (d, J=18.00, 1 H) 2.91 - 2.97 (m, 1 H) 3.03(m, 1 H) 3.30 (s, 3 H) 3.33 - 3.42 (m, 7 H) 3.50 (m, 1 H) 3.61 - 3.72 (m, 3 H) 3.93 (m, 1 H) 4.12 (s, 3 H) 4.14 (m., 1 H) 4.19 (dd, J=8.58, 7.26, 1 H) 4.23 (d, J=1.98 Hz, 1 H) 4.38 (m, 1 H) 4.60 (d, J=1.76 Hz, 1 H) 4.99 (s, 2 H) 5.05 (t, J=3.52 Hz, 1 H) 5.34 (s, 1 H) 5.40 (s, 3 H) 5.96 (t, J=5.72 Hz, 1 H) 7.00 (s, 2 H) 7.28 (d, J=8.58 Hz, 2 H) 7.59 (d, J=8.58 Hz, 2 H) 7.64 (d, J=8.36 Hz, 1 H) 7.80 (d, J=8.80 Hz, 1 H) 7.87 (t, J=7.92 Hz, 1 H) 8.08 (m, 2 H) 9.66 (d, J=5.00 Hz  1 H) 9.99 (s, 1 H) 13.59 (d, J=5.00 Hz, 1 H) 15.88 (s, 1 H) C 65H 82N 10O 19[M+H] +之HRMS (ESI)計算值1307.5831，實驗值1307.5836 [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 己醯胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ] 丙醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 4-[2- 側氧基 -2-[(2S,4S)-2,5,12- 三羥基 -6- 亞胺基 -7- 甲氧基 -4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10- 甲氧基 -6- 甲基 -5,8,11- 三氧雜 -1- 氮雜三環 [7.4.0.02,7] 十三烷 -4- 基 ] 氧基 ]-11- 側氧基 -3,4- 二氫 -1H- 并四苯 -2- 基 ] 乙基 ] 哌 𠯤 -1- 羧酸酯 - 化合物 4 ( 式 (I); X = NH, A = (IIIa ' ), L = (IVb) ，其中 r 為 5) 藍色固體(0.0075 g，0.0061 mmol，73%產率)。 1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6) δ ppm 0.82 (d, J=6.70 3 H) 0.86 (d, J=6.70 3 H)1.12 - 1.26 (m, 5 H) 1.30 (d, J=7.13 Hz, 3 H) 1.39 - 1.52 (m, 4 H) 1.55 - 1.68 (m, 2 H) 1.90 - 2.22 (m, 5 H) 2.40 (br. s., 3 H) 2.57 - 2.72 (m, 3 H) 2.81 - 2.95 (m, 2 H) 3.30 (s, 4 H) 3.33 - 3.40 (m, 7 H) 3.45 - 3.55 (m, 1 H) 3.63 - 3.75 (m, 3 H) 3.93 (d, J=7.26 Hz, 1 H) 4.12 (s, 3 H) 4.14 - 4.20 (m, 1 H) 4.23 (d, J=1.56 Hz, 1 H) 4.33 - 4.42 (m, 1 H) 4.59 (s, 1 H) 4.99 (s, 2 H) 5.02 - 5.07 (m, 1 H) 5.35 (br. s., 1 H) 5.40 (t, J=4.48 Hz, 1 H) 7.00 (s, 2 H) 7.29 (d, J=8.43 Hz, 2 H) 7.58 (d, J=8.43 Hz, 2 H) 7.64 (d, J=6.36 Hz, 1 H) 7.82 (d, J=8.56 Hz, 1 H) 7.86 (m., 1 H) 8.08 (d, J=7.91 Hz, 1 H) 8.18 (d, J=6.88 Hz, 1 H) 9.67 (br. s., 1 H) 9.96 (s, 1 H) 13.59 (br. s., 1 H) 15.88 (br. s., 1 H) C 62H 76N 8O 18[M+H] +之HRMS (ESI)計算值1221.5351，實驗值1221.5363 [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 己醯胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 N- 甲基 -N-[1-[2- 側氧基 -2-[(2S,4S)-2,5,12- 三羥基 -6- 亞胺基 -7- 甲氧基 -4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10- 甲氧基 -6- 甲基 -5,8,11- 三氧雜 -1- 氮雜三環 [7.4.0.02,7] 十三烷 -4- 基 ] 氧基 ]-11- 側氧基 -3,4- 二氫 -1H- 并四苯 -2- 基 ] 乙基 ]-4- 哌啶基 ] 胺甲酸酯 - 化合物 5 ( 式 (I); X = NH, A = (IIIc ' ) ，其中 R 為甲基 , L = (IVa) ，其中 r 為 5) 藍色固體(0.0065 g，0.0049 mmol，41%產率)。 