TW202313098A - 用於冠狀病毒感染之治療或預防的干擾素相聯抗原結合蛋白 - Google Patents

用於冠狀病毒感染之治療或預防的干擾素相聯抗原結合蛋白 Download PDF

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Abstract

本發明係關於藉由投予一腫瘤壞死因子受體超家族(TNFRSF)促效劑及一干擾素(IFN)之一組合，例如一IFN相聯抗原結合蛋白，諸如一融合IFN之抗體，或其編碼核酸及表現載體，來治療或預防一個體之冠狀病毒感染的方法。本發明亦關於相應醫藥組成物用於治療冠狀病毒感染之用途。

Description

用於冠狀病毒感染之治療或預防的干擾素相聯抗原結合蛋白
發明領域
本發明係關於用於治療或預防個體之冠狀病毒感染的方法。本發明亦關於用於療法中，更特定言之用於治療或預防冠狀病毒感染的新穎干擾素相聯抗原結合蛋白以及編碼該等干擾素相聯抗原結合蛋白的核酸及表現載體。此包括融合干擾素之抗體或其融合干擾素之抗原結合片段，在本文中又稱為「IFA」。本發明亦關於用於療法中，更特定言之用於治療冠狀病毒感染的醫藥組成物，其包含該等干擾素相聯抗原結合蛋白或核酸或表現載體。本發明進一步提供使用該等干擾素相聯抗原結合蛋白、或者核酸或表現載體、或醫藥組成物的治療方法。該等新穎干擾素相聯抗原結合蛋白提供相對於當前技術現狀有益的改進，例如，其可有效地挽救細胞免於冠狀病毒誘發之細胞死亡及/或免於冠狀病毒誘發之細胞病變作用。
發明背景
持續的冠狀病毒疾病2019 (COVID-19)全球大流行係由嚴重急性呼吸道症候群冠狀病毒2(SARS-CoV-2；又稱為2019-nCoV或HCoV-19)引起的。SARS-CoV-2連同2003年鑑別的SARS-CoV-1及2012年鑑別的中東呼吸道症候群冠狀病毒(MERS-CoV)皆屬於冠狀病毒科內之β-冠狀病毒屬(Zhu等人, N Engl J Med 382(8):727-733 (2020)；Jiang等人, Emerg. Microbes Infect. 9, 275-277 (2020)；Jiang等人, Lancet 395, 949 (2020)；Zhou等人, Nature 579, 270-273 (2020)；Zhu等人, N. Engl. J. Med. 382, 727-733 (2020))。SARS-CoV-2係一種包膜病毒，含有約30kb的正義單股RNA基因體，該基因體編碼16種非結構蛋白質(nsp1-16)、4種結構蛋白[棘(S)蛋白、包膜(E)蛋白、膜(M)蛋白及核衣殼(N)蛋白]及8種輔助蛋白(ORF3a、ORF3b、ORF6、ORF7a、ORF7b、ORF8、ORF9b及ORF10)。nsp負責病毒複製，結構蛋白負責病毒粒子形成，且輔助蛋白促進病毒感染，但並非病毒複製所必需的(Yoshimoto, The Protein Journal 39, 198-216 (2020))。
SARS-CoV-2的快速國際擴散與改變病毒適應度之多種突變相關。已記錄由病毒基因體編碼之全部4種結構蛋白中的突變。最重要的突變係在棘蛋白中，該蛋白質藉由與血管收縮素轉化酶2(ACE2)受體接合而介導病毒進入細胞中(Cai等人, Science 369:1586-92 (2020)；Walls等人, Cell 181:281-92. (2020)；Lan等人, Nature 581:215-20 (2020)；Benton等人, Nature 588:327-30 (2020))。在棘蛋白受體結合域(RBD)中出現的突變尤其值得關注，因為其很有可能改變病毒與目標細胞之相互作用的動力學及強度。此等突變亦可影響能夠結合ACE2及阻斷病毒與ACE2之接合之抗體的結合。2020年12月，英國(SARS-CoV-2 VOC202012/01)及南非(501Y.V2)記錄了在棘蛋白中攜帶若干突變的新SARS-CoV-2變異株(World Health Organization. Geneva: World Health Organization; (2020)；Lauring等人, JAMA 325(6):529-31. (2021))。早期的流行病及臨床發現指示，此等變異株在群體中顯示出增加的可傳播性(Davies等人, Estimated transmissibility and severity of novel SARS-CoV-2 Variant of Concern 202012/01 in England. medRxiv. 2021年2月7日)。
干擾素係在感染病毒之細胞中上調的第一批細胞介素且表示在感染早期負責病毒消除之宿主先天免疫系統的關鍵組分。SARS-CoV-2已進化出多種策略來防止干擾素釋放且因此逃避先天性免疫反應並促進病毒複製、傳播及致病(Xia及Shi, Journal of Interferon & Cytokine Research第40卷, 第12期(2020))。經顯示，若干SARS-CoV-2非結構蛋白質可阻斷干擾素路徑，包括nsp1、nsp3、nsp6、nsp13、nsp 14及nsp15。據不同團隊報導，SARS-CoV-2 nsp1係強效IFN-I拮抗劑，其將IFN-I及ISG之表現明顯降低＞95% (Lei等人, Nat Commun 11(1) (2020):3810；Xia等人, Cell Rep 33(1):108234. (2020)；Yuen等人, Emerg Microbes Infect 9(1):1418-1428. (2020))。
SARS-CoV-2 Nsp3，稱為木瓜蛋白酶樣蛋白酶(papain-like protease，PLpro)，藉由直接裂解IRF3或藉由裂解泛素樣蛋白質ISG15並減少磷酸化IRF3，使得IRF3活化及IFN-I產生減少來限制IFN-I產生(Shin等人, Nature 587(7835):657-662 (2020)；Moustaqil等人, Emerg Microbes Infect 10(1):178-195(2021))。
Nsp6減少在IFN-I信號傳導期間STAT1及STAT2之磷酸化。值得注意的是，SARS-CoV-2 nsp6對RIG-I誘導之IFN-I產生及IFN-I刺激之ISG產生所展現的抑制作用要比來自SARS-CoV及MERS-CoV之nsp6所展現的抑制作用高效，由此在IFN-I刺激之短暫複製子系統中引起較高病毒複製(Xia等人, Cell Rep 33(1):108234. (2020))。
解螺旋酶nsp13對IFN-I產生及信號傳導具有較強抑制作用。Nsp13結合至TBK1，引起TBK1之磷酸化減少及IRF3失活。此外，nsp13亦經由抑制STAT1及STAT2活化，使得STAT1滯留於細胞質中及ISRE啟動子之刺激減弱而被鑑別為IFN-I信號傳導之強效拮抗劑(Lei等人, Nat Commun 11(1):3810. (2020)；Xia等人, Cell Rep 33(1):108234 (2020)；Yuen等人, Emerg Microbes Infect 9(1):1418-1428 (2020))。
SARS-CoV-2感染之最常見症狀最初為發熱、乾咳及疲倦。較嚴重的下呼吸道感染會導致較嚴重的症狀，諸如呼吸困難或呼吸短促及胸部疼痛或壓迫。此時，患者可能需要住院且若血液的血氧飽和度位準降低，則其將需要補充氧或呼吸器支持以便緩解症狀。接下來可出現全身發炎及嚴重發病或死亡。
需要用於治療及預防冠狀病毒感染，特別是SARS-CoV-2感染的新穎方法。特定言之，需要用於挽救細胞免於冠狀病毒誘發之細胞死亡及冠狀病毒誘發之細胞病變作用，特別是免於SARS-CoV-2誘發之細胞死亡及SARS-CoV-2誘發之細胞病變作用的方法。
發明概要
在一個態樣中，本發明係關於一種用於治療或預防冠狀病毒感染之腫瘤壞死因子受體超家族(TNFRSF)促效劑或其功能片段，其中該TNFRSF促效劑或其功能片段係與干擾素(IFN)或其功能片段組合投予。
在另一態樣中，本發明進一步關於一種用於治療或預防冠狀病毒感染之干擾素(IFN)或其功能片段，其中該IFN或其功能片段係與腫瘤壞死因子受體超家族(TNFRSF)促效劑或其功能片段組合投予。
在另一態樣中，本發明亦關於腫瘤壞死因子受體超家族(TNFRSF)促效劑或其功能片段及干擾素(IFN)或其功能片段之組合，其用於治療或預防冠狀病毒感染。
在另一態樣中，本發明係關於一種用於治療或預防冠狀病毒感染之干擾素相聯抗原結合蛋白，其包含：(I)促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段；及(II)干擾素(IFN)或其功能片段。
根據本發明之態樣中的任一者，該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段可包含：(a)重鏈或其片段，其包含與SEQ ID NO 56至少90%一致之互補決定區(CDR) CDRH1、與SEQ ID NO 57至少90%一致之CDRH2及與SEQ ID NO 58至少90%一致之CDRH3；及(b)輕鏈或其片段，其包含與SEQ ID NO 52至少90%一致之CDRL1、與SEQ ID NO 53至少90%一致之CDRL2及與SEQ ID NO 54至少90%一致之CDRL3。替代地，該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段可包含：(a)重鏈或其片段，其包含與SEQ ID NO 56一致之互補決定區(CDR) CDRH1、與SEQ ID NO 57一致之CDRH2及與SEQ ID NO 58一致之CDRH3；及(b)輕鏈或其片段，其包含與SEQ ID NO 52一致之CDRL1、與SEQ ID NO 53一致之CDRL2及與SEQ ID NO 54一致之CDRL3。
根據一個實施例，該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含：輕鏈可變區V L，其包含如SEQ ID NO 51中所示之序列或與該序列至少90%一致之序列；及/或重鏈可變區V H，其包含如SEQ ID NO 55中所示之序列或與該序列至少90%一致之序列。
根據另一實施例，該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含：輕鏈(LC)，其包含如SEQ ID NO3所示之序列或與該序列至少90%一致之序列；及/或重鏈(HC)，其包含選自由SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 49及SEQ ID NO 48組成之群之序列或與該序列至少90%一致之序列。
根據另一實施例，IFN或其功能片段可選自由以下組成之群：I型IFN、II型IFN及III型IFN，或其功能片段。較佳地，I型IFN或其功能片段係IFNα或IFNβ，或其功能片段。
根據另一實施例，IFN或其功能片段係IFNα2a或其功能片段。根據一個較佳實施例，IFNα2a包含如SEQ ID NO 17中所示之序列或與該序列至少90%一致之序列。
根據另一實施例，IFN或其功能片段係IFNβ或其功能片段。在一個較佳實施例中，IFNβ包含如SEQ ID NO 14中所示之序列或與該序列至少90%一致之序列。
根據另一實施例，IFN或其功能片段與促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之輕鏈融合，較佳地與C末端融合。
根據另一實施例，該IFN或其功能片段與促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之重鏈融合，較佳地與C末端融合。
根據另一實施例，該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段與IFN或其功能片段經由連接子彼此融合。在一個較佳實施例中，連接子包含如SEQ ID NO 20、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 25或SEQ ID NO 26中所示之序列。
根據另一實施例，干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含表9、特定言之表9A或表9B、更特定言之表9A中所揭示之序列組合中的一者。
根據另一實施例，用途包含藉助於基因遞送編碼干擾素相聯抗原結合蛋白之RNA或DNA序列或者編碼干擾素相聯抗原結合蛋白之載體或載體系統來向有需要之個體投予干擾素相聯抗原結合蛋白。
根據又另一實施例，干擾素相聯抗原結合蛋白係包含在醫藥組成物中。
較佳實施例之詳細說明
應理解，本文中所描述及/或所主張的定義及實施例中之任一者意欲作為適用於本發明之所有態樣、實施例、項目及主題之定義及實施例。舉例而言，應理解，本文所提供的關於製備、調配及投予本發明之干擾素相聯抗原結合蛋白、或者編碼或表現該等干擾素相聯抗原結合蛋白之核酸的適合方式或實施例、以及其投予途徑、其適合劑量及投予方案的教示及解釋加以必要的變更即適用於如本文中所描述或所主張之腫瘤壞死因子受體超家族(TNFRSF)促效劑或其功能片段、干擾素(IFN)或其功能片段、或者編碼或表現其之核酸、或其組合。
本發明係部分基於發現基於在冠狀病毒療法中使用「干擾素相聯抗原結合蛋白」、其變異體或衍生物的療法，該等干擾素相聯抗原結合蛋白、其變異體或衍生物包含(I)促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段；以及(II)干擾素(IFN)或其功能片段。該等干擾素相聯抗原結合蛋白挽救細胞免於冠狀病毒誘發之細胞死亡及冠狀病毒誘發之細胞病變作用並增強未感染及經感染細胞中之IFN路徑，且甚至可以按協同作用方式起作用。提供冠狀病毒療法，其包含向感染冠狀病毒之細胞或感染冠狀病毒之個體投予干擾素相聯抗原結合蛋白。
根據以下定義的所選術語可更容易地理解本發明。
如本文所使用，腫瘤壞死因子(配體)超家族成員(或TNFSF)係指屬於共有標誌性細胞外TNF同源結構域(TNF homology domain，THD)之蛋白質配體超家族的蛋白質(Bremer ISRN Oncology (2013), 摘要ID 371854, 第25頁, 線上存取：dx.doi.org/10.1155/2013/371854)。THD引起非共價同源三聚物之形成。TNF配體通常表現為II型跨膜蛋白形式，但在大多數情況下可經歷蛋白水解加工成為可溶性配體。TNF配體藉由結合並活化TNFRSF成員來發揮其生物功能。TNFRSF通常表現為三聚I型跨膜蛋白形式且在其細胞外域中含有一至六個富含半胱胺酸之域(CRD)。TNF超家族的一個重要功能係在免疫反應之不同階段提供共刺激信號。一些配體具有結合並活化不同受體之能力(例如LTa3結合並活化TNFRSFlA、TNFRSFlB及TNFRSF14且LIGHT(TNFSF14)結合並活化TNFRSF3及TNFRSF14)。例示性TNFSF基因家族成員陳述於下表A中，該表衍生自HUGO基因命名委員會(HUGO Gene Nomenclature Committee，HGNC)(參見Gray等人, Nucleic Acids Res. 43: D1079-1085 (2015)；HGNC Database, HUGO Gene Nomenclature Committee (HGNC), EMBL Outstation - Hinxton, European Bioinformatics Institute, Wellcome Trust Genome Campus, Hinxton, Cambridgeshire, CBl0 lSD, UK www.genenames.org)。批准之符號表示應用於特定基因之HGNC符號且批准之名稱對應於該基因之完整拼寫。先前的符號表示HGNC使用的任何先前符號或指特定基因。同義詞係指特定基因之替代性、同義名稱。 表 A. 例示性 TNFSF 基因家族成員
批准之符號 批准之名稱 先前的符號 同義詞
TNF 腫瘤壞死因子 TNFA TNFSF2、DIF、TNFα
LTA 淋巴毒素α TNFB LT、TNFSF1
LTB 淋巴毒素β TNFC TNFSF3、p33
TNFSF4 TNF超家族成員4 TXGP1 OX-40L、gp34、CD252
CD40LG CD40配體 TNFSF5、HIGM1、IMD3 CD40L、TRAP、gp39、hCD40L、CD154
FASLG Fas配體 TNFSF6、APT1LG1 FasL、CD178
CD70 CD70分子 TNFSF7、CD27L CD27L
TNFSF8 TNF超家族成員8    CD153
TNFSF9 TNF超家族成員9    4-1BB-L
TNFSF10 TNF超家族成員10    TRAIL、Apo-2L、TL2、CD253
TNFSF11 TNF超家族成員11    TRANCE、RANKL、OPGL、ODF、CD254
TNFSF12 TNF超家族成員12    TWEAK、DR3LG、APO3L
TNFSF13 TNF超家族成員13    APRIL、CD256
TNFSF13B TNF超家族成員13B TNFSF20 BAFF、THANK、BLYS、TALL-1、TALL1、CD257
TNFSF14 TNF超家族成員14    LIGHT、LTγ、HVEM-L、CD258
TNFSF15 TNF超家族成員15    TL1、VEGI、TL1A、VEGI192A、MGC129934、MGC129935
TNFSF18 TNF超家族成員18    AITRL、TL6、hGITRL
EDA 外異蛋白A ED1、EDA2、ODT1 EDA1、XLHED、HED、XHED、ED1-A1、ED1-A2、EDA-A1、EDA-A2
表 B. 例示性 TNFRSF 基因家族成員
批准之符號 批准之名稱 先前的符號 同義詞
EDAR 外異蛋白A受體 ED3、DL ED5、EDA3、Edar、ED1R、EDA1R
TNFRSF1A TNF受體超家族成員1A TNFR1 TNF-R、TNFAR、TNFR60、TNF-R-I、CD120a、TNF-R55
TNFRSF1B TNF受體超家族成員1B TNFR2 TNFBR、TNFR80、TNF-R75、TNF-R-II、p75、CD120b
LBTR 淋巴毒素β受體 D12S370 TNF-R-III、TNFCR、TNFRSF3、TNFR2-RP、TNFR-RP
TNFRSF4 TNF受體超家族成員4 TXGP1L ACT35、OX40、CD134
CD40 CD40分子 TNFRSF5 p50、Bp50
FAS Fas細胞表面死亡受體 APT1、FAS1、TNFRSF6 CD95、APO-1
TNFRSF6b TNF受體超家族成員6b    DcR3、DCR3、TR6、M68
CD27 CD27分子 TNFRSF7 S152、Tp55
TNFRSF8 TNF受體超家族成員8 CD30、D1S166E KI-1
TNFRSF9 TNF受體超家族成員9 ILA CD137、4-1BB
TNFRSF10a TNF受體超家族成員10a    DR4、Apo2、TRAILR-1、CD261、TRAILR1
TNFRSF10b TNF受體超家族成員10b    DR5、KILLER、TRICK2A、TRAIL-R2、TRICKB、CD262、TRAILR2
TNFRSF10c TNF受體超家族成員10c    DcR1、TRAILR3、LIT、TRID、CD263
TNFRSF10d TNF受體超家族成員10d    DcR2、TRUNDD、TRAILR4、CD264
TNFRSF11a TNF受體超家族成員11a PDB2、LOH18CR1 RANK、CD265、FEO
TNFRSF11b TNF受體超家族成員11b OPG OCIF、TR1
TNFRSF12A TNF受體超家族成員12A    FN14、TweakR、CD266
TNFRSF13B TNF受體超家族成員13B    TACI、CD267、IGAD2
TNFRSF13C TNF受體超家族成員13C    BAFFR、CD268
TNFRSF14 TNF受體超家族成員14    HVEM、ATAR、TR2、LIGHTR、HVEA、CD270
NGFR 神經生長因子受體    TNFRSF16、p75NTR、CD271
TNFRSF17 TNF受體超家族成員17 BCMA BCM、CD269、TNFRSF13A
TNFRSF18 TNF受體超家族成員18    AITR、GITR、CD357
TNFRSF19 TNF受體超家族成員19    TAJ-alpha、TROY、TAJ、TRADE
RELT RELT，TNF受體 TNFRSF19L FLJ14993
TNFRSF21 TNF受體超家族成員21    DR6、CD358
TNFRSF25 TNF受體超家族成員25 TNFRSF12 DR3、TRAMP、WSL-1、LARD、WSL-LR、DDR3、TR3、APO-3
EDA2R 外異蛋白A2受體    XEDAR、EDAA2R、EDA-A2R、TNFRSF27
如本文所使用，「 TNFRSF 促效劑」係指活化TNFRSF，例如表B中所列之TNFRSF的化合物(例如蛋白質、融合蛋白、多肽、抗體、抗體之抗原結合片段或類似物)。與以上表A一樣，表B係衍生自HGNC。舉例而言，TNFRSF促效劑可為針對TNFRSF之成員的一種促效性抗體，即一種可溶性TNFRSF促效劑，包括但不限於其天然配體或其功能片段。
在某些例示性實施例中，TNFRSF促效劑包括但不限於LTa3受體(TNFRSFlA、TNFRSFlB或TNFRSF14)促效劑、LTβ受體(TNFRSF3)促效劑(例如LIGHT或LTβ)、疱疹病毒入侵介導蛋白(herpesvirus entry mediator，HVEM；或TNFRSF14)促效劑(LIGHT)、腫瘤壞死因子樣受體弱細胞凋亡誘導蛋白(TNFRSF12A)促效劑(例如TWEAK，又稱為TNFSF12)、分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)促效劑(CD40L)、CD27(TNFRSF7)促效劑(CD70)、CD30(TNFRSF8)促效劑、4-lBB(CD137、TNFRSF9)促效劑、核因子KB受體活化物(RANK、TNFRSF 1 lA)促效劑、Troy(TNFRSF 19)促效劑及OX40受體(TNFRSF4)促效劑。
如本文所使用，術語「 功能片段」係指保留原始物質之一或多種功能活性、較佳地所有功能活性的物質之片段。舉例而言，TNFRSF促效劑之功能片段係指保留如本文中所描述及/或所主張之TNFRSF促效劑的功能(例如其活化目標TNFRSF)的TNFRSF促效劑之片段。
如本文所使用，術語「 配體」係指能夠結合至或經結合至另一物質的任何物質。配體可為肽、多肽、蛋白質、適體、多醣、糖分子、碳水化合物、脂質、寡核苷酸、聚核苷酸、合成分子、無機分子、有機分子及其任何組合。較佳地，配體係多肽。
如本文所使用，術語「 CD40」係指「分化簇40」，即腫瘤壞死因子受體(TNFR)超家族的一個成員。CD40係在抗原呈現細胞(例如B細胞、樹突狀細胞、單核球)、造血前驅物、內皮細胞、平滑肌細胞、上皮細胞以及大部分人體腫瘤上發現的一種共刺激蛋白質(Grewal及Flavell, Ann. Rev. lmmunol., 1996, 16: 111-35；Toes及Schoenberger, Seminars in Immunology, 1998, 10(6): 443-8)。T H細胞上之天然配體CD154(CD40L)與CD40結合將活化抗原呈現細胞並誘導多種下游效應。TNF受體相關因子轉接蛋白TRAF1、TRAF2、TRAF6及TRAF5與CD40相互作用並充當信號轉導之介體。最後，CD40信號傳導將活化典型及非典型NF-κB路徑。 促效性抗CD40抗體及其抗原結合片段
如本文所使用，術語「 抗體」係指包含四條多肽鏈，即藉由二硫鍵互連之二條重(H)鏈及二條(L)輕鏈的免疫球蛋白分子，以及其多聚體(例如IgM)。各重鏈包含重鏈可變區(縮寫為VH或V H)及重鏈恆定區(CH或C H)。重鏈恆定區包括三個域，即CH1、CH2及CH3。各輕鏈包含輕鏈可變區(縮寫為VL或V L)及輕鏈恆定區(CL或C L)。輕鏈恆定區包含一個域(CL1)。VH及VL區可進一步細分成稱為「 互補決定區( CDR)」之高變區，其間穿插有稱為「 骨架區」(FR)的保守性較高之區域。各VH及VL係由三個CDR及四個FR構成，自胺基末端至羧基末端按以下順序佈置：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。骨架區可有助於維持CDR之適當構形以促進抗原結合區與抗原之間的結合。
最常用於治療應用之免疫球蛋白係免疫球蛋白G (或IgG)，其係一種四聚醣蛋白。在天然存在之免疫球蛋白中，各四聚體係由二個一致的多肽鏈對構成，各對具有一條「輕」鏈(約25 kDa)及一條「重」鏈(約50-70 kDa)。各鏈之胺基末端部分包括一個具有約100至110個或更多個胺基酸的主要負責抗原識別之可變區。各鏈之羧基末端部分界定主要負責效應功能之恆定區。免疫球蛋白可取決於其重鏈恆定域之胺基酸序列而分為不同類別。
重鏈分類為µ (mu)、δ (delta)、γ (gamma)、α (alpha)及ε (epsilon)，且將抗體之同型分別定義為IgM、IgD、IgG、IgA及IgE。若干此等抗體可進一步分成亞類或同型，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2。不同的同型具有不同的效應功能；例如，IgG1及IgG3同型具有抗體依賴性細胞毒性(ADCC)活性。在較佳實施例中，根據本發明之干擾素相聯抗原結合蛋白中所包含的促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段為IgG種類。在更佳的實施例中，根據本發明之干擾素相聯抗原結合蛋白中所包含的促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段為IgG1或IgG3亞類。在尤其較佳之實施例中，根據本發明之干擾素相聯抗原結合蛋白中所包含的促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段為IgG1亞類。在其他更佳的實施例中，根據本發明之干擾素相聯抗原結合蛋白中所包含的促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段為IgG2或IgG4亞類。在尤其較佳之實施例中，根據本發明之干擾素相聯抗原結合蛋白中所包含的促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段為IgG2亞類。
人類輕鏈分類為κ (kappa)及λ (lambda)輕鏈。因此，在一些實施例中，根據本發明之干擾素相聯抗原結合蛋白中所包含的促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含κ種類之輕鏈。在其他實施例中，根據本發明之干擾素相聯抗原結合蛋白中所包含的促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含λ種類之輕鏈。在輕鏈及重鏈內，可變區與恆定區藉由具有約12個或更多個胺基酸之「J」區接合，其中該重鏈另外包括具有約10個以上胺基酸之「D」區。一般參見Fundamental Immunology, 第7章(Paul, W.編, 第2版, Raven Press, N.Y. (1989))。
術語「 抗體」分別進一步包括但不限於單株抗體雙特異性抗體、微型抗體、域抗體、合成抗體(有時稱為「抗體模擬物」)、嵌合抗體、人源化抗體、人類抗體及其片段。除非另外指示，否則術語「抗體」除包含二條全長重鏈及二條全長輕鏈之抗體以外，亦包括其衍生物、變異體、抗原結合片段及突變蛋白，其實例描述於下文中。
如本文所使用，術語「 促效性CD40 抗體」或「 促效性抗 CD40 抗體」係指結合至CD40並介導CD40信號傳導之抗體。在一個較佳實施例中，其結合至人類CD40。如下文所描述，與CD40之結合可使用表面電漿子共振，較佳地使用BIAcore®系統確定。促效性抗CD40抗體當添加至表現CD40之細胞、組織或生物體中時，可使一或多種CD40活性增加至少約20%。在一些實施例中，抗體使CD40活性活化至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%或至少85%。促效性抗CD40抗體之 CD40 活性可使用全血表面分子上調分析或使用活體外報導體細胞分析，例如使用HEK-Blue™ CD40L細胞(InvivoGen目錄號：hkb-cd40)量測，此更詳細地描述於實例I中。此等報導體細胞係藉由用人類CD40基因及NFκB誘導型分泌性胚胎鹼性磷酸酶(secreted embryonic alkaline phosphatase，SEAP)構築體穩定轉染HEK293細胞產生，用以量測CD40促效劑之活性。刺激CD40引起NFκB活化且因此產生SEAP，SEAP可在上清液中使用諸如QUANTI-Blue™之類顯色基質偵測。
在本發明的情形中，干擾素相聯抗原結合蛋白活化CD40路徑及IFN路徑兩者。在某些實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白以低於400、300、200、150、100、70、60、50、40、30、25、20或15 ng/mL之EC 50活化CD40路徑，其中如例如實例I中所描述，CD40活性較佳地係使用活體外報導體細胞分析，任擇地使用HEK-Blue TMCD40L細胞確定。 在更特定之實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白以在10至200 ng/mL範圍內之EC 50活化CD40路徑。在甚至更特定之實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白以在10至50 ng/mL範圍內，較佳地在10至30 ng/mL範圍內之EC 50活化CD40路徑。
適合促效性抗CD40抗體之實例包括但不限於CP870,893 (Pfizer/Roche)、SGN-40 (Seattle Genetics)、ADC-1013 (Janssen / Alligator BioSciences)、Chi Lob 7/4 (University of Southampton)、達昔妥尤單抗(dacetumumab) (Seattle Genetics)、APX005M (Apexigen, Inc.)、3G5 (Celldex)及CDX-1140 (Celldex)。促效性抗CD40抗體CP870,893之例示性輕鏈及重鏈序列顯示於 表 7中。促效性抗CD40抗體3G5之例示性輕鏈及重鏈序列顯示於 表 8中。
如本文所使用，術語促效性抗CD40抗體之「 促效性抗原結合片段」係指保留原始抗體之一或多種功能活性，諸如保留結合細胞中之CD40並充當細胞中CD40信號傳導之促效劑的能力(例如其介導CD40路徑信號傳導)的促效性抗CD40抗體之片段。此類片段可與完整抗體競爭結合至CD40。
促效性抗CD40抗體之促效性抗原結合片段可藉由重組DNA技術製造，或可藉由抗CD40抗體之酶或化學裂解製造。促效性抗原結合片段包括但不限於Fab片段、雙功能抗體(經由短肽連接子連接的與輕鏈可變域相同之多肽上的重鏈可變域，該短肽連接子太短而不允許同一鏈上的二個域之間配對)、Fab'片段、F(ab') 2片段、Fv片段、域抗體及單鏈抗體，且可衍生自任何哺乳動物來源，包括但不限於人類、小鼠、大鼠、駱駝或兔。
術語「 可變區」或「 可變域」係指抗體之輕鏈及/或重鏈之一部分，通常包括重鏈中約120至130個胺基末端胺基酸及輕鏈中約100至110個胺基末端胺基酸。不同抗體之可變區的胺基酸序列有極大差異，甚至是衍生自同一物種或同一種類之抗體間亦如此。促效性抗CD40抗體CP870,893之例示性V L及V H域序列顯示於 表 1中。因為抗體之可變區含有CDR，所以其通常決定特定抗體對其目標之特異性。 表 1亦顯示促效性抗CD40抗體CP870,893的例示性CDR序列。 表 1. 促效性抗 CD40 抗體 CP870 , 893 之抗 CD40 抗體重鏈/ 輕鏈可變區及 CDR 。 粗體斜體序列對應於根據 Kabat 定義之 CDR 區 。
抗CD40抗體區 序列
抗CD40抗體V L域 (SEQ ID NO 51) DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITC RASQGIYSWLA WYQQKPGKAPNLLIY TAST LQS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQANIFPLT FGGGTKVEIK
抗CD40抗體CDRL1 (SEQ ID NO 52) RASQGIYSWLA
抗CD40抗體CDRL2 (SEQ ID NO 53) TASTLQS
抗CD40抗體CDRL3 (SEQ ID NO 54) QQANIFPLT
抗CD40抗體V H域 (SEQ ID NO 55) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTF TGYYMH WVRQAPGQGLEWMG WINPDSGGTNYAQKFQG RVTMTRDTSISTAYMELNRLRSDDTAVYYCAR DQPLGYCTNGVCSYFDY WGQGTLVTVSS
抗CD40抗體CDRH1 (SEQ ID NO 56) TGYYMH
抗CD40抗體CDRH2 (SEQ ID NO 57) WINPDSGGTNYAQKFQG
抗CD40抗體CDRH3 (SEQ ID NO 58) DQPLGYCTNGVCSYFDY
CDR之定界及包含抗體結合位點之殘基的鑑別可藉由解析抗體之結構及/或解析抗體-配體複合物之結構來實現。此可藉由熟習此項技術者已知之多種技術中任一者來實現，諸如X射線結晶法。各種分析方法均可用於鑑別或估計CDR區。此類方法之實例包括但不限於Kabat定義、Chothia定義、AbM定義及接觸(contact)定義。
Kabat定義係用於對抗體中之殘基編號的標準且通常用於鑑別CDR區。參見例如Johnson及Wu, Nucleic Acids Res., 28: 214-8 (2000)。Chothia定義與Kabat定義類似，但Chothia定義考慮某些結構環區之位置。參見例如Chothia等人, J. Mol. Biol., 196: 901-17 (1986)；Chothia等人, Nature, 342: 877-83 (1989)。AbM定義使用由Oxford Molecular Group所製造的模擬抗體結構之電腦程式的整合套件。參見例如Martin等人, Proc Natl Acad Sci (USA), 86:9268-9272 (1989)；「AbM TM, A Computer Program for Modeling Variable Regions of Antibodies」, Oxford, UK; Oxford Molecular, Ltd。AbM定義使用知識資料庫與全始算法( ab initiomethods)之組合根據一級序列模擬抗體的三級結構，全始算法係諸如Samudrala等人, 「Ab Initio Protein Structure Prediction Using a Combined Hierarchical Approach」, PROTEINS, Structure, Function and Genetics Suppl., 3:194-198 (1999)中所描述者。接觸定義係基於可用複雜晶體結構之分析。參見例如MacCallum等人 ,J. Mol. Biol., 5:732-45 (1996)。
在某些實施例中，促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之輕鏈及重鏈可變區的互補決定區(CDR)可移植至來自同一物種或另一物種之骨架區(FR)上。在某些實施例中，促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之輕鏈及重鏈可變區的CDR可移植至共同人類FR上。為產生共同人類FR，在某些實施例中，將比對來自若干人類重鏈或輕鏈胺基酸序列之FR以鑑別共同胺基酸序列。在某些實施例中，促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之重鏈或輕鏈的FR經來自不同重鏈或輕鏈之FR置換。在某些實施例中，促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之重鏈及輕鏈的FR中之稀有胺基酸未經置換，而其餘FR胺基酸經置換。稀有胺基酸係在FR中通常未發現該等胺基酸之位置中的特殊胺基酸。在某些實施例中，來自促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段的移植之可變區可與不同於促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之恆定區的恆定區一起使用。在某些實施例中，移植之可變區為單鏈Fv抗體的一部分。CDR移植描述於例如以下中：美國專利第6,180,370號、第6,054,297號、第5,693,762號、第5,859,205號、第5,693,761號、第5,565,332號、第5,585,089號及第5,530,101號；以及Jones等人, Nature, 321: 522-525 (1986)；Riechmann等人, Nature, 332: 323-327 (1988)；Verhoeyen等人, Science, 239:1534-1536 (1988)；Winter, FEBS Letts., 430:92-94 (1998)，其特此以引用的方式併入用於任何目的。
「 Fc」區通常包含抗體的包含C H2及C H3域之二個重鏈片段。該二個重鏈片段藉由二個或更多個雙硫鍵及藉由C H3域之疏水相互作用保持在一起。
「 Fab 片段」包含全長輕鏈以及一條重鏈之C H1及可變區(V H及C H1區之組合在本文中稱為「 fab 區 重鏈」)。
「 Fab ' 片段」包含一條輕鏈及含有VH域及C H1域以及在C H1與C H2域之間之區的一條重鏈之一部分，由此使二個Fab'片段之二條重鏈之間可形成鏈間二硫鍵以形成F(ab') 2分子。
「 F(ab') 2 片段」含有二條輕鏈及含有在C H1與C H2域之間的恆定區之一部分的二條重鏈，由此使在二條重鏈之間形成鏈間二硫鍵。因此，F(ab') 2片段係由藉由二條重鏈之間之二硫鍵保持在一起的二個Fab'片段構成。
「 Fv 區」包含來自重鏈及輕鏈之可變區，但缺乏恆定區。
「 單鏈抗體」係Fv分子，其中重鏈及輕鏈可變區已由可撓性連接子連接形成單一多肽鏈，該單一多肽鏈形成抗原結合區。單鏈抗體詳細論述於國際專利申請公開案第WO 88/01649號以及美國專利第4,946,778號及第5,260,203號中，其揭露內容以引用的方式併入。
「 域抗體」係僅含重鏈可變區或輕鏈可變區的有免疫功能之免疫球蛋白片段。在一些情況下，二個或更多個V H區與肽連接子共價接合，產生二價域抗體。二價域抗體之二個V H區可靶向相同或不同抗原。
抗體或抗原結合蛋白，諸如根據本發明之干擾素相聯抗原結合蛋白，較佳地以解離常數(K d)≤10 -7M結合至其目標抗原。當K d≤5×10 -9M時，該抗體或抗原結合蛋白以「高親和力」結合其抗原，且當K d≤5×10 -10M時，以「極高親和力」結合其抗原。更佳地，該抗體或抗原結合蛋白的K d≤10 -9M。在一些實施例中，解離速率＜1×10 -5。在其他實施例中，該抗體或抗原結合蛋白將以介於約10 -9M與10 -13M之間的K d結合至人類CD40，且在又另一實施例中，該抗體或抗原結合蛋白將以K d≤5×10 -10結合。熟習此項技術者應瞭解，在一些實施例中，該等抗原結合片段中之任一者或全部可結合至CD40。較佳地，該等常數係使用表面電漿子共振，更佳地使用BIAcore®系統確定。
術語「 表面電漿子共振」意謂允許藉由例如使用BIAcore®系統(BIAcore International AB, GE Healthcare公司, Uppsala, Sweden及Piscataway, N.J.)偵測生物感測器基質內蛋白質濃度之變化來分析即時生物特異性相互作用的光學現象。關於進一步描述，參見Jönsson等人(1993) Ann. Biol. Clin. 51:19-26。術語「 K on 」意謂結合蛋白(例如抗體或抗原結合蛋白)與抗原締合形成例如抗原結合蛋白/抗原複合物的締合速率常數。術語「 K on 」或「 締合速率」亦意謂「 締合速率常數」或「 ka」，此等術語在本文中可互換使用。此指示結合蛋白與其目標抗原之結合速率或結合蛋白(例如抗體或抗原結合蛋白)與抗原之間複合物形成之速率的值亦由以下方程式顯示： 抗體(「 Ab」)+抗原(「 Ag」)→Ab-Ag
如此項技術中所知，術語「 K off 」或「 解離速率」意謂結合蛋白(例如抗體或抗原結合蛋白)自例如抗原結合蛋白/抗原複合物解離之解離速率常數(off rate constant)或「 解離速率常數( dissociation rate constant)」。此值指示結合蛋白(例如抗體或抗原結合蛋白)自其目標抗原解離之速率或Ab-Ag複合物隨時間而分離為游離抗體及抗原，如以下方程式所示： Ab+Ag←Ab−Ag
術語「 K d 」及「 平衡解離常數」意謂平衡時在滴定量測中獲得或藉由用解離速率常數(K off)除以締合速率常數(K on)獲得的值。締合速率常數、解離速率常數及平衡解離常數用於表示結合蛋白(例如抗體或抗原結合蛋白)與抗原之結合親和力。用於確定締合及解離速率常數之方法係此項技術中眾所周知的。使用基於螢光之技術將提供高靈敏度及檢查在平衡時生理緩衝液中之樣本的能力。可使用其他實驗方法及儀器，諸如BIAcore®(生物分子相互作用分析)分析(例如可獲自BIAcore International AB, GE Healthcare公司(Uppsala, Sweden)之儀器)。另外，亦可使用KinExA® (動態排除分析(Kinetic Exclusion Assay))分析法，其可獲自Sapidyne Instruments (Boise, Id.)。
根據本發明之抗原結合蛋白與一個目標結合之親和力可比對另一目標之親和力高至少一個數量級、較佳地至少二個數量級。
術語「 目標」係指能夠與抗原結合蛋白結合之分子或分子之一部分。在某些實施例中，目標可具有一或多個抗原決定基。因此，應理解，目標可充當本發明之「抗原結合蛋白」的「抗原」。
術語「 抗原決定基」包括能夠與抗原結合蛋白(諸如抗體)結合之任何決定子。抗原決定基係抗原中與靶向該抗原之抗原結合蛋白結合的區，且當該抗原為蛋白質時，該抗原決定基包括直接接觸抗原結合蛋白之特定胺基酸。最通常地，抗原決定基存在於蛋白質上，但在一些情況下可存在於其他種類之分子，諸如核酸上。抗原決定基決定子可包括分子之化學活性表面基團，諸如胺基酸、糖側鏈、磷醯基或磺醯基，且可具有特定三維結構特徵及/或特定電荷特徵。一般而言，對特定目標抗原具有特異性之抗體將優先/特異性識別蛋白質及/或巨分子之複雜混合物中目標抗原上之抗原決定基。
在例示性實施例中，形成本發明之干擾素相聯抗原結合蛋白之部分(I)的促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含：與SEQ ID NO 3內之CDRL1、CDRL2及CDRL3序列至少90%一致之三個輕鏈互補決定區(CDR)；以及與SEQ ID NO 6內之CDRH1、CDRH2及CDRH3序列至少90%一致之三個重鏈CDR。促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段亦可包含：與SEQ ID NO 3內之CDRL1、CDRL2及CDRL3序列一致之三個輕鏈互補決定區(CDR)；以及與SEQ ID NO 6內之CDRH1、CDRH2及CDRH3序列一致之三個重鏈CDR。在此類實施例中，各CDR係根據CDR之Kabat定義、Chothia定義、AbM定義或接觸定義界定；較佳地其中各CDR係根據Kabat之CDR定義或Chothia之CDR定義界定。在特定實施例中，各CDR係根據Kabat定義界定。在其他特定實施例中，各CDR係根據Chothia定義界定。
替代地，形成本發明之干擾素相聯抗原結合蛋白之部分(I)的促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段可包含：(a)重鏈或其片段，其包含與SEQ ID NO 56至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致之互補決定區(CDR) CDRH1、與SEQ ID NO 57至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致之CDRH2及與SEQ ID NO 58至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致之CDRH3；以及(b)輕鏈或其片段，其包含與SEQ ID NO 52至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致之CDRL1、與SEQ ID NO 53至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致之CDRL2及與SEQ ID NO 54至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致之CDRL3。
在一些實施例中，促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含：(a)重鏈或其片段，其包含與SEQ ID NO 56一致之互補決定區(CDR) CDRH1、與SEQ ID NO 57一致之CDRH2及與SEQ ID NO 58一致之CDRH3；以及(b)輕鏈或其片段，其包含與SEQ ID NO 52一致之CDRL1、與SEQ ID NO 53一致之CDRL2及與SEQ ID NO 54一致之CDRL3。
更具體言之，促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含：輕鏈可變區V L，其包含如SEQ ID NO 51中所示之序列、或與該序列至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致之序列；及/或重鏈可變區V H，其包含如SEQ ID NO 55中所示之序列、或與該序列至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致之序列。
本發明之干擾素相聯抗原結合蛋白亦可包含促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段，其包含Fab區重鏈，該Fab區重鏈包含如SEQ ID NO 12中所示之胺基酸序列、或與該序列至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致之序列。
在一些實施例中，促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含：輕鏈(LC)，其包含如SEQ ID NO 3中所示之序列、或與該序列至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致之序列；及/或重鏈(HC)，其包含選自由SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 49、SEQ ID NO 12及SEQ ID NO 50組成之群的序列、或與該序列至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致之序列。
在更特定之實施例中，促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含：輕鏈(LC)，其包含如SEQ ID NO 3中所示之序列、或與該序列至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致之序列；及/或重鏈(HC)，其包含如SEQ ID NO 6中所示之序列、或與該序列至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致之序列。
在更特定之實施例中，促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含：輕鏈(LC)，其包含如SEQ ID NO 3中所示之序列、或與該序列至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致之序列；及/或重鏈(HC)，其包含如SEQ ID NO 9中所示之序列、或與該序列至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致之序列。
在其他更特定之實施例中，促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含：輕鏈(LC)，其包含如SEQ ID NO 3中所示之序列、或與該序列至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致之序列；及/或重鏈(HC)，其包含如SEQ ID NO 49中所示之序列、或與該序列至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致之序列。
在其他更特定之實施例中，促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含：輕鏈(LC)，其包含如SEQ ID NO 3中所示之序列、或與該序列至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致之序列；及/或重鏈(HC)，其包含如SEQ ID NO 12中所示之序列、或與該序列至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致之序列。
在其他更特定之實施例中，促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含：輕鏈(LC)，其包含如SEQ ID NO 3中所示之序列、或與該序列至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致之序列；及/或重鏈(HC)，其包含如SEQ ID NO 50中所示之序列、或與該序列至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致之序列。
在一些實施例中，促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含：輕鏈(LC)，其包含如SEQ ID NO 59中所示之序列、或與該序列至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致之序列；及/或重鏈(HC)，其包含選自由SEQ ID NO 61、SEQ ID NO 63及SEQ ID NO 65組成之群的序列、或與該序列至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致之序列。
在更特定之實施例中，促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含：輕鏈(LC)，其包含如SEQ ID NO 59中所示之序列、或與該序列至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致之序列；及/或重鏈(HC)，其包含如SEQ ID NO 61中所示之序列、或與該序列至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致之序列。
在其他更特定之實施例中，促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含：輕鏈(LC)，其包含如SEQ ID NO 59中所示之序列、或與該序列至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致之序列；及/或重鏈(HC)，其包含如SEQ ID NO 63中所示之序列、或與該序列至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致之序列。
在其他更特定之實施例中，促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含：輕鏈(LC)，其包含如SEQ ID NO 59中所示之序列、或與該序列至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致之序列；及/或重鏈(HC)，其包含如SEQ ID NO 65中所示之序列、或與該序列至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致之序列。 干擾素相聯抗原結合蛋白或其組分之變異體及衍生物
多肽(例如干擾素相聯抗原結合蛋白、融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段、抗體、抗原結合蛋白或IFN，或其組分)之「 變異體」包含相對於另一多肽序列在胺基酸序列中插入、缺失及/或取代一個、二個、三個、四個、五個或更多個胺基酸殘基的胺基酸序列。較佳地，該變異體包含至多十插入、缺失及/或取代，更佳地包含至多八個插入、缺失及/或取代。更具體言之，該變異體可包含至多十個、更佳地至多八個插入。該變異體亦可包含至多十個、更佳地至多八個缺失。在甚至更佳之實施例中，該變異體包含至多十個取代，最佳地至多八個取代。在一些實施例中，此等取代係如下文所描述之保守胺基酸取代。
聚核苷酸序列(例如RNA或DNA)之「 變異體」相對於另一聚核苷酸序列在該聚核苷酸序列內包含一或多個突變，其中在核酸序列中插入、缺失及/或取代一個、二個、三個、四個、五個或更多個核酸殘基。較佳地，該變異體包含至多十插入、缺失及/或取代，更佳地包含至多八個插入、缺失及/或取代。更具體言之，該變異體可包含至多十個、更佳地至多八個插入。該變異體亦可包含至多十個、更佳地至多八個缺失。在甚至更佳之實施例中，該變異體包含至多十個取代，最佳地至多八個取代。相較於另一個胺基酸序列，該一個、二個、三個、四個、五個或更多個突變可在該變異體所編碼之胺基酸序列內引起一個、二個、三個、四個、五個或更多個胺基酸交換(亦即，「 非沉默突變」)。變異體亦包括一個、二個、三個、四個、五個或更多個密碼子已經其同義詞置換之核酸序列，該置換不會引起胺基酸交換且因此稱為「 沉默突變」。
在多肽或核苷酸序列變異體之情形中，術語「 一致性」或「 同源性」係指藉由比對並比較序列所確定的二個或更多個多肽分子或者二個或更多個核酸分子之序列之間的關係。「 一致性百分比」意謂所比較分子中胺基酸或核苷酸之間的一致殘基之百分比，且基於大小最小之比較分子來計算。較佳地，一致性係在序列全長內確定。應理解，表述「至少80%一致」包括所描述或所主張之序列與參考序列至少85%、較佳地至少90%、更佳地至少95%、更佳地至少98%或再更佳地至少99%一致的實施例。表述「至少90%一致」包括所描述或所主張之序列與參考序列至少90%、較佳地至少91%、更佳地至少92%、更佳地至少93%、更佳地至少94%、更佳地至少95%、更佳地至少96%、更佳地至少97%、更佳地至少98%或再更佳地至少99%一致之實施例。
為計算一致性百分比，較佳地利用特定數學模型或電腦程式(亦即，「演算法」)來處理比對時的空位(若存在)。可用於計算所比對之核酸或多肽之一致性的方法包括以下文獻中所描述之方法： Computational Molecular Biology, (Lesk, A. M.編), 1988, New York: Oxford University Press；Biocomputing Informatics and Genome Projects, (Smith, D. W.編), 1993, New York: Academic Press; Computer Analysis of Sequence Data, Part I, (Griffin, A. M.及Griffin, H. G.編), 1994, New Jersey: Humana Press；von Heinje, G., 1987, Sequence Analysis in Molecular Biology, New York: Academic Press; Sequence Analysis Primer, (Gribskov, M.及Devereux, J.編), 1991, New York: M. Stockton Press；以及Carillo等人, 1988, SIAM J. Applied Math.48:1073。
在計算一致性百分比時，通常以在序列之間得到最大匹配之方式比對所比較之序列。可用於確定一致性百分比之電腦程式的一個實例係GCG程式包，其包括GAP (Devereux等人, (1984) Nucl . Acid Res . 12:387；Genetics Computer Group, University of Wisconsin, Madison, WI)。使用電腦演算法GAP來比對擬確定序列一致性百分比之二個多肽或聚核苷酸。比對序列以獲得其各別胺基酸或核苷酸之最佳匹配(「匹配跨度(matched span)」，藉由演算法測定)。將空位開放罰分(gap opening penalty) (以3×平均對角線計算，其中「平均對角線(average diagonal)」係所用比較矩陣之對角線的平均值；「對角線」係由特定比較矩陣分配給各完美胺基酸匹配之評分或數值)及空位延伸罰分(gap extension penalty) (通常為1/10×空位開放罰分)以及比較矩陣(諸如PAM 250或BLOSUM 62)與該演算法結合使用。在某些實施例中，演算法亦使用標準比較矩陣(關於PAM 250比較矩陣，參見Dayhoff等人, 1978, Atlas of Protein Sequence and Structure5:345-352；關於BLOSum 62比較矩陣，參見Henikoff等人, 1992, Proc . Natl . Acad . Sci . U . S . A .89:10915-10919)。
可使用GAP程式確定多肽或核苷酸序列之一致性百分比之參數的實例如下： ●                    演算法：Needleman等人, 1970, J. Mol. Biol.48:443-453 ●                    比較矩陣：來自上述Henikoff等人, 1992之BLOSum 62 ●                    空位罰分：12 (但末端空位無罰分) ●                    空位長度罰分：4 ●                    相似性臨限值：0
用於比對二個胺基酸序列之某些比對方案可進行二個序列之僅較短區域的匹配，且此較小比對區域可具有極高序列一致性，即使二個全長序列之間不存在顯著關係。因此，必要時，可對所選比對方法(GAP程式)進行調整以進行跨目標多肽之至少50個或至少100個、較佳地完整長度之連續胺基酸的比對。
保守胺基酸取代可涵蓋非天然存在的胺基酸殘基，其通常藉由化學肽合成而非藉由在生物系統中的合成來併入。此等非天然存在的胺基酸殘基包括肽模擬物及胺基酸部分之其他逆轉或反轉形式。
天然存在的殘基可根據共同的側鏈特性進行分類： 1)      疏水性：正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile； 2)      中性親水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln； 3)      酸性：Asp、Glu； 4)      鹼性：His、Lys、Arg； 5)      影響鏈取向之殘基：Gly、Pro；以及 6)      芳族：Trp、Tyr、Phe。
舉例而言，非保守取代可涉及以此等種類中之一者的成員交換另一種類之成員。此類經取代殘基可例如引入至人類抗體的與非人類抗體同源之區域中，或引入至分子之非同源區域中。
在對干擾素相聯抗原結合蛋白進行改變時，根據某些實施例，可以考慮胺基酸之親水指數。已基於疏水性及電荷特徵指定各胺基酸之親水指數。其為：異白胺酸(+4.5)；纈胺酸(+4.2)；白胺酸(+3.8)；苯丙胺酸(+2.8)；半胱胺酸/胱胺酸(+2.5)；甲硫胺酸(+1.9)；丙胺酸(+1.8)；甘胺酸(-0.4)；蘇胺酸(-0.7)；絲胺酸(-0.8)；色胺酸(-0.9)；酪胺酸(-1.3)；脯胺酸(-1.6)；組胺酸(-3.2)；麩胺酸(-3.5)；麩醯胺酸(-3.5)；天冬胺酸(-3.5)；天冬醯胺酸(-3.5)；離胺酸(-3.9)；及精胺酸(-4.5)。
胺基酸親水指數在賦予蛋白質相互作用生物功能方面之重要性在此項技術中有所瞭解。Kyte等人, J. Mol. Biol., 157:105-131 (1982)。已知某些胺基酸可取代成具有類似親水指數或分數的其他胺基酸且仍然保留類似生物活性。在基於親水指數進行改變時，在某些實施例中，包括親水指數在±2內之胺基酸的取代。在某些實施例中，包括親水指數在±1內之胺基酸的取代，且在某些實施例中，包括親水指數在±0.5內之胺基酸的取代。
在此項技術中亦應理解，可基於親水性有效地進行類似胺基酸之取代。在某些實施例中，由相鄰胺基酸之親水性所決定的蛋白質之最大局部平均親水性與其免疫原性及抗原性相關，亦即，與蛋白質之生物特性相關。
已對此等胺基酸殘基分配以下親水性值：精胺酸(+3.0)；離胺酸(+3.0)；天冬胺酸(+3.0±1)；麩胺酸(+3.0±1)；絲胺酸(+0.3)；天冬醯胺(+0.2)；麩醯胺酸(+0.2)；甘胺酸(0)；蘇胺酸(-0.4)；脯胺酸(-0.5±1)；丙胺酸(-0.5)；組胺酸(-0.5)；半胱胺酸(-1.0)；甲硫胺酸(-1.3)；纈胺酸(-1.5)；白胺酸(-1.8)；異白胺酸(-1.8)；酪胺酸(-2.3)；苯丙胺酸(-2.5)及色胺酸(-3.4)。在基於類似親水性值進行改變時，在某些實施例中，包括親水性值在±2內之胺基酸的取代，在某些實施例中，包括親水性值在±1內之胺基酸的取代，且在某些實施例中，包括親水性值在±0.5內之胺基酸的取代。
例示性胺基酸取代示於 表 2中。 表 2. 胺基酸取代 .
