TW202246496A

TW202246496A - 在宿主細胞中產生包含ln3作為核心結構的寡醣

Info

Publication number: TW202246496A
Application number: TW111102369A
Authority: TW
Inventors: 蘇菲艾斯艾特; 喬瑞博普雷茲; 格特彼得斯; 安妮莉絲維考特倫
Original assignee: 比利時商因比奥斯公司
Priority date: 2021-01-20
Filing date: 2022-01-20
Publication date: 2022-12-01
Also published as: AU2022210808A1; US20240117398A1; KR20230134558A; EP4281577A1; WO2022157213A1; CN116745430A

Abstract

本發明係於合成生物學及代謝工程的技術領域中。更特別是，本發明係於代謝工程之宿主細胞之培養的技術領域中。本發明係描述藉由培養基因修飾細胞，以產生包含乳糖-N-三糖（lacto-N-triose; LN3; GlcNAc-beta1,3-Gal-beta1,4-Glc）作為核心三醣的寡醣之方法，以及該方法所使用之基因修飾細胞。基因修飾細胞包括，用以編碼參與包括LN3作為核心三醣的寡醣之合成的半乳糖苷-β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶（galactoside beta-1,3-N-acetylglucosaminyltransferase）及醣基轉移酶（glycosyltransferase）至少一核酸序列，以及表現一膜蛋白的至少一核酸序列。再者，本發明為了培養之具有LN3作為核心三醣的寡醣提供純化。

Description

在宿主細胞中產生包含LN3作為核心結構的寡醣

今日，已有超過80種歸屬於人乳寡醣（HMOs）家族之化合物被結構上辨明。此些HMOs代表一類作用為益生元（prebiotics）之複雜寡醣。再者，HMOs與上皮抗原決定位之結構同源性，說明瞭其抵抗細菌性病原體之特性。在嬰兒腸胃道中，HMOs選擇性地滋養選定之細菌株的生長，且因此在母乳哺育嬰兒體內發展出獨特的腸道微菌叢。一些前述HMOs需要存在具有N-乙醯葡糖胺-β-1,3-半乳糖-β-1,4-葡萄糖（GlcNAc-beta1,3-Gal-beta1,4-Glc; lacto-N-triose; LN3）之核心的特別寡醣結構，此結構很可能展現出特別的生物活性。產生上述寡醣需要半乳糖苷-β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶的作用與其他醣基轉移酶的進一步作用，半乳糖苷-β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶自UDP-N-乙醯葡糖胺供體（UDP-GlcNAc donor）轉移N-乙醯葡糖胺殘基（GlcNAc residue）至乳糖受體（lactose acceptor）上，從而合成LN3，其他醣基轉移酶進一步修飾LN3核心三醣。在微生物發酵生產中，具有LN3作為核心三醣的寡醣在許多情形中係被細胞內生產於工業化生產之宿主細胞中。在此領域中，一個被認定為確實困難之問題，係產生之寡醣所造成之細胞內寡醣濃度上升，以及它們之萃取。細胞內寡醣濃度之上升，被視為係造成所欲寡醣之產物抑制效果的原因。因此，合成速度可能下降或所欲寡醣可能達到具備細胞毒性之濃度，導致代謝停滯或甚至細胞溶解。

本發明之目標，係藉由提供高效率、省時及節省成本之具有LN3作為核心三醣的寡醣之生產工具及方法，以生產大量所欲產物。

依據本發明，上述目標及其他目標係透過提供一方法及細胞來達成，以產生具有LN3作為核心三醣的寡醣，其中上述細胞經過基因修飾以產生具有LN3作為核心三醣的寡醣，且包含至少一核酸序列編碼合成具有LN3作為核心三醣的寡醣所參與之酵素，更具體而言，上述細胞包含核酸序列以編碼半乳糖苷-β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶，藉以形成LN3，以及至少一種其他醣基轉移酶以形成具有LN3作為核心三醣的寡醣。所述細胞更表現一膜蛋白，更具體而言，此細胞更表現一過去未知之膜蛋白，依據本發明，此膜蛋白得以改善生產及/或提供及/或強化具有LN3作為核心三醣的寡醣之排出。

令人驚喜地，本發明使用之膜蛋白已被發現提供了一新辨識的膜蛋白，更具體而言，本發明提供之新辨識的膜蛋白，係先前未知能夠使具有LN3作為核心三醣的寡醣運輸，且對於所述具有LN3作為核心三醣的寡醣之發酵生產具有正面影響，故當用於基因工程化宿主細胞以產生所述具有LN3作為核心三醣的寡醣時，提供了較佳的產量（yield）、生產力（productivity）、單位生產力（specific productivity）及/或生長速度（growth speed）。

本發明亦提供產生具有LN3作為核心三醣的寡醣之方法。所述具有LN3作為核心三醣的寡醣係獲得自包括本發明膜蛋白之宿主細胞。

名詞定義

本說明書中用以描述發明或各實施例的文字，應理解為不僅在其通常定義之涵義上有意義，而係包括在本說明書之結構、材料或步驟中超過其通常定義之涵義範圍的特別定義。因此，倘一元件在本說明書之脈絡下可理解為包括多於一種涵義，則其使用於請求項應理解為泛稱被說明書及該文字本身所支援之所有可能涵義。

本發明於此揭露之各方面及各方面之實施例，應理解為不僅於本說明書所具體描述之順序及脈絡，而包括任何順序及任何上述之組合。當文義需要時，所有使用單數之文字應被視為包括複數，反之亦然。除非另有定義，所有本文使用之技術及科學用語，通常具有與本發明所屬技術領域具有通常知識者所一般理解之涵義相同。一般而言，本文使用之命名及描述之實驗程式中的細胞培養、分子遺傳學、有機化學、及核酸化學與雜交，係該技術領域所公知且通常實行者。標準技術用於合成核酸及勝肽。一般而言，酵素反應及純化步驟係根據製造者之說明書進行。

在圖示及說明書中有揭露之本發明實施例，雖然採用特定用語，但此些用語僅係用於描述意義，而目的非在於限制之後請求項中所闡述之發明範圍。應理解的是，圖示實施例之目的僅係用以闡述範例，而不應被用以限制本發明。對於所屬技術領域之技藝人士，其他實施例、改良、細節、及使用可以在與本發明文字及精神一致且本發明之範圍內做成，並僅受包括均等論之符合專利法解釋下的請求項之限制。在後面有參照字元（reference characters）用以指明請求項步驟之請求項中，上述參考字元僅係為了描述之便利，而無暗示任何特定順序以實行所述步驟之意圖。

在本檔及其請求項中，動詞「包括（to comprise）」、「具有（to have）」及「包含（to contain）」、及其詞型變化係用於非限制之意義，代表含有此些詞語後方之項目，但不排除未特定提及之項目。動詞「大抵由…組成（to consist essentially of）」表示除具體述及之元件外，可能存在附加元件，此些附加元件未改變本發明之獨特性質。在整個申請及請求項中，除非有另外特別敘明，動詞「包括」、「具有」及「包含」、及其詞型變化可能被偏好地替換為「組成（及其詞型變化）」或「大抵由…組成（及其詞型變化）」，反之亦然。再者，以不定冠詞「一」參照元件並未排除存在多於一個元件之可能，除非文義清楚要求一個且僅有一個元件。因此，不定冠詞「一」通常表示「至少一個」。

根據本發明，「多核苷酸（polynucleotide）」用語通常係指任何多核醣核苷酸或多去氧核醣核苷酸，其可為未修飾之RNA或DNA、或修飾之RNA或DNA。「多核苷酸」包括但不限於單股DNA、雙股DNA、混合單股及雙股區（single- and doubled-stranded regions）之DNA、混合單股、雙股及三股區（single-, double- and triple-stranded regions）之DNA、單股RNA、雙股RNA、混合單股及雙股區之RNA、或包括DNA及RNA之雜交分子，上述雜交分子之DNA及RNA可能為單股、雙股（較常見）或三股區、或混合之單股及雙股區。再者，本文使用於指涉包括RNA或DNA或RNA及DNA之三股區的「多核苷酸」，所述區域之股可源自相同分子或不同分子。所述區域可能包括一或多個分子之全部，但通常多僅涉及一些分子之部分區域。其中一種具有三股螺旋區之分子為寡醣。本文使用之「多核苷酸」用語亦包括上述包含一或多個修飾鹼基之DNA或RNA。因此，依據本發明，為了穩定性或其他原因而主幹經修飾之DNA或RNA亦為「多核苷酸」。再者，DNA或RNA包括非一般鹼基（如：肌核苷（inosine））或其他經修飾鹼基（如：三苯甲基化鹼基（tritylated bases）），應理解為涵蓋於「多核苷酸」用語內。應理解的是，為了提供許多有用的目的，對於DNA及RNA所做之大量修飾，已被所屬技術領域之技藝人士所知悉。本文採用之「多核苷酸」用語，涵蓋如：化學上、酵素上或代謝上修飾型態之多核苷酸，以及病毒及細胞（如包括：單細胞或複雜細胞）之DNA及RNA性質的化學型態。「多核苷酸」亦涵蓋通常稱作寡核苷酸（oligonucleotide）之短核苷酸。

「多肽（polypeptide）」係指任何包括二或多個胺基酸，且彼此藉由肽鍵或修飾肽鍵連接之勝肽或蛋白質。「多肽」係指通常稱作勝肽、寡肽及寡聚體（oligomer）之短鏈，以及通常稱作蛋白質之長鏈。多肽可能包含除20個基因編碼之胺基酸以外之其他胺基酸。「多肽」包括藉由自然處理（如：加工及其他轉譯後修飾）及化學修飾技術所修飾者。上述修飾被良好地描述於基礎檔及更詳細的專論，以及大量研究文獻中，並為技藝人士所熟知。在給定多肽中，相同種類的修飾在一些位置之修飾程度可能相同或不同。再者，給定多肽可能包含許多種類之修飾。修飾可能發生於多肽的任何位置，包括多肽主幹、胺基酸側鏈、及胺基或羧基端。修飾包括如：乙醯化、醯化、ADP核糖基化、醯胺化、共價結合黃素（covalent attachment of flavin）、共價結合血紅素官能基（covalent attachment of heme moeity）、共價結合核苷酸或核苷酸衍生物、共價結合脂質或脂質衍生物、共價結合磷脂酸肌醇（phosphatidylinositol）、交聯（cross-linking）、環化、形成雙硫鍵、去甲基化、形成共價交聯、形成焦麩胺酸、甲醯化、γ-羧基化、醣基化、GPI錨定形成（GPI anchor formation）、羥基化、碘化、甲基化、豆蔻醯化（myristoylation）、氧化、蛋白酶解化、磷酸化、異戊二烯化（prenylation）、消旋化（racemization）、脂質附連（lipid attachment）、硫化、麩胺酸殘基之γ-羧基化（gamma-carboxylation of glutamic acid residues）、羥基與ADP核糖基化、硒化（selenylation）、tRNA調節之添加胺基酸至蛋白質（transfer-RNA mediated addition of amino acids to proteins）（例如：精胺酸化（arginylation））、及泛素化（ubiquitination）。多肽可能為線型或（分枝或無分枝的）環狀。環狀、分枝狀及分枝環狀的多肽可能源自自然加工之轉譯後修飾，亦可能完全由合成方法而製成。

「分離（isolated）」代表透過「人為（by the hand of man）」改變其自然狀態，亦即：倘其發生於自然界，其已被改變或被移除自其原始環境，或兩者皆是。舉例而言，自然地存在於活體中的多核苷酸或多肽並未被「分離」，但相同的多核苷酸或多肽被從其自然狀態下共存的物質分開，依本文採用之用語，係被「分離」。類似地，「合成（synthetic）」序列，如本文使用之用語，表示任何藉由合成產生之序列，而非指從自然資源中分離者。

「重組（recombinant）」表示藉由移植或剪接（splicing）一物種之基因至不同物種之宿主個體的細胞，所製備而成之基因工程化DNA。上述DNA變成宿主基因組成之一部分，並且被複製。

「內源（endogenous）」用語，在本發明脈絡下，表示屬細胞自然的一部分，且出現在細胞染色體中自然位置的任何多核苷酸、多肽或蛋白質序列。

「異源（heterologous）」用語，當用以指涉多核苷酸、基因、核酸、多肽或酵素時，係指所述多核苷酸、基因、核酸、多肽或酵素係源自或衍生自宿主個體物種以外之來源。相對地，本文使用之「同源（homologous）」多核苷酸、基因、核酸、多肽或酵素，係表示所述多核苷酸、基因、核酸、多肽或酵素衍生自宿主個體物種。當指涉用以維持或操縱基因序列之基因調節序列或輔助核酸序列時，例如：啟動子、5’非轉譯區、3’非轉譯區、多線苷酸添加序列（poly A addition sequence）、內含子序列、剪接位、核糖體結合位、內部核糖體進入序列（internal ribosome entry sequence）、基因組同源區（genome homology region）、重組位等，「異源」表示所述調節序列或操縱序列並非自然地連結至所述基因，而係銜接於構築物（construct）、基因組、染色體或游離基因組（episome）。因此，啟動子被可操縱地連結（operably linked）至其自然狀態下不會可操縱地連結之基因時，例如：在非基因工程化個體的基因組中，本文稱之為「異源啟動子（heterologous promoter）」，即使所述啟動子連結的基因可能衍生自相同物種（或在一些情形下為相同個體）。

本文使用之「編碼多肽之多核苷酸（polynucleotide encoding a polypeptide）」用語，涵蓋含有編碼本發明之多肽序列的多核苷酸。此詞亦涵蓋含有單一連續或非連續之多肽編碼區（如：被整合之噬菌體（integrated phage）或插入序列或編輯所中斷），以及含有亦可能包含編碼及/或非編碼序列之附加區域的多核苷酸。

基因的「修飾表現（modified expression）」用語，係指在具有LN3作為核心三醣的寡醣的任何生產程式之階段中，所述基因相較於其野生型表現的表現變化。上述「修飾表現」相較於野生型為較低或較高的表現，其中「較高的表現（higher expression）」在內源基因之情形下，亦可被定義為「過表現（overexpression）」，或在野生型品系不存在的異源基因之情形下，被定義為「表現（expression）」。較低的表現可藉由技藝人士一般周知之技術（例如：使用siRNA、CrispR、CrispRi、重組工程（rebombineering）、同源重組（homologous recombination）、ssDNA誘發突變（ssDNA mutagenesis）、RNAi、miRNA、asRNA、基因突變、基因剔除、轉位子誘發突變…等）獲得，上述技術透過使基因較無法（即：相較於功能性野生型基因之統計上顯著的「較無法（less-able）」）或完全無法（如：基因剔除）產生功能性最終產物之方式改變基因。過表現或表現可藉由技藝人士一般周知之技術所獲得，其中所述基因為「表現匣（expression cassette）」之一部分，所述表現匣涉及存在啟動子序列、非轉譯區序列（包含核糖體結合序列或Kozak序列）、編碼序列（例如：膜蛋白基因序列）、及任選的轉錄終止子（transcription terminator）之任一序列，並導致功能性活化蛋白質之表現。所述表現為組成性（constitutive）或條件性（conditional）或調節性（regulated）或可調性（tunable）。

「組成性表現（constitutive expression）」用語，定義為在某些生長條件下，所述表現不受除了RNA聚合酶次單元（例如：細菌σ因數）外之轉錄因數所調節。上述轉錄因數之未限制範例為：大腸桿菌（ E. coli）中的CRP、LacI、ArcA、Cra、IclR；釀酒酵母菌（ Saccharomyces cerevisiae）中的Aft2p、Crz1p、Skn7；枯草芽孢桿菌（ B. subtilis）中的DeoR、GntR、Fur。此些轉錄因數結合在特定序列上，且可能在某些生長條件下阻止或強化表現。RNA聚合酶透過與特定序列結合以開始轉錄，例如於原核生物宿主中透過σ因數。

「調節性表現（regulated expression）」用語，定義為在某些生長條件下，所述表現除了受RNA聚合酶次單元（例如：細菌σ因數）調節外，亦受其他轉錄因數所調節。所述轉錄因數之範例已於上段描述。通常表現調節可透過誘導物（inducer），例如但不限於：IPTG、阿拉伯糖、鼠李糖、岩藻糖、異乳糖（allo-lactose），或pH變化、溫度變化、碳耗盡（carbon depletion）、受質或產生之產物等來獲得。

「控制序列（control sequences）」用語，指所述序列被宿主細胞之轉錄或轉譯系統辨認，並允許多核苷酸序列轉錄或轉譯成多肽。因此，此些DNA序列在特定宿主細胞或個體中，係表現可操縱地連結之編碼序列所必要。上述控制序列可為但不限於：啟動子序列、核糖體結合序列、Shine Dalgarno序列、Kozak序列、轉錄終止子序列。適合於原核生物之上述控制序列，例如包括：啟動子、任選的操縱子序列、及核糖體結合位。真核細胞已知會利用啟動子、多腺苷酸化訊號（polyadnylation signals）及強化子（enhancer）。前序列（presequence）或分泌主導（secretory leader）之DNA可能可操縱地連結至一多肽之DNA，如果其係被表現為參與多肽分泌之前蛋白（preprotein）；啟動子或強化子可操縱地連結至一編碼序列，如果其影響所述序列之轉錄；核糖體結合位可能可操縱地連結至一編碼序列，如果其影響所述序列之轉錄；核糖體結合位可能可操縱地連結至一編碼序列，如果其如此設置以促進轉譯。上述控制序列可能再被外在化學物質控制，例如但不限於：IPTG、阿拉伯糖、乳糖、異乳糖、鼠李糖或岩藻糖，透過一可誘發的啟動子（inducible promoter），或透過一基因迴路，以誘發或抑制上述多核苷酸之轉錄或轉譯至多肽。

一般而言，「可操縱地連結（operably linked）」表示被連結的DNA序列為鄰接的（contiguous），及在分泌主導之情形下，鄰接且在閱讀階段（reading phase）。然而，強化子不需要係鄰接。

「野生型（wild type）」用語，指一般所知發生於自然界之基因型或表現型之情形。

本文使用之「變異型（variant）」用語，係指與各自對照之多核苷酸或多肽不同之多核苷酸或多肽，但其保有基本特性。一典型變異型多核苷酸的核苷酸序列與另一對照之多核苷酸不同。變異型核苷酸序列的改變，可能或可能不會改變對照之多核苷酸所編碼而成之多肽的胺基酸序列。核苷酸改變可能在對照序列所編碼的多肽中，導致如下討論之胺基酸置換、添加、刪除、融合及截斷。一典型變異型多肽的胺基酸序列與另一對照之多肽不同。一般而言，上述差異受有限制，使得對照多肽與變異型多肽整體非常類似，且許多區域相同。變異型與對照多肽可能由於一或多個置換、添加、刪除、或上述任意組合，而在胺基酸序列上有所差異。置換或插入之胺基酸殘基可能或可能不會被遺傳密碼所編碼。多核苷酸或多肽的變異型可能自然發生，如：對偶基因變異（allelic variant），或可能為未知會自然發生之變異型。非自然發生之多核苷酸及多肽變異型，可以透過突變誘發（mutagenesis）技術、直接合成（direct synthesis）、及其他所屬領域技藝人士所知之重組方法而成。

在一些實施例中，本發明關注於透過修改本發明所用之膜蛋白的結構，以製作功能性之變異型。變異型可以透過胺基酸置換、刪除、添加、或上述任意組合而產生。例如，可以合理預期單獨置換一白胺酸成一異白胺酸或纈胺酸、一天門冬胺酸成一麩胺酸、一蘇胺酸成一絲胺酸、或將一胺基酸類似地置換成一結構相關之胺基酸（如：保守性突變（conservative mutations），並不會對於結果分子之生物活性有主要影響。保守性替換（conservative replacement）發生於支鏈相關之胺基酸家族內。改變本發明多肽之胺基酸序列是否導致功能同源物（functional homolog），可以藉由分析變異型多肽在細胞中以類似於野生型多肽形成回應的能力，而被容易地判定，且在本發明之情形下，相較於沒有變異型的細胞，本發明提供了更佳的生產量、生產率及/或生長速度。

本文使用之「功能同源物（functional homolog）」用語，描述此些分子具有序列相似，且亦共用至少一種功能上特質（如：生化活性）。在本發明之脈絡中，根據發明之膜蛋白Z（通常以序列識別號指明）的功能同源物，如本文所描述，指涉可以運輸具有LN3作為核心醣類的寡醣的一膜蛋白，即：所述功能同源物保留膜蛋白Z具有運輸具有LN3作為核心醣類的寡醣之功能上特質。更具體而言，本文使用之「功能同源物」用語，描述此些蛋白質具有序列相似（換句話說，同源性），且同時具有至少一種功能上相似性，例如：生化活性（Altenhoff等人， PLoS Comput. Biol. 8 (2012) e1002514）。

功能同源物有時亦指涉異種同源物（orthologs），所述「異種同源物」指同源基因或蛋白質在功能上相當於另一物種之對照基因或蛋白質。功能同源物通常導致相似但不需要相同程度的相同特質。功能同源蛋白質具有相同特質，其中一個同源物的定量量測至少為原始分子之10%：更典型地，至少20%、介於約30－40%之間；例如，介於約50－60%之間；介於約70－80%之間；介於約90－95%之間；介於約98－100%之間或大於100%。因此，當所述分子具有酵素活性，其功能同源物具有相較於原始酵素之上述比例的酵素活性。當所述分子為DNA結合分子（如：多肽），其同源物具有相較於原始分子之上述比例的結合親和力，所述結合親和力係藉由測量結合分子之重量所得。

一功能同源物及對照之多肽可能係自然發生之多肽，且其序列相似性可能係由於趨同或趨異之演化事件。

功能同源物可能透過核苷酸及多肽序列比對（sequence alignment）分析而被識別。舉例而言，在核苷酸或多肽序列資料庫上進行查詢可以識別出生物量調節型多肽（biomass-modulating polypeptides）之同源物。序列分析可以透過使用生物量調節型多肽作為對照序列，並包含BLAST、Reciprocal Blast或PSI-BLAST以分析非冗餘之資料庫（non-redundant databases）。胺基酸序列在一些實例中，會從核苷酸序列扣除。通常，在資料庫中序列一致性（sequence identity）大於40%之複數個多肽序列，為進一步評估作為生物量調節型多肽之合適度的候選對象。胺基酸序列一致性容許保守性胺基酸置換，例如：置換一個疏水性殘基成另一疏水性殘基或置換一個極性殘基成另一個極性殘基。如有需要，可以進行上述候選對象之人工檢查，以縮小進一步研究之候選對象的數量。可以透過選擇在生產量調節型多肽（productivity-modulating polypeptides）中呈現結構域（domains）之候選對象（如：保守功能域（conserved functional domains）），以實施人工檢查。

關於多核苷酸之「片段（fragment）」，指多核苷酸分子之克隆（clone）或任一部份，尤其是保留有用性、功能性特質的多核苷酸部分。有用的片段包括可以用於雜交或放大技術，或調節複製、轉錄或轉譯之寡核苷酸及多核苷酸。「多核苷酸片段（polynucleotide fragment）」指任何通常包含至少約9個連續多核苷酸之多核苷酸子序列，例如：本文提供之至少約30個核苷酸或至少約50個核苷酸之任一序列。示範序列（exemplary fragments）可以額外地或替換地含有片段，此片段包括、大抵組成自或組成編碼多肽保守家族域（conserved family domain）之區域。

示範序列可能額外地或替換地含有包括多肽保守域之片段。

示範序列可能額外地或替換地含有多肽及蛋白質分子之子序列，或多肽的子序列。在一些情形中，片段或結構域為多肽之子序列，所述子序列實質上相同地展現完整多肽（intact polypeptides）之至少一種生物功能，或以類似程度展現之。舉例而言，多肽片段可以包括可供辨認的結構模體（structural motif）或功能域，例如：結合DNA啟動子區域之DNA結合位或結構域、活化域、或蛋白質-蛋白質互動（protein-protein interactions）結構域，且可能引發轉錄。片段尺寸可以變化，並可能少如3個胺基酸殘基至如完整多肽之全長，例如：至少約20個胺基酸殘基長、至少約30個胺基酸殘基長。較佳的片段為一功能性片段，其具有至少一種來源多肽之性質或活性，例如：所述片段可能含有一多肽的功能域或保守域。因此，在本發明的脈絡中，依據發明之膜蛋白Z（通常以序列識別號指明）的功能性片段，指所述片段保留膜蛋白Z具有運輸具有LN3作為核心醣類的寡醣之功能上特質。結構域可以被辨明，例如透過Pfam（El-Gebali等人，Nucleic Acids Res. 47 (2019) D427-D432）、IPR（InterPro域）（Mitchell等人，Nucleic Acids Res. 47 (2019) D351-D360）、蛋白質指紋域 (protein fingerprint domain, PRINTS) (Attwood等人，Nucleic Acids Res. 31 (2003) 400-402）、SUBFAM域（Gough等人，J. Mol. Biol. 313 (2001) 903-919）、TIGRFAM域（Selengut等人，Nucleic Acids Res. 35 (2007) D260-D264）、保守域資料庫（Conserved Domain Databas, CDD) （https://www.ncbi.nlm.nih.gov/cdd）（Lu等人，Nucleic Acids Res. 48 (2020) D265-D268）、或 PTHR域（http://www.pantherdb.org）（Mi等人，Nucleic Acids. Res. 41 (2013) D377-D386; Thomas 等人，Genome Research 13 (2003) 2129-2141）。應理解的是，對於所屬領域技藝人士而言，本文使用之資料庫包括：Pfam 32.0 （2018年9月發佈）、CDD v3.17（2019年4月3日發佈）、eggnogdb 4.5.1（2016年9月發佈）、InterPro 75.0（2019年7月4日發佈）、TCDB（2019年7月17日發佈），上述每一資料庫之內容在每一次發佈即固定不變。當特定資料庫更動，此特定資料庫將獲得新的發佈版本並搭配新發佈日期。每個資料庫的所有發佈版本及其對應的發佈日期，及在這些特定發佈日期加註之特定內容，對於所屬領域技藝人士而言為可取得且已知的。

因此，一多肽序列識別號之片段，較佳地表示其包括或由所述多肽序列識別號之一定數量連續胺基酸序列所組成，其中所述一定數量連續胺基酸序列，較佳為所述多肽序列識別號全長的至少50.0%、60.0%、70.0%、80.0%、81.0%、82.0%、83.0%、84.0%、85.0%、86.0%、87.0%、88.0%、89.0%、90.0%、91.0%、92.0%、93.0%、94.0%、95.0%、95.5%、96.0%、96.5%、97.0%、97.5%、98.0%、98.5%、99.0%、99.5%、100%，較佳為至少80.0%，更佳為至少87.0%，甚至更佳為至少90.0%，甚至更佳為至少95.0%，最佳為至少97.0%，且其實質上相同地展現完整多肽之至少一種生物功能，或較佳地以類似或更高程度展現之，此並可被技藝人士例行性地分析。因此，在本發明脈絡中，依據發明之膜蛋白Z（通常以序列識別號(SEQ ID NO)指明）的功能性片段，保留膜蛋白Z具有運輸具有LN3作為核心醣類的寡醣之功能上特質。因此，一多肽序列識別號之片段，較佳地表示其包括或由所述多肽序列識別號組成之片段，其中失去一定數量連續胺基酸序列，則所述失去之一定數量，較佳為所述多肽序列識別號全長的不多於50.0%、40.0%、30.0%，較佳為不多於20.0%、15.0%、10.0%、9.0 %、8.0 %、7.0 %、6.0 %、5.0 %、4.5%、4.0%、3.5%、3.0%、 2.5%、2.0%、1.5%、1.0%、0.5%，較佳為不多於15.0%，更佳為不多於10.0%，甚至更佳為不多於5.0%，最佳為不多於2.5%，且其實質上相同地展現完整多肽之至少一種生物功能，或較佳地以類似或更高程度展現之，此並可被技藝人士例行性地分析。「一致（identical）」或「一致百分比（percent identity）」或「%一致（%identity）」等詞，在二或多個核酸或多肽序列之脈絡中，當以序列比較演算法（sequence comparison algorithms）或目視檢查量測比較（compare）或比對（align）最大對應（maximum correspondence）時，指所述二或多個序列或子序列為相同，或有特定百分比之核苷酸或胺基酸序列為相同。在序列比較中，一序列作為對照序列，以與測試序列比較。當使用序列比對演算法時，輸入測試及對照序列至電腦中，如有必要，指派子序列座標（subsequence coordinate），以及指派序列演算法程式參數。序列比較演算法接著依據分派之程式參數，計算測試序列相對於對照序列之一致百分比。一致百分比可以對照序列之序列全長為全域計算，得出全域一致百分比（global percent identity）的數值。另外，一致百分比亦可以對照序列之部分序列為計算，得出部分一致百分比的數值。使用對照序列之全長於區域序列比對時，得出測試與對照序列間之全域一致百分比。一致百分比可以透過使用不同演算法而決定，例如：BLAST及PSI-BLAST（Altschul等人，1990，J Mol Biol 215:3，403- 410; Altschul等人，1997，Nucleic Acids Res 25: 17，3389-402）、Clustal Omega法（Sievers等人，2011, Mol. Syst. Biol. 7:539）、MatGAT法（Campanella等人，2003, BMC Bioinformatics，4:29）或EMBOSS Needle法（https://galaxy-iuc.github.io/emboss-5.0-docs/needle.html）。

BLAST（Basic Local Alignment Search Tool) 比對，係由美國國家生物技術資訊中心（National Center for Biotechnology Information, NCBI）所提供之使用預設參數比較序列的演算法。此程式將核苷酸或蛋白質序列與序列資料庫比較，並計算統計顯著性。PSI-BLAST（Position-Specific Iterative Basic Local Alignment Search Tool）從複數個序列比對中，使用蛋白質-蛋白質BLAST（BLASTp）偵測高於給定分數閾值者，以獲得位置具體得分矩陣（position-specific scoring matrix, PSSM）或資料（profile）。BLAST法可以被用於成對的（pairwise）或複數個序列比對。成對的序列比對用以識別區域相似度，並可能指出二生物序列（蛋白質或核酸）間之功能上、結構上及/或演化上的關係。BLAST的網路介面可以於此連結取得： https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi.

Clustal Omega (Clustal Ω) 為一複數個序列比對程式，其利用種子引導樹（seeded guide trees）及HMM profile-profile技術產生三或多個序列間之比對結果。此程式就發散序列（divergant sequences），產生生物學上有意義的複數序列比對。Clustal Ω的網路介面可以於此連結取得： https://www.ebi.ac.uk/Tools/msa/clustalo/。使用Clustal Ω法對蛋白質序列為複數序列比對及計算一致百分比之預設參數為：enabling de-alignment of input sequences: FALSE；enabling mbed-like clustering guide-tree: TRUE；enabling mbed-like clustering iteration: TRUE；Number of (combined guide-tree/HMM) iterations: default(0)；Max Guide Tree Iterations: default [-1]；Max HMM Iterations: default [-1]；order: aligned。

MatGAT（Matrix Global Alignment Tool）為一種電腦應用程式，其產生DNA或蛋白質序列之相似度/一致度矩陣時，不需要資料預比對（pre-alignment）。上述程式透過運用Myers與Miller全域比對演算法（Myers and Miller global alignment algorithm）計算相似度及一致度，接著將結果置於距離矩陣中，進行一系列之成對比對。使用者可以在他們的蛋白質序列檢驗中，特定化採用之比對矩陣種類（如：BLOSUM50、BLOSUM62及PAM250）。

EMBOSS Needle（https://galaxy-iuc.github.io/emboss-5.0-docs/needle.html）當考量到序列整體長度時，使用Needleman-Wunsch全域比對演算法（Needleman-Wunsch global alignment algorithm）尋找兩序列之最佳比對（包括間隙）。所述最佳比對透過探索所有可能之比對，並選擇最佳者之動態程式法所確保。Needleman-Wunsch演算法為一類演算法之一員，所述演算法可按mn步（mn steps）之順序計算最佳得分及比對，其中n及m為兩序列之長度。間隙開口懲罰值（gap open penalty）（預設為10.0）係當間隙形成時被扣除之分數。預設值係假設使用EBLOSUM62矩陣於蛋白質序列。間隙延伸懲罰值（gap extension penalty）（預設為0.5）被加至間隙中每個鹼基或殘基之標準間隙懲罰值中，此為懲罰間隙之長度。

如本文所述，具有對照多肽序列的全長序列之至少80%整體序列一致之胺基酸序列的多肽（或蛋白質序列具有至少80%之整體序列一致），應理解為所述序列具有對照多肽序列的全長胺基酸序列80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、100%的整體序列一致。在整個申請中，除非有另外特別敘明，多肽序列包括/組成/具有/被表示於一胺基酸序列，其具有對照多肽的全長胺基酸序列（通常以序列識別號指明）至少80%的整體序列一致，較佳為對照序列全長至少85%、90%、91%、92.00%、93.00%、94.00%、95.00%、96.00%、97.00%、98.00%或99.00%，更佳為至少85%，甚至更佳為至少90%，甚至更佳為至少95.00%，甚至更佳為至少97.00%，最佳為99.00%的整體序列一致。本發明之脈絡中，具有對照膜蛋白Z（通常以序列識別號指明）胺基酸序列的全長序列例如至少80%的整體序列一致之具有胺基酸序列的多肽（或蛋白質具有例如80%的整體序列一致），係指一多肽（如：膜蛋白）如本文所述可以運輸具有LN3作為核心醣類的寡醣，即：所述多肽保留了對照膜蛋白Z具有運輸具有LN3作為核心醣類的寡醣之功能上特質。

為了本發明之目的，多肽的整體序列一致性較佳地藉由EMBOSS Needle 5.0（https://galaxy-iuc.github.io/emboss-5.0-docs/needle.html）程式所決定，且較佳為搭配預設參數（substitution matrix EBLOSUM62、gap opening penalty 10及gap extension penalty 0.5），及較佳為搭配成熟蛋白之序列（即：不考慮分泌訊號或轉運肽）。

本文使用之「醣基轉移酶（glycosyltransferase）」用語，係指一酵素，其具有催化醣基從活化的供體分子轉移至特定受體分子並形成醣苷鍵之功能。依此方法形成的寡醣可為線型或分枝狀，且可包含複數個單醣構築區塊（monosaccharide building blocks）。一類使用核苷酸二磷酸糖、核苷酸單磷酸糖、磷酸化糖及相關蛋白質之獨特的基於序列之醣基轉移酶家族，已經被描述（Campbell等人，Biochem. J. 326，929-939 （1997）），且可自CAZy（CArbohydrate-Active EnZymes）網站（www.cazy.org）取得。

本文使用之醣基轉移酶可以選自包括但不限於下述名單：岩藻糖基轉移酶、唾液酸轉移酶、半乳糖基轉移酶、葡萄糖基轉移酶、甘露糖基轉移酶、N-乙醯葡萄糖胺轉移酶、N-乙醯半乳糖胺轉移酶、N-乙醯甘露糖胺轉移酶、木糖基轉移酶、葡萄糖醛酸轉移酶、半乳糖醛酸轉移酶、葡萄糖胺轉移酶、N-羥乙醯神經胺酸轉移酶、鼠李糖基轉移酶、N-乙醯鼠李糖胺轉移酶、UDP-4-胺基-4,6-二去氧基-N-乙醯基-β-L-阿卓糖胺轉胺酶（UDP-4-amino-4,6-dideoxy-N-acetyl-beta-L-altrosamine transaminases）及岩藻糖胺轉移酶。

岩藻糖基轉移酶為一種醣基轉移酶，其自GDP-岩藻糖（GDP-Fuc）供體轉移岩藻糖（Fuc）殘基至多醣受體上。岩藻糖基轉移酶包括α-1,2-岩藻糖基轉移酶、α-1,3-岩藻糖基轉移酶、α-1,4-岩藻糖基轉移酶及α-1,6-岩藻糖基轉移酶，以催化Fuc殘基從GDP-Fuc透過α醣苷鍵轉移至多醣受體上。岩藻糖基轉移酶可被發現自但不限於GT10、GT11、GT23、GT65及GT68之CAZy家族。唾液酸轉移酶為一種醣基轉移酶，其自供體（如：CMP-Neu5Ac或CMP-Neu5Gc）轉移唾液酸基（如：Neu5Ac或Neu5Gc)至多醣受體上。唾液酸轉移酶包括α-2,3-唾液酸轉移酶及α-2,6-唾液酸轉移酶，以催化唾液酸基透過α醣苷鍵轉移至多醣受體上。唾液酸轉移酶可以被發現但不限於GT29、GT42、GT80及GT97之CAZy家族。半乳糖基轉移酶為一種醣基轉移酶，其自UDP-半乳糖（UDP-Gal）供體轉移半乳糖（Gal）殘基至多醣受體上。半乳糖基轉移酶包括β-1,3-半乳糖基轉移酶、β-1,4-半乳糖基轉移酶、α-1,3-半乳糖基轉移酶及α-1,4-半乳糖基轉移酶，以催化Gal殘基從UDP-Gal透過α醣苷鍵或β醣苷鍵轉移至多醣受體上。半乳糖基轉移酶可被發現自但不限於GT2、GT6、GT8、GT25及GT92之CAZy家族。葡萄糖基轉移酶為一種醣基轉移酶，其自UDP-葡萄糖（UDP-Glc）供體轉移葡萄糖（Glc）基至多醣受體上。葡萄糖基轉移酶包括α-葡萄糖基轉移酶、β-葡萄糖基轉移酶、β-1,2-葡萄糖基轉移酶、β-1,3-葡萄糖基轉移酶及β-1,4-葡萄糖基轉移酶，以催化Glc殘基從UDP-Glc透過α醣苷鍵或β醣苷鍵轉移至多醣受體上。葡萄糖基轉移酶可被發現自但不限於GT1、GT4及GT25之CAZy家族。甘露糖基轉移酶為一種醣基轉移酶，其自GDP-甘露糖（GDP-Man）供體轉移甘露糖（Man）基至多醣受體上。甘露糖基轉移酶包括α-1,2-甘露糖基轉移酶、α-1,3-甘露糖基轉移酶及α-1,6-甘露糖基轉移酶，以催化Man殘基從GDP-Man透過α醣苷鍵轉移至多醣受體上。甘露糖基轉移酶可被發現自但不限於GT22、GT39、GT62及GT69之CAZy家族。N-乙醯葡萄糖胺轉移酶為一種醣基轉移酶，其自UDP-N-乙醯葡萄糖胺（UDP-GlcNAc）供體轉移N-乙醯葡萄糖胺（GlcNAc）基至多醣受體上。N-乙醯葡萄糖胺轉移酶可被發現自但不限於GT2及GT4之CAZy家族。N-乙醯半乳糖胺轉移酶為一種醣基轉移酶，其自UDP-N-乙醯半乳糖胺（UDP-GalNAc）供體轉移N-乙醯半乳糖胺（GalNAc）基至多醣受體上。N-乙醯半乳糖胺轉移酶可被發現自但不限於GT7及GT12及GT27之CAZy家族。N-乙醯甘露糖胺轉移酶為一種醣基轉移酶，其自UDP-N-乙醯甘露糖胺（UDP-ManNAc）供體轉移N-乙醯甘露糖胺（ManNAc）基至多醣受體上。木糖基轉移酶為一種醣基轉移酶，其自UDP-木糖（UDP-Xyl）供體轉移木糖（Xyl）殘基至多醣受體上。木糖基轉移酶可被發現自但不限於GT14及GT61及GT77之CAZy家族。葡萄糖醛酸轉移酶為一種醣基轉移酶，其自UDP-葡萄糖醛酸鹽供體透過α醣苷鍵或β醣苷鍵轉移葡萄糖醛酸鹽至多醣受體上。葡萄糖醛酸轉移酶可被發現自但不限於GT4、GT43及GT93之CAZy家族。半乳糖醛酸轉移酶為一種醣基轉移酶，其自UDP-半乳糖醛酸鹽供體轉移半乳糖醛酸鹽至多醣受體上。N-羥乙醯神經胺酸轉移酶為一種醣基轉移酶，其自CMP-N-羥乙醯神經胺酸（CMP-N-glycolylneuraminic acid, CMP-Neu5Gc）供體轉移N-羥乙醯神經胺酸（Neu5Gc）至多醣受體上。鼠李糖基轉移酶為一種醣基轉移酶，其自GDP-鼠李糖供體轉移鼠李糖殘基至多醣受體上。鼠李糖基轉移酶可被發現自但不限於GT1、GT2及GT102之CAZy家族。N-乙醯鼠李糖胺轉移酶為一種醣基轉移酶，其自UDP-N-乙醯基-L-鼠李糖胺供體轉移N-乙醯鼠李糖胺殘基至多醣受體上。UDP-4-胺基-4,6-二去氧基-N-乙醯基-β-L-阿卓糖胺轉胺酶為一種醣基轉移酶，其利用UDP-2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-L-阿拉伯糖-4-己酮糖（UDP-2-acetamido-2,6-dideoxy--L-arabino-4-hexulose）於偽胺基酸（pseudaminic acid）生化合成中，所述偽胺基酸為一種類似唾液酸之醣類，且可用以修飾鞭毛蛋白（flagellin）。岩藻糖胺轉移酶為一種醣基轉移酶，其自dTDP-N-乙醯岩藻糖胺或UDP-N-乙醯岩藻糖胺供體轉移N-乙醯岩藻糖胺殘基至多醣受體上。「半乳糖苷β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶（galactoside beta-1,3-N-acetylglucosaminyltransferase）」用語，指涉一種醣基轉移酶，其可以自UDP-GlcNAC透過β-1,3鍵結轉移N-乙醯葡萄糖胺（GlcNAc）殘基至乳糖末端的半乳糖殘基上。

本文可以互相替換使用之「核苷酸醣（nucleotide-sugar）」、「活化醣（activated sugar）」或「核苷（nucleoside）」等詞，指涉單醣之活化型態。活化單醣之範例包括但不限於：UDP-N-乙醯葡萄糖胺（UDP-GlcNAc）、UDP-N-乙醯半乳糖胺（UDP-GalNAc）、UDP-N-乙醯甘露糖胺（UDP-ManNAc）、UDP-葡萄糖（UDP-Glc）、UDP-半乳糖（UDP-Gal）、GDP-甘露糖（GDP-Man）、UDP-葡萄糖醛酸鹽、UDP-半乳糖醛酸鹽、UDP-2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-L-阿拉伯糖-4-己酮糖、UDP-2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-L-木糖-4-己酮糖（UDP-2-acetamido-2,6-dideoxy-L-lyxo-4-hexulose）、 UDP-N-乙醯基-L-鼠李糖胺（UDP-L-RhaNAc或UDP-2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-L-甘露糖（UDP-2-acetamido-2,6-dideoxy-L-mannose））、dTDP-N-乙醯岩藻糖胺、UDP-N-乙醯岩藻糖胺（UDP-L-FucNAc或UDP-2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-L-半乳糖）、 UDP-N-乙醯-L-去氧塔羅糖胺（UDP-N-acetyl-L-pneumosamine）（UDP-L-PneNAC或UDP-2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-L-塔羅糖（UDP-2-acetamido-2,6-dideoxy-L-talose））、UDP-N-乙醯胞壁酸（UDP-N-acetylmuramic acid）、UDP-N-乙醯基-L-奎諾糖胺（UDP-N-acetyl-L-quinovosamine）（UDP-L-QuiNAc或UDP-2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-L-葡萄糖（UDP-2-acetamido-2,6-dideoxy-L-glucose））、GDP-L-奎諾糖（GDP-L-quinovose）、CMP-唾液酸（CMP-Neu5Ac或CMP-N-乙醯神經胺酸）、CMP-N-羥乙醯神經胺酸（CMP-Neu5Gc）、GDP-岩藻糖、GDP-鼠李糖及UDP-木糖。核苷酸醣在醣化作用中作為醣基供體，而醣化作用係由醣基轉移酶所催化。

本文使用之「單醣（monosaccharide）」用語，指涉一種無法透過水解分解為更簡單的糖之醣類，且被歸類為醛醣（aldose）或酮醣（ketose），其每一分子並包含一或多個羥基。單醣為僅包含一簡單糖之醣類。單醣之範例包括：己糖、D-葡萄呱喃糖、D-半乳呋喃糖、D-半乳呱喃糖、L-半乳呱喃糖、D-甘露呱喃糖、D-阿洛呱喃糖（D-Allopyranose）、L-阿卓呱喃糖（L-Altropyranose）、D-古洛呱喃糖（D-Gulopyranose）、L-艾杜呱喃糖（L-Idopyranose）、D-塔羅呱喃糖（D-Talopyranose）、D-核呋喃糖（D-Ribofuranose）、D-核呱喃糖（D-Ribopyranose）、D-阿拉伯呋喃糖、D-阿拉伯呱喃糖、L-阿拉伯呋喃糖、L-阿拉伯呱喃糖、D-木呱喃糖（D-Xylopyranose）、D-來蘇呱喃糖（D-Lyxopyranose）、D-赤藻呋喃糖（D-Erythrofuranose）、D-異赤藻呋喃糖（D-Threofuranose）、庚糖、L-甘油-D-甘露糖-庚呱喃糖（L-glycero-D-manno-Heptopyranose (LDmanHep)）、D-甘油-D-甘露糖-庚呱喃糖（D-glycero-D-manno-Heptopyranose (DDmanHep)）、6-去氧基-L-阿卓呱喃糖、6-去氧基-D-古洛呱喃糖、6-去氧基-D-塔羅呱喃糖、6-去氧基-D-半乳呱喃糖、6-去氧基-L-半乳呱喃糖、6-去氧基-D-甘露呱喃糖、6-去氧基-L-甘露呱喃糖、6-去氧基-D-葡萄呱喃糖、2-去氧基-D-阿拉伯糖-己糖、2-去氧基-D-赤藻糖-戊糖、2,6-二去氧基-D-阿拉伯糖-己呱喃糖、3,6-二去氧基-D-阿拉伯糖-己呱喃糖、3,6-二去氧基-L-阿拉伯糖-己呱喃糖、3,6-二去氧基-D-木糖-己呱喃糖、3,6-二去氧基-D-核糖-己呱喃糖、2,6-二去氧基-D-核糖-己呱喃糖、3,6-二去氧基-L-木糖-己呱喃糖、2-胺基-2-去氧基-D-葡萄呱喃糖、2-胺基-2-去氧基-D-半乳呱喃糖、2-胺基-2-去氧基-D-甘露呱喃糖、2-胺基-2-去氧基-D-阿洛呱喃糖、2-胺基-2-去氧基-L-阿卓呱喃糖、2-胺基-2-去氧基-D-古洛呱喃糖、2-胺基-2-去氧基-L-艾杜呱喃糖、2-胺基-2-去氧基-D-塔羅呱喃糖、2-乙醯胺基-2-去氧基-D-葡萄呱喃糖、2-乙醯胺基-2-去氧基-D-半乳呱喃糖、2-乙醯胺基-2-去氧基-D-甘露呱喃糖、2-乙醯胺基-2-去氧基-D-阿洛呱喃糖、2-乙醯胺基-2-去氧基-L-阿卓呱喃糖、2-乙醯胺基-2-去氧基-D-古洛呱喃糖、2-乙醯胺基-2-去氧基-L-艾杜呱喃糖、2-乙醯胺基-2-去氧基-D-塔羅呱喃糖、2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-D-半乳呱喃糖、2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-L-半乳呱喃糖、2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-L-甘露呱喃糖、2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-D-葡萄呱喃糖、2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-L-阿卓呱喃糖、2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-D-塔羅呱喃糖、 D-葡萄呱喃糖醛酸（D-Glucopyranuronic acid）、D-半乳呱喃糖醛酸、D-甘露呱喃糖醛酸、D-阿洛呱喃糖醛酸、L-阿卓呱喃糖醛酸、D-古洛呱喃糖醛酸、L-古洛呱喃糖醛酸、L-艾杜呱喃糖醛酸、D-塔羅呱喃糖醛酸、唾液酸、5-胺基-3,5-二去氧基-D-甘油-D-半乳糖壬基-2-酮醣酸（5-Amino-3,5-dideoxy-D-glycero-D-galacto-non-2-ulosonic acid）、5-乙醯胺基-3,5-二去氧基-D-甘油-D-半乳糖壬基-2-酮醣酸（5-Acetamido-3,5-dideoxy-D-glycero-D-galacto-non-2-ulosonic acid）、5-羥乙醯胺基-3,5-二去氧基-D-甘油-D-半乳糖壬基-2-酮醣酸（5-Glycolylamido-3,5-dideoxy-D-glycero-D-galacto-non-2-ulosonic acid）、赤藻糖醇（Erythritol）、阿拉伯糖醇、木糖醇、核糖醇、葡萄糖醇、半乳糖醇、甘露糖醇、D-核糖己基-2-酮呱喃糖（D-ribo-Hex-2-ulopyranose）、D-阿拉伯糖己基-2-酮呋喃糖（D-arabino-Hex-2-ulofuranose (D-fructofuranose)）、D-阿拉伯糖己基-2-酮呱喃糖、L-木糖己基-2-酮呱喃糖、D-木糖己基-2-酮呱喃糖、 D-異赤藻糖戊基-2-酮呱喃糖、D-阿卓糖庚基-2-酮呱喃糖、3-C-(羥甲基)-D-赤藻呋喃糖（3-C-(Hydroxymethyl)-D-erythofuranose）、2,4,6-三去氧基-2,4-二胺基-D-葡萄呱喃糖（2,4,6-Trideoxy-2,4-diamino-D-glucopyranose）、6-去氧基-3-O-甲基-D-葡萄糖（6-Deoxy-3-O-methyl-D-glucose）、3-O-甲基-D-鼠李糖、2,6-二去氧基-3-甲基-D-核糖-己糖（2,6-Dideoxy-3-methyl-D-ribo-hexose）、2-胺基-3-O-[(R)-1-羧乙基]-2-去氧基-D-葡萄呱喃糖（2-Amino-3-O-[(R)-1-carboxyethyl]-2-deoxy-D-glucopyranose）、2-乙醯胺基-3-O-[(R)- 羧乙基]-2-去氧基-D-葡萄呱喃糖（2-Acetamido-3-O-[(R)-carboxyethyl]-2-deoxy-D-glucopyranose）、2-羥乙醯胺基-3-O-[(R)- 羧乙基]-2-去氧基-D-葡萄呱喃糖（2-Glycolylamido-3-O-[(R)-1-carboxyethyl]-2-deoxy-D-glucopyranose）、3-去氧基-D-來蘇糖庚基-2-酮呱喃糖酸(3-Deoxy-D-lyxo-hept-2-ulopyranosaric acid)、3-去氧基-D-甘露糖辛基-2-酮呱喃糖酸（3-Deoxy-D-manno-oct-2-ulopyranosonic acid）、3-去氧基-D-甘油-D-半乳糖壬基-2-酮呱喃糖酸（3-Deoxy-D-glycero-D-galacto-non-2-ulopyranosonic acid）、5,7-二胺基-3,5,7,9-四去氧基-L-甘油-L-甘露糖壬基-2-酮呱喃糖酸（5,7-Diamino-3,5,7,9-tetradeoxy-L-glycero-L-manno-non-2-ulopyranosonic acid）、5,7-二胺基-3,5,7,9-四去氧基-L-甘油-L-阿卓糖壬基-2-酮呱喃糖酸（5,7-Diamino-3,5,7,9-tetradeoxy-L-glycero-L-altro-non-2-ulopyranosonic acid）5,7-二胺基-3,5,7,9-四去氧基-D-甘油-D-半乳糖壬基-2-酮呱喃糖酸（5,7-Diamino-3,5,7,9-tetradeoxy-D-glycero-D-galacto-non-2-ulopyranosonic acid）、5,7-二胺基-3,5,7,9-四去氧基-D-甘油-D-塔羅糖壬基-2-酮呱喃糖酸（5,7-Diamino-3,5,7,9-tetradeoxy-D-glycero-D-talo-non-2-ulopyranosonic acid）、2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-L-阿拉伯糖-4-己酮糖、2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-L-來蘇糖-4-己酮糖、N-乙醯基-L-鼠李糖胺、N-乙醯基-D-岩藻糖胺、N-乙醯基-L-去氧塔羅糖胺（N-acetyl-L-pneumosamine）、N-乙醯胞壁酸（N-acetylmuramic acid）、N-乙醯基-L-奎諾糖胺、葡萄糖、半乳糖、N-乙醯葡萄糖胺、葡萄糖胺、甘露糖、木糖）、N-乙醯甘露糖胺、N-乙醯神經胺酸、N-羥乙醯神經胺酸、N-乙醯半乳糖胺、半乳糖胺、岩藻糖、鼠李糖、葡萄醣醛酸（glucuronic acid）、葡萄糖酸（gluconic acid）、果糖及多元醇（polyols）。

本文使用之「寡醣（oligosaccharide）」用語，如所屬技術領域中所通常理解的，指一種醣聚合物，其包含少量（一般為3至20個）簡單糖（即：單醣類）。本發明所用之寡醣可以為線型結構或包括分枝。兩糖單元間之連結（例如：醣苷鍵、乳醣苷鍵、葡萄醣苷鍵等）可以被表示為例如：1,4、1-＞4或(1-4)，且可互相替換使用。每一單醣可以為環型（如：呱喃醣或呋喃醣型態）。寡醣可以包含α與β醣苷鍵兩者或只包含β醣苷鍵。多醣（glycan）及聚醣（polysaccharide）等詞可以互相替換使用，且指涉一化合物包括大量透過醣苷鍵連結之單醣。多醣一詞常用於包含多於10個單醣殘基之化合物。

本文使用之「具有LN3作為核心三醣的寡醣」用語，指乳糖-N-三糖，或包含進一步醣化之乳糖-N-三醣的寡醣。所述寡醣較佳為包含選自本文上方所列名單的單醣。本發明之寡醣範例包括但不限制於Lewis型抗原寡醣及哺乳動物乳寡醣（mammalian milk oligosaccharides, MMOs），且較佳為具有LN3作為核心三醣的人乳寡醣（HMOs）。上述範例包括：乳糖-N-三糖、乳糖-N-四糖、乳糖-N-新四糖、乳糖-N-岩藻五糖I、乳糖-N-新岩藻五糖I、乳糖-N-岩藻五糖II、乳糖-N-岩藻五糖III、乳糖-N-岩藻五糖V、乳糖-N-岩藻五糖VI、乳糖-N-新岩藻五糖V、乳糖-N-二岩藻六糖I、乳糖-N-二岩藻六糖II、乳糖-N-六糖（lacto-N-hexaose, LNH）、乳糖-N-新六糖（lacto-N-neohexaose, LNnH）、對-乳糖-N-六糖（para-lacto-N-hexaose, pLNnH）、對-乳糖-N-新六糖（para-lacto-N-neohexaose, pLNH）、二岩藻糖基-乳糖-N-六糖、二岩藻糖基-乳糖-N-新六糖、乳糖-N-五糖（lacto-N-pentaose, LNP）、乳糖-N-新五糖、對乳糖-N-五糖、對乳糖-N-新五糖、乳糖-N-novo五糖I、乳糖-N-七糖、乳糖-N-新七糖、對乳糖-N-新七糖、對乳糖-N-七糖、乳糖-N-八糖（lacto-N-octaose, LNO）、乳糖-N-新八糖、異乳糖-N-八糖、對乳糖-N-八糖、異乳糖-N-新八糖、novo乳糖-N-新八糖、對乳糖-N-新八糖、異乳糖-N-九糖、novo乳糖-N-九糖、乳糖-N-九糖、乳糖-N-十糖、異乳糖-N-十糖、novo乳糖-N-十糖、乳糖-N-新十糖、唾液酸基-乳糖-N-四糖a（Sialyl-lacto-N-tetraose a）、唾液酸基-乳糖-N-四糖b、唾液酸基-乳糖-N-四糖c、唾液酸基-乳糖-N-四糖d。本發明之寡醣（即：本文所定義之具有LN3作為核心三醣的寡醣）較佳為哺乳動物乳寡醣（MMO），更佳為人乳寡醣（HMO），甚至更佳為具有LNT或LNnT作為核心四醣的HMO或MMO，甚至更佳為具有LNT或LNnT作為核心四醣的MMO，最佳為LNT或LNnT。在本發明脈絡中，本發明所述寡醣亦較佳為中性的寡醣（即：所述寡醣並無源自於羧基的負電）。

本發明所用之「LNT II」、「LNT-II」、「LN3」、「乳糖-N-三糖II」、「乳糖-N-三糖」、「乳糖-N-三糖」或「GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc」可以互相替換使用。

本發明所用之「LNT」、「乳糖-N-四糖」、「乳糖- N-四糖」或「Galβ1-3GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc」可以互相替換使用。

本發明所用之「LNnT」、「乳糖- N-新四糖」、「乳糖- N-新四糖」、「新-LNT」或「Galβ1-4GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc」可以互相替換使用。

本發明所用之「LSTa」、「LS-四醣a」、「唾液酸基-乳糖-N-四糖a」、「唾液酸基乳糖-N-四糖a」或「Neu5Ac-a2,3-Gal-b1,3-GlcNAc-b1,3-Gal-b1,4-Glc」可以互相替換使用。

本發明所用之「LSTb」、「LS-四醣b」、「唾液酸基-乳糖-N-四糖b」、「唾液酸基乳糖-N-四糖b」或「Gal-b1,3-(Neu5Ac-a2,6)-GlcNAc-b1,3-Gal-b1,4-Glc」可以互相替換使用。

本發明所用之「LSTc」、「LS-四醣c」、「唾液酸基-乳糖-N-四糖c」、「唾液酸基乳糖-N-四糖c」、「唾液酸基乳糖-N-新四糖c （sialyllacto-N-neotetraose c）」或「Neu5Ac-a2,6-Gal-b1,4-GlcNAc-b1,3-Gal-b1,4-Glc」可以互相替換使用。

本發明所用之「LSTd」、「LS-四醣d」、「唾液酸基-乳糖-N-四糖d」、「唾液酸基乳糖-N-四糖d」、「唾液酸基乳糖-N-新四糖d （sialyllacto-N-neotetraose d）」或「Neu5Ac-a2,3-Gal-b1,4-GlcNAc-b1,3-Gal-b1,4-Glc」可以互相替換使用。

哺乳動物乳寡醣包括在泌乳之任何階段所發現存在於乳汁中之單醣，包括人類及哺乳動物之初乳（colostrum milk），上述哺乳動物包括但不限於：乳牛（ Bos Taurus）、綿羊（ Ovis aries）、家山羊（ Capra aegagrus hircus）、雙峰駱駝（ Camelus bactrianus）、馬（ Equus ferus caballus）、豬（ Sus scropha）、家犬（ Canis lupus familiaris）、日本棕熊（ Ursus arctos yesoensis）、北極熊（ Ursus maritimus）、日本黑熊（ Ursus thibetanus japonicus）、臭鼬（ Mephitis mephitis）、冠海豹（ Cystophora cristata）、亞洲象（ Elephas maximus）、非洲象（ Loxodonta africana）、大食蟻獸（ Myrmecophaga tridactyla）、瓶鼻海豚（ Tursiops truncates）、小鬚鯨（ Balaenoptera acutorostrata）、尤金袋鼠（ Macropus eugenii）、紅大袋鼠（ Macropus rufus）、刷尾負鼠（ Trichosurus Vulpecula）、無尾熊（ Phascolarctos cinereus）、東袋鼬（ Dasyurus viverrinus）、鴨嘴獸（ Ornithorhynchus anatinus）。

本文使用之「途徑（pathway）」，指一生物化學途徑，其組成自合成本文所定義之寡醣的酵素及其各別基因。上述寡醣生產途徑包括但不限於：合成核苷酸活化醣（nucleotide-activated sugar）所涉及之途徑，以及轉移所述核苷酸活化醣至受體以形成本發明之寡醣的途徑。上述途徑之範例包括但不限於：岩藻糖化、唾液酸化、半乳糖化、N-乙醯葡萄糖胺化、N-乙醯半乳糖胺化、甘露糖化、N-乙醯甘露糖胺化途徑。

本文使用之「岩藻糖化途徑（fucosylation pathway）」，指一生物化學途徑，其組成自酵素及其各別基因、甘露糖-6-磷酸異構酶（mannose-6-phosphate isomerase）、磷酸甘露糖變位酶（phosphomannomutase）、甘露糖-1-磷酸鳥苷酸轉移酶（mannose-1-phosphate guanyltransferase）、GDP-甘露糖-4,6-脫水酶（GDP-mannose 4,6-dehydratase）、GDP-L-岩藻糖合成酶（GDP-L-fucose synthase）及/或再利用途徑（salvage pathway）之L-岩藻糖激酶/GDP-岩藻糖焦磷酸化酶（L-fucokinase/GDP-fucose pyrophosphorylase），並結合岩藻糖基轉移酶，以形成α1,2、α1,3、α1,4或α1,6之岩藻糖化寡醣。

本文使用之「唾液酸化途徑（sialylation pathway）」，指一生物化學途徑，其組成自酵素及其各別基因、L-麩胺酸-D-果糖-6-磷酸胺基轉移酶（L-glutamine—D-fructose-6-phosphate aminotransferase）、葡萄糖胺-6-磷酸去胺酶（glucosamine-6-phosphate deaminase）、磷酸葡萄糖胺變位酶（phosphoglucosamine mutase）、N-乙醯葡萄糖胺-6-磷酸去乙醯酶（N-acetylglucosamine-6-phosphate deacetylase）、N-乙醯葡萄糖胺表異構酶（N-acetylglucosamine epimerase）、UDP- N-乙醯葡萄糖胺2-表異構酶（UDP-N-acetylglucosamine 2-epimerase）、N-乙醯葡萄糖胺-6-磷酸 2-表異構酶（N-acetylglucosamine-6-phosphate 2-epimerase）、葡萄糖胺-6-磷酸N-乙醯基轉移酶（Glucosamine 6-phosphate N-acetyltransferase）、N-乙醯葡萄糖胺-6-磷酸磷酸酶（N-AcetylGlucosamine-6-phosphate phosphatase）、N-乙醯甘露糖胺-6-磷酸磷酸酶（N-acetylmannosamine-6-phosphate phosphatase）、N-乙醯甘露糖胺激酶（N-acetylmannosamine kinase）、磷酸乙醯葡萄糖胺變位酶（phosphoacetylglucosamine mutase）、N-乙醯葡萄糖胺-1-磷酸尿苷醯轉移酶（N-acetylglucosamine-1-phosphate uridyltransferase）、葡萄糖胺-1-磷酸乙醯基轉移酶（glucosamine-1-phosphate acetyltransferase）、唾液酸合成酶（sialic acid synthase）、N-乙醯神經胺酸解離酶（N-acetylneuraminate lyase）、N-醯基神經胺酸-9-磷酸合成酶（N-acylneuraminate-9-phosphate synthase）、N-醯基神經胺酸-9-磷酸磷酸酶（N-acylneuraminate-9-phosphate phosphatase）及/或CMP-唾液酸合成酶（CMP-sialic acid synthase），並結合唾液酸轉移酶，以形成α2,3、α2,6、α2,8之唾液酸化寡醣。

本文使用之「半乳糖化途徑（galactosylation pathway）」，指一生物化學途徑，其組成自酵素及其各別基因、半乳糖-1-表異構酶（galactose-1-epimerase）、半乳糖激酶（galactokinase）、葡萄糖激酶（glucokinase）、半乳糖-1-磷酸尿苷醯轉移酶（galactose-1-phosphate uridylyltransferase）、UDP-葡萄醣4-表異構酶（UDP-glucose 4-epimerase）、葡萄糖-1-磷酸尿苷醯轉移酶（glucose-1-phosphate uridylyltransferase）及/或葡萄磷酸變位酶（glucophosphomutase），並結合半乳糖基轉移酶，以在單、雙或寡醣的2、3、4、6羥基上形成α或β鍵結之半乳糖。

本文使用之「N-乙醯葡萄糖胺化途徑（N-acetylglucosaminylation pathway）」，指一生物化學途徑，其組成自酵素及其各別基因、L-麩胺酸-D-果醣-6-磷酸胺基轉移酶、葡萄糖胺-6-磷酸去胺酶、磷酸葡萄醣胺變位酶、N-乙醯葡萄糖胺-6-磷酸去乙醯酶、葡萄糖胺-6-磷酸N-乙醯轉移酶、N-乙醯葡萄糖胺-1-磷酸尿苷醯轉移酶、葡萄糖胺-1-磷酸乙醯基轉移酶及/或葡萄糖胺-1-磷酸乙醯基轉移酶，並結合醣基轉移酶，以在單、雙或寡醣的3、4、6羥基上形成α或β鍵結之N-乙醯葡萄糖胺。

本文使用之「N-乙醯半乳糖胺化途徑（N-acetylgalactosylation pathway）」，指一生物化學途徑，其組成自酵素及其各別基因、L-麩胺酸-D-果醣-6-磷酸胺基轉移酶、磷酸葡萄醣胺變位酶、N-乙醯葡萄糖胺1-磷酸尿苷醯轉移酶（N-acetylglucosamine 1-phosphate uridylyltransferase）、UDP-N-乙醯葡萄糖胺4-表異構酶（UDP-N-acetylglucosamine 4-epimerase）、UDP-半乳糖4-表異構酶（UDP-galactose 4-epimerase） N-乙醯半乳糖胺激酶（N-acetylgalactosamine kinase）及/或UDP-N-乙醯半乳糖胺焦磷酸化酶（ UDP-GalNAc pyrophosphorylase），並結合醣基轉移酶，以在單、雙或寡醣上形成α或β鍵結之N-乙醯半乳糖胺。

本文使用之「甘露糖化途徑（mannosylation pathway）」，指一生物化學途徑，其組成自酵素及其各別基因、甘露糖-6-磷酸異構酶、磷酸甘露糖變位酶（phosphomannomutase）及/或甘露糖-1-鳥苷酸轉移酶，並結合醣基轉移酶，以在單、雙或寡醣上形成α或β鍵結之甘露糖。

本文使用之「N-乙醯甘露糖胺化途徑（N-acetylmannosinylation pathway）」，指一生物化學途徑，其組成自酵素及其各別基因、L-麩胺酸-D-果糖-6-磷酸胺基轉移酶、葡萄糖胺-6-磷酸去胺酶、磷酸葡萄糖胺變位酶、N-乙醯葡萄糖胺-6-磷酸去乙醯酶、葡萄糖胺-6-磷酸N-乙醯基轉移酶、N-乙醯葡萄糖胺-1-磷酸尿苷醯轉移酶、葡萄糖胺-1-磷酸乙醯基轉移酶、葡萄糖胺-1-磷酸乙醯基轉移酶、UDP-GlcNAc 2-表異構酶（UDP-GlcNAc 2-epimerase）及/或N-乙醯甘露糖胺激酶（ManNAc kinase），並結合醣基轉移酶，以在單、雙或寡醣上形成α或β鍵結之N-乙醯甘露糖胺。

本文使用之「膜蛋白（membrane protein）」，指一蛋白質，其為細胞膜的一部分或與細胞膜交互作用，並控制分子及訊息流過細胞。因此，膜蛋白參與了運輸，不論是輸入或輸出細胞。

上述膜蛋白可以為轉運蛋白分類資料庫（Transporter Classification Database, TCDB）所定義的運輸蛋白（porters）、P-P鍵水解驅動轉運蛋白（P-P-bond-hydrolysis-driven transporters）或β-桶狀孔蛋白（β-Barrel Porins），上述資料庫係由Saier Lab Bioinformation Group（可得於：www.tcdb.org）所營運及規劃，且其提供膜運輸蛋白功能上及親緣關係上的分類。所述轉運蛋白分類資料庫為膜運輸蛋白敘明瞭一種IUBMB核准的全面分類，此分類被稱為轉運蛋白分類系統（Transporter classification system, TC system）。本文所述之TCDB分類搜尋係由2019年6月17日所發佈之TCDB.org 所定義。

運輸蛋白（porters）為運用載體媒介方式（carrier-mediated process）之單向運輸蛋白（uniporters）、同向運輸蛋白（symporters）及反向運輸蛋白（antiporters）的總稱(Saier等人，Nucleic Acids Res. 44 (2016) D372-D379)。上述運輸蛋白屬於電化學電位驅動轉運蛋白，並亦被稱作二級載體型促進者（secondary carrier-type facilitators）。膜蛋白被包含於上述分類中，當其在單一物質透過促進性擴散時，或假設溶質帶電而透過細胞膜電位依賴型運輸時，利用載體媒介方式催化單向運輸；在二或多個物質被以緊密連結（但除化學滲透能外不以直接能量形式連結）方式往相反方向運輸時，利用載體媒介方式催化反向運輸；及/或在二或多個物質被以緊密連結（但除化學滲透能外不以直接能量形式連結）方式往相同方向運輸時，利用載體媒介方式催化同向運輸（Forrest等人，Biochim. Biophys. Acta 1807 (2011) 167-188）。上述運輸系統通常為立體專一性（stereospecific）。溶質逆向運輸（solute countertransport）為二級載體之性質特徵。運輸蛋白及酵素之動態聯結形成功能上的膜運輸代謝群組（metabolons），且通常引導源自細胞外液之受質直接進入其細胞代謝中（Moraes 與 Reithmeier, Biochim. Biophys. Acta 1818 (2012), 2687-2706）。透過此運輸蛋白系統運輸之溶質包括但不限於：陽離子、有機陰離子、非有機陰離子、核苷、胺基酸、多元醇、磷酸糖解化之中間產物、滲透劑（osmolytes）、螯鐵蛋白（siderophores）。

膜蛋白被包含於P-P鍵水解驅動轉運蛋白分類中，倘其水解非有機焦磷酸鹽、ATP或另一核苷三磷酸之雙磷酸鍵，以驅動主動攝取或排出溶質（Saier等人，Nucleic Acids Res. 44 (2016) D372-D379）。上述膜蛋白可能或可能未被短暫磷酸化，但受質未被磷酸化。透過此P-P鍵水解驅動轉運蛋白運輸之受質包括但不限於：陽離子、重金屬、β-葡聚醣（β-glucan）、UDP-葡萄糖、脂多醣、磷壁酸（teichoic acid）。

源自跨膜孔之β-桶狀孔蛋白通常允許溶質以能量獨立之方式跨越細胞膜。此些蛋白的跨膜部分專屬為行程β-桶狀的β-股（β-strand）（Saier等人，Nucleic Acids Res. 44 (2016) D372-D379）。上述孔狀蛋白被發現於革蘭氏陰性菌、粒線體、質體體（plastid）的外膜，及可能於抗酸性格蘭氏陽性菌的外膜。透過此β-桶狀孔蛋白運輸之受質包括但不限於：核苷、棉子糖（raffinose）、葡萄糖、β-葡萄糖苷（beta-glucosides）、寡醣。

「致能排出（enabled efflux）」用語，表示引發溶質跨越細胞質膜及/或細胞壁之運輸活動。所述運輸可能透過引發及/或提升本發明所述轉運蛋白之表現而被賦予。「強化排出（enhanced efflux）」用語，表示改良受質跨越細胞膜及/或細胞壁之運輸活動。所述運輸可能透過引發及/或提升本發明所述之轉運蛋白的表現而被強化。所述蛋白的「表現」，在編碼轉運蛋白的基因係內源基因時，被定義為「過表現」；在編碼轉運蛋白的基因係野生型品系不存在的異源基因時，被定義為「表現」。

本文使用之「細胞生產指數（cell productivity index）」，指重組細胞所產生的產物質量除以培養所產生的重組細胞質量。

本文使用於指涉具有LN3作為核心三醣的寡醣之「非天然的（non-native）」用語，表示所述寡醣為非自然產生，或與藉由細胞自然產生的量不同，且所述細胞為經基因修飾以具有產生所述寡醣的能力，或可以產生較多所述寡醣。

「純化的（purified）」用語，指物質實質上或基本上不含幹擾生物分子活性的成分。對於細胞、醣類、核酸及多肽而言，「純化的」指物質實質上或基本上不含於自然狀態下通常被發現伴隨於所述物質的成分。一般而言，本發明純化的醣類、寡醣、蛋白質或核酸，藉由測量銀染膠片（silver stained gel）之譜帶強度（band intensity）或其他方法測定純度時，具有至少約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80% 或 85% 之純度，且通常具有至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99% 之純度。純度及均質性（homogeneity）可以透過所述技術領域所熟知之複數個方式測定，例如蛋白質或核酸樣本之聚丙烯醯胺膠體電泳，再透過染色視覺化。為了某些需要高解析度之目的，會運用HPLC或相似之方法進行純化。對於寡醣，可以透過包括但不限於：薄層層析、氣相層析、NMR、HPLC、毛細管電泳或質譜法等方法測定純度。

「培養（cultivation）」用語，指細胞被培養或發酵的培養培養基、細胞本身以及細胞在整個肉湯(broth)中產生之具有LN3作為核心多醣的寡醣，即：在細胞裡面（胞內）或外面（胞外）。

本文使用之「前驅物（precursor）」，指被細胞攝取或合成以用於產生依據本發明之寡醣之物質。在此情況下，前驅物可以為本文所定義之受體，但也可以為先在細胞中修改以作為生化合成寡醣路徑一部分的另一物質或代謝物。所述前驅物之範例包括本文所定義之受體，及/或葡萄糖、半乳糖、果糖、甘油、唾液酸、岩藻糖、甘露糖、麥芽糖、蔗糖、乳糖、葡萄糖-1-磷酸、半乳糖-磷酸、UDP-葡萄糖、UDP-半乳糖、葡萄糖-6-磷酸、果糖-6-磷酸、果糖-1,6-二磷酸、甘油-3-磷酸、二羥丙酮、甘油醛-3-磷酸、二羥丙酮磷酸、葡萄糖胺-6-磷酸、葡萄糖胺、N-乙醯基-葡萄糖胺-6-磷酸、N-乙醯基-葡萄糖胺、N-乙醯基-甘露糖胺、N-乙醯基甘露糖胺-6-磷酸、UDP-N-乙醯葡萄糖胺、N-乙醯葡萄糖胺-1-磷酸、N-乙醯神經胺酸（唾液酸）、N-乙醯基-神經胺酸-9-磷酸、CMP-唾液酸、甘露糖-6-磷酸、甘露糖-1-磷酸、GDP-甘露糖、GDP-4-脫氫-6-去氧基-α-D-甘露糖（GDP-4-dehydro-6-deoxy-α-D-mannose）及/或GDP-岩藻糖。

細胞任選地轉化成包括至少一核酸序列，以編碼選自下列所組成之蛋白群組：乳糖運輸蛋白、N-乙醯神經胺酸運輸蛋白、岩藻糖運輸蛋白、核苷酸活化醣之運輸蛋白（transporter for a nucleotide-activated sugar），其中所述運輸蛋白內化於添加合成本發明之寡醣之前驅物的介質中。

本文使用之「受體（acceptor）」，指可以被醣基轉移酶修飾的單、雙或寡醣。此些受體的範例包括：葡萄糖、半乳糖、果糖、甘油、唾液酸、岩藻糖、甘露糖、麥芽糖、蔗糖、乳糖、乳糖-N-三糖、乳糖-N-四糖（LNT）、乳糖-N-新四糖（LNnT）、乳糖-N-五糖（LNP）, 乳糖-N-新五糖、對乳糖-N-五糖、對乳糖-N-新五糖、乳糖-N-novo五糖I、乳糖-N-六糖（LNH）、乳糖-N-新六糖（LNnH）、對乳糖-N-新六糖（pLNnH）、對乳糖-N-六糖（pLNH）、乳糖-N-七糖、乳糖-N-新七糖、對乳糖-N-新七糖、對乳糖-N-七糖、乳糖-N-八糖（LNO）、乳糖-N-新八糖、異乳糖-N-八糖、對乳糖-N-八糖、異乳糖-N-新八糖、novo 乳糖-N-新八糖、對乳糖-N-新八糖、異乳糖-N-九糖、novo 乳糖-N-九糖、乳糖-N-九糖、乳糖-N-十糖、異乳糖-N-十糖、novo 乳糖-N-十糖、乳糖-N-新十糖、及包含一或多個N-乙醯乳糖胺單元及/或一或多個乳糖-N-雙糖（lacto-N-biose）單元的寡醣，或寡醣的中間物，或上述之岩藻糖化或唾液酸化物。