C 67H 86N 10O 19[M+H] +之HRMS (ESI)計算值1335.6144，實驗值1335.6151 [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 己醯胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ] 丙醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 N- 甲基 -N-[1-[2- 側氧基 -2-[(2S,4S)-2,5,12- 三羥基 -6- 亞胺基 -7- 甲氧基 -4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10- 甲氧基 -6- 甲基 -5,8,11- 三氧雜 -1- 氮雜三環 [7.4.0.02,7] 十三烷 -4- 基 ] 氧基 ]-11- 側氧基 -3,4- 二氫 -1H- 并四苯 -2- 基 ] 乙基 ]-4- 哌啶基 ] 胺甲酸酯 - 化合物 6 ( 式 (I); X = NH, A = (IIIc ' ) ，其中 R 為甲基 , L = (IVb) ，其中 r 為 5) 藍色固體(0.012 g，0.0096 mmol，28%產率)。 C 64H 80N 8O 18[M+H] +之HRMS (ESI)計算值1249.5663，實驗值1249.5670 [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 己醯胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 4-[ 甲基 -[2- 側氧基 -2-[(2S,4S)-2,5,12- 三羥基 -7- 甲氧基 -4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10- 甲氧基 -6- 甲基 -5,8,11- 三氧雜 -1- 氮雜三環 [7.4.0.02,7] 十三烷 -4- 基 ] 氧基 ]-6,11- 二側氧基 -3,4- 二氫 -1H- 并四苯 -2- 基 ] 乙基 ] 胺基 ] 哌啶 -1- 羧酸酯 - 化合物 7 ( 式 (I); X = O, A = (IIIb ' ) ，其中 R 為甲基 , L = (IVa) ，其中 r 為 5) 紅色固體(0.0027 g，0.002 mmol，43%產率)。 C 67H 85N 9O 20[M+H] +之HRMS (ESI)計算值1336.5984，實驗值1336.5991 [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 己醯胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ] 丙醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 4-[ 甲基 -[2- 側氧基 -2-[(2S,4S)-2,5,12- 三羥基 -7- 甲氧基 -4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10- 甲氧基 -6- 甲基 -5,8,11- 三氧雜 -1- 氮雜三環 [7.4.0.02,7] 十三烷 -4- 基 ] 氧基 ]-6,11- 二側氧基 -3,4- 二氫 -1H- 并四苯 -2- 基 ] 乙基 ] 胺基 ] 哌啶 -1- 羧酸酯 - 化合物 8 ( 式 (I); X = O, A = (IIIb ' ) ，其中 R 為甲基 , L = (IVb) ，其中 r 為 5) 紅色固體(0.0048 g，0.0038 mmol，46%產率)。 C 64H 79N 7O 19[M+H] +之HRMS (ESI)計算值1250.5504，實驗值1250.5510 [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 己醯胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 4-[2- 側氧基 -2-[(2S,4S)-2,5,12- 三羥基 -7- 甲氧基 -4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10- 甲氧基 -6- 甲基 -5,8,11- 三氧雜 -1- 氮雜三環 [7.4.0.02,7] 十三烷 -4- 基 ] 氧基 ]-6,11- 二側氧基 -3,4- 二氫 -1H- 并四苯 -2- 基 ] 乙基 ] 哌 𠯤 -1- 羧酸酯 - 化合物 9 ( 式 (I); X = O, A = (IIIa ' ), L = (IVa) ，其中 r 為 5) 紅色固體(0.0044 g，0.0034 mmol，64%產率)。 