原始殘基 例示性取代 較佳之取代
Ala Val、Leu、Ile Val
Arg Lys、Gln、Asn Lys
Asn Gln Gln
Asp Glu Glu
Cys Ser、Ala Ser
Gln Asn Asn
Glu Asp Asp
Gly Pro、Ala Ala
His Asn、Gln、Lys、Arg Arg
Ile Leu、Val、Met、Ala, Phe、正白胺酸 Leu
Leu 正白胺酸、Ile, Val、Met、Ala、Phe Ile
Lys Arg、1,4二胺基-丁酸、Gln、Asn Arg
Met Leu、Phe、Ile Leu
Phe Leu、Val、Ile、Ala, Tyr Leu
Pro Ala、Gly Ala
Ser Thr、Ala、Cys Thr
Thr Ser Ser
Trp Tyr、Phe Tyr
Tyr Trp、Phe、Thr、Ser Phe
Val Ile、Met、Leu、Phe, Ala、正白胺酸 Leu
根據本發明，熟練技術人員將能夠使用熟知技術確定如本文所闡述之干擾素相聯抗原結合蛋白的適合變異體。在某些實施例中，熟習此項技術者可藉由靶向咸信對活性不重要之區域來鑑別分子中可在不破壞活性之情況下進行改變的適合區域。在某些實施例中，可鑑別分子中在類似多肽間保守之殘基及部分。在某些實施例中，甚至對於生物活性或對於結構很重要之區域亦可經歷保守胺基酸取代，而不破壞生物活性或不會不利地影響多肽結構。
此外，熟習此項技術者可回顧鑑別類似多肽中對於活性或結構很重要之殘基的結構-功能研究。鑒於此類比較，可預測蛋白質中對應於類似蛋白質中對活性或結構很重要之胺基酸殘基的胺基酸殘基之重要性。熟習此項技術者可選擇化學上類似之胺基酸取代該等預測很重要之胺基酸殘基。
熟習此項技術者亦可關於類似蛋白質或蛋白質域之結構來分析三維結構及胺基酸序列。鑒於該等資訊，熟習此項技術者可參照三維結構預測如本文所描述之干擾素相聯抗原結合蛋白、抗體或其抗原結合片段、或者干擾素或其功能片段之胺基酸殘基的排列。在某些實施例中，熟習此項技術者可選擇不對預測位於蛋白質表面上之胺基酸殘基作出根本性改變，因為此類殘基可涉及與其他分子之重要相互作用。此外，熟習此項技術者可產生在各所需胺基酸殘基處含有單一胺基酸取代之測試變異體。接著，可使用熟習此項技術者已知之活性分析來篩選該等變異體。此等變異體可用以收集關於適合變異體之資訊。舉例而言，若發現改變特定胺基酸殘基會導致破壞、不合需要地降低或不適合之活性，則可避免具有此類改變之變異體。換言之，基於自該等實驗收集之資訊，熟習此項技術者可容易地確定應避免單獨或與其他突變組合之其他取代的胺基酸。
根據某些實施例，胺基酸取代係以下取代：(1)減小對蛋白水解之敏感性；(2)減小對氧化之敏感性；(3)改變有關形成蛋白質複合物之結合親和力；(4)改變結合親和力；及/或(5)賦予或改良此類多肽之其他物理化學或功能特性。根據某些實施例，可在天然存在之序列中(在某些實施例中，在形成分子間接觸之(複數個)域外的多肽部分中)進行單個或多個胺基酸取代(在某些實施例中為保守胺基酸取代)。在某些實施例中，保守胺基酸取代通常不會實質上改變親代序列之結構特徵(例如置換胺基酸往往不應斷開親代序列中存在之螺旋或破壞表徵該親代序列的其他類型之二級結構)。此項技術中公認的多肽二級及三級結構之實例描述於以下中： Proteins, Structures and Molecular Principles(Creighton編, W. H. Freeman and Company, New York (1984))； Introduction to Protein Structure(C. Branden及J. Tooze編, Garland Publishing, New York, N.Y. (1991))；以及Thornton等人, Nature, 354:105 (1991)，其各以引用的方式併入本文中。
術語「 衍生物」係指包括除胺基酸(或核酸)之插入、缺失或取代外之化學修飾的分子。在某些實施例中，衍生物包含共價修飾，包括但不限於與聚合物、脂質或其他有機或無機部分化學鍵結。在某些實施例中，經化學修飾之干擾素相聯抗原結合蛋白可具有比未經化學修飾之干擾素相聯抗原結合蛋白要大的循環半衰期。在某些實施例中，經化學修飾之干擾素相聯抗原結合蛋白可對所需細胞、組織及/或器官具有改善的靶向能力。在一些實施例中，衍生物干擾素相聯抗原結合蛋白經共價修飾成包括一或多種水溶性聚合物連接，包括但不限於聚乙二醇、聚氧乙二醇或聚丙二醇。參見例如美國專利第4,640,835號、第4,496,689號、第4,301,144號、第4,670,417號、第4,791,192號及第4,179,337號。在某些實施例中，衍生物干擾素相聯抗原結合蛋白包含一或多種聚合物，包括但不限於單甲氧基-聚乙二醇、葡聚糖、纖維素或其他以碳水化合物為主之聚合物、聚(N-乙烯基吡咯啶酮)-聚乙二醇、丙二醇均聚物、聚氧化丙烯/氧化乙烯共聚物、聚氧乙基化多元醇(例如甘油)及聚乙烯醇，以及此類聚合物之混合物。
在某些實施例中，本文所描述之干擾素相聯抗原結合蛋白的衍生物經聚乙二醇(PEG)次單元共價修飾。在某些實施例中，一或多種水溶性聚合物在衍生物之一或多個特定位置處，例如在胺基末端處鍵結。在某些實施例中，一或多種水溶性聚合物隨機連接至衍生物之一或多個側鏈。在某些實施例中，使用PEG改善干擾素相聯抗原結合蛋白之治療能力。某些此類方法論述於例如美國專利第6,133,426號中，該案特此以引用的方式併入用於任何目的。
在某些實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白變異體包括糖基化變異體，其中糖基化位點之數目及/或類型相較於親代多肽之胺基酸序列已改變。在某些實施例中，與天然蛋白質相比，蛋白質變異體包含較大數目的N-連接之糖基化位點。在其他實施例中，與天然蛋白質相比，蛋白質變異體包含較少數目的N-連接之糖基化位點。N-連接之糖基化位點係由Asn-X-Ser或Asn-X-Thr序列表徵，其中指定為X之胺基酸殘基可為除脯胺酸之外的任何胺基酸殘基。用於產生此序列的胺基酸殘基之取代提供潛在的新位點以用於添加N-連接之碳水化合物鏈。替代地，消除此序列之取代將移除現有的N-連接之碳水化合物鏈。亦提供N-連接之碳水化合物鏈的重新佈置，其中消除一個、二個、三個、四個、五個或更多個N-連接之糖基化位點(通常為天然存在之糖基化位點)且產生一或多個新的N-連接位點。其他較佳的變異體包括半胱胺酸變異體，其中相較於親代胺基酸序列，一或多個半胱胺酸殘基缺失或被取代為另一胺基酸(例如絲胺酸)。當抗體必須再摺疊成具有生物活性的構形時，諸如在分離不溶性包涵體之後，半胱胺酸變異體可為有用的。半胱胺酸變異體一般具有比天然蛋白質少的半胱胺酸殘基，且通常具有偶數個以使由不配對半胱胺酸產生之相互作用減到最小。 冠狀病毒感染
本文所描述之干擾素相聯抗原結合蛋白、核酸、載體、載體系統、方法及組成物可用於治療冠狀病毒感染，特別是SARS-CoV-2感染。如本文所使用，「 治療冠狀病毒感染」及「 冠狀病毒感染之治療」係指以下中之一或多者：(i)挽救細胞免於冠狀病毒誘發之細胞死亡；(ii)挽救細胞免於冠狀病毒誘發之細胞病變作用；(iii)減輕一或多種冠狀病毒相關病症；及(iv)減輕個體之一或多種冠狀病毒相關症狀。
術語「 病毒負荷量」及「 病毒力價」係指細胞、器官或體液諸如血液或血清中病毒顆粒之數目。取決於分析之類型，病毒負荷量或病毒力價通常以每毫升的病毒顆粒數或感染性顆粒數表示。當今，病毒負荷量通常使用國際單位/毫升(IU/mL)量度。病毒負荷量或病毒力價可替代地以所謂的病毒基因體當量確定。較高的病毒負擔、力價或病毒負荷量通常與活動性病毒感染之嚴重程度相關。因此，降低病毒負荷量或病毒力價與例如血清中感染性病毒顆粒之數目減少相關。病毒負荷量通常係使用基於核酸擴增之測試(NATs或NAATss)確定。NAT/NAAT測試利用例如PCR、(定量)逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR或qRT-PCR)、基於核酸序列之擴增(NASBA)或基於探針之分析。由於使用基於核酸擴增之測試易於偵測病毒核酸，故病毒負荷量可用於臨床環境中以在治療期間監測成功性。
術語「 患者」與「 個體」可互換使用且包括人類及非人類動物個體、較佳地人類個體，以及患有經正式診斷之病症的個體、未患經正式辨識之病症的個體、接受醫療照顧的個體、有發展病症之風險的個體等。
如本文所使用，「 冠狀病毒相關病症」，特別是與SARS-CoV-2感染相關之病症係指由個體感染冠狀病毒引起之病症。冠狀病毒相關病症包括但不限於Covid-19、呼吸道疾患、肺炎以及由此等病症中之任一者引起的症狀及/或併發症。
如本文所使用，「 冠狀病毒相關症狀」、「 冠狀病毒感染之症狀」或「 冠狀病毒相關併發症」包括與冠狀病毒感染有關，特別是與SARS-CoV-2感染有關的一或多種身體功能異常。冠狀病毒症狀及併發症包括但不限於發熱、乾咳、疲倦、呼吸困難或呼吸短促、胸部疼痛或壓迫、味覺喪失、味覺倒錯(parageusia)、味覺減退(hypogeusia)、嗅覺喪失、嗅覺倒錯(parosmia)、嗅覺減退(hyposmia)以及類似症狀及併發症。 干擾素
如本文所使用，「 干擾素」或「 IFN」係指通常由細胞回應於病原體或腫瘤細胞之存在而產生及釋放的細胞介素或其衍生物。IFN包括I型IFN (例如IFNα、IFNβ、IFNε、IFNκ、IFNτ、IFNζ及IFNω)、II型IFN (例如IFNγ)及III型IFN (例如IFNλ1、IFNλ2及IFNλ3)。術語「干擾素」或「IFN」包括但不限於全長IFN、其變異體或衍生物(例如以化學方式(例如聚乙二醇化)修飾之衍生物或突變蛋白)、或其保留全長IFN之一或多種信號傳導活性的功能活性片段。
如本文所使用，術語「 功能片段」係指保留原始物質之一或多種功能活性的物質之片段。舉例而言，干擾素之功能片段係指保留如本文所描述之IFN功能(例如其介導IFN路徑信號傳導)的干擾素之片段。
IFN當添加至表現同源IFN受體(對於IFNα為IFNAR、對於IFNβ為IFNBR等)之細胞、組織或生物體中時，可使一或多種IFN受體活性增加至少約20%。在一些實施例中，干擾素使IFN受體活性活化至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%或至少85%。IFN之活性(亦即，「 IFN 活性」)可如實例I中更詳細地描述，例如使用活體外報導體細胞分析，例如使用HEK-Blue™ IFN-α/β細胞(InvivoGen，目錄號：hkb-ifnαβ)、HEKBlue™ IFN-λ(InvivoGen，目錄號：hkb-ifnl)或HEK-Blue™ Dual IFN-γ細胞(InvivoGen，目錄號：hkb-ifng)量測。此等報導體細胞係藉由用人類IFN受體基因及 IFN 刺激之反應元件控制的分泌性胚胎鹼性磷酸酶(SEAP)構築體穩定轉染HEK293細胞產生，用以量測IFN之活性。HEK-Blue™ IFN細胞係設計成用於監測由I型、II型或III型干擾素誘導的JAK/STAT/ISGF3路徑活化情況。活化此等路徑將誘導SEAP之產生及釋放。
在本發明的情形中，干擾素相聯抗原結合蛋白活化CD40路徑及IFN路徑兩者。在某些實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白以低於100、60、50、40、30、20、10或1 ng/mL之EC 50、較佳地以低於11 ng/mL之EC 50、更佳地以低於6 ng/mL之EC 50活化IFN路徑，其中IFN活性較佳地如例如實例I中所描述，使用活體外報導體細胞分析，任擇地使用HEK-Blue TMIFN細胞確定。
在此等實施例中之一些實施例中，IFN路徑係干擾素α(IFNα)、干擾素β(IFNβ)、干擾素ε(IFNε)、干擾素ω(IFNω)、干擾素γ(IFNγ)或干擾素λ(IFNλ)路徑。
根據某些例示性實施例，本文所描述之干擾素相聯抗原結合蛋白包含全長IFN、其變異體或衍生物(例如以化學方式(例如聚乙二醇化)修飾之衍生物或突變蛋白)，或其保留全長IFN之一或多種信號傳導活性的功能活性片段。在某些實施例中，IFN係人類IFN。
在某些實施例中，本文所描述之干擾素相聯抗原結合蛋白包含選自由以下組成之群的IFN或其功能片段：I型IFN、II型IFN及III型IFN，或其功能片段。
在特定實施例中，IFN或其功能片段係I型IFN或其功能片段。在特定實施例中，I型IFN或其功能片段係IFNα、IFNβ、IFNω或IFNε，或其功能片段。在更特定之實施例中，I型IFN或其功能片段係IFNα或IFNβ，或其功能片段。在其他更特定之實施例中，I型IFN或其功能片段係IFN α或其功能片段。在其他更特定之實施例中，I型IFN或其功能片段係IFN β或其功能片段。在其他更特定之實施例中，I型IFN或其功能片段係IFNω或其功能片段。在其他更特定之實施例中，I型IFN或其功能片段係IFNε或其功能片段。
在特定實施例中，IFN或其功能片段係IFNα、IFNβ、IFNγ、IFNλ、IFNε或IFNω，或其功能片段。在特定實施例中，IFN或其功能片段係IFNα或IFNβ，或其功能片段。
在一些實施例中，IFN或其功能片段係IFNα或其功能片段。在更特定之實施例中，IFN或其功能片段係IFNα2a或其功能片段。IFNα2a可包含如SEQ ID NO 17中所示之序列或與該序列至少90%一致之序列。
在一些實施例中，IFN或其功能片段係IFNβ或其功能片段。IFNβ可包含如SEQ ID NO 14中所示之序列或與該序列至少90%一致之序列。IFNβ或其功能片段相對於SEQ ID NO 14可包含選自C17S及N80Q之一個或二個胺基酸取代。在一些實施例中，IFNβ或其功能片段相對於SEQ ID NO 14包含胺基酸取代C17S。在一些實施例中，IFNβ包含如SEQ ID NO 15中所示之胺基酸序列。在其他實施例中，IFNβ相對於SEQ ID NO 14包含胺基酸取代C17S及N80Q。在又其他實施例中，IFNβ包含如SEQ ID NO 16中所示之胺基酸序列。
在一些實施例中，IFN或其功能片段係IFNγ或IFNλ，或其功能片段。在特定實施例中，IFN或其功能片段係IFNγ或其功能片段。在更特定之實施例中，IFNγ包含如SEQ ID NO 19中所示之序列、或與該序列至少90%一致之序列。在其他特定實施例中，IFN或其功能片段係IFNλ或其功能片段。在更特定之實施例中，IFNλ或其功能片段係IFNλ2或其功能片段。IFNλ2可包含如SEQ ID NO 18中所示之序列或與該序列至少90%一致之序列。
在一些實施例中，IFN或其功能片段係IFNε或其功能片段。IFNε可包含如SEQ ID NO 80中所示之序列或與該序列至少90%一致之序列。
在一些實施例中，IFN或其功能片段係IFNω或其功能片段。IFNω可包含如SEQ ID NO 79中所示之序列或與該序列至少90%一致之序列。
在某些實施例中，用本文所描述之干擾素相聯抗原結合蛋白 治療的感染冠狀病毒之細胞中一或多個IFN信號傳導路徑生物標記物之表現位準改變，亦即，上調或下調。根據某些例示性實施例，用本文所描述之干擾素相聯抗原結合蛋白治療的感染冠狀病毒之細胞中一或多個IFN路徑生物標記物之表現位準上調。在此情形中，「 生物標記物」應理解為作為正常生物過程、致病過程或對治療干預之藥理學反應的指標進行客觀地量測及評價的特徵。
根據某些實施例，作為本文之特徵的適合IFN路徑生物標記物係選自由CXCL9、CXCL10及CXCL11組成之群的趨化因子，例如C-X-C趨化因子。在某些例示性實施例中，由IFN路徑誘導的適合生物標記物係CXCL9、CXCL10及/或CXCL11，以及干擾素刺激基因ISG20。細胞介素誘導或釋放可使用此項技術中已知之技術，諸如ELISA定量。替代地，亦可使用基於RNA之分析，諸如RNAseq或qRT-PCR確定誘導作用。在某些實施例中，上調可以指此等細胞介素之表現或分泌的至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少4倍至少5倍或至少10倍增加。
在此等實施例中或在其他例示性實施例中，在用本發明之干擾素相聯抗原結合蛋白治療後，人全血細胞中促炎性細胞介素，例如IL10、IL1β及/或IL2之表現位準未明顯上調。在一些實施例中，在用本發明之干擾素相聯抗原結合蛋白治療後，人全血細胞中IL10之表現位準未明顯上調。在一些實施例中，在用本發明之干擾素相聯抗原結合蛋白治療後，人全血細胞中IL1β之表現位準未明顯上調。在一些實施例中，在用本發明之干擾素相聯抗原結合蛋白治療後，感染冠狀病毒之細胞中IL2之表現位準未明顯上調。在一些實施例中，在用本發明之干擾素相聯抗原結合蛋白治療後，感染冠狀病毒之細胞中IL10及IL1β之表現位準未明顯上調。在一些實施例中，在用本發明之干擾素相聯抗原結合蛋白治療後，感染冠狀病毒之細胞中IL10及IL2之表現位準未明顯上調。在一些實施例中，在用本發明之干擾素相聯抗原結合蛋白治療後，感染冠狀病毒之細胞中IL1β及IL2之表現位準未明顯上調。在一些實施例中，在用本發明之干擾素相聯抗原結合蛋白治療後，感染冠狀病毒之細胞中IL10、IL1β及IL2之表現位準未明顯上調。 干擾素相聯抗原結合蛋白
如本文所使用，術語「 相聯( associated)」一般係指二個(或更多個)分子的共價或非共價鍵聯。相聯蛋白質係藉由接合二種或更多種不同肽或蛋白質，產生具有衍生自原始蛋白質各者之一或多種功能特性的蛋白質而產生。在本發明的情形中，干擾素相聯抗原結合蛋白活化CD40路徑及IFN路徑兩者。相聯蛋白質涵蓋不同相聯或融合蛋白質之複合物的單體及多聚體，例如二聚體、三聚體、四聚體或類似物。在此情形中，非共價鍵聯係由二個蛋白質表面區之間之較強相互作用產生，通常經由離子、凡得瓦爾(Van-der-Waals)及/或氫鍵相互作用產生。另一方面，共價鍵聯需要存在實際化學鍵，諸如肽鍵、二硫橋鍵等。如本文所使用，術語「 融合」一般係指二種或更多種不同肽或蛋白質經由肽鍵共價接合。因此，「 融合蛋白」係藉由經肽鍵接合二種或更多種不同肽或蛋白質產生的具有衍生自原始蛋白質各者之一或多種功能特性的單一蛋白質。在某些實施例中，二種或更多種不同肽或蛋白質可經由一或多個肽連接子(「L」)彼此融合。
在本發明之某一態樣中，干擾素相聯抗原結合蛋白係包含促效性抗CD40抗體或其促效抗原結合片段以及IFN或其功能片段的蛋白質。
在一些實施例中，IFN或其功能片段與促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段非共價相聯。在更特定之實施例中，IFN或其功能片段經由離子、凡得瓦爾及/或氫鍵相互作用與促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段非共價相聯。
在其他實施例中，IFN或其功能片段與促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段共價相聯。在較佳實施例中，IFN或其功能片段與促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段融合。IFN或其功能片段可與促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之輕鏈融合。在一些實施例中，IFN或其功能片段與促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之輕鏈的N末端融合。在其他實施例中，IFN或其功能片段與促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之輕鏈的C末端融合。IFN或其功能片段亦可與促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之重鏈融合。在一些實施例中，IFN或其功能片段與促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之重鏈的N末端融合。在其他實施例中，IFN或其功能片段與促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之重鏈的C末端融合。在此等實施例中之任一者中，促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段與IFN或其功能片段可經由連接子彼此融合。
如本文所使用，術語「 連接子」或「 L」係指將一或多種促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段與一或多種干擾素或其功能片段共價接合的任何部分。在例示性實施例中，連接子係肽連接子。如本文所使用，術語「 肽連接子」係指適合於連接二個或更多個部分之肽。本文所提及之肽連接子可具有以下概述之特性中之一或多者。根據某些例示性實施例之肽連接子的序列示於 表 7中。
肽連接子可具有任何長度，亦即，包含任何數目之胺基酸殘基。在例示性實施例中，連接子包含至少1個、至少2個、至少3個、至少4個、至少5個胺基酸。連接子可包含至少4個胺基酸。連接子可包含至少11個胺基酸。連接子可包含至少12個胺基酸。連接子可包含至少13個胺基酸。連接子可包含至少15個胺基酸。連接子可包含至少20個胺基酸。連接子可包含至少21個胺基酸。連接子可包含至少24個胺基酸。
連接子通常足夠長以提供適當程度之可撓性，由此防止連接之部分干擾彼此的活性，例如一個部分結合至受體之能力。在例示性實施例中，連接子包含至多10個、至多20個、至多30個、至多40個、至多50個、至多60個、至多70個、至多80個、至多90個或至多100個胺基酸。連接子可包含至多80個胺基酸。連接子可包含至多40個胺基酸。連接子可包含至多24個胺基酸。連接子可包含至多21個胺基酸。連接子可包含至多20個胺基酸。連接子可包含至多15個胺基酸。連接子可包含至多13個胺基酸。連接子可包含至多12個胺基酸。連接子可包含至多11個胺基酸。連接子可包含至多4個胺基酸。
在一些實施例中，連接子選自包含以下之群：剛性連接子、可撓性連接子及/或成螺旋連接子。應理解，成螺旋連接子亦可為剛性連接子，因為α-螺旋之自由度低於呈現更類似隨機線圈構形之肽的自由度。在一些實施例中，連接子係剛性連接子。例示性剛性連接子包含如SEQ ID NO 20中所示之序列。其他例示性剛性連接子包含如SEQ ID NO 22或SEQ ID NO 23中所示之序列。在相關實施例中，連接子係成螺旋連接子。例示性成螺旋連接子包含如SEQ ID NO 22或SEQ ID NO 23中所示之序列。在其他實施例中，連接子係可撓性連接子。例示性可撓性連接子包含如SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 25或SEQ ID NO 26中所示之序列。
連接子亦可具有不同化學特性。連接子可選自酸性連接子、鹼性連接子或中性連接子。通常，酸性連接子含有一或多個酸性胺基酸，諸如Asp或Glu。鹼性連接子通常含有一或多個鹼性胺基酸，諸如Arg、His及Lys。兩種類型之胺基酸均具有極高親水性。在一些實施例中，連接子係酸性連接子。例示性酸性連接子包含如SEQ ID NO 22或SEQ ID NO 23中所示之序列。在其他實施例中，連接子係鹼性連接子。在又其他實施例中，連接子係中性連接子。例示性中性連接子包含如SEQ ID NO 20、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 25或SEQ ID NO 26中所示之序列。
在較佳實施例中，連接子係Gly-Ser或Gly-Ser-Thr連接子，其由多個甘胺酸、絲胺酸以及適用時蘇胺酸殘基構成。在此等實施例中之一些實施例中，連接子包含胺基酸甘胺酸及絲胺酸。在更特定之實施例中，連接子包含如SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 25、SEQ ID NO 26中所示之序列。在一些實施例中，連接子進一步包含胺基酸蘇胺酸。在一個更特定之實施例中，連接子包含如SEQ ID NO 21中所示之序列。
在本發明之例示性實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白包括含選自如SEQ ID NOs 20至26中所示之序列、較佳地選自如SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 25或SEQ ID NO 26中所示之序列之序列的連接子。在一個較佳實施例中，連接子包含如SEQ ID NO 24中所示之序列。在另一個較佳實施例中，連接子包含如SEQ ID NO 25中所示之序列。在另一個較佳實施例中，連接子包含如SEQ ID NO 26中所示之序列。
在本發明之態樣中之任一者的各種實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白不包含除形成以下之胺基酸外的胺基酸：(I)該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段以及(II)該IFN或其功能片段。在相關實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白不包含除形成以下之胺基酸外的胺基酸：(I)該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段、(II)該IFN或其功能片段以及(III)該連接子。
表示(I)該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段、(II)該干擾素(IFN)或其功能片段以及(III)該連接子之各種不同組態的例示性實施例概述於下。
在某些較佳實施例中，IFN或其功能片段經由如 表 3A或 表 3B中所示之連接子與促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之重鏈的C末端融合。在此等實施例中，促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之重鏈可包含如SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 48或SEQ ID NO 49、SEQ ID NO 61或SEQ ID NO 63中所示之序列。IFNα2a可包含如SEQ ID NO 17中所示之序列 。IFNβ可包含如SEQ ID NO 14、SEQ ID NO 15或SEQ ID NO 16中所示之序列。IFNβ可包含如SEQ ID NO 14中所示之序列。IFNβ_C17S可包含如SEQ ID NO 15中所示之序列。IFNβ_C17S,N80Q可包含如SEQ ID NO 16中所示之序列。IFNγ可包含如SEQ ID NO 19中所示之序列。IFNλ2可包含如SEQ ID NO 18中所示之序列。IFNε可包含如SEQ ID NO 80中所示之序列。IFNω可包含如SEQ ID NO 79中所示之序列。所提及之連接子係 表 7中所列者。
在IFN與促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之重鏈的C末端融合之實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白進一步包含促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之輕鏈。在更特定之實施例中，重鏈包含如SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 48或SEQ ID NO 49中所示之序列且輕鏈包含如SEQ ID NO 3中所示之序列。在其他更特定之實施例中，重鏈包含如SEQ ID NO 61或SEQ ID NO 63中所示之序列且輕鏈包含如SEQ ID NO 59中所示之序列。 表 3. 與抗 CD40 抗體或其促效性抗原結合片段之重鏈的 C 末端 融合之干擾素或其功能片段 .
A IFNα2a IFNβ IFNβ_C17S IFNβ_C17S,N80Q IFNγ IFNλ2
RL 連接子 抗CD40_HC--RL--IFNα2a 抗CD40_HC--RL--IFNβ 抗CD40_HC--RL--IFNβ_C17S 抗CD40_HC--RL--IFNβ_C17S,N80Q 抗CD40_HC--RL--IFNγ 抗CD40_HC--RL--IFNλ2
GST 連接子 抗CD40_HC--GST--IFNα2a 抗CD40_HC--GST--IFNβ 抗CD40_HC--GST--IFNβ_C17S 抗CD40_HC--GST--IFNβ_C17S,N80Q 抗CD40_HC--GST--IFNγ 抗CD40_HC--GST--IFNλ2
HL 連接子 抗CD40_HC--HL--IFNα2a 抗CD40_HC--HL--IFNβ 抗CD40_HC--HL--IFNβ_C17S 抗CD40_HC--HL--IFNβ_C17S,N80Q 抗CD40_HC--HL--IFNγ 抗CD40_HC--HL--IFNλ2
HL2 連接子 抗CD40_HC--HL2--IFNα2a 抗CD40_HC--HL2--IFNβ 抗CD40_HC--HL2--IFNβ_C17S 抗CD40_HC--HL2--IFNβ_C17S,N80Q 抗CD40_HC--HL2--IFNγ 抗CD40_HC--HL2--IFNλ2
(G4S)2 連接子 抗CD40_HC--(G4S)2--IFNα2a 抗CD40_HC--(G4S)2--IFNβ 抗CD40_HC--(G4S)2--IFNβ_C17S 抗CD40_HC--(G4S)2--IFNβ_C17S,N80Q 抗CD40_HC--(G4S)2--IFNγ 抗CD40_HC--(G4S)2--IFNλ2
(G4S)3 連接子 抗CD40_HC--(G4S)3--IFNα2a 抗CD40_HC--(G4S)3--IFNβ 抗CD40_HC--(G4S)3--IFNβ_C17S 抗CD40_HC--(G4S)3--IFNβ_C17S,N80Q 抗CD40_HC--(G4S)3--IFNγ 抗CD40_HC--(G4S)3--IFNλ2
(G4S)4 連接子 抗CD40_HC--(G4S)4--IFNα2a 抗CD40_HC--(G4S)4--IFNβ 抗CD40_HC--(G4S)4--IFNβ_C17S 抗CD40_HC--(G4S)4--IFNβ_C17S,N80Q 抗CD40_HC--(G4S)4--IFNγ 抗CD40_HC--(G4S)4--IFNλ2
B IFNε IFNω
RL 連接子 抗CD40_HC--RL--IFNε 抗CD40_HC--RL--IFNω
GST 連接子 抗CD40_HC--GST--IFNε 抗CD40_HC--GST--IFNω
HL 連接子 抗CD40_HC--HL--IFNε 抗CD40_HC--HL--IFNω
HL2 連接子 抗CD40_HC--HL2--IFNε 抗CD40_HC--HL2--IFNω
(G4S)2 連接子 抗CD40_HC--(G4S)2--IFNε 抗CD40_HC--(G4S)2--IFNω
(G4S)3 連接子 抗CD40_HC--(G4S)3--IFNε 抗CD40_HC--(G4S)3--IFNω
(G4S)4 連接子 抗CD40_HC--(G4S)4--IFNε 抗CD40_HC--(G4S)4--IFNω
在某些較佳實施例中，IFN或其功能片段經由如 表 4A或 表 4B中所示之連接子與促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之重鏈的N末端融合。在此等實施例中，促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之重鏈可包含如SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 48、SEQ ID NO 49、SEQ ID NO 50、SEQ ID NO 61、SEQ ID NO 63或SEQ ID NO 65中所示之序列。IFNα2a可包含如SEQ ID NO 17中所示之序列。IFNβ可包含如SEQ ID NO 14、SEQ ID NO 15或SEQ ID NO 16中所示之序列。IFNβ可包含如SEQ ID NO 14中所示之序列。IFNβ_C17S可包含如SEQ ID NO 15中所示之序列。IFNβ_C17S,N80Q可包含如SEQ ID NO 16中所示之序列。IFNγ可包含如SEQ ID NO 19中所示之序列。IFNλ2可包含如SEQ ID NO 18中所示之序列。IFNε可包含如SEQ ID NO 80中所示之序列。IFNω可包含如SEQ ID NO 79中所示之序列。所提及之連接子係 表 7中所列者。
在IFN與促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之重鏈的N末端融合之實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白進一步包含促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之輕鏈。在更特定之實施例中，重鏈包含如SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 48、SEQ ID NO 49或SEQ ID NO 50中所示之序列且輕鏈包含如SEQ ID NO 3中所示之序列。在其他更特定之實施例中，重鏈包含如SEQ ID 61、SEQ ID 63或SEQ ID 65中所示之序列且輕鏈包含如SEQ ID NO 59中所示之序列。 表 4. 與抗 CD40 抗體或其促效性抗原結合片段之重鏈的 N 末端 融合之干擾素或其功能片段 .
A IFNα2a IFNβ IFNβ_C17S IFNβ_C17S,N80Q IFNγ IFNλ2
RL 連接子 IFNα2a--RL--抗CD40_HC IFNβ--RL--抗CD40_HC IFNβ_C17S--RL--抗CD40_HC IFNβ_C17S,N80Q--RL--抗CD40_HC IFNγ--RL--抗CD40_HC IFNλ2--RL--抗CD40_HC
GST 連接子 IFNα2a--GST--抗CD40_HC IFNβ--GST--抗CD40_HC IFNβ_C17S--GST--抗CD40_HC IFNβ_C17S,N80Q--GST--抗CD40_HC IFNγ--GST--抗CD40_HC IFNλ2--GST--抗CD40_HC
HL 連接子 IFNα2a--HL--抗CD40_HC IFNβ--HL--抗CD40_HC IFNβ_C17S--HL--抗CD40_HC IFNβ_C17S,N80Q--HL--抗CD40_HC IFNγ--HL--抗CD40_HC IFNλ2--HL--抗CD40_HC
HL2 連接子 IFNα2a--HL2--抗CD40_HC IFNβ--HL2--抗CD40_HC IFNβ_C17S--HL2--抗CD40_HC IFNβ_C17S,N80Q--HL2--抗CD40_HC IFNγ--HL2--抗CD40_HC IFNλ2--HL2--抗CD40_HC
(G4S)2 連接子 IFNα2a--(G4S)2--抗CD40_HC IFNβ--(G4S)2--抗CD40_HC IFNβ_C17S--(G4S)2--抗CD40_HC IFNβ_C17S,N80Q--(G4S)2--抗CD40_HC IFNγ--(G4S)2--抗CD40_HC IFNλ2--(G4S)2--抗CD40_HC
(G4S)3 連接子 IFNα2a--(G4S)3--抗CD40_HC IFNβ--(G4S)3--抗CD40_HC IFNβ_C17S--(G4S)3--抗CD40_HC IFNβ_C17S,N80Q--(G4S)3--抗CD40_HC IFNγ--(G4S)3--抗CD40_HC IFNλ2--(G4S)3--抗CD40_HC
(G4S)4 連接子 IFNα2a--(G4S)4--抗CD40_HC IFNβ--(G4S)4--抗CD40_HC IFNβ_C17S--(G4S)4--抗CD40_HC IFNβ_C17S,N80Q--(G4S)4--抗CD40_HC IFNγ--(G4S)4--抗CD40_HC IFNλ2--(G4S)4--抗CD40_HC
B IFNε IFNω
RL 連接子 IFNε--RL--抗CD40_HC IFNω--RL--抗CD40_HC
GST 連接子 IFNε--GST--抗CD40_HC IFNω--GST--抗CD40_HC
HL 連接子 IFNε--HL--抗CD40_HC IFNω--HL--抗CD40_HC
HL2 連接子 IFNε--HL2--抗CD40_HC IFNω--HL2--抗CD40_HC
(G4S)2 連接子 IFNε--(G4S)2--抗CD40_HC IFNω--(G4S)2--抗CD40_HC
(G4S)3 連接子 IFNε--(G4S)3--抗CD40_HC IFNω--(G4S)3--抗CD40_HC
(G4S)4 連接子 IFNε--(G4S)4--抗CD40_HC IFNω--(G4S)4--抗CD40_HC
在某些較佳實施例中，IFN經由如 表 5A或 表 5B中所示之連接子與促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之輕鏈的C末端融合。在此等實施例中，促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之輕鏈可包含如SEQ ID NO 3中所示之序列。在其他實施例中，輕鏈可包含如SEQ ID NO 59中所示之序列。IFNα2a可包含如SEQ ID NO 17中所示之序列。IFNβ可包含如SEQ ID NO 14、SEQ ID NO 15或SEQ ID NO 16中所示之序列。IFNβ可包含如SEQ ID NO 14中所示之序列。IFNβ_C17S可包含如SEQ ID NO 15中所示之序列。IFNβ_C17S,N80Q可包含如SEQ ID NO 16中所示之序列。IFNγ可包含如SEQ ID NO 19中所示之序列。IFNλ2可包含如SEQ ID NO 18中所示之序列。IFNε可包含如SEQ ID NO 80中所示之序列。IFNω可包含如SEQ ID NO 79中所示之序列。所提及之連接子係 表 7中所列者。
在IFN與促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之輕鏈的C末端融合之實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白進一步包含促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之重鏈。在更特定之實施例中，輕鏈包含如SEQ ID NO 3中所示之序列且重鏈包含如SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 49、SEQ ID NO 48、SEQ ID NO 50或SEQ ID NO 12中所示之序列。在其他更特定之實施例中，輕鏈包含如SEQ ID NO 59中所示之序列且重鏈包含如SEQ ID NO 61、SEQ ID NO 63或SEQ ID NO 65中所示之序列。 表 5. 與抗 CD40 抗體或其促效性抗原結合片段之輕鏈的 C 末端 融合之干擾素或其功能片段 .
A IFNα2a IFNβ IFNβ_C17S IFNβ_C17S,N80Q IFNγ IFNλ2
RL 連接子 抗CD40_LC—RL--IFNα2a 抗CD40_LC--RL--IFNβ 抗CD40_LC--RL--IFNβ_C17S 抗CD40_LC--RL--IFNβ_C17S,N80Q 抗CD40_LC--RL--IFNγ 抗CD40_LC--RL--IFNλ2
GST 連接子 抗CD40_LC--GST--IFNα2a 抗CD40_LC--GST--IFNβ 抗CD40_LC--GST--IFNβ_C17S 抗CD40_LC--GST--IFNβ_C17S,N80Q 抗CD40_LC--GST--IFNγ 抗CD40_LC--GST--IFNλ2
HL 連接子 抗CD40_LC--HL--IFNα2a 抗CD40_LC--HL--IFNβ 抗CD40_LC--HL--IFNβ_C17S 抗CD40_LC--HL--IFNβ_C17S,N80Q 抗CD40_LC--HL--IFNγ 抗CD40_LC--HL--IFNλ2
HL2 連接子 抗CD40_LC--HL2--IFNα2a 抗CD40_LC--HL2--IFNβ 抗CD40_LC--HL2--IFNβ_C17S 抗CD40_LC--HL2--IFNβ_C17S,N80Q 抗CD40_LC--HL2--IFNγ 抗CD40_LC--HL2--IFNλ2
(G4S)2 連接子 抗CD40_LC--(G4S)2--IFNα2a 抗CD40_LC--(G4S)2--IFNβ 抗CD40_LC--(G4S)2--IFNβ_C17S 抗CD40_LC--(G4S)2--IFNβ_C17S,N80Q 抗CD40_LC--(G4S)2--IFNγ 抗CD40_LC--(G4S)2--IFNλ2
(G4S)3 連接子 抗CD40_LC--(G4S)3--IFNα2a 抗CD40_LC--(G4S)3--IFNβ 抗CD40_LC--(G4S)3--IFNβ_C17S 抗CD40_LC--(G4S)3--IFNβ_C17S,N80Q 抗CD40_LC--(G4S)3--IFNγ 抗CD40_LC--(G4S)3--IFNλ2
(G4S)4 連接子 抗CD40_LC--(G4S)4--IFNα2a 抗CD40_LC--(G4S)4--IFNβ 抗CD40_LC--(G4S)4--IFNβ_C17S 抗CD40_LC--(G4S)4--IFNβ_C17S,N80Q 抗CD40_LC--(G4S)4--IFNγ 抗CD40_LC--(G4S)4--IFNλ2
B IFNε IFNω
RL 連接子 抗CD40_LC--RL--IFNε 抗CD40_LC--RL--IFNω
GST 連接子 抗CD40_LC--GST--IFNε 抗CD40_LC--GST--IFNω
HL 連接子 抗CD40_LC--HL--IFNε 抗CD40_LC--HL--IFNω
HL2 連接子 抗CD40_LC--HL2--IFNε 抗CD40_LC--HL2--IFNω
(G4S)2 連接子 抗CD40_LC--(G4S)2--IFNε 抗CD40_LC--(G4S)2--IFNω
(G4S)3 連接子 抗CD40_LC--(G4S)3--IFNε 抗CD40_LC--(G4S)3--IFNω
(G4S)4 連接子 抗CD40_LC--(G4S)4--IFNε 抗CD40_LC--(G4S)4--IFNω
在某些較佳實施例中，IFN經由如 表 6A或 表 6B中所示之連接子與促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之輕鏈的N末端融合。在此等實施例中，促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之輕鏈可包含如SEQ ID NO 3或SEQ ID NO 59中所示之序列。IFNα2a可包含如SEQ ID NO 17中所示之序列。IFNβ可包含如SEQ ID NO 14、SEQ ID NO 15或SEQ ID NO 16中所示之序列。IFNβ可包含如SEQ ID NO 14中所示之序列。IFNβ_C17S可包含如SEQ ID NO 15中所示之序列。IFNβ_C17S,N80Q可包含如SEQ ID NO 16中所示之序列。IFNγ可包含如SEQ ID NO 19中所示之序列。IFNλ2可包含如SEQ ID NO 18中所示之序列。IFNε可包含如SEQ ID NO 80中所示之序列。IFNω可包含如SEQ ID NO 79中所示之序列。所提及之連接子係 表 7中所列者。
在IFN與促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之輕鏈的N末端融合之實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白進一步包含促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之重鏈。在更特定之實施例中，輕鏈包含如SEQ ID NO 3中所示之序列且重鏈包含如SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 49、SEQ ID NO 48、SEQ ID NO 12或SEQ ID NO 50中所示之序列。在其他更特定之實施例中，輕鏈包含如SEQ ID NO 59中所示之序列且重鏈包含如SEQ ID NO 61、SEQ ID NO 63或SEQ ID NO 65中所示之序列。 表 6. 與抗 CD40 抗體或其促效性抗原結合片段之輕鏈的 N 末端 融合之干擾素或其功能片段 .
