TW202216789A - 預靶向抗體及使用方法 - Google Patents

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Abstract

本發明係關於一種會結合至目標細胞上之抗原且使放射核種靶向該等細胞之抗體且關於其使用方法。本發明進一步關於用於連接多域蛋白之域之新穎連接子。

Description

預靶向抗體及使用方法
本發明係關於結合至目標細胞上之抗原且使放射核種靶向該等細胞之抗體且關於其使用方法。
本發明亦關於用於連接多域蛋白之兩個域之連接子。
多種臨床環境中常常需要選擇性破壞個別細胞或特定細胞類型。舉例而言，癌症療法之主要目標為特異性地破壞腫瘤細胞，同時使健康細胞及組織完整且不受損。
就此而言，雙特異性抗體已經設計以與一個「臂」一起結合至目標細胞上之表面抗原，且與第二「臂」一起結合至諸如藥物之效應部分。已研發出大量各種各樣之雙特異性格式，但研發雙特異性抗體之任務絕非無關緊要。
在預靶向放射免疫療法(PRIT)中，利用一方面對腫瘤相關抗原具有親和力且另一方面對放射性標記化合物具有親和力之抗體構築體。在第一步中，將抗體投與且定位至腫瘤。隨後，投與放射性標記化合物。因為放射性標記化合物小，故可將其迅速遞送至腫瘤，且非結合化合物係清除快速的，此情況減少腫瘤外之輻射暴露(Goldenberg等人Theranostics 2012, 2(5), 523-540)。類似程序亦可用於成像。預靶向可利用使用抗生物素蛋白-生物素之雙特異性抗體或系統，但後者具有抗生物素蛋白/抗生蛋白鏈菌素具免疫原性之缺點。
預靶向放射免疫療法或成像之方法通常利用清除劑或阻斷劑，該清除劑或阻斷劑係在投與抗體步驟與投與放射性標記化合物步驟之間投與。目的在於自血液清除抗體且/或在於阻斷放射性標記化合物之循環抗體之結合位點(參見例如Karacay等人, Bioconj. Chem., 13(5), 1054-1070 (2002))。清除劑或阻斷劑之使用允許待投與以用於有效治療之足夠位準之放射性，同時限制不利毒性，但必須謹慎選擇時序及劑量，且清除劑可能會引入諸如免疫反應之副作用之風險。因此，在預靶向方法中清除階段之使用為複雜態樣。
本發明提供可用於預靶向方法中之抗體組及其使用方法。
在一個態樣中，本發明提供抗體組，該抗體組包含： i)第一抗體，其包含結合至於目標細胞表面上表現之抗原之抗原結合部分，且進一步包含放射性標記化合物之抗原結合位點之V H域，但不包含放射性標記化合物之抗原結合位點之V L域；以及 ii)第二抗體，其包含結合至於目標細胞表面上表現之抗原之抗原結合部分，且進一步包含放射性標記化合物之抗原結合位點之V L域，但不包含放射性標記化合物之抗原結合位點之V H域， 其中第一抗體之該V H域及第二抗體之該V L域能夠一起形成放射性標記化合物之功能抗原結合位點。
在一特定實施例中，第一抗體及第二抗體各自包含Fc域。在一些實施例中，第一抗體及第二抗體中之各者可包含a) Fc域；b)至少一個抗原結合部分，其包含用於目標抗原之結合位點；及c)包含用於放射性標記化合物之抗原結合位點之VL域或VH域(但非兩者)的多肽，其中(b)之抗原結合部分之C端與Fc域之一個次單元之N端融合，且(c)之多肽之C端與Fc域之另一次單元之N端融合。
因此，第一抗體可包含以下或由以下組成： a)包含第一次單元及第二次單元之Fc域； b)包含用於目標抗原之結合位點之抗原結合部分；及 c)包含用於放射性標記化合物之抗原結合位點之抗體重鏈可變域(VH)或由其組成之多肽； 其中(b)之抗原結合部分與(a)之Fc域之第一次單元之N端融合，且(c)之多肽藉由其C端與(a)之Fc域之第二次單元之N端融合， 且其中第一抗體不包含用於放射性標記化合物之抗原結合位點之VL域。
第二抗體可包含以下或由以下組成： a)包含第一次單元及第二次單元之Fc域； b)包含用於目標抗原之結合位點之抗原結合部分；及 c)包含用於放射性標記化合物之抗原結合位點之抗體輕鏈可變域(VL)或由其組成之多肽； 其中(b)之抗原結合部分與(a)之Fc域之第一次單元之N端融合，且(c)之多肽藉由其C端與(a)之Fc域之第二次單元之N端融合， 且其中第二抗體不包含用於放射性標記化合物之抗原結合位點之VH域。
第一抗體及第二抗體均不獨自包含放射性標記化合物之功能抗原結合位點。第一抗體僅具有來自放射性標記化合物之功能結合位點之V H域，且不具有V L域。第二抗體僅具有V L域，且不具有V H域。
當第一抗體及第二抗體之V H及V L域締合時，形成放射性標記化合物之功能抗原結合位點。此種情況可例如在第一抗體及第二抗體結合至同一個別目標細胞或結合至鄰接細胞時發生。
本文所描述之第一抗體及第二抗體可在本文中稱為「單域分裂抗體」、「SPLIT」、「分裂抗體」、「半抗體(hemibody/demibody)」。一起形成能夠結合至放射性標記化合物之抗原結合位點之V H域及V L域在兩個抗體之間分裂，且不作為同一抗體之一部分存在。
