TW202242410A - 肺炎黴漿菌之免疫測定方法及免疫測定器具 - Google Patents

肺炎黴漿菌之免疫測定方法及免疫測定器具 Download PDF

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Abstract

本發明揭示一種利用單株抗體之免疫測定方法，該單株抗體係與肺炎黴漿菌之P1蛋白質及P30蛋白質兩者特異性地結合者，且與公知之單株抗體相比，對肺炎黴漿菌之P1蛋白質及P30蛋白質的親和性較高。免疫測定方法係利用單株抗體或其抗原結合性片段與源自肺炎黴漿菌之P1蛋白質及P30蛋白質的抗原抗體反應，該單株抗體係與源自肺炎黴漿菌之P1蛋白質及P30蛋白質特異性地反應者，且與含有包含PPQPG之胺基酸序列之肽特異性地反應。

Description

肺炎黴漿菌之免疫測定方法及免疫測定器具
本發明係關於一種肺炎黴漿菌之免疫測定方法、及用於該方法之免疫測定器具、以及該方法所使用之單株抗體。
單株抗體由於僅識別特定抗原，故被廣泛用於該特定抗原之檢測。例如，專利文獻1中記載有一種利用夾層法之免疫測定方法，其係對肺炎黴漿菌進行免疫測定之方法，該方法中，將識別肺炎黴漿菌之P30蛋白質之單株抗體固定於固相。
多株抗體係混合存在有識別各種抗原或抗原決定區之各種抗體者，單株抗體具有僅識別某種特定抗原之某一特定區域之性質，故與多株抗體相比，一般特異性較高。另一方面，就可與抗體結合之抗原之種類及其總數，容易估計到，單株抗體不如多株抗體。此會導致單株抗體以及使用其之免疫測定方法及免疫測定器具的感度較低。
本申請人為了解決該課題，首先發明了一種與肺炎黴漿菌之P1蛋白質及P30蛋白質兩者特異性地結合之單株抗體，並提出了專利申請(專利文獻2)。 [先前技術文獻] [專利文獻]
[專利文獻1]WO 2015/025968 [專利文獻2]WO 2016/194797
(發明所欲解決之問題)
專利文獻2中所記載之單株抗體係可用於以單一之單株抗體對肺炎黴漿菌之P1蛋白質及P30蛋白質兩者特異性地結合，當然，若為對P1蛋白質及P30蛋白質之親和性更高的單株抗體，則可進一步提昇免疫測定感度，因此較有利。
本發明之目的在於提供一種新穎之單株抗體、以及使用該單株抗體之肺炎黴漿菌之免疫測定方法及用於該方法之免疫測定器具，上述單株抗體係與肺炎黴漿菌之P1蛋白質及P30蛋白質兩者特異性地結合者，且與專利文獻2中所記載之單株抗體相比，對肺炎黴漿菌之P1蛋白質及P30蛋白質之親和性更高。 (解決問題之技術手段)
本案發明人等進行了銳意研究，結果發現，藉由使用與源自肺炎黴漿菌之P1蛋白質及P30蛋白質特異性地反應，且與含有包含PPQPG之胺基酸序列之肽特異性地反應的單株抗體，而相較於使用專利文獻2中所記載之單株抗體之免疫測定方法，可更高感度地測定肺炎黴漿菌，從而完成了本發明。
即，本發明提供以下發明。
(1)一種肺炎黴漿菌之免疫測定方法，其利用單株抗體或其抗原結合性片段與源自肺炎黴漿菌之P1蛋白質及P30蛋白質的抗原抗體反應，上述單株抗體係與源自肺炎黴漿菌之P1蛋白質及P30蛋白質特異性地反應者，且與含有包含PPQPG之胺基酸序列之肽特異性地反應。 (2)如(1)所記載之免疫測定方法，其中，上述肽之胺基酸序列為PPQPGFPPKR或GMPPQPGFPPKR。 (3)如(1)所記載之方法，其中，上述免疫測定方法為夾層法，並將上述單株抗體或其抗原結合性片段用於標記或固相之至少任一者。 (4)如(2)所記載之方法，其中，上述免疫測定方法為免疫層析法。 (5)如(1)至(4)中任一項所記載之方法，其中，由上述單株抗體識別之上述2種以上之抗原形成複合體。 (6)一種免疫測定器具，其係用以進行(1)所記載之方法者，且將上述單株抗體或其抗原結合性片段用於標記或固相之至少任一者。 (7)如(6)所記載之免疫測定器具，其為免疫層析試片。 (8)如(6)或(7)所記載之免疫測定器具，其中，上述受檢對象為肺炎黴漿菌。 (9)一種單株抗體，其係與源自肺炎黴漿菌之P1蛋白質及P30蛋白質特異性地反應者，且與含有包含PPQPG之胺基酸序列之肽特異性地反應。 (對照先前技術之功效)
本發明之方法與專利文獻2中所記載之方法相比，檢測感度得到改善。又，本發明提供一種用於本發明之新穎之檢測方法的免疫測定器具及單株抗體。
藉本發明之方法所檢測之受檢對象為肺炎黴漿菌，抗原為P1蛋白質及P30蛋白質。再者，於對受檢對象進行定量或半定量之情形時，定量或半定量亦必然伴隨「檢測」，因此包含於本發明所述之「檢測」中。
