TW202317167A - 製備到手香萃取物的方法 - Google Patents
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Abstract
一種製備到手香(
Plectranthus amboinicus,PA)萃取物的方法,該方法包括以包含具有合適極性指數的溶劑之萃取溶液萃取到手香的地上部、過濾並濃縮由此產生的萃取物,並使用疏水性交互作用色層分析樹酯使該濃縮的萃取物進行色層分析分離步驟,以產生該到手香萃取物。
Description
相關申請之交互引用。本案主張於2021年6月28日提出申請之美國專利臨時申請第63/215,697號之申請日的權益,其全部內容透過引用併入本文。本發明關於一種製備到手香萃取物的方法。
到手香(
Plectranthus amboinicus,又名
Coleus amboinicus Lour.、
Coleus aromaticus Benth.、
Coleus aromaticus auct.、
Plectranthus aromaticus Roxb.、
Plectranthus aromaticus Benth.,以及
Plectranthus amboinicus ( Lour. ) Spreng.),為唇形花科(Lamiaceae,又名Labiatae)多年生草本植物,原產於非洲南部及東部。到手香也被稱為廣藿香、古巴牛至、印度琉璃苣、印度薄荷、墨西哥薄荷、墨西哥牛至、鄉村琉璃苣,以及西班牙百里香。
到手香具有多種健康益處,例如,抗微生物活性、抗真菌活性、抗發炎活性、抗糖尿病活性、抗焦慮活性、抗腫瘤、鎮痛、抗瘧疾、抗生物膜功效、利尿、傷口癒合活性、護膚活性、治療呼吸系統疾病,以及抗血小板聚集活性。據報導,到手香含有幾類植物化學物質,包括單萜類、二萜類、三萜類、倍半萜類、酚類、黃酮類,以及酯類。不同的製備方法使得到手香萃取物在不同濃度下具有不同的植物化學成分組合,進而具有不同的健康益處。
本發明至少部分基於開發用於生產具有所需活性成分(例如,有效促進傷口癒合)的到手香(PA)萃取物的製備方法。這種製備方法大幅縮短了整個製備方法並具有高產率。
因此,本發明提供一種製備到手香(PA)萃取物的方法,該方法包括:(i)將到手香的地上部與萃取溶液混合以產生第一到手香萃取物,其中該萃取溶液包含極性指數為約2.9至6.6的溶劑;(ii)過濾且可選擇地濃縮該第一到手香萃取物以產生第二到手香萃取物,其可選擇地為濃縮的到手香萃取物;(iii)將該第二到手香萃取物(例如,該濃縮的到手香萃取物)與疏水性交互作用色層分析樹脂接觸,以及(iv)以沖提溶液沖提該管柱以產生該到手香萃取物,其中該沖提溶液包含極性指數為約2.1至5.4的溶劑。
於某些具體實施例中,在步驟(i)中的萃取溶液中的溶劑可為丙酮、丁基甲基醚、乙醇、乙酸乙酯、異丙醇、甲醇,或其混合物。於某些實施例中,在該萃取溶液中的溶劑為乙醇。於其他實施例中,該萃取溶液中的溶劑為乙酸乙酯。於其他實施例中,該萃取溶液中的溶劑為丙酮。或者,該萃取溶液中的溶劑為異丙醇。於其他實施例中,該萃取溶液中的溶劑可為甲醇。
於某些情況下,步驟(i)可重複2-4次,可選擇為2次。於某些情況下,步驟(i)可在約25-80℃(例如,約40-80℃或約50-80℃)的溫度下進行約1-9小時(例如,1-3小時)。或者,步驟(i)在約20-30℃的溫度下進行約12-48小時(例如,12-24小時或24-48小時)。於某些實施例中,到手香的地上部與步驟(i)中的萃取溶液之間的重量體積比可為約1:10至約1:20(公斤/公升)。
於某些具體實施例中,在步驟(ii)中,可將該第一到手香萃取物濃縮以將體積減少至原始體積的約30%-70%(例如,約30-50%)以產生該濃縮的到手香萃取物。於其他具體實施例中,可將該第一到手香萃取物濃縮以將體積減少至原始體積的約2.5%至約4%以產生該濃縮的到手香萃取物。
於其他具體實施例中,步驟(ii)不涉及濃縮該第一到手香萃取物。
於某些具體實施例中,在步驟(iii)中使用的該疏水性交互作用色層分析樹脂可為非極性共聚物苯乙烯-二乙烯基苯吸附樹脂、與二乙烯基苯交聯的聚苯乙烯聚合物,或聚苯乙烯二乙烯基-苯共聚物樹脂。於某些情況下,可透過將該濃縮的到手香萃取物加載至包含該疏水性交互作用色層分析樹脂的管柱上來進行步驟(iii)。或者,可透過將該濃縮的到手香萃取物與該疏水性交互作用色層分析樹脂混合來進行步驟(iii)。
於某些具體實施例中,在步驟(iv)中的沖提溶液可包含至少兩種溶劑的混合物,該溶劑選自由下列所組成之群組:丙酮、乙醇、乙酸乙酯、異丙醇,以及己烷。於某些情況下,該沖提溶液可包含體積比為50:50的兩種溶劑。於一實施例中,該沖提溶液包含己烷與乙酸乙酯的混合物。於另一實施例中,該沖提溶液包含乙醇與乙酸乙酯的混合物。於又一實施例中,該沖提溶液包含丙酮與乙酸乙酯的混合物。於又一實施例中,該沖提溶液包含丙酮與異丙醇的混合物。
本文公開之任何方法可進一步包括,在步驟(iv)之前以及在步驟(iii)之後,以包含乙醇的水溶液清洗該疏水性交互作用色層分析樹脂。
本文還提供一到手香(PA)萃取物,其透過本文公開之任何方法製備。於某些情況下,該到手香萃取物可包含三裂鼠尾草素、薊黃素、迷迭香酸,以及香旱芹酚。於某些實施例中,透過本文公開之方法所製備的到手香萃取物可包含0.04%-0.4%三裂鼠尾草素(w/w)、0.01%-0.9%薊黃素(w/w)、至多1.1%迷迭香酸(w/w),以及0.04%-6.7%香旱芹酚(w/w)。
於以下之描述中闡述本發明之一或多個具體實施例的細節。本發明的其他特徵或優點將從以下附圖及數個具體實施例的詳細描述以及從所附之申請專利範圍中顯而易見。
到手香為一種藥用植物,具有多種藥理特性。不同的製備方法使得到手香(PA)萃取物在不同濃度下具有不同的植物化學成分組合,進而造成不同的生物活性及藥用價值。
本文提供用於生產含有具有所需治療活性(例如,傷口癒合)的植物化學成分的到手香萃取物的方法。這樣的方法表現出一種或多種有利的特徵,例如高產率以及縮短製備的時間。因此,本文公開之製備方法可高效地生產到手香萃取物,以用於製備具有所需治療效用(例如,促進傷口癒合)的醫藥組合物。
I.
