JP2023550054A - Ａｌｄｈ２の発現を阻害するための化学修飾 - Google Patents

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Abstract

本開示は、アルコール嗜癖を治療するための、ＡＬＤＨ２発現を減少させるのに有用な化学的に修飾されたオリゴヌクレオチド、組成物、及び方法に関する。ＡＬＤＨ２発現の減少のための開示されたオリゴヌクレオチドは、強化された薬理学的特性のために修飾されている。【選択図】図３

Description

本願は、化学的に修飾されたオリゴヌクレオチド、ならびにアルコール嗜癖及び関連症状の治療のためのその使用に関する。
配列表への参照
配列表は明細書と同時にＡＳＣＩＩ形式のテキストファイルとして提出され、そのファイル名はＤＲＮＡ０７４＿ＳＴ２５．ｔｘｔであり、作成日は２０２０年１１月１３日であり、サイズは１９キロバイトである。この配列表の電子形式の情報は、明細書の一部であり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
アルコール嗜癖は、アルコール乱用、アルコール使用障害、またはアルコール依存症に分類され得る。アルコール使用障害（ＡＵＤ）は、米国及び世界で非常に蔓延しており、費用がかかり、多くの場合治療されていない状態である。薬物療法は、ＡＵＤを治療し、この衰弱性疾患の臨床転帰を改善するための有望な手段を提供する。ＡＵＤを治療するための新しい薬を開発する必要性が非常に高い。本開示は、アルデヒドデヒドロゲナーゼ２（ＡＬＤＨ２）阻害によりＡＵＤを治療するための化学的に修飾されたオリゴヌクレオチドを提供する。
本発明は、少なくとも部分的に、耐久性のあるＲＮＡｉベースのＡＬＤＨ２阻害剤を産生する強力なオリゴヌクレオチドの開発に基づく。本開示の特定の態様は、対象のアルコール嗜癖を治療するためのオリゴヌクレオチドの化学修飾及び関連する方法に関する。
ＡＵＤを治療するための既存の薬学的アプローチには、ナルトレキソン、アカンプロセート、及びアルデヒドデヒドロゲナーゼ２（ＡＬＤＨ２）阻害剤であるジスルフィラムが含まれる。ＡＬＤＨ２は保存された解毒ミトコンドリア酵素であり、特にアルデヒドの代謝に関与している。エタノール（「アルコール」）の全身代謝は、まずアルコールデヒドロゲナーゼ（ＡＤＨ）によるアセトアルデヒドへの代謝から始まり、次にＡＬＤＨ２によるアセテートへの代謝に至る。さらに、ＡＬＤＨ２は、４－ヒドロキシ－２－ノネナールやマロンジアルデヒドなど、酸化ストレス下で生成される脂質過酸化生成物の酸化において重要な役割を果たす。世界人口の推定８％（主に東アジア系）が、機能しないＡＬＤＨ２酵素をコードするＡＬＤＨ２＊２対立遺伝子を保有しており、その結果、アルコール摂取後に肝臓や脳などの血液や臓器にアセトアルデヒドが蓄積する。これらの個体では、アセトアルデヒドの蓄積が顔面紅潮や、吐き気、頭痛、動悸、及び全体的な不快感などの不快感を引き起こす。代謝が困難なため、ＡＬＤＨ２欠損症の個体はＡＵＤを発症するリスクが低くなる。これらの理由から、ＡＬＤＨ２活性を特異的かつ可逆的に阻害することを目的とするアプローチは、ＡＵＤの治療において非常に興味深いものになるであろう。
特定の実施形態では、本開示のオリゴヌクレオチドの化学修飾は、驚くほど化学的安定性を高め、製造コストを削減する。特定の実施形態において、化学修飾は、フッ素含有量の低減を含む（例えば、ＰＣＴ／ＵＳ２０／５３９９９、Ｗｅｉｍｉｎ Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌを参照；参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）。特定の実施形態では、フッ素含有量が減少すると、製造における収率が向上し、それによってコストが大幅に低下する。特定の実施形態において、フッ素含有量の減少は、脱フッ素不純物を減少させる。いくつかの実施形態では、強力で安定なＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、ＡＬＤＨ２活性を低下させるのに有用であり、それによってアルコール耐性及び／またはアルコール消費欲求を低下させる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、従来のオリゴヌクレオチドと比較して、他の特徴の中でも、効力の保持、作用の保持もしくは延長、高い治療指数の保持、安定性の改善、バイオアベイラビリティの改善、標的化の改善、製造の容易化、毒性の低下、及び／または他の改善された薬理学的特性を有する。
アルコール代謝に関与する主な酵素は、アルコールデヒドロゲナーゼ（ＡＤＨ）とアルデヒドデヒドロゲナーゼ（ＡＬＤＨ）である。両方の酵素は、異なる遺伝子によってコードされるいくつかの形態で発生する。さらに、これらの遺伝子のいくつかには、異なる特徴を持つ酵素をコードする変異体（すなわち、対立遺伝子）があり、民族グループごとに異なる集団分布を持っている。ヒトがどのＡＤＨまたはＡＬＤＨ対立遺伝子を持っているかは、そのヒトのアルコール消費量とアルコール嗜癖のリスクに影響する。これまでの研究者は主に、得られた酵素の速度論的特性の変化に関連するＡＤＨ１Ｂ、ＡＤＨ１Ｃ、及びＡＬＤＨ２遺伝子のコーディング変異体を研究してきた。
本開示の一態様は、ＡＬＤＨ２の発現を低下させるためのオリゴヌクレオチドであって、ＵＡＡＡＣＵＧＡＧＵＵＵＣＡＵＣＣＡＣＣＧＧ（配列番号１）として示される５’から３’までの配列を有するアンチセンス鎖と、ＧＧＵＧＧＡＵＧＡＡＡＣＵＣＡＧＵＵＵＡＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ（配列番号２）として示される５’から３’までの配列を有するセンス鎖とを含むオリゴヌクレオチドを提供する。
いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの全てのヌクレオチドが修飾される。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは２’修飾を含む。いくつかの実施形態では、２’修飾は、２’－フルオロまたは２’－Ｏ－メチルである。いくつかの実施形態では、センス鎖の１～７位及び１２～３６位、ならびに／またはアンチセンス鎖の１、６、８～１３及び１５～２２位の１つ以上の位置が２’－Ｏ－メチルで修飾される。いくつかの実施形態では、センス鎖の１～７位及び１２～３６位、ならびにアンチセンス鎖の１、６、８～１３及び１５～２２位の全てが、２’－Ｏ－メチルで修飾される。いくつかの実施形態では、センス鎖の８～１１位ならびに／またはアンチセンス鎖の２～５、７及び１４位の１つ以上の位置が２’－フルオロで修飾される。いくつかの実施形態では、センス鎖の８～１１位、ならびにアンチセンス鎖の２～５、７、及び１４位の全てが、２’－フルオロで修飾される。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間結合を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート結合である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、センス鎖の１位と２位、アンチセンス鎖の１位と２位、アンチセンス鎖の２位と３位、アンチセンス鎖の３位と４位、アンチセンス鎖の２０位と２１位、及びアンチセンス鎖の２１位と２２位のうちの１つ以上の間にホスホロチオエート結合を有する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、センス鎖の１位と２位、アンチセンス鎖の１位と２位、アンチセンス鎖の２位と３位、アンチセンス鎖の３位と４位、アンチセンス鎖の２０位と２１位、及びアンチセンス鎖の２１位と２２位のそれぞれの間にホスホロチオエート結合を有する。
いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の第１位のウリジンがホスフェートアナログを含む。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、アンチセンス鎖の１位に以下の構造を含む：
Figure 2023550054000002
いくつかの実施形態では、センス鎖上の－ＧＡＡＡ－配列のヌクレオチドのうちの１つ以上は、一価のＧａｌＮＡｃ部分に結合される。いくつかの実施形態では、センス鎖上の－ＧＡＡＡ－配列の各Ａヌクレオチドは、一価のＧａｌＮＡｃ部分に結合される。いくつかの実施形態では、ａｄｅｍＡ ＧａｌＮＡｃは以下の構造を表す：
Figure 2023550054000003
いくつかの実施形態では、ＡＬＤＨ２の発現を低下させるためのオリゴヌクレオチドは、ＵＡＡＡＣＵＧＡＧＵＵＵＣＡＵＣＣＡＣＣＧＧ（配列番号１）として示される５’から３’までの配列を有するアンチセンス鎖と、ＧＧＵＧＧＡＵＧＡＡＡＣＵＣＡＧＵＵＵＡＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ（配列番号２）として示される５’から３’までの配列を有するセンス鎖とを含み、
ここで、センス鎖の１～７位及び１２～３６位の全て、ならびにアンチセンス鎖の１、６、８～１３及び１５～２２位の全てが２’－Ｏ－メチルで修飾され、センス鎖の８～１１位の全て、ならびにアンチセンス鎖の２～５、７及び１４位の全てが、２’－フルオロで修飾され、
オリゴヌクレオチドは、センス鎖の１位と２位、アンチセンス鎖の１位と２位、アンチセンス鎖の２位と３位、アンチセンス鎖の３位と４位、アンチセンス鎖の２０位と２１位、及びアンチセンス鎖の２１位と２２位のそれぞれの間にホスホロチオエート結合を有し、
オリゴヌクレオチドは、アンチセンス鎖の１位に以下の構造を含み：
Figure 2023550054000004
 ここで、センス鎖上の－ＧＡＡＡ－配列のアデノシン（Ａ）ヌクレオチドのそれぞれは、次の構造を含む一価のＧａｌＮＡｃ部分に結合される。
Figure 2023550054000005
本開示の他の態様は、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドのいずれかとＮａ＋対イオンとを含む組成物を提供する。
図３に示される化学構造を有する組成物も提供される。
本開示の別の態様は、本開示の組成物を対象に投与することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、この方法は、対象におけるエタノール耐性の低下をもたらす。いくつかの実施形態では、この方法は、対象によるエタノール摂取の阻害をもたらす。いくつかの実施形態では、この方法は、対象のエタノール消費欲求の減少をもたらす。いくつかの実施形態では、治療される対象は、アルコール嗜癖を患っている。
本明細書に組み込まれ、かつ本明細書の一部を構成する添付の図面は、特定の実施形態を例示するものであり、発明の詳細な説明と共に、本明細書に開示される組成物及び方法の特定の態様の非限定的な例を提供する役割を果たすものである。
ＧａｌＮＡｃ結合ＡＬＤＨ２オリゴヌクレオチドのインビボ活性評価に対する２’－ＯＭｅ置換の影響を示すグラフである。オリゴヌクレオチドは、０．５ｍｇ／ｋｇでマウスに皮下投与した。データは、ＰＢＳ対照に対して標準化された、投与後４日目のＡＬＤＨ２ ｍＲＮＡの残存量を示す。 非ヒト霊長類（ＮＨＰ）における異なる修飾パターンを有するＧａｌＮＡｃ結合ＡＬＤＨ２オリゴヌクレオチドの持続実験の結果を示すグラフである。オリゴヌクレオチドの単回用量（３ｍｇ／ｋｇ）を非ヒト霊長類に皮下投与した。データは、投与前のＡＬＤＨ２ ｍＲＮＡの量に対する、投与後４、８、１２、及び１６週間のＡＬＤＨ２ ｍＲＮＡの残存量を示す。 開示されたオリゴヌクレオチドの構造及び化学修飾パターンを示す概略図である。
本開示の態様は、アルコール嗜癖の治療のための、細胞、特に肝臓細胞（例えば、肝細胞）において、より優れた効力及び持続性を有するＡＬＤＨ２発現を減少させるための化学修飾パターンを含むオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ干渉オリゴヌクレオチド）を提供する。したがって、関連する態様において、本開示は、肝臓におけるＡＬＤＨ２遺伝子発現を選択的に減少させることを含む、アルコール嗜癖を治療する方法を提供する。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＡＬＤＨ２を標的とするオリゴヌクレオチドは、対象のアルコール嗜癖を治療するために、標的組織の選択された細胞（例えば、肝細胞）に送達するように設計されており、オリゴヌクレオチドは、分解に対する耐性が増加し、及び／または選択された細胞内での持続時間の増加を示す。
摂取された飲料アルコール（すなわち、エタノール）が脳を含む様々な臓器に及ぼす影響は、達成されたエタノール濃度及び曝露時間によって異なる。両方の変数は、エタノールの血流や組織への吸収、及びエタノール代謝の影響を受ける（Ｈｕｒｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，“Ｔｈｅ ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｏｍｉｃｓ ｏｆ ａｌｃｏｈｏｌｉｓｍ，”Ｉｎ：Ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｏｍｉｃｓ：Ｔｈｅ Ｓｅａｒｃｈ ｆｏｒ Ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｉｚｅｄ Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ．，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ：Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ，ｐｐ．４１７－４４１（２００２））。エタノール代謝の主な部位は肝臓であるが、一部の代謝は他の組織でも発生し、そこで局所的な損傷を引き起こす可能性がある。エタノール代謝の主な経路には、アセトアルデヒドへの変換（すなわち、酸化）が含まれ、これは、アルコールデヒドロゲナーゼとして知られる酵素によって媒介される（すなわち、触媒される）反応である。本発明によれば、これらのアルコールデヒドロゲナーゼの１つ以上、好ましくはＡＬＤＨ２の発現の阻害は、対象がアルコールを分解する能力を防止または排除し、ヒトにおけるアルコールの摂取に関連する「高い」状態の防止につながる。
アルデヒドデヒドロゲナーゼ２（ＡＬＤＨ２）は、エタノール代謝物であるアセトアルデヒドを解毒するための重要な酵素であり、アルコール使用障害（ＡＵＤ）を治療するための潜在的な治療標的として認識されている。強力なＡＬＤＨ２阻害剤であるジスルフィラムは、ＡＵＤの治療薬として承認されているが、副作用のために臨床的な制限がある。臓器系の寄与に関しては、肝臓がアセトアルデヒド代謝に関与する主要な臓器であることが知られており、他の臓器からのＡＬＤＨ２の累積効果も全身のアセトアルデヒド排出に寄与している可能性が高い。本発明によれば、ｓｉＲＮＡによるＡＬＤＨ２発現の肝臓標的化ノックダウンは、アルコール嗜好を低下させることができ、ＡＵＤの治療の基礎となり得る。
特定の態様では、本開示は、製造中の収率が高く、不純物が少ない、ＡＬＤＨ２を標的とするオリゴヌクレオチドを提供する。
さらなる態様において、ＡＬＤＨ２を標的とするオリゴヌクレオチドは、フッ素含有量が減少している。いくつかの態様では、ピリミジン塩基のフッ素含有量が減少している。
定義された用語の説明を含む、本開示のさらなる態様を以下に示す。
Ｉ．定義