於本發明之方法中，使用與上述2種抗原特異性地反應之單株抗體或其抗原結合性片段進行免疫測定。此處，「特異性地反應」係意指發生抗原抗體反應，意指於蛋白質與該抗體混合之液體系統中，該抗體與抗原之蛋白質成分不會以能夠檢測之等級發生抗原抗體反應，或即便發生某些結合反應或締合反應，亦僅發生明顯弱於該抗體與抗原之抗原抗體反應之反應。
基於本發明之單株抗體，僅分離了抗原結合部位所得之抗原結合性片段亦可用於本發明之方法。即，於使用藉由公知之方法製作之Fab、Fab'、F(ab')2、單鏈抗體(scFv)等具有特異性抗原結合性之片段(抗原結合性片段)的情形時，亦包含於本發明之範圍內。又，單株抗體之類型不限定於免疫球蛋白G(IgG，Immunoglobulin G)，亦可為免疫球蛋白M(IgM，Immunoglobulin M)或免疫球蛋白Y(IgY，Immunoglobulin Y)。
本發明之方法所使用之單株抗體可藉由如下方式獲得：使用公知之免疫方法，使被免疫動物對包含上述2種抗原之複合體或萃取物、或者2種抗原中之1種抗原或其部分肽產生免疫，使用被免疫動物之細胞製作融合瘤。用於免疫之肽之長度並無特別限定，可使用較佳為5個胺基酸以上、更佳為10個胺基酸以上之肽製成免疫原。免疫原亦可自培養液獲得，亦可藉由將編碼任意抗原之去氧核糖核酸(DNA，DeoxyriboNucleic Acid)組入至質體載體，將其導入至宿主細胞，進行表現而獲得。作為免疫原之任意抗原或其部分肽亦可以與以下所例示之蛋白質之融合蛋白質的形式表現，於純化後用作免疫原或不純化而直接用作免疫原。於製作融合蛋白質時，可利用熟悉本技藝者一般作為「蛋白質表現、純化標籤」所使用的麩胱甘肽S-轉移酶(GST)、麥芽糖結合蛋白質(MBP)、硫氧化還原蛋白(TRX)、Nus標籤、S標籤、HSV標籤、FRAG標籤、多組胺酸標籤等。與其等之融合蛋白質較佳為使用消化酵素將任意抗原或其部分肽部分與除此以外之標籤部分切斷，進行分離純化後用作為免疫原。
可藉由周知之Kohler等之方法(Kohler et al., Nature, vol, 256, p495-497(1975))，容易地自經免疫之動物製備單株抗體。即，自經免疫之動物回收脾細胞或淋巴細胞等抗體產生細胞，藉由常規方法使其與小鼠骨髓瘤細胞融合而製作融合瘤，藉由極限稀釋法等對所獲得之融合瘤進行選殖，選擇經選殖之各融合瘤產生之單株抗體中與用於動物免疫之抗原發生抗原抗體反應的單株抗體。
本發明之方法所使用之單株抗體由於識別2種抗原，因此對於以上述方式選擇出之識別2種抗原中之一種之單株抗體，進而篩選識別另一種抗原之單株抗體。本發明之方法所使用之單株抗體係以上述方式獲得之識別2種抗原的單株抗體，可藉由篩選與含有包含PPQPG(序列編號1)之胺基酸序列之肽特異性地反應之單株抗體而獲得。用於篩選之肽係含有包含PPQPG之胺基酸序列之肽，例如可使用胺基酸序列包含PPQPGFPPKR(序列編號2)之肽、及胺基酸序列包含GMPPQPGFPPKR(序列編號3)之肽。
於自腹水或培養上清液純化單株抗體時，可使用公知之免疫球蛋白純化法。可舉例如：使用硫酸銨或硫酸鈉進行鹽析之區分法、聚乙二醇(PEG，Polyethylene Glycol)區分法、乙醇區分法、二乙胺基乙基(DEAE，diethylaminoethyl)離子交換層析法、凝膠過濾法等。又，根據免疫動物種類及單株抗體之類型，亦可藉由親和層析法進行純化，該親和層析法使用結合有蛋白質A、蛋白質G、蛋白質L之任一者之載體。
於本發明之免疫測定方法中，藉由免疫測定進行測定，該免疫測定係利用與上述方式製作之與2種抗原特異性地反應之單株抗體或其抗原結合性片段(以下，於實施例之前之記載中，除了根據上下文來看明顯並非如此之情形以外，「抗體」意指「抗體或其抗原結合性片段」)與檢體中之肺炎黴漿菌的抗原抗體反應。作為用於上述免疫測定之免疫測定法，競爭法、凝集法、西方墨點法、免疫染色法、夾層法等對熟悉本技藝者而言周知之方法均可使用。再者，於本發明中，「測定」包括定量、半定量、檢測。
作為免疫測定，較佳為夾層法。夾層法本身於免疫測定領域中為人所周知，例如可藉由免疫層析法或酵素結合免疫吸附分析(ELISA，enzyme linked immunosorbent assay)法進行。該等夾層法本身均為人所周知，本發明之方法除了使用上述本發明之識別2種以上之抗原之單株抗體以外，可藉由周知之夾層法來進行。
夾層法中可使用識別抗原之2種抗體(固定於固相之抗體及標記抗體)，但於本發明之方法中，該等2種抗體中至少任一者為上述識別2種抗原之單株抗體。如下所述，固定於固相之抗體由於每單位面積可固定之抗體量有限，故為了更良好地達成本發明之目的、即提昇感度，較佳為至少於固定化抗體使用上述識別2種抗原之單株抗體。再者，於單一分子或單一複合體中存在至少2種由該單株抗體識別之抗原之情形時，亦可使用單一種類之該單株抗體作為固相化抗體及標記抗體而進行夾層法。