發明詳細說明

在一第一態樣中，本發明提供一用於如於此所定義之包括LN3作為核心三醣之寡醣之產生之代謝工程的細胞。於此，所提供之代謝工程的細胞其包括一半乳糖苷-β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶（galactoside beta-1,3-N-acetylglucosaminyltransferase）的至少一核酸序列，此半乳糖苷-β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶自一UDP-GlcNAc供體轉移一N-乙醯葡萄糖胺（GlcNAc）殘基至一乳糖受體上，從而合成LN3，且其更包括（i）一內源膜蛋白的過表現及/或（ii）一異源膜蛋白的表現，提供一包括LN3作為一核心三醣的寡醣的經改良的生產及/或經啟動及/或經提升的排出。所述細胞可更包括編碼一醣基轉移酶（glycosyltransferase）的至少一核酸序列，所述醣基轉移酶具有修飾所述LN3成一包括LN3作為核心三醣之寡醣的能力。

根據一第二態樣，本發明提供一藉由一基因修飾細胞產生一具有LN3作為一核心三醣的寡醣的方法。此方法包括步驟： 1) 提供一具有產生一具有LN3作為一核心三醣的寡醣的能力的細胞，所述細胞包括一半乳糖苷-β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶（galactoside beta-1,3-N-acetylglucosaminyltransferase）的至少一核酸序列，此半乳糖苷-β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶自一UDP-GlcNAc供體轉移一N-乙醯葡萄糖胺（GlcNAc）殘基至一乳糖受體上，從而合成LN3，所述細胞更包括 i）一內源膜蛋白，更特別是，一涉及一具有LN3作為一核心三醣的寡醣之生產及/或排出的內源膜蛋白，甚至更特別是，一啟動及/或提升一具有LN3作為一核心三醣的寡醣的生產及/或啟動及/或提升一具有LN3作為一核心三醣的寡醣的排出的內源膜蛋白的過表現，及/或 ii）一異源膜蛋白的表現，更特別是，一涉及一具有LN3作為一核心三醣的寡醣之生產與排出的異源膜蛋白，甚至更特別是，一啟動及/或提升一具有LN3作為一核心三醣的寡醣的生產及/或啟動及/或提升一具有LN3作為一核心三醣的寡醣的排出的異源膜蛋白的表現，與 2) 在允許產生所需具有LN3作為一核心三醣的寡醣之條件下，培養此細胞於一培養基中。

在整個申請中，除非另有說明，動詞「培養(cultivate)」（及其動詞變化形式）與「培養(culture)」在本發明的上下文中可互換使用。

在本發明的上下文中，較佳為本發明所述內源膜蛋白及/或所述異源膜蛋白不是乳糖通透酶(lactose permease)（例如由lacy基因或lac12基因所編碼），較佳為其中所述乳糖通透酶係以序列識別號52呈現。然而，此較佳實施例不排除在本發明的細胞中存在乳糖滲透酶。該技術領域中具有通常知識者理解，根據本發明的所述細胞（過表現內源膜蛋白及/或表現異源膜蛋白）可以通過乳糖通透酶（例如，序列識別號52）的引入及/或過表現另外被基因修飾以將乳糖輸入細胞中如於此進一步描述的。

較佳為，所述細胞更包括編碼具修飾所述LN3之能力的醣基轉移酶的至少一核酸序列。

較佳為，具有具有LN3作為一核心三醣的寡醣係從培養物(cultivation)被分離，如於此所解釋。

在本發明的範圍內，允許條件被理解為與物理或化學參數相關的條件，包括但不限於溫度、pH、壓力、滲透壓語產物/前驅物/受體濃度。

在一特別實施例中，允許的條件可能包括30 +/- 20 攝氏度的溫度範圍，7 +/- 3的pH範圍。

在本發明的方法及/或細胞的一個較佳實施例中，代謝工程細胞以基因表現模組(modules)修飾，其中來自任何一種所述表現模組的表現是組成型(constitutive)的或可調節的(tuneable)。所述表現模組也已知為轉錄單元並且包括用於重組基因之表現的多核苷酸，其包括編碼基因序列與可操作地連接到編碼基因的適當的轉錄及/或轉譯控制訊號。所述控制訊號包括啟動子序列、非轉譯區、核醣體結合位點、終止子序列。所述表現模組可以包含用於一單一重組基因之表現的要素，但也可以包含用於表現更多重組基因之表現的要素或可以被組織成用以兩個或更多個重組基因之整合表現的操縱子結構(operon structure)。所述多核苷酸可使用本領域熟知的技術藉由重組DNA技術產生。該技術領域中具有通常知識者熟知的構建表現模組的方法包括，例如，體外重組DNA技術、合成技術與體內基因重組。參見，例如於Sambrook et al. (2001) Molecular Cloning: a laboratory manual, 3rd Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, CSH, New York or to Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, N.Y.（1989及每年更新）中所描述的技術。

根據本發明的一較佳實施例，以一種或更多之表現模組修飾細胞。表現模組可以整合到所述細胞的基因體中，或者可以在載體上呈遞給所述細胞。所述載體可以以質體(plasmid)、黏接質體(cosmid)、噬菌體(phage)、脂質體(liposome)或病毒(virus)的形式存在，其將被穩定地轉形(transformed)/轉染(transfected)到所述代謝工程細胞中。此類載體尤其包括染色體、游離基因體(episomes)與病毒衍生的載體，例如來自細菌質體、來自噬菌體、來自轉座子(transposons)、來自酵母游離基因體、來自插入要素(insertion elements)、來自酵母染色體要素(chromosomal elements)、來自病毒的載體，以及來自其組合之載體，例如衍生自質體與噬菌體基因要素(genetic elements)的那些，例如黏接質體和噬菌粒。這些載體可以包含選擇標記，例如但不限於抗生素標記、營養缺陷(auxotrophic)標記、毒素-抗毒素標記、RNA有義(sense)/反義(antisense)標記。表現系統構建體可以包含調節以及引起表現的控制區。一般而言，任何適合在宿主中維持、繁殖或表現多核苷酸和/或表現多肽的系統或載體均可用於這方面的表現。合適的DNA序列可以藉由多種周知的常規技術之的任何一種插入到表現系統中，例如Sambrook et al.所述的那些，參見上文。對於重組生產，可以對細胞進行基因修飾以引入本發明的表現系統或其部分或多核苷酸。可以藉由許多標準實驗室手冊例如Davis et al.，分子生物學的基本方法，(1986)與前方Sambrook et al.，1989，中描述的方法來造成多核苷酸至細胞的引入。

如於此所使用，表現模組包含用於至少一重組基因之表現的多核苷酸。所述重組基因涉及在所述糖基化產物的合成中起作用的多肽的表現；或所述重組基因與所述宿主細胞中不參與所述糖基化產物之合成的其他途徑相連。所述重組基因編碼具有修飾的表現或活性的內源蛋白，較佳為，所述內源蛋白是過表現的；或所述重組基因編碼異源蛋白，所述異源蛋白被異源引入所述修飾細胞中並表現，較佳為過表現。內源蛋白質可以在也表現異源蛋白質的細胞中具有經修飾的表現。

根據本發明的較佳實施例，所述表現模組中的每一個的表現是組成型或可調節的，如於此所定義。

根據本發明的方法及/或細胞的一較佳實施例，細胞被代謝工程以包括用於於此所定義之具有LN3作為一核心三醣的寡醣之產生的途徑。在一更進一步之較佳實施例中，細胞包括一具有將乳糖或中間體修飾成LN3之能力的重組半乳糖苷-β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶。在一甚至更一進一步較佳實施例中，細胞包括另一具有將LN3或LN3的衍生物修飾成具有LN3作為一核心三醣的寡醣的重組醣基轉移酶的能力。

在此方法及/或細胞的另一較佳實施例中，該細胞被基因修飾以表現UDP-GlcNAc的重新(de novo)合成。UDP-GlcNAc可由一細胞中表現的酵素或由細胞之代謝提供。這種產生UDP-GlcNAc 的細胞可以表現例如，將要添加到細胞的 GlcNAc轉化成UDP-GlcNAc的酵素。這些酵素可為來自包括智人、大腸桿菌之幾個物種之一N-乙醯基-D-葡糖胺激酶(N-acetyl-D-glucosamine kinase)、一N-乙醯基葡糖胺-6-磷酸脫乙醯酶(N-acetylglucosamine-6-phosphate deacetylase)、一磷酸葡糖胺變位酶(phosphoglucosamine mutase)與一N-乙醯基葡糖胺-1-磷酸尿苷基轉移酶/葡糖胺-1-磷酸乙醯轉移酶(N-acetylglucosamine-1-phosphate uridyltransferase/glucosamine-1-phosphate acetyltransferase)。較佳為，細胞被修飾以產生UDP-GlcNAc。更佳為，細胞被修飾以提升UDP-GlcNAc的產生。所述修飾可為選自包括一N-乙醯葡萄糖胺-6-磷酸脫乙醯酶的敲除、一L-麩醯胺酸-D-果糖-6-磷酸胺基轉移酶(L-glutamine—D-fructose-6-phosphate aminotransferase)的過表現、一磷酸葡萄糖胺變位酶(phosphoglucosamine mutase)的過表現與一N-乙醯葡萄糖胺- 1-磷酸尿苷基轉移酶/葡萄糖胺-1-磷酸乙醯轉移酶的過表現之群組的任一種或更多種。

另外或替代地，與此使用的宿主細胞視需要而定地被基因修飾以藉由一乳糖滲透酶的引入及/或過表現將乳糖輸入細胞中。所述乳糖滲透酶例如由lacY基因或lac12基因所編碼。

根據本發明的方法及/或細胞，細胞表現一膜蛋白。膜蛋白是具有經修飾表現的內源蛋白，較佳為所述內源蛋白是過表現的；或者膜蛋白是異源蛋白，其可以被細胞異源表現。然後將異源表現的膜蛋白引入並表現，較佳為過表現。在另一實施例中，內源蛋白可以在也表現異源膜蛋白的細胞中具有經修飾的表現。在另一實施例中，一內源性膜蛋白的修飾表現包括在所述內源性膜蛋白的相同操縱子中定位(map)及/或共享用於表現的共同控制序列的其他蛋白的驚修飾表現。在另一實施例中，膜蛋白與共享相同調節子(regulon)的終端(conterminal)蛋白一起表現。在另一個實施方案中，當膜蛋白是內膜轉運蛋白(複合物)時，膜蛋白與一種或多種外膜轉運蛋白一起表現。在一替代實施例中，當膜蛋白是外膜轉運蛋白時，膜蛋白與一種或多種內膜蛋白一起表現。在替代實施例中，膜蛋白與一種或多種內膜蛋白和/或一種或多種外膜蛋白一起表現。根據本發明的另一個實施例，編碼膜蛋白的多核苷酸適用於各個細胞或表現系統的密碼子使用。

在本發明的方法及/或細胞的更進一步較佳實施例中，膜蛋白係選自運輸蛋白（porters）、P-P鍵水解驅動轉運蛋白（P-P-bond-hydrolysis-driven transporters）、及β-桶狀孔蛋白（β-Barrel Porins）之群組。

在本發明的方法及/或細胞的一較佳實施例中，當膜蛋白係選自運輸蛋白之群組，膜蛋白係選自-TCDB分類 2.A.1.1、2.A.1.2、2.A.1.3、2.A.1.6、 2.A.2.2、2.A.7.1及2.A.66之群組。

在本發明的方法及/或細胞的一替代較佳實施例中，當膜蛋白係選自運輸蛋白膜蛋白之群組，膜蛋白係選自eggnog家族 05E8G、05EGZ、05JHE、07QF7、 07QRN、07RBJ、0814C及08N8A之群組。

在本發明的方法及/或細胞的另一較佳實施例中，當膜蛋白係選自運輸蛋白膜蛋白之群組，膜蛋白係選自PFAM列表 PF00893、PF01943、PF05977、PF07690 及PF13347。

在本發明的方法及/或細胞的另一較佳實施例中，當膜蛋白係選自運輸蛋白膜蛋白之群組，膜蛋白係選自interpro列表IPR000390、IPR001411、IPR001927、IPR002797、IPR004638、IPR005829、IPR010290、IPR011701、IPR020846、IPR023721、IPR023722、IPR032896、IPR036259及IPR039672。

在本發明的方法及/或細胞的另一較佳實施例中，當膜蛋白係選自運輸蛋白膜蛋白之群組，膜蛋白係選自源自 Cronobacter muytjensii之具有序列識別號01的MdfA、源自雷根斯堡預研菌（ Yokenella regensburgei）（ATCC43003）之具有序列識別號02的MdfA、源自大腸桿菌（ Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號03的MdfA、源自腸桿菌屬（ Enterobacter sp.）之具有序列識別號04的MdfA、源自克氏檸檬酸桿菌（ Citrobacter koseri）之具有序列識別號05的MFS、源自 Citrobacter youngae之具有序列識別號06的MdfA、源自大腸桿菌（ Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號07的YbdA、源自源自大腸桿菌（ Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號08的YjhB、源自大腸桿菌（ Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號09的WzxE、源自大腸桿菌（ Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號10的EmrE、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（ Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號11的Blon_2331、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（ Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號12的 Blon_0247、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（ Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號13的Blon_0345、源自肺炎克雷伯氏菌（ Klebsiella pneumoniae）之具有序列識別號14的IceT、源自阪崎腸桿菌（ Cronobacter sakazakii）品系MOD1_LR753之具有序列識別號53的MdfA、源自粉末佛朗哥氏菌（ Franconibacter pulveris）LMG 24059之具有序列識別號54的MdfA、源自霍氏腸桿菌（ Enterobacter hormaechei）品系017之具有序列識別號55的MdfA、源自克氏檸檬酸桿菌（ Citrobacter koseri）品系NCTC10771之具有序列識別號56的MdfA、源自 腸道沙門氏菌 arizonae亞種血清型41:z4,z23:- 品系TAMU30EF之具有序列識別號57的MdfA、源自副痢疾桿菌（ Shigella flexneri）品系585219之具有序列識別號58的MdfA、源自雷根斯堡預研菌（ Yokenella regensburgei）品系UMB0819之具有序列識別號59的MdfA、源自大腸桿菌（ Escherichia coli）品系AMC_967之具有序列識別號60的MdfA、源自肺炎克雷伯氏菌（ Klebsiella pneumoniae）VAKPC309之具有序列識別號61的MdfA、源自產酸克雷伯氏菌（ Klebsiella oxytoca）品系4928STDY7071490之具有序列識別號62的MdfA、源自密西根克雷伯氏菌（ Klebsiella michiganensis）品系A2之具有序列識別號63的MdfA、源自 Pluralibacter gergoviae品系FDAARGOS_186 之具有序列識別號64的MdfA、源自抗壞血克呂沃爾氏菌（Kluyvera ascorbata）ATCC 33433之具有序列識別號65的MdfA、神戶腸桿菌（ Enterobacter kobei）之具有序列識別號66的MdfA、源自萊略特菌屬（ Lelliottia sp.）WB101之具有序列識別號67的MdfA、源自弗氏檸檬酸桿菌（ Citrobacter freundii）之具有序列識別號68的MdfA、源自腸道沙門氏菌 Salamae亞種（ Salmonella enterica subsp. Salamae）之具有序列識別號69的MdfA或源自副痢疾桿菌（ Shigella flexneri）之具有序列識別號70的MdfA，或以上任一運輸膜蛋白之功能同源物（functional homolog）或功能性片段（functional fragment），或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號 01、 02、03、04、05、06、07、08、09、10、11、12、13、14、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69或70的膜蛋白之任一個的全長序列，具有至少80%之序列一致性（sequence identity）。在整個說明書與申請專利範圍中，術語「具有至少80%序列一致性的蛋白質序列」較佳為替換為術語「具有至少80%序列一致性的蛋白質」或「具有至少80%序列一致性的多肽」。

在本發明的方法及/或細胞的較佳實施例中，當膜蛋白係選自運輸蛋白膜蛋白之群組，膜蛋白係選自（即呈現為）序列識別號01、 02、 04、 05、 06、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67、 68、 69或70，或以上任一所述運輸蛋白膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號01、 02、 04、 05、 06、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67、 68、 69或70的所述膜蛋白之任一個的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性。

在本發明的方法及/或細胞的甚至更佳實施例中，當膜蛋白係選自運輸蛋白膜蛋白之群組，膜蛋白係選自（即呈現為）序列識別號01、 02、 04、 05、 06、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67、 68、 69或70，或以上任一所述運輸蛋白膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列： -其分別與具有序列識別號09、10、11、12或13的所述膜蛋白之任一個的全長序列，具有至少80%之序列一致性， -其分別與具有序列識別號01、02、04、14、53、54、55、59、 61、62、63、64、65、66、67或69的所述膜蛋白之任一個的全長序列，具有至少90%之序列一致性， -其分別與具有序列識別號05、06、56、57或68的所述膜蛋白之任一個的全長序列，具有至少95%之序列一致性，或 -其分別與具有序列識別號58、60或70的所述膜蛋白之任一個的全長序列，具有至少99%之序列一致性。

在本發明的方法及/或細胞的一替代實施例中，當膜蛋白係選自運輸蛋白膜蛋白膜蛋白之群組，膜蛋白係選自（即呈現為）序列識別號01、02、04、09、10、11、12、13、14、53、 54、55、59、61、62、63、64、65、66、67或69，或任一所述運輸蛋白膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號序列識別號01、02、04、09、 10、11、12、 13、14、53、54、55、59、61、62、63、64、65、66、67或69的所述膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性。更佳為膜蛋白係選自（即呈現為）序列識別號01、 02、 04、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 53、 54、 55、 59、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67或69，或任一所述運輸蛋白膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號01、02、04、09、10、11、12、13、14、53、 54、55、59、61、 62、63、64、 65、66、67或69的所述膜蛋白的全長序列，具有至少90%、較佳為至少95.00%、更佳為至少97.00%之序列一致性。

在本發明的方法及/或細胞的另一實施例中，當膜蛋白係選自運輸蛋白膜蛋白之群組，膜蛋白係選自源自Cronobacter muytjensii之具有序列識別號01的MdfA、源自雷根斯堡預研菌（Yokenella regensburgei）（ATCC43003）之具有序列識別號02的MdfA、源自大腸桿菌（Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號03的MdfA、源自腸桿菌屬（Enterobacter sp.）之具有序列識別號04的MdfA、源自克氏檸檬酸桿菌（Citrobacter koseri）之具有序列識別號05的MFS、源自Citrobacter youngae之具有序列識別號06的MdfA、源自大腸桿菌（Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號07的YbdA、源自源自大腸桿菌（Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號08的YjhB、源自大腸桿菌（Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號09的WzxE、源自大腸桿菌（Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號10的EmrE、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號11的Blon_2331、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號12的 Blon_0247、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號13的Blon_0345、源自肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）之具有序列識別號14的IceT、源自阪崎腸桿菌（Cronobacter sakazakii）品系MOD1_LR753之具有序列識別號53的MdfA、源自粉末佛朗哥氏菌（Franconibacter pulveris）LMG 24059之具有序列識別號54的MdfA、源自霍氏腸桿菌（Enterobacter hormaechei）品系017之具有序列識別號55的MdfA、源自克氏檸檬酸桿菌（Citrobacter koseri）品系NCTC10771之具有序列識別號56的MdfA、源自腸道沙門氏菌arizonae亞種血清型41:z4,z23:- 品系TAMU30EF之具有序列識別號57的MdfA、源自副痢疾桿菌（Shigella flexneri ）品系585219之具有序列識別號58的MdfA、源自雷根斯堡預研菌（Yokenella regensburgei）品系UMB0819之具有序列識別號59的MdfA、源自大腸桿菌（Escherichia coli）品系AMC_967之具有序列識別號60的MdfA、源自肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）VAKPC309之具有序列識別號61的MdfA、源自產酸克雷伯氏菌（Klebsiella oxytoca）品系4928STDY7071490之具有序列識別號62的MdfA、源自密西根克雷伯氏菌（Klebsiella michiganensis）品系A2之具有序列識別號63的MdfA、源自Pluralibacter gergoviae品系FDAARGOS_186之具有序列識別號64的MdfA或源自抗壞血克呂沃爾氏菌（Kluyvera ascorbata）ATCC 33433之具有序列識別號65的MdfA或以上任一運輸蛋白膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號01、02、03、04、05、06、07、08、09、10、11、12、13、14、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、 64或65的所述膜蛋白之任一個的全長序列，具有至少80%之序列一致性。

在本發明的方法及/或細胞的一更佳實施例中，當膜蛋白係選自運輸蛋白膜蛋白之群組，膜蛋白係選自（即呈現為）序列識別號01、 02、 04、 05、 06、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64或65，或任一所述運輸蛋白膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號01、 02、 04、 05、 06、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64或65的所述膜蛋白的全長序列，具有至少80%具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性。

在本發明的方法及/或細胞的一甚至更佳實施例中，當膜蛋白係選自運輸蛋白膜蛋白之群組，膜蛋白係選自（即呈現為）序列識別號01、 02、 04、 05、 06、09、10、11、12、 13、14、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64或65，或任一所述運輸蛋白膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列： -其分別與具有序列識別號09、10、11、12或13的所述膜蛋白之任一個的全長序列，具有至少80%之序列一致性， -其分別與具有序列識別號01、02、04、14、53、54、55、59、 61、62、63、64或65的所述膜蛋白之任一個的全長序列，具有至少90%之序列一致性， -其分別與具有序列識別號05、06、56或57的所述膜蛋白之任一個的全長序列，具有至少95%之序列一致性，或 -其分別與具有序列識別號58或60的所述膜蛋白之任一個的全長序列，具有至少99%之序列一致性。

在本發明的方法及/或細胞的一甚至更佳實施例中，當膜蛋白係選自運輸蛋白膜蛋白之群組，膜蛋白係選自（即呈現為）序列識別號01、02、04、09、10、11、12、13、14、53、 54、55、59、61、62、63、64或65，或任一所述運輸蛋白膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號01、02、04、09、10、11、12、13、14、53、 54、 55、 59、61、62、63、64或65的所述膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性。更佳為膜蛋白係選自（即呈現為）序列識別號01、02、04、09、10、11、12、13、14、53、54、55、59、61、62、63、64或65，或任一所述運輸蛋白膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號01、 02、 04、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 53、 54、 55、 59、 61、 62、 63、 64或65的所述膜蛋白的全長序列，具有至少90%、較佳為至少95.00%、更佳為至少97.00之序列一致性

此類運輸蛋白膜蛋白之胺基酸序列可為一序列，選自所附之序列表之序列識別號01、 02、 03、 04、 05、 06、 07、 08、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67、 68、 69或70，較佳為選自序列識別號01、 02、 04、 05、 06、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67、 68、 69 或70，更佳為選自序列識別號01、 02、 04、 05、 06、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64或65，甚至更佳為選自序列識別號01、 02、 04、 05、 06、 55、 59、 66 或68，最佳為選自序列識別號01、 02、 04、 05、 06、 55或59，或一胺基酸序列，其分別與具有序列識別號01、 02、 03、 04、 05、 06、 07、 08、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67 、68、 69或70之任一個之全長胺基酸序列具有至少80%之序列一致性，80 %、 81 %、 82 %、 83 %、 84 %、 85 %、 86 %、 87 %、 88 %、 89 %、 90 %、 91 %、 91.50 %、 92.00 %、 92.50 %、 93.00 %、 93.50 %、 94.00 %、 94.50 %、 95.00 %、 95.50 %、 96.00 %、 96.50 %、 97.00 %、 97.50 %、 98.00 %、 98.50 %、 99.00 %、 99.50 %、 99、60 %、 99、70 %、 99、80 %、 99、90 %，較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性。

或者，此類運輸蛋白膜蛋白之胺基酸序列可為一序列，選自所附之序列表之序列識別號01、 02、 04、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 53、 54、 55、 59、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67或69，較佳為選自所附之序列表之序列識別號01、 02、 04、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 53、 54、 55、 59、 61、 62、 63、 64或65，甚至更佳為選自01、 02、 04、 55、 59、 66或68，甚至更佳為選自所附之序列表之序列識別號01、 02、 04、 55或59，最佳為選自所附之序列表之序列識別號01、02或04，甚至更佳為選自所附之序列表之序列識別號01或02，最佳為序列識別號01，或一胺基酸序列，其分別與具有序列識別號01、 02、 04、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 53、 54、 55、 59、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67或69之任一個之全長胺基酸序列具有至少80%之序列一致性，80 %、 81 %、 82 %、 83 %、 84 %、 85 %、 86 %、 87 %、 88 %、 89 %、 90 %、 91 %、 91.50 %、 92.00 %、 92.50 %、 93.00 %、 93.50 %、 94.00 %、 94.50 %、 95.00 %、 95.50 %、 96.00 %、 96.50 %、 97.00 %、 97.50 %、 98.00 %、 98.50 %、 99.00 %、 99.50 %、 99、60 %、 99、70 %、 99、80 %、 99、90 %，較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、甚至更佳為至少97.00%、最佳為至少99.00%之序列一致性。

具有與具有序列識別號01、 02、 04、 05、 06、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67、 68、 69或70之所述膜蛋白之任一個之全長序列具有至少80%之序列一致性之一蛋白質序列的示例性與較佳膜蛋白提供於表1。

表1

運輸蛋白膜蛋白	示例性膜蛋白具有與所述運輸蛋白膜蛋白之全長 ≥ 80 % 之序列一致性
序列識別號01	序列識別號71、 72、 73、 74、 75、 76、 77、 78、 79、 80、 81、 83、 84、 85、 86、 87、 88、 89、 90、 91、 92、 93、 94、 95、 96、 97、 98
序列識別號02、 04、 05、 06、 54、 56、 57、 58、 60、 61、 62、 66、 67、 68、 69、 70	序列識別號71、 72、 73、 74、 75、 76、 77、 78、 79、 80、 81、 82、 83、 84、 85、 86、 87、 88、 89、 90、 91、 92、 93、 94、 95、 96、 97、 98
序列識別號53	序列識別號71、 72、 73、 74、 75、 77、 78、 80、 81、 83、 85、 86、 87、 88、 89、 90、 91、 92、 93、 94、 95、 96、 97、 98
序列識別號55、 59	序列識別號71、 72、 73、 74、 75、 77、 78、 79、 80、 81、 82、 83、 84、 85、 86、 87、 88、 89、 90、 91、 92、 93、 94、 95、 96、 97、 98
序列識別號63	序列識別號71、 72、 73、 74、 75、 76、 77、 78、 79、 80、 81、 83、 85、 86、 87、 88、 89、 90、 91、 92、 93、 94、 95、 96、 97、 98
序列識別號64	序列識別號71、 72、 73、 74、 75、 76、 77、 78、 79、 80、 81、 85、 86、 87、 88、 89、 90、 91、 92、 93、 94、 95、 96、 97、 98
序列識別號65	序列識別號71、 73、 74、 75、 76、 77、 78、 79、 80、 81、 83、 85、 86、 87、 88、 89、 90、 91、 92、 93、 94、 95、 96、 97、 98

在本發明的方法及/或細胞的一較佳實施例中，當膜蛋白係選自P-P鍵水解驅動轉運蛋白之群組，膜蛋白係選自TCDB分類3.A.1.1及3.A.1.2之群組。

在本發明的方法及/或細胞的另一較佳實施例中，當膜蛋白係選自P-P鍵水解驅動轉運蛋白之群組，膜蛋白係選自eggnog家族 05CJ1、05DFW、05EZD、05I1K、07HR3 及08IJ9之群組。

在本發明的方法及/或細胞的另一較佳實施例中，當膜蛋白係選自P-P鍵水解驅動轉運蛋白之群組，膜蛋白係選自PFAM列表 PF00005、PF00528、PF13407及PF17912.

在本發明的方法及/或細胞的另一較佳實施例中，當膜蛋白係選自P-P鍵水解驅動轉運蛋白之群組，膜蛋白係選自interpro列表IPR000515、IPR003439、IPR003593、IPR005978、IPR008995、IPR013456、IPR015851、IPR017871、IPR025997、IPR027417、 IPR028082、IPR035906及IPR040582。

在本發明的方法及/或細胞的另一較佳實施例中，當膜蛋白係選自P-P鍵水解驅動轉運蛋白之群組，膜蛋白係選自源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號15的Blon_2475、源自大豆慢生根瘤菌（Bradyrhizobium japonicum）USDA 110之具有序列識別號16的nodi、源自大腸桿菌（Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號17的xylF、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（Bifidobacterium longum subsp. Infantis）Bi-26之具有序列識別號18的TIC77290、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（Bifidobacterium longum subsp. Infantis）Bi-26之具有序列識別號19的TIC77291、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（Bifidobacterium longum subsp. Infantis）Bi-26之具有序列識別號20的TIC76854 TIC77291，或以上任一P-P鍵水解驅動轉運膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號15、16、17、18、19或20的所述膜蛋白的任一個的全長序列，具有至少80%之序列一致性。

在本發明的方法及/或細胞的另一較佳實施例中，當膜蛋白係選自β-桶狀孔蛋白（β-Barrel Porins）之群組，膜蛋白係選自TCDB分類 1.B.18。

在本發明的方法及/或細胞的另一較佳實施例中，當膜蛋白係選自β-桶狀孔蛋白之群組，膜蛋白係選自eggnog家族 05DAY。

在本發明的方法及/或細胞的另一較佳實施例中，當膜蛋白係選自β-桶狀孔蛋白之群組，膜蛋白係選自PFAM列表 PF02563、PF10531及PF18412。

在本發明的方法及/或細胞的另一較佳實施例中，當膜蛋白係選自β-桶狀孔蛋白之群組，膜蛋白係選自interpro列表 IPR003715、IPR019554及IPR040716。

在本發明的方法及/或細胞的另一較佳實施例中，當膜蛋白係選自β-桶狀孔蛋白之群組，膜蛋白係為源自大腸桿菌（Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號21的Wza或其功能同源物或功能片段，或一蛋白質序列，其與具有序列識別號21的所述膜蛋白的全長序列，具有至少80%之序列一致性。

在本發明的方法及/或細胞的一替代較佳實施例中，膜蛋白係選自TCDB分類1.B.18、 2.A.1.1、 2.A.1.2、 2.A.1.3、 2.A.1.6、2.A.2.2、2.A.7.1、2.A.66、3.A.1.1與3.A.1.2之群組；eggnog家族05CJ1、 05DAY、 05DFW、 05E8G、 05EGZ、 05EZD、 05I1K、 05JHE、 07HR3、 07QF7 07QRN、 07RBJ、 0814C、 08IJ9 與08N8A之群組；PFAM列表PF00005、 PF00528、 PF00893、 PF01943、 PF02563、 PF05977、 PF07690、 PF10531、 PF13347、 PF13407、 PF17912與PF18412；interpro列表IPR000390、 IPR000515、 IPR001411、 IPR001927、 IPR002797、 IPR003439、 IPR003593、 IPR003715、 IPR004638、 IPR005829、 IPR005978、 IPR008995、 IPR010290、 IPR011701、 IPR013456、 IPR015851、 IPR017871、 IPR019554、 IPR020846、 IPR023721、 IPR023722、 IPR025997、 IPR027417、 IPR028082、 IPR032896、 IPR035906、 IPR036259、 IPR039672、 IPR040582與IPR040716；源自 Cronobacter muytjensii之具有序列識別號01的MdfA、源自雷根斯堡預研菌（ Yokenella regensburgei）（ATCC43003）之具有序列識別號02的MdfA、源自大腸桿菌（ Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號03的MdfA、源自腸桿菌屬（ Enterobacter sp.）之具有序列識別號04的MdfA、源自克氏檸檬酸桿菌（ Citrobacter koseri）之具有序列識別號05的MFS、源自 Citrobacter youngae之具有序列識別號06的MdfA、源自大腸桿菌（ Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號07的YbdA、源自源自大腸桿菌（ Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號08的YjhB、源自大腸桿菌（ Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號09的WzxE、源自大腸桿菌（ Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號10的EmrE、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（ Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號11的Blon_2331、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（ Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號12的 Blon_0247、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（ Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號13的Blon_0345、源自肺炎克雷伯氏菌（ Klebsiella pneumoniae）之具有序列識別號14的IceT、源自阪崎腸桿菌（ Cronobacter sakazakii）品系MOD1_LR753之具有序列識別號53的MdfA、源自粉末佛朗哥氏菌（ Franconibacter pulveris）LMG 24059之具有序列識別號54的MdfA、源自霍氏腸桿菌（ Enterobacter hormaechei）品系017之具有序列識別號55的MdfA、源自克氏檸檬酸桿菌（ Citrobacter koseri）品系NCTC10771之具有序列識別號56的MdfA、源自腸道沙門氏菌 arizonae亞種血清型41:z4,z23:- 品系TAMU30EF之具有序列識別號57的MdfA、源自副痢疾桿菌（ Shigella flexneri）品系585219之具有序列識別號58的MdfA、源自雷根斯堡預研菌（ Yokenella regensburgei）品系UMB0819之具有序列識別號59的MdfA、源自大腸桿菌（ Escherichia coli）品系AMC_967之具有序列識別號60的MdfA、源自肺炎克雷伯氏菌（ Klebsiella pneumoniae）VAKPC309之具有序列識別號61的MdfA、源自產酸克雷伯氏菌（ Klebsiella oxytoca）品系4928STDY7071490之具有序列識別號62的MdfA、源自密西根克雷伯氏菌（ Klebsiella michiganensis）品系A2之具有序列識別號63的MdfA、源自 Pluralibacter gergoviae品系FDAARGOS_186 之具有序列識別號64的MdfA、源自抗壞血克呂沃爾氏菌（ Kluyvera ascorbata）ATCC 33433之具有序列識別號65的MdfA、神戶腸桿菌（ Enterobacter kobei）之具有序列識別號66的MdfA、源自萊略特菌屬（ Lelliottia sp.）WB101之具有序列識別號67的MdfA、源自弗氏檸檬酸桿菌（ Citrobacter freundii）之具有序列識別號68的MdfA、源自腸道沙門氏菌 Salamae亞種（ Salmonella enterica subsp. Salamae）之具有序列識別號69的MdfA或源自副痢疾桿菌（ Shigella flexneri）之具有序列識別號70的MdfA、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（ Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號15的Blon_2475、源自大豆慢生根瘤菌（ Bradyrhizobium japonicum）USDA 110之具有序列識別號16的nodi、源自大腸桿菌（ Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號17的xylF、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（ Bifidobacterium longum subsp. Infantis）Bi-26之具有序列識別號18的TIC77290、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（ Bifidobacterium longum subsp. Infantis）Bi-26之具有序列識別號19的TIC77291、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（ Bifidobacterium longum subsp. Infantis）Bi-26之具有序列識別號20的TIC76854 TIC77291或源自大腸桿菌（ Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號21的Wza；或以上任一膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號01、 02、 03、 04、 05、 06、 07、 08、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67、 68、 69、 70、 15、 16、 17、 18、 19、 20或21的所述膜蛋白的任一個的全長序列，具有至少80%之序列一致性。

在本發明的方法及/或細胞的一替代較佳實施例中，膜蛋白係選自TCDB分類1.B.18、2.A.1.1、2.A.1.2、2.A.1.3、2.A.1.6、2.A.2.2、2.A.7.1、2.A.66、3.A.1.1與3.A.1.2之群組；eggnog家族05CJ1、 05DAY、 05DFW、 05E8G、 05EGZ、 05EZD、 05I1K、 05JHE、 07HR3、 07QF7 07QRN、 07RBJ、 0814C、 08IJ9 與08N8A之群組；PFAM列表PF00005、 PF00528、 PF00893、 PF01943、 PF02563、 PF05977、 PF07690、 PF10531、 PF13347、 PF13407、 PF17912與PF18412；interpro列表IPR000390、 IPR000515、 IPR001411、 IPR001927、 IPR002797、 IPR003439、 IPR003593、 IPR003715、 IPR004638、 IPR005829、 IPR005978、 IPR008995、 IPR010290、 IPR011701、 IPR013456、 IPR015851、 IPR017871、 IPR019554、 IPR020846、 IPR023721、 IPR023722、 IPR025997、 IPR027417、 IPR028082、 IPR032896、 IPR035906、 IPR036259、 IPR039672、 IPR040582與IPR040716；源自 Cronobacter muytjensii之具有序列識別號01的MdfA、源自雷根斯堡預研菌（ Yokenella regensburgei）（ATCC43003）之具有序列識別號02的MdfA、源自大腸桿菌（ Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號03的MdfA、源自腸桿菌屬（ Enterobacter sp.）之具有序列識別號04的MdfA、源自克氏檸檬酸桿菌（ Citrobacter koseri）之具有序列識別號05的MFS、源自 Citrobacter youngae之具有序列識別號06的MdfA、源自大腸桿菌（ Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號07的YbdA、源自源自大腸桿菌（ Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號08的YjhB、源自大腸桿菌（ Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號09的WzxE、源自大腸桿菌（ Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號10的EmrE、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（ Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號11的Blon_2331、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（ Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號12的 Blon_0247、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（ Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號13的Blon_0345、源自肺炎克雷伯氏菌（ Klebsiella pneumoniae）之具有序列識別號14的IceT、源自阪崎腸桿菌（ Cronobacter sakazakii）品系MOD1_LR753之具有序列識別號53的MdfA、源自粉末佛朗哥氏菌（ Franconibacter pulveris）LMG 24059之具有序列識別號54的MdfA、源自霍氏腸桿菌（ Enterobacter hormaechei）品系017之具有序列識別號55的MdfA、源自克氏檸檬酸桿菌（ Citrobacter koseri）品系NCTC10771之具有序列識別號56的MdfA、源自腸道沙門氏菌 arizonae 亞種血清型41:z4,z23:- 品系TAMU30EF之具有序列識別號57的MdfA、源自副痢疾桿菌（ Shigella flexneri）品系585219之具有序列識別號58的MdfA、源自雷根斯堡預研菌（ Yokenella regensburgei）品系UMB0819之具有序列識別號59的MdfA、源自大腸桿菌（ Escherichia coli）品系AMC_967之具有序列識別號60的MdfA、源自肺炎克雷伯氏菌（ Klebsiella pneumoniae）VAKPC309之具有序列識別號61的MdfA、源自產酸克雷伯氏菌（ Klebsiella oxytoca）品系4928STDY7071490之具有序列識別號62的MdfA、源自密西根克雷伯氏菌（ Klebsiella michiganensis）品系A2之具有序列識別號63的MdfA、源自 Pluralibacter gergoviae品系FDAARGOS_186 之具有序列識別號64的MdfA、源自抗壞血克呂沃爾氏菌（Kluyvera ascorbata）ATCC 33433之具有序列識別號65的MdfA、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（ Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號15的Blon_2475、源自大豆慢生根瘤菌（ Bradyrhizobium japonicum）USDA 110之具有序列識別號16的nodi、源自大腸桿菌（ Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號17的xylF、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（ Bifidobacterium longum subsp. Infantis）Bi-26之具有序列識別號18的TIC77290、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（ Bifidobacterium longum subsp. Infantis）Bi-26之具有序列識別號19的TIC77291、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（ Bifidobacterium longum subsp. Infantis）Bi-26之具有序列識別號20的TIC76854 TIC77291或源自大腸桿菌（ Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號21的Wza；或以上任一膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號01、 02、 03、 04、 05、 06、 07、 08、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 15、 16、 17、 18、 19、 20或21的所述膜蛋白的任一個的全長序列，具有至少80%之序列一致性。

所述TCDB分類係由2019年6月17日發佈之TCDB.org所定義。所述eggnog家族係由2016年9月發佈之eggnogdb 4.5.1。所述PFAM列表係由2018年9月所發佈之Pfam 32.0所定義。所述interpro列表係由2019年7月4日發佈之InterPro 75.0所定義。

如於此所使用，一蛋白質，其具有與任何入列之膜蛋白之全長序列具有至少80 %之序列一致性，應理解為序列與分別之膜蛋白之胺基酸序列的全長具有80 %、 81 %、 82 %、 83 %、 84 %、 85 %、 86 %、 87 %、 88 %、 89 %、 90 %、 91 %、 91.50 %、 92.00 %、 92.50 %、 93.00 %、 93.50 %、 94.00 %、 94.50 %、 95.00 %、 95.50 %、 96.00 %、 96.50 %、 97.00 %、 97.50 %、 98.00 %、 98.50 %、 99.00 %、 99.50 %、 99.60 %、 99.70 %、 99.80 %、 99.90 % 之序列一致性。在本發明的上下文中，具有與一參考膜蛋白‘Z’（通常以序列識別號表示）之全長序列具有例如至少具有80 %序列一致性之一胺基酸序列（例如，具有如在整個說明書與申請專利範圍中階露之蛋白質序列的膜蛋白）的蛋白質/多肽意指，一蛋白質（即膜蛋白），其能夠運輸如於此所述之一具有LN3作為一核心醣的寡醣，即此蛋白質保留了參考膜蛋白‘Z’的功能特徵以運輸一具有LN3作為一核心醣的寡醣。同樣地，具有與一參考膜蛋白‘Z’（通常以序列識別號表示）之全長序列具有例如至少具有80 %序列一致性之一蛋白質序列意指，一蛋白質（即膜蛋白），其能夠運輸如於此所述之一具有LN3作為一核心醣的寡醣，即此蛋白質保留了參考膜蛋白‘Z’的功能特徵以運輸一具有LN3作為一核心醣的寡醣。技術人員可以評估膜蛋白運輸如於此所述之一具有LN3作為一核心醣的寡醣的能力，例如如目前實施例中所述。

此類膜蛋白之胺基酸序列可為一序列，其選自所附序列表之序列識別號01、 02、 03、 04、 05、 06、 07、 08、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67、 68、 69或70，較佳為選自所附序列表之序列識別號01、 02、 03、 04、 05、 06、 07、 08、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64或65，更佳為選自所附序列表之序列識別號01、 02、 04、 05、 06、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67、 68、 69或70，甚至更佳為選自所附序列表之序列識別號01、 02、 04、 05、 06、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64或65，甚至更佳為選自所附序列表之01、 02、 04、 05、 06、 55、 59、 66或68，最佳為選自所附序列表之序列識別號01、 02、 04、 05、 06、 55或59，或一胺基酸序列，其分別與序列識別號01、 02、 03、 04、 05、 06、 07、 08、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67 、68、 69或70之任一個之全長胺基酸序列具有至少80 %之序列一致性，80 %、 81 %、 82 %、 83 %、 84 %、 85 %、 86 %、 87 %、 88 %、 89 %、 90 %、 91 %、 91.50 %、 92.00 %、 92.50 %、 93.00 %、 93.50 %、 94.00 %、 94.50 %、 95.00 %、 95.50 %、 96.00 %、 96.50 %、 97.00 %、 97.50 %、 98.00 %、 98.50 %、 99.00 %、 99.50 %、 99、60 %、 99、70 %、 99、80 %、 99、90 %，較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、甚至更佳為至少97.00%、最佳為至少99.00%之序列一致性。

或者，此類膜蛋白之胺基酸序列可為一序列，其係選自所附序列表之序列識別號01、 02、 04、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 53、 54、 55、 59、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67或69，較佳為選自所附序列表之序列識別號序列識別號01、 02、 04、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 53、 54、 55、 59、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67或69，更佳為選自所附序列表之序列識別號01、 02、 04、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 53、 54、 55、 59、 61、 62、 63、 64或65，甚至更佳為選自所附序列表之01、 02、 04、 55、 59、 66或68，甚至更佳為選自序列識別號01、 02、 04、 55或59，甚至更佳為選自所附序列表之序列識別號01、 02或04，甚至更佳為選自序列識別號01或02，最佳為選自所附序列表之序列識別號01，或一胺基酸序列，其分別與序列識別號01、 02、 04、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 53、 54、 55、 59、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67或69之任一個之全長胺基酸序列具有至少80 %之序列一致性，80 %、 81 %、 82 %、 83 %、 84 %、 85 %、 86 %、 87 %、 88 %、 89 %、 90 %、 91 %、 91.50 %、 92.00 %、 92.50 %、 93.00 %、 93.50 %、 94.00 %、 94.50 %、 95.00 %、 95.50 %、 96.00 %、 96.50 %、 97.00 %、 97.50 %、 98.00 %、 98.50 %、 99.00 %、 99.50 %、 99、60 %、 99、70 %、 99、80 %、 99、90 %，較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、甚至更佳為至少97.00%、最佳為至少99.00%之序列一致性。

在本發明之方法及/或細胞之一更進一步之實施例中，宿主細胞表現一種膜蛋白，其為一轉運蛋白，參與化合物跨細胞壁外膜的轉運。較佳為，細胞被轉形以包括至少一核酸序列，其編碼一選自包括乳糖轉運蛋白、葡萄糖轉運蛋白、半乳糖轉運蛋白或核苷酸激活糖的轉運蛋白，例如UDP-GlcNAc的轉運蛋白之群組的蛋白質。

根據本發明之方法及/或細胞之另一較佳實施例，細胞表現多於一個之膜蛋白。

在一更佳替代實施例中，當所述膜蛋白為源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（品系ATCC 15697）之具有序列識別號10的 Blon_0247，所述Blon_0247與源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（品系ATCC 15697）之Blon_0245一起被表現。

在一更佳替代實施例中，當所述膜蛋白為源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（品系ATCC 15697）之具有序列識別號9的 Blon2331，所述Blon2331與Blon23325一起被表現。

在一更佳替代實施例中，當所述膜蛋白為源自大豆慢生根瘤菌USDA 110之具有序列識別號15的Bjnodi，所述Bjnodi與結節因子(nodulation factor) nodj一起被表現。

在一更佳替代實施例中，當所述膜蛋白為源自大腸桿菌（Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號20的wza，所述wza與wzx、wzb及/或wzc之任一個或更多個一起被表現

根據本發明之方法及/或細胞之另一較佳實施例，細胞表現一醣基轉移酶，其選自包括岩藻糖基轉移酶、唾液酸轉移酶、半乳糖基轉移酶、葡萄糖基轉移酶、甘露糖基轉移酶、N-乙醯葡萄糖胺基轉移酶、N-乙醯半乳糖胺基轉移酶、N-乙醯甘露糖胺基轉移酶、木糖基轉移酶、葡醣醛酸基轉移酶、半乳醣醛酸基轉移酶、葡萄糖胺基轉移酶、N-羥乙醯神經胺基轉移酶(N-glycolylneuraminyltransferases)、鼠李糖基轉移酶、N-乙醯鼠李糖基轉移酶、UDP-4-胺基-4,6-二脫氧-N-乙醯基-β-L-阿卓糖胺轉氨酶(UDP-4-amino-4,6-dideoxy-N-acetyl-beta-L-altrosamine transaminases)、UDP-N-乙醯胺基葡萄糖烯醇丙酮基轉移酶(UDP-N-acetylglucosamine enolpyruvyl transferases)與岩藻糖胺基轉移酶(fucosaminyltransferases)的列表。

在本發明之方法及/或細胞之一較佳實施例中，細胞於至少一種所述醣基轉移酶的表現或活性被修飾。在一較佳實施例中，所述醣基轉移酶是具有經修飾的表現或活性之細胞的內源性蛋白質，較佳為，所述內源性醣基轉移酶是過表現的；或者，所述所述醣基轉移酶是異源蛋白，其在所述細胞中異質引入並表現，較佳為過表現。所述內源性醣基轉移酶可以在也表現異源醣基轉移酶之細胞中具有經修飾的表現。

在本發明之方法及/或細胞之一進一步之較佳實施例中，細胞表現一N-乙醯基葡萄糖胺β-1,3-半乳糖基轉移酶，其將半乳糖(Gal)從UDP-Gal供體轉移到在之LN3的末端 GlcNAc殘基為β-1,3鍵，從而產生乳糖-N-四糖(lacto-N-tetraose) (LNT; Gal-beta1,3-GlcNAc-beta1,3-Gal-beta1,4-Glc)。

在本發明之方法及/或細胞之一進一步之較佳實施例中，細胞在整個肉湯(broth)及/或上清液中，產生90 g/L或更多的LNT，及/或其中所述LNT在整個肉湯及/或上清液中具有至少80%之一純度，依據所述細胞在整個肉湯及/或上清液中產生之LNT及LN3的總量所分別測量。較佳為，細胞在上清液中，產生90 g/L或更多的LNT，其中所述LNT具有至少80%之一純度，依據所述細胞在上清液中產生之LNT及LN3的總量所測量。在本發明之方法及/或細胞之一更佳實施例中，在整個肉湯及/或上清液中之90 g/L或更多的LNT係經由在一培養程序，較佳為一發酵程序中培養的所述細胞所獲得。在本發明之方法及/或細胞之另一更佳實施例中，依據所述細胞在整個肉湯及/或上清液中產生之LNT及LN3的總量所測量之至少80%之LNT在整個肉湯及/或上清液中的所述純度，係經由在一培養程序，較佳為一發酵程序中培養的所述細胞所獲得。

依據在整個肉湯中或在上清液中之LNT與LN3的總量之至少百分之80的LNT的一純度，應理解為分別在全肉湯中或在上清液中之LNT與LN3的混合物的所述LNT的量之80 %或更多，包括80、 81、 82、 83、 84、 85、 86、 87、 88、 89、 90、 91、 92、 93、 94、 95、 95.5、 96、 96.5、 97、 97.5、 98、 98.5、 99或99.5 %之依據細胞在整個肉湯中或在上清液中分別產生的LNT與LN3的總量所測量的LNT。

在本發明之方法及/或細胞之一額外及/或替代之進一步之較佳實施例中，細胞該細胞表現N-乙醯葡萄糖胺β-1,4-半乳糖基轉移酶，其自一UDP-Gal供體透過一β-1,4鍵結轉移一半乳糖（Gal）至LN3之末端GlcNAC殘基上，從而產生乳糖-N-新四糖（LNnT；Gal-beta1,4-GlcNAc-beta1,3-Gal-beta1,4-Glc）。

在本發明之方法及/或細胞之一進一步之較佳實施例中，細胞在整個肉湯及/或上清液中，產生70 g/L或更多的、較佳為90 g/L或更多的LNnt及/或其中所述LNnT在整個肉湯及/或上清液中具有至少80%之一純度，依據所述細胞在整個肉湯及/或上清液中產生之LNnT及LN3的總量所分別測量。較佳為，細胞在上清液中，產生70 g/L或更多的、較佳為90 g/L或更多的LNnt，其中所述LNnT具有至少80%之一純度，依據所述細胞在上清液中產生之LNnT及LN3的總量所測量。在本發明之方法及/或細胞之一更佳實施例中，在整個肉湯及/或上清液中之70 g/L或更多的、較佳為90 g/L或更多的LNnT係經由在一培養程序，較佳為一發酵程序中培養的所述細胞所獲得。在本發明之方法及/或細胞之另一更佳實施例中，依據所述細胞在整個肉湯及/或上清液中產生之LNT及LN3的總量所測量之至少80%之LNnT在整個肉湯及/或上清液中的所述純度，係經由在一培養程序，較佳為一發酵程序中培養的所述細胞所獲得。

依據在整個肉湯中或在上清液中之LNnT與LN3的總量之至少百分之80的LNnT的一純度，應理解為分別在全肉湯中或在上清液中之LNnT與LN3的混合物的所述LNnT的量之80 %或更多，包括80、 81、 82、 83、 84、 85、 86、 87、 88、 89、 90、 91、 92、 93、 94、 95、 95.5、 96、 96.5、 97、 97.5、 98、 98.5、 99或99.5 %之依據細胞在整個肉湯中或在上清液中分別產生的LNnT與LN3的總量所測量的LNnT。

根據本發明之方法及/或細胞之另一之較佳實施例，具有合成一核苷酸活化醣脂能力的細胞，要被用於所述包括一乳糖-N-三糖（LN3; GlcNAc-beta1,3-Gal-beta1,4-Glc）作為一核心三醣的寡醣的生產。在本發明之方法及/或細胞之一較佳實施例中，所述核苷酸活化醣係選自包括下列清單：UDP-N-乙醯半乳糖胺（UDP-GalNAc）、UDP-N-乙醯甘露糖胺（UDP-ManNAc）、UDP-葡萄糖（UDP-Glc）、UDP-半乳糖（UDP-Gal）、GDP-甘露糖（GDP-Man）、UDP-葡萄糖醛酸鹽、UDP-半乳糖醛酸鹽、UDP-2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-L-阿拉伯糖-4-己酮糖、UDP-2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-L-木糖-4-己酮糖（UDP-2-acetamido-2,6-dideoxy-L-lyxo-4-hexulose）、 UDP-N-乙醯基-L-鼠李糖胺（UDP-L-RhaNAc或UDP-2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-L-甘露糖（UDP-2-acetamido-2,6-dideoxy-L-mannose））、dTDP-N-乙醯岩藻糖胺、UDP-N-乙醯岩藻糖胺（UDP-L-FucNAc或UDP-2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-L-半乳糖）、 UDP-N-乙醯-L-去氧塔羅糖胺（UDP-N-acetyl-L-pneumosamine）（UDP-L-PneNAC或UDP-2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-L-塔羅糖（UDP-2-acetamido-2,6-dideoxy-L-talose））、UDP-N-乙醯胞壁酸（UDP-N-acetylmuramic acid）、UDP-N-乙醯基-L-奎諾糖胺（UDP-N-acetyl-L-quinovosamine）（UDP-L-QuiNAc或UDP-2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-L-葡萄糖（UDP-2-acetamido-2,6-dideoxy-L-glucose））、CMP-唾液酸（CMP-Neu5Ac）、CMP-N-羥乙醯神經胺酸（CMP-Neu5Gc）、GDP-岩藻糖(GDP-Fuc)、GDP-鼠李糖及UDP-木糖。

此外，或者，於此使用之宿主細胞視需要而定地被基因修飾以表現GDP-岩藻糖的重新合成。GDP-岩藻糖可由一細胞中表現的酵素或由細胞之代謝提供。這種產生GDP-岩藻糖的細胞可以表現例如，將要添加到細胞的岩藻糖轉化成GDP-岩藻糖的酵素。此酵素可以是例如雙功能岩藻糖激酶/岩藻糖-1-磷酸鳥苷轉移酶，如來自脆弱類桿菌( Bacteroides fragilis)的Fkp，或一種單獨的岩藻糖激酶與一種單獨的岩藻糖-1-磷酸鳥苷酸轉移酶的組合，就像它們從包括智人(Homo sapiens)、豬(Sus scrofa)與褐鼠(Rattus norvegicus)之幾種物種已知的那樣。較佳為，細胞被修飾以產生GDP-岩藻糖。更佳為，細胞被修飾為了經提升的GDP-岩藻糖生產。所述修飾可為選自包括一 UDP-葡萄糖：十一碳二烯磷酸葡萄糖-1-磷酸轉移酶(UDP-glucose:undecaprenyl-phosphate glucose-1-phosphate transferase)編碼基因的敲除、一GDP-L-岩藻糖合酶(GDP-L-fucose synthase)編碼基因的過表現、一GDP-甘露糖4，6-脫水酶(GDP-mannose 4,6-dehydratase)編碼基因的過表現、一甘露糖-1-磷酸鳥苷酸轉移酶(mannose-1-phosphate guanylyltransferase)編碼基因的過表現、一磷酸甘露變位酶(phosphomannomutase)編碼基因的過表現與一甘露糖-6-磷酸異構酶(mannose-6-phosphate isomerase)編碼基因的過表現之群組的任一個或更多個。

此外，或者，於此使用之宿主細胞視需要而定地被基因修飾以表現CMP-Neu5Ac的重新合成。CMP-Neu5Ac可由一細胞中表現的酵素或由細胞之代謝提供。這種產生CMP-Neu5Ac的細胞可以表現例如，將要添加到細胞的唾液酸轉化成CMP-Neu5Ac的酵素。此酵素可以是此酵素可為一CMP-唾液酸合成酶，如來自包括智人、腦膜炎雙球菌與多殺性巴氏桿菌( Pasteurella multocida)在的幾種物種的N-醯基神經氨酸胞苷醯轉移酶。較佳為，細胞被修飾以產生CMP-Neu5Ac。更佳為，細胞被修飾為了經提升的CMP-Neu5Ac生產。所述修飾可為選自包括一 N-乙醯葡萄糖胺-6-磷酸脫乙醯酶(N-acetylglucosamine-6-phosphate deacetylase)的敲除、一葡萄糖糖胺-6-磷酸脫氨酶(glucosamine-6-phosphate deaminase)的敲除、一唾液酸合成酶(sialate synthase)編碼基因的過表現與一N-乙醯-D-葡萄糖胺-2-差向異構酶(N-acetyl-D-glucosamine-2-epimerase)編碼基因的過表現之群組的任一個或更多個。

此外，或者，於此使用之宿主細胞視需要而定地被基因修飾以表現UDP-Gal的重新合成。UDP-Gal可由一細胞中表現的酵素或由細胞之代謝提供。這種產生UDP-Gal的細胞可以表現將例如UDP-葡萄糖轉化成UDP-Gal的酵素。此酵素為UDP-葡萄糖-4-差向異構酶(UDP-glucose-4-epimerase) GalE，就像它們從包括智人、大腸桿菌與褐鼠之幾種物種已知的那樣。較佳為，細胞被修飾以產生UDP-Gal。更佳為，細胞被修飾為了經提升的UDP-Gal生產。所述修飾可為選自包括雙功能 5'-核苷酸酶/UDP-糖水解酶(bifunctional 5’-nucleotidase/UDP-sugar hydrolase)編碼基因的敲除、一半乳糖-1-磷酸尿苷醯轉移酶(galactose-1-phosphate uridylyltransferase)編碼基因的敲除與一UDP-葡萄糖-4-差向異構酶(UDP-glucose-4-epimerase)編碼基因的過表現之群組的任一個或更多個。

通常較佳的是，細胞對選定的單醣、雙醣或寡醣的分解代謝途徑至少部分失活，單醣、雙醣或寡醣參與及/或需要一具有LN3作為核心三糖之寡醣的合成。

根據本發明的方法及/或細胞的另一較佳實施例，包括一LN3作為核心三糖的寡醣為哺乳動物乳寡醣或包含LN3作為核心三糖的Lewis型抗原寡醣。

根據本發明的方法及/或細胞的另一較佳實施例，細胞具有合成一包括包括LN3作為核心三糖之至少一寡醣之寡醣的混合物的能力。

在一特定的示例性實施例中，本發明的方法提供以高產率之一具有LN3作為核心三糖的寡醣的生產。此方法包括在含有乳糖的水性培養或發酵培養基中培養或發酵一經基因修飾的細胞，較佳為大腸桿菌，更佳為藉由敲除基因LacZ與nagB基因而修飾的大腸桿菌細胞的步驟。甚至更佳為，另外可以將大腸桿菌lacY基因、源自運動發酵單胞菌( Zymomonas mobilis)的一果糖激酶基因(frk)與源自青春雙歧桿菌( Bifidobacterium adolescentis)的一蔗糖磷酸化酶(sucrose phosphorylase SP)敲入基因組並組成型地表現。組成型啟動子來源於De Mey et al. (BMC Biotechnology, 2007)與Mutalik et al. (Nat. Methods 2013, No. 10, 354-360)所描述的啟動子庫。此外，經修飾的大腸桿菌細胞具有編碼半乳糖苷β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶的重組基因與編碼具有修飾LN3以合成本發明寡醣的醣基轉移酶之能力的另一重組基因。細胞更包括一編碼如於此所述之任何一膜蛋白之表現的一重組基因。

根據本發明的方法及/或細胞的另一較佳實施例，所述細胞使用前驅物來用於所述包括LN3作為核心三糖的寡醣的合成。在本發明的方法及/或細胞之一較佳實施例中，膜蛋白參與用於包含LN3作為核心三糖之所述寡醣之合成的一前驅物的攝取。在另一較佳實施例中，細胞正在產生用於包含LN3作為核心三糖之所述寡醣之合成的一前驅物。

本發明的另一實施例提供了一種方法與一種細胞，其中醣基化產物在一微生物中及/或由一微生物產生，所述微生物選自一細菌、一酵母菌或一真菌，或一植物細胞、動物細胞、一非人類哺乳動物細胞、一昆蟲細胞或一原生動物。後者細菌較佳為屬於變形菌(Proteobacteria)門或厚壁菌(Firmicutes)門或藍細菌(Cyanobacteria)門或奇異球菌-棲熱菌(Deinococcus-Thermus)門。屬於變形菌門之後者細菌較佳為屬於腸桿菌(Enterobacteriaceae)科，較佳為大腸桿菌種。後方細菌較佳為關於屬於大腸桿菌種的任何菌株，例如但不限於大腸桿菌B、大腸桿菌C、大腸桿菌W、大腸桿菌K12、大腸桿菌Nissle。更具體地，後方用語關於經培養的大腸桿菌菌株-命名為大腸桿菌K12菌-其很好地適應了實驗室環境，並且與野生型菌株不同，它們已經失去了在腸道中茁壯成長的能力。大腸桿菌 K12 菌株之周知的例子為 K12 野生型、W3110、MG1655、M182、MC1000、MC1060、MC1061、MC4100、JM101、NZN111與AA200。因此，較佳為，本發明具體地關於如上所指出的突變及/或轉形的大腸桿菌菌株，其中所述大腸桿菌菌株是K12菌株。更具體地，本發明關於如上所指出的突變及/或轉形的大腸桿菌菌株，其中所述K12菌株是大腸桿菌MG1655。屬於厚壁菌門的後方細菌較佳為屬於芽孢桿菌(Bacilli)，較佳來自芽孢桿菌( Bacillus)種，例如枯草芽孢桿菌 (Bacillus subtilis)或液化澱粉芽孢桿菌( B. amyloliquefacien)。後者的細菌屬於放線菌( Actinobacteria)門，較佳為屬於棒狀桿菌( Corynebacteriaceae)科，具有麩胺酸棒狀桿菌( Corynebacterium glutamicum)或 C. afermentans成員，或屬於鏈黴菌(Streptomycetaceae)科，具有灰色鏈黴菌( Streptomyces griseus)或S. fradiae成員。後方酵母較佳為屬於子囊菌( Ascomycota)門或擔子菌( Basidiomycota)門或半知菌(Deuteromycota)門或接合菌(Zygomycete)門。後方酵母較佳為屬於酵母屬（具有成員，如釀酒酵母菌、貝酵母菌( Saccharomyces bayanus)、布拉酵母( S. boulardii)）、畢赤酵母菌屬( Pichia)（具有成員，如嗜甲醇酵母菌( Pichia pastoris) 、異常畢赤酵母( P. anomala)、克魯弗畢赤酵母( P. kluyveri)）、駒形菌屬( Komagataella)、漢遜氏菌屬( Hansunella)、克魯維酵母屬( Kluyveromyces)（具有成員，如乳酸克魯維酵母( Kluyveromyces lactis)、馬克斯克魯維酵母( K. marxianus)、耐熱克魯維酵母( K. thermotolerans)）、耶氏酵母屬( Yarrowia)（如解脂耶氏酵母菌( Yarrowia lipolytica)）、假囊酵母屬( Eremothecium)、接合酵母菌屬( Zygosaccharomyces)、 Starmerella（如熊蜂生假絲酵母( Starmerella bombicola)）或德巴厘酵母屬( Debaromyces)。後方酵母菌較佳為選自嗜甲醇酵母菌、解脂耶氏酵母菌、釀酒酵母菌與乳酸克魯維酵母。後方真菌較佳為屬於根黴菌屬( Rhizopus)、網柄菌屬( Dictyostelium)、青梅菌屬( Penicillium)、白黴菌屬( Mucor)或麴菌屬( Aspergillus)。「植物細胞」包括開花植物與非開花植物的細胞，以及藻類細胞，例如衣藻(Chlamydomonas)、小球藻(Chlorella)等。較佳為，所述植物細胞為煙草、苜蓿、稻、棉花、油菜籽、番茄、玉米、玉蜀黍或大豆細胞。後方動物細胞較佳為來源於非人類哺乳動物（例如牛、水牛、豬、綿羊、小鼠、大鼠）、鳥類（例如雞、鴨、鴕鳥、火雞、雉(pheasant)）、魚（例如箭魚、鮭魚、鮪魚、鱸魚、鱒魚、鯰魚）、無脊椎動物（例如龍蝦、螃蟹、蝦、蛤蜊、牡蠣、貽貝、海膽）、爬蟲類（例如蛇、短吻鱷、龜）、兩棲類（例如青蛙）或昆蟲（例如蒼蠅、線蟲）或者是源自不包括胚胎幹細胞之人類細胞的基因修飾細胞株。人類與非人類哺乳動物細胞兩者均較佳選自包括一上皮細胞，如一乳腺上皮細胞、一胚胎腎細胞（例如 HEK293 或 HEK 293T 細胞）、一纖維母細胞、一COS 細胞、一中國倉鼠卵巢 (CHO) 細胞、鼠骨髓瘤細胞，如N20、SP2/0或 YB2/0 細胞、一NIH-3T3細胞、一非乳腺成體幹細胞或如於WO21067641中所述之其衍生物的列表。所述昆蟲細胞較佳來源於草地貪夜蛾( Spodoptera frugiperda)，例如，Sf9或Sf21細胞、家蠶( Bombyx mori)、甘藍夜蛾( Mamestra brasicae)、粉紋夜蛾( Trichoplusia ni)，例如 BTI-TN-5B1-4 細胞或黑腹果蠅，例如，果蠅 S2 細胞。後方原生動物細胞較佳為利什曼原蟲( Leishmania tarentolae)細胞。

在一較佳實施例中，細胞為一微生物之一細胞，其中更佳為所述微生物為一細菌或一酵母菌。在一更佳實施例中，微生物為一細菌，最佳為大腸桿菌。於此敘述使用如大腸桿菌的例子。

在另一更佳實施例中，細胞為一酵母菌。

另一個實施例提供了要在一培養基中穩定培養的一細胞，其中所述培養基可為任何類型的生長培養基，包括基本培養基(minimal medium)、複合培養基(complex medium)或富含某些化合物，例如但不限於維生素、微量元素、胺基酸的生長培養基。

如於此所使用之微生物或細胞具有在一單醣、一雙醣、一寡醣、一多醣、一多元醇、一複合培養基或其混合物作為主要碳源上生長的能力。用語主要是指用於感興趣的寡醣、生物質形成、二氧化碳及/或副產物形成（例如酸及/或醇，例如乙酸鹽、乳酸鹽及/或乙醇）的最重要的碳源，即所有所需碳的20、30、40、50、60、70、75、80、85、90、95、98、99%來自上述碳源。在本發明之一實施例中，所述碳源是所述生物體的唯一碳源，即所有所需碳的100％來源於上述碳源。常見的主要碳源包括但不限於葡萄糖、甘油、果糖、麥芽糖、乳糖、阿拉伯糖、麥芽寡醣、麥芽三糖(maltotriose)、山梨醇、木糖、鼠李糖、蔗糖、半乳糖、甘露糖、甲醇、乙醇、海藻糖、澱粉、纖維素、半纖維素、玉米浸液(corn-steep liquor)、高果糖漿(high-fructose syrup)、乙酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽與丙酮酸鹽。用語複合培養基是指其確切組成未確定的一培養基。例子是糖蜜(molasses)、玉米浸液、蛋白腖、胰蛋白腖或酵母萃取物。

在一進一步較佳實施例中，於此敘述之微生物或細胞使用具有生產途徑(production pathway)與生物質途徑(biomass pathway)的分裂代謝(split metabolism)，如WO2012/007481中所述，其通過引用併入於此。所述生物體可以例如通過改變選自磷酸葡萄糖異構酶基因、磷酸果糖激酶基因、果糖6-磷酸醛縮酶基因、果糖異構酶基因及/或果糖：PEP磷酸轉移酶基因被基因修飾以累積果糖-6-磷酸。

在一進一步較佳實施例中，如於此所述之具有LN3為一核心三糖之一寡醣的生產方法包括下列步驟之至少之一： i) 添加一乳糖給料於培養培養基，乳糖給料包括至少50、更佳為至少75、更佳為至少100、更佳為至少120、更佳為至少150克乳糖每升之初始反應器體積（initial reactor volum），其中反應器體積介於250 mL（毫升）至10.000 m ³（立方公尺）範圍之間，較佳為以一連續方式，且較佳為以使培養培養基之最終體積為不多於添加乳糖給料前培養培養基之體積的3倍、較佳為不多於2倍、更佳為少於2倍； ii) 藉由一給料溶液，在1日、2日、3日、4日、5日之過程中，以一連續方式添加一乳糖給料於培養培養基； iii) 藉由一給料溶液，在1日、2日、3日、4日、5日之過程中，以一連續方式添加一乳糖給料於培養培養基，且其中乳糖給料溶液之濃度為50 g/L、較佳為75 g/L、更佳為100 g/L、更佳為125 g/L、更佳為150 g/L、更佳為175 g/L、更佳為200 g/L、更佳為225 g/L、更佳為250 g/L、 275 g/L、更佳為300 g/L、更佳為325 g/L、更佳為350 g/L、更佳為375 g/L、更佳為400 g/L、更佳為450 g/L、更佳為500 g/L、甚至更佳為550 g/L、最佳為600 g/L；以及較佳為溶液之PH值係設定於3至7之間，且其中較佳為給料溶液之溫度為保持於20°C至80°C之間；所述方法致生一具有LN3作為一核心三醣的寡醣之於所述培養培養基之最終體積中具有至少50 g/L、較佳為至少75 g/L、更佳為至少90 g/L、更佳為至少100 g/L、更佳為至少125 g/L、更佳為至少150 g/L、更佳為至少175 g/L、更佳為至少200 g/L的濃度。

較佳為，乳糖給料，係透過自開始培養時以至少5mM的濃度、較佳為以至少30、40、50、60、70、80、90、100、150 mM的濃度、更佳為以＞300 mM的濃度添加乳糖來達成。

在另一實施例中，乳糖給料，係透過以一濃度之添加乳糖至培養培養基來達成，以致在整個培養之生產階段，獲得濃度至少為5 mM、較佳為至少10 mM或30 mM的一乳糖。

在於此所述之方法的一進一步實施例中，宿主細胞被培養至少約60、80、100或約120小時，或以連續方式培養。

在於此所述之方法的另一實施例中，一碳及能量來源，較佳為葡萄糖、甘油、果糖、麥芽糖、阿拉伯糖、麥芽糊精、麥芽寡醣、麥芽三糖、山梨醇、木糖、鼠李糖、蔗糖、半乳糖、甘露糖、甲醇、乙醇、海藻糖、澱粉、纖維素、半纖維素、多元醇、玉米浸液、高果糖漿、琥珀酸鹽、蘋果酸鹽、醋酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸及/或丙酮酸鹽，亦被添加，較佳為持續添加至培養培養基，並較佳為搭配乳糖。

在一較佳實施例中，一碳基基質，較佳為蔗糖被提供於培養培養基中3或更多天，較佳為上至7天；及/或被提供於培養培養基中，至少100，有利地至少105，更有利地至少110，甚至更有利地至少120克之蔗糖每升初始培養體積，以連續方式，以使培養培養基之最終體積為不多於培養前培養培養基之體積的三倍、有利地為不多於兩倍、更有利地少於兩倍。

較佳為，當執行於此所述之方法時，在第二階段將乳糖添加到培養基中之前，通過將碳基基質，較佳為葡萄糖或蔗糖，添加到培養基中來提供指數細胞生長的第一階段。

在一替代較佳實施例中，在於此所述之方法中，乳糖已經在指數增長的第一階段與碳基基質一起添加。

根據本發明，於此所述之方法較佳為包括分別從所述培養物分離所述包括LN3為一核心三糖之寡醣或包括至少一種包括LN3為一核心三糖之寡醣的寡醣混合物的一步驟。

用語「從所述培養物分離」是指從細胞及/或其生長之培養基中收穫、收集或回收所述寡醣或包括至少一種包括LN3作為一核心三糖的寡醣的所述寡醣混合物。

寡醣或包括至少一種包括LN3作為一核心三糖的寡醣的寡醣混合物可以以一般方式從細胞在其中生長的水性培養基中分離。若所述寡醣或所述寡醣混合物仍存在於產生寡醣或所述寡醣混合物的細胞中，可以使用從細胞中游離或提取所述寡醣或所述寡醣混合物的一般方式，例如使用高pH、熱休克(heat shock)、音振(sonication)、法式壓榨(French press)、均質化、酵素水解、化學水解、溶劑水解、清潔劑、水解…破壞細胞。然後可以將培養培養基及/或細胞萃取物一起與分別地進一步用於分離所述寡醣或所述寡醣混合物。

此較佳包括澄清所述寡醣或所述寡醣混合物以去除懸浮顆粒和污染物、特別是細胞、細胞組分、不溶性代謝物與培養經基因修飾之細胞所產生的碎片(debris)。在此步驟中，可以以一般方式澄清所述寡醣或所述寡醣混合物。較佳為，所述寡醣或所述寡醣混合物通過離心、絮凝(flocculation)、傾析(decantation)及/或過濾來澄清。分離所述寡醣或包括至少一種包括LN3作為一核心三糖的寡醣的寡醣混合物之一第二步驟較佳包含從所述寡醣或所述寡醣混合物中去除基本上所有的蛋白質，以及胜肽、胺基酸、RNA與DNA以及任何可能干擾後續分離步驟的內毒素與醣脂，較佳為在其已經被澄清之後。在此步驟中，蛋白質和相關雜質可以通過一般方式從所述寡醣或所述寡醣混合物中去除。較佳為，藉由超過濾、奈米過濾、逆滲透、微過濾、活性炭或碳處理、切向流高效過濾(tangential flow high-performance filtration)、切向流超濾(tangential flow ultrafiltration)、親和層析、離子交換層析（例如但不限於陽離子交換、陰離子交換、混合床離子交換(mixed bed ion exchange)）、疏水相互作用層析(hydrophobic interaction chromatography)及/或凝膠過濾（即粒徑篩析層析法(size exclusion chromatography)），特別是藉由層析，更特別是藉由離子交換層析或疏水相互作用層析或配體交換層析從所述寡醣或所述寡醣混合物中去除蛋白質、鹽、副產物、顏色與其他相關雜質。除粒徑篩析層析法外，蛋白質與相關雜質被層析介質或所選擇的膜保留。

在一進一步較佳實施例中，於此所述之方法也提供本發明之包括LN3作為核心三糖的寡醣或包括至少一種包括LN3作為核心三糖的寡醣的寡醣混合物的進一步純化。所述寡醣或所述寡醣混合物的進一步純化可以例如藉由（活性）炭或碳、奈米過濾、超濾或離子交換的使用以去除任何剩餘的DNA、蛋白質、LPS、內毒素或其他雜質來達成。也可以使用醇，例如乙醇，與含水醇混合物。另一個純化步驟通過所述寡醣或所述寡醣混合物的結晶、蒸發或沉澱來達成。另一個純化步驟是乾燥，例如將產生的寡醣或寡醣混合物噴霧乾燥或凍乾。

在一示例性實施例中，包括LN3作為核心三糖的寡醣或包括至少一種包括LN3作為核心三糖的寡醣的寡醣混合物的分離與純化，在一程序中進行，包括以任何順序之以下步驟： a) 將培養物或其澄清版本與具600-3500 Da之截留分子量 (molecular weight cut-off, MWCO)的奈米濾膜接觸，確保保留所產生的寡醣或寡醣混合物，並允許至少一部分蛋白質、副產物、顏色與其他相關雜質通過， b) 使用所述膜，使用無機電解質的水溶液對來自步驟a)的滲餘物(retentate)進行滲濾(diafiltration)程序，接著視需要而定地以純水滲濾以除去過量的電解質， c) 與從所述電解質的陽離子收集富含於鹽的形式之所述寡醣或所述寡醣混合物的滲餘物。