アルコール嗜癖：本明細書で使用される場合、「アルコール嗜癖」という用語は、再発性の有害な結果にもかかわらず、個体によるエタノールの反復使用を指し、これは、耐性、禁断症状、及び／またはアルコールを消費する制御不能な衝動と組み合わされる場合も、組み合わされない場合もある。アルコール嗜癖は、アルコール乱用、アルコール使用障害、またはアルコール依存症に分類され得る。アルコール嗜癖に苦しんでいる個体を特定するために、様々なアプローチを使用することができる。例えば、世界保健機関は、依存症を含む潜在的なアルコール乱用を特定するためのツールとしてアルコール使用障害特定テスト（ＡＵＤＩＴ）を確立しており、ミシガン州アルコールスクリーニングテスト（Ｍｉｃｈｉｇａｎ Ａｌｃｏｈｏｌ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ Ｔｅｓｔ（ＭＡＳＴ）） を含む他の同様のテストが開発された。臨床検査は、飲酒の慢性使用及び／または再発を検出するための血液マーカーを評価するために使用される場合があり、これは、ガンマグルタミルトランスフェラーゼ（ＧＧＴ）、平均赤血球容積（赤血球サイズ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、炭水化物欠乏トランスフェリン（ＣＤＴ）、グルクロン酸エチル（ＥｔＧ）、硫酸エチル（ＥｔＳ）、及び／またはホスファチジルエタノール（ＰＥｔｈ）のレベルを検出するための検査を含む。アルコール嗜癖の動物モデル（例えば、マウスモデル）が確立されている（例えば、Ｒｉｊｋ ｅｔ ａｌ．，“Ａ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ａｌｃｏｈｏｌｉｓｍ，”Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｂｅｈａｖ．，１９８２，２９（５）：８３３－３９；Ｅｌｉｚａｂｅｔｈ Ｂｒａｎｄｏｎ－Ｗａｒｎｅｒ，ｅｔ ａｌ．，“Ｒｏｄｅｎｔ Ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ Ａｌｃｏｈｏｌｉｃ Ｌｉｖｅｒ Ｄｉｓｅａｓｅ：Ｏｆ Ｍｉｃｅ ａｎｄ Ｍｅｎ，”Ａｌｃｏｈｏｌ，２０１２；４６（８）：７１５－２５；ａｎｄ Ａｄｅｌｉｎｅ Ｂｅｒｔｏｌａ，ｅｔ ａｌ．，“Ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｃｈｒｏｎｉｃ ａｎｄ ｂｉｎｇｅ ｅｔｈａｎｏｌ ｆｅｅｄｉｎｇ（ｔｈｅ ＮＩＡＡＡ ｍｏｄｅｌ），”Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，２０１３，８：６２７－３７を参照）。
ＡＬＤＨ２：本明細書で使用される場合、「ＡＬＤＨ２」という用語は、アルデヒドデヒドロゲナーゼ２ファミリー（ミトコンドリア性）遺伝子を指す。ＡＬＤＨ２は、アルデヒドデヒドロゲナーゼファミリーに属し、エタノールからアセテート（酢酸）を合成するアルコール代謝の酸化的経路の２番目の酵素として機能するタンパク質をコードする。ＡＬＤＨ２のホモログは、ヒト、マウス、ラット、非ヒト霊長類種、及びその他を含む広範な種で保存されている（例えば、ＮＣＢＩ ＨｏｍｏｌｏＧｅｎｅ：５５４８０を参照）。ＡＬＤＨ２は、例えば、ＡＬＤＨ１Ａ１を含む、他のアルデヒドデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子とも相同性を有する。ヒトでは、ＡＬＤＨ２は、それぞれが異なるアイソフォームＮＰ＿０００６８１．２（アイソフォーム１）及びＮＰ＿００１１９１８１８．１（アイソフォーム２）をコードする、少なくとも２つの転写産物、すなわちＮＭ＿０００６９０．３（変異体１）及びＮＭ＿００１２０４８８９．１（変異体２）をコードしている。転写変異体２は、転写変異体１と比較して５’コード領域のインフレームエクソンを欠いており、アイソフォーム１と比較して短いアイソフォーム（２）をコードしている。ＡＬＤＨ２の多型が同定されている（例えば、Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，“ＡＬＤＨ２ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ａｎｄ ａｌｃｏｈｏｌ－ｒｅｌａｔｅｄ ｃａｎｃｅｒｓ ｉｎ Ａｓｉａｎｓ：ａ ｐｕｂｌｉｃ ｈｅａｌｔｈ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ，”Ｊ Ｂｉｏｍｅｄ Ｓｃｉ．，２０１７，２４（１）：１９を参照）。
およそ：本明細書で使用される場合、対象とする１つ以上の値に適用される「およそ」または「約」という用語は、記載される基準値と同様の値を指す。特定の実施形態では、用語「およそ」または「約」とは、別途記載のない限りまたは別途内容から明らかでない限り（かかる数が可能な値の１００％を超え得る場合を除く）、述べられた基準値のいずれかの方向（上回るまたは下回る）において、２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％以下に含まれる値の範囲を指す。
投与する：本明細書で使用される場合、「投与する」または「投与」という用語は、薬理学的に有用な形で（例えば、対象の状態を治療するために）対象に物質（例えば、オリゴヌクレオチド）を与えることを意味する。
アシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）：本明細書で使用される場合、「アシアロ糖タンパク質受容体」または「ＡＳＧＰＲ」という用語は、４８ｋＤａのメジャーサブユニット（ＡＳＧＰＲ－１）及び４０ｋＤａのマイナーサブユニット（ＡＳＧＰＲ－２）によって形成される２部構成のＣ型レクチンを指す。ＡＳＧＰＲは、主として肝細胞の類洞表面で発現され、末端ガラクトースまたはＮ－アセチルガラクトサミン残基（アシアロ糖タンパク質）を含む循環糖タンパク質の結合、内在化、及びその後の排出に主要な役割を有する。
組み合わせ：本明細書で使用される場合、「組み合わせ製品」、「併用療法」、「多剤療法」などは、１つを超える治療薬または１つを超える薬剤もしくはモダリティを使用して疾患または障害を治療するために使用される療法を指す。組み合わせ製品を構成する治療薬は、同時に、断続的に、または任意の順序で投与することができる。組み合わせ生成物は、例えば、２つのオリゴヌクレオチド、または抗体もしくは小分子薬物と組み合わされたオリゴヌクレオチドを含み得る。このような治療法では、使用される各薬剤の投与量は、患者の転帰を最適化及び／または向上させるために変更することができる。
相補的：本明細書で使用される場合、「相補的」という用語は、ヌクレオチド同士が互いに塩基対を形成することを可能にするヌクレオチド（例えば、２本の対向する核酸上または一本の核酸鎖の対向する領域上の２個のヌクレオチド）間の構造的関係を指す。例えば、対向する核酸のピリミジンヌクレオチドに相補的である１つの核酸のプリンヌクレオチドは、互いに水素結合を形成することにより共に塩基対合し得る。いくつかの実施形態では、相補的なポリヌクレオチド鎖は、ワトソン・クリック型、または、安定した二重鎖の形成を可能にする他の任意の形で塩基対を形成することができる。いくつかの実施形態では、２本の核酸は、本明細書に記載されるように、互いに相補的であることで相補性領域を形成するヌクレオチド配列を有することができる。
デオキシリボヌクレオチド：本明細書で使用される場合、「デオキシリボヌクレオチド」という用語は、リボヌクレオチドと比較して、そのペントース糖の２’位に水素を有するヌクレオチドを指す。修飾デオキシリボヌクレオチドとは、糖、ホスフェート基または塩基の修飾または置換を含む、２’位以外の原子の１つ以上の修飾または置換を有するデオキシリボヌクレオチドである。
二本鎖オリゴヌクレオチド：本明細書で使用される場合、「二本鎖オリゴヌクレオチド」という用語は、実質的に二重鎖形態であるオリゴヌクレオチドを指す。いくつかの実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドの二重鎖領域の相補的塩基対合は、共有結合により分離した核酸鎖のヌクレオチドの逆平行配列間で形成される。いくつかの実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドの二重鎖領域の相補的塩基対合は、共有結合した核酸鎖のヌクレオチドの逆平行配列間で形成される。いくつかの実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドの二重鎖領域の相補的塩基対合は、塩基対を形成するヌクレオチドの相補的逆平行配列を提供するために（例えば、ヘアピンを介して）折り畳まれた単一の核酸鎖から形成される。いくつかの実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、互いに完全に二本鎖化された共有結合により分離した２つの核酸鎖を含む。しかしながら、いくつかの実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、部分的に二重鎖である、例えば一端または両端にオーバーハングを有する、共有結合的に分離した２つの核酸鎖を含む。いくつかの実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、部分的に相補的であるヌクレオチドの逆平行配列を含み、したがって、内部ミスマッチまたは末端ミスマッチを含み得る１つ以上のミスマッチを有し得る。
二重鎖：本明細書で使用される場合、核酸（例えば、オリゴヌクレオチド）に関して「二重鎖」という用語は、ヌクレオチドの２つの逆平行配列の相補的塩基対合により形成される構造を指す。
賦形剤：本明細書で使用される場合、「賦形剤」という用語は、例えば、所望の稠度または安定化効果を与えるかまたはこれらに寄与するために組成物中に含めることができる非治療的物質を指す。
肝細胞：本明細書で使用される「肝細胞」または「肝細胞」という用語は、肝臓の実質組織の細胞を指す。これらの細胞は、肝臓の質量の約７０～８５％を構成し、血清アルブミン、フィブリノゲン、及び凝固因子のプロトロンビン群（因子３及び４を除く）を製造する。肝細胞系譜細胞のマーカーには、トランスサイレチン（Ｔｔｒ）、グルタミン合成酵素（Ｇｌｕｌ）、肝細胞核因子１ａ（Ｈｎｆ１ａ）、及び肝細胞核因子４ａ（Ｈｎｆ４ａ）が含まれ得るが、これらに限定されない。成熟肝細胞のマーカーには、シトクロムＰ４５０（Ｃｙｐ３ａ１１）、フマリルアセト酢酸ヒドロラーゼ（Ｆａｈ）、グルコース６－ホスフェート（Ｇ６ｐ）、アルブミン（Ａｌｂ）、及びＯＣ２－２Ｆ８が含まれ得るが、これらに限定されない。例えば、Ｈｕｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２０１３，４９４（７４３６）：２４７－５０を参照されたい（その内容は、肝細胞マーカーに関連して参照により本明細書に組み込まれる）。
ループ：本明細書で使用される場合、「ループ」という用語は、互いに十分に相補的な核酸の２つの逆平行領域によって挟まれている核酸（例えば、オリゴヌクレオチド）の不対合領域であって、適切なハイブリダイゼーション条件下（例えば、リン酸緩衝溶液中、細胞内）で、不対合領域を挟んだ２つの逆平行領域がハイブリダイズして二重鎖（「ステム」と呼ばれる）を形成する、核酸の不対合領域を指す。
修飾ヌクレオチド間結合：本明細書で使用される場合、「修飾されたヌクレオチド間結合」という用語は、ホスホジエステル結合を含む参照ヌクレオチド間結合と比較して１つ以上の化学修飾を有するヌクレオチド間結合を指す。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、天然に存在しない結合である。典型的には、修飾ヌクレオチド間結合は、修飾ヌクレオチド間結合が存在する核酸に１つ以上の望ましい特性を付与する。例えば、修飾ヌクレオチドは、熱安定性、分解に対する耐性、ヌクレアーゼ耐性、可溶性、バイオアベイラビリティ、生物活性、免疫原性の低下などを改善することができる。
修飾ヌクレオチド：本明細書で使用される場合、「修飾ヌクレオチド」という用語は、アデニンリボヌクレオチド、グアニンリボヌクレオチド、シトシンリボヌクレオチド、ウラシルリボヌクレオチド、アデニンデオキシリボヌクレオチド、グアニンデオキシリボヌクレオチド、シトシンデオキシリボヌクレオチド及びチミジンデオキシリボヌクレオチドから選択される対応する参照ヌクレオチドと比較して１つ以上の化学修飾を有するヌクレオチドを指す。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、天然に存在しないヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、その糖、核酸塩基及び／またはホスフェート基に１つ以上の化学修飾を有する。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、対応する参照ヌクレオチドに結合された１つ以上の化学部分を有する。典型的には、修飾ヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドが存在する核酸に１つ以上の望ましい特性を付与する。例えば、修飾ヌクレオチドは、熱安定性、分解に対する耐性、ヌクレアーゼ耐性、可溶性、バイオアベイラビリティ、生物活性、免疫原性の低下などを改善することができる。特定の実施形態では、修飾ヌクレオチドは、リボース環の２’位に２’－Ｏ－メチルまたは２’－Ｆ置換を含む。
ニックを有するテトラループ構造：「ニックを有するテトラループ構造」は、別々のセンス（パッセンジャー）鎖とアンチセンス（ガイド）鎖の存在を特徴とするＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの構造であって、センス鎖はアンチセンス鎖との相補性領域を有することにより２つの鎖が二重鎖を形成し、鎖の少なくとも一方、一般的にセンス鎖が二重鎖から伸長し、伸長部分がテトラループとテトラループに隣接するステム領域を形成する２つの自己相補的配列とを含み、テトラループが、少なくとも一方の鎖の自己相補的配列によって形成された隣接するステム領域を安定化するように構成されているような、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの構造である。
オリゴヌクレオチド：本明細書で使用される場合、「オリゴヌクレオチド」という用語は、例えば、オリゴヌクレオチド１００個未満の長さの短い核酸を指す。オリゴヌクレオチドは、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、及び／または修飾リボヌクレオチドなどの修飾ヌクレオチドを含むことができる。オリゴヌクレオチドは、一本鎖または二本鎖であることができる。オリゴヌクレオチドは二重鎖領域を有していても有していなくてもよい。一連の非限定的な例として、オリゴヌクレオチドは、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、ダイサー基質干渉ＲＮＡ（ｄｓｉＲＮＡ）、アンチセンスオリゴヌクレオチド、短いｓｉＲＮＡ、または一本鎖ｓｉＲＮＡであり得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドである。
オーバーハング：本明細書で使用される場合、「オーバーハング」という用語は、１つの鎖または領域が、その１つの鎖または領域が二重鎖を形成する相補鎖の末端を超えて延びていることから生じる末端の塩基対合していないヌクレオチド（複数可）を指す。いくつかの実施形態では、オーバーハングは、二本鎖オリゴヌクレオチドの５’末端または３’末端で二重鎖領域から伸長する１つ以上の不対合ヌクレオチドを含む。特定の実施形態では、オーバーハングは、二本鎖オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖またはセンス鎖上の３’または５’オーバーハングである。
薬学的に許容される：本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」という用語は、一般に安全で、毒性がなく、生物学的にも他の点でも望ましくないものではない化合物または組成物を指し、ヒトの薬学的及び獣医学での使用が許容される化合物または組成物を含む。化合物または組成物は、規制当局によって承認されているか、または承認可能であるか、または米国薬局方またはヒトを含む動物での使用について一般に認められている他の薬局方にリストされている場合がある。
