TW202233650A - Masp抑制性化合物及其用途 - Google Patents

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伊果 伏拉姆
德米特里 祖波夫
湯瑪士 紐包爾
阿德里安 特斯泰根
拉斯 包曼
凱瑟琳 朱爾
瑪莉耶 格拉茨
詹恩 德雷爾
席蒙 霍爾頓
熊建成
徐建超
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德商拜耳製藥股份有限公司
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Abstract

本發明係有關新穎之甘露糖結合凝集素(MBL)-相關絲胺酸蛋白酶(MASP)抑制性雙環化合物，及製備其等之製程、其單獨或組合於治療及/或預防疾病之用途、及其於製造供治療及/或預防疾病之醫藥上之用途，尤指治療及/或預防腎與心血管疾患及缺血再灌流損傷。

Description

MASP抑制性化合物及其用途
本發明係有關新穎之甘露糖結合凝集素(MBL)-相關絲胺酸蛋白酶(MASP)抑制性雙環化合物，及製備其等之製程、其單獨或組合於治療及/或預防疾病之用途、及其於製造供治療及/或預防疾病之醫藥上之用途，尤指治療及/或預防腎與心血管疾患及缺血-再灌流損傷。
補體系統係由許多在血液系統中循環之蛋白質、受體、及酵素複雜的連串級聯網絡所組成。補體系統為先天免疫力的重要組成，且係對抗入侵的病原體及清除死亡細胞及感染病毒的細胞的防禦作用所必需。其形成先天免疫與後天免疫反應之間的橋樑。補體系統之激活亦涉及例如：在心肌梗塞、缺血性腎臟損傷或器官移植之後之敗血病與缺血再灌流損傷之病理學。已判別出補體系統的三個分支系統：凝集素途徑、典型及替代途徑( Dunkelberger and  Song, Complement and its role in innate and adaptive immune responses. Cell Res. 2010; 20(1): 34-50)。凝集素途徑係受到在血流中循環之凝集素沉積時所激活，在正常條件下，藉由分別辨識外來及改變的碳水化合物表面型態，並裝飾其表面，而具有對抗入侵的病原體與死細胞蛋白質之哨兵功能。甘露糖結合凝集素(MBL)、纖維蛋白膠凝素(ficolins)及膠原凝集素(collectins)為此等凝集素之主要代表，其等係由肝臟、腎臟及其他器官產生( Garred等人， A journey through the lectin pathway of complement-MBL and beyond. Immunol Rev. 2016;274(1):74-97)。其沉積之後進一步從血流募集兩種極相關之絲胺酸蛋白酶之酶原：甘露糖結合性凝集素-相關絲胺酸蛋白酶1及2 (MASP-1及MASP-2)，形成複合物，其中酶原彼此接近。目前的觀念係在活體內條件下，募集後之MASP-1 酶原在自行激活後，經由裂解作用而激活MASP-2酶原。激活之MASP-1進一步裂解補體因子C2，成為C2a與及C2b。激活之MASP-2亦裂解C2與補體因子C4，成為C4a與C4b，其與C2a共同形成C4bC2a複合物，作為補體因子C3轉化酶。C3轉化酶活性的構成及構成性C3沉積在標靶細胞表面上代表所有三種補體途徑的匯合點，激活共通的下游級聯反應，造成產生發炎介質及標靶細胞瓦解。兩種MASP-酵素之完整人類血清活性係形成C3轉化酶不可或缺( Héja等人， Revised mechanism of complement lectin-pathway activation revealing the role of serine protease MASP-1 as the exclusive activator of MASP-2. Proc Natl Acad Sci U S A. 2012;109(26):10498-503)。
微血管系統在發炎及缺血性器官疾患期間扮演關鍵角色。障壁功能、白血球移行及凝血控制與小血管的管腔內皮細胞表面整體性極具相關性。管腔內皮表面有一層從膜融合醣蛋白、蛋白聚糖、及醣脂延伸的密集糖基化層，統稱為醣質包被(glycokalyx)。動物實驗與人類病理學檢體之電子顯微鏡分析已顯示，特別指內皮醣質包被在受到缺血挑戰及在如：敗血病之發炎條件下，會快速且完全瓦解。此等變化導致正常條件下不會被檢測到之碳水化合物殘基曝露在血流中(其概述可參見： Sieve等人， Regulation and function of endothelial glycocalyx layer in vascular diseases. Vascul Pharmacol. 2018; 100: 26-33)。此外，細胞表面之其他變化，特定言之改變的碳水化合物型態被視為會激活凝集素途徑，導致辨識凝集素之型態沉積，接著導致C3沉積及啟動細胞瓦解。MBL及C3沉積顯示發生在包括人類的物種之間的缺血及急性腎臟損傷之後。凝集素途徑激活與再灌流傷害特別相關，因為有目標地刪除MBL及MASP-2可以保護小鼠心腎及腸免於缺血再灌流傷害( Møller-Kristensen等人， Mannan-binding lectin recognizes structures on ischaemic reperfused mouse kidneys and is implicated in tissue injury. Scand J Immunol. 2005; 61(5): 426-34 ； Schwaeble等人， Targeting of mannan-binding lectin-associated serine protease-2 confers protection from myocardial and gastrointestinal ischemia/reperfusion injury. Proc Natl Acad Sci U S A. 2011; 108(18): 7523-8)。此外刪除膠原凝集素11(其係主要表現在腎臟之另一種MASP活化凝集素)使得小鼠對缺血性急性腎臟損傷具有抗性( Farrar等人， Collectin-11 detects stress-induced L-fucose pattern to trigger renal epithelial injury. J Clin Invest. 2016; 126(5): 1911–1925)。已採用來自向日葵或蚱蜢之天然胰蛋白酶抑制劑作為起點，從噬菌體展示庫中判別MASP‑1及MASP‑2之選擇性肽抑制劑。此等肽已顯示可以於活體外抑制凝集素途徑依賴性C3轉化酶形成( Kocsis等人， Selective inhibition of the lectin pathway of complement with phage display selected peptides against mannose-binding lectin-associated serine protease (MASP)-1 and -2: significant contribution of MASP-1 to lectin pathway activation. J Immunol. 2010; 185(7): 4169-78 ； Héja等人， Monospecific inhibitors show that both mannan-binding lectin-associated serine protease-1 (MASP-1) and are essential for lectin pathway activation and reveal structural plasticity of MASP-2. J Biol Chem. 2012; 287(24): 20290-300)。然而，尚沒有證據顯示可以利用彼等肽抑制劑之醫藥用途及活體內效力。同樣地，針對會干擾與MASP酶原交互作用之MASP2之抗體已判別出來，且已進入臨床發展針對非典型溶血性尿毒症候群及其他發炎腎臟疾患( ClinicalTrials.gov identifier: NCT03205995; NCT02682407; NCT03608033)。然而，仍然沒有用於預防或治療急性，特定言之缺血性器官傷害之臨床證據。
WO 2004/075837 揭示抗-MASP抗體、其功能等效片段、及MASP結合性肽，藉由抑制補體系統，而降低因與缺血-再灌流損傷或TAAA修復相關之組織傷害所引起之罹病率及死亡率。用於治療補體系統(主要指凝集素途徑)相關疾病之小型肽，如：向日葵MASP抑制劑-1 (SFMI-1)及向日葵MASP抑制劑-2 (SFMI-2)及其衍生物首先說明於WO 2010/136831。
WO 2015/054298揭示之方法係藉由降低MASP-1、MASP-2或MASP-3之活性，為受試者保有視力或減輕視力喪失及為受試者抑制或減少光受體細胞死亡。WO 2004/106384、WO 2005/123128、WO 2007/117996與WO 2014/144542揭示以抗-MASP-2抗體治療與MASP-2-依賴性補體活化作用相關之疾病。
WO2020/225095揭示單環之甘露糖結合凝集素(MBL)-相關絲胺酸蛋白酶(MASP)抑制劑尤其用於治療及/或預防腎臟與心血管疾患及缺血再灌流損傷。
本發明之目的為提供一種新穎肽，其具有針對MASP-1及/或MASP-2酵素之抑制效力及其他有利性質，使得其等適合作為預防及治療下文所定義MASP-1及/或MASP-2-相關疾患之有效且安全之替代物。另一個目的為提供一種新穎肽，其具有針對人類MASP-1及/或MASP-2酵素及/或大鼠MASP-1及/或MASP-2酵素之改良抑制效力。
本發明一般係有關作為MASP-1及/或MASP-2酵素之抑制劑之肽，及製造其等之方法及使用其等之方法。
本發明提供一種雙環化合物，其可經單離及/或純化，其包含、基本上組成為、或組成為式(I)：
Figure 02_image001
(I) 或其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物或鹽之溶劑合物，其中 X 1代表天然胺基酸，其可呈D-或L-立體組態，係選自下列所組成的群組：丙胺酸、甘胺酸、離胺酸、半胱胺酸與麩胺酸，或代表選自下列所組成的群組之部份體：6-胺基己酸(Ahx)、L-2,3-二胺基丙酸(Dap)、L-2,4-二胺基丁酸(Dab)、3-疊氮基-L-丙胺酸、L-2-胺基丁酸(Abu)、γ-胺基丁酸(γ-Abu)、2-胺基異丁酸(Aib)、L-鳥胺酸(Orn)、1,13-二胺基-4,7,10-三氧雜十三烷-琥珀醯胺酸(TTDS)、9-胺基-4,7-二氧雜壬烷酸[PEG1(10個原子)]、12-胺基-4,7,10-三氧雜­十二烷酸[PEG2(13個原子)]、15-胺基-4,7,10,13-四氧雜十五烷酸[PEG3(16個原子)]與己二酸，或X 1可能不存在， X 2代表天然胺基酸，其可呈D-或L-立體組態，係選自下列所組成的群組：甘胺酸與絲胺酸，或代表選自下列所組成的群組之部份體：N-甲基-甘胺酸、L-2,3-二胺基丙酸(Dap)、L-2,4-二胺基丁酸(Dab)、L-2-胺基丁酸(Abu)、γ-胺基丁酸(γ-Abu)、傳明酸(TXA)、3-(胺基甲基)苯甲酸與4-(胺基甲基)苯甲酸，或X 2可能不存在， X 3代表天然胺基酸，其可呈D-或L-立體組態，係選自下列所組成的群組：甘胺酸與丙胺酸，或X 3可能不存在， Ile 4代表L-異白胺酸， Cys 5代表L-半胱胺酸， Ser 6代表L-絲胺酸， Arg 7代表L-精胺酸， Ser 8代表L-絲胺酸， X 9代表L-白胺酸或L-第三丁基丙胺酸 [(tBu)A)]， Pro 10代表L-脯胺酸， X 11代表L-脯胺酸或2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氫吲哚-2-羧酸(Oic)， Ile 12代表L-異白胺酸， X 13代表L-半胱胺酸、L-N-甲基半胱胺酸 [(N-Me)C]或L-青黴胺(Pen)， Ile 14代表L-異白胺酸， X 15代表L-脯胺酸或2-胺基異丁酸(Aib)，或X 15可能不存在， X 16代表天然胺基酸，其可呈D-或L-立體組態，係選自下列所組成的群組：天冬胺酸與麩胺酸，或X 16可能不存在， X 17代表天然胺基酸，其可呈D-或L-立體組態，係選自下列所組成的群組：絲胺酸、半胱胺酸、脯胺酸與離胺酸，或代表選自下列所組成的群組之部份體：L-2,3-二胺基丙酸(Dap)、L-2,4-二胺基丁酸(Dab)與L-炔丙基甘胺酸，或X 17可能不存在， 其中 Cys 5與X 13係利用兩個基團的硫原子之間之二硫鍵連接，形成第一個環， 其中在N-末端之X 1(若X 1存在時)、X 2(若X 1不存在且X 2存在時)、X 3(若X 1與X 2不存在且X 3存在時)或Ile 4(若X 1、X 2與X 3均不存在時)與C-末端之Ile 14(若X 15、X 16與X 17均不存在時)、X 15(若X 16與X 17不存在且X 15存在時)、X 16(若X 17不存在且X 16存在時)或X 17(若X 17存在時)之間形成第二個環， 且其中可能利用主幹中之α-肽鍵或利用一或兩個胺基酸側鏈形成此等第二個環，其中若未使用C-末端羧酸形成該第二個環時，則該C-末端羧基可以轉化成醯胺基， 其中若X 1代表3-疊氮基-L-丙胺酸及X 17代表L-炔丙基甘胺酸時，所形成之環會產生1,2,3-三唑環，其附接在相對於丙胺酸之1-位置及相對於甘胺酸之4-位置。
為了方便參照，例如：X 2與Cys 5中之指數2與5係指肽中胺基酸之位置。
除非本文中另有其他定義，否則本申請案採用之科學與技術術語均具有彼等習此相關技藝者習知之定義。一般而言，本文所說明化學、分子生物學、細胞與癌症生物學、免疫學、微生物學、藥學、及蛋白質與核酸化學所採用之相關命名法及技術係彼等習此相關技藝習知且常用者。
本說明書全文中，用語「包含(comprise)」或其變化，如：「包括(comprises)」或「包括(comprising)」咸了解意指包括所指示之整數(或組份)或一群整數(或組份)，但不排除任何其他整數(或組份)或一群整數(或組份)。單數型「一個」、「一種」及「該」包括複數型，除非文中另有其他說明。術語「包括」及「包含」係用於指「包括，但不限於」，該等敘述可以交換使用。特定言之，「包含肽之化合物」之敘述意指包含指定肽序列之化合物，其可視需要再包含與肽共價鍵結之其他化學基團或取代基，例如：胺基酸、脂肪酸、加強肽之藥物動力學或藥效學性質之化學基團、或任何其他化學基團。亦咸了解，「包含肽之化合物」之敘述明確包括指定之肽序列，不含任何其他與肽共價鍵結之化學基團或取代基。
本文所採用下列術語具有其歸屬之定義，除非另有其他說明。「基本上其組成為」咸了解係指肽與其所比較之肽為至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%相同。
術語「蛋白質」、「多肽」及「肽」可以交換使用，係廣義指兩個或更多個胺基酸(較佳為利用肽(醯胺))鍵鏈結在一起的序列。當一個胺基酸之羧基與另一個胺基酸之胺基反應時，即形成肽(醯胺)鍵。亦應了解，術語「蛋白質」、「多肽」及「肽」不表示意指特定長度之胺基酸聚合物，亦無意暗示或區分該多肽是否採用重組技術、化學、或酵素合成法製造，或是否為天然發生。亦應了解，肽可包含一個或多個沒有本申請書所定義胺基酸之部份。此等部份較佳為出現在肽之N-及C-末端。
本文所採用術語「胺基酸」或「任何胺基酸」係指包含胺(-NH 2)與羧基(-COOH)官能基，並具有側鏈之有機化合物，且意指任何及所有胺基酸，包括天然發生之胺基酸(例如：α-L-胺基酸)、非天然胺基酸、經修飾胺基酸、及非天然胺基酸。「天然胺基酸」包括彼等出現在天然界者，如，例如：組合成肽鏈之23種胺基酸，其形成各種不同系列蛋白質之構成嵌段。此等主要呈L立體異構物，但在細菌包膜及有些抗生素中會出現少數D-胺基酸。表2中列出20種蛋白質形成性天然胺基酸之標準遺傳密碼。
「非天然」或「不為天然」胺基酸為天然發生或化學合成之非蛋白質形成性胺基酸(亦即彼等不是天然編碼或不會出現在遺傳密碼中)。已知超過140種天然胺基酸，且可能有上千種組合。「非天然」胺基酸實例包括β-胺基酸(β 3及β 2)、高碳-胺基酸、脯胺酸及丙酮酸衍生物、3-經取代之丙胺酸衍生物、甘胺酸衍生物、環經取代之苯基丙胺酸及酪胺酸衍生物、線性核心胺基酸、二胺基酸、D-胺基酸、及N-甲基胺基酸。非天然或不為天然胺基酸亦包括經修飾胺基酸。「經修飾」胺基酸包括已經過化學修飾之胺基酸(例如：天然胺基酸)，所以包括不會天然存在於胺基酸中之一個基團、多個基團、或化學部份體。根據本發明較佳非天然胺基酸列於表1。表1出示呈D-及/或L-立體異構物之非天然胺基酸，然而根據本發明較佳非天然胺基酸為表1所列出非天然胺基酸之D-與L-兩種立體異構物。 表 1 ：較佳非天然胺基酸
1,13-二胺基-4,7,10-三氧雜十三烷-琥珀醯胺酸(TTDS)
12-胺基-4,7,10-三氧雜十二烷酸[PEG2(13個原子)]
15-胺基-4,7,10,13-四氧雜十五烷酸[PEG3(16個原子)]
 2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氫吲哚-2-羧酸(Oic)
3-(胺基甲基)苯甲酸
3-疊氮基-L-丙胺酸
4-(胺基甲基)苯甲酸
9-胺基-4,7-二氧雜壬烷酸[PEG1(10個原子)]
γ-胺基丁酸(γ-Abu)
L-2,3-二胺基丙酸(Dap)
L-2,4-二胺基丁酸(Dab)
L-2-胺基丁酸(Abu)
L-N-甲基半胱胺酸 ((N-Me)C)
L-鳥胺酸(Orn)
L-青黴胺(Pen)
L-炔丙基甘胺酸
L-第三丁基丙胺酸 ((tBu)A)
N-甲基-甘胺酸 ((N-Me)G)
6-胺基己酸(Ahx)
傳明酸(TXA)
2-胺基異丁酸(Aib)
更佳非天然胺基酸係選自下列各物所組成之列表中：N-甲基-甘胺酸 ((N-Me)G)、L-第三丁基丙胺酸 ((tBu)A)、3-(胺基甲基)苯甲酸、4-(胺基甲基)苯甲酸、L-2-胺基丁酸(Abu)、6-胺基己酸(Ahx)、2-胺基異丁酸(Aib)、L-2,4-二胺基丁酸(Dab)、L-2,3-二胺基丙酸(Dap)、γ-胺基丁酸(γ-Abu)、L-鳥胺酸(Orn)、2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氫吲哚-2-羧酸(Oic)、L-N-甲基半胱胺酸 ((N-Me)C)、L-青黴胺(Pen)、傳明酸(TXA)、1,13-二胺基-4,7,10-三氧雜十三烷-琥珀醯胺酸(TTDS)、12-胺基-4,7,10-三氧雜十二烷酸、15-胺基-4,7,10,13-四氧雜十五烷酸與1,13-二胺基-4,7,10-三氧雜十三烷-琥珀醯胺酸(TTDS)。
最佳非天然胺基酸係選自下列各物所組成之列表中：L-第三丁基丙胺酸 ((tBu)A)、3-(胺基甲基)苯甲酸、4-(胺基甲基)苯甲酸、6-胺基己酸(Ahx)、L-2,4-二胺基丁酸(Dab)、L-2,3-二胺基丙酸(Dap)、L-鳥胺酸(Orn)、2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氫吲哚-2-羧酸(Oic)、L-青黴胺(Pen)、傳明酸(TXA)、1,13-二胺基-4,7,10-三氧雜十三烷-琥珀醯胺酸(TTDS)、12-胺基-4,7,10-三氧雜十二烷酸、15-胺基-4,7,10,13-四氧雜十五烷酸與1,13-二胺基-4,7,10-三氧雜十三烷-琥珀醯胺酸(TTDS)。
應了解，本發明肽之所有胺基酸及化學基團均藉由肽(醯胺)鍵連結。通常，肽係由α-胺基酸之α-胺基與羧基連接形成，其等再利用α-肽鍵連接。根據本發明，肽鍵可由各天然或非天然胺基酸上之任何羧基及胺基形成。例如：除了α-胺基以外再包含第二個胺基之α-胺基酸(例如：L-離胺酸)或除了α-羧基以外再包含第二個羧基之α-胺基酸(例如：L-天冬胺酸及L-麩胺酸)可以利用額外的胺基-或羧基連結。
依據習此相關技藝者之了解，本文所揭示肽序列代表胺基酸利用α-肽鍵連結之序列。序列中之「+」意指該附接法係使用胺基酸側鏈附接，形成第一個環之二硫鍵[例如：C+、(Pen)+、(N-Me)C+]。由於本發明肽包含兩個環，因此第二個環係以「**」或「++」表示，指示這兩個胺基酸接合形成第二個環。下列兩個實例將說明式(I)所繪結構與線性序列之相關性。
(1)序列 A**GGIC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IPd**中，C+與(Pen)+之「+」指示利用Cys-5與Pen-13之側鏈硫原子形成二硫鍵，及「**」指示Ala-1與d-Asp-16利用醯胺鍵形成頭接尾之環化，形成第二個環(此例中之X 17不存在)。根據式I之結構式如下(參見實例39)：
Figure 02_image004
同樣地，序列 (Ahx)**-GIC+SRS-((tBu)A)-PPI-((N-Me)C)+-IPD++-NH 2中，C+與((N-Me)C)+ 之「+」指示利用Cys-5與(N-Me)Cys-13之側鏈硫原子形成二硫鍵，及「**」與「++」指示在Ahx-1與Asp-16之側鏈之間形成頭接尾側鏈醯胺鍵(此例中之X 2與X 17不存在)。根據式I之結構式如下(參見實例40)，其中CONH 2基團指示利用Asp 16之側鏈與Ahx 1形成鍵結。
Figure 02_image006
依據習此相關技藝者之了解，本文所揭示肽序列係從左邊到右邊的順序表示，序列的左端為肽的「N-末端」(「胺基末端」、「N-端」)，及序列的右端為肽的「C-末端」(「羧基末端」、「C-端」) 。不論肽之N-末端是否確實包含胺基，此術語「N-末端(胺基末端、N-端)」均適用。不論肽之C-末端是否確實包含羧基，此術語「C-末端(羧基末端、C-端)」均適用。術語「末端胺基」係指出現在N-末端之任何胺基。術語「末端羧基」係指出現在C-末端之任何羧基。
根據本發明，在N-末端之X 1(若X 1存在時)、X 2(若X 1不存在且X 2存在時)、X 3(若X 1與X 2不存在且X 3存在時)或Ile 4(若X 1、X 2與X 3均不存在時)與C-末端之Ile 14(若X 15、X 16與X 17均不存在時)、X 15(若X 16與X 17不存在且X 15存在時)、X 16(若X 17不存在且X 16存在時)或X 17(若X 17存在時)之間形成第二個環。
本發明中，本文所採用天然發生及非天然發生胺基醯基殘基的名稱較佳為依據 Nomenclature of α-Amino Acids (Recommendations, 1974), Biochemistry, 14(2), (1975)中所制定之IUPAC學會有機化學命名法(IUPAC Commission on the Nomenclature of Organic Chemistry)及IUPAC-IUB學會生物化學命名法(IUPAC-IUB Commission on Biochemical Nomenclature)之建議規則命名。
本說明書中，天然發生之蛋白質形成性胺基酸通常以其慣用之單字母縮寫表示。或者，其等亦可由其三字母縮寫表示(例如：特別在序列表中)或以其全名表示，如下表2所示： 表2：天然胺基酸之標準縮寫
3- 字母 1- 字母 胺基酸   3- 字母 1- 字母 胺基酸
Ala A 丙胺酸   Leu L 白胺酸
Arg R 精胺酸   Lys K 離胺酸
Asn N 天冬醯胺酸   Met M 甲硫胺酸
Asp D 天冬胺酸   Phe F 苯基丙胺酸
Cys C 半胱胺酸   Pro P 脯胺酸
Glu E 麩胺酸   Ser S 絲胺酸
Gln Q 麩醯胺酸   Thr T 蘇胺酸
Gly G 甘胺酸   Trp W 色胺酸
His H 組胺酸   Tyr Y 酪胺酸
Ile I 異白胺酸   Val V 纈胺酸
在非蛋白質形成性或非天然發生之胺基酸中，除非另有其他說明，否則係以其全名說明(例如：鳥胺酸，等等)，其殘基經常使用三至六字母密碼，包括以下縮寫列表所列之彼等縮寫(表3)。
本文所採用術語「L-胺基酸」係指「L」異構型胺基酸，反之術語「D-胺基酸」係指「D」異構型胺基酸。另一種常用之方式為以大寫字母，如：Ala / A、Arg / R，等等指示L-胺基酸，及以小寫字母，如：ala / a、arg / r，等等指示D-胺基酸。
上表所示三字母密碼形式，亦即Ala、Arg、Asn，等等及常用於本說明書者，一般應包括D-及L型及高碳-及正-型，除非另有明確說明。字首「正(nor-)」係指由母化合物脫除一個碳及附隨之氫原子所衍生之結構類似物。字首「高碳(homo)」係指同系物中下一個更高的組員數。所提及之明確異構型將如上述，以大寫字首L-或D-表示(例如：D-Arg、L-Arg，等等)。因此明確提及之高碳-或正-型將分別以各字首說明(例如：homo-Arg、homo-R、nor-Arg、nor-R、homo-Cys、homo-C，等等)。
本文所揭示序列係在利用胺基酸側鏈形成第二個環的鍵上納入「-OH」部份體或「-NH 2」部份體之序列。在序列之此等鍵上之「-OH」或「‑NH 2」部份體係指羥基或胺基，分別對應於出現之羧基或醯胺基(-(C=O)-NH 2)。本發明各序列中，「-OH」部份體可經取代成C-末端「-NH 2」部份體，反之亦然。然而，該等選項中，以C-末端「-OH」部份體較佳。
根據另一項實施例，本發明提供一種雙環化合物，其可經單離及/或純化，包含、基本上組成為、或組成為式(I)或其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物或鹽之溶劑合物，其中 X 1代表選自下列所組成的群組之天然胺基酸：D-丙胺酸、L-丙胺酸、甘胺酸、D-離胺酸、L-離胺酸、L-半胱胺酸與L-麩胺酸，或代表選自下列所組成的群組之部份體：6-胺基己酸(Ahx)、L-2,3-二胺基丙酸(Dap)、L-2,4-二胺基丁酸(Dab)、γ-胺基丁酸(γ-Abu)、L-鳥胺酸(Orn)、1,13-二胺基-4,7,10-三氧雜十三烷-琥珀醯胺酸(TTDS)、9-胺基-4,7-二氧雜壬烷酸[PEG1(10個原子)]、15-胺基-4,7,10,13-四氧雜十五烷酸[PEG3(16個原子)]與己二酸，或X 1可能不存在，  X 2代表選自下列所組成的群組之天然胺基酸：甘胺酸與L-絲胺酸，或代表選自下列所組成的群組之部份體：N-甲基-甘胺酸、L-2,3-二胺基丙酸(Dap)、L-2,4-二胺基丁酸(Dab)、L-2-胺基丁酸(Abu)、傳明酸(TXA)、與4-(胺基甲基)苯甲酸，或X 2可能不存在， X 3代表選自下列所組成的群組之天然胺基酸：甘胺酸、L-丙胺酸與D-丙胺酸，或X 3可能不存在， Ile 4代表L-異白胺酸， Cys 5代表L-半胱胺酸， Ser 6代表L-絲胺酸， Arg 7代表L-精胺酸， Ser 8代表L-絲胺酸， X 9代表L-白胺酸或L-第三丁基丙胺酸 [(tBu)A)]， Pro 10代表L-脯胺酸， X 11代表L-脯胺酸或2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氫吲哚-2-羧酸(Oic)， Ile 12代表L-異白胺酸， X 13代表L-半胱胺酸、L-N-甲基半胱胺酸 [(N-Me)C]或L-青黴胺(Pen)， Ile 14代表L-異白胺酸， X 15代表L-脯胺酸，或X 15可能不存在， X 16代表選自下列所組成的群組之天然胺基酸：L-天冬胺酸、D-天冬胺酸與L-麩胺酸，或X 16可能不存在， X 17代表選自下列所組成的群組之天然胺基酸：L-絲胺酸、L-半胱胺酸、L-脯胺酸與L-離胺酸，或代表選自下列所組成的群組之部份體：L-2,3-二胺基丙酸(Dap)，或X 17可能不存在， 其中 Cys 5與X 13係利用兩個基團的硫原子之間之二硫鍵連接，形成第一個環， 其中在N-末端之X 1(若X 1存在時)、X 2(若X 1不存在且X 2存在時)、X 3(若X 1與X 2不存在且X 3存在時)或Ile 4(若X 1、X 2與X 3均不存在時)與C-末端之Ile 14(若X 15、X 16與X 17均不存在時)、X 15(若X 16與X 17不存在且X 15存在時)、X 16(若X 17不存在且X 16存在時)或X 17(若X 17存在時)之間形成第二個環， 且其中可能利用主幹中之α-肽鍵或利用一或兩個胺基酸側鏈形成此等第二個環，其中若未使用C-末端羧酸形成該第二個環時，則該C-末端羧基可能轉化成醯胺基團。
根據另一項實施例，本發明提供一種雙環化合物，其可經單離及/或純化，包含、基本上組成為、或組成為式(I)或其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物或鹽之溶劑合物，其中 X 1代表選自下列所組成的群組之天然胺基酸：L-丙胺酸、甘胺酸、L-離胺酸與L-麩胺酸，或代表選自下列所組成的群組之部份體：6-胺基己酸(Ahx)、L‑2,3-二胺基丙酸(Dap)、L-2,4-二胺基丁酸(Dab)、γ-胺基丁酸(γ-Abu)、L-鳥胺酸(Orn)、1,13-二胺基-4,7,10-三氧雜十三烷-琥珀醯胺酸(TTDS)、9-胺基-4,7-二氧雜壬烷酸[PEG1(10個原子)]、15-胺基-4,7,10,13-四氧雜十五烷酸[PEG3(16個原子)]與己二酸，  X 2代表選自下列所組成的群組之天然胺基酸：甘胺酸與L-絲胺酸，或代表選自下列所組成的群組之部份體：N-甲基-甘胺酸、L-2,3-二胺基丙酸(Dap)、L-2-胺基丁酸(Abu)、傳明酸(TXA)、與4-(胺基甲基)苯甲酸，或X 2可能不存在， X 3代表選自下列所組成的群組之天然胺基酸：甘胺酸與L-丙胺酸，或X 3可能不存在， Ile 4代表L-異白胺酸， Cys 5代表L-半胱胺酸， Ser 6代表L-絲胺酸， Arg 7代表L-精胺酸， Ser 8代表L-絲胺酸， X 9代表L-白胺酸或L-第三丁基丙胺酸 [(tBu)A)]， Pro 10代表L-脯胺酸， X 11代表L-脯胺酸或2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氫吲哚-2-羧酸(Oic)， Ile 12代表L-異白胺酸， X 13代表L-N-甲基半胱胺酸 [(N-Me)C]或L-青黴胺(Pen)， Ile 14代表L-異白胺酸， X 15代表L-脯胺酸，或X 15可能不存在， X 16代表選自下列所組成的群組之天然胺基酸：L-天冬胺酸與L-麩胺酸，或X 16可能不存在， X 17代表選自下列所組成的群組之天然胺基酸：L-脯胺酸與L-離胺酸，或代表選自下列所組成的群組之部份體：L-2,3-二胺基丙酸(Dap)，或X 17可能不存在， 其中 Cys 5與X 13係利用兩個基團的硫原子之間之二硫鍵連接，形成第一個環， 其中在N-末端之X 1與C-末端之Ile 14(若X 15、X 16與X 17均不存在時)、X 15(若X 16與X 17不存在且X 15存在時)、X 16(若X 17不存在且X 16存在時)或X 17(若X 17存在時)之間形成第二個環， 且其中可能利用主幹中之α-肽鍵或利用一或兩個胺基酸側鏈形成此等第二個環，其中若未使用C-末端羧酸形成該第二個環時，則該C-末端羧基可能轉化成醯胺基。
根據另一項實施例，本發明提供一種雙環化合物，其可經單離及/或純化，包含、基本上組成為、或組成為式(I)或其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物或鹽之溶劑合物，其中 X 1代表選自下列所組成的群組之天然胺基酸：L-丙胺酸與甘胺酸、L-離胺酸，或代表選自下列所組成的群組之部份體：6-胺基己酸(Ahx)、L-2,3-二胺基丙酸(Dap)、γ-胺基丁酸(γ-Abu)、L-鳥胺酸(Orn)、 X 2代表天然胺基酸甘胺酸，或代表選自下列所組成的群組之部份體：L-2,3-二胺基丙酸(Dap)、L-2-胺基丁酸(Abu)、傳明酸(TXA)、與4-(胺基甲基)­苯甲酸，或X 2可能不存在， X 3代表選自下列所組成的群組之天然胺基酸：甘胺酸與L-丙胺酸，或X 3可能不存在， Ile 4代表L-異白胺酸， Cys 5代表L-半胱胺酸， Ser 6代表L-絲胺酸， Arg 7代表L-精胺酸， Ser 8代表L-絲胺酸， X 9代表L-第三丁基丙胺酸 [(tBu)A)]， Pro 10代表L-脯胺酸， X 11代表2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氫吲哚-2-羧酸(Oic)， Ile 12代表L-異白胺酸， X 13代表L-青黴胺(Pen)， Ile 14代表L-異白胺酸， X 15代表L-脯胺酸，或X 15可能不存在， X 16代表選自下列所組成的群組之天然胺基酸：L-天冬胺酸與L-麩胺酸，或X 16可能不存在， X 17不存在， 其中Cys 5與X 13係利用兩個基團的硫原子之間之二硫鍵連接，形成第一個環， 其中在N-末端之X 1與C-末端之Ile 14(若X 15與X 16不存在時)、X 15(若X 16不存在且X 15存在時)或X 16(X 16存在時)之間形成第二個環， 且其中可能利用主幹中之α-肽鍵或利用一或兩個胺基酸側鏈形成此等第二個環，其中若未使用C-末端羧酸形成該第二個環時，則該C-末端羧基可能轉化成醯胺基團。
下文揭示本發明其他實施例。
本發明提供由式(I)組成之雙環化合物：
Figure 02_image001
(I) 其中 X 1、X 2、X 3、X 9、X 11、X 13、X 15、X 16、X 17具有本文之定義。
X 1可能存在或不存在。
較佳係X 1存在。
X 1，若存在時，代表天然胺基酸，其可呈D-或L-立體組態，係選自下列所組成的群組：丙胺酸、甘胺酸、離胺酸、半胱胺酸與麩胺酸，或代表選自下列所組成的群組之部份體：6-胺基己酸(Ahx)、L-2,3-二胺基丙酸(Dap)、L-2,4-二胺基丁酸(Dab)、3-疊氮基-L-丙胺酸、L-2-胺基丁酸(Abu)、γ-胺基丁酸(γ-Abu)、2-胺基異丁酸(Aib)、L-鳥胺酸(Orn)、1,13-二胺基-4,7,10-三氧雜十三烷-琥珀醯胺酸(TTDS)、9-胺基-4,7-二氧雜壬烷酸[PEG1(10個原子)]、12-胺基-4,7,10-三氧雜十二烷酸[PEG2(13個原子)]、15-胺基-4,7,10,13-四氧雜十五烷酸[PEG3(16個原子)]與己二酸。
X 1，若存在時，較佳係代表選自下列所組成的群組之天然胺基酸：D-丙胺酸、L-丙胺酸、甘胺酸、D-離胺酸、L-離胺酸、L-半胱胺酸與L-麩胺酸，或代表選自下列所組成的群組之部份體：6-胺基己酸(Ahx)、L-2,3-二胺基丙酸(Dap)、L-2,4-二胺基丁酸(Dab)、γ-胺基丁酸(γ-Abu)、L-鳥胺酸(Orn)、1,13-二胺基-4,7,10-三氧雜十三烷-琥珀醯胺酸(TTDS)、9-胺基-4,7-二氧雜壬烷酸[PEG1(10個原子)]、15-胺基-4,7,10,13-四氧雜十五烷酸[PEG3(16個原子)]與己二酸。
X 1，若存在時，更佳係代表選自下列所組成的群組之天然胺基酸：L-丙胺酸、甘胺酸、L-離胺酸與L-麩胺酸，或代表選自下列所組成的群組之部份體：6-胺基己酸(Ahx)、L-2,3-二胺基丙酸(Dap)、L-2,4-二胺基丁酸(Dab)、γ-胺基丁酸(γ-Abu)、L-鳥胺酸(Orn)、1,13-二胺基-4,7,10-三氧雜十三烷-琥珀醯胺酸(TTDS)、9-胺基-4,7-二氧雜壬烷酸[PEG1(10個原子)]、15-胺基-4,7,10,13-四氧雜十五烷酸[PEG3(16個原子)]與己二酸。
另一項實施例中，X 1，若存在時，代表選自下列所組成的群組之天然胺基酸：L-丙胺酸與甘胺酸、L-離胺酸，或代表選自下列所組成的群組之部份體：6-胺基己酸(Ahx)、L-2,3-二胺基丙酸(Dap)、γ-胺基丁酸(γ-Abu)、L-鳥胺酸(Orn)。
X 2可能存在或不存在。
X 2，若存在時，代表天然胺基酸，其可呈D-或L-立體組態，係選自下列所組成的群組：甘胺酸與絲胺酸，或代表選自下列所組成的群組之部份體：N-甲基-甘胺酸、L-2,3-二胺基丙酸(Dap)、L-2,4-二胺基丁酸(Dab)、L-2-胺基丁酸(Abu)、γ-胺基丁酸(γ-Abu)、傳明酸(TXA)、3-(胺基甲基)苯甲酸與4-(胺基甲基)苯甲酸。
X 2，若存在時，較佳係代表選自下列所組成的群組之天然胺基酸：甘胺酸與L-絲胺酸，或代表選自下列所組成的群組之部份體：N-甲基-甘胺酸、L-2,3-二胺基丙酸(Dap)、L-2,4-二胺基丁酸(Dab)、L-2-胺基丁酸(Abu)、傳明酸(TXA)、與4-(胺基甲基)苯甲酸。
X 2，若存在時，更佳係代表選自下列所組成的群組之天然胺基酸：甘胺酸與L-絲胺酸，或代表選自下列所組成的群組之部份體：N-甲基-甘胺酸、L-2,3-二胺基丙酸(Dap)、L-2-胺基丁酸(Abu)、傳明酸(TXA)、與4-(胺基甲基)苯甲酸。
另一項實施例中，X 2，若存在時，代表天然胺基酸甘胺酸，或代表選自下列所組成的群組之部份體：L-2,3-二胺基丙酸(Dap)、L-2-胺基丁酸(Abu)、傳明酸(TXA)、與4-(胺基甲基)苯甲酸。
X 3可能存在或不存在。
X 3，若存在時，代表天然胺基酸，其可呈D-或L-立體組態，係選自下列所組成的群組：甘胺酸與丙胺酸。
X 3，若存在時，較佳係代表選自下列所組成的群組之天然胺基酸：甘胺酸、L-丙胺酸與D-丙胺酸。
X 3，若存在時，更佳係代表選自下列所組成的群組之天然胺基酸：甘胺酸與L-丙胺酸。
X 9較佳係代表L-第三丁基丙胺酸 [(tBu)A)]。
X 11較佳係代表2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氫吲哚-2-羧酸(Oic)。
X 13較佳係代表L-N-甲基半胱胺酸 [(N-Me)C]或L-青黴胺(Pen)。
X 13更佳係代表L-青黴胺(Pen)。
X 15較佳係代表L-脯胺酸或X 15不存在。
X 15更佳係代表L-脯胺酸。
X 15亦更佳係不存在。
X 16可能存在或不存在。
X 16，若存在時，代表天然胺基酸，其可呈D-或L-立體組態，係選自下列所組成的群組：天冬胺酸與麩胺酸。
X 16，若存在時，較佳係代表選自下列所組成的群組之天然胺基酸：L-天冬胺酸、D-天冬胺酸與L-麩胺酸。
X 16，若存在時，更佳係代表選自下列所組成的群組之天然胺基酸：L-天冬胺酸與L-麩胺酸。
X 17可能存在或不存在。
X 17，若存在時，代表天然胺基酸，其可呈D-或L-立體組態，係選自下列所組成的群組：絲胺酸、半胱胺酸、脯胺酸與離胺酸，或代表選自下列所組成的群組之部份體：L-2,3-二胺基丙酸(Dap)、L-2,4-二胺基丁酸(Dab)與L-炔丙基甘胺酸。
X 17，若存在時，較佳係代表選自下列所組成的群組之天然胺基酸：L-絲胺酸、L-半胱胺酸、L-脯胺酸與L-離胺酸，或代表選自下列所組成的群組之部份體：L-2,3-二胺基丙酸(Dap)。
X 17，若存在時，更佳係代表選自下列所組成的群組之天然胺基酸：L-脯胺酸與L-離胺酸，或代表選自下列所組成的群組之部份體：L-2,3-二胺基丙酸(Dap)。
另一項實施例中，X 17不存在。
本發明另一項實施例中，X 1與X 16存在且X 17不存在。
本發明另一項實施例中，X 1與X 15存在且X 16與X 17不存在。
化學基團、非天然胺基酸或部份體可在本文中以縮寫表示，如表3所示。 表 3 ：序列中之化學基團、非天然胺基酸或其他部份體所採用之縮寫 / 敘述與命名法
縮寫 / 敘述 縮寫 / 敘述定義
((N-Me)C) L-N-甲基半胱胺酸
(N-Me)G N-甲基-甘胺酸
3-(胺基甲基)苯甲酸 3-(胺基甲基)苯甲酸
4-(胺基甲基)苯甲酸 4-(胺基甲基)苯甲酸
Abu L-2-胺基丁酸
己二酸 己二酸
Ahx 6-胺基己酸
Aib 2-胺基異丁酸
(tBu)A L-第三丁基丙胺酸
3-疊氮基-L-丙胺酸 3-疊氮基-L-丙胺酸
Dab L-2,4-二胺基丁酸
Dap L-2,3-二胺基丙酸
γ-Abu γ-胺基丁酸
L-Propargylglycine L-炔丙基甘胺酸
Oic  2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氫吲哚-2-羧酸
Orn L-鳥胺酸
PEG1(10個原子) 9-胺基-4,7-二氧雜壬烷酸
PEG2(13個原子) 12-胺基-4,7,10-三氧雜十二烷酸
PEG3(16個原子) 15-胺基-4,7,10,13-四氧雜十五烷酸
Pen L-青黴胺
Suberic acid 辛二酸
TXA 傳明酸
TTDS 1,13-二胺基-4,7,10-三氧雜十三烷-琥珀醯胺酸
本發明進一步包括所說明肽之類似物及衍生物。根據本發明肽或胺基酸序列之「類似物」或「衍生物」術語特定言之包括與該序列具有至少80%或至少85%序列一致性，較佳係至少90%，更佳係至少95%，及甚至更佳係至少99%一致性且具有相同或可比擬之性質或活性之任何胺基酸序列。序列一致性可採用常見技術決定，如：目視比對或採用此領域常用之任何電腦工具。其實例包括使用預設參數之BLAST程式。
本發明肽或胺基酸序列之類似物或衍生物可能來自本發明肽之序列因突變或變異所衍生的變化，包括刪除或插入一個或多個胺基酸或取代一個或多個胺基酸，或甚至交替剪接。可能組合數種此等修飾。較佳者，本發明胺基酸序列之類似物包含相對於胺基酸序列之保留性取代。
本文所採用術語「保留性取代」係指一或多個胺基酸被另一個生物上類似之殘基置換。其實例包括利用類似特徵之胺基酸殘基取代，例如：小型胺基酸、酸性胺基酸、極性胺基酸、鹼性胺基酸、疏水性胺基酸及芳香系胺基酸。參見例如：下表4之列表，其中胺基酸之保留性取代係利用物化特性分類。I：中性，親水性；II：酸類及醯胺類；III：鹼性；IV：疏水性；V：芳香系，大型胺基酸；VI：中性或疏水性；VII：酸性；VIII：極性。 表 4 ：根據其物化特性分類之胺基酸
I II III IV V VI VII VIII
Ala Asn His Met Phe Ala Glu Met
Ser Asp Arg Leu Tyr Leu Asp Ser
Thr Glu Lys Ile Trp Ile   Thr
Pro Gln   Val   Pro   Cys
Gly     Cys   Gly   Asn
          Val   Gln
除非另有其他說明，否則本發明所有肽為TFA鹽。本發明進一步包含如本文所定義肽之醫藥上可接受之鹽及無鹽游離型。其中，醫藥上可接受之鹽代表可於水或油中溶解或勻散之本發明肽或化合物之鹽型或兩性離子型，其等適合治療疾病，沒有不當毒性、刺激性、與過敏反應；符合合理之效益/風險比值，且其等可有效用於計畫用途。該等鹽可在化合物最終單離及純化期間製備，或可另外由胺基與合適酸反應製備。代表性酸加成鹽包括乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、檸檬酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、碳酸鹽、二葡糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、甲酸鹽、富馬酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽(isethionate)、乳酸鹽、馬來酸鹽、均三甲苯基磺酸鹽、甲磺酸鹽、萘磺酸鹽、菸酸鹽、2-萘磺酸鹽、草酸鹽、羥基萘酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、三氯乙酸鹽、三氟乙酸鹽、磷酸鹽、麩胺酸鹽、碳酸氫鹽、對甲苯磺酸鹽、及十一烷酸鹽。較佳酸加成鹽包括三氟乙酸鹽、甲酸鹽、鹽酸鹽、及乙酸鹽。
此外，本發明化合物之胺基可經過甲基、乙基、丙基、與丁基之氯化物、溴化物及碘化物；二甲基、二乙基、二丁基、與二戊基之硫酸酯；癸基、月桂基、肉豆蔻基、與硬脂基之氯化物、溴化物及碘化物；及苯甲基與苯乙基之溴化物進行四級化。可用於形成醫療上可接受之加成鹽之酸類實例包括無機酸，如：鹽酸、氫溴酸、硫酸、與磷酸，及有機酸，如：草酸、馬來酸、琥珀酸、與檸檬酸。醫藥上可接受之鹽適合為選自例如：酸加成鹽與鹼性鹽中之鹽。酸加成鹽實例包括氯化物鹽、檸檬酸鹽及乙酸鹽。
鹼性鹽實例包括其中陽離子選自鹼金屬陽離子之鹽，如：鈉或鉀離子，鹼土金屬陽離子之鹽，如：鈣或鎂離子，及經取代之銨離子之鹽，如：N(R 1)(R 2)(R 3)(R 4) +型離子，其中R 1、R 2、R 3及R 4彼此分別獨立通常為氫、視需要經取代之C 1-6-烷基、或視需要經取代之C 2‑6-烯基。相關C 1-6-烷基實例包括甲基、乙基、1-丙基及2-丙基。可能相關之C 2-6-烯基實例包括乙烯基、1-丙烯基、及2-丙烯基。其中以選自鈉、鉀及鈣之陽離子之鹽較佳。
其他醫藥上可接受之鹽類實例說明於「 Remington's Pharmaceutical Sciences」，第17版 ， Alfonso R. Gennaro(編輯) , Mark Publishing Company, Easton, PA, USA, 1985(及其較新版本)、「 Encyclopaedia of Pharmaceutical Technology」，第3版 ， James Swarbrick ( 編輯 ), Informa Healthcare USA (Inc.), NY, USA, 2007，及 J. Pharm. Sci. 66: 2 (1977)中。此外，有關合適鹽類之概述可參見Stahl與Wermuth之 Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use(Wiley-VCH, 2002)。其他合適鹼鹽係由形成無毒性鹽之鹼類形成。代表性實例包括鋁、精胺酸、芐乙二胺(benzathine)、鈣、膽鹼、二乙基胺、二醇胺、甘胺酸、離胺酸、鎂、葡甲胺、乙醇胺(olamine)、鉀、鈉、三羥甲基胺(tromethamine)、與鋅等鹽類，較佳為膽鹼。亦可能形成酸與鹼之半鹽類，例如：半硫酸鹽與半鈣鹽。
本發明進一步包括如本文所定義肽之溶劑合物。其中術語「溶劑合物」係指溶質(例如：根據本發明肽或其醫藥上可接受之鹽)與溶劑之間形成之限定化學計量之複合物。此相關溶劑可能為例如：水、乙醇或另一種醫藥上接受，通常為小分子之有機物質，如(但不限於)：乙酸或乳酸。當該溶劑為水時，此等溶劑合物通常稱為水合物。
根據本發明化合物具有適用之藥理性質，可用於預防及治療人類與動物之疾患。
本發明內容中，術語「治療」或「處理」包括抑制、延遲、遏止、減輕、減弱、限制、降低、壓制、逆轉或治癒疾病、病症、疾患、損傷或健康衰弱、或此等狀態與/或此等狀態之症狀之發展、過程或演進。咸了解，術語「療法」係術語「治療」之同義字。
本發明內容中，術語「預防」、「防止」或「防範」係以同義字使用，並意指避免或降低染上、經歷、罹患或患有疾病、病症、疾患、損傷或健康衰弱、或此等狀態與/或此等狀態之症狀之發展、過程或演進之風險。
可能部份或完全治療或預防疾病、病症、疾患、損傷或健康衰弱。
根據本發明化合物特別適合治療及/或預防心血管、心肺、腎、肺部、纖維化、血栓性栓塞、及發炎疾患。
因此，根據本發明化合物可用於醫藥，供治療及/或預防下列心血管與心肺疾患及其後遺症，如，例如：發炎心臟疾病、心肌炎、心內膜炎、心包膜炎、涉及心臟及未涉及心臟之風濕熱、急性風濕性心包膜炎、急性風濕性心內膜炎、急性風濕性心肌炎、出現及未出現心內膜炎之慢性風濕性心臟疾病、心臟瓣膜炎、心包膜炎、缺血性心臟疾病(如：不穩定狹心症及急性心肌梗塞)、心房及心室心律不整及傳導受阻，如，例如：第 I-III級房室傳導阻滯、上心室心跳過快、心房纖維性顫動、心房撲動、心室纖維性顫動、心室撲動、心室心跳過快、尖端扭轉型室速心跳過快、心房及心室期外收縮、AV-聯結性期外收縮、病竇症候群、因腦動脈阻塞及狹窄造成之中風(繼例如：血栓性栓塞、動脈粥樣硬化、感染及發炎血管病灶之後之腦梗塞)，供治療及/或預防因腦內或臚內出血造成之中風、因動脈、小動脈及毛血管疾病(例如：血栓性栓塞、動脈粥樣硬化、感染及發炎血管病灶、變形性或閉塞性動脈內膜炎、及動脈瘤剝離)造成之末梢缺血性組織傷害(例如：動脈粥樣硬化壞疽)、靜脈炎及血栓性靜脈炎，供預防循環系統之手術後疾患，例如：全身性發炎反應症候群、手術後血管麻痺、心臟切開術後症候群、手術後低血壓及心臟衰竭，供預防及治療在例如：血栓溶解療法、經皮穿腔血管成形術(PTA)、經皮穿腔冠狀動脈血管成形術(PTCA)、繞道手術及心、肺、肝及腎臟移植後之缺血再灌流損傷及器官功能障礙，及供預防及治療腎臟移植後之移植物功能延遲。
根據本發明化合物亦可藉由預防MASP所介導最終器官傷害，而適合治療休克，如：心因性休克、敗血性休克及過敏性休克。
此外，根據本發明化合物具有抗發炎作用，因此可用為消炎劑，供治療及/或預防敗血病(SIRS)、多重器官衰竭(MODS、MOF)、腎臟之發炎疾患、慢性腸部發炎(IBD，克隆氏症(Crohn´s Disease)，UC)、胰臟炎、腹膜炎、類風濕疾患、發炎性皮膚疾患及發炎性眼睛疾患。
根據本發明化合物基於其活性型態，特別適合治療及/或預防敗血病及全身性發炎反應症候群之心血管、肺、腦及腎臟之後遺症。
根據本發明化合物特別適合在復甦及手術干預，例如(但不限於)：繞道手術、心臟辦膜手術、及主動脈瘤手術上，治療及/或預防心臟及腎臟及其他器官之與缺血及/或再灌流相關之傷害。
根據本發明化合物亦可用於預防器官或組織之缺血及/或再灌流相關傷害，亦可特別在手術干預及移植醫學領域上，作為來自人類或動物之器官、部份器官、組織或部份組織之灌流及保存溶液之添加劑。
此外，根據本發明化合物適合治療及/或預防血液與形成血液之器官及免疫系統之疾病 ，包括(但不限於)：後天溶血性貧血、溶血性-尿毒症症候群、陣發性夜間血紅素尿症[爾基亞法-米凱利症(Marchiafava-Micheli)]、凝血缺陷、紫斑症及其他出血病症、瀰漫性血管內凝血[脫纖維蛋白化症候群]、本態性(出血性)血小板增多症、猛爆性紫斑症、血栓性血小板減少紫斑症、過敏性紫斑症、過敏性脈管炎、淋巴球減少症及粒性白細胞增多症、及類肉瘤病。
此外，根據本發明化合物適合治療及/或預防糖尿病後遺症，如：糖尿病之腎併發症、糖尿病性腎病變、毛細血管內腎絲球腎病、糖尿病之眼睛併發症、糖尿病性視網膜病變、神經併發症、糖尿病性多發性神經病變、及循環併發症，如：微血管病變及壞疽。
此外，根據本發明化合物適合治療及/或預防神經系統發炎疾病 ，如：多發性硬化、腦膜炎及腦炎、細菌性與病毒性腦膜炎及腦炎、免疫接種後腦炎、發炎性多發性神經病變、及感染與寄生蟲疾病之多發性神經病變。
