TW202233839A - 用於抑制ａｌｄｈ２表現之化學修飾 - Google Patents

用於抑制ａｌｄｈ２表現之化學修飾 Download PDF

Info

Publication number
TW202233839A
TW202233839A TW110142162A TW110142162A TW202233839A TW 202233839 A TW202233839 A TW 202233839A TW 110142162 A TW110142162 A TW 110142162A TW 110142162 A TW110142162 A TW 110142162A TW 202233839 A TW202233839 A TW 202233839A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
cdata
modified
oligonucleotide
base
fluoro
Prior art date
Application number
TW110142162A
Other languages
English (en)
Inventor
包柏 戴爾 布朗
亨立克 Ｔ 杜迪克
烏薩夫 薩克森納
Original Assignee
美商戴瑟納製藥股份有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 美商戴瑟納製藥股份有限公司 filed Critical 美商戴瑟納製藥股份有限公司
Publication of TW202233839A publication Critical patent/TW202233839A/zh

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0008—Oxidoreductases (1.) acting on the aldehyde or oxo group of donors (1.2)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/145—Amines having sulfur, e.g. thiurams (>N—C(S)—S—C(S)—N< and >N—C(S)—S—S—C(S)—N<), Sulfinylamines (—N=SO), Sulfonylamines (—N=SO2)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
    • A61P25/32—Alcohol-abuse
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1137—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y102/00—Oxidoreductases acting on the aldehyde or oxo group of donors (1.2)
    • C12Y102/01—Oxidoreductases acting on the aldehyde or oxo group of donors (1.2) with NAD+ or NADP+ as acceptor (1.2.1)
    • C12Y102/01003—Aldehyde dehydrogenase (NAD+) (1.2.1.3)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/312—Phosphonates
    • C12N2310/3125—Methylphosphonates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/315—Phosphorothioates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/321—2'-O-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/322—2'-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate
    • C12N2310/3515—Lipophilic moiety, e.g. cholesterol
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/352—Nature of the modification linked to the nucleic acid via a carbon atom
    • C12N2310/3521—Methyl
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/353—Nature of the modification linked to the nucleic acid via an atom other than carbon
    • C12N2310/3533—Halogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/30—Special therapeutic applications
    • C12N2320/32—Special delivery means, e.g. tissue-specific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/50—Methods for regulating/modulating their activity
    • C12N2320/53—Methods for regulating/modulating their activity reducing unwanted side-effects

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Addiction (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Bidet-Like Cleaning Device And Other Flush Toilet Accessories (AREA)
  • External Artificial Organs (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