分裂域格式意謂放射性標記化合物不可獨自結合至第一抗體或獨自結合至第二抗體。在血液中，第一抗體與第二抗體之間存在很少或不存在穩定締合，且因此存在很少或不存在放射性標記化合物之穩定結合。
於目標細胞表面上表現之抗原可在本文中稱為「目標抗原」、「目標細胞抗原」或「TA」。根據本發明，上文所描述之第一抗體及第二抗體可具有用於不同目標抗原或用於相同目標抗原之結合位點。(為避免疑問，在陳述抗體結合相同目標抗原之情況下，此意謂其具有能夠結合至相同目標抗原之結合位點且包括抗體可結合至彼此相同之兩個個別抗原分子之可能性)。舉例而言，在一個實施例中，第一抗體及第二抗體均結合至CEA。
在一些實施例中，第一抗體及第二抗體可結合至相同目標抗原之相同抗原決定基(具有用於目標抗原之相同抗原決定基之結合位點)。在其他實施例中，第一抗體可結合至與第二抗體不同之目標抗原之抗原決定基(具有用於與第二抗體不同之目標抗原之抗原決定基的結合位點)。
在一些實施例中，第一抗體及第二抗體可包含相同用於目標抗原之抗原結合位點。亦即，其可包含能夠結合至目標抗原之抗原結合位點，該抗原結合位點包含V L序列及V H序列，其中在第一抗體中及在第二抗體中，形成此抗原結合位點之V L序列及V H序列為相同的。
在一些實施例中，對於目標抗原而言，第一抗體及第二抗體中之各者為單價的。在其他實施例中，對於目標抗原而言，第一抗體及第二抗體中之各者為二價的。在一些實施例中，對於抗原決定基而言，其各自為二價且單特異性的。在其他實施例中，對於目標抗原而言，第一抗體及第二抗體中之各者為雙互補位的，亦即第一抗體及第二抗體各自具有用於目標抗原之兩個不同抗原決定基之結合位點。
在放射免疫療法及放射成像之情形下Fc區之存在具有效益，例如延長蛋白質之循環半衰期及/或引起腫瘤吸收高於可在較小片段情況下觀測到之腫瘤吸收。在此情形下，本文所描述之「分裂域」格式可特別地有利，此係因為其降低與放射性標記化合物之締合之較大可能性，該締合係由於循環抗體之延長存在而以其他方式發生。
在一些實施例中，Fc域經修飾以減弱或消除效應功能。
在另一態樣中，本發明提供包含如本文所描述之抗體組之醫藥組合物。在另一態樣中，本發明提供包含兩個單獨醫藥組合物之套組，該兩個單獨醫藥組合物各自包含本文所描述之抗體中之一者(亦即分別包含第一抗體及第二抗體)。
在另一態樣中本發明係關於編碼本文所描述之抗體或抗體組中之任一者之多核苷酸或多核苷酸組。在另一態樣中，本發明係關於包含該一或多個多核苷酸之載體或載體組，視情況表現載體或表現載體組。在另一目標中，本發明係關於包含本發明之載體或載體組之原核或真核宿主細胞或宿主細胞組。另外，提供產生抗體之方法，該方法包含培養一或多個宿主細胞以使得產生抗體。
在一些實施例中，如本文所描述之抗體用於預靶向放射免疫療法(PRIT)方法中或預靶向放射成像方法中。
在一個態樣中，本發明提供預靶向放射免疫療法方法，該方法包含： i)向個體投與如上文所描述之第一抗體及第二抗體；以及 ii)隨後向該個體投與放射性標記化合物。
在另一態樣中，本發明提供用於治療方法中之上文所描述之第一抗體及第二抗體，該治療方法包含向個體投與第一抗體及第二抗體以及隨後向該個體投與放射性標記化合物。在另一態樣中，本發明提供用於治療方法中之如上文所描述之第一抗體，該治療方法包含向個體投與第一抗體及第二抗體以及隨後向該個體投與放射性標記化合物。在另一態樣中，本發明提供用於治療方法中之如上文所描述之第二抗體，該治療方法包含向個體投與第一抗體及第二抗體以及隨後向該個體投與放射性標記化合物。
在另一態樣中，本發明提供放射成像方法，該方法包含： i)向個體投與如本文所描述之第一抗體及第二抗體，其中抗體結合至目標抗原且定位至表現目標抗原之細胞表面； ii)隨後投與放射性標記化合物；以及視情況 iii)對其中定位有放射核種之組織或器官進行成像。
在另一態樣中，本發明提供用於對人類或動物身體進行之診斷方法中之如本文所描述之第一抗體及第二抗體，其中該方法包含 i)向個體投與如本文所描述之第一抗體及第二抗體，其中抗體結合至目標抗原且定位至表現目標抗原之細胞表面； ii)隨後投與放射性標記化合物；以及視情況 iii)對其中定位有放射核種之組織或器官進行成像。
成像步驟之後可為形成診斷之步驟且視情況為向個體遞送彼診斷之步驟。在一些實施例中，該方法可進一步包含確定適當治療且視情況向個體投與彼治療。
在上文方法/用途中之各者中，第一抗體及第二抗體與相同或鄰接目標細胞之結合引起放射性標記化合物之抗原結合位點之V H域及V L域的締合及放射性標記化合物之功能抗原結合位點的形成。因此，在投與放射性標記化合物之後，放射性標記化合物結合至藉由締合V H及V L形成之功能抗原結合位點。
在本文所描述之方法及用途中之任一者中，第一抗體及第二抗體可同時或以任一次序依序投與。
通常在此項技術中，PRIT或放射成像方法涉及清除步驟。清除步驟包含在投與抗體與投與放射性標記化合物之間投與藥劑，其中藥劑提高自血液移除抗體之速率且/或阻斷放射性標記化合物與抗體之結合。