薬学的に許容される塩：本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される塩」という用語は、本発明の化合物の生理学的及び薬学的に許容される塩、すなわち、親オリゴヌクレオチドの所望の生物学的活性を保持し、かつそれに望ましくない毒物学的影響を与えない塩を意味する。
薬学的に許容される賦形剤、担体またはアジュバント：本明細書で使用される用語「薬学的に許容される賦形剤、担体またはアジュバント」は、少なくとも１つの治療薬（例えば、本開示のオリゴヌクレオチド）と一緒に対象に投与することができ、治療量の薬剤を送達するのに十分な用量で投与された場合、その薬理活性を破壊せず、一般に安全で無毒であり、生物学的にも他の点でも望ましくないものではない賦形剤、担体またはアジュバントを指す。
ホスフェートアナログ：本明細書で使用される場合、「ホスフェートアナログ」という用語は、ホスフェート基の静電特性及び／または立体特性を模倣する化学部分を指す。いくつかの実施形態では、ホスフェートアナログは、しばしば酵素的除去を受けやすい５’－ホスフェートの代わりにオリゴヌクレオチドの５’末端ヌクレオチドに配置される。いくつかの実施形態では、５’ホスフェートアナログはホスファターゼ耐性結合を含む。ホスフェートアナログの例としては、５’メチレンホスホナート（５’－ＭＰ）、及び５’－（Ｅ）－ビニルホスホナート（５’－ＶＰ）などの５’ホスホナートが挙げられる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、５’末端ヌクレオチドの糖の４’位の炭素にホスフェートアナログを有する（４’－ホスフェートアナログと呼ぶ）。４’－ホスフェートアナログの例として、オキシメチル基の酸素原子が糖部分（例えば、その４’炭素）に結合したオキシメチルホスホネートまたはそのアナログがある。例えば、２０１７年９月１日出願の国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０４９９０９号、２０１６年９月２日出願の米国特許仮出願第６２／３８３，２０７号、及び２０１６年９月１２日出願の同第６２／３９３，４０１号を参照されたい。ホスフェートアナログに関するこれらのそれぞれの内容を本明細書に参照によって援用する。オリゴヌクレオチドの５’末端の他の修飾も開発されている（例えば、ＷＯ２０１１／１３３８７１、米国特許第８，９２７，５１３号、及びＰｒａｋａｓｈ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２０１５，４３（６）：２９９３－３０１１を参照されたい。ホスフェートアナログに関するこれらのそれぞれの内容を本明細書に参照によって援用する）。
発現の低下：本明細書で使用される場合、ある遺伝子の「発現の低下」という用語は、適切な参照細胞または対象と比較した、その遺伝子によってコードされるＲＮＡ転写産物またはタンパク質の量の減少、及び／または細胞または対象におけるその遺伝子の活性量の減少を指す。例えば、細胞を二本鎖オリゴヌクレオチド（例えば、ＡＬＤＨ２ ｍＲＮＡ配列と相補的なアンチセンス鎖を有するもの）で処理する行為は、二本鎖オリゴヌクレオチドで処理されていない細胞と比較して、ＲＮＡ転写産物、タンパク質、及び／または酵素活性（例えば、ＡＬＤＨ２遺伝子によってコードされる）の量の減少をもたらし得る。同様に、本明細書で使用される「発現の低下」は、遺伝子（例えば、ＡＬＤＨ２）の発現の低下をもたらす行為を指す。
相補性領域：本明細書で使用される場合、「相補性領域」という用語は、ヌクレオチドの逆平行配列（例えば、ｍＲＮＡ内の標的ヌクレオチド配列）と十分に相補的であることにより、例えば、リン酸緩衝液中、細胞内などの適当なハイブリダイゼーション条件下で２つのヌクレオチド配列間のハイブリダイゼーションを可能にするような、核酸のヌクレオチド配列（例えば、二本鎖オリゴヌクレオチド）を指す。相補性領域は、ヌクレオチド配列（例えば、ｍＲＮＡまたはその一部内に存在する標的ヌクレオチド配列）に完全に相補的であり得る。例えば、ｍＲＮＡに存在するヌクレオチド配列に完全に相補的な相補性領域は、ｍＲＮＡの対応する配列にミスマッチやギャップがなく相補的なヌクレオチドの連続配列を有する。あるいは、相補性領域は、ヌクレオチド配列（例えば、ｍＲＮＡまたはその一部に存在するヌクレオチド配列）に部分的に相補的であり得る。例えば、ｍＲＮＡに存在するヌクレオチド配列に部分的に相補的な相補性領域は、ｍＲＮＡ内の対応する配列に相補的であるが、ｍＲＮＡ内の対応する配列と比較して、１つ以上のミスマッチまたはギャップ（例えば、１、２、３、またはそれ以上のミスマッチまたはギャップ）を含む連続したヌクレオチド配列を有し、ただし、相補性領域が適切なハイブリダイゼーション条件下でｍＲＮＡとハイブリダイズできるままであることが条件となる。
リボヌクレオチド：本明細書で使用される場合、「リボヌクレオチド」という用語は、そのペントース糖として、２’位にヒドロキシル基を有するリボースを有するヌクレオチドを指す。修飾リボヌクレオチドとは、リボース、ホスフェート基または塩基の修飾または置換を含む、２’位以外の原子の１つ以上の修飾または置換を有するリボヌクレオチドである。
ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド：本明細書で使用される場合、「ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド」という用語は、（ａ）センス鎖（パッセンジャー）とアンチセンス鎖（ガイド）を有する二本鎖オリゴヌクレオチドであって、アンチセンス鎖またはアンチセンス鎖の一部がアルゴノート２（Ａｇｏ２）エンドヌクレアーゼによって標的ｍＲＮＡの切断に使用される二本鎖オリゴヌクレオチド、または（ｂ）１本のアンチセンス鎖を有する一本鎖オリゴヌクレオチドであって、そのアンチセンス鎖（またはそのアンチセンス鎖の一部）が、Ａｇｏ２エンドヌクレアーゼによって標的ｍＲＮＡの切断に使用される一本鎖オリゴヌクレオチドのいずれかを指す。
鎖：本明細書で使用される場合、「鎖」という用語は、ヌクレオチド間結合（例えば、ホスホジエステル結合、ホスホロチオエート結合）を介して互いに連結されたヌクレオチドの一本の連続した配列を指す。いくつかの実施形態では、鎖は、２つの自由末端、例えば５’末端及び３’末端を有する。
対象：本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、マウス、ウサギ、及びヒトを含む任意の哺乳動物を意味する。一実施形態では、対象はヒトまたは非ヒト霊長類である。いくつかの実施形態では、「個体」または「患者」という用語は、ヒト対象を指す。
合成：本明細書で使用される場合、「合成」という用語は、人工的に合成された（例えば、機械（例えば、固体核酸合成装置）を使用して）、またはその分子を通常生成する天然のソース（例えば、細胞または生物）に由来していない核酸または他の分子を指す。
標的化リガンド：本明細書で使用される場合、「標的化リガンド」という用語は、目的の組織または細胞の同族分子（例えば、受容体）に選択的に結合し、他の物質を目的の組織または細胞に標的化する目的で別の物質に結合可能な分子（例えば、炭水化物、アミノ糖、コレステロール、ポリペプチド、または脂質）を指す。例えば、いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドを目的の特定の組織または細胞に標的化する目的で、標的化リガンドをオリゴヌクレオチドに結合することができる。いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、細胞表面受容体に選択的に結合する。したがって、いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドに結合された場合、標的化リガンドは、オリゴヌクレオチド、標的化リガンド及び受容体を含む複合体の細胞の表面に発現された受容体への選択的結合及び細胞によるエンドソーム内在化を介して、特定の細胞へのオリゴヌクレオチドの送達を促進する。いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、オリゴヌクレオチドが細胞内の標的化リガンドから放出されるように、細胞内在化後または細胞内在化中に切断されるリンカーを介してオリゴヌクレオチドに結合される。
テトラループ：本明細書で使用される場合、「テトラループ」という用語は、ヌクレオチドのフランキング配列のハイブリダイゼーションによって形成される隣接二重鎖の安定性を増加させるループを指す。安定性の増加は、ランダムに選択されたヌクレオチド配列からなる同等の長さのループのセットからの平均として予想される隣接したステム二重鎖のＴmよりも高い、隣接したステム二重鎖の融解温度（Ｔm）の上昇として検出可能である。例えば、テトラループは、少なくとも２塩基対長の二重鎖を含むヘアピンに、１０ｍＭのＮａＨＰＯ4中で、少なくとも５０℃、少なくとも５５℃、少なくとも５６℃、少なくとも５８℃、少なくとも６０℃、少なくとも６５℃、または少なくとも７５℃の融解温度をもたらし得る。いくつかの実施形態では、テトラループは、スタッキング相互作用によって、隣接したステム二重鎖の塩基対を安定化させることができる。さらに、テトラループ内のヌクレオチド間の相互作用としては、これらに限定されるものではないが、非Ｗａｔｓｏｎ－Ｃｒｉｃｋ塩基対合、スタッキング相互作用、水素結合、及び接触相互作用を含む（Ｃｈｅｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ １９９０；３４６（６２８５）：６８０－８２、Ｈｅｕｓ ａｎｄ Ｐａｒｄｉ，Ｓｃｉｅｎｃｅ １９９１；２５３（５０１６）：１９１－９４）。いくつかの実施形態では、テトラループは、３～６個のヌクレオチドを含むかまたはそれらからなり、典型的には４～５個のヌクレオチドである。特定の実施形態では、テトラループは、修飾されていてもされていなくてもよい（例えば、標的化部分に結合されていてもいなくてもよい）３、４、５、または６個のヌクレオチドを含むか、またはそれらからなる。一実施形態では、テトラループは、ヌクレオチド４個からなる。テトラループでは任意のヌクレオチドを使用することができ、Ｃｏｒｎｉｓｈ－Ｂｏｗｄｅｎ，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９８５，１３：３０２１－３０３０に記載されるようにそのようなヌクレオチドの標準的なＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ記号を使用することができる。例えば、文字「Ｎ」は、任意の塩基がその位置にあり得ることを意味するために使用することができ、文字「Ｒ」は、Ａ（アデニン）またはＧ（グアニン）がその位置にあり得ることを示すために使用することができ、「Ｂ」は、Ｃ（シトシン）、Ｇ（グアニン）、またはＴ（チミン）がその位置にあり得ることを示すために使用できる。テトラループの例としては、ＵＮＣＧファミリーのテトラループ（例、ＵＵＣＧ）、ＧＮＲＡファミリーのテトラループ（例、ＧＡＡＡ）、及びＣＵＵＧテトラループが挙げられる（Ｗｏｅｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．，１９９０，８７（２１）：８４６７－７１；Ａｎｔａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９１，１９（２１）：５９０１－５）。ＤＮＡテトラループの例としては、テトラループのｄ（ＧＮＮＡ）ファミリー（例えば、ｄ（ＧＴＴＡ））、テトラループのｄ（ＧＮＲＡ）ファミリー、テトラループのｄ（ＧＮＡＢ）ファミリー、テトラループのｄ（ＣＮＮＧ）ファミリー、及びテトラループのｄ（ＴＮＣＧ）ファミリー（例えば、ｄ（ＴＴＣＧ））が挙げられる。例えば、それらの関連する開示について本明細書に参照により援用する、Ｎａｋａｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００２，４１（４８）：１４２８１－１４２９２；Ｓｈｉｎｊｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎｉｐｐｏｎ Ｋａｇａｋｋａｉ Ｋｏｅｎ Ｙｏｋｏｓｈｕ，Ｖｏｌ７８ｔｈ，Ｎｏ．２，ｐａｇｅ７３１（２０００）を参照されたい。いくつかの実施形態では、テトラループは、ニックを有するテトラループ構造内に含まれる。
治療する：本明細書で使用される場合、「治療する」という用語は、例えば、既存の状態（例えば、疾患、障害）に関して、または状態の発生の可能性を予防または低減するために、対象の健康及び／または福祉を改善する目的で、対象に治療薬（例えば、オリゴヌクレオチド）を投与することにより、ケアを必要とする対象にケアを提供する行為を指す。いくつかの実施形態では、治療は、対象が経験する状態（例えば、疾患、障害）の少なくとも１つの徴候、症状、または寄与因子の頻度または重症度を低減することを含む。
ＩＩ．オリゴヌクレオチドベースの阻害剤
ｉ．ＡＬＤＨ２を標的とするオリゴヌクレオチド
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドは、配列ＵＡＡＡＣＵＧＡＧＵＵＵＣＡＵＣＣＡＣＣＧＧ（配列番号１）を有するガイド（アンチセンス）鎖を有する。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖と二重鎖を形成するセンス鎖が提供される。いくつかの実施形態では、センス鎖は、３’末端にステムループを含む。特定の実施形態では、センス鎖は、（例えば、その３’末端に）Ｓ１－Ｌ－Ｓ２として示されるステムループを含み、ただし、Ｓ１は、Ｓ２と相補的であり、Ｌは、Ｓ１とＳ２との間にヌクレオチド２～６個の長さの範囲でループを形成する。いくつかの実施形態では、Ｓ１とＳ２との間に形成される二重鎖は、長さが４、５、６、７、または８塩基対である。いくつかの実施形態では、ステムループのループ（Ｌ）は、テトラループである（例えば、ニックを有するテトラループ構造内の）。テトラループは、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチド、及び／またはそれらの組み合わせを含むことができる。通常、テトラループは４～５個のヌクレオチドを有する。しかしながら、いくつかの実施形態では、テトラループは、３～６個のヌクレオチドを含むかまたはそれらからなり、典型的には４個のヌクレオチドからなる。特定の実施形態では、テトラループは、３、４、５、または６個のヌクレオチドを含むかまたはそれらからなる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドは、配列ＧＧＵＧＧＡＵＧＡＡＡＣＵＣＡＧＵＵＵＡＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ（配列番号２）のセンス鎖、またはその薬学的に許容される塩を有する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列ＵＡＡＡＣＵＧＡＧＵＵＵＣＡＵＣＣＡＣＣＧＧ（配列番号１）のアンチセンス鎖及び配列ＧＧＵＧＧＡＵＧＡＡＡＣＵＣＡＧＵＵＵＡＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ（配列番号２）のセンス鎖、またはその薬学的に許容される塩を含む。
ｉｉ．オリゴヌクレオチドの修飾
いくつかの実施形態では、本開示のオリゴヌクレオチドは、１つ以上の適当な修飾を含むことができる。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、その塩基（または核酸塩基）、糖（例えば、リボース、デオキシリボース）、またはホスフェート基に修飾を有する。本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドのいくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの全てまたはほぼ全てのヌクレオチドが修飾される。特定の実施形態では、半分を超えるヌクレオチドが修飾されている。特定の実施形態では、半分未満のヌクレオチドが修飾されている。
このようなＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの化学修飾は、このクラスの分子の治療の可能性を十分に活用するために不可欠である。様々な化学修飾が開発され、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドに適用されて、その薬物動態及び薬力学特性を改善し（Ｄｅｌｅａｖｅｙ ａｎｄ Ｄａｍｈａ，Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ．，２０１２，１９：９３７－９５４）、自然免疫活性化をブロックする（Ｊｕｄｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．，２００６，１３：４９４－５０５）。最も一般的な化学修飾の１つは、ヌクレアーゼ分解に関与するため、リボヌクレオチドのフラノース糖の２’－ＯＨに対するものである。二重鎖全体に２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）と２’－デオキシ－２’－フルオロ（２’－Ｆ）を組み合わせて完全に化学修飾されたｓｉＲＮＡが報告されており、優れた安定性及びＲＮＡｉ活性を示している（Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２００５，４１：１３４９－１３５６；Ａｌｌｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ．，２００５，４８：９０１－９０４；Ｈａｓｓｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．，２０１８，４６：２１８５－２／１９６）。より最近では、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）結合化学修飾ｓｉＲＮＡが、インビボで有効なアシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰｒ）を介した肝臓肝細胞への送達を示した（Ｎａｉｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ．，２０１４，１３６：１６９５８－９６１）。ＧａｌＮＡｃダイサー－基質結合体（ＧａｌＸＣ）プラットフォームを含むいくつかのＧａｌＮＡｃ結合ＲＮＡｉプラットフォームは、広範囲のヒト疾患を治療するための臨床開発に進んでいる。
ＲＮＡｉ ＧａｌＮＡｃ結合体を含むオリゴヌクレオチドベースの治療薬の開発において、化学的に修飾されたヌクレオシド類似体を使用する際の主な懸念の１つは、修飾に伴う潜在的な毒性である。治療用オリゴヌクレオチドは患者の体内でゆっくりと分解し、リン酸化されて細胞のＤＮＡまたはＲＮＡに組み込まれる可能性のあるヌクレオシド類似体を放出する可能性がある。抗ウイルス治療の分野では、多くの低分子ヌクレオチド阻害剤の臨床開発中に毒性が明らかになった（Ｆｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，２０１６，６０：８０６－８１７）。完全にホスホロチオ化されたアンチセンスオリゴヌクレオチドの２’－Ｆ修飾は、細胞タンパク質の減少と二本鎖ＤＮＡ切断を引き起こし、インビボで急性肝毒性を引き起こすことが報告されている（Ｓｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．，２０１５，４３：４５６９－４５７８；Ｓｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．，２０１８，４６：２２０４－２２１７）。これまでのところ、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドとの関連で２’－Ｆ修飾が起こりやすいという証拠は観察されていない（Ｊａｎａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｔｈｅｒ．，２０１６，２６：３６３－３７１；Ｊａｎａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｔｈｅｒ．，２０１６，２７：１１－２２）。さらに、２’－Ｆ ｓｉＲＮＡは臨床試験で十分に許容されている。それにもかかわらず、治療用ＲＮＡオリゴヌクレオチドにおける２’－Ｆ修飾ヌクレオシドなどの非天然ヌクレオシド類似体の使用を最小限に抑えることが依然として望ましい。
２’－デオキシ－２’－フルオロＲＮＡとは異なり、２’－Ｏ－メチルＲＮＡは、転写後修飾として生じるｔＲＮＡ及びその他の小さなＲＮＡに見られるＲＮＡの自然発生的な修飾である。かさばる２’－Ｏ－メチル修飾は、かさばらない２’－Ｆ修飾と比較して、より優れた代謝安定性を付与することも知られている。したがって、２’－ＯＭｅは、安定性及び認容性の点で２’－Ｆよりも好ましい。しかし、より嵩高い２’－ＯＭｅは、ｓｉＲＮＡの配列に適切に配置されていない場合、ＲＮＡタンパク質結合を妨害し、ＲＮＡｉ活性を阻害することが示されている（Ｃｈｉｕ ｅｔ ａｌ．，ＲＮＡ，２００３，９：１０３４－１０４８；Ｐｒａｋａｓｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ．，２００５，４８：４２４７－４２５３；Ｚｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，ＦＡＳＥＢ Ｊ．，２０１３，２７：４０１７－４０２６）。
２’－Ｆ含有量をさらに減らし、同時に２’－ＯＭｅ含有量を増加させて、ＲＮＡｉ活性を損なうことなく安定性と忍容性を向上させるには、２’－ＯＭｅと２’－Ｆの位置を微調整する（修飾パターン）ことは、すでに優れた効力と持続時間を示しているＤｓｉＲＮＡ結合体に必要である。最近の報告では、２１／２３ｍｅｒ ｓｉＲＮＡ ＧａｌＮＡｃ結合体プラットフォームの修飾パターンの最適化が試みられた（Ｆｏｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．，２０１８，２６：７０８－１７）。しかし、その報告は、２’－ＯＭｅ置換に対する認容性が低い位置を含め、本明細書に開示されているように高い効力と持続時間をオリゴヌクレオチドに付与する２’－ＯＭｅ及び２’－Ｆのパターンを特定しなかった。また、その報告は、本明細書に開示されているように、トリループ、ペンタループ、及びテトラループのＧａｌＸＣプラットフォームに特化した最小限の２’－Ｆ含有量を有する高度な設計を特定しなかった。
驚くべきことに、配列がより多くのフッ素（例えば、ｆＵ）を含む場合、脱フッ素不純物がＨＰＬＣで生成物に現れ、フッ素含有量が減少した（主にｆＵを含まない）修飾パターンは、切断及び脱保護後に脱フッ素副生成物を示さないことがわかった。したがって、予想外に製造歩留まりが向上し、不純物が減少した。
特定の実施形態では、本開示のオリゴヌクレオチドは、表１の配列番号３（ＤＰ１１６６３Ｐ）のセンス鎖、ならびに配列番号４（ＤＰ１７２３２Ｇ）、配列番号５（ＤＰ１６２７９Ｇ）、配列番号６（ＤＰ１６２８１Ｇ）、及び配列番号７（ＤＰ１３４８８Ｇ）から選択されるアンチセンス鎖を含む二本鎖オリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩である。特定の実施形態では、本開示のオリゴヌクレオチドは、配列番号８（ＤＰ１１５１８Ｐ）のセンス鎖及び配列番号９（ＤＰ１１６７４Ｇ）のアンチセンス鎖を含む二本鎖オリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩である。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号３のセンス鎖及び配列番号４のアンチセンス鎖を含む。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号３のセンス鎖及び配列番号５のアンチセンス鎖を含む。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号３のセンス鎖及び配列番号６のアンチセンス鎖を含む。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号３のセンス鎖及び配列番号７のアンチセンス鎖を含む。
Figure 2023550054000006
特定の態様では、本開示のオリゴヌクレオチドは、センス鎖：
５’ｍＧ－Ｓ－ｍＧ－ｍＵ－ｍＧ－ｍＧ－ｍＡ－ｍＵ－ｆＧ－ｆＡ－ｆＡ－ｆＡ－ｍＣ－ｍＵ－ｍＣ－ｍＡ－ｍＧ－ｍＵ－ｍＵ－ｍＵ－ｍＡ－ｍＧ－ｍＣ－ｍＡ－ｍＧ－ｍＣ－ｍＣ－ｍＧ－［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］－［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］－［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］－ｍＧ－ｍＧ－ｍＣ－ｍＵ－ｍＧ－ｍＣ３’（配列番号３）と、
アンチセンス鎖：
５’［ＭｅＰｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ－４Ｏ－ｍＵ］－Ｓ－ｆＡ－Ｓ－ｆＡ－Ｓ－ｆＡ－ｆＣ－ｍＵ－ｆＧ－ｍＡ－ｍＧ－ｍＵ－ｍＵ－ｍＵ－ｍＣ－ｆＡ－ｍＵ－ｍＣ－ｍＣ－ｍＡ－ｍＣ－ｍＣ－Ｓ－ｍＧ－Ｓ－ｍＧ３’（配列番号６）とを含む二本鎖オリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩であり、
ここで、
ヌクレオシド間の「－」がホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、
ヌクレオシド間の「－Ｓ－」がホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表し、
ｍＡが２’－Ｏ－メチルアデノシンリボヌクレオシドを表し、
ｍＧが２’－Ｏ－メチルグアノシンリボヌクレオシドを表し、
ｍＣが２’－Ｏ－メチルシチジンリボヌクレオシドを表し、
ｍＵが２’－Ｏ－メチルウリジンリボヌクレオシドを表し、
ｆＡが２’－フルオロ－アデノシンデオキシリボヌクレオシドを表し、
ｆＧが２’－フルオロ－グアノシンデオキシリボヌクレオシドを表し、
ｆＣが２’－フルオロ－シチジンデオキシリボヌクレオシドを表し、
ｆＵが２’－フルオロ－ウリジンデオキシリボヌクレオシドを表し、
［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］が、
Figure 2023550054000007
 を表し、及び
［ＭｅＰｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ－４Ｏ－ｍＵ］が、
Figure 2023550054000008
 を表す。
特定の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドはナトリウム塩である。
ａ．糖の修飾
いくつかの実施形態では、修飾糖（本明細書では糖アナログとも呼ばれる）は、修飾デオキシリボースまたはリボース部分を含む。いくつかの実施形態では、ヌクレオチドの糖における修飾は、２’－修飾を含む。２’－修飾は、２’－アミノエチル、２’－フルオロ、２’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－メトキシエチル、または２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸であってよい。通常、修飾は２’－フルオロまたは２’－Ｏ－メチルである。いくつかの実施形態では、糖の修飾は糖環の修飾を含み、糖環の１つ以上の炭素の修飾を含み得る。
いくつかの実施形態では、センス鎖の１～７位及び１２～３６位、ならびに／またはアンチセンス鎖の１、６、８～１３及び１５～２２位の１つ以上の位置が２’－Ｏ－メチルで修飾される。いくつかの実施形態では、センス鎖の１～７位及び１２～３６位、ならびにアンチセンス鎖の１、６、８～１３及び１５～２２位の全てが、２’－Ｏ－メチルで修飾される。いくつかの実施形態では、センス鎖の８～１１位ならびに／またはアンチセンス鎖の２～５、７及び１４位の１つ以上の位置が２’－フルオロで修飾される。いくつかの実施形態では、センス鎖の８～１１位、ならびにアンチセンス鎖の２～５、７、及び１４位の全てが、２’－フルオロで修飾される。
いくつかの実施形態では、末端の３’末端基（例えば、３’－ヒドロキシル）は、ホスフェート基または他の基であり、例えば、リンカー、アダプターまたは標識を結合するために利用することができる。
ｂ．５’末端ホスフェート
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの５’末端ホスフェート基は、アルゴノート２との相互作用を促進する。しかしながら、５’－ホスフェート基を含むオリゴヌクレオチドは、ホスファターゼまたは他の酵素による分解を受けやすく、インビボでのバイオアベイラビリティを制限する可能性がある。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、こうした分解に耐性のある５’ホスフェートのアナログを有する。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、糖の４’位の炭素にホスフェートアナログを有する（４’－ホスフェートアナログと呼ぶ）。例えば、２０１７年９月１日に出願された、発明名称が４’－ホスフェートアナログ及びそれを含むオリゴヌクレオチドである国際出願番号第ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０４９９０９号を参照されたい。ホスフェートアナログに関するその内容を、参照により本明細書に援用する。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドは、５’末端ヌクレオチドに４’－ホスフェートアナログを含む。いくつかの実施形態では、ホスフェートアナログは、オキシメチル基の酸素原子が糖部分（例えば、その４’炭素）に結合したオキシメチルホスホネートまたはそのアナログである。他の実施形態では、４’－ホスフェートアナログは、チオメチルホスホナートまたはアミノメチルホスホナートであり、チオメチル基の硫黄原子またはアミノメチル基の窒素原子は、糖部分またはそのアナログの４’－炭素に結合している。特定の実施形態では、４’－ホスフェートアナログはオキシメチルホスホネートである。
特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドに結合したホスフェートアナログは、メトキシホスホネート（ＭＯＰ）である。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドに結合したホスフェートアナログは、５’モノメチル保護ＭＯＰである。いくつかの実施形態では、例えば、ガイド（アンチセンス）鎖の最初の位置で、ホスフェートアナログを含む以下のウリジンヌクレオチドを使用することができ、
Figure 2023550054000009
 この修飾ヌクレオチドは、［ＭｅＰｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ－４Ｏ－ｍＵ］または５’－メトキシ、ホスホネート－４’－オキシ－２’－Ｏ－メチルウリジンと呼ばれる。
ｃ．修飾ヌクレオチド間結合
