CN115398234A - 肺炎支原体的免疫测定方法和免疫测定仪器 - Google Patents

肺炎支原体的免疫测定方法和免疫测定仪器 Download PDF

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Abstract

本发明公开了利用单克隆抗体的免疫测定方法，所述单克隆抗体是与肺炎支原体的P1蛋白和P30蛋白这两者均特异性结合的单克隆抗体，与已知的单克隆抗体相比，对肺炎支原体的P1蛋白和P30蛋白的亲和性高。免疫测定方法利用单克隆抗体或其抗原结合片段与来自肺炎支原体的P1蛋白和P30蛋白的抗原抗体反应，所述单克隆抗体与来自肺炎支原体的P1蛋白和P30蛋白特异性反应、并且与包含由PPQPG组成的氨基酸序列的肽特异性反应。

Description

肺炎支原体的免疫测定方法和免疫测定仪器
技术领域
本发明涉及肺炎支原体的免疫测定方法和用于该方法的免疫测定仪器以及用于该方法的单克隆抗体。
背景技术
由于单克隆抗体仅识别特定的抗原，因此被广泛用于其特定抗原的检测中。例如，专利文献1中记载了：免疫测定肺炎支原体的方法，其是基于将识别肺炎支原体的P30蛋白的单克隆抗体固定于固相上的夹心法(sandwich method，夹层法)的免疫测定方法。
多克隆抗体是识别各种各样的抗原或抗原决定簇的各种抗体混杂而成的抗体，由于单克隆抗体具有仅识别某特定抗原的、某特定区域的性质，因此与多克隆抗体比较，通常特异性较高。其另一方面，容易想到的是：在可与抗体结合的抗原种类及其总数中，相对于多克隆抗体，单克隆抗体处于劣势。这会导致：单克隆抗体和使用该单克隆抗体的免疫测定方法和免疫测定仪器的低灵敏度。
为了解决这个课题，本申请人之前已经发明了一种单克隆抗体并申请了专利，所述单克隆抗体与肺炎支原体的P1蛋白和P30蛋白这两者均特异性结合(专利文献2)。
现有技术文献
专利文献
专利文献 1：WO2015/025968；
专利文献2：WO2016/194797。
发明内容
发明所要解决的课题
专利文献2中记载的单克隆抗体是通过单一的单克隆抗体与肺炎支原体的P1蛋白和P30蛋白这两者均特异性结合的有用的抗体，但如果是对P1蛋白和P30蛋白的亲和性更高的单克隆抗体，则可进一步提升免疫测定的灵敏度，因此不言而喻是有利的。
本发明的目的在于，提供新型的单克隆抗体、以及使用该单克隆抗体的肺炎支原体的免疫测定方法和用于该方法的免疫测定仪器，所述单克隆抗体与肺炎支原体的P1蛋白和P30蛋白这两者均特异性结合，且与专利文献2中记载的单克隆抗体相比，对肺炎支原体的P1蛋白和P30蛋白的亲和性高。
用于解决课题的手段
本申请发明人专心研究的结果，发现通过使用下述的单克隆抗体，与使用专利文献2中记载的单克隆抗体的免疫测定方法相比，可高灵敏度地测定肺炎支原体，从而完成了本发明，所述单克隆抗体与来自肺炎支原体的P1蛋白和P30蛋白特异性反应、并且与包含由PPQPG组成的氨基酸序列的肽特异性反应。
即，本发明提供以下内容。
(1) 肺炎支原体的免疫测定方法，其利用了单克隆抗体或其抗原结合片段与来自肺炎支原体的P1蛋白和P30蛋白的抗原抗体反应，所述单克隆抗体与来自肺炎支原体的P1蛋白和P30蛋白特异性反应、并且与包含由PPQPG组成的氨基酸序列的肽特异性反应。
(2) 根据(1)所述的免疫测定方法，其中，所述肽的氨基酸序列为PPQPGFPPKR或GMPPQPGFPPKR。
(3) 根据(1)所述的方法，其中，所述单克隆抗体或其抗原结合片段用于标记或固相的至少一种的、所述免疫测定方法为夹心法。
(4) 根据(2)所述的方法，其中，所述免疫测定方法为免疫层析法。
(5) 根据(1)～(4)中任一项所述的方法，其中，由所述单克隆抗体识别的所述2种以上的抗原形成复合物。
(6) 免疫测定仪器，其是用于进行(1)所述的方法的免疫测定仪器，且所述单克隆抗体或其抗原结合片段用于标记或固相的至少一种。
(7) 根据(6)所述的免疫测定仪器，其是免疫层析试验片。