根據本發明化合物進一步適合治療及/或預防眼睛及其附屬器之疾病，如：急性與亞急性虹膜睫狀體炎、脈絡膜退化、脈絡膜視網膜發炎、感染與寄生蟲疾病之脈絡膜視網膜發炎、背景視網膜病變及視網膜血管變化、增生性視網膜病變、黃斑部與後眼極部退化、周邊視網膜退化、老年性黃斑部退化(AMD)，包括乾性(非滲液性)與濕性(滲液性、新生血管) AMD、脈絡膜新生血管(CNV)、脈絡膜新生血管膜(CNVM)、黃斑囊樣水腫(CME)、視網膜前膜(ERM)及黃斑部裂孔、近視相關之脈絡膜新生血管、血管樣與血管條紋、視網膜剝離、糖尿病性視網膜病變、糖尿病性黃斑部水腫(DME)、視網膜色素上皮中之萎縮及肥大病灶、視網膜靜脈阻塞、脈絡膜視網膜靜脈阻塞、黃斑部水腫、與視網膜靜脈阻塞相關之黃斑部水腫、眼睛與附屬器之手術後疾患，例如：白內障手術後之角膜病變。
此外，根據本發明化合物適合治療及/或預防呼吸系統疾病，包括(但不限於)：病毒、細菌、及真菌性肺炎、放射性肺炎、塵肺症、過敏性肺泡炎、因特定有機塵灰造成之呼吸道疾病，例如：農夫肺、支氣管炎、及因化學物質、氣體、燻煙與蒸氣造成之肺炎及肺水腫、藥物誘發之間質性肺疾患、成人呼吸窘迫症候群(ARDS)及急性肺損傷(ALI)、急性肺水腫、出現纖維化之間質性肺病、類風濕肺病、其他瀰漫性結締組織疾患之呼吸疾患，如：與全身紅斑性狼瘡、硬皮症及韋格納肉芽腫(Wegener granulomatosis)相關者。
此外，根據本發明化合物適合治療及/或預防由諸如(但不限於)：流感病毒(例如：由血清型H1N1、H5N1、H7N9菌株引起)、及冠狀病毒(例如：SARS-CoV、 嚴重急性呼吸症候群 (SARS)之病原菌、MERS-CoV、 中東呼吸症候群 (MERS)之病原菌、及 COVID-19 大流行之病原菌 SARS-CoV-2)之病毒感染引起之微血管損傷、血栓與連續血栓性栓塞事件。
此外，根據本發明化合物適合治療及/或預防消化系統疾病，包括(但不限於)：非感染性腸炎及結腸炎，如：克隆氏症(Crohn disease)及潰瘍性結腸炎、胰臟炎(包括急性酒精-及藥物誘發之胰臟炎)、膽囊炎、發炎性肝病、肝腎症候群、肝臟之手術後疾患，例如：肝臟手術後。
根據本發明化合物基於其活性型態，特別適合治療及/或預防泌尿系統疾病，包括(但不限於)：急性腎衰竭、急性腎臟損傷(AKI)、手術相關之AKI、敗血病相關之AKI、顯影劑與化療法誘發之AKI、腎臟之缺血與梗塞、諸如：血液透析及血液透析過濾背景下之過敏之併發症、膀胱炎、放射線性膀胱炎、攝護腺之發炎疾病、及子宮內膜異位症。
根據本發明化合物亦適合治療及/或預防燒傷及受傷之後遺症，包括(但不限於)：創傷之早期併發症、創傷性無尿、擠壓傷症候群、擠壓傷後之腎衰竭、肌肉之創傷性缺血、創傷性腦損傷、曝露到電流、放射線及極度環境空氣溫度與壓力後、曝露到煙霧、火、與火焰後、接觸到有毒動物與植物後之器官傷害。
根據本發明化合物基於其活性型態，進一步適合治療發炎性皮膚疾病，例如：皮膚紅斑狼瘡、水皰疾患及表皮崩解性皮膚疾病，如：天疱瘡亞型、丘疹鱗屑性疾患，如：乾癬、皮膚炎與濕疹、蕁麻疹及紅斑。
根據另一項實施例，本發明提供一種雙環化合物，其可經單離及/或純化，包含、基本上組成為、或組成為式(I)或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，用於預防及治療疾病。
根據另一項實施例，本發明提供一種雙環化合物，其可以單離及/或純化，包含、基本上組成為、或組成為式(I)或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，用於預防及治療MASP-相關疾患。
根據另一項實施例，本發明提供一種雙環化合物，其可經單離及/或純化，包含、基本上組成為、或組成為式(I)或其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物或鹽之溶劑合物，其作用係作為MASP-1及/或MASP-2抑制劑及/或其抑制C3沉積，用於預防及治療MASP-相關疾患。
根據另一項實施例，本發明提供一種雙環化合物，其可經單離及/或純化，包含、基本上組成為、或組成為式(I)或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，用於預防及治療心血管及心肺疾患、休克、發炎疾患、敗血病之心血管、肺、腦及腎後遺症、缺血及/或再灌流相關傷害、急性腎損傷、移植物保護及延遲的移植物功能、血液與形成血液之器官及免疫系統之疾病、糖尿病後遺症、神經系統發炎疾病、眼睛疾病、皮膚疾病、呼吸、消化或生殖泌尿系統疾病、及燒傷與受傷之後遺症。
根據另一項實施例，本發明提供一種雙環化合物，其可經單離及/或純化，包含、基本上組成為、或組成為式(I)或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其係用於預防及治療泌尿系統疾病系統，包括(但不限於)：急性腎衰竭、急性腎臟損傷(AKI)、手術相關之AKI、敗血病相關之AKI、顯影劑與化療法誘發之AKI、腎臟之缺血與梗塞、如：血液透析及血液透析過濾背景下之過敏之併發症、膀胱炎、放射線性膀胱炎、攝護腺之發炎疾病、及子宮內膜異位症。
本發明進一步有關一種治療或緩解受試者或患者之如上述定義MASP-相關疾患之方法，其係對該有需要之受試者或患者投與至少一種本文所定義之肽或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物、如上述定義之複合物、或醫藥組成物。
本文所採用術語「患者」、「受試者」或「個體」可能交換使用，且係指人類或非人類動物。此等術語包括哺乳動物，如：人類、靈長類、牲畜動物(例如：牛、豬)、寵物動物(例如：狗、貓)及囓齒類(例如：小鼠及大鼠)。術語「哺乳動物」係指任何哺乳動物物種，如：人類、小鼠、大鼠、狗、貓、倉鼠、天竺鼠、兔、牲畜，及類似物。
根據本發明至少一種如本文所定義之肽或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物、或如上述定義之複合物係以醫療有效量投與患者或受試者，其中本發明化合物之「醫療有效量」意在說明足以治療如本文所定義MASP-相關疾患時之本發明化合物用量。特定言之，醫療有效量將可以達成適用於任何醫學處理之所需效益/風險比值。
如本文所定義之雙環化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物或複合物或醫藥組成物(如下文定義)在下文中亦統稱為「本發明MASP抑制性肽」。
有些實施例中，本發明MASP抑制性肽會結合MASP-1及/或MASP-2，例如：人類MASP-1及/或MASP-2。某些實施例中，本發明MASP抑制性肽特異性結合人類MASP-1及/或MASP-2。本文所採用「特異性結合」係指特異性結合劑會比其他製劑優先與樣本中指定配體交互作用。例如：特異性結合指定配體之特異性結合劑會在適當條件下與指定配體結合，其可觀察到之結合量或結合程度高於與樣本中其他組份之任何非特異性交互作用。合適之條件為彼等容許指定之特異性結合劑與指定之配體之間交互作用之條件。此等條件包括pH、溫度、濃度、溶劑、培養時間、及類似條件，且可能隨指定特異性結合劑及配對配體之間不同，但很容易由彼等習此相關技藝者決定。有些實施例中，本發明MASP抑制性肽與MASP-1及/或MASP-2結合之特異性高於MASP抑制性肽參考化合物(例如：本文所提供任何一種MASP抑制性肽參考化合物)。
因此本發明進一步有關一種複合物，其包含與MASP-1或MASP-2結合之如本文所定義至少一種雙環化合物。
有些實施例中，本發明MASP抑制性肽對MASP-1及/或MASP-2，尤指人類MASP-1及/或MASP-2之特異結合性比所選擇MASP抑制性肽參考化合物高出至少約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、200%、300%、400%、500%、700%、1000%、或10,000%。
有些實施例中，本發明MASP抑制性肽對MASP-1及/或MASP-2，尤指人類MASP-1及/或MASP-2之特異結合性比所選擇MASP抑制性肽參考化合物高出至少約1、2、3、4、5倍，或至少約10、20、50、或100倍。
有些實施例中，本發明MASP抑制性肽對MASP-1及/或MASP-2之結合親和性比所選擇MASP抑制性肽參考化合物高出至少約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、200%、300%、400%、500%、700%、1000%、或10,000%。
有些實施例中，本發明MASP抑制性肽對MASP-1及/或MASP-2之結合親和性比所選擇MASP抑制性肽參考化合物高出至少約1、2、3、4、5倍，或至少約10、20、50、100或1000倍。
有些實施例中，本發明MASP抑制性肽具有抑制MASP-1及/或MASP-2 (例如：大鼠或人類MASP-1及/或MASP-2)之活性。有些實施例中，該活性為活體外或活體內活性，例如：本文所說明活體外或活體內活性。有些實施例中，本發明MASP抑制性肽對MASP-1及/或MASP-2 活性之抑制性為所選擇MASP抑制性肽參考化合物之抑制性之至少約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、200%、300%、400%、500%、700%、1000%、或10,000%。
某些實施例中，本發明MASP抑制性肽對MASP-1及/或MASP-2 之抑制性比所選擇MASP抑制性肽參考化合物高出1.5、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、30、40、50、60、70、80、90、100、120、140、160、180、或200倍。
另一項特別實施例中，根據本發明MASP抑制性肽之MASP-1及/或MASP-2抑制性活性係藉由測量其等對MASP-1及/或MASP-2 (例如：大鼠或人類MASP-1及/或MASP-2)之IC 50而測定。可採用本文所示生化分析法測定對MASP-1及/或MASP-2之IC 50。特別佳係本發明MASP抑制性肽對MASP-1及/或MASP-2之IC 50為 ＜ 1,000 nM，較佳為≤ 500 nM，更佳為≤ 300 nM、更佳為≤ 250 nM、更佳為≤ 200 nM、更佳為≤ 150 nM、更佳為≤ 100 nM、更佳為≤ 75 nM、更佳為≤ 50 nM、更佳為≤ 45 nM、更佳為≤ 40nM、更佳為≤ 35nM、更佳為≤ 30 nM。
有些實施例中，本發明MASP抑制性肽對MASP-1及/或MASP-2 (例如：大鼠或人類MASP-1及/或MASP-2)之IC 50低於所選擇MASP抑制性肽參考化合物 (亦即較高結合親和性)。有些實施例中，根據本發明MASP抑制性肽在MASP-1及/或MASP-2競爭結合分析中之IC 50比所選擇MASP抑制性肽參考化合物降低至少約5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、200%、300%、400%、500%、700%、1000%、或10,000%。
有些實施例中，本發明MASP抑制性肽於活體外對人類MASP-1及/或MASP-2 活性之抑制性比所選擇MASP抑制性肽參考化合物高出至少約5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、97%、98%、99%，或超過99%、100%、200% 300%、400%、500%、700%、1000%或10,000%。
有些實施例中，本發明MASP抑制性肽於活體內對人類MASP-1及/或MASP-2 活性之抑制性比所選擇MASP抑制性肽參考化合物高出至少約5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、97%、98%、99%，或超過99%、100%、200% 300%、400%、500%、700%、1000%或10,000%。
某些實施例中，本文所採用具有「MASP-1及/或MASP-2抑制性活性」之MASP抑制性肽意指當投與該化合物(例如：採用非經腸式途徑，例如：注射，或採用經肺部、鼻、舌下、舌部、頰、皮膚、穿皮式、結膜、眼睛途徑或呈植入物或人工支架、經口投與)時，其會隨劑量及隨時間變化，在活體外或在受試者內(例如：小鼠或人類)中有能力抑制C3沉積。
有些實施例中，本發明MASP抑制性肽具有C3沉積(例如：人類C3沉積)抑制性。有些實施例中，C3沉積抑制性係採用活體外或於活體內抑制性決定。有些實施例中，本發明MASP抑制性肽對C3沉積之抑制性為所選擇MASP抑制性肽參考化合物之抑制性之至少約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、200%、300%、400%、500%、700%、1000%、或10,000%。
某些實施例中，本發明MASP抑制性肽對C3沉積之抑制性比所選擇MASP抑制性肽參考化合物高出1.5、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、30、40、50、60、70、80、90、100、120、140、160、180、或200倍。
另一項特別實施例中，根據本發明 MASP抑制性肽之MASP-1及/或MASP-2抑制性活性係於活體外或在受試者(例如：小鼠或人類)中測量抑制C3沉積之IC 50而測定。可採用本文所示之C3人類沉積分析法測定對C3-沉積之IC 50。特別佳為本發明MASP抑制性肽對C3沉積之IC 50為  ＜ 1,000 nM，較佳為≤ 500 nM，更佳為≤ 300 nM、更佳為≤ 250 nM、更佳為≤ 200 nM、更佳為≤ 150 nM、更佳為≤ 100 nM、更佳為≤ 75 nM、更佳為≤ 50 nM、更佳為≤ 45 nM、更佳為≤ 40nM、更佳為≤ 35nM、更佳為≤ 30 nM。
有些實施例中，本發明MASP抑制性肽於活體外對C3-沉積之抑制性比所選擇MASP抑制性肽參考化合物高出至少約5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、97%、98%、99%，或超過99%、100%、200% 300%、400%、500%、700%、1000%或10,000%。
有些實施例中，本發明MASP抑制性肽於活體內對C3-沉積之抑制性比所選擇MASP抑制性肽參考化合物高出至少約5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、97%、98%、99%，或超過99%、100%、200% 300%、400%、500%、700%、1000%或10,000%。
特別佳係根據本發明肽作為MASP抑制性肽，其活性係依據根據本發明實例之至少一種特異分析法及/或活體內試驗測定。
基於其上述MASP-1及/或MASP-2抑制性活性及C3-沉積之抑制活性，一種包含本發明肽之化合物或本發明肽(包括其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，及上述複合物)適用於預防及治療MASP-1及/或MASP-2-相關疾患。
根據另一項實施例，本發明提供一種雙環化合物，其可經單離及/或純化，包含、基本上組成為、或組成為式(I)或其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物、或鹽之溶劑合物，其作用為作為MASP-1及/或MASP-2抑制劑及/或其抑制C3沉積。
根據本發明化合物可以單獨使用或若必要時，可與其他活性化合物組合使用。本發明進一步有關一種醫藥，其包含至少一種根據本發明化合物及一或多種其他活性化合物，特定言之，供治療及/或預防上述疾病。適合組合之活性化合物可述及例如及較佳為： ․    抑制環狀鳥苷單磷酸(cGMP)及/或環狀腺苷單磷酸(cAMP)降解之化合物，例如：磷酸二酯酶(PDE) 1、2、3、4與/或5之抑制劑，特定言之PDE 4抑制劑，如：羅氟司特(roflumilast)或利瓦司特(revamilast)，及PDE 5抑制劑 ，如：昔多芬(sildenafil)、伐地那非(vardenafil)、他達拉非(tadalafil)、烏地那非(udenafil)、達生他非(dasantafil)、阿伐那菲(avanafil)、米羅那非(mirodenafil)或羅地那非(lodenafil)； ․    不依賴NO，但依賴血色素之鳥苷酸環化酶刺激劑，特定言之利奥西呱(riociguat)、尼樂西呱(nelociguat)、菲利西呱(vericiguat)，及WO 00/06568、WO 00/06569、WO 02/42301、WO 03/095451、WO 2011/147809、WO 2012/004258、WO 2012/028647與WO 2012/059549中說明之化合物； ․    前列環素類似物與IP受體促效劑，例如及較佳為：伊洛前列素(iloprost)、貝前列素(beraprost)、曲前列素(treprostinil)、依前列醇(epoprostenol)、NS-304、希樂普(selexipag)、或拉寧納帕(ralinepag)； ․    內皮肽受體拮抗劑，例如及較佳為：波生坦(bosentan)、達盧生坦(darusentan)、安倍生坦(ambrisentan)、馬西替坦(macicentan)、或希塔生坦(sitaxsentan)； ․    血管加壓素受體拮抗劑，例如：托伐普坦(tolvaptan)、考尼伐坦(conivaptan)、瑞伐普坦(relcovaptan)； ․    人類嗜中性球彈性蛋白酶(HNE)抑制劑，例如及較佳為：西維來斯他(sivelestat)或DX-890(利他(Reltran))； ․    抑制訊號轉導級聯之化合物，特定言之選自酪胺酸激酶抑制劑之群中，例如及較佳為：達沙替尼(dasatinib)、尼祿替尼(nilotinib)、波舒替尼(bosutinib)、瑞格拉非尼(regorafenib)、蕾莎瓦(sorafenib)、紓癌特(sunitinib)、西地尼布(cediranib)、阿西替尼(axitinib)、替拉替尼(telatinib)、伊馬替尼(imatinib)、布立尼布(brivanib)、帕唑帕尼(pazopanib)、瓦他拉尼(vatalanib)、吉非替尼(gefitinib)、厄洛替尼(erlotinib)、拉帕替尼(lapatinib)、卡紐替尼(canertinib)、來他替尼(lestaurtinib)、培利替尼(pelitinib)、舒馬賽尼(semaxanib)、馬西替尼(masitinib)、或坦度替尼(tandutinib)； ․    選自ASK1激酶抑制劑群中之訊號轉導調控劑，例如：希樂色提(selonsertib)； ․    ρ(Rho)-激酶抑制劑，例如及較佳為：法舒地爾(fasudil)、Y‑27632、SLx-2119、BF-66851、BF-66852、BF-66853、KI-23095或BA-1049； ․    降低血管壁通透性(水腫形成)之活性成份，例如及較佳為：ALK1-Smad1/5 訊號傳導途徑之抑制劑、VEGF及/或PDGF訊號傳導途徑之抑制劑、環氧合酶抑制劑、血漿激肽釋放酶-激肽系統(kallikrein-kinin system)之抑制劑、或鞘胺醇-1-磷酸訊號傳導途徑之抑制劑；及/或 ․    皮質類固醇，例如：可體松(cortisone)、皮質醇(cortisol)、潑尼松龍(prednisolone)、甲基潑尼松龍、去炎松(triamcinolone)、或地塞米松(dexamethasone)； ․    降低氧化壓力下之器官傷害之活性成份，例如及較佳為：補體系統之抑制劑，尤指補體C5a受體之拮抗劑、抗C5抗體或5-HT1A受體之促效劑； ․    轉錄因子Nrf2之調控劑、刺激劑及加強劑，例如：CXA-10、奥替普拉(Oltipraz)、富馬酸二甲酯或巴多索隆(Bardoxolone)； ․    腎上腺髓素及腎上腺髓素衍生物，例如：聚乙二醇化腎上腺髓素，及腎上腺髓素安定劑，例如：阿德瑞珠單抗(adrecizumab)； ․    抑制缺氧誘發因子脯胺醯基羥化酶之化合物(HIF-PH抑制劑)，例如：莫立司他(molidustat)、韋達司他(vadadustat)、洛達司他(roxadustat)、達普司他(daprodustat)或達希司他(daprodustat)； ․    抑制誘發細胞死亡及細胞凋亡途徑之化合物，例如：QPI-1002； ․    C-Met促效劑及肝細胞生長因子擬似物，例如：利發靈(refanalin)； ․    鹼性磷酸酶及重組鹼性磷酸酶； ․    抑制發炎反應及T 細胞增生之化合物，例如：CD28拮抗化合物，如：瑞替莫德(Reltecimod)； ․    調控Th17 T細胞活化作用之化合物，例如：RORc/ROR-γ轉錄因子之調控劑； ․    拮抗Th17 T 細胞反應之化合物例如：抗IL-17與抗IL-23抗體，例如：抑希克單抗(Ixekizumab)、希庫克單抗(Secukinumab)、布洛達單抗(Brodalumab)、優特齊單抗(Ustekinumab)、古希克單抗(Guselkumab)、或PTG-200； ․    抗血栓劑，例如及較佳為：選自血小板凝集抑制劑、抗凝血劑或促纖維蛋白分解物質之群中； ․    本發明較佳實施例中，根據本發明化合物係與血小板凝集抑制劑組合投藥，例如及較佳為：阿斯匹靈(aspirin)、氯吡格雷(clopidogrel)、噻氯匹定(ticlopidine)或雙嘧達莫(dipyridamole)； ․    本發明較佳實施例中，根據本發明化合物係與凝血酶抑制劑組合投藥，例如及較佳為：希美加群(ximelagatran)、美拉加群(melagatran)、達比加群(dabigatran)、比伐盧定(bivalirudin)或克立生(Clexane)。 ․    本發明較佳實施例中，根據本發明化合物係與GPIIb/IIIa拮抗劑組合投藥，例如及較佳為：替羅非班(tirofiban)或阿昔單抗(abciximab)。 ․    本發明較佳實施例中，根據本發明化合物係與Xa因子抑制劑組合投藥，例如及較佳為：利伐沙班(rivaroxaban)、阿哌沙班(apixaban)、菲得沙班(fidexaban)、雷扎沙班(razaxaban)、磺達肝素(fondaparinux)、抑達肝素(idraparinux)、DU-176b、PMD-3112、YM-150、KFA-1982、EMD-503982、MCM-17、MLN-1021、DX 9065a、DPC 906、JTV 803、SSR-126512或SSR-128428。 ․    本發明較佳實施例中，根據本發明化合物係與肝素或低分子量(LMW)肝素衍生物組合投藥。 ․    本發明較佳實施例中，根據本發明化合物係與凝血因子XI之直接抑制劑、凝血因子XI 表現之抑制劑、及抗凝血因子XI抗體(如：Xisomab 3G3)組合投藥； ․    本發明較佳實施例中，根據本發明化合物係與礦物皮質酮受體拮抗劑組合投藥，例如及較佳為：螺旋內酯固醇(spironolactone)、依普利酮(eplerenon)或吩瑞酮(finerenone)。 ․    本發明較佳實施例中，根據本發明化合物係與利尿劑組合投藥，例如及較佳為：服樂泄麥(furosemide)、布美他尼(bumetanide)、托拉塞米(Torsemide)、芐氟噻嗪(bendroflumethiazide)、氯噻嗪(chlorthiazide)、氫氯噻嗪(hydrochlorothiazide)、氫氟噻嗪(hydroflumethiazide)、甲氯噻嗪(methyclothiazide)、泊利噻嗪(polythiazide)、三氯噻嗪(trichlormethiazide)、氯噻酮(chlorthalidone)、吲達帕胺(indapamide)、甲苯喹唑酮(metolazone)、喹噻酮(quinethazone)、乙醯唑胺(acetazolamide)、二氯磺胺(dichlorphenamide)、甲醋唑胺(methazolamide)、甘油、異山梨醇酯(isosorbide)、甘露糖醇、阿米洛利(amiloride)或三胺蝶呤(triamterene)。 ․    本發明較佳實施例中，根據本發明化合物係與PPAR-γ促效劑組合投藥，例如及較佳為：皮利酮(pioglitazone)或羅格列酮(rosiglitazone)。 ․    本發明較佳實施例中，根據本發明化合物係與PPAR-δ促效劑組合投藥，例如及較佳為：GW 501516或BAY 68-5042。
根據另一項實施例，本發明提供一種醫藥組成物，其包含至少一種雙環化合物，其可以單離及/或純化，包含、基本上組成為、或組成為式(I)或醫藥上可接受之鹽、溶劑合物或鹽之溶劑合物，與一或多種選自下列所組成的群組之其他活性成份組合：磷酸二酯酶之抑制劑、鳥苷酸環化酶之刺激劑或活化劑、IP受體促效劑、礦物皮質酮受體拮抗劑、利尿劑、PPAR-γ促效劑、PPAR-δ促效劑、皮質類固醇、降低氧化壓力下之器官傷害之活性成份、抑制誘發細胞死亡及細胞凋亡途徑之化合物、抑制發炎反應及T 細胞增生之化合物、抗血栓劑、血小板凝集抑制劑、凝血酶抑制劑、GPIIb/IIIa拮抗劑、因子Xa抑制劑、肝素或低分子量(LMW)肝素衍生物、及凝血因子XI之抑制劑。
本發明進一步有關一種部件套組組合，其包含至少一種如本文所定義之肽或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物、如上述定義之複合物或醫藥組成物，及選自試劑、醫學裝置、說明書、或其任何組合中至少一者。
本發明進一步有關一種醫學裝置，其包含至少一種如本文所定義之肽或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物、如上述定義之複合物或醫藥組成物，供傳遞肽或其複合物或醫藥組成物給受試者。
如上述定義之醫藥組成物、部件套組或醫學裝置係特別用於預防或治療如本文所定義之疾患或疾病。
本發明MASP抑制性肽可能具有全身作用及/或局部活性。基於此目的，其等可依合適方式投藥，如，例如：經口、非經腸式、經肺、鼻、舌下、舌部、頰、直腸、陰道、皮膚、穿皮式、經結膜、經耳朵途徑，或呈植入物或人工支架投藥。
針對此等投藥途徑，根據本發明化合物可能呈合適之投藥劑型投藥。
經口投藥時，根據本發明化合物可調配成相關技藝已知可快速及/或依修飾方式傳遞本發明化合物之劑型，如，例如：錠劑(無包衣或有包衣錠劑，例如：包覆可延緩溶解或不溶解之腸溶性包衣或控制釋放之包衣)、可於口中崩解之錠劑、膜衣錠/粉片、膜衣錠/冷凍乾燥物、膠囊(例如：硬式或軟式明膠囊)、糖衣錠、粒劑、丸劑、粉劑、乳液、懸浮液、氣霧劑或溶液。根據本發明化合物可能呈結晶及/或非晶型及/或溶解型納入該劑型中。
非經腸式投藥法可避過吸收步驟進行(例如：經靜脈內、經動脈內、經心臟內、經脊柱內或經腰椎內途徑)，或包括吸收作用進行(例如：經肌內、皮下、皮內、經皮膚、或經腹膜內、眼內)。適合非經腸式投藥之投藥型式特別為呈溶液、懸浮液、乳液、冷凍乾燥物或無菌粉末型式之注射及輸液製劑。
適合其他投藥途徑之實例為供吸入之醫藥型式[特別指粉劑吸入器、噴霧劑]、鼻用滴劑、鼻用溶液或鼻用噴液；供經舌部、舌下或頰內投藥之錠劑/膜衣錠/粉片/膠囊；栓劑；滴眼劑、眼藥膏、洗眼液、眼部插入劑、滴耳藥、耳用噴液、耳用粉劑、耳用沖洗液、或耳用棉條；陰道用膠囊、局部用水性懸浮液(洗液、搖溶混合物)、親脂性懸浮液、乳液、油膏、乳霜、穿皮式醫療系統(如，例如：貼布)、乳劑、糊劑、泡沫劑、細粉劑、植入物或人工支架。
根據另一項實施例，本發明提供一種醫藥組成物，其包含至少一種雙環化合物，其可經-單離及/或純化，包含、基本上組成為、或組成為式(I)或醫藥上可接受之鹽、溶劑合物或鹽之溶劑合物，與一或多種惰性、無毒之醫藥上合適之賦形劑組合。
根據本發明化合物可納入上述投藥型式中。其可依本身已知方式，與醫藥上合適之賦形劑混合來達成。醫藥上合適之賦形劑特別包括： ․    填料與載劑(例如：纖維素、微晶纖維素(如，例如：Avicel ®)、乳糖、甘露糖醇、澱粉、磷酸鈣(如，例如：Di-Cafos ®))， ․    油膏基質(例如：凡士林、石蠟、三酸甘油酯、蠟類、羊毛蠟、羊毛蠟醇、羊毛脂、親水性油膏、聚乙二醇)， ․    栓劑基質(例如：聚乙二醇、可可脂、硬脂)， ․    溶劑(例如：水、乙醇、異丙醇、甘油、丙二醇、中鏈長三酸甘油酯脂肪油、液態聚乙二醇、石蠟)， ․    界面活性劑、乳化劑、勻散劑或濕化劑(例如：十二烷基硫酸鈉)、卵磷脂、磷脂類、脂肪醇類(如，例如：Lanette ®)、山梨糖醇酐脂肪酸酯類(如，例如：Span ®)、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯類(如，例如：Tween®)、聚氧乙烯脂肪酸甘油酯類(如，例如：Cremophor®)、聚氧乙烯脂肪酸酯類、聚氧乙烯脂肪醇醚類、甘油脂肪酸酯類、泊洛沙姆(poloxamer)( 如，例如：Pluronic ®))， ․    緩衝劑、酸類及鹼類(例如：磷酸鹽、碳酸鹽、檸檬酸、乙酸、鹽酸、氫氧化鈉溶液、碳酸銨、三羥基胺基甲烷、三乙醇胺)， ․    等滲劑(例如：葡萄糖、氯化鈉)， ․    吸附劑(例如：高分散性矽石)， ․    提高黏度劑、凝膠形成劑、增稠劑及/或結合劑(例如：聚乙烯吡咯烷酮、甲基纖維素、羥基丙基甲基纖維素、羥基丙基纖維素、羧甲基纖維素-鈉、澱粉、卡波姆(carbomer)、聚丙烯酸(如，例如：Carbopol ®)、藻酸鹽、明膠)， ․    崩解劑(例如：改質澱粉、羧甲基纖維素-鈉、澱粉乙醇酸鈉(例如：Explotab ®)、交聯聚乙烯吡咯烷酮、交聯羧甲纖維素-鈉(如，例如：AcDiSol ®))， ․    流動調節劑、潤滑劑、助滑劑與釋模劑(例如：硬脂酸鎂、硬脂酸、滑石、高分散性矽石(如，例如：Aerosil ®))， ․    包衣劑(例如：糖、蟲膠)及可以快速溶解或以修飾方式溶解之膜片或擴散膜之膜形成劑(例如：聚乙烯吡咯烷酮(如，例如：Kollidon ®)、聚乙烯醇、羥基丙基甲基纖維素、羥基丙基纖維素、乙基纖維素、羥基丙基甲基纖維素酞酸酯、纖維素乙酸酯、纖維素乙酸酯酞酸酯、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯，如，例如：Eudragit ®)， ․    膠囊材料(例如：明膠、羥基丙基甲基纖維素)， ․    合成性聚合物(例如：聚丙交酯、聚乙交酯、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯(如，例如：Eudragit ®)、聚乙烯吡咯烷酮(如，例如：Kollidon ®)、聚乙烯醇、聚乙酸乙烯酯、聚環氧乙烷、聚乙二醇及其共聚物與嵌段共聚物)， ․    增塑劑(例如：聚乙二醇、丙二醇、甘油、三乙酸甘油酯、三乙醯基檸檬酸酯、酞酸二丁酯)， ․    滲透加強劑， ․    安定劑(例如：抗氧化劑，如，例如：抗壞血酸、棕櫚酸抗壞血基酯、抗壞血酸鈉、丁基羥基苯甲醚、丁基羥基甲苯、沒食子酸丙基酯)， ․    防腐劑(例如：對羥基苯甲酸酯、山梨酸、硫柳汞(thiomersal)、氯化烷基二甲基苄基銨(benzalkonium chloride)、醋酸氯己定(chlorhexidine acetate)、苯甲酸鈉)， ․    著色劑(例如：無機色素，如，例如：氧化鐵、二氧化鈦)， ․    風味劑、甜味劑、調味劑與/或氣味遮蔽劑。
本發明進一步有關一種醫藥組成物，其包含至少一種如本文所定義之肽或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物、或如上述定義之複合物。
特定言之，本發明係有關一種醫藥組成物，其包含至少一種如本文所定義之肽或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物、或如上述定義之複合物，通常與一或多種醫藥上合適之賦形劑(群)共同使用，並有關其根據本發明之用途。
根據本發明醫藥組成物可包含至少一種額外活性成份，如：較佳係具有預防或治療如本文所定義疾患或疾病之活性之額外活性成份。
該至少一種如本文所定義之肽或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物、或如上述定義之複合物或醫藥組成物可依經腸式或非經腸式投藥，包括經靜脈內、肌內、腹膜內、胸骨內、皮下、皮內及關節內注射及輸注、經口、陰道內、腹膜內、直腸內、局部或經頰。用於個別投藥途徑之合適調配物係習此相關技藝者習知，且包括(但不限於)：丸劑、錠劑、腸衣錠、膜衣錠、層壓錠、用於經口投藥之持續釋放或延長釋放調配物、膏藥、局部用延長釋放調配物、糖衣錠、陰道栓劑、凝膠、油膏、糖漿、粒劑、栓劑、乳液、勻散液、微膠囊、微米調配物、奈米調配物、脂質體調配物、膠囊、腸衣膠囊、粉劑、吸入性粉劑、微晶調配物、吸入性噴液、粉劑、滴劑、鼻滴劑、鼻噴液、氣霧劑、安瓿、溶液、果汁、懸浮液、輸注液或注射液，等等。
根據另一項實施例，本發明提供一種醫藥組成物，其包含至少一種雙環化合物，其可以單離及/或純化，包含、基本上組成為、或組成為式(I)或醫藥上可接受之鹽、溶劑合物或鹽之溶劑合物，並組合使用一或多種惰性、無毒性、醫藥上合適之賦形劑，用於預防及治療心血管及心肺疾患、休克、發炎疾患、敗血病之心血管、肺、腦及腎後遺症、缺血及/或再灌流相關傷害、急性腎損傷、移植物保護及延遲的移植物功能、血液與形成血液之器官及免疫系統之疾病、糖尿病後遺症、神經系統發炎疾病、眼睛疾病、皮膚疾病、呼吸、消化或生殖泌尿系統疾病、及燒傷與受傷之後遺症。
根據另一項實施例，本發明提供一種醫藥組成物，其包含至少一種雙環化合物，其可經單離及/或純化，包含、基本上組成為、或組成為式(I)或醫藥上可接受之鹽、溶劑合物或鹽之溶劑合物，並組合使用一或多種選自下列所組成的群組之其他活性成份：磷酸二酯酶之抑制劑、鳥苷酸環化酶之刺激劑或活化劑、IP受體促效劑、礦物皮質酮受體拮抗劑、利尿劑、PPAR-γ促效劑、PPAR-δ促效劑、皮質類固醇、降低氧化壓力下之器官傷害之活性成份、抑制誘發細胞死亡及細胞凋亡途徑之化合物、抑制發炎反應及T 細胞增生之化合物、抗血栓劑、血小板凝集抑制劑、凝血酶抑制劑、GPIIb/IIIa拮抗劑、因子Xa抑制劑、肝素或低分子量(LMW)肝素衍生物、及凝血因子XI之抑制劑，用於預防及治療心血管及心肺疾患、休克、發炎疾患、敗血病之心血管、肺、腦及腎後遺症、缺血及/或再灌流相關傷害、急性腎損傷、移植物保護及延遲的移植物功能、血液與形成血液之器官及免疫系統之疾病、糖尿病後遺症、神經系統發炎疾病、眼睛疾病、皮膚疾病、呼吸、消化或生殖泌尿系統疾病、及燒傷與受傷之後遺症。
根據另一項實施例，本發明提供一種治療及/或預防人類與動物之心血管及心肺疾患、休克、發炎疾患、敗血病之心血管、肺、腦及腎後遺症、缺血及/或再灌流相關傷害、急性腎損傷、移植物保護及延遲的移植物功能、血液與形成血液之器官及免疫系統之疾病、糖尿病後遺症、神經系統發炎疾病、眼睛疾病、皮膚疾病、呼吸、消化或生殖泌尿系統疾病、及燒傷與受傷之後遺症之方法，其係投與有效量之醫藥組成物，其包含至少一種雙環化合物，該化合物可以單離及/或純化，包含、基本上組成為、或組成為式(I)或醫藥上可接受之鹽、溶劑合物或鹽之溶劑合物，並組合使用一或多種惰性、無毒性、醫藥上合適之賦形劑、及/或一或多種其他活性成份。
本發明MASP抑制性肽之合適劑量可以由參與醫師在完整醫學判斷範圍內決定。對任何特定受試者之明確醫療有效劑量將隨各種不同因素而定，包括：a)所治療疾患及疾患之嚴重性；b)所採用特定化合物之活性；c)所採用特定組成物、患者之年齡、體重、一般健康、性別及飲食；d)投藥時間、投藥途徑、所採用特定鐵調素(hepcidin)類似物之排除速率；e)治療持續時間；f)與所採用MASP抑制性肽組合或併行使用之藥物，及醫學技藝上習知之類似因素。
特定實施例中，呈單一劑量或分割劑量投與受試者或患者之本發明MASP抑制性肽之每日總劑量可為例如：每天0.0001至300 mg/kg體重或每天1至300 mg/kg體重，或每天約0.0001至約100 mg/kg體重 ，如：每天約0.0005至約50 mg/kg體重，如：每天約0.001至約10 mg/kg體重，例如：每天約0.01至約1 mg/kg體重，其係投與一劑或多劑，如：一至三劑。通常，本發明MASP抑制性肽可以連續投藥(例如：靜脈內投藥或另一種連續投藥方法)，或可依間隔，通常依規律時間間隔投與受試者，端賴習此相關技藝操作者針對特定受試者所需劑量及所選擇醫藥組成物而定。規律投藥劑量間隔包括例如：一天一次、一天兩次、每隔2、3、4、5或6天一次、每周一或兩次、每月一或兩次，及類似間隔。
本發明進一步包括以如本文所說明MASP抑制性肽於製造醫藥上之用途，特定言之用於製造供預防或治療如本文所定義疾患或疾病之醫藥。
本發明進一步包括一種製造分別如本文所說明之本發明肽或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物、或複合物之製程。該製造過程包括本發明實例所示之步驟。
通常，本發明MASP抑制性肽可依合成法或半重組法製造。
根據另一項實施例，本發明提供一種採用固相肽合成法，製備一種可以單離及/或純化，包含、基本上組成為、或組成為式(I)之雙環化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物之方法。
根據另一項實施例，本發明提供一種製備可經單離及/或純化，包含、基本上組成為、或組成為式(I)之雙環化合物或其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物或鹽之溶劑合物之方法，其包含以下步驟 1.      使用2-氯三苯甲基型樹脂，加載量為0.2 – 1.2 mmol/g，已先加載或未先加載第一胺基酸， 2.      加載序列之c-末端胺基酸至樹脂上(若需要時)， 3.      使用含於DMF或NMP中之15-30%哌啶溶液脫除fmoc保護， 4.      使用偶合試劑，如：HBTU、HATU或DIC/Oxyma，使用3-8當量之間之化學計量，與序列中下一個胺基酸偶合， 5.      重覆步驟3及4，直到序列完成為止， 6.      使用包含1-5% TFA或HFIP之裂解混合液，從固體擔體上裂解肽， 7.      可視需要使用諸如：Pd(PPh 3) 4與PhSiH之試劑，排除正交保護基(例如：烯丙基或alloc)， 8.      可視需要使用1-5%肼水合物溶液，排除正交保護基(例如：Dde、Dmab、或ivDde)， 9.      由肽使用偶合試劑，如：HBTU、HATU、PyBop、PyAop或DIC/Oxyma，使用3-8當量之間之化學計量，藉由形成醯胺鍵而環化，或當胺及C-末端出現兩個半胱胺酸時，則在兩個半胱胺酸之間形成二硫鍵， 10.   使用包含TFA與硫醇清除劑之裂解混合液，從肽上排除保護基， 11.   序列中兩個半胱胺酸在氧化條件(空氣或I 2)下環化， 12.   使用逆相HPLC純化已裂解之肽。
根據另一項實施例，本發明提供一種製備可以單離及/或純化，包含、基本上組成為、或組成為式(I)之雙環化合物或其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物或鹽之溶劑合物之方法，其包含以下步驟： 1.          使用2-氯三苯甲基型樹脂，加載量為0.2 – 1.2 mmol/g，已先加載或未先加載第一胺基酸， 2.          加載序列之c-末端胺基酸至樹脂上(若需要時)， 3.          使用含於DMF或NMP中之15-30%哌啶溶液脫除fmoc保護， 4.          使用偶合試劑，如：HBTU、HATU或DIC/Oxyma，使用3-8當量之間之化學計量，與序列中下一個胺基酸偶合， 5.          重覆步驟3及4，直到序列完成為止， 6.          使用包含1-5% TFA或HFIP之裂解混合液，從固體擔體上裂解肽， 7.          可視需要使用諸如：Pd(PPh 3) 4與PhSiH之試劑，排除正交保護基(例如：烯丙基或alloc)， 8.          可視需要使用1-5%肼水合物溶液，排除正交保護基(例如：Dde、Dmab、或ivDde)， 9.          由肽使用偶合試劑，如：HBTU、HATU、PyBop、PyAop或DIC/Oxyma，使用3-8當量之間之化學計量，藉由形成醯胺鍵而環化，或當胺及C-末端出現兩個半胱胺酸時，則在兩個半胱胺酸之間形成二硫鍵， 10.      使用包含TFA與硫醇清除劑之裂解混合液，從肽上排除保護基， 11.      序列中兩個半胱胺酸在氧化條件(空氣或I 2)下環化， 12.      使用逆相HPLC純化已裂解之肽， 13.      轉化成HCl鹽。
根據另一項實施例，本發明提供一種製備可以單離及/或純化，包含、基本上組成為、或組成為式(I)之雙環化合物或其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物或鹽之溶劑合物之方法，其包含以下步驟： 1.          使用Rink醯胺型樹脂，諸如：MBHA Rink醯胺樹脂，加載量為0.2 – 1.4 mmol/g，已先加載或未先加載第一胺基酸， 2.          使用含於DMF或NMP中之15-30%哌啶溶液脫除fmoc保護， 3.          使用偶合試劑，如：HBTU、HATU或DIC/Oxyma，使用3-8當量之間之化學計量，與序列中下一個胺基酸偶合， 4.          重覆步驟3及4，直到序列完成為止， 5.          使用包含1-5% TFA或HFIP之裂解混合液，從固體擔體上裂解肽， 6.          可視需要使用諸如：Pd(PPh 3) 4與PhSiH之試劑，排除正交保護基(例如：烯丙基或alloc)， 7.          可視需要使用1-5%肼水合物溶液，排除正交保護基(例如：Dde、Dmab、或ivDde)， 8.          由肽使用偶合試劑，如：HBTU、HATU、PyBop、PyAop或DIC/Oxyma，使用3-8當量之間之化學計量，藉由形成醯胺鍵而環化，或當胺及C-末端出現兩個半胱胺酸時，則在兩個半胱胺酸之間形成二硫鍵， 9.          使用包含TFA與硫醇清除劑之裂解混合液，從肽上排除保護基， 10.      序列中兩個半胱胺酸在氧化條件(空氣或I 2)下環化， 11.      使用逆相HPLC純化已裂解之肽。
根據另一項實施例，本發明提供一種製備可以單離及/或純化，包含、基本上組成為、或組成為式(I)之雙環化合物或其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物或鹽之溶劑合物之方法，其包含以下步驟： 1.          使用Rink醯胺型樹脂，諸如：MBHA Rink醯胺樹脂，加載量為0.2 – 1.4 mmol/g，已先加載或未先加載第一胺基酸， 2.          使用含於DMF或NMP中之15-30%哌啶溶液脫除fmoc保護， 3.          使用偶合試劑，如：HBTU、HATU或DIC/Oxyma，使用3-8當量之間之化學計量，與序列中下一個胺基酸偶合， 4.          重覆步驟3及4，直到序列完成為止， 5.          使用包含1-5% TFA或HFIP之裂解混合液，從固體擔體上裂解肽， 6.          可視需要使用諸如：Pd(PPh 3) 4與PhSiH之試劑，排除正交保護基(例如：烯丙基或alloc)， 7.          可視需要使用1-5%肼水合物溶液，排除正交保護基(例如：Dde、Dmab、或ivDde)， 8.          由肽使用偶合試劑，如：HBTU、HATU、PyBop、PyAop或DIC/Oxyma，使用3-8當量之間之化學計量，藉由形成醯胺鍵而環化，或當胺及C-末端出現兩個半胱胺酸時，則在兩個半胱胺酸之間形成二硫鍵， 9.          使用包含TFA與硫醇清除劑之裂解混合液，從肽上排除保護基， 10.      序列中兩個半胱胺酸在氧化條件(空氣或I 2)下環化， 11.      使用逆相HPLC純化已裂解之肽， 12.      轉化成HCl鹽。
如本文所定義至少一種肽或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物或如本文所定義複合物亦可作為生化製劑，用於生化分析法中，如，例如：診斷分析法，供測定對MASP抑制劑之反應性，或用於基於MASP抑制劑結合性之任何生化分析法中。
本發明亦包括一種聚核苷酸，其包含編碼根據本發明MASP抑制性肽之序列，及一種載體，其包含編碼根據本發明MASP抑制性肽之序列之聚核苷酸。
本發明進一步利用下列與本發明某些明確實施例相關之實例說明。該等實例係利用習此相關技藝者之例行習知標準技術進行，除非另有其他說明。下列實例僅供說明，並無意限制本發明之條件或範圍。因此，其等不應以任何方式構成限制本發明範圍。 實例
實驗章節中採用之縮寫列表： Å             埃 ACN        乙腈 aq.           水性、水溶液 bar           壓力單位 BPR         背壓壓力調整器 conc         濃縮 d              雙裂峰(NMR) dd            雙重雙裂峰(NMR) DCM       二氯甲烷 DEA        二乙基胺 DIPEA    N,N-二異丙基乙基胺(亨尼氏鹼(Hünig`s base)) DMAP     4-二甲基胺基吡啶 DMF        N,N-二甲基甲醯胺 DMSO     二甲亞碸 dt             雙重參裂峰 (NMR) EA           乙酸乙酯 ee             對映異構性超量 ent           對映異構性 eq            當量 equiv       當量(離子層析法) ESI          電噴灑-電離化(質譜) Fmoc-OSu   1-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氧}吡咯啶-2,5-二酮 GC-MS    氣相層析法偶聯質譜儀 h              小時 HATU     O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽 HFIP       1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇 HPLC      高壓液相層析法 IC            離子層析法 ID            內直徑 IRA         Amberlite IRA離子交換樹脂之部份商品名稱 L              公升 LC-MS    液相層析法偶聯質譜儀 LiHMDS 雙(三甲基矽烷基)胺化鋰 lit.            文獻 m             多裂峰(NMR) MALDI   基質輔助雷射脫附/電離化(質譜儀) Me           甲基 mL           毫升 min          分鐘 mm          毫米 μL            微升 μm           微米(micron) M             莫耳濃度 MPLC      中壓液相層析法 MS          質譜 MTBE     第三丁基甲基醚 MTP        微滴定盤 m/z          質量-電荷比(質譜儀) nm           奈米 NMM      N-甲基嗎啉 NMP        N-甲基-2-吡咯烷酮 NMR       核磁共振光譜 PBS         磷酸鹽緩衝生理食鹽水 PE           石油醚 PEG         聚乙二醇 pos          正電荷 ppm         每百萬分之一 Pr            丙基 Psi           每平方吋之磅數(壓力) q / quart   肆裂峰(NMR) qd            四重雙裂峰(NMR) quint        五裂峰(NMR) rac           消旋性 Rf            滯留因數(TLC) RP           逆相(液相層析法) Rt            滯留時間(層析法) s              單峰(NMR) s              秒(時間) SPPS       固相肽合成法 t               參裂峰(NMR) TBTU      O (苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓四氟硼酸鹽 tBu          第三丁基 TEA        三乙基胺 THF         四氫呋喃 TLC         薄層層析法 UPLC      超效液相層析法 UV          紫外光 其他縮寫可參見表2與3。 分析性 LC-MS 方法
方法1 設備型態MS：ThermoFisherScientific LTQ-Orbitrap-XL；設備型態HPLC：Agilent 1200SL；管柱：Agilent，POROSHELL 120，3 x 150 mm，SB – C18 2.7 µm；溶離劑A：1 L水 + 0.1% 三氟乙酸；溶離劑B：1 L 乙腈 + 0.1% 三氟乙酸；梯度：0.0 min 2% B → 1.5 min 2% B → 15.5 min 98% B → 18.0 min 98% B；烘箱：40°C；流速：0.75 mL/min；UV-檢測：210 nm。
方法2 設備型態MS：ThermoFisherScientific LTQ-Orbitrap-XL；設備型態HPLC：Agilent 1200SL；管柱：Agilent，POROSHELL 120；3 x 150 mm，SB – C18 2.7 µm；溶離劑A：1 L水 + 0.1% 三氟乙酸；溶離劑B：1 L乙腈 + 0.1% 三氟乙酸；梯度：0.0 min 5% B → 0.3 min 5% B → 7.0 min 98% B → 10 min 98% B；烘箱：40°C；流速：0.75 mL/min；UV-檢測：210 nm。
方法3 設備型態MS：Waters TOF儀器；設備型態UPLC：Waters Acquity I-CLASS；管柱：YMC，TRIART C18，75 x 1 mm，3.0 µm x 12nm；溶離劑A：1 L水 + 0.01% 甲酸；溶離劑B：1 L乙腈 + 0.01% 甲酸；梯度：0.0 min 1% B → 2.0 min 1% B →8.0 min 95% B → 10.0 min 95% B；烘箱：50°C；流速：0.63 mL/min；UV-檢測：210 nm。