於以夾層法為檢測原理之免疫測定中，作為供抗體固定之固相，係藉由公知技術可固定抗體者均可使用，例如，可任意選擇具有毛細管作用之多孔性薄膜(membrane)、粒子狀物質、試管、樹脂平板等公知者。又，作為標記抗體之物質，可使用酵素、放射性同位素、螢光物質、發光物質、有色粒子、膠體粒子等。於利用上述各種材料之免疫測定法中，尤其是由臨床檢查之簡便性及迅速性之觀點而言，較佳為使用薄膜之側流式免疫測定法。
本發明亦提供一種可使用識別2種以上之抗原之單株抗體進行側流式免疫測定之免疫測定器具。本發明提供之免疫測定器具包含：支持體，其具有固定有會捕捉測定對象物(抗原)之抗體(抗體1)之檢測區域；標記物區域，其具有可移動之標記抗體(抗體2)；樣品墊，其供滴加檢體；吸收帶，其吸收經展開之檢體液；及背襯片材，其用以將該等構件貼合成一體；且抗體1及抗體2之至少一者為本發明之識別2種以上之抗原之單株抗體。
再者，檢測區域之數量及標記物區域所包含之標記抗體之種類並不限於1種，藉由使用與複數個測定對象物對應之抗體，可利用同一免疫測定器具來檢測2種以上之抗原。
關於藉由本發明之方法而免疫測定感度提昇之原理，認為如下所述。於夾層法中，使用固定於固相之抗體，但固相之每單位面積可固定之抗體量有限。又，抗原抗體反應之時間亦有限。尤其是於免疫層析法中，檢體或使用檢體所製備之試樣(檢體之稀釋物等)僅於自上游流來並通過檢測區域之期間進行抗原抗體反應，因此於該時間內無法與抗體結合之抗原直接向較檢測區域更下游處流去，未被檢測。於檢體中之抗原量較少之情形時，相較於使用識別1種抗原之1種單株抗體作為固相化抗體(通常之夾層法)，使用識別2種以上之抗原之單株抗體作為固相化抗體時，與抗體結合之抗原量增加，因此感度提昇。又，於將各自識別1種抗原之單株抗體2種組合使用作為固相化抗體之情形時，固相化之各單株抗體之量分別為總固相化抗體量之一半，因此於抗原抗體反應時間較短之情形時，某種抗原於既定方向上與可與該抗原結合之單株抗體碰撞並結合之概率係固相化抗體全部為識別該抗原之單株抗體之情形時的1/2。另一方面，於使用識別2種以上之抗原之單株抗體之情形時，若2種以上之抗原均於既定方向上與固相化抗體碰撞，則與抗體結合，因此被固相化抗體捕捉之抗原量多於將各自識別1種抗原之單株抗體2種組合使用之情形，因此，免疫測定感度提昇。 [實施例]
以下，基於實施例更具體地說明本發明。但是，本發明並不限定於下述實施例。
＜實施例1＞抗肺炎黴漿菌單株抗體之製作 1.肺炎黴漿菌抗原之製備 培養肺炎黴漿菌，將該培養液於60℃下熱處理30分鐘而使其不活化，使用所得者作為抗原。
2.抗肺炎黴漿菌單株抗體之製作 使BALB/c小鼠對上述1.之黴漿菌不活化抗原產生免疫，自飼養一定時間後之小鼠摘除脾臟，藉由Kohler等之方法(Kohler et al., Nature, vol, 256, p495-497(1975))與小鼠骨髓瘤細胞(P3×63)融合。將所獲得之融合細胞(融合瘤)維持在37℃培養箱中，藉由ELISA確認上清液之抗體活性並且進行細胞之純化(單選殖化)，上述ELISA係使用固相化有肺炎黴漿菌P1抗原之平板及固相化有肺炎黴漿菌P30抗原之平板。
結果，如表1所示，獲得複數個產生抗肺炎黴漿菌P1抗體、抗肺炎黴漿菌P30抗體及抗肺炎黴漿菌P1・P30抗體之融合瘤細胞株。
[表1]
純系名 反應抗原
P1-30Aab P1、P30
P1-30Bab P1、P30
P1ab P1
P30ab P30
再者，用於該ELISA之P1、P30係藉由凝膠過濾及離子交換層析而製備。將取得之細胞株投予至經姥鮫烷處理之BALB/c小鼠之腹腔，約2週後，採取含抗體之腹水。藉由使用蛋白質A管柱之親和層析法，自所獲得之腹水純化IgG，獲得複數種純化抗肺炎黴漿菌單株抗體。
＜實施例2＞ [藉由使用合成肽之ELISA法進行表位分析] 根據P30之胺基酸重複序列部位製作以下所示之肽。
(合成肽) 肽1-1：GFPPQPGMAP(序列編號4) 肽1-2：QPGMAPRPGM(序列編號5) 肽1-3：APRPGMPPHP(序列編號6) 肽1-4：GMPPHPGMAP(序列編號7) 肽1-5：HPGMAPRPGF(序列編號8) 肽1-6：APRPGFPPQP(序列編號9) 肽1-7：APRPGMQPPR(序列編號10) 肽1-8：GMQPPRPGMP(序列編號11) 肽1-9：PGMPPQPGFP(序列編號12) 肽1-10：PPQPGFPPKR(序列編號2) 肽1-11：PGMAPRPGMPPH(序列編號13) 肽1-12：PGMAPRPGFPPQ(序列編號14) 肽1-13：GMPPQPGFPPKR(序列編號3)