いくつかの実施形態では、ホスフェートの修飾または置換は、少なくとも１個（例えば、少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、または少なくとも５個）の修飾ヌクレオチド間結合を含むオリゴヌクレオチドを生じ得る。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドのいずれか１つは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の修飾ヌクレオチド間結合を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドのいずれか１つの少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート結合である。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間結合を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート結合である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、センス鎖の１位と２位、アンチセンス鎖の１位と２位、アンチセンス鎖の２位と３位、アンチセンス鎖の３位と４位、アンチセンス鎖の２０位と２１位、及びアンチセンス鎖の２１位と２２位のうちの１つ以上の間にホスホロチオエート結合を有する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、センス鎖の１位と２位、アンチセンス鎖の１位と２位、アンチセンス鎖の２位と３位、アンチセンス鎖の３位と４位、アンチセンス鎖の２０位と２１位、及びアンチセンス鎖の２１位と２２位のそれぞれの間にホスホロチオエート結合を有する。
ｉｉｉ．標的化リガンド
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、特定の組織、細胞または器官の標的化を促進する（例えば、肝臓へのオリゴヌクレオチドの送達を促進する）ように修飾する。特定の実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、肝臓の肝細胞へのオリゴヌクレオチドの送達を促進するために修飾することができる。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１つ以上の標的化リガンドに結合されたヌクレオチドを含む。特定の実施形態では、標的化リガンドは、１つ以上のＧａｌＮＡｃ部分である。ＧａｌＮＡｃは、主として肝細胞の類洞表面で発現される、末端ガラクトースまたはＮ－アセチルガラクトサミン残基（アシアロ糖タンパク質）を含む循環糖タンパク質の結合、内在化、及びその後の排出に主要な役割を有するアシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）の高親和性リガンドである。いくつかの実施形態では、本開示のオリゴヌクレオチドにＧａｌＮＡｃ部分を結合させて、これらの肝細胞で発現されるＡＳＧＰＲにこれらのオリゴヌクレオチドを標的化する。いくつかの実施形態では、本開示のオリゴヌクレオチドは、一価のＧａｌＮＡｃ部分に直接的または間接的に結合される。いくつかの実施形態では、本開示のオリゴヌクレオチドは、１つ以上の二価ＧａｌＮＡｃ、三価ＧａｌＮＡｃ、または四価ＧａｌＮＡｃ部分に結合される。いくつかの実施形態では、本開示のオリゴヌクレオチドは、三価のＧａｌＮＡｃ部分に結合される。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、下記に示されるような［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］または２’－アミノジエトキシメタノール－アデニン－ＧａｌＮＡｃと呼ばれる、アデニンヌクレオチドに結合された一価のＧａｌＮＡｃを含む。
Figure 2023550054000010
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの－ＧＡＡＡ－の３つのアデノシンヌクレオチドは全て、それぞれＧａｌＮＡｃ部分に結合される。いくつかの実施形態では、ステムループのループ（Ｌ）の３個のヌクレオチドが、それぞれ別個のＧａｌＮＡｃに結合される。
適当な方法または化学的手法（例えば、クリックケミストリー）を用いて標的化リガンドをヌクレオチドに連結することができる。いくつかの実施形態では、リンカーは、不安定なリンカーである。しかしながら、他の実施形態では、リンカーはより安定している。いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、クリックリンカーを使用してヌクレオチドに結合される。いくつかの実施形態では、アセタールベースのリンカーを使用して、標的化リガンドを本明細書に記載のオリゴヌクレオチドのヌクレオチドに結合させる。アセタールベースのリンカーは、例えば、２０１６年６月２３日に公開された国際特許出願公開番号第ＷＯ２０１６１００４０１Ａ１号に開示されており、そのようなリンカーに関する内容は参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、ＡＬＤＨ２の発現を低下させるオリゴヌクレオチドを対象の肝臓の肝細胞に標的化することが望ましい。この目的のために、任意の適切な肝細胞標的化部分を使用することができる。
ＧａｌＮＡｃは、主として肝細胞の類洞表面で発現される、末端ガラクトースまたはＮ－アセチルガラクトサミン残基（アシアロ糖タンパク質）を含む循環糖タンパク質の結合、内在化、及びその後の排出に主要な役割を有するアシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）の高親和性リガンドである。本開示のオリゴヌクレオチドにＧａｌＮＡｃ部分を結合（間接的または直接的に）させて、これらの肝細胞で発現されるＡＳＧＰＲにこれらのオリゴヌクレオチドを標的化することができる。
いくつかの実施形態では、本開示のオリゴヌクレオチドは、一価のＧａｌＮＡｃに直接的または間接的に結合される。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、複数の一価ＧａｌＮＡｃに直接的または間接的に結合される（すなわち、２、３、または４個の一価ＧａｌＮＡｃ部分に結合され、一般的には３個または４個の一価ＧａｌＮＡｃ部分に結合される）。いくつかの実施形態では、本開示のオリゴヌクレオチドは、１つ以上の二価ＧａｌＮＡｃ、三価ＧａｌＮＡｃ、または四価ＧａｌＮＡｃ部分に結合される。
ＩＩＩ．薬学的に許容される塩
いくつかの実施形態では、本開示のオリゴヌクレオチドは、薬学的に許容される塩の形態である。薬学的に許容される塩基付加塩は、アルカリ金属及びアルカリ土類金属または有機アミンなどの金属またはアミンで形成される。カチオンとして使用される金属の例としては、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなどが挙げられる。適切なアミンの例としては、Ｎ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、エチレンジアミン、Ｎ－メチルグルカミン、及びプロカインが挙げられる（例えば、Ｂｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．，“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ，”Ｊ．Ｐｈａｒｍａ Ｓｃｉ．，１９７７，６６：１－１９を参照）。塩基付加塩形態は、遊離酸形態を十分な量の所望の塩基と接触させて、従来の方法で塩を生成することによって調製することができる。遊離酸形態は、塩形態を酸と接触させ、従来の方法で遊離酸を単離することによって再生することができる。遊離酸の形態は、極性溶媒中での溶解度などのある特定の物理的特性において、それぞれの塩形態とはいくらか異なるが、さもなければ塩は、本発明の目的に関して、それぞれの遊離酸と同等である。本明細書で使用される場合、「薬学的付加塩」には、本発明の組成物の成分の１つの酸形態の薬学的に許容される塩が含まれる。これらには、アミンの有機または無機酸塩が含まれる。好ましい酸性塩は、塩酸塩、酢酸塩、サリチル酸塩、硝酸塩、及びリン酸塩である。他の適切な薬学的に許容される塩は、当業者に周知であり、様々な無機酸及び有機酸の塩基性塩を含み、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸もしくはリン酸などの無機酸；酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、コハク酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、メチルマレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、乳酸、シュウ酸、グルコン酸、グルカン酸、グルクロン酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、サリチル酸、４－アミノサリチル酸、２－フェノキシ安息香酸、２－アセトキシ安息香酸、エンボン酸、ニコチン酸もしくはイソニコチン酸などの有機カルボン酸、スルホン酸、スルホ酸、もしくはリン酸、もしくはＮ－置換スルファミン酸；グルタミン酸やアスパラギン酸など、自然界のタンパク質の合成に関与する２０個のアルファアミノ酸などのアミノ酸；及び、フェニル酢酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、２－ヒドロキシエタンスルホン酸、エタン－１，２－ジスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４－メチルベンゼンスルホン酸、ナフタレン－２－スルホン酸、ナフタレン－１，５－ジスルホン酸、２－ホスホグリセレートもしくは３－ホスホグリセレート、グルコース－６－ホスフェート、Ｎ－シクロヘキシルスルファミン酸（シクラメートの形成を伴う）；またはアスコルビン酸などの他の酸性有機化合物が挙げられる。薬学的に許容される塩形態は、薬学的に許容される陽イオンを用いて調製することもできる。適切な薬学的に許容される陽イオンは、当業者に周知であり、アルカリ、アルカリ土類、アンモニウム、及び四級アンモニウム陽イオンを含む。炭酸塩または炭酸水素塩も可能である。
オリゴヌクレオチドの場合、好ましい薬学的に許容される塩は、（ａ）ナトリウム、カリウム、アンモニウム、マグネシウム、カルシウムなどのカチオン、スペルミンやスペルミジンなどのポリアミンなどと形成される塩；（ｂ）例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸などの無機酸と形成される酸付加塩；（ｃ）酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パルミチン酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、メタンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、ポリガラクツロン酸などの有機酸と形成される塩；及び（ｄ）塩素、臭素、ヨウ素などの元素陰イオンから形成される塩を含むが、これらに限定されない。
好ましい一実施形態では、本開示のオリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドのナトリウム塩の形態である。いくつかの実施形態では、本開示のオリゴヌクレオチドは二本鎖オリゴヌクレオチドであり、二本鎖オリゴヌクレオチドはナトリウム塩の形態である。
ＩＶ．製剤
オリゴヌクレオチドの使用を容易にするために、様々な製剤が開発されている。例えば、オリゴヌクレオチドは、分解を最小限に抑え、送達及び／または取り込みを促進し、または製剤中のオリゴヌクレオチドに別の有益な特性を与える製剤を使用して対象または細胞環境に送達することができる。いくつかの実施形態では、本明細書では、ＡＬＤＨ２の発現を低下させるためのオリゴヌクレオチド（例えば、一本鎖または二本鎖オリゴヌクレオチド）を含む組成物が提供される。かかる組成物は、標的細胞の隣接環境にまたは全身的に対象に投与された場合に、オリゴヌクレオチドの十分な部分が細胞に入ってＡＬＤＨ２発現を低下させるように適当に配合することができる。各種の適当なオリゴヌクレオチド製剤のいずれかを使用して、本明細書に開示されるＡＬＤＨ２を低減させるためのオリゴヌクレオチドを送達することができる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、リン酸緩衝生理食塩水などの緩衝液、リポソーム、ミセル構造、及びカプシド中に配合される。いくつかの実施形態では、裸のオリゴヌクレオチドまたはそのコンジュゲートが、水または水溶液（例えば、ｐＨ調整された水）中に配合される。いくつかの実施形態では、裸のオリゴヌクレオチドまたはそのコンジュゲートが、塩基性緩衝水溶液（例えば、ＰＢＳ）中に配合される。
特定の態様では、本開示は、センス鎖：
５’ｍＧ－Ｓ－ｍＧ－ｍＵ－ｍＧ－ｍＧ－ｍＡ－ｍＵ－ｆＧ－ｆＡ－ｆＡ－ｆＡ－ｍＣ－ｍＵ－ｍＣ－ｍＡ－ｍＧ－ｍＵ－ｍＵ－ｍＵ－ｍＡ－ｍＧ－ｍＣ－ｍＡ－ｍＧ－ｍＣ－ｍＣ－ｍＧ－［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］－［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］－［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］－ｍＧ－ｍＧ－ｍＣ－ｍＵ－ｍＧ－ｍＣ３’（配列番号３）と、
アンチセンス鎖：
５’［ＭｅＰｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ－４Ｏ－ｍＵ］－Ｓ－ｆＡ－Ｓ－ｆＡ－Ｓ－ｆＡ－ｆＣ－ｍＵ－ｆＧ－ｍＡ－ｍＧ－ｍＵ－ｍＵ－ｍＵ－ｍＣ－ｆＡ－ｍＵ－ｍＣ－ｍＣ－ｍＡ－ｍＣ－ｍＣ－Ｓ－ｍＧ－Ｓ－ｍＧ３’（配列番号６）とを含む二本鎖オリゴヌクレオチドまたはその薬学的に許容される塩を含む組成物を提供し、
ここで、
ヌクレオシド間の「－」がホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、
ヌクレオシド間の「－Ｓ－」がホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表し、
ｍＡが２’－Ｏ－メチルアデノシンリボヌクレオシドを表し、
ｍＧが２’－Ｏ－メチルグアノシンリボヌクレオシドを表し、
ｍＣが２’－Ｏ－メチルシチジンリボヌクレオシドを表し、
ｍＵが２’－Ｏ－メチルウリジンリボヌクレオシドを表し、
ｆＡが２’－フルオロ－アデノシンデオキシリボヌクレオシドを表し、
ｆＧが２’－フルオロ－グアノシンデオキシリボヌクレオシドを表し、
ｆＣが２’－フルオロ－シチジンデオキシリボヌクレオシドを表し、
ｆＵが２’－フルオロ－ウリジンデオキシリボヌクレオシドを表し、
［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］が、
Figure 2023550054000011
 を表し、及び
［ＭｅＰｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ－４Ｏ－ｍＵ］が、
Figure 2023550054000012
 を表す。
いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物は、その意図される投与経路に適合するように配合される。投与経路の例には、非経口、例えば、静脈内、皮内、皮下、経口（例えば、吸入）、経皮（局所）、経粘膜、及び直腸投与が含まれる。典型的には、投与経路は静脈内または皮下である。
注射用途に適した医薬組成物としては、滅菌注射溶液または分散液の即時調製用の滅菌水溶液（水溶性の場合）または分散液及び滅菌粉末が挙げられる。静脈内または皮下投与用では、適当な担体として、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，Ｎ．Ｊ．）またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）、及びそれらの適当な混合物を含む溶媒または分散媒とすることができる。多くの場合、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールなどの多価アルコール、及び塩化ナトリウムなどの等張剤を組成物に加えることが好ましい。必要な量のオリゴヌクレオチドを選択された溶媒中に、必要に応じて上記に列挙した成分の１つまたは組み合わせと共に加えた後、滅菌濾過を行うことによって滅菌注射液を調製することができる。