本發明係關於可用於降低ALDH2表現之經化學修飾之寡核苷酸、組合物及方法，以治療酒精中毒。所揭示之用於降低ALDH2表現之寡核苷酸係經修飾以增強藥理學特性。

Description

用於抑制ALDH2表現之化學修飾
本申請案係關於經化學修飾之寡核苷酸及其用於治療酒精中毒及相關疾患之用途。
酒精中毒可分類為酒精濫用、酒精使用病症或酒精依賴。酒精使用病症(AUD)代表在美國及全球具有高度普遍性、代價高昂且通常未加治療之疾患。藥物療法提供一種用於治療AUD且用於改良此使人衰弱的病症之臨床結果之有希望的途徑。非常需要開發治療AUD之新穎藥物。本發明提供經由醛去氫酶2 (ALDH2)抑制作用來治療AUD之經化學修飾之寡核苷酸。
本發明至少部分地基於有效寡核苷酸之開發，該等寡核苷酸產生持久的基於RNAi之ALDH2抑制劑。本發明之某些態樣係關於用於治療個體之酒精中毒的寡核苷酸之化學修飾及用於治療個體之酒精中毒之相關方法。
治療AUD之現有醫藥方法包括納曲酮、阿坎酸及戒酒硫(一種醛去氫酶-2 (ALDH2)抑制劑)。ALDH2係一種保守的解毒粒線體酶，尤其牽涉於醛之代謝中。首先藉由酒精去氫酶(ADH)使乙醇代謝為乙醛，接著藉由ALDH2使其代謝為乙酸鹽，由此起始乙醇(「酒精」)之全身代謝。另外，ALDH2在氧化在氧化壓力下產生之脂質過氧化產物(諸如4-羥基-2-壬烯醛及丙二醛)中發揮關鍵作用。據估計世界人口之8% (主要為東亞後裔)具有編碼無功能性ALDH2酶之ALDH2*2等位基因，在飲酒後導致乙醛積累於血液及諸如肝及腦之器官中。在此等個體中，乙醛聚集引起面部潮紅及使人不快之感覺，諸如惡心、頭疼、心悸及總體不適。歸因於此代謝困難，ALDH2缺乏個體處於發展AUD之較低風險下。由於此等原因，旨在特定地且可逆地抑制ALDH2活性之方法將在AUD治療中引起極大關注。
在某些實施例中，本發明寡核苷酸之化學修飾提供意外增強之化學穩定性及降低之製造成本。在某些實施例中，該等化學修飾包括降低氟含量(參見例如PCT/US20/53999, Weimin Wang等人，其以引用之方式整體倂入本文中)。在某些實施例中，降低之氟含量增加製造產率，由此顯著降低成本。在某些實施例中，氟含量之降低減少去氟雜質。在一些實施例中，有效且穩定之RNAi寡核苷酸可用於降低ALDH2活性，且由此減少酒精耐受性及/或對飲酒之期望。在一些實施例中，如與先前寡核苷酸相比，本文所揭示之RNAi寡核苷酸除其他特徵外亦具有保持之效能、保持或增加之作用持續時間、保持之高治療指數、改良之穩定性、改良之生物可用性、改良之靶向、簡易製造、較低毒性及/或其他改良之藥理學特性。
酒精代謝中牽涉之主要酶係酒精去氫酶(ADH)及醛去氫酶(ALDH)。兩種酶以數種形式出現，該等形式由不同基因編碼；此外，存在此等基因中之一些的變異體(亦即，等位基因)，其編碼具有不同特徵之酶，且具有種族族群之不同人口分佈。一個人攜帶ADH或ALDH基因影響他或她的飲酒水準及酒精中毒風險。研究人員迄今主要已研究ADH1B、ADH1C及ALDH2基因之編碼變異體，其與所產生之酶之改變的動力學特性有關。
本發明之一態樣提供一種用於降低ALDH2表現之寡核苷酸，該寡核苷酸包含具有自5’至3’陳述為UAAACUGAGUUUCAUCCACCGG (SEQ ID NO: 1)之序列的反義鏈及具有自5’至3’陳述為GGUGGAUGAAACUCAGUUUAGCAGCCGAAAGGCUGC (SEQ ID NO: 2)之序列的有義鏈。
在一些實施例中，該寡核苷酸包含至少一種經修飾之核苷酸。在一些實施例中，該寡核苷酸之所有核苷酸均經修飾。在一些實施例中，該經修飾之核苷酸包含2′-修飾。在一些實施例中，該2′-修飾為2′-氟或2′-O-甲基。在一些實施例中，以下位置中之一或多者係經2′-O-甲基修飾：有義鏈之位置1-7及12-36及/或反義鏈之位置1、6、8-13及15-22。在一些實施例中，有義鏈之位置1-7及12-36及反義鏈之位置1、6、8-13及15-22均係經2′-O-甲基修飾。在一些實施例中，以下位置中之一或多者係經2′-氟修飾：有義鏈之位置8-11及/或反義鏈之位置2-5、7及14。在一些實施例中，有義鏈之位置8-11及反義鏈之位置2-5、7及14均係經2′-氟修飾。
在一些實施例中，該寡核苷酸包含至少一個經修飾之核苷酸間鍵。在一些實施例中，該至少一個經修飾之核苷酸間鍵為硫代磷酸酯鍵。在一些實施例中，該寡核苷酸在以下一或多者之間具有硫代磷酸酯鍵：有義鏈之位置1及2、反義鏈之位置1及2、反義鏈之位置2及3、反義鏈之位置3及4、反義鏈之位置20及21以及反義鏈之位置21及22。在一些實施例中，該寡核苷酸在以下每一者之間具有硫代磷酸酯鍵：有義鏈之位置1及2、反義鏈之位置1及2、反義鏈之位置2及3、反義鏈之位置3及4、反義鏈之位置20及21以及反義鏈之位置21及22。
在一些實施例中，在反義鏈之第一個位置處之尿苷包含磷酸鹽類似物。
在一些實施例中，該寡核苷酸包含在反義鏈之位置1處之以下結構：
Figure 02_image001
在一些實施例中，有義鏈上之–GAAA–序列的一或多個核苷酸結合於單價GalNAc部分。在一些實施例中，有義鏈上之–GAAA–序列的每一個A核苷酸均結合於單價GalNAc部分。在一些實施例中，ademA GalNAc表示以下結構：
Figure 02_image003
在一些實施例中，用於降低ALDH2表現之寡核苷酸包含具有自5’至3’陳述為UAAACUGAGUUUCAUCCACCGG (SEQ ID NO: 1)之序列的反義鏈及具有自5’至3’陳述為GGUGGAUGAAACUCAGUUUAGCAGCCGAAAGGCUGC (SEQ ID NO: 2)之序列的有義鏈， 其中有義鏈之位置1-7及12-36及反義鏈之位置1、6、8-13及15-22均係經2′-O-甲基修飾，且有義鏈之位置8-11及反義鏈之位置2-5、7及14均係經2′-氟修飾； 其中該寡核苷酸在以下每一者之間具有硫代磷酸酯鍵：有義鏈之位置1及2、反義鏈之位置1及2、反義鏈之位置2及3、反義鏈之位置3及4、反義鏈之位置20及21以及反義鏈之位置21及22； 其中該寡核苷酸包含在反義鏈之位置1處之以下結構：
Figure 02_image001
，且 其中有義鏈上之–GAAA–序列的每一個腺苷(A)核苷酸均結合於包含以下結構之單價GalNAc部分：
Figure 02_image003
本發明之其他態樣提供一種組合物，其包含任何本文所述之寡核苷酸及Na+平衡離子。
亦提供一種具有如圖3中描繪之化學結構之組合物。
本發明之另一態樣提供一種方法，其包括向個體投與本發明組合物。在一些實施例中，該方法導致個體之乙醇耐受性減少。在一些實施例中，該方法導致個體之乙醇攝入受到抑制。在一些實施例中，該方法導致個體飲用乙醇之期望減少。在一些實施例中，欲治療之個體罹患酒精中毒。
對序列表之引用
與本說明書並行地提交呈ASCII格式文本檔案之序列表，其中檔案名稱為DRNA074_ST25.txt，創建日期為2020年11月13日，且大小為19千位元。在序列表之電子格式中的資訊係本說明書之一部分且由此以引用之方式整體倂入本文中。
本發明之態樣提供一種用於治療酒精中毒之寡核苷酸(例如RNA干擾寡核苷酸)，其包含用於降低具有較佳效能及持久性之細胞、尤其肝臟細胞(例如肝細胞)中的ALDH2表現之化學修飾模式。因此，在相關態樣中，本發明提供治療酒精中毒之方法，其涉及選擇性地降低肝臟中之ALDH2基因表現。在某些實施例中，設計本文所提供之ALDH2靶向性寡核苷酸用於遞送至所選擇的標靶組織細胞(例如肝臟肝細胞)以治療個體之酒精中毒，其中該等寡核苷酸在所選擇的細胞中具有增加之降解抗性及/或呈現增加之持續時間。
所攝取之飲料酒精(亦即，乙醇)對包括腦在內之不同器官的影響取決於所實現之乙醇濃度及暴露持續時間。兩種變數又受血流及組織中之乙醇吸收以及乙醇代謝影響(Hurley等人, 「The pharmacogenomics of alcoholism,」 Pharmacogenomics: The Search for Individualized Therapies., Weinheim, Germany: Wiley-VCH, 第417–441頁 (2002))。乙醇代謝之主要位點為肝臟，不過一些代謝亦發生於其他組織中且可在那裡引起局部損害。乙醇代謝之主要路徑涉及其轉化(亦即，氧化)為乙醛，該反應由稱作酒精去氫酶之酶介導(亦即，催化)。根據本發明，此等酒精去氫酶中之一或多者、較佳地ALDH2之表現的抑制作用預防或消除個體分解酒精之能力—導致與人類攝入酒精相關之『高』的預防。
醛去氫酶2 (ALDH2)係用於乙醇代謝物乙醛之解毒的關鍵酶且已公認為治療酒精使用病症(AUD)之潛在治療標靶。戒酒硫係一種有效ALDH2抑制劑，係獲批用於治療AUD之藥物，但由於其副作用而具有臨床限制。就器官系統貢獻而言，已知肝臟係負責乙醛代謝之主要器官，來自其他器官之ALDH2的累積效應亦有助於全身乙醛清除。根據本發明，經由siRNA實現的靶向肝臟之ALDH2表現之基因敲低可減少酒精嗜好且可為AUD治療之基礎。
在某些態樣中，本發明提供ALDH2靶向性寡核苷酸，其在製造期間具有增加之產率及較低雜質。
在其他態樣中，該等ALDH2靶向性寡核苷酸具有減少之氟含量。在一些態樣中，嘧啶鹼基之氟含量減少。
下文提供本發明之其他態樣，包括定義術語之描述。 Ⅰ . 定義
酒精中毒：如本文所用，術語「酒精中毒」係指儘管反復出現不良後果，個體仍重複使用乙醇，這可能與或可能不與對飲酒之耐受性、戒斷及/或無法控制之驅動力組合。酒精中毒可分類為酒精濫用、酒精使用病症或酒精依賴。可使用多種方法來鑑別罹患酒精中毒之個體。舉例而言，世界衛生組織已建立酒精使用病症鑑別測試(AUDIT)作為用於鑑別潛在酒精濫用(包括依賴)之工具，且已開發其他類似測試，包括密西根酒精篩選測試(MAST)。實驗室測試可用於評估血液標誌物以偵測飲酒之長期使用及/或複發，包括偵測γ-麩胺醯轉移酶(GGT)、平均紅血球體積(紅血球大小)、天冬胺酸轉胺酶(AST)、丙胺酸轉胺酶(ALT)、碳水化合物缺乏性轉鐵蛋白(CDT)、乙基葡萄糖醛酸苷(EtG)、硫酸乙酯(EtS)及/或磷脂醯乙醇(PEth)之水準的測試。已建立酒精中毒之動物模型(例如小鼠模型) (參見例如Rijk等人, 「A mouse model of alcoholism,」 Physiol Behav., 1982, 29(5):833-39；Elizabeth Brandon-Warner等人, 「 Rodent Models of Alcoholic Liver Disease: Of Mice and Men,」 Alcohol, 2012; 46(8):715–25；及Adeline Bertola等人, 「 Mouse model of chronic and binge ethanol feeding (the NIAAA model),」 Nature Protocols, 2013, 8:627–37)。
ALDH2：如本文所用，術語「 ALDH2」係指醛去氫酶2家族(粒線體)基因。ALDH2編碼之蛋白質屬於醛去氫酶家族，且充當自乙醇合成乙酸鹽(乙酸)之酒精代謝氧化路徑之第二種酶。ALDH2之同源物在一系列物種中係保守的，包括人類、小鼠、大鼠、非人類靈長類物種及其他物種(參見例如NCBI HomoloGene: 55480)。ALDH2亦與其他醛去氫酶編碼基因(包括例如ALDH1A1)具有同源性。在人類中，ALDH2編碼至少兩種轉錄物，即NM_000690.3 (變異體1)及NM_001204889.1 (變異體2)，各自分別編碼不同的同功型NP_000681.2 (同功型1)及NP_001191818.1 (同功型2)。轉錄物變異體2與轉錄物變異體1相比在5'編碼區中缺乏同框外顯子，且與同功型1相比編碼較短同功型(2)。已鑑別ALDH2中之多型性(參見例如Chang等人, 「ALDH2 polymorphism and alcohol-related cancers in Asians: a public health perspective,」 J Biomed Sci., 2017, 24(1):19)。
近似：如本文所用，術語「近似」或「約」當應用於一或多個所關注之值時，係指類似所陳述之參考值的值。在某些實施例中，除非另有規定或自上下文另外顯而易見(除非此類數字將超過可能值之100%)，否則術語「近似」或「約」係指處於在任一方向上(大於或小於)所陳述之參考值之25%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或更小值以內之值的範圍。
投與：如本文所用，術語「投與(administering)」或「投與(administration)」意謂以藥理學上有用(例如，以治療個體之疾患)之方式向個體提供物質(例如，寡核苷酸)。
去唾液酸醣蛋白受體 (ASGPR)：如本文所用，術語「去唾液酸醣蛋白受體」或「ASGPR」係指由主要的48 kDa (ASGPR-1)及次要的40 kDa次單元(ASGPR-2)形成之二分C型凝集素。ASGPR主要在肝細胞之血竇表面上表現，且在含有末端半乳糖或N-乙醯半乳糖胺殘基之循環醣蛋白(去唾液酸醣蛋白)的結合、內化及後續清除中起主要作用。
組合：如本文所用，「組合產品」、「組合療法」、「聯合療法」及其類似術語係指使用超過一種治療劑或超過一種藥物或方式用於治療疾病或病症之療法。包含組合產品之治療劑可並行地、間歇地或以任何次序給藥。組合產品可包含例如兩種寡核苷酸或與抗體或小分子藥物組合之寡核苷酸。對於此類療法，所使用之每種劑的劑量可變化以最佳化及/或增強患者結果。
互補：如本文所用，術語「互補」係指核苷酸(例如，在相對核酸上或在單一核酸鏈之相對區域上之兩個核苷酸)之間的結構關係，其允許該等核苷酸彼此形成鹼基對。舉例而言，與相對核酸之嘧啶核苷酸互補的一個核酸之嘌呤核苷酸可藉由彼此形成氫鍵而一起鹼基配對。在一些實施例中，互補核苷酸可按沃森-克里克(Watson-Crick)方式或按允許形成穩定雙鏈體之任何其他方式鹼基配對。在一些實施例中，如本文所述，兩種核酸可具有彼此互補以形成互補區域之核苷酸序列。
去氧核糖核苷酸：如本文所用，術語「去氧核糖核苷酸」係指如與核糖核苷酸相比在其戊糖之2′位置處具有氫之核苷酸。經修飾之去氧核糖核苷酸係除2′位置以外具有一或多種原子修飾或取代之去氧核糖核苷酸，包括糖、磷酸酯基或鹼基內部或本身之修飾或取代。
雙鏈寡核苷酸：如本文所用，術語「雙鏈寡核苷酸」係指實質上呈雙鏈體形式之寡核苷酸。在一些實施例中，在共價分離之核酸鏈之核苷酸的反平行序列之間形成雙鏈寡核苷酸之雙鏈體區域的互補鹼基配對。在一些實施例中，在共價連接之核酸鏈之核苷酸的反平行序列之間形成雙鏈寡核苷酸之雙鏈體區域的互補鹼基配對。在一些實施例中，由折疊(例如，經由髮夾環)之單一核酸鏈形成雙鏈寡核苷酸之雙鏈體區域的互補鹼基配對，以提供一起鹼基配對之核苷酸之互補反平行序列。在一些實施例中，雙鏈寡核苷酸包含彼此完全呈雙鏈之兩條共價分離之核酸鏈。然而，在一些實施例中，雙鏈寡核苷酸包含部分呈雙鏈，例如在一端或兩端具有懸垂物之兩條共價分離之核酸鏈。在一些實施例中，雙鏈寡核苷酸包含部分互補之核苷酸之反平行序列，且因此可具有一或多個錯配，其可包括內部錯配或末端錯配。
雙鏈體：如本文所用，關於核酸(例如，寡核苷酸)之術語「雙鏈體」係指經由核苷酸之兩個反平行序列之互補鹼基配對形成的結構。
賦形劑：如本文所用，術語「賦形劑」係指可包括於組合物中之非治療劑，例如，以提供或有助於所需稠度或穩定效應。
肝細胞：如本文所用，術語「肝細胞(hepatocyte)」或「肝細胞(hepatocytes)」係指肝臟實質組織之細胞。此等細胞佔肝臟之質量的大約70-85%且製造血清白蛋白、纖維蛋白原以及凝血因子(因子3及4除外)之凝血酶原組。肝細胞譜系細胞之標誌物可包括但不限於：轉甲狀腺素蛋白(Ttr)、麩醯胺合成酶(Glul)、肝細胞核因子1a (Hnf1a)及肝細胞核因子4a (Hnf4a)。成熟肝細胞之標誌物可包括但不限於：細胞色素P450 (Cyp3a11)、反丁烯二醯乙醯乙酸水解酶(Fah)、葡萄糖6-磷酸(G6p)、白蛋白(Alb)及OC2-2F8。參見例如Huch等人, Nature, 2013, 494(7436):247-50，其與肝細胞標誌物有關之內容以引用之方式併入本文中。
環：如本文所用，術語「環」係指核酸(例如，寡核苷酸)之未配對區域，該區域側接該核酸中彼此充分互補之兩個反平行區域，使得在適當雜交條件下(例如，在磷酸鹽緩衝液中、在細胞中)，側接該未配對區域之兩個反平行區域雜交形成雙鏈體(稱作「莖」)。
經修飾之核苷酸間鍵：如本文所用，術語「經修飾之核苷酸間鍵」係指與包含磷酸二酯鍵之參考核苷酸間鍵相比具有一或多種化學修飾之核苷酸間鍵。在一些實施例中，經修飾之核苷酸係非天然存在之鍵。典型地，經修飾之核苷酸間鍵向其中存在該經修飾之核苷酸間鍵的核酸賦予一或多種所需特性。舉例而言，經修飾之核苷酸可改良熱穩定性、降解抗性、核酸酶抗性、溶解度、生物可用性、生物活性、降低之免疫原性等。
經修飾之核苷酸：如本文所用，術語「經修飾之核苷酸」係指與選自以下之相應參考核苷酸相比具有一或多種化學修飾之核苷酸：腺嘌呤核糖核苷酸、鳥嘌呤核糖核苷酸、胞嘧啶核糖核苷酸、尿嘧啶核糖核苷酸、腺嘌呤去氧核糖核苷酸、鳥嘌呤去氧核糖核苷酸、胞嘧啶去氧核糖核苷酸及胸苷去氧核糖核苷酸。在一些實施例中，經修飾之核苷酸係非天然存在之核苷酸。在一些實施例中，經修飾之核苷酸在其糖、核鹼基及/或磷酸酯基中具有一或多種化學修飾。在一些實施例中，經修飾之核苷酸具有與相應參考核苷酸結合之一或多個化學部分。典型地，經修飾之核苷酸向其中存在該經修飾之核苷酸的核酸賦予一或多種所需特性。舉例而言，經修飾之核苷酸可改良熱穩定性、降解抗性、核酸酶抗性、溶解度、生物可用性、生物活性、降低之免疫原性等。在某些實施例中，經修飾之核苷酸在核糖環之2’位置處包含2’-O-甲基或2’-F取代。
帶缺口之四環結構：「帶缺口之四環結構」係RNAi寡核苷酸之結構，其特徵在於存在分離之有義(過客)及反義(向導)鏈，其中有義鏈具有與反義鏈互補之區域，使得兩條鏈形成雙鏈體，且其中該等鏈中之至少一者(一般為有義鏈)自雙鏈體延伸，其中該延伸段含有四環及形成與該四環相鄰之莖區域的兩個自我互補序列，其中該四環係經組態以穩定由該至少一條鏈之自我互補序列形成之相鄰莖區域。
寡核苷酸：如本文所用，術語「寡核苷酸」係指短核酸，例如長度小於100個核苷酸。寡核苷酸可包含核糖核苷酸、去氧核糖核苷酸及/或經修飾之核苷酸，包括例如經修飾之核糖核苷酸。寡核苷酸可為單鏈或雙鏈。寡核苷酸可能具有或可能不具有雙鏈體區域。作為一組非限制性實例，寡核苷酸可為但不限於小干擾RNA (siRNA)、微小RNA (miRNA)、短髮夾RNA (shRNA)、切丁酶受質干擾RNA (dsiRNA)、反義寡核苷酸、短siRNA或單鏈siRNA。在一些實施例中，雙鏈寡核苷酸為RNAi寡核苷酸。
懸垂物：如本文所用，術語「懸垂物」係指由一條鏈或一個區域延伸超出與該一條鏈或一個區域形成雙鏈體之互補鏈之末端產生的末端非鹼基配對核苷酸。在一些實施例中，懸垂物包含自雙鏈寡核苷酸之5′末端或3′末端之雙鏈體區域延伸的一或多個未配對核苷酸。在某些實施例中，該懸垂物係在雙鏈寡核苷酸之反義鏈或有義鏈上的3′或5′懸垂物。
醫藥學上可接受：如本文所用，術語「醫藥學上可接受」係指一般安全、無毒且在生物學上或其他方面均合乎需要之化合物或組合物，且包括人類醫藥及獸醫用途可接受之化合物或組合物。該化合物或組合物可由管理機構批准或可批准，或者列入美國藥典或其他公認藥典中以用於動物，包括人類。
醫藥學上可接受之鹽：如本文所用，術語「醫藥學上可接受之鹽」係指本發明化合物之生理學上及醫藥學上可接受之鹽：亦即，保留親本寡核苷酸之所需生物活性且不向其賦予非所需毒物學效應之鹽。
醫藥學上可接受之賦形劑、載劑或佐劑：如本文所用，術語「醫藥學上可接受之賦形劑、載劑或佐劑」係指賦形劑、載劑或佐劑可與至少一種治療劑(例如，本發明寡核苷酸)一起投與至個體，且當以足以遞送治療量之該劑的劑量投與時不破壞其藥理學活性且一般安全、無毒且在生物學上或其他方面均合乎需要。
磷酸酯類似物：如本文所用，術語「磷酸酯類似物」係指模擬磷酸酯基之靜電及/或空間特性之化學部分。在一些實施例中，磷酸酯類似物位於寡核苷酸之5'末端核苷酸處以替代常常易於酶促移除之5'-磷酸酯。在一些實施例中，5'磷酸酯類似物含有磷酸酶抗性鍵。磷酸酯類似物之實例包括5'膦酸酯，諸如5'亞甲基膦酸酯(5′-MP)及5′-(E)-乙烯基膦酸酯(5′-VP)。在一些實施例中，寡核苷酸在5′-末端核苷酸處具有在糖之4′-碳位置處的磷酸酯類似物(稱作「4′-磷酸酯類似物」)。4′-磷酸酯類似物之實例為氧甲基膦酸酯，其中氧甲基之氧原子結合至糖部分(例如，在其4′-碳處)或其類似物。參見例如2017年9月1日申請之國際專利申請案PCT/US2017/049909、2016年9月2日申請之美國臨時申請案第62/383,207號及2016年9月12日申請之美國臨時申請案第62/393,401號，各文獻中與磷酸酯類似物有關之內容以引用之方式併入本文中。已開發針對寡核苷酸之5′端的其他修飾(參見例如WO 2011/133871；美國專利第8,927,513號；及Prakash等人, Nucleic Acids Res., 2015, 43(6):2993-3011，各文獻中與磷酸酯類似物有關之內容以引用之方式併入本文中)。
降低之表現：如本文所用，術語基因之「降低之表現」係指如與適當參考細胞或個體相比，細胞或個體中由該基因編碼的RNA轉錄物或蛋白質之量減少及/或基因活性之量減少。舉例而言，與未經雙鏈寡核苷酸(例如，具有與ALDH2 mRNA序列互補之反義鏈的雙鏈寡核苷酸)處理之細胞相比，用該雙鏈寡核苷酸處理細胞之行為可使RNA轉錄物、蛋白質及/或酶活性(例如，由ALDH2基因編碼)之量減少。同樣，如本文所用，「降低表現」係指使基因(例如，ALDH2)之表現降低之行為。
互補區域：如本文所用，術語「互補區域」係指核酸(例如，雙鏈寡核苷酸)之核苷酸序列，其與核苷酸之反平行序列(例如，mRNA內之標靶核苷酸序列)充分互補，以允許在適當雜交條件下(例如，在磷酸鹽緩衝液中、在細胞中，等)，在核苷酸之兩個序列之間進行雜交。互補區域可與核苷酸序列(例如，mRNA或其部分內存在之標靶核苷酸序列)完全互補。舉例而言，與mRNA中存在之核苷酸序列完全互補之互補區域具有與mRNA中的相應序列互補而無任何錯配或間隙之相連核苷酸序列。或者，互補區域可與核苷酸序列(例如，mRNA或其部分內存在之核苷酸序列)部分地互補。舉例而言，與mRNA中存在之核苷酸序列部分地互補之互補區域具有與mRNA中的相應序列互補，但與mRNA中的該相應序列相比含有一或多個錯配或間隙(例如，1、2、3個或更多個錯配或間隙)之相連核苷酸序列，其限制條件在於該互補區域仍能夠在適當雜交條件下與mRNA雜交。
核糖核苷酸：如本文所用，術語「核糖核苷酸」係指具有呈戊糖形式之核糖的核苷酸，在其2′位置處含有羥基。經修飾之核糖核苷酸係除2′位置以外具有一或多種原子修飾或取代之核糖核苷酸，包括核糖、磷酸酯基或鹼基內部或本身之修飾或取代。
RNAi 寡核苷酸：如本文所用，術語「RNAi寡核苷酸」係指(a)具有有義鏈(過客)及反義鏈(向導)之雙鏈寡核苷酸，其中反義鏈或反義鏈之一部分由Argonaute 2 (Ago2)核酸內切酶用於標靶mRNA之裂解中，或(b)具有單一反義鏈之單鏈寡核苷酸，其中彼反義鏈(或彼反義鏈之一部分)由Ago2核酸內切酶用於標靶mRNA之裂解中。
鏈：如本文所用，術語「鏈」係指經由核苷酸間鍵(例如，磷酸二酯鍵、硫代磷酸酯鍵)連接在一起之單一相連核苷酸序列。在一些實施例中，鏈具有兩個自由端，例如5′-端及3′-端。
個體：如本文所用，術語「個體」意謂任何哺乳動物，包括小鼠、兔及人類。在一實施例中，個體為人類或非人類靈長類動物。在一些實施例中，術語「個體」或「患者」係指人類個體。
合成：如本文所用，術語「合成」係指人工合成(例如，使用機器(例如，固態核酸合成器))或以其他方式不來源於通常產生分子之天然來源(例如，細胞或生物體)的核酸或其他分子。
靶向配位體：如本文所用，術語「靶向配位體」係指選擇性地結合至所關注之組織或細胞的同源分子(例如，受體)，且可與另一物質結合以達成將該另一物質靶向至所關注之組織或細胞之目的之分子(例如，碳水化合物、胺基糖、膽固醇、多肽或脂質)。舉例而言，在一些實施例中，靶向配位體可與寡核苷酸結合以達成將該寡核苷酸靶向至所關注之特定組織或細胞之目的。在一些實施例中，靶向配位體選擇性地結合至細胞表面受體。因此，在一些實施例中，當與寡核苷酸結合時，靶向配位體經由選擇性結合至在特定細胞之表面上表現的受體及由該細胞內體內化包含該寡核苷酸、靶向配位體及受體之複合物而促進將該寡核苷酸遞送至該細胞。在一些實施例中，靶向配位體經由連接體與寡核苷酸結合，該連接體在細胞內化之後或期間裂解，使得自細胞中之靶向配位體釋放該寡核苷酸。
四環：如本文所用，術語「四環」係指增加藉由核苷酸之側接序列之雜交形成的相鄰雙鏈體之穩定性之環。穩定性之增加可偵測為相鄰莖雙鏈體之熔融溫度(T m)的增加，該熔融溫度高於由隨機選擇之核苷酸序列組成的長度可相當之環之集合平均預期的相鄰莖雙鏈體之T m。舉例而言，四環可在10 mM NaHPO 4中向包含長度為至少2個鹼基對之雙鏈體的髮夾賦予至少50℃、至少55℃、至少56℃、至少58℃、至少60℃、至少65℃或至少75℃之熔融溫度。在一些實施例中，四環可藉由堆疊相互作用使相鄰莖雙鏈體中之鹼基對穩定化。另外，四環中核苷酸之間的相互作用包括但不限於非沃森-克里克鹼基配對、堆疊相互作用、氫鍵結及接觸相互作用(Cheong等人, Nature, 1990 346(6285):680-82；Heus及Pardi, Science, 1991, 253(5016):191-94)。在一些實施例中，四環包含3至6個核苷酸或由3至6個核苷酸組成且典型地為4至5個核苷酸。在某些實施例中，四環包含三個、四個、五個或六個核苷酸或由三個、四個、五個或六個核苷酸組成，該等核苷酸可或可不經修飾(例如，其可或可不與靶向部分結合)。在一實施例中，四環由四個核苷酸組成。任何核苷酸均可用於四環中且可如Cornish-Bowden, Nucl. Acids Res., 1985, 13:3021-3030中所述來使用針對此類核苷酸之標準IUPAC-IUB符號。例如，字母「N」可用於意謂任何鹼基均可處於彼位置中，字母「R」可用於顯示腺嘌呤(A)或鳥嘌呤(G)可處於彼位置中，且「B」可用於顯示胞嘧啶(C)、鳥嘌呤(G)或胸腺嘧啶(T)可處於彼位置中。四環之實例包括四環之UNCG家族(例如，UUCG)、四環之GNRA家族(例如，GAAA)及CUUG四環(Woese等人, Proc Natl Acad Sci USA., 1990, 87(21):8467-71；Antao等人, Nucleic Acids Res., 1991, 19(21):5901-5)。DNA四環之實例包括四環之d(GNNA)家族(例如，d(GTTA))、四環之d(GNRA)家族、四環之d(GNAB)家族、四環之d(CNNG)家族及四環之d(TNCG)家族(例如，d(TTCG))。參見例如Nakano等人 Biochemistry, 2002, 41(48):14281-14292；Shinji等人, Nippon Kagakkai Koen Yokoshu, 第78卷, 第2期, 第731頁 (2000)，該等文獻之相關揭示內容以引用之方式併入本文中。在一些實施例中，四環含於帶缺口之四環結構內。
治療：如本文所用，術語「治療」係指例如經由向有需要之個體投與治療劑(例如，寡核苷酸)而向該個體提供照護之行為，以達成關於現有疾患(例如，疾病、病症)改良個體之健康及/或福祉之目的或者預防或減少疾患發生之可能性。在一些實施例中，治療涉及降低個體經歷之疾患(例如，疾病、病症)之至少一種徵象、症狀或促成因素之頻率或嚴重性。 II. 基於寡核苷酸之抑制劑 i. ALDH2 靶向性寡核苷酸
在一些實施例中，本文所述之寡核苷酸具有具有序列UAAACUGAGUUUCAUCCACCGG (SEQ ID NO: 1)之向導(反義)鏈。在一些實施例中，提供有義鏈，其與該反義鏈形成雙鏈體。在一些實施例中，該有義鏈在其3′-端包含莖-環。在某些實施例中，該有義鏈(例如，在其3′-端)包含如下所陳述之莖-環：S1-L-S2，其中S1與S2互補，且其中L在S1與S2之間形成長度在2至6個核苷酸範圍內之環。在一些實施例中，在S1與S2之間形成之雙鏈體的長度為4、5、6、7或8個鹼基對。在一些實施例中，莖-環之環(L)為四環(例如，在帶缺口之四環結構內)。四環可含有核糖核苷酸、經修飾之核苷酸及/或其組合。典型地，四環具有4至5個核苷酸。然而，在一些實施例中，四環包含3至6個核苷酸或由3至6個核苷酸組成，且典型地由4個核苷酸組成。在某些實施例中，四環包含三個、四個、五個或六個核苷酸或由三個、四個、五個或六個核苷酸組成。
在一些實施例中，本文所述之寡核苷酸具有序列GGUGGAUGAAACUCAGUUUAGCAGCCGAAAGGCUGC (SEQ ID NO: 2)之有義鏈，或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，該寡核苷酸包含序列UAAACUGAGUUUCAUCCACCGG (SEQ ID NO: 1)之反義鏈及序列GGUGGAUGAAACUCAGUUUAGCAGCCGAAAGGCUGC (SEQ ID NO: 2)之有義鏈，或其醫藥學上可接受之鹽。 ii. 寡核苷酸修飾
