TW202241866A - 成纖維細胞活化蛋白抑制劑 - Google Patents

Abstract

本發明提供通式(I)之化合物或者其醫藥學上可接受之鹽、立體異構體或溶劑合物，其中C為螯合劑單元；AB為白蛋白結合單元；FAPI為成纖維活化蛋白抑制劑單元。本發明還提供上述化合物與放射性核素之螯合物、藥物組合物以及其作為成纖維細胞活化蛋白抑制劑用於診斷及治療疾病之用途。 C-AB-FAPI  (I)

Description

成纖維細胞活化蛋白抑制劑

本發明係關於醫療及診斷領域，具體關於抑制成纖維活化蛋白之化合物、螯合物、組合物及其用途。

腫瘤係威脅人們健康的第二大殺手。腫瘤不僅可以被認為係惡性細胞之集合，亦可以被認為係基質細胞之集合，其中包括血管細胞、發炎細胞及成纖維細胞。在有纖維增生反應之腫瘤如乳癌、結腸癌及胰臟癌中，腫瘤中的間質可能會達至90%或更高。腫瘤間質中之一種被稱為癌症相關成纖維細胞(CAF)的成纖維細胞亞群，會參與腫瘤之生長、遷移及進展甚至對化學療法產生抵抗及免疫抑制。

腫瘤周圍之腫瘤微環境(TME)在腫瘤的發生發展過程中起到了重要作用，TME以活化的成纖維細胞(CAF)為核心。成纖維活化蛋白(fibroblast activation protein，FAP)係一種II型跨膜絲胺酸蛋白水解酶，屬於二肽基肽酶(DPP)家族。FAP選擇性地表現於90%以上的上皮惡性腫瘤的CAF上，而在正常組織中幾乎不表現，具有特殊之生物學特性及基因穩定性。FAP在多種腫瘤的微環境中廣泛表現，因此可以靶向不同之腫瘤實體，包括胰臟癌，乳癌及肺癌，其占實體瘤整體的很大一部分。因此FAP既可以作為腫瘤早期診斷之生物學標誌物，又具有良好的靶向治療生物學特性，有望在惡性腫瘤的臨床診斷及治療方面發揮重要作用。

目前，對FAP之抑制劑研究尚不深入，第一個進入臨床試驗的FAP活性抑制劑為他拉司他(Talabostat)，但其在各種癌症中表現出不充分的臨床活性，因此沒有繼續進一步的發展。後來有研究者利用 ¹³¹I標記抗FAP之抗體西羅珠單抗(sibrotuzumab)進行腫瘤治療研究，但存在低清除率及缺乏臨床活性等缺陷。

近兩年來，德國海德堡大學Haberkorn, Uwe團隊開發了一系列基於喹啉的小分子放射藥物靶向FAP進行診斷及治療，參見WO2019154886A1。所生成之抑制劑能夠快速且幾乎完全的與人類及小鼠的FAP結合，重要的是，其與DPP家族成員DPP4沒有交叉反應，因此為進一步的發展奠定了基礎。藉由將此種FAP抑制劑(FAPI)與螯合劑DOTA連接便形成了具有良好藥物動力學特性的放射性核素示蹤劑。整個示蹤劑中最受關注的為FAPI-04，其對FAP有較高親和力，示蹤劑迅速自血液中清除，並被腎臟清除。此等特性使 ⁶⁸Ga-FAPI-04 PET/CT之腫瘤顯像具有高對比度及高靈敏度。但FAPI-04在體內的快速溶離限制其在腫瘤核素治療中的應用。因此在保留其優異靶向性並解決FAP抑制劑小分子的循環時間短的問題係尤為期望的。

本發明之一個態樣提供一種通式(I)之化合物或者其醫藥學上可接受之鹽、異構體或溶劑合物， C-AB-FAPI  (I) 其中C為螯合劑單元；AB為白蛋白結合單元；FAPI為成纖維活化蛋白抑制劑單元。

在一些實施方案中，通式(I)中之C單元選自：

、

、

、

、

、

或者

。

在一些實施方案中，通式(I)中之FAPI單元選自：

、

、

或者

。

在一些實施方案中，通式(I)中之AB單元包含4-碘-苯基末端基團

。

在一些實施方案中，通式(I)中之AB單元選自

。

在一些實施方案中，AB單元藉由與FAPI單元中之末端

、

、

或

形成醯胺鍵將其與FAPI單元相連，AB單元藉由與C單元中之末端羰基形成醯胺鍵將其與C單元相連。

在一些具體實施方案中，通式(I)化合物為

或者其醫藥學上可接受之鹽、異構體或溶劑合物。

本發明之另一個態樣提供一種螯合物，其包含上述式(I)化合物及放射性核素。

在一些實施方案中，放射性核素選自： ¹⁸F、 ⁵¹Cr、 ⁶⁷Ga、 ⁶⁸Ga、 ¹¹¹In、 ⁹⁹mTc、 ¹⁸⁶Re、 ¹⁸⁸Re、 ¹³⁹La、 ¹⁴⁰La、 ¹⁷⁵Yb、 ¹⁵3Sm、 ¹⁶⁶Ho、 ⁸⁶Y、 ⁸⁸Y、 ⁹⁰Y、 ¹⁴⁹Pm、 ¹⁶⁵Dy、 ¹⁶⁹Er、 ¹⁷⁷Lu、 ⁴⁷Sc、 ¹⁴²Pr、 ¹⁵⁹Gd、 ²¹²Bi、 ²¹³Bi、 ⁷²As、 ⁷²Se、 ⁹⁷Ru、 ¹⁰⁹Pd、 ¹⁰⁵Rh、 ^101mRh、 ¹¹⁹Sb、 ¹²⁸Ba、 ¹²³I、 ¹²⁴I、 ¹³¹I、 ¹⁹⁷Hg、 ²¹¹At、 ¹⁵¹Eu、 ¹⁵³Eu、 ¹⁶⁹Eu、 ²⁰¹Tl、 ²⁰³Pb、 ²¹²Pb、 ⁶⁴Cu、 ⁶⁷Cu、 ¹⁸⁸Re、 ¹⁸⁶Re、 ¹⁹⁸Au、 ²²⁵Ac、 ²²⁷Th及 ¹⁹⁹Ag中之一或多種。

在一些具體實施方案中，放射性核素為 ⁶⁸Ga、 ⁸⁶Y或 ¹⁷⁷Lu。

本發明之再一個態樣提供一種藥物組合物，其包含或組成為：至少一種上述式(I)化合物，視情況及醫藥學上可接受之輔料。

本發明之又一個態樣還提供上述螯合物或藥物組合物在製備用於診斷或治療在個體中以成纖維細胞活化蛋白(FAP)過度表現為特徵之疾病之試劑或套組中之用途。

本發明之又一個態樣還提供一種診斷或治療在個體中以成纖維細胞活化蛋白(FAP)過度表現為特徵之疾病之方法，藉由向需要治療之個體投與有效劑量之上述螯合物或藥物組合物。

本發明之又一個態樣還提供用於診斷或治療在個體中以成纖維細胞活化蛋白(FAP)過度表現為特徵之疾病之上述螯合物或藥物組合物。

在一些實施方案中，以成纖維細胞活化蛋白(FAP)過度表現為特徵之疾病選自癌症、慢性發炎、動脈粥樣硬化、纖維化、組織重塑及瘢痕病，較佳地，其中癌症選自乳癌、胰臟癌、小腸癌、結腸癌、直腸癌、肺癌、頭頸癌、卵巢癌、肝細胞癌、食道癌、下咽癌、鼻咽癌、喉癌、骨髓瘤細胞、膀胱癌、膽管細胞癌、透明細胞腎癌、神經內分泌腫瘤、致癌性骨軟化症、肉瘤、CUP(原發性未知癌)、胸腺癌、膠質瘤、神經膠質瘤、星形細胞瘤、子宮頸癌及前列腺癌中之一或多種。

本發明之又一個態樣還提供一種套組，其包含或組成為上述螯合物或藥物組合物，以及用於診斷或治療疾病之說明書。

相關申請案之交叉引用本申請案主張於2020年12月21日申請之中國專利申請案序列號202011519183.X之優先權之權益，該申請案以全文引用的方式併入本文中。