C 65H 81N 9O 20[M+H] +之HRMS (ESI)計算值1308.5671，實驗值1308.5679 [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 己醯胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ] 丙醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 4-[2- 側氧基 -2-[(2S,4S)-2,5,12- 三羥基 -7- 甲氧基 -4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10- 甲氧基 -6- 甲基 -5,8,11- 三氧雜 -1- 氮雜三環 [7.4.0.02,7] 十三烷 -4- 基 ] 氧基 ]-6,11- 二側氧基 -3,4- 二氫 -1H- 并四苯 -2- 基 ] 乙基 ] 哌 𠯤 -1- 羧酸酯 - 化合物 10 ( 式 (I); X = O, A = (IIIa ' ), L = (IVb) ，其中 r 為 5) 紅色固體(0.0085 g，0.007 mmol，62%產率)。 1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm  0.78 - 0.88 (m, 6 H) 1.13 - 1.20 (m, 2 H) 1.23 (m, 3H) 1.30 (d, J=7.08 Hz, 3 H) 1.41 - 1.53 (m, 4 H) 1.66 (br. s., 2 H) 1.91 - 2.03 (m, 1 H) 2.07 - 2.23 (m, 4 H) 2.39 (br. s., 4 H) 2.57 - 2.72 (m, 2 H) 2.95 (q, J=17.90 Hz, 2 H) 3.30 (s, 3 H) 3.31 - 3.40 (m, 7H) 3.46 - 3.54 (m, 1 H) 3.60 - 3.73 (m, 3 H) 3.93 (d, J=7.45 Hz, 1 H) 3.99 (s, 3 H) 4.14 - 4.20 (m, 2 H) 4.23 (d, J=1.83 Hz, 1 H) 4.38 (t, J=7.08 Hz, 1 H) 4.59 (d, J=1.71 Hz, 1 H) 4.99 (s, 3 H) 5.22 (t, J=4.21 Hz, 1 H) 5.45 (s, 1 H) 7.00 (s, 2 H) 7.29 (d, J=8.55 Hz, 2 H) 7.58 (d, J=8.42 Hz, 2 H) 7.66 (d, J=6.23 Hz, 1 H) 7.81 (d, J=8.67 Hz, 1 H) 7.89 - 7.96 (m, 2 H) 8.17 (d, J=6.84 Hz, 1 H) 9.95 (s, 1 H) 13.13 - 13.42 (m, 1 H) 13.89 - 14.18 (m, 1 H) C 62H 75N 7O 19[M+H] +之HRMS (ESI)計算值1222.5191，實驗值1222.5194 [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 己醯胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 N- 甲基 -N-[1-[2- 側氧基 -2-[(2S,4S)-2,5,12- 三羥基 -7- 甲氧基 -4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10- 甲氧基 -6- 甲基 -5,8,11- 三氧雜 -1- 氮雜三環 [7.4.0.02,7] 十三烷 -4- 基 ] 氧基 ]-6,11- 二側氧基 -3,4- 二氫 -1H- 并四苯 -2- 基 ] 乙基 ]-4- 哌啶基 ] 胺甲酸酯 - 化合物 11 ( 式 (I); X = O, A = (IIIc ' ) ，其中 R 為甲基 , L = (IVa) ，其中 r 為 5) 紅色固體(0.0075 g，0.0056 mmol，44%產率)。 