(8) 根据(6)或(7)所述的免疫测定仪器，其中，所述被检对象为肺炎支原体。
(9) 单克隆抗体，所述单克隆抗体与来自肺炎支原体的P1蛋白和P30蛋白特异性反应、并且与包含由PPQPG组成的氨基酸序列的肽特异性反应。
发明效果
与专利文献2中记载的方法相比，本发明的方法改善了检测灵敏度。另外，根据本发明，提供了用于本发明的新型检测方法的免疫测定仪器和单克隆抗体。
具体实施方式
通过本发明的方法检测的被检对象为肺炎支原体，抗原为P1蛋白和P30蛋白。需说明的是，即使在对被检对象进行定量或半定量的情况下，定量或半定量也必然伴随着“检测”，因此也包含在本发明中所说的“检测”中。
在本发明的方法中，使用与上述2种抗原特异性反应的单克隆抗体或其抗原结合片段进行免疫测定。在此，“特异性反应”是指，进行抗原抗体反应，是指在蛋白和该抗体混合的溶液体系中，该抗体不与抗原的蛋白成分以可检测的水平引起抗原抗体反应、或者即使引起某些的结合反应或缔合反应，相比该抗体与抗原的抗原抗体反应，也仅引起显然弱的反应。
以本发明的单克隆抗体为基础，仅分离了抗原结合位点的抗原结合片段也可用于本发明的方法中。即，使用通过已知的方法所制作的、Fab、Fab’、F(ab’)2、单链抗体(scFv)等具有特异性抗原结合性的片段(抗原结合片段)的情况也包含在本发明的范围内。另外，单克隆抗体的类别(class)不限于IgG，也可为IgM或IgY。
用于本发明的方法的单克隆抗体可如下获得：使用已知的免疫学方法，用包含上述2种抗原的复合物或提取物、或者2种抗原中的1个抗原或其部分肽，对被免疫动物进行免疫，使用被免疫动物的细胞来制作杂交瘤，从而获得。对用于免疫的肽的长度没有特别限定，可优选使用5个氨基酸以上、更优选10个氨基酸以上的肽，作为免疫原。免疫原也可从培养液中获得，还可通过将编码任意抗原的DNA插入到质粒载体中，将其导入到宿主细胞中进行表达而获得。也可使作为免疫原的任意抗原或其部分肽与如以下所例示的蛋白以融合蛋白的形式表达，以精制之后或未精制的状态用作免疫原。在融合蛋白的制作中，本领域技术人员可利用通常用作“蛋白表达/精制标签”的、谷胱甘肽S-转移酶(GST)、麦芽糖结合蛋白(MBP)、硫氧还蛋白(TRX)、Nus标签、S标签、HSV标签、FRAG标签、多组氨酸标签等。与这些的融合蛋白优选使用消化酶将任意抗原或其部分肽部分与其以外的标签部分切断，分离精制之后用作免疫原。
由已免疫的动物调制单克隆抗体可通过周知的Kohler等人的方法(Kohler等人,Nature, 第256卷, 495-497页(1975))容易地进行。即，从已免疫的动物回收脾细胞或淋巴细胞等抗体产生细胞，通过常规方法使该抗体产生细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合来制作杂交瘤，将所得的杂交瘤通过极限稀释法等进行克隆，在所克隆的各杂交瘤产生的单克隆抗体中，选择与用于动物免疫的抗原进行抗原抗体反应的单克隆抗体。
由于用于本发明的方法的单克隆抗体是识别2种抗原的单克隆抗体，因此针对如此操作而选择的、识别2种抗原中的一个的单克隆抗体，进一步筛选识别另一个抗原的单克隆抗体。用于本发明的方法的单克隆抗体是如此操作而得到的、识别2种抗原这两者的单克隆抗体，可通过筛选与包含由PPQPG (SEQ ID NO: 1)组成的氨基酸序列的肽特异性反应的单克隆抗体而获得。作为用于筛选的肽，是包含由PPQPG组成的氨基酸序列的肽，例如，可使用氨基酸序列由PPQPGFPPKR (SEQ ID NO: 2)组成的肽和由GMPPQPGFPPKR (SEQ ID NO:3)组成的肽。
从腹水或培养上清中精制单克隆抗体可使用已知的免疫球蛋白精制法。例如可举出：基于使用硫酸铵或硫酸钠的盐析的分馏法、PEG分馏法、乙醇分馏法、DEAE离子交换层析法、凝胶过滤法等。另外，根据免疫动物种类和单克隆抗体的类别，还可通过使用结合有蛋白A、蛋白G、蛋白L的任一种的载体的亲和性层析法进行精制。