在一些實施例中，本發明寡核苷酸可包括一或多種合適修飾。在一些實施例中，經修飾之核苷酸在其鹼基(或核鹼基)、糖(例如，核糖、去氧核糖)或磷酸酯基中具有修飾。在本文所提供之寡核苷酸的一些實施例中，寡核苷酸之所有或實質上所有核苷酸均係經修飾。在某些實施例中，超過一半之核苷酸係經修飾。在某些實施例中，少於一半之核苷酸係經修飾。
此類RNAi寡核苷酸之化學修飾係充分利用此類分子之治療潛力所必需的。已開發多種化學修飾且將其應用於RNAi寡核苷酸以改良其藥物動力學及藥效學特性(Deleavey及Damha, Chem Biol., 2012, 19:937-954)，及阻斷先天免疫活化(Judge等人, Mol Ther., 2006, 13:494-505)。最常見的化學修飾之一係核糖核苷酸之呋喃糖的2′-OH，因為其參與核酸酶降解。已報道在整個雙鏈體中具有2′-O-甲基(2′-OMe)及2′-去氧-2′-氟(2′-F)之組合的經充分化學修飾之siRNA，且其已證明卓越穩定性及RNAi活性(Morrissey等人, Hepatology, 2005, 41:1349–1356；Allerson等人, J Med Chem., 2005, 48:901-904；Hassler等人, Nucleic Acid Res., 2018, 46:2185-2\196)。最近，N-乙醯半乳糖胺(GalNAc)結合之經化學修飾之siRNA已顯示有效的去唾液酸醣蛋白受體(ASGPr)介導之活體內遞送至肝臟肝細胞(Nair等人, J Am Chem Soc., 2014, 136:16958-961)。包括GalNAc切丁酶-受質結合物(GalXC)平台在內之數種GalNAc結合之RNAi平台已進入臨床開發階段，用於治療多種人類疾病。
在基於寡核苷酸之治療劑(包括RNAi GalNAc結合物)的開發中使用經化學修飾之核苷類似物時，一個主要問題係與修飾相關之潛在毒性。治療性寡核苷酸可能在患者中緩慢地降解，從而釋放可能潛在地經磷酸化且倂入至細胞DNA或RNA中之核苷類似物。在抗病毒治療劑領域中，多種小分子核苷酸抑制劑之臨床開發中已出現毒性(Feng等人, Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 2016, 60:806-817)。據報道，經完全硫代磷酸化之反義寡核苷酸的2′-F修飾會引起細胞蛋白質降低及雙鏈DNA斷裂，從而導致活體內急性肝毒性(Shen等人, Nucleic Acid Res., 2015, 43:4569-4578；Shen等人, Nucleic Acid Res., 2018, 46:2204-2217)。迄今為止，尚未在RNAi寡核苷酸背景中觀察到2’-F修飾之此類傾向性的證據(Janas等人, Nucleic Acid Ther., 2016, 26:363-371；Janas等人, Nucleic Acid Ther., 2016, 27:11-22)。此外，2′-F siRNA在臨床試驗中已具有充分耐受性。儘管如此，仍可需要使諸如2′-F修飾之核苷之非天然核苷類似物在治療性RNA寡核苷酸中的使用降至最低。
與2′-去氧-2′-氟RNA不同，2'-O-甲基RNA係在tRNA及其他小RNA中發現的天然存在之RNA修飾，作為轉錄後修飾出現。亦已知如與體積較小之2′-F修飾相比，體積較大之2′-O-甲基修飾賦予較佳代謝穩定性。因此，就穩定性及耐受性而言，2′-OMe優於2′-F。然而，若未正確定位於siRNA序列中，則體積較大之2′-OMe已顯示干擾RNA蛋白質結合且抑制RNAi活性(Chiu等人, RNA, 2003, 9:1034-1048；Prakash等人, J. Med Chem., 2005, 48:4247-4253；Zheng等人, FASEB J., 2013, 27:4017-4026)。
為了進一步降低2′-F含量且並行地增加2′-OMe，從而可在不損害RNAi活性之情況下改良穩定性及耐受性，微調2′-OMe及2′-F之位置(修飾模式)在已顯示良好效能及持續時間之DsiRNA結合物中係必需的。最近的報道已試圖最佳化21聚體/23聚體siRNA GalNAc結合物平台之修飾模式(Foster等人, Mol Ther., 2018, 26:708-17)。然而，彼報道未鑑別賦予寡核苷酸如本文所揭示之高效能及持續時間的2′-OMe及2′-F模式，包括對2′-OMe取代具有不良耐受性之位置。彼報道亦未鑑別特定地針對如本文所揭示之三環、五環及四環GalXC平台具有最小2′-F含量之先進設計。
已驚訝地發現，當序列含有更多氟(例如，fU)時，在HPLC中之產物中顯示去氟雜質增多，且具有降低之氟含量(主要不具有fU)的修飾模式在裂解及保護基脫除之後顯示無去氟副產物，因此，出乎意料地增強了製造產率且降低了雜質。
在某些實施例中，本發明寡核苷酸為雙鏈寡核苷酸，其包含有義鏈SEQ ID NO: 3 (DP11663P)，及選自SEQ ID NO: 4 (DP17232G)、5 (DP16279G)、6 (DP16281G)及7 (DP13488G)之反義鏈，或其醫藥學上可接受之鹽，該等序列在 表 1中。在某些實施例中，本發明寡核苷酸為雙鏈寡核苷酸，其包含有義鏈SEQ ID NO: 8 (DP11518P)，及反義鏈SEQ ID NO: 9 (DP11674G)，或其醫藥學上可接受之鹽。在某些實施例中，該寡核苷酸包含有義鏈SEQ ID NO: 3，及反義鏈SEQ ID NO: 4。在某些實施例中，該寡核苷酸包含有義鏈SEQ ID NO: 3，及反義鏈SEQ ID NO: 5。在某些實施例中，該寡核苷酸包含有義鏈SEQ ID NO: 3，及反義鏈SEQ ID NO: 6。在某些實施例中，該寡核苷酸包含有義鏈SEQ ID NO: 3，及反義鏈SEQ ID NO: 7。 表 1
SEQ ID No: 參考編號 序列 5’-3’
3 DP11663P [mGs][mG][mU][mG][mG][mA][mU][fG][fA][fA][fA][mC][mU][mC][mA][mG][mU][mU][mU][mA][mG][mC][mA][mG][mC][mC][mG][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][mG][mG][mC][mU][mG][mC]
4 DP17232G [MePhosphonate-4O-mUs][fAs][fAs][fA][mC][mU][fG][mA][mG][mU][mU][mU][mC][fA][mU][mC][mC][mA][mC][mCs][mGs][mG]
5 DP16279G [MePhosphonate-4O-mUs][fAs][fAs][fA][mC][mU][fG][mA][mG][fU][mU][mU][mC][fA][mU][mC][mC][mA][mC][mCs][mGs][mG]
6 DP16281G [MePhosphonate-4O-mUs][fAs][fAs][fA][fC][mU][fG][mA][mG][mU][mU][mU][mC][fA][mU][mC][mC][mA][mC][mCs][mGs][mG]
7 DP13488G [MePhosphonate-4O-mUs][fAs][fAs][fA][fC][mU][fG][mA][mG][fU][mU][mU][mC][fA][mU][mC][mC][mA][mC][mCs][mGs][mG]
8 DP11518P [mGs][mG][fU][mG][fG][mA][mU][fG][mA][fA][mA][fC][fU][mC][fA][mG][fU][mU][mU][mA][mG][mC][mA][mG][mC][mC][mG][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][mG][mG][mC][mU][mG][mC]
9 DP11674G [MePhosphonate-4O-mUs][fAs][fA][fA][fC][mU][fG][mA][mG][fU][mU][mU][mC][fA][mU][fC][mC][mA][fC][mCs][mGs][mG]
在某些態樣中，本發明寡核苷酸為雙鏈寡核苷酸，其包含有義鏈： 5’ mG‒S‒mG‒mU‒mG‒mG‒mA‒mU‒fG‒fA‒fA‒fA‒mC‒mU‒mC‒mA‒mG‒mU‒mU‒mU‒mA‒mG‒mC‒mA‒mG‒mC‒mC‒mG‒[ademA-GalNAc]‒[ademA-GalNAc]‒[ademA-GalNAc]‒mG‒mG‒mC‒mU‒mG‒mC 3’ (SEQ ID NO: 3)，及 反義鏈： 5’ [MePhosphonate-4O-mU]‒S‒fA‒S‒fA‒S‒fA‒fC‒mU‒fG‒mA‒mG‒mU‒mU‒mU‒mC‒fA‒mU‒mC‒mC‒mA‒mC‒mC‒S‒mG‒S‒mG 3’ (SEQ ID NO: 6)；或其醫藥學上可接受之鹽 其中： 核苷之間的「―」表示磷酸二酯核苷間鍵； 核苷之間的「‒S‒」表示硫代磷酸酯核苷間鍵； mA表示2’-O-甲基腺苷核糖核苷； mG表示2’-O-甲基鳥苷核糖核苷； mC表示2’-O-甲基胞苷核糖核苷； mU表示2’-O-甲基尿苷核糖核苷； fA表示2’-氟-腺苷去氧核糖核苷； fG表示2’-氟-鳥苷去氧核糖核苷； fC表示2’-氟-胞苷去氧核糖核苷； fU表示2’-氟-尿苷去氧核糖核苷； [ademA-GalNAc]表示：
Figure 02_image003
；且 [MePhosphonate-4O-mU]表示：
Figure 02_image007
。
在某些實施例中，該雙鏈寡核苷酸為鈉鹽。 a. 糖修飾
在一些實施例中，經修飾之糖(本文中亦稱作糖類似物)包括經修飾之去氧核糖或核糖部分。在一些實施例中，糖中之核苷酸修飾包含2′-修飾。2′-修飾可為2′-胺基乙基、2′-氟、2′-O-甲基、2′-O-甲氧基乙基或2′-去氧-2′-氟-β-d-阿拉伯糖核酸。典型地，該修飾為2′-氟或2′-O-甲基。在一些實施例中，糖中之修飾包含糖環之修飾，其可包含糖環之一或多個碳的修飾。
在一些實施例中，以下位置中之一或多者係經2′-O-甲基修飾：有義鏈之位置1-7及12-36及/或反義鏈之位置1、6、8-13及15-22。在一些實施例中，有義鏈之位置1-7及12-36及反義鏈之位置1、6、8-13及15-22均係經2′-O-甲基修飾。在一些實施例中，以下位置中之一或多者係經2′-氟修飾：有義鏈之位置8-11及/或反義鏈之位置2-5、7及14。在一些實施例中，有義鏈之位置8-11及反義鏈之位置2-5、7及14均係經2′-氟修飾。
在一些實施例中，末端3′-端基(例如，3′-羥基)為磷酸酯基或其他基團，其可用於例如附接連接體、銜接子或標記。 b. 5′ 末端磷酸酯
在一些實施例中，寡核苷酸之5′-末端磷酸酯基增強與Argonaut 2之相互作用。然而，包含5′-磷酸酯基之寡核苷酸可能易於經由磷酸酶或其他酶降解，這可限制其活體內生物可用性。在一些實施例中，寡核苷酸包括抵抗此類降解之5′磷酸酯類似物。
在一些實施例中，寡核苷酸在糖之4′-碳位置處具有磷酸酯類似物(稱作「4′-磷酸酯類似物」)。參見例如2017年9月1日申請之國際申請案第PCT/US2017/049909號，標題為4′-Phosphate Analogs and Oligonucleotides Comprising the Same，其中與磷酸酯類似物有關之內容以引用之方式倂入本文中。
在一些實施例中，本文所提供之寡核苷酸在5′-末端核苷酸處包含4′-磷酸酯類似物。在一些實施例中，磷酸酯類似物為氧甲基膦酸酯，其中氧甲基之氧原子結合至糖部分(例如，在其4′-碳處)或其類似物。在其他實施例中，4′-磷酸酯類似物為硫甲基膦酸酯或胺基甲基膦酸酯，其中硫甲基之硫原子或胺基甲基之氮原子結合至糖部分或其類似物之4′-碳。在某些實施例中，4′-磷酸酯類似物為氧甲基膦酸酯。
在某些實施例中，附接至寡核苷酸之磷酸酯類似物為甲氧基膦酸酯(MOP)。在某些實施例中，附接至寡核苷酸之磷酸酯類似物為5′單甲基保護之MOP。在一些實施例中，可使用包含磷酸酯類似物之以下尿苷核苷酸，例如在向導(反義)鏈之第一位置處：
Figure 02_image009
， 該經修飾之核苷酸係稱作[MePhosphonate-4O-mU]或5'-甲氧基,膦酸酯-4'-氧基- 2'-O-甲基尿苷。 c. 經修飾之核苷酸間鍵
在一些實施例中，磷酸酯修飾或取代可產生包含至少一個(例如，至少1個、至少2個、至少3個或至少5個)經修飾之核苷酸間鍵的寡核苷酸。在一些實施例中，本文所揭示之寡核苷酸中之任一者包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個經修飾之核苷酸間鍵。在一些實施例中，如本文所揭示之寡核苷酸中之任一者的至少一個經修飾之核苷酸間鍵為硫代磷酸酯鍵。
在一些實施例中，該寡核苷酸包含至少一個經修飾之核苷酸間鍵。在一些實施例中，該至少一個經修飾之核苷酸間鍵為硫代磷酸酯鍵。在一些實施例中，該寡核苷酸在以下一或多者之間具有硫代磷酸酯鍵：有義鏈之位置1及2、反義鏈之位置1及2、反義鏈之位置2及3、反義鏈之位置3及4、反義鏈之位置20及21以及反義鏈之位置21及22。在一些實施例中，該寡核苷酸在以下每一者之間具有硫代磷酸酯鍵：有義鏈之位置1及2、反義鏈之位置1及2、反義鏈之位置2及3、反義鏈之位置3及4、反義鏈之位置20及21以及反義鏈之位置21及22。 iii. 靶向配位體
在一些實施例中，本文所揭示之寡核苷酸係經修飾以促進特定組織、細胞或器官之靶向，例如以促進將該寡核苷酸遞送至肝臟。在某些實施例中，本文所揭示之寡核苷酸可經修飾以促進將該寡核苷酸遞送至肝臟之肝細胞。
在一些實施例中，寡核苷酸包含與一或多種靶向配位體結合之核苷酸。在某些實施例中，靶向配位體為一或多個GalNAc部分。GalNAc係去唾液酸醣蛋白受體(ASGPR)之高親和力配位體，ASGPR主要在肝細胞之血竇表面上表現，且在含有末端半乳糖或N-乙醯半乳糖胺殘基之循環醣蛋白(去唾液酸醣蛋白)的結合、內化及後續清除中起主要作用。在一些實施例中，使用GalNAc部分與本發明寡核苷酸之結合以將此等寡核苷酸靶向至在此等肝細胞上表現之ASGPR。在一些實施例中，本發明寡核苷酸直接地或間接地與單價GalNAc部分結合。在一些實施例中，本發明寡核苷酸與一或多個二價GalNAc、三價GalNAc或四價GalNAc部分結合。在一些實施例中，本發明寡核苷酸與三價GalNAc部分結合。
在一些實施例中，本文中之寡核苷酸包含附接至腺嘌呤核苷酸之單價GalNAc，稱作[ademA-GalNAc]或2'-胺基二乙氧基甲醇-腺嘌呤-GalNAc，如下文所描繪。
Figure 02_image011
在一些實施例中，該寡核苷酸之-GAAA-的所有三個腺苷核苷酸各自與GalNAc部分結合。在一些實施例中，莖-環之環(L)的3個核苷酸各自與單獨GalNAc結合。
可使用適當方法或化學(例如，點擊化學)使靶向配位體連接至核苷酸。在一些實施例中，連接體為不穩定連接體。然而，在其他實施例中，連接體係更穩定的。在一些實施例中，使用點擊連接體使靶向配位體與核苷酸結合。在一些實施例中，使用基於縮醛之連接體使靶向配位體與本文所述之寡核苷酸的核苷酸結合。基於縮醛之連接體揭示於例如國際專利申請公開案第WO2016100401 A1號中，該公開案在2016年6月23日公開，且其中與此類連接體有關之內容以引用之方式倂入本文中。
在一些實施例中，可需要使降低ALDH2表現之寡核苷酸靶向至個體之肝臟的肝細胞。任何合適的肝細胞靶向部分均可用於此目的。
GalNAc係去唾液酸醣蛋白受體(ASGPR)之高親和力配位體，ASGPR主要在肝細胞之血竇表面上表現，且在含有末端半乳糖或N-乙醯半乳糖胺殘基之循環醣蛋白(去唾液酸醣蛋白)的結合、內化及後續清除中起主要作用。可使用GalNAc部分與本發明寡核苷酸之結合(間接或直接)以將此等寡核苷酸靶向至在此等肝細胞上表現之ASGPR。
在一些實施例中，本發明寡核苷酸直接地或間接地與單價GalNAc結合。在一些實施例中，該寡核苷酸直接地或間接地與超過一個單價GalNAc結合(亦即，與2、3或4個單價GalNAc部分結合，且典型地與3或4個單價GalNAc部分結合)。在一些實施例中，本發明寡核苷酸與一或多個二價GalNAc、三價GalNAc或四價GalNAc部分結合。 III. 醫藥學上可接受之鹽
在一些實施例中，本發明寡核苷酸係呈醫藥學上可接受之鹽形式。醫藥學上可接受之鹼加成鹽係由金屬或胺，諸如鹼金屬及鹼土金屬或有機胺形成的。用作陽離子之金屬之實例為鈉、鉀、鎂、鈣及其類似金屬。合適的胺之實例為N,N′-二苄基乙二胺、氯普魯卡因、膽鹼、二乙醇胺、二環己胺、乙二胺、N-甲基葡糖胺及普魯卡因(參見例如Berge等人, 「Pharmaceutical Salts,」 J. Pharma Sci., 1977, 66:1-19)。可藉由使游離酸形式與充足之所需鹼接觸以習知方式產生鹽來製備該等鹼加成鹽形式。該游離酸形式可藉由使該鹽形式與酸接觸且以習知方式分離游離酸而再生。該等游離酸形式在某些物理特性(諸如極性溶劑中之溶解度)方面略微不同於其各別鹽形式，但出於本發明目的，在其他方面該等鹽與其各別游離酸等效。如本文所用，「醫藥加成鹽」包括本發明組合物之一組分之酸形式的醫藥學上可接受之鹽。此等鹽包括胺之有機或無機酸鹽。較佳酸式鹽為鹽酸鹽、乙酸鹽、水楊酸鹽、硝酸鹽及磷酸鹽。其他合適的醫藥學上可接受之鹽係熟習此項技術者熟知的且包括多種無機及有機酸之鹼式鹽，諸如使用無機酸，諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸或磷酸；使用有機羧酸、磺酸、硫複酸或膦酸或N取代之胺磺酸，例如乙酸、丙酸、乙醇酸、丁二酸、順丁烯二酸、羥基順丁烯二酸、甲基順丁烯二酸、反丁烯二酸、蘋果酸、酒石酸、乳酸、草酸、葡萄糖酸、葡萄糖二酸、葡萄糖醛酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、杏仁酸、水楊酸、4-胺基水楊酸、2-苯氧基苯甲酸、2-乙醯氧基苯甲酸、撲酸、菸鹼酸或異菸鹼酸；及使用胺基酸，諸如自然界中之蛋白質合成所牽涉的20種α-胺基酸，例如麩胺酸或天冬胺酸，以及使用苯乙酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、2-羥基乙烷磺酸、乙烷-1,2-二磺酸、苯磺酸、4-甲基苯磺酸、萘-2-磺酸、萘-1,5-二磺酸、2-或3-磷甘油酸、葡萄糖-6-磷酸鹽、N-環己基胺磺酸(利用賽克拉美之形成)，或使用其他酸性有機化合物，諸如抗壞血酸。醫藥學上可接受之鹽形式亦可用醫藥學上可接受之陽離子製備。合適的醫藥學上可接受之陽離子係熟習此項技術者熟知的且包括鹼金屬、鹼土金屬、銨及四級銨陽離子。碳酸鹽或碳酸氫鹽亦係可能的。
對於寡核苷酸，較佳的醫藥學上可接受之鹽包括但不限於(a)用諸如鈉、鉀、銨、鎂、鈣、聚胺(諸如精胺及亞精胺)等陽離子形成之鹽；(b)用無機酸(例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、硝酸及其類似物)形成之酸加成鹽；(c)用諸如乙酸、草酸、酒石酸、丁二酸、順丁烯二酸、反丁烯二酸、葡萄糖酸、檸檬酸、蘋果酸、抗壞血酸、苯甲酸、鞣酸、棕櫚酸、褐藻酸、聚麩胺酸、萘磺酸、甲烷磺酸、對甲苯磺酸、萘二磺酸、聚半乳糖醛酸及其類似物之有機酸形成的鹽；及(d)由諸如氯、溴及碘之元素陰離子形成的鹽。
在一較佳實施例中，本發明寡核苷酸係呈該寡核苷酸之鈉鹽形式。在一些實施例中，本發明寡核苷酸為雙鏈寡核苷酸，其中該雙鏈寡核苷酸係呈鈉鹽形式。 IV. 調配物
已開發了多種調配物來促進寡核苷酸使用。例如，可使用調配物將寡核苷酸遞送至個體或細胞環境，該調配物使降解減至最少、促進遞送及/或攝取或者向該調配物中之寡核苷酸提供另一有益特性。在一些實施例中，本文提供包含寡核苷酸(例如，單鏈或雙鏈寡核苷酸)以降低ALDH2表現之組合物。此類組合物可適當地經調配，使得當投與至個體時，無論投與至標靶細胞之直接環境中抑或全身性投與，充足部分之寡核苷酸進入該細胞以降低ALDH2表現。多種合適的寡核苷酸調配物中之任一者均可用於遞送寡核苷酸以用於如本文所揭示之ALDH2降低。在一些實施例中，在諸如磷酸鹽緩衝生理食鹽水溶液、脂質體、微胞結構及殼體之緩衝溶液中調配寡核苷酸。在一些實施例中，在水中或在水溶液(例如，具有pH調節之水)中調配裸寡核苷酸或其結合物。在一些實施例中，在鹼性緩衝水溶液(例如，PBS)中調配裸寡核苷酸或其結合物。
在某些態樣中，本發明提供一種包含雙鏈寡核苷酸之組合物，其中該雙鏈寡核苷酸包含有義鏈： 5’mG‒S‒mG‒mU‒mG‒mG‒mA‒mU‒fG‒fA‒fA‒fA‒mC‒mU‒mC‒mA‒mG‒mU‒mU‒mU‒mA‒mG‒mC‒mA‒mG‒mC‒mC‒mG‒[ademA-GalNAc]‒[ademA-GalNAc]‒[ademA-GalNAc]‒mG‒mG‒mC‒mU‒mG‒mC 3’ (SEQ ID NO: 3)，及 反義鏈： 5’ [MePhosphonate-4O-mU]‒S‒fA‒S‒fA‒S‒fA‒fC‒mU‒fG‒mA‒mG‒mU‒mU‒mU‒mC‒fA‒mU‒mC‒mC‒mA‒mC‒mC‒S‒mG‒S‒mG 3’ (SEQ ID NO: 6)；或其醫藥學上可接受之鹽， 其中： 核苷之間的「―」表示磷酸二酯核苷間鍵； 核苷之間的「‒S‒」表示硫代磷酸酯核苷間鍵； mA表示2’-O-甲基腺苷核糖核苷； mG表示2’-O-甲基鳥苷核糖核苷； mC表示2’-O-甲基胞苷核糖核苷； mU表示2’-O-甲基尿苷核糖核苷； fA表示2’-氟-腺苷去氧核糖核苷； fG表示2’-氟-鳥苷去氧核糖核苷； fC表示2’-氟-胞苷去氧核糖核苷； fU表示2’-氟-尿苷去氧核糖核苷； [ademA-GalNAc]表示
Figure 02_image003
；且 [MePhosphonate-4 O-mU]表示
Figure 02_image007
。
在一些實施例中，調配醫藥組合物以與其預期投與途徑可相容。投與途徑之實例包括非經腸(例如，靜脈內)、皮內、皮下、經口(例如，吸入)、經皮(表面)、經黏膜及直腸投與。典型地，投與途徑為靜脈內或皮下。
適用於可注射用途之醫藥組合物包括無菌水溶液(其中水溶性)或分散液及用於臨時製備無菌可注射溶液或分散液之無菌粉末。對於靜脈內或皮下投與，合適載劑包括生理食鹽水、抑菌水、Cremophor EL TM(BASF, Parsippany, N.J.)或磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)。該載劑可以係含有例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇及液體聚乙二醇及其類似物)及其合適混合物之溶劑或分散介質。在多種情況下，將較佳在該組合物中包括等張劑，例如糖、多元醇(諸如甘露糖醇、山梨糖醇)及氯化鈉。可藉由將所需量之寡核苷酸倂入視需要具有上文所列舉之一成分或成分組合之所選溶劑中，隨後過濾滅菌來製備無菌可注射溶液。
在一些實施例中，組合物可含有至少約0.1%或更多治療劑(例如，用於降低ALDH2表現之寡核苷酸)，不過活性成分之百分率可在總組合物之重量或體積的約1%與約80%或更高之間。熟習此項技術者在製備此類醫藥調配物時將考慮諸如溶解度、生物可用性、生物半衰期、投與途徑、產品儲存期限以及其他藥理學考慮之因素，且因而，可需要多種劑量及治療方案。
儘管若干實施例係有關本文所揭示之寡核苷酸中的任一者之肝臟靶向遞送，亦考慮靶向其他組織。 IV. 使用方法 i. 降低細胞中之 ALDH2 表現
在一些實施例中，提供用於向細胞遞送有效量之本文所揭示之寡核苷酸中的任一者以達成降低細胞中之ALDH2表現的目的之方法。本文所提供之方法可用於任何適當細胞類型。 在一些實施例中，細胞係表現 ALDH2 之任何細胞 (例如，肝細胞、巨噬細胞、單核細胞源性細胞、前列腺癌細胞、腦、內分泌組織、骨髓、淋巴結、肺、膽囊、肝臟、十二指腸、小腸、胰臟、腎臟、胃腸道、膀胱、脂肪及軟組織以及皮膚之細胞)。在一些實施例中，細胞係已自個體獲得之原代細胞且可已經歷有限次數之繼代，使得該細胞實質上維持其天然表型特性。在一些實施例中，經遞送寡核苷酸之細胞係離體或活體外的(亦即，可遞送至培養中的細胞或該細胞所處之生物體) 。在特定實施例中，提供用於向細胞遞送有效量之本文所揭示之寡核苷酸中的任一者以達成僅降低肝細胞中之ALDH2表現的目的之方法。
可藉由評估細胞或個體之一或多種特性的適當分析，或藉由評估指示ALDH2表現之分子(例如，RNA、蛋白質)的生物化學技術來確認抑制後果。在一些實施例中，藉由與適當對照(例如，尚未遞送寡核苷酸或已遞送陰性對照之細胞或細胞群體中的ALDH2表現水準)比較表現水準(例如，mRNA或蛋白質ALDH2水準，來評估本文所提供之寡核苷酸使ALDH2之表現水準降低的程度。
在一些實施例中，ALDH2表現之適當對照水準可為預定水準或值，使得無需每次量測對照水準。該預定水準或值可採用多種形式。在一些實施例中，預定水準或值可為單一截止值，諸如中值或平均值。
在一些實施例中，如本文所述之寡核苷酸的投與引起細胞中之ALDH2表現水準降低。在一些實施例中，ALDH2表現水準之降低可以係與ALDH2之適當對照水準相比，降低至1%或更低、5%或更低、10%或更低、15%或更低、20%或更低、25%或更低、30%或更低、35%或更低、40%或更低、45%或更低、50%或更低、55%或更低、60%或更低、70%或更低、80%或更低或者90%或更低。該適當對照水準可以係尚未與如本文所述之寡核苷酸接觸的細胞或細胞群體中之ALDH2表現水準。在一些實施例中，在有限時期之後評價根據本文所揭示之方法將寡核苷酸遞送至細胞的效應。例如，可在將該寡核苷酸引入至該細胞中之後至少8小時、12小時、18小時、24小時；或至少一天、兩天、三天、四天、五天、六天、七天或十四天分析細胞中之ALDH2水準。 ii. 治療方法
本發明之態樣係關於用於降低ADH1B、ADH1C及ALDH2表現以治療個體之酒精中毒之方法。在某些實施例中，本發明係關於用於降低ALDH2表現以治療個體之酒精中毒之方法。在一些實施例中，該等方法可包括向有需要之個體投與有效量之本文所揭示之寡核苷酸中的任一者。此類治療可能用於例如減少個體之乙醇耐受性，由此抑制該個體之乙醇攝入(例如，藉由減少該個體飲用乙醇之期望)。本發明提供治療處於酒精中毒及/或與酒精中毒相關之疾病或病症的風險中(或易患該病)之個體的預防及治療方法。
在某些態樣中，本發明提供一種藉由向個體投與治療劑(例如，寡核苷酸或載體或編碼其之轉殖基因)來預防該個體的如本文所述之疾病或病症之方法。在一些實施例中，欲治療之個體係將在治療上受益於例如肝臟中之ALDH2蛋白的量降低之個體。
本文所述之方法典型地涉及向個體投與有效量的寡核苷酸，即能夠產生所需治療結果之量。治療上可接受之量可以係可治療疾病或病症之量。針對任一個體之適當劑量將取決於某些因素，包括個體之體格、體表面積、年齡、欲投與之組合物、該組合物中的活性成分、投與時間及途徑、一般健康狀況及並行地投與之其他藥物。
在一些實施例中，經腸(例如，經口、藉由胃飼管、藉由十二指腸飼管、經由胃造口術或經直腸)、非經腸(例如，皮下注射、靜脈內注射或輸注、動脈內注射或輸注、肌肉內注射)、經表面(例如，經皮、吸入、經由滴眼劑或經由黏膜)或藉由直接注射至標靶器官(例如，個體之肝臟)中向個體投與本文所揭示之組合物中的任一者。典型地，經靜脈內或皮下投與本文所揭示之寡核苷酸。
在一些實施例中，以0.1 mg/kg至25 mg/kg (例如，1 mg/kg至5 mg/kg)範圍內之劑量投與寡核苷酸。在一些實施例中，以0.1 mg/kg至5 mg/kg範圍內或者0.5 mg/kg至5 mg/kg範圍內之劑量投與寡核苷酸。
在一些實施例中，單獨或組合投與本文中之寡核苷酸。在一些實施例中，並行地、依序(以任何次序)或間歇地組合投與本文中之寡核苷酸。例如，可並行地共投與兩種寡核苷酸。或者，可投與一種寡核苷酸且在任何時間量(例如，一小時、一天、一週或一個月)之後，投與第二種寡核苷酸。在某些實施例中，本文中之寡核苷酸可與戒酒硫組合投與。
作為非限制性實例之集合，將典型地每年一次、每年兩次、每季一次(每三個月一次)、兩個月一次(每兩個月一次)、每月一次或每週一次投與本發明寡核苷酸。
在一些實施例中，欲治療之個體為人類或非人類靈長類動物或其他哺乳動物個體。其他例示性個體包括馴養動物，諸如犬及貓；家畜，諸如馬、牛、豬、綿羊、山羊及雞；及動物，諸如小鼠、大鼠、豚鼠及倉鼠。 實例 實例 1 ：取代對活體內效能之影響 活體內鼠科動物實驗
分析將改良遞送特性、同時維持降低小鼠肝細胞中之ALDH2表現之活性的修飾模式。藉由以3 mg/kg經皮下投與至CD-1小鼠來分析具有多種2’-OMe修飾模式之寡核苷酸之效能。在投與後第4天對小鼠實施安樂死。獲得肝臟樣品，且提取RNA以藉由RT-qPCR評估ALDH2 mRNA水準。基於此等量測值來確定如與PBS對照mRNA相比之ALDH2 mRNA百分比且在圖1中示出。 實例 2 ： GalNAc 結合之 ALDH2 寡核苷酸在非人類靈長類動物 (NHP) 中之持續時間研究
