TW202246310A

TW202246310A - 改善免疫細胞功能

Info

Publication number: TW202246310A
Application number: TW111108782A
Authority: TW
Inventors: 露絲Ｅ溫特; 賽卡特班納吉
Original assignee: 美商凱特製藥公司
Priority date: 2021-03-11
Filing date: 2022-03-10
Publication date: 2022-12-01
Also published as: IL305571A; CA3212950A1; EP4305053A1; US20220289815A1; AU2022234333A1; WO2022192439A8; KR20230155521A; JP2024510162A; WO2022192439A1

Abstract

本揭露係關於細胞療法之領域，且更具體而言，係關於透過改善改善細胞介素信號傳導來改善CAR及/或TCR功能。

Description

改善免疫細胞功能

本揭露關於免疫學及細胞療法之領域，且更具體而言，關於藉由調節細胞介素信號傳導來改善包含嵌合抗原受體(CAR)及/或T細胞受體(TCR)的基於T細胞及自然殺手(NK)細胞之免疫療法。

免疫系統透過其搜索、尋找、及破壞全身惡性細胞之能力來提供先天性防禦抵抗癌症。然而，對此防禦機制要注意的是某些癌症可誘導降低抗腫瘤免疫反應之穩健性的免疫抑制微環境。(Beatty et al., Clin Cancer Res, (21)(4): 687-632 (2015))。此等免疫逃脫機制對細胞免疫療法（包括使用經工程改造之細胞療法技術，諸如嵌合抗原受體(CAR) T細胞療法及T細胞受體(TCR) T細胞療法及/或基於自然殺手細胞之免疫療法）之實施及有效性提出挑戰。

由於整體T細胞功能及增生係依賴於細胞介素信號傳導，所以理論上，使用細胞介素可改善基於T細胞之療法之整體品質及效力。過去研究已展示成功使用IL-2作為基於T細胞之療法擴增的手段，儘管缺點包括T細胞耗竭及T細胞持久性減少兩者。(Gattinoni et al., J Clin Invest, (115): 1616-1626 (2005))。其他研究顯示，在一起使用IL-7及IL-15之情況下改善CAR-T細胞之效力(Xu et al., Blood, (123): 3750-3759 (2014)。亦報導在使用IL-21之情況下改善CAR-T效力(Singh et al., Cancer Res, (71) 3516-3527 (2011))。類似地，已發現IL-2增強NK細胞之細胞毒性(Hu et al., Front. Immunol., (20) 1205 (2019))。

因此，需要開發使用細胞介素信號傳導作為改善基於免疫細胞之免疫療法之功效的手段。

揭示一種膜結合介白素15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合受體。在實施例中，膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體包含：包含根據SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的IL-15多肽、將IL-15域連接至根據SEQ ID NO: 7或SEQ ID NO: 95之IL-15Rα壽司域多肽的第一連接子、及包含FAS跨膜域或二聚化域（諸如IL-7跨膜域）的跨膜域。

在實施例中，連接IL-15多肽及IL-15Rα壽司域的第一連接子包含根據SEQ ID NO: 8之胺基酸序列。在實施例中，第一連接子包含根據SEQ ID NO: 10之胺基酸序列。

在實施例中，IL-15Rα壽司域多肽係藉由第二連接子連接至跨膜域。在實施例中，第二連接子包含根據SEQ ID NO: 24之胺基酸序列。在實施例中，第二連接子包含根據SEQ ID NO: 26之胺基酸序列。

在實施例中，跨膜域係FAS跨膜域，其包含根據SEQ ID NO: 22之胺基酸序列。在實施例中，跨膜域係FAS跨膜域，其包含根據SEQ ID NO: 42之胺基酸序列。在實施例中，IL-7跨膜域包含根據SEQ ID NO: 23之胺基酸序列。

在實施例中，膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體包含選自由SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、及94所組成之群組的胺基酸序列。在實施例中，膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體包含根據SEQ ID NO: 30之胺基酸。

在實施例中，膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體進一步包含信號傳導序列。在實施例中，信號傳導序列包含根據SEQ ID NO: 12至20中之一者之胺基酸序列。在實施例中，信號傳導序列包含根據SEQ ID NO: 12之胺基酸序列。

揭示一種核酸，其編碼本文所述之膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體。在實施例中，編碼膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體之核酸包含根據選自由下列所組成之群組的序列之核酸序列：SEQ ID NO: 31、SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 96、SEQ ID NO: 97、及SEQ ID NO: 100。

揭示一種重組載體，其包含編碼本文所述之膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體之核酸。

在實施例中，重組載體或核酸進一步包含編碼嵌合抗原受體(CAR)或T細胞受體(TCR)之核酸。在實施例中，CAR或TCR結合腫瘤抗原。在實施例中，腫瘤抗原係選自由下列所組成之群組：2B4 (CD244)、4-1BB、5T4、A33抗原、腺癌抗原、腎上腺素受體β3 (ADRB3)、A激酶錨定蛋白4 (AKAP-4)、α胎兒蛋白(AFP)、間變性淋巴瘤激酶(ALK)、雄性激素受體、B7H3 (CD276)、β2整合素、BAFF、B淋巴瘤細胞、B細胞突變抗原(BCMA)、bcr-abl（由斷點簇集區(BCR)及Abelson鼠白血病病毒致癌基因同源物1 (Abl)所組成之致癌基因融合蛋白）、BhCG、骨髓基質細胞抗原2 (BST2)、CCCTC結合因子（鋅指蛋白質）樣（BORIS或印記位點調節物兄弟(brother of the regulator of imprinted site)）、BST2、C242抗原、9-0-乙醯基-CA19-9標記、CA-125、CAEX、鈣網蛋白(calreticulin)、碳酸酐酶9 (CAIX)、C-MET、CCR4、CCR5、CCR8、CD2、CD3、CD4、CD5、CD8、CD7、CD10、CD16、CD19、CD20、CD22、CD23（IgE受體）、CD24、CD25、CD27、CD28、CD30 (TNFRSF8)、CD33、CD34、CD38、CD40、CD40L、CD41、CD44、CD44V6、CD49f、CD51、CD52、CD56、CD63、CD70、CD72、CD74、CD79a、CD79b、CD80、CD84、CD96、CD97、CD100、CD123、CD125、CD133、CD137、CD138、CD150、CD152 (CTLA-4)、CD160、CD171、CD179a、CD200、CD221、CD229、CD244、CD272 (BTLA)、CD274 (PD-L1、B7H1)、CD279 (PD-1)、CD352、CD358、CD300分子樣家族成員f (CD300LF)、癌胚抗原(CEA)、密連蛋白6 (CLDN6)、C型凝集素樣分子（CLL-1或CLECL1）、C型凝集素域家族12成員A (CLEC12A)、巨細胞病毒(CMV)感染之細胞抗原、CNT0888、CRTAM (CD355)、CS-1（亦稱為CD2子集1、CRACC、CD319、及19A24）、CTLA-4、週期蛋白B l、染色體X開讀框61 (CXORF61)、細胞色素P450 1B 1 (CYP1B1)、DNAM-1 (CD226)、橋粒芯蛋白(desmoglein) 4、DR3、DR5、E-鈣黏素新表位(E-cadherin neoepitope)、上皮生長因子受體(EGFR)、EGF1R、上皮生長因子受體變體III (EGFRvIII)、上皮醣蛋白2 (EGP-2)、上皮醣蛋白40 (EGP-40)、含EGF樣模組之黏液素樣激素受體樣2 (EMR2)、突變型延伸因子2 (ELF2M)、內皮唾液酸蛋白、上皮細胞黏附分子(EPCAM)、A型蝶素受體2 (EphA2)、蝶素B2、受體酪胺酸蛋白質激酶erb-B2,3,4 (erb-B2,3,4)、ERBB、ERBB2 (Her2/neu)、ERG（跨膜絲胺酸蛋白酶2 (TMPRSS2) ETS融合基因）、ETA、位於染色體12p上之ETS易位變體基因6 (ETV6-AML)、IgA受體之Fc片段（FCAR或CD89）、纖維母細胞活化蛋白α (FAP)、FBP、Fc受體樣5 (FcRL5)、胎兒乙醯膽鹼受體(AChR)、纖連蛋白外域B、Fms樣酪胺酸激酶3 (FLT3)、葉酸結合蛋白(FBP)、葉酸受體1、葉酸受體β、葉酸受體γ、Fos相關抗原1、岩藻醣基、岩藻醣基GM1；GM2、神經節苷脂G2 (Gd2)、神經節苷脂GD3 (aNeu5Ac(2-8)aNeu5Ac(2-3)bDGalp(l -4)bDGlcp(l- l)Cer)、o-乙醯基-GD2神經節苷脂(OAcGD2)、GITR (TNFRSF 18)、GM1、神經節苷脂GM3、globoH糖基神經醯胺之六醣部分(GloboH)、醣蛋白75、磷脂醯肌醇蛋白聚醣3 (GPC3)、醣蛋白100 (gpl00)、GPNMB、G蛋白偶聯受體20 (GPR20)、G蛋白偶聯受體C類5組成員D (GPRC5D)、A型肝炎病毒細胞受體1 (HAVCR1)、人類表皮生長因子受體2 (HER-2)、HER2/neu、HER3、HER4、HGF、高分子量黑色素瘤相關抗原(HMWMAA)、人類乳突病毒E6 (HPV E6)、人類乳突病毒E7 (HPV E7)、突變型熱休克蛋白70-2 (mut hsp70-2)、人類分散因子受體激酶、人類端粒酶反轉錄酶(hTERT)、HVEM、ICOS、類胰島素生長因子受體1（IGF-1受體）、IGF-I、IgGl、免疫球蛋白λ樣多肽1 (IGLL1)、IL-6、介白素11受體α (IL-llR)、IL-13、介白素13受體次單元α2（IL- 13Rα2或CD213A2）、類胰島素生長因子I受體(IGF1-R)、整合素α5β1、整合素ανβ3、腸羧基酯酶、κ輕鏈、KCS1、激酶插入域受體(KDR)、KIR、KIR2DL1、KIR2DL2、KIR2DL3、KIR3DL2、KIR-L、KG2D配體、KIT (CD117)、KLRGI、LAGE-la、LAG3、淋巴球特異性蛋白酪胺酸激酶(LCK)、白血球免疫球蛋白樣受體亞家族A成員2 (LILRA2)、豆莢蛋白(legumain)、白血球相關免疫球蛋白樣受體1 (LAIR1)、路易士(Y)抗原(Lewis(Y) antigen)、LeY、LG、LI細胞黏附分子(LI-CAM)、LIGHT、LMP2、淋巴球抗原6複合物、LTBR、基因座K 9 (LY6K)、Ly-6、淋巴球抗原75 (LY75)、黑色素瘤癌症睪丸抗原1 (MAD-CT-1)；黑色素瘤癌症睪丸抗原2 (MAD-CT-2)、MAGE、黑色素瘤相關抗原1 (MAGE-A1)、由T細胞識別之MAGE-A3黑色素瘤抗原1（MelanA或MARTI）、MelanA/MARTl、間皮素、MAGE A3、黑色素瘤細胞凋亡抑制因子(ML-IAP)、黑色素瘤特異性硫酸軟骨素蛋白聚醣(MCSCP)、MORAb-009、MS4A1、黏液素1 (MUCl)、MUC2、MUC3、MUC4、MUC5AC、MUC5b、MUC7、MUC16、黏液素CanAg、II型密拉氏管抑制物質(mullerian inhibitory substance, MIS)受體、v-myc禽骨髓瘤細胞病毒致癌基因神經母細胞瘤衍生性同源物(MYCN)、N-羥乙醯神經胺酸、N-乙醯基葡萄糖胺基轉移酶V (NA17)、神經細胞黏附分子(NCAM)、NKG2A、NKG2C、NKG2D、NKG2E配體、NKR-P IA、NPC-1C、NTB-A、乳腺分化抗原(NY-BR-1)、NY-ESO-1、致癌胎兒抗原(h5T4)、嗅覺受體51E2 (OR51E2)、OX40、漿細胞抗原、poly SA、前頂體素(proacrosin)結合蛋白sp32 (OY-TES l)、p53、p53突變體、泛連接蛋白3 (PANX3)、前列腺酸性磷酸酶(PAP)、成對盒蛋白Pax-3 (PAX3)、成對盒蛋白Pax-5 (PAX5)、前列腺癌腫瘤抗原1（PCTA-1或半乳糖凝集素8）、PD-1H、血小板衍生生長因子受體α (PDGFR-α)、PDGFR-β、PDL192、PEN-5、磷脂絲胺酸、胎盤特異性蛋白1 (PLAC1)、聚唾液酸、前列腺酶、前列腺癌細胞、前列腺蛋白(prostein)、蛋白酶絲胺酸21（睪素或PRSS21）、蛋白酶3 (PR1)、前列腺幹細胞抗原(PSCA)、前列腺特異性膜抗原(PSMA)、蛋白酶體（前體(prosome)、巨蛋白因子(macropain)）次單元β型、晚期糖化終產物受體(RAGE-1)、RANKL、Ras突變體、Ras同源物家族成員C (RhoC)、RON、受體酪胺酸激酶樣孤兒受體1 (ROR1)、腎遍在蛋白1 (renal ubiquitous 1, RU1)、腎遍在蛋白2 (RU2)、肉瘤易位斷點、由T細胞識別之鱗狀細胞癌抗原3 (SART3)、SAS、SDC1、SLAMF7、唾液酸基路易士黏附分子(sLe)、Siglec-3、Siglec-7、Siglec-9、音蝟因子(SHH)、精子蛋白17 (SPA17)、階段特異性胚胎抗原4 (SSEA-4)、STEAP、sTn抗原、滑膜肉瘤X斷點2 (SSX2)、存活素(survivin)、腫瘤相關醣蛋白72 (TAG72)、TCR5β、TCRα、TCRβ、TCRδ、TCRγ。交替讀框蛋白(TARP)、端粒酶、TIGIT、TNF-α前驅物、腫瘤內皮標記1 (TEM1/CD248)、腫瘤內皮標記7相關蛋白(TEM7R)、肌腱蛋白C (tenascin C)、TGF-β1、TGF-β2、轉麩醯胺酸酶5 (TGS5)、促血管生成素結合細胞表面受體2 (Tie 2)、TIM1、TIM2、TIM3、Tn Ag、TRAIL-R1、TRAIL-R2、酪胺酸酶相關蛋白2 (TRP-2)、促甲狀腺激素受體(TSHR)、腫瘤抗原CTAA16.88、酪胺酸酶、尿溶蛋白2 (UPK2)、VEGF-A、VEGFR-1、血管內皮生長因子受體2 (VEGFR2)、及波形蛋白、TACI、威爾姆氏腫瘤(Wilms tumor)蛋白(WT1)、或X抗原家族成員1A (XAGE1)。

揭示一種免疫細胞，其包含本文所述之膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體、重組載體、或核酸。在實施例中，免疫細胞係T細胞或自然殺手(NK)細胞。揭示一種醫藥組成物，其包含本文所述之免疫細胞。

揭示一種治療對象之與腫瘤抗原表現相關之癌症的方法，其包含：向對象投予有效量的本文所揭示之免疫細胞或醫藥組成物。

揭示一種在對象中誘導免疫反應或使對象針對癌症免疫之方法，該方法包含向對象投予有效量的本文所述之免疫細胞或醫藥組成物。

揭示一種用於改善免疫細胞功能之方法，其包含將免疫細胞工程改造以表現膜結合介白素15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合受體。

相關申請案之交互參照

本申請案主張於2021年3月11日申請之美國臨時專利申請案第63/159,610號及於2021年6月14日申請之美國臨時專利申請案第63/210,300號之優先權，其等全文出於所有目的併入本文中。用語

為了能更輕易理解本揭露，以下先定義某些用語。下列用語及其他用語之額外定義係在本說明書中各處闡述。

如本說明書及隨附申請專利範圍中所使用，單數形式「一(a)」、「一(an)」、及「該(the)」皆包括複數指稱，除非上下文另有明確說明。

除非有具體陳述或自上下文中明顯可知，如本文中所使用，用語「或(or)」係理解為涵括性的且同時涵蓋「或(or)」與「及(and)」。

在本文中，將使用用語「及/或(and/or)」之處認為是具體揭露兩個指定特徵或組分之各者（包含或不包含另一者）。因此，如用於諸如「A及/或B」之詞組中的用語「及/或」在本文中係意欲包括A及B；A或B；A（單獨）；及B（單獨）。同樣地，如用於諸如「A、B、及/或C」之詞組中的用語「及/或」係意欲涵蓋下列態樣之各者：A、B、及C；A、B、或C；A或C；A或B；B或C；A及C；A及B；B及C；A（單獨）；B（單獨）；及C（單獨）。

如本文所使用，用語「例如( e.g.)」僅作為實例所使用，但不意欲限制，且不應解釋為僅參考本說明書中明確列舉之彼等項目。

用語「或更多(or more)」、「至少(at least)」、「多於(more than)」、及類似者，例如「至少一個(at least one)」應理解為包括但不限於至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149或150、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000、或多於所述值。亦包括的是任何更大之數目或其間之分數。

相反地，用語「不多於(no more than)」包括少於所述值之各值。例如，「不超過100個核苷酸」包括100、99、98、97、96、95、94、93、92、91、90、89、88、87、86、85、84、83、82、81、80、79、78、77、76、75、74、73、72、71、70、69、68、67、66、65、64、63、62、61、60、59、58、57、56、55、54、53、52、51、50、49、48、47、46、45、44、43、42、41、40、39、38、37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1、及0個核苷酸。亦包括的是任何更小之數目或其間之分數。

用語「複數(plurality)」、「至少二(at least two)」、「二或更多(two or more)」、「至少第二(at least second)」、及類似者係理解為包括但不限於至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19 20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149或150、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000或更多。亦包括的是任何更大之數目或其間之分數。

在本說明書各處，詞語「包含(comprising)」或諸如「comprises」或「comprising」之變型將理解為有意涵括所述元素、整數、或步驟、或元素組、整數組、或步驟組，但不排除任何其他元素、整數、或步驟、或元素組、整數組、或步驟組。應理解的是，在本文中以用語「包含」描述的態樣之處，亦另提供以用語「由…所組成(consisting of)」及/或「基本上由…所組成(consisting essentially of)」所描述之類似態樣。

除非特定陳述或從上下文顯而易見，否則用語「約(about)」係指藉由所屬技術領域中具有通常知識者所判定之特定值或組成之可接受誤差範圍內之一值或組成，其將部分取決於該值或組成如何測量或判定，即，測量系統之限制。舉例而言，「約」或「基本上包含(comprising essentially of)」可意指根據所屬技術領域中之實踐之一或多個標準差內。「約」或「基本上包含」可意指至多10%之範圍（即±10%）。因此，「約」可理解為在10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%、0.1%、0.05%、0.01%、或0.001%內大於或小於所述值。舉例而言，約5 mg可包括在4.5 mg與5.5 mg之間的任何量。此外，特別是關於生物系統或程序，用語可意指至多一個數量級或至多5倍之值。除非另外說明，否則在本揭露中提供特定值或組成時，應假設「約」或「基本上包含」之意義係在該特定值或組成之可接受誤差範圍內。

如本文中所述，任何濃度範圍、百分比範圍、比率範圍、或整數範圍係理解為涵括所述範圍內之任何整數值，並且在適當時亦涵括其分數（諸如整數之十分之一及百分之一），除非另有指示。

本文中所使用之單位、前綴、及符號係使用其國際單位制(SI)公認形式來提供。數字範圍涵括定義該範圍之數字。

除非另有定義，否則本文中所使用之所有技術及科學用語具有與本揭露所相關之技術領域中具有通常知識者一般理解者相同的意義。舉例而言，Juo，「The Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology」，2 ^nded., (2001), CRC Press；「The Dictionary of Cell & Molecular Biology」，5 ^thed., (2013), Academic Press；及「The Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology」，Cammack et al.eds., 2 ^nded, (2006), Oxford University Press，提供所屬技術領域中具有通常知識者用於本揭露之許多用語的一般詞典。

「投予(administering)」係指使用所屬技術領域中具有通常知識者已知的任何各種方法及遞送系統將藥劑實體引入對象中，諸如本文所揭示之經修飾之T細胞或NK細胞。用於本文所揭示之配方的例示性投予途徑包括靜脈內、肌內、皮下、腹膜內、脊椎、或其他腸胃外投予途徑，例如藉由注射或輸注。片語「腸胃外投予(parenteral administration)」意指除腸內及局部(topical)投予以外的投予模式，通常藉由注射，且包括但不限於靜脈內、肌內、動脈內、鞘內、淋巴內(intralymphatic)、病灶內、囊內、眶內、心內、皮內、腹膜內、經氣管、皮下、表皮下(subcuticular)、關節內、囊下、蜘蛛膜下、脊椎內、硬膜外、及胸骨內注射及輸注、以及體內電穿孔。在一些實施例中，配方經由非腸胃外途徑投予，例如經口。其他非腸胃外途徑包括局部、上皮或黏膜投予途徑，例如，鼻內、陰道內、直腸、舌下、或局部。亦可執行投予，例如一次、多次、及/或經過一或多個延伸週期。

用語「經活化(activated)」及「活化(activation)」係指已被足夠刺激以誘導可偵測細胞增生的T細胞或NK細胞之狀態。在一個實施例中，活化亦可與誘導之細胞介素產生及可偵測效應功能相關。用語「經活化T細胞(activated T cell)」尤其係指增生之T細胞。用語「經活化NK細胞(activated NK cell)」尤其係指增生之NK細胞。透過單獨TCR產生的信號可能不足以完全活化T細胞，且亦可能需要一或多個二級或共刺激信號。因此，T細胞活化包含透過TCR/CD3複合物之初級刺激信號及一或多個二級共刺激信號。共刺激可藉由已接受初級活化信號之T細胞（諸如透過TCR/CD3複合物之刺激）的增生及/或細胞介素產生來證明。

用語「劑(agent)」可指任何類別的分子或實體，其包含或係複數個分子或實體，其中任一者可係例如多肽、核酸、醣、脂質、小分子、金屬、細胞（諸如T細胞或NK細胞或此類細胞之先驅細胞）、或生物體（例如其部分或萃取物）、或其組分。在一些實施例中，藥劑可以單離或純形式使用。在一些實施例中，藥劑可以粗製或不純形式使用。在一些實施例中，藥劑可被提供為群體、集合、或庫，例如可經篩選以識別或表徵其中存在之成員。

用語「同種異體(allogeneic)」係指衍生自一個個體之任何材料，其接著引入相同物種之另一個體，例如同種異體T細胞移植。

用語「抗體(antibody)」(Ab)包括但不限於特異性結合至抗原之醣蛋白免疫球蛋白。一般而言，且抗體可包含至少兩個重(H)鏈及兩個輕(L)鏈，其等藉由二硫鍵或其抗原結合分子互相連接。各H鏈包含重鏈可變區（在本文中縮寫為VH）及重鏈恆定區。重鏈恆定區包含三個恆定域，CH1、CH2、及CH3。各輕鏈包含輕鏈可變區（在本文中縮寫為VL）及輕鏈恆定區。輕鏈恆定區包含一個恆定域CL。VH及VL區可進一步細分成高度變異區，稱為互補決定區(CDR)，其中散布稱為架構區(FR)之更具保守性的區。各VH及VL包含三個CDR及四個FR，以下列順序從胺基端排列到羧基端：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、及FR4。重鏈及輕鏈之可變區含有與抗原相互作用之結合域。Ab之恆定區可介導免疫球蛋白與宿主組織或因子之結合，包括免疫系統之各種細胞（例如效應細胞）及經典補體系統之第一組分(C1q)。一般而言，人類抗體係大約150 kD之四聚體藥劑，由兩個同一之重(H)鏈多肽（各自約50 kD）及兩個同一之輕(L)鏈多肽（各自約25 kD）組成，其等彼此締合成一般稱為「Y形狀」結構。重鏈及輕鏈藉由單一二硫鍵彼此相連或連接；其他兩個二硫鍵將重鏈鉸鏈區彼此連接，使得二聚體彼此連接並形成四聚體。天然產生之抗體亦經醣基化，例如在C _H2域上。

用語「人類抗體(human antibody)」意欲包含具有可變及恆定域序列之抗體，其由人類免疫球蛋白序列或與其無法區分之序列產生、組裝、或衍生。在一些實施例中，抗體（或抗體組分）可視為「人類」，即使其胺基酸序列包含未由人類生殖系免疫球蛋白序列編碼之殘基或元素（例如藉由體外隨機或位點特異性突變誘發引入之變體，或藉由體內體細胞突變引入之變體）。用語「人源化(humanized)」意欲包含具有可變域之抗體，該可變域之序列衍生自非人類物種（例如小鼠）之可變域，經修飾以更類似於人類生殖系編碼之序列。在一些實施例中，「人源化」抗體包含一或多個實質上具有人類架構域之胺基酸序列的架構域、及一或多個實質上具有與非人類抗體之胺基酸序列相同之胺基酸序列的互補決定區。在一些實施例中，人源化抗體包含至少一部分免疫球蛋白恆定區(Fc)，通常係人類免疫球蛋白恆定域之至少一部分。在一些實施例中，人源化抗體可包含人類重鏈恆定域之C _H1、鉸鏈、C _H2、C _H3、及可選地C _H4區。

抗體可包括例如單株抗體、重組產生的抗體、單特異性抗體、多特異性抗體（包括雙特異性抗體）、人類抗體、經工程改造之抗體、人源化抗體、嵌合抗體、免疫球蛋白、合成抗體、包含兩個重鏈及兩個輕鏈分子之四聚體抗體、抗體輕鏈單體、抗體重鏈單體、抗體輕鏈二聚物、抗體重鏈二聚物、抗體輕鏈-抗體重鏈對、體內抗體、抗體融合（本文有時稱為「抗體接合物」）、異源接合物抗體、單域抗體、單價抗體、單鏈抗體或單鏈Fvs (scFv)、駱駝化抗體、親合體(affybody)、Fab片段、F(ab’) ₂片段、二硫化物連接之Fvs (sdFv)、抗遺傳型（抗Id）抗體（包括例如抗-抗Id抗體）、微型體(minibody)、域抗體、合成抗體（本文有時稱為「抗體模擬物(antibody mimetic)」）、及上述任一者之抗原結合片段。在某些實施例中，本文所描述之抗體指多株抗體群。抗體亦可包含例如Fab′片段、Fd′片段、Fd片段、單離CDR、單鏈Fvs、多肽-Fc融合、單域抗體（例如，鯊魚單域抗體，諸如IgNAR或其片段）、駱駝科動物抗體、單鏈或Tandem雙抗體(TandAb®)、Anticalins®、Nanobodies®微型體、BiTE®、錨蛋白重複蛋白質或DARPINs®、Avimers®、DART、類TCR抗體、Adnectins®、Affilins®、Trans-bodies®、Affibodies®、TrimerX®、微蛋白、Fynomers®、Centyrins®、及KALBITOR®。

免疫球蛋白可衍生自通常已知同型中之任一者，包括但不限於IgA、分泌IgA、IgG、IgE、及IgM。IgG亞類亦為所屬技術領域中具有通常知識者所熟知，且包括但不限於人類IgG1、IgG2、IgG3、及IgG4。「同型(isotype)」係指由重鏈恆定區基因編碼之Ab類或亞類（例如IgM或IgG1）。用語「抗體(antibody)」包括舉實例而言天然存在及非天然存在之Ab兩者；單株及多株Ab；嵌合及人源化Ab；人類或非人類Ab；全合成Ab；及單鏈Ab。非人類Ab可藉由重組方法來人源化以減少其在人中之免疫原性。在未明確陳述之情況下，且除非上下文另外指示，否則用語「抗體(antibody)」亦包括任何前述免疫球蛋白之抗原結合片段或抗原結合部分，且包括單價及二價片段或部分及單鏈Ab。

「抗原結合分子(antigen binding molecule)」、「抗原結合部分(antigen binding portion)」、「抗原結合片段(antigen binding fragment)」、或「抗體片段(antibody fragment)」或「抗原結合域(antigen binding domain)」係指包含衍生分子之抗體之抗原結合部分（例如CDR）之任何分子。抗原結合分子可包括抗原互補決定區(CDR)。抗體片段之實例包括但不限於形成自抗原結合分子之Fab、Fab'、F(ab')2、及Fv片段、dAb、線性抗體、scFv抗體、及多特異性抗體。肽體(peptibody)（亦即，包含肽結合域之Fc融合分子）係合適抗原結合分子之另一個實例。在一些實施例中，抗原結合分子結合至腫瘤細胞上之抗原。在一些實施例中，抗原結合分子結合至涉及過度增生性疾病之細胞上的抗原或結合至病毒或細菌抗原。在某些實施例中，抗原結合分子係嵌合抗原受體(CAR)或經工程改造之T細胞受體(TCR)。在某些實施例中，抗原結合分子或域係特異性結合至抗原之抗體片段，包括其互補決定區(CDR)之一或多者。在進一步實施例中，抗原結合分子係單鏈可變片段(scFv)。在一些實施例中，抗原結合分子或域包含親和性多聚體(avimer)或由親和性多聚體組成。

在一些情況下，CDR與參考抗體（例如本揭露之抗體）中所發現之一個CDR及/或本揭露中所提供之CDR之序列實質上同一。在一些實施例中，CDR與參考CDR實質上同一，其中相較於參考CDR，其序列同一或含有在1、2、3、4、或5（例如1至5）個之間的胺基酸取代。在一些實施例中，CDR與參考CDR實質上同一，其中其顯示與參考CDR至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%之序列同一性（例如85%至90%、85%至95%、85%至100%、90%至95%、90%至100%、或95至100%）。在一些實施例中，CDR與參考CDR實質上同一，其中其顯示與參考CDR至少96%、96%、97%、98%、99%、或100%之序列同一性。在一些實施例中，CDR與參考CDR實質上同一，其中相較於參考CDR，CDR內之一個胺基酸經缺失、添加、或取代，而該CDR之其他部分具有與參考CDR之胺基酸序列同一之胺基酸序列。在一些實施例中，CDR與參考CDR實質上同一，其中相較於參考CDR，CDR內之2、3、4、或5（例如2至5）個胺基酸經缺失、添加、或取代，而該CDR之其他部分具有與參考CDR之胺基酸序列同一之胺基酸序列。在各種實施例中，抗原結合片段與參考抗體結合相同抗原。在各種實施例中，抗原結合片段與參考抗體交叉競爭，例如結合至與參考抗體實質上同一之表位

抗原結合片段可藉由任何手段產生。舉例而言，在一些實施例中，抗原結合片段可藉由完整抗體碎斷而酶促或化學產生。在一些實施例中，抗原結合片段可重組產生（諸如藉由經工程改造之核酸序列之表現）。在一些實施例中，抗原結合片段可完全或部分地合成產生。在一些實施例中，抗原結合片段可具有至少約50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190個胺基酸或更多之長度；在一些實施例中，至少約200個胺基酸（例如50至100、50至150、50至200、或100至200個胺基酸）。

用語「可變區(variable region)」或「可變域(variable domain)」可互換使用。可變區一般係指抗體之一部分，通常係輕鏈或重鏈之一部分，一般係成熟重鏈中胺基端的約110至120個胺基及成熟輕鏈中約90至115個胺基酸，其在抗體之間的序列差異很大，且係用於特定抗體對其特定抗原之結合及特異性。序列之變異性集中在稱為互補決定區(CDR)之區中，而可變域中更高度保守的區稱為架構區(FR)。不希望受任何特定機制或理論束縛，咸信輕鏈及重鏈之CDR主要負責抗體與抗原之相互作用及特異性。在某些實施例中，可變區係人類可變區。在某些實施例中，可變區包含嚙齒動物或鼠類CDR及人類架構區(FR)。在實施例中，可變區係靈長類（例如非人類靈長類）可變區。在某些實施例中，可變區包含嚙齒動物或鼠類CDR及靈長類（例如非人類靈長類）架構區(FR)。

用語「VL」及「VL域(VL domain)」可互換使用以指抗體或其抗原結合分子之輕鏈可變區。

用語「VH」及「VH域(VH domain)」可互換使用以指抗體或其抗原結合分子之重鏈可變區。

通常使用之CDR之許多定義：Kabat編號、Chothia編號、AbM編號、或Contact編號。AbM定義係Oxford Molecular之AbM抗體模型化軟體所使用之兩者之間之妥協。Contact定義係基於可用複雜晶體結構之分析。表1 ：CDR 編號

環	Kabat	AbM	Chothia	接觸
L1	L24--L34	L24--L34	L24--L34	L30--L36
L2	L50--L56	L50--L56	L50--L56	L46--L55
L3	L89--L97	L89--L97	L89--L97	L89--L96
H1	H31-H35B （Kabat編號）	H26--H35B	H26--H32..34	H30--H35B
H1	H31--H35 （Chothia編號）	H26--H35	H26--H32	H30--H35
H2	H50--H65	H50--H58	H52--H56	H47--H58
H3	H95--H102	H95--H102	H95--H102	H93--H101

用語「Kabat編號(Kabat numbering)」及類似用語在所屬技術領域中被認可，且指抗體或其抗原結合分子之重鏈及輕鏈可變區中之編號胺基酸殘基之系統。在某些態樣中，抗體之CDR可根據Kabat編號系統判定（參見例如Kabat EA & Wu TT (1971) Ann NY Acad Sci 190: 382-391 and Kabat EA et al.,(1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242）。使用Kabat編號系統，抗體重鏈分子內之CDR一般存在於胺基酸位置31至35，其可選地可包括一或兩個35以後之額外胺基酸（在Kabat編號方案中稱為35A及35B）(CDR1)、胺基酸位置50至65 (CDR2)、及胺基酸位置95至102 (CDR3)。使用Kabat編號系統，抗體輕鏈分子內之CDR一般存在於胺基酸位置24至34 (CDR1)、胺基酸位置50至56 (CDR2)、及胺基酸位置89至97 (CDR3)。在一特定實施例中，本文所述之抗體之CDR已根據Kabat編號方案判定。

在某些態樣中，抗體之CDR可根據Chothia編號方案判定，其係指免疫球蛋白結構環之位置（參見例如Chothia C & Lesk AM, (1987), J Mol Biol 196: 901-917；Al-Lazikani B et al.,(1997) J Mol Biol 273: 927-948；Chothia C et al.,(1992) J Mol Biol 227: 799-817；Tramontano A et al.,(1990) J Mol Biol 215(1): 175-82；及美國專利第7,709,226號）。一般而言，當使用Kabat編號慣例，Chothia CDR-H1環存在於重鏈胺基酸26至32、33、或34處，Chothia CDR-H2環存在於重鏈胺基酸52至56處，且Chothia CDR-H3環存在於重鏈胺基酸95至102處，而Chothia CDR-L1環存在於輕鏈胺基酸24至34處，Chothia CDR-L2環存在於輕鏈胺基酸50至56處，且Chothia CDR-L3環存在於輕鏈胺基酸89至97處。在使用Kabat編號慣例編號時，Chothia CDR-HI環之結束在H32與H34之間之變化，取決於環的長度（此係因為Kabat編號方案將插入部分置於H35A及H35B處；若35A及35B均不存在，則環在32處結束；若僅存在35A，則環在33處結束；若35A及35B均存在，則環在34處結束）。在一特定實施例中，本文所述之抗體之CDR已根據Chothia編號方案判定。

用語「恆定區(constant region)」及「恆定域(constant domain)」可互換且具有所屬技術領域中通用的含義。恆定區係抗體部分，例如輕鏈及/或重鏈之羧基端部分，其不直接涉及抗體與抗原之結合，但可展現各種效應功能，諸如與Fc受體相互作用。免疫球蛋白分子之恆定區通常具有相對於免疫球蛋白可變域更保守之胺基酸序列。

當參考抗體使用時，用語「重鏈(heavy chain)」可指任何不同類型，例如α、δ、ε、γ、及µ，基於恆定域之胺基酸序列，其各別產生IgA、IgD、IgE、IgG、及IgM類別之抗體，包括IgG之亞類，例如IgG ₁、IgG ₂、IgG ₃、及IgG ₄。

當參考抗體使用時，用語「輕鏈(light chain)」可指任何不同類型，例如基於恆定域之胺基酸序列之κ或λ。輕鏈胺基酸序列係所屬技術領域中所熟知。在特定實施例中，輕鏈係人類輕鏈。

「抗原(antigen)」係指可刺激人類或動物產生抗體或T細胞反應之化合物、組成物或物質，包括組成物（諸如包括腫瘤特異性蛋白質之一者），該等組成物被注射或吸收至人類或動物中。抗原與特定體液或細胞免疫之產物反應，包括藉由異源抗原（諸如所揭示之抗原）所誘導者。「目標抗原(target antigen)」或「所關注之目標抗原(target antigen of interest)」係在其他正常（所欲）細胞之表面上未實質上發現之抗原，且本文所涵蓋之TCR或CAR之結合域經設計以結合至其。所屬技術領域中具有通常知識者將容易地理解，任何大分子包括幾乎所有蛋白質或肽可作為抗原。抗原可內源性表現，即藉由基因體DNA表現，或可重組表現。抗原可對特定組織（諸如癌細胞）具有特異性，或其可廣泛表現。此外，較大分子之片段可充當抗原。「目標(target)」係由結合模體、CAR、TCR、或抗原結合劑（例如抗體）結合的任何分子。

「抗原特異性靶向區(antigen-specific targeting region)」(ASTR)係指靶向特定抗原之CAR或TCR的區。CAR或TCR上之靶向區係胞外的。在一些實施例中，抗原特異性靶向區包含抗體或其功能等效物或其片段或其衍生物，且靶向區之各者靶向不同抗原。靶向區可包含全長重鏈、Fab片段、單鏈Fv (scFv)片段、二價單鏈抗體或雙抗體，其各者對目標抗原具有特異性。然而，許多替代方案，諸如連接細胞介素（其導致識別帶有細胞介素受體之細胞）、親和抗體(affibody)、來自天然存在受體之配體結合域、受體之可溶性蛋白質/肽配體（例如在腫瘤細胞上）、肽、及疫苗，以促使免疫反應，其可各自用於本揭露案之各種實施例中。事實上，如所屬技術領域中具有通常知識者將瞭解，幾乎任何與具有高親和力之給定抗原結合之分子均可用作抗原特異性靶向區。

「抗原呈現細胞(Antigen presenting cell)」或「APC」係指處理並向T細胞呈現抗原之細胞。例示性APC包含樹突細胞、巨噬細胞、B細胞、某些活化上皮細胞、及能夠TCR刺激及適當T細胞共刺激之其他細胞類型。

「抗腫瘤效應(anti-tumor effect)」係指可呈現為下列之生物效應：腫瘤體積減少、腫瘤細胞數目減少、腫瘤細胞增生減少、轉移數目減少、整體或無進展存活期增加、預期壽命增加、或改善與腫瘤相關之各種生理症狀。抗腫瘤效應亦可指預防腫瘤出現。

若一者之存在、水準、及/或形式與另一者相關，則兩個事件或實體係「關聯(associated)」。例如，實體（例如多肽、基因印記、代謝物、微生物等）係與疾病、病症或病狀相關聯，若其存在、水準、及/或形式與疾病、病症或病況之發生率及/或易感性相關（例如跨越相關群體）。舉例而言，若二或更多個實體彼此直接或間接相互作用，則其等實體地「相關聯」，使得其等係及/或保持在實體上彼此接近（例如結合）。在額外的實例中，彼此實體相關聯的二或更多個實體係彼此共價鍵聯或連接，或例如藉由氫鍵、凡得瓦相互作用、疏水性相互作用、磁性、及其組合之手段非共價締合。

用語「自體(autologous)」係指任何衍生自相同個體之材料，該材料之後會再重新引入至該個體。例如，本文所述之經工程改造之自體細胞療法(eACT™)方法涉及自患者收集淋巴球，接著將其工程改造以表現例如CAR構築體，接著投予回同一位患者。

「結合親和力(binding affinity)」通常係指分子（例如抗體）之單結合位點與其結合伴體（例如抗原）之間的非共價相互作用之總和的強度。除非另外指示，否則「結合親和力」係指本質結合親和力，其反映結合對（例如抗體及抗原）之成員之間的1:1相互作用。分子X針對其伴體Y的親和力通常可由解離常數(K _D)表示。親和力可以所屬技術領域中已知之多種方式測量及/或表現，包括但不限於平衡解離常數(K _D)及平衡締合常數(K _A)。K _D係由k _off/k _on之商計算，而K _A係由k _on/k _off之商計算。k _on係指例如抗體至抗原之締合速率常數，且k _off係指例如抗體至抗原之解離。k _on及k _off可藉由所屬領域中具有通常知識者已知之技術判定，諸如BIAcore®或KinExA。

用語「KD」(M)係指特定抗體-抗原相互作用之解離平衡常數，或抗體或抗體結合片段與抗原結合之解離平衡常數。K _D與結合親和力之間存在倒數關係，因此K _D值越小，親和力愈高，即越強。因此，用語「較高親和力(higher affinity)」或「較強親和力(stronger affinity)」係關於形成相互作用之較高能力且因此K _D值較小，且相反地用語「較低親和力(lower affinity)」或「較弱親和力(weaker affinity)」係關於形成相互作用之較低能力且因此K _D值較大。在一些情況下，特定分子（例如抗體）與其相互作用伴體分子（例如抗原X）之結合親和力（或K _D）與該分子（例如抗體）與另一相互作用伴體分子（例如抗原Y）相比有較高之結合親和力，可表示為藉由將較大之K _D值（較低或較弱之親和力）除以較小之K _D（較高或較強之親和力）而判定之結合比率，例如表示為大5倍或10倍之結合親和力，視情況而定。

用語「k _d」（sec-1或1/s）係指特定抗體-抗原相互作用之解離速率常數，或抗體或抗體結合片段之解離速率常數。所述值亦稱為k _0ir值。

用語「k _a」（M-1 × sec-1或1/M）係指特定抗體-抗原相互作用之締合速率常數，或抗體或抗體結合片段之締合速率常數。

用語「K _A」（M-1或1/M）係指特定抗體-抗原相互作用之締合平衡常數，或抗體或抗體結合片段之締合平衡常數。藉由將k _a除以k _d來獲得締合平衡常數。

用語「結合(binding)」通常係指或兩個或更多個實體之間的非共價締合。直接結合涉及實體或部分之間的實體接觸。「間接(indirect)」結合涉及藉由具有一或多個中間實體之實體接觸的物理相互作用。可在多種情形中之任一者中評定兩個或更多個實體之間之結合，例如其中在單離中或在更複雜系統（例如同時共價或以其他方式與載體實體締合，且/或在生物系統（諸如細胞）中）之情況下研究相互作用之實體或部分。

用語「免疫特異性結合(immunospecifically bind)」、「免疫特異性辨識(immunospecifically recognize)」、「特異性結合(specifically bind)」、及「特異性辨識(specifically recognize)」係抗體在上下文中之類似用語，且指結合至抗原（例如表位或免疫複合物）之分子，所屬技術領域中具有通常知識者理解此類結合。舉例而言，特異性結合至抗原之分子可結合至其他肽或多肽，通常具有較低親和力，藉由例如免疫檢定、BIACORE ^®、KinExA 3000儀器(Sapidyne Instruments, Boise, ID)、或所屬技術領域中已知之其他檢定所判定。在特定實施例中，特異性結合至抗原之分子以至少2 logs、2.5 logs、3 logs、4 logs之K _A，或大於分子結合至另一抗原時之K _A結合至該抗原。相較於與具有不是目標之實體（即非目標）的結合模體、抗體、或抗原結合系統之締合，結合可包含與具有結合模體、抗體、或抗原結合系統之目標的結合模體、抗體、或抗原結合系統之優先締合。在一些實施例中，若結合模體、抗體、或抗原結合系統與目標之間的結合，相較於結合模體、抗體、或抗原結合系統與非目標之結合大於2倍、大於5倍、大於10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、或大於100倍，則結合模體、抗體、或抗原結合系統選擇性地結合目標。在一些實施例中，若結合親和力小於約10 ^-5M、小於約10 ^-6M、小於約10 ^-7M、小於約10 ^-8M、或小於約10 ^-9M，則結合模體、抗體、或抗原結合系統選擇性地結合目標。

在另一實施例中，特異性結合至抗原之分子以約1 × 10 ^-7M之解離常數(K _d)結合。在一些實施例中，當K _d係約1 × 10 ^-9M至約5 × 10 ^-9M時，抗原結合分子以「高親和力」特異性結合抗原。在一些實施例中，當K _d係1 × 10 ^-10M至約5 × 10 ^-10M時，抗原結合分子以「非常高親和力」特異性結合抗原。在一個實施例中，抗原結合分子具有10 ^-9M之K _d。在一實施例中，釋放速率小於約1 × 10 ^-5。

在某些實施例中，本文提供一種結合至目標人類抗原之抗體或其抗原結合分子，例如在某些實施例中，抗原結合分子以比結合至另一物種的目標抗原高5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、或更高的親和力結合至目標抗原，如藉由例如放射性免疫檢定、表面電漿共振、或動力學排除檢定所測量。在一具體實施例中，結合至目標人類抗原之本文所述之抗體或其抗原結合分子將以小於該抗體或其抗原結合分子與人類抗原結合之10%、15%、或20%與另一物種之目標抗原結合，如藉由例如放射性免疫檢定、表面電漿共振、或動力學排除檢定所測量。

用語「癌症(cancer)」大致上關於其中異常細胞不受控的分裂且可侵犯附近組織的一類疾病或病況。可藉由本揭露之方法治療的癌症之實例包括但不限於免疫系統之癌症，包括淋巴瘤、白血病、骨髓瘤、及其他白血球惡性疾病。在一些實施例中，本揭露之方法可用於縮小衍生自例如下列之腫瘤的腫瘤大小：骨癌、胰臟癌、皮膚癌、頭頸癌、皮膚或眼內惡性黑色素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛門部位癌、胃癌、睪丸癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮內膜癌、子宮頸癌、陰道癌、外陰癌、多發性骨髓瘤、霍奇金氏病(Hodgkin's Disease)、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、原發性縱膈腔大B細胞淋巴瘤(PMBC)、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、濾泡淋巴瘤(FL)、變化型濾泡淋巴瘤、脾邊緣區型淋巴瘤(SMZL)、食道癌、小腸癌、內分泌系統癌、甲狀腺癌、副甲狀腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、慢性或急性白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性淋巴母細胞白血病(ALL)（包括非T細胞ALL）、慢性淋巴球性白血病(CLL)、兒童實體腫瘤、淋巴球性淋巴瘤、膀胱癌、腎臟或輸尿管癌、腎盂癌、中樞神經系統(CNS)贅瘤、原發性CNS淋巴瘤、腫瘤血管生成、脊柱腫瘤、腦幹神經膠質瘤、垂體腺瘤、卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、表皮樣癌、鱗狀細胞癌、T細胞淋巴瘤、環境誘導之癌症（包括由石棉誘導者）、其他B細胞惡性疾病、及該等癌症之組合。在一個特定實施例中，癌症係多發性骨髓瘤。特定癌症可回應於化學或輻射療法或癌症可為難治性的。難治性癌症係指手術介入不能修正之癌症，及癌症初始不回應於化學或輻射療法或癌症隨時間推移而變得不反應。癌症進一步包括在二或更多線全身性療法之後的復發性或難治性大B細胞淋巴瘤，包括非特指型之瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、在二或更多線全身性療法之後的原發性縱膈腔大B細胞淋巴瘤、高級別B細胞淋巴瘤、及由濾泡淋巴瘤引起之DLBCL。

用語「癌細胞(cancerous cell/cancer cell)」、「腫瘤細胞(tumor cell)」、或其變體係指癌性生長或組織之個別細胞。腫瘤通常係指由細胞之異常生長形成的腫脹或病灶，其可係良性、癌前(pre-malignant)、或惡性。大多數癌症形成腫瘤，但一些例如白血病不一定形成腫瘤。對於形成腫瘤之癌症，用語癌症（細胞）及腫瘤（細胞）可互換使用。個體中之腫瘤量係「腫瘤負荷(tumor burden)」，其可以腫瘤之數目、體積、或重量測量。

「趨化激素(chemokine)」係一種細胞介素類型，其介導細胞趨化性或方向性移動。趨化激素之實例包括但不限於IL-8、IL-16、伊紅趨素、伊紅趨素-3、巨噬細胞衍生之趨化激素（MDC或CCL22）、單核球趨化蛋白1（MCP-1或CCL2）、MCP-4、巨噬細胞炎性蛋白1α (MIP-1α, MIP-1a)、MIP-1β (MIP-1b)、γ誘導蛋白10 (IP-10)、及胸腺及活化調節趨化激素（TARC或CCL17）。

「嵌合抗原受體(chimeric antigen receptor)」或「CAR」係指經工程改造以包含結合模體之分子及活化免疫細胞（例如T細胞，諸如初始T細胞、中央記憶T細胞、效應記憶T細胞、NK細胞或其組合）在抗原結合時之手段。CAR亦稱為人工T細胞受體、嵌合T細胞受體或嵌合免疫受體。在一些實施例中，CAR包含結合模體、胞外域、跨膜域、一或多個共刺激域、及胞內信號傳導域。已經基因工程改造以表現嵌合抗原受體之T細胞可稱為CAR T細胞。類似地，已經基因工程改造以表現嵌合抗原受體之NK細胞可稱為CAR NK細胞。

「減少(decrease)」、或「減低(lower)」、或「減輕(lessen)」、或「降低(reduce)」、或「消減(abate)」通常係指相較於由單獨媒劑（亦即活性部份）或對照分子/組成物造成之反應，本文所設想之組成物產生、引發、或造成較小生理反應（亦即下游效應）之能力。「減少」或「降低」量一般係「統計學上顯著的(statistically significant)」量，且可包括下列之1.1、1.2、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、15、20、30或更多倍（例如500、1000倍）的減少（包括介於之間及大於1之所有整數及小數點，例如1.5、1.6、1.7、1.8等）：由媒劑、對照組成物產生之反應（參考反應）。

「胞外域(extracellular domain)」（或「ECD」）係指多肽之部分，其當多肽存在於細胞膜中時，應理解為位於細胞膜外之胞外空間中。

如本文中所使用，用語「胞外配體結合域(extracellular ligand-binding domain)」係指能夠結合配體（例如細胞表面分子）之寡肽或多肽。例如，可選擇胞外配體結合域以識別作用為與特定疾病狀態（例如癌症）相關之目標細胞上之細胞表面標記的配體。可作用為配體之細胞表面標記之實例包括與病毒、細菌、及寄生蟲感染、自體免疫疾病、及癌細胞相關者。

CAR之結合域後面可接著「間隔子(spacer)」或「鉸鏈(hinge)」，其係指將抗原結合域移動遠離效應細胞表面以實現適當細胞/細胞接觸、抗原結合、及活化的區(Patel et al., Gene Therapy, 1999; 6: 412-419)。CAR中之鉸鏈區通常在跨膜(TM)與結合域之間。在某些實施例中，鉸鏈區係免疫球蛋白鉸鏈區，且可為野生型免疫球蛋白鉸鏈區或改變之野生型免疫球蛋白鉸鏈區。用於本文所描述之CAR中之其他例示性鉸鏈區包括衍生自類型1膜蛋白（諸如CD8α、CD4、CD28、及CD7）之胞外區的鉸鏈區，其可係來自此等分子之野生型鉸鏈區，或可經改變。

「跨膜(transmembrane)」區或域係CAR之一部分，其將胞外結合部分錨定至免疫效應細胞之質膜，並促進結合域與目標抗原之結合。跨膜域可係CD3ζ跨膜域，然而可採用之其他跨膜域包括由CD8α、CD4、CD28、CD45、CD9、CD16、CD22、CD33、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、及CD154獲得者。在一個實施例中，跨膜域係CD137之跨膜域。在某些實施例中，跨膜域係合成，其中其將主要包括疏水性殘基，諸如白胺酸及纈胺酸。