在本文所描述之方法及用途之一實施例中，該方法不包含清除步驟。亦即，其不包含在投與第一抗體及第二抗體與投與放射性標記化合物之間(亦即，在投與抗體之後、但在投與放射性標記化合物之前)投與清除劑或阻斷劑之步驟。在另一實施例中，在投與第一抗體及第二抗體與投與放射性標記化合物之間不投與除視情況選用之放射增敏劑、免疫治療劑及/或化學治療劑以外之藥劑。在另一實施例中，在投與第一抗體及第二抗體與投與放射性標記化合物之間不投與藥劑。
在一些實施例中，本文所描述之抗體可作為組合療法之一部分投與。舉例而言，其可與一或多種放射增敏劑、免疫治療劑及/或化學治療劑組合投與：放射增敏劑、免疫治療劑或化學治療劑及抗體可同時或以任一次序依序投與。
本文所描述之放射成像方法及放射免疫療法方法可如本文進一步論述視情況組合。
在另一態樣中，本發明提供套組，該套組包含： i)如本文所描述之第一抗體及第二抗體； ii)結合至藉由締合第一抗體及第二抗體形成之抗原結合位點之放射性標記化合物。
套組可視情況排除(亦即不包含)如本文所描述之清除劑或阻斷劑。
套組可視情況進一步包含放射增敏劑、免疫治療劑或化學治療劑。
在一些實施例中，第一抗體及第二抗體可存在於同一醫藥組合物中。在其他實施例中，第一抗體及第二抗體可存在於單獨醫藥組合物中。在一些實施例中，放射性標記化合物與抗體分開存在於醫藥組合物中。
在另一態樣中，本發明係關於一新穎肽連接子。本發明人已確定在由y個胺基酸組成之肽連接子中，y位置中之Ser (亦即，作為連接子之最末/C端胺基酸之Ser)可視y+2胺基酸(亦即，在C端方向上距離連接子中之最末胺基酸2個殘基定位之胺基酸)之性質而誘導此y+2胺基酸之醣基化。因此，可較佳地，將連接子之最末絲胺酸殘基置於y-2或y-3位置中(亦即，連接子之最末絲胺酸殘基處於在N端方向上距離連接子中之最末胺基酸2或3個胺基酸之位置處)。在一些實施例中，連接子可由y個選自由Gly及Ser組成之群之連續胺基酸殘基組成，例如其中y = 5或更大，例如y = 5至100、5至70、5至60、或5至50；或y = 10至100、10至70、10至60、或10至50，例如15至31、或15至30，例如y = 15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25；且其中最末絲胺酸處於y-2或y-3位置中。(因此，在y-2位置中可存在絲胺酸且在y-1及y位置中可存在甘胺酸；或在y-3位置中可存在絲胺酸且在y-2、y-1及y位置中可存在甘胺酸)。在一些實施例中，可較佳地，y = 20或21。在一些實施例中，可較佳地，連接子為(GxS)n(GGSGG)或(GxS)n(GGSGGG)，其中G =甘胺酸，S =絲胺酸，x = 4且n = 1至20、或2至20、或1至10、或2至10，例如n = 2、3、4或5、6、7、8或9，例如n = 2至5、或2至4。舉例而言，連接子可為GGGGSGGGGSGGGGSGGSGG (SEQ ID NO: 150)或GGGGSGGGGSGGGGSGGSGGG (SEQ ID NO: 151)。
在本發明之另一態樣中，本發明係關於該肽連接子接合多域蛋白之兩個域的用途。在另一態樣中，本發明係關於包含至少第一域及第二域之多域蛋白，其中該第一域與該第二域經該連接子連接。在另一態樣中，本發明係關於連接多域蛋白中之兩個域之方法，該方法包含經由連接子連接該等域。在一些實施例中，該方法可包含由編碼第一域、連接子及第二域之核酸表現多域蛋白，其中連接子連接第一域與第二域。
在一些實施例中，第一域及第二域可獨立地選自i)抗體之Fc域；ii)抗原結合部分；及iii) VL或VH域(例如如可發現於分離抗體或半抗體中)。
在一些實施例中，抗原結合部分可為抗體片段，諸如Fv、Fab、交叉Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2；雙功能抗體；線性抗體；單鏈抗體分子(例如，scFv或scFab)；或單域抗體(dAb)，諸如VHH；或可為非抗體結合骨架，諸如DARPin (經設計之錨蛋白重複蛋白)；親和抗體；Sso7d；單功能抗體或抗運載蛋白。
在一些實施例中，多域蛋白可為例如雙特異性抗體之多特異性抗體。第一域及第二域可各自為能夠結合至抗原之抗體片段。在另一實施例中，連接子可用於將抗體片段連接至多特異性抗體中之Fc域。
在一些實施例中，多域蛋白可包含作為抗原結合部分(諸如能夠結合至抗原之抗體片段)之第一域及作為VH或VL域之第二域。在一些實施例中，連接子可用於將抗原結合部分(例如抗體片段)連接至VH或VL域。舉例而言，在一些實施例中，抗體片段之C端(或其一個鏈，其中抗體片段包含超過一個鏈，例如在Fab之情況下)與VH或VL域之N端連接。在一些實施例中，多域蛋白可進一步包含有包含第一次單元及第二次單元之Fc域，且連接子可用於將Fc域之第一次單元或第二次單元連接至VH或VL域。在一個實施例中，Fc域之第一次單元或第二次單元之C端與VH或VL域之N端連接。在另一實施例中，VH或VL域之C端與Fc域之第一次單元或第二次單元之N端連接。
在一些實施例中，多域蛋白可為如本文所描述之任何抗體。
