TW202220989A - 含二并環類衍生物抑制劑自由鹼的晶型及其製備方法和應用 - Google Patents

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Abstract

本發明關於一種含二并環類衍生物抑制劑自由鹼的晶型及其製備方法和應用。具體關於通式(I)所示的化合物的晶型、製備方法及含有治療有效量的該化合物晶型的藥物組合物，及其作為RET抑制劑在治療癌症、炎症、慢性肝病、糖尿病、心血管疾病和AIDS等疾病中的應用。

Description

含二并環類衍生物抑制劑自由鹼的晶型及其製備方法和應用
本發明要求申請日為2020年11月13日的中國專利申請2020112717256和申請日為2021年11月11日的中國專利申請202111333586X的優先權。本發明引用上述中國專利申請的全文。
本發明屬於醫藥生物領域，具體關於一種含二并環類衍生物抑制劑自由鹼的晶型及其製備方法和應用。
RET(rearranged during transfection)蛋白由位於10號染色體上的原癌基因RET編碼，是一種受體酪胺酸激酶，由胞外區、跨膜區以及胞內激酶區組成。RET配體為神經膠質細胞源性的神經營養因子(GDNF)家族配體(GFLs)如GDNF、 neurturin(NRTN)、artemin(ARTN)、persephin(PSPN)，活化受體還需要共受體GFRα家族的共同作用，GFLs與GFRα組成二聚體，結合RET並將其招募到富含膽固醇的膜區，RET蛋白進行二聚化並發生自磷酸化，從而活化下游的RAS-MAPK，PI3K-AKT，PKC等訊號傳遞路徑。RET在胚胎發育過程中對腎臟以及腸道神經系統的發育發揮重要作用；且對於神經內分泌、造血及男性生殖細胞等組織的穩態也同樣重要。
RET蛋白功能的紊亂導致了多種疾病的發生。發育過程中RET蛋白功能缺失會導致一系列先天性疾病如先天性巨結腸(Hirschsprung's discase，HSCR)、先天性腎臟和尿道畸形(CAKUT)等。而RET蛋白的活化突變包括點突變以及染色體重排產生的RET蛋白融合也與多種疾病的發生有關。RET融合主要發生在1~2%的非小細胞肺癌(NSCLC)患者及5~10%的甲狀腺乳突狀癌中，而RET突變主要發生在60%的甲狀腺髓樣癌中，另外RET蛋白的活化突變在許多其他腫瘤如乳腺癌、胃癌、腸癌、慢性骨髓單核細胞性白血病等中均有發現。
雖然存在較大的臨床需求，但是目前針對RET靶點的治療仍存在極大的局限性，不同於ALK、EGFR等靶向藥在臨床中取得了極好的療效，RET靶點目前仍沒有獲批的靶向藥。目前臨床用藥多選用多激酶抑制劑(MKI)如凡德替尼、卡博替尼等，這些多激酶抑制劑由於選擇性差，存在著副作用高，藥效差的缺點，而且也無法克服治療過程中出現的耐藥問題。
對於RET靶向藥的需求吸引了大批國內外製藥公司開展RET特異性靶向藥的研發，其中比較突出的是Loxo Oncology公司的LOXO-292，已進入臨床I/II期，以及Blueprint公司的BLU-667，也已進入臨床I期。這兩個靶向藥均在前期的臨床實驗中針對RET活化突變的病人表現出了非常好的療效以及很好的安全性，同時在臨床前的活性篩選中也克服了可能發生的耐藥突變，預期未來可以為RET活化突變的癌症帶來更多的治療選擇。
RET靶點目前沒有特異的靶向藥，存在較大的臨床需求。選擇性更高、活性更好、安全性更佳、且能克服耐藥突變的RET抑制劑有治療多種癌症的潛力，具有廣闊的市場前景。
江蘇豪森藥業集團有限公司的PCT專利（申請號：PCT/CN2020/090142）中公開了一系列含二并環類衍生物抑制劑的結構，在後續的研發中，為了簡化過程製備方法，提高穩定性和生物利用度等，本發明對上述物質的自由鹼進行了全面的研究，致力於得到適合後期藥物開發的過程操作簡單、易於存儲且高生物利用度的穩定晶型。
專利PCT/CN2020/090142中所涉及的所有內容均以引證的方式添加到本發明中。
本發明的目的在於提供一種通式(I)所示化合物的晶型，
Figure 02_image003
其中： L選自-CH 2-或-NHC(O)-； M選自CR或N； R選自氫、氘、鹵素、胺基、硝基、羥基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6氘代烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8環烷基、3-8元雜環基、C 6-10芳基或5-12元雜芳基； X 1選自CR a或N； X 2選自CR b或N； R a和R b各自獨立地選自氫、氘、鹵素、胺基、硝基、羥基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6氘代烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8環烷基、3-8元雜環基、C 6-10芳基或5-12元雜芳基； R 1、R 2和R 3各自獨立地選自氫、氘、鹵素、胺基、硝基、羥基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6氘代烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8環烷基、3-8元雜環基、C 6-10芳基或5-12元雜芳基； R 4選自C 2-6烯基、C 2-6炔基、3-8元雜環基、-O(CH 2) mR 5、-(CH 2) mR 5、-NR 6(CH 2) mR 5、-NR 6C(O)R 5、-CH=CH-(CH 2) mR 5、-O(CH 2) mS(O)R 5、-O(CH 2) mS(O) 2R 5或-O(CH 2) mS(O)(=NH)R 5，C 2-6烯基、C 2-6炔基和3-8元雜環基，任選地進一步被氘、鹵素、胺基、硝基、羥基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6氘代烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8環烷基、3-12元雜環基、C 6-10芳基和5-12元雜芳基中的一個或多個取代基所取代； R 5和R 6各自獨立地選自氫、氘、鹵素、胺基、硝基、羥基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6氘代烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8環烷基、3-8元雜環基、C 6-10芳基或5-12元雜芳基，C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6氘代烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8環烷基、3-8元雜環基、C 6-10芳基和5-12元雜芳基，任選地進一步被氘、鹵素、胺基、硝基、羥基、氰基、氧代基、硫代基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6氘代烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8環烷基、3-8元雜環基、C 6-10芳基、5-12元雜芳基、=NH、-(CH 2) tR 7、-(CH 2) tOR 7和-(CH 2) tC(O)NR 7R 8中的一個或多個取代基所取代； R 7和R 8各自獨立地選自氫、氘、鹵素、胺基、硝基、羥基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6氘代烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8環烷基、3-8元雜環基、C 6-10芳基或5-12元雜芳基，C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6氘代烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8環烷基、3-8元雜環基、C 6-10芳基和5-12元雜芳基，任選地進一步被氘、鹵素、胺基、硝基、羥基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6氘代烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8環烷基、3-8元雜環基、C 6-10芳基和5-12元雜芳基中的一個或多個取代基所取代； n為0、1、2或3； m為0、1、2或3；且 t為0、1、2或3。
在本發明進一步優選的實施方式中，M選自CR或N； R選自氫、胺基或C 1-3烷基； 優選氫、胺基或甲基； X 1選自CR a或N； X 2選自CR b或N； R a和R b選自各自獨立地選自氫、氘、鹵素、C 1-3烷基或C 1-3烷氧基； 優選氫、氟、氯、甲基或甲氧基； R 1、R 2和R 3各自獨立地選自氫、氘、鹵素、C 1-3烷基或C 1-3烷氧基； 優選氫、氟、氯、甲基或甲氧基。
在本發明進一步優選的實施方式中，R 4選自C 2-3炔基、C 2-3烯基、3-8元含氮或氧原子的雜環基、-O(CH 2) mR 5、-(CH 2) mR 5、-NR 6(CH 2) mR 5、-NHC(O)R 5、-CH=CH-(CH 2) mR 5、-O(CH 2) mS(O)R 5、-O(CH 2) mS(O) 2R 5或-O(CH 2) mS(O)(=NH)R 5，所述的3-8元含氮或氧原子的雜環基，任選地進一步被氘、氟、氯、溴、胺基、羥基、氰基、C 1-3烷基、C 1-3羥烷基或C 1-3烷氧基中的一個或多個取代基所取代； 優選乙烯基、乙炔基、氧雜環丁烷基、氮雜環丁烷基、吡咯啶基、哌啶基、2-氮雜螺[3.3]庚烷基、-OCH 2R 5、-O(CH 2) 2R 5、-(CH 2) 2R 5、-NR 6(CH 2) mR 5、-NHC(O)R 5、-CH=CH-(CH 2) mR 5、-O(CH 2) mS(O)R 5、-O(CH 2) mS(O) 2R 5或-O(CH 2) mS(O)(=NH)R 5，乙烯基、乙炔基、氧雜環丁烷基、氮雜環丁烷基、吡咯啶基、哌啶基和2-氮雜螺[3.3]庚烷基，任選地進一步被氘、羥基、氰基、甲基、羥基乙基、2-羥基異丙基、2-胺基異丙基中的一個或多個取代基所取代； R 5選自氫、氘、鹵素、胺基、硝基、羥基、氰基、C 1-3烷基、C 1-3氘代烷基、C 1-3鹵代烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3氘代烷氧基、C 1-3鹵代烷氧基、C 1-3羥烷基、C 2-3烯基、C 2-3炔基、C 3-6環烷基或3-8元雜環基，C 1-3烷基、C 1-3氘代烷基、C 1-3鹵代烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3氘代烷氧基、C 1-3鹵代烷氧基、C 1-3羥烷基、C 2-3烯基、C 2-3炔基、C 3-3環烷基和3-8元雜環基，任選地進一步被氘、鹵素、胺基、硝基、羥基、氰基、C 1-3烷基、C 1-3氘代烷基、C 1-3鹵代烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3氘代烷氧基、C 1-3鹵代烷氧基、C 1-3羥烷基、C 2-3烯基、C 2-3炔基、C 3-6環烷基、3-8元雜環基、-CH 2R 7、-CH 2OR 7和-C(O)NR 7R 8中的一個或多個取代基所取代； 優選甲基、乙基、異丙基、環丙基、環丁基、環戊基、乙炔基、氧雜環丁基、硫雜環丁基、氮雜環丁基、四氫吡喃基、雙環[1.1.1]戊烷基或四氫-2H-硫代吡喃，甲基、乙基、異丙基、環丙基、環丁基、環戊基、氧雜環丁基、硫雜環丁基、氮雜環丁基、四氫吡喃基、雙環[1.1.1]戊烷基和四氫-2H-硫代吡喃，任選地進一步被氘、羥基、胺基、氰基、氟、氯、溴、甲氧基、乙炔基、環丙基、羥乙基、氧代基、=NH、-CH 2OCH 3、-C(O)NH 2和-C(O)NHCH 3中的一個或多個取代基所取代； R 6選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基或C 1-3烷基； 優選氫、氘或甲基； R 7和R 8各自獨立地選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基或C 1-3烷基； 優選氫、氘或甲基； n為0、1、2或3；且 m為0、1、2或3。
在本發明進一步優選的實施方式中，所述的化合物，進一步為通式(II)所示：
Figure 02_image005
R 2選自氫、氟或氯； R 4選自-O(CH 2) mR 5、-(CH 2) mR 5或-NR 6(CH 2) mR 5， R 5選自C 2-3炔基，任選地進一步被氘、鹵素、胺基、硝基、羥基、氰基、C 1-3烷基、C 1-3氘代烷基、C 1-3鹵代烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3氘代烷氧基、C 1-3鹵代烷氧基、C 1-3羥烷基或C 3-6環烷基中的一個或多個取代基所取代。
在本發明進一步優選的實施方式中，化合物為6-(((R)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈，其中，晶型為晶型I、晶型II、晶型III、晶型IV或晶型V。
最優選地，在本發明進一步優選的實施方式中，實施例63所示化合物6-(((R)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈晶型I。
晶型I的X光粉末繞射圖譜在2θ為5.0±0.2°處具有繞射峰；或者在9.6±0.2°處具有繞射峰；或者在15.0±0.2°處具有繞射峰；或者在17.2±0.2°處具有繞射峰；或者在22.2±0.2°處具有繞射峰；或者在19.4±0.2°處具有繞射峰；或者在30.2±0.2°處具有繞射峰；或者在8.2±0.2°處具有繞射峰；或者在25.1±0.2°處具有繞射峰；或者在26.9±0.2°處具有繞射峰；優選包含上述繞射繞射峰中的任意2-5處，或者3-5處，或者3-6處，或者3-8處，或者5-8處，或者6-8處；更優選包含其中任意6處、7處或8處，
晶型I的X光粉末繞射圖譜在2θ為5.0±0.2°處具有繞射峰；或者在8.2±0.2°處具有繞射峰；或者在9.6±0.2°處具有繞射峰；或者在12.9±0.2°處具有繞射峰；或者在15.0±0.2°處具有繞射峰；或者在17.2±0.2°處具有繞射峰；或者在15.4±0.2°處具有繞射峰；或者在16.6±0.2°處具有繞射峰；或者在17.7±0.2°處具有繞射峰；或者在18.5±0.2°處具有繞射峰；優選包含上述繞射繞射峰中的任意2-5處，或者3-5處，或者3-6處，或者3-8處，或者5-8處，或者6-8處；更優選包含其中任意6處、7處或8處；
作為一種具體示例，晶型I的X光粉末繞射圖譜至少包含位於2θ為5.0±0.2°、9.6±0.2°、15.0±0.2°中的一處或多處繞射峰，優選包含其中2處，更優選包含3處；任選的，進一步還可以包含2θ為17.2±0.2°、22.2±0.2°、19.4±0.2°、30.2±0.2°或8.2±0.2°中的至少一處，優選包含其中2處、3處、4處或5處；
包含位於2θ為5.0±0.2°、9.6±0.2°、15.0±0.2°、17.2±0.2°、22.2±0.2°和19.4±0.2°處的繞射峰；
或者，包含位於2θ為5.0±0.2°、9.6±0.2°、15.0±0.2°、17.2±0.2°、22.2±0.2°和8.2±0.2°處的繞射峰；
或者，包含位於2θ為5.0±0.2°、9.6±0.2°、15.0±0.2°、17.2±0.2°、22.2±0.2°、19.4±0.2°和8.2±0.2°處的繞射峰，
晶型I的X光粉末繞射圖譜至少包含位於2θ為5.0±0.2°、8.2±0.2°、9.6±0.2°中的一處或多處繞射峰，優選包含其中2處，更優選包含3處；任選的，進一步還可以包含2θ為12.9±0.2°、15.0±0.2°、17.2±0.2°、15.4±0.2°或16.6±0.2°中的至少一處，優選包含其中2處、3處、4處或5處； 包含位於2θ為5.0±0.2°、8.2±0.2°、9.6±0.2°、12.9±0.2°、15.0±0.2°和17.2±0.2°處的繞射峰；
或者，包含位於2θ為8.2±0.2°、9.6±0.2°、12.9±0.2°、15.0±0.2°、17.2±0.2°和15.4±0.2°處的繞射峰；
或者，包含位於2θ為9.6±0.2°、12.9±0.2°、15.0±0.2°、17.2±0.2°、15.4±0.2°和16.6±0.2°處的繞射峰；
或者，包含位於2θ為5.0±0.2°、9.6±0.2°、12.9±0.2°、15.0±0.2°、17.2±0.2°和15.4±0.2°處的繞射峰；
或者，包含位於2θ為8.2±0.2°、12.9±0.2°、15.0±0.2°、17.2±0.2°、15.4±0.2°和16.6±0.2°處的繞射峰；
優選地，晶型I的X光粉末繞射圖譜任選還包含位於2θ為10.0±0.2°、25.4±0.2°、26.9±0.2°、13.0±0.2°、12.9±0.2°或20.0±0.2中的一處或多處繞射峰；優選至少包含其中任意2-3處，或者4-5處，或者6-7處；進一步優選，包含其中任意2處、3處、4處、5處、6處、7處；
包含位於2θ為5.0±0.2°、9.6±0.2°、15.0±0.2°、17.2±0.2°、22.2±0.2°、19.4±0.2°、26.9±0.2°和10.0±0.2°處的繞射峰；
或者，包含位於2θ為5.0±0.2°、9.6±0.2°、15.0±0.2°、17.2±0.2°、22.2±0.2°、19.4±0.2°、26.9±0.2°和25.4±0.2°處的繞射峰，
優選的晶型I的X光粉末繞射圖譜任選還包含位於2θ為15.4±0.2°、16.6±0.2°、17.7±0.2°、18.5±0.2°、19.3±0.2°或24.0±0.2中的一處或多處繞射峰；優選至少包含其中任意2-3處，或者4-5處，或者6處；進一步優選，包含其中任意2處、3處、4處、5處或6處；
包含位於2θ為5.0±0.2°、8.2±0.2°、9.6±0.2°、15.4±0.2°、16.6±0.2°、17.7±0.2°、18.5±0.2°和19.3±0.2°處的繞射峰；
或者，包含位於2θ為5.0±0.2°、8.2±0.2°、9.6±0.2°、16.6±0.2°、17.7±0.2°、18.5±0.2°、19.3±0.2°和24.0±0.2處的繞射峰；
進一步優選地，晶型I的X光粉末繞射圖譜包含位於2θ為5.0±0.2°、9.6±0.2°、15.0±0.2°、17.2±0.2°、22.2±0.2°、19.4±0.2°、30.2±0.2°、25.1±0.2°、10.0±0.2°、25.1±0.2°、25.4±0.2°、26.9±0.2°、13.0±0.2°、12.9±0.2°或20.0±0.2中的一處或多處繞射峰；優選的，包含其中任選的4處、5處、6處、8處或10處有繞射峰；
晶型I的X光粉末繞射圖譜在2θ為以下位置處有繞射峰： 5.0±0.2°、9.6±0.2°、15.0±0.2°和17.2±0.2°處；
或者，5.0±0.2°、9.6±0.2°、15.0±0.2°和22.2±0.2°處；
或者，5.0±0.2°、9.6±0.2°、17.2±0.2°和22.2±0.2°處；
或者，5.0±0.2°、15.0±0.2°、17.2±0.2°和22.2±0.2°處；
或者，9.6±0.2°、15.0±0.2°、17.2±0.2°和22.2±0.2°處；
或者，5.0±0.2°、9.6±0.2°、15.0±0.2°、17.2±0.2°、22.2±0.2°和25.1±0.2°處；
或者，8.2±0.2°、9.6±0.2°、15.0±0.2°、17.2±0.2°、19.4±0.2°、22.2±0.2°、25.1±0.2°和25.4±0.2°處；
或者，5.0±0.2°、10.0±0.2°、15.0±0.2°、17.2±0.2°、19.4±0.2°、22.2±0.2°、25.1±0.2°和25.4±0.2°處；
進一步優選地，晶型I的X光粉末繞射圖譜包含位於2θ為5.0±0.2°、8.2±0.2°、9.6±0.2°、12.9±0.2°、15.0±0.2°、17.2±0.2°、15.4±0.2°、16.6±0.2°、17.7±0.2°、18.5±0.2°、19.3±0.2°或24.0±0.2中的一處或多處繞射峰；優選的，包含其中任選的4處、5處、6處、8處或10處有繞射峰；
晶型I的X光粉末繞射圖譜在2θ為以下位置處有繞射峰： 5.0±0.2°、8.2±0.2°和9.6±0.2°處；
或者，5.0±0.2°、8.2±0.2°、9.6±0.2°和12.9±0.2°處；
或者，8.2±0.2°、9.6±0.2°、12.9±0.2°和15.0±0.2°處；
或者，9.6±0.2°、12.9±0.2°、15.0±0.2°和17.2±0.2°處；
或者，12.9±0.2°、15.0±0.2°、17.2±0.2°和15.4±0.2°處；
或者，15.0±0.2°、17.2±0.2°、15.4±0.2°和16.6±0.2°處；
或者，5.0±0.2°、8.2±0.2°、9.6±0.2°、12.9±0.2°、15.0±0.2°和17.2±0.2°處；
或者，8.2±0.2°、9.6±0.2°、12.9±0.2°、15.0±0.2°、17.2±0.2°和15.4±0.2°處；
或者，5.0±0.2°、8.2±0.2°、9.6±0.2°、12.9±0.2°、15.0±0.2°、17.2±0.2°、15.4±0.2°和16.6±0.2°處；
或者，8.2±0.2°、9.6±0.2°、12.9±0.2°、15.0±0.2°、17.2±0.2°、15.4±0.2°、16.6±0.2°和17.7±0.2°處；
或者，5.0±0.2°、8.2±0.2°、9.6±0.2°、12.9±0.2°、15.0±0.2°、17.2±0.2°、15.4±0.2°、16.6±0.2°、17.7±0.2°和18.5±0.2°處；
或者，8.2±0.2°、9.6±0.2°、12.9±0.2°、15.0±0.2°、17.2±0.2°、15.4±0.2°、16.6±0.2°、17.7±0.2°、18.5±0.2°和19.3±0.2°處；
使用Cu-Kα輻射，以2θ角和晶面間距d值表示的X光特徵繞射峰如表1所示。 表1
序號    實施例63化合物的晶型I的XRPD射線繞射數據
2θ（±0.2 o） d值 峰高 比例（I%） 面積 比例（I%）
1 4.997 17.6685 30424 100 115645 100
2 8.218 10.7493 598 2 2298 2
3 9.574 9.2298 4345 14.3 17682 15.3
4 9.987 8.8495 433 1.4 2548 2.2
5 12.879 6.8683 313 1 1618 1.4
6 13.007 6.8009 320 1.1 1506 1.3
7 14.997 5.9027 3532 11.6 14167 12.3
8 17.201 5.1508 1921 6.3 13121 11.3
9 19.373 4.578 1575 5.2 7520 6.5
10 20.038 4.4275 312 1 1331 1.2
11 22.212 3.9989 1682 5.5 8985 7.8
12 25.109 3.5436 574 1.9 2876 2.5
13 25.352 3.5103 411 1.4 2286 2
14 26.874 3.3147 514 1.7 2428 2.1
15 30.236 2.9534 677 2.2 2993 2.6
本發明實施例63所示化合物6-(((R)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈晶型I，其X光粉末繞射圖譜基本如圖1所示；其DSC圖譜基本如圖2所示，晶型I的熔點為216.8～218.4℃；其TGA圖譜基本如圖3所示。
在本發明進一步優選的實施方式中，實施例63所示化合物6-(((R)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈晶型II。
晶型II的X光粉末繞射圖譜至少包含位於2θ為4.8±0.2°、17.7±0.2°、16.6±0.2°中的一處或多處繞射峰，優選包含其中2處，更優選包含3處；任選的，進一步還可以包含2θ為9.4±0.2°、18.4±0.2°、19.1±0.2°、17.0±0.2°或18.6±0.2°中的至少一處，優選包含其中2處、3處、4處或5處；
或者，包含位於2θ為4.8±0.2°、17.7±0.2°、16.6±0.2°、9.4±0.2°、18.4±0.2°和19.1±0.2°處的繞射峰；
或者，包含位於2θ為4.8±0.2°、17.7±0.2°、16.6±0.2°、9.4±0.2°、18.4±0.2°和17.0±0.2°處的繞射峰；
或者，包含位於2θ為4.8±0.2°、17.7±0.2°、16.6±0.2°、9.4±0.2°、18.4±0.2°和18.6±0.2°處的繞射峰；
或者，包含位於2θ為4.8±0.2°、17.7±0.2°、9.4±0.2°、18.4±0.2°、19.1±0.2°和17.0±0.2°處的繞射峰；
或者，包含位於2θ為4.8±0.2°、16.6±0.2°、9.4±0.2°、18.4±0.2°、19.1±0.2°和17.0±0.2°處的繞射峰；
優選地，晶型II的X光粉末繞射圖譜任選還包含位於2θ為4.5±0.2°、15.4±0.2°、14.6±0.2°、24.0±0.2°、21.5±0.2°、20.5±0.2°或18.0±0.2中的一處或多處繞射峰；優選至少包含其中任意2-3處，或者4-5處，或者6-7處；進一步優選，包含其中任意2處、3處、4處、5處、6處、7處；
包含位於2θ為4.8±0.2°、17.7±0.2°、16.6±0.2°、9.4±0.2°、18.4±0.2°、19.1±0.2°、4.5±0.2°和15.4±0.2°處的繞射峰；
或者，包含位於2θ為4.8±0.2°、17.7±0.2°、16.6±0.2°、9.4±0.2°、18.4±0.2°、19.1±0.2°、4.5±0.2°和14.6±0.2°處的繞射峰；
進一步優選地，晶型II的X光粉末繞射圖譜包含位於2θ為4.8±0.2°、17.7±0.2°、16.6±0.2°、9.4±0.2°、18.4±0.2°、19.1±0.2°、17.0±0.2°、18.6±0.2°、4.5±0.2°、15.4±0.2°、14.6±0.2°、24.0±0.2°、21.5±0.2°、20.5±0.2°或18.0±0.2中的一處或多處繞射峰；優選的，包含其中任選的4處、5處、6處、8處或10處有繞射峰；
晶型II的X光粉末繞射圖譜在2θ為以下位置處有繞射峰：
4.8±0.2°、17.7±0.2°、16.6±0.2°和9.4±0.2°處；
4.8±0.2°、17.7±0.2°、16.6±0.2°和18.4±0.2°處；
4.8±0.2°、17.7±0.2°、16.6±0.2°、9.4±0.2°、18.4±0.2°和20.5±0.2°處；
4.8±0.2°、17.7±0.2°、16.6±0.2°、9.4±0.2°、18.4±0.2°、19.1±0.2°、17.0±0.2°和18.6±0.2°處；
4.8±0.2°、17.7±0.2°、16.6±0.2°、9.4±0.2°、18.4±0.2°、19.1±0.2°、17.0±0.2°、18.6±0.2°、4.5±0.2°、14.6±0.2°處；
進一步優選地，晶型II的X光粉末繞射圖譜包含位於2θ為4.8±0.2°、17.7±0.2°、16.6±0.2°、9.4±0.2°、18.4±0.2°、19.1±0.2°、17.0±0.2°、18.6±0.2°、4.5±0.2°、15.4±0.2°、14.6±0.2°、24.0±0.2°、21.5±0.2°、20.5±0.2°、18.0±0.2、26.0±0.2°、22.0±0.2°、14.8±0.2°、28.8±0.2°或25.4±0.2°中的一處或多處繞射峰；優選的，包含其中任選的6處、8處、10處、11處或12處有繞射峰；
使用Cu-Kα輻射，以2θ角和晶面間距d值表示的X光特徵繞射峰如表2所示。 表2
序號    實施例63化合物的晶型II的XRPD射線繞射數據
2θ（±0.2 o） d值 峰高 比例（I%） 面積 比例（I%）
1 4.504 19.6038 493 24 4333 33.4
2 4.792 18.4264 2058 100 12984 100
3 7.992 11.0529 134 6.5 803 6.2
4 9.389 9.4118 812 39.5 5836 44.9
5 12.722 6.9526 127 6.2 1300 10
6 14.583 6.069 431 20.9 2970 22.9
7 14.801 5.9803 222 10.8 2546 19.6
8 15.353 5.7664 474 23 3106 23.9
9 16.567 5.3466 854 41.5 6411 49.4
10 16.993 5.2135 511 24.8 4718 36.3
11 17.662 5.0174 1010 49.1 6824 52.6
12 18.009 4.9215 206 10 1872 14.4
13 18.354 4.8299 557 27.1 5343 41.2
14 18.576 4.7725 504 24.5 4212 32.4
15 19.143 4.6325 554 26.9 3823 29.4
16 19.895 4.4591 131 6.4 1118 8.6
17 20.545 4.3194 261 12.7 2750 21.2
18 21.48 4.1334 270 13.1 2122 16.3
19 22.042 4.0292 288 14 2991 23
20 22.326 3.9787 133 6.5 1318 10.2
21 22.835 3.8912 108 5.2 1136 8.7
22 23.951 3.7124 415 20.2 3602 27.7
23 25.086 3.5469 146 7.1 2093 16.1
24 25.447 3.4974 216 10.5 3291 25.3
25 25.996 3.4247 292 14.2 4449 34.3
26 26.624 3.3453 189 9.2 1048 8.1
27 26.975 3.3026 157 7.6 1198 9.2
28 28.834 3.0937 223 10.8 2373 18.3
29 29.12 3.0641 110 5.3 1307 10.1
本發明的實施例63所示化合物6-(((R)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈晶型II，其X光粉末繞射圖譜基本如圖4所示；其DSC圖譜基本如圖5所示；其TGA圖譜基本如圖6所示。
在本發明進一步優選的實施方式中，實施例63所示化合物6-(((R)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈晶型III。