在一替代示例實施例中，所述寡醣或所述寡醣混合物的分離與純化，在一程序中進行，包括以任何順序之以下步驟：使培養物或其澄清版本經受使用不同膜的兩個膜過濾步驟，其中wherein -一膜具有介於約300至約500道爾頓之間的截留分子量，且 -另一膜作為介於約600至約800道爾頓之間的截留分子量。

在一替代示例實施例中，所述寡醣或所述寡醣混合物的分離與純化，在一程序中進行，包括以任何順序之以下步驟，其包括以一H ⁺形式的強陽離子交換樹脂與一游離鹼形式的弱陰離子交換樹脂處理培養物或其澄清形式的步驟。

在一替代示例實施例中，所述寡醣或所述寡醣混合物的分離與純化，在以下方式中進行。包含所產生的寡醣、生物質、培養基成分和污染物的培養物，其中培養物中所產生的寡醣或寡醣混合物的純度＜80%，應用於以下純化步驟： i) 從培養物分離生物質， ii) 用於帶正電荷物質之去除的陽離子交換處理， iii) 用於帶負電荷物質之去除的陰離子交換處理， iv) 奈米濾步驟及/或電滲析步驟，其中提供包含純度大於或等於百分之80之所產生的寡醣或寡醣混合物的一經純化的溶液。視需要而定地，將經純化的溶液噴霧乾燥。

在一替代示例性實施例中，包括LN3作為核心三糖的寡醣或包括至少一種包括LN3作為核心三糖的寡醣的寡醣混合物的分離與純化，在一程序中進行，包括以任何順序之以下步驟：培養物的酵素處理；從培養物之生物質的去除；超過濾；奈米過濾；與一管柱層析步驟。較佳為，此種柱色譜是單柱或多柱。進一步較佳為，柱層析步驟為模擬移動床層析(simulated moving bed chromatography)。這種模擬移動床層析較佳為包括i) 至少4根柱，其中至少一管柱包含弱或強陽離子交換樹脂；及/或ii) 具有不同流速的四個區域 I、II、III與IV；及/或iii)包含水的洗脫液；及/或iv) 15攝氏度至60攝氏度的一工作溫度。

在一特定實施例中，本發明提供所產生之包括LN3作為核心三糖的寡醣或包括至少一種包括LN3作為核心三糖的寡醣的寡醣混合物，其被噴霧乾燥成粉末，其中噴霧乾燥的粉末含有＜百分之15-wt.的水，較佳為＜百分之10-wt.的水，更佳為＜百分之7-wt.的水，最佳為＜百分之5-wt.的水。

本發明的另一態樣提供了選自如於此所定義的膜蛋白之組的一膜蛋白在一具有LN3作為核心三糖的寡醣或一包括至少一種包括LN3作為核心三糖的寡醣的寡醣混合物之發酵生產中的用途。

在一進一步之態樣中，本發明提供於此所定義之一細胞在用於一具有LN3作為核心三糖的寡醣或一包括至少一種包括LN3作為核心三糖的寡醣的寡醣混合物之生產之方法中的用途。

此外，本發明也關於根據本發明方法所獲得之一具有LN3作為核心三糖的寡醣或一包括至少一種包括LN3作為核心三糖的寡醣的寡醣混合物，以及如上述之一多核苷酸、載體、宿主細胞、微生物或多胜肽的用於所述寡醣或所述寡醣混合物之生產的用途。所述寡醣或所述寡醣混合物可使用為食品添加劑、益生元(prebiotic)、共生元(symbiotic)，用於嬰兒食品、成人食品或飼料之補充，或使用為治療或藥學活性化合物。藉由此新穎的方法，無需複雜、耗時且費錢的合成程序，即可容易且有效地提供具有LN3作為核心三糖的寡醣或包括至少一種包括LN3作為核心三糖的寡醣的寡醣混合物。

為了如於此所述在細胞中產生的寡醣的鑑定，單體建構組元(monomeric building blocks)（例如單醣或聚醣單元組成）、側鏈的變旋構型(anomeric configuration)、取代基的存在與位置、聚合度/分子量及連接形態(linkage pattern)，可藉由本領域已知之標準方法來鑑定，如，例如甲基化分析、還原裂解、水解、GC-MS（氣相層析-質譜）、MALDI-MS（基質輔助雷射脫附/游離-質譜）、ESI-MS（電灑游離-質譜）、HPLC（帶紫外或折射率檢測之高效液相層析，）、HPAEC-PAD（帶脈衝安培檢測(Pulsed Amperometric Detection)的高效陰離子交換層析）、CE（毛細管電泳）、IR（紅外）/拉曼光譜(Raman spectroscopy)與NMR（核磁共振）光譜技術。使用例如固態NMR、FT-IR（傅立葉變換紅外光譜(Fourier transform infrared spectroscopy)）與WAXS（廣角 X 射線散射(wide-angle X-ray scattering)）可解析晶體結構。聚合度 (DP)、DP 分佈與多分散性(polydispersity)可以藉由例如黏度測定法(viscosimetry)與SEC（SEC-HPLC，高效粒徑篩析層析(high performance size-exclusion chromatography)）來確定。為了鑑定寡醣的單體成分，可以使用方法如，例如酸催化水解、HPLC（高效液相層析）或 GLC（氣液層析）（轉化為糖醇乙酸酯(alditol acetates)之後）。為了確定糖苷鍵，寡醣以甲基碘與在DMSO中之強鹼甲基化，進行水解，達成為部分甲基化的糖醇的還原，進行對甲基化之糖醇乙酸酯的乙醯化，並藉由GLC/ MS（氣液層析與質譜聯用）來執行分析。為了確定聚醣序列，使用酸或酵素進行部分解聚以確定結構。為了鑑定變旋構型，寡醣經受酶分析法(enzymatic analysis)，例如其與對特定類型的連接具有特異性的酵素，例如β-半乳糖苷酶或α-葡萄糖苷酶等接觸，且可使用NMR以分析產物。

於此所述之經分離且較佳為也經純化之具有LN3作為核心三糖的寡醣或一包括至少一種具有LN3作為核心三糖的寡醣的寡醣混合物被併入一食品（例如，人類食品或飼料）、膳食補充劑、藥學成分、化妝品成分或藥物。在一些實施例中，將寡醣或寡醣混合物與一或更多之適用於食品、飼料、膳食補充劑、藥學成分、化妝品成分或藥物的成分混合。

在一些實施例中，膳食補充劑包含至少一益生元成分及/或至少一益生菌(probiotic)成分。

一「益生元」是一種促進對宿主有益的微生物生長的物質，尤其是胃腸道中的微生物。在一些實施例中，膳食補充劑提供多種益生元，包括為藉由本說明書中揭露的方法生產及/或純化的益生元的寡醣或寡醣混合物，以促進一種或更多之有益微生物的生長。用於膳食補充劑的益生元成分的例子包括其他益生元分子（如 HMO）與植物多醣（如菊醣(inulin)、果膠(pectin)、β-葡聚醣(b-glucan)與木質寡醣(xylooligosaccharide)）。「益生菌」產品通常包含活的微生物，這些微生物可以替代或添加到胃腸微生物叢(gastrointestinal microflora)中，以使接受者受益。此類微生物的例子包括乳桿菌屬( Lactobacillus)物種（例如，嗜酸乳桿菌( L. acidophilus)與保加利亞乳桿菌( L. bulgaricus)）、雙歧桿菌( Bifidobacterium)物種（例如，動物雙歧桿菌( B. animalis)、長雙歧桿菌與和嬰兒雙歧桿菌（例如，Bi-26））與布拉氏酵母( Saccharomyces boulardii)。在一些實施例中，本說明書之一程序所產生及/或純化的一寡醣或寡醣混合物與此類微生物組合口服給藥。

膳食補充劑的進一步成分的例子包括雙醣（例如乳糖）、單醣（例如葡萄糖與半乳糖）、增稠劑（例如阿拉伯膠(gum arabic)）、酸度調節劑（例如檸檬酸三鈉）、水、脫脂牛奶與調味劑。

在一些實施例中，將包括LN3作為核心三糖的寡醣或一包括至少一種包括LN3作為核心三糖的寡醣的寡醣混合物併入人類嬰兒食品（例如嬰兒配方奶(infant formula)）中。嬰兒配方奶通常是用於餵養嬰兒的加工食品，作為人乳的完全或部分替代品。在一些實施方案中，嬰兒配方奶以粉末形式出售，並藉由與水混合而製備以瓶或杯餵給嬰兒。嬰兒配方奶的成分通常設計為大致模仿人乳。在一些實施例中，通過本說明書中的方法生產及/或純化的寡醣或寡醣混合物包括在嬰兒配方奶中以提供類似於人乳中的寡醣所提供的營養益處。在一些實施例中，將寡醣或寡醣混合物與嬰兒配方奶的一或更多成分混合。嬰兒配方奶成分包括脫脂牛奶、碳水化合物來源（例如，乳糖）、蛋白質來源（例如濃縮乳清蛋白(whey protein concentrate)與酪蛋白）、脂肪來源（例如，植物油—例如棕櫚、高油酸紅花、油菜、椰子及/或葵花油；與魚油）、維生素（例如，維生素 A、Bb、Bi2、C 與D）、礦物質（例如，檸檬酸鉀、檸檬酸鈣、氯化鎂、氯化鈉、檸檬酸鈉與磷酸鈣）與可能的人乳寡醣（HMO）。此類 HMO 可包括，例如DiFL、乳糖-N-三糖 II、LNT、LNnT、乳糖-N-岩藻五糖 I、乳糖-N-新岩藻五糖、乳糖-N-岩藻五糖 II、乳糖-N-岩藻五糖 III、乳糖-N-岩藻五糖 V、乳糖-N-新岩藻五糖V、乳糖-N-二岩藻六糖I、乳糖-N-二岩藻六糖II、6'-半乳糖基乳糖、3'-半乳糖基乳糖、乳糖-N-六糖與乳糖-N-新六糖。

在一些實施例中，一或更多之嬰兒配方奶成分包括脫脂牛奶、一碳水化合物來源、一蛋白質來源、一脂肪來源及/或一維生素與礦物質。

在一些實施例中，一或更多之嬰兒配方奶成分包括乳糖、濃縮乳清蛋白及/或高油酸紅花油。

在一些實施例中，嬰兒配方奶中寡醣或寡醣混合物的濃度與人乳中通常存在的寡醣濃度為大致相同的濃度。

在一些實施例中，將寡醣或寡醣混合物併入一飼料製劑中，其中所述飼料選自包括寵物食品、動物代乳品、獸醫產品(veterinary product)、斷奶後飼料(post weaning feed)或教槽飼料(creep feed)的列表。

如於此的實施例中所示，當使用於此定義的膜蛋白時，本發明的方法與細胞提供至少一種之以下令人驚訝的優點： -較佳之具有LN3為一核心三糖之寡醣的滴定量（經提升） (g/L)， -較佳的生產率r (g寡醣/L/h)， -較佳的細胞效能指數(cell performance index) CPI (g 寡醣/g X) ， -較佳的單位生產力(specific productivity) Qp (g 寡醣/g X /h)， -較佳的蔗糖產量(yield) Ys (g 寡醣/g 蔗糖)， -較佳的蔗糖攝取/轉化率Qs (g 蔗糖/g X/h)， -較佳的乳糖轉化/消耗率rs (g 乳糖/h)， -經提升之具有LN3為一核心三糖之寡醣的分泌，及/或 -經提升的生產宿主之生長速度，當將一具有LN3為一核心三糖之寡醣或一包括至少一種包括LN3作為一核心三糖的寡醣的寡醣混合物的生產宿主與相同的基因背景但缺乏異源膜蛋白之表現或內源膜蛋白的調節表現比較時。在目前內容中，「X」意指生物量、「g」意指公克，「L」意指公升，而「h」意指小時。所述「g 寡醣」可被測量於整個肉湯中及/或於上清液中。

較佳為，當使用於此定義的膜蛋白時，本發明的方法與細胞提供至少一種之以下令人驚訝的優點： -較佳之具有LN3為一核心三糖之寡醣的滴定量（經提升） (g/L)， -較佳的生產率r (g 寡醣/L/h)， -較佳的細胞效能指數(cell performance index) CPI (g 寡醣/g X) ， -較佳的單位生產力(specific productivity) Qp (g 寡醣/g X /h)， -較佳的蔗糖產量Ys (g 寡醣/g 蔗糖)， -較佳的蔗糖攝取/轉化率Qs (g 蔗糖/g X/h)， -較佳的乳糖轉化/消耗率rs (g 乳糖/h) ，及/或 -經提升之具有LN3為一核心三糖之寡醣的分泌。當將一具有LN3為一核心三糖之寡醣或一包括至少一種包括LN3作為一核心三糖的寡醣的寡醣混合物的生產宿主與相同的基因背景但缺乏異源膜蛋白之表現或內源膜蛋白的調節表現比較時。

又，本發明係關於以下特定實施例： 1. 一種宿主細胞，其經基因修飾以產生一包括一乳糖-N-三糖（LN3；GlcNAc-beta1,3-Gal-beta1,4-Glc ）作為一核心三醣的寡醣，其中該宿主細胞包括及表現一半乳糖苷-β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶（galactoside beta-1,3-N-acetylglucosaminyltransferase）的至少一核酸序列，該半乳糖苷-β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶自一UDP-GlcNAc供體轉移一N-乙醯葡萄糖胺（GlcNAc）殘基至一乳糖受體上，從而合成LN3， -該細胞更包括：（i）一內源膜蛋白的過表現及/或（ii）一異源膜蛋白的表現，以提供一包括LN3作為一核心三醣的寡醣的（a）經改良的生產及/或（b）經啟動及/或經提升的排出， -較佳為該細胞更包括及表現編碼一醣基轉移酶（glycosyltransferase）的至少一核酸序列，該醣基轉移酶具有修飾該LN3之能力。 2. 如實施例1之細胞，其中該膜蛋白係選自運輸蛋白（porters）、P-P鍵水解驅動轉運蛋白（P-P-bond-hydrolysis-driven transporters）、及β-桶狀孔蛋白（β-Barrel Porins）之群組，其中，（a）當該膜蛋白係選自該運輸蛋白之群組，該膜蛋白係選自： -TCDB分類 2.A.1.1、2.A.1.2、2.A.1.3、2.A.1.6、 2.A.2.2、2.A.7.1及2.A.66之群組，或 -eggnog家族 05E8G、05EGZ、05JHE、07QF7、 07QRN、07RBJ、0814C及08N8A之群組，或 -PFAM列表 PF00893、PF01943、PF05977、PF07690 及PF13347，或 -interpro列表IPR000390、IPR001411、IPR001927、IPR002797、IPR004638、IPR005829、IPR010290、IPR011701、IPR020846、IPR023721、IPR023722、IPR032896、IPR036259及IPR039672，或 -源自Cronobacter muytjensii 之具有序列識別號01的MdfA、源自雷根斯堡預研菌（Yokenella regensburgei）（ATCC43003）之具有序列識別號02的MdfA、源自大腸桿菌（Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號03的MdfA、源自腸桿菌屬（Enterobacter sp.）之具有序列識別號04的MdfA、源自克氏檸檬酸桿菌（Citrobacter koseri）之具有序列識別號05的MFS、源自Citrobacter youngae之具有序列識別號06的MdfA、源自大腸桿菌（Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號07的YbdA、源自源自大腸桿菌（Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號08的YjhB、源自大腸桿菌（Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號09的WzxE、源自大腸桿菌（Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號10的EmrE、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號11的Blon_2331、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號12的 Blon_0247、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號13的Blon_0345、源自肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）之具有序列識別號14的IceT、源自阪崎腸桿菌（Cronobacter sakazakii）品系MOD1_LR753之具有序列識別號53的MdfA、源自粉末佛朗哥氏菌（Franconibacter pulveris）LMG 24059之具有序列識別號54的MdfA、源自霍氏腸桿菌（Enterobacter hormaechei）品系017之具有序列識別號55的MdfA、源自克氏檸檬酸桿菌（Citrobacter koseri）品系NCTC10771之具有序列識別號56的MdfA、源自腸道沙門氏菌 arizonae亞種血清型41:z4,z23:- 品系TAMU30EF之具有序列識別號57的MdfA、源自副痢疾桿菌（Shigella flexneri ）品系585219之具有序列識別號58的MdfA、源自雷根斯堡預研菌（Yokenella regensburgei）品系UMB0819之具有序列識別號59的MdfA、源自大腸桿菌（Escherichia coli）品系AMC_967之具有序列識別號60的MdfA、源自肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）VAKPC309之具有序列識別號61的MdfA、源自產酸克雷伯氏菌（Klebsiella oxytoca）品系4928STDY7071490之具有序列識別號62的MdfA、源自密西根克雷伯氏菌（Klebsiella michiganensis）品系A2之具有序列識別號63的MdfA、源自Pluralibacter gergoviae品系FDAARGOS_186之具有序列識別號64的MdfA或源自抗壞血克呂沃爾氏菌（Kluyvera ascorbata）ATCC 33433之具有序列識別號65的MdfA或以上任一運輸膜蛋白之功能同源物（functional homolog）或功能性片段（functional fragment），或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號 01、 02、03、04、05、06、07、08、09、10、11、12、13、14、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64或65的該膜蛋白之任一個的全長序列，具有至少80%之序列一致性（sequence identity）；（b）當該膜蛋白係選自該P-P鍵水解驅動轉運蛋白之群組，該膜蛋白係選自： -TCDB分類 3.A.1.1及3.A.1.2之群組，或 -eggnog家族 05CJ1、05DFW、05EZD、05I1K、07HR3 及08IJ9之群組，或 -PFAM列表 PF00005、PF00528、PF13407及PF17912，或 -interpro列表IPR000515、IPR003439、IPR003593、IPR005978、IPR008995、IPR013456、IPR015851、IPR017871、IPR025997、IPR027417、 IPR028082、IPR035906及IPR040582，或 -源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號15的Blon_2475、源自大豆慢生根瘤菌（Bradyrhizobium japonicum）USDA 110之具有序列識別號16的nodi、源自大腸桿菌（Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號17的xylF、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（Bifidobacterium longum subsp. Infantis）Bi-26之具有序列識別號18的TIC77290、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（Bifidobacterium longum subsp. Infantis）Bi-26之具有序列識別號19的TIC77291、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（Bifidobacterium longum subsp. Infantis）Bi-26之具有序列識別號20的TIC76854 TIC77291，或以上任一P-P鍵水解驅動轉運膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號15、16、17、18、19或20的該膜蛋白的任一個的全長序列，具有至少80%之序列一致性；或（c）當該膜蛋白係選自該β-桶狀孔蛋白之群組，該膜蛋白係選自： -TCDB分類 1.B.18，或 -eggnog家族 05DAY，或 -PFAM列表 PF02563、PF10531及PF18412，或 -interpro列表 IPR003715、IPR019554及IPR040716，或 -源自大腸桿菌（Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號21的Wza或其功能同源物或功能片段，或一蛋白質序列，其與具有序列識別號21的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%之序列一致性；其中該TCDB分類係由2019年6月17日發佈之TCDB.org所定義、該eggnog家族係由2016年9月發佈之eggnogdb 4.5.1所定義、該PFAM列表係由2018年9月所發佈之Pfam 32.0所定義、該interpro列表係由2019年7月4日發佈之InterPro 75.0所定義。 3. 如實施例1或2之細胞，其中該膜蛋白係選自下列膜蛋白所組成之群組：（a）該運輸膜蛋白源自Cronobacter muytjensii 之具有序列識別號01的Mdfa、源自雷根斯堡預研菌（Yokenella regensburgei）（ATCC43003）之具有序列識別號02的MdfA、源自大腸桿菌（Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號03的MdfA、源自腸桿菌屬（Enterobacter sp.）之具有序列識別號04的MdfA、源自克氏檸檬酸桿菌（Citrobacter koseri）之具有序列識別號05的MFS、源自Citrobacter youngae之具有序列識別號06的MdfA、源自大腸桿菌（Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號07的YbdA、源自源自大腸桿菌（Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號08的YjhB、源自大腸桿菌（Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號09的WzxE、源自大腸桿菌（Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號10的EmrE、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號11的Blon_2331、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號12的 Blon_0247、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號13的Blon_0345、源自肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）之具有序列識別號14的IceT、源自阪崎腸桿菌（Cronobacter sakazakii）品系MOD1_LR753之具有序列識別號53的MdfA、源自粉末佛朗哥氏菌（Franconibacter pulveris）LMG 24059之具有序列識別號54的MdfA、源自霍氏腸桿菌（Enterobacter hormaechei）品系017之具有序列識別號55的MdfA、源自克氏檸檬酸桿菌（Citrobacter koseri）品系NCTC10771之具有序列識別號56的MdfA、源自腸道沙門氏菌arizonae亞種（Salmonella enterica subsp. arizonae）血清型41:z4,z23:- 品系TAMU30EF之具有序列識別號57的MdfA、源自副痢疾桿菌（Shigella flexneri）品系585219之具有序列識別號58的MdfA、源自雷根斯堡預研菌（Yokenella regensburgei）品系UMB0819之具有序列識別號59的MdfA、源自大腸桿菌（Escherichia coli）品系AMC_967之具有序列識別號60的MdfA、源自肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）VAKPC309之具有序列識別號61的MdfA、源自產酸克雷伯氏菌（Klebsiella oxytoca）品系4928STDY7071490之具有序列識別號62的MdfA、源自密西根克雷伯氏菌（Klebsiella michiganensis）品系A2之具有序列識別號63的MdfA、源自Pluralibacter gergoviae品系FDAARGOS_186之具有序列識別號64的MdfA或源自抗壞血克呂沃爾氏菌（Kluyvera ascorbata）ATCC 33433之具有序列識別號65的MdfA或以上任一運輸膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號01、02、03、04、05、06、07、08、09、10、11、12、13、14、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64或65的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%之序列一致性；及（b）該P-P鍵水解驅動轉運蛋白源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號15的Blon_2475、源自大豆慢生根瘤菌（Bradyrhizobium japonicum）USDA 110之具有序列識別號16的nodi、源自大腸桿菌（Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號17的xylF、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（Bifidobacterium longum subsp. Infantis）Bi-26之具有序列識別號18的TIC77290、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（Bifidobacterium longum subsp. Infantis）Bi-26之具有序列識別號19的TIC77291、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（Bifidobacterium longum subsp. Infantis）Bi-26之具有序列識別號20的TIC76854 TIC77291，或以上任一P-P鍵水解驅動轉運膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其與任一具有序列識別號15、16、17、18、19或20的該膜蛋白的全長序列，分別具有至少80%之序列一致性；及（c）該β-桶狀膜孔蛋白源自大腸桿菌（Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號21的Wza或該Wza蛋白之功能同源物或功能片段，或一蛋白質序列，其與具有序列識別號21的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%之序列一致性。 4. 如實施例1至3任一項之細胞，其中該膜蛋白係參與運輸化合物跨越細胞壁外膜之一轉運蛋白。 5.如前方實施例任一項之細胞，其中該醣基轉移酶係選自包括下列清單：岩藻糖基轉移酶、唾液酸轉移酶、半乳糖基轉移酶、葡萄糖基轉移酶、甘露糖基轉移酶、N-乙醯葡萄糖胺轉移酶、N-乙醯半乳糖胺轉移酶、N-乙醯甘露糖胺轉移酶、木糖基轉移酶、葡萄糖醛酸轉移酶、半乳糖醛酸轉移酶、葡萄糖胺轉移酶、N-羥乙醯神經胺酸轉移酶、鼠李糖基轉移酶、N-乙醯鼠李糖胺轉移酶、UDP-4-胺基-4,6-二去氧基-N-乙醯基-β-L-阿卓糖胺轉胺酶（UDP-4-amino-4,6-dideoxy-N-acetyl-beta-L-altrosamine transaminases）及岩藻糖胺轉移酶，較佳為其中該細胞被至少一個該醣基轉移酶修飾表現或活性。 6. 如前方實施例任一項之細胞，其中該包括一乳糖-N-三糖（LN3; GlcNAc-beta1,3-Gal-beta1,4-Glc）作為一核心三醣的寡醣係選自包括下列清單：乳糖-N-三糖、乳糖-N-四糖、乳糖-N-新四糖、乳糖-N-岩藻五糖I、乳糖-N-新岩藻五糖I、乳糖-N-岩藻五糖II、乳糖-N-岩藻五糖III、乳糖-N-岩藻五糖V、乳糖-N-岩藻五糖VI、乳糖-N-新岩藻五糖V、乳糖-N-二岩藻六糖I、乳糖-N-二岩藻六糖II、乳糖-N-六糖（lacto-N-hexaose, LNH）、乳糖-N-新六糖（lacto-N-neohexaose, LNnH）、對-乳糖-N-六糖（para-lacto-N-hexaose, pLNnH）、對-乳糖-N-新六糖（para-lacto-N-neohexaose, pLNH）、二岩藻糖基-乳糖-N-六糖、二岩藻糖基-乳糖-N-新六糖、乳糖-N-五糖（lacto-N-pentaose, LNP）、乳糖-N-新五糖、對乳糖-N-五糖、對乳糖-N-新五糖、乳糖-N-novo五糖I、乳糖-N-七糖、乳糖-N-新七糖、對乳糖-N-新七糖、對乳糖-N-七糖、乳糖-N-八糖（lacto-N-octaose, LNO）、乳糖-N-新八糖、異乳糖-N-八糖、對乳糖-N-八糖、異乳糖-N-新八糖、novo乳糖-N-新八糖、對乳糖-N-新八糖、異乳糖-N-九糖、novo乳糖-N-九糖、乳糖-N-九糖、乳糖-N-十糖、異乳糖-N-十糖、novo乳糖-N-十糖、乳糖-N-新十糖、唾液酸基-乳糖-N-四糖a（Sialyl-lacto-N-tetraose a）、唾液酸基-乳糖-N-四糖b、唾液酸基-乳糖-N-四糖c、唾液酸基-乳糖-N-四糖d。 7. 如前方實施例任一項之細胞，其中該醣基轉移酶係一N-乙醯葡萄糖胺β-1,3-半乳糖基轉移酶或一N-乙醯葡萄糖胺β-1,4-半乳糖基轉移酶，其自一UDP-Gal供體透過一β-1,3或β-1,4鍵結轉移一半乳糖（Gal）至LN3之末端GlcNAC殘基上，從而分別產生乳糖-N-四糖（LNT; Gal-beta1,3-GlcNAc-beta1,3-Gal-beta1,4-Glc）或乳糖-N-新四糖（LNnT; Gal-beta1,4-GlcNAc-beta1,3-Gal-beta1,4-Glc）。 8. 如實施例7之細胞，其中該細胞在整個肉湯(broth)及/或上清液中，產生90 g/L或更多的LNT，及/或其中該LNT在整個肉湯及/或上清液中具有至少80%之一純度，依據該細胞在整個肉湯及/或上清液中產生之LNT及LN3的總量所分別測量。 9. 如實施例7之細胞，其中該細胞在整個肉湯及/或上清液中，產生90 g/L或更多的LNnt及/或其中該LNnT在整個肉湯及/或上清液中具有至少80%之一純度，依據該細胞在整個肉湯及/或上清液中產生之LNnT及LN3的總量所分別測量。 10. 如前方實施例任一項之細胞，其中該細胞係更能合成一核苷酸活化醣，用於生產該包括一乳糖-N-三糖（LN3; GlcNAc-beta1,3-Gal-beta1,4-Glc）作為一核心三醣的寡醣。 11. 如實施例10之細胞，其中該核苷酸活化醣係選自包括下列清單：UDP-N-乙醯半乳糖胺（UDP-GalNAc）、UDP-N-乙醯甘露糖胺（UDP-ManNAc）、UDP-葡萄糖（UDP-Glc）、UDP-半乳糖（UDP-Gal）、GDP-甘露糖（GDP-Man）、UDP-葡萄糖醛酸鹽、UDP-半乳糖醛酸鹽、UDP-2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-L-阿拉伯糖-4-己酮糖、UDP-2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-L-木糖-4-己酮糖（UDP-2-acetamido-2,6-dideoxy-L-lyxo-4-hexulose）、 UDP-N-乙醯基-L-鼠李糖胺（UDP-L-RhaNAc或UDP-2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-L-甘露糖（UDP-2-acetamido-2,6-dideoxy-L-mannose））、dTDP-N-乙醯岩藻糖胺、UDP-N-乙醯岩藻糖胺（UDP-L-FucNAc或UDP-2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-L-半乳糖）、 UDP-N-乙醯-L-去氧塔羅糖胺（UDP-N-acetyl-L-pneumosamine）（UDP-L-PneNAC或UDP-2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-L-塔羅糖（UDP-2-acetamido-2,6-dideoxy-L-talose））、UDP-N-乙醯胞壁酸（UDP-N-acetylmuramic acid）、UDP-N-乙醯基-L-奎諾糖胺（UDP-N-acetyl-L-quinovosamine）（UDP-L-QuiNAc或UDP-2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-L-葡萄糖（UDP-2-acetamido-2,6-dideoxy-L-glucose））、CMP-唾液酸（CMP-Neu5Ac）、CMP-N-羥乙醯神經胺酸（CMP-Neu5Gc）、GDP-岩藻糖、GDP-鼠李糖及UDP-木糖。 12. 如前方實施例任一項之細胞，其中該細胞包括一分解代謝途徑，用於經選擇之至少部分未活化之單、雙或寡醣，該單、雙或寡醣參與及/或需要於一包括LN3作為一核心三醣的寡醣之合成。 13. 如前方實施例任一項之細胞，其中該細胞利用一前驅物以合成該包括LN3作為一核心三醣的寡醣。 14. 如前方實施例任一項之細胞，其中該膜蛋白參與一前驅物之攝取，以合成該包括LN3作為一核心三醣的寡醣。 15. 如前方實施例任一項之細胞，其中該細胞產生一前驅物，以合成該包括LN3作為一核心三醣的寡醣。 16. 如前方實施例任一項之細胞，其中該細胞係穩定地培養於培養基(medium)中。 17. 如前方實施例任一項之細胞，其中該細胞係選自由微生物、植物或動物細胞所組成之群組，較佳為： -該微生物係一細菌、真菌或一酵母菌， -較佳為該植物係一米、棉、油菜、大豆、玉蜀黍或玉米植物，較佳為該動物為昆蟲、魚、鳥或非人類之哺乳動物。 18. 如實施例17之細胞，其中該細胞係一細菌，較佳為一大腸桿菌品系，更佳為一K-12品系之大腸桿菌品系之細胞、甚至更佳為該大腸桿菌K-12品系為E. coli MG1655。 19. 前方實施例任一項之細胞，其中該包括LN3作為一核心三醣之寡醣為一哺乳動物乳寡醣或一或一Lewis型抗原寡醣。 20. 如前方實施例任一項之細胞，其中該細胞具有合成包括至少一寡醣之一寡醣混合物的能力，該至少一寡醣包括LN3作為一核心三醣。 21. 一種藉由一基因修飾細胞產生一包括一乳糖-N-三糖（LN3；GlcNAc-beta1,3-Gal-beta1,4-Glc ）作為一核心三醣的寡醣的方法，包括步驟：（a）提供如實施例1至20任一項之一細胞，及（b）在允許產生該包括LN3作為一核心三醣的寡醣之條件下，培養該細胞於一培養基中，（c）將該包括LN3作為一核心三醣的寡醣或包括至少一寡醣之一寡醣混合物，分別自該培養分離，該至少一寡醣包括LN3作為一核心三醣。 22. 如實施例21之方法，該方法更包括至少一下列步驟：（i）添加一乳糖給料於該培養培養基，該乳糖給料包括至少50、更佳為至少75、更佳為至少100、更佳為至少120、更佳為至少150克乳糖每升之初始反應器體積（initial reactor volum），其中該反應器體積介於250mL至10.00m3（立方公尺）範圍之間，較佳為以一連續方式，且較佳為以使該培養培養基之最終體積為不多於添加該乳糖給料前該培養培養基之體積的三倍、較佳為不多於兩倍、更佳為少於兩倍；（ii）藉由一給料溶液，在1日、2日、3日、4日、5日之過程中，以一連續方式添加一乳糖給料於培養培養基；（iii）藉由一給料溶液，在1日、2日、3日、4日、5日之過程中，以一連續方式添加一乳糖給料於培養培養基，且其中該乳糖給料溶液之濃度為50 g/L、較佳為75 g/L、更佳為100 g/L、更佳為125 g/L、更佳為150 g/L、更佳為175 g/L、更佳為200 g/L、更佳為225 g/L、更佳為250 g/L、 275 g/L、更佳為300 g/L、更佳為325 g/L、更佳為350 g/L、更佳為375 g/L、更佳為400 g/L、更佳為450 g/L、更佳為500 g/L、甚至更佳為550 g/L、最佳為600 g/L；以及較佳為該溶液之PH值係設定於3至7之間，且其中較佳為該給料溶液之溫度為保持於20°C至80°C之間；該方法致生一包括一乳糖-N-三糖（LN3；GlcNAc-beta1,3-Gal-beta1,4-Glc ）作為一核心三醣的寡醣，其於該培養培養基之最終體積中具有至少50 g/L、較佳為至少75 g/L、更佳為至少90 g/L、更佳為至少100 g/L、更佳為至少125 g/L、更佳為至少150 g/L、更佳為至少175 g/L、更佳為至少200 g/L的濃度。 23. 如實施例22之方法，其中該乳糖給料，係透過自開始培養時以至少5mM的濃度、較佳為以至少30、40、50、60、70、80、90、100、150mM的濃度、更佳為以大於300mM的濃度添加乳糖來達成。 24. 如實施例22或23任一項之方法，其中該乳糖給料，係透過以一濃度之添加乳糖至培養培養基來達成，以致在整個培養之生產階段，獲得濃度至少為5mM、較佳為至少10mM或30mM的一乳糖。 25. 如實施例21至24任一項之方法，其中該宿主細胞被培養至少約60、80、100或約120小時，或以連續方式培養。 26. 如實施例21至25任一項之方法，其中一碳及能量來源，較佳為葡萄糖、甘油、果糖、麥芽糖、阿拉伯糖、麥芽糊精、麥芽寡醣（malto-oligosacchraides）、麥芽三糖、山梨醇、木糖、鼠李糖、蔗糖、半乳糖、甘露糖、甲醇、乙醇、海藻糖、澱粉、纖維素、半纖維素、多元醇、玉米浸液（corn-steep liquor）、高果糖漿（high-fructose syrup）、琥珀酸鹽、蘋果酸鹽、醋酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸及丙酮酸鹽，亦被添加，較佳為持續添加至培養培養基，並較佳為搭配乳糖。 27. 如實施例21至26任一項之方法，其中指數細胞成長之一第一期，係藉由在第二期添加乳糖至該培養培養基之前，添加一碳基受質且較佳為葡萄糖或果糖至該培養培養基來提供。 28. 如實施例21至27任一項之方法，其中該分離包括至少一下列步驟：澄清(clarification)、超過濾、奈米過濾、逆滲透、微過濾、活性炭或碳處理、切向流高效能過濾（tangential flow high-performance filtration）、切向流超過濾（tangential flow ultrafiltration）、親和力層析、離子交換層析、疏水性交互作用層析及/或凝膠過濾、配位基交換層析。 29. 如實施例21至28任一項之方法，更包括分別自該細胞純化該包括LN3作為一核心三醣的寡醣或包括至少一寡醣的寡醣混合物，該至少一寡醣包括LN3作為一核心三醣。 30. 如實施例21至29任一項之方法，其中該純化包括至少一下列步驟：利用活性炭或碳、利用木炭、奈米過濾、超過濾或離子交換、利用醇類、利用含水醇類混合物、結晶化、蒸發、沉澱、乾燥、噴霧乾燥或冷凍乾燥。 31. 一種選自如實施例1至4任一項中所定義之膜蛋白之群組的一膜蛋白於發酵生產一包括LN3作為一核心三醣的寡醣中的用途。 32. 一種如實施例1至19項之一細胞用於產生一包括LN3作為一核心三醣的寡醣的用途。 33. 一種如實施例20之一細胞用於產生一包括至少一寡醣之寡醣混合物的用途，該至少一寡醣包括LN3作為一核心三醣。 34. 一種如實施例21至30任一項之一方法用於產生一包括LN3作為一核心三醣的寡醣的用途。

此外，本發明係關於以下較佳特定實施例： 1. 一種宿主細胞，其經基因修飾以產生一包括一乳糖-N-三糖（LN3；GlcNAc-beta1,3-Gal-beta1,4-Glc ）作為一核心三醣的寡醣，其中該宿主細胞包括及表現一半乳糖苷-β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶（galactoside beta-1,3-N-acetylglucosaminyltransferase）的至少一核酸序列，該半乳糖苷-β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶自一UDP-GlcNAc供體轉移一N-乙醯葡萄糖胺（GlcNAc）殘基至一乳糖受體上，從而合成LN3， -該細胞更包括：（i）一内源膜蛋白的過表現及/或（ii）一異源膜蛋白的表現，以提供一包括LN3作為一核心三醣的寡醣的（a）經改良的生產及/或（b）經啟動及/或經提升的排出，較佳為其中該經改良的生產及該經提升的排出，係相較於具有一同一基因背景但欠缺該過表現一内源膜蛋白及該表現一異源膜蛋白的宿主細胞， -較佳為該細胞更包括及表現編碼一醣基轉移酶（glycosyltransferase）的至少一核酸序列，該醣基轉移酶具有修飾該LN3之能力，其中視需要而定的該經改良的生產包括： -較佳的該寡醣滴定量（公克寡醣/公升）， -較佳的生產率r（公克寡醣/公升‧小時）， -較佳的細胞效能指數（cell performance index）（公克寡醣/公克生物量）， -較佳的單位生產力（specific productivity）（公克寡醣/公克生物量‧小時）， -較佳的蔗糖產量（yield）（公克寡醣/公克蔗糖），及/或 -較佳的蔗糖攝取/轉化率（公克蔗糖/公克‧小時）， -較佳的乳糖轉化/消耗率（公克乳糖/小時），及/或 -經提升的該宿主細胞之生長速度。 2. 如請求項1之細胞，其中該膜蛋白係選自運輸蛋白（porters）、P-P鍵水解驅動轉運蛋白（P-P-bond-hydrolysis-driven transporters）、及β-桶狀孔蛋白（β-Barrel Porins）之群組，其中，（a）當該膜蛋白係選自該運輸蛋白之群組，該膜蛋白係選自： -TCDB分類 2.A.1.1、2.A.1.2、2.A.1.3、2.A.1.6、 2.A.2.2、2.A.7.1及2.A.66之群組，或 -eggnog家族 05E8G、05EGZ、05JHE、07QF7、 07QRN、07RBJ、0814C及08N8A之群組，或 -PFAM列表 PF00893、PF01943、PF05977、PF07690 及PF13347，或 -interpro列表IPR000390、IPR001411、IPR001927、IPR002797、IPR004638、IPR005829、IPR010290、IPR011701、IPR020846、IPR023721、IPR023722、IPR032896、IPR036259及IPR039672，或 -源自Cronobacter muytjensii 之具有序列識別號01的MdfA、源自雷根斯堡預研菌（Yokenella regensburgei）（ATCC43003）之具有序列識別號02的MdfA、源自大腸桿菌（Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號03的MdfA、源自腸桿菌屬（Enterobacter sp.）之具有序列識別號04的MdfA、源自克氏檸檬酸桿菌（Citrobacter koseri）之具有序列識別號05的MFS、源自Citrobacter youngae之具有序列識別號06的MdfA、源自大腸桿菌（Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號07的YbdA、源自源自大腸桿菌（Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號08的YjhB、源自大腸桿菌（Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號09的WzxE、源自大腸桿菌（Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號10的EmrE、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號11的Blon_2331、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號12的 Blon_0247、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號13的Blon_0345、源自肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）之具有序列識別號14的IceT、源自阪崎腸桿菌（Cronobacter sakazakii）品系MOD1_LR753之具有序列識別號53的MdfA、源自粉末佛朗哥氏菌（Franconibacter pulveris）LMG 24059之具有序列識別號54的MdfA、源自霍氏腸桿菌（Enterobacter hormaechei）品系017之具有序列識別號55的MdfA、源自克氏檸檬酸桿菌（Citrobacter koseri）品系NCTC10771之具有序列識別號56的MdfA、源自腸道沙門氏菌arizonae亞種血清型41:z4,z23:- 品系TAMU30EF之具有序列識別號57的MdfA、源自副痢疾桿菌（Shigella flexneri ）品系585219之具有序列識別號58的MdfA、源自雷根斯堡預研菌（Yokenella regensburgei）品系UMB0819之具有序列識別號59的MdfA、源自大腸桿菌（Escherichia coli）品系AMC_967之具有序列識別號60的MdfA、源自肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）VAKPC309之具有序列識別號61的MdfA、源自產酸克雷伯氏菌（Klebsiella oxytoca）品系4928STDY7071490之具有序列識別號62的MdfA、源自密西根克雷伯氏菌（Klebsiella michiganensis）品系A2之具有序列識別號63的MdfA、源自Pluralibacter gergoviae品系FDAARGOS_186 之具有序列識別號64的MdfA、源自抗壞血克呂沃爾氏菌（Kluyvera ascorbata）ATCC 33433之具有序列識別號65的MdfA、神戶腸桿菌（Enterobacter kobei）之具有序列識別號66的MdfA、源自萊略特菌屬（Lelliottia sp.）WB101之具有序列識別號67的MdfA、源自弗氏檸檬酸桿菌（Citrobacter freundii）之具有序列識別號68的MdfA、源自腸道沙門氏菌Salamae亞種（Salmonella enterica subsp. Salamae）之具有序列識別號69的MdfA或源自副痢疾桿菌（Shigella flexneri）之具有序列識別號70的MdfA，或以上任一運輸膜蛋白之功能同源物（functional homolog）或功能性片段（functional fragment），或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號 01、 02、03、04、05、06、07、08、09、10、11、12、13、14、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69或70的該膜蛋白之任一個的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性（sequence identity）；（b）當該膜蛋白係選自該P-P鍵水解驅動轉運蛋白之群組，該膜蛋白係選自： -TCDB分類 3.A.1.1及3.A.1.2之群組，或 -eggnog家族 05CJ1、05DFW、05EZD、05I1K、07HR3 及08IJ9之群組，或 -PFAM列表 PF00005、PF00528、PF13407及PF17912，或 -interpro列表 IPR000515、IPR003439、IPR003593、IPR005978、IPR008995、IPR013456、IPR015851、IPR017871、IPR025997、IPR027417、 IPR028082、IPR035906及IPR040582，或 -源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號15的Blon_2475、源自大豆慢生根瘤菌（Bradyrhizobium japonicum）USDA 110之具有序列識別號16的nodi、源自大腸桿菌（Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號17的xylF、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（Bifidobacterium longum subsp. Infantis）Bi-26之具有序列識別號18的TIC77290、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（Bifidobacterium longum subsp. Infantis）Bi-26之具有序列識別號19的TIC77291、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（Bifidobacterium longum subsp. Infantis）Bi-26之具有序列識別號20的TIC76854 TIC77291，或以上任一P-P鍵水解驅動轉運膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號15、16、17、18、19或20的該膜蛋白的任一個的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性；或（c）當該膜蛋白係選自該β-桶狀孔蛋白之群組，該膜蛋白係選自： -TCDB分類 1.B.18，或 -eggnog家族 05DAY，或 -PFAM列表 PF02563、PF10531及PF18412，或 -interpro列表 IPR003715、IPR019554及IPR040716，或 -源自大腸桿菌（Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號21的Wza或其功能同源物或功能片段，或一蛋白質序列，其與具有序列識別號21的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性；其中該TCDB分類係由2019年6月17日發佈之TCDB.org所定義、該eggnog 家族係由2016年9月發佈之eggnogdb 4.5.1所定義、該PFAM列表係由2018年9月所發佈之Pfam 32.0所定義、該interpro 列表係由2019年7月4日發佈之InterPro 75.0所定義。 3. 如請求項1或2之細胞，其中該膜蛋白係選自下列膜蛋白所組成之群組：（a）該運輸膜蛋白源自Cronobacter muytjensii 之具有序列識別號01的Mdfa、源自雷根斯堡預研菌（Yokenella regensburgei）（ATCC43003）之具有序列識別號02的MdfA、源自大腸桿菌（Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號03的MdfA、源自腸桿菌屬（Enterobacter sp.）之具有序列識別號04的MdfA、源自克氏檸檬酸桿菌（Citrobacter koseri）之具有序列識別號05的MFS、源自Citrobacter youngae之具有序列識別號06的MdfA、源自大腸桿菌（Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號07的YbdA、源自源自大腸桿菌（Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號08的YjhB、源自大腸桿菌（Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號09的WzxE、源自大腸桿菌（Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號10的EmrE、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號11的Blon_2331、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號12的 Blon_0247、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號13的Blon_0345、源自肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）之具有序列識別號14的IceT、源自阪崎腸桿菌（Cronobacter sakazakii）品系MOD1_LR753之具有序列識別號53的MdfA、源自粉末佛朗哥氏菌（Franconibacter pulveris）LMG 24059之具有序列識別號54的MdfA、源自霍氏腸桿菌（Enterobacter hormaechei）品系017之具有序列識別號55的MdfA、源自克氏檸檬酸桿菌（Citrobacter koseri）品系NCTC10771之具有序列識別號56的MdfA、源自腸道沙門氏菌arizonae亞種（Salmonella enterica subsp. arizonae）血清型41:z4,z23:- 品系TAMU30EF之具有序列識別號57的MdfA、源自副痢疾桿菌（Shigella flexneri ）品系585219之具有序列識別號58的MdfA、源自雷根斯堡預研菌（Yokenella regensburgei）品系UMB0819之具有序列識別號59的MdfA、源自大腸桿菌（Escherichia coli）品系AMC_967之具有序列識別號60的MdfA、源自肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）VAKPC309之具有序列識別號61的MdfA、源自產酸克雷伯氏菌（Klebsiella oxytoca）品系4928STDY7071490之具有序列識別號62的MdfA、源自密西根克雷伯氏菌（Klebsiella michiganensis）品系A2之具有序列識別號63的MdfA、源自Pluralibacter gergoviae品系FDAARGOS_186之具有序列識別號64的MdfA、源自抗壞血克呂沃爾氏菌（Kluyvera ascorbata）ATCC 33433之具有序列識別號65的MdfA、神戶腸桿菌（Enterobacter kobei）之具有序列識別號66的MdfA、源自萊略特菌屬（Lelliottia sp.）WB101之具有序列識別號67的MdfA、源自弗氏檸檬酸桿菌（Citrobacter freundii）之具有序列識別號68的MdfA、源自腸道沙門氏菌Salamae亞種（Salmonella enterica subsp. Salamae）之具有序列識別號69的MdfA或源自副痢疾桿菌（Shigella flexneri）之具有序列識別號70的MdfA，或以上任一運輸膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號01、 02、03、04、05、06、07、08、09、10、11、12、13、14、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69或70的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性；及（b）該P-P鍵水解驅動轉運蛋白源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號15的Blon_2475、源自大豆慢生根瘤菌（Bradyrhizobium japonicum）USDA 110之具有序列識別號16的nodi、源自大腸桿菌（Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號17的xylF、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（Bifidobacterium longum subsp. Infantis）Bi-26之具有序列識別號18的TIC77290、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（Bifidobacterium longum subsp. Infantis）Bi-26之具有序列識別號19的TIC77291、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（Bifidobacterium longum subsp. Infantis）Bi-26之具有序列識別號20的TIC76854 TIC77291，或以上任一P-P鍵水解驅動轉運膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其與任一具有序列識別號15、16、17、18、19或20的該膜蛋白的全長序列，分別具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性；及（c）該β-桶狀膜孔蛋白源自大腸桿菌（Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號21的Wza或該Wza蛋白之功能同源物或功能片段，或一蛋白質序列，其與具有序列識別號21的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性。 4. 如請求項1至3任一項之細胞，其中該膜蛋白係選自下列膜蛋白所組成之群組：（a）以序列識別號01、 02、04、05、06、09、10、11、12、13、14、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69或70表示的該運輸膜蛋白，或該任一運輸膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號01、 02、04、05、06、09、10、11、12、13、14、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69或70的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性；及（b）以序列識別號15、16、17、18、19或20表示的該P-P鍵水解驅動轉運蛋白，或該任一P-P鍵水解驅動轉運膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號15、16、17、18、19或20的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性；及（c）以序列識別號21表示的該β-桶狀膜孔蛋白，或該β-桶狀膜孔蛋白之功能同源物或功能片段，或一蛋白質序列，其與具有序列識別號21的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性。 5. 如請求項1至4任一項之細胞，其中該膜蛋白係選自下列膜蛋白所組成之群組：（a）以序列識別號01、 02、04、05、06、09、10、11、12、13、14、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69或70表示的該運輸膜蛋白，或該運輸膜蛋白之任一個的功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，具有： -分別與具有序列識別號09、10、11、12或13的該膜蛋白的全長序列具有至少80%之序列一致性， -分別與具有序列識別號 01、02、04、14、53、54、55、59、61、62、63、64、65、66、67或 69的該膜蛋白的全長序列具有至少90%之序列一致性， -分別與具有序列識別號05、06、56、57或68的該膜蛋白的全長序列具有至少95.00%之的序列一致性，或 -分別與具有序列識別號58、60或70的該膜蛋白的全長序列具有至少99.00%之的序列一致性，及（b）以序列識別號15、16、17、18、19或20表示的該P-P鍵水解驅動轉運蛋白，或該任一P-P鍵水解驅動轉運膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號15、16、17、18、19或20的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性；及（c）以序列識別號21表示的該β-桶狀膜孔蛋白，或該β-桶狀膜孔蛋白之功能同源物或功能片段，或一蛋白質序列，其與具有序列識別號21的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性。 6. 如請求項1至4任一項之細胞，其中該膜蛋白係選自下列膜蛋白所組成之群組：（a）以序列識別號01、02、04、09、10、11、12、13、14、53、54、55、59、61、62、63、64、65、66、67或69表示的該運輸膜蛋白，或該任一運輸膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號01、02、04、09、10、11、12、13、14、53、54、55、59、61、62、63、64、65、66、67或69的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性；及（b）以序列識別號15、16、17、18、19或20表示的該P-P鍵水解驅動轉運蛋白，或該任一P-P鍵水解驅動轉運膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號15、16、17、18、19或20的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性；及（c）以序列識別號21表示的該β-桶狀膜孔蛋白，或該β-桶狀膜孔蛋白之功能同源物或功能片段，或一蛋白質序列，其與具有序列識別號21的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性。 7. 如請求項1至4任一項或第6項之細胞，其中該膜蛋白係選自下列膜蛋白所組成之群組：（a）以序列識別號01、02、04、09、10、11、12、13、14、53、54、55、59、61、62、63、64、65、66、67或69表示的該運輸膜蛋白，或該任一運輸膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號01、02、04、09、10、11、12、13、14、53、54、55、59、61、62、63、64、65、66、67或69的該膜蛋白的全長序列，具有至少90%、較佳為至少95.00%、更佳為至少97.00%之序列一致性；及（b）以序列識別號15、16、17、18、19或20表示的該P-P鍵水解驅動轉運蛋白，或該任一P-P鍵水解驅動轉運膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號15、16、17、18、19或20的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性；及（c）以序列識別號21表示的該β-桶狀膜孔蛋白，或該β-桶狀膜孔蛋白之功能同源物或功能片段，或一蛋白質序列，其與具有序列識別號21的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性。 8. 如請求項1至3任一項之細胞，其中該膜蛋白係選自下列膜蛋白所組成之群組：（a）以序列識別號01、02、03、04、05、06、07、08、09、10、11、12、13、14、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64或65表示的該運輸膜蛋白，或該任一運輸膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號01、02、03、04、05、06、07、08、09、10、11、12、13、14、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64或65的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性；及（b）以序列識別號15、16、17、18、19或20表示的該P-P鍵水解驅動轉運蛋白，或該任一P-P鍵水解驅動轉運膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號15、16、17、18、19或20的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性；及（c）以序列識別號21表示的該β-桶狀膜孔蛋白，或該β-桶狀膜孔蛋白之功能同源物或功能片段，或一蛋白質序列，其與具有序列識別號21的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性。 9. 如請求項1至3任一項或第8項之細胞，其中該膜蛋白係選自下列膜蛋白所組成之群組：（a）以序列識別號01、02、04、05、06、09、10、11、12、13、14、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64或65表示的該運輸膜蛋白，或該任一運輸膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號01、02、04、05、06、09、10、11、12、13、14、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64或65的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性；及（b）以序列識別號15、16、17、18、19或20表示的該P-P鍵水解驅動轉運蛋白，或該任一P-P鍵水解驅動轉運膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號15、16、17、18、19或20的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性；及（c）以序列識別號21表示的該β-桶狀膜孔蛋白，或該β-桶狀膜孔蛋白之功能同源物或功能片段，或一蛋白質序列，其與具有序列識別號21的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性。 10. 如請求項1至3、8或9任一項之細胞，其中該膜蛋白係選自下列膜蛋白所組成之群組：（a）以序列識別號01、02、04、05、06、09、10、11、12、13、14、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64或65表示的該運輸膜蛋白，或該任一運輸膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，具有： -分別與具有序列識別號09、10、11、12或13的該膜蛋白的全長序列具有至少80%之序列一致性， -分別與具有序列識別號01、02、04、14、53、54、55、59、61、62、63、64或65的該膜蛋白的全長序列具有至少90%之序列一致性， -分別與具有序列識別號05、06、56或57的該膜蛋白的全長序列具有至少95.00%之的序列一致性，或 -分別與具有序列識別號58或60的該膜蛋白的全長序列具有至少99.00%之的序列一致性，及（b）以序列識別號15、16、17、18、19或20表示的該P-P鍵水解驅動轉運蛋白，或該任一P-P鍵水解驅動轉運膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號15、16、17、18、19或20的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性；及（c）以序列識別號21表示的該β-桶狀膜孔蛋白，或該β-桶狀膜孔蛋白之功能同源物或功能片段，或一蛋白質序列，其與具有序列識別號21的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性。 11. 如請求項1至3、8或9任一項之細胞，其中該膜蛋白係選自下列膜蛋白所組成之群組：（a）以序列識別號01、02、04、09、10、11、12、13、14、53、54、55、59、61、62、63、64或65表示的該運輸膜蛋白，或該任一運輸膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號01、02、04、09、10、11、12、13、14、53、54、55、59、61、62、63、64或65的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性；及（b）以序列識別號15、16、17、18、19或20表示的該P-P鍵水解驅動轉運蛋白，或該任一P-P鍵水解驅動轉運膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與序列識別號15、16、17、18、19或20的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性；及（c）以序列識別號21表示的該β-桶狀膜孔蛋白，或該β-桶狀膜孔蛋白之功能同源物或功能片段，或一蛋白質序列，其與具有序列識別號21的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性。 12. 如請求項1至3、8、9或11任一項之細胞，其中該膜蛋白係選自下列膜蛋白所組成之群組：（a）以序列識別號01、02、04、09、10、11、12、13、14、53、54、55、59、61、62、63、64或65表示的該運輸膜蛋白，或該任一運輸膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號01、02、04、09、10、11、12、13、14、53、54、55、59、61、62、63、64或65的該膜蛋白的全長序列，具有至少90%、較佳為至少95.00%、更佳為至少97.00%之序列一致性；及（b）以序列識別號15、16、17、18、19或20表示的該P-P鍵水解驅動轉運蛋白，或該任一P-P鍵水解驅動轉運膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號15、16、17、18、19或20的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性；及（c）以序列識別號21表示的該β-桶狀膜孔蛋白，或該β-桶狀膜孔蛋白之功能同源物或功能片段，或一蛋白質序列，其與具有序列識別號21的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性。 13. 如請求項1至12任一項之細胞，其中該膜蛋白係參與運輸化合物跨越細胞壁外膜之一轉運蛋白。 14. 如請求項1至13任一項之細胞，其中該醣基轉移酶係選自包括下列清單：岩藻糖基轉移酶、唾液酸轉移酶、半乳糖基轉移酶、葡萄糖基轉移酶、甘露糖基轉移酶、N-乙醯葡萄糖胺轉移酶、N-乙醯半乳糖胺轉移酶、N-乙醯甘露糖胺轉移酶、木糖基轉移酶、葡萄糖醛酸轉移酶、半乳糖醛酸轉移酶、葡萄糖胺轉移酶、N-羥乙醯神經胺酸轉移酶、鼠李糖基轉移酶、N-乙醯鼠李糖胺轉移酶、UDP-4-胺基-4,6-二去氧基-N-乙醯基-β-L-阿卓糖胺轉胺酶（UDP-4-amino-4,6-dideoxy-N-acetyl-beta-L-altrosamine transaminases）及岩藻糖胺轉移酶，較佳為其中該細胞被至少一個該醣基轉移酶修飾表現或活性。 15. 如請求項1至14任一項之細胞，其中該包括一乳糖-N-三糖（LN3; GlcNAc-beta1,3-Gal-beta1,4-Glc）作為一核心三醣的寡醣係一哺乳動物乳寡醣（mammalian milk oligosaccharide）或一Lewis型抗原寡醣。 16. 如請求項1至15任一項之細胞，其中該包括一乳糖-N-三糖（LN3; GlcNAc-beta1,3-Gal-beta1,4-Glc）作為一核心三醣的寡醣係一哺乳動物乳寡醣（MMO）、較佳為一人乳寡醣（HMO）、更佳為具有一LNT或LNnT作為一核心三醣的一MMO或HMO、甚至更佳為具有一LNT或LNnT作為一核心三醣的一HMO、最佳為LNT或LNnT。 17. 如請求項1至16任一項之細胞，其中該包括一乳糖-N-三糖（LN3; GlcNAc-beta1,3-Gal-beta1,4-Glc）作為一核心三醣的寡醣係一中性寡醣。 18. 如請求項1至17任一項之細胞，其中該包括一乳糖-N-三糖（LN3; GlcNAc-beta1,3-Gal-beta1,4-Glc）作為一核心三醣的寡醣係選自包括下列清單：乳糖-N-三糖、乳糖-N-四糖、乳糖-N-新四糖、乳糖-N-岩藻五糖I、乳糖-N-新岩藻五糖I、乳糖-N-岩藻五糖II、乳糖-N-岩藻五糖III、乳糖-N-岩藻五糖V、乳糖-N-岩藻五糖VI、乳糖-N-新岩藻五糖V、乳糖-N-二岩藻六糖I、乳糖-N-二岩藻六糖II、乳糖-N-六糖（lacto-N-hexaose, LNH）、乳糖-N-新六糖（lacto-N-neohexaose, LNnH）、對-乳糖-N-六糖（para-lacto-N-hexaose, pLNnH）、對-乳糖-N-新六糖（para-lacto-N-neohexaose, pLNH）、二岩藻糖基-乳糖-N-六糖、二岩藻糖基-乳糖-N-新六糖、乳糖-N-五糖（lacto-N-pentaose, LNP）、乳糖-N-新五糖、對乳糖-N-五糖、對乳糖-N-新五糖、乳糖-N-novo五糖I、乳糖-N-七糖、乳糖-N-新七糖、對乳糖-N-新七糖、對乳糖-N-七糖、乳糖-N-八糖（lacto-N-octaose, LNO）、乳糖-N-新八糖、異乳糖-N-八糖、對乳糖-N-八糖、異乳糖-N-新八糖、novo乳糖-N-新八糖、對乳糖-N-新八糖、異乳糖-N-九糖、novo乳糖-N-九糖、乳糖-N-九糖、乳糖-N-十糖、異乳糖-N-十糖、novo乳糖-N-十糖、乳糖-N-新十糖、唾液酸基-乳糖-N-四糖a（Sialyl-lacto-N-tetraose a）、唾液酸基-乳糖-N-四糖b、唾液酸基-乳糖-N-四糖c、唾液酸基-乳糖-N-四糖d。 19. 如請求項1至18任一項之細胞，其中該醣基轉移酶係一N-乙醯葡萄糖胺β-1,3-半乳糖基轉移酶或一N-乙醯葡萄糖胺β-1,4-半乳糖基轉移酶，其自一UDP-Gal供體透過一β-1,3或β-1,4鍵結轉移一半乳糖（Gal）至LN3之末端GlcNAC殘基上，從而分別產生乳糖-N-四糖（LNT; Gal-beta1,3-GlcNAc-beta1,3-Gal-beta1,4-Glc）或乳糖-N-新四糖（LNnT; Gal-beta1,4-GlcNAc-beta1,3-Gal-beta1,4-Glc）。 20. 如請求項19之細胞，其中該細胞在整個培養液(broth)及/或上清液中，產生90 g/L或更多的LNT，及/或其中該LNT在整個培養液及/或上清液中具有至少80%之一純度，依據該細胞在整個培養液及/或上清液中產生之LNT及LN3的總量所分別測量。 21. 如請求項19之細胞，其中該細胞在整個培養液及/或上清液中，產生70 g/L或更多的、較佳為90 g/L或更多的LNnt及/或其中該LNnT在整個培養液及/或上清液中具有至少80%之一純度，依據該細胞在整個培養液及/或上清液中產生之LNnT及LN3的總量所分別測量。 22. 如請求項1至12任一項之細胞，其中該細胞係更能合成一核苷酸活化醣，用於生產該包括一乳糖-N-三糖（LN3; GlcNAc-beta1,3-Gal-beta1,4-Glc）作為一核心三醣的寡醣。 23. 如請求項22之細胞，其中該核苷酸活化醣係選自包括下列清單：UDP-N-乙醯半乳糖胺（UDP-GalNAc）、UDP-N-乙醯甘露糖胺（UDP-ManNAc）、UDP-葡萄糖（UDP-Glc）、UDP-半乳糖（UDP-Gal）、GDP-甘露糖（GDP-Man）、UDP-葡萄糖醛酸鹽、UDP-半乳糖醛酸鹽、UDP-2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-L-阿拉伯糖-4-己酮糖、UDP-2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-L-木糖-4-己酮糖（UDP-2-acetamido-2,6-dideoxy-L-lyxo-4-hexulose）、 UDP-N-乙醯基-L-鼠李糖胺（UDP-L-RhaNAc或UDP-2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-L-甘露糖（UDP-2-acetamido-2,6-dideoxy-L-mannose））、dTDP-N-乙醯岩藻糖胺、UDP-N-乙醯岩藻糖胺（UDP-L-FucNAc或UDP-2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-L-半乳糖）、 UDP-N-乙醯-L-去氧塔羅糖胺（UDP-N-acetyl-L-pneumosamine）（UDP-L-PneNAC或UDP-2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-L-塔羅糖（UDP-2-acetamido-2,6-dideoxy-L-talose））、UDP-N-乙醯胞壁酸（UDP-N-acetylmuramic acid）、UDP-N-乙醯基-L-奎諾糖胺（UDP-N-acetyl-L-quinovosamine）（UDP-L-QuiNAc或UDP-2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-L-葡萄糖（UDP-2-acetamido-2,6-dideoxy-L-glucose））、CMP-唾液酸（CMP-Neu5Ac）、CMP-N-羥乙醯神經胺酸（CMP-Neu5Gc）、GDP-岩藻糖、GDP-鼠李糖及UDP-木糖。 24. 如請求項1至23任一項之細胞，其中該細胞包括一分解代謝途徑，用於經選擇之至少部分未活化之單、雙或寡醣，該單、雙或寡醣參與及/或需要於一包括LN3作為一核心三醣的寡醣之合成。 25. 如請求項1至24任一項之細胞，其中該細胞利用一前驅物以合成該包括LN3作為一核心三醣的寡醣。 26. 如請求項1至25任一項之細胞，其中該膜蛋白參與一前驅物之攝取，以合成該包括LN3作為一核心三醣的寡醣。 27. 如請求項1至26任一項之細胞，其中該細胞產生一前驅物，以合成該包括LN3作為一核心三醣的寡醣。 28. 如請求項1至27任一項之細胞，其中該細胞係穩定地培養於培養基(medium)中。 29. 如請求項1至28任一項之細胞，其中該細胞係一微生物、一植物細胞、一動物細胞、一昆蟲細胞或一原生動物細胞，其中較佳為： -該微生物係一細菌、真菌或一酵母菌， -該植物細胞係一菸草、苜蓿、米、棉、油菜、大豆、玉蜀黍或玉米，及/或細胞 -該動物細胞係源自非人類之哺乳動物、鳥類、魚類、無脊椎動物、爬蟲類或兩棲類，或該動物細胞係源自排除胚胎幹細胞之人類細胞的一基因修飾細胞。 30. 如請求項29之細胞，其中該細胞係一細菌，較佳為一大腸桿菌品系，更佳為一K-12品系之大腸桿菌品系之細胞、甚至更佳為該大腸桿菌K-12品系為E. coli MG1655。 31. 如請求項1至30任一項之細胞，其中該細胞具有合成包括至少一寡醣之一寡醣混合物的能力，該至少一寡醣包括LN3作為一核心三醣。 32. 一種藉由一基因修飾細胞產生一包括一乳糖-N-三糖（LN3；GlcNAc-beta1,3-Gal-beta1,4-Glc ）作為一核心三醣的寡醣的方法，包括步驟：（a）提供如請求項1至31任一項之一細胞，及（b）在允許產生該包括LN3作為一核心三醣的寡醣之條件下，培養該細胞於一培養基中，及（c）較佳為將該包括LN3作為一核心三醣的寡醣或包括至少一寡醣之一寡醣混合物，分別自該培養分離，該至少一寡醣包括LN3作為一核心三醣。 33. 如請求項32之方法，該方法更包括至少一下列步驟：（i）添加一乳糖給料於該培養培養基，該乳糖給料包括至少50、更佳為至少75、更佳為至少100、更佳為至少120、更佳為至少150克乳糖每升之初始反應器體積（initial reactor volum），其中該反應器體積介於250mL至10.00m3（立方公尺）範圍之間，較佳為以一連續方式，且較佳為以使該培養培養基之最終體積為不多於添加該乳糖給料前該培養培養基之體積的三倍、較佳為不多於兩倍、更佳為少於兩倍；（ii）藉由一給料溶液，在1日、2日、3日、4日、5日之過程中，以一連續方式添加一乳糖給料於培養培養基；（iii）藉由一給料溶液，在1日、2日、3日、4日、5日之過程中，以一連續方式添加一乳糖給料於培養培養基，且其中該乳糖給料溶液之濃度為50 g/L、較佳為75 g/L、更佳為100 g/L、更佳為125 g/L、更佳為150 g/L、更佳為175 g/L、更佳為200 g/L、更佳為225 g/L、更佳為250 g/L、 275 g/L、更佳為300 g/L、更佳為325 g/L、更佳為350 g/L、更佳為375 g/L、更佳為400 g/L、更佳為450 g/L、更佳為500 g/L、甚至更佳為550 g/L、最佳為600 g/L；以及較佳為該溶液之PH值係設定於3至7之間，且其中較佳為該給料溶液之溫度為保持於20°C至80°C之間；該方法致生一包括一乳糖-N-三糖（LN3；GlcNAc-beta1,3-Gal-beta1,4-Glc ）作為一核心三醣的寡醣，其於該培養培養基之最終體積中具有至少50 g/L、較佳為至少75 g/L、更佳為至少90 g/L、更佳為至少100 g/L、更佳為至少125 g/L、更佳為至少150 g/L、更佳為至少175 g/L、更佳為至少200 g/L的濃度。 34. 如請求項33之方法，其中該乳糖給料，係透過自開始培養時以至少5mM的濃度、較佳為以至少30、40、50、60、70、80、90、100、150mM的濃度、更佳為以大於300mM的濃度添加乳糖來達成。 35. 如請求項33或34之方法，其中該乳糖給料，係透過以一濃度之添加乳糖至培養培養基來達成，以致在整個培養之生產階段，獲得濃度至少為5mM、較佳為至少10mM或30mM的一乳糖。 36. 如請求項32至35任一項之方法，其中該宿主細胞被培養至少約60、80、100或約120小時，或以連續方式培養。 37. 如請求項32至36任一項之方法，其中一碳及能量來源，較佳為葡萄糖、甘油、果糖、麥芽糖、阿拉伯糖、麥芽糊精、麥芽寡醣（malto-oligosacchraides）、麥芽三糖、山梨醇、木糖、鼠李糖、蔗糖、半乳糖、甘露糖、甲醇、乙醇、海藻糖、澱粉、纖維素、半纖維素、多元醇、玉米浸液（corn-steep liquor）、高果糖漿（high-fructose syrup）、琥珀酸鹽、蘋果酸鹽、醋酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸及丙酮酸鹽，亦被添加，較佳為持續添加至培養培養基，並較佳為搭配乳糖。 38. 如請求項32至37任一項之方法，其中指數細胞成長之一第一期，係藉由在第二期添加乳糖至該培養培養基之前，添加一碳基受質且較佳為葡萄糖或果糖至該培養培養基來提供。 39. 如請求項32至38任一項之方法，其中該分離包括至少一下列步驟：澄清(clarification)、超過濾、奈米過濾、逆滲透、微過濾、活性炭或碳處理、切向流高效能過濾（tangential flow high-performance filtration）、切向流超過濾（tangential flow ultrafiltration）、親和力層析、離子交換層析、疏水性交互作用層析及/或凝膠過濾、配位基交換層析。 40. 如請求項32至39任一項之方法，更包括分別自該細胞純化該包括LN3作為一核心三醣的寡醣或包括至少一寡醣的寡醣混合物，該至少一寡醣包括LN3作為一核心三醣。 41. 如請求項32至40任一項之方法，其中該純化包括至少一下列步驟：利用活性炭或碳、利用木炭、奈米過濾、超過濾或離子交換、利用醇類、利用含水醇類混合物、結晶化、蒸發、沉澱、乾燥、噴霧乾燥或冷凍乾燥。 42. 一種選自如請求項1至12任一項中所定義之膜蛋白之群組的一膜蛋白於發酵生產一包括LN3作為一核心三醣的寡醣中的用途。 43. 一種如請求項1至31項之一細胞用於產生一包括LN3作為一核心三醣的寡醣的用途。 44. 一種如請求項31之一細胞用於產生一包括至少一寡醣之寡醣混合物的用途，該至少一寡醣包括LN3作為一核心三醣。 45. 一種如請求項32至41任一項之一方法用於產生一包括LN3作為一核心三醣的寡醣的用途。

本發明將更詳細描述於實施例中。實施例將作為本發明之更進一步說明與澄清，但不意指為被限制。

實施例

實施例1. 膜蛋白家族之鑑定

HMM是一種稱為輪廓隱藏馬爾可夫模型(profile hidden Markov models)的機率模型(probabilistic model)。其將一組對齊之蛋白質描繪成一位置(特定評分系統position-specific scoring system) 。胺基酸在序列比對中的每個位置被給予一個分數，根據它們發生的頻率(Eddy, S.R.1998. Profile hidden Markov models. Bioinformatics. 14: 755-63)。HMM具有廣泛的用途，從使用這種方法進行蛋白質分類之包括Pfam、InterPro、SMART、TIGRFAM、PIRSF、PANTHER、SFLD、Superfamily與Gene3D的眾多數據庫可以清楚地看出。

2019年6月13日發佈的HMMER套件(package)3.2.1(http://hmmer.org/)中的HMMsearch可以使用此HMM來搜索序列資料庫的序列同源物(sequence homologs)。S可被使用之序列資料庫，例如，但不限於：NCBI nr Protein Database (NR; https://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein)、UniProt Knowledgebase (UniProtKB, https://www.uniprot.org/help/uniprotkb)與SWISS-PROT database (https://web.expasy.org/docs/swiss-prot_guideline.html)。

膜蛋白家族被分類，依據2016年9月所發佈之eggNOG database 4.5.1 (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6324079/; http://eggnog.embl.de/#/app/home)、2019年6月17所發佈之TCDB database (http://www.tcdb.org/public/tcdb、2019年7月4日所發佈之InterPro 75.0 (https://www.ebi.ac.uk/interpro/)與2018年9月所發佈之PFAM domains using Pfam 32.0 (https://pfam.xfam.org/)。eggNOG 資料庫係為一直系(orthology)關係、基因進化歷史(gene evolutionary histories)與功能註釋(functional annotations)的公開資料庫。轉運蛋白分類資料庫 (Transporter Classification DataBase, TCDB)類似於對酶進行分類的酶學委員會(Enzyme Commission, EC)系統，並結合了功能與系統發生資訊(phylogenetic information)。Pfam與InterPro資料庫是蛋白質家族的大集合。也可使用其他蛋白質區域(domains)，如SMART (http://smart.embl-heidelberg.de/)、TIGRFAM (https://www.jcvi.org/tigrfams) 、PIRSF (https://proteininformationresource.org/pirwww/dbinfo/pirsf.shtml) 、PANTHER (http://pantherdb.org/、SFLD (http://sfld.rbvi.ucsf.edu/archive/django/index.html) 、Superfamily (http://supfam.org/)與Gene3D (http://gene3d.biochem.ucl.ac.uk/Gene3D/)、NCBI保守區域(NCBI Conserved Domains) (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/cdd/wrpsb.cgi)。

藉由使用2017年11月15日所發佈之獨立版本的 eggNOG-mapper 1.0.3 (https://github.com/eggnogdb/eggnog-mapper)與基於2016 年9月所發佈的eggnogdb 4.5.1來進行eggNOG家族的鑑定。對於每個eggNOG家族，可以在eggNOG網站上下載HMM，並可對蛋白質資料庫用於HMMsearch。

藉由對 2019年6月17日發布的 TCDB資料庫進行序列比對(blasting, blastp)來進行TCDB家族的鑑定。所獲得的家族新成員可以在網站(http://www.tcdb.org/download.php)上被檢索到。Fasta檔案對於蛋白質資料庫可作為blastp中的輸入。

藉由在於2018年9月所發佈之https://pfam.xfam.org/search#tabview=tab1的一線上檢索來進行PFAM區域的鑑定。所獲得之家族的HMM係於‘Curation & model’中下載。使用此模型對蛋白質數據庫進行 HMM 搜索將識別新的家庭成員。對於蛋白質資料庫之伴隨此模型的HMMsearches將會鑑定新的家族成員。包括InterPro hit的序列也可自PFAM網站下載。

藉由使用於 https://www.ebi.ac.uk/interpro/上的線上工具或獨立版本之InterProScan (https://www.ebi.ac.uk/interpro/download.html)來進行 InterPro（超級）家族、區域與位點的鑑定，https://www.ebi.ac.uk/interpro/與獨立版本之InterProScan (https://www.ebi.ac.uk/interpro/download.html)兩者均基於2019年7月4日所發布之InterPro 75.0。InterPro係為一複合資料庫，其結合了許多蛋白質基序(motifs)與區域之資料庫的資訊。The InterPro區域及/或(超級)家族之HMM可獲自InterProScan且可被使用以於蛋白質資料庫中鑑定新的家族成員。包括InterPro hit 之序列也可自InterPro網站(‘Protein Matched’)下載或可於UniProt網站(https://www.uniprot.org)詢問。

實施例2：多肽序列之間百分比一致度(percentage identity)的計算

用於比較之序列之比對(alignment of sequences)的方法是本領域熟知的，此類方法包括GAP、BESTFIT、BLAST、FASTA與TFASTA。GAP使用 Needleman 與Wunsch (J. Mol. Biol. (1970) 48: 443-453)之演算法以找出使匹配數最大化並使間隙(gap)數最小化之兩個序列的全域(global)（即跨越全長序列）比對。The BLAST演算法(Altschul et al., J. Mol. Biol. (1990) 215: 403-10)計算全域百分比序列一致度（即，遍及(over)全長序列）並執行兩序列之間之相似度(similarity)的一統計分析。執行BLAS分析的軟體為經由國家生物技術資訊中心(National Centre for Biotechnology Information, NCBI)可公開獲得。使用例如ClustalW多重序列比對演算法（版本 1.83），使用默認的成對比對參數(default pairwise alignment parameter)與百分比評分方法，可以很容易地識別同源物(homolog)。也可以使用於 MatGAT軟體套件中可獲得的方法之一來確定相似性與一致性的全域百分比（（即，跨越全長序列）） (Campanella et al., BMC Bioinformatics (2003) 4:29)。可以進行少量手動編輯以最佳化保守基序之間的比對，這對該技術領域中具有通常知識者而言是明顯的。此外，不使用全長序列來鑑定同源物，也可以使用特定的區域，以確定所謂的局部序列一致性。序列一致性值可以在整個核酸或胺基酸序列（=對全長序列進行局部序列一致性檢索，產生全域序列一致性分數）上或在所選區域或保守基序（=對部分序列進行局部序列一致性檢索，產生局部序列一致性分數）上確定，使用上面提到的程式使用默認參數。對於局部比對，Smith-Waterman演算法特別有用(Smith TF, Waterman MS (1981) J. Mol. Biol 147(1); 195-7)。

實施例3：具有序列識別號01之膜蛋白之同源物的鑑定

轉運蛋白基因之同源物可獲自序列資料庫，如PATRIC (https://www.patricbrc.org/)、Uniprot (https://www.uniprot.org/), NCBI nr或nt資料庫 (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)與其他。PATRIC (https://www.patricbrc.org/) 係為支持細菌病原體研究的不同類型資料與軟體工具的集成。

本實施例描述瞭如何萃取與編碼序列識別號01的全長基因具有至少80%之序列一致性之編碼蛋白質序列的基因。具有序列識別號01之膜蛋白屬於總體家族(global family)。使用PATRIC命令列介面(command-line interface) (https://docs.patricbrc.org/cli_tutorial/index.html)來萃取此家族。以如使用EMBOSS Needle以默認參數所計算之與序列識別號01具有＞ 80 %的全域序列一致性來篩選胺基酸序列。於2020 年 11月25日萃取了代表7002個獨特序列的70477個標識符(identifiers)。使用默認參數與序列識別號01 作為查詢的 Blastp從 Uniprot 中萃取序列（資料庫發佈資料於2020年12月2日）。以如使用EMBOSS Needle以默認參數所計算之與序列識別號01具有＞ 80 %的全域序列一致性來篩選胺基酸序列且產生1471個標識符。在這些標識符中，可以鑑定所附序列表中所列的具有序列識別號53、54、55、56、57、58、59、60、63、64、65、66、67與68的膜蛋白。

實施例4. 材料與方法大腸桿菌(Escherichia coli)

培養基

Luria肉湯(Luria Broth, LB)培養基由1%胰化蛋白腖(tryptone peptone) (Difco, Erembodegem, Belgium), 0.5%酵母菌萃取物(Difco)與0.5%氯化鈉(VWR. Leuven, Belgium) 所組成。於 96孔盤或搖瓶中使用於培養實驗的基本培養(minimal medium)含有2.00 g/L NH ₄Cl、5.00 g/L (NH ₄) ₂SO ₄、2.993 g/L KH ₂PO ₄、7.315 g/L K ₂HPO ₄、8.372 g/L MOPS、0.5 g/L NaCl、0.5 g/L MgSO ₄.7H ₂O、30 g/L蔗糖或實施例中指定的其他碳源、1 ml/L維生素溶液、100 μL/L鉬酸鹽(molybdate)溶液與1 mL/L硒(selenium)溶液。如各個實施例中所具體指明，將20 g/L乳糖額外添加於培養基中作為前驅物。以1M KOH將基本培養基的pH設為7。維生素溶液係由3.6 g/L FeCl ₂.4H ₂O、5 g/L CaCl ₂.2H ₂O、1.3 g/L MnCl ₂.2H ₂O、0.38 g/L CuCl ₂.2H ₂O、0.5 g/L CoCl ₂.6H ₂O、0.94 g/L ZnCl ₂、0.0311 g/L H ₃BO ₄、0.4 g/L Na ₂EDTA.2H ₂O與1.01 g/L硫胺素(thiamine).HCl。鉬酸鹽溶液含有0.967 g/L NaMoO ₄.2H ₂O。硒(selenium)溶液含有42 g/L Seo2.