A IFNα2a IFNβ IFNβ_C17S IFNβ_C17S,N80Q IFNγ IFNλ2
RL 連接子 IFNα2a--RL--抗CD40_LC IFNβ--RL--抗CD40_LC IFNβ_C17S--RL--抗CD40_LC IFNβ_C17S,N80Q--RL--抗CD40_LC IFNγ--RL--抗CD40_LC IFNλ2--RL--抗CD40_LC
GST 連接子 IFNα2a--GST--抗CD40_LC IFNβ--GST--抗CD40_LC IFNβ_C17S--GST--抗CD40_LC IFNβ_C17S,N80Q--GST--抗CD40_LC IFNγ--GST--抗CD40_LC IFNλ2--GST--抗CD40_LC
HL 連接子 IFNα2a--HL--抗CD40_LC IFNβ--HL--抗CD40_LC IFNβ_C17S--HL--抗CD40_LC IFNβ_C17S,N80Q--HL--抗CD40_LC IFNγ--HL--抗CD40_LC IFNλ2--HL--抗CD40_LC
HL2 連接子 IFNα2a--HL2--抗CD40_LC IFNβ--HL2--抗CD40_LC IFNβ_C17S--HL2--抗CD40_LC IFNβ_C17S,N80Q--HL2--抗CD40_LC IFNγ--HL2--抗CD40_LC IFNλ2--HL2--抗CD40_LC
(G4S)2 連接子 IFNα2a--(G4S)2--抗CD40_LC IFNβ--(G4S)2--抗CD40_LC IFNβ_C17S--(G4S)2--抗CD40_LC IFNβ_C17S,N80Q--(G4S)2--抗CD40_LC IFNγ--(G4S)2--抗CD40_LC IFNλ2--(G4S)2--抗CD40_LC
(G4S)3 連接子 IFNα2a--(G4S)3--抗CD40_LC IFNβ--(G4S)3--抗CD40_LC IFNβ_C17S--(G4S)3--抗CD40_LC IFNβ_C17S,N80Q--(G4S)3--抗CD40_LC IFNγ--(G4S)3--抗CD40_LC IFNλ2--(G4S)3--抗CD40_LC
(G4S)4 連接子 IFNα2a--(G4S)4--抗CD40_LC IFNβ--(G4S)4--抗CD40_LC IFNβ_C17S--(G4S)4--抗CD40_LC IFNβ_C17S,N80Q--(G4S)4--抗CD40_LC IFNγ--(G4S)4--抗CD40_LC IFNλ2--(G4S)4--抗CD40_LC
B IFNε IFNω
RL 連接子 IFNε--RL--抗CD40_LC IFNω--RL--抗CD40_LC
GST 連接子 IFNε--GST--抗CD40_LC IFNω--GST--抗CD40_LC
HL 連接子 IFNε--HL--抗CD40_LC IFNω--HL--抗CD40_LC
HL2 連接子 IFNε--HL2--抗CD40_LC IFNω--HL2--抗CD40_LC
(G4S)2 連接子 IFNε--(G4S)2--抗CD40_LC IFNω--(G4S)2--抗CD40_LC
(G4S)3 連接子 IFNε--(G4S)3--抗CD40_LC IFNω--(G4S)3--抗CD40_LC
(G4S)4 連接子 IFNε--(G4S)4--抗CD40_LC IFNω--(G4S)4--抗CD40_LC
本發明之干擾素相聯抗原結合蛋白或其前驅物中所包含之例示性序列列於 表 7中。
在例示性較佳實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白包含融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含選自SEQ ID NOs 28-47或SEQ ID NOs 66-75之序列。在其他例示性實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白包含融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含選自SEQ ID NOs 81-88之序列。在例示性較佳實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含選自SEQ ID NOs 28-47或SEQ ID NOs 66-75之序列。在其他例示性實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含選自SEQ ID NOs 81-88之序列。在其他例示性實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含選自SEQ ID NOs 93-94之序列。
在某些例示性實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白包含融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 93中所示之序列。在另一個例示性實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 93中所示之序列。
在某些例示性實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白包含融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 94中所示之序列。在另一個例示性實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 94中所示之序列。
在某些例示性實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白包含融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 81中所示之序列。在另一個例示性實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 81中所示之序列。
在某些例示性實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白包含融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 82中所示之序列。在另一個例示性實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 82中所示之序列。
在某些例示性實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白包含融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 83中所示之序列。在另一個例示性實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 83中所示之序列。
在某些例示性實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白包含融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 84中所示之序列。在另一個例示性實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 84中所示之序列。
在某些例示性實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白包含融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 85中所示之序列。在另一個例示性實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 85中所示之序列。
在某些例示性實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白包含融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 86中所示之序列。在另一個例示性實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 86中所示之序列。
在某些例示性實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白包含融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 87中所示之序列。在另一個例示性實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 87中所示之序列。
在某些例示性實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白包含融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 88中所示之序列。在另一個例示性實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 88中所示之序列。
在更佳之實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白包含融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含選自SEQ ID NO 38、SEQ ID NO 39、SEQ ID NO 40、SEQ ID NO 41、SEQ ID NO 42或SEQ ID NO 43之序列。在更佳之實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含選自SEQ ID NO 38、SEQ ID NO 39、SEQ ID NO 40、SEQ ID NO 41、SEQ ID NO 42或SEQ ID NO 43之序列。在其他更佳之實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白包含融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含選自SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74及SEQ ID NO 75之序列。在又其他更佳之實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含選自SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74及SEQ ID NO 75之序列。
在甚至更佳之實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白包含融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 38中所示之序列。在又另一個甚至更佳之實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 38中所示之序列。
在另一個甚至更佳之實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白包含融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 39中所示之序列。在另一個甚至更佳之實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 39中所示之序列。
在另一個甚至更佳之實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白包含融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 40中所示之序列。在另一個甚至更佳之實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 40中所示之序列。
在另一個甚至更佳之實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白包含融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 41中所示之序列。在另一個甚至更佳之實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 41中所示之序列。
在另一個甚至更佳之實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白包含融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 42中所示之序列。在另一個甚至更佳之實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 42中所示之序列。
在另一個甚至更佳之實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白包含融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 43中所示之序列。在另一個甚至更佳之實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 43中所示之序列。
在另一個甚至更佳之實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白包含融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 72中所示之序列。在另一個甚至更佳之實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 72中所示之序列。
在另一個甚至更佳之實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白包含融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 73中所示之序列。在另一個甚至更佳之實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 73中所示之序列。
在另一個甚至更佳之實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白包含融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 74中所示之序列。在另一個甚至更佳之實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 74中所示之序列。
在另一個甚至更佳之實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白包含融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 75中所示之序列。在另一個甚至更佳之實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 75中所示之序列。 表 7. 基於抗 CD40 抗體 CP870 , 893 之 例示性干擾素相聯抗原結合蛋白及其組分的序列。斜體序列對應於信號肽。 SEQ ID NOs 3 及 6 中之粗體斜體序列對應於 CDR 區 。粗體非斜體序列對應於連接子。突變胺基酸加下劃線。
名稱/SEQ ID編號 序列
信號肽1 (SEQ ID NO 1) MGWSCIILFLVATATGVHS
信號肽2 (SEQ ID NO 2) MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARC
抗CD40抗體輕鏈 (SEQ ID NO 3) DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITC RASQGIYSWLA WYQQKPGKAPNLLIY TAST LQS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQANIFPLT FGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
具有信號肽1之抗CD40抗體輕鏈 (SEQ ID NO 4) MGWSCIILFLVATATGVHSDIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIYSWLAWYQQKPGKAPNLLIYTASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANIFPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
具有信號肽2之抗CD40抗體輕鏈 (SEQ ID NO 5) MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARCDIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIYSWLAWYQQKPGKAPNLLIYTASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANIFPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
抗CD40抗體重鏈hIgG2 dK (SEQ ID NO 6) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTF TGYYMH WVRQAPGQGLEWMG WINPDSGGTNYAQKFQG RVTMTRDTSISTAYMELNRLRSDDTAVYYCAR DQPLGYCTNGVCSYFDY WGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
具有信號肽1之抗CD40抗體重鏈hIgG2 dK (SEQ ID NO 7) MGWSCIILFLVATATGVHSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPDSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELNRLRSDDTAVYYCARDQPLGYCTNGVCSYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
具有信號肽2之抗CD40抗體重鏈hIgG2 dK (SEQ ID NO 8) MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARCQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPDSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELNRLRSDDTAVYYCARDQPLGYCTNGVCSYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
抗CD40抗體重鏈hIgG2 (SEQ ID NO 9) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPDSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELNRLRSDDTAVYYCARDQPLGYCTNGVCSYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
具有信號肽1之抗CD40抗體重鏈hIgG2 (SEQ ID NO 10) MGWSCIILFLVATATGVHSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPDSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELNRLRSDDTAVYYCARDQPLGYCTNGVCSYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
具有信號肽2之抗CD40抗體重鏈hIgG2 (SEQ ID NO 11) MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARCQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPDSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELNRLRSDDTAVYYCARDQPLGYCTNGVCSYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
抗CD40抗體hIgG1重鏈-NNAS (SEQ ID NO 48) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPDSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELNRLRSDDTAVYYCARDQPLGYCTNGVCSYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NNASRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
抗CD40抗體hIgG1重鏈-NNAS-dK (SEQ ID NO 49) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPDSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELNRLRSDDTAVYYCARDQPLGYCTNGVCSYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NNASRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
抗CD40抗體hIgG2 Fab區重鏈 (SEQ ID NO 12) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPDSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELNRLRSDDTAVYYCARDQPLGYCTNGVCSYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVE
具有信號肽1之抗CD40抗體hIgG2 Fab區重鏈 (SEQ ID NO 13) MGWSCIILFLVATATGVHSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPDSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELNRLRSDDTAVYYCARDQPLGYCTNGVCSYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVE
抗CD40抗體hIgG2 Fab區重鏈 --TEV--6His標籤 (SEQ ID NO 50) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPDSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELNRLRSDDTAVYYCARDQPLGYCTNGVCSYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVEENLYFQSHHHHHH
IFNβ dM (SEQ ID NO 76) SYNLLGFLQRSSNFQCQKLLWQLNGRLEYCLKDRMNFDIPEEIKQLQQFQKEDAALTIYEMLQNIFAIFRQDSSSTGWNETIVENLLANVYHQINHLKTVLEEKLEKEDFTRGKLMSSLHLKRYYGRILHYLKAKEYSHCAWTIVRVEILRNFYFINRLTGYLRN
IFNβ dM C17S (SEQ ID NO 77) SYNLLGFLQRSSNFQ SQKLLWQLNGRLEYCLKDRMNFDIPEEIKQLQQFQKEDAALTIYEMLQNIFAIFRQDSSSTGWNETIVENLLANVYHQINHLKTVLEEKLEKEDFTRGKLMSSLHLKRYYGRILHYLKAKEYSHCAWTIVRVEILRNFYFINRLTGYLRN
IFNβ (SEQ ID NO 14) MSYNLLGFLQRSSNFQCQKLLWQLNGRLEYCLKDRMNFDIPEEIKQLQQFQKEDAALTIYEMLQNIFAIFRQDSSSTGWNETIVENLLANVYHQINHLKTVLEEKLEKEDFTRGKLMSSLHLKRYYGRILHYLKAKEYSHCAWTIVRVEILRNFYFINRLTGYLRN
IFNβ C17S (SEQ ID NO 15) MSYNLLGFLQRSSNFQ SQKLLWQLNGRLEYCLKDRMNFDIPEEIKQLQQFQKEDAALTIYEMLQNIFAIFRQDSSSTGWNETIVENLLANVYHQINHLKTVLEEKLEKEDFTRGKLMSSLHLKRYYGRILHYLKAKEYSHCAWTIVRVEILRNFYFINRLTGYLRN
IFNβ C17S,N80Q (SEQ ID NO 16) MSYNLLGFLQRSSNFQ SQKLLWQLNGRLEYCLKDRMNFDIPEEIKQLQQFQKEDAALTIYEMLQNIFAIFRQDSSSTGW QETIVENLLANVYHQINHLKTVLEEKLEKEDFTRGKLMSSLHLKRYYGRILHYLKAKEYSHCAWTIVRVEILRNFYFINRLTGYLRN
IFNα2a (SEQ ID NO 17) CDLPQTHSLGSRRTLMLLAQMRKISLFSCLKDRHDFGFPQEEFGNQFQKAETIPVLHEMIQQIFNLFSTKDSSAAWDETLLDKFYTELYQQLNDLEACVIQGVGVTETPLMKEDSILAVRKYFQRITLYLKEKKYSPCAWEVVRAEIMRSFSLSTNLQESLRSKE
IFNλ2 (SEQ ID NO 18) VPVARLHGALPDARGCHIAQFKSLSPQELQAFKRAKDALEESLLLKDCRCHSRLFPRTWDLRQLQVRERPMALEAELALTLKVLEATADTDPALVDVLDQPLHTLHHILSQFRACIQPQPTAGPRTRGRLHHWLYRLQEAPKKESPGCLEASVTFNLFRLLTRDLNCVASGDLCV
IFNγ (SEQ ID NO 19) QDPYVKEAENLKKYFNAGHSDVADNGTLFLGILKNWKEESDRKIMQSQIVSFYFKLFKNFKDDQSIQKSVETIKEDMNVKFFNSNKKKRDDFEKLTNYSVTDLNVQRKAIHELIQVMAELSPAAKTGKRKRSQMLFRGRRASQ
IFNω (SEQ ID NO 79) LGCDLPQNHGLLSRNTLVLLHQMRRISPFLCLKDRRDFRFPQEMVKGSQLQKAHVMSVLHEMLQQIFSLFHTERSSAAWNMTLLDQLHTGLHQQLQHLETCLLQVVGEGESAGAISSPALTLRRYFQGIRVYLKEKKYSDCAWEVVRMEIMKSLFLSTNMQERLRSKDRDLGSS
IFNε (SEQ ID NO 80) LDLKLIIFQQRQVNQESLKLLNKLQTLSIQQCLPHRKNFLLPQKSLSPQQYQKGHTLAILHEMLQQIFSLFRANISLDGWEENHTEKFLIQLHQQLEYLEALMGLEAEKLSGTLGSDNLRLQVKMYFRRIHDYLENQDYSTCAWAIVQVEISRCLFFVFSLTEKLSKQGRPLNDMKQELTTEFRSPR
RL連接子 (SEQ ID NO 20) PAPA
GST連接子 (SEQ ID NO 21) SGGTSGSTSGTGS
HL連接子 (SEQ ID NO 22) AEAAAKEAAAKA
HL2連接子 (SEQ ID NO 23) AEAAAKEAAAKAAEAAAKEAAAKA
(G4S)2連接子 (SEQ ID NO 24) GGGGSGGGGS
(G4S)3連接子 (SEQ ID NO 25) GGGGSGGGGSGGGGS
(G4S)4連接子 (SEQ ID NO 26) GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS
TEV-6His標籤 (SEQ ID NO 27) ENLYFQSHHHHHH
抗CD40_LC--HL--IFNβ (SEQ ID NO 28) DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIYSWLAWYQQKPGKAPNLLIYTASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANIFPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC AEAAAKEAAAKAMSYNLLGFLQRSSNFQCQKLLWQLNGRLEYCLKDRMNFDIPEEIKQLQQFQKEDAALTIYEMLQNIFAIFRQDSSSTGWNETIVENLLANVYHQINHLKTVLEEKLEKEDFTRGKLMSSLHLKRYYGRILHYLKAKEYSHCAWTIVRVEILRNFYFINRLTGYLRN
抗CD40_LC--HL--IFNβ_C17S (SEQ ID NO 29)    DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIYSWLAWYQQKPGKAPNLLIYTASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANIFPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC AEAAAKEAAAKAMSYNLLGFLQRSSNFQ SQKLLWQLNGRLEYCLKDRMNFDIPEEIKQLQQFQKEDAALTIYEMLQNIFAIFRQDSSSTGWNETIVENLLANVYHQINHLKTVLEEKLEKEDFTRGKLMSSLHLKRYYGRILHYLKAKEYSHCAWTIVRVEILRNFYFINRLTGYLRN
抗CD40_hIgG2_dK_HC--RL--IFNβ (SEQ ID NO 30) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPDSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELNRLRSDDTAVYYCARDQPLGYCTNGVCSYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG PAPAMSYNLLGFLQRSSNFQCQKLLWQLNGRLEYCLKDRMNFDIPEEIKQLQQFQKEDAALTIYEMLQNIFAIFRQDSSSTGWNETIVENLLANVYHQINHLKTVLEEKLEKEDFTRGKLMSSLHLKRYYGRILHYLKAKEYSHCAWTIVRVEILRNFYFINRLTGYLRN
抗CD40_hIgG2_dK_HC--RL--IFNβ_C17S (SEQ ID NO 31) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPDSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELNRLRSDDTAVYYCARDQPLGYCTNGVCSYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG PAPAMSYNLLGFLQRSSNFQ SQKLLWQLNGRLEYCLKDRMNFDIPEEIKQLQQFQKEDAALTIYEMLQNIFAIFRQDSSSTGWNETIVENLLANVYHQINHLKTVLEEKLEKEDFTRGKLMSSLHLKRYYGRILHYLKAKEYSHCAWTIVRVEILRNFYFINRLTGYLRN
抗CD40_hIgG2_dK_HC--HL--IFNβ (SEQ ID NO 32) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPDSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELNRLRSDDTAVYYCARDQPLGYCTNGVCSYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG AEAAAKEAAAKAMSYNLLGFLQRSSNFQCQKLLWQLNGRLEYCLKDRMNFDIPEEIKQLQQFQKEDAALTIYEMLQNIFAIFRQDSSSTGWNETIVENLLANVYHQINHLKTVLEEKLEKEDFTRGKLMSSLHLKRYYGRILHYLKAKEYSHCAWTIVRVEILRNFYFINRLTGYLRN
抗CD40_hIgG2_dK_HC--HL--IFNβ_C17S (SEQ ID NO 33) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPDSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELNRLRSDDTAVYYCARDQPLGYCTNGVCSYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG AEAAAKEAAAKAMSYNLLGFLQRSSNFQ SQKLLWQLNGRLEYCLKDRMNFDIPEEIKQLQQFQKEDAALTIYEMLQNIFAIFRQDSSSTGWNETIVENLLANVYHQINHLKTVLEEKLEKEDFTRGKLMSSLHLKRYYGRILHYLKAKEYSHCAWTIVRVEILRNFYFINRLTGYLRN
抗CD40_LC--RL--IFNβ (SEQ ID NO 34) DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIYSWLAWYQQKPGKAPNLLIYTASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANIFPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC PAPAMSYNLLGFLQRSSNFQCQKLLWQLNGRLEYCLKDRMNFDIPEEIKQLQQFQKEDAALTIYEMLQNIFAIFRQDSSSTGWNETIVENLLANVYHQINHLKTVLEEKLEKEDFTRGKLMSSLHLKRYYGRILHYLKAKEYSHCAWTIVRVEILRNFYFINRLTGYLRN
抗CD40_LC--RL--IFNβ_C17S (SEQ ID NO 35) DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIYSWLAWYQQKPGKAPNLLIYTASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANIFPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC PAPAMSYNLLGFLQRSSNFQ SQKLLWQLNGRLEYCLKDRMNFDIPEEIKQLQQFQKEDAALTIYEMLQNIFAIFRQDSSSTGWNETIVENLLANVYHQINHLKTVLEEKLEKEDFTRGKLMSSLHLKRYYGRILHYLKAKEYSHCAWTIVRVEILRNFYFINRLTGYLRN
抗CD40_LC--GST--IFNβ_C17S (SEQ ID NO 36) DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIYSWLAWYQQKPGKAPNLLIYTASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANIFPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC SGGTSGSTSGTGSMSYNLLGFLQRSSNFQ SQKLLWQLNGRLEYCLKDRMNFDIPEEIKQLQQFQKEDAALTIYEMLQNIFAIFRQDSSSTGWNETIVENLLANVYHQINHLKTVLEEKLEKEDFTRGKLMSSLHLKRYYGRILHYLKAKEYSHCAWTIVRVEILRNFYFINRLTGYLRN
抗CD40_LC--HL2--IFNβ_C17S (SEQ ID NO 37) DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIYSWLAWYQQKPGKAPNLLIYTASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANIFPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC AEAAAKEAAAKAAEAAAKEAAAKAMSYNLLGFLQRSSNFQ SQKLLWQLNGRLEYCLKDRMNFDIPEEIKQLQQFQKEDAALTIYEMLQNIFAIFRQDSSSTGWNETIVENLLANVYHQINHLKTVLEEKLEKEDFTRGKLMSSLHLKRYYGRILHYLKAKEYSHCAWTIVRVEILRNFYFINRLTGYLRN
抗CD40_hIgG2_dK_HC--(G4S)2--IFNα2a (SEQ ID NO 38) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPDSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELNRLRSDDTAVYYCARDQPLGYCTNGVCSYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG GGGGSGGGGSCDLPQTHSLGSRRTLMLLAQMRKISLFSCLKDRHDFGFPQEEFGNQFQKAETIPVLHEMIQQIFNLFSTKDSSAAWDETLLDKFYTELYQQLNDLEACVIQGVGVTETPLMKEDSILAVRKYFQRITLYLKEKKYSPCAWEVVRAEIMRSFSLSTNLQESLRSKE
抗CD40_hIgG2_dK_HC--(G4S)3--IFNα2a (SEQ ID NO 39) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPDSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELNRLRSDDTAVYYCARDQPLGYCTNGVCSYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG GGGGSGGGGSGGGGSCDLPQTHSLGSRRTLMLLAQMRKISLFSCLKDRHDFGFPQEEFGNQFQKAETIPVLHEMIQQIFNLFSTKDSSAAWDETLLDKFYTELYQQLNDLEACVIQGVGVTETPLMKEDSILAVRKYFQRITLYLKEKKYSPCAWEVVRAEIMRSFSLSTNLQESLRSKE
抗CD40_hIgG2_dK_HC--(G4S)4--IFNα2a (SEQ ID NO 40) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPDSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELNRLRSDDTAVYYCARDQPLGYCTNGVCSYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSCDLPQTHSLGSRRTLMLLAQMRKISLFSCLKDRHDFGFPQEEFGNQFQKAETIPVLHEMIQQIFNLFSTKDSSAAWDETLLDKFYTELYQQLNDLEACVIQGVGVTETPLMKEDSILAVRKYFQRITLYLKEKKYSPCAWEVVRAEIMRSFSLSTNLQESLRSKE
抗CD40_LC--(G4S)2--IFNα2a (SEQ ID NO 41) DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIYSWLAWYQQKPGKAPNLLIYTASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANIFPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC GGGGSGGGGSCDLPQTHSLGSRRTLMLLAQMRKISLFSCLKDRHDFGFPQEEFGNQFQKAETIPVLHEMIQQIFNLFSTKDSSAAWDETLLDKFYTELYQQLNDLEACVIQGVGVTETPLMKEDSILAVRKYFQRITLYLKEKKYSPCAWEVVRAEIMRSFSLSTNLQESLRSKE
抗CD40_LC--(G4S)3--IFNα2a (SEQ ID NO 42) DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIYSWLAWYQQKPGKAPNLLIYTASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANIFPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC GGGGSGGGGSGGGGSCDLPQTHSLGSRRTLMLLAQMRKISLFSCLKDRHDFGFPQEEFGNQFQKAETIPVLHEMIQQIFNLFSTKDSSAAWDETLLDKFYTELYQQLNDLEACVIQGVGVTETPLMKEDSILAVRKYFQRITLYLKEKKYSPCAWEVVRAEIMRSFSLSTNLQESLRSKE
抗CD40_LC--(G4S)4--IFNα2a (SEQ ID NO 43) DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIYSWLAWYQQKPGKAPNLLIYTASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANIFPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSCDLPQTHSLGSRRTLMLLAQMRKISLFSCLKDRHDFGFPQEEFGNQFQKAETIPVLHEMIQQIFNLFSTKDSSAAWDETLLDKFYTELYQQLNDLEACVIQGVGVTETPLMKEDSILAVRKYFQRITLYLKEKKYSPCAWEVVRAEIMRSFSLSTNLQESLRSKE
IFNβ--(G4S)3--抗CD40_LC) (SEQ ID NO 44) MSYNLLGFLQRSSNFQCQKLLWQLNGRLEYCLKDRMNFDIPEEIKQLQQFQKEDAALTIYEMLQNIFAIFRQDSSSTGWNETIVENLLANVYHQINHLKTVLEEKLEKEDFTRGKLMSSLHLKRYYGRILHYLKAKEYSHCAWTIVRVEILRNFYFINRLTGYLRN GGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIYSWLAWYQQKPGKAPNLLIYTASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANIFPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
抗CD40_LC--(G4S)4--IFNβ (SEQ ID NO 45) DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIYSWLAWYQQKPGKAPNLLIYTASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANIFPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSMSYNLLGFLQRSSNFQCQKLLWQLNGRLEYCLKDRMNFDIPEEIKQLQQFQKEDAALTIYEMLQNIFAIFRQDSSSTGWNETIVENLLANVYHQINHLKTVLEEKLEKEDFTRGKLMSSLHLKRYYGRILHYLKAKEYSHCAWTIVRVEILRNFYFINRLTGYLRN
IFNβ--(G4S)3--抗CD40_HC_IgG1_NNAS_dK (SEQ ID NO 46) MSYNLLGFLQRSSNFQCQKLLWQLNGRLEYCLKDRMNFDIPEEIKQLQQFQKEDAALTIYEMLQNIFAIFRQDSSSTGWNETIVENLLANVYHQINHLKTVLEEKLEKEDFTRGKLMSSLHLKRYYGRILHYLKAKEYSHCAWTIVRVEILRNFYFINRLTGYLRN GGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPDSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELNRLRSDDTAVYYCARDQPLGYCTNGVCSYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NNASRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
抗CD40_HC_IgG1_NNAS_dK--(G4S)4--IFNβ (SEQ ID NO 47) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPDSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELNRLRSDDTAVYYCARDQPLGYCTNGVCSYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NNASRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSMSYNLLGFLQRSSNFQCQKLLWQLNGRLEYCLKDRMNFDIPEEIKQLQQFQKEDAALTIYEMLQNIFAIFRQDSSSTGWNETIVENLLANVYHQINHLKTVLEEKLEKEDFTRGKLMSSLHLKRYYGRILHYLKAKEYSHCAWTIVRVEILRNFYFINRLTGYLRN
抗CD40_hIgG2 dK_HC--HL--IFNα2A (SEQ ID NO 81) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPDSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELNRLRSDDTAVYYCARDQPLGYCTNGVCSYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG AEAAAKEAAAKACDLPQTHSLGSRRTLMLLAQMRKISLFSCLKDRHDFGFPQEEFGNQFQKAETIPVLHEMIQQIFNLFSTKDSSAAWDETLLDKFYTELYQQLNDLEACVIQGVGVTETPLMKEDSILAVRKYFQRITLYLKEKKYSPCAWEVVRAEIMRSFSLSTNLQESLRSKE
抗CD40_LC-衍生物--HL--IFNα2A (SEQ ID NO 82) DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIYSWLAWYQQKPGKAPNLLIYTASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANIFPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEKSLSLSPG AEAAAKEAAAKACDLPQTHSLGSRRTLMLLAQMRKISLFSCLKDRHDFGFPQEEFGNQFQKAETIPVLHEMIQQIFNLFSTKDSSAAWDETLLDKFYTELYQQLNDLEACVIQGVGVTETPLMKEDSILAVRKYFQRITLYLKEKKYSPCAWEVVRAEIMRSFSLSTNLQESLRSKE
抗CD40_LC--(G4S)4--IFNγ (SEQ ID NO 83) DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIYSWLAWYQQKPGKAPNLLIYTASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANIFPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQDPYVKEAENLKKYFNAGHSDVADNGTLFLGILKNWKEESDRKIMQSQIVSFYFKLFKNFKDDQSIQKSVETIKEDMNVKFFNSNKKKRDDFEKLTNYSVTDLNVQRKAIHELIQVMAELSPAAKTGKRKRSQMLFRGRRASQ
抗CD40_hIgG2 dK_HC--(G4S)4--IFNγ (SEQ ID NO 84) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPDSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELNRLRSDDTAVYYCARDQPLGYCTNGVCSYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQDPYVKEAENLKKYFNAGHSDVADNGTLFLGILKNWKEESDRKIMQSQIVSFYFKLFKNFKDDQSIQKSVETIKEDMNVKFFNSNKKKRDDFEKLTNYSVTDLNVQRKAIHELIQVMAELSPAAKTGKRKRSQMLFRGRRASQ
抗CD40_LC--(G4S)4--IFNλ2 (SEQ ID NO 85) DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIYSWLAWYQQKPGKAPNLLIYTASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANIFPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSVPVARLHGALPDARGCHIAQFKSLSPQELQAFKRAKDALEESLLLKDCRCHSRLFPRTWDLRQLQVRERPMALEAELALTLKVLEATADTDPALVDVLDQPLHTLHHILSQFRACIQPQPTAGPRTRGRLHHWLYRLQEAPKKESPGCLEASVTFNLFRLLTRDLNCVASGDLCV
抗CD40_hIgG2 dK_HC--(G4S)4--IFNλ2 (SEQ ID NO 86) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPDSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELNRLRSDDTAVYYCARDQPLGYCTNGVCSYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSVPVARLHGALPDARGCHIAQFKSLSPQELQAFKRAKDALEESLLLKDCRCHSRLFPRTWDLRQLQVRERPMALEAELALTLKVLEATADTDPALVDVLDQPLHTLHHILSQFRACIQPQPTAGPRTRGRLHHWLYRLQEAPKKESPGCLEASVTFNLFRLLTRDLNCVASGDLCV
抗CD40_LC--(G4S)4--IFNω (SEQ ID NO 87) DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIYSWLAWYQQKPGKAPNLLIYTASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANIFPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSLGCDLPQNHGLLSRNTLVLLHQMRRISPFLCLKDRRDFRFPQEMVKGSQLQKAHVMSVLHEMLQQIFSLFHTERSSAAWNMTLLDQLHTGLHQQLQHLETCLLQVVGEGESAGAISSPALTLRRYFQGIRVYLKEKKYSDCAWEVVRMEIMKSLFLSTNMQERLRSKDRDLGSS
抗CD40_hIgG2 dK_HC--(G4S)4--IFNε (SEQ ID NO 88) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPDSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELNRLRSDDTAVYYCARDQPLGYCTNGVCSYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSLDLKLIIFQQRQVNQESLKLLNKLQTLSIQQCLPHRKNFLLPQKSLSPQQYQKGHTLAILHEMLQQIFSLFRANISLDGWEENHTEKFLIQLHQQLEYLEALMGLEAEKLSGTLGSDNLRLQVKMYFRRIHDYLENQDYSTCAWAIVQVEISRCLFFVFSLTEKLSKQGRPLNDMKQELTTEFRSPR
抗CD40_LC--(G4S)3--IFNβ_C17S (SEQ ID NO 94) DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIYSWLAWYQQKPGKAPNLLIYTASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANIFPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC GGGGSGGGGSGGGGSMSYNLLGFLQRSSNFQSQKLLWQLNGRLEYCLKDRMNFDIPEEIKQLQQFQKEDAALTIYEMLQNIFAIFRQDSSSTGWNETIVENLLANVYHQINHLKTVLEEKLEKEDFTRGKLMSSLHLKRYYGRILHYLKAKEYSHCAWTIVRVEILRNFYFINRLTGYLRN
表 8. 基於抗 CD40 抗體 3G5 之 例示性干擾素相聯抗原結合蛋白及其組分的序列。斜體序列對應於信號肽。粗體非斜體序列對應於連接子。突變胺基酸加下劃線。
名字/SEQ ID編號 序列
抗CD40_輕鏈 (SEQ ID NO 59) EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVRSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTINSLQSEDFAVYYCQQHNKWITFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
具有信號肽1之抗CD40_輕鏈 (SEQ ID NO 60) MGWSCIILFLVATATGVHSEIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVRSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTINSLQSEDFAVYYCQQHNKWITFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
抗CD40_重鏈hIgG2 dK (SEQ ID NO 61) QVQLVESGGGVVQPGKSLRLSCAASGFTFSSNGIHWVRQAPGKGLEWVAVIWSDGSNKFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARASGSGSYYNFFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
具有信號肽1之抗CD40_重鏈hIgG2 dK (SEQ ID NO 62) MGWSCIILFLVATATGVHSQVQLVESGGGVVQPGKSLRLSCAASGFTFSSNGIHWVRQAPGKGLEWVAVIWSDGSNKFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARASGSGSYYNFFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
抗CD40抗體Fab區重鏈hIgG2 (SEQ ID NO 63) QVQLVESGGGVVQPGKSLRLSCAASGFTFSSNGIHWVRQAPGKGLEWVAVIWSDGSNKFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARASGSGSYYNFFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVE
具有信號肽1之抗CD40抗體Fab區重鏈hIgG2 (SEQ ID NO 64) MGWSCIILFLVATATGVHSQVQLVESGGGVVQPGKSLRLSCAASGFTFSSNGIHWVRQAPGKGLEWVAVIWSDGSNKFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARASGSGSYYNFFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVE
抗CD40抗體Fab區重鏈hIgG2 --TEV--6His標籤 (SEQ ID NO 65) QVQLVESGGGVVQPGKSLRLSCAASGFTFSSNGIHWVRQAPGKGLEWVAVIWSDGSNKFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARASGSGSYYNFFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVEENLYFQSHHHHHH
抗CD40_hIgG2 dK_HC--RL--IFNβdM (SEQ ID NO 66) QVQLVESGGGVVQPGKSLRLSCAASGFTFSSNGIHWVRQAPGKGLEWVAVIWSDGSNKFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARASGSGSYYNFFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG PAPASYNLLGFLQRSSNFQCQKLLWQLNGRLEYCLKDRMNFDIPEEIKQLQQFQKEDAALTIYEMLQNIFAIFRQDSSSTGWNETIVENLLANVYHQINHLKTVLEEKLEKEDFTRGKLMSSLHLKRYYGRILHYLKAKEYSHCAWTIVRVEILRNFYFINRLTGYLRN
抗CD40_hIgG2 dK_HC--RL--IFNβdM_C17S (SEQ ID NO 67) QVQLVESGGGVVQPGKSLRLSCAASGFTFSSNGIHWVRQAPGKGLEWVAVIWSDGSNKFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARASGSGSYYNFFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG PAPASYNLLGFLQRSSNFQ SQKLLWQLNGRLEYCLKDRMNFDIPEEIKQLQQFQKEDAALTIYEMLQNIFAIFRQDSSSTGWNETIVENLLANVYHQINHLKTVLEEKLEKEDFTRGKLMSSLHLKRYYGRILHYLKAKEYSHCAWTIVRVEILRNFYFINRLTGYLRN
抗CD40_hIgG2 dK_HC--HL--IFNβdM (SEQ ID NO 68) QVQLVESGGGVVQPGKSLRLSCAASGFTFSSNGIHWVRQAPGKGLEWVAVIWSDGSNKFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARASGSGSYYNFFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG AEAAAKEAAAKASYNLLGFLQRSSNFQCQKLLWQLNGRLEYCLKDRMNFDIPEEIKQLQQFQKEDAALTIYEMLQNIFAIFRQDSSSTGWNETIVENLLANVYHQINHLKTVLEEKLEKEDFTRGKLMSSLHLKRYYGRILHYLKAKEYSHCAWTIVRVEILRNFYFINRLTGYLRN
抗CD40_hIgG2 dK_HC--HL--IFNβdM_C17S (SEQ ID NO 69) QVQLVESGGGVVQPGKSLRLSCAASGFTFSSNGIHWVRQAPGKGLEWVAVIWSDGSNKFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARASGSGSYYNFFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG AEAAAKEAAAKASYNLLGFLQRSSNFQ SQKLLWQLNGRLEYCLKDRMNFDIPEEIKQLQQFQKEDAALTIYEMLQNIFAIFRQDSSSTGWNETIVENLLANVYHQINHLKTVLEEKLEKEDFTRGKLMSSLHLKRYYGRILHYLKAKEYSHCAWTIVRVEILRNFYFINRLTGYLRN
抗CD40_LC--HL2--IFNβ_C17S (SEQ ID NO 70) EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVRSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTINSLQSEDFAVYYCQQHNKWITFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC AEAAAKEAAAKAAEAAAKEAAAKAMSYNLLGFLQRSSNFQ SQKLLWQLNGRLEYCLKDRMNFDIPEEIKQLQQFQKEDAALTIYEMLQNIFAIFRQDSSSTGWNETIVENLLANVYHQINHLKTVLEEKLEKEDFTRGKLMSSLHLKRYYGRILHYLKAKEYSHCAWTIVRVEILRNFYFINRLTGYLRN
抗CD40_LC--(G4S)3--IFNβ_C17S (SEQ ID NO 71) EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVRSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTINSLQSEDFAVYYCQQHNKWITFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC GGGGSGGGGSGGGGSMSYNLLGFLQRSSNFQ SQKLLWQLNGRLEYCLKDRMNFDIPEEIKQLQQFQKEDAALTIYEMLQNIFAIFRQDSSSTGWNETIVENLLANVYHQINHLKTVLEEKLEKEDFTRGKLMSSLHLKRYYGRILHYLKAKEYSHCAWTIVRVEILRNFYFINRLTGYLRN
抗CD40_hIgG2 dK_HC--(G4S)2--IFNα2a (SEQ ID NO 72) QVQLVESGGGVVQPGKSLRLSCAASGFTFSSNGIHWVRQAPGKGLEWVAVIWSDGSNKFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARASGSGSYYNFFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG GGGGSGGGGSCDLPQTHSLGSRRTLMLLAQMRKISLFSCLKDRHDFGFPQEEFGNQFQKAETIPVLHEMIQQIFNLFSTKDSSAAWDETLLDKFYTELYQQLNDLEACVIQGVGVTETPLMKEDSILAVRKYFQRITLYLKEKKYSPCAWEVVRAEIMRSFSLSTNLQESLRSKE
抗CD40_hIgG2 dK_HC--(G4S)3--IFNα2a (SEQ ID NO 73) QVQLVESGGGVVQPGKSLRLSCAASGFTFSSNGIHWVRQAPGKGLEWVAVIWSDGSNKFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARASGSGSYYNFFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG GGGGSGGGGSGGGGSCDLPQTHSLGSRRTLMLLAQMRKISLFSCLKDRHDFGFPQEEFGNQFQKAETIPVLHEMIQQIFNLFSTKDSSAAWDETLLDKFYTELYQQLNDLEACVIQGVGVTETPLMKEDSILAVRKYFQRITLYLKEKKYSPCAWEVVRAEIMRSFSLSTNLQESLRSKE
抗CD40_hIgG2 dK_HC--(G4S)4--IFNα2a (SEQ ID NO 74) QVQLVESGGGVVQPGKSLRLSCAASGFTFSSNGIHWVRQAPGKGLEWVAVIWSDGSNKFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARASGSGSYYNFFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSCDLPQTHSLGSRRTLMLLAQMRKISLFSCLKDRHDFGFPQEEFGNQFQKAETIPVLHEMIQQIFNLFSTKDSSAAWDETLLDKFYTELYQQLNDLEACVIQGVGVTETPLMKEDSILAVRKYFQRITLYLKEKKYSPCAWEVVRAEIMRSFSLSTNLQESLRSKE
抗CD40_hIgG2 dK_HC--HL--IFNα2a (SEQ ID NO 75) QVQLVESGGGVVQPGKSLRLSCAASGFTFSSNGIHWVRQAPGKGLEWVAVIWSDGSNKFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARASGSGSYYNFFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG AEAAAKEAAAKACDLPQTHSLGSRRTLMLLAQMRKISLFSCLKDRHDFGFPQEEFGNQFQKAETIPVLHEMIQQIFNLFSTKDSSAAWDETLLDKFYTELYQQLNDLEACVIQGVGVTETPLMKEDSILAVRKYFQRITLYLKEKKYSPCAWEVVRAEIMRSFSLSTNLQESLRSKE
抗CD40 _hIgG2 dK_HC--(G4S)4--IFNγ (SEQ ID NO 93) QVQLVESGGGVVQPGKSLRLSCAASGFTFSSNGIHWVRQAPGKGLEWVAVIWSDGSNKFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARASGSGSYYNFFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQDPYVKEAENLKKYFNAGHSDVADNGTLFLGILKNWKEESDRKIMQSQIVSFYFKLFKNFKDDQSIQKSVETIKEDMNVKFFNSNKKKRDDFEKLTNYSVTDLNVQRKAIHELIQVMAELSPAAKTGKRKRSQMLFRGRRASQ
在較佳實施例中，本文所描述之干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之抗原結合蛋白，其包含衍生自下 表 9、特定言之 表 9A或 表 9B、更特定言之 表 9A中說明之多肽，且尤其衍生自以上SEQ ID NO 38、SEQ ID NO 39、SEQ ID NO 40、SEQ ID NO 41、SEQ ID NO 42或SEQ ID NO 43之多肽的多肽。在較佳實施例中，本文所描述之干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之抗原結合蛋白，其由衍生自下 表 9、特定言之 表 9A或 表 9 B、更特定言之 表 9A中說明之多肽，且尤其衍生自以上SEQ ID NO 38、SEQ ID NO 39、SEQ ID NO 40、SEQ ID NO 41、SEQ ID NO 42或SEQ ID NO 43之多肽的多肽組成。在更佳之實施例中，融合干擾素之抗體包含如SEQ ID NO 38及SEQ ID NO 3中所示之序列。在其他更佳之實施例中，融合干擾素之抗體包含如SEQ ID NO 39及SEQ ID NO 3中所示之序列。在其他更佳之實施例中，融合干擾素之抗體包含如SEQ ID NO 40及SEQ ID NO 3中所示之序列。在其他更佳之實施例中，融合干擾素之抗體包含如SEQ ID NO 41及SEQ ID NO 9中所示之序列。在其他更佳之實施例中，融合干擾素之抗體包含如SEQ ID NO 42及SEQ ID NO 9中所示之序列。在其他更佳之實施例中，融合干擾素之抗體包含如SEQ ID NO 43及SEQ ID NO 9中所示之序列。
表 9. 基於抗 CD40 抗體 CP870 , 893 的 本發明之較佳融合干擾素之抗原結合蛋白中發現的多肽組合、其針對 CD40 及 IFN 路徑活化之平均 EC 50 值以及其生產力 ( 亦即， 每公升培養物之產量 ) 。所指示之各序列組合在各別 IFA 中包含二次。SN：上清液。 A
融合干擾素之抗體 (IFA) 序列組合 CD40 EC 50(ng/mL) IFNβ EC 50(ng/mL) IFNα EC 50(ng/mL) 生產力 (mg/L)
IFA1 (SEQ ID NO 28) + (SEQ ID NO 9) 74,1 1,64    16,7
IFA2 (SEQ ID NO 29) + (SEQ ID NO 9) 111 0,14    17,8
IFA8 (SEQ ID NO 30) + (SEQ ID NO 3) 39,7 2,9    6,45
IFA9 (SEQ ID NO 31) + (SEQ ID NO 3) 42,6 0,7    3,4
IFA10 (SEQ ID NO 32) + (SEQ ID NO 3) 26,5 4,5    6,9
IFA11 (SEQ ID NO 33) + (SEQ ID NO 3) 42,8 1,78    5,1
IFA12 (SEQ ID NO 34) + (SEQ ID NO 9) 105 3,64    21,2
IFA13 (SEQ ID NO 35) + (SEQ ID NO 9) 192 0,7    11,5
IFA19 (SEQ ID NO 36) + (SEQ ID NO 9) 110 1,3    5,6
IFA20 (SEQ ID NO 37) + (SEQ ID NO 9) 182 2,34    4,2
IFA25 (SEQ ID NO 38) + (SEQ ID NO 3) 13,3    5,1 21
IFA26 (SEQ ID NO 39) + (SEQ ID NO 3) 15,35    4 8,6
IFA27 (SEQ ID NO 40) + (SEQ ID NO 3) 17    2,4 9,3
IFA28 (SEQ ID NO 41) + (SEQ ID NO 9) 12,8    4,5 75
IFA29 (SEQ ID NO 42) + (SEQ ID NO 9) 11,1    2 56,6
IFA30 (SEQ ID NO 43) + (SEQ ID NO 9) 11,3    1,6 46,6
IFA34 (SEQ ID NO 44) + (SEQ ID NO 49) 有活性(SN) 有活性(SN)    未大量產生
IFA35 (SEQ ID NO 45) + (SEQ ID NO 49) 有活性(SN) 有活性(SN)    未大量產生
IFA36 (SEQ ID NO 46) + (SEQ ID NO 3) 有活性(SN) 有活性(SN)    未大量產生
IFA37 (SEQ ID NO 47) + (SEQ ID NO 3) 有活性(SN) 有活性(SN)    未大量產生
IFA126 (SEQ ID NO 94) + (SEQ ID NO 9) 364,05 2,075    未確定
B
融合干擾素之抗體 (IFA) 序列組合 CD40 EC 50(ng/mL) IFNα EC 50(ng/mL) IFNλ EC 50(ng/mL) IFNγ EC 50(ng/mL) IFNε EC 50(ng/mL) IFNω EC 50(ng/mL) 生產力 (mg/L)
IFA38 (SEQ ID NO 81) + (SEQ ID NO 3) 22.7 3.77             1.32
IFA39 (SEQ ID NO 82) + (SEQ ID NO 9) 17.5 2.95             1.25
IFA42 (SEQ ID NO 83) + (SEQ ID NO 9) 65.6       15.4       0.72
IFA43 (SEQ ID NO 84) + (SEQ ID NO 3) 50.8       ＜0.001       0.55
IFA44 (SEQ ID NO 85) + (SEQ ID NO 9) 41.4    0.153          0.91
IFA45 (SEQ ID NO 86) + (SEQ ID NO 3) 25.8    ＜0.001          1.09
IFA46 (SEQ ID NO 87) + (SEQ ID NO 9) 86.3             0.493 0.89
IFA49 (SEQ ID NO 88) + (SEQ ID NO 3) 65.8          78.2    0.61
IFA50 (SEQ ID NO 41) + (SEQ ID NO 50) 128 1.36             0.57
IFA51 (SEQ ID NO 42) + (SEQ ID NO 50) 123 1.43             0.48
在其他較佳實施例中，本文所描述之干擾素相聯抗原結合蛋白係包含衍生自下 表 10中所說明之多肽之多肽的融合干擾素之抗原結合蛋白。在較佳實施例中，本文所描述之干擾素相聯抗原結合蛋白係由衍生自下 表 10中說明之多肽之多肽組成的融合干擾素之抗原結合蛋白。 表 10. 基於抗 CD40 抗體 3G5 的 本發明之較佳融合干擾素之抗原結合蛋白中發現的多肽組合、其針對 CD40 及 IFN 路徑活化之平均 EC 50 值。所指示之各序列組合在各別 IFA 中包含二次。SN：上清液。 A
融合干擾素之抗體 (IFA) 序列組合 CD40 EC 50(ng/mL) IFNβ EC 50(ng/mL) IFNα EC 50(ng/mL) 生產力 mg/L
IFA106 (seq ID NO 66) + (seq ID NO 59) 190,5 10,30   0,36
IFA107 (seq ID NO 67) + (seq ID NO 59) 141,5 2,03   0,28
IFA108 (seq ID NO 68) + (seq ID NO 59) 37,3 1,27   0,59
IFA109 (seq ID NO 69) + (seq ID NO 59) 30 0,45   0,4
IFA114 (seq ID NO 70) + (seq ID NO 61) 有活性(SN) 有活性(SN)   未大量產生
IFA115 (seq ID NO 71) + (seq ID NO 61) 有活性(SN) 有活性(SN)   未大量產生
IFA121 (seq ID NO 72) + (seq ID NO 59) 14,2   0,12 22,6
IFA122 (seq ID NO 73) + (seq ID NO 59) 11,74   0,07 16,8
IFA123 (seq ID NO 74) + (seq ID NO 59) 12,85   0,05 17,2
IFA124 (seq ID NO 75) + (seq ID NO 59) 12,14   0,04 21,6
B
融合干擾素之抗體 (IFA) 序列組合 CD40 EC 50(ng/mL) IFNα EC 50(ng/mL) IFNλ EC 50(ng/mL) IFNγ EC 50(ng/mL) IFNε EC 50(ng/mL) IFNω EC 50(ng/mL) 生產力 (mg/L)
IFA125 (seq ID NO 93) + (seq ID NO 59) 8,8       0,142       1,79
核酸及表現載體
在一個態樣中，提供編碼干擾素相聯抗原結合蛋白之聚核苷酸的組合。亦提供製備干擾素相聯抗原結合蛋白之方法，其包含表現此等聚核苷酸。
在一些實施例中，提供一種核酸，其編碼如本文所揭示的與促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段融合之IFN或其功能片段。在某些例示性實施例中，該核酸編碼根據SEQ ID NOs 93至94中所示序列中之任一者的與促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段融合之IFN或其功能片段，或為與編碼此等序列中之任一者之核酸至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致的核酸序列。在某些例示性實施例中，該核酸與編碼SEQ ID NOs 93至94中之任一者之核酸至少95%、至少98%或至少99%一致。在某些例示性實施例中，該核酸編碼根據SEQ ID NOs 81至88中所示序列中之任一者的與促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段融合之IFN或其功能片段，或為與編碼此等序列中之任一者之核酸至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致的核酸序列。在某些例示性實施例中，該核酸與編碼SEQ ID NOs 81至88中之任一者之核酸至少95%、至少98%或至少99%一致。在較佳實施例中，該核酸編碼根據SEQ ID NOs 28至47中所示序列中之任一者的與促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段融合之IFN或其功能片段，或為與編碼此等序列中之任一者之核酸至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致的核酸序列。在甚至更特定之實施例中，該核酸與編碼SEQ ID NOs 28至47中之任一者的核酸至少95%、至少98%或至少99%一致。在其他較佳實施例中，該核酸編碼根據SEQ ID NOs 66至75中所示序列中之任一者的與促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段融合之IFN或其功能片段，或為與編碼此等序列中之任一者之核酸至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致的核酸序列。在甚至更特定之實施例中，該核酸與編碼SEQ ID NOs 66至75中之任一者的核酸至少95%、至少98%或至少99%一致。
在核酸編碼與促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之輕鏈融合的IFN或其功能片段的該等實施例中，該核酸可進一步編碼促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之重鏈。在更特定之實施例中，促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之重鏈包含如SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 7、SEQ ID NO 8、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 10、SEQ ID NO 11、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 13、SEQ ID NO 48、SEQ ID NO 49或SEQ ID NO 50中所示之序列，或與編碼此等序列中之任一者之核酸至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致之核酸序列。在甚至更特定之實施例中，該核酸與編碼SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 7、SEQ ID NO 8、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 10、SEQ ID NO 11、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 13、SEQ ID NO 48、SEQ ID NO 49或SEQ ID NO 50之核酸至少95%、至少98%或至少99%一致。在其他更特定之實施例中，促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之重鏈包含如SEQ ID NO 61、SEQ ID NO 62、SEQ ID NO 63、SEQ ID NO 64或SEQ ID NO 65中所示之序列、或與編碼此等序列中之任一者的核酸至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致的核酸序列。在此類其他甚至更特定之實施例中，該核酸與編碼SEQ ID NO 61、SEQ ID NO 62、SEQ ID NO 63、SEQ ID NO 64或SEQ ID NO 65之核酸至少95%、至少98%或至少99%一致。
在核酸編碼與促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之重鏈融合的IFN或其功能片段的該等實施例中，該核酸可進一步編碼促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之輕鏈。在更特定之實施例中，促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之輕鏈包含如SEQ ID NO3、SEQ ID NO 4或SEQ ID NO 5中所示之序列、或與編碼序列中之任一者之核酸至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致的核酸序列。在甚至更特定之實施例中，該核酸與編碼SEQ ID NO3、SEQ ID NO 4或SEQ ID NO 5之核酸至少95%、至少98%或至少99%一致。在其他更特定之實施例中，促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之輕鏈包含如SEQ ID 59或SEQ ID NO 60中所示之序列、或與編碼此等序列中之任一者之核酸至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致之核酸序列。在甚至更特定之實施例中，該核酸與編碼SEQ ID NO 59或SEQ ID NO 60之核酸至少95%、至少98%或至少99%一致。
在某些實施例中，本文所描述之核酸可包含編碼增加產率(例如溶解度標籤)或便利所表現之蛋白質之純化(亦即，純化標籤)之序列的序列。純化標籤係熟習此項技術者已知的且可選自麩胱甘肽 S-轉移酶(GST)標籤、麥芽糖結合蛋白(maltose binding protein，MBP)標籤、鈣調蛋白結合肽(CBP)標籤、內含肽-幾丁質結合域(intein-CBD)標籤、以鏈黴抗生物素蛋白/生物素為主之標籤(諸如生物素化信號肽(BCCP)標籤、鏈黴抗生物素蛋白結合肽(SBP)標籤、His-patch ThioFusion標籤、串聯親和純化(TAP)標籤、小泛素樣修飾蛋白(Small ubiquitin-like modifier，SUMO)標籤、HaloTag®(Promega)、ProfinityeXact™系統(Bio-Rad)。在一些實施例中，純化標籤可為聚組胺酸標籤(例如His 6標籤、His 7標籤、His 8標籤、His 9標籤或His 10標籤)。在其他實施例中，純化標籤可為Strep-tag(例如Strep-tag®或Strep-tagII®；IBA Life Sciences)。在又其他實施例中，純化標籤可為麥芽糖結合蛋白(MBP)標籤。
在一些實施例中，核酸序列可進一步包含編碼用於移除標籤之裂解位點的序列。此類裂解序列係熟習此項技術者已知的且可選自內切蛋白酶或外切蛋白酶識別及裂解的序列。在一些實施例中，用於移除純化標籤之內切蛋白酶可選自：腸肽酶、凝血酶、因子Xa、TEV蛋白酶或鼻病毒3C蛋白酶。在一些實施例中，用於移除純化標籤之外切蛋白酶可選自：羧肽酶A、羧肽酶B或DAP酶。在較佳實施例中，用於移除純化標籤之蛋白酶係TEV蛋白酶。在一更特定之較佳實施例中，核酸包含編碼His 6標籤及TEV裂解位點之序列。在一甚至更特定之較佳實施例中，該核酸包含編碼如SEQ ID NO 27中所示之序列的序列。
本發明之核酸分子亦可包含編碼信號肽之序列。熟習此項技術者瞭解可用於將所表現蛋白質引導至所需摺疊、組裝及/或成熟位點以及實現最終蛋白質分泌至培養基中以促進下游加工的各種信號肽。因此，在一些實施例中，信號肽係分泌信號肽。所編碼之信號肽可包含如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2中所示之序列。在一些實施例中，信號肽包含如SEQ ID NO: 1中所示之序列。在其他實施例中，信號肽包含如SEQ ID NO:2中所示之序列。