C 67H 85N 9O 20[M+H] +之HRMS (ESI)計算值1336.5984，實驗值1336.5979 [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 己醯胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ] 丙醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 N- 甲基 -N-[1-[2- 側氧基 -2-[(2S,4S)-2,5,12- 三羥基 -7- 甲氧基 -4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10- 甲氧基 -6- 甲基 -5,8,11- 三氧雜 -1- 氮雜三環 [7.4.0.02,7] 十三烷 -4- 基 ] 氧基 ]-6,11- 二側氧基 -3,4- 二氫 -1H- 并四苯 -2- 基 ] 乙基 ]-4- 哌啶基 ] 胺甲酸酯 - 化合物 12 ( 式 (I); X = O, A = (IIIc ' ) ，其中 R 為甲基 , L = (IVb) ，其中 r 為 5) 紅色固體(0.0043 g，0.0034 mmol，28%產率)。 1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.77 - 0.91 (m, 6 H) 0.80 (m, 2H) 1.23 (d, J =6.54, 3H) 1.30 (d, J=7.27 Hz, 3 H) 1.40 - 1.52 (m, 6 H) 1.64 - 1.69 (m, 4 H) 1.95 (m, 1 H) 2.02 - 2.24 (m, 6 H) 2.69 - 2.68 (m, 2 H) 2.70 (s, 3 H) 2.83 (m, 2 H) 2.90 (d, J=17.98 Hz, 1 H) 3.02 (d, J=17.98 Hz, 1 H) 3.30 (s, 3 H) 3.34 - 3.39 (m, 3 H) 3.50 (m, 1 H) 3.55 - 3.64 (m, 2 H) 3.66 (m, 1 H) 3.93 (m, 1 H) 3.99 (s, 3 H) 4.16 (dd, J=8.63, 6.99 Hz, 2 H) 4.23 (d, J=2.00 Hz, 1 H) 4.38 (m, 2 H) 4.59 (d, J=2.00 Hz, 1 H) 4.90 - 5.04 (m, 3 H) 5.23 (t, J=4.54 Hz, 1 H) 5.47 (s, 1 H) 6.99 (s, 2 H) 7.22 - 7.34 (m, 2 H) 7.54 - 7.61 (m, 2 H) 7.67 (m, 1 H) 7.80 (d, J=8.72 Hz, 1 H) 7.87.95 (m, 2 H) 8.15 (d, J=7.08 Hz, 1 H) 9.93 (s, 1 H) 13.28 (br. s., 1 H) 14.05 (br. s., 1 H) C 64H 79N 7O 19[M+H] +之HRMS (ESI)計算值1250.5504，實驗值1250.5507 [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 己醯胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ] 丙醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 4-[2- 側氧基 -2-[(2S,4S)-2,5,12- 三羥基 -7- 甲氧基 -4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10- 甲氧基 -6- 甲基 -5,8,11- 三氧雜 -1- 氮雜三環 [7.4.0.02,7] 十三烷 -4- 基 ] 氧基 ]-6,11- 二側氧基 -3,4- 二氫 -1H- 并四苯 -2- 基 ] 乙基 ]-1,4- 二氮 𠰢 -1- 羧酸酯 - 化合物 16 ( 式 (I); X = O, A = (IIIa '' ), L = (IVb) ，其中 r 為 5) 紅色固體(0.0081 g，0.0065 mmol，61%產率)。 C 63H 77N 7O 19[M+H] +之HRMS (ESI)計算值1236.5347，實驗值1236.5351
圖1顯示本發明之ADC化合物(Ia iv)在HCC1954異種移植模型上的活體內活性資料。

Claims (17)

  1. 一種式(I)之蒽環黴素-接合劑： 其中： Ant為式(II)之蒽環黴素藥物部分： 其中： X為O或NH，及 A為選自由(IIIa)-(IIIe)組成之群的雜環(Het)或碳環(Cb)： 其中： R獨立地為氫或直鏈或分支鏈(C 1-C 6)烷基； n為0至6的整數； L為式(VI)之接合體： 其中： W獨立地為空值或選自由(Va)-(Vc)組成之群的自我分解型系統： 其中： R1及 R2各自獨立地為氫、鹵素、甲基、乙基或直鏈或分支鏈C 1-C 4羥烷基； PE獨立地為空值或由天然L-胺基酸與非天然D-胺基酸之任何組合組成之二肽或三肽部分； RM為選自由(VIa)-(VIc)組成之群的反應性部分： 其中： R3及 R4各自獨立地為氫、鹵素、甲基、乙基、直鏈或分支鏈C 1-C 4羥烷基、直鏈或分支鏈C 1-C 4鹵烷基，或R3及R4結合在一起形成3員至6員碳環； R5為氫、C 1-C 3烷基或包含NO 2或CN基團的拉電子基團； r為0至7之整數； 或其醫藥學上可接受之鹽。