晶型III的X光粉末繞射圖譜在2θ為4.6±0.2°處具有繞射峰；或者在15.2±0.2°處具有繞射峰；或者在9.9±0.2°處具有繞射峰；或者在16.7±0.2°處具有繞射峰；或者在18.2±0.2°處具有繞射峰；或者在17.9±0.2°處具有繞射峰；或者在25.5±0.2°處具有繞射峰；或者在15.0±0.2°處具有繞射峰；或者在19.5±0.2°處具有繞射峰；或者在23.6±0.2°處具有繞射峰；優選包含上述繞射繞射峰中的任意2-5處，或者3-5處，或者3-6處，或者3-8處，或者5-8處，或者6-8處；更優選包含其中任意6處、7處或8處；
晶型III的X光粉末繞射圖譜至少包含位於2θ為4.6±0.2°、15.2±0.2°或9.9±0.2°中的一處或多處繞射峰，優選包含其中2處，更優選包含3處；任選的，進一步還可以包含2θ為16.7±0.2°、18.2±0.2°、17.9±0.2°、25.5±0.2°或15.0±0.2°中的至少一處，優選包含其中2處、3處、4處或5處；
或者，包含位於2θ為4.6±0.2°、15.2±0.2°、9.9±0.2°、16.7±0.2°、18.2±0.2°和17.9±0.2°處的繞射峰；
或者，包含位於2θ為4.6±0.2°、15.2±0.2°、9.9±0.2°、16.7±0.2°、18.2±0.2°和25.5±0.2°處的繞射峰；
或者，包含位於2θ為4.6±0.2°、15.2±0.2°、9.9±0.2°、16.7±0.2°、18.2±0.2°和15.0±0.2°處的繞射峰；
或者，包含位於2θ為4.6±0.2°、15.2±0.2°、9.9±0.2°、16.7±0.2°、18.2±0.2°和25.5±0.2°處的繞射峰；
或者，包含位於2θ為4.6±0.2°、15.2±0.2°、9.9±0.2°、18.2±0.2°、17.9±0.2°和15.0±0.2°處的繞射峰；
晶型III的X光粉末繞射圖譜任選還包含位於2θ為19.5±0.2°、23.6±0.2°、26.1±0.2°、22.0±0.2°、20.2±0.2°、21.1±0.2°或27.4±0.2中的一處或多出繞射峰；優選至少包含其中任意2-3處，或者4-5處，或者6-7處；進一步優選，包含其中任意2處、3處、4處、5處、6處、7處；
包含位於2θ為4.6±0.2°、15.2±0.2°、9.9±0.2°、16.7±0.2°、18.2±0.2°、17.9±0.2°、19.5±0.2°和23.6±0.2°處的繞射峰；
或者，包含位於2θ為4.6±0.2°、15.2±0.2°、9.9±0.2°、16.7±0.2°、18.2±0.2°、17.9±0.2°、19.5±0.2°和26.1±0.2°處的繞射峰；
晶型III的X光粉末繞射圖譜包含位於2θ為2θ為4.6±0.2°、15.2±0.2°、9.9±0.2°、16.7±0.2°、18.2±0.2°、17.9±0.2°、25.5±0.2°、15.0±0.2°、19.5±0.2°、23.6±0.2°、26.1±0.2°、22.0±0.2°、20.2±0.2°、21.1±0.2°或27.4±0.2中的一處或多處繞射峰；優選的，包含其中任選的4處、5處、6處、8處或10處有繞射峰；
晶型III的X光粉末繞射圖譜在2θ為以下位置處有繞射峰：
4.6±0.2°、15.2±0.2°、9.9±0.2°和16.7±0.2°處；
或者，4.6±0.2°、15.2±0.2°、9.9±0.2°和18.2±0.2°處；
或者，4.6±0.2°、15.2±0.2°、16.7±0.2°和18.2±0.2°處；
或者，4.6±0.2°、9.9±0.2°、16.7±0.2°和18.2±0.2°處；
或者，15.2±0.2°、9.9±0.2°、16.7±0.2°和18.2±0.2°處；
4.6±0.2°、15.2±0.2°、9.9±0.2°、16.7±0.2°、18.2±0.2°和17.9±0.2°處；
4.6±0.2°、15.2±0.2°、9.9±0.2°、16.7±0.2°、18.2±0.2°、17.9±0.2°、26.1±0.2°和22.0±0.2°處；
4.6±0.2°、15.2±0.2°、9.9±0.2°、16.7±0.2°、18.2±0.2°、17.9±0.2°、25.5±0.2°、15.0±0.2°、19.5±0.2°和23.6±0.2°處；
使用Cu-Kα輻射，以2θ角和晶面間距d值表示的X光特徵繞射峰如表3所示。 表3
序號    實施例63化合物的晶型III的XRPD射線繞射數據
2θ（±0.2 o） d值 峰高 比例（I%） 面積 比例（I%）
1 4.588 19.2419 1334 100 10972 100
2 8.435 10.4741 88 6.6 614 5.6
3 9.922 8.9076 414 31 6208 56.6
4 14.971 5.9129 202 15.1 6637 60.5
5 15.23 5.8127 501 37.6 7112 64.8
6 16.691 5.3071 361 27.1 4827 44
7 17.947 4.9383 273 20.5 5505 50.2
8 18.23 4.8623 360 27 7587 69.1
9 19.53 4.5416 192 14.4 2413 22
10 20.2 4.3924 142 10.6 872 7.9
11 21.07 4.2129 139 10.4 1962 17.9
12 21.962 4.0438 151 11.3 2037 18.6
13 23.561 3.7729 175 13.1 2656 24.2
14 25.472 3.494 230 17.2 4657 42.4
15 26.132 3.4072 174 13 3629 33.1
16 27.351 3.258 121 9.1 1308 11.9
17 28.227 3.1589 84 6.3 1896 17.3
本發明實施例63所示化合物6-(((R)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈晶型III，其X光粉末繞射圖譜基本如圖7所示；其DSC圖譜基本如圖8所示；其TGA圖譜基本如圖9所示。
在本發明進一步優選的實施方式中，實施例63所示化合物6-(((R)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈晶型IV。
晶型IV的X光粉末繞射圖譜在2θ為5.0±0.2°處具有繞射峰；或者在4.8±0.2°處具有繞射峰；或者在15.0±0.2°處具有繞射峰；或者在19.1±0.2°處具有繞射峰；或者在14.3±0.2°處具有繞射峰；或者在10.0±0.2°處具有繞射峰；或者在23.9±0.2°處具有繞射峰；或者在25.1±0.2°處具有繞射峰；或者在30.3±0.2°處具有繞射峰；或者在9.6±0.2°處具有繞射峰；優選包含上述繞射繞射峰中的任意2-5處，或者3-5處，或者3-6處，或者3-8處，或者5-8處，或者6-8處；更優選包含其中任意6處、7處或8處；
晶型IV的X光粉末繞射圖譜至少包含位於2θ為5.0±0.2°、4.8±0.2°或15.0±0.2°中的一處或多處繞射峰，優選包含其中2處，更優選包含3處；任選的，進一步還可以包含2θ為19.1±0.2°、14.3±0.2°、10.0±0.2°、23.9±0.2°或25.1±0.2°中的至少一處，優選包含其中2處、3處、4處或5處；
或者，包含位於2θ為5.0±0.2°、4.8±0.2°、15.0±0.2°、19.1±0.2°、14.3±0.2°和10.0±0.2°處的繞射峰；
或者，包含位於2θ為5.0±0.2°、4.8±0.2°、15.0±0.2°、19.1±0.2°、14.3±0.2°和23.9±0.2°處的繞射峰；
晶型IV的X光粉末繞射圖譜任選還包含位於2θ為30.3±0.2°或9.6±0.2°中的一處或多出繞射峰；優選至少包含其中任意2-3處，或者4-5處，或者6-7處；進一步優選，包含其中任意2處、3處、4處、5處、6處、7處；
包含位於2θ為5.0±0.2°、4.8±0.2°、15.0±0.2°、19.1±0.2°、14.3±0.2°、10.0±0.2°、23.9±0.2°和30.3±0.2°處的繞射峰；
或者，包含位於2θ為5.0±0.2°、4.8±0.2°、15.0±0.2°、19.1±0.2°、14.3±0.2°、10.0±0.2°、23.9±0.2°和9.6±0.2°處的繞射峰；
晶型IV的X光粉末繞射圖譜包含位於2θ為2θ為5.0±0.2°、4.8±0.2°、15.0±0.2°、19.1±0.2°、14.3±0.2°、10.0±0.2°、23.9±0.2°、25.1±0.2°、30.3±0.2°或9.6±0.2°中的一處或多處繞射峰；優選的，包含其中任選的4處、5處、6處、8處或10處有繞射峰；
晶型IV的X光粉末繞射圖譜在2θ為以下位置處有繞射峰：
包含位於2θ為5.0±0.2°、4.8±0.2°、15.0±0.2°和19.1±0.2°處的繞射峰；
或者，5.0±0.2°、4.8±0.2°、15.0±0.2°和14.3±0.2°處；
或者，5.0±0.2°、4.8±0.2°、15.0±0.2°、19.1±0.2°、23.9±0.2°和25.1±0.2°處；
或者，5.0±0.2°、4.8±0.2°、15.0±0.2°、19.1±0.2°、14.3±0.2°、10.0±0.2°、23.9±0.2°和25.1±0.2°處；
或者，5.0±0.2°、4.8±0.2°、15.0±0.2°、19.1±0.2°、14.3±0.2°、10.0±0.2°、23.9±0.2°、25.1±0.2°和30.3±0.2°處；
或者，5.0±0.2°、4.8±0.2°、15.0±0.2°、19.1±0.2°、14.3±0.2°、10.0±0.2°、23.9±0.2°、25.1±0.2°、30.3±0.2°和9.6±0.2°處；
使用Cu-Kα輻射，以2θ角和晶面間距d值表示的X光特徵繞射峰如表4所示。 表4
序號    實施例63化合物的晶型IV的XRPD射線繞射數據
2θ（±0.2 o） d值 峰高 比例（I%） 面積 比例（I%）
1 4.79 18.4329 18504 76.6 217525 100
2 4.992 17.6863 24146 100 145528 66.9
3 9.592 9.2128 139 0.6 1687 0.8
4 9.983 8.8531 392 1.6 2644 1.2
5 14.306 6.1858 444 1.8 4841 2.2
6 14.993 5.9042 2086 8.6 17268 7.9
7 19.109 4.6406 673 2.8 6105 2.8
8 23.949 3.7126 259 1.1 2259 1
9 25.109 3.5437 268 1.1 2045 0.9
10 30.271 2.9501 230 1 2439 1.1
本發明實施例63所示化合物6-(((R)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈晶型IV，其X光粉末繞射圖譜基本如圖10所示；其DSC圖譜基本如圖11所示；其TGA圖譜基本如圖12所示。
在本發明進一步優選的實施方式中，實施例63所示化合物6-(((R)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈晶型V。
晶型V的X光粉末繞射圖譜在2θ為4.7±0.2°處具有繞射峰；或者在18.2±0.2°處具有繞射峰；或者在10.1±0.2°處具有繞射峰；或者在18.8±0.2°處具有繞射峰；或者在15.6±0.2°處具有繞射峰；或者在17.0±0.2°處具有繞射峰；或者在21.8±0.2°處具有繞射峰；或者在14.7±0.2°處具有繞射峰；或者在19.3±0.2°處具有繞射峰；或者在25.8±0.2°處具有繞射峰；優選包含上述繞射繞射峰中的任意2-5處，或者3-5處，或者3-6處，或者3-8處，或者5-8處，或者6-8處；更優選包含其中任意6處、7處或8處。
晶型V的X光粉末繞射圖譜至少包含位於2θ為4.7±0.2°、18.2±0.2°或10.1±0.2°中的一處或多處繞射峰，優選包含其中2處，更優選包含3處；任選的，進一步還可以包含2θ為18.8±0.2°、15.6±0.2°、17.0±0.2°、21.8±0.2°或14.7±0.2°中的至少一處，優選包含其中2處、3處、4處或5處；
或者，包含位於2θ為4.7±0.2°、18.2±0.2°、10.1±0.2°、18.8±0.2、15.6±0.2°和17.0±0.2°處的繞射峰；
或者，包含位於2θ為4.7±0.2°、18.2±0.2°、10.1±0.2°、18.8±0.2、15.6±0.2°和21.8±0.2°處的繞射峰；
或者，包含位於2θ為4.7±0.2°、18.2±0.2°、10.1±0.2°、18.8±0.2、15.6±0.2°和14.7±0.2°處的繞射峰。
晶型V的X光粉末繞射圖譜任選還包含位於2θ為19.3±0.2°、25.8±0.2°、15.2±0.2°、17.8±0.2°、20.4±0.2°、23.5±0.2°或25.6±0.2°中的一處或多處繞射峰；優選至少包含其中任意2-3處，或者4-5處，或者6-7處；進一步優選，包含其中任意2處、3處、4處、5處、6處、7處；
包含位於4.7±0.2°、18.2±0.2°、10.1±0.2°、18.8±0.2°、15.6±0.2°、17.0±0.2°、19.3±0.2°和25.8±0.2°處的繞射峰；
或者，包含位於4.7±0.2°、18.2±0.2°、10.1±0.2°、18.8±0.2°、15.6±0.2°、17.0±0.2°、19.3±0.2°和15.2±0.2°處的繞射峰。
晶型V的X光粉末繞射圖譜包含位於2θ為4.7±0.2°、18.2±0.2°、10.1±0.2°、18.8±0.2°、15.6±0.2°、17.0±0.2°、21.8±0.2°、14.7±0.2°、19.3±0.2°、25.8±0.2°、15.2±0.2°、17.8±0.2°、20.4±0.2°、23.5±0.2°或25.6±0.2°中的一處
或多處繞射峰；優選的，包含其中任選的4處、5處、6處、8處或10處有繞射峰；
晶型V的X光粉末繞射圖譜在2θ為以下位置處有繞射峰：
包含位於2θ為4.7±0.2°、18.2±0.2°、10.1±0.2°和18.8±0.2處的繞射峰；
或者，包含位於2θ為4.7±0.2°、10.1±0.2°、18.8±0.2°、15.6±0.2°、17.0±0.2°和21.8±0.2°處的繞射峰；
或者，包含位於2θ為4.7±0.2°、18.2±0.2°、10.1±0.2°、18.8±0.2°、15.6±0.2°、17.0±0.2°、21.8±0.2°和14.7±0.2°處的繞射峰；
或者，包含位於2θ為4.7±0.2°、18.2±0.2°、10.1±0.2°、18.8±0.2°、15.6±0.2°、17.0±0.2°、21.8±0.2°、14.7±0.2°、19.3±0.2°和15.2±0.2°處的繞射峰。
使用Cu-Kα輻射，以2θ角和晶面間距d值表示的X光特徵繞射峰如表5所示。 表5
序號    實施例63化合物的晶型V的XRPD射線繞射數據
2θ（±0.2 o） d值 峰高 比例（I%） 面積 比例（I%）
1 4.67 18.9077 7168 100 60818 100
2 10.127 8.7276 298 4.2 2287 3.8
3 14.053 6.2969 77 1.1 663 1.1
4 14.748 6.0017 161 2.2 1656 2.7
5 15.249 5.8054 114 1.6 1464 2.4
6 15.559 5.6905 200 2.8 1204 2
7 16.992 5.2137 173 2.4 1751 2.9
8 17.766 4.9882 109 1.5 1166 1.9
9 18.23 4.8623 305 4.3 2516 4.1
10 18.777 4.7219 302 4.2 4255 7
11 19.289 4.5977 147 2.1 1504 2.5
12 20.36 4.3582 106 1.5 1256 2.1
13 20.788 4.2695 80 1.1 922 1.5
14 21.841 4.0659 173 2.4 1357 2.2
15 23.521 3.7791 99 1.4 2240 3.7
16 25.574 3.4803 86 1.2 1614 2.7
17 25.835 3.4457 146 2 2713 4.5
本發明實施例63所示化合物6-(((R)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈晶型V，其X光粉末繞射圖譜基本如圖13所示；其DSC圖譜基本如圖14所示；其TGA圖譜基本如圖15所示。
本發明所述的晶型，其中，其X光粉末繞射圖譜中相對峰強度為前十強的繞射峰位置與相應附圖對應位置繞射峰的2θ誤差為±0.2°~±0.5°，優選±0.2°~±0.3°，最優選±0.2°。
在本發明優選的實施方案中，通式(I)所述任一化合物的晶型，晶型為含溶劑或不含溶劑的晶型，其中溶劑選自水、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、乙腈、乙醇、88%丙酮、四氫呋喃、2-甲基-四氫呋喃、二氯甲烷、1,4-二氧六環、苯、甲苯、異丙醇、正丁醇、異丁醇、N,N-二甲基甲醯胺、N,N-二甲基乙醯胺、N-甲基吡咯啶酮、二甲基亞碸、正丙醇、叔丁醇、2-丁酮、3-戊酮、正庚烷、庚烷、甲酸乙酯、醋酸異丙酯、環己烷、甲基叔丁基醚或異丙醚中的一種或多種。
在本發明優選的實施方案中，通式(I)所述任一化合物的晶型，溶劑的個數0.2-3，優選0.2、0.5、1、1.5、2、2.5或3，更優選0.5、1、2或3。
在本發明優選的實施方案中，通式(I)所述化合物的晶型為非溶劑晶型，優選為無水晶型。
在本發明優選的實施方案中，通式(I)所述化合物的晶型為水合物晶型，水的個數為0.2-3，優選0.2、0.5、1、1.5、2、2.5或3，更優選0.5、1、2或3。
在本發明更優選的實施方案中，化合物6-(((R)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈的晶型為非溶劑化合物，優選為無水物或水合物。
在本發明更優選的實施方案中，化合物6-(((R)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈的水合物晶型中水的個數為0.2-3，優選0.2、0.5、1、1.5、2、2.5或3，更優選0.5、1、2或3。
本發明所屬技術領域中具有通常知識者所熟知的是，XRPD可能會因檢測方法、條件和儀器的原因產生一定的位移和強度偏差。作為本發明晶型的一個具體示例，其XRPD如圖譜X所示，但本發明所屬技術領域中具有通常知識者瞭解的是，當關鍵特徵峰位移2θ偏差在±0.5，尤其在±0.2左右時，均可以被認定為同一晶型。
本發明還提供一種製備通式(I)所示化合物的晶型的方法，具體包括如下步驟： 1)秤取適量的自由鹼，用不良溶劑混懸，懸浮密度優選為50~200mg/mL； 2)以上所得混懸液振搖，溫度優選0~50℃，時間優選4h~10天； 3)將以上混懸液快速離心，去除上清液，剩餘固體放入50℃真空乾燥箱中烘乾至恆重得到目標產物；
其中： 不良性溶劑選自甲醇、丙酮、乙酸乙酯、四氫呋喃、乙腈、乙醇、88%丙酮、2-甲基-四氫呋喃、二氯甲烷、1,4-二氧六環、甲基叔丁基醚、正庚烷、苯、甲苯、氯苯、異丙醇、正丁醇、異丁醇、N，N-二甲基甲醯胺、N，N-二甲基乙醯胺、二甲基亞碸、正丙醇、甲酸乙酯、醋酸異丙酯、叔丁醇、2-丁酮或3-戊酮；優選乙腈、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇。
本發明還提供一種製備通式(I)所示化合物的晶型的方法，具體包括如下步驟： 1)秤取適量的自由鹼，用良溶劑溶解； 2)任選的，向以上所得溶液中加入反溶劑； 3)攪拌至固體析出，析晶溫度優選0~50℃； 4)任選的，將以上混懸液快速離心； 5)去除上清液，剩餘固體乾燥得到目標產物；
其中： 良性溶劑選自甲醇、丙酮、乙酸乙酯、四氫呋喃、乙腈、乙醇、88%丙酮、2-甲基-四氫呋喃、二氯甲烷、1,4-二氧六環、苯、甲苯、氯苯、異丙醇、正丁醇、異丁醇、N,N-二甲基甲醯胺、N,N-二甲基乙醯胺、二甲基亞碸、正丙醇、甲酸乙酯、醋酸異丙酯、叔丁醇、2-丁酮或3-戊酮；優選二氯甲烷、四氫呋喃、2-甲基-四氫呋喃、1,4-二氧六環、二甲基亞碸、乙腈、2-丁酮。
不良溶劑選自甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮、異丙醇、甲苯、正庚烷、水、醋酸異丙酯、環己烷、甲基叔丁基醚、異丙醚；優選水、正庚烷、環己烷和甲基叔丁基醚。
本發明的目的還在於提供了一種藥物組合物，其含有治療有效量的式(I)所示通式化合物的晶型，以及一種或多種藥學上可接受的載體或賦形劑。
本發明的目的還在於提供式(I)所示通式化合物6-(((R)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈的晶型，以及其藥物組合物在製備RET抑制劑藥物中的應用。
本發明的目的在於提供了的通式(I)所示化合物的晶型以及藥物組合物在製備用於治療和/或預防腫瘤藥物中的應用，優選的，腫瘤選自非小細胞肺癌、纖維肉瘤、胰腺腫瘤、甲狀腺髓樣癌、甲狀腺乳頭狀腫瘤、軟組織肉瘤、高度實性腫瘤、乳腺腫瘤和結腸腫瘤。
晶型可以藉由粉末X光繞射譜進行鑑定。然而，本發明所屬技術領域中具有通常知識者知道，粉末X光繞射的峰強度和/或者峰情況可能會因為實驗條件的不同而不同，如不同的繞射測試條件和/或者優先取向等。同時由於不同儀器的精確度不同，測得的2θ值會有約±0.2的誤差，個別峰可能會有約±0.3或±0.4的誤差。然而，已知的是峰的相對強度值比峰的位置更依賴於所測定樣品的某些性質，例如樣品中晶體的尺寸、結晶的取向作用和被分析的材料的純度，因此所顯示的峰強度偏差在約±20％或更大範圍是可能出現的。
除非有相反陳述，在說明書和申請專利範圍中使用的術語具有下述含義。
術語「烷基」指飽和脂肪族烴基團，其為包含1至20個碳原子的直鏈或支鏈基團，優選含有1至8個碳原子的烷基，更優選1至6個碳原子的烷基，最更優選1至3個碳原子的烷基。非限制性實例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基，及其各種支鏈異構體等。更優選的是含有1至6個碳原子的低級烷基，非限制性實施例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代的或非取代的，當被取代時，取代基可以在任何可使用的連接點上被取代，取代基優選為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基，本發明優選甲基、乙基、異丙基、叔丁基、鹵代烷基、氘代烷基、烷氧基取代的烷基和羥基取代的烷基。
術語「環烷基」指飽和或部分不飽和單環或多環環狀烴取代基，環烷基環包含3至20個碳原子，優選包含3至12個碳原子，更優選包含3至8個碳原子，最優選包含3至6個碳原子。單環環烷基的非限制性實例包括環丙基、環丁基、環戊基、環戊烯基、環己基、環己烯基、環己二烯基、環庚基、環庚三烯基、環辛基等；多環環烷基包括螺環、稠環和橋環的環烷基，優選環丙基、環丁基、環己基、環戊基和環庚基。
術語「雜環基」指飽和或部分不飽和單環或多環環狀烴取代基，其包含3至20個環原子，其中一個或多個環原子為選自氮、氧或S(O) m(其中m是整數0至2)的雜原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的環部分，其餘環原子為碳。優選包含3至12個環原子，其中1至4個是雜原子；更優選包含3至8個環原子；最優選包含3至6個環原子。單環雜環基的非限制性實例包括氧雜環丁烷基、硫雜環丁烷基、吡咯啶基、吡咯啶酮基、咪唑烷基、四氫呋喃基、四氫噻吩基、二氫咪唑基、二氫呋喃基、二氫吡唑基、二氫吡咯基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、硫代嗎啉基、高哌嗪基、吡喃基等，優選氧雜環丁烷基、吡咯啶酮基、四氫呋喃基、吡唑烷基、嗎啉基、哌嗪基和吡喃基。多環雜環基包括螺環、稠環和橋環的雜環基；其中涉及到的螺環、稠環和橋環的雜環基任選與其他基團藉由單鍵相連接，或者藉由環上的任意兩個或者兩個以上的原子與其他環烷基、雜環基、芳基和雜芳基進一步并環連接。
雜環基可以是任選取代的或非取代的，當被取代時，取代基優選為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基。
「鹵代烷基」指被一個或多個鹵素取代的烷基，其中烷基如上所定義。
「鹵代烷氧基」指被一個或多個鹵素取代的烷氧基，其中烷氧基如上所定義。
「羥烷基」指被羥基取代的烷基，其中烷基如上所定義。
「烯基」指鏈烯基，又稱烯烴基，其中烯基可以進一步被其他相關基團取代，例如：烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、羧基或羧酸酯基。
「炔基」指(CH≡C-)，其中炔基可以進一步被其他相關基團取代，例如：烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、羧基或羧酸酯基。
「羥基」指-OH基團。
「鹵素」指氟、氯、溴或碘。
「胺基」指-NH 2。
「氰基」指-CN。
「硝基」指-NO 2。
「羧基」指-C(O)OH。
「THF」指四氫呋喃。
「EtOAc」指乙酸乙酯。
「MeOH」指甲醇。
「DMF」指N、N-二甲基甲醯胺。
「DIPEA」指二異丙基乙胺。
「TFA」指三氟乙酸。
「MeCN」指乙腈。
「DMA」指N,N-二甲基乙醯胺。
「Et 2O」指乙醚。
「DCE」指1,2-二氯乙烷。
「DIPEA」指N,N-二異丙基乙胺。
「NBS」指N-溴代琥珀醯亞胺。
「NIS」指N-碘代丁二醯亞胺。
「Cbz-Cl」指氯甲酸苄酯。
「Pd 2(dba) 3」指三(二亞苄基丙酮)二鈀。
「Dppf」指1,1’-雙二苯基膦二茂鐵。
「HATU」指2-(7-氧化苯並三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯。
「KHMDS」指六甲基二矽基胺基鉀。
「LiHMDS」指雙三甲基矽基胺基鋰。
「MeLi」指甲基鋰。
「n-BuLi」指正丁基鋰。
「NaBH(OAc) 3」指三乙醯氧基硼氫化鈉。
「DMAP」指4-二甲胺基吡啶。
「SEM-Cl」指氯甲基三甲基矽乙基醚。
「Xantphos」指4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽。
「DCM」指二氯甲烷。
「X選自A、B、或C」、「X選自A、B和C」、「X為A、B或C」、「X為A、B和C」等不同用語均表現了相同的意義，即表示X可以是A、B、C中的任意一種或幾種。
本發明的氫原子均可被其同位素氘所取代，本發明涉及的實施例化合物中的任一氫原子也均可被氘原子取代。
「任選」或「任選地」意味著隨後所描述的事件或環境可以但不必發生，該說明包括該事件或環境發生或不發生的場合。例如，「任選被烷基取代的雜環基團」意味著烷基可以但不必須存在，該說明包括雜環基團被烷基取代的情形和雜環基團不被烷基取代的情形。
「取代的」指基團中的一個或多個氫原子，優選為最多5個，更優選為1～3個氫原子彼此獨立地被相應數目的取代基取代。不言而喻，取代基僅處在它們的可能的化學位置，本發明所屬技術領域中具有通常知識者能夠在不付出過多努力的情況下確定（藉由實驗或理論）可能或不可能的取代。例如，具有游離氫的胺基或羥基與具有不飽和（如烯屬）鍵的碳原子結合時可能是不穩定的。
「藥物組合物」表示含有一種或多種本文所述化合物或其生理學上/可藥用的鹽或前體藥物與其他化學組分的混合物，以及其他組分例如生理學/可藥用的載體和賦形劑。藥物組合物的目的是促進對生物體的給藥，利於活性成分的吸收進而發揮生物活性。
「可藥用鹽」是指本發明化合物的鹽，這類鹽用於哺乳動物體內時具有安全性和有效性，且具有應有的生物活性。
以下結合實施例進一步描述本發明，但這些實施例並非限制著本發明的範圍。
一、化合物的製備
實施例
本發明的化合物結構是藉由核磁共振(NMR)或/和液質聯用色譜(LC-MS)來確定的。NMR化學位移(δ)以百萬分之一(ppm)的單位給出。NMR的測定是用Bruker AVANCE-400核磁儀，測定溶劑為氘代二甲基亞碸(DMSO- d 6 )，氘代甲醇(CD 3OD)和氘代氯仿(CDCl 3)，內標為四甲基矽烷(TMS)。
液質聯用色譜LC-MS的測定用Agilent 1200 Infinity Series質譜儀。HPLC的測定使用安捷倫1200DAD高壓液相色譜儀（Sunfire C18 150×4.6 mm色譜柱）和Waters 2695-2996高壓液相色譜儀（Gimini C18 150×4.6 mm色譜柱）。
薄層層析矽膠板使用煙臺黃海HSGF254或青島GF254矽膠板，TLC採用的規格是0.15mm～0.20mm，薄層層析分離純化產品採用的規格是0.4mm～0.5mm。柱層析一般使用200～300目煙臺黃海矽膠為載體。
本發明實施例中的起始原料是已知的並且可以在市場上買到，或者可以採用按照本領域已知的方法來合成。
在無特殊說明的情況下，本發明的所有反應均在連續的磁力攪拌下，在乾燥氮氣或氬氣氛下進行，溶劑為乾燥溶劑，反應溫度單位為攝氏度。
實施例1
4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-(甲基亞硫醯基＜亞磺醯＞)乙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image007
第一步：2-(甲硫基)乙烷-1-醇
Figure 02_image009
將2-(甲硫基)乙酸乙酯(500mg，3.7mmol)溶於20mL MeOH中，0℃下加入NaBH 4(562mg，14.8mmol)，室溫攪拌0.5h。加入10mL NH 4Cl溶液，乙酸乙酯(20mL*3)萃取。有機相使用水和飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥。過濾，旋乾，得到2-(甲硫基)乙烷-1-醇（240mg，無色液體，產率70%）。
第二步：4-溴-6-(2-(甲硫基)乙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image011
將4-溴-6-羥基吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈(100mg，0.42mmol)溶於10mL THF中，加入2-(甲硫基)乙烷-1-醇(16mg，0.5mmol)，三苯基膦(165mg，0.63mmol)和DIAD(127mg，0.63mmol)，室溫攪拌過夜。加入10mL水，乙酸乙酯(20mL*3)萃取。有機相使用水和飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥。過濾，旋乾，粗產物用柱層析分離（二氯甲烷/甲醇=10/1沖洗），得到4-溴-6-(2-(甲硫基)乙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（69mg，白色固體，產率53%）。
MS m/z (ESI): 311.9 [M+H] +.