到手香(
PA
)萃取物之製備
於某些方面,本發明提供使用到手香植物的地上部作為起始材料來製備到手香萃取物的方法。該地上部可包括葉、莖、花,或其組合。於某些實施例中,可將到手香植物的整個地上部作為起始材料。可使用新鮮的到手香植物的地上部。或者,可使用乾燥形式的到手香植物的地上部。於某些情況下,可將到手香植物的地上部進行乾燥程序以形成粉末,其可作為製備本文公開之到手香萃取物的起始材料,這也在本發明的範圍內。
本文公開之任何製備方法可至少包括以下步驟:(i)萃取步驟,(ii)過濾及濃縮步驟,(iii)透過疏水性交互作用色層分析所進行的分離步驟,以及(iv)沖提步驟。於某些情況下,該方法可進一步包括在分離步驟(iii)以及沖提步驟(iv)之間的清洗步驟。
(
a
)
萃取步驟
可透過將到手香植物的地上部(例如,以上所揭露的那些)與一萃取溶液混合來進行萃取步驟,該萃取溶液包含具有一合適極性指數的溶劑。溶劑的極性指數係指一溶劑與各種極性測試溶質相互作用程度的相對量度。以下表1列出常用的溶劑及其極性指數(斯奈德極性指數)。
表
1.
示例性溶劑及其極性指數
溶劑 | 極性指數 (斯奈德) |
環己烷 | 0 |
正己烷 | 0 |
正癸烷 | 0.3 |
異辛烷 | 0.4 |
辛烷 | 0.4 |
丁醚 | 1.7 |
四氯化碳 | 1.7 |
三乙胺 | 1.8 |
異丙醚 | 2.2 |
甲苯 | 2.3 |
對二甲苯 | 2.4 |
叔丁基甲基醚 | 2.9 |
苯 | 3 |
芐醚 | 3.3 |
二氯甲烷 | 3.4 |
二氯甲烷 | 3.4 |
氯仿 | 3.4-4.4 |
二氯乙烷 | 3.7 |
二氯乙烷 | 3.7 |
1-丁醇 | 3.9 |
異丁醇 | 3.9 |
四氫呋喃 | 4.2 |
乙酸乙酯 | 4.3 |
1-丙醇 | 4.3 |
2-丙醇 | 4.3 |
乙酸甲酯 | 4.4 |
環己酮 | 4.5 |
甲乙酮 (methyl ethyl ketone,MEK) | 4.5 |
硝基苯 | 4.5 |
苯甲腈 | 4.6 |
1,4-二噁烷 | 4.8 |
對二噁烷 | 4.8 |
乙醇 | 5.2 |
硝基乙烷 | 5.3 |
吡啶 | 5.3 |
丙酮 | 5.4 |
苯甲醇 | 5.5 |
2-甲氧基乙醇 | 5.7 |
醋酸 | 6.2 |
乙腈 | 6.2 |
N,N-二甲基甲醯胺 | 6.4 |
二甲基亞碸 | 6.5 |
甲醇 | 6.6 |
甲醯胺 | 7.3 |
水 | 9 |
於某些情況下,可在萃取步驟中使用極性指數為約2.9至約6.6的溶劑。於某些情況下,該溶劑可為單一溶劑(亦即,包含同質的溶劑化合物群,例如,乙醇)。於其他情況下,該溶劑可為共溶劑(亦即,包含多種溶劑化合物的混合物,例如,乙醇與丙酮的混合物)。
用於萃取步驟的合適溶劑可為表1中極性指數為2.9至6.6的任何溶劑,或其混合物。於某些實施例中,該溶劑可為乙醇。於其他實施例中,該溶劑可為丙酮。於又一些實施例中,該溶劑可為乙醇與丙酮的混合物(例如,1:1的體積比)。其他合適的溶劑包括叔丁基甲基醚、乙酸乙酯、異丙醇、甲醇,或其混合物。
於某些情況下,到手香植物的地上部可與本文公開之任何合適的溶劑以約1:10至1:20(公斤/公升)的比例混合。例如,可將1公斤的到手香植物的地上部放入10-20公升的溶劑中。可於一合適的溫度(例如,室溫至80℃)下將該混合物攪拌一段合適的時間(例如,1小時至24小時)。於某些實施例中,該萃取步驟可在一升高的溫度下進行,例如在60±5℃。於此情況下,該萃取時間可縮短,例如,約1小時至2小時(例如,約90分鐘)。或者,該萃取步驟可於室溫下進行,例如於約20-25℃下。於此情況下,該萃取時間可能需要大約12小時至24小時。於其他實施例中,該萃取步驟可於約30-40℃下進行約3-8小時(例如,4小時)。
本文公開之任何萃取步驟可重複多次,例如2次。
(
b
)
過濾及選擇性的濃縮步驟
於某些情況下,可過濾從本文公開之萃取步驟獲得之粗萃取物以去除固體成分。
於某些具體實施例中,該粗萃取物或所得之濾液可透過常規方法濃縮,例如真空濃縮。於某些實施例中,該濃縮萃取物的體積可減少至原始體積(粗萃取物或濾液)的約1%-70%。於某些實施例中,該粗萃取物或濾液可低度濃縮,例如,該濃縮萃取物的體積可為濃縮前體積(原始體積)的約30%-70%(例如約30-50%)。於其他實施例中,該粗萃取物或濾液可高度濃縮,例如減少至約2%-10%的體積。於某些實施例中,該濃縮萃取物的體積可為濃縮前體積(原始體積)的約2-4%。
或者,該粗萃取物或所得濾液可基本上不濃縮(體積減少小於20%,例如小於15%、10%,或5%)或根本不濃縮。
(
c
)
分離步驟
從過濾及濃縮步驟獲得的濃縮粗萃取物然後可透過疏水性交互作用色層分析法進行分離,該色層分析法根據其表面疏水性的差異分離濃縮粗萃取物中的組成分。該步驟可透過使該濃縮溶液與一疏水性交互作用色層分析樹脂接觸來進行,該樹脂可為任何非離子及疏水性樹脂。實例包括,但不限於,非極性共聚物苯乙烯-二乙烯基苯吸附樹脂(例如DIAION® HP20、DIAION® HP20SS、AMBERLITE® XAD-2或AMBERLITE® XAD-4)、一種非離子及交聯聚合物吸附劑樹脂(SEPLITE® LX20),或聚苯乙烯二乙烯基苯共聚物樹脂(例如,Amberlite
TMXAD1180N)。其他實例包括基於甲基丙烯酸酯的樹脂、矽膠、非離子聚苯乙烯-二乙烯基苯聚合物樹脂(例如,SEPABEAD® SP27)。
於某些實施例中,該疏水性交互作用色層分析樹脂可裝於管柱中,該管柱在裝載用於分離的材料之前可先進行清洗以達到平衡。然後可將該濃縮溶液加載到該管柱上並流過該管柱。於某些實施例中(例如,高濃度濃縮粗萃取物),可在加載後以一種或多種溶液依序清洗該管柱。用於依序清洗的溶液可包含具有高至低極性指數的溶劑。例如,可先以水清洗該管柱,然後以50%乙醇(溶於水中),然後再以乙醇清洗。或者,該樹脂可以具有低極性指數的溶劑(例如,己烷)清洗。於其他實施例中,該清洗步驟可能並非必需,例如針對低度濃縮的粗萃取物。
於其他實施例中,濃縮溶液可與一疏水性交互作用色層分析樹脂混合。在攪拌一段合適的時間後,可過濾該混合物以除去上清液。於某些情況下(例如,高度濃縮的粗萃取物),可在加載後透過混合並攪拌該溶液中的樹脂而以一種或多種溶液依序清洗該樹脂。用於依序清洗的溶液可包含具有高至低極性指數的溶劑。例如,該樹脂首先可以水清洗,然後以50%乙醇(溶於水中),然後以乙醇清洗。或者,該樹脂可以具有低極性指數的溶劑(例如,己烷)清洗。於其他實施例中,該清洗步驟可能並非必需的,例如針對低度濃縮的粗萃取物。
(
d
)
沖提
步驟
然後可使用合適的沖提溶液沖提填充於管柱中或與濃縮粗萃取物混合的樹脂,以提供目標到手香(PA)萃取物。沖提溶液可包含具有合適極性指數的溶劑,例如,約2.1至約5.4。於某些實施例中,可使用極性指數為4.3-5.4的溶劑。於某些實施例中,該溶劑可為單一溶劑。於其他情況下,該溶劑可為共溶劑。用於沖提溶液的溶劑的實例包括,但不限於,乙醇與乙酸乙酯的混合物(例如,以1:1或2:1的體積比)、丙酮與乙酸乙酯的混合物(例如,以1:1或2:1的體積比)、己烷與乙酸乙酯的混合物(例如,以1:1的體積比)。與這些實施例具有相似極性指數的其他溶劑亦可用於沖提溶液中。
(
e
)
示例性萃取方法
以下
表 2提供用於本文公開之萃取方法的每個步驟的示例性溶劑及條件。提供這些示例性的條件僅用於說明之目的。
表
2.