いくつかの実施形態では、組成物は、少なくとも約０．１％以上の治療剤（例えば、ＡＬＤＨ２発現を低下させるためのオリゴヌクレオチド）を含み得るが、活性成分（複数可）の割合は、全組成物の重量または体積の約１％～約８０％とすることができる。溶解度、バイオアベイラビリティ、生物学的半減期、投与経路、製品の有効期間、及び他の薬理学的考慮事項などの要因は、かかる医薬製剤の調製の分野における当業者によって想到されるものであり、したがって、様々な投与量及び治療レジメンが望ましい場合がある。
いくつかの実施形態は、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドのいずれかの肝臓を標的とする送達を対象とするが、他の組織を標的とすることも企図される。
ＩＶ．使用方法
ｉ．細胞内のＡＬＤＨ２発現の低下
いくつかの実施形態では、細胞内のＡＬＤＨ２の発現を低下させる目的で、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドのいずれか１つの有効量を細胞に送達するための方法が提供される。本明細書で提供される方法は、任意の適当な細胞タイプで有用である。いくつかの実施形態では、細胞は、ＡＬＤＨ２を発現するあらゆる細胞である（例えば、肝細胞、マクロファージ、単球由来細胞、前立腺癌細胞、脳細胞、内分泌組織、骨髄、リンパ節、肺、胆嚢、肝臓、十二指腸、小腸、膵臓、腎臓、胃腸管、膀胱、脂肪及び軟組織及び皮膚）。いくつかの実施形態では、細胞は、対象から得られ、限られた数の継代を行っていてもよい初代細胞であり、それにより、細胞は天然の表現型特性を実質的に維持している。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドが送達される細胞は、エクスビボまたはインビトロである（すなわち、培養中の細胞または細胞が存在する生物に送達することができる）。具体的な実施形態では、肝細胞内のＡＬＤＨ２のみの発現を低下させる目的で、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドのいずれか１つの有効量を細胞に送達するための方法が提供される。
阻害の結果は、細胞または対象の１つ以上の特性を評価するための適当なアッセイによって、またはＡＬＤＨ２発現を示す分子（例えば、ＲＮＡ、タンパク質）を評価する生化学的手法によって確認することができる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドがＡＬＤＨ２の発現のレベルを低下させる程度は、発現レベル（例えば、ＡＬＤＨ２のｍＲＮＡまたはタンパク質レベル）を適当な対照（例えば、オリゴヌクレオチドが送達されていない、または陰性対照が送達された細胞または細胞集団におけるＡＬＤＨ２の発現レベル）と比較することによって評価される。
いくつかの実施形態では、ＡＬＤＨ２発現の適当な対照レベルを所定のレベルまたは値とすることで、対照レベルを毎回測定する必要をなくすことができる。所定のレベルまたは値は、様々な形態のものとすることができる。いくつかの実施形態では、所定のレベルまたは値は、中央値または平均などの単一のカットオフ値とすることができる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドの投与は、細胞内のＡＬＤＨ２発現のレベルを低下させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＤＨ２発現のレベルの低下は、ＡＬＤＨ２の適当な対照レベルと比較して、１％以下、５％以下、１０％以下、１５％以下、２０％以下、２５％以下、３０％以下、３５％以下、４０％以下、４５％以下、５０％以下、５５％以下、６０％以下、７０％以下、８０％以下、または９０％以下であり得る。適当な対照レベルは、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドと接触させられていない細胞または細胞集団におけるＡＬＤＨ２発現のレベルとすることができる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法による細胞へのオリゴヌクレオチドの送達の効果は、一定期間の後に評価される。例えば、ＡＬＤＨ２のレベルは、細胞内へのオリゴヌクレオチドの導入の少なくとも８時間、１２時間、１８時間、２４時間後、または、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、もしくは１４日後に細胞中で分析することができる。
ｉｉ．治療方法
本開示の態様は、対象におけるアルコール嗜癖の治療のためにＡＤＨ１Ｂ、ＡＤＨ１Ｃ、及びＡＬＤＨ２の発現を低下させる方法に関する。特定の実施形態において、本開示は、対象におけるアルコール嗜癖の治療のためにＡＬＤＨ２の発現を低下させる方法に関する。いくつかの実施形態では、方法は、治療を要する対象に本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドのいずれか１つの有効量を投与することを含み得る。そのような治療は、例えば、対象のエタノール耐性を低下させ、それによって対象によるエタノール摂取を阻害するために使用することができる（例えば、対象のエタノール消費欲求を減少させることにより）。本開示は、アルコール嗜癖及び／またはアルコール嗜癖に関連する疾患もしくは障害のリスクを有する（または感受性を有する）対象を治療する予防的及び治療的方法の両方を提供する。
特定の態様において、本開示は、対象に治療薬（例えば、オリゴヌクレオチド、またはオリゴヌクレオチドをコードするベクターもしくは導入遺伝子）を投与することによって、対象における本明細書に記載される疾患または障害を予防するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、治療される対象は、例えば肝臓におけるＡＬＤＨ２タンパク質の量の低下から治療的な利益が得られる対象である。
本明細書に記載される方法は、一般的には、有効量のオリゴヌクレオチド、すなわち、望ましい治療結果を生じることができる量を対象に投与することを含む。治療許容量は、疾患または障害を治療することができる量とすることができる。任意の１人の対象に対する適当な投与量は、対象のサイズ、体表面積、年齢、投与される組成物、組成物中の活性成分（複数可）、投与の時間及び経路、一般的な健康状態、及び同時に投与されている他の薬剤を含む特定の因子に応じて決められる。
いくつかの実施形態において、対象に、本明細書に開示される組成物のいずれか１つを経腸的に（例えば、経口、胃栄養チューブによって、十二指腸栄養チューブによって、胃瘻を介して、または直腸に）、非経口的に（例えば、皮下注射、静脈内注射または注入、動脈内注射または注入、筋肉内注射）、局所的（例えば、皮膚上、吸入、点眼薬または粘膜を介して）、または標的器官（例えば、対象の肝臓）への直接注射によって投与する。通常、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、静脈内または皮下に投与される。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、０．１ｍｇ／ｋｇ～２５ｍｇ／ｋｇの範囲（例えば、１ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇ）の用量で投与される。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、０．１ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇの範囲、または０．５ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、単独でまたは組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、同時に、連続して（任意の順序で）、または断続的に組み合わせて投与される。例えば、２つのオリゴヌクレオチドを同時に併用投与することができる。あるいは、１つのオリゴヌクレオチドを投与し、任意の時間（例えば、１時間、１日、１週間、または１ヶ月）後に、２つ目のオリゴヌクレオチドを投与することができる。特定の実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、ジスルフィラムと組み合わせて投与することができる。
非限定的の一組の例として、本開示のオリゴヌクレオチドは、通常、年に１回、年に２回、四半期ごと（３ヶ月に１回）、隔月（２ヶ月に１回）、毎月、または毎週投与される。
いくつかの実施形態では、治療される対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類または他の哺乳動物の対象である。他の例示的な対象としては、イヌ及びネコなどの愛玩動物、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ニワトリなどの家畜、ならびにマウス、ラット、モルモット、ハムスターなどの動物が挙げられる。
実施例１：インビボ効力に対する置換の影響
インビボマウス実験
マウス肝細胞におけるＡＬＤＨ２発現の減少に対する活性を維持しながら送達特性を改善する可能性のある修飾パターンを分析した。様々な２’－ＯＭｅ修飾パターンを持つオリゴヌクレオチドについて、３ｍｇ／ｋｇでＣＤ－１マウスに皮下投与することにより、その効力を分析した。投与後４日目にマウスを安楽死させた。肝臓サンプルを得、ＲＮＡを抽出して、ＲＴ－ｑＰＣＲによってＡＬＤＨ２ ｍＲＮＡレベルを評価した。ＰＢＳ対照ｍＲＮＡと比較したＡＬＤＨ２ ｍＲＮＡの割合は、これらの測定に基づいて決定し、図１に示す。
実施例２：非ヒト霊長類（ＮＨＰ）におけるＧａｌＮＡｃ結合ＡＬＤＨ２オリゴヌクレオチドの持続時間実験
この実験は、異なる修飾パターン（例えば、アンチセンス鎖中の異なる数の２’－フルオロ修飾及び／または異なる数のホスホロチオエート結合を有する修飾パターン）を有する単一用量のＧａｌＮＡｃ結合ＡＬＤＨ２オリゴヌクレオチドの薬力学を評価するために設計された。この実験でテストされたＧａｌＮＡｃ結合ＡＬＤＨ２オリゴヌクレオチドは、Ｓ５８５－ＡＳ５９５－Ｍ１４、Ｓ５８５－ＡＳ５９５－Ｍ１５、Ｓ５８５－ＡＳ５９５－Ｍ１６、Ｓ５８５－ＡＳ５９５－Ｍ１７、Ｓ５８７－ＡＳ５９７－Ｍ２３、及びＳ５８７－ＡＳ５９７－Ｍ２４であった。これらのオリゴヌクレオチドは、参照により本明細書に組み込まれる国際特許公開第ＷＯ２０１１９／１４３６２１号に開示されている。ＧａｌＮＡｃ結合ＡＬＤＨ２オリゴヌクレオチドの単回用量を、非ヒト霊長類（各群ｎ＝４）に３ｍｇ／ｋｇで皮下投与した。動物を一晩絶食させ、翌朝の給餌前に血清サンプル及び肝臓生検を採取した。馴化中に各動物について１回の投与前生検を採取し、投与後４、８、または１２、または１６週間で３回の生検を採取した。生検は２つのセクションに分けられ、１つは急速冷凍されて－８０℃で保存され、もう１つは後でＲＮＡで処理され（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、ｍＲＮＡレベル分析のために４℃で保存された。
投与前のＡＬＤＨ２ ｍＲＮＡの量に対する、投与後４、８、１２、または１６週間後に残っているＡＬＤＨ２ ｍＲＮＡの量を定量的ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）で分析した結果、６つのＧａｌＮＡｃ結合ＡＬＤＨ２オリゴヌクレオチドのうち４つが、約５０％のＡＬＤＨ２ ｍＲＮＡ抑制を達成し、その効果は３ｍｇ／ｋｇの単回投与後３ヶ月間維持されたことが示された（図２）。この結果は、提案されているヒトの四半期に１回以下の投与頻度を支持している。
血清サンプルは、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）、及びガンマグルタミルトランスフェラーゼ（ＧＧＴ）を含む、保存された肝機能パネルテスト用であった。
材料
Ｔｉｓｓｕｅｌｙｓｅｒ ＩＩ（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）を使用して、０．７５ｍＬフェノール／グアニジンベースのＱＩＡｚｏｌ Ｌｙｓｉｓ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）中で肝臓サンプルをホモジナイズした。ホモジネートを１－ブロモ－３－クロロプロパン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で抽出した。製造元の指示に従って、ＭａｇＭａｘ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を使用して、０．２ｍＬの水相からＲＮＡを抽出した。ＲＮＡは、２６０ｎｍ及び２８０ｎｍでの分光分析を使用して定量化した。大容量ｃＤＮＡ逆転写キット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を使用してｃＤＮＡを調製した。Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｃｏｒａｌｖｉｌｌｅ，ＩＡ）のＲＴ－ｑＰＣＲアッセイ及びＢｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）の試薬を使用して、内因性ハウスキーピング遺伝子に対する正規化を行ってＡＬＤＨ２ ｍＲＮＡレベルを測定した。ＡＬＤＨ２ ｍＲＮＡ発現の程度は、ＰＢＳ群（マウス研究）または投与前の生検（ＮＨＰ研究）に対して正規化した。
実施例３：マウスへの皮下注射によるＤＰ１１６６３Ｐ：ＤＰ１６２８１Ｇ（ＤＣＲ－Ａ１２０３）の５週間の実験
要約
この実験の目的は、ＣＤ－１マウスにおけるＤＣＲ－Ａ１２０３の皮下（ＳＣ）反復投与（４週間ごと；２回投与）の潜在的な毒性を決定し、所見の潜在的な可逆性を評価することであった。さらに、ＤＣＲ－Ａ１２０３の毒物動態学的（ＴＫ）特性を決定した。
動物には皮下注射により４週間に１回（１日目と２９日目）投与した。ただし、ＴＫ期の群１では雌雄あたり３匹、群２～４では雌雄あたり１５匹の動物には単回のみ（１日目）投与した。実験デザインを表２に示す。
Figure 2023550054000013
全ての動物は、予定された安楽死まで生存した。ＤＣＲ－Ａ１２０３に関連する臨床所見、または体重、摂餌量、血液学、臨床化学、尿検査、もしくは臓器重量への影響はなかった。ＤＣＲ－Ａ１２０３に関連する眼科的または肉眼的所見はなかった。
最終安楽死で認められたＤＣＲ－Ａ１２０３関連の非有害な顕微鏡所見は、オス及びメスの全ての用量レベルで注射部位における最小から軽度の空胞化／顆粒状マクロファージ、オスの全ての用量レベル及びメスの１００と３００ｍｇ／ｋｇ群で腎臓における最小の空胞化／顆粒状上皮細胞、オス及びメスの３００ｍｇ／ｋｇ群で肝臓における最小の空胞化／顆粒状肝細胞、ならびにオスの１００及び／または３００ｍｇ／ｋｇ群及びメスの３００ｍｇ／ｋｇ群でリンパ節（腋窩、下顎、及び腸間膜）における最小の空胞化／顆粒状マクロファージを含んだ。これらの顕微鏡所見は、オリゴヌクレオチド投与に関連する一般的な組織病理学的特徴に似ており、毒性を示唆する変化（例えば、上皮細胞または肝細胞の変性／壊死、または炎症誘発効果）がないことを考えると、有害ではないと見なされた。回復安楽死時に、オス及びメスの１００と３００ｍｇ／ｋｇ群の注射部位（最小から軽度の空胞化／顆粒状マクロファージ）、ならびにオスの１００及び／または３００ｍｇ／ｋｇ群及びメスの３００ｍｇ／ｋｇ群のリンパ節（腋窩、下顎、及び腸間膜）で、ＤＣＲ－Ａ１２０３関連の微視的変化が依然として認められた。ただし、腎臓及び肝臓には所見がなく、これらの組織の変化が部分的に解消されたことを示した。
ＤＣＲ－Ａ１２０３濃度は、１日目、２９日目（投与後２４時間）、及び５８日目（最終剖検中に採取されたサンプル）の全ての用量レベルで、肝臓及び腎臓組織で定量化可能であった。肝臓濃度は、全ての評価日において、用量レベルが３０から３００ｍｇ／ｋｇに増加すると、用量比例未満に増加した。腎臓濃度は、１日目と２９日目にはほぼ用量に比例して増加し、５８日目には３０から３００ｍｇ／ｋｇへの用量レベルの増加に伴い、用量比例以上に増加した。ＤＣＲ－Ａ１２０３濃度は、評価した全ての時点で腎臓よりも肝臓で高かった。ＡＲＣ24hr値によって示されるように、肝臓及び腎臓におけるＤＣＲ－Ａ１２０３の蓄積は２９日目に観察されなかった。肝臓及び腎臓のＤＣＲ Ａ１２０３濃度は、２９日目の濃度と比較して、５８日目には９６％超減少した。