「胞內信號傳導域(intracellular signaling domain)」或「信號傳導域(signaling domain)」係指嵌合抗原受體蛋白之部分，其參與將有效CAR結合至目標抗原之訊息轉導至免疫效應細胞內部以引發效應細胞功能，例如活化、細胞介素產生、增生、及細胞毒性活性，包括細胞毒性因子至結合CAR之目標細胞的釋放、或與胞外CAR域結合之抗原引發的其他細胞反應。用語「效應功能(effector function)」係指細胞之特定功能。T細胞之效應功能，例如可係細胞溶解活性或包括細胞介素之分泌之幫助或活性。因此，用語「胞內信號傳導域(intracellular signaling domain)」或「信號傳導域(signaling domain)」在本文中可互換使用，指蛋白質之部分，其轉導效應功能信號且引導細胞以執行特定功能。雖然通常可採用整個胞內信號傳導域，但在許多情況下，不必使用整個域。在使用胞內信號傳導域之截短部分的程度，只要其轉導效應功能信號，則可使用此類截短部分代替整個域。用語胞內信號傳導域意欲包括足以轉導效應功能信號之胞內信號傳導域之任何截短部分。胞內信號傳導域亦稱為「信號轉導域」，且通常源自人類CD3或FcRy鏈之部分。

已知透過單獨T細胞受體產生之信號不足於完全活化T細胞且亦需要二級或共刺激信號。因此，T細胞活化可說是藉由兩種不同類別的細胞質信號傳導序列介導：透過T細胞受體起始抗原依賴性初級活化者（初級細胞質信號傳導序列）及以抗原非依賴性方式作用者，以提供二級或共刺激信號（二級細胞質信號傳導序列）。共刺激方式作用之細胞質信號傳導序列可含有稱為基於免疫受體酪胺酸之活化模體或ITAM之信號傳導模體。

含有特別用於本揭露之初級細胞質信號傳導序列之ITAM的實例包括衍生自DAP10、DAP12、TCRζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b、及CD66d者。

如本文所用，用語「共刺激信號傳導域(costimulatory signaling domain)」或「共刺激域(costimulatory domain)」係指包含共刺激分子之胞內域之CAR之部分。共刺激分子係除抗原受體或Fc受體以外之細胞表面分子，其提供T淋巴球在結合至抗原時為有效活化及功能所需之第二信號。此類共刺激分子之實例包括CD27、CD28、4-1 BB (CD137)、0X40 (CD134)、CD30、CD40、PD-1、ICOS (CD278)、LFA-1、CD2、CD7、LIGHT、NKD2C、B7-H2、及特異性結合CD83之配體。因此，雖然本揭露提供衍生自4-1 BB之例示性共刺激域，但亦設想其他共刺激域。納入一或多種共刺激信號傳導域可增強T細胞表現CAR受體之功效及擴增。胞內信號傳導及共刺激信號傳導域可以任何順序串聯連接至跨膜域之羧基端。

儘管經工程改造以含有來自CD3或FcRγ之信號傳導域的基於scFv之CAR已經顯示遞送用於T細胞活化及效應功能之強效信號，在不存在伴隨共刺激信號之情況下，其不足以引起促使T細胞存活及擴增的信號。含有衍生自CD3ζ或FcRγ之結合域、鉸鏈、跨膜、及信號傳導域之其他CAR與一或多個共刺激信號傳導域（例如衍生自4-1BB、CD28、CD137、CD134、及CD278之胞內共刺激域）一起可更有效地引導抗腫瘤活性以及在體外、及動物模型及癌症患者中增加CAR表現性T細胞中之細胞介素分泌、裂解活性、存活、及增生(Milone et al., Molecular Therapy, 2009; 17: 1453-1464; Zhong et al., Molecular Therapy, 2010; 18: 413-420; Carpenito et al., PNAS, 2009; 106:3360-3365)。

「共刺激信號(costimulatory signal)」係指與初級信號（諸如TCR/CD3連接）組合之信號引起T細胞反應，諸如但不限於關鍵分子之增生及/或上調或下調。

「共刺激配體(costimulatory ligand)」包括特異性結合T細胞上之同源共刺激分子的抗原呈現細胞上之分子。共刺激配體之結合提供介導T細胞反應之信號，包括但不限於增生、活化、分化、及類似者。除了刺激分子所提供之初級信號外，共刺激配體還會藉由結合T細胞受體(TCR)/CD3複合物與裝載有肽之主要組織相容性複合體(MHC)分子而誘導信號。共刺激配體可包括但不限於3/TR6、4-1BB配體、結合鐸(Toll)配體受體之促效劑或抗體、B7-1 (CD80)、B7-2 (CD86)、CD30配體、CD40、CD7、CD70、CD83、疱疹病毒進入介導物(herpes virus entry mediator, HVEM)、人類白血球抗原G (HLA-G)、ILT4、免疫球蛋白樣轉錄本(ILT) 3、可誘導型共刺激配體(ICOS-L)、細胞間黏附分子(ICAM)、與B7-H3特異性結合之配體、淋巴毒素β受體、MHC I類鏈相關蛋白A (MICA)、MHC I類鏈相關蛋白B (MICB)、OX40配體、PD-L2、或程式性死亡(PD) L1。共刺激配體包括但不限於與存在於T細胞上之共刺激分子特異性結合之抗體，諸如但不限於4-1BB、B7-H3、CD2、CD27、CD28、CD30、CD40、CD7、ICOS、與CD83特異性結合之配體、淋巴球功能相關抗原1 (LFA-1)、自然殺手細胞受體C (NKG2C)、OX40、PD-1、或腫瘤壞死因子超家族成員14（TNFSF14或LIGHT）。

「共刺激分子」係與共刺激配體特異性結合之T細胞上之同源結合夥伴(partner)，從而介導T細胞之共刺激反應，諸如但不限於增生。共刺激分子包括但不限於「共刺激分子」係與共刺激配體特異性結合之T細胞上之同源結合夥伴，從而介導T細胞之共刺激反應，諸如但不限於增生。共刺激分子包括但不限於4-1BB/CD137、B7-H3、BAFFR、BLAME (SLAMF8)、BTLA、CD33、CD45、CD100 (SEMA4D)、CD103、CD134、CD137、CD154、CD16、CD160 (BY55)、CD18、CD19、CD19a、CD2、CD22、CD247、CD27、CD276 (B7-H3)、CD28、CD29、CD3 (α; β；δ；ε；γ；ζ)、CD30、CD37、CD4、CD4、CD40、CD49a、CD49D、CD49f、CD5、CD64、CD69、CD7、CD80、CD83配體、CD84、CD86、CD8α、CD8β、CD9、CD96 (Tactile)、CDl-la、CDl-lb、CDl-lc、CDl-ld、CDS、CEACAM1、CRT AM、DAP-10、DNAM1 (CD226)、Fcγ受體、GADS、GITR、HVEM (LIGHTR)、IA4、ICAM-1、ICAM-1、ICOS、Igα (CD79a)、IL2Rβ、IL2Rγ、IL7Rα、整合素、ITGA4、ITGA4、ITGA6、ITGAD、ITGAE、ITGAL、ITGAM、ITGAX、ITGB2、ITGB7、ITGBl、KIRDS2、LAT、LFA-1、LFA-1、LIGHT、LIGHT（腫瘤壞死因子超家族成員14；TNFSF14）、LTBR、Ly9 (CD229)、淋巴球功能相關抗原-1 (LFA-1 (CDl la/CD18)、MHC I類分子、NKG2C、NKG2D、NKp30、NKp44、NKp46、NKp80 (KLRF1)、OX40、PAG/Cbp、PD-1、PSGL1、SELPLG (CD162)、信號傳導淋巴球性活化分子、SLAM (SLAMF1; CD150; IPO-3)、SLAMF4 (CD244; 2B4）、SLAMF6（NTB-A；Lyl08)、SLAMF7、SLP-76、TNF、TNFr、TNFR2、鐸配體受體、TRANCE/RANKL、VLA1、或VLA-6、或其片段、截短、或組合。

「保守性胺基酸取代(conservative amino acid substitution)」係其中胺基酸殘基被具有類似側鏈之胺基酸殘基置換者。所屬技術領域中已定義具有側鏈之胺基酸殘基之家族。此等家族包括具有鹼性側鏈之胺基酸（例如離胺酸、精胺酸、組胺酸）、酸性側鏈（例如天冬胺酸、麩胺酸）、未帶電極性側鏈（例如甘胺酸、天冬醯胺酸、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸、色胺酸）、非極性側鏈（例如丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸）、β-支鏈側鏈（例如蘇胺酸、纈胺酸、異白胺酸）、及芳族側鏈（例如酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、組胺酸）。在某些實施例中，抗體或其抗原結合分子之（多個）CDR內或（多個）架構區內的一或多個胺基酸殘基可用具有類似側鏈之胺基酸殘基置換。通常而言，若兩個序列在對應位置中含有保守性胺基酸取代，則通常將該兩個序列視為「實質上類似的(substantially similar)」。舉例而言，某些胺基酸通常分類為「疏水性(hydrophobic)」或「親水性(hydrophilic)」胺基酸，及/或具有「極性(polar)」或「非極性(non-polar)」側鏈。用一個胺基酸取代相同類型的另一胺基酸可視為保守性取代。例示性胺基酸分類概述於以下表2及表3中：表2

胺基酸	3字母	1字母	性質	性質	疏水性指數
丙胺酸	Ala	A	非極性	中性	1.8
精胺酸	Arg	R	極性	陽性	-4.5
天冬醯胺酸	Asn	N	極性	中性	-3.5
天冬胺酸	Asp	D	極性	陰性	-3.5
半胱胺酸	Cys	C	非極性	中性	2.5
麩胺酸	Glu	E	極性	陰性	-3.5
麩醯胺酸	Gln	Q	極性	中性	-3.5
甘胺酸	Gly	G	非極性	中性	-0.4
組胺酸	His	H	極性	陽性	-3.2
異白胺酸	Ile	I	非極性	中性	4.5
白胺酸	Leu	L	非極性	中性	3.8
離胺酸	Lys	K	極性	陽性	-3.9
甲硫胺酸	Met	M	非極性	中性	1.9
苯丙胺酸	Phe	F	非極性	中性	2.8
脯胺酸	Pro	P	非極性	中性	-1.6
絲胺酸	Ser	S	極性	中性	-0.8
蘇胺酸	Thr	T	極性	中性	-0.7
色胺酸	Trp	W	非極性	中性	-0.9
酪胺酸	Tyr	Y	極性	中性	-1.3
纈胺酸	Val	V	非極性	中性	4.2

表3

不明確胺基酸	3字母	1字母
天冬醯胺酸或天冬胺酸	Asx	B
麩醯胺酸或麩胺酸	Glx	Z
白胺酸或異白胺酸	Xle	J
未指定或未知之胺基酸	Xaa	X

「組合療法(combination therapy)」係指對象同時暴露於二或更多個治療方案（例如二或更多種治療部分）之彼等情況。在一些實施例中，二或更多個方案可同時投予；在一些實施例中，可依序投予此類方案（例如第一方案之所有「劑量(dose)」係在投與任何劑量之第二方案之前投予）；在一些實施例中，此類藥劑以重疊給藥方案投予。在一些實施例中，組合療法之「投予(administration)」可涉及對接受在組合中之其他藥劑或療法之對象投予一或多種藥劑或療法。為清楚起見，組合療法不需要將個別藥劑在單一組成物中一起投予（或甚至不需要同時），儘管在一些實施例中，二或更多種藥劑或其活性部分可在組合組成物中一起投予，或甚至在組合化合物中投予（例如作為單一化學複合物或共價實體之一部分）。

「對應於(corresponding to)」可用以藉由與適當之參考分子或組成物比較，指定分子或組成物中之結構元件之位置/身分。例如，在一些實施例中，聚合物中之單體殘基（例如多肽中之胺基酸殘基或多核苷酸中之核酸殘基）可識別為「對應於」在適當之參考聚合物中之殘基。舉例而言，針對簡單起見之目的，多肽中之殘基可使用基於參考相關多肽之標準編號系統指定，使得在位置100處「對應於」殘基之胺基酸（例如不需要實際上為所提供胺基酸鏈中之第100個胺基酸），其對應於在參考多肽中之位置100處發現之殘基。各種序列比對策略係可用的，包含軟體程式，諸如例如BLAST、CS-BLAST、CUDASW++、DIAMOND、FASTA、GGSEARCH/GLSEARCH、Genoogle、HMMER、HHpred/HHsearch、IDF、Infernal、KLAST、USEARCH、parasail、PSI-BLAST、PSI-Search、ScalaBLAST、Sequilab、SAM、SSEARCH、SWAPHI、SWAPHI-LS、SWIMM、或SWIPE，其可用於例如根據本揭露識別多肽及/或核酸中之「對應」殘基。

若抗原與第一抗原結合分子之間之相互作用阻擋、限制、抑制、或以其他方式降低參考結合分子與抗原相互作用之能力，則抗原結合分子（諸如抗體、其抗原結合片段、CAR或TCR）與參考結合分子（諸如抗體或其抗原結合片段）「交叉競爭(cross-compete)」。交叉競爭可完成，例如抗原結合分子與抗原之結合完全阻斷參考結合分子與抗原結合之能力，或其可為部分的，例如抗原結合分子與抗原之結合降低參考抗原結合分子與抗原結合之能力。在某些實施例中，與參考抗原結合分子交叉競爭之抗原結合分子結合與參考抗原結合分子相同或重疊之表位。在其他實施例中，與參考抗原結合分子交叉競爭之抗原結合分子結合與參考抗原結合分子不同之表位。許多類型之競爭結合檢定可用以判定一種抗原結合分子是否與另一種爭，例如：固相直接或間接放射免疫檢定(RIA)；固相直接或間接酶免疫檢定(EIA)；夾心競爭檢定(Stahli et al., 1983, Methods in Enzymology 9:242-253)；固相直接生物素抗生物素蛋白EIA (Kirkland et al., 1986, J. Immunol. 137:3614-3619)；固相直接標記檢定，固相直接標記之夾心檢定(Harlow and Lane, 1988, Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press)；使用1-125標記之固相直接標記RIA (Morel et al., 1988, Molec. Immunol. 25:7-15)；固相直接生物素抗生物素蛋白EIA (Cheung, et al., 1990, Virology 176:546-552)；及直接標示之RIA (Moldenhauer et al., 1990, Scand. J. Immunol. 32:77-82)。

「細胞介素(cytokine)」係指藉由一個細胞回應於與特定抗原接觸而釋放之非抗體蛋白，其中細胞介素與第二細胞相互作用以介導第二細胞中之反應。細胞介素可藉由胞內源性表現或向對象投予。細胞介素可由免疫細胞（包括巨噬細胞、B細胞、T細胞、及肥大細胞）釋放而傳播免疫反應。細胞介素可誘導接受者細胞中之各種反應。細胞介素可包括體內恆定細胞介素、趨化激素、促炎性細胞介素、效應物、及急性期蛋白。例如，包括介白素(IL) 7及IL-15之體內恆定(homeostatic)細胞介素促進免疫細胞存活及增生，且促炎性細胞介素可促進發炎性反應。體內恆定細胞介素之實例包括但不限於IL-2、IL-4、IL-5、IL-7、IL-10、IL-12p40、IL-12p70、IL-15、及干擾素(IFN) γ。促發炎細胞介素之實例包括但不限於IL-1a、IL-1b、IL-6、IL-13、IL-17a、腫瘤壞死因子(TNF)-α、TNF-β、纖維母細胞生長因子(FGF) 2、顆粒球巨噬細胞群落刺激因子(GM-CSF)、可溶細胞間黏附分子1 (sICAM-1)、可溶血管黏附分子1 (sVCAM-1)、血管內皮生長因子(VEGF)、VEGF-C、VEGF-D、及胎盤生長因子(PLGF)。效應物之實例包括但不限於顆粒酶A、顆粒酶B、可溶Fas配體(sFasL)、及穿孔蛋白。急性期蛋白之實例包括但不限於C反應蛋白(CRP)及血清類澱粉蛋白A (SAA)。

用語「域(domain)」係指一實體之一部分。在一些實施例中，「域」與實體之結構及/或功能性特徵相關聯，例如使得當域實體與其親本實體之其餘部分分離時，其實質上或完全保留結構及/或功能特徵。在一些實施例中，域可包含實體之一部分，當與（親本）實體分離且與不同（接收者）實體鏈接或連接時，實質上保留及/或賦予接收者實體一或多個結構及/或功能特徵，例如其在親本實體中之特徵。在一些實施例中，域係分子之一部分（例如小分子、碳水化合物、脂質、核酸、或多肽）。在一些實施例中，域係多肽之區段；在一些此類實施例中，域之特徵在於結構元件（例如胺基酸序列或序列模體、α-螺旋性狀、β-薄片性狀、捲曲線圈性狀、隨機線圈性狀等），及/或功能性特徵（例如結合活性、酶活性、摺疊活性、信號傳導活性等）。

用語「劑型(dosage form)」可用以指投予至對象之活性劑之物理離散單元（例如抗原結合系統或抗體）。一般而言，各此類單元含有預定量之活性劑。在一些實施例中，此類量係根據已判定當向相關群體投予時與所期望或有益結果相關之給藥方案之適於投予之單位劑量（或其全部部分）。向對象投予之治療組成物或藥劑之總量由一或多個醫學醫師判定，且可涉及投予超過一種劑型。

用語「給藥方案(dosing regimen)」可用於指一組一或多個單位劑量，該組一或多個單位劑量係個別投予至對象。在一些實施例中，給定治療劑具有推薦劑量方案，其可涉及一或多種劑量。在一些實施例中，給藥方案包含複數個劑量，其各者在時間上與其他劑量分開。在一些實施例中，給藥方案包含複數個劑量且連續劑量藉由相等長度之時段彼此分離；在一些實施例中，給藥方案包含複數個劑量且連續劑量藉由至少兩個不同長度之時段彼此分離。在一些實施例中，給藥方案內之所有劑量係相同單位劑量。在一些實施例中，給藥方案內不同劑量係不同量。在一些實施例中，給藥方案包含第一劑量之第一劑量，隨後係不同於第一劑量之第二劑量之一或多個額外劑量。在一些實施例中，週期性調整給藥方案以達成所欲或有益結果。

「效應細胞(effector cell)」係指表現一或多種Fc受體且介導一或多種效應功能之免疫系統之細胞。在一些實施例中，效應細胞可包含但不限於單核球、巨噬細胞、嗜中性球、樹突細胞、嗜酸性球、肥大細胞、血小板、大顆粒淋巴球、蘭格罕細胞(Langerhans' cell)、自然殺手(NK)細胞、T淋巴球、及B淋巴球中之一或多者。效應細胞可屬於任何生物體，包含但不限於人類、小鼠、大鼠、兔、及猴。

「效應功能(effector function)」係指抗體Fc區與Fc受體或配體相互作用之生物結果。效應功能包含但不限於抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity, ADCC)、抗體依賴性細胞介導之吞噬作用(antibody-dependent cell-mediated phagocytosis, ADCP)、及補體介導之細胞毒性(complement-mediated cytotoxicity, CMC)。效應功能可係抗原結合依賴性、抗原結合獨立性、或兩者。ADCC係指藉由免疫效應細胞裂解抗體結合之目標細胞。不希望受任何理論束縛，ADCC通常理解為涉及辨識及隨後殺滅抗體塗佈之目標細胞之Fc受體(FcR)攜帶效應細胞（例如表現在抗體結合之表面抗原上之細胞）。介導ADCC之效應細胞可包含免疫細胞，其包含但不限於自然殺手(NK)細胞、巨噬細胞、嗜中性球、嗜酸性球中之一或多者。

用語「經工程改造之自體細胞療法(engineered Autologous Cell Therapy)」可縮寫為「eACT™」亦稱為過繼性細胞轉移(adoptive cell transfer)，係收集患者之自身T細胞且隨後基因改變以識別及靶向一或多種特異性腫瘤細胞或惡性之細胞表面上表現之一或多種抗原之方法。T細胞可經工程改造以表現例如嵌合抗原受體(CAR)或T細胞受體(TCR)。CAR陽性(+) T細胞經工程改造以表現對連接至胞內信號傳導部分（包含至少一個共刺激域及至少一個活化域）之特定腫瘤抗原具有特異性的胞外單鏈可變片段(scFv)。共刺激域可衍生自天然存在之共刺激域或其變體，例如具有截短鉸鏈域(「THD」)之變體，且活化域可衍生自例如CD3ζ。在某些實施例中，CAR經設計以具有兩個、三個、四個、或更多個共刺激域。CAR scFv可經設計以靶向。

在一些實施例中，CAR經工程改造，使得共刺激域表示為獨立多肽鏈。實例CAR T細胞療法及構築體描述於美國專利公開案第2013/0287748、2014/0227237、2014/0099309、及2014/0050708號，其全文以引用方式併入本文中。「過繼性細胞療法(Adoptive cell therapy)」或「ACT」涉及將具有抗腫瘤活性之免疫細胞轉移至對象中，例如癌症患者。在一些實施例中，ACT係涉及使用具有抗腫瘤活性之淋巴球（例如經工程改造之淋巴球）之治療方法。

用語「增強(enhance)」、或「促進(promote)」、或「增加(increase)」、或「擴增(expand)」通常係指相較於由單獨媒劑或對照分子/組成物造成之反應，本文所設想之組成物產生、引發、或造成較大生理反應（亦即下游效應）之能力。可測量的生理反應可包括T細胞擴增、活化、持久性增加及/或癌細胞死亡殺滅能力增加、及其他由所屬技術領域之理解及本文中之描述中顯而易見者。「增加」或「增強」量一般係「統計學上顯著的」量，且可包括由媒劑或對照組成物產生之反應之1.1、1.2、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、15、20、30或更多倍（例如500、1000倍）（包括介於之間及大於1之所有整數及小數點，例如1.5、1.6、1.7、1.8等）的增加。

「表位(epitope)」係指抗體可特異性結合之抗原的局部區域。表位可係例如多肽（線性或連續表位）之連續胺基酸，或表位可例如一起來自一或多個多肽之二或更多個非連續區域（構形、非線性、不連續、或非連續表位）。在某些實施例中，抗體結合之表位可藉由例如NMR光譜術、X射線繞射結晶學研究、ELISA檢定、與質譜測定術交換耦合之氫/氘（例如液相層析電噴霧質譜測定術）、基於陣列之寡肽掃描檢定、及/或突變誘發映射（例如位點引導之突變誘發映射）。對於X射線結晶學，可使用所屬技術領域中已知方法中之任一者來實現結晶（例如Giegé R et al.,(1994) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 50(Pt 4): 339-350；McPherson A (1990) Eur J Biochem 189: 1-23；Chayen NE (1997) Structure 5: 1269-1274；McPherson A (1976) J Biol Chem 251: 6300-6303）。抗體：抗原結晶，可使用熟知之X射線繞射技術研究，且可使用電腦軟體改良，諸如X-PLOR（Yale University, 1992, distributed by Molecular Simulations, Inc.；參見例如Meth Enzymol (1985) volumes 114 & 115, eds Wyckoff HW et al.,; U.S. 2004/0014194）、及BUSTER (Bricogne G (1993) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 49(Pt 1): 37-60; Bricogne G (1997) Meth Enzymol 276A: 361-423, ed Carter CW; Roversi P et al.,(2000) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 56(Pt 10): 1316-1323)。突變誘發映射研究可使用所屬技術領域中具有通常知識者已知之任何方法實現。參見例如Champe M et al.,(1995) J Biol Chem 270: 1388-1394 and Cunningham BC & Wells JA (1989) Science 244: 1081-1085針對突變誘發技術之描述，包括丙胺酸掃描突變誘發技術。

參考基因、蛋白質、及/或核酸之「內源性(endogenous)」係指基因、蛋白質、及/或核酸在細胞（諸如免疫細胞）中之天然存在。

「外源(exogenous)」係指引入細胞之藥劑，諸如核酸、基因、或蛋白質，例如來自外部源。即使其編碼在細胞中天然存在之蛋白質，引入細胞中之核酸係外源。此類外源引入編碼蛋白質之核酸可用以增加蛋白質之表現，其超過在類似條件下（例如不引入外源核酸）在細胞中自然發現之水準。

用語「賦形劑(excipient)」係指可包含在組成物中之藥劑，例如用以提供或促進所欲的同一性或穩定化效應。在一些實施例中，適合的賦形劑可包含例如澱粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、大米、麵粉、白土粉、矽膠、硬脂酸鈉、甘油單硬脂酸酯、滑石、氯化鈉、乾燥之脫脂牛奶、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇、或類似物。

如本文中所使用，「擴增(expansion)」係指將經轉導之免疫細胞群擴增一段特定時間以產生經工程改造之免疫細胞群。用於擴增之預定時間可為允許產生下列之任何合適的時間：(i)在經工程改造之免疫細胞群中產生足以向患者投予至少一個劑量的細胞數目；(ii)相較於一般較長的過程，產生具有有利比例之未成熟細胞(juvenile cell)的經工程改造之T細胞群；或(iii) (i)及(ii)兩者。此時間將取決於由免疫細胞表現的細胞表面受體、所使用之載體、具有治療效果所需之劑量、及其他變數。因此，在一些實施例中，用於擴增之預定時間可係1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、或多於21天。

如本文所述之材料或實體之「片段(fragment)」或「部分(portion)」具有包含整個例如物理實體或抽象實體之離散部分之結構。在一些實施例中，片段缺乏整個發現之一或多個部分。在一些實施例中，片段由整個發現之特性結構元件、域或部分所組成，或包含其等。在一些實施例中，聚合物片段包含如在整個聚合物中發現之至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500或更多個單體單元（例如殘基），或由其等所組成。在一些實施例中，聚合物片段包含在整個聚合物中發現之單體單元（例如殘基）之至少約5%、10%、15%、20%、25%、30%、25%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或更多或由其等所組成（例如85%至90%、85%至95%、85%至100%、90%至95%、90%至100%、或95%至100%）。在一些實施例中，整個材料或實體可稱為片段之「親本(parent)」。

用語「融合多肽(fusion polypeptide)」或「融合蛋白(fusion protein)」通常係指包含至少兩個區段之多肽。一般而言，含有至少兩個此類區段之多肽在下列情況下被視為融合多肽，若兩個區段係下列之部分：(1)非天然包含在相同肽中，及/或(2)先前未在單一多肽中鏈接或連接至彼此，及/或(3)已透過人手之作動而鏈接或連接至彼此。在實施例中，CAR係融合蛋白。在一實施例中，膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合多肽係融合蛋白。

用語「基因產物(gene product)」或「表現產物(expression product)」通常係指由基因（預先及/或後處理）轉錄之RNA，或由基因轉錄之RNA編碼之多肽（預先及/或後修飾）。

用語「經基因工程改造(genetically engineered)」或「經工程改造(engineered)」係指修飾細胞基因體之方法，其包括但不限於缺失編碼或非編碼區或其部分、或插入編碼區或其部分。在一些實施例中，經修飾之細胞係淋巴球，例如T細胞或NK細胞，其可自患者或捐贈者獲得。細胞可經修飾以表現外源性構築體，諸如例如膜結合介白素15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合受體、嵌合抗原受體(CAR)、或T細胞受體(TCR)，其被併入細胞基因體中。工程改造通常包含人手操縱。舉例而言，當二或更多個序列在自然界中未依此順序鏈接或連接，而係經人手操縱而直接鏈接或連接至彼此時，將多核苷酸視為「經工程改造」。在藉由分子生物學技術操縱細胞之背景下，若細胞或生物體已經操縱使其基因資訊被改變（例如已引入先前不存在之新基因物質，例如藉由轉化、體細胞雜交、轉染、轉導、或其他機制，或改變或移除先前存在之基因物質，例如藉由取代或缺失突變、或藉由其他規程），則將該細胞或生物體視為「經工程改造」。經工程改造之細胞可經修飾以表現外源性構築體，諸如例如膜結合介白素15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合受體、嵌合抗原受體(CAR)、或T細胞受體(TCR)，其被併入細胞基因體中。經工程改造之多核苷酸或結合劑之後代通常稱為「經工程改造」，即使實際操縱在先前實體上進行。在一些實施例中，「經工程改造」係指已經設計及產生之實體。用語「經設計(designed)」係指藥劑(i)其結構係或經人手選擇；(ii)由需要人手之方法產生；及/或(iii)與天然物質及其他已知藥劑相異。

「T細胞受體」或「TCR」係指存在於T細胞表面上之抗原識別分子。在正常T細胞發展期間，四個TCR基因α、β、γ、及δ之各者可重新排列導致高度不同之TCR蛋白質。

用語「異源(heterologous)」意指來自非天然存在之序列的任何來源。例如，作為共刺激蛋白質之一部分包括的異源序列係非天然存在之胺基酸，亦即與野生型人類共刺激蛋白不一致。舉例而言，異源核苷酸序列係指除野生型人類共刺激蛋白編碼序列之外的核苷酸序列。

用語「同一性(identity)」係指聚合分子之間的整體相關性，例如在核酸分子之間（例如DNA分子及/或RNA分子）及/或多肽分子之間。與兩個所提供之多肽序列之間的同一性百分比計算的方法係已知的。例如可藉由比對二個序列以用於最佳比較目的來執行兩個核酸或多肽序列之同一性百分比之計算（例如可在第一及第二序列中之一或兩者中引入間隙以用於最佳比對，且可出於比較目的忽略非同一性序列）。接著比較對應位置處之核苷酸或胺基酸。當第一序列中之位置被與第二序列中之對應位置同一之殘基（例如核苷酸或胺基酸）佔據時，則分子在彼位置處係同一的。兩個序列之間的同一性百分比係序列共有的相同位置數目之函數，其可選地考慮間隙數目及各間隙之長度，可能需要引入間隙以達到兩個序列之最佳比對。可使用數學演算法（諸如BLAST（基本局部比對搜尋工具））實現序列之比較或比對及兩個序列之間的同一性百分比之判定。在一些實施例中，若其序列係至少25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、或99%同一（例如85%至90%、85%至95%、85%至100%、90%至95%、90%至100%、或95%至100%），則聚合分子視為彼此「同源」。

為了計算同一性百分比，被比較之序列一般係以給予序列之間最大匹配的方式比對。可用於判定同一性百分比的電腦程式之一個實例係GCG程式封裝，其包括GAP (Devereux et al., 1984, Nucl. Acid Res. 12:387; Genetics Computer Group, University of Wisconsin, Madison, Wis.)。電腦演算法GAP係用於比對兩個多肽或多核苷酸，以判定其等之序列同一性百分比。序列針對其各別胺基酸或核苷酸之最佳匹配進行比對（如由演算法判定之「匹配跨度(matched span)」）。在某些實施例中，標準比較矩陣（參見Dayhoff et al., 1978, Atlas of Protein Sequence and Structure 5:345-352 for the PAM 250 comparison matrix; Henikoff et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89:10915-10919 for the BLOSUM 62 comparison matrix)亦由演算法使用。其他演算法亦可用於胺基酸或核苷酸序列之比較，包含在商業電腦程式中可用的演算法，諸如用於核苷酸序列之BLASTN及用於胺基酸序列之BLASTP、gapped BLAST、及PSI-BLAST。例示性的此類程式描述於Altschul, et al., Basic local alignment search tool, J. Mol. Biol., 215(3): 403-410, 1990；Altschul, et al., Methods in Enzymology；Altschul, et al.，「Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs，」Nucleic Acids Res. 25:3389-3402, 1997；Baxevanis, et al., Bioinformatics : A Practical Guide to the Analysis of Genes and Proteins, Wiley, 1998；及Misener, et al., (eds.), Bioinformatics Methods and Protocols (Methods in Molecular Biology, Vol. 132), Humana Press, 1999。除識別類似序列之外，上文所提及之程式通常提供相似性程度之指示。在一些實施例中，兩個序列視為實質上相似若至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或更多其對應殘基在殘基之相關延伸係相似及/或同一（例如85%至90%、85%至95%、85%至100%、90%至95%、90%至100%、或95%至100%）。在一些實施例中，相關延伸係完整序列。在一些實施例中，相關延伸係至少10、至少15、至少20、至少25、至少30、至少35、至少40、至少45、至少50、至少55、至少60、至少65、至少70、至少75、至少80、至少85、至少90、至少95、至少100、至少125、至少150、至少175、至少200、至少225、至少250、至少275、至少300、至少325、至少350、至少375、至少400、至少425、至少450、至少475、至少500或更多殘基。具有實質序列類似性之序列可彼此同源。

當提及核酸或其片段時，用語「實質同一性(substantial identity)」或「實質上同一(substantially identical)」指示當與另一核酸（或其互補股）以適當核苷酸插入或缺失進行最佳比對時，在至少約95%（諸如至少約95%、96%、97%、98%、或99%）的核苷酸鹼基中有核苷酸序列同一性，如由序列同一性之任何熟知演算法所測量，諸如FASTA、BLAST、或Gap，如以下所論述。在某些情況下，具有與參考核酸分子實質同一性之核酸分子可編碼具有與參考核酸分子編碼之多肽相同或實質上類似之胺基酸序列之多肽。

如應用於多肽，用語「實質類似性(substantial similarity)」或「實質上類似(substantially similar)」意指兩個肽序列當最佳比對（諸如藉由程式GAP或BESTFIT使用預設間隙權重）時，共有至少95%序列同一性，甚至至少98%或99%序列同一性。一般而言，不同一的殘基位置因保守性胺基酸取代而不同。

用語「改善(improve)」、「增加(increase)」、「抑制(inhibit)」、及「減少(reduce)」指示相對於基線或其他參考測量之值。在一些實施例中，適當的參考測量可包含在某些系統中的測量（例如在一單個個體中），在其他可比情況下，不存在（例如之前及/或之後）藥劑或治療，或存在適當的可比參考藥劑。在一些實施例中，適當的參考測量可包含在相關劑或治療存在下對所已知或預期的相當系統以相當的方式反應之測量結果。

「免疫反應(immune response)」係指免疫系統細胞（例如，T淋巴球、B淋巴球、自然殺手(NK)細胞、巨噬細胞、嗜酸性球、肥大細胞、樹突細胞、及嗜中性球）及由任何這些細胞或肝臟所生產之可溶巨分子（包括Ab、細胞介素、及補體）的作用，其會導致對脊椎動物體內之侵犯病原體、受病原體所感染之細胞或組織、癌性或其他異常細胞、或（在自體性或病理性發炎之情況下）正常人類細胞或組織的選擇性靶向、結合、損傷、破壞、及/或消除。

用語「免疫療法(immunotherapy)」係指罹患疾病、或有感染疾病或遭受疾病再發之風險的對象藉由包含誘導、增強、抑制、或以其他方式修改免疫反應之方法的治療。免疫療法之實例包括但不限於NK細胞及T細胞療法。T細胞療法可包括過繼性T細胞療法、腫瘤浸潤淋巴球(TIL)免疫療法、自體細胞療法、經工程改造之自體細胞療法(eACT™)、及同種異體T細胞移植。然而，所屬技術領域中具有通常知識者會認知到，本文中所揭示之調理方法會增強任何移植T細胞療法之有效性。T細胞療法之實例描述於美國專利公開案第2014/0154228號及第2002/0006409號、美國專利第5,728,388號、及國際專利公開案WO 2008/081035。

免疫療法之T細胞或NK細胞可來自所屬技術領域中已知之任何來源。例如，T細胞及NK細胞可體外分化自造血幹細胞群或可獲自對象。T細胞及NK細胞可從下列獲得，例如周邊血液單核細胞(PBMC)、骨髓、淋巴結組織、臍帶血、胸腺組織、來自感染位點之組織、腹膜、胸膜滲出液、脾臟組織、及腫瘤。此外，T細胞可衍生自所屬技術領域中可用之一或多種T細胞系。T細胞亦可使用所屬技術領域中具有通常知識者已知之任何數量之技術，諸如FICOLL™分離及/或血球分離來自對象收集之血液之單位獲得。T細胞療法單離T細胞之額外方法揭示於美國專利公開案第2013/0287748號，其以全文以引用方式併入本文中。

用語「體外(in vitro)」係指在一人工環境中發生的事件，例如在測試管、反應容器、細胞培養等中，而非在多細胞生物體內。用語「體外細胞( in vitrocell)」係指離體培養之任何細胞。體外細胞可包括T細胞或NK細胞。用語「體內(in vivo)」係指在多細胞生物體（諸如人類或非人類動物）內發生之事件。

用語「單離(isolated)」係指一種物質，其：(1)已自至少一些組分分離，其中其與該物質在較早時間締合或該物質將以其他方式與其相關聯，及/或(2)存在於組成物中，該組成物包含一或多種已知或未知污染物之限制或限定量或濃度。在一些實施例中，經單離物質可自約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%、或超過約99%（例如85%至90%、85%至95%、85%至100%、90%至95%、90%至100%、或95%至100%）之其他非物質組分分離，其與該物質在較早時間相關聯，例如該物質先前或以其他方式將與其他組分或污染物相關聯。在某些情況下，若物質存在於包含相同或類似類型之分子之限制或減少量或濃度之組成物中，則單離物質。舉例而言，在某些情況下，若核酸、DNA、或RNA物質存在於包含限制或減少量或濃度之非物質核酸、DNA、或RNA分子之組成物中，則單離核酸、DNA、或RNA物質。舉例而言，在某些情況下，若多肽物質存在於包含限制或減少量或濃度之非物質多肽分子之組成物中，則單離多肽物質。在某些實施例中，量可係例如相對於在組成物中存在之所欲物質所測量之量。在某些實施例中，有限量可係組成物中之物質量不超過100%之量，例如不超過1%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、或95%之組成物中之物質量（例如85%至90%、85%至95%、85%至100%、90%至95%、90%至100%、或95%至100%）。在某些情況下，組成物相對於所選擇物質係純的或實質上純的。在一些實施例中，經單離物質係約80%、約85%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%、或超過約99%之純（例如85%至90%、85%至95%、85%至100%、90%至95%、90%至100%、或95%至100%）。若其實質上不含其他組分或污染物，則物質係「純」。在一些實施例中，物質仍可被視為「經單離」或甚至「純」，在其已與某些其他組分諸如，例如一或多個載劑或賦形劑（例如緩衝劑、溶劑、水等）組合之後；在此類實施例中，在不包含此類載劑或賦形劑之情況下計算物質之單離百分比或純度。

「連接子(linker)」(L)或「連接子域(linker domain)」或「連接子區(linker region)」係指長度為約1至100個胺基酸的寡肽或多肽區，其例如將膜結合IL-15-IL-15Rα壽司結構域嵌合多肽、嵌合抗原受體、及/或scFv之任何域/區連接在一起，或將該等多肽中之一或多者連接在一起。連接子可由可撓性殘基（如甘胺酸及絲胺酸）構成，使得相鄰的蛋白質域可以相對於彼此自由移動。當確保兩個相鄰域不會在空間上彼此干擾係所欲時，可使用較長連接子。連接子可係可裂解或不可裂解。可裂解連接子之實例包括2A連接子（例如T2A）、類2A連接子或其功能等效物及其組合。在一些實施例中，連接子包括小核糖核酸病毒(picornaviral) 2A樣連接子、豬鐵士古病毒(teschovirus) (P2A)之CHYSEL (SEQ ID NO: 1)序列、病毒(T2A)、或其組合、變體、及功能等效物。在其他實施例中，連接子序列可包含Asp-Val/Ile-Glu-X-Asn-Pro-Gly ^(2A)-Pro ^(2B)模體(SEQ ID NO: 2)，其導致在2A甘胺酸與2B脯胺酸之間的裂解。其他連接子包括非可裂解連接子。採用數個連接子實現主題揭露，包括「可撓性連接子」。後者富含甘胺酸。Klein et al., Protein Engineering, Design & Selection Vol. 27, No. 10, pp. 325–330, 2014; Priyanka et al., Protein Sci., 2013 Feb; 22(2): 153–167。在一些實施例中，連接子係合成連接子。在一些實施例中，連接子係可撓性連接子。在一些實施例中，連接子富含甘胺酸（Gly或G）殘基。在一些實施例中，連接子富含絲胺酸（Ser或S）殘基。在一些實施例中，連接子富含甘胺酸及絲胺酸殘基。在一些實施例中，連接子具有一或多個甘胺酸-絲胺酸殘基對(GS (SEQ ID NO: 104))，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10或更多個GS對（「GS」揭示為SEQ ID NO: 104）。在一實施例中，連接子具有胺基酸序列AGS (SEQ ID NO: 3)。在一實施例中，連接子具有胺基酸序列GGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGS (seQ ID NO: 4)。在一實施例中，連接子具有胺基酸序列ggggsggggs (seQ ID NO: 5)

連接子可係多元素劑之一部分，其將不同元件彼此連接。舉例而言，多肽包括二或更多個功能或結構域可包含在彼此連接之此類域之間的胺基酸之延伸。在一些實施例中，包含連接子元件之多肽具有通常形式S1-L-S2之總結構，其中S1及S2可係相同或不同且表示藉由連接子彼此相關聯之兩個域。連接子可將膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合多肽、嵌合抗原受體、及/或scFv之任何域/區連接或鏈接在一起。在一些實施例中，多肽連接子之長度係至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100或更多個胺基酸（例如長度係1至10、1至20、1至30、1至40、1至50、1至60、1至70、1至80、1至90、1至100、10至20、10至30、10至40、10至50、10至60、10至70、10至80、10至90、或10至100個胺基酸）。在一個實例中，連接子係用於將IL-15多肽之C端連接或鏈接至IL-15Rα壽司域多肽之N端。在另一實例中，連接子係用於將IL-15Rα壽司域多肽之C端鏈接至跨膜域。在一些實施例中，連接子之特徵在於其傾向不採用剛性三維結構，且替代地提供多肽之靈活性。在另一實例中，其可用於連接至或更多待表現之多肽，諸如CAR、TCR、及/或膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合多肽，如本文所揭示。在一些實例中，CAR或TCR及膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合多肽係由可裂解連接子連接，例如使其可以單一肽表現，接著在細胞中裂解。

用語「淋巴球(lymphocyte)」包括自然殺手(NK)細胞、T細胞、或B細胞。NK細胞係代表固有免疫系統之組分的細胞毒性淋巴球之一種類型。NK細胞會除去腫瘤及受病毒感染之細胞。其透過細胞凋亡或程式性細胞死亡之程序發揮作用。其等之所以稱為「自然殺手」是因為不需要活化即可殺滅細胞。T細胞在細胞介導之免疫性中起作用（無抗體參與）。其T細胞受體(TCR)是自其他淋巴球類型使自身分化出來。胸腺（免疫系統之特化器官）主要負責T細胞之成熟。有六種類型之T細胞，亦即：輔助T細胞（例如CD4+細胞）、細胞毒性T細胞（亦稱為TC、細胞毒性T淋巴球、CTL、T-殺手細胞、細胞毒性T細胞、CD8+ T細胞或殺手T細胞）、記憶T細胞（(i)幹記憶T _SCM細胞，類似初級細胞，係CD45RO−、CCR7+、CD45RA+、CD62L+（L-選擇素）、CD27+、CD28+、及IL-7Rα+、但其亦表現大量CD95、IL-2Rβ、CXCR3及LFA-1，且展示記憶體細胞特有之多種功能屬性）；(ii)中央記憶T _CM細胞，表現L-選擇素及CCR7，其分泌IL-2但不為IFNγ或IL-4，及(iii)效應記憶T _EM細胞，然而，不表現L-選擇素或CCR7，但產生類似IFNγ及IL-4之效應細胞介素）、調節T細胞（Treg、抑制T細胞、或CD4+CD25+調節T細胞）、自然殺手T細胞(NKT)、及γδT細胞。另一方面，B細胞在體液免疫中起作用（具有抗體參與）。其製造抗體及抗原且扮演抗原呈現細胞(APC)之角色，且在由抗原相互作用活化之後轉變成記憶B細胞。在哺乳動物中，未成熟B細胞係在骨髓中形成，因而得到其名稱。

用語「中和(neutralizing)」係指結合至配體且防止或降低該配體之生物效應的抗原結合分子、scFv、抗體、或其片段。在一些實施例中，抗原結合分子、scFv、抗體、或其片段直接阻斷配體上之結合位點，或以其他方式透過間接手段（諸如配體中之結構或能量改變）改變配體之結合能力。在一些實施例中，抗原結合分子、scFv、抗體、或其片段防止其所結合之蛋白質執行生物功能。

「核酸(nucleic acid)」係指核苷酸之任何聚合鏈。核酸可係DNA、RNA、或其組合。在一些實施例中，核酸包含一或多種天然核酸殘基。在一些實施例中，核酸包含一或多種核酸類似物。在一些實施例中，核酸係藉由從天然來源單離、藉由基於互補模板聚合之酶促合成（體內或體外）、在重組細胞或系統中再生、及化學合成中之一或多者來製備。在一些實施例中，核酸係至少3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、20、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、600、700、800、900、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000或更多個殘基長（例如20至100、20至500、20至1000、20至2000、或20至5000或更多個殘基）。在一些實施例中，核酸係部分或全單股；在一些實施例中，核酸係部分或全雙股。在一些實施例中，核酸具有包含編碼多肽或係編碼多肽之序列的補體之至少一個元件之核苷酸序列。

「可操作地連接(operably linked)」係指其中所述組分處於允許其等以其預期方式起作用之關係中之鄰接位置。例如，控制元件「可操作地連接」至功能元件係以在相容的條件下達成功能元件之表現及/或活性的方式與該控制元件相關聯。在實施例中，啟動子可操作地連接至核酸。

「患者(patient)」包括任何罹患癌症之人類。用語「對象(subject)」及「患者」在本文中可互換使用。

用語「肽(peptide)」、「多肽(polypeptide)」、及「蛋白/蛋白質(protein)」可互換使用，並且係指包含由肽鍵所共價連接之胺基酸殘基的化合物。蛋白質或肽含有至少兩個胺基酸，且對可包含蛋白質或肽序列之胺基酸的最大數目沒有限制。多肽包括包含彼此由肽鍵所接合之二或更多個胺基酸的任何肽或蛋白質。如本文中所使用，該用語係同時指短鏈（在所屬技術領域中亦經常稱為例如肽、寡肽、及寡聚物）及長鏈（在所屬技術領域中通常稱為蛋白質，而蛋白質有許多類型）。「多肽」包括例如生物活性片段、實質上同源之多肽、寡肽、同二聚體、異二聚體、多肽之變體、經修飾多肽、衍生物、類似物、融合蛋白等。多肽包括自然肽、重組肽、合成肽、或其組合。

用語「醫藥上可接受(pharmaceutically acceptable)」係指分子或組成物當向接受者投予時，對其接受者無害，或對其接受者的益處超過任何有害效應。關於用於調配如本文所揭示之組成物的載劑、稀釋劑、或賦形劑，醫藥上可接受之載劑、稀釋劑、或賦形劑必須與組成物之其他成分相容且對其接受者無害，或對接受者的益處必須超過任何有害效應。用語「醫藥上可接受之載劑(pharmaceutically acceptable carrier)」意指醫藥上可接受之材料、組成物、或媒劑，諸如液體或固體填充劑、稀釋劑、賦形劑、或溶劑包封材料，其涉及將藥劑自身體之一個部分攜帶或運輸至另一部分（例如自一個器官至另一個）。在醫藥組成物中存在之各載體在與配方之其他成分相容之情況下必須係「可接受(acceptable)」，且對患者無害，或必須對接受者的益處超過任何有害效應。可作為醫藥上可接受之載劑的材料之一些實例包含：糖，諸如乳糖、葡萄糖、及蔗糖；澱粉，諸如玉米澱粉及馬鈴薯澱粉；纖維素及其衍生物，諸如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素、及乙酸纖維素；粉末狀黃蓍膠；麥芽；明膠；滑石；賦形劑，諸如可可脂及栓劑蠟；油，諸如花生油、棉籽油、紅花子油、芝麻油、橄欖油、玉米油、及黃豆油；二醇，諸如丙二醇；多元醇，諸如甘油、山梨醇、甘露醇、及聚乙二醇；酯，諸如油酸乙酯及月桂酸乙酯；洋菜；緩衝劑，諸如氫氧化鎂及氫氧化鋁；藻酸；無致熱原的水；等張鹽水；林格氏液；乙醇；pH緩衝溶液；聚酯、聚碳酸酯及/或聚酐；及醫藥配方中採用的其他非毒性相容物質。

用語「醫藥組成物(pharmaceutical composition)」係指其中活性劑與一或多種醫藥上可接受之載劑調配在一起之組成物。在一些實施例中，活性劑以適於治療方案中投予之單位劑量存在，該治療方案展示當向相關對象或群體投予時達成預定治療效果之統計顯著機率。在一些實施例中，醫藥組成物可經調配用於以固體或液體形式投予，包含但不限於適用於以下形式：經口投予，例如灌劑（水性或非水溶液或懸浮液）、錠劑（例如彼等目標用於口腔、舌下及全身性吸收）、用於施用至舌片之丸劑、粉末、顆粒、膏；腸胃外投予，例如藉由皮下、肌肉內、靜脈內或硬膜外注射作為例如無菌溶液或懸浮液或持續釋放配方；局部施用，例如作為乳膏、軟膏或控制釋放貼片、或施用至皮膚、肺或口腔之噴霧；陰道內或直腸內，例如作為栓劑、乳膏或泡沫；舌下；眼；經皮膚；或經鼻、肺及其他黏膜表面。

用語「增生(proliferation)」係指細胞分裂之增加，細胞之對稱或不對稱分裂。在一些實施例中，「增生」係指T細胞之對稱或不對稱分裂。相較於未經處理之樣本中之細胞，當經處理樣本中之細胞數目增加時，發生「增生增加」。

用語「參考(reference)」描述與其進行比較之標準或控制。舉例而言，在一些實施例中，將所關注之藥劑、動物、個體、群體、樣本、序列、或值與作為藥劑、動物、個體、群體、樣本、序列、或值之參考或對照相比較。在一些實施例中，將所關注之測試、測量或判定與參考或對照實質上同時測試、測量及/或判定。在一些實施例中，參考或對照係歷史參考或對照，該歷史參考或對照可選地實施在有形介質中。通常，參考或對照係在與評估對象相當的條件或情況下判定或表徵的。當存在足夠的相似性以證明對所選擇之參考或對照的依賴及/或比較是合理的。

「調節T細胞(regulatory T cell)」（「Treg」、「Treg細胞」、或「Tregs」）係指參與控制某些免疫活性（例如自體免疫、過敏、及對感染之反應）之CD4+ T淋巴球譜系。調節T細胞可調節T細胞群之活性，且亦可影響某些先天性免疫系統細胞類型。Treg可藉由生物標記CD4、CD25、及Foxp3之表現及CD127之低表現識別。天然存在之Treg細胞通常構成約5%至10%周邊CD4+ T淋巴球。然而，腫瘤微環境內之Treg細胞（亦即腫瘤浸潤Treg細胞），Treg細胞可能佔總CD4+ T淋巴球群之多達20至30%。

用語「樣本(sample)」通常係指從所關注源獲得或衍生之材料之等分試樣。在一些實施例中，所關注源係生物或環境源。在一些實施例中，所關注來源可包含細胞或生物體，諸如細胞群、組織、或動物（例如人類）。在一些實施例中，所關注源包含生物組織或流體。在一些實施例中，生物組織或流體可包含羊水、房水、腹水、膽汁、骨髓、血液、乳汁、腦脊髓液、耵聹、乳糜、纓、射精、內淋巴、滲出液、糞便、胃酸、胃液、淋巴液、黏液、心包液、外淋巴液、腹膜液、胸膜液、膿液、風濕液、唾液、皮脂、精液、血清、包皮垢、痰液、滑液、汗液、淚液、尿液、陰道分泌物、玻璃狀液、嘔吐物、及/或其組合或組分。在一些實施例中，生物流體可包含胞內流體、胞外流體、靜脈內流體（血漿）、組織間隙液、淋巴液、及/或移植細胞流體。在一些實施例中，生物流體可包含植物滲出液。在一些實施例中，可獲得生物組織或樣本例如藉由抽吸、活體組織切片（例如細針或組織活體組織切片）、拭子（例如口腔、鼻、皮膚、或陰道拭子）、刮刀、手術、洗滌或灌洗（例如支氣管肺泡、導管、鼻、眼部、口腔、子宮、陰道、或其他洗滌或灌洗）。在一些實施例中，生物樣本包含獲自個體之細胞。在一些實施例中，樣本係藉由任何適當方式直接自所關注來源獲得之「初級樣本(primary sample)」。在一些實施例中，如從上下文中將清楚的，用語「樣本(sample)」係指藉由處理（例如藉由移除一或多種組分及/或藉由添加一或多種劑至）初級樣本而獲得的製劑。此類「經處理樣本」可包含例如核酸或蛋白質，其係萃取自樣本中或藉由使初級樣本經受一或多種技術而獲得，諸如核酸之擴增或反轉錄、某些組分之單離及/或純化等。