到手香萃取物製備過程中使用之示例性溶劑及條件
步驟 | 試劑及條件 | 實例 |
萃取 | 溶劑:極性指數(PI)約為2.9至6.6 | ˙乙醇(PI:5.2) ˙乙酸乙酯(PI:4.3) ˙丙酮(PI:5.4) ˙異丙醇(PI:4.3) ˙甲醇(PI:6.6) |
溫度:25-80ºC | ˙25 ± 2ºC ˙40 ± 2ºC ˙60 ± 5ºC | |
時間:1-9小時 | ˙1小時 ˙2小時 ˙3小時 | |
次數:2-4次 | ˙1次 ˙2次 ˙3次 | |
濃縮 | 是 | 最多6倍濃縮 |
否 | ||
分離 | 樹脂:非極性共聚物苯乙烯-二乙烯基苯吸附樹脂、非離子交聯聚合吸附樹脂、聚苯乙烯二乙烯基苯共聚物樹脂或SiO 2 | ˙HP20 ˙LX-20 ˙XAD1180N ˙矽膠 |
分離方法 | ˙加載 ˙結合 ˙攪拌 | |
沖提 | 沖提液:PI約為2.1-5.4的溶劑 | ˙己烷與乙酸乙酯 ˙乙醇與乙酸乙酯 ˙丙酮與乙酸乙酯 ˙丙酮與異丙醇 |
可收集使用本文公開之任何沖提溶液所沖提出的級分,其為含有具有所需生物活性(例如,促進傷口癒合)的植物化學成分(例如,三裂鼠尾草素)的到手香萃取物。
II.
包含到手香(
PA
)萃取物的醫藥組合物
透過本文公開之任何方法製備的到手香(PA)萃取物可與一醫藥上可接受的載體(賦形劑)混合以形成用於本文公開之用於治療的醫藥組合物。「可接受的」係指載體必須與組合物的活性成分相容(且較佳地,能夠穩定活性成分)且對待治療的個體無害。醫藥上可接受的賦形劑(載體),包括本領域熟知的緩衝液。參閱,例如,Remington: The Science and Practice of Pharmacy,第20版(2000年) Lippincott Williams與Wilkins編輯,K. E. Hoover。
本方法中使用的醫藥組合物可包含在凍乾製劑或水溶液形式中的醫藥上可接受的載體、賦形劑,或穩定劑。(Remington: The Science and Practice of Pharmacy,第20版(2000年) Lippincott Williams與Wilkins編輯,K. E. Hoover)。可接受的載體、賦形劑,或穩定劑在使用的劑量及濃度下對接受者無毒,且可包含緩衝劑,例如磷酸鹽、檸檬酸鹽,以及其他有機酸;抗氧化劑,包括抗壞血酸以及甲硫胺酸;防腐劑(例如,十八烷基二甲基芐基氯化銨;六甲銨氯化物;苯扎氯銨、芐索氯銨;苯酚、丁醇或苯甲醇;對羥基苯甲酸烷基酯,例如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯;鄰苯二酚;間苯二酚;環己醇;3-戊醇;以及間甲酚);低分子量(少於約10個殘基)多肽;蛋白質,例如血清白蛋白、明膠,或免疫球蛋白;親水性聚合物,例如聚乙烯吡咯烷酮;胺基酸,例如甘胺酸、麩醯胺酸、天門冬醯胺、組胺酸、精胺酸,或離胺酸;單醣、二糖,以及其他碳水化合物,包括葡萄糖、甘露糖,或葡聚醣;螯合劑,例如EDTA;糖類,例如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖,或山梨糖醇;形成鹽類的反離子,例如鈉;金屬複合物(例如,鋅-蛋白質錯合物);及/或非離子介面活性劑,例如TWEEN
TM、PLURONIC
TM或聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)。
用於體內給藥的醫藥組合物必須是無菌的。這很容易透過,例如,以無菌過濾膜過濾來實現。治療組合物通常放置在具有一無菌接入端口的容器中,例如,具有可被皮下注射針刺穿的塞子的靜脈注射溶液袋或小瓶。
本文所述之醫藥組合物可為用於口服、腸胃外或直腸給藥或局部給藥的單位劑型,例如,片劑、丸劑、膠囊劑、散劑、顆粒劑、溶液劑,或混懸劑,或栓劑。
為了製備固體組合物,例如片劑,主要活性成分可與一藥物載體混合,例如,常規的壓片成分,例如玉米澱粉、乳糖、蔗糖、山梨糖醇、滑石、硬脂酸、硬脂酸鎂、磷酸二鈣或樹膠,以及其他藥物稀釋劑,例如水,以形成一固體預製劑組合物,其含有本發明化合物的均勻混合物,或其無毒醫藥上可接受的鹽類。當指稱這些預製劑組合物為均質時,其係指活性成分均勻地分散在整個組合物中,使得該組合物可容易地細分為同樣有效的單位劑型,例如片劑、丸劑,以及膠囊。然後將該固體預製劑組合物細分為上述類型的單位劑型,其含有0.1至約500 mg的本發明之活性成分。新穎組合物的片劑或丸劑可被包覆或以其他方式複合以提供具有延長作用之優點的劑型。例如,片劑或丸劑可包含一內部劑型以及一外部劑型成分,後者在前者之外為包封形式。這兩種成分可透過一腸溶層隔開,腸溶層係用於抵抗在胃中的崩解,並允許該內部成分完整地進入十二指腸或延遲釋放。多種材料可用於此類腸溶層或包衣,此類材料包括多種聚合酸以及聚合酸與例如紫膠、鯨蠟醇,以及醋酸纖維素等材料的混合物。
合適的介面活性劑特別是包括非離子試劑,例如聚氧乙烯山梨聚醣(例如,Tween
TM20、40、60、80或85)以及其他山梨聚醣(例如,Span
TM20、40、60、80或85)。具有介面活性劑的組合物將方便地包含介於0.05及5%之間的介面活性劑,並可介於0.1及2.5%之間。可理解的是,如果需要,可添加其他成分,例如甘露醇或其他醫藥上可接受的載體。
於某些具體實施例中,本文公開之包含到手香萃取物的醫藥組合物可為局部製劑,其可用於促進傷口癒合(例如,糖尿病患者的傷口癒合)。這種局部製劑可包含約0.0001%至約0.5%(w/w)含量的三裂鼠尾草素,以及可選擇地包含積雪草苷,其含量可為約0.05%至約5%(w/w)。於某些具體實施例中,積雪草苷可能包含於積雪草(
Centella asiatica)萃取物中,或兩者的含量為約0.1-30%(w/w)。參閱,例如,美國專利第10,758,584號,其相關公開內容透過引用併入本文提及之標的及目的。
局部製劑還可包含一種或多種載體或賦形劑,包括一種或多種增黏劑(例如,約1.0-10%)、一種或多種軟膏基質(例如,一種或多種乳膏基質),其範圍可從約5%至30%、一種或多種抗微生物防腐劑(例如,按重量計約0.005-0.2%)、一種或多種乳化劑(按重量計約0.5-10%)或其組合。這些組成分可溶解或分散在合適的溶劑中。
局部製劑還包含一種或多種載體及賦形劑,包括增黏劑、軟膏基質(例如乳膏基質)、抗微生物防腐劑、乳化劑,及/或溶劑。