設計此研究以評估單一劑量之具有不同修飾模式(例如，在反義鏈中具有不同數目之2ʹ-氟修飾及/或不同數目之硫代磷酸酯鍵的修飾模式)之GalNAc結合之ALDH2寡核苷酸的藥效學。此研究中測試之GalNAc結合之ALDH2寡核苷酸為：S585-AS595-M14、S585-AS595-M15、S585-AS595-M16、S585-AS595-M17、S587-AS597-M23及S587-AS597-M24。此等寡核苷酸揭示於國際專利公開案WO20119/143621中，該案以引用之方式倂入本文中。3 mg/kg單一劑量之GalNAc結合之ALDH2寡核苷酸經皮下投與至非人類靈長類動物(每組n=4)。使動物禁食隔夜且在次日早晨餵食之前收集血清樣品及肝臟生檢。在適應期間對每隻動物收集一份給藥前生檢且在投與後4週、8週或12週或16週收集三份生檢。將該等生檢分成兩部分，一部分經速凍且儲存於-80℃下且另一部分在RNA later (Thermo Fisher Scientific)中進行加工且儲存於4℃下用於mRNA水準分析。
藉由定量PCR (qPCR)來分析相對於投與前ALDH2 mRNA之量，在投與後4週、8週、12週或16週剩餘的ALDH2 mRNA之量，且結果顯示六分之四的GalNAc結合之ALDH2寡核苷酸實現約50% ALDH2 mRNA抑制且在單一3 mg/kg劑量之後，該等效應維持三個月(圖2)。結果支持所建議之每季一次或更少之人類給藥頻率。
該等血清樣品係經儲存用於肝功能小組測試，包括丙胺酸轉胺酶(ALT)、鹼性磷酸酶(ALP) 乳酸去氫酶(LDH)、γ麩胺醯轉移酶(GGT)。 材料
使用Tissuelyser II (Qiagen, Valencia, CA)使肝臟樣品在0.75 mL基於苯酚/胍之QIAzol溶解試劑(Qiagen, Valencia, CA)中均質化。用1-溴-3-氯丙烷(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)提取勻漿。根據製造商之說明書，使用MagMax Technology (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA)自0.2 mL水相中提取RNA。使用光譜法在260及280 nm下對RNA定量。使用高容量cDNA逆轉錄套組(Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA)來製備cDNA。使用來自Integrated DNA Technologies (Coralville, IA)之RT-qPCR分析及來自Bio-Rad Laboratories (Hercules, CA)之試劑來量測ALDH2 mRNA水準，且針對內源持家基因標準化。使ALDH2 mRNA表現程度針對PBS組(小鼠研究)或針對給藥前生檢(NHP研究)標準化。 實例 3 ：藉由皮下注射於小鼠中進行之 DP11663P:DP16281G (DCR-A1203) 5 週研究 概述
此研究之目的係測定DCR-A1203在CD-1小鼠中之重複給藥(每4週；2劑)皮下(SC)投與的潛在毒性且評估任何發現之潛在可逆性。另外，亦測定DCR-A1203之毒物動力學(TK)特徵。
經由SC注射每4週一次(第1天及第29天)對動物給藥，除了組1中之3隻動物/性別及組2–4中之15隻動物/性別在TK期中僅接受單一劑量(第1天)。研究設計呈遞於 表 2中。 表 2. 實驗設計
組編號 測試材料 劑量 水準 (mg/kg) a 劑量體積 (mL/kg) 劑量濃度 (mg/mL) b 動物數目
主要研究 恢復研究 c TK 研究 PD 研究
M F M F M F M F
1 媒劑 0 5 0 10 10 6 6 6 6 6 6
2 DCR-A1203 30 5 6 10 10 - - 33 33 6 6
3 DCR-A1203 100 5 20 10 10 6 6 33 33 6 6
4 DCR-A1203 300 5 60 10 10 6 6 33 33 6 6
- = 不適用；M = 雄性；F = 雌性；TK = 毒物動力學；PD = 藥效學。 a基於最近之體重量測值。第一天給藥係基於第1天體重量測值且最後一天給藥係基於第29天體重量測值。 b針對純度及水分含量來校正調配物濃度(校正因子= 1.14)。 c恢復期之第一天為第30天。
所有動物均存活至預定屍體剖檢。無DCR-A1203相關之臨床觀察結果，或對體重、食物消耗、血液學、臨床化學、尿液分析或器官重量無影響。無DCR-A1203相關之眼科或宏觀發現。
末期安樂死時注意到的DCR-A1203相關之非不利顯微鏡發現包括在雄性及雌性中在所有劑量水準下在注射位點處的最少至輕度有液泡/顆粒狀巨噬細胞，在雄性中在所有劑量水準下及在100及300 mg/kg組雌性中在腎臟中之最少有液泡/顆粒狀上皮細胞，在300 mg/kg組雄性及雌性中在肝臟中之最少有液泡/顆粒狀肝細胞，以及在100及/或300 mg/kg組雄性及300 mg/kg組雌性中在淋巴結(腋下、下顎及腸系膜)中之最少有液泡/顆粒狀巨噬細胞。此等顯微鏡發現類似與寡核苷酸投與有關之常見組織病理學特徵且由於不存在任何表明毒性之變化(例如，上皮細胞或肝細胞之變性/壞死，或促發炎效應)而被視為非不利的。在恢復安樂死時，在100及300 mg/kg組雄性及雌性中在注射位點處(最少至輕度有液泡/顆粒狀巨噬細胞)以及在100及/或300 mg/kg組雄性及300 mg/kg組雌性中在淋巴結(腋下、下顎及腸系膜)處仍注意到DCR-A1203相關之顯微鏡下變化；然而，在腎臟及肝臟中無發現，指示此等組織中之變化的部分消退。
在所有劑量水準下，在第1天、第29天(給藥後24小時)及第58天(在末期尸體剖檢期間收集之樣品)均可在肝臟及腎臟組織中定量DCR-A1203濃度。在所有評估日，隨著劑量水準自30增加至300 mg/kg，肝臟濃度小於劑量成比例地增加。隨著劑量水準自30增加至300 mg/kg，腎臟濃度在第1天及第29天接近劑量成比例地增加且在第58天超過劑量成比例地增加。在所評估之所有時間點，肝臟中之DCR-A1203濃度均高於腎臟中。如ARC 24 h值所指示，在第29天未觀察到肝臟及腎臟中之DCR-A1203聚集。如與第29天濃度相比，肝臟及腎臟DCR A1203濃度在第58天減少超過96%。 表 3. DCR-A1203 在雄性及雌性小鼠 ( 性別合併 ) 中之平均組織及血漿結果，以及組織 : 血漿比率
劑量 天 肝臟 腎臟 血漿 肝臟 / 血漿 腎臟 / 血漿 肝臟 / 腎臟
(mg/kg) (ng/g) (ng/g) (ng/mL) 比率 比率 比率
30 1 98000 22900 18.4 8100 1900 4.3
100 169000 72200 36.3 4900 2100 2.4
300 264000 186000 94.1 3000 2100 1.6
30 29 88500 17300 29.1 4500 1000 5.6
100 215000 77800 41.4 5500 2100 3.3
300    360000 224000 146 3600 2000 2.0
30 58 3400 165 NA NA NA 15
100    5240 1200 NA NA NA 6.3
300    14900 3600 NA NA NA 6.0
  NA = 不適用，因為在第58天無可用於DCR-A1203濃度分析之血漿樣品。
肝臟係用於DCR-A1203遞送及活性之主要標靶器官。藉由相對於對照投與30、100及300 mg/kg之第31天研究組中 Aldh2mRNA降低＞ 97%證明了肝臟中之DCR-A1203活性的證據。在任何劑量水準下，肝臟中之 Aldh2mRNA表現均未恢復( 表 3)。在腎臟中未偵測到DCR-A1203活性且僅在第58天組中偵測到食道及骨髓中之活性。僅在第58天收集之樣品中觀察到食道及骨髓中之 Aldh2mRNA降低。在第58天，食道(11.7-42.0%)及骨髓(42.8-55.1%)中之 Aldh2mRNA存在最小但統計學上顯著之降低，其中在第31天出現下降趨勢。由於此等組織中之ASGPR表現缺乏、 Aldh2mRNA相對於肝臟降低之最小性質以及此等變化之遲發性，尚不清楚降低機制。在雄性與雌性小鼠之間， Aldh2mRNA表現或DCR-A1203活性無明顯差異。
總之，已耐受經由皮下注射至Crl:CD1(ICR)小鼠以30、100及300 mg/kg之劑量水準每4週投與DCR-A1203一次(共計2劑；第1天及第29天)，無死亡率或不利發現。末期安樂死時之非不利發現局限於顯微鏡發現：在注射位點處之最少至輕度有液泡/顆粒狀巨噬細胞，在腎臟中之最少有液泡/顆粒狀上皮細胞，在肝臟中之最少有液泡/顆粒狀肝細胞，以及在腋下、下顎及腸系膜淋巴結中之最少有液泡/顆粒狀巨噬細胞，但在恢復安樂死時，僅在注射位點及淋巴結處之發現仍存在。基於此等結果，未觀察到不良效應之水準(NOAEL)為300 mg/kg。此劑量對應於第29天合併性別之391,000 h*ng/mL之平均AUC 最後值及134,000 ng/mL之平均C max值。 實例 4 ：藉由皮下注射於猴中進行之 DP11663P:DP16281G ( DCR-A1203) 5 週研究 概述
此研究之目的係當每28天經皮下向食蟹獼猴投與一次持續總計2劑時測定DCR-A1203之潛在毒性，且評估經過4週恢復期任何發現之潛在可逆性。另外，亦測定DCR-A1203之毒物動力學特徵。
研究設計如下： 表 4. 實驗設計
組編號 測試材料 劑量水準 (mg/kg/ 劑 ) 劑量體積 (mL/kg) a 劑量濃度 (mg/mL) b 動物數目 c
主要研究 恢復研究
雄性 雌性 雄性 雌性
1 對照 0 1.5 0 4 4 2 2
2 DCR-A1203 30 0.15 200 4 4 - -
3 DCR-A1203 100 0.5 200 4 4 2 2
4 DCR-A1203 300 1.5 200 4 4 2 2
- = 不適用。 a基於最近之體重量測值。 b該濃度係基於完整siRNA雙鏈體含量。 c在第31天對主要研究動物實施安樂死。在第57天對恢復動物實施安樂死。
此研究評估以下參數及終點：死亡率、臨床觀察結果、體重、食物消耗、眼科學、心電學檢查、臨床病理學參數(血液學、凝血、臨床化學及尿液分析)、生物分析及毒物動力學參數、組織藥效學分析(標靶mRNA表現)、補體(C3a及Bb)、細胞因子及趨化因子、器官重量以及宏觀及顯微鏡檢查。
在該研究期間，DCR-A1203之重複劑量投與不會產生臨床觀察結果、體重、定性食物消耗、眼科學參數、心電學參數、凝血參數、補體因子C3a及Bb或者宏觀尸體剖檢觀察結果之變化。
在≥ 100 mg/kg/劑下觀察到DCR-A1203相關之血液學及臨床化學參數變化且該等變化包括最少至適度增加之嗜中性球(1.98倍至7.55倍基線[範圍第2天及第30天])、略微減少之嗜酸性球(在第30天0.15倍至0.28倍基線，除了在100 mg/kg/劑下的雄性)及增加之鹼性磷酸酶(1.38倍至1.75倍[範圍第2天及第30天])。另外，在300 mg/kg/劑下在單一雌性動物中存在DCR-A1203相關之略微增加之丙胺酸轉胺酶，這與最小單細胞肝細胞壞死之顯微鏡發現有關。藉由恢復，DCR-A1203相關組之臨床病理學參數變化接近對照值，指示可逆性。臨床病理學變化未被視為不利的。
在第1天及第29天給藥後8及/或24小時，相對於對照組平均值，兩種性別在≥ 30 mg/kg/劑下均具有增加的平均介白素(IL)-6濃度，這已由第29天之給藥前時間點充分解決。此等增加之量級在30與100 mg/kg/劑之間一般可相當，但在300 mg/kg/劑下更顯著。IL-6增加在第1天及第29天給藥後8小時被視為最少至輕度(介於1.7倍至7.6倍範圍內)且在第1天及第29天給藥後24小時被視為最少至適度(介於2.0倍至47.5倍範圍內)。其在雄性中在所有劑量水準下在第1天及第29天給藥後8小時且在雄性中在300 mg/kg/劑下(每次給藥後8及24小時)典型地更顯著，但在雌性中在30及100 mg/kg/劑下在第1天及第29天給藥後24小時更顯著。增加之IL-6指示促發炎反應且在第2天及第30天在≥ 100 mg/kg/劑下導致最少增加之鹼性磷酸酶活性的發生率增加。IL-6增加未被視為不利的。
在末期安樂死時，在投與300 mg/kg/劑之雄性中觀察到DCR-A1203相關之較高平均絕對及/或相對(於腦)肝臟重量；在顯微鏡下觀察到相關之肝細胞肥大。在恢復安樂死時，未觀察到DCR-A1203相關之器官重量差異，證明恢復。
在末期安樂死時，在肝臟、淋巴結(引流、下顎及腸系膜)及皮下投與位點中觀察到DCR-A1203相關之顯微鏡發現。在肝臟中，顯微鏡發現包括投與≥ 100 mg/kg/劑之動物中的有液泡/顆粒狀柯弗氏細胞，投與300 mg/kg/劑之雄性中的肝細胞肥大(最少)，及投與300 mg/kg/劑之雌性中的單細胞壞死(最少)。在淋巴結中及/或在皮下投與位點處，在投與≥ 30 mg/kg/劑之動物中觀察到有液泡/顆粒狀巨噬細胞(最少至輕度)。此等發現與使用文獻中報道之相似siRNA平台的其他治療劑的觀察結果一致。
在恢復安樂死時，再次在肝臟、淋巴結及皮下投與位點中觀察到DCR-A1203相關之顯微鏡發現。在肝臟中，顯微鏡發現包括在投與≥ 100 mg/kg/劑之動物中及在淋巴結中及/或在皮下投與位點處之有液泡/顆粒狀柯弗氏細胞(最少)，在投與≥ 100 mg/kg/劑之動物中觀察到有液泡/顆粒狀巨噬細胞(最少至輕度)。在恢復安樂死時觀察到的發現之較低發生率及/或嚴重性(如與末期安樂死相比)證明正在進行，但不完全恢復。
在第1天及第29天給藥後1至12小時之範圍內觀察到峰值血漿DCR-A1203濃度。在第1天及在第29天，在Cmax之後，雄性及雌性中之DCR-A1203濃度一般在48小時(收集之最後時間點)內減少。在恢復動物中，在100及300 mg/kg/劑下，血漿DCR-A1203濃度在第57天可定量。
就給藥後零時至48小時之濃度時間曲線下面積(AUC)及血漿中之DCR-A1203最大量測濃度而言，DCR-A1203暴露隨劑量水準增加。與劑量水準之10倍增加相比，給藥後零時至48小時之AUC在第1天增加大約18倍且在第29天增加大約15倍，顯示在兩個評估日均超過劑量成比例增加。血漿中之DCR-A1203最大量測濃度在第1天增加大約9倍且在第29天增加大約7倍，顯示在兩個評估日均接近劑量成比例增加。總之，血漿暴露在第1天及第29天大致相當，無聚集跡象。在給藥後0至48小時測定平均半衰期且其在第1天介於3.76至4.12小時範圍內且在第29天介於4.01至5.21小時範圍內。應謹慎解釋計算之半衰期，因為其係在給藥後0至48小時測定的，且血漿中之DCR-A1203濃度在給藥後長達28天(第57天)可量化。就AUC(0-48 h)及Cmax而言，在兩個評估日，DCR-A1203暴露在雄性與雌性猴之間係相似的(≤ 1.6倍)；因此，提供合併雄性及雌性之數據。 表 5. 血漿中之 DCR-A1203 的毒物動力學概述 – 合併性別
劑量 (mg/kg) 天 AUC (0-48 h) (ng*h/mL) AUC(0-48 h)/D Cmax (ng/mL) Cmax/D tmax (h) t 最後 (h) T1/2 a(h) ARAUC ( 比率 ) ARCmax ( 比率 )
30 78600 2620 7640 255 1.5 (1-4) 48 4.10† 7 NA NA
100 1 454000 4540 29800 298 4 (1-12) 48 3.76 NA NA
300    1380000 4610 65400 218 8 (2-12) 48 4.12 NA NA
30    101000 3370 9260 309 1.5 (1-4) 48 4.86† 7 1.3 1.3
100 29 383000 3830 23300 233 4 (1-12) 48 4.01 0.87 0.85
300    1480000 4940 61200 204 8 (4-12) 48 5.21 1.1 0.96
N = 8 (30 mg/kg，合併性別)或N = 12 (100及300 mg/kg，合併性別)，除非另外注釋為† n，其中 n= 數字。對於tmax，呈遞中值(min – max)；對於所有劑量組，針對t最後之範圍為(48 h – 48 h)。NA = 不適用。使用AUC(0-48 h)計算ARAUC；D = 劑量。 a應謹慎解釋計算之半衰期，因為其係在給藥後0至48小時測定的，且血漿中之DCR-A1203濃度在給藥後長達28天(第57天)可量化。
在第31天(相對於第29天，給藥後48小時)，在所有劑量水準下，肝臟及腎臟中之DCR-A1203濃度均可量化；肝臟濃度小於劑量成比例地增加，且腎臟濃度接近劑量成比例地增加。在第57天，在兩種劑量水準(100及300 mg/kg)下，肝臟及腎臟中之DCR-A1203濃度均可量化；在100至300 mg/kg劑量水準下，肝臟濃度接近劑量成比例地增加(2倍)，且在100與300 mg/kg之間，雌性中之腎臟濃度接近劑量成比例地增加(2倍)，但在100與300 mg/kg之間，雄性中之濃度減少。肝臟中之DCR-A1203濃度高於腎臟中。對於100及300 mg/kg組，在恢復尸體剖檢(第57天)時，肝臟濃度分別為末期尸體剖檢水準(第31天)之84%及98%且腎臟濃度分別為65%及8%。因此，與第31天相比，肝臟:腎臟比率在第57天一般較高。就平均比率而言，在末期尸體剖檢(第31天)時，肝臟中之DCR-A1203濃度比腎臟中高8倍至38倍且在恢復尸體剖檢(第57天)時，肝臟中之DCR-A1203濃度比腎臟中高79倍至94倍( 表 6)。 表 6. 雄性及雌性猴中 DCR-A1203 之組織 : 血漿比率 – 合併性別 a
劑量 (mg/kg) 天 肝臟 (ng/g) 腎臟 (ng/g) 血漿 (ng/mL) 肝臟 / 血漿 比率 腎臟 / 血漿 比率 肝臟 / 腎臟 比率
30 621000 41800 15.8 52000 3600 16
100 31 1510000 114000 80.9 23000 1800 38
300 2670000 357000 2360 5000 780 7.7
100 57 1270000 74400† 24.7 60000 2300 79
300        2600000 28600 51.8 53000 590 94
a相對於安樂死之前第29天或第57天，給藥後48小時之血漿平均濃度。† 注意 – 雌性腎臟濃度比雄性腎臟濃度低大約14倍。
藉由相對於對照投與30、100及300 mg/kg DCR-A1203之主要研究組中 ALDH2mRNA降低＞ 85%證明了肝臟中之DCR-A1203活性的證據。在雄性與雌性之間， ALDH2mRNA表現無明顯差異。在100或300 mg/kg/劑恢復組中，未恢復肝臟中之 ALDH2降低(未在30 mg/kg/劑下評估恢復)。在主要或恢復研究組中，未在任何測試之肝外組織(腎臟、食道及骨髓)中偵測到DCR-A1203活性。
總之，已充分耐受藉由皮下注射至食蟹獼猴以30、100及300 mg/kg/劑之水準每28天投與DCR-A1203一次持續總計2劑。DCR-A1203相關之非不良變化出現於數種臨床病理學參數中(≥ 100 mg/kg/劑)以及肝臟(≥ 100 mg/kg/劑)及淋巴結及劑量投與位點(≥ 30 mg/kg/劑)之顯微病理學中。臨床病理學中之所有DCR-A1203相關變化均係可逆的，且顯微變化趨向於恢復。在此研究之條件下，未觀察到不良效應之水準(NOAEL)經測定為300 mg/kg/劑，其中相關AUC(0-48 h)為1,480,000 ng*h/mL且Cmax為61,200 ng/mL (合併雄性及雌性，第29天)。 實例 5 ：在皮下注射投與至有意識、配備無線電遙測儀器之食蟹獼猴之後 DP11663P:DP16281G ( DCR-A1203) 之心血管、呼吸及中樞神經系統評估
此研究之目的係評估皮下注射DCR-A1203對呼吸參數、動脈血壓、心率、體溫及導聯II心電圖(ECG)之潛在急性影響以及對有意識的配備無線電遙測儀器之雄性食蟹獼猴之總體行為、生理學及神經狀態之影響。
在遞增劑量設計中，動物接受0 (媒劑；0.9%生理食鹽水)、30、100或300 mg/kg之單一皮下劑量。研究設計如下： 表 7. 實驗設計
測試材料 劑量水準 (mg/kg) 劑量濃度 (mg/mL) a 劑量體積 (mL/kg) b 雄性數目 c
1 (媒劑對照：0.9%注射用氯化鈉) 0 0 1.6 4
2 (DCR-A1203) 30 18.75 1.6 4
3 (DCR-A1203) 100 62.5 1.6 4
4 (DCR-A1203) 300 187.5 1.6 4
a使用校正因子1.14，針對純度及水分含量校正調配物濃度。 b基於最近之體重量測值。 c每個給藥場合使用相同的4隻動物，其中各劑之間為7天。自媒劑(0 mg/kg)治療開始，以遞增劑量設計對動物給藥。
此研究評估以下參數及終點：臨床病征、定性食物消耗、心率、動脈血壓(收縮壓、舒張壓及平均動脈壓)、脈搏壓、體溫及ECG波形(由此產生ECG間期PR、QRS、QT以及心率校正之QT [QTcB及QTcL])、呼吸參數(呼吸率、潮氣量及分容量)、神經檢查及生物分析。
以遞增劑量設計以30、100及300 mg/kg之劑量水準將DCR-A1203單一皮下投與至雄性食蟹獼猴，未引起DCR-A1203相關之心血管、呼吸或神經效應。
因此，未觀察到效應之水準(NOEL)為300 mg/kg。 結論
以遞增劑量設計以30、100及300 mg/kg之劑量水準將DCR-A1203單一皮下投與至雄性食蟹獼猴，未引起DCR-A1203相關之心血管、呼吸或神經效應。因此，未觀察到效應之水準(NOEL)為300 mg/kg。
可適當地在本文中未特定揭示之任何一或多種要素、一或多種限制不存在下實踐本文中說明性描述之本發明。因此，舉例而言，在本文中之各情況下，術語「包含」、「基本上由......組成」及「由......組成」中之任一者均可由另兩個術語中之任一者替換。已使用之術語及表述係用作描述術語而非限制，且在使用此類術語及表述時不欲排除所顯示及所描述之特徵或其部分的任何相等物，但應認識到多種修改可能在所主張之發明範圍內。因此，應理解儘管已由較佳實施例特定地揭示本發明，熟習此項技術者可採取本文中揭示之概念的視情況選用之特徵、修改及變化，且此類修改及變化被視為在由本說明書及隨附申請專利範圍定義之本發明範圍內。
另外，在本發明之特徵或態樣係根據馬庫什組或其他替代分組描述之情況下，熟習此項技術者應認識到，本發明亦由此根據馬庫什組或其他組之任何個別成員或成員子組來描述。
應理解，在一些實施例中，在描述寡核苷酸或其他核酸之結構時可參考序列表中呈遞之序列。在此類實施例中，與規定序列相比，實際寡核苷酸或其他核酸可具有一或多種替代核苷酸(例如，DNA核苷酸之RNA配對物或RNA核苷酸之DNA配對物)及/或一或多種經修飾之核苷酸及/或一或多種經修飾之核苷酸間鍵及/或一或多種其他修飾，同時保留與該規定序列基本上相同或相似之互補特性。
除非本文另外指示或清楚地與上下文相抵觸，否則術語「一(a)」及「一(an)」及「該(the)」以及相似指示物在描述本發明之上下文中(尤其在以下申請專利範圍之上下文中)的使用應被解釋為涵蓋單數及複數。除非另有說明，否則術語「包含」、「具有」、「包括」及「含有」應被解釋為開放式術語(亦即，意謂「包括但不限於」)。除非本文另外指示，否則本文中對值範圍之陳述僅意欲充當個別地提及落入該範圍內之各單獨值的速記方法，且各單獨值係倂入本說明書中，就如同本文中個別地陳述該值一般。除非本文另外指示或另外清楚地與上下文相抵觸，否則可以任何合適次序執行本文所描述之所有方法。本文所提供之所有實例或例示性語言(例如，「諸如」)之使用僅意欲較佳地說明本發明，且除非另外聲明，否則不會對本發明範圍構成限制。不應將本說明書中之語言解釋為指示任何未主張之要素係實踐本發明所必需的。
本文中描述本發明之實施例。在閱讀前述描述時，彼等實施例之變化對於一般技術者可變得顯而易見。
本發明人期望熟練技術人員適當地使用此類變化，且本發明人意欲不同於本文中特定描述來實踐本發明。因此，本發明包括適用法律允許之隨附申請專利範圍中所陳述的主題之所有修改及相等物。此外，除非本文另外指示或另外清楚地與上下文相抵觸，否則本發明涵蓋上述要素之所有可能變化的任何組合。熟習此項技術者將認識到或能夠僅適用常規實驗來確定本文所描述之本發明的特定實施例之多種相等物。此類相等物意欲由以下申請專利範圍涵蓋。 參考文獻Hurley, T.D., Edenberg, H.J., Li, T.-K., “ The pharmacogenomics of alcoholism,” In: Pharmacogenomics: The Search for Individualized Therapies, Weinheim, Germany: Wiley-VCH, pp. 417–41 (2002). Guillot, A., Ren, T., Jourdan, T., Pawlosky, R.J., Han, E., Kim, S-J, Zhang, L., Koob, G.G., and Gao, B., “ Targeting liver aldehyde dehydrogenase-2 prevents heavy but not moderate alcohol drinking,”Proc Natl Acad Sci USA., 2019, 116(51):25974-981. Nutt, D.J., “ The role of the opioid system in alcohol dependence,” J Psychopharmacology, 2014, 28:8–22. Plosker, G.L., “ Acamprosate: A review of its use in alcohol dependence,” Drugs, 2015, 75:1255–68. Suh, J.J., Pettinati, H.M., Kampman, K.M., O’Brien, C.P., “ The status of disulfiram: A half of a century later,” J Clin Psychopharmacol., 2006, 26, 290–302. Jørgensen, C.H., Pedersen, B., Tønnesen, H., “ The efficacy of disulfiram for the treatment of alcohol use disorder,” Alcohol Clin Exp Res., 2011, 35, 1749–58. Blanc, M., Daeppen, J.B., “ Does disulfiram still have a role in alcoholism treatment?”Rev. Med. Suisse, 2005, 1, 1728–1730, 1732–1733. Malcolm, R., Olive, M.F., Lechner, W., “ The safety of disulfiram for the treatment of alcohol and cocaine dependence in randomized clinical trials: Guidance for clinical practice,” Expert Opin. Drug Saf., 2008, 7:459–72. Chen, C.H., Ferreira, J.C., Gross, E.R., Mochly-Rosen, D. “ Targeting aldehyde dehydrogenase 2: New therapeutic opportunities,” Physiol. Rev., 2014, 94:1–34. Edenberg, H.J., McClintick, J.N., “ Alcohol dehydrogenases, aldehyde dehydrogenases, and alcohol use disorders: A critical review,” Alcohol. Clin. Exp. Res., 2018, 42:2281–97.
附圖倂入本說明書中且構成其一部分，說明了某些實施例，且與書面描述一起用於提供本文所揭示之組合物及方法之某些態樣的非限制性實例。 圖1係顯示2’-OMe取代對GalNAc結合之ALDH2寡核苷酸之活體內活性評估的影響之圖形。寡核苷酸以0.5 mg/kg經皮下投與至小鼠。數據顯示在投與之後第4天保留之ALDH2 mRNA的量，針對PBS對照標準化。 圖2係顯示具有不同修飾模式之GalNAc結合之ALDH2寡核苷酸在非人類靈長類動物(NHP)中的持續時間研究之結果之圖形。單一劑量(3 mg/kg)之寡核苷酸經皮下投與至非人類靈長類動物。數據顯示相對於投與之前ALDH2 mRNA之量，在投與之後4週、8週、12週及16週保留之ALDH2 mRNA的量。 圖3係描繪所揭示之寡核苷酸之結構及化學修飾模式的示意圖。 
<![CDATA[<110>  美商戴瑟納製藥股份有限公司(Dicerna Pharmaceuticals, Inc.)]]>
          <![CDATA[<120>  用於抑制ALDH2表現之化學修飾]]>