方法4 設備型態MS：Waters TOF儀器；設備型態UPLC：Waters Acquity I-CLASS；管柱：YMC，TRIART C18，75 x 1 mm，3.0 µm 12nm；溶離劑A：1 L水 + 0.01% 甲酸；溶離劑B：1 L乙腈 + 0.01% 甲酸；梯度：0.0 min 1% B → 1.0 min 1% B →15.0 min 50% B → 18.0 min 95% B；烘箱：50°C；流速：0.63 mL/min；UV-檢測：210 nm。
方法5 設備型態MS：Waters TOF儀器；設備型態UPLC：Waters Acquity I-CLASS；管柱：Waters，HSST3，2.1 x 50 mm，C18 1.8 µm；溶離劑A：1 L水 + 0.01% 甲酸；溶離劑B：1 L乙腈 + 0.01% 甲酸；梯度：0.0 min 2% B → 0.5 min 2% B → 7.5 min 95% B → 10.0 min 95% B；烘箱：50°C；流速：1.00 mL/min；UV-檢測：210 nm。
方法6 設備型態MS：Waters Synapt G2S；設備型態UPLC：Waters Acquity I-CLASS；管柱：Waters，BEH300，2.1 x 150 mm，C18 1.7 µm；溶離劑A：1 L水 + 0.01% 甲酸；溶離劑B：1 L乙腈 + 0.01% 甲酸；梯度：0.0 min 2% B → 1.5 min 2% B → 8.5 min 95% B → 10.0 min 95% B；烘箱：50°C；流速：0.50 mL/min；UV-檢測：220 nm。
方法7 儀器型態MS：Agilent 6410 Triple Quad；儀器型態HPLC：Agilent 1200；管柱：Gemini-NX C18 5μm 110Å 150 x 4.6 mm；溶離劑A：0.1%TFA之H 2O溶液；溶離劑B：0.1%TFA之ACN溶液；梯度：0.0 min 20% B → 20 min 50% B → 20.1 min 90% B → 23 min 90% B；烘箱溫度：50°C；流速：1.0 mL/min；UV-檢測：220 nm。
方法8 儀器型態MS: Agilent 6410 Triple Quad；儀器型態HPLC：Agilent 1200；管柱：Discovery BIO Wide Pore C18 5μm 300Å x 4.6 mm；溶離劑A：0.1%TFA之H 2O溶液；溶離劑B：0.1%TFA之ACN溶液；梯度：0.0 min 10% B → 20 min 80% B → 20.1 min 90% B → 23 min 90% B；烘箱溫度：50°C；流速：1.0 mL/min；UV-檢測：220 nm。
方法9 儀器：Waters ACQUITY SQD UPLC系統；管柱：Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8 µm 50 x 1 mm；溶離劑A：1 L水 + 0.25 mL 99% 甲酸；溶離劑B：1 L乙腈 + 0.25 mL 99% 甲酸；梯度：0.0 min 90% A → 1.2 min 5% A → 2.0 min 5% A；烘箱：50 °C；流速：0.40 mL/min；UV-檢測：210 nm。
方法10 儀器MS：Thermo Scientific FT-MS；儀器UHPLC：Thermo Scientific UltiMate 3000；管柱：Waters，HSST3，2.1 x 75 mm，C18 1.8 µm；溶離劑A：1 L 水 + 0.01% 甲酸；溶離劑B：1 L乙腈 + 0.01% 甲酸；梯度：0.0 min 10% B → 2.5 min 95% B → 3.5 min 95% B；烘箱：50°C；流速：0.90 mL/min；UV-檢測：210 nm/ 最佳積分軌跡(Optimum Integration Path) 210-300 nm。
方法11 MS 儀器：Agilent MS Quad 6150；HPLC: Agilent 1290；管柱：Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8 µm 50 x 2.1 mm；溶離劑A：1 L水 + 0.25 mL 甲酸；溶離劑B：1 L乙腈 + 0.25 mL 甲酸；梯度：0.0 min 90% A → 0.3 min 90% A → 1.7 min 5% A → 3.0 min 5% A；烘箱：50°C；流速：1.20 mL/min；UV-檢測：205 – 305 nm。
方法12 儀器：Waters ACQUITY SQD UPLC系統；管柱：Waters Acquity UPLC HSST3 1.8 µm 50 x 1 mm；溶離劑A：1 L水 + 0.25 mL 99% 甲酸；溶離劑B：1 L乙腈 + 0.25 mL 99% 甲酸；梯度：0.0 min 95% A → 6.0 min 5% A → 7.5 min 5% A；烘箱：50°C；流速：0.35 mL/min；UV-檢測：210 nm。
方法13 儀器：Waters Single Quad MS系統；儀器Waters UPLC Acquity；管柱：Waters BEH C18 1.7 µm 50 x 2.1 mm；溶離劑A：1 L水 + 1.0 mL (25%氨)/L；溶離劑B：1 L乙腈；梯度：0.0 min 92% A → 0.1 min 92% A → 1.8 min 5% A → 3.5 min 5% A；烘箱：50°C；流速：0.45 mL/min；UV-檢測：210 nm。
方法14 系統MS：Waters TOF儀器：系統 UPLC：Waters Acquity I-CLASS；管柱：Waters Acquity UPLC Peptide BEH C18 300Å，1.7 µm 150 x 2.1 mm；溶離劑A：1 l水 + 0.100 ml 99% 甲酸；溶離劑B：1 L乙腈 + 0.100 ml 99% 甲酸；梯度：0.0 min 90% A →0.25 min 90% A → 8.0 min 45% A → 10.0 min 2% → 12.0 min 2% A；烘箱：50°C；流速：0.475 ml/min；UV-檢測：210 nm。
方法15 MS儀器型態：Agilent G6110A；HPLC儀器型態：Agilent 1200系列LC； UV DAD；管柱：Chromolith Flash RP-18e 25 x 2.0mm；移動相A：0.0375% TFA之水溶液(v/v)；移動相B：0.01875% TFA之乙腈溶液(V/V)；梯度：0.01 min 5% B → 0.80 min 95% B → 1.20 min 95% B → 1.21 min 5% B → 1.5 min 5% B；流速：1.50 mL/min；烘箱溫度：50 °C； UV檢測：220 nm & 254 nm。
MALDI方法 精確之質量測定係在所選擇肽上，利用基質輔助雷射脫附/電離(MALDI)質譜儀方法，在Bruker autoflex maX LRF MALDI MS 飛時測距(Time-of-Flight)(ToF-MS)系統上進行。樣本係在Bruker MALDI靶盤上，使用α-氰基-4-羥基肉桂酸(CAS 28166-41-8)作為基質來製備。製備0.1至1.0 mg肽樣本含於1.0 mL 乙腈-水(50/50或30/70)中之溶液及含於50%乙腈之水(包含 0.05%三氟乙酸)溶液中之基質儲液(10 mg/mL)。各取1.0 uL溶液置入MALDI靶盤上，乾燥。隨即可以準備分析樣本。有關MALDI靶盤之建議樣本製法可參見Bruker所提供之文獻。 分析性離子層析法
方法：IC – 定量 採用外標準物定量測定陽離子與陰離子；儀器: Thermo Scientific ICS 5000+；毛細IC管柱：IonPac AS11-HC與IonPac CS16；溶離液：梯度溶離液[H]+ [OH]-；檢測器：傳導性檢測；可能之例行陰離子：乙酸根、溴離子、檸檬酸根、氯離子、氟離子、甲酸根、乳酸根、甲磺酸根、磷酸根、硫酸根、酒石酸根、三氟乙酸根；可能之例行陽離子：銨、鋇、鈣、鉀、鋰、鈉、鎂、膽鹼。 分析性氣相層析質譜方法
GC-MS 方法1 儀器：Thermo Scientific DSQII，Thermo Scientific Trace GC Ultra；管柱：Restek RTX-35MS，15 m x 200 µm x 0.33 µm；恆定氦氣流速：1.20 mL/min；烘箱：60°C；入口：220°C；梯度：60°C，30°C/min → 300°C (保持3.33 min)。 NMR
所選定化合物之1H-NMR數據係以1H-NMR波峰列表型式出示。其中，每個訊號峰先以δ(ppm)數值表示，然後訊號強度則列於圓括號中。不同波峰之每對δ值-訊號強度數字之間以分號分隔。因此說明波峰列表型式之一般型式為：δ1(強度1)，δ2(強度2)，... ，δi(強度i)，... ，δn(強度n)。
陡峰訊號強度係與印出之NMR光譜中訊號高度(以cm計)呈相關性。當與其他訊號比較時，此數據可與訊號強度之真實比例呈相關性。在寬峰訊號中，則出示超過一個峰、或訊號中心及其等相較於光譜中所顯示最高強度訊號之相對強度。1H-NMR波峰列表類似印出之典型1H-NMR圖，因此通常包含列於典型NMR解讀中之所有波峰。此外，類似印出之典型1H-NMR圖，波峰列表可顯示溶劑訊號、來自特定目標化合物之立體異構物之訊號、雜質波峰、13C衛星波峰、及/或旋轉邊帶。立體異構物之波峰與/或雜質之波峰通常顯示低於目標化合物(例如：純度＞90%)之波峰強度。此等立體異構物與/或雜質係典型出現在特定製法中，因此其等波峰有助於依據「副產物指印」辨識製造過程之再現性。採用已知方法(MestReC，ACD-模擬法，或採用實驗性分析之預期數值)計算目標化合物波峰之專家若需要時，可以視需要另外選用其他強度濾波器，單離出目標化合物之波峰。此等操作即類似典型1H-NMR解讀中之波峰挑選法。有關以波峰列表型式報告NMR數據之詳細說明可參見公開文獻：「Citation of NMR Peaklist Data within Patent Applications」(參見 http://www.researchdisclosure.com/searching-disclosures, Research Disclosure Database Number 605005, 2014, 01 Aug 2014)。在Research Disclosure Database Number 605005中說明之例行波峰挑選法中，「最小高度」參數可設在1%至4%之間。然而，依所測定化合物之化學結構及/或濃度而定，合理的「最小高度」參數可設定在＜ 1%。 製造實例一般合成法
固相肽合成法 (SPPS)係採用自動化肽合成儀進行，或手動進行。肽合成法的規模通常在0.1至1.0 mmol之範圍內進行。當肽合成法以手動進行時，採用下文說明之一般製程方法C、D與E。自動化肽合成法係於Symphony X肽合成儀(Gyros Protein Technologies)上進行。
受Fmoc保護之胺基酸係購自Novabiochem、Bachem、Iris Biotech、Sigma-Aldrich、Alfa、Enamine、Amatek、Anichem、ACBR、Combiblocks、ArZa Bioscience、Ark Pharm、Acroteinchem、Apollo Scientific、Biofine、Broadpharm、VWR、或Gyros Protein Technologies (芴基甲氧基羰基 = Fmoc)、GL Biochem (Shanghai) Ltd、Chengdu aminotp Pharmaceutical Technology Ltd, Suzhou Highfine Biotech Co., Ltd，或透過其他中國供應商提供。有些特殊之受fmoc保護之胺基酸係由內部合成，且此等合成方法已說明於本文中。有些內部合成之fmoc 胺基酸亦可自商品取得。若無法自商品取得Fmoc保護之胺基酸，但可自商品取得Boc保護之非天然胺基酸時，可由Boc保護之胺基酸採用相關技藝常用之方法脫除保護基及再度保護，製成fmoc保護之胺基酸。本發明肽合成法所採用非天然胺基酸商品之CAS編號大部份已包括在表5中。若購買消旋性胺基酸(Fmoc或Boc)時，習此相關技藝者應了解可以採用對掌性層析法分離對映異構物，且事實上有時候可以在肽合成法之前先得到純對映異構性胺基酸。
下列非天然胺基酸已用於製備本發明肽。Fmoc-或Boc-保護之胺基酸係得自商品來源(可取得CAS編號)，或在內部採用本文說明之方法合成。表5出示用於肽合成法之化學基團/胺基酸之CAS編號(右欄)及出現在肽中之對應化學基團/胺基酸(左欄)。 表 5 ：本發明可採用之非天然胺基酸與化學基團
縮寫 / 表示定義 用於肽合成法之 Fmoc-/Boc 保護之胺基酸、化學基團或構成嵌段之 CAS 編號
L-N-甲基半胱胺酸 944797-51-7
N-甲基-甘胺酸 77128-70-2
3-(胺基甲基)苯甲酸 117445-22-4
4-(胺基甲基)苯甲酸 33233-67-9
L-2-胺基丁酸 135112-27-5
己二酸 124-04-9
6-胺基己酸 88574-06-5
L-第三丁基丙胺酸 139551-74-9
3-疊氮基-L-丙胺酸 684270-46-0
L-2,4-二胺基丁酸 125238-99-5; 607366-21-2 (ivDde); 851392-68-2 (MTT)
L-2,3-二胺基丙酸 162558-25-0; 607366-20-1 (ivDde); 654670-89-0 (MTT)
γ-胺基丁酸 116821-47-7; 57294-38-9 (Boc)
L-炔丙基甘胺酸 1435854-95-7
2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氫吲哚-2-羧酸 130309-37-4
L-鳥胺酸 109425-55-0; 269062-80-8 (DDE); 1198321-33-3 (ivDDE); 147290-11-7 (Alloc)
9-胺基-4,7-二氧雜壬烷酸 872679-70-4
12-胺基-4,7,10-三氧雜十二烷酸 867062-95-1
15-胺基-4,7,10,13-四氧雜十五烷酸 557756-85-1
L-青黴胺 201531-88-6
辛二酸 505-48-6
傳明酸 167690-53-1; 27687-14-5 (Boc)
1,13-二胺基-4,7,10-三氧雜十三烷-琥珀醯胺酸 172089-14-4
2-胺基異丁酸 94744-50-0
固相樹脂係購自Novabiochem、Bachem、Iris Biotech、Pcas Biomatrix、GL Biochem (Shanghai) Ltd、CEM、或Protein Technologies。樹脂加載量為0.3 – 1.0 mmol/g。肽係於2-氯三苯甲基樹脂、Wang樹脂、或Rink 醯胺型樹脂上合成，端賴所需C-末端而定。有些例子中，採用包含已附接之第一胺基酸之2-氯三苯甲基樹脂或Wang型樹脂(例如：Fmoc-Asp(Ot-Bu)-2-氯三苯甲基樹脂)。於室溫下，使用20%哌啶之二甲基甲醯胺溶液裂解芴基甲氧基羰基(Fmoc)保護基。每個Fmoc 裂解步驟均進行2次。胺基酸係在自動化合成儀上(Symphony X)，使用8當量Fmoc-胺基酸、8當量 DIC (二異丙基碳化二亞胺) (0.5 M DMF溶液)及8當量 Oxyma (氰基羥基亞胺基乙酸乙酯) (0.5M DMF溶液)偶合。使用Symphony X時，胺基酸偶合法係於室溫下及氮蒙氣下進行。當使用高價或自家製備之fmoc-胺基酸時，則使用3當量Fmoc-胺基酸、3當量DIC (0.5 M DMF溶液)及3當量 Oxyma (0.5M DMF溶液)進行手動偶合。每個胺基酸偶合步驟均進行兩次(雙重偶合)。或者，使用3當量Fmoc-胺基酸、2.85當量HBTU ((2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽，六氟磷酸鹽苯并三唑四甲基脲鎓( Hexafluorophosphate Benzotriazole Tetramethyl Uronium)) (0.5 M DMF溶液)及6當量DIPEA (0.5 M DMF溶液)，採用SPPS手動製備肽。該偶合反應係採用茚三酮(ninhydrin)試驗監測。
使用1%TFA溶液或HFIP，脫除 2-氯三苯甲基樹脂上之肽。裂解之肽再進一步藉由形成醯胺鍵及/或形成二硫鍵來修飾。
使用三氟乙酸(TFA)/硫代苯甲醚(TA)/1,2-乙二硫醇(EDT) (90：7：3)或使用92.5%TFA/2.5%EDT/2.5%TIS (三異丙基矽烷)/2.5%H 2O完全脫除肽之保護基。針對包含甲硫胺酸之肽，使用1.6% EDT及1.2% 三甲基矽烷基溴之TFA溶液，於室溫下處理該肽 2 h，還原已氧化之甲硫胺酸。
肽環化法：
肽藉由形成醯胺鍵之頭接尾環化法係在從2-氯三苯甲基樹脂上裂解之後，於溶液中，使用諸如： HBTU、HATU、PyBop、PyAop或DIC/Oxyma之偶合試劑，使用3-8當量之間之化學計量完成。當為諸如MBHA Rink醯胺樹脂之Rink醯胺型樹脂時，通常於樹脂上，使用諸如： HBTU、HATU、PyBop、PyAop或DIC/Oxyma之偶合試劑，使用3-8當量之間之化學計量進行側鏈接尾、頭接側鏈、側鏈接側鏈之環化法，然後再從樹脂上完全裂解。於溶液中形成醯胺鍵後，則在形成二硫鍵之前，先使用裂解混合液，如：三氟乙酸(TFA)/硫代苯甲醚(TA)/1,2-乙二硫醇(EDT) (90：7：3)或使用92.5%TFA/2.5%EDT/2.5%TIS(三異丙基矽烷)/2.5%H 2O來脫除其餘保護基。 二硫醚環化法：
由肽於0.1 M碳酸氫銨緩衝液(pH 7.83)中(濃度為0.5 mg/mL)振盪一夜，形成二硫醚橋連。溶液隨後冷凍乾燥。或者，由肽於已使用固體碳酸氫銨緩衝劑調整至 pH 9.0之乙腈/水混合物(經常為3：7)中(濃度為1-3 mg/mL)振盪一夜，形成二硫醚橋連。或者，使用碘(I 2) (0.1 M MeOH溶液)，濃度為1 – 1.3 mg/mL之乙腈/水(1：1)溶液於20°C下氧化2min後，使用硫代硫酸鈉(0.1 M水溶液)處理後，冷凍乾燥，製成二硫醚橋連。 視需要之乙醯基化：
N-末端乙醯基化係使用10當量乙酸酐(或另一種酸酐試劑，例如：己二酸酐)之DMF溶液(2 mL)及2.5當量 DIPEA進行，懸浮液於室溫下，於環繞式振盪器上振盪1 h。排除溶劑，使用DMF (5x)及DCM (5x) 洗滌樹脂。再次重覆製程。或者，N-末端乙醯基化係使用10 mL封端溶液(由乙酸酐/N-甲基嗎啉(NMM)/DMF (10：5：85)組成)進行，懸浮液於室溫下，於環繞式振盪器上振盪30 min。 肽裂解：
製備包含TFA/EDT/硫代苯甲醚(90：3：7)之裂解混合液。添加該裂解混合液(2 mL)至包含肽之樹脂中，懸浮液於環繞式振盪器上振盪2.5小時。添加冷的醚(-20°C)，使肽沉澱。所得溶液於氮氣下離心(Sigma 2-16KL)，傾析後所得固體再使用冷的醚，經過離心及傾析洗滌3次。所得固體採用製備性HPLC純化。
或者，製備包含 TFA/EDT/TIS/H 2O (92.5：2.5：2.5：2.5)之裂解混合液。添加該裂解混合液(6 mL (0.3 mmol規模))至包含肽之樹脂中，懸浮液於環繞式振盪器上振盪2.5小時。添加冷的第三丁基甲基醚(-20°C)，使肽沉澱。所得溶液於3000 rpm下離心3 min，傾析後所得固體再使用冷的第三丁基甲基醚(20 mL x 3)，經過離心及傾析洗滌3次。所得粗製肽真空乾燥2小時後，採用製備性HPLC純化。彼等習此相關技藝者應了解，有時候可能需要改用替代之裂解混合液，以改善產量及儘管減少副產物。 製備性HPLC：
採用Agilent 1260製備性逆相HPLC或Knauer AZURA製備性逆相HPLC進行純化。依據管柱篩選結果選擇管柱。肽溶於10 – 30% ACN/水(通常為梯度起點)。水與乙腈二者均包含0.1% TFA。通常採用流速20 mL/min，10-30% ACN/水至85-90% ACN/水。溶出份係利用HPLC(Agilent 1260 Infinity)(使用Chromolith Speedrod管柱，5-95%ACN/水梯度，歷時8 min)及採用以下一或多種LC-MS方法分析：方法1、方法2、方法3、方法4、方法5、方法6。
或者，採用Gilson GX-281製備性逆相HPLC進行純化。依據管柱篩選結果選擇管柱。肽溶於10 – 30% ACN/水(通常為梯度起點)。水包含0.075%TFA。通常採用Luna管柱 (25 x 200 mm, C18 10  μm, 110 Å)或Gemini管柱 (30 x 150 mm, C18 5  μm,110 Å)。製備性HPLC之條件：流速20 mL/min，10-30% ACN/水至85-90% ACN/水，波長214/254 nm，烘箱溫度30 oC。溶出份利用HPLC(Agilent 1260 Infinity)，使用方法7分析。隨後採用以下一或多種方法分析肽：方法1、方法2、方法3、方法4、方法5、方法6。
其中-S-S-二硫鍵被-CH 2-S-、-S-CH 2-、-CH 2-CH 2-、-S-(CH 2) 2-、-(CH 2) 2-S-或-CH 2-S-CH 2-置換之二硫醚擬似物可依據下列參考文獻說明之製程，組合本文說明之方法製備：(1) Hong-Kui Cui, Ye Guo, Yao He, Feng-Liang Wang, Hao-Nan Chang, Yu-Jia Wang, Fang-Ming Wu, Chang-Lin Tian, Lei Liu Angew. Chem. Int. Ed. 2013, 52, 9558–9562；(2) Ye Guo, De-Meng Sun, Feng-Liang Wang, Yao He, Lei Liu, Chang-Lin Tian Angew. Chem. Int. Ed. 2015, 54, 14276–14281；(3) Yang Xu, Tao Wang, Chao-Jian Guan, Yi-Ming Li, Lei Liu, Jing Shi, Donald Bierer Tetrahedron Letters 2017, 58, 1677–1680；(4) Tao Wang, Yi-Fu Kong, Yang Xu, Jian Fan, Hua-Jian Xu, Donald Bierer, Jun Wang, Jing Shi, Yi-Ming Li Tetrahedron Letters 2017, 58, 3970–3973；(5) Tao Wang, Jian Fan, Xiao-Xu Chen, Rui Zhao, Yang Xu, Donald Bierer, Lei Liu, Yi-Ming Li, Jing Shi, Ge-Min Fang Org. Lett. 2018, 20, 6074−6078；(6) Jan‐Patrick Fischer, Ria Schönauer, Sylvia Els‐Heindl, Donald Bierer, Johannes Koebberling, Bernd Riedl, Annette G. Beck‐Sickinger J Pep Sci. 2019; e3147；(7) Dong-Liang Huang, Jing-Si Bai, Meng Wu, Xia Wang, Bernd Riedl, Elisabeth Pook, Carsten Alt, Marion Erny, Yi-Ming Li, Donald Bierer, Jing Shi, Ge-Min Fang Chem. Commun., 2019, 55, 2821−2824；(8) Shuai-Shuai Sun, Junyou Chen, Rui Zhao, Donald Bierer, Jun Wang, Ge-Min Fang, Yi-Ming Li Tetrahedron Letters 2019, 60, 1197–1201；(9) C. M. B. K. Kourra與N. Cramer Chem. Sci., 2016, 7, 7007–7012；(10) Qian Qu, Shuai Gao, Fangming Wu, Meng-Ge Zhang, Ying Li, Long-Hua Zhang, Donald Bierer, Chang-Lin Tian, Ji-Shen Zheng, Lei Liu Angew. Chem. Int. Ed. 2020, 59, 6037-6045；(11) Rui Zhao, Pan Shi, Junyou Chen, Shuaishuai Sun, Jingnan Chen, Jibin Cui, Fangming Wu, Gemin Fang, Changlin Tian, Jing Shi, Donald Bierer, Lei Liu, Yi-Ming Li Chem. Sci., 2020, 11, 7927-7932; 10.1039/d0sc02374d；(12) Junyou Chen, Shuaishuai Sun, Rui Zhao, Chen-Peng Xi, Wenjie Qiu, Ning Wang, Ya Wang, Donald Bierer, Jing Shi, Yi-Ming Li ChemistrySelect 2020, 5, 1359-1363; 10.1002/slct.201904042；(13) Yun-Kun Qi, Qian Qu, Donald Bierer, Lei Liu Chem Asian J. 2020, 15, 2793-2802; 10.1002/asia.202000609。
本發明所有肽除非另有其他說明，否則均為TFA鹽。 Masp 肽之自動化 SPPS 之通用方法 ( 方法 A)
以(Ahx)**-GIC+SRSLPPIC+IPD** (實例13)之合成法為代表。
採用標準Fmoc化學法合成該肽。通常使用2-氯三苯甲基樹脂或已預先加載第一胺基酸之2-氯三苯甲基樹脂。
自動化SPPS係於Symphony X肽合成儀(Protein Technologies)上進行。在C-末端包含 Asp之肽通常採用Fmoc-Asp(O-tBu)-氯三苯甲基樹脂(加載0.3 – 0.8 mmol/克)，規模為0.1 mmol。實例13採用之加載量為0.389 mmol/克。取樹脂置入反應容器中，置於儀器上。製備下列溶液及用於合成期間中： 1) Fmoc 胺基酸：0.2 M (8 eq) 2) 激活劑1：0.5 M DIC之DMF溶液(7.5 eq - 8 eq) 3) 激活劑2：0.5 M Oxyma之DMF溶液(7.5 eq – 8 eq) 4) 脫除Fmoc保護：30%哌啶之DMF溶液
各胺基酸通常進行雙重偶合法。針對高價的非天然Fmoc或Boc 胺基酸、自家合成之Fmoc 胺基酸、或N-甲基化胺基酸，則穿插在序列中，並手動偶合此胺基酸(雙重偶合，但通常使用較少試劑(3-5當量))。此偶合完成時，通常繼續在合成儀上進行合成。若在序列上增加N-甲基胺基酸時，通常亦手動偶合下一個胺基酸。所有步驟均在室溫及氮氣下進行。Fmoc-Pen及Fmoc-Oic通常使用自動化SPPS偶合。Fmoc(N-Me)G通常手動偶合。Ahx則最好且最常手動偶合。
使樹脂膨脹及使用DMF洗滌(3 x 3 mL, 10 min)。若樹脂包含Fmoc時，則使用30%哌啶溶液(2 x 3 mL, 10 min)脫除Fmoc。樹脂係使用DMF洗滌(6 x 3 mL, 30 sec)。 裂解Fmoc：
添加30%哌啶溶液(2 x 3 mL, 10 min)來脫除Fmoc保護基。使用DMF(6 x 3 mL, 30 sec)洗滌樹脂。 偶合：
添加Fmoc-Pro (4.0 mL)。添加激活劑1溶液(DIC, 1.6 mL)與激活劑2溶液(Oxyma, 1.6 mL)，在氮氣鼓泡下進行偶合2小時。瀝乾溶液，及使用DMF洗滌(1 x 3 mL, 30 sec)。重覆偶合步驟。添加Fmoc-Pro (4.0 mL)。添加激活劑1溶液(DIC, 1.6 mL)與激活劑2溶液(Oxyma, 1.6 mL)，及在氮氣鼓泡下進行偶合2小時。瀝乾溶液，及使用DMF洗滌(6 x 3 mL, 30 sec)。 裂解Fmoc：
添加30%哌啶溶液(2 x 3 mL, 10 min)來排除Fmoc保護基。使用DMF(6 x 3 mL, 30 sec)洗滌樹脂。 偶合：
添加Fmoc-Ile (4.0 mL)。添加激活劑1溶液(DIC, 1.6 mL)與激活劑2溶液(Oxyma, 1.6 mL)，及在氮氣鼓泡下進行偶合2小時。瀝乾溶液，及使用DMF洗滌(1 x 3 mL, 30 sec)。重覆偶合步驟。添加Fmoc-Ile (4.0 mL)。添加激活劑1溶液(DIC, 1.6 mL)與激活劑2溶液(Oxyma, 1.6 mL)，及在氮氣鼓泡下進行偶合2小時。瀝乾溶液，及使用DMF洗滌(6 x 3 mL, 30 sec)。 裂解Fmoc：
添加30%哌啶溶液(2 x 3 mL, 10 min)來排除Fmoc保護基。使用DMF(6 x 3 mL, 30 sec)洗滌樹脂。 偶合：
添加Fmoc-Cys(Trt) (4.0 mL)。添加激活劑1溶液(DIC, 1.6 mL)與激活劑2溶液(Oxyma, 1.6 mL)，及在氮氣鼓泡下進行偶合2小時。瀝乾溶液，及使用DMF洗滌(1 x 3 mL, 30 sec)。重覆偶合步驟。添加Fmoc-Cys(Trt) (4.0 mL)。添加激活劑1溶液(DIC, 1.6 mL)與激活劑2溶液(Oxyma, 1.6 mL)，及在氮氣鼓泡下進行偶合2小時。瀝乾溶液，及使用DMF洗滌(6 x 3 mL, 30 sec)。 裂解Fmoc：
添加30%哌啶溶液(2 x 3 mL, 10 min)來排除Fmoc保護基。使用DMF(6 x 3 mL, 30 sec)洗滌樹脂。 偶合：
添加Fmoc-Ile (4.0 mL)。添加激活劑1溶液(DIC, 1.6 mL)與激活劑2溶液(Oxyma, 1.6 mL)，及在氮氣鼓泡下進行偶合2小時。瀝乾溶液，及使用DMF洗滌(1 x 3 mL, 30 sec)。重覆偶合步驟。添加Fmoc-Ile (4.0 mL)。添加激活劑1溶液(DIC, 1.6 mL)與激活劑2溶液(Oxyma, 1.6 mL)，及在氮氣鼓泡下進行偶合2小時。瀝乾溶液，及使用DMF洗滌(6 x 3 mL, 30 sec)。 裂解Fmoc：
添加30%哌啶溶液(2 x 3 mL, 10 min)來排除Fmoc保護基。使用DMF(6 x 3 mL, 30 sec)洗滌樹脂。 偶合：
添加Fmoc-Pro (4.0 mL)。添加激活劑1溶液(DIC, 1.6 mL)與激活劑2溶液(Oxyma, 1.6 mL)，及在氮氣鼓泡下進行偶合2小時。瀝乾溶液，及使用DMF洗滌(1 x 3 mL, 30 sec)。重覆偶合步驟。添加Fmoc-Pro (4.0 mL)。添加激活劑1溶液(DIC, 1.6 mL)與激活劑2溶液(Oxyma, 1.6 mL)，及在氮氣鼓泡下進行偶合2小時。瀝乾溶液，及使用DMF洗滌(6 x 3 mL, 30 sec)。 裂解Fmoc：
添加30%哌啶溶液(2 x 3 mL, 10 min)來排除Fmoc保護基。使用DMF(6 x 3 mL, 30 sec)洗滌樹脂。 偶合：
添加Fmoc-Pro (4.0 mL)。添加激活劑1溶液(DIC, 1.6 mL)與激活劑2溶液(Oxyma, 1.6 mL)，及在氮氣鼓泡下進行偶合2小時。瀝乾溶液，及使用DMF洗滌(1 x 3 mL, 30 sec)。重覆偶合步驟。添加Fmoc-Pro (4.0 mL)。添加激活劑1溶液(DIC, 1.6 mL)與激活劑2溶液(Oxyma, 1.6 mL)，及在氮氣鼓泡下進行偶合2小時。瀝乾溶液，及使用DMF洗滌(6 x 3 mL, 30 sec)。 裂解Fmoc：
添加30%哌啶溶液(2 x 3 mL, 10 min)來排除Fmoc保護基。使用DMF(6 x 3 mL, 30 sec)洗滌樹脂。 偶合：
添加Fmoc-Leu (4.0 mL)。添加激活劑1溶液(DIC, 1.6 mL)與激活劑2溶液(Oxyma, 1.6 mL)，及在氮氣鼓泡下進行偶合2小時。瀝乾溶液，及使用DMF洗滌(1 x 3 mL, 30 sec)。重覆偶合步驟。添加Fmoc-Leu (4.0 mL)。添加激活劑1溶液(DIC, 1.6 mL)與激活劑2溶液(Oxyma, 1.6 mL)，及在氮氣鼓泡下進行偶合2小時。瀝乾溶液，及使用DMF洗滌(6 x 3 mL, 30 sec)。 裂解Fmoc：
添加30%哌啶溶液(2 x 3 mL, 10 min)來排除Fmoc保護基。使用DMF(6 x 3 mL, 30 sec)洗滌樹脂。 偶合：
添加Fmoc-Ser(t-Bu) (4.0 mL)。添加激活劑1溶液(DIC, 1.6 mL)與激活劑2溶液(Oxyma, 1.6 mL)，及在氮氣鼓泡下進行偶合2小時。瀝乾溶液，及使用DMF洗滌(1 x 3 mL, 30 sec)。重覆偶合步驟。添加Fmoc-Ser(t-Bu) (4.0 mL)。添加激活劑1溶液(DIC, 1.6 mL)與激活劑2溶液(Oxyma, 1.6 mL)，及在氮氣鼓泡下進行偶合2小時。瀝乾溶液，及使用DMF洗滌(6 x 3 mL, 30 sec)。 裂解Fmoc：
添加30%哌啶溶液(2 x 3 mL, 10 min)來排除Fmoc保護基。使用DMF(6 x 3 mL, 30 sec)洗滌樹脂。 偶合：
添加Fmoc-Arg(Pbf) (4.0 mL)。添加激活劑1溶液(DIC, 1.6 mL)與激活劑2溶液(Oxyma, 1.6 mL)，及在氮氣鼓泡下進行偶合2小時。瀝乾溶液，及使用DMF洗滌(1 x 3 mL, 30 sec)。重覆偶合步驟。添加Fmoc-Arg(Pbf) (4.0 mL)。添加激活劑1溶液(DIC, 1.6 mL)與激活劑2溶液(Oxyma, 1.6 mL)，及在氮氣鼓泡下進行偶合2小時。瀝乾溶液，及使用DMF洗滌(6 x 3 mL, 30 sec)。 裂解Fmoc：
添加30%哌啶溶液(2 x 3 mL, 10 min)來排除Fmoc保護基。使用DMF(6 x 3 mL, 30 sec)洗滌樹脂。 偶合：
添加Fmoc-Ser(t-Bu) (4.0 mL)。添加激活劑1溶液(DIC, 1.6 mL)與激活劑2溶液(Oxyma, 1.6 mL)，及在氮氣鼓泡下進行偶合2小時。瀝乾溶液，及使用DMF洗滌(1 x 3 mL, 30 sec)。重覆偶合步驟。添加Fmoc-Ser(t-Bu) (4.0 mL)。添加激活劑1溶液(DIC, 1.6 mL)與激活劑2溶液(Oxyma, 1.6 mL)，及在氮氣鼓泡下進行偶合2小時。瀝乾溶液，及使用DMF洗滌(6 x 3 mL, 30 sec)。 裂解Fmoc：
添加30%哌啶溶液(2 x 3 mL, 10 min)來排除Fmoc保護基。使用DMF(6 x 3 mL, 30 sec)洗滌樹脂。 偶合：
添加Fmoc-Cys(Trt) (4.0 mL)。添加激活劑1溶液(DIC, 1.6 mL)與激活劑2溶液(Oxyma, 1.6 mL)，及在氮氣鼓泡下進行偶合2小時。瀝乾溶液，及使用DMF洗滌(1 x 3 mL, 30 sec)。重覆偶合步驟。添加Fmoc-Cys(Trt) (4.0 mL)。添加激活劑1溶液(DIC, 1.6 mL)與激活劑2溶液(Oxyma, 1.6 mL)，及在氮氣鼓泡下進行偶合2小時。瀝乾溶液，及使用DMF洗滌(6 x 3 mL, 30 sec)。 裂解Fmoc：
添加30%哌啶溶液(2 x 3 mL, 10 min)來排除Fmoc保護基。使用DMF(6 x 3 mL, 30 sec)洗滌樹脂。 偶合：
添加Fmoc-Ile (4.0 mL)。添加激活劑1溶液(DIC, 1.6 mL)與激活劑2溶液(Oxyma, 1.6 mL)，及在氮氣鼓泡下進行偶合2小時。瀝乾溶液，及使用DMF洗滌(1 x 3 mL, 30 sec)。重覆偶合步驟。添加Fmoc-Ile (4.0 mL)。添加激活劑1溶液(DIC, 1.6 mL)與激活劑2溶液(Oxyma, 1.6 mL)，及在氮氣鼓泡下進行偶合2小時。瀝乾溶液，及使用DMF洗滌(6 x 3 mL, 30 sec)。 裂解Fmoc：
添加30%哌啶溶液(2 x 3 mL, 10 min)來排除Fmoc保護基。使用DMF(6 x 3 mL, 30 sec)洗滌樹脂。 偶合：
添加Fmoc-Gly (4.0 mL)。添加激活劑1溶液(DIC, 1.6 mL)與激活劑2溶液(Oxyma, 1.6 mL)，及在氮氣鼓泡下進行偶合2小時。瀝乾溶液，及使用DMF洗滌(1 x 3 mL, 30 sec)。重覆偶合步驟。添加Fmoc-Gly (4.0 mL)。添加激活劑1溶液(DIC, 1.6 mL)與激活劑2溶液(Oxyma, 1.6 mL)，及在氮氣鼓泡下進行偶合2小時。瀝乾溶液，及使用DMF洗滌(6 x 3 mL, 30 sec)。 裂解Fmoc：
添加30%哌啶溶液(2 x 3 mL, 10 min)來排除Fmoc保護基。使用DMF(6 x 3 mL, 30 sec)洗滌樹脂。 在自動化SPPS期間進行手動偶合：
添加Fmoc-Ahx (0.2 M之DMF溶液, 3當量)至樹脂中。添加激活劑1溶液(DIC, 0.6 mL)與激活劑2溶液(Oxyma, 0.6 mL)，在振盪下進行偶合(溫度調控混合器(Thermomixer)，室溫) 2小時。溶液過濾，及使用DMF洗滌(1 x 3 mL, 30 sec)。重覆偶合步驟。添加Fmoc-Ahx (0.2 M之DMF溶液, 3當量)。添加激活劑1溶液(DIC, 0.6 mL)與激活劑2溶液(Oxyma, 0.6 mL)，在振盪下進行偶合(溫度調控混合器，室溫) 2小時。溶液過濾，及使用DMF洗滌(6 x 3 mL, 30 sec)。 裂解Fmoc：
添加30%哌啶溶液(2 x 3 mL, 10 min)來排除Fmoc保護基。使用DMF(6 x 3 mL, 30 sec)洗滌樹脂。
若序列中出現額外胺基酸，其等係採取上述步驟偶合。 測試裂解：
當進行手動偶合時，通常進行測試裂解來監測反應。測試裂解混合液為TFA/EDT/硫代苯甲醚(90：3：7)；於溫度調控混合器上，於室溫及750 rpm下振盪1.5 h。採用上述其中一種方法，進行LC-MS分析。 從2-氯三苯甲基樹脂上裂解肽：
取包含肽之樹脂置入針筒中，添加3.0 mL裂解緩衝液HFIP/DCM (1：4)至樹脂中。混合物於室溫下振盪2.5小時。過濾收集溶液，使用DCM (2 x 20 mL)洗滌樹脂。合併之HFIP/DCM溶液使用旋轉蒸發器濃縮，及使用DCM洗滌後，濃縮(2 x 20 mL)。 肽環化(頭接尾形成醯胺)：
取粗製肽 (510 mg)溶於DMF (足以溶解的量)中後，分裝入兩個圓底燒瓶中。添加DIC (5當量)、Oxyma (5當量)與DCM (1000 mL)以達到終濃度1 mg肽/2 mL溶液體積。反應混合物於室溫下，於環繞式振盪器上振盪2小時。再添加DIC (5當量)與Oxyma (5當量)。反應混合物再於室溫下振盪一夜。反應混合物接著使用旋轉蒸發器蒸發至乾。 完全裂解：
取粗製肽置入5 mL針筒中，添加TFA/EDT/硫代苯甲醚(90：3：7) (1 mL)裂解緩衝液之混合物後，溶液於室溫下振盪2小時。添加冷的乙醚(-20 oC)使肽沉澱。溶液於Falcon離心管(60 mL)中，於氮蒙氣下離心(3000 rpm)。傾析醚，固體殘質使用冷的乙醚重覆洗滌(5 x 10 mL)。然後取固體殘質乾燥。 二硫醚環化法：
取粗製肽 (173 mg)溶於0.1 M碳酸氫銨緩衝液(pH 7.8-8.2) (此例為pH = 7.81)，濃度為1 mg/2 mL(350 mL)。讓溶液於圓底燒瓶中，在開放空氣下，於環繞式振盪器上振盪一夜後。然後溶液冷凍乾燥，得到白色粉末。 篩選用於HPLC純化法之管柱：
取肽溶於5% CH 3CN及95%水中。每一種肽均進行管柱篩選，以決定可用於純化之製備性HPLC 方法。篩選下列分析性管柱。
有兩種方法可用於篩選管柱： 1)  5-60% ACN_8 Min_1 mL/min_25°C 2)  30-85% ACN_8 Min_1 mL/min_25°C
可採用之管柱(50 mm x ID 4.6 mm) (亦可作為製備性管柱)： 1)  Aeris C18 (Phenomenex) 2)  X-Bridge C18 (Waters) 3)  Kinetex C18 (Coreshell Material) (Phenomenex) 4)  YMC Triart C18 (可能使用100%水溶離) 5)  Kinetix Biphenyl (Phenomenex) 6)  X-Select C18 (帶正電荷) 7)  Jupiter Proteo C18 (Phenomenex) 8)  Luna C18 (Phenomenex)
本發明肽採用下列5種製備性管柱其中一種： 1)       管柱：Phenomenex，Aeris Peptide 5µ XB-C18，AXIA Packed，21.2x250mm + 濾筒5µ 2)       管柱：Phenomenex，Kinetex C18 5µ 21.5x250mm + 濾筒5µ 3)       管柱：Phenomenex，Kinetex 5µ Biphenyl 100A，AXIA Packed，21.2x250mm + 濾筒5µ 4)       管柱：YMC Actus Triart Prep. C18 12nm，S-10µm 250x20mm + 濾筒3µm (10x4mm) 5)       管柱：Waters，Xbridge Prep.C18 5µ OBD 19x250mm + 濾筒10µ
一旦選定管柱，即可採用下列其中一種方法： 1)       方法：梯度5-60% ACN之水溶液(0.10%TFA) 2)       方法：梯度30-85% ACN之水溶液(0.10%TFA) 3)       依據管柱篩選結果之聚焦梯度。 流速20 mL/min
合併之溶出份係採用HPLC(歷時8分鐘之5-95梯度，Chromolith SpeedROD & Poroshell 120SB C18歷時18分鐘之5-95梯度)及使用上述其中一種LC-MS方法分析。
實例13中，取粗製肽溶於30% CH 3CN/水，於Waters XBridge Prep C18 5µ，OBD 19x250mm + 濾筒5µ上純化，流速：20 mL/min，方法：5-60% ACN之水溶液(各包含0.10% TFA)歷時40分鐘。合併之溶出份冷凍乾燥，產生8.24 mg實例13 (95%純度)及額外16.0 mg，83-87% 純度。 表 6 ：所使用材料及條件說明：
# 材料 偶合試劑 (2x 供雙重偶合 ) 偶合時間
1 Fmoc-Asp(Ot-Bu)-CT 樹脂加載0.389 mmol/g (0.1 mmol規模) ---  
2 Fmoc-Pro-OH (8.0 eq) DIC (8.0 eq) Oxyma (8.0 eq) 120 min
3 Fmoc-Ile-OH (8.0 eq) DIC (8.0 eq) Oxyma (8.0 eq) 120 min
4 Fmoc-Cys(Trt)-OH (8.0 eq) DIC (8.0 eq) Oxyma (8.0 eq) 120 min
5 Fmoc-Ile-OH (8.0 eq) DIC (8.0 eq) Oxyma (8.0 eq) 120 min
6 Fmoc-Oic-OH (8.0 eq) DIC (8.0 eq) Oxyma (8.0 eq) 120 min
7 Fmoc-Pro-OH (8.0 eq) DIC (8.0 eq) Oxyma (8.0 eq) 120 min
8 Fmoc-Leu-OH (8.0 eq) DIC (8.0 eq) Oxyma (8.0 eq) 120 min
9 Fmoc-Ser(tBu)-OH (8.0 eq) DIC (8.0 eq) Oxyma (8.0 eq) 120 min
10 Fmoc-Arg(Pbf)-OH (8.0 eq) DIC (8.0 eq) Oxyma (8.0 eq) 120 min
11 Fmoc-Ser(t-Bu)-OH (8.0 eq) DIC (8.0 eq) Oxyma (8.0 eq) 120 min
12 Fmoc-Cys(Trt)-OH (8.0 eq) DIC (8.0 eq) Oxyma (8.0 eq) 120 min
13 Fmoc-Ile-OH (8.0 eq) DIC (8.0 eq) Oxyma (8.0 eq) 120 min
14 Fmoc-6-Ahx-OH (3.0 eq) DIC (3.0 eq) Oxyma (3.0 eq) 120 min
15 頭接尾環化步驟 DIC (5.0 eq) Oxyma (5.0 eq) 120 min + 一夜
當無法利用第一胺基酸預先加載樹脂時，則手動添加，及在合成法中使用氯三苯甲基樹脂。 在2-氯三苯甲基樹脂上加載第一胺基酸：
取2-氯三苯甲基樹脂(500 mg, 0.775 mmol)，於50 mL Falcon離心管中，使用10 mL DCM膨脹15 min。取第一胺基酸(例如：Fmoc-Ile-OH) (0.775 mmol)溶於含DIEA(6當量, 0.81 mL)之DCM中，及添加該溶液至樹脂中。溶液使用氬氣吹掃，及於室溫下振盪一夜。混合物過濾及使用DMF (3 x 5 mL)與DCM(3 x 5 mL)洗滌。添加甲醇(5 mL)，混合物振盪30分鐘後，過濾。樹脂使用DMF(3 x 5 mL)與DCM (3 x 5 mL)洗滌。再度添加甲醇(5 mL)，混合物振盪30分鐘後，過濾。樹脂使用DMF(3 x 5 mL)與DCM(3 x 5 mL)洗滌。依據下文說明之加載製程測得之加載量為0.42 mmol/g。
該樹脂接著以0.1 mmol規模用於來自Protein Technologies 之 Symphony X合成儀上，進行自動化SPPS。 樹脂加載量之測定：
測定樹脂加載量時，從指定量之樹脂上裂解FMOC保護基，然後藉由301nm光度計測定裂解溶液上清液中所得芴基化合物濃度。此濃度與樹脂上之胺基酸加載量呈正相關性。 1)       稱取1-3 mg樹脂加至2 mL Eppendorf離心管或類似離心管中(注意確實添加量) 2)       添加1000 µL 20%哌啶之DMF溶液。 3)       攪拌混合物30分鐘，以裂解FMOC基團。 4)       然後取100 µL上清液轉移至石英測光管中，使用900µL 20%哌啶 / DMF稀釋。 5)       在第二個測光管中製備空白樣本1000µl 哌啶/DMF 。 6)       測定參考樣本中之空白值後，於UV-Vis光度計(Thermo Scientific Evolution 201)中測定試驗樣本在λ = 301nm之消光度。 7)       為了提高準確度，可準備多重試驗樣本(通常為兩個)；然後計算所測得消光度之算術平均值。 計算樹脂加載量：
樹脂加載量L 301(以mmol/g計)係採用下列公式計算：
Figure 02_image009
E = 消光度 ε =在301nm波長下之消光係數(7800 L/mol**cm) m =樹脂用量(g) V =樣本體積(L) D = 測光管層厚度 (cm) VF = 稀釋因數( = 10) Masp 肽之自動化 SPPS 之通用方法 ( 方法 B)
以G**GIC+SRSLPPIC+IPD** 之合成法(實例15)為代表。
該合成法係與方法A相同，但改用20%哌啶之DMF溶液進行Fmoc裂解步驟。
自動化SPPS係於Symphony X肽合成儀(Protein Technologies)上進行。在C-末端包含 Asp之肽通常採用Fmoc-Asp(O-tBu)-氯三苯甲基樹脂(加載0.3 – 0.8 mmol/克)，規模為0.1 mmol。實例15採用之加載量為0.80 mmol/克。取樹脂置入反應容器中，置於儀器上。製備下列溶液及用於合成期間中： 1)       Fmoc 胺基酸：0.2 M (8 eq) 2)       激活劑1：0.5 M DIC之DMF溶液(7.5 eq - 8 eq) 3)       激活劑2：0.5 M Oxyma之DMF溶液(7.5 eq – 8 eq) 4)       脫除Fmoc保護：20%哌啶之DMF溶液
實例15係取粗製肽溶於CH 3CN/水中，於Waters XBridge Prep C18 5µ，OBD 19x250mm + 濾筒5µ上純化，流速：20 mL/min，方法：5-60% ACN之水溶液(各包含0.10% TFA)，歷時40 min。取合併之溶出份冷凍乾燥，產生4.43 mg之實例15 (＞99%純度)。 Masp 肽之手動 SPPS 之通用方法 ( 方法 C)
以K++GIC+SRSLPPIC+IPD** (實例22)之合成法為代表。
肽之線性合成法係依據方法B進行。準備進行側鏈接尾端醯胺環化時，需要使用經正交保護之胺基酸(例如：此例為Boc-Lys(Fmoc)。使用HFIP/DCM從樹脂上裂解之步驟係與方法B舉例說明相同。 肽環化(側鏈接尾形成醯胺)：
取粗製肽(476 mg)溶於DMF(足以溶解的量)中後，分裝至兩個圓底燒瓶中。添加DIC (5當量)、Oxyma (5當量)與DCM (900 mL)，以達終濃度1 mg肽/2 mL溶液體積。使用三個圓底燒瓶。反應混合物於室溫下，於環繞式振盪器上振盪2小時。再添加DIC (5當量)與Oxyma (5當量)，反應混合物再於室溫下振盪一夜。反應混合物接著使用旋轉蒸發器蒸發至乾。 完全裂解：
取粗製肽置入10 mL針筒中，添加TFA/EDT/硫代苯甲醚(90：3：7)裂解緩衝液之混合物(2 mL)，然後於室溫下振盪2小時。添加冷的乙醚(-20 oC)使肽沉澱。溶液於Falcon離心管(60 mL)中，於氮蒙氣下離心(3000 rpm)。傾析醚，固體殘質使用冷的乙醚重覆洗滌(5 x 10 mL)。然後取固體殘質乾燥。 二硫醚環化法：