「單鏈可變片段」、「單鏈抗體可變片段」或「scFv」抗體指包含僅藉由連接子肽連接之重鏈及輕鏈之可變區的抗體形式。

用語「癌症階段(stage of cancer)」係指癌症進展水準之定性或定量評定。在一些實施例中，用於判定癌症之階段之標準可包含但不限於下列之一或多者：癌症在本體中之位置、腫瘤尺寸、癌症是否已擴散至淋巴結，癌症是否已擴散至本體中之一或多種不同部分等。在一些實施例中，可使用所謂的TNM系統對癌症進行分級，根據該系統T係指主要腫瘤之尺寸及程度，通常稱為原發腫瘤；N係指附近具有癌症之淋巴結的數目；且M係指癌症是否已轉移。在一些實施例中，癌症可稱為0期（存在異常細胞但未擴散至附近組織，亦稱為原位癌或CIS；CIS不是癌症，但可能會變成癌症），I-III期（存在癌症；數目愈高，腫瘤愈大，且其擴散至附近組織之程度越大），或IV期（癌症已擴散至本體之遠端部分）。在一些實施例中，癌症可指定為選自由以下所組成之群組之階段：原位；局部（癌症受限於其開始之地點，不具有其擴散的跡象）；區域（癌症已擴散至附近淋巴結、組織、或器官）；遠端（癌症已擴散至本體之遠端部分）；及未知（不存在足夠資訊以判定該階段）。

「刺激(stimulation)」係指藉由刺激分子與其同源配體之結合誘導的初級反應，其中該結合介導信號轉導事件。「刺激分子(stimulatory molecule)」係T細胞上之分子，例如T細胞受體(TCR)/CD3複合物，其與存在於抗原呈現細胞上之同源刺激配體特異性結合。「刺激配體(stimulatory ligand)」係當存在於抗原呈現細胞（例如APC、樹突細胞、B細胞、及類似者）上時可與T細胞上之刺激分子特異性結合的配體，從而介導T細胞之初級反應，包括但不限於活化、起始免疫反應、增生、及類似者。刺激配體包括但不限於抗CD3抗體（諸如OKT3）、載有肽之MHC I類分子、超促效劑抗CD2抗體、及超促效劑抗CD28抗體。

詞組「治療劑(therapeutic agent)」可指任何藥劑，其在投予生物體時引發所欲藥理效應。在一些實施例中，若其證實跨適當群體之統計顯著效應，則將藥劑視為治療劑。在一些實施例中，適當群體可係模型生物體或人類對象之群體。在一些實施例中，適當群體可藉由各種標準定義，諸如特定年齡組、性別、遺傳背景、預先存在之臨床病況、根據生物標記之存在或不存在等。在一些實施例中，治療劑係可用於減輕、改善、和緩、抑制、預防疾病、病症、及/或病況之一或多種症狀或特徵、延緩其發作、降低其嚴重性、及/或降低其發生率的物質。在一些實施例中，治療劑係在其銷售之前已經過或需要政府機關批准之藥劑，以便投予至人類。在一些實施例中，治療劑係需要醫學處方才能投予至人類之藥劑。

一種治療劑（例如經工程改造之CAR T細胞或NK細胞）之「治療有效量(therapeutically effective amount)」、「有效劑量(effective dose)」、「有效量(effective amount)」、或「治療有效劑量(therapeutically effective dosage)」係任何量，當單獨或與另一治療劑組合使用時，保護對象免受疾病之發作或促進疾病回歸，表現為疾病症狀之嚴重程度降低、疾病無症狀期之頻率及持續時間增加，或預防由於疾病折磨造成的損害或殘疾。促進疾病回歸之治療劑之能力可使用所屬技術領域中具有通常知識者已知之各種方法評估，諸如在臨床試驗期間在人類對象中、在預測人類功效的動物模型系統中、或藉由在體外檢定中檢定藥劑之活性。

用語「轉導(transduction)」及「轉導(transduced)」係指藉由病毒載體將外來DNA引入細胞中之程序（參見Jones et al.，「Genetics: principles and analysis，」Boston: Jones & Bartlett Publ. (1998)）。在一些實施例中，載體係反轉錄病毒載體、DNA載體、RNA載體、腺病毒載體、桿狀病毒載體、艾司坦-巴爾(Epstein Barr)病毒載體、乳多泡病毒載體、牛痘病毒載體、單純疱疹病毒載體、腺病毒相關載體、慢病毒載體、或其任何組合。

「轉化(transformation)」係指將外源DNA引入宿主細胞中之任何方法。可使用各種方法在天然或人工條件下進行轉化。轉化可使用任何已知方法來達成，該方法用於插入外來核酸序列至原核或真核宿主細胞中。在一些實施例中，基於被轉化之宿主細胞及/或待插入之核酸來選擇一些轉化方法。轉化方法可包含但不限於病毒感染、電穿孔、及脂質轉染。在一些實施例中，「轉化」細胞係經穩定地轉化，其中所插入之DNA能夠複製作為自主複製質體或作為宿主染色體之部分。在一些實施例中，轉化之細胞可表現引入核酸。

對象之「治療(treatment)」或「治療(treating)」係指向對象進行之任何類型之干預或過程，或向對象投予活性劑，目的係反轉、緩解、改善、抑制、減緩或預防症狀、併發症或病況之發作、進展、發展、嚴重程度或再發、或與疾病相關聯之生物化學指示。在一個實施例中，「治療(treatment)」或「治療(treating)」」包括部分緩解。在另一實施例中，「治療」包括完全緩解。在一些實施例中，治療可係未展現出相關疾病、病症及/或病況之徵象之對象，及/或僅展現出疾病、病症及/或病況之早期徵象之對象。在一些實施例中，此類治療可係展現出相關疾病、病症及/或病況之一或多種建立徵象之對象。在一些實施例中，治療可係已診斷患有相關疾病、病症及/或病況之對象。在一些實施例中，治療可係已知具有一或多個敏感性因子之對象，該一或多個敏感性因子與相關疾病、病症及/或病況之發展風險增加的統計學上相關。

用語「載體(vector)」係指經修飾以包含或合併所提供核酸序列之接受者核酸分子。一種類型之載體係「質體(plasmid)」，其係指額外DNA可連接之環狀雙股DNA分子。另一種類型之載體係病毒載體，其中額外DNA區段可連接至病毒基因體中。某些載體能夠在其等被引入的宿主細胞中自主複製（例如具有細菌複製起源之細菌載體及游離基因(episomal)哺乳動物載體）。其他載體（例如非游離基因哺乳動物載體）在引入宿主細胞中後可整合至宿主細胞之基因體中，且藉此與宿主基因體一起複製。此外，某些載體包含直接表現可操作性地連接至其之插入基因之序列。此類載體在本文中可稱為「表現載體(expression vector)」。標準技術可用於經工程改造之載體，例如在Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989))，其以引用方式併入本文中。

「結合蛋白質(binding protein)」係能夠非共價結合至另一分子之蛋白質。結合蛋白質可結合至例如DNA分子（DNA結合蛋白）、RNA分子（RNA結合蛋白質）、及/或蛋白質分子（蛋白質結合蛋白質）。在蛋白質結合蛋白質之情況下，其可結合至本身（以形成同二聚體、同三聚體等）及/或其可結合至一或多個不同蛋白質之一或多個分子。結合蛋白質可具有超過一種類型之結合活性。

「跨膜域(transmembrane domain)」係多肽之域，其包括至少一個連續胺基酸序列，當在哺乳動物細胞中表現且存在於對應內源性多肽中時，該序列穿過脂質雙層。舉例而言，當在哺乳動物細胞中表現且存在於相應之內源性多肽中時，跨膜域可包括一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、或十個連續胺基酸序列，該序列各自穿過脂質雙層。跨膜域可例如包括至少一個（例如兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、或十個）連續胺基酸序列（當在哺乳動物細胞中表現且存在於對應內源性多肽中時穿過脂質雙層），該等胺基酸序列在脂質雙層中具有α-螺旋二級結構。在一些實施例中，跨膜域可包括二或更多個連續胺基酸序列（當在哺乳動物細胞中表現且存在於對應內源性多肽中時各自穿過脂質雙層），該等胺基酸序列在脂質雙層中形成β-桶狀二級結構。跨膜域之非限制性實例描述於本文中。跨膜域之額外實例係所屬技術領域中已知的。

當用於描述多肽之位置時，詞組「質膜之胞外側(extracellular side of the plasma membrane)」意指多肽包括至少一個穿過質膜之跨膜域及位於胞外空間中之至少一個域（例如至少一個抗原結合域）。在一個實例中，膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之IL-15及IL-15Rα部分係展示在質膜之胞外側。

「信號序列(signal sequence)」意指通常存在於新合成蛋白質之N端的肽序列，其引導新合成蛋白質進入分泌路徑中。

「膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合多肽」意指IL-15多肽係連接至IL-15Rα壽司域。膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合多肽係藉由連接至如本文所述之跨膜域而進一步繫鏈(tether)至細胞膜（且不分泌）。

用語「持久性(persistence)」係指例如向對象投予之一或多種經移植免疫細胞或其後代（例如NK細胞或分化或成熟的T細胞）在對象中保持可偵測水平一段時間的能力。如本文中所使用，增加一或多種經移植免疫細胞或其後代（例如NK細胞或分化或成熟的T細胞）之持久性係指在投予之後增加經移植免疫細胞在對象中可偵測到的時間量。例如，一或多種經移植免疫細胞之體內持久性可增加至少約1天、至少約2天、至少約3天、至少約4天、至少約5天、至少約6天、至少約7天、至少約8天、至少約9天、至少約10天、至少約11天、至少約12天、至少約13天、至少約14天、至少約3週、至少約4週、至少約1個月、至少約2個月、至少約3個月、至少約4個月、至少約5個月、或至少約6個月。此外，一或多種經移植免疫細胞之體內持久性相較於非藉由本文所揭示之本方法製備的一或多種經移植免疫細胞，可增加至少約1.5倍、至少約2倍、至少約2.5倍、至少約3倍、至少約3.5倍、至少約4倍、至少約4.5倍、至少約5倍、至少約6倍、至少約7倍、至少約8倍、至少約9倍、或至少約10倍。

除非具體相反地指示，否則本揭露可使用在本領域之技術範圍內之化學、生物化學、有機化學、分子生物學、微生物學、重組DNA技術、基因學、免疫學、及細胞生物學之方法，其中許多為了說明之目的描述於下文。此類技術在文獻中完整解釋。參見例如Sambrook, et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual(3rd Edition, 2001)；Maniatis et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual(1982)；Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology(John Wiley and Sons, updated July 2008)； Short Protocols in Molecular Biology: A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology, Greene Pub. Associates and Wiley–Interscience；Glover, DNA Cloning: A Practical Approach, vol. I & II (IRL Press, Oxford, 1985)；Anand, Techniques for the Analysis of Complex Genomes, (Academic Press, New York, 1992； Transcription and Translation(B. Hames & S. Higgins, Eds., 1984)；Perbal, A Practical Guide to Molecular Cloning(1984)；Harlow and Lane, Antibodies, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1998) Current Protocols in ImmunologyQ. E. Coligan, A. M. Kruisbeek, D. H. Margulies, E. M. Shevach and W. Strober, eds., 1991)； Annual Review of Immunology；以及在期刊上之專論，諸如 Advances in Immunology。

本揭露之其他特徵、目的、及優點在以下詳細描述中係明顯的。然而，應理解，在指示本揭露之實施例時，詳細描述僅以說明而非限制而給出。

揭示一種膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽。在實施例中，膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合多肽包括信號肽，使得當自其對應的核酸表現時，咸信由於其信號序列而被引導至細胞膜。在實施例中，信號序列被切割掉，使得展示的膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合多肽不包括信號序列。在實施例中，膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合多肽包括跨膜域，以將膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合多肽錨定至細胞膜。

介白素15 (IL-15)係與介白素-2 (IL-2)結構類似的細胞介素。如同IL-2，IL-15結合至由IL-2/IL-15受體β鏈(CD122)及常見γ鏈(γC, CD132)構成之複合物並透過其發送信號。IL-15係在受（多種）病毒感染後由單核吞噬細胞（及一些其他細胞）分泌。此細胞介素誘導自然殺手細胞、亦即先天性免疫系統之細胞的增生，其主要作用係殺滅病毒感染的細胞。由此基因編碼的蛋白質係調節T細胞及自然殺手細胞活化及增生的細胞介素。此細胞介素及介白素2共享許多生物學活性。發現其等結合常見的造血素受體次單元，且可競爭相同受體，因此負調節彼此的活性。CD8+記憶細胞之數目顯示受此細胞介素與IL2之間的平衡控制。此細胞介素誘導JAK激酶之活化、以及轉錄活化因子STAT3、STAT5、及STAT6之磷酸化及活化。如本文中所使用，除非另有明確說明，否則用語「IL-15」係指IL-15之成熟形式（亦即不具有信號肽）或其活性片段。IL-15之蛋白質產物可具有所屬技術領域中已知之任何胺基酸序列，例如如在2021年2月6日更新的NCBI Gene ID: 3600中可得，其以引用方式具體併入本文中。

在某些實施例中，IL-15多肽係指與下列具有至少75%序列同一性之多肽（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：IL-15之成熟形式、或其具有類似於全長成熟形式之活性的片段。在實施例中，IL-15多肽具有與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 6。NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS (seQ ID NO: 6)

介白素15受體次單元α（亦稱為CD125或IL-15Rα）係細胞介素受體，其以高親和力特異性結合介白素15 (IL-15)。IL-15及IL-2之受體共享兩個次單元，即IL2Rβ及IL2Rγ。IL-15Rα在結構上與IL2Rα（用於高親和力IL2結合之額外IL2特異性α次單元）相關。不同於IL2RA，IL-15Rα能夠以獨立於其他次單元的高親和力結合IL-15，其表明IL-15與IL2之間的不同作用。據報導此受體增強細胞增生及細胞凋亡抑制劑BCL2L1/BCL2-XL及BCL2之表現。如本文中所使用，除非另有明確說明，否則用語「IL-15Rα」係指IL-15Rα之成熟形式（亦即不具有信號肽）。IL-15Rα之蛋白質產物可具有所屬技術領域中已知之任何胺基酸序列，例如如在2021年2月3日更新的NCBI Gene ID: 3601中可得，其以引用方式具體併入本文中。此外，除非另有說明，否則IL-15Rα壽司域係指IL-15Rα之壽司域，其例如包含全長IL-15Rα多肽之胺基酸殘基49至162或由其所組成。

在某些實施例中，IL-15Rα多肽係指與下列具有至少75%序列同一性之多肽（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：IL-15Rα之成熟形式、或其具有類似於全長成熟形式之活性的片段。在實施例中，IL-15Rα多肽包含IL-15Rα多肽自胺基酸49至162之活性形式。在實施例中，IL-15Rα壽司域次單元具有與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 7 ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRD (SEQ ID NO: 7)。在進一步實施例中，IL-15Rα壽司域次單元具有與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 95 ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPG (SEQ ID NO: 95)。

在某些實施例中，IL-15及IL-15Rα壽司域次單元可如本文所描述連接。在特定實施例中，連接子序列包含甘胺酸及絲胺酸重複序列之集合，諸如Ser(Gly ₄Ser)n (SEQ ID NO: 8)，其中n係等於或大於1且小於10之正整數。在一個實施例中，連接子包含Ser(Gly ₄Ser) ₃(SEQ ID NO: 9)或Ser(Gly ₃Ser) ₁(Gly ₄Ser) _n(Gly ₃Ser) ₁(SEQ ID NO: 10)。在實施例中，連接子序列包含SGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGS (SEQ ID NO: 11)或由其所組成。額外序列可用作連接子序列。

在實施例中，本文所揭示之多肽包含信號序列，諸如異源信號序列，例如IgE信號序列、κ信號序列、CD8信號序列、或具有基本上等效活性之任何肽。

例示性信號序列係提供於下表4中表4 ：代表性信號序列

來源	序列	SEQ ID NO:
IgE	MDWTWILFLVAAATRVHS	12
IL-2（人類）	MYRMQLLSCIALSLALVTNS	13
IL-2（小鼠）	MYSMQLASCVTLTLVLLVNS	14
κ（人類）	METPAQLLFLLLLWLPDTTG	15
κ（小鼠）	METDTLLLWVLLLWVPGSTG	16
CD8（人類）	MALPVTALLLPLALLLHAARP	17
白蛋白（人類）	MKWVTFISLLFSSAYS	18
IL-15	MRISKPHLRSISIQCYLCLLLNSHFLTEAGIHVFILGCFSAGLPKTEA	19
泌乳素（人類）	MDSKGSSQKGSRLLLLLVVSNLLLCQGVVS	20

在實施例中，信號序列係用連接子（諸如本文所述之一種連接子）連接至IL-15次單元。在一個實施例中，連接子係AGS (SEQ ID NO: 3)連接子。在實施例中，Myc序列係單獨或與上述任一連接子組合使用。在一些實施例中，Myc序列之胺基酸序列係EQKLISEEDL (SEQ ID NO: 21)。

在實施例中，本文所揭示之多肽包含跨膜域序列，諸如異源跨膜域，例如FAS跨膜域序列、或IL-7跨膜域序列、或具有基本上等效活性之肽。

在實施例中，膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合多肽包含FAS跨膜域序列。咸信此序列導致單體膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之表面表現。在實施例中，FAS跨膜域序列包含與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 22: LGWLCLLLLPIPLIVWV (SEQ ID NO: 22)。

在實施例中，FAS跨膜域序列包含與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 42: RSNLGWLCLLLLPIPLIVWVKRKEVQKT (SEQ ID NO: 42)。

在實施例中，膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合多肽包括異源二聚化域，使得當表現時，膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合多肽形成同二聚體。在實施例中，膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合多肽包含IL-7跨膜域序列。在實施例中，IL-7跨膜域序列包含CPT序列模體。咸信此序列導致同二聚體膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之表面表現，該嵌合多肽由於雙硫鍵形成而形成穩定的同二聚體。在實施例中，IL-7跨膜域序列包含與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 23: PILLT CPTISILSFFSVALLVILACVLW (SEQ ID NO: 23)。

在某些實施例中，IL-15Rα壽司域次單元可連接至如本文所述之跨膜錨定域。在特定實施例中，連接子序列包含甘胺酸及絲胺酸重複序列之集合，諸如(Gly ₄Ser) _n(SEQ ID NO: 24)，其中n係等於或大於1且小於10之正整數。在一個實施例中，連接子可係(Gly ₄Ser) ₁(SEQ ID NO: 25)、或(Gly ₄Ser) ₂(SEQ ID NO: 26)、或(Gly ₄Ser) ₃(SEQ ID NO: 102)。在一實施例中，連接子序列包含GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 26)或由其所組成。

在一個實施例中，膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合多肽具有與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 27。MDWTWILFLVAAATRVHSEQKLISEEDLAGSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDGGGGSGGGGSRSNLGWLCLLLLPIPLIVWVKRKEVQKT (SEQ ID NO: 27)。

在一個實施例中，膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合多肽具有與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 43。MDWTWILFLVAAATRVHSAGSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDGGGGSGGGGSRSNLGWLCLLLLPIPLIVWVKRKEVQKT (SEQ ID NO: 43)。

在一個實施例中，膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合多肽具有與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 28。NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDGGGGSGGGGSRSNLGWLCLLLLPIPLIVWVKRKEVQKT (SEQ ID NO: 28)。

在一個實施例中，膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合多肽具有與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 44。MDWTWILFLVAAATRVHSAGSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDGGGGSGGGGSPILLTCPTISILSFFSVALLVILACVLW (SEQ ID NO: 44)。

在一個實施例中，膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合多肽具有與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 29。MDWTWILFLVAAATRVHSEQKLISEEDLAGSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDGGGGSGGGGSPILLTCPTISILSFFSVALLVILACVLW (SEQ ID NO: 29)。

在一個實施例中，膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽具有與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 30。NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDGGGGSGGGGSPILLTCPTISILSFFSVALLVILACVLW (SEQ ID NO: 30)。

在一個實施例中，膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽具有與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 94。MDWTWILFLVAAATRVHSEQKLISEEDLAGSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGGGGGSGGGGSRSNLGWLCLLLLPIPLIVWVKRKEVQKT (SEQ ID NO: 94)。

本揭露提供編碼本文所述之膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸。在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸包含編碼與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列之核酸（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 6。在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸包含編碼與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列之核酸（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 7。在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸包含編碼與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列之核酸（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 8。在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸包含編碼與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列之核酸（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 9。在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸包含編碼與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列之核酸（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 10。在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸包含編碼與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列之核酸（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 11。在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸包含編碼與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列之核酸（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 12。在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸包含編碼與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列之核酸（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 13。在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸包含編碼與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列之核酸（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 14。在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸包含編碼與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列之核酸（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 15。在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸包含編碼與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列之核酸（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 16。在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸包含編碼與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列之核酸（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 17。在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸包含編碼與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列之核酸（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 18。在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸包含編碼與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列之核酸（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 19。在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸包含編碼與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列之核酸（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 20。在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸包含編碼與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列之核酸（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 21。在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸包含編碼與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列之核酸（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 22。在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸包含編碼與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列之核酸（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 23。在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸包含編碼與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列之核酸（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 24。在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸包含編碼與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列之核酸（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 25。在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸包含編碼與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列之核酸（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 26。在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸包含編碼與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列之核酸（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 27。在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸包含編碼與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列之核酸（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 28。在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸包含編碼與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列之核酸（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 29。在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸包含編碼與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列之核酸（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 30。在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸包含編碼與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列之核酸（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 94。

在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸包含與下列具有至少75%序列同一性之核酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 31 GCTGGAAGCAATTGGGTGAACGTGATCTCCGACCTCAAGAAGATCGAGGATCTGATCCAGTCCATGCACATCGATGCCACACTCTACACCGAGTCCGATGTGCACCCTAGCTGCAAAGTTACAGCCATGAAATGCTTTCTGCTGGAGCTGCAAGTGATCTCTCTGGAGTCCGGAGATGCTTCCATCCACGACACAGTGGAGAATCTGATCATTCTGGCTAACAACTCCCTCTCCAGCAACGGCAATGTCACAGAGTCCGGCTGCAAAGAGTGTGAAGAGCTGGAGGAGAAAAACATCAAAGAGTTTCTGCAGAGCTTCGTCCACATCGTCCAGATGTTCATCAACACCTCCTCC (SEQ ID NO: 31)。

在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸包含與下列具有至少75%序列同一性之核酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 32 GCCGGCAGCAACTGGGTCAACGTGATCTCCGATCTGAAGAAGATCGAAGATCTGATCCAGTCCATGCACATCGATGCCACACTGTACACCGAGAGCGACGTGCACCCCAGCTGCAAAGTTACAGCCATGAAGTGCTTTCTGCTCGAACTGCAAGTGATTTCTCTGGAGAGCGGAGATGCCAGCATCCACGACACCGTGGAGAATCTGATCATTCTGGCCAACAACTCTCTGAGCAGCAACGGCAATGTGACAGAGTCCGGCTGTAAGGAGTGCGAGGAGCTGGAGGAGAAAAACATCAAAGAGTTTCTGCAGAGCTTCGTCCACATTGTCCAAATGTTCATCAACACCAGCAGC (SEQ ID NO: 32)。

在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸包含與下列具有至少75%序列同一性之核酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 33 ATTACATGCCCTCCCCCCATGTCCGTGGAACATGCCGACATCTGGGTGAAGTCCTACTCTCTGTACTCGCGTGAACGTTATATCTGCAACAGCGGCTTTAAGAGGAAGGCCGGAACCTCCTCTCTGACCGAATGTGTGCTGAACAAGGCCACCAATGTGGCTCACTGGACCACACCTAGCCTCAAGTGTATTAGGGAC (SEQ ID NO: 33)。

在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸包含與下列具有至少75%序列同一性之核酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 34。AGAAGCAATCTGGGCTGGCTGTGTCTGCTGCTGCTCCCCATCCCTCTGATTGTGTGGGTCAAGAGGAAGGAGGTCCAGAAAACC (SEQ ID NO: 34)。

在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸包含與下列具有至少75%序列同一性之核酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 35。CCTATTCTGCTGACATGCCCCACCATCTCCATCCTGTCTTTTTTTTCTGTTGCTCTGCTGGTGATTCTGGCTTGCGTGCTGTGG (SEQ ID NO: 35)。

在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸包含與下列具有至少75%序列同一性之核酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 36。GGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGATCCGGCGGAGGAGGCAGCGGAGGAGGAGGAAGCGGAGGAGGCTCC (SEQ ID NO: 36)。

在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸包含與下列具有至少75%序列同一性之核酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 37 GGCGGCGGCTCCGGCGGCGGAGGCTCCGGCGGAGGCGGATCCGGCGGCGGCGGATCCGGCGGAGGATCC (SEQ ID NO: 37)。

在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸包含與下列具有至少75%序列同一性之核酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 38 GGCGGCGGAGGATCCGGAGGAGGCGGATCT (SEQ ID NO: 38)。

在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸包含與下列具有至少75%序列同一性之核酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 39 GGCGGCGGAGGAAGCGGAGGAGGAGGAAGC (SEQ ID NO: 39)。單體

在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸包含與下列具有至少75%序列同一性之核酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 40 GCTGGAAGCAATTGGGTGAACGTGATCTCCGACCTCAAGAAGATCGAGGATCTGATCCAGTCCATGCACATCGATGCCACACTCTACACCGAGTCCGATGTGCACCCTAGCTGCAAAGTTACAGCCATGAAATGCTTTCTGCTGGAGCTGCAAGTGATCTCTCTGGAGTCCGGAGATGCTTCCATCCACGACACAGTGGAGAATCTGATCATTCTGGCTAACAACTCCCTCTCCAGCAACGGCAATGTCACAGAGTCCGGCTGCAAAGAGTGTGAAGAGCTGGAGGAGAAAAACATCAAAGAGTTTCTGCAGAGCTTCGTCCACATCGTCCAGATGTTCATCAACACCTCCTCCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGATCCGGCGGAGGAGGCAGCGGAGGAGGAGGAAGCGGAGGAGGCTCCATTACATGCCCTCCCCCCATGTCCGTGGAACATGCCGACATCTGGGTGAAGTCCTACTCTCTGTACTCGCGTGAACGTTATATCTGCAACAGCGGCTTTAAGAGGAAGGCCGGAACCTCCTCTCTGACCGAATGTGTGCTGAACAAGGCCACCAATGTGGCTCACTGGACCACACCTAGCCTCAAGTGTATTAGGGACGGCGGCGGAGGATCCGGAGGAGGCGGATCTAGAAGCAATCTGGGCTGGCTGTGTCTGCTGCTGCTCCCCATCCCTCTGATTGTGTGGGTCAAGAGGAAGGAGGTCCAGAAAACC (SEQ ID NO: 40)。

在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸包含與下列具有至少75%序列同一性之核酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 103 GCTGGAAGCAATTGGGTGAACGTGATCTCCGACCTCAAAAAGATCGAGGATCTGATCCAGTCCATGCACATCGATGCCACACTCTACACCGAGTCCGATGTGCACCCTAGCTGCAAAGTTACAGCAATGAAATGCTTTCTGCTGGAGTTGCAAGTAATCTCCCTGGAGTCCGGAGATGCTTCCATCCACGACACAGTGGAGAATTTAATCATTCTGGCTAACAATTCCCTCTCGTCTAATGGCAATGTCACTGAGAGCGGCTGTAAAGAGTGTGAAGAGCTGGAGGAGAAAAACATCAAAGAGTTTCTGCAGAGCTTCGTCCACATCGTCCAAATGTTCATCAACACCTCGTCCGGGGGCGGCTCCGGGGGAGGAGGATCGGGGGGAGGAGGAAGCGGAGGTGGAGGAAGCGGTGGAGGGTCCATTACATGCCCTCCCCCCATGTCCGTGGAACATGCCGACATATGGGTAAAGTCCTACTCTCTGTACTCGCGGGAACGTTATATCTGCAACAGCGGCTTTAAGAGAAAGGCCGGAACATCtTCTCTGACCGAATGTGTGCTGAACAAGGCCACAAATGTGGCTCACTGGACCACGCCTAGCCTCAAGTGTATTAGGGACGGCGGCGGAGGTTCCGGTGGCGGGGGCTCTAGATCGAATCTGGGCTGGCTGTGTCTGCTGCTGCTCCCCATCCCTCTGATTGTGTGGGTTAAGCGAAAAGAGGTCCAGAAAACCTAA (SEQ ID NO: 103)

在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽之核酸包含與下列具有至少75%序列同一性之核酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 41 GCCGGCAGCAACTGGGTCAACGTGATCTCCGATCTGAAGAAGATCGAAGATCTGATCCAGTCCATGCACATCGATGCCACACTGTACACCGAGAGCGACGTGCACCCCAGCTGCAAAGTTACAGCCATGAAGTGCTTTCTGCTCGAACTGCAAGTGATTTCTCTGGAGAGCGGAGATGCCAGCATCCACGACACCGTGGAGAATCTGATCATTCTGGCCAACAACTCTCTGAGCAGCAACGGCAATGTGACAGAGTCCGGCTGTAAGGAGTGCGAGGAGCTGGAGGAGAAAAACATCAAAGAGTTTCTGCAGAGCTTCGTCCACATTGTCCAAATGTTCATCAACACCAGCAGCGGCGGCGGCTCCGGCGGCGGAGGCTCCGGCGGAGGCGGATCCGGCGGCGGCGGATCCGGCGGAGGATCCATTACATGCCCCCCTCCCATGTCCGTGGAACACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTACTCTCTGTACAGCAGAGAGCGTTACATCTGCAACAGCGGCTTTAAGAGGAAAGCCGGCACCAGCAGCCTCACAGAGTGCGTGCTCAACAAGGCCACCAACGTCGCCCATTGGACCACCCCCTCTCTGAAGTGTATTAGGGACGGCGGCGGAGGAAGCGGAGGAGGAGGAAGCCCTATTCTGCTGACATGCCCCACCATCTCCATCCTGTCTTTTTTTTCTGTTGCTCTGCTGGTGATTCTGGCTTGCGTGCTGTGGTGA (SEQ ID NO: 41)。

在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽（包含FAS跨膜域且無myc標籤）之核酸包含與下列具有至少75%序列同一性之核酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 96 ATGGACTGGACATGGATTCTGTTTCTGGTGGCCGCCGCCACAAGAGTGCACAGCAATTGGGTGAACGTGATCTCCGACCTCAAGAAGATCGAGGATCTGATCCAGTCCATGCACATCGATGCCACACTCTACACCGAGTCCGATGTGCACCCTAGCTGCAAAGTTACAGCCATGAAATGCTTTCTGCTGGAGCTGCAAGTGATCTCTCTGGAGTCCGGAGATGCTTCCATCCACGACACAGTGGAGAATCTGATCATTCTGGCTAACAACTCCCTCTCCAGCAACGGCAATGTCACAGAGTCCGGCTGCAAAGAGTGTGAAGAGCTGGAGGAGAAAAACATCAAAGAGTTTCTGCAGAGCTTCGTCCACATCGTCCAGATGTTCATCAACACCTCCTCCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGATCCGGCGGAGGAGGCAGCGGAGGAGGAGGAAGCGGAGGAGGCTCCATTACATGCCCTCCCCCCATGTCCGTGGAACATGCCGACATCTGGGTGAAGTCCTACTCTCTGTACTCGCGTGAACGTTATATCTGCAACAGCGGCTTTAAGAGGAAGGCCGGAACCTCCTCTCTGACCGAATGTGTGCTGAACAAGGCCACCAATGTGGCTCACTGGACCACACCTAGCCTCAAGTGTATTAGGGACGGCGGCGGAGGATCCGGAGGAGGCGGATCTAGAAGCAATCTGGGCTGGCTGTGTCTGCTGCTGCTCCCCATCCCTCTGATTGTGTGGGTCAAGAGGAAGGAGGTCCAGAAAACCTAA (SEQ ID NO: 96)。

在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽（包含IL-7跨膜域且無myc標籤）之核酸包含與下列具有至少75%序列同一性之核酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 97 ATGGACTGGACATGGATTCTGTTTCTGGTGGCCGCCGCCACAAGAGTGCACTCCAACTGGGTCAACGTGATCTCCGATCTGAAGAAGATCGAAGATCTGATCCAGTCCATGCACATCGATGCCACACTGTACACCGAGAGCGACGTGCACCCCAGCTGCAAAGTTACAGCCATGAAGTGCTTTCTGCTCGAACTGCAAGTGATTTCTCTGGAGAGCGGAGATGCCAGCATCCACGACACCGTGGAGAATCTGATCATTCTGGCCAACAACTCTCTGAGCAGCAACGGCAATGTGACAGAGTCCGGCTGTAAGGAGTGCGAGGAGCTGGAGGAGAAAAACATCAAAGAGTTTCTGCAGAGCTTCGTCCACATTGTCCAAATGTTCATCAACACCAGCAGCGGCGGCGGCTCCGGCGGCGGAGGCTCCGGCGGAGGCGGATCCGGCGGCGGCGGATCCGGCGGAGGATCCATTACATGCCCCCCTCCCATGTCCGTGGAACACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTACTCTCTGTACAGCAGAGAGCGTTACATCTGCAACAGCGGCTTTAAGAGGAAAGCCGGCACCAGCAGCCTCACAGAGTGCGTGCTCAACAAGGCCACCAACGTCGCCCATTGGACCACCCCCTCTCTGAAGTGTATTAGGGACGGCGGCGGAGGAAGCGGAGGAGGAGGAAGCCCTATTCTGCTGACATGCCCCACCATCTCCATCCTGTCTTTTTTTTCTGTTGCTCTGCTGGTGATTCTGGCTTGCGTGCTGTGGTGA (SEQ ID NO: 97)。

在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽（在抗CD19 CAR之背景下，包含FAS跨膜域且無myc標籤）之核酸包含與下列具有至少75%序列同一性之核酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 98 ATGCTTCTCCTGGTGACAAGCCTTCTGCTCTGTGAGTTACCACACCCAGCATTCCTCCTGATCCCAGACATCCAGATGACACAGACTACATCCTCCCTGTCTGCCTCTCTGGGAGACAGAGTCACCATCAGTTGCAGGGCAAGTCAGGACATTAGTAAATATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGATGGAACTGTTAAACTCCTGATCTACCATACATCAAGATTACACTCAGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGAACAGATTATTCTCTCACCATTAGCAACCTGGAGCAAGAAGATATTGCCACTTACTTTTGCCAACAGGGTAATACGCTTCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACTAAGTTGGAAATAACAGGCTCCACCTCTGGATCCGGCAAGCCCGGATCTGGCGAGGGATCCACCAAGGGCGAGGTGAAACTGCAGGAGTCAGGACCTGGCCTGGTGGCGCCCTCACAGAGCCTGTCCGTCACATGCACTGTCTCAGGGGTCTCATTACCCGACTATGGTGTAAGCTGGATTCGCCAGCCTCCACGAAAGGGTCTGGAGTGGCTGGGAGTAATATGGGGTAGTGAAACCACATACTATAATTCAGCTCTCAAATCCAGACTGACCATCATCAAGGACAACTCCAAGAGCCAAGTTTTCTTAAAAATGAACAGTCTGCAAACTGATGACACAGCCATTTACTACTGTGCCAAACATTATTACTACGGTGGTAGCTATGCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACAGTCTCCTCAGCGGCCGCAATTGAAGTTATGTATCCTCCTCCTTACCTAGACAATGAGAAGAGCAATGGAACCATTATCCATGTGAAAGGGAAACACCTTTGTCCAAGTCCCCTATTTCCCGGACCTTCTAAGCCCTTTTGGGTGCTGGTGGTGGTTGGGGGAGTCCTGGCTTGCTATAGCTTGCTAGTAACAGTGGCCTTTATTATTTTCTGGGTGAGGAGTAAGAGGAGCAGGCTCCTGCACAGTGACTACATGAACATGACTCCCCGCCGCCCCGGGCCCACCCGCAAGCATTACCAGCCCTATGCCCCACCACGCGACTTCGCAGCCTATCGCTCCAGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACCAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGGCGTGGCCGGGACCCTGAGATGGGGGGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTACAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTACCAGGGTCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCCCCTCGCGGCTCTGGAGAGGGCAGAGGCTCTCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAAGAGAACCCAGGCCCCATGGACTGGACATGGATTCTGTTTCTGGTGGCCGCCGCCACAAGAGTGCACAGCAATTGGGTGAACGTGATCTCCGACCTCAAGAAGATCGAGGATCTGATCCAGTCCATGCACATCGATGCCACACTCTACACCGAGTCCGATGTGCACCCTAGCTGCAAAGTTACAGCCATGAAATGCTTTCTGCTGGAGCTGCAAGTGATCTCTCTGGAGTCCGGAGATGCTTCCATCCACGACACAGTGGAGAATCTGATCATTCTGGCTAACAACTCCCTCTCCAGCAACGGCAATGTCACAGAGTCCGGCTGCAAAGAGTGTGAAGAGCTGGAGGAGAAAAACATCAAAGAGTTTCTGCAGAGCTTCGTCCACATCGTCCAGATGTTCATCAACACCTCCTCCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGATCCGGCGGAGGAGGCAGCGGAGGAGGAGGAAGCGGAGGAGGCTCCATTACATGCCCTCCCCCCATGTCCGTGGAACATGCCGACATCTGGGTGAAGTCCTACTCTCTGTACTCGCGTGAACGTTATATCTGCAACAGCGGCTTTAAGAGGAAGGCCGGAACCTCCTCTCTGACCGAATGTGTGCTGAACAAGGCCACCAATGTGGCTCACTGGACCACACCTAGCCTCAAGTGTATTAGGGACGGCGGCGGAGGATCCGGAGGAGGCGGATCTAGAAGCAATCTGGGCTGGCTGTGTCTGCTGCTGCTCCCCATCCCTCTGATTGTGTGGGTCAAGAGGAAGGAGGTCCAGAAAACCTAA (SEQ ID NO: 98)。

在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽（在抗CD19 CAR之背景下，包含IL-7跨膜域且無myc標籤）之核酸包含與下列具有至少75%序列同一性之核酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 99 ATGCTTCTCCTGGTGACAAGCCTTCTGCTCTGTGAGTTACCACACCCAGCATTCCTCCTGATCCCAGACATCCAGATGACACAGACTACATCCTCCCTGTCTGCCTCTCTGGGAGACAGAGTCACCATCAGTTGCAGGGCAAGTCAGGACATTAGTAAATATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGATGGAACTGTTAAACTCCTGATCTACCATACATCAAGATTACACTCAGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGAACAGATTATTCTCTCACCATTAGCAACCTGGAGCAAGAAGATATTGCCACTTACTTTTGCCAACAGGGTAATACGCTTCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACTAAGTTGGAAATAACAGGCTCCACCTCTGGATCCGGCAAGCCCGGATCTGGCGAGGGATCCACCAAGGGCGAGGTGAAACTGCAGGAGTCAGGACCTGGCCTGGTGGCGCCCTCACAGAGCCTGTCCGTCACATGCACTGTCTCAGGGGTCTCATTACCCGACTATGGTGTAAGCTGGATTCGCCAGCCTCCACGAAAGGGTCTGGAGTGGCTGGGAGTAATATGGGGTAGTGAAACCACATACTATAATTCAGCTCTCAAATCCAGACTGACCATCATCAAGGACAACTCCAAGAGCCAAGTTTTCTTAAAAATGAACAGTCTGCAAACTGATGACACAGCCATTTACTACTGTGCCAAACATTATTACTACGGTGGTAGCTATGCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACAGTCTCCTCAGCGGCCGCAATTGAAGTTATGTATCCTCCTCCTTACCTAGACAATGAGAAGAGCAATGGAACCATTATCCATGTGAAAGGGAAACACCTTTGTCCAAGTCCCCTATTTCCCGGACCTTCTAAGCCCTTTTGGGTGCTGGTGGTGGTTGGGGGAGTCCTGGCTTGCTATAGCTTGCTAGTAACAGTGGCCTTTATTATTTTCTGGGTGAGGAGTAAGAGGAGCAGGCTCCTGCACAGTGACTACATGAACATGACTCCCCGCCGCCCCGGGCCCACCCGCAAGCATTACCAGCCCTATGCCCCACCACGCGACTTCGCAGCCTATCGCTCCAGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACCAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGGCGTGGCCGGGACCCTGAGATGGGGGGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTACAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTACCAGGGTCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCCCCTCGCGGCTCTGGAGAGGGCAGAGGCTCTCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAAGAGAACCCAGGCCCCATGGACTGGACATGGATTCTGTTTCTGGTGGCCGCCGCCACAAGAGTGCACTCCAACTGGGTCAACGTGATCTCCGATCTGAAGAAGATCGAAGATCTGATCCAGTCCATGCACATCGATGCCACACTGTACACCGAGAGCGACGTGCACCCCAGCTGCAAAGTTACAGCCATGAAGTGCTTTCTGCTCGAACTGCAAGTGATTTCTCTGGAGAGCGGAGATGCCAGCATCCACGACACCGTGGAGAATCTGATCATTCTGGCCAACAACTCTCTGAGCAGCAACGGCAATGTGACAGAGTCCGGCTGTAAGGAGTGCGAGGAGCTGGAGGAGAAAAACATCAAAGAGTTTCTGCAGAGCTTCGTCCACATTGTCCAAATGTTCATCAACACCAGCAGCGGCGGCGGCTCCGGCGGCGGAGGCTCCGGCGGAGGCGGATCCGGCGGCGGCGGATCCGGCGGAGGATCCATTACATGCCCCCCTCCCATGTCCGTGGAACACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTACTCTCTGTACAGCAGAGAGCGTTACATCTGCAACAGCGGCTTTAAGAGGAAAGCCGGCACCAGCAGCCTCACAGAGTGCGTGCTCAACAAGGCCACCAACGTCGCCCATTGGACCACCCCCTCTCTGAAGTGTATTAGGGACGGCGGCGGAGGAAGCGGAGGAGGAGGAAGCCCTATTCTGCTGACATGCCCCACCATCTCCATCCTGTCTTTTTTTTCTGTTGCTCTGCTGGTGATTCTGGCTTGCGTGCTGTGGAAGAAGAGGATCAAGCCGATAGTTTGA (SEQ ID NO: 99)。

在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽（包含FAS跨膜域且無myc標籤）之核酸包含與下列具有至少75%序列同一性之核酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 100 ATGGACTGGACCTGGATACTTTTCCTGGTGGCCGCCGCTACCAGAGTTCACTCAAATTGGGTCAATGTAATTTCAGACTTGAAGAAGATCGAAGATCTGATCCAGTCTATGCATATAGATGCTACTCTGTACACTGAGTCCGATGTGCATCCGTCCTGTAAAGTGACAGCCATGAAGTGTTTCCTGCTTGAGCTCCAAGTTATCAGTCTCGAATCCGGCGATGCCTCAATACATGATACTGTAGAGAACCTCATCATTCTCGCAAACAATTCCCTGTCAAGCAATGGAAATGTTACGGAGTCAGGTTGTAAAGAATGTGAGGAATTGGAAGAAAAGAACATAAAAGAGTTCTTGCAGAGTTTCGTGCACATCGTACAAATGTTCATCAATACGAGTAGTGGTGGTGGTTCCGGAGGAGGAGGATCTGGCGGAGGCGGTAGTGGTGGAGGAGGATCCGGAGGTGGGAGTATAACTTGTCCGCCGCCCATGAGTGTGGAACATGCTGATATATGGGTAAAGTCTTATTCACTTTATAGCAGAGAACGCTATATTTGTAATTCTGGCTTCAAGCGAAAAGCTGGCACGAGCAGTCTCACGGAGTGCGTCCTGAACAAGGCAACCAACGTCGCGCATTGGACAACTCCTAGCCTCAAATGCATAAGGGACCCTGCACTGGTGCACCAACGCCCTGCGCCACCGTCAACGGTCACTACAGCTGGCGTTACACCGCAGCCAGAATCTTTGAGTCCATCAGGCAAGGAACCCGCGGCGTCTTCCCCGTCTTCTAACAATACCGCCGCAACGACGGCGGCAATCGTGCCGGGATCACAACTCATGCCTTCCAAAAGTCCCTCAACGGGCACGACAGAGATTAGCAGCCACGAAAGCTCCCATGGCACTCCCTCACAAACGACCGCGAAGAACTGGGAGCTGACTGCAAGTGCATCTCACCAGCCACCGGGTGGCGGGGGTGGATCAGGTGGCGGTGGCTCTCGCTCCAACCTCGGTTGGCTTTGCCTTCTTTTGCTGCCCATACCGTTGATCGTCTGGGTTAAGCGCAAAGAAGTCCAGAAAACTTAA (SEQ ID NO: 100)。

在實施例中，編碼膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽（在抗CD19 CAR之背景下，包含FAS跨膜域且無myc標籤）之核酸包含與下列具有至少75%序列同一性之核酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 101 ATGCTTCTCCTGGTGACAAGCCTTCTGCTCTGTGAGTTACCACACCCAGCATTCCTCCTGATCCCAGACATCCAGATGACACAGACTACATCCTCCCTGTCTGCCTCTCTGGGAGACAGAGTCACCATCAGTTGCAGGGCAAGTCAGGACATTAGTAAATATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGATGGAACTGTTAAACTCCTGATCTACCATACATCAAGATTACACTCAGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGAACAGATTATTCTCTCACCATTAGCAACCTGGAGCAAGAAGATATTGCCACTTACTTTTGCCAACAGGGTAATACGCTTCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACTAAGTTGGAAATAACAGGCTCCACCTCTGGATCCGGCAAGCCCGGATCTGGCGAGGGATCCACCAAGGGCGAGGTGAAACTGCAGGAGTCAGGACCTGGCCTGGTGGCGCCCTCACAGAGCCTGTCCGTCACATGCACTGTCTCAGGGGTCTCATTACCCGACTATGGTGTAAGCTGGATTCGCCAGCCTCCACGAAAGGGTCTGGAGTGGCTGGGAGTAATATGGGGTAGTGAAACCACATACTATAATTCAGCTCTCAAATCCAGACTGACCATCATCAAGGACAACTCCAAGAGCCAAGTTTTCTTAAAAATGAACAGTCTGCAAACTGATGACACAGCCATTTACTACTGTGCCAAACATTATTACTACGGTGGTAGCTATGCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACAGTCTCCTCAGCGGCCGCAATTGAAGTTATGTATCCTCCTCCTTACCTAGACAATGAGAAGAGCAATGGAACCATTATCCATGTGAAAGGGAAACACCTTTGTCCAAGTCCCCTATTTCCCGGACCTTCTAAGCCCTTTTGGGTGCTGGTGGTGGTTGGGGGAGTCCTGGCTTGCTATAGCTTGCTAGTAACAGTGGCCTTTATTATTTTCTGGGTGAGGAGTAAGAGGAGCAGGCTCCTGCACAGTGACTACATGAACATGACTCCCCGCCGCCCCGGGCCCACCCGCAAGCATTACCAGCCCTATGCCCCACCACGCGACTTCGCAGCCTATCGCTCCAGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACCAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGGCGTGGCCGGGACCCTGAGATGGGGGGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTACAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTACCAGGGTCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCCCCTCGCAGAGCCAAGAGAGGCTCCGGAGAGGGCAGAGGCTCTCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAAGAGAATCCAGGGCCCATGGACTGGACCTGGATACTTTTCCTGGTGGCCGCCGCTACCAGAGTTCACTCAAATTGGGTCAATGTAATTTCAGACTTGAAGAAGATCGAAGATCTGATCCAGTCTATGCATATAGATGCTACTCTGTACACTGAGTCCGATGTGCATCCGTCCTGTAAAGTGACAGCCATGAAGTGTTTCCTGCTTGAGCTCCAAGTTATCAGTCTCGAATCCGGCGATGCCTCAATACATGATACTGTAGAGAACCTCATCATTCTCGCAAACAATTCCCTGTCAAGCAATGGAAATGTTACGGAGTCAGGTTGTAAAGAATGTGAGGAATTGGAAGAAAAGAACATAAAAGAGTTCTTGCAGAGTTTCGTGCACATCGTACAAATGTTCATCAATACGAGTAGTGGTGGTGGTTCCGGAGGAGGAGGATCTGGCGGAGGCGGTAGTGGTGGAGGAGGATCCGGAGGTGGGAGTATAACTTGTCCGCCGCCCATGAGTGTGGAACATGCTGATATATGGGTAAAGTCTTATTCACTTTATAGCAGAGAACGCTATATTTGTAATTCTGGCTTCAAGCGAAAAGCTGGCACGAGCAGTCTCACGGAGTGCGTCCTGAACAAGGCAACCAACGTCGCGCATTGGACAACTCCTAGCCTCAAATGCATAAGGGACCCTGCACTGGTGCACCAACGCCCTGCGCCACCGTCAACGGTCACTACAGCTGGCGTTACACCGCAGCCAGAATCTTTGAGTCCATCAGGCAAGGAACCCGCGGCGTCTTCCCCGTCTTCTAACAATACCGCCGCAACGACGGCGGCAATCGTGCCGGGATCACAACTCATGCCTTCCAAAAGTCCCTCAACGGGCACGACAGAGATTAGCAGCCACGAAAGCTCCCATGGCACTCCCTCACAAACGACCGCGAAGAACTGGGAGCTGACTGCAAGTGCATCTCACCAGCCACCGGGTGGCGGGGGTGGATCAGGTGGCGGTGGCTCTCGCTCCAACCTCGGTTGGCTTTGCCTTCTTTTGCTGCCCATACCGTTGATCGTCTGGGTTAAGCGCAAAGAAGTCCAGAAAACTTAA (SEQ ID NO: 101)。

本揭露提供用於改善抗原結合系統（諸如CAR及TCR）之功效的方法及組成物，其包含結合至所關注之抗原（例如腫瘤抗原）之結合模體。在某些實施例中，抗原結合系統係嵌合抗原受體(CAR)。在某些實施例中，抗原結合系統係T細胞受體(TCR)。抗原結合系統可結合至腫瘤抗原或病原體抗原。

嵌合抗原受體(CAR)係經工程改造之受體，其可引導或重導T細胞（例如患者或捐贈者T細胞）以靶向所選抗原。CAR可經工程改造以識別抗原且當與抗原結合時，活化免疫細胞以攻擊及破壞攜帶抗原之細胞。當這些抗原存在於腫瘤細胞上時，表現該CAR之免疫細胞即可靶向及殺滅該腫瘤細胞。CAR通常包含介導抗原結合之胞外結合模體、當抗原結合系統存在於細胞表面或細胞膜時跨越或理解為跨越細胞膜之跨膜域、及胞內（或細胞質）信號傳導域。

根據至少一個非限制性視圖，已存在至少三個「代(generation)」之CAR組成物。在第一代CAR中，結合模體（例如單鏈可變片段、結合模體）係經由跨膜域鏈接或連接至信號傳導域（例如CD3ζ），其可選地包含鉸鏈域及一或多個間隔子。在第二代CAR中，將共刺激域（諸如CD28、4-1BB、或OX-40）與信號傳導域（例如CD3ζ）一起引入。在第三代CAR中，包括第二共刺激域。