對於實施例1所獲得之單株抗體P1-30Aab及P1-30Bab，藉由以下所示之ELISA法來評價與上述合成肽之反應。於藉由ELISA法進行測定時，使用固相化有合成肽之96孔板(NUNC公司)。將合成肽(2.0 μg/ml)以100 μl/孔添加至上述平板中，並反應一晚。其後，用1×TBS緩衝液洗淨，以200 μL/孔添加封閉緩衝液(1%牛血清白蛋白(BSA，Bovine Serum Albumin)/TBS)。捨去封閉緩衝液，以100 μL/孔加入將實施例1之抗體經稀釋後所得之抗體，反應30分鐘。其後，用1×洗淨緩衝液200 μL洗淨，以100 μL/孔添加標記抗體液辣根過氧化酶(HRP，horseradish peroxidase)標記多株兔抗小鼠免疫球蛋白(P0260，Dako公司)，以50 μl/孔添加包含2 w/v%BSA之TBS(pH 7.0)，反應30分鐘。其後，用緩衝液II洗淨，以100 μl/孔添加包含屬於HRP之受質之鄰苯二胺(OPD，o-phenylenediamine)之受質液，靜置10分鐘，以100 μl/孔添加2 N硫酸而終止反應。使用微盤讀取器測定各孔中之反應液之450～630 nm之吸光度。
結果，所有抗體均可見到與P30之胺基酸重複序列部位發生反應。 單株抗體P1-30Aab(本發明之單株抗體)與肽1-10及1-13發生了強烈反應。又，亦與肽1-1及1-9發生了反應。根據以上之結果確認到，單株抗體P1-30Aab對包含「PPQPG(Pro-Pro-Gln-Pro-Gly)」之肽序列具有反應性。另一方面，單株抗體P1-30Bab雖然對P1表現出反應性，但於P1之胺基酸序列中不存在PPQPG，作為替代，存在作為類似序列之PPHP。
＜實施例3＞測定肺炎黴漿菌之免疫測定器具 1.將抗肺炎黴漿菌抗體固定於硝化纖維素膜 準備用純化水將實施例1所製作之抗體稀釋至1.0 mg/mL而成之液體及抗小鼠IgG抗體，於以聚對苯二甲酸乙二酯(PET，polyethylene terephthalate)薄膜為襯底之硝化纖維素膜之樣品墊側線狀地塗佈抗體，於吸收體側線狀地塗佈抗小鼠IgG抗體。其後，將硝化纖維素膜於45℃下乾燥30分鐘，獲得抗肺炎黴漿菌抗體固定化薄膜。於本實施例中稱為抗體固定化薄膜。
2.將抗肺炎黴漿菌抗體固定於著色聚苯乙烯粒子 用純化水將實施例1所製作之抗體稀釋至1.0 mg/mL，將著色聚苯乙烯粒子以成為0.1%之方式加入至其中，攪拌後，以成為1%之方式加入碳二醯亞胺，進而加以攪拌。藉由離心操作去除上清液，再懸浮於50 mM之三羥甲基胺基甲烷(pH 9.0)、3%BSA，獲得結合有抗肺炎黴漿菌抗體之著色聚苯乙烯粒子。於本實施例中稱為抗體固定化粒子。
3.用於測定肺炎黴漿菌之試片之製作 將1中所製作之抗體固定化薄膜與其他構件(背襯片材、吸收體、樣品墊)貼合並切割成5 mm之寬度，製成肺炎黴漿菌試片。於本實施例中，將其等稱為試片。
免疫層析感度 ＜實施例4＞用於測定肺炎黴漿菌之免疫測定器具之感度比較 對於實施例1所獲得之抗P1-P30單株抗體(P1-30Aab、P1-30Bab)、抗P1單株抗體(P1ab)及抗P30單株抗體(P30ab)，以表2之組合，並按照實施例3之順序製作P1P30、P30試片及P1×P1P30之3種。
[表2]
   使用抗體
抗體固定化薄膜 抗體固定化粒子
P1 P1ab P1ab
P30 P30ab P30ab
P1P30A P1-30Aab P1-30Aab
P1P30B P1-30Bab P1-30Bab
將包含經任意稀釋之肺炎黴漿菌抗原及2中所製作之抗體固定化粒子之檢體懸浮液50 μL滴加至各試片，靜置15分鐘。於在抗小鼠IgG抗體及抗肺炎黴漿菌抗體兩者之塗佈位置處以目視確認到顯色之情形時，判定為+。於僅在抗小鼠IgG抗體之塗佈位置處以目視確認到顯色，且在抗肺炎黴漿菌抗體之塗佈位置處以目視無法確認到顯色之情形時，判定為-。又，於在抗小鼠IgG抗體之塗佈位置處以目視無法確認到顯色之情形時，判定為無效。
將各試片之結果示於表3。
[表3]
   ×32 ×64 ×128 ×256 ×512 ×1024 ×2048
P1 + - - - - - -
P30 + + + - - - -
P1P30A + + + + + - -
P1P30B + + + + + + -
如表3所示，使用屬於本發明之單株抗體之P1-30Bab的免疫測定器具係與使用其他抗體之免疫測定器具相比，表現出更優異之感度。
 