取粗製肽(280 mg)分成三份，置入3個圓底燒瓶中(100 mg、90 mg、90 mg)。肽溶於0.1M碳酸氫銨緩衝液(pH 7.8-8.2) (此例中pH = 7.77 – 7.83)，濃度為1 mg/2 mL(分別為200 mL、180 mL、180 mL)。讓溶液於圓底燒瓶中，在開放空氣下，於環繞式振盪器上振盪一夜。合併之溶液冷凍乾燥，得到白色粉末。 篩選用於HPLC純化法之管柱：
依據方法A之管柱篩選法選出YMC Triart Prep C18 5µ，20x250mm + 濾筒5µ作為最適合此肽之管柱。取肽溶於5% CH 3CN之水溶液中，使用YMC Triart管柱純化，流速：20 mL/min，方法：5-60% ACN之水溶液(各包含0.10% TFA)，歷時40 min。取合併之溶出份冷凍乾燥，產生50.36 mg之實例22 (＞ 99%純度)。 表 7 ：所採用材料及條件說明：
# 材料 偶合試劑 (2x 用於雙重偶合 ) 偶合時間
1 Fmoc-Asp(Ot-Bu)-CT 樹脂加載0.380 mmol/g (0.1 mmol scale) ---  
2 Fmoc-Pro-OH (8.0 eq) DIC (8.0 eq) Oxyma (8.0 eq) 120 min
3 Fmoc-Ile-OH (8.0 eq) DIC (8.0 eq) Oxyma (8.0 eq) 120 min
4 Fmoc-Cys(Trt)-OH (8.0 eq) DIC (8.0 eq) Oxyma (8.0 eq) 120 min
5 Fmoc-Ile-OH (8.0 eq) DIC (8.0 eq) Oxyma (8.0 eq) 120 min
6 Fmoc-Pro-OH (8.0 eq) DIC (8.0 eq) Oxyma (8.0 eq) 120 min
7 Fmoc-Pro-OH (8.0 eq) DIC (8.0 eq) Oxyma (8.0 eq) 120 min
8 Fmoc-Leu-OH (8.0 eq) DIC (8.0 eq) Oxyma (8.0 eq) 120 min
9 Fmoc-Ser(tBu)-OH (8.0 eq) DIC (8.0 eq) Oxyma (8.0 eq) 120 min
10 Fmoc-Arg(Pbf)-OH (8.0 eq) DIC (8.0 eq) Oxyma (8.0 eq) 120 min
11 Fmoc-Ser(t-Bu)-OH (8.0 eq) DIC (8.0 eq) Oxyma (8.0 eq) 120 min
12 Fmoc-Cys(Trt)-OH (8.0 eq) DIC (8.0 eq) Oxyma (8.0 eq) 120 min
13 Fmoc-Ile-OH (8.0 eq) DIC (8.0 eq) Oxyma (8.0 eq) 120 min
14 Fmoc-Gly-OH (8.0 eq) DIC (8.0 eq) Oxyma (8.0 eq) 120 min
15 Boc-Lys(Fmoc)-OH (8.0 eq) DIC (8.0 eq) Oxyma (8.0 eq) 120 min + 一夜
16 Side chain-to-tail cyclization step DIC (5.0 eq) Oxyma (5.0 eq) 120 min + 一夜
Masp 肽之手動 SPPS 之通用方法 ( 方法 D)
以(Ahx)**-GIC+SRS-((tBu)A)-PPI-((N-Me)C)+-IPD** (實例30)之合成法為代表。
肽合成法： 肽係採用標準Fmoc化學合成。 1)          樹脂製法：在2-氯三苯甲基樹脂 (0.267 g, 0.30 mmol，加載= 1.12 mmol/g)中添加胺基胺基酸(Fmoc-Asp(Ot-Bu)-OH) (1當量)、DIEA (4當量)、與DCM (15 mL)，混合物於20°C下，於N 2鼓泡下攪拌0.5 h。排除管柱反應溶液，管柱使用DCM洗滌。然後添加1：1 DCM/MeOH溶液，繼續氮氣鼓泡30 min (以蓋住樹脂)。抽吸樹脂排除DCM/MeOH後，使用DCM與DMF洗滌。然後添加20%哌啶之DMF溶液(10 mL)，於20°C下使用N 2攪拌混合物20 min。排除溶液，樹脂使用DMF洗滌(10 mL x 5)，及真空過濾，得到樹脂。 2)          偶合：取含序列中下一個胺基酸Fmoc-Pro-OH (0.9 mmol, 0.303 g, 3.0 eq)、HBTU (0.33 g, 0.85 mmol, 2.85 eq)與DIEA (1.80 mmol, 0.31 mL, 6.00 eq)之DMF溶液(30 mL)加至樹脂中，於20°C下使用N 2攪拌30 min。隨後使用DMF洗滌 (30 mL x 3)樹脂。 3)          脫除保護：取20%哌啶之DMF溶液(10.0 mL)加至樹脂中，於20°C下使用N 2攪拌20 min。 4)          所有其他胺基酸均重覆步驟2至3。 表 8 ：所採用材料及條件說明：
# 材料 偶合試劑 偶合時間
1 Fmoc-Asp(Ot-Bu)-OH (1.0 eq) HBTU(2.85 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
2 Fmoc-Pro-OH (3.0 eq) HBTU(2.85 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
3 Fmoc-Ile-OH (3.0 eq) HBTU(2.85 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
4 Fmoc -Cys(N-Me)-OH (3.0 eq) HBTU(2.85 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
5 Fmoc-Ile-OH (3.0 eq) HBTU(2.85 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
6 Fmoc-Pro-OH (3.0 eq) HBTU(2.85 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
7 Fmoc-Pro-OH (3.0 eq) HBTU(2.85 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
8 Fmoc-Ala(t-Bu)-OH (3.0 eq) HBTU(2.85 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
9 Fmoc-Ser(tBu)-OH (3.0 eq) HBTU(2.85 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
10 Fmoc-Arg(Pbf)-OH (3.0 eq) HBTU(2.85 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
11 Fmoc-Ser(tBu)-OH (3.0 eq) HBTU(2.85 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
12 Fmoc-Cys(Trt)-OH (3.0 eq) HBTU(2.85 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
13 Fmoc-Ile-OH (3.0 eq) HBTU(2.85 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
14 Fmoc-Gly-OH (3.0 eq) HBTU(2.85 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
15 Fmoc-Ahx-OH (3.0 eq) HBTU(2.85 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
採用20%哌啶之DMF溶液脫除Fmoc保護基30 min。採用茚三酮(除了Pro以外之所有胺基酸)及四氯苯醌試驗(chloranil test)(Pro)監測偶合反應，及使用DMF(5.0 mL)洗滌樹脂 5次。 肽裂解：
完成肽之延長後，樹脂使用MeOH洗滌 (10 mL x 3)及真空乾燥，得到肽樹脂。然後添加10.0 mL裂解緩衝液1% TFA/DCM至含樹脂之容器，讓混合物膨脹10 min。混合物過濾，及收集濾液。重覆該製程，取合併之濾液用於下一個步驟。 醯胺環化及脫除保護基：
使用DCM稀釋肽，以調整肽濃度至1mM。添加DIEA，以調整pH至約8。然後添加TBTU (289 mg, 3.0 eq)與HOBT (122 mg, 3.0 eq)至溶液中，讓反應混合物反應約3 h。然後使用1N HCl (1 x 150 mL)洗滌該溶液，收集有機層，及真空濃縮。所得殘質使用90%TFA/5%TIPS/2.5%H 2O/2.5%EDT (10 mL)混合液處理， 及膨脹約2 h。粗製肽使用冷的第三丁基甲基醚(50 mL)沉澱，及離心(3000 rpm下3 min)，得到粗製肽固體。粗製肽沉澱物使用第三丁基甲基醚再洗滌3次(20.0 mL x 3)後，粗製肽於真空下乾燥。 形成二硫鍵：
取粗製肽溶於H 2O/ACN (1：1)，以調整濃度至1 mM。然後添加1 M NH4HCO3 至上述溶液中，以調整pH至約8-9。讓溶液於室溫下反應約8 h。採用LC-MS監測反應。反應完成後，添加乙酸調整pH至約6，以淬滅反應。反應混合物接著冷凍乾燥，所得固體經逆相HPLC純化。 純化：
粗製肽係經製備性HPLC純化 (條件：A：0.075% TFA之水溶液，B：CH 3CN)及冷凍乾燥，得到74.4 mg (97.2%純度，採用方法7純化；94.4%純度，採用方法8純化)所需肽(實例30)之白色固體與TFA鹽。純化條件：肽溶於TFA/H 2O (7：3)；流速20 mL/min；梯度12-42%歷時60 min；操作時間= 42 min；經Luna 25 x 200 mm，C18 10 um，110 Å管柱純化。 Masp 肽之手動 SPPS 之通用方法 ( 方法 E)
以A**GAIC+SRS-((tBu)A)-PPI-((N-Me)C)+-IPD** (實例31)之合成法為代表。
肽合成法： 肽係採用標準Fmoc化學合成。 1)          樹脂製法：在2-氯三苯甲基樹脂 (0.267 g, 0.30 mmol, 加載= 1.12 mmol/g)中添加胺基胺基酸 (Fmoc-Asp(Ot-Bu)-OH) (1當量)、DIEA (4當量)、與DCM (15 mL)，混合物於20°C下，於N 2鼓泡下攪拌0.5 h。排除管柱反應溶液，管柱使用DCM洗滌。然後添加1：1 DCM/MeOH溶液，繼續氮氣鼓泡30 min (以蓋住樹脂)。抽吸樹脂排除DCM/MeOH後，使用DCM與DMF依序洗滌。然後添加20%哌啶之DMF溶液(10 mL)，於20°C下使用N 2攪拌混合物20 min。真空過濾排除反應溶劑，樹脂使用DMF洗滌(10 mL x 5)後，過濾，得到樹脂。 2)          偶合：取含序列中下一個胺基酸Fmoc-Pro-OH (0.9 mmol, 0.303 g, 3.0 eq)、HBTU (0.33 g, 0.88 mmol, 2.95 eq)與DIEA (1.80 mmol, 0.31 mL, 6.00 eq)之DMF溶液(30 mL)加至樹脂中，於20°C下使用N 2攪拌30 min。隨後使用DMF洗滌 (30 mL x 3)樹脂。 3)          脫除保護：取20%哌啶之DMF溶液(10.0 mL)加至樹脂中，於20°C下，使用N 2攪拌混合物20 min。 4)          所有其他胺基酸均重覆步驟2至3。 表 9 ：所採用材料及條件說明：
# 材料 偶合試劑 偶合時間
1 Fmoc-Asp(Ot-Bu)-OH (1.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
2 Fmoc-Pro-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
3 Fmoc-Ile-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
4 Fmoc -Cys(N-Me)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
5 Fmoc-Ile-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
6 Fmoc-Pro-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
7 Fmoc-Pro-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
8 Fmoc-Ala(t-Bu)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
9 Fmoc-Ser(tBu)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
10 Fmoc-Arg(Pbf)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
11 Fmoc-Ser(tBu)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
12 Fmoc-Cys(Trt)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
13 Fmoc-Ile-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
14 Fmoc-Gly-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
15 Fmoc-Ahx-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
採用20%哌啶之DMF溶液脫除Fmoc保護基30 min。採用茚三酮(除了Pro以外之所有胺基酸)及四氯苯醌試驗(Pro)監測偶合反應，及使用DMF(5.0 mL)洗滌樹脂 5次。 肽裂解：
完成肽之延長後，樹脂使用MeOH洗滌(10 mL x 3)及真空乾燥，得到肽樹脂。然後添加10.0 mL裂解緩衝液1% TFA/DCM至含樹脂之容器中，混合物膨脹10 min。混合物過濾，及收集濾液。重覆該製程，取合併之濾液用於下一個步驟。 醯胺環化及脫除保護基：
使用DCM稀釋肽，以調整肽濃度至1mM。添加DIEA，以調整pH至約8。然後添加TBTU (289 mg, 3.0 eq)與HOBT (122 mg, 3.0 eq)至溶液中，讓反應混合物反應約3 h。然後使用1N HCl (1 x 150 mL)洗滌該溶液，收集有機層，及真空濃縮。所得殘質使用90%TFA/5%TIPS/2.5%H 2O/2.5%EDT (10 mL)混合液處理， 及膨脹約2 h。粗製肽使用冷的第三丁基甲基醚(50 mL)沉澱，及離心(3000 rpm下3 min)，得到粗製肽固體。粗製肽沉澱物使用第三丁基甲基醚再洗滌3次(20.0 mL x 3)後，粗製肽於真空下乾燥。 形成二硫鍵：
取粗製肽溶於H 2O/ACN (1：1)，以調整濃度至1 mM。然後添加1 M NH4HCO3 至上述溶液中，以調整pH至約8-9。讓溶液於室溫下反應約8 h。採用LC-MS監測反應。反應完成後，添加乙酸調整pH至約6，以淬滅反應。反應混合物接著冷凍乾燥，所得固體經逆相HPLC純化。 純化：
粗製肽係經製備性HPLC純化 (條件：A：0.075% TFA之水溶液，B：CH 3CN)及冷凍乾燥，得到36.2 mg (95.0%純度，採用方法7純化；92.80%純度，採用方法8純化)所需肽(實例30)之白色固體與TFA鹽。純化條件：肽溶於TFA/H 2O (7：3)；流速20 mL/min；梯度12-42%歷時60 min；操作時間= 42 min；經Luna 25 x 200 mm，C18 10 um，110 Å管柱純化。 Masp 肽之手動 SPPS 之通用方法 ( 方法 F)
以(PEG1(10個原子))**-AIC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IPD** (實例34)之合成法為代表。
肽合成法： 肽係採用標準Fmoc化學合成。 1)          樹脂製法：讓2-氯三苯甲基樹脂於含於管柱中之DCM 中膨脹30 min，然後使用氮氣推出管柱中之DCM。在2-氯三苯甲基樹脂 (0.267 g, 0.30 mmol, 加載= 1.12 mmol/g)中添加胺基胺基酸 (Fmoc-Asp(Ot-Bu)-OH) (1當量)、DIEA (4當量)、與DCM (10 mL)，混合物於20°C下，於N 2鼓泡下攪拌0.5 h。排除反應溶液，使用DCM洗滌樹脂。然後添加1：1 DCM/MeOH溶液，繼續氮氣鼓泡30 min (以蓋住樹脂)。 2)          排出管柱中之溶劑，樹脂依序使用DCM (10 mL)與DMF (10 mL x 3)洗滌。 3)          添加 20%哌啶之DMF溶液(10 mL)，於室溫下使用N 2攪拌反應混合物20 min。 4)          排出管柱中之溶劑，樹脂使用DMF洗滌 (10 mL x 5)及過濾，得到樹脂。 5)          製備(或激活)胺基酸：稱取下一個胺基酸 Fmoc-Pro-OH (0.9 mmol, 3當量)與HBTU (2.95 eq)，然後溶於DMF溶液中。添加DIEA(6當量)至上述溶液中。然後添加激活之溶液至包含樹脂之管柱中，及反應約2 h。 6)          排出管柱中之溶劑，及使用DMF (10 mL x 3)洗滌樹脂。 7)          序列中所有其他胺基酸均重覆步驟3-6 表 10 ：所採用材料及條件說明：
# 材料 偶合試劑 偶合時間
1 Fmoc-Asp(Ot-Bu)-OH (1.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
2 Fmoc-Pro-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
3 Fmoc-Ile-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
4 Fmoc-Pen(Trt)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
5 Fmoc-Ile-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
6 Fmoc-Pro-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
7 Fmoc-Pro-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
8 Fmoc-Ala(t-Bu)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
9 Fmoc-Ser(tBu)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
10 Fmoc-Arg(Pbf)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
11 Fmoc-Ser(tBu)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
12 Fmoc-Cys(Trt)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
13 Fmoc-Ile-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
14 Fmoc-Ala-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
15 Fmoc-PEG1(10個原子)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
採用20%哌啶之DMF溶液脫除Fmoc保護基30 min。採用茚三酮(除了Pro以外之所有胺基酸)及四氯苯醌試驗(Pro)監測偶合反應，及使用DMF(5.0 mL)洗滌樹脂 5次。 肽裂解：
完成肽之延長後，樹脂使用MeOH洗滌 (10 mL x 3)及真空乾燥，得到肽樹脂。然後添加10.0 mL裂解緩衝液1% TFA/DCM至含樹脂之容器，讓混合物膨脹10 min。混合物過濾，及收集濾液。重覆該製程，取合併之濾液用於下一個步驟。 醯胺環化及脫除保護基：
使用DCM稀釋肽，以調整肽濃度至1mM。添加DIEA，以調整pH至約8。然後添加TBTU (289 mg, 3.0 eq)與HOBT (122 mg, 3.0 eq)至溶液中，讓反應混合物反應約3 h。然後使用1N HCl (1 x 150 mL)洗滌該溶液，收集有機層，及真空濃縮。所得殘質使用90%TFA/5%TIPS/2.5%H 2O/2.5%EDT (10 mL)混合液處理 ，及膨脹約2 h。粗製肽使用冷的第三丁基甲基醚(50 mL)沉澱，及離心(3000 rpm下3 min)，得到粗製肽固體。粗製肽沉澱物使用第三丁基甲基醚再洗滌3次(20.0 mL x 3)後，粗製肽於真空下乾燥。 形成二硫鍵：
取粗製肽溶於H 2O/ACN (1：1)，以調整濃度至1 mM。然後添加1 M NH 4HCO 3至上述溶液中，以調整pH至約8-9。讓溶液於室溫下反應約8 h。採用LC-MS監測反應。反應完成後，添加乙酸調整pH至約6，以淬滅反應。反應混合物接著冷凍乾燥，所得固體經逆相HPLC純化。 純化：
粗製肽係經製備性HPLC純化 (條件：A：0.075% TFA之水溶液，B：CH 3CN)及冷凍乾燥，得到133.1 mg (96.80%純度，採用方法7純化；94.90%純度，採用方法8純化)所需肽(實例34)之白色固體與TFA鹽。純化條件：肽溶於TFA/H 2O (7：3)；流速20 mL/min；梯度12-42%歷時60 min；操作時間= 42 min；經Luna 25 x 200 mm，C18 10 um，110 Å管柱純化。 Masp 肽之手動 SPPS 之通用方法 ( 方法 G)
以A**GAIC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IPD++-NH 2(實例41)之合成法為代表。
肽合成法： 肽係採用標準Fmoc化學合成。 1)          樹脂製法：讓MBHA Rink 醯胺樹脂 (666.67 mg, 0.30 mmol, 加載0.45 mmol/g)於含於管柱中之DMF中膨脹30 min，然後使用氮氣推出管柱中之DMF。 2)          添加20%哌啶之DMF溶液(10 mL)，於室溫下使用N 2攪拌反應混合物20 min，以裂解Fmoc基團。 3)          脫除Fmoc基團後，排出管柱中之溶劑，樹脂使用DMF (10 mL x 3)洗滌後，排出。 4)          製備(或激活)胺基酸：稱取第一胺基酸 Fmoc-Asp(O)-OH (0.9 mmol, 3當量)與HBTU (2.95 eq)，然後溶於DMF溶液中。添加DIEA(6當量)至上述溶液中。然後添加激活之溶液至包含樹脂之管柱中，及反應約2 h。 5)          排出管柱中之溶劑，及使用DMF (10 mL x 3)洗滌樹脂。 6)          序列中所有其他胺基酸均重覆步驟2-5。 表 11 ：所採用材料及條件說明：
# 材料 偶合試劑 偶合時間
1 Fmoc-Asp(O烯丙基)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
2 Fmoc-Pro-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
3 Fmoc-Ile-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
4 Fmoc-Pen(Trt)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
5 Fmoc-Ile-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
6 Fmoc-Oic-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
7 Fmoc-Pro-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
8 Fmoc-Leu-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
9 Fmoc-Ser(tBu)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
10 Fmoc-Arg(Pbf)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
11 Fmoc-Ser(tBu)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
12 Fmoc-Cys(Trt)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
13 Fmoc-Ile-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
14 Fmoc-Ala-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
15 Fmoc-Gly-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
16 Fmoc-Ala-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
採用20%哌啶之DMF溶液脫除Fmoc保護基30 min。採用茚三酮(除了Pro以外之所有胺基酸)及四氯苯醌試驗(Pro)監測偶合反應，及使用DMF(5.0 mL)洗滌樹脂 5次。 裂解烯丙基：
取含Pd(PPh 3) 4(69.3 mg, 0.2當量)與PhSiH (324.6 mg,10 eq)之DCM (20 mL)溶液加至管柱中，混合物使用氮氣鼓泡2 h。瀝乾溶液，使用DCM洗滌3次。再重覆該製程2次。
樹脂使用DCM (10 mL)洗滌3次後，使用0.5%二乙基二硫代胺甲酸鈉三水合物與0.5% DIEA (1：1)之DMF溶液(10 mL)洗滌3次。
樹脂使用MeOH洗滌3次後，乾燥。 醯胺環化(於樹脂上)：
取含PyBOP (468 mg, 3.0 eq)與DIEA (6.0 eq)之DMF溶液加至樹脂中，及採用氮氣鼓泡攪拌反應混合物。採用LC-MS監測反應進程。當反應完成時，瀝乾DMF溶液，樹脂使用DMF(10 mL x 3 mL)、DCM (10 mL x 3)洗滌後，乾燥。 肽裂解：
樹脂使用90%TFA/5%TIPS/2.5%H 2O/2.5%EDT (10 mL)混合液處理 ，及膨脹約2 h。收集溶液，及粗製肽使用冷的第三丁基甲基醚(50 mL)沉澱，及離心(3000 rpm下3 min)，得到粗製肽固體。粗製肽沉澱物使用第三丁基甲基醚再洗滌3次(20.0 mL x 3)後，粗製肽於真空下乾燥。 形成二硫鍵：
取粗製肽溶於H 2O/ACN (1：1) (300 mL)，以調整濃度至1 mM。然後添加1 M NH 4HCO 3至上述溶液中，以調整pH至約8-9。讓溶液於室溫下反應約10 h。採用LC-MS監測反應。反應完成後，添加乙酸調整pH至約6-7，以淬滅反應。反應混合物隨後冷凍乾燥，所得固體經逆相HPLC純化。 純化：
粗製肽係經製備性HPLC純化 (條件：A：0.075% TFA之水溶液，B：CH 3CN)及冷凍乾燥，得到10.3 mg (95.20%純度，採用方法7純化；95.30%純度，採用方法8純化)所需肽(實例41)之白色固體與TFA鹽。純化條件：肽溶於TFA/H 2O (7：3)；流速20 mL/min；梯度12-42%歷時60 min；操作時間= 42 min；經Luna 25 x 200 mm，C18 10 um，110 Å管柱純化。 Masp 肽之手動 SPPS 之通用方法 ( 方法 H)
以(Dap)**-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IP** (實例55)之合成法為代表。
肽合成法： 肽係採用標準Fmoc化學合成。 1)          樹脂製法：讓2-氯三苯甲基樹脂 (0.667 g, 0.30 mmol, 加載= 0.45 mmol/g)於DCM中膨脹30 min，然後排除DCM。在2-氯三苯甲基樹脂中添加胺基胺基酸 (Fmoc-Pro-OH) (3當量)、DIEA (4當量)、與DCM (15 mL)，混合物於20°C下，於N 2鼓泡下攪拌0.5 h。排除反應溶液，使用DCM洗滌樹脂。然後添加1：1 DCM/MeOH溶液，及繼續氮氣鼓泡30 min (以蓋住樹脂)。 2)          排出管柱中之溶劑，樹脂依序使用DCM (10 mL)與DMF (10 mL x 3)洗滌。 3)          添加20%哌啶之DMF溶液(10 mL)，於室溫下使用N 2攪拌反應混合物20 min。 4)          排出管柱中之溶劑，樹脂使用DMF洗滌 (10 mL x 5)及過濾，得到樹脂。 5)          製備(或激活)胺基酸：稱取下一個胺基酸 Fmoc-Ile-OH (0.9 mmol, 3當量)與HBTU (2.95 eq)，然後溶於DMF溶液中。添加DIEA(6當量)至上述溶液中。然後添加激活之溶液至包含樹脂之管柱中，及反應約2 h。 6)          排出管柱中之溶劑，及使用DMF (10 mL x 3)洗滌樹脂。 7)          序列中所有其他胺基酸均重覆步驟3-6。 表 12 ：所採用材料及條件說明：
# 材料 偶合試劑 偶合時間
1 Fmoc-Pro-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
2 Fmoc-Ile-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
3 Fmoc-Pen(Trt)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
4 Fmoc-Ile-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
5 Fmoc-Pro-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
6 Fmoc-Pro-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
7 Fmoc-Ala(t-Bu)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
8 Fmoc-Ser(tBu)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
9 Fmoc-Arg(Pbf)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
10 Fmoc-Ser(tBu)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
11 Fmoc-Cys(Trt)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
12 Fmoc-Ile-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
13 Fmoc-Dap(Boc)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
採用20%哌啶之DMF溶液脫除Fmoc保護基30 min。採用茚三酮(除了Pro以外之所有胺基酸)及四氯苯醌試驗(Pro)監測偶合反應，及使用DMF(5.0 mL)洗滌樹脂 5次。 肽裂解：
完成肽之延長後，樹脂使用MeOH洗滌 (10 mL x 3)及真空乾燥，得到肽樹脂。然後添加10.0 mL裂解緩衝液1% TFA/DCM至含樹脂之容器，讓混合物膨脹10 min。混合物過濾，及收集濾液。重覆該製程，取合併之濾液用於下一個步驟。 醯胺環化及脫除保護基：
使用DCM稀釋肽，以調整肽濃度至1mM。添加DIEA，以調整pH至約8。然後添加TBTU (289 mg, 3.0 eq)與HOBT (122 mg, 3.0 eq)至溶液中，讓反應混合物反應約3 h。然後使用1N HCl (1 x 150 mL)洗滌該溶液，收集有機層，及真空濃縮。所得殘質使用90%TFA/5%TIPS/2.5%H 2O/2.5%EDT (10 mL)混合液處理 ，及膨脹約2 h。粗製肽使用冷的第三丁基甲基醚(50 mL)沉澱，及離心(3000 rpm下3 min)，得到粗製肽固體。粗製肽沉澱物使用第三丁基甲基醚再洗滌3次(20.0 mL x 3)後，粗製肽於真空下乾燥。 形成二硫鍵：
取粗製肽溶於H 2O/ACN (1：1)，以調整濃度至1 mM。在上述溶液中慢慢添加0.5 M I 2/MeOH溶液，直到溶液轉成黃色。採用LC-MS監測反應進度。反應完成後，添加1 M Na 2S 2O 3淬滅反應混合物 ，直到溶液轉成無色。反應混合物隨後冷凍乾燥，所得固體經逆相HPLC純化。 純化：
粗製肽係經製備性HPLC純化 (條件：A：0.075% TFA之水溶液，B：CH 3CN)及冷凍乾燥，得到36.2 mg (95.0%純度，採用方法7純化；92.80%純度，採用方法8純化)所需肽(實例30)之白色固體與TFA鹽。純化條件：肽溶於TFA/H 2O (7：3)；流速20 mL/min；梯度12-42%歷時60 min；操作時間= 42 min；經Luna 25 x 200 mm，C18 10 um，110 Å管柱純化。 Masp 肽之手動 SPPS 之通用方法 ( 方法 I)
以(己二酸)**-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IPD-(Dap)++-NH 2(實例60)之合成法為代表。
肽合成法： 肽係採用標準Fmoc化學合成。 1)          樹脂製法：讓MBHA Rink 醯胺樹脂 (666.67 mg, 0.30 mmol, 加載0.45 mmol/g)於含於管柱中之DMF中膨脹30 min，然後使用氮氣推出管柱中之DMF。 2)          添加 20%哌啶之DMF溶液(10 mL)，於室溫下使用N 2攪拌反應混合物20 min，以裂解Fmoc基團。 3)          脫除Fmoc基團後，排出管柱中之溶劑，樹脂使用DMF (10 mL x 3)洗滌後，排出。 4)          製備(或激活)胺基酸：稱取第一胺基酸 Fmoc-Dap(Dde)-OH (0.9 mmol, 3當量)與HBTU (2.95 eq)，然後溶於DMF溶液中。添加DIEA(6當量)至上述溶液中。然後添加激活之溶液至包含樹脂之管柱中，及反應約2 h。 5)          排出管柱中之溶劑，及使用DMF (10 mL x 3)洗滌樹脂。 6)          序列中所有其他胺基酸均重覆步驟2-5。 表 13 ：所採用材料及條件說明：
# 材料 偶合試劑 偶合時間
1 Fmoc-Dap(Dde)-OH HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
2 Fmoc-Asp(Ot-Bu)-OH HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
3 Fmoc-Pro-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
4 Fmoc-Ile-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
5 Fmoc-Pen(Trt)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
6 Fmoc-Ile-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
7 Fmoc-Pro-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
8 Fmoc-Pro-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
9 Fmoc-Ala(t-Bu)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
10 Fmoc-Ser(tBu)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
11 Fmoc-Arg(Pbf)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
12 Fmoc-Ser(tBu)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
13 Fmoc-Cys(Trt)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
14 Fmoc-Ile-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
15 己二酸 anhydride (3.0 eq)   30 min
採用20%哌啶之DMF溶液脫除Fmoc保護基30 min。採用茚三酮(除了Pro以外之所有胺基酸)及四氯苯醌試驗(Pro)監測偶合反應，及使用DMF(5.0 mL)洗滌樹脂 5次。 乙醯化：
製備包含己二酸酐(246 mg, 3當量)之NMM/DMF (15：85)混合液，加至樹脂中，在氮氣鼓泡下反應30 min。排除溶劑，使用DMF(3x)洗滌樹脂。 裂解Dde基團：
製備3%肼水合物之DMF溶液，加至樹脂中。20 min後，排除溶液。再重覆該製程一次。接著使用DMF (3x)洗滌管柱。 醯胺環化(於樹脂上)：
取含PyBOP (468 mg, 3.0 eq)與DIEA (6.0 eq)之DMF溶液加至樹脂中，及採用氮氣鼓泡攪拌反應混合物。採用LC-MS監測反應進程。當反應完成時，瀝乾DMF溶液，樹脂使用MeOH (10 mL x 3 mL)、DCM (10 mL x 3)洗滌後，乾燥。 肽裂解：
樹脂使用90%TFA/5%TIPS/2.5%H2O/2.5%EDT(10 mL)混合液處理，及膨脹約2 h。收集溶液，粗製肽使用冷的第三丁基甲基醚(50 mL)沉澱，及離心(3000 rpm下3 min)，得到粗製肽固體。粗製肽沉澱物使用第三丁基甲基醚再洗滌3次(20.0 mL x 3)後，粗製肽於真空下乾燥。 形成二硫鍵：
取粗製肽溶於H 2O/ACN (1：1) (300 mL)，以調整濃度至1 mM。然後添加1 M NH 4HCO 3至上述溶液中，以調整pH至約8-9。讓溶液於室溫下反應約10 h。採用LC-MS監測反應。反應完成後，添加乙酸調整pH至約6-7，以淬滅反應。反應混合物隨後冷凍乾燥，所得固體經逆相HPLC純化。 純化：
粗製肽係經製備性HPLC純化 (條件：A：0.075% TFA之水溶液，B：CH 3CN)及冷凍乾燥，得到12.8 mg (98.10%純度，採用方法7純化；92.80%純度，採用方法8純化)所需肽(實例60)之白色固體與TFA鹽。純化條件：肽溶於TFA/H 2O (7：3)；流速20 mL/min；梯度12-42%歷時60 min；操作時間= 42 min；經Luna 25 x 200 mm，C18 10 um，110 Å管柱純化。 Masp 肽之手動 SPPS 之通用方法 ( 方法 J)
以G**-(TXA)-GIC+SRS-((tBu)A)-PPI-((N-Me)C)+-IPD++-NH 2(實例69)之合成法為代表。
肽合成法： 肽係採用標準Fmoc化學合成。 1)          樹脂製法：讓MBHA Rink 醯胺樹脂 (666.67 mg, 0.30 mmol, 加載0.45 mmol/g)於含於管柱中之DMF中膨脹30 min，然後使用氮氣推出管柱中之DMF。 2)          添加 20%哌啶之DMF溶液(10 mL)，於室溫下使用N 2攪拌反應混合物20 min，以裂解Fmoc基團。 3)          脫除Fmoc基團後，排出管柱中之溶劑，樹脂使用DMF (10 mL x 3)洗滌後，排出。 4)          製備(或激活)胺基酸：稱取第一胺基酸 Fmoc-Asp(O烯丙基)-OH (0.9 mmol, 3當量)與HBTU (2.95 eq)，然後溶於DMF溶液中。添加DIEA(6當量)至上述溶液中。然後添加激活之溶液至包含樹脂之管柱中，及反應約2 h。 5)          排出管柱中之溶劑，及使用DMF (10 mL x 3)洗滌樹脂。 6)          序列中所有其他胺基酸均重覆步驟2-5。 表 14 ： 所採用材料及條件說明：
# 材料 偶合試劑 偶合時間
1 Fmoc-Asp(O烯丙基)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
2 Fmoc-Pro-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
3 Fmoc-Ile-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
4 Fmoc-(N-Me)Cys(Trt)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
5 Fmoc-Ile-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
6 Fmoc-Pro-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
7 Fmoc-Pro-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
8 Fmoc-Ala(t-Bu)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
9 Fmoc-Ser(tBu)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
10 Fmoc-Arg(Pbf)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
11 Fmoc-Ser(tBu)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
12 Fmoc-Cys(Trt)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
13 Fmoc-Ile-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
14 Fmoc-Ala-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
15 Fmoc-Gly-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
16 Fmoc-TXA-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
17 Fmoc-Gly-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
採用20%哌啶之DMF溶液脫除Fmoc保護基30 min。採用茚三酮(除了Pro以外之所有胺基酸)及四氯苯醌試驗(Pro)監測偶合反應，及使用DMF(5.0 mL)洗滌樹脂 5次。 裂解烯丙基：
取含Pd(PPh 3) 4(69.3 mg, 0.2當量)與PhSiH (324.6 mg,10 eq)之DCM (20 mL)溶液加至管柱中，混合物使用氮氣鼓泡2 h。瀝乾溶液，使用DCM洗滌3次。再重覆該製程2次。
樹脂使用DCM (10 mL)洗滌3次後，使用0.5%二乙基二硫代胺甲酸鈉三水合物之DMF溶液(10 mL)與0.5% DIEA之DMF溶液(10 mL)洗滌。 樹脂再各使用0.5%二乙基二硫代胺甲酸鈉三水合物之DMF溶液(10 mL)與0.5% DIEA之DMF溶液(10 mL)交替洗滌2次。樹脂接著使用MeOH洗滌3次後，乾燥。 醯胺環化(於樹脂上)：
取含PyBOP (468 mg, 3.0 eq)與DIEA (6.0 eq)之DMF溶液加至樹脂中，及採用氮氣鼓泡攪拌反應混合物。採用LC-MS監測反應進程。當反應完成時，瀝乾DMF溶液，樹脂使用DMF(10 mL x 3 mL)、DCM (10 mL x 3)洗滌後，乾燥。 肽裂解：
樹脂使用90%TFA/5%TIPS/2.5%H2O/2.5%EDT (10 mL)混合液處理，及膨脹約2 h。收集溶液，粗製肽使用冷的第三丁基甲基醚(50 mL)沉澱，及離心(3000 rpm下3 min)，得到粗製肽固體。粗製肽沉澱物使用第三丁基甲基醚再洗滌3次(20.0 mL x 3)後，粗製肽於真空下乾燥。 形成二硫鍵：
取粗製肽溶於H 2O/ACN (1：1) (300 mL)，以調整濃度至1 mM。然後添加1 M NH 4HCO 3至上述溶液中，以調整pH至約8-9。讓溶液於室溫下反應約10 h，採用LC-MS監測反應。反應完成後，添加乙酸調整pH至約6-7，以淬滅反應。反應混合物隨後冷凍乾燥，所得固體經逆相HPLC純化。 純化：
粗製肽係經製備性HPLC純化 (條件：A：0.075% TFA之水溶液，B：CH 3CN)及冷凍乾燥，得到10.3 mg (95.20%純度，採用方法7純化；95.30%純度，採用方法8純化)所需肽(實例41)之白色固體與TFA鹽。純化條件：肽溶於TFA/H 2O (7：3)；流速20 mL/min；梯度12-42%歷時60 min；操作時間= 42 min；經Luna 25 x 200 mm，C18 10 um，110 Å管柱純化。 Masp 肽之手動 SPPS 之通用方法 ( 方法 K)
以C++AIC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IPDC++-NH 2(實例50)之合成法為代表。
肽合成法： 肽係採用標準Fmoc化學合成。 1)          樹脂製法：讓MBHA Rink 醯胺樹脂 (666.67 mg, 0.30 mmol, 加載0.45 mmol/g)於含於管柱中之DMF中膨脹30 min，然後使用氮氣推出管柱中之DMF。 2)          添加 20%哌啶之DMF溶液(10 mL)，於室溫下使用N 2攪拌反應混合物20 min，以裂解Fmoc基團。 3)          脫除Fmoc基團後，排出管柱中之溶劑，樹脂使用DMF (10 mL x 3)洗滌後，排出。 4)          製備(或激活)胺基酸：稱取第一胺基酸 Fmoc-Cys(Acm)-OH (0.9 mmol, 3當量)與HBTU (2.95 eq)，然後溶於DMF溶液中。添加DIEA(6當量)至上述溶液中。然後添加激活之溶液至包含樹脂之管柱中，及反應約2 h。 5)          排出管柱中之溶劑，及使用DMF (10 mL x 3)洗滌樹脂。 6)          序列中所有其他胺基酸均重覆步驟2-5。 表 15 ：所採用材料及條件說明：
# 材料 偶合試劑 偶合時間
1 Fmoc-Cys(Acm)-OH HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
2 Fmoc-Asp(Ot-Bu)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
3 Fmoc-Pro-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
4 Fmoc-Ile-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
5 Fmoc-Pen(Trt)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
6 Fmoc-Ile-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
7 Fmoc-Pro-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
8 Fmoc-Pro-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
9 Fmoc-Ala(t-Bu)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
10 Fmoc-Ser(tBu)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
11 Fmoc-Arg(Pbf)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
12 Fmoc-Ser(tBu)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
13 Fmoc-Cys(Trt)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