用於發酵的基本培養基含有 6.75 g/L NH4Cl、1.25 g/L (NH4)2SO4、2.93 g/L KH2PO4與7.31 g/L KH2PO4、0.5 g/L NaCl、0.5 g/L MgSO4.7H2O、30 g/ L蔗糖、1 mL/L 維生素溶液、100 µL/L鉬酸鹽溶液及1 mL/L硒溶液，具有與上述相同組成。如各個實施例中所具體指明，將100 g/L乳糖額外添加於培養基中作為前驅物。

複合培養基(complex medium)以高溫高壓蒸氣滅菌法(121°C, 21')來滅菌，而基本培養基藉由過濾(0.22 µm Sartorius)來滅菌。必要時，藉由添加抗生素（例如，氯黴素(chloramphenicol)（20 mg/L）、卡本西林(carbenicillin)(100 mg/L)、奇黴素(spectinomycin)(40 mg/L)及/或康黴素(kanamycin)(50 mg/L)）使培養基具有選擇性。

質體(Plasmid)

pKD46（Red輔助質體，胺苄青黴素(Ampicillin)抗性）、pKD3（包含FRT側面(FRT-flanked)氯黴素抗性(cat)基因）、pKD4（包含FRT側面康黴素抗性(kan)基因）與 pCP20（表現FLP重組酶活性）質體為獲自R. Cunin 教授（比利時布魯塞爾自由大學(Vrije Universiteit Brussel)，2007年）。質體維持於購自Invitrogen的宿主大腸桿菌DH5alpha (F ^-, phi80d lacZdeltaM15, delta( lacZYAargF) U169, deoR, recA1, endA1, hsdR17(rk ^-, mk ⁺), phoA, supE44, lambda ^-, thi-1, gyrA96, relA1)。

菌株(Strains)與突變(mutations)

大腸桿菌K12 MG1655 [λ ^-, F ^-, rph-1] 於2007年3月從大腸桿菌遺傳儲備中心(Coli Genetic Stock Center)(US), CGSC Strain#:7740獲得。使用Datsenko與Wanner (PNAS 97 (2000), 6640-6645)發表的技術進行基因破壞(gene disruption)及基因導入(gene introduction)。此種技術是基於藉由λ Red重組酶(lambda Red recombinase)進行同源重組(homologous recombination)後的抗生素選擇(antibiotic selection)。隨後的內翻轉酶(flippase)重組酶的催化作用確保了在最終產生菌株(final production strain)中之抗生素選擇卡匣(antibiotic selection cassette)的去除。

攜帶Red輔助質體pKD46的轉形體(transformant)在10 mL具有胺苄青黴素(100 mg/L)與L-阿拉伯糖(10 mM)的LB培養基中於30℃下生長至OD _{600 nm}為0.6。藉由第一次以50 mL冰冷水(ice-cold water)洗滌細胞與第二次以1 mL 冰冷水洗滌細胞，而使細胞為電勝任的(electrocompetent)。之後，將細胞重新懸浮於50 µL冰冷的水中。使用Gene Pulser™ (BioRad)對 50 µL 細胞與10-100 ng 線性雙股 DNA 產物進行電穿孔（600 Ω、25 µFD與250 伏特）。電穿孔(electroporation)後，將細胞加入到1 mL LB培養基中，在37℃下培養1小時，最後塗於含有25 mg/L之氯黴素或50 mg/L康黴素的LB-瓊脂上，以選擇抗生素抗性的轉形體。選擇的突變株以修飾區上游與下游的引子經由PCR來驗證，並在42°C於LB瓊脂中生長以消除輔助質體。測試突變株之的胺苄青黴素(ampicillin)敏感性。使用pKD3、pKD4與其衍生物作為模板，藉由PCR獲得線性ds-DNA擴增子(amplicon)。所使用之引子具有與模板互補的一部分序列及與染色體DNA上需發生重組的一側互補的另一部分。對於基因體(genomic)敲除(knock-out)，同源(homology)之區域被設計在目標基因的起始與終止密碼子(codon)的上游50-nt與下游50-nt。對於基因體敲入(knock-in)，必須尊重轉錄起點(transcriptional starting point)(+1)。將PCR產物PCR-純化、以DpnI 消化、從瓊脂糖凝膠中重新純化，並懸浮在洗脫緩衝液(5 mM Tris, pH 8.0)中。選擇的突變株（氯黴素或康黴素抗性）以 pCP20質體轉形，其為一種胺苄青黴素與氯黴素抗性質體，顯示出FLP合成的溫度敏感複製(replication)與熱誘導。在30°C選擇胺苄青黴素抗性轉形體，於其後在42°C在LB中純化一些菌落，然後測試所有抗生素抗性與FLP輔助質體的喪失。使用對照引子(control primers)檢查基因敲除與敲入。

為了生產乳糖-N-三糖（LN3、LNT-II、GlcNAc-b1,3-Gal-b1,4-Glc）及源於此的包括乳糖-N-四糖（LNT）與乳糖-N-新四糖（LNnT）的寡醣，突變菌株來自大腸桿菌K12 MG1655，並藉由大腸桿菌 LacZ與 nagB基因的敲除以及具有序列識別號22之來自腦膜炎雙球菌的半乳糖苷β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶(LgtA)的組成型轉錄單元的基因組敲入來修飾。對於LNT或LNnT的生產，突變體菌株被進一步分別以具有序列識別號23的來自大腸桿菌O55:H7的N-乙醯葡萄糖胺β-1,3-半乳糖基轉移酶（WbgO）或具有序列識別號24之來自腦膜炎雙球菌的N-乙醯葡萄糖胺β-1,4-半乳糖基轉移酶（LgtB）的組成型轉錄單元來修飾，其可以通過基因組敲入或從表現質體傳遞給菌株。視需要而定，可以將 LgtA、 wbgO及/或 LgtB基因的多個複製添加到突變的大腸桿菌菌株中。在這些菌株中，可以藉由改進UDP-GlcNAc的生產來提高LNT及/或LNnT的產量，其是藉由具有具有序列識別號25之來自大腸桿菌的突變L-麩醯胺酸-D-果糖-6-磷酸轉氨酶glmS*54（以A39T、R250C與G472S突變而與野生型glmS不同）之組成型轉錄單元一個或多個基因組敲入的菌株的修飾。此外，這些菌株可以視需要而定用大腸桿菌ushA與galT基因的基因組敲除來增強UDP-半乳糖生產。突變的大腸桿菌菌株也可以視需要而定地以具有序列識別號26之來自大腸桿菌的UDP-葡萄糖-4-差向異構酶(galE)、具有序列識別號27之來自大腸桿菌的磷酸葡糖胺變位酶(glmM)與具有序列識別號28之來自大腸桿菌的N-乙醯葡萄糖胺-1-磷酸尿苷基轉移酶/葡萄糖胺-1-磷酸乙醯轉移酶(glmU)的組成型轉錄單元的一基因組敲入來適應。

為了生產具有LN3為核心三糖的岩藻糖化寡醣，對大腸桿菌菌株以大腸桿菌的 wcaJ和 thyA基因之敲除，以包含具有序列識別號29之幽門螺桿菌α-1,2-岩藻糖基轉移酶（HpFutC）及/或具有序列識別號30之幽門螺桿菌α-1,3-岩藻糖基轉移酶（HpFucT）之組成型轉錄單元的表現質體以及以具有序列識別號31之大腸桿菌thyA的組成型轉錄單元作為選擇性標記進行了進一步修飾。岩藻糖轉移酶基因的組成轉錄單元也可以經由基因組敲入存在於突變的大腸桿菌菌株中。如WO2016075243與WO2012007481中所述，GDP-岩藻糖的生產可以經由包括 glgC、 agp、 pfkA、 pfkB、 pgi、 arcA、 iclR、 pgi與 lon之大腸桿菌基因的基因組敲除進一步優化。GDP-岩藻糖的生產可額外地經由包括大腸桿菌具有序列識別號32之manA、具有序列識別號33之manB、具有序列識別號34之manC、具有序列識別號35之gmd與具有序列識別號36之fcl的組成型轉錄單元的基因組敲入而優化。藉由對大腸桿菌 fucK與 fucI基因的基因組敲除，以及包含具有序列識別號37之來自大腸桿菌的岩藻糖滲透酶（fucP）與具有序列識別號38之來自脆弱類桿菌的雙功能岩藻糖激酶/岩藻糖-1-磷酸鳥苷酸轉移酶（fkp）的組成型轉錄單元的基因組敲入，也可以獲得GDP-岩藻糖的生產。

為了生產具有LN3為核心三糖的唾液酸化寡醣，大腸桿菌菌株被進一步修飾，以大腸桿菌的 nagA基因的敲除，以及包含具有序列識別號39之來自釀酒酵母的6-磷酸葡萄糖胺N-乙醯轉移酶（GNA1）、序列識別號40之來自卵形擬桿菌（ Bacteroides ovatus）的N-乙醯葡糖胺2-外聚酶（AGE）、序列識別號41之來自腦膜炎雙球菌的N-乙醯神經氨酸（Neu5Ac）合成酶（NeuB）、具有序列識別號42之來自多殺性巴氏桿菌的N-乙醯神經氨酸胞苷轉移酶（NeuA），以及包括來自多殺性巴氏桿菌之序列識別號43（PmultST3）及/或來自腦膜炎雙球菌之序列識別號44（NmeniST3）的β-半乳糖苷α-2,3-唾液酸轉移酶及/或包括來自發光桿菌( Photobacterium damselae)的序列識別號45（PdST6）及/或來自發光菌( Photobacteriumsp.) JT-ISH-224的序列識別號46（P-JT-ISH-224-ST6）的β-半乳糖苷α-2,6-唾液酸轉移酶的組成型轉錄單元的基因組敲入。 PmNeuA與唾液酸轉移酶的組成型轉錄單元可以經由基因組敲入或經由表現質體傳遞給突變株。可以進一步優化突變大腸桿菌菌株中的唾液酸生產，藉由包括WO18122225中所述之包括 nagC、 nagD、 nagE、 nanA、 nanE、 nanK、 manX、 manY與 manZ的大腸桿菌基因的基因組敲除，以及包括具有序列識別號25之來自大腸桿菌的L-麩醯胺酸-D-果糖-6-磷酸轉氨酶（glmS*54）的一突變體（以A39T、R250C與G472S突變而與野生型大腸桿菌glmS不同）與具有序列識別號47之來自大腸桿菌的磷酸酶yqaB的組成型轉錄單元的基因組敲入。唾液酸生產也可藉由大腸桿菌nagA與nagB基因的敲除以及包含具有序列識別號27之來自大腸桿菌的磷酸葡萄糖胺變位酶（glmM）、具有序列識別號28之來自大腸桿菌的N-乙醯葡萄糖胺-1-磷酸尿苷轉移酶/葡萄糖胺-1-磷酸乙醯轉移酶（glmU）、具有序列識別號48之來自空腸彎曲桿菌( Campylobacter jejuni)的UDP-N-乙醯葡萄糖胺2-差向異構酶（NeuC）與具有序列識別號41之來自腦膜炎雙球菌的N-乙醯神經氨酸合成酶（NeuB）的組成型轉錄單元的基因組敲入來獲得。在此突變株中，唾液酸生產可以進一步藉由包括具有SEQ ID NO 25之來自大腸桿菌的突變glmS*54與具有SEQ ID NO 47之來自大腸桿菌的磷酸酶yqaB的組成型轉錄單元的基因組敲入來優化。

所有的突變菌株也可以視需要而定經由包含具有序列識別號49之來自大腸桿菌W的蔗糖轉運體（ CscB）、具有序列識別號50之來自運動發酵單胞菌( Z. mobilis)的果糖激酶（ Frk）與具有序列識別號51之來青春雙歧桿菌( B. adolescentis)的蔗糖磷酸酶之組成型轉錄單元的基因組敲入來適應在蔗糖上的生長。此外，突變株可經由具有序列識別號52之來自大腸桿菌乳糖滲透酶lacY的組成型轉錄單元的基因組敲入來修飾，以增強乳糖的攝取。

此外，所有突變株可以視需要而定地藉由 lacZ、 glk與 galETKM操作子的基因組敲除，與具有序列識別號24之來自腦膜炎雙球菌的lgtB與具有序列識別號26之來自大腸桿菌的UDP-葡萄糖4-外引物酶(UDP-glucose 4-eprimerase)（galE）的組成型轉錄單元的基因組敲入一起來適應細胞內乳糖合成。

在一接下來之步驟中，如表2與表3中所列具有序列識別號01、02、03、04、05、06、07、08、09、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97與98之膜蛋白，可在上述來自E. 大腸桿菌K12 MG1655之突變株中被評估。表2中也列舉了本發明所述的其他蛋白質。膜蛋白基因可以被評估為存在於PSC101質體上或以組成型轉錄單元整合在宿主的基因組中。

較佳為但非必須，醣基轉移酶N端融合至MBP標籤，以提高其溶解度 (Fox et al., Protein Sci. 2001, 10(3), 622-630)。

所有組成型啟動子、UTR與終止子的序列皆源自Cambray et al. (Nucleic Acids Res. 2013, 41(9), 5139-5148), Chen et al. (Nat. Methods 2013, 10(7), 659-664), De Mey et al. (BMC Biotechnol. 2007, 4(34), 1-14), Dunn et al. (Nucleic Acids Res. 1980, 8(10), 2119-2132), Kim and Lee (FEBS Letters 1997, 407(3), 353-356)與Mutalik et al. (Nat. Methods 2013, No. 10, 354-360)所述的資料庫。所有的基因都是在Twist Bioscience（twistbioscience.com）或IDT（eu.idtdna.com）合成訂購的，且使用供應商的工具來使密碼子的使用適合。

所有菌株都保存在-80℃的冷凍管(cryovials)中（隔夜LB培養基與70%甘油以1:1的比例混合）。

表2–本發明中描述的序列識別號的概述

序列識別號	名稱 / TCDB 群組	物種	來源	數位序列資料的來源國家
01	MdfA	Cronobacter muytjensii	合成	USA
02	MdfA	肺炎克雷伯氏菌(Yokenella regensburgei) (ATCC43003)	合成	未知
03	MdfA	大腸桿菌 K12 MG1655	合成	USA
04	MdfA	腸桿菌屬(Enterobacter sp.)	合成	澳洲
05	MFS	克氏檸檬酸桿菌	合成	USA
06	MdfA	Citrobacter youngae ATCC 29220	合成	USA
07	YbdA	大腸桿菌 K12 MG1655	合成	USA
08	YjhB	大腸桿菌 K12 MG1655	合成	USA
09	WzxE	大腸桿菌 K12 MG1655	合成	USA
10	EmrE	大腸桿菌 K12 MG1655	合成	USA
11	Blon_2331	長雙歧桿菌嬰兒亞種 (strain ATCC 15697)	合成	德國
12	Blon_0247	長雙歧桿菌嬰兒亞種 (strain ATCC 15697)	合成	德國
13	Blon_0345	長雙歧桿菌嬰兒亞種 (strain ATCC 15697)	合成	德國
14	IceT	克雷伯氏肺炎桿菌(Klebsiella pneumoniae)	合成	USA
15	Blon_2475	長雙歧桿菌嬰兒亞種 (strain ATCC 15697)	合成	德國
16	nodi	大豆慢生根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum) USDA 110	合成	USA
17	xylF	大腸桿菌 K12 MG1655	合成	USA
18	TIC77290	長雙歧桿菌嬰兒 Bi-26	合成	USA
19	TIC77291	長雙歧桿菌嬰兒 Bi-26	合成	USA
20	TIC76854	長雙歧桿菌嬰兒 Bi-26	合成	USA
21	Wza	大腸桿菌 K12 MG1655	合成	USA
22	LgtA	腦膜炎雙球菌	合成	英國
23	WbgO	大腸桿菌 O55:H7	合成	德國
24	LgtB	腦膜炎雙球菌 MC58	合成	英國
25	glmS*54	大腸桿菌 K12 MG1655	合成	USA
26	galE	大腸桿菌 K12 MG1655	合成	USA
27	glmM	大腸桿菌 K12 MG1655	合成	USA
28	glmU	大腸桿菌 K12 MG1655	合成	USA
29	FutC	幽門螺旋菌 UA1234	合成	英國
30	FucT	幽門螺旋菌UA1234	合成	英國
31	thyA	大腸桿菌 K12 MG1655	合成	USA
32	manA	大腸桿菌 K12 MG1655	合成	USA
33	manB	大腸桿菌 K12 MG1655	合成	USA
34	manC	大腸桿菌 K12 MG1655	合成	USA
35	Gmd	大腸桿菌 K12 MG1655	合成	USA
36	fcl	大腸桿菌 K12 MG1655	合成	USA
37	fucP	大腸桿菌 K12 MG1655	合成	USA
38	Fkp	脆弱類桿菌 NCTC 9343	合成	英國
39	GNA1	釀酒酵母菌	合成	USA
40	AGE	卵形擬桿菌	合成	USA
41	NeuB	腦膜炎雙球菌	合成	英國
42	NeuA	多殺性巴氏桿菌	合成	USA
43	PmultST3	多殺性巴氏桿菌	合成	USA
44	NmeniST3	腦膜炎雙球菌	合成	英國
45	PdST6	發光桿菌(Photobacterium damselae)	合成	日本
46	P-JT-ISH-224-ST6	發光菌(Photobacterium) sp. JT-ISH-224	合成	日本
47	yqaB	大腸桿菌 K12 MG1655	合成	USA
48	NeuC	空腸彎曲桿菌	合成	USA
49	CscB	大腸桿菌 W	合成	USA
50	Frk	運動發酵單胞菌	合成	英國
51	BaSP	青春雙歧桿菌	合成	德國
52	LacY	大腸桿菌 K12 MG1655	合成	USA
53	MdfA	阪崎克羅諾桿菌菌株 MOD1_LR753	合成	USA
54	MdfA	粉末佛朗哥氏菌(Franconibacter pulveris) LMG 24059	合成	瑞士
55	MdfA	霍氏腸桿菌(Enterobacter hormaechei)菌株017	合成	德國
56	MdfA	柯氏檸檬酸桿菌(Citrobacter koseri) 菌株 NCTC10771	合成	加拿大
57	MdfA	腸道沙門氏菌(Salmonella enterica) arizonae serovar亞種 41:z4,z23:- 菌株TAMU30EF	合成	USA
58	MdfA	副痢疾桿菌菌株 585219	合成	英國
59	MdfA	肺炎克雷伯氏菌菌株 UMB0819	合成	USA
60	MdfA	大腸桿菌菌株AMC_967	合成	英國
61	MdfA	克雷伯氏肺炎桿菌(Klebsiella pneumoniae) VAKPC309	合成	USA
62	MdfA	產酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca) 菌株 4928STDY7071490	合成	英國
63	MdfA	密西根克雷伯氏菌(Klebsiella michiganensis) 菌株A2	合成	USA
64	MdfA	多菌杆菌(Pluralibacter gergoviae)菌株 FDAARGOS_186	合成	USA
65	MdfA	抗壞血克呂沃爾氏菌 ATCC 33433	合成	USA
66	MdfA	神戶腸桿菌	合成	日本
67	MdfA	萊略特菌 sp. WB101	合成	德國
68	MdfA	弗氏檸檬酸桿菌	合成	未知
69	MdfA	腸道沙門氏菌Salamae亞種	合成	英國
70	MdfA	副痢疾桿菌	合成	未知
71	MdfA	阪崎腸桿菌菌株 MOD1_LR634	合成	USA
72	MdfA	Cronobacter condimenti 菌株s37	合成	波蘭
73	MdfA	Cronobacter sp. EKM102R	合成	加拿大
74	MdfA	廣泛克羅諾桿菌(Cronobacter universalis) NCTC 9529	合成	英國
75	MdfA	腸道沙門氏菌菌株 413_SENT	合成	USA
76	MdfA	克雷伯氏肺炎桿菌(Klebsiella pneumoniae)肺炎亞種菌株 NCTC11695	合成	未知
77	MdfA	Klebsiella aerogenes 菌株 4928STDY7071344	合成	英國
78	MdfA	Raoultella planticola 菌株 FDAARGOS_283	合成	USA
79	MdfA	Klebsiella sp. 2680	合成	未知
80	MdfA	Kluyvera georgiana 菌株 HRGM_Genome_0064	合成	日本
81	MdfA	Kluyvera intermedia 菌株 NCTC12125	合成	未知
82	MdfA	腸道沙門氏菌菌株 2014K-0203	合成	USA
83	MdfA	邦戈沙門氏菌(Salmonella bongori) 菌株 85-0051	合成	USA
84	MdfA	腸道沙門氏菌enterica亞種serovar Hillingdon 菌株 S01-0588	合成	未知
85	MdfA	Citrobacter youngae菌株 TE1	合成	USA
86	MdfA	Citrobacter sp. RHB21-C01	合成	英國
87	MdfA	魏氏檸檬酸桿菌(Citrobacter werkmanii)菌株 MGYG-HGUT-02535	合成	USA
88	MdfA	腸桿菌(Enterobacteriaceae bacterium)UBA3109	合成	USA
89	MdfA	腸桿菌UBA6698	合成	USA
90	MdfA	Leclercia sp. 4-9-1-25	合成	德國
91	MdfA	河生萊略特氏菌(Lelliottia amnigena)菌株 TZW14	合成	德國
92	MdfA	Lelliottia aquatilis菌株 TZW17	合成	德國
93	MdfA	腸桿菌sp. RHBSTW-00901	合成	英國
94	MdfA	陰溝腸桿菌(Enterobacter cloacae) dissolven亞種菌株 GN05902	合成	USA
95	MdfA	桑樹常感菌(Enterobacter mori )菌株 JGM37	合成	USA
96	MdfA	Kosakonia sacchari 菌株 BO-1	合成	日本
97	MdfA	Cronobacter malonaticus 菌株 MOD1-Md25g	合成	USA
98	MdfA	Cronobacter dublinensis 582	合成	英國

表3–本發明的膜蛋白的區域資料

序列識別號	家族	EggNOG	PFAM	Interpro	TCDB
01 - 06	運輸蛋白	07QF7	PF07690	IPR011701、 IPR020846、 IPR036259、 IPR005829	2.A.1.2
07	運輸蛋白	05E8G	PF05977	IPR023722、 IPR020846、 IPR036259、 IPR010290	2.A.1.3
08	運輸蛋白	05JHE	PF07690	IPR011701、 IPR020846、 IPR036259	2.A.1.1
09	運輸蛋白	05EGZ	PF01943	IPR002797、 IPR032896	2.A.66
10	運輸蛋白	0814C	PF00893	IPR000390	2.A.7.1
11	運輸蛋白	07RBJ	PF13347	IPR039672、 IPR036259、 IPR001927	2.A.2.2
12 - 13	運輸蛋白	08N8A	PF07690	IPR011701、 IPR020846、 IPR036259	2.A.1.6
14	運輸蛋白	07QRN	PF07690	IPR011701、 IPR023721、 IPR020846、 IPR036259、 IPR001411、 IPR004638	2.A.1.2
15	P-P鍵水解驅動轉運蛋白	08IJ9	PF00005、 PF17912	IPR003593、 IPR003439、 IPR017871、 IPR008995、 IPR040582、 IPR027417	3.A.1.1
16	P-P鍵水解驅動轉運蛋白	05CJ1	PF00005	IPR003593、 IPR003439、 IPR017871、 IPR015851、 IPR005978、 IPR027417	3.A.1.1
17	P-P鍵水解驅動轉運蛋白	05DFW	PF13407	IPR013456、 IPR025997、 IPR028082	3.A.1.2
18	P-P鍵水解驅動轉運蛋白	05EZD	PF00528	IPR000515、 IPR035906	3.A.1.1
19	P-P鍵水解驅動轉運蛋白	05I1K	PF00528	IPR000515、 IPR035906	3.A.1.1
20	P-P鍵水解驅動轉運蛋白	07HR3	PF00528	IPR000515、 IPR035906	3.A.1.1
21	β-桶狀孔蛋白	05DAY	PF02563、 PF10531、 PF18412	IPR003715、 IPR019554、 IPR040716	1.B.18
53 - 98	運輸蛋白	07QF7	PF07690	IPR011701、 IPR020846、 IPR036259、 IPR005829	2.A.1.2

培養條件

96孔微量滴定盤實驗的預培養起始於一冷凍管，於150 µL LB中，並在37°C下在800 rpm的定軌振盪器(orbital shaker)上隔夜培養。使用此培養物用作 96 孔方形微量滴定盤的接種物，以稀釋400x加入 400 µL 基本培養基。然後將這些最終的 96 孔培養盤於37°C在定軌振盪器上以800 rpm培養72小時，或更短或更長。為了在培養實驗結束時測量糖濃度，從每個孔中取出全部肉湯樣品，藉由在旋下細胞之前，將培養液在60°C煮15分鐘（= 細胞內與細胞外糖濃度的平均值）。又，對培養物進行稀釋以測量600nm處的光學密度。細胞效能指數或CPI是通過將整個肉湯中測得的具有LN3為核心三糖的寡醣的濃度，除非另有規定，為除以生物量來確定的，相較於參考菌株，以相對百分比形式。根據經驗，生物量約為在600nm處測量的光學密度的1/3 ^rd。具有LN3為核心三糖的寡醣的輸出率是通過將上清液中測得的具有LN3為核心三糖的寡醣的濃度除以整個肉湯中測得的具有LN3為核心三糖的寡醣的濃度來確定的，相較於參考菌株，以相對百分比形式。

生物反應器的預培養是從特定菌株的整個1mL冷凍管開始的，接種於250 mL或500 mL基本培養基中於1L或2.5L搖瓶中，並在37℃、以200 rpm的定軌振盪器培養24小時。然後接種一個5 L的生物反應器（250 mL接種物在2 L批次培養基中）；該過程由MFCS控制軟體（Sartorius Stedim Biotech, Melsungen, Germany）控制。培養條件被設定為37℃，最大限度的攪拌；壓力氣體流速取決於菌種與生物反應器。使用0.5M H2S04和20% NH4OH將pH值控制在6.8。排出的氣體被冷卻。當發酵過程中出現泡沫時，加入矽酮消泡劑(silicone antifoaming agent)的10%溶液。

光學密度(Optical density)

藉由測量600 nm的光學密度（Implen Nanophotometer NP80, Westburg, Belgium或以Spark 10M microplate reader, Tecan, Switzerland）經常監測培養物的細胞密度。

生產力

單位生產率(specific productivity) Qp是指產品（即以LN3為核心三糖的寡醣）的單位生產率(specific production rate)，通常以每時間單位的每質量單位的生物質的產品質量單位表示（=g寡醣/g生物質/h）。通過測量每個階段結束時形成的產品和生物質的數量以及每個階段持續的時間框架，對發酵過程的每個階段，即批次處理和混合批次處理階段，確定了Qp值。

單位生產率Qs是基質，如蔗糖的單位消耗率，通常以每單位時間的生物量之每單位質量的基質之每單位質量表示（=g蔗糖/g生物量/h）。藉由在每個階段結束以及每個階段持續的時段(time frame) 測量消耗的蔗糖總量與所形成的生物量，已經確定了發酵過程的每個階段，即批次與饋料批次(Fed-Batch)階段的Qs值。

蔗糖產量Ys是指由基質製成的產品的部分，通常以蔗糖之每質量單位的產物之質量單位（=g寡醣/g蔗糖）表示。藉由在每個階段結束測量所產生之具有LN3為一核心三糖的寡醣的總量與所消耗之蔗糖的總量，確定了發酵過程的每個階段即批次與饋料批次階段的Ys值。

生物量產量Yx是由基質製成之生物量的部分，通常以基質之每單位質量的生物量之質量單位（=g生物量/g蔗糖）表示。藉由在每個階段結束測量所產生之生物質的總量與所消耗之蔗糖的總量，確定了發酵過程的每個階段即批次與饋料批次階段的Yp值。

速率是指在發酵過程中製作產品的速度，通常以每單位時間的所製作之產品之濃度（=g寡醣/L/h）表示。速率是藉由測量在饋料批次階段結束已經製成之具有LN3為一核心三糖的寡醣的濃度並將此濃度除以總發酵時間來確定的。

乳糖轉化率是指在發酵過程中乳糖被消耗的速度，通常以每單位時間的乳糖之質量單位表示（=g消耗的乳糖/h）。乳糖轉化率是藉由測量在發酵過程期間消耗的乳糖總除以總發酵時間來確定的。

生長率/速度測量

最大生長率（µMax）是根據在600nm處觀察到的光學密度，使用R套裝grofit計算出來的。

解析分析

標準品，如但不限於蔗糖、乳糖、乳糖-N-三糖II（LN3）、乳糖-N-四糖（LNT）、乳糖-N-新四糖（LNnT）、LNFP-I。LNFP-II、LNFP-III、LNFP-V、LNFP-VI、LSTa、LSTc與LSTd，購自Carbosynth（英國）、Elicityl（法國）與IsoSep（瑞典）。其他化合物以內部製作的標準品進行分析。

中性寡醣在具有蒸發光散射檢測器（ELSD）或折射率（RI）檢測之Waters Acquity H-class UPLC上進行分析。在Waters Acquity UPLC BEH Amide柱（2.1 x 100 mm；130 Å；1.7 µm與Acquity UPLC BEH Amide VanGuard柱，130 Å，2.1 x 5 mm上注入0.7 µL的樣品。柱溫為50℃。移動相由1/4的水和3/4的乙腈溶液組成，其中加入了0.2%的三乙胺。此方法是等度的，流量為0.130mL/分鐘。ELS檢測器具有50°C之漂移管溫度，N2氣體壓力為50 psi，增益(gain)為200，資料速率為10 pps。RI檢測器的溫度被設定為35℃。

唾液酸化寡醣在具有折射率（RI）檢測之Waters Acquity H-class UPLC上進行分析。在Waters Acquity UPLC BEH Amide柱（2.1 x 100 mm；130 Å；1.7 µm）上注入0.5 µL樣品。柱溫為50℃。移動相由70%的乙腈、26%的乙酸銨緩衝液（150 mM）與4%的甲醇的混合物組成，其中加入了0.05%的吡咯烷。此方法為等度的，流量為0.150 mL/分鐘。RI檢測器的溫度被設定在35℃。

中性糖與唾液酸化糖兩者在在具有折射率（RI）檢測之Waters Acquity H-class UPLC上進行分析。在Waters Acquity UPLC BEH Amide柱（2.1 x 100 mm；130 Å；1.7 µm）上注入0.5 µL樣品。柱溫為50℃。移動相由72%的乙腈與28%的乙酸銨緩衝液（100mM）的混合物組成，其中加入了0.1%的三乙胺。此方法是等度的，流量為0.260毫升/分鐘。RI檢測器的溫度被設定在35℃。

為了於一質譜上之分析，使用具有電噴霧離子源(Electron Spray Ionisation (ESI))之Waters Xevo TQ-MS，具有450℃之去溶劑(desolvation)溫度，650L/h之氮去溶劑氣流量與20V之錐電壓(cone voltage)。對所有寡醣，MS在選擇離子監測（selected ion monitoring, SIM）模式為負下操作。分離在具有Thermo Hypercarb柱（2.1 x 100 mm; 3 µm）之Waters Acquity UPLC於35℃進行。使用梯度，其中洗脫液A是含0.1%甲酸的超純水，洗脫液B是含0.1%甲酸的乙腈。使用以下梯度在55分鐘內分離寡醣：在21分鐘內洗脫液B從2至12%的起始增加，在11分鐘內洗脫液B從12至40%的第二增加，在5分鐘內洗脫液B從40至100%的地三增加。作為清洗步驟，使用100％的洗脫液B， 5分鐘。為了管柱平衡，在1分鐘內恢復到2％洗脫液B的起始狀態，並保持12分鐘。

低濃度（低於50 mg/L）的中性與唾液酸化糖在具有脈衝安培檢測（PAD）Dionex HPAEC系統上進行了分析，並採用。在Dionex CarboPac PA200柱4 x 250 mm與Dionex CarboPac PA200保護柱4 x 50 mm上注入5 µL的樣品量。柱溫被設定為30℃。使用梯度，其中洗脫液A為去離子水，其中洗脫液B為200 mM氫氧化鈉，且其中洗脫液C為500 mM乙酸鈉。寡醣在60分鐘內被分離，同時使用以下梯度保持25％的洗脫液B的恆定比例：75％的洗脫液A之起始等度步驟10分鐘，在8分鐘內洗脫液C從0至4％的起始增加，71％的洗脫液A與4％的洗脫液C之第二個等度步驟6分鐘，在2.6分鐘內洗脫液C從4至12％的第二次增加，63%的洗脫液A與12%的洗脫液C之第三個等度步驟3.4分鐘，及在5分鐘內洗脫液C從12至48%的第三次增加。作為清洗步驟，使用48%的洗脫液C， 3分鐘。為了管柱平衡，在1分鐘內恢復到75%洗脫液A與0%洗脫液C的起始狀態，並保持11分鐘。應用的流量為0.5 mL/分鐘。

數據的標準化

對於所有類型的培養條件，從突變菌株獲得的數據對在相同培養條件下以具有與突變菌株相同的基因背景但缺乏膜蛋白表現卡匣（即設定點(setpoint)）之參考菌株所獲得的資料進行標準化。因此，所有數據（包括表4-11中的數據）都以相對於此設定點的百分比給出。

實施例5. 在補充有20 g/L乳糖的基本培養基中的生長實驗中，在大腸桿菌宿主中培養72小時測試膜蛋白的 LN3產量

建立了一個實驗來評估具有序列識別號01、 02、 03、 04、 05、 06、 07、 08、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67、 68、 69、 70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、 82、 83、 84、 85、 86、 87、88、89、90、91、92、93、 94、 95、 96、 97或98之膜蛋白其提高生長在補充有20 g/L乳糖的基本培養基中的宿主細胞的LN3產生的能力。候選基因在pSC101質體上呈現給LN3產生宿主。根據實施例4中提供的培養條件進行生長實驗。在每個表現具有序列識別號22之來自腦膜炎雙球菌( N. meningitidis)的半乳糖苷β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶(galactoside beta-1,3-N-acetylglucosaminyltransferase) (LgtA)的LN3產生宿主中，評估LN3的產量。

實施例6. 在補充有20 g/L乳糖的基本培養基中的生長實驗中，大腸桿菌宿主培養72小時鑑定提高LN3與乳糖-N-四糖(LNT)產量的膜蛋白。

建立了一個實驗來評估具有序列識別號01、 03、 07、 08、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19與21之膜蛋白其提高生長在補充有20 g/L乳糖的基本培養基中的宿主細胞的LN3與乳糖-N-四糖(LNT)產生的能力。候選基因在pSC101質體上呈現給LNT產生宿主。根據實施例4中提供的培養條件進行生長實驗。

表4顯示相較於沒有表現膜蛋白的參考菌株，表現膜蛋白的不同菌株的LN3與LNT的全肉湯測量值(whole broth measurements)。根據表4，具有序列識別號01、 03、 07、 08、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19或21之膜蛋白的表現提升了被產生於表現具有序列識別號22之來自腦膜炎雙球菌( N. meningitidis)的半乳糖苷β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶(LgtA)與具有序列識別號23之來自大腸桿菌O55:H7的N-乙醯葡萄糖胺β-1,3-半乳糖基轉移酶(N-acetylglucosamine beta-1,3-galactosyltransferase)的LNT產生宿主中的LN3及LNT的產生。

表4

序列識別號	相較於參考菌株之 % LN3 生產 ( 整個肉湯 )	SD	相較於參考菌株之 % LNT 生產 ( 整個肉湯 )	SD
01	798.1	± 36	574	± 20
03	483.1	± 140	157	± 90
07	155.4	± 26	132	± 2
08	150.6	± 29	123	± 12
09	141.3	± 11	111	± 14
10	182.7	± 27	150	± 14
11	200.8	± 6	147	± 4
12	116.6	± 13	111	± 11
13	151.9	± 0.6	118	± 5
14	190.4	± 59	132	± 32
15	161.5	± 2.8	140	± 2
16	204.5	± 16	173	± 9
17	166.8	± 75	165	± 137
18	185.6	± 43	129	± 19
19	159.5	± 2.4	140	± 19
21	125.2	± 22	111	± 8

“SD”代表標準差（同一菌株的4次重複）。“參考菌株”與測試菌株相同，除了所指出的膜蛋白（序列識別號所指）不在參考菌株中表現。

此外，表5顯示，相較於沒有表現所述膜蛋白的參考菌株，表現如本實施例中概述的膜蛋白的不同菌株的細胞效能指數(cell performance index, CPI)較高。

表5

序列識別號	相較於參考菌株，在整個肉湯中 % CPI (g LN3/g 生物量 )	SD	相較於參考菌株，在整個肉湯中 % CPI (g LNT/g 生物量 )	SD
01	427	± 62	418	± 47
03	335	± 51	141	± 54
07	110	± 19	128	± 1
08	110	± 11	123	± 1
09	112	± 4	121	± 10
10	128	± 16	143	± 11
11	144	± 4	143	± 3
12	96	± 9	116	± 9
13	117	± 2	124	± 3
14	126	± 25	118	± 16
15	113	± 2	134	± 1
16	115	± 10	133	± 6
17	109	± 50	122	± 78
18	128	± 3	121	± 21
19	105	±13	125	± 1
21	108	±7	118	± 6

實施例7 在補充有20 g/L乳糖的基本培養基中的生長實驗中，大腸桿菌宿主培養72小時鑑定提高乳糖-N-四糖(LNT)產量的膜蛋白。

建立了一個實驗來評估具有序列識別號02、 04、 05、 66、 67與68之膜蛋白其提高生長在補充有20 g/L乳糖的基本培養基中的宿主細胞的乳糖-N-四糖(LNT)產生的能力。候選基因在pSC101質體上呈現給LNT產生宿主。根據實施例4中提供的培養條件進行生長實驗。因此，本實施例中的菌株與實施例6中的菌株相同，不同之處在於評估的膜蛋白。

來自上述6種不同膜蛋白的實驗數據顯示於表6 中。

當根據實施例4提供之於培養基含有蔗糖作為碳源且乳糖作為前驅物的培養條件在生長實驗中評估時，於全肉湯樣品中，相較於參考菌株（不表現膜蛋白），所有6個菌株都能夠產生更多的 LNT 並顯示出較高的細胞效能指數(CPI)。此外，相較於實施例6中使用的菌株，這些菌株沒有顯示出更高的LN3產量（%LN3產量，相較於參考菌株，在全肉湯中測量）。本實施例7中的菌株因此特別有利於LNT的產生，其中LN3的比例應保持盡可能低，而若目標是LN3與LNT的混合物，或者當生產的寡醣部分中 LN3的相對量不重要時，實施例6中的菌株是有用的。

用於此篩選的LNT產生宿主表現具有序列識別號22之來自腦膜炎雙球菌的半乳糖苷β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶(LgtA)與具有序列識別號23之來自腦膜炎雙球菌的N-乙醯葡萄糖胺β-1,3-半乳糖基轉移酶(wbgO)。

表6

序列識別號	相較於參考菌株之 %LNT 產量（整個肉湯）	SD	相較於參考菌株，在整個肉湯中 % CPI (g LNT/g 生物量 )	SD
02	117	± 4	169	± 39
04	137	± 8	151	± 26
05	197	± 8	181	± 49
66	117	± 4	147	± 26
67	122	± 9	117	± 15
68	114	± 4	142	± 22

實施例8 在補充有20 g/L乳糖的基本培養基中的生長實驗中，大腸桿菌宿主培養72小時鑑定提高乳糖-N-新四糖(LNnT)產量的膜蛋白

建立了一個實驗來評估具有序列識別號01、 02、 03、 05、 66與68之膜蛋白其提高生長在補充有20 g/L乳糖的基本培養基中的宿主細胞的LN3及/或乳糖-N-新四糖(LNnT)產生的能力。候選基因在pSC101質體上呈現給LNnT產生宿主。根據實施例4中提供的培養條件進行生長實驗。

來自上述6種不同膜蛋白的實驗數據顯示於表 7中。

當根據實施例4提供之於培養基含有蔗糖作為碳源且乳糖作為前驅物的培養條件在生長實驗中評估時，於全肉湯樣品中，相較於參考菌株（不表現膜蛋白），所有6個菌株都能夠產生更多的LNnT。用於此篩選的LNnT產生宿主表現具有序列識別號22之來自腦膜炎雙球菌的半乳糖苷β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶(LgtA)與具有序列識別號24之來自腦膜炎雙球菌的N-乙醯葡萄糖胺β-1,4-半乳糖基轉移酶(N-acetylglucosamine beta-1,4-galactosyltransferase) (LgtB)。

表7

序列識別號	相較於參考菌株之 % LNnT 生產 ( 整個肉湯 )	SD
01	240	± 3
02	266	± 36
03	222	± 19
05	139	± 19
66	143	± 5
68	217	± 34

實施例9. 在5L發酵過程(run)中大腸桿菌LN3產生宿主中之膜蛋白的評估

於實施例4中描述的LN3產生宿主被修飾以自pSC101質體表現具有序列識別號01、 02、 03、 04、 05、 06、 07、 08、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67、 68、 69、 70、 71、 72、 73、 74、 75、 76、 77、 78、 79、 80、 81、 82、 83、 84、 85、 86、 87、 88、 89、 90、 91、 92、 93、 94、 95、 96、 97或98之膜蛋白。經修飾菌株於生物反應器設定(bioreactor settings)（5 L發酵槽(fermenter)）中被評估其生產力。根據實施例4中所提供的條件來進行發酵過程。又，一與LN3產生宿主相同但缺乏膜蛋白之基因的一參考菌株於相同之發酵設定中被分析。在發酵結束時，表現膜蛋白基因的菌株在上清液與整個肉湯樣品中測得的滴定量(titre)在80 g/L與125 g/L之間變化。參考菌株達到在上清液與整個肉湯樣品中測得的45 g/L與 65 g/L之間的LN3滴定量，其顯示具有序列識別號01、 02、 03、 04、 05、 06、 07、 08、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67、 68、 69、 70、 71、 72、 73、 74、 75、 76、 77、 78、 79、 80、 81、 82、 83、 84、 85、 86、 87、 88、 89、 90、 91、 92、 93、 94、 95、 96、 97與98之膜蛋白對在5 L發酵過程中之LN3產生的正向作用。

實施例10. 在5L發酵過程中大腸桿菌LN3產生宿主中之膜蛋白的評估

於實施例4中描述的LN3產生宿主被修飾以自pSC101質體表現具有序列識別號01、 02、 03、 04、 05、 06、 07、 08、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67、 68、 69、 70、 71、 72、 73、 74、 75、 76、 77、 78、 79、 80、 81、 82、 83、 84、 85、 86、 87、 88、 89、 90、 91、 92、 93、 94、 95、 96、 97或98之膜蛋白。經修飾菌株於生物反應器設定（5 L發酵槽）中被評估其生產力。根據實施例4中所提供的條件來進行發酵過程。又，一與LN3產生宿主相同但缺乏膜蛋白之基因的一參考菌株於相同之發酵設定中被分析。在發酵結束時，相較於參考菌株，於經修飾菌株中之LN3產生為125 %至250 %，支援具有序列識別號01、 02、 03、 04、 05、 06、 07、 08、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67、 68、 69、 70、 71、 72、 73、 74、 75、 76、 77、 78、 79、 80、 81、 82、 83、 84、 85、 86、 87、 88、 89、 90、 91、 92、 93、 94、 95、 96、 97與98之膜蛋白對於在5 L發酵過程中之LN3產生的正向作用。

實施例11. 在5L發酵過程中大腸桿菌LNT產生宿主中之膜蛋白的評估

於實施例4中描述的LNT產生宿主被修飾以自pSC101質體表現具有序列識別號01、 02、 03、 04、 05、 06、 07、 08、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、66、 67、 68、 69、 70、 71、 72、 73、 74、 75、 76、 77、 78、 79、 80、 81、 82、 83、 84、 85、 86、 87、 88、 89、 90、 91、 92、 93、 94、 95、 96、 97或98之膜蛋白。經修飾菌株於生物反應器設定（5 L發酵槽）中被評估其生產力。根據實施例4中所提供的條件來進行發酵過程。又，一與LNT產生宿主相同但缺乏膜蛋白之基因的一參考菌株於相同之發酵設定中被分析。在發酵結束時，表現膜蛋白基因的菌株在上清液與整個肉湯樣品中測得的滴定量在90 g/L與130 g/L之間變化。參考菌株達到在上清液與整個肉湯樣品中測得的50 g/L與70 g/L之間的LNT滴定量，其顯示具有序列識別號01、 02、 03、 04、 05、 06、 07、 08、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67、 68、 69、 70、 71、 72、 73、 74、 75、 76、 77、 78、 79、 80、 81、 82、 83、 84、 85、 86、 87、 88、 89、 90、 91、 92、 93、 94、 95、 96、97與98之膜蛋白對在5 L發酵過程中之LNT產生的正向作用。

實施例12. 在5L發酵過程中大腸桿菌LNT產生宿主中之膜蛋白的評估

於實施例4中描述的LNT產生宿主被修飾以自pSC101質體表現具有序列識別號01、 02、 03、 04、 05、 06、 07、 08、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、66、 67、 68、 69、 70、 71、 72、 73、 74、 75、 76、 77、 78、 79、 80、 81、 82、 83、 84、 85、 86、 87、 88、 89、 90、 91、 92、 93、 94、 95、 96、 97或98之膜蛋白。經修飾菌株於生物反應器設定（5 L發酵槽）中被評估其生產力。根據實施例4中所提供的條件來進行發酵過程。又，一與LNT產生宿主相同但缺乏膜蛋白之基因的一參考菌株於相同之發酵設定中被分析。在發酵結束時，相較於參考菌株，於經修飾菌株中之LNT產生為135 % 至265 %，支援具有序列識別號01、 02、 03、 04、 05、 06、 07、 08、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67、 68、 69、 70、 71、 72、 73、 74、 75、 76、 77、 78、 79、 80、 81、 82、 83、 84、 85、 86、 87、 88、 89、 90、 91、 92、 93、 94、 95、 96、 97與98之膜蛋白對於在5 L發酵過程中之LNT產生的正向作用。

實施例13. 在5L發酵過程中大腸桿菌LNT產生宿主中之膜蛋白的評估

於實施例4中描述的LNT產生宿主被修飾以自pSC101質體表現具有序列識別號01之膜蛋白。經修飾菌株於生物反應器設定（5 L發酵槽）中被評估其生產力。根據實施例4中所提供的條件來進行發酵過程。又，一與LNT產生宿主相同但缺乏膜蛋白之基因的一參考菌株於相同之發酵設定中被分析。來自發酵之實驗資料被顯示於表8與9中。

在發酵結束時，在上清液與全肉湯樣品中測得的滴定量高於在參考菌株中測得的滴定量（表8）。進一步觀察到，相較於參考菌株，LNT分泌提升，由於相較於參考菌株，上清液的 LNT產量增加高於整個肉湯。此外，相較於參考菌株，LNT 的產率、乳糖消耗率與蔗糖上的LNT產量較高（表9）。總之，這些資料顯示具有序列識別號01之的膜蛋白對於在5 L發酵過程中之LNT產生的正向作用。

表8

序列識別號	相較於參考菌株之 % LNT 生產 ( 上清液 )	相較於參考菌株之 % LNT 生產 ( 整個肉湯 )
01	220	147

表9

序列識別號	相較於參考菌株，在整個肉湯中 % 生產率 (g LNT/L/h)	相較於參考菌株，在整個肉湯中 % 蔗糖產量 (g LNT / g 蔗糖 )	相較於參考菌株，在整個肉湯中 % 乳糖消耗率 (g 乳糖 /h)
01	151	150	136
序列識別號	相較於參考菌株，在上清液中 % 生產率 (g LNT/L/h)	相較於參考菌株，在上清液中 % 蔗糖產量 (g LNT / g 蔗糖 )	相較於參考菌株，在上清液中 % 乳糖消耗率 (g 乳糖 /h)
01	230	235	187

實施例14. 在5L發酵過程中大腸桿菌LNnT產生宿主中之膜蛋白的評估

於實施例4中描述的LNnT產生宿主被修飾以自pSC101質體表現具有序列識別號01、 02、 03、 04、 05、 06、 07、 08、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67、 68、 69、 70、 71、 72、 73、 74、 75、 76、 77、 78、 79、 80、 81、 82、 83、 84、 85、 86、 87、 88、 89、 90、 91、 92、 93、 94、 95、 96、 97或98之膜蛋白。經修飾菌株於生物反應器設定（5 L發酵槽）中被評估其生產力。根據實施例4中所提供的條件來進行發酵過程。又，一與LNnT產生宿主相同但缺乏膜蛋白之基因的一參考菌株於相同之發酵設定中被分析。在發酵結束時，表現膜蛋白基因的菌株在上清液與整個肉湯樣品中測得的滴定量在70 g/L與100 g/L之間變化。參考菌株達到在上清液與整個肉湯樣品中測得的40 g/L與60 g/L之間的LNnT滴定量，其顯示具有序列識別號01、 02、 03、 04、 05、 06、 07、 08、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67、 68、 69、 70、 71、 72、 73、 74、 75、 76、 77、 78、 79、 80、 81、 82、 83、 84、 85、 86、 87、 88、 89、 90、 91、 92、 93、 94、 95、 96、 97與98之膜蛋白對在5 L發酵過程中之LNnT產生的正向作用。

實施例15. 在5L發酵過程中大腸桿菌LNnT產生宿主中之膜蛋白的評估

於實施例4中描述的LNnT產生宿主被修飾以自pSC101質體表現具有序列識別號01、 02、 03、 04、 05、 06、 07、 08、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67、 68、 69、 70、 71、 72、 73、 74、 75、 76、 77、 78、 79、 80、 81、 82、 83、 84、 85、 86、 87、 88、 89、 90、 91、 92、 93、 94、 95、 96、 97或98之膜蛋白。經修飾菌株於生物反應器設定（5 L發酵槽）中被評估其生產力。根據實施例4中所提供的條件來進行發酵過程。又，一與LNnT產生宿主相同但缺乏膜蛋白之基因的一參考菌株於相同之發酵設定中被分析。在發酵結束時，相較於參考菌株，於經修飾菌株中之LNnT產生為120 %至245 %，支援具有序列識別號01、 02、 03、 04、 05、 06、 07、 08、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67、 68、 69、 70、 71、 72、 73、 74、 75、 76、 77、 78、 79、 80、 81、 82、 83、 84、 85、 86、 87、 88、 89、 90、 91、 92、 93、 94、 95、 96、 97與98之膜蛋白對於在5 L發酵過程中之LNnT產生的正向作用。

實施例16. 在5L發酵過程中大腸桿菌LNnT產生宿主中之膜蛋白的評估

於實施例4中描述的LNnT產生宿主被修飾以自pSC101質體表現具有序列識別號02之膜蛋白。經修飾菌株於生物反應器設定（5 L發酵槽）中被評估其生產力。根據實施例4中所提供的條件來進行發酵過程。又，一與LNnT產生宿主相同但缺乏膜蛋白之基因的一參考菌株於相同之發酵設定中被分析。來自發酵之實驗資料被顯示於表10與11中。

在發酵結束時，在上清液與全肉湯樣品中測得的滴定量高於在參考菌株中測得的滴定量（表10）。此外，相較於參考菌株，獲得一較高之細胞效能指數(CPI)。進一步觀察到，相較於參考菌株，LNnT分泌提升，由於相較於參考菌株，上清液的 LNnT產量增加高於整個肉湯。此外，相較於參考菌株，LNnT的產率、乳糖消耗率與蔗糖上的LNnT產量較高（表11）。總之，這些資料顯示具有序列識別號02之的膜蛋白對於在5 L發酵過程中之LNnT產生的正向作用。

表10

序列識別號	相較於參考菌株， % LNnT 生產 ( 上清液 )	相較於參考菌株，在上清液中 % CPI (g LNnT/g 生物量 )	相較於參考菌株， % LNnT production ( 整個肉湯 )	相較於參考菌株，在整個肉湯中 % CPI (g LNnT/g 生物量 )
02	160	183	127	136

表11

序列識別號	相較於參考菌株，在整個肉湯中 % 生產率 (g LNnT/L/h)	相較於參考菌株，在整個肉湯中 % 蔗糖產量 ( g LNnT / g 蔗糖 )	相較於參考菌株，在整個肉湯中 % 乳糖消耗率 (g 乳糖 /h)	相較於參考菌株，在整個肉湯中 % 單位生產力 (g LNnT / g 生物量 / h)
02	130	117	97	139
序列識別號	相較於參考菌株，在上清液中 % 生產率 (g LNnT/L/h)	相較於參考菌株，在上清液中 % 蔗糖產量 ( g LNnT / g 蔗糖 )	相較於參考菌株，在上清液中 % 乳糖消耗率 (g 乳糖 /h)	相較於參考菌株，在上清液中 % 單位生產力 (g LNnT / g 生物量 / h)
02	165	186	107	177

實施例17. 材料與方法釀酒酵母菌( Saccharomyces cerevisiae)

培養基

菌株在具有含有6.7 g/L不含胺基酸的酵母氮鹼 (YNB w/o AA, Difco) 20 g/L瓊脂 (Difco)（固體培養物）、22 g/L葡萄糖一水合物或20 g/L乳糖與0.79 g/L CSM或0.77 g/L CSM-Ura、0.77 g/L CSM-Trp，或0.77 g/L CSM-His (MP Biomedicals)的完全補充混合物(Complete Supplement Mixture)(SD CSM)或CSM drop-out (SD CSM-Ura、SD CSM-Trp、SD CSM-His)的一合成界定酵母培養基(Synthetic Defined yeast medium)上生長。

菌株

使用由Brachmann et al. (Yeast (1998) 14:115-32) 創建的釀酒酵母菌BY4742，可在Euroscarf培養物保藏中心獲得。所有突變株均藉由同源重組或質體轉形使用Gietz的方法(Yeast 11:355-360, 1995)產生。

質體

在產生 UDP-半乳糖的例子中，一酵母表現質體可以衍生自 pRS420-質體系列 (Christianson et al., 1992, Gene 110: 119-122)，其包含HIS3選擇標記與UDP-葡萄糖-4-差向異構酶的組成型轉錄單元，例如，如來自大腸桿菌的galE (UniProt ID P09147)。此質體可以進一步以乳糖通透酶，例如，如來自乳酸克魯維酵母 (UniProt ID P07921)的LAC12，與半乳糖苷 β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶活性，例如，如來自腦膜炎雙球菌的lgtA (序列識別號22)的組成型轉錄單元修飾，以產生LN3 (lacto-N-triose, LNT-II, )。為了進一步生產LN3衍生的寡醣，如LNT，突變之LN3產生菌株被進一步以N-乙醯葡萄糖胺β-1,3-半乳糖基轉移酶，例如，如來自大腸桿菌O55:H7的WbgO（序列識別號23）的組成型轉錄單元修飾。

在一個生產LN3衍生的寡醣如乳糖-N-新四糖（LNnT，Gal-b1,4-GlcNAc-b1,3-Gal-b1,4-Glc）的例子中，突變之LN3生產菌株進一步以N-乙醯葡糖胺β-1,4-半乳糖基轉移酶例如，如來自腦膜炎雙球菌的LgtB（序列識別號24）的組成型轉錄單元修飾。

在一個生產GDP-岩藻糖的例子中，可以使用酵母表現質體如p2a_2µ_Fuc（Chan 2013, Plasmid 70, 2-17）用於釀酒酵母菌中之外來基因的表現。此質體含有一個氨苄青黴素抗性基因與一個細菌複製原點，以便在大腸桿菌中進行選擇和維持，而2µ酵母ori與Ura3選擇標記用於在酵母中進行選擇與維持。此質體被進一步以乳糖滲透酶例如，如來自乳酸克魯維酵母的LAC12（UniProt ID P07921）、GDP-甘露糖4,6-脫水酶，例如，如來自大腸桿菌的gmd（序列識別號35）與GDP-L-岩藻糖合成酶，例如，如來自大腸桿菌的fcl（序列識別號36）的組成型轉錄單元修飾。酵母表現質體p2a_2µ_Fuc2可作為p2a_2µ_Fuc質體的替代表現質體，此質體包括與氨苄青黴素抗性基因、細菌ori、2µ酵母ori與Ura3選擇相鄰的乳糖滲透酶，例如，如來自乳酸克魯維酵母的LAC12（UniProt ID P07921）、岩藻糖滲透酶，例如，如來自大腸桿菌的fucP（序列識別號37）以及具有岩藻糖激酶/岩藻糖-1-磷酸鳥苷酸轉移酶活性的雙功能酶，例如，如來自脆弱類桿菌的fkp（序列識別號38）的組成型轉錄單元。為了進一步生產具有LN3為核心三糖的岩藻糖化寡醣，p2a_2µ_Fuc及其變體p2a_2µ_Fuc2，額外含有序列識別號29之幽門螺桿菌α-1,2-岩藻糖基轉移酶（HpFutC）及/或具有序列識別號30之幽門螺桿菌α-1,3-岩藻糖基轉移酶（HpFucT）的組成型轉錄單元。

為了生產唾液酸與CMP-唾液酸，從pRS420-質體系列(Christianson et al., 1992, Gene 110: 119-122)衍生，含有TRP1選擇標記與具有序列識別號25之來自大腸桿菌的突變glmS*54、具有序列識別號47之來自大腸桿菌的磷酸酶yqaB、具有序列識別號40之來自卵形擬桿菌的N-乙醯葡糖胺2-外聚酶（AGE）、具有序列識別號41之來自腦膜炎雙球菌的N-乙醯神經氨酸合成酶（NeuB）具有與序列識別號42之來自多殺性巴氏桿菌的N-乙醯神經氨酸細胞醯化轉移酶（NeuA）的組成型轉錄單元。視需要而定，也可加入具有序列識別號39之來自釀酒酵母菌的GNA1的組成型轉錄單元。

為了生產具有LN3為核心三糖的唾液酸化寡醣，質體進一步包括來自乳酸克魯維酵母（UniProt ID P07921）的乳糖滲透酶（LAC12），與一或更多之唾液酸轉移酶，包括，包括來自多殺性巴氏桿菌之序列識別號43 (PmultST3)及/或來自腦膜炎雙球菌之序列識別號44 (NmeniST3) 之β-半乳糖苷α-2,3-唾液酸轉移酶，及/或包括來自發光桿菌之序列識別號45 (PdST6)及/或來自發光菌JT-ISH-224之序列識別號46 (P-JT-ISH-224-ST6)的β-半乳糖α-2,6-醛基轉移酶的組成型轉錄單元。

較佳為，但並非必須，任何一或更多之醣基轉移酶及/或參與核苷酸啟動的糖合成的蛋白質N端及/或C端地與SUMOstar標籤（例如從pYSUMOstar, Life Sensors, Malvern, PA獲得）融合，以提高其溶解度。

視需要而定，以編碼伴侶蛋白(chaperone protein)，例如，Hsp31、 Hsp32、 Hsp33、 Sno4、 Kar2、 Ssb1、 Sse1、 Sse2、 Ssa1、 Ssa2、 Ssa3、 Ssa4、 Ssb2、 Ecm10、 Ssc1、 Ssq1、 Ssz1、 Lhs1、 Hsp82、 Hsc82、 Hsp78、 Hsp104、 Tcp1、 Cct4、 Cct8、 Cct2、 Cct3、 Cct5、 Cct6或Cct7的組成型轉錄單元的基因組敲入來修飾突變的酵母菌株(Gong et al., 2009, Mol. Syst. Biol. 5: 275)。質體維持在宿主大腸桿菌DH5alpha中(F ^-, phi80d lacZdeltaM15, delta( lacZYA- argF)U169, deoR, recA1, endA1, hsdR17(rk ^-, mk ⁺), phoA, supE44, lambda ^-, thi-1, gyrA96, relA1)購自Invitrogen。

在接下來之步驟中，如表2和表3所列具有序列識別號01、02、03、04、05、06、07、08、09、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67。68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97與98之膜蛋白，可在上述突變株中進行評估。膜蛋白基因可以呈現在p2a 2µ_Fuc或p2a_2µ_Fuc2或pRS420（Christianson et al., 1992, Gene 110: 119-122；有一個HIS3選擇標記）質體上，或者以組成型轉錄單元整合到宿主的基因組中進行評估。

如Blazeck (Biotechnology and Bioengineering, Vol. 109, No. 11, 2012)所述，使用合成的組成型啟動子來表現基因。

需要表現的基因，無論是來自質體還是來自基因組的，都是由以下公司之一合成的。DNA2.0、Gen9、IDT或Twist Bioscience。藉由將密碼子使用優化為表現宿主的密碼子使用，可以進一步促進表現。基因使用供應商的工具進行了優化。

培養條件

一般來說，酵母菌株最初在SD CSM平板上生長，以獲得單一菌落。這些平板在30℃下生長2-3天。從單個菌落開始，在30℃下預培養物以5 mL隔夜生長，以200 rpm的速度振盪。隨後的125mL搖瓶實驗以2%的預培養物接種在25 mL的培養基中。這些搖瓶在30℃下以200 rpm的定軌振盪進行培養。

解析分析

參見實施例4的這一部分。

實施例18.在釀酒酵母菌( S. cerevisiae)宿主中測試膜蛋白的LN3產量

建立了一個實驗來評估具有序列識別號01、 02、 03、 04、 05、 06、 07、 08、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67、 68、 69、 70、 71、 72、 73、 74、 75、 76、 77、 78、 79、 80、 81、 82、 83、 84、 85、 86、 87、 88、 89、 90、 91、 92、 93、 94、 95、 96、 97 或98之膜蛋白其提高如實施例17所述生長在補充有20 g/L乳糖的培養基中的宿主細胞的LN3產生的能力。候選基因在pRS420質體上呈現給LN3產生宿主。根據實施例17中提供的培養條件進行生長實驗。在每個表現具有序列識別號22之來自腦膜炎雙球菌的半乳糖苷β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶(LgtA)的LN3產生宿主中，評估LN3的產量。

實施例19.在釀酒酵母菌宿主中測試膜蛋白的乳糖-N-四糖(LNT)產量

建立了一個實驗來評估具有序列識別號01、 02、 03、 04、 05、 06、 07、 08、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67、 68、 69、 70、 71、 72、 73、 74、 75、 76、 77、 78、 79、 80、 81、 82、 83、 84、 85、 86、 87、 88、 89、 90、 91、 92、 93、 94、 95、 96、 97 或98之膜蛋白其提高如實施例17所述生長在補充有20 g/L乳糖的培養基中的宿主細胞的LN3及/或乳糖-N-四糖(LNT)產生的能力。候選基因在pRS420質體上呈現給LNT產生宿主。根據實施例17中提供的培養條件進行生長實驗。在每個表現具有序列識別號22之來自腦膜炎雙球菌的半乳糖苷β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶(LgtA)與具有序列識別號23之來自腦膜炎雙球菌的N-乙醯葡萄糖胺β-1,3-半乳糖基轉移酶 (wbgO)的LNT產生宿主中，評估LN3與LNT的產量。

實施例20. 釀酒酵母菌宿主中鑑定提高乳糖-N-新四糖(LNnT)產量的膜蛋白

建立了一個實驗來評估具有序列識別號01、 02、 03、 04、 05、 06、 07、 08、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67、 68、 69、 70、 71、 72、 73、 74、 75、 76、 77、 78、 79、 80、 81、 82、 83、 84、 85、 86、 87、 88、 89、 90、 91、 92、 93、 94、 95、 96、 97 或98之膜蛋白其提高如實施例17所述生長在補充有20 g/L乳糖的培養基中的宿主細胞的LN3及/或乳糖-N-新四糖(LNnT)產生的能力。候選基因在pRS420質體上呈現給LNnT產生宿主。根據實施例17中提供的培養條件進行生長實驗。在每個表現具有序列識別號22之來自腦膜炎雙球菌的半乳糖苷β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶(LgtA)與具有序列識別號24之來自腦膜炎雙球菌的N-乙醯葡萄糖胺β-1,4-半乳糖基轉移酶(LgtB)的LNnT產生宿主中，評估LN3與LNnT的產量。

實施例21. 材料與方法萊茵衣藻( Chlamydomonas reinhardtii)

培養基

萊茵衣藻細胞在Tris-乙酸-磷酸鹽 (TAP)培養基 (pH 7.0)中培養。TAP 培養基使用 1000x儲備Hutner微量元素混合物。Hutner微量元素混合物由50 g/L Na2EDTA.H2O (Titriplex III)、22 g/L ZnSO4.7H2O、11.4 g/L H3BO3、5 g/L MnCl2.4H2O、5 g/L FeSO4.7H2O、1.6 g/L CoCl2.6H2O、1.6 g/L CuSO4.5H2O與1.1 g/L (NH4)6MoO3組成。

TAP 培養基含有 2.42 g/L Tris（三（羥甲基）胺基甲烷）、25 mg/L 鹽儲備溶液、0.108 g/L K2HPO4、0.054 g/L KH2PO4與1.0 mL/L冰醋酸。鹽儲備溶液由 15 g/L NH4CL、4 g/L MgSO4·7H2O 和 2 g/L CaCl2·2H2O 組成。作為醣類合成的前驅物，前驅物例如，如乳糖（例如20 g/L）、半乳糖、葡萄糖、果糖、岩藻糖、GlcNAc可被添加。藉由高壓滅菌（121°C，21'）對培養基進行滅菌。對於在斜面瓊脂上的原種培養(stock cultures)，使用含有 1% 瓊脂（純化的高強度，1000 g/cm2）的TAP培養基。

藻株

萊茵衣藻野生型藻株21gr (CC-1690，野生型，mt+)、6145C (CC-1691，野生型，mt-)、CC-125 (137c，野生型，mt+)、CC-124 （137c，野生型，mt-）可從美國明尼蘇達大學衣藻資源中心 (https://www.chlamycollection.org) 獲得。

質體

表現質體來源於 pSI103，可從衣藻資源中心獲得。可以使用 Gibson 組裝、Golden Gate 組裝、Cliva 組裝、LCR 或限制性連接進行選殖。用於（異源）基因表現的合適啟動子可以來自例如 Scranton et al. (Algal Res. 2016, 15: 135-142)。可以使用Crispr-Cas技術進行靶向基因修飾（如基因敲除或基因替換），如，例如Jiang et al. (Eukaryotic Cell 2014, 13(11): 1465-1469)所述。

如Wang等人所述，經由電穿孔進行轉形 (Biosci. Rep. 2019, 39: BSR2018210)。細胞在恆定通氣與具有8000 Lx之光照強度的連續光照下在液體TAP 培養基中生長，直到細胞密度達到 1.0–2.0 × 107個細胞/mL。然後，以1.0 × 106個細胞/mL的濃度將細胞接種到的新鮮液體TAP培養基中，並在連續光照下生長18-20小時，直至細胞密度達到4.0 × 106 個細胞/mL。接下來，藉由在室溫下以1250 g離心5分鐘收集細胞，用含有60 mM 山梨糖醇（Sigma，美國）的預冷液體 TAP培養基洗滌並重新懸浮，並冰鎮10分鐘。然後，將250 µL細胞懸浮液（對應於5.0 × 107個細胞）放入具有100 ng質體DNA (400 ng/mL)之預冷的0.4 cm電穿孔比色皿中。使用BTX ECM830電穿孔設備 (1575 Ω, 50 μFD)，以 6個 500 V脈衝進行電穿孔，每個脈衝具有4 ms的脈衝長度與100 ms的脈衝間隔時間。電穿孔後，立即將比色皿置於冰上10 分鐘。最後，將細胞懸浮液轉移到含有10 mL具有60 mM山梨糖醇的新鮮液體 TAP 培養基的50 ml 錐形離心管中，通過緩慢振盪在昏暗的光線下隔夜恢復。隔夜恢復後，重新收集細胞並用澱粉包埋法將其塗盤到含有氨芐青黴素 (100 mg/L) 或氯黴素 (100 mg/L) 的選擇性 1.5% (w/v) 瓊脂-TAP盤上。然後將盤在具有8000 Lx光強度的連續照明下在23 +-0.5°C下培養。5-7天後分析細胞。

在產生 UDP-半乳糖的一個例子中，萊茵衣藻細胞以包含編碼半乳糖激酶，例如來自阿拉伯芥( Arabidopsis thaliana)（KIN，UniProt ID Q9SEE5）與UDP-糖焦磷酸化酶，例如來自阿拉伯芥的 USP（UniProt ID Q9C5I1）的基因的轉錄單元進行修飾。

在產生 LN3 的例子中，組成型轉錄包含半乳糖苷 β-1,3-N-乙醯胺基葡糖轉移酶，例如來自腦膜炎雙球菌的lgtA (序列識別號22)。一個用於生產LNT的例子，將LN3生產的菌株進一步以包含N-乙醯葡萄糖胺β-1，3-半乳糖基轉移酶，例如，如來自大腸桿菌 O55:H7的WbgO (序列識別號23)的組成型轉錄單元進行修飾。在用於LNnT生產的一個例子中，LN3生產的菌株進一步以包含 N-乙醯葡糖胺 β-1，4-半乳糖基轉移酶，例來，如自腦膜炎雙球菌的lgtB (序列識別號24)的組成型轉錄單元進行修飾。

為了生產 GDP-岩藻糖，萊茵衣藻細胞以例如，如來自阿拉伯芥（GER1，UniProt ID O49213）之GDP-岩藻糖合成酶的轉錄單元進行修飾。

為了進一步產生具有LN3作為核心三糖的岩藻糖基化寡醣，可以表現質體修飾萊茵衣藻細胞，此表現質體包括 α-1,2-岩藻糖基轉移酶，例如，如來自幽門螺桿菌的HpFutC (序列識別號29) 及/或 α-1,3-岩藻糖基轉移酶，例如，如來自幽門螺桿菌的HpFucT (序列識別號30) 的組成型轉錄單元。

在接下來之步驟中，如表2與表3所列，具有序列識別號01、02、03、04、05、06、07、08、09、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97與98之膜蛋白，可以在上述突變菌株中進行評估。膜蛋白基因可以呈現在一適合之表現質體上，或者以組成型轉錄單元整合到宿主的基因組中進行評估。

需要表現的基因，無論是來自質體還是來自基因組，由以下公司之一合成合成：DNA2.0、Gen9、Twist Biosciences 或 IDT。

通過優化密碼子使用以適應表現宿主的密碼子使用，可以進一步促進表現。使用供應商的工具優化基因。

培養條件

萊茵衣藻細胞於選擇性 TAP 瓊脂盤中，在23 +/- 0.5°C，在具有8000 Lx之光照強度的14/10 小時光照/黑暗週期下培養。培養5至7天後分析細胞。

對於高密度培養，細胞可以在封閉系統中培養，例如：Chen et al. (Bioresour. Technol. 2011, 102: 71-81)與Johnson et al. (Biotechnol. Prog. 2018, 34: 811-827)描述的垂直或水平管光生物反應器、攪拌槽光生物反應器或平板光生物反應器。

解析分析

參見實施例4的這一部分。

實施例22.在萊茵衣藻( C. reinhardtii)宿主中測試膜蛋白的LN3產量

建立了一個實驗來評估具有序列識別號01、 02、 03、 04、 05、 06、 07、 08、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67、 68、 69、 70、 71、 72、 73、 74、 75、 76、 77、 78、 79、 80、 81、 82、 83、 84、 85、 86、 87、 88、 89、 90、 91、 92、 93、 94、 95、 96、 97 或98之膜蛋白其提高生長在補充有20 g/L乳糖的培養基（參見實施例21）中的宿主細胞的LN3產生的能力。候選基因藉由包括所述膜蛋白基因之一組成型轉錄單元(constitutive transcriptional unit)的基因組敲入(genomic knock-in)來呈現給LN3產生宿主。根據實施例21中提供的培養條件進行生長實驗。在每個表現具有序列識別號22之來自腦膜炎雙球菌的半乳糖苷β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶(LgtA)的LN3產生宿主中，評估LN3的產量。