「增黏劑」係用於使一製劑增加稠度的試劑。示例性增黏劑可包括,例如,鯨蠟硬脂醇、膽固醇、硬脂醇、氯甲酚、白蠟、硬脂酸、鯨蠟醇,或其組合。增黏劑可以約1.0-10%(w/w)的濃度存在於局部製劑中。例如,該局部製劑可包含約1-1.5%、1.5-2%、2-2.5%、2.5-3%、3-3.5%、3.5-4%、4-4.5%、4.5-5%、5-5.5%、5.5-6%、6-6.5%、6.5-7%、7-7.5%、7.5-8%、8-8.5%、8.5-9%、9-9.5%,或9.5-10%(w/w)的增黏劑。或者,該局部製劑可包含約1-5%、2.5-7.5%或5-10%(w/w)的增黏劑。
「軟膏基質」可為可摻入活性劑的任何半固體製劑或載體。示例性軟膏基質包括,但不限於,油性軟膏基質(例如,白凡士林或白色軟膏)、吸收性軟膏基質(例如,親水性凡士林、無水羊毛脂、Aquabase
TM、Aquaphor®,以及Polysorb®)、水/油乳液軟膏基質(例如,冷霜、含水羊毛脂、玫瑰水軟膏、Hydrocream
TM、Eucerin®,以及Nivea®)、油/水乳液軟膏基質(例如,親水性軟膏、Dermabase
TM、Velvachol®,以及Unibase®),以及水混溶性軟膏基質(例如,聚乙二醇(PEG)軟膏以及Polybase
TM)。軟膏基質可為藥理學惰性的,但可截留水分以提供潤膚保護膜。於一特定具體實施例中,軟膏基質可為任何凡士林化合物(例如,凡士林、白凡士林、白軟石蠟、液體凡士林、液體石蠟)。於另一特定具體實施例中,軟膏基質為白凡士林(CAS號8009-03-8)。軟膏基質可以約5-30%(w/w),例如10-30%(w/w)的濃度存在於局部製劑中。例如,局部製劑可包含約5-25%、5-20%、5-15%、5-15%、10-15%、15-20%、20-25%,或25-30%(w/w)的軟膏基質。具體而言,局部製劑可包含約5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29,或30%(w/w)的軟膏基質。
於某些具體實施例中,本文所述之「軟膏基質」包含少於20%的水及揮發物,以及多於50%的烴、蠟,或多元醇作為載體。於某些具體實施例中,本文所述之「軟膏基質」為「乳膏基質」,其含有超過20%的水及揮發物及/或通常含有低於50%的烴、蠟,或多元醇作為藥物物質的載體。乳膏基質可為包含一親脂相以及一水相的多相製劑。於某些情況下,乳膏基質為一親脂乳膏基質,其具有一作為連續相的親油相。這種乳膏基質通常含有油包水乳化劑,例如羊毛醇、脫水山梨糖醇酯,以及甘油單酯。於其他情況下,乳膏基質為一親水性乳膏基質,其具有一作為連續相的水相。這種乳膏基質通常包含水包油型乳化劑,例如鈉皂或三乙醇胺皂、硫酸化脂肪醇、聚山梨醇酯以及聚氧基脂肪酸以及脂肪醇酯,如果需要,其可與油包水型乳化劑組合。
「抗微生物防腐劑」可為能夠破壞微生物、防止微生物繁殖或生長,或防止微生物致病作用的任何化合物。示例性抗微生物防腐劑包括,但不限於,一對羥基苯甲酸酯化合物(對羥基苯甲酸酯;例如,對羥基苯甲酸酯、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯、對羥基苯甲酸庚酯、對羥基苯甲酸芐酯、對羥基苯甲酸異丁酯、對羥基苯甲酸異丙酯、對羥基苯甲酸芐酯,或其鈉鹽)、苯扎氯銨、芐索氯銨、苯甲醇、硼酸、溴硝醇、溴化十六基三甲銨、氯化十六烷基吡啶、氯己定、氯丁醇、氯甲酚、氯二甲酚、甲酚、乙醇、甘油、海克替啶、咪脲、苯酚、苯氧乙醇、苯乙醇、硝酸苯汞、丙二醇,以及硫柳汞。抗微生物防腐劑可以約0.005-0.2%,例如,約0.01-0.2%(w/w)的濃度存在於局部製劑中。例如,局部製劑可包含約0.005-0.01%、0.01-0.05%、0.05-0.1%、0.1-0.15%,或0.15-0.2%(w/w)的抗微生物防腐劑。特定而言,局部製劑可包含約0.005、0.006、0.007、0.008、0.009、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.11、0.12、0.13、0.14、0.15、0.16、0.17、0.18、0.19,或0.2%(w/w)的抗菌防腐劑。
「乳化劑」為一種化合物或物質,其作為兩種或多種通常不混溶(不可混合或不可摻合)的液體的混合物的穩定劑。示例性乳化劑可包括,但不限於,天然乳化劑(例如,阿拉伯膠、瓊脂、海藻酸、海藻酸鈉、黃蓍膠、軟骨素、膽固醇、黃原膠、果膠、明膠、蛋黃、酪蛋白、羊毛脂肪、膽固醇、蠟,以及卵磷脂)、膠體黏土(例如,膨潤土[矽酸鋁]以及Veegum[矽酸鋁鎂])、長鏈胺基酸衍生物、高分子量醇(例如,硬脂醇、鯨蠟醇、油醇、三乙酸甘油酯單硬脂酸酯、乙二醇二硬脂酸酯、甘油單硬脂酸酯、丙二醇單硬脂酸酯,以及聚乙烯醇)、卡波姆(例如,羧基聚亞甲基、聚丙烯酸、丙烯酸聚合物,以及羧基乙烯基聚合物)、角叉菜膠、纖維素衍生物(例如,羧甲基纖維素鈉、粉狀纖維素、羥甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素,以及甲基纖維素)、山梨糖醇脂肪酸酯(例如,聚氧乙烯脫水山梨糖醇單月桂酸酯[Tween® 20]、聚氧乙烯脫水山梨糖醇[Tween® 60]、聚氧乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯[Tween® 80]、山梨糖醇單棕櫚酸酯[Span® 40]、山梨糖醇單硬脂酸酯[Span® 60]、山梨糖醇三硬脂酸酯[Span® 65]、單油酸甘油酯,以及山梨糖醇單油酸酯[Span® 80])、聚氧乙烯酯(例如,聚氧乙烯單硬脂酸酯[Myrj® 45]、聚氧乙烯氫化蓖麻油、聚乙氧基化蓖麻油、聚甲醛硬脂酸酯,以及Solutol)、蔗醣脂肪酸酯、聚乙二醇脂肪酸酯(例如Cremophor®)、聚氧乙烯醚(例如,聚氧乙烯月桂基醚[Brij®])以及聚(乙烯基吡咯烷酮)、二甘醇單月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯、油酸鈉、油酸鉀、油酸乙酯、油酸、月桂酸乙酯、月桂基硫酸鈉、普朗尼克(Pluronic)F 68、泊洛沙姆(Poloxamer)188、溴化西曲銨、氯化十六烷基吡啶、苯扎氯銨,以及多庫酯鈉,及/或其組合。乳化劑可以約0.5-10%(w/w),例如0.5-6%(w/w)的濃度存在於局部製劑中。例如,該局部製劑可包含約0.5-1%、1-1.5%、1.5-2%、2-2.5%、2.5-3%、3-3.5%、3.5-4%、4-4.5%、4.5-5%、5-5.5%、5.5-6%、5-10%、6-10%,或8-10%(w/w)的乳化劑。具體而言,該局部製劑可包含約0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5 或10%(w/w)的乳化劑。