14 Fmoc-Ile-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
15 Fmoc-Ala-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
16 Fmoc-Gly-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
17 Fmoc-Ala-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
18 Fmoc-Cys(Acm)-OH HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
採用20%哌啶之DMF溶液脫除Fmoc保護基30 min。採用茚三酮(除了Pro以外之所有胺基酸)及四氯苯醌試驗(Pro)監測偶合反應，及使用DMF(5.0 mL)洗滌樹脂 5次。 肽裂解：
使用90%TFA/5%TIPS/2.5%H 2O/2.5%EDT (10 mL)混合液處理樹脂，及膨脹約2 h。收集溶液，粗製肽使用冷的第三丁基甲基醚(50 mL)沉澱，及離心(3000 rpm下3 min)，得到粗製肽固體。粗製肽沉澱物使用第三丁基甲基醚再洗滌3次(20.0 mL x 3)後，粗製肽於真空下乾燥。 形成第一個二硫鍵：
取粗製肽溶於H 2O/ACN (1：1) (300 mL)，以調整濃度至1 mM。然後添加1 M NH 4HCO 3至上述溶液中，以調整pH至約8-9。讓溶液於室溫下反應約8 h。採用LC-MS監測反應。反應完成後，添加乙酸調整pH至約6-7，以淬滅反應。反應混合物隨後冷凍乾燥。 純化：
粗製肽係經製備性HPLC純化 (條件：A：0.075% TFA之水溶液，B：CH 3CN)及冷凍乾燥，得到10.3 mg (95.20%純度，採用方法7純化；95.30%純度，採用方法8純化)所需肽(實例41)之白色固體與TFA鹽。純化條件：肽溶於TFA/H 2O (7：3)；流速20 mL/min；梯度12-42%歷時60 min；操作時間= 42 min；經Luna 25 x 200 mm，C18 10 um，110 Å管柱純化。 形成第二個二硫鍵：
於20°C下，在含已純化肽之水與CH 3CN (10 mg/ml, H 2O：CH 3CN=0.7：0.3)中滴加碘(I 2)之AcOH溶液(0.1 M)。以LC-MS監測反應進度。當LC-MS顯示反應已完成時，反應混合物隨後冷凍乾燥，所得固體經逆相HPLC純化。 純化：
粗製肽係經製備性HPLC純化 (條件：A：0.075% TFA之水溶液，B：CH 3CN)及冷凍乾燥，得到10.2 mg (95.0%純度，採用方法7純化；96.8%純度，採用方法8純化)所需肽(實例50)之白色固體與TFA鹽。純化條件：肽溶於TFA/H 2O (7：3)；流速20 mL/min；梯度12-42%歷時60 min；操作時間= 42 min；經Luna 25 x 200 mm，C18 10 um，110 Å管柱純化。 Masp 肽之手動 SPPS 之通用方法 ( 方法 L)
以(3-疊氮基-L-丙胺酸)++-GAIC+SRS-((tBu)A)-PPIC+IP-(L-炔丙基甘胺酸)++-NH 2(1,2,3-三唑-1,4二基) (實例81)之合成法為代表。
肽合成法： 肽係採用標準Fmoc化學合成。 1)          樹脂製法：讓MBHA Rink 醯胺樹脂 (666.67 mg, 0.30 mmol, 加載0.45 mmol/g)於含於管柱中之DMF中膨脹30 min，然後使用氮氣推出管柱中之DMF。 2)          添加 20%哌啶之DMF溶液(10 mL)，於室溫下使用N 2攪拌反應混合物20 min，以裂解Fmoc基團。 3)          脫除Fmoc基團後，排出管柱中之溶劑，樹脂使用DMF (10 mL x 3)洗滌後，排出。 4)          製備(或激活)胺基酸：稱取第一胺基酸 Fmoc-Asp(O烯丙基)-OH (0.9 mmol, 3當量)與HBTU (2.95 eq)，然後溶於DMF溶液中。添加DIEA(6當量)至上述溶液中。然後添加激活之溶液至包含樹脂之管柱中，及反應約2 h。 5)          排出管柱中之溶劑，及使用DMF (10 mL x 3)洗滌樹脂。 6)          序列中所有其他胺基酸均重覆步驟2-5。 表 16 ：所採用材料及條件說明：
# 材料 偶合試劑 偶合時間
1 Fmoc-(炔丙基-Gly)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
2 Fmoc-Pro-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
3 Fmoc-Ile-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
4 Fmoc-Cys(Acm)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
5 Fmoc-Ile-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
6 Fmoc-Pro-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
7 Fmoc-Pro-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
8 Fmoc-Ala(t-Bu)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
9 Fmoc-Ser(tBu)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
10 Fmoc-Arg(Pbf)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
11 Fmoc-Ser(tBu)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
12 Fmoc-Cys(Acm)-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
13 Fmoc-Ile-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
14 Fmoc-Ala-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
15 Fmoc-Gly-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
16 Fmoc-3-疊氮基-丙胺酸-OH (3.0 eq) HBTU(2.95 eq) DIEA(6.0 eq) 30 min
採用20%哌啶之DMF溶液脫除Fmoc保護基30 min。採用茚三酮(除了Pro以外之所有胺基酸)及四氯苯醌試驗(Pro)監測偶合反應，及使用DMF(5.0 mL)洗滌樹脂 5次。 肽裂解：
使用90%TFA/5%TIPS/2.5%H 2O/2.5%EDT (10 mL)混合液處理樹脂，及膨脹約2 h。收集溶液，粗製肽使用冷的第三丁基甲基醚(50 mL)沉澱，及離心(3000 rpm下3 min)，得到粗製肽固體。粗製肽沉澱物使用第三丁基甲基醚再洗滌3次(20.0 mL x 3)後，粗製肽於真空下乾燥。 點擊反應：
取粗製肽溶於水-t-BuOH (2：1)，使用CuSO 4x 5H 2O (10當量)與抗壞血酸(10當量)處理。攪拌反應混合物一夜，濃縮後，冷凍乾燥。 形成二硫鍵：
於20°C下，在含粗製肽之水與CH 3CN (10 mg/ml，H 2O：CH 3CN=0.7：0.3)中滴加碘(I 2)之AcOH溶液(0.1 M)。以LC-MS監測反應進度。當LC-MS顯示反應已完成時，反應混合物隨後冷凍乾燥，所得固體經逆相HPLC純化。 純化：
粗製肽係經製備性HPLC純化 (條件：A：0.075% TFA之水溶液，B：CH 3CN)及冷凍乾燥，得到5.0 mg (95.10%純度，採用方法7純化；95.80%純度，採用方法8純化)所需肽(實例41)之白色固體與TFA鹽。純化條件：肽溶於TFA/H 2O (7：3)；流速20 mL/min；梯度12-42%歷時60 min；操作時間= 42 min；經Luna 25 x 200 mm， C18 10 um，110 Å管柱純化。 Masp 肽之手動 SPPS 之通用方法 ( 方法 M)
以序列 (Ahx)**-AIC+SRSLP-(Oic)-IC+IP**之合成法為代表(實例25)。
Figure 02_image011
肽合成法： 肽係採用標準Fmoc化學合成。
以下化學結構式中之黑球係指示用於固相肽合成法(SPPS)之固體聚合物擔體，例如：2-氯三苯甲基樹脂、Rink 醯胺樹脂，等等。
在合成法之不同時間點，取少量樹脂，使用DCM/HFIP (4：1)處理樣本，製成監測反應之LC-MS樣本。 實例 1A
Figure 02_image013
該反應係在氬蒙氣下進行。在含N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-異白胺酸 (9.401 g, 26.6 mmol)之無水二氯甲烷溶液(53 mL, 0.5莫耳濃度溶液)中添加N,N-二異丙基乙基胺(18.533 mL, 106.4 mmol)。然後添加2-氯三苯甲基氯樹脂 (10g, 13.3mmol)，混合物於室溫及氬蒙氣下振盪一夜 。抽吸樹脂，使用DMF洗滌3次。樹脂與1：1 DCM/MeOH一起振盪30 min(以蓋住樹脂)。抽吸樹脂，排除DCM/MeOH，使用MeOH與DCM洗滌。最後一次DCM洗滌後，樹脂先使用旋轉蒸發器乾燥後，再於高度真空下乾燥，產生15.16 g樹脂。採用方法B 說明之方法測得之加載為0.45 mmol/g。 實例 2A
Figure 02_image015
在來自實例1A之樹脂(15.16 g, 6.822 mmol)中添加DMF/哌啶溶液(4：1, 200 mL)，混合物於室溫下振盪15 min。抽吸排除溶液，樹脂使用DMF徹底洗滌3次。再於相同條件下重覆一次脫除Fmoc保護基之製程。抽吸排除DMF/哌啶溶液，使用DMF (200 mL)洗滌樹脂3次。然後使用MeOH (200 mL)與DCM (200 mL)洗滌樹脂。再重覆使用MeOH與DCM洗滌2次。最後一次DCM洗滌後，樹脂使用旋轉蒸發器乾燥，產生11.4 g樹脂。 實例 3A
Figure 02_image017
在來自實例2A之樹脂(11.4 g, 5.13 mmol)中添加DMF (100 mL)，讓樹脂膨脹5分鐘。添加含N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-S-三苯甲基半胱胺酸 (6.01 g, 10.26 mmol)之DMF溶液(50 mL)，然後添加N,N'-二異丙基碳化二亞胺(1.549 mL, 10.004 mmol)與(羥亞胺基)氰基乙酸乙酯(1.422 g, 10.004 mmol)。混合物於室溫下振盪2 h。抽吸反應混合物，使用DMF徹底洗滌樹脂三次。使用相同條件重覆偶合製程。抽吸樹脂以排除溶液，樹脂使用DMF洗滌三次 (150 mL)。樹脂再使用MeOH (150 mL)、DCM (150 mL)洗滌。再重覆使用MeOH與DCM洗滌2次。最後一次DCM洗滌後，樹脂使用旋轉蒸發器乾燥，再於高度真空下乾燥，產生18.9 g樹脂。 實例 4A
Figure 02_image019
在來自實例3A之樹脂 (18.9 g, 8.505 mmol)中添加DMF/哌啶溶液(4:1, 200 mL)，混合物於室溫下振盪15 min。抽吸排除溶液，使用DMF徹底洗滌樹脂三次。於相同條件下再重覆一次脫除Fmoc保護基之製程。抽吸排除DMF/哌啶溶液。樹脂使用DMF(200 mL)洗滌三次。然後樹脂再使用MeOH (200 mL)與DCM (200 mL)洗滌。再重覆使用MeOH與DCM洗滌2次。最後一次DCM洗滌後，樹脂使用旋轉蒸發器乾燥，產生16.27 g樹脂。 實例 5A
Figure 02_image021
在來自實例4A之樹脂(16.27 g, 7.32 mmol)中添加DMF (150 mL)，讓樹脂膨脹5分鐘。添加含N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-異白胺酸 (5.17 g, 14.64 mmol)之DMF溶液(50 mL)，然後添加N,N'-二異丙基碳化二亞胺(2.211 mL, 14.277 mmol)與(羥亞胺基)氰基乙酸乙酯(2.029g, 14.277mmol)。混合物於室溫下振盪2 h。抽吸反應混合物，使用DMF徹底洗滌樹脂三次。使用相同條件重覆偶合製程。抽吸樹脂以排除溶液，樹脂使用DMF(200 mL)洗滌三次。樹脂再使用MeOH (200 mL)、DCM (200 mL)洗滌。再重覆使用MeOH與DCM洗滌2次。最後一次DCM洗滌後，樹脂使用旋轉蒸發器乾燥，再於高度真空下乾燥，產生19.96 g樹脂。採用通用方法2說明之方法重覆該加載試驗，並測得為0.388 mmol/g。 實例 6A
Figure 02_image023
在來自實例5A之樹脂(19.96 g, 8.982 mmol)中添加DMF/哌啶溶液(4:1, 200 mL)，混合物於室溫下振盪15 min。抽吸排除溶液，使用DMF徹底洗滌樹脂三次。於相同條件下再重覆一次脫除Fmoc保護基之製程。抽吸排除DMF/哌啶溶液。樹脂使用DMF(200 mL)洗滌三次。然後樹脂再使用MeOH (200 mL)與DCM (200 mL)洗滌。再重覆使用MeOH與DCM洗滌2次。最後一次DCM洗滌後，樹脂使用旋轉蒸發器乾燥，產生17.75 g樹脂。 實例 7A
Figure 02_image025
在來自實例6A之樹脂(17.75 g, 7.988 mmol)中添加DMF (150 mL)，讓樹脂膨脹5分鐘。添加含(2S,3aS,7aS)-1-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-八氫-1H-吲哚-2-羧酸(6.254 g, 15.975 mmol)之DMF溶液(50 mL)，然後添加N,N'-二異丙基碳化二亞胺(2.412 mL, 15.576 mmol)與(羥亞胺基)氰基乙酸乙酯(2.213 g, 15.576 mmol)。混合物於室溫下振盪2 h。抽吸反應混合物，使用DMF徹底洗滌樹脂三次。使用相同條件重覆偶合製程。抽吸樹脂以排除溶液，樹脂使用DMF(200 mL)洗滌三次。樹脂再使用MeOH (200 mL)、DCM (200 mL)洗滌。再重覆使用MeOH與DCM洗滌2次。最後一次DCM洗滌後，樹脂使用旋轉蒸發器乾燥，再於高度真空下乾燥，產生21.22 g樹脂。 實例 8A
Figure 02_image027
在來自實例7A之樹脂(21.5g, 9.675mmol)中添加DMF/哌啶溶液(4:1, 200 mL)，混合物於室溫下振盪30 min。抽吸排除溶液，使用DMF徹底洗滌樹脂三次。於相同條件下再重覆一次脫除Fmoc保護基之製程。抽吸排除DMF/哌啶溶液。樹脂使用DMF(200 mL)洗滌三次。然後樹脂再使用MeOH (200 mL)與DCM (200 mL)洗滌。再重覆使用MeOH與DCM洗滌2次。最後一次DCM洗滌後，樹脂使用旋轉蒸發器乾燥，產生18.07 g樹脂。 實例 9A
Figure 02_image029
在來自實例8A之樹脂 (18.07 g, 8.132 mmol)中添加DMF (150 mL)，讓樹脂膨脹5分鐘。添加含1-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-脯胺酸 (10.974 g, 32.526 mmol)之DMF溶液(50 mL)，然後添加N,N'-二異丙基碳化二亞胺(4.911 mL, 31.713 mmol)與(羥亞胺基)氰基乙酸乙酯(4.507 g, 31.713 mmol)。混合物於室溫下振盪2 h。抽吸反應混合物，使用DMF徹底洗滌樹脂三次。使用相同條件重覆偶合製程。抽吸樹脂以排除溶液，樹脂使用DMF(200 mL)洗滌三次。樹脂再使用MeOH (200 mL)、DCM (200 mL)洗滌。再重覆使用MeOH與DCM洗滌2次。最後一次DCM洗滌後，樹脂使用旋轉蒸發器乾燥，再於高度真空下乾燥，產生20.36 g樹脂。 實例 10A
Figure 02_image031
在來自實例9A之樹脂(20.36 g, 9.162 mmol)中添加DMF/哌啶溶液(4:1, 150 mL)，混合物於室溫下振盪30 min。抽吸排除溶液，使用DMF徹底洗滌樹脂三次。於相同條件下再重覆一次脫除Fmoc保護基之製程。抽吸排除DMF/哌啶溶液。樹脂使用DMF(200 mL)洗滌三次。然後樹脂再使用MeOH (200 mL)與DCM (200 mL)洗滌。再重覆使用MeOH與DCM洗滌2次。最後一次DCM洗滌後，樹脂使用旋轉蒸發器乾燥，產生18.18 g樹脂。 實例 11A
Figure 02_image033
在來自實例10A之樹脂 (18.18 g, 8.181 mmol)中添加DMF (150 mL)，讓樹脂膨脹5分鐘。添加含N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-白胺酸 (11.565 g, 32.724 mmol)之DMF溶液(50 mL)，然後添加N,N'-二異丙基碳化二亞胺(4.94 mL, 31.906 mmol)與(羥亞胺基)氰基乙酸乙酯(4.534 g, 31.906 mmol)。混合物於室溫下振盪2 h。抽吸反應混合物，使用DMF徹底洗滌樹脂三次。使用相同條件重覆偶合製程。抽吸樹脂以排除溶液，樹脂使用DMF(200 mL)洗滌三次。樹脂再使用MeOH (200 mL)、DCM (200 mL)洗滌。再重覆使用MeOH與DCM洗滌2次。最後一次DCM洗滌後，樹脂使用旋轉蒸發器乾燥，再於高度真空下乾燥，產生20.93 g樹脂。 實例 12A
Figure 02_image035
在來自實例11A之樹脂 (20.93 g, 9.419 mmol)中添加DMF/哌啶溶液(4:1, 150 mL)，混合物於室溫下振盪30 min。抽吸排除溶液，使用DMF徹底洗滌樹脂三次。於相同條件下再重覆一次脫除Fmoc保護基之製程。抽吸排除DMF/哌啶溶液。樹脂使用DMF(200 mL)洗滌三次。然後樹脂再使用MeOH (200 mL)與DCM (200 mL)洗滌。再重覆使用MeOH與DCM洗滌2次。最後一次DCM洗滌後，樹脂使用旋轉蒸發器乾燥，產生18.02 g樹脂。 實例 13A
Figure 02_image037
在來自實例12A之樹脂 (18.02 g, 8.109 mmol)中添加DMF (150 mL)，讓樹脂膨脹5分鐘。添加含O-第三丁基-N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-絲胺酸 (12.438 g, 32.436 mmol)之DMF溶液(50 mL)，然後添加N,N'-二異丙基碳化二亞胺(4.897 mL, 31.625 mmol)與(羥亞胺基)氰基乙酸乙酯(4.494 g, 31.625 mmol)。混合物於室溫下振盪2 h。抽吸反應混合物，使用DMF徹底洗滌樹脂三次。使用相同條件重覆偶合製程。抽吸樹脂以排除溶液，樹脂使用DMF(200 mL)洗滌三次。樹脂再使用MeOH (200 mL)、DCM (200 mL)洗滌。再重覆使用MeOH與DCM洗滌2次。最後一次DCM洗滌後，樹脂使用旋轉蒸發器乾燥，再於高度真空下乾燥，產生21.43 g樹脂。 實例 14A
Figure 02_image039
在來自實例13A之樹脂(21.43 g, 9.644 mmol)中添加DMF/哌啶溶液(4:1, 200 mL)，混合物於室溫下振盪30 min。抽吸排除溶液，使用DMF徹底洗滌樹脂三次。於相同條件下再重覆一次脫除Fmoc保護基之製程。抽吸排除DMF/哌啶溶液。樹脂使用DMF(200 mL)洗滌三次。然後樹脂再使用MeOH (200 mL)與DCM (200 mL)洗滌。再重覆使用MeOH與DCM洗滌2次。最後一次DCM洗滌後，樹脂使用旋轉蒸發器乾燥，產生18.91 g樹脂。 實例 15A
Figure 02_image041
在來自實例14A之樹脂 (18.91 g, 8.510 mmol)中添加DMF (150 mL)，讓樹脂膨脹5分鐘。添加N 2-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N 5-{N-[(2,2,4,6,7-五甲基-2,3-二氫-1-苯并呋喃-5-基)磺醯基]甲脒基}-L-鳥胺酸(22.083 g, 34.038 mmol)之DMF溶液(50 mL)，然後添加N,N'-二異丙基碳化二亞胺(5.139 mL, 33.187 mmol)與(羥亞胺基)氰基乙酸乙酯(4.716 g, 33.187 mmol)。混合物於室溫下振盪2 h。抽吸反應混合物，使用DMF徹底洗滌樹脂三次。使用相同條件重覆偶合製程。抽吸樹脂以排除溶液，樹脂使用DMF(200 mL)洗滌三次。樹脂再使用MeOH (200 mL)、DCM (200 mL)洗滌。再重覆使用MeOH與DCM洗滌2次。最後一次DCM洗滌後，樹脂使用旋轉蒸發器乾燥，再於高度真空下乾燥，產生23.77 g樹脂。 實例 16A
Figure 02_image043
在來自實例15A之樹脂 (23.77 g, 10.697 mmol)中添加DMF/哌啶溶液(4:1, 200 mL)，混合物於室溫下振盪30 min。抽吸排除溶液，使用DMF徹底洗滌樹脂三次。於相同條件下再重覆一次脫除Fmoc保護基之製程。抽吸排除DMF/哌啶溶液。樹脂使用DMF(200 mL)洗滌三次。然後樹脂再使用MeOH (200 mL)與DCM (200 mL)洗滌。再重覆使用MeOH與DCM洗滌2次。最後一次DCM洗滌後，樹脂使用旋轉蒸發器乾燥，產生22.1 g樹脂。 實例 17A
Figure 02_image045
在來自實例16A之樹脂 (22.1 g, 9.945 mmol)中添加DMF (150 mL)，讓樹脂膨脹5分鐘。添加O-第三丁基-N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-絲胺酸 (15.254g, 39.78mmol)之DMF溶液(50 mL)，然後添加N,N'-二異丙基碳化二亞胺(6.006 mL, 38.786 mmol)與(羥亞胺基)氰基乙酸乙酯(5.512 g, 38.786 mmol)。混合物於室溫下振盪2 h。抽吸反應混合物，使用DMF徹底洗滌樹脂三次。使用相同條件重覆偶合製程。抽吸樹脂以排除溶液，樹脂使用DMF(200 mL)洗滌三次。樹脂再使用MeOH (200 mL)、DCM (200 mL)洗滌。再重覆使用MeOH與DCM洗滌2次。最後一次DCM洗滌後，樹脂使用旋轉蒸發器乾燥，再於高度真空下乾燥，產生24.65 g樹脂。 實例 18A
Figure 02_image047
在來自實例17A之樹脂 (24.65 g, 11.093 mmol)中添加DMF/哌啶溶液(4:1, 200 mL)，混合物於室溫下振盪30 min。抽吸排除溶液，使用DMF徹底洗滌樹脂三次。於相同條件下再重覆一次脫除Fmoc保護基之製程。抽吸排除DMF/哌啶溶液。樹脂使用DMF(200 mL)洗滌三次。然後樹脂再使用MeOH (200 mL)與DCM (200 mL)洗滌。再重覆使用MeOH與DCM洗滌2次。最後一次DCM洗滌後，樹脂使用旋轉蒸發器乾燥，產生22.20 g樹脂。 實例 19A
Figure 02_image049
在來自實例18A之樹脂(22.2 g, 9.99 mmol)中添加DMF (150 mL)，讓樹脂膨脹5分鐘。添加含N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-S-三苯甲基半胱胺酸 (23.406 g, 39.96 mmol)之DMF溶液(50 mL)，然後添加N,N'-二異丙基碳化二亞胺(6.033 mL, 38.961 mmol)與(羥亞胺基)氰基乙酸乙酯(5.537 g, 38.961 mmol)。混合物於室溫下振盪2 h。抽吸反應混合物，使用DMF徹底洗滌樹脂三次。使用相同條件重覆偶合製程。抽吸樹脂以排除溶液，樹脂使用DMF(200 mL)洗滌三次。樹脂再使用MeOH (200 mL)、DCM (200 mL)洗滌。再重覆使用MeOH與DCM洗滌2次。最後一次DCM洗滌後，樹脂使用旋轉蒸發器乾燥，再於高度真空下乾燥，產生24.53 g樹脂。 實例 20A
Figure 02_image051
在來自實例19A之樹脂(24.53 g, 11.039 mmol)中添加DMF/哌啶溶液(4:1, 200 mL)，混合物於室溫下振盪30 min。抽吸排除溶液，使用DMF徹底洗滌樹脂三次。於相同條件下再重覆一次脫除Fmoc保護基之製程。抽吸排除DMF/哌啶溶液。樹脂使用DMF(200 mL)洗滌三次。然後樹脂使用MeOH (200 mL)與DCM (200 mL)洗滌。再重覆使用MeOH與DCM洗滌2次。最後一次DCM洗滌後，樹脂使用旋轉蒸發器乾燥，產生22.25 g樹脂。 實例 21A
Figure 02_image053
在來自實例20A之樹脂(22.25 g, 10.013 mmol)中添加DMF (150 mL)，讓樹脂膨脹5分鐘。添加含N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-異白胺酸 (14.155 g, 40.0 5mmol)之DMF溶液(50 mL)，然後添加N,N'-二異丙基碳化二亞胺(6.047 mL, 39.049 mmol)與(羥亞胺基)氰基乙酸乙酯(5.549 g, 39.049 mmol)。混合物於室溫下振盪2 h。抽吸反應混合物，使用DMF徹底洗滌樹脂三次。使用相同條件重覆偶合製程。抽吸樹脂以排除溶液，樹脂使用DMF(200 mL)洗滌三次。樹脂再使用MeOH (200 mL)、DCM (200 mL)洗滌。再重覆使用MeOH與DCM洗滌2次。最後一次DCM洗滌後，樹脂使用旋轉蒸發器乾燥，再於高度真空下乾燥，產生24.25 g樹脂。樹脂分成小份用於進一步轉化。針對此目的使用計算加載量為0.25 mmol/g。 實例 22A
Figure 02_image055
在來自實例21A之樹脂(4.0 g, 1.0 mmol) (兩支針筒，各2克)中，每支針筒添加DMF/哌啶溶液(4:1, 15 mL)，混合物於室溫下振盪30 min。抽吸排除溶液，使用DMF徹底洗滌樹脂三次。於相同條件下再重覆一次脫除Fmoc保護基之製程。抽吸排除DMF/哌啶溶液。樹脂使用DMF洗滌三次。然後樹脂使用MeOH與DCM洗滌。再重覆使用MeOH與DCM洗滌2次。最後一次DCM洗滌後，樹脂使用旋轉蒸發器乾燥，產生之樹脂用於後續步驟。 實例 23A
Figure 02_image057
在來自實例22A之樹脂(2.0 g, 0.5 mmol)中添加DMF (10 mL)，讓樹脂膨脹5分鐘。添加含N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-丙胺酸 (0.623 g, 2.0 mmol)之DMF溶液(4 mL)，然後添加N,N'-二異丙基碳化二亞胺(0.246 g, 1.95 mmol)與(羥亞胺基)氰基乙酸乙酯(0.277 g, 1.95 mmol)。混合物於室溫下振盪2 h。抽吸反應混合物，及使用DMF徹底洗滌樹脂三次。使用相同條件重覆偶合製程。抽吸樹脂以排除溶液，樹脂使用DMF洗滌三次。樹脂再使用MeOH與DCM洗滌。再重覆使用MeOH與DCM洗滌2次。最後一次DCM洗滌後，樹脂使用旋轉蒸發器乾燥，再於高度真空下乾燥，產生之樹脂用於進一步之步驟。 實例 24A
Figure 02_image059
在來自實例23A之樹脂(3.0 g, 0.75 mmol) (三支針筒中，各1克)中，每支針筒添加DMF/哌啶溶液(4:1, 7.5 mL)，混合物於室溫下振盪30 min。抽吸排除溶液，使用DMF徹底洗滌樹脂三次。於相同條件下再重覆一次脫除Fmoc保護基之製程。抽吸排除DMF/哌啶溶液，樹脂使用DMF洗滌三次。然後樹脂使用MeOH與DCM洗滌。再重覆使用MeOH與DCM洗滌2次。最後一次DCM洗滌後，樹脂於高度真空下乾燥，產生之樹脂用於後續步驟。 實例 25A
Figure 02_image061
在含於兩支針筒(各1.0克)之來自實例24A之樹脂(2.0 g, 0.5 mmol)中添加DMF (5 mL)，讓樹脂膨脹5分鐘。添加含6-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]胺基}己酸(354 mg, 1.0 mmol)之DMF溶液(1 mL)，然後添加N,N'-二異丙基碳化二亞胺(151 μL, 0.975 mmol)與(羥亞胺基)氰基乙酸乙酯(139 mg, 0.975 mmol)之DMF溶液(1 mL)。混合物於室溫下振盪一夜。抽吸反應混合物，使用DMF徹底洗滌樹脂三次。使用相同條件重覆偶合製程。抽吸樹脂以排除溶液，樹脂使用DMF洗滌三次。樹脂再使用MeOH與DCM洗滌。再重覆使用MeOH與DCM洗滌2次。最後一次DCM洗滌後，樹脂使用旋轉蒸發器乾燥，再於高度真空下乾燥，產生之樹脂用於進一步之步驟。 實例 26A
Figure 02_image063
在來自實例25A之樹脂(2.0 g, 0.5 mmol) (兩支針筒，各1克)中，各針筒添加DMF/哌啶溶液(4:1, 7.5 mL)，混合物於室溫下振盪30 min。抽吸排除溶液，使用DMF徹底洗滌樹脂三次。於相同條件下再重覆一次脫除Fmoc保護基之製程。抽吸排除DMF/哌啶溶液，樹脂使用DMF洗滌三次。然後樹脂使用MeOH與DCM洗滌。再重覆使用MeOH與DCM洗滌2次。最後一次DCM洗滌後，樹脂於高度真空下乾燥，產生之樹脂用於後續步驟。 實例 27A
Figure 02_image065
在來自實例26A之樹脂(1.0 g, 0.25 mmol)中添加DMF (5 mL)，讓樹脂膨脹5分鐘。添加含1-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-脯胺酸 (0.337 g, 1.0 mmol)之DMF溶液(1 mL)，然後添加含N,N'-二異丙基碳化二亞胺(151 μL, 0.975 mmol)與(羥亞胺基)氰基乙酸乙酯(139 mg, 0.975 mmol)之DMF溶液(1 mL)。混合物於室溫下振盪一夜。抽吸反應混合物，使用DMF徹底洗滌樹脂三次。使用相同條件重覆偶合製程。抽吸樹脂以排除溶液，樹脂使用DMF洗滌三次。樹脂再使用MeOH與DCM洗滌。再重覆使用MeOH與DCM洗滌2次。最後一次DCM洗滌後，樹脂使用旋轉蒸發器乾燥，再於高度真空下乾燥，產生之樹脂用於進一步之步驟。 實例 28A
Figure 02_image067
在來自實例27A之樹脂 (1.0 g, 0.25 mmol)中添加DMF/哌啶溶液(4:1, 7.5 mL)，混合物於室溫下振盪30 min。抽吸排除溶液，使用DMF徹底洗滌樹脂三次。於相同條件下再重覆一次脫除Fmoc保護基之製程。抽吸排除DMF/哌啶溶液。樹脂使用DMF洗滌三次。然後樹脂使用MeOH與DCM洗滌。再重覆使用MeOH與DCM洗滌2次。最後一次DCM洗滌後，樹脂於高度真空下乾燥，產生之樹脂用於後續步驟。 實例 29A(2S,3S)-2-{[(2R)-2-{[(2S,3S)-2-({[(2S,3aS,7aS)-1-{[(2S)-1-{(2S,5S,8S,11S,14R,17S,20S)-17-[(2S)-丁烷-2-基]-5,11-雙(第三丁氧基甲基)-2-異丁基-20-甲基-4,7,10,13,16,19,22,29-八側氧基-8-(3-{N'-[(2,2,4,6,7-五甲基-2,3-二氫-1-苯并呋喃-5-基)磺醯基]甲脒基}丙基)-29-[(2S)-吡咯啶-2-基]-14-[(三苯甲基硫烷基)甲基]-3,6,9,12,15,18,21,28-八氮雜二十九烷-1-醯基}吡咯啶-2-基]羰基}八氫-1H-吲哚-2-基]羰基}胺基)-3-甲基戊醯基]胺基}-3-(三苯甲基硫烷基)丙醯基]胺基}-3-甲基戊酸
Figure 02_image069
取來自實例28A之樹脂 (1.0 g, 0.250 mmol)與DCM/HFIP 4:1溶液(7 mL)混合，混合物於室溫下振盪20 min。然後過濾所釋出之溶液，收集在燒瓶中，使用DCM徹底洗滌樹脂。合併之溶液蒸發，及於高度真空下乾燥，產生573.8 mg偏黃色的硬泡沫物。 實例 30AN-[N-(3-{(3aS,13S,16S,19R,22S,25S,28S,31S,36aS,38aS,42aS,43aS,46S,49R,52S)-52-[(2S)-丁烷-2-基]-22,28-雙(第三丁氧基甲基)-16, 46-二-第二-丁基-31-異丁基-13-甲基-4,11,14,17,20,23,26,29,32, 37,44,47, 50,53-十四側氧基-19,49-雙[(三苯甲基硫烷基)甲基]五十四氫-1H,34H-二吡咯并­[2',1':18,19;2'', 1'':3,4][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40]十四氮雜環四十六烴并[16,15-a]吲哚-25-基}丙基)甲脒基]-2,2,4,6,7-五甲基-2,3-二氫-1-苯并呋喃-5-磺醯胺
Figure 02_image071
取來自實例29A之粗製殘質 (573.8 mg, 0.240 mmol)溶於DMF (20 mL)。添加N,N'-二異丙基碳化二亞胺(0.149 mL, 0.962 mmol)與(羥亞胺基)氰基乙酸乙酯(136.69 mg, 0.962 mmol)，反應混合物立即使用DCM (1150 mL)稀釋，達到濃度為1 mg肽/ 2mL溶液。反應混合物於室溫下攪拌一夜。反應混合物濃縮，及於高度真空下乾燥，產生760 mg無定形殘質。粗產物直接用於下一個步驟。 實例 31A1-{3-[(3aS,13S,16S,19R,22S,25S,28S,31S,36aS,38aS,42aS,43aS,46S,49R,52S)-52-[(2S)-丁烷-2-基]-16,46-二-第二丁基-22,28-雙(羥甲基)-31-異丁基-13-甲基-4, 11,14,17,20,23,26,29,32,37,44,47,50,53-十四側氧基-19,49-雙(硫烷基甲基)五十四氫-1H,34H-二吡咯并[2',1':18,19;2'',1'':3,4]­[1,4,7,10, 13,16,19,22,25,28,31,34,37,40]十四氮雜環四十六烴并[16,15-a]吲哚-25-基]丙基}胍
Figure 02_image073
取來自實例30 A之粗產物 (760 mg, 0.321 mmol)與5 mL TFA/EDT/硫代苯甲醚90：3：7 混合物混合，於室溫下攪拌2.5 h。溶液使用DCM稀釋及蒸發。殘質再使用DCM處理後，使用旋轉蒸發器乾燥。殘質與乙醚攪拌，抽真空，使用乙醚洗滌2次，及於高度真空下乾燥，產生523.4 mg米色固體，直接用於下一個步驟。 實例 251-{3-[(3aS,13S,16S,19R,22S,25S,28S,31S,36aS,38aS,42aS,43aS,46S,49R,52S)-16,46,52-三-第二丁基-22,28-雙(羥甲基)-31-異丁基-13-甲基-4,11,14,17,20,23,26,29,32,37,44,47,50,53-十四-側氧基五十四氫-1H,34H-19,49-(甲撐二硫代甲撐)二吡咯并[2',1':18,19;2'',1'':3,4][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28, 31,34,37,40]十四氮雜環四十六烴并[16,15-a]吲哚-25-基]丙基}胍
Figure 02_image075
取來自實例31A之粗製肽(523 mg, 0.344 mmol)與1050 mL 0.1莫耳濃度之碳酸氫銨溶液(pH= 7.83)混合。在同時攪拌下，讓空氣通過溶液5 min。反應混合物於一個開口燒瓶中攪拌一夜(懸浮液)。反應混合物經過冷凍乾燥，產生5.64 g白色凍乾物。取一部份(1000 mg)使用Pur-A-Lyzer Mega 1000 (透析套組-物品編號(Dialysis Kit- Article no.)：PURG10010-1Kt，Sigma-Aldrich)脫鹽。
取1000 mg粗製肽懸浮於5%乙腈-H 2O混合物(18 mL)中。取懸浮液填入Pur-A-Lyzer Mega 1000透析套組中。透析套組置於(浮在)包含1.6 L水之燒杯中，同時慢慢攪拌。1.5小時後，水被新鮮水置換，套組再繼續攪拌1.5小時。從套組中排除懸浮液後，冷凍乾燥，產生133 mg粗製肽。粗製肽溶於5% ACN/水，經製備性HPLC純化(管柱：Phenomenex, Kinetex 5µ Biphenyl 100A, AXIA Packed, 21,2 x 250mm + 濾筒5µ；流速：20 mL/min，方法：梯度30-85% ACN之水溶液(0.10 % TFA)。合併含產物之溶出份(採用分析性HLPC分析(5-95歷時8 min，Chromolith Speedrod & YMC)，產生1.10 mg (＞99純度)標題化合物。 通用方法 N ：肽 TFA 鹽轉化成 HCl 鹽
以I**C+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IP** (HCl鹽) (實例88)之合成法為代表。
採用方法A進行I**C+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IP**之TFA鹽之合成法。此肽初始之TFA含量為11.4% TFA (1.49 eq)。 自動化離子交換台之製程(方法N1)：
Hirschmann公司之蠕動式幫浦 (Rotarus體積 50)，管子：Tygon 2001 (ID 0.64mm) 設定： 使用H 2O洗滌：運轉時間1200 s；80 min -1；1次循環(為35 mL體積) 使用肽之樣本循環：運轉時間 1200 s；80 min -1；1次循環(為70 mL體積) 使用H 2O洗滌(或%ACN之H 2O溶液)：運轉時間1200 s；80 min -1；1次循環(為35 mL體積) 採用Amberlite IRA 410 (HCl型)。取700 mg樹脂置入2支濾筒中，使用去離子水洗滌(10次)。
取肽(56 mg)溶於3 mL 5% ACN/H 2O溶液，加載至管柱上，通過管柱循環10次。管柱使用水洗滌，收集溶液至Falcon離心管中，及冷凍乾燥。 得到45.5 mg所需肽，呈HCl鹽：LC-MS (＞ 99%)；離子層析分析法：2.7 wt% Cl- (1.01 eq Cl-) ，＜1 wt % TFA。 亦可採用下列製程進行離子交換法(方法N2)：
以(Ahx)**-GIC+SRSLPPIC+IPD** (HCl鹽) (實例94)之合成法為代表。
採用方法B進行(Ahx)**-GIC+SRSLPPIC+IPD** (實例13)之TFA鹽之合成法(LC-MS (95.0%))。此肽之初始TFA含量為15.9% TFA (2.6 eq)。 手動離子交換製程(方法N2)：
取Amberlite IRA 410 樹脂 (HCl型) (1-2 g)置入10 mL熔結玻璃針筒中(100 mg肽需要1g IRA 410 樹脂) 1)          使用水洗滌樹脂(10次 x 3 mL) 2)          使用5% ACN之水溶液洗滌樹脂(1次x 3 mL) 3)          肽溶於5% ACN之水溶液中 4)          添加肽至針筒中，溶液循環通過管柱10 -20次。在Falcon管中收集溶出份。 5)          樹脂使用5%ACN之水溶液洗滌(10次 x 3 mL)；添加此溶液至Falcon管內之溶液中 6)          取合併之溶液冷凍乾燥。
採用此製程與1500 g IRA 410 樹脂，得到106 mg 所需肽之HCl鹽：LC-MS (＞ 95.4%)；離子層析分析法：3.1 wt% Cl- (1.4 eq Cl-)，＜ 0.5 wt % TFA。 亦可採用下列製程轉化成HCl鹽(方法N3)：
當採用上述方法A-M之純化法改用0.075% HCl之水溶液作為HPLC修飾劑替代TFA或甲酸作為修飾劑時，直接得到HCl鹽(例如：實例79：(Ahx)**-aIC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IPE++-NH 2(HCl鹽)，離子層析分析法：4.9 wt% Cl- (2.4 eq Cl-)，＜1 wt % TFA。 亦可採用下列製程轉化成HCl鹽(方法N4)：
從通用方法P製備之無鹽游離型之肽可溶於ACN/水，添加化學計量之HCl (aq)(以肽之鹼當量計)。溶液接著冷凍乾燥，產生鹽。 通用方法 O ：肽 TFA 鹽轉化成其他鹽其他鹽型：
抗衡離子氯離子可以依類似方式，與其他抗衡離子交換，其係使所需鹽型之溶液(例如：乙酸鈉)重覆通過管柱，然後使用水重覆洗滌管柱。然後加載肽至樹脂上，接著依據上述通用方法N說明之離子交換製程。已製備MASP肽之肽乙酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、及乳酸鹽。
可採用依據方法P 製備之無鹽游離型MASP肽來製備其他鹽型，其係取肽溶於ACN-水中，添加化學計量之抗衡離子之酸(例如：乙酸)，然後由溶液冷凍乾燥，產生鹽。 通用方法 P ：無鹽游離型之製法
MASP肽之無鹽游離型製法可由本發明肽之TFA鹽或HCl鹽經過逆相製備性HPLC，使用70 oC且不含酸修飾劑之乙腈-水梯度純化。合併所需溶出份及冷凍乾燥，得到幾乎無抗衡離子之肽；LC-MS (＞ 99%純度)；離子層析法(＜ 1% TFA) 表 17 ：參考肽
參考編號 識別碼 序列 製法
2 雙環SFTI-1 G**RC+TKSIPPIC+FPD** 方法D
7 雙環SFMI-1 G**IC+SRSLPPIC+IPD** 方法B
8 雙環SFMI-2 G**YC+SRSYPPVC+IPD** 方法A
12   P**FC+IPPISKTC+RGD** 方法B
表 18 ：根據本發明製備之肽
實例編號 序列 MoP†
13 (Ahx)**-GIC+SRSLPPIC+IPD** A, B
14 (PEG3(16個原子))**-GIC+SRSLPPIC+IPD** A
15 G**GIC+SRSLPPIC+IPD** B
16 (Ahx)**-GIC+SRSLPPIC+IPd** B
17 A**GGIC+SRSLPPIC+IPd** B
18 A**GGIC+SRSLPPIC+IPD** B
19 a**GGIC+SRSLPPIC+IPD** B
20 (Dap)++-GGIC+SRSLPPIC+IPD** C
21 G**SGIC+SRSLPPIC+IPDS** B
22 K++GIC+SRSLPPIC+IPD** C
23 (Dap)**-(Dap)-GIC+SRSLPPIC+IPD** B
24 (PEG1(10個原子))**-GIC+SRSLPPIC+IPD** B
25 (Ahx)**-AIC+SRSLP-(Oic)-IC+IP** M
26 A**GAIC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IPD** D
27 (Ahx)**-AIC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IPD** E
28 (Ahx)**-GIC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IPD** E
29 A**GGIC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IPD** E
30 (Ahx)**-GIC+SRS-((tBu)A)-PPI-((N-Me)C)+-IPD** D
31 A**GAIC+SRS-((tBu)A)-PPI-((N-Me)C)+-IPD** E
32 (Ahx)**-AIC+SRS-((tBu)A)-PPI-((N-Me)C)+-IPD** E
33 (Ahx)**-(Abu)-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-((N-Me)C)+-IPD** E
34 (PEG1(10個原子))**-AIC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IPD** F
35 (Γ-Abu)**-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IPD** F
36 (Γ-Abu)**-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-((N-Me)C)+-IPD** F
37 G**AIC+SRSLPPIC+IPD++-NH 2 G
38 (Ahx)**-(Abu)-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IPD** E
39 A**GGIC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IPd** E
40 (Ahx)**-GIC+SRS-((tBu)A)-PPI-((N-Me)C)+-IPD++-NH 2 G
41 A**GAIC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IPD++-NH 2 G
42 A**GGIC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IPD++-NH 2 G
43 (Ahx)**AIC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IPD++-NH 2 G
44 (Orn)++-AIC+SRS-((tBu)A)-PPI-((N-Me)C)+-IPD++-NH 2 G
45 (Ahx)**-AIC+SRSLPPIC+IPD** E
46 (Ahx)**-AIC+SRS-((tBu)A)-PPIC+IPD** E
47 A**GGIC+SRS-((tBu)A)-PPI-((N-Me)C)+-IPd** E
48 (Ahx)**-GIC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IPD++-NH 2 G
49 (Ahx)**-GIC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IPD++-NH 2 G
50 C++AIC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IPDC++-NH 2 K
51 (Ahx)**-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IP** E
52 (Ahx)**-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-I** E
53 (Ahx)**-AIC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IP** E
54 (Ahx)**-((N-Me)G)-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IP** E
55 (Dap)**-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IP** H
56 (Dab)**-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IP** H
57 (Dap)**-(Dap)-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-I** H
58 I**C+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IPP** H
59 (Ahx)**-(TXA)-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IP** E
60 (己二酸)**-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IPD-(Dap)++-NH 2 I
61 (Orn)++-AIC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IPD++-NH 2 G
62 G**-(TXA)-GIC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IPD++-NH 2 G
63 (TTDS)**-AIC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IPD** E
64 (Ahx)**-((N-Me)G)-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-I** E
65 (Orn)**-GIC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-I** E
66 (Orn)++-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-I** E
67 K++-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-I** E
68 (Ahx)**- (4-(胺基甲基)苯甲酸)-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IP** E