實施例23.在萊茵衣藻宿主中測試膜蛋白的乳糖-N-四糖(LNT)產量

建立了一個實驗來評估具有序列識別號01、 02、 03、 04、 05、 06、 07、 08、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67、 68、 69、 70、 71、 72、 73、 74、 75、 76、 77、 78、 79、 80、 81、 82、 83、 84、 85、 86、 87、 88、 89、 90、 91、 92、 93、 94、 95、 96、 97 或98之膜蛋白其提高生長在補充有20 g/L乳糖的培養基（參見實施例21）中的宿主細胞的LN3及/或乳糖-N-四糖(LNT)產生的能力。候選基因藉由包括所述膜蛋白基因之一組成型轉錄單元的基因組敲入來呈現給LNT產生宿主。根據實施例21中提供的培養條件進行生長實驗。在每個表現具有序列識別號22之來自腦膜炎雙球菌的半乳糖苷β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶(LgtA)與具有序列識別號23之來自腦膜炎雙球菌的N-乙醯葡萄糖胺β-1,3-半乳糖基轉移酶 (wbgO)的LNT產生宿主中，評估LN3與LNT的產量。

實施例24. 萊茵衣藻宿主中鑑定提高乳糖-N-新四糖(LNnT)產量的膜蛋白

建立了一個實驗來評估具有序列識別號01、 02、 03、 04、 05、 06、 07、 08、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67、 68、 69、 70、 71、 72、 73、 74、 75、 76、 77、 78、 79、 80、 81、 82、 83、 84、 85、 86、 87、 88、 89、 90、 91、 92、 93、 94、 95、 96、 97 或98之膜蛋白其提高生長在補充有20 g/L乳糖的培養基（參見實施例21）中的宿主細胞的LN3及/或乳糖-N-新四糖(LNnT)產生的能力。候選基因藉由包括所述膜蛋白基因之一組成型轉錄單元的基因組敲入來呈現給LNnT產生宿主。根據實施例21中提供的培養條件進行生長實驗。在每個表現具有序列識別號22之來自腦膜炎雙球菌的半乳糖苷β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶(LgtA)與具有序列識別號24之來自腦膜炎雙球菌的N-乙醯葡萄糖胺β-1,4-半乳糖基轉移酶(LgtB)的LNnT產生宿主中，評估LN3與LNnT的產量。

實施例25. 材料與方法枯草芽孢桿菌( Bacillus subtilis)

培養基

使用了兩種不同的培養基，即富含 Luria肉湯(LB) 與用於搖瓶(MMsf) 的基本培養基。基本培養基使用微量元素混合物。

微量元素混合物由0.735 g/L CaCl2.2H2O、0.1 g/L MnCl2.2H2O、0.033 g/L CuCl2.2H2O、0.06 g/L CoCl2.6H2O、0.17 g/L ZnCl2、0.0311 g/L H3BO4、0.4 g/L Na2EDTA.2H2O與0.06 g/L Na2MoO4 組成。檸檬酸鐵溶液含有 0.135 g/L FeCl3.6H2O、1 g/L Na-檸檬酸鹽（Hoch 1973 PMC1212887）。

Luria肉湯(LB)培養基由1%胰蛋白腖(Difco, Erembodegem, Belgium)、0.5% 酵母萃取物 (Difco) 與0.5% 氯化鈉(VWR. Leuven, Belgium)組成。Luria肉湯瓊脂 (LBA)盤由LB培養基組成，添加了12 g/L瓊脂(Difco, Erembodegem, Belgium)。

搖瓶(MMsf)實驗的基本培養基含有2.00 g/L (NH4)2SO4、7.5 g/L KH2PO4、17.5 g/L K2HPO4、1.25 g/L 檸檬酸鈉、0.25 g/L MgSO4.7H2O、0.05 g/L 色氨酸、從10上至 30 g/L 葡萄糖或其他碳源，包括但不限於實施例中指定的果糖、麥芽糖、蔗糖、甘油與麥芽三糖、10 ml/L 微量元素混合物及10 ml/L 檸檬酸鐵溶液。以1M KOH 將培養基的pH值設置為7。根據實驗，添加乳糖(20 g/L)。

複合培養基，例如LB，藉由高壓滅菌（121°C，21'）來滅菌，而基本培養基藉由過濾（0.22 µm Sartorius）來滅菌。必要時，藉由添加抗生素（例如 zeocin (20mg/L)）使培養基具有選擇性。

菌株

枯草芽孢桿菌168，可在芽孢桿菌基因儲備中心 (Ohio, USA)獲得。

質體

使用如Popp et al.(Sci. Rep., 2017, 7, 15158)描述的綜合載體(Integrative vectors)作為表現載體，如有必要可進一步用於基因組整合。用於表現的合適啟動子可以來自部分存儲庫(part repository)(iGem)：序列id：Bba_K143012、Bba_K823000、Bba_K823002 或 Bba_K823003。可以使用 Gibson組裝、Golden Gate組裝、Cliva組裝、LCR或限制性連接進行選殖。在產生LN3的一個實例中，產生枯草芽孢桿菌突變株以包含編碼乳糖輸入蛋白（例如具有序列識別號52的大腸桿菌 lacY）的基因，並進一步包含包括半乳糖苷 β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶，例如，如來自腦膜炎雙球菌的lgtA (序列識別號22)的組成型轉錄單元。一個用於生產LNT的例子中，LN3生產的菌株進一步以包含一N-乙醯葡萄糖胺β-1,3-半乳糖基轉移酶，例如，如來自大腸桿菌O55:H7之WbgO(序列識別號23)的組成型轉錄單元來修飾。在 LNnT 生產的一個例子中，LN3生產的菌株進一步以包含 N-乙醯葡糖胺 β-1,4-半乳糖基轉移酶，例如，如來自腦膜炎雙球菌的lgtB (序列識別號24)的組成型轉錄單元來修飾。為了進一步產生具有LN3 作為核心三糖的岩藻糖基化寡醣，可以表現質體（或經由基因組敲入）修飾枯草芽孢桿菌細胞，該表現質體包含 α-1,2-岩藻糖基轉移酶，例如，如來自幽門螺桿菌的 HpFutC (序列識別號29) 及/或 α-1,3-岩藻糖基轉移酶，例如，如來自幽門螺桿菌的HpFucT (序列識別號30)的組成型轉錄單元。

在接下來的步驟中，如表2與表3所列具有序列識別號01、02、03、04、05、06、07、08、09、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、 21、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97與98之膜蛋白，可以在上述突變株中進行評估。膜蛋白基因可以呈現在此所述的一適合之表現質體上，或者以組成型轉錄單元整合到宿主的基因組中進行評估。

需要表現的基因，無論是來自質體還是來自基因組，均由以下公司之一合成：DNA2.0、Gen9、Twist Biosciences 或 IDT。

培養條件

96孔微量滴定盤實驗的預培養從冷凍管或 LB盤的單個菌落開始，在150 µL LB中，並以 800 rpm於定軌振盪器上在37°C下隔夜培養。該培養物被用作96孔方形微量滴定盤的接種物，以400 µL MMsf培養基稀釋400x。每個菌株在96孔板的多個孔中作為生物學複製品生長。然後將這些最終的96孔培養盤在37°C在定軌振盪器上以800 rpm培養72小時或更短或更長時間。

解析分析

參見實施例4 的這一部分。

實施例26.在枯草芽孢桿菌( B. subtilis)宿主中測試膜蛋白的LN3產量

建立了一個實驗來評估具有序列識別號01、 02、 03、 04、 05、 06、 07、 08、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67、 68、 69、 70、 71、 72、 73、 74、 75、 76、 77、 78、 79、 80、 81、 82、 83、 84、 85、 86、 87、 88、 89、 90、 91、 92、 93、 94、 95、 96、 97 或98之膜蛋白其提高生長在補充有20 g/L乳糖的培養基（參見實施例25）中的宿主細胞的LN3產生的能力。候選基因藉由包括所述膜蛋白基因之一組成型轉錄單元的基因組敲入來呈現給LN3產生宿主。根據實施例25中提供的培養條件進行生長實驗。在每個表現具有序列識別號22之來自腦膜炎雙球菌的半乳糖苷β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶(LgtA)的LN3產生宿主中，評估LN3的產量。

實施例27.在枯草桿菌宿主中測試膜蛋白的乳糖-N-四糖(LNT)產量

建立了一個實驗來評估具有序列識別號01、 02、 03、 04、 05、 06、 07、 08、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67、 68、 69、 70、 71、 72、 73、 74、 75、 76、 77、 78、 79、 80、 81、 82、 83、 84、 85、 86、 87、 88、 89、 90、 91、 92、 93、 94、 95、 96、 97或98之膜蛋白其提高生長在補充有20 g/L乳糖的培養基（參見實施例25）中的宿主細胞的LN3及/或乳糖-N-四糖(LNT)產生的能力。候選基因藉由包括所述膜蛋白基因之一組成型轉錄單元的基因組敲入來呈現給LNT產生宿主。根據實施例25中提供的培養條件進行生長實驗。在每個表現具有序列識別號22之來自腦膜炎雙球菌的半乳糖苷β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶(LgtA)與具有序列識別號23之來自腦膜炎雙球菌的N-乙醯葡萄糖胺β-1,3-半乳糖基轉移酶 (wbgO)的LNT產生宿主中，評估LN3與LNT的產量。

實施例28. 枯草桿菌宿主中鑑定提高乳糖-N-新四糖(LNnT)產量的膜蛋白

建立了一個實驗來評估具有序列識別號01、 02、 03、 04、 05、 06、 07、 08、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67、 68、 69、 70、 71、 72、 73、 74、 75、 76、 77、 78、 79、 80、 81、 82、 83、 84、 85、 86、 87、 88、 89、 90、 91、 92、 93、 94、 95、 96、 97或98之膜蛋白其提高生長在補充有20 g/L乳糖的培養基（參見實施例25）中的宿主細胞的LN3及/或乳糖-N-新四糖(LNnT)產生的能力。候選基因藉由包括所述膜蛋白基因之一組成型轉錄單元的基因組敲入來呈現給LNnT產生宿主。根據實施例25中提供的培養條件進行生長實驗。在每個表現具有序列識別號22之來自腦膜炎雙球菌的半乳糖苷β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶(LgtA)與具有序列識別號24之來自腦膜炎雙球菌的N-乙醯葡萄糖胺β-1,4-半乳糖基轉移酶(LgtB)的LNnT產生宿主中，評估LN3與LNnT的產量。

實施例29. 材料與方法麩胺酸棒狀桿菌( Corynebacterium glutamicum)

培養基

使用了兩種不同的培養基，即富含胰蛋白腖-酵母萃取物 (TY) 培養基與搖瓶基本培養基 (MMsf)。基本培養基使用 1000x 儲備微量元素混合物。

微量元素混合物由10 g/L CaCl2、10 g/L FeSO4.7H2O、10 g/L MnSO4.H2O、1 g/L ZnSO4.7H2O、0.2 g/L CuSO4、0.02 g/L NiCl2.6H2O、0.2 g/L 生物素 (pH 7.0) 與0.03 g/L原兒茶酸組成。

搖瓶(MMsf)實驗的基本培養基含有20 g/L (NH4)2SO4、5 g/L 尿素、1 g/L KH2PO4、1 g/L K2HPO4、0.25 g/L MgSO4.7H2O、42 g/ L MOPS，從10上至30 g/L葡萄糖或其他碳源，包括但不限於實施例中指定的果糖、麥芽糖、蔗糖、甘油與麥芽三糖及 1 ml/L 微量元素混合物。根據實驗，將乳糖 (20 g/L) 添加到培養基中。

TY培養基由1.6%胰蛋白腖(Difco, Erembodegem, Belgium)、1% 酵母提取物 (Difco)與0.5% 氯化鈉 (VWR. Leuven, Belgium) 組成。TY瓊脂(TYA)盤由TY培養基組成，添加了12 g/L瓊脂(Difco, Erembodegem, Belgium)。

複合培養基，例如TY，通過高壓滅菌（121°C，21'）來滅菌，而基本培養基藉由過濾（0.22 µm Sartorius）來滅菌。必要時，通過添加抗生素（例如卡那黴素、氨芐青黴素）使培養基具有選擇性。

菌株

麩胺酸棒狀桿菌 ATCC 13032，可在美國典型培養物保藏中心獲得。

質體

如Suzuki et al. (Appl. Microbiol. Biotechnol., 2005 Apr, 67(2):225-33)所述基於Cre/loxP技術的綜合質體載體與如Okibe et al. (Journal of Microbiological Methods 85, 2011, 155-163)所述的溫度敏感穿梭載體(temperature-sensitive shuttle vectors) 是針對基因缺失、突變和插入而構建的。用於(異源)基因表現的合適啟動子可以來自Yim et al. (Biotechnol. Bioeng., 2013 Nov, 110(11):2959-69)。可以使用Gibson組裝、Golden Gate組裝、Cliva組裝、LCR或限制性連接進行選殖。

在產生LN3的一個例子中，產生麩胺酸棒桿菌突變菌株以包含編碼乳糖輸入蛋白的基因（例如具有序列識別號52的大腸桿菌 lacY），並進一步包含包括半乳糖苷 β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶，例如，如來自腦膜炎雙球菌的 lgtA (序列識別號22)的組成型轉錄單元。一個用於生產LNT的例子中，LN3生產的菌株進一步以包含一N-乙醯葡萄糖胺β-1,3-半乳糖基轉移酶，例如，如來自大腸桿菌O55:H7之WbgO(序列識別號23)的組成型轉錄單元來修飾。在 LNnT 生產的一個例子中，LN3生產的菌株進一步以包含N-乙醯葡糖胺 β-1,4-半乳糖基轉移酶，例如，如來自腦膜炎雙球菌的lgtB (序列識別號24)的組成型轉錄單元來修飾。為了進一步產生具有LN3作為核心三糖的岩藻糖基化寡醣，可以表現質體（或經由基因組敲入）修飾麩胺酸棒桿菌細胞，該表現質體包含 α-1,2-岩藻糖基轉移酶，例如，如來自幽門螺桿菌的HpFutC (序列識別號29) 及/或 α-1,3-岩藻糖基轉移酶，例如，如來自幽門螺桿菌的HpFucT (序列識別號30)的組成型轉錄單元。

在接下來的步驟中，如表2與表3所列具有序列識別號01、02、03、04、05、06、07、08、09、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、 20、 21、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67、 68、 69、 70、 71、 72、 73、 74、 75、 76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97與98之膜蛋白，可以在上述突變株中進行評估。膜蛋白基因可以呈現在於此所述的一適合之表現質體上，或者以組成型轉錄單元整合到宿主的基因組中進行評估。

需要表現的基因，無論是來自質體還是來自基因組，均由以下公司之一合成：DNA2.0、Gen9、Twist Biosciences 或IDT。

通過將密碼子使用優化為表現宿主的密碼子使用，可以進一步促進表現。使用供應商的工具優化基因。

培養條件

96孔微量滴定盤實驗的預培養從冷凍管或TY盤的單個菌落開始，在150 µL TY中，並以 800 rpm於定軌振盪器上在37°C下隔夜培養。該培養物被用作96孔方形微量滴定盤的接種物，以400 µL MMsf 培養基稀釋400x。每個菌株在96孔板的多個孔中作為生物學複製品生長。然後將這些最終的96孔培養盤在37°C在定軌振盪器上以800 rpm培養72小時或更短或更長時間。

解析分析

參見示實施例4的這一部分。

實施例30.在麩胺酸棒狀桿菌( C. glutamicum)宿主中測試膜蛋白的LN3產量

建立了一個實驗來評估具有序列識別號01、 02、 03、 04、 05、 06、 07、 08、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67、 68、 69、 70、 71、 72、 73、 74、 75、 76、 77、 78、 79、 80、 81、 82、 83、 84、 85、 86、 87、 88、 89、 90、 91、 92、 93、 94、 95、 96、 97或98之膜蛋白其提高生長在補充有20 g/L乳糖的培養基（參見實施例29）中的宿主細胞的LN3產生的能力。如實施例29中所述，對每個菌株進行修飾用於LN3的產生。此外，藉由nagB、glmS與gamA基因的基因組敲除(genomic knock-out)與包括編碼來自大腸桿菌的乳糖通透酶(lactose permease) (LacY)（序列識別號52）、天然果糖-6-P-胺基轉移酶(native fructose-6-P-aminotransferase)(UniProt ID Q8NND3)、來自大腸桿菌 W (UniProt ID E0IXR1) 的蔗糖轉運蛋白(sucrose transporter) (CscB)、來自運動發酵單胞菌( Z. mobilis)運動發酵單胞菌的果糖激酶(fructose kinase) (Frk) (UniProt ID Q03417)與來自青春雙歧桿菌( B. adolescentis)的蔗糖磷酸化酶(sucrose phosphorylase) (BaSP) (UniProt ID A0ZZH6)之基因的一組成型轉錄單元的基因組敲入，每個菌株以蔗糖生長。候選基因藉由包括所述膜蛋白基因之一組成型轉錄單元的基因組敲入來呈現給LN3產生宿主。根據實施例29中提供的培養條件進行生長實驗。在每個表現具有序列識別號22之來自腦膜炎雙球菌的半乳糖苷β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶(LgtA)的LN3產生宿主中，評估LN3的產量。

實施例31.在麩胺酸棒狀桿菌宿主中測試膜蛋白的乳糖-N-四糖(LNT)產量

建立了一個實驗來評估具有序列識別號01、 02、 03、 04、 05、 06、 07、 08、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67、 68、 69、 70、 71、 72、 73、 74、 75、 76、 77、 78、 79、 80、 81、 82、 83、 84、 85、 86、 87、 88、 89、 90、 91、 92、 93、 94、 95、 96、 97或98之膜蛋白其提高生長在補充有20 g/L乳糖的培養基（參見實施例29）中的宿主細胞的LN3及/或乳糖-N-四糖(LNT)產生的能力。如實施例29中所述，對每個菌株進行修飾用於LN3的產生。此外，藉由nagB、glmS與gamA基因的基因組敲除與包括編碼來自大腸桿菌的乳糖通透酶 (LacY)（序列識別號52）、天然果糖-6-P-胺基轉移酶(UniProt ID Q8NND3)、來自大腸桿菌 W (UniProt ID E0IXR1) 的蔗糖轉運蛋白(CscB)、來自運動發酵單胞菌運動發酵單胞菌的果糖激酶 (Frk) (UniProt ID Q03417)與來自青春雙歧桿菌的蔗糖磷酸化酶(BaSP) (UniProt ID A0ZZH6)之基因的一組成型轉錄單元的基因組敲入，每個菌株以蔗糖生長。候選基因藉由包括所述膜蛋白基因之一組成型轉錄單元的基因組敲入來呈現給LNT產生宿主。根據實施例29中提供的培養條件進行生長實驗。在每個表現具有序列識別號22之來自腦膜炎雙球菌的半乳糖苷β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶(LgtA)與具有序列識別號23之來自腦膜炎雙球菌的N-乙醯葡萄糖胺β-1,3-半乳糖基轉移酶 (wbgO)的LNT產生宿主中，評估LN3與LNT的產量。

實施例32. 麩胺酸棒狀桿菌宿主中鑑定提高乳糖-N-新四糖(LNnT)產量的膜蛋白

建立了一個實驗來評估具有序列識別號01、 02、 03、 04、 05、 06、 07、 08、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67、 68、 69、 70、 71、 72、 73、 74、 75、 76、 77、 78、 79、 80、 81、 82、 83、 84、 85、 86、 87、 88、 89、 90、 91、 92、 93、 94、 95、 96、 97或98之膜蛋白其提高生長在補充有20 g/L乳糖的培養基（參見實施例29）中的宿主細胞的LN3及/或乳糖-N-新四糖(LNnT)產生的能力。如實施例29中所述，對每個菌株進行修飾用於LN3的產生。此外，藉由nagB、glmS與gamA基因的基因組敲除與包括編碼來自大腸桿菌的乳糖通透酶(LacY)（序列識別號52）、天然果糖-6-P-胺基轉移酶 (UniProt ID Q8NND3)、來自大腸桿菌 W (UniProt ID E0IXR1) 的蔗糖轉運蛋白(CscB)、來自運動發酵單胞菌運動發酵單胞菌的果糖激酶 (Frk) (UniProt ID Q03417)與來自青春雙歧桿菌的蔗糖磷酸化酶(BaSP) (UniProt ID A0ZZH6)之基因的一組成型轉錄單元的基因組敲入，每個菌株以蔗糖生長。候選基因藉由包括所述膜蛋白基因之一組成型轉錄單元的基因組敲入來呈現給LNnT產生宿主。根據實施例29中提供的培養條件進行生長實驗。在每個表現具有序列識別號22之來自腦膜炎雙球菌的半乳糖苷β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶(LgtA)與具有序列識別號24之來自腦膜炎雙球菌的N-乙醯葡萄糖胺β-1,4-半乳糖基轉移酶(LgtB)的LNnT產生宿主中，評估LN3與LNnT的產量。

實施例33. 材料與方法動物細胞

從不同哺乳動物的脂肪組織中之間充質幹細胞的分離

新鮮脂肪組織取自屠宰場（例如牛、豬、羊、雞、鴨、鯰魚、蛇、青蛙）或吸脂術（例如，在人類的情況下，在知情同意後），並保存在補充有抗生素的磷酸鹽緩衝鹽水中。對脂肪組織進行酶消化，然後離心以分離間充質幹細胞。將分離的間充質幹細胞轉移到細胞培養瓶中並在標準生長條件下生長，例如37°C，5% 二氧化碳。起始培養基包括DMEM-F12、RPMI與Alpha-MEM培養基（添加15%胎牛血清）與1%抗生素。在第一次繼代後，隨後將培養基更換為添加了 10% FBS（胎牛血清）的培養培養基。例如，為了所有目的引用全文併入於此之Ahmad與Shakoori (2013, Stem Cell Regen Med. 9(2): 29-36) 描述了於此實施例中描述的方法的某些變化。

從乳汁之間充質幹細胞的分離

該實施例說明了從在無菌條件下從人或任何其他哺乳動物，例如於此所述，收集的乳汁中分離間充質幹細胞。將等體積的磷酸鹽緩衝鹽水加入稀釋的牛奶中，然後離心 20 分鐘。將細胞沉澱以磷酸鹽緩衝鹽水洗滌三次，然後在標準培養條件下將細胞接種在細胞培養瓶中在具有10%胎牛血清與1%抗生素的DMEM-F12、RPMI與Alpha-MEM培養基中。例如，為了所有目的引用全文併入於此之Hassiotou et al. (2012, Stem Cells. 30(10): 2164-2174)描述了於此實施例中描述的方法的某些變化。

使用2D與3D培養系統之幹細胞的分化

分離的間充質細胞可以在2D與3D培養系統中分化成乳腺樣上皮細胞和管腔細胞。參見，例如Huynh et al. 1991. Exp Cell Res. 197(2): 191 -199; Gibson et al. 1991, In Vitro Cell Dev Biol Anim. 27(7): 585-594; Blatchford et al. 1999; Animal Cell Technology’: Basic & Applied Aspects, Springer, Dordrecht. 141-145; Williams et al. 2009, Breast Cancer Res 11(3): 26-43; and Arevalo et al. 2015, Am J Physiol Cell Physiol. 310(5): C348 - C356；為了所有目的，其各個引用全文併入於此。

對於2D培養，最初將分離的細胞接種在培養板中於補充有10 ng/ml上皮生長因子與5 pg/ml胰島素的生長培養基中。在匯合時，以補充有2%胎牛血清、1%青黴素-鏈黴素（100 U/ml 青黴素、100 ug/ml 鏈黴素）與5 pg/ml胰島素的生長培養基餵養細胞48小時。為了誘導分化，細胞以含有5 pg/ml胰島素、1 pg/ml氫皮質酮(hydrocortisone)、0.65 ng/ml三碘甲腺胺酸(triiodothyronine)、100 nM地塞米松(dexamethasone)與1 pg/ml泌乳素(prolactin)的完全生長培養基餵養。24小時後，從完全誘導培養基中除去血清。

對於3D培養，將分離的細胞用胰蛋白酶消化並在Matrigel、透明質酸或超低附著表面培養盤中培養 6 天，並通過添加補充有10 ng/ml上皮生長因子與5 pg/ml胰島素的生長培養基誘導分化與乳酸。在匯合時，以補充有2%胎牛血清、1%青黴素-鏈黴素（100 U/ml 青黴素、100 ug/ml 鏈黴素）與5 pg/ml胰島素的生長培養基餵養細胞48小時。為了誘導分化，細胞以含有5 pg/ml胰島素、1 pg/ml氫皮質酮、0.65 ng/ml三碘甲腺胺酸、100 nM地塞米松與1 pg/ml泌乳素的完全生長培養基餵養。24小時後，從完全誘導培養基中除去血清。

製備乳腺樣細胞的方法

通過以編碼 Oct4、Sox2、Klf4與c-Myc的病毒載體重新編程，哺乳動物細胞被引起以誘導多能性(pluripotency)。然後將得到的重編程細胞在Mammocult培養基（可從 Stem Cell Technologies 獲得）或乳腺細胞富集培養基（DMEM、3% FBS、雌激素、孕酮、肝素、氫皮質酮、胰島素、EGF）中培養，使它們成為乳腺樣的，從中可以誘導選定乳成分的表現。或者，使用 CRISPR/Cas9等重塑系統進行表觀遺傳重塑，以激活選擇的感興趣基因，如酪蛋白、α-乳白蛋白以為組成型地允許它們各自的蛋白質表現，及/或向下調節及/或敲除選擇內源基因，例如在WO21067641所述，為了所有目的，其引用全文併入於此。

培養

完整的生長培養基包括高葡萄糖DMEM/F12、10% FBS、1% NEAA、1% pen/strep、1% ITS-X、1% F-Glu、10 ng/ml EGF與5 pg/ml氫皮質酮。完整的泌乳培養基包括高葡萄糖 DMEM/F12、1% NEAA、1% pen/strep、1% ITS-X、1% F-Glu、10 ng/ml EGF、5 pg/ml氫皮質酮與1 pg/ml泌乳素（Hyunh 1991 中的 5ug/ml）。將細胞以 20,000個細胞/cm2的密度接種到膠原蛋白塗佈的燒瓶中在完全生長培養基中，並在完全生長培養基中粘附與擴張 48小時，然後將培養基換成完全泌乳培養基。暴露於泌乳培養基後，細胞開始分化並停止生長。在大約一週內，細胞開始將泌乳產物，如乳脂、乳糖、酪蛋白與乳清分泌到培養基中。可以藉由超過濾藉由濃縮或稀釋來實現所需的泌乳培養基的濃度。可以藉由透析來實現泌乳培養基的所需鹽平衡，例如，以從培養基中去除不需要的代謝產物。使用的荷爾蒙與其他生長因子可以藉由樹脂純化選擇性地萃取，例如使用鎳樹脂去除帶有 His 標籤的生長因子，以進一步降低乳酸產品中的污染物程度。

解析分析

參見示實施例4的這一部分。

實施例34. 在非乳腺成體幹細胞(non-mammary adult stem cell)中測試膜蛋白的LN3產量

建立了一個實驗來評估具有序列識別號01、 02、 03、 04、 05、 06、 07、 08、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67、 68、 69、 70、 71、 72、 73、 74、 75、 76、 77、 78、 79、 80、 81、 82、 83、 84、 85、 86、 87、 88、 89、 90、 91、 92、 93、 94、 95、 96、 97或98之膜蛋白其提高LN3產生的能力。如實施例33中所述，經分離的間充質細胞與重新編程(re-programmed)為乳腺樣細胞藉由CRISPR-CAS修飾以過表現來自智人的GlcN6P合成酶(GlcN6P synthase) (UniProt ID Q06210)、來自智人的6-磷酸葡萄糖胺 N-乙醯轉移酶(glucosamine 6-phosphate N-acetyltransferase) (UniProt ID Q96EK6)、來自智人的磷酸乙醯胺基葡萄糖變位酶(phosphoacetylglucosamine mutase) (UniProt ID O95394)、UDP-N-乙醯己糖胺焦磷酸化酶(UDP-N-acetylhexosamine pyrophosphorylase) (UniProt ID Q16222)與具有序列識別號22之來自腦膜炎雙球菌的半乳糖苷β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶(LgtA)。所有引入的基因都對宿主細胞進行密碼子最佳化(codon-optimized)。此外，將候選膜蛋白基因引入LN3產生宿主(CRISPR-CAS。根據實施例33中提供的培養條件進行生長實驗。在每個表現具有序列識別號22之來自腦膜炎雙球菌的半乳糖苷β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶(LgtA)的LN3產生宿主中，評估LN3的產量。

實施例35. 在非乳腺成體幹細胞中測試膜蛋白的乳糖-N-四糖(LNT)產量

建立了一個實驗來評估具有序列識別號01、 02、 03、 04、 05、 06、 07、 08、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67、 68、 69、 70、 71、 72、 73、 74、 75、 76、 77、 78、 79、 80、 81、 82、 83、 84、 85、 86、 87、 88、 89、 90、 91、 92、 93、 94、 95、 96、 97或98之膜蛋白其提高LN3及/或乳糖-N-四糖(LNT)產生的能力。如實施例33中所述，經分離的間充質細胞與重新編程為乳腺樣細胞藉由CRISPR-CAS修飾以過表現來自智人的GlcN6P合成酶 (UniProt ID Q06210)、來自智人的6-磷酸葡萄糖胺 N-乙醯轉移酶、來自智人的磷酸乙醯胺基葡萄糖變位酶(UniProt ID O95394)、UDP-N-乙醯己糖胺焦磷酸化酶(UniProt ID Q16222)、具有序列識別號22之來自腦膜炎雙球菌的半乳糖苷β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶(LgtA)與具有序列識別號23之來自腦膜炎雙球菌的N-乙醯葡萄糖胺β-1,3-半乳糖基轉移酶(wbgO)。所有引入的基因都對宿主細胞進行密碼子最佳化。此外，將候選膜蛋白基因引入LNT產生宿主(CRISPR-CAS)。根據實施例33中提供的培養條件進行生長實驗。在每個表現具有序列識別號22之來自腦膜炎雙球菌的半乳糖苷β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶(LgtA) 與具有序列識別號23之來自腦膜炎雙球菌的N-乙醯葡萄糖胺β-1,3-半乳糖基轉移酶 (wbgO)的LNT產生宿主中，評估LN3與LNT的產量。

實施例36. 在非乳腺成體幹細胞中鑑定提高乳糖-N-新四糖(LNnT)產量的膜蛋白

建立了一個實驗來評估具有序列識別號01、 02、 03、 04、 05、 06、 07、 08、 09、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 53、 54、 55、 56、 57、 58、 59、 60、 61、 62、 63、 64、 65、 66、 67、 68、 69、 70、 71、 72、 73、 74、 75、 76、 77、 78、 79、 80、 81、 82、 83、 84、 85、 86、 87、 88、 89、 90、 91、 92、 93、 94、 95、 96、 97或98之膜蛋白其提高LN3及/或乳糖-N-四糖(LNT)產生的能力。如實施例33中所述，經分離的間充質細胞與重新編程為乳腺樣細胞藉由CRISPR-CAS修飾以過表現來自智人的GlcN6P合成酶 (UniProt ID Q06210)、來自智人的6-磷酸葡萄糖胺 N-乙醯轉移酶、來自智人的磷酸乙醯胺基葡萄糖變位酶(UniProt ID O95394)、UDP-N-乙醯己糖胺焦磷酸化酶(UniProt ID Q16222)、具有序列識別號22之來自腦膜炎雙球菌的半乳糖苷β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶(LgtA)與具有序列識別號24之來自腦膜炎雙球菌的N-乙醯葡萄糖胺β-1,4-半乳糖基轉移酶(LgtB)。所有引入的基因都對宿主細胞進行密碼子最佳化。此外，將候選膜蛋白基因引入LNnT產生宿主(CRISPR-CAS)。根據實施例33中提供的培養條件進行生長實驗。在每個表現具有序列識別號22之來自腦膜炎雙球菌的半乳糖苷β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶(LgtA) 與具有序列識別號24之來自腦膜炎雙球菌的N-乙醯葡萄糖胺β-1,4-半乳糖基轉移酶(LgtB)的LNnT產生宿主中，評估LN3與LNnT的產量。