在本发明的免疫测定方法中，通过利用与如上操作而制作的2种抗原特异性反应的单克隆抗体或其抗原结合片段(以下，在截至实施例的记述中，除了根据上下文明确并非如此的情况以外，“抗体”是指“抗体或其抗原结合片段”)与检体中的肺炎支原体的抗原抗体反应的免疫测定进行测定。作为用于该测定的免疫测定法，还可使用竞争法、凝集法、免疫印迹法、免疫染色法、夹心法等本领域技术人员所周知的任一种方法。需说明的是，本发明中，“测定”也包含定量、半定量、检测的任一种。
作为免疫测定，优选夹心法。夹心法本身在免疫测定的领域中是周知的，例如可通过免疫层析法或ELISA法进行。这些夹心法本身均为周知的，本发明的方法除了使用上述的本发明的识别2种以上抗原的单克隆抗体以外，可通过周知的夹心法进行。
夹心法中使用识别抗原的2种抗体(固定于固相上的抗体和标记抗体)，但在本发明的方法中，这些的2种抗体中，至少其中一种是上述的识别2种抗原的单克隆抗体。如后所述，由于固定于固相上的抗体在每单位面积上可固定的抗体量受限，因此为了更好实现称之为灵敏度提升的本发明的目的，优选至少在固定抗体上使用上述的识别2种抗原的单克隆抗体。需说明的是，单一的分子或单一的复合物之中，在由该单克隆抗体识别的抗原至少存在2种的情况下，还可将单一种类的该单克隆抗体用作固相化抗体和标记抗体来进行夹心法。
以夹心法为检测原理的免疫测定中，作为使抗体固定的固相，可使用通过已知技术能够固定抗体的所有固相，例如可任意地选择：具有毛细管作用的多孔薄膜(膜)、粒子状物质、试验管、树脂平板等已知的固相。另外，作为标记抗体的物质，可使用：酶、放射性同位素、荧光物质、发光物质、有色粒子、胶体粒子等。即使是在基于前述的各种材料的免疫测定法中，特别是从临床测试的简便性和快速性的观点出发，也优选使用膜的横向流动(lateral flow，侧向流动)式的免疫测定法。
本发明还提供使用识别2种以上抗原的单克隆抗体可横向流动式地进行免疫测定的免疫测定仪器。本发明所提供的免疫测定仪器为下述的免疫测定仪器，其包含：具有固定有捕捉测定对象物(抗原)的抗体(抗体1)的检测区域的支持体；具有可移动的标记抗体(抗体2)的标记物区域；滴加检体的样品垫；吸收已展开的检体液的吸收带；用于将这些部件贴合成1个的包装片，抗体1和抗体2的至少一者为本发明的识别2种以上抗原的单克隆抗体。
需说明的是，检测区域的数目和标记物区域所含的标记抗体的种类不限于1种，通过使用对应于多个测定对象物的抗体，可通过同一免疫测定仪器检测2种以上的抗原。
认为通过本发明的方法提升免疫测定的灵敏度的原理如下。在夹心法中，使用固定于固相上的抗体，但可固定于固相的每单位面积的抗体量受限。另外，抗原抗体反应的时间也受限。特别是，在免疫层析法中，由于检体或使用检体而调制的试样(检体的稀释物等)仅在自上游起流下来而流过检测区域的之间进行抗原抗体反应，因此在该时间内未能与抗体结合的抗原直接向检测区域的下游流动，无法进行检测。在检体中的抗原量少的情况下，作为固相化抗体，与使用识别1种抗原的1种单克隆抗体(通常的夹心法)相比，使用识别2种以上抗原的单克隆抗体的情况由于与抗体结合的抗原量增加，因此灵敏度提升。另外，作为固相化抗体，在将2种的分别识别1种抗原的单克隆抗体组合使用的情况下，由于固相化的各单克隆抗体的量分别为总固相化抗体量的半份，因此在抗原抗体反应的时间短的情况下，某抗原和能够与该抗原结合的单克隆抗体以规定的方向进行碰撞而结合的概率，与固相化抗体的全部为识别其抗原的单克隆抗体的情况比较，为1/2。另一方面，在使用识别2种以上抗原的单克隆抗体的情况下，如果2种以上抗原的任一种与固相化抗体以规定的方向进行碰撞都会与抗体结合，因此固相化抗体所捕捉的抗原量相比将2种的分别识别1种抗原的单克隆抗体组合使用的情况变多，因此，免疫测定的灵敏度提升。
实施例
以下，基于实施例，更具体地对本发明进行说明。然而，本发明不限于下述的实施例。
＜实施例1＞ 抗肺炎支原体单克隆抗体的制作
1．肺炎支原体抗原的调制
培养肺炎支原体，将其培养液通过60℃、30分钟的热处理进行灭活，将所得的灭活物用作抗原。
2．抗肺炎支原体单克隆抗体的制作