69 G**-(TXA)-GIC+SRS-((tBu)A)-PPI-((N-Me)C)+-IPD++-NH 2 J
71 (Orn)++-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IP** H
72 (Ahx)**-AIC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-I** B, E
73 (Dap)**-(Dab)-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-I** H
74 (Ahx)**-AIC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IPE++-NH 2 G
75 (Ahx)**-IC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IPE++-NH 2 G
76 (Ahx)**- ((N-Me)G)-GIC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IPE++-NH 2 G
77 (Ahx)**-((N-Me)G)-AIC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IPE++-NH 2 G
78 k++-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-I** (HCl鹽) F, N
79 (Ahx)**-aIC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IPE++-NH 2(HCl鹽) G, N
80 k++-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-I** F
81 (3-疊氮基-L-丙胺酸)++-GAIC+SRS-((tBu)A)-PPIC+IP-(L-炔丙基­甘胺酸)++-NH 2(1,2,3-三唑-1,4-二基) L
82 (Ahx)**-GAIC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IPE++-NH 2 G
83 (Ahx)**-GIC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IPE++-NH 2 G
84 (Ahx)**-GaIC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IPE++-NH 2 G
85 (Dap)++-IC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IP** C
86 (Dap)++-(Dap)-IC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IP** C
87 (Dap)**-IC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IP** B
88 I**C+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IP** (HCl鹽) A, N
89 (Dap)**-(Dap)-IC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IP** B
90 E++GIC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IPK++-NH 2 G
91 E++GIC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IPDK++-NH 2 G
92 A**GGIC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IPD** E
93 E++GIC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IPD-(Dap)++-NH 2 I, J
94 (Ahx)**-GIC+SRSLPPIC+IPD**(HCl鹽) A, N
95 (Ahx)**-IC+SRSLP-(Oic)-IC+I** M
96 (Orn)**-GIC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IP** F
97 (Dap)**-(Dap)-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IP** F
98 A**GGIC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IPd** E
† MoP = 製法 表 19 ：參考肽之分析數據
參考編號 滯留時間 (min) LC-MS 方法 純度 (%) 確實質量 計算值 (g/mol) 確實質量 實測值 (g/mol) 電離化 LC-MS 純度 (%) 方法 7 LC-MS 純度 (%) 方法 8
2 6.66 方法4 100 1512.7217 1512.7438 [M+2H] 2+ 96.50 92.50
7 4.56 方法2 100 1449.7108 1449.7254 [M+2H] 2+    
8 4.29 方法2 100 1535.6537 1535.6540 [M+2H] 2+    
12 9.63 方法4 98.68 1512.7217 1512.742 [M+2H] 2+    
表 20 ：根據本發明製備之肽之分析數據
實例編號 滯留時間 (min) LC-MS 方法 純度  (%) 確實質量 計算值 (g/mol) 確實質量 實測值 (g/mol) 電離化 LC-MS 純度 (%) 方法 7 LC-MS 純度 (%) 方法 8
13 4.68 方法2 92.05 1562.7949 1562.7992 [M+2H] 2+    
14 4.65 方法2 99.53 1696.8528 1696.8648 [M+2H] 2+    
15 4.51 方法2 100 1506.7323 1506.7386 [M+2H] 2+    
16 4.62 方法2 100 1562.7949 1562.8072 [M+2H] 2+    
17 4.60 方法2 100 1577.7694 1577.7788 [M+2H] 2+    
18 4.54 方法2 100 1577.7694 1577.7784 [M+2H] 2+    
19 4.52 方法2 100 1577.7694 1577.7780 [M+2H] 2+    
20 4.42 方法2 100 1592.7803 1592.7918 [M+2H] 2+    
21 4.49 方法2 100 1680.7964 1680.8048 [M+2H] 2+    
22 4.48 方法2 100 1577.8058 1577.8132 [M+2H] 2+    
23 4.30 方法2 100 1621.8069 1621.8152 [M+2H] 2+    
24 9.42 方法1 92.94 1608.8004 1608.8106 [M+2H] 2+    
25 10.90 方法1 100 1515.8306 1515.8434 [M+2H] 2+    
26 9.75 方法1 94.72 1633.8320 1633.8442 [M+2H] 2+ 97.2 96.5
27 10.15 方法4 97.33 1618.8575 1618.8748 [M+2H] 2+ 98.2 96.4
28 10.28 方法1 88.20 1604.8419 1604.8510 [M+2H] 2+ 96.90 95.60
29 9.52 方法1 98.95 1619.8164 1619.8280 [M+2H] 2+ 96.80 96.40
30 10.32 方法1 86.22 1590.8262 1590.8344 [M+2H] 2+ 97.20 94.40
31 10.07 方法1 100 1619.8164 1619.8214 [M+2H] 2+ 95.00 92.80
32 10.35 方法4 98.07 1604.8419 1604.8578 [M+2H] 2+ 95.50 91.40
33 11.12 方法1 95.04 1618.8575 1618.8622 [M+2H] 2+ 96.30 84.20
34 10.18 方法1 96.33 1664.8630 1664.8806 [M+2H] 2+ 96.80 94.90
35 9.80 方法1 100 1519.7891 1519.805 [M+2H] 2+ 99.0 97.90
36 10.02 方法1 100 1505.7734 1505.7900 [M+2H] 2+ 97.10 96.90
37 9.22 方法1 100 1519.7639 1519.7802 [M+2H] 2+ 96.02 93.57
38 10.85 方法1 60.23 1632.8732 1632.8916 [M+2H] 2+ 95.20 97.60
39 9.66 方法1 100 1619.8164 1619.8314 [M+2H] 2+ 95.80 96.10
40 9.29 方法4 100 1589.8422 1589.8616 [M+2H] 2+ 95.20 92.40
41 10.09 方法1 100 1672.8793 1672.8966 [M+2H] 2+ 95.20 95.30
42 8.94 方法4 100 1658.8637 1658.8768 [M+2H] 2+ 92.60 91.70
43 10.43 方法1 93.88 1657.9048 1657.9208 [M+2H] 2+ 95.00 94.20
44 9.53 方法1 74.12 1604.8531 1604.8698 [M+2H] 2+ 92.80 95.40
45 9.05 方法4 95.95 1576.8106 1576.8252 [M+2H] 2+ 98.20 95.50
46 9.56 方法4 92.72 1590.8262 1590.8444 [M+2H] 2+ 97.60 95.80
47 9.37 方法4 100 1605.8007 1605.8172 [M+2H] 2+ 96.00 95.50
48 8.66 方法4 100 1603.8578 1603.8752 [M+2H] 2+ 92.10 90.30
49 9.67 方法4 100 1643.8891 1643.9060 [M+2H] 2+ 96.00 96.60
50 7.82 方法4 100 1726.8027 1726.8166 [M+2H] 2+ 95.00 96.80
51 9.83 方法4 98.41 1432.7934 1432.8126 [M+2H] 2+ 94.80 95.50
52 10.14 方法4 100 1335.7407 1335.7584 [M+2H] 2+ 97.60 97.00
53 10.04 方法4 100 1503.8306 1503.8482 [M+2H] 2+ 98.20 98.90
54 9.81 方法4 100 1503.8306 1503.8482 [M+2H] 2+ 96.80 97.40
55 7.37 方法4 100 1405.7574 1405.7768 [M+2H] 2+ 97.10 95.60
56 7.36 方法4 100 1419.7730 1419.7938 [M+2H] 2+ 97.00 96.50
57 5.06 方法4 100 1394.7526 1394.7741 [M+3H] 3+ 93.10 94.60
58 9.87 方法4 100 1416.7621 1416.7774 [M+2H] 2+ 96.5 99.4
59 10.20 方法4 100 1571.8932 1571.9084 [M+2H] 2+ 96.9 95.7
60 8.89 方法4 95.70 1647.8477 1647.8648 [M+2H] 2+ 98.1 92.8
61 7.36 方法4 100 1618.8687 1618.8858 [M+2H] 2+ 78.0 74.7
62 5.74 方法5 100 1686.8950 1687.9146 [M+2H] 2+ 94.90 89.10
63 9.87 方法4 100 1807.9576 1807.9742 [M+2H] 2+ 98.70 99.0
64 9.91 方法4 100 1406.7778 1406.7934 [M+2H] 2+ 99.70 99.70
65 6.10 方法4 100 1393.7574 1393.7756 [M+2H] 2+ 92.60 96.20
66 7.28 方法4 100 1336.7359 1336.7526 [M+2H] 2+ 98.4 93.5
67 7.08 方法4 97.43 1350.7516 1350.7672 [M+2H] 2+ 95.9 96.2
68 10.34 方法4 100 1565.8462 1565.8532 [M+2H] 2+ 99.3 99.8
69 8.77 方法4 100 1672.8793 1672.8952 [M+2H] 2+ 98.8 98.70
71 7.43 方法4 96.28 1433.7887 1433.8060 [M+2H] 2+ 97.80 96.30
72 9.64 方法4 100 1406.7778 1406.80 [M+2H] 2+    
73 4.85 方法4 97.34 1408.7683 1408.7934 [M+3H] 3+ 87.9 88.80
74 9.90 方法4 94.15 1671.9204 1671.9346 [M+2H] 2+ 82.50 77.50
75 9.71 方法4 100 1600.8833 1600.90 [M+2H] 2+ 97.90 93.40
76 9.42 方法4 98.91 1728.9419 1728.9546 [M+2H] 2+ 95.40 93.80
77 9.84 方法4 100 1742.9576 1743.977 [M+2H] 2+ 90.70 89.90
78 7.63 方法4 100 1350.7516 1350.7600 [M+2H] 2+ 88.40 89.20
79 9.71 方法4 89.27 1671.9204 1671.936 [M+2H] 2+ 90.80 92.90
80 7.41 方法4 100 1350.7516 1350.767 [M+2H] 2+ 99.10 95.00
81 7.15 方法4 100 1643.8388 1643.8614 [M+2H] 2+ 95.10 95.80
82 9.72 方法4 100 1728.9419 1729.9614 [M+2H] 2+ 88.1 90.1
83 9.77 方法4 92.72 1657.9048 1657.9198 [M+2H] 2+ 96.80 95.1
84 9.53 方法4 100 1728.9419 1729.9622 [M+2H] 2+ 82.8 95.1
85 8.25 方法4 100 1445.7887 1445.8116 [M+2H] 2+    
86 2.41 方法5 100 1531.8367 1531.8528 [M+2H] 2+    
87 7.87 方法4 100 1445.7887 1445.8056 [M+2H] 2+    
88 9.17 方法4 100 1319.7094 1319.7244 [M+2H] 2+    
89 6.10 方法4 100 1531.8367 1531.86 [M+3H] 3+    
90 7.70 方法4 100 1672.9157 1672.9342 [M+2H] 2+ 97.7 95.8
91 8.08 方法4 100 1787.9426 1788.9644 [M+2H] 2+ 97.7 95.8
92 9.30 方法4 100 1659.8477 1659.8638 [M+2H] 2+ 98.40 97.43
93 7.83 方法4 100 1745.8957 1746.90 [M+2H] 2+ 97.56 88.43
94 9.45 方法1 97.73 1562.7949 1562.8106 [M+2H] 2+    
95 5.43 方法1 100 1347.7407 1347.7566 [M+2H] 2+    
96 7.16 方法4 100 1490.8102 1490.8254 [M+2H] 2+ 90.50 93.90
97 5.60 方法4 95.90 1491.8054 1491.8298 [M+3H] 3+ 97.60 92.00
98 9.75 方法4 95.01 1659.8477 1659.8638 [M+2H] 2+ 96.6 96.5
表 21 ：根據本發明製備之肽之 HCl 鹽之分析性離子層析數據
實例編號 氯離子 % 氯離子當量 TFA% 方法
78 10.9% 4.53 ＜ 1% 方法N3
79 4.9% 2.36 ＜ 1% 方法N3
88 2.7% 1.01 ＜ 1% 方法N1
94 3.1% 1.4 ＜ 0.5% 方法N2
下列實例係利用其等化學結構舉例說明。本發明包括此等實例之醫藥上可接受之鹽、溶劑合物或該等鹽之溶劑合物。若沒有不同指示，化學結構係以無鹽游離型表示。由於大環分子長碳鏈可能呈圓形鍵結，但仍正確繪出-CH­ 2-鏈。參見例如：實例13，其中Ahx鏈之CH 2基團幾乎呈圓形繪出。 實例 13
序列：(Ahx)**-GIC+SRSLPPIC+IPD** [(6S,9S,12S,15S,18R,21S,34S,36aS,42S,45R,48S,50aS,55aS)-21,42,48-三[(2S)-丁烷-2-基]-12-(3-甲脒基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-6-(2-甲基丙基)-5,8,11,14,17,20,23,26,33,36,41,44,47,50,55-十五側氧基五十四氫-1H-18,45-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[2,1-f:2',1'-r:2'',1''-u]­[1,4,7,10,13, 16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]十五氮雜環四十九烴-34-基]乙酸
Figure 02_image077
實例 14
序列：(PEG3(16個原子))**-GIC+SRSLPPIC+IPD** [(6S,9S,12S,15S,18R,21S,43S,45aS,51S,54R,57S,59aS,64aS)-21,51,57-三[(2S)-丁烷-2-基]-12-(3-甲脒基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-6-(2-甲基丙基)-5,8,11,14,17,20,23,26,42,45,50,53,56,59,64-十五側氧基五十八氫-1H,39H-18,54-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[2,1-r:2',1'-d 1:2'',1''-g 1]­[1,4,7, 10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55]四氧雜十五氮雜環五十八烴-43-基]乙酸
Figure 02_image079
實例 15
序列：G**GIC+SRSLPPIC+IPD** [(6S,9S,12S,15S,18R,21S,30S,32aS,38S,41R,44S,46aS,51aS)-21,38,44-三[(2S)-丁烷-2-基]-12-(3-甲脒基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-6-(2-甲基丙基)-5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,37,40,43,46,51-十五側氧基五十氫-1H-18,41-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[1,2-a:1',2'-d:1'',2''-p][1,4,7,10,13,16, 19,22,25,28,31,34,37,40,43]十五氮雜環四十五烴-30-基]乙酸
Figure 02_image081
實例 16
序列：(Ahx)**-GIC+SRSLPPIC+IPd** [(6S,9S,12S,15S,18R,21S,34R,36aS,42S,45R,48S,50aS,55aS)-21,42,48-三[(2S)-丁烷-2-基]-12-(3-甲脒基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-6-(2-甲基丙基)-5,8,11,14,17,20,23,26,33,36,41,44,47,50,55-十五側氧基五十四氫-1H-18,45-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[2,1-f:2',1'-r:2'',1''-u]­[1,4,7,10,13, 16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]十五氮雜環四十九烴-34-基]乙酸
Figure 02_image083
實例 17
序列：A**GGIC+SRSLPPIC+IPd** [(6S,9S,12S,15S,18R,21S,30S,33R,35aS,41S,44R,47S,49aS,54aS)-21,41,47-三[(2S)-丁烷-2-基]-12-(3-甲脒基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-30-甲基-6-(2-甲基丙基)-5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35, 40,43,46,49,54-十六側氧基五十二氫-1H,5H-18,44-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[1,2-a:1',2'-d:1'',2''-p][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46]十六氮雜環四十八烴-33-基]乙酸
Figure 02_image085
實例 18
序列：A**GGIC+SRSLPPIC+IPD** [(6S,9S,12S,15S,18R,21S,30S,33S,35aS,41S,44R,47S,49aS,54aS)-21,41,47-三[(2S)-丁烷-2-基]-12-(3-甲脒基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-30-甲基-6-(2-甲基丙基)-5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35, 40,43,46,49,54-十六側氧基五十二氫-1H,5H-18,44-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[1,2-a:1',2'-d:1'',2''-p][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46]十六氮雜環四十八烴-33-基]乙酸
Figure 02_image087
實例 19
序列：a**GGIC+SRSLPPIC+IPD** [(6S,9S,12S,15S,18R,21S,30R,33S,35aS,41S,44R,47S,49aS,54aS)-21,41,47-三[(2S)-丁烷-2-基]-12-(3-甲脒基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-30-甲基-6-(2-甲基丙基)-5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35, 40,43,46,49,54-十六側氧基五十二氫-1H,5H-18,44-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[1,2-a:1',2'-d:1'',2''-p][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46]十六氮雜環四十八烴-33-基]乙酸
Figure 02_image089
實例 20
序列：(Dap)++-GGIC+SRSLPPIC+IPD*** [(6S,9S,12S,15S,18R,21S,30S,34S,36aS,42S,45R,48S,50aS,55aS)-30-胺基-21,42,48-三[(2S)-丁烷-2-基]-12-(3-甲脒基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-6-(2-甲基丙基)-5,8,11,14,17,20,23,26,29,33,36,41, 44,47,50,55-十六側氧基五十四氫-1H-18,45-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[2,1-f:2',1'-r:2'',1''-u][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46]十六氮雜環四十九烴-34-基]乙酸
Figure 02_image091
實例 21
序列：G**SGIC+SRSLPPIC+IPDS** [(6S,9S,12S,15S,18R,21S,27S,33S,36S,38aS,44S,47R,50S,52aS,57aS)-21,44,50-三[(2S)-丁烷-2-基]-12-(3-甲脒基丙基)-9,15,27,33-肆(羥甲基)-6-(2-甲基丙基)-5,8,11,14,17,20,23,26,29, 32,35,38,43,46,49,52,57-十七側氧基五十六氫-1H-18,47-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[1,2-a:1',2'-d:1'',2''-p][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49]十七氮雜環五十一烴-36-基]乙酸
Figure 02_image093
實例 22
序列：K++GIC+SRSLPPIC+IPD** [(6S,9S,12S,15S,18R,21S,27S,34S,36aS,42S,45R,48S,50aS,55aS)-27-胺基-21,42,48-三[(2S)-丁烷-2-基]-12-(3-甲脒基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-6-(2-甲基丙基)-5,8,11,14,17,20,23,26,33,36,41,44, 47,50,55-十五側氧基五十四氫-1H-18,45-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[2,1-f:2',1'-r:2'',1''-u]­[1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]十五氮雜環四十九烴-34-基]乙酸
Figure 02_image095
實例 23
序列：(Dap)**-(Dap)-GIC+SRSLPPIC+IPD** [(6S,9S,12S,15S,18R,21S,27S,30S,33S,35aS,41S,44R,47S,49aS,54aS)-27,30-雙(胺基甲基)-21,41,47-三[(2S)-丁烷-2-基]-12-(3-甲脒基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-6-(2-甲基丙基)-5,8,11,14, 17,20,23,26,29,32,35,40,43,46,49,54-十六側氧基五十二氫-1H,5H-18,44-(甲撐二硫代甲撐)­三吡咯并[1,2-a:1',2'-d:1'',2''-p][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46]十六氮雜環四十八烴-33-基]乙酸
Figure 02_image097
實例 24
序列：(PEG1(10個原子))**-GIC+SRSLPPIC+IPD** [(6S,9S,12S,15S,18R,21S,37S,39aS,45S,48R,51S,53aS,58aS)-21,45,51-三[(2S)-丁烷-2-基]-12-(3-甲脒基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-6-(2-甲基丙基)-5,8,11,14,17,20,23,26,36,39,44,47,50,53,58-十五側氧基五十四氫-1H,33H-18,48-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[2,1-l:2',1'-x:2'',1''-a 1][1,4,7, 10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49]二氧雜十五氮雜環五十二烴-37-基]乙酸
Figure 02_image099
實例 25
序列：(Ahx)**-AIC+SRSLP-(Oic)-IC+IP** N-{3-[(3aS,13S,16S,19R,22S,25S,28S,31S,36aS,38aS,42aS,43aS,46S,49R,52S)-16,46,52-三[(2S)-丁烷-2-基]-22,28-雙(羥甲基)-13-甲基-31-(2-甲基丙基)-4,11,14,17,20,23,26,29,32,37,44,47,50,53-十四側氧基五十四氫-1H,34H-19,49-(甲撐二硫代甲撐)二吡咯并[2',1':18,19;2'',1'':3,4]­[1,4,7, 10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40]十四氮雜環四十六烴并[16,15-a]吲哚-25-基]丙基}胍
Figure 02_image101
實例 26
序列：A**GAIC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IPD** [(6S,9S,12S,15S,18R,21S,24S,30S,33S,35aS,41S,44R,47S,49aS,54aS)-21,41,47-三[(2S)-丁烷-2-基]-12-(3-甲脒基丙基)-6-(2,2-二甲基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-24,30,55,55-四甲基-5,8,11, 14,17,20,23,26,29,32,35,40,43,46,49,54-十六側氧基五十二氫-1H,5H-18,44-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[1,2-a:1',2'-d:1'',2''-p][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46]十六氮雜環四十八烴-33-基]乙酸
Figure 02_image103
實例 27
序列：(Ahx)**-AIC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IPD** [(6S,9S,12S,15S,18R,21S,24S,34S,36aS,42S,45R,48S,50aS,55aS)-21,42,48-三[(2S)-丁烷-2-基]-12-(3-甲脒基丙基)-6-(2,2-二甲基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-24,56,56-三甲基-5,8,11,14,17,20, 23,26,33,36,41,44,47,50,55-十五側氧基五十四氫-1H-18,45-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[2,1-f:2',1'-r:2'',1''-u][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]十五氮雜環四十九烴-34-基]乙酸
Figure 02_image105
實例 28
序列：(Ahx)**-GIC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IPD** [(6S,9S,12S,15S,18R,21S,34S,36aS,42S,45R,48S,50aS,55aS)-21,42,48-三[(2S)-丁烷-2-基]-12-(3-甲脒基丙基)-6-(2,2-二甲基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-56,56-二甲基-5,8,11,14,17,20,23,26,33, 36,41,44,47,50,55-十五側氧基五十四氫-1H-18,45-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[2,1-f:2',1'-r:2'',1''-u][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]十五氮雜環四十九烴-34-基]乙酸
Figure 02_image107
實例 29
序列：A**GGIC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IPD** [(6S,9S,12S,15S,18R,21S,30S,33S,35aS,41S,44R,47S,49aS,54aS)-21,41,47-三[(2S)-丁烷-2-基]-12-(3-甲脒基丙基)-6-(2,2-二甲基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-30,55,55-三甲基-5,8,11,14,17,20, 23,26,29,32,35,40,43,46,49,54-十六側氧基五十二氫-1H,5H-18,44-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[1,2-a:1',2'-d:1'',2''-p][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46]十六氮雜環四十八烴-33-基]乙酸
Figure 02_image109
實例 30
序列：(Ahx)**-GIC+SRS-((tBu)A)-PPI-((N-Me)C)+-IPD** [(6S,9S,12S,15S,18R,21S,34S,36aS,42S,45R,48S,50aS,55aS)-21,42,48-三[(2S)-丁烷-2-基]-12-(3-甲脒基丙基)-6-(2,2-二甲基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-46-甲基-5,8,11,14,17,20,23,26,33,36, 41,44,47,50,55-十五側氧基五十四氫-1H-18,45-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[2,1-f:2',1'-r:2'',1''-u][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]十五氮雜環四十九烴-34-基]乙酸
Figure 02_image111
實例 31
序列：A**GAIC+SRS-((tBu)A)-PPI-((N-Me)C)+-IPD** [(6S,9S,12S,15S,18R,21S,24S,30S,33S,35aS,41S,44R,47S,49aS,54aS)-21,41,47-三[(2S)-丁烷-2-基]-12-(3-甲脒基丙基)-6-(2,2-二甲基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-24,30,45-三甲基-5,8,11,14,17, 20,23,26,29,32,35,40,43,46,49,54-十六側氧基五十二氫-1H,5H-18,44-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[1,2-a:1',2'-d:1'',2''-p][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46]十六氮雜環四十八烴-33-基]乙酸
Figure 02_image113
實例 32
序列：(Ahx)**-AIC+SRS-((tBu)A)-PPI-((N-Me)C)+-IPD** [(6S,9S,12S,15S,18R,21S,24S,34S,36aS,42S,45R,48S,50aS,55aS)-21,42,48-三[(2S)-丁烷-2-基]-12-(3-甲脒基丙基)-6-(2,2-二甲基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-24,46-二甲基-5,8,11,14,17,20,23, 26,33,36,41,44,47,50,55-十五側氧基五十四氫-1H-18,45-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[2,1-f:2',1'-r:2'',1''-u][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]十五氮雜環四十九烴-34-基]乙酸
Figure 02_image115
實例 33
序列：(Ahx)**-(Abu)-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-((N-Me)C)+-IPD** [(6S,9S,12S,15S,18R,21S,24S,34S,36aS,42S,45R,48S,50aS,55aS)-21,42,48-三[(2S)-丁烷-2-基]-12-(3-甲脒基丙基)-6-(2,2-二甲基丙基)-24-乙基-9,15-雙(羥甲基)-46-甲基-5,8,11,14,17,20, 23,26,33,36,41,44,47,50,55-十五側氧基五十四氫-1H-18,45-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[2,1-f:2',1'-r:2'',1''-u][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]十五氮雜環四十九烴-34-基]­乙酸
Figure 02_image117
實例 34
序列：(PEG1(10個原子))**-AIC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+ -IPD** [(6S,9S,12S,15S,18R,21S,24S,37S,39aS,45S,48R,51S,53aS,58aS)-21,45,51-三[(2S)-丁烷-2-基]-12-(3-甲脒基丙基)-6-(2,2-二甲基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-24,59,59-三甲基-5,8,11,14,17,20,23, 26,36,39,44,47,50,53,58-十五側氧基五十四氫-1H,33H-18,48-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[2,1-l:2',1'-x:2'',1''-a 1][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49]二氧雜十五氮雜環五十二烴-37-基]乙酸
Figure 02_image119
實例 35
序列：(Γ-Abu)**-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IPD** [(6S,9S,12S,15S,18R,21S,29S,31aS,37S,40R,43S,45aS,50aS)-21,37,43-三[(2S)-丁烷-2-基]-12-(3-甲脒基丙基)-6-(2,2-二甲基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-51,51-二甲基-5,8,11,14,17,20,23,28, 31,36,39,42,45,50-十四氧雜四十八氫-1H,5H-18,40-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[2,1-f:2',1'-r:2'',1''-u][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40]十四氮雜環四十四烴-29-基]乙酸
Figure 02_image121
實例 36
序列：(Γ-Abu)**-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-((N-Me)C)+-IPD** [(6S,9S,12S,15S,18R,21S,29S,31aS,37S,40R,43S,45aS,50aS)-21,37,43-三[(2S)-丁烷-2-基]-12-(3-甲脒基丙基)-6-(2,2-二甲基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-41-甲基-5,8,11,14,17,20,23,28, 31,36,39,42,45,50-十四氧雜四十八氫-1H,5H-18,40-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[2,1-f:2',1'-r:2'',1''-u][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40]十四氮雜環四十四烴-29-基]乙酸
Figure 02_image123
實例 37
序列：G**AIC+SRSLPPIC+IPD++-NH 2(6S,9S,12S,15S,18R,21S,24S,31S,33aS,39S,42R,45S,47aS,52aS)-21,39,45-三[(2S)-丁烷-2-基]-12-(3-甲脒基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-24-甲基-6-(2-甲基丙基)-5,8,11,14,17,20,23,26,29,33, 38,41,44,47,52-十五側氧基五十氫-1H,5H-18,42-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[2,1-c:2',1'-o:2'',1''-r][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]十五氮雜環四十六烴-31-甲醯胺
Figure 02_image125
實例 38
序列：(Ahx)**-(Abu)-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IPD** [(6S,9S,12S,15S,18R,21S,24S,34S,36aS,42S,45R,48S,50aS,55aS)-21,42,48-三[(2S)-丁烷-2-基]-12-(3-甲脒基丙基)-6-(2,2-二甲基丙基)-24-乙基-9,15-雙(羥甲基)-56,56-二甲基-5,8,11, 14,17,20,23,26,33,36,41,44,47,50,55-十五側氧基五十四氫-1H-18,45-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[2,1-f:2',1'-r:2'',1''-u][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]十五氮雜環四十九烴-34-基]乙酸
Figure 02_image127
實例 39
序列：A**GGIC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IPd** [(6S,9S,12S,15S,18R,21S,30S,33R,35aS,41S,44R,47S,49aS,54aS)-21,41,47-三[(2S)-丁烷-2-基]-12-(3-甲脒基丙基)-6-(2,2-二甲基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-30,55,55-三甲基-5,8,11,14,17,20,23, 26,29,32,35,40,43,46,49,54-十六側氧基五十二氫-1H,5H-18,44-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[1,2-a:1',2'-d:1'',2''-p][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46]十六氮雜環四十八烴-33-基]乙酸
Figure 02_image129
實例 40
序列：(Ahx)**-GIC+SRS-((tBu)A)-PPI-((N-Me)C)+-IPD++ -NH 2(6S,9S,12S,15S,18R,21S,35S,37aS,43S,46R,49S,51aS,56aS)-21,43,49-三[(2S)-丁烷-2-基]-12-(3-甲脒基丙基)-6-(2,2-二甲基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-47-甲基-5,8,11,14,17,20,23,26,33,37,42,45, 48,51,56-十五側氧基五十四氫-1H,5H-18,46-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[1,2-v:1',2'-y:1'',2''-k 1][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,44]十五氮雜環五十烴-35-甲醯胺
Figure 02_image131
實例 41
序列：A**GAIC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IPD++-NH 2(3aS,6S,10S,16S,19S,22R,25S,28S,31S,34S,39aS,41aS,45aS,46aS,49S,52R,55S)-19,49,55-三[(2S)-丁烷-2-基]-28-(3-甲脒基丙基)-25,31-雙(羥甲基)-10,16,58,58-四甲基-34-(2-甲基丙基)-4,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,40,47,50,53,56-十六側氧基五十八氫-37H-22,52-(甲撐二硫代甲撐)二吡咯并[2',1':18,19;2'',1'':3,4][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46]十六氮雜環四十九烴并[16,15-a]吲哚-6-甲醯胺
Figure 02_image133
實例 42
序列：A**GGIC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IPD++-NH 2(3aS,6S,10S,19S,22R,25S,28S,31S,34S,39aS,41aS,45aS,46aS,49S,52R,55S)-19,49,55-三[(2S)-丁烷-2-基]-28-(3-甲脒基丙基)-25,31-雙(羥甲基)-10,58,58-三甲基-34-(2-甲基丙基)-4,8,11, 14,17,20,23,26,29,32,35,40,47,50,53,56-十六側氧基五十八氫-37H-22,52-(甲撐二硫代甲撐)二吡咯并[2',1':18,19;2'',1'':3,4][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46]十六氮雜環四十九烴并[16,15-a]吲哚-6-甲醯胺
Figure 02_image135
實例 43
序列：(Ahx)**AIC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IPD++-NH2 (3aS,6S,17S,20S,23R,26S,29S,32S,35S,40aS,42aS,46aS,47aS,50S,53R,56S)-20,50,56-三[(2S)-丁烷-2-基]-29-(3-甲脒基丙基)-26,32-雙(羥甲基)-17,59,59-三甲基-35-(2-甲基丙基)-4,8,15,18,21, 24,27,30,33,36,41,48,51,54,57-十五側氧基五十八氫-1H,38H-23,53-(甲撐二硫代甲撐)二吡咯并[1',2':22,23;1'',2'':37,38][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,44]十五氮雜環五十烴并[25,26-a]吲哚-6-甲醯胺
Figure 02_image137
實例 44