無

                         序列表
          <![CDATA[<110>  比利時商因比奥斯公司(Inbiose N.V.)]]>
          <![CDATA[<120>  在宿主細胞中產生包含 LN3 作為核心結構的寡醣]]>
          <![CDATA[<130>  035-TW]]>
          <![CDATA[<150>  EP21152592.8]]>
          <![CDATA[<151>  2021-01-20]]>
          <![CDATA[<160>  98    ]]>
          <![CDATA[<170>  PatentIn version 3.5]]>
          <![CDATA[<210>  1]]>
          <![CDATA[<211>  410]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  Cronobacter muytjensii]]>
          <![CDATA[<400>  1]]>
          Met Gln Thr His Ala Asn Arg Thr Gly Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Glu Gln Tyr Gln 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Val Glu Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Ala Gly Val Val Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Leu Ala Gln Thr Ile Glu Gln Phe Thr Val Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Ile Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Ala Ala Pro Trp Glu Met Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Ala Leu Ala Ala Ile Ser Phe Phe Gly Leu Trp Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Leu Gly Glu Lys Leu Ser Leu Arg Glu Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Lys Ala Val Leu Lys Asn Leu Arg Phe Val Ser Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Ile Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Val Ile Ile Ile Ser Gly Glu Gln Met Ser Thr Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Leu Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Lys Leu Thr Ala Arg Arg Ser Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Ile Met Gly Gly Trp Pro Ile Met Ala Gly Leu Ala Leu Ala Ala Phe 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Leu Leu Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Ile Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Ile Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Asp Ile Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Thr Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Trp Ile Gly Gly Gly Asn Gly Leu Phe Asn Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Ala Asn Gly Leu Leu Trp Leu Gly Leu Met Val Ile Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Thr Val Gly Ala Ser Arg Glu Gly 
                          405                 410 
          <![CDATA[<210>  2]]>
          <![CDATA[<211>  411]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  肺炎克雷伯氏菌(Yokenella regensburgei)  (ATCC43003)]]>
          <![CDATA[<400>  2]]>
          Met Gln Asn His Thr Leu Ser Gly Lys Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Glu Gln Tyr Gln 
                  35                  40                  45              
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              50                  55                  60                  
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          Leu Ala Thr Leu Leu Ala Gln Asn Ile Glu Gln Phe Thr Phe Leu Arg 
                      100                 105                 110         
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                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
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          145                 150                 155                 160 
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          Gly Arg Asp Tyr Ser Ala Val Leu Lys Asn Leu Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
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                      260                 265                 270         
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          Ser Val Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Leu Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Asp Met Ser Lys Gly Thr Val Ala Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Met Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Tyr Leu Leu Gly Gly Asn Gly Leu Phe Ser Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Ala Gly Gly Leu Val Trp Leu Val Leu Ile Val Tyr Phe Leu Lys 
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          Asp Lys Thr Val Gly Ala Ser Thr Lys Pro Asp 
                          405                 410     
          <![CDATA[<210>  3]]>
          <![CDATA[<211>  410]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  大腸桿菌菌株K12 (MG1655)]]>
          <![CDATA[<400>  3]]>
          Met Gln Asn Lys Leu Ala Ser Gly Ala Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Glu Gln Tyr Gln 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Ile Asp Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Ala Gly Val Val Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Ile Leu Leu Ala Gln Asn Ile Glu Gln Phe Thr Leu Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Ile Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Ile His Val Leu Pro Trp Glu Gly Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Ala Leu Ala Ala Ile Ser Phe Phe Gly Leu Gln Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Ile Gly Glu Lys Leu Ser Leu Lys Glu Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Lys Leu Val Leu Lys Asn Gly Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Leu Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Ile Ile Ile Ile Thr Gly Glu Gln Leu Ser Ser Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Ala Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Leu Leu Ala Arg Leu Thr Ser Arg Arg Thr Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Ile Met Gly Gly Trp Pro Ile Met Ile Gly Leu Leu Val Ala Ala Ala 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Ile Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Ile Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Leu Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Asp Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Ile Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Trp Leu Asn Gly Gly Asn Gly Leu Phe Asn Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Val Asn Gly Ile Leu Trp Leu Ser Leu Met Val Ile Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Gln Met Gly Asn Ser His Glu Gly 
                          405                 410 
          <![CDATA[<210>  4]]>
          <![CDATA[<211>  411]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  腸桿菌屬(Enterobacter sp.)]]>
          <![CDATA[<400>  4]]>
          Met Leu Asn Arg Ser Ser Ser Gly Thr Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Ala Gln Tyr Asn 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Ile Glu Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Thr Gly Val Ala Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Leu Ala Gln Thr Ile Glu Gln Phe Met Val Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Val Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Val Ala Pro Trp Glu Gly Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Val Leu Ala Ala Ile Ser Phe Tyr Gly Leu His Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Ile Gly Glu Lys Leu Ser Leu Gln Glu Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Lys Glu Val Leu Lys Asn Gly Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Ile Gly Phe Val Cys Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Val Ile Ile Ile Ser Gly Glu Asn Leu Ser Ser Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Val Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Ile Val Leu Ala Arg Leu Thr Ser Arg Arg Thr Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Ile Met Gly Gly Trp Pro Ile Val Ile Gly Leu Val Val Ala Ala Val 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Val Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Ile Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Leu Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Glu Val Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Phe Ser Ser Gly Gly Asn Gly Leu Phe Ser Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Val Asn Gly Leu Leu Trp Leu Ala Leu Met Phe Val Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Arg Val Gly Ser Ser Leu Gln Pro Gly 
                          405                 410     
          <![CDATA[<210>  5]]>
          <![CDATA[<211>  410]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  克氏檸檬酸桿菌(Citrobacter koseri) (Citrobacter diversus)]]>
          <![CDATA[<400>  5]]>
          Met Gln Asn Leu Ser Gln Thr Gly Val Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Glu Gln Tyr Gln 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Ile Asp Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Ala Gly Val Ile Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Leu Ala Gln Asn Ile Glu Gln Phe Thr Leu Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Val Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Val Leu Pro Trp Glu Gly Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Val Leu Ala Ala Ile Ala Phe Val Gly Leu Gln Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Leu Gly Glu Lys Leu Ser Leu Lys Glu Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Thr Leu Val Leu Lys Asn Val Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Leu Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Ile Ile Ile Ile Ser Gly Glu Gln Leu Ser Ser Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Val Phe Gly Ala Leu Ile Ala Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Arg Leu Thr Ser Arg Arg Thr Val Arg Ala Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Ile Met Gly Gly Trp Pro Ile Val Ala Gly Leu Leu Ile Ala Ala Ala 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Val Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Val Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Val Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Asp Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Tyr Leu Ser Gly Gly Asn Gly Leu Phe Ser Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Ala Asn Gly Ile Leu Trp Leu Leu Leu Met Val Ile Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Arg Val Gly Asp Ser Arg Glu Gly 
                          405                 410 
          <![CDATA[<210>  6]]>
          <![CDATA[<211>  410]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  Citrobacter youngae ATCC 29220]]>
          <![CDATA[<400>  6]]>
          Met Gln Asn Arg Leu Ser Ser Gly Ala Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Glu Gln Tyr Asn 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Leu Asp Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Thr Gly Val Leu Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Leu Ala Gln Asn Ile Glu Gln Phe Thr Phe Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Ile Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Ile Leu Pro Trp Glu Gly Met Phe Ile Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Ala Leu Ala Ser Ile Ser Phe Phe Gly Leu Gln Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Leu Gly Glu Lys Leu Ser Ile Lys Glu Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Lys Asp Tyr Lys Leu Val Leu Lys Asn Gly Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Leu Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Ile Ile Ile Ile Ser Gly Glu His Leu Ser Ser Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Ala Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Ala Leu Ala Arg Leu Thr Ser Arg Lys Thr Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Ile Met Gly Gly Trp Pro Ile Ala Val Gly Leu Val Ile Ala Ala Ala 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Val Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Val Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Leu Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Glu Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Leu Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Tyr Leu Leu Gly Gly Asn Gly Leu Phe Ser Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Ala Ser Gly Val Leu Trp Leu Ile Leu Met Val Ile Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Arg Val Gly Asn Ser Arg Lys Ile 
                          405                 410 
          <![CDATA[<210>  7]]>
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          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  大腸桿菌K12 MG1655]]>
          <![CDATA[<400>  7]]>
          Met Asn Lys Gln Ser Trp Leu Leu Asn Leu Ser Leu Leu Lys Thr His 
          1               5                   10                  15      
          Pro Ala Phe Arg Ala Val Phe Leu Ala Arg Phe Ile Ser Ile Val Ser 
                      20                  25                  30          
          Leu Gly Leu Leu Gly Val Ala Val Pro Val Gln Ile Gln Met Met Thr 
                  35                  40                  45              
          His Ser Thr Trp Gln Val Gly Leu Ser Val Thr Leu Thr Gly Gly Ala 
              50                  55                  60                  
          Met Phe Val Gly Leu Met Val Gly Gly Val Leu Ala Asp Arg Tyr Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Lys Lys Val Ile Leu Leu Ala Arg Gly Thr Cys Gly Ile Gly Phe 
                          85                  90                  95      
          Ile Gly Leu Cys Leu Asn Ala Leu Leu Pro Glu Pro Ser Leu Leu Ala 
                      100                 105                 110         
          Ile Tyr Leu Leu Gly Leu Trp Asp Gly Phe Phe Ala Ser Leu Gly Val 
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Leu Leu Ala Ala Thr Pro Ala Leu Val Gly Arg Glu Asn Leu 
              130                 135                 140                 
          Met Gln Ala Gly Ala Ile Thr Met Leu Thr Val Arg Leu Gly Ser Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ile Ser Pro Met Ile Gly Gly Leu Leu Leu Ala Thr Gly Gly Val Ala 
                          165                 170                 175     
          Trp Asn Tyr Gly Leu Ala Ala Ala Gly Thr Phe Ile Thr Leu Leu Pro 
                      180                 185                 190         
          Leu Leu Ser Leu Pro Ala Leu Pro Pro Pro Pro Gln Pro Arg Glu His 
                  195                 200                 205             
          Pro Leu Lys Ser Leu Leu Ala Gly Phe Arg Phe Leu Leu Ala Ser Pro 
              210                 215                 220                 
          Leu Val Gly Gly Ile Ala Leu Leu Gly Gly Leu Leu Thr Met Ala Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Ala Val Arg Val Leu Tyr Pro Ala Leu Ala Asp Asn Trp Gln Met Ser 
                          245                 250                 255     
          Ala Ala Gln Ile Gly Phe Leu Tyr Ala Ala Ile Pro Leu Gly Ala Ala 
                      260                 265                 270         
          Ile Gly Ala Leu Thr Ser Gly Lys Leu Ala His Ser Ala Arg Pro Gly 
                  275                 280                 285             
          Leu Leu Met Leu Leu Ser Thr Leu Gly Ser Phe Leu Ala Ile Gly Leu 
              290                 295                 300                 
          Phe Gly Leu Met Pro Met Trp Ile Leu Gly Val Val Cys Leu Ala Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Phe Gly Trp Leu Ser Ala Val Ser Ser Leu Leu Gln Tyr Thr Met Leu 
                          325                 330                 335     
          Gln Thr Gln Thr Pro Glu Ala Met Leu Gly Arg Ile Asn Gly Leu Trp 
                      340                 345                 350         
          Thr Ala Gln Asn Val Thr Gly Asp Ala Ile Gly Ala Ala Leu Leu Gly 
                  355                 360                 365             
          Gly Leu Gly Ala Met Met Thr Pro Val Ala Ser Ala Ser Ala Ser Gly 
              370                 375                 380                 
          Phe Gly Leu Leu Ile Ile Gly Val Leu Leu Leu Leu Val Leu Val Glu 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Arg His Phe Arg Gln Thr Pro Pro Gln Val Thr Ala Ser Asp Ser 
                          405                 410                 415     
          <![CDATA[<210>  8]]>
          <![CDATA[<211>  405]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  大腸桿菌K12 MG1655]]>
          <![CDATA[<400>  8]]>
          Met Ala Thr Ala Trp Tyr Lys Gln Val Asn Pro Pro Gln Arg Lys Ala 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Ser Ala Trp Leu Gly Tyr Val Phe Asp Gly Phe Asp Phe Met 
                      20                  25                  30          
          Met Ile Phe Tyr Ile Leu His Ile Ile Lys Ala Asp Leu Gly Ile Thr 
                  35                  40                  45              
          Asp Ile Gln Ala Thr Leu Ile Gly Thr Val Ala Phe Ile Ala Arg Pro 
              50                  55                  60                  
          Ile Gly Gly Gly Phe Phe Gly Ala Met Ala Asp Lys Tyr Gly Arg Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Met Met Met Trp Ala Ile Phe Ile Tyr Ser Val Gly Thr Gly Leu 
                          85                  90                  95      
          Ser Gly Ile Ala Thr Asn Leu Tyr Met Leu Ala Val Cys Arg Phe Ile 
                      100                 105                 110         
          Val Gly Leu Gly Met Ser Gly Glu Tyr Ala Cys Ala Ser Thr Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Val Glu Ser Trp Pro Lys Asn Leu Gln Ser Lys Ala Ser Ala Phe Leu 
              130                 135                 140                 
          Val Ser Gly Phe Ser Val Gly Asn Ile Ile Ala Ala Gln Ile Ile Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Gln Phe Ala Glu Val Tyr Gly Trp Arg Asn Ser Phe Phe Ile Gly Leu 
                          165                 170                 175     
          Leu Pro Val Leu Leu Val Leu Trp Ile Arg Lys Ser Ala Pro Glu Ser 
                      180                 185                 190         
          Gln Glu Trp Ile Glu Asp Lys Tyr Lys Asp Lys Ser Thr Phe Leu Ser 
                  195                 200                 205             
          Val Phe Arg Lys Pro His Leu Ser Ile Ser Met Ile Val Phe Leu Val 
              210                 215                 220                 
          Cys Phe Cys Leu Phe Gly Ala Asn Trp Pro Ile Asn Gly Leu Leu Pro 
          225                 230                 235                 240 
          Ser Tyr Leu Ala Asp Asn Gly Val Asn Thr Val Val Ile Ser Thr Leu 
                          245                 250                 255     
          Met Thr Ile Ala Gly Leu Gly Thr Leu Thr Gly Thr Ile Phe Phe Gly 
                      260                 265                 270         
          Phe Val Gly Asp Lys Ile Gly Val Lys Lys Ala Phe Val Val Gly Leu 
                  275                 280                 285             
          Ile Thr Ser Phe Ile Phe Leu Cys Pro Leu Phe Phe Ile Ser Val Lys 
              290                 295                 300                 
          Asn Ser Ser Leu Ile Gly Leu Cys Leu Phe Gly Leu Met Phe Thr Asn 
          305                 310                 315                 320 
          Leu Gly Ile Ala Gly Leu Val Pro Lys Phe Ile Tyr Asp Tyr Phe Pro 
                          325                 330                 335     
          Thr Lys Leu Arg Gly Leu Gly Thr Gly Leu Ile Tyr Asn Leu Gly Ala 
                      340                 345                 350         
          Thr Gly Gly Met Ala Ala Pro Val Leu Ala Thr Tyr Ile Ser Gly Tyr 
                  355                 360                 365             
          Tyr Gly Leu Gly Val Ser Leu Phe Ile Val Thr Val Ala Phe Ser Ala 
              370                 375                 380                 
          Leu Leu Ile Leu Leu Val Gly Phe Asp Ile Pro Gly Lys Ile Tyr Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Ser Val Ala Lys 
                          405 
          <![CDATA[<210>  9]]>
          <![CDATA[<211>  416]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  大腸桿菌K12 MG1655]]>
          <![CDATA[<400>  9]]>
          Met Ser Leu Ala Lys Ala Ser Leu Trp Thr Ala Ala Ser Thr Leu Val 
          1               5                   10                  15      
          Lys Ile Gly Ala Gly Leu Leu Val Gly Lys Leu Leu Ala Val Ser Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Pro Ala Gly Leu Gly Leu Ala Ala Asn Phe Arg Gln Leu Ile Thr 
                  35                  40                  45              
          Val Leu Gly Val Leu Ala Gly Ala Gly Ile Phe Asn Gly Val Thr Lys 
              50                  55                  60                  
          Tyr Val Ala Gln Tyr His Asp Asn Pro Gln Gln Leu Arg Arg Val Val 
          65                  70                  75                  80  
          Gly Thr Ser Ser Ala Met Val Leu Gly Phe Ser Thr Leu Met Ala Leu 
                          85                  90                  95      
          Val Phe Val Leu Ala Ala Ala Pro Ile Ser Gln Gly Leu Phe Gly Asn 
                      100                 105                 110         
          Thr Asp Tyr Gln Gly Leu Val Arg Leu Val Ala Leu Val Gln Met Gly 
                  115                 120                 125             
          Ile Ala Trp Gly Asn Leu Leu Leu Ala Leu Met Lys Gly Phe Arg Asp 
              130                 135                 140                 
          Ala Ala Gly Asn Ala Leu Ser Leu Ile Val Gly Ser Leu Ile Gly Val 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Ala Tyr Tyr Val Ser Tyr Arg Leu Gly Gly Tyr Glu Gly Ala Leu 
                          165                 170                 175     
          Leu Gly Leu Ala Leu Ile Pro Ala Leu Val Val Ile Pro Ala Ala Ile 
                      180                 185                 190         
          Met Leu Ile Lys Arg Gly Val Ile Pro Leu Ser Tyr Leu Lys Pro Ser 
                  195                 200                 205             
          Trp Asp Asn Gly Leu Ala Gly Gln Leu Ser Lys Phe Thr Leu Met Ala 
              210                 215                 220                 
          Leu Ile Thr Ser Val Thr Leu Pro Val Ala Tyr Ile Met Met Arg Lys 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Leu Ala Ala Gln Tyr Ser Trp Asp Glu Val Gly Ile Trp Gln Gly 
                          245                 250                 255     
          Val Ser Ser Ile Ser Asp Ala Tyr Leu Gln Phe Ile Thr Ala Ser Phe 
                      260                 265                 270         
          Ser Val Tyr Leu Leu Pro Thr Leu Ser Arg Leu Thr Glu Lys Arg Asp 
                  275                 280                 285             
          Ile Thr Arg Glu Val Val Lys Ser Leu Lys Phe Val Leu Pro Ala Val 
              290                 295                 300                 
          Ala Ala Ala Ser Phe Thr Val Trp Leu Leu Arg Asp Phe Ala Ile Trp 
          305                 310                 315                 320 
          Leu Leu Leu Ser Asn Lys Phe Thr Ala Met Arg Asp Leu Phe Ala Trp 
                          325                 330                 335     
          Gln Leu Val Gly Asp Val Leu Lys Val Gly Ala Tyr Val Phe Gly Tyr 
                      340                 345                 350         
          Leu Val Ile Ala Lys Ala Ser Leu Arg Phe Tyr Ile Leu Ala Glu Val 
                  355                 360                 365             
          Ser Gln Phe Thr Leu Leu Met Val Phe Ala His Trp Leu Ile Pro Ala 
              370                 375                 380                 
          His Gly Ala Leu Gly Ala Ala Gln Ala Tyr Met Ala Thr Tyr Ile Val 
          385                 390                 395                 400 
          Tyr Phe Ser Leu Cys Cys Gly Val Phe Leu Leu Trp Arg Arg Arg Ala 
                          405                 410                 415     
          <![CDATA[<210>  10]]>
          <![CDATA[<211>  110]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  大腸桿菌MG1655]]>
          <![CDATA[<400>  10]]>
          Met Asn Pro Tyr Ile Tyr Leu Gly Gly Ala Ile Leu Ala Glu Val Ile 
          1               5                   10                  15      
          Gly Thr Thr Leu Met Lys Phe Ser Glu Gly Phe Thr Arg Leu Trp Pro 
                      20                  25                  30          
          Ser Val Gly Thr Ile Ile Cys Tyr Cys Ala Ser Phe Trp Leu Leu Ala 
                  35                  40                  45              
          Gln Thr Leu Ala Tyr Ile Pro Thr Gly Ile Ala Tyr Ala Ile Trp Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Val Gly Ile Val Leu Ile Ser Leu Leu Ser Trp Gly Phe Phe Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Arg Leu Asp Leu Pro Ala Ile Ile Gly Met Met Leu Ile Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Gly Val Leu Ile Ile Asn Leu Leu Ser Arg Ser Thr Pro His 
                      100                 105                 110 
          <![CDATA[<210>  11]]>
          <![CDATA[<211>  507]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  長雙歧桿菌嬰兒亞種 (長雙歧桿菌嬰兒亞種 ATCC 15697)]]>
          <![CDATA[<400>  11]]>
          Met Ser Asn Glu Asn Thr Ala Val Gly Asp Val Arg Lys Lys Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Leu Gly Gln Arg Ile Ala Tyr Ala Cys Gly Asn Leu Gly Gln Ala Ala 
                      20                  25                  30          
          Phe Tyr Asn Ala Met Ser Thr Tyr Phe Val Thr Tyr Val Thr Ser Cys 
                  35                  40                  45              
          Leu Phe Val Ser Tyr Ser Lys Ala Leu Ala Ala Gln Met Ile Ala Val 
              50                  55                  60                  
          Ile Thr Gly Leu Ile Val Val Ile Arg Ile Ala Glu Ile Phe Ile Asp 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Leu Leu Gly Asn Leu Val Asp Asn Thr Thr Thr Lys Trp Gly Arg 
                          85                  90                  95      
          Phe Arg Pro Trp Gln Phe Ile Gly Gly Leu Val Ser Ser Val Leu Ile 
                      100                 105                 110         
          Met Leu Ile Phe Ser Gly Met Phe Gly Leu Val Asn Val Asn Thr Thr 
                  115                 120                 125             
          Leu Phe Ile Val Leu Phe Val Ile Thr Phe Ile Val Leu Asp Val Phe 
              130                 135                 140                 
          Tyr Ser Leu Arg Asp Ile Ser Tyr Trp Gly Met Ile Pro Ala Leu Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Asp Ser His Glu Arg Ser Thr Tyr Thr Ala Leu Gly Thr Phe Thr 
                          165                 170                 175     
          Gly Ser Ile Gly Tyr Asn Gly Ile Thr Val Ile Val Ile Pro Ile Val 
                      180                 185                 190         
          Ser Tyr Phe Thr Trp Thr Phe Thr Gly Ala Lys Gly Gln Gly Gln Ala 
                  195                 200                 205             
          Gly Trp Thr Ser Phe Gly Phe Ile Val Ala Leu Leu Gly Leu Ile Thr 
              210                 215                 220                 
          Ala Trp Ala Val Ala Phe Gly Thr Lys Glu Ser Thr Asn Ala Leu Arg 
          225                 230                 235                 240 
          Ala Lys Ala Gln Lys Asn Gly Asn Pro Phe Glu Ala Phe Lys Ala Leu 
                          245                 250                 255     
          Phe Gln Asn Asp Gln Leu Leu Trp Val Ala Leu Ser Tyr Leu Leu Tyr 
                      260                 265                 270         
          Ala Ile Ala Asn Val Ile Thr Thr Gly Val Met Tyr Tyr Leu Phe Val 
                  275                 280                 285             
          Phe Val Leu Asp Glu Pro Ala Ala Phe Ser Val Thr Gly Ile Ile Pro 
              290                 295                 300                 
          Leu Ile Ala Gly Phe Ile Met Ala Pro Leu Tyr Pro Ile Leu Asn Arg 
          305                 310                 315                 320 
          Trp Ile Pro Arg Arg Tyr Leu Phe Ala Gly Gly Met Val Ser Met Ile 
                          325                 330                 335     
          Ile Gly Tyr Thr Met Leu Ala Leu Phe Ser Ser Asn Leu Pro Val Val 
                      340                 345                 350         
          Ile Val Ala Leu Ile Phe Phe Tyr Val Pro Ala Gln Phe Ile Gln Met 
                  355                 360                 365             
          Thr Ala Ile Leu Ser Leu Thr Asp Ser Ile Glu Tyr Gly Gln Leu Lys 
              370                 375                 380                 
          Asn Gly Lys Arg Asn Glu Ala Val Thr Leu Ser Val Arg Pro Met Leu 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Ile Gly Gly Ala Met Ser Asn Gly Val Val Gly Ala Val Ala 
                          405                 410                 415     
          Leu Ala Ala Gly Met Thr Gly His Ala Thr Ala Ala Asp Met Thr Ala 
                      420                 425                 430         
          Ser Asn Ile Thr Thr Phe Lys Thr Phe Ala Phe Tyr Ile Pro Leu Val 
                  435                 440                 445             
          Leu Ile Ile Leu Ser Leu Val Val Phe Trp Phe Lys Val Lys Ile Asp 
              450                 455                 460                 
          Glu Lys Met His Ala Gln Ile Val Asp Glu Leu Glu Ala Lys Leu Ala 
          465                 470                 475                 480 
          Ser Gly Glu Ile Val Asp Asp Glu Ala Gln Thr Val Glu Ala Val Glu 
                          485                 490                 495     
          Ala Ile Asn Glu Glu Thr Pro Ala Ala Lys Asn 
                      500                 505         
          <![CDATA[<210>  12]]>
          <![CDATA[<211>  405]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  長雙歧桿菌嬰兒亞種(菌株 ATCC 15697)]]>
          <![CDATA[<400>  12]]>
          Met Ala Leu Asp Val Gly Lys Ala Leu Lys Ser Lys Thr Leu Val Val 
          1               5                   10                  15      
          Gly Val Leu Ser Met Ser Leu Leu Met Ser Ala Ser Asn Ala Val Ser 
                      20                  25                  30          
          Gly Thr Ile Pro Ala Met Lys Glu Ala Phe Ser Asp Tyr Ser Ala Ala 
                  35                  40                  45              
          Asn Val Glu Leu Leu Thr Thr Val Pro Thr Ile Gly Ser Met Val Gly 
              50                  55                  60                  
          Thr Ala Leu Thr Gly Leu Phe Ala Asn Ala Ile Gly Arg Lys Lys Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ala Met Ala Gly Phe Leu Ile Ser Ala Val Thr Gly Val Ile Pro Ala 
                          85                  90                  95      
          Phe Phe Pro Tyr Tyr Trp Pro Ile Leu Ile Ser Arg Met Phe Phe Gly 
                      100                 105                 110         
          Phe Gly Ser Ala Leu Phe Val Thr Leu Ser Val Ser Tyr Ile Thr Asp 
                  115                 120                 125             
          Leu Tyr Asp Gly Asp Met Gln Arg Lys Leu Leu Gly Trp Arg Gln Ala 
              130                 135                 140                 
          Val Gly Asn Leu Gly Asp Val Val Leu Leu Phe Val Ala Ser Leu Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Ile Thr Ile Asn Trp Gln Ser Thr Tyr Leu Ile Phe Phe Leu Leu Phe 
                          165                 170                 175     
          Val Pro Met Val Leu Val Gly Met Phe Ile Pro Lys Glu Phe Asp Asn 
                      180                 185                 190         
          Phe Ser Ile Arg Ser Ala Leu Val Asp Asp Glu Gly His Val Val Asp 
                  195                 200                 205             
          Lys Ser Ala Ser Gln Lys Gln Thr Thr Asn Trp Gln Val Leu Trp Leu 
              210                 215                 220                 
          Ala Phe Ile Phe Leu Val Val Ser Met Leu Tyr Asn Val Met Ser Ile 
          225                 230                 235                 240 
          Lys Leu Ala Ser Tyr Val Val Asp Glu Gly Ile Gly Ser Ala Ser Leu 
                          245                 250                 255     
          Ala Thr Leu Ile Phe Ser Phe Leu Val Val Ala Thr Ile Leu Ser Gly 
                      260                 265                 270         
          Val Leu Phe Asp Lys Val Ala Lys Val Thr Lys Arg Leu Thr Val Thr 
                  275                 280                 285             
          Ile Ser Glu Val Val Ile Gly Ile Cys Phe Ile Ala Thr Ala Leu Thr 
              290                 295                 300                 
          Lys Asn Val Pro Leu Met Phe Ala Leu Val Leu Ile Ala Gly Phe Ala 
          305                 310                 315                 320 
          Trp Gly Ile Ile Asn Pro Ala Leu Thr Ala Arg Phe Val Asp Tyr Ser 
                          325                 330                 335     
          Pro Ala His Ser Met Asn Leu Thr Thr Ser Ile Val Ile Ile Gly Ile 
                      340                 345                 350         
          Asn Ile Gly Cys Leu Ile Ser Pro Tyr Phe Phe Ala Leu Thr Ala Ser 
                  355                 360                 365             
          Ile Phe Gly Asn Ser Ser Ala Gly Phe Ala Ile Ile Val Gly Gly Ala 
              370                 375                 380                 
          Leu Tyr Leu Val Met Val Val Ile Glu Leu Ile Thr Leu Lys Val Asp 
          385                 390                 395                 400 
          Lys Lys Leu Thr Val 
                          405 
          <![CDATA[<210>  13]]>
          <![CDATA[<211>  407]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  長雙歧桿菌嬰兒亞種(菌株 ATCC 15697)]]>
          <![CDATA[<400>  13]]>
          Met Ser Lys Ile Ile Asn Tyr Ser Glu Val Leu Glu Ser Lys Arg Leu 
          1               5                   10                  15      
          Met Val Gly Val Leu Ser Val Ser Phe Leu Leu Ser Ala Gly Asn Ala 
                      20                  25                  30          
          Ile Ser Gly Thr Ile Pro Ala Met Glu Glu Ala Phe Ser Asn Ile Ser 
                  35                  40                  45              
          Lys Ala Asn Ile Glu Thr Leu Thr Thr Ile Pro Thr Ala Gly Ile Met 
              50                  55                  60                  
          Leu Gly Thr Val Leu Ser Gly Val Phe Ser Asn Tyr Leu Gly Lys Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Lys Ser Val Leu Ala Gly Leu Ile Ile Ala Leu Val Gly Gly Val Ile 
                          85                  90                  95      
          Pro Ala Phe Leu Pro Gln Tyr Trp Pro Ile Phe Ile Ser Arg Phe Leu 
                      100                 105                 110         
          Phe Gly Val Gly Met Gly Ile Phe Asn Pro Leu Ser Val Ser Tyr Ile 
                  115                 120                 125             
          Thr Asp Leu Tyr Val Gly Asp Arg Gln Arg Ser Leu Leu Gly Tyr Arg 
              130                 135                 140                 
          Asn Ala Val Ser Asn Leu Gly Asp Thr Ile Met Leu Phe Val Ala Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Ile Leu Ile Thr Phe Gly Trp Asn Ile Thr Tyr Leu Val Phe Phe Ala 
                          165                 170                 175     
          Leu Leu Ile Pro Ile Val Leu Ile Ile Leu Phe Val Pro Lys Glu Phe 
                      180                 185                 190         
          Asp Asn Phe Asp Ile Arg Asn Ser Ala Leu Asp Glu Asn Gly Gln Ile 
                  195                 200                 205             
          Ser Asp Ser Val Ser Asp Val Lys Pro Ser Thr Asn Leu Lys Val Ile 
              210                 215                 220                 
          Glu Val Gly Val Val Phe Met Val Ile Thr Met Leu Tyr Asn Ala Ile 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Leu Lys Phe Ala Ser Tyr Ile Val Thr Glu His Ile Gly Thr Ala 
                          245                 250                 255     
          Ser Thr Ala Thr Trp Ile Phe Ser Phe Leu Val Leu Ala Gly Ile Phe 
                      260                 265                 270         
          Ser Gly Val Leu Phe Glu Lys Ile Ser Lys Val Phe Lys Arg Leu Thr 
                  275                 280                 285             
          Val Phe Val Phe Glu Ile Val Ile Gly Val Ala Tyr Ile Thr Ile Ala 
              290                 295                 300                 
          Phe Thr Tyr Asn Ile Pro Leu Leu Thr Ala Leu Val Leu Ile Ser Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Phe Gly Trp Gly Ile Ile Asn Pro Ala Leu Thr Ala Arg Leu Val Asp 
                          325                 330                 335     
          Val Ser Pro Ile Asn Ser Met Asn Leu Ser Thr Ser Ile Ile Val Ile 
                      340                 345                 350         
          Phe Ile Ser Val Gly Ser Leu Ile Ser Pro Tyr Phe Phe Ala Met Phe 
                  355                 360                 365             
          Ala Gly Leu Phe Gly Asn Asp Ser Ala Ala Phe Ala Ile Val Val Gly 
              370                 375                 380                 
          Gly Ala Leu Tyr Val Val Met Ala Val Leu Asp Phe Ile Lys Ile Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Lys Asn Lys Glu Leu Ser Ile 
                          405         
          <![CDATA[<210>  14]]>
          <![CDATA[<211>  471]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  克雷伯氏肺炎桿菌(Klebsiella pneumoniae)]]>
          <![CDATA[<400>  14]]>
          Met Thr Glu Leu Pro Asp Ser Thr Arg Trp Gln Leu Trp Ile Val Ala 
          1               5                   10                  15      
          Phe Gly Phe Phe Met Gln Ser Leu Asp Thr Thr Ile Val Asn Thr Ala 
                      20                  25                  30          
          Leu Pro Ser Met Ala Leu Ser Leu Gly Glu Ser Pro Leu His Met His 
                  35                  40                  45              
          Met Val Val Val Ser Tyr Val Leu Thr Val Ala Val Met Leu Pro Ala 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Trp Leu Ala Asp Lys Val Gly Val Arg Asn Ile Phe Phe Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Ala Ile Val Leu Phe Thr Leu Gly Ser Leu Phe Cys Ala Trp Ser Ser 
                          85                  90                  95      
          Thr Leu Asn Glu Leu Val Leu Ala Arg Val Leu Gln Gly Val Gly Gly 
                      100                 105                 110         
          Ala Met Met Val Pro Val Gly Arg Leu Thr Val Met Lys Ile Val Pro 
                  115                 120                 125             
          Arg Glu Gln Tyr Met Ala Ala Met Thr Phe Val Thr Leu Pro Gly Gln 
              130                 135                 140                 
          Val Gly Pro Leu Leu Gly Pro Ala Leu Gly Gly Ile Leu Val Glu Tyr 
          145                 150                 155                 160 
          Ala Ser Trp His Trp Ile Phe Leu Ile Asn Ile Pro Val Gly Ile Val 
                          165                 170                 175     
          Gly Ala Ile Ala Thr Leu Met Leu Met Pro Asn Tyr Thr Met Gln Thr 
                      180                 185                 190         
          Arg Arg Phe Asp Leu Ser Gly Phe Leu Leu Leu Ala Val Gly Met Ala 
                  195                 200                 205             
          Val Leu Thr Leu Ala Leu Asp Gly Ser Lys Gly Thr Gly Leu Ser Pro 
              210                 215                 220                 
          Leu Ser Leu Gly Ala Leu Val Leu Cys Gly Ile Leu Ala Ile Ala Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Tyr Leu Lys His Ala Lys Asn Asn Pro Arg Ala Leu Phe Ser Leu Ala 
                          245                 250                 255     
          Leu Phe Arg Thr His Thr Phe Ser Leu Gly Leu Ser Gly Ser Phe Ala 
                      260                 265                 270         
          Gly Arg Val Gly Ser Gly Met Leu Pro Phe Met Thr Pro Val Phe Leu 
                  275                 280                 285             
          Gln Ile Gly Leu Gly Phe Ser Pro Phe His Ala Gly Leu Met Met Ile 
              290                 295                 300                 
          Pro Met Val Leu Gly Ser Met Gly Met Lys Arg Ile Val Val Gln Val 
          305                 310                 315                 320 
          Val Asn Arg Phe Gly Tyr Arg Arg Val Leu Val Ser Thr Thr Leu Gly 
                          325                 330                 335     
          Leu Ser Leu Val Ser Leu Leu Phe Met Ser Val Ala Met Leu Gly Trp 
                      340                 345                 350         
          Tyr Tyr Ala Leu Pro Phe Val Leu Phe Leu Gln Gly Met Val Asn Ser 
                  355                 360                 365             
          Thr Arg Phe Ser Ser Met Asn Thr Leu Thr Leu Lys Asp Leu Pro Asp 
              370                 375                 380                 
          Glu Leu Ala Ser Ser Gly Asn Ser Leu Leu Ser Met Ile Met Gln Leu 
          385                 390                 395                 400 
          Ser Met Ser Ile Gly Val Thr Ile Ala Gly Leu Leu Leu Gly Met Phe 
                          405                 410                 415     
          Gly Gln Gln His Ile Ala Ala Asp Ser Gly Ala Ser His Thr Val Phe 
                      420                 425                 430         
          Met Tyr Thr Trp Leu Cys Met Ala Leu Ile Ile Ala Leu Pro Ala Leu 
                  435                 440                 445             
          Ile Phe Ala Arg Val Pro Asn Asp Thr His Lys Asn Ala Val Ile Ser 
              450                 455                 460                 
          Arg Arg Lys Arg Ser Thr Gln 
          465                 470     
          <![CDATA[<210>  15]]>
          <![CDATA[<211>  375]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  長雙歧桿菌嬰兒亞種(菌株 ATCC 15697)]]>
          <![CDATA[<400>  15]]>
          Met Ala Glu Val Val Phe Asp His Val Thr Arg Ile Tyr Pro Gly Asn 
          1               5                   10                  15      
          Asp Lys Pro Ser Val Asp Asp Leu Asn Leu Asp Ile Lys Asp Gly Glu 
                      20                  25                  30          
          Phe Leu Val Leu Val Gly Pro Ser Gly Cys Gly Lys Ser Thr Thr Leu 
                  35                  40                  45              
          Arg Met Leu Ala Gly Leu Glu Glu Val Asn Lys Gly Arg Ile Leu Ile 
              50                  55                  60                  
          Gly Gly Lys Asp Val Thr Thr Met Gln Pro Lys Asp Arg Asp Ile Ala 
          65                  70                  75                  80  
          Met Val Phe Gln Asn Tyr Ala Leu Tyr Pro His Met Thr Val Ala Asp 
                          85                  90                  95      
          Asn Met Gly Phe Ala Leu Lys Ile Ala Gly Thr Pro Lys Asp Glu Ile 
                      100                 105                 110         
          Arg Lys Arg Val Glu Lys Ala Ala Glu Ile Leu Asp Leu Thr Glu Tyr 
                  115                 120                 125             
          Leu Asp Arg Lys Pro Lys Ala Leu Ser Gly Gly Gln Arg Gln Arg Val 
              130                 135                 140                 
          Ala Met Gly Arg Ala Ile Val Arg Glu Pro Lys Val Phe Leu Met Asp 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Pro Leu Ser Asn Leu Asp Ala Lys Leu Arg Val Gln Thr Arg Thr 
                          165                 170                 175     
          Gln Ile Ala Ala Leu Gln Arg Gln Leu Gly Val Thr Thr Leu Tyr Val 
                      180                 185                 190         
          Thr His Asp Gln Thr Glu Ala Leu Thr Met Gly Asp Arg Ile Ala Val 
                  195                 200                 205             
          Ile Lys Leu Gly Ile Leu Gln Gln Val Gly Ala Pro Thr Glu Leu Tyr 
              210                 215                 220                 
          Asp Arg Pro Ala Asn Val Phe Val Ala Gly Phe Ile Gly Ser Pro Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Met Asn Leu Asn Thr His Pro Val Val Asn Gly Lys Ala Lys Ile Gly 
                          245                 250                 255     
          Glu Asp Thr Val Asp Leu Pro Ala Glu Ala Val Asn Lys Leu Thr Ala 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Asn Gly Gln Ile Val Val Gly Phe Arg Pro Glu Asp Ala Gly 
                  275                 280                 285             
          Leu Ala Pro Val Asp Asp Pro Asn Ala Phe Ser Leu Lys Val Val Asn 
              290                 295                 300                 
          Val Glu Asp Leu Gly Ser Asp Gly Tyr Ile Tyr Gly Thr Ile Val Thr 
          305                 310                 315                 320 
          Asp Gly Ser Ala Ala Glu Ala Ser Gln Val Met Ser Asp Gln Asn Lys 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Thr Ile Arg Val Asn Pro Arg Ala Leu Pro Lys Val Gly Ala 
                      340                 345                 350         
          Thr Val Lys Ile Lys Ile Asp Pro Ala Lys Met His Leu Phe Ala Pro 
                  355                 360                 365             
          Ser Thr Glu Leu Arg Leu Asn 
              370                 375 
          <![CDATA[<210>  16]]>
          <![CDATA[<211>  306]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  大豆慢生根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)USDA 110]]>
          <![CDATA[<400>  16]]>
          Met Asn Met Ser Asn Met Ala Ile Asp Leu Val Gly Val Arg Lys Ser 
          1               5                   10                  15      
          Phe Gly Asp Lys Val Ile Val Asn Asp Leu Ser Phe Ser Val Ala Arg 
                      20                  25                  30          
          Gly Glu Cys Phe Gly Leu Leu Gly Pro Asn Gly Ala Gly Lys Ser Thr 
                  35                  40                  45              
          Ile Ala Arg Met Leu Leu Gly Met Ile Ser Pro Asp Arg Gly Lys Ile 
              50                  55                  60                  
          Thr Val Leu Asp Glu Pro Val Pro Ser Arg Ala Arg Ala Ala Arg Val 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Val Gly Val Val Pro Gln Phe Asp Asn Leu Glu Pro Glu Phe Thr 
                          85                  90                  95      
          Val Arg Glu Asn Leu Leu Val Phe Gly Arg Tyr Phe Gly Met Ser Ala 
                      100                 105                 110         
          Arg Thr Ile Glu Ala Val Val Pro Ser Leu Leu Glu Phe Ala Arg Leu 
                  115                 120                 125             
          Glu Ser Lys Ala Asp Val Arg Val Ser Leu Leu Ser Gly Gly Met Lys 
              130                 135                 140                 
          Arg Arg Leu Thr Leu Ala Arg Ala Leu Ile Asn Asp Pro His Leu Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Val Met Asp Glu Pro Thr Thr Gly Leu Asp Pro His Ala Arg His Leu 
                          165                 170                 175     
          Ile Trp Glu Arg Leu Arg Ala Leu Leu Ala Arg Gly Lys Thr Ile Leu 
                      180                 185                 190         
          Leu Thr Thr His Phe Met Glu Glu Ala Glu Arg Leu Cys Asp Arg Leu 
                  195                 200                 205             
          Cys Val Leu Glu Ser Gly Cys Lys Ile Ala Glu Gly Lys Pro Asp Ala 
              210                 215                 220                 
          Leu Ile Asp Glu His Ile Gly Cys Asn Val Ile Glu Ile Tyr Gly Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Asp Leu Asp Gln Leu Arg Glu Leu Ile Arg Pro Tyr Ala Arg His Ile 
                          245                 250                 255     
          Glu Val Ser Gly Glu Thr Leu Phe Cys Tyr Ala Arg Cys Pro Asp Glu 
                      260                 265                 270         
          Ile Ser Val His Leu Arg Gly Arg Thr Asp Leu Arg Val Leu Gln Arg 
                  275                 280                 285             
          Pro Pro Asn Leu Glu Asp Val Phe Leu Arg Leu Thr Gly Arg Glu Met 
              290                 295                 300                 
          Glu Lys 
          305     
          <![CDATA[<210>  17]]>
          <![CDATA[<211>  330]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  大腸桿菌 K12 MG1655]]>
          <![CDATA[<400>  17]]>
          Met Lys Ile Lys Asn Ile Leu Leu Thr Leu Cys Thr Ser Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Asn Val Ala Ala His Ala Lys Glu Val Lys Ile Gly Met Ala Ile 
                      20                  25                  30          
          Asp Asp Leu Arg Leu Glu Arg Trp Gln Lys Asp Arg Asp Ile Phe Val 
                  35                  40                  45              
          Lys Lys Ala Glu Ser Leu Gly Ala Lys Val Phe Val Gln Ser Ala Asn 
              50                  55                  60                  
          Gly Asn Glu Glu Thr Gln Met Ser Gln Ile Glu Asn Met Ile Asn Arg 
          65                  70                  75                  80  
          Gly Val Asp Val Leu Val Ile Ile Pro Tyr Asn Gly Gln Val Leu Ser 
                          85                  90                  95      
          Asn Val Val Lys Glu Ala Lys Gln Glu Gly Ile Lys Val Leu Ala Tyr 
                      100                 105                 110         
          Asp Arg Met Ile Asn Asp Ala Asp Ile Asp Phe Tyr Ile Ser Phe Asp 
                  115                 120                 125             
          Asn Glu Lys Val Gly Glu Leu Gln Ala Lys Ala Leu Val Asp Ile Val 
              130                 135                 140                 
          Pro Gln Gly Asn Tyr Phe Leu Met Gly Gly Ser Pro Val Asp Asn Asn 
          145                 150                 155                 160 
          Ala Lys Leu Phe Arg Ala Gly Gln Met Lys Val Leu Lys Pro Tyr Val 
                          165                 170                 175     
          Asp Ser Gly Lys Ile Lys Val Val Gly Asp Gln Trp Val Asp Gly Trp 
                      180                 185                 190         
          Leu Pro Glu Asn Ala Leu Lys Ile Met Glu Asn Ala Leu Thr Ala Asn 
                  195                 200                 205             
          Asn Asn Lys Ile Asp Ala Val Val Ala Ser Asn Asp Ala Thr Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Gly Ala Ile Gln Ala Leu Ser Ala Gln Gly Leu Ser Gly Lys Val Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Ile Ser Gly Gln Asp Ala Asp Leu Ala Gly Ile Lys Arg Ile Ala Ala 
                          245                 250                 255     
          Gly Thr Gln Thr Met Thr Val Tyr Lys Pro Ile Thr Leu Leu Ala Asn 
                      260                 265                 270         
          Thr Ala Ala Glu Ile Ala Val Glu Leu Gly Asn Gly Gln Glu Pro Lys 
                  275                 280                 285             
          Ala Asp Thr Thr Leu Asn Asn Gly Leu Lys Asp Val Pro Ser Arg Leu 
              290                 295                 300                 
          Leu Thr Pro Ile Asp Val Asn Lys Asn Asn Ile Lys Asp Thr Val Ile 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Asp Gly Phe His Lys Glu Ser Glu Leu 
                          325                 330 
          <![CDATA[<210>  18]]>
          <![CDATA[<211>  309]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  長雙歧桿菌嬰兒Bi-26]]>
          <![CDATA[<400>  18]]>
          Met Ser His Ala Thr Ala Thr Lys Thr Ala Ala Lys Lys Pro Ala Lys 
          1               5                   10                  15      
          Lys Lys Val Ser Ala Phe Ser Thr Arg Lys Val Asp Pro Ala Tyr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Trp Met Val Val Pro Ala Ala Ile Ile Phe Ala Phe Phe Leu Tyr Leu 
                  35                  40                  45              
          Pro Phe Leu Asp Gly Val Lys Tyr Ser Phe Thr Asn Ser Gln Gly Tyr 
              50                  55                  60                  
          Gly Asp Tyr Lys Phe Ile Gly Leu Lys Asn Tyr Ile Ala Leu Phe Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Asn Arg Val Gly His Ala Tyr Leu Phe Thr Phe Leu Ile Ala Ile 
                          85                  90                  95      
          Leu Ile Thr Val Leu Ile Asn Val Ile Ala Leu Phe Leu Ser Val Leu 
                      100                 105                 110         
          Leu Asn Ser Lys Ile Ala Phe Lys Asn Gly Phe Arg Ala Val Phe Phe 
                  115                 120                 125             
          Ile Pro Tyr Thr Leu Ser Val Leu Val Ile Gly Tyr Val Phe Lys Tyr 
              130                 135                 140                 
          Ile Phe Met Asn Pro Leu Pro Glu Leu Gly Lys Ala Leu Gly Ile Lys 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Leu Ser Thr Ser Leu Leu Thr Asn Glu Gln Leu Ser Trp Ile Pro 
                          165                 170                 175     
          Ile Val Phe Leu Ala Val Trp Gln Gly Ile Ala Tyr Ser Val Leu Ile 
                      180                 185                 190         
          Tyr Leu Ala Gly Leu Gln Thr Ile Asp Asp Glu Ile Tyr Glu Ala Ala 
                  195                 200                 205             
          Ala Ile Asp Gly Val Asn Ala Trp Gln Lys Phe Trp Lys Ile Thr Phe 
              210                 215                 220                 
          Pro Leu Ile Gly Pro Phe Phe Thr Ile Asn Leu Val Leu Ser Met Lys 
          225                 230                 235                 240 
          Asn Ala Leu Gly Thr Phe Asp Gln Val Val Ala Leu Thr Glu Gly Gly 
                          245                 250                 255     
          Pro Asn Ser Ser Thr Glu Thr Val Thr Tyr Leu Ile Trp Lys Gly Gly 
                      260                 265                 270         
          Leu Thr Gly Gly Glu Tyr Ala Tyr Gln Thr Ala Asn Ala Val Leu Phe 
                  275                 280                 285             
          Phe Ile Val Leu Ala Ile Ile Ala Phe Val Gln Leu Arg Ile Ser Arg 
              290                 295                 300                 
          Ser Gln Glu Gln Ile 
          305                 
          <![CDATA[<210>  19]]>
          <![CDATA[<211>  288]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  長雙歧桿菌嬰兒Bi-26]]>
          <![CDATA[<400>  19]]>
          Met Thr Thr Ala Thr Val Thr Pro Ser Lys Ser Gly Lys Pro Ala Lys 
          1               5                   10                  15      
          Phe Arg Arg Asp His Lys Ile Asn Trp Trp Leu Thr Ala Ala Val Ala 
                      20                  25                  30          
          Val Leu Ser Leu Thr Ile Leu Ile Pro Leu Tyr Phe Thr Ile Val Thr 
                  35                  40                  45              
          Ala Leu Lys Thr Pro Ala Glu Ala Gly Thr Phe Ala Leu Pro Thr Ser 
              50                  55                  60                  
          Trp Gln Trp His Asn Phe Ala Asp Ala Ser Ala Lys Val Asn Tyr Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Lys Ala Ala Leu Asn Ser Ala Ile Ile Thr Val Ala Ala Val Val Leu 
                          85                  90                  95      
          Thr Leu Leu Thr Asn Thr Phe Val Ala Tyr Ala Val Ala Arg Asn Met 
                      100                 105                 110         
          Asp Lys Arg Phe Phe Arg Phe Leu Tyr Tyr Phe Phe Ile Ala Ala Met 
                  115                 120                 125             
          Phe Val Pro Phe Pro Val Val Met Leu Pro Ile Ala Lys Gln Met Gly 
              130                 135                 140                 
          Ser Leu His Leu Asp Asn Gln Val Gly Leu Ile Ile Leu Tyr Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Gly Leu Gly Thr Asn Leu Phe Ile Ala Thr Gly Phe Ile Arg Ser 
                          165                 170                 175     
          Ile Pro Val Ser Leu Glu Glu Ala Ala Arg Ile Asp Gly Ala Ser Thr 
                      180                 185                 190         
          Trp Arg Ile Phe Trp Thr Ile Ile Phe Pro Leu Met Ser Pro Ile Asn 
                  195                 200                 205             
          Ala Thr Ile Ala Ile Leu Thr Ala Leu Trp Ala Trp Asn Asp Phe Leu 
              210                 215                 220                 
          Leu Pro Leu Ile Ile Leu Thr Asp Gln Ser Asn Gln Thr Ile Pro Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Ala Gln Tyr Val Phe Ser Ser Gln Phe Ala Thr Asn Tyr Pro Met Ala 
                          245                 250                 255     
          Phe Ser Ser Tyr Leu Met Ala Met Ala Pro Ile Leu Ile Val Tyr Ile 
                      260                 265                 270         
          Phe Ala Gln Lys Trp Val Val Gly Gly Val Met Arg Gly Ala Val Lys 
                  275                 280                 285             
          <![CDATA[<210>  20]]>
          <![CDATA[<211>  303]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  長雙歧桿菌嬰兒Bi-26]]>
          <![CDATA[<400>  20]]>
          Met Thr Asn Ala Thr Ala Gln Pro Asp Thr Ser Val Met Arg Lys Pro 
          1               5                   10                  15      
          Lys Arg Gln Tyr Ile Gly Ile Leu Tyr Cys Leu Pro Tyr Val Val Val 
                      20                  25                  30          
          Phe Leu Phe Gly Met Ile Val Pro Met Phe Tyr Ala Leu Tyr Leu Ser 
                  35                  40                  45              
          Phe Phe Lys Gln Ser Leu Leu Gly Gly Thr Thr Phe Ala Gly Phe Asp 
              50                  55                  60                  
          Asn Phe Ile Arg Ala Phe Lys Asp Glu Ala Leu Trp Gly Gly Phe Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Asn Val Leu Ile Tyr Ala Ala Ile Gln Ile Pro Met Asn Leu Ile Leu 
                          85                  90                  95      
          Ser Leu Val Ala Ala Leu Val Leu Asp Ser Gln Arg Ile Arg His Ile 
                      100                 105                 110         
          Ala Val Pro Arg Ile Leu Leu Phe Leu Pro Tyr Ala Val Pro Gly Val 
                  115                 120                 125             
          Ile Ala Ala Leu Met Trp Gly Tyr Ile Tyr Gly Asp Lys Tyr Gly Leu 
              130                 135                 140                 
          Phe Gly Gln Ile Ala Gly Met Phe Gly Val Ala Ala Pro Asn Met Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Lys Gln Leu Met Leu Phe Ala Ile Ala Asn Ile Cys Thr Trp Cys 
                          165                 170                 175     
          Phe Leu Gly Tyr Asn Met Leu Ile Tyr Tyr Ser Ala Leu Ile Gly Ile 
                      180                 185                 190         
          Pro Asn Asp Leu Tyr Glu Ser Ala Arg Ile Asp Gly Ala Ser Glu Leu 
                  195                 200                 205             
          Arg Ile Ala Trp Ser Val Lys Ile Pro Gln Ile Lys Ser Thr Ile Val 
              210                 215                 220                 
          Met Thr Val Leu Phe Ser Val Ile Gly Thr Leu Gln Leu Phe Asn Glu 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Asn Ile Leu Arg Thr Ser Ala Pro Asp Val Ile Asn Ser Ser Tyr 
                          245                 250                 255     
          Thr Pro Asn Ile Tyr Thr Tyr Asn Leu Ala Phe Asn Gly Gln Asn Val 
                      260                 265                 270         
          Asn Tyr Ala Ala Ala Val Ser Leu Val Ile Gly Ile Ile Val Met Ala 
                  275                 280                 285             
          Leu Val Ala Val Val Lys Ile Ile Gly Asn Lys Trp Glu Asn Lys 
              290                 295                 300             
          <![CDATA[<210>  21]]>
          <![CDATA[<211>  379]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  大腸桿菌K12 MG1655]]>
          <![CDATA[<400>  21]]>
          Met Met Lys Ser Lys Met Lys Leu Met Pro Leu Leu Val Ser Val Thr 
          1               5                   10                  15      
          Leu Ile Ser Gly Cys Thr Val Leu Pro Gly Ser Asn Met Ser Thr Met 
                      20                  25                  30          
          Gly Lys Asp Val Ile Lys Gln Gln Asp Ala Asp Phe Asp Leu Asp Lys 
                  35                  40                  45              
          Met Val Asn Val Tyr Pro Leu Thr Pro Arg Leu Ile Asp Gln Leu Arg 
              50                  55                  60                  
          Pro Arg Pro Asn Val Ala Arg Pro Asn Met Thr Leu Glu Ser Glu Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ala Asn Tyr Gln Tyr Arg Val Gly Pro Gly Asp Val Leu Asn Val Thr 
                          85                  90                  95      
          Val Trp Asp His Pro Glu Leu Thr Thr Pro Ala Gly Gln Tyr Arg Ser 
                      100                 105                 110         
          Ser Ser Asp Thr Gly Asn Trp Val Gln Pro Asp Gly Thr Met Phe Tyr 
                  115                 120                 125             
          Pro Tyr Ile Gly Lys Val His Val Val Gly Lys Thr Leu Ala Glu Ile 
              130                 135                 140                 
          Arg Ser Asp Ile Thr Gly Arg Leu Ala Thr Tyr Ile Ala Asp Pro Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Val Asp Val Asn Ile Ala Ala Phe Arg Ser Gln Lys Ala Tyr Ile Ser 
                          165                 170                 175     
          Gly Gln Val Asn Lys Ser Gly Gln Gln Ala Ile Thr Asn Val Pro Leu 
                      180                 185                 190         
          Thr Ile Leu Asp Ala Ile Asn Ala Ala Gly Gly Leu Thr Asp Thr Ala 
                  195                 200                 205             
          Asp Trp Arg Asn Val Val Leu Thr His Asn Gly Arg Glu Glu Arg Ile 
              210                 215                 220                 
          Ser Leu Gln Ala Leu Met Gln Asn Gly Asp Leu Asn Gln Asn Arg Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Tyr Pro Gly Asp Ile Leu Tyr Val Pro Arg Asn Asp Asp Leu Lys 
                          245                 250                 255     
          Val Phe Val Met Gly Glu Val Lys Lys Gln Ser Thr Leu Lys Met Asp 
                      260                 265                 270         
          Phe Ser Gly Met Thr Leu Thr Glu Ala Leu Gly Asn Ala Glu Gly Ile 
                  275                 280                 285             
          Asp Met Thr Thr Ser Asn Ala Ser Gly Ile Phe Val Ile Arg Pro Leu 
              290                 295                 300                 
          Lys Gly Glu Gly Gly Arg Asn Gly Lys Ile Ala Asn Ile Tyr Gln Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Asp Met Ser Asp Ala Thr Ser Leu Val Met Ala Thr Glu Phe Arg Leu 
                          325                 330                 335     
          Gln Pro Tyr Asp Val Val Tyr Val Thr Thr Ala Pro Val Ser Arg Trp 
                      340                 345                 350         
          Asn Arg Leu Ile Asn Gln Leu Leu Pro Thr Ile Ser Gly Val Arg Tyr 
                  355                 360                 365             
          Met Thr Asp Thr Ala Ser Asp Ile His Asn Trp 
              370                 375                 
          <![CDATA[<210>  22]]>
          <![CDATA[<211>  348]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  腦膜炎雙球菌]]>
          <![CDATA[<400>  22]]>
          Met Pro Ser Glu Ala Phe Arg Arg His Arg Ala Tyr Arg Glu Asn Lys 
          1               5                   10                  15      
          Leu Gln Pro Leu Val Ser Val Leu Ile Cys Ala Tyr Asn Val Glu Lys 
                      20                  25                  30          
          Tyr Phe Ala Gln Ser Leu Ala Ala Val Val Asn Gln Thr Trp Cys Asn 
                  35                  40                  45              
          Leu Asp Ile Leu Ile Val Asp Asp Gly Ser Thr Asp Gly Thr Leu Ala 
              50                  55                  60                  
          Ile Ala Gln Arg Phe Gln Glu Gln Asp Gly Arg Ile Lys Ile Leu Ala 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Ala Gln Asn Ser Gly Leu Ile Pro Ser Leu Asn Ile Gly Leu Asp 
                          85                  90                  95      
          Glu Leu Ala Lys Ser Gly Met Gly Glu Tyr Ile Ala Arg Thr Asp Ala 
                      100                 105                 110         
          Asp Asp Ile Ala Ala Pro Asp Trp Ile Glu Lys Ile Val Gly Glu Met 
                  115                 120                 125             
          Glu Lys Asp Arg Ser Ile Ile Ala Met Gly Ala Trp Leu Glu Val Leu 
              130                 135                 140                 
          Ser Glu Glu Lys Asp Gly Asn Arg Leu Ala Arg His His Glu His Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Lys Ile Trp Lys Lys Pro Thr Arg His Glu Asp Ile Ala Asp Phe Phe 
                          165                 170                 175     
          Pro Phe Gly Asn Pro Ile His Asn Asn Thr Met Ile Met Arg Arg Ser 
                      180                 185                 190         
          Val Ile Asp Gly Gly Leu Arg Tyr Asn Thr Glu Arg Asp Trp Ala Glu 
                  195                 200                 205             
          Asp Tyr Gln Phe Trp Tyr Asp Val Ser Lys Leu Gly Arg Leu Ala Tyr 
              210                 215                 220                 
          Tyr Pro Glu Ala Leu Val Lys Tyr Arg Leu His Ala Asn Gln Val Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Ser Lys Tyr Ser Ile Arg Gln His Glu Ile Ala Gln Gly Ile Gln Lys 
                          245                 250                 255     
          Thr Ala Arg Asn Asp Phe Leu Gln Ser Met Gly Phe Lys Thr Arg Phe 
                      260                 265                 270         
          Asp Ser Leu Glu Tyr Arg Gln Ile Lys Ala Val Ala Tyr Glu Leu Leu 
                  275                 280                 285             
          Glu Lys His Leu Pro Glu Glu Asp Phe Glu Arg Ala Arg Arg Phe Leu 
              290                 295                 300                 
          Tyr Gln Cys Phe Lys Arg Thr Asp Thr Leu Pro Ala Gly Val Trp Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Asp Phe Ala Ala Asn Gly Arg Met Arg Arg Leu Phe Thr Leu Arg Gln 
                          325                 330                 335     
          Tyr Phe Gly Ile Leu His Arg Leu Leu Lys Asn Arg 
                      340                 345             
          <![CDATA[<210>  23]]>
          <![CDATA[<211>  265]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  大腸桿菌 O55:H7]]>
          <![CDATA[<400>  23]]>
          Met Ile Ile Asp Glu Ala Glu Ser Ala Glu Ser Thr His Pro Val Val 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Ile Leu Pro Val Asn Lys Lys Asn Pro Phe Leu Asp Glu Ala 
                      20                  25                  30          
          Ile Asn Ser Ile Leu Ser Gln Thr Phe Ser Ser Phe Glu Ile Ile Ile 
                  35                  40                  45              
          Val Ala Asn Cys Cys Thr Asp Asp Phe Tyr Asn Glu Leu Lys His Lys 
              50                  55                  60                  
          Val Asn Asp Lys Ile Lys Leu Ile Arg Thr Asn Ile Ala Tyr Leu Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Ser Leu Asn Lys Ala Ile Asp Leu Ser Asn Gly Glu Phe Ile Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Met Asp Ser Asp Asp Ile Ser His Pro Asp Arg Phe Thr Lys Gln 
                      100                 105                 110         
          Val Asp Phe Leu Lys Asn Asn Pro Tyr Val Asp Val Val Gly Thr Asn 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Phe Ile Asp Asp Lys Gly Arg Glu Ile Asn Lys Thr Lys Leu 
              130                 135                 140                 
          Pro Glu Glu Asn Leu Asp Ile Val Lys Asn Leu Pro Tyr Lys Cys Cys 
          145                 150                 155                 160 
          Ile Val His Pro Ser Val Met Phe Arg Lys Lys Val Ile Ala Ser Ile 
                          165                 170                 175     
          Gly Gly Tyr Met Phe Ser Asn Tyr Ser Glu Asp Tyr Glu Leu Trp Asn 
                      180                 185                 190         
          Arg Leu Ser Leu Ala Lys Ile Lys Phe Gln Asn Leu Pro Glu Tyr Leu 
                  195                 200                 205             
          Phe Tyr Tyr Arg Leu His Glu Gly Gln Ser Thr Ala Lys Lys Asn Leu 
              210                 215                 220                 
          Tyr Met Val Met Val Asn Asp Leu Val Ile Lys Met Lys Cys Phe Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Thr Gly Asn Ile Asn Tyr Leu Phe Gly Gly Ile Arg Thr Ile Ala 
                          245                 250                 255     
          Ser Phe Ile Tyr Cys Lys Tyr Ile Lys 
                      260                 265 
          <![CDATA[<210>  24]]>
          <![CDATA[<211>  275]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  腦膜炎雙球菌MC58]]>
          <![CDATA[<400>  24]]>
          Met Gln Asn His Val Ile Ser Leu Ala Ser Ala Ala Glu Arg Arg Ala 
          1               5                   10                  15      
          His Ile Ala Asp Thr Phe Gly Arg His Gly Ile Pro Phe Gln Phe Phe 
                      20                  25                  30          
          Asp Ala Leu Met Pro Ser Glu Arg Leu Glu Gln Ala Met Ala Glu Leu 
                  35                  40                  45              
          Val Pro Gly Leu Ser Ala His Pro Tyr Leu Ser Gly Val Glu Lys Ala 
              50                  55                  60                  
          Cys Phe Met Ser His Ala Val Leu Trp Lys Gln Ala Leu Asp Glu Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Pro Tyr Ile Thr Val Phe Glu Asp Asp Val Leu Leu Gly Glu Gly 
                          85                  90                  95      
          Ala Glu Lys Phe Leu Ala Glu Asp Ala Trp Leu Gln Glu Arg Phe Asp 
                      100                 105                 110         
          Pro Asp Thr Ala Phe Ile Val Arg Leu Glu Thr Met Phe Met His Val 
                  115                 120                 125             
          Leu Thr Ser Pro Ser Gly Val Ala Asp Tyr Cys Gly Arg Ala Phe Pro 
              130                 135                 140                 
          Leu Leu Glu Ser Glu His Trp Gly Thr Ala Gly Tyr Ile Ile Ser Arg 
          145                 150                 155                 160 
          Lys Ala Met Arg Phe Phe Leu Asp Arg Phe Ala Ala Leu Pro Pro Glu 
                          165                 170                 175     
          Gly Leu His Pro Val Asp Leu Met Met Phe Ser Asp Phe Phe Asp Arg 
                      180                 185                 190         
          Glu Gly Met Pro Val Cys Gln Leu Asn Pro Ala Leu Cys Ala Gln Glu 
                  195                 200                 205             
          Leu His Tyr Ala Lys Phe His Asp Gln Asn Ser Ala Leu Gly Ser Leu 
              210                 215                 220                 
          Ile Glu His Asp Arg Leu Leu Asn Arg Lys Gln Gln Arg Arg Asp Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Ala Asn Thr Phe Lys His Arg Leu Ile Arg Ala Leu Thr Lys Ile 
                          245                 250                 255     
          Ser Arg Glu Arg Glu Lys Arg Arg Gln Arg Arg Glu Gln Phe Ile Val 
                      260                 265                 270         
          Pro Phe Gln 
                  275 
          <![CDATA[<210>  25]]>
          <![CDATA[<211>  609]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  大腸桿菌 K12 MG1655]]>
          <![CDATA[<400>  25]]>
          Met Cys Gly Ile Val Gly Ala Ile Ala Gln Arg Asp Val Ala Glu Ile 
          1               5                   10                  15      
          Leu Leu Glu Gly Leu Arg Arg Leu Glu Tyr Arg Gly Tyr Asp Ser Ala 
                      20                  25                  30          
          Gly Leu Ala Val Val Asp Thr Glu Gly His Met Thr Arg Leu Arg Arg 
                  35                  40                  45              
          Leu Gly Lys Val Gln Met Leu Ala Gln Ala Ala Glu Glu His Pro Leu 
              50                  55                  60                  
          His Gly Gly Thr Gly Ile Ala His Thr Arg Trp Ala Thr His Gly Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Ser Glu Val Asn Ala His Pro His Val Ser Glu His Ile Val Val 
                          85                  90                  95      
          Val His Asn Gly Ile Ile Glu Asn His Glu Pro Leu Arg Glu Glu Leu 
                      100                 105                 110         
          Lys Ala Arg Gly Tyr Thr Phe Val Ser Glu Thr Asp Thr Glu Val Ile 
                  115                 120                 125             
          Ala His Leu Val Asn Trp Glu Leu Lys Gln Gly Gly Thr Leu Arg Glu 
              130                 135                 140                 
          Ala Val Leu Arg Ala Ile Pro Gln Leu Arg Gly Ala Tyr Gly Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ile Met Asp Ser Arg His Pro Asp Thr Leu Leu Ala Ala Arg Ser Gly 
                          165                 170                 175     
          Ser Pro Leu Val Ile Gly Leu Gly Met Gly Glu Asn Phe Ile Ala Ser 
                      180                 185                 190         
          Asp Gln Leu Ala Leu Leu Pro Val Thr Arg Arg Phe Ile Phe Leu Glu 
                  195                 200                 205             
          Glu Gly Asp Ile Ala Glu Ile Thr Arg Arg Ser Val Asn Ile Phe Asp 
              210                 215                 220                 
          Lys Thr Gly Ala Glu Val Lys Arg Gln Asp Ile Glu Ser Asn Leu Gln 
          225                 230                 235                 240 
          Tyr Asp Ala Gly Asp Lys Gly Ile Tyr Cys His Tyr Met Gln Lys Glu 
                          245                 250                 255     
          Ile Tyr Glu Gln Pro Asn Ala Ile Lys Asn Thr Leu Thr Gly Arg Ile 
                      260                 265                 270         
          Ser His Gly Gln Val Asp Leu Ser Glu Leu Gly Pro Asn Ala Asp Glu 
                  275                 280                 285             
          Leu Leu Ser Lys Val Glu His Ile Gln Ile Leu Ala Cys Gly Thr Ser 
              290                 295                 300                 
          Tyr Asn Ser Gly Met Val Ser Arg Tyr Trp Phe Glu Ser Leu Ala Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Ile Pro Cys Asp Val Glu Ile Ala Ser Glu Phe Arg Tyr Arg Lys Ser 
                          325                 330                 335     
          Ala Val Arg Arg Asn Ser Leu Met Ile Thr Leu Ser Gln Ser Gly Glu 
                      340                 345                 350         
          Thr Ala Asp Thr Leu Ala Gly Leu Arg Leu Ser Lys Glu Leu Gly Tyr 
                  355                 360                 365             
          Leu Gly Ser Leu Ala Ile Cys Asn Val Pro Gly Ser Ser Leu Val Arg 
              370                 375                 380                 
          Glu Ser Asp Leu Ala Leu Met Thr Asn Ala Gly Thr Glu Ile Gly Val 
          385                 390                 395                 400 
          Ala Ser Thr Lys Ala Phe Thr Thr Gln Leu Thr Val Leu Leu Met Leu 
                          405                 410                 415     
          Val Ala Lys Leu Ser Arg Leu Lys Gly Leu Asp Ala Ser Ile Glu His 
                      420                 425                 430         
          Asp Ile Val His Gly Leu Gln Ala Leu Pro Ser Arg Ile Glu Gln Met 
                  435                 440                 445             
          Leu Ser Gln Asp Lys Arg Ile Glu Ala Leu Ala Glu Asp Phe Ser Asp 
              450                 455                 460                 
          Lys His His Ala Leu Phe Leu Ser Arg Gly Asp Gln Tyr Pro Ile Ala 
          465                 470                 475                 480 
          Leu Glu Gly Ala Leu Lys Leu Lys Glu Ile Ser Tyr Ile His Ala Glu 
                          485                 490                 495     
          Ala Tyr Ala Ala Gly Glu Leu Lys His Gly Pro Leu Ala Leu Ile Asp 
                      500                 505                 510         
          Ala Asp Met Pro Val Ile Val Val Ala Pro Asn Asn Glu Leu Leu Glu 
                  515                 520                 525             
          Lys Leu Lys Ser Asn Ile Glu Glu Val Arg Ala Arg Gly Gly Gln Leu 
              530                 535                 540                 
          Tyr Val Phe Ala Asp Gln Asp Ala Gly Phe Val Ser Ser Asp Asn Met 
          545                 550                 555                 560 
          His Ile Ile Glu Met Pro His Val Glu Glu Val Ile Ala Pro Ile Phe 
                          565                 570                 575     
          Tyr Thr Val Pro Leu Gln Leu Leu Ala Tyr His Val Ala Leu Ile Lys 
                      580                 585                 590         
          Gly Thr Asp Val Asp Gln Pro Arg Asn Leu Ala Lys Ser Val Thr Val 
                  595                 600                 605             
          Glu 
          <![CDATA[<210>  26]]>
          <![CDATA[<211>  338]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  大腸桿菌 K12 MG1655]]>
          <![CDATA[<400>  26]]>
          Met Arg Val Leu Val Thr Gly Gly Ser Gly Tyr Ile Gly Ser His Thr 
          1               5                   10                  15      
          Cys Val Gln Leu Leu Gln Asn Gly His Asp Val Ile Ile Leu Asp Asn 
                      20                  25                  30          
          Leu Cys Asn Ser Lys Arg Ser Val Leu Pro Val Ile Glu Arg Leu Gly 
                  35                  40                  45              
          Gly Lys His Pro Thr Phe Val Glu Gly Asp Ile Arg Asn Glu Ala Leu 
              50                  55                  60                  
          Met Thr Glu Ile Leu His Asp His Ala Ile Asp Thr Val Ile His Phe 
          65                  70                  75                  80  
          Ala Gly Leu Lys Ala Val Gly Glu Ser Val Gln Lys Pro Leu Glu Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Asp Asn Asn Val Asn Gly Thr Leu Arg Leu Ile Ser Ala Met Arg 
                      100                 105                 110         
          Ala Ala Asn Val Lys Asn Phe Ile Phe Ser Ser Ser Ala Thr Val Tyr 
                  115                 120                 125             
          Gly Asp Gln Pro Lys Ile Pro Tyr Val Glu Ser Phe Pro Thr Gly Thr 
              130                 135                 140                 
          Pro Gln Ser Pro Tyr Gly Lys Ser Lys Leu Met Val Glu Gln Ile Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Thr Asp Leu Gln Lys Ala Gln Pro Asp Trp Ser Ile Ala Leu Leu Arg 
                          165                 170                 175     
          Tyr Phe Asn Pro Val Gly Ala His Pro Ser Gly Asp Met Gly Glu Asp 
                      180                 185                 190         
          Pro Gln Gly Ile Pro Asn Asn Leu Met Pro Tyr Ile Ala Gln Val Ala 
                  195                 200                 205             
          Val Gly Arg Arg Asp Ser Leu Ala Ile Phe Gly Asn Asp Tyr Pro Thr 
              210                 215                 220                 
          Glu Asp Gly Thr Gly Val Arg Asp Tyr Ile His Val Met Asp Leu Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Asp Gly His Val Val Ala Met Glu Lys Leu Ala Asn Lys Pro Gly Val 
                          245                 250                 255     
          His Ile Tyr Asn Leu Gly Ala Gly Val Gly Asn Ser Val Leu Asp Val 
                      260                 265                 270         
          Val Asn Ala Phe Ser Lys Ala Cys Gly Lys Pro Val Asn Tyr His Phe 
                  275                 280                 285             
          Ala Pro Arg Arg Glu Gly Asp Leu Pro Ala Tyr Trp Ala Asp Ala Ser 
              290                 295                 300                 
          Lys Ala Asp Arg Glu Leu Asn Trp Arg Val Thr Arg Thr Leu Asp Glu 
          305                 310                 315                 320 
          Met Ala Gln Asp Thr Trp His Trp Gln Ser Arg His Pro Gln Gly Tyr 
                          325                 330                 335     
          Pro Asp 
          <![CDATA[<210>  27]]>
          <![CDATA[<211>  445]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  大腸桿菌 K12 MG1655]]>
          <![CDATA[<400>  27]]>
          Met Ser Asn Arg Lys Tyr Phe Gly Thr Asp Gly Ile Arg Gly Arg Val 
          1               5                   10                  15      
          Gly Asp Ala Pro Ile Thr Pro Asp Phe Val Leu Lys Leu Gly Trp Ala 
                      20                  25                  30          
          Ala Gly Lys Val Leu Ala Arg His Gly Ser Arg Lys Ile Ile Ile Gly 
                  35                  40                  45              
          Lys Asp Thr Arg Ile Ser Gly Tyr Met Leu Glu Ser Ala Leu Glu Ala 
              50                  55                  60                  
          Gly Leu Ala Ala Ala Gly Leu Ser Ala Leu Phe Thr Gly Pro Met Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Thr Pro Ala Val Ala Tyr Leu Thr Arg Thr Phe Arg Ala Glu Ala Gly 
                          85                  90                  95      
          Ile Val Ile Ser Ala Ser His Asn Pro Phe Tyr Asp Asn Gly Ile Lys 
                      100                 105                 110         
          Phe Phe Ser Ile Asp Gly Thr Lys Leu Pro Asp Ala Val Glu Glu Ala 
                  115                 120                 125             
          Ile Glu Ala Glu Met Glu Lys Glu Ile Ser Cys Val Asp Ser Ala Glu 
              130                 135                 140                 
          Leu Gly Lys Ala Ser Arg Ile Val Asp Ala Ala Gly Arg Tyr Ile Glu 
          145                 150                 155                 160 
          Phe Cys Lys Ala Thr Phe Pro Asn Glu Leu Ser Leu Ser Glu Leu Lys 
                          165                 170                 175     
          Ile Val Val Asp Cys Ala Asn Gly Ala Thr Tyr His Ile Ala Pro Asn 
                      180                 185                 190         
          Val Leu Arg Glu Leu Gly Ala Asn Val Ile Ala Ile Gly Cys Glu Pro 
                  195                 200                 205             
          Asn Gly Val Asn Ile Asn Ala Glu Val Gly Ala Thr Asp Val Arg Ala 
              210                 215                 220                 
          Leu Gln Ala Arg Val Leu Ala Glu Lys Ala Asp Leu Gly Ile Ala Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Asp Gly Asp Gly Asp Arg Val Ile Met Val Asp His Glu Gly Asn Lys 
                          245                 250                 255     
          Val Asp Gly Asp Gln Ile Met Tyr Ile Ile Ala Arg Glu Gly Leu Arg 
                      260                 265                 270         
          Gln Gly Gln Leu Arg Gly Gly Ala Val Gly Thr Leu Met Ser Asn Met 
                  275                 280                 285             
          Gly Leu Glu Leu Ala Leu Lys Gln Leu Gly Ile Pro Phe Ala Arg Ala 
              290                 295                 300                 
          Lys Val Gly Asp Arg Tyr Val Leu Glu Lys Met Gln Glu Lys Gly Trp 
          305                 310                 315                 320 
          Arg Ile Gly Ala Glu Asn Ser Gly His Val Ile Leu Leu Asp Lys Thr 
                          325                 330                 335     
          Thr Thr Gly Asp Gly Ile Val Ala Gly Leu Gln Val Leu Ala Ala Met 
                      340                 345                 350         
          Ala Arg Asn His Met Ser Leu His Asp Leu Cys Ser Gly Met Lys Met 
                  355                 360                 365             
          Phe Pro Gln Ile Leu Val Asn Val Arg Tyr Thr Ala Gly Ser Gly Asp 
              370                 375                 380                 
          Pro Leu Glu His Glu Ser Val Lys Ala Val Thr Ala Glu Val Glu Ala 
          385                 390                 395                 400 
          Ala Leu Gly Asn Arg Gly Arg Val Leu Leu Arg Lys Ser Gly Thr Glu 
                          405                 410                 415     
          Pro Leu Ile Arg Val Met Val Glu Gly Glu Asp Glu Ala Gln Val Thr 
                      420                 425                 430         
          Glu Phe Ala His Arg Ile Ala Asp Ala Val Lys Ala Val 
                  435                 440                 445 
          <![CDATA[<210>  28]]>
          <![CDATA[<211>  456]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  大腸桿菌 K12 MG1655]]>
          <![CDATA[<400>  28]]>
          Met Leu Asn Asn Ala Met Ser Val Val Ile Leu Ala Ala Gly Lys Gly 
          1               5                   10                  15      
          Thr Arg Met Tyr Ser Asp Leu Pro Lys Val Leu His Thr Leu Ala Gly 
                      20                  25                  30          
          Lys Ala Met Val Gln His Val Ile Asp Ala Ala Asn Glu Leu Gly Ala 
                  35                  40                  45              
          Ala His Val His Leu Val Tyr Gly His Gly Gly Asp Leu Leu Lys Gln 
              50                  55                  60                  
          Ala Leu Lys Asp Asp Asn Leu Asn Trp Val Leu Gln Ala Glu Gln Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gly Thr Gly His Ala Met Gln Gln Ala Ala Pro Phe Phe Ala Asp Asp 
                          85                  90                  95      
          Glu Asp Ile Leu Met Leu Tyr Gly Asp Val Pro Leu Ile Ser Val Glu 
                      100                 105                 110         
          Thr Leu Gln Arg Leu Arg Asp Ala Lys Pro Gln Gly Gly Ile Gly Leu 
                  115                 120                 125             
          Leu Thr Val Lys Leu Asp Asp Pro Thr Gly Tyr Gly Arg Ile Thr Arg 
              130                 135                 140                 
          Glu Asn Gly Lys Val Thr Gly Ile Val Glu His Lys Asp Ala Thr Asp 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Gln Arg Gln Ile Gln Glu Ile Asn Thr Gly Ile Leu Ile Ala Asn 
                          165                 170                 175     
          Gly Ala Asp Met Lys Arg Trp Leu Ala Lys Leu Thr Asn Asn Asn Ala 
                      180                 185                 190         
          Gln Gly Glu Tyr Tyr Ile Thr Asp Ile Ile Ala Leu Ala Tyr Gln Glu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Glu Ile Val Ala Val His Pro Gln Arg Leu Ser Glu Val Glu 
              210                 215                 220                 
          Gly Val Asn Asn Arg Leu Gln Leu Ser Arg Leu Glu Arg Val Tyr Gln 
          225                 230                 235                 240 
          Ser Glu Gln Ala Glu Lys Leu Leu Leu Ala Gly Val Met Leu Arg Asp 
                          245                 250                 255     
          Pro Ala Arg Phe Asp Leu Arg Gly Thr Leu Thr His Gly Arg Asp Val 
                      260                 265                 270         
          Glu Ile Asp Thr Asn Val Ile Ile Glu Gly Asn Val Thr Leu Gly His 
                  275                 280                 285             
          Arg Val Lys Ile Gly Thr Gly Cys Val Ile Lys Asn Ser Val Ile Gly 
              290                 295                 300                 
          Asp Asp Cys Glu Ile Ser Pro Tyr Thr Val Val Glu Asp Ala Asn Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ala Ala Ala Cys Thr Ile Gly Pro Phe Ala Arg Leu Arg Pro Gly Ala 
                          325                 330                 335     
          Glu Leu Leu Glu Gly Ala His Val Gly Asn Phe Val Glu Met Lys Lys 
                      340                 345                 350         
          Ala Arg Leu Gly Lys Gly Ser Lys Ala Gly His Leu Thr Tyr Leu Gly 
                  355                 360                 365             
          Asp Ala Glu Ile Gly Asp Asn Val Asn Ile Gly Ala Gly Thr Ile Thr 
              370                 375                 380                 
          Cys Asn Tyr Asp Gly Ala Asn Lys Phe Lys Thr Ile Ile Gly Asp Asp 
          385                 390                 395                 400 
          Val Phe Val Gly Ser Asp Thr Gln Leu Val Ala Pro Val Thr Val Gly 
                          405                 410                 415     
          Lys Gly Ala Thr Ile Ala Ala Gly Thr Thr Val Thr Arg Asn Val Gly 
                      420                 425                 430         
          Glu Asn Ala Leu Ala Ile Ser Arg Val Pro Gln Thr Gln Lys Glu Gly 
                  435                 440                 445             
          Trp Arg Arg Pro Val Lys Lys Lys 
              450                 455     
          <![CDATA[<210>  29]]>
          <![CDATA[<211>  299]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  幽門螺旋菌UA1234]]>
          <![CDATA[<400>  29]]>
          Met Ala Phe Lys Val Val Gln Ile Cys Gly Gly Leu Gly Asn Gln Met 
          1               5                   10                  15      
          Phe Gln Tyr Ala Phe Ala Lys Ser Leu Gln Lys His Ser Asn Thr Pro 
                      20                  25                  30          
          Val Leu Leu Asp Ile Thr Ser Phe Asp Trp Ser Asn Arg Lys Met Gln 
                  35                  40                  45              
          Leu Glu Leu Phe Pro Ile Asp Leu Pro Tyr Ala Ser Glu Lys Glu Ile 
              50                  55                  60                  
          Ala Ile Ala Lys Met Gln His Leu Pro Lys Leu Val Arg Asn Val Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Lys Cys Met Gly Phe Asp Arg Val Ser Gln Glu Ile Val Phe Glu Tyr 
                          85                  90                  95      
          Glu Pro Lys Leu Leu Lys Thr Ser Arg Leu Thr Tyr Phe Tyr Gly Tyr 
                      100                 105                 110         
          Phe Gln Asp Pro Arg Tyr Phe Asp Ala Ile Ser Pro Leu Ile Lys Gln 
                  115                 120                 125             
          Thr Phe Thr Leu Pro Pro Pro Pro Glu Asn Gly Asn Asn Lys Lys Lys 
              130                 135                 140                 
          Glu Glu Glu Tyr His Arg Lys Leu Ala Leu Ile Leu Ala Ala Lys Asn 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Val Phe Val His Ile Arg Arg Gly Asp Tyr Val Gly Ile Gly Cys 
                          165                 170                 175     
          Gln Leu Gly Ile Asp Tyr Gln Lys Lys Ala Leu Glu Tyr Met Ala Lys 
                      180                 185                 190         
          Arg Val Pro Asn Met Glu Leu Phe Val Phe Cys Glu Asp Leu Glu Phe 
                  195                 200                 205             
          Thr Gln Asn Leu Asp Leu Gly Tyr Pro Phe Met Asp Met Thr Thr Arg 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Glu Glu Glu Ala Tyr Trp Asp Met Leu Leu Met Gln Ser Cys 
          225                 230                 235                 240 
          Lys His Gly Ile Ile Ala Asn Ser Thr Tyr Ser Trp Trp Ala Ala Tyr 
                          245                 250                 255     
          Leu Ile Asn Asn Pro Glu Lys Ile Ile Ile Gly Pro Lys His Trp Leu 
                      260                 265                 270         
          Phe Gly His Glu Asn Ile Leu Cys Lys Glu Trp Val Lys Ile Glu Ser 
                  275                 280                 285             
          His Phe Glu Val Lys Ser Gln Lys Tyr Asn Ala 
              290                 295                 
          <![CDATA[<210>  30]]>
          <![CDATA[<211>  478]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  幽門螺旋菌UA1234]]>
          <![CDATA[<400>  30]]>
          Met Phe Gln Pro Leu Leu Asp Ala Tyr Val Glu Ser Ala Ser Ile Glu 
          1               5                   10                  15      
          Lys Met Ala Ser Lys Ser Pro Pro Pro Leu Lys Ile Ala Val Ala Asn 
                      20                  25                  30          
          Trp Trp Gly Asp Glu Glu Ile Lys Glu Phe Lys Asn Ser Val Leu Tyr 
                  35                  40                  45              
          Phe Ile Leu Ser Gln Arg Tyr Thr Ile Thr Leu His Gln Asn Pro Asn 
              50                  55                  60                  
          Glu Phe Ser Asp Leu Val Phe Gly Asn Pro Leu Gly Ser Ala Arg Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Ile Leu Ser Tyr Gln Asn Ala Lys Arg Val Phe Tyr Thr Gly Glu Asn 
                          85                  90                  95      
          Glu Ser Pro Asn Phe Asn Leu Phe Asp Tyr Ala Ile Gly Phe Asp Glu 
                      100                 105                 110         
          Leu Asp Phe Asn Asp Arg Tyr Leu Arg Met Pro Leu Tyr Tyr Asp Arg 
                  115                 120                 125             
          Leu His His Lys Ala Glu Ser Val Asn Asp Thr Thr Ala Pro Tyr Lys 
              130                 135                 140                 
          Leu Lys Asp Asn Ser Leu Tyr Ala Leu Lys Lys Pro Ser His Cys Phe 
          145                 150                 155                 160 
          Lys Glu Lys His Pro Asn Leu Cys Ala Val Val Asn Asp Glu Ser Asp 
                          165                 170                 175     
          Pro Leu Lys Arg Gly Phe Ala Ser Phe Val Ala Ser Asn Pro Asn Ala 
                      180                 185                 190         
          Pro Ile Arg Asn Ala Phe Tyr Asp Ala Leu Asn Ser Ile Glu Pro Val 
                  195                 200                 205             
          Thr Gly Gly Gly Ser Val Arg Asn Thr Leu Gly Tyr Asn Val Lys Asn 
              210                 215                 220                 
          Lys Asn Glu Phe Leu Ser Gln Tyr Lys Phe Asn Leu Cys Phe Glu Asn 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Gln Gly Tyr Gly Tyr Val Thr Glu Lys Ile Ile Asp Ala Tyr Phe 
                          245                 250                 255     
          Ser His Thr Ile Pro Ile Tyr Trp Gly Ser Pro Ser Val Ala Lys Asp 
                      260                 265                 270         
          Phe Asn Pro Lys Ser Phe Val Asn Val His Asp Phe Lys Asn Phe Asp 
                  275                 280                 285             
          Glu Ala Ile Asp Tyr Ile Lys Tyr Leu His Thr His Lys Asn Ala Tyr 
              290                 295                 300                 
          Leu Asp Met Leu Tyr Glu Asn Pro Leu Asn Thr Leu Asp Gly Lys Ala 
          305                 310                 315                 320 
          Tyr Phe Tyr Gln Asn Leu Ser Phe Lys Lys Ile Leu Ala Phe Phe Lys 
                          325                 330                 335     
          Thr Ile Leu Glu Asn Asp Thr Ile Tyr His Asp Asn Pro Phe Ile Phe 
                      340                 345                 350         
          Cys Arg Asp Leu Asn Glu Pro Leu Val Thr Ile Asp Asp Leu Arg Val 
                  355                 360                 365             
          Asn Tyr Asp Asp Leu Arg Val Asn Tyr Asp Asp Leu Arg Ile Asn Tyr 
              370                 375                 380                 
          Asp Asp Leu Arg Val Asn Tyr Asp Asp Leu Arg Ile Asn Tyr Asp Asp 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Arg Val Asn Tyr Asp Asp Leu Arg Val Asn Tyr Asp Asp Leu Arg 
                          405                 410                 415     
          Ile Asn Tyr Asp Asp Leu Arg Val Asn Tyr Asp Asp Leu Arg Val Asn 
                      420                 425                 430         
          Tyr Glu Arg Leu Leu Ser Lys Ala Thr Pro Leu Leu Glu Leu Ser Gln 
                  435                 440                 445             
          Asn Thr Thr Ser Lys Ile Tyr Arg Lys Ala Tyr Gln Lys Ser Leu Pro 
              450                 455                 460                 
          Leu Leu Arg Ala Ile Arg Arg Trp Val Lys Lys Leu Gly Leu 
          465                 470                 475             
          <![CDATA[<210>  31]]>
          <![CDATA[<211>  264]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  大腸桿菌 K12 MG1655]]>
          <![CDATA[<400>  31]]>
          Met Lys Gln Tyr Leu Glu Leu Met Gln Lys Val Leu Asp Glu Gly Thr 
          1               5                   10                  15      
          Gln Lys Asn Asp Arg Thr Gly Thr Gly Thr Leu Ser Ile Phe Gly His 
                      20                  25                  30          
          Gln Met Arg Phe Asn Leu Gln Asp Gly Phe Pro Leu Val Thr Thr Lys 
                  35                  40                  45              
          Arg Cys His Leu Arg Ser Ile Ile His Glu Leu Leu Trp Phe Leu Gln 
              50                  55                  60                  
          Gly Asp Thr Asn Ile Ala Tyr Leu His Glu Asn Asn Val Thr Ile Trp 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Glu Trp Ala Asp Glu Asn Gly Asp Leu Gly Pro Val Tyr Gly Lys 
                          85                  90                  95      
          Gln Trp Arg Ala Trp Pro Thr Pro Asp Gly Arg His Ile Asp Gln Ile 
                      100                 105                 110         
          Thr Thr Val Leu Asn Gln Leu Lys Asn Asp Pro Asp Ser Arg Arg Ile 
                  115                 120                 125             
          Ile Val Ser Ala Trp Asn Val Gly Glu Leu Asp Lys Met Ala Leu Ala 
              130                 135                 140                 
          Pro Cys His Ala Phe Phe Gln Phe Tyr Val Ala Asp Gly Lys Leu Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Cys Gln Leu Tyr Gln Arg Ser Cys Asp Val Phe Leu Gly Leu Pro Phe 
                          165                 170                 175     
          Asn Ile Ala Ser Tyr Ala Leu Leu Val His Met Met Ala Gln Gln Cys 
                      180                 185                 190         
          Asp Leu Glu Val Gly Asp Phe Val Trp Thr Gly Gly Asp Thr His Leu 
                  195                 200                 205             
          Tyr Ser Asn His Met Asp Gln Thr His Leu Gln Leu Ser Arg Glu Pro 
              210                 215                 220                 
          Arg Pro Leu Pro Lys Leu Ile Ile Lys Arg Lys Pro Glu Ser Ile Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Asp Tyr Arg Phe Glu Asp Phe Glu Ile Glu Gly Tyr Asp Pro His Pro 
                          245                 250                 255     
          Gly Ile Lys Ala Pro Val Ala Ile 
                      260                 
          <![CDATA[<210>  32]]>
          <![CDATA[<211>  391]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  大腸桿菌 K12 MG1655]]>
          <![CDATA[<400>  32]]>
          Met Gln Lys Leu Ile Asn Ser Val Gln Asn Tyr Ala Trp Gly Ser Lys 
          1               5                   10                  15      
          Thr Ala Leu Thr Glu Leu Tyr Gly Met Glu Asn Pro Ser Ser Gln Pro 
                      20                  25                  30          
          Met Ala Glu Leu Trp Met Gly Ala His Pro Lys Ser Ser Ser Arg Val 
                  35                  40                  45              
          Gln Asn Ala Ala Gly Asp Ile Val Ser Leu Arg Asp Val Ile Glu Ser 
              50                  55                  60                  
          Asp Lys Ser Thr Leu Leu Gly Glu Ala Val Ala Lys Arg Phe Gly Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Pro Phe Leu Phe Lys Val Leu Cys Ala Ala Gln Pro Leu Ser Ile 
                          85                  90                  95      
          Gln Val His Pro Asn Lys His Asn Ser Glu Ile Gly Phe Ala Lys Glu 
                      100                 105                 110         
          Asn Ala Ala Gly Ile Pro Met Asp Ala Ala Glu Arg Asn Tyr Lys Asp 
                  115                 120                 125             
          Pro Asn His Lys Pro Glu Leu Val Phe Ala Leu Thr Pro Phe Leu Ala 
              130                 135                 140                 
          Met Asn Ala Phe Arg Glu Phe Ser Glu Ile Val Ser Leu Leu Gln Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Val Ala Gly Ala His Pro Ala Ile Ala His Phe Leu Gln Gln Pro Asp 
                          165                 170                 175     
          Ala Glu Arg Leu Ser Glu Leu Phe Ala Ser Leu Leu Asn Met Gln Gly 
                      180                 185                 190         
          Glu Glu Lys Ser Arg Ala Leu Ala Ile Leu Lys Ser Ala Leu Asp Ser 
                  195                 200                 205             
          Gln Gln Gly Glu Pro Trp Gln Thr Ile Arg Leu Ile Ser Glu Phe Tyr 
              210                 215                 220                 
          Pro Glu Asp Ser Gly Leu Phe Ser Pro Leu Leu Leu Asn Val Val Lys 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Asn Pro Gly Glu Ala Met Phe Leu Phe Ala Glu Thr Pro His Ala 
                          245                 250                 255     
          Tyr Leu Gln Gly Val Ala Leu Glu Val Met Ala Asn Ser Asp Asn Val 
                      260                 265                 270         
          Leu Arg Ala Gly Leu Thr Pro Lys Tyr Ile Asp Ile Pro Glu Leu Val 
                  275                 280                 285             
          Ala Asn Val Lys Phe Glu Ala Lys Pro Ala Asn Gln Leu Leu Thr Gln 
              290                 295                 300                 
          Pro Val Lys Gln Gly Ala Glu Leu Asp Phe Pro Ile Pro Val Asp Asp 
          305                 310                 315                 320 
          Phe Ala Phe Ser Leu His Asp Leu Ser Asp Lys Glu Thr Thr Ile Ser 
                          325                 330                 335     
          Gln Gln Ser Ala Ala Ile Leu Phe Cys Val Glu Gly Asp Ala Thr Leu 
                      340                 345                 350         
          Trp Lys Gly Ser Gln Gln Leu Gln Leu Lys Pro Gly Glu Ser Ala Phe 
                  355                 360                 365             
          Ile Ala Ala Asn Glu Ser Pro Val Thr Val Lys Gly His Gly Arg Leu 
              370                 375                 380                 
          Ala Arg Val Tyr Asn Lys Leu 
          385                 390     
          <![CDATA[<210>  33]]>
          <![CDATA[<211>  456]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  大腸桿菌 K12 MG1655]]>
          <![CDATA[<400>  33]]>
          Met Lys Lys Leu Thr Cys Phe Lys Ala Tyr Asp Ile Arg Gly Lys Leu 
          1               5                   10                  15      
          Gly Glu Glu Leu Asn Glu Asp Ile Ala Trp Arg Ile Gly Arg Ala Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Glu Phe Leu Lys Pro Lys Thr Ile Val Leu Gly Gly Asp Val Arg 
                  35                  40                  45              
          Leu Thr Ser Glu Thr Leu Lys Leu Ala Leu Ala Lys Gly Leu Gln Asp 
              50                  55                  60                  
          Ala Gly Val Asp Val Leu Asp Ile Gly Met Ser Gly Thr Glu Glu Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Phe Ala Thr Phe His Leu Gly Val Asp Gly Gly Ile Glu Val Thr 
                          85                  90                  95      
          Ala Ser His Asn Pro Met Asp Tyr Asn Gly Met Lys Leu Val Arg Glu 
                      100                 105                 110         
          Gly Ala Arg Pro Ile Ser Gly Asp Thr Gly Leu Arg Asp Val Gln Arg 
                  115                 120                 125             
          Leu Ala Glu Ala Asn Asp Phe Pro Pro Val Asp Glu Thr Lys Arg Gly 
              130                 135                 140                 
          Arg Tyr Gln Gln Ile Asn Leu Arg Asp Ala Tyr Val Asp His Leu Phe 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Tyr Ile Asn Val Lys Asn Leu Thr Pro Leu Lys Leu Val Ile Asn 
                          165                 170                 175     
          Ser Gly Asn Gly Ala Ala Gly Pro Val Val Asp Ala Ile Glu Ala Arg 
                      180                 185                 190         
          Phe Lys Ala Leu Gly Ala Pro Val Glu Leu Ile Lys Val His Asn Thr 
                  195                 200                 205             
          Pro Asp Gly Asn Phe Pro Asn Gly Ile Pro Asn Pro Leu Leu Pro Glu 
              210                 215                 220                 
          Cys Arg Asp Asp Thr Arg Asn Ala Val Ile Lys His Gly Ala Asp Met 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Ile Ala Phe Asp Gly Asp Phe Asp Arg Cys Phe Leu Phe Asp Glu 
                          245                 250                 255     
          Lys Gly Gln Phe Ile Glu Gly Tyr Tyr Ile Val Gly Leu Leu Ala Glu 
                      260                 265                 270         
          Ala Phe Leu Glu Lys Asn Pro Gly Ala Lys Ile Ile His Asp Pro Arg 
                  275                 280                 285             
          Leu Ser Trp Asn Thr Val Asp Val Val Thr Ala Ala Gly Gly Thr Pro 
              290                 295                 300                 
          Val Met Ser Lys Thr Gly His Ala Phe Ile Lys Glu Arg Met Arg Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Glu Asp Ala Ile Tyr Gly Gly Glu Met Ser Ala His His Tyr Phe Arg 
                          325                 330                 335     
          Asp Phe Ala Tyr Cys Asp Ser Gly Met Ile Pro Trp Leu Leu Val Ala 
                      340                 345                 350         
          Glu Leu Val Cys Leu Lys Asp Lys Thr Leu Gly Glu Leu Val Arg Asp 
                  355                 360                 365             
          Arg Met Ala Ala Phe Pro Ala Ser Gly Glu Ile Asn Ser Lys Leu Ala 
              370                 375                 380                 
          Gln Pro Val Glu Ala Ile Asn Arg Val Glu Gln His Phe Ser Arg Glu 
          385                 390                 395                 400 
          Ala Leu Ala Val Asp Arg Thr Asp Gly Ile Ser Met Thr Phe Ala Asp 
                          405                 410                 415     
          Trp Arg Phe Asn Leu Arg Thr Ser Asn Thr Glu Pro Val Val Arg Leu 
                      420                 425                 430         
          Asn Val Glu Ser Arg Gly Asp Val Pro Leu Met Glu Ala Arg Thr Arg 
                  435                 440                 445             
          Thr Leu Leu Thr Leu Leu Asn Glu 
              450                 455     
          <![CDATA[<210>  34]]>
          <![CDATA[<211>  478]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  大腸桿菌 K12 MG1655]]>
          <![CDATA[<400>  34]]>
          Met Ala Gln Ser Lys Leu Tyr Pro Val Val Met Ala Gly Gly Ser Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Arg Leu Trp Pro Leu Ser Arg Val Leu Tyr Pro Lys Gln Phe Leu 
                      20                  25                  30          
          Cys Leu Lys Gly Asp Leu Thr Met Leu Gln Thr Thr Ile Cys Arg Leu 
                  35                  40                  45              
          Asn Gly Val Glu Cys Glu Ser Pro Val Val Ile Cys Asn Glu Gln His 
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Ile Val Ala Glu Gln Leu Arg Gln Leu Asn Lys Leu Thr Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asn Ile Ile Leu Glu Pro Ala Gly Arg Asn Thr Ala Pro Ala Ile Ala 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Ala Leu Ala Ala Lys Arg His Ser Pro Glu Ser Asp Pro Leu 
                      100                 105                 110         
          Met Leu Val Leu Ala Ala Asp His Val Ile Ala Asp Glu Asp Ala Phe 
                  115                 120                 125             
          Arg Ala Ala Val Arg Asn Ala Met Pro Tyr Ala Glu Ala Gly Lys Leu 
              130                 135                 140                 
          Val Thr Phe Gly Ile Val Pro Asp Leu Pro Glu Thr Gly Tyr Gly Tyr 
          145                 150                 155                 160 
          Ile Arg Arg Gly Glu Val Ser Ala Gly Glu Gln Asp Met Val Ala Phe 
                          165                 170                 175     
          Glu Val Ala Gln Phe Val Glu Lys Pro Asn Leu Glu Thr Ala Gln Ala 
                      180                 185                 190         
          Tyr Val Ala Ser Gly Glu Tyr Tyr Trp Asn Ser Gly Met Phe Leu Phe 
                  195                 200                 205             
          Arg Ala Gly Arg Tyr Leu Glu Glu Leu Lys Lys Tyr Arg Pro Asp Ile 
              210                 215                 220                 
          Leu Asp Ala Cys Glu Lys Ala Met Ser Ala Val Asp Pro Asp Leu Asn 
          225                 230                 235                 240 
          Phe Ile Arg Val Asp Glu Glu Ala Phe Leu Ala Cys Pro Glu Glu Ser 
                          245                 250                 255     
          Val Asp Tyr Ala Val Met Glu Arg Thr Ala Asp Ala Val Val Val Pro 
                      260                 265                 270         
          Met Asp Ala Gly Trp Ser Asp Val Gly Ser Trp Ser Ser Leu Trp Glu 
                  275                 280                 285             
          Ile Ser Ala His Thr Ala Glu Gly Asn Val Cys His Gly Asp Val Ile 
              290                 295                 300                 
          Asn His Lys Thr Glu Asn Ser Tyr Val Tyr Ala Glu Ser Gly Leu Val 
          305                 310                 315                 320 
          Thr Thr Val Gly Val Lys Asp Leu Val Val Val Gln Thr Lys Asp Ala 
                          325                 330                 335     
          Val Leu Ile Ala Asp Arg Asn Ala Val Gln Asp Val Lys Lys Val Val 
                      340                 345                 350         
          Glu Gln Ile Lys Ala Asp Gly Arg His Glu His Arg Val His Arg Glu 
                  355                 360                 365             
          Val Tyr Arg Pro Trp Gly Lys Tyr Asp Ser Ile Asp Ala Gly Asp Arg 
              370                 375                 380                 
          Tyr Gln Val Lys Arg Ile Thr Val Lys Pro Gly Glu Gly Leu Ser Val 
          385                 390                 395                 400 
          Gln Met His His His Arg Ala Glu His Trp Val Val Val Ala Gly Thr 
                          405                 410                 415     
          Ala Lys Val Thr Ile Asp Gly Asp Ile Lys Leu Leu Gly Glu Asn Glu 
                      420                 425                 430         
          Ser Ile Tyr Ile Pro Leu Gly Ala Thr His Cys Leu Glu Asn Pro Gly 
                  435                 440                 445             
          Lys Ile Pro Leu Asp Leu Ile Glu Val Arg Ser Gly Ser Tyr Leu Glu 
              450                 455                 460                 
          Glu Asp Asp Val Val Arg Phe Ala Asp Arg Tyr Gly Arg Val 
          465                 470                 475             
          <![CDATA[<210>  35]]>
          <![CDATA[<211>  373]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  大腸桿菌 K12 MG1655]]>
          <![CDATA[<400>  35]]>
          Met Ser Lys Val Ala Leu Ile Thr Gly Val Thr Gly Gln Asp Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Tyr Leu Ala Glu Phe Leu Leu Glu Lys Gly Tyr Glu Val His Gly Ile 
                      20                  25                  30          
          Lys Arg Arg Ala Ser Ser Phe Asn Thr Glu Arg Val Asp His Ile Tyr 
                  35                  40                  45              
          Gln Asp Pro His Thr Cys Asn Pro Lys Phe His Leu His Tyr Gly Asp 
              50                  55                  60                  
          Leu Ser Asp Thr Ser Asn Leu Thr Arg Ile Leu Arg Glu Val Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Glu Val Tyr Asn Leu Gly Ala Met Ser His Val Ala Val Ser Phe 
                          85                  90                  95      
          Glu Ser Pro Glu Tyr Thr Ala Asp Val Asp Ala Met Gly Thr Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Leu Leu Glu Ala Ile Arg Phe Leu Gly Leu Glu Lys Lys Thr Arg Phe 
                  115                 120                 125             
          Tyr Gln Ala Ser Thr Ser Glu Leu Tyr Gly Leu Val Gln Glu Ile Pro 
              130                 135                 140                 
          Gln Lys Glu Thr Thr Pro Phe Tyr Pro Arg Ser Pro Tyr Ala Val Ala 
          145                 150                 155                 160 
          Lys Leu Tyr Ala Tyr Trp Ile Thr Val Asn Tyr Arg Glu Ser Tyr Gly 
                          165                 170                 175     
          Met Tyr Ala Cys Asn Gly Ile Leu Phe Asn His Glu Ser Pro Arg Arg 
                      180                 185                 190         
          Gly Glu Thr Phe Val Thr Arg Lys Ile Thr Arg Ala Ile Ala Asn Ile 
                  195                 200                 205             
          Ala Gln Gly Leu Glu Ser Cys Leu Tyr Leu Gly Asn Met Asp Ser Leu 
              210                 215                 220                 
          Arg Asp Trp Gly His Ala Lys Asp Tyr Val Lys Met Gln Trp Met Met 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Gln Gln Glu Gln Pro Glu Asp Phe Val Ile Ala Thr Gly Val Gln 
                          245                 250                 255     
          Tyr Ser Val Arg Gln Phe Val Glu Met Ala Ala Ala Gln Leu Gly Ile 
                      260                 265                 270         
          Lys Leu Arg Phe Glu Gly Thr Gly Val Glu Glu Lys Gly Ile Val Val 
                  275                 280                 285             
          Ser Val Thr Gly His Asp Ala Pro Gly Val Lys Pro Gly Asp Val Ile 
              290                 295                 300                 
          Ile Ala Val Asp Pro Arg Tyr Phe Arg Pro Ala Glu Val Glu Thr Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Leu Gly Asp Pro Thr Lys Ala His Glu Lys Leu Gly Trp Lys Pro Glu 
                          325                 330                 335     
          Ile Thr Leu Arg Glu Met Val Ser Glu Met Val Ala Asn Asp Leu Glu 
                      340                 345                 350         
          Ala Ala Lys Lys His Ser Leu Leu Lys Ser His Gly Tyr Asp Val Ala 
                  355                 360                 365             
          Ile Ala Leu Glu Ser 
              370             
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          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  大腸桿菌 K12 MG1655]]>
          <![CDATA[<400>  36]]>
          Met Ser Lys Gln Arg Val Phe Ile Ala Gly His Arg Gly Met Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Ala Ile Arg Arg Gln Leu Glu Gln Arg Gly Asp Val Glu Leu Val 
                      20                  25                  30          
          Leu Arg Thr Arg Asp Glu Leu Asn Leu Leu Asp Ser Arg Ala Val His 
                  35                  40                  45              
          Asp Phe Phe Ala Ser Glu Arg Ile Asp Gln Val Tyr Leu Ala Ala Ala 
              50                  55                  60                  
          Lys Val Gly Gly Ile Val Ala Asn Asn Thr Tyr Pro Ala Asp Phe Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Gln Asn Met Met Ile Glu Ser Asn Ile Ile His Ala Ala His Gln 
                          85                  90                  95      
          Asn Asp Val Asn Lys Leu Leu Phe Leu Gly Ser Ser Cys Ile Tyr Pro 
                      100                 105                 110         
          Lys Leu Ala Lys Gln Pro Met Ala Glu Ser Glu Leu Leu Gln Gly Thr 
                  115                 120                 125             
          Leu Glu Pro Thr Asn Glu Pro Tyr Ala Ile Ala Lys Ile Ala Gly Ile 
              130                 135                 140                 
          Lys Leu Cys Glu Ser Tyr Asn Arg Gln Tyr Gly Arg Asp Tyr Arg Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Val Met Pro Thr Asn Leu Tyr Gly Pro His Asp Asn Phe His Pro Ser 
                          165                 170                 175     
          Asn Ser His Val Ile Pro Ala Leu Leu Arg Arg Phe His Glu Ala Thr 
                      180                 185                 190         
          Ala Gln Asn Ala Pro Asp Val Val Val Trp Gly Ser Gly Thr Pro Met 
                  195                 200                 205             
          Arg Glu Phe Leu His Val Asp Asp Met Ala Ala Ala Ser Ile His Val 
              210                 215                 220                 
          Met Glu Leu Ala His Glu Val Trp Leu Glu Asn Thr Gln Pro Met Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Ser His Ile Asn Val Gly Thr Gly Val Asp Cys Thr Ile Arg Glu Leu 
                          245                 250                 255     
          Ala Gln Thr Ile Ala Lys Val Val Gly Tyr Lys Gly Arg Val Val Phe 
                      260                 265                 270         
          Asp Ala Ser Lys Pro Asp Gly Thr Pro Arg Lys Leu Leu Asp Val Thr 
                  275                 280                 285             
          Arg Leu His Gln Leu Gly Trp Tyr His Glu Ile Ser Leu Glu Ala Gly 
              290                 295                 300                 
          Leu Ala Ser Thr Tyr Gln Trp Phe Leu Glu Asn Gln Asp Arg Phe Arg 
          305                 310                 315                 320 
          Gly 
          <![CDATA[<210>  37]]>
          <![CDATA[<211>  438]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  大腸桿菌 K12 MG1655]]>
          <![CDATA[<400>  37]]>
          Met Gly Asn Thr Ser Ile Gln Thr Gln Ser Tyr Arg Ala Val Asp Lys 
          1               5                   10                  15      
          Asp Ala Gly Gln Ser Arg Ser Tyr Ile Ile Pro Phe Ala Leu Leu Cys 
                      20                  25                  30          
          Ser Leu Phe Phe Leu Trp Ala Val Ala Asn Asn Leu Asn Asp Ile Leu 
                  35                  40                  45              
          Leu Pro Gln Phe Gln Gln Ala Phe Thr Leu Thr Asn Phe Gln Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Leu Ile Gln Ser Ala Phe Tyr Phe Gly Tyr Phe Ile Ile Pro Ile Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Ala Gly Ile Leu Met Lys Lys Leu Ser Tyr Lys Ala Gly Ile Ile Thr 
                          85                  90                  95      
          Gly Leu Phe Leu Tyr Ala Leu Gly Ala Ala Leu Phe Trp Pro Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Glu Ile Met Asn Tyr Thr Leu Phe Leu Val Gly Leu Phe Ile Ile Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Gly Leu Gly Cys Leu Glu Thr Ala Ala Asn Pro Phe Val Thr Val 
              130                 135                 140                 
          Leu Gly Pro Glu Ser Ser Gly His Phe Arg Leu Asn Leu Ala Gln Thr 
          145                 150                 155                 160 
          Phe Asn Ser Phe Gly Ala Ile Ile Ala Val Val Phe Gly Gln Ser Leu 
                          165                 170                 175     
          Ile Leu Ser Asn Val Pro His Gln Ser Gln Asp Val Leu Asp Lys Met 
                      180                 185                 190         
          Ser Pro Glu Gln Leu Ser Ala Tyr Lys His Ser Leu Val Leu Ser Val 
                  195                 200                 205             
          Gln Thr Pro Tyr Met Ile Ile Val Ala Ile Val Leu Leu Val Ala Leu 
              210                 215                 220                 
          Leu Ile Met Leu Thr Lys Phe Pro Ala Leu Gln Ser Asp Asn His Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Asp Ala Lys Gln Gly Ser Phe Ser Ala Ser Leu Ser Arg Leu Ala Arg 
                          245                 250                 255     
          Ile Arg His Trp Arg Trp Ala Val Leu Ala Gln Phe Cys Tyr Val Gly 
                      260                 265                 270         
          Ala Gln Thr Ala Cys Trp Ser Tyr Leu Ile Arg Tyr Ala Val Glu Glu 
                  275                 280                 285             
          Ile Pro Gly Met Thr Ala Gly Phe Ala Ala Asn Tyr Leu Thr Gly Thr 
              290                 295                 300                 
          Met Val Cys Phe Phe Ile Gly Arg Phe Thr Gly Thr Trp Leu Ile Ser 
          305                 310                 315                 320 
          Arg Phe Ala Pro His Lys Val Leu Ala Ala Tyr Ala Leu Ile Ala Met 
                          325                 330                 335     
          Ala Leu Cys Leu Ile Ser Ala Phe Ala Gly Gly His Val Gly Leu Ile 
                      340                 345                 350         
          Ala Leu Thr Leu Cys Ser Ala Phe Met Ser Ile Gln Tyr Pro Thr Ile 
                  355                 360                 365             
          Phe Ser Leu Gly Ile Lys Asn Leu Gly Gln Asp Thr Lys Tyr Gly Ser 
              370                 375                 380                 
          Ser Phe Ile Val Met Thr Ile Ile Gly Gly Gly Ile Val Thr Pro Val 
          385                 390                 395                 400 
          Met Gly Phe Val Ser Asp Ala Ala Gly Asn Ile Pro Thr Ala Glu Leu 
                          405                 410                 415     
          Ile Pro Ala Leu Cys Phe Ala Val Ile Phe Ile Phe Ala Arg Phe Arg 
                      420                 425                 430         
          Ser Gln Thr Ala Thr Asn 
                  435             
          <![CDATA[<210>  38]]>
          <![CDATA[<211>  949]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  脆弱類桿菌NCTC 9343]]>
          <![CDATA[<400>  38]]>
          Met Gln Lys Leu Leu Ser Leu Pro Ser Asn Leu Val Gln Ser Phe His 
          1               5                   10                  15      
          Glu Leu Glu Arg Val Asn Arg Thr Asp Trp Phe Cys Thr Ser Asp Pro 
                      20                  25                  30          
          Val Gly Lys Lys Leu Gly Ser Gly Gly Gly Thr Ser Trp Leu Leu Glu 
                  35                  40                  45              
          Glu Cys Tyr Asn Glu Tyr Ser Asp Gly Ala Thr Phe Gly Glu Trp Leu 
              50                  55                  60                  
          Glu Lys Glu Lys Arg Ile Leu Leu His Ala Gly Gly Gln Ser Arg Arg 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Pro Gly Tyr Ala Pro Ser Gly Lys Ile Leu Thr Pro Val Pro Val 
                          85                  90                  95      
          Phe Arg Trp Glu Arg Gly Gln His Leu Gly Gln Asn Leu Leu Ser Leu 
                      100                 105                 110         
          Gln Leu Pro Leu Tyr Glu Lys Ile Met Ser Leu Ala Pro Asp Lys Leu 
                  115                 120                 125             
          His Thr Leu Ile Ala Ser Gly Asp Val Tyr Ile Arg Ser Glu Lys Pro 
              130                 135                 140                 
          Leu Gln Ser Ile Pro Glu Ala Asp Val Val Cys Tyr Gly Leu Trp Val 
          145                 150                 155                 160 
          Asp Pro Ser Leu Ala Thr His His Gly Val Phe Ala Ser Asp Arg Lys 
                          165                 170                 175     
          His Pro Glu Gln Leu Asp Phe Met Leu Gln Lys Pro Ser Leu Ala Glu 
                      180                 185                 190         
          Leu Glu Ser Leu Ser Lys Thr His Leu Phe Leu Met Asp Ile Gly Ile 
                  195                 200                 205             
          Trp Leu Leu Ser Asp Arg Ala Val Glu Ile Leu Met Lys Arg Ser His 
              210                 215                 220                 
          Lys Glu Ser Ser Glu Glu Leu Lys Tyr Tyr Asp Leu Tyr Ser Asp Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Leu Ala Leu Gly Thr His Pro Arg Ile Glu Asp Glu Glu Val Asn 
                          245                 250                 255     
          Thr Leu Ser Val Ala Ile Leu Pro Leu Pro Gly Gly Glu Phe Tyr His 
                      260                 265                 270         
          Tyr Gly Thr Ser Lys Glu Leu Ile Ser Ser Thr Leu Ser Val Gln Asn 
                  275                 280                 285             
          Lys Val Tyr Asp Gln Arg Arg Ile Met His Arg Lys Val Lys Pro Asn 
              290                 295                 300                 
          Pro Ala Met Phe Val Gln Asn Ala Val Val Arg Ile Pro Leu Cys Ala 
          305                 310                 315                 320 
          Glu Asn Ala Asp Leu Trp Ile Glu Asn Ser His Ile Gly Pro Lys Trp 
                          325                 330                 335     
          Lys Ile Ala Ser Arg His Ile Ile Thr Gly Val Pro Glu Asn Asp Trp 
                      340                 345                 350         
          Ser Leu Ala Val Pro Ala Gly Val Cys Val Asp Val Val Pro Met Gly 
                  355                 360                 365             
          Asp Lys Gly Phe Val Ala Arg Pro Tyr Gly Leu Asp Asp Val Phe Lys 
              370                 375                 380                 
          Gly Asp Leu Arg Asp Ser Lys Thr Thr Leu Thr Gly Ile Pro Phe Gly 
          385                 390                 395                 400 
          Glu Trp Met Ser Lys Arg Gly Leu Ser Tyr Thr Asp Leu Lys Gly Arg 
                          405                 410                 415     
          Thr Asp Asp Leu Gln Ala Val Ser Val Phe Pro Met Val Asn Ser Val 
                      420                 425                 430         
          Glu Glu Leu Gly Leu Val Leu Arg Trp Met Leu Ser Glu Pro Glu Leu 
                  435                 440                 445             
          Glu Glu Gly Lys Asn Ile Trp Leu Arg Ser Glu His Phe Ser Ala Asp 
              450                 455                 460                 
          Glu Ile Ser Ala Gly Ala Asn Leu Lys Arg Leu Tyr Ala Gln Arg Glu 
          465                 470                 475                 480 
          Glu Phe Arg Lys Gly Asn Trp Lys Ala Leu Ala Val Asn His Glu Lys 
                          485                 490                 495     
          Ser Val Phe Tyr Gln Leu Asp Leu Ala Asp Ala Ala Glu Asp Phe Val 
                      500                 505                 510         
          Arg Leu Gly Leu Asp Met Pro Glu Leu Leu Pro Glu Asp Ala Leu Gln 
                  515                 520                 525             
          Met Ser Arg Ile His Asn Arg Met Leu Arg Ala Arg Ile Leu Lys Leu 
              530                 535                 540                 
          Asp Gly Lys Asp Tyr Arg Pro Glu Glu Gln Ala Ala Phe Asp Leu Leu 
          545                 550                 555                 560 
          Arg Asp Gly Leu Leu Asp Gly Ile Ser Asn Arg Lys Ser Thr Pro Lys 
                          565                 570                 575     
          Leu Asp Val Tyr Ser Asp Gln Ile Val Trp Gly Arg Ser Pro Val Arg 
                      580                 585                 590         
          Ile Asp Met Ala Gly Gly Trp Thr Asp Thr Pro Pro Tyr Ser Leu Tyr 
                  595                 600                 605             
          Ser Gly Gly Asn Val Val Asn Leu Ala Ile Glu Leu Asn Gly Gln Pro 
              610                 615                 620                 
          Pro Leu Gln Val Tyr Val Lys Pro Cys Lys Asp Phe His Ile Val Leu 
          625                 630                 635                 640 
          Arg Ser Ile Asp Met Gly Ala Met Glu Ile Val Ser Thr Phe Asp Glu 
                          645                 650                 655     
          Leu Gln Asp Tyr Lys Lys Ile Gly Ser Pro Phe Ser Ile Pro Lys Ala 
                      660                 665                 670         
          Ala Leu Ser Leu Ala Gly Phe Ala Pro Ala Phe Ser Ala Val Ser Tyr 
                  675                 680                 685             
          Ala Ser Leu Glu Glu Gln Leu Lys Asp Phe Gly Ala Gly Ile Glu Val 
              690                 695                 700                 
          Thr Leu Leu Ala Ala Ile Pro Ala Gly Ser Gly Leu Gly Thr Ser Ser 
          705                 710                 715                 720 
          Ile Leu Ala Ser Thr Val Leu Gly Ala Ile Asn Asp Phe Cys Gly Leu 
                          725                 730                 735     
          Ala Trp Asp Lys Asn Glu Ile Cys Gln Arg Thr Leu Val Leu Glu Gln 
                      740                 745                 750         
          Leu Leu Thr Thr Gly Gly Gly Trp Gln Asp Gln Tyr Gly Gly Val Leu 
                  755                 760                 765             
          Gln Gly Val Lys Leu Leu Gln Thr Glu Ala Gly Phe Ala Gln Ser Pro 
              770                 775                 780                 
          Leu Val Arg Trp Leu Pro Asp His Leu Phe Thr His Pro Glu Tyr Lys 
          785                 790                 795                 800 
          Asp Cys His Leu Leu Tyr Tyr Thr Gly Ile Thr Arg Thr Ala Lys Gly 
                          805                 810                 815     
          Ile Leu Ala Glu Ile Val Ser Ser Met Phe Leu Asn Ser Ser Leu His 
                      820                 825                 830         
          Leu Asn Leu Leu Ser Glu Met Lys Ala His Ala Leu Asp Met Asn Glu 
                  835                 840                 845             
          Ala Ile Gln Arg Gly Ser Phe Val Glu Phe Gly Arg Leu Val Gly Lys 
              850                 855                 860                 
          Thr Trp Glu Gln Asn Lys Ala Leu Asp Ser Gly Thr Asn Pro Pro Ala 
          865                 870                 875                 880 
          Val Glu Ala Ile Ile Asp Leu Ile Lys Asp Tyr Thr Leu Gly Tyr Lys 
                          885                 890                 895     
          Leu Pro Gly Ala Gly Gly Gly Gly Tyr Leu Tyr Met Val Ala Lys Asp 
                      900                 905                 910         
          Pro Gln Ala Ala Val Arg Ile Arg Lys Ile Leu Thr Glu Asn Ala Pro 
                  915                 920                 925             
          Asn Pro Arg Ala Arg Phe Val Glu Met Thr Leu Ser Asp Lys Gly Phe 
              930                 935                 940                 
          Gln Val Ser Arg Ser 
          945                 
          <![CDATA[<210>  39]]>
          <![CDATA[<211>  159]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  釀酒酵母菌]]>
          <![CDATA[<400>  39]]>
          Met Ser Leu Pro Asp Gly Phe Tyr Ile Arg Arg Met Glu Glu Gly Asp 
          1               5                   10                  15      
          Leu Glu Gln Val Thr Glu Thr Leu Lys Val Leu Thr Thr Val Gly Thr 
                      20                  25                  30          
          Ile Thr Pro Glu Ser Phe Ser Lys Leu Ile Lys Tyr Trp Asn Glu Ala 
                  35                  40                  45              
          Thr Val Trp Asn Asp Asn Glu Asp Lys Lys Ile Met Gln Tyr Asn Pro 
              50                  55                  60                  
          Met Val Ile Val Asp Lys Arg Thr Glu Thr Val Ala Ala Thr Gly Asn 
          65                  70                  75                  80  
          Ile Ile Ile Glu Arg Lys Ile Ile His Glu Leu Gly Leu Cys Gly His 
                          85                  90                  95      
          Ile Glu Asp Ile Ala Val Asn Ser Lys Tyr Gln Gly Gln Gly Leu Gly 
                      100                 105                 110         
          Lys Leu Leu Ile Asp Gln Leu Val Thr Ile Gly Phe Asp Tyr Gly Cys 
                  115                 120                 125             
          Tyr Lys Ile Ile Leu Asp Cys Asp Glu Lys Asn Val Lys Phe Tyr Glu 
              130                 135                 140                 
          Lys Cys Gly Phe Ser Asn Ala Gly Val Glu Met Gln Ile Arg Lys 
          145                 150                 155                 
          <![CDATA[<210>  40]]>
          <![CDATA[<211>  421]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  卵形擬桿菌]]>
          <![CDATA[<400>  40]]>
          Met Asp Ser Lys Asn Asn Ile Gly His Ser Ala Asp Ile Ser Leu Thr 
          1               5                   10                  15      
          Ala Glu Leu Pro Ile Pro Ile Tyr Asn Gly Asn Thr Ile Met Asp Phe 
                      20                  25                  30          
          Lys Lys Leu Ala Ser Leu Tyr Lys Asp Glu Leu Leu Asp Asn Val Leu 
                  35                  40                  45              
          Pro Phe Trp Leu Glu His Ser Gln Asp His Glu Tyr Gly Gly Tyr Phe 
              50                  55                  60                  
          Thr Cys Leu Asp Arg Glu Gly Lys Val Phe Asp Thr Asp Lys Phe Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Trp Leu Gln Ser Arg Glu Val Trp Met Phe Ser Met Leu Tyr Asn Lys 
                          85                  90                  95      
          Val Glu Lys Arg Gln Glu Trp Leu Asp Cys Ala Ile Gln Gly Gly Glu 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Lys Lys Tyr Gly His Asp Gly Asn Tyr Asn Trp Tyr Phe Ser 
                  115                 120                 125             
          Leu Asp Arg Ser Gly Arg Pro Leu Val Glu Pro Tyr Asn Ile Phe Ser 
              130                 135                 140                 
          Tyr Thr Phe Ala Thr Met Ala Phe Gly Gln Leu Ser Leu Thr Thr Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Asn Gln Glu Tyr Ala Asp Ile Ala Lys Lys Thr Phe Asp Ile Ile Leu 
                          165                 170                 175     
          Ser Lys Val Asp Asn Pro Lys Gly Arg Trp Asn Lys Leu His Pro Gly 
                      180                 185                 190         
          Thr Arg Asn Leu Lys Asn Phe Ala Leu Pro Met Ile Leu Cys Asn Leu 
                  195                 200                 205             
          Ala Leu Glu Ile Glu His Leu Leu Asp Glu Thr Tyr Leu Arg Glu Thr 
              210                 215                 220                 
          Met Asp Thr Cys Ile His Glu Val Met Glu Val Phe Tyr Arg Pro Glu 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Gly Gly Ile Ile Val Glu Asn Val Asp Ile Asp Gly Asn Leu Val 
                          245                 250                 255     
          Asp Cys Phe Glu Gly Arg Gln Val Thr Pro Gly His Ala Ile Glu Ala 
                      260                 265                 270         
          Met Trp Phe Ile Met Asp Leu Gly Lys Arg Leu Asn Arg Pro Glu Leu 
                  275                 280                 285             
          Ile Glu Lys Ala Lys Glu Thr Thr Leu Thr Met Leu Asn Tyr Gly Trp 
              290                 295                 300                 
          Asp Lys Gln Tyr Gly Gly Ile Tyr Tyr Phe Met Asp Arg Asn Gly Cys 
          305                 310                 315                 320 
          Pro Pro Gln Gln Leu Glu Trp Asp Gln Lys Leu Trp Trp Val His Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Thr Leu Ile Ser Leu Leu Lys Gly Tyr Gln Leu Thr Gly Asp Lys 
                      340                 345                 350         
          Lys Cys Leu Glu Trp Phe Glu Lys Val His Asp Tyr Thr Trp Glu His 
                  355                 360                 365             
          Phe Lys Asp Lys Glu Tyr Pro Glu Trp Tyr Gly Tyr Leu Asn Arg Arg 
              370                 375                 380                 
          Gly Glu Val Leu Leu Pro Leu Lys Gly Gly Lys Trp Lys Gly Cys Phe 
          385                 390                 395                 400 
          His Val Pro Arg Gly Leu Tyr Gln Cys Trp Lys Thr Leu Glu Glu Ile 
                          405                 410                 415     
          Lys Asn Ile Val Ser 
                      420     
          <![CDATA[<210>  41]]>
          <![CDATA[<211>  349]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  腦膜炎雙球菌]]>
          <![CDATA[<400>  41]]>
          Met Gln Asn Asn Asn Glu Phe Lys Ile Gly Asn Arg Ser Val Gly Tyr 
          1               5                   10                  15      
          Asn His Glu Pro Leu Ile Ile Cys Glu Ile Gly Ile Asn His Glu Gly 
                      20                  25                  30          
          Ser Leu Lys Thr Ala Phe Glu Met Val Asp Ala Ala Tyr Asn Ala Gly 
                  35                  40                  45              
          Ala Glu Val Val Lys His Gln Thr His Ile Val Glu Asp Glu Met Ser 
              50                  55                  60                  
          Asp Glu Ala Lys Gln Val Ile Pro Gly Asn Ala Asp Val Ser Ile Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Ile Met Glu Arg Cys Ala Leu Asn Glu Glu Asp Glu Ile Lys Leu 
                          85                  90                  95      
          Lys Glu Tyr Val Glu Ser Lys Gly Met Ile Phe Ile Ser Thr Pro Phe 
                      100                 105                 110         
          Ser Arg Ala Ala Ala Leu Arg Leu Gln Arg Met Asp Ile Pro Ala Tyr 
                  115                 120                 125             
          Lys Ile Gly Ser Gly Glu Cys Asn Asn Tyr Pro Leu Ile Lys Leu Val 
              130                 135                 140                 
          Ala Ser Phe Gly Lys Pro Ile Ile Leu Ser Thr Gly Met Asn Ser Ile 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Ile Lys Lys Ser Val Glu Ile Ile Arg Glu Ala Gly Val Pro 
                          165                 170                 175     
          Tyr Ala Leu Leu His Cys Thr Asn Ile Tyr Pro Thr Pro Tyr Glu Asp 
                      180                 185                 190         
          Val Arg Leu Gly Gly Met Asn Asp Leu Ser Glu Ala Phe Pro Asp Ala 
                  195                 200                 205             
          Ile Ile Gly Leu Ser Asp His Thr Leu Asp Asn Tyr Ala Cys Leu Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Val Ala Leu Gly Gly Ser Ile Leu Glu Arg His Phe Thr Asp Arg 
          225                 230                 235                 240 
          Met Asp Arg Pro Gly Pro Asp Ile Val Cys Ser Met Asn Pro Asp Thr 
                          245                 250                 255     