I.     定義 出於本文中之目的，「接受體人類構架」為包含來源於如下文所定義之人類免疫球蛋白構架或人類共同構架之輕鏈可變域(VL)構架或重鏈可變域(VH)構架之胺基酸序列的構架。「來源於」人類免疫球蛋白構架或人類共同構架之接受體人類構架可包含人類免疫球蛋白構架或人類共同構架之相同胺基酸序列，或其可含有胺基酸序列變化。在一些態樣中，胺基酸變化之數目為10或更少、9或更少、8或更少、7或更少、6或更少、5或更少、4或更少、3或更少或2或更少。在一些態樣中，VL接受體人類構架與VL人類免疫球蛋白構架序列或人類共同構架序列具有序列一致性。
「親和力」係指分子(例如抗體)之單一結合位點與該分子結合搭配物(例如抗原)之間的非共價相互作用之總和之強度。除非另外指示，否則如本文所使用之「結合親和力」係指反映結合對(例如抗體與抗原)成員之間1:1相互作用之固有結合親和力。分子X對其搭配物Y之親和力一般可由解離常數(K D)表示。親和力可藉由此項技術中已知之常用方法，包括本文所描述之方法來量測。用於量測結合親和力之特定說明性及例示性方法描述於以下中。
「親和力成熟」抗體係指相較於親本抗體而言在一或多個互補決定區(CDR)中具有一或多個更改之抗體，該親本抗體不具有該等更改，該等更改引起抗體對抗原之親和力改善。
術語「結合至於目標細胞表面上表現之抗原之抗體」係指能夠以足以使得抗體在靶向該抗原中可用作診斷劑及/或治療劑之親和力結合該抗原之抗體。在一個態樣中，如例如藉由表面電漿子共振(SPR)所量測，抗體與不相關非抗原蛋白之結合程度小於抗體與抗原之結合之約10%。在某些態樣中，結合至於目標細胞表面上表現之抗原之抗體之解離常數(K D)為≤ 1 μM、≤ 100 nM、≤ 10 nM、≤ 1 nM、≤ 0.1 nM、≤ 0.01 nM或≤ 0.001 nM (例如10 -8M或更小，例如10 -8M至10 -13M，例如10 -9M至10 -13M)。據稱當抗體之K D為1 μM或更小時，抗體「特異性結合」至於目標細胞表面上表現之抗原。在某些態樣中，抗體結合至該抗原之抗原決定基，該抗原決定基在來自不同物種之該抗原當中為保守的。
術語「放射性標記化合物之抗原結合位點」或「放射性標記化合物之功能抗原結合位點」係指能夠以足以使得抗體可用作診斷劑及/或治療劑之親和力結合至放射性標記化合物以締合放射性標記化合物與抗體之包含VH域及VL域的抗原結合位點。在一個態樣中，如例如藉由表面電漿子共振(SPR)所量測，抗原結合位點與不相關非抗原化合物之結合程度小於抗體與放射性標記化合物之結合之約10%。在某些態樣中，結合至放射性標記化合物之抗原結合位點之解離常數(K D)為≤ 1 μM、≤ 100 nM、≤ 10 nM、≤ 1 nM、≤ 0.1 nM、≤ 0.01 nM或≤ 0.001 nM (例如10 -8M或更小，例如10 -8M至10 -13M，例如10 -9M至10 -13M)。可較佳地，其K D為100 pM、50 pM、20 pM、10 pM、5 pM、1 pM或更小，例如0.9 pM或更小、0.8 pM或更小、0.7 pM或更小、0.6 pM或更小或0.5 pM或更小。舉例而言，功能結合位點可以約1 pM-1 nM，例如約1-10 pM、1-100 pM、5-50 pM、100-500 pM或500 pM-1 nM之K D結合放射性標記化合物。據稱當抗原結合位點之K D為1 μM或更小時，抗原結合位點「特異性結合」至放射性標記化合物。
術語「抗體」在本文中以最廣泛意義使用且涵蓋各種抗體結構，該等抗體結構包括但不限於單株抗體、多株抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)及抗體片段，只要該等抗體片段展現所需抗原結合活性即可。如本文所使用之術語「抗體」亦涵蓋包含功能抗原結合位點之VH域或VL域之個別半抗體。
「抗體片段」係指除完整抗體以外包含完整抗體之一部分之分子，該部分結合完整抗體所結合之抗原。抗體片段之實例包括但不限於Fv、Fab、交叉Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab') 2；雙功能抗體；線性抗體；單鏈抗體分子(例如scFv及scFab)；單域抗體(dAb)；以及由抗體片段形成之多特異性抗體。對於某些抗體片段之綜述，參見Holliger及Hudson, Nature Biotechnology 23:1126-1136 (2005)。術語「Fab片段」係指由免疫球蛋白之重鏈之VH及CH1域以及輕鏈之VL及CL域組成的蛋白質。「Fab'片段」與Fab片段之不同之處在於，在包括一或多個來自抗體鉸鏈區之半胱胺酸之CH1域之羧基端處添加有殘基。對於包含救助受體結合抗原決定基殘基且具有延長之活體內半衰期之Fab及F(ab') 2片段的論述，參見美國專利第5,869,046號。
如本文所使用，提及「Fab片段」意欲包括交叉Fab片段或scFab以及習知Fab片段(亦即，包含有包含VL域及CL域之輕鏈及包含VH域及CH1域之重鏈片段的Fab片段)。