第三步：4-溴-6-(2-(甲基亞硫醯基＜亞磺醯＞)乙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image013
將4-溴-6-(2-(甲硫基)乙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈(200mg，0.64mmol)溶於20mL DCM中，加入間氯過氧苯甲酸(110mg，0.64mmol)，室溫攪拌4h，加入10mL水，乙酸乙酯(20mL*3)萃取。有機相使用水和飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥。過濾，旋乾，粗產物用柱層析分離（二氯甲烷/甲醇=10/1沖洗），得到4-溴-6-(2-(甲基亞硫醯基＜亞磺醯＞)乙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（189mg，白色固體，產率90%）。
MS m/z (ESI): 327.9 [M+H] +.
第四步：叔-丁基 3-(5-溴吡啶-2-基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-6-羧酸酯
Figure 02_image015
將5-溴-2-氟吡啶(500mg，2.5mmol)溶於20mL DMSO中，加入叔-丁基 3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-6-羧酸酯(489mg，2.8mmol)，碳酸鉀(1.7g，12.5mmol)，90℃下攪拌過夜。加入10mL水，乙酸乙酯(20mL*3)萃取。有機相使用水和飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥。過濾，旋乾，粗產物用柱層析分離（石油醚/乙酸乙酯=1/1沖洗），得到叔-丁基 3-(5-溴吡啶-2-基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-6-羧酸酯（650mg，白色固體，產率73%）。
MS m/z (ESI): 354.0 [M+H] +.
第五步：3-(5-溴吡啶-2-基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷
Figure 02_image017
將叔-丁基 3-(5-溴吡啶-2-基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-6-羧酸酯(100mg，0.28mmol)溶於3mL DCM中，加入1mL TFA，室溫攪拌2h。旋乾，加入碳酸氫鈉水溶液調pH至鹼性，乙酸乙酯(20mL*3)萃取。有機相使用水和飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥。過濾，旋乾，得到3-(5-溴吡啶-2-基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷（70mg，白色固體，產率99%）。
MS m/z (ESI): 254.0 [M+H] +.
第六步：3-(5-溴吡啶-2-基)-6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷
Figure 02_image019
將3-(5-溴吡啶-2-基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷(70mg，0.28mmol)，6-甲氧基尼古丁醛(113mg，0.83mmol)溶於10mL DCE中，加入NaBH(OAc) 3(176mg，0.83mmol)，室溫攪拌過夜。加入10mL水，乙酸乙酯(20mL*3)萃取。有機相使用水和飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥。過濾，旋乾，粗產物用柱層析分離（二氯甲烷/甲醇=10/1沖洗），得到3-(5-溴吡啶-2-基)-6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷（60mg，白色固體，產率57%）。
MS m/z (ESI): 375.0 [M+H] +.
第七步：6-(2-(甲基亞硫醯基＜亞磺醯＞)乙氧基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊環-2-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image021
將4-溴-6-(2-(甲基亞硫醯基＜亞磺醯＞)乙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈(200mg，0.6mmol)，聯硼酸頻那醇酯(232mg，0.91mmol)，Pd(dppf)Cl 2(44mg，0.06mmol)和KOAc(176mg，1.8mmol)溶於dioxane/H 2O(20mL，v/v=10:1)中，氮氣保護下90℃攪拌過夜。加入10mL水，乙酸乙酯(20mL*3)萃取。有機相使用水和飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥。過濾，旋乾，粗產物用柱層析分離（二氯甲烷/甲醇=10/1沖洗），得到6-(2-(甲基亞硫醯基＜亞磺醯＞)乙氧基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊環-2-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（117mg，白色固體，產率52%）。
MS m/z (ESI): 376.1 [M+H] +.
第八步：4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-(甲基亞硫醯基＜亞磺醯＞)乙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image023
將6-(2-(甲基亞硫醯基＜亞磺醯＞)乙氧基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊環-2-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈(60mg，0.16mmol)，3-(5-溴吡啶-2-基)-6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷(72mg，0.19mmol)，Pd(dppf)Cl 2(15mg，0.02mmol)和KOAc(44mg，0.5mmol)溶於dioxane/H 2O(20mL, v/v=10:1)中，氮氣保護下90℃攪拌過夜。加入10mL水，乙酸乙酯(20mL*3)萃取。有機相使用水和飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥。過濾，旋乾，粗產物用prep-HPLC製備得產品4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-(甲基亞硫醯基＜亞磺醯＞)乙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（41mg，白色固體，產率48%）。
MS m/z (ESI): 544.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.82 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.41 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.07 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.85 (dd, J = 8.8, 2.4 Hz, 1H), 7.68 (dd, J = 8.5, 2.2 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.78 (t, J = 9.4 Hz, 2H), 4.62 – 4.44 (m, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.73 (d, J = 11.6 Hz, 2H), 3.67 (d, J = 5.7 Hz, 2H), 3.58 – 3.52 (m, 2H), 3.50 (s, 2H), 3.13 (dt, J = 13.6, 4.4 Hz, 1H), 2.67 (s, 3H), 2.59 – 2.52 (m, 2H), 1.59 (d, J = 8.5 Hz, 1H).
實施例2
4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-(甲磺醯)乙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image025
Figure 02_image027
以4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-(甲基亞硫醯基＜亞磺醯＞)乙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈為原料參考實施例1第三步得到4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-(甲磺醯)乙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（45mg，白色固體，產率70%）。
MS m/z (ESI): 560.2 [M+H] +.
實施例3
4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-(S-甲基磺亞胺醯基)乙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image029
Figure 02_image031
將4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-(甲磺醯)乙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈(60mg，0.11mmol)溶於5mL甲醇中，加入胺基甲酸銨(17mg，0.22mmol)，碘苯二乙酸(70mg，0.22mmol)，室溫反應2h。加入10mL水，乙酸乙酯(10mL*3)萃取。有機相使用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥。過濾，旋乾，粗產物用prep-HPLC製備得產品4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-(S-甲基磺亞胺醯基)乙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（25mg，白色固體，產率45%）。
MS m/z (ESI): 559.2 [M+H] +.
實施例4
4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(3-(甲基亞硫醯基＜亞磺醯＞)丙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image033
以乙基 3-(甲硫基)丙酸酯為起始原料參考實施例1得到標題化合物（35mg，白色固體，40%）。
MS m/z (ESI): 558.2 [M+H] +.
實施例5
4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(3-(甲磺醯)丙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image035
Figure 02_image037
以4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(3-(甲基亞硫醯基＜亞磺醯＞)丙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈為原料參考實施例2得到4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(3-(甲磺醯)丙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（32mg，白色固體，56%）。
MS m/z (ESI): 574.2 [M+H] +.
實施例6
4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(3-(S-甲基磺亞胺醯基)丙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image039
Figure 02_image041
以4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(3-(甲基亞硫醯基＜亞磺醯＞)丙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈為原料參考實施例3得到4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(3-(S-甲基磺亞胺醯基)丙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（28mg，白色固體，44%）。
MS m/z (ESI): 573.2 [M+H] +.
實施例7
6-(3-(2-羥基丙烷-2-基)四氫吖唉-1-基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image043
第一步：6-溴-3-氰基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基三氟甲磺酸酯
Figure 02_image045
25mL單口瓶中依次加入6-溴-4-羥基吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈，二氯甲烷及吡啶，反應液攪拌2分鐘後慢慢滴加三氟甲磺酸酐。反應液在室溫下攪拌12小時，反應液濃縮，用乙酸乙酯溶解後用飽和食鹽水洗滌，有機相經無水硫酸鈉乾燥，過濾，旋乾。粗產物用柱層析分離（純化得產品6-溴-3-氰基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基三氟甲磺酸酯。
MS m/z (ESI): 370.0[M+H] +, 372.0[M+H+2] +.
第二步：6-溴-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image047
25mL三口瓶中依次加入以6-溴-3-氰基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基三氟甲磺酸酯、6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊環-2-基)吡啶-2-基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷、四三苯基磷鈀、碳酸鈉、及二氧六環和水，反應液用氮氣置換5次。反應液在氮氣保護下加熱升溫至85℃攪拌5小時後冷卻至室溫，反應液濃縮，用乙酸乙酯溶解後用飽和食鹽水洗滌，有機相經無水硫酸鈉乾燥，過濾，旋乾。粗產物用prep-HPLC純化實施例7第二步6-溴-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI): 516.1[M+H] +, 518.1[M+H+2] +.
第三步：6-(3-(2-羥基丙烷-2-基)四氫吖唉-1-基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image049
將6-溴-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈(80mg，0.15mmol)，2-(四氫吖唉-3-基)丙烷-2-醇(36mg，0.30mmol)，三（二亞苄基丙酮）二鈀(7mg，0.0075mmol)，2-二環己基磷-2',4',6'-三異丙基聯苯(4mg，0.0075mmol)，碳酸銫(146mg，0.45mmol)和甲苯(4mL)的混合物氮氣置換後在微波條件下130℃攪拌2小時。反應完畢冷卻至室溫，反應液濃縮，乙酸乙酯(20mL)溶解後用飽和食鹽水(15mL)洗滌，有機相經無水硫酸鈉乾燥，過濾，旋乾，然後製備色譜分離純化（18mg，白色固體，產率：21%）。
MS m/z (ESI): 551.2[M+H] +.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.32 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.85 – 7.79 (m, 2H), 7.71 (dd, J= 8.5, 2.3 Hz, 1H), 6.92 (d, J= 1.7 Hz, 1H), 6.86 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 6.78 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 3.97 (t, J= 7.8 Hz, 2H), 3.92 – 3.84 (m, 7H), 3.78 (d, J= 5.6 Hz, 2H), 3.65 (s, 1H), 3.62 (s, 3H), 2.95 – 2.81 (m, 1H), 2.70 (d, J= 7.0 Hz, 1H), 1.70 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 1.21 (s, 6H).
實施例8
6-(3-羥基-3-甲基丁-1-炔-1-基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image051
第一步：6-溴-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊環-2-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image053
以6-溴-3-氰基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基三氟甲磺酸酯為原料參考實施例1第七步得到6-溴-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊環-2-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（620mg，白色固體，56%）。
MS m/z (ESI): 348.0 [M+H] +.
第二步：6-(3-羥基-3-甲基丁-1-炔-1-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊環-2-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image055
將6-溴-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊環-2-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈(300mg，0.86mmol)溶於20mL三乙胺中，加入2-甲基丁-3-炔-2-醇(108mg，1.3mmol)，Pd 2(PPh 3) 2Cl 2(120mg，0.17mmol)，CuI(17mg，0.09mmol)，氮氣保護下65℃反應過夜。加入10mL氯化銨水溶液，乙酸乙酯(20mL*3)萃取。有機相使用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥。過濾，旋乾，粗產物用柱層析分離（二氯甲烷/甲醇=10/1沖洗）得6-(3-羥基-3-甲基丁-1-炔-1-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊環-2-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（197mg，白色固體，產率65%）。
MS m/z (ESI): 352.1 [M+H] +.
第三步：6-(3-羥基-3-甲基丁-1-炔-1-基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image057
以6-(3-羥基-3-甲基丁-1-炔-1-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊環-2-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈和3-(5-溴吡啶-2-基)-6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷為原料參考實施例1第八步得到6-(3-羥基-3-甲基丁-1-炔-1-基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（25mg，白色固體，43%）。
MS m/z (ESI): 520.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.83 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.35 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.84 (dd, J = 8.8, 2.3 Hz, 1H), 7.72 (dd, J = 8.4, 2.1 Hz, 1H), 7.41 (s, 1H), 6.88 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 6.78 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.91 (s, 1H), 3.88 (s, 4H), 3.79 (d, J = 5.7 Hz, 2H), 3.66 (s, 1H), 3.63 (s, 3H), 2.74 – 2.62 (m, 1H), 1.70 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 1.59 (s, 6H).
實施例9
6-(2-氰基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image059
第一步：4-溴-6-(2-氰基-2-甲基丙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image061
4-溴-6-羥基吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈(200mg，0.84mmol)和3-羥基-2,2-二甲基丙腈(83mg，0.84mmol)溶於5mL無水四氫呋喃溶液中，然後加入三苯基磷(330mg，1.26mmol)和偶氮二羧酸二異丙酯(202mg，1mmol)，反應液在氮氣保護下於0℃下攪拌12小時。反應液濃縮，乙酸乙酯(10mL)溶解，用水洗三次(5mL*3)，有機相濃縮後用柱層析分離（二氯甲烷/甲醇：30/1）純化得產品4-溴-6-(2-氰基-2-甲基丙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（180mg，黃色固體，產率67.1%）。
MS m/z (ESI):319.0 [M+H] +. 321.0 [M+H+2] +.
第二步：6-(2-氰基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image063
以4-溴-6-(2-氰基-2-甲基丙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈為原料參考實施例7第二步得產品6-(2-氰基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI):535.2[M+H] +.
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 8.43 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.16 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.13 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.81-7.75 (m, 2H), 7.19 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 6.75 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.70 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.96 – 3.86 (m, 6H), 3.78 – 3.64 (m, 4H), 2.94 – 2.80 (m, 1H), 1.78 – 1.72 (m, 1H), 1.55 (s, 6H).
實施例10
4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-(甲磺醯)乙基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image065
第一步：3-溴-5-(2-(甲磺醯)乙基)吡啶
Figure 02_image067
將DMSO(780mg，10mmol)溶於10 mL THF中，-78℃下加入n-BuLi(4mL，10mmol)，-78℃下攪拌0.5h，-78℃下加入3-溴-5-(溴甲基)吡啶(500mg，2mmol)，緩慢升至室溫攪拌2 h，加入10 mL氯化銨水溶液，乙酸乙酯(20mL*3)萃取。有機相使用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥。過濾，旋乾，粗產物用柱層析分離（二氯甲烷/甲醇=10/1沖洗）得3-溴-5-(2-(甲磺醯)乙基)吡啶（252mg，產率48%）。
MS m/z (ESI): 263.9 [M+H] +.
第二步：4-溴-6-(2-(甲磺醯)乙基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image069
將3-溴-5-(2-(甲磺醯)乙基)吡啶和2-氯丙烯腈的二氯甲烷溶液中分批加入1.8-二氮雜二環[5.4.0]十一烷-7-烯，然後升溫到室溫攪拌24小時，向反應液中加甲基叔丁基醚，室溫打漿15分鐘，然後過濾，濾餅烘乾，得到4-溴-6-(2-(甲磺醯)乙基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（350mg，白色固體）。
MS m/z (ESI): 327.9 [M+H] +.
第三步：6-(2-(甲磺醯)乙基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊環-2-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image071
以4-溴-6-(2-(甲磺醯)乙基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈為原料參考實施例1第七步得到6-(2-(甲磺醯)乙基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊環-2-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（230mg，白色固體，68%）。
MS m/z (ESI): 376.1 [M+H] +.
第四步：4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-(甲磺醯)乙基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image073
以6-(2-(甲磺醯)乙基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊環-2-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈為原料參考實施例1第八步得到4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-(甲磺醯)乙基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（30mg，白色固體，48%）。
MS m/z (ESI): 544.2 [M+H] +.
實施例11
6-(3-羥基-3-甲基丁基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image075
參考實施例10得到產品6-(3-羥基-3-甲基丁基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（33mg，白色固體）。
MS m/z (ESI): 524.2 [M+H] +.
實施例12
6-((1-亞胺基-1-羥基-1l6-噻丁環-3-基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image077
第一步：噻丁環-3-基甲醇
Figure 02_image079
將噻丁環-3-羧酸(500mg，4.2mmol)溶於10mL THF中，-78℃下加入LiAlH 4(8.4mL，8.4mmol)，-78℃下攪拌2 h，緩慢升至室溫攪拌2h，加入10 mL氯化銨水溶液，乙酸乙酯(20mL*3)萃取。有機相使用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥。過濾，旋乾，得到粗產物噻丁環-3-基甲醇（314mg，產率72%）。
第二步：4-溴-6-(噻丁環-3-基甲氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image081
以4-溴-6-羥基吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈和噻丁環-3-基甲醇為原料參考實施例1第二步得到4-溴-6-(噻丁環-3-基甲氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（210mg，白色固體，67%）。
MS m/z (ESI): 323.9 [M+H] +.
第三步：4-溴-6-((1-羥基噻丁環-3-基)甲氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image083
以4-溴-6-(噻丁環-3-基甲氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈為原料參考實施例1第三步得到4-溴-6-((1-羥基噻丁環-3-基)甲氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（180mg，白色固體，85%）。
MS m/z (ESI): 339.9 [M+H] +.
第四步：4-溴-6-((1-亞胺基-1-羥基-1l6-噻丁環-3-基)甲氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image085
以4-溴-6-((1-羥基噻丁環-3-基)甲氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈為原料參考實施例3得到4-溴-6-((1-亞胺基-1-羥基-1l6-噻丁環-3-基)甲氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（150mg，白色固體，79%）。
MS m/z (ESI): 354.9 [M+H] +.
第五步：6-((1-亞胺基-1-羥基-1l6-噻丁環-3-基)甲氧基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊環-2-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image087
以4-溴-6-((1-亞胺基-1-羥基-1l6-噻丁環-3-基)甲氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈為原料參考實施例1第七步得到6-((1-亞胺基-1-羥基-1l6-噻丁環-3-基)甲氧基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊環-2-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（96mg，白色固體，64%）。
MS m/z (ESI): 403.1 [M+H] +.
第六步：6-((1-亞胺基-1-羥基-1l6-噻丁環-3-基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image089
以6-((1-亞胺基-1-羥基-1l6-噻丁環-3-基)甲氧基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊環-2-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈為原料參考實施例1第八步得到6-((1-亞胺基-1-羥基-1l6-噻丁環-3-基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（30mg，白色固體，34%）。
MS m/z (ESI): 571.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.53 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.87 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.77 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 7.32 (s, 1H), 6.90 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 6.83 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 4.43 – 4.22 (m, 4H), 4.21 – 4.05 (m, 4H), 4.06 – 3.94 (m, 5H), 3.91 (s, 3H), 3.67 – 3.59 (m, 1H), 3.22 – 3.11 (m, 1H), 2.25 – 1.88 (m, 2H).
實施例13
6-(2-(1-亞胺基-1-羥基-1l6-噻丁環-3-基)乙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image091
以2-(噻丁環-3-基)乙烷-1-醇為原料參考實施例12得到6-(2-(1-亞胺基-1-羥基-1l6-噻丁環-3-基)乙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（35mg，白色固體）。
MS m/z (ESI): 585.2 [M+H] +.
實施例14
4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-(1-羥基四氫-2H-噻喃-4-基)乙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image093
以2-(四氫-2H-噻喃-4-基)乙烷-1-醇為原料參考實施例12得到4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-(1-羥基四氫-2H-噻喃-4-基)乙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（29mg，白色固體）。
MS m/z (ESI): 598.2 [M+H] +.
實施例15
6-(2-(1-亞胺基-1-羥基六氫-1l6-噻喃-4-基)乙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image095
以4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-(1-羥基四氫-2H-噻喃-4-基)乙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈為原料參考實施例3得到6-(2-(1-亞胺基-1-羥基六氫-1l6-噻喃-4-基)乙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（18mg，白色固體）。
MS m/z (ESI): 613.2 [M+H] +.
實施例16
6-((1-亞胺基-1-羥基六氫-1l6-噻喃-4-基)氧代)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image097
第一步：4-溴-6-((四氫-2H-噻喃-4-基)氧代)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈的製備
Figure 02_image099
4-溴-6-羥基吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈(10g，42.0mmol)溶於四氫呋喃(100mL)，加入四氫-2H-噻喃-4-醇(6g，50.4mmol)和三苯基磷(22g，84.0mmol)。DEAD(14.6g，84.0mmol)慢慢滴加入反應液。該反應室溫攪拌過夜。水加入淬滅反應，再加入乙酸乙酯萃取。有機相乾燥後旋乾。粗產品藉由柱層析純化，得到4-溴-6-((四氫-2H-噻喃-4-基)氧代)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（7g，收率：49%）。
MS m/z (ESI): 337.9[M+H] +.
第二步：4-溴-6-((1-亞胺基-1-羥基六氫-1l6-噻喃-4-基)氧代)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈的製備
Figure 02_image101
4-溴-6-((四氫-2H-噻喃-4-基)氧代)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈(3g，8.9mmol)溶於甲醇(40mL)，加入碳酸銨(1.6g，16.9mmol)和(二乙醯氧基碘)苯(5.7g，17.8mmol)。該反應室溫攪拌過夜。反應液旋乾。粗產品藉由柱層析純化，得到4-溴-6-((1-亞胺基-1-羥基六氫-1l6-噻喃-4-基)氧代)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（350mg，收率：11%）。
MS m/z (ESI): 368.9[M+H] +.
第三步：6-((1-亞胺基-1-羥基六氫-1l6-噻喃-4-基)氧代)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈的製備
Figure 02_image103
以4-溴-6-((1-亞胺基-1-羥基六氫-1l6-噻喃-4-基)氧代)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈和6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊環-2-基)吡啶-2-基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷為原料參考實例1第八步得到6-((1-亞胺基-1-羥基六氫-1l6-噻喃-4-基)氧代)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（35mg，收率：36%）。
MS m/z (ESI): 585.2[M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.89 (dd, J = 7.6, 2.0 Hz, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.42 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.85 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.72 – 7.60 (m, 1H), 7.51 – 7.40 (m, 1H), 6.78 (t, J = 9.4 Hz, 2H), 4.90 – 4.78 (m, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.79 – 3.61 (m, 4H), 3.60 – 3.45 (m, 4H), 3.27 – 3.13 (m, 2H), 3.13 – 2.98 (m, 2H), 2.65 – 2.53 (m, 1H),2.31 – 2.14 (m, 3H), 2.13 – 1.92 (m, 1H), 1.59 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 0.84 – 0.69 (m, 1H).
實施例17
6-(3-胺基-3-甲基丁-1-炔-1-基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image105
以2-甲基丁-3-炔-2-胺為原料參考實施例7得到6-(3-胺基-3-甲基丁-1-炔-1-基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI): 519.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, Methanol-d 4) δ 8.82 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.34 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.09 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.84 (dd, J = 8.9, 2.5 Hz, 1H), 7.72 (dd, J = 8.5, 2.5 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 6.78 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.01 – 3.83 (m, 5H), 3.84 – 3.73 (m, 2H), 3.72 – 3.56 (m, 4H), 2.78 – 2.65 (m, 1H), 1.71 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 1.52 (s, 6H).
實施例18
4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(3-羥基-3-甲基丁-1-炔-1-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image107
第一步：6-溴-3-氰基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基三氟甲磺酸酯
Figure 02_image109
將6-溴-4-羥基吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈(5g，21mmol)和三乙胺(4.2g，42mmol)溶於二氯甲烷(500mL)中，冰浴下加入三氟甲磺酸酐(8.9g，31.5mmol)，然後在室溫攪拌12小時，加入100mL水，乙酸乙酯(80mL*3)萃取。有機相使用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，旋乾，粗產物用柱層析分離（石油醚/乙酸乙酯=1/1）得到6-溴-3-氰基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基三氟甲磺酸酯（5g，白色固體，產率64%）。
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.60 (d, J= 0.9 Hz, 1H), 8.85 (s, 1H), 8.23 (s, 1H).
第二步：6-溴-4-(6-氟吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image111
向6-溴-3-氰基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基三氟甲磺酸酯(5g，13.51mmol)，2-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊環-2-基)吡啶(3.3g，14.86mmol)，碳酸鉀(3.7g，27mmol)和二氧六環(100mL)的混合物溶液中加入1,1-雙(二苯膦基)二茂鐵二氯化鈀(II)二氯甲烷複合物(494mg，0.68mmol)，氮氣置換三次後在氮氣保護下70℃攪拌16小時，反應完畢後冷卻過濾，濾液減壓濃縮乾，經過柱層析分離（二氯甲烷/甲醇=10：1），得到白色固體6-溴-4-(6-氟吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（3g，產率70%）。
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.49 (d, J= 1.3 Hz, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.51 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.27 (td, J= 8.2, 2.5 Hz, 1H), 7.86 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 7.40 (dd, J= 8.5, 2.5 Hz, 1H).
MS m/z (ESI): 317.0 [M+H] +.
第三步：叔-丁基 3-(5-(6-溴-3-氰基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-6-羧酸酯
Figure 02_image113
以6-溴-4-(6-氟吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈為原料參考實例11第七步得叔-丁基 3-(5-(6-溴-3-氰基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-6-羧酸酯。
MS m/z (ESI):495.1 [M+H] +.
第四步：4-(6-(3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-溴吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image115
以叔-丁基 3-(5-(6-溴-3-氰基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-6-羧酸酯為原料參考實例11第八步得4-(6-(3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-溴吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI): 395.1 [M+H] +.
第五步：6-溴-4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image117
以4-(6-(3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-溴吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈和5-氟-6-甲氧基尼古丁醛為原料參考實例11第九步得6-溴-4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI):534.1 [M+H] +. 第六步：4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(3-羥基-3-甲基丁-1-炔-1-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image119
以2-甲基丁-3-炔-2-醇和6-溴-4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈為原料參考實例8第二步得4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(3-羥基-3-甲基丁-1-炔-1-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI):538.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.61 (s, 1H), 8.40 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.76 (dd, J = 8.8, 2.4 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 11.1 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.68 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 4.01 (s, 3H), 3.80 (s, 4H), 3.59 (s, 4H), 2.78 – 2.53 (m, 2H), 1.65 (s, 6H).
實施例19
6-(3-環丙基-3-羥基丙-1-炔-1-基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image121
Figure 02_image123
將6-溴-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈(50mg，0.1mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(2mL)中，加入1-環丙基丙-2-炔-1-醇(47mg，0.5mmol)，三乙胺(50mg，0.5mmol)，Pd 2(PPh 3) 2Cl 2(7mg，0.01mmol)，CuI(1mg，0.01mmol)，氮氣保護下65℃反應過夜。加入5 mL氯化銨水溶液，乙酸乙酯(3mL*3)萃取。有機相使用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥。過濾，旋乾，粗產物用柱層析分離（二氯甲烷/甲醇=10/1沖洗）得6-(3-環丙基-3-羥基丙-1-炔-1-基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（15mg，白色固體，產率29%）。
MS m/z (ESI): 532.2 [M+H] +.
實施例20
6-((1-氰基環戊基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image125
Figure 02_image127
以6-溴-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈和(1-氰基環戊基)甲基 4-甲基苯磺酸酯為原料參考實施例27第二步得到6-((1-氰基環戊基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI): 561.2 [M+H] +.
實施例21
6-((S)-3-羥基丁-1-炔-1-基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image129
以6-溴-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈和(S)-丁-3-炔-2-醇為原料參考實施例20第二步得到6-((S)-3-羥基丁-1-炔-1-基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（白色固體）。
MS m/z (ESI): 506.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, Methanol-d4) δ 8.85 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.35 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.08 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.84 (dd, J = 8.9, 2.6 Hz, 1H), 7.72 (dd, J = 8.5, 2.5 Hz, 1H), 7.42 (s, 1H), 6.88 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 6.78 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 4.72 (q, J = 6.6 Hz, 1H), 3.96 – 3.84 (m, 5H), 3.83 – 3.74 (m, 2H), 3.69 – 3.56 (m, 4H), 2.76 – 2.64 (m, 1H), 1.70 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 1.51 (d, J = 6.6 Hz, 3H).
實施例22
6-((R)-3-羥基丁-1-炔-1-基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image131
以6-溴-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈和(R)-丁-3-炔-2-醇為原料參考實施例20第二步得到6-((S)-3-羥基丁-1-炔-1-基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（白色固體）。
MS m/z (ESI): 506.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, Methanol-d 4) δ 8.85 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.35 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.84 (dd, J = 8.8, 2.5 Hz, 1H), 7.72 (dd, J = 8.5, 2.5 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 6.78 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.75 – 4.70 (m, 1H), 3.92 – 3.85 (m, 5H), 3.84 – 3.75 (m, 2H), 3.68 – 3.58 (m, 4H), 2.74 – 2.67 (m, 1H), 1.71 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 1.51 (d, J = 6.7 Hz, 3H).
實施例23
6-(3-胺基-3-甲基丁-1-炔-1-基)-4-(6-(6-((6-(甲氧基-d3)吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image133
第一步：6-溴-4-(6-(6-((6-(甲氧基-d3)吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈的製備
Figure 02_image135
以4-(6-(3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-溴吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈為原料參考實施例1第六步得到6-溴-4-(6-(6-((6-(甲氧基-d3)吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（黃色固體）。
MS m/z (ESI): 519.1 [M+H] +.