          Phe Lys Glu Leu Lys Gln Gly Ala His Ala Leu Lys Leu Ala Arg Gly 
                      260                 265                 270         
          Gly Lys Lys Asp Thr Ile Ile Ala Gly Glu Lys Pro Thr Lys Asp Phe 
                  275                 280                 285             
          Ala Phe Ala Ser Val Val Ala Asp Lys Asp Ile Lys Lys Gly Glu Leu 
              290                 295                 300                 
          Leu Ser Gly Asp Asn Leu Trp Val Lys Arg Pro Gly Asn Gly Asp Phe 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Val Asn Glu Tyr Glu Thr Leu Phe Gly Lys Val Ala Ala Cys Asn 
                          325                 330                 335     
          Ile Arg Lys Gly Ala Gln Ile Lys Lys Thr Asp Ile Glu 
                      340                 345                 
          <![CDATA[<210>  42]]>
          <![CDATA[<211>  223]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  多殺性巴氏桿菌]]>
          <![CDATA[<400>  42]]>
          Met Thr Asn Ile Ala Ile Ile Pro Ala Arg Ala Gly Ser Lys Gly Ile 
          1               5                   10                  15      
          Pro Asp Lys Asn Leu Gln Pro Val Gly Gly His Ser Leu Ile Gly Arg 
                      20                  25                  30          
          Ala Ile Leu Ala Ala Lys Asn Ala Asp Val Phe Asp Met Ile Val Val 
                  35                  40                  45              
          Thr Ser Asp Gly Asp Asn Ile Leu Arg Glu Ala Glu Lys Tyr Gly Ala 
              50                  55                  60                  
          Leu Ala Leu Lys Arg Pro Ala Glu Leu Ala Gln Asp Asn Ser Arg Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Ile Asp Ala Ile Leu His Ala Leu Glu Ser Leu Asn Ile Arg Glu Gly 
                          85                  90                  95      
          Thr Cys Thr Leu Leu Gln Pro Thr Ser Pro Leu Arg Asp His Leu Asp 
                      100                 105                 110         
          Ile Lys Asn Ala Met Asp Met Tyr Val Asn Gly Gly Val His Ser Val 
                  115                 120                 125             
          Val Ser Ala Cys Glu Cys Glu His His Pro Tyr Lys Ala Phe Ala Leu 
              130                 135                 140                 
          Ser Lys Asp His Glu Val Leu Pro Val Arg Glu Ile Ala Asp Phe Glu 
          145                 150                 155                 160 
          Ala Ala Arg Gln Thr Leu Pro Lys Met Tyr Arg Ala Asn Gly Ala Ile 
                          165                 170                 175     
          Tyr Ile Asn Asp Ile Ala Gln Leu Leu Lys Glu Lys Tyr Phe Phe Ile 
                      180                 185                 190         
          Pro Pro Leu Lys Phe Tyr Leu Met Pro Thr Tyr Arg Ser Val Asp Ile 
                  195                 200                 205             
          Asp Val Lys Gln Asp Leu Glu Leu Ala Glu Ile Leu Ser Asn Lys 
              210                 215                 220             
          <![CDATA[<210>  43]]>
          <![CDATA[<211>  268]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  多殺性巴氏桿菌]]>
          <![CDATA[<400>  43]]>
          Met Asp Lys Phe Ala Glu His Glu Ile Pro Lys Ala Val Ile Val Ala 
          1               5                   10                  15      
          Gly Asn Gly Glu Ser Leu Ser Gln Ile Asp Tyr Arg Leu Leu Pro Lys 
                      20                  25                  30          
          Asn Tyr Asp Val Phe Arg Cys Asn Gln Phe Tyr Phe Glu Glu Arg Tyr 
                  35                  40                  45              
          Phe Leu Gly Asn Lys Ile Lys Ala Val Phe Phe Thr Pro Gly Val Phe 
              50                  55                  60                  
          Leu Glu Gln Tyr Tyr Thr Leu Tyr His Leu Lys Arg Asn Asn Glu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Phe Val Asp Asn Val Ile Leu Ser Ser Phe Asn His Pro Thr Val Asp 
                          85                  90                  95      
          Leu Glu Lys Ser Gln Lys Ile Gln Ala Leu Phe Ile Asp Val Ile Asn 
                      100                 105                 110         
          Gly Tyr Glu Lys Tyr Leu Ser Lys Leu Thr Ala Phe Asp Val Tyr Leu 
                  115                 120                 125             
          Arg Tyr Lys Glu Leu Tyr Glu Asn Gln Arg Ile Thr Ser Gly Val Tyr 
              130                 135                 140                 
          Met Cys Ala Val Ala Ile Ala Met Gly Tyr Thr Asp Ile Tyr Leu Thr 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ile Asp Phe Tyr Gln Ala Ser Glu Glu Asn Tyr Ala Phe Asp Asn 
                          165                 170                 175     
          Lys Lys Pro Asn Ile Ile Arg Leu Leu Pro Asp Phe Arg Lys Glu Lys 
                      180                 185                 190         
          Thr Leu Phe Ser Tyr His Ser Lys Asp Ile Asp Leu Glu Ala Leu Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Leu Gln Gln His Tyr His Val Asn Phe Tyr Ser Ile Ser Pro Met 
              210                 215                 220                 
          Ser Pro Leu Ser Lys His Phe Pro Ile Pro Thr Val Glu Asp Asp Cys 
          225                 230                 235                 240 
          Glu Thr Thr Phe Val Ala Pro Leu Lys Glu Asn Tyr Ile Asn Asp Ile 
                          245                 250                 255     
          Leu Leu Pro Pro His Phe Val Tyr Glu Lys Leu Gly 
                      260                 265             
          <![CDATA[<210>  44]]>
          <![CDATA[<211>  371]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  腦膜炎雙球菌]]>
          <![CDATA[<400>  44]]>
          Met Gly Leu Lys Lys Ala Cys Leu Thr Val Leu Cys Leu Ile Val Phe 
          1               5                   10                  15      
          Cys Phe Gly Ile Phe Tyr Thr Phe Asp Arg Val Asn Gln Gly Glu Arg 
                      20                  25                  30          
          Asn Ala Val Ser Leu Leu Lys Glu Lys Leu Phe Asn Glu Glu Gly Glu 
                  35                  40                  45              
          Pro Val Asn Leu Ile Phe Cys Tyr Thr Ile Leu Gln Met Lys Val Ala 
              50                  55                  60                  
          Glu Arg Ile Met Ala Gln His Pro Gly Glu Arg Phe Tyr Val Val Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Met Ser Glu Asn Arg Asn Glu Lys Tyr Asp Tyr Tyr Phe Asn Gln Ile 
                          85                  90                  95      
          Lys Asp Lys Ala Glu Arg Ala Tyr Phe Phe His Leu Pro Tyr Gly Leu 
                      100                 105                 110         
          Asn Lys Ser Phe Asn Phe Ile Pro Thr Met Ala Glu Leu Lys Val Lys 
                  115                 120                 125             
          Ser Met Leu Leu Pro Lys Val Lys Arg Ile Tyr Leu Ala Ser Leu Glu 
              130                 135                 140                 
          Lys Val Ser Ile Ala Ala Phe Leu Ser Thr Tyr Pro Asp Ala Glu Ile 
          145                 150                 155                 160 
          Lys Thr Phe Asp Asp Gly Thr Gly Asn Leu Ile Gln Ser Ser Ser Tyr 
                          165                 170                 175     
          Leu Gly Asp Glu Phe Ser Val Asn Gly Thr Ile Lys Arg Asn Phe Ala 
                      180                 185                 190         
          Arg Met Met Ile Gly Asp Trp Ser Ile Ala Lys Thr Arg Asn Ala Ser 
                  195                 200                 205             
          Asp Glu His Tyr Thr Ile Phe Lys Gly Leu Lys Asn Ile Met Asp Asp 
              210                 215                 220                 
          Gly Arg Arg Lys Met Thr Tyr Leu Pro Leu Phe Asp Ala Ser Glu Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Lys Thr Gly Asp Glu Thr Gly Gly Thr Val Arg Ile Leu Leu Gly Ser 
                          245                 250                 255     
          Pro Asp Lys Glu Met Lys Glu Ile Ser Glu Lys Ala Ala Lys Asn Phe 
                      260                 265                 270         
          Lys Ile Gln Tyr Val Ala Pro His Pro Arg Gln Thr Tyr Gly Leu Ser 
                  275                 280                 285             
          Gly Val Thr Thr Leu Asn Ser Pro Tyr Val Ile Glu Asp Tyr Ile Leu 
              290                 295                 300                 
          Arg Glu Ile Lys Lys Asn Pro His Thr Arg Tyr Glu Ile Tyr Thr Phe 
          305                 310                 315                 320 
          Phe Ser Gly Ala Ala Leu Thr Met Lys Asp Phe Pro Asn Val His Val 
                          325                 330                 335     
          Tyr Ala Leu Lys Pro Ala Ser Leu Pro Glu Asp Tyr Trp Leu Lys Pro 
                      340                 345                 350         
          Val Tyr Ala Leu Phe Thr Gln Ser Gly Ile Pro Ile Leu Thr Phe Asp 
                  355                 360                 365             
          Asp Lys Asn 
              370     
          <![CDATA[<210>  45]]>
          <![CDATA[<211>  391]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  發光桿菌(Photobacterium damselae)]]>
          <![CDATA[<400>  45]]>
          Met Thr Val Val Ala Pro Thr Leu Glu Val Tyr Ile Asp His Ala Ser 
          1               5                   10                  15      
          Leu Pro Ser Leu Gln Gln Leu Ile His Ile Ile Gln Ala Lys Asp Glu 
                      20                  25                  30          
          Tyr Pro Ser Asn Gln Arg Phe Val Ser Trp Lys Arg Val Thr Val Asp 
                  35                  40                  45              
          Ala Asp Asn Ala Asn Lys Leu Asn Ile His Thr Tyr Pro Leu Lys Gly 
              50                  55                  60                  
          Asn Asn Thr Ser Pro Glu Met Val Ala Ala Ile Asp Glu Tyr Ala Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Lys Asn Arg Leu Asn Ile Glu Phe Tyr Thr Asn Thr Ala His Val 
                          85                  90                  95      
          Phe Asn Asn Leu Pro Pro Ile Ile Gln Pro Leu Tyr Asn Asn Glu Lys 
                      100                 105                 110         
          Val Lys Ile Ser His Ile Ser Leu Tyr Asp Asp Gly Ser Ser Glu Tyr 
                  115                 120                 125             
          Val Ser Leu Tyr Gln Trp Lys Asp Thr Pro Asn Lys Ile Glu Thr Leu 
              130                 135                 140                 
          Glu Gly Glu Val Ser Leu Leu Ala Asn Tyr Leu Ala Gly Thr Ser Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Asp Ala Pro Lys Gly Met Gly Asn Arg Tyr Asn Trp His Lys Leu Tyr 
                          165                 170                 175     
          Asp Thr Asp Tyr Tyr Phe Leu Arg Glu Asp Tyr Leu Asp Val Glu Ala 
                      180                 185                 190         
          Asn Leu His Asp Leu Arg Asp Tyr Leu Gly Ser Ser Ala Lys Gln Met 
                  195                 200                 205             
          Pro Trp Asp Glu Phe Ala Lys Leu Ser Asp Ser Gln Gln Thr Leu Phe 
              210                 215                 220                 
          Leu Asp Ile Val Gly Phe Asp Lys Glu Gln Leu Gln Gln Gln Tyr Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Leu Pro Asn Phe Ile Phe Thr Gly Thr Thr Thr Trp Ala 
                          245                 250                 255     
          Gly Gly Glu Thr Lys Glu Tyr Tyr Ala Gln Gln Gln Val Asn Val Ile 
                      260                 265                 270         
          Asn Asn Ala Ile Asn Glu Thr Ser Pro Tyr Tyr Leu Gly Lys Asp Tyr 
                  275                 280                 285             
          Asp Leu Phe Phe Lys Gly His Pro Ala Gly Gly Val Ile Asn Asp Ile 
              290                 295                 300                 
          Ile Leu Gly Ser Phe Pro Asp Met Ile Asn Ile Pro Ala Lys Ile Ser 
          305                 310                 315                 320 
          Phe Glu Val Leu Met Met Thr Asp Met Leu Pro Asp Thr Val Ala Gly 
                          325                 330                 335     
          Ile Ala Ser Ser Leu Tyr Phe Thr Ile Pro Ala Asp Lys Val Asn Phe 
                      340                 345                 350         
          Ile Val Phe Thr Ser Ser Asp Thr Ile Thr Asp Arg Glu Glu Ala Leu 
                  355                 360                 365             
          Lys Ser Pro Leu Val Gln Val Met Leu Thr Leu Gly Ile Val Lys Glu 
              370                 375                 380                 
          Lys Asp Val Leu Phe Trp Ala 
          385                 390     
          <![CDATA[<210>  46]]>
          <![CDATA[<211>  498]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  發光菌(Photobacterium) sp. JT-ISH-224]]>
          <![CDATA[<400>  46]]>
          Met Ser Glu Glu Asn Thr Gln Ser Ile Ile Lys Asn Asp Ile Asn Lys 
          1               5                   10                  15      
          Thr Ile Ile Asp Glu Glu Tyr Val Asn Leu Glu Pro Ile Asn Gln Ser 
                      20                  25                  30          
          Asn Ile Ser Phe Thr Lys His Ser Trp Val Gln Thr Cys Gly Thr Gln 
                  35                  40                  45              
          Gln Leu Leu Thr Glu Gln Asn Lys Glu Ser Ile Ser Leu Ser Val Val 
              50                  55                  60                  
          Ala Pro Arg Leu Asp Asp Asp Glu Lys Tyr Cys Phe Asp Phe Asn Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Val Ser Asn Lys Gly Glu Lys Tyr Ile Thr Lys Val Thr Leu Asn Val 
                          85                  90                  95      
          Val Ala Pro Ser Leu Glu Val Tyr Val Asp His Ala Ser Leu Pro Thr 
                      100                 105                 110         
          Leu Gln Gln Leu Met Asp Ile Ile Lys Ser Glu Glu Glu Asn Pro Thr 
                  115                 120                 125             
          Ala Gln Arg Tyr Ile Ala Trp Gly Arg Ile Val Pro Thr Asp Glu Gln 
              130                 135                 140                 
          Met Lys Glu Leu Asn Ile Thr Ser Phe Ala Leu Ile Asn Asn His Thr 
          145                 150                 155                 160 
          Pro Ala Asp Leu Val Gln Glu Ile Val Lys Gln Ala Gln Thr Lys His 
                          165                 170                 175     
          Arg Leu Asn Val Lys Leu Ser Ser Asn Thr Ala His Ser Phe Asp Asn 
                      180                 185                 190         
          Leu Val Pro Ile Leu Lys Glu Leu Asn Ser Phe Asn Asn Val Thr Val 
                  195                 200                 205             
          Thr Asn Ile Asp Leu Tyr Asp Asp Gly Ser Ala Glu Tyr Val Asn Leu 
              210                 215                 220                 
          Tyr Asn Trp Arg Asp Thr Leu Asn Lys Thr Asp Asn Leu Lys Ile Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Lys Asp Tyr Leu Glu Asp Val Ile Asn Gly Ile Asn Glu Asp Thr Ser 
                          245                 250                 255     
          Asn Thr Gly Thr Ser Ser Val Tyr Asn Trp Gln Lys Leu Tyr Pro Ala 
                      260                 265                 270         
          Asn Tyr His Phe Leu Arg Lys Asp Tyr Leu Thr Leu Glu Pro Ser Leu 
                  275                 280                 285             
          His Glu Leu Arg Asp Tyr Ile Gly Asp Ser Leu Lys Gln Met Gln Trp 
              290                 295                 300                 
          Asp Gly Phe Lys Lys Phe Asn Ser Lys Gln Gln Glu Leu Phe Leu Ser 
          305                 310                 315                 320 
          Ile Val Asn Phe Asp Lys Gln Lys Leu Gln Asn Glu Tyr Asn Ser Ser 
                          325                 330                 335     
          Asn Leu Pro Asn Phe Val Phe Thr Gly Thr Thr Val Trp Ala Gly Asn 
                      340                 345                 350         
          His Glu Arg Glu Tyr Tyr Ala Lys Gln Gln Ile Asn Val Ile Asn Asn 
                  355                 360                 365             
          Ala Ile Asn Glu Ser Ser Pro His Tyr Leu Gly Asn Ser Tyr Asp Leu 
              370                 375                 380                 
          Phe Phe Lys Gly His Pro Gly Gly Gly Ile Ile Asn Thr Leu Ile Met 
          385                 390                 395                 400 
          Gln Asn Tyr Pro Ser Met Val Asp Ile Pro Ser Lys Ile Ser Phe Glu 
                          405                 410                 415     
          Val Leu Met Met Thr Asp Met Leu Pro Asp Ala Val Ala Gly Ile Ala 
                      420                 425                 430         
          Ser Ser Leu Tyr Phe Thr Ile Pro Ala Glu Lys Ile Lys Phe Ile Val 
                  435                 440                 445             
          Phe Thr Ser Thr Glu Thr Ile Thr Asp Arg Glu Thr Ala Leu Arg Ser 
              450                 455                 460                 
          Pro Leu Val Gln Val Met Ile Lys Leu Gly Ile Val Lys Glu Glu Asn 
          465                 470                 475                 480 
          Val Leu Phe Trp Ala Asp Leu Pro Asn Cys Glu Thr Gly Val Cys Ile 
                          485                 490                 495     
          Ala Val 
          <![CDATA[<210>  47]]>
          <![CDATA[<211>  188]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  大腸桿菌 K12 MG1655]]>
          <![CDATA[<400>  47]]>
          Met Tyr Glu Arg Tyr Ala Gly Leu Ile Phe Asp Met Asp Gly Thr Ile 
          1               5                   10                  15      
          Leu Asp Thr Glu Pro Thr His Arg Lys Ala Trp Arg Glu Val Leu Gly 
                      20                  25                  30          
          His Tyr Gly Leu Gln Tyr Asp Ile Gln Ala Met Ile Ala Leu Asn Gly 
                  35                  40                  45              
          Ser Pro Thr Trp Arg Ile Ala Gln Ala Ile Ile Glu Leu Asn Gln Ala 
              50                  55                  60                  
          Asp Leu Asp Pro His Ala Leu Ala Arg Glu Lys Thr Glu Ala Val Arg 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Met Leu Leu Asp Ser Val Glu Pro Leu Pro Leu Val Asp Val Val 
                          85                  90                  95      
          Lys Ser Trp His Gly Arg Arg Pro Met Ala Val Gly Thr Gly Ser Glu 
                      100                 105                 110         
          Ser Ala Ile Ala Glu Ala Leu Leu Ala His Leu Gly Leu Arg His Tyr 
                  115                 120                 125             
          Phe Asp Ala Val Val Ala Ala Asp His Val Lys His His Lys Pro Ala 
              130                 135                 140                 
          Pro Asp Thr Phe Leu Leu Cys Ala Gln Arg Met Gly Val Gln Pro Thr 
          145                 150                 155                 160 
          Gln Cys Val Val Phe Glu Asp Ala Asp Phe Gly Ile Gln Ala Ala Arg 
                          165                 170                 175     
          Ala Ala Gly Met Asp Ala Val Asp Val Arg Leu Leu 
                      180                 185             
          <![CDATA[<210>  48]]>
          <![CDATA[<211>  373]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  空腸彎曲桿菌]]>
          <![CDATA[<400>  48]]>
          Met Val Lys Lys Ile Leu Phe Ile Thr Gly Ser Arg Ala Asp Tyr Ser 
          1               5                   10                  15      
          Lys Ile Lys Ser Leu Met Tyr Arg Val Gln Asn Ser Ser Glu Phe Glu 
                      20                  25                  30          
          Leu Tyr Ile Phe Ala Thr Gly Met His Leu Ser Lys Asn Phe Gly Tyr 
                  35                  40                  45              
          Thr Val Lys Glu Leu Tyr Lys Asn Gly Phe Lys Asn Ile Tyr Glu Phe 
              50                  55                  60                  
          Ile Asn Tyr Asp Lys Tyr Tyr Gln Thr Asp Lys Ala Leu Ala Thr Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Ile Asp Gly Phe Ser Arg Tyr Ala Asn Glu Leu Lys Pro Asp Leu Ile 
                          85                  90                  95      
          Val Val His Gly Asp Arg Ile Glu Pro Leu Ala Ala Ala Ile Val Gly 
                      100                 105                 110         
          Ala Leu Asn Asn Ile Leu Val Ala His Ile Glu Gly Gly Glu Ile Ser 
                  115                 120                 125             
          Gly Thr Ile Asp Asp Ser Leu Arg His Ala Ile Ser Lys Leu Ala His 
              130                 135                 140                 
          Ile His Leu Val Asn Asp Glu Phe Ala Lys Arg Arg Leu Met Gln Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Glu Asp Glu Lys Ser Ile Phe Ile Ile Gly Ser Pro Asp Leu Glu 
                          165                 170                 175     
          Leu Leu Asn Asp Asn Lys Ile Ser Leu Ser Glu Ala Lys Lys Tyr Tyr 
                      180                 185                 190         
          Asp Ile Asn Tyr Glu Asn Tyr Ala Leu Leu Met Phe His Pro Val Thr 
                  195                 200                 205             
          Thr Glu Ile Thr Ser Ile Lys Asn Gln Ala Asp Asn Leu Val Lys Ala 
              210                 215                 220                 
          Leu Ile Gln Ser Asn Lys Asn Tyr Ile Val Ile Tyr Pro Asn Asn Asp 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Gly Phe Glu Leu Ile Leu Gln Ser Tyr Glu Glu Phe Lys Asn Asn 
                          245                 250                 255     
          Pro Arg Phe Lys Leu Phe Pro Ser Leu Arg Phe Glu Tyr Phe Ile Thr 
                      260                 265                 270         
          Leu Leu Lys Asn Ala Asp Phe Ile Ile Gly Asn Ser Ser Cys Ile Leu 
                  275                 280                 285             
          Lys Glu Ala Leu Tyr Leu Lys Thr Ala Gly Ile Leu Val Gly Ser Arg 
              290                 295                 300                 
          Gln Asn Gly Arg Leu Gly Asn Glu Asn Thr Leu Lys Val Asn Ala Asn 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Asp Glu Ile Leu Lys Ala Ile Asn Thr Ile His Lys Lys Gln Asp 
                          325                 330                 335     
          Leu Phe Ser Ala Lys Leu Glu Ile Leu Asp Ser Ser Lys Leu Phe Phe 
                      340                 345                 350         
          Glu Tyr Leu Gln Ser Gly Asp Phe Phe Lys Leu Ser Thr Gln Lys Val 
                  355                 360                 365             
          Phe Lys Asp Ile Lys 
              370             
          <![CDATA[<210>  49]]>
          <![CDATA[<211>  415]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  大腸桿菌W]]>
          <![CDATA[<400>  49]]>
          Met Ala Leu Asn Ile Pro Phe Arg Asn Ala Tyr Tyr Arg Phe Ala Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Tyr Ser Phe Leu Phe Phe Ile Ser Trp Ser Leu Trp Trp Ser Leu 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ala Ile Trp Leu Lys Gly His Leu Gly Leu Thr Gly Thr Glu Leu 
                  35                  40                  45              
          Gly Thr Leu Tyr Ser Val Asn Gln Phe Thr Ser Ile Leu Phe Met Met 
              50                  55                  60                  
          Phe Tyr Gly Ile Val Gln Asp Lys Leu Gly Leu Lys Lys Pro Leu Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Trp Cys Met Ser Phe Ile Leu Val Leu Thr Gly Pro Phe Met Ile Tyr 
                          85                  90                  95      
          Val Tyr Glu Pro Leu Leu Gln Ser Asn Phe Ser Val Gly Leu Ile Leu 
                      100                 105                 110         
          Gly Ala Leu Phe Phe Gly Leu Gly Tyr Leu Ala Gly Cys Gly Leu Leu 
                  115                 120                 125             
          Asp Ser Phe Thr Glu Lys Met Ala Arg Asn Phe His Phe Glu Tyr Gly 
              130                 135                 140                 
          Thr Ala Arg Ala Trp Gly Ser Phe Gly Tyr Ala Ile Gly Ala Phe Phe 
          145                 150                 155                 160 
          Ala Gly Ile Phe Phe Ser Ile Ser Pro His Ile Asn Phe Trp Leu Val 
                          165                 170                 175     
          Ser Leu Phe Gly Ala Val Phe Met Met Ile Asn Met Arg Phe Lys Asp 
                      180                 185                 190         
          Lys Asp His Gln Cys Val Ala Ala Asp Ala Gly Gly Val Lys Lys Glu 
                  195                 200                 205             
          Asp Phe Ile Ala Val Phe Lys Asp Arg Asn Phe Trp Val Phe Val Ile 
              210                 215                 220                 
          Phe Ile Val Gly Thr Trp Ser Phe Tyr Asn Ile Phe Asp Gln Gln Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Phe Pro Val Phe Tyr Ser Gly Leu Phe Glu Ser His Asp Val Gly Thr 
                          245                 250                 255     
          Arg Leu Tyr Gly Tyr Leu Asn Ser Phe Gln Val Val Leu Glu Ala Leu 
                      260                 265                 270         
          Cys Met Ala Ile Ile Pro Phe Phe Val Asn Arg Val Gly Pro Lys Asn 
                  275                 280                 285             
          Ala Leu Leu Ile Gly Val Val Ile Met Ala Leu Arg Ile Leu Ser Cys 
              290                 295                 300                 
          Ala Leu Phe Val Asn Pro Trp Ile Ile Ser Leu Val Lys Leu Leu His 
          305                 310                 315                 320 
          Ala Ile Glu Val Pro Leu Cys Val Ile Ser Val Phe Lys Tyr Ser Val 
                          325                 330                 335     
          Ala Asn Phe Asp Lys Arg Leu Ser Ser Thr Ile Phe Leu Ile Gly Phe 
                      340                 345                 350         
          Gln Ile Ala Ser Ser Leu Gly Ile Val Leu Leu Ser Thr Pro Thr Gly 
                  355                 360                 365             
          Ile Leu Phe Asp His Ala Gly Tyr Gln Thr Val Phe Phe Ala Ile Ser 
              370                 375                 380                 
          Gly Ile Val Cys Leu Met Leu Leu Phe Gly Ile Phe Phe Leu Ser Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Lys Arg Glu Gln Ile Val Met Glu Thr Pro Val Pro Ser Ala Ile 
                          405                 410                 415 
          <![CDATA[<210>  50]]>
          <![CDATA[<211>  301]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  運動發酵單胞菌]]>
          <![CDATA[<400>  50]]>
          Met Lys Asn Asp Lys Lys Ile Tyr Gly Cys Ile Glu Gly Gly Gly Thr 
          1               5                   10                  15      
          Lys Phe Met Leu Ala Leu Ile Asp Ser Asp Arg Lys Met Leu Ala Val 
                      20                  25                  30          
          Glu Arg Val Pro Thr Thr Thr Pro Glu Glu Thr Leu Gly Lys Ser Val 
                  35                  40                  45              
          Glu Phe Phe Lys Lys Ala Leu Pro Gln Tyr Ala Asp Ser Phe Ala Ser 
              50                  55                  60                  
          Phe Gly Ile Ala Ser Phe Gly Pro Leu Cys Leu Asp Arg Lys Ser Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Lys Trp Gly Tyr Ile Thr Asn Thr Pro Lys Pro Phe Trp Pro Asn Thr 
                          85                  90                  95      
          Asp Val Val Thr Pro Phe Lys Glu Ala Phe Gly Cys Pro Val Glu Ile 
                      100                 105                 110         
          Asp Thr Asp Val Asn Gly Ala Ala Leu Ala Glu Asn Phe Trp Gly Ala 
                  115                 120                 125             
          Ser Lys Gly Thr His Thr Ser Val Tyr Val Thr Val Gly Thr Gly Phe 
              130                 135                 140                 
          Gly Gly Gly Val Leu Ile Asp Gly Lys Pro Ile His Gly Leu Ala His 
          145                 150                 155                 160 
          Pro Glu Met Gly His Gly Ile Pro Ile Arg His Pro Asp Asp Arg Asp 
                          165                 170                 175     
          Phe Glu Gly Cys Cys Pro Tyr His Gly Gly Cys Tyr Glu Gly Leu Ala 
                      180                 185                 190         
          Ser Gly Thr Ala Ile Arg Lys Arg Trp Gly Lys Ala Leu Asn Glu Met 
                  195                 200                 205             
          Glu Pro Ala Glu Phe Glu Lys Ala Arg Glu Ile Ile Ala Phe Tyr Leu 
              210                 215                 220                 
          Ala His Phe Asn Val Thr Leu Gln Ala Phe Ile Ser Pro Glu Arg Ile 
          225                 230                 235                 240 
          Val Phe Gly Gly Gly Val Met His Val Asp Gly Met Leu Ala Ser Val 
                          245                 250                 255     
          Arg Arg Gln Thr Ala Glu Ile Ala Asn Ser Tyr Phe Glu Gly Ala Asp 
                      260                 265                 270         
          Phe Glu Lys Ile Ile Val Leu Pro Gly Leu Gly Asp Gln Ala Gly Met 
                  275                 280                 285             
          Met Gly Ala Phe Ala Leu Ala Leu Ala Ala Glu Asn Lys 
              290                 295                 300     
          <![CDATA[<210>  51]]>
          <![CDATA[<211>  504]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  青春雙歧桿菌]]>
          <![CDATA[<400>  51]]>
          Met Lys Asn Lys Val Gln Leu Ile Thr Tyr Ala Asp Arg Leu Gly Asp 
          1               5                   10                  15      
          Gly Thr Ile Lys Ser Met Thr Asp Ile Leu Arg Thr Arg Phe Asp Gly 
                      20                  25                  30          
          Val Tyr Asp Gly Val His Ile Leu Pro Phe Phe Thr Pro Phe Asp Gly 
                  35                  40                  45              
          Ala Asp Ala Gly Phe Asp Pro Ile Asp His Thr Lys Val Asp Glu Arg 
              50                  55                  60                  
          Leu Gly Ser Trp Asp Asp Val Ala Glu Leu Ser Lys Thr His Asn Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Met Val Asp Ala Ile Val Asn His Met Ser Trp Glu Ser Lys Gln Phe 
                          85                  90                  95      
          Gln Asp Val Leu Ala Lys Gly Glu Glu Ser Glu Tyr Tyr Pro Met Phe 
                      100                 105                 110         
          Leu Thr Met Ser Ser Val Phe Pro Asn Gly Ala Thr Glu Glu Asp Leu 
                  115                 120                 125             
          Ala Gly Ile Tyr Arg Pro Arg Pro Gly Leu Pro Phe Thr His Tyr Lys 
              130                 135                 140                 
          Phe Ala Gly Lys Thr Arg Leu Val Trp Val Ser Phe Thr Pro Gln Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Val Asp Ile Asp Thr Asp Ser Asp Lys Gly Trp Glu Tyr Leu Met Ser 
                          165                 170                 175     
          Ile Phe Asp Gln Met Ala Ala Ser His Val Ser Tyr Ile Arg Leu Asp 
                      180                 185                 190         
          Ala Val Gly Tyr Gly Ala Lys Glu Ala Gly Thr Ser Cys Phe Met Thr 
                  195                 200                 205             
          Pro Lys Thr Phe Lys Leu Ile Ser Arg Leu Arg Glu Glu Gly Val Lys 
              210                 215                 220                 
          Arg Gly Leu Glu Ile Leu Ile Glu Val His Ser Tyr Tyr Lys Lys Gln 
          225                 230                 235                 240 
          Val Glu Ile Ala Ser Lys Val Asp Arg Val Tyr Asp Phe Ala Leu Pro 
                          245                 250                 255     
          Pro Leu Leu Leu His Ala Leu Ser Thr Gly His Val Glu Pro Val Ala 
                      260                 265                 270         
          His Trp Thr Asp Ile Arg Pro Asn Asn Ala Val Thr Val Leu Asp Thr 
                  275                 280                 285             
          His Asp Gly Ile Gly Val Ile Asp Ile Gly Ser Asp Gln Leu Asp Arg 
              290                 295                 300                 
          Ser Leu Lys Gly Leu Val Pro Asp Glu Asp Val Asp Asn Leu Val Asn 
          305                 310                 315                 320 
          Thr Ile His Ala Asn Thr His Gly Glu Ser Gln Ala Ala Thr Gly Ala 
                          325                 330                 335     
          Ala Ala Ser Asn Leu Asp Leu Tyr Gln Val Asn Ser Thr Tyr Tyr Ser 
                      340                 345                 350         
          Ala Leu Gly Cys Asn Asp Gln His Tyr Ile Ala Ala Arg Ala Val Gln 
                  355                 360                 365             
          Phe Phe Leu Pro Gly Val Pro Gln Val Tyr Tyr Val Gly Ala Leu Ala 
              370                 375                 380                 
          Gly Lys Asn Asp Met Glu Leu Leu Arg Lys Thr Asn Asn Gly Arg Asp 
          385                 390                 395                 400 
          Ile Asn Arg His Tyr Tyr Ser Thr Ala Glu Ile Asp Glu Asn Leu Lys 
                          405                 410                 415     
          Arg Pro Val Val Lys Ala Leu Asn Ala Leu Ala Lys Phe Arg Asn Glu 
                      420                 425                 430         
          Leu Asp Ala Phe Asp Gly Thr Phe Ser Tyr Thr Thr Asp Asp Asp Thr 
                  435                 440                 445             
          Ser Ile Ser Phe Thr Trp Arg Gly Glu Thr Ser Gln Ala Thr Leu Thr 
              450                 455                 460                 
          Phe Glu Pro Lys Arg Gly Leu Gly Val Asp Asn Thr Thr Pro Val Ala 
          465                 470                 475                 480 
          Met Leu Glu Trp Glu Asp Ser Ala Gly Asp His Arg Ser Asp Asp Leu 
                          485                 490                 495     
          Ile Ala Asn Pro Pro Val Val Ala 
                      500                 
          <![CDATA[<210>  52]]>
          <![CDATA[<211>  417]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  大腸桿菌K12 MG1655]]>
          <![CDATA[<400>  52]]>
          Met Tyr Tyr Leu Lys Asn Thr Asn Phe Trp Met Phe Gly Leu Phe Phe 
          1               5                   10                  15      
          Phe Phe Tyr Phe Phe Ile Met Gly Ala Tyr Phe Pro Phe Phe Pro Ile 
                      20                  25                  30          
          Trp Leu His Asp Ile Asn His Ile Ser Lys Ser Asp Thr Gly Ile Ile 
                  35                  40                  45              
          Phe Ala Ala Ile Ser Leu Phe Ser Leu Leu Phe Gln Pro Leu Phe Gly 
              50                  55                  60                  
          Leu Leu Ser Asp Lys Leu Gly Leu Arg Lys Tyr Leu Leu Trp Ile Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Thr Gly Met Leu Val Met Phe Ala Pro Phe Phe Ile Phe Ile Phe Gly 
                          85                  90                  95      
          Pro Leu Leu Gln Tyr Asn Ile Leu Val Gly Ser Ile Val Gly Gly Ile 
                      100                 105                 110         
          Tyr Leu Gly Phe Cys Phe Asn Ala Gly Ala Pro Ala Val Glu Ala Phe 
                  115                 120                 125             
          Ile Glu Lys Val Ser Arg Arg Ser Asn Phe Glu Phe Gly Arg Ala Arg 
              130                 135                 140                 
          Met Phe Gly Cys Val Gly Trp Ala Leu Cys Ala Ser Ile Val Gly Ile 
          145                 150                 155                 160 
          Met Phe Thr Ile Asn Asn Gln Phe Val Phe Trp Leu Gly Ser Gly Cys 
                          165                 170                 175     
          Ala Leu Ile Leu Ala Val Leu Leu Phe Phe Ala Lys Thr Asp Ala Pro 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Ala Thr Val Ala Asn Ala Val Gly Ala Asn His Ser Ala Phe 
                  195                 200                 205             
          Ser Leu Lys Leu Ala Leu Glu Leu Phe Arg Gln Pro Lys Leu Trp Phe 
              210                 215                 220                 
          Leu Ser Leu Tyr Val Ile Gly Val Ser Cys Thr Tyr Asp Val Phe Asp 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Gln Phe Ala Asn Phe Phe Thr Ser Phe Phe Ala Thr Gly Glu Gln 
                          245                 250                 255     
          Gly Thr Arg Val Phe Gly Tyr Val Thr Thr Met Gly Glu Leu Leu Asn 
                      260                 265                 270         
          Ala Ser Ile Met Phe Phe Ala Pro Leu Ile Ile Asn Arg Ile Gly Gly 
                  275                 280                 285             
          Lys Asn Ala Leu Leu Leu Ala Gly Thr Ile Met Ser Val Arg Ile Ile 
              290                 295                 300                 
          Gly Ser Ser Phe Ala Thr Ser Ala Leu Glu Val Val Ile Leu Lys Thr 
          305                 310                 315                 320 
          Leu His Met Phe Glu Val Pro Phe Leu Leu Val Gly Cys Phe Lys Tyr 
                          325                 330                 335     
          Ile Thr Ser Gln Phe Glu Val Arg Phe Ser Ala Thr Ile Tyr Leu Val 
                      340                 345                 350         
          Cys Phe Cys Phe Phe Lys Gln Leu Ala Met Ile Phe Met Ser Val Leu 
                  355                 360                 365             
          Ala Gly Asn Met Tyr Glu Ser Ile Gly Phe Gln Gly Ala Tyr Leu Val 
              370                 375                 380                 
          Leu Gly Leu Val Ala Leu Gly Phe Thr Leu Ile Ser Val Phe Thr Leu 
          385                 390                 395                 400 
          Ser Gly Pro Gly Pro Leu Ser Leu Leu Arg Arg Gln Val Asn Glu Val 
                          405                 410                 415     
          Ala 
          <![CDATA[<210>  53]]>
          <![CDATA[<211>  410]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  阪崎克羅諾桿菌菌株 MOD1_LR753]]>
          <![CDATA[<400>  53]]>
          Met Gln Thr His Ala Asn Arg Thr Gly Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Glu Gln Tyr Gln 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Val Glu Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Ala Gly Val Ala Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Leu Ala Arg Asp Ile Glu Gln Phe Thr Val Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Ile Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Ala Ala Pro Trp Glu Met Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Ala Leu Ala Ala Ile Ser Phe Phe Gly Leu Trp Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Leu Gly Glu Lys Leu Ser Leu Arg Glu Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Lys Ala Val Leu Lys Asn Leu Arg Phe Val Ser Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Ile Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Val Ile Ile Ile Ser Gly Glu Gln Met Ser Thr Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Ile Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Lys Leu Thr Ala Arg Arg Ser Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Val Met Gly Gly Trp Pro Met Met Phe Gly Leu Ala Leu Ala Ala Leu 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Ile Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Ile Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Ile Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Asp Ile Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Thr Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Ile Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Trp Leu Gly Gly Gly Asn Ala Leu Phe Asn Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Phe Ala Ser Gly Leu Leu Trp Leu Gly Leu Met Val Ile Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Thr Val Gly Thr Arg Pro Glu Ala 
                          405                 410 
          <![CDATA[<210>  54]]>
          <![CDATA[<211>  411]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  粉末佛朗哥氏菌(Franconibacter pulveris) LMG 24059]]>
          <![CDATA[<400>  54]]>
          Met Gln Asn Lys Thr Met Thr Lys Lys Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Glu Gln Tyr Gln 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Met Glu Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Thr Gly Val Val Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Leu Ala Gln Asn Ile Glu Gln Phe Thr Ala Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Ile Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Met Ala Pro Trp Glu Met Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Val Leu Ala Ala Ile Ala Tyr Tyr Gly Leu Trp Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Leu Gly Glu Lys Leu Ser Leu Lys Glu Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Lys Ala Val Met Lys Asn Ala Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Thr Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Val Ile Ile Ile Ser Gly Glu Gln Leu Ser Ser Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Ala Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Ala Leu Ala Lys Leu Thr Ser Arg Arg Thr Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Ile Leu Gly Gly Trp Pro Ile Thr Leu Gly Leu Val Ile Ala Ala Leu 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Leu Leu Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Val Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Leu Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Asp Ile Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Tyr Leu Ala Gly Gly Asn Gly Leu Phe Ser Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Leu Asn Gly Leu Leu Trp Leu Gly Met Met Val Ile Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Thr Val Gly Asn Ser Leu Gln Pro Gln 
                          405                 410     
          <![CDATA[<210>  55]]>
          <![CDATA[<211>  410]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  霍氏腸桿菌(Enterobacter hormaechei)菌株 017]]>
          <![CDATA[<400>  55]]>
          Met Ile Asn Arg Ser Ser Ser Gly Asn Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Glu Gln Tyr Asn 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Ile Glu Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Thr Gly Val Val Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Leu Ala Gln Asn Ile Glu Gln Phe Thr Leu Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Val Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Val Ala Pro Trp Glu Gly Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Ala Leu Ala Ala Ile Ser Phe Phe Gly Leu His Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Leu Gly Glu Lys Leu Ser Leu Lys Glu Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Lys Ala Val Leu Lys Asn Gly Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Thr Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Val Ile Ile Ile Ser Gly Glu Gln Leu Ser Ser Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Ile Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Arg Leu Thr Ser Arg Arg Thr Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Ile Met Gly Gly Trp Pro Ile Ala Ala Gly Leu Ile Ile Ala Ala Val 
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          Ala Thr Val Ala Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
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          Ser Ile Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Val Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Glu Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Tyr Ala Phe Gly Gly Asn Gly Leu Phe Ser Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Ala Asn Gly Val Leu Trp Val Gly Leu Met Val Val Phe Leu Lys 
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          Asp Lys Arg Val Gly Asn Ala Leu Gln Pro 
                          405                 410 
          <![CDATA[<210>  56]]>
          <![CDATA[<211>  410]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  柯氏檸檬酸桿菌(Citrobacter koseri)菌株 NCTC10771]]>
          <![CDATA[<400>  56]]>
          Met Gln Asn Leu Ser Gln Thr Gly Val Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Glu Gln Tyr Gln 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Ile Asp Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
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          Arg Arg Pro Val Met Leu Ala Gly Val Ile Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Leu Ala Gln Asn Ile Glu Gln Phe Thr Leu Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Val Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
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          Gly Ala Ala Trp Val His Val Leu Pro Trp Glu Glu Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Val Leu Ala Ala Ile Ala Phe Val Gly Leu Gln Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Leu Gly Glu Lys Leu Ser Leu Lys Glu Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Lys Leu Val Leu Lys Asn Val Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Leu Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Ile Ile Ile Ile Ser Gly Glu Gln Leu Ser Ser Tyr Glu 
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          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Val Phe Gly Ala Leu Ile Ala Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Arg Leu Thr Ser Arg Arg Thr Val Arg Ala Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Ile Met Gly Gly Trp Pro Ile Val Ala Gly Leu Leu Ile Ala Ala Ala 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Val Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Val Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Val Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Asp Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Tyr Leu Ser Gly Gly Asn Gly Leu Phe Ser Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Ala Asn Gly Ile Leu Trp Leu Leu Leu Met Val Ile Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Arg Val Gly Asp Ser Arg Glu Gly 
                          405                 410 
          <![CDATA[<210>  57]]>
          <![CDATA[<211>  410]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  腸道沙門氏菌(Salmonella enterica) arizonae serovar亞種serovar 41:z4,z23:- 菌株 TAMU30EF]]>
          <![CDATA[<400>  57]]>
          Met His Asn Arg Leu Gln Ser Gly Val Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Glu Gln Tyr Gln 
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          Ala Gly Leu Asp Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Ala Gly Val Val Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Leu Ala Lys Asn Ile Glu Gln Phe Thr Phe Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Ile Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Val Leu Pro Trp Glu Gly Met Phe Ile Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Ala Leu Ala Ala Ile Ala Phe Phe Gly Leu Gln Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Arg Gly Glu Thr Leu Ser Phe Lys Ala Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Arg Leu Val Ile Lys Asn Arg Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Leu Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
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          Gln Ser Pro Ile Ile Ile Ile Ser Gly Glu Gln Leu Ser Ser Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Val Phe Gly Ala Leu Ile Ala Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Arg Leu Thr Ser Arg Arg Thr Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Val Met Gly Gly Trp Pro Ile Val Ala Gly Leu Val Ile Ala Ala Ala 
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          Ala Thr Val Val Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Val Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Leu Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ser Ser Asp Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Trp Leu Ser Gly Gly Asn Gly Leu Phe Ser Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Ala Asn Gly Ile Leu Trp Leu Leu Leu Met Leu Val Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Arg Thr Gly Asn Leu His Thr Val 
                          405                 410 
          <![CDATA[<210>  58]]>
          <![CDATA[<211>  408]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  副痢疾桿菌菌株 585219]]>
          <![CDATA[<400>  58]]>
          Met Gln Asn Lys Leu Ala Ser Gly Ala Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Glu Gln Tyr Gln 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Ile Asp Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Ala Gly Val Leu Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Ile Leu Leu Ala Gln Asn Ile Glu Gln Phe Thr Met Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Ile Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Val Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Ile His Val Leu Pro Trp Glu Gly Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Ala Leu Ala Ala Ile Ser Phe Phe Gly Leu Gln Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Ile Gly Glu Lys Leu Ser Leu Lys Glu Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Lys Leu Val Leu Lys Asn Gly Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala Gln Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Ile Ile Ile Ile Thr Gly Glu Gln Leu Ser Ser Tyr Glu Tyr Gly 
                          245                 250                 255     
          Leu Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Ala Gly Asn Leu Leu 
                      260                 265                 270         
          Leu Ala Arg Leu Thr Ser Arg Arg Thr Val Arg Ser Leu Ile Ile Met 
                  275                 280                 285             
          Gly Gly Trp Pro Ile Met Ile Gly Leu Leu Val Ala Ala Ala Ala Thr 
              290                 295                 300                 
          Val Ile Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu Ser Ile 
          305                 310                 315                 320 
          Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Leu Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg Leu Thr 
                          325                 330                 335     
          Leu Phe Ala Ser Asp Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala Met Gly 
                      340                 345                 350         
          Met Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Ile Ser Lys His 
                  355                 360                 365             
          Ala Trp Leu Asn Gly Gly Asn Gly Leu Phe Asn Leu Phe Asn Leu Val 
              370                 375                 380                 
          Asn Gly Ile Leu Trp Leu Ser Leu Met Val Ile Phe Leu Lys Asp Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Gln Met Gly Asn Ser His Glu Gly 
                          405             
          <![CDATA[<210>  59]]>
          <![CDATA[<211>  410]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  肺炎克雷伯氏菌菌株 UMB0819]]>
          <![CDATA[<400>  59]]>
          Met Leu Asn Arg Ser Ser Ser Gly Ser Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Ala Gln Tyr Asn 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Ile Glu Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Thr Gly Val Val Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Leu Ala Gln Asn Ile Glu Gln Phe Thr Leu Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Val Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Val Ala Pro Trp Glu Gly Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Val Leu Ala Ala Ile Ala Phe Phe Gly Leu His Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Leu Gly Glu Lys Leu Ser Leu Lys Glu Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Lys Ala Val Leu Gln Asn Gly Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Thr Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Val Ile Ile Ile Ser Gly Glu Lys Leu Ser Ser Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Ile Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Arg Leu Thr Ser Arg Arg Thr Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Ile Met Gly Gly Trp Pro Ile Ala Ala Gly Leu Ile Leu Ala Ala Val 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Ala Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Ile Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Val Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Glu Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Tyr Ala Leu Gly Gly Asn Gly Leu Phe Ser Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Ala Asn Gly Val Leu Trp Val Gly Leu Met Val Val Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Arg Val Gly Asn Ala Leu Gln Pro 
                          405                 410 
          <![CDATA[<210>  60]]>
          <![CDATA[<211>  410]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  大腸桿菌菌株 AMC_967]]>
          <![CDATA[<400>  60]]>
          Met Gln Asn Lys Leu Ala Ser Gly Ala Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Glu Gln Tyr Gln 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Ile Asp Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Ala Gly Val Val Trp Phe Ile Ile Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Ile Leu Leu Ala Gln Asn Ile Glu Gln Phe Thr Leu Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Ile Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Ile His Val Leu Pro Trp Glu Gly Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Ala Leu Ala Ala Ile Ser Phe Phe Gly Leu Gln Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Ile Gly Glu Lys Leu Ser Leu Lys Glu Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Lys Leu Val Leu Lys Asn Gly Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Leu Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Ile Ile Ile Ile Thr Gly Glu Gln Leu Ser Ser Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Ala Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Leu Leu Ala Arg Leu Thr Ser Arg Arg Thr Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Ile Met Gly Gly Trp Pro Ile Met Ile Gly Leu Leu Val Ala Ala Ala 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Ile Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Ala Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Leu Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Leu Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Asp Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Ile Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Trp Leu Asn Gly Gly Asn Gly Leu Phe Asn Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Val Asn Gly Ile Leu Trp Leu Leu Leu Met Val Ile Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Gln Met Gly Asn Ser His Glu Gly 
                          405                 410 
          <![CDATA[<210>  61]]>
          <![CDATA[<211>  410]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  克雷伯氏肺炎桿菌VAKPC309]]>
          <![CDATA[<400>  61]]>
          Met Gln Asn Tyr Ser Leu Ser Gly Arg Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Gln Glu Phe Gln 
                  35                  40                  45              
          Val Gly Asn Glu Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Thr Gly Val Val Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Leu Ala Gln Thr Ile Glu Gln Phe Thr Leu Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Ile Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Val Leu Pro Trp Glu Met Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Val Leu Ala Ala Ile Ser Phe Phe Gly Leu Gln Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Leu Gly Glu Lys Leu Ser Val Lys Glu Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Arg Leu Val Leu Lys Asn Leu Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Thr Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Val Ile Ile Ile Ser Gly Glu Gln Ala Thr Ser Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Met Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Ala Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Arg Leu Thr Ala Arg Arg Thr Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Ile Met Gly Gly Trp Pro Ile Met Phe Gly Leu Ile Leu Ser Ala Ala 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Val Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Phe Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Leu Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Glu Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Leu Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Tyr Glu Leu Gly Gly Asn Gly Leu Phe Ser Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Leu Gly Gly Val Leu Trp Leu Gly Leu Met Ile Tyr Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Ser Val Gly Asn Ser Gln Gln Gly 
                          405                 410 
          <![CDATA[<210>  62]]>
          <![CDATA[<211>  411]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  產酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)菌株 4928STDY7071490]]>
          <![CDATA[<400>  62]]>
          Met His Asn Ser Ser Leu Ser Gly Lys Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ala Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ser Val Val Glu Glu Phe Gly 
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          Val Gly Asn Glu Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Thr Gly Val Val Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Leu Ala Gln Thr Ile Glu Gln Phe Thr Leu Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Ile Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Ile Leu Pro Trp Glu Met Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Val Leu Ala Ala Ile Ala Phe Phe Gly Leu Gln Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Met Gly Glu Lys Leu Ser Val Lys Glu Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Arg Glu Val Leu Lys Asn Leu Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Thr Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Val Ile Ile Ile Ser Gly Glu Gln Ala Thr Ser Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Ala Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Arg Gln Thr Ser Arg Lys Thr Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Ile Leu Gly Gly Trp Pro Ile Met Leu Gly Leu Leu Ile Ser Ala Val 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Ala Ser Thr His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Val Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Leu Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Glu Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Tyr Glu Ser Gly Gly Ser Gly Leu Phe Ser Leu Leu Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Leu Ser Gly Val Leu Trp Leu Ala Met Met Val Tyr Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Arg Val Gly Ser Ser Leu Glu Pro Gln 
                          405                 410     
          <![CDATA[<210>  63]]>
          <![CDATA[<211>  411]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  密西根克雷伯氏菌(Klebsiella michiganensis)菌株 A2]]>
          <![CDATA[<400>  63]]>
          Met His Asn Ser Ser Leu Ser Gly Lys Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ala Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ser Val Val Glu Glu Phe Gly 
                  35                  40                  45              
          Val Gly Asn Glu Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Thr Gly Val Val Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Leu Ala Gln Thr Ile Glu Gln Phe Thr Leu Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Ile Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Leu Leu Leu Trp Glu Met Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Val Leu Ala Ala Ile Ala Phe Phe Gly Leu Gln Lys Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Met Gly Glu Lys Leu Ser Val Lys Glu Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Arg Glu Val Leu Lys Asn Leu Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Thr Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Val Ile Ile Ile Ser Gly Glu Gln Ala Thr Ser Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Ala Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Arg Gln Thr Ser Arg Lys Thr Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Ile Leu Gly Gly Trp Pro Ile Met Ile Gly Leu Leu Ile Ser Ala Val 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Ala Ser Thr His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Val Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Leu Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Glu Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Tyr Glu Ala Gly Gly Ser Gly Leu Phe Ser Leu Leu Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Leu Ser Gly Val Leu Trp Leu Ala Met Thr Val Tyr Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Arg Val Gly Ser Ser Leu Glu Pro Gln 
                          405                 410     
          <![CDATA[<210>  64]]>
          <![CDATA[<211>  409]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  多菌杆菌(Pluralibacter gergoviae)菌株 FDAARGOS_186]]>
          <![CDATA[<400>  64]]>
          Met Gln Asn His Ala Leu Ser Gly Lys Arg Leu Gly Arg Ser Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Ala Glu Phe Gln 
                  35                  40                  45              
          Ala Ser Thr Glu Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Val Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Ala Gly Val Val Trp Phe Ile Leu Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Leu Val Gln Asn Ile Glu Gln Phe Thr Leu Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Cys Gly Leu Cys Phe Val Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Tyr Glu Glu Ala Val Ser Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Ala Ala Ser Trp Glu Ser Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Ala Leu Ala Ala Val Ala Phe Val Gly Leu Gln Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Leu Gly Glu Arg Leu Ser Leu Lys Glu Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly His Asp Tyr Gly Leu Val Leu Lys Asn Leu Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Thr Gly Phe Ile Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Val Ile Ile Ile Ser Gly Glu Gln Ala Ser Ser Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Met Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Ala Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Lys Leu Thr Ala Arg Cys Ser Val Arg Trp Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Ile Ala Gly Gly Trp Pro Ala Met Thr Gly Leu Leu Val Ala Ala Leu 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Val Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Ile Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Ile Ser Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Glu Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ser Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Val Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Ile Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Tyr Gln Leu Gly Gly Ser Gly Leu Phe Ser Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Leu Ser Gly Ala Leu Trp Leu Gly Leu Ile Ile Tyr Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Arg Val Gly Ser Gly Asn Arg 
                          405                 
          <![CDATA[<210>  65]]>
          <![CDATA[<211>  410]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  抗壞血克呂沃爾氏菌 ATCC 33433]]>
          <![CDATA[<400>  65]]>
          Met Asp Thr Ser Ser Ser Arg Lys Arg Leu Gly Arg Lys Ala Ile Leu 
          1               5                   10                  15      
          Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly Asn 
                      20                  25                  30          
          Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Lys Glu Phe Asn Ala 
                  35                  40                  45              
          Gly Asn Glu Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly Gly 
              50                  55                  60                  
          Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly Arg 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Pro Val Met Leu Thr Gly Val Ile Trp Phe Ile Val Thr Cys Leu 
                          85                  90                  95      
          Ala Thr Leu Leu Val Asn Asn Ile Glu Gln Phe Thr Phe Leu Arg Phe 
                      100                 105                 110         
          Leu Gln Gly Val Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala Ala 
                  115                 120                 125             
          Ile Gln Glu Ser Phe Asp Glu Ala Thr Cys Ile Lys Ile Thr Ala Leu 
              130                 135                 140                 
          Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Ala Ala Trp Ile His Val Ala Arg Trp Glu Gly Met Phe Val Leu Phe 
                          165                 170                 175     
          Ala Ala Leu Ser Ala Ile Ala Phe Val Gly Leu Phe Lys Ser Met Pro 
                      180                 185                 190         
          Glu Thr Ala Thr Arg Ile Gly Glu Thr Leu Ser Leu Lys Ala Leu Gly 
                  195                 200                 205             
          Arg Asp Tyr Arg Glu Val Leu Lys Asn Gly Arg Phe Val Ala Gly Ala 
              210                 215                 220                 
          Leu Ala Thr Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala Gln 
          225                 230                 235                 240 
          Ser Pro Val Ile Ile Ile Ser Gly Glu His Ala Ser Ser Tyr Glu Tyr 
                          245                 250                 255     
          Gly Leu Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Leu Gly Asn Leu 
                      260                 265                 270         
          Val Leu Ala Arg Leu Thr Ser Arg Arg Thr Val Arg Ala Leu Ile Ile 
                  275                 280                 285             
          Ala Gly Gly Tyr Pro Ile Met Phe Gly Leu Val Leu Ala Ala Ala Ala 
              290                 295                 300                 
          Thr Val Val Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu Ser 
          305                 310                 315                 320 
          Phe Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Leu Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg Leu 
                          325                 330                 335     
          Thr Leu Phe Ala Ser Asp Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala Met 
                      340                 345                 350         
          Gly Met Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Leu Ser Lys 
                  355                 360                 365             
          His Cys Tyr Glu Leu Gly Gly Ile Gly Leu Phe Ser Leu Phe Asn Leu 
              370                 375                 380                 
          Ala Gly Gly Leu Leu Trp Leu Gly Leu Met Thr Met Phe Leu Arg Asp 
          385                 390                 395                 400 
          Lys Ala Val Gly Ser Gly Leu Gln Pro Gln 
                          405                 410 
          <![CDATA[<210>  66]]>
          <![CDATA[<211>  409]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  神戶腸桿菌]]>
          <![CDATA[<400>  66]]>
          Met Gln Asn His Ser Leu Pro Gly Arg Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Ala 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Glu Gln Tyr Asn 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Ile Glu Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Thr Gly Val Val Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Leu Ala Gln Asp Ile Glu Gln Phe Thr Leu Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Val Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Asp Glu Ala Thr Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Ala Ala Pro Trp Glu Gly Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Val Leu Ala Ala Ile Ala Phe Phe Gly Leu His Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Leu Gly Glu Pro Leu Ser Leu Asn Ala Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Lys Ala Val Leu Lys Asn Gly Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Thr Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Ile Ile Ile Ile Ser Ala Glu Gly Met Ser Ser Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Ile Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Arg Leu Thr Ser Arg Arg Thr Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Ile Met Gly Gly Gly Pro Ile Val Ala Gly Leu Leu Val Ala Ala Val 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Ala Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Ile Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Leu Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Asp Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Ala Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Phe Leu Ala Gly Gly Asn Gly Leu Phe Ser Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Ala Asn Gly Leu Ile Trp Leu Ala Leu Met Val Val Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Thr Val Gly Asn Ala Leu Ser 
                          405                 
          <![CDATA[<210>  67]]>
          <![CDATA[<211>  409]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  萊略特菌sp. WB101]]>
          <![CDATA[<400>  67]]>
          Met Leu Asn Arg Ser Ser Ser Gly Asn Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Glu Gln Tyr Asn 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Ile Glu Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Thr Gly Val Val Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Ile Leu Leu Ala Gln Thr Ile Glu Gln Phe Thr Leu Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Val Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Val Ala Pro Trp Glu Gly Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Ala Leu Ala Ala Ile Ser Phe Phe Gly Leu His Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Leu Gly Glu Lys Leu Ser Leu Lys Glu Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Lys Glu Val Leu Arg Asn Gly Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Thr Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Val Ile Ile Ile Ser Gly Glu Lys Leu Ser Ser Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Val Phe Gly Ala Leu Ile Ile Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Arg Leu Thr Ser Arg Arg Ser Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Ile Met Gly Gly Trp Pro Ile Val Ala Gly Leu Val Val Ala Ala Val 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Ala Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Ile Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Leu Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Glu Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Tyr Ser Phe Gly Gly Asn Gly Leu Phe Ser Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Ala Asn Gly Val Leu Trp Leu Gly Leu Met Val Met Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Arg Val Gly Ser Ala Leu Gln 
                          405                 
          <![CDATA[<210>  68]]>
          <![CDATA[<211>  410]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  弗氏檸檬酸桿菌]]>
          <![CDATA[<400>  68]]>
          Met Gln Asn Arg Leu Ser Ser Gly Ala Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Glu Gln Tyr Gln 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Leu Asp Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Val Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Thr Gly Val Val Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Phe Ala Gln Asn Ile Glu Gln Phe Thr Phe Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Ile Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Val Leu Pro Trp Glu Gly Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Ala Leu Ala Ala Ile Ala Phe Phe Gly Leu Gln Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Leu Gly Glu Lys Leu Ser Ile Lys Glu Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Lys Asp Tyr Lys Leu Val Leu Lys Asn Val Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Leu Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Ile Ile Ile Ile Ser Gly Glu His Leu Ser Ser Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Ala Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Arg Leu Thr Ser Arg Arg Thr Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Ile Met Gly Gly Trp Pro Ile Ser Val Gly Leu Ile Ile Ala Ala Ala 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Val Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Leu Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Val Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Glu Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Leu Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Tyr Leu Leu Gly Gly Asn Gly Leu Phe Ser Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Ala Ser Gly Val Leu Trp Leu Ile Leu Met Val Ile Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Arg Val Gly Asn Ser Arg Glu Gly 
                          405                 410 
          <![CDATA[<210>  69]]>
          <![CDATA[<211>  410]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  腸道沙門氏菌Salamae亞種]]>
          <![CDATA[<400>  69]]>
          Met His Asn Arg Leu Gln Ser Gly Gly Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Ala Gln Tyr Gln 
                  35                  40                  45              
          Ala Ser Leu Asp Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Ala Gly Val Val Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Leu Ala Lys Asn Ile Glu Gln Phe Thr Phe Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Ile Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Val Leu Pro Trp Glu Gly Met Phe Ile Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Val Leu Ala Ala Ile Ala Phe Phe Gly Leu Gln Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Arg Gly Glu Thr Leu Ser Phe Lys Val Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Arg Leu Val Ile Lys Asn Arg Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Leu Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Ile Ile Ile Ile Ser Gly Glu Gln Leu Ser Ser Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Val Phe Gly Ala Leu Ile Ala Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Arg Leu Thr Ser Arg Arg Thr Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Val Met Gly Gly Trp Pro Ile Val Ala Gly Leu Ile Ile Ala Ala Ala 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Val Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Val Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Leu Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ser Ser Asp Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Trp Leu Ser Gly Gly Asn Gly Leu Phe Ser Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Ala Asn Gly Ile Leu Trp Leu Leu Leu Met Leu Val Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Arg Thr Gly Asp Ser Gln Thr Gly 
                          405                 410 
          <![CDATA[<210>  70]]>
          <![CDATA[<211>  408]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  副痢疾桿菌]]>
          <![CDATA[<400>  70]]>
          Met Gln Asn Lys Leu Ala Ser Gly Ala Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Glu Gln Tyr Gln 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Ile Asp Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Ala Gly Val Val Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Ile Leu Leu Ala Gln Asn Ile Glu Gln Phe Thr Leu Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Ile Ser Phe Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Ile His Val Leu Pro Trp Glu Gly Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Ala Leu Ala Ala Ile Ser Phe Phe Gly Leu Gln Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Met Arg Ile Gly Glu Lys Leu Ser Leu Lys Glu Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Lys Leu Val Leu Lys Asn Gly Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala Gln Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Ile Ile Ile Ile Thr Gly Glu Gln Leu Ser Ser Tyr Glu Tyr Gly 
                          245                 250                 255     
          Leu Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Ala Gly Asn Leu Leu 
                      260                 265                 270         
          Leu Ala Arg Leu Thr Ser Arg Arg Thr Val Arg Ser Leu Ile Ile Met 
                  275                 280                 285             
          Gly Gly Trp Pro Ile Met Ile Gly Leu Leu Val Ala Ala Ala Ala Thr 
              290                 295                 300                 
          Val Ile Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu Ser Ile 
          305                 310                 315                 320 
          Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Leu Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg Leu Thr 
                          325                 330                 335     
          Leu Phe Ala Ser Asp Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala Met Gly 
                      340                 345                 350         
          Met Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Ile Ser Lys His 
                  355                 360                 365             
          Ala Trp Leu Asn Gly Gly Asn Gly Leu Phe Asn Leu Phe Asn Leu Val 
              370                 375                 380                 
          Asn Gly Ile Leu Trp Leu Ser Leu Met Val Ile Phe Leu Lys Asp Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Gln Met Gly Asn Ser His Gly Gly 
                          405             
          <![CDATA[<210>  71]]>
          <![CDATA[<211>  410]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  阪崎腸桿菌菌株 MOD1_LR634]]>
          <![CDATA[<400>  71]]>
          Met Gln Thr His Ala Asn Arg Thr Gly Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Glu Gln Tyr Gln 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Val Glu Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Ala Gly Val Ala Trp Phe Ile Val Ala Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Leu Ala Gln Asn Ile Glu Gln Phe Thr Val Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Ile Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Ala Ala Pro Trp Glu Met Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Val Leu Ala Thr Ile Ser Phe Phe Gly Leu Trp Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Leu Gly Glu Lys Leu Ser Leu Arg Glu Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Lys Ala Val Leu Lys Asn Leu Arg Phe Val Ser Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Ile Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Val Ile Ile Ile Ser Gly Glu Gln Met Ser Thr Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Val Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Lys Leu Thr Ala Arg Arg Ser Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Val Met Gly Gly Trp Pro Met Met Phe Gly Leu Ala Leu Ala Ala Leu 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Ile Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Ile Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Ile Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Asp Ile Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Thr Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Ile Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Trp Leu Gly Gly Gly Asn Ala Leu Phe Asn Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Phe Ala Ser Gly Leu Leu Trp Leu Gly Leu Met Val Ile Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Thr Val Gly Thr Arg Pro Glu Ala 
                          405                 410 
          <![CDATA[<210>  72]]>
          <![CDATA[<211>  410]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  Cronobacter condimenti 菌株 s37]]>
          <![CDATA[<400>  72]]>
          Met Gln Thr His Ala Asn Arg Thr Gly Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Glu Gln Tyr Gln 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Val Glu Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Ala Gly Val Val Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Leu Ala Gln Thr Ile Glu Gln Phe Thr Val Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Ile Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Ala Ala Pro Trp Glu Met Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Ala Leu Ala Ala Ile Ser Phe Phe Gly Leu Trp Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Leu Gly Glu Lys Leu Ser Leu Arg Glu Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Lys Ala Val Leu Lys Asn Leu Arg Phe Val Ser Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Ile Gly Phe Ile Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Val Ile Ile Ile Ser Gly Glu Gln Met Ser Thr Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Val Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Leu Leu Ala Lys Leu Thr Ala Arg Arg Ser Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Ile Met Gly Gly Trp Pro Met Met Ile Gly Leu Ala Leu Ala Ala Leu 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Leu Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Ile Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Ile Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Asp Ile Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Thr Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Trp Ile Ile Gly Gly Asn Ala Leu Phe Asn Leu Phe Ser 
              370                 375                 380                 
          Phe Ala Ser Gly Leu Leu Trp Leu Gly Leu Met Val Ile Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Thr Val Gly Ala Ser Arg Gly Gly 
                          405                 410 
          <![CDATA[<210>  73]]>
          <![CDATA[<211>  410]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  Cronobacter sp. EKM102R]]>
          <![CDATA[<400>  73]]>
          Met Gln Thr His Ala Asn Arg Thr Gly Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Glu Gln Tyr Gln 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Val Glu Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Ala Gly Val Val Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Leu Ala Gln Thr Ile Glu Gln Phe Thr Val Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Ile Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Ala Ala Pro Trp Glu Met Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Ala Leu Ala Ala Ile Ser Phe Phe Gly Leu Trp Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Leu Gly Glu Lys Leu Ser Leu Arg Glu Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Lys Ala Val Leu Lys Asn Leu Arg Phe Val Ser Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Ile Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Val Ile Ile Ile Ser Gly Glu Gln Met Ser Thr Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Leu Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Lys Leu Thr Ala Arg Arg Ala Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Val Met Gly Gly Trp Pro Ile Val Ala Gly Leu Ala Leu Ala Ala Leu 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Ile Ser Ser His Ser Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Ile Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Ile Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Asp Ile Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Thr Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Trp Ile Gly Gly Gly Asn Ala Leu Phe Asn Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Phe Ala Ser Gly Leu Leu Trp Leu Gly Leu Met Val Ile Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Thr Val Gly Thr Arg Pro Glu Gly 
                          405                 410 
          <![CDATA[<210>  74]]>
          <![CDATA[<211>  410]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  廣泛克羅諾桿菌(Cronobacter universalis) NCTC 9529]]>
          <![CDATA[<400>  74]]>
          Met Gln Thr His Ala Asn Arg Thr Gly Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Glu Gln Tyr Gln 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Val Glu Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Ala Gly Val Val Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Leu Ala Gln Thr Ile Glu Gln Phe Thr Val Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Ile Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Ala Ala Pro Trp Glu Met Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Ala Leu Ala Ala Ile Ser Phe Phe Gly Leu Trp Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Leu Gly Glu Lys Leu Ser Leu Arg Glu Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Lys Ala Val Leu Lys Asn Leu Arg Phe Val Ser Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Ile Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Val Ile Ile Ile Ser Gly Glu Gln Met Ser Thr Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Ile Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Lys Leu Thr Ala Arg Arg Ser Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Val Met Gly Gly Trp Pro Met Met Ala Gly Leu Ala Leu Ala Ala Leu 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Ile Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Ile Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Ile Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Asp Ile Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Thr Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Trp Leu Gly Gly Gly Asn Ala Leu Phe Asn Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Phe Ala Ser Gly Leu Leu Trp Leu Gly Leu Met Ala Ile Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Thr Val Gly Thr Arg Pro Glu Gly 
                          405                 410 
          <![CDATA[<210>  75]]>
          <![CDATA[<211>  411]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  腸道沙門氏菌菌株 413_SENT]]>
          <![CDATA[<400>  75]]>
          Met Gln Asn Asn Ser Leu Thr Lys Lys Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Glu Gln Tyr Gln 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Val Glu Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Thr Gly Val Val Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Leu Ala Gln Asn Ile Glu Gln Phe Thr Ala Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Ile Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Val Ala Pro Trp Glu Met Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Val Leu Ala Ala Ile Ser Trp Tyr Gly Leu Trp Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Leu Gly Glu Lys Leu Ser Leu Gly Glu Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Lys Ala Val Met Lys Asn Ala Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Thr Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Val Ile Ile Ile Ser Gly Glu Gln Leu Ser Ser Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Ala Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Lys Leu Thr Ser Arg Arg Thr Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Ile Leu Gly Gly Trp Pro Ile Ala Phe Gly Leu Ala Met Ala Ala Leu 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Leu Phe Ser Ala His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Val Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Leu Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Asp Ile Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Tyr Leu Ala Gly Gly Asn Gly Leu Phe Ser Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Leu Asn Gly Leu Leu Trp Val Ala Met Met Val Ile Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Thr Val Gly Asn Ser Leu Gln Pro Gln 
                          405                 410     
          <![CDATA[<210>  76]]>
          <![CDATA[<211>  393]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  克雷伯氏肺炎桿菌(Klebsiella pneumoniae)肺炎亞種 菌株 NCTC11695]]>
          <![CDATA[<400>  76]]>
          Met Gln Asn Tyr Ser Leu Ser Gly Arg Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Gln Glu Phe Gln 
                  35                  40                  45              
          Val Gly Asn Glu Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Thr Gly Val Val Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Leu Ala Gln Thr Ile Glu Gln Phe Thr Leu Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Ile Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Val Leu Pro Trp Glu Met Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Val Leu Ala Ala Ile Ser Phe Val Gly Leu Gln Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Leu Gly Glu Lys Leu Ser Val Lys Glu Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Arg Leu Val Leu Lys Asn Leu Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Thr Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Val Ile Ile Ile Ser Gly Glu Gln Ala Thr Ser Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Met Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Ala Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Arg Leu Thr Ser Arg Arg Thr Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Ile Met Gly Gly Trp Pro Ile Met Phe Gly Leu Ile Leu Ser Ala Ala 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Val Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Phe Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Leu Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Glu Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Leu Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Tyr Glu Leu Gly Ala Thr Ala Cys Ser Ala Cys Leu Thr 
              370                 375                 380                 
          Cys Trp Ala Glu Tyr Cys Gly Trp Gly 
          385                 390             
          <![CDATA[<210>  77]]>
          <![CDATA[<211>  410]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  Klebsiella aerogenes 菌株 4928STDY7071344]]>
          <![CDATA[<400>  77]]>
          Met Gln Asn Tyr Ser Leu Ser Gly Lys Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Gln Glu Phe Gln 
                  35                  40                  45              
          Val Gly Asn Glu Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Thr Gly Val Val Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Leu Ala Gln Thr Ile Glu Gln Phe Thr Leu Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Ile Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Met Leu Pro Trp Glu Met Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Val Leu Ala Ala Ile Ser Phe Ile Gly Leu Gln Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Met Gly Glu Lys Leu Ser Val Lys Glu Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Arg Leu Val Leu Lys Asn Leu Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Thr Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Val Ile Ile Ile Ser Gly Glu Gln Ala Thr Ser Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Met Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Ala Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Arg Leu Thr Ser Arg Arg Ser Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Ile Met Gly Gly Trp Pro Ile Met Phe Gly Leu Leu Leu Ser Ala Ala 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Val Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Phe Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Leu Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Glu Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Leu Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Tyr Glu Leu Gly Gly Asn Gly Leu Phe Ser Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Leu Gly Gly Val Leu Trp Leu Gly Leu Ile Ile Tyr Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Ser Val Gly Ser Ser Gln Gln Ala 
                          405                 410 
          <![CDATA[<210>  78]]>
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          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  Raoultella planticola 菌株 FDAARGOS_283]]>
          <![CDATA[<400>  78]]>
          Met Gln Asn Tyr Ser Leu Ser Gly Lys Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ser Val Val Glu Glu Phe Gln 
                  35                  40                  45              
          Val Gly Asn Glu Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Thr Gly Val Val Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Leu Ala Gln Thr Ile Glu Gln Phe Thr Leu Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Ile Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Met Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Ile Leu Pro Trp Glu Met Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Val Leu Ala Ala Ile Ala Phe Val Gly Leu Gln Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Met Gly Glu Lys Leu Ser Met Lys Glu Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Gly Leu Val Leu Lys Asn Leu Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Thr Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Val Ile Ile Ile Ser Gly Glu Lys Ala Thr Ser Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Ala Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Arg Leu Thr Ser Arg Arg Thr Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Ile Leu Gly Gly Trp Pro Ile Met Phe Gly Leu Leu Leu Ser Ala Val 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Val Ser Thr His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Val Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Leu Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Asp Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Tyr Glu Leu Gly Gly Ser Gly Val Phe Ser Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Leu Ser Gly Val Met Trp Leu Ala Met Ile Val Tyr Phe Leu Lys 
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          Asp Lys Ser Val Gly Asn Ser Asn Asp Pro Gln Ala 
                          405                 410         
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          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  Klebsiella sp. 2680]]>
          <![CDATA[<400>  79]]>
          Met His Asn Tyr Ser Leu Ala Gly Lys Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ser Val Val Asp Ala Phe Gly 
                  35                  40                  45              
          Val Gly Asn Glu Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Thr Gly Val Val Trp Phe Ile Ala Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Leu Ala Gln Thr Ile Glu Gln Phe Thr Leu Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Ile Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Phe Leu Pro Trp Glu Met Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Val Leu Ala Thr Ile Ala Phe Val Gly Leu Gln Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Gln Gly Glu Lys Leu Ser Val Lys Ala Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Arg Asp Val Leu Lys Asn Arg Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Thr Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Val Ile Ile Ile Ser Gly Glu Gln Ala Thr Ser Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Ala Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Arg Gln Thr Ser Arg Lys Thr Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Ile Leu Gly Gly Trp Pro Ile Ile Thr Gly Leu Leu Ile Ser Ala Ala 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Val Ser Ala His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Val Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Leu Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Asp Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Trp Glu Phe Gly Gly Ser Gly Leu Phe Ser Leu Leu Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Leu Ser Gly Ala Leu Trp Leu Val Met Thr Ala Tyr Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Arg Ala Gly Asn Ser Arg Glu Pro Gln 
                          405                 410     
          <![CDATA[<210>  80]]>
          <![CDATA[<211>  411]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  Kluyvera georgiana 菌株 HRGM_Genome_0064]]>
          <![CDATA[<400>  80]]>
          Met Asp Thr Leu Ser Ser Ser Arg Lys Arg Leu Gly Arg Lys Ala Ile 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Lys Glu Phe Asn 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Asp Glu Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Thr Gly Val Val Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Leu Val Gln Asn Ile Glu Gln Phe Thr Phe Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Val Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Tyr Asp Glu Ala Thr Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Ile His Val Ala Arg Trp Glu Ser Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Ala Leu Ala Ala Leu Ala Tyr Ile Gly Leu His Lys Glu Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Ile Gly Glu Lys Leu Ser Leu Lys Glu Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Arg Glu Val Leu Lys Asn Gly Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Thr Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Val Ile Ile Ile Ser Gly Glu Gly Ala Ser Ser Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Leu Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Arg Leu Thr Ser Arg Arg Thr Val Arg Ala Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Val Ala Gly Gly Tyr Pro Ile Met Phe Gly Leu Ile Leu Ala Ala Ala 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Val Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Phe Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Leu Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Glu Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Leu Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Met Tyr Leu Leu Gly Gly Ile Gly Leu Phe Ser Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Ala Gly Gly Leu Leu Trp Leu Gly Leu Met Val Met Phe Leu Arg 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Thr Val Gly Ser Gly Leu Gln Pro Gln 
                          405                 410     
          <![CDATA[<210>  81]]>
          <![CDATA[<211>  411]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  Kluyvera intermedia 菌株 NCTC12125]]>
          <![CDATA[<400>  81]]>
          Met Asp Thr Ser Ser Ser Ser Arg Lys Arg Leu Gly Arg Lys Ala Ile 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Ala 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Lys Glu Phe Asn 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Asp Glu Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Thr Gly Val Ile Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Met Val Gln Asn Ile Glu Gln Phe Thr Phe Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Val Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Asp Glu Ala Thr Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Ile His Leu Ala Arg Trp Glu Ser Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Val Leu Ala Ala Ile Ala Tyr Val Gly Leu Phe Lys Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Leu Gly Glu Lys Leu Ser Leu Lys Thr Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Gln Asp Tyr Arg Glu Val Leu Lys Asn Gly Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Thr Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Val Ile Ile Ile Ser Gly Glu Asn Ala Ser Ser Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Leu Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Arg Leu Thr Ser Arg Arg Thr Val Arg Ala Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Ile Ala Gly Gly Tyr Pro Ile Met Phe Gly Leu Ile Leu Ala Ala Ala 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Val Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Phe Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Leu Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Asp Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Leu Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ser Tyr Gln Met Gly Gly Ile Gly Leu Phe Ser Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Ala Gly Gly Val Leu Trp Leu Val Leu Met Val Met Phe Leu Arg 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Thr Val Gly Ser Gly Leu Gln Pro Glu 
                          405                 410     
          <![CDATA[<210>  82]]>
          <![CDATA[<211>  431]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  腸道沙門氏菌菌株 2014K-0203]]>
          <![CDATA[<400>  82]]>
          Met His Asn Arg Leu Gln Ser Gly Val Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Glu Gln Tyr Gln 
                  35                  40                  45              
          Val Ser Leu Asp Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Ala Gly Ile Val Trp Phe Ile Ala Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Leu Ala Lys Asn Ile Glu Gln Phe Thr Phe Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Ile Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Val Leu Pro Trp Glu Gly Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Ala Leu Ala Ala Ile Ala Phe Phe Gly Leu Gln Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Arg Gly Glu Thr Leu Ser Leu Lys Ala Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Arg Leu Val Ile Lys Asn Arg Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Leu Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Ile Ile Ile Ile Ser Gly Glu Gln Leu Ser Ser Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Val Phe Gly Ala Leu Ile Ala Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Arg Leu Thr Ser Arg Arg Thr Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Val Met Gly Gly Trp Pro Ile Val Val Gly Leu Ile Ile Ala Ala Ala 
              290                 295                 300                 
          Ala Ala Val Val Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Met Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Val Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Leu Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ser Ser Glu Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Trp Leu Ser Gly Gly Asn Glu Leu Phe Ser Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Ala Asn Gly Ile Leu Trp Leu Leu Leu Met Leu Val Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Arg Ala Gly Ile Arg Lys Gln Ala Lys Arg Ala Ala Met Pro 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Pro Ser Val Ile Arg His Arg Glu Ala Ser Ala Lys Arg 
                      420                 425                 430     
          <![CDATA[<210>  83]]>
          <![CDATA[<211>  416]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  邦戈沙門氏菌(Salmonella bongori)菌株 85-0051]]>
          <![CDATA[<400>  83]]>
          Met His Asn Arg Thr Gln Ser Gly Ala Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Glu Gln Tyr Gln 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Leu Asp Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Ala Gly Val Ile Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Leu Ala Lys Asn Ile Glu Gln Phe Thr Phe Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Ile Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Val Leu Pro Trp Glu Gly Met Phe Ile Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Ala Leu Ala Ala Ile Ala Phe Phe Gly Leu Gln Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Arg Gly Glu Thr Leu Ser Leu Lys Asp Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Gln Arg Val Ile Lys Asn Arg Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Leu Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Ile Ile Ile Ile Ser Gly Glu Gln Leu Ser Ser Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Val Phe Gly Ala Leu Ile Ala Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Arg Leu Thr Ser Arg Arg Thr Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Val Met Gly Gly Trp Pro Ile Val Ala Gly Leu Ile Ile Ala Ala Ala 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Val Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Ile Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Leu Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Asp Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Trp Leu Ser Gly Gly Asn Gly Leu Phe Ser Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Ala Asn Gly Ile Phe Trp Leu Leu Leu Met Leu Val Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asn Lys Arg Thr Gly Asp Ser Gln Thr Asp Pro Glu Ser Gly Tyr Ala 
                          405                 410                 415     
          <![CDATA[<210>  84]]>
          <![CDATA[<211>  412]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  腸道沙門氏菌enterica亞種serovar Hillingdon 菌株 S01-0588]]>
          <![CDATA[<400>  84]]>
          Met Val Cys Arg Ile Val Tyr Asn Gln Ala Ala Gly Trp Asp Val Arg 
          1               5                   10                  15      
          Arg Cys Phe Phe Leu Ser Val Trp Cys Cys Thr Ser Phe Ser Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ile Gly Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Glu Gln 
                  35                  40                  45              
          Tyr Gln Ala Gly Leu Asp Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu 
              50                  55                  60                  
          Ala Gly Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg 
          65                  70                  75                  80  
          Ile Gly Arg Arg Pro Val Met Leu Ala Gly Val Val Trp Phe Ile Val 
                          85                  90                  95      
          Thr Cys Leu Ala Thr Leu Leu Ala Lys Asn Ile Glu Gln Phe Thr Phe 
                      100                 105                 110         
          Leu Arg Phe Leu Gln Gly Ile Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly 
                  115                 120                 125             
          Tyr Ala Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile 
              130                 135                 140                 
          Thr Ala Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Val Gly Ala Ala Trp Val His Val Leu Pro Trp Glu Gly Met Phe 
                          165                 170                 175     
          Ile Leu Phe Ala Ala Leu Ala Ala Ile Ala Phe Phe Gly Leu Gln Arg 
                      180                 185                 190         
          Ala Met Pro Glu Thr Ala Thr Arg Arg Gly Glu Thr Leu Ser Phe Lys 
                  195                 200                 205             
          Ala Leu Gly Arg Asp Tyr Arg Leu Val Ile Lys Asn Arg Arg Phe Val 
              210                 215                 220                 
          Ala Gly Ala Leu Ala Leu Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp 
          225                 230                 235                 240 
          Ile Ala Gln Ser Pro Ile Ile Ile Ile Ser Gly Glu Gln Leu Ser Ser 
                          245                 250                 255     
          Tyr Glu Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Val Phe Gly Ala Leu Ile Ala 
                      260                 265                 270         
          Gly Asn Leu Val Leu Ala Arg Leu Thr Ser Arg Arg Thr Val Arg Ser 
                  275                 280                 285             
          Leu Ile Val Met Gly Gly Trp Pro Ile Val Ala Gly Leu Ile Ile Ala 
              290                 295                 300                 
          Ala Ala Ala Thr Val Val Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala 
          305                 310                 315                 320 
          Gly Leu Ser Val Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Leu Ala Asn Ala Gly Leu 
                          325                 330                 335     
          Val Arg Leu Thr Leu Phe Ser Ser Asp Met Ser Lys Gly Thr Val Ser 
                      340                 345                 350         
          Ala Ala Met Gly Met Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu 
                  355                 360                 365             
          Val Ser Lys His Ala Trp Leu Ser Gly Gly Asn Gly Leu Phe Ser Leu 
              370                 375                 380                 
          Phe Asn Leu Ala Asn Gly Ile Leu Trp Leu Leu Leu Met Leu Val Phe 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Lys Asp Lys Arg Thr Gly Asn Leu Gln Thr Val 
                          405                 410         
          <![CDATA[<210>  85]]>
          <![CDATA[<211>  410]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  Citrobacter youngae 菌株 TE1]]>
          <![CDATA[<400>  85]]>
          Met Gln Asn Arg Leu Ser Ser Gly Ala Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Ala 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Glu Gln Tyr Gln 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Ile Asp Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Ala Gly Val Val Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Leu Ala Gln Asn Ile Glu Gln Phe Thr Phe Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Ile Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Val Leu Pro Trp Glu Gly Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Val Leu Ala Ala Phe Ala Phe Phe Gly Leu Gln Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Ile Gly Glu Lys Leu Ser Leu Lys Glu Leu 
                  195                 200                 205             
          Trp Arg Asp Tyr Lys Leu Val Leu Lys Asn Val Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Leu Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Ile Ile Ile Ile Ser Gly Glu Gln Leu Ser Ser Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Val Phe Gly Ala Leu Ile Ala Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Arg Leu Thr Ala Arg Arg Thr Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Ile Met Gly Gly Trp Pro Ile Met Leu Gly Leu Ile Leu Ala Ala Ala 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Ala Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Leu Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Val Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Asp Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys Tyr Ala Tyr Leu Gly Gly Gly Asn Gly Leu Phe Ser Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Ala Asn Gly Ile Leu Trp Leu Leu Leu Met Phe Ile Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Gln Val Gly Ala Ser Arg Gly Gly 
                          405                 410 
          <![CDATA[<210>  86]]>
          <![CDATA[<211>  410]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  Citrobacter sp. RHB21-C01]]>
          <![CDATA[<400>  86]]>
          Met Gln Asn Arg Leu Gln Gln Gly Ala Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Ala Gln Tyr Gln 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Ile Asp Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Ala Gly Val Val Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Leu Ala Gln Thr Ile Glu Gln Phe Thr Leu Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Ile Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Val Leu Pro Trp Glu Gly Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Val Leu Ala Ala Met Ala Phe Phe Gly Leu Gln Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Ile Gly Glu Pro Leu Ser Leu Lys Ala Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Gln Gln Val Met Lys Asn Gly Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Leu Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Ile Ile Ile Ile Ser Gly Glu Gln Leu Ser Ser Tyr Gln 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Ala Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Arg Leu Thr Ser Arg Arg Thr Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Ile Ile Gly Gly Trp Pro Ile Val Leu Gly Leu Ile Leu Ala Ala Ala 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Val Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Val Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Leu Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Asp Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Leu Gly Ile Glu Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys Tyr Ala Tyr Leu Ser Gly Gly Asn Gly Leu Phe Ser Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Thr Asn Gly Ile Leu Trp Leu Leu Leu Met Val Ile Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Gln Val Gly Asn Thr Arg Glu Gly 
                          405                 410 
          <![CDATA[<210>  87]]>
          <![CDATA[<211>  410]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  魏氏檸檬酸桿菌(Citrobacter werkmanii)菌株 MGYG-HGUT-02535]]>
          <![CDATA[<400>  87]]>
          Met His Asn Arg Leu Ser Ser Gly Ala Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Glu Gln Tyr Gln 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Leu Asp Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Thr Gly Val Val Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Phe Ala Gln Asn Ile Glu Gln Phe Thr Phe Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Ile Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Val Leu Pro Trp Glu Gly Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Val Leu Ala Ala Ile Ala Phe Val Gly Leu Gln Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Leu Gly Glu Thr Leu Ser Ile Lys Glu Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Lys Asp Tyr Lys Leu Val Leu Lys Asn Val Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Leu Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Ile Ile Ile Ile Ser Gly Glu Gln Leu Ser Ser Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Ala Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Arg Leu Thr Ala Arg Arg Thr Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Ile Met Gly Gly Trp Pro Ile Ala Val Gly Leu Ile Ile Ala Ala Ala 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Val Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Val Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Val Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Asp Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Leu Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Tyr Leu Leu Gly Gly Asn Gly Leu Phe Ser Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Ala Ser Gly Ile Leu Trp Leu Ala Leu Met Phe Ile Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Arg Val Gly Asp Ser Arg Glu Gly 
                          405                 410 
          <![CDATA[<210>  88]]>
          <![CDATA[<211>  409]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  腸桿菌(Enterobacteriaceae bacterium)UBA3109]]>
          <![CDATA[<400>  88]]>
          Met Gln Asn His Ser Leu Ser Gly Gly Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Ala 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Glu Gln Tyr His 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Ile Glu Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Thr Gly Val Val Trp Phe Ile Leu Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Leu Ala Gln Asn Ile Glu Gln Phe Thr Ile Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Val Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Asp Glu Ala Thr Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Ala Ala Pro Trp Glu Gly Met Phe Ile Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Val Leu Ala Ala Ile Ala Phe Phe Gly Leu Gln Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Leu Gly Glu Pro Leu Ser Leu Lys Ala Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Lys Ala Val Leu Lys Asn Val Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Thr Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Ile Ile Ile Ile Ser Gly Glu Gly Met Ser Ser Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Ile Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Arg Leu Thr Ser Arg Arg Thr Val Arg Ala Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Ile Phe Gly Gly Trp Pro Ile Val Phe Gly Leu Ala Leu Ala Ala Val 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Val Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Leu Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Leu Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Asp Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Ala Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Leu Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Tyr Leu Ser Gly Gly Ser Gly Leu Phe Ser Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Val Asn Gly Val Leu Trp Val Ala Leu Met Val Val Phe Leu Arg 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Ser Val Gly Asn Ala Leu Ser 
                          405                 
          <![CDATA[<210>  89]]>
          <![CDATA[<211>  409]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  腸桿菌UBA6698]]>
          <![CDATA[<400>  89]]>
          Met Pro Asn His Ala Leu Pro Gly Arg Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Ala 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Glu Gln Tyr Asn 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Ile Glu Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Thr Gly Val Val Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Leu Ala Gln Asp Ile Glu Gln Phe Thr Ile Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Val Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Asp Glu Ala Thr Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Ala Ala Pro Trp Glu Gly Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Val Leu Ala Ala Ile Ala Phe Phe Gly Leu His Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Leu Gly Glu Pro Leu Ser Leu Asn Ala Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Lys Ala Val Met Lys Asn Gly Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Thr Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Ile Ile Ile Ile Ser Ala Glu Gly Met Ser Ser Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Ile Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Arg Leu Thr Ser Arg Arg Thr Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Ile Met Gly Gly Gly Pro Ile Val Ala Gly Leu Leu Leu Ala Ala Val 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Ala Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Ile Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Leu Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Asp Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Ala Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Phe Leu Ala Gly Gly Asn Gly Leu Phe Ser Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Ala Asn Gly Leu Ile Trp Leu Val Leu Met Val Val Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Ser Val Gly Asn Ala Leu Ser 
                          405                 
          <![CDATA[<210>  90]]>
          <![CDATA[<211>  411]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  Leclercia sp. 4-9-1-25]]>
          <![CDATA[<400>  90]]>
          Met Leu Asn Arg Ser Ser Ser Gly Asn Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Glu Gln Tyr Asn 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Ile Glu Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Thr Gly Val Val Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Ile Leu Leu Ala Gln Asn Ile Glu Gln Phe Thr Phe Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Val Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Val Ala Pro Trp Glu Gly Met Phe Ile Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Leu Leu Ala Ala Ile Ser Phe Phe Gly Leu Trp Lys Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Leu Gly Glu Thr Leu Ser Met Arg Glu Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Lys Ala Val Met Lys Asn Val Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Thr Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Val Ile Ile Ile Ser Gly Glu Gln Leu Ser Ser Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Ile Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Arg Leu Thr Ser Arg Arg Thr Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Ile Met Gly Gly Trp Pro Ile Thr Leu Gly Leu Leu Leu Ala Ala Val 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Val Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Leu Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Leu Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Asp Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Phe Ser Phe Gly Gly Asn Gly Leu Phe Ser Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Ala Asn Gly Leu Leu Trp Leu Val Leu Met Val Ile Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Arg Val Gly Asn Ala Leu Gln Pro Asp 
                          405                 410     
          <![CDATA[<210>  91]]>
          <![CDATA[<211>  411]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  河生萊略特氏菌(Lelliottia amnigena)菌株 TZW14]]>
          <![CDATA[<400>  91]]>
          Met Leu Asn Arg Ser Ser Ser Ser Gly His Arg Leu Gly Arg Gln Ala 
          1               5                   10                  15      
          Leu Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile 
                      20                  25                  30          
          Ala Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Ala Gln Tyr 
                  35                  40                  45              
          Asn Ala Gly Ile Glu Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala 
              50                  55                  60                  
          Gly Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Gly Arg Arg Pro Val Met Leu Thr Gly Val Val Trp Phe Ile Val Thr 
                          85                  90                  95      
          Cys Leu Ala Ile Leu Leu Ala Gln Thr Ile Glu Gln Phe Met Val Leu 
                      100                 105                 110         
          Arg Phe Leu Gln Gly Val Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr 
                  115                 120                 125             
          Ala Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Val Gly Ala Ala Trp Val His Val Ala Pro Trp Glu Gly Met Phe Ile 
                          165                 170                 175     
          Leu Phe Ala Leu Leu Ala Ala Ile Ser Trp Tyr Gly Leu His Arg Ala 
                      180                 185                 190         
          Met Pro Glu Thr Ala Thr Arg Leu Gly Glu Lys Leu Ser Leu Lys Glu 
                  195                 200                 205             
          Leu Gly Arg Asp Tyr Lys Glu Val Leu Lys Asn Val Arg Phe Val Ala 
              210                 215                 220                 
          Gly Ala Leu Ala Thr Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile 
          225                 230                 235                 240 
          Ala Gln Ser Pro Val Ile Ile Ile Ser Gly Glu Lys Leu Ser Ser Tyr 
                          245                 250                 255     
          Glu Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Ile Gly 
                      260                 265                 270         
          Asn Leu Val Leu Ala Arg Leu Thr Ser Arg Arg Ser Val Arg Ser Leu 
                  275                 280                 285             
          Ile Ile Leu Gly Gly Trp Pro Ile Ala Gly Gly Leu Ile Leu Ala Ala 
              290                 295                 300                 
          Val Ala Thr Val Val Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Leu Ser Ile Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Leu Ala Asn Ala Gly Leu Val 
                          325                 330                 335     
          Arg Leu Thr Leu Phe Ala Ser Glu Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala 
                      340                 345                 350         
          Ala Met Gly Met Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Val 
                  355                 360                 365             
          Ser Lys His Ala Tyr Ile Ile Gly Gly Asn Gly Leu Phe Ser Leu Phe 
              370                 375                 380                 
          Asn Leu Ala Asn Gly Val Leu Trp Val Gly Leu Met Val Ile Phe Leu 
          385                 390                 395                 400 
          Lys Asn Lys Arg Val Gly Asn Ala Leu Gln Pro 
                          405                 410     
          <![CDATA[<210>  92]]>
          <![CDATA[<211>  409]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  Lelliottia aquatilis 菌株 TZW17]]>
          <![CDATA[<400>  92]]>
          Met Leu Asn Arg Ser Ser Ser Gly Asn Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Glu Gln Phe Asn 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Ile Glu Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Thr Gly Val Val Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Ile Leu Leu Ala Gln Thr Ile Glu Gln Phe Thr Ile Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Val Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Val Ala Pro Trp Glu Gly Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Leu Leu Ala Ala Ile Ser Phe Phe Gly Leu His Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Leu Gly Glu Lys Leu Ser Leu Lys Glu Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Lys Glu Val Leu Arg Asn Val Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Thr Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Val Ile Ile Ile Ser Gly Glu Lys Leu Ser Ser Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Ile Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Arg Leu Thr Ser Arg Arg Ser Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Ile Met Gly Gly Trp Pro Ile Met Ala Gly Leu Val Val Ala Ala Val 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Ala Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Ile Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Leu Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Glu Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Tyr Ser Phe Gly Gly Asn Gly Leu Phe Ser Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Ala Asn Gly Ile Leu Trp Leu Gly Leu Met Val Val Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Arg Val Gly Ser Ala Leu Gln 
                          405                 
          <![CDATA[<210>  93]]>
          <![CDATA[<211>  410]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  腸桿菌sp. RHBSTW-00901]]>
          <![CDATA[<400>  93]]>
          Met Leu Asn Arg Ser Ser Ser Gly Thr Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Glu Gln Tyr Asn 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Ile Glu Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Thr Gly Val Val Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Leu Ala Gln Asn Ile Glu Gln Phe Thr Leu Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Val Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Met Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Ile His Val Ala Pro Trp Glu Gly Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Ala Phe Ala Ala Ile Ala Phe Phe Gly Leu His Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Leu Gly Glu Thr Leu Ser Leu Lys Glu Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Lys Leu Val Leu Lys Asn Val Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Leu Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Val Ile Ile Ile Ser Gly Glu Lys Leu Ser Ser Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Met Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Ile Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Thr Leu Ala Arg Leu Thr Ser Arg Arg Thr Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Ile Met Gly Gly Trp Pro Ile Val Ala Gly Leu Ile Met Ala Ala Val 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Ala Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Val Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Leu Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Asp Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Tyr Ala Met Gly Gly Asn Gly Leu Phe Ser Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Ala Asn Gly Val Leu Trp Leu Gly Leu Met Val Val Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Arg Val Gly Asn Ala Leu Gln Pro 
                          405                 410 
          <![CDATA[<210>  94]]>
          <![CDATA[<211>  410]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  陰溝腸桿菌(Enterobacter cloacae) dissolven亞種菌株 GN05902]]>
          <![CDATA[<400>  94]]>
          Met Leu Asn Arg Ser Ser Ser Gly Thr Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Ala Gln Tyr Asn 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Ile Glu Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Thr Gly Val Val Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Leu Ala Gln Asn Ile Glu Gln Phe Thr Leu Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Val Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Val Ala Pro Trp Glu Gly Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Val Leu Ala Ala Ile Ala Phe Phe Gly Leu His Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Leu Gly Glu Thr Leu Ser Leu Lys Glu Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Lys Ala Val Leu Lys Asn Gly Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Thr Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Val Ile Ile Ile Ser Gly Glu Gln Leu Ser Ser Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Ile Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Arg Leu Thr Ser Arg Arg Thr Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Ile Met Gly Gly Trp Pro Ile Ala Ala Gly Leu Thr Val Ala Ala Val 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Val Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Ile Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Val Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Glu Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Thr Tyr Ala Leu Gly Gly Asn Gly Leu Phe Ser Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Ala Asn Gly Val Leu Trp Val Val Leu Met Val Met Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Arg Val Gly Asn Ala Leu Gln Pro 
                          405                 410 
          <![CDATA[<210>  95]]>
          <![CDATA[<211>  410]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  桑樹常感菌(Enterobacter mori)菌株 JGM37]]>
          <![CDATA[<400>  95]]>
          Met Leu Asn Arg Ser Ser Ser Gly Asn Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Glu Gln Tyr Asn 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Ile Glu Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Thr Gly Val Val Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Leu Ala Gln Asn Ile Glu Gln Phe Thr Leu Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Val Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Val Ala Pro Trp Glu Gly Met Phe Ile Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Ala Leu Ala Ala Ile Ser Phe Phe Gly Leu His Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Leu Gly Glu Lys Leu Ser Leu Lys Glu Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Lys Glu Val Leu Lys Asn Gly Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Thr Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Val Ile Ile Ile Ser Gly Glu Lys Leu Ser Ser Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Ala Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Arg Leu Thr Ser Arg Arg Thr Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Ile Met Gly Gly Trp Pro Ile Ala Ala Gly Leu Val Met Ala Ala Val 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Ala Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Val Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Val Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Glu Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Leu Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Tyr Ala Phe Gly Gly Asn Gly Leu Phe Ser Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Ala Asn Gly Val Leu Trp Val Gly Leu Met Val Val Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Arg Ile Gly Ser Ala Leu Gln Pro 
                          405                 410 
          <![CDATA[<210>  96]]>
          <![CDATA[<211>  410]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  Kosakonia sacchari 菌株 BO-1]]>
          <![CDATA[<400>  96]]>
          Met Gln Asn His Thr Leu Thr Ser Gln Arg Leu Gly Arg Arg Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Ala 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Glu Gln Tyr Asn 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Ile Glu Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Thr Gly Val Val Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Leu Ala Gln Asp Ile Glu Gln Phe Thr Leu Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Ile Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Ala Ala Pro Trp Gln Gly Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Leu Leu Ala Ala Phe Ala Phe Phe Gly Leu Gln Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Leu Gly Glu Lys Leu Ser Phe Lys Ala Leu 
                  195                 200                 205             
          Trp Arg Asp Tyr Ala Asp Val Met Lys Asn Leu Arg Phe Val Ala Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Thr Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Ile Ile Ile Ile Ser Gly Glu Gln Leu Ser Ser Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Ile Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Arg Leu Thr Ser Arg Arg Thr Val Arg Ala Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Ile Met Gly Gly Trp Pro Ile Ala Ala Gly Leu Leu Leu Ala Ala Val 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Ala Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Leu Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Leu Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Glu Met Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Phe Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Ile Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Trp Leu Ser Gly Gly Asn Gly Leu Phe Ser Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Leu Ala Asn Gly Val Leu Trp Leu Gly Leu Met Val Val Phe Leu Arg 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Arg Val Gly Asn Ser Leu Glu Gly 
                          405                 410 
          <![CDATA[<210>  97]]>
          <![CDATA[<211>  410]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  Cronobacter malonaticus 菌株 MOD1-Md25g]]>
          <![CDATA[<400>  97]]>
          Met Gln Thr His Ala Asn Arg Thr Gly Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Glu Gln Tyr Gln 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Val Glu Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Ala Gly Val Ala Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Leu Ala Gln Asn Ile Glu Gln Phe Thr Val Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Ile Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Ala Ala Pro Trp Glu Met Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Val Leu Ala Ala Ile Ser Phe Phe Gly Leu Trp Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Leu Gly Glu Lys Leu Ser Leu Arg Glu Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Lys Ala Val Leu Lys Asn Leu Arg Phe Val Ser Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Ile Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Val Ile Ile Ile Ser Gly Glu Gln Met Ser Thr Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Ile Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Lys Leu Thr Ala Arg Arg Ser Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Val Met Gly Gly Trp Pro Met Met Phe Gly Leu Ala Leu Ala Ala Leu 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Ile Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Ile Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Ile Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Asp Ile Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Thr Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Trp Ile Gly Gly Gly Asn Ala Leu Phe Asn Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Phe Ala Ser Gly Leu Leu Trp Leu Gly Leu Met Val Ile Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Thr Val Gly Thr Arg Pro Glu Ala 
                          405                 410 
          <![CDATA[<210>  98]]>
          <![CDATA[<211>  410]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  Cronobacter dublinensis 582]]>
          <![CDATA[<400>  98]]>
          Met Gln Thr His Ala Asn Arg Thr Gly Arg Leu Gly Arg Gln Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Pro Leu Cys Leu Val Leu Tyr Glu Phe Ser Thr Tyr Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Met Ile Gln Pro Gly Met Leu Ala Val Val Glu Gln Tyr Gln 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Val Glu Trp Val Pro Thr Ser Met Thr Ala Tyr Leu Ala Gly 
              50                  55                  60                  
          Gly Met Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gly Pro Leu Ser Asp Arg Ile Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Pro Val Met Leu Ala Gly Val Val Trp Phe Ile Val Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Leu Ala Thr Leu Leu Ala Gln Asn Ile Glu Gln Phe Thr Val Leu Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Leu Gln Gly Ile Ser Leu Cys Phe Ile Gly Ala Val Gly Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Ile Gln Glu Ser Phe Glu Glu Ala Val Cys Ile Lys Ile Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Met Ala Asn Val Ala Leu Ile Ala Pro Leu Leu Gly Pro Leu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Ala Trp Val His Ala Ala Pro Trp Glu Met Met Phe Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe Ala Val Leu Ala Ala Ile Ser Phe Phe Gly Leu Trp Arg Ala Met 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Thr Ala Thr Arg Leu Gly Glu Lys Leu Ser Leu Arg Glu Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Arg Asp Tyr Lys Lys Val Leu Lys Asn Leu Arg Phe Val Ser Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Leu Ala Ile Gly Phe Val Ser Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Ser Pro Val Ile Ile Ile Ser Gly Glu Gln Met Ser Thr Tyr Glu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Gly Leu Leu Gln Val Pro Ile Phe Gly Ala Leu Ile Ile Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Leu Ala Lys Leu Thr Ala Arg Arg Ser Val Arg Ser Leu Ile 
                  275                 280                 285             
          Val Met Gly Gly Trp Pro Ile Met Ala Gly Leu Ala Leu Ala Ala Phe 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Val Ile Ser Ser His Ala Tyr Leu Trp Met Thr Ala Gly Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Ile Tyr Ala Phe Gly Ile Gly Ile Ala Asn Ala Gly Leu Val Arg 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Leu Phe Ala Ser Asp Ile Ser Lys Gly Thr Val Ser Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Gly Met Leu Gln Met Thr Ile Phe Thr Val Gly Ile Glu Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys His Ala Trp Thr Gly Gly Gly Asn Gly Leu Phe Asn Leu Phe Asn 
              370                 375                 380                 
          Phe Ala Ser Gly Leu Leu Trp Leu Gly Leu Thr Val Ile Phe Leu Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Lys Thr Val Gly Ala Ser Arg Glu Gly 
                          405                 410