為使本發明實施例之目的、技術方案及優點更加清楚，下面將結合本發明實施例之附圖，對本發明實施例之技術方案進行清楚、完整地描述。顯然，所描述之實施例係本發明之一部分實施例，而並非全部之實施例。基於所描述的本發明之實施例，一般技術者在無需創造性勞動的前提下所獲得的所有其他實施例，均屬於本發明保護的範圍。

本發明可在不偏離本發明基本屬性的情況下以其他具體形式來實施。應該理解的是，在不衝突的前提下，本發明之任一及所有實施方案均可與任一其他實施方案或多個其他實施方案中之技術特徵進行組合以得到另外的實施方案。本發明包括此類組合得到另外的實施方案。

本發明中提及之所有出版物及專利在此以引用的方式以其全部內容納入本發明。若以引用的方式納入的任何出版物及專利中使用之用途或術語與本發明中使用之用途或術語衝突，則以本發明之用途及術語為準。

本文所用之章節標題僅用於組織文章之目的，而不應被解釋為對所述主題的限制。

除非另有規定，本文使用之所有技術術語及科學術語具有主張主題所屬領域的通常含義。倘若對於某術語存在多個定義，則以本文定義為準。

除非另有說明，當揭示或主張任何類型的範圍時，意圖單獨揭示或主張該範圍可有理由涵蓋的各可能的數值，包括涵蓋在其中之任何子範圍。例如取代基個數為1至5表明該範圍內的整數，其中1-5應理解包括1、2、3、4、5，亦包括1-4及1-3的子範圍。

本發明之說明書應該被解釋為與化學鍵的法則及原理一致。在一些情況下，可能為了在給定的位置適應取代基而除去氫原子。

本發明中使用的「包括」、「含有」或者「包含」等類似的詞語意謂出現該詞前面的要素涵蓋出現在該詞後面列舉的要素及其等同，而不排除未記載的要素。本文所用之術語「含有」或「包括(包含)」可以係開放式、半封閉式及封閉式的。換言之，上述術語亦包括「基本上由…組成」、或「由…組成」。

術語「醫藥學上可接受之」在本申請案中係指：化合物或組合物在化學上及/或在毒理學上與構成製劑的其他成分及/或與用其預防或治療疾病或病症的人類或哺乳動物相容。

術語「個體」或「患者」在本申請案中包括人類及哺乳動物。

在本申請案之上下文中，除非作出相反的具體說明，術語「治療」亦可包括預防。

術語「溶劑合物」在本申請案中係指藉由組合式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽及溶劑而形成的複合物。應理解的是，在診斷或治療本申請案所述之疾病或病症中使用的式(I)化合物的任何溶劑合物儘管可能提供不同的性質(包括藥物動力學性質)，但是一旦吸收至個體中，會得到式(I)化合物，使得式(I)化合物的使用分別涵蓋式(I)化合物的任何溶劑合物的使用。

術語「水合物」係指上述術語「溶劑合物」中溶劑為水之情形。

應進一步理解，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽可以溶劑合物形式分離，並且因此任何上述溶劑合物皆包括於本發明之範圍內。例如，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽可以未溶劑化形式以及與醫藥學上可接受之溶劑(諸如，水、乙醇等)形成之溶劑化形式存在。

術語「醫藥學上可接受之鹽」係指本發明化合物的相對無毒的加成鹽。例如，參見S. M. Berge等人「Pharmaceutical Salts」， J. Pharm. Sci.1977, 66, 1-19。

本發明化合物的適合的醫藥學上可接受之鹽可以係例如在鏈或環中攜帶氮原子的具有足夠鹼性之本發明化合物之酸加成鹽，例如與如下無機酸形成之酸加成鹽：例如鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、磷酸或硝酸，或者與如下有機酸形成之酸加成鹽：例如甲酸、乙酸、乙醯乙酸、丙酮酸、三氟乙酸、丙酸、丁酸、己酸、庚酸、十一烷酸、月桂酸、苯甲酸、水楊酸、2-(4-羥基苯甲醯基)苯甲酸、樟腦酸、肉桂酸、環戊烷丙酸、3-羥基-2-萘甲酸、菸酸、撲酸、果膠酯酸、過硫酸、3-苯基丙酸、苦味酸、特戊酸、2-羥基乙磺酸、衣康酸、胺基磺酸、三氟甲磺酸、十二烷基硫酸、乙磺酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、甲磺酸、2-萘磺酸、萘二磺酸、樟腦磺酸、檸檬酸、酒石酸、硬脂酸、乳酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、蘋果酸、己二酸、藻酸、順丁烯二酸、反丁烯二酸、D-葡糖酸、扁桃酸、抗壞血酸、葡庚酸、甘油磷酸、天冬胺酸、磺基水楊酸或硫氰酸。

另外，具有足夠酸性之本發明化合物的另一種適合的醫藥學上可接受之鹽係鹼金屬鹽例如鈉鹽或鉀鹽，鹼土金屬鹽例如鈣鹽或鎂鹽，銨鹽，或與提供生理學上可接受之陽離子的有機鹼形成之鹽，例如與如下物質形成之鹽：N-甲基葡糖胺、二甲基葡糖胺、乙基葡糖胺、離胺酸、二環己基胺、1,6-己二胺、乙醇胺、葡糖胺、肌胺酸、絲胺醇、三羥基甲基胺基甲烷、胺基丙二醇、1-胺基-2,3,4-丁三醇。另外，鹼性含氮基團可用如下試劑四級銨化：低級烷基鹵化物，例如甲基、乙基、丙基及丁基氯化物、溴化物及碘化物；硫酸二烷基酯，例如硫酸二甲酯、硫酸二乙酯、硫酸二丁酯及硫酸二戊酯；長鏈鹵化物例如癸基、月桂基、肉豆蔻基及硬脂基氯化物、溴化物及碘化物；芳烷基鹵化物如苄基及苯乙基溴化物等。

熟習此項技術者還會認識到，所主張之化合物之酸加成鹽可藉由多種已知方法中的任意一種使上述化合物與適當的無機酸或有機酸反應來製備。或者，本發明之酸性化合物的鹼金屬鹽及鹼土金屬鹽藉由各種已知之方法使其與適當的鹼反應來製備。

本發明包括本發明化合物的所有可能之鹽，其可為單一鹽或上述鹽的任意比例的任意混合物。

應理解，本申請案所用之術語「本發明化合物」根據語境可包括：式(I)所示之化合物、其醫藥學上可接受之鹽、其溶劑合物、其醫藥學上可接受之鹽之溶劑合物、以及其混合物。

本發明之化合物可包含一或多個不對稱中心，視期望的各種取代基的位置及性質而定。不對稱碳原子可以(R)或(S)組態存在，在具有一個不對稱中心的情況下得到外消旋混合物，並且在具有多個不對稱中心的情況下得到非對映異構體混合物。在某些情況下，由於圍繞特定鍵的旋轉受阻還可能存在不對稱性，例如該中心鍵連接特定化合物的兩個經取代之芳環。

較佳之化合物係彼等能產生更期望之生物活性之化合物。本發明化合物的分離的、純化的或部分純化的異構體及立體異構體、或者外消旋混合物或非對映異構體混合物均包括在本發明之範圍內。此類物質的純化及分離可藉由此項技術中已知的標準技術實現。

本發明針對通式(I)之化合物提及之「螯合劑單元」係指衍生自螯合劑之分子片段。例如螯合劑單元係衍生自1,4,7,10-四氮雜環十二烷-N,N',N,N'-四乙酸(DOTA)之分子片段，其可以係藉由DOTA之一個羧基形成醯胺

而引入至通式(I)之化合物中。

本發明針對通式(I)之化合物提及之「成纖維活化蛋白抑制劑單元」係指衍生自成纖維活化蛋白抑制劑之分子片段。例如，當抑制劑係WO2019154886A1的表1及表3中揭示之FAPI系列化合物，「成纖維活化蛋白抑制劑單元」係該FAPI系列化合物中去除R ⁸得到之分子片段。