          <![CDATA[<130>  400930-027USP1 (177211)]]>
          <![CDATA[<150>  US 63/113,689]]>
          <![CDATA[<151>  2020-11-13]]>
          <![CDATA[<160>  9     ]]>
          <![CDATA[<170>  PatentIn 3.5版]]>
          <![CDATA[<210>  1]]>
          <![CDATA[<211>  22]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成序列]]>
          <![CDATA[<400>  1]]>
          uaaacugagu uucauccacc gg                                                22
          <![CDATA[<210>  2]]>
          <![CDATA[<211>  36]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成序列]]>
          <![CDATA[<400>  2]]>
          gguggaugaa acucaguuua gcagccgaaa ggcugc                                 36
          <![CDATA[<210>  3]]>
          <![CDATA[<211>  36]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(1)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基鳥苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(2)]]>
          <![CDATA[<223>  藉由硫代磷酸酯核苷酸間鍵修飾]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (2)..(2)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基鳥苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (3)..(3)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基尿苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (4)..(4)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基鳥苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (5)..(5)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基鳥苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (6)..(6)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基腺苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (7)..(7)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基尿苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (8)..(8)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-鳥苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (9)..(9)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-腺苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (10)..(10)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-腺苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (11)..(11)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-腺苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (12)..(12)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基胞苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (13)..(13)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基尿苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (14)..(14)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基胞苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (15)..(15)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基腺苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (16)..(16)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基鳥苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (17)..(17)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基尿苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (18)..(18)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基尿苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (19)..(19)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基尿苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (20)..(20)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基腺苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (21)..(21)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基鳥苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (22)..(22)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基胞苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (23)..(23)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基腺苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (24)..(24)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基鳥苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (25)..(25)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基胞苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (26)..(26)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基胞苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (27)..(27)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基鳥苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (28)..(28)]]>
          <![CDATA[<223>  ademA-GalNAc]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (29)..(29)]]>
          <![CDATA[<223>  ademA-GalNAc]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (30)..(30)]]>
          <![CDATA[<223>  ademA-GalNAc]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (31)..(31)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基鳥苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (32)..(32)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基鳥苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (33)..(33)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基胞苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (34)..(34)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基尿苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (35)..(35)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基鳥苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (36)..(36)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基胞苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  3]]>
          gguggaugaa acucaguuua gcagccgaaa ggcugc                                 36
          <![CDATA[<210>  4]]>
          <![CDATA[<211>  22]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(1)]]>
          <![CDATA[<223>  5'-甲氧基, 膦酸酯-4'-氧基-2'-O-甲基尿苷]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(4)]]>
          <![CDATA[<223>  藉由硫代磷酸酯核苷酸間鍵修飾]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (2)..(2)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-腺苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (3)..(3)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-腺苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (4)..(4)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-腺苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (5)..(5)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基胞苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (6)..(6)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基尿苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (7)..(7)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-鳥苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (8)..(8)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基腺苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (9)..(9)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基鳥苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (10)..(10)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基尿苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (11)..(11)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基尿苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (12)..(12)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基尿苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (13)..(13)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基胞苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (14)..(14)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-腺苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (15)..(15)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基尿苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (16)..(16)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基胞苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (17)..(17)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基胞苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (18)..(18)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基腺苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (19)..(19)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基胞苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (20)..(20)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基胞苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (20)..(22)]]>
          <![CDATA[<223>  藉由硫代磷酸酯核苷酸間鍵修飾]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (21)..(21)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基鳥苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (22)..(22)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基鳥苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  4]]>
          uaaacugagu uucauccacc gg                                                22
          <![CDATA[<210>  5]]>
          <![CDATA[<211>  22]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(1)]]>
          <![CDATA[<223>  5'-甲氧基, 膦酸酯-4'-氧基-2'-O-甲基尿苷]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(4)]]>
          <![CDATA[<223>  藉由硫代磷酸酯核苷酸間鍵修飾]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (2)..(2)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-腺苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (3)..(3)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-腺苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (4)..(4)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-腺苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (5)..(5)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基胞苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (6)..(6)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基尿苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (7)..(7)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-鳥苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (8)..(8)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基腺苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (9)..(9)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基鳥苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (10)..(10)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-尿苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (11)..(11)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-尿苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (12)..(12)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-尿苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (13)..(13)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基胞苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (14)..(14)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-腺苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (15)..(15)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基尿苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (16)..(16)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基胞苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (17)..(17)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基胞苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (18)..(18)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基腺苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (19)..(19)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基胞苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (20)..(20)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基胞苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (20)..(22)]]>
          <![CDATA[<223>  藉由硫代磷酸酯核苷酸間鍵修飾]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (21)..(21)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基鳥苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (22)..(22)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基鳥苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  5]]>
          uaaacugagu uucauccacc gg                                                22
          <![CDATA[<210>  6]]>
          <![CDATA[<211>  22]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(1)]]>
          <![CDATA[<223>  5'-甲氧基, 膦酸酯-4'-氧基-2'-O-甲基尿苷]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(4)]]>
          <![CDATA[<223>  藉由硫代磷酸酯核苷酸間鍵修飾]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (2)..(2)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-腺苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (3)..(3)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-腺苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (4)..(4)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-腺苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (5)..(5)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-胞苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (6)..(6)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基尿苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (7)..(7)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-鳥苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (8)..(8)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基腺苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (9)..(9)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基鳥苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (10)..(10)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基尿苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (11)..(11)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基尿苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (12)..(12)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基尿苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (13)..(13)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基胞苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (14)..(14)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-腺苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (15)..(15)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基尿苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (16)..(16)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基胞苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (17)..(17)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基胞苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (18)..(18)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基腺苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (19)..(19)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基胞苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (20)..(20)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基胞苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (20)..(22)]]>