信號肽1(SEQ ID NO 1)係用於合成如以下中所示之多肽序列：SEQ ID NO 28、SEQ ID NO 29、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 31、SEQ ID NO 32、SEQ ID NO 33、SEQ ID NO 34、SEQ ID NO 35、SEQ ID NO 36、SEQ ID NO 37、SEQ ID NO 44、SEQ ID NO 45、SEQ ID NO 46、SEQ ID NO 47、SEQ ID NO 50、SEQ ID NO 65、SEQ ID NO 66、SEQ ID NO 67、SEQ ID NO 68、SEQ ID NO 69、SEQ ID NO 70、SEQ ID NO 71、SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74及SEQ ID NO 75。最初存在於多肽各別序列之N末端的此類信號肽在合成期間被裂解。
信號肽2(SEQ ID NO 2)係用於合成如以下中所示之多肽序列：SEQ ID NO 38、SEQ ID NO 39、SEQ ID NO 40、SEQ ID NO 41、SEQ ID NO 42及SEQ ID NO 43。最初存在於多肽各別序列之N末端的此類信號肽在合成期間被裂解。
為了合成如SEQ ID NO 81、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 87及SEQ ID NO 88中所示之多肽序列，使用信號肽MGWSCIILFLVATATGVHS (SEQ ID NO 1)。最初存在於多肽各別序列之N末端的此類信號肽在合成期間被裂解。
為合成如SEQ ID NO 93及SEQ IDNO 94中所示之多肽序列，使用信號肽1 (SEQ ID NO 1)。最初存在於多肽各別序列之N末端的此類信號肽在合成期間被裂解。
通常將編碼如本文所揭示的與促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段融合之IFN或其功能片段的聚核苷酸插入表現載體中以引入宿主細胞中，該等宿主細胞可用於產生所需數量的所描述或所主張之干擾素相聯抗原結合蛋白。因此，在某些態樣中，本發明提供包含本文中所揭示之聚核苷酸之表現載體以及包含此等載體及聚核苷酸之宿主細胞。
術語「 載體」或「 表現載體」在本文中用於說明書及申請專利範圍的目的，意謂根據本發明的用作在細胞中引入所需基因及在細胞中表現該基因之媒介物的載體。如熟習此項技術者所知，此類載體可容易地選自由以下組成之群：質體、噬菌體、病毒及逆轉錄病毒。一般而言，與本發明相容之載體將包含選擇標記物、便利所需基因之選殖的適當限制位點以及進入真核或原核細胞及/或在真核或原核細胞中複製之能力。
大量表現 載體系統可用於實現本發明之目的。舉例而言，一類載體利用衍生自動物病毒，諸如牛乳頭狀瘤病毒、多瘤病毒、腺病毒、牛痘病毒、桿狀病毒、逆轉錄病毒(RSV、MMTV或MOMLV)或SV40病毒之DNA元件。其他載體涉及使用具有內部核糖體結合位點之多順反子系統。此外，亦可藉由引入一或多種允許選擇經轉染之宿主細胞的標記物來選擇將DNA整合至其染色體中之細胞。標記物可向營養缺陷型宿主提供原營養，提供殺生物劑抗性(例如抗生素)或對重金屬諸如銅之抗性。選擇性標記物基因可直接連接至待表現之DNA序列，或藉由共轉型而引入相同細胞中。mRNA之最佳合成亦可能需要額外元件。此等元件可包括信號序列、剪接信號以及轉錄啟動子、強化子及終止信號。在一些實施例中，將選殖之可變區基因以及如上文所論述合成的重鏈及輕鏈恆定區基因(諸如人類基因)插入表現載體中，該等可變區基因中之一者與編碼IFN或其功能片段之基因融合。
在其他實施例中，本發明之載體系統可包含多於一個載體。在一些實施例中，載體系統可包含：用於表現與促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之輕鏈融合之IFN或其功能片段的第一載體；以及用於表現促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之重鏈的第二載體。替代地，此類載體系統可包含：用於表現與促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之重鏈融合之IFN或其功能片段的第一載體；及用於表現促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之輕鏈的第二載體。
在其他實施例中，本文所描述之干擾素相聯抗原結合蛋白可使用多順反子構築體表現。在此類表現系統中，可由單一多順反子構築體產生多種感興趣之基因產物，諸如編碼與促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之重鏈融合之IFN或其功能片段且編碼該抗體之輕鏈的基因產物，或編碼與促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之輕鏈融合之IFN或其功能片段且編碼該抗體或其促效性抗原結合片段之重鏈的基因產物。此等系統宜使用內部核糖體進入位點(IRES)以在真核宿主細胞中提供相對較高水準之多肽。相容的IRES序列揭示於美國專利第6,193,980號中，該案以引用之方式併入本文中。熟習此項技術者將瞭解，此類表現系統可用於有效產生本申請案中所揭示之所有多肽。
更一般而言，在製備出編碼本發明之干擾素相聯抗原結合蛋白的載體或DNA序列之後，即可將表現載體引入適當宿主細胞中。亦即，可對宿主細胞進行轉型。將質體引入宿主細胞中可藉由熟習此項技術者熟知之各種技術實現。此等技術包括但不限於轉染(包括電泳及電穿孔)、原生質體融合、磷酸鈣沈澱、用包膜DNA進行之細胞融合、顯微注射及用完整病毒感染。參見例如Ridgway, A. A. G. 「Mammalian Expression Vectors」 第24.2章, 第470-472頁, Vectors, Rodriguez及Denhardt編, (Butterworths, Boston, MA 1988)。使經轉型之細胞在適於產生輕鏈及重鏈之條件下生長，且分析重鏈及/或輕鏈蛋白質合成情況。例示性分析技術包括酶聯結免疫吸附分析法(ELISA)、放射免疫分析法(RIA)、螢光活化細胞分選分析(FACS)、免疫組織化學及類似技術。
如本文所使用，術語「轉型」應以廣義使用且係指將DNA引入受體宿主細胞中，從而改變基因型並因此引起受體細胞之變化。
據此，「 宿主細胞」係指經載體轉型之細胞，該等載體係使用重組DNA技術構築且編碼至少一異源基因。在有關自重組宿主分離多肽之方法的描述中，除非另作明確說明，否則術語「 細胞」與「 細胞培養物」可互換使用以表示干擾素相聯抗原結合蛋白之來源。換言之，自「 細胞」回收多肽可意謂自快速離心之全細胞或自含有培養基及懸浮細胞之細胞培養物回收。
在一個實施例中，用於表現干擾素相聯抗原結合蛋白之 宿主細胞株為真核或原核來源的。如本文所使用，術語「表現」可包括多於一條多肽鏈(諸如干擾素相聯抗原結合蛋白之抗體部分的重鏈及輕鏈)之轉錄及轉譯，該多於一條多肽鏈相聯形成最終的干擾素相聯抗原結合蛋白。在一個實施例中，用於表現干擾素相聯抗原結合蛋白之宿主細胞株為細菌來源的。在一個實施例中，用於表現干擾素相聯抗原結合蛋白之宿主細胞株為哺乳動物來源的；熟習此項技術者可確定最適合在其中表現所需基因產物之特定宿主細胞株。例示性宿主細胞株包括但不限於來自Horizon之CHO K1 GS基因剔除細胞株DG44及DUXB11 (中國倉鼠卵巢細胞株，DHFR缺陷型)、HELA (人類子宮頸癌)、CVI (猴腎細胞株)、COS (具有SV40 T抗原之CVI之衍生物)、R1610(中國倉鼠纖維母細胞)、BALBC/3T3 (小鼠纖維母細胞)、HAK (倉鼠腎細胞株)、SP2/O (小鼠骨髓瘤)、BFA-1c1BPT (牛內皮細胞)、RAJI (人類淋巴球)、HEK 293 (人類腎臟)。在一較佳實施例中，可使用HEK FS S11/254細胞。在另一較佳實施例中，可使用來自Horizon之CHO K1 GS。在一個實施例中，細胞株提供由其表現之抗體的改變之糖基化，例如去岩藻醣基化(例如PER.C6® (Crucell)或FUT8基因剔除CHO細胞株(POTELLIGENT TM細胞)(Biowa, Princeton, NJ))。在一個實施例中，可使用NS0細胞。宿主細胞株通常可自商業服務、美國組織培養物保藏中心(American Tissue Culture Collection)或公佈之文獻獲得。
在一個實施例中，用於表現干擾素相聯抗原結合蛋白之 宿主係非人類轉殖基因動物或轉殖基因植物。
本發明之干擾素相聯抗原結合蛋白亦可經由產生針對感興趣序列為轉殖基因之非人類動物(例如哺乳動物)或植物及以自其以可回收形式產生干擾素相聯抗原結合蛋白而以轉殖基因方法產生。關於在哺乳動物中進行轉殖基因製造，可在山羊、牛或其他哺乳動物之乳汁中產生並回收干擾素相聯抗原結合蛋白。參見例如美國專利第5,827,690號、第5,756,687號、第5,750,172號及第5,741,957號。例示性植物宿主有菸草、芥菜、浮萍、玉米、小麥、馬鈴薯等。此項技術中已知用於在植物中表現抗體之方法，包括啟動子及載體的描述，以及植物轉型。參見例如美國專利6,517,529，以引用的方式併入本文中。在一些實施例中，非人類轉殖基因動物或植物係藉由利用標準轉殖基因技術將一或多個編碼本發明之干擾素相聯抗原結合蛋白之核酸分子引入動物或植物中來產生。參見Hogan及美國專利6,417,429。用於製造轉殖基因動物的轉殖基因細胞可為胚胎幹細胞或體細胞。轉殖基因非人類生物體可為嵌合、非嵌合異型接合子及非嵌合同型接合子。參見例如Hogan等人, Manipulating the Mouse Embryo: A Laboratory Manual 第2版, Cold Spring Harbor Press (1999)；Jackson等人, Mouse Genetics and Transgenics: A Practical Approach, Oxford University Press (2000)；以及Pinkert, Transgenic Animal Technology: A Laboratory Handbook, Academic Press (1999)。在一些實施例中，轉殖基因非人類動物藉由編碼感興趣序列之靶向構築體進行靶向破壞及置換。干擾素相聯抗原結合蛋白可在任何轉殖基因動物中產生。在一較佳實施例中，非人類動物係小鼠、大鼠、綿羊、豬、山羊、牛或馬。非人類轉殖基因動物在血液、乳汁、尿液、唾液、淚液、黏液及其他體液中表現該等干擾素相聯抗原結合蛋白。
活體外製造允許按比例擴大以產生大量所需的干擾素相聯抗原結合蛋白。用於在組織培養條件下進行哺乳動物細胞培養之技術係此項技術中已知的且包括均質懸浮培養，例如在氣升式反應器或連續攪拌反應器中培養；或固定或包埋式細胞培養，例如在中空纖維、微膠囊中、在瓊脂糖微珠或陶瓷濾筒上培養。視要求及/或需要，可藉由習用的層析方法，例如凝膠過濾、離子交換層析、在DEAE-纖維素上進行之層析及/或(免疫)親和層析來純化干擾素相聯抗原結合蛋白之溶液。
一或多個編碼干擾素相聯抗原結合蛋白之基因亦可在非哺乳動物細胞中，諸如在細菌或酵母或植物細胞中表現。在此方面，應瞭解，亦可對各種單細胞非哺乳動物微生物，諸如細菌(亦即，能夠在培養物中生長或醱酵之微生物)進行轉型。易於轉型之細菌包括以下之成員：腸內菌科(enterobacteriaceae)，諸如大腸桿菌( Escherichia coli)或沙門氏菌( Salmonella)菌株；芽孢桿菌科( Bacillaceae)，諸如枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)；肺炎球菌( Pneumococcus)；鏈球菌( Streptococcus)；及流感嗜血桿菌( Haemophilus influenzae)。應進一步瞭解，當在細菌中表現時，根據本發明之干擾素相聯抗原結合蛋白或其組分(亦即，促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段，以及IFN或IFN之功能片段)可變為包涵體之一部分。接著，可能需要分離所需的干擾素相聯抗原結合蛋白，任擇地亦進行再摺疊及純化。
除原核生物以外，亦可使用真核微生物。在真核微生物中，釀酒酵母( Saccharomyces cerevisiae)或常用焙用酵母係最常用的，但通常亦可使用許多其他菌株。對於在酵母菌中表現，通常使用例如質體YRp7 (Stinchcomb等人, Nature, 282:39 (1979)；Kingsman等人, Gene, 7:141 (1979)；Tschemper等人, Gene, 10:157 (1980))。此質體已含有TRP1基因，該基因為缺乏在色胺酸中生長之能力的突變型酵母菌株(例如ATCC編號44076或PEP4-1)提供選擇標記物(Jones, Genetics 85:12 (1977))。作為酵母宿主細胞基因體之特徵的trp1損傷(lesion)之存在則可提供藉由在無色胺酸存在下生長來偵測轉型的有效環境。 治療性載體
編碼干擾素相聯抗原結合蛋白之核酸序列可插入載體中並用作治療性載體，例如表現本發明之干擾素相聯抗原結合蛋白之載體。適合的功能性表現構築體及治療性表現載體之構築係一般熟習此項技術者已知的。因此，在某些實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白可藉助於基因遞送RNA或DNA序列、編碼干擾素相聯抗原結合蛋白之載體或載體系統來投予個體。
治療性載體可藉由例如靜脈內注射、局部投予(參見美國專利第5,328,470號)或藉由立體定位注射(參見例如Chen等人, PNAS 91:3054-3057(1994))遞送給個體。治療性載體之醫藥製劑可包括於可接受之稀釋劑中的載體。
一或多種編碼干擾素相聯抗原結合蛋白之核酸可併入基因構築體中用作療法方案之一部分，以遞送編碼干擾素相聯抗原結合蛋白之核酸。提供用於活體內轉染及表現干擾素相聯抗原結合蛋白之表現載體。
如一般熟習此項技術者所知，此等組分之表現構築體可以任何生物學上有效之載劑投予，例如能夠在活體內將組分核酸序列有效地遞送至細胞的任何調配物或組成物。方法包括但不限於將(複數個)主題核酸序列插入病毒載體、重組細菌或真核質體及類似物中，該等病毒載體包括但不限於重組逆轉錄病毒、腺病毒、腺相關病毒及單純疱疹病毒-1。
逆轉錄病毒載體及腺相關病毒載體可以用作用於在活體內轉移外源核酸序列，特定言之轉移至人體中的重組遞送系統。此類載體將基因高效遞送至細胞中，且轉移之核酸可穩定整合至宿主之染色體DNA中。
僅產生複製缺陷型逆轉錄病毒的特化細胞株(稱為「 包裝細胞( packaging cells)」)之開發使得逆轉錄病毒用於基因療法之效用增加，且出於基因療法目的，對缺陷型逆轉錄病毒進行表徵以用於基因轉移(相關評述，參見例如Miller, Blood 76:271-78 (1990))。複製缺陷型逆轉錄病毒可包裝至病毒粒子中，可使用該等病毒粒子，經由使用輔助病毒，利用標準技術感染目標細胞。用於製造重組逆轉錄病毒及用於在活體外或活體內用該等病毒感染細胞之方案可見於Current Protocols in Molecular Biology, Ausubel等人(編) Greene Publishing Associates, (1989), 第9.10-9.14部分，以及其他標準實驗室手冊。適合逆轉錄病毒之非限制性實例包括pLJ、pZIP、pWE及pEM，此等逆轉錄病毒係一般熟習此項技術者已知的。適合包裝病毒株之實例包括*Crip、*Cre、*2及*Am。(參見例如Eglitis等人, Science 230:1395-1398 (1985)；Danos及Mulligan, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:6460-6464 (1988)；Wilson等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:3014-3018 (1988)；Armentano等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:6141-6145 (1990)；Huber等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:8039-8043 (1991)；Ferry等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:8377-8381 (1991)；Chowdhury等人, Science 254:1802-1805 (1991)；van Beusechem等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:7640-7644 (1992)；Kay等人, Human Gene Therapy 3:641-647 (1992)；Dai等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10892-10895 (1992)；Hwu等人, J. Immunol. 150:4104-4115 (1993)；美國專利第4,868,116號；美國專利第4,980,286號；PCT申請案WO 89/07136；PCT申請案WO 89/02468；PCT申請案WO 89/05345；及PCT申請案WO 92/07573)。
在另一實施例中，提供腺病毒衍生之遞送載體。腺病毒之基因體可經操作以使得其編碼及表現感興趣基因產物，但不活化其在正常溶解病毒生命週期中複製之能力。參見例如Berkner等人, BioTechniques 6:616 (1988)；Rosenfeld等人, Science 252:431-434 (1991)；以及Rosenfeld等人, Cell 68:143-155 (1992)。衍生自腺病毒株Ad 5型d1324或其他腺病毒株(例如Ad2、Ad3、Ad7等)的適合腺病毒載體已為一般熟習此項技術者所知。重組腺病毒在某些情況中可為有利的，因為其不能感染非分裂細胞且可用以感染多種細胞類型，包括上皮細胞(Rosenfeld等人(1992), 見上文)。另外，病毒顆粒相對較穩定且適合於純化及濃縮，且如上所述，可經修飾以便影響感染譜。此外，引入的腺病毒DNA(及其中所含之外來DNA)不整合至宿主細胞基因體中，而是保持游離狀態，由此避免由於原位插入突變誘發使得引入之DNA變得整合至宿主基因體(例如逆轉錄病毒DNA)中而可能出現的問題。另外，相對於其他遞送載體，腺病毒基因體對外來DNA之負載容量較大(高達8千鹼基) (Berkner等人(1998), 見上文；Haj-Ahmand及Graham, J. Virol. 57:267 (1986))。
可用於遞送編碼干擾素相聯抗原結合蛋白之核酸序列的又一病毒載體系統係腺相關病毒(AAV)。AAV係一種天然存在之缺陷型病毒，該病毒需要另一病毒，諸如腺病毒或疱疹病毒作為輔助病毒進行高效複製及生產性生命週期。(相關評述，參見Muzyczka等人, Curr. Topics in Micro. and Immunol. 158:97-129 (1992))。其亦為可將其DNA整合至非分裂細胞中且展現高頻穩定整合的少數病毒之一(參見例如Flotte等人, Am. J. Respir. Cell. Mol. Biol. 7:349-356 (1992)；Samulski等人, J. Virol. 63:3822-3828 (1989)；以及McLaughlin等人, J. Virol. 62:1963-1973 (1989))。含有少至300個鹼基對之AAV的載體可經包裝且可整合。用於外源DNA之空間侷限於約4.5 kb。可使用AAV載體，諸如Tratschin等人, Mol. Cell. Biol. 5:3251-3260 (1985)中所描述之載體將DNA引入細胞中。已使用AAV載體將多種核酸引入不同細胞類型中(參見例如Hermonat等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6466-6470 (1984)；Tratschin等人, Mol. Cell. Biol. 4:2072-2081 (1985)；Wondisford等人, Mol. Endocrinol. 2:32-39 (1988)；Tratschin等人, J. Virol. 51:611-619 (1984)；以及Flotte等人, J. Biol. Chem. 268:3781-3790 (1993))。
除病毒轉移方法外，亦可採用非病毒方法使編碼干擾素相聯抗原結合蛋白之核酸序列在個體之組織中表現。大部分非病毒基因轉移方法依賴於哺乳動物細胞使用的正常機制進行巨分子之吸收及細胞內運輸。在一些實施例中，非病毒遞送系統依賴於胞吞路徑用於目標細胞對主題基因之吸收。例示性此類型遞送系統包括脂質體衍生系統、聚離胺酸結合物及人工病毒包膜。其他實施例包括質體注射系統，諸如以下中描述者：Meuli等人, J. Invest. Dermatol. 116 (1):131-135 (2001)；Cohen等人, Gene Ther 7 (22):1896-905 (2000)；或Tam等人, Gene Ther. 7 (21):1867-74 (2000)。
在臨床環境中，可藉由多種方法中之任一者將遞送系統引入個體中，該等方法中之各者係此項技術中熟悉的。舉例而言，遞送系統之醫藥製劑可例如藉由靜脈內注射全身性引入。目標細胞中蛋白質之特異性轉導主要來自遞送媒介物、由控制受體基因表現之轉錄調控序列引起之細胞類型或組織類型表現、或其組合提供之轉染特異性。在其他實施例中，重組基因之初始遞送受到較多限制，因為引入動物體內係相當局部化的。舉例而言，遞送媒介物可藉由導管(參見美國專利第5,328,470號)或藉由立體定位注射(例如Chen等人, PNAS 91: 3054-3057 (1994))引入。
治療性構築體之醫藥製劑可基本上由在可接受之稀釋劑中之遞送系統組成，或可包含緩慢釋放基質，其中將嵌入遞送媒介物。替代地，在完整遞送系統可完全由重組細胞，例如逆轉錄病毒載體產生的情況下，醫藥製劑可包含一或多個產生該遞送系統之細胞。 治療方法及相應用途
在一個態樣中，本發明提供治療有需要之患者(例如感染冠狀病毒、特定言之SARS-CoV-2之患者)的方法，其包含投予有效量的如本文所揭示之干擾素相聯抗原結合蛋白或編碼干擾素相聯抗原結合蛋白之核酸序列(例如mRNA)。本發明亦提供如本文所揭示的干擾素相聯抗原結合蛋白或編碼干擾素相聯抗原結合蛋白之核酸序列(例如mRNA)在製備用於治療冠狀病毒感染之藥劑中的用途。在某些實施例中，本發明提供用於治療需要此類治療之哺乳動物個體之病症及/或症狀，例如冠狀病毒相關病症及/或冠狀病毒相關症狀的套組及方法。在某些例示性實施例中，個體係人類。 本發明之干擾素相聯抗原結合蛋白或其編碼核酸序列可用於多種不同應用。舉例而言，在一個實施例中，主題干擾素相聯抗原結合蛋白或其編碼核酸序列可用於挽救感染冠狀病毒之細胞免於細胞死亡及/或免於冠狀病毒誘發之細胞病變作用。
在另一實施例中，主題干擾素相聯抗原結合蛋白或其編碼核酸序列可用於減少如本文所描述的一或多種與冠狀病毒感染相關聯之症狀及/或併發症(見下文)。
因此，本發明亦關於一種治療人類或其他動物之一或多種與冠狀病毒感染相關聯之病症、症狀及/或併發症的方法，該方法係藉由向此類人類或動物投予有效且無毒之量的干擾素相聯抗原結合蛋白或其編碼核酸序列進行。熟習此項技術者藉由常規實驗將能夠確定將實現治療冠狀病毒感染之目的的干擾素相聯抗原結合蛋白或其編碼核酸序列之有效且無毒之量。
舉例而言，本發明之干擾素相聯抗原結合蛋白的「 治療活性量」可根據諸多因素而變化，諸如個體的疾病階段(例如急性相對於慢性)、年齡、性別、醫學併發症(例如HIV共感染、免疫抑制病況或疾病)及體重、以及干擾素相聯抗原結合蛋白在個體體內引起所需反應之能力。可調整劑量方案以提供最佳治療反應。舉例而言，可每天投予若干分次劑量，或可根據治療情況之緊急程度指示按比例減少劑量。
一般而言，本發明中所提供之組成物可用於預防性治療未感染細胞或治療性治療任何感染冠狀病毒之細胞，該等感染冠狀病毒之細胞包含抗原標記物，該抗原標記物允許干擾素相聯抗原結合蛋白靶向該等感染冠狀病毒之細胞。
根據本文中所描述及所主張之方法及用途的冠狀病毒感染之治療或預防可能需要投予TNFRSF促效劑或其功能片段(例如與IFN或其功能片段「 組合」投予，且反之亦然)。若TNFRSF促效劑或其功能片段及IFN或其功能片段係存在於不同醫藥組成物中，則該組合投予可藉由同時投予執行。替代地，在該情形中，組合投予可經由依序投予實現。舉例而言，TNFRSF促效劑或其功能片段可在投予IFN或其功能片段之前投予。替代地，IFN或其功能片段可在投予TNFRSF促效劑或其功能片段之前投予。在依序投予之情況下，投予之執行方式將使得組合投予引起治療對例如挽救細胞免於冠狀病毒誘發之細胞死亡及/或免於冠狀病毒誘發之細胞病變作用的有利作用較佳地相較於僅投予IFN或其功能片段增強。當實現此類增強時，熟練技術人員將能夠容易地確定適合的投予方案、相關聯之劑量、投予時間間隔以及在選擇依序投予不同醫藥組成物情況下該等不同醫藥組成物之投予之間的時間間隔。 醫藥組成物及其投予
在某些實施例中，本發明之干擾素相聯抗原結合蛋白或其編碼核酸序列(包括載體或載體系統)係包含在醫藥組成物中。製備本發明之干擾素相聯抗原結合蛋白或其編碼核酸序列及向個體投予該等干擾素相聯抗原結合蛋白或其編碼核酸序列的方法係熟習此項技術者熟知的或可由熟習此項技術者使用本說明書及此項技術中之知識作為指導容易地確定。本發明之干擾素相聯抗原結合蛋白或其編碼核酸序列的投予途徑可為經口、非經腸、藉由吸入或表面投予。如本文所使用，術語「 非經腸」包括靜脈內、動脈內、腹膜內、肌肉內、皮下、經直腸或經陰道投予。所有此等投予形式明確涵蓋於本發明之範圍內，一投予形式為注射溶液，特別是用於靜脈內或動脈內注射或滴注的溶液。通常，適於注射之醫藥組成物可包含緩衝劑(例如乙酸鹽、磷酸鹽或檸檬酸鹽緩衝劑)、表面活性劑(例如聚山梨醇酯)，任擇地包含穩定劑(例如人類白蛋白)等。在一些實施例中，緩衝劑係乙酸鹽。在另一實施例中，緩衝劑係甲酸鹽。在又另一實施例中，緩衝劑係檸檬酸鹽。在相關實施例中，表面活性劑可選自包含以下之清單：普朗尼克(pluronics)、PEG、脫水山梨糖醇酯、聚山梨醇酯、曲拉通(triton)、緩血酸胺、卵磷脂、膽固醇及泰洛沙泊(tyloxapal)。在較佳實施例中，表面活性劑係聚山梨醇酯。在更佳實施例中，表面活性劑係聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯80或聚山梨醇酯100，較佳地為聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
在一些實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白或其編碼核酸序列可直接遞送至不良細胞群體(例如肝)之部位，由此增加患病組織對治療劑之暴露。
供非經腸投予之製劑包括無菌水性或非水性溶液、懸浮液及乳液。非水性溶劑之實例為丙二醇、聚乙二醇、植物油(諸如橄欖油)及可注射有機酯(諸如油酸乙酯)。水性載劑包括水、醇/水性溶液、乳液或懸浮液，包括鹽水及緩衝介質。在本發明之組成物及方法中，醫藥學上可接受之載劑包括但不限於0.01-0.1 M、例如0.05 M磷酸鹽緩衝液、或0.8%鹽水。其他常見的非經腸媒介物包括磷酸鈉溶液、林格氏右旋糖(Ringer's dextrose)、右旋糖及氯化鈉、乳酸林格氏溶液(lactated Ringer's)或不揮發性油。靜脈內媒介物包含流體及營養補充劑、電解質補充劑(諸如基於林格氏右旋糖之電解質補充劑)及類似物。亦可存在防腐劑及其他添加劑，諸如抗微生物劑、抗氧化劑、螯合劑及惰性氣體、以及類似物。更特定言之，適於注射使用之醫藥組成物包括無菌水溶液(在水溶性情況下)或分散液及用於臨時製備無菌可注射溶液或分散液之無菌粉末。在此類情況下，組成物必須為無菌的且流動性應達到存在易於注射性之程度。其應在製造及儲存條件下穩定且通常針對諸如細菌及真菌之類微生物的污染作用進行防腐處理。載劑可為含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇及液體聚乙二醇、以及類似物)及其適合混合物之溶劑或分散介質。舉例而言，可藉由使用包衣諸如卵磷脂、在分散液情況下藉由維持所需粒度以及藉由使用表面活性劑來維持適當之流動性。
可利用各種抗細菌劑及抗真菌劑，例如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗壞血酸、硫柳汞及類似物，來防止微生物作用。在許多情況下，該組成物中將包括等張劑，例如糖；多元醇，諸如甘露糖醇、山梨糖醇；或氯化鈉。可注射組成物之延長吸收可藉由在該組成物中包括例如單硬脂酸鋁及明膠之類吸收延遲劑來實現。
在任何情況下，無菌可注射溶液可藉由在含有本文所列舉成分中之一者或組合的適當溶劑中併入所需量的單獨或與其他活性劑組合之活性化合物，諸如本發明之干擾素相聯抗原結合蛋白或編碼該干擾素相聯抗原結合蛋白之核酸序列，視需要隨後過濾滅菌來製備。一般而言，分散液係藉由將活性化合物併入含有基礎分散介質及來自上文所列舉成分之所需其他成分的無菌媒介物中來製備。在用於製備無菌可注射溶液之無菌粉末之情況下，例示性製備方法包括真空乾燥及冷凍乾燥，自其預先無菌過濾之溶液產生活性成分加上任何額外所需成分的粉末。根據此項技術中已知之方法，對注射用製劑進行加工，填充至諸如安瓿、袋子、瓶子、注射器或小瓶之類容器中，且在無菌條件下密封。此外，亦可包裝製劑且以套組形式出售。此類製品通常將具有標籤或包裝插頁，指示相關組成物可用於治療罹患冠狀病毒感染之個體。
用於治療上述冠狀病毒感染相關病況的本發明組成物之有效劑量取決於許多不同因素而不同，包括投予手段、目標部位、患者之生理狀態、患者係人抑或動物、投予之其他藥物以及治療為防治性的抑或治療性的。通常，患者係人類，但亦可治療非人類哺乳動物，包括轉殖基因哺乳動物，特別是非人類靈長類動物。可使用熟習此項技術者已知的常規方法來調定治療劑量以使安全性及功效最佳化。
對於用干擾素相聯抗原結合蛋白治療，劑量範圍可為例如約0.0001至約100 mg/kg宿主體重，且更通常為約0.01至約5 mg/kg宿主體重(例如約0.02 mg/kg宿主體重、約0.25 mg/kg宿主體重、約0.5 mg/kg宿主體重、約0.75 mg/kg宿主體重、約1 mg/kg宿主體重、約2 mg/kg宿主體重等)。舉例而言，劑量可為約1 mg/kg體重或約10 mg/kg體重，或在約1 mg/kg至約10 mg/kg範圍內，例如至少約1 mg/kg。在以上範圍內之中間劑量亦意欲在本發明之範圍內。可每天、隔天、每週或根據經驗分析確定之任何其他時程表向個體投予此類劑量。例示性治療需要經例如至少六個月之延長時段，以多次劑量投予。額外的例示性治療方案需要約每二週一次或約一月一次或約每3至6個月一次投予。例示性劑量時間表包括連續數天約1至約10 mg/kg或約15 mg/kg、隔天約30 mg/kg、或每週約60 mg/kg。
干擾素相聯抗原結合蛋白或表現此等干擾素相聯抗原結合蛋白中之任一者的核酸序列可在多個時刻投予。單次劑量之間的時間間隔可為每週、每月或每年。藉由量測患者體內干擾素相聯抗原結合蛋白或其組分之血液位準所指示，時間間隔亦可為不規律的。替代地，干擾素相聯抗原結合蛋白或表現此等干擾素相聯抗原結合蛋白中之任一者的核酸序列可以持續釋放調配物形式投予，在此情況下，需要較低的投予頻率。劑量及頻率取決於患者體內干擾素相聯抗原結合蛋白之半衰期而變化。
如本文中所提及，術語「 半衰期」或「 t 1/2 」與化合物，諸如本發明之干擾素相聯抗原結合蛋白的穩定性及/或排泄速率相關。實際上，化合物之半衰期通常係在血清中量測且表示在投予之後血清濃度為投予時血清濃度之50%的時間。本發明之干擾素相聯抗原結合蛋白係以在小鼠體內較長之血清半衰期表徵。在一些實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白之半衰期係至少50小時、至少60小時、至少70小時、至少80小時、至少90小時或至少100小時。在一些實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白之半衰期係至少100小時。在較佳實施例中，小鼠體內干擾素相聯抗原結合蛋白之半衰期在116至158小時範圍內。
蛋白質之半衰期與其清除率有關。如本文所使用，術語「清除率( clearance/ clearance rate)」係指單位時間內清除掉蛋白質的血漿之體積。本發明之干擾素相聯抗原結合蛋白的清除率較低。在一些實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白之清除率低於10 mL/h/kg、低於5 mL/h/kg、低於2.5 mL/h/kg、低於1 mL/h/kg或低於0.5 mL/h/kg。在一些實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白之清除率低於5 mL/h/kg。在一些實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白之半衰期低於1 mL/h/kg。在一些實施例中，小鼠體內干擾素相聯抗原結合蛋白之清除率在0.28至0.49 mL/h/kg範圍內。
如本文所使用，術語「 分佈體積」、「 V D 」、「 V SS 」或「 表觀分佈體積」係指含有濃度與血漿中所觀測到的濃度相同的投予化合物諸如本發明之干擾素相聯抗原結合蛋白之總量所需的理論體積且與在經口或非經腸給予之後該化合物在血漿與身體其餘部分之間之分佈有關。在某些實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白之分佈體積Vss低於500 mL/kg、低於400 mL/kg、低於300 mL/kg、低於200 mL/kg或低於100 mL/kg。在一些實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白之分佈體積Vss低於100 mL/kg。在一些實施例中，小鼠體內干擾素相聯抗原結合蛋白之分佈體積Vss在50至98 mL/kg範圍內。
另一相關的藥物動力學參數係全身暴露量。如本文所使用，術語「 全身暴露量」、「 AUC」或「 曲線下面積」係指濃度-時間曲線的積分。全身暴露量可由母化合物及/或(複數種)代謝物之血漿(血清或血液)濃度或AUC表示。本發明之干擾素相聯抗原結合蛋白以比其親代抗體高的全身暴露量(AUC(0-inf))在血液中循環。在一些實施例中，親代抗體係CP870,893。在其他實施例中，親代抗體係3G5。在一些實施例中，干擾素相聯抗原結合蛋白之全身暴露量係至少600 µg*h/mL、至少700 µg*h/mL、至少800 µg*h/mL、至少900 µg*h/mL或至少1000 µg*h/mL、較佳地至少1000 µg*h/mL。在一些實施例中，小鼠體內干擾素相聯抗原結合蛋白之全身暴露量在1033 µg*h/mL至1793 µg*h/mL範圍內。
如先前論述，本發明之干擾素相聯抗原結合蛋白可以醫藥有效量投予以在活體內治療哺乳動物病症。在此方面，應瞭解，所揭示之干擾素相聯抗原結合蛋白將經調配以便利投予及促進活性劑之穩定性。
根據本發明之醫藥組成物可包含醫藥學上可接受之無毒、無菌載劑，諸如生理鹽水、無毒緩衝液、防腐劑及類似物。干擾素相聯抗原結合蛋白之醫藥有效量通常為足以介導以下中之一或多者之量：減少冠狀病毒誘發之細胞死亡，特別是SARS-CoV-2誘發之細胞死亡；及刺激受感染細胞中之IFN信號傳導路徑。當然，本發明之醫藥組成物可以單次或多次劑量投予以提供醫藥有效量之干擾素相聯抗原結合蛋白。
與本發明之範圍一致，干擾素相聯抗原結合蛋白或表現其中任一者之核酸序列可根據前述治療方法以足以產生治療作用的量投予人類或其他動物。干擾素相聯抗原結合蛋白或表現其中任一者之核酸序列可以習知劑型投予該人類或其他動物，該劑型係藉由根據已知技術組合干擾素相聯抗原結合蛋白或表現其中任一者之核酸序列與習知醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑來製備。熟習此項技術者將認識到，醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑之形式及特徵係由與其組合之活性成分的量、投予途徑及其他熟知變數指示。熟習此項技術者應進一步瞭解，本發明中所描述的包含一或多個物種之干擾素相聯抗原結合蛋白或表現其中任一者之核酸序列的混合液可被證明為有效的。
應理解，本發明中所描述之方法不限於本文所揭示之特定方法及實驗條件，因為此類方法及條件可變化。亦應理解，本文所使用之術語僅出於描述特定實施例的目的，而不意欲作限制。
另外，除非另外指示，否則本文所描述之實驗使用在此項技術之技能範圍內的習知分子及細胞生物及免疫技術。此類技術已為習此相關技藝之人士所熟知，且在文獻中充分解釋。參見例如Ausubel等人編, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc., NY, N.Y. (1987-2008)，包括所有增刊；Molecular Cloning: A Laboratory Manual (第四版), MR Green及J. Sambrook以及Harlow等人, Antibodies: A Laboratory Manual, 第14章, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor (2013, 第2版)。
除非另外定義，否則本文所使用之科學及技術術語具有一般技術者通常所理解之含義。在存在任何潛在歧義的情況下，本文提供的定義優先於任何字典或外部定義。除非上下文另外需要，否則單數術語應包含複數且複數術語應包含單數。除非另外說明，否則使用「或」意謂「及/或」。使用術語「包括(including)」以及其他形式，諸如「包括(includes)」及「包括(included)」，不具限制性。除非另外陳述，否則使用術語「包含」應包括術語「由...組成」。
一般而言，本文所描述的與細胞及組織培養、分子生物學、免疫學、微生物學、遺傳學以及蛋白質及核酸化學及雜交結合使用之命名法為此項技術中熟知及常用的。除非另外指明，否則本文中所提供之方法及技術一般係根據此項技術中熟知之習知方法且如本說明書通篇所引用及論述之各種一般及更特定之參考文獻中所描述來執行。酶反應及純化技術可以根據製造商之說明書、如通常在此項技術中所實現或如本文所描述來執行。本文所描述的與分析化學、合成有機化學及藥物與醫藥化學結合使用的命名法以及其實驗步驟及技術係此項技術中熟知且常用者。使用標準技術進行化學合成、化學分析、醫藥製備、調配及遞送以及患者治療。
本文使用之章節標題僅出於組織目的而不應被視為限制所描述之主題。本文中提及或引用的文章、專利及專利申請案、以及所有其他文獻及以電子方式獲得的資訊之內容特此以全文引用之方式併入，其引用程度就如同具體且個別地指示各個別公開案以引用之方式併入。申請者保留將來自任何此類文章、專利、專利申請案或其他物理及電子文件之任何及所有材料及資訊以物理方式併入本申請案中的權力。
雖然本發明已參考其具體實施例加以描述，但熟習此項技術者應理解，使用本揭露內容作為指導，在不脫離本發明的真實精神及範圍的情況下，可進行各種改變且等效物可進行取代。現已詳細描述某些實施例，參照以下實例將更清楚理解該等實施例，該等實例係僅出於說明之目的而包括在內且不意欲作為限制。 實例  實例I  基於促效性抗CD40抗體CP870,893產生融合干擾素之抗體(IFA)及其在報導體細胞上之表徵  I.a – IFA設計
設計成具有CP870,893促效性抗CD40抗體作為主鏈抗體的例示性IFA之序列組合以及IFN之位置及連接子之性質列於 表 7及 表 9中。如 表 7中所指示，IFN在輕鏈(LC)或重鏈(HC)之N末端或C末端部分處經由連接子融合。用最佳化的哺乳動物表現密碼子合成編碼HC、LC或融合物之核酸並將其選殖入真核表現載體，諸如pcDNA3.1(Invitrogen)中。 圖2A描繪在pCMV啟動子控制下編碼Seq ID NO 32之pcDNA3.1質體的例示性圖譜。 I.b - IFA產生
用以4/6之HC/LC比率編碼HC及LC的質體短暫共轉染Freestyle 293-F細胞(Invitrogen)。轉染之後六天，收集上清液，離心並經由0.22 µm過濾器過濾。在AktaExpress層析系統(GE Healthcare)上，使用蛋白質A MabSelect Sure 5mL 1.6/2.5 cm管柱(GE Healthcare)，以5 mL/min之流動速率分二個純化步驟執行純化方法。在D-PBS1X pH 7.5緩衝液中進行樣本結合，並用甘胺酸/HCl 0.1 M pH 3.0緩衝液溶析。將溶析峰儲存於環(loop)中，接著在D-PBS1XpH 7.5緩衝液中以10 mL/min之流動速率注射於HiTrap脫鹽26/10管柱(GE Healthcare)上。將溶析峰收集於96孔微量盤(2 mL流份)上。根據UV峰輪廓執行匯集。在0.22 µm過濾器(Sartorius MiniSart)上過濾之後，執行品質控制，包括使用Endosafe® nexgen-PTS™(Charles River)確定細菌內毒素；尺寸排阻層析法：使用SEC 200 Increase 10/300管柱(GE Healthcare) 確定純度及寡聚物；以及在NuPAGE凝膠系統(Invitrogen)上，在還原及非還原條件下於MES SDS操作緩衝液中進行SDS-PAGE。製造產率如 表 9中所示。對於一些IFA，製造產率極低。在此情況下，不經任何進一步純化，即直接使用含有IFA之上清液評估促效性CD40活性及IFN活性。
關於純化IFA之還原SDS-PAGE分析指示存在對應於HC及LC之二個主要譜帶。當IFN(任何IFN家族成員)與HC融合時，觀測到其分子量移位且關於與任何IFN融合之LC觀測到相同現象( 圖 2B)。 I.c - 在報導體細胞上IFA之表徵
使用HEK-Blue™ CD40L細胞(InvivoGen目錄號：hkb-cd40)或HEK-Blue™ IFN-α/β細胞(InvivoGen，目錄號：hkb-ifnαβ)分別監測CD40促效劑引起之NFκB路徑活化或I型IFN誘導的IFN路徑之活化。
藉由用人類CD40基因及NFκB誘導型分泌性胚胎鹼性磷酸酶(SEAP)構築體(Invivogen)穩定轉染HEK293細胞產生HEK-Blue™ CD40L細胞，以量測CD40促效劑之活性。刺激CD40引起NFκB之誘導及隨後SEAP之產生，此係在上清液中使用QUANTI-Blue™ (Invivogen，目錄號rep-qbs2)偵測。
HEK-Blue™ IFN細胞係設計用於監測由I型IFN誘導的JAK/STAT/ISGF3路徑之活化。活化此路徑將誘導SEAP之產生及釋放。使用QUANTI-Blue™可容易地評估上清液中SEAP之位準。
使用HEK-Blue™ IFN-α/β監測人類IFNα或IFNβ之活性。
將細胞接種於96孔盤(50,000個細胞/孔)中並用指定濃度之各IFA或對照刺激，並在37℃下培育24小時。接著，收集上清液並在將上清液培育約30分鐘之後，在Ensight盤讀取器或PheraStar(Lab Biotech)上用QuantiBlue™及在620 nm下之光學密度(O.D.)評估對SEAP位準進行定量。
可分別使用HEK-Blue™ Dual IFN-γ細胞(InvivoGen，目錄號：hkb-ifng)或HEK-Blue™ IFN-λ (InvivoGen，目錄號：hkb-ifnl)監測II型IFN及III型IFN之活性。HEK-Blue™ IFN-λ細胞係設計用於監測IFNλ之活性。HEK-Blue™ Dual IFN-γ細胞允許偵測生物活性人類IFNγ。 I.d - 以IFNα/β為主之IFA在報導體細胞上之功能活性
圖3顯示在HEK-Blue™ CD40L( 圖3A 至 圖3B)及HEK-Blue™ IFN-α/β細胞( 圖3C 至圖3D)上IFA之劑量反應的實例，其中如 表 7中所說明之IFNβ或其突變形式與如 表 7中所指示之HC融合。IFA之促效性抗CD40活性概述於 表 9中且實例顯示於 圖 3A及 圖 3B中。結果指示，所有測試IFA皆有以劑量依賴性方式活化CD40路徑及IFN-α/β路徑兩者的功能。對於與HC或LC之C末端融合，促效性CD40之EC 50值在11.1 ng/mL至192 ng/mL範圍內( 表9)。在 圖 3中所示之實驗中，親代抗體之平均EC 50值係48 ng/mL及57 ng/mL。具有與HC或LC之N末端融合之IFN的IFA亦能夠活化CD40路徑，但由於活性係直接自上清液確定且未使用純化蛋白質，故此等IFA之精確EC 50值無法確定( 圖3B)。
各種IFA之IFN活性概述於 表 9中且實例顯示於 圖 3C至 圖 3D中。對於IFNβ或突變IFNβ (如 表 7中所說明)與HC或LC之C末端融合，IFN活性取決於連接子序列而變化，其EC 50值在0.14 ng/mL至4.5 ng/mL範圍內( 圖 3C及 表 9)。 圖3D顯示具有與N末端部分融合之IFNβ的IFA展現高IFN活性。用作陰性對照之親代抗體不顯示任何活性，而重組IFNβ則顯示較強的劑量依賴性反應。總而言之，此等結果展示， 表 7中所說明之IFNβ或其突變形式與抗體不管在何位置融合均維持兩種生物功能，但在效力方面存在差異。
圖4顯示在HEK-Blue™ CD40L ( 圖4A及 圖 4C)及HEK-Blue™ IFN-α/β細胞( 圖4B及 圖 4D)上IFA之劑量反應的實例，其中如 表 7中所指示，IFNα與HC或LC融合。結果指示，所有測試IFA皆有以劑量依賴性方式活化CD40路徑及IFNα/β路徑兩者的功能。意外地是，對於所有以IFNα為主之IFA，針對CD40路徑之效力可再現地高於親代抗體的效力。以IFNα為主之IFA的EC 50值在11.1 ng/mL至22.7 ng/mL範圍內且CP870,893之EC 50在30 ng/mL至80 ng/mL範圍內(平均EC 50值：48 ng/mL)。
IFA之IFN活性取決於連接子序列而變化，且其EC 50值在1.6 ng/mL至5.1 ng/mL範圍內。在同一分析中，聚乙二醇化IFNα2a (珮格西施®)亦以劑量依賴性方式具有活性，且其EC 50值為約1 ng/mL。 I.e -不含Fc區之IFA的產生及表徵
根據本發明之適合構築體亦可為不含Fc區之干擾素相聯抗原結合蛋白。設計出編碼與TEV-His標籤融合的CP870,893之fab片段之重鏈的構築體(SEQ ID NO 50)並將其選殖入表現質體pcDNA3.1中。如先前所描述，將此構築體共轉染至HEK細胞中，其中LC經由不同連接子與不同IFN融合，諸如SEQ ID NO 28、SEQ ID NO 29、SEQ ID NO 34、SEQ ID NO 35、SEQ ID NO 36、SEQ ID NO 37、SEQ ID NO 41、SEQ ID NO 42或SEQ ID NO 43。在報導體細胞中評價蛋白質及/或上清液。熟習此項技術者應理解，用於療法中的構築體將不再含有TEV-His標籤。此等構築體同樣為本發明之實施例。不含Fc部分之干擾素相聯抗原結合蛋白將針對冠狀病毒感染具有活性。接著，製備二種IFA且其功能表徵描述於實例V中：IFA50：(SEQ ID NO 41) + (SEQ ID NO 50)及IFA51：(SEQ ID NO 42) + (SEQ ID NO 50)。 實例II  IFA對感染SARS-CoV-2之細胞的作用  II.a – 細胞培養
Vero E6細胞係獲自ElabScience(目錄號EP-CL-0491)，該等細胞係自非洲綠猴腎衍生細胞株CCL81萃取。將黏附細胞株維持在補充有10%胎牛血清(FBS；Gibco, Carlsbad, CA, USA)的杜貝克氏改良型伊格爾氏培養基(Dulbecco's Modified Eagle Medium，DMEM；Gibco目錄號21885-025，Carlsbad Carlsbad CA, USA)中。在37℃下，在含有5% CO 2之潮濕氛圍中培養細胞。 II.b – 病毒分離株
以下在實驗中使用之SARS-CoV-2病毒株係獲自BEI Resources： ●                    分離株USA-WA1/2020 (NR-52281) ●                    分離株Germany/BavPat1/2020 (NR-52370) ●                    分離株hCoV-19/South Africa/KRISP-EC-K005325/2020 (NR-54009) ●                    分離株USA/CA_CDC_5574/2020 (NR-54011) ●                    分離株hCoV-19/England/204820464/2020 (NR-54000) ●                    分離株hCoV-19/South Africa/KRISP-EC-K005321/2020 (NR-54008) ●                    分離株hCoV-19/Japan/TY7-503/2021 (NR-57982) ●                    分離株hCoV-19/USA/PHC658/2021 (NR-55611) ●                    分離株hCoV-19/USA/MD-HP20874/2021 (NR-56461) II.c -對照IFA之序列 表 C. 基於同型對照 Evi5 之 對照干擾素相聯抗原結合蛋白的序列。斜體序列對應於信號肽。粗體非斜體序列對應於連接子。
名稱/SEQ ID編號 序列
eVi-5 D1.3-h1v2_hIgG2 dK_HC (SEQ ID NO 89) MGWSCIILFLVATATGVHSEVKLQESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTGYGVNWVRQPPGKGLEWLGMIWGDGNTDYNSALKSRLSISKDNSKSQVFLKMNSLHTDDTARYYCARERDYRLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
evi-5 D1.3-hk-LC (SEQ ID NO 90) MGWSCIILFLVATATGVHSIELTQSPASLSASVGETVTITCRASGNIHNYLAWYQQKQGKSPQLLVYYTTTLADGVPSRFSGSGSGTQYSLKINSLQPEDFGSYYCQHFWSTPRTFGGGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
eVi-5 D1.3-h1v2_hIgG2 dK_HC--(G4S)2--IFNα2A (SEQ ID NO 91) MGWSCIILFLVATATGVHSEVKLQESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTGYGVNWVRQPPGKGLEWLGMIWGDGNTDYNSALKSRLSISKDNSKSQVFLKMNSLHTDDTARYYCARERDYRLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP GGGGGSGGGGSCDLPQTHSLGSRRTLMLLAQMRKISLFSCLKDRHDFGFPQEEFGNQFQKAETIPVLHEMIQQIFNLFSTKDSSAAWDETLLDKFYTELYQQLNDLEACVIQGVGVTETPLMKEDSILAVRKYFQRITLYLKEKKYSPCAWEVVRAEIMRSFSLSTNLQESLRSKE
eVi-5 D1.3-h1v2_hIgG2 dK_HC--(G4S)4--IFNα2A (SEQ ID NO 92) MGWSCIILFLVATATGVHSEVKLQESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTGYGVNWVRQPPGKGLEWLGMIWGDGNTDYNSALKSRLSISKDNSKSQVFLKMNSLHTDDTARYYCARERDYRLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP GGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSCDLPQTHSLGSRRTLMLLAQMRKISLFSCLKDRHDFGFPQEEFGNQFQKAETIPVLHEMIQQIFNLFSTKDSSAAWDETLLDKFYTELYQQLNDLEACVIQGVGVTETPLMKEDSILAVRKYFQRITLYLKEKKYSPCAWEVVRAEIMRSFSLSTNLQESLRSKE
表 D. 基於同型對照 Evi5 之 對照融合干擾素之抗原結合蛋白中發現的多肽組合 (=( SEQ ID NO 89 )+( SEQ ID NO 90 ) ； 序列組合包含兩次 ) 。所指示之各序列組合在各別 IFA 中包含二次。
融合干擾素之抗體 (IFA) 序列組合
IFA201 (seq ID NO 90) + (seq ID NO 92)
IFA202 (seq ID NO 90) + (seq ID NO 91)
II.d - 細胞測量分析：CD40染色
在4℃下，在FcR阻斷抗體(Miltenyi 130-059-901)存在下，使Vero E6細胞(1.10 6個細胞/孔)再懸浮於PEB緩衝液中，保持15分鐘。在4℃下以1500rpm離心2分鐘之後，將細胞再懸浮於單獨或存在同型抗體(Miltenyi 130-113-438)或抗CD40-APCVio770抗體(Miltenyi, 130-123-395)之100 µl緩衝液中，並在4℃下培育30分鐘。接著，將細胞離心，洗滌，在4℃下用4% PFA固定10分鐘。在離心及洗滌之後，將細胞再懸浮於PEB緩衝液中並在MACSQuant16細胞計數器上進行分析。 II.e - 細胞生存力分析CellTiter-Glo
根據製造商之說明書(Promega，目錄號：G7570)對各樣本執行CellTiter-Glo發光細胞生存力分析(CTG)。簡言之，將細胞一式三份平板接種於96孔盤中並在37℃、5% CO 2下培育。接種後二十四小時，將細胞以0.05之感染倍率(MOI)(Gamma及Omicron變異株除外，其MOI分別為0.5及0.1)感染1小時，用PBS洗滌一次且接著用瑞德西韋(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA; Wang (2020) Cell Res. 30: 2-71)或用指定濃度之測試物治療。對於預治療程序( 圖5F及 圖 5G、 圖 5F.bis及 圖 5G.bis)，在37℃下，將細胞用瑞德西韋或用指定濃度之測試物治療1小時，用PBS洗滌一次並在37℃、5% CO 2下，以0.05之MOI感染72小時。對於中和分析，在37℃下，將病毒以MOI 0.05與指定濃度之S309 (Pinto (2020) Nature Jul;583(7815):290-295)混合1小時以使抗體結合至該病毒之棘蛋白。接著，將細胞用病毒/抗體混合物感染並在37℃、5% CO 2下培育72小時。對於以上描述之所有程序，在感染後72小時，將細胞用PBS洗滌一次並與CellTiter-Glo試劑一起培育10分鐘，且在微量盤讀取器(Perkin Elmer Ensight)中使用96孔盤讀取器(GloMax-96微量盤光度計；Promega)以每孔0.1秒之積分時間量測發光。背景發光係在不含細胞之培養基中量測且自實驗值減除。 II.f -  SARS-CoV-2感染模型驗證(利用CTG分析)
為了驗證感染模型，使用中和抗體及聚合酶抑制劑瑞德西韋進行二個實驗。對於中和分析，在細胞感染之前，將中和抗體S309及病毒(分離株USA-WA1/2020)預培育1小時，並在感染之後3天評估細胞生存力。 圖5A顯示S309以858 ng/mL之EC 50強效地中和SARS-CoV-2。
亦藉由在感染後一小時，用遞增劑量範圍之測試產物治療細胞持續72小時來評估瑞德西韋之作用。結果指示，瑞德西韋有以劑量反應方式抑制病毒複製及病毒誘發之細胞病變作用的功能，且其EC 50為1.341 µM( 圖 5B)。 II.g.1 -  IFA27對SARS-CoV-2感染之作用(利用CTG分析)
經顯示，Vero E6細胞在其細胞表面上表現CD40 ( 圖 5C)。因此，在2項實驗設計中，相較於瑞德西韋評估IFA27對SARS-CoV-2感染之作用。在用SARS-CoV-2感染之後1小時，用一定劑量範圍之IFA27或瑞德西韋治療細胞( 圖 5D及 圖 5E)。3天後，使用CTG分析評估細胞生存力。結果指示，IFA27以劑量依賴性方式強效地挽救Vero E6免於SARS-CoV-2誘發之細胞病變作用，且其EC 50為8.10 -5µM( 圖5D)。在同一實驗中，瑞德西韋之EC 50＞1 µM( 圖5E)。在第二實驗環境中，將細胞與IFA27或與瑞德西韋一起預培育1小時，用PBS洗滌並在37℃下以0.05之MOI感染72小時。藉由CTG方法評估細胞生存力。結果指示，用IFA27短期治療能夠挽救Vero E6細胞免於SARS-CoV-2誘發之細胞死亡( 圖5F)，但用瑞德西韋則不能( 圖5G)。儘管治療持續時間較短，但EC 50係3.45.10 -4µM( 圖5F)。 II.g.2. -  IFA 25對SARS-CoV-2感染之作用(利用CTG分析)
在2項實驗設計中，相較於瑞德西韋評估IFA25對SARS-CoV-2感染之作用。在用SARS-CoV-2感染之後1小時，將細胞用一定劑量範圍之IFA25或瑞德西韋治療( 圖 5D. bis及 圖 5E. bis)。3天後，使用CTG分析評估細胞生存力。結果指示，IFA25以劑量依賴性方式強效地挽救Vero E6免於SARS-CoV-2誘發之細胞病變作用，且其EC 50為2.231×10 -5μM( 圖 5D. bis)。在同一實驗中，瑞德西韋之EC 50係1.756 μM ( 圖5E. bis)。在第二實驗環境中，將細胞與IFA25或與瑞德西韋一起預培育1小時，用PBS洗滌並在37℃下以0.05之MOI感染72小時。藉由CTG方法評估細胞生存力。結果指示，用IFA25短期治療能夠挽救Vero E6細胞免於SARS-CoV-2誘發之細胞死亡( 圖 5F.bis)，但用瑞德西韋不能( 圖 5G.bis)。儘管治療持續時間較短，但IFA25 EC 50係4.813×10 -5μM。當在感染步驟之前或之後施加時，IFA25之此類抗病毒作用展示，其可在臨床情況下保護感染部位處存在的受感染之細胞及周圍未感染之細胞。因此，此等結果證實本發明之構築體不僅能夠治療冠狀病毒感染，而且亦能夠預防冠狀病毒感染。另外，對於周圍未感染細胞之保護作用使得治療特別有效。 II.h -  IFA25、IFA27對SARS-CoV-2感染之作用與對照IFA、CP870,893及珮格西施之作用的比較(利用CTG分析)
接著，評價IFA27之作用與親代抗體(CP870,893)或與IFNA2A經由相同(G4S)4連接子與對照抗體(無CD40促效性活性)融合之對照IFA (IFA201)之作用的比較。在感染之後1小時，治療細胞，並在3天後，藉由CTG評估細胞生存力。結果指示，單獨CP870,893對SARS-CoV-2誘發之細胞死亡不具有任何作用。對照IFA因存在IFNA2A而展示劑量作用活性，而IFA27在挽救Vero E6免於SARS-CoV-2誘發之細胞死亡方面的效力要比對照IFA之效力高超過100倍( 圖5H)。
IFA25展現與IFA27極其類似之活性，且相較於其對照IFA (IFA202)或珮格西施®，其具有高效力( 圖5I)。
接著，評價IFA25之作用與親代抗體(CP870,893)或與IFNA2A經由相同(G4S)2連接子與對照抗體(EVI5，無CD40促效性活性)融合之對照IFA (IFA202)之作用的比較。在感染之後1小時，治療細胞，並在3天後，藉由CTG評估細胞生存力。結果指示，單獨CP870,893在防護SARS-CoV-2誘發之細胞死亡方面不具有強效作用。對照IFA202因存在IFNA2A而展示劑量作用活性，而IFA25在挽救Vero E6細胞免於SARS-CoV-2誘發之細胞死亡方面要比對照IFA強效。值得注意的是，單獨或與同型EVI5組合(具有與CP870,893及IFA202組合中相同之抗體負載)之IFA25亦比CP870,893及IFA202組合強效，因此展示在同一分子內具有CD40及IFN兩種功能之益處( 圖5I.bis)。 II.i -  IFA25對SARS-CoV-2分離株之作用(利用CTG分析)
將Vero E6細胞用不同分離株感染且用IFA25治療3天。結果指示，不管分離株為何，IFA25在預防細胞感染SARS-CoV-2後死亡方面極其強效，且其EC 50為約10 -6µM，展示其可廣泛用於任何SARS-CoV-2變異株或甚至是任何冠狀病毒( 圖5J至 圖 5O)。
在 圖 5P至圖 5R中，關於其他分離株之額外結果指示，亦與此等分離株相同，IFA25在預防細胞感染SARS-CoV-2後死亡方面極其強效，且其EC50為約10 -5µM。
在所有此等實驗( 圖5J 至 圖5R)中，應用相同方案且包括瑞德西韋(RDV)作為比較劑，瑞德西韋係用於治療COVID19之直接作用抗病毒劑。為比較IFA25及瑞德西韋功效，估計Log10絕對EC50(Log絕對EC50)並報導於 表14中。在所有測試條件下，IFA25保護VeroE6細胞免於死亡之效力優於RDV之效力。另外，在治療比較中，利用針對SARS-CoV-2譜系之配對，使用有關Log絕對EC50的成對t檢定，發現IFA25明顯不同於RDV ( 表14)，且p值為p＜0.001。由此展示IFA25可廣泛用於任何SARS-CoV-2變異株或甚至是任何冠狀病毒。 II.j -  IFA126對SARS-CoV-2分離株之作用(利用CTG分析)
在針對3種主要變異株之後治療設計實驗中，評估在一定劑量範圍內的IFA126針對SARS-CoV-2感染的作用：分離株USA-WA1/2020 (MOI 0.05)、分離株hCoV-19/USA/PHC658/2021 (Delta變異株，MOI 0.05)及分離株hCoV-19/USA/MD-HP20874/2021 (Omicron變異株，MOI 0.1) ( 圖5S至 圖 5U)。3天後，使用CTG分析評估細胞生存力。
IFA126以劑量依賴性方式強效地挽救Vero E6細胞免於SARS-CoV-2誘發之細胞病變作用，且其針對USA-WA1/2020分離株之EC 50為9.5×10 -6μM( 圖5S)，針對Delta變異株之EC 50為1.445×10 -5µM( 圖5T)以及針對Omicron變異株之EC 50為2.72×10 -5µM( 圖5U)。 II.k - 即時細胞分析系統(RTCA xCELLigence; Nat Med. 2020年9月;26(9):1422-1427)
RTCA儀器使用含有在各孔底部中整合之金生物感測器(gold biosensor)的微量盤。金生物感測器上黏附細胞之存在會阻礙電流且阻抗之量值取決於細胞之數目、細胞之大小、細胞-基底附著品質及細胞-細胞黏附(屏障功能)。當感染病毒時，宿主細胞通常展示顯微鏡下可見之變化，統稱為細胞病變作用(CPE)。CPE可包括細胞收縮或增大、退化/溶解、細胞融合及/或包涵體形成。經由連續細胞病變作用(CPE)進展之感染細胞在阻礙電流之流動方面效率越來越低。藉由連續地量測此等變化，RTCA詳細地追蹤病毒CPE並產生定量動力學。根據製造商之說明書，研究中使用之裝置及軟體分別為xCELLigence RTCA SP (Agilent)及RTCA軟體2.0 (Agilent)。如下文所描述，對各樣本執行RTCA。簡言之，將細胞一式三份平板接種於96孔E-plates (Agilent，目錄號5232368001)中並在37℃、5% CO 2下培育。接種後二十四小時，在37℃、5% CO 2下將盤置放於位於培育箱中之xCELLigence工作台中並如下啟動各孔中之電流記錄：在1分鐘時間間隔內61個連續讀數、在15分鐘時間間隔內100個連續讀數及在1小時之時間間隔內200個連續讀數。監測電阻抗(稱為細胞指數(CI)， 圖6)1小時以評價細胞單層之背景。接著，將細胞以0.05之MOI感染1小時，用PBS洗滌一次且接著用珮格西施®或用指定濃度之測試物治療。連續地監測細胞指數55小時。使用軟體GraphPad Prism 8分析資料。對於 圖 6D、 圖 6F及 圖 6H ，CI正規化如下：100%對應於在未感染條件(NI)下記錄之最高CI (在25小時)且0%對應於在55小時獲得的CI，此時所有細胞均死亡。在 圖 6E、 圖 6G及 圖 6I中，為確定EC 50，使用4PL非線性回歸分析標繪在45小時之時間點時各濃度之測試物的資料。 II.l - 使用即時細胞分析系統驗證感染模型
使用xCELLigence系統即時評價IFA對Vero E6細胞感染SARS-CoV-2後細胞死亡的作用。先評定病毒濃度對病毒誘發之細胞病變作用的作用，此處以細胞指數表示。將細胞保持未感染或用不同數目蝕斑形成單位(PFU)之SARS-CoV-2感染75小時。結果指示，細胞指數與PFU數目之間存在良好相關性( 圖 6A)。接著，證實中和抗體S309能夠預防SARS-CoV-2誘發之細胞死亡( 圖 6B)且瑞德西韋亦能夠以劑量依賴性方式預防Vero E6細胞中SARS-CoV-2誘發之細胞病變作用( 圖 6C)。 II.m - 使用即時細胞分析系統確定的IFA25對SARS-CoV-2感染之作用
相較於珮格西施®及相關對照IFA，監測IFA25針對感染SARS-CoV-2之Vero E6細胞之即時作用。結果指示相較於珮格西施®或對照IFA (IFA202)，IFA25具有強效作用，由此證實先前使用CTG分析得到的結果，且其EC 50為4.4×10 -7µM( 圖6D-E)。 實例III  細胞介素釋放  III.a - 人全血細胞之細胞介素釋放評估(CRA)
使用全血細胞(WBC)離體刺激分析研究在IFA刺激之後細胞介素之釋放情況。自四名健康供體收集WBC，以1/3稀釋於RPMI1640 (72400-021, Gibco)中並分配於無菌反應管(300 µl)中。將細胞保持未刺激，用10 ng/mL脂多醣(LPS) K12 (tlrl-eklps, Invivogen)刺激作為陽性對照或用1 µg/mL IFA刺激並在37℃下培育24小時。接著，收集上清液並在-20℃冷凍以待分析。
使用多工MSD分析(K15067L-4)對人類促炎性細胞介素進行分析，該MSD分析量測腫瘤壞死因子(TNF)-α、介白素(IL)-1β、IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12/IL-23p40及IFNγ。在1300 MESO QuickPlex SQ120設備(MSD)上分析MSD盤。
圖7描繪由未刺激、用LPS或用IFA1處理之人類WBC之活體外細胞介素釋放評估得到的例示性結果。
由測試以IFNβ/突變IFNβ為主及以IFNα為主之IFA得到的其他結果概述於表 11a及 表 11b中。結果顯示，對於所有供體，LPS誘導極高水準之炎性細胞介素(IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-12p40及IFNγ)。其亦誘導作為IFN路徑之生物標記物之IP10 (CXCL10)及中等位準之IL-10。測試二種以IFNβ為主之IFA( 表11a)及六種以IFNα為主之IFA( 表11b)。其全部誘導生物標記物IP10。然而，其不誘導IL-10、IL-1β及IL-2，且其僅誘導極低至中等位準之IFNγ、IL-6及TNF-α，由此表明有關炎性細胞介素誘導之有利安全輪廓。 實例IV  藥物動力學研究  IV.a -關於IFA定量之ELISA分析開發
對於ELISA定量，在4℃下，用100 µl於碳酸鈉(0.05 M，pH 9.6，C-3041，Sigma)中0.5 µg/mL之重組人類CD40/TNFRSF5 Fc嵌合蛋白(Chimera Protein)塗覆96孔盤(PLATES 96孔Maxisorp, THERMO Scientifique; 442404)隔夜，該嵌合蛋白由與人類IgG1之Fc部分融合的人類CD40之細胞外域組成(CD40-Fc；R&D Systems；1493-CDB-050)。在藉由翻轉排空之後，接著將盤在37℃下與PBS-0.05% Tween20-1%牛奶(SIGMA；70166-500g)一起培育1小時，隨後用PBS-0.05% Tween20洗滌。接著，將樣本及對照(100 µl之1/2連續稀釋液)在37℃下培育90分鐘，隨後洗滌三次(PBS-0.05% Tween20)並與在PBS-0.05% Tween20-1%牛奶中的二次抗IgG2結合之HRP(1/5000，ab99779，Abcam)抗體或抗IFNα結合之HRP (1/1000，eBIOSCIENCE/Invitrogen；BMS216MST)一起培育。用PBS、0.05% Tween2洗滌三次之後，添加四甲基聯苯胺(Tetramethylbenzidin，TMB；Tebu Bio；TMBW-1000-01)並在暗處培育該等盤20分鐘。藉由添加1 M HCl停止反應。用Ensight盤讀取器(Perkin Elmer)在450-650 nm下讀取盤。使用類似方案步驟，但使用來自eBioscience/Invitrogen之人類IFNα相配抗體對評估珮格西施之定量。使用100 μL於碳酸鈉(0.05 M，pH 9.6，C-3041，Sigma)中1 μg/mL之人類抗IFNα抗體(eBioscience/Invitrogen；BMS216MST)執行捕捉。對於偵測，應用於PBS-0.05% Tween20-1%牛奶中之二次抗IFNα結合之HRP抗體(1/1000，Affymetrix eBioscience/BMS216MST；15501707)。 IV.b - 在小鼠中之活體內生體可用率
為確定PK參數，對雄性CD1-瑞士小鼠靜脈內推注投予0.5 mg/kg之CP870,893、IFA25、IFA26、IFA27、IFA28、IFA29及IFA30以及0.3 mg/kg之珮格西施，並在不同時間點收集血液樣本。使用以上描述之ELISA方法且用抗IFNα結合之HRP披露的定量循環分子之實例顯示於 圖 8A及 圖 8B中，而用抗IgG2結合之HRP披露的定量之實例顯示於 圖 8C中；珮格西施定量顯示於 圖 8D中。在 表 12A中概述的一組實驗中，CP870,893之PK參數係以7天實驗研究且IFA27、IFA29及IFA30之PK參數係以10天實驗研究(IFA27之定量係使用2種不同的ELISA方法執行)。在 表 12B中概述之另一組實驗中， CP870,893及IFA25、IFA26、IFA28以及珮格西施之PK參數係以21天實驗研究(IFA25之定量係使用2種不同的ELISA方法執行)。
在較短的分佈期之後，藉由在116至218小時範圍內之長血清半衰期表徵IFA之藥物動力學輪廓( 表12A及 表 12B)。該6種測試IFA獲得極其類似的PK輪廓，且甚至在單次劑量投予之後十天亦具有高循環位準。 表 12A/B中概述之藥物動力學參數指示，此等IFA意外地在血液中循環，且IFA之全身暴露量(AUC(0-inf))在1033 µg.h/mL至2552 µg.h/mL範圍內，高於親代CP870,893之各別590或797 µg.h/mL全身暴露量(至多3.2倍)，亦反映IFA之較低清除率值。分佈體積Vss較低且自50至105 mL/kg評級，略高於在此物種中之血漿血管體積(50 mL/kg)。對於所有IFA，清除率均評為低(0.28至0.49 mL/h/kg)。值得關注的是，珮格西施之清除率(1.4 mL/hr/kg)比IFA之清除率(例如IFA27之清除率為0.2 mL/hr/kg)高至多7倍，展示IFA之較高全身暴露量。 實例V  V.a -不含Fc區之IFA在報導體細胞上之功能活性
為了確定IFA之Fc部分是否為活性所需的，設計並製造出IFNα融合與HC之Fab片段相聯的LC之C末端部分的融合物。將IFNα用(G4S)2 (IFA50)或(G4S)3 (IFA51)連接子連接至LC部分。
在HEK-Blue™ CD40L細胞上進行之評價展示，該等IFA仍展現促效性CD40活性( 圖9A)且活化CD40路徑，且其EC 50值分別為約128 ng/ml(IFA 50)及123 ng/mL(IFA51)。
在HEK-Blue™ IFN-α/β細胞上進行之IFN活性評價顯示，兩種測試IFA均展現IFN活性( 圖9B)。EC 50值報導於 表 9B中且IFA50之EC 50值為約1.36 ng/mL且IFA51之EC 50值為1.43 ng/mL。 V.b - 以IFNε為主之IFA對於報導體細胞及對於感染SARS-CoV-2之細胞的功能活性
亦設計並製造出CP870,893與第三種I型干擾素(IFN epsilon；IFNε)之融合物。在HEK-Blue™ CD40L細胞上測試此類IFA且可展示其維持促效性CD40活性。一種此類IFA (IFA49)之結果顯示於 圖 10A中。在HEK-Blue™ hIFN-α/β細胞(該等細胞實際上被任何I型干擾素活化)上進行之評價顯示，IFA49亦能夠活化IFN-I路徑( 圖 10B)。EC 50值報導於 表 9B中。
此等結果展示，具有IFNε之IFA維持IFN及促效性CD40活性兩者(亦即，為雙功能的)。
在針對3種主要變異株之後治療設計實驗中，評估在一定劑量範圍內的IFA49針對SARS-CoV-2感染的作用：分離株USA-WA1/2020 (MOI 0.05)、分離株hCoV-19/USA/PHC658/2021 (Delta變異株，MOI 0.05)及分離株hCoV-19/USA/MD-HP20874/2021 (Omicron變異株，MOI 0.1) ( 圖10C至 圖 10E)。3天後，使用CTG分析評估細胞生存力。
IFA49以劑量依賴性方式強效地挽救Vero E6細胞免於SARS-CoV-2誘發之細胞病變作用，且其針對USA-WA1/2020分離株之EC 50為6.565×10 -4μM( 圖10C)，針對Delta變異株之EC 50為5.45×10 -4µM( 圖10D)以及針對Omicron變異株之EC 50為1.517×10 -3µM( 圖10E)。 V.c - 以IFNω為主之IFA對於報導體細胞及對於感染SARS-CoV-2之細胞的功能活性
亦設計並製造出CP870,893與第四種I型干擾素(IFN omega；IFNω)之融合物。在HEK-Blue™ CD40L細胞上測試此類IFA且結果展示其維持促效性CD40活性。一種此類IFA (IFA46)之結果顯示於 圖 11A中。在HEK-Blue™ hIFN-α/β細胞(該等細胞實際上被任何I型干擾素活化)上進行之評價顯示，IFA46亦能夠活化IFN-I路徑( 圖 11B)。EC 50值報導於 表 9B中。
此等結果展示，具有IFNω之IFA維持IFN及促效性CD40活性兩者(亦即，為雙功能的)。
在針對3種主要變異株之後治療設計實驗中，評估在一定劑量範圍內的IFA46針對SARS-CoV-2感染的作用：分離株USA-WA1/2020 (MOI 0.05)、分離株hCoV-19/USA/PHC658/2021 (Delta變異株，MOI 0.05)及分離株hCoV-19/USA/MD-HP20874/2021 (Omicron變異株，MOI 0.1) ( 圖11C至 圖 11E)。3天後，使用CTG分析評估細胞生存力。
IFA46以劑量依賴性方式強效地挽救Vero E6細胞免於SARS-CoV-2誘發之細胞病變作用，且其在最高濃度下100%挽救感染USA-WA1/2020分離株之Vero E6細胞( 圖11C)，且針對Delta病毒株之EC 50為8.395×10 -4µM( 圖11D)以及針對Omicron病毒株之EC 50為2.111×10 -5µM( 圖11E)。 V.d - 以IFNγ為主之IFA對於報導體細胞及對於感染SARS-CoV-2之細胞的功能活性
亦設計並製造出CP870,893與II型干擾素(IFN gamma；IFNγ)之融合物。在HEK-Blue™ CD40L細胞上評價此等IFA展示，其維持促效性CD40活性，不管IFNγ連接至LC之C末端部分(IFA42)抑或HC之C末端部分(IFA43)( 圖12A)。在HEK-Blue™-IFNγ細胞上評價此等IFA ( 圖12B)顯示，其亦能夠活化IFNγ路徑。IFA42(EC 50：15 ng/ml)與IFA43(EC 50：＜0.01 ng/ml)之間之IFNγ活性略有不同。EC 50值報導於 表 9B中。
綜合而言，此等結果展示，具有IFNγ之IFA維持IFN及促效性CD40活性兩者(亦即，為雙功能的)。
在針對3種主要變異株之後治療設計實驗中，評估在一定劑量範圍內的IFA42及IFA43針對SARS-CoV-2感染的作用：分離株USA-WA1/2020 (MOI 0.05)、分離株hCoV-19/USA/PHC658/2021 (Delta變異株，MOI 0.05)及分離株hCoV-19/USA/MD-HP20874/2021 (Omicron變異株，MOI 0.1) ( 圖12C至 圖 12H)。3天後，使用CTG分析評估細胞生存力。
結果指示，IFA42以劑量依賴性方式強效地挽救Vero E6細胞免於SARS-CoV-2誘發之細胞病變作用，且其針對USA-WA1/2020分離株之EC 50為1.195×10 -3μM( 圖12C)，針對Delta變異株之EC 50為0.9971×10 -3µM( 圖12D)以及針對Omicron變異株之EC 50為0.6351×10 -3µM( 圖12E)。IFA43以劑量依賴性方式強效地挽救Vero E6細胞免於SARS-CoV-2誘發之細胞病變作用，且其針對USA-WA1/2020分離株之EC 50為1.063×10 -3μM( 圖12F)，針對Delta變異株之EC 50為1.812×10 -4µM( 圖12G)以及針對Omicron變異株之EC 50為7.575×10 -5µM( 圖12H)。 V.e - 以IFNλ為主之IFA對於報導體細胞及對於感染SARS-CoV-2之細胞的功能活性
亦設計並製造出CP870,893與III型干擾素(IFN lambda；IFNλ)之融合物。在HEK-Blue™ CD40L細胞上測試此等IFA且結果展示，其亦維持促效性CD40活性，不管IFNλ連接至LC之C末端部分(IFA44)抑或HC之C末端部分(IFA45)( 圖13A)。在HEK-Blue™-IFNλ細胞上評價此等IFA顯示，其亦能夠活化IFNλ路徑( 圖13B)。EC 50值報導於 表 9B中。此等結果亦展示，具有IFNλ之IFA維持IFN及促效性CD40活性兩者(亦即，為雙功能的)。
在針對3種主要變異株之後治療設計實驗中，評估在一定劑量範圍內的IFA44及IFA45針對SARS-CoV-2感染的作用：分離株USA-WA1/2020 (MOI 0.05)、分離株hCoV-19/USA/PHC658/2021 (Delta變異株，MOI 0.05)及分離株hCoV-19/USA/MD-HP20874/2021 (Omicron變異株，MOI 0.1) ( 圖13C至 圖 13H)。3天後，使用CTG分析評估細胞生存力。
IFA44以劑量依賴性方式強效地挽救Vero E6細胞免於SARS-CoV-2誘發之細胞病變作用，且其在10 -1µM濃度下挽救超過60%的感染USA-WA1/2020分離株之Vero E6細胞( 圖13C)，針對Delta變異株之EC 50為1.628×10 -2µM( 圖13D)以及針對Omicron變異株之EC 50為2.132×10 -2µM( 圖13E)。IFA45以劑量依賴性方式強效地挽救Vero E6細胞免於SARS-CoV-2誘發之細胞病變作用，且其針對USA-WA1/2020分離株之EC 50為1.458×10 -2μM( 圖13F)，針對Delta變異株之EC 50為6.789×10 -3µM( 圖13G)以及針對Omicron變異株之EC 50為2.329×10 -2µM( 圖13H)。 實例VI  基於抗CD40抗體3G5產生融合干擾素之抗體(IFA)及其在報導體細胞上之表徵  VI.a – IFA設計
設計成具有3G5促效性抗CD40抗體(Celldex)作為主鏈抗體的例示性IFA之序列組合以及IFN之位置及連接子之性質列於 表 8及 表 10中。如 表 8中所指示，IFN在輕鏈(LC)或重鏈(HC)之C末端部分處經由連接子融合。用最佳化的哺乳動物表現密碼子合成編碼HC、LC或融合物之核酸並將其選殖入真核表現載體，諸如pcDNA3.1(Invitrogen)中。 VI.b – IFA產生
IFA產生係如先前所描述執行且製造產率示於 表 10中。對於一些IFA，製造產率極低，主要為IFNβ與LC之C末端部分的融合物。對於此等IFA，不經任何進一步純化，即直接使用含有IFA之上清液評估促效性CD40活性及IFN活性。關於純化IFA之還原SDS-PAGE分析指示存在對應於HC及LC之二個主要譜帶。當IFN與HC融合時，觀測到其分子量移位。( 圖 14)。 VI.c- 以IFNα/β為主之IFA在報導體細胞上之功能活性
在報導體細胞上進行之3G5 IFA之表徵係如先前所描述( 參見I.c)，在HEK-Blue™ CD40L ( 圖15A-B及 圖 16A)及HEK-Blue™ IFN-α/β細胞( 圖15C-D及 圖 16B)上進行。 VI.c.1. 以IFNβ為主之IFA
圖15顯示在HEK-Blue™ CD40L及HEK-Blue™ IFN-α/β細胞上IFA之劑量反應的實例，其中IFNβ與3G5之HC或LC融合( 圖15)。 表 10中概述之結果指示，所有以IFNβ為主之測試IFA均具有功能且能夠以劑量依賴性方式活化CD40路徑及IFNα/β路徑兩者。
CD40活性之實例顯示於 圖 15A及 圖 15B中。IFNβ與HC之C末端部分融合展示出高度變化之抗CD40活性且在所有情況下皆低於親代抗體，其EC 50值在30 ng/mL至190.5 ng/mL範圍內( 圖15A及 表 10)。親代3G5抗體之平均EC 50值係9.3 ng/mL。
對於與LC之C末端部分的融合物，製造產率極低且在HEK細胞中過度表現之後使用含IFA之上清液評估活性。在HEK-Blue™ CD40L上評價此等上清液( 圖15B)展示，此等IFA對於CD40路徑具有活性。對於3G5，當將上清液稀釋300倍時，仍偵測到促效性抗CD40活性。相反，含IFA之上清液需要1/10稀釋來觀測到活性( 圖 15B)。
在HEK-Blue™ IFN-α/β細胞上測試IFA之IFN活性且其結果概述於 表 10中。實例示於 圖 15C-D中。對於IFNβ在HC之C末端部分處融合，IFN活性取決於連接子序列而變化，且其EC 50值在0.45 ng/mL至10.3 ng/mL範圍內( 圖15C)。對於含有IFNβ在LC之C末端部分融合之IFA的上清液，甚至在上清液稀釋10000倍之後，仍偵測到IFN活性( 圖15D)。 VI.c.2. 以IFNα為主之IFA
圖16A-B顯示在HEK-Blue™ CD40L細胞( 圖16A)及HEK-Blue™ IFNα/β細胞( 圖16B)上IFA之劑量反應的實例，其中IFNα與3G5之HC融合。
結果指示，所有IFA以劑量依賴性方式展示對CD40路徑及IFNα/β路徑之功能活化(平均EC 50值報導於 表 10中)。
對於所有以IFNα為主之IFA，針對CD40路徑之效力與親代抗體類似，且其平均EC 50值在11.74 ng/mL至14.2 ng/mL範圍內( 圖 16A及 表 10)。親代3G5抗體之平均EC 50值係9.3 ng/mL。
在HEK-Blue™ IFN-α/β細胞上測試以IFNα為主之IFA的IFN活性且其展示出極高活性。關於此等IFA之IFN活性的EC 50值在0.04 ng/mL至0.12 ng/mL範圍內( 圖16B及 表 10)。 VI.c.3.以IFNγ為主之IFA
根據先前所描述(參見I.c)，在HEK-Blue™ CD40L細胞及HEK-Blue™-IFNγ細胞上評價IFA125顯示，IFA 125具有功能性且能夠活化CD40路徑及IFNγ路徑兩者( 表10B)。
在針對3種主要變異株之後治療設計實驗中，評估在一定劑量範圍內的IFA125針對SARS-CoV-2感染的作用：分離株USA-WA1/2020 (MOI 0.05)、分離株hCoV-19/USA/PHC658/2021 (Delta變異株，MOI 0.05)及分離株hCoV-19/USA/MD-HP20874/2021 (Omicron變異株，MOI 0.1) ( 圖16C至 圖 16E)。3天後，使用CTG分析評估細胞生存力。
IFA125以劑量依賴性方式強效地挽救Vero E6細胞免於SARS-CoV-2誘發之細胞病變作用，且其自10 -4µM濃度起100%挽救感染USA-WA1/2020分離株之Vero E6細胞( 圖16C)，且其針對Delta變異株之EC 50為4.283×10 -6µM( 圖16D)以及針對Omicron變異株之EC 50為7.482×10 -6µM( 圖16E)。 VI.d - 不含Fc區之IFA的產生及表徵
根據本發明之適合構築體亦可為不含Fc區之干擾素相聯抗原結合蛋白。設計出編碼與TEV-His標籤融合的3G5之Fab片段之重鏈的構築體(SEQ ID NO 65)並將其選殖入表現質體pcDNA3.1中。根據先前所描述，將此構築體共轉染至HEK細胞中，其中LC經由不同連接子與IFN融合，諸如SEQ ID NO 70或SEQ ID NO 71。在報導體細胞中評價蛋白質及/或上清液及/或其對感染冠狀病毒之細胞的作用。熟習此項技術者應理解，用於療法中的構築體將不再含有TEV-His標籤。此等構築體同樣為本發明之實施例。不含Fc部分之干擾素相聯抗原結合蛋白將針對冠狀病毒感染具有活性。 實例VII  人全血細胞之細胞介素釋放分析(CRA)
根據先前所描述 ( 參見III.a)，使用WBC離體刺激分析研究在IFA刺激之後細胞介素之釋放情況。利用IFA109之實例示於 圖 17及 表 13中。結果指示，所有IFA均誘導CXCL10釋放。其不誘導IL-10、IL-1β及IL-2，且其僅誘導極低至中等位準之IFNγ、IL-6及TNF-α，由此表明有關炎性細胞介素誘導之有利安全輪廓。 實例VIII  IFA對感染SARS-CoV-2之鼻及支氣管人類呼吸道上皮細胞的作用  VIII.a - 人類鼻及支氣管細胞中之CD40及IFNAR RNA表現及細胞測量分析
藉由RT-qPCR分析評估在空氣-液體界面系統中培養的處於感染及未感染條件之初代人類鼻及支氣管細胞中CD40及IFNAR之表現。遵循製造商之建議(SV96總RNA分離系統，目錄號Z3505)，自初代人類鼻及支氣管細胞(未感染或經感染)萃取總RNA。簡言之，使用組合異硫氰酸胍(GTC)及β-巰基乙醇之破壞及保護特性的SV 96總RNA分離系統破壞核蛋白複合物並使細胞萃取物中存在之核糖核酸酶失活。
接著，將細胞溶解產物施加至結合盤上以使總RNA結合至管柱。將不含核糖核酸酶之去氧核糖核酸酶I直接施加至二氧化矽膜上以消化污染性基因體DNA。再藉由簡單洗滌步驟將經結合之總RNA自污染性鹽、蛋白質及細胞雜質純化。最後，藉由添加無核酸酶水自該膜溶析總RNA。溶析後，先遵循製造商之說明書(目錄號11754050)，使用500 ng RNA作為模板進行cDNA合成。接著，執行TLDA受體陣列卡(ThermoFisher Scientific)，同時對包括CD40( Taqman 分析Hs00374176)、IFNAR1( Taqman 分析Hs01066116)及IFNAR2( Taqman 分析Hs00174198)在內之特定受體的mRNA位準進行定量。在該分析中亦包括管家基因mRNA表現，包括GAPDH ( Taqman 分析Hs99999905)、GUSB( Taqman 分析Hs99999908)、TBP( Taqman 分析Hs99999910)及RPLP0( Taqman 分析Hs99999902)，以評估在所有4種測試條件中的潛在mRNA變化，其中各受體之Ct值低於25( 圖18A)。
亦藉由細胞測量分析，在蛋白質層面上證實在空氣-液體界面系統中培養的未感染之鼻及支氣管細胞中CD40及IFNAR之表現( 圖18B)。在生存力標記物Aqua LIVE/DEAD(Invitrogen L34957)存在下，使初代人類鼻及支氣管細胞(0.2×10 6個細胞/孔)再懸浮於PBS 1X +2 mM EDTA +0.5% BSA+(PEB)緩衝液中，在4℃下保持30分鐘。在4℃下以1300 rpm離心3分鐘之後，在抗CD40-APC抗體(Miltenyi, 130-110-947)或相配的對照同型-APC(Miltenyi 130-113-434)存在下、在抗IFNAR1-APC抗體(Bio-techne SAS, FAB245A)或相配的對照同型-APC(Bio-techne SAS, IC002A)存在下以及在抗IFNAR2-APC抗體(Miltenyi, 130-099-558)或相配的對照同型-APC(Miltenyi, 130-113-434)存在下，使細胞再懸浮於100 μl之PEB中。將細胞在4℃下培育30分鐘。接著，將細胞離心，洗滌，在4℃下用4% PFA固定10分鐘。在離心及洗滌之後，將細胞再懸浮於PEB緩衝液中，採集於MACSQuant16細胞計數器上並使用Flowjo軟體分析。 VIII.b - 在空氣液體界面系統中之初代人類細胞的SARS-CoV-2感染模型.