本發明針對通式(I)之化合物提及之「白蛋白結合單元」係指具有與白蛋白高親合力之分子片段，並且該分子片段具有與螯合劑單元及成纖維活化蛋白抑制劑單元相連的基團。

本發明針對通式(I)之化合物提及之「FAPI單元及C單元一起構成」並不是指在通式(I)之化合物中FAPI單元及C單元直接連接，而是指一種假像情形，亦即將通式(I)之化合物中的FAPI單元及C單元抽出來連接(去掉中間的白蛋白結合單元)。

應該理解，在本發明中使用的單數形式(如「一種」)可包括複數指代，除非另有規定。

除非另有指明，本發明採用分析化學、有機合成化學及配位化學的標準命名及標準實驗室步驟及技術。除非另有說明，本發明採用質譜、元素分析的傳統方法，各步驟及條件可參照此項技術中習知的操作步驟及條件。

本發明所用試劑及原料係市售可得的或者可藉由習知化學合成方法製得的。

本文使用術語「視情況」來描述某一情形係指該情形可發生亦可不發生。例如，術語「視情況經取代的」係指為未經取代的或者具有至少一個不破壞由未經取代之類似物所擁有之目的效能的非氫取代基。例如，針對藥物組合物，本文使用之表述「視情況，及醫藥學上可接受之輔料」表示醫藥學上可接受之輔料可存在於藥物組合物中，亦可以不存在於藥物組合物中。

本發明中，如無特殊說明，所述之「取代」之個數可為一個或複數個；當為複數個時，可為2個、3個或4個。並且，當所述之「取代」之個數為複數個時，所述之「取代」可相同或不同。

本發明中，「取代」的位置，如未做特別說明，位置可為任意。

本文使用之術語「C ₁-C ₁₀烷基」係指含有1-10個碳原子的直鏈或分支鏈烷烴鏈。例如，C ₁-C ₆烷基之代表性實例包括但不限於甲基(C ₁)、乙基(C ₂)、正丙基(C ₃)、異丙基(C ₃)、正丁基(C ₄)、第三丁基(C ₄)、二級丁基(C ₄)、異丁基(C ₄)、正戊基(C ₅)、3-戊烷基(C ₅)、新戊基(C ₅)、3-甲基-2-丁烷基(C ₅)、第三戊基(C ₅)及正己基(C ₆)等。術語「低級烷基」係指具有1至4個碳原子的直鏈或分支鏈烷基。「經取代之烷基」指在任何可用連接點處經一或多個取代基較佳1至4個取代基取代之烷基。術語「鹵代烷基」係指具有一或多個鹵素取代基之烷基，其包括但不限於如-CH ₂Br、-CH ₂I、-CH ₂Cl、-CH ₂F、-CHF ₂及-CF ₃那樣的基團。

本文使用之術語「伸烷基」係指如以上就「烷基」所述但具有兩個連接點的二價烴基。例如，亞甲基為-CH ₂-基團，伸乙基為-CH ₂-CH ₂-基團。

本文使用之術語「烷氧基」及「烷基硫基」指分別經由氧鍵(-O-)或硫鍵(-S-)連接之如上所述之烷基。術語「經取代之烷氧基」及「經取代之烷基硫基」指分別經由氧鍵或硫鍵連接之經取代之烷基。「低級烷氧基」為基團OR，其中R為低級烷基(含有1至4個碳原子之烷基)。

本文使用之術語「鹵素」係指氟、氯、碘或溴。

白蛋白作為藥物載體的應用已越來越廣泛，常被用來改善藥物的血流動力學特性，從而提高血流半衰期。白蛋白係人體血漿中含量最豐富的蛋白質，承擔著體內各種貯存及運輸工作。與正常組織相比，腫瘤組織的血管豐富、血管內皮間隙較大，白蛋白作為大分子物質，能夠滲入腫瘤組織而不能進入正常組織，另外，分子量較小的物質自腫瘤間質中清除較快，而大分子被截留，此種效應又被稱為大分子物質在腫瘤組織的透過性增強及滯留效應(enhanced permeability and retention effect, EPR)。此外，腫瘤微環境有結合白蛋白的受體高表現，例如gp60受體及SPARC134，其進一步使白蛋白保留在腫瘤附近。因此，使用白蛋白作為抗癌藥物的載體不僅改善了此等藥物的半衰期，而且還改善了向腫瘤的傳遞及在腫瘤中的保留。白蛋白載藥體系主要包括化學偶聯及物理結合的白蛋白載藥。

本發明將白蛋白結合劑與螯合劑單元及FAP抑制劑單元進行連接，從而形成能與FAP及白蛋白進行雙靶向的小分子化合物(TEFAPI)，目的在於延長FAPI分子的血液循環半衰期，增加腫瘤攝取。

本發明提供了一種通式(I)之化合物或者其醫藥學上可接受之鹽、異構體或溶劑合物， C-AB-FAPI  (I) 其中C為螯合劑單元；AB為白蛋白結合單元；FAPI為成纖維活化蛋白抑制劑單元。

在一種實施方式中，C單元衍生自選自以下之螯合劑：1,4,7,10-四氮雜環十二烷-N,N',N,N'-四乙酸(DOTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、1,4,7-三氮雜環壬烷-1,4,7-三乙酸(NOTA)、三伸乙基四胺(TETA)、亞胺基二乙酸、二伸乙基三胺-N,N,N',N',N''-五乙酸(DTPA)、雙-(羧甲基咪唑)甘胺酸或6-肼基吡啶-3-羧酸(HYNIC)。

例如，C單元為

，其衍生自1,4,7,10-四氮雜環十二烷-N,N',N,N'-四乙酸(DOTA)，其可以藉由DOTA之一個羧基形成醯胺

而引入至通式(I)之化合物中。

例如，C單元為

，其衍生自11,4,7-三氮雜環壬烷-1,4,7-三乙酸(NOTA)，其可以藉由NOTA之一個羧基形成醯胺

而引入至通式(I)之化合物中。

在一種實施方式中，通式(I)之化合物中的C單元選自：

、

、

、

、

、

或者

。

在一種實施方式中，通式(I)之化合物中的FAPI單元選自

、

、

或者

。

在一種實施方式中，通式(I)之化合物中的FAPI單元及C單元滿足以下條件： 若將FAPI單元及C單元進行連接(去掉中間的白蛋白結合單元)，則連接得到的新的化合物選自：

。換言之，在該實施方式中，通式(I)之化合物可以看作係在化合物FAPI-02、FAPI-04、FAPI-21、FAPI-34、FAPI-42、FAPI-46、FAPI-52、FAPI-69、FAPI-70、FAPI-71、FAPI-72、FAPI-73、FAPI-74之分子結構中插入白蛋白結合單元AB。化合物FAPI-02、FAPI-04、FAPI-21、FAPI-34、FAPI-42、FAPI-46、FAPI-52、FAPI-69、FAPI-70、FAPI-71、FAPI-72、FAPI-73、FAPI-74在WO2019154886A1中披露為一種FAP抑制劑。

在一種較佳的實施方式中，通式(I)之化合物中的FAPI單元及C單元滿足以下條件： 若將FAPI單元及C單元進行連接(去掉中間的白蛋白結合單元)，則連接得到的新的化合物選自：FAPI-04、FAPI-21或FAPI-46。在一種實施方式中，通式(I)之化合物中的FAPI單元及C單元滿足以下條件：若將FAPI單元及C單元進行連接(去掉中間的白蛋白結合單元)，則連接得到的新的化合物為FAPI-04。