TCR係由α鏈及β鏈所構成之異二聚體。TCR信號傳導需要募集產生免疫突觸之信號傳導蛋白質。此外，TCR在質膜處之局部化取決於CD3複合物，其在T細胞中表現。可例如使用CAR構築體之跨膜及信號傳導域、已知的方法及構築體（例如sTCR及TCR-CAR分子，例如TCRβ鏈與CD28 TM及CD28及CD3ζ信號傳導模組之融合）來產生經工程改造之單鏈TCR。

抗原結合系統可包含VH及VL。在一些實施例中，VH及VL係藉由連接子(L)連接。

在一些實施例中，抗原結合系統進一步包含共刺激域、及/或胞外域（例如「鉸鏈(hinge)」或「間隔子(spacer)」區）、及/或跨膜域、及/或胞內（信號傳導）域、及/或CD3ζ或CD3ε活化域。

一或多種抗原結合模體判定抗原結合系統之目標。抗原結合系統之結合模體可包含任何結合模體。結合模體係至少部分用於嵌合抗原受體中，因為其可經工程改造以連同其他CAR組分一起表現為單鏈之一部分。參見例如美國專利第7,741,465號及第6,319,494號以及Eshhar et al., Cancer Immunol Immunotherapy (1997) 45: 131-136、Krause et al., J. Exp. Med., Volume 188, No. 4, 1998 (619-626)；Finney et al., Journal of Immunology, 1998, 161: 2791-2797，其等之各者關於CAR中之結合模體域以引用方式併入本文中。結合模體（或scFv）係單鏈抗原結合片段，其包含重鏈可變域及輕鏈可變域，其中重鏈可變域及輕鏈可變域係鏈接或連接在一起。參見例如美國專利第7,741,465號及第6,319,494號以及Eshhar et al., Cancer Immunol Immunotherapy (1997) 45: 131-136，其中之各者關於結合模體域以引用方式併入本文中。當衍生自親本抗體時，結合模體可保留一些，保留全部，或基本上保留目標抗原之親本抗體之結合。

在各種實施例中，結合模體結合至腫瘤抗原。在某些實施例中，腫瘤抗原係選自由下列所組成之群組：2B4 (CD244)、4-1BB、5T4、A33抗原、腺癌抗原、腎上腺素受體β3 (ADRB3)、A激酶錨定蛋白4 (AKAP-4)、α胎兒蛋白(AFP)、間變性淋巴瘤激酶(ALK)、雄性激素受體、B7H3 (CD276)、β2整合素、BAFF、B淋巴瘤細胞、B細胞突變抗原(BCMA)、bcr-abl（由斷點簇集區(BCR)及Abelson鼠白血病病毒致癌基因同源物1 (Abl)所組成之致癌基因融合蛋白）、BhCG、骨髓基質細胞抗原2 (BST2)、CCCTC結合因子（鋅指蛋白質）樣（BORIS或印記位點調節物兄弟）、BST2、C242抗原、9-0-乙醯基-CA19-9標記、CA-125、CAEX、鈣網蛋白、碳酸酐酶9 (CAIX)、C-MET、CCR4、CCR5、CCR8、CD2、CD3、CD4、CD5、CD8、CD7、CD10、CD16、CD19、CD20、CD22、CD23（IgE受體）、CD24、CD25、CD27、CD28、CD30 (TNFRSF8)、CD33、CD34、CD38、CD40、CD40L、CD41、CD44、CD44V6、CD49f、CD51、CD52、CD56、CD63、CD70、CD72、CD74、CD79a、CD79b、CD80、CD84、CD96、CD97、CD100、CD123、CD125、CD133、CD137、CD138、CD150、CD152 (CTLA-4)、CD160、CD171、CD179a、CD200、CD221、CD229、CD244、CD272 (BTLA)、CD274 (PDL-1、B7H1)、CD279 (PD-1)、CD352、CD358、CD300分子樣家族成員f (CD300LF)、癌胚抗原(CEA)、密連蛋白6 (CLDN6)、TACI、C型凝集素樣分子（CLL-1或CLECL1）、C型凝集素域家族12成員A (CLEC12A)、巨細胞病毒(CMV)感染之細胞抗原、CNT0888、CRTAM (CD355)、CS-1（亦稱為CD2子集1、CRACC、CD319、及19A24）、CTLA-4、週期蛋白B l、染色體X開讀框61 (CXORF61)、細胞色素P450 1B 1 (CYP1B1)、DNAM-1 (CD226)、橋粒芯蛋白4、DR3、DR5、E-鈣黏素新表位、上皮生長因子受體(EGFR)、EGF1R、上皮生長因子受體變體III (EGFRvIII)、上皮醣蛋白2 (EGP-2)、上皮醣蛋白40 (EGP-40)、含EGF樣模組之黏液素樣激素受體樣2 (EMR2)、突變型延伸因子2 (ELF2M)、內皮唾液酸蛋白、上皮細胞黏附分子(EPCAM)、A型蝶素受體2 (EphA2)、蝶素B2、受體酪胺酸蛋白質激酶erb-B2,3,4 (erb-B2,3,4)、ERBB、ERBB2 (Her2/neu)、ERG（跨膜絲胺酸蛋白酶2 (TMPRSS2) ETS融合基因）、ETA、位於染色體12p上之ETS易位變體基因6 (ETV6-AML)、IgA受體之Fc片段（FCAR或CD89）、纖維母細胞活化蛋白α (FAP)、FBP、Fc受體樣5 (FCRL5)、胎兒乙醯膽鹼受體(AChR)、纖連蛋白外域B、Fms樣酪胺酸激酶3 (FLT3)、葉酸結合蛋白(FBP)、葉酸受體1、葉酸受體α、葉酸受體β、Fos相關抗原1、岩藻醣基、岩藻醣基GM1；GM2、神經節苷脂G2 (Gd2)、神經節苷脂GD3 (aNeu5Ac(2-8)aNeu5Ac(2-3)bDGalp(l -4)bDGlcp(l- l)Cer)、o-乙醯基-GD2神經節苷脂(OAcGD2)、GITR (TNFRSF 18)、GM1、神經節苷脂GM3 (aNeu5Ac(2-3)bDGalp(l-4)bDGlcp(l-l)Cer)、GP 100、globoH糖基神經醯胺之六醣部分(GloboH)、醣蛋白75、磷脂醯肌醇蛋白聚醣3 (GPC3)、醣蛋白100 (gpl00)、GPNMB、G蛋白偶聯受體20 (GPR20)、G蛋白偶聯受體C類5組成員D (GPRC5D)、A型肝炎病毒細胞受體1 (HAVCR1)、人類表皮生長因子受體2 (HER-2)、HER2/neu、HER3、HER4、HGF、高分子量黑色素瘤相關抗原(HMWMAA)、人類乳突病毒E6 (HPV E6)、人類乳突病毒E7 (HPV E7)、突變型熱休克蛋白70-2 (mut hsp70-2)、人類分散因子受體激酶、人類端粒酶反轉錄酶(hTERT)、HVEM、ICOS、類胰島素生長因子受體1（IGF-1受體）、IGF-I、IgGl、免疫球蛋白λ樣多肽1 (IGLL1)、IL-6、介白素11受體α (IL- l lRa)、IL-13、介白素13受體次單元α2（IL- 13Ra2或CD213A2）、類胰島素生長因子I受體(IGF1-R)、整合素α5β1、整合素ανβ3、腸羧基酯酶、κ輕鏈、KCS1、激酶插入域受體(KDR)、KIR、KIR2DL1、KIR2DL2、KIR2DL3、KIR3DL2、KIR-L、KG2D配體、KIT (CD117)、KLRGI、LAGE-la、LAG3、淋巴球特異性蛋白酪胺酸激酶(LCK)、白血球免疫球蛋白樣受體亞家族A成員2 (LILRA2)、豆莢蛋白、白血球相關免疫球蛋白樣受體1 (LAIR1)、路易士(Y)抗原、LeY、LG、LI細胞黏附分子(LI-CAM)、LIGHT、LMP2、淋巴球抗原6複合物、LTBR、基因座K 9 (LY6K)、Ly-6、淋巴球抗原75 (LY75)、黑色素瘤癌症睪丸抗原1 (MAD-CT-1)；黑色素瘤癌症睪丸抗原2 (MAD-CT-2)、MAGE、黑色素瘤相關抗原1 (MAGE-A1)、由T細胞識別之MAGE-A3黑色素瘤抗原1（MelanA或MARTI）、MelanA/MARTl、間皮素、MAGE A3、黑色素瘤細胞凋亡抑制因子(ML-IAP)、黑色素瘤特異性硫酸軟骨素蛋白聚醣(MCSCP)、MORAb-009、MS4A1、黏液素1 (MUCl)、MUC2、MUC3、MUC4、MUC5AC、MUC5b、MUC7、MUC16、黏液素CanAg、II型密拉氏管抑制物質(MIS)受體、v-myc禽骨髓瘤細胞病毒致癌基因神經母細胞瘤衍生性同源物(MYCN)、N-羥乙醯神經胺酸、N-乙醯基葡萄糖胺基轉移酶V (NA17)、神經細胞黏附分子(NCAM)、NKG2A、NKG2C、NKG2D、NKG2E配體、NKR-P IA、NPC-1C、NTB-A、乳腺分化抗原(NY-BR-1)、NY-ESO-1、致癌胎兒抗原(h5T4)、嗅覺受體51E2 (OR51E2)、OX40、漿細胞抗原、poly SA、前頂體素結合蛋白sp32 (OY-TES l)、p53、p53突變體、泛連接蛋白3 (PANX3)、前列腺酸性磷酸酶(PAP)、成對盒蛋白Pax-3 (PAX3)、成對盒蛋白Pax-5 (PAX5)、前列腺癌腫瘤抗原1（PCTA-1或半乳糖凝集素8）、PD-1H、血小板衍生生長因子受體α (PDGFR-α)、PDGFR-β、PDL192、PEN-5、磷脂絲胺酸、胎盤特異性蛋白1 (PLAC1)、聚唾液酸、前列腺酶、前列腺癌細胞、前列腺蛋白、蛋白酶絲胺酸21（睪素或PRSS21）、蛋白酶3 (PR1)、前列腺幹細胞抗原(PSCA)、前列腺特異性膜抗原(PSMA)、蛋白酶體（前體、巨蛋白因子）次單元β型、晚期糖化終產物受體(RAGE-1)、RANKL、Ras突變體、Ras同源物家族成員C (RhoC)、RON、受體酪胺酸激酶樣孤兒受體1 (ROR1)、腎遍在蛋白1 (RU1)、腎遍在蛋白2 (RU2)、肉瘤易位斷點、由T細胞識別之鱗狀細胞癌抗原3 (SART3)、SAS、SDC1、SLAMF7、唾液酸基路易士黏附分子(sLe)、Siglec-3、Siglec-7、Siglec-9、音蝟因子(SHH)、精子蛋白17 (SPA17)、階段特異性胚胎抗原4 (SSEA-4)、STEAP、sTn抗原、滑膜肉瘤X斷點2 (SSX2)、存活素、腫瘤相關醣蛋白72 (TAG72)、TCRa、TCRb、TCR5γ、TCRγ交替讀框蛋白(TARP)、端粒酶、TIGIT、TNF-α前驅物、腫瘤內皮標記1 (TEM1/CD248)、腫瘤內皮標記7相關蛋白(TEM7R)、肌腱蛋白C (tenascin C)、TGF-β1、TGF-β2、轉麩醯胺酸酶5 (TGS5)、促血管生成素結合細胞表面受體2 (Tie 2)、TIM1、TIM2、TIM3、Tn Ag、TRAIL-R1、TRAIL-R2、酪胺酸酶相關蛋白2 (TRP-2)、促甲狀腺激素受體(TSHR)、腫瘤抗原CTAA16.88、酪胺酸酶、ROR1、TAG- 72、尿溶蛋白2 (UPK2)、VEGF-A、VEGFR-1、血管內皮生長因子受體2 (VEGFR2)、及波形蛋白、威爾姆氏腫瘤蛋白(WT1)、或X抗原家族成員1A (XAGE1)。亦參見國際專利申請公開案第WO2015/142675號。

CAR可包含結合目標抗原之一或多個抗原結合域。在某些實施例中，抗原結合域結合CD19。在某些實施例中，抗原結合域結合CD20。在一些實施例中，CAR進一步包含共刺激域、及/或胞外域（例如「鉸鏈」或「間隔子」區）、及/或跨膜域、及/或胞內（信號傳導）域、及/或CD3活化域。在一些實施例中，CAR至少包含結合目標抗原之結合域、共刺激域、胞外域、跨膜域、及CD3ζ或CD3ε活化域。

在某些實施例中，本文所涵蓋之CAR可包含各種域之間的連接子殘基，例如在VH及VL域之間，添加用於分子之適當間隔構形。本文所涵蓋之CAR可包含一、兩個、三個、四個、或五個或更多個連接子。在一些實施例中，連接子之長度係約1至約25個胺基酸、約5至約20個胺基酸、或約10至約20個胺基酸、或任何中介長度之胺基酸。在一些實施例中，連接子係1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多個胺基酸長。

連接子之說明性實例包括甘胺酸聚合物(G)n；甘胺酸-絲胺酸聚合物(G _1–5S _1–5)n，其中n係至少一、二、三、四、或五之整數(SEQ ID NO: 109)；甘胺酸-丙胺酸聚合物；丙胺酸-絲胺酸聚合物；及所屬技術領域中已知之其他可撓性連接子。甘胺酸及甘胺酸-絲胺酸聚合物係相對非結構化，且因此可能夠作為融合蛋白（諸如本文所述之CAR）之域之間的中性繫鏈。甘胺酸甚至比丙胺酸能進入更多的φ–ψ空間，且比具有較長側鏈之殘基限制更少（參見Scheraga, Rev. Computational Chem.11173–142 (1992)）。本文所涵蓋之其他連接子包括惠特洛(Whitlow)連接子（參見Whitlow, Protein Eng. 6(8): 989–95 (1993)）。所屬技術領域中具有通常知識者將認識到，一些實施例中之CAR的設計可包括全部或部分可撓性之連接子，使得連接子可包括可撓性連接子以及賦予較低可撓性結構之一或多個部分，以提供所欲CAR結構。在一個實施例中，本文所述之構築體中之任一者可包含「GS」連接子(SEQ ID NO: 104)。在另一實施例中，本文所述之構築體中之任一者包含「GSG」連接子。在一實例中，甘胺酸-絲胺酸連接子包含胺基酸序列GS (SEQ ID NO: 104)或由其所組成。在一實例中，甘胺酸-絲胺酸連接子包含胺基酸序列GGGSGGGS (SEQ ID NO: 105)或由其所組成。在另一實施例中，本文所述之CAR包含與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 45 (GSTSGSGKPGSGEGSTKG (SEQ ID NO: 45)。在一實施例中，連接子係由核酸序列編碼，該核酸序列與下列具有至少75%序列同一性（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：根據GGCTCCACCTCTGGATCCGGCAAGCCCGGATCTGGCGAGGGATCCACCAAGGGC (SEQ ID NO: 46)、GGGAGCACTAGCGGCTCTGGCAAACCTGGATCTGGCGAGGGATCTACCAAGGGC (SEQ ID NO: 47)、GGCTCCACCAGCGGAAGCGGCAAGCCAGGCTCAGGCGAAGGATCTACAAAAGGC (SEQ ID NO: 48)、或GGGAGCACAAGCGGCTCTGGCAAACCTGGATCCGGCGAGGGATCTACCAAGGGC (SEQ ID NO: 49)之核酸序列。

在實施例中，CAR包含進一步包含可變區連接序列之scFv。「可變區連接序列(variable region linking sequence)」係將重鏈可變區連接至輕鏈可變區之胺基酸序列，且提供與兩個子結合域之相互作用相容之間隔子功能，使得所得多肽保持與包含相同之輕及重鏈可變區之抗體相同的目標分子之特異性結合親和力。在一個實施例中，可變區連接序列係1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多個胺基酸長。

在實施例中，CAR之結合域接著係一或多個「間隔域(spacer domain)」，其係指移動抗原結合域遠離效應細胞表面以使適當的細胞/細胞接觸、抗原結合及活化之區(Patel et al., Gene Therapy,1999; 6: 412-419)。間隔域可衍生自天然、合成、半合成、或重組源。在某些實施例中，間隔域係免疫球蛋白之部分，包括但不限於一或多個重鏈恆定區，例如CH2及CH3。間隔域可包括天然存在之免疫球蛋白鉸鏈區或改變免疫球蛋白鉸鏈區之胺基酸序列。

CAR之結合域可通常接著一或多個「鉸鏈域(hinge domain)」，其在定位抗原結合域遠離效應細胞表面上起作用，以實現適當的細胞/細胞接觸、抗原結合及活化。鉸鏈可係定位於結合模體與跨膜域之間的抗原結合系統之胞外域。鉸鏈亦可稱為胞外域或「間隔子」。鉸鏈可有助於受體表現、活性、及/或穩定性。在一些實施例中，鉸鏈域係定位於結合模體與跨膜域之間。鉸鏈亦可提供接近目標抗原之靈活性。鉸鏈包含免疫球蛋白樣鉸鏈域。CAR通常包含結合域與跨膜域之間的一或多個鉸鏈域。鉸鏈域可衍生自天然、合成、半合成、或重組源。鉸鏈域可包括天然存在之免疫球蛋白鉸鏈區或改變免疫球蛋白鉸鏈區之胺基酸序列。在一些實施例中，抗原結合系統可包含鉸鏈，其係、來自、或衍生自（例如包含所有或片段的）免疫球蛋白樣鉸鏈域。在一些實施例中，鉸鏈域來自免疫球蛋白或衍生自免疫球蛋白。在一些實施例中，鉸鏈域係選自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgD、IgE、或IgM、或其片段之鉸鏈。

鉸鏈可衍生自天然來源或合成來源。在一些實施例中，抗原結合系統可包含鉸鏈，其係、來自、或衍生自（例如包含所有或片段的）CD2、CD3δ、CD3ε、CD3γ、CD4、CD7、CD8α、CD8β、CD11a (ITGAL)、CD11b (ITGAM)、CD11c (ITGAX)、CD11d (ITGAD)、CD18 (ITGB2)、CD19 (B4)、CD27 (TNFRSF7)、CD28、CD28T、CD29 (ITGB1)、CD30 (TNFRSF8)、CD40 (TNFRSF5)、CD48 (SLAMF2)、CD49a (ITGA1)、CD49d (ITGA4)、CD49f (ITGA6)、CD66a (CEACAM1)、CD66b (CEACAM8)、CD66c (CEACAM6)、CD66d (CEACAM3)、CD66e (CEACAM5)、CD69 (CLEC2)、CD79A（B細胞抗原受體複合物相關α鏈）、CD79B（B細胞抗原受體複合物相關β鏈）、CD84 (SLAMF5)、CD96 (Tactile)、CD100 (SEMA4D)、CD103 (ITGAE)、CD134 (OX40)、CD137 (4-1BB)、CD150 (SLAMF1)、CD158A (KIR2DL1)、CD158B1 (KIR2DL2)、CD158B2 (KIR2DL3)、CD158C (KIR3DP1)、CD158D (KIRDL4)、CD158F1 (KIR2DL5A)、CD158F2 (KIR2DL5B)、CD158K (KIR3DL2)、CD160 (BY55)、CD162 (SELPLG)、CD226 (DNAM1)、CD229 (SLAMF3)、CD244 (SLAMF4)、CD247 (CD3ζ)、CD258 (LIGHT)、CD268 (BAFFR)、CD270 (TNFSF14)、CD272 (BTLA)、CD276 (B7-H3)、CD279 (PD-1)、CD314 (NKG2D)、CD319 (SLAMF7)、CD335 (NK-p46)、CD336 (NK-p44)、CD337 (NK-p30)、CD352 (SLAMF6)、CD353 (SLAMF8)、CD355 (CRTAM)、CD357 (TNFRSF18)、可誘導型T細胞共刺激劑(ICOS)、LFA-1 (CD11a/CD18)、NKG2C、DAP-10、ICAM-1、NKp80 (KLRF1)、IL-2Rβ、IL-2Rγ、IL-7Rα、LFA-1、SLAMF9、LAT、GADS (GrpL)、SLP-76 (LCP2)、PAG1/CBP、CD83配體、Fcγ受體、MHC 1類分子、MHC 2類分子、TNF受體蛋白、免疫球蛋白蛋白質、細胞介素受體、整合素、活化NK細胞受體、或鐸配體受體、或其片段或組合。

在一些實施例中，CAR可包含鉸鏈，其係、來自、或衍生自（例如包含所有或片段的）CD8α之鉸鏈。在一些實施例中，CAR可包含鉸鏈，其係、來自、或衍生自（例如包含所有或片段的）CD28之鉸鏈。在一些實施例中，鉸鏈係、來自、或衍生自CD8α之鉸鏈的片段或CD28之鉸鏈的片段，其中該片段不是整個鉸鏈。在一些實施例中，CD8α鉸鏈之片段或CD28鉸鏈之片段包含排除CD8α鉸鏈或CD28鉸鏈之N端、或C端、或兩者之至少1、至少2、至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、至少8、至少9、至少10、至少11、至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18、至少19、或至少20個胺基酸的胺基酸序列。

在實施例中，鉸鏈域包含CD28鉸鏈區。在實施例中，CD28鉸鏈域具有與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 230 (IEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP (SEQ ID NO: 50))。在實施例中，CD28鉸鏈域係由核酸編碼，該核酸與下列具有至少75%序列同一性（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：具有根據attgaagttatgtatcctcctccttacctagacaatgagaagagcaatggaaccattatccatgtgaaagggaaacacctttgtccaagtcccctatttcccggaccttctaagccc (SEQ ID NO: 51)之序列的核酸。

在實施例中，鉸鏈域包含截短之CD28鉸鏈區(CD28T)鉸鏈區，諸如揭示於國際專利申請案：2017年3月31日申請之PCT/US2017/025351，其以全文引用之方式併入本文中。在實施例中，CAR包含CD28T鉸鏈域，其具有與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 52 (LDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP (SEQ ID NO: 52))。在實施例中，CD28T鉸鏈域係由核酸編碼，該核酸與下列具有至少75%序列同一性（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：具有根據ctagacaatgagaagagcaatggaaccattatccatgtgaaagggaaacacctttgtccaagtcccctatttcccggaccttctaagccc (SEQ ID NO: 53)之序列的核酸。

在實施例中，鉸鏈域包含CD8α鉸鏈區。在實施例中，本文所述之CAR包含來自CD8α之鉸鏈域，該CD8α具有與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 54 (FVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD (SEQ ID NO: 54))。在實施例中，來自CD8α之鉸鏈域係由核酸編碼，該核酸與下列具有至少75%序列同一性（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：具有根據TTCGTGCCTGTGTTCCTGCCTGCTAAGCCCACCACCACTCCTGCTCCAAGACCTCCTACCCCCGCTCCTACAATCGCCAGCCAACCTCTGAGCCTGAGACCGGAGGCATGCAGACCTGCGGCAGGGGGAGCAGTTCACACAAGAGGCTTGGACTTCGCTTGCGAC (SEQ ID NO: 55)之序列的核酸。

此等鉸鏈域之多核苷酸及多肽序列係已知的。在一些實施例中，編碼鉸鏈域之多核苷酸包含與已知核苷酸序列至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%、或約100%（例如85%至90%、85%至95%、85%至100%、90%至95%、90%至100%、或95%至100%）同一之核苷酸序列。在一些實施例中，鉸鏈域之多肽序列包含與已知多肽序列至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%、或約100%（例如85%至90%、85%至95%、85%至100%、90%至95%、90%至100%、或95%至100%）同一之多肽序列。

通常，（例如抗原結合系統之）「跨膜域」係指當在細胞表面或細胞膜（例如跨越細胞膜之一部分或全部）處存在於分子中時，具有存在於膜中之屬性的域。本揭露之抗原結合系統之共刺激域可進一步包含跨膜域及/或胞內信號傳導域。不需要跨膜域中之每一胺基酸存在於膜中。舉例而言，在一些實施例中，跨膜域特徵在於蛋白質之指定段或部分實質上位於膜中。可使用各種演算法分析胺基酸或核酸序列以預測蛋白質亞細胞定位（例如跨膜定位）。程式psort (PSORT.org)及Prosite (prosite.expasy.org)係此類程式之例示性。

包含於本文所述之抗原結合系統中之跨膜域的類型不限於任何類型。在一些實施例中，選擇與結合模體及/或胞內域天然相關之跨膜域。在一些情況下，跨膜域包含一或多個胺基酸之修飾（例如缺失、插入、及/或取代），例如以避免此類域與相同或不同表面膜蛋白之跨膜域結合，以最小化與受體複合物之其他成員的相互作用。

跨膜域可衍生自天然或合成來源。在來源係天然之情況下，域可衍生自任何膜結合或跨膜蛋白。例示性跨膜域可衍生自（例如可至少包含下列之跨膜域）：T細胞受體之α、β、或ζ鏈、CD28、CD3ε、CD3δ、CD3γ、CD45、CD4、CD5、CD7、CD8、CD8α、CD8β、CD9、CD11a、CD11b、CD11c、CD11d、CD16、CD22、CD27、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、TNFSFR25、CD154、4-1BB/CD137、活化NK細胞受體、免疫球蛋白蛋白質、B7-H3、BAFFR、BLAME (SLAMF8)、BTLA、CD100 (SEMA4D)、CD103、CD160 (BY55)、CD18、CD19、CD19a、CD2、CD247、CD276 (B7-H3)、CD29、CD30、CD40、CD49a、CD49D、CD49f、CD69、CD84、CD96 (Tactile)、CDS、CEACAM1、CRT AM、細胞介素受體、DAP-10、DNAM1 (CD226)、Fcγ受體、GADS、GITR、HVEM(LIGHTR)、IA4、ICAM-1、ICAM-1、Igα (CD79a)、IL-2Rβ、IL-2Rγ、IL-7Rα、可誘導型T細胞共刺激劑(ICOS)、整合素、ITGA4、ITGA4、ITGA6、ITGAD、ITGAE、ITGAL、ITGAM、ITGAX、ITGB2、ITGB7、ITGB1、KIRDS2、LAT、LFA-1、LFA-1、與CD83結合之配體、LIGHT、LIGHT、LTBR、Ly9 (CD229)、淋巴球功能相關抗原1 (LFA-1；CD1-1a/CD18)、MHC第1型分子、NKG2C、NKG2D、NKp30、NKp44、NKp46、NKp80 (KLRF1)、OX-40、PAG/Cbp、程式性死亡1 (PD-1)、PSGL1、SELPLG (CD162)、信號傳導淋巴球性活化分子（SLAM蛋白）、SLAM (SLAMF1; CD150; IPO-3)、SLAMF4 (CD244; 2B4）、SLAMF6（NTB-A；Ly108)、SLAMF7、SLP-76、TNF受體蛋白、TNFR2、TNFSF14、鐸配體受體、TRANCE/RANKL、VLA1、或VLA-6、或其片段、截短、或組合。在一些實施例中，跨膜域可係合成的（且可例如主要包含疏水性殘基，諸如白胺酸及纈胺酸）。在一些實施例中，苯丙胺酸之三聯體、色胺酸、及纈胺酸包含在合成跨膜域之各端處。在一些實施例中，跨膜域直接鏈接或連接至細胞質域。在一些實施例中，短寡肽或多肽連接子（例如長度在2與10個胺基酸之間）可形成在跨膜域與胞內域之間的鏈接。在一些實施例中，連接子係甘胺酸-絲胺酸雙聯體(doublet) (SEQ ID NO: 104)。

在實施例中，本文所述之CAR包含來自CD28之TM域，其具有與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 56 (FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV (SEQ ID NO: 56))。在實施例中，來自CD28之TM域係由核酸編碼，該核酸與下列具有至少75%序列同一性（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：具有根據ttttgggtgctggtggtggttgggggagtcctggcttgctatagcttgctagtaacagtggcctttattattttctgggtg (SEQ ID NO: 57)之序列的核酸。

在實施例中，本文所述之CAR包含來自CD8α之TM及細胞間域，其具有與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 58 IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRN (SEQ ID NO: 58)。在實施例中，來自CD8α之TM域係由核酸編碼，該核酸與下列具有至少75%序列同一性（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：具有根據ATCTACATCTGGGCCCCTCTGGCCGGCACATGCGGAGTTCTTCTTCTTAGCCTGGTGATCACCCTGTACTGCAACCACAGAAAC (SEQ ID NO: 59)之序列的核酸。

本文所提供之跨膜域之多核苷酸及多肽序列係已知的。在一些實施例中，編碼跨膜域之多核苷酸包含與已知核苷酸序列至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%、或約100%（例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）同一的核苷酸序列。在一些實施例中，跨膜域之多肽序列包含與已知多肽序列至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%、或約100%（例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）同一的多肽序列。可選地，短間隔子可在CAR之任何或一些胞外、跨膜、及胞內域之間形成連接。

胞內域（或細胞質域）包含一或多個信號傳導域，其在目標抗原與結合模體結合後造成且/或介導胞內信號，該胞內信號例如活化一或多種免疫細胞效應功能（例如天然免疫細胞效應功能）。在一些實施例中，胞內域之信號傳導域介導免疫細胞之正常效應功能中之至少一者活化。T細胞之效應功能例如可係細胞溶解活性或輔助活性，其包含細胞介素之分泌。在一些實施例中，胞內域之信號傳導域介導T細胞活化、增生、存活、及/或其他T細胞功能。胞內域可包含為活化域的信號傳導域。胞內域可包含為共刺激信號傳導域的信號傳導域。

已知可在抗原結合至免疫細胞時轉導信號的胞內信號傳導域，其中任一者可包含於本揭露之抗原結合系統中。例如，已知T細胞受體(TCR)之細胞質序列會在TCR結合至抗原後起始信號轉導（參見例如Brownlie et al., Nature Rev. Immunol. 13:257-269 (2013)）。

在一些實施例中，本文所涵蓋之CAR包含胞內信號傳導域。「胞內信號傳導域」係指CAR之部分，其參與將有效CAR結合至目標抗原之訊息轉導至免疫效應細胞內部以引發效應細胞功能，例如活化、細胞介素產生、增生、及細胞毒性活性，包括細胞毒性因子至結合CAR之目標細胞的釋放、或與胞外CAR域結合之抗原引發的其他細胞反應。在一些實施例中，信號傳導域及/或活化域包含基於免疫受體酪胺酸之活化域(ITAM)。含有細胞質信號傳導序列之ITAM之實例包含衍生自TCR ζ、FcR γ、FcR β、CD3 ζ、CD3 γ、CD3 δ、CD3 ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b、及CD66d之彼等（參見例如Love et al., Cold Spring Harb. Perspect. Biol. 2:a002485 (2010); Smith-Garvin et al., Annu. Rev. Immunol. 27:591-619 (2009)）。在某些實施例中，合適的信號傳導域包含但不限於4-1BB/CD137、活化NK細胞受體、免疫球蛋白蛋白質、B7-H3、BAFFR、BLAME (SLAMF8)、BTLA、CD100 (SEMA4D)、CD103、CD160 (BY55)、CD18、CD19、CD19a、CD2、CD247、CD27、CD276 (B7-H3)、CD28、CD29、CD3δ、CD3ε、CD3γ、CD30、CD4、CD40、CD49a、CD49D、CD49f、CD69、CD7、CD84、CD8α、CD8β、CD96 (Tactile)、CD11a、CD11b、CD11c、CD11d、CDS、CEACAM1、CRT AM、細胞介素受體、DAP-10、DNAM1 (CD226)、Fcγ受體、GADS、GITR、HVEM (LIGHTR)、IA4、ICAM-1、ICAM-1、Igα (CD79a)、IL-2Rβ、IL-2Rγ、IL-7Rα、可誘導型T細胞共刺激劑(ICOS)、整合素、ITGA4、ITGA4、ITGA6、ITGAD、ITGAE、ITGAL、ITGAM、ITGAX、ITGB2、ITGB7、ITGB1、KIRDS2、LAT、LFA-1、LFA-1、與CD83結合之配體、LIGHT、LIGHT、LTBR、Ly9 (CD229)、Ly108)、淋巴球功能相關抗原1 (LFA-1; CD1-1a/CD18)、MHC第1型分子、NKG2C、NKG2D、NKp30、NKp44、NKp46、NKp80 (KLRF1)、OX-40、PAG/Cbp、程式性死亡1 (PD-1)、PSGL1、SELPLG (CD162)、信號傳導淋巴球性活化分子（SLAM蛋白）、SLAM (SLAMF1; CD150; IPO-3)、SLAMF4 (CD244; 2B4)、SLAMF6（NTB-A、SLAMF7、SLP-76、TNF受體蛋白、TNFR2、TNFSF14、鐸配體受體、TRANCE/RANKL、VLA1、或VLA-6、或其片段、截短、或組合。

用語「效應功能(effector function)」係指細胞之特定功能。T細胞之效應功能，例如可係細胞溶解活性或包括細胞介素之分泌之幫助或活性。因此，用語「胞內信號傳導域」係指蛋白質之部分，其轉導效應功能信號且引導細胞以執行特定功能。雖然通常可採用整個胞內信號傳導域，但在許多情況下，不必使用整個域。在使用胞內信號傳導域之截短部分的程度，只要其轉導效應功能信號，則可使用此類截短部分代替整個域。用語胞內信號傳導域意欲包括足以轉導效應功能信號之胞內信號傳導域之任何截短部分。

已知透過單獨TCR產生之信號不足於完全活化T細胞且亦可能需要二級或共刺激信號。因此，T細胞活化可說是藉由兩種不同類別的胞內信號傳導域介導：透過TCR（例如TCR/CD3複合物）起始抗原依賴性初級活化之初級信號傳導域及以抗原非依賴性方式作用之共刺激信號傳導域，以提供二級或共刺激信號。在一些實施例中，本文所設想之CAR包含含一或多個「共刺激信號傳導域」及「初級信號傳導域」之胞內信號傳導域。

在一些實施例中，信號傳導域及/或活化域包含基於免疫受體酪胺酸之活化模體(ITAM)。含有細胞質信號傳導序列之ITAM的實例包含衍生自TCRζ、FcRγ、FcRβ、CD3ζ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b、及CD66d者（參見例如Love et al., Cold Spring Harb. Perspect. Biol. 2:a002485 (2010); Smith-Garvin et al., Annu. Rev. Immunol. 27:591-619 (2009)）。在一些實施例中，CAR包含CD3ζ初級信號傳導域及一或多個共刺激信號傳導域。胞內初級信號傳導及共刺激信號傳導域可以任何順序串聯連接至跨膜域之羧基端。在一個實施例中，CAR具有CD3ζ域，該CD3ζ域具有與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 60。VKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (SEQ ID NO: 60)。在實施例中，CD3ζ域係由核酸編碼，該核酸與下列具有至少75%序列同一性（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：具有根據AGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACCAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGGCGTGGCCGGGACCCTGAGATGGGGGGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTACAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTACCAGGGTCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCCCCTCGC (SEQ ID NO: 61)之序列的核酸。在實施例中，CD3ζ域係由核酸編碼，該核酸與下列具有至少75%序列同一性（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：具有根據AGAGTTAAGTTCAGCAGGAGCGCCGACGCCCCTGCCTACCAGCAAGGACAGAATCAACTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAGGAATACGATGTGCTGGACAAGAGGAGAGGCAGAGACCCCGAGATGGGCGGCAAACCTAGAAGAAAGAACCCCCAGGAGGGCCTGTATAACGAGCTCCAGAAGGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAAAGAAGAAGAGGCAAGGGCCACGACGGCCTCTACCAGGGCTTAAGCACAGCTACAAAGGACACCTACGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCTAGA (SEQ ID NO: 106)之序列的核酸。

本文所涵蓋之CAR包含一或多個共刺激信號傳導域以增強T細胞表現CAR受體之功效及擴增。如本文所用，用語「共刺激信號傳導域」或「共刺激域」係指共刺激分子之胞內信號傳導域。

在某些實施例中，合適的信號傳導域包含但不限於4-1BB/CD137、活化NK細胞受體、免疫球蛋白蛋白質、B7-H3、BAFFR、BLAME (SLAMF8)、BTLA、CD100 (SEMA4D)、CD103、CD160 (BY55)、CD18、CD19、CD19a、CD2、CD247、CD27、CD276 (B7-H3)、CD28、CD29、CD3δ、CD3ε、CD3γ、CD30、CD4、CD40、CD49a、CD49D、CD49f、CD69、CD7、CD84、CD8α、CD8β、CD96 (Tactile)、CD11a、CD11b、CD11c、CD11d、CDS、CEACAM1、CRT AM、細胞介素受體、DAP-10、DAP-12、DNAM1 (CD226)、Fcγ受體、GADS、GITR、HVEM (LIGHTR)、IA4、ICAM-1、ICAM-1、Igα (CD79a)、IL-2Rβ、IL-2Rγ、IL-7Rα、可誘導型T細胞共刺激劑(ICOS)、整合素、ITGA4、ITGA4、ITGA6、ITGAD、ITGAE、ITGAL、ITGAM、ITGAX、ITGB2、ITGB7、ITGB1、KIRDS2、LAT、LFA-1、LFA-1、與CD83結合之配體、LIGHT、LIGHT、LTBR、Ly9 (CD229)、Ly108)、淋巴球功能相關抗原1 (LFA-1; CD1-1a/CD18)、MHC第1型分子、NKG2C、NKG2D、NKp30、NKp44、NKp46、NKp80 (KLRF1)、OX-40、PAG/Cbp、程式性死亡1 (PD-1)、PSGL1、SELPLG (CD162)、信號傳導淋巴球性活化分子（SLAM蛋白）、SLAM (SLAMF1; CD150; IPO-3)、SLAMF4 (CD244; 2B4)、SLAMF6（NTB-A、SLAMF7、SLP-76、TNF受體蛋白、TNFR2、TNFSF14、鐸配體受體、TRANCE/RANKL、VLA1、或VLA-6、或其片段、截短、或組合。

CAR可包含共刺激信號傳導域，例如以增加信號傳導效力。參見美國專利第7,741,465號及第6,319,494號、以及Krause et al. and Finney et al.（上述）、Song et al., Blood 119:696-706 (2012)；Kalos et al., Sci Transl. Med. 3:95 (2011)；Porter et al., N. Engl. J. Med. 365:725-33 (2011)、及Gross et al., Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 56:59-83 (2016)。透過單獨TCR產生的信號可能不足以完全活化T細胞，且二級或共刺激信號可增加活化。因此，在一些實施例中，信號傳導域進一步包含活化一或多種免疫細胞效應功能（例如本文所述之天然免疫細胞效應功能）的一或多個額外信號傳導域（例如共刺激信號傳導域）。在一些實施例中，可使用此類共刺激信號傳導域之一部分，只要該部分轉導效應功能信號即可。在一些實施例中，本文所述之細胞質域包含T細胞輔助受體（或其片段）之一或多個細胞質序列。共刺激域之非限制性實例包括但不限於4-1BB（亦稱為TNFRSF9、CD137、CDw137、ILA、及腫瘤壞死因子受體超家族成員9）、4-1BBL/CD137、BAFFR、BLAME (SLAMF8)、活化NK受體、BTLA（亦稱為CD272及BTLA1）、CARD1l、CD2（亦稱為LFA-2、SRBC、T11、及CD2分子）、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD4、CD7（亦稱為GP40、LEU-9、TP41、Tp40、及CD7分子）、CD8α、CD8β、CD11a、CD11b、CD11c、CD11d、CD18、CD19、CD19a、CD27（亦稱為S152、S152.LPFS2、T14、TNFRSF7、及Tp55）、CD28（亦稱為Tp44）、CD29、CD30（亦稱為TNFRSF8、D1S166E、及Ki-1）、CD40L（亦稱為CD40LG、CD154、HIGM1、IGM、IMD3、T-BAM、TNFSF5、TRAP、gp39、hCD40L、及CD40配體）、CD40（亦稱為Bp50、CDW40、TNFRSF5、p50、CD40（蛋白質）、及CD40分子）、CD49a、CD49D、CD49f、CD54 (ICAM)、CD69、CD80（亦稱為B7、B7-1、B7.1、BB1、CD28LG、CD28LG1、LAB7、及CD80分子）、CD83（及與CD83特異性結合之配體）、CD84、CD86、CD96 (Tactile)、CD100 (SEMA4D)、CD103、CD160（亦稱為BY55、NK1、NK28、及CD160分子）、CD244（亦稱為2B4、NAIL、NKR2B4、Nmrk、SLAMF4、及CD244分子）、CD247、CD276（亦稱為B7-H3、4Ig-B7-H3、B7H3、B7RP-2）、CD366、CDS、CEACAM1、CRT AM、細胞介素受體、DAP10、DNAM1 (CD226)、Fcγ受體、GADS、GITR（亦稱為TNFRSF18、RP5-902P8.2、AITR、CD357、及GITR-D）、GITRL、HVEM（亦稱為TNFRSF14、RP3-395M20.6、ATAR、CD270、HVEA、HVEM、LIGHTR、及TR2）、ICAM-1、ICOS（亦稱為可誘導型T細胞共刺激、AILIM、CD278、及CVID1）、Igα (CD79a)、IL2Rβ、IL2Rγ、IL7Rα、免疫球蛋白樣蛋白質、整合素、ITGA4、IA4、ITGA6、ITGAD、ITGAE、ITGAL、ITGAM、ITGAX、ITGB 1、ITGB2、ITGB7、KIRDS2、LAG3（亦稱為CD223及淋巴球活化3）、LAT、LFA-1（亦稱為淋巴球功能相關抗原1及CDl la/CD18）、LIGHT（亦稱為TNFSF14、CD258、HVEML、LTg、TR2、TNLG1D、及腫瘤壞死因子超家族成員14）、LTBR、Ly9 (CD229)、MHC I類分子、NKG2C（亦稱為CD314、D12S2489E、KLR、NKG2-D、NKG2D、及殺手細胞凝集素樣受體K1）、NKG2D、NKp30、NKp44、NKp46、NKp80 (KLRF1)、OX40（亦稱為TNFRSF4、ACT35、RP5-902P8.3、IMD16、CD134、TXGP1L、及腫瘤壞死因子受體超家組成員4）、PAG/Cbp、PD-1（亦稱為PDCD1、CD279、PD-1、SLEB2、hPD-1、hPD-l、hSLE1、及程式性細胞死亡1）、PD-L1（亦稱為CD274、B7-H、B7H1、PD-L1、PDCD1L1、PDCD1LG1、PDL1、CD274分子、及程式性細胞死亡1配體1）、PSGL1、SELPLG (CD162)、信號傳導淋巴球活化分子（SLAM蛋白質，諸如SLAM（SLAMF1、CD150、IPO-3）、SLAMF4（CD244、2B4）、SLAMF6（NTB-A、Lyl08）、及SLAMF7）、SLP76、TIM3（亦稱為HAVCR2、HAVcr-2、KIM-3、TIM3、TIMD-3、TIMD3、Tim-3、及A型肝炎病毒細胞受體2）、TNF受體蛋白質、TNFR2、鐸配體受體、TLRl、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10、TNFR2、TRANCE/RANKL、TRIM、VLAl、VLA-6、及ZAP70。例示性共刺激蛋白質具有天然存在於T細胞上之共刺激蛋白質之胺基酸序列，其共刺激蛋白質之完整天然胺基酸序列係描述於NCBI參考序列：NP_006130.1中。在某些情況下，CAR包含4-1BB共刺激域。

在實施例中，CAR包含CD28共刺激域，其具有與下列具有至少75%序列同一性胺基酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 62。RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS (SEQ ID NO: 62)。在實施例中，CD28共刺激域係由核酸編碼，該核酸與下列具有至少75%序列同一性（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：具有根據aggagtaagaggagcaggctcctgcacagtgactacatgaacatgactccccgccgccccgggcccacccgcaagcattaccagccctatgccccaccacgcgacttcgcagcctatcgctcc (SEQ ID NO: 63)之序列的核酸。

在實施例中，CAR包含4–1BB共刺激域，其具有與下列具有至少75%序列同一性胺基酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 64。RFSVVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL (SEQ ID NO: 64)。在實施例中，4–IBB共刺激域係由核酸編碼，該核酸與下列具有至少75%序列同一性（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：具有根據AGATTCAGCGTTGTGAAGAGAGGCCGGAAGAAGCTGCTGTACATCTTCAAGCAGCCCTTCATGAGACCTGTGCAGACCACACAGGAGGAAGACGGCTGCAGCTGTAGATTCCCCGAGGAAGAGGAGGGCGGCTGTGAGCTG (SEQ ID NO: 65)之序列的核酸。

本文所述之經工程改造之CAR亦可包含在scFv或抗原結合域之N端處之N端信號肽或標籤。在一個實施例中，可使用異源信號肽。可將抗原結合域或scFV融合至前導或信號肽，其將初生蛋白質引導至內質網且隨後轉位至細胞表面。應理解的是，一旦含有信號肽之多肽在細胞表面表現，信號肽通常在多肽於內質網中處理並轉位至細胞表面之期間被蛋白裂解移除。因此，諸如本文所描述之CAR構築體之多肽作為缺乏信號肽之成熟蛋白通常在細胞表面處表現，而多肽之前驅物形式包括信號肽。可使用所屬技術領域中已知之任何合適的信號序列。類似地，亦可使用所屬技術領域中已知之任何已知標籤序列。在一實施例中，信號序列係CSF2RA信號序列。在實施例中，CSF2RA信號序列具有與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIP (SEQ ID NO: 66) SEQ ID MEWTWVFLFLLSVTAGVHS (SEQ ID NO: 67)、或MALPVTALLLPLALLLHAARP (SEQ ID NO: 68)。

本文所提供之信號傳導域之多核苷酸及多肽序列係已知的。在一些實施例中，編碼信號傳導域之多核苷酸包含與已知核苷酸序列至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%、或約100%（例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）同一的核苷酸序列。在一些實施例中，信號傳導域之多肽序列包含與已知多肽序列至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%、或約100%（例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）同一的多肽序列。

CAR之組分可使用生物技術用於等效組分之常規技術交換或「對換(swapped)」。為僅提供幾個非限制性及部分實例，本揭露之CAR可包含如本文所提供之結合模體與本文所提供之鉸鏈及本文所提供之共刺激域之組合。在某些實例中，本揭露之CAR可包含前導序列連同如本文所提供之結合模體與本文所提供之鉸鏈及本文所提供之共刺激域的組合。

已知各種CAR序列、組分、及/或架構，其包含但不限於鉸鏈、間隔子、跨膜域、共刺激域、刺激域、結合模體、及各者之變體之序列，且若提供例如重鏈可變域序列或CDR序列、及輕鏈可變域序列或CDR序列，則可容易地構築具有所欲結合及組分或構造的CAR。

除非相反地規定，否則「多肽」、「多肽片段」、「肽」、及「蛋白質」係根據習知含義，即作為胺基酸序列。多肽不限於特定長度，例如其可包含全長蛋白質序列或全長蛋白質之片段，且可包括多肽之轉譯後修飾，例如醣基化、乙醯基化、磷酸化及類似者，以及所屬技術領域中天然存在及非天然存在之其他修飾。在各種實施例中，本文所設想之多肽包含在蛋白質之N端處之信號（或前導）序列，其共轉譯或轉譯後地引導蛋白質之轉移。

多肽包括「多肽變體」。多肽變體可與天然存在之多肽有一或多個取代、缺失、添加、及/或插入之不同。此類變體可係天然存在或可例如藉由修飾上述多肽序列中之一或多者而合成產生。例如，在一些實施例中，可為所欲的是藉由引入一或多個取代、缺失、添加、及/或插入來改善經工程改造之膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體及CAR及TCR之結合親和力及/或其他生物性質。較佳地，本揭露之多肽包括與其具有至少約50%、60%、65%、70%、75%、85%、90%、95%、98%、或99%胺基酸同一性之多肽。本揭露之多肽包括與本文所述之參考序列（參見例如序列表）中之任一者具有至少約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%序列同一性之變體，一般而言變體維持參考序列之至少一種生物活性。多肽包括「多肽片段」。多肽片段係指多肽，其可係單體或多聚體，其具有胺基端缺失、羧基端缺失、及/或天然存在或重組產生之多肽之內部缺失或取代。在某些實施例中，多肽片段可包含至少5至約500個胺基酸長之胺基酸鏈。應瞭解，在某些實施例中，片段係至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、150、200、250、300、350、400、或450個胺基酸長。

多肽亦可框內融合或接合至連接子或其他序列，以便於合成、純化或識別多肽（例如聚-His），或增強多肽至固體支撐物之結合。如上所述，本揭露之多肽可以各種方式改變，包括胺基酸取代、缺失、截短、及插入。此類操控之方法通常係所屬技術領域中已知的。例如，參考多肽之胺基酸序列變體可藉由DNA中之突變製備。用於突變誘發及核苷酸序列改變之方法係所屬技術領域中熟知的。參見例如Kunkel (1985, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 82: 488–492)、Kunkel et al., (1987, Methods in Enzymol, 154: 367–382)、美國專利第4,873,192號、Watson, J. D. et al., ( Molecular Biology of the Gene, Fourth Edition, Benjamin/Cummings, Menlo Park, Calif., 1987)及其中所引用之參考文獻。對於不影響所關注蛋白質之生物活性之適當胺基酸取代的指南可在Dayhoff et al., (1978) Atlas of Protein Sequence and Structure (Natl. Biomed. Res. Found., Washington, D.C.)之模型中發現。

在某些實施例中，變體將含有保守性取代。「保守性取代」係其中用一個胺基酸取代具有類似性質之另一胺基酸者，使得在肽化學技術領域中具有通常知識者將預期多肽之二級結構及疏水性(hydropathic)本質實質上不變。可在本揭露之多核苷酸及多肽之結構中進行修飾，且仍獲得編碼具有所欲特徵之變體或或衍生性多肽之功能性分子。

多肽變體進一步包括醣基化形式、與其他分子之聚集接合物、及與不相關化學部份（例如聚乙二醇化分子）之共價接合物。如所屬技術領域中所已知，共價變體可藉由將官能性連接至在胺基酸鏈中或在N端或C端殘基處發現之基團來製備。變體亦包括等位基因變體、物種變體、及突變蛋白質(mutein)。不影響蛋白質功能活性的區域之截短或缺失亦係變體。

當二或更多個多肽之表現係所欲者，可藉由IRES序列來分離編碼其之多核苷酸序列。在另一實施例中，二或更多個多肽可表現為包含一或多個自我剪切多肽序列之融合蛋白，諸如T2A多肽。在其他實施例中，其由不同啟動子表現，且可在兩個或更多個載體中。在一些實施例中，抗CD19 CAR係在與經工程改造之膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體相同的載體中編碼，且係可操作地連接至與經工程改造之膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體相同的啟動子，其中序列係由IRES序列分隔。在一些實施例中，抗CD19 CAR或TCR係在與經工程改造之膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體相同的載體中編碼，係可操作地連接至與經工程改造之膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體不同的啟動子。在某些實施例中，抗CD19及/或抗CD20 CAR或TCR係在亦已經工程改造以表現經工程改造之膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體的細胞上表現。在一些實施例中，抗CD19及/或抗CD20 CAR或TCR係在與經工程改造之膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體相同的載體中編碼，且係可操作地連接至與經工程改造之膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體相同的啟動子，其中序列係由IRES序列或可裂解連接子分隔。在一些實施例中，抗CD19及/或抗CD20 CAR CAR或TCR係在與經工程改造之膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體相同的載體中編碼，係可操作地連接至與經工程改造之膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體不同的啟動子。在某些實施例中，抗CD19及/或抗CD20 CAR結合CAR係在與經工程改造之膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體不同的載體中編碼。