用上述1.的支原体灭活抗原，对BALB/c小鼠进行免疫，自饲养了一定期间的小鼠摘出脾脏，利用Kohler等人的方法(Kohler等人, Nature, 第256卷, 495-497页(1975))，与小鼠骨髓瘤细胞(P3×63)进行融合。将所得的融合细胞(杂交瘤)在37℃保温箱中维持，通过使用固相有肺炎支原体P1抗原的板和固相有肺炎支原体P30抗原的板的ELISA，确认上清的抗体活性，同时进行细胞的纯化(单克隆化)。
其结果，如表1所示，获得了多个产生抗肺炎支原体P1抗体、抗肺炎支原体P30抗体和抗肺炎支原体P1-P30抗体的杂交瘤细胞株。
[表1]
克隆名称 反应抗原
P1-30Aab P1, P30
P1-30Bab P1, P30
P1ab P1
P30ab P30
需说明的是，用于该ELISA的P1、P30通过凝胶过滤和离子交换层析进行调制。将已获取的细胞株腹腔给予至经降植烷处理的BALB/c小鼠，约2周后，采取了含有抗体的腹水。从所得的腹水中，通过使用蛋白A柱的亲和性层析法，精制IgG，获得了多个精制的抗肺炎支原体单克隆抗体。
＜实施例2＞
[通过使用合成肽的ELISA法分析表位]
由P30的氨基酸重复序列位点制作了以下所示的肽。
(合成肽)
肽1-1：GFPPQPGMAP (SEQ ID NO: 4)；
肽1-2：QPGMAPRPGM (SEQ ID NO: 5)；
肽1-3：APRPGMPPHP (SEQ ID NO: 6)；
肽1-4：GMPPHPGMAP (SEQ ID NO: 7)；
肽1-5：HPGMAPRPGF (SEQ ID NO: 8)；
肽1-6：APRPGFPPQP (SEQ ID NO: 9)；
肽1-7：APRPGMQPPR (SEQ ID NO: 10)；
肽1-8：GMQPPRPGMP (SEQ ID NO: 11)；
肽1-9：PGMPPQPGFP (SEQ ID NO: 12)；
肽1-10：PPQPGFPPKR (SEQ ID NO: 2)；
肽1-11：PGMAPRPGMPPH (SEQ ID NO: 13)；
肽1-12：PGMAPRPGFPPQ (SEQ ID NO: 14)；
肽1-13：GMPPQPGFPPKR (SEQ ID NO: 3)。
针对实施例1中得到的单克隆抗体P1-30Aab和P1-30Bab，将该单克隆抗体与上述合成肽的反应通过以下所示的ELISA法进行评价。在通过ELISA法的测定中，使用了固相有合成肽的96孔板(NUNC公司)。将合成肽(2.0μg/ml)以100μl/孔添加到上述的板上，使之反应一夜。之后，用1×TBS缓冲液进行洗涤，以200μL/孔添加了封闭缓冲液(1%BSA/TBS)。弃去封闭缓冲液，以100μL/孔加入实施例1之2.的稀释抗体，使之反应30分钟。之后，用200μL的1×洗涤缓冲液进行洗涤，以100μL/孔添加标记抗体液HRP标记的多克隆兔抗小鼠免疫球蛋白(Polyclonal Rabbit Anti-Mouse Immunoglobulins) (P0260；Dako公司)，以50μl/孔添加包含2w/v% BSA的TBS (pH7.0))，使之反应30分钟。之后，用缓冲液II进行洗涤，以100μl/孔添加作为HRP底物的包含OPD的底物溶液，使之静置10分钟，以100μl/孔添加2N硫酸，使反应终止。使用酶标仪测定了各孔中的反应液在450-630nm处的吸光度。
其结果，发现了所有抗体均与P30的氨基酸重复序列位点反应。
单克隆抗体P1-30Aab (本发明的单克隆抗体)与肽1-10和1-13强烈反应。另外，也与肽1-1和1-9反应。由以上的结果确认到：单克隆抗体P1-30Aab与包含“PPQPG (Pro-Pro-Gln-Pro-Gly)”的肽序列具有反应性。另一方面，单克隆抗体P1-30Bab与P1反应，但P1的氨基酸序列中不存在PPQPG，而是存在类似序列的PPHP。
＜实施例3＞ 测定肺炎支原体的免疫测定仪器
1．抗肺炎支原体抗体在硝化纤维素膜上的固定