本文公開之局部製劑還可包含一種或多種溶劑(例如,非水溶劑或水)。示例性的非水溶劑可包括,但不限於,任何已知的溶劑,包括丙二醇、乙二醇,及其混合物。非水溶劑可以約2-65%(w/w)的濃度存在於局部製劑中。例如,該局部製劑可包含約2-15%、15-30%、30-45%,或45-65%(w/w)的溶劑。於某些具體實施例中,本發明的局部製劑還可包含水。
於某些具體實施例中,該局部製劑還可包含一種或多種潤膚劑、香料,或顏料。局部配方也可與傷口敷料結合使用(例如,帶黏合劑的繃帶、膏藥貼片等)(例如,環己烷、正己烷、正癸烷、異辛烷、辛烷、丁醚、四氯化碳、三乙胺、異丙醚、甲苯、對二甲苯、叔丁基甲基醚、苯、芐基醚、二氯甲烷、氯化甲烷、氯仿、二氯乙烷、二氯化乙烯、1-丁醇、異丁醇、四氫呋喃、乙酸乙酯、1-丙醇、2-丙醇、乙酸甲酯、環己酮、甲乙酮(MEK)、硝基苯、芐腈、1,4-二噁烷,或對二噁烷)。
III
. 包含到手香( PA )萃取物的醫藥組合物之治療應用
包含透過本文公開之方法製備的有效量的到手香萃取物的任何醫藥組合物(例如,局部製劑)可用於在需要治療的個體中治療目標疾病或病症,例如,促進傷口癒合,透過合適的途徑進行治療,例如靜脈內給藥,例如,作為推注或透過在一段時間內連續輸注、透過肌肉內、腹膜內、腦脊髓內、皮下、關節內、滑膜內、鞘內、口服、吸入或局部途徑。
如本文所用,「有效量」係指單獨或與一種或多種其他活性劑組合賦予該個體治療效果所需的每種活性劑的量。確定一定量的到手香萃取物是否達到治療效果對於本領域技術人員而言是顯而易見的。如本領域技術人員所知,有效量取決於所治療的具體病症、病症的嚴重程度、包括年齡、身體狀況、大小、性別,以及體重在內的個體患者參數、治療的持續時間、同步治療的性質(如果有的話)、具體的給藥途徑,以及健康從業者知識及專長範圍內等的類似因素。這些因素對於本領域普通技術人員而言是熟知的並可透過不超過常規實驗來解決。通常較佳使用單個組成分或其組合的最大劑量,亦即根據合理的醫學判斷的最高安全劑量。
經驗考量,例如半衰期,通常有助於確定劑量。例如,與人類免疫系統相容的抗體,例如,人源化抗體或完全人類抗體,可用於延長到手香萃取物或其中的活性成分的半衰期。通常,但不一定,根據治療及/或抑制及/或改善及/或延遲目標疾病/病症,可在治療過程中確定並調整給藥頻率。
於某些具體實施例中,如本文所公開之局部製劑可在合適的劑量以及治療方案之後施用於傷口部位。所述之方法的劑量及給藥方案將取決於所治療傷口的性質及狀況、患者的年齡及狀況,以及任何先前或同時的治療。於某些情況下,該局部製劑可以每週一次、隔天一次、每天一次、每天兩次、每天三次,或每天四次施用一段合適的時間。當傷口恢復時可終止治療。必要時,例如,若傷口復發,可恢復治療。
術語「傷口」係指由切割、打擊,或其他衝擊(例如,由例如皮膚病等醫學狀況引起)引起的對活組織的損傷,通常是其中皮膚被切割或破裂。傷口可能與醫療狀況有關,例如,皮膚病。術語「傷口癒合」表示替換失活或缺失的細胞結構及/或組織層的動態且複雜的過程。術語「傷口癒合的促進」或「促進傷口癒合」表示誘導失去活力或缺失的細胞結構及/或組織層的替換程度或速率增加。作為一實例,促進傷口癒合可透過潰瘍部分或完全閉合或潰瘍癒合率的增加來表示(包括,但不限於,相較於以安慰劑治療的對照潰瘍,潰瘍大小、面積或嚴重程度的更快速變化、潰瘍更快閉合,及/或潰瘍大小、面積或嚴重程度相對於基線的百分比變化增加)。
以該局部製劑治療的對象可為人類或非人類的哺乳動物。於某些具體實施例中,該個體為一帶有一開放性傷口的人類患者,開放性傷口係指對活組織(例如,皮膚)造成破壞的損傷或損害,其導致生物結構的正常連續性中斷。開放性傷口可包括,但不限於,擦傷、切口、裂傷、刺傷、撕脫、割傷,或其他類似傷害。
於其他具體實施例中,該個體為帶有慢性傷口的人類患者,該慢性傷口可為對活組織(例如,皮膚)的損傷或損害,導致生物結構的正常連續性受到破壞,且在一系列有序的階段中及/或在可預測的時間內無法癒合。慢性傷口可包括,但不限於:手術傷口、外傷性傷口、壓瘡、靜脈性潰瘍,或糖尿病性潰瘍。於其他實施例中,慢性傷口可能與疾病或病症相關,例如癌症、燒傷、褥瘡、皮膚病症,如異位性皮膚炎。
於一實施例中,該個體為患有與糖尿病(例如,第I型或第II型)相關的足部潰瘍的人類患者。糖尿病(Diabetes mellitus)(亦稱為糖尿病(diabetes))為一群代謝性疾病,其導致長時間處於高血糖濃度。糖尿病可能是由於胰腺無法產生足夠的胰島素或身體細胞對所產生的胰島素沒有正確的反應所致。糖尿病的三種主要類型為第I型(亦稱為「胰島素依賴型糖尿病」(insulin-dependent diabetes mellitus,IDDM)或「青少年糖尿病」;由胰腺無法產生足夠的胰島素所引起)、第II型(亦稱為「非胰島素依賴型糖尿病」(non-insulin-dependent diabetes mellitus,NIDDM)或「成人發病型糖尿病」;由細胞未能正確對胰島素產生反應所引起),以及妊娠性糖尿病(在懷孕期間觀察到高血糖而過往並無糖尿病史)。在糖尿病患者中觀察到許多嚴重併發症,包括,但不限於,慢性傷口,例如糖尿病足潰瘍(亦稱為糖尿病潰瘍)。
於某些具體實施例中,待透過本文所述方法治療的個體患有嚴重傷口,例如,具有面積大於2 cm
2(例如,3 cm
2、4 cm
2,或5 cm
2)的潰瘍。於某些實施例中,該個體患有一種或多種足底潰瘍。
無需進一步詳述,相信本領域技術人員可基於以上描述充分利用本發明。因此,以下具體實施例應被解釋為僅為說明性的,而不以任何方式限制本發明的其他部分。出於本文所引用之目的或主題,本文引用的所有出版物均以引用方式併入本文。
實施例
1
:示例性到手香製備方法
A