術語「交叉Fab片段」或「xFab片段」或「交換Fab片段」係指其中重鏈及輕鏈之可變區或恆定區經互換之Fab片段。交叉Fab片段包含由輕鏈可變區(VL)及重鏈恆定區1 (CH1)構成之多肽鏈以及由重鏈可變區(VH)及輕鏈恆定區(CL)構成之多肽鏈。為清楚起見，在其中Fab輕鏈及Fab重鏈之可變區發生交換的互換型Fab分子中，包含重鏈恆定區之肽鏈在本文中稱為互換型Fab分子之「重鏈」。反之，在其中Fab輕鏈及Fab重鏈之恆定區發生交換的互換型Fab分子中，包含重鏈可變區之肽鏈在本文中稱為互換型Fab分子之「重鏈」。
如本文所使用之術語「單鏈」係指包含藉由肽鍵線性連接之胺基酸單體之分子。單鏈Fab分子為其中Fab輕鏈與Fab重鏈經肽連接子連接以形成單一肽鏈之Fab分子。在一特定該實施例中，在單鏈Fab分子中，Fab輕鏈之C端與Fab重鏈之N端連接。
不對稱Fab臂亦可藉由將帶電或不帶電胺基酸突變引入域介面中以導引正確Fab配對來進行工程改造。參見例如WO 2016/172485。
「單鏈可變片段」或「scFv」為藉由肽連接子連接之抗體重鏈(VH)及輕鏈(VL)可變域之融合蛋白。特定言之，連接子為具有10至25個胺基酸之短多肽，且通常富含甘胺酸以獲得可撓性以及富含絲胺酸或蘇胺酸以獲得溶解度，且可連接VH之N端與VL之C端，反之亦然。不管恆定區移除及連接子引入如何，此蛋白質仍保持原始抗體之特異性。對於scFv片段之綜述，參見例如Plückthun, 在The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, 第113卷中, Rosenburg及Moore編, (Springer-Verlag, New York), 第269-315頁(1994)；亦參見WO 93/16185；以及美國專利第5,571,894號及第5,587,458號。
術語「阻斷劑」係指阻斷效應分子，詳言之放射性標記化合物與用於彼效應分子之功能結合位點之結合的藥劑。一般而言，該阻斷劑結合至效應分子之功能結合位點，例如特異性結合至該功能結合位點。
術語「清除劑」係指提高自個體循環清除抗體之速率之藥劑。一般而言，清除劑結合至抗體，例如特異性結合至抗體。
如本文所使用之術語「清除步驟」或「清除階段」涵蓋阻斷劑或清除劑之使用。一些藥劑可充當清除劑且充當阻斷劑。
術語「抗原決定基」指示抗體所結合之蛋白質或非蛋白質抗原上之位點。抗原決定基可由相連胺基酸伸長段(線性抗原決定基)或包含例如由於抗原摺疊，亦即因蛋白質抗原之三級摺疊而在空間上鄰近之非相連胺基酸(構形抗原決定基)來形成。線性抗原決定基通常在蛋白質抗原暴露於變性劑之後仍與抗體結合，而構形抗原決定基通常在經變性劑處理之後受到破壞。抗原決定基在獨特空間構形中包含至少3個、至少4個、至少5個、至少6個、至少7個或8-10個胺基酸。
針對結合至特定抗原決定基之抗體(亦即結合至相同抗原決定基之抗體)之篩選可使用此項技術中之常規方法來進行，該等方法諸如但不限於丙胺酸掃描、肽墨點法(參見Meth. Mol. Biol. 248 (2004) 443-463)、肽裂解分析、抗原決定基切除、抗原決定基提取、抗原化學修飾(參見Prot. Sci. 9 (2000) 487-496)以及交叉阻斷(參見「Antibodies」, Harlow及Lane (Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harb., NY)。
基於抗原結構之抗體剖析(ASAP)亦稱為修飾輔助剖析(MAP)，允許基於來自特異性結合至抗原之多個單株抗體之抗體中之各者與經化學修飾或經酶修飾之抗原表面的結合概況來對多個單株抗體進行分組(參見例如US 2004/0101920)。各組中之抗體結合至相同抗原決定基，該相同抗原決定基可為與由另一組所表示之抗原決定基顯然不同或部分重疊之獨特抗原決定基。
此外，競爭性結合可用於容易地判定抗體是否結合至與參考抗體相同之抗原決定基，或是否與參考抗體競爭結合。舉例而言，「結合至與參考抗體相同之抗原決定基之抗體」係指在競爭分析中阻斷參考抗體與其抗原之結合達50%或更高之抗體，且反之，參考抗體在競爭分析中阻斷該抗體與其抗原之結合達50%或更高。此外，舉例而言，為判定抗體是否結合至與參考抗體相同之抗原決定基，使參考抗體在飽和條件下結合至抗原。在移除過量參考抗體之後，評估所討論之抗體結合至抗原之能力。若所討論之抗體能夠在參考抗體飽和結合之後結合至抗原，則可得出結論：所討論之抗體結合至與參考抗體不同之抗原決定基。但，若所討論之抗體不能在參考抗體飽和結合之後結合至抗原，則所討論之抗體可能結合至與參考抗體所結合之抗原決定基相同之抗原決定基。為確認所討論之抗體係結合至相同抗原決定基或僅由於空間原因而結合受阻，可使用常規實驗(例如使用ELISA之肽突變及結合分析、RIA、表面電漿子共振、流動式細胞量測術或此項技術中可獲得之任何其他定量或定性抗體結合分析)。此分析應在兩個設置下進行，亦即，在均為飽和抗體之兩個抗體之情況下進行。若在兩個設置下，僅第一(飽和)抗體能夠結合至抗原，則可得出結論：所討論之抗體及參考抗體競爭結合至抗原。