第二步：6-(3-胺基-3-甲基丁-1-炔-1-基)-4-(6-(6-((6-(甲氧基-d3)吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈的製備
Figure 02_image137
以6-溴-4-(6-(6-((6-(甲氧基-d3)吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈為原料參考實施例20第二步得到6-(3-胺基-3-甲基丁-1-炔-1-基)-4-(6-(6-((6-(甲氧基-d3)吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（白色固體）。
MS m/z (ESI): 522.2 [M+H] +.
實施例24
6-(3-胺基-3-甲基丁-1-炔-1-基)-4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image139
Figure 02_image141
以6-溴-4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈和2-甲基丁-3-炔-2-胺為原料參考實施例20第二步得到6-(3-胺基-3-甲基丁-1-炔-1-基)-4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（白色固體）。
MS m/z (ESI): 537.2 [M+H] +.
實施例25
6-(3-羥基-3-甲基丁-1-炔-1-基)-4-(6-(6-((6-(甲氧基-d3)吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image143
以6-溴-4-(6-(6-((6-(甲氧基-d3)吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈為原料參考實施例20第二步得到6-(3-羥基-3-甲基丁-1-炔-1-基)-4-(6-(6-((6-(甲氧基-d3)吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（白色固體）。
MS m/z (ESI): 523.3 [M+H] +.
實施例26
4-(6-(6-((6-環丙氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(3-羥基-3-甲基丁-1-炔-1-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image145
第一步：5-(氯甲基)-2-環丙氧基吡啶
Figure 02_image147
將5-(氯甲基)-2-氟吡啶(900mg，6.2mmol)溶於30mL THF中，加入環丙醇(539mg，9.3mmol)。叔丁基鉀(1.04g，9.3mmol)分批慢慢加入反應液中。該反應在室溫下攪拌4小時。水加入反應液，淬滅反應，再加入乙酸乙酯萃取。有機相乾燥後旋乾。粗產品藉由柱層析純化，得到5-(氯甲基)-2-環丙氧基吡啶（0.6g，產率52%）。
MS m/z (ESI): 184.2 [M+H] +.
第二步：6-溴-4-(6-(6-((6-環丙氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image149
4-(6-(3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-溴吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈(500mg，1.26mmol)溶於DMAc(15mL)，加入5-(氯甲基)-2-環丙氧基吡啶(279mg，1.52mmol)和叔丁醇鉀(284mg，2.53mmol)。反應液在90℃攪拌4小時。水加入淬滅反應，再加入乙酸乙酯萃取。有機相乾燥後旋乾。粗產品藉由柱層析純化，得到6-溴-4-(6-(6-((6-環丙氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（300mg，產率44%）。
MS m/z (ESI): 542.2 [M+H] +.
第三步：4-(6-(6-((6-環丙氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(3-羥基-3-甲基丁-1-炔-1-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image151
以2-甲基丁-3-炔-2-醇和6-溴-4-(6-(6-((6-環丙氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈為原料參考實施例8得到4-(6-(6-((6-環丙氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(3-羥基-3-甲基丁-1-炔-1-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI): 546.2 [M+H] +.
實施例27
6-((1-氰基環丙基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image153
第一步：6-羥基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image155
以(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)硼酸和4-溴-6-羥基吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈為原料參考實施例1第八步得到6-羥基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（500mg，白色固體，產率80%）。
MS m/z (ESI): 454.1 [M+H] +.
第二步：6-((1-氰基環丙基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image157
將6-羥基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈(50mg，0.11mmol)溶於2mL DMF中，加入(1-氰基環丙基)甲基 4-甲基苯磺酸酯(28mg，0.11mmol)，碳酸鉀(42mg，0.3mmol)，90℃下攪拌過夜。加入10mL水，乙酸乙酯(2mL*3)萃取。有機相使用水和飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥。過濾，旋乾，粗產物用prep-HPLC製備分離，得到6-((1-氰基環丙基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（23mg，白色固體，產率39%）。
MS m/z (ESI): 533.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, Methanol-d 4) δ 8.47 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.39 – 8.33 (m, 2H), 8.09 (s, 1H), 7.86 (dd, J = 8.8, 2.5 Hz, 1H), 7.72 (dd, J = 8.5, 2.5 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 6.78 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.15 (s, 2H), 3.93 – 3.87 (m, 5H), 3.82 – 3.77 (m, 2H), 3.69 – 3.60 (m, 4H), 2.74 – 2.65 (m, 1H), 1.75 – 1.66 (m, 1H), 1.47 – 1.40 (m, 2H), 1.28 – 1.24 (m, 2H).
實施例28
6-((1-氰基環丙基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-(甲氧基-d3)吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image159
第一步：3-(5-溴吡啶-2-基)-6-((6-(甲氧基-d3)吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷
Figure 02_image161
以3-(5-溴吡啶-2-基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷和6-(甲氧基-d3)尼古丁醛為原料參考實施例1第六步得到3-(5-溴吡啶-2-基)-6-((6-(甲氧基-d3)吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷。
MS m/z (ESI): 378.0 [M+H] +.
第二步：6-((6-(甲氧基-d3)吡啶-3-基)甲基)-3-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊環-2-基)吡啶-2-基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷
Figure 02_image163
以3-(5-溴吡啶-2-基)-6-((6-(甲氧基-d3)吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷為原料參考實施例1第七步得到6-((6-(甲氧基-d3)吡啶-3-基)甲基)-3-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊環-2-基)吡啶-2-基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷。
MS m/z (ESI): 426.2 [M+H] +.
第三步：6-羥基-4-(6-(6-((6-(甲氧基-d3)吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image165
以6-((6-(甲氧基-d3)吡啶-3-基)甲基)-3-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊環-2-基)吡啶-2-基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷和4-溴-6-羥基吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈為原料參考實施例1第八步得到6-羥基-4-(6-(6-((6-(甲氧基-d3)吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI): 457.2 [M+H] +.
第四步：6-((1-氰基環丙基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-(甲氧基-d3)吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image167
以6-羥基-4-(6-(6-((6-(甲氧基-d3)吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈和(1-氰基環丙基)甲基 4-甲基苯磺酸酯為原料參考實施例27第二步得到6-((1-氰基環丙基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-(甲氧基-d3)吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI): 536.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 8.42 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.13 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.11 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.91 – 7.74 (m, 2H), 7.19 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 6.76 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.71 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.09 – 3.99 (m, 4H), 3.98 – 3.89 (m, 2H), 3.84 – 3.64 (m, 4H), 2.05 – 1.97 (m, 1H), 1.79 – 1.71 (m, 1H), 1.53 – 1.48 (m, 2H), 1.21 – 1.15 (m, 2H).
實施例29
6-((1-羥基環丙基)乙炔基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image169
Figure 02_image171
以6-溴-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈和1-乙炔基環丙烷-1-醇為原料參考實施例20第二步得到6-((1-羥基環丙基)乙炔基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（白色固體）。
MS m/z (ESI): 518.2 [M+H] +.
實施例30
6-(4-氟-3-(氟甲基)-3-羥基丁-1-炔-1-基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image173
Figure 02_image175
以6-溴-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈和1-氟-2-(氟甲基)丁-3-炔-2-醇為原料參考實施例20第二步得到6-(4-氟-3-(氟甲基)-3-羥基丁-1-炔-1-基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（白色固體）。
MS m/z (ESI): 556.2 [M+H] +.
實施例31
4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(3-(2-羥基丙烷-2-基)四氫吖唉-1-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image177
第一步：4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(3-(2-羥基丙烷-2-基)四氫吖唉-1-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image179
向6-溴-4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈(50mg，0.094mmol)，2-(四氫吖唉-3-基)丙烷-2-醇(16mg，0.14mmol），碳酸銫(122mg，0.376mmol)和甲苯(3mL)的混合物溶液加入三(二亞苄基丙酮)二鈀(5mg，0.005mmol)和4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(3mg，0.005mmol)，氮氣置換後在微波下130℃攪拌2小時，反應完畢後冷卻過濾，濾液減壓濃縮乾，經過製備色譜分離，得到白色固體4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(3-(2-羥基丙烷-2-基)四氫吖唉-1-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（15mg，產率28%）。
MS m/z (ESI):569.3 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.39 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.79 (dd, J= 8.8, 2.3 Hz, 1H), 7.72 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 6.75 (d, J= 1.7 Hz, 1H), 6.69 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 4.01 (s, 3H), 3.99 – 3.93 (m, 2H), 3.91 – 3.83 (m, 4H), 3.66 (s, 4H), 2.91 – 2.79 (m, 2H), 1.25 (s, 6H).
實施例32
6-(6-羥基-6-甲基-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image181
第一步：6-溴-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image183
以4-(6-(3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-溴吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈和6-甲氧基尼古丁醛為原料參考實例11第九步得6-溴-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
MS m/z (ESI):516.1 [M+H] +.
第二步：6-(6-羥基-6-甲基-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image185
以6-甲基-2-氮雜螺[3.3]庚烷-6-醇為原料參考實例31第一步得6-(6-羥基-6-甲基-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI):563.3 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.38 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 8.14 (d, J= 6.8 Hz, 2H), 7.89 (s, 1H), 7.80 (dd, J= 8.7, 2.3 Hz, 1H), 7.68 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 6.76 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 6.71 (t, J= 5.9 Hz, 2H),4.01- 3.93 (m, 10H), 3.74 (s, 4H), 2.96 (s, 1H), 2.39 (s, 4H), 1.40 (s, 3H).
實施例33
6-(3-羥基-3-甲基四氫吖唉-1-基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image187
以3-甲基四氫吖唉-3-醇為原料參考實例31第一步得6-(3-羥基-3-甲基四氫吖唉-1-基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI):523.3 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.40 (s, 1H), 8.15 (s, 3H), 7.82 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 7.74 (s, 1H), 6.80 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 6.75 (d, J= 1.7 Hz, 1H), 6.72 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 4.21 (s, 2H), 4.01 (s, 2H), 3.93-3.92 (m, 7H), 3.84 (d, J= 7.3 Hz, 4H), 1.68 (s, 3H).
實施例34
6-(3-羥基-3-甲基吡咯啶-1-基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image189
以3-甲基吡咯啶-3-醇為原料參考實例31第一步得6-(3-羥基-3-甲基吡咯啶-1-基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI):537.3 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.44 (s, 2H), 8.16 (m, 2H), 7.88 (d, J= 6.7 Hz, 1H), 7.80 (s, 1H), 6.93 (s, 1H), 6.86 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 6.76 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 4.18-4.13 (m, 2H), 4.07-4.03(m, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.65-3.61 (m, 2H), 3.46-3.41 (m, 2H), 2.24 – 2.12 (m, 3H), 2.0-1.96 (m, 3H), 1.31 (s, 3H).
實施例35
6-(4-羥基-4-甲基哌啶-1-基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image191
以4-甲基哌啶-4-醇為原料參考實例31第一步得6-(4-羥基-4-甲基哌啶-1-基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI): 551.3 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.41 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.07 (s, 2H), 7.82 (d, J= 6.7 Hz, 1H), 7.22 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 6.79 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 6.71 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 3.99 (s, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.85 (s, 4H), 3.36-3.32 (m, 2H), 3.23 – 3.15 (m, 2H), 1.85 – 1.74 (m, 6H), 1.35 (s, 3H).
實施例36
6-((1-氰基環丁基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image193
參考實施例27得到6-((1-氰基環丁基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（白色固體）。
MS m/z (ESI): 547.2 [M+H] +.
實施例37
6-((3-氰基噁丁環-3-基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image195
參考實施例27得到6-((3-氰基噁丁環-3-基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（12mg，白色固體，29%）。
MS m/z (ESI): 549.2 [M+H] +.
H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.83 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.42 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.86 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.68 (d, J= 6.9 Hz, 1H), 7.40 (s, 1H), 6.81 – 6.76 (m, 2H), 4.93 (d, J= 6.5 Hz, 2H), 4.70 (s, 2H), 4.68 (d, J= 6.5 Hz, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.67 (d, J= 5.3 Hz, 2H), 3.53–3.47 (m, 6H), 2.01 – 1.99 (m, 2H).
實施例38
6-(((1-羥基環丙基)甲基)(甲基)胺基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image197
以1-((甲基胺基)甲基)環丙烷-1-醇為原料參考實例31第一步得6-(((1-羥基環丙基)甲基)(甲基)胺基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI):537.3 [M+H] +.
實施例39
6-(((1-氰基環丙基)甲基)胺基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image199
以1-(胺基甲基)環丙烷-1-甲腈為原料參考實例31第一步得6-(((1-氰基環丙基)甲基)胺基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI):532.3 [M+H] +.
實施例40
4-(6-(6-((6-環丙氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(3-(2-羥基丙烷-2-基)四氫吖唉-1-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image201
Figure 02_image203
以6-溴-4-(6-(6-((6-環丙氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈為原料參考實施例31第二步得產品4-(6-(6-((6-環丙氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(3-(2-羥基丙烷-2-基)四氫吖唉-1-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI): 577.2[M+H] +.
實施例41
6-(3-(2-羥基丙烷-2-基)四氫吖唉-1-基)-4-(6-(6-((6-(甲氧基-d3)吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image205
以6-溴-4-(6-(6-((6-(甲氧基-d3)吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈為原料參考實施例31第一步得到6-(3-(2-羥基丙烷-2-基)四氫吖唉-1-基)-4-(6-(6-((6-(甲氧基-d3)吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（20mg，黃色固體，30%）。
MS m/z (ESI): 554.3 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.32 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.08 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.84 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.82 (dd, J = 8.8, 2.4 Hz, 1H), 7.71 (dd, J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 6.92 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 6.87 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.78 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 3.97 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 3.91 – 3.85 (m, 4H), 3.79 (d, J = 5.7 Hz, 2H), 3.65 (s, 1H), 3.62 (s, 3H), 2.92 – 2.84 (m, 1H), 2.71 (s, 1H), 1.70 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 1.21 (s, 6H).
實施例42
N-(3-氰基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-6-基)-2-羥基-2-甲基丙醯胺
Figure 02_image207
第一步：叔丁基(3-氰基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-6-基)胺基甲酸叔丁酯
Figure 02_image209
以叔-丁基胺基甲酸酯為原料參考實例31第一步得叔丁基(3-氰基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-6-基)胺基甲酸叔丁酯
MS m/z (ESI):553.3 [M+H] +.
第二步：6-胺基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image211
以叔丁基(3-氰基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-6-基)胺基甲酸叔丁酯為原料參考實例31第一步得6-胺基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
MS m/z (ESI):453.3 [M+H] +.
第三步：N-(3-氰基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-6-基)-2-羥基-2-甲基丙醯胺
Figure 02_image213
將6-胺基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-碳腈、2-羥基-2-甲基丙酸、2-(7-偶氮苯並三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯、三乙胺；N,N-二甲胺鹽酸鹽和二氯甲烷的混合物在室溫攪拌16小時，反應完畢加水淬滅，乙酸乙酯萃取，有機相用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮乾，經過柱層析分離得N-(3-氰基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-6-基)-2-羥基-2-甲基丙醯胺
MS m/z (ESI): 539.2 [M+H] +.
實施例43
6-((1-胺基環丙基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image215
第一步：(1-(((3-氰基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-6-基)氧代)甲基)環丙基)胺基甲酸叔丁酯的製備
Figure 02_image217
以(1-(溴甲基)環丙基)胺基甲酸叔丁酯和6-羥基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈溶於DMAc中，加入(1-(溴甲基)環丙基)胺基甲酸叔丁基酯和碳酸銫。反應液在100℃下攪拌過夜。反應液中加入水，再加入乙酸乙酯萃取。有機相乾燥後旋乾。粗產品藉由prep-HPLC純化得到(1-(((3-氰基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-6-基)氧代)甲基)環丙基)胺基甲酸叔丁酯。
MS m/z (ESI): 623.3 [M+H] +.
第二步：6-((1-胺基環丙基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈的製備
Figure 02_image219
以(1-(((3-氰基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-6-基)氧代)甲基)環丙基)胺基甲酸叔丁酯溶於25%三氟乙酸/二氯甲烷溶液。反應液在室溫攪拌2小時。反應液旋乾後再加入二氯甲烷。NaHCO 3水溶液慢慢加入，調節pH至7~8。有機相乾燥後旋乾，得6-((1-胺基環丙基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)
甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI): 523.3 [M+H] +.
實施例44
6-((順式-3-羥基-3-甲基環丁基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image221
第一步：順式-3-(羥甲基)-1-甲基環丁烷-1-醇
Figure 02_image223
向0攝氏度的順式-3-羥基-3-甲基環丁烷-1-羧酸(1g，7.68mmol)的四氫呋喃(10mL)溶液中滴加硼烷-四氫呋喃溶液(7.5mL，15mmol，2M)，然後在室溫攪拌2小時，反應完畢，加甲醇淬滅，然後乙酸乙酯萃取，合併有機相，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮乾，得到無色油狀物順式-3-(羥甲基)-1-甲基環丁烷-1-醇（600mg，粗品）
第二步：(順式-3-羥基-3-甲基環丁基)甲基 4-甲基苯磺酸酯
Figure 02_image225
向順式-3-(羥甲基)-1-甲基環丁烷-1-醇(600mg，5.17mmol)、三乙胺(1.04g，10.34mmol)和二氯甲烷(10mL)的混合溶液中加入對甲苯磺醯氯(987mg，5.17mmol)，然後在室溫攪拌16小時，反應完畢，加水淬滅，然後乙酸乙酯萃取，合併有機相，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮乾，然後柱層析分離，得到無色油狀物(順式-3-羥基-3-甲基環丁基)甲基 4-甲基苯磺酸酯（800mg，產率57%）
第三步：6-((順式-3-羥基-3-甲基環丁基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image227
以6-羥基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈和(順式-3-羥基-3-甲基環丁基)甲基4-甲基苯磺酸酯為原料參考實例27第二步得6-((順式-3-羥基-3-甲基環丁基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
MS m/z (ESI):552.3[M+H] +.
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.41 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.13 (s, 2H), 7.87 – 7.73 (m, 2H), 7.13 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.75 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.70 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.03 (d, J = 5.8 Hz, 2H), 3.92 (s, 7H), 3.70 (s, 4H), 2.89 (s, 1H), 2.41-2.36(m, 1H), 2.32-2.27(m, 2H), 2.05-2.00 (m, 3H), 1.45 (s, 3H).
實施例45
6-((3-(羥甲基)二環[1.1.1]戊烷-1-基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image229
第一步：二環[1.1.1]戊烷-1,3-二基二甲醇
Figure 02_image231
向0℃的3-(甲酯基＜甲氧羰基＞)二環[1.1.1]戊烷-1-羧酸(1g，5.88mmol)的四氫呋喃(10mL)溶液中加入氫化鋰鋁(670mg，17.63mmol)，然後升溫到室溫攪拌16小時，反應完畢，加十水硫酸鈉淬滅，過濾，濾液減壓濃縮乾，得到無色油狀物二環[1.1.1]戊烷-1,3-二基二甲醇(640mg，85%)
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 4.39 (t, J= 5.5 Hz, 2H), 3.35 (d, J= 5.5 Hz, 4H), 1.45 (s, 6H).
第二步：(3-(羥甲基)二環[1.1.1]戊烷-1-基)甲基 4-甲基苯磺酸酯
Figure 02_image233
以二環[1.1.1]戊烷-1,3-二基二甲醇為原料參照參考實例44第二步得到(3-(羥甲基)二環[1.1.1]戊烷-1-基)甲基 4-甲基苯磺酸酯
第三步：6-((3-(羥甲基)二環[1.1.1]戊烷-1-基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image235
以6-羥基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈和(3-(羥甲基)二環[1.1.1]戊烷-1-基)甲基 4-甲基苯磺酸酯為原料參考實例27第二步得6-((3-(羥甲基)二環[1.1.1]戊烷-1-基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
MS m/z (ESI):564.3[M+H] +.
實施例46
(E)-6-(3-羥基-3-甲基丁-1-烯-1-基)-4-(6-(6-((6-(甲氧基-d3)吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image237
以6-溴-4-(6-(6-((6-(甲氧基-d3)吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈和(E)-2-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊環-2-基)丁-3-烯-2-醇為原料參考實施例1第八步得到(E)-6-(3-羥基-3-甲基丁-1-烯-1-基)-4-(6-(6-((6-(甲氧基-d3)吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（10mg，白色固體，30%）。
MS m/z (ESI): 522.3 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.71 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.36 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.86 (dd, J = 8.8, 2.3 Hz, 1H), 7.72 (dd, J = 8.5, 2.3 Hz, 1H), 7.64 (s, 1H), 6.89 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 6.78 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.65 (q, J = 16.1 Hz, 2H), 3.91 (s, 1H), 3.88 (s, 4H), 3.79 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 3.67 – 3.62 (m, 4H), 2.71 (s, 1H), 1.71 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 1.40 (s, 6H).
實施例47
6-((3-羥基二環[1.1.1]戊烷-1-基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image239
第一步：6-((3-羥基二環[1.1.1]戊烷-1-基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image241
將6-羥基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈(50mg，0.11mmol)、3-(溴甲基)二環[1.1.1]戊烷-1-醇(29mg，0.17mmol)、碳酸鉀(46mg，0.33mmol)和乙腈(5mL)的混合物在70℃攪拌2小時，然後冷卻到室溫過濾，濾液減壓濃縮乾，經過製備色譜分離，得到6-((3-羥基二環[1.1.1]戊烷-1-基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（10mg，產率17%）。
MS m/z (ESI): 550.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.45 (s, 1H), 8.25 – 8.15 (m, 3H), 7.85 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 7.17 (s, 1H), 6.84 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 6.74 (d, J= 7.8 Hz, 2H), 4.09 (s, 2H), 4.02 (s, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.24-3.19 (m, 2H), 2.93-2.88(m, 2H), 2.24 – 2.20 (m, 2H) , 1.58 (s, 6H).
實施例48
6-(4-羥基-4-甲基戊-1-炔-1-基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image243
以2-甲基戊-4-炔-2-醇為原料參考實例8第二步得 6-(4-羥基-4-甲基戊-1-炔-1-基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI):534.3 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.62 (s, 1H), 8.41 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.78 (dd, J= 8.8, 2.4 Hz, 2H), 7.31 (s, 1H), 6.75 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 6.70 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 3.98-3.93 (m, 7H), 3.72 (s, 4H), 2.66 (s, 2H), 1.41 (s, 6H).
實施例49
6-((1-胺基環丙基)乙炔基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image245
以1-乙炔基環丙烷-1-胺原料參考實例8第二步得6-((1-胺基環丙基)乙炔基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
MS m/z (ESI): 517.2 [M+H] +.
實施例50
4-(6-(6-((6-環丙氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羥基-2-甲基丙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image247
Figure 02_image249
5-(氯甲基)-2-環丙氧基吡啶(91mg，0.495mmol)和4-(6-(3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羥基-2-甲基丙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈(200mg，0.495mmol)溶於DMSO(15mL)，加入碳酸銫(322mg，0.989mmol)。該反應在90℃攪拌2小時。水加入反應液，再加入乙酸乙酯萃取。有機相乾燥後旋乾。粗產品藉由prep-HPLC純化，得到4-(6-(6-((6-環丙氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羥基-2-甲基丙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（33.6mg，收率12%）。
MS m/z (ESI): 552.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.68 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.41 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.10 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.85 (dd, J = 8.8, 2.6 Hz, 1H), 7.70 (dd, J = 8.5, 2.4 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 6.80 (dd, J = 8.7, 3.9 Hz, 2H), 4.72 (s, 1H), 4.21 – 4.11 (m, 1H), 3.88 (s, 2H), 3.80 – 3.64 (m, 4H), 3.62 – 3.47 (m, 4H), 2.55 – 2.53 (m, 1H), 1.59 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 1.23 (s, 6H), 0.79 – 0.71 (m, 2H), 0.68 – 0.59 (m, 2H).
實施例51
6-((3-羥基二環[1.1.1]戊烷-1-基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-(甲氧基-d3)吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image251
以6-羥基-4-(6-(6-((6-(甲氧基-d3)吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈和3-(溴甲基)二環[1.1.1]戊烷-1-醇為原料參考實例37第一步得6-((3-羥基二環[1.1.1]戊烷-1-基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-(甲氧基-d3)吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
MS m/z (ESI):553.3 [M+H] +.
實施例52
6-((3-氰基-3-甲基環丁基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image253
以6-羥基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈和(3-氰基-3-甲基環丁基)甲基 4-甲基苯磺酸酯為原料參考實施例27第二步得到6-((3-氰基-3-甲基環丁基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI): 561.2 [M+H] +.
實施例53
6-((3-氰基二環[1.1.1]戊烷-1-基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image255
以(3-氰基二環[1.1.1]戊烷-1-基)甲基 4-甲基苯磺酸酯為原料參考實例27第二步得6-((3-氰基二環[1.1.1]戊烷-1-基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI): 559.3.[M+H] +.
實施例54
6-((1-亞胺基-1-羥基六氫-1l6-噻喃-4-基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image257
以(四氫-2H-噻喃-4-基)甲醇為原料參考實施例16得到6-((1-亞胺基-1-羥基六氫-1l6-噻喃-4-基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI): 599.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.70 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.41 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.07 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.84 (dd, J = 8.8, 2.5 Hz, 1H), 7.68 (dd, J = 8.5, 2.4 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 6.78 (t, J = 8.5 Hz, 2H), 4.16 (t, J = 6.5 Hz, 1H), 4.09 – 3.98 (m, 1H), 3.89 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.77 – 3.64 (m, 4H), 3.60 – 3.45 (m, 4H), 3.32 – 3.26 (m, 1H), 3.20 – 3.09 (m, 1H), 3.08 – 2.97 (m, 1H), 2.79 (q, J = 11.3 Hz, 1H), 2.65 – 2.53 (m, 1H), 2.38 – 2.25 (m, 1H), 2.19 – 2.05 (m, 1H), 2.02 – 1.93 (m, 1H), 1.92 – 1.73 (m, 1H), 1.58 (d, J = 8.4 Hz, 1H).
實施例55
6-((1-氰基環丙基)甲氧基)-4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image259
Figure 02_image261
以6-溴-4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈和(1-氰基環丙基)甲基 4-甲基苯磺酸酯為原料參考實施例27第二步得到6-((1-氰基環丙基)甲氧基)-4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI): 551.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.67 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.42 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.92 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.86 (dd, J = 8.8, 2.6 Hz, 1H), 7.64 (dd, J = 11.6, 1.9 Hz, 1H), 7.39 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 6.79 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.21 (s, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.84 – 3.65 (m, 4H), 3.63 – 3.48 (m, 4H), 2.61 – 2.53 (m, 1H), 1.59 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 1.51 – 1.33 (m, 2H), 1.31 – 1.16 (m, 2H).
實施例56
4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-((3-羥基二環[1.1.1]戊烷-1-基)甲氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image263
以3-(溴甲基)二環[1.1.1]戊烷-1-醇和4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-羥基吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈為原料參考實例47第一步得到4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-((3-羥基二環[1.1.1]戊烷-1-基)甲氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI): 568.2 [M+H] +.
實施例57
6-((1-氰基-3,3-二氟環丁基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image265
第一步：1-(氯甲基)-3,3-二氟環丁烷-1-甲腈
Figure 02_image267
將3,3-二氟環丁烷-1-甲腈(200mg，1.7mmol)溶於10mL THF中，-78℃下加入LDA(1mL，2M)，-78℃下攪拌1小時。-78℃下加入溴氯甲烷(441mg，3.4mmol)，-78℃到室溫攪拌3小時。水(20mL)加入反應液，再加入乙酸乙酯(20mL*3)萃取。有機相乾燥後旋乾得到粗產物1-(氯甲基)-3,3-二氟環丁烷-1-甲腈（280mg，產率：99%）。
第二步：6-((1-氰基-3,3-二氟環丁基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image269
將6-羥基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈(50mg，0.13mmol)溶於5mL DMF中，加入1-(氯甲基)-3,3-二氟環丁烷-1-甲腈(280mg)，碳酸鉀(55mg，0.4mmol)，80℃下攪拌5小時。旋乾，粗產品藉由prep-HPLC純化得到產物6-((1-氰基-3,3-二氟環丁基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（3.4mg，產率：4.5%）。
MS m/z (ESI): 583.2[M+H] +.
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.45 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.23 (d, J= 1.3 Hz, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.86 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 7.22 – 7.19 (m, 1H), 6.90 – 6.83 (m, 1H), 6.77 (s, 1H), 4.28 (s, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.34 – 3.22 (m, 3H), 3.07 – 2.97 (m, 3H), 2.96 – 2.88 (m, 2H), 2.25 – 2.19 (m, 2H), 2.06 – 1.93 (m, 4H).
實施例58
6-((3-氰基噁丁環-3-基)甲氧基)-4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image271
以4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-羥基吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈為原料參考實施例31得6-((3-氰基噁丁環-3-基)甲氧基)-4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI): 567.2 [M+H] +.