          <![CDATA[<223>  藉由硫代磷酸酯核苷酸間鍵修飾]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (21)..(21)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基鳥苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (22)..(22)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基鳥苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  6]]>
          uaaacugagu uucauccacc gg                                                22
          <![CDATA[<210>  7]]>
          <![CDATA[<211>  22]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(1)]]>
          <![CDATA[<223>  5'-甲氧基, 膦酸酯-4'-氧基-2'-O-甲基尿苷]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(4)]]>
          <![CDATA[<223>  藉由硫代磷酸酯核苷酸間鍵修飾]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (2)..(2)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-腺苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (3)..(3)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-腺苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (4)..(4)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-腺苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (5)..(5)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-胞苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (6)..(6)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基尿苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (7)..(7)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-鳥苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (8)..(8)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基腺苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (9)..(9)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基鳥苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (10)..(10)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-尿苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (11)..(11)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基尿苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (12)..(12)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基尿苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (13)..(13)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基胞苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (14)..(14)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-腺苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (15)..(15)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基尿苷核糖核苷]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (16)..(16)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基胞苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (17)..(17)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基胞苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (18)..(18)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基腺苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (19)..(19)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基胞苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (20)..(20)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基胞苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (20)..(22)]]>
          <![CDATA[<223>  藉由硫代磷酸酯核苷酸間鍵修飾]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (21)..(21)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基鳥苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (22)..(22)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基鳥苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  7]]>
          uaaacugagu uucauccacc gg                                                22
          <![CDATA[<210>  8]]>
          <![CDATA[<211>  36]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(1)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基鳥苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(2)]]>
          <![CDATA[<223>  藉由硫代磷酸酯核苷酸間鍵修飾]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (2)..(2)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基鳥苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (3)..(3)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-尿苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (4)..(4)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基鳥苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (5)..(5)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-鳥苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (6)..(6)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基腺苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (7)..(7)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基尿苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (8)..(8)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-鳥苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (9)..(9)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基腺苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (10)..(10)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-腺苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (11)..(11)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基腺苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (12)..(12)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-鳥苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (13)..(13)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基尿苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (14)..(14)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基胞苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (15)..(15)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-腺苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (16)..(16)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基鳥苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (17)..(17)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-尿苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (18)..(18)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基尿苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (19)..(19)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基尿苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (20)..(20)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基腺苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (21)..(21)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基鳥苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (22)..(22)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基胞苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (23)..(23)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基腺苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (24)..(24)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基鳥苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (25)..(25)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基胞苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (26)..(26)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基胞苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (27)..(27)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基鳥苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (28)..(28)]]>
          <![CDATA[<223>  ademA-GalNAc]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (29)..(29)]]>
          <![CDATA[<223>  ademA-GalNAc]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (30)..(30)]]>
          <![CDATA[<223>  ademA-GalNAc]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (31)..(31)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基鳥苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (32)..(32)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基鳥苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (33)..(33)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基胞苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (34)..(34)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基尿苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (35)..(35)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基鳥苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (36)..(36)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基胞苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  8]]>
          gguggaugaa acucaguuua gcagccgaaa ggcugc                                 36
          <![CDATA[<210>  9]]>
          <![CDATA[<211>  22]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(1)]]>
          <![CDATA[<223>  5'-甲氧基, 膦酸酯-4'-氧基-2'-O-甲基尿苷]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(3)]]>
          <![CDATA[<223>  藉由硫代磷酸酯核苷酸間鍵修飾]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (2)..(2)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-腺苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (3)..(3)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-腺苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (4)..(4)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-腺苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (5)..(5)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-胞苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (6)..(6)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基尿苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (7)..(7)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-鳥苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (8)..(8)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基腺苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (9)..(9)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基鳥苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (10)..(10)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-尿苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (11)..(11)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基尿苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (12)..(12)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基尿苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (13)..(13)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基胞苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (14)..(14)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-腺苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (15)..(15)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基尿苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (16)..(16)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-胞苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (17)..(17)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基胞苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (18)..(18)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基腺苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (19)..(19)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-胞苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (20)..(20)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-氟-胞苷去氧核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (20)..(22)]]>
          <![CDATA[<223>  藉由硫代磷酸酯核苷酸間鍵修飾]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (21)..(21)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基鳥苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  經修飾之_鹼基]]>
          <![CDATA[<222>  (22)..(22)]]>
          <![CDATA[<223>  2'-O-甲基鳥苷核糖核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  9]]>
          uaaacugagu uucauccacc gg                                                22
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
Figure 12_A0101_SEQ_0004
Figure 12_A0101_SEQ_0005
Figure 12_A0101_SEQ_0006
Figure 12_A0101_SEQ_0007
Figure 12_A0101_SEQ_0008
Figure 12_A0101_SEQ_0009
Figure 12_A0101_SEQ_0010
Figure 12_A0101_SEQ_0011
Figure 12_A0101_SEQ_0012
Figure 12_A0101_SEQ_0013
Figure 12_A0101_SEQ_0014
Figure 12_A0101_SEQ_0015
Figure 12_A0101_SEQ_0016
Figure 12_A0101_SEQ_0017
Figure 12_A0101_SEQ_0018
Figure 12_A0101_SEQ_0019
Figure 12_A0101_SEQ_0020
Figure 12_A0101_SEQ_0021
Figure 12_A0101_SEQ_0022
Figure 12_A0101_SEQ_0023