  2. 如請求項1之式(I)化合物，其中： A為選自由以下組成之群的雜環或碳環基： 其中： R為直鏈或分支鏈(C 1-C 6)烷基； L為式(VI)之接合體，其中 W為基團(Va')或(Vb')： PE為由以下胺基酸之任何組合組成之二肽或三肽部分：甘胺酸、丙胺酸、白胺酸、纈胺酸、瓜胺酸、苯丙胺酸，其中C端胺基酸殘基連接至 W，且N端胺基酸殘基連接至 RM； RM為選自(VIa)-(VIc)之基團： 其中： R3、 R4及 R5為氫； r為3至5之整數。
  3. 如請求項2之式(I)化合物，其中： A為選自由(IIIa')、(IIIa'')、(IIIb')及(IIIc')組成之群的雜環基； W為基團(Va')或(Vb')； PE為選自纈胺酸-丙胺酸及纈胺酸-瓜胺酸之二肽或三肽苯丙胺酸-白胺酸-甘胺酸 其中C端胺基酸殘基連接至 W且N端胺基酸殘基連接至 RM； RM為選自基團(VIa)-(VIc)之反應性部分。
  4. 如請求項3之式(I)化合物，其中： A為選自由(IIIa')、(IIIa'')、(IIIb')及(IIIc')組成之群的雜環基；及 L為選自由(IVa)-(IVc)組成之群的接合體： 其中： r為3至5之整數。
  5. 如請求項1之式(I)化合物(comp)，其選自由以下組成之群： [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]-5-脲基-戊醯基]胺基]苯基]甲基4-[甲基-[2-側氧基-2-[(2S,4S)-2,5,12-三羥基-6-亞胺基-7-甲氧基-4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10-甲氧基-6-甲基-5,8,11-三氧雜-1-氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-4-基]氧基]-11-側氧基-3,4-二氫-1H-并四苯-2-基]乙基]胺基]哌啶-1-羧酸酯(化合物1)； [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]丙醯基]胺基]苯基]甲基4-[甲基-[2-側氧基-2-[(2S,4S)-2,5,12-三羥基-6-亞胺基-7-甲氧基-4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10-甲氧基-6-甲基-5,8,11-三氧雜-1-氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-4-基]氧基]-11-側氧基-3,4-二氫-1H-并四苯-2-基]乙基]胺基]哌啶-1-羧酸酯(化合物2)； [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]-5-脲基-戊醯基]胺基]苯基]甲基4-[2-側氧基-2-[(2S,4S)-2,5,12-三羥基-6-亞胺基-7-甲氧基-4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10-甲氧基-6-甲基-5,8,11-三氧雜-1-氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-4-基]氧基]-11-側氧基-3,4-二氫-1H-并四苯-2-基]乙基]哌𠯤-1-羧酸酯(化合物3)； [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]丙醯基]胺基]苯基]甲基4-[2-側氧基-2-[(2S,4S)-2,5,12-三羥基-6-亞胺基-7-甲氧基-4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10-甲氧基-6-甲基-5,8,11-三氧雜-1-氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-4-基]氧基]-11-側氧基-3,4-二氫-1H-并四苯-2-基]乙基]哌𠯤-1-羧酸酯(化合物4)； [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]-5-脲基-戊醯基]胺基]苯基]甲基N-甲基-N-[1-[2-側氧基-2-[(2S,4S)-2,5,12-三羥基-6-亞胺基-7-甲氧基-4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10-甲氧基-6-甲基-5,8,11-三氧雜-1-氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-4-基]氧基]-11-側氧基-3,4-二氫-1H-并四苯-2-基]乙基]-4-哌啶基]胺甲酸酯(化合物5)； [