抗CD19 CAR可包含於如本文所述之抗體中所發現之抗原結合序列（參見例如表5）。在一些實施例中，本揭露之抗CD19 CAR包含本文所提供之抗原結合片段。

在各種實施例中，抗CD19 CAR包含至少一個表5中所揭示之HCDR。在各種實施例中，抗CD19 CAR包含至少兩個表5中所揭示之HCDR。在各種實施例中，抗CD19 CAR包含三個表5中所揭示之HCDR。

在各種實施例中，抗CD19結合模體包含至少一個表5中所揭示之LCDR。在各種實施例中，抗CD19 CAR包含至少兩個表5中所揭示LCDR。在各種實施例中，抗CD19 CAR包含三個表5中所揭示之LCDR。

在各種實施例中，抗CD19 CAR包含至少一個表5中所揭示之HCDR、及至少一個表5中所揭示之LCDR。在各種實施例中，抗CD19結合模體包含至少兩個表5中所揭示之HCDR、及至少兩個表5中所揭示之LCDR。在各種實施例中，抗CD19結合模體包含三個表5中所揭示之HCDR、及三個表5中所揭示之LCDR。

在各種實施例中，抗CD19結合模體包含至少一個表5中所揭示之重鏈可變域之重鏈架構區（重鏈FR）。在各種實施例中，抗CD19結合模體包含至少兩個表5中所揭示之重鏈可變域之重鏈FR。在各種實施例中，抗CD19結合模體包含三個表5中所揭示之重鏈可變域之重鏈FR。

在各種實施例中，抗CD19結合模體包含至少一個表5中所揭示之輕鏈可變域之輕鏈FR。在各種實施例中，抗CD19結合模體包含至少兩個表5中所揭示之輕鏈可變域之輕鏈FR。在各種實施例中，抗CD19結合模體包含三個表5中所揭示之輕鏈可變域之輕鏈FR。

在各種實施例中，抗CD19 CAR包含至少一個表5中所揭示之重鏈可變域之重鏈FR、及至少一個表5中所揭示之輕鏈可變域之輕鏈FR。在各種實施例中，抗CD19 CAR包含至少兩個表5中所揭示之重鏈可變域之重鏈FR、及至少兩個表5中所揭示之輕鏈可變域之輕鏈FR。在各種實施例中，抗CD19 CAR包含三個表5中所揭示之重鏈可變域之重鏈FR、及三個表5中所揭示之輕鏈可變域之輕鏈FR。

在各種實施例中，抗CD19 CAR包含一、二、或三個FR，其一起或各自個別地與下列具有至少75%同一性（例如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：表5中所揭示之重鏈可變域之重鏈可變域之（多個）對應FR。在各種實施例中，抗CD19 CAR包含一、二、或三個FR，其一起或各自個別地與下列具有至少75%同一性（例如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：表5中所揭示之輕鏈可變域之輕鏈可變域之（多個）對應FR。

在各種實施例中，抗CD19 CAR包含至少一個重鏈可變域，其與表5中所揭示之重鏈可變域具有至少75%序列同一性（例如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）。在各種實施例中，抗CD19 CAR包含至少一個輕鏈可變域，其與表5中所揭示之輕鏈可變域具有至少75%序列同一性（例如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）。

在各種實施例中，抗CD19 CAR包含至少一個重鏈可變域，其與表5中所揭示之重鏈可變域具有至少75%序列同一性（例如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）；及至少一個輕鏈可變域，其與表5中所揭示之輕鏈可變域具有至少75%序列同一性（例如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）。

在某些實施例中，抗CD19 CAR包含結合模體，其包含本揭露之重鏈可變域、本揭露之輕鏈可變域、及與SEQ ID NO: 45具有至少75%序列同一性之連接子（例如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）。在某些實施例中，抗CD19 CAR包含結合模體，其包含本揭露之重鏈可變域、本揭露之輕鏈可變域、及與SEQ ID NO: 66具有至少75%序列同一性之前導序列（例如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）。表5 ：例示性抗CD19 序列

SEQ ID NO:	描述	序列
69	重鏈可變域	EVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSS
70	CDRH1 IMGT (Prot)	GVSLPDYG
71	CDRH1 Kabat (Prot)	DYGVS
72	CDRH1 Chothia (Prot)	GVSLPDY
73	CDRH2 IMGT (Prot)	IWGSETT
74	CDRH2 Kabat (Prot)	VIWGSETTYYNSALKS
75	CDRH2 Chothia (Prot)	WGSET
76	CDRH3 IMGT (Prot)	AKHYYYGGSYAMDY
77	CDRH3 Kabat (Prot)	HYYYGGSYAMDY
78	CDRH3 Chothia (Prot)	HYYYGGSYAMDY
79	輕鏈可變域	DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEIT
80	CDRL1 IMGT (Prot)	RASQDISKYLN
81	CDRL1 Kabat (Prot)	RASQDISKYLN
82	CDRL1 Chothia (Prot)	RASQDISKYLN
83	CDRL2 IMGT (Prot)	HTSRLHS
84	CDRL2 Kabat (Prot)	HTSRLHS
85	CDRL2 Chothia (Prot)	HTSRLHS
86	CDRL3 IMGT (Prot)	QQGNTLPYT
87	CDRL3 Kabat (Prot)	QQGNTLPYT
88	CDRL3 Chothia (Prot)	QQGNTLPYT
89	結合模體(Prot)	DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSS

在一實施例中，抗CD19 CAR具有與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 90。DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (SEQ ID NO: 90)。在實施例中，抗CD19 CAR係由核酸編碼，該核酸與下列具有至少75%序列同一性（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：具有根據：GACATTCAGATGACCCAGACCACCAGCAGCCTGAGCGCCAGCTTAGGAGATAGAGTTACCATCAGCTGCAGAGCCAGCCAGGACATCAGCAAATACCTGAACTGGTATCAGCAGAAGCCCGACGGCACTGTGAAACTGCTTATTTACCACACCTCCAGACTGCACAGCGGCGTTCCCAGCAGATTCTCTGGCAGCGGATCTGGAACCGACTACAGCCTCACCATCTCCAACCTGGAGCAGGAGGACATCGCCACCTACTTCTGCCAGCAGGGCAACACACTGCCCTACACCTTCGGAGGAGGAACCAAGCTGGAGATCACCGGCTCCACCTCTGGATCCGGCAAGCCCGGATCTGGCGAGGGATCCACCAAGGGCGAGGTTAAGCTGCAGGAGAGCGGCCCTGGCCTGGTGGCTCCTAGCCAATCTTTATCTGTGACCTGCACTGTGTCCGGCGTTAGCCTGCCCGATTATGGCGTTTCCTGGATCAGACAGCCCCCCAGAAAGGGCCTGGAATGGCTGGGCGTTATCTGGGGCAGCGAGACCACATACTACAACAGCGCCCTGAAGAGCAGACTTACGATTATCAAGGACAACAGCAAGAGCCAGGTTTTCCTGAAGATGAACAGCCTGCAGACCGACGACACCGCCATCTACTACTGCGCTAAGCACTACTACTACGGCGGCAGCTACGCCATGGACTACTGGGGCCAGGGAACAAGCGTTACCGTTAGCAGCGCTGCTGCAATTGAAGTTATGTATCCTCCTCCTTACCTGGACAACGAGAAGAGCAACGGCACCATCATCCACGTTAAGGGCAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGACCTTCTAAGCCTTTCTGGGTTCTGGTGGTGGTCGGCGGCGTTTTAGCCTGTTACAGCCTTCTGGTGACTGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTTAGAAGCAAGAGAAGCAGACTGCTCCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCTGGCCCCACCAGAAAGCATTACCAGCCCTACGCTCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGGAGCAGAGTTAAATTCAGCAGATCCGCCGATGCCCCCGCTTACCAACAGGGACAAAACCAGCTGTACAATGAGCTCAACCTGGGGAGAAGAGAAGAATACGACGTTCTGGATAAGAGAAGGGGCAGAGATCCCGAAATGGGGGGCAAGCCCAGACGCAAGAACCCTCAGGAGGGGCTTTACAACGAACTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAGGCTTACTCGGAGATTGGGATGAAGGGGGAGAGAAGGCGGGGCAAGGGACACGATGGCTTATACCAGGGGCTGAGCACCGCCACCAAGGACACATACGACGCTCTTCATATGCAGGCTCTGCCCCCAAGA (SEQ ID NO: 91)之序列的核酸。

在一實施例中，連接至膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體之抗CD19 CAR具有與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 92。DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSGEGRGSLLTCGDVEENPGPMDWTWILFLVAAATRVHSEQKLISEEDLAGSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDGGGGSGGGGSRSNLGWLCLLLLPIPLIVWVKRKEVQKT (SEQ ID NO: 92)。在實施例中，連接至膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體之抗CD19 CAR係由核酸編碼，該核酸與下列具有至少75%序列同一性（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：具有根據：GACATCCAGATGACACAGACTACATCCTCCCTGTCTGCCTCTCTGGGAGACAGAGTCACCATCAGTTGCAGGGCAAGTCAGGACATTAGTAAATATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGATGGAACTGTTAAACTCCTGATCTACCATACATCAAGATTACACTCAGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGAACAGATTATTCTCTCACCATTAGCAACCTGGAGCAAGAAGATATTGCCACTTACTTTTGCCAACAGGGTAATACGCTTCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACTAAGTTGGAAATAACAGGCTCCACCTCTGGATCCGGCAAGCCCGGATCTGGCGAGGGATCCACCAAGGGCGAGGTGAAACTGCAGGAGTCAGGACCTGGCCTGGTGGCGCCCTCACAGAGCCTGTCCGTCACATGCACTGTCTCAGGGGTCTCATTACCCGACTATGGTGTAAGCTGGATTCGCCAGCCTCCACGAAAGGGTCTGGAGTGGCTGGGAGTAATATGGGGTAGTGAAACCACATACTATAATTCAGCTCTCAAATCCAGACTGACCATCATCAAGGACAACTCCAAGAGCCAAGTTTTCTTAAAAATGAACAGTCTGCAAACTGATGACACAGCCATTTACTACTGTGCCAAACATTATTACTACGGTGGTAGCTATGCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACAGTCTCCTCAGCGGCCGCAATTGAAGTTATGTATCCTCCTCCTTACCTAGACAATGAGAAGAGCAATGGAACCATTATCCATGTGAAAGGGAAACACCTTTGTCCAAGTCCCCTATTTCCCGGACCTTCTAAGCCCTTTTGGGTGCTGGTGGTGGTTGGGGGAGTCCTGGCTTGCTATAGCTTGCTAGTAACAGTGGCCTTTATTATTTTCTGGGTGAGGAGTAAGAGGAGCAGGCTCCTGCACAGTGACTACATGAACATGACTCCCCGCCGCCCCGGGCCCACCCGCAAGCATTACCAGCCCTATGCCCCACCACGCGACTTCGCAGCCTATCGCTCCAGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACCAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGGCGTGGCCGGGACCCTGAGATGGGGGGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTACAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTACCAGGGTCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCCCCTCGCGGCTCTGGCGAAGGCAGAGGCTCTCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAAGAGAACCCAGGCCCCATGGACTGGACATGGATTCTGTTTCTTGTGGCTGCCGCCACAAGAGTGCACAGCGAGCAGAAGCTGATCAGCGAGGAAGACCTCGCTGGAAGCAATTGGGTGAACGTGATCTCCGACCTCAAAAAGATCGAGGATCTGATCCAGTCCATGCACATCGATGCCACACTCTACACCGAGTCCGATGTGCACCCTAGCTGCAAAGTTACAGCAATGAAATGCTTTCTGCTGGAGTTGCAAGTAATCTCCCTGGAGTCCGGAGATGCTTCCATCCACGACACAGTGGAGAATTTAATCATTCTGGCTAACAATTCCCTCTCGTCTAATGGCAATGTCACTGAGAGCGGCTGTAAAGAGTGTGAAGAGCTGGAGGAGAAAAACATCAAAGAGTTTCTGCAGAGCTTCGTCCACATCGTCCAAATGTTCATCAACACCTCGTCCGGGGGCGGCTCCGGGGGAGGAGGATCGGGGGGAGGAGGAAGCGGAGGTGGAGGAAGCGGTGGAGGGTCCATTACATGCCCTCCCCCCATGTCCGTGGAACATGCCGACATATGGGTAAAGTCCTACTCTCTGTACTCGCGGGAACGTTATATCTGCAACAGCGGCTTTAAGAGAAAGGCCGGAACATCTTCTCTGACCGAATGTGTGCTGAACAAGGCCACAAATGTGGCTCACTGGACCACGCCTAGCCTCAAGTGTATTAGGGACGGCGGCGGAGGTTCCGGTGGCGGGGGCTCTAGATCGAATCTGGGCTGGCTGTGTCTGCTGCTGCTCCCCATCCCTCTGATTGTGTGGGTTAAGCGAAAAGAGGTCCAGAAAACCTAA (SEQ ID NO: 93)之序列的核酸。

適用於本文所揭示之CAR、載體、細胞、及方法的例示性抗CD20抗體及其片段可見於2020年6月18日公開之國際專利公開案第WO/2020/123691號中，其全文以引用方式具體併入本文中。在一實施例中，抗CD20 CAR具有與下列具有至少75%序列同一性之胺基酸序列（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：SEQ ID NO: 107。QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFKEYGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYSGHTYYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARGPHYDDWSGFIIWFDPWGQGTLVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYRFPPTFGQGTKVEIKAAAFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRFSVVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (SEQ ID NO: 107)。在實施例中，抗CD20 CAR係由核酸編碼，該核酸與下列具有至少75%序列同一性（諸如至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%同一性；例如85至90%、85至95%、85至100%、90至95%、90至100%、或95至100%）：具有根據：CAGGTTCAGCTTGTGCAGAGCGGAGCTGAAGTTAAGAAGCCTGGCGCCTCTGTGAAGGTTAGCTGCAAGGCCAGCGGCTACACATTCAAGGAATATGGCATCTCCTGGGTTAGGCAGGCTCCCGGCCAAGGCTTAGAATGGATGGGCTGGATCTCCGCCTACTCCGGCCACACCTACTACGCCCAGAAGCTTCAGGGCAGGGTTACCATGACCACCGACACCAGCACCTCTACCGCCTATATGGAGCTGAGGAGCCTGAGATCGGACGACACAGCTGTGTATTACTGCGCCAGAGGCCCCCACTACGACGACTGGTCTGGATTTATCATCTGGTTCGACCCCTGGGGGCAGGGCACCCTGGTCACAGTTTCTTCTGGCTCCACCAGCGGAAGCGGCAAGCCAGGCTCAGGCGAAGGATCTACAAAAGGCGACATCCAAATGACACAGAGCCCCAGCAGCTTGAGCGCCTCCGTTGGCGACAGAGTTACAATCACCTGCAGGGCCTCTCAGAGCATCAGCAGCTATTTGAATTGGTATCAACAGAAGCCAGGAAAGGCCCCTAAGCTGCTCATCTACGCTGCCAGCTCGCTCCAATCTGGCGTTCCTAGCAGATTTAGCGGCTCCGGCAGCGGCACAGACTTTACTCTTACCATTAGCTCCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCTACCTACTATTGCCAGCAAAGCTACAGATTCCCTCCCACCTTTGGCCAGGGCACAAAGGTTGAGATCAAGGCAGCTGCTTTCGTGCCTGTGTTCCTGCCTGCTAAGCCCACCACCACTCCTGCTCCAAGACCTCCTACCCCCGCTCCTACAATCGCCAGCCAACCTCTGAGCCTGAGACCGGAGGCATGCAGACCTGCGGCAGGGGGAGCAGTTCACACAAGAGGCTTGGACTTCGCTTGCGACATCTACATCTGGGCCCCTCTGGCCGGCACATGCGGAGTTCTTCTTCTTAGCCTGGTGATCACCCTGTACTGCAACCACAGAAACAGATTCAGCGTTGTGAAGAGAGGCCGGAAGAAGCTGCTGTACATCTTCAAGCAGCCCTTCATGAGACCTGTGCAGACCACACAGGAGGAAGACGGCTGCAGCTGTAGATTCCCCGAGGAAGAGGAGGGCGGCTGTGAGCTGAGAGTTAAGTTCAGCAGGAGCGCCGACGCCCCTGCCTACCAGCAAGGACAGAATCAACTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAGGAATACGATGTGCTGGACAAGAGGAGAGGCAGAGACCCCGAGATGGGCGGCAAACCTAGAAGAAAGAACCCCCAGGAGGGCCTGTATAACGAGCTCCAGAAGGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAAAGAAGAAGAGGCAAGGGCCACGACGGCCTCTACCAGGGCTTAAGCACAGCTACAAAGGACACCTACGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCTAGA (SEQ ID NO: 108)之序列的核酸。

本揭露亦提供編碼本文所述之各種膜結合IL-15-IL-15Rα嵌合多肽中之任一者、或CAR或TCR中之任一者的核酸。在一個實施例中，重組核酸構築體包含編碼膜結合IL-15-IL-15Rα嵌合多肽（可選地具有一或多個CAR或TRC）之核酸分子。

本揭露包含載體，其包含本揭露之核酸及/或編碼本揭露之膜結合IL-15-IL-15Rα嵌合多肽的核酸（可選地與編碼本文所述之CAR或TCR中之任一者的核酸組合）。任何載體皆可適用於本揭露。在一些實施例中，載體係病毒載體。在一些實施例中，載體係反轉錄病毒載體、DNA載體、鼠類白血病病毒載體、SFG載體、質體、RNA載體、腺病毒載體、桿狀病毒載體、艾司坦-巴爾病毒載體、乳多泡病毒載體、牛痘病毒載體、單純疱疹病毒載體、腺病毒相關載體(AAV)、慢病毒載體、或其任何組合。合適的例示性載體包括例如pGAR、pBABE-puro、pBABE-neo大TcDNA、pBABE-hygro-hTERT、pMKO.1 GFP、MSCV-IRES-GFP、pMSCV PIG（Puro IRES GFP空質體）、pMSCV-loxp-dsRed-loxp-eGFP-Puro-WPRE、MSCV IRES螢光素酶、pMIG、MDH1-PGK-GFP_2.0、TtRMPVIR、pMSCV-IRES-mCherry FP、pRetroX GFP T2A Cre、pRXTN、pLncEXP、及pLXIN-Luc。

重組表現載體可係任何合適的重組表現載體。合適的載體包含經設計用於增殖及擴增、或用於表現、或兩者之載體，諸如質體及病毒。例如，載體可選自pUC系列(Fermentas Life Sciences, Glen Burnie, Md.)、pBluescript系列(Stratagene, LaJolla, Calif.)、pET系列(Novagen, Madison, Wis.)、pGEX系列(Pharmacia Biotech, Uppsala, Sweden)、及pEX系列(Clontech, Palo Alto, Calif.)。亦可使用噬菌體載體，諸如λGT10、λGT11、λZapII (Stratagene)、λEMBL4、及λNM1149。可用於本揭露之背景下的植物表現載體之實例包含pBI01、pBI101.2、pBI101.3、pBI121、及pBIN19 (Clontech)。可用於本揭露之背景下的動物表現載體之實例包含pcDNA、pEUK-Cl、pMAM、及pMAMneo (Clontech)。在一些實施例中，雙順反子(bicistronic) IRES載體（例如來自Clontech）係用於包含編碼抗原結合系統之核酸及本文所述之可誘導型表現構築體兩者。

重組表現載體可使用描述於例如下列中之標準重組DNA技術製備：Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd ed., Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y. 2001；及Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and John Wiley & Sons, NY, 1994。可將表現載體之構築體（其係環狀或線性）製備成含有在原核或真核宿主細胞中發揮功能的複製系統。複製系統可衍生自例如ColEl、2 µ質體、λ、SV40、牛乳突病毒、及類似者。

重組表現載體可包含一或多個允許選擇經轉化或轉染宿主的標記基因。標記基因包含殺生物劑抗性（例如對抗生素、重金屬等具有抗性）、在營養缺陷型宿主(auxotrophic host)中互補以提供原養(prototrophy)、及類似者。適用於重組表現載體之標記基因包含例如新黴素/G418抗性基因、嘌呤黴素抗性基因、潮黴素抗性基因、組胺醇抗性基因、四環素抗性基因、及安比西林抗性基因。

可用於本揭露之背景下的載體可係「裸(naked)」核酸載體（亦即載體幾乎不具有或不具有包封其的蛋白質、糖、及/或脂質）、或與其他分子複合的載體。可適合地與載體組合的其他分子包含但不限於病毒外殼、陽離子脂質、微脂體、多胺、金粒子、及靶向部份（諸如靶向細胞分子之配體、受體、或抗體）。

在某些實施例中，可將膜結合IL-15-IL-15Rα嵌合多肽及CAR或TCR構築在單一多順反子表現卡匣中、在單一載體之多個表現卡匣中、或在多個載體中。在一個實施例中，本揭露提供載體之集合，其包括第一載體及第二載體，第一載體包括編碼本文所述之膜結合IL-15-IL-15Rα嵌合多肽中之任一者的序列，第二載體包括編碼CAR或TCR之序列。在一些實施例中，第一載體及第二載體中之一或兩者係慢病毒、反轉錄病毒、或腺病毒載體。在一些實施例中，第二載體進一步包括可操作地連接至編碼CAR或TCR之序列的啟動子序列及/或增強子序列。在一些實施例中，第二載體進一步包括可操作地連接至編碼CAR或TCR之序列的poly(A)序列。在一個實施例中，本揭露提供多順反子表現卡匣。產生多順反子表現卡匣之元件的實例包括但不限於各種病毒及非病毒內部核糖體進入位點（IRES，例如FGF-1 IRES、FGF-2 IRES、VEGF IRES、IGF-II IRES、NF-KB IRES、RUNX1 IRES、p53 IRES、A型肝炎IRES、C型肝炎IRES、瘟疫病毒(pestivirus) IRES、口蹄疫病毒IRES、小核糖核酸病毒IRES、脊髓灰白質炎病毒病毒IRES、及腦心肌炎病毒IRES）及可裂解連接子（例如2A肽，例如P2A、T2A、E2A、及F2A肽）。反轉錄病毒載體及適當的包裝系(packaging line)之組合亦係合適的，其中殼體蛋白將具有感染人類細胞的功能。已知各種產生雙嗜性病毒(amphotropic virus)之細胞系，包括但不限於PA12 (Miller et al., 1985, Mol. Cell. Biol. 5:431-437)；PA317 (Miller et al., 1986, Mol. Cell. Biol. 6:2895-2902)；及CRIP (Danos et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:6460-6464)。非雙嗜性粒子亦係合適的，例如用VSVG、RD114、或GALV套膜假型化(pseudotyped)的粒子及任何其他所屬技術領域中已知的粒子。

載體DNA可經由習知轉化、轉染、或轉導技術引入細胞（例如免疫細胞）中。用語「轉化(transformation)」及「轉染(transfection)」涵蓋各種用於將外來核酸（例如DNA）引入細胞中之所屬技術領域公認的技術，諸如磷酸鈣或氯化鈣共沉澱、DEAE-右旋糖酐介導之轉染、脂轉染(lipofection)、基因槍、奈米粒子介導之遞送、或電穿孔。轉導包含例如藉由本文所揭示之載體將載體病毒遞送至細胞，載體包含但不限於反轉錄病毒、慢病毒、及AAV。

本揭露包含細胞，該等細胞包含、表現本揭露之至少一種載體或核酸、或經工程改造（例如轉化或轉導）以包含或表現本揭露之至少一種載體或核酸。在一個實施例中，本揭露提供細胞(1)，其包含(a) CAR或TCR、及(b)膜結合IL-15-IL-15Rα嵌合多肽。可將免疫細胞用CAR或TCR及膜結合IL-15-IL-15Rα嵌合多肽轉導，使得細胞表現CAR或TCR及膜結合IL-15-IL-15Rα嵌合多肽。

可容易地將嵌合抗原受體（CAR或CAR-T）及經工程改造之T細胞受體(TCR)插入免疫細胞（例如T細胞）中並由其表現。在某些實施例中，細胞（例如免疫細胞，諸如T細胞、NK細胞、或誘導性多能幹細胞(induced pluripotent stem cell, iPSC)）係獲自捐贈者對象。在一些實施例中，捐贈者對象係罹患癌症或腫瘤之人類患者。在其他實施例中，捐贈者對象係未罹患癌症或腫瘤之人類患者。在一些實施例中，經工程改造之細胞對對象係自體的。在一些實施例中，經工程改造之細胞對對象係同種異體的。

在某些實施例中，目前揭示之免疫細胞例如具有增加的抗腫瘤細胞介素之分泌，包括但不限於IL-18、IL-2、IFN-γ、及TNF-α。在某些實施例中，免疫細胞具有減少的與細胞介素釋放症候群(CRS)相關的細胞介素之分泌，例如IL-6。

任何細胞可用作本揭露之多核苷酸、載體、或多肽的宿主細胞。在一些實施例中，細胞可係原核細胞、真菌細胞、酵母細胞、或高等真核細胞，諸如哺乳動物細胞。合適的原核細胞包括但不限於真細菌，諸如革蘭氏陰性或革蘭氏陽性生物體，例如腸內菌科(Enterobactehaceae)，諸如大腸桿菌屬，例如大腸桿菌；腸桿菌屬；伊文氏桿菌屬；克留氏菌屬；變形桿菌屬；沙氏桿菌屬，例如鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella typhimurium)；鋸桿菌屬，例如黏質沙門氏菌(Serratia marcescans)、及志賀桿菌(Shigella)；桿菌，諸如枯草芽孢桿菌(B. subtilis)、及地衣芽孢桿菌(B. licheniformis)；假單孢菌屬，諸如綠膿桿菌(P. aeruginosa)；及鏈黴菌屬。在一些實施例中，細胞係人類細胞。在一些實施例中，細胞係免疫細胞。在一些實施例中，免疫細胞係選自由下列所組成之群組：T細胞、B細胞、腫瘤浸潤淋巴球(TIL)、TCR表現性細胞、自然殺手(NK)細胞、樹突細胞、顆粒球、先天性淋巴細胞、巨核細胞、單核球、巨噬細胞、血小板、胸腺細胞、及骨髓細胞。在一個實施例中，免疫細胞係T細胞。在另一實施例中，免疫細胞係NK細胞。在某些實施例中，T細胞係腫瘤浸潤淋巴球(TIL)、自體T細胞、經工程改造之自體T細胞(eACT™)、同種異體T細胞、異源T細胞、iPSC細胞、或其任何組合。

在一個實施例中，將如本文所提供之膜結合IL-15-IL-15Rα嵌合多肽及/或CAR或TCR引入T細胞中。T細胞可來自所屬技術領域中已知的任何來源。例如，T細胞可體外分化自造血幹細胞群，或T細胞可獲自對象。T細胞可得自例如周邊血液單核細胞(PBMC)、骨髓、淋巴結組織、臍帶血、胸腺組織、來自感染部位之組織、腹水、胸膜積水、脾臟組織、及腫瘤。此外，T細胞可衍生自所屬技術領域中可得之一或多種T細胞系。T細胞亦可得自使用熟習技藝人士已知之多種技術（諸如FICOLL™分離及/或血球分離術）收集自對象的血液單元。在一些實施例中，將藉由血球分離術收集之細胞洗滌以移除血漿部分，並置於適當緩衝劑或培養基中以用於後續處理。在一些實施例中，細胞係用PBS洗滌。如將理解的是，可使用洗滌步驟，諸如藉由使用半自動順流(flow through)離心機，例如CobeTM 2991細胞處理機、Baxter CytoMateTM、或類似者。在一些實施例中，經洗滌細胞係再懸浮於一或多種生物相容緩衝劑、或其他有或無緩衝劑之鹽水溶液中。在一些實施例中，血球分離術樣本之非所欲組分係經移除。用於T細胞療法之單離T細胞的額外方法係揭示於美國專利公開案第2013/0287748號、及國際專利申請公開案第WO2015/120096號及第WO2017/070395號中，出於描述此等方法之目的，所有該等文獻之全文以引用方式整體併入本文中。

在一些實施例中，T細胞係單離自PBMC，方式為溶解紅血球及去除單核球，例如藉由使用透過PERCOLL ^TM梯度之離心。在一些實施例中，特定T細胞亞群（諸如CD4+、CD8+、CD28+、CD45RA+、及CD45RO+ T細胞）係藉由所屬技術領域中已知之正向或負向選擇技術進一步單離。例如，藉由負向選擇之T細胞群富集可用針對負向選擇細胞特有之表面標記的抗體之組合達成。在一些實施例中，可使用經由負向磁性免疫黏附或流動式細胞測量術之細胞分選及/或選擇，其使用針對存在於負向選擇細胞上之細胞表面標記的單株抗體混合物。例如，為了藉由負向選擇來富集CD4+細胞，單株抗體混合物一般包括針對CD8、CD11b、CD14、CD16、CD20、及HLA-DR之抗體。在一些實施例中，使用流動式細胞測量術及細胞分選來單離用於本揭露之所關注細胞群。

在一些實施例中，PBMC係直接用於使用本文所述之方法用免疫細胞進行基因修飾。在一些實施例中，在單離PBMC後，將T淋巴球進一步單離，並且在基因修飾及/或擴增前或後將細胞毒性及輔助T淋巴球分選為初始、記憶、及效應T細胞亞群。在一些實施例中，CD8+細胞係進一步分選為初始、中央記憶、及效應細胞，其係藉由識別與此等類型的CD8+細胞中之各者相關之細胞表面抗原。在一些實施例中，中央記憶T細胞之表型標記之表現包括CCR7、CD3、CD28、CD45RO、CD62L、及CD127，且對顆粒酶B呈陰性。在一些實施例中，中央記憶T細胞係CD8+、CD45RO+、及CD62L+ T細胞。在一些實施例中，效應T細胞對於CCR7、CD28、CD62L、及CD127係陰性且對於顆粒酶B及穿孔蛋白係陽性。在一些實施例中，CD4+ T細胞係進一步分選為亞群。例如，CD4+輔助T細胞可分選為初始、中央記憶、及效應細胞，其係藉由識別具有細胞表面抗原之細胞群。

在一些實施例中，將免疫細胞（例如NK細胞或T細胞）在使用已知方法單離後基因修飾，或在將免疫細胞基因修飾前將其在體外活化及擴增（或在先驅細胞之情況下分化）。在另一實施例中，將免疫細胞（例如NK細胞或T細胞）用如本文所述之CAR或TCR基因修飾（例如用包含一或多種編碼CAR或TCR之核苷酸序列的病毒載體轉導），可選地用膜結合IL-15-IL-15Rα嵌合多肽基因修飾（例如用包含一或多種編碼膜結合IL-15-IL-15Rα嵌合多肽之核苷酸序列的病毒載體轉導），接著在體外活化及/或擴增。用於活化及擴增T細胞之方法係所屬技術領域中已知的且描述於例如美國專利第6,905,874；第6,867,041號；及6,797,514號；及國際專利申請公開案第WO 2012/079000號，其內容全文特此以引用方式併入本文中。大致上，此類方法包括使PBMC或經單離T細胞在具有適當細胞介素（諸如IL-2）之培養基中與刺激劑及共刺激劑（諸如抗CD3及抗CD28抗體，通常附接至珠或其他表面）接觸。附接至相同珠之抗CD3及抗CD28抗體作為「代理(surrogate)」抗原呈現細胞(APC)。一個實例係Dynabeads®系統，其係用於生理活化人類T細胞之CD3/CD28活化劑/刺激劑系統。在其他實施例中，使用諸如描述於美國專利第6,040,177號及第5,827,642號及國際專利申請公開案第WO 2012/129514號中之方法，將T細胞用餵養細胞及適當抗體及細胞介素活化及刺激以增生，其內容全文特此以引用方式併入本文中。

本文所述之方法可進一步包含富集獲自捐贈者之淋巴球群。淋巴球群（例如一或多種T細胞）之富集可藉由任何合適的分離方法實現，包括但不限於使用分離培養基（例如FICOLL-PAQUE™、ROSETTESEP™ HLA總淋巴球富集混合物、淋巴球分離培養基(Lymphocyte Separation Medium, LSA)（MP Biomedical目錄號0850494X）、或類似者）、藉由過濾或淘析進行的細胞大小、形狀、或密度分離、免疫磁性分離（例如磁性活化細胞分選系統(MACS)）、螢光分離（例如螢光活化細胞分選系統(FACS)）、或基於珠之管柱分離。

本文所述之方法可進一步包含在合適條件下用一或多種T細胞刺激劑刺激淋巴球群，以產生經活化之T細胞群。一或多種合適的T細胞刺激劑之任何組合皆可用於產生經活化之T細胞群，包括但不限於靶向T細胞刺激或共刺激分子之抗體或其功能片段（例如抗CD2抗體、抗CD3抗體、抗CD28抗體、或其功能片段）、或任何其他合適的促分裂原(mitogen)（例如佛波醇十四烷醯乙酸酯(TPA)、植物血凝素(PHA)、刀豆球蛋白A (conA)、脂多醣(LPS)、商陸促分裂原(PWM)）、或T細胞刺激或共刺激分子之天然配體。

如本文所述之用於刺激淋巴球群的合適條件可包括溫度、時間量、及/或在一定水平的CO ₂之存在下。在某些實施例中，用於刺激之溫度係約34℃、約35℃、約36℃、約37℃、或約38℃。在某些實施例中，用於刺激之溫度係約34至38℃。在某些實施例中，用於刺激之溫度係約35至37℃。在某些實施例中，用於刺激之溫度係約36至38℃。在某些實施例中，用於刺激之溫度係約36至37℃或約37℃。

如本文所述之用於刺激淋巴球群的另一條件可包括用於刺激之時間。在一些實施例中，用於刺激之時間係約24至72小時。在一些實施例中，用於刺激之時間係約24至36小時、約30至42小時、約36至48小時、約40至52小時、約42至54小時、約44至56小時、約46至58小時、約48至60小時、約54至66小時、或約60至72小時。在一個特定實施例中，用於刺激之時間係約48小時或至少約48小時。在其他實施例中，用於刺激之時間係約44至52小時。在某些實施例中，用於刺激之時間係約40至44小時、約40至48小時、約40至52小時、或約40至56小時。

如本文所述之用於刺激淋巴球群的其他條件可包括CO ₂水平。在一些實施例中，用於刺激之CO ₂水平係約1.0至10% CO ₂。在一些實施例中，用於刺激之CO ₂水平係約1.0%、約2.0%、約3.0%、約4.0%、約5.0%、約6.0%、約7.0%、約8.0%、約9.0%、或約10.0% CO ₂。在一個實施例中，用於刺激之CO ₂水平係約3至7% CO ₂。在其他實施例中，用於刺激之CO ₂水平係約4至6% CO ₂。在仍其他實施例中，用於刺激之CO ₂水平係約4.5至5.5% CO ₂。在一個特定實施例中，用於刺激之CO ₂水平係約5% CO ₂。

用於刺激淋巴球群的條件可包含溫度、用於刺激之時間量、及/或在一定水平的CO ₂存在下的任何組合。例如，刺激淋巴球群之步驟可包含在約36至38℃之溫度下且在約4.5至5.5% CO ₂之CO ₂水平存在下，用一或多種T細胞刺激劑刺激淋巴球群達約44至52小時之時間量。

可用於本文中之方法中的淋巴球之濃度係約1.0至10.0 × 10 ⁶個細胞/mL。在某些實施例中，淋巴球之濃度係約1.0至2.0 × 10 ⁶個細胞/mL、約1.0至3.0 × 10 ⁶個細胞/mL、約1.0至4.0 × 10 ⁶個細胞/mL、約1.0至5.0 × 10 ⁶個細胞/mL、約1.0至6.0 × 10 ⁶個細胞/mL、約1.0至7.0 × 10 ⁶個細胞/mL、約1.0至8.0 × 10 ⁶個細胞/mL、1.0至9.0 × 10 ⁶個細胞/mL、或約1.0至10.0 × 10 ⁶個細胞/mL。在某些實施例中，淋巴球之濃度係約1.0至2.0 × 10 ⁶個細胞/mL。在某些實施例中，淋巴球之濃度係約1.0至1.2 × 10 ⁶個細胞/mL、約1.0至1.4 × 10 ⁶個細胞/mL、約1.0至1.6 × 10 ⁶個細胞/mL、約1.0至1.8 × 10 ⁶個細胞/mL、或約1.0至2.0 × 10 ⁶個細胞/mL.在某些實施例中，淋巴球之濃度係至少約1.0 × 10 ⁶個細胞/mL、至少約1.1 × 10 ⁶個細胞/mL、至少約1.2 × 10 ⁶個細胞/mL、至少約1.3 × 10 ⁶個細胞/mL、至少約1.4 × 10 ⁶個細胞/mL、至少約1.5 × 10 ⁶個細胞/mL、至少約1.6 × 10 ⁶個細胞/mL、至少約1.7 × 10 ⁶個細胞/mL、至少約1.8 × 10 ⁶個細胞/mL、至少約1.9 × 10 ⁶個細胞/mL、至少約2.0 × 10 ⁶個細胞/mL、至少約4.0 × 10 ⁶個細胞/mL、至少約6.0 × 10 ⁶個細胞/mL、至少約8.0 × 10 ⁶個細胞/mL、或至少約10.0 × 10 ⁶個細胞/mL。

可根據刺激淋巴球群之步驟使用抗CD3抗體（或其功能片段）、抗CD28抗體（或其功能片段）、或抗CD3及抗CD28抗體之組合。可使用任何可溶性或經固定之抗CD2、抗CD3、及/或抗CD28抗體或其功能片段（例如殖株OKT3（抗CD3）、殖株145-2C11（抗CD3）、殖株UCHT1（抗CD3）、殖株L293（抗CD28）、殖株15E8（抗CD28））。於一些態樣中，抗體可商購自所屬技術領域中已知的供應商，包括但不限於Miltenyi Biotec、BD Biosciences（例如MACS GMP CD3純1 mg/mL，件號170-076-116）、及eBioscience, Inc。此外，所屬技術領域中具有通常知識者將理解如何藉由標準方法產生抗CD3及/或抗CD28抗體。在一些實施例中，根據刺激淋巴球群之步驟使用的一或多種T細胞刺激劑包括在T細胞細胞介素存在下靶向T細胞刺激或共刺激分子的抗體或其功能片段。在一個態樣中，一或多種T細胞刺激劑包括抗CD3抗體及IL-2。在某些實施例中，T細胞刺激劑包括濃度為約20 ng/mL至100 ng/mL的抗CD3抗體。在某些實施例中，抗CD3抗體之濃度係約20 ng/mL、約30 ng/mL、約40 ng/mL、約50 ng/mL、約60 ng/mL、約70 ng/mL、約80 ng/mL、約90 ng/mL、或約100 ng/mL。在一個特定實施例中，抗CD3抗體之濃度係約50 ng/mL。在一替代實施例中，不需要T細胞活化。在此類實施例中，方法中省略刺激淋巴球群以產生經活化之T細胞群的步驟，且將可富含T淋巴球之淋巴球群根據以下步驟轉導。

本文所述之方法可包含使用單一循環轉導，將經活化之T細胞群用包含編碼膜結合IL-15-IL-15Rα嵌合多肽及/或CAR或TCR之核酸分子的病毒載體轉導，以產生經轉導之T細胞群。在實施例中，利用具有膜結合IL-15-IL-15Rα嵌合多肽之病毒載體，該病毒載體可與編碼CAR或TCR之病毒載體分開，或病毒載體可編碼膜結合IL-15-IL-15Rα嵌合多肽及CAR或TCR兩者。如本文所述之轉導經活化之免疫細胞群可在某些溫度下且/或在特定水平的CO ₂存在下執行一段時間（以任何組合）：約36至38℃之溫度、約16至24小時之時間量、及在約4.5至5.5% CO ₂之CO ₂水平存在下。免疫細胞可藉由本申請案之方法中之任一者與下列之組合製備：任何製備用於免疫療法之T細胞的製造方法，其包括但不限於國際專利申請公開案第WO2015/120096號及第WO2017/070395號中所述者，出於描述此等方法之目的，該等文獻以引用方式整體併入本文中；用於製備西卡思羅(axicabtagene ciloleucel)、布萊奧妥(brexucabtagene autoleucel)、Liso-cel之任何及所有方法；用於製備替薩真來魯塞(tisagenlecleucel)之任何及所有方法；用於製備用於免疫療法之「現成(off-the-shelf)」T細胞之任何及所有方法；及任何其他製備用於向人類投予之淋巴球的方法。製造程序可經調適以自獲自患者之細胞中移除循環腫瘤細胞。

數種重組病毒已被用作病毒載體以將基因材料遞送至細胞。可根據轉導步驟使用的病毒載體可係任何親嗜性(ecotropic)或雙嗜性病毒載體，包括但不限於重組反轉錄病毒載體、重組慢病毒載體、重組腺病毒載體、及重組腺相關病毒(AAV)載體。在一些實施例中，方法進一步包含將一或多種NK細胞或T細胞用反轉錄病毒轉導。在一個實施例中，用於轉導NK細胞群或經活化之T細胞群的病毒載體係MSGV1γ反轉錄病毒載體。在某些實施例中，用於轉導NK細胞群或經活化之T細胞群的病毒載體係下列所述之PG13-CD19-H3載體：Kochenderfer, J. Immunother. 32(7): 689–702 (2009)。根據此實施例之一個態樣，病毒載體係生長在於特定用於病毒載體製造的培養基（在本文中稱為「病毒載體接種液(viral vector inoculum)」)中之懸浮培養物中。任何適用於生長病毒載體之生長培養基及/或補充劑皆可用於根據本文所述之方法的病毒載體接種液中。根據一些態樣，在轉導步驟期間將病毒載體接種液接著添加至下述無血清培養基中。

如本文所述之用於轉導NK細胞群或經活化之T細胞群的條件可包含特定時間、在特定溫度下、及/或在特定水平的CO2存在下。在某些實施例中，用於轉導之溫度係約34℃、約35℃、約36℃、約37℃、或約38℃。在一個實施例中，用於轉導之溫度係約34至38℃。在另一實施例中，用於轉導之溫度係約35至37℃。在另一實施例中，用於轉導之溫度係約36至38℃。在仍另一實施例中，用於轉導之溫度係約36至37℃。在一個實施例中，用於轉導之溫度係約37℃。

在某些實施例中，用轉導之時間係約12至36小時。在某些實施例中，用於轉導之時間係約12至16小時、約12至20小時、約12至24小時、約12至28小時、或約12至32小時。在其他實施例中，用於轉導之時間係約20小時或至少約20小時。在一個實施例中，用轉導之時間係約16至24小時。在其他實施例中，用於轉導之時間係至少約14小時、至少約16小時、至少約18小時、至少約20小時、至少約22小時、至少約24小時、或至少約26小時。

在某些實施例中，用於轉導之CO ₂水平係約1.0至10% CO ₂。在其他實施例中，用於轉導之CO ₂水平係約1.0%、約2.0%、約3.0%、約4.0%、約5.0%、約6.0%、約7.0%、約8.0%、約9.0%、或約10.0% CO ₂。在一個實施例中，用於轉導之CO ₂水平係約3至7% CO ₂。在另一實施例中，用於轉導之CO ₂水平係約4至6% CO ₂。在另一實施例中，用於轉導之CO ₂水平係約4.5至5.5% CO ₂。在一個實施例中，用於轉導之CO ₂水平係約5% CO ₂。

在一些實施例中，如本文所述之轉導經活化之T細胞群可在特定溫度下且/或在特定水平的CO ₂存在下以任何組合執行特定時間：約36至38℃之溫度、約16至24小時之時間量、及在約4.5至5.5% CO ₂之CO ₂水平存在下。

本文所述之方法可包含擴增經轉導之一或多種NK細胞群或T細胞群達特定時間，以產生經工程改造之NK細胞群或T細胞群。用於擴增之預定時間可為允許產生下列之任何合適的時間：(i)在經工程改造之NK細胞群或T細胞群中產生足以向患者投予至少一個劑量的細胞數目；(ii)相較於一般較長的過程，產生具有有利比例之未成熟細胞的經工程改造之T細胞群；或(iii) (i)及(ii)兩者。此時間將取決於由NK細胞或T細胞表現的細胞表面受體、所使用之載體、具有治療效果所需之劑量、及其他變數。因此，在一些實施例中，用於擴增之預定時間可係1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、或多於21天。在一些態樣中，用於擴增之時間比所屬技術領域中已知的擴增方法短。例如，用於擴增之預定時間可縮短至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%，或可縮短多於75%。在一個態樣中，用於擴增之時間係約3天，且自富集淋巴球群至產生經工程改造之NK細胞或T細胞的時間係約6天。

用於擴增經轉導之NK細胞群或T細胞群的條件可包括溫度及/或在一定水平的CO ₂存在下。在某些實施例中，溫度係約34℃、約35℃、約36℃、約37℃、或約38℃。在一個實施例中，溫度係約34至38℃。在另一實施例中，溫度係約35至37℃。在另一實施例中，溫度係約36至38℃。在又另一實施例中，溫度係約36至37℃。在一個實施例中，溫度係約37℃。在某些實施例中，CO2水平係1.0至10% CO ₂。在其他實施例中，CO ₂水平係約1.0%、約2.0%、約3.0%、約4.0%、約5.0%、約6.0%、約7.0%、約8.0%、約9.0%、或約10.0% CO ₂。在一個實施例中，CO ₂水平係約4.5至5.5% CO2。在另一實施例中，CO ₂水平係約5% CO ₂。在其他實施例中，CO2水平係約3.5%、約4.0%、約4.5%、約5.0%、約5.5%、或約6.5% CO ₂。在一些實施例中，用於擴增經轉導之NK細胞群或T細胞群的條件包括溫度及/或在一定水平的CO ₂存在下的任何組合。例如，用於擴增經轉導之T細胞群的條件包含約36至38℃之溫度及在約4.5至5.5% CO ₂之CO ₂水平存在下。

本文所述之製造的各步驟可在封閉系統中執行。在某些實施例中，封閉系統係使用任何合適的細胞培養袋（例如Miltenyi Biotec MACS® GMP細胞分化袋、Origen Biomedical PermaLife細胞培養袋）之封閉袋培養系統。在一些實施例中，用於封閉袋培養系統中之細胞培養袋係在轉導步驟期間用重組人類纖連蛋白(fibronectin)片段塗佈。重組人類纖連蛋白片段可包含三個功能域：中央細胞結合域、肝素結合域II、及CS1-序列。重組人類纖連蛋白片段可用於藉由協助目標細胞與病毒載體之共定位來增加免疫細胞之反轉錄病毒轉導的基因效率。在某些實施例中，重組人類纖連蛋白片段係RETRONECTIN® (Takara Bio, Japan)。在某些實施例中，將細胞培養袋用濃度為約1至60 µg/mL或約1至40 µg/mL的重組人類纖連蛋白片段塗佈。在其他實施例中，將細胞培養袋用濃度為約1至20 µg/mL、20至40 µg/mL、或約40至60 µg/mL的重組人類纖連蛋白片段塗佈。在一些實施例中，將細胞培養袋用約約1 µg/mL、約2 µg/mL、約3 µg/mL、約4 µg/mL、約5 µg/mL、約6 µg/mL、約7 µg/mL、約8 µg/mL、約9 µg/mL、約10 µg/mL、約11 µg/mL、約12 µg/mL、約13 µg/mL、約14 µg/mL、約15 µg/mL、約16 µg/mL、約17 µg/mL、約18 µg/mL、約19 µg/mL、或約20 µg/mL的重組人類纖連蛋白片段塗佈。在其他實施例中，將細胞培養袋用約2至5 µg/mL、約2至10 µg/mL、約2至20 µg/mL、約2至25 µg/mL、約2至30 µg/mL、約2至35 µg/mL、約2至40 µg/mL、約2至50 µg/mL、或約2至60 µg/mL的重組人類纖連蛋白片段塗佈。在某些實施例中，將細胞培養袋用至少約2 µg/mL、至少約5 µg/mL、至少約10 µg/mL、至少約15 µg/mL、至少約20 µg/mL、至少約25 µg/mL、至少約30 µg/mL、至少約40 µg/mL、至少約50 µg/mL、或至少約60 µg/mL的重組人類纖連蛋白片段塗佈。在一個特定實施例中，將細胞培養袋用至少約10 µg/mL的重組人類纖連蛋白片段塗佈。可以可選地將用於封閉袋培養系統中之細胞培養袋在轉導步驟期間用人類白蛋白血清(HSA)阻斷。在一替代實施例中，細胞培養袋在轉導步驟期間並未用HSA阻斷。

可以可選地將藉由上述方法產生的經工程改造之免疫細胞群冷凍保存，以便可稍後使用細胞。本文亦提供一種用於將經工程改造之免疫細胞群冷凍保存的方法。此類方法可包括將經工程改造之免疫細胞群用稀釋溶液洗滌及濃縮的步驟。例如，稀釋溶液係生理食鹽水、0.9%鹽水、PlasmaLyte A (Pl)、5%右旋糖/0.45% NaCl鹽水溶液(D5)、人類血清白蛋白(HSA)、或其組合。此外，可將HSA添加至經洗滌及濃縮之細胞，以改善解凍之後的細胞存活率及細胞恢復率。在另一態樣中，洗滌溶液係生理食鹽水，且經洗滌及濃縮之細胞補充有HSA (5%)。方法亦可包括產生冷凍保存混合物之步驟，其中冷凍保存混合物包括於稀釋溶液中之經稀釋細胞群及合適的冷凍保存溶液。冷凍保存溶液可係任何合適的冷凍保存溶液，包括但不限於CryoStor10 (BioLife Solution)，其以1:1或2:1之比與經工程改造之免疫細胞的稀釋溶液混合。可添加HSA以在冷凍保存的混合物中提供約1.0至10%、約1.0%、約2.0%、約3.0%、約4.0%、約5.0%、約6.0%、約7.0%、約8.0%、約9.0%、約10.0%、約1至3% HSA、約1至4% HSA、約1至5% HSA、約1至7% HSA、約2至4% HSA、約2至5% HSA、約2至6% HSA、約2至7% HSA、或約2.5% HSA之最終濃度。經工程改造之免疫細胞群的冷凍保存可包含將細胞用0.9%生理食鹽水洗滌、以5%之最終濃度將HSA添加至經洗滌之細胞、及將細胞用CryoStor™ CS10以1:1稀釋（在最終冷凍保存混合物中之最終濃度為2.5% HSA）。在一些態樣中，方法亦包括將冷凍保存混合物冷凍之步驟。此外，冷凍保存混合物係以在約1×10 ⁶至約1.5×10 ⁷個細胞/mL之間的冷凍保存混合物之細胞濃度，使用定義的冷凍循環在控速冷凍器中冷凍。方法亦可包括將冷凍保存混合物儲存在氣相液態氮中之步驟。