MucilAir TM(Epithelix)係在空氣液體界面處培養之人類呼吸道上皮細胞之活體外細胞模型。將即用型上皮細胞維持在37℃、95%濕度及5% CO 2之專用培育箱中的MucilAir TM培養基(目錄號EP05MM)中。在此MucilAir TM系統中，治療可在感染步驟之前、期間或之後施加。對於IFA評價，如下開發二種治療設計，分別命名為後治療及預治療。
後治療設計(2次或3次治療)：在感染當天，在頂面處用Opti-MEM(目錄號31985-062)洗滌上皮細胞兩次，接著用0.1 MOI之SARS-CoV-2分離株USA-WA1/2020感染1小時。隨後，將細胞用Opti-MEM洗滌兩次以移除殘留病毒接種物且在基底隔室處添加補充有感興趣治療之新鮮MucilAir TM培養基。對於96小時動力學，在48小時，在培養基更新期間施加第二次治療。對於168小時動力學，在48小時及96小時，在培養基更新期間進行第二次及第三次治療。取決於動力學，在48小時、96小時及168小時，將頂部洗滌液收集於Opti-MEM中，如下文所描述進行SARS-CoV-2 RT-qPCR (nucleospin 96病毒，目錄號740691)及TCID50評估。在動力學(96小時或168小時)結束時，用RNA溶解套組(目錄號Z3505)溶解上皮細胞，如下文所描述進行細胞內SARS-CoV-2 RT-qPCR定量。
預治療設計：感染當天，在感染前，在基底隔室處添加補充有感興趣治療之新鮮MucilAir TM培養基，保持3小時。隨後，在頂面處用Opti-MEM(目錄號31985-062)洗滌上皮細胞兩次，接著用0.1 MOI之SARS-CoV-2分離株USA-WA1/2020感染1小時。隨後，將細胞用Opti-MEM洗滌兩次以移除殘留病毒接種物且在基底隔室處添加不含治療之新鮮MucilAir TM培養基，保持48小時。在動力學結束時，將頂部洗滌液收集於Opti-MEM中，如下文所描述進行SARS-CoV-2 RT-qPCR及TCID50評估。接著，遵循製造商之說明書，用RNA溶解套組(目錄號Z3505)溶解上皮細胞，如下文所描述進行細胞內SARS-CoV-2 RT-qPCR定量。
SARS-CoV-2病毒RNA定量：對於頂部洗滌液中病毒RNA之定量，簡言之，遵循製造商之說明書，用病毒特異性核酸萃取套組(nucleospin 96病毒，目錄號74061，來自Macherey-Nagel)萃取每種條件100µl洗滌液。接著，在100µl無核酸酶水中溶析病毒RNA，隨後藉由RT-qPCR定量。對於RT-qPCR定量，將5µl病毒RNA添加至TaqMan Fast型病毒1步法預混液(Virus 1-step Master mix)(#4444434，Thermo Fisher)、SARS-CoV-2 20×Taqman分析(#4332078，正向引子5'-GACCCCAAAATCAGCGAAAT-3'；反向引子5'-TCTGGTTACTGCCAGTTGAATCTG-3；探針FAM-ACCCCGCATTACGTTTGGTGGACC-MGB-NFQ)及無核酸酶水之反應混合物中。在50℃進行初始逆轉錄步驟5分鐘以產生cDNA後，在95℃下進行酶失活步驟20秒。將PCR產物直接以40個PCR循環進行擴增(在95℃下進行變性步驟3秒，隨後在60℃下黏接並延伸30秒)。使用在相同條件下擴增的內部參考基因體SARS-CoV-2 RNA標準品的十倍連續稀釋液計算SARS-CoV-2拷貝數。
對於在MucilAir TM組織中進行病毒RNA定量，根據以上所描述，先使用RNA溶解套組(目錄號Z3505)萃取RNA。接著，根據上文所描述，在100µl無核酸酶水中溶析總RNA進行RT-qPCR擴增及定量。
SARS-CoV-2病毒力價確定：簡言之，對於各治療條件，匯集相同體積來自生物重複實驗之頂部洗滌液，由此表示各組一份樣本。接著，製備此等樣本之連續十倍稀釋液並將其施加至平板接種之Vero E6細胞上，保持1天。3天之後，藉由CellTiter-Glo分析評價CPE並用於鑑別感染終點。使用五次重複實驗計算每毫升頂部洗滌液之50%細胞組織培養感染劑量(TCID/mL)。 VIII.c -  IFA25及IFA27對初代人類細胞系統中SARS-CoV-2感染之作用
根據實例VIII.b，評價IFA25及IFA27在初代人類鼻及支氣管細胞中之作用，該等細胞係在空氣液體界面系統中培養並用0.1 MOI之SARS-CoV-2分離株USA-WA1/2020感染。首先，以0.1 nM及1 nM測試之IFA27在鼻組織( 圖19A)及鼻頂部洗滌液( 圖19B)中展示劑量依賴性減少病毒RNA的作用。另外，根據頂部洗滌液中TCID 50力價顯示，IFA27治療在最高劑量下消除感染性病毒之從頭製造( 圖19C)。根據組織病毒RNA負荷量( 圖20A)及頂部洗滌液病毒RNA負荷量( 圖20B)顯示，在支氣管細胞亦觀測到抗病毒作用。當在相同實驗中測試時，直接作用之抗病毒瑞德西韋在比IFA27高得多的濃度(1.25µM及5 µM)下對病毒RNA負荷量及感染性病毒力價顯示出依賴性作用。
此外，根據鼻組織( 圖21)及支氣管組織( 圖23)中之病毒抑制顯示，IFA25在RNA及感染性病毒層面上均展現出抗病毒活性。IFA25在測試的1 nM最低劑量下實現抗病毒作用，而瑞德西韋治療展現出一定劑量範圍之作用且在比IFA25高得多的濃度下實現抑制。此外，如上文所描述，在預治療設計中測試IFA25及瑞德西韋。在預治療設計中，IFA25保持針對鼻( 圖22)及支氣管( 圖24)細胞中SARS-CoV-2感染的極其強效之作用。觀測到細胞內隔室中( 圖22A及 圖 24A)及頂部洗滌液中( 圖22B及 圖 24B)病毒RNA負荷量降低，以及鼻細胞之頂部洗滌液中感染性病毒力價減小( 圖22C)。在預治療設計中亦觀測到細胞內隔室中( 圖22A及 圖 24A)及頂部洗滌液中( 圖22B及 圖 24B)瑞德西韋對病毒RNA負荷量之作用，但其並未達到與後治療設計相同的位準。此外，在預治療設計中瑞德西韋並未對鼻細胞頂部洗滌液中之感染性病毒力價產生任何作用( 圖22C)。 等效內容
本發明可在不脫離其精神或基本特徵之情況下以其他特定形式實施。因此，前述實施例在所有方面應視為示例性的，而非對本發明之限制。因此，所主張發明之範圍係由所附申請專利範圍而非由前述描述指示，且因此，在與申請專利範圍等效之含義及範圍內的所有變化均意欲包含在本文中。 項目
鑒於上述，應瞭解，本發明亦關於以下 項目： 1.   一種干擾素相聯抗原結合蛋白，其包含 (I)促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段，及 (II)干擾素(IFN)或其功能片段， 該干擾素相聯抗原結合蛋白用於冠狀病毒感染之治療或預防之用途。 2.   如項目1之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含與SEQ ID NO 3內之CDRL1、CDRL2及CDRL3序列至少90%一致之三個輕鏈互補決定區(CDR)；及與SEQ ID NO 6內之CDRH1、CDRH2及CDRH3序列至少90%一致之三個重鏈CDR； 較佳地，其中該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段包含與SEQ ID NO 3內之CDRL1、CDRL2及CDRL3序列至少95%一致之三個輕鏈互補決定區(CDR)；及與SEQ ID NO 6內之CDRH1、CDRH2及CDRH3序列與至少95%一致之三個重鏈CDR； 更佳地，其中該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段包含與SEQ ID NO 3內之CDRL1、CDRL2及CDRL3序列至少98%一致之三個輕鏈互補決定區(CDR)；及與SEQ ID NO 6內之CDRH1、CDRH2及CDRH3序列與至少98%一致之三個重鏈CDR； 或再更佳地，其中該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段包含與SEQ ID NO 3內之CDRL1、CDRL2及CDRL3序列至少99%一致之三個輕鏈互補決定區(CDR)；及與SEQ ID NO 6內之CDRH1、CDRH2及CDRH3序列與至少99%一致之三個重鏈CDR。 3.   如項目1或2之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段包含與SEQ ID NO 3內之CDRL1、CDRL2及CDRL3序列一致之三個輕鏈互補決定區(CDR)；及與SEQ ID NO 6內之CDRH1、CDRH2及CDRH3序列一致之三個重鏈CDR。 4.   如項目2或3之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中各CDR係根據CDR之Kabat定義、Chothia定義、AbM定義或接觸定義界定；較佳地，其中各CDR係根據Kabat之CDR定義或Chothia之CDR定義界定。 5.   如項目1之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段包含 (I) (a)重鏈或其片段，其包含與SEQ ID NO 56至少90%一致的互補決定區(CDR) CDRH1、與SEQ ID NO 57至少90%一致之CDRH2及與SEQ ID NO 58至少90%一致之CDRH3；及 (b)輕鏈或其片段，其包含與SEQ ID NO 52至少90%一致之CDRL1、與SEQ ID NO 53至少90%一致之CDRL2及與SEQ ID NO 54至少90%一致之CDRL3； 較佳地(II) (a)重鏈或其片段，其包含與SEQ ID NO 56至少95%一致的互補決定區(CDR) CDRH1、與SEQ ID NO 57至少95%一致之CDRH2及與SEQ ID NO 58至少95%一致之CDRH3；及 (b)輕鏈或其片段，其包含與SEQ ID NO 52至少95%一致之CDRL1、與SEQ ID NO 53至少95%一致之CDRL2及與SEQ ID NO 54至少95%一致之CDRL3； 更佳地(III) (a)重鏈或其片段，其包含與SEQ ID NO 56至少98%一致的互補決定區(CDR) CDRH1、與SEQ ID NO 57至少98%一致之CDRH2及與SEQ ID NO 58至少98%一致之CDRH3；及 (b)輕鏈或其片段，其包含與SEQ ID NO 52至少98%一致之CDRL1、與SEQ ID NO 53至少98%一致之CDRL2及與SEQ ID NO 54至少98%一致之CDRL3；或 再更佳地(IV) (a)重鏈或其片段，其包含與SEQ ID NO 56至少99%一致的互補決定區(CDR) CDRH1、與SEQ ID NO 57至少99%一致之CDRH2及與SEQ ID NO 58至少99%一致之CDRH3；及 (b)輕鏈或其片段，其包含與SEQ ID NO 52至少99%一致之CDRL1、與SEQ ID NO 53至少99%一致之CDRL2及與SEQ ID NO 54至少99%一致之CDRL3。 6.   如項目1之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段包含 (a)重鏈或其片段，其包含與SEQ ID NO 56一致之互補決定區(CDR)CDRH1、與SEQ ID NO 57一致之CDRH2及與SEQ ID NO 58一致之CDRH3；及 (b)輕鏈或其片段，其包含與SEQ ID NO 52一致之CDRL1、與SEQ ID NO 53一致之CDRL2及與SEQ ID NO 54一致之CDRL3。 7.   如前述項目中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段包含：輕鏈可變區V L，其包含如SEQ ID NO 51所示之序列或與該序列至少90%一致之序列；及/或重鏈可變區V H，其包含如SEQ ID NO 55中所示之序列或與該序列至少90%一致之序列； 較佳地，其中該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段包含：輕鏈可變區V L，其包含與如SEQ ID NO 51中所示之序列至少95%一致之序列；及/或重鏈可變區V H，其包含與如SEQ ID NO 55中所示之序列至少95%一致之序列； 更佳地，其中該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段包含：輕鏈可變區V L，其包含與如SEQ ID NO 51中所示之序列至少98%一致之序列；及/或重鏈可變區V H，其包含與如SEQ ID NO 55中所示之序列至少98%一致之序列； 再更佳地，該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段包含：輕鏈可變區V L，其包含與如SEQ ID NO 51中所示之序列至少99%一致之序列；及/或重鏈可變區V H，其包含與如SEQ ID NO 55中所示之序列至少99%一致之序列；或 最佳地，其中該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含：輕鏈可變區V L，其包含如SEQ ID NO 51中所示之序列；及重鏈可變區V H，其包含如SEQ ID NO 55中所示之序列。 8.   如前述項目中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段之重鏈包含Fab區重鏈，其包含如SEQ ID NO 12中所示之胺基酸序列、或與該序列至少90%、較佳地95%、更佳地98%或再更佳地99%一致之序列。 9.   如前述項目中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段包含：輕鏈(LC)，其包含如SEQ ID NO 3所示之序列或與該序列至少90%一致之序列；及/或重鏈(HC)，其包含選自由SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 49及SEQ ID NO 48組成之群的序列或與該序列至少90%一致之序列； 較佳地，其中該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段包含：輕鏈(LC)，其包含與如SEQ ID NO 3中所示之序列至少95%一致之序列；及/或重鏈(HC)，其包含與如由SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 49及SEQ ID NO 48組成之序列群內所示的序列至少95%一致之序列； 更佳地，其中該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段包含：輕鏈(LC)，其包含與如SEQ ID NO 3中所示之序列至少98%一致之序列；及/或重鏈(HC)，其包含與如由SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 49及SEQ ID NO 48組成之序列群內所示之序列至少98%一致的序列； 再更佳地，其中該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段包含：輕鏈(LC)，其包含與如SEQ ID NO 3中所示之序列至少99%一致之序列；及/或重鏈(HC)，其包含與如由SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 49及SEQ ID NO 48組成之序列群內所示之序列至少99%一致的序列；或 最佳地，其中該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段包含：輕鏈(LC)，其包含如SEQ ID NO 3中所示之序列；及重鏈(HC)，其包含選自由SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 49及SEQ ID NO 48組成之群的序列。 10. 如項目9之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該HC包含如SEQ ID NO 6中所示之序列、或與該序列至少90%、較佳地95%、更佳地98%或再更佳地99%一致之序列。 11. 如項目9之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該HC包含如SEQ ID NO 9中所示之序列、或與該序列至少90%、較佳地95%、更佳地98%或再更佳地99%一致之序列。 12. 如項目9之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該HC包含如SEQ ID NO 49中所示之序列、或與該序列至少90%、較佳地95%、更佳地98%或再更佳地99%一致之序列。 13. 如項目9之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該HC包含如SEQ ID NO 48中所示之序列、或與該序列至少90%、較佳地95%、更佳地98%或再更佳地99%一致之序列。 14. 如前述項目中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN或該其功能片段係人類干擾素。 15. 如前述項目中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN或該其功能片段係選自由以下組成之群：I型IFN、II型IFN及III型IFN，或其功能片段。 16. 如前述項目中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN或該其功能片段係I型IFN或其功能片段。 17. 如項目16之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該I型IFN或該其功能片段係IFNα、IFNβ、IFNω或IFNε，或其功能片段。 18. 如項目16之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該I型IFN或該其功能片段係IFNα或IFNβ，或其功能片段。 19. 如項目16之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該I型IFN或該其功能片段係IFNω或其功能片段。 20. 如項目16之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該I型IFN或該其功能片段係IFNε或其功能片段。 21. 如項目1至14中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN或該其功能片段係IFNα、IFNβ、IFNγ、IFNλ、IFNω或IFNε，或其功能片段。 22. 如項目21之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN或該其功能片段係IFNα或IFNβ，或其功能片段。 23. 如項目22之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN或該其功能片段係IFNα或其功能片段。 24. 如項目23之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN或其功能片段係IFNα2a或其功能片段。 25. 如項目24之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFNα2a包含如SEQ ID NO 17中所示之序列、或與該序列至少90%、較佳地95%、更佳地98%或再更佳地99%一致之序列。 26. 如項目22之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN或該其功能片段係IFNβ或其功能片段。 27. 如項目26之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFNβ包含如SEQ ID NO 14中所示之序列、或與該序列至少90%、較佳地95%、更佳地98%或再更佳地99%一致之序列。 28. 如項目26之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFNβ或該其功能片段相對於SEQ ID NO 14包含選自C17S及N80Q之一個或二個胺基酸取代。 29. 如項目28之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFNβ或該其功能片段相對於SEQ ID NO 14包含胺基酸取代C17S。 30. 如項目29之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFNβ包含如SEQ ID NO 15中所示之胺基酸序列。 31. 如項目28之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFNβ或該其功能片段相對於SEQ ID NO 14包含胺基酸取代C17S及N80Q。 32. 如項目31之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFNβ包含如SEQ ID NO 16中所示之胺基酸序列。 33. 如項目21之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN或其功能片段係IFNγ或IFNλ，或其功能片段。 34. 如項目33之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN或其功能片段係IFNγ或其功能片段。 35. 如項目34之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFNγ包含如SEQ ID NO 19中所示之序列、或與該序列至少90%、較佳地95%、更佳地98%或再更佳地99%一致之序列。 36. 如項目33之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN或其功能片段係IFNλ或其功能片段。 37. 如項目36之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFNλ或該其功能片段係IFNλ2或其功能片段。 38. 如項目37之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFNλ2包含如SEQ ID NO 18中所示之序列、或與該序列至少90%、較佳地95%、更佳地98%或再更佳地99%一致之序列。 39. 如前述項目中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN或該其功能片段與該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段非共價相聯。 40. 如項目39之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN或該其功能片段經由離子、凡得瓦爾及/或氫鍵相互作用與該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段非共價相聯。 41. 如項目1至38中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN或該其功能片段與該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段共價相聯。 42. 如項目41之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN或該其功能片段與該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段融合。 43. 如項目42之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN或該其功能片段與該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段之輕鏈融合。 44. 如項目43之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN或該其功能片段與該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段之輕鏈的N末端融合。 45. 如項目43之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN或該其功能片段與該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段之輕鏈的C末端融合。 46. 如項目42之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN或該其功能片段與該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段之重鏈融合。 47. 如項目46之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN或該其功能片段與該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段之重鏈之N末端融合。 48. 如項目46之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN或該其功能片段與該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段之重鏈之C末端融合。 49. 如項目42至48中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段與該IFN或該其功能片段經由連接子彼此融合。 50. 如項目49之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白不包含除形成以下之胺基酸外的胺基酸：(I)該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段；(II)該IFN或其功能片段；及(III)該連接子。 51. 如項目1至49中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白不包含除形成以下之胺基酸外的胺基酸：(I)該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段；及(II)該IFN或其功能片段。 52. 如項目49至50中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子係肽連接子。 53. 如項目52之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子包含至少1個、至少2個、至少3個、至少4個或至少5個胺基酸。 54. 如項目53之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子包含至少4個胺基酸。 55. 如項目53之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子包含至少11個胺基酸。 56. 如項目53之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子包含至少12個胺基酸。 57. 如項目53之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子包含至少13個胺基酸。 58. 如項目53之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子包含至少15個胺基酸。 59. 如項目53之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子包含至少20個胺基酸。 60. 如項目53之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子包含至少21個胺基酸。 61. 如項目53之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子包含至少24個胺基酸。 62. 如項目52之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子包含至多10個、至多20個、至多30個、至多40個、至多50個、至多60個、至多70個、至多80個、至多90個或至多100個胺基酸。 63. 如項目62之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子包含至多80個胺基酸。 64. 如項目62之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子包含至多40個胺基酸。 65. 如項目62之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子包含至多24個胺基酸。 66. 如項目62之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子包含至多21個胺基酸。 67. 如項目62之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子包含至多20個胺基酸。 68. 如項目62之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子包含至多15個胺基酸。 69. 如項目62之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子包含至多13個胺基酸。 70. 如項目62之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子包含至多12個胺基酸。 71. 如項目62之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子包含至多11個胺基酸。 72. 如項目62之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子包含至多4個胺基酸。 73. 如項目52至72中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子係選自包含酸性連接子、鹼性連接子及中性連接子之群。 74. 如項目73之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子係酸性連接子。 75. 如項目73或74之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子包含如SEQ ID NO 22或SEQ ID NO 23中所示之序列。 76. 如項目73之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子係鹼性連接子。 77. 如項目73之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子係中性連接子。 78. 如項目73或77之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子包含如SEQ ID NO 20、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 25或SEQ ID NO 26中所示之序列。 79. 如項目52至78中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子係選自包含剛性連接子、可撓性連接子及成螺旋連接子之群。 80. 如項目79之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子係剛性連接子。 81. 如項目79或80之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子包含如SEQ ID NO 20、SEQ ID NO 22或SEQ ID NO 23中所示之序列。 82. 如項目79之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子係可撓性連接子。 83. 如項目79或82之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子包含如SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 25或SEQ ID NO 26中所示之序列。 84. 如項目79之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子係成螺旋連接子。 85. 如項目79或84之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子包含如SEQ ID NO 22或SEQ ID NO 23中所示之序列。 86. 如項目52至74、76、77、79、80、82或84中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子包含胺基酸甘胺酸及絲胺酸。 87. 如項目86之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子包含如SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 25或SEQ ID NO 26中所示之序列。 88. 如項目86之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子進一步包含胺基酸蘇胺酸。 89. 如項目88之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子包含如SEQ ID NO 21中所示之序列。 90. 如項目52之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子包含選自如SEQ ID NOs 20至26中所示之序列的序列。 91. 如項目90之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子包含選自如SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 25或SEQ ID NO 26中所示之序列的序列。 92. 如項目91之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子包含如SEQ ID NO 24中所示之序列。 93. 如項目91之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子包含如SEQ ID NO 25中所示之序列。 94. 如項目91之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該連接子包含如SEQ ID NO 26中所示之序列。 95. 如項目49、50或52至94中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN或其功能片段經由如表3、特定言之表3A或表3B、更特定言之表3A中所示之連接子與該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段之重鏈之C末端融合。 96. 如項目95之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段之重鏈包含如SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 48或SEQ ID NO 49中所示之序列。 97. 如項目95或96之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFNα2a包含如SEQ ID NO 17中所示之序列。 98. 如項目95或96之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFNβ包含如SEQ ID NO 14、SEQ ID NO 15或SEQ ID NO 16中所示之序列。 99. 如項目98之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFNβ包含如SEQ ID NO 14中所示之序列。 100.   如項目98之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFNβ包含如SEQ ID NO 15中所示之序列。 101.   如項目98之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFNβ包含如SEQ ID NO 16中所示之序列。 102.   如項目95或96之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFNγ包含如SEQ ID NO 19中所示之序列。 103.   如項目95或96之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFNλ2包含如SEQ ID NO 18中所示之序列。 104.   如項目95至103中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白進一步包含促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之輕鏈。 105.   如項目104之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該輕鏈包含如SEQ ID NO 3中所示之序列。 106.   如項目49、50或52至94中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN或其功能片段經由如表4、特定言之表4A或表4B、更特定言之表4A中所示之連接子與該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段之重鏈之N末端融合。 107.   如項目106之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段之重鏈包含如SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 49、SEQ ID NO 48或SEQ ID NO 12中所示之序列。 108.   如項目106或107之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFNα2a包含如SEQ ID NO 17中所示之序列。 109.   如項目106或107之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFNβ包含如SEQ ID NO 14、SEQ ID NO 15或SEQ ID NO 16中所示之序列。 110.   如項目109之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFNβ包含如SEQ ID NO 14中所示之序列。 111.   如項目109之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFNβ包含如SEQ ID NO 15中所示之序列。 112.   如項目109之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFNβ包含如SEQ ID NO 16中所示之序列。 113.   如項目106或107之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFNγ包含如SEQ ID NO 19中所示之序列。 114.   如項目106或107之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFNλ2包含如SEQ ID NO 18中所示之序列。 115.   如項目106至114中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白進一步包含促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之輕鏈。 116.   如項目115之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該輕鏈包含如SEQ ID NO 3中所示之序列。 117.   如項目49、50或52至94中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN或其功能片段經由如表5、特定言之表5A或表5B、更特定言之表5A中所示之連接子與該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段之輕鏈之C末端融合。 118.   如項目117之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段之輕鏈包含如SEQ ID NO 3中所示之序列。 119.   如項目117或118之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFNα2a包含如SEQ ID NO 17中所示之序列。 120.   如項目117或118之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFNβ包含如SEQ ID NO 14、SEQ ID NO 15或SEQ ID NO 16中所示之序列。 121.   如項目120之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFNβ包含如SEQ ID NO 14中所示之序列。 122.   如項目120之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFNβ包含如SEQ ID NO 15中所示之序列。 123.   如項目120之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFNβ包含如SEQ ID NO 16中所示之序列。 124.   如項目117或118之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFNγ包含如SEQ ID NO 19中所示之序列。 125.   如項目117或118之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFNλ2包含如SEQ ID NO 18中所示之序列。 126.   如項目117至125中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白進一步包含促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之重鏈。 127.   如項目126之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該促效性抗CD40抗體之重鏈包含如SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 49、SEQ ID NO 48或SEQ ID NO 12中所示之序列。 128.   如項目49、50或52至94中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN經由如表6、特定言之表6A或表6B、更特定言之表6A中所示之連接子與該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段之輕鏈之N末端融合。 129.   如項目128之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段之輕鏈包含如SEQ ID NO 3中所示之序列。 130.   如項目128或129之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFNα2a包含如SEQ ID NO 17中所示之序列。 131.   如項目128或129之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFNβ包含如SEQ ID NO 14、SEQ ID NO 15或SEQ ID NO 16中所示之序列。 132.   如項目131之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFNβ包含如SEQ ID NO 14中所示之序列。 133.   如項目131之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFNβ包含如SEQ ID NO 15中所示之序列。 134.   如項目131之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFNβ包含如SEQ ID NO 16中所示之序列。 135.   如項目128或129之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFNγ包含如SEQ ID NO 19中所示之序列。 136.   如項目128或129之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFNλ2包含如SEQ ID NO 18中所示之序列。 137.   如項目128至136中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白進一步包含抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之重鏈。 138.   如項目137之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該促效性抗CD40抗體之重鏈包含如SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 49、SEQ ID NO 48或SEQ ID NO 12中所示之序列。 139.   如項目1至138中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白包含選自以下之序列：SEQ ID NO 28、SEQ ID NO 29、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 31、SEQ ID NO 32、SEQ ID NO 33、SEQ ID NO 34、SEQ ID NO 35、SEQ ID NO 36、SEQ ID NO 37、SEQ ID NO 38、SEQ ID NO 39、SEQ ID NO 40、SEQ ID NO 41、SEQ ID NO 42、SEQ ID NO 43、SEQ ID NO 44、SEQ ID NO 45、SEQ ID NO 46、SEQ ID NO 47、SEQ ID NO 81、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 87、SEQ ID NO 88及SEQ ID NO 94。 140.   如項目139之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白包含選自以下之序列：SEQ ID NO 38、SEQ ID NO 39、SEQ ID NO 40、SEQ ID NO 41、SEQ ID NO 42或SEQ ID NO 43。 141.   如項目139或140之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含表9、特定言之表9A或表9B、更特定言之表9A中所揭示之序列組合中之一者。 142.   如項目141之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 38及SEQ ID NO 3中所示之序列。 143.   如項目141之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 39及SEQ ID NO 3中所示之序列。 144.   如項目141之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 40及SEQ ID NO 3中所示之序列。 145.   如項目141之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 41及SEQ ID NO 9中所示之序列。 146.   如項目141之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 42及SEQ ID NO 9中所示之序列。 147.   如項目141之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 43及SEQ ID NO 9中所示之序列。 148.   如項目1至147中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白活化CD40路徑及IFN路徑兩者。 149.   如項目148之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中CD40活性係使用全血表面分子上調分析或活體外報導體細胞分析測定。 150.   如項目149之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中CD40活性係使用活體外報導體細胞分析，任擇地使用HEK-Blue TMCD40L細胞確定。 151.   如項目148至150中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白以小於400、300、200、150、100、70、60、50、40、30、25、20或15 ng/mL之EC 50活化該CD40路徑。 152.   如項目151之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白以在10至200 ng/mL範圍內之EC 50活化該CD40路徑。 153.   如項目152之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白以在10至50 ng/mL範圍內、較佳地10至30 ng/mL範圍內之EC 50活化該CD40路徑。 154.   如項目148至153中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白以小於100、60、50、40、30、20、10或1 ng/mL之EC 50活化該IFN路徑。 155.   如項目148至154中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白以小於11 ng/mL、較佳地小於6 ng/mL之EC 50活化該IFN路徑。 156.   如項目148至155中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN路徑係IFNα、IFNβ、IFNε、IFNγ、IFNω或IFNλ路徑。 157.   如項目156之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中IFNβ活性係使用活體外報導體細胞分析，任擇地使用HEK-Blue™ IFN-α/β細胞確定。 158.   如項目156之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中IFNα活性係使用活體外報導體細胞分析，任擇地使用HEK-Blue™ IFN-α/β細胞確定。 159.   如項目156之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中IFNγ活性係使用活體外報導體細胞分析，任擇地使用HEK-Blue™ Dual IFN-γ細胞確定。 160.   如項目156之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中IFNλ活性係使用活體外報導體細胞分析，任擇地使用HEK-Blue™ IFN-λ細胞確定。 161.   如前述項目、特定言之項目148至160中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中在用該干擾素相聯抗原結合蛋白處理後，感染冠狀病毒之細胞中一或多種IFN路徑生物標記物的表現位準相較於未用該干擾素相聯抗原結合蛋白處理的該感染冠狀病毒之細胞中該等生物標記物的表現位準上調，較佳地上調至少1.5倍、更佳地至少2倍、最佳地至少3倍。 162.   如項目161之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN路徑生物標記物係趨化因子。 163.   如項目162之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN路徑生物標記物係干擾素刺激基因ISG20。 164.   如項目162之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN路徑生物標記物係選自由CXCL9、CXCL10及CXCL11組成之群的C-X-C趨化因子。 165.   如項目164之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN路徑生物標記物係CXCL10。 166.   如前述項目、特定言之項目148至165中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中在用該干擾素相聯抗原結合蛋白處理之後，感染冠狀病毒之細胞中IL10、IL1β及IL2中一或多者之表現位準相較於未用該干擾素相聯抗原結合蛋白處理的該感染冠狀病毒之細胞中該等介白素的表現位準無明顯上調。 167.   如前述項目中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白之全身暴露量相較於抗體CP870,893增加，較佳地增加至少10%、更佳地增加至少15%、最佳地增加至少25%。 168.   如前述項目中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白之全身暴露量係至少1000 µg*h/mL。 169.   如項目168之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白之全身暴露量在1033 µg*h/mL至1793 µg*h/mL範圍內。 170.   如前述項目中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白之半衰期係至少100小時。 171.   如項目170之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白之半衰期在116至158小時範圍內。 172.   如前述項目中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白之清除率低於0.5 mL/h/kg。 173.   如項目172之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白之清除率在0.28至0.49 mL/h/kg範圍內。 174.   如項目1至173中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白之分佈體積Vss低於100 mL/kg。 175.   如項目174之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白之分佈體積Vss在50至98 mL/kg範圍內。 176.   如前述項目中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該用途包含藉助於基因遞送編碼該干擾素相聯抗原結合蛋白之RNA或DNA序列或者編碼該干擾素相聯抗原結合蛋白之載體或載體系統向有需要之個體投予該干擾素相聯抗原結合蛋白。 177.   如項目1至176中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白係包含在醫藥組成物中。 178.   如項目177之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該醫藥組成物適於經口、非經腸或表面投予或者適於藉由吸入投予。 179.   如項目178之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該醫藥組成物適於經口投予。 180.   如項目178之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該醫藥組成物適於表面投予。 181.   如項目178之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該醫藥組成物適於藉由吸入投予。 182.   如項目178之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該醫藥組成物適於非經腸投予。 183.   如項目182之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該醫藥組成物適於靜脈內、動脈內、腹膜內、肌肉內、皮下、直腸或陰道投予。 184.   如項目183之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該醫藥組成物適於注射，較佳地適於靜脈內或動脈內注射或滴注。 185.   如項目177至184中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該醫藥組成物包含至少一緩衝劑。 186.   如項目185之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該緩衝劑係乙酸鹽、甲酸鹽或檸檬酸鹽。 187.   如項目186之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該緩衝劑係乙酸鹽。 188.   如項目186之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該緩衝劑係甲酸鹽。 189.   如項目186之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該緩衝劑係檸檬酸鹽。 190.   如項目177至189中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該醫藥組成物包含表面活性劑。 191.   如項目190之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該表面活性劑係選自包含以下之清單：普朗尼克、PEG、脫水山梨糖醇酯、聚山梨醇酯、曲拉通、緩血酸胺、卵磷脂、膽固醇及泰洛沙泊。 192.   如項目191之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該表面活性劑係聚山梨醇酯。 193.   如項目192之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該表面活性劑係聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯80或聚山梨醇酯100。 194.   如項目193之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該表面活性劑係聚山梨醇酯20。 195.   如項目193之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該表面活性劑係聚山梨醇酯80。 196.   如項目177至195中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該醫藥組成物包含穩定劑，任擇地其中該穩定劑係白蛋白。 197.   如項目1至196中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含與SEQ ID NO 3內之各別CDRL1、CDRL2及CDRL3序列至少90%一致之三個輕鏈互補決定區(CDR) CDRL1、CDRL2及CDRL3；以及與SEQ ID NO 6內之各別CDRH1、CDRH2及CDRH3序列至少90%一致之三個重鏈CDR，即CDRH1、CDRH2及CDRH3。 198.   如項目1至197中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含與SEQ ID NO 3內之各別CDRL1、CDRL2及CDRL3序列一致之三個輕鏈互補決定區(CDR) CDRL1、CDRL2及CDRL3；以及與SEQ ID NO 6內之各別CDRH1、CDRH2及CDRH3序列一致之三個重鏈CDR，即CDRH1、CDRH2及CDRH3。 199.   如項目197或項目198之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中各CDR係根據CDR之Kabat定義、Chothia定義、AbM定義或接觸定義界定；較佳地，其中各CDR係根據Kabat之CDR定義或Chothia之CDR定義界定。 200.   如項目2至199中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中在該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之重鏈及輕鏈可變區的互補決定區內不存在胺基酸取代、插入或缺失。 201.   如項目2至199中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中在該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之重鏈及輕鏈可變區的互補決定區中之各者內獨立地不存在、存在一個或二個胺基酸取代、插入或缺失。 202.   一或多種編碼如前述項目中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白的聚核苷酸，該一或多種聚核苷酸用於治療或預防有需要之個體的冠狀病毒感染，其中該治療包含在該個體體內由投予該個體之一或多種聚核苷酸表現該干擾素相聯抗原結合蛋白。 203.   如前述項目中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白、或者一或多種聚核苷酸，其中該冠狀病毒選自由以下組成之群：嚴重急性呼吸道症候群冠狀病毒1 (SARS-CoV-1)、嚴重急性呼吸道症候群冠狀病毒2 (SARS-CoV-2)及中東呼吸道症候群冠狀病毒(MERS-CoV)。 204.   如前述項目中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白、或者一或多種聚核苷酸，其中該冠狀病毒係SARS-CoV-2或其變異株。 205.   如項目204之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白、或者一或多種聚核苷酸，其中該冠狀病毒係在得自https://outbreak.info/situation-reports或https://cov-lineages.org/global_report.html之譜系報導中所鑑別的SARS-CoV-2之變異株。 206.   如項目204或205之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白、或者一或多種聚核苷酸，其中該SARS-CoV-2變異株係選自由以下組成之群：A.23.1、B.1.1.7、B.1.351、B.1.427、B.1.429、B.1.525、B.1.526、B.1.526.1、B.1.526.2、B.1.617、B.1.617.1、B.1.617.2、B.1.617.3、P.1或P.2。 主題
鑒於上述，應另外瞭解，本發明亦關於以下 主題： 1.   一種用於治療或預防冠狀病毒感染之用途的腫瘤壞死因子受體超家族(TNFRSF)促效劑或其功能片段，其中該TNFRSF促效劑或其功能片段係與干擾素(IFN)或其功能片段組合投予。 2.   一種用於治療或預防冠狀病毒感染之用途的干擾素(IFN)或其功能片段，其中該IFN或其功能片段係與腫瘤壞死因子受體超家族(TNFRSF)促效劑或其功能片段組合投予。 3.   一種腫瘤壞死因子受體超家族(TNFRSF)促效劑或其功能片段及干擾素(IFN)或其功能片段之組合，其用於治療或預防冠狀病毒感染之用途。 4.   如主題1至3中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該TNFRSF促效劑或其功能片段係選自由以下組成之群：CD27促效劑、CD30促效劑、分化簇因子40(CD40)促效劑、HVEM促效劑、OX40促效劑、TNFRSF12A促效劑及4-1BB促效劑，或其功能片段。 5.   如前述主題中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該TNFRSF促效劑或其功能片段係多肽或其功能片段，或者抗體或其功能片段。 6.   如主題1至5中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該TNFRSF促效劑或其功能片段係選自CD70、CD30L (TNFSF8)、CD40L、LIGHT、OX40L、TWEAK及4-1BBL，或其功能片段；較佳地其中該TNFRSF促效劑或其功能片段係選自CD40L、LIGHT及TWEAK，或其功能片段。 7.   如主題1至5中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該TNFRSF促效劑或其功能片段係促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段。 8.   如主題7之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含與SEQ ID NO 3內之各別CDRL1、CDRL2及CDRL3序列至少90%一致之三個輕鏈互補決定區(CDR) CDRL1、CDRL2及CDRL3；以及與SEQ ID NO 6內之各別CDRH1、CDRH2及CDRH3序列至少90%一致之三個重鏈CDR，即CDRH1、CDRH2及CDRH3； 較佳地，其中該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含與SEQ ID NO 3內之各別CDRL1、CDRL2及CDRL3序列至少95%一致之三個輕鏈互補決定區(CDR) CDRL1、CDRL2及CDRL3；以及與SEQ ID NO 6內之各別CDRH1、CDRH2及CDRH3序列至少95%一致之三個重鏈CDR，即CDRH1, CDRH2及CDRH3； 更佳地，其中該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含與SEQ ID NO 3內之各別CDRL1、CDRL2及CDRL3序列至少98%一致之三個輕鏈互補決定區(CDR) CDRL1、CDRL2及CDRL3；以及與SEQ ID NO 6內之各別CDRH1、CDRH2及CDRH3序列至少98%一致之三個重鏈CDR，即CDRH1、CDRH2及CDRH3； 或再更佳地，其中該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含與SEQ ID NO 3內之各別CDRL1、CDRL2及CDRL3序列至少99%一致之三個輕鏈互補決定區(CDR) CDRL1、CDRL2及CDRL3；以及與SEQ ID NO 6內之各別CDRH1、CDRH2及CDRH3序列至少99%一致之三個重鏈CDR，即CDRH1、CDRH2及CDRH3。 9.   如主題8之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含與SEQ ID NO 3內之各別CDRL1、CDRL2及CDRL3序列一致之三個輕鏈互補決定區(CDR) CDRL1、CDRL2及CDRL3；以及與SEQ ID NO 6內之各別CDRH1、CDRH2及CDRH3序列一致之三個重鏈CDR，即CDRH1、CDRH2及CDRH3。 10. 如主題8或主題9之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中各CDR係根據CDR之Kabat定義、Chothia定義、AbM定義或接觸定義界定；較佳地，其中各CDR係根據Kabat之CDR定義或Chothia之CDR定義界定。 11. 如主題7之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含 (I) (a)重鏈或其片段，其包含與SEQ ID NO 56至少90%一致之互補決定區(CDR) CDRH1、與SEQ ID NO 57至少90%一致之CDRH2及與SEQ ID NO 58至少90%一致之CDRH3；以及 (b)輕鏈或其片段，其包含與SEQ ID NO 52至少90%一致之CDRL1、與SEQ ID NO 53至少90%一致之CDRL2及與SEQ ID NO 54至少90%一致之CDRL3； 較佳地(II) (a)重鏈或其片段，其包含與SEQ ID NO 56至少95%一致之互補決定區(CDR) CDRH1、與SEQ ID NO 57至少95%一致之CDRH2及與SEQ ID NO 58至少95%一致之CDRH3；以及 (b)輕鏈或其片段，其包含與SEQ ID NO 52至少95%一致之CDRL1、與SEQ ID NO 53至少95%一致之CDRL2及與SEQ ID NO 54至少95%一致之CDRL3； 更佳地(III) (a)重鏈或其片段，其包含與SEQ ID NO 56至少98%一致之互補決定區 (CDR) CDRH1、與SEQ ID NO 57至少98%一致之CDRH2及與SEQ ID NO 58至少98%一致之CDRH3；以及 (b)輕鏈或其片段，其包含與SEQ ID NO 52至少98%一致之CDRL1、與SEQ ID NO 53至少98%一致之CDRL2及與SEQ ID NO 54至少98%一致之CDRL3；或 再更佳地(IV) (a)重鏈或其片段，其包含與SEQ ID NO 56至少99%一致之互補決定區(CDR) CDRH1、與SEQ ID NO 57至少99%一致之CDRH2及與SEQ ID NO 58至少99%一致之CDRH3；以及 (b)輕鏈或其片段，其包含與SEQ ID NO 52至少99%一致之CDRL1、與SEQ ID NO 53至少99%一致之CDRL2及與SEQ ID NO 54至少99%一致之CDRL3。 12. 如主題11之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含 a)   重鏈或其片段，其包含與SEQ ID NO 56一致之互補決定區(CDR) CDRH1、與SEQ ID NO 57一致之CDRH2及與SEQ ID NO 58一致之CDRH3；以及 b)   輕鏈或其片段，其包含與SEQ ID NO 52一致之CDRL1、與SEQ ID NO 53一致之CDRL2及與SEQ ID NO 54一致之CDRL3。 13. 如主題7至12中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含：輕鏈可變區VL，其包含如SEQ ID NO 51中所示之序列或與該序列至少90%一致之序列；及/或重鏈可變區VH，其包含如SEQ ID NO 55中所示之序列或與該序列至少90%一致之序列； 較佳地，其中該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含：輕鏈可變區VL，其包含與如SEQ ID NO 51中所示之序列至少95%一致之序列；及/或重鏈可變區VH，其包含與如SEQ ID NO 55中所示之序列至少95%一致之序列； 更佳地，其中該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含：輕鏈可變區VL，其包含與如SEQ ID NO 51中所示之序列至少98%一致之序列；及/或重鏈可變區VH，其包含與如SEQ ID NO 55中所示之序列至少98%一致之序列； 再更佳地，其中該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含：輕鏈可變區VL，其包含與如SEQ ID NO 51中所示之序列至少99%一致之序列；及/或重鏈可變區VH，其包含與如SEQ ID NO 55中所示之序列至少99%一致之序列；或 最佳地，其中該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含：輕鏈可變區VL，其包含如SEQ ID NO 51中所示之序列；以及重鏈可變區VH，其包含如SEQ ID NO 55中所示之序列。 14. 如主題7至13中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之重鏈包含Fab區重鏈，其包含如SEQ ID NO 12中所示之胺基酸序列、或與該序列至少90%、較佳地95%、更佳地98%或再更佳地99%一致之序列。 15. 如主題7至14中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含：輕鏈(LC)，其包含如SEQ ID NO 3中所示之序列或與該序列至少90%一致之序列；及/或重鏈(HC)，其包含選自由SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 49及SEQ ID NO 48組成之序列、或與該序列至少90%一致之序列； 較佳地，其中該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含：輕鏈(LC)，其包含與如SEQ ID NO 3中所示之序列至少95%一致之序列；及/或重鏈(HC)，其包含與如由SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 49及SEQ ID NO 48組成之序列群內所示之序列至少95%一致之序列； 更佳地，其中該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含：輕鏈(LC)，其包含與如SEQ ID NO 3中所示之序列至少98%一致之序列；及/或重鏈(HC)，其包含與如由SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 49及SEQ ID NO 48組成之序列群內所示之序列至少98%一致之序列； 再更佳地，其中該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含：輕鏈(LC)，其包含與如SEQ ID NO 3中所示之序列至少99%一致之序列；及/或重鏈(HC)，其包含與如由SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 49及SEQ ID NO 48組成之序列群內所示之序列至少99%一致之序列；或 最佳地，其中該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段包含：輕鏈(LC)，其包含如SEQ ID NO 3中所示之序列；及重鏈(HC)，其包含選自由SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 49及SEQ ID NO 48組成之序列。 16. 如主題15之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該HC包含如SEQ ID NO 6中所示之序列、或與該序列至少90%、較佳地95%、更佳地98%或再更佳地99%一致之序列。 17. 如主題15之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該HC包含如SEQ ID NO 9中所示之序列、或與該序列至少90%、較佳地95%、更佳地98%或再更佳地99%一致之序列。 18. 如主題15之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該HC包含如SEQ ID NO 49中所示之序列、或與該序列至少90%、較佳地95%、更佳地98%或再更佳地99%一致之序列。 19. 如主題15之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該HC包含如SEQ ID NO 48中所示之序列、或與該序列至少90%、較佳地95%、更佳地98%或再更佳地99%一致之序列。 20. 如主題13至19中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中在該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之重鏈及輕鏈可變區的互補決定區內不存在胺基酸取代、插入或缺失。 21. 如主題8至19中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之重鏈及輕鏈可變區的互補決定區中之各者內不存在、存在一個或二個胺基酸取代、插入或缺失。 22. 如前述主題中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFN或其功能片段係人類干擾素。 23. 如前述主題中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFN或其功能片段係選自由以下組成之群：I型IFN、II型IFN及III型IFN，或其功能片段。 24. 如前述主題中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFN或該其功能片段係I型IFN或其功能片段。 25. 如主題24之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該I型IFN或該其功能片段係IFNα、IFNβ、IFNω或IFNε，或其功能片段。 26. 如主題24之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該I型IFN或該其功能片段係IFNα或IFNβ，或其功能片段。 27. 如主題24之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該I型IFN或該其功能片段係IFNω或其功能片段。 28. 如主題24之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該I型IFN或該其功能片段係IFNε或其功能片段。 29. 如主題1至23中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFN或其功能片段係IFNα、IFNβ、IFNγ、IFNλ、IFNω或IFNε，或其功能片段。 30. 如主題29之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFN或其功能片段係IFNα或IFNβ，或其功能片段。 31. 如主題30之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFN或其功能片段係IFNα或其功能片段。 32. 如主題31之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFN或其功能片段係IFNα2a或其功能片段。 33. 如主題32之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFNα2a包含如SEQ ID NO 17中所示之序列、或與該序列至少90%、較佳地95%、更佳地98%或再更佳地99%一致之序列。 34. 如主題30之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFN或其功能片段係IFNβ或其功能片段。 35. 如主題34之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFNβ包含如SEQ ID NO 14中所示之序列、或與該序列至少90%、較佳地95%、更佳地98%或再更佳地99%一致之序列。 36. 如主題34之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFNβ或其功能片段相對於SEQ ID NO 14包含選自C17S及N80Q之一個或二個胺基酸取代。 37. 如主題36之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFNβ或其功能片段相對於SEQ ID NO 14包含胺基酸取代C17S。 38. 如主題37之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFNβ包含如SEQ ID NO 15中所示之胺基酸序列。 39. 如主題36之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFNβ或其功能片段相對於SEQ ID NO 14包含胺基酸取代C17S及N80Q。 40. 如主題39之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFNβ包含如SEQ ID NO 16中所示之胺基酸序列。 41. 如主題29之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFN或其功能片段係IFNγ或IFNλ，或其功能片段。 42. 如主題41之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFN或其功能片段係IFNγ或其功能片段。 43. 如主題42之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFNγ包含如SEQ ID NO 19中所示之序列、或與該序列至少90%、較佳地95%、更佳地98%或再更佳地99%一致之序列。 44. 如主題41之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFN或其功能片段係IFNλ或其功能片段。 45. 如主題44之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFNλ或其功能片段係IFNλ2或其功能片段。 46. 如主題45之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFNλ2包含如SEQ ID NO 18中所示之序列、或與該序列至少90%、較佳地95%、更佳地98%或再更佳地99%一致之序列。 47. 如主題1至46中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFN或其功能片段與該TNFRSF促效劑或其功能片段非共價相聯。 48. 如主題47之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFN或其功能片段經由離子、凡得瓦爾及/或氫鍵相互作用與TNFRSF促效劑或其功能片段非共價相聯。 49. 如主題1至46中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFN或其功能片段與該TNFRSF促效劑或其功能片段共價相聯。 50. 如主題1至46或49中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFN或其功能片段與該TNFRSF促效劑或其功能片段融合，較佳地其中該IFN或其功能片段與該TNFRSF促效劑或其功能片段經由連接子彼此融合。 51. 如主題50之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFN或該其功能片段與TNFRSF促效劑或其功能片段融合，該TNFRSF促效劑或其功能片段選自CD70、CD30L (TNFSF8)、CD40L、LIGHT、OX40L、TWEAK及4-1BBL，或其功能片段；較佳地其中該IFN或該其功能片段與TNFRSF促效劑或其功能片段融合，該TNFRSF促效劑或其功能片段選自CD40L、LIGHT及TWEAK、或其功能片段。 52. 如主題50之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該TNFRSF促效劑或其功能片段與該IFN或其功能片段係以干擾素相聯抗原結合蛋白形式提供，其中該TNFRSF促效劑或其功能片段係抗體或其抗原結合片段，較佳地為促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段，更佳地為包含以下的促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段： a)   重鏈或其片段，其包含與SEQ ID NO 56一致之互補決定區(CDR) CDRH1、與SEQ ID NO 57一致之CDRH2及與SEQ ID NO 58 一致之CDRH3；以及 b)   輕鏈或其片段，其包含與SEQ ID NO 52一致之CDRL1、與SEQ ID NO 53一致之CDRL2及與SEQ ID NO 54一致之CDRL3； 且其中該IFN或其功能片段與該抗體或其抗原結合片段融合。 53. 如主題52之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFN或其功能片段與該抗體或其抗原結合片段之輕鏈融合。 54. 如主題53之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFN或該其功能片段與該抗體或其抗原結合片段之輕鏈的N末端融合。 55. 如主題53之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFN或該其功能片段與該抗體或其抗原結合片段之輕鏈的C末端融合。 56. 如主題52之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFN或該其功能片段與該抗體或其抗原結合片段之重鏈融合。 57. 如主題56之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFN或該其功能片段與該抗體或其抗原結合片段之重鏈之N末端融合。 58. 如主題56之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFN或該其功能片段與該抗體或其抗原結合片段之重鏈之C末端融合。 59. 如主題50至58中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該連接子係肽連接子。 60. 如主題59之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該連接子包含至少1個、至少2個、至少3個、至少4個、至少5個、至少10個、至少11個、至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少20個、至少21個或至少24個胺基酸。 61. 如主題59之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該連接子包含至多4個、至多10個、至多11個、至多12個、至多13個、至多15個、至多20個、至多21個、至多24個、至多30個、至多40個、至多50個、至多60個、至多70個、至多80個、至多90個或至多100個胺基酸。 62. 如主題59至61中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該連接子係選自包含酸性連接子、鹼性連接子及中性連接子之群。 63. 如主題62之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該連接子係酸性連接子。 64. 如主題62或主題63之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該連接子包含如SEQ ID NO 22或SEQ ID NO 23中所示之序列。 65. 如主題62之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該連接子係鹼性連接子。 66. 如主題62之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該連接子係中性連接子。 67. 如主題62或主題66之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該連接子包含如SEQ ID NO 20、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 25或SEQ ID NO 26中所示之序列。 68. 如主題59至67中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該連接子係選自包含剛性連接子、可撓性連接子及成螺旋連接子之群。 69. 如主題68之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該連接子係剛性連接子。 70. 如主題68或主題69之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該連接子包含如SEQ ID NO 20、SEQ ID NO 22或SEQ ID NO 23中所示之序列。 71. 如主題68之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該連接子係可撓性連接子。 72. 如主題68或主題71之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該連接子包含如SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 25或SEQ ID NO 26中所示之序列。 73. 如主題68之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該連接子係成螺旋連接子。 74. 如主題68或主題73之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該連接子包含如SEQ ID NO 22或SEQ ID NO 23中所示之序列。 75. 如主題59至63、65、66、68、69、71或73中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該連接子包含胺基酸甘胺酸及絲胺酸。 76. 如主題75之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該連接子包含如SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 25或SEQ ID NO 26中所示之序列。 77. 如主題75之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該連接子進一步包含胺基酸蘇胺酸。 78. 如主題77之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該連接子包含如SEQ ID NO 21中所示之序列。 79. 如主題59之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該連接子包含選自如SEQ ID NOs 20至26中所示之序列的序列。 80. 如主題79之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該連接子包含選自如SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 25或SEQ ID NO 26中所示之序列的序列。 81. 如主題80之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該連接子包含如SEQ ID NO 24中所示之序列。 82. 如主題80之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該連接子包含如SEQ ID NO 25中所示之序列。 83. 如主題80之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該連接子包含如SEQ ID NO 26中所示之序列。 84. 如主題59至83中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFN或其功能片段經由如表3、特定言之表3A或表3B、更特定言之表3A中所示之連接子與該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段之重鏈之C末端融合。 85. 如主題84之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段之重鏈包含如SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 48或SEQ ID NO 49中所示之序列。 86. 如主題84或主題85之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFNα2a包含如SEQ ID NO 17中所示之序列。 87. 如主題84或主題85之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFNβ包含如SEQ ID NO 14、SEQ ID NO 15或SEQ ID NO 16中所示之序列。 88. 如主題87之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFNβ包含如SEQ ID NO 14中所示之序列。 89. 如主題87之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFNβ包含如SEQ ID NO 15中所示之序列。 90. 如主題87之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFNβ包含如SEQ ID NO 16中所示之序列。 91. 如主題84或主題85之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFNγ包含如SEQ ID NO 19中所示之序列。 92. 如主題84或主題85之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFNλ2包含如SEQ ID NO 18中所示之序列。 93. 如主題84至92中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段包含輕鏈，較佳地其中該輕鏈包含如SEQ ID NO 3中所示之序列。 94. 如主題59至83中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFN或其功能片段經由如表4、特定言之表4A或表4B、更特定言之表4A中所示之連接子與該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段之重鏈之N末端融合。 95. 如主題94之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段之重鏈包含如SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 49、SEQ ID NO 48或SEQ ID NO 12中所示之序列。 96. 如主題94或主題95之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFNα2a包含如SEQ ID NO 17中所示之序列。 97. 如主題94或主題95之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFNβ包含如SEQ ID NO 14、SEQ ID NO 15或SEQ ID NO 16中所示之序列。 98. 如主題97之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFNβ包含如SEQ ID NO 14中所示之序列。 99. 如主題97之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFNβ包含如SEQ ID NO 15中所示之序列。 100.   如主題97之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFNβ包含如SEQ ID NO 16中所示之序列。 101.   如主題94或主題95之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFNγ包含如SEQ ID NO 19中所示之序列。 102.   如主題94或主題95之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFNλ2包含如SEQ ID NO 18中所示之序列。 103.   如主題94至102中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含輕鏈，較佳地其中該輕鏈包含如SEQ ID NO 3中所示之序列。 104.   如主題59至83中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFN或其功能片段經由如表5、特定言之表5A或表5B、更特定言之表5A中所示之連接子與該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段之輕鏈之C末端融合。 105.   如主題104之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段之輕鏈包含如SEQ ID NO 3中所示之序列。 106.   如主題104或105之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFNα2a包含如SEQ ID NO 17中所示之序列。 107.   如主題104或105之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFNβ包含如SEQ ID NO 14、SEQ ID NO 15或SEQ ID NO 16中所示之序列。 108.   如主題107之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFNβ包含如SEQ ID NO 14中所示之序列。 109.   如主題107之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFNβ包含如SEQ ID NO 15中所示之序列。 110.   如主題107之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFNβ包含如SEQ ID NO 16中所示之序列。 111.   如主題104或105之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFNγ包含如SEQ ID NO 19中所示之序列。 112.   如主題104或105之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFNλ2包含如SEQ ID NO 18中所示之序列。 113.   如主題104至112中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段包含重鏈，較佳地其中該重鏈包含如SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 49、SEQ ID NO 48或SEQ ID NO 12中所示之序列。 114.   如主題59至83中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFN或其功能片段經由如表6、特定言之表6A或表6B、更特定言之表6A中所示之連接子與該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段之輕鏈之N末端融合。 115.   如主題114之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段之輕鏈包含如SEQ ID NO 3中所示之序列。 116.   如主題114或主題115之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFNα2a包含如SEQ ID NO 17中所示之序列。 117.   如主題114或主題115之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFNβ包含如SEQ ID NO 14、SEQ ID NO 15或SEQ ID NO 16中所示之序列。 118.   如主題117之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFNβ包含如SEQ ID NO 14中所示之序列。 119.   如主題117之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFNβ包含如SEQ ID NO 15中所示之序列。 120.   如主題117之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFNβ包含如SEQ ID NO 16中所示之序列。 121.   如主題114或主題115之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFNγ包含如SEQ ID NO 19中所示之序列。 122.   如主題114或主題115之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該IFNλ2包含如SEQ ID NO 18中所示之序列。 123.   如主題114至122中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段包含重鏈，較佳地其中該重鏈包含如SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 49、SEQ ID NO 48或SEQ ID NO 12中所示之序列。 124.   如主題52至123中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白包含選自以下之序列：SEQ ID NO 28、SEQ ID NO 29、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 31、SEQ ID NO 32、SEQ ID NO 33、SEQ ID NO 34、SEQ ID NO 35、SEQ ID NO 36、SEQ ID NO 37、SEQ ID NO 38、SEQ ID NO 39、SEQ ID NO 40、SEQ ID NO 41、SEQ ID NO 42、SEQ ID NO 43、SEQ ID NO 44、SEQ ID NO 45、SEQ ID NO 46、SEQ ID NO 47、SEQ ID NO 81、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 87、SEQ ID NO 88及SEQ ID NO 94。 125.   如主題124之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、或者IFN或其功能片段、或者組合，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白包含選自以下之序列：SEQ ID NO 38、SEQ ID NO 39、SEQ ID NO 40、SEQ ID NO 41、SEQ ID NO 42或SEQ ID NO 43。 126.   如主題124或主題125之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、或者IFN或其功能片段、或者組合，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含表9、特定言之表9A或表9B、更特定言之表9A中所揭示之序列組合中之一者。 127.   如主題126之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、或者IFN或其功能片段、或者組合，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 38及SEQ ID NO 3中所示之序列。 128.   如主題126之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、或者IFN或其功能片段、或者組合，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 39及SEQ ID NO 3中所示之序列。 129.   如主題126之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、或者IFN或其功能片段、或者組合，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 40及SEQ ID NO 3中所示之序列。 130.   如主題126之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、或者IFN或其功能片段、或者組合，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 41及SEQ ID NO 9中所示之序列。 131.   如主題126之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、或者IFN或其功能片段、或者組合，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 42及SEQ ID NO 9中所示之序列。 132.   如主題126之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、或者IFN或其功能片段、或者組合，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含如SEQ ID NO 43及SEQ ID NO 9中所示之序列。 133.   一種干擾素相聯抗原結合蛋白，其包含 (I)  促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段，及 (II) 干擾素(IFN)或其功能片段， 該干擾素相聯抗原結合蛋白用於治療或預防冠狀病毒感染。 134.   如主題133之干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段包含 (a)  重鏈或其片段，其包含與SEQ ID NO 56至少90%一致之互補決定區(CDR) CDRH1、與SEQ ID NO 57至少90%一致之CDRH2及與SEQ ID NO 58至少90%一致之CDRH3；以及 (b)  輕鏈或其片段，其包含與SEQ ID NO 52至少90%一致之CDRL1、與SEQ ID NO 53至少90%一致之CDRL2及與SEQ ID NO 54至少90%一致之CDRL3。 135.   如主題133之干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段包含 (a)  重鏈或其片段，其包含與SEQ ID NO 56一致之互補決定區(CDR) CDRH1、與SEQ ID NO 57一致之CDRH2及與SEQ ID NO 58一致之CDRH3；以及 (b)  輕鏈或其片段，其包含與SEQ ID NO 52一致之CDRL1、與SEQ ID NO 53一致之CDRL2及與SEQ ID NO 54一致之CDRL3。 136.   如主題133至135中任一項之干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段包含：輕鏈可變區VL，其包含如SEQ ID NO 51中所示之序列或與該序列至少90%一致之序列；及/或重鏈可變區VH，其包含如SEQ ID NO 55中所示之序列或與該序列至少90%一致之序列。 137.   如主題133至136中任一項之干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段包含：輕鏈(LC)，其包含如SEQ ID NO 3中所示之序列或與該序列至少90%一致之序列；及/或重鏈(HC)，其包含選自由SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 49及SEQ ID NO 48組成之群的序列或與該序列至少90%一致之序列。 138.   如主題133至137中任一項之干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN或該其功能片段係選自由以下組成之群：I型IFN、II型IFN及III型IFN，或其功能片段。 139.   如主題138之干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該I型IFN或該其功能片段係IFNα或IFNβ，或其功能片段。 140.   如主題133至139中任一項之干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN或該其功能片段係IFNα2a或其功能片段，且其中較佳地該IFNα2a包含如SEQ ID NO 17中所示之序列或與該序列至少90%一致之序列。 141.   如主題133至139中任一項之干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN或該其功能片段係IFNβ或其功能片段，且其中較佳地該IFNβ包含如SEQ ID NO 14中所示之序列或與該序列至少90%一致之序列。 142.   如主題133至141中任一項之干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN或該其功能片段與該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段之輕鏈融合，較佳地與C末端融合。 143.   如主題133至141中任一項之干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN或該其功能片段與該促效性抗CD40抗體或該其促效性抗原結合片段之重鏈融合，較佳地與C末端融合。 144.   如主題133至143中任一項之干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段經由連接子與該IFN或該其功能片段彼此融合，且其中較佳地該連接子包含如SEQ ID NO 20、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 25或SEQ ID NO 26中所示之序列。 145.   如主題133至144中任一項之干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含表9、特定言之表9A或表9B、更特定言之表9A中所揭示之序列組合中之一者。 146.   如主題133至145中任一項之干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該用途包含藉助於基因遞送編碼該干擾素相聯抗原結合蛋白之RNA或DNA序列或者編碼該干擾素相聯抗原結合蛋白之載體或載體系統向有需要之個體投予該干擾素相聯抗原結合蛋白。 147.   如以下之干擾素相聯抗原結合蛋白 (a)  主題133至145中之任一項，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白係包含在醫藥組成物中；或 (b)  主題146，其中編碼該干擾素相聯抗原結合蛋白之RNA或DNA序列或者編碼該干擾素相聯抗原結合蛋白之載體或載體系統係包含在醫藥組成物中。 148.   一種用於治療或預防冠狀病毒感染之干擾素相聯抗原結合蛋白，其包括含如SEQ ID NO 38及SEQ ID NO 3中所示之胺基酸序列的融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段。 149.   一種用於治療或預防冠狀病毒感染干擾素相聯抗原結合蛋白，其包括含如SEQ ID NO 39及SEQ ID NO 3中所示之胺基酸序列的融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段。 150.   一種用於治療或預防冠狀病毒感染干擾素相聯抗原結合蛋白，其包括含如SEQ ID NO 40及SEQ ID NO 3中所示之胺基酸序列的融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段。 151.   一種用於治療或預防冠狀病毒感染之干擾素相聯抗原結合蛋白，其包括含如SEQ ID NO 41及SEQ ID NO 9中所示之胺基酸序列的融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段。 152.   一種用於治療或預防冠狀病毒感染的干擾素相聯抗原結合蛋白，其包括含如SEQ ID NO 42及SEQ ID NO 9中所示之胺基酸序列的融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段。 153.   一種用於治療或預防冠狀病毒感染之干擾素相聯抗原結合蛋白，其包括含如SEQ ID NO 43及SEQ ID NO 9中所示之胺基酸序列的融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段。 154.   如主題1至132中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或者如主題133至153中任一項之干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白活化CD40路徑及IFN路徑兩者。 155.   如主題154之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中CD40活性係使用全血表面分子上調分析或活體外報導體細胞分析確定。 156.   如主題155之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中CD40活性係使用活體外報導體細胞分析，任擇地使用HEK-BlueTM CD40L細胞確定。 157.   如主題154至156中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白以小於400、300、200、150、100、70、60、50、40、30、25、20或15 ng/mL之EC 50活化該CD40路徑。 158.   如主題157中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白以在10至200 ng/mL範圍內之EC 50活化該CD40路徑。 159.   如主題158之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白以在10至50 ng/mL範圍內、較佳地在10至30 ng/mL範圍內之EC 50活化該CD40路徑。 160.   如主題154至159中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白以小於100、60、50、40、30、20、10或1 ng/mL之EC 50活化該IFN路徑。 161.   如主題154至160中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白以小於11 ng/mL、較佳地小於6 ng/mL之EC 50活化該IFN路徑。 162.   如主題154至161中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN路徑係IFNα、IFNβ、IFNε、IFNγ、IFNω或IFNλ路徑。 163.   如主題162之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中IFNβ活性係使用活體外報導體細胞分析，任擇地使用HEK-Blue™ IFN-α/β細胞確定。 164.   如主題162之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中IFNα活性係使用活體外報導體細胞分析，任擇地使用HEK-Blue™ IFN-α/β細胞確定。 165.   如主題162之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中IFNγ活性係使用活體外報導體細胞分析，任擇地使用HEK-Blue™ Dual IFN-γ細胞確定。 166.   如主題162之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中IFNλ活性係使用活體外報導體細胞分析，任擇地使用HEK-Blue™ IFN-λ細胞確定。 167.   如主題1至166中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中在用該干擾素相聯抗原結合蛋白處理後，感染冠狀病毒之細胞中一或多種IFN路徑生物標記物的表現位準相較於未用該干擾素相聯抗原結合蛋白處理的該感染冠狀病毒之細胞中該等生物標記物的表現位準上調，較佳地上調至少1.5倍，更佳地上調至少2倍，最佳地上調至少3倍。 168.   如主題167之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN路徑生物標記物係趨化因子。 169.   如主題168之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN路徑生物標記物係干擾素刺激基因ISG20。 170.   如主題168之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN路徑生物標記物係選自由CXCL9、CXCL10及CXCL11組成之群的C-X-C趨化因子。 171.   如主題170之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN路徑生物標記物係CXCL10。 172.   如主題1至171中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中在用該干擾素相聯抗原結合蛋白處理之後，感染冠狀病毒之細胞中IL10、IL1β及IL2中一或多者之表現位準相較於未用該干擾素相聯抗原結合蛋白處理的該感染冠狀病毒之細胞中該等介白素的表現位準無明顯上調。 173.   如主題1至172中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白之全身暴露量相較於抗體CP870,893增加，較佳地增加至少10%、更佳地增加至少15%、最佳地增加至少25%。 174.   如主題52至173中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白之全身暴露量係至少1000 µg*h/mL。 175.   如主題174之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白之全身暴露量在1033 µg*h/mL至1793 µg*h/mL範圍內。 176.   如主題52至175中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白之半衰期係至少100小時。 177.   如主題176之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白之半衰期在116至158小時範圍內。 178.   如主題52至177中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白之清除率低於0.5 mL/h/kg。 179.   如主題178之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白之清除率在0.28至0.49 mL/h/kg範圍內。 180.   如主題1至179中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白之分佈體積Vss低於100 mL/kg。 181.   如主題180之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白之分佈體積Vss在50至98 mL/kg範圍內。 182.   如前述主題中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該用途包含藉助於以下方式向有需要之個體投予該TNFRSF促效劑或其功能片段、該IFN或其功能片段、該組合或該干擾素相聯抗原結合蛋白： a)   基因遞送編碼該TNFRSF促效劑或其功能片段、該IFN或其功能片段、該組合或該干擾素相聯抗原結合蛋白之RNA或DNA序列；或 b)   編碼該TNFRSF促效劑或其功能片段、該IFN或其功能片段、該組合或該干擾素相聯抗原結合蛋白之載體或載體系統。 183.   如主題182之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白係在該個體體內由投予該個體之一或多種聚核苷酸表現。 184.   如主題1至183中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白係包含在醫藥組成物中。 185.   如主題1至184中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、或者組合，其中該TNFRSF促效劑或該其功能片段與該IFN或該其功能片段係包含在同一醫藥組成物中或不同醫藥組成物中。 186.   如主題184或主題185之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該醫藥組成物適於經口、非經腸或表面投予或者適於藉由吸入投予。 187.   如主題186之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該醫藥組成物適於經口投予。 188.   如主題186之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該醫藥組成物適於表面投予。 189.   如主題186之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該醫藥組成物適於藉由吸入投予。 190.   如主題186之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該醫藥組成物適於非經腸投予。 191.   如主題184或主題185之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該醫藥組成物適於靜脈內、動脈內、腹膜內、肌肉內、皮下、直腸或陰道投予。 192.   如主題184或主題185之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該醫藥組成物適於注射，較佳地適於靜脈內或動脈內注射或滴注。 193.   如主題184至192中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該醫藥組成物包含至少一緩衝劑。 194.   如主題193之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該緩衝劑係乙酸鹽、甲酸鹽或檸檬酸鹽。 195.   如主題194之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該緩衝劑係乙酸鹽。 196.   如主題194之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該緩衝劑係甲酸鹽。 197.   如主題194之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該緩衝劑係檸檬酸鹽。 198.   如主題184至197中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該醫藥組成物包含表面活性劑。 199.   如主題198之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該表面活性劑係選自包含以下之清單：普朗尼克、PEG、脫水山梨糖醇酯、聚山梨醇酯、曲拉通、緩血酸胺、卵磷脂、膽固醇及泰洛沙泊。 200.   如主題199之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該表面活性劑係聚山梨醇酯。 201.   如主題200之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該表面活性劑係聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯80或聚山梨醇酯100。 202.   如主題201之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該表面活性劑係聚山梨醇酯20。 203.   如主題201之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該表面活性劑係聚山梨醇酯80。 204.   如主題184至203中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合或干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該醫藥組成物包含穩定劑，任擇地其中該穩定劑係白蛋白。 205.   如主題133至204中任一項之干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含：與SEQ ID NO 3內之各別CDRL1、CDRL2及CDRL3序列至少90%一致之三個輕鏈互補決定區(CDR) CDRL1、CDRL2及CDRL3；以及與SEQ ID NO 6內之各別CDRH1、CDRH2及CDRH3序列至少90%一致之三個重鏈CDR，即CDRH1、CDRH2及CDRH3。 206.   如主題133至205中任一項之干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含：與SEQ ID NO 3內之各別CDRL1、CDRL2及CDRL3序列一致之三個輕鏈互補決定區(CDR) CDRL1、CDRL2及CDRL3；以及與SEQ ID NO 6內之各別CDRH1、CDRH2及CDRH3序列一致之三個重鏈CDR，即CDRH1、CDRH2及CDRH3。 207.   如主題205或主題206之干擾素相聯抗原結合蛋白，其中各CDR係根據CDR之Kabat定義、Chothia定義、AbM定義或接觸定義界定；較佳地其中各CDR係根據Kabat之CDR定義或Chothia之CDR定義界定。 208.   如主題133至207中任一項之干擾素相聯抗原結合蛋白，其中在該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之重鏈及輕鏈可變區的互補決定區內不存在胺基酸取代、插入或缺失。 209.   如主題133至207中任一項之干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之重鏈及輕鏈可變區的互補決定區中之各者內獨立地不存在、存在一個或二個胺基酸取代、插入或缺失。 210.   一或多種編碼如前述主題中任一項中所定義之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段或干擾素相聯抗原結合蛋白的聚核苷酸，該聚核苷酸用於治療或預防有需要之個體的冠狀病毒感染用途，其中該治療包含由投予該個體之一或多種聚核苷酸在該個體體內表現該促效劑或其功能片段及該IFN或其功能片段，或在該個體體內表現該干擾素相聯抗原結合蛋白。 211.   如前述主題中任一項之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合、干擾素相聯抗原結合蛋白或者一或多種聚核苷酸，其中該冠狀病毒係選自由以下組成之群：嚴重急性呼吸道症候群冠狀病毒1(SARS-CoV-1)、嚴重急性呼吸道症候群冠狀病毒2(SARS-CoV-2)及中東呼吸道症候群冠狀病毒(MERS-CoV)。 212.   如前述主題中任一項之之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合、干擾素相聯抗原結合蛋白或者一或多種聚核苷酸，其中該冠狀病毒係SARS-CoV-2或其變異株。 213.   如主題212之之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合、干擾素相聯抗原結合蛋白或者一或多種聚核苷酸，其中該冠狀病毒係如得自https://outbreak.info/situation-reports或https://cov-lineages.org/global_report.html之譜系報導中所鑑別的SARS-CoV-2之變異株。 214.   如主題212或213之之用於它們的用途之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、組合、干擾素相聯抗原結合蛋白或者一或多種聚核苷酸，其中該SARS-CoV-2變異株係選自由以下組成之群：A.23.1、B.1.1.7、B.1.351、B.1.427、B.1.429、B.1.525、B.1.526、B.1.526.1、B.1.526.2、B.1.617、B.1.617.1、B.1.617.2、B.1.617.3、P.1及P.2。
熟習此項技術者應理解，本發明亦關於本文所標識之主題或項目中任一項之TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、二者之組合、干擾素相聯抗原結合蛋白或者一或多種聚核苷酸，其中該TNFRSF促效劑包含如表8中所揭示之SEQ ID NO 59、SEQ ID NO 61或SEQ ID NO 63及/或其中該干擾素相聯結合蛋白係包含表10中所揭示之序列組合中之一者的融合干擾素之促效性抗CD40抗體，或其融合干擾素之促效性抗原結合片段。
另外，熟習此項技術者應理解，本發明另外亦關於用於治療或預防個體之冠狀病毒感染，特別是如主題211至214中所標識之冠狀病毒感染的方法，其中將治療有效量的如本文中或前一段落中所標識之態樣、實施例、主題或項目中之任一者中所提及的TNFRSF促效劑或其功能片段、IFN或其功能片段、二者之組合、干擾素相聯抗原結合蛋白或者一或多種聚核苷酸投予該個體。
應理解，根據本文中所描述及主張的所有態樣、實施例、項目及主題，待治療之個體較佳地為哺乳動物，且最佳為人類個體。
最後，應理解，本文所描述之所有態樣、實施例、項目及主題可為其他申請專利範圍(除以下所提供之申請專利範圍外)的主題。
(無)
圖1 ：此示意圖描繪例示性干擾素相聯抗原結合蛋白型式。干擾素相聯抗原結合蛋白係融合干擾素之促效性抗CD40抗體或其融合干擾素之促效性抗原結合片段。IFN經由連接子與該抗體或其抗原結合片段上之不同位置相聯：輕鏈(LC)或重鏈(HC)之N末端或C末端部分。特定言之，IFN係選自I型、II型及III型干擾素家族。
圖2A描繪在pCMV啟動子控制下編碼SEQ ID NO 32之pcDNA3.1質體的例示性圖譜。底部亦顯示編碼SEQ ID NO 32之核酸序列(=SEQ ID NO 78)。斜體：信號肽序列；黑色：CP870,893重鏈編碼序列；加下劃線：HL連接子編碼序列；粗體：IFNβ編碼序列。
圖2B顯示在重鏈或輕鏈中之任一者處融合IFNα或IFNβ的一些IFA在還原條件下的SDS PAGE之實例。左側亦顯示親代CP870,893之遷移。
圖3A 至圖3B以圖形描繪具有IFNβ融合物之多種IFA分子對在HEK-Blue™ CD40L細胞中進行之活化CD40介導之NFκB路徑報導體分析的劑量依賴性作用。 圖3A顯示具有與重鏈(HC)之C末端部分融合之IFNβ的IFA之抗CD40活性的實例。 圖3B顯示具有與LC (IFA34)或HC (IFA36)之N末端部分融合之IFNβ以及在C末端部分上具有相應融合物(IFA35及IFA37)的IFA之抗CD40活性的實例。後一組IFA之純化產率極低，因此，為了測試其活性，使用來自HEK經轉染細胞的上清液並對其進行連續稀釋以評價針對HEK-Blue™ CD40L細胞之抗CD40活性。
圖3C 至圖3D以圖形描繪具有IFNβ融合物之多種IFA分子對活化報導體HEK-Blue-IFN-α/β細胞中之I型IFN路徑之劑量依賴性作用。 圖3C顯示具有與HC之C末端部分融合之IFNβ的IFA之IFN活性的實例。 圖3D顯示具有與LC (IFA34)或HC (IFA36)之N末端部分融合之IFNβ以及在C末端部分上具有相應融合物(IFA35及IFA37)的IFA之IFN活性的實例。使用與圖3B中相同的來自HEK經轉染細胞的上清液並對其進行連續稀釋以評價IFN活性。親代抗體CP870,893用作陰性對照且重組人類IFNβ用作陽性對照。NS：未刺激。
圖4A以圖形描繪具有IFNα融合物之多種IFA分子對活化HEK-Blue™ CD40L細胞中CD40介導之NFκB路徑報導體分析之劑量作用。
圖4B以圖形描繪具有IFNα融合物之多種IFA分子對活化報導體HEK-Blue-IFN-α/β細胞中I型IFN介導之路徑之劑量作用。右下角之插圖中指示珮格西施(Pegasys)之活性。
圖4C以圖形描繪在HC (IFA38)或LC (IFA39)上具有IFNα融合物及HL連接子之IFA分子對在HEK-Blue™ CD40L細胞中進行之活化CD40介導之NFκB路徑報導體分析的作用。
圖4D以圖形描繪IFA38及IFA39對報導體HEK-Blue-IFNα/β細胞中I型IFN路徑活化之作用。
圖5A以圖形描繪在感染SARS-CoV-2 (分離株USA-WA1/2020)之後S309抗體對Vero E6細胞生存力之作用。對於中和實驗，將病毒與在一定劑量範圍內之S309抗體一起在37℃下預培育1小時且隨後，將病毒/抗體添加至細胞上並在37℃下培育3天。在感染後72小時，藉由CellTiter Glo (CTG)分析來評估細胞生存力。
圖5B以圖形描繪在感染SARS-CoV-2 (分離株USA-WA1/2020)之後瑞德西韋(Remdesivir)對Vero E6細胞生存力之作用。為評價瑞德西韋，使細胞感染SARS-CoV-2 (感染倍率(multiplicity of infection，MOI)：0.05)。一小時後，移除病毒並添加在一定劑量範圍內之瑞德西韋。在感染後72小時，藉由CellTiter Glo來評估細胞生存力。
圖 5C以圖形描繪藉由流式細胞測量術評價的Vero E6細胞上CD40之表現情況。
圖5D-G以圖形描繪在感染SARS-CoV-2 (分離株USA-WA1/2020)之後IFA27對Vero E6細胞生存力之作用與瑞德西韋(RDV)之作用的比較。 圖5D以圖形描繪在感染之後IFA27治療之作用(後治療)。 圖5E以圖形描繪在感染之後瑞德西韋(RDV)治療的作用(後治療)。 圖5F以圖形描繪在感染之前IFA27治療之作用(預治療)。 圖5G以圖形描繪在感染之前瑞德西韋(RDV)治療之作用(預治療)。使細胞感染SARS-CoV-2 (MOI 0.05)。在後治療環境中，在感染1小時之後，移除病毒，洗滌細胞並添加指定濃度之IFA27或瑞德西韋，保持72小時持續時間。在預治療環境中，將Vero E6細胞用IFA27或瑞德西韋治療1小時。接著，對細胞進行洗滌並使其感染SARS-CoV-2 (分離株USA-WA1/2020)，保持72小時之持續時間。在兩種實驗中，在感染之後3天，藉由CellTiter-Glo評估細胞生存力。
圖5D.bis-G.bis以圖形描繪在感染SARS-CoV-2 (分離株USA-WA1/2020)之後IFA25對Vero E6細胞生存力之作用與瑞德西韋(RDV)之作用的比較。 圖5D.bis以圖形描繪在感染之後IFA25治療之作用(後治療)。 圖5E.bis以圖形描繪在感染之後瑞德西韋(RDV)治療的作用(後治療)。 圖5F.bis以圖形描繪在感染之前IFA25治療之作用(預治療)。 圖5G.bis以圖形描繪在感染之前瑞德西韋(RDV)治療之作用(預治療)。使細胞感染SARS-CoV-2 (MOI 0.05)。在後治療環境中，在感染1小時之後，移除病毒，洗滌細胞並添加指定濃度之IFA25或瑞德西韋，保持72小時持續時間。在預治療環境中，將Vero E6細胞用IFA25或瑞德西韋治療1小時。接著，對細胞進行洗滌並使其感染SARS-CoV-2 (分離株USA-WA1/2020，MOI 0.05)，並保持72小時之持續時間。在兩種實驗中，在感染之後3天，藉由CellTiter-Glo評估細胞生存力。
圖5H以圖形描繪在後治療環境中IFA27之作用與親代抗體(CP870,893)或對照IFA201 (無抗CD40促效活性)之作用的比較。使Vero E6細胞感染SARS-CoV-2 (分離株USA-WA1/2020；MOI 0.05)。感染一小時之後，移除病毒，洗滌細胞並在一定劑量範圍內之指定治療存在下添加新鮮培養基，保持72小時持續時間。藉由CTG分析評估細胞生存力。
圖5I以圖形描繪在後治療環境中IFA25之作用與珮格西施®或對照IFA202 (無抗CD40促效活性)之作用的比較。使Vero E6細胞感染SARS-CoV-2 (分離株USA-WA1/2020；MOI 0.05)。感染一小時之後，移除病毒，洗滌細胞並在一定劑量範圍內之指定治療存在下添加新鮮培養基，保持72小時持續時間。藉由CTG分析評估細胞生存力。
圖5I.bis以圖形描繪在後治療環境中，單獨或與同型EVI5組合(具有與CP870,893及IFA202組合中相同之抗體負載)之IFA25的作用與單獨或呈組合形式之CP870,893或對照IFA202 (無抗CD40促效活性)之作用的比較。使Vero E6細胞感染SARS-CoV-2 (分離株USA-WA1/2020；MOI 0.05)。感染一小時之後，移除病毒，洗滌細胞並在一定劑量範圍內之指定治療存在下添加新鮮培養基，保持72小時持續時間。藉由CTG分析評估細胞生存力。
圖5J-R以圖形描繪在感染各種SARS-CoV-2分離株之後IFA25對Vero E6細胞生存力之作用。 圖5J顯示在感染分離株USA-WA1/2020之後的作用。 圖5K顯示感染分離株Germany/BavPat1/2020之後的作用。 圖5L顯示在感染分離株USA-CA_CDC_5574-2020之後的作用。 圖5M顯示在感染分離株hCoV-19_England_204820464_2020之後的作用。 圖5N顯示在感染分離株South Africa/KRISP-EC-K005321/2020之後的作用。 圖5O顯示在感染分離株South Africa/KRISP-EC-K005325/2020之後的作用。 圖 5P顯示在感染分離株hCoV-19/Japan/TY7-503/2021 (Gamma變異株)之後的作用。 圖 5Q顯示在感染分離株hCoV-19/USA/PHC658/2021 (Delta變異株)之後的作用。 圖 5R顯示在感染分離株hCoV-19/USA/MD-HP20874/2021 (Omicron變異株)之後的作用。將細胞用SARS-CoV-2以MOI 0.05感染(Gamma及Omicron變異株除外，分別以MOI 0.5及0.1感染)。一小時後，移除病毒，洗滌細胞並添加在一定劑量範圍內之IFA25。感染之後3天，藉由CTG分析評估細胞生存力。
圖5S-U以圖形描繪在感染各種SARS-CoV-2分離株之後IFA126對Vero E6細胞生存力之作用。 圖 5S顯示在感染分離株USA-WA1/2020 (MOI 0.05)之後的作用。 圖 5T顯示在感染分離株hCoV-19/USA/PHC658/2021 (Delta變異株，MOI 0.05)之後的作用。 圖 5U顯示在感染分離株hCoV-19/USA/MD-HP20874/2021 (Omicron變異株，MOI 0.1)之後的作用。
圖 6A-C以圖形描繪有關在用SARS-CoV-2感染Vero E6細胞後使用xCELLigence系統進行即時細胞分析之設置的結果。使Vero E6細胞感染SARS-CoV-2 (分離株USA-WA1/2020)。感染一小時之後，移除病毒，洗滌細胞並在指定治療存在下添加新鮮培養基。 圖6A顯示用陰性對照(未感染)或不同數目蝕斑形成單位(PFU)之SARS-CoV-2接種75小時的E-Plate各孔的正規化之細胞指數(CI)。水平線表示CI降低至其初始值之50%的點。達到此點所需之時間稱為CIT 50。 圖6B展示S309抗體對Vero E6細胞中SARS-CoV-2誘發之細胞病變作用的作用。將細胞用陰性對照(未感染)、以MOI 0.025感染之對照或在37℃下預培育1小時的病毒(MOI 0.025)與1 µg/mL S309抗體之混合物接種。 圖6C描繪瑞德西韋(RDV)對Vero E6細胞中SARS-CoV-2誘發之細胞病變作用的作用。將細胞用陰性對照(NI)、以MOI 0.01感染之對照或遞增濃度瑞德西韋(RDV)接種。
圖6D 至圖6I以圖形描繪在感染SARS-CoV-2 (USA-WA1/2020)之後IFA25、珮格西施®及對照IFA202對Vero E6細胞生存力之作用。使細胞感染SARS-CoV-2 (MOI 0.05)。一小時後，移除病毒並添加在一定劑量範圍內之IFA25。使用xCELLigence即時細胞分析(Real Time Cell Analysis，RTCA)技術量測細胞生存力。
圖7描繪由人全血細胞(Whole Blood Cells，WBCs)之活體外細胞介素釋放分析得到的結果：在刺激來自4名健康志願者供體之WBC之後獲得的資料之實例。WBC保持未刺激(NS)、用LPS (10 ng/mL)或用IFA1 (1 µg/mL)處理24小時。收集上清液並使用MSD u-Plex套組針對人類細胞介素進行細胞介素釋放定量。結果表示來自各供體之二次獨立刺激之平均值。示出CXCL10 (IP10)、IL6、IL1β及TNFα之輪廓。
表11a-b ：此等表概述在活體外刺激自健康志願者獲得的全血細胞(WBC)之後獲得的資料。針對來自四名不同供體之WBC測試各IFA。WBC保持未處理(NT)、用LPS (10 ng/mL)或用IFA (1 µg/mL)處理24小時。收集上清液並使用MSD u-Plex套組針對人類細胞介素進行細胞介素釋放定量。結果表示來自各供體之二次獨立刺激的平均值且以pg/mL表示(nd：未偵測)。
圖8 ：在對小鼠靜脈內推注注射0.5 mg/kg (IFA)或0.3 mg/kg (珮格西施)之後IFA25、IFA26、IFA27、IFA28、IFA29及IFA30之藥物動力學曲線。資料基於半對數尺度以平均值+/-SD表示。在投予之後至多10天，收集樣本。對於IFA27、IFA29及IFA30 ( 圖8A)以及對於IFA25、IFA26及IFA28( 圖8B)，使用抗IFNα作為用於定量方法之二次抗體進行ELISA分析。對於IFA25及IFA27 ( 圖8C)，使用抗IgG2作為用於定量方法之二次抗體進行ELISA分析。 圖8D：珮格西施定量係使用人類IFNα相配抗體對進行。標記線(LLOQ)表示珮格西施分析之偵測限。
表12A ：PK報導概述：在對雄性CD1瑞士小鼠(Swiss mice)單次靜脈內投予0.5 mg/kg之後CP870,893、IFA27、IFA29及IFA30的PK參數。CP870,893之PK參數係在7天實驗中研究且IFA27、IFA29及IFA30之PK參數係在10天實驗中研究(IFA27之定量係使用2種不同的ELISA方法執行)。
表12B ：PK報導概述：在對雄性CD1瑞士小鼠單次靜脈內推注投予0.5 mg/kg之後CP870,893、珮格西施及三種不同IFA (IFA25、IFA26及IFA28)之PK參數。CP870,893及IFA25、IFA26、IFA28以及珮格西施之PK參數係在21天實驗中研究(IFA25之定量係使用2種不同的ELISA方法執行)。
圖9A描繪不含Fc區之IFA50及IFA51與親代抗CD40抗體在報導體HEK-Blue™ CD40L細胞中的劑量依賴性CD40促效性活性的比較。 圖9B描繪IFA50及IFA51在報導體HEK-Blue™ hIFN-α/β細胞中之劑量依賴性IFNα活性。
圖10A描繪以IFNε為主之IFA49與親代抗CD40抗體在HEK-Blue™ CD40L報導體細胞中的劑量依賴性CD40促效性活性的比較。IFA49對應於IFNε經由肽連接子與HC之融合物。 圖10B描繪IFA49針對I型干擾素活化的報導體HEK-Blue™ hIFN-α/β報導體細胞之劑量依賴性IFN活性。
圖10C 至圖10E以圖形描繪在感染各種SARS-CoV-2分離株之後IFA49對Vero E6細胞生存力之作用。 圖10C顯示在感染分離株USA-WA1/2020 (MOI 0.05)之後的作用。 圖 10D顯示在感染分離株hCoV-19/USA/PHC658/2021 (Delta變異株，MOI 0.05)之後的作用。 圖 10E顯示在感染分離株hCoV-19/USA/MD-HP20874/2021 (Omicron變異株，MOI 0.1)之後的作用。
圖11A描繪以IFNω為主之IFA46與親代抗CD40抗體在HEK-Blue™ CD40L報導體細胞中的劑量依賴性CD40促效性活性的比較。IFA46對應於IFNω經由肽連接子與LC之融合物。 圖11B描繪IFA46針對I型干擾素活化的報導體HEK-Blue™ hIFN-α/β報導體細胞之劑量依賴性IFN活性。
圖11C 至圖11E以圖形描繪在感染各種SARS-CoV-2分離株之後IFA46對Vero E6細胞生存力之作用。 圖11C顯示在感染分離株USA-WA1/2020 (MOI 0.05)之後的作用。 圖 11D顯示在感染分離株hCoV-19/USA/PHC658/2021 (Delta變異株，MOI 0.05)之後的作用。 圖 11E顯示在感染分離株hCoV-19/USA/MD-HP20874/2021 (Omicron變異株，MOI 0.1)之後的作用。
圖12A描繪以IFNγ為主之IFA (IFA42及IFA43)與親代抗CD40抗體在HEK-Blue™ CD40L報導體細胞中的劑量依賴性CD40促效性活性的比較。IFA42對應於IFNγ經由肽連接子與LC之融合物且IFA43對應於IFNγ經由肽連接子與HC之融合物。 圖12B描繪IFA42及IFA43在報導體HEK-Blue-hIFNγ細胞中之劑量依賴性IFN活性。
圖12C 至圖12E以圖形描繪在感染各種SARS-CoV-2分離株之後IFA42對Vero E6細胞生存力之作用。 圖12C顯示在感染分離株USA-WA1/2020 (MOI 0.05)之後的作用。 圖 12D顯示在感染分離株hCoV-19/USA/PHC658/2021 (Delta變異株，MOI 0.05)之後的作用。 圖 12E顯示在感染分離株hCoV-19/USA/MD-HP20874/2021 (Omicron變異株，MOI 0.1)之後的作用。
圖12F 至圖12H以圖形描繪在感染各種SARS-CoV-2分離株之後IFA43對Vero E6細胞生存力之作用。 圖12F顯示在感染分離株USA-WA1/2020 (MOI 0.05)之後的作用。 圖 12G顯示在感染分離株hCoV-19/USA/PHC658/2021 (Delta變異株，MOI 0.05)之後的作用。 圖 12H顯示在感染分離株hCoV-19/USA/MD-HP20874/2021 (Omicron變異株，MOI 0.1)之後的作用。
圖13A描繪以IFNλ為主之IFA (IFA44及IFA45)與親代抗CD40抗體在HEK-Blue™ CD40L報導體細胞中的劑量依賴性CD40促效性活性的比較。IFA44對應於IFNλ經由肽連接子與LC之融合物且IFA45對應於IFNλ經由肽連接子與HC之融合物。 圖13B描繪IFA44及IFA45在報導體HEK-Blue-hIFNλ細胞中之劑量依賴性IFN活性。
圖13C 至圖13E以圖形描繪在感染各種SARS-CoV-2分離株之後IFA44對Vero E6細胞生存力之作用。 圖13C顯示在感染分離株USA-WA1/2020 (MOI 0.05)之後的作用。 圖 13D顯示在感染分離株hCoV-19/USA/PHC658/2021 (Delta變異株，MOI 0.05)之後的作用。 圖 13E顯示在感染分離株hCoV-19/USA/MD-HP20874/2021 (Omicron變異株，MOI 0.1)之後的作用。
圖13F 至圖13H以圖形描繪在感染各種SARS-CoV-2分離株之後IFA45對Vero E6細胞生存力之作用。 圖13F顯示在感染分離株USA-WA1/2020 (MOI 0.05)之後的作用。 圖 13G顯示在感染分離株hCoV-19/USA/PHC658/2021 (Delta變異株，MOI 0.05)之後的作用。 圖 13H顯示在感染分離株hCoV-19/USA/MD-HP20874/2021 (Omicron病毒株，MOI 0.1)之後的作用。
圖14顯示在3G5-抗CD40抗體之重鏈上融合IFNα或IFNβ的一些IFA在還原條件下的SDS PAGE之實例。左側亦顯示親代3G5抗CD40抗體之遷移。
圖15A-B以圖形顯示具有IFNβ融合物之多種以3G5為主之IFA分子對在HEK-Blue™ CD40L細胞中進行之活化CD40介導之NFκB路徑報導體分析之劑量依賴性作用。同樣顯示出與親代抗體3G5 (在此圖中命名為CDX-3G5)之比較。 圖15A顯示具有與重鏈(HC)之C末端部分融合之IFNβ的IFA之抗CD40活性的實例。在輕鏈上與IFNβ融合之IFA的純化產率極低，因此，為了測試其活性，使用來自HEK經轉染細胞的上清液並對其進行連續稀釋以評價針對HEK-Blue™ CD40L細胞之抗CD40活性；活性實例示於 圖 15B中且含有3G5之上清液用作對照。
圖15C-D以圖形顯示具有IFNβ融合物之多種IFA分子對活化報導體HEK-Blue-IFN-α/β細胞中之I型IFN路徑之劑量依賴性作用。 圖15C顯示在HC之C末端部分與IFNβ融合的IFA之IFN活性的實例。 圖15D顯示在輕鏈上融合IFNβ之IFA的IFN活性；此等蛋白質之產生位準極低且因此， 圖 15D中使用與圖15B中相同之上清液顯示二種IFA之活性的實例。
圖16A以圖形顯示具有IFNα融合物之四種IFA分子對在HEK-Blue™ CD40L細胞中進行之活化CD40介導之NFκB路徑報導體分析的劑量依賴性作用。同樣顯示出與親代抗體3G5 (在此圖中命名為CDX-3G5)之比較。
圖16B以圖形顯示具有IFNα融合物之多種IFA分子對活化報導體HEK-Blue-IFN-α/β細胞中I型IFN介導之路徑之劑量依賴性作用。
圖16C-E以圖形描繪在感染各種SARS-CoV-2分離株之後IFA125 (IFNγ融合物)對Vero E6細胞生存力之作用。 圖16C顯示在感染分離株USA-WA1/2020 (MOI 0.05)之後的作用。 圖 16D顯示在感染分離株hCoV-19/USA/PHC658/2021 (Delta變異株，MOI 0.05)之後的作用。 圖 16E顯示在感染分離株hCoV-19/USA/MD-HP20874/2021 (Omicron變異株，MOI 0.1)之後的作用。
圖17 ：人全血細胞(WBC)之活體外細胞介素釋放分析：在刺激來自4名健康志願者供體之WBC之後獲得的資料之實例。WBC保持未處理(NT)、用LPS(10 ng/mL)或用IFA109 (1 µg/mL)處理24小時。收集上清液並使用MSD u-Plex套組針對人類細胞介素進行細胞介素釋放定量。結果表示來自各供體之二次獨立刺激之平均值。示出CXCL10 (IP10)、IL6、IL1β及TNFα之輪廓。
表13 ：此表概述在活體外刺激自健康志願者獲得的全血細胞之後獲得的資料。針對來自四名不同供體之WBC測試IFA109。WBC保持未處理(NT)、用LPS (10 ng/mL)或用IFA109 (1 µg/mL)處理24小時。收集上清液並使用MSD u-Plex套組針對人類細胞介素進行細胞介素釋放定量。結果表示來自各供體之二次獨立刺激的平均值且以pg/mL表示(nd：未偵測)。
表14 ：此表報導估計的IFA25及瑞德西韋針對各SARS-CoV-2分離株之Log絕對EC50值。在圖5J至圖5R中呈現的評價IFA25對Vero E6細胞生存力之作用的實驗中，以相同條件測試瑞德西韋。絕對EC50根據有關準確EC50/IC50估計之指導原則(Sebaugh J. L.; Guidelines for accurate EC50/IC50 estimation. Pharmaceut. Statist. 2010; DOI: 10.1002/pst.426.)定義為產生50%反應之濃度，該50%反應定義為0%(未感染之CTR條件)及100%(經感染之CTR條件)之平均值。因此，利用PRISM，使用4-PL模型，藉由在設定Y等於50%反應(50%對照平均值)下進行反向預測，來估計Log絕對EC50。
圖18以圖形描繪在未感染條件及感染SARS-CoV-2條件下，初代人類鼻及支氣管細胞中CD40、IFNAR1及IFNAR2之表現。CD40、IFNAR1及IFNAR2之RNA表現係藉由RT-qPCR分析評估。對於此評估，根據實例VIII中之詳細描述，遵循製造商說明書(目錄號11754050)，先使用500 ng自初代人類鼻及支氣管細胞(未感染或經感染細胞)萃取之總RNA作為cDNA合成之模板。接著，執行TLDA受體陣列卡(Thermofisher Scientific；詳細描述於方法部分中)，以同時定量特定受體之mRNA位準。在TLDA分析中亦包括管家基因mRNA表現(GAPDH、GUSB、TBP及RPLP0)以評估在全部4種測試條件下的潛在mRNA變化。該4種管家基因各自在存在或不存在感染情況下於鼻及支氣管細胞中具有類似的表現位準，因此能夠直接比較Ct。( 圖18A)。在蛋白質層面上，藉由細胞測量分析確認在未感染細胞中的CD40及IFNAR目標表現。將初代人類鼻及支氣管細胞與抗hCD40-APC、抗hIFNAR1-APC及抗hIFNAR2-APC或相配的同型對照一起培育。細胞係在MACSQuant16流式細胞儀上獲取。同型對照係藉由虛線直方圖表示且感興趣標記物藉由全灰色直方圖表示( 圖18B)。
圖19以圖形描繪IFA27治療(在168小時動力學中，在1小時、48小時及96小時施加的後治療)對在空氣-液體界面(ALI)系統中培養(分批，MD0713)並感染分離株USA-WA1/2020之初代人類鼻細胞中SARS-CoV-2病毒負荷量的作用。將細胞自收到時起培養於MucilAir TM培養基中並在實驗第0天用分離株USA-WA1/2020以0.1 MOI感染。1小時之後，洗滌感染並施加含有IFA27或EVI5同型對照或者瑞德西韋治療之新鮮培養基，且在感染之後2天及4天更新培養基。執行額外的未感染及經感染未治療條件。最終的洗滌液及組織收集係在感染之後7天執行。病毒負荷量係如實例VIII中所描述，在終末終點，即在感染之後7天，利用RT-qPCR，藉由在RNA萃取之後量測鼻組織( 圖19A)及鼻頂部洗滌液(apical wash) ( 圖19B)中之SARS-CoV-2 RNA拷貝來評估。感染性病毒係如實例VIII中所描述，在終末終點，即在感染之後7天，使用50%組織培養感染劑量(TCID50)分析在頂部洗滌液中評價( 圖19C)。
圖20以圖形描繪IFA27治療(在168小時動力學中，在1小時、48小時及96小時施加的後治療)對在空氣-液體界面(ALI)系統中培養(分批，MD0713)並感染分離株USA-WA1/2020之初代人類支氣管細胞中SARS-CoV-2病毒負荷量的作用。將細胞自收到時起培養於MucilAir TM培養基中並在實驗第0天用分離株USA-WA1/2020以0.1 MOI感染。1小時之後，洗滌感染並施加含有IFA27或EVI5同型對照或者瑞德西韋治療之新鮮培養基，且在感染之後2天及4天更新培養基。執行額外的未感染及經感染未治療條件。最終的洗滌液及組織收集係在感染之後7天執行。病毒負荷量係如實例VIII中所描述，在終末終點，即在感染之後7天，利用RT-qPCR，藉由在RNA萃取之後量測支氣管組織( 圖20A)及支氣管頂部洗滌液( 圖20B)中之SARS-CoV-2 RNA拷貝來評估。
圖21以圖形描繪IFA25治療(在96小時動力學中，在1小時及48小時施加的後治療)對在空氣-液體界面(ALI)系統中培養(分批，MD0853)並感染分離株USA-WA1/2020之初代人類鼻細胞中SARS-CoV-2病毒負荷量的作用。將細胞自收到時起培養於MucilAir TM培養基中並在實驗第0天用分離株USA-WA1/2020以0.1 MOI感染。1小時之後，洗滌感染並施加含有IFA25或EVI5同型對照或者瑞德西韋治療之新鮮培養基，且在感染之後2天更新培養基。執行額外的未感染及經感染未治療條件。病毒負荷量係如實例VIII中所描述，在終末終點，即在感染之後4天，利用RT-qPCR，藉由在RNA萃取之後量測鼻組織( 圖21A)及鼻頂部洗滌液( 圖21B)中之SARS-CoV-2 RNA拷貝來評估。感染性病毒係如實例VIII中所描述，在終末終點，即在感染之後4天，使用50%組織培養感染劑量(TCID50)分析在頂部洗滌液中評價( 圖21C)。
圖22以圖形描繪用IFA25預治療對在空氣-液體界面(ALI)系統中培養(分批，MD0853)且感染分離株USA-WA1/2020病毒株之初代人類鼻細胞中SARS-CoV-2病毒負荷量的作用。將細胞自收到時起在MucilAir TM培養基中培養並在感染之前3小時用IFA25或EVI5同型對照或瑞德西韋治療。執行額外的未感染及經感染未治療條件。移除治療並用分離株USA-WA1/2020病毒株以0.1 MOI感染1小時。感染1小時之後，洗滌頂部隔室並添加新鮮培養基。最終的洗滌液及組織收集係在感染之後2天執行。病毒負荷量係如實例VIII中所描述，在終末終點，即在感染之後2天，利用RT-qPCR，藉由在RNA萃取之後量測鼻組織( 圖22A)及鼻頂部洗滌液( 圖22B)中之SARS-CoV-2 RNA拷貝來評估。感染性病毒係如實例VIII中所描述，在終末終點，即在感染之後2天，使用50%組織培養感染劑量(TCID50)分析在頂部洗滌液中評價( 圖22C)。
圖23以圖形描繪IFA25治療(在96小時動力學中，在1小時及48小時施加的後治療)對在空氣-液體界面(ALI)系統中培養(分批，MD0868)並感染分離株USA-WA1/2020之初代人類支氣管細胞中SARS-CoV-2病毒負荷量的作用。將細胞自收到時起培養於MucilAir TM培養基中並在實驗第0天用分離株USA-WA1/2020以0.1 MOI感染。1小時之後，洗滌感染並施加含有IFA25或EVI5同型對照或者瑞德西韋治療之新鮮培養基，且在感染之後2天更新培養基。執行額外的未感染及經感染未治療條件。病毒負荷量係如實例VIII中所描述，在終末終點，即在感染之後4天，利用RT-qPCR，藉由在RNA萃取之後量測支氣管組織( 圖23A)及支氣管頂部洗滌液( 圖23B)中之SARS-CoV-2 RNA拷貝來評估。感染性病毒係如實例VIII中所描述，在終末終點，即在感染之後4天，使用50%組織培養感染劑量(TCID50)分析在頂部洗滌液中評價( 圖23C)。
圖24以圖形描繪用IFA25預治療對在空氣-液體界面(ALI)系統中培養(分批，MD0868)且感染分離株USA-WA1/2020之初代人類支氣管細胞中SARS-CoV-2病毒負荷量的作用。將細胞自收到時起在MucilAir TM培養基中培養並在感染之前3小時用IFA25或EVI5同型對照或瑞德西韋治療。執行額外的未感染及經感染未治療條件。移除治療並用分離株USA-WA1/2020以0.1 MOI感染1小時。感染1小時之後，洗滌頂部隔室並添加新鮮培養基。最終的洗滌液及組織收集係在感染之後2天執行。病毒負荷量係如實例VIII中所描述，在終末終點，在感染之後2天，利用RT-qPCR，藉由在RNA萃取之後量測支氣管組織( 圖24A)及支氣管頂部洗滌液( 圖24B)中之SARS-CoV-2 RNA拷貝來評估。
「細胞生存力(%)」與「生存力(%)」在本文件通篇可互換使用。
由結合隨附圖式的示例性實施例之以下詳細說明將更全面地理解本發明之前述及其他特徵及優點。
 
               序列表
          <![CDATA[<110> 德商埃沃特克國際有限公司(EVOTEC INTERNATIONAL GMBH)]]>
          <![CDATA[<120> 用於冠狀病毒感染之治療或預防的干擾素相聯抗原結合蛋白]]>
          <![CDATA[<140> TW111121275]]>
          <![CDATA[<141> 2022-06-08]]>
          <![CDATA[<150> EP21305786.2]]>
          <![CDATA[<151> 2021-06-09]]>
          <![CDATA[<160> 94]]>
          <![CDATA[<170> BiSSAP 1.3.6]]>
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          Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 
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          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD40抗體輕鏈]]>
          <![CDATA[<400> 3]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Tyr Ser Trp 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Thr Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ile Phe Pro Leu 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 
          <![CDATA[<210> 4]]>
          <![CDATA[<211> 233]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 具有信號肽1之抗CD40抗體輕鏈]]>
          <![CDATA[<400> 4]]>
          Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 
          1               5                   10                  15      
          Val His Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala 
                      20                  25                  30          
          Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ser Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn 
              50                  55                  60                  
          Leu Leu Ile Tyr Thr Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg 
          65                  70                  75                  80  
          Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser 
                          85                  90                  95      
          Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ile 
                      100                 105                 110         
          Phe Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 
                  115                 120                 125             
          Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu 
              130                 135                 140                 
          Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly 
                          165                 170                 175     
          Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His 
                  195                 200                 205             
          Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val 
              210                 215                 220                 
          Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
          225                 230             
          <![CDATA[<210> 5]]>
          <![CDATA[<211> 236]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 具有信號肽2之抗CD40抗體輕鏈]]>
          <![CDATA[<400> 5]]>
          Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 
          1               5                   10                  15      
          Leu Arg Gly Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser 
                      20                  25                  30          
          Val Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser 
                  35                  40                  45              
          Gln Gly Ile Tyr Ser Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 
              50                  55                  60                  
          Ala Pro Asn Leu Leu Ile Tyr Thr Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 
                          85                  90                  95      
          Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 