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]丙醯基]胺基]苯基]甲基N-甲基-N-[1-[2-側氧基-2-[(2S,4S)-2,5,12-三羥基-6-亞胺基-7-甲氧基-4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10-甲氧基-6-甲基-5,8,11-三氧雜-1-氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-4-基]氧基]-11-側氧基-3,4-二氫-1H-并四苯-2-基]乙基]-4-哌啶基]胺甲酸酯(化合物6)； [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]-5-脲基-戊醯基]胺基]苯基]甲基4-[甲基-[2-側氧基-2-[(2S,4S)-2,5,12-三羥基-7-甲氧基-4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10-甲氧基-6-甲基-5,8,11-三氧雜-1-氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-4-基]氧基]-6,11-二側氧基-3,4-二氫-1H-并四苯-2-基]乙基]胺基]哌啶-1-羧酸酯(化合物7)； [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]丙醯基]胺基]苯基]甲基4-[甲基-[2-側氧基-2-[(2S,4S)-2,5,12-三羥基-7-甲氧基-4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10-甲氧基-6-甲基-5,8,11-三氧雜-1-氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-4-基]氧基]-6,11-二側氧基-3,4-二氫-1H-并四苯-2-基]乙基]胺基]哌啶-1-羧酸酯(化合物8)； [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]-5-脲基-戊醯基]胺基]苯基]甲基4-[2-側氧基-2-[(2S,4S)-2,5,12-三羥基-7-甲氧基-4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10-甲氧基-6-甲基-5,8,11-三氧雜-1-氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-4-基]氧基]-6,11-二側氧基-3,4-二氫-1H-并四苯-2-基]乙基]哌𠯤-1-羧酸酯(化合物9)； [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]丙醯基]胺基]苯基]甲基4-[2-側氧基-2-[(2S,4S)-2,5,12-三羥基-7-甲氧基-4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10-甲氧基-6-甲基-5,8,11-三氧雜-1-氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-4-基]氧基]-6,11-二側氧基-3,4-二氫-1H-并四苯-2-基]乙基]哌𠯤-1-羧酸酯(化合物10)； [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]-5-脲基-戊醯基]胺基]苯基]甲基N-甲基-N-[1-[2-側氧基-2-[(2S,4S)-2,5,12-三羥基-7-甲氧基-4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10-甲氧基-6-甲基-5,8,11-三氧雜-1-氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-4-基]氧基]-6,11-二側氧基-3,4-二氫-1H-并四苯-2-基]乙基]-4-哌啶基]胺甲酸酯(化合物11)； [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]丙醯基]胺基]苯基]甲基N-甲基-N-[1-[2-側氧基-2-[(2S,4S)-2,5,12-三羥基-7-甲氧基-4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10-甲氧基-6-甲基-5,8,11-三氧雜-1-氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-4-基]氧基]-6,11-二側氧基-3,4-二氫-1H-并四苯-2-基]乙基]-4-哌啶基]胺甲酸酯(化合物12)； [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]-5-脲基-戊醯基]胺基]苯基]甲基4-[2-側氧基-2-[(2S,4