藉由本文所述之方法產生的經工程改造之免疫細胞群可以預定劑量冷凍保存。預定劑量可係治療有效劑量，其可係如以下所提供之任何治療有效劑量。經工程改造之免疫細胞的預定劑量可取決於由免疫細胞表現的結合模體（例如在細胞上表現的結合模體之親和力及密度）、目標細胞之類型、所治療之疾病或病理狀況之性質、或兩者之組合。由經工程改造之免疫細胞表現的結合模體可係由CAR或TCR靶向的任何抗原或分子。在某些態樣中，表現CAR或TCR的經工程改造之免疫細胞的預定劑量可係多於約100萬至小於約300萬個經轉導之經工程改造之NK細胞或T細胞/kg。在一個實施例中，表現CAR或TCR的經工程改造之NK細胞或T細胞的預定劑量可係每公斤體重多於約100萬至約200萬個經轉導之經工程改造之NK細胞或T細胞（細胞/kg）。表現CAR或TCR的經工程改造之NK細胞或T細胞的預定劑量可係每公斤體重多於100萬至約200萬、至少約200萬至小於約300萬個經轉導之經工程改造之NK細胞或T細胞（細胞/kg）。在一個實施例中，表現CAR或TCR的經工程改造之NK細胞或T細胞的預定劑量可係約200萬個經轉導之經工程改造之T細胞/kg。在另一實施例中，表現CAR或TCR的經工程改造之NK細胞或T細胞的預定劑量可係至少約200萬個經轉導之經工程改造之NK細胞或T細胞/kg。表現CAR或TCR的經工程改造之NK細胞或T細胞的預定劑量之實例可係約200萬、約210萬、約220萬、約230萬、約240萬、約250萬、約260萬、約270萬、約280萬、或約290萬個經轉導之經工程改造之NK細胞或T細胞/kg。在一個實施例中，經工程改造之T細胞群可以每公斤體重約100萬個經工程改造之NK細胞或T細胞（細胞/kg）之預定劑量冷凍保存。在某些實施例中，經工程改造之NK細胞群或T細胞群可以約500,000至約100萬個經工程改造之NK細胞或T細胞/kg之預定劑量冷凍保存。在某些實施例中，經工程改造之NK細胞群或T細胞群可以至少約100萬、至少約200萬、至少約300萬、至少約400萬、至少約500萬、至少約600萬、至少約700萬、至少約800萬、至少約900萬、至少約1000萬個經工程改造之NK細胞或T細胞/kg之預定劑量冷凍保存。在其他態樣中，經工程改造之NK細胞群或T細胞群可以少於100萬個細胞/kg、100萬個細胞/kg、200萬個細胞/kg、300萬個細胞/kg、400萬個細胞/kg、500萬個細胞/kg、600萬個細胞/kg、700萬個細胞/kg、800萬個細胞/kg、900萬個細胞/kg、1000萬個細胞/kg、多於1000萬個細胞/kg、多於2000萬個細胞/kg、多於3000萬個細胞/kg、多於4000萬個細胞/kg、多於5000萬個細胞/kg、多於6000萬個細胞/kg、多於7000萬個細胞/kg、多於8000萬個細胞/kg、多於9000萬個細胞/kg、或多於1億個細胞/kg之預定劑量冷凍保存。在某些態樣中，經工程改造之NK細胞群或T細胞群可以約100萬至約200萬個經工程改造之NK細胞或T細胞/kg之預定劑量冷凍保存。經工程改造之NK細胞群或T細胞群可以在約100萬個細胞至約200萬個細胞/kg、約100萬個細胞至約300萬個細胞/kg、約100萬個細胞至約400萬個細胞/kg、約100萬個細胞至約500萬個細胞/kg、約100萬個細胞至約600萬個細胞/kg、約100萬個細胞至約700萬個細胞/kg、約100萬個細胞至約800萬個細胞/kg、約100萬個細胞至約900萬個細胞/kg、約100萬個細胞至約1000萬個細胞/kg之間的預定劑量冷凍保存。經工程改造之NK細胞群或T細胞群的預定劑量可基於對象的體重計算。在一個實例中，可將經工程改造之NK細胞群或T細胞群冷凍保存在約0.5至200 mL的冷凍保存培養基中。此外，可將經工程改造之T細胞群冷凍保存在約0.5 mL、約1.0 mL、約5.0 mL、約10.0 mL、約20 mL、約30 mL、約40 mL、約50 mL、約60 mL、約70 mL、約80 mL、約90 mL、或100 mL、約10至30 mL、約10至50 mL、約10至70 mL、約10至90 mL、約50至70 mL、約50至90 mL、約50至110 mL、約50至150 mL、或約100至200 mL的冷凍保存培養基中。在某些態樣中，可將經工程改造之NK細胞群或T細胞群冷凍保存在約50至70 mL的冷凍保存培養基中。

本揭露亦提供組成物（例如醫藥組成物），其包括本文所述之核酸、載體、核酸之集合、載體之集合、或細胞中之任一者。例如，本文提供一種組成物，其包括本文所述之核酸或核酸之集合中之任一者、或本文所提供之載體或載體之集合中之任一者、及醫藥上可接受之溶劑或載劑。本文亦提供醫藥組成物，其包括本文所提供之各種載體之集合中之任一者（例如包括第一載體及第二載體的載體之集合，第一載體包括編碼膜結合IL-15-IL-15Rα嵌合多肽之核酸中之任一者，第二載體包括編碼CAR或TCR之核酸序列）及醫藥上可接受之載劑。在一些實施例中，組成物包括醫藥上可接受之載劑、稀釋劑、助溶劑、乳化劑、防腐劑、及/或佐劑。在一些實施例中，組成物包含賦形劑。在另一實施例中，組成物包含NK細胞或T細胞，其包含CAR或TCR及膜結合IL-15-IL-15Rα嵌合多肽。

在其他實施例中，組成物經選擇以用於腸胃外遞送、用於吸入、或用於透過消化道遞送（諸如口服）。此等醫藥上可接受組成物之製備係在所屬技術領域中具有通常知識者之能力內。在某些實施例中，緩衝劑係用以將組成物維持在生理pH或在稍低pH下，一般在約5至約8之pH範圍內。在某些實施例中，當設想腸胃外投予時，組成物係呈無熱原(pyrogen)、腸胃外可接受之水溶液之形式，其包含在醫藥上可接受之媒劑中之本文所述之組成物（有或無額外治療劑）。在一些實施例中，用於腸胃外注射之媒劑係無菌蒸餾水，其中將本文所述之組成物（有或無至少一種額外治療劑）調配成適當防腐的無菌等張溶液。在某些實施例中，製備涉及所欲分子與聚合化合物（諸如聚乳酸或聚乙醇酸）、珠、或微脂體（其提供產物之控制或持續釋放）之配方，其接著經由長效儲存式注射(depot injection)遞送。在某些實施例中，使用可植入藥物遞送裝置以引入所欲分子。

在一些實施例中，組成物可係本文所述之細胞中之任一者（例如先前獲自對象（例如經確定或診斷為患有癌症之對象）的本文所述之細胞中之任一者）。在一個實施例中，細胞包含編碼本文所述之膜結合IL-15-IL-15Rα嵌合多肽及/或CAR或TCR中之任一者的核酸。在包括本文所述之細胞中之任一者的組成物中，組成物可進一步包括細胞培養基或醫藥上可接受之緩衝劑（例如磷酸鹽緩衝鹽水）。

醫藥組成物可包含CAR或TCR表現性細胞（例如複數個如本文所述之TCR或CAR表現性細胞）與一或多種醫藥上或生理上可接受之載劑、稀釋劑、或賦形劑。此類組成物可包含緩衝劑，諸如中性緩衝鹽水、磷酸鹽緩衝鹽水、及類似者；碳水化合物，諸如葡萄糖、甘露糖、蔗糖、或聚葡醣、甘露醇；蛋白質；多肽或胺基酸，諸如甘胺酸；抗氧化劑；螯合劑，諸如EDTA或麩胱甘肽；佐劑（例如氫氧化鋁）；及防腐劑。

本揭露之醫藥組成物可經調配用於根據本文所闡述之任何實施例投予，其至少一個非限制性實例係靜脈內投予。組成物可經調配用於靜脈內、腫瘤內、動脈內、肌內、腹膜內、鞘內、硬膜外、及/或皮下投予途徑。在實施例中，組成物經調配用於腸胃外投予途徑。適用於腸胃外投予之組成物可係水性或非水性、等張無菌注射溶液，其可含有抗氧化劑、緩衝劑、制菌劑、及溶質（例如使組成物與預期接受者之血液等張的溶質）。水性或非水性無菌懸浮液可含有一或多種懸浮劑、助溶劑、增稠劑、穩定劑、及防腐劑。本揭露之醫藥組成物可以適於待治療（或預防）疾病之方式投予。

在各種實施例中，可將本文所述之經工程改造之NK或T細胞併入醫藥組成物中。如本文所揭示，包含經工程改造之T細胞的醫藥組成物可呈任何形式。此類形式包含例如液體、半固體、及固體劑型，諸如液體溶液（例如可注射溶液及可輸注溶液）、分散液或懸浮液、錠劑、丸劑、粉劑、微脂體、及栓劑。

包含本揭露之結合劑的醫藥組成物可藉由已知方法調配（諸如描述於Remington’s Pharmaceutical Sciences, 17th edition, ed. Alfonso R. Gennaro, Mack Publishing Company, Easton, Pa. (1985)）。在各種情況下，可將包含本揭露之結合劑的醫藥組成物調配成包含醫藥上可接受之載劑或賦形劑。醫藥上可接受之載劑的實例包含但不限於生理上相容的任何及所有溶劑、分散介質、包衣、抗細菌劑及抗真菌劑、等張劑及吸收延遲劑、及類似者。包含經工程改造之T細胞的組成物可包含醫藥上可接受之鹽，例如酸加成鹽或鹼加成鹽。

注射用無菌組成物可根據習知醫藥實務使用注射用蒸餾水作為媒劑來調配。例如，生理鹽水或含有葡萄糖之等張溶液及其他補充劑（諸如D-山梨醇、D-甘露糖、D-甘露醇、及氯化鈉）可用作注射用水溶液，其可選地與合適的助溶劑（例如醇（諸如乙醇）及多元醇（諸如丙二醇或聚乙二醇））及非離子界面活性劑（諸如聚山梨醇酯80™、HCO-50、及類似者）組合。

油性液體之非限制性實例包含芝麻油及大豆油，且可與苯甲酸苄酯或苄醇組合作為助溶劑。可包含在組成物中的其他物品係緩衝劑，諸如磷酸鹽緩衝劑或乙酸鈉緩衝劑；舒緩劑(soothing agent)，諸如普魯卡因鹽酸鹽(procaine hydrochloride)；穩定劑，諸如苄醇或酚；及抗氧化劑。可將經調配之注射液包裝於合適的安瓿中。

在一個實施例中，醫藥組成物實質上不含可偵測水平的污染物，例如內毒素、黴漿菌、複製勝任型慢病毒(replication competent lentivirus, RCL)、p24、VSV-G核酸、HIV gag、殘餘的抗CD3/抗CD28塗佈珠、小鼠抗體、匯集的人類血清、牛血清白蛋白、牛血清、培養基組分、載體包裝細胞或質體組分、細菌、及真菌。在一個實施例中，細菌係選自由下列所組成之群組的至少一者：糞產鹼桿菌(Alcaligenes faecalis)、白色念珠菌(Candida albicans)、大腸桿菌(Escherichia coli)、流感嗜血桿菌(Haemophilus influenzae)、腦膜炎雙球菌(Neisseria meningitides)、綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumonia)、及/或A群化膿性鏈球菌(Streptococcus pyogenes group A)。

在一些實施例中，在輸注至癌症患者中前用介白素-2 (IL-2)離體處理經工程改造之細胞，且在輸注之後用IL-2治療癌症患者。此外，在一些實施例中，癌症患者可在投予結合劑前經歷預備性淋巴球清除(lymphodepletion)--免疫系統之暫時消融。IL-2治療與預備性淋巴球清除之組合可增強結合劑之持久性。在一些實施例中，將經工程改造之細胞用編碼細胞介素（例如膜結合IL-15-IL-15Rα嵌合多肽）之核酸轉導或轉染，其中核酸可經工程改造以提供細胞介素之持續性(constitutive)、可調控、或時間控制表現。合適的細胞介素包含例如在收縮期(contraction phase)期間作用以增強T淋巴球之存活的細胞介素，其可促進記憶T淋巴球之形成及存活。

在一些實施例中，向對象投予的劑量可隨實施例、所採用之組成物、投予方法、及所治療之部位及對象而變化。然而，劑量應足以提供治療反應。臨床醫師可判定向人類或其他對象投予的組成物之治療有效量，以治療或預防醫療病況。治療有效所需的組成物之確切量可取決於許多因素，例如諸如結合劑之活性及投予途徑。

可向對象投予合適數目的包含CAR或TCR的經工程改造之細胞。雖然本文所述之單一經工程改造之細胞能夠擴增且提供治療益處，但在一些實施例中，投予10 ²或更多、例如10 ³或更多、10 ⁴或更多、10 ⁵或更多、或10 ⁸或更多個經工程改造之細胞。在一些實施例中，向對象投予本文所述之10 ¹²或更少、例如10 ¹¹或更少、10 ⁹或更少、10 ⁷或更少、或10 ⁵或更少個經工程改造之細胞。在一些實施例中，投予本文所述之10 ²至10 ⁵、10 ⁴至10 ⁷、10 ³至10 ⁹、或10 ⁵至10 ¹⁰個經工程改造之細胞。可投予包含含CAR或TCR之細胞的醫藥組成物，例如10 ⁴至10 ⁹個細胞/kg體重（例如10 ⁵至10 ⁶個細胞/kg體重）之劑量。在另一實施例中，T細胞之治療有效量係約10 ⁴個細胞、約10 ⁵個細胞、約10 ⁶個細胞、約10 ⁷細胞、或約10 ⁸個細胞。醫藥組成物可以例如約2 × 10 ⁶個細胞/kg、約3 × 10 ⁶個細胞/kg、約4 × 10 ⁶個細胞/kg、約5 × 10 ⁶個細胞/kg、約6 × 10 ⁶個細胞/kg、約7 × 10 ⁶個細胞/kg、約8 × 10 ⁶個細胞/kg、約9 × 10 ⁶個細胞/kg、約1 × 10 ⁷個細胞/kg、約2 × 10 ⁷個細胞/kg、約3 × 10 ⁷個細胞/kg、約4 × 10 ⁷個細胞/kg、約5 × 10 ⁷個細胞/kg、約6 × 10 ⁷個細胞/kg、約7 × 10 ⁷個細胞/kg、約8 × 10 ⁷個細胞/kg、或約9 × 10 ⁷個細胞/kg之劑量投予。

可向哺乳動物一次性投予或在一段合適的時間段（例如按需要每日、每半週、每週、每兩週、每半個月、每兩個月、每半年、或每年）內以一系列的子劑量投予如本文所述之經工程改造之T細胞或NK細胞之劑量。包含有效量的結合劑之劑量單位可以單次日劑量投予，或可按需要以每日投予二、三、四、或更多次分次劑量投予每日總劑量。

合適的投予手段可由開業醫師選擇。投予途徑可係腸胃外，例如藉由注射投予、經鼻投予、經肺投予、或經皮投予。投予可藉由靜脈內注射、肌內注射、腹膜內注射、皮下注射而為全身性或局部的。在一些實施例中，組成物經選擇以用於腸胃外遞送、用於吸入、或用於透過消化道遞送（諸如口服）。劑量及投予方法可取決於對象之體重、年齡、病況、及類似者而變化，且可適當地選擇。

任何形式之選擇或使用可部分取決於預期的投予模式及治療應用。例如，包含意欲全身性或局部遞送的本揭露之經工程改造之細胞的組成物可呈可注射或可輸注溶液之形式。因此，包含本揭露之經工程改造的組成物可經調配以藉由腸胃外模式（例如靜脈內、皮下、腹膜內、或肌內注射）投予。腸胃外投予係指除腸內及局部投予以外的投予模式，通常藉由注射，且包含但不限於靜脈內、鼻內、眼內、肺、肌內、動脈內、鞘內、囊內、眶內、心內、皮內、肺內、腹膜內、經氣管、皮下、表皮下、關節內、囊下、蜘蛛膜下、脊椎內、硬膜外、腦內、顱內、頸動脈內、及胸骨內注射及輸注。

在各種實施例中，包含本揭露之經工程改造之細胞的醫藥組成物可調配成溶液、微乳液、分散液、微脂體、或適於在高濃度下穩定儲存之其他有序結構。無菌可注射溶液可藉由併入包含本揭露之經工程改造之細胞的組成物以所需量在適當溶劑中按需要與以上所列舉之成分中之一者或組合，接著過濾滅菌來製備。通常，分散液係藉由將包含本揭露之經工程改造之細胞的組成物併入含有基礎分散介質及來自以上所列舉者所需之其他成分的無菌媒劑中來製備。溶液之適當流動性可藉由例如使用包衣（諸如卵磷脂）、在分散液之情況下藉由維持所需粒徑、及藉由使用界面活性劑來維持。包含本揭露之結合劑的可注射組成物之延長吸收可藉由在包含本揭露之結合劑的組成物中包含延遲吸收的試劑（例如單硬脂酸鹽及明膠）來達成。

包含本揭露之經工程改造之細胞的醫藥組成物可以包含於水或另一醫藥上可接受之液體中之無菌溶液或懸浮液的可注射配方之形式腸胃外投予。例如，包含抗原結合系統的醫藥組成物可藉由以下調配：將經工程改造之細胞與醫藥上可接受之媒劑或介質（諸如無菌水及生理鹽水、植物油、乳化劑、懸浮劑、界面活性劑、穩定劑、調味賦形劑、稀釋劑、媒劑、防腐劑、結合劑）適當地組合，接著以一般公認之醫藥實務所需之單位劑型混合。包含在醫藥製劑中的活性成分之量係使得提供指定範圍內的合適劑量。油性液體之非限制性實例包含芝麻油及大豆油，且其可與苯甲酸苄酯或苄醇組合作為助溶劑。可包含的其他物品係緩衝劑，諸如磷酸鹽緩衝劑或乙酸鈉緩衝劑；舒緩劑，諸如普魯卡因鹽酸鹽；穩定劑，諸如苄醇或酚；及抗氧化劑。可將經調配之注射液包裝於合適的安瓿中。

在一些實施例中，包含抗原結合系統之組成物可經調配用於在低於0℃（例如，-20℃或-80℃）之溫度下儲存。在一些實施例中，包含本揭露之經工程改造之細胞的組成物可經調配用於在2至8℃（例如4℃）下儲存至多2年（例如一個月、兩個月、三個月、四個月、五個月、六個月、七個月、八個月、九個月、10個月、11個月、1年、11/2年、或2年）。因此，在一些實施例中，包含抗原結合系統之組成物在2至8℃（例如4℃）下穩定儲存至少1年。

在一些情況下，可將包含本揭露之經工程改造之醫藥組成物調配成溶液。在一些實施例中，包含本揭露之經工程改造之細胞的組成物可例如調配成在合適的濃度下且適於在2至8℃（例如4℃）下儲存的緩衝溶液。包含如本文所述之經工程改造之細胞的醫藥組成物可調配於免疫微脂體組成物中。具有延長循環時間的微脂體係揭示於例如美國專利第5,013,556號。

在某些實施例中，包含本揭露之經工程改造之細胞的組成物可與保護該組成物免於快速釋放的載劑調配，諸如控制釋放配方，其包含植入物及微囊封遞送系統。可使用可生物降解、生物相容聚合物，諸如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、膠原蛋白、聚原酸酯、及聚乳酸。許多用於製備此類配方之方法係已知的。參見例如J. R. Robinson (1978)「Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems，」Marcel Dekker, Inc., New York。

在各種實施例中，皮下投予可藉由裝置之手段實現，該裝置諸如注射器、預填充式注射器、自動注射器（例如拋棄式或可重複使用）、筆式注射器、貼片式注射器、可穿戴式注射器、具有皮下輸注組之攜帶式注射器輸注泵、或與皮下注射用結合劑藥物組合的其他裝置。

本揭露之注射系統可採用如下列中所述之遞送筆：美國專利第5,308,341號。筆式裝置常用於向患有糖尿病之患者自行遞送胰島素。此類裝置可包含至少一個注射針（例如長度為約5至8 mm之31號針），一般預填充有一或多個治療單位劑量的治療溶液，且可用於在儘可能少疼痛之情況下將溶液快速遞送至對象。一種藥物遞送筆包含小瓶固持器，可在其中接收治療劑或其他藥物之小瓶。筆可係完全機械裝置，或其可與電子電路組合以精確設定且/或指示注射至使用者中藥物之劑量。參見例如美國專利第6,192,891號。在一些實施例中，筆式裝置之針係拋棄式的，且套組包含一或多個拋棄式替換針。適用於遞送包含本揭露之結合劑的目前特徵組成物中之至少一者的筆式裝置亦描述於例如美國專利第6,277,099號；第6,200,296號；及第6,146,361號中，其各者之揭露全文以引用方式併入本文中。基於微針之筆式裝置係描述於例如美國專利第7,556,615號中，其揭露全文以引用方式併入本文中。亦參見由Scandinavian Health Ltd製造的精確筆式注射器(Precision Pen Injector, PPI)裝置MOLLYTM。

在一些實施例中，包含本揭露之經工程改造之細胞的組成物可藉由不依賴經由血管系統將經工程改造之細胞輸送至其預期目標組織或部位的局部投予方式遞送至對象。例如，包含本揭露之經工程改造之細胞的組成物可藉由注射或植入包含本揭露之經工程改造之細胞的組成物、或藉由注射或植入含有包含本揭露之經工程改造之細胞的組成物的裝置遞送。在某些實施例中，在目標組織或部位附近局部投予後，包含本揭露之經工程改造之細胞的組成物、或其一或多種組分可擴散至不是投予部位的預期目標組織或部位。

醫藥溶液可包含治療有效量的包含本揭露之經工程改造之細胞的組成物。此類有效量可部分基於所投予之包含本揭露之經工程改造之細胞的組成物之效應、或包含本揭露之經工程改造之細胞及一或多種額外活性劑的組成物之組合效應容易地判定。包含本揭露之經工程改造之T細胞的組成物之治療有效量亦可根據諸如下列之因素而變化：個體之疾病狀態、年齡、性別、及體重、及組成物（及一或多種額外活性劑）在個體中引發所欲反應之能力，例如改善至少一個病況參數，例如改善補體介導之病症的至少一種症狀。例如，治療有效量的包含本揭露之經工程改造之細胞的組成物可抑制（減輕其嚴重性或消除其發生）且/或預防病症及/或病症之任一種症狀。治療有效量亦係其中包含本揭露之經工程改造之細胞的組成物之治療有益效應超過其任何毒性或有害效應的量。

包含本揭露之經工程改造之細胞的組成物可以固定劑量或以每公斤毫克(mg/kg)劑量投予。在一些實施例中，亦可選擇降低或避免產生針對包含本揭露之經工程改造之細胞的組成物中之一或多種結合模體分子的抗體或其他宿主免疫反應的劑量。雖然決不意欲限制，結合劑（諸如包含本揭露之經工程改造之細胞的組成物）之例示性劑量包含例如1至1000 mg/kg、1至100 mg/kg、0.5至50 mg/kg、0.1至100 mg/kg、0.5至25 mg/kg、1至20 mg/kg、及1至10 mg/kg。包含本揭露之經工程改造之細胞的組成物之例示性劑量包含但不限於0.1 mg/kg、0.5 mg/kg、1.0 mg/kg、2.0 mg/kg、4 mg/kg、8 mg/kg、或20 mg/kg。

包含本揭露之結合劑的組成物中之任一者之合適的人類劑量可在例如第I期劑量增量研究中進一步評估。參見例如van Gurp et al. (2008) Am J Transplantation 8(8):1711-1718；Hanouska et al. (2007) Clin Cancer Res 13(2, part 1):523-531；及Hetherington et al. (2006) Antimicrobial Agents and Chemotherapy 50(10): 3499-3500。

本揭露提供用於在有需要之對象中增加對目標抗原之免疫反應的方法及用途，其包含向對象投予有效量的如本文所揭示之免疫細胞，其中該等免疫細胞包含膜結合IL-15-IL-15Rα嵌合多肽及CAR或TCR。本揭露亦提供用於治療及/或預防對象之癌症的方法，其包含向對象投予有效量的如本文所揭示之免疫細胞，其中該等免疫細胞包含膜結合IL-15-IL-15Rα嵌合多肽及CAR或TCR。本揭露進一步提供一種回應對象中之癌症及病原體而增加細胞介素產生之方法，其包含向對象投予有效量的如本文所揭示之免疫細胞，其中免疫細胞包含膜結合IL-15-IL-15Rα嵌合多肽及CAR或TCR。本揭露進一步提供一種增加磷酸化STAT5 (pSTAT5)之方法，其包含向對象投予有效量的本文所揭示之免疫細胞，其中免疫細胞包含膜結合IL-15-IL-15Rα嵌合多肽及可選地CAR或TCR。目前揭示之標的亦提供一種降低對象中之腫瘤負荷的方法，該方法包含向對象投予有效量的本文所揭示之免疫細胞，其中免疫細胞包含膜結合IL-15-IL-15Rα嵌合多肽及CAR或TCR。包含投予醫藥有效量的本揭露之經工程改造之細胞的本揭露之方法及用途亦可用於增加對目標細胞之T細胞介導之細胞毒性（相較於無膜結合IL-15-IL-15Rα的對照）、增加IFN-γ及/或TNFα之產生（相較於無膜結合IL-15-IL-15Rα的對照）、縮小腫瘤大小、殺滅腫瘤細胞、預防腫瘤細胞增生、預防腫瘤之生長、消除患者的腫瘤、預防腫瘤之復發、預防腫瘤轉移、誘導患者之緩解、或其任何組合。在某些實施例中，本文所提供之方法誘導完全反應。在一些實施例中，本文所提供之方法誘導部分反應。

可治療之癌症包括未形成血管、尚未實質上形成血管、或已形成血管之腫瘤。癌症亦可包括實體或非實體腫瘤。在一些實施例中，癌症係血液癌症。在一些實施例中，癌症係白血球細胞者。在其他實施例中，癌症係漿細胞者。在一些實施例中，癌症係白血病、淋巴瘤、或骨髓瘤。在某些實施例中，癌症係急性淋巴母細胞白血病(ALL)（包括非T細胞ALL）、急性淋巴樣白血病(ALL)、及噬血球性淋巴組織細胞增生症(HLH)、B細胞前淋巴球白血病、B細胞急性淋巴樣白血病(「BALL」)、母細胞性漿細胞樣樹突細胞贅瘤、Burkitt氏淋巴瘤、慢性淋巴球性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、慢性骨髓白血病(CML)、慢性或急性肉芽腫病、慢性或急性白血病、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、濾泡淋巴瘤、濾泡淋巴瘤(FL)、毛細胞白血病、噬血球性症候群（巨噬細胞活化症候群(MAS)、霍奇金氏病、大細胞肉芽腫、白血球黏附缺乏症、惡性淋巴增生病況、MALT淋巴瘤、被套細胞淋巴瘤、邊緣區淋巴瘤、意義不明單株免疫球蛋白增高症(MGUS)、多發性骨髓瘤、骨髓化生不良及骨髓化生不良症候群(MDS)、骨髓疾病（包括但不限於急性骨髓白血病(AML)）、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、漿細胞增生性病症（例如無症狀骨髓瘤（燜燃型多發性骨髓瘤或無痛骨髓瘤））、漿母細胞淋巴瘤、漿細胞樣樹突細胞贅瘤、漿細胞瘤（例如漿細胞惡液質；孤立性骨髓瘤；孤立性漿細胞瘤；髓外漿細胞瘤；及多發性漿細胞瘤）、POEMS症候群（Crow-Fukase氏症候群；Takatsuki氏症；PEP症候群）、原發性縱膈腔大B細胞淋巴瘤(PMBC)、小細胞或大細胞濾泡淋巴瘤、脾邊緣區淋巴瘤(SMZL)、全身性類澱粉蛋白輕鏈類澱粉變性症、T細胞急性淋巴樣白血病(「TALL」)、T細胞淋巴瘤、變化型濾泡淋巴瘤、Waldenstrom氏巨球蛋白血症、或其組合。在其他實施例中，癌症可係下列中之任一者：肉瘤（例如滑膜肉瘤、骨原性肉瘤、子宮平滑肌肉瘤、及腺泡狀橫紋肌肉瘤(alveolar rhabdomyosarcoma)）、肝細胞癌、神經膠質瘤、頭部癌症（例如鱗狀細胞癌）、頸部癌症（例如鱗狀細胞癌）、骨癌、腦癌、乳癌、肛門癌、肛管癌、或肛門直腸癌、眼癌、肝內膽管癌、關節癌、頸部癌症、膽囊癌、或胸膜癌、鼻癌、鼻腔癌、或中耳癌、口腔癌、外陰癌、結腸癌症（例如結腸癌）、食道癌、子宮頸癌、胃癌、胃腸道類癌腫瘤、下咽癌、喉癌、肝癌（例如肝細胞癌）、肺癌（例如非小細胞肺癌）、惡性間皮瘤、黑色素瘤、鼻咽癌、卵巢癌、胰臟癌、腹膜癌、網膜癌、及腸繫膜癌、咽癌、前列腺癌、直腸癌、腎癌（例如腎細胞癌）、小腸癌、軟組織癌、胃癌、睪丸癌、甲狀腺癌、及泌尿上皮癌（例如輸尿管癌及膀胱癌）。

在各種情況下，使用如本文所提供之包含CAR或TCR的經工程改造之細胞治療癌症的方法係自體細胞療法。在各種情況下，使用如本文所提供之包含CAR或TCR的經工程改造之細胞治療癌症的方法係同種異體細胞療法。

在各種實施例中，本文所提供之用於本揭露中的細胞療法可在治療過程中向對象投予，該治療過程進一步包含投予一或多種額外治療劑或不是本文所提供之細胞療法的療法。在某些實施例中，本揭露提供用於治療癌症之組合療法，該治療包含向接受且/或需要本文所提供之細胞療法的對象投予抗癌劑。

在某些實施例中，如本文所提供之包含CAR或TCR的經工程改造之細胞可向先前已接受、排定接受包含額外抗癌療法之治療方案、或在其過程中的對象投予。在各種實施例中，與經工程改造之細胞組合投予的額外劑或療法可與經工程改造之細胞同時、與經工程改造之細胞同一天、或與經工程改造之細胞同一週投予。在各種實施例中，可投予與如本文所提供之包含CAR或TCR的經工程改造之細胞組合投予的額外劑或療法，使得經工程改造之細胞及額外劑或療法的投予係在經工程改造之細胞的投予之前或之後相隔一或多個小時、之前或之後相隔一或多天、之前或之後相隔一或多週、或之前或之後相隔一或多個月。在各種實施例中，一或多種額外劑之投予頻率可與經工程改造之細胞之投予頻率相同、類似、或不同。

與如本文所提供之包含CAR或TCR的經工程改造之細胞組合使用的劑或療法可以單一治療性組成物或劑量之方式與經工程改造之細胞一起投予、以分開組成物之形式與經工程改造之細胞同時投予、或以在時間上不同於經工程改造之細胞之投予的方式投予。當將如本文所提供之包含CAR或TCR的經工程改造之細胞與額外劑組合使用時，經工程改造之細胞可與額外劑共調配，或經工程改造之細胞可與額外劑配方分開調配。

在一些實施例中，方法進一步包含投予化學治療劑。在某些實施例中，所選化學治療劑係淋巴球清除（預調理）化學治療劑。有益的預調理治療方案、連同相關有益的生物標記係描述於美國臨時專利申請案62/262,143及62/167,750中，其全文特此以引用方式併入本文中。此等描述例如調理需要T細胞療法之患者的方法，其包含向患者投予指定有益劑量的環磷醯胺（在200 mg/m2/天與2000 mg/m2/天之間）及指定劑量的氟達拉濱(fludarabine)（在20 mg/m2/天與900 mg/m2/天之間）。一種此類劑量方案涉及治療患者，其包含在向患者投予治療有效量的經工程改造T之細胞前先向患者每天投予約500 mg/m2/天的環磷醯胺及約60 mg/m2/天的氟達拉濱達三天。在其他實施例中，含有CAR或TCR的經工程改造之細胞、及化學治療劑係各自以有效治療對象之疾病或病況的量投予。

在一些實施例中，包含本文所揭示之CAR及/或TCR表現性免疫細胞的組成物可與任何數目的化學治療劑結合投予。化學治療劑之實例包括烷化劑，諸如噻替哌(thiotepa)及環磷醯胺(CYTOXANTM)；烷基磺酸酯，諸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)、及哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶，諸如苯唑多巴(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、美妥多巴(meturedopa)、及優瑞多巴(uredopa)；伸乙亞胺及甲基蜜胺(methylamelamine)，包括六甲蜜胺(altretamine)、三伸乙基蜜胺(triethylenemelamine)、三伸乙基磷醯胺(trietylenephosphoramide)、三伸乙基硫代磷醯胺(triethylenethiophosphaoramide)、及三羥甲基三聚氰胺(trimethylolomelamine resume)；氮芥子氣，諸如氯芥苯丁酸、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷醯胺(cholophosphamide)、雌氮芥(estramustine)、異環磷醯胺(ifosfamide)、二氯甲基二乙胺(mechlorethamine)、二氯甲基二乙胺氧化物鹽酸鹽、黴法蘭(melphalan)、新恩比興(novembichin)、苯芥膽甾醇(phenesterine)、潑尼氮芥(prednimustine)、氯乙環磷醯胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)；亞硝基脲(nitrosurea)，諸如雙氯乙基亞硝脲(carmustine)、氯脲黴素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)、雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素，諸如阿克拉黴素(aclacinomysins)、放線菌素(actinomycin)、安麯黴素(authramycin)、偶氮絲胺酸、博萊黴素、放線菌素C (cactinomycin)、卡奇黴素(calicheamicin)、卡拉比星(carabicin)、洋紅黴素(carminomycin)、嗜癌黴素(carzinophilin)、色黴素(chromomycin)、放線菌素D (dactinomycin)、道諾黴素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮-5-側氧基-L-正白胺酸、阿黴素(doxorubicin)、依索比星(esorubicin)、艾達黴素(idarubicin)、麻西羅黴素(marcellomycin)、絲裂黴素(mitomycin)、黴酚酸(mycophenolic acid)、諾加黴素(nogalamycin)、橄欖黴素(olivomycin)、培洛黴素(peplomycin)、泊非黴素(potfiromycin)、嘌呤黴素(puromycin)、奎拉黴素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑菌素(streptonigrin)、鏈脲黴素(streptozocin)、殺結核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、淨司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代謝物，諸如胺甲喋呤及5-氟脲嘧啶(5-FU)；葉酸類似物，諸如二甲葉酸(denopterin)、胺甲喋呤、蝶羅呤(pteropterin)、曲美沙特(trimetrexate)；嘌呤類似物，諸如氟達拉濱、6-巰嘌呤、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鳥嘌呤(thioguanine)；嘧啶類似物，諸如環胞苷(ancitabine)、阿紮胞苷(azacitidine)、6-硫唑脲嘧啶、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、二去氧尿苷、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)、5-FU；雄性激素，諸如卡魯睪酮(calusterone)、屈他雄酮丙酸酯(dromostanolone propionate)、環硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睪內酯(testolactone)；抗腎上腺劑，諸如胺麩精(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；葉酸補充劑，諸如夫羅林酸(frolinic acid)；醋葡醛內酯(aceglatone)；醛磷醯胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；胺基乙醯丙酸(aminolevulinic acid)；安吖啶(amsacrine)；倍曲布西(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；依達曲沙(edatraxate)；得弗伐胺(defofamine)；地美可辛(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；埃夫咪辛(elformithine)；依利醋銨(elliptinium acetate)；依託格魯(etoglucid)；硝酸鎵；羥基尿素；蘑菇多糖(lentinan)；氯尼達明(lonidamine)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌達醇(mopidamol)；二胺硝吖啶(nitracrine)；噴司他汀(pentostatin)；凡那明(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；2-乙基醯肼(2-ethylhydrazide)；丙卡巴肼(procarbazine)；PSK®；雷佐生(razoxane)；西索菲蘭(sizofiran)；鍺螺胺(spirogermanium)；細交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亞胺醌(triaziquone)；2, 2',2''-三氯三乙胺；烏拉坦(urethan)；長春地辛(vindesine)；達卡巴嗪；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴衛矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；伽托辛(gacytosine)；阿拉伯糖苷（「Ara-C」）；環磷醯胺；噻替派；類紫杉醇(taxoid)，例如太平洋紫杉醇(paclitaxel) (TAXOLTM, Bristol-Myers Squibb)及多西紫杉醇(doxetaxel) (TAXOTERE®, Rhone-Poulenc Rorer)；氯芥苯丁酸；吉西他濱；6-硫鳥嘌呤；巰嘌呤；甲胺喋呤；鉑類似物，諸如順鉑及卡鉑；長春鹼；鉑；依託泊苷(VP-16)；依弗醯胺；絲裂黴素C (mitomycin C)；米托蒽醌(mitoxantrone)；長春新鹼(vincristine)；長春瑞濱(vinorelbine)；溫諾平(navelbine)；諾安托(novantrone)；替尼泊苷；道諾黴素(daunomycin)；胺喋呤；截瘤達(xeloda)；伊班膦酸鹽(ibandronate)；CPT-11；拓撲異構酶(topoisomerase)抑制劑RFS2000；二氟甲基鳥胺酸(DMFO)；視黃酸衍生物，諸如TargretinTM（貝沙羅汀(bexarotene)）、PanretinTM（阿利維A酸(alitretinoin)）；ONTAKTM（地尼白介素(denileukin diftitox)）；埃斯培拉黴素(esperamicin)；卡培他濱；及以上任一者之醫藥上可接受之鹽、酸或衍生物。在一些實施例中，包含本文所揭示之CAR及/或TCR表現性免疫細胞的組成物可與抗荷爾蒙劑結合投予，抗荷爾蒙劑作用為調控或抑制對腫瘤之荷爾蒙作用，抗荷爾蒙劑諸如抗雌激素，包括例如泰莫西芬(tamoxifen)、雷洛昔芬(raloxifene)、芳香酶抑制4(5)-咪唑、4-羥基泰莫西芬、曲沃昔芬(trioxifene)、克沃昔芬(keoxifene)、LY117018、奧那司酮(onapristone)、及托瑞米芬(toremifene) (Fareston)；及抗雄性激素，諸如氟他胺(flutamide)、尼魯米特(nilutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)、柳菩林(leuprolide)、及戈舍瑞林(goserelin)；及以上任一者之醫藥上可接受之鹽、酸或衍生物。若適當，亦投予化學治療劑之組合，包括但不限於CHOP（亦即環磷醯胺(Cytoxan®)）、阿黴素（羥基阿黴素）、長春新鹼(Oncovin®)、及潑尼松(Prednisone)。

在一些實施例中，化學治療劑係與含有CAR或TCR或編碼CAR或TCR之核酸的經工程改造之細胞之投予同時或在其之後一週內投予。在其他實施例中，化學治療劑係在經工程改造細胞或核酸之投予後1至4週、或1週至1個月、1週至2個月、1週至3個月、1週至6個月、1週至9個月、或1週至12個月投予。在一些實施例中，化學治療劑係在投予經工程改造之細胞或核酸之前至少1個月投予。在一些實施例中，方法進一步包含投予二或更多種化學治療劑。

可結合本文中所述之組成物使用各種額外治療劑。例如，可能有用的額外治療劑包括PD-1抑制劑，諸如納武單抗(nivolumab) (Opdivo®)、派姆單抗(pembrolizumab) (Keytruda®)、派姆單抗、皮地利珠單抗(pidilizumab) (CureTech)、及阿特珠單抗(atezolizumab) (Roche)。適用於與本揭露組合使用的額外治療劑包括但不限於依魯替尼(ibrutinib) (Imbruvica®)、奧法木單抗(ofatumumab) (Arzerra®)、利妥昔單抗(Rituxan®)、貝伐珠單抗(bevacizumab) (Avastin®)、曲妥珠單抗(trastuzumab) (Herceptin®)、曲妥珠單抗恩他新(trastuzumab emtansine) (KADCYLA®)、伊馬替尼(imatinib) (Gleevec®))、西妥昔單抗(cetuximab) (Erbitux®)、帕尼單抗(panitumumab) (Vectibix®)、卡妥索單抗(catumaxomab)、替伊莫單抗(ibritumomab)、奧法木單抗、托西莫單抗(tositumomab)、本妥昔單抗(brentuximab)、阿侖單抗(alemtuzumab)、吉妥珠單抗(gemtuzumab)、埃羅替尼(erlotinib)、吉非替尼(gefitinib)、凡德他尼(vandetanib)、阿法替尼(afatinib)、拉帕替尼(lapatinib)、來那替尼(neratinib)、阿西替尼(axitinib)、馬賽替尼(masitinib)、帕唑帕尼(pazopanib)、舒尼替尼(sunitinib)、索拉非尼(sorafenib)、托西尼布(toceranib)、來他替尼(lestaurtinib)、阿西替尼、西地尼布(cediranib)、樂伐替尼(lenvatinib)、尼達尼布(nintedanib)、帕唑帕尼、瑞戈非尼(regorafenib)、司馬沙尼(semaxanib)、索拉非尼、舒尼替尼、替沃紮尼(tivozanib)、托西尼布、凡德他尼(vandetanib)、恩曲替尼(entrectinib)、卡博替尼(cabozantinib)、伊馬替尼、達沙替尼(dasatinib)、尼羅替尼(nilotinib)、普納替尼(ponatinib)、拉多替尼(radotinib)、博舒替尼(bosutinib)、來他替尼、魯索替尼(ruxolitinib)、帕瑞替尼(pacritinib)、考比替尼(cobimetinib)、司美替尼(selumetinib)、曲美替尼(trametinib)、比美替尼(binimetinib)、艾樂替尼(alectinib)、色瑞替尼(ceritinib)、克唑替尼(crizotinib)、阿柏西普(aflibercept)、脂肪肽(adipotide)、地尼白介素、mTOR抑制劑（諸如依維莫司(everolimus)及替西羅莫司(temsirolimus)）、刺蝟蛋白抑制劑（諸如索尼德吉(sonidegib)及維莫德吉(vismodegib)）、CDK抑制劑（諸如CDK抑制劑（帕博西尼(palbociclib)））。

在額外實施例中，包含含CAR及/或TCR之免疫細胞的組成物係與消炎劑一起投予。消炎劑或藥物可包括但不限於類固醇及糖皮質素（包括倍他米松(betamethasone)、布地奈德(budesonide)、地塞米松、乙酸氫化可體松、氫化可體松、氫化可體松、甲基潑尼松龍、潑尼松龍、潑尼松、曲安西龍(triamcinolone)）、非類固醇消炎藥(NSAIDS)，包括阿司匹靈、布洛芬(ibuprofen)、萘普生(naproxen)、胺甲喋呤(methotrexate)、柳氮磺吡啶(sulfasalazine)、來氟米特(leflunomide)、抗TNF藥品、環磷醯胺、及黴酚酸酯(mycophenolate)。例示性NSAID包括布洛芬、萘普生、萘普生鈉、Cox-2抑制劑、及唾液酸化物(sialylate)。例示性止痛劑包括乙醯胺酚、羥考酮(oxycodone)、鹽酸普帕西芬之曲馬多(tramadol)。例示性糖皮質素包括可體松、地塞米松、氫化可體松、甲基潑尼松龍、潑尼松龍、或潑尼松。例示性生物反應調節劑包括針對細胞表面標記（例如CD4、CD5等）之分子、細胞介素抑制劑（諸如TNF拮抗劑（例如依那西普(etanercept) (ENBREL®)）、阿達木單抗(adalimumab) (HUMIRA®)、及英夫利昔單抗(infliximab) (REMICADE®)）、趨化激素抑制劑、及黏附分子抑制劑。生物反應調節劑包括單株抗體以及分子之重組形式。例示性DMARD包括硫唑嘌呤、環磷醯胺、環孢素、胺甲喋呤、青黴胺、來氟米特、柳氮磺吡啶、羥氯奎寧、Gold（口服（金諾芬(auranofin)）及肌內）、及米諾環素(minocycline)。

在一些實施例中，本文所述之組成物係與細胞介素結合投予。「細胞介素」意欲係指由一個細胞群釋放且作為細胞間介導物作用於另一細胞之蛋白質。細胞介素之實例係淋巴激素、單核因子(monokines)、及傳統多肽荷爾蒙。細胞介素中包括係生長荷爾蒙，諸如人類生長荷爾蒙、N-甲硫胺醯基人類生長荷爾蒙、及牛生長荷爾蒙；副甲狀腺荷爾蒙；甲狀腺素；胰島素；前胰島素；鬆弛素；前鬆弛素(prorelaxin)；醣蛋白荷爾蒙，諸如濾泡刺激素(FSH)、甲狀腺刺激素(TSH)、及黃體激素(LH)；肝生長因子(HGF)；纖維母細胞生長因子(FGF)；泌乳素；胎盤泌乳原；密拉氏管抑制物質；小鼠促性腺素相關肽；抑制素；活化素；血管內皮生長因子；整合素；促血小板生成素(thrombopoietin) (TPO)；神經生長因子(NGF)，諸如NGF-β；血小板生長因子；轉化生長因子(TGF)，諸如TGF-α及TGF-β；似胰島素生長因子-I及-II；紅血球生成素(EPO)；骨誘導因子；干擾素，諸如干擾素α、β、及γ；群落刺激因子(CSF)，諸如巨噬細胞-CSF (M-CSF)；顆粒球-巨噬細胞-CSF (GM-CSF)；及顆粒球-CSF (G-CSF)；介白素(IL)，諸如IL-1、IL-1α、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12；IL-15，腫瘤壞死因子，諸如TNF-α或TNF-β；及其他多肽因子，包括LIF及kit配體(KL)。如本文中所使用，用語細胞介素包括來自自然來源或重組T細胞培養物之蛋白質、及初始序列細胞介素之生物活性等效物。如本文中所使用，「細胞介素」亦指一個細胞回應於與特異性抗原接觸而釋放的非抗體蛋白質，其中細胞介素與第二細胞相互作用以介導第二細胞中之反應。細胞介素可藉由胞內源性表現或向對象投予。細胞介素可由免疫細胞（包括巨噬細胞、B細胞、T細胞、及肥大細胞）釋放而傳播免疫反應。細胞介素可誘導接受者細胞中之各種反應。細胞介素可包括體內恆定細胞介素、趨化激素、促炎性細胞介素、效應物、及急性期蛋白。例如，包括介白素(IL) 7及IL–15之體內恆定(homeostatic)細胞介素促進免疫細胞存活及增生，且促炎性細胞介素可促進發炎性反應。體內恆定細胞介素之實例包括但不限於IL–2、IL–4、IL–5、IL–7、IL–10、IL-12（例如IL–12p40及IL–12p35）、IL–15、及干擾素(IFN)γ。促炎性細胞介素之實例包括但不限於IL–1a、IL–1b、IL–6、IL–13、IL–17a、腫瘤壞死因子(TNF)-α、TNF-β、纖維母細胞生長因子(FGF) 2、顆粒球巨噬細胞群落刺激因子(GM–CSF)、可溶細胞間黏附分子1 (sICAM–1)、可溶血管黏附分子1 (sVCAM–1)、血管內皮生長因子(VEGF)、VEGF–C、VEGF–D、及胎盤生長因子(PLGF)。效應物之實例包括但不限於顆粒酶A、顆粒酶B、可溶Fas配體(sFasL)、及穿孔蛋白。急性期蛋白之實例包括但不限於C反應蛋白(CRP)及血清類澱粉蛋白A (SAA)。

本說明書中所提及之所有出版物、專利、及專利申請案係以引用方式併入本文中，有如特定及個別指示以引用方式併入各個別出版物、專利、及專利申請案。然而，在本文中引用參考文獻不應解讀為承認此類參考文獻對本揭露而言係先前技術。在以引用方式併入之參考文獻中所提供之任何定義及用語不同於本文中所提供之用語及論述之情況下，則以本文之用語及定義為準。本說明書中各處所引用之所有參考文獻之內容係以引用方式明示併入本文中。實例 實例1

經工程改造之膜結合IL-15繫鏈至IL-15Rα促效劑受體構築體（膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽）係設計為如SEQ ID NO: 27之序列中所示。此構築體長度為273個胺基酸，且包括來自IgE之胺基酸1至18的信號肽域、myc表位標籤、AGS連接子(SEQ ID NO: 3)、自胺基酸49至162的IL-15之活性形式、GS連接子(SEQ ID NO: 104)、IL-15Rα之胺基酸31至96的壽司域、GS連接子(SEQ ID NO: 104)、FAS之胺基酸171至190的跨膜域、及包含8個胺基酸之截短的FAS之胞內域。所述之繫鏈至IL-15Rα之此膜結合IL-15係以T細胞表面上之單體展示。此受體之胺基酸序列係顯示於下：MDWTWILFLVAAATRVHSEQKLISEEDLAGSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDggggsggggsRSNLGWLCLLLLPIPLIVWVKRKEVQKT (SEQ ID NO: 27)。

此外，亦設計並合成第二經工程改造之膜結合IL-15繫鏈至IL-15Rα促效劑構築體（膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合多肽），其根據SEQ ID NO: 29之序列，如下所示：MDWTWILFLVAAATRVHSEQKLISEEDLAGSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDGGGGSGGGGSPILLTCPTISILSFFSVALLVILACVLW (SEQ ID NO: 29)。

此構築體長度亦為273個胺基酸，且包括來自IgE之胺基酸1至18的信號肽域、myc表位標籤、及AGS連接子(SEQ ID NO: 3)、自胺基酸49至162的IL-15之活性形式、GS連接子(SEQ ID NO: 104)、IL-15Rα之胺基酸31至96的壽司域、GS連接子(SEQ ID NO: 104)、IL-7 CPT突變蛋白之胺基酸237至264的跨膜域。由於跨膜域中之半胱胺酸殘基形成雙硫鍵之能力，咸信繫鏈至IL-15Rα之此膜結合IL-15以二聚體展示。在此實例及其他實例中，兩種膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合多肽可被稱為IL15壽司單體及IL15壽司二聚體，以分別指具有FAS及IL-7衍生之跨膜域的構築體。 實例2

起初將如實例1中所述之具有N端Myc表位標籤的兩種膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合多肽在T細胞中測試，接著與兩種不同CAR配對。兩種CAR構築體利用兩種不同的共刺激域（CD28及4–1BB）並顯示如下： a. CD19：（FMC63 scFv + CD28胞內域+ CD3ζ胞內域） b. GPC3：（YP7 scFv + 4–1BB胞內域+ CD3ζ胞內域）。

慢病毒載體係用於所有T細胞轉導。EF1A啟動子係用於單獨在T細胞中測試的受體且與GPC CAR配對。CD19 CAR利用mSCV啟動子。

將獲自STEMCELL™ Technologies (Vancouver, Canada)的CD3 ⁺細胞自獲自健康捐贈者的周邊血液單核細胞單離，並冷凍於CryoStor ^®細胞冷凍保存培養基(Sigma Aldrich ^®)中。在慢病毒轉導之前，將CD3泛T細胞解凍，根據製造商建議用CD3/CD28 Dynabeads ^® _,(ThermoFisher Scientific)活化並靜置整夜。隔天，將細胞係用含有如本文所述之膜結合IL-15-IL-15壽司域受體的慢病毒轉導。

將細胞在具有5%人類血清的TC培養基(X–VIVO™, Lonza)中生長12天，每週補充三次100個國際單位/ml的介白素–2 (IL–2)。在第12天，將細胞離心並再懸浮於具有5%人類血清且無IL-2補充劑的TC培養基(X–VIVO™, Lonza)中。轉殖基因陽性細胞係在第6、15、20、23天藉由流動式細胞測量術使用Myc標籤AF 647接合物（DL650-抗-FMC63用於19CAR+、Antti Whitlow-APC用於GPC3 CAR、BUV737用於CD3、BUV563用於CD4、及BUV395用於CD8）測量。

所有流動式細胞測量術數據係用BD FACSDiva™軟體(BD and Company)在BD LSRFortessa™ (BD and Company)上收集，且使用FlowJo (BD and Company)分析數據。含有1% BSA之PBS在4℃下進行所有抗體染色。評估細胞之存活率及轉殖基因表現23天。在第12天之後用無補充IL-2之TC培養基培養的經轉導及未經轉導之T細胞的表現水平及細胞存活率係顯示於表6中。表6

實驗組	Myc+（平均螢光強度(MFI)）	存活率%
	第6天	第15天	第20天	第23天	第6天	第15天	第20天	第23天
未經轉導之T細胞	283	199	437	350	92	54	17	19
IL-15-IL-15Rα壽司單體	1187	988	972	1037	90	80	69.9	88
IL-15-IL-15Rα壽司二聚體	4270	521	607	569	90	75	42.7	58

膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體之表現係藉由將細胞用針對Myc標籤之抗體染色來確認。相較於未經轉導之T細胞，用任一膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體（單體或二聚體）轉導之T細胞展示更大的存活率，其指示含有膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體的經轉導之T細胞的增生增強。 實例3

為測量由膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體所致之IL-15路徑活化，將相等數目的經轉導及未經轉導之第六天T細胞在不具有血清的RPMI培養基中培養整夜。接著藉由離心收集細胞，並將其在pSTAT5水平之MSD分析之前使用MSD裂解緩衝劑+蛋白酶及磷酸酶抑制劑(Meso Scale Discovery)裂解。pSTAT5信號傳導係來自膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體的IL-15路徑活化之指標。結果係顯示於下表7中：表7

實驗組	pSTAT5 MSD信號
未經轉導之T細胞	215
IL-15-IL-15Rα壽司單體	2239
IL-15-IL-15Rα壽司二聚體	2091

如表7中所示，用兩種IL-15-IL-15Rα壽司域受體轉導之T細胞具有比未經轉導之T細胞高10倍以上的pSTAT5信號傳導水平。 實例4

為了研究表現膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體是否能增強使用嵌合抗原受體(CAR)之基於T細胞之免疫療法的持久性及有效性，設計編碼膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體單體及膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體二聚體的構築體：具有特異於CD19或GPC3之scFv的CAR、接著為T2A自我剪切肽。不具IL-膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體的CAR構築體係作為陽性對照。藉由添加膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體，經增強之CAR T細胞刺激用於IL-15Rβ/γ陽性T細胞之活化及/或增生的IL-15Rβ/γ信號傳導路徑。

為了判定本文所述之IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體是否可增強持久性及有效性，將CD3 ⁺細胞自初代人類周邊血液單核細胞(PBMC)單離並用包含下列之構築體轉導：僅CD19 CAR（FMC63 scFv + CD28胞內域+ CD3ζ胞內域）、CD19 CAR + IL-15-IL-15Rα壽司域單體、或CD19 CAR + IL-15-IL-15Rα壽司域二聚體。

評估19CAR、CD19 CAR + IL-15-IL-15Rα壽司域單體、及CD19 CAR + IL-15-IL-15Rα壽司域二聚體T細胞的表現及平均螢光強度(MFI)，結果係顯示於下表8中。表8

CD19 CAR + IL-15-IL-15Rα 壽司域受體的表現% 及MFI
	表現%	平均螢光強度(MFI)
實驗組	19CAR	IL-15受體	19CAR	IL-15受體
未經轉導之T細胞	0.945	0.075	N/A	N/A
CD19 CAR	68.09	0.29	2292	1186
CD19 CAR + IL-15壽司單體	42.9	28.5	1913	1699
CD19 CAR + IL-15壽司二聚體	51.03	43.6	1633	2387

接下來，將第十一天的T細胞在RPMI培養基中培養整夜，製備全細胞裂解物(lysate)，並獲得pSTAT5信號傳導。結果係描述於表9中。表9

CD19 CAR + IL-15-IL-15Rα 壽司域受體活化pSTAT5 信號傳導路徑
實驗組	pSTAT5信號
未經轉導之T細胞	2202
CD19 CAR	1948
CD19 CAR + IL-15壽司單體	14526
CD19 CAR + IL-15壽司二聚體	15285

在所有經工程改造之T細胞中pSTAT5信號傳導之背景水平係顯示於表9中。

未轉導之T細胞或表現CD19 CAR之T細胞並未誘導pSTAT5信號傳導，而用任一1IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體工程改造之T細胞誘導的pSTAT5信號傳導大致增加大於7x。此數據證實IL-15-IL-15Rα壽司單體及IL-15-IL-15Rα壽司二聚體受體在19CAR之情況下可反式發出信號。 實例5

在長期體外殺滅檢定中用目標重複刺激常與體內實驗結果相關。因此，使用連續刺激檢定以測量CD19 CAR T細胞擴增並在此檢定中測試IL-15-IL-15Rα壽司域單體及IL-15-IL-15Rα壽司域二聚體之效應。所有CAR組之表現水平係如上表8。

將CD19 CAR陽性T細胞與來自美國菌種保存中心(American Type Culture Company, ATCC, Manassas, VA)的CD19表現性Nalm6目標細胞以1:1比共培養十八天。基於如藉由計數珠及流動式細胞測量術測量的CAR+ T細胞之數目，以1:1比每三至四天添加目標細胞。

為了判定IL-15-IL-15Rα壽司域單體及IL-15-IL-15Rα壽司域二聚體對CD19 CAR T細胞功能之結果，將CD19 CAR T細胞在18天中用CD19 ⁺Nalm6目標細胞刺激六次。測量目標介導之CAR T細胞擴增倍數以及Nalm6細胞溶解%。結果係描述於表10中。 表10

CD19 CAR + 19CAR + IL15-IL-15Rα壽司單體及二聚體T細胞擴增倍數
實驗組	天
	0	4	7	10	14	18
19CAR	1	1.56	0.62	0.12	0.08	0.01
19CAR + IL15-IL-15Rα壽司單體	1	1.67	1.12	0.53	0.37	0.04
19CAR + IL15-IL-15Rα壽司二聚體	1	3.19	2.62	4.41	9.96	5.93

結果指示，至第十八天，19CAR + IL15-IL-15Rα壽司單體及19CAR + IL15-IL-15Rα壽司二聚體相較於單獨19CAR具有更大的CAR+擴增倍數。19CAR + IL15-IL-15Rα壽司二聚體擴增之擴增在第14天及第18天分別比19CAR大124x及593x，在第14天縮小。IL-15-IL-15Rα壽司二聚體擴增在第14天比19CAR大5x，在第十天之後縮小。測量CAR T細胞Nalm6細胞殺滅。結果係描述於表11中。 表11

連續殺滅Nalm6細胞溶解%
	19CAR	19CAR + IL15-IL-15Rα壽司單體	19CAR + IL15-IL-15Rα壽司二聚體
D3	98.51	98.36	98.26
D6	97.24	98.84	98.22
D9	98.41	99.74	99.53
D13	87.56	99.18	99.87
D18	-405.19	99.24	99.67

連續殺滅結果指示19CAR + IL15-IL-15Rα壽司單體及19CAR + IL15-IL-15Rα壽司二聚體在D18在1:1 E:T比下表現優於19CAR。19CAR在第18天並未殺滅Nalm6細胞。 實例6

IL-15主要作用於CD8+子集。評估來自連續殺滅的CD8+比率，且結果係於表12中。結果指示相較於單獨19CAR，至第十四天的CD8+ T細胞比率更高。 表12

CD19 CAR + 19CAR + IL15-IL-15Rα壽司單體及二聚體CD8+子集t細胞比率
實驗組	天
	0	4	7	10	14	18
19CAR	0.34	0.60	0.75	0.82	0.58	0.87
19CAR + IL15-IL-15Rα壽司單體	0.51	0.86	0.92	0.97	0.96	0.97
19CAR + IL15-IL-15Rα壽司二聚體	0.43	0.81	0.92	0.95	0.96	0.99

實例7

在Nalm6散播性小鼠模型(disseminated mouse model)中體內測試CD19 CAR、CD19 CAR + 19CAR + IL15-IL-15Rα壽司單體、及CD19 CAR + 19CAR + IL15-IL-15Rα二聚體。

將含有生物發光報導子之CD19+ Nalm6細胞在90% RPMI、10% FBS、1% L-麩醯胺酸中生長。本研究使用來自Jackson Laboratory的NSG小鼠(NOD.Cg- Prkdc ^scidIl2rg ^tm1Wjl/ SzJ)。8週齡小鼠係藉由使用BD U-100胰島素注射器(1/2 cc, 28G)在第0天經由側尾靜脈靜脈內注射0.1 ml的5.0×10 ⁵CD19+ Nalm6細胞來植入。如先前所述製造及編輯CAR-T細胞。在CD19+ Nalm6植入後第7天，將來自製造第10天之100 ul的CAR-T細胞透過靜脈內注射向小鼠給藥。

使用IVIS Lumina S5執行體內生物發光成像。動物係在~2至3%的異氟醚氣體麻醉下一次照三張相。將各小鼠IP注射150 mg/kg D-螢光素，並在注射之後15分鐘以俯臥位照相。使用CCD晶片之大的像素合併(binning)，並將曝光時間調整至30秒，以自影像中各小鼠中可觀察到的轉移性腫瘤獲得至少數百個計數並避免CCD晶片之飽和。在第5、7、12、19、23、26、29、33、43天收集BLI影像。使用Living Image版本4.5.4軟體分析影像。將全身固定體積ROI置於各個別動物之俯臥位影像上並基於動物識別進行標示。針對所有ROI計算總通量（光子/秒）並匯出。

針對不同治療組呈現對應於小鼠中之CD19+ Nalm6腫瘤負荷的BLI（生物發光成像）值（顯示為平均值± SEM）（表13）。較高的值指示較高的腫瘤負荷。CD19 CAR + 19CAR + IL15-IL-15Rα壽司單體及CD19 CAR + IL15-IL-15Rα二聚體表現優於典型CD19CAR，如藉由在研究過程中BLI降低所判定。19CAR + IL15-IL-15Rα二聚體表現最佳，其次是19CAR + IL15-IL-15Rα壽司單體。體內研究之結果係顯示於表13中。 表13

用1e6 19CAR給藥的小鼠之生物發光成像(BLI)
	第5天	第7天	第12天	第15天	第19天	第23天	第26天	第29天	第33天	第43天
媒劑	4.74E+06	3.36E+07	2.84E+09	1.74E+10	4.62E+10
6.01E+06	3.40E+07	5.53E+09	2.26E+10	3.35E+10
5.26E+06	5.58E+07	6.77E+09	2.35E+10	4.23E+10
未經轉導之T細胞	2.29E+06	2.45E+07	1.80E+09	1.47E+10	2.00E+10
3.66E+06	4.71E+07	4.18E+09	1.28E+10	3.22E+10
8.45E+06	1.22E+08	8.03E+09	1.61E+10	2.86E+10
7.14E+06	6.71E+07	5.83E+09	2.21E+10	3.46E+10
19CAR	6.46E+06	5.91E+06	9.73E+05	9.96E+05	1.88E+06	6.45E+06	2.99E+07	1.43E+08	4.62E+08
4.64E+06	2.39E+06	9.54E+05	9.98E+05	1.27E+06	3.63E+06	1.06E+07	5.20E+07	9.54E+08
3.95E+06	5.15E+06	1.37E+06	1.26E+06	2.71E+06	3.63E+07	1.04E+08	8.66E+08	1.38E+10
3.34E+06	4.21E+06	9.99E+05	8.26E+05	8.06E+05	1.35E+06	7.14E+06	4.06E+07	1.51E+09
2.88E+06	3.14E+06	6.46E+05	1.08E+06	9.64E+05	2.80E+06	3.37E+06	1.68E+07	5.02E+07
6.44E+06	5.00E+06	8.07E+05	1.09E+06	1.50E+06	9.22E+06	1.29E+07	4.88E+07	5.29E+08
19CAR + IL15-IL-15Rα壽司單體	6.02E+06	4.43E+06	9.57E+05	8.40E+05	9.23E+05	6.28E+05	9.61E+05	8.12E+05	1.73E+06
6.48E+06	2.42E+06	1.41E+06	9.26E+05	9.61E+05	7.93E+05	1.01E+06	1.06E+06	4.37E+07
4.05E+06	2.77E+06	1.48E+06	5.15E+05	7.61E+05	7.39E+05	1.37E+06	3.66E+06	7.12E+06
7.59E+06	4.79E+06	9.23E+05	9.47E+05	9.87E+05	1.04E+06	1.32E+06	6.51E+06	5.22E+07
3.90E+06	3.32E+06	8.67E+05	1.00E+06	1.05E+06	1.27E+06	1.06E+06	1.54E+06	9.60E+06
3.86E+06	2.59E+06	7.62E+05	1.00E+06	1.29E+06	1.25E+06	8.72E+05	9.63E+05	9.03E+05
19CAR + IL15-IL-15Rα壽司二聚體	5.48E+06	4.13E+06	1.15E+06	9.05E+05	8.33E+05	7.49E+05	1.08E+06	1.03E+06	1.16E+06	3.50E+09
6.99E+06	7.44E+06	1.17E+06	1.01E+06	8.57E+05	9.08E+05	1.15E+06	1.60E+06	1.64E+06	1.29E+08
8.87E+06	5.45E+06	6.71E+05	9.05E+05	1.12E+06	8.00E+05	9.34E+05	1.05E+06	1.25E+06	6.72E+09
4.06E+06	6.90E+06	9.46E+05	1.00E+06	7.99E+05	9.17E+05	6.79E+05	5.42E+05	7.76E+05	4.36E+07
3.51E+06	2.88E+06	1.03E+06	1.11E+06	1.16E+06	1.17E+06	8.89E+05	1.13E+06	3.11E+06	2.34E+09
3.73E+06	1.94E+06	1.40E+06	1.50E+06	1.03E+06	8.74E+05	8.57E+05	8.92E+05	1.37E+06	4.12E+09

實例8

在實體腫瘤Hep3b小鼠模型中測試GPC CAR、GPC CAR + 1L15-IL-15Rα壽司單體、及GPC CAR + IL-15-IL-15Rα二聚體。

CAR T細胞係製造如下。將CD3 ⁺細胞自初代人類周邊血液單核細胞(PBMC)單離並用包含下列之構築體轉導：僅GPC3 CAR（YP7 scFv + 4–1BB胞內域+ CD3ζ胞內域）、GPC3 CAR + IL-15-IL-15Rα壽司域單體、或GPC3 CAR + IL-15-IL-15Rα壽司域二聚體。

評估GPC3 CAR、GPC3 CAR + IL-15-IL-15Rα壽司域單體、及GPC3 CAR + IL-15-IL-15Rα壽司域二聚物T細胞的GPC3 CAR及mbIL-15_-IL-15Rα壽司受體表現及MFI，結果係顯示於下表14中。 表14

GPC3 CAR + IL-15-IL-15Rα 壽司域受體的表現% 及MFI
	表現%	MFI
實驗組	GPC3CAR	IL-15受體	GPC3CAR	IL-15受體
未經轉導之T細胞	0.51	0.037	10.3	110
GPC3 CAR	82.1	0.59	1349	130
GPC3 CAR + IL-15壽司單體	57.7	59.3	519	1415
GPC3 CAR + IL-15壽司二聚體	59.1	57.6	707	1392

使人類肝細胞癌細胞(Hep 3B2.1-7)生長並皮下植入於6至8週齡雌性NSG小鼠之側腹(NOD.Cg- Prkdc ^scidIl2rg ^tm1Wjl/ SzJ)。將動物分選為5個研究組。在第18天將T細胞以2e6給藥注射。在植入後，每3至4天使用數位卡尺測量腫瘤，並計算腫瘤體積。

針對不同治療組呈現對應於小鼠中之GPC3+腫瘤負荷的腫瘤體積值（表14）。較高的值指示較高的腫瘤負荷。CD19 CAR + 19CAR + IL15-IL-15Rα壽司單體及CD19 CAR + IL15-IL-15Rα二聚體表現優於典型CD19CAR，如藉由在研究過程中腫瘤體積降低所判定。19CAR + IL15-IL-15Rα單體表現最佳，其次是19CAR + IL15-IL-15Rα壽司二聚體。 表15

用2e6 GPC3 CAR T細胞給藥的小鼠之腫瘤體積
接種後天數	17	21	23	28	31	36	38	42	45	50	56	58	62	65	70	72
媒劑	90.3	127.4	192.1	213.8	416.9	543.4	638.6	783.6	1127.2
104.7	261.1	406	620.3	1025.2	1524.5	1839.7	2079.4
105.1	196.9	280.2	542.6	716.6	1148.7	1341.1	1878.6	1970.3
122.7	261.6	334.7	528.6	834.8	1498.2	1728.2	2055.6
123.4	202.6	285.9	462.6	689.6	1046.6	1471.3	1666.8	2391.2
139	246.6	326.6	710.6	669.5	1004.3	1058.2	1289.8	1660.2
140.6	213.3	349.7	568.1	848.5	1197.2	1197.4	1440.1	2208.2
188.7	314	490.8	722.7	937.2	1229.2	1201.8	1622.7	2089.5
未經轉導	90.3	195.3	239.2	357.6	494.7	868.5	1410.6	1573	2207.6
103.9	231.4	331.1	456.5	691.8	1357.2	1564	2416.8
106.7	216.7	248.9	618.1	902.6	769.4	849.5	1089.5	1117.3
122.6	209.8	371	688.1	962.2	1475.4	1813.9	2056.1
125.5	272.9	353.3	646.1	910.3	1290.7	1495.8	1758.2	2782
137.3	243.5	352.5	371.4	453.7	1349.4	1511.5	2047.9
142.7	238.4	421.9	710.2	943.3	1708.6	1784.6	2446.5
182.6	368.2	514.7	912.2	1286.3	1727.9	1853	2398.5
GPC3 CAR	93.6	253.6	422.2	618.1	772	968.1	1249.6	1365	1775.5	2465
103.9	173.1	241.3	281.8	454.1	528	529.1	587.8	802.7	1167.1	1564.8	1879.9	2026.9
107.8	239.8	304.2	466.2	645.2	1002.5	1137	1570.6	1521.3	2113.2
121.9	293.4	358	466	779	1102.5	1265.3	1343.4	1914.1	1918.6	2220.8
126.1	205	413.9	714.1	1100.2	1400.2	1629.4	2169.1
136.7	218.7	322.8	522.8	811.5	928.8	981.2	1386.7	1853.6	2312.4
144.1	221.8	369	548.9	765.6	856.5	1017	1121.6	1262.9	1796.7	2017
179.4	313.4	456.2	658.7	598.3	200.9	119.7	75.6	0	37.6	74.1	80.8	56.8	108	114.2	121.5
GPC3 CAR+15壽司單體	95.5	205.1	266	296.6	190.7	108	62.9	49.6	69.4	102	335.3	354.9	496.1	548.7	686.4
100	182.7	287.6	328	189.5	108.9	72.8	0	0	48.9	186.3	283.4	518.4	775.4	1649.4	2155.7
111.4	243.1	342.5	382.9	250.1	112.3	75	0	0	123.8	440.4	677.5	1343.3	1834.3	2872.5
117.5	254.6	324.2	212.5	165.3	113.4	0	0	0	0	71.8	141.2	58.8
129	336.1	412.5	590.2	328.2	230.5	170.2	87.5	84.9	126.9	311.6	534.9	898.3	919.6
133.8	354	429.6	403.9	335.1	192.2	164.7	121.4	0	0	0	0
160.2	344.1	589.8	585.7	396.4	313.8	261.8	0	0	0	0
167.8	305.9	355.5	486.9	272.9	150.2	141.3	68.8	38.4	92.6
GPC3 CAR+15壽司二聚體	95.8	248.9	303.6	422.5	396.5	192.8	199.9	66.3	0	0	36	92.1	300	451.6	827	1112
98.2	198.6	424.4	463.5	381.4	185.5	150.6	90.8	95.8	132.2	186
112.7	202.8	555.4	800.8	567.5	273.6	256.8	139.4	113.9	117.3	338.2	564.2	980.8	1328.4	2013.7
114.9	183.2	372.7	780.5	818.3	730.7	629.6	593.8	673.4	716.3	1327.3	1264.4	1766.9	2058
129.1	283	206.7	254.4	164.3	108.4	65	0	0	0	38.2	89.5	132.9	212.6	465.8	625.1
133.5	299.9	381.1	624.1	476.3	219.9	276	208.9	264.3	635.3	1416.7	1818.7	2809
161	352.8	313.1	511.2	412.4	203.7	129.2	88.9	0	0	0	0	69.6	189.9	506.8	813.9
164.9	226.9	498.3	533.6	628.5	254.9	203.7	161.7	154	254.6	525.4	854.9	1429.9	1912.5	2921.4

實例9

NK-92 CD16+ (ATCC PTA-8836)係介白素-2 (IL-2)依賴性自然殺手細胞系。在用IL-15-IL-15Rα壽司域單體及IL-15-IL-15Rα壽司域二聚體受體慢病毒轉導前，將此等細胞培養於補充有200IU/mL IL-2之hTCM中。

在轉導當天，在轉導之前將細胞用IL-2 (100U/mL)及人類IL-12 (100 ng/mL Miltenyi)刺激2小時。在細胞介素刺激後，將細胞接種至12孔盤之各孔中。添加病毒上清液以達20、50、及100之感染複數(multiplicity of infection)，且添加聚凝胺(polybrene)（8ug/mL最終濃度），將細胞培養整夜。隔天，將培養基藉由離心移除，並將細胞沉澱物再懸浮於無補充IL-2之hTCM中。包括含有使用或未使用補充IL-2生長之未經轉導NK-92 CD16+細胞的對照孔。

將細胞培養八天。每2天將補充IL-2添加至未經轉導之對照細胞（200Iu/mL）。Ki-67及Myc MFI係藉由流動式細胞測量術判定。分泌的IFN-g及TNFa之上清液水平係藉由Meso Scale Discovery判定。

經IL-15-IL-15Rα壽司域單體及IL-15-IL-15Rα壽司域二聚體轉導之NK-92 CD16+的增生係顯示於表16中。 表16

經IL-15-IL-15Rα壽司域單體及IL-15-IL-15Rα壽司域二聚體轉導之NK-92 CD16+的增生
實驗組	MOI	活Myc+%	活Ki67+%	Myc+ MFI	Myc+/Ki67+ MFI
NK-92 CD16+	0	0	0	n/a	n/a
NK-92 CD16+加IL-2 (100U/mL)	0	0	0	n/a	n/a
IL-15-IL-15Rα壽司域單體	20	79.4	77.1	3184	1328
IL-15-IL-15Rα壽司域單體	50	78.5	79.3	2947	1404
IL-15-IL-15Rα壽司域單體	100	84.8	94	4085	1592
IL-15-IL-15Rα壽司域二聚體	20	72.3	73.2	2644	1337
IL-15-IL-15Rα壽司域二聚體	50	74.7	76.5	2602	1352
IL-15-IL-15Rα壽司域二聚體	100	80.3	87.1	2381	1487

結果顯示在轉導後八天，表現IL-15-IL-15Rα壽司域單體及IL-15-IL-15Rα壽司域二聚體之NK-92 CD16+細胞會在補充IL-2不存在下增生，如藉由Ki-67細胞增生標記流動式細胞測量術分析所判定。

當比較Myc+子集與Myc-子集時，亦觀察到旁觀者效應，其指示IL-15經轉呈現(transpresented)為未經轉導之NK-92 CD16+細胞。Myc+及Myc-子集之細胞計數係顯示於表17中。 表17

實驗組	MOI	Myc+/Ki67+細胞計數	Myc-/Ki67+細胞計數
NK-92 CD16+	0	0	74
NK-92 CD16+加IL-2 (100U/mL)	0	0	19
IL-15-IL-15Rα壽司域單體	20	4809	1331
IL-15-IL-15Rα壽司域單體	50	6024	1707
IL-15-IL-15Rα壽司域單體	100	1151	192
IL-15-IL-15Rα壽司域二聚體	20	4043	1671
IL-15-IL-15Rα壽司域二聚體	50	3776	1334
IL-15-IL-15Rα壽司域二聚體	100	2852	685

結果指示IL-15經轉呈現為經轉導樣本集之未經轉導細胞，如藉由Ki-67染色所判定。

分泌的IFN-g及TNFa之上清液水平係顯示於表18中。 表18

細胞上清液中之分泌的IFN-g及TNF-a水平
實驗組	MOI	IFN-g	TNF-a
NK-92 CD16+	0	1932	954
NK-92 CD16+加IL-2 (100U/mL)	0	5707	2352
IL-15-IL-15Rα壽司域單體	20	27438	1402
IL-15-IL-15Rα壽司域單體	50	14156	2080
IL-15-IL-15Rα壽司域單體	100	11144	2410
IL-15-IL-15Rα壽司域二聚體	20	10175	2310
IL-15-IL-15Rα壽司域二聚體	50	6817	2072
IL-15-IL-15Rα壽司域二聚體	100	5794	1684

當活化時，NK-92 CD16+分泌IFN-g及TNF-a。結果指示，相對於未經轉導之未補充IL-2的細胞，經IL-15-IL-15Rα壽司域單體及IL-15-IL-15Rα壽司域二聚體轉導之細胞的上清液中之IFN-g水平增加。當相較於IL-2+對照時，所有經轉導之mb15細胞之TNF-a水平高大於兩倍。 實例10

第三經工程改造之膜結合IL-15繫鏈至IL-15Rα促效劑受體構築體（膜結合介白素-15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合多肽）係命名為IL-15壽司混合體，且設計為如SEQ ID NO: 94之序列中所示。此構築體長度為372個胺基酸，且包括來自IgE之胺基酸1至18的信號肽域、myc表位標籤、AGS連接子(SEQ ID NO: 3)、自胺基酸49至162的IL-15之活性形式、GS連接子(SEQ ID NO: 104)、IL-15Rα之胺基酸31至195的IL-15Ra之胞外域、GS連接子(SEQ ID NO: 104)、FAS之胺基酸171至190的跨膜域、及包含8個胺基酸之截短的FAS之胞內域。所述之繫鏈至IL-15Rα之此膜結合IL-15亦以T細胞表面上之單體展示。此受體之胺基酸序列係顯示於下：

MDWTWILFLVAAATRVHSEQKLISEEDLAGSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGGGGGSGGGGSRSNLGWLCLLLLPIPLIVWVKRKEVQKT (SEQ ID NO: 94)

此構築體係建構在CD19 CAR（FMC63 scFv + CD28胞內域+ CD3ζ胞內域）之下游、接著為T2A自我剪切肽。將此與作為對照的CD19 CAR構築體比較。兩種構築體皆使用mSCV啟動子表現且使用慢病毒載體遞送。

使用(Prodigy ^TM)將CD4 ⁺/CD8 ⁺細胞自獲自AllCells ^TM(Alameda, CA)健康捐贈者的Leukopak內部單離，並冷凍於CryoStor ^®細胞冷凍保存培養基(Sigma Aldrich ^®)中。將冷凍CD4 ⁺/CD8 ⁺T細胞解凍，根據製造商建議用盤結合MACS GMP CD3 pure (OKT3) (Miltenyl Biotec)及可溶人類抗CD28 (BD Biosciences)活化並在介白素–2 (IL–2) (Prometheus)中靜置整夜。隔天，將細胞用慢病毒載體轉導。使細胞在T細胞培養基（OpTmizer ^TMCTS ^TMT細胞擴增基礎培養基）中生長8天，培養基在解凍期間、轉導期間、用介白素–2 (IL–2)轉導後第2及4天補充擴增補充劑、CTS免疫細胞SR、CTS Glutamax (Gibco ^TM)。在8天，將細胞離心並冷凍於CryoStor ^®CS5培養基(BioLife Solutions ^®)中。將細胞在TC培養基(X–VIVO™, Lonza)中解凍並靜置整夜，其具有5%人類血清並補充有介白素–2 (IL–2)。隔天，藉由流動式細胞測量術測量細胞，以開始使用Myc標籤PE接合物（DL650-抗-FMC63用於19CAR+及BUV395用於CD3）進行檢定。所有抗體染色皆在室溫下於含有染色緩衝劑(FBS)之BD Pharmingen ^TMAzide中執行。所有流動式細胞測量術數據係用BD FACSDiva™軟體(BD and Company)在BD FACSymphony™ A5細胞分析儀(BD and Company)上收集，且使用FlowJo (BD and Company)分析數據。構築體表現良好，如下表19中所示。 表19

CD19 CAR + IL-15-IL-15Rα 壽司域受體之表現% 及MFI
	表現%	平均螢光強度(MFI)
實驗組	19CAR	IL-15受體	19CAR	IL-15受體
CD19 CAR	73.5	0.12	1245	239
CD19 CAR + IL-15壽司混合體	56.4	60.1	863	891

如先前實例中所述，使用基於MSD之pSTAT5檢定測量由IL-15壽司混合體誘導之IL-15信號傳導。簡言之，將相等數目的CAR+細胞在無血清培養基(Lonza X-VIVO™)中靜置整夜。接著將細胞離心，並在pSTAT5水平之MSD分析之前使用裂解緩衝劑+蛋白酶及磷酸酶抑制劑(Meso Scale Discovery™)裂解。結果係顯示於下表20中： 表20

CD19 CAR + IL-15-IL-15Rα 壽司域受體活化pSTAT5 信號傳導路徑
實驗組	pSTAT5信號
CD19 CAR	2973
CD19 CAR + IL-15壽司混合體	10919

表現CD19 CAR之T細胞並未誘導pSTAT5信號傳導，而在CD19 CAR之下游且表現IL-15壽司混合體之T細胞誘導較高的pSTAT5信號傳導。此數據證實IL-15-IL-15Rα壽司混合體在CD19 CAR之情況下具有功能。

一般而言，在以下申請專利範圍中，使用之用語不應解釋為將申請專利範圍限制為本說明書及申請專利範圍中所揭示之特定實施例，但應解釋為包括所有可能實施例連同此類申請專利範圍授權之等效物的完整範疇。因此，申請專利範圍不受本揭露限制。