在一些態樣中，若如在競爭結合分析中所量測，1倍、5倍、10倍、20倍或100倍過量之一個抗體抑制另一抗體之結合達至少50%、至少75%、至少90%或甚至99%或更高，則兩個抗體視為結合至相同或重疊抗原決定基(參見例如Junghans等人, Cancer Res. 50 (1990) 1495-1502)。
在一些態樣中，若抗原中減弱或消除一個抗體之結合之基本上所有胺基酸突變亦減弱或消除另一抗體之結合，則兩個抗體視為結合至相同抗原決定基。若僅減弱或消除一個抗體之結合之胺基酸突變子組減弱或消除另一抗體之結合，則兩個抗體視為具有「重疊抗原決定基」。
術語「嵌合」抗體係指其中重鏈及/或輕鏈之一部分來源於特定來源或物種，同時該重鏈及/或輕鏈之剩餘部分來源於不同來源或物種之抗體。
抗體「類別」係指其重鏈所具有之恆定域或恆定區之類型。存在五個主要類別之抗體：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，且此等抗體中之若干者可進一步分成子類(同型)，例如IgG 1、IgG 2、IgG 3、IgG 4、IgA 1及IgA 2。在某些態樣中，抗體係IgG 1同型。在某些態樣中，抗體係具有用於減弱Fc區效應功能之P329G、L234A及L235A突變之IgG 1同型。在其他態樣中，抗體係IgG 2同型。在某些態樣中，抗體係具有用於改善IgG 4抗體穩定性之鉸鏈區中S228P突變之IgG 4同型。對應於不同類別之免疫球蛋白之重鏈恆定域分別稱為α、δ、ε、γ及μ。抗體輕鏈可基於其恆定域之胺基酸序列歸為稱為κ (kappa)及λ (lambda)之兩個類型中之一個。
「效應功能」係指隨抗體同型而變化之可歸因於抗體之Fc區之彼等生物活性。抗體效應功能之實例包括：C1q結合及補體依賴性細胞毒性(CDC)；Fc受體結合；抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細胞表面受體(例如B細胞受體)下調；以及B細胞活化。
例如醫藥組合物之藥劑之「有效量」係指在必需劑量下且持續必需時間段有效地達成所需治療結果或預防結果之量。
術語「串聯Fab」係指包含經由肽連接子/繫鏈連接之兩個Fab片段之抗體。在一些實施例中，串聯Fab可包含藉由肽連接子/繫鏈連接之一個Fab片段及一個交叉Fab片段。
術語「Fc區」在本文中用於界定含有恆定區之至少一部分之免疫球蛋白重鏈之C端區。術語「Fc域」在本文中用於定義含有兩個重鏈之恆定區、不包括第一恆定區之免疫球蛋白之C端區。因此，Fc域係指IgA、IgD及IgG之最後兩個恆定區免疫球蛋白域以及IgE及IgM之最後三個恆定區免疫球蛋白域。該術語包括原生序列Fc區及變異Fc區。在一個態樣中，人類IgG重鏈Fc區自Cys226或自Pro230延伸至重鏈之羧基端。然而，宿主細胞所產生之抗體可能經歷自重鏈之C端開始之一或多個，特定言之一或兩個胺基酸之轉譯後裂解。因此，宿主細胞藉由表現編碼全長重鏈之特定核酸分子所產生之抗體可包括全長重鏈，或其可包括全長重鏈之經裂解變異體。此情況可為重鏈之最末兩個C端胺基酸為甘胺酸(G446)及離胺酸(K447，根據EU索引編號)之情況。因此，Fc區之C端離胺酸(Lys447)或C端甘胺酸(Gly446)及離胺酸(Lys447)可存在或可不存在。在一個態樣中，包括如本文所規定、包含於本發明之抗體中之Fc區之重鏈包含另一C端甘胺酸-離胺酸二肽(G446及K447，根據EU索引編號)。在一個態樣中，包括如本文所規定、包含於本發明之抗體中之Fc區之重鏈包含另一C端甘胺酸殘基(G446，根據EU索引編號)。如Kabat等人 , Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版 國立衛生研究院公共衛生處(Public Health Service, National Institutes of Health), Bethesda, MD, 1991中所描述，除非另外規定，否則Fc區或恆定區中之胺基酸殘基之編號係根據亦稱為EU索引之EU編號系統。如本文所使用之Fc域之「次單元」係指形成二聚Fc域之兩個多肽中之一者，亦即能夠與形成二聚Fc域之兩個多肽中之另一者穩定締合的包含免疫球蛋白重鏈之C端恆定區之多肽。舉例而言，IgG Fc域之次單元包含IgG CH2及IgG CH3恆定域。
「構架」或「FR」係指除互補決定區(CDR)以外之可變域殘基。可變域之FR一般由以下四個FR域組成：FR1、FR2、FR3及FR4。因此，在VH (或VL)中，CDR序列及FR序列一般以以下序列形式出現：FR1-CDR-H1(CDR-L1)-FR2-CDR-H2(CDR-L2)-FR3-CDR-H3(CDR-L3)-FR4。
術語「全長抗體」、「完整抗體」及「全抗體」在本文中可互換使用以指代具有實質上與原生抗體結構類似之結構或具有含有如本文所定義之Fc區之重鏈的抗體。