                      100                 105                 110         
          Ala Asn Ile Phe Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 
                  115                 120                 125             
          Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 
              130                 135                 140                 
          Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 
          145                 150                 155                 160 
          Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 
                          165                 170                 175     
          Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 
                      180                 185                 190         
          Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 
                  195                 200                 205             
          Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 
              210                 215                 220                 
          Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
          225                 230                 235     
          <![CDATA[<210> 6]]>
          <![CDATA[<211> 451]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD40抗體重鏈hIgG2 dK]]>
          <![CDATA[<400> 6]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Pro Asp Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Asn Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Asp Gln Pro Leu Gly Tyr Cys Thr Asn Gly Val Cys Ser Tyr 
                      100                 105                 110         
          Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 
                  115                 120                 125             
          Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr 
              130                 135                 140                 
          Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 
                          165                 170                 175     
          His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 
                      180                 185                 190         
          Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr 
                  195                 200                 205             
          Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val 
              210                 215                 220                 
          Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 
          225                 230                 235                 240 
          Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 
                          245                 250                 255     
          Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 
                      260                 265                 270         
          His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 
                  275                 280                 285             
          Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr 
              290                 295                 300                 
          Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn 
          305                 310                 315                 320 
          Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro 
                          325                 330                 335     
          Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 
                      340                 345                 350         
          Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 
                  355                 360                 365             
          Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 
              370                 375                 380                 
          Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 
                          405                 410                 415     
          Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 
                      420                 425                 430         
          Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 
                  435                 440                 445             
          Ser Pro Gly 
              450     
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          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220> ]]>
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          <![CDATA[<400> 7]]>
          Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 
          1               5                   10                  15      
          Val His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 
                      20                  25                  30          
          Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 
                  35                  40                  45              
          Thr Gly Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 
              50                  55                  60                  
          Glu Trp Met Gly Trp Ile Asn Pro Asp Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser 
                          85                  90                  95      
          Thr Ala Tyr Met Glu Leu Asn Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val 
                      100                 105                 110         
          Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Gln Pro Leu Gly Tyr Cys Thr Asn Gly Val 
                  115                 120                 125             
          Cys Ser Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 
              130                 135                 140                 
          Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 
                          165                 170                 175     
          Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr 
                      180                 185                 190         
          Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr 
                  195                 200                 205             
          Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln 
              210                 215                 220                 
          Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp 
          225                 230                 235                 240 
          Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala 
                          245                 250                 255     
          Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 
                      260                 265                 270         
          Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 
                  275                 280                 285             
          Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 
              290                 295                 300                 
          Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 
          305                 310                 315                 320 
          Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp 
                          325                 330                 335     
          Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 
                      340                 345                 350         
          Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg 
                  355                 360                 365             
          Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 
              370                 375                 380                 
          Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 
          385                 390                 395                 400 
          Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 
                          405                 410                 415     
          Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 
                      420                 425                 430         
          Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 
                  435                 440                 445             
          Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 
              450                 455                 460                 
          Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          465                 470 
          <![CDATA[<210> 8]]>
          <![CDATA[<211> 473]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 具有信號肽2之抗CD40抗體重鏈hIgG2 dK]]>
          <![CDATA[<400> 8]]>
          Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 
          1               5                   10                  15      
          Leu Arg Gly Ala Arg Cys Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu 
                      20                  25                  30          
          Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly 
                  35                  40                  45              
          Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Trp Ile Asn Pro Asp Ser Gly Gly Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr 
                          85                  90                  95      
          Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Asn Arg Leu Arg Ser Asp Asp 
                      100                 105                 110         
          Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Gln Pro Leu Gly Tyr Cys Thr 
                  115                 120                 125             
          Asn Gly Val Cys Ser Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 
              130                 135                 140                 
          Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 
          145                 150                 155                 160 
          Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 
                          165                 170                 175     
          Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 
                      180                 185                 190         
          Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 
                  195                 200                 205             
          Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe 
              210                 215                 220                 
          Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr 
          225                 230                 235                 240 
          Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro 
                          245                 250                 255     
          Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 
                      260                 265                 270         
          Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 
                  275                 280                 285             
          Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp 
              290                 295                 300                 
          Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 
          305                 310                 315                 320 
          Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val 
                          325                 330                 335     
          His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 
                      340                 345                 350         
          Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly 
                  355                 360                 365             
          Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 
              370                 375                 380                 
          Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 
          385                 390                 395                 400 
          Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 
                          405                 410                 415     
          Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 
                      420                 425                 430         
          Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 
                  435                 440                 445             
          Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 
              450                 455                 460                 
          Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          465                 470             
          <![CDATA[<210> 9]]>
          <![CDATA[<211> 452]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD40抗體重鏈hIgG2]]>
          <![CDATA[<400> 9]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Pro Asp Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Asn Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Asp Gln Pro Leu Gly Tyr Cys Thr Asn Gly Val Cys Ser Tyr 
                      100                 105                 110         
          Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 
                  115                 120                 125             
          Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr 
              130                 135                 140                 
          Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 
                          165                 170                 175     
          His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 
                      180                 185                 190         
          Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr 
                  195                 200                 205             
          Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val 
              210                 215                 220                 
          Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 
          225                 230                 235                 240 
          Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 
                          245                 250                 255     
          Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 
                      260                 265                 270         
          His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 
                  275                 280                 285             
          Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr 
              290                 295                 300                 
          Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn 
          305                 310                 315                 320 
          Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro 
                          325                 330                 335     
          Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 
                      340                 345                 350         
          Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 
                  355                 360                 365             
          Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 
              370                 375                 380                 
          Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 
                          405                 410                 415     
          Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 
                      420                 425                 430         
          Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 
                  435                 440                 445             
          Ser Pro Gly Lys 
              450         
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          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 具有信號肽1之抗CD40抗體重鏈hIgG2]]>
          <![CDATA[<400> 10]]>
          Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 
          1               5                   10                  15      
          Val His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 
                      20                  25                  30          
          Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 
                  35                  40                  45              
          Thr Gly Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 
              50                  55                  60                  
          Glu Trp Met Gly Trp Ile Asn Pro Asp Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser 
                          85                  90                  95      
          Thr Ala Tyr Met Glu Leu Asn Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val 
                      100                 105                 110         
          Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Gln Pro Leu Gly Tyr Cys Thr Asn Gly Val 
                  115                 120                 125             
          Cys Ser Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 
              130                 135                 140                 
          Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 
                          165                 170                 175     
          Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr 
                      180                 185                 190         
          Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr 
                  195                 200                 205             
          Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln 
              210                 215                 220                 
          Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp 
          225                 230                 235                 240 
          Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala 
                          245                 250                 255     
          Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 
                      260                 265                 270         
          Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 
                  275                 280                 285             
          Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 
              290                 295                 300                 
          Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 
          305                 310                 315                 320 
          Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp 
                          325                 330                 335     
          Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 
                      340                 345                 350         
          Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg 
                  355                 360                 365             
          Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 
              370                 375                 380                 
          Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 
          385                 390                 395                 400 
          Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 
                          405                 410                 415     
          Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 
                      420                 425                 430         
          Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 
                  435                 440                 445             
          Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 
              450                 455                 460                 
          Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
          465                 470     
          <![CDATA[<210> 11]]>
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          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 具有信號肽2之抗CD40抗體重鏈hIgG2]]>
          <![CDATA[<400> 11]]>
          Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 
          1               5                   10                  15      
          Leu Arg Gly Ala Arg Cys Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu 
                      20                  25                  30          
          Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly 
                  35                  40                  45              
          Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Trp Ile Asn Pro Asp Ser Gly Gly Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr 
                          85                  90                  95      
          Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Asn Arg Leu Arg Ser Asp Asp 
                      100                 105                 110         
          Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Gln Pro Leu Gly Tyr Cys Thr 
                  115                 120                 125             
          Asn Gly Val Cys Ser Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 
              130                 135                 140                 
          Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 
          145                 150                 155                 160 
          Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 
                          165                 170                 175     
          Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 
                      180                 185                 190         
          Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 
                  195                 200                 205             
          Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe 
              210                 215                 220                 
          Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr 
          225                 230                 235                 240 
          Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro 
                          245                 250                 255     
          Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 
                      260                 265                 270         
          Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 
                  275                 280                 285             
          Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp 
              290                 295                 300                 
          Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 
          305                 310                 315                 320 
          Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val 
                          325                 330                 335     
          His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 
                      340                 345                 350         
          Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly 
                  355                 360                 365             
          Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 
              370                 375                 380                 
          Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 
          385                 390                 395                 400 
          Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 
                          405                 410                 415     
          Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 
                      420                 425                 430         
          Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 
                  435                 440                 445             
          Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 
              450                 455                 460                 
          Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
          465                 470                 
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          <![CDATA[<223> 抗CD40抗體hIgG2 Fab區重鏈]]>
          <![CDATA[<400> 12]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Pro Asp Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Asn Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Asp Gln Pro Leu Gly Tyr Cys Thr Asn Gly Val Cys Ser Tyr 
                      100                 105                 110         
          Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 
                  115                 120                 125             
          Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr 
              130                 135                 140                 
          Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 
                          165                 170                 175     
          His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 
                      180                 185                 190         
          Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr 
                  195                 200                 205             
          Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val 
              210                 215                 220                 
          Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu 
          225                 230     
          <![CDATA[<210> 13]]>
          <![CDATA[<211> 250]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 具有信號肽1之抗CD40抗體hIgG2 Fab區重鏈]]>
          <![CDATA[<400> 13]]>
          Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 
          1               5                   10                  15      
          Val His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 
                      20                  25                  30          
          Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 
                  35                  40                  45              
          Thr Gly Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 
              50                  55                  60                  
          Glu Trp Met Gly Trp Ile Asn Pro Asp Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser 
                          85                  90                  95      
          Thr Ala Tyr Met Glu Leu Asn Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val 
                      100                 105                 110         
          Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Gln Pro Leu Gly Tyr Cys Thr Asn Gly Val 
                  115                 120                 125             
          Cys Ser Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 
              130                 135                 140                 
          Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 
                          165                 170                 175     
          Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr 
                      180                 185                 190         
          Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr 
                  195                 200                 205             
          Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln 
              210                 215                 220                 
          Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp 
          225                 230                 235                 240 
          Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu 
                          245                 250 
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          Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser Asn Phe Gln 
          1               5                   10                  15      
          Cys Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg Leu Glu Tyr Cys Leu 
                      20                  25                  30          
          Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys Gln Leu Gln 
                  35                  40                  45              
          Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu Met Leu Gln 
              50                  55                  60                  
          Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser Ser Thr Gly Trp Asn 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val Tyr His Gln Ile Asn 
                          85                  90                  95      
          His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu Lys Glu Asp Phe Thr 
                      100                 105                 110         
          Arg Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys Arg Tyr Tyr Gly Arg 
                  115                 120                 125             
          Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser His Cys Ala Trp Thr 
              130                 135                 140                 
          Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr Phe Ile Asn Arg Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Thr Gly Tyr Leu Arg Asn 
                          165     
          <![CDATA[<210> 15]]>
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          <![CDATA[<400> 15]]>
          Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser Asn Phe Gln 
          1               5                   10                  15      
          Ser Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg Leu Glu Tyr Cys Leu 
                      20                  25                  30          
          Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys Gln Leu Gln 
                  35                  40                  45              
          Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu Met Leu Gln 
              50                  55                  60                  
          Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser Ser Thr Gly Trp Asn 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val Tyr His Gln Ile Asn 
                          85                  90                  95      
          His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu Lys Glu Asp Phe Thr 
                      100                 105                 110         
          Arg Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys Arg Tyr Tyr Gly Arg 
                  115                 120                 125             
          Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser His Cys Ala Trp Thr 
              130                 135                 140                 
          Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr Phe Ile Asn Arg Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Thr Gly Tyr Leu Arg Asn 
                          165     
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          <![CDATA[<400> 16]]>
          Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser Asn Phe Gln 
          1               5                   10                  15      
          Ser Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg Leu Glu Tyr Cys Leu 
                      20                  25                  30          
          Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys Gln Leu Gln 
                  35                  40                  45              
          Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu Met Leu Gln 
              50                  55                  60                  
          Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser Ser Thr Gly Trp Gln 
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          Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val Tyr His Gln Ile Asn 
                          85                  90                  95      
          His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu Lys Glu Asp Phe Thr 
                      100                 105                 110         
          Arg Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys Arg Tyr Tyr Gly Arg 
                  115                 120                 125             
          Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser His Cys Ala Trp Thr 
              130                 135                 140                 
          Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr Phe Ile Asn Arg Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Thr Gly Tyr Leu Arg Asn 
                          165     
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          <![CDATA[<400> 17]]>
          Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Ser Arg Arg Thr Leu Met 
          1               5                   10                  15      
          Leu Leu Ala Gln Met Arg Lys Ile Ser Leu Phe Ser Cys Leu Lys Asp 
                      20                  25                  30          
          Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Gly Asn Gln Phe Gln 
                  35                  40                  45              
          Lys Ala Glu Thr Ile Pro Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln Ile Phe 
              50                  55                  60                  
          Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Asp Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu 
                          85                  90                  95      
          Ala Cys Val Ile Gln Gly Val Gly Val Thr Glu Thr Pro Leu Met Lys 
                      100                 105                 110         
          Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu 
                  115                 120                 125             
          Tyr Leu Lys Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg 
              130                 135                 140                 
          Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gln Glu Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Arg Ser Lys Glu 
                          165 
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          <![CDATA[<400> 18]]>
          Val Pro Val Ala Arg Leu His Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys 
          1               5                   10                  15      
          His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe 
                      20                  25                  30          
          Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp Cys 
                  35                  40                  45              
          Arg Cys His Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu 
              50                  55                  60                  
          Gln Val Arg Glu Arg Pro Met Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Val Asp 
                          85                  90                  95      
          Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Phe 
                      100                 105                 110         
          Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly 
                  115                 120                 125             
          Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu 
              130                 135                 140                 
          Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val 
                          165                 170                 175 
          <![CDATA[<210> 19]]>
          <![CDATA[<211> 143]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 智人]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> IFN γ]]>
          <![CDATA[<400> 19]]>
          Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn 
          1               5                   10                  15      
          Ala Gly His Ser Asp Val Ala Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile 
                      20                  25                  30          
          Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln 
                  35                  40                  45              
          Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln 
              50                  55                  60                  
          Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr 
                          85                  90                  95      
          Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu 
                      100                 105                 110         
          Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly Lys 
                  115                 120                 125             
          Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly Arg Arg Ala Ser Gln 
              130                 135                 140             
          <![CDATA[<210> 20]]>
          <![CDATA[<211> 4]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> RL連接子]]>
          <![CDATA[<400> 20]]>
          Pro Ala Pro Ala 
          1               
          <![CDATA[<210> 21]]>
          <![CDATA[<211> 13]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> GST連接子]]>
          <![CDATA[<400> 21]]>
          Ser Gly Gly Thr Ser Gly Ser Thr Ser Gly Thr Gly Ser 
          1               5                   10              
          <![CDATA[<210> 22]]>
          <![CDATA[<211> 12]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> HL連接子]]>
          <![CDATA[<400> 22]]>
          Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Ala 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210> 23]]>
          <![CDATA[<211> 24]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> HL2連接子]]>
          <![CDATA[<400> 23]]>
          Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Ala Ala Glu Ala Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Ala 
                      20                  
          <![CDATA[<210> 24]]>
          <![CDATA[<211> 10]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> (G4S)2連接子]]>
          <![CDATA[<400> 24]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210> 25]]>
          <![CDATA[<211> 15]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> (G4S)3連接子]]>
          <![CDATA[<400> 25]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210> 26]]>
          <![CDATA[<211> 20]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> (G4S)4連接子]]>
          <![CDATA[<400> 26]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Gly Gly Ser 
                      20  
          <![CDATA[<210> 27]]>
          <![CDATA[<211> 13]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> TEV-6His標籤]]>
          <![CDATA[<400> 27]]>
          Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Ser His His His His His His 
          1               5                   10              
          <![CDATA[<210> 28]]>
          <![CDATA[<211> 392]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD4]]>0_LC--HL--IFN β
          <![CDATA[<400> 28]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Tyr Ser Trp 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Thr Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ile Phe Pro Leu 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Gly Glu Cys Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala 
              210                 215                 220                 
          Lys Ala Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser Asn 
          225                 230                 235                 240 
          Phe Gln Cys Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg Leu Glu Tyr 
                          245                 250                 255     
          Cys Leu Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys Gln 
                      260                 265                 270         
          Leu Gln Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu Met 
                  275                 280                 285             
          Leu Gln Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser Ser Thr Gly 
              290                 295                 300                 
          Trp Asn Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val Tyr His Gln 
          305                 310                 315                 320 
          Ile Asn His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu Lys Glu Asp 
                          325                 330                 335     
          Phe Thr Arg Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys Arg Tyr Tyr 
                      340                 345                 350         
          Gly Arg Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser His Cys Ala 
                  355                 360                 365             
          Trp Thr Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr Phe Ile Asn 
              370                 375                 380                 
          Arg Leu Thr Gly Tyr Leu Arg Asn 
          385                 390         
          <![CDATA[<210> 29]]>
          <![CDATA[<211> 392]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD40_LC--HL--IFN β_C17S]]>
          <![CDATA[<400> 29]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Tyr Ser Trp 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Thr Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ile Phe Pro Leu 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Gly Glu Cys Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala 
              210                 215                 220                 
          Lys Ala Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser Asn 
          225                 230                 235                 240 
          Phe Gln Ser Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg Leu Glu Tyr 
                          245                 250                 255     
          Cys Leu Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys Gln 
                      260                 265                 270         
          Leu Gln Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu Met 
                  275                 280                 285             
          Leu Gln Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser Ser Thr Gly 
              290                 295                 300                 
          Trp Asn Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val Tyr His Gln 
          305                 310                 315                 320 
          Ile Asn His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu Lys Glu Asp 
                          325                 330                 335     
          Phe Thr Arg Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys Arg Tyr Tyr 
                      340                 345                 350         
          Gly Arg Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser His Cys Ala 
                  355                 360                 365             
          Trp Thr Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr Phe Ile Asn 
              370                 375                 380                 
          Arg Leu Thr Gly Tyr Leu Arg Asn 
          385                 390         
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          <![CDATA[<400> 30]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Pro Asp Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Asn Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Asp Gln Pro Leu Gly Tyr Cys Thr Asn Gly Val Cys Ser Tyr 
                      100                 105                 110         
          Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 
                  115                 120                 125             
          Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr 
              130                 135                 140                 
          Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 
                          165                 170                 175     
          His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 
                      180                 185                 190         
          Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr 
                  195                 200                 205             
          Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val 
              210                 215                 220                 
          Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 
          225                 230                 235                 240 
          Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 
                          245                 250                 255     
          Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 
                      260                 265                 270         
          His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 
                  275                 280                 285             
          Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr 
              290                 295                 300                 
          Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn 
          305                 310                 315                 320 
          Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro 
                          325                 330                 335     
          Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 
                      340                 345                 350         
          Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 
                  355                 360                 365             
          Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 
              370                 375                 380                 
          Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 
                          405                 410                 415     
          Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 
                      420                 425                 430         
          Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 
                  435                 440                 445             
          Ser Pro Gly Pro Ala Pro Ala Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu 
              450                 455                 460                 
          Gln Arg Ser Ser Asn Phe Gln Cys Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn 
          465                 470                 475                 480 
          Gly Arg Leu Glu Tyr Cys Leu Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro 
                          485                 490                 495     
          Glu Glu Ile Lys Gln Leu Gln Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu 
                      500                 505                 510         
          Thr Ile Tyr Glu Met Leu Gln Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp 
                  515                 520                 525             
          Ser Ser Ser Thr Gly Trp Asn Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala 
              530                 535                 540                 
          Asn Val Tyr His Gln Ile Asn His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys 
          545                 550                 555                 560 
          Leu Glu Lys Glu Asp Phe Thr Arg Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His 
                          565                 570                 575     
          Leu Lys Arg Tyr Tyr Gly Arg Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu 
                      580                 585                 590         
          Tyr Ser His Cys Ala Trp Thr Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn 
                  595                 600                 605             
          Phe Tyr Phe Ile Asn Arg Leu Thr Gly Tyr Leu Arg Asn 
              610                 615                 620     
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          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Pro Asp Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Asn Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Asp Gln Pro Leu Gly Tyr Cys Thr Asn Gly Val Cys Ser Tyr 
                      100                 105                 110         
          Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 
                  115                 120                 125             
          Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr 
              130                 135                 140                 
          Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 
                          165                 170                 175     
          His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 
                      180                 185                 190         
          Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr 
                  195                 200                 205             
          Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val 
              210                 215                 220                 
          Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 
          225                 230                 235                 240 
          Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 
                          245                 250                 255     
          Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 
                      260                 265                 270         
          His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 
                  275                 280                 285             
          Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr 
              290                 295                 300                 
          Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn 
          305                 310                 315                 320 
          Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro 
                          325                 330                 335     
          Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 
                      340                 345                 350         
          Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 
                  355                 360                 365             
          Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 
              370                 375                 380                 
          Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 
                          405                 410                 415     
          Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 
                      420                 425                 430         
          Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 
                  435                 440                 445             
          Ser Pro Gly Pro Ala Pro Ala Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu 
              450                 455                 460                 
          Gln Arg Ser Ser Asn Phe Gln Ser Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn 
          465                 470                 475                 480 
          Gly Arg Leu Glu Tyr Cys Leu Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro 
                          485                 490                 495     
          Glu Glu Ile Lys Gln Leu Gln Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu 
                      500                 505                 510         
          Thr Ile Tyr Glu Met Leu Gln Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp 
                  515                 520                 525             
          Ser Ser Ser Thr Gly Trp Asn Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala 
              530                 535                 540                 
          Asn Val Tyr His Gln Ile Asn His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys 
          545                 550                 555                 560 
          Leu Glu Lys Glu Asp Phe Thr Arg Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His 
                          565                 570                 575     
          Leu Lys Arg Tyr Tyr Gly Arg Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu 
                      580                 585                 590         
          Tyr Ser His Cys Ala Trp Thr Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn 
                  595                 600                 605             
          Phe Tyr Phe Ile Asn Arg Leu Thr Gly Tyr Leu Arg Asn 
              610                 615                 620     
          <![CDATA[<210> 32]]>
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          <![CDATA[<400> 32]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Pro Asp Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Asn Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Asp Gln Pro Leu Gly Tyr Cys Thr Asn Gly Val Cys Ser Tyr 
                      100                 105                 110         
          Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 
                  115                 120                 125             
          Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr 
              130                 135                 140                 
          Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 
                          165                 170                 175     
          His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 
                      180                 185                 190         
          Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr 
                  195                 200                 205             
          Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val 
              210                 215                 220                 
          Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 
          225                 230                 235                 240 
          Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 
                          245                 250                 255     
          Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 
                      260                 265                 270         
          His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 
                  275                 280                 285             
          Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr 
              290                 295                 300                 
          Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn 
          305                 310                 315                 320 
          Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro 
                          325                 330                 335     
          Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 
                      340                 345                 350         
          Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 
                  355                 360                 365             
          Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 
              370                 375                 380                 
          Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 
                          405                 410                 415     
          Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 
                      420                 425                 430         
          Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 
                  435                 440                 445             
          Ser Pro Gly Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Ala Met 
              450                 455                 460                 
          Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser Asn Phe Gln Cys 
          465                 470                 475                 480 
          Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg Leu Glu Tyr Cys Leu Lys 
                          485                 490                 495     
          Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys Gln Leu Gln Gln 
                      500                 505                 510         
          Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu Met Leu Gln Asn 
                  515                 520                 525             
          Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser Ser Thr Gly Trp Asn Glu 
              530                 535                 540                 
          Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val Tyr His Gln Ile Asn His 
          545                 550                 555                 560 
          Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu Lys Glu Asp Phe Thr Arg 
                          565                 570                 575     
          Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys Arg Tyr Tyr Gly Arg Ile 
                      580                 585                 590         
          Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser His Cys Ala Trp Thr Ile 
                  595                 600                 605             
          Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr Phe Ile Asn Arg Leu Thr 
              610                 615                 620                 
          Gly Tyr Leu Arg Asn 
          625                 
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          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Pro Asp Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Asn Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
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                      100                 105                 110         
          Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 
                  115                 120                 125             
          Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr 
              130                 135                 140                 
          Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 
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                          165                 170                 175     
          His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 
                      180                 185                 190         
          Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr 
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          Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 
                          245                 250                 255     
          Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 
                      260                 265                 270         
          His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 
                  275                 280                 285             
          Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr 
              290                 295                 300                 
          Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn 
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                          325                 330                 335     
          Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 
                      340                 345                 350         
          Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 
                  355                 360                 365             
          Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 
              370                 375                 380                 
          Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 
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          Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 
                          405                 410                 415     
          Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 
                      420                 425                 430         
          Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 
                  435                 440                 445             
          Ser Pro Gly Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Ala Met 
              450                 455                 460                 
          Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser Asn Phe Gln Ser 
          465                 470                 475                 480 
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                          485                 490                 495     
          Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys Gln Leu Gln Gln 
                      500                 505                 510         
          Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu Met Leu Gln Asn 
                  515                 520                 525             
          Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser Ser Thr Gly Trp Asn Glu 
              530                 535                 540                 
          Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val Tyr His Gln Ile Asn His 
          545                 550                 555                 560 
          Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu Lys Glu Asp Phe Thr Arg 
                          565                 570                 575     
          Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys Arg Tyr Tyr Gly Arg Ile 
                      580                 585                 590         
          Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser His Cys Ala Trp Thr Ile 
                  595                 600                 605             
          Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr Phe Ile Asn Arg Leu Thr 
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          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Tyr Ser Trp 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Thr Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ile Phe Pro Leu 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 
                      100                 105                 110         
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                  115                 120                 125             
          Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Gly Glu Cys Pro Ala Pro Ala Met Ser Tyr Asn Leu Leu 
              210                 215                 220                 
          Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser Asn Phe Gln Cys Gln Lys Leu Leu Trp 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Leu Asn Gly Arg Leu Glu Tyr Cys Leu Lys Asp Arg Met Asn Phe 
                          245                 250                 255     
          Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys Gln Leu Gln Gln Phe Gln Lys Glu Asp 
                      260                 265                 270         
          Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu Met Leu Gln Asn Ile Phe Ala Ile Phe 
                  275                 280                 285             
          Arg Gln Asp Ser Ser Ser Thr Gly Trp Asn Glu Thr Ile Val Glu Asn 
              290                 295                 300                 
          Leu Leu Ala Asn Val Tyr His Gln Ile Asn His Leu Lys Thr Val Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Glu Glu Lys Leu Glu Lys Glu Asp Phe Thr Arg Gly Lys Leu Met Ser 
                          325                 330                 335     
          Ser Leu His Leu Lys Arg Tyr Tyr Gly Arg Ile Leu His Tyr Leu Lys 
                      340                 345                 350         
          Ala Lys Glu Tyr Ser His Cys Ala Trp Thr Ile Val Arg Val Glu Ile 
                  355                 360                 365             
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          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
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                      20                  25                  30          
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                  35                  40                  45              
          Tyr Thr Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
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                          165                 170                 175     
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                          245                 250                 255     
          Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys Gln Leu Gln Gln Phe Gln Lys Glu Asp 
                      260                 265                 270         
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                  275                 280                 285             
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          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Tyr Ser Trp 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Thr Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ile Phe Pro Leu 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
                  195                 200                 205             
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              210                 215                 220                 
          Thr Gly Ser Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Asn Phe Gln Ser Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg Leu Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Cys Leu Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys 
                      260                 265                 270         
          Gln Leu Gln Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu 
                  275                 280                 285             
          Met Leu Gln Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser Ser Thr 
              290                 295                 300                 
          Gly Trp Asn Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val Tyr His 
          305                 310                 315                 320 
          Gln Ile Asn His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu Lys Glu 
                          325                 330                 335     
          Asp Phe Thr Arg Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys Arg Tyr 
                      340                 345                 350         
          Tyr Gly Arg Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser His Cys 
                  355                 360                 365             
          Ala Trp Thr Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr Phe Ile 
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          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Tyr Ser Trp 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Thr Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ile Phe Pro Leu 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 
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          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Gly Glu Cys Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala 
              210                 215                 220                 
          Lys Ala Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Ala Met Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser Asn Phe Gln Ser Gln 
                          245                 250                 255     
          Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg Leu Glu Tyr Cys Leu Lys Asp 
                      260                 265                 270         
          Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys Gln Leu Gln Gln Phe 
                  275                 280                 285             
          Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu Met Leu Gln Asn Ile 
              290                 295                 300                 
          Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser Ser Thr Gly Trp Asn Glu Thr 
          305                 310                 315                 320 
          Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val Tyr His Gln Ile Asn His Leu 
                          325                 330                 335     
          Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu Lys Glu Asp Phe Thr Arg Gly 
                      340                 345                 350         
          Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys Arg Tyr Tyr Gly Arg Ile Leu 
                  355                 360                 365             
          His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser His Cys Ala Trp Thr Ile Val 
              370                 375                 380                 
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          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Pro Asp Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Asn Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Asp Gln Pro Leu Gly Tyr Cys Thr Asn Gly Val Cys Ser Tyr 
                      100                 105                 110         
          Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 
                  115                 120                 125             
          Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr 
              130                 135                 140                 
          Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 
                          165                 170                 175     
          His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 
                      180                 185                 190         
          Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr 
                  195                 200                 205             
          Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val 
              210                 215                 220                 
          Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 
          225                 230                 235                 240 
          Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 
                          245                 250                 255     
          Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 
                      260                 265                 270         
          His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 
                  275                 280                 285             
          Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr 
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          Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn 
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                          325                 330                 335     
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          Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 
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          Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 
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          Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 
                          405                 410                 415     
          Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 
                      420                 425                 430         
          Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 
                  435                 440                 445             
          Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Cys Asp Leu 
              450                 455                 460                 
          Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Ser Arg Arg Thr Leu Met Leu Leu Ala 
          465                 470                 475                 480 
          Gln Met Arg Lys Ile Ser Leu Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Asp 
                          485                 490                 495     
          Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Gly Asn Gln Phe Gln Lys Ala Glu 
                      500                 505                 510         
          Thr Ile Pro Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln Ile Phe Asn Leu Phe 
                  515                 520                 525             
          Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu Leu Asp Lys 
              530                 535                 540                 
          Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val 
          545                 550                 555                 560 
          Ile Gln Gly Val Gly Val Thr Glu Thr Pro Leu Met Lys Glu Asp Ser 
                          565                 570                 575     
          Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Lys 
                      580                 585                 590         
          Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile 
                  595                 600                 605             
          Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gln Glu Ser Leu Arg Ser 
              610                 615                 620                 
          Lys Glu 
          625     
          <![CDATA[<210> 39]]>
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          <![CDATA[<400> 39]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Pro Asp Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Asn Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Asp Gln Pro Leu Gly Tyr Cys Thr Asn Gly Val Cys Ser Tyr 
                      100                 105                 110         
          Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 
                  115                 120                 125             
          Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr 
              130                 135                 140                 
          Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 
                          165                 170                 175     