Claims

一種宿主細胞，其經基因修飾以產生一包括一乳糖-N-三糖（LN3；GlcNAc-beta1,3-Gal-beta1,4-Glc ）作為一核心三醣的寡醣，其中該宿主細胞包括及表現一半乳糖苷-β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶（galactoside beta-1,3-N-acetylglucosaminyltransferase）的至少一核酸序列，該半乳糖苷-β-1,3-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶自一UDP-GlcNAc供體轉移一N-乙醯葡萄糖胺（GlcNAc）殘基至一乳糖受體上，從而合成LN3， -該細胞更包括：（i）一內源膜蛋白的過表現及/或（ii）一異源膜蛋白的表現，以提供一包括LN3作為一核心三醣的寡醣的（a）經改良的生產及/或（b）經啟動及/或經提升的排出，較佳為其中該經改良的生產及該經提升的排出，係相較於具有一同一基因背景但欠缺該過表現一內源膜蛋白及該表現一異源膜蛋白的宿主細胞， -較佳為該細胞更包括及表現編碼一醣基轉移酶（glycosyltransferase）的至少一核酸序列，該醣基轉移酶具有修飾該LN3之能力，其中視需要而定的該經改良的生產包括： -較佳的該寡醣滴定量（公克寡醣/公升）， -較佳的生產率r（公克寡醣/公升‧小時）， -較佳的細胞效能指數（cell performance index）（公克寡醣/公克生物量）， -較佳的單位生產力（specific productivity）（公克寡醣/公克生物量‧小時）， -較佳的蔗糖產量（yield）（公克寡醣/公克蔗糖），及/或 -較佳的蔗糖攝取/轉化率（公克蔗糖/公克‧小時）， -較佳的乳糖轉化/消耗率（公克乳糖/小時），及/或 -經提升的該宿主細胞之生長速度。
如請求項1之細胞，其中該膜蛋白係選自運輸蛋白（porters）、P-P鍵水解驅動轉運蛋白（P-P-bond-hydrolysis-driven transporters）、及β-桶狀孔蛋白（β-Barrel Porins）之群組，其中，（a）當該膜蛋白係選自該運輸蛋白之群組，該膜蛋白係選自： -TCDB分類 2.A.1.1、2.A.1.2、2.A.1.3、2.A.1.6、 2.A.2.2、2.A.7.1及2.A.66之群組，或 -eggnog家族 05E8G、05EGZ、05JHE、07QF7、 07QRN、07RBJ、0814C及08N8A之群組，或 -PFAM列表 PF00893、PF01943、PF05977、PF07690 及PF13347，或 -interpro列表IPR000390、IPR001411、IPR001927、IPR002797、IPR004638、IPR005829、IPR010290、IPR011701、IPR020846、IPR023721、IPR023722、IPR032896、IPR036259及IPR039672，或 -源自 Cronobacter muytjensii之具有序列識別號01的MdfA、源自雷根斯堡預研菌（ Yokenella regensburgei）（ATCC43003）之具有序列識別號02的MdfA、源自大腸桿菌（ Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號03的MdfA、源自腸桿菌屬（ Enterobacter sp.）之具有序列識別號04的MdfA、源自克氏檸檬酸桿菌（ Citrobacter koseri）之具有序列識別號05的MFS、源自 Citrobacter youngae之具有序列識別號06的MdfA、源自大腸桿菌（ Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號07的YbdA、源自源自大腸桿菌（ Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號08的YjhB、源自大腸桿菌（ Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號09的WzxE、源自大腸桿菌（ Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號10的EmrE、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（ Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號11的Blon_2331、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（ Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號12的 Blon_0247、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（ Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號13的Blon_0345、源自肺炎克雷伯氏菌（ Klebsiella pneumoniae）之具有序列識別號14的IceT、源自阪崎腸桿菌（ Cronobacter sakazakii）品系MOD1_LR753之具有序列識別號53的MdfA、源自粉末佛朗哥氏菌（ Franconibacter pulveris）LMG 24059之具有序列識別號54的MdfA、源自霍氏腸桿菌（ Enterobacter hormaechei）品系017之具有序列識別號55的MdfA、源自克氏檸檬酸桿菌（ Citrobacter koseri）品系NCTC10771之具有序列識別號56的MdfA、源自 Salmonella enterica subsp. arizonae血清型41:z4,z23:- 品系TAMU30EF之具有序列識別號57的MdfA、源自副痢疾桿菌（ Shigella flexneri）品系585219之具有序列識別號58的MdfA、源自雷根斯堡預研菌（ Yokenella regensburgei）品系UMB0819之具有序列識別號59的MdfA、源自大腸桿菌（ Escherichia coli）品系AMC_967之具有序列識別號60的MdfA、源自肺炎克雷伯氏菌（ Klebsiella pneumoniae）VAKPC309之具有序列識別號61的MdfA、源自產酸克雷伯氏菌（ Klebsiella oxytoca）品系4928STDY7071490之具有序列識別號62的MdfA、源自密西根克雷伯氏菌（ Klebsiella michiganensis）品系A2之具有序列識別號63的MdfA、源自 Pluralibacter gergoviae品系FDAARGOS_186 之具有序列識別號64的MdfA、源自抗壞血克呂沃爾氏菌（Kluyvera ascorbata）ATCC 33433之具有序列識別號65的MdfA、神戶腸桿菌（ Enterobacter kobei）之具有序列識別號66的MdfA、源自萊略特菌屬（ Lelliottia sp.）WB101之具有序列識別號67的MdfA、源自弗氏檸檬酸桿菌（ Citrobacter freundii）之具有序列識別號68的MdfA、源自腸道沙門氏菌 Salamae亞種（ Salmonella enterica subsp. Salamae）之具有序列識別號69的MdfA或源自副痢疾桿菌（ Shigella flexneri）之具有序列識別號70的MdfA，或以上任一運輸膜蛋白之功能同源物（functional homolog）或功能性片段（functional fragment），或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號 01、 02、03、04、05、06、07、08、09、10、11、12、13、14、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69或70的該膜蛋白之任一個的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性（sequence identity）；（b）當該膜蛋白係選自該P-P鍵水解驅動轉運蛋白之群組，該膜蛋白係選自： -TCDB分類 3.A.1.1及3.A.1.2之群組，或 -eggnog家族 05CJ1、05DFW、05EZD、05I1K、07HR3 及08IJ9之群組，或 -PFAM列表 PF00005、PF00528、PF13407及PF17912，或 -interpro列表 IPR000515、IPR003439、IPR003593、IPR005978、IPR008995、IPR013456、IPR015851、IPR017871、IPR025997、IPR027417、 IPR028082、IPR035906及IPR040582，或 -源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（ Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號15的Blon_2475、源自大豆慢生根瘤菌（ Bradyrhizobium japonicum）USDA 110之具有序列識別號16的nodi、源自大腸桿菌（ Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號17的xylF、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（ Bifidobacterium longum subsp. Infantis）Bi-26之具有序列識別號18的TIC77290、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（ Bifidobacterium longum subsp. Infantis）Bi-26之具有序列識別號19的TIC77291、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（ Bifidobacterium longum subsp. Infantis）Bi-26之具有序列識別號20的TIC76854 TIC77291，或以上任一P-P鍵水解驅動轉運膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號15、16、17、18、19或20的該膜蛋白的任一個的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性；或（c）當該膜蛋白係選自該β-桶狀孔蛋白之群組，該膜蛋白係選自： -TCDB分類 1.B.18，或 -eggnog家族 05DAY，或 -PFAM列表 PF02563、PF10531及PF18412，或 -interpro列表 IPR003715、IPR019554及IPR040716，或 -源自大腸桿菌（ Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號21的Wza或其功能同源物或功能片段，或一蛋白質序列，其與具有序列識別號21的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性；其中該TCDB分類係由2019年6月17日發佈之TCDB.org所定義、該eggnog 家族係由2016年9月發佈之eggnogdb 4.5.1所定義、該PFAM列表係由2018年9月所發佈之Pfam 32.0所定義、該interpro 列表係由2019年7月4日發佈之InterPro 75.0所定義。
如請求項1或2之細胞，其中該膜蛋白係選自下列膜蛋白所組成之群組：（a）該運輸膜蛋白源自 Cronobacter muytjensii之具有序列識別號01的Mdfa、源自雷根斯堡預研菌（ Yokenella regensburgei）（ATCC43003）之具有序列識別號02的MdfA、源自大腸桿菌（ Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號03的MdfA、源自腸桿菌屬（ Enterobacter sp.）之具有序列識別號04的MdfA、源自克氏檸檬酸桿菌（ Citrobacter koseri）之具有序列識別號05的MFS、源自 Citrobacter youngae之具有序列識別號06的MdfA、源自大腸桿菌（ Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號07的YbdA、源自源自大腸桿菌（ Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號08的YjhB、源自大腸桿菌（ Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號09的WzxE、源自大腸桿菌（ Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號10的EmrE、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（ Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號11的Blon_2331、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（ Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號12的 Blon_0247、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（ Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號13的Blon_0345、源自肺炎克雷伯氏菌（ Klebsiella pneumoniae）之具有序列識別號14的IceT、源自阪崎腸桿菌（ Cronobacter sakazakii）品系MOD1_LR753之具有序列識別號53的MdfA、源自粉末佛朗哥氏菌（ Franconibacter pulveris）LMG 24059之具有序列識別號54的MdfA、源自霍氏腸桿菌（ Enterobacter hormaechei）品系017之具有序列識別號55的MdfA、源自克氏檸檬酸桿菌（ Citrobacter koseri）品系NCTC10771之具有序列識別號56的MdfA、源自腸道沙門氏菌 arizonae亞種（ Salmonella enterica subsp. arizonae）血清型41:z4,z23:- 品系TAMU30EF之具有序列識別號57的MdfA、源自副痢疾桿菌（ Shigella flexneri）品系585219之具有序列識別號58的MdfA、源自雷根斯堡預研菌（ Yokenella regensburgei）品系UMB0819之具有序列識別號59的MdfA、源自大腸桿菌（ Escherichia coli）品系AMC_967之具有序列識別號60的MdfA、源自肺炎克雷伯氏菌（ Klebsiella pneumoniae）VAKPC309之具有序列識別號61的MdfA、源自產酸克雷伯氏菌（ Klebsiella oxytoca）品系4928STDY7071490之具有序列識別號62的MdfA、源自密西根克雷伯氏菌（ Klebsiella michiganensis）品系A2之具有序列識別號63的MdfA、源自 Pluralibacter gergoviae品系FDAARGOS_186之具有序列識別號64的MdfA、源自抗壞血克呂沃爾氏菌（Kluyvera ascorbata）ATCC 33433之具有序列識別號65的MdfA、神戶腸桿菌（ Enterobacter kobei）之具有序列識別號66的MdfA、源自萊略特菌屬（ Lelliottia sp.）WB101之具有序列識別號67的MdfA、源自弗氏檸檬酸桿菌（ Citrobacter freundii）之具有序列識別號68的MdfA、源自腸道沙門氏菌 Salamae亞種（ Salmonella enterica subsp. Salamae）之具有序列識別號69的MdfA或源自副痢疾桿菌（ Shigella flexneri）之具有序列識別號70的MdfA，或以上任一運輸膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號01、 02、03、04、05、06、07、08、09、10、11、12、13、14、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69或70的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性；及（b）該P-P鍵水解驅動轉運蛋白源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（ Bifidobacterium longum subsp. Infantis）（品系ATCC 15697）之具有序列識別號15的Blon_2475、源自大豆慢生根瘤菌（ Bradyrhizobium japonicum）USDA 110之具有序列識別號16的nodi、源自大腸桿菌（ Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號17的xylF、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（ Bifidobacterium longum subsp. Infantis）Bi-26之具有序列識別號18的TIC77290、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（ Bifidobacterium longum subsp. Infantis）Bi-26之具有序列識別號19的TIC77291、源自長雙歧桿菌嬰兒亞種（ Bifidobacterium longum subsp. Infantis）Bi-26之具有序列識別號20的TIC76854 TIC77291，或以上任一P-P鍵水解驅動轉運膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其與任一具有序列識別號15、16、17、18、19或20的該膜蛋白的全長序列，分別具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性；及（c）該β-桶狀膜孔蛋白源自大腸桿菌（ Escherichia coli）K-12 MG1655之具有序列識別號21的Wza或該Wza蛋白之功能同源物或功能片段，或一蛋白質序列，其與具有序列識別號21的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性。
如請求項1至3任一項之細胞，其中該膜蛋白係選自下列膜蛋白所組成之群組：（a）以序列識別號01、 02、04、05、06、09、10、11、12、13、14、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69或70表示的該運輸膜蛋白，或該任一運輸膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號01、 02、04、05、06、09、10、11、12、13、14、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69或70的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性；及（b）以序列識別號15、16、17、18、19或20表示的該P-P鍵水解驅動轉運蛋白，或該任一P-P鍵水解驅動轉運膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號15、16、17、18、19或20的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性；及（c）以序列識別號21表示的該β-桶狀膜孔蛋白，或該β-桶狀膜孔蛋白之功能同源物或功能片段，或一蛋白質序列，其與具有序列識別號21的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性。
如請求項1至4任一項之細胞，其中該膜蛋白係選自下列膜蛋白所組成之群組：（a）以序列識別號01、 02、04、05、06、09、10、11、12、13、14、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69或70表示的該運輸膜蛋白，或該運輸膜蛋白之任一個的功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，具有： -分別與具有序列識別號09、10、11、12或13的該膜蛋白的全長序列具有至少80%之序列一致性， -分別與具有序列識別號 01、02、04、14、53、54、55、59、61、62、63、64、65、66、67或 69的該膜蛋白的全長序列具有至少90%之序列一致性， -分別與具有序列識別號05、06、56、57或68的該膜蛋白的全長序列具有至少95.00%之的序列一致性，或 -分別與具有序列識別號58、60或70的該膜蛋白的全長序列具有至少99.00%之的序列一致性，及（b）以序列識別號15、16、17、18、19或20表示的該P-P鍵水解驅動轉運蛋白，或該任一P-P鍵水解驅動轉運膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號15、16、17、18、19或20的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性；及（c）以序列識別號21表示的該β-桶狀膜孔蛋白，或該β-桶狀膜孔蛋白之功能同源物或功能片段，或一蛋白質序列，其與具有序列識別號21的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性。
如請求項1至4任一項之細胞，其中該膜蛋白係選自下列膜蛋白所組成之群組：（a）以序列識別號01、02、04、09、10、11、12、13、14、53、54、55、59、61、62、63、64、65、66、67或69表示的該運輸膜蛋白，或該任一運輸膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號01、02、04、09、10、11、12、13、14、53、54、55、59、61、62、63、64、65、66、67或69的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性；及（b）以序列識別號15、16、17、18、19或20表示的該P-P鍵水解驅動轉運蛋白，或該任一P-P鍵水解驅動轉運膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號15、16、17、18、19或20的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性；及（c）以序列識別號21表示的該β-桶狀膜孔蛋白，或該β-桶狀膜孔蛋白之功能同源物或功能片段，或一蛋白質序列，其與具有序列識別號21的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性。
如請求項1至4任一項或第6項之細胞，其中該膜蛋白係選自下列膜蛋白所組成之群組：（a）以序列識別號01、02、04、09、10、11、12、13、14、53、54、55、59、61、62、63、64、65、66、67或69表示的該運輸膜蛋白，或該任一運輸膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號01、02、04、09、10、11、12、13、14、53、54、55、59、61、62、63、64、65、66、67或69的該膜蛋白的全長序列，具有至少90%、較佳為至少95.00%、更佳為至少97.00%之序列一致性；及（b）以序列識別號15、16、17、18、19或20表示的該P-P鍵水解驅動轉運蛋白，或該任一P-P鍵水解驅動轉運膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號15、16、17、18、19或20的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性；及（c）以序列識別號21表示的該β-桶狀膜孔蛋白，或該β-桶狀膜孔蛋白之功能同源物或功能片段，或一蛋白質序列，其與具有序列識別號21的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性。
如請求項1至3任一項之細胞，其中該膜蛋白係選自下列膜蛋白所組成之群組：（a）以序列識別號01、02、03、04、05、06、07、08、09、10、11、12、13、14、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64或65表示的該運輸膜蛋白，或該任一運輸膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號01、02、03、04、05、06、07、08、09、10、11、12、13、14、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64或65的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性；及（b）以序列識別號15、16、17、18、19或20表示的該P-P鍵水解驅動轉運蛋白，或該任一P-P鍵水解驅動轉運膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號15、16、17、18、19或20的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性；及（c）以序列識別號21表示的該β-桶狀膜孔蛋白，或該β-桶狀膜孔蛋白之功能同源物或功能片段，或一蛋白質序列，其與具有序列識別號21的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性。
如請求項1至3任一項或第8項之細胞，其中該膜蛋白係選自下列膜蛋白所組成之群組：（a）以序列識別號01、02、04、05、06、09、10、11、12、13、14、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64或65表示的該運輸膜蛋白，或該任一運輸膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號01、02、04、05、06、09、10、11、12、13、14、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64或65的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性；及（b）以序列識別號15、16、17、18、19或20表示的該P-P鍵水解驅動轉運蛋白，或該任一P-P鍵水解驅動轉運膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號15、16、17、18、19或20的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性；及（c）以序列識別號21表示的該β-桶狀膜孔蛋白，或該β-桶狀膜孔蛋白之功能同源物或功能片段，或一蛋白質序列，其與具有序列識別號21的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性。
如請求項1至3、8或9任一項之細胞，其中該膜蛋白係選自下列膜蛋白所組成之群組：（a）以序列識別號01、02、04、05、06、09、10、11、12、13、14、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64或65表示的該運輸膜蛋白，或該任一運輸膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，具有： -分別與具有序列識別號09、10、11、12或13的該膜蛋白的全長序列具有至少80%之序列一致性， -分別與具有序列識別號01、02、04、14、53、54、55、59、61、62、63、64或65的該膜蛋白的全長序列具有至少90%之序列一致性， -分別與具有序列識別號05、06、56或57的該膜蛋白的全長序列具有至少95.00%之的序列一致性，或 -分別與具有序列識別號58或60的該膜蛋白的全長序列具有至少99.00%之的序列一致性，及（b）以序列識別號15、16、17、18、19或20表示的該P-P鍵水解驅動轉運蛋白，或該任一P-P鍵水解驅動轉運膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號15、16、17、18、19或20的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性；及（c）以序列識別號21表示的該β-桶狀膜孔蛋白，或該β-桶狀膜孔蛋白之功能同源物或功能片段，或一蛋白質序列，其與具有序列識別號21的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性。
如請求項1至3、8或9任一項之細胞，其中該膜蛋白係選自下列膜蛋白所組成之群組：（a）以序列識別號01、02、04、09、10、11、12、13、14、53、54、55、59、61、62、63、64或65表示的該運輸膜蛋白，或該任一運輸膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號01、02、04、09、10、11、12、13、14、53、54、55、59、61、62、63、64或65的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性；及（b）以序列識別號15、16、17、18、19或20表示的該P-P鍵水解驅動轉運蛋白，或該任一P-P鍵水解驅動轉運膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與序列識別號15、16、17、18、19或20的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性；及（c）以序列識別號21表示的該β-桶狀膜孔蛋白，或該β-桶狀膜孔蛋白之功能同源物或功能片段，或一蛋白質序列，其與具有序列識別號21的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性。
如請求項1至3、8、9或11任一項之細胞，其中該膜蛋白係選自下列膜蛋白所組成之群組：（a）以序列識別號01、02、04、09、10、11、12、13、14、53、54、55、59、61、62、63、64或65表示的該運輸膜蛋白，或該任一運輸膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號01、02、04、09、10、11、12、13、14、53、54、55、59、61、62、63、64或65的該膜蛋白的全長序列，具有至少90%、較佳為至少95.00%、更佳為至少97.00%之序列一致性；及（b）以序列識別號15、16、17、18、19或20表示的該P-P鍵水解驅動轉運蛋白，或該任一P-P鍵水解驅動轉運膜蛋白之功能同源物或功能性片段，或一蛋白質序列，其分別與具有序列識別號15、16、17、18、19或20的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性；及（c）以序列識別號21表示的該β-桶狀膜孔蛋白，或該β-桶狀膜孔蛋白之功能同源物或功能片段，或一蛋白質序列，其與具有序列識別號21的該膜蛋白的全長序列，具有至少80%、較佳為至少85%、更佳為至少90%、甚至更佳為至少95.00%、最佳為至少97.00%之序列一致性。
如請求項1至12任一項之細胞，其中該膜蛋白係參與運輸化合物跨越細胞壁外膜之一轉運蛋白。
如請求項1至13任一項之細胞，其中該醣基轉移酶係選自包括下列清單：岩藻糖基轉移酶、唾液酸轉移酶、半乳糖基轉移酶、葡萄糖基轉移酶、甘露糖基轉移酶、N-乙醯葡萄糖胺轉移酶、N-乙醯半乳糖胺轉移酶、N-乙醯甘露糖胺轉移酶、木糖基轉移酶、葡萄糖醛酸轉移酶、半乳糖醛酸轉移酶、葡萄糖胺轉移酶、N-羥乙醯神經胺酸轉移酶、鼠李糖基轉移酶、N-乙醯鼠李糖胺轉移酶、UDP-4-胺基-4,6-二去氧基-N-乙醯基-β-L-阿卓糖胺轉胺酶（UDP-4-amino-4,6-dideoxy-N-acetyl-beta-L-altrosamine transaminases）及岩藻糖胺轉移酶，較佳為其中該細胞被至少一個該醣基轉移酶修飾表現或活性。
如請求項1至14任一項之細胞，其中該包括一乳糖-N-三糖（LN3; GlcNAc-beta1,3-Gal-beta1,4-Glc）作為一核心三醣的寡醣係一哺乳動物乳寡醣（mammalian milk oligosaccharide）或一Lewis型抗原寡醣。
如請求項1至15任一項之細胞，其中該包括一乳糖-N-三糖（LN3; GlcNAc-beta1,3-Gal-beta1,4-Glc）作為一核心三醣的寡醣係一哺乳動物乳寡醣（MMO）、較佳為一人乳寡醣（HMO）、更佳為具有一LNT或LNnT作為一核心三醣的一MMO或HMO、甚至更佳為具有一LNT或LNnT作為一核心三醣的一HMO、最佳為LNT或LNnT。
如請求項1至16任一項之細胞，其中該包括一乳糖-N-三糖（LN3; GlcNAc-beta1,3-Gal-beta1,4-Glc）作為一核心三醣的寡醣係一中性寡醣。
如請求項1至17任一項之細胞，其中該包括一乳糖-N-三糖（LN3; GlcNAc-beta1,3-Gal-beta1,4-Glc）作為一核心三醣的寡醣係選自包括下列清單：乳糖-N-三糖、乳糖-N-四糖、乳糖-N-新四糖、乳糖-N-岩藻五糖I、乳糖-N-新岩藻五糖I、乳糖-N-岩藻五糖II、乳糖-N-岩藻五糖III、乳糖-N-岩藻五糖V、乳糖-N-岩藻五糖VI、乳糖-N-新岩藻五糖V、乳糖-N-二岩藻六糖I、乳糖-N-二岩藻六糖II、乳糖-N-六糖（lacto-N-hexaose, LNH）、乳糖-N-新六糖（lacto-N-neohexaose, LNnH）、對-乳糖-N-六糖（para-lacto-N-hexaose, pLNnH）、對-乳糖-N-新六糖（para-lacto-N-neohexaose, pLNH）、二岩藻糖基-乳糖-N-六糖、二岩藻糖基-乳糖-N-新六糖、乳糖-N-五糖（lacto-N-pentaose, LNP）、乳糖-N-新五糖、對乳糖-N-五糖、對乳糖-N-新五糖、乳糖-N-novo五糖I、乳糖-N-七糖、乳糖-N-新七糖、對乳糖-N-新七糖、對乳糖-N-七糖、乳糖-N-八糖（lacto-N-octaose, LNO）、乳糖-N-新八糖、異乳糖-N-八糖、對乳糖-N-八糖、異乳糖-N-新八糖、novo乳糖-N-新八糖、對乳糖-N-新八糖、異乳糖-N-九糖、novo乳糖-N-九糖、乳糖-N-九糖、乳糖-N-十糖、異乳糖-N-十糖、novo乳糖-N-十糖、乳糖-N-新十糖、唾液酸基-乳糖-N-四糖a（Sialyl-lacto-N-tetraose a）、唾液酸基-乳糖-N-四糖b、唾液酸基-乳糖-N-四糖c、唾液酸基-乳糖-N-四糖d。
如請求項1至18任一項之細胞，其中該醣基轉移酶係一N-乙醯葡萄糖胺β-1,3-半乳糖基轉移酶或一N-乙醯葡萄糖胺β-1,4-半乳糖基轉移酶，其自一UDP-Gal供體透過一β-1,3或β-1,4鍵結轉移一半乳糖（Gal）至LN3之末端GlcNAC殘基上，從而分別產生乳糖-N-四糖（LNT; Gal-beta1,3-GlcNAc-beta1,3-Gal-beta1,4-Glc）或乳糖-N-新四糖（LNnT; Gal-beta1,4-GlcNAc-beta1,3-Gal-beta1,4-Glc）。
如請求項19之細胞，其中該細胞在整個肉湯(broth)及/或上清液中，產生90 g/L或更多的LNT，及/或其中該LNT在整個肉湯及/或上清液中具有至少80%之一純度，依據該細胞在整個肉湯及/或上清液中產生之LNT及LN3的總量所分別測量。
如請求項19之細胞，其中該細胞在整個肉湯及/或上清液中，產生70 g/L或更多的、較佳為90 g/L或更多的LNnt及/或其中該LNnT在整個肉湯及/或上清液中具有至少80%之一純度，依據該細胞在整個肉湯及/或上清液中產生之LNnT及LN3的總量所分別測量。
如請求項1至12任一項之細胞，其中該細胞係更能合成一核苷酸活化醣，用於生產該包括一乳糖-N-三糖（LN3; GlcNAc-beta1,3-Gal-beta1,4-Glc）作為一核心三醣的寡醣。
如請求項22之細胞，其中該核苷酸活化醣係選自包括下列清單：UDP-N-乙醯半乳糖胺（UDP-GalNAc）、UDP-N-乙醯甘露糖胺（UDP-ManNAc）、UDP-葡萄糖（UDP-Glc）、UDP-半乳糖（UDP-Gal）、GDP-甘露糖（GDP-Man）、UDP-葡萄糖醛酸鹽、UDP-半乳糖醛酸鹽、UDP-2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-L-阿拉伯糖-4-己酮糖、UDP-2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-L-木糖-4-己酮糖（UDP-2-acetamido-2,6-dideoxy-L-lyxo-4-hexulose）、 UDP-N-乙醯基-L-鼠李糖胺（UDP-L-RhaNAc或UDP-2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-L-甘露糖（UDP-2-acetamido-2,6-dideoxy-L-mannose））、dTDP-N-乙醯岩藻糖胺、UDP-N-乙醯岩藻糖胺（UDP-L-FucNAc或UDP-2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-L-半乳糖）、 UDP-N-乙醯-L-去氧塔羅糖胺（UDP-N-acetyl-L-pneumosamine）（UDP-L-PneNAC或UDP-2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-L-塔羅糖（UDP-2-acetamido-2,6-dideoxy-L-talose））、UDP-N-乙醯胞壁酸（UDP-N-acetylmuramic acid）、UDP-N-乙醯基-L-奎諾糖胺（UDP-N-acetyl-L-quinovosamine）（UDP-L-QuiNAc或UDP-2-乙醯胺基-2,6-二去氧基-L-葡萄糖（UDP-2-acetamido-2,6-dideoxy-L-glucose））、CMP-唾液酸（CMP-Neu5Ac）、CMP-N-羥乙醯神經胺酸（CMP-Neu5Gc）、GDP-岩藻糖、GDP-鼠李糖及UDP-木糖。
如請求項1至23任一項之細胞，其中該細胞包括一分解代謝途徑，用於經選擇之至少部分未活化之單、雙或寡醣，該單、雙或寡醣參與及/或需要於一包括LN3作為一核心三醣的寡醣之合成。
如請求項1至24任一項之細胞，其中該細胞利用一前驅物以合成該包括LN3作為一核心三醣的寡醣。
如請求項1至25任一項之細胞，其中該膜蛋白參與一前驅物之攝取，以合成該包括LN3作為一核心三醣的寡醣。
如請求項1至26任一項之細胞，其中該細胞產生一前驅物，以合成該包括LN3作為一核心三醣的寡醣。
如請求項1至27任一項之細胞，其中該細胞係穩定地培養於培養基(medium)中。
如請求項1至28任一項之細胞，其中該細胞係一微生物、一植物細胞、一動物細胞、一昆蟲細胞或一原生動物細胞，其中較佳為： -該微生物係一細菌、真菌或一酵母菌， -該植物細胞係一菸草、苜蓿、米、棉、油菜、大豆、玉蜀黍或玉米，及/或細胞 -該動物細胞係源自非人類之哺乳動物、鳥類、魚類、無脊椎動物、爬蟲類或兩棲類，或該動物細胞係源自排除胚胎幹細胞之人類細胞的一基因修飾細胞。
如請求項29之細胞，其中該細胞係一細菌，較佳為一大腸桿菌品系，更佳為一K-12品系之大腸桿菌品系之細胞、甚至更佳為該大腸桿菌K-12品系為 E. coliMG1655。
如請求項1至30任一項之細胞，其中該細胞具有合成包括至少一寡醣之一寡醣混合物的能力，該至少一寡醣包括LN3作為一核心三醣。
一種藉由一基因修飾細胞產生一包括一乳糖-N-三糖（LN3；GlcNAc-beta1,3-Gal-beta1,4-Glc ）作為一核心三醣的寡醣的方法，包括步驟：（a）提供如請求項1至31任一項之一細胞，及（b）在允許產生該包括LN3作為一核心三醣的寡醣之條件下，培養該細胞於一培養基中，及（c）較佳為將該包括LN3作為一核心三醣的寡醣或包括至少一寡醣之一寡醣混合物，分別自該培養分離，該至少一寡醣包括LN3作為一核心三醣。
如請求項32之方法，該方法更包括至少一下列步驟：（i）添加一乳糖給料於該培養培養基，該乳糖給料包括至少50、更佳為至少75、更佳為至少100、更佳為至少120、更佳為至少150克乳糖每升之初始反應器體積（initial reactor volum），其中該反應器體積介於250mL至10.00m ³（立方公尺）範圍之間，較佳為以一連續方式，且較佳為以使該培養培養基之最終體積為不多於添加該乳糖給料前該培養培養基之體積的三倍、較佳為不多於兩倍、更佳為少於兩倍；（ii）藉由一給料溶液，在1日、2日、3日、4日、5日之過程中，以一連續方式添加一乳糖給料於培養培養基；（iii）藉由一給料溶液，在1日、2日、3日、4日、5日之過程中，以一連續方式添加一乳糖給料於培養培養基，且其中該乳糖給料溶液之濃度為50 g/L、較佳為75 g/L、更佳為100 g/L、更佳為125 g/L、更佳為150 g/L、更佳為175 g/L、更佳為200 g/L、更佳為225 g/L、更佳為250 g/L、 275 g/L、更佳為300 g/L、更佳為325 g/L、更佳為350 g/L、更佳為375 g/L、更佳為400 g/L、更佳為450 g/L、更佳為500 g/L、甚至更佳為550 g/L、最佳為600 g/L；以及較佳為該溶液之PH值係設定於3至7之間，且其中較佳為該給料溶液之溫度為保持於20°C至80°C之間；該方法致生一包括一乳糖-N-三糖（LN3；GlcNAc-beta1,3-Gal-beta1,4-Glc ）作為一核心三醣的寡醣，其於該培養培養基之最終體積中具有至少50 g/L、較佳為至少75 g/L、更佳為至少90 g/L、更佳為至少100 g/L、更佳為至少125 g/L、更佳為至少150 g/L、更佳為至少175 g/L、更佳為至少200 g/L的濃度。
如請求項33之方法，其中該乳糖給料，係透過自開始培養時以至少5mM的濃度、較佳為以至少30、40、50、60、70、80、90、100、150mM的濃度、更佳為以大於300mM的濃度添加乳糖來達成。
如請求項33或34之方法，其中該乳糖給料，係透過以一濃度之添加乳糖至培養培養基來達成，以致在整個培養之生產階段，獲得濃度至少為5mM、較佳為至少10mM或30mM的一乳糖。
如請求項32至35任一項之方法，其中該宿主細胞被培養至少約60、80、100或約120小時，或以連續方式培養。
如請求項32至36任一項之方法，其中一碳及能量來源，較佳為葡萄糖、甘油、果糖、麥芽糖、阿拉伯糖、麥芽糊精、麥芽寡醣（malto-oligosacchraides）、麥芽三糖、山梨醇、木糖、鼠李糖、蔗糖、半乳糖、甘露糖、甲醇、乙醇、海藻糖、澱粉、纖維素、半纖維素、多元醇、玉米浸液（corn-steep liquor）、高果糖漿（high-fructose syrup）、琥珀酸鹽、蘋果酸鹽、醋酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸及丙酮酸鹽，亦被添加，較佳為持續添加至培養培養基，並較佳為搭配乳糖。
如請求項32至37任一項之方法，其中指數細胞成長之一第一期，係藉由在第二期添加乳糖至該培養培養基之前，添加一碳基受質且較佳為葡萄糖或果糖至該培養培養基來提供。
如請求項32至38任一項之方法，其中該分離包括至少一下列步驟：澄清(clarification)、超過濾、奈米過濾、逆滲透、微過濾、活性炭或碳處理、切向流高效能過濾（tangential flow high-performance filtration）、切向流超過濾（tangential flow ultrafiltration）、親和力層析、離子交換層析、疏水性交互作用層析及/或凝膠過濾、配位基交換層析。
如請求項32至39任一項之方法，更包括分別自該細胞純化該包括LN3作為一核心三醣的寡醣或包括至少一寡醣的寡醣混合物，該至少一寡醣包括LN3作為一核心三醣。
如請求項32至40任一項之方法，其中該純化包括至少一下列步驟：利用活性炭或碳、利用木炭、奈米過濾、超過濾或離子交換、利用醇類、利用含水醇類混合物、結晶化、蒸發、沉澱、乾燥、噴霧乾燥或冷凍乾燥。
一種選自如請求項1至12任一項中所定義之膜蛋白之群組的一膜蛋白於發酵生產一包括LN3作為一核心三醣的寡醣中的用途。
一種如請求項1至31項之一細胞用於產生一包括LN3作為一核心三醣的寡醣的用途。
一種如請求項31之一細胞用於產生一包括至少一寡醣之寡醣混合物的用途，該至少一寡醣包括LN3作為一核心三醣。
一種如請求項32至41任一項之一方法用於產生一包括LN3作為一核心三醣的寡醣的用途。