准备将实施例1中制作的抗体用精制水稀释成1.0mg/mL的溶液和抗小鼠IgG抗体，在由PET膜衬里的硝化纤维素膜的样品垫侧将抗体、在吸收体侧将抗小鼠IgG抗体分别涂布成线状。之后，使硝化纤维素膜在45℃下干燥30分钟，获得了抗肺炎支原体抗体固定膜。本实施例中称为抗体固定膜。
2．抗肺炎支原体抗体在着色聚苯乙烯粒子上的固定
将实施例1中制作的抗体用精制水稀释成1.0mg/mL，向其中加入着色聚苯乙烯粒子使达到0.1％，搅拌后，加入碳二亚胺使达到1％，进一步进行搅拌。通过离心操作去除上清，再悬浮于50mM Tris (pH9.0)、3％BSA中，获得了结合抗肺炎支原体抗体的着色聚苯乙烯粒子。本实施例中称为抗体固定粒子。
3．测定肺炎支原体的试验片的制作
将1中制作的抗体固定膜与其它部件(包装片、吸收体、样品垫)贴合，切断成5mm宽度，作为肺炎支原体试验片。这些在本实施例中被称为试验片。
免疫层析灵敏度
＜实施例4＞ 测定肺炎支原体的免疫测定仪器的灵敏度比较
将实施例1中得到的抗P1-P30单克隆抗体(P1-30Aab、P1-30Bab)和抗P1单克隆抗体(P1ab)、抗P30单克隆抗体(P30ab)以表2的组合通过实施例3的步骤制作了P1P30、P30试验片和P1×P1P30的3种。
[表2]
Figure 132488DEST_PATH_IMAGE002
在各试验片上滴加50μL的包含任意地稀释的肺炎支原体抗原和2中制作的抗体固定粒子的检体悬浮液，静置15分钟。将在抗小鼠IgG抗体和抗肺炎支原体抗体这两者的涂布位置可目视确认到显色的情况判定为+。将仅在抗小鼠IgG抗体的涂布位置可目视确认到显色、在抗肺炎支原体抗体的涂布位置不能目视确认到显色的情况判定为-。另外，将在抗小鼠IgG抗体的涂布位置不能目视确认到显色的情况判定为无效。
将各试验片的结果示于表3中。
[表3]
×32 ×64 ×128 ×256 ×512 ×1024 ×2048
P1 + ﹣ ﹣ ﹣ ﹣ ﹣ ﹣
P30 + + + ﹣ ﹣ ﹣ ﹣
P1P30A + + + + + ﹣ ﹣
P1P30B + + + + + + ﹣
如表3所示，使用作为本发明的单克隆抗体的P1-30Bab的免疫测定仪器，与使用其他抗体的免疫测定仪器比较，显示出优异的灵敏度。
<110> 电化株式会社
<120> 肺炎支原体的免疫测定方法和免疫测定仪器
<130> PF000700-PCT
<160> 14
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> 肺炎支原体
<400> 1
Pro Pro Gln Pro Gly
1 5
<210> 2
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肺炎支原体抗原的部分片段
<400> 2
Pro Pro Gln Pro Gly Phe Pro Pro Lys Arg
1 5 10
<210> 3
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肺炎支原体抗原的部分片段
<400> 3
Gly Met Pro Pro Gln Pro Gly Phe Pro Pro Lys Arg
1 5 10
<210> 4
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肺炎支原体抗原的部分片段
<400> 4
Gly Phe Pro Pro Gln Pro Gly Met Ala Pro
1 5 10
<210> 5
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肺炎支原体抗原的部分片段
<400> 5
Gln Pro Gly Met Ala Pro Arg Pro Gly Met
1 5 10
<210> 6
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肺炎支原体抗原的部分片段
<400> 6
Ala Pro Arg Pro Gly Met Pro Pro His Pro