萃取時,將1公斤的到手香地上部在10-20公升的乙醇中於60 ± 5℃下攪拌90分鐘。重複該步驟兩次,過濾所得混合物並使用旋轉蒸發濃縮,直到濃縮萃取物的體積為原始體積的約2.5%-4%。將濃縮溶液以水稀釋並加載至填充有 DIAION® HP-20樹脂(一種非極性共聚物苯乙烯-二乙烯基苯吸附樹脂)的管柱上。依序以水、50%乙醇、乙醇清洗該管柱。然後以含有乙醇及乙酸乙酯的沖提溶液以大約1:1的比例(v/v)沖提該管柱。收集並乾燥沖提部分以獲得到手香萃取物(產率:1.0%)。
實施例
2
:示例性到手香製備方法
B
萃取時,將1公斤的到手香地上部在10-20公升的乙醇中於60 ± 5℃下攪拌90分鐘。重複該步驟兩次,過濾所得混合物並使用旋轉蒸發濃縮,直到濃縮萃取物的體積為原始體積的約2.5%-4%。將濃縮溶液以水稀釋,然後與DIAION® HP-20樹脂(一種非極性共聚物苯乙烯-二乙烯基苯吸附樹脂)混合,然後充填至管柱上。依序以水、50%乙醇、乙醇清洗該管柱。然後以含有體積比約為1∶1的乙醇及乙酸乙酯的沖提溶液沖提該固體部分。收集並乾燥沖提部分以獲得到手香萃取物(產率:1.0%)
實施例
3
:示例性到手香製備方法
C
萃取時,將1公斤的到手香地上部在10-20公升的乙醇中於60 ± 5℃下攪拌90分鐘。重複該步驟兩次,過濾所得混合物並使用旋轉蒸發濃縮,直到濃縮萃取物的體積為原始體積的約2.5%-4%。將濃縮溶液以水稀釋,然後加載至填充有DIAION® HP-20樹脂(一種非極性共聚物苯乙烯-二乙烯基苯吸附樹脂)的管柱上。依序以水、50%乙醇、乙醇清洗該管柱。然後以含有體積比約為1:1的丙酮及乙酸乙酯的沖提溶液沖提該管柱。收集並乾燥沖提部分以產生到手香萃取物(產率:1.1%)。
實施例
4
:示例性到手香製備方法
D
萃取時,將1公斤的到手香地上部在10-20公升的乙醇中於60 ± 5℃下攪拌90分鐘。重複該步驟兩次,過濾所得混合物並使用旋轉蒸發濃縮,直到濃縮萃取物的體積為原始體積的約2.5%-4%。將濃縮溶液以水稀釋,然後與DIAION® HP-20樹脂(一種非極性共聚物苯乙烯-二乙烯基苯吸附樹脂)混合,然後充填至一管柱上。依序以水、50%乙醇、乙醇清洗該管柱,然後以體積比約為1:1的丙酮及乙酸乙酯的沖提溶液沖提該管柱。收集並乾燥沖提部分以產生到手香萃取物(產率:1.1%)。
實施例
5
:示例性到手香製備方法
E
萃取時,將1公斤的到手香地上部在10-20公升的乙醇中於60 ± 5℃下攪拌90分鐘。重複該步驟兩次,過濾所得混合物並使用旋轉蒸發濃縮,直到濃縮萃取物的體積為原始體積的約30-70%。在不稀釋的情況下,將濃縮溶液加載至填充有DIAION® HP-20樹脂(一種非極性共聚物苯乙烯-二乙烯基苯吸附樹脂)的管柱上。以含有體積比約為1∶1的乙醇及乙酸乙酯的沖提溶液沖提該管柱。收集並乾燥沖提部分以產生到手香萃取物(產率:1.2%)。
實施例
6
:示例性到手香製備方法
F
萃取時,將1公斤的到手香地上部在10-20公升的乙醇中於室溫(例如,約20-25℃)下攪拌24小時。重複該步驟兩次,過濾所得混合物並使用旋轉蒸發濃縮,直到濃縮萃取物的體積為原始體積的約2.5%-4%。將濃縮溶液以水稀釋,然後加載至填充有DIAION® HP-20樹脂(一種非極性共聚物苯乙烯-二乙烯基苯吸附樹脂)的管柱上。依序以水、50%乙醇、乙醇清洗該管柱。之後,以含有體積比約為1:1的乙醇及乙酸乙酯的沖提溶液沖提該管柱。收集並乾燥沖提部分以產生到手香萃取物(產率:0.4%)。
實施例
7
:示例性到手香製備方法
G
萃取時,將1公斤的到手香地上部在10-20公升的乙醇中於60 ± 5℃下攪拌90分鐘。重複該步驟兩次,過濾所得混合物並使用真空濃縮至乾燥。然後將乾燥的到手香萃取物加載至填充有矽膠的管柱上。以己烷清洗該管柱。然後,以含有體積比約為1∶1的己烷及乙酸乙酯的沖提溶液沖提該管柱。收集並乾燥沖提部分以產生到手香萃取物(產率:1.4%)。
實施例
8
:示例性到手香製備方法
H
萃取時,將1公斤的到手香地上部在10-20公升的乙醇中於60 ± 5℃下攪拌90分鐘。重複該步驟兩次,過濾所得混合物並使用真空濃縮至乾燥。然後將乾燥的到手香萃取物加載至填充有HP-20樹脂(一種非極性共聚物苯乙烯-二乙烯基苯吸附樹脂)的管柱上。以己烷清洗該管柱。然後,以體積比約為1∶1的己烷及乙酸乙酯的沖提溶液沖提該管柱。收集並乾燥沖提部分以產生到手香萃取物(產率:1.0%)。
實施例
9
:示例性到手香製備過程
I
萃取時,將1公斤的到手香地上部在10-20公升的乙醇中於60 ± 5℃下攪拌90分鐘。重複該步驟兩次,過濾所得混合物並使用旋轉蒸發濃縮,直到濃縮萃取物的體積為原始體積的約30-70%。無需稀釋,然後將濃縮溶液加載至填充有LX-20樹脂(一種非離子、疏水性聚苯乙烯聚合物,與二乙烯基苯交聯)的管柱上。以含有體積比約為1∶1的乙醇及乙酸乙酯的沖提溶液沖提該管柱。收集並乾燥沖提部分以產生到手香萃取物(產率:1.2%)。
實施例
10
:示例性到手香製備方法
J
萃取時,將1公斤的到手香地上部在10-20公升的乙醇中於60 ± 5℃下攪拌90分鐘。重複該步驟兩次,過濾所得混合物並使用旋轉蒸發濃縮,直到濃縮萃取物的體積為原始體積的約30-70%。無需稀釋,然後將濃縮溶液加載至填充有XAD1180N樹脂(聚苯乙烯二乙烯基苯共聚物樹脂)的管柱上。以含有體積比約為1∶1的乙醇及乙酸乙酯的沖提溶液沖提該管柱。收集並乾燥沖提部分以獲得到手香萃取物(產率:1.1%)。
實施例
11
:示例性到手香製備方法
K
萃取時,將1公斤的到手香地上部在10-20公升的乙醇中於60 ± 5℃下攪拌90-180分鐘。過濾所得混合物並使用旋轉蒸發濃縮,直到濃縮萃取物的體積為原始體積的約30-70%。將濃縮溶液與DIAION® HP-20樹脂(一種非極性共聚物苯乙烯-二乙烯基苯吸附樹脂)混合,然後充填至一管柱中。以含有體積比約為1∶1的乙醇及乙酸乙酯的沖提溶液沖提該管柱。收集並乾燥沖提部分以產生到手香萃取物(產率:1.0%)。
實施例
12
:示例性到手香製備方法
L
萃取時,將1公斤的到手香地上部在10-20公升的乙醇中於60 ± 5℃下攪拌90分鐘。過濾所得混合物並使用真空濃縮,直到濃縮萃取物的體積為原始體積的約30%-70%。然後將濃縮溶液加載至填充有DIAION® HP-20樹脂(一種非極性共聚物苯乙烯-二乙烯基苯吸附樹脂)的管柱上。以含有體積比約為1∶1的乙醇及乙酸乙酯的沖提溶液沖提該管柱。收集並乾燥沖提部分以獲得到手香萃取物(產率:1.3%)。
實施例
13
:到手香萃取物的特徵分析