「融合」意指組分係藉由肽鍵直接連接或經由一或多個肽連接子連接。
術語「宿主細胞」、「宿主細胞株」及「宿主細胞培養物」可互換使用且係指已引入有外源核酸之細胞，包括該等細胞之後代。宿主細胞包括「轉型體」及「經轉型細胞」，該等「轉型體」及「經轉型細胞」包括原代經轉型細胞及在不考慮繼代數目之情況下來源於其之後代。後代之核酸含量與母細胞可能不完全一致，但可能含有突變。本文包括具有與在原始經轉型細胞中所篩選或選擇之功能或生物活性相同之功能或生物活性之突變後代。
「人類抗體」為具有對應於人類或人類細胞所產生或來源於利用人類抗體譜系或其他人類抗體編碼序列之非人類來源之抗體之胺基酸序列的胺基酸序列的抗體。此人類抗體定義特定地排除包含非人類抗原結合殘基之人類化抗體。
「人類共同構架」為表示精選人類免疫球蛋白VL或VH構架序列中最常存在之胺基酸殘基之構架。一般而言，該精選人類免疫球蛋白VL或VH序列係來自可變域序列子組。一般而言，該序列子組為如Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第五版, NIH公開案91-3242, Bethesda MD (1991), 第1-3卷中之子組。在一個態樣中，對於VL，該子組為如Kabat等人，同前文獻中之子組κ I。在一個態樣中，對於VH，該子組為如Kabat等人，同前文獻中之子組III。
「人類化」抗體係指包含來自非人類CDR之胺基酸殘基及來自人類FR之胺基酸殘基之嵌合抗體。在某些態樣中，人類化抗體將包含實質上全部至少一個且通常兩個可變域，其中全部或實質上全部CDR對應於非人類抗體之CDR，且全部或實質上全部FR對應於人類抗體之FR。人類化抗體視情況可包含來源於人類抗體之抗體恆定區之至少一部分。例如非人類抗體之抗體之「人類化形式」係指已經歷人類化之抗體。
如本文所使用之術語「高變區」或「HVR」係指具序列高變性且決定抗原結合特異性之抗體可變域之區域，例如「互補決定區」(「CDR」)中之各者。
一般而言，抗體包含六個CDR：VH中之三個CDR (CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3)及VL中之三個CDR (CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3)。本文中之例示性CDR包括： (a)存在於胺基酸殘基26-32 (L1)、50-52 (L2)、91-96 (L3)、26-32 (H1)、53-55 (H2)及96-101 (H3)處之高變環(Chothia及Lesk, J. Mol. Biol.196:901-917 (1987))； (b)存在於胺基酸殘基24-34 (L1)、50-56 (L2)、89-97 (L3)、31-35b (H1)、50-65 (H2)及95-102 (H3)處之CDR (Kabat等人 , Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版 國立衛生研究院公共衛生處, Bethesda, MD (1991))；以及 (c)存在於胺基酸殘基27c-36 (L1)、46-55 (L2)、89-96 (L3)、30-35b (H1)、47-58 (H2)及93-101 (H3)處之抗原接點(MacCallum等人 J. Mol. Biol.262: 732-745 (1996))。
除非另外指示，否則CDR係根據Kabat等人，同前文獻來確定。熟習此項技術者應理解，CDR名稱亦可根據以下來確定：Chothia，同前文獻；McCallum，同前文獻；或任何其他科學上所接受之命名法系統。代替上文，如本文所描述之CDR-H1之序列可自Kabat26延伸至Kabat35，例如對於Pb-DOTAM結合可變域而言。
在一個態樣中，CDR殘基包含在序列表中或本說明書中其他地方識別之CDR殘基。
除非另外指示，否則可變域中之HVR/CDR殘基及其他殘基(例如FR殘基)係在本文中根據Kabat等人，同前文獻來進行編號。
「免疫接合物」為接合至一或多個異源分子之抗體，包括但不限於細胞毒性劑。
「個體(individual/subject)」為哺乳動物。哺乳動物包括但不限於家畜(例如母牛、綿羊、貓、狗及馬)、靈長類動物(例如人類及諸如猴之非人類靈長類動物)、兔以及嚙齒動物(例如小鼠及大鼠)。在某些態樣中，個體為人類。
如本文所描述之分子可為「經分離」的。「經分離」抗體為已與其天然環境之組分分離之抗體。在一些態樣中，如藉由例如電泳(例如SDS-PAGE、等電聚焦(IEF)、毛細管電泳)或層析(例如離子交換或逆相HPLC)方法所測定，抗體經純化至大於95%或99%純度。對於用於評估抗體純度之方法之綜述，參見例如Flatman等人, J. Chromatogr. B848:79-87 (2007)。
「多域蛋白」為包含至少一第一蛋白質域及一第二蛋白質域之蛋白質。蛋白質域為穩定且獨立於蛋白質之其餘部分摺疊之蛋白質子結構。