在一種實施方式中，AB單元包含4-碘-苯基末端基團。

在一個實施方式中，AB單元選自

。

在一種實施方式中，AB單元藉由與FAPI單元中之末端

、

、

或

形成醯胺鍵將其與FAPI單元相連，AB單元藉由與C單元中之末端羰基形成醯胺鍵將其與C單元相連。

在一種實施方式中，通式(I)之化合物為

或者其醫藥學上可接受之鹽、異構體或溶劑合物。

基於Jansen等人設計的具有高親和力的小分子FAP抑制劑(FAPI)，Loktev等人首先開發了放射性示蹤劑FAPI-01及FAPI-02，可以迅速與人及鼠細胞中的FAP結合內化。在正常組織中的積聚非常少，且清除速度很快，因此可以為PET成像獲得高對比度。此外，FAPI-02可藉由腎臟清除而迅速自生物體中清除，而不會保留在腎實質中，此有利於治療應用。為了最佳化腫瘤中的攝取及示蹤劑保留，開發了一系列基於FAPI-02之化合物，其中FAPI-04的PET成像顯示出較高之腫瘤攝取，更長的滯留時間，並且在正常器官中的活性沒有明顯增加。FAPI-04在臨床實驗中對28種不同癌症的病人進行PET成像，發現只有癌症部位有攝取而正常組織幾乎沒有攝取，顯示出了非常優異的癌症靶向性質，該診斷試劑現在已經在臨床中得到了應用。由於FAP靶點亦係一個優異的治療性靶點，對於轉移性晚期病人，手術、放化療等習知方法無法抑制腫瘤發展，延長病人生命，使用FAP抑制劑攜帶放射性治療核素將係有希望的治療方法。因此期望在保留其優異靶向性的前提下解決FAP抑制劑小分子的循環時間短的問題。

TEFAPI-06係在FAPI-04結構中引入4-(對-碘苯基)丁酸衍生物結構。在FAPI-04結構中引入此種與白蛋白有高親和力的碘苯結構延長了成纖維活化蛋白(FAP)抑制劑的活體內血液循環時間，並且可以在腫瘤部位有特異性高攝取，經過PET顯像測試其影像學代謝規律後，發現血液半衰期由原來26分鐘延長至400分鐘。在鑥-177放射性治療實驗中，小鼠腫瘤得到明顯抑制。TEFAPI-06有望應用於多種癌症的顯像及放射性核素攜帶劑。

本發明還提供了一種螯合物，其包含： 上述通式(I)之化合物或者其醫藥學上可接受之鹽、異構體或溶劑合物，及 放射性核素。

在上述螯合物中，螯合劑單元與放射性核素直接螯合(例如， ⁶⁸Ga與衍生自DOTA之螯合劑單元螯合)，或者藉由與其他金屬螯合間接地引入放射性核素(例如，Al ³⁺與衍生自DOTA之螯合劑單元螯合，放射性核素 ¹⁸F以反離子形式引入螯合物中)。

在一種實施方式中，放射性核素選自： ¹⁸F、 ⁵¹Cr、 ⁶⁷Ga、 ⁶⁸Ga、 ¹¹¹In、 ⁹⁹mTc、 ¹⁸⁶Re、 ¹⁸⁸Re、 ¹³⁹La、 ¹⁴⁰La、 ¹⁷⁵Yb、 ¹⁵3Sm、 ¹⁶⁶Ho、 ⁸⁶Y、 ⁸⁸Y、 ⁹⁰Y、 ¹⁴⁹Pm、 ¹⁶⁵Dy、 ¹⁶⁹Er、 ¹⁷⁷Lu、 ⁴⁷Sc、 ¹⁴²Pr、 ¹⁵⁹Gd、 ²¹²Bi、 ²¹³Bi、 ⁷²As、 ⁷²Se、 ⁹⁷Ru、 ¹⁰⁹Pd、 ¹⁰⁵Rh、 ^101mRh、 ¹¹⁹Sb、 ¹²⁸Ba、 ¹²³I、 ¹²⁴I、 ¹³¹I、 ¹⁹⁷Hg、 ²¹¹At、 ¹⁵¹Eu、 ¹⁵³Eu、 ¹⁶⁹Eu、 ²⁰¹Tl、 ²⁰³Pb、 ²¹²Pb、 ⁶⁴Cu、 ⁶⁷Cu、 ¹⁸⁸Re、 ¹⁸⁶Re、 ¹⁹⁸Au、 ²²⁵Ac、 ²²⁷Th及 ¹⁹⁹Ag。例如，上述放射性核素為 ⁶⁸Ga、 ⁸⁶Y或 ¹⁷⁷Lu。

本發明還提供了一種藥物組合物，其包含或組成為： 至少一種上述螯合物， 視情況，及醫藥學上可接受之輔料。

在一種實施方式中，藥物組合物包含或組成為至少一種上述螯合物。在另一種實施方式中，藥物組合物包含或組成為至少一種上述螯合物及醫藥學上可接受之輔料。

本發明之組合物必須或視需要還可包含將螯合物調配成用於預期的給藥途徑的醫藥學上可接受之輔料。輔料包括但不限於稀釋劑、崩解劑、沈澱抑制劑、界面活性劑、助流劑、黏合劑、潤滑劑、包衣材料等。輔料在E.W. Martin的「Remington's Pharmaceutical Sciences」中被一般性描述。輔料之實例包括但不限於單硬脂酸鋁、硬脂酸鋁、羧甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、交聯普維酮、異硬脂酸甘油酯、單硬脂酸甘油酯、羥基乙基纖維素、羥基甲基纖維素、羥基硬脂酸羥基二十八酯、羥基丙基纖維素、羥基丙基甲基纖維素、乳糖、乳糖一水合物、硬脂酸鎂、甘露醇、微晶纖維素等。

適當時可用於將上述組合物調配成用於預期的給藥途徑之試劑包括： 酸化劑(實例包括但不限於乙酸、檸檬酸、反丁烯二酸、鹽酸、硝酸)； 鹼化劑(實例包括但不限於氨水溶液、碳酸銨、二乙醇胺、單乙醇胺、氫氧化鉀、硼酸鈉、碳酸鈉、氫氧化鈉、三乙醇胺(triethanolamine)、三乙醇胺(trolamine))； 緩衝劑(實例包括但不限於偏磷酸鉀、磷酸氫二鉀、乙酸鈉、無水檸檬酸鈉以及檸檬酸鈉二水合物)；等等。

WO2019154886A1披露了包含FAPI系列化合物及放射性核素之螯合物或組合物可用於診斷或治療在哺乳動物或人類中以成纖維細胞活化蛋白過度表現為特徵之疾病。本發明藉由在WO2019154886A1揭示之FAPI化合物的結構中引入白蛋白結合單元，保留了其優異的FAP靶向性，同時延長了FAP抑制劑的循環時間。

本發明之另一態樣係關於上述之螯合物或組合物用於診斷或治療在哺乳動物或人類中以成纖維細胞活化蛋白過度表現為特徵之疾病。例如以成纖維細胞活化蛋白(FAP)過度表現為特徵之疾病選自癌症、慢性發炎、動脈粥樣硬化、纖維化、組織重塑及瘢痕病，較佳地，其中癌症選自乳癌、胰臟癌、小腸癌、結腸癌、直腸癌、肺癌、頭頸癌、卵巢癌、肝細胞癌、食道癌、下咽癌、鼻咽癌、喉癌、骨髓瘤細胞、膀胱癌、膽管細胞癌、透明細胞腎癌、神經內分泌腫瘤、致癌性骨軟化症、肉瘤、CUP(原發性未知癌)、胸腺癌、膠質瘤、神經膠質瘤、星形細胞瘤、子宮頸癌及前列腺癌。

本發明之又一態樣係關於一種套組，其包含或組成為上述螯合物或上述藥物組合物，以及用於診斷或治療疾病之說明書。在一種較佳的實施方式中，上述疾病為以成纖維細胞活化蛋白過度表現為特徵之上述疾病。

實施例實施例的起始材料係市售可得的及/或可以以有機合成技術中熟習此項技術者熟知的多種方法進行製備。有機合成技術中熟習此項技術者會在下述合成方法的中適當地選擇反應條件(包括溶劑、反應氛圍、反應溫度、實驗的持續時間及後處理)。有機合成技術中熟習此項技術者會理解，存在於分子各部分上的官能基應當與所提出之試劑及反應相容。

以下縮寫分別表示： 一、 TEFAPI-06 化學合成

合成的所有試劑、化合物均可在中國藉由一般商業渠道購得，供應商包括國藥集團化學試劑有限公司、薩恩化學技術(上海)有限公司、九鼎化學(上海)科技有限公司、北京百靈威科技有限公司、北京市通廣精細化工公司、上海畢得醫藥科技有限公司、北京伊諾凱科技有限公司、上海麥克林生化科技有限公司、西格瑪奧德里奇(上海)貿易有限公司。其中的關鍵起始物料均在線路圖上標示出CAS號。