以高效液相色層分析法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)分析由上述實施例製備的到手香萃取物中所含的主要植物化學物質。結果如下
表 3所示。
由方法E、I,以及J製備的萃取物具有相似的植物化學成分,表示不同的疏水性樹脂會得到相似的到手香萃取物。
由方法B及D製備的萃取物具有相似的植物化學成分,表示使用50%丙酮/50%乙酸乙酯以及50%乙醇/50%乙酸乙酯的沖提溶液會得到相似的到手香萃取物。
此外,由方法E及K製備的萃取物具有相似的植物化學成分,而方法B、D、E,及L使用不同的色層分析法分離方法所製備的萃取物也具有相似的植物化學成分。
特徵分析結果還顯示,使用高萃取溫度(例如,60℃ ± 5℃)可提高產量並縮短萃取時間。此外,相對於高度濃縮(例如,體積減少至約原始體積的2.5-4%),萃取後低度濃縮(例如,體積減少至約原始體積的30-70%)可顯著減少色層分析的分離時間,進而大幅減少製備萃取物的總時間。例如,相對於方法F(約 57小時,包括48小時萃取以及9小時濃縮),方法E在色層分析分離步驟之前的總製備時間(約6小時,包括3小時萃取、3小時濃縮)顯著減少。相較於方法F,方法E還具有縮短的色層分析分離步驟(6小時相對於16小時)。
此外,相較於以管柱形式進行色層分析分離程序,透過與樹脂混合及過濾步驟所進行的色層分析分離程序會產生具有較高活性成分濃度的萃取物(比較方法A與方法B,或比較方法C與方法D)。
表 3. 到手香萃取物的特徵描述
*
×100%
方法 | * 產率% | 成分(% ) | |||||
三裂鼠尾草素 | 薊黃素 | 迷迭香酸 | 香旱芹酚 | ||||
A | 1.0% | 0.3 | 0.02 | 0.01 | 0.1 | ||
B | 1.0% | 0.3 | 0.2 | 0.03 | 0.5 | ||
C | 1.1% | 0.2 | 0.01 | 0.01 | 0.04 | ||
D | 1.1% | 0.2 | 0.2 | 0.02 | 0.4 | ||
E | 1.2% | 0.2 | 0.2 | 0.1-0.4 | 0.8-1.2 | ||
F | 0.4% | 0.2 | 0.01 | N.D. | 0.05 | ||
G | 1.4% | 0.3 | 0.7 | N.D. | 6.7 | ||
H | 1.0% | 0.4 | 0.9 | 1.1 | 0.1 | ||
I | 1.2% | 0.3 | 0.2 | 0.1 | 1.6 | ||
J | 1.1% | 0.2 | 0.2 | 0.1 | 1.5 | ||
K | 1.0% | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 1.4-1.6 | ||
L | 1.3% | 0.3 | 0.3 | 0.04 | 1.1 | ||
實施例
14.
用於生產到手香萃取物的其他示例性製備方法
本實施例提供用於生產到手香萃取物的額外示例性製備方法,所有這些方法都在本發明之範圍內。
在這些示例性製備過程中,使用極性指數為4.3-6.6的溶劑於25-60℃下萃取到手香的地上部1-3小時。萃取步驟重複1-3次。將所得粗萃取物濃縮6倍或50倍。或者,不濃縮所得之粗萃取物。然後使濃縮的或未濃縮的萃取物與合適的疏水性交互作用色層分析樹脂(例如,HP20、LX-20或XAD1180N)接觸,例如,加載到包含樹脂的管柱上,或與樹脂混合以結合(於某些情況下攪拌混合物)。然後使用極性指數為4.3-5.4的沖提溶液將萃取物從樹脂上沖提下來。
以下
表 4總結示例性製備過程中每個步驟的試劑及條件。
表 5總結這些製備過程的結果。透過示例性製備方法製備的到手香萃取物含有約0.04%-0.2%的三裂鼠尾草素、約0.1%-0.3%的薊黃素、約0-0.3%的迷迭香酸,以及約0.3%-1.7%的香旱芹酚。
其他實施例
本說明書中公開之所有特徵可以任意的組合進行組合。本說明書中公開之每個特徵可被用於相同、等效或類似目的之替代特徵替換。因此,除非另有明確說明,否則所公開之每個特徵僅為等價或類似特徵的通用系列之示例。
透過以上描述,本領域技術人員可以很容易地確定本發明之本質特徵,並且在不脫離本發明之精神及範圍的情況下,可對本發明進行各種變化及修改,以使其適應各種用途及條件。因此,其他實施例也在申請專利範圍內。
等同
儘管本文已經描述並說明數個創造性的實施例,但本領域普通技術人員將容易地設想用於執行功能及/或獲得結果及/或本文所描述之一個或多個優點的各種其他手段及/或結構,且每個這樣的變化及/或修改被認為是在本文所描述之發明實施例的範圍內。更普通的是,本領域技術人員將容易理解,本文所述之所有參數、尺寸、材料及配置皆為示例性的,且實際參數、尺寸、材料及/或配置將取決於使用本發明教導之具體應用或應用。本領域技術人員將認識到或能夠僅使用常規實驗來確定本文所描述之特定發明實施例的許多等效物。因此,應當理解的是,前述實施例僅作為示例呈現,且在所附申請專利範圍及其等同物的範圍內,可以不同於具體描述及請求保護的方式實施本發明實施例。本發明之創造性實施例係針對本文所述之每個單獨的特徵、系統、物品、材料、套組及/或方法。此外,若此類特徵、系統、物品、材料、套組及/或方法不相互矛盾的話,則兩個或多個此類特徵、系統、物品、材料、套組及/或方法的任何組合包含於本說明書中的發明範圍。
如本文所定義及使用之所有定義應理解為超越字典定義、透過引用併入之文件中的定義,及/或所定義之術語的普通含義。
本文公開之所有參考文獻、專利以及專利申請均透過引用的方式併入每一個所引用的主題,於某些情況下,該主題可涵蓋整個文件。
在說明書及申請專利範圍中使用的不定冠詞「一」以及「一個」,除非明確指出相反意思,否則應理解為「至少一個」。
如本文在說明書及申請專利範圍中使用之短語「及/或」,應理解為表示如此結合的元素中的「一個或兩個」,亦即,於某些情況下結合存在而於其他情況下分離存在的元素。以「及/或」列出的多個元素應該以相同的方式解釋,亦即,「一個或多個」這樣結合的元素。除了由「及/或」子句具體標識的元素之外,可以可選擇地存於其他元素,無論是否與那些具體標識的元素相關或不相關。因此,作為非限制性示例,當與例如「包括」之類的開放式語言結合使用時,於一具體實施例中對「A及/或B」的引用可以僅指A(可選擇地包括除了B以外的元素);於另一具體實施例中,僅指B(可選擇地包括除了A以外的元素);於又一具體實施例中,指A及B兩者(可選擇地包括其他元素);等等。