Claims (22)

  1. 一種用於降低ALDH2表現之寡核苷酸，該寡核苷酸包含具有自5’至3’陳述為UAAACUGAGUUUCAUCCACCGG (SEQ ID NO: 1)之序列的反義鏈及具有自5’至3’陳述為GGUGGAUGAAACUCAGUUUAGCAGCCGAAAGGCUGC (SEQ ID NO: 2)之序列的有義鏈；或其醫藥學上可接受之鹽。
  2. 如請求項1之寡核苷酸，其中所有核苷酸均經修飾。
  3. 如請求項2之寡核苷酸，其中該核苷酸包含2′-氟或2′-O-甲基修飾。
  4. 如請求項3之寡核苷酸，其中以下位置係經2′-O-甲基修飾：該有義鏈之位置1-7及12-36及/或該反義鏈之位置1、6、8-13及15-22。
  5. 如請求項3之寡核苷酸，其中以下位置係經2′-氟修飾：該有義鏈之位置8-11及/或該反義鏈之位置2-5、7及14。
  6. 如請求項2之寡核苷酸，其中該寡核苷酸包含至少一個經修飾之核苷酸間鍵。
  7. 如請求項6之寡核苷酸，其中至少一個經修飾之核苷酸間鍵為硫代磷酸酯鍵。
  8. 如請求項6之寡核苷酸，其中該寡核苷酸在以下一或多者之間具有硫代磷酸酯鍵：該有義鏈之位置1及2、該反義鏈之位置1及2、該反義鏈之位置2及3、該反義鏈之位置3及4、該反義鏈之位置20及21以及該反義鏈之位置21及22。
  9. 一種雙鏈寡核苷酸，其包含有義鏈： 5’mG‒S‒mG‒mU‒mG‒mG‒mA‒mU‒fG‒fA‒fA‒fA‒mC‒mU‒mC‒mA‒mG‒mU‒mU‒mU‒mA‒mG‒mC‒mA‒mG‒mC‒mC‒mG‒[ademA-GalNAc]‒[ademA-GalNAc]‒[ademA-GalNAc]‒mG‒mG‒mC‒mU‒mG‒mC 3’ (SEQ ID NO: 3)，及 反義鏈： 5’ [MePhosphonate-4 O-mU]‒S‒fA‒S‒fA‒S‒fA‒fC‒mU‒fG‒mA‒mG‒mU‒mU‒mU‒mC‒fA‒mU‒mC‒mC‒mA‒mC‒mC‒S‒mG‒S‒mG 3’ (SEQ ID NO: 6)；或其醫藥學上可接受之鹽， 其中： 核苷之間的「―」表示磷酸二酯核苷間鍵； 核苷之間的「‒S‒」表示硫代磷酸酯核苷間鍵； mA表示2’-O-甲基腺苷核糖核苷； mG表示2’-O-甲基鳥苷核糖核苷； mC表示2’-O-甲基胞苷核糖核苷； mU表示2’-O-甲基尿苷核糖核苷； fA表示2’-氟-腺苷去氧核糖核苷； fG表示2’-氟-鳥苷去氧核糖核苷； fC表示2’-氟-胞苷去氧核糖核苷； fU表示2’-氟-尿苷去氧核糖核苷； [ademA-GalNAc]表示
    Figure 03_image003
    ；且 [MePhosphonate-4 O-mU]表示
    Figure 03_image007
    。
  10. 一種雙鏈寡核苷酸之鈉鹽，該雙鏈寡核苷酸包含有義鏈： 5’ mG‒S‒mG‒mU‒mG‒mG‒mA‒mU‒fG‒fA‒fA‒fA‒mC‒mU‒mC‒mA‒mG‒mU‒mU‒mU‒mA‒mG‒mC‒mA‒mG‒mC‒mC‒mG‒[ademA-GalNAc]‒[ademA-GalNAc]‒[ademA-GalNAc]‒mG‒mG‒mC‒mU‒mG‒mC 3’ (SEQ ID NO: 3)，及 反義鏈： 5’ [MePhosphonate-4 O-mU]‒S‒fA‒S‒fA‒S‒fA‒fC‒mU‒fG‒mA‒mG‒mU‒mU‒mU‒mC‒fA‒mU‒mC‒mC‒mA‒mC‒mC‒S‒mG‒S‒mG 3’ (SEQ ID NO: 6)， 其中： 核苷之間的「―」表示磷酸二酯核苷間鍵； 核苷之間的「‒S‒」表示硫代磷酸酯核苷間鍵； mA表示2’-O-甲基腺苷核糖核苷； mG表示2’-O-甲基鳥苷核糖核苷； mC表示2’-O-甲基胞苷核糖核苷； mU表示2’-O-甲基尿苷核糖核苷； fA表示2’-氟-腺苷去氧核糖核苷； fG表示2’-氟-鳥苷去氧核糖核苷； fC表示2’-氟-胞苷去氧核糖核苷； fU表示2’-氟-尿苷去氧核糖核苷； [ademA-GalNAc]表示
    Figure 03_image003
    ；且 [MePhosphonate-4 O-mU]表示
    Figure 03_image007
    。
  11. 一種包含雙鏈寡核苷酸之組合物，其中該雙鏈寡核苷酸包含有義鏈： 5’ mG‒S‒mG‒mU‒mG‒mG‒mA‒mU‒fG‒fA‒fA‒fA‒mC‒mU‒mC‒mA‒mG‒mU‒mU‒mU‒mA‒mG‒mC‒mA‒mG‒mC‒mC‒mG‒[ademA-GalNAc]‒[ademA-GalNAc]‒[ademA-GalNAc]‒mG‒mG‒mC‒mU‒mG‒mC 3’(SEQ ID NO: 3)，及 反義鏈： 5’ [MePhosphonate-4 O-mU]‒S‒fA‒S‒fA‒S‒fA‒fC‒mU‒fG‒mA‒mG‒mU‒mU‒mU‒mC‒fA‒mU‒mC‒mC‒mA‒mC‒mC‒S‒mG‒S‒mG 3’ (SEQ ID NO: 6)；或其醫藥學上可接受之鹽， 其中： 核苷之間的「―」表示磷酸二酯核苷間鍵； 核苷之間的「‒S‒」表示硫代磷酸酯核苷間鍵； mA表示2’-O-甲基腺苷核糖核苷； mG表示2’-O-甲基鳥苷核糖核苷； mC表示2’-O-甲基胞苷核糖核苷； mU表示2’-O-甲基尿苷核糖核苷； fA表示2’-氟-腺苷去氧核糖核苷； fG表示2’-氟-鳥苷去氧核糖核苷； fC表示2’-氟-胞苷去氧核糖核苷； fU表示2’-氟-尿苷去氧核糖核苷； [ademA-GalNAc]表示
    Figure 03_image003
    ；且 [MePhosphonate-4 O-mU]表示
    Figure 03_image007
    。
  12. 如請求項11之組合物，其進一步包含醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或佐劑。
  13. 如請求項11或12之組合物，其中該醫藥學上可接受之鹽係該寡核苷酸之鈉鹽。
  14. 一種將寡核苷酸遞送至個體之方法，該方法包括向該個體投與如請求項1至10中任一項之寡核苷酸或如請求項11至13中任一項之組合物。
  15. 一種減少個體之乙醇耐受性之方法，該方法包括向該個體投與如請求項1至10中任一項之寡核苷酸或如請求項11至13中任一項之組合物。
  16. 一種抑制個體之乙醇攝入之方法，該方法包括向該個體投與如請求項10中任一項之寡核苷酸或如請求項11至13中任一項之組合物。
  17. 一種減少個體代謝乙醇之能力之方法，該方法包括向該個體投與如請求項1至10中任一項之寡核苷酸或如請求項11至13中任一項之組合物。
  18. 如請求項17之方法，其中該個體罹患酒精中毒。
  19. 一種降低個體之ADH1B、ADH1C及ALDH2水準之方法，該方法包括向該個體投與如請求項1至10中任一項之寡核苷酸或如請求項11至13中任一項之組合物。
  20. 一種降低個體之ALDH2水準之方法，該方法包括向該個體投與如請求項1至10中任一項之寡核苷酸或如請求項11至13中任一項之組合物。
  21. 一種治療罹患酒精中毒之個體之方法，該方法包括與另一ALDH2抑制劑組合投與如請求項1至10中任一項之寡核苷酸或如請求項11至13中任一項之組合物。
  22. 如請求項21之方法，其中該另一ALDH2抑制劑為戒酒硫。
TW110142162A 2020-11-13 2021-11-12 用於抑制ａｌｄｈ２表現之化學修飾 TW202233839A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202063113689P 2020-11-13 2020-11-13
US63/113,689 2020-11-13