實施例59
6-((4-氰基四氫-2H-吡喃-4-基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image273
Figure 02_image275
以6-羥基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈和(4-氰基四氫-2H-吡喃-4-基)甲基4-甲基苯磺酸酯為原料參考實施例31第二步得到6-((4-氰基四氫-2H-吡喃-4-基)甲氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI): 577.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 8.42 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.17 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.13 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.90-7.78 (m, 2H), 7.18 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 6.76 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.71 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.14 – 4.02 (m, 4H), 3.99-3.88 (m, 6H), 3.86 – 3.61 (m, 6H), 2.12-2.05 (m, 2H), 1.90 – 1.78 (m, 3H), 1.78 – 1.64 (m, 2H).
實施例60
6-((4-氰基四氫-2H-吡喃-4-基)甲氧基)-4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image277
Figure 02_image279
以4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-羥基吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈和(4-氰基四氫-2H-吡喃-4-基)甲基4-甲基苯磺酸酯為原料參考實施例31第二步得到6-((4-氰基四氫-2H-吡喃-4-基)甲氧基)-4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI): 595.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 8.42 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.17 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.79 (dd, J = 8.8, 2.6 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 19.9 Hz, 1H), 7.17 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 6.70 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.09 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 4.06 (s, 3H), 4.01 (s, 3H), 3.91 – 3.78 (m, 6H), 3.70 – 3.62 (m, 3H), 2.90 – 2.73 (m, 1H), 2.11 – 2.05 (m, 2H), 1.89 – 1.77 (m, 3H), 1.73 – 1.69 (m, 1H).
實施例61
4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(3-羥基-4-甲氧基-3-甲基丁-1-炔-1-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image281
以6-溴-4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈和1-甲氧基-2-甲基丁-3-炔-2-醇為原料參考實例31第二步得4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(3-羥基-4-甲氧基-3-甲基丁-1-炔-1-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI):568.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.64 (s, 1H), 8.40 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.78 (dd, J= 8.8, 2.4 Hz, 1H), 7.67 (dd, J= 11.8, 7.1 Hz, 1H), 7.32 (s, 1H), 6.70 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 4.02 (s, 3H), 3.89 (s, 3H), 3.72 (s, 5H), 3.60 (d, J= 9.1 Hz, 1H), 3.52 (s, 3H), 3.45 (d, J= 9.1 Hz, 1H), 2.97 (m, 2H), 1.58 (s, 3H).
實施例62
6-(2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image283
第一步：4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-氧代丙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image285
6-羥基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈(200mg，0.441mmol)溶於DMF(20mL)，分別加入溴丙酮(121mg，0.882mmol)，碳酸銫(431mg，1.32mmol)和碘化鈉(66mg，0.441mmol)。該反應在室溫攪拌過夜。水加入反應液，再加入乙酸乙酯萃取。有機相乾燥後旋乾。粗產品藉由柱層析純化，得到4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-氧代丙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（160mg，收率：71%）。
MS m/z (ESI): 510.1 [M+H] +.
第二步：6-((2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6 - ((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3，6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image287
4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-氧代丙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈(160mg，0.314mmol)溶於無水四氫呋喃(15mL)，再慢慢加入乙炔基氯化鎂(6.28mL，3.14mmol，0.5M)。加完以後，反應液繼續攪拌一小時。氯化銨水溶液加入其中，淬滅反應，再加入乙酸乙酯萃取。有機相乾燥後旋乾。粗產品藉由柱層析純化，得到6-((2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈(48 mg，收率28%)。
MS m/z (ESI): 536.1 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.74 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.42 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.07 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.85 (dd, J = 8.8, 2.6 Hz, 1H), 7.68 (dd, J = 8.5, 2.4 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 6.78 (dd, J = 10.8, 8.6 Hz, 2H), 5.84 (s, 1H), 4.08 (s, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.78 – 3.70 (m, 2H), 3.70 – 3.65 (m, 2H), 3.61 – 3.52 (m, 2H), 3.50 (s, 2H), 3.40 (s, 1H), 2.57 – 2.53 (m, 1H), 1.59 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 1.49 (s, 3H).
實施例63
6-(((R)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image289
第一步：4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-氧代丙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image291
6-羥基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈(200mg，0.441mmol)溶於DMF(20mL)，分別加入溴丙酮(121mg，0.882mmol)，碳酸銫(431mg，1.32mmol)和碘化鈉(66mg，0.441mmol)。該反應在室溫攪拌過夜。水加入反應液，再加入乙酸乙酯萃取。有機相乾燥後旋乾。粗產品藉由柱層析純化，得到4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-氧代丙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（160mg，收率：71%）。
MS m/z (ESI): 510.1 [M+H] +.
第二步：6-((2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6 - ((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3，6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image293
4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-氧代丙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈(160mg，0.314mmol)溶於無水四氫呋喃(15mL)，再慢慢加入乙炔基氯化鎂(6.28mL，3.14mmol，0.5M)。加完以後，反應液繼續攪拌一小時。氯化銨水溶液加入其中，淬滅反應，再加入乙酸乙酯萃取。有機相乾燥後旋乾。粗產品藉由柱層析純化，得到6-((2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（48mg，收率28%）。
MS m/z (ESI): 536.1 [M+H] +.
第三步：6-(((R)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image295
6-((2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈(48.2mg，0.09mmol)藉由手性拆分，得到6-(((R)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈(16mg)。
手性拆分條件： 表6
儀器 CHIRALPAK  IBN
柱型 5.0 cm I.D. × 25 cm L, 10μm
流動相 Hexane/EtOH/DCM=60/30/10(V/V/V)
流速 60 mL/min
檢測波長 UV 254nm
柱溫 35℃
t R =9.002min
MS m/z (ESI): 536.1 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.74 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.42 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 8.07 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.85 (dd, J= 8.8, 2.6 Hz, 1H), 7.68 (dd, J= 8.5, 2.4 Hz, 1H), 7.33 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 6.78 (m, 2H), 5.84 (s, 1H), 4.08 (s, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.78 – 3.63 (m, 4H), 3.61 – 3.46 (m, 4H), 3.40 (s, 1H), 2.57 – 2.53 (m, 1H), 1.59 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 1.49 (s, 3H).
實施例64
6-(((S)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image297
第一步：6-(((S)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image299
6-((2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈(48.2mg，0.09mmol)藉由手性拆分，得到6-(((S)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈(18mg)。
手性拆分條件: 表7
儀器 CHIRALPAK  IBN
柱型 5.0cm I.D. × 25cm L, 10μm
流動相 Hexane/EtOH/DCM=60/30/10(V/V/V)
流速 60 mL/min
檢測波長 UV 254 nm
柱溫 35℃
t R =7.431min
MS m/z (ESI): 536.1 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.74 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.42 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 8.07 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.85 (dd, J= 8.8, 2.6 Hz, 1H), 7.68 (dd, J= 8.5, 2.4 Hz, 1H), 7.33 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 6.78 (m, 2H), 5.84 (s, 1H), 4.08 (s, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.78 – 3.63 (m, 4H), 3.61 – 3.46 (m, 4H), 3.40 (s, 1H), 2.57 – 2.53 (m, 1H), 1.59 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 1.49 (s, 3H).
實施例65
4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(((S)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image301
第一步：4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-氧代丙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image303
以4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-羥基吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈為原料參考實施例63第一步得到4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-氧代丙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（190mg，收率84%）。
MS m/z (ESI): 528.1 [M+H] +.
第二步：4-(6-(6 - ((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(((S)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image305
以4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-氧代丙氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈為原料參考實施例63第二步得到4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(((S)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（40mg，收率22%）。
MS m/z (ESI): 554.3 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.74 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.42 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 7.92 (d, J= 1.9 Hz, 1H), 7.85 (dd, J= 8.8, 2.6 Hz, 1H), 7.64 (dd, J= 11.5, 1.9 Hz, 1H), 7.33 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 6.79 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 5.84 (s, 1H), 4.08 (s, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.81 – 3.65 (m, 4H), 3.64 – 3.48 (m, 4H), 3.40 (s, 1H), 2.59 – 2.53 (m, 1H), 1.59 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 1.49 (s, 3H).
實施例66
3-(((3-氰基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-6-基)氧代)甲基)二環[1.1.1]戊烷-1-甲醯胺
Figure 02_image307
以(3-胺基甲醯二環[1.1.1]戊烷-1-基)甲基4-甲基苯磺酸酯和6-羥基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈為原料參考實施例27第二步得3-(((3-氰基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-6-基)氧代)甲基)二環[1.1.1]戊烷-1-甲醯胺。
MS m/z (ESI):577.3 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 9.70 – 9.62 (m, 1H), 8.41 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.16 – 8.08 (m, 2H), 7.93 – 7.77 (m, 2H), 7.13 (d, J= 1.9 Hz, 1H), 6.73 (dd, J= 22.6, 8.7 Hz, 2H), 5.52 (s, 1H), 5.39 (s, 1H), 4.07 (s, 2H), 3.93 (s, 5H), 3.72 (s, 4H), 2.96 (s, 1H), 2.88 (s, 1H), 2.15 (s, 6H).
實施例67
3-(((3-氰基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-6-基)氧代)甲基)-N-甲基二環[1.1.1]戊烷-1-甲醯胺
Figure 02_image309
以(3-(甲基胺基甲醯)二環[1.1.1]戊烷-1-基)甲基4-甲基苯磺酸酯和6-羥基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈為原料參考實施例27第二步得3-(((3-氰基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-6-基)氧代)甲基)-N-甲基二環[1.1.1]戊烷-1-甲醯胺。
MS m/z (ESI):591.3 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.40 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.14 – 8.05 (m, 2H), 7.78 (dd, J= 8.8, 2.4 Hz, 1H), 7.67 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 7.12 (d, J= 1.9 Hz, 1H), 6.70 (dd, J= 15.4, 8.7 Hz, 2H), 5.58 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 4.05 (s, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.83 (dd, J= 17.6, 8.8 Hz, 4H), 3.60 (s, 4H), 2.83 (d, J= 4.9 Hz, 3H), 2.72 (d, J= 5.8 Hz, 1H), 2.11 (s, 6H), 1.67 (d, J= 8.7 Hz, 1H).
實施例68
4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-((R)-3-羥基丁-1-炔-1-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image311
以(R)-丁-3-炔-2-醇和6-溴-4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈為原料參考實例8第二步得4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-((R)-3-羥基丁-1-炔-1-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI):524.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.62 (d, J= 1.0 Hz, 1H), 8.40 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.78 (dd, J= 8.8, 2.4 Hz, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.30 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 6.70 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 4.80 (q, J= 6.6 Hz, 1H), 4.01 (s, 3H), 3.97 – 3.82 (m, 3H), 3.71 (s, 4H), 2.87 (s, 2H), 1.74 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 1.59 (d, J= 6.6 Hz, 3H).
實施例69
6-((3-氰基二環[1.1.1]戊烷-1-基)甲氧基)-4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image313
以(3-氰基二環[1.1.1]戊烷-1-基)甲基4-甲基苯磺酸酯和4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-羥基吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈為原料參考實施例31第二步得6-((3-氰基二環[1.1.1]戊烷-1-基)甲氧基)-4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI):577.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.40 (d, J= 1.9 Hz, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.79 (dd, J= 8.7, 2.0 Hz, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.11 (s, 1H), 6.70 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 4.01 (s, 5H), 3.88 (m, 4H), 3.68 (s, 4H), 2.85 (s, 1H), 2.37 (s, 6H), 1.76 – 1.69 (m, 1H).
實施例70
6-((3-氰基-3-甲基環丁基)甲氧基)-4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image315
以(3-氰基-3-甲基環丁基)甲基4-甲基苯磺酸酯和4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-羥基吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈為原料參考實施例31第二步得6-((3-氰基-3-甲基環丁基)甲氧基)-4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI): 579.3 [M+H] +.
實施例71
4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-((3-(羥甲基)二環[1.1.1]戊烷-1-基)甲氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image317
以(3-(羥甲基)二環[1.1.1]戊烷-1-基)甲基4-甲基苯磺酸酯和4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-羥基吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈為原料參考實施例27第二步得4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-((3-(羥甲基)二環[1.1.1]戊烷-1-基)甲氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI): 582.3 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.41 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.11 (d, J= 1.9 Hz, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.79 (dd, J= 8.8, 2.4 Hz, 1H), 7.54 (d, J= 10.8 Hz, 1H), 7.14 (d, J= 1.9 Hz, 1H), 6.69 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 4.05 (s, 2H), 4.01 (s, 3H), 3.85 (d, J= 11.3 Hz, 4H), 3.66 (s, 6H), 2.79 (s, 1H), 1.82 (s, 6H), 1.70 (d, J= 8.8 Hz, 1H).
實施例72
4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-((順式-3-羥基-3-甲基環丁基)甲氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image319
以(順式-3-羥基-3-甲基環丁基)甲基4-甲基苯磺酸酯和4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-羥基吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈為原料參考實施例27第二步得4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-((順式-3-羥基-3-甲基環丁基)甲氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI):570.3 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.42 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.13 (d, J= 1.9 Hz, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.81 (dd, J= 8.7, 2.2 Hz, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.14 (d, J= 1.9 Hz, 1H), 6.71 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 4.14 – 3.99 (m, 7H), 3.93 (s, 2H), 3.77 (s, 4H), 3.00 (s, 1H), 2.38 (dd, J= 15.0, 7.6 Hz, 1H), 2.29 (dd, J= 12.5, 7.4 Hz, 2H), 2.02 (t, J= 10.2 Hz, 2H), 1.78 (s, 2H), 1.45 (s, 3H).
實施例73
4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(3-羥基-3-甲基四氫吖唉-1-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image321
以3-甲基四氫吖唉-3-醇和6-溴-4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈為原料參考實例31第一步得4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(3-羥基-3-甲基四氫吖唉-1-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI): 541.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.40 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.95 (s, 2H), 7.82 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.74 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 6.74 (dd, J= 11.8, 5.2 Hz, 2H), 4.25 (s, 2H), 4.02 (s, 3H), 3.88 (dd, J= 36.0, 7.4 Hz, 7H), 3.22 (s, 1H), 2.25 – 2.18 (m, 1H), 2.01 (s, 1H), 1.85 (s, 2H), 1.68 (s, 3H).
實施例74
1-氰基-N-(3-氰基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-6-基)環丙烷-1-羧醯胺
Figure 02_image323
第一步：1-氰基-N-(3-氰基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-6-基)環丙烷-1-羧醯胺
Figure 02_image325
以6-胺基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈溶於DMF，加入1-氰基環丙烷-1-羧酸、HATU和DIEA。該反應在室溫下攪拌過夜。加入水，再加入乙酸乙酯萃取。有機相用飽和氯化鈉洗滌後乾燥，再旋乾。粗產品藉由柱層析純化後得到1-氰基-N-(3-氰基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-6-基)環丙烷-1-羧醯胺（類白色固體）。
MS m/z (ESI): 546.1 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.43 (br., s, 1H), 9.26 (d, J= 1.7 Hz, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.40 (d, J= 2.6 Hz, 1H), 8.07 (d, J= 2.3 Hz, 1H), 7.83 (dd, J= 8.8, 2.6 Hz, 1H), 7.74 – 7.64 (m, 2H), 6.82 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 6.77 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.80 – 3.65 (m, 4H), 3.61 – 3.49 (m, 4H), 1.79 – 1.70 (m, 3H), 1.59 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 1.26 – 1.13 (m, 2H).
實施例75
6-(3-羥基-4-甲氧基-3-甲基丁-1-炔-1-基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image327
以6-溴-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈和1-甲氧基-2-甲基丁-3-炔-2-醇得6-(3-羥基-4-甲氧基-3-甲基丁-1-炔-1-基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（類白色固體）。
MS m/z (ESI):550.3 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.09 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 6.80 (s, 1H), 5.72 (s, 1H), 3.79 (m, 14H), 3.15 – 2.98 (m, 4H), 1.47 (s, 3H).
實施例76
6-(3-氰基-3-甲基四氫吖唉-1-基)-4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image329
以6-溴-4-(6-(6-(5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基）吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈和3-甲基四氫吖唉-3-甲腈為原料參考實例31第一步得6-(3-氰基-3-甲基四氫吖唉-1-基)-4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI):550.2 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.38 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.79 (dd, J= 8.8, 2.4 Hz, 1H), 7.73 (d, J= 1.7 Hz, 1H), 7.54 (d, J= 10.5 Hz, 1H), 6.70 (dd, J= 5.2, 3.4 Hz, 2H), 4.29 (d, J= 7.0 Hz, 2H), 4.01 (s, 3H), 3.91-3.85 (m, 6H), 3.67-3.64 (m, 4H), 2.80 (s, 1H), 1.83 (s, 3H), 1.70 (d, J= 8.7 Hz, 1H).
實施例77
6-(3-氰基-3-甲基四氫吖唉-1-基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image331
第一步：6-(3-氰基-3-甲基四氫吖唉-1-基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈的製備
Figure 02_image333
將6-溴-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈(100mg，0.19mmol)，三(二亞苄基丙酮)二鈀(9mg，0.0095mmol)，2-二環己基磷-2',4',6'-三異丙基聯苯(5mg，0.011mmol)，碳酸銫(123mg，0.38mmol)，3-甲基四氫吖唉-3-甲腈(28mg，0.29mmol)和甲苯(5mL)的混合物氮氣置換後在微波條件下130℃攪拌2小時。反應完畢冷卻至室溫，反應液濃縮，乙酸乙酯溶解後用飽和食鹽水洗滌，有機相經無水硫酸鈉乾燥，過濾，旋乾，然後製備色譜分離純化，得到6-(3-氰基-3-甲基四氫吖唉-1-基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（45mg，白色固體，產率：45%）。
MS m/z (ESI):532.3 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.53 (s, 1H), 8.40 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 8.21 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.83 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 7.68 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.03 (d, J= 1.7 Hz, 1H), 6.78 (t, J= 9.3 Hz, 2H), 4.27 (d, J= 7.7 Hz, 2H), 3.91 (d, J= 7.7 Hz, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.76-3.67 (m, 4H), 3.56-3.50 (m, 4H), 2.04 – 1.93 (m, 1H), 1.67 (s, 3H), 1.59 (d, J= 7.9 Hz, 1H).
實施例78
6-((4-羥基四氫-2H-吡喃-4-基)乙炔基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image335
以6-溴-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1，5-a]吡啶-3-甲腈和4-乙炔基四氫-2H-吡喃-4-醇為原料參考實例8第二步得6-((4-羥基四氫-2H-吡喃-4-基)乙炔基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI):562.3 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.66 (s, 1H), 8.42 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.80 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.31 (s, 1H), 6.79 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 6.72 (d, J= 8.9 Hz, 1H), 4.12 (d, J= 7.1 Hz, 2H), 4.04 – 3.90 (m, 7H), 3.88 – 3.68 (m, 6H), 2.32 (s, 1H), 2.13 – 2.03 (m, 3H), 1.96-1.90 (m, 2H).
實施例79
4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-((4-羥基四氫-2H-吡喃-4-基)乙炔基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image337
以6-溴-4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈和4-乙炔基四氫-2H-吡喃-4-醇為原料參考實例8第二步得4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-((4-羥基四氫-2H-吡喃-4-基)乙炔基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI):580.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.66 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.97 – 7.75 (m, 3H), 7.31 (s, 1H), 6.72 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 4.20 – 4.08 (m, 2H), 4.05 – 3.93 (m, 7H), 3.84-3.70 (m, 6H), 2.13 – 2.03 (m, 3H), 1.97 – 1.88 (m, 3H).
實施例80
6-((3-羥基噁丁環-3-基)乙炔基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image339
參考實施例8第二步得到6-((3-羥基噁丁環-3-基)乙炔基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（白色固體）。
MS m/z (ESI): 534.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.66 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.77 (d, J= 8.7 Hz, 2H), 7.29 (d, J= 10.6 Hz, 1H), 6.72 (dd, J= 16.3, 8.5 Hz, 2H), 4.95 (d, J= 6.7 Hz, 2H), 4.83 (d, J= 6.7 Hz, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.89 (s, 4H), 3.67 (s, 4H), 2.82 (s, 1H), 1.72 (d, J= 8.2 Hz, 2H).
實施例81
4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-((3-羥基噁丁環-3-基)乙炔基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image341
參考實施例8第二步得到4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-((3-羥基噁丁環-3-基)乙炔基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（白色固體）。
MS m/z (ESI): 552.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.66 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.77 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.70 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 4.95 (d, J= 6.7 Hz, 2H), 4.83 (d, J= 6.8 Hz, 2H), 4.01 (s, 3H), 3.88 (s, 4H), 3.66 (s, 4H), 2.81 (s, 1H), 1.71 (d, J= 6.8 Hz, 2H).
實施例82
6-((1-羥基環丁基)乙炔基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image343
以6-溴-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈和1-乙炔基環丁烷-1-醇為原料參考實施例8第二步得到6-((1-羥基環丁基)乙炔基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI): 532.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 9.14 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.42 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.07 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.86 (dd, J = 8.8, 2.5 Hz, 1H), 7.68 (dd, J = 8.5, 2.4 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 6.83 – 6.73 (m, 2H), 6.00 (s, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.79 – 3.67 (m, 4H), 3.60 – 3.50 (m, 4H), 2.58 – 2.56 (m, 1H), 2.47 – 2.39 (m, 2H), 2.29 – 2.19 (m, 2H), 1.85 – 1.78 (m, 2H), 1.62 – 1.57 (m, 1H).
實施例83
4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-((1-羥基環丁基)乙炔基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image345
以6-溴-4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈和1-乙炔基環丁烷-1-醇為原料參考實施例8第二步得到4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-((1-羥基環丁基)乙炔基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI): 550.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 9.14 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.86 (dd, J = 8.7, 2.6 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 6.80 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.99 (s, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.76 – 3.68 (m, 4H), 3.60 – 3.51 (m, 4H), 2.58 – 2.56 (m, 1H), 2.45 – 2.35 (m, 2H), 2.27 – 2.23 (m, 2H), 1.83 – 1.78 (m, 2H), 1.59 (d, J = 8.2 Hz, 1H).
實施例84
N-(1-(5-(3-氰基-6-(3-羥基-3-甲基丁-1-炔-1-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯醯胺
Figure 02_image347
Figure 02_image349
以6-(3-羥基-3-甲基丁-1-炔-1-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊環-2-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈和N-(1-(5-溴吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯醯胺為原料參考實施例1第八步得到N-(1-(5-(3-氰基-6-(3-羥基-3-甲基丁-1-炔-1-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯醯胺（30mg，白色固體，45%）。
MS m/z (ESI): 551.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, Methanol-d 4) δ 8.82 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.29 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.76 (dd, J = 9.0, 2.5 Hz, 1H), 7.41 – 7.36 (m, 1H), 7.28 – 7.21 (m, 1H), 7.09 – 7.02 (m, 2H), 6.98 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 4.10 – 4.00 (m, 2H), 3.44 – 3.39 (m, 2H), 2.44 – 2.38 (m, 2H), 2.38 (s, 3H), 1.77 – 1.69 (m, 2H), 1.58 (s, 6H), 1.54 (s, 3H).
實施例85
3-氯-N-(1-(5-(3-氰基-6-(3-羥基-3-甲基丁-1-炔-1-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基吡啶醯胺
Figure 02_image351
第一步：(1-(5-(6-溴-3-氰基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)胺基甲酸叔丁酯
Figure 02_image353
以6-溴-4-(6-氟吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈為原料參考實施例1第四步得到(1-(5-(6-溴-3-氰基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)胺基甲酸叔丁酯（白色固體）。
MS m/z (ESI): 511.1 [M+H] +.
第二步：4-(6-(4-胺基-4-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-溴吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure 02_image355
以(1-(5-(6-溴-3-氰基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)胺基甲酸叔丁酯為原料參考實施例1第五步得到4-(6-(4-胺基-4-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-溴吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈（白色固體）。
MS m/z (ESI): 411.1 [M+H] +.
第三步：N-(1-(5-(6-溴-3-氰基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-3-氯甲基吡啶醯胺
Figure 02_image357
以4-(6-(4-胺基-4-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-溴吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈為原料參考實施例20第一步得到N-(1-(5-(6-溴-3-氰基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-3-氯甲基吡啶醯胺（白色固體）。
MS m/z (ESI): 550.0 [M+H] +.
第四步：3-氯-N-(1-(5-(3-氰基-6-(3-羥基-3-甲基丁-1-炔-1-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基吡啶醯胺
Figure 02_image359
以N-(1-(5-(6-溴-3-氰基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-3-氯甲基吡啶醯胺為原料參考實施例20第二步得到3-氯-N-(1-(5-(3-氰基-6-(3-羥基-3-甲基丁-1-炔-1-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基吡啶醯胺（白色固體）。
MS m/z (ESI): 554.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, Methanol-d 4) δ 8.81 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 8.50 (dd, J = 4.7, 1.3 Hz, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.28 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.96 (dd, J = 8.2, 1.4 Hz, 1H), 7.75 (dd, J = 8.8, 2.6 Hz, 1H), 7.48 (dd, J = 8.2, 4.7 Hz, 1H), 7.38 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 6.97 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 4.18 – 4.03 (m, 2H), 3.48 – 3.37 (m, 2H), 2.54 – 2.34 (m, 2H), 1.80 – 1.68 (m, 2H), 1.58 (s, 6H), 1.56 (s, 3H).
實施例86
N-(1-(5-(6-(3-胺基-3-甲基丁-1-炔-1-基)-3-氰基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-3-氯甲基吡啶醯胺
Figure 02_image361
Figure 02_image363
以N-(1-(5-(6-溴-3-氰基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-3-氯甲基吡啶醯胺和2-甲基丁-3-炔-2-胺為原料參考實施例20第二步得到N-(1-(5-(6-(3-胺基-3-甲基丁-1-炔-1-基)-3-氰基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-3-氯甲基吡啶醯胺（白色固體）。
MS m/z (ESI): 553.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, Methanol-d 4) δ 8.80 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 8.50 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.28 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.99 – 7.94 (m, 1H), 7.78 – 7.73 (m, 1H), 7.51 – 7.46 (m, 1H), 7.38 (s, 1H), 6.98 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.15 – 4.05 (m, 2H), 3.50 – 3.45 (m, 2H), 2.44 – 2.38 (m, 2H), 1.78 – 1.72 (m, 2H), 1.56 (s, 3H), 1.52 (s, 6H).
實施例87
N-(1-(5-(6-(3-胺基-3-甲基丁-1-炔-1-基)-3-氰基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯醯胺
Figure 02_image365
第一步：N-(1-(5-(6-溴-3-氰基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯醯胺
Figure 02_image367
以4-(6-(4-胺基-4-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-溴吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈和5-氟-2-甲基苯甲酸為原料參考實施例20第二步得到N-(1-(5-(6-溴-3-氰基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯醯胺（白色固體）。
MS m/z (ESI): 547.1 [M+H] +.
第二步：N-(1-(5-(6-(3-胺基-3-甲基丁-1-炔-1-基)-3-氰基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯醯胺
Figure 02_image369
以N-(1-(5-(6-溴-3-氰基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯醯胺和2-甲基丁-3-炔-2-胺為原料參考實施例20第二步得到N-(1-(5-(6-(3-胺基-3-甲基丁-1-炔-1-基)-3-氰基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯醯胺（白色固體）。
MS m/z (ESI): 550.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, Methanol-d 4) δ 8.80 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.28 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.76 (dd, J = 8.9, 2.6 Hz, 1H), 7.38 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.28 – 7.21 (m, 1H), 7.11 – 7.02 (m, 2H), 6.98 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 4.08 – 4.00 (m, 2H), 3.43 – 3.38 (m, 2H), 2.46 – 2.39 (m, 2H), 2.38 (s, 3H), 1.75 – 1.69 (m, 2H), 1.54 (s, 3H), 1.52 (s, 6H).
實施例88
3-氯-N-(1-(5-(3-氰基-6-(3-(2-羥基丙烷-2-基)四氫吖唉-1-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基吡啶醯胺
Figure 02_image371
以2-(四氫吖唉-3-基)丙烷-2-醇和N-(1-(5-(6-溴-3-氰基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-3-氯甲基吡啶醯胺為原料參考實例31第一步得3-氯-N-(1-(5-(3-氰基-6-(3-(2-羥基丙烷-2-基)四氫吖唉-1-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基吡啶醯胺。
MS m/z (ESI):585.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.46 (d, J= 3.9 Hz, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.83 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 7.71 (s, 1H), 7.38 (dd, J= 8.1, 4.5 Hz, 1H), 6.77 (s, 1H), 4.14 (s, 2H), 3.96 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 3.85 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 3.48 (s, 2H), 2.48 (s, 2H), 1.89 – 1.80 (m, 2H), 1.25 (s, 3H), 1.24 (s, 6H).
實施例89
3-氯-N-(1-(5-(3-氰基-6-(6-羥基-6-甲基-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基吡啶醯胺
Figure 02_image373
以6-甲基-2-氮雜螺[3.3]庚烷-6-醇為原料參考實例31第一步得3-氯-N-(1-(5-(3-氰基-6-(6-羥基-6-甲基-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基吡啶醯胺。
MS m/z (ESI): 597.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.47 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.83 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.39 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 6.89 (s, 1H), 6.71 (s, 1H), 4.15 (s, 2H), 3.94 (d, J = 5.8 Hz, 4H), 3.47 (s, 2H), 2.48 (s, 2H), 2.38 (s, 4H), 1.84 (s, 2H), 1.39 (s, 3H), 1.25 (s, 3H).