TEFAPI-06藉由以上化學線路合成。具體可以分解為砌塊4合成、砌塊12合成、砌塊13合成、砌塊20合成及砌塊連接共5部分，相互之間具有一定的前置性要求。

砌塊 4 合成：

a)向 化合物 5978-22-3(20 g, 53.64 mmol, 1 eq, HCl)的二氯甲烷(200 mL)溶液中加入四氫哌喃-2,6-二酮(9.18 g, 80.45 mmol, 1.5 eq)，接著將溶液冷卻至0℃，隨後逐滴加入三乙胺(16.28 g, 160.91 mmol, 22.40 mL, 3 eq)，隨後在20℃攪拌反應1小時。反應結束後濃縮得到無色油狀液體 化合物 1(20 g, 粗品)。 MS(ESI ⁺): m/z 451.2(M+H) ⁺

b)向 化合物 1(20 g, 44.39 mmol, 1 eq)的甲醇(200 mL)溶液中加入Pd/C(8 g, 10%純度)，隨後在H ₂(15psi)氛圍中反應12小時。反應結束後，減壓濃縮，得到無色油狀液體 化合物 2(14 g, 粗品)。 MS(ESI ⁺): m/z 317.2(M+H) ⁺

c)在0℃下，向 化合物 27913-58-2(15 g, 51.71 mmol, 1 eq)的二氯甲烷(150 mL)溶液中加入1-羥基吡咯啶-2,5-二酮(6.55 g, 56.88 mmol, 1.1 eq)及二環己基碳二亞胺(12.80 g, 62.05 mmol, 12.55 mL, 1.2 eq)，隨後恢復至室溫反應1小時。反應結束後，過濾獲得濾液，並減壓濃縮得到淺黃色固體，隨後溶於二甲基甲醯胺(120 mL)中。並加入 化合物 2(12 g, 37.93 mmol, 1 eq)及N,N-二異丙基乙胺(14.71 g, 113.78 mmol, 19.82 mL, 3 eq)，隨後在室溫下反應2小時。反應混合物濃縮後使用製備型HPLC分離純化，得到無色油狀液體 化合物 3(10 g, 16.57 mmol, 43.68%產率, 97.5%純度)。 MS(ESI ⁺): m/z 533.1(M/2+H) ⁺

d)向Trt-Cl樹脂(3.85 g, 76.3 mmol, 1 eq)/二氯甲烷(500 mL)溶液中加入 化合物 71989-26-9(42.90 g, 91.56 mmol, 1.2 eq)、N,N-二異丙基乙胺(29.58 g, 228.90 mmol, 39.87 mL, 3 eq)，室溫攪拌，並氮氣鼓泡48小時。隨後，混合物依次用二氯甲烷(5*500 mL)、CH ₃OH(5*500 mL)及二甲基甲醯胺(5*500 mL)洗滌。隨後加入哌啶/二甲基甲醯胺(v/v=1:5, 400 mL)溶液，氮氣鼓泡20分鐘，隨後用二甲基甲醯胺(5*300 mL)洗滌。隨後加入二甲基甲醯胺(300 mL)，反應降至0℃，依次加入 化合物 3(18.14 g, 30.43 mmol, 1.1 eq)、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯HCTU(22.84 g, 56.96 mmol, 2 eq)、1-羥基苯并三唑HOBT(1.92 g, 14.14 mmol, 0.5 eq)及N,N-二異丙基乙胺(10.8 g, 86.44 mmol, 14.9 mL, 3 eq)，隨後恢復至室溫反應2小時。隨後使用二甲基甲醯胺(4*400 mL)及二氯甲烷(4*400 mL)洗滌，接著加入二氯甲烷/三氟乙酸(v/v=100:1, 600 mL)，並鼓泡反應20分鐘，過濾。濾液使用NaHCO ₃(aq)調至中性，並用二氯甲烷(200 mL*3)及水(200 mL*3)分液萃取，合併的有機相用檸檬酸(200 mL*3)洗滌，隨後減壓蒸乾，獲得黃色固體 化合物 4(6 g, 7.11 mmol, 74.99%產率, 96.77%純度)。 ¹ H NMR(400 MHz, CDCl ₃)δ = 1.30-1.40(m, 2H), 1.43-1.51(m, 24H), 1.91-1.93(m, 6H), 2.16-2.21(m, 7H), 2.56-2.60(m, 3H), 3.07-3.11(m, 3H), 3.47-3.49(m, 1H), 4.48-4.50(m, 1H), 4.57-4.60(m, 1H), 4.76-4.79(m, 1H), 5.86(br s, 1H), 6.90-6.94(m, 2H), 7.58-7.61(m, 2H), 7.88-7.91(m, 1H), 8.09-8.12(m, 1H)。 MS(ESI ⁺): m/z 817.4(M+H) ⁺

砌塊 12 合成：

a)在0℃下，20分鐘內緩慢地向 化合物 203866-15-3(10 g, 37.70 mmol, 1 eq)的MeOH(25 mL)溶液中加入NH ₃的(28.89 g, 1.70 mol, 45 eq)的MeOH(125 mL)溶液。隨後溫度恢復至室溫，在N ₂(15psi)氛圍下攪拌反應18小時。反應結束後，減壓蒸發濃縮，使用PE/MTBE打漿，得到黃色固體 化合物 8(8.9 g, 35.57 mmol, 94.34%產率)。 ¹ H NMR(400MHz DMSO ) ：δ 1.28-1.45(m, 9H), 2.16-2.38(m, 1H), 2.59-2.87(m, 1H), 3.55-3.84(m, 2H), 4.08-4.36(m, 1H), 6.97-7.19(m, 1H), 7.36-7.61(m, 1H)

b)在0℃下，20分鐘內緩慢地向 化合物 8(8.9 g, 35.57 mmol, 1 eq)的二氯甲烷(100 mL)溶液中加入吡啶(3.38 g, 42.68 mmol, 3.44 mL, 1.2 eq)。保持0℃，加入三氟乙酸酐(8.96 g, 42.68 mmol, 5.94 mL, 1.2 eq)，隨後反應恢復至室溫並攪拌18小時，隨後減壓濃縮。使用PE/MTBE打漿，得到黃色固體 化合物 9(7.5 g, 32.30 mmol, 90.81%產率)。 ¹ H NMR(400MHz 氯仿-d)：δ 1.33-1.66(m, 9H), 2.71(br t, J=9.04 Hz, 2H), 3.80(br s, 2H), 4.52-4.90(m, 1H)

c)向 化合物 9(7.0 g, 30.14 mmol, 1 eq)的乙腈(200 mL)溶液中加入HCl/二㗁烷(4 M, 14.00 mL, 1.86 eq)，隨後反應18小時。固體過濾並用MTBE(100 mL)洗滌，得到白色固體 化合物 10(2.2 g, 13.05 mmol, 43.30%產率, HCl)。 ¹ H NMR(400MHz DMSO )δ 2.64-3.13(m, 2H), 3.48-3.89(m, 2H), 4.99(br t, J=6.95 Hz, 1H), 9.80(br s, 2H)

d)向10 mL的二甲基甲醯胺中依次加入2-(第三丁氧基羰基胺基)乙酸(779.41 mg, 4.45 mmol, 1.5 eq)、1-羥基苯并三唑HOBT(80.16 mg, 593.22 umol, 0.2 eq)、2-(IH-苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基異脲六氟化磷HBTU(2.25 g, 5.93 mmol, 2 eq)及 化合物 10(500 mg, 2.97 mmol, 1 eq, HCl)，隨後反應攪拌30分鐘。隨後加入N,N-二異丙基乙胺(1.15 g, 8.90 mmol, 1.55 mL, 3 eq)並攪拌16小時。反應結束後，加入水(20 mL)，並用乙酸乙酯(50 mL)萃取，有機相濃縮後，使用矽膠管柱層析法(PE:乙酸乙酯=1:1)純化，得到 化合物 11(0.625 g, 2.13 mmol, 71.68%產率)。 ¹ H NMR(400MHz DMSO): δ 1.38(m, 9H), 2.78(m, 2H), 3.77(m, 2H), 4.06(m, 1H), 4.23(m, 1H), 5.07(d, J= 5.2 Hz, 1H), 7.14(m, 1H)

e)向 化合物 11(0.4 g, 1.38 mmol, 1 eq)的乙腈(13.5 mL)溶液中，在0攝氏度下，加入HCl/二㗁烷(4 M, 2.67 mL, 7.71 eq)，隨後反應恢復至室溫反應16小時。濃縮得到灰白色固體 化合物 12(322 mg, 1.28 mmol, 92.89%產率, 90%純度, HCl)。 ¹ H NMR(400MHz DMSO): δ 2.81-3.01(m, 2H), 3.57(s, 2H), 3.69(br d, J=5.01 Hz, 1H), 3.78-3.89(m, 1H), 3.91-4.14(m, 2H), 4.24(ddd, J=15.59, 11.41, 4.11 Hz, 1H), 5.19(dd, J=8.70, 3.34 Hz, 1H), 8.38(br s, 3H)