Figure 2023550054000014
肝臓は、ＤＣＲ－Ａ１２０３の送達及び活性の主要な標的臓器であった。肝臓におけるＤＣＲ－Ａ１２０３活性の証拠は、対照と比較して、３０、１００、及び３００ｍｇ／ｋｇを投与された３１日目の実験群でＡｌｄｈ２ ｍＲＮＡが９７％超減少したことによって実証された。いずれの用量レベルでも、肝臓におけるＡｌｄｈ２ ｍＲＮＡ発現の回復はなかった（表３）。腎臓ではＤＣＲ－Ａ１２０３活性は検出されず、食道及び骨髄での活性は５８日目の群でのみ検出された。食道及び骨髄におけるＡｌｄｈ２ ｍＲＮＡの減少は、５８日目に採取されたサンプルでのみ観察された。食道（１１．７～４２．０％）及び骨髄（４２．８～５５．１％）のＡｌｄｈ２ ｍＲＮＡは、３１日目には減少傾向にあり、５８日目に最小限ではあるが統計的に有意に減少した。これらの組織におけるＡＳＧＰＲ発現の欠如、肝臓と比較したＡｌｄｈ２ ｍＲＮＡの減少の最小の性質、及びこれらの変化の遅発性を考慮すると、減少のメカニズムは不明である。オスとメスのマウスの間でＡｌｄｈ２ ｍＲＮＡ発現またはＤＣＲ－Ａ１２０３活性に明らかな違いはなかった。
結論として、Ｃｒｌ：ＣＤ１（ＩＣＲ）マウスへの３０、１００、及び３００ｍｇ／ｋｇの用量レベルでの皮下注射による４週間に１回のＤＣＲ－Ａ１２０３の投与（合計２回の投与；１日目及び２９日目）は、死亡も有害な所見もなく忍容された。非有害な所見は、最終安楽死時の注射部位における最小から軽度の空胞／顆粒マクロファージ、腎臓における最小の空胞／顆粒上皮細胞、肝臓における最小の空胞／顆粒肝細胞、ならびに腋窩、下顎、及び腸間膜リンパ節における最小の空胞／顆粒マクロファージの顕微鏡所見に限定されていたが、回復安楽死時には、注射部位とリンパ節での所見のみが依然として存在していた。これらの結果に基づき、無毒性量（ＮＯＡＥＬ）は３００ｍｇ／ｋｇであった。この用量は、２９日目に各性別合わせの平均ＡＵＣlast値３９１，０００ｈｒ＊ｎｇ／ｍＬ及び平均Ｃmax値１３４，０００ｎｇ／ｍＬに相当した。
実施例４：サルへの皮下注射によるＤＰ１１６６３Ｐ：ＤＰ１６２８１Ｇ（ＤＣＲ－Ａ１２０３）の５週間の実験
要約
この実験の目的は、ＤＣＲ－Ａ１２０３を２８日に１回、合計２回皮下投与した場合のカニクイザルへの潜在的な毒性を判断し、４週間の回復期間にわたる所見の潜在的な可逆性を評価することであった。さらに、ＤＣＲ－Ａ１２０３の毒物動態学的特性を決定した。
実験デザインは次のとおりである。
Figure 2023550054000015
この実験では、次のパラメータ及びエンドポイント：死亡率、臨床観察、体重、摂餌量、眼科、心電図検査、臨床病理学パラメータ（血液学、凝固、臨床化学、及び尿検査）、生物分析及び毒物動態パラメータ、組織の薬力学分析（標的ｍＲＮＡ発現）、補体（Ｃ３ａ及びＢｂ）、サイトカイン及びケモカイン、臓器重量、ならびに肉眼及び顕微鏡検査が評価された。
ＤＣＲ－Ａ１２０３の反復投与は、実験中の臨床観察、体重、質的摂食量、眼科パラメータ、心電図パラメータ、凝固パラメータ、補体因子Ｃ３ａ及びＢｂ、または肉眼的剖検観察に変化をもたらさなかった。
ＤＣＲ－Ａ１２０３に関連した血液学及び臨床化学パラメータの変化は１００ｍｇ／ｋｇ／回以上で観察され、好中球の微少から中程度の増加（ベースラインの１．９８倍から７．５５倍［２日目と３０日目の範囲］）、好酸球の軽度の減少（１００ｍｇ／ｋｇ／回のオスを除いて、３０日目にベースラインの０．１５倍から０．２８倍）、及びアルカリホスファターゼの増加（１．３８倍から１．７５倍［２日目と３０日目の範囲］）を含んだ。さらに、ＤＣＲ－Ａ１２０３関連のアラニンアミノトランスフェラーゼが３００ｍｇ／ｋｇ／回で１匹のメス動物に軽度に増加し、これは最小の単細胞肝細胞壊死の顕微鏡所見と相関していた。回復までに、ＤＣＲ－Ａ１２０３関連群の臨床病理パラメータの変化は対照値に近づき、可逆性を示した。有害とみなされる臨床病理学的変化はなかった。
１日目及び２９日目の投与後８時間及び／または２４時間で、３０ｍｇ／ｋｇ／回以上の雌雄投与群で、２９日目の投与前時点までに完全に消失した対照群の平均値と比較して、平均インターロイキン（ＩＬ）－６濃度が増加した。これらの増加は、一般に３０～１００ｍｇ／ｋｇ／回で大きさが同等であったが、３００ｍｇ／ｋｇ／回でより顕著であった。ＩＬ－６の増加は、１日目及び２９日目の投与後８時間で最小から軽度（１．７倍から７．６倍の範囲）であり、１日目及び２９日目の投与後２４時間で最小から中程度（２．０倍から４７．５倍の範囲）であると見なされた。それらは典型的には、１日目及び２９日目の投与後８時間で全ての用量レベルのオスでより顕著であり、３００ｍｇ／ｋｇ／回（各投与の８時間後と２４時間後）のオスで顕著であったが、１日目及び２９日目の投与後２４時間で３０及び１００ｍｇ／ｋｇ／回のメスではより顕著であった。ＩＬ－６の増加は炎症誘発性反応を示しており、２日目及び３０日目の１００ｍｇ／ｋｇ／回以上の投与では、最小限に増加したアルカリホスファターゼ活性の発生率の増加と相関していた。ＩＬ－６の増加は有害とは見なされなかった。
終末安楽死時に、３００ｍｇ／ｋｇ／回を投与されたオスでＤＣＲ－Ａ１２０３関連のより高い平均絶対及び／または相対（脳に対する）肝臓重量が観察された。肝細胞肥大は顕微鏡的な相関関係として観察された。回復安楽死では、ＤＣＲ－Ａ１２０３関連の臓器重量の差は観察されず、回復が示された。
終末安楽死時に、ＤＣＲ－Ａ１２０３関連の顕微鏡所見が、肝臓、リンパ節（排出管、下顎、及び腸間膜）、及び皮下投与部位に観察された。肝臓では、顕微鏡所見は、１００ｍｇ／ｋｇ／回以上投与された動物の空胞化／顆粒クッパー細胞（最小から軽度）、３００ｍｇ／ｋｇ／回を投与されたオスの肝細胞肥大（最小）、及び３００ｍｇ／ｋｇ／回を投与されたメスの単細胞壊死（最小）を含んだ。リンパ節及び／または皮下投与部位では、３０ｍｇ／ｋｇ／回以上投与された動物における空胞化／顆粒マクロファージ（最小から軽度）が観察された。これらの発見は、文献で報告されている同様のｓｉＲＮＡプラットフォームを使用した他の治療法での観察結果と一致している。
回復安楽死時に、ＤＣＲ－Ａ１２０３関連の顕微鏡所見が、肝臓、リンパ節、及び皮下投与部位で再び観察された。肝臓では、１００ｍｇ／ｋｇ／回以上投与された動物の空胞／顆粒クッパー細胞（最小）が顕微鏡所見に含まれ、リンパ節及び／または皮下投与部位では、１００ｍｇ／ｋｇ／回以上を投与された動物において空胞／顆粒マクロファージ（最小から軽度）が観察された。（終末安楽死と比較して）回復安楽死で観察された所見の発生率及び／または重症度が低いことは、進行中の不完全な回復を示した。
ピーク血漿ＤＣＲ－Ａ１２０３濃度は、１日目と２９日目に、投与後１時間から１２時間の範囲で観察された。Ｃｍａｘに続いて、ＤＣＲ－Ａ１２０３濃度は一般に、１日目と２９日目にオスとメスで４８時間（最後に収集された時点）まで減少した。血漿ＤＣＲ－Ａ１２０３濃度は、１００及び３００ｍｇ／ｋｇ／回で回復動物において５７日目に定量化可能であった。
ＤＣＲ－Ａ１２０３曝露は、投与後０時間から４８時間までの濃度時間曲線下面積（ＡＵＣ）及び血漿中のＤＣＲ－Ａ１２０３の最大測定濃度では、用量レベルと共に増加した。投与後０時間から４８時間までのＡＵＣは、用量レベルの１０倍の増加に対して、１日目で約１８倍、２９日目で約１５倍増加し、両方の評価日で用量比例を超える増加を示した。血漿中のＤＣＲ－Ａ１２０３の最大測定濃度は、１日目に約９倍、２９日目に約７倍増加し、両方の評価日でおおよそ用量に比例した増加を示した。全体として、血漿暴露は１日目と２９日目でほぼ同等であり、蓄積の兆候はなかった。平均半減期は、投与後０～４８時間にわたって測定され、１日目で３．７６～４．１２時間、２９日目で４．０１～５．２１時間の範囲であった。計算された半減期は、投与後０～４８時間にわたって決定され、ＤＣＲ－Ａ１２０３濃度が投与後２８日（５７日目）まで血漿中で定量可能であったため、慎重に解釈する必要がある。ＤＣＲ－Ａ１２０３曝露は、ＡＵＣ（０～４８時間）及びＣｍａｘに関して、両方の評価日でオスとメスのサル間で類似していた（１．６倍以下）。したがって、データはオスとメスを合わせて表示される。
Figure 2023550054000016
ＤＣＲ－Ａ１２０３濃度は、３１日目（２９日目に対して投与後４８時間）に全ての用量レベルで肝臓及び腎臓で定量化可能であった。肝臓濃度は用量比例未満に増加し、腎臓濃度はほぼ用量に比例して増加した。ＤＣＲ－Ａ１２０３濃度は、５７日目に両方の用量レベル（１００及び３００ｍｇ／ｋｇ）で肝臓及び腎臓で定量化可能であった。肝臓濃度は１００～３００ｍｇ／ｋｇの用量レベルでほぼ用量比例（２倍）に増加し、腎臓濃度は１００～３００ｍｇ／ｋｇのメスでほぼ用量比例（２倍）に増加したが、オスでは濃度は１００～３００ｍｇ／ｋｇの間で減少した。ＤＣＲ－Ａ１２０３濃度は、腎臓よりも肝臓で高かった。１００及び３００ｍｇ／ｋｇ群ではそれぞれ、肝臓濃度は８４％及び９８％であり、腎臓濃度は、回復剖検時（５７日目）の最終剖検レベル（３１日目）の６５％及び８％であった。その結果、肝臓と腎臓の比率は、３１日目に比べて５７日目に一般的に高かった。ＤＣＲ－Ａ１２０３濃度は、平均比で、最終剖検時（３１日目）に腎臓より肝臓で８～３８倍高く、回復剖検時（５７日目）に腎臓より肝臓で７９～９４倍高かった（表６）。
Figure 2023550054000017
肝臓におけるＤＣＲ－Ａ１２０３活性の証拠は、対照と比較して、３０、１００、及び３００ｍｇ／ｋｇのＤＣＲ－Ａ１２０３を投与された主な実験群でＡＬＤＨ２ ｍＲＮＡが８５％超減少したことによって実証された。オスとメスとの間でＡＬＤＨ２ ｍＲＮＡ発現に明らかな違いはなかった。１００または３００ｍｇ／ｋｇ／回の回復群のいずれにおいても、肝臓のＡＬＤＨ２減少の回復はなかった（回復は３０ｍｇ／ｋｇ／回では評価されなかった）。ＤＣＲ－Ａ１２０３活性は、主な実験群または回復実験群のいずれにおいても、試験した肝外組織（腎臓、食道、及び骨髄）のいずれにおいても検出されなかった。
結論として、３０、１００、及び３００ｍｇ／ｋｇ／回のレベルでのカニクイザルへの２８日に１回、合計２回の皮下注射によるＤＣＲ－Ａ１２０３の投与は十分に許容された。ＤＣＲ－Ａ１２０３関連の非有害な変化が、いくつかの臨床病理学的パラメータ（１００ｍｇ／ｋｇ／回以上）、ならびに、肝臓（１００ｍｇ／ｋｇ／回以上）、リンパ節及び用量投与部位（３０ｍｇ／ｋｇ／回以上）の顕微鏡的病理学で発生した。臨床病理学におけるＤＣＲ－Ａ１２０３関連の変化は全て可逆的であり、顕微鏡的な変化は回復傾向にあった。この実験の条件下で、無毒性量（ＮＯＡＥＬ）は３００ｍｇ／ｋｇ／回であると決定され、関連ＡＵＣ（０～４８時間）は１，４８０，０００ｎｇ＊ｈｒ／ｍＬであり、Ｃｍａｘは６１，２００ｎｇ／ｍＬであった（オスとメスとを合わせて、２９日目）。
実施例５：ラジオテレメトリー装置を装備した意識のあるカニクイザルへの皮下注射投与後のＤＰ１１６６３Ｐ：ＤＰ１６２８１Ｇ（ＤＣＲ－Ａ１２０３）の心血管系、呼吸器系及び中枢神経系の評価
この実験の目的は、ＤＣＲ－Ａ１２０３の皮下注射が呼吸パラメータ、動脈血圧、心拍数、体温、及び第ＩＩ誘導心電図（ＥＣＧ）に及ぼす潜在的な急性影響、ならびにラジオテレメトリーを装備した意識のあるオスのカニクイザルの全体的な行動的、生理学的、及び神経学的状態に対する影響を評価することであった。
動物は、漸増用量設計で、０（溶媒；０．９％生理食塩水）、３０、１００、または３００ｍｇ／ｋｇの単回皮下用量を受けた。実験デザインは次のとおりである。
Figure 2023550054000018
この実験では、次のパラメータ及びエンドポイント：臨床徴候、定性的な摂餌量、心拍数、動脈血圧（収縮期、拡張期、及び平均動脈圧）、脈圧、体温、及びＥＣＧ波形（そこからＥＣＧ間隔ＰＲ、ＱＲＳ、ＱＴ、及び心拍数補正ＱＴ［ＱＴｃＢ及びＱＴｃＬ］が導出された）、呼吸パラメータ（呼吸数、一回換気量、及び分時換気量）、神経学的検査、及び生物分析が評価された。
ＤＣＲ－Ａ１２０３を３０、１００、及び３００ｍｇ／ｋｇの用量レベルでオスのカニクイザルに漸増用量設計で単回皮下投与した結果、ＤＣＲ－Ａ１２０３に関連する心臓血管、呼吸器、または神経への影響はなかった。
したがって、無影響量（ＮＯＥＬ）は３００ｍｇ／ｋｇであった。
結論
ＤＣＲ－Ａ１２０３を３０、１００、及び３００ｍｇ／ｋｇの用量レベルでオスのカニクイザルに漸増用量設計で単回皮下投与した結果、ＤＣＲ－Ａ１２０３に関連する心臓血管、呼吸器、または神経への影響はなかった。したがって、無影響量（ＮＯＥＬ）は３００ｍｇ／ｋｇであった。
本明細書に例示的に記載される開示は、本明細書に具体的に開示されない任意の１つまたは複数の要素、１つまたは複数の限定がない状態で適当に実施することができる。したがって、例えば、本明細書におけるそれぞれの場合において、「～を含む」、「～から本質的になる」、及び「～からなる」という用語のいずれかを、他の２つの用語のいずれかで置き換えることができる。使用した用語及び表現は、限定のためではなく、説明のための用語として用いられているものであり、かかる用語及び表現の使用においては、図示及び記載される特徴のいずれの均等物またはその部分も除外する意図はなく、むしろ、特許請求される発明の範囲内で様々な改変が可能であることが認識されよう。したがって、本発明は好ましい実施形態によって具体的に開示されているが、本明細書に開示される概念の任意選択の特徴、改変及び変形は当業者によって実施することが可能であり、かかる改変及び変形は、説明文及び添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲内にあることは理解されるべきである。
さらに、本発明の特徴または態様が、マーカッシュ群または他の代替物の群分けに関して記載されている場合、当業者には、本発明がマーカッシュ群または他の群の個々の要素または要素のサブグループに関しても記載されていることが認識されよう。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドまたは他の核酸の構造を説明する際に配列表に示された配列を参照している場合がある点は理解されよう。かかる実施形態では、実際のオリゴヌクレオチドまたは他の核酸は、記載された配列と本質的に同じまたは同様の相補的特性を保持しながら、記載された配列と比較して１つ以上の代替的ヌクレオチド（例えば、ＤＮＡヌクレオチドのＲＮＡ対応物またはＲＮＡヌクレオチドのＤＮＡ対応物）及び／または１つ以上の修飾ヌクレオチド及び／または１つ以上の修飾ヌクレオチド間結合及び／または１つ以上の他の修飾を有し得る。
本発明の説明との関連での（特に下記の請求項との関連での）用語「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」、及び同様の指示語の使用は、本明細書中で特に断らない限り、または文脈により明らかに矛盾のない限り、単数及び複数の両方を含むものと解釈されるべきである。「備える」（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）、「有する」（ｈａｖｉｎｇ）、及び「含む」（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）なる用語は、特に断らない限りはオープンエンドタームとして（すなわち、「それらを含むがそれらに限定されない」ことを意味する）解釈されるべきである。本明細書の値の範囲の記載は、本明細書で特に断らない限り、範囲内に含まれるそれぞれの別個の値を個々に記載する手軽な方法としての役割を果たすことを単に意図したものに過ぎず、それぞれの別個の値は、本明細書に恰も個々に記載されているものと同様にして本明細書に含まれるものである。本明細書に記載される全ての方法は、本明細書で特に断らない限り、または文脈により明らかに矛盾のない限り、任意の適当な順序で実施することができる。本明細書内に提供される全ての実施例、または例示的文言（例えば、「など」）の使用は、本発明をより分かりやすく説明することを単に意図したものであり、特に主張されない限りは本発明の範囲を限定するものではない。いかなる本明細書の文言も、請求されていない要素を本発明の実施に不可欠なものとして示しているものと解釈されるべきではない。