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW202233839A true TW202233839A (zh) 2022-09-01

Family

ID=78845131

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW110142162A TW202233839A (zh) 2020-11-13 2021-11-12 用於抑制ａｌｄｈ２表現之化學修飾

Country Status (12)

Country Link
US (1) US20230416752A1 (zh)
EP (1) EP4244356A1 (zh)
JP (1) JP2023550054A (zh)
KR (1) KR20230107630A (zh)
CN (1) CN116745420A (zh)
AR (1) AR124056A1 (zh)
AU (1) AU2021379983A1 (zh)
CA (1) CA3198526A1 (zh)
IL (1) IL302886A (zh)
MX (1) MX2023005627A (zh)
TW (1) TW202233839A (zh)
WO (1) WO2022104366A1 (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11661603B2 (en) 2018-01-16 2023-05-30 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting ALDH2 expression
GB202218090D0 (en) 2022-12-01 2023-01-18 Proqr Therapeutics Ii Bv Antisense oligonucleotides for the treatment of aldehyde dehydrogenase 2 deficiency

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8927513B2 (en) 2009-07-07 2015-01-06 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. 5′ phosphate mimics
US9725479B2 (en) 2010-04-22 2017-08-08 Ionis Pharmaceuticals, Inc. 5′-end derivatives
ES2747842T3 (es) 2014-12-15 2020-03-11 Dicerna Pharmaceuticals Inc Acidos nucleicos de doble hebra modificados por ligando
WO2019075419A1 (en) * 2017-10-13 2019-04-18 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR INHIBITING LDHA EXPRESSION
US11661603B2 (en) 2018-01-16 2023-05-30 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting ALDH2 expression
EP3947683A1 (en) * 2019-04-04 2022-02-09 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting gene expression in the central nervous system

Also Published As

Publication number Publication date
WO2022104366A1 (en) 2022-05-19
MX2023005627A (es) 2023-05-24
AU2021379983A1 (en) 2023-06-22
EP4244356A1 (en) 2023-09-20
IL302886A (en) 2023-07-01
CA3198526A1 (en) 2022-05-19
KR20230107630A (ko) 2023-07-17
JP2023550054A (ja) 2023-11-30
US20230416752A1 (en) 2023-12-28
AR124056A1 (es) 2023-02-08
CN116745420A (zh) 2023-09-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR20210148264A (ko) 중추신경계에서 유전자 발현을 억제하는 조성물 및 방법
TW201803989A (zh) 拮抗ｂ型肝炎病毒之組成物和藥劑及彼等之用途
US11484546B2 (en) Nucleic acid molecule for reduction of PAPD5 and PAPD7 mRNA for treating hepatitis B infection
TW202233839A (zh) 用於抑制ａｌｄｈ２表現之化學修飾
EP4038191A1 (en) Chemical modifications of small interfering rna with minimal fluorine content
TW202020152A (zh) 調節rtel1表現之寡核苷酸
WO2023134705A1 (zh) 抑制angptl3表达的rna干扰剂及其用途
CN117070517A (zh) 用于抑制血管紧张素原表达的siRNA、其缀合物和药物组合物及用途
US20230119360A1 (en) Pharmaceutical combination of a therapeutic oligonucleotide targeting hbv and a tlr7 agonist for treatment of hbv
US11634715B2 (en) Methods and compositions for treating bile duct paucity-associated conditions
JP2023509872A (ja) Ｈｂｖを標的とする抗ウイルス剤及び／又はｈｂｖの処置のための免疫調節剤の医薬組合せ
CN118284695A (zh) 用于治疗hbv的药物组合
JP2023554579A (ja) 核内受容体サブファミリー１グループｈメンバー３（ｎｒ１ｈ３）発現を阻害するための組成物および方法
JP2024508069A (ja) ミトコンドリアアミドキシム還元成分１（ｍａｒｃ１）発現を阻害するための組成物および方法
WO2023027759A1 (en) Compositions and methods for inhibiting αlpha-1 antitrypsin expression
WO2023083906A2 (en) Pharmaceutical combinations for treatment of hbv
EP4392556A1 (en) Compositions and methods for inhibiting ?lpha-1 antitrypsin expression