          His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 
                      180                 185                 190         
          Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr 
                  195                 200                 205             
          Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val 
              210                 215                 220                 
          Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 
          225                 230                 235                 240 
          Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 
                          245                 250                 255     
          Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 
                      260                 265                 270         
          His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 
                  275                 280                 285             
          Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr 
              290                 295                 300                 
          Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn 
          305                 310                 315                 320 
          Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro 
                          325                 330                 335     
          Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 
                      340                 345                 350         
          Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 
                  355                 360                 365             
          Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 
              370                 375                 380                 
          Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 
                          405                 410                 415     
          Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 
                      420                 425                 430         
          Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 
                  435                 440                 445             
          Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 
              450                 455                 460                 
          Gly Ser Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Ser Arg Arg Thr 
          465                 470                 475                 480 
          Leu Met Leu Leu Ala Gln Met Arg Lys Ile Ser Leu Phe Ser Cys Leu 
                          485                 490                 495     
          Lys Asp Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Gly Asn Gln 
                      500                 505                 510         
          Phe Gln Lys Ala Glu Thr Ile Pro Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln 
                  515                 520                 525             
          Ile Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu 
              530                 535                 540                 
          Thr Leu Leu Asp Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp 
          545                 550                 555                 560 
          Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Gly Val Gly Val Thr Glu Thr Pro Leu 
                          565                 570                 575     
          Met Lys Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile 
                      580                 585                 590         
          Thr Leu Tyr Leu Lys Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val 
                  595                 600                 605             
          Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gln 
              610                 615                 620                 
          Glu Ser Leu Arg Ser Lys Glu 
          625                 630     
          <![CDATA[<210> 40]]>
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          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Pro Asp Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Asn Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
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                      100                 105                 110         
          Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 
                  115                 120                 125             
          Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr 
              130                 135                 140                 
          Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 
                          165                 170                 175     
          His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 
                      180                 185                 190         
          Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr 
                  195                 200                 205             
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          His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 
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          Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn 
          305                 310                 315                 320 
          Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro 
                          325                 330                 335     
          Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 
                      340                 345                 350         
          Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 
                  355                 360                 365             
          Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 
              370                 375                 380                 
          Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 
                          405                 410                 415     
          Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 
                      420                 425                 430         
          Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 
                  435                 440                 445             
          Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 
              450                 455                 460                 
          Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu 
          465                 470                 475                 480 
          Gly Ser Arg Arg Thr Leu Met Leu Leu Ala Gln Met Arg Lys Ile Ser 
                          485                 490                 495     
          Leu Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu 
                      500                 505                 510         
          Glu Phe Gly Asn Gln Phe Gln Lys Ala Glu Thr Ile Pro Val Leu His 
                  515                 520                 525             
          Glu Met Ile Gln Gln Ile Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser 
              530                 535                 540                 
          Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu Leu Asp Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr 
          545                 550                 555                 560 
          Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Gly Val Gly Val 
                          565                 570                 575     
          Thr Glu Thr Pro Leu Met Lys Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys 
                      580                 585                 590         
          Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Lys Glu Lys Lys Tyr Ser Pro 
                  595                 600                 605             
          Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu 
              610                 615                 620                 
          Ser Thr Asn Leu Gln Glu Ser Leu Arg Ser Lys Glu 
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          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Tyr Ser Trp 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Thr Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ile Phe Pro Leu 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
              210                 215                 220                 
          Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Ser Arg Arg Thr Leu Met 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Leu Ala Gln Met Arg Lys Ile Ser Leu Phe Ser Cys Leu Lys Asp 
                          245                 250                 255     
          Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Gly Asn Gln Phe Gln 
                      260                 265                 270         
          Lys Ala Glu Thr Ile Pro Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln Ile Phe 
                  275                 280                 285             
          Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu 
              290                 295                 300                 
          Leu Asp Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu 
          305                 310                 315                 320 
          Ala Cys Val Ile Gln Gly Val Gly Val Thr Glu Thr Pro Leu Met Lys 
                          325                 330                 335     
          Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu 
                      340                 345                 350         
          Tyr Leu Lys Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg 
                  355                 360                 365             
          Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gln Glu Ser 
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          Leu Arg Ser Lys Glu 
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          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Tyr Ser Trp 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Thr Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ile Phe Pro Leu 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 
                  115                 120                 125             
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          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 
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          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
                  195                 200                 205             
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                          325                 330                 335     
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          Asn Leu Gln Glu Ser Leu Arg Ser Lys Glu 
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          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Tyr Ser Trp 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Thr Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ile Phe Pro Leu 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
              210                 215                 220                 
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Cys Asp Leu Pro Gln Thr 
          225                 230                 235                 240 
          His Ser Leu Gly Ser Arg Arg Thr Leu Met Leu Leu Ala Gln Met Arg 
                          245                 250                 255     
          Lys Ile Ser Leu Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Asp Phe Gly Phe 
                      260                 265                 270         
          Pro Gln Glu Glu Phe Gly Asn Gln Phe Gln Lys Ala Glu Thr Ile Pro 
                  275                 280                 285             
          Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln Ile Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys 
              290                 295                 300                 
          Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu Leu Asp Lys Phe Tyr Thr 
          305                 310                 315                 320 
          Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Gly 
                          325                 330                 335     
          Val Gly Val Thr Glu Thr Pro Leu Met Lys Glu Asp Ser Ile Leu Ala 
                      340                 345                 350         
          Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Lys Glu Lys Lys 
                  355                 360                 365             
          Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser 
              370                 375                 380                 
          Phe Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gln Glu Ser Leu Arg Ser Lys Glu 
          385                 390                 395                 
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          Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser Asn Phe Gln 
          1               5                   10                  15      
          Cys Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg Leu Glu Tyr Cys Leu 
                      20                  25                  30          
          Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys Gln Leu Gln 
                  35                  40                  45              
          Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu Met Leu Gln 
              50                  55                  60                  
          Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser Ser Thr Gly Trp Asn 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val Tyr His Gln Ile Asn 
                          85                  90                  95      
          His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu Lys Glu Asp Phe Thr 
                      100                 105                 110         
          Arg Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys Arg Tyr Tyr Gly Arg 
                  115                 120                 125             
          Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser His Cys Ala Trp Thr 
              130                 135                 140                 
          Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr Phe Ile Asn Arg Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Thr Gly Tyr Leu Arg Asn Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
                          165                 170                 175     
          Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val 
                      180                 185                 190         
          Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln 
                  195                 200                 205             
          Gly Ile Tyr Ser Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 
              210                 215                 220                 
          Pro Asn Leu Leu Ile Tyr Thr Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro 
          225                 230                 235                 240 
          Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 
                          245                 250                 255     
          Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala 
                      260                 265                 270         
          Asn Ile Phe Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                  275                 280                 285             
          Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 
              290                 295                 300                 
          Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 
          305                 310                 315                 320 
          Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 
                          325                 330                 335     
          Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 
                      340                 345                 350         
          Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 
                  355                 360                 365             
          Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 
              370                 375                 380                 
          Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
          385                 390                 395 
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          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Tyr Ser Trp 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Thr Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ile Phe Pro Leu 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
              210                 215                 220                 
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Met Ser Tyr Asn Leu Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser Asn Phe Gln Cys Gln Lys Leu Leu Trp 
                          245                 250                 255     
          Gln Leu Asn Gly Arg Leu Glu Tyr Cys Leu Lys Asp Arg Met Asn Phe 
                      260                 265                 270         
          Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys Gln Leu Gln Gln Phe Gln Lys Glu Asp 
                  275                 280                 285             
          Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu Met Leu Gln Asn Ile Phe Ala Ile Phe 
              290                 295                 300                 
          Arg Gln Asp Ser Ser Ser Thr Gly Trp Asn Glu Thr Ile Val Glu Asn 
          305                 310                 315                 320 
          Leu Leu Ala Asn Val Tyr His Gln Ile Asn His Leu Lys Thr Val Leu 
                          325                 330                 335     
          Glu Glu Lys Leu Glu Lys Glu Asp Phe Thr Arg Gly Lys Leu Met Ser 
                      340                 345                 350         
          Ser Leu His Leu Lys Arg Tyr Tyr Gly Arg Ile Leu His Tyr Leu Lys 
                  355                 360                 365             
          Ala Lys Glu Tyr Ser His Cys Ala Trp Thr Ile Val Arg Val Glu Ile 
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          Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser Asn Phe Gln 
          1               5                   10                  15      
          Cys Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg Leu Glu Tyr Cys Leu 
                      20                  25                  30          
          Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys Gln Leu Gln 
                  35                  40                  45              
          Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu Met Leu Gln 
              50                  55                  60                  
          Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser Ser Thr Gly Trp Asn 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val Tyr His Gln Ile Asn 
                          85                  90                  95      
          His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu Lys Glu Asp Phe Thr 
                      100                 105                 110         
          Arg Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys Arg Tyr Tyr Gly Arg 
                  115                 120                 125             
          Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser His Cys Ala Trp Thr 
              130                 135                 140                 
          Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr Phe Ile Asn Arg Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Thr Gly Tyr Leu Arg Asn Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
                          165                 170                 175     
          Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val 
                      180                 185                 190         
          Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 
                  195                 200                 205             
          Thr Phe Thr Gly Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln 
              210                 215                 220                 
          Gly Leu Glu Trp Met Gly Trp Ile Asn Pro Asp Ser Gly Gly Thr Asn 
          225                 230                 235                 240 
          Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Asn Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr 
                      260                 265                 270         
          Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Gln Pro Leu Gly Tyr Cys Thr Asn 
                  275                 280                 285             
          Gly Val Cys Ser Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 
              290                 295                 300                 
          Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 
                          325                 330                 335     
          Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 
                      340                 345                 350         
          Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 
                  355                 360                 365             
          Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 
              370                 375                 380                 
          Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 
                          405                 410                 415     
          Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 
                      420                 425                 430         
          Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 
                  435                 440                 445             
          Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 
              450                 455                 460                 
          Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 
          465                 470                 475                 480 
          Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Asn Ala Ser Arg Val Val Ser Val Leu 
                          485                 490                 495     
          Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 
                      500                 505                 510         
          Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 
                  515                 520                 525             
          Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 
              530                 535                 540                 
          Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 
          545                 550                 555                 560 
          Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 
                          565                 570                 575     
          Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 
                      580                 585                 590         
          Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 
                  595                 600                 605             
          Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 
              610                 615                 620                 
          His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          625                 630                 635     
          <![CDATA[<210> 47]]>
          <![CDATA[<211> 641]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD40_HC_IgG1_NNAS_dK--(G4S)4--IFN β]]>
          <![CDATA[<400> 47]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Pro Asp Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Asn Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Asp Gln Pro Leu Gly Tyr Cys Thr Asn Gly Val Cys Ser Tyr 
                      100                 105                 110         
          Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 
                  115                 120                 125             
          Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr 
              130                 135                 140                 
          Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 
                          165                 170                 175     
          His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 
                      180                 185                 190         
          Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile 
                  195                 200                 205             
          Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val 
              210                 215                 220                 
          Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 
                          245                 250                 255     
          Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 
                      260                 265                 270         
          Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 
                  275                 280                 285             
          Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 
              290                 295                 300                 
          Tyr Asn Asn Ala Ser Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 
          305                 310                 315                 320 
          Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 
                          325                 330                 335     
          Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 
                      340                 345                 350         
          Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr 
                  355                 360                 365             
          Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 
              370                 375                 380                 
          Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 
          385                 390                 395                 400 
          Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 
                          405                 410                 415     
          Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 
                      420                 425                 430         
          Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 
                  435                 440                 445             
          Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
              450                 455                 460                 
          Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Met Ser Tyr Asn Leu 
          465                 470                 475                 480 
          Leu Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser Asn Phe Gln Cys Gln Lys Leu Leu 
                          485                 490                 495     
          Trp Gln Leu Asn Gly Arg Leu Glu Tyr Cys Leu Lys Asp Arg Met Asn 
                      500                 505                 510         
          Phe Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys Gln Leu Gln Gln Phe Gln Lys Glu 
                  515                 520                 525             
          Asp Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu Met Leu Gln Asn Ile Phe Ala Ile 
              530                 535                 540                 
          Phe Arg Gln Asp Ser Ser Ser Thr Gly Trp Asn Glu Thr Ile Val Glu 
          545                 550                 555                 560 
          Asn Leu Leu Ala Asn Val Tyr His Gln Ile Asn His Leu Lys Thr Val 
                          565                 570                 575     
          Leu Glu Glu Lys Leu Glu Lys Glu Asp Phe Thr Arg Gly Lys Leu Met 
                      580                 585                 590         
          Ser Ser Leu His Leu Lys Arg Tyr Tyr Gly Arg Ile Leu His Tyr Leu 
                  595                 600                 605             
          Lys Ala Lys Glu Tyr Ser His Cys Ala Trp Thr Ile Val Arg Val Glu 
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          Ile Leu Arg Asn Phe Tyr Phe Ile Asn Arg Leu Thr Gly Tyr Leu Arg 
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          Asn 
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          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Pro Asp Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
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          Met Glu Leu Asn Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Asp Gln Pro Leu Gly Tyr Cys Thr Asn Gly Val Cys Ser Tyr 
                      100                 105                 110         
          Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 
                  115                 120                 125             
          Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr 
              130                 135                 140                 
          Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 
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          Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 
                          165                 170                 175     
          His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 
                      180                 185                 190         
          Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile 
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          Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 
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          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Pro Asp Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
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          Met Glu Leu Asn Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
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                      100                 105                 110         
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                  115                 120                 125             
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                          165                 170                 175     
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          Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile 
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          Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 
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          Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 
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          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
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          Met Glu Leu Asn Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
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                      100                 105                 110         
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                      180                 185                 190         
          Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr 
                  195                 200                 205             
          Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val 
              210                 215                 220                 
          Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Ser His His 
          225                 230                 235                 240 
          His His His His 
          <![CDATA[<210> 51]]>
          <![CDATA[<211> 107]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD40抗體VL域]]>
          <![CDATA[<400> 51]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Tyr Ser Trp 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Thr Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ile Phe Pro Leu 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210> 52]]>
          <![CDATA[<211> 11]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD40抗體CDRL1]]>
          <![CDATA[<400> 52]]>
          Arg Ala Ser Gln Gly Ile Tyr Ser Trp Leu Ala 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210> 53]]>
          <![CDATA[<211> 7]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD40抗體CDRL2]]>
          <![CDATA[<400> 53]]>
          Thr Ala Ser Thr Leu Gln Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210> 54]]>
          <![CDATA[<211> 9]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD40抗體CDRL3]]>
          <![CDATA[<400> 54]]>
          Gln Gln Ala Asn Ile Phe Pro Leu Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210> 55]]>
          <![CDATA[<211> 126]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD40抗體VH域]]>
          <![CDATA[<400> 55]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Pro Asp Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Asn Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Asp Gln Pro Leu Gly Tyr Cys Thr Asn Gly Val Cys Ser Tyr 
                      100                 105                 110         
          Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120                 125     
          <![CDATA[<210> 56]]>
          <![CDATA[<211> 6]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD40抗體CDRH1]]>
          <![CDATA[<400> 56]]>
          Thr Gly Tyr Tyr Met His 
          1               5       
          <![CDATA[<210> 57]]>
          <![CDATA[<211> 17]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD40抗體CDRH2]]>
          <![CDATA[<400> 57]]>
          Trp Ile Asn Pro Asp Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210> 58]]>
          <![CDATA[<211> 17]]>
          <![CDATA[<212]]>> PRT]]&gt;
          <br/>&lt;![CDATA[&lt;213&gt; 人工序列]]&gt;
          <br/>
          <br/>
          <br/>&lt;![CDATA[&lt;220&gt; ]]&gt;
          <br/>&lt;![CDATA[&lt;223&gt; 抗CD40抗體CDRH3]]&gt;
          <br/>
          <br/>&lt;![CDATA[&lt;400&gt; 58]]&gt;
          <br/><![CDATA[Asp Gln Pro Leu Gly Tyr Cys Thr Asn Gly Val Cys Ser Tyr Phe Asp 
          1               5                   10                  15      
          Tyr 
          <![CDATA[<210> 59]]>
          <![CDATA[<211> 213]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD40抗體_輕鏈]]>
          <![CDATA[<400> 59]]>
          Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Arg Ser Asn 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Lys Trp Ile Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 
                      100                 105                 110         
          Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr 
                  115                 120                 125             
          Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 
              130                 135                 140                 
          Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 
                          165                 170                 175     
          Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 
                      180                 185                 190         
          Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 
                  195                 200                 205             
          Asn Arg Gly Glu Cys 
              210             
          <![CDATA[<210> 60]]>
          <![CDATA[<211> 232]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 具有信號肽1之抗CD40抗體輕鏈]]>
          <![CDATA[<400> 60]]>
          Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 
          1               5                   10                  15      
          Val His Ser Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val 
                      20                  25                  30          
          Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val 
                  35                  40                  45              
          Arg Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg 
              50                  55                  60                  
          Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg 
          65                  70                  75                  80  
          Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser 
                          85                  90                  95      
          Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Lys 
                      100                 105                 110         
          Trp Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val 
                  115                 120                 125             
          Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys 
              130                 135                 140                 
          Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn 
                          165                 170                 175     
          Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser 
                      180                 185                 190         
          Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys 
                  195                 200                 205             
          Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr 
              210                 215                 220                 
          Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
          225                 230         
          <![CDATA[<210> 61]]>
          <![CDATA[<211> 447]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD40抗體重鏈hIgG2 dK]]>
          <![CDATA[<400> 61]]>
          Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Lys 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn 
                      20                  25                  30          
          Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Val Ile Trp Ser Asp Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Ala Ser Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Asn Phe Phe Asp Tyr Trp 
                      100                 105                 110         
          Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 
                  115                 120                 125             
          Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr 
              130                 135                 140                 
          Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 
          145                 150                 155                 160 
          Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 
                          165                 170                 175     
          Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 
                      180                 185                 190         
          Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp 
                  195                 200                 205             
          His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys 
              210                 215                 220                 
          Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 
                          245                 250                 255     
          Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 
                      260                 265                 270         
          Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 
                  275                 280                 285             
          Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val 
              290                 295                 300                 
          Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 
                          325                 330                 335     
          Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 
                      340                 345                 350         
          Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 
                  355                 360                 365             
          Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 
              370                 375                 380                 
          Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp 
          385                 390                 395                 400 
          Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 
                          405                 410                 415     
          Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 
                      420                 425                 430         
          Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
                  435                 440                 445         
          <![CDATA[<210> 62]]>
          <![CDATA[<211> 466]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 具有信號肽1之抗CD40抗體重鏈hIgG2 dK]]>
          <![CDATA[<400> 62]]>
          Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 
          1               5                   10                  15      
          Val His Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln 
                      20                  25                  30          
          Pro Gly Lys Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 
                  35                  40                  45              
          Ser Ser Asn Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 
              50                  55                  60                  
          Glu Trp Val Ala Val Ile Trp Ser Asp Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 
                          85                  90                  95      
          Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 
                      100                 105                 110         
          Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Ser Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Asn Phe Phe 
                  115                 120                 125             
          Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 
              130                 135                 140                 
          Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 
                          165                 170                 175     
          Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 
                      180                 185                 190         
          Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 
                  195                 200                 205             
          Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys 
              210                 215                 220                 
          Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu 
          225                 230                 235                 240 
          Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala 
                          245                 250                 255     
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                      260                 265                 270         
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                  275                 280                 285             
          Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
              290                 295                 300                 
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe 
          305                 310                 315                 320 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
                          325                 330                 335     
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile 
                      340                 345                 350         
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                  355                 360                 365             
          Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 
              370                 375                 380                 
          Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
          385                 390                 395                 400 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
                          405                 410                 415     
          Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                      420                 425                 430         
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                  435                 440                 445             
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
              450                 455                 460                 
          Pro Gly 
          465     
          <![CDATA[<210> 63]]>
          <![CDATA[<211> 227]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD40抗體Fab區重鏈hIgG2]]>
          <![CDATA[<400> 63]]>
          Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Lys 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn 
                      20                  25                  30          
          Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Val Ile Trp Ser Asp Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Ala Ser Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Asn Phe Phe Asp Tyr Trp 
                      100                 105                 110         
          Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 
                  115                 120                 125             
          Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr 
              130                 135                 140                 
          Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 
          145                 150                 155                 160 
          Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 
                          165                 170                 175     
          Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 
                      180                 185                 190         
          Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp 
                  195                 200                 205             
          His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys 
              210                 215                 220                 
          Cys Val Glu 
          225         
          <![CDATA[<210> 64]]>
          <![CDATA[<211> 246]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 具有信號肽1之抗CD40抗體Fab區重鏈hIgG2]]>
          <![CDATA[<400> 64]]>
          Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 
          1               5                   10                  15      
          Val His Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln 
                      20                  25                  30          
          Pro Gly Lys Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 
                  35                  40                  45              
          Ser Ser Asn Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 
              50                  55                  60                  
          Glu Trp Val Ala Val Ile Trp Ser Asp Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 
                          85                  90                  95      
          Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 
                      100                 105                 110         
          Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Ser Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Asn Phe Phe 
                  115                 120                 125             
          Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 
              130                 135                 140                 
          Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser 
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          Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 
                          165                 170                 175     
          Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 
                      180                 185                 190         
          Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 
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          Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Lys 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn 
                      20                  25                  30          
          Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Val Ile Trp Ser Asp Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
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          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
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          Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 
          145                 150                 155                 160 
          Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 
                          165                 170                 175     
          Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 
                      180                 185                 190         
          Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp 
                  195                 200                 205             
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          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn 
                      20                  25                  30          
          Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Val Ile Trp Ser Asp Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Ala Ser Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Asn Phe Phe Asp Tyr Trp 
                      100                 105                 110         
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              130                 135                 140                 
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          145                 150                 155                 160 
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                          165                 170                 175     
          Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 
                      180                 185                 190         
          Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp 
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          Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Lys 
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                      180                 185                 190         
          Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp 
                  195                 200                 205             
          His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys 
              210                 215                 220                 
          Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 
                          245                 250                 255     
          Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 
                      260                 265                 270         
          Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 
                  275                 280                 285             
          Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val 
              290                 295                 300                 
          Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 
                          325                 330                 335     
          Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 
                      340                 345                 350         
          Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 
                  355                 360                 365             
          Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 
              370                 375                 380                 
          Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp 
          385                 390                 395                 400 
          Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 
                          405                 410                 415     
          Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 
                      420                 425                 430         
          Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Pro 
                  435                 440                 445             
          Ala Pro Ala Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser Asn 
              450                 455                 460                 
          Phe Gln Ser Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg Leu Glu Tyr 
          465                 470                 475                 480 
          Cys Leu Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys Gln 
                          485                 490                 495     
          Leu Gln Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu Met 
                      500                 505                 510         
          Leu Gln Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser Ser Thr Gly 
                  515                 520                 525             
          Trp Asn Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val Tyr His Gln 
              530                 535                 540                 
          Ile Asn His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu Lys Glu Asp 
          545                 550                 555                 560 
          Phe Thr Arg Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys Arg Tyr Tyr 
                          565                 570                 575     
          Gly Arg Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser His Cys Ala 
                      580                 585                 590         
          Trp Thr Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr Phe Ile Asn 
                  595                 600                 605             
          Arg Leu Thr Gly Tyr Leu Arg Asn 
              610                 615     
          <![CDATA[<210> 68]]>
          <![CDATA[<211> 624]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD40_hIgG2_dK_HC--HL--IFN β]]>
          <![CDATA[<400> 68]]>
          Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Lys 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn 
                      20                  25                  30          
          Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Val Ile Trp Ser Asp Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Ala Ser Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Asn Phe Phe Asp Tyr Trp 
                      100                 105                 110         
          Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 
                  115                 120                 125             
          Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr 
              130                 135                 140                 
          Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 
          145                 150                 155                 160 
          Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 
                          165                 170                 175     
          Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 
                      180                 185                 190         
          Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp 
                  195                 200                 205             
          His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys 
              210                 215                 220                 
          Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 
                          245                 250                 255     
          Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 
                      260                 265                 270         
          Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 
                  275                 280                 285             
          Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val 
              290                 295                 300                 
          Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 
                          325                 330                 335     
          Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 
                      340                 345                 350         
          Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 
                  355                 360                 365             
          Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 
              370                 375                 380                 
          Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp 
          385                 390                 395                 400 
          Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 
                          405                 410                 415     
          Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 
                      420                 425                 430         
          Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ala 
                  435                 440                 445             
          Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Ala Ser Tyr Asn Leu Leu 
              450                 455                 460                 
          Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser Asn Phe Gln Cys Gln Lys Leu Leu Trp 
          465                 470                 475                 480 
          Gln Leu Asn Gly Arg Leu Glu Tyr Cys Leu Lys Asp Arg Met Asn Phe 
                          485                 490                 495     
          Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys Gln Leu Gln Gln Phe Gln Lys Glu Asp 
                      500                 505                 510         
          Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu Met Leu Gln Asn Ile Phe Ala Ile Phe 
                  515                 520                 525             
          Arg Gln Asp Ser Ser Ser Thr Gly Trp Asn Glu Thr Ile Val Glu Asn 
              530                 535                 540                 
          Leu Leu Ala Asn Val Tyr His Gln Ile Asn His Leu Lys Thr Val Leu 
          545                 550                 555                 560 
          Glu Glu Lys Leu Glu Lys Glu Asp Phe Thr Arg Gly Lys Leu Met Ser 
                          565                 570                 575     
          Ser Leu His Leu Lys Arg Tyr Tyr Gly Arg Ile Leu His Tyr Leu Lys 
                      580                 585                 590         
          Ala Lys Glu Tyr Ser His Cys Ala Trp Thr Ile Val Arg Val Glu Ile 
                  595                 600                 605             
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              610                 615                 620                 
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          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn 
                      20                  25                  30          
          Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Val Ile Trp Ser Asp Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Ala Ser Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Asn Phe Phe Asp Tyr Trp 
                      100                 105                 110         
          Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 
                  115                 120                 125             
          Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr 
              130                 135                 140                 
          Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 
          145                 150                 155                 160 
          Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 
                          165                 170                 175     
          Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 
                      180                 185                 190         
          Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp 
                  195                 200                 205             
          His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys 
              210                 215                 220                 
          Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 
                          245                 250                 255     
          Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 
                      260                 265                 270         
          Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 
                  275                 280                 285             
          Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val 
              290                 295                 300                 
          Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 
                          325                 330                 335     
          Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 
                      340                 345                 350         
          Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 
                  355                 360                 365             
          Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 
              370                 375                 380                 
          Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp 
          385                 390                 395                 400 
          Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 
                          405                 410                 415     
          Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 
                      420                 425                 430         
          Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ala 
                  435                 440                 445             
          Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Ala Ser Tyr Asn Leu Leu 
              450                 455                 460                 
          Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser Asn Phe Gln Ser Gln Lys Leu Leu Trp 
          465                 470                 475                 480 
          Gln Leu Asn Gly Arg Leu Glu Tyr Cys Leu Lys Asp Arg Met Asn Phe 
                          485                 490                 495     
          Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys Gln Leu Gln Gln Phe Gln Lys Glu Asp 
                      500                 505                 510         
          Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu Met Leu Gln Asn Ile Phe Ala Ile Phe 
                  515                 520                 525             
          Arg Gln Asp Ser Ser Ser Thr Gly Trp Asn Glu Thr Ile Val Glu Asn 
              530                 535                 540                 
          Leu Leu Ala Asn Val Tyr His Gln Ile Asn His Leu Lys Thr Val Leu 
          545                 550                 555                 560 
          Glu Glu Lys Leu Glu Lys Glu Asp Phe Thr Arg Gly Lys Leu Met Ser 
                          565                 570                 575     
          Ser Leu His Leu Lys Arg Tyr Tyr Gly Arg Ile Leu His Tyr Leu Lys 
                      580                 585                 590         
          Ala Lys Glu Tyr Ser His Cys Ala Trp Thr Ile Val Arg Val Glu Ile 
                  595                 600                 605             
          Leu Arg Asn Phe Tyr Phe Ile Asn Arg Leu Thr Gly Tyr Leu Arg Asn 
              610                 615                 620                 
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          Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Arg Ser Asn 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Lys Trp Ile Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 
                      100                 105                 110         
          Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr 
                  115                 120                 125             
          Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 
              130                 135                 140                 
          Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 
                          165                 170                 175     
          Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 
                      180                 185                 190         
          Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 
                  195                 200                 205             
          Asn Arg Gly Glu Cys Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys 
              210                 215                 220                 
          Ala Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Ala Met Ser Tyr 
          225                 230                 235                 240 
          Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser Asn Phe Gln Ser Gln Lys 
                          245                 250                 255     
          Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg Leu Glu Tyr Cys Leu Lys Asp Arg 
                      260                 265                 270         
          Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys Gln Leu Gln Gln Phe Gln 
                  275                 280                 285             
          Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu Met Leu Gln Asn Ile Phe 
              290                 295                 300                 
          Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser Ser Thr Gly Trp Asn Glu Thr Ile 
          305                 310                 315                 320 
          Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val Tyr His Gln Ile Asn His Leu Lys 
                          325                 330                 335     
          Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu Lys Glu Asp Phe Thr Arg Gly Lys 
                      340                 345                 350         
          Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys Arg Tyr Tyr Gly Arg Ile Leu His 
                  355                 360                 365             
          Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser His Cys Ala Trp Thr Ile Val Arg 
              370                 375                 380                 
          Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr Phe Ile Asn Arg Leu Thr Gly Tyr 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Arg Asn 
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          <![CDATA[<400> 71]]>
          Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Arg Ser Asn 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Lys Trp Ile Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 
                      100                 105                 110         
          Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr 
                  115                 120                 125             
          Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 
              130                 135                 140                 
          Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 
                          165                 170                 175     
          Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 
                      180                 185                 190         
          Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 
                  195                 200                 205             
          Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 
              210                 215                 220                 
          Gly Gly Gly Ser Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Ser Asn Phe Gln Ser Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg Leu 
                          245                 250                 255     
          Glu Tyr Cys Leu Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu Ile 
                      260                 265                 270         
          Lys Gln Leu Gln Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile Tyr 
                  275                 280                 285             
          Glu Met Leu Gln Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser Ser 
              290                 295                 300                 
          Thr Gly Trp Asn Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val Tyr 
          305                 310                 315                 320 
          His Gln Ile Asn His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu Lys 
                          325                 330                 335     
          Glu Asp Phe Thr Arg Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys Arg 
                      340                 345                 350         
          Tyr Tyr Gly Arg Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser His 
                  355                 360                 365             
          Cys Ala Trp Thr Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr Phe 
              370                 375                 380                 
          Ile Asn Arg Leu Thr Gly Tyr Leu Arg Asn 
          385                 390                 
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          Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Lys 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn 
                      20                  25                  30          
          Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Val Ile Trp Ser Asp Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Ala Ser Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Asn Phe Phe Asp Tyr Trp 
                      100                 105                 110         
          Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 
                  115                 120                 125             
          Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr 
              130                 135                 140                 
          Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 
          145                 150                 155                 160 
          Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 
                          165                 170                 175     
          Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 
                      180                 185                 190         
          Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp 
                  195                 200                 205             
          His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys 
              210                 215                 220                 
          Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 
                          245                 250                 255     
          Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 
                      260                 265                 270         
          Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 
                  275                 280                 285             
          Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val 
              290                 295                 300                 
          Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 
                          325                 330                 335     
          Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 
                      340                 345                 350         
          Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 
                  355                 360                 365             
          Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 
              370                 375                 380                 
          Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp 
          385                 390                 395                 400 
          Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 
                          405                 410                 415     
          Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 
                      420                 425                 430         
          Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly 
                  435                 440                 445             
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Cys Asp Leu Pro Gln Thr His 
              450                 455                 460                 
          Ser Leu Gly Ser Arg Arg Thr Leu Met Leu Leu Ala Gln Met Arg Lys 
          465                 470                 475                 480 
          Ile Ser Leu Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Asp Phe Gly Phe Pro 
                          485                 490                 495     
          Gln Glu Glu Phe Gly Asn Gln Phe Gln Lys Ala Glu Thr Ile Pro Val 
                      500                 505                 510         
          Leu His Glu Met Ile Gln Gln Ile Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp 
                  515                 520                 525             
          Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu Leu Asp Lys Phe Tyr Thr Glu 
              530                 535                 540                 
          Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Gly Val 
          545                 550                 555                 560 