本発明の実施形態は、本明細書に記載されている。これらの実施形態の変例は、上記の説明を読むことで当業者に明らかになり得る。
発明者は、当業者がかかる変形を適宜用いることを予期しており、また、発明者は、本発明が本明細書に具体的に記載されるのとは別の形で実施されることは想定している。したがって、本発明は、適用法が認めるように、本明細書に添付される特許請求の範囲に記載される主題の全ての改変物及び均等物を含むものである。さらに、それらの全ての可能な変例における上記の要素の任意の組み合わせは、本明細書で特に断らない限り、または文脈により明らかに矛盾のない限り、本発明に包含されるものである。当業者であれば、通常の実験以上のことを行うことなく、本明細書に記載される発明の特定の実施形態の多くの均等物が認識されるかまたは確認できるであろう。かかる均等物は、以下の特許請求の範囲に包含されるものとする。
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Ｍａｌｃｏｌｍ，Ｒ．，Ｏｌｉｖｅ，Ｍ．Ｆ．，Ｌｅｃｈｎｅｒ，Ｗ．，“Ｔｈｅ ｓａｆｅｔｙ ｏｆ ｄｉｓｕｌｆｉｒａｍ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ａｌｃｏｈｏｌ ａｎｄ ｃｏｃａｉｎｅ ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ ｉｎ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌｓ：Ｇｕｉｄａｎｃｅ ｆｏｒ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｐｒａｃｔｉｃｅ，”Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ． Ｄｒｕｇ Ｓａｆ．，２００８，７：４５９－７２．
Ｃｈｅｎ，Ｃ．Ｈ．，Ｆｅｒｒｅｉｒａ，Ｊ．Ｃ．，Ｇｒｏｓｓ，Ｅ．Ｒ．，Ｍｏｃｈｌｙ－Ｒｏｓｅｎ，Ｄ．“Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ａｌｄｅｈｙｄｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ２：Ｎｅｗ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ，”Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｖ．，２０１４，９４：１－３４．
Ｅｄｅｎｂｅｒｇ，Ｈ．Ｊ．，ＭｃＣｌｉｎｔｉｃｋ，Ｊ．Ｎ．，“Ａｌｃｏｈｏｌ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｓ，ａｌｄｅｈｙｄｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｓ，ａｎｄ ａｌｃｏｈｏｌ ｕｓｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ：Ａ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｒｅｖｉｅｗ，”Ａｌｃｏｈｏｌ．Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｒｅｓ．，２０１８，４２：２２８１－９７．

Claims (22)

  1. ＡＬＤＨ２の発現を低下させるためのオリゴヌクレオチドであって、ＵＡＡＡＣＵＧＡＧＵＵＵＣＡＵＣＣＡＣＣＧＧ（配列番号１）として示される５’から３’までの配列を有するアンチセンス鎖と、ＧＧＵＧＧＡＵＧＡＡＡＣＵＣＡＧＵＵＵＡＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ（配列番号２）として示される５’から３’までの配列を有するセンス鎖とを含む前記オリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩。
  2. 全てのヌクレオチドが修飾されている、請求項１に記載のオリゴヌクレオチド。
  3. 前記ヌクレオチドが２’－フルオロまたは２’－Ｏ－メチル修飾を含む、請求項２に記載のオリゴヌクレオチド。
  4. 前記センス鎖の１～７位及び１２～３６位、ならびに／または前記アンチセンス鎖の１、６、８～１３及び１５～２２位の位置が２’－Ｏ－メチルで修飾されている、請求項３に記載のオリゴヌクレオチド。
  5. 前記センス鎖の８～１１位、ならびに／または前記アンチセンス鎖の２～５、７及び１４位の位置が２’－フルオロで修飾されている、請求項３に記載のオリゴヌクレオチド。
  6. 少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間結合を含む、請求項２に記載のオリゴヌクレオチド。
  7. 前記少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間結合が、ホスホロチオエート結合である、請求項６に記載のオリゴヌクレオチド。
  8. 前記センス鎖の１位と２位、前記アンチセンス鎖の１位と２位、前記アンチセンス鎖の２位と３位、前記アンチセンス鎖の３位と４位、前記アンチセンス鎖の２０位と２１位、及び前記アンチセンス鎖の２１位と２２位のうちの１つ以上の間にホスホロチオエート結合を有する、請求項６に記載のオリゴヌクレオチド。
  9. センス鎖：
    ５’ｍＧ－Ｓ－ｍＧ－ｍＵ－ｍＧ－ｍＧ－ｍＡ－ｍＵ－ｆＧ－ｆＡ－ｆＡ－ｆＡ－ｍＣ－ｍＵ－ｍＣ－ｍＡ－ｍＧ－ｍＵ－ｍＵ－ｍＵ－ｍＡ－ｍＧ－ｍＣ－ｍＡ－ｍＧ－ｍＣ－ｍＣ－ｍＧ－［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］－［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］－［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］－ｍＧ－ｍＧ－ｍＣ－ｍＵ－ｍＧ－ｍＣ ３’（配列番号３）と、
    アンチセンス鎖：
    ５’［ＭｅＰｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ－４Ｏ－ｍＵ］－Ｓ－ｆＡ－Ｓ－ｆＡ－Ｓ－ｆＡ－ｆＣ－ｍＵ－ｆＧ－ｍＡ－ｍＧ－ｍＵ－ｍＵ－ｍＵ－ｍＣ－ｆＡ－ｍＵ－ｍＣ－ｍＣ－ｍＡ－ｍＣ－ｍＣ－Ｓ－ｍＧ－Ｓ－ｍＧ ３’（配列番号６）と
    を含む二本鎖オリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩であって、
    ここで、
    ヌクレオシド間の「－」がホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、
    ヌクレオシド間の「－Ｓ－」がホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表し、
    ｍＡが２’－Ｏ－メチルアデノシンリボヌクレオシドを表し、
    ｍＧが２’－Ｏ－メチルグアノシンリボヌクレオシドを表し、
    ｍＣが２’－Ｏ－メチルシチジンリボヌクレオシドを表し、
    ｍＵが２’－Ｏ－メチルウリジンリボヌクレオシドを表し、
    ｆＡが２’－フルオロ－アデノシンデオキシリボヌクレオシドを表し、
    ｆＧが２’－フルオロ－グアノシンデオキシリボヌクレオシドを表し、
    ｆＣが２’－フルオロ－シチジンデオキシリボヌクレオシドを表し、
    ｆＵが２’－フルオロ－ウリジンデオキシリボヌクレオシドを表し、
    ［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］が、
    Figure 2023550054000019
     を表し、及び
    ［ＭｅＰｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ－４Ｏ－ｍＵ］が、
    Figure 2023550054000020
     を表す、前記二本鎖オリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩。
  10. センス鎖：
    ５’ｍＧ－Ｓ－ｍＧ－ｍＵ－ｍＧ－ｍＧ－ｍＡ－ｍＵ－ｆＧ－ｆＡ－ｆＡ－ｆＡ－ｍＣ－ｍＵ－ｍＣ－ｍＡ－ｍＧ－ｍＵ－ｍＵ－ｍＵ－ｍＡ－ｍＧ－ｍＣ－ｍＡ－ｍＧ－ｍＣ－ｍＣ－ｍＧ－［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］－［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］－［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］－ｍＧ－ｍＧ－ｍＣ－ｍＵ－ｍＧ－ｍＣ ３’（配列番号３）と、
    アンチセンス鎖：
    ５’［ＭｅＰｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ－４Ｏ－ｍＵ］－Ｓ－ｆＡ－Ｓ－ｆＡ－Ｓ－ｆＡ－ｆＣ－ｍＵ－ｆＧ－ｍＡ－ｍＧ－ｍＵ－ｍＵ－ｍＵ－ｍＣ－ｆＡ－ｍＵ－ｍＣ－ｍＣ－ｍＡ－ｍＣ－ｍＣ－Ｓ－ｍＧ－Ｓ－ｍＧ ３’（配列番号６）と
    を含む二本鎖オリゴヌクレオチドのナトリウム塩であって、
    ここで、
    ヌクレオシド間の「－」がホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、
    ヌクレオシド間の「－Ｓ－」がホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表し、
    ｍＡが２’－Ｏ－メチルアデノシンリボヌクレオシドを表し、
    ｍＧが２’－Ｏ－メチルグアノシンリボヌクレオシドを表し、
    ｍＣが２’－Ｏ－メチルシチジンリボヌクレオシドを表し、
    ｍＵが２’－Ｏ－メチルウリジンリボヌクレオシドを表し、
    ｆＡが２’－フルオロ－アデノシンデオキシリボヌクレオシドを表し、
    ｆＧが２’－フルオロ－グアノシンデオキシリボヌクレオシドを表し、
    ｆＣが２’－フルオロ－シチジンデオキシリボヌクレオシドを表し、
    ｆＵが２’－フルオロ－ウリジンデオキシリボヌクレオシドを表し、
    ［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］が、
    Figure 2023550054000021
     を表し、及び
    ［ＭｅＰｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ－４Ｏ－ｍＵ］が、
    Figure 2023550054000022
     を表す、前記ナトリウム塩。
  11. 二本鎖オリゴヌクレオチドまたはその薬学的に許容される塩を含む組成物であって、前記二本鎖オリゴヌクレオチドが、センス鎖：
    ５’ｍＧ－Ｓ－ｍＧ－ｍＵ－ｍＧ－ｍＧ－ｍＡ－ｍＵ－ｆＧ－ｆＡ－ｆＡ－ｆＡ－ｍＣ－ｍＵ－ｍＣ－ｍＡ－ｍＧ－ｍＵ－ｍＵ－ｍＵ－ｍＡ－ｍＧ－ｍＣ－ｍＡ－ｍＧ－ｍＣ－ｍＣ－ｍＧ－［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］－［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］－［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］－ｍＧ－ｍＧ－ｍＣ－ｍＵ－ｍＧ－ｍＣ ３’（配列番号３）と、
    アンチセンス鎖：
    ５’［ＭｅＰｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ－４Ｏ－ｍＵ］－Ｓ－ｆＡ－Ｓ－ｆＡ－Ｓ－ｆＡ－ｆＣ－ｍＵ－ｆＧ－ｍＡ－ｍＧ－ｍＵ－ｍＵ－ｍＵ－ｍＣ－ｆＡ－ｍＵ－ｍＣ－ｍＣ－ｍＡ－ｍＣ－ｍＣ－Ｓ－ｍＧ－Ｓ－ｍＧ ３’（配列番号６）と
    を含み、ここで、
    ヌクレオシド間の「－」がホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、
    ヌクレオシド間の「－Ｓ－」がホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表し、
    ｍＡが２’－Ｏ－メチルアデノシンリボヌクレオシドを表し、
    ｍＧが２’－Ｏ－メチルグアノシンリボヌクレオシドを表し、
    ｍＣが２’－Ｏ－メチルシチジンリボヌクレオシドを表し、
    ｍＵが２’－Ｏ－メチルウリジンリボヌクレオシドを表し、
    ｆＡが２’－フルオロ－アデノシンデオキシリボヌクレオシドを表し、
    ｆＧが２’－フルオロ－グアノシンデオキシリボヌクレオシドを表し、
    ｆＣが２’－フルオロ－シチジンデオキシリボヌクレオシドを表し、
    ｆＵが２’－フルオロ－ウリジンデオキシリボヌクレオシドを表し、
    ［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］が、
    Figure 2023550054000023
     を表し、及び
    ［ＭｅＰｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ－４Ｏ－ｍＵ］が、
    Figure 2023550054000024
     を表す、前記組成物。
  12. 薬学的に許容される担体、賦形剤、またはアジュバントをさらに含む、請求項１１に記載の組成物。
  13. 前記薬学的に許容される塩が前記オリゴヌクレオチドのナトリウム塩である、請求項１１または１２に記載の組成物。
  14. 請求項１～１０のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチドまたは請求項１１～１３のいずれか１項に記載の組成物を対象に投与することを含む、オリゴヌクレオチドを前記対象に送達する方法。
  15. 請求項１～１０のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチドまたは請求項１１～１３のいずれか１項に記載の組成物を対象に投与することを含む、前記対象におけるエタノール耐性を低下させる方法。
  16. 請求項１～１０のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチドまたは請求項１１～１３のいずれか１項に記載の組成物を対象に投与することを含む、前記対象によるエタノール摂取を阻害する方法。
  17. 請求項１～１０のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチドまたは請求項１１～１３のいずれか１項に記載の組成物を対象に投与することを含む、前記対象のエタノール代謝能力を低下させる方法。
  18. 前記対象がアルコール嗜癖を患っている、請求項１７に記載の方法。
  19. 請求項１～１０のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチドまたは請求項１１～１３のいずれか１項に記載の組成物を対象に投与することを含む、前記対象におけるＡＤＨ１Ｂ、ＡＤＨ１Ｃ、及びＡＬＤＨ２のレベルを低下させる方法。
  20. 請求項１～１０のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチドまたは請求項１１～１３のいずれか１項に記載の組成物を対象に投与することを含む、前記対象におけるＡＬＤＨ２のレベルを低下させる方法。
  21. 請求項１～１０のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチドまたは請求項１１～１３のいずれか１項に記載の組成物を別のＡＬＤＨ２阻害剤と組み合わせて投与することを含む、アルコール嗜癖を患っている対象を治療する方法。
  22. 前記他のＡＬＤＨ２阻害剤がジスルフィラムである、請求項２１に記載の方法。
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