                         序列表
          <![CDATA[<110>  DENKA股份有限公司]]>
          <![CDATA[<120>  肺炎黴漿菌之免疫測定方法及免疫測定器具]]>
          <![CDATA[<130>  PF000700-PCT]]>
          <![CDATA[<160>  14    ]]>
          <![CDATA[<170>  PatentIn第3.5版]]>
          <![CDATA[<210>  1]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  肺炎黴漿菌]]>
          <![CDATA[<400>  1]]>
          Pro Pro Gln Pro Gly 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  2]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肺炎黴漿菌抗原之部分片段]]>
          <![CDATA[<400>  2]]>
          Pro Pro Gln Pro Gly Phe Pro Pro Lys Arg 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  3]]>
          <![CDATA[<211>  12]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肺炎黴漿菌抗原之部分片段]]>
          <![CDATA[<400>  3]]>
          Gly Met Pro Pro Gln Pro Gly Phe Pro Pro Lys Arg 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210>  4]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肺炎黴漿菌抗原之部分片段]]>
          <![CDATA[<400>  4]]>
          Gly Phe Pro Pro Gln Pro Gly Met Ala Pro 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  5]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肺炎黴漿菌抗原之部分片段]]>
          <![CDATA[<400>  5]]>
          Gln Pro Gly Met Ala Pro Arg Pro Gly Met 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  6]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肺炎黴漿菌抗原之部分片段]]>
          <![CDATA[<400>  6]]>
          Ala Pro Arg Pro Gly Met Pro Pro His Pro 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  7]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肺炎黴漿菌抗原之部分片段]]>
          <![CDATA[<400>  7]]>
          Gly Met Pro Pro His Pro Gly Met Ala Pro 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  8]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肺炎黴漿菌抗原之部分片段]]>
          <![CDATA[<400>  8]]>
          His Pro Gly Met Ala Pro Arg Pro Gly Phe 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  9]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肺炎黴漿菌抗原之部分片段]]>