          Gly Val Thr Glu Thr Pro Leu Met Lys Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val 
                          565                 570                 575     
          Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Lys Glu Lys Lys Tyr 
                      580                 585                 590         
          Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe 
                  595                 600                 605             
          Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gln Glu Ser Leu Arg Ser Lys Glu 
              610                 615                 620         
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          Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Lys 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn 
                      20                  25                  30          
          Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Val Ile Trp Ser Asp Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Ala Ser Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Asn Phe Phe Asp Tyr Trp 
                      100                 105                 110         
          Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 
                  115                 120                 125             
          Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr 
              130                 135                 140                 
          Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 
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                          165                 170                 175     
          Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 
                      180                 185                 190         
          Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp 
                  195                 200                 205             
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          Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 
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                      420                 425                 430         
          Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly 
                  435                 440                 445             
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Cys Asp 
              450                 455                 460                 
          Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Ser Arg Arg Thr Leu Met Leu Leu 
          465                 470                 475                 480 
          Ala Gln Met Arg Lys Ile Ser Leu Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His 
                          485                 490                 495     
          Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Gly Asn Gln Phe Gln Lys Ala 
                      500                 505                 510         
          Glu Thr Ile Pro Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln Ile Phe Asn Leu 
                  515                 520                 525             
          Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu Leu Asp 
              530                 535                 540                 
          Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys 
          545                 550                 555                 560 
          Val Ile Gln Gly Val Gly Val Thr Glu Thr Pro Leu Met Lys Glu Asp 
                          565                 570                 575     
          Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu 
                      580                 585                 590         
          Lys Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu 
                  595                 600                 605             
          Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gln Glu Ser Leu Arg 
              610                 615                 620                 
          Ser Lys Glu 
          625         
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          Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Lys 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn 
                      20                  25                  30          
          Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Val Ile Trp Ser Asp Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Ala Ser Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Asn Phe Phe Asp Tyr Trp 
                      100                 105                 110         
          Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 
                  115                 120                 125             
          Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr 
              130                 135                 140                 
          Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 
          145                 150                 155                 160 
          Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 
                          165                 170                 175     
          Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 
                      180                 185                 190         
          Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp 
                  195                 200                 205             
          His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys 
              210                 215                 220                 
          Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 
                          245                 250                 255     
          Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 
                      260                 265                 270         
          Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 
                  275                 280                 285             
          Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val 
              290                 295                 300                 
          Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 
                          325                 330                 335     
          Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 
                      340                 345                 350         
          Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 
                  355                 360                 365             
          Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 
              370                 375                 380                 
          Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp 
          385                 390                 395                 400 
          Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 
                          405                 410                 415     
          Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 
                      420                 425                 430         
          Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly 
                  435                 440                 445             
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 
              450                 455                 460                 
          Gly Gly Ser Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Ser Arg Arg 
          465                 470                 475                 480 
          Thr Leu Met Leu Leu Ala Gln Met Arg Lys Ile Ser Leu Phe Ser Cys 
                          485                 490                 495     
          Leu Lys Asp Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Gly Asn 
                      500                 505                 510         
          Gln Phe Gln Lys Ala Glu Thr Ile Pro Val Leu His Glu Met Ile Gln 
                  515                 520                 525             
          Gln Ile Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asp 
              530                 535                 540                 
          Glu Thr Leu Leu Asp Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn 
          545                 550                 555                 560 
          Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Gly Val Gly Val Thr Glu Thr Pro 
                          565                 570                 575     
          Leu Met Lys Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg 
                      580                 585                 590         
          Ile Thr Leu Tyr Leu Lys Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu 
                  595                 600                 605             
          Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Thr Asn Leu 
              610                 615                 620                 
          Gln Glu Ser Leu Arg Ser Lys Glu 
          625                 630         
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          Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Lys 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn 
                      20                  25                  30          
          Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Val Ile Trp Ser Asp Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Ala Ser Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Asn Phe Phe Asp Tyr Trp 
                      100                 105                 110         
          Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 
                  115                 120                 125             
          Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr 
              130                 135                 140                 
          Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 
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          Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 
                          165                 170                 175     
          Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 
                      180                 185                 190         
          Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp 
                  195                 200                 205             
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                  355                 360                 365             
          Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 
              370                 375                 380                 
          Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp 
          385                 390                 395                 400 
          Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 
                          405                 410                 415     
          Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 
                      420                 425                 430         
          Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ala 
                  435                 440                 445             
          Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Ala Cys Asp Leu Pro Gln 
              450                 455                 460                 
          Thr His Ser Leu Gly Ser Arg Arg Thr Leu Met Leu Leu Ala Gln Met 
          465                 470                 475                 480 
          Arg Lys Ile Ser Leu Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Asp Phe Gly 
                          485                 490                 495     
          Phe Pro Gln Glu Glu Phe Gly Asn Gln Phe Gln Lys Ala Glu Thr Ile 
                      500                 505                 510         
          Pro Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln Ile Phe Asn Leu Phe Ser Thr 
                  515                 520                 525             
          Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu Leu Asp Lys Phe Tyr 
              530                 535                 540                 
          Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln 
          545                 550                 555                 560 
          Gly Val Gly Val Thr Glu Thr Pro Leu Met Lys Glu Asp Ser Ile Leu 
                          565                 570                 575     
          Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Lys Glu Lys 
                      580                 585                 590         
          Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg 
                  595                 600                 605             
          Ser Phe Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gln Glu Ser Leu Arg Ser Lys Glu 
              610                 615                 620                 
          <![CDATA[<210> 76]]>
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          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
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          <![CDATA[<400> 76]]>
          Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser Asn Phe Gln Cys 
          1               5                   10                  15      
          Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg Leu Glu Tyr Cys Leu Lys 
                      20                  25                  30          
          Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys Gln Leu Gln Gln 
                  35                  40                  45              
          Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu Met Leu Gln Asn 
              50                  55                  60                  
          Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser Ser Thr Gly Trp Asn Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val Tyr His Gln Ile Asn His 
                          85                  90                  95      
          Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu Lys Glu Asp Phe Thr Arg 
                      100                 105                 110         
          Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys Arg Tyr Tyr Gly Arg Ile 
                  115                 120                 125             
          Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser His Cys Ala Trp Thr Ile 
              130                 135                 140                 
          Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr Phe Ile Asn Arg Leu Thr 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Tyr Leu Arg Asn 
                          165 
          <![CDATA[<210> 77]]>
          <![CDATA[<211> 165]]>
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          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> IFN β dM C17S]]>
          <![CDATA[<400> 77]]>
          Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser Asn Phe Gln Ser 
          1               5                   10                  15      
          Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg Leu Glu Tyr Cys Leu Lys 
                      20                  25                  30          
          Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys Gln Leu Gln Gln 
                  35                  40                  45              
          Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu Met Leu Gln Asn 
              50                  55                  60                  
          Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser Ser Thr Gly Trp Asn Glu 
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          Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val Tyr His Gln Ile Asn His 
                          85                  90                  95      
          Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu Lys Glu Asp Phe Thr Arg 
                      100                 105                 110         
          Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys Arg Tyr Tyr Gly Arg Ile 
                  115                 120                 125             
          Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser His Cys Ala Trp Thr Ile 
              130                 135                 140                 
          Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr Phe Ile Asn Arg Leu Thr 
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          Gly Tyr Leu Arg Asn 
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          agaagcacca gcgagtctac agccgctctg ggctgtctgg tcaaggacta ctttcctgag     540
          cctgtgaccg tgtcctggaa tagcggagca ctgacatccg gcgtgcacac atttccagct     600
          gtgctgcaga gcagcggcct gtactctctg tctagcgtgg tcaccgtgcc tagcagcaat     660
          ttcggcaccc agacctacac ctgtaacgtg gaccacaagc ctagcaacac caaggtggac     720
          aagaccgtgg aacggaagtg ctgcgtggaa tgccctcctt gtcctgctcc tccagtggcc     780
          ggaccttccg tgtttctgtt ccctccaaag cctaaggaca ccctgatgat cagcagaacc     840
          cctgaagtga cctgcgtggt ggtggatgtg tctcacgagg atcccgaggt gcagttcaat     900
          tggtacgtgg acggcgtgga agtgcacaac gccaagacca agcctagaga ggaacagttc     960
          aacagcacct tcagagtggt gtccgtgctg accgtggtgc atcaggactg gctgaacggc    1020
          aaagagtaca agtgcaaggt gtccaacaag ggcctgcctg ctcctatcga gaaaaccatc    1080
          agcaagacca aaggccagcc tcgcgagcct caggtttaca cactgcctcc aagccgggaa    1140
          gagatgacca agaatcaggt gtccctgacc tgcctcgtga agggcttcta cccttccgat    1200
          atcgccgtgg aatgggagag caatggccag cctgagaaca actacaagac cacacctcct    1260
          atgctggaca gcgacggctc attcttcctg tacagcaagc tgacagtgga caagtccaga    1320
          tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgttct gtgatgcacg aggccctgca caaccactac    1380
          acccagaagt ctctgtctct gagccctggc gctgaagccg ctgctaaaga agctgccgcc    1440
          aaggccatga gctacaacct gctgggcttt ctgcagcgga gcagcaactt ccagtgccag    1500
          aaactgctgt ggcagctgaa tggccggctg gaatactgcc tgaaggaccg gatgaacttc    1560
          gacatccccg aggaaatcaa gcagctgcag cagttccaga aagaggacgc cgctctgacc    1620
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          aaaaccgtgc tggaagagaa gctggaaaaa gaggacttca cccggggcaa gctgatgagc    1800
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          Leu Gly Cys Asp Leu Pro Gln Asn His Gly Leu Leu Ser Arg Asn Thr 
          1               5                   10                  15      
          Leu Val Leu Leu His Gln Met Arg Arg Ile Ser Pro Phe Leu Cys Leu 
                      20                  25                  30          
          Lys Asp Arg Arg Asp Phe Arg Phe Pro Gln Glu Met Val Lys Gly Ser 
                  35                  40                  45              
          Gln Leu Gln Lys Ala His Val Met Ser Val Leu His Glu Met Leu Gln 
              50                  55                  60                  
          Gln Ile Phe Ser Leu Phe His Thr Glu Arg Ser Ser Ala Ala Trp Asn 
          65                  70                  75                  80  
          Met Thr Leu Leu Asp Gln Leu His Thr Gly Leu His Gln Gln Leu Gln 
                          85                  90                  95      
          His Leu Glu Thr Cys Leu Leu Gln Val Val Gly Glu Gly Glu Ser Ala 
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                  115                 120                 125             
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          Leu Asp Leu Lys Leu Ile Ile Phe Gln Gln Arg Gln Val Asn Gln Glu 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Lys Leu Leu Asn Lys Leu Gln Thr Leu Ser Ile Gln Gln Cys 
                      20                  25                  30          
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                  35                  40                  45              
          Gln Gln Tyr Gln Lys Gly His Thr Leu Ala Ile Leu His Glu Met Leu 
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                          85                  90                  95      
          Glu Tyr Leu Glu Ala Leu Met Gly Leu Glu Ala Glu Lys Leu Ser Gly 
                      100                 105                 110         
          Thr Leu Gly Ser Asp Asn Leu Arg Leu Gln Val Lys Met Tyr Phe Arg 
                  115                 120                 125             
          Arg Ile His Asp Tyr Leu Glu Asn Gln Asp Tyr Ser Thr Cys Ala Trp 
              130                 135                 140                 
          Ala Ile Val Gln Val Glu Ile Ser Arg Cys Leu Phe Phe Val Phe Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Thr Glu Lys Leu Ser Lys Gln Gly Arg Pro Leu Asn Asp Met Lys 
                          165                 170                 175     
          Gln Glu Leu Thr Thr Glu Phe Arg Ser Pro Arg 
                      180                 185         
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          <![CDATA[<400> 81]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Pro Asp Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Asn Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Asp Gln Pro Leu Gly Tyr Cys Thr Asn Gly Val Cys Ser Tyr 
                      100                 105                 110         
          Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 
                  115                 120                 125             
          Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr 
              130                 135                 140                 
          Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 
                          165                 170                 175     
          His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 
                      180                 185                 190         
          Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr 
                  195                 200                 205             
          Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val 
              210                 215                 220                 
          Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 
          225                 230                 235                 240 
          Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 
                          245                 250                 255     
          Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 
                      260                 265                 270         
          His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 
                  275                 280                 285             
          Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr 
              290                 295                 300                 
          Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn 
          305                 310                 315                 320 
          Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro 
                          325                 330                 335     
          Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 
                      340                 345                 350         
          Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 
                  355                 360                 365             
          Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 
              370                 375                 380                 
          Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 
                          405                 410                 415     
          Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 
                      420                 425                 430         
          Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 
                  435                 440                 445             
          Ser Pro Gly Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Ala Cys 
              450                 455                 460                 
          Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Ser Arg Arg Thr Leu Met Leu 
          465                 470                 475                 480 
          Leu Ala Gln Met Arg Lys Ile Ser Leu Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg 
                          485                 490                 495     
          His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Gly Asn Gln Phe Gln Lys 
                      500                 505                 510         
          Ala Glu Thr Ile Pro Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln Ile Phe Asn 
                  515                 520                 525             
          Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu Leu 
              530                 535                 540                 
          Asp Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala 
          545                 550                 555                 560 
          Cys Val Ile Gln Gly Val Gly Val Thr Glu Thr Pro Leu Met Lys Glu 
                          565                 570                 575     
          Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr 
                      580                 585                 590         
          Leu Lys Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala 
                  595                 600                 605             
          Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gln Glu Ser Leu 
              610                 615                 620                 
          Arg Ser Lys Glu 
          625             
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          <![CDATA[<223> 抗CD40_LC-衍生物--HL--IFN α2A]]>
          <![CDATA[<400> 82]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Tyr Ser Trp 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Thr Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ile Phe Pro Leu 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Gly Glu Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ala Glu Ala 
              210                 215                 220                 
          Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Ala Cys Asp Leu Pro Gln Thr His 
          225                 230                 235                 240 
          Ser Leu Gly Ser Arg Arg Thr Leu Met Leu Leu Ala Gln Met Arg Lys 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Leu Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Asp Phe Gly Phe Pro 
                      260                 265                 270         
          Gln Glu Glu Phe Gly Asn Gln Phe Gln Lys Ala Glu Thr Ile Pro Val 
                  275                 280                 285             
          Leu His Glu Met Ile Gln Gln Ile Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp 
              290                 295                 300                 
          Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu Leu Asp Lys Phe Tyr Thr Glu 
          305                 310                 315                 320 
          Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Gly Val 
                          325                 330                 335     
          Gly Val Thr Glu Thr Pro Leu Met Lys Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val 
                      340                 345                 350         
          Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Lys Glu Lys Lys Tyr 
                  355                 360                 365             
          Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe 
              370                 375                 380                 
          Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gln Glu Ser Leu Arg Ser Lys Glu 
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          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Tyr Ser Trp 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Thr Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ile Phe Pro Leu 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
              210                 215                 220                 
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Asp Pro Tyr Val Lys 
          225                 230                 235                 240 
          Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn Ala Gly His Ser Asp Val 
                          245                 250                 255     
          Ala Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile Leu Lys Asn Trp Lys Glu 
                      260                 265                 270         
          Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln Ile Val Ser Phe Tyr Phe 
                  275                 280                 285             
          Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln Ser Ile Gln Lys Ser Val 
              290                 295                 300                 
          Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys Phe Phe Asn Ser Asn Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr Asn Tyr Ser Val Thr Asp 
                          325                 330                 335     
          Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu Leu Ile Gln Val Met Ala 
                      340                 345                 350         
          Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly Lys Arg Lys Arg Ser Gln Met 
                  355                 360                 365             
          Leu Phe Arg Gly Arg Arg Ala Ser Gln 
              370                 375         
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          <![CDATA[<400> 84]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Pro Asp Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Asn Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Asp Gln Pro Leu Gly Tyr Cys Thr Asn Gly Val Cys Ser Tyr 
                      100                 105                 110         
          Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 
                  115                 120                 125             
          Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr 
              130                 135                 140                 
          Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 
                          165                 170                 175     
          His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 
                      180                 185                 190         
          Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr 
                  195                 200                 205             
          Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val 
              210                 215                 220                 
          Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 
          225                 230                 235                 240 
          Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 
                          245                 250                 255     
          Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 
                      260                 265                 270         
          His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 
                  275                 280                 285             
          Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr 
              290                 295                 300                 
          Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn 
          305                 310                 315                 320 
          Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro 
                          325                 330                 335     
          Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 
                      340                 345                 350         
          Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 
                  355                 360                 365             
          Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 
              370                 375                 380                 
          Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 
                          405                 410                 415     
          Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 
                      420                 425                 430         
          Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 
                  435                 440                 445             
          Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 
              450                 455                 460                 
          Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu 
          465                 470                 475                 480 
          Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn Ala Gly His Ser Asp Val Ala Asp Asn 
                          485                 490                 495     
          Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp 
                      500                 505                 510         
          Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe 
                  515                 520                 525             
          Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile 
              530                 535                 540                 
          Lys Glu Asp Met Asn Val Lys Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg 
          545                 550                 555                 560 
          Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val 
                          565                 570                 575     
          Gln Arg Lys Ala Ile His Glu Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser 
                      580                 585                 590         
          Pro Ala Ala Lys Thr Gly Lys Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg 
                  595                 600                 605             
          Gly Arg Arg Ala Ser Gln 
              610                 
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          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<400> 85]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Tyr Ser Trp 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Thr Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ile Phe Pro Leu 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
              210                 215                 220                 
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Val Pro Val Ala Arg Leu 
          225                 230                 235                 240 
          His Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys His Ile Ala Gln Phe Lys 
                          245                 250                 255     
          Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala 
                      260                 265                 270         
          Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp Cys Arg Cys His Ser Arg Leu 
                  275                 280                 285             
          Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro 
              290                 295                 300                 
          Met Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala 
          305                 310                 315                 320 
          Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Val Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu 
                          325                 330                 335     
          His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Phe Arg Ala Cys Ile Gln Pro 
                      340                 345                 350         
          Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu 
                  355                 360                 365             
          Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu 
              370                 375                 380                 
          Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn 
          385                 390                 395                 400 
          Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val 
                          405                 
          <![CDATA[<210> 86]]>
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          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD40_hIgG2 dK_HC--(G4S)4--IFN λ 2]]>
          <![CDATA[<400> 86]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Pro Asp Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Asn Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Asp Gln Pro Leu Gly Tyr Cys Thr Asn Gly Val Cys Ser Tyr 
                      100                 105                 110         
          Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 
                  115                 120                 125             
          Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr 
              130                 135                 140                 
          Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 
                          165                 170                 175     
          His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 
                      180                 185                 190         
          Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr 
                  195                 200                 205             
          Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val 
              210                 215                 220                 
          Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 
          225                 230                 235                 240 
          Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 
                          245                 250                 255     
          Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 
                      260                 265                 270         
          His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 
                  275                 280                 285             
          Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr 
              290                 295                 300                 
          Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn 
          305                 310                 315                 320 
          Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro 
                          325                 330                 335     
          Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 
                      340                 345                 350         
          Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 
                  355                 360                 365             
          Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 
              370                 375                 380                 
          Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 
                          405                 410                 415     
          Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 
                      420                 425                 430         
          Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 
                  435                 440                 445             
          Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 
              450                 455                 460                 
          Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Val Pro Val Ala Arg Leu His Gly Ala 
          465                 470                 475                 480 
          Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser 
                          485                 490                 495     
          Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu 
                      500                 505                 510         
          Ser Leu Leu Leu Lys Asp Cys Arg Cys His Ser Arg Leu Phe Pro Arg 
                  515                 520                 525             
          Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Met Ala Leu 
              530                 535                 540                 
          Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp 
          545                 550                 555                 560 
          Thr Asp Pro Ala Leu Val Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu 
                          565                 570                 575     
          His His Ile Leu Ser Gln Phe Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr 
                      580                 585                 590         
          Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu 
                  595                 600                 605             
          Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val 
              610                 615                 620                 
          Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala 
          625                 630                 635                 640 
          Ser Gly Asp Leu Cys Val 
                          645     
          <![CDATA[<210> 87]]>
          <![CDATA[<211> 408]]>
          <![CDATA[<212> PR]]>T
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          <![CDATA[<223> 抗CD40_LC--(G4S)—IFN ω]]>
          <![CDATA[<400> 87]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Tyr Ser Trp 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Thr Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ile Phe Pro Leu 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
              210                 215                 220                 
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Gly Cys Asp Leu Pro 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Asn His Gly Leu Leu Ser Arg Asn Thr Leu Val Leu Leu His Gln 
                          245                 250                 255     
          Met Arg Arg Ile Ser Pro Phe Leu Cys Leu Lys Asp Arg Arg Asp Phe 
                      260                 265                 270         
          Arg Phe Pro Gln Glu Met Val Lys Gly Ser Gln Leu Gln Lys Ala His 
                  275                 280                 285             
          Val Met Ser Val Leu His Glu Met Leu Gln Gln Ile Phe Ser Leu Phe 
              290                 295                 300                 
          His Thr Glu Arg Ser Ser Ala Ala Trp Asn Met Thr Leu Leu Asp Gln 
          305                 310                 315                 320 
          Leu His Thr Gly Leu His Gln Gln Leu Gln His Leu Glu Thr Cys Leu 
                          325                 330                 335     
          Leu Gln Val Val Gly Glu Gly Glu Ser Ala Gly Ala Ile Ser Ser Pro 
                      340                 345                 350         
          Ala Leu Thr Leu Arg Arg Tyr Phe Gln Gly Ile Arg Val Tyr Leu Lys 
                  355                 360                 365             
          Glu Lys Lys Tyr Ser Asp Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Met Glu Ile 
              370                 375                 380                 
          Met Lys Ser Leu Phe Leu Ser Thr Asn Met Gln Glu Arg Leu Arg Ser 
          385                 390                 395                 400 
          Lys Asp Arg Asp Leu Gly Ser Ser 
                          405             
          <![CDATA[<210> 88]]>
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          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<400> 88]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Pro Asp Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Asn Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Asp Gln Pro Leu Gly Tyr Cys Thr Asn Gly Val Cys Ser Tyr 
                      100                 105                 110         
          Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 
                  115                 120                 125             
          Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr 
              130                 135                 140                 
          Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 
                          165                 170                 175     
          His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 
                      180                 185                 190         
          Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr 
                  195                 200                 205             
          Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val 
              210                 215                 220                 
          Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 
          225                 230                 235                 240 
          Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 
                          245                 250                 255     
          Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 
                      260                 265                 270         
          His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 
                  275                 280                 285             
          Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr 
              290                 295                 300                 
          Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn 
          305                 310                 315                 320 
          Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro 
                          325                 330                 335     
          Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 
                      340                 345                 350         
          Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 
                  355                 360                 365             
          Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 
              370                 375                 380                 
          Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 
                          405                 410                 415     
          Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 
                      420                 425                 430         
          Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 
                  435                 440                 445             
          Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 
              450                 455                 460                 
          Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Asp Leu Lys Leu Ile Ile Phe Gln 
          465                 470                 475                 480 
          Gln Arg Gln Val Asn Gln Glu Ser Leu Lys Leu Leu Asn Lys Leu Gln 
                          485                 490                 495     
          Thr Leu Ser Ile Gln Gln Cys Leu Pro His Arg Lys Asn Phe Leu Leu 
                      500                 505                 510         
          Pro Gln Lys Ser Leu Ser Pro Gln Gln Tyr Gln Lys Gly His Thr Leu 
                  515                 520                 525             
          Ala Ile Leu His Glu Met Leu Gln Gln Ile Phe Ser Leu Phe Arg Ala 
              530                 535                 540                 
          Asn Ile Ser Leu Asp Gly Trp Glu Glu Asn His Thr Glu Lys Phe Leu 
          545                 550                 555                 560 
          Ile Gln Leu His Gln Gln Leu Glu Tyr Leu Glu Ala Leu Met Gly Leu 
                          565                 570                 575     
          Glu Ala Glu Lys Leu Ser Gly Thr Leu Gly Ser Asp Asn Leu Arg Leu 
                      580                 585                 590         
          Gln Val Lys Met Tyr Phe Arg Arg Ile His Asp Tyr Leu Glu Asn Gln 
                  595                 600                 605             
          Asp Tyr Ser Thr Cys Ala Trp Ala Ile Val Gln Val Glu Ile Ser Arg 
              610                 615                 620                 
          Cys Leu Phe Phe Val Phe Ser Leu Thr Glu Lys Leu Ser Lys Gln Gly 
          625                 630                 635                 640 
          Arg Pro Leu Asn Asp Met Lys Gln Glu Leu Thr Thr Glu Phe Arg Ser 
                          645                 650                 655     
          Pro Arg 
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          <![CDATA[<400> 89]]>
          Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 
          1               5                   10                  15      
          Val His Ser Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala 
                      20                  25                  30          
          Pro Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu 
                  35                  40                  45              
          Thr Gly Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu 
              50                  55                  60                  
          Glu Trp Leu Gly Met Ile Trp Gly Asp Gly Asn Thr Asp Tyr Asn Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Ala Leu Lys Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln 
                          85                  90                  95      
          Val Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu His Thr Asp Asp Thr Ala Arg Tyr 
                      100                 105                 110         
          Tyr Cys Ala Arg Glu Arg Asp Tyr Arg Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 
              130                 135                 140                 
          Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 
                          165                 170                 175     
          Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 
                      180                 185                 190         
          Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 
                  195                 200                 205             
          Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro 
              210                 215                 220                 
          Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu 
          225                 230                 235                 240 
          Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu 
                          245                 250                 255     
          Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 
                      260                 265                 270         
          Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln 
                  275                 280                 285             
          Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 
              290                 295                 300                 
          Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 
                          325                 330                 335     
          Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 
                      340                 345                 350         
          Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 
                  355                 360                 365             
          Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 
              370                 375                 380                 
          Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 
          385                 390                 395                 400 
          Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly 
                          405                 410                 415     
          Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 
                      420                 425                 430         
          Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 
                  435                 440                 445             
          His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
              450                 455                 460 
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          Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 
          1               5                   10                  15      
          Val His Ser Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser 
                      20                  25                  30          
          Val Gly Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile His 
                  35                  40                  45              
          Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu 
              50                  55                  60                  
          Leu Val Tyr Tyr Thr Thr Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu 
                          85                  90                  95      
          Gln Pro Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Thr 
                      100                 105                 110         
          Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val 
                  115                 120                 125             
          Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys 
              130                 135                 140                 
          Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn 
                          165                 170                 175     
          Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser 
                      180                 185                 190         
          Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys 
                  195                 200                 205             
          Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr 
              210                 215                 220                 
          Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
          225                 230         
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          Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 
          1               5                   10                  15      
          Val His Ser Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala 
                      20                  25                  30          
          Pro Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu 
                  35                  40                  45              
          Thr Gly Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu 
              50                  55                  60                  
          Glu Trp Leu Gly Met Ile Trp Gly Asp Gly Asn Thr Asp Tyr Asn Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Ala Leu Lys Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln 
                          85                  90                  95      
          Val Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu His Thr Asp Asp Thr Ala Arg Tyr 
                      100                 105                 110         
          Tyr Cys Ala Arg Glu Arg Asp Tyr Arg Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 
              130                 135                 140                 
          Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 
                          165                 170                 175     
          Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 
                      180                 185                 190         
          Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 
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          Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro 
              210                 215                 220                 
          Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu 
          225                 230                 235                 240 
          Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu 
                          245                 250                 255     
          Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 
                      260                 265                 270         
          Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln 
                  275                 280                 285             
          Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 
              290                 295                 300                 
          Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu 
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          Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 
                          325                 330                 335     
          Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 
                      340                 345                 350         
          Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 
                  355                 360                 365             
          Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 
              370                 375                 380                 
          Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 
          385                 390                 395                 400 
          Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly 
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          Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 
                      420                 425                 430         
          Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 
                  435                 440                 445             
          His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly 
              450                 455                 460                 
          Ser Gly Gly Gly Gly Ser Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly 
          465                 470                 475                 480 
          Ser Arg Arg Thr Leu Met Leu Leu Ala Gln Met Arg Lys Ile Ser Leu 
                          485                 490                 495     
          Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu 
                      500                 505                 510         
          Phe Gly Asn Gln Phe Gln Lys Ala Glu Thr Ile Pro Val Leu His Glu 
                  515                 520                 525             
          Met Ile Gln Gln Ile Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala 
              530                 535                 540                 
          Ala Trp Asp Glu Thr Leu Leu Asp Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr Gln 
          545                 550                 555                 560 
          Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Gly Val Gly Val Thr 
                          565                 570                 575     
          Glu Thr Pro Leu Met Lys Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr 
                      580                 585                 590         
          Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Lys Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys 
                  595                 600                 605             
          Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser 
              610                 615                 620                 
          Thr Asn Leu Gln Glu Ser Leu Arg Ser Lys Glu 
          625                 630                 635 
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          Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 
          1               5                   10                  15      
          Val His Ser Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala 
                      20                  25                  30          
          Pro Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu 
                  35                  40                  45              
          Thr Gly Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu 
              50                  55                  60                  
          Glu Trp Leu Gly Met Ile Trp Gly Asp Gly Asn Thr Asp Tyr Asn Ser 
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          Ala Leu Lys Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln 
                          85                  90                  95      
          Val Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu His Thr Asp Asp Thr Ala Arg Tyr 
                      100                 105                 110         
          Tyr Cys Ala Arg Glu Arg Asp Tyr Arg Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 
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          Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu 
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          Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 
                          165                 170                 175     
          Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 
                      180                 185                 190         
          Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 
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              210                 215                 220                 
          Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu 
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          Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 
                      260                 265                 270         
          Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln 
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          Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 
              290                 295                 300                 
          Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 
                          325                 330                 335     
          Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 
                      340                 345                 350         
          Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 
                  355                 360                 365             
          Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 
              370                 375                 380                 
          Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 
          385                 390                 395                 400 
          Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly 
                          405                 410                 415     
          Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 
                      420                 425                 430         
          Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 
                  435                 440                 445             
          His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly 
              450                 455                 460                 
          Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
          465                 470                 475                 480 
          Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Ser Arg Arg Thr Leu Met 
                          485                 490                 495     
          Leu Leu Ala Gln Met Arg Lys Ile Ser Leu Phe Ser Cys Leu Lys Asp 
                      500                 505                 510         
          Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Gly Asn Gln Phe Gln 
                  515                 520                 525             
          Lys Ala Glu Thr Ile Pro Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln Ile Phe 
              530                 535                 540                 
          Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu 
          545                 550                 555                 560 
          Leu Asp Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu 
                          565                 570                 575     
          Ala Cys Val Ile Gln Gly Val Gly Val Thr Glu Thr Pro Leu Met Lys 
                      580                 585                 590         
          Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu 
                  595                 600                 605             
          Tyr Leu Lys Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg 
              610                 615                 620                 
          Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gln Glu Ser 
          625                 630                 635                 640 
          Leu Arg Ser Lys Glu 
                          645 
          <![CDATA[<210> 93]]>
          <![CDATA[<211> 610]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 抗CD40 _hIgG2 dK_HC--(G4S)4--IFN γ]]>
          <![CDATA[<400> 93]]>
          Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Lys 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn 
                      20                  25                  30          
          Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Val Ile Trp Ser Asp Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Ala Ser Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Asn Phe Phe Asp Tyr Trp 
                      100                 105                 110         
          Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 
                  115                 120                 125             
          Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr 
              130                 135                 140                 
          Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 
          145                 150                 155                 160 
          Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 
                          165                 170                 175     
          Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 
                      180                 185                 190         
          Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp 
                  195                 200                 205             
          His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys 
              210                 215                 220                 
          Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 
                          245                 250                 255     
          Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 
                      260                 265                 270         
          Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 
                  275                 280                 285             
          Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val 
              290                 295                 300                 
          Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 
                          325                 330                 335     
          Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 
                      340                 345                 350         
          Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 
                  355                 360                 365             
          Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 
              370                 375                 380                 
          Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp 
          385                 390                 395                 400 
          Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 
                          405                 410                 415     
          Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 
                      420                 425                 430         
          Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly 
                  435                 440                 445             
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 
              450                 455                 460                 
          Gly Gly Ser Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys 
          465                 470                 475                 480 
          Tyr Phe Asn Ala Gly His Ser Asp Val Ala Asp Asn Gly Thr Leu Phe 
                          485                 490                 495     
          Leu Gly Ile Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met 
                      500                 505                 510         
          Gln Ser Gln Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys 
                  515                 520                 525             
          Asp Asp Gln Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met 
              530                 535                 540                 
          Asn Val Lys Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu 
          545                 550                 555                 560 
          Lys Leu Thr Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala 
                          565                 570                 575     
          Ile His Glu Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys 
                      580                 585                 590         
          Thr Gly Lys Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly Arg Arg Ala 
                  595                 600                 605             
          Ser Gln 
              610 
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          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Tyr Ser Trp 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Thr Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ile Phe Pro Leu 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 
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          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
              210                 215                 220                 
          Gly Gly Gly Gly Ser Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg 
          225                 230                 235                 240 
          Ser Ser Asn Phe Gln Ser Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg 
                          245                 250                 255     
          Leu Glu Tyr Cys Leu Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu 
                      260                 265                 270         
          Ile Lys Gln Leu Gln Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile 
                  275                 280                 285             
          Tyr Glu Met Leu Gln Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser 
              290                 295                 300                 
          Ser Thr Gly Trp Asn Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val 
          305                 310                 315                 320 
          Tyr His Gln Ile Asn His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu 
                          325                 330                 335     
          Lys Glu Asp Phe Thr Arg Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys 
                      340                 345                 350         
          Arg Tyr Tyr Gly Arg Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser 
                  355                 360                 365             
          His Cys Ala Trp Thr Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr 
              370                 375                 380                 
          Phe Ile Asn Arg Leu Thr Gly Tyr Leu Arg Asn 
          385                 390                 395
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(無)

Claims (16)

  1. 一種腫瘤壞死因子受體超家族(TNFRSF)促效劑或其功能片段及干擾素(IFN)或其功能片段之組合，其用於一冠狀病毒感染之治療或預防之用途。
  2. 一種干擾素相聯抗原結合蛋白，其包含 (I)  一促效性抗CD40抗體或一其促效性抗原結合片段，及 (II) 一干擾素(IFN)或一其功能片段， 該干擾素相聯抗原結合蛋白用於一冠狀病毒感染之治療或預防之用途。
  3. 如請求項2之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含 (a)一重鏈或一其片段，其包含與SEQ ID NO 56至少90%一致的一互補決定區(CDR) CDRH1、與SEQ ID NO 57至少90%一致之一CDRH2及與SEQ ID NO 58至少90%一致之一CDRH3；及 (b)一輕鏈或一其片段，其包含與SEQ ID NO 52至少90%一致之一CDRL1、與SEQ ID NO 53至少90%一致之一CDRL2及與SEQ ID NO 54至少90%一致之一CDRL3。
  4. 如請求項2或3之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含 (a)一重鏈或一其片段，其包含與SEQ ID NO 56一致之一互補決定區(CDR) CDRH1、與SEQ ID NO 57一致之一CDRH2及與SEQ ID NO 58一致之一CDRH3；及 (b)一輕鏈或一其片段，其包含與SEQ ID NO 52一致之一CDRL1、與SEQ ID NO 53一致之一CDRL2及與SEQ ID NO 54一致之一CDRL3。
  5. 如請求項2至4中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含：一輕鏈可變區V L，其包含如SEQ ID NO 51中所示之序列或與其至少90%一致之一序列；及/或一重鏈可變區V H，其包含如SEQ ID NO 55所示之序列或與其至少90%一致之一序列。
  6. 如請求項2至5中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段包含：一輕鏈(LC)，其包含如SEQ ID NO 3中所示之一序列或與其至少90%一致之一序列；及/或一重鏈(HC)，其包含選自由SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 49及SEQ ID NO 48組成之群之一序列或與其至少90%一致之一序列。
  7. 如請求項2至6中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN或其功能片段係選自由以下組成之群：一I型IFN、一II型IFN及一III型IFN，或一其功能片段。
  8. 如請求項7之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該I型IFN或其功能片段係IFNα或IFNβ，或一其功能片段。
  9. 如請求項2至8中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN或其功能片段係IFNα2a或一其功能片段，且其中較佳地該IFNα2a包含如SEQ ID NO 17中所示之序列或與其至少90%一致之一序列。
  10. 如請求項2至8中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN或其功能片段係IFNβ或一其功能片段，且其中較佳地該IFNβ包含如SEQ ID NO 14中所示之序列或與其至少90%一致之一序列。
  11. 如請求項2至10中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN或其功能片段與該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之一輕鏈融合，較佳地與C末端融合。
  12. 如請求項2至10中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該IFN或其功能片段與該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段之一重鏈融合，較佳地與C末端融合。
  13. 如請求項2至12中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該促效性抗CD40抗體或其促效性抗原結合片段及該IFN或其功能片段經由一連接子彼此融合，且其中較佳地該連接子包含如SEQ ID NO 20、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 25或SEQ ID NO 26中所示之一序列。
  14. 如請求項2至13中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白係一融合干擾素之促效性抗CD40抗體或一其融合干擾素之促效性抗原結合片段，其包含表9、特定言之表9A或表9B、更特定言之表9A中所揭示之序列組合中的一者。
  15. 如請求項2至14中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該使用包含藉助於基因遞送編碼該干擾素相聯抗原結合蛋白之RNA或DNA序列、或者編碼該干擾素相聯抗原結合蛋白之一載體或載體系統來向一有需要之個體投予該干擾素相聯抗原結合蛋白。
  16. 如請求項2至15中任一項之用於該用途的干擾素相聯抗原結合蛋白，其中該干擾素相聯抗原結合蛋白係包含在一醫藥組成物中。
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