無


          <![CDATA[<110> 美商凱特製藥公司(KITE PHARMA, INC.)]]>
          <![CDATA[<120> 改善免疫細胞功能]]>
          <![CDATA[<130> K-1103-TW-NP]]>
          <![CDATA[<140> TW 111108782]]>
          <![CDATA[<141> 2022-03-10]]>
          <![CDATA[<150> 63/210,300]]>
          <![CDATA[<151> 2021-06-14]]>
          <![CDATA[<150> 63/159,610]]>
          <![CDATA[<151> 2021-03-11]]>
          <![CDATA[<160> 109   ]]>
          <![CDATA[<170> PatentIn第3.5版]]>
          <![CDATA[<210> 1]]>
          <![CDATA[<211> 6]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 1]]>
          Cys His Tyr Ser Glu Leu 
          1               5       
          <![CDATA[<210> 2]]>
          <![CDATA[<211> 8]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> MOD_RES]]>
          <![CDATA[<222> (2)..(2)]]>
          <![CDATA[<223> V或I]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> MOD_RES]]>
          <![CDATA[<222> (4)..(4)]]>
          <![CDATA[<223>任何胺基酸]]>
          <![CDATA[<400> 2]]>
          Asp Xaa Glu Xaa Asn Pro Gly Pro 
          1               5               
          <![CDATA[<210> 3]]>
          <![CDATA[<211> 3]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 3]]>
          Ala Gly Ser 
          1           
          <![CDATA[<210> 4]]>
          <![CDATA[<211> 23]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 4]]>
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser 
                      20              
          <![CDATA[<210> 5]]>
          <![CDATA[<211> 10]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 5]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210> 6]]>
          <![CDATA[<211> 114]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>智人]]>
          <![CDATA[<400> 6]]>
          Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile 
          1               5                   10                  15      
          Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His 
                      20                  25                  30          
          Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln 
                  35                  40                  45              
          Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu 
              50                  55                  60                  
          Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val 
          65                  70                  75                  80  
          Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile 
                          85                  90                  95      
          Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn 
                      100                 105                 110         
          Thr Ser 
          <![CDATA[<210> 7]]>
          <![CDATA[<211> 66]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>智人]]>
          <![CDATA[<400> 7]]>
          Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val 
          1               5                   10                  15      
          Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly 
                      20                  25                  30          
          Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn 
                  35                  40                  45              
          Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile 
              50                  55                  60                  
          Arg Asp 
          65      
          <![CDATA[<210> 8]]>
          <![CDATA[<211> 46]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：合成多肽]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> SITE]]>
          <![CDATA[<222> (2)..(46)]]>
          <![CDATA[<223>此區可涵蓋1至9個「Gly Gly Gly Gly Ser」]]>
                重複單元
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>參見所提交之說明書以獲得取代及較]]>
                佳實施例之詳細描述
          <![CDATA[<400> 8]]>
          Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 
                      20                  25                  30          
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
                  35                  40                  45      
          <![CDATA[<210> 9]]>
          <![CDATA[<211> 16]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 9]]>
          Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          <![CDATA[<210> 10]]>
          <![CDATA[<211> 14]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>參見所提交之說明書以獲得取代及較]]>
                佳實施例之詳細描述
          <![CDATA[<400> 10]]>
          Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser 
          1               5                   10                  
          <![CDATA[<210> 11]]>
          <![CDATA[<211> 24]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 11]]>
          Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser 
                      20                  
          <![CDATA[<210> 12]]>
          <![CDATA[<211> 18]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>智人]]>
          <![CDATA[<400> 12]]>
          Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val 
          1               5                   10                  15      
          His Ser 
          <![CDATA[<210> 13]]>
          <![CDATA[<211> 20]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>智人]]>
          <![CDATA[<400> 13]]>
          Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Val Thr Asn Ser 
                      20  
          <![CDATA[<210> 14]]>
          <![CDATA[<211> 20]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>鼠屬(Mus sp.)]]>
          <![CDATA[<400> 14]]>
          Met Tyr Ser Met Gln Leu Ala Ser Cys Val Thr Leu Thr Leu Val Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Val Asn Ser 
                      20  
          <![CDATA[<210> 15]]>
          <![CDATA[<211> 20]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>智人]]>
          <![CDATA[<400> 15]]>
          Met Glu Thr Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro 
          1               5                   10                  15      
          Asp Thr Thr Gly 
                      20  
          <![CDATA[<210> 16]]>
          <![CDATA[<211> 20]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>鼠屬(Mus sp.)]]>
          <![CDATA[<400> 16]]>
          Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro 
          1               5                   10                  15      
          Gly Ser Thr Gly 
                      20  
          <![CDATA[<210> 17]]>
          <![CDATA[<211> 21]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>智人]]>
          <![CDATA[<400> 17]]>
          Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          His Ala Ala Arg Pro 
                      20      
          <![CDATA[<210> 18]]>
          <![CDATA[<211> 16]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>智人]]>
          <![CDATA[<400> 18]]>
          Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Ser Ser Ala Tyr Ser 
          1               5                   10                  15      
          <![CDATA[<210> 19]]>
          <![CDATA[<211> 48]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>智人]]>
          <![CDATA[<400> 19]]>
          Met Arg Ile Ser Lys Pro His Leu Arg Ser Ile Ser Ile Gln Cys Tyr 
          1               5                   10                  15      
          Leu Cys Leu Leu Leu Asn Ser His Phe Leu Thr Glu Ala Gly Ile His 
                      20                  25                  30          
          Val Phe Ile Leu Gly Cys Phe Ser Ala Gly Leu Pro Lys Thr Glu Ala 
                  35                  40                  45              
          <![CDATA[<210> 20]]>
          <![CDATA[<211> 30]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>智人]]>
          <![CDATA[<400> 20]]>
          Met Asp Ser Lys Gly Ser Ser Gln Lys Gly Ser Arg Leu Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Val Val Ser Asn Leu Leu Leu Cys Gln Gly Val Val Ser 
                      20                  25                  30  
          <![CDATA[<210> 21]]>
          <![CDATA[<211> 10]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 21]]>
          Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210> 22]]>
          <![CDATA[<211> 17]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 22]]>
          Leu Gly Trp Leu Cys Leu Leu Leu Leu Pro Ile Pro Leu Ile Val Trp 
          1               5                   10                  15      
          Val 
          <![CDATA[<210> 23]]>
          <![CDATA[<211> 28]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 23]]>
          Pro Ile Leu Leu Thr Cys Pro Thr Ile Ser Ile Leu Ser Phe Phe Ser 
          1               5                   10                  15      
          Val Ala Leu Leu Val Ile Leu Ala Cys Val Leu Trp 
                      20                  25              
          <![CDATA[<210> 24]]>
          <![CDATA[<211> 45]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：合成多肽]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> SITE]]>
          <![CDATA[<222> (1)..(45)]]>
          <![CDATA[<223> 此序列可涵蓋1至9個「Gly Gly Gly Gly Ser」重複單元]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>參見所提交之說明書以獲得取代及較]]>
                佳實施例之詳細描述
          <![CDATA[<400> 24]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 
                      20                  25                  30          
          Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
                  35                  40                  45  
          <![CDATA[<210> 25]]>
          <![CDATA[<211> 5]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 25]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser 
          1               5   
          <![CDATA[<210> 26]]>
          <![CDATA[<211> 10]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 26]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210> 27]]>
          <![CDATA[<211> 273]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 27]]>
          Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val 
          1               5                   10                  15      
          His Ser Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Ala Gly Ser Asn 
                      20                  25                  30          
          Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln 
                  35                  40                  45              
          Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro 
              50                  55                  60                  
          Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val 
          65                  70                  75                  80  
          Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn 
                          85                  90                  95      
          Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr 
                      100                 105                 110         
          Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys 
                  115                 120                 125             
          Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr 
              130                 135                 140                 
          Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met 
                          165                 170                 175     
          Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser 
                      180                 185                 190         
          Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr 
                  195                 200                 205             
          Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His 
              210                 215                 220                 
          Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Asp Gly Gly Gly Gly Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Gly Gly Gly Ser Arg Ser Asn Leu Gly Trp Leu Cys Leu Leu Leu 
                          245                 250                 255     
          Leu Pro Ile Pro Leu Ile Val Trp Val Lys Arg Lys Glu Val Gln Lys 
                      260                 265                 270         
          Thr 
          <![CDATA[<210> 28]]>
          <![CDATA[<211> 242]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 28]]>
          Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile 
          1               5                   10                  15      
          Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His 
                      20                  25                  30          
          Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln 
                  35                  40                  45              
          Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu 
              50                  55                  60                  
          Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val 
          65                  70                  75                  80  
          Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile 
                          85                  90                  95      
          Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn 
                      100                 105                 110         
          Thr Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
                  115                 120                 125             
          Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ile Thr Cys Pro Pro Pro 
              130                 135                 140                 
          Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly 
                          165                 170                 175     
          Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala 
                      180                 185                 190         
          His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Asp Gly Gly Gly Gly 
                  195                 200                 205             
          Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Ser Asn Leu Gly Trp Leu Cys Leu Leu 
              210                 215                 220                 
          Leu Leu Pro Ile Pro Leu Ile Val Trp Val Lys Arg Lys Glu Val Gln 
          225                 230                 235                 240 
          Lys Thr 
          <![CDATA[<210> 29]]>
          <![CDATA[<211> 273]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 29]]>
          Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val 
          1               5                   10                  15      
          His Ser Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Ala Gly Ser Asn 
                      20                  25                  30          
          Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln 
                  35                  40                  45              
          Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro 
              50                  55                  60                  
          Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val 
          65                  70                  75                  80  
          Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn 
                          85                  90                  95      
          Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr 
                      100                 105                 110         
          Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys 
                  115                 120                 125             
          Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr 
              130                 135                 140                 
          Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met 
                          165                 170                 175     
          Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser 
                      180                 185                 190         
          Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr 
                  195                 200                 205             
          Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His 
              210                 215                 220                 
          Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Asp Gly Gly Gly Gly Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Gly Gly Gly Ser Pro Ile Leu Leu Thr Cys Pro Thr Ile Ser Ile 
                          245                 250                 255     
          Leu Ser Phe Phe Ser Val Ala Leu Leu Val Ile Leu Ala Cys Val Leu 
                      260                 265                 270         
          Trp 
          <![CDATA[<210> 30]]>
          <![CDATA[<211> 242]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 30]]>
          Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile 
          1               5                   10                  15      
          Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His 
                      20                  25                  30          
          Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln 
                  35                  40                  45              
          Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu 
              50                  55                  60                  
          Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val 
          65                  70                  75                  80  
          Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile 
                          85                  90                  95      
          Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn 
                      100                 105                 110         
          Thr Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
                  115                 120                 125             
          Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ile Thr Cys Pro Pro Pro 
              130                 135                 140                 
          Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly 
                          165                 170                 175     
          Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala 
                      180                 185                 190         
          His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Asp Gly Gly Gly Gly 
                  195                 200                 205             
          Ser Gly Gly Gly Gly Ser Pro Ile Leu Leu Thr Cys Pro Thr Ile Ser 
              210                 215                 220                 
          Ile Leu Ser Phe Phe Ser Val Ala Leu Leu Val Ile Leu Ala Cys Val 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Trp 
          <![CDATA[<210> 31]]>
          <![CDATA[<211> 354]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成多核苷酸
          <![CDATA[<400> 31]]>
          gctggaagca attgggtgaa cgtgatctcc gacctcaaga agatcgagga tctgatccag       60
          tccatgcaca tcgatgccac actctacacc gagtccgatg tgcaccctag ctgcaaagtt      120
          acagccatga aatgctttct gctggagctg caagtgatct ctctggagtc cggagatgct      180
          tccatccacg acacagtgga gaatctgatc attctggcta acaactccct ctccagcaac      240
          ggcaatgtca cagagtccgg ctgcaaagag tgtgaagagc tggaggagaa aaacatcaaa      300
          gagtttctgc agagcttcgt ccacatcgtc cagatgttca tcaacacctc ctcc            354
          <![CDATA[<210> 32]]>
          <![CDATA[<211> 354]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成多核苷酸
          <![CDATA[<400> 32]]>
          gccggcagca actgggtcaa cgtgatctcc gatctgaaga agatcgaaga tctgatccag       60
          tccatgcaca tcgatgccac actgtacacc gagagcgacg tgcaccccag ctgcaaagtt      120
          acagccatga agtgctttct gctcgaactg caagtgattt ctctggagag cggagatgcc      180
          agcatccacg acaccgtgga gaatctgatc attctggcca acaactctct gagcagcaac      240
          ggcaatgtga cagagtccgg ctgtaaggag tgcgaggagc tggaggagaa aaacatcaaa      300
          gagtttctgc agagcttcgt ccacattgtc caaatgttca tcaacaccag cagc            354
          <![CDATA[<210> 33]]>
          <![CDATA[<211> 198]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成多核苷酸
          <![CDATA[<400> 33]]>
          attacatgcc ctccccccat gtccgtggaa catgccgaca tctgggtgaa gtcctactct       60
          ctgtactcgc gtgaacgtta tatctgcaac agcggcttta agaggaaggc cggaacctcc      120
          tctctgaccg aatgtgtgct gaacaaggcc accaatgtgg ctcactggac cacacctagc      180
          ctcaagtgta ttagggac                                                    198
          <![CDATA[<210> 34]]>
          <![CDATA[<211> 84]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成寡核苷酸
          <![CDATA[<400> 34]]>
          agaagcaatc tgggctggct gtgtctgctg ctgctcccca tccctctgat tgtgtgggtc       60
          aagaggaagg aggtccagaa aacc                                              84
          <![CDATA[<210> 35]]>
          <![CDATA[<211> 84]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成寡核苷酸
          <![CDATA[<400> 35]]>
          cctattctgc tgacatgccc caccatctcc atcctgtctt ttttttctgt tgctctgctg       60
          gtgattctgg cttgcgtgct gtgg                                              84
          <![CDATA[<210> 36]]>
          <![CDATA[<211> 69]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成寡核苷酸
          <![CDATA[<400> 36]]>
          ggcggcggca gcggcggcgg cggatccggc ggaggaggca gcggaggagg aggaagcgga       60
          ggaggctcc                                                               69
          <![CDATA[<210> 37]]>
          <![CDATA[<211> 69]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成寡核苷酸
          <![CDATA[<400> 37]]>
          ggcggcggct ccggcggcgg aggctccggc ggaggcggat ccggcggcgg cggatccggc       60
          ggaggatcc                                                               69
          <![CDATA[<210> 38]]>
          <![CDATA[<211> 30]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成寡核苷酸
          <![CDATA[<400> 38]]>
          ggcggcggag gatccggagg aggcggatct                                        30
          <![CDATA[<210> 39]]>
          <![CDATA[<211> 30]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成寡核苷酸
          <![CDATA[<400> 39]]>
          ggcggcggag gaagcggagg aggaggaagc                                        30
          <![CDATA[<210> 40]]>
          <![CDATA[<211> 735]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成多核苷酸
          <![CDATA[<400> 40]]>
          gctggaagca attgggtgaa cgtgatctcc gacctcaaga agatcgagga tctgatccag       60
          tccatgcaca tcgatgccac actctacacc gagtccgatg tgcaccctag ctgcaaagtt      120
          acagccatga aatgctttct gctggagctg caagtgatct ctctggagtc cggagatgct      180
          tccatccacg acacagtgga gaatctgatc attctggcta acaactccct ctccagcaac      240
          ggcaatgtca cagagtccgg ctgcaaagag tgtgaagagc tggaggagaa aaacatcaaa      300
          gagtttctgc agagcttcgt ccacatcgtc cagatgttca tcaacacctc ctccggcggc      360
          ggcagcggcg gcggcggatc cggcggagga ggcagcggag gaggaggaag cggaggaggc      420
          tccattacat gccctccccc catgtccgtg gaacatgccg acatctgggt gaagtcctac      480
          tctctgtact cgcgtgaacg ttatatctgc aacagcggct ttaagaggaa ggccggaacc      540
          tcctctctga ccgaatgtgt gctgaacaag gccaccaatg tggctcactg gaccacacct      600
          agcctcaagt gtattaggga cggcggcgga ggatccggag gaggcggatc tagaagcaat      660
          ctgggctggc tgtgtctgct gctgctcccc atccctctga ttgtgtgggt caagaggaag      720
          gaggtccaga aaacc                                                       735
          <![CDATA[<210> 41]]>
          <![CDATA[<211> 738]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成多核苷酸
          <![CDATA[<400> 41]]>
          gccggcagca actgggtcaa cgtgatctcc gatctgaaga agatcgaaga tctgatccag       60
          tccatgcaca tcgatgccac actgtacacc gagagcgacg tgcaccccag ctgcaaagtt      120
          acagccatga agtgctttct gctcgaactg caagtgattt ctctggagag cggagatgcc      180
          agcatccacg acaccgtgga gaatctgatc attctggcca acaactctct gagcagcaac      240
          ggcaatgtga cagagtccgg ctgtaaggag tgcgaggagc tggaggagaa aaacatcaaa      300
          gagtttctgc agagcttcgt ccacattgtc caaatgttca tcaacaccag cagcggcggc      360
          ggctccggcg gcggaggctc cggcggaggc ggatccggcg gcggcggatc cggcggagga      420
          tccattacat gcccccctcc catgtccgtg gaacacgccg acatctgggt gaagagctac      480
          tctctgtaca gcagagagcg ttacatctgc aacagcggct ttaagaggaa agccggcacc      540
          agcagcctca cagagtgcgt gctcaacaag gccaccaacg tcgcccattg gaccaccccc      600
          tctctgaagt gtattaggga cggcggcgga ggaagcggag gaggaggaag ccctattctg      660
          ctgacatgcc ccaccatctc catcctgtct tttttttctg ttgctctgct ggtgattctg      720
          gcttgcgtgc tgtggtga                                                    738
          <![CDATA[<210> 42]]>
          <![CDATA[<211> 28]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 42]]>
          Arg Ser Asn Leu Gly Trp Leu Cys Leu Leu Leu Leu Pro Ile Pro Leu 
          1               5                   10                  15      
          Ile Val Trp Val Lys Arg Lys Glu Val Gln Lys Thr 
                      20                  25              
          <![CDATA[<210> 43]]>
          <![CDATA[<211> 263]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 43]]>
          Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val 
          1               5                   10                  15      
          His Ser Ala Gly Ser Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys 
                      20                  25                  30          
          Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr 
                  35                  40                  45              
          Glu Ser Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe 
              50                  55                  60                  
          Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile 
          65                  70                  75                  80  
          His Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser 
                          85                  90                  95      
          Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu 
                      100                 105                 110         
          Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val 
                  115                 120                 125             
          Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
              130                 135                 140                 
          Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ile 
          145                 150                 155                 160 
          Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys 
                          165                 170                 175     
          Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe 
                      180                 185                 190         
          Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys 
                  195                 200                 205             
          Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg 
              210                 215                 220                 
          Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Ser Asn Leu Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Trp Leu Cys Leu Leu Leu Leu Pro Ile Pro Leu Ile Val Trp Val Lys 
                          245                 250                 255     
          Arg Lys Glu Val Gln Lys Thr 
                      260             
          <![CDATA[<210> 44]]>
          <![CDATA[<211> 263]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 44]]>
          Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val 
          1               5                   10                  15      
          His Ser Ala Gly Ser Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys 
                      20                  25                  30          
          Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr 
                  35                  40                  45              
          Glu Ser Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe 
              50                  55                  60                  
          Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile 
          65                  70                  75                  80  
          His Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser 
                          85                  90                  95      
          Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu 
                      100                 105                 110         
          Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val 
                  115                 120                 125             
          Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
              130                 135                 140                 
          Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ile 
          145                 150                 155                 160 
          Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys 
                          165                 170                 175     
          Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe 
                      180                 185                 190         
          Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys 
                  195                 200                 205             
          Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg 
              210                 215                 220                 
          Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Pro Ile Leu Leu Thr 
          225                 230                 235                 240 
          Cys Pro Thr Ile Ser Ile Leu Ser Phe Phe Ser Val Ala Leu Leu Val 
                          245                 250                 255     
          Ile Leu Ala Cys Val Leu Trp 
                      260             
          <![CDATA[<210> 45]]>
          <![CDATA[<211> 18]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 45]]>
          Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr 
          1               5                   10                  15      
          Lys Gly 
          <![CDATA[<210> 46]]>
          <![CDATA[<211> 54]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成寡核苷酸
          <![CDATA[<400> 46]]>
          ggctccacct ctggatccgg caagcccgga tctggcgagg gatccaccaa gggc             54
          <![CDATA[<210> 47]]>
          <![CDATA[<211> 54]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成寡核苷酸
          <![CDATA[<400> 47]]>
          gggagcacta gcggctctgg caaacctgga tctggcgagg gatctaccaa gggc             54
          <![CDATA[<210> 48]]>
          <![CDATA[<211> 54]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成寡核苷酸
          <![CDATA[<400> 48]]>
          ggctccacca gcggaagcgg caagccaggc tcaggcgaag gatctacaaa aggc             54
          <![CDATA[<210> 49]]>
          <![CDATA[<211> 54]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成寡核苷酸
          <![CDATA[<400> 49]]>
          gggagcacaa gcggctctgg caaacctgga tccggcgagg gatctaccaa gggc             54
          <![CDATA[<210> 50]]>
          <![CDATA[<211> 39]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 50]]>
          Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn 
          1               5                   10                  15      
          Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu 
                      20                  25                  30          
          Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro 
                  35                  
          <![CDATA[<210> 51]]>
          <![CDATA[<211> 117]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成多核苷酸
          <![CDATA[<400> 51]]>
          attgaagtta tgtatcctcc tccttaccta gacaatgaga agagcaatgg aaccattatc       60
          catgtgaaag ggaaacacct ttgtccaagt cccctatttc ccggaccttc taagccc         117
          <![CDATA[<210> 52]]>
          <![CDATA[<211> 30]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 52]]>
          Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys 
          1               5                   10                  15      
          His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro 
                      20                  25                  30  
          <![CDATA[<210> 53]]>
          <![CDATA[<211> 90]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成寡核苷酸
          <![CDATA[<400> 53]]>
          ctagacaatg agaagagcaa tggaaccatt atccatgtga aagggaaaca cctttgtcca       60
          agtcccctat ttcccggacc ttctaagccc                                        90
          <![CDATA[<210> 54]]>
          <![CDATA[<211> 55]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 54]]>
          Phe Val Pro Val Phe Leu Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro 
          1               5                   10                  15      
          Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu 
                      20                  25                  30          
          Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg 
                  35                  40                  45              
          Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp 
              50                  55  
          <![CDATA[<210> 55]]>
          <![CDATA[<211> 165]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成多核苷酸
          <![CDATA[<400> 55]]>
          ttcgtgcctg tgttcctgcc tgctaagccc accaccactc ctgctccaag acctcctacc       60
          cccgctccta caatcgccag ccaacctctg agcctgagac cggaggcatg cagacctgcg      120
          gcagggggag cagttcacac aagaggcttg gacttcgctt gcgac                      165
          <![CDATA[<210> 56]]>
          <![CDATA[<211> 27]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 56]]>
          Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val 
                      20                  25          
          <![CDATA[<210> 57]]>
          <![CDATA[<211> 81]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成寡核苷酸
          <![CDATA[<400> 57]]>
          ttttgggtgc tggtggtggt tgggggagtc ctggcttgct atagcttgct agtaacagtg       60
          gcctttatta ttttctgggt g                                                 81
          <![CDATA[<210> 58]]>
          <![CDATA[<211> 28]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 58]]>
          Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn 
                      20                  25              
          <![CDATA[<210> 59]]>
          <![CDATA[<211> 84]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成寡核苷酸
          <![CDATA[<400> 59]]>
          atctacatct gggcccctct ggccggcaca tgcggagttc ttcttcttag cctggtgatc       60
          accctgtact gcaaccacag aaac                                              84
          <![CDATA[<210> 60]]>
          <![CDATA[<211> 111]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 60]]>
          Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln 
          1               5                   10                  15      
          Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp 
                      20                  25                  30          
          Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro 
                  35                  40                  45              
          Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp 
              50                  55                  60                  
          Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr 
                          85                  90                  95      
          Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 
                      100                 105                 110     
          <![CDATA[<210> 61]]>
          <![CDATA[<211> 336]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成多核苷酸
          <![CDATA[<400> 61]]>
          agagtgaagt tcagcaggag cgcagacgcc cccgcgtacc agcagggcca gaaccagctc       60
          tataacgagc tcaatctagg acgaagagag gagtacgatg ttttggacaa gaggcgtggc      120
          cgggaccctg agatgggggg aaagccgaga aggaagaacc ctcaggaagg cctgtacaat      180
          gaactgcaga aagataagat ggcggaggcc tacagtgaga ttgggatgaa aggcgagcgc      240
          cggaggggca aggggcacga tggcctttac cagggtctca gtacagccac caaggacacc      300
          tacgacgccc ttcacatgca ggccctgccc cctcgc                                336
          <![CDATA[<210> 62]]>
          <![CDATA[<211> 41]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 62]]>
          Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr 
          1               5                   10                  15      
          Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro 
                      20                  25                  30          
          Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser 
                  35                  40      
          <![CDATA[<210> 63]]>
          <![CDATA[<211> 123]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成多核苷酸
          <![CDATA[<400> 63]]>
          aggagtaaga ggagcaggct cctgcacagt gactacatga acatgactcc ccgccgcccc       60
          gggcccaccc gcaagcatta ccagccctat gccccaccac gcgacttcgc agcctatcgc      120
          tcc                                                                    123
          <![CDATA[<210> 64]]>
          <![CDATA[<211> 47]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 64]]>
          Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe 
          1               5                   10                  15      
          Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly 
                      20                  25                  30          
          Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu 
                  35                  40                  45          
          <![CDATA[<210> 65]]>
          <![CDATA[<211> 141]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成多核苷酸
          <![CDATA[<400> 65]]>
          agattcagcg ttgtgaagag aggccggaag aagctgctgt acatcttcaa gcagcccttc       60
          atgagacctg tgcagaccac acaggaggaa gacggctgca gctgtagatt ccccgaggaa      120
          gaggagggcg gctgtgagct g                                                141
          <![CDATA[<210> 66]]>
          <![CDATA[<211> 22]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 66]]>
          Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro 
          1               5                   10                  15      
          Ala Phe Leu Leu Ile Pro 
                      20          
          <![CDATA[<210> 67]]>
          <![CDATA[<211> 19]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 67]]>
          Met Glu Trp Thr Trp Val Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly 
          1               5                   10                  15      
          Val His Ser 
          <![CDATA[<210> 68]]>
          <![CDATA[<211> 21]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 68]]>
          Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          His Ala Ala Arg Pro 
                      20      
          <![CDATA[<210> 69]]>
          <![CDATA[<211> 120]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 69]]>
          Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu 
                  35                  40                  45              
          Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 
              50                  55                  60                  
          Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120 
          <![CDATA[<210> 70]]>
          <![CDATA[<211> 8]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 70]]>
          Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly 
          1               5               
          <![CDATA[<210> 71]]>
          <![CDATA[<211> 5]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 71]]>
          Asp Tyr Gly Val Ser 
          1               5   
          <![CDATA[<210> 72]]>
          <![CDATA[<211> 7]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 72]]>
          Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr 
          1               5           
          <![CDATA[<210> 73]]>
          <![CDATA[<211> 7]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 73]]>
          Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr 
          1               5           
          <![CDATA[<210> 74]]>
          <![CDATA[<211> 16]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 74]]>
          Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser 
          1               5                   10                  15      
          <![CDATA[<210> 75]]>
          <![CDATA[<211> 5]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 75]]>
          Trp Gly Ser Glu Thr 
          1               5   
          <![CDATA[<210> 76]]>
          <![CDATA[<211> 14]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 76]]>
          Ala Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr 
          1               5                   10                  
          <![CDATA[<210> 77]]>
          <![CDATA[<211> 12]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 77]]>
          His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210> 78]]>
          <![CDATA[<211> 12]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 78]]>
          His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210> 79]]>
          <![CDATA[<211> 107]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 79]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr 
                      20                  25                  30          
          Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210> 80]]>
          <![CDATA[<211> 11]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 80]]>
          Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210> 81]]>
          <![CDATA[<211> 11]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 81]]>
          Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210> 82]]>
          <![CDATA[<211> 11]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 82]]>
          Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210> 83]]>
          <![CDATA[<211> 7]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 83]]>
          His Thr Ser Arg Leu His Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210> 84]]>
          <![CDATA[<211> 7]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 84]]>
          His Thr Ser Arg Leu His Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210> 85]]>
          <![CDATA[<211> 7]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 85]]>
          His Thr Ser Arg Leu His Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210> 86]]>
          <![CDATA[<211> 9]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 86]]>
          Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210> 87]]>
          <![CDATA[<211> 9]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 87]]>
          Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210> 88]]>
          <![CDATA[<211> 9]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 88]]>
          Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210> 89]]>
          <![CDATA[<211> 245]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 89]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr 
                      20                  25                  30          
          Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Gly Ser Thr Ser Gly 
                      100                 105                 110         
          Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val Lys 
                  115                 120                 125             
          Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser 
              130                 135                 140                 
          Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile 
                          165                 170                 175     
          Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu 
                      180                 185                 190         
          Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn 
                  195                 200                 205             
          Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr 
              210                 215                 220                 
          Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Val Thr Val Ser Ser 
                          245 
          <![CDATA[<210> 90]]>
          <![CDATA[<211> 467]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 90]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr 
                      20                  25                  30          
          Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Gly Ser Thr Ser Gly 
                      100                 105                 110         
          Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val Lys 
                  115                 120                 125             
          Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser 
              130                 135                 140                 
          Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile 
                          165                 170                 175     
          Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu 
                      180                 185                 190         
          Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn 
                  195                 200                 205             
          Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr 
              210                 215                 220                 
          Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro 
                          245                 250                 255     
          Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly 
                      260                 265                 270         
          Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe 
                  275                 280                 285             
          Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu 
              290                 295                 300                 
          Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg 
          305                 310                 315                 320 
          Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro 
                          325                 330                 335     
          Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr 
                  355                 360                 365             
          Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg 
              370                 375                 380                 
          Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met 
          385                 390                 395                 400 
          Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu 
                          405                 410                 415     
          Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys 
                      420                 425                 430         
          Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu 
                  435                 440                 445             
          Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu 
              450                 455                 460                 
          Pro Pro Arg 
          465         
          <![CDATA[<210> 91]]>
          <![CDATA[<211> 1401]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成多核苷酸
          <![CDATA[<400> 91]]>
          gacattcaga tgacccagac caccagcagc ctgagcgcca gcttaggaga tagagttacc       60
          atcagctgca gagccagcca ggacatcagc aaatacctga actggtatca gcagaagccc      120
          gacggcactg tgaaactgct tatttaccac acctccagac tgcacagcgg cgttcccagc      180
          agattctctg gcagcggatc tggaaccgac tacagcctca ccatctccaa cctggagcag      240
          gaggacatcg ccacctactt ctgccagcag ggcaacacac tgccctacac cttcggagga      300
          ggaaccaagc tggagatcac cggctccacc tctggatccg gcaagcccgg atctggcgag      360
          ggatccacca agggcgaggt taagctgcag gagagcggcc ctggcctggt ggctcctagc      420
          caatctttat ctgtgacctg cactgtgtcc ggcgttagcc tgcccgatta tggcgtttcc      480
          tggatcagac agccccccag aaagggcctg gaatggctgg gcgttatctg gggcagcgag      540
          accacatact acaacagcgc cctgaagagc agacttacga ttatcaagga caacagcaag      600
          agccaggttt tcctgaagat gaacagcctg cagaccgacg acaccgccat ctactactgc      660
          gctaagcact actactacgg cggcagctac gccatggact actggggcca gggaacaagc      720
          gttaccgtta gcagcgctgc tgcaattgaa gttatgtatc ctcctcctta cctggacaac      780
          gagaagagca acggcaccat catccacgtt aagggcaagc acctgtgccc cagccctctg      840
          ttccctggac cttctaagcc tttctgggtt ctggtggtgg tcggcggcgt tttagcctgt      900
          tacagccttc tggtgactgt ggccttcatc atcttttggg ttagaagcaa gagaagcaga      960
          ctgctccaca gcgactacat gaacatgacc cccagacggc ctggccccac cagaaagcat     1020
          taccagccct acgctcctcc cagagacttc gccgcctaca ggagcagagt taaattcagc     1080
          agatccgccg atgcccccgc ttaccaacag ggacaaaacc agctgtacaa tgagctcaac     1140
          ctggggagaa gagaagaata cgacgttctg gataagagaa ggggcagaga tcccgaaatg     1200
          gggggcaagc ccagacgcaa gaaccctcag gaggggcttt acaacgaact gcagaaggat     1260
          aagatggctg aggcttactc ggagattggg atgaaggggg agagaaggcg gggcaaggga     1320
          cacgatggct tataccaggg gctgagcacc gccaccaagg acacatacga cgctcttcat     1380
          atgcaggctc tgcccccaag a                                               1401
          <![CDATA[<210> 92]]>
          <![CDATA[<211> 761]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 92]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr 
                      20                  25                  30          
          Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Gly Ser Thr Ser Gly 
                      100                 105                 110         
          Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val Lys 
                  115                 120                 125             
          Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser 
              130                 135                 140                 
          Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile 
                          165                 170                 175     
          Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu 
                      180                 185                 190         
          Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn 
                  195                 200                 205             
          Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr 
              210                 215                 220                 
          Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro 
                          245                 250                 255     
          Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly 
                      260                 265                 270         
          Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe 
                  275                 280                 285             
          Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu 
              290                 295                 300                 
          Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg 
          305                 310                 315                 320 
          Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro 
                          325                 330                 335     
          Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala 
                      340                 345                 350         
          Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr 
                  355                 360                 365             
          Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg 
              370                 375                 380                 
          Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met 
          385                 390                 395                 400 
          Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu 
                          405                 410                 415     
          Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys 
                      420                 425                 430         
          Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu 
                  435                 440                 445             
          Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu 
              450                 455                 460                 
          Pro Pro Arg Gly Ser Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly 
          465                 470                 475                 480 
          Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe 
                          485                 490                 495     
          Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val His Ser Glu Gln Lys Leu Ile Ser 
                      500                 505                 510         
          Glu Glu Asp Leu Ala Gly Ser Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu 
                  515                 520                 525             
          Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu 
              530                 535                 540                 
          Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys 
          545                 550                 555                 560 
          Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala 
                          565                 570                 575     
          Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser 
                      580                 585                 590         
          Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu 
                  595                 600                 605             
          Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His 
              610                 615                 620                 
          Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly 
          625                 630                 635                 640 
          Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 
                          645                 650                 655     
          Ser Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp 
                      660                 665                 670         
          Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser 
                  675                 680                 685             
          Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu 
              690                 695                 700                 
          Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys 
          705                 710                 715                 720 
          Ile Arg Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Ser Asn 
                          725                 730                 735     
          Leu Gly Trp Leu Cys Leu Leu Leu Leu Pro Ile Pro Leu Ile Val Trp 
                      740                 745                 750         
          Val Lys Arg Lys Glu Val Gln Lys Thr 
                  755                 760     
          <![CDATA[<210> 93]]>
          <![CDATA[<211> 2286]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成多核苷酸
          <![CDATA[<400> 93]]>
          gacatccaga tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagagtcacc       60
          atcagttgca gggcaagtca ggacattagt aaatatttaa attggtatca gcagaaacca      120
          gatggaactg ttaaactcct gatctaccat acatcaagat tacactcagg agtcccatca      180
          aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccattagcaa cctggagcaa      240
          gaagatattg ccacttactt ttgccaacag ggtaatacgc ttccgtacac gttcggaggg      300
          gggactaagt tggaaataac aggctccacc tctggatccg gcaagcccgg atctggcgag      360
          ggatccacca agggcgaggt gaaactgcag gagtcaggac ctggcctggt ggcgccctca      420
          cagagcctgt ccgtcacatg cactgtctca ggggtctcat tacccgacta tggtgtaagc      480
          tggattcgcc agcctccacg aaagggtctg gagtggctgg gagtaatatg gggtagtgaa      540
          accacatact ataattcagc tctcaaatcc agactgacca tcatcaagga caactccaag      600
          agccaagttt tcttaaaaat gaacagtctg caaactgatg acacagccat ttactactgt      660
          gccaaacatt attactacgg tggtagctat gctatggact actggggtca aggaacctca      720
          gtcacagtct cctcagcggc cgcaattgaa gttatgtatc ctcctcctta cctagacaat      780
          gagaagagca atggaaccat tatccatgtg aaagggaaac acctttgtcc aagtccccta      840
          tttcccggac cttctaagcc cttttgggtg ctggtggtgg ttgggggagt cctggcttgc      900
          tatagcttgc tagtaacagt ggcctttatt attttctggg tgaggagtaa gaggagcagg      960
          ctcctgcaca gtgactacat gaacatgact ccccgccgcc ccgggcccac ccgcaagcat     1020
          taccagccct atgccccacc acgcgacttc gcagcctatc gctccagagt gaagttcagc     1080
          aggagcgcag acgcccccgc gtaccagcag ggccagaacc agctctataa cgagctcaat     1140
          ctaggacgaa gagaggagta cgatgttttg gacaagaggc gtggccggga ccctgagatg     1200
          gggggaaagc cgagaaggaa gaaccctcag gaaggcctgt acaatgaact gcagaaagat     1260
          aagatggcgg aggcctacag tgagattggg atgaaaggcg agcgccggag gggcaagggg     1320
          cacgatggcc tttaccaggg tctcagtaca gccaccaagg acacctacga cgcccttcac     1380
          atgcaggccc tgccccctcg cggctctggc gaaggcagag gctctctgct gacctgcggc     1440
          gacgtggaag agaacccagg ccccatggac tggacatgga ttctgtttct tgtggctgcc     1500
          gccacaagag tgcacagcga gcagaagctg atcagcgagg aagacctcgc tggaagcaat     1560
          tgggtgaacg tgatctccga cctcaaaaag atcgaggatc tgatccagtc catgcacatc     1620
          gatgccacac tctacaccga gtccgatgtg caccctagct gcaaagttac agcaatgaaa     1680
          tgctttctgc tggagttgca agtaatctcc ctggagtccg gagatgcttc catccacgac     1740
          acagtggaga atttaatcat tctggctaac aattccctct cgtctaatgg caatgtcact     1800
          gagagcggct gtaaagagtg tgaagagctg gaggagaaaa acatcaaaga gtttctgcag     1860
          agcttcgtcc acatcgtcca aatgttcatc aacacctcgt ccgggggcgg ctccggggga     1920
          ggaggatcgg ggggaggagg aagcggaggt ggaggaagcg gtggagggtc cattacatgc     1980
          cctcccccca tgtccgtgga acatgccgac atatgggtaa agtcctactc tctgtactcg     2040
          cgggaacgtt atatctgcaa cagcggcttt aagagaaagg ccggaacatc ttctctgacc     2100
          gaatgtgtgc tgaacaaggc cacaaatgtg gctcactgga ccacgcctag cctcaagtgt     2160
          attagggacg gcggcggagg ttccggtggc gggggctcta gatcgaatct gggctggctg     2220
          tgtctgctgc tgctccccat ccctctgatt gtgtgggtta agcgaaaaga ggtccagaaa     2280
          acctaa                                                                2286
          <![CDATA[<210> 94]]>
          <![CDATA[<211> 372]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 94]]>
          Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val 
          1               5                   10                  15      
          His Ser Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Ala Gly Ser Asn 
                      20                  25                  30          
          Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln 
                  35                  40                  45              
          Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro 
              50                  55                  60                  
          Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val 
          65                  70                  75                  80  
          Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn 
                          85                  90                  95      
          Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr 
                      100                 105                 110         
          Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys 
                  115                 120                 125             
          Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr 
              130                 135                 140                 
          Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met 
                          165                 170                 175     
          Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser 
                      180                 185                 190         
          Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr 
                  195                 200                 205             
          Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His 
              210                 215                 220                 
          Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Asp Pro Ala Leu Val His 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser Thr Val Thr Thr Ala Gly Val Thr Pro 
                          245                 250                 255     
          Gln Pro Glu Ser Leu Ser Pro Ser Gly Lys Glu Pro Ala Ala Ser Ser 
                      260                 265                 270         
          Pro Ser Ser Asn Asn Thr Ala Ala Thr Thr Ala Ala Ile Val Pro Gly 
                  275                 280                 285             
          Ser Gln Leu Met Pro Ser Lys Ser Pro Ser Thr Gly Thr Thr Glu Ile 
              290                 295                 300                 
          Ser Ser His Glu Ser Ser His Gly Thr Pro Ser Gln Thr Thr Ala Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Asn Trp Glu Leu Thr Ala Ser Ala Ser His Gln Pro Pro Gly Gly Gly 
                          325                 330                 335     
          Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Ser Asn Leu Gly Trp Leu Cys 
                      340                 345                 350         
          Leu Leu Leu Leu Pro Ile Pro Leu Ile Val Trp Val Lys Arg Lys Glu 
                  355                 360                 365             
          Val Gln Lys Thr 
              370         
          <![CDATA[<210> 95]]>
          <![CDATA[<211> 165]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>智人]]>
          <![CDATA[<400> 95]]>
          Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val 
          1               5                   10                  15      
          Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly 
                      20                  25                  30          
          Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn 
                  35                  40                  45              
          Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile 
              50                  55                  60                  
          Arg Asp Pro Ala Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser Thr Val 
          65                  70                  75                  80  
          Thr Thr Ala Gly Val Thr Pro Gln Pro Glu Ser Leu Ser Pro Ser Gly 
                          85                  90                  95      
          Lys Glu Pro Ala Ala Ser Ser Pro Ser Ser Asn Asn Thr Ala Ala Thr 
                      100                 105                 110         
          Thr Ala Ala Ile Val Pro Gly Ser Gln Leu Met Pro Ser Lys Ser Pro 
                  115                 120                 125             
          Ser Thr Gly Thr Thr Glu Ile Ser Ser His Glu Ser Ser His Gly Thr 
              130                 135                 140                 
          Pro Ser Gln Thr Thr Ala Lys Asn Trp Glu Leu Thr Ala Ser Ala Ser 
          145                 150                 155                 160 
          His Gln Pro Pro Gly 
                          165 
          <![CDATA[<210> 96]]>
          <![CDATA[<211> 783]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成多核苷酸
          <![CDATA[<400> 96]]>
          atggactgga catggattct gtttctggtg gccgccgcca caagagtgca cagcaattgg       60
          gtgaacgtga tctccgacct caagaagatc gaggatctga tccagtccat gcacatcgat      120
          gccacactct acaccgagtc cgatgtgcac cctagctgca aagttacagc catgaaatgc      180
          tttctgctgg agctgcaagt gatctctctg gagtccggag atgcttccat ccacgacaca      240
          gtggagaatc tgatcattct ggctaacaac tccctctcca gcaacggcaa tgtcacagag      300
          tccggctgca aagagtgtga agagctggag gagaaaaaca tcaaagagtt tctgcagagc      360
          ttcgtccaca tcgtccagat gttcatcaac acctcctccg gcggcggcag cggcggcggc      420
          ggatccggcg gaggaggcag cggaggagga ggaagcggag gaggctccat tacatgccct      480
          ccccccatgt ccgtggaaca tgccgacatc tgggtgaagt cctactctct gtactcgcgt      540
          gaacgttata tctgcaacag cggctttaag aggaaggccg gaacctcctc tctgaccgaa      600
          tgtgtgctga acaaggccac caatgtggct cactggacca cacctagcct caagtgtatt      660
          agggacggcg gcggaggatc cggaggaggc ggatctagaa gcaatctggg ctggctgtgt      720
          ctgctgctgc tccccatccc tctgattgtg tgggtcaaga ggaaggaggt ccagaaaacc      780
          taa                                                                    783
          <![CDATA[<210> 97]]>
          <![CDATA[<211> 783]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成多核苷酸
          <![CDATA[<400> 97]]>
          atggactgga catggattct gtttctggtg gccgccgcca caagagtgca ctccaactgg       60
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          gtggagaatc tgatcattct ggccaacaac tctctgagca gcaacggcaa tgtgacagag      300
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          <![CDATA[<210> 98]]>
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          <![CDATA[<212> DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成多核苷酸
          <![CDATA[<400> 98]]>
          atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg       60
          atcccagaca tccagatgac acagactaca tcctccctgt ctgcctctct gggagacaga      120
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          aaaccagatg gaactgttaa actcctgatc taccatacat caagattaca ctcaggagtc      240
          ccatcaaggt tcagtggcag tgggtctgga acagattatt ctctcaccat tagcaacctg      300
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          agtgaaacca catactataa ttcagctctc aaatccagac tgaccatcat caaggacaac      660
          tccaagagcc aagttttctt aaaaatgaac agtctgcaaa ctgatgacac agccatttac      720
          tactgtgcca aacattatta ctacggtggt agctatgcta tggactactg gggtcaagga      780
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          gacaatgaga agagcaatgg aaccattatc catgtgaaag ggaaacacct ttgtccaagt      900
          cccctatttc ccggaccttc taagcccttt tgggtgctgg tggtggttgg gggagtcctg      960
          gcttgctata gcttgctagt aacagtggcc tttattattt tctgggtgag gagtaagagg     1020
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          gagatggggg gaaagccgag aaggaagaac cctcaggaag gcctgtacaa tgaactgcag     1320
          aaagataaga tggcggaggc ctacagtgag attgggatga aaggcgagcg ccggaggggc     1380
          aaggggcacg atggccttta ccagggtctc agtacagcca ccaaggacac ctacgacgcc     1440
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          tgcggcgacg tggaagagaa cccaggcccc atggactgga catggattct gtttctggtg     1560
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          gaggatctga tccagtccat gcacatcgat gccacactct acaccgagtc cgatgtgcac     1680
          cctagctgca aagttacagc catgaaatgc tttctgctgg agctgcaagt gatctctctg     1740
          gagtccggag atgcttccat ccacgacaca gtggagaatc tgatcattct ggctaacaac     1800
          tccctctcca gcaacggcaa tgtcacagag tccggctgca aagagtgtga agagctggag     1860
          gagaaaaaca tcaaagagtt tctgcagagc ttcgtccaca tcgtccagat gttcatcaac     1920
          acctcctccg gcggcggcag cggcggcggc ggatccggcg gaggaggcag cggaggagga     1980
          ggaagcggag gaggctccat tacatgccct ccccccatgt ccgtggaaca tgccgacatc     2040
          tgggtgaagt cctactctct gtactcgcgt gaacgttata tctgcaacag cggctttaag     2100
          aggaaggccg gaacctcctc tctgaccgaa tgtgtgctga acaaggccac caatgtggct     2160
          cactggacca cacctagcct caagtgtatt agggacggcg gcggaggatc cggaggaggc     2220
          ggatctagaa gcaatctggg ctggctgtgt ctgctgctgc tccccatccc tctgattgtg     2280
          tgggtcaaga ggaaggaggt ccagaaaacc taa                                  2313
          <![CDATA[<210> 99]]>
          <![CDATA[<211> 2337]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成多核苷酸
          <![CDATA[<400> 99]]>
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                合成多核苷酸
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          gctactctgt acactgagtc cgatgtgcat ccgtcctgta aagtgacagc catgaagtgt      180
          ttcctgcttg agctccaagt tatcagtctc gaatccggcg atgcctcaat acatgatact      240
          gtagagaacc tcatcattct cgcaaacaat tccctgtcaa gcaatggaaa tgttacggag      300
          tcaggttgta aagaatgtga ggaattggaa gaaaagaaca taaaagagtt cttgcagagt      360
          ttcgtgcaca tcgtacaaat gttcatcaat acgagtagtg gtggtggttc cggaggagga      420
          ggatctggcg gaggcggtag tggtggagga ggatccggag gtgggagtat aacttgtccg      480
          ccgcccatga gtgtggaaca tgctgatata tgggtaaagt cttattcact ttatagcaga      540
          gaacgctata tttgtaattc tggcttcaag cgaaaagctg gcacgagcag tctcacggag      600
          tgcgtcctga acaaggcaac caacgtcgcg cattggacaa ctcctagcct caaatgcata      660
          agggaccctg cactggtgca ccaacgccct gcgccaccgt caacggtcac tacagctggc      720
          gttacaccgc agccagaatc tttgagtcca tcaggcaagg aacccgcggc gtcttccccg      780
          tcttctaaca ataccgccgc aacgacggcg gcaatcgtgc cgggatcaca actcatgcct      840
          tccaaaagtc cctcaacggg cacgacagag attagcagcc acgaaagctc ccatggcact      900
          ccctcacaaa cgaccgcgaa gaactgggag ctgactgcaa gtgcatctca ccagccaccg      960
          ggtggcgggg gtggatcagg tggcggtggc tctcgctcca acctcggttg gctttgcctt     1020
          cttttgctgc ccataccgtt gatcgtctgg gttaagcgca aagaagtcca gaaaacttaa     1080
          <![CDATA[<210> 101]]>
          <![CDATA[<211> 2622]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成多核苷酸
          <![CDATA[<400> 101]]>
          atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg       60
          atcccagaca tccagatgac acagactaca tcctccctgt ctgcctctct gggagacaga      120
          gtcaccatca gttgcagggc aagtcaggac attagtaaat atttaaattg gtatcagcag      180
          aaaccagatg gaactgttaa actcctgatc taccatacat caagattaca ctcaggagtc      240
          ccatcaaggt tcagtggcag tgggtctgga acagattatt ctctcaccat tagcaacctg      300
          gagcaagaag atattgccac ttacttttgc caacagggta atacgcttcc gtacacgttc      360
          ggagggggga ctaagttgga aataacaggc tccacctctg gatccggcaa gcccggatct      420
          ggcgagggat ccaccaaggg cgaggtgaaa ctgcaggagt caggacctgg cctggtggcg      480
          ccctcacaga gcctgtccgt cacatgcact gtctcagggg tctcattacc cgactatggt      540
          gtaagctgga ttcgccagcc tccacgaaag ggtctggagt ggctgggagt aatatggggt      600
          agtgaaacca catactataa ttcagctctc aaatccagac tgaccatcat caaggacaac      660
          tccaagagcc aagttttctt aaaaatgaac agtctgcaaa ctgatgacac agccatttac      720
          tactgtgcca aacattatta ctacggtggt agctatgcta tggactactg gggtcaagga      780
          acctcagtca cagtctcctc agcggccgca attgaagtta tgtatcctcc tccttaccta      840
          gacaatgaga agagcaatgg aaccattatc catgtgaaag ggaaacacct ttgtccaagt      900
          cccctatttc ccggaccttc taagcccttt tgggtgctgg tggtggttgg gggagtcctg      960
          gcttgctata gcttgctagt aacagtggcc tttattattt tctgggtgag gagtaagagg     1020
          agcaggctcc tgcacagtga ctacatgaac atgactcccc gccgccccgg gcccacccgc     1080
          aagcattacc agccctatgc cccaccacgc gacttcgcag cctatcgctc cagagtgaag     1140
          ttcagcagga gcgcagacgc ccccgcgtac cagcagggcc agaaccagct ctataacgag     1200
          ctcaatctag gacgaagaga ggagtacgat gttttggaca agaggcgtgg ccgggaccct     1260
          gagatggggg gaaagccgag aaggaagaac cctcaggaag gcctgtacaa tgaactgcag     1320
          aaagataaga tggcggaggc ctacagtgag attgggatga aaggcgagcg ccggaggggc     1380
          aaggggcacg atggccttta ccagggtctc agtacagcca ccaaggacac ctacgacgcc     1440
          cttcacatgc aggccctgcc ccctcgcaga gccaagagag gctccggaga gggcagaggc     1500
          tctctgctga cctgcggcga cgtggaagag aatccagggc ccatggactg gacctggata     1560
          cttttcctgg tggccgccgc taccagagtt cactcaaatt gggtcaatgt aatttcagac     1620
          ttgaagaaga tcgaagatct gatccagtct atgcatatag atgctactct gtacactgag     1680
          tccgatgtgc atccgtcctg taaagtgaca gccatgaagt gtttcctgct tgagctccaa     1740
          gttatcagtc tcgaatccgg cgatgcctca atacatgata ctgtagagaa cctcatcatt     1800
          ctcgcaaaca attccctgtc aagcaatgga aatgttacgg agtcaggttg taaagaatgt     1860
          gaggaattgg aagaaaagaa cataaaagag ttcttgcaga gtttcgtgca catcgtacaa     1920
          atgttcatca atacgagtag tggtggtggt tccggaggag gaggatctgg cggaggcggt     1980
          agtggtggag gaggatccgg aggtgggagt ataacttgtc cgccgcccat gagtgtggaa     2040
          catgctgata tatgggtaaa gtcttattca ctttatagca gagaacgcta tatttgtaat     2100
          tctggcttca agcgaaaagc tggcacgagc agtctcacgg agtgcgtcct gaacaaggca     2160
          accaacgtcg cgcattggac aactcctagc ctcaaatgca taagggaccc tgcactggtg     2220
          caccaacgcc ctgcgccacc gtcaacggtc actacagctg gcgttacacc gcagccagaa     2280
          tctttgagtc catcaggcaa ggaacccgcg gcgtcttccc cgtcttctaa caataccgcc     2340
          gcaacgacgg cggcaatcgt gccgggatca caactcatgc cttccaaaag tccctcaacg     2400
          ggcacgacag agattagcag ccacgaaagc tcccatggca ctccctcaca aacgaccgcg     2460
          aagaactggg agctgactgc aagtgcatct caccagccac cgggtggcgg gggtggatca     2520
          ggtggcggtg gctctcgctc caacctcggt tggctttgcc ttcttttgct gcccataccg     2580
          ttgatcgtct gggttaagcg caaagaagtc cagaaaactt aa                        2622
          <![CDATA[<210> 102]]>
          <![CDATA[<211> 15]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 102]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210> 103]]>
          <![CDATA[<211> 738]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成多核苷酸
          <![CDATA[<400> 103]]>
          gctggaagca attgggtgaa cgtgatctcc gacctcaaaa agatcgagga tctgatccag       60
          tccatgcaca tcgatgccac actctacacc gagtccgatg tgcaccctag ctgcaaagtt      120
          acagcaatga aatgctttct gctggagttg caagtaatct ccctggagtc cggagatgct      180
          tccatccacg acacagtgga gaatttaatc attctggcta acaattccct ctcgtctaat      240
          ggcaatgtca ctgagagcgg ctgtaaagag tgtgaagagc tggaggagaa aaacatcaaa      300
          gagtttctgc agagcttcgt ccacatcgtc caaatgttca tcaacacctc gtccgggggc      360
          ggctccgggg gaggaggatc ggggggagga ggaagcggag gtggaggaag cggtggaggg      420
          tccattacat gccctccccc catgtccgtg gaacatgccg acatatgggt aaagtcctac      480
          tctctgtact cgcgggaacg ttatatctgc aacagcggct ttaagagaaa ggccggaaca      540
          tcttctctga ccgaatgtgt gctgaacaag gccacaaatg tggctcactg gaccacgcct      600
          agcctcaagt gtattaggga cggcggcgga ggttccggtg gcgggggctc tagatcgaat      660
          ctgggctggc tgtgtctgct gctgctcccc atccctctga ttgtgtgggt taagcgaaaa      720
          gaggtccaga aaacctaa                                                    738
          <![CDATA[<210> 104]]>
          <![CDATA[<211> 2]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 104]]>
          Gly Ser 
          1       
          <![CDATA[<210> 105]]>
          <![CDATA[<211> 8]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成肽
          <![CDATA[<400> 105]]>
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser 
          1               5               
          <![CDATA[<210> 106]]>
          <![CDATA[<211> 336]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成多核苷酸
          <![CDATA[<400> 106]]>
          agagttaagt tcagcaggag cgccgacgcc cctgcctacc agcaaggaca gaatcaactg       60
          tacaacgagc tgaacctggg cagacgggag gaatacgatg tgctggacaa gaggagaggc      120
          agagaccccg agatgggcgg caaacctaga agaaagaacc cccaggaggg cctgtataac      180
          gagctccaga aggacaagat ggccgaggcc tacagcgaga tcggcatgaa gggcgaaaga      240
          agaagaggca agggccacga cggcctctac cagggcttaa gcacagctac aaaggacacc      300
          tacgacgccc tgcacatgca ggccctgccc cctaga                                336
          <![CDATA[<210> 107]]>
          <![CDATA[<211> 495]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 107]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Lys Glu Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Ser Gly His Thr Tyr Tyr Ala Gln Lys Leu 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Gly Pro His Tyr Asp Asp Trp Ser Gly Phe Ile Ile Trp Phe 
                      100                 105                 110         
          Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr 
                  115                 120                 125             
          Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Asp 
              130                 135                 140                 
          Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp 
          145                 150                 155                 160 
          Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu 
                          165                 170                 175     
          Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 
                  195                 200                 205             
          Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 
              210                 215                 220                 
          Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Arg Phe Pro Pro Thr 
          225                 230                 235                 240 
          Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ala Ala Ala Phe Val Pro 
                          245                 250                 255     
          Val Phe Leu Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro 
                      260                 265                 270         
          Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu 
                  275                 280                 285             
          Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp 
              290                 295                 300                 
          Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn 
                          325                 330                 335     
          Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe 
                      340                 345                 350         
          Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly 
                  355                 360                 365             
          Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg 
              370                 375                 380                 
          Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln 
          385                 390                 395                 400 
          Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp 
                          405                 410                 415     
          Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro 
                      420                 425                 430         
          Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp 
                  435                 440                 445             
          Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg 
              450                 455                 460                 
          Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr 
          465                 470                 475                 480 
          Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 
                          485                 490                 495 
          <![CDATA[<210> 108]]>
          <![CDATA[<211> 1485]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：]]>
                合成多核苷酸
          <![CDATA[<400> 108]]>
          caggttcagc ttgtgcagag cggagctgaa gttaagaagc ctggcgcctc tgtgaaggtt       60
          agctgcaagg ccagcggcta cacattcaag gaatatggca tctcctgggt taggcaggct      120
          cccggccaag gcttagaatg gatgggctgg atctccgcct actccggcca cacctactac      180
          gcccagaagc ttcagggcag ggttaccatg accaccgaca ccagcacctc taccgcctat      240
          atggagctga ggagcctgag atcggacgac acagctgtgt attactgcgc cagaggcccc      300
          cactacgacg actggtctgg atttatcatc tggttcgacc cctgggggca gggcaccctg      360
          gtcacagttt cttctggctc caccagcgga agcggcaagc caggctcagg cgaaggatct      420
          acaaaaggcg acatccaaat gacacagagc cccagcagct tgagcgcctc cgttggcgac      480
          agagttacaa tcacctgcag ggcctctcag agcatcagca gctatttgaa ttggtatcaa      540
          cagaagccag gaaaggcccc taagctgctc atctacgctg ccagctcgct ccaatctggc      600
          gttcctagca gatttagcgg ctccggcagc ggcacagact ttactcttac cattagctcc      660
          ctgcagcccg aggacttcgc tacctactat tgccagcaaa gctacagatt ccctcccacc      720
          tttggccagg gcacaaaggt tgagatcaag gcagctgctt tcgtgcctgt gttcctgcct      780
          gctaagccca ccaccactcc tgctccaaga cctcctaccc ccgctcctac aatcgccagc      840
          caacctctga gcctgagacc ggaggcatgc agacctgcgg cagggggagc agttcacaca      900
          agaggcttgg acttcgcttg cgacatctac atctgggccc ctctggccgg cacatgcgga      960
          gttcttcttc ttagcctggt gatcaccctg tactgcaacc acagaaacag attcagcgtt     1020
          gtgaagagag gccggaagaa gctgctgtac atcttcaagc agcccttcat gagacctgtg     1080
          cagaccacac aggaggaaga cggctgcagc tgtagattcc ccgaggaaga ggagggcggc     1140
          tgtgagctga gagttaagtt cagcaggagc gccgacgccc ctgcctacca gcaaggacag     1200
          aatcaactgt acaacgagct gaacctgggc agacgggagg aatacgatgt gctggacaag     1260
          aggagaggca gagaccccga gatgggcggc aaacctagaa gaaagaaccc ccaggagggc     1320
          ctgtataacg agctccagaa ggacaagatg gccgaggcct acagcgagat cggcatgaag     1380
          ggcgaaagaa gaagaggcaa gggccacgac ggcctctacc agggcttaag cacagctaca     1440
          aaggacacct acgacgccct gcacatgcag gccctgcccc ctaga                     1485
          <![CDATA[<210> 109]]>
          <![CDATA[<211> 50]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213>人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>人工序列說明：合成多肽]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> SITE]]>
          <![CDATA[<222> (1)..(5)]]>
          <![CDATA[<223>此區可涵蓋1至5個「Gly」重複單元]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> SITE]]>
          <![CDATA[<222> (6)..(10)]]>
          <![CDATA[<223>此區可涵蓋1至5個「Ser」重複單元]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> SITE]]>
          <![CDATA[<222> (1)..(50)]]>
          223>此序列可涵蓋1至5個「Gly Gly Gly Gly Gly]]&gt;
          <br/><![CDATA[Ser Ser Ser Ser Ser」重複單元
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>參見所提交之說明書以獲得取代及較]]>
                佳實施例之詳細描述
          <![CDATA[<400> 109]]>
          Gly Gly Gly Gly Gly Ser Ser Ser Ser Ser Gly Gly Gly Gly Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Ser Ser Ser Gly Gly Gly Gly Gly Ser Ser Ser Ser Ser Gly Gly 
                      20                  25                  30          
          Gly Gly Gly Ser Ser Ser Ser Ser Gly Gly Gly Gly Gly Ser Ser Ser 
                  35                  40                  45              
          Ser Ser 
              50

Claims

一種膜結合介白素15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合受體，其包含：包含根據SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的IL-15多肽、將該IL-15域連接至根據SEQ ID NO: 7或SEQ ID NO: 95之該IL-15Rα壽司域多肽的第一連接子、及包含IL-7跨膜域或FAS跨膜域的跨膜域。
如請求項1之膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體，其中該第一連接子包含根據SEQ ID NO: 8之胺基酸序列。
如請求項2之膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體，其中該第一連接子包含根據SEQ ID NO: 11之胺基酸序列。
如請求項1至3中任一項之膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體，其中該IL-15Rα壽司域多肽係藉由作為第二連接子連接至該跨膜域。
如請求項4之膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體，其中該第二連接子包含根據SEQ ID NO: 24之胺基酸序列。
如請求項5之膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體，其中該第二連接子包含根據SEQ ID NO: 26之胺基酸序列。
如請求項1至6中任一項之膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體，其中該跨膜域係FAS跨膜域，其包含根據SEQID NO: 22之胺基酸序列。
如請求項7之膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體，其包含選自由SEQ ID NO: 27、28、及94所組成之群組的胺基酸序列。
如請求項1至6中任一項之膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體，其中該跨膜域係IL-7跨膜域，其包含根據SEQID NO: 23之胺基酸序列。
如請求項9之膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體，其包含根據SEQ ID NO: 30之胺基酸。
如請求項1至8中任一項之膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體，其進一步包含信號傳導序列。
如請求項11之膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體，其中該信號傳導序列包含根據SEQ ID NO: 12至20中之一者之胺基酸序列。
如請求項12之膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體，其中該信號傳導序列包含根據SEQ ID NO: 12之胺基酸序列。
一種核酸，其編碼如請求項1至13中任一項之膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體。
如請求項14之核酸，其中該核酸包含根據選自由下列所組成之群組的序列之核酸序列：SEQ ID NO: 31、SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 96、SEQ ID NO: 97、及SEQ ID NO: 100。
一種重組載體，其包含如請求項14之核酸。
如請求項14或15之重組載體或核酸，其中該重組載體或核酸進一步包含編碼嵌合抗原受體或T細胞受體之核酸。
如請求項14或15之重組載體或核酸，其中該嵌合抗原受體或T細胞受體結合腫瘤抗原。
如請求項14或15之重組載體或核酸，其中該腫瘤抗原係選自由下列所組成之群組：2B4 (CD244)、4-1BB、5T4、A33抗原、腺癌抗原、腎上腺素受體β3 (ADRB3)、A激酶錨定蛋白4 (AKAP-4)、α胎兒蛋白(AFP)、間變性淋巴瘤激酶(ALK)、雄性激素受體、B7H3 (CD276)、β2整合素、BAFF、B淋巴瘤細胞、B細胞突變抗原(BCMA)、bcr-abl（由斷點簇集區(BCR)及Abelson鼠白血病病毒致癌基因同源物1 (Abl)所組成之致癌基因融合蛋白）、BhCG、骨髓基質細胞抗原2 (BST2)、CCCTC結合因子（鋅指蛋白質）樣（BORIS或印記位點調節物兄弟）、BST2、C242抗原、9-0-乙醯基-CA19-9標記、CA-125、CAEX、鈣網蛋白(calreticulin)、碳酸酐酶9 (CAIX)、C-MET、CCR4、CCR5、CCR8、CD2、CD3、CD4、CD5、CD8、CD7、CD10、CD16、CD19、CD20、CD22、CD23（IgE受體）、CD24、CD25、CD27、CD28、CD30 (TNFRSF8)、CD33、CD34、CD38、CD40、CD40L、CD41、CD44、CD44V6、CD49f、CD51、CD52、CD56、CD63、CD70、CD72、CD74、CD79a、CD79b、CD80、CD84、CD96、CD97、CD100、CD123、CD125、CD133、CD137、CD138、CD150、CD152 (CTLA-4)、CD160、CD171、CD179a、CD200、CD221、CD229、CD244、CD272 (BTLA)、CD274 (PD-L1、B7H1)、CD279 (PD-1)、CD352、CD358、CD300分子樣家族成員f (CD300LF)、癌胚抗原(CEA)、密連蛋白6 (CLDN6)、C型凝集素樣分子（CLL-1或CLECL1）、C型凝集素域家族12成員A (CLEC12A)、巨細胞病毒(CMV)感染之細胞抗原、CNT0888、CRTAM (CD355)、CS-1（亦稱為CD2子集1、CRACC、CD319、及19A24）、CTLA-4、週期蛋白B l、染色體X開讀框61 (CXORF61)、細胞色素P450 1B 1 (CYP1B1)、DNAM-1 (CD226)、橋粒芯蛋白(desmoglein) 4、DR3、DR5、E-鈣黏素新表位(E-cadherin neoepitope)、上皮生長因子受體(EGFR)、EGF1R、上皮生長因子受體變體III (EGFRvIII)、上皮醣蛋白2 (EGP-2)、上皮醣蛋白40 (EGP-40)、含EGF樣模組之黏液素樣激素受體樣2 (EMR2)、突變型延伸因子2 (ELF2M)、內皮唾液酸蛋白、上皮細胞黏附分子(EPCAM)、A型蝶素受體2 (EphA2)、蝶素B2、受體酪胺酸蛋白質激酶erb-B2,3,4 (erb-B2,3,4)、ERBB、ERBB2 (Her2/neu)、ERG（跨膜絲胺酸蛋白酶2 (TMPRSS2) ETS融合基因）、ETA、位於染色體12p上之ETS易位變體基因6 (ETV6-AML)、IgA受體之Fc片段（FCAR或CD89）、纖維母細胞活化蛋白α (FAP)、FBP、Fc受體樣5 (FcRL5)、胎兒乙醯膽鹼受體(AChR)、纖連蛋白外域B、Fms樣酪胺酸激酶3 (FLT3)、葉酸結合蛋白(FBP)、葉酸受體1、葉酸受體α、葉酸受體β、Fos相關抗原1、岩藻醣基、岩藻醣基GM1；GM2、神經節苷脂G2 (Gd2)、神經節苷脂GD3 (aNeu5Ac(2-8)aNeu5Ac(2-3)bDGalp(l -4)bDGlcp(l- l)Cer)、o-乙醯基-GD2神經節苷脂(OAcGD2)、GITR (TNFRSF 18)、GM1、神經節苷脂GM3、globoH糖基神經醯胺之六醣部分(GloboH)、醣蛋白75、磷脂醯肌醇蛋白聚醣3 (GPC3)、醣蛋白100 (gpl00)、GPNMB、G蛋白偶聯受體20 (GPR20)、G蛋白偶聯受體C類5組成員D (GPRC5D)、A型肝炎病毒細胞受體1 (HAVCR1)、人類表皮生長因子受體2 (HER-2)、HER2/neu、HER3、HER4、HGF、高分子量黑色素瘤相關抗原(HMWMAA)、人類乳突病毒E6 (HPV E6)、人類乳突病毒E7 (HPV E7)、突變型熱休克蛋白70-2 (mut hsp70-2)、人類分散因子受體激酶、人類端粒酶反轉錄酶(hTERT)、HVEM、ICOS、類胰島素生長因子受體1（IGF-1受體）、IGF-I、IgGl、免疫球蛋白λ樣多肽1 (IGLL1)、IL-6、介白素11受體α (IL-llRα)、IL-13、介白素13受體次單元α2（IL- 13Rα2或CD213A2）、類胰島素生長因子I受體(IGF1-R)、整合素α5β1、整合素ανβ3、腸羧基酯酶、κ輕鏈、KCS1、激酶插入域受體(KDR)、KIR、KIR2DL1、KIR2DL2、KIR2DL3、KIR3DL2、KIR-L、KG2D配體、KIT (CD117)、KLRGI、LAGE-la、LAG3、淋巴球特異性蛋白酪胺酸激酶(LCK)、白血球免疫球蛋白樣受體亞家族A成員2 (LILRA2)、豆莢蛋白(legumain)、白血球相關免疫球蛋白樣受體1 (LAIR1)、路易士(Y)抗原(Lewis(Y) antigen)、LeY、LG、LI細胞黏附分子(LI-CAM)、LIGHT、LMP2、淋巴球抗原6複合物、LTBR、基因座K 9 (LY6K)、Ly-6、淋巴球抗原75 (LY75)、黑色素瘤癌症睪丸抗原1 (MAD-CT-1)；黑色素瘤癌症睪丸抗原2 (MAD-CT-2)、MAGE、黑色素瘤相關抗原1 (MAGE-A1)、由T細胞識別之MAGE-A3黑色素瘤抗原1（MelanA或MARTI）、MelanA/MARTl、間皮素、MAGE A3、黑色素瘤細胞凋亡抑制因子(ML-IAP)、黑色素瘤特異性硫酸軟骨素蛋白聚醣(MCSCP)、MORAb-009、MS4A1、黏液素1 (MUCl)、MUC2、MUC3、MUC4、MUC5AC、MUC5b、MUC7、MUC16、黏液素CanAg、II型密拉氏管抑制物質(Mullerian inhibitory substance, MIS)受體、v-myc禽骨髓瘤細胞病毒致癌基因神經母細胞瘤衍生性同源物(MYCN)、N-羥乙醯神經胺酸、N-乙醯基葡萄糖胺基轉移酶V (NA17)、神經細胞黏附分子(NCAM)、NKG2A、NKG2C、NKG2D、NKG2E配體、NKR-P IA、NPC-1C、NTB-A、乳腺分化抗原(NY-BR-1)、NY-ESO-1、致癌胎兒抗原(h5T4)、嗅覺受體51E2 (OR51E2)、OX40、漿細胞抗原、poly SA、前頂體素(proacrosin)結合蛋白sp32 (OY-TES l)、p53、p53突變體、泛連接蛋白3 (PANX3)、前列腺酸性磷酸酶(PAP)、成對盒蛋白Pax-3 (PAX3)、成對盒蛋白Pax-5 (PAX5)、前列腺癌腫瘤抗原1（PCTA-1或半乳糖凝集素8）、PD-1H、血小板衍生生長因子受體α (PDGFR-α)、PDGFR-β、PDL192、PEN-5、磷脂絲胺酸、胎盤特異性蛋白1 (PLAC1)、聚唾液酸、前列腺酶、前列腺癌細胞、前列腺蛋白(prostein)、蛋白酶絲胺酸21（睪素或PRSS21）、蛋白酶3 (PR1)、前列腺幹細胞抗原(PSCA)、前列腺特異性膜抗原(PSMA)、蛋白酶體（前體(prosome)、巨蛋白因子(macropain)）次單元β型、晚期糖化終產物受體(RAGE-1)、RANKL、Ras突變體、Ras同源物家族成員C (RhoC)、RON、受體酪胺酸激酶樣孤兒受體1 (ROR1)、腎遍在蛋白1 (renal ubiquitous 1, RU1)、腎遍在蛋白2 (RU2)、肉瘤易位斷點、由T細胞識別之鱗狀細胞癌抗原3 (SART3)、SAS、SDC1、SLAMF7、唾液酸基路易士黏附分子(sLe)、Siglec-3、Siglec-7、Siglec-9、音蝟因子(SHH)、精子蛋白17 (SPA17)、階段特異性胚胎抗原4 (SSEA-4)、STEAP、sTn抗原、滑膜肉瘤X斷點2 (SSX2)、存活素(survivin)、腫瘤相關醣蛋白72 (TAG72)、TCR5γ、TCRα、TCRβ、TCRγ交替讀框蛋白(TARP)、端粒酶、TIGIT、TNF-α前驅物、腫瘤內皮標記1 (TEM1/CD248)、腫瘤內皮標記7相關蛋白(TEM7R)、肌腱蛋白C (tenascin C)、TGF-β1、TGF-β2、轉麩醯胺酸酶5 (TGS5)、促血管生成素結合細胞表面受體2 (Tie 2)、TACI、TIM1、TIM2、TIM3、Tn Ag、TRAIL-R1、TRAIL-R2、酪胺酸酶相關蛋白2 (TRP-2)、促甲狀腺激素受體(TSHR)、腫瘤抗原CTAA16.88、酪胺酸酶、尿溶蛋白2 (UPK2)、VEGF-A、VEGFR-1、血管內皮生長因子受體2 (VEGFR2)、及波形蛋白、威爾姆氏腫瘤(Wilms tumor)蛋白(WT1)、或X抗原家族成員1A (XAGE1)。
一種免疫細胞，其包含如請求項1至19中任一項之膜結合IL-15-IL-15Rα壽司域嵌合受體、重組載體、或核酸。
如請求項20之免疫細胞，其中該細胞係T細胞或自然殺手(NK)細胞。
一種醫藥組成物，其包含如請求項20或21之免疫細胞。
一種治療對象之與腫瘤抗原表現相關之癌症的方法，其包含：向該對象投予有效量的如請求項20或21之免疫細胞或如請求項22之醫藥組成物。
一種在對象中誘導免疫反應或使對象針對癌症免疫之方法，該方法包含向該對象投予有效量的如請求項20或21之免疫細胞或如請求項22之醫藥組成物。
一種用於改善免疫細胞功能之方法，其包含將該免疫細胞工程改造以表現如請求項1至13中任一項之膜結合介白素15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合受體。
一種用於增加免疫細胞中之磷酸化STAT5水平的方法，其包含將該免疫細胞工程改造以表現如請求項1至13中任一項之膜結合介白素15 (IL-15)-IL-15Rα壽司域嵌合受體。