1 5 10
<210> 7
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肺炎支原体抗原的部分片段
<400> 7
Gly Met Pro Pro His Pro Gly Met Ala Pro
1 5 10
<210> 8
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肺炎支原体抗原的部分片段
<400> 8
His Pro Gly Met Ala Pro Arg Pro Gly Phe
1 5 10
<210> 9
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肺炎支原体抗原的部分片段
<400> 9
Ala Pro Arg Pro Gly Phe Pro Pro Gln Pro
1 5 10
<210> 10
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肺炎支原体抗原的部分片段
<400> 10
Ala Pro Arg Pro Gly Met Gln Pro Pro Arg
1 5 10
<210> 11
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肺炎支原体抗原的部分片段
<400> 11
Gly Met Gln Pro Pro Arg Pro Gly Met Pro
1 5 10
<210> 12
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肺炎支原体抗原的部分片段
<400> 12
Pro Gly Met Pro Pro Gln Pro Gly Phe Pro
1 5 10
<210> 13
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肺炎支原体抗原的部分片段
<400> 13
Pro Gly Met Ala Pro Arg Pro Gly Met Pro Pro His
1 5 10
<210> 14
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PGMAPRPGFPPQ
<400> 14
Pro Gly Met Ala Pro Arg Pro Gly Phe Pro Pro Gln
1 5 10

Claims (9)

1.肺炎支原体的免疫测定方法，其利用了单克隆抗体或其抗原结合片段与来自肺炎支原体的P1蛋白和P30蛋白的抗原抗体反应，所述单克隆抗体与来自肺炎支原体的P1蛋白和P30蛋白特异性反应、并且与包含由PPQPG组成的氨基酸序列的肽特异性反应。
2.根据权利要求1所述的免疫测定方法，其中，所述肽的氨基酸序列为PPQPGFPPKR或GMPPQPGFPPKR。
3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述单克隆抗体或其抗原结合片段用于标记或固相的至少一种的、所述免疫测定方法为夹心法。
4.根据权利要求2所述的方法，其中，所述免疫测定方法为免疫层析法。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，由所述单克隆抗体识别的所述2种以上的抗原形成复合物。
6.免疫测定仪器，其是用于进行权利要求1所述的方法的免疫测定仪器，且所述单克隆抗体或其抗原结合片段用于标记或固相的至少一种。
7.根据权利要求6所述的免疫测定仪器，其是免疫层析试验片。
8.根据权利要求6或7所述的免疫测定仪器，其中，所述被检对象为肺炎支原体。
9.单克隆抗体，所述单克隆抗体与来自肺炎支原体的P1蛋白和P30蛋白特异性反应、并且与包含由PPQPG组成的氨基酸序列的肽特异性反应。
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