砌塊 13 合成：

a) 化合物 137076-54-1(150 mg, 261.90 μmol, 1eq)溶解於乙腈(15 mL)中，並依次加入1-羥基吡咯啶-2,5-二酮(33.16 mg, 288.09 μmol, 1.1 eq)、HBTU(109.26 mg, 288.09 μmol, 1.1 eq)，隨後攪拌12小時，混合物減壓乾燥後，使用製備型TLC(EA:CAN=7:1)純化，得到淺黃色固體 化合物 13(115 mg, 171.69 umol, 65.56%產率)直接用於下步。

砌塊 20 合成：

a) 化合物 52351-75-4(20 g, 112.89 mmol, 1 eq)及KOH(69.68 g, 1.24 mol, 11 eq)溶解於H ₂O(200 mL)中，隨後加入丙酮酸(10.94 g, 124.18 mmol, 8.75 mL, 1.1 eq)，反應混合物在40℃下反應15小時。隨後將反應冷卻至15℃，並用鹽酸酸化至pH 3，將固體過濾並用去離子水洗滌，得到灰白色固體 化合物 14(24 g, 92.23 mmol, 81.70%產率, 95%純度) ¹ H NMR(400MHz DMSO): δ 3.70-4.24(m, 3H), 7.58(dd, J=9.24, 2.80 Hz, 1H), 8.15(d, J=9.30 Hz, 1H), 8.26(d, J=2.74 Hz, 1H), 8.53(s, 1H), 13.75(br s, 2H), MS(ESI+): m/z 248.1(M+H) ⁺

b)向 化合物 14(24 g, 97.09 mmol, 1 eq)中加入硝基苯(150 mL)並在220℃下攪拌1.5小時。隨後將反應冷卻至15℃，並加入PE(150 mL)，析出的固體用PE(100 mL)洗滌，得到灰白色固體 化合物 15(16.8 g, 82.68 mmol, 85.16%產率)。 ¹ H NMR(400MHz DMSO)δ 3.72-4.14(m, 3H), 7.49(dd, J=9.23, 2.75 Hz, 1H), 7.93(d, J=4.40 Hz, 1H), 8.02(d, J=9.17 Hz, 1H), 8.18(d, J=2.69 Hz, 1H), 8.87(d, J=4.40 Hz, 1H), 13.76(br s, 1H)。 MS(ESI+): m/z 202.1(M-H) ^-

c)向 化合物 15(40 g, 196.86 mmol, 1 eq)加入溴化氫(1 L, 48%水溶液)，並在130℃下攪拌12小時。隨後，反應使用350 ml 30%氫氧化鈉溶液鹼化至pH = 6，大量沈澱析出，沈澱過濾後，使用甲醇洗滌沈澱，並抽乾得到粗產物，並用甲醇多次洗滌得到產品褐色固體 化合物 16 (30 g, 128.93 mmol, 65.50%產率, 81.3%純度)。 ¹ H NMR(400 MHz, DMSO- d ₆)δ ppm 13.66(br s, 1H), 10.24(s, 1H), 8.77(d, J= 4.5 Hz, 1H), 8.06(d, J= 2.6 Hz, 1H), 7.95(d, J= 9.1 Hz, 1H), 7.84(d, J= 4.4 Hz, 1H), 7.36(dd, J= 2.7, 9.1 Hz, 1H)。 MS(ESI ^-): m/z 377.0(2M-H) ^-

d)向 化合物 16(30 g, 158.59 mmol, 1 eq)的二甲基甲醯胺(300 mL)溶液中加入碳酸鉀(87.67 g, 634.36 mmol, 4 eq)及1-溴-3-氯-丙烷(24.97 g, 158.59 mmol, 15.60 mL, 1 eq)，隨後反應在60℃攪拌12小時。蒸發濃縮後，向體系加入200 mL水，大量固體析出，隨後反應混合物在25℃攪拌15分鐘，抽濾。使用乙酸乙酯研磨，並過濾，獲得棕色固體 化合物 17(37.58 g, 130.13 mmol, 86.15%產率, 92%純度)。 ¹ H NMR(400 MHz, DMSO- d ₆)δ ppm 2.26-2.98(m,2 H), 3.83-3.88(m,2 H), 4.22-4.25(m,2 H), 7.54(dd, J= 9.19, 2.69 Hz, 1 H), 7.96(d, J= 4.38 Hz, 1 H), 8.03-8.11(m, 1 H), 8.19(d, J= 2.63 Hz, 1 H), 8.90(d, J= 4.38 Hz, 1 H)。 MS(ESI ⁺): m/z 266.1(M+H) ⁺,

e)將 化合物 17(30 g, 112.91 mmol, 1 eq)加入 N-甲基吡咯啶酮(300 mL)中，並加入哌𠯤-1-甲酸第三丁酯(105.15 g, 564.56 mmol, 5 eq)及碘化鉀(9.37 g, 56.46 mmol, 0.5 eq)，隨後60℃攪拌12小時。反應混合物冷卻至室溫並過濾，粗產品由Prep-HPLC(0.1% FA)純化得到黃色固體 化合物 18(42.96 g, 96.16 mmol, 85.16%產率, 93%純度)。 ¹ H NMR(400 MHz, DMSO- d ₆)δ ppm 8.82(d, J= 4.4 Hz, 1H), 8.19-8.16(m, 1H), 7.99(d, J= 9.3 Hz, 1H), 7.85(d, J= 4.4 Hz, 1H), 7.45(dd, J= 2.8, 9.1 Hz, 1H), 4.15(br t, J= 6.2 Hz, 2H), 2.62-2.50(m, 6H), 2.42(br t, J= 4.6 Hz, 4H), 1.99(br d, J= 6.6 Hz, 2H), 1.39(s, 9H)。 MS(ESI ⁺): m/z 416.1(M+H) ⁺

f)向 化合物 18(12.00 g, 26.57 mmol, 92%純度, 1.02 eq)的二甲基甲醯胺(120 mL)溶液中加入 O-苯并三唑-1-基-四甲基脲鎓六氟磷酸酯(19.76 g, 52.10 mmol, 2 eq)、1-羥基苯并三唑(7.04 g, 52.10 mmol, 2 eq)、 N, N-二異丙基乙胺(10.10 g, 78.15 mmol, 13.61 mL, 3 eq)，隨後加入 化合物 12(5.88 g, 26.05 mmol, 1.00 eq, HCl)，反應在25℃攪拌12小時。過濾，濾液使用製備型HPLC( HCl)純化，得到黃色固體 化合物 19(11.27 g, 17.29 mmol, 66.37%產率, 90%純度)。 ¹ H NMR(400 MHz, DMSO- d ₆)δ ppm 1.41(s, 9 H), 2.27-2.33(m, 2 H), 3.27-3.29(m, 5 H), 3.43-3.55(m, 2 H), 3.93-4.21(m, 10 H), 5.19(dd, J= 9.26, 2.75 Hz, 1 H), 7.59(dd, J= 9.26, 2.63 Hz, 1 H), 7.69(d, J= 4.63 Hz, 1 H)7.87-8.00(m, 1 H), 8.14(d, J= 9.26 Hz, 1 H), 8.95(d, J= 4.63 Hz, 1 H), 9.24(br t, J= 5.82 Hz, 1 H), 11.00(br s, 1 H).。 MS(ESI ⁺): m/z 587.2(M+H) ⁺,

g)將 化合物 19(2 g, 3.41 mmol, 1 eq)溶解於乙酸乙酯(40 mL)中，加入鹽酸/乙酸乙酯溶液(4 M, 4 mL, 4.69 eq)，隨後反應在25℃下反應6小時。反應混合物蒸發濃縮，並直接使用，獲得黃色固體 化合物 20 (1.5 g, 粗品, HCl)。 MS(ESI ^-): m/z 485.1(M+H) ⁺