實施例90
N-(1-(5-(6-((1-胺基環丙基)乙炔基)-3-氰基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-3-氯甲基吡啶醯胺
Figure 02_image375
以1-乙炔基環丙烷-1-胺原料參考實例31第二步得N-(1-(5-(6-((1-胺基環丙基)乙炔基)-3-氰基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-3-氯甲基吡啶醯胺。
MS m/z (ESI): 551.2[M+H] +.
實施例91
N-(1-(5-(6-((1-胺基環丙基)甲氧基)-3-氰基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-3-氯甲基吡啶醯胺
Figure 02_image377
第一步：叔-丁基 (1-(((4-(6-(4-(3-氯甲基吡啶醯胺基)-4-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-3-氰基吡唑並[1,5-a]吡啶-6-基)氧代)甲基)環丙基)胺基甲酸酯
Figure 02_image379
N-(1-(5-(6-溴-3-氰基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-3-氯甲基吡啶醯胺(100mg，0.182mmol)溶於NMP(2mL)，加入叔-丁基(1-(羥基) 環丙基)胺基甲酸酯(51mg，0.272mmol)和碳酸銫(177mg，0.545mmol)。該反應在微波160℃攪拌1小時，直接製備，得到叔-丁基(1-(((4-(6-(4-(3-氯甲基吡啶醯胺基)-4-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-3-氰基吡唑並[1,5-a]吡啶-6-基)氧代)甲基)環丙基)胺基甲酸酯。
MS m/z (ESI): 657.2 [M+H] +.
第二步：N-(1-(5-(6-((1-胺基環丙基)甲氧基)-3-氰基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-3-氯甲基吡啶醯胺
Figure 02_image381
以叔-丁基 (1-(((4-(6-(4-(3-氯甲基吡啶醯胺基)-4-甲基哌啶-1-基) 吡啶-3-基)-3-氰基吡唑並[1,5-a]吡啶-6-基)氧代)甲基)環丙基)胺基甲酸酯為原料參考實施例1第五步得到N-(1-(5-(6-((1-胺基環丙基)甲氧基)-3-氰基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-3-氯甲基吡啶醯胺。
MS m/z (ESI): 557.2 [M+H] +.
實施例92
3-氯-N-(1-(5-(3-氰基-6-((1-氰基環丙基)甲氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基吡啶醯胺
Figure 02_image383
第一步：3-氯-N-(1-(5-(3-氰基-6-羥基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基吡啶醯胺
Figure 02_image385
以4-(6-氟吡啶-3-基)-6-羥基吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈為原料參考實施例85第一至第三步得到3-氯-N-(1-(5-(3-氰基-6-羥基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基吡啶醯胺。
MS m/z (ESI):488.1 [M+H] +.
第二步：3-氯-N-(1-(5-(3-氰基-6-((1-氰基環丙基)甲氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基吡啶醯胺
Figure 02_image387
以3-氯-N-(1-(5-(3-氰基-6-羥基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基吡啶醯胺和(1-氰基環丙基)甲基 4-甲基苯磺酸酯為原料參考實施例27第二步得到3-氯-N-(1-(5-(3-氰基-6-((1-氰基環丙基)甲氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基吡啶醯胺。
MS m/z (ESI): 567.1 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.66 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.53 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 8.34 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.03 – 7.98 (m, 1H), 7.82 – 7.74 (m, 1H), 7.52 – 7.48 (m, 1H), 7.39 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 6.99 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 4.20 (s, 2H), 4.10 – 4.01 (m, 2H), 3.40 – 3.34 (m, 2H), 2.34 – 2.30 (m, 2H), 1.63 – 1.54 (m, 2H), 1.45 (s, 3H), 1.44 – 1.39 (m, 2H), 1.22 – 1.16 (m, 2H).
實施例93
N-(1-(5-(3-氰基-6-((1-氰基環丙基)甲氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-3-氟甲基吡啶醯胺
Figure 02_image389
第一步：N-(1-(5-(3-氰基-6-羥基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-3-氟甲基吡啶醯胺
Figure 02_image391
以4-(6-氟吡啶-3-基)-6-羥基吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈為原料參考實施例85第一至第三步得到N-(1-(5-(3-氰基-6-羥基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-3-氟甲基吡啶醯胺。
MS m/z (ESI):472.1 [M+H] +.
第二步：N-(1-(5-(3-氰基-6-((1-氰基環丙基)甲氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-3-氟甲基吡啶醯胺
Figure 02_image393
以N-(1-(5-(3-氰基-6-羥基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-3-氟甲基吡啶醯胺和(1-氰基環丙基)甲基4-甲基苯磺酸酯為原料參考實施例31第二步得到N-(1-(5-(3-氰基-6-((1-氰基環丙基)甲氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-3-氟甲基吡啶醯胺。
MS m/z (ESI): 551.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.66 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.51 – 8.43 (m, 1H), 8.35 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.89 – 7.81 (m, 1H), 7.78 (dd, J = 8.8, 2.6 Hz, 1H), 7.68 – 7.58 (m, 1H), 7.39 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 6.99 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 4.20 (s, 2H), 4.10 – 3.98 (m, 2H), 3.31 – 3.24 (m, 2H), 2.40 – 2.27 (m, 2H), 1.69 – 1.56 (m, 2H), 1.46 (s, 3H), 1.45 – 1.40 (m, 2H), 1.24 – 1.16 (m, 2H).
實施例94
3-氯-N-(1-(5-(3-氰基-6-((3-氰基噁丁環-3-基)甲氧基)吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基吡啶醯胺
Figure 02_image395
以3-氯-N-(1-(5-(3-氰基-6-羥基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基吡啶醯胺為原料參考實施例31得6-((3-氰基噁丁環-3-基)甲氧基)-4-(6-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈。
MS m/z (ESI): 583.2 [M+H] +.
實施例95 3-氯-N-(1-(5-(3-氰基-6-(3-羥基-3-甲基四氫吖唉-1-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基吡啶醯胺
Figure 02_image397
以3-甲基四氫吖唉-3-醇和N-(1-(5-(6-溴-3-氰基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-3-氯甲基吡啶醯胺為原料參考實例31第一步得3-氯-N-(1-(5-(3-氰基-6-(3-羥基-3-甲基四氫吖唉-1-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基吡啶醯胺。
MS m/z (ESI):557.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.46 (d, J= 3.7 Hz, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.83 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.38 (dd, J= 8.1, 4.5 Hz, 1H), 6.92 (d, J= 9.6 Hz, 1H), 6.75 (s, 1H), 4.15 (s, 2H), 3.91 (d, J= 7.3 Hz, 2H), 3.82 (d, J= 7.2 Hz, 2H), 3.49 (s, 2H), 2.49 (s, 2H), 2.24 – 2.18 (m, 1H), 1.88 – 1.80 (m, 2H), 1.68 – 1.65 (m, 3H), 1.25 (s, 3H).
實施例96
3-氯-N-(1-(5-(3-氰基-6-(3-氰基-3-甲基四氫吖唉-1-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基吡啶醯胺
Figure 02_image399
以3-甲基四氫吖唉-3-甲腈和N-(1-(5-(6-溴-3-氰基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-3-氯甲基吡啶醯胺為原料參考實例31第一步得3-氯-N-(1-(5-(3-氰基-6-(3-氰基-3-甲基四氫吖唉-1-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基吡啶醯胺。
MS m/z (ESI):566.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.46 (dd, J= 4.5, 1.3 Hz, 1H), 8.31 (d, J= 2.3 Hz, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.83 (dd, J= 8.1, 1.3 Hz, 1H), 7.71 (d, J= 1.9 Hz, 1H), 7.37 (dd, J= 8.1, 4.5 Hz, 1H), 6.82 (d, J= 8.9 Hz, 1H), 6.67 (d, J= 1.9 Hz, 1H), 4.28 (d, J= 7.0 Hz, 2H), 4.09 (d, J= 13.6 Hz, 2H), 3.88 (d, J= 7.0 Hz, 2H), 3.39 (t, J= 11.1 Hz, 2H), 2.43 (d, J= 13.8 Hz, 2H), 1.84 (d, J= 4.3 Hz, 1H), 1.82 (s, 3H), 1.78 (d, J= 4.1 Hz, 1H), 1.60 (s, 3H).
實施例97
3-氯-N-(1-(5-(3-氰基-6-((3-羥基噁丁環-3-基)乙炔基)吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基吡啶醯胺
Figure 02_image401
以3-乙炔基噁丁環-3-醇和N-(1-(5-(6-溴-3-氰基吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-3-氯甲基吡啶醯胺為原料參考實例8第二步得3-氯-N-(1-(5-(3-氰基-6-((3-羥基噁丁環-3-基)乙炔基)吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)甲基吡啶醯胺。
MS m/z (ESI):568.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.57 (s, 1H), 8.39 (d, J= 3.9 Hz, 1H), 8.24 (s, 2H), 7.84 (s, 1H), 7.76 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.67 – 7.60 (m, 1H), 7.31 (dd, J= 7.8, 4.6 Hz, 1H), 7.23 (s, 1H), 6.77 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 4.87 (d, J= 6.6 Hz, 2H), 4.64 (d, J= 6.7 Hz, 2H), 3.99 (d, J= 13.6 Hz, 2H), 3.34 (t, J= 11.0 Hz, 2H), 2.36 (d, J= 14.0 Hz, 2H), 1.73 (d, J= 3.8 Hz, 2H), 1.53 (s, 3H).
二、化合物生物學測試評價
以下結合測試例進一步描述解釋本發明，但這些實施例並非意味著限制本發明的範圍。
一、測試酶學實驗
測試例1、本發明化合物對RET野生型及突變型激酶活性抑制作用的測定
1. 實驗目的：
該測試例的目的是測量化合物對RET野生型及突變型激酶活性的抑制能力。
2.1 實驗儀器： 離心機(Eppendorf 5810R)； 酶標儀(BioTek Synergy H1)； 移液器(Eppendorf & Rainin)。
2.2 實驗試劑： RET酶購自Carna公司，貨號為08-159； RET M918T酶購自Carna公司，貨號為08-508； KIF5B-RET購自SignalChem公司，貨號為R02-19FG-05； CCDC6-RET購自SignalChem公司，貨號為R02-19BG-05； RET V804M酶購自Thermofisher公司，貨號為PV6223； RET V804L酶購自Thermofisher公司，貨號為PV4397； HTRF KinEASE-TK kit購自Cisbio公司，貨號為62TK0PEC； ATP購自Thermofisher公司，貨號為PV3227； 384孔板購自PerkinElmer公司，貨號為6007290。
2.3 受試化合物：
本發明實施例化合物，自製。
3. 實驗方法：
本實驗採用均相時間分辨螢光(HTRF)的方法進行化合物對RET激酶活性的檢測。本實驗在384孔板中開展，使用實驗緩衝液(25mM HEPES，10 mM MgCl 2，0.01%TritonX-100)配製不同濃度的化合物溶液，加入到384孔板中，再分別加入稀釋好的RET、RET M918T、CCDC6-RET、KIF5B-RET、RET V804M或RET V804L激酶溶液(0.01-2nM)以及底物TK-substrate biotin(500nM-1μM)和Km(0.19-200μM)濃度的ATP溶液，總反應體系為10μL，1000rpm離心1分鐘混合均勻，室溫反應45分鐘後，加入10μL使用檢測溶液配製的Sa-XL665以及TK-ab-Cryptate混合液，1000rpm離心1分鐘混合均勻，室溫反應1小時後使用BioTek Synergy H1儀器進行讀數，記錄665nm以及620nm下的讀數。
4. 實驗數據處理方法：
藉由用BioTek Synergy H1儀器進行讀數，記錄665nm以及620nm下的讀數，計算比值(665nm/620nm)，並計算抑制率，將濃度以及抑制率使用Graphpad Prism軟體進行非線性迴歸曲線擬合，得到IC 50值。
5. 實驗結果：
藉由上述測試方法，得到具體實施例對化合物對RET多種突變型激酶的測試數據見表8。 表8：化合物對RET多種突變型激酶活性抑制的IC 50值
實施例編號 RET M918T IC 50(nM) CCDC6-RET IC 50(nM) KIF5B-RET IC 50(nM) RET V804M IC 50(nM) RET V804L IC 50(nM)
7 1.06 NA NA NA NA
8 0.67 NA NA NA NA
17 0.38 NA NA NA NA
18 0.66 NA 0.97 1.8 0.74
31 0.47 NA NA NA NA
63 0.21 0.85 0.53 0.6 0.24
64 0.17 1.74 0.36 3.0 0.23
77 0.41 0.98 0.42 0.6 0.49
85 0.79 NA NA NA NA
97 0.37 1.72 0.50 1.1 0.28
註：表中「NA」表示未進行測試。
6. 實驗結論：
本發明實施例化合物對RET多種突變型激酶表現出良好的抑制活性，且在耐藥突變RET M918T 、KIF5B-RET和RET V804L中活性顯著。
測試例2、本發明化合物對KDR激酶活性抑制作用的測定
1. 實驗目的：
該測試例的目的是測量化合物對KDR激酶活性的抑制能力。
2.1 實驗儀器： 離心機(Eppendorf 5810R)； 酶標儀(BioTek Synergy H1)； 移液器(Eppendorf & Rainin)。
2.2 實驗試劑： KDR激酶購自Carna公司，貨號為08-191； HTRF KinEASE-TK kit購自Cisbio公司，貨號為62TK0PEC； ATP購自Thermofisher公司，貨號為PV3227； 384孔板購自PerkinElmer公司，貨號為6007290。
2.3 受試化合物：
本發明實施例化合物，自製。
3. 實驗方法：
本實驗採用均相時間分辨螢光(HTRF)的方法進行化合物對KDR激酶活性的檢測。本實驗在384孔板中開展，使用實驗緩衝液(25mM HEPES，10mM MgCl 2，0.01%TritonX-100)配製不同濃度的化合物溶液，加入到384孔板中，再加入稀釋好的KDR激酶溶液(0.05nM)以及底物TK-substrate biotin(500nM-1μM)和Km濃度的(0.19-200μM)ATP溶液，總反應體系為10μL，1000rpm離心1分鐘混合均勻，室溫反應45分鐘後，加入10μL使用檢測溶液配製的Sa-XL665以及TK-ab-Cryptate混合液，1000rpm離心1分鐘混合均勻，室溫反應1小時後使用BioTek Synergy H1酶標儀進行讀數，記錄665nm以及620nm下的讀數。
4. 實驗數據處理方法：
藉由用BioTek Synergy H1儀器進行讀數，記錄665nm以及620nm下的讀數，計算比值(665nm/620nm)，並計算抑制率，將濃度以及抑制率使用Graphpad Prism軟體進行非線性迴歸曲線擬合，得到IC 50值。
5. 實驗結果：
藉由上述測試方法，得到具體實施例測試數據見表9： 表9：化合物對RET激酶活性抑制和KDR激酶活性抑制相對IC 50值
實施例編號 RET IC 50(nM) KDR IC 50(nM) Ratio(KDR/RET)
1 0.47 28 59
6 0.79 27.7 35
7 0.69 11 16
8 0.48 16 34
9 0.76 70.0 92
12 1.3 69 55
17 0.39 8.2 21
18 0.31 23 73
21 0.41 9.4 23
22 0.32 24 75
27 0.32 88 280
31 0.75 23 30
32 0.49 1.8 4
33 0.4 5.6 14
34 0.7 4.7 7
35 0.49 6.2 13
36 0.83 213.3 257
37 0.71 60.4 85
41 0.4 11 27
42 1.56 104.8 67
46 0.26 6.5 25
47 0.40 176 438
48 0.42 13 30
53 0.8 21.6 27
54 0.34 9 26
55 0.31 37.5 121
57 1.1 209.3 187
59 0.58 183.9 317
60 0.58 257.1 445
61 0.35 11.2 32
62 0.48 35.24 73
63 0.34 21.7 63
64 0.38 44.34 118
65 0.33 14.5 44
66 0.25 3.0 12
67 0.25 4.0 16
68 0.44 18.9 43
72 0.37 7.4 20
74 1.8 246.6 137
77 0.37 6.90 19
85 0.38 46 122
88 1.2 61 49
89 1.1 8.9 8
91 1.54 204.4 133
92 0.85 185.3 218
93 1.1 150.0 136
95 1.0 24 24
96 0.72 15.8 22
6. 實驗結論：
以上數據顯示，本發明所示的實施例化合物對RET激酶活性具有很強的抑制作用，而對KDR激酶活性具有較差的抑制作用。對比兩組數據可知，本發明系列化合物對KDR/RET激酶活性的抑制作用具有很高的選擇性。
二、測試細胞學實驗
測試例1、本發明化合物對TT細胞增殖活性抑制作用的測定
1. 實驗目的：
該測試例的目的是測量化合物對TT細胞增殖活性的抑制作用。
2.1 實驗儀器： 酶標儀(BioTek Synergy H1)； 移液器(Eppendorf & Rainin)。
2.2 實驗試劑： TT細胞購自中國科學院細胞庫； Cell Titer-Glo細胞購自Promega公司，貨號為G7573。
2.3 受試化合物：
本發明實施例化合物，自製。
3. 實驗方法：
培養TT細胞至合適的融合度時，收集TT細胞，使用完全培養基將細胞調整為合適的細胞濃度，將細胞懸液鋪於96孔板，每孔90μL，放入37℃，5%CO 2培養箱貼壁過夜，使用DMSO以及培養基配製不同濃度的化合物溶液，設置溶媒對照，將化合物溶液加入到96孔板中，每孔10μL，放入37℃，5%CO 2培養箱中繼續培養72h後，加入CellTiter-Glo溶液，振盪混合均勻後，避光孵育10分鐘，用BioTek Synergy H1酶標儀進行讀數。
4. 實驗數據處理方法： 使用發光訊號值計算抑制率，將濃度以及抑制率使用Graphpad Prism軟體進行非線性迴歸曲線擬合，得到IC 50值。
5. 實驗結果： 表10
實施例編號 TT (MTC, RET C634W) IC 50(nM)
1 11.53
7 11.00
8 17.00
9 29.30
17 13.13
18 18.99
21 18.11
22 20.71
25 14.97
26 18.97
31 6.59
32 2.07
41 9.45
44 12.22
45 9.17
46 5.87
47 13.30
48 19.60
53 24.67
54 9.00
55 28.53
60 28.40
63 14.11
64 27.78
65 12.65
66 5.18
67 6.84
71 8.65
72 13.86
73 5.95
75 24.39
76 3.48
77 4.10
78 13.92
79 10.51
80 17.30
81 13.77
82 17.77
85 9.44
86 14.62
87 23.63
91 29.61
92 27.45
95 15.01
6. 實驗結論：
以上數據顯示，本發明實施例化合物對TT細胞的增殖有良好的抑制作用。
測試例2、本發明化合物對Ba/F3 KIF5B-RET細胞增殖活性抑制作用的測定
1. 實驗目的：
測量化合物對Ba/F3 KIF5B-RET細胞增殖活性的抑制作用。
2. 儀器與試劑：
2.1 實驗儀器： 酶標儀(BioTek Synergy H1)； 移液器(Eppendorf & Rainin)。
2.2 實驗試劑： Ba/F3 KIF5B-RET由北京康源博創生物科技有限公司提供，細胞編號為CVCL_UE86，可在細胞訊息網站https://web.expasy.org/cellosaurus/查詢到，該穩轉細胞株無需依賴IL-3生長；
Cell Titer-Glo細胞購自Promega公司，貨號為G7573。
2.3 受試化合物：
本發明實施例化合物，自製。
3. 實驗方法：
培養Ba/F3 KIF5B-RET細胞至合適的細胞密度時，收集細胞，使用完全培養基將細胞調整為合適的細胞濃度，將細胞懸液鋪於96孔板，每孔90μL，放入37℃，5%CO 2培養箱貼壁過夜，使用DMSO以及培養基配製不同濃度的化合物溶液，設置溶媒對照，將化合物溶液加入到96孔板中，每孔10μL，放入37℃，5%CO 2培養箱中繼續培養72h-144h後，加入CellTiter-Glo溶液，振盪混合均勻後，避光孵育10分鐘，用BioTek Synergy H1酶標儀進行讀數。
4. 實驗數據處理方法： 使用發光訊號值計算抑制率，將濃度以及抑制率使用Graphpad Prism軟體進行非線性迴歸曲線擬合，得到IC 50值。
5. 實驗結果： 表11：
實施例編號 Ba/F3 KIF5B-RET IC 50(nM)
1 24.62
7 13.00
8 12.00
9 28.88
18 22.62
19 27.83
22 16.94
25 13.54
27 15.90
44 15.30
45 7.06
53 30.64
55 19.61
59 33.97
60 17.96
61 16.77
63 11.05
64 22.56
65 7.03
66 14.84
67 5.33
68 26.30
71 5.59
72 8.59
73 12.04
75 34.73
76 6.04
77 4.79
78 15.62
79 13.66
80 23.93
81 16.79
82 21.93
86 15.42
87 18.55
92 32.10
95 22.46
6. 實驗結論：
以上數據顯示，本發明實施例化合物對Ba/F3 KIF5B-RET細胞的增殖有良好的抑制作用。
測試例4、本發明化合物對TT細胞下游訊號因子ERK磷酸化的抑制作用
1. 實驗目的：
檢測化合物對TT細胞下游訊號因子ERK磷酸化程度的抑制作用。
2. 實驗儀器與試劑：
2.1 實驗儀器： 成像儀(Biorad ChemiDoc™MP)； 移液器(Eppendorf & Rainin)。
2.2 實驗試劑： pERK抗體購自Cell Signaling Technology公司，貨號為4370S； total ERK抗體購自Cell Signaling Technology公司，貨號為4696S； 內參GAPDH購自Cell Signaling Technology公司，貨號為5174S； 螢光二抗購自LI-COR公司，貨號為P/N 925-68071 以及 P/N 926-32210。
2.3 受試化合物：
本發明實施例化合物，自製。
3. 實驗方法：
本實驗藉由Western Blot方法測量化合物對TT細胞下游訊號因子ERK磷酸化程度的抑制作用。培養TT細胞至合適的融合度時，收集細胞，使用完全培養基將細胞調整為合適的細胞濃度，將細胞懸液鋪於24孔板，每孔1mL，放入37℃，5%CO 2培養箱貼壁過夜，加入不同濃度(3.7nM、11.1nM、33.3nM、100nM、300nM)的化合物稀釋液，在37℃下作用2小時，吸出細胞上清，用PBS清洗一遍，用裂解液收集蛋白，蛋白變性後進行Western blot實驗：蛋白電泳，120V條件下電泳約75分鐘，再用半乾轉膜儀10V轉膜45分鐘到PVDF膜上，5%BSA室溫封閉1小時後，將PVDF膜剪成合適大小的條帶，分別用配製好的抗體稀釋液4℃孵育過夜，TBST洗膜6次，後用羊抗鼠二抗和羊抗兔二抗在室溫下孵育1小時，TBST洗膜6次，在Biorad ChemiDoc™MP成像系統中進行成像。
4. 實驗數據處理方法：
藉由檢測蛋白條帶來判斷化合物在不同濃度下對TT細胞中ERK磷酸化程度的抑制作用。
5. 實驗結果：
實施例63和實施例64均能顯著抑制TT細胞中ERK的磷酸化程度，且呈劑量依賴作用。化合物與TT細胞37℃共孵育2小時後，實施例63在300nM、100nM、33.3nM、11.1nM都幾乎完全抑制ERK磷酸化，在3.7nM時可以抑制約一半的ERK磷酸化程度。而實施例64在300nM，100nM可以完全抑制ERK的磷酸化，在33.3nM時抑制程度有所降低，在11.1nM時可以抑制一半的ERK磷酸化程度，在3.7nM時抑制程度較弱。
6. 實驗結論：
藉由以上方案得出，本發明所示的化合物在TT細胞下游訊號因子ERK的磷酸化中顯示出劑量依賴性的抑制作用。
三、Balb/C小鼠藥代動力學測定
1. 研究目的：
以Balb/C小鼠為受試動物，研究以下化合物實施例，在5mg/kg劑量下口服給藥在小鼠體內血漿的藥代動力學行為。
2. 試驗方案：
2.1 試驗藥品：
本發明實施例，自製。
2.2 試驗動物：
Balb/C Mouse 6隻/實施例，雄性，上海傑思捷實驗動物有限公司，動物生產許可證號(SCXK（滬）2013-0006 N0.311620400001794)。
2.3 給藥：
Balb/C小鼠，雄性；禁食一夜後分別p.o.，劑量為5mg/kg，給藥體積10mL/kg。
2.4 樣品配製：
0.5%CMC-Na(1%Tween80)，超聲溶解，配製為澄清溶液或均一混懸液。
2.5 樣品採集：
小鼠給藥前和給藥後，在0、0.5、1、2、4、6、8和24小時，採用眼眶採血0.1mL，置於EDTA-K 2試管中，4℃ 6000rpm離心6min分離血漿，於-80℃保存。
2.5 樣品處理： 1)血漿樣品40uL加入160uL乙腈沉澱，混合後3500×g離心5-20分鐘。 2)取處理後上清溶液100uL進行LC/MS/MS分析待測化合物的濃度。