術語「約」或「大約」係指在由本領域普通技術人員確定的特定數值的可接受誤差範圍內,這將部分取決於如何測量或確定該數值,亦即,該測量系統的局限性。例如,根據本領域的實際運作,「約」可表示在可接受的標準偏差內。或者,「約」可表示至多±20%,較佳至多±10%,更佳至多±5%,且更佳至多±1%的給定數值的範圍。或者,特別是關於生物系統或過程,該術語可表示於一個數值的一數量級內,較佳在2倍內。於說明書及申請專利範圍中描述特定數值的情況下,除非另有說明,否則術語「約」是隱含的,且在本文中代表在特定數值的可接受誤差範圍內。
如本文在說明書及申請專利範圍中所使用的,「或」應被理解為與如上所定義之「及/或」具有相同的含義。例如,當分隔一列表中的項目時,「或」或「及/或」應被解釋為具有包容性,亦即包括至少一個,但也包括數個元素或一元素列表中的超過一個,以及可選擇地,其他未列出的項目。只有在明確指出相反的術語時,例如「僅一個」或「確切為一個」,或在申請專利範圍中使用時,「由...組成」將指包含數個元素或一元素列表中的確切一個元素。一般而言,當前面帶有排他性術語,例如「任一」、「其中一個」、「只有一個」或「確切為一個」時,本文所用之術語「或」僅應解釋為表示排他性的替代方案(亦即「一個或另一個,但不是兩者」)。申請專利範圍中使用之「基本上由……組成」,應具有專利法領域所使用之一般含義。
如本文在說明書及申請專利範圍中所使用的,短語「至少一個」在提及一種或多種元素的列表時,應當理解為表示選自該元素列表中的任何一種或多種元素的至少一種元素,但不一定包括該元素列表中具體列出的每個元素中的至少一個,且不排除該元素列表中元素的任何組合。該定義還允許除了在短語「至少一個」所指的該元素列表中具體標識的元素之外的元素可以可選擇地存在,無論是否與那些具體標識的元素相關或不相關。因此,作為非限制性示例,「A及B中的至少一個」(或等效地,「A或B中的至少一個」,或等效地「A及/或B中的至少一個」),於一具體實施例中,可以指至少一種,可選擇地包括多於一種的A,不存在B(且可選擇地包括除了B之外的元素);於另一具體實施例中,可以指至少一個,可選擇地包括多於一個的B,不存在A(且可選擇地包括除了A之外的元素);於又一具體實施例中,可以指至少一種,可選擇地包括多於一種的A,以及至少一種,可選擇地包括多於一種的B(且可選擇地包括其它元素);等等。
還應當理解的是,除非有明確的相反指示,於本文請求保護的任何包括一個以上步驟或動作的方法中,該方法的步驟或動作的順序不一定限於記載該方法的步驟或動作的順序。
無
無
無
Claims (23)
- 一種製備到手香( Plectranthus amboinicus,PA)萃取物的方法,該方法包括: (i)將到手香的地上部與萃取溶液混合以產生第一到手香萃取物,其中該萃取溶液包含極性指數為約2.9至6.6的溶劑; (ii)過濾該第一到手香萃取物以產生第二到手香萃取物; (iii)將該第二到手香萃取物與疏水性交互作用色層分析樹脂接觸,以及 (iv)以沖提溶液沖提該管柱以產生該到手香萃取物,其中該沖提溶液包含極性指數為約2.1至5.4的溶劑。
- 如請求項1之方法,其中步驟(ii)進一步包括濃縮該第一到手香萃取物以產生該第二到手香萃取物,該第二到手香萃取物為一濃縮的到手香萃取物。
- 如請求項1之方法,其中步驟(ii)不包括濃縮該第一到手香萃取物。
- 如請求項1至3中任一項所述之方法,其中該萃取溶液中的溶劑為丙酮、丁基甲基醚、乙醇、乙酸乙酯、異丙醇、甲醇,或其混合物。
- 如請求項4之方法,其中該萃取溶液中的溶劑為乙醇、乙酸乙酯、丙酮、異丙醇,或甲醇。
- 如請求項1至5中任一項所述之方法,其中步驟(i)重複2-4次,可選擇為2次。
- 如請求項1至6中任一項所述之方法,其中步驟(i)在約25-80℃的溫度下進行約1-9小時。
- 如請求項7之方法,其中步驟(i)在約50-80℃的溫度下進行約1-3小時。
- 如請求項1至6中任一項之方法,其中步驟(i)在約20-30℃的溫度下進行約12-48小時。
- 如請求項9之方法,其中步驟(i)在約20-30℃的溫度下進行約12-24小時。
- 如請求項1至10中任一項之方法,其中在步驟(i)中,到手香地上部與該萃取溶液的重量體積比為1:10至1:20(公斤/公升)。
- 如請求項1、2及4至11中任一項之方法,其中在步驟(ii)中,將該第一到手香萃取物濃縮以產生該濃縮的到手香萃取物,且其中該濃縮的到手香萃取物的體積為約該第一到手香萃取物體積的30%至70%。
- 如請求項1、2,以及4至11中任一項之方法,其中在步驟(ii)中,將該第一到手香萃取物濃縮以產生該濃縮的到手香萃取物,且其中該濃縮的到手香萃取物的體積為該第一到手香萃取物的2.5%至4%。
- 如請求項1至13中任一項之方法,其中該疏水性交互作用色層分析樹脂係選自由下列所組成之群組:非極性共聚物苯乙烯-二乙烯基苯吸附樹脂、與二乙烯基苯交聯的聚苯乙烯聚合物、聚苯乙烯二乙烯基苯共聚物樹脂,以及矽膠。
- 如請求項1至14中任一項之方法,其中步驟(iii)透過將該濃縮的到手香萃取物加載至包含該疏水性交互作用色層分析樹脂的管柱上來進行。
- 如請求項1至14中任一項之方法,其中步驟(iii)包括將該濃縮的到手香萃取物與該疏水性交互作用色層分析樹脂混合,以使該濃縮的到手香萃取物中的組成分與該疏水性交互作用色層分析樹脂結合。
- 如請求項16之方法,其中步驟(iii)進一步包括攪拌該濃縮的到手香萃取物與該疏水性交互作用色層分析樹脂的混合物。
- 如請求項1至17中任一項之方法,其中該沖提溶液包含至少兩種溶劑的混合物,該溶劑係選自由下列所組成之群組:丙酮、乙醇、乙酸乙酯、異丙醇,以及己烷。
- 如請求項18之方法,其中該沖提溶液包含體積比為50:50的兩種溶劑。
- 如請求項18或19之方法,其中該沖提溶液包含以下混合物: (a)己烷與乙酸乙酯, (b)乙醇與乙酸乙酯, (c)丙酮與乙酸乙酯,或 (d)丙酮與異丙醇。
- 如請求項1至20中任一項之方法,其中該方法進一步包括,在步驟(iv)之前以及在步驟(iii)之後,以包含乙醇的水溶液清洗該疏水性交互作用色層分析樹脂。
- 一種到手香(PA)萃取物,其透過請求項1至21中任一項所示之方法製備。
- 如請求項22之到手香萃取物,其包含三裂鼠尾草素、薊黃素、迷迭香酸,以及香旱芹酚。
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