序列：(Orn)++-AIC+SRS-((tBu)A)-PPI-((N-Me)C)+-IPD++-NH 2(6S,9S,12S,15S,18R,21S,24S,27S,34S,36aS,42S,45R,48S,50aS,55aS)-27-胺基-21,42,48-三[(2S)-丁烷-2-基]-12-(3-甲脒基丙基)-6-(2,2-二甲基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-24,46-二甲基-5,8,11, 14,17,20,23,26,32,36,41,44,47,50,55-十五側氧基五十四氫-1H-18,45-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[1,2-v:1',2'-y:1'',2''-k 1][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,44]十五氮雜環四十九烴-34-甲醯胺
Figure 02_image139
實例 45
序列：(Ahx)**-AIC+SRSLPPIC+IPD** [(6S,9S,12S,15S,18R,21S,24S,34S,36aS,42S,45R,48S,50aS,55aS)-21,42,48-三[(2S)-丁烷-2-基]-12-(3-甲脒基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-24-甲基-6-(2-甲基丙基)-5,8,11,14,17,20,23,26,33,36, 41,44,47,50,55-十五側氧基五十四氫-1H-18,45-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[2,1-f:2',1'-r:2'',1''-u][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]十五氮雜環四十九烴-34-基]乙酸
Figure 02_image141
實例 46
序列：(Ahx)**-AIC+SRS-((tBu)A)-PPIC+IPD** [(6S,9S,12S,15S,18R,21S,24S,34S,36aS,42S,45R,48S,50aS,55aS)-21,42,48-三[(2S)-丁烷-2-基]-12-(3-甲脒基丙基)-6-(2,2-二甲基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-24-甲基-5,8,11,14,17,20,23,26,33, 36,41,44,47,50,55-十五側氧基五十四氫-1H-18,45-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[2,1-f:2',1'-r:2'',1''-u][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]十五氮雜環四十九烴-34-基]乙酸
Figure 02_image143
實例 47
序列：A**GGIC+SRS-((tBu)A)-PPI-((N-Me)C)+-IPd** [(6S,9S,12S,15S,18R,21S,30S,33R,35aS,41S,44R,47S,49aS,54aS)-21,41,47-三[(2S)-丁烷-2-基]-12-(3-甲脒基丙基)-6-(2,2-二甲基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-30,45-二甲基-5,8,11,14,17,20,23,26, 29,32,35,40,43,46,49,54-十六側氧基五十二氫-1H,5H-18,44-(甲撐二硫代甲撐)­三吡咯并[1,2-a:1',2'-d:1'',2''-p][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46]十六氮雜環四十八烴-33-基]乙酸
Figure 02_image145
實例 48
序列：(Ahx)**-GIC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IPD++-NH 2(6S,9S,12S,15S,18R,21S,35S,37aS,43S,46R,49S,51aS,56aS)-21,43,49-三[(2S)-丁烷-2-基]-12-(3-甲脒基丙基)-6-(2,2-二甲基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-57,57-二甲基-5,8,11,14,17,20,23,26,33,37, 42,45,48,51,56-十五側氧基五十四氫-1H,5H-18,46-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[1,2-v:1',2' -y:1'',2''-k 1][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,44]十五氮雜環五十烴-35-甲醯胺
Figure 02_image147
實例 49
序列：(Ahx)**-GIC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IPD++-NH 2(3aS,6S,20S,23R,26S,29S,32S,35S,40aS,42aS,46aS,47aS,50S,53R,56S)-20,50,56-三[(2S)-丁烷-2-基]-29-(3-甲脒基丙基)-26,32-雙(羥甲基)-59,59-二甲基-35-(2-甲基丙基)-4,8,15,18,21,24, 27,30,33,36,41,48,51,54,57-十五側氧基五十八氫-1H,38H-23,53-(甲撐二硫代甲撐)二吡咯并[1',2':22,23;1'',2'':37,38][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,44]十五氮雜環五十烴并[25,26-a]吲哚-6-甲醯胺
Figure 02_image149
實例 50
序列：C++AIC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IPDC++-NH 2[(6S,9S,12S,15S,18R,21S,24S,27R,32R,35S,37aS,43S,46R,49S,51aS,56aS)-27-胺基-21,43,49-三[(2S)-丁烷-2-基]-12-(3-甲脒基丙基)-32-胺甲醯基-6-(2,2-二甲基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-24, 57,57-三甲基-5,8,11,14,17,20,23,26,34,37,42,45,48,51,56-十五側氧基五十二氫-1H,31H-18,46-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[2,1-j:2',1'-v:2'',1''-y]­[1,2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44, 47]­二硫雜十五氮雜環五十烴-35-基]乙酸
Figure 02_image151
實例 51
序列：(Ahx)**-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IP** N-{3-[(6S,9S,12S,15S,18R,21S,30aS,36S,39R,42S,44aS,49aS)-21,36,42-三[(2S)-丁烷-2-基]-6-(2,2-二甲基­丙基)-9,15-雙(羥甲基)-50,50-二甲基-5,8,11,14,17,20,23,30,35,38,41,44,49-十三氧雜四十八­氫-1H-18,39-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[2,1-c:2',1'-o:2'',1''-r]­[1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31, 34,37]十三氮雜環四十三烴-12-基]丙基}胍
Figure 02_image153
實例 52
序列：(Ahx)**-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-I** N-{3-[(5aS,11S,14S,17S,20S,23R,26S,36S,39R,42S,44aS)-26,36,42-三[(2S)-丁烷-2-基]-11-(2,2-二甲基丙基)-14,20-雙(羥甲基)-45,45-二甲基-5,10,13,16,19,22,25,28,35,38,41,44-十二側氧基­四十二­氫-1H,5H-23,39-(甲撐二硫代甲撐)二吡咯并[2,1-l:2',1'-o]­[1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34]十二­氮雜環四十烴-17-基]丙基}胍
Figure 02_image155
實例 53
序列：(Ahx)**-AIC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IP** N-{3-[(6S,9S,12S,15S,18R,21S,24S,33aS,39S,42R,45S,47aS,52aS)-21,39,45-三[(2S)-丁烷-2-基]-6-(2,2-二甲基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-24,53,53-三甲基-5,8,11,14,17,20,23,26,33,38,41,44,47,52-十四側氧基五十氫-1H,5H-18,42-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[2,1-c:2',1'-o:2'',1''-r]­[1,4,7,10,13,16, 19,22,25,28,31,34,37,40]十四氮雜環四十六烴-12-基]丙基}胍
Figure 02_image157
實例 54
序列：(Ahx)**-((N-Me)G)-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IP** N-{3-[(6S,9S,12S,15S,18R,21S,33aS,39S,42R,45S,47aS,52aS)-21,39,45-三[(2S)-丁烷-2-基]-6-(2,2-二甲基­丙基)-9,15-雙(羥甲基)-25,53,53-三甲基-5,8,11,14,17,20,23,26,33,38,41,44,47,52-十四­側氧基五十氫-1H,5H-18,42-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[2,1-c:2',1'-o:2'',1''-r]­[1,4,7,10,13,16,19,22, 25,28,31,34,37,40]十四氮雜環四十六烴-12-基]丙基}胍
Figure 02_image159
實例 55
序列：(Dap)**-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IP** N-{3-[(6S,9S,12S,15S,18R,21S,24S,26aS,32S,35R,38S,40aS,45aS)-24-(胺基甲基)-21,32,38-三[(2S)-丁烷-2-基]-6-(2,2-二甲基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-46,46-二甲基-5,8,11,14,17,20,23,26,31,34,37,40, 45-十三氧雜四十四氫-1H-18,35-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[1,2-a:1',2'-d:1'',2''-p]­[1,4,7,10, 13,16,19,22,25,28,31,34,37]十三氮雜環三十九烴-12-基]丙基}胍
Figure 02_image161
實例 56
序列：(Dab)**-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IP** N-{3-[(6S,9S,12S,15S,18R,21S,24S,26aS,32S,35R,38S,40aS,45aS)-24-(2-胺基乙基)-21,32,38-三[(2S)-丁烷-2-基]-6-(2,2-二甲基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-46,46-二甲基-5,8,11,14,17,20,23,26,31,34,37, 40,45-十三氧雜四十四氫-1H-18,35-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[1,2-a:1',2'-d:1'',2''-p]­[1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37]十三氮雜環三十九烴-12-基]丙基}胍
Figure 02_image163
實例 57
序列：(Dap)**-(Dap)-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-I** N-{3-[(5aS,11S,14S,17S,20S,23R,26S,29S,32S,35S,38R,41S,43aS)-29,32-雙(胺基甲基)-26,35,41-三[(2S)-丁烷-2-基]-11-(2,2-二甲基丙基)-14,20-雙(羥甲基)-44,44-二甲基-5,10,13,16,19,22,25, 28,31,34,37,40,43-十三側氧基四十二氫-5H-23,38-(甲撐二硫代甲撐)二吡咯并[1,2-a:1',2'-d]­[1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37]十三氮雜環三十九烴-17-基]丙基}胍
Figure 02_image165
實例 58
序列：I**C+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IPP** N-{3-[(6S,9S,12S,15S,18R,21S,23aS,28aS,34S,37R,40S,42aS,47aS)-21,34,40-三[(2S)-丁烷-2-基]-6-(2,2-二甲基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-48,48-二甲基-5,8,11,14,17,20,23,28,33,36,39,42,47-十三氧雜四十四氫-1H,5H,28H-18,37-(甲撐二硫代甲撐)四吡咯并[1,2-a:1',2'-d:1'',2''-p:1''',2'''-s]­[1,4,7, 10,13,16,19,22,25,28,31,34,37]十三氮雜環三十九烴-12-基]丙基}胍
Figure 02_image167
實例 59
序列：(Ahx)**-(TXA)-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IP** N-{3-[(1R,4S,7S,13S,19S,22S,25S,28S,31R,34S,37S,40S,51S,57S)-4,34,57-三[(2S)-丁烷-2-基]-19-(2,2-二甲基丙基)-22,28-雙(羥甲基)-60,60-二甲基-3,6,12,18,21,24,27,30,33,36,43,50,56,59-十四­側氧基-61,62-二硫雜-2,5,11,17,20,23,26,29,32,35,42,49,55,58-十四氮雜六環­[29.28.4.2 37,40.0 7,11.0 13,17.0 51,55]­六十五烷-25-基]丙基}胍
Figure 02_image169
實例 60
序列：(己二酸)**-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IPD-(Dap)++ -NH 2[(6S,9S,12S,15S,18R,21S,31S,34S,36aS,42S,45R,48S,50aS,55aS)-21,42,48-三[(2S)-丁烷-2-基]-12-(3-甲脒基丙基)-31-胺甲醯基-6-(2,2-二甲基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-56,56-二甲基-5,8,11, 14,17,20,23,28,33,36,41,44,47,50,55-十五側氧基五十四氫-1H-18,45-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[2,1-i:2',1'-u:2'',1''-x][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]十五氮雜環四十九烴-34-基]乙酸
Figure 02_image171
實例 61
序列：(Orn)++-AIC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IPD++-NH 2(6S,9S,12S,15S,18R,21S,24S,27S,34S,36aS,42S,45R,48S,50aS,55aS)-27-胺基-21,42,48-三[(2S)-丁烷-2-基]-12-(3-甲脒基丙基)-6-(2,2-二甲基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-24,56,56-三甲基-5,8,11,14,17,20,23,26,32,36,41,44,47,50,55-十五側氧基五十四氫-1H-18,45-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[1,2-v:1',2'-y:1'',2''-k 1][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,44]十五氮雜環四十九烴-34-甲醯胺
Figure 02_image173
實例 62序列：G**-(TXA)-GIC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IPD++-NH 2(1R,4S,10S,21S,24S,30S,33R,36S,39S,42S,45S,51S,57S,60S)-4,30,60-三[(2S)-丁烷-2-基]-39-(3-甲脒基丙基)-45-(2,2-二甲基丙基)-36,42-雙(羥甲基)-63,63-二甲基-2,5,11,15,18,25,28,31,34, 37,40,43,46,52,58,61-十六側氧基-64,65-二硫雜-3,6,12,16,19,26,29,32,35,38,41,44,47,53,59,62-十六氮雜六環[31.29.4.2 21,24.0 6,10.0 47,51.0 53,57]六十八烷-13-甲醯胺
Figure 02_image175
實例 63
序列：(TTDS)**-AIC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IPD** [(6S,9S,12S,15S,18R,21S,24S,46S,48aS,54S,57R,60S,62aS,67aS)-21,54,60-三[(2S)-丁烷-2-基]-12-(3-甲脒基丙基)-6-(2,2-二甲基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-24,68,68-三甲基-5,8,11,14,17,20, 23,26,29,45,48,53,56,59,62,67-十六側氧基六十二氫-1H,5H-18,57-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[2,1-p:2',1'-b 1:2'',1''-e 1][1,4,7,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,58]三氧雜十六氮雜環六十一烴-46-基]乙酸
Figure 02_image177
實例 64
序列：(Ahx)**-((N-Me)G)-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-I** N-{3-[(5aS,11S,14S,17S,20S,23R,26S,39S,42R,45S,47aS)-26,39,45-三[(2S)-丁烷-2-基]-11-(2,2-二甲基­丙基)-14,20-雙(羥甲基)-30,48,48-三甲基-5,10,13,16,19,22,25,28,31,38,41,44,47-十三側氧基四十六氫-5H-23,42-(甲撐二硫代甲撐)二吡咯并[2,1-l:2',1'-o][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34, 37]­十三氮雜環四十三烴-17-基]丙基}胍
Figure 02_image179
實例 65
序列：(Orn)**-GIC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-I** N-{3-[(5aS,11S,14S,17S,20S,23R,26S,32S,35S,38R,41S,43aS)-32-(3-胺基丙基)-26,35,41-三[(2S)-丁烷-2-基]-11-(2,2-二甲基丙基)-14,20-雙(羥甲基)-44,44-二甲基-5,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40, 43-十三側氧基四十二氫-5H-23,38-(甲撐二硫代甲撐)二吡咯并[1,2-a:1',2'-d][1,4,7,10,13,16,19, 22,25,28,31,34,37]十三氮雜環三十九烴-17-基]丙基}胍
Figure 02_image181
實例 66
序列：(Orn)++-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-I** N-{3-[(5aS,11S,14S,17S,20S,23R,26S,29R,35S,38S,41S,43aS)-29-胺基-26,35,41-三[(2S)-丁烷-2-基]-11-(2,2-二甲基丙基)-14,20-雙(羥甲基)-44,44-二甲基-5,10,13,16,19,22,25,28,34,37,40,43-十二側氧基­四十二氫-5H-23,38-(甲撐二硫代甲撐)二吡咯并[2,1-l:2',1'-o]­[1,4,7,10,13,16,19,22,25,28, 31,34]十二氮雜環三十九烴-17-基]丙基}胍
Figure 02_image183
實例 67
序列：K++-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-I*** N-{3-[(5aS,11S,14S,17S,20S,23R,26S,29S,36S,39R,42S,44aS)-29-胺基-26,36,42-三[(2S)-丁烷-2-基]-11-(2,2-二甲基丙基)-14,20-雙(羥甲基)-45,45-二甲基-5,10,13,16,19,22,25,28,35,38,41,44-十二側氧基­四十二氫-1H,5H-23,39-(甲撐二硫代甲撐)二吡咯并[2,1-l:2',1'-o][1,4,7,10,13,16,19,22,25, 28,31,34]十二氮雜環四十烴-17-基]丙基}胍
Figure 02_image185
實例 68
序列：(Ahx)**-(4-(胺基甲基)苯甲酸)-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IP** N-{3-[(1R,4S,7S,13S,19S,22S,25S,28S,31R,34S,51S,57S)-4,34,57-三[(2S)-丁烷-2-基]-19-(2,2-二甲基­丙基)-22,28-雙(羥甲基)-60,60-二甲基-3,6,12,18,21,24,27,30,33,36,43,50,56,59-十四側氧基-61,62-二硫雜-2,5,11,17,20,23,26,29,32,35,42,49,55,58-十四氮雜六環­[29.28.4.2 37,40.0 7,11.0 13,17.0 51,55]­六十五-37,39,64-三烯-25-基]丙基}胍
Figure 02_image187
實例 69
序列：G**-(TXA)-GIC+SRS-((tBu)A)-PPI-((N-Me)C)+-IPD++-NH 2(1R,4S,10S,13S,21S,24S,30S,33R,36S,39S,42S,45S,51S,57S,60S)-4,30,60-三[(2S)-丁烷-2-基]-39-(3-甲脒基丙基)-45-(2,2-二甲基丙基)-36,42-雙(羥甲基)-62-甲基-2,5,11,15,18,25,28,31, 34,37,40,43,46,52,58,61-十六側氧基-64,65-二硫雜-3,6,12,16,19,26,29,32,35,38,41,44,47,53,59,62-十六氮雜六環[31.29.4.2 21,24.0 6,10.0 47,51.0 53,57]六十八烷-13-甲醯胺
Figure 02_image189
實例 71
序列：(Orn)++-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IP** N-{3-[(6S,9S,12S,15S,18R,21S,24S,29aS,35S,38R,41S,43aS,48aS)-24-胺基-21,35,41-三[(2S)-丁烷-2-基]-6-(2,2-二甲基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-49,49-二甲基-5,8,11,14,17,20,23,29,34,37,40,43,48-十三­側氧基四十六氫-1H,5H-18,38-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[2,1-c:2',1'-o:2'',1''-r][1,4,7,10,13, 16,19,22,25,28,31,34,37]十三氮雜環四十二烴-12-基]丙基}胍
Figure 02_image191
實例 72
序列：(Ahx)**-AIC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-I** N-{3-[(5aS,11S,14S,17S,20S,23R,26S,29S,39S,42R,45S,47aS)-26,39,45-三[(2S)-丁烷-2-基]-11-(2,2-二甲基丙基)-14,20-雙(羥甲基)-29,48,48-三甲基-5,10,13,16,19,22,25,28,31,38,41,44,47-十三側氧基四十六氫-5H-23,42-(甲撐二硫代甲撐)二吡咯并[2,1-l:2',1'-o][1,4,7,10,13,16,19,22, 25,28,31,34,37]十三氮雜環四十三烴-17-基]丙基}胍
Figure 02_image193
實例 73
序列：(Dap)**-(Dab)-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-I** N-{3-[(5aS,11S,14S,17S,20S,23R,26S,29S,32S,35S,38R,41S,43aS)-29-(2-胺基乙基)-32-(胺基甲基)-26, 35,41-三[(2S)-丁烷-2-基]-11-(2,2-二甲基丙基)-14,20-雙(羥甲基)-44,44-二甲基-5,10,13,16,19, 22,25,28,31,34,37,40,43-十三側氧基四十二氫-5H-23,38-(甲撐二硫代甲撐)二吡咯并[1,2-a:1',2'-d]­[1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37]十三氮雜環三十九烴-17-基]丙基}胍
Figure 02_image195
實例 74
序列：(Ahx)**-AIC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IPE++-NH 2(3aS,6S,18S,21S,24R,27S,30S,33S,36S,41aS,43aS,47aS,48aS,51S,54R,57S)-21,51,57-三[(2S)-丁烷-2-基]-30-(3-甲脒基丙基)-27,33-雙(羥甲基)-18,60,60-三甲基-36-(2-甲基丙基)-4,9,16,19,22, 25,28,31,34,37,42,49,52,55,58-十五側氧基六十氫-39H-24,54-(甲撐二硫代甲撐)二吡咯并[1',2':22,23;1'',2'':37,38][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,45]十五氮雜環五十一烴并[25,26-a]吲哚-6-甲醯胺
Figure 02_image197
實例 75
序列：(Ahx)**-IC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IPE++-NH 2(3aS,6S,18S,21R,24S,27S,30S,33S,38aS,40aS,44aS,45aS,48S,51R,54S)-18,48,54-三[(2S)-丁烷-2-基]-27-(3-甲脒基丙基)-24,30-雙(羥甲基)-57,57-二甲基-33-(2-甲基丙基)-4,9,16,19,22, 25,28,31,34,39,46,49,52,55-十四側氧基五十六氫-1H,36H-21,51-(甲撐二硫代甲撐)二吡咯并[1',2':19,20;1'',2'':34,35][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,42]十四氮雜環四十八烴并[22,23-a]­吲哚-6-甲醯胺
Figure 02_image199
實例 76
序列：(Ahx)**- ((N-Me)G)-GIC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IPE++ -NH 2(3aS,6S,24S,27R,30S,33S,36S,39S,44aS,46aS,50aS,51aS,54S,57R,60S)-24,54,60-三[(2S)-丁烷-2-基]-33-(3-甲脒基丙基)-30,36-雙(羥甲基)-20,63,63-三甲基-39-(2-甲基丙基)-4,9,16,19,22,25, 28,31,34,37,40,45,52,55,58,61-十六側氧基六十二氫-1H,42H-27,57-(甲撐二硫代甲撐)二吡咯并[1',2':25,26;1'',2'':40,41][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,48]十六氮雜環五十四烴并[28,29-a]吲哚-6-甲醯胺
Figure 02_image201
實例 77
序列：(Ahx)**-((N-Me)G)-AIC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IPE++-NH 2(3aS,6S,21S,24S,27R,30S,33S,36S,39S,44aS,46aS,50aS,51aS,54S,57R,60S)-24,54,60-三[(2S)-丁烷-2-基]-33-(3-甲脒基丙基)-30,36-雙(羥甲基)-20,21,63,63-四甲基-39-(2-甲基丙基)-4,9,16, 19,22,25,28,31,34,37,40,45,52,55,58,61-十六側氧基六十二氫-1H,42H-27,57-(甲撐二硫代甲撐)二吡咯并[1',2':25,26;1'',2'':40,41][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,48]十六氮雜環五十四烴并[28,29-a]吲哚-6-甲醯胺
Figure 02_image203
實例 78序列：k++-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-I** (HCl鹽) N-{3-[(5aS,11S,14S,17S,20S,23R,26S,29R,36S,39R,42S,44aS)-29-胺基-26,36,42-三[(2S)-丁烷-2-基]-11-(2,2-二甲基丙基)-14,20-雙(羥甲基)-45,45-二甲基-5,10,13,16,19,22,25,28,35,38,41,44-十二側氧基四十二氫-1H,5H-23,39-(甲撐二硫代甲撐)二吡咯并[2,1-l:2',1'-o][1,4,7,10,13,16,19,22,25, 28,31,34]十二氮雜環四十烴-17-基]丙基}胍鹽酸鹽
Figure 02_image205
實例 79
序列：(Ahx)**-aIC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IPE++-NH 2(HCl鹽) (3aS,6S,18R,21S,24R,27S,30S,33S,36S,41aS,43aS,47aS,48aS,51S,54R,57S)-21,51,57-三[(2S)-丁烷-2-基]-30-(3-甲脒基丙基)-27,33-雙(羥甲基)-18,60,60-三甲基-36-(2-甲基丙基)-4,9,16, 19,22,25,28,31,34,37,42,49,52,55,58-十五側氧基六十氫-39H-24,54-(甲撐二硫代甲撐)二吡咯并[1',2':22,23;1'',2'':37,38][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,45]十五氮雜環五十一烴并[25,26-a]吲哚-6-甲醯胺 鹽酸鹽
Figure 02_image207
實例 80
序列：k++-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-I** N-{3-[(5aS,11S,14S,17S,20S,23R,26S,29R,36S,39R,42S,44aS)-29-胺基-26,36,42-三[(2S)-丁烷-2-基]-11-(2,2-二甲基丙基)-14,20-雙(羥甲基)-45,45-二甲基-5,10,13,16,19,22,25,28,35,38,41,44-十二側氧基四十二氫-1H,5H-23,39-(甲撐二硫代甲撐)二吡咯并[2,1-l:2',1'-o][1,4,7,10,13,16,19,22,25, 28,31,34]十二氮雜環四十烴-17-基]丙基}胍
Figure 02_image209
實例 81
序列：(3-疊氮基-L-丙胺酸)++-GAIC+SRS-((tBu)A)-PPIC+IP- (L-炔丙基甘胺酸)++-NH 2(1,2,3-三唑-1,4-二基) (1R,4S,10S,13S,20S,26S,29R,32R,35S,38S,41S,44S,50S,56S,59S)-20-胺基-4,29,59-三[(2S)-丁烷-2-基]-38-(3-甲脒基丙基)-44-(2,2-二甲基丙基)-35,41-雙(羥甲基)-26-甲基-2,5,11,21, 24,27,30,33,36,39,42,45,51,57,60-十五側氧基-63,64-二硫雜-3,6,12,16,17,18,22,25,28,31,34,37,40,43,46, 52,58,61-十八氮雜六環[30.29.4.1 15,18.0 6,10.0 46,50.0 52,56]六十六-15(66),16-二烯-13-甲醯胺
Figure 02_image211
實例 82
序列：(Ahx)**-GAIC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IPE++-NH 2(3aS,6S,21S,24S,27R,30S,33S,36S,39S,44aS,46aS,50aS,51aS,54S,57R,60S)-24,54,60-三[(2S)-丁烷-2-基]-33-(3-甲脒基丙基)-30,36-雙(羥甲基)-21,63,63-三甲基-39-(2-甲基丙基)-4,9,16,19,22, 25,28,31,34,37,40,45,52,55,58,61-十六側氧基六十二氫-1H,42H-27,57-(甲撐二硫代甲撐)二吡咯并[1',2':25,26;1'',2'':40,41][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,48]十六氮雜環五十四烴并[28,29-a]吲哚-6-甲醯胺
Figure 02_image213
實例 83
序列：(Ahx)**-GIC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IPE++-NH 2(3aS,6S,21S,24R,27S,30S,33S,36S,41aS,43aS,47aS,48aS,51S,54R,57S)-21,51,57-三[(2S)-丁烷-2-基]-30-(3-甲脒基丙基)-27,33-雙(羥甲基)-60,60-二甲基-36-(2-甲基丙基)-4,9,16,19,22, 25,28,31,34,37,42,49,52,55,58-十五側氧基六十氫-39H-24,54-(甲撐二硫代甲撐)二吡咯并[1',2':22,23;1'',2'':37,38][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,45]十五氮雜環五十一烴并[25,26-a]吲哚-6-甲醯胺
Figure 02_image215
實例 87序列：(Ahx)**-GaIC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IPE++-NH 2(3aS,6S,21R,24S,27R,30S,33S,36S,39S,44aS,46aS,50aS,51aS,54S,57R,60S)-24,54,60-三[(2S)-丁烷-2-基]-33-(3-甲脒基丙基)-30,36-雙(羥甲基)-21,63,63-三甲基-39-(2-甲基丙基)-4,9,16,19, 22,25,28,31,34,37,40,45,52,55,58,61-十六側氧基六十二氫-1H,42H-27,57-(甲撐二硫代甲撐)二吡咯并[1',2':25,26;1'',2'':40,41][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,48]十六氮雜環五十四烴并[28,29-a]吲哚-6-甲醯胺
Figure 02_image217
實例 85
序列：(Dap)++-IC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IP** N-{3-[(3aS,7S,10S,13R,16S,19S,22S,25S,30aS,32aS,36aS,37aS,40S,43R,46S)-7-胺基-10,40,46-三[(2S)-丁烷-2-基]-16,22-雙(羥甲基)-49,49-二甲基-25-(2-甲基丙基)-4,8,11,14,17,20,23,26,31,38,41,44, 47-十三氧雜四十八氫-1H,28H-13,43-(甲撐二硫代甲撐)二吡咯并[2',1':18,19;2'',1'':3,4][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37]十三氮雜環四十烴并[16,15-a]吲哚-19-基]丙基}胍
Figure 02_image219
實例 86
序列：(Dap)++-(Dap)-IC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IP*** N-{3-[(3aS,7S,10S,13S,16R,19S,22S,25S,28S,33aS,35aS,39aS,40aS,43S,46R,49S)-7-胺基-10-(胺基甲基)-13,43,49-三[(2S)-丁烷-2-基]-19,25-雙(羥甲基)-52,52-二甲基-28-(2-甲基丙基)-4,8,11,14, 17,20,23,26,29,34,41,44,47,50-十四側氧基五十二氫-31H-16,46-(甲撐二硫代甲撐)二吡咯并[2',1':18,19;2'',1'':3,4][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40]十四氮雜環四十三烴并[16,15-a]吲哚-22-基]丙基}胍
Figure 02_image221
實例 87
序列：(Dap)**-IC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IP** N-{3-[(3aS,6S,9S,12R,15S,18S,21S,24S,29aR,31aS,35aS,36aS,39S,42R,45S)-6-(胺基甲基)-9,39,45-三[(2S)-丁烷-2-基]-15,21-雙(羥甲基)-48,48-二甲基-24-(2-甲基丙基)-4,7,10,13,16,19,22,25,30, 37,40,43,46-十三氧雜四十八氫-27H-12,42-(甲撐二硫代甲撐)二吡咯并[1',2':13,14; 1'',2'':37,38][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37]十三氮雜環三十九烴并[1,2-a]吲哚-18-基]丙基}胍
Figure 02_image223
實例 88序列：I**C+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IP** N-{3-[(6S,9S,12S,15S,18R,21S,23aS,29S,32R,35S,37aS,42aS)-21,29,35-三[(2S)-丁烷-2-基]-6-(2,2-二甲基­丙基)-9,15-雙(羥甲基)-43,43-二甲基-5,8,11,14,17,20,23,28,31,34,37,42-十二側氧基四十­氫-1H,5H-18,32-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[1,2-a:1',2'-d:1'',2''-p][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34]­十二氮雜環三十六烴-12-基]丙基}胍 鹽酸鹽
Figure 02_image225
實例 89
序列：(Dap)**-(Dap)-IC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IP** N-{3-[(3aS,6S,9S,12S,15R,18S,21S,24S,27S,32aR,34aS,38aS,39aS,42S,45R,48S)-6,9-雙(胺基甲基)-12, 42,48-三[(2S)-丁烷-2-基]-18,24-雙(羥甲基)-51,51-二甲基-27-(2-甲基丙基)-4,7,10,13,16,19, 22,25,28,33,40,43,46,49-十四側氧基五十氫-1H,30H-15,45-(甲撐二硫代甲撐)二吡咯并[1',2':13,14;1'',2'':40,41][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40]十四氮雜環四十二烴并[1,2-a]吲哚-21-基]丙基}胍
Figure 02_image227
實例 90
序列：E++GIC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IPK++-NH 2(3aS,6S,15S,21S,24R,27S,30S,33S,36S,43aS,47aS,48aS,51S,54R,57S)-15-胺基-21,51,57-三[(2S)-丁烷-2-基]-30-(3-甲脒基丙基)-27,33-雙(羥甲基)-60,60-二甲基-36-(2-甲基丙基)-4,12, 16,19,22,25,28,31,34,37,42,49,52,55,58-十五側氧基六十氫-39H-24,54-(甲撐二硫代甲撐)­二吡咯并[2',1':18,19;2'',1'':3,4][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,46]十五氮雜環五十一烴并[16,15-a]吲哚-6-甲醯胺
Figure 02_image229
實例 91
序列：E++GIC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IPDK+-NH 2[(3aS,6S,9S,18S,24S,27R,30S,33S,36S,39S,44aR,46aS,50aS,51aS,54S,57R,60S)-18-胺基-24,54,60-三[(2S)-丁烷-2-基]-33-(3-甲脒基丙基)-9-胺甲醯基-30,36-雙(羥甲基)-63,63-二甲基-39-(2-甲基丙基)-4,7,15,19,22,25,28,31,34,37,40,45,52,55,58,61-十六側氧基六十二氫-1H,42H-27,57-(甲撐二硫代甲撐)二吡咯并[2',1':21,22;2'',1'':6,7]­[1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,49]十六­氮雜環五十四烴并[19,18-a]吲哚-6-基]乙酸
Figure 02_image231
實例 92
序列：A**GGIC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IPD** [(3aS,6S,9S,18S,21R,24S,27S,30S,33S,38aS,40aS,44aS,45aS,48S,51R,54S)-18,48,54-三[(2S)-丁烷-2-基]-27-(3-甲脒基丙基)-24,30-雙(羥甲基)-9,57,57-三甲基-33-(2-甲基丙基)-4,7,10, 13,16,19,22,25,28,31,34,39,46,49,52,55-十六側氧基五十六氫-1H,36H-21,51-(甲撐二硫代甲撐)二吡咯并[1',2':13,14;1'',2'':46,47][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46]十六氮雜環四十八烴并[1,2-a]吲哚-6-基]乙酸
Figure 02_image233
實例 93
序列：E++GIC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IPD-(Dap)++-NH 2[(3aS,6S,9S,15S,21S,24R,27S,30S,33S,36S,41aS,43aS,47aS,48aS,51S,54R,57S)-15-胺基-21,51,57-三[(2S)-丁烷-2-基]-30-(3-甲脒基丙基)-9-胺甲醯基-27,33-雙(羥甲基)-60,60-二甲基-36-(2-甲基丙基)-4,7,12,16,19,22,25,28,31,34,37,42,49,52,55,58-十六側氧基六十氫-39H-24,54-(甲撐二硫代甲撐)二吡咯并[2',1':24,25;2'',1'':9,10][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46]十六氮雜環五十一烴并[22,21-a]吲哚-6-基]乙酸
Figure 02_image235
實例 94
序列：(Ahx)**-GIC+SRSLPPIC+IPD**(HCl鹽) [(6S,9S,12S,15S,18R,21S,34S,36aS,42S,45R,48S,50aS,55aS)-21,42,48-三[(2S)-丁烷-2-基]-12-(3-甲脒基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-6-(2-甲基丙基)-5,8,11,14,17,20,23,26,33,36,41,44,47,50,55-十五側氧基五十四氫-1H-18,45-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[2,1-f:2',1'-r:2'',1''-u][1,4,7,10, 13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]十五氮雜環四十九烴-34-基]乙酸 鹽酸鹽
Figure 02_image237
實例 95
序列：(Ahx)*-IC+SRSLP-(Oic)-IC+I* N-{3-[(6S,9S,12S,15S,18R,21S,31S,34R,37S,39aS,40aS,44aS,46aS)-21,31,37-三[(2S)-丁烷-2-基]-9,15-雙(羥甲基)-6-(2-甲基丙基)-5,8,11,14,17,20,23,30,33,36,39,46-十二側氧基四十六氫-1H,5H-18,34-(甲撐二硫代甲撐)吡咯并[2',1':15,16][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34]十二氮雜環四十烴并[13,12-a]吲哚-12-基]丙基}胍
Figure 02_image239
實例 96
序列：(Orn)**-GIC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IP** N-{3-[(6S,9S,12S,15S,18R,21S,27S,29aS,35S,38R,41S,43aS,48aS)-27-(3-胺基丙基)-21,35,41-三[(2S)-丁烷-2-基]-6-(2,2-二甲基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-49,49-二甲基-5,8,11,14,17,20,23,26,29,34, 37,40,43,48-十四側氧基四十六氫-1H,5H-18,38-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[1,2-a:1',2'-d:1'',2''-p][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40]十四氮雜環四十二烴-12-基]丙基}胍