S)-2,5,12-三羥基-6-亞胺基-7-甲氧基-4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10-甲氧基-6-甲基-5,8,11-三氧雜-1-氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-4-基]氧基]-11-側氧基-3,4-二氫-1H-并四苯-2-基]乙基]-1,4-二氮𠰢-1-羧酸酯(化合物13)； [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]丙醯基]胺基]苯基]甲基4-[2-側氧基-2-[(2S,4S)-2,5,12-三羥基-6-亞胺基-7-甲氧基-4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10-甲氧基-6-甲基-5,8,11-三氧雜-1-氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-4-基]氧基]-11-側氧基-3,4-二氫-1H-并四苯-2-基]乙基]-1,4-二氮𠰢-1-羧酸酯(化合物14)； [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]-5-脲基-戊醯基]胺基]苯基]甲基4-[2-側氧基-2-[(2S,4S)-2,5,12-三羥基-7-甲氧基-4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10-甲氧基-6-甲基-5,8,11-三氧雜-1-氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-4-基]氧基]-6,11-二側氧基-3,4-二氫-1H-并四苯-2-基]乙基]-1,4-二氮𠰢-1-羧酸酯(化合物15)，及 [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]丙醯基]胺基]苯基]甲基4-[2-側氧基-2-[(2S,4S)-2,5,12-三羥基-7-甲氧基-4-[[(2S,4R,6S,7S,9R,10S)-10-甲氧基-6-甲基-5,8,11-三氧雜-1-氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-4-基]氧基]-6,11-二側氧基-3,4-二氫-1H-并四苯-2-基]乙基]-1,4-二氮𠰢-1-羧酸酯(化合物16)。
  6. 一種式(Ia)之抗體-藥物結合物(ADC)： 其中： Ab包括與給定目標細胞群體相關之受體、抗原或其他接受部分結合或反應性締合或形成複合物的任何單元、類型或類別之抗體； m(藥物負載)為選自1至8之整數；及 Ant-L為如請求項1至5中任一項之式(I)之蒽環黴素-接合劑； 或其醫藥學上可接受之鹽。
  7. 如請求項6之式(Ia)之抗體-藥物結合物(ADC)，其中 Ant-L為如請求項5之化合物。
  8. 如請求項6之式(Ia)之抗體-藥物結合物(ADC)，其中 Ab為結合至一或多種腫瘤相關之ErbB2抗原或細胞表面ErbB2受體的抗體。
  9. 如請求項6之式(Ia)之抗體-藥物結合物(ADC)，其選自由化合物(Ia I)-(Ia XVI)組成之群： 其中m為2至6之整數且TRZ為曲妥珠單抗(Trastuzumab)。
  10. 一種醫藥組合物，其包含如請求項6之式(Ia)之抗體-藥物結合物化合物或其醫藥學上可接受之鹽之混合物，其中抗體-藥物結合物化合物之該混合物中每個抗體之平均藥物負載為約2至約4。
  11. 如請求項10之醫藥組合物，其進一步包含一或多種化學治療劑。
  12. 如請求項6之式(Ia)之抗體-藥物結合物化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用作藥劑。
  13. 一種如請求項6之式(Ia)之抗體-藥物結合物化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造用於治療癌症之藥劑。
  14. 如請求項13之用途，其中該癌症係選自：癌瘤、淋巴譜系之造血腫瘤、骨髓譜系之造血腫瘤、包括纖維肉瘤及橫紋肌肉瘤的間葉來源之腫瘤、中樞及周邊神經系統之腫瘤，及其他腫瘤，包括黑色素瘤、精原細胞瘤、畸胎上皮癌、骨肉瘤、著色性乾皮病、角化棘皮瘤(keratoxanthoma)、甲狀腺濾泡癌、卡波西肉瘤(Kaposi's sarcoma)及間皮瘤。
  15. 如請求項1之式(I)之蒽環黴素-接合劑化合物，其中該蒽環黴素-接合劑用作製備如請求項6之式(Ia)之抗體-藥物結合物化合物的中間物。
  16. 一種式(II)之蒽環黴素衍生物，其選自： ； 或其醫藥學上可接受之鹽。
  17. 如請求項16之蒽環黴素衍生物，其中該蒽環黴素衍生物用作製備式(I)之蒽環黴素-接合劑化合物的合成中間物。
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