2.6 液相分析： l 液相條件：Shimadzu LC-20AD 泵 l 質譜條件: AB Sciex API 4000質譜儀 l 色譜柱：phenomenex Gemiu 5um C18 50×4.6mm l 移動相：A液為0.1%甲酸水溶液，B液為乙腈 l 流速：0.8mL/min l 洗脫時間：0-4.0分鐘，洗脫液如下： 表12
時間/分鐘 A液 B液
0.01 90% 10%
0.5 90% 10%
0.8 5% 95%
2.4 5% 95%
2.5 90% 10%
4.0 Stop
3. 試驗結果與分析
藥代動力學主要參數用WinNonlin 6.1計算得到，小鼠藥代實驗結果見下表13： 表13小鼠藥代實驗結果
實施例 編號 藥代實驗(5mg/kg)
達峰時間 血藥濃度 曲線面積 曲線面積 半衰期 平均滯 留時間
t max(ng/mL) C max(ng/mL) AUC 0-t(ng/mL×h) AUC 0- ∞(ng/mL×h) t 1/2(h) MRT(h)
7 0.5 3283.3 13821.5 13830.0 2.18 3.76
8 0.5 3706.7 21369.7 21511.8 3.37 4.91
9 0.5 1920.0 16076.7 16389.2 4.2 5.84
18 0.5 2786.7 18167.5 18230.7 2.9 4.61
31 0.5 3120.0 18865.2 18904.9 2.66 4.71
36 0.5 1490.0 6208.1 6220.8 2.19 3.80
44 0.5 1616.7 13953.1 14019.7 3.45 5.22
55 2.0 1943.3 21624.6 22084.0 4.26 6.51
59 0.5 1326.7 7343.3 7369.3 2.34 4.27
60 0.5 3083.0 27955.0 28150.0 3.26 5.56
62 0.5 2816.7 13773.0 13789.2 2.4 4.07
63 1.0 2936.7 10978.5 10981.2 1.3 2.90
64 1.0 3920.0 14458.5 14460.7 1.2 2.70
65 2.0 2400.0 20159.0 20251.0 3.05 5.24
68 0.5 1703.3 7208.0 7218.5 1.73 3.47
77 0.5 4680.0 51613.2 51946.2 3.2 6.0
92 0.5 9340.0 24470.9 24473.6 1.7 2.85
4. 實驗結論：
從表中小鼠藥代實驗結果可以看出：本發明實施例化合物表現出良好的代謝性質，暴露量AUC和最大血藥濃度C max都表現良好。
四、Ba/F3 KIF5B-RET移植瘤模型上對腫瘤的抑制實驗
1. 實驗目的：
評價受試化合物對Ba/F3 KIF5B-RET細胞裸小鼠皮下移植瘤的抗腫瘤活性。
2. 實驗儀器與試劑：
2.1 儀器： 超淨工作臺（BSC-1300II A2，上海博訊實業有限公司醫療設備廠）； CO 2培養箱(311，Thermo)； 離心機(Centrifuge 5720R，Eppendorf)； 全自動細胞計數儀(Countess II，Life)； 移液器(10-20μL，Eppendorf)； 顯微鏡（TS100，尼康）； 遊標卡尺（500-196，日本三豐）； 細胞培養瓶(T25/T75/T225，Corning)。
2.2 試劑： RPMI1640(22400-089，Gibco)； 胎牛血清(FBS)(10099-141，Gibco)； 磷酸鹽緩衝液(PBS)(10010-023，Gibco)。
2.3 受試化合物：
本發明實施例化合物，自製。
3. 實驗操作：
從細胞庫中取出Ba/F3 KIF5B-RET細胞，復蘇後加入RPMI1640培養基中（RPMI1640+10%FBS+1%Glu+1% P/S）置於CO 2培養箱中培養（培養箱溫度為37℃，CO 2濃度為5%），待細胞數量擴增到體內接種所需數量時，收集Ba/F3 KIF5B-RET細胞。用全自動細胞計數儀計數，根據計數結果用PBS重懸細胞，製成細胞懸液（密度2×10 7/mL），置於冰盒中待用。
使用6-8週齡雌性BALB/c裸小鼠，體重約為18-22克。小鼠飼養與SPF級動物房中，單籠飼養，每籠5隻小鼠。所有的籠子、墊料和水在使用前進行高溫消毒，所有動物均可自由飲食、飲水。實驗開始前用一次性大小鼠通用耳標標記裸鼠，接種前用75%醫用酒精消毒接種部位皮膚，每隻小鼠在右後背皮下接種0.1mL（含2*10 6個細胞）Ba/F3 KIF5B-RET細胞。當腫瘤體積達到60-200mm 3時開始分組給藥，每組5隻。各受試化合物每天口服給藥2次、持續14天。每週2次測量腫瘤體積、秤量小鼠體重，並計算腫瘤TGI(%)，並計算腫瘤TGI(%)。
4. 數據處理：
腫瘤體積(mm 3)，計算公式為：V=0.5*D*d*d，其中D和d分別是腫瘤的長徑和短徑。
TGI(%)的計算：
當腫瘤無消退時，TGI(%)=[（1-（某處理組給藥結束時平均瘤體積－該處理組開始給藥時平均瘤體積））/（溶劑對照組治療結束時平均瘤體積－溶劑對照組開始治療時平均瘤體積）]×100%；
當腫瘤有消退時，TGI(%)=[1-（某處理組給藥結束時平均瘤體積－該處理組開始給藥時平均瘤體積）/該處理組開始給藥時平均瘤體積]×100%。
5. 實驗結果： 表14 藥效參數
分組 腫瘤體積 (mm 3, Mean ± SD) TGI(%)
Day 0 Day 14 Day 14
7 10mg/kg 100.80 ± 31.28 (101.24 ± 35.15) 232.46 ± 133.65 (1,536.07 ± 263.57) 90.82
18 30mg/kg 132.34 ± 19.40 (133.86 ± 28.86) 118.64 ± 84.34 (1,366.89 ± 291.81) 110.35
62 10mg/kg 100.24 ± 27.85 (101.24 ± 35.15) 247.52 ± 85.65 (1,536.07 ± 263.57) 89.74
63 10mg/kg 126.13 ± 17.24 (126.52 ± 16.11) 219.86 ± 64.31 (1,882.69 ± 968.48) 94.66
64 10mg/kg 126.93 ± 16.98 （126.52 ± 16.11） 330.85 ± 147.00 (1,882.69 ± 968.48) 88.39
65 10mg/kg 100.40 ± 29.77 (101.24 ± 35.15) 276.69 ± 106.21 (1,536.07 ± 263.57) 87.71
77 10mg/kg 101.59 ± 36.86 (101.24 ± 35.15) 40.84 ± 53.92 (1,536.07 ± 263.57) 159.80
92 30mg/kg 133.41 ± 18.82 (133.86 ± 28.86) 98.26 ± 33.71 (1,366.89 ± 291.81) 126.35
備註：括號中的數據表示，該實施例對應Vehicle QD x 3w組（即對照組）相應時間的腫瘤體積
6. 實驗結論：
以上數據顯示，口服連續給藥14天後，本發明實施例化合物能顯著抑制Ba/F3 KIF5B-RET裸小鼠移植瘤的生長。
五、關於人骨髓樣甲狀腺癌細胞TT的皮下異種移植腫瘤模型的藥效實驗
1. 實驗目的：
以BALB/c裸小鼠為受試動物，採用人骨髓樣甲狀腺癌細胞TT異種移植瘤模型進行體內藥效實驗，評價受試化合物抗腫瘤作用。
2. 實驗儀器和試劑：
2.1 儀器： CO 2培養箱(311，Thermo)； 高速冷凍離心機(Multifuge X3R，Thermo)； 自動細胞計數儀(Mini-006-0484，Cellometer)； 生物安全櫃(1300 SERIES A2，Thermo)； 電子天平（JJ300Y，常熟雙傑）； 遊標卡尺（0-150mm/0.01mm，日本三豐）。
2.2 試劑： F-12K(21127-022，Gibco)； 胎牛血清(FBS)(10099-141，Gibco)； 請鏈黴素雙抗(PS)(SV30010，Hyclone)。
3. 實驗動物：
BALB/c裸鼠小鼠，雌性，6-8週齡，體重18-22g，由上海靈暢生物科技有限公司提供。
4. 受試化合物：
本發明實施例化合物，自製。
5. 實驗操作：
5.1 細胞培養：
TT細胞體外單層培養，培養條件為：F-12K培養基中加20%熱滅活胎牛血清和1%青黴素-鏈黴素雙抗，37℃、5% CO 2培養。一週兩次用胰酶-EDTA進行消化處理傳代。當細胞呈指數生長期時，收取細胞，計數，接種。
5.2 腫瘤接種：
細胞TT在對數生長期的時候長滿收集，保證活力在90%以上。將含有約1x10 7個TT細胞的0.2mL細胞懸液（細胞懸於基礎F-12K培養基中並加入50% Matrigel）皮下接種於每隻小鼠的右後背腫瘤平均體積達到約150-200mm 3時開始分組給藥。
5.3實驗分組和給藥：
1. 分組當天為第0天(D0)。BID 給藥間隔6-8h/18-16h。第一次給藥於D0天下午，最後一次給藥於D21天上午。
2. 給藥容積：根據裸小鼠體重10µL/g。
動物飼養：動物到達後在實驗環境飼養7天後開始實驗。動物在SPF級動物房以IVC（獨立送風系統）籠具飼養（每籠5隻）。
動物分組：給藥前稱重動物，測量瘤體積。根據瘤體積隨機分組（隨機分組設計），每組5隻。
觀察：每天監測動物的健康狀況及死亡情況，例行檢查包括觀察藥物對動物日常行為表現的影響如行為活動，攝食攝水量，體重變化（每週測量兩次體重或每隔一天測量），外觀體徵或其它不正常情況。基於各組動物數量記錄組內動物死亡數和副作用。
實驗指標：每週兩次遊標卡尺測量腫瘤直徑。腫瘤體積的計算公式為：V=a×b 2/2，a和b分別表示腫瘤的長徑和短徑。化合物的抑瘤療效用TGI(%)評。TGI(%)=(1-(TV Treatment/Dx-TV Treatment/D1)/(TV Control/Dx-TV Control/D1))×100％。腫瘤抑瘤療效用TGI=(1-(TW control–TW treatment)/TW control×100%。TGI≧58%說明受試物能有效抑制腫瘤生長，TGI≧90%說明受試物能夠非常有效地抑制腫瘤生長。
5.4 數據分析：
T檢驗用於兩組間比較。三組或多組間比較用one-way ANOVA。如果F值有顯著性差異，應在ANOVA分析之後再進行多重比較。用GraphPadPrism 5.0進行所有數據分析。
6. 實驗結果： 表15 藥效參數
分組 腫瘤體積/(mm 3，mean±SEM) 腫瘤抑制率/TGI
d0 d22 d22
Vehicle 206.10 ± 22.69 1,276.23 ± 161.33 -
18 30 mg/kg 199.73 ± 24.07 203.56 ± 31.74 99.64%
77 10 mg/kg 205.23 ± 16.57 144.14 ± 8.95 129.77%
7. 實驗結論：
以上數據顯示，口服連續給藥21天後，本發明實施例化合物能顯著抑制甲狀腺癌細胞TT裸小鼠移植瘤的生長。
六、本發明化合物對對hERG電流的影響
1. 實驗目的：
藉由手動膜片鉗全細胞記錄技術評價化合物對HEK293細胞hERG電流的影響。
2. 實驗儀器和試劑：
2.1 試劑： 特非那定(Sigma-Aldrich，MKBX6318V)； HEK293-hERG細胞系（穩定表現hERG通道的人胚腎細胞），來源：軍事醫學科學院。
2.2儀器： 膜片鉗放大器(700B，Axon Instruments，USA)； 數模轉換器(DigiData 1440A，Axon Instruments，USA)； 倒置顯微鏡(Ti-S，Nikon，Japan)； 微操縱器(MP-225，Sutter Instrument, USA)； 微電極拉制儀(P-97，Sutter Instrument，USA)； 微電極(Borosilicate glass，Sutter Instrument，USA)； 蠕動泵(BT100-2J，Longerpump，China)； 防震台與屏蔽網(TMC，USA)； 數據採集軟體(Clampex 10.3，Axon Instruments，USA)； 數據分析軟體(Clampfit 10.3，Axon Instruments，USA)； 超純水系統(Synergy UV，Merck)。
3. 實驗方法：
細胞培養：
穩定表現hERG通道的人胚腎細胞(HEK293)在含有5% CO 2的37℃細胞培養箱中的DMEM培養液裡(DMEM，HyClone)培養。細胞培養液中添加約10%的胎牛血清(FBS，gibco)。
細胞培養液成分如下表所示：
試劑 來源 批號
DMEM（高糖）培養液 HyClone AE29431648
胎牛血清(FBS) gibco 2148169CP
青鏈黴素混合液 gibco 2145460
試驗用穩定表現hERG通道的人胚腎細胞(HEK293-hERG)。以Multi Clamp 700B手動膜片鉗系統鉗制HEK293細胞形成全細胞電壓鉗模式，並以相應的電壓誘發hERG電流。藉由6通道灌流系統分別給予細胞0.1、1、3、10和30μmol/L濃度的實施例63或10μmol/L陽性對照品特非那定。記錄hERG通道尾電流並用Clampex 10.3軟體獲取各給藥濃度下的尾電流峰值，數據用Clampfit 10.3軟體進行分析。以溶媒對照下記錄的尾電流峰值作為100%，對陽性對照品及供試品數據進行標準化處理。曲線擬合及IC 50計算用標準希爾方程在軟體GraphPad Prism 5.00中完成。
4. 實驗結果：
本試驗中，由於給藥系統管壁會對供試品吸附作用，造成實際濃度低於理論濃度，故以實際濃度進行統計。配製濃度為0.1、1、3、10和30μmol/L的實施例63實際濃度分別為0.07、0.58、2.17、6.14及28.61μmol/L。在本試驗條件下，實施例63對HEK293細胞hERG電流的平均抑制率為3.24%±5.14%、8.39%±3.51%、12.69%±5.67%、35.40%±2.15%和58.84%±3.92%，實施例63對hERG電流的IC 50為16.89μmol/L。在相同試驗條件下，10μmol/L的陽性對照品特非那定對同樣抑制hERG電流，其平均抑制率為97.45%±1.07%。
七、晶型研究
1. 實驗儀器：
1.1 實驗儀器—物理化學檢測儀器的一些參數 表 16
XRPD 儀器型號 BRUKER D8 ADVANCE
繞射線 CuK(40 kV, 25 mA)
掃描速率 0.02°/S(2θ值)
掃描範圍 4°~40°(2θ值)
DSC 儀器型號 NETZSCH DSC 214 polyma
吹掃氣 氮氣
吹掃速度 40 mL/min
升溫速率 10℃/min
溫度範圍 25～300℃
盤類型 鋁盤
TGA 儀器型號 NETZSCH TG 209 Tarsus
吹掃氣 氮氣
吹掃速度 40 mL/min
升溫速率 10℃/min
溫度範圍 35～350℃
盤類型 Al 2O 3
高效液相色譜儀 Agilent 1260
泵 Agilent G1311B
進樣器 G1329B
柱溫箱 G1316A
檢測器 G1315D
高效液相色譜儀 Thermo U3000
泵 LPG-3400SDN
進樣器 WPS-3000TSL
柱溫箱 TCC-3000SD
檢測器 DAD-3000
2. 晶型的製備
2.1 實施例63化合物自由鹼晶型的製備
2.1.1自由鹼晶型I的製備
秤量10mg的化合物（無定型），加入10mL甲醇，然後加熱至50℃，溶清，趁熱過濾，放入冰箱(2~8℃)過夜，觀察有沉澱析出，快速離心，去除上清液，固體在40℃條件下真空乾燥，得到晶型I，經檢測分析，其有如圖1所示的XRPD圖、如圖2所示的DSC圖及如圖3所示的TGA圖。
2.1.2自由鹼晶型II的製備
秤量15mg的化合物（晶型I）到2mL的玻璃瓶中，加入200μL的2-甲基四氫呋喃，得到混懸液；將混懸液置於磁力攪拌器上50℃打漿2~3天，離心，去除上清液，固體進一步在真空乾燥箱中乾燥過夜（50℃減壓真空乾燥），得到晶型II，經檢測分析，其有如下如圖4所示的XRPD圖、如圖5所示的DSC圖及如圖6所示的TGA圖。
2.1.3自由鹼晶型III的製備
秤量15mg的化合物（晶型I）到2mL的玻璃瓶中，加入200μL的二丁酮，得到混懸液；將混懸液置於磁力攪拌器上50℃打漿2~3天，離心，去除上清液，固體進一步在真空乾燥箱中乾燥過夜（50℃減壓真空乾燥），得到晶型III，經檢測分析，其有如圖7所示的XRPD圖、如圖8所示的DSC圖及如圖9所示的TGA圖。
2.1.4自由鹼晶型IV的製備
秤量20mg的化合物（晶型I），加入3.5mL 88%丙酮，然後加熱至50℃，溶清，趁熱過濾，濾液置於50℃條件下的真空乾燥，快速揮發後，得到晶型IV，經檢測分析，其有如圖10所示的XRPD圖、如圖11所示的DSC圖及如圖12所示的TGA圖。
2.1.5自由鹼晶型V的製備
秤量10mg化合物（晶型I），加入500μL四氫呋喃，然後加熱至50℃，溶解，加入700μL環己烷，有固體析出，攪拌過夜後，快速離心，去除上清液，固體在50℃條件真空乾燥後，得到晶型V，經檢測分析，其有如下如圖13所示的XRPD圖、如圖14所示的DSC圖及如圖15所示的TGA圖。
3. 化合物自由鹼固體穩定性實驗
3.1 實施例63化合物穩定性實驗
3.1.1實驗目的：
考察晶型I在光照5000lx、高溫60℃、高濕92.5%RH、高溫高濕50℃/75%RH條件下，化合物的物理化學穩定性，為化合物貯存提供依據。
3.1.2儀器和液相分析條件
色譜條件： 表 17
儀器 Thermo Ultimate 3000
流動相A 25 mM Phosphate buffer(NH 4H 2PO 4, pH2.0)
流動相B MeOH
流速 1.0 mL/min
進樣量 5.0 μL
色譜柱 Waters x-bridge (150*4.6 mm,3.5µm)
柱溫 35℃
檢測波長 235，238，326 nm
洗脫梯度(min) A% B%
0.00 65 35
10.00 20 80
12.00 20 80
12.01 65 35
15.00 65 35
3.1.3實驗方案：
取晶型I約1mg，於光照5000lx、高溫60℃、高濕92.5%RH、高溫高濕50℃/75%RH條件下，考察5天、10天，用HPLC，外標法測定含量，並採用色譜峰面積歸一化法計算有關物質的變化。
3.1.4實驗結果：
自由鹼晶型I物理化學穩定性結果如表18所示： 表 18
自由鹼晶型I固體穩定性（14天）（雜質增加情況）
條件 總雜質增加% 單雜最大增加%
高溫/60℃ ＜0.02 0.06
高濕/92.5%RH ＜0.02 ＜0.02
高溫高濕/50℃/75%RH ＜0.02 0.11
光照/5000lx ＜0.02 0.18
3.1.5實驗結論：
以上數據表明，自由鹼晶型I在高溫、高濕、高溫高濕及光照條件下穩定性良好。
4.引濕性實驗
4.1實施例63化合物的引濕性實驗
4.1.1實驗目的：
考察化合物自由鹼晶型I在不同相對濕度條件下的引濕性，為化合物貯存提供依據。
4.1.2 實驗儀器及參數：
儀器型號 SMS Intrinsic
實驗溫度 25 ºC
乾燥時間 0%RH 120 min
平衡dm/dt 0.02%/min（最小10min，最大180min）
RH(%)測量步長 10%
測量梯度 0-95-0%
循環次數 2
4.1.3實驗方案：
將化合物自由鹼晶型I置於同相對濕度的飽和水蒸氣中，使化合物與水蒸氣達到動態平衡，並計算平衡後化合物吸濕增重的百分數。
4.1.4實驗結果：
自由鹼晶型I在RH80%條件下吸濕增重約0.43%，略有引濕性；經0-95%相對濕度條件下吸濕與解吸濕循環2次，自由鹼晶型I的XRPD譜圖並未發生改變，即晶型未轉變，具體等溫線如圖16所示。
4.1.5實驗結論：
自由鹼晶型I略有引濕性，且在高濕度條件下晶型穩定。
5.不同介質中溶解度實驗
5.1實施例63化合物的溶解度實驗
5.1.1實驗目的：
比較自由鹼晶型I在pH1~8 USP緩衝液、人工模擬胃液(FaSSGF)、禁食人工模擬腸液(FaSSIF)、非禁食人工模擬腸液(FeSSIF)以及純水等媒介中溶解度大小，為可成藥性評估提供依據。
5.1.2實驗方案：
將約1mg自由鹼晶型I混懸到不同介質中4小時，用HPLC，外標法測定化合物37℃下的熱力學溶解度。
5.1.3實驗結果：
由鹼晶型I的溶解度實驗結果如下表19所示： 表 19
編號 媒介 晶型I溶解度(mg/mL)
1 pH 1 ＞2.00
2 pH 2 ＞2.00
3 pH 3 0.71
4 pH 4 0.37
5 pH 5 0.02
6 pH 6 0.001
7 FaSSGF ＞2.00
8 FaSSIF 0.001
9 FeSSIF 0.09
6、熱力學穩定晶型確認實驗
6.1實施例63化合物的競爭打漿實驗。
6.1.1實驗目的：
藉由競爭打漿實驗，確認熱力學穩定晶型。
6.1.2實驗方案：
分別秤取晶型I~V兩兩等量混合，加入乙酸乙酯，在50℃攪拌3天後，快速離心，去除上清液，固體沉澱在40℃烘箱中真空乾燥後進行XRPD表徵。
6.1.3實驗結果： 表20 多晶型競爭實驗結果
溶劑 晶型 I+II 晶型I+III 晶型I+ IV 晶型I+V
乙酸乙酯 I I I I
7. 多晶篩選實驗
7.1 實施例63的多晶篩選：
7.1.1實驗目的：
藉由多種方法進行多晶型篩選實驗，獲得更多晶型。
7.1.2實驗方案：
7.1.2.1混懸打漿法：
分別秤取15mg的化合物到2mL的玻璃瓶中，加入200μL的溶劑，得到混懸液；將混懸液置於磁力攪拌器上50℃打漿2-3天，離心，去除上清液，固體進一步在真空乾燥箱中乾燥過夜（50℃減壓真空乾燥），檢測XRPD，若有變化，再檢測DSC。篩選及表徵結果如表21。 表21 自由鹼混懸打漿法的多晶型篩選結果
序號 溶劑 自由鹼
- 初始晶型 晶型 I
1 甲醇 晶型 I
2 乙醇 晶型 II
3 異丙醇 晶型 I
4 乙腈 晶型 I
5 丙酮 晶型 III
6 2-甲基-四氫呋喃 晶型 II
7 乙酸乙酯 晶型 I
8 甲苯 晶型 I
9 二丁酮 晶型 III
10 醋酸異丙酯 晶型 I
7.1.2.2快速冷卻法：
秤量10mg的化合物，加入相應溶劑，然後加熱至50℃，若未溶清，補加溶劑至溶清，趁熱過濾，降溫至-25℃，觀察是否有沉澱析出，若有沉澱析出，快速離心，去除上清液，固體在40℃條件真空乾燥過夜後，測定固體的XRPD，並與初始XRPD比較，結果如下表22所示。 表22 游離鹼的快速冷卻法多晶篩選實驗結果
序號 溶劑 自由鹼
- 初始晶型 晶型 I
1 二氯甲烷 晶型 I
2 88%丙酮 晶型 III
3 丙酮 晶型 III
4 甲醇 晶型 I
7.1.2.3快速揮發法：
秤量10mg的化合物，加入相應溶劑，然後加熱至50℃，若未溶清，補加溶劑至溶清，趁熱過濾，然後放置在50℃的真空乾燥箱過夜，快速揮發後，測定固體XRPD，並與初始XRPD比較，結果如下表23所示。 表23 自由鹼溶液快速揮發法多晶篩選實驗結果
序號 溶劑 自由鹼
- 初始晶型 晶型 I
1 二氯甲烷 晶型 I
2 88%丙酮 晶型 IV
3 丙酮 晶型 I
4 甲醇 晶型 I
5 2-甲基-四氫呋喃 晶型 I
6 三氯甲烷 晶型 I
7.1.2.4反溶劑結晶法：
分別秤取適量化合物，加入一定體積的良溶劑，高溫溶解，過濾，分成等份，每份1mL，加入反溶劑，若有固體析出，攪拌過夜後，快速離心，去除上清液，固體在50℃條件真空乾燥過夜後，測定固體的XRPD，並與初始XRPD比較。共發現4種多晶型，結果如下表24所示。 表24 自由鹼反溶劑結晶法多晶篩選實驗結果
溶劑    良溶劑
四氫呋喃 二氯甲烷
反溶劑 乙酸乙酯 / 晶型 I
乙醇 晶型 I 晶型 I
乙腈 晶型 I 晶型 I
正庚烷 晶型 II 晶型 I
異丙醚 晶型 II 晶型 I
甲基叔丁基醚 晶型 I 晶型 I
醋酸異丙酯 / 晶型 I
異丙醇 / 晶型 V
甲苯 晶型 I 晶型 I
二丁酮 / 晶型 III
水 晶型 I /
環己烷 晶型 V 晶型 V
8. 晶型含水量檢測
8.1 元素分析
Elementar Vario ELⅢ型元素分析儀測定化合物中C、H、N含量。 表25 樣品的元素分析數據
元素 C% H% N% 備註
計算值 67.27 5.46 18.31 計算值按無水物C 30H 29N 7O 3計
晶型I 67.19 5.61 18.39
晶型I 67.21 5.59 18.45
平均值 67.20 5.60 18.42
水分測定結果進一步表明，樣品不含結晶水。
圖1為6-(((R)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈晶型I的XRPD圖示。 圖2為6-(((R)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈晶型I的DSC圖示。 圖3為6-(((R)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈晶型I的TGA圖示。 圖4為6-(((R)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈晶型II的XRPD圖示。 圖5為6-(((R)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈晶型II的DSC圖示。 圖6為6-(((R)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈晶型II的TGA圖示。 圖7為6-(((R)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈晶型III的XRPD圖示。 圖8為6-(((R)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈晶型III的DSC圖示。 圖9為6-(((R)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈晶型III的TGA圖示。 圖10為6-(((R)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈晶型IV的XRPD圖示。 圖11為6-(((R)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈晶型IV的DSC圖示。 圖12為6-(((R)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈晶型IV的TGA圖示。 圖13為6-(((R)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈晶型V的XRPD圖示。 圖14為6-(((R)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈晶型V的DSC圖示。 圖15為6-(((R)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈晶型V的TGA圖示。 圖16為6-(((R)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈晶型I的DVS圖示。
Figure 110142459-A0101-11-0002-3

Claims (19)

  1. 一種通式(I)所示化合物的晶型，
    Figure 03_image003
    其中： L選自-CH 2-或-NHC(O)-； M選自CR或N； R選自氫、氘、鹵素、胺基、硝基、羥基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6氘代烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8環烷基、3-8元雜環基、C 6-10芳基或5-12元雜芳基； X 1選自CR a或N； X 2選自CR b或N； R a和R b各自獨立地選自氫、氘、鹵素、胺基、硝基、羥基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6氘代烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8環烷基、3-8元雜環基、C 6-10芳基或5-12元雜芳基； R 1、R 2和R 3各自獨立地選自氫、氘、鹵素、胺基、硝基、羥基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6氘代烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8環烷基、3-8元雜環基、C 6-10芳基或5-12元雜芳基； R 4選自C 2-6烯基、C 2-6炔基、3-8元雜環基、-O(CH 2) mR 5、-(CH 2) mR 5、-NR 6(CH 2) mR 5、-NR 6C(O)R 5、-CH=CH-(CH 2) mR 5、-O(CH 2) mS(O)R 5、-O(CH 2) mS(O) 2R 5或-O(CH 2) mS(O)(=NH)R 5，所述C 2-6烯基、C 2-6炔基和3-8元雜環基，任選地進一步被氘、鹵素、胺基、硝基、羥基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6氘代烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8環烷基、3-12元雜環基、C 6-10芳基和5-12元雜芳基中的一個或多個取代基所取代； R 5和R 6各自獨立地選自氫、氘、鹵素、胺基、硝基、羥基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6氘代烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8環烷基、3-8元雜環基、C 6-10芳基或5-12元雜芳基，所述C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6氘代烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8環烷基、3-8元雜環基、C 6-10芳基和5-12元雜芳基，任選地進一步被氘、鹵素、胺基、硝基、羥基、氰基、氧代基、硫代基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6氘代烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8環烷基、3-8元雜環基、C 6-10芳基、5-12元雜芳基、=NH、-(CH 2) tR 7、-(CH 2) tOR 7和-(CH 2) tC(O)NR 7R 8中的一個或多個取代基所取代； R 7和R 8各自獨立地選自氫、氘、鹵素、胺基、硝基、羥基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6氘代烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8環烷基、3-8元雜環基、C 6-10芳基或5-12元雜芳基，所述C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6氘代烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8環烷基、3-8元雜環基、C 6-10芳基和5-12元雜芳基，任選地進一步被氘、鹵素、胺基、硝基、羥基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6氘代烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8環烷基、3-8元雜環基、C 6-10芳基和5-12元雜芳基中的一個或多個取代基所取代； n為0、1、2或3； m為0、1、2或3；且 t為0、1、2或3。