Figure 02_image241
實例 97
序列：(Dap)**-(Dap)-IC+SRS-((tBu)A)-PPI-(Pen)+-IP** N-{3-[(6S,9S,12S,15S,18R,21S,24S,27S,29aS,35S,38R,41S,43aS,48aS)-24,27-雙(胺基甲基)-21,35,41-三[(2S)-丁烷-2-基]-6-(2,2-二甲基丙基)-9,15-雙(羥甲基)-49,49-二甲基-5,8,11,14,17,20,23,26, 29,34,37,40,43,48-十四側氧基四十六氫-1H,5H-18,38-(甲撐二硫代甲撐)三吡咯并[1,2-a:1', 2'-d:1'',2''-p][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40]十四氮雜環四十二烴-12-基]­丙基}胍
Figure 02_image243
實例 98
序列：A**GGIC+SRSLP-(Oic)-I-(Pen)+-IPd** [(3aS,6R,9S,18S,21R,24S,27S,30S,33S,38aS,40aS,44aS,45aS,48S,51R,54S)-18,48,54-三[(2S)-丁烷-2-基]-27-(3-甲脒基丙基)-24,30-雙(羥甲基)-9,57,57-三甲基-33-(2-甲基丙基)-4,7,10,13,16, 19,22,25,28,31,34,39,46,49,52,55-十六側氧基五十六氫-1H,36H-21,51-(甲撐二硫代甲撐)­二吡咯并[1',2':13,14;1'',2'':46,47][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46]十六氮雜環四十八­烴并[1,2-a]吲哚-6-基]乙酸
Figure 02_image245
活體外生物試驗 1. 試驗化合物之絲胺酸蛋白酶型態分析
在由不同人類絲胺酸蛋白酶組成之蛋白酶群組中測試試驗化合物，其等蛋白酶包括血漿激肽釋放酶、血纖維蛋白溶解酶、FXIa、凝血酶、因子Xa、tPA、與胰蛋白酶。 試驗說明
測定試驗化合物之抑制效力及/或選擇性。該分析法係依據產生螢光之肽蛋白酶受質受到蛋白酶催化裂解時所釋出胺基甲基香豆素(AMC)之螢光來檢測。活性蛋白酶或酶原通常從人類血漿中純化，或胰蛋白酶係從人類胰臟中純化，及對應受質則自商品取得。
絲胺酸蛋白酶分析法包括下列酵素及受質。所有酵素及受質均於分析緩衝液(50 mM Tris/HCl pH7.4，100 mM NaCl，5 mM CaCl2，0.1% BSA)中稀釋。最終分析濃度為 ․    血漿激肽釋放酶 (Kordia；0.2 nM)，H-Pro-Phe-Arg-AMC (Bachem I-1295；5 µM) ․    血纖維蛋白溶解酶 (Kordia；0.1 µg/mL，1.2 nM)，MeOSuc-Ala-Phe-Lys-AMC (Bachem I-1275；50 µM) ․    因子XIa (Kordia；0.15 nM)，Boc-Glu(OBzl)-Ala-Arg-AMC (Bachem I-1575；5 µM) ․    凝血酶 (Kordia；0.02 nM)，Boc-Asp(OBzl)-Pro-Arg-AMC (Bachem I-1560；5 µM) ․    因子Xa (Kordia；1.3 nM)，Boc-Ile-Glu-Gly-Arg-AMC (Bachem I-1100；5 µM) ․    組織血纖維蛋白溶酶原活化劑(tPA，Loxo；2 nM)，CH3SO2-D-Phe-Gly-Arg-AMC (Pentapharm 091-06；5 µM) ․    胰蛋白酶 (Sigma；0.042 U/mL)，受質Boc-Ile-Glu-Gly-Arg-AMC (Bachem I-1100；5 µM)
測定試驗化合物效力時，採用酵素及對應受質稀釋液進行蛋白酶分析法：
在包含1 µL/孔之試驗化合物或參考化合物連續稀釋液之384孔微滴定盤(白色，Greiner)中添加20 µL分析緩衝液、20 µl酵素稀釋液、及20 µl 受質。對照反應不包含試驗化合物(僅含DMSO)。通常於室溫下培養30 min(線性反應動力學)後，於微滴定盤螢光測定儀(例如：Tecan Safire II)中測定螢光(激發光360 nm，發射光465 nm)。由試驗化合物濃度log值相對於蛋白酶活性百分比作圖，決定IC 50值。 2. 生化人類MASP-1及MASP-2分析法 2.1重組人類MASP1及MASP2 活性蛋白酶之重組表現及蛋白質生產
取編碼對應於胺基酸297-699且具有C-末端His標籤及N-末端Ig-κ分泌訊號之片段之人類MASP1之截短cDNA 序列(SEQ ID No: 2)次選殖至哺乳動物表現載體pcDNA3.1 (Invitrogen)中。
取編碼對應於胺基酸297-686且具有C-末端His標籤及N-末端Ig-κ分泌訊號之片段之人類MASP1之截短cDNA 序列(SEQ ID No: 3)次選殖至哺乳動物表現載體pcDNA3.1 (Invitrogen)中。
取MASP1或MASP2表現載體，使用脂染胺試劑(Lipofectamine LTX® Reagent)(Thermo-Fischer)，依製造商之說明，轉染至HEK293 (ATCC No. CRL-1573)細胞株中。重組人類MASP1及MASP2 蛋白酶之成熟型分泌至培養基中。採用親和性層析法，於Ni-NTA Superflow 樹脂(Qiagen)上，依製造商說明，從條件培養基中純化MASP1及MASP2 蛋白質。 2.2  生化人類MASP1分析法
取在HEK 293細胞中產生之重組人類MASP1酵素於反應緩衝液(50 mM HEPES pH 8.0；100 mM NaCl；0.01% CHAPS；0.5 mM 穀胱甘肽)中稀釋成濃度20 nM，及取25 µl移至384-孔白色微滴定盤(Greiner Bio One 781075)之每一個孔中。取1 µl抑制劑化合物溶液(溶於DMSO，依對應濃度)或作為對照之純DMSO添加至相同孔中。添加25 µl含於反應緩衝液中之20 µM FRET 受質ABZ-MYGGARRL-Lys (Dnp)-NH 2；(ABZ - 2-胺基苯甲醯基；DNP - 2,4-二硝基苯基；由Jerini Peptide Technologies, Berlin訂製合成)之溶液，啟動酵素反應。微滴定盤於32℃溫度下培養60-120 min。於適當螢光盤測定儀(例如：TECAN Ultra)，使用激發波長320 nm及發射波長420 nm，測定所增加之螢光強度。以試驗化合物濃度為函數，由抑制人類MASP1活性百分比計算IC50值。 2.3  生化人類MASP2分析法
取在HEK 293細胞中產生之重組人類MASP2酵素於反應緩衝液(50 mM HEPES pH 8.0；100 mM NaCl；0.01% CHAPS；0.5 mM 穀胱甘肽)中稀釋成濃度20 nM，及取25 µl移至384-孔白色微滴定盤(Greiner Bio One 781075)之每一個孔中。取1 µl抑制劑化合物溶液(溶於DMSO，依對應濃度)或作為對照之純DMSO添加至相同孔中。添加25 µl含於反應緩衝液中之60 µM FRET 受質DABCYL-KISPQGYGRR-Glu(EDANS)-NH 2；(Dabcyl - 4 - ((4 - (二甲基胺基)苯基)偶氮)苯甲酸；Edans - 5-[(2-胺基乙基) 胺基]萘-1-磺醯基；由Jerini Peptide Technologies, Berlin訂製合成)之溶液，啟動酵素反應。微滴定盤於32℃溫度下培養60-120 min。於適當螢光盤測定儀(例如：TECAN Ultra)，使用激發波長340 nm及發射波長490 nm，測定所增加之螢光強度。以試驗化合物濃度為函數，由抑制人類MASP2活性百分比計算IC50值。 3. C3沉積分析法(人類、大鼠、小鼠、狗、豬)
基本上依(參考文獻)說明進行C3沉積分析法。在多孔分析盤(Greiner-Nunc 384 Maxi Sorp #464718)上塗佈來自釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)之甘露聚醣(Sigma M7504，10 µg/mL之0.05 M 碳酸鹽-碳酸氫鹽緩衝液，pH 9.6)，於4°C下一夜。使用TBS洗滌孔三次，接著與50 µL含1%牛血清白蛋白(BSA)之Tris-緩衝生理食鹽水(TBS)，於37°C下培養2小時，以阻斷非特異結合性。此步驟之後及每個培養步驟之後，使用C3洗滌緩衝液(TBS；0.05% Tween 20；5 mM CaCl 2)洗滌孔三次。分析孔接著與50 µL含試驗化合物及在Veronal緩衝液(Veronal Puffer (Lonza 12624E))中稀釋之血清之混合物於37°C下培養30 min。在預備試驗中不會對未塗佈之分析盤顯示可檢測之C3沉積之濃度即為所使用之血清濃度。已發現人類、大鼠、小鼠及狗血清之適當稀釋液在1：100 – 1：200範圍內，及對迷你豬血清則在1：20 – 1：100之範圍內。典型實驗中，化合物之試驗濃度在1x10 -9至5x10 -5mol/L之範圍內。洗滌後檢測 C3沉積，其係與多株兔子抗人類C3抗體(Dako (Biozol) A0062)培養1小時後，洗滌，及與接合過氧化酶之抗兔子IgG (Sigma A1949)於37°C下培養30 min，隨後洗滌，及與TMB 受質溶液於黑暗中培養。當發展出適當顏色時，添加 25 µL中止溶液(Sigma S5814)停止反應，並於光度計上，測定450 nm波長之吸光度進行定量。抗體係於補充0.5% BSA之C3洗滌緩衝液中稀釋。 4. 生化大鼠 MASP-1及MASP-2分析法 4.1 重組人類及大鼠MASP1及MASP2 活性蛋白酶之重組表現及蛋白質生產
取編碼對應於胺基酸302-704且具有C-末端His標籤及N-末端Ig-κ分泌訊號之片段之大鼠 MASP1之截短cDNA 序列(SEQ ID No: 4)次選殖至哺乳動物表現載體pcDNA3.1 (Invitrogen)中。
取編碼對應於胺基酸296-685且具有C-末端His標籤及N-末端Ig-κ分泌訊號之片段之大鼠 MASP2之截短cDNA 序列(SEQ ID No: 5)次選殖至哺乳動物表現載體pcDNA3.1 (Invitrogen)中。
取MASP1或MASP2表現載體，使用脂染胺試劑(Lipofectamine LTX® Reagent)(Thermo-Fischer)，依製造商之說明，轉染至HEK293 (ATCC No. CRL-1573)細胞株中。重組大鼠MASP1及MASP2 蛋白酶之成熟型分泌至培養基中。採用親和性層析法，於Ni-NTA Superflow 樹脂(Qiagen)上，依製造商說明，從條件培養基中純化MASP1及MASP2 蛋白質。 4.2 生化大鼠 MASP1分析法
取在HEK 293細胞中產生之重組大鼠MASP1酵素於反應緩衝液(50 mM HEPES pH 8.0；100 mM NaCl；0.01% CHAPS；0.5 mM 穀胱甘肽)中稀釋成濃度4 nM，及取25 µl移至384-孔白色微滴定盤(Greiner Bio One 781075)之每一個孔中。取1 µl抑制劑化合物溶液(溶於DMSO，依對應濃度)或作為對照之純DMSO添加至相同孔中。添加25 µl含於反應緩衝液中之40 µM FRET 受質Dabcyl-MYGGARRL-Glu(Edans)-NH2；(Dabcyl - 4 - ((4 - (二甲基胺基)苯基)偶氮)苯甲酸；Edans - 5-[(2-胺基乙基) 胺基]萘-1-磺醯基；由Jerini Peptide Technologies, Berlin訂製合成)之溶液，啟動酵素反應。微滴定盤於32℃溫度下培養60-120 min。於適當螢光盤測定儀(例如：TECAN Ultra)，使用激發波長340 nm及發射波長490 nm，測定所增加之螢光強度。以試驗化合物濃度為函數，由抑制大鼠 MASP2 活性百分比計算IC50值。 4.3 生化大鼠 MASP2分析法
取在HEK 293細胞中產生之重組大鼠MASP2酵素於反應緩衝液(50 mM HEPES pH 8.0；100 mM NaCl；0.01% CHAPS；0.5 mM 穀胱甘肽)中稀釋成濃度20 nM，及取25 µl移至384-孔白色微滴定盤(Greiner Bio One 781075)之每一個孔中。取1 µl抑制劑化合物溶液(溶於DMSO，依對應濃度)或作為對照之純DMSO添加至相同孔中。添加25 µl含於反應緩衝液中之30 µM FRET受質Abz-IEGRTSED-(Lys)Dnp-NH2；(ABZ - 2-胺基苯甲醯基；DNP - 2,4-二硝基苯基；由Jerini Peptide Technologies, Berlin訂製合成)之溶液，啟動酵素反應。微滴定盤於32℃溫度下培養60-120 min。於適當螢光盤測定儀(例如：TECAN Ultra)，使用激發波長320 nm及發射波長420 nm，測定所增加之螢光強度。以試驗化合物濃度為函數，由抑制大鼠 MASP2 活性百分比計算IC50值。 表 22 ：參考肽之平均 IC50
參考編號 人類 MASP1 IC50 [mol/L] 人類 MASP2 IC50 [mol/L] 人類 C3- 沉積血清 IC50 [mol/L]
2 ＞ 3.00 E-06 ＞ 3.00 E-06 ＞ 5.00 E-04
7 1.45 E-07 8.95 E-07 1.12 E-06
8 8.13 E-06   2.60 E-06
12 4.80 E-06 5.00 E-06 5.00 E-05
表 23 ：本發明肽之平均 IC50
實例編號 人類 MASP1 IC50 [mol/L] 人類 MASP2 IC50 [mol/L] 人類 C3- 沉積血清 IC50 [mol/L]
13 1.40 E-07 1.30 E-07 3.51 E-07
14 1.70 E-07 2.40 E-07 7.35 E-07
15 1.20 E-07 3.00 E-07 5.71 E-07
16 1.50 E-07 3.70 E-07 3.84 E-07
17 2.60 E-08 8.80 E-08 3.04 E-07
18 5.00 E-08 1.50 E-08 2.07 E-07
19 4.90 E-08 2.10 E-07 4.41 E-07
20 5.50 E-08 1.10 E-07 8.50 E-07
21 1.70 E-07 1.20 E-07 3.26 E-07
22 1.90 E-07 9.10 E-08 3.08 E-07
23 1.80 E-07 2.00 E-08 1.21 E-07
24 1.10 E-07 2.10 E-07 7.59 E-07
25 6.00 E-08 6.10 E-07 1.91 E-07
26 1.20 E-08 1.70 E-07 1.63 E-07
27 9.10 E-09 3.75 E-08 1.27 E-07
28 1.90 E-08 2.90 E-08 9.19 E-08
29 8.60 E-09 6.80 E-08 8.46 E-08
30 1.60 E-08 6.50 E-08 1.11 E-07
31 1.60 E-08 1.30 E-07 1.10 E-07
32 2.20 E-08 6.35 E-08 1.21 E-07
33 2.80 E-08 6.20 E-08 2.06 E-07
34 1.10 E-08 9.80 E-08 4.26 E-08
35 4.10 E-09 1.70 E-08 3.30 E-09
36 8.70 E-09 1.10 E-07 8.68 E-09
37 1.60 E-08 1.40 E-07 5.94 E-08
38 2.00 E-08 4.40 E-08 4.27 E-08
39 6.00 E-09 7.50 E-08 3.36 E-08
40 7.10 E-09 9.00 E-08 7.26 E-08
41 5.90 E-09 1.90 E-07 2.24 E-08
42 1.30 E-08 2.00 E-07 9.47 E-08
43 6.70 E-09 1.20 E-07 2.82 E-08
44 4.70 E-09 2.30 E-07 2.37 E-08
45 9.20 E-08 7.40 E-08 3.31 E-07
46 5.60 E-08 8.90 E-08 2.28 E-07
47 8.20 E-09 6.60 E-08 7.29 E-08
48 1.00 E-08 7.00 E-08 5.34 E-08
49 1.90 E-08 1.40 E-07 5.62 E-08
50 1.30 E-08 2.10 E-07 2.28 E-07
51 6.30 E-09 1.70 E-08 2.82 E-08
52 7.90 E-09 9.30 E-09 2.37 E-08
53 6.75 E-09 8.35 E-08 4.45 E-08
54 8.50 E-09 3.30 E-08 3.96 E-08
55 4.60 E-08 9.00 E-07 3.82 E-07
56 8.60 E-08 1.10 E-06 5.66 E-07
57 4.60 E-08 3.40 E-07 2.36 E-07
58 9.00 E-09 6.50 E-07 8.17 E-08
59 1.10 E-08 5.70 E-09 1.77 E-07
60 5.80 E-08 5.40 E-09 2.05 E-08
61 3.10 E-09 3.10 E-07 2.34 E-08
62 2.20 E-08 5.40 E-07 1.49 E-07
63 2.80 E-08 1.70 E-07 4.09 E-08
64 9.40 E-09 1.20 E-08 1.78 E-08
65 4.90 E-08 5.40 E-07 6.70 E-08
66 8.10 E-09 2.20 E-08 2.58 E-08
67 3.25 E-09 1.50 E-07 1.91 E-08
68 6.10 E-09 2.57 E-09 4.64 E-09
69 2.00 E-08 1.90 E-07 3.64 E-07
71 2.10 E-08 2.40 E-08 5.38 E-08
72 6.30 E-09 4.80 E-08 5.34 E-08
73 4.20 E-08 4.30 E-07 4.82 E-08
74 1.40 E-08 1.60 E-07 1.43 E-08
75 7.20 E-09 1.40 E-08 8.14 E-09
76 9.70 E-09 1.80 E-07 1.93 E-08
77 1.10 E-08 2.10 E-07 1.99 E-08
78 1.00 E-08 7.00 E-09 1.20 E-08
79 2.20 E-08 4.50 E-08 1.03 E-08
80 1.10 E-08 6.80 E-09 1.39 E-08
81 1.80 E-08 2.30 E-07 2.28 E-08
82 6.90 E-08 7.00 E-07 2.04 E-08
83 1.80 E-08 9.10 E-08 2.65 E-08
84 1.50 E-08 8.70 E-08 2.56 E-08
85 1.00 E-06 1.00 E-06 3.13 E-06
86 2.70 E-08 1.00 E-06 4.63 E-08
87 4.60 E-08 7.00 E-07 7.86 E-08
88 1.00 E-06 1.00 E-06 5.00 E-05
89 5.70 E-09 9.10 E-08 1.85 E-08
90 9.80 E-09 1.10 E-07 5.86 E-08
91 2.90 E-08 7.10 E-08 1.47 E-07
92 8.40E-09 7.70 E-8 1.11 E-07
93 3.50 E-08 4.50 E-08 2.74 E-07
94 1.20 E-07 1.30 E-07 1.02 E-06
95 1.00 E-07 1.10 E-07  
96 2.30 E-08 4.00 E-07 1.03 E-07
97 5.00 E-09 7.60 E-07 5.64 E-08
98 1.90 E-08 1.60 E-07 3.57 E-07
表 24 ：參考肽之平均 IC50
參考 物 編號 大鼠 MASP1 IC50 [mol/L] 大鼠 MASP2 |IC50 [mol/L] 大鼠 C3- 沉積血清 IC50 [mol/L]
2 1.00 E-06 1.00 E-06  
7 1.00 E-06 2.32 E-07 1.00 E-04
8 1.00 E-06 1.26 E-07 1.00 E-04
12 1.00 E-06 1.00 E-06  
表 25 ：本發明代表性肽之平均 IC50
實例編號 大鼠 MASP1 IC50 [mol/L] 大鼠 MASP2 |IC50 [mol/L] 大鼠 C3- 沉積血清 IC50 [mol/L]
28 7.90 E-08 1.60 E-08  
35 6.30 E-08 2.40 E-08  
39 4.40 E-08 8.00 E-09  
52 7.90 E-08 1.16 E-08  
53 9.60 E-08 1.90 E-08  
54 1.80 E-07 1.80 E-08  
58 1.10 E-07 4.60 E-08  
59 4.86 E-08 4.57 E-09  
60 3.30 E-07 1.30 E-08  
64 1.57 E-07 1.30 E-08  
68 3.08 E-08 2.97 E-09  
72 8.50 E-08 1.40 E-08  
75 2.70 E-08 1.40 E-09  
89 2.90 E-07 6.40 E-08  
92 1.70 E-07 4.10 E-08  
93 4.10 E-07 6.80 E-08  
98 1.70 E-07    
4. 單側腎臟切除後之大鼠腎臟缺血再灌流損傷(IRI)
所有過程均符合用於科學目的之動物的國家法規(dt. Tierschutzgesetz)及EU指令，並經過Bayer AG的動物保護辦公室機構及適格的區域管理部門(LANUV Recklinghausen)核准。可以自由取用標準實驗室飼料及自來水。典型實驗中，動物之使用數量為n = 6至12。動物隨機分配至實驗組別。在較佳體重在250至350 g範圍內之雄性單側腎臟切除威斯塔(Wistar)大鼠中進行腎臟缺血再灌流損傷(IRI)。單側腎臟切除之大鼠吸入含2%異氟烷(isoflurane)之空氣而維持麻醉。經皮下注射400 µl/kg之含25% Ketavet與8% Rompun之0.9 NaCl提供止痛效果。透過背外側腹壁中的小切口讓右腎突出後，切除單側腎臟並結紮腎臟腳部。切除單側腎臟後，利用手術縫線逐層縫合腹部切口，讓動物恢復7至8天後才進行IRI。IRI係在麻醉下進行，並如上述提供止痛效果。透過腹壁小切口讓剩餘的左腎突出，並利用無創傷之微血管夾，在典型設定下夾住腎臟腳血管45分鐘，此期間，腎臟連同原位的血管夾一起重新置入腹腔內，以確保溫熱的缺血。45 min後，打開夾子並移除，如上述利用縫線縫合切口。利用手術前即置入頸靜脈內之聚乙烯導管，經靜脈內投與試驗化合物或媒劑。
化合物溶於適當媒劑中，在IRI之前預防性投藥或在完成IRI之後醫療性投藥。採用之典型劑量範圍為0.1 – 30 mg/kg i.v.。對動物投與不含化合物之媒劑作為對照組。偽處理對照組動物則如上述進行完整手術過程，但不閉合用於誘發缺血之夾子。
在IRI之後第1天及第8天，在麻醉下取得血樣。在典型設定下，在IRI之後8天殺死動物，取出腎臟樣本，於液態氮中冷凍。在另一個典型設定下，在IRI之後1天殺死動物。
為了分析腎臟功能所測定血漿樣本之典型實驗室參數為肌酸酐及尿素。測定肌酸酐清除率時，動物保持在代謝籠中，收集尿液至少16小時。測定尿液體積流(V U)及測定尿與血漿肌酸酐濃度(分別為[Crea] U及[Crea] Pl)後，根據標準公式：Cl Crea= V U** [Crea] U/ [Crea] Pl計算肌酸酐清除率(Cl Crea)。
RNA萃取及定量性實時聚合酶鏈反應：採用Trizol法，從組織樣本中萃取總RNA。於生物分析儀(Bioanalyzer)(Agilent)上檢測所得RNA之完整性。進行逆轉錄時，取1 μg總RNA先使用無RNase之DNase I (Gibco)於室溫下消解15 min後，使用 Promiscript (Promega)，在總反應體積40 μl下，根據套組供應商之標準製程進行逆轉錄。加熱酵素至65 °C滅活15 min後，使用雙蒸餾水稀釋所得cDNA 至最終體積150 μl，每次PCR反應選用4 μl。依文獻說明(Ellinghaus等人，2005)進行之實時 PCR包括相對於作為管家基因之胞質β-肌動蛋白校正原始數據。所得表現係以任意單位表示，所採用寡核苷酸引子與探針之序列示於表1。 5. 豬之主動脈內氣球閉鎖後之腎臟缺血再灌流損傷 (IRI)
所有過程均符合用於科學目的之動物的國家法規(dt. Tierschutzgesetz)及EU指令，並經過Bayer AG的動物保護辦公室機構及適格的區域管理部門(LANUV Recklinghausen)核准。採用較佳體重在12至16 kg範圍內之雌性哥廷根(Göttingen)迷你豬(Ellegaard, Denmark)進行實驗。動物隨機分配至實驗組別。
採用文獻說明，修改最低侵入性方法( Simon 等人， Effects of intravenous sulfide during porcine aortic occlusion-induced kidney ischemia/reperfusion injury. Shock. 2011;35:156-163 ； Matejkova 等人， Carbamylated erythropoie tin -FC fusion protein and recombinant human erythropoietin during porcine kidney ischemia/reperfusion injury. Intensive Care Med. 2011;39:497–510)。簡言之，讓豬預先接受肌內注射Ketavet® / Stresnil®投藥後，藉由連續i.v.輸注 Ketavet®、Dormicum®及Pancuronium®，保持麻醉。經氣管內插管後的動物使用兒童呼吸器 (Avance CS², GE Healthcare)進行人工呼吸，氧氣-空氣混合物之潮氣體積為6至8 mL/kg，恆定吐氣末正壓(PEEP)為3 - 4 cm H 2O及頻率為13至20 min -1。調整通氣，保持基線時之動脈PaCO2為約40 mmHg。將導管置入右頸靜脈，供投與藥物與流體。林格氏(Ringer) -乳酸鹽溶液則經靜脈內，依恆定速率10 mL/kg/h輸注。動物接受50 i.E./kg肝素i.v.。採用已連接置入右頸動脈內之Pulsion 4F 熱稀釋導管(Thermodilution-catheter)(PV2014L08N)之PiCCO® 系統 (Pulsion, Germany)，在置入必要探針及加裝導管至適當壓力傳感器及記錄儀器後，例行測定下列心血管及呼吸參數：中樞靜脈壓(經由左頸靜脈)、動脈血壓及心跳速率(BP及HR；經由左頸動脈)及心輸出量(CO)與全身性血管阻力(SVR)。用於測定CVP、BP及HR之導管係利用Combitrans傳感器(Braun, REF 5203660)附接Ponemah記錄系統。取Fogarty閉鎖導管(8F/14F, Edwards Lifesiences, REF 6208014F)經由左股動脈插入腹主動脈，因此讓帶有可膨脹球囊的尖端位在腎臟動脈上游。經由腹部小切口插入導管至膀胱，供連續收集尿液。依規律間隔收集動脈血樣，測定其中肌酸酐、尿素、肝酵素、血球、及化合物濃度。在Stat Profile® PRIME® (Nova Biomedical)血液氣體分析儀上，依規律間隔測定動脈血樣之動脈pO 2、pCO 2及pH。採用加裝2.0至5.0 MHz廣譜弧型傳感器(C1-5-RS, REF 5384874)之LOGIQ e獸用超音波裝置(General Electrics)，依規律間隔，利用杜普勒(Doppler)超音波測定血流阻力指數，評估腎臟灌流。腎血流阻力指數(RRI)為評估患者中急性腎臟損傷嚴重性之合適參數( Darmon 等人， Diagnostic accuracy of Doppler renal resistive index for reversibility of acute kidney injury in critically ill patients. Intensive Care Med. 2011;37(1):68-76)。
當心血管參數顯示穩定基線時(其通常為手術後60 min)時，即開始記錄，並收集樣本的基線參數。連續測定HR及MABP，並記錄2分鐘間隔的平均值。實驗結束時，放血殺死豬。
使用生理食鹽水充滿Fogarty球囊導管的球囊，立即中斷流向腎臟及腹部器官的血流，並造成球囊上游主動脈血壓陡然上升，而誘發腎臟損傷。進一步利用杜普勒超音波檢查腎臟血管，證實血流已中斷。典型實驗中，主動脈保持閉鎖90至120 min，直到球囊洩氣後再灌流。再灌流後，加倍林格氏-乳酸鹽溶液輸注速率至20 mL/kg/h，以穩定血壓，並可以利尿。再灌流後，監測所有參數至長6小時。
化合物溶於適當媒劑中，在IRI 之前進行預防性投藥或在IRI完成後進行醫療性投藥。所採用之典型劑量範圍為0.1 – 10 mg/kg i.v.。典型實驗中，每組至多6隻動物，測試至多3個劑量。對動物投與不含化合物之媒劑作為對照組。偽處理對照組動物除了不誘發缺血外，其餘如上述進行完整過程。
再灌流後之腎臟功能測定較佳係(但不限於)利尿性、血清肌酸酐、血清鉀、血清碳酸氫鹽、及利用杜普勒超音波檢測之血流阻力指數。 表 26 ：序列表
SEQ ID No 序列
SEQ ID 1 G**RC+TKSIPPIC+FPD**
SEQ ID 2 METDTLLLWVLLLWVPGSTGDAGNECPELQPPVHGKIEPSQAKYFFKDQVLVSCDTGYKVLKDNVEMDTFQIECLKDGTWSNKIPTCKIVDCRAPGELEHGLITFSTRNNLTTYKSEIKYSCQEPYYKMLNNNTGIYTCSAQGVWMNKVLGRSLPTCLPVCGLPKFSRKLMARIFNGRPAQKGTTPWIAMLSHLNGQPFCGGSLLGSSWIVTAAHCLHQSLDPEDPTLRDSDLLSPSDFKIILGKHWRLRSDENEQHLGVKHTTLHPQYDPNTFENDVALVELLESPVLNAFVMPICLPEGPQQEGAMVIVSGWGKQFLQRFPETLMEIEIPIVDHSTCQKAYAPLKKKVTRDMICAGEKEGGKDACAGDSGGPMVTLNRERGQWYLVGTVSWGDDCGKKDRYGVYSYIHHNKDWIQRVTGVRNHHHHHH
SEQ ID 3 METDTLLLWVLLLWVPGSTGDAQPCPYPMAPPNGHVSPVQAKYILKDSFSIFCETGYELLQGHLPLKSFTAVCQKDGSWDRPMPACSIVDCGPPDDLPSGRVEYITGPGVTTYKAVIQYSCEETFYTMKVNDGKYVCEADGFWTSSKGEKSLPVCEPVCGLSARTTGGRIYGGQKAKPGDFPWQVLILGGTTAAGALLYDNWVLTAAHAVYEQKHDASALDIRMGTLKRLSPHYTQAWSEAVFIHEGYTHDAGFDNDIALIKLNNKVVINSNITPICLPRKEAESFMRTDDIGTASGWGLTQRGFLARNLMYVDIPIVDHQKCTAAYEKPPYPRGSVTANMLCAGLESGGKDSCRGDSGGALVFLDSETERWFVGGIVSWGSMNCGEAGQYGVYTKVINYIPWIENIISDFHHHHHH
SEQ ID 4 METDTLLLWVLLLWVPGSTGDAGNECPKLQPPVYGKIEPSQAVYSFKDQVLISCDTGYKVLKDNEVMDTFQIECLKDGAWSNKIPTCKIVDCGVPAVLKHGLVTFSTRNNLTTYKSEIRYSCQQPYYKMLHNTTGVYTCSAHGTWTNEVLKRSLPTCLPVCGLPKFSRKHISRIFNGRPAQKGTTPWIAMLSQLNGQPFCGGSLLGSNWVLTAAHCLHHPLDPEEPILHNSHLLSPSDFKIIMGKHWRRRSDEDEQHLHVKHIMLHPLYNPSTFENDLGLVELSESPRLNDFVMPVCLPEHPSTEGTMVIVSGWGKQFLQRLPENLMEIEIPIVNYHTCQEAYTPLGKKVTQDMICAGEKEGGKDACAGDSGGPMVTKDAERDQWYLVGVVSWGEDCGKKDRYGVYSYIYPNKDWIQRVTGVRNHHHHHH
SEQ ID 5 METDTLLLWVLLLWVPGSTGDTAQPCPDPTAPPNGHISPVQATYVLKDSFSVFCKTGFELLQGSVPLKSFTAVCQKDGSWDRPIPECSIIDCGPPDDLPNGHVDYITGPEVTTYKAVIQYSCEETFYTMSSNGKYVCEADGFWTSSKGEKSLPVCKPVCGLSTHTSGGRIIGGQPAKPGDFPWQVLLLGETTAAGALIHDDWVLTAAHAVYGKTEAMSSLDIRMGILKRLSLIYTQAWPEAVFIHEGYTHGAGFDNDIALIKLKNKVTINRNIMPICLPRKEAASLMKTDFVGTVAGWGLTQKGFLARNLMFVDIPIVDHQKCATAYTKQPYPGAKVTVNMLCAGLDRGGKDSCRGDSGGALVFLDNETQRWFVGGIVSWGSINCGGSEQYGVYTKVTNYIPWIENIINNFHHHHHH
SEQ ID 6 Abz-MYGGARRL-Lys (Dnp)-NH 2
SEQ ID 7 DABCYL-KISPQGYGRR-Glu(EDANS)-NH 2
SEQ ID 8 Dabcyl-MYGGARRL-Glu(Edans)-NH 2
SEQ ID 9 Abz-IEGRTSED-(Lys)Dnp-NH 2
SEQ ID 10 G**IC+SRSLPPIC+IPD**
SEQ ID 11 G**YC+SRSYPPVC+IPD**
SEQ ID 12 P**FC+IPPISKTC+RGD**
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無
無
無
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
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Claims (13)

  1. 一種雙環化合物，其可經單離及/或純化，其包含、基本上組成為、或組成為式(I)：
    Figure 03_image001
    (I) 或醫藥上可接受之鹽、溶劑合物或鹽之溶劑合物，其中 X 1代表天然胺基酸，其可呈D-或L-立體組態，係選自下列所組成的群組：丙胺酸、甘胺酸、離胺酸、半胱胺酸與麩胺酸，或代表選自下列所組成的群組之部份體：6-胺基己酸(Ahx)、L-2,3-二胺基丙酸(Dap)、L-2,4-二胺基丁酸(Dab)、3-疊氮基-L-丙胺酸、L-2-胺基丁酸(Abu)、γ-胺基丁酸(γ-Abu)、2-胺基異丁酸(Aib)、L-鳥胺酸(Orn)、1,13-二胺基-4,7,10-三氧雜十三烷-琥珀醯胺酸(TTDS)、9-胺基-4,7-二氧雜壬烷酸[PEG1(10個原子)]、12-胺基-4,7,10-三氧雜十二烷酸[PEG2(13個原子)]、15-胺基-4,7,10,13-四氧雜十五烷酸[PEG3(16個原子)]與己二酸，或X 1可能不存在， X 2代表天然胺基酸，其可呈D-或L-立體組態，係選自下列所組成的群組：甘胺酸與絲胺酸，或代表選自下列所組成的群組之部份體：N-甲基-甘胺酸、L-2,3-二胺基丙酸(Dap)、L-2,4-二胺基丁酸(Dab)、L-2-胺基丁酸(Abu)、γ-胺基丁酸(γ-Abu)、傳明酸(TXA)、3-(胺基甲基)苯甲酸與4-(胺基甲基)苯甲酸，或X 2可能不存在， X 3代表天然胺基酸，其可呈D-或L-立體組態，係選自下列所組成的群組：甘胺酸與丙胺酸，或X 3可能不存在， Ile 4代表L-異白胺酸， Cys 5代表L-半胱胺酸， Ser 6代表L-絲胺酸， Arg 7代表L-精胺酸， Ser 8代表L-絲胺酸， X 9代表L-白胺酸或L-第三丁基丙胺酸 [(tBu)A)]， Pro 10代表L-脯胺酸， X 11代表L-脯胺酸或2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氫吲哚-2-羧酸(Oic)， Ile 12代表L-異白胺酸， X 13代表L-半胱胺酸、L-N-甲基半胱胺酸 [(N-Me)C]或L-青黴胺(Pen)， Ile 14代表L-異白胺酸， X 15代表L-脯胺酸或2-胺基異丁酸(Aib)，或X 15可能不存在， X 16代表天然胺基酸，其可呈D-或L-立體組態，係選自下列所組成的群組：天冬胺酸與麩胺酸，或X 16可能不存在， X 17代表天然胺基酸，其可呈D-或L-立體組態，係選自下列所組成的群組：絲胺酸、半胱胺酸、脯胺酸與離胺酸，或代表選自下列所組成的群組之部份體：L-2,3-二胺基丙酸(Dap)、L-2,4-二胺基丁酸(Dab)與L-炔丙基甘胺酸，或X 17可能不存在， 其中Cys 5與X 13係利用兩個基團的硫原子之間之二硫鍵連接，形成第一個環， 其中在N-末端之X 1(若X 1存在時)、X 2(若X 1不存在且X 2存在時)、X 3(若X 1與X 2不存在且X 3存在時)或Ile 4(若X 1、X 2與X 3均不存在時)與C-末端之Ile 14(若X 15、X 16與X 17均不存在時)、X 15(若X 16與X 17不存在且X 15存在時)、X 16(若X 17不存在且X 16存在時)或X 17(若X 17存在時)之間形成第二個環， 且其中可能利用主幹中之α-肽鍵或利用一或兩個胺基酸側鏈形成此等第二個環，其中若未使用C-末端羧酸形成該第二個環時，則該C-末端羧基可能轉化成醯胺基， 其中若X 1代表3-疊氮基-L-丙胺酸及X 17代表L-炔丙基甘胺酸時，所形成之環產生1,2,3-三唑環，其附接在相對於丙胺酸之1-位置及相對於甘胺酸之4-位置。
  2. 如請求項1之雙環化合物，其可經單離及/或純化，其包含、基本上組成為、或組成為式(I)或其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物或鹽之溶劑合物，其中 X 1代表選自下列所組成的群組之天然胺基酸：D-丙胺酸、L-丙胺酸、甘胺酸、D-離胺酸、L-離胺酸、L-半胱胺酸與L-麩胺酸，或代表選自下列所組成的群組之部份體：6-胺基己酸(Ahx)、L-2,3-二胺基丙酸(Dap)、L-2,4-二胺基丁酸(Dab)、γ-胺基丁酸(γ-Abu)、L-鳥胺酸(Orn)、1,13-二胺基-4,7,10-三氧雜十三烷-琥珀醯胺酸(TTDS)、9-胺基-4,7-二氧雜壬烷酸[PEG1(10個原子)]、15-胺基-4,7,10,13-四氧雜十五烷酸[PEG3(16個原子)]與己二酸，或X 1可能不存在， X 2代表選自下列所組成的群組之天然胺基酸：甘胺酸與L-絲胺酸，或代表選自下列所組成的群組之部份體：N-甲基-甘胺酸、L-2,3-二胺基丙酸(Dap)、L-2,4-二胺基丁酸(Dab)、L-2-胺基丁酸(Abu)、傳明酸(TXA)、與4-(胺基甲基)苯甲酸，或X 2可能不存在， X 3代表選自下列所組成的群組之天然胺基酸：甘胺酸、L-丙胺酸與D-丙胺酸，或X 3可能不存在， Ile 4代表L-異白胺酸， Cys 5代表L-半胱胺酸， Ser 6代表L-絲胺酸， Arg 7代表L-精胺酸， Ser 8代表L-絲胺酸， X 9代表L-白胺酸或L-第三丁基丙胺酸 [(tBu)A)]， Pro 10代表L-脯胺酸， X 11代表L-脯胺酸或2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氫吲哚-2-羧酸(Oic)， Ile 12代表L-異白胺酸， X 13代表L-半胱胺酸、L-N-甲基半胱胺酸 [(N-Me)C]或L-青黴胺(Pen)， Ile 14代表L-異白胺酸， X 15代表L-脯胺酸，或X 15可能不存在， X 16代表選自下列所組成的群組之天然胺基酸：L-天冬胺酸、D-天冬胺酸與L-麩胺酸，或X 16可能不存在， X 17代表選自下列所組成的群組之天然胺基酸：L-絲胺酸、L-半胱胺酸、L-脯胺酸與L-離胺酸，或代表選自下列所組成的群組之部份體：L-2,3-二胺基丙酸(Dap)，或X 17可能不存在， 其中 Cys 5與X 13係利用兩個基團的硫原子之間之二硫鍵連接，形成第一個環， 其中在N-末端之X 1(若X 1存在時)、X 2(若X 1不存在且X 2存在時)、X 3(若X 1與X 2不存在且X 3存在時)或Ile 4(若X 1、X 2與X 3均不存在時)與C-末端之Ile 14(若X 15、X 16與X 17均不存在時)、X 15(若X 16與X 17不存在且X 15存在時)、X 16(若X 17不存在且X 16存在時)或X 17(若X 17存在時)之間形成第二個環， 且其中可能利用主幹中之α-肽鍵或利用一或兩個胺基酸側鏈形成此等第二個環，其中若未使用C-末端羧酸形成該第二個環時，則該C-末端羧基可能轉化成醯胺基。
  3. 如請求項1或2之雙環化合物，其可以單離及/或純化，包含、基本上組成為、或組成為式(I)或其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物或鹽之溶劑合物，其中 X 1代表選自下列所組成的群組之天然胺基酸：L-丙胺酸、甘胺酸、L-離胺酸與L-麩胺酸，或代表選自下列所組成的群組之部份體：6-胺基己酸(Ahx)、L-2,3-二胺基丙酸(Dap)、L-2,4-二胺基丁酸(Dab)、γ-胺基丁酸(γ-Abu)、L-鳥胺酸(Orn)、1,13-二胺基-4,7,10-三氧雜十三烷-琥珀醯胺酸(TTDS)、9-胺基-4,7-二氧雜壬烷酸[PEG1(10個原子)]、15-胺基-4,7,10,13-四氧雜十五烷酸[PEG3(16個原子)]與己二酸， X 2代表選自下列所組成的群組之天然胺基酸：甘胺酸與L-絲胺酸，或代表選自下列所組成的群組之部份體：N-甲基-甘胺酸、L-2,3-二胺基丙酸(Dap)、L-2-胺基丁酸(Abu)、傳明酸(TXA)、與4-(胺基甲基)苯甲酸，或X 2可能不存在， X 3代表選自下列所組成的群組之天然胺基酸：甘胺酸與L-丙胺酸，或X 3可能不存在， Ile 4代表L-異白胺酸， Cys 5代表L-半胱胺酸， Ser 6代表L-絲胺酸， Arg 7代表L-精胺酸， Ser 8代表L-絲胺酸， X 9代表L-白胺酸或L-第三丁基丙胺酸 [(tBu)A)]， Pro 10代表L-脯胺酸， X 11代表L-脯胺酸或2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氫吲哚-2-羧酸(Oic)， Ile 12代表L-異白胺酸， X 13代表L-N-甲基半胱胺酸 [(N-Me)C]或L-青黴胺(Pen)， Ile 14代表L-異白胺酸， X 15代表L-脯胺酸，或X 15可能不存在， X 16代表選自下列所組成的群組之天然胺基酸：L-天冬胺酸與L-麩胺酸，或X 16可能不存在， X 17代表選自下列所組成的群組之天然胺基酸：L-脯胺酸與L-離胺酸，或代表選自下列所組成的群組之部份體：L-2,3-二胺基丙酸(Dap)，或X 17可能不存在， 其中 Cys 5與X 13係利用兩個基團的硫原子之間之二硫鍵連接，形成第一個環， 其中在N-末端之X 1與C-末端之Ile 14(若X 15、X 16與X 17均不存在時)、X 15(若X 16與X 17不存在且X 15存在時)、X 16(若X 17不存在且X 16存在時)或X 17(若X 17存在時)之間形成第二個環， 且其中可能利用主幹中之α-肽鍵或利用一或兩個胺基酸側鏈形成此等第二個環，其中若未使用C-末端羧酸形成該第二個環時，則該C-末端羧基可能轉化成醯胺基。
  4. 如請求項1、2、或3中任一項之雙環化合物，其可以單離及/或純化，包含、基本上組成為、或組成為式(I)或其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物或鹽之溶劑合物，其中 X 1代表選自下列所組成的群組之天然胺基酸：L-丙胺酸與甘胺酸、L-離胺酸，或代表選自下列所組成的群組之部份體：6-胺基己酸(Ahx)、L-2,3-二胺基丙酸(Dap)、γ-胺基丁酸(γ-Abu)、L-鳥胺酸(Orn)， X 2代表天然胺基酸甘胺酸，或代表選自下列所組成的群組之部份體：L-2,3-二胺基丙酸(Dap)、L-2-胺基丁酸(Abu)、傳明酸(TXA)、與4-(胺基甲基)­苯甲酸，或X 2可能不存在， X 3代表選自下列所組成的群組之天然胺基酸：甘胺酸與L-丙胺酸，或X 3可能不存在， Ile 4代表L-異白胺酸， Cys 5代表L-半胱胺酸， Ser 6代表L-絲胺酸， Arg 7代表L-精胺酸， Ser 8代表L-絲胺酸， X 9代表L-第三丁基丙胺酸 [(tBu)A)]， Pro 10代表L-脯胺酸， X 11代表2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氫吲哚-2-羧酸(Oic)， Ile 12代表L-異白胺酸， X 13代表L-青黴胺(Pen)， Ile 14代表L-異白胺酸， X 15代表L-脯胺酸，或X 15可能不存在， X 16代表選自下列所組成的群組之天然胺基酸：L-天冬胺酸與L-麩胺酸，或X 16可能不存在， X 17不存在， 其中 Cys 5與X 13係利用兩個基團的硫原子之間之二硫鍵連接，形成第一個環， 其中在N-末端之X 1與C-末端之Ile 14(若X 15與X 16不存在時)、X 15(若X 16不存在且X 15存在時)或X 16(若X 16存在時)之間形成第二個環， 且其中可能利用主幹中之α-肽鍵或利用一或兩個胺基酸側鏈形成此等第二個環，其中若未使用C-末端羧酸形成該第二個環時，則該C-末端羧基可能轉化成醯胺基。
  5. 如請求項1、2、3、或4中任一項之雙環化合物，其可經單離及/或純化，其包含、基本上組成為、或組成為式(I)或其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物或鹽之溶劑合物，其中 X 1存在。
  6. 如請求項1至5中任一項之雙環化合物或其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物或鹽之溶劑合物，其作用係作為MASP-1與/或MASP-2抑制劑及/或抑制C3沉積。
  7. 一種製備如請求項1至6中任一項之雙環化合物或其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物或鹽之溶劑合物之方法，其係使用固相肽合成法。
  8. 如請求項1至6中任一項之雙環化合物或其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物或鹽之溶劑合物，其用於預防及治療疾病。
  9. 如請求項1至6中任一項之雙環化合物或其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物或鹽之溶劑合物，其用於預防及治療心血管及心肺疾患、休克、發炎疾患、敗血病之心血管、肺、腦及腎後遺症、缺血及/或再灌流相關傷害、急性腎損傷、移植物保護及延遲的移植物功能、血液與形成血液之器官及免疫系統之疾病、糖尿病後遺症、神經系統發炎疾病、眼睛疾病、皮膚疾病、呼吸、消化或生殖泌尿系統疾病、及燒傷與受傷之後遺症。
  10. 一種醫藥組成物，其包含至少一種如請求項1至6中任一項之雙環化合物或其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物或鹽之溶劑合物，其係與一或多種惰性、無毒之醫藥上可接受之賦形劑組合。
  11. 一種醫藥組成物，其包含至少一種如請求項1至6中任一項之雙環化合物或其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物或鹽之溶劑合物，其係與一或多種選自下列所組成的群組之其他活性成份組合：磷酸二酯酶之抑制劑、鳥苷酸環化酶之刺激劑或活化劑、IP受體促效劑、礦物皮質酮受體拮抗劑、利尿劑、PPAR-γ促效劑、PPAR-δ促效劑、皮質類固醇、降低氧化壓力下之器官傷害之活性成份、抑制誘發細胞死亡及細胞凋亡途徑之化合物、抑制發炎反應及T細胞增生之化合物、抗血栓劑、血小板凝集抑制劑、凝血酶抑制劑、GPIIb/IIIa拮抗劑、因子Xa抑制劑、肝素或低分子量(LMW)肝素衍生物、及凝血因子XI之抑制劑。
  12. 如請求項10或11之醫藥組成物，供預防及/或治療心血管及心肺疾患、休克、發炎疾患、敗血病之心血管、肺、腦及腎後遺症、缺血及/或再灌流相關傷害、急性腎損傷、移植物保護及延遲的移植物功能、血液與形成血液之器官及免疫系統之疾病、糖尿病後遺症、神經系統發炎疾病、眼睛疾病、皮膚疾病、呼吸、消化或生殖泌尿系統疾病、及燒傷與受傷之後遺症。
  13. 一種治療及/或預防人類或動物之心血管及心肺疾患、休克、發炎疾患、敗血病之心血管、肺、腦及腎後遺症、缺血及/或再灌流相關傷害、急性腎損傷、移植物保護及延遲的移植物功能、血液與形成血液之器官及免疫系統之疾病、糖尿病後遺症、神經系統發炎疾病、眼睛疾病、皮膚疾病、呼吸、消化或生殖泌尿系統疾病、及燒傷與受傷之後遺症之方法，其係投與有效量之至少一種如請求項1至6中任一項所定義之雙環化合物，或如請求項10或11之醫藥組成物。
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