砌塊連接：

a)將 化合物 4(858.97 mg, 1.05 mmol, 1.1 eq)溶解於二甲基甲醯胺(5 mL)中，加入HBTU(453.23 mg, 1.20 mmol, 1.25 eq)、HOBT((167.94 mg, 1.24 mmol, 1.3 eq)、N,N-二異丙基乙胺(617.83 mg, 4.78 mmol, 832.65 uL, 5 eq)及 化合物 20(229.65 mg, 333.04 umol, 1 eq)，混合物攪拌12小時。反應產物濃縮後，使用製備型HPLC(HCl)純化得到白色固體 化合物 21(230 mg, 170.00 umol, 17.78%產率, 95%純度)。 MS(ESI ⁺): m/z 1285.4(M+H) ⁺

b)將 化合物 21(150 mg, 116.71 umol, 1 eq)溶解於二氯甲烷(10 mL)中，加入三氟乙酸(3.08 g, 27.01 mmol, 2 mL, 231.45 eq)，反應攪拌4小時，隨後蒸發濃縮，直接得到粗產物黃色油狀液體 化合物 22(150 mg, 粗品, 三氟乙酸)。 MS(ESI ⁺): m/z 1129.3(M+H) ⁺

c)將 化合物 22(150 mg, 120.67 umol, 1 eq, 三氟乙酸)溶解於二甲基甲醯胺(1.6 mL)中，依次加入N,N-二異丙基乙胺(124.77 mg, 965.36 umol, 168.15 uL, 8 eq)及 化合物 13(88.91 mg, 132.74 umol, 1.1 eq)，反應攪拌12h，隨後真空濃縮除去溶劑。得到粗產品黃色油狀 化合物 23(220 mg, 粗品)。 MS(ESI ⁺): m/z 1684.9(M/2+H) ⁺

d) 化合物 23(210 mg, 124.72 umol, 1 eq)加入三氟乙酸(3.23 g, 28.36 mmol, 2.10 mL, 227.41 eq)並攪拌3小時。隨後減壓濃縮，使用製備型HPLC(三氟乙酸)純化，得到白色固體 化合物 24(TEFAPI-06)(30 mg, 26.40 μmol, 21.16%產率, 100%純度)。

白色固體 化合物 24(TEFAPI-06)的表徵如下： LCMS(ESI ⁺): m/z 758.4 1/2(M+2H) ⁺Rt: 1.959 min. LC條件：Kinetex C18 50 * 2.1 mm管柱(5 μm粒徑)1.0 ml/min 梯度：A相0.05%三氟乙酸/水，B相0.05%三氟乙酸/乙腈。0-0.40 min 5% B，0.40-3.00 min 5-95% B，3.00-4.00 min 95% B。 HPLC: Rt: 2.266 min. LC條件：Luna-C18 2.0 * 50 mm管柱(5 μm粒徑)，A相0.05%三氟乙酸/水，B相0.05%三氟乙酸/乙腈。 LC梯度：0.00-4.90 min：10-80% B 0.8mL/min，4.90-5.50 min：0% B 1.2mL/min。 ¹ H NMR(400 MHz, DMSO- d ₆) δ ppm 9.18-9.07(m, 1H), 8.84(d, J= 4.4 Hz, 1H), 8.49(br s, 1H), 8.18-7.97(m, 3H), 7.89(br d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.78(br t, J= 5.8 Hz, 1H), 7.62(br d, J= 8.1 Hz, 2H), 7.55(d, J= 4.4 Hz, 1H), 7.46(br dd, J= 2.7 Hz, 9.1 Hz, 1H), 7.00(br d, J= 8.1 Hz, 2H), 5.15(br dd, J= 3.3, 9.0 Hz, 1H), 4.69(br s, 1H), 4.47-4.08(m, 6H), 4.07-3.69(m, 13H), 3.64-3.22(m, 11H), 3.21-2.69(m, 14H), 2.47(br s, 2H), 2.33-1.90(m, 9H), 1.87-1.18(m, 18H). ¹⁹ F NMR(400 MHz, DMSO- d ₆)-73.867 ¹ H NMR(400 MHz, 甲醇- d ₄ ) δ ppm 8.85(d, J= 4.6 Hz, 1H), 8.22-7.97(m, 2H), 7.71-7.53(m, 4H), 6.99(d, J= 8.3 Hz, 2H), 5.15(br d, J= 9.3 Hz, 1H), 4.83-4.74(m, 4H), 4.49-4.30(m, 6H), 4.30-4.08(m, 4H), 3.90-3.38(m, 17H), 3.20-2.74(m, 16H), 2.58(s, 2H), 2.40(br s, 2H), 2.30-2.15(m, 6H), 2.02-1.82(m, 6H), 1.77-0.99(m, 11H). ¹⁸ F NMR(400 MHz, 甲醇- d ₄ )-77.161

二、利用 ⁶⁸ Ga-TEFAPI-06 對健康鼠成像測定活體內半衰期用5 mL的0.6 M高純鹽酸淋洗鍺鎵發生器，得到Ga-68鹽酸溶液。取淋洗的Ga-68溶液1mL，加入100微升3M氫氧化鈉、130微升3M醋酸鈉調節酸度，最終pH為4.0，加入50微克TEFAPI-06前驅體，將反應混合物加熱至90℃，保持10分鐘。將反應溶液通過C18小管柱，將游離離子去除，接著用乙醇溶液溶離C18管柱。得到標記好的 ⁶⁸Ga-TEFAPI-06。

取37 MBq標記產物，加入200微升生理鹽水進行稀釋並用胰島素注射器抽取好藥物備用，其中藥物的乙醇含量不高於5%。將健康的小鼠事先麻醉放入PET/CT的採集床上，在尾靜脈處放置留置針。將注射器連在留置針上，在推針的零時刻便開始進行PET資料的採集。採集時間點分別為0-60分鐘，2小時，3小時，4小時，5小時。採集完畢後用專業軟體進行資料重建，重建條件為前5分鐘每分鐘間隔均重建資料，5-60分鐘每5分鐘重建一次資料，其餘時間點重建一次資料。採集的資料經過PET重建軟體進行處理，得到連續圖像。在PET處理軟體中，在小鼠的心臟處描繪固定區域，得到具心臟處的SUV-Mean及SUV-Max值。將得到的SUV在資料處理軟體進行模擬。得到對應的血液半衰期，得出TEFAPI-06的半衰期為398分鐘，如圖1所示。

三、 ⁶⁸ Ga-TEFAPI-06 在胰臟癌 PDX 小鼠模型的 PET 成像用5 mL的0.6 M高純鹽酸淋洗鍺鎵發生器，得到Ga-68鹽酸溶液。取淋洗的Ga-68溶液1mL，加入100微升3M氫氧化鈉、130微升3M醋酸鈉調節酸度，最終pH為4.0，加入50微克TEFAPI-06前驅體，將反應混合物加熱至90℃，保持10分鐘。將反應溶液通過C18小管柱，將游離離子去除，接著用乙醇溶液溶離C18管柱。得到標記好的 ⁶⁸Ga-TEFAPI-06。將標記好的 ⁶⁸Ga-TEFAPI-06用生理鹽水稀釋，每隻小鼠注射3.7 MBq。在0.5小時，1.5小時，2.5小時進行PET掃描成像，用PET圖像處理軟體進行重建。得到的顯像圖如圖2所示，可以看到該探針在腫瘤部位有明顯的攝取。