  2. 如請求項1所述之化合物的晶型，其中，M選自CR或N； R選自氫、胺基或C 1-3烷基，優選氫、胺基或甲基； X 1選自CR a或N； X 2選自CR b或N； R a和R b選自各自獨立地選自氫、氘、鹵素、C 1-3烷基或C 1-3烷氧基，優選氫、氟、氯、甲基或甲氧基； R 1、R 2和R 3各自獨立地選自氫、氘、鹵素、C 1-3烷基或C 1-3烷氧基，優選氫、氟、氯、甲基或甲氧基。
  3. 如請求項1至2中任一項所述之化合物的晶型，其中，R 4選自C 2-3炔基、C 2-3烯基、3-8元含氮或氧原子的雜環基、-O(CH 2) mR 5、-(CH 2) mR 5、-NR 6(CH 2) mR 5、-NHC(O)R 5、-CH=CH-(CH 2)mR 5、-O(CH 2) mS(O)R 5、-O(CH 2) mS(O) 2R 5或-O(CH 2) mS(O)(=NH)R 5，3-8元含氮或氧原子的雜環基，任選地進一步被氘、氟、氯、溴、胺基、羥基、氰基、C 1-3烷基、C 1-3羥烷基或C 1-3烷氧基中的一個或多個取代基所取代； 優選地，R 4選自乙烯基、乙炔基、氧雜環丁烷基、氮雜環丁烷基、吡咯啶基、哌啶基、2-氮雜螺[3.3]庚烷基、-OCH 2R 5、-O(CH 2) 2R 5、-(CH 2) 2R 5、-NR 6(CH 2) mR 5、-NHC(O)R 5、-CH=CH-(CH 2) mR 5、-O(CH 2) mS(O)R 5、-O(CH 2) mS(O) 2R 5或-O(CH 2) mS(O)(=NH)R 5，所述的乙烯基、乙炔基、氧雜環丁烷基、氮雜環丁烷基、吡咯啶基、哌啶基和2-氮雜螺[3.3]庚烷基，任選地進一步被氘、羥基、氰基、甲基、羥基乙基、2-羥基異丙基、2-胺基異丙基中的一個或多個取代基所取代； R 5選自氫、氘、鹵素、胺基、硝基、羥基、氰基、C 1-3烷基、C 1-3氘代烷基、C 1-3鹵代烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3氘代烷氧基、C 1-3鹵代烷氧基、C 1-3羥烷基、C 2-3烯基、C 2-3炔基、C 3-6環烷基或3-8元雜環基，所述的C 1-3烷基、C 1-3氘代烷基、C 1-3鹵代烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3氘代烷氧基、C 1-3鹵代烷氧基、C 1-3羥烷基、C 2-3烯基、C 2-3炔基、C 3-6環烷基和3-8元雜環基，任選地進一步被氘、鹵素、胺基、硝基、羥基、氰基、C 1-3烷基、C 1-3氘代烷基、C 1-3鹵代烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3氘代烷氧基、C 1-3鹵代烷氧基、C 1-3羥烷基、C 2-3烯基、C 2-3炔基、C 3-6環烷基、3-8元雜環基、-CH 2R 7、-CH 2OR 7和-C(O)NR 7R 8中的一個或多個取代基所取代； 優選地，R 5選自甲基、乙基、異丙基、環丙基、環丁基、環戊基、乙炔基、氧雜環丁基、硫雜環丁基、氮雜環丁基、四氫吡喃基、雙環[1.1.1]戊烷基或四氫-2H-硫代吡喃，任選地進一步被氘、羥基、胺基、氰基、氟、氯、溴、甲氧基、乙炔基、環丙基、羥乙基、氧代基、=NH、-CH 2OCH 3、-C(O)NH 2和-C(O)NHCH 3中的一個或多個取代基所取代； R 6選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基或C 1-3烷基，優選氫、氘或甲基； R 7和R 8各自獨立地選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基或C 1-3烷基，優選氫、氘或甲基； n為0、1、2或3；且 m為0、1、2或3。
  4. 如請求項1至3中任一項所述之化合物的晶型，其中，所述化合物進一步為通式(II)所示：
    Figure 03_image005
    R 2選自氫、氟或氯； R 4選自-O(CH 2) mR 5、-(CH 2) mR 5或-NR 6(CH 2) mR 5， R 5選自C 2-3炔基，任選地進一步被氘、鹵素、胺基、硝基、羥基、氰基、C 1-3烷基、C 1-3氘代烷基、C 1-3鹵代烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3氘代烷氧基、C 1-3鹵代烷氧基、C 1-3羥烷基或C 3-6環烷基中的一個或多個取代基所取代； R 6選自氫、氘、鹵素、胺基、羥基或C 1-3烷基，優選氫、氘或甲基； m為0、1、2或3。
  5. 如請求項1至4中任一項所述之化合物的晶型，其中，化合物具體結構如下：
    Figure 03_image405
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    或
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    。
  6. 如請求項1至5中任一項所述化合物的晶型，其中，晶型為6-(((R)-2-羥基-2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑並[1,5-a]吡啶-3-甲腈的晶型I、晶型II、晶型III、晶型IV或晶型V，其中： 晶型I的X-射線粉末繞射圖譜在2θ為5.0±0.2°處具有繞射峰；或者在9.6±0.2°處具有繞射峰；或者在15.0±0.2°處具有繞射峰；或者在17.2±0.2°處具有繞射峰；或者在22.2±0.2°處具有繞射峰；或者在19.4±0.2°處具有繞射峰；或者在30.2±0.2°處具有繞射峰；或者在8.2±0.2°處具有繞射峰；或者在25.1±0.2°處具有繞射峰；或者在26.9±0.2°處具有繞射峰；優選包含上述繞射峰中的任意2-5處，或者3-5處，或者3-6處，或者3-8處，或者5-8處，或者6-8處；更優選包含其中任意6處、7處或8處；或 晶型I的X-射線粉末繞射圖譜在2θ為5.0±0.2°處具有繞射峰；或者在8.2±0.2°處具有繞射峰；或者在9.6±0.2°處具有繞射峰；或者在12.9±0.2°處具有繞射峰；或者在15.0±0.2°處具有繞射峰；或者在17.2±0.2°處具有繞射峰；或者在15.4±0.2°處具有繞射峰；或者在16.6±0.2°處具有繞射峰；或者在17.7±0.2°處具有繞射峰；或者在18.5±0.2°處具有繞射峰；優選包含上述繞射峰中的任意2-5處，或者3-5處，或者3-6處，或者3-8處，或者5-8處，或者6-8處；更優選包含其中任意6處、7處或8處； 晶型II的X-射線粉末繞射圖譜在2θ為4.8±0.2°處具有繞射峰；或者在17.7±0.2°處具有繞射峰；或者在16.6±0.2°處具有繞射峰；或者在9.4±0.2°處具有繞射峰；或者在18.4±0.2°處具有繞射峰；或者在19.1±0.2°處具有繞射峰；或者在17.0±0.2°處具有繞射峰；或者在18.6±0.2°處具有繞射峰；或者在4.5±0.2°處具有繞射峰；或者在15.4±0.2°處具有繞射峰；優選包含上述繞射峰中的任意2-5處，或者3-5處，或者3-6處，或者3-8處，或者5-8處，或者6-8處，更優選包含其中任意6處、7處或8處； 晶型III的X-射線粉末繞射圖譜在2θ為4.6±0.2°處具有繞射峰；或者在15.2±0.2°處具有繞射峰；或者在9.9±0.2°處具有繞射峰；或者在16.7±0.2°處具有繞射峰；或者在18.2±0.2°處具有繞射峰；或者在17.9±0.2°處具有繞射峰；或者在25.5±0.2°處具有繞射峰；或者在15.0±0.2°處具有繞射峰；或者在19.5±0.2°處具有繞射峰；或者在23.6±0.2°處具有繞射峰；優選包含上述繞射峰中的任意2-5處，或者3-5處，或者3-6處，或者3-8處，或者5-8處，或者6-8處；更優選包含其中任意6處、7處或8處； 晶型IV的X-射線粉末繞射圖譜在2θ為5.0±0.2°處具有繞射峰；或者在4.8±0.2°處具有繞射峰；或者在15.0±0.2°處具有繞射峰；或者在19.1±0.2°處具有繞射峰；或者在14.3±0.2°處具有繞射峰；或者在10.0±0.2°處具有繞射峰；或者在23.9±0.2°處具有繞射峰；或者在25.1±0.2°處具有繞射峰；或者在30.3±0.2°處具有繞射峰；或者在9.6±0.2°處具有繞射峰；優選包含上述繞射峰中的任意2-5處，或者3-5處，或者3-6處，或者3-8處，或者5-8處，或者6-8處；更優選包含其中任意6處、7處或8處； 晶型V的X-射線粉末繞射圖譜在2θ為4.7±0.2°處具有繞射峰；或者在18.2±0.2°處具有繞射峰；或者在10.1±0.2°處具有繞射峰；或者在18.8±0.2°處具有繞射峰；或者在15.6±0.2°處具有繞射峰；或者在17.0±0.2°處具有繞射峰；或者在21.8±0.2°處具有繞射峰；或者在14.7±0.2°處具有繞射峰；或者在19.3±0.2°處具有繞射峰；或者在25.8±0.2°處具有繞射峰；優選包含上述繞射峰中的任意2-5處，或者3-5處，或者3-6處，或者3-8處，或者5-8處，或者6-8處；更優選包含其中任意6處、7處或8處。
  7. 如請求項6所述化合物的晶型，其中，晶型I的X-射線粉末繞射圖譜至少包含位於2θ為5.0±0.2°、9.6±0.2°、15.0±0.2°中的一處或多處繞射峰，優選包含其中2處，更優選包含3處；任選的，進一步還可以包含2θ為17.2±0.2°、22.2±0.2°、19.4±0.2°、30.2±0.2°或8.2±0.2°中的至少一處，優選包含其中2處、3處、4處或5處； 或者，包含位於2θ為5.0±0.2°、9.6±0.2°、15.0±0.2°、17.2±0.2°、22.2±0.2°和19.4±0.2°處的繞射峰； 或者，包含位於2θ為5.0±0.2°、9.6±0.2°、15.0±0.2°、17.2±0.2°、22.2±0.2°和8.2±0.2°處的繞射峰； 晶型I的X-射線粉末繞射圖譜至少包含位於2θ為5.0±0.2°、8.2±0.2°、9.6±0.2°中的一處或多處繞射峰，優選包含其中2處，更優選包含3處；任選的，進一步還可以包含2θ為12.9±0.2°、15.0±0.2°、17.2±0.2°、15.4±0.2°或16.6±0.2°中的至少一處，優選包含其中2處、3處、4處或5處； 或者，包含位於2θ為5.0±0.2°、8.2±0.2°、9.6±0.2°、12.9±0.2°、15.0±0.2°和17.2±0.2°處的繞射峰； 或者，包含位於2θ為5.0±0.2°、9.6±0.2°、12.9±0.2°、15.0±0.2°、17.2±0.2°和15.4±0.2°處的繞射峰； 晶型II的X-射線粉末繞射圖譜至少包含位於2θ為4.8±0.2°、17.7±0.2°、16.6±0.2°中的一處或多處繞射峰，優選包含其中2處，更優選包含3處；任選的，進一步還可以包含2θ為9.4±0.2°、18.4±0.2°、19.1±0.2°、17.0±0.2°或18.6±0.2°中的至少一處，優選包含其中2處、3處、4處或5處； 或者，包含位於2θ為4.8±0.2°、17.7±0.2°、16.6±0.2°、9.4±0.2°、18.4±0.2°和19.1±0.2°處的繞射峰； 或者，包含位於2θ為4.8±0.2°、17.7±0.2°、16.6±0.2°、9.4±0.2°、18.4±0.2°和17.0±0.2°處的繞射峰； 或者，包含位於2θ為4.8±0.2°、17.7±0.2°、16.6±0.2°、9.4±0.2°、18.4±0.2°和18.6±0.2°處的繞射峰； 或者，包含位於2θ為4.8±0.2°、17.7±0.2°、9.4±0.2°、18.4±0.2°、19.1±0.2°和17.0±0.2°處的繞射峰； 或者，包含位於2θ為4.8±0.2°、16.6±0.2°、9.4±0.2°、18.4±0.2°、19.1±0.2°和17.0±0.2°處的繞射峰； 晶型III的X-射線粉末繞射圖譜至少包含位於2θ為4.6±0.2°、15.2±0.2°或9.9±0.2°中的一處或多處繞射峰，優選包含其中2處，更優選包含3處；任選的，進一步還可以包含2θ為16.7±0.2°、18.2±0.2°、17.9±0.2°、25.5±0.2°或15.0±0.2°中的至少一處，優選包含其中2處、3處、4處或5處； 或者，包含位於2θ為4.6±0.2°、15.2±0.2°、9.9±0.2°、16.7±0.2°、18.2±0.2°和17.9±0.2°處的繞射峰； 或者，包含位於2θ為4.6±0.2°、15.2±0.2°、9.9±0.2°、16.7±0.2°、18.2±0.2°和25.5±0.2°處的繞射峰； 或者，包含位於2θ為4.6±0.2°、15.2±0.2°、9.9±0.2°、16.7±0.2°、18.2±0.2°和15.0±0.2°處的繞射峰； 或者，包含位於2θ為4.6±0.2°、15.2±0.2°、9.9±0.2°、16.7±0.2°、18.2±0.2°和25.5±0.2°處的繞射峰； 或者，包含位於2θ為4.6±0.2°、15.2±0.2°、9.9±0.2°、18.2±0.2°、17.9±0.2°和15.0±0.2°處的繞射峰； 晶型IV的X-射線粉末繞射圖譜至少包含位於2θ為5.0±0.2°、4.8±0.2°或15.0±0.2°中的一處或多處繞射峰，優選包含其中2處，更優選包含3處；任選的，進一步還可以包含2θ為19.1±0.2°、14.3±0.2°、10.0±0.2°、23.9±0.2°或25.1±0.2°中的至少一處，優選包含其中2處、3處、4處或5處； 或者，包含位於2θ為5.0±0.2°、4.8±0.2°、15.0±0.2°、19.1±0.2°、14.3±0.2°和10.0±0.2°處的繞射峰； 或者，包含位於2θ為5.0±0.2°、4.8±0.2°、15.0±0.2°、19.1±0.2°、14.3±0.2°和23.9±0.2°處的繞射峰； 晶型V的X-射線粉末繞射圖譜至少包含位於2θ為4.7±0.2°、18.2±0.2°或10.1±0.2°中的一處或多處繞射峰，優選包含其中2處，更優選包含3處；任選的，進一步還可以包含2θ為18.8±0.2°、15.6±0.2°、17.0±0.2°、21.8±0.2°或14.7±0.2°中的至少一處，優選包含其中2處、3處、4處或5處； 或者，包含位於2θ為4.7±0.2°、18.2±0.2°、10.1±0.2°、18.8±0.2、15.6±0.2°和17.0±0.2°處的繞射峰； 或者，包含位於2θ為4.7±0.2°、18.2±0.2°、10.1±0.2°、18.8±0.2、15.6±0.2°和21.8±0.2°處的繞射峰； 或者，包含位於2θ為4.7±0.2°、18.2±0.2°、10.1±0.2°、18.8±0.2、15.6±0.2°和14.7±0.2°處的繞射峰。
  8. 如請求項6至7任一項所述化合物的晶型，其中，晶型I的X-射線粉末繞射圖譜任選還包含位於2θ為10.0±0.2°、25.4±0.2°、26.9±0.2°、13.0±0.2°、12.9±0.2°或20.0±0.2中的一處或多處繞射峰；優選至少包含其中任意2-3處，或者4-5處，或者6處；進一步優選，包含其中任意2處、3處、4處、5處或6處； 或者，包含位於2θ為5.0±0.2°、9.6±0.2°、15.0±0.2°、17.2±0.2°、22.2±0.2°、19.4±0.2°、26.9±0.2°和10.0±0.2°處的繞射峰； 或者，包含位於2θ為5.0±0.2°、9.6±0.2°、15.0±0.2°、17.2±0.2°、22.2±0.2°、19.4±0.2°、26.9±0.2°和25.4±0.2°處的繞射峰； 晶型I的X-射線粉末繞射圖譜任選還包含位於2θ為15.4±0.2°、16.6±0.2°、17.7±0.2°、18.5±0.2°、19.3±0.2°或24.0±0.2中的一處或多處繞射峰；優選至少包含其中任意2-3處，或者4-5處，或者6處；進一步優選，包含其中任意2處、3處、4處、5處或6處； 或者，包含位於2θ為5.0±0.2°、8.2±0.2°、9.6±0.2°、15.4±0.2°、16.6±0.2°、17.7±0.2°、18.5±0.2°和19.3±0.2°處的繞射峰； 或者，包含位於2θ為5.0±0.2°、8.2±0.2°、9.6±0.2°、16.6±0.2°、17.7±0.2°、18.5±0.2°、19.3±0.2°和24.0±0.2處的繞射峰； 晶型II的X-射線粉末繞射圖譜任選還包含位於2θ為4.5±0.2°、15.4±0.2°、14.6±0.2°、24.0±0.2°、21.5±0.2°、20.5±0.2°或18.0±0.2中的一處或多處繞射峰；優選至少包含其中任意2-3處，或者4-5處，或者6-7處；進一步優選，包含其中任意2處、3處、4處、5處、6處、7處； 或者，包含位於2θ為4.8±0.2°、17.7±0.2°、16.6±0.2°、9.4±0.2°、18.4±0.2°、19.1±0.2°、4.5±0.2°和15.4±0.2°處的繞射峰； 或者，包含位於2θ為4.8±0.2°、17.7±0.2°、16.6±0.2°、9.4±0.2°、18.4±0.2°、19.1±0.2°、4.5±0.2°和14.6±0.2°處的繞射峰； 晶型III的X-射線粉末繞射圖譜任選還包含位於2θ為19.5±0.2°、23.6±0.2°、26.1±0.2°、22.0±0.2°、20.2±0.2°、21.1±0.2°或27.4±0.2中的一處或多出繞射峰；優選至少包含其中任意2-3處，或者4-5處，或者6-7處；進一步優選，包含其中任意2處、3處、4處、5處、6處、7處； 或者，包含位於2θ為4.6±0.2°、15.2±0.2°、9.9±0.2°、16.7±0.2°、18.2±0.2°、17.9±0.2°、19.5±0.2°和23.6±0.2°處的繞射峰； 或者，包含位於2θ為4.6±0.2°、15.2±0.2°、9.9±0.2°、16.7±0.2°、18.2±0.2°、17.9±0.2°、19.5±0.2°和26.1±0.2°處的繞射峰； 晶型IV的X-射線粉末繞射圖譜任選還包含位於2θ為30.3±0.2°或9.6±0.2°中的一處或多出繞射峰；優選至少包含其中任意1-2處； 或者，包含位於2θ為5.0±0.2°、4.8±0.2°、15.0±0.2°、19.1±0.2°、14.3±0.2°、10.0±0.2°、23.9±0.2°和30.3±0.2°處的繞射峰； 或者，包含位於2θ為5.0±0.2°、4.8±0.2°、15.0±0.2°、19.1±0.2°、14.3±0.2°、10.0±0.2°、23.9±0.2°和9.6±0.2°處的繞射峰； 晶型V的X-射線粉末繞射圖譜任選還包含位於2θ為19.3±0.2°、25.8±0.2°、15.2±0.2°、17.8±0.2°、20.4±0.2°、23.5±0.2°或25.6±0.2°中的一處或多處繞射峰；優選至少包含其中任意2-3處，或者4-5處，或者6-7處；進一步優選，包含其中任意2處、3處、4處、5處、6處、7處； 或者，包含位於4.7±0.2°、18.2±0.2°、10.1±0.2°、18.8±0.2°、15.6±0.2°、17.0±0.2°、19.3±0.2°和25.8±0.2°處的繞射峰； 或者，包含位於4.7±0.2°、18.2±0.2°、10.1±0.2°、18.8±0.2°、15.6±0.2°、17.0±0.2°、19.3±0.2°和15.2±0.2°處的繞射峰。
  9. 如請求項6所述化合物的晶型，其中，晶型I的X-射線粉末繞射圖譜包含位於2θ為5.0±0.2°、9.6±0.2°、15.0±0.2°、17.2±0.2°、22.2±0.2°、19.4±0.2°、30.2±0.2°、25.1±0.2°、10.0±0.2°、25.4±0.2°、26.9±0.2°、13.0±0.2°、12.9±0.2°或20.0±0.2中的一處或多處繞射峰；優選的，包含其中任選的4處、5處、6處、8處或10處有繞射峰； 晶型I的X-射線粉末繞射圖譜在2θ為以下位置處有繞射峰： 9.6±0.2°、15.0±0.2°和17.2±0.2°處； 或者，5.0±0.2°、9.6±0.2°、15.0±0.2°和17.2±0.2°處； 或者，5.0±0.2°、9.6±0.2°、15.0±0.2°和22.2±0.2°處； 或者，5.0±0.2°、9.6±0.2°、15.0±0.2°、17.2±0.2°、22.2±0.2°和25.1±0.2°處； 晶型I的X-射線粉末繞射圖譜包含位於2θ為5.0±0.2°、8.2±0.2°、9.6±0.2°、12.9±0.2°、15.0±0.2°、17.2±0.2°、15.4±0.2°、16.6±0.2°、17.7±0.2°、18.5±0.2°、19.3±0.2°或24.0±0.2中的一處或多處繞射峰；優選的，包含其中任選的4處、5處、6處、8處或10處有繞射峰； 晶型I的X-射線粉末繞射圖譜在2θ為以下位置處有繞射峰： 8.2±0.2°、9.6±0.2°、12.9±0.2°、15.0±0.2°、17.2±0.2°、15.4±0.2°、16.6±0.2°和17.7±0.2°處； 或者，5.0±0.2°、8.2±0.2°、9.6±0.2°、12.9±0.2°、15.0±0.2°、17.2±0.2°、15.4±0.2°、16.6±0.2°、17.7±0.2°和18.5±0.2°處； 或者，8.2±0.2°、9.6±0.2°、12.9±0.2°、15.0±0.2°、17.2±0.2°、15.4±0.2°、16.6±0.2°、17.7±0.2°、18.5±0.2°和19.3±0.2°處； 晶型II的X-射線粉末繞射圖譜包含位於2θ為4.8±0.2°、17.7±0.2°、16.6±0.2°、9.4±0.2°、18.4±0.2°、19.1±0.2°、17.0±0.2°、18.6±0.2°、4.5±0.2°、15.4±0.2°、14.6±0.2°、24.0±0.2°、21.5±0.2°、20.5±0.2°或18.0±0.2中的一處或多處繞射峰；優選的，包含其中任選的4處、5處、6處、8處或10處有繞射峰； 晶型II的X-射線粉末繞射圖譜在2θ為以下位置處有繞射峰： 4.8±0.2°、17.7±0.2°、16.6±0.2°和9.4±0.2°處； 或者，4.8±0.2°、17.7±0.2°、16.6±0.2°和18.4±0.2°處； 或者，4.8±0.2°、17.7±0.2°、16.6±0.2°、9.4±0.2°、18.4±0.2°和20.5±0.2°處； 或者，4.8±0.2°、17.7±0.2°、16.6±0.2°、9.4±0.2°、18.4±0.2°、19.1±0.2°、17.0±0.2°和18.6±0.2°處； 或者，4.8±0.2°、17.7±0.2°、16.6±0.2°、9.4±0.2°、18.4±0.2°、19.1±0.2°、17.0±0.2°、18.6±0.2°、4.5±0.2°、14.6±0.2°處； 晶型III的X-射線粉末繞射圖譜包含位於2θ為2θ為4.6±0.2°、15.2±0.2°、9.9±0.2°、16.7±0.2°、18.2±0.2°、17.9±0.2°、25.5±0.2°、15.0±0.2°、19.5±0.2°、23.6±0.2°、26.1±0.2°、22.0±0.2°、20.2±0.2°、21.1±0.2°或27.4±0.2中的一處或多處繞射峰；優選的，包含其中任選的4處、5處、6處、8處或10處有繞射峰； 晶型III的X-射線粉末繞射圖譜在2θ為以下位置處有繞射峰： 4.6±0.2°、15.2±0.2°、9.9±0.2°和16.7±0.2°處； 或者，4.6±0.2°、15.2±0.2°、9.9±0.2°和18.2±0.2°處； 或者，4.6±0.2°、15.2±0.2°、16.7±0.2°和18.2±0.2°處； 或者，4.6±0.2°、15.2±0.2°、9.9±0.2°、16.7±0.2°、18.2±0.2°和17.9±0.2°處； 或者，4.6±0.2°、15.2±0.2°、9.9±0.2°、16.7±0.2°、18.2±0.2°、17.9±0.2°、26.1±0.2°和22.0±0.2°處； 或者，4.6±0.2°、15.2±0.2°、9.9±0.2°、16.7±0.2°、18.2±0.2°、17.9±0.2°、25.5±0.2°、15.0±0.2°、19.5±0.2°和23.6±0.2°處； 晶型IV的X-射線粉末繞射圖譜包含位於2θ為2θ為5.0±0.2°、4.8±0.2°、15.0±0.2°、19.1±0.2°、14.3±0.2°、10.0±0.2°、23.9±0.2°、25.1±0.2°、30.3±0.2°或9.6±0.2°中的一處或多處繞射峰；優選的，包含其中任選的4處、5處、6處、8處或10處有繞射峰； 晶型IV的X-射線粉末繞射圖譜在2θ為以下位置處有繞射峰： 包含位於2θ為5.0±0.2°、4.8±0.2°、15.0±0.2°和19.1±0.2°處的繞射峰； 或者，5.0±0.2°、4.8±0.2°、15.0±0.2°和14.3±0.2°處； 或者，5.0±0.2°、4.8±0.2°、15.0±0.2°、19.1±0.2°、23.9±0.2°和25.1±0.2°處； 或者，5.0±0.2°、4.8±0.2°、15.0±0.2°、19.1±0.2°、14.3±0.2°、10.0±0.2°、23.9±0.2°和25.1±0.2°處； 或者，5.0±0.2°、4.8±0.2°、15.0±0.2°、19.1±0.2°、14.3±0.2°、10.0±0.2°、23.9±0.2°、25.1±0.2°和30.3±0.2°處； 或者，5.0±0.2°、4.8±0.2°、15.0±0.2°、19.1±0.2°、14.3±0.2°、10.0±0.2°、23.9±0.2°、25.1±0.2°、30.3±0.2°和9.6±0.2°處； 晶型V的X-射線粉末繞射圖譜包含位於2θ為4.7±0.2°、18.2±0.2°、10.1±0.2°、18.8±0.2°、15.6±0.2°、17.0±0.2°、21.8±0.2°、14.7±0.2°、19.3±0.2°、25.8±0.2°、15.2±0.2°、17.8±0.2°、20.4±0.2°、23.5±0.2°或25.6±0.2°中的一處或多處繞射峰；優選的，包含其中任選的4處、5處、6處、8處或10處有繞射峰； 晶型V的X-射線粉末繞射圖譜在2θ為以下位置處有繞射峰： 4.7±0.2°、18.2±0.2°、10.1±0.2°和18.8±0.2處； 或者，4.7±0.2°、10.1±0.2°、18.8±0.2°、15.6±0.2°、17.0±0.2°和21.8±0.2°處； 或者，4.7±0.2°、18.2±0.2°、10.1±0.2°、18.8±0.2°、15.6±0.2°、17.0±0.2°、21.8±0.2°和14.7±0.2°處； 或者，4.7±0.2°、18.2±0.2°、10.1±0.2°、18.8±0.2°、15.6±0.2°、17.0±0.2°、21.8±0.2°、14.7±0.2°、19.3±0.2°和15.2±0.2°處。
  10. 如請求項1至9中任一項所述化合物的晶型，其中，晶型I的X-射線粉末繞射圖譜如圖1所示；晶型II的X-射線粉末繞射圖譜如圖4所示；晶型III的X-射線粉末繞射圖譜如圖7所示；晶型IV的X-射線粉末繞射圖譜如圖10所示；晶型V的X-射線粉末繞射圖譜如圖13所示。
  11. 如請求項1至9中任一項所述化合物的晶型，其中，晶型I、晶型II、晶型III、晶型IV、晶型V的X-射線粉末繞射圖譜中相對峰強度為前十強的繞射峰位置分別與圖1、圖4、圖7、圖10和圖13對應位置繞射峰的2θ誤差為±0.2°~±0.5°，優選±0.2°~±0.3°，最優選±0.2°。
  12. 如請求項1至9中任一項所述化合物的晶型，其中， 晶型I具有如圖2所示的DSC圖譜；或者具有如圖3所示的TGA圖譜； 晶型II具有如圖5所示的DSC圖譜；或者具有如圖6所示的TGA圖譜； 晶型III具有如圖8所示的DSC圖譜；或者具有如圖9所示的TGA圖譜； 晶型IV具有如圖11所示的DSC圖譜；或者具有如圖12所示的TGA圖譜； 晶型V具有如圖14所示的DSC圖譜；或者具有如圖15所示的TGA圖譜。
  13. 如請求項1至12中任一項所述化合物的晶型，其中，晶型為含溶劑或不含溶劑的晶型，其中溶劑選自水、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、乙腈、乙醇、88%丙酮、四氫呋喃、2-甲基-四氫呋喃、二氯甲烷、1,4-二氧六環、苯、甲苯、異丙醇、正丁醇、異丁醇、N,N-二甲基甲醯胺、N,N-二甲基乙醯胺、N-甲基吡咯啶酮、二甲基亞碸、正丙醇、叔丁醇、2-丁酮、3-戊酮、正庚烷、庚烷、甲酸乙酯、醋酸異丙酯、環己烷、甲基叔丁基醚或異丙醚中的一種或多種，優選的，晶型為無水晶型。
  14. 如請求項13所述化合物的晶型，其中，溶劑的個數為0~3，優選0、0.2、0.5、1、1.5、2、2.5或3，更優選0、0.5、1、2或3。
  15. 一種製備請求項1至14中任一項所述化合物的晶型的方法，具體包括如下步驟： 1)秤取適量的自由鹼，用不良溶劑混懸，懸浮密度優選為50~200mg/mL； 2)以上所得混懸液振搖，溫度優選0~50℃； 3)將以上混懸液快速離心，去除上清液，剩餘固體乾燥得到目標產物； 其中： 不良性溶劑選自甲醇、丙酮、乙酸乙酯、四氫呋喃、乙腈、乙醇、88%丙酮、2-甲基-四氫呋喃、二氯甲烷、1,4-二氧六環、甲基叔丁基醚、正庚烷、苯、甲苯、氯苯、異丙醇、正丁醇、異丁醇、N,N-二甲基甲醯胺、N,N-二甲基乙醯胺、二甲基亞碸、正丙醇、甲酸乙酯、醋酸異丙酯、叔丁醇、2-丁酮或3-戊酮的一種或多種； 優選乙腈、丙酮、乙酸乙酯、甲醇或乙醇的一種或多種。
  16. 一種製備請求項1至14中任一項所述化合物的晶型的方法，具體包括如下步驟： 1)秤取適量的自由鹼，用良溶劑溶解； 2)任選地，向以上所得溶液中加入不良溶劑； 3)攪拌至固體析出，析晶溫度選自0~50℃； 4)任選地，將以上混懸液快速離心； 5)去除上清液，剩餘固體乾燥得到目標產物； 其中： 良性溶劑選自甲醇、丙酮、乙酸乙酯、四氫呋喃、乙腈、乙醇、88%丙酮、2-甲基-四氫呋喃、二氯甲烷、1,4-二氧六環、苯、甲苯、氯苯、異丙醇、正丁醇、異丁醇、N,N-二甲基甲醯胺、N,N-二甲基乙醯胺、二甲基亞碸、正丙醇、甲酸乙酯、醋酸異丙酯、叔丁醇、2-丁酮或3-戊酮的一種或多種； 優選二氯甲烷、四氫呋喃、2-甲基-四氫呋喃、1,4-二氧六環、二甲基亞碸、乙腈或2-丁酮中的一種或多種； 不良溶劑選自甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮、異丙醇、甲苯、正庚烷、水、醋酸異丙酯、環己烷、甲基叔丁基醚或異丙醚的一種或多種； 優選水、正庚烷、環己烷或甲基叔丁基醚中的一種或多種。
  17. 一種藥物組合物，其包括治療有效劑量的請求項1至14中所示的各通式化合物的晶型以及一種或多種藥學上可接受的載體賦形劑。
  18. 一種如請求項1至14中任一項所述化合物的晶型，或如請求項17所述的藥物組合物在製備RET抑制劑藥物中的應用。
  19. 一種如請求項1至14中任一項所述化合物的晶型，或如請求項17所述的藥物組合物在製備用於治療和/或預防腫瘤藥物中的應用，優選的，腫瘤選自非小細胞肺癌、纖維肉瘤、胰腺腫瘤、甲狀腺髓樣癌、甲狀腺乳頭狀腫瘤、軟組織肉瘤、高度實性腫瘤、乳腺腫瘤和結腸腫瘤。
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