          <![CDATA[<400>  9]]>
          Ala Pro Arg Pro Gly Phe Pro Pro Gln Pro 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  10]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肺炎黴漿菌抗原之部分片段]]>
          <![CDATA[<400>  10]]>
          Ala Pro Arg Pro Gly Met Gln Pro Pro Arg 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  11]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肺炎黴漿菌抗原之部分片段]]>
          <![CDATA[<400>  11]]>
          Gly Met Gln Pro Pro Arg Pro Gly Met Pro 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  12]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肺炎黴漿菌抗原之部分片段]]>
          <![CDATA[<400>  12]]>
          Pro Gly Met Pro Pro Gln Pro Gly Phe Pro 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  13]]>
          <![CDATA[<211>  12]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肺炎黴漿菌抗原之部分片段]]>
          <![CDATA[<400>  13]]>
          Pro Gly Met Ala Pro Arg Pro Gly Met Pro Pro His 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210>  14]]>
          <![CDATA[<211>  12]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  PGMAPRPGFPPQ]]>
          <![CDATA[<400>  14]]>
          Pro Gly Met Ala Pro Arg Pro Gly Phe Pro Pro Gln 
          1               5                   10
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
Figure 12_A0101_SEQ_0004
Figure 12_A0101_SEQ_0005

Claims (9)

  1. 一種肺炎黴漿菌之免疫測定方法，其利用單株抗體或其抗原結合性片段與源自肺炎黴漿菌之P1蛋白質及P30蛋白質的抗原抗體反應，上述單株抗體係與源自肺炎黴漿菌之P1蛋白質及P30蛋白質特異性地反應者，且與含有包含PPQPG之胺基酸序列之肽特異性地反應。
  2. 如請求項1之免疫測定方法，其中，上述肽之胺基酸序列為PPQPGFPPKR或GMPPQPGFPPKR。
  3. 如請求項1之方法，其中，上述免疫測定方法為夾層法，上述單株抗體或其抗原結合性片段係用於標記或固相之至少任一者。
  4. 如請求項2之方法，其中，上述免疫測定方法為免疫層析法。
  5. 如請求項1至4中任一項之方法，其中，由上述單株抗體識別之上述2種以上之抗原形成複合體。
  6. 一種免疫測定器具，其係用以進行請求項1之方法者，且上述單株抗體或其抗原結合性片段係用於標記或固相之至少任一者。
  7. 如請求項6之免疫測定器具，其為免疫層析試片。
  8. 如請求項6或7之免疫測定器具，其中，上述受檢對象為肺炎黴漿菌。
  9. 一種單株抗體，其係與源自肺炎黴漿菌之P1蛋白質及P30蛋白質特異性地反應者，且與含有包含PPQPG之胺基酸序列之肽特異性地反應。
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