四、 ⁸⁶ Y-TEFAPI-06 在胰臟癌 PDX 小鼠模型的長時間 PET 成像Y-86係一種半衰期長達14.6小時的正電子核素，並且可以使用DOTA進行放射標記，因此非常適合用來長時間偵測TEFAPI分子在活體內的分佈情況。取1mL Y-86鹽酸溶液，加入100微升3M氫氧化鈉、130微升3M醋酸鈉調節酸度，最終pH為4.0，加入50微克TEFAPI-06前驅體，將反應混合物加熱至90℃，保持10分鐘。將反應溶液通過C18小管柱，將游離離子去除，接著用乙醇溶液溶離C18管柱。得到標記好的 ⁸⁶Y-TEFAPI-06。將標記好的 ⁸⁶Y-TEFAPI-06用生理鹽水稀釋，每隻小鼠注射7.4 MBq。在注射後0.5、2、6、12、18、24、36小時分別PET掃描成像，用PET圖像處理軟體進行重建。得到的PET圖像如圖3所示，在小鼠之腫瘤及心臟處勾畫SUV值，並將SUV值隨時間的變化做成曲線。腫瘤攝取其SUV攝取曲線表明腫瘤攝取在前24小時不斷上升，血液循環時間較長，且自腎臟中不斷清除。

五、 TEFAPI-06 在 PDX 胰臟癌小鼠中的競爭抑制實驗為了驗證TEFAPI-06的針對FAP靶點的特異性，在競爭抑制實驗中我們對同一批小鼠進行了抑制前後的PET成像。根據Y-86長時間PET成像可以得知，注射藥物18小時至24小時之間，腫瘤的攝取達至峰值。因此先對荷瘤小鼠進行 ⁶⁸Ga-FAPI-04成像，確定小鼠具有腫瘤攝取。等待48小時確保 ⁶⁸Ga-FAPI-04代謝之後，對此兩隻小鼠注射300微克TEFAPI-06分子，18小時後對注射TEFAPI-06分子的小鼠進行 ⁶⁸Ga-FAPI-04的PET分子成像。注射後 ⁶⁸Ga-FAPI-04 30分鐘的PET成像結果顯示，未注射TEFAPI-06時腫瘤處有明顯攝取，注射TEFAPI-06分子之後則顯示在小鼠腫瘤處沒有額外攝取。

如圖4所示，進行抑制的小鼠腫瘤處基本沒有額外攝取，而沒有抑制的同一批小鼠，腫瘤處的攝取較高。結果表明TEFAPI-06的靶向部位為FAP。

六、 ¹⁷⁷ Lu-TEFAPI-06 對 PDX 胰臟癌小鼠治療基於TEFAPI-06之腫瘤靶向性及小鼠代謝規律，由於其優異的瘤/正常組織的攝取比在18小時後就大於10，且腎臟的代謝基本清除，因此對PDX胰臟癌小鼠進行了Lu-177的放射性靶向治療。每組小鼠5隻，治療計劃如下圖，治療劑量為3.7MBq，腫瘤生長曲線可以看到治療組之腫瘤完全被壓製住。為了評估治療效果，我們在治療前後分別對小鼠進行了FAPI-04的成像體檢，結果如圖5所示。可以看到經過治療後，小鼠的原腫瘤攝取均已經基本消失。

以上所述僅係本發明之示範性實施方式，而非用於限制本發明之保護範圍，本發明之保護範圍由所附的申請專利範圍確定。

為了更清楚地說明本發明實施例之技術方案，下面將對實施例之附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中之附圖僅僅涉及本發明之一些實施例，而非對本發明之限制。 圖1示出了利用 ⁶⁸Ga-TEFAPI-06對健康鼠成像測定活體內半衰期結果。 圖2示出了利用 ⁶⁸Ga-TEFAPI-06在胰臟癌PDX小鼠模型的PET成像結果。 圖3示出了利用 ⁸⁶Y-TEFAPI-06在胰臟癌PDX小鼠模型中的長時間PET成像結果。 圖4示出了TEFAPI-06在PDX胰臟癌小鼠中的競爭抑制實驗結果。 圖5示出了利用 ¹⁷⁷Lu-TEFAPI-06對PDX胰臟癌小鼠治療結果。

Claims (14)

1. 一種通式(I)之化合物或者其醫藥學上可接受之鹽、立體異構體或溶劑合物， C-AB-FAPI  (I) 其中C為螯合劑單元； AB為白蛋白結合單元； FAPI為成纖維活化蛋白抑制劑單元。
2. 如請求項1之化合物，其中C單元選自：

   

   、

   

   、

   

   、

   

   、

   

   、

   

   或者

   

   。
3. 如請求項1或2之化合物，其中FAPI單元選自：

   

   、

   

   、

   

   或者

   

   。
4. 如請求項3之化合物，其中： C單元為

   

   ，FAPI單元為

   

   。
5. 如前述請求項中任一項之化合物，其中AB單元包含4-碘-苯基末端基團

   

   ；較佳地，上述AB單元選自

   

   。
6. 如前述請求項中任一項之化合物，其中AB單元藉由與FAPI單元中之末端

   

   、

   

   、

   

   或

   

   形成醯胺鍵將其與FAPI單元相連，AB單元藉由與C單元中之末端羰基形成醯胺鍵將其與C單元相連。
7. 如請求項1之化合物，上述化合物為

   

   或者其醫藥學上可接受之鹽、異構體或溶劑合物。
8. 一種螯合物，其包含如請求項1至7中任一項之化合物及放射性核素。
9. 如請求項8之螯合物，其中上述放射性核素選自： ¹⁸F、 ⁵¹Cr、 ⁶⁷Ga、 ⁶⁸Ga、 ¹¹¹In、 ⁹⁹mTc、 ¹⁸⁶Re、 ¹⁸⁸Re、 ¹³⁹La、 ¹⁴⁰La、 ¹⁷⁵Yb、 ¹⁵3Sm、 ¹⁶⁶Ho、 ⁸⁶Y、 ⁸⁸Y、 ⁹⁰Y、 ¹⁴⁹Pm、 ¹⁶⁵Dy、 ¹⁶⁹Er、 ¹⁷⁷Lu、 ⁴⁷Sc、 ¹⁴²Pr、 ¹⁵⁹Gd、 ²¹²Bi、 ²¹³Bi、 ⁷²As、 ⁷²Se、 ⁹⁷Ru、 ¹⁰⁹Pd、 ¹⁰⁵Rh、 ^101mRh、 ¹¹⁹Sb、 ¹²⁸Ba、 ¹²³I、 ¹²⁴I、 ¹³¹I、 ¹⁹⁷Hg、 ²¹¹At、 ¹⁵¹Eu、 ¹⁵³Eu、 ¹⁶⁹Eu、 ²⁰¹Tl、 ²⁰³Pb、 ²¹²Pb、 ⁶⁴Cu、 ⁶⁷Cu、 ¹⁸⁸Re、 ¹⁸⁶Re、 ¹⁹⁸Au、 ²²⁵Ac、 ²²⁷Th及 ¹⁹⁹Ag中之一或多種。
10. 如請求項9之螯合物，其中上述放射性核素為 ⁶⁸Ga、 ⁸⁶Y或 ¹⁷⁷Lu。
11. 一種藥物組合物，其包含或組成為： 至少一種如請求項8至10中任一項之螯合物， 視情況，及醫藥學上可接受之輔料。
12. 一種如請求項8至10中任一項之螯合物或如請求項11之藥物組合物在製備用於診斷或治療在個體中以成纖維細胞活化蛋白(FAP)過度表現為特徵之疾病之試劑或套組中之用途。
13. 如請求項12之用途，其中以成纖維細胞活化蛋白(FAP)過度表現為特徵之疾病選自癌症、慢性發炎、動脈粥樣硬化、纖維化、組織重塑及瘢痕病，較佳地，其中癌症選自乳癌、胰臟癌、小腸癌、結腸癌、直腸癌、肺癌、頭頸癌、卵巢癌、肝細胞癌、食道癌、下咽癌、鼻咽癌、喉癌、骨髓瘤細胞、膀胱癌、膽管細胞癌、透明細胞腎癌、神經內分泌腫瘤、致癌性骨軟化症、肉瘤、CUP(原發性未知癌)、胸腺癌、膠質瘤、神經膠質瘤、星形細胞瘤、子宮頸癌及前列腺癌中之一或多種。
14. 一種套組，其包含或組成為如請求項8至10中任一項之螯合物或如請求項11之藥物組合物，以及用於診斷或治療疾病之說明書。

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