術語「核酸分子」或「多核苷酸」包括包含核苷酸聚合物之任何化合物及/或物質。各核苷酸由鹼基，具體言之嘌呤或嘧啶鹼基(亦即胞嘧啶(C)、鳥嘌呤(G)、腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)或尿嘧啶(U))、糖(亦即去氧核糖或核糖)及磷酸酯基構成。核酸分子常常藉由鹼基序列描述，由此該等鹼基表示核酸分子之一級結構(線性結構)。鹼基序列通常自5'至3'表示。在本文中，術語核酸分子涵蓋去氧核糖核酸(DNA)，包括例如互補DNA (cDNA)及基因體DNA；核糖核酸(RNA)，詳言之信使RNA (mRNA)；DNA或RNA之合成形式；以及包含此等分子中之兩個或更多個之混合聚合物。核酸分子可為線性或圓形的。另外，術語核酸分子包括有義股及反義股以及單股形式及雙股形式。此外，本文所描述之核酸分子可含有天然存在或非天然存在之核苷酸。非天然存在之核苷酸之實例包括具有衍生糖或磷酸酯主鏈鍵或經化學修飾之殘基之經修飾核苷酸鹼基。核酸分子亦涵蓋適用作用於活體外及/或活體內，例如在宿主或患者中直接表現本發明抗體之載體之DNA及RNA分子。該DNA (例如cDNA)或RNA (例如mRNA)載體可不經修飾或經修飾。舉例而言，mRNA可經化學修飾以增強RNA載體之穩定性及/或經編碼分子之表現，以使得可將mRNA注射至個體中以活體內生成抗體(參見例如Stadler等人, Nature Medicine 2017, 2017年6月12日線上發佈, doi:10.1038/nm.4356或EP 2 101 823 B1)。
「經分離」核酸係指已與其天然環境之組分分離之核酸分子。經分離核酸包括一般含有核酸分子之細胞中所含有之該核酸分子，但該核酸分子存在於染色體外或存在於不同於其天然染色體位置之染色體位置處。
「編碼抗體之經分離核酸」係指編碼抗體重鏈及輕鏈(或其片段)之一或多個核酸分子，包括單一載體或單獨載體中之該一或多個核酸分子及存在於宿主細胞中之一或多個位置處之該一或多個核酸分子。
如本文所使用之術語「單株抗體」係指自實質上均質抗體群體獲得之抗體，亦即除可能性變異抗體(例如含有天然存在之突變或在產生單株抗體製劑期間產生之變異抗體，該等變異體一般少量存在)之外，構成該群體之個別抗體具有一致性且/或結合相同抗原決定基。與通常包括針對不同決定子(抗原決定基)之不同抗體之多株抗體製劑形成對比，單株抗體製劑之各單株抗體係針對抗原上之單一決定子。因此，修飾語「單株」指示自實質上均質抗體群體獲得之抗體特徵，且不應解釋為需要藉由任何特定方法產生抗體。舉例而言，本發明之單株抗體可藉由多種技術製造，該等技術包括但不限於融合瘤方法、重組DNA方法、噬菌體呈現方法及利用含有全部或部分人類免疫球蛋白基因座之基因轉殖動物之方法、本文所描述之用於製造單株抗體之該等方法及其他例示性方法。
「裸抗體」係指不接合至異源部分(例如細胞毒性部分)或放射性標記之抗體。裸抗體可存在於醫藥組合物中。
「原生抗體」係指具有變化結構之天然存在之免疫球蛋白分子。舉例而言，原生IgG抗體為約150,000道爾頓(dalton)之由雙硫鍵鍵結之兩個一致輕鏈及兩個一致重鏈構成之雜四聚體醣蛋白。各重鏈自N端至C端具有可變域(VH)，該VH亦稱為可變重域或重鏈可變區，接著為三個恆定重域(CH1、CH2及CH3)。類似地，各輕鏈自N端至C端具有可變域(VL)，該VL亦稱為可變輕域或輕鏈可變區，接著為恆定輕(CL)域。
術語「藥品說明書」用以指慣常包括於治療性產品之商業封裝中之說明書，其含有關於與使用該等治療性產品有關之適應症、用法、劑量、投與、組合療法、禁忌及/或警告之資訊。
關於參考多肽序列之「胺基酸序列一致性百分比(%)」定義為在比對序列且必要時引入間隙以達成最大序列一致性百分比且出於比對之目的不將任何保守取代視為序列一致性之一部分之後，候選序列中與參考多肽序列中之胺基酸殘基具有一致性之胺基酸殘基的百分比。出於確定胺基酸序列一致性百分比之目的而進行之比對可以此項技術內之各種方式，例如使用諸如BLAST、BLAST-2、Clustal W、Megalign (DNASTAR)軟體或FASTA套裝程式之公開可獲得之電腦軟體來達成。熟習此項技術者可確定適用於比對序列之參數，包括在所比較之序列全長內達成最大比對所需之任何演算法。可替代地，一致性百分比值可使用序列比較電腦程式ALIGN-2生成。ALIGN-2序列比較電腦程式係由Genentech公司撰寫，且源碼已與華盛頓哥倫比亞特區美國版權局(U.S. Copyright Office, Washington D.C., 20559)中之使用者文件一起提交，其中其以美國版權登記號TXU510087登記且描述於WO 2001/007611中。
出於本文之目的，除非另外指示，否則胺基酸序列一致性百分比值係使用FASTA套裝36.3.8c版或更新版之ggsearch程式，用BLOSUM50比較矩陣生成。FASTA套裝程式係由W. R. Pearson及D. J. Lipman (1988), 「Improved Tools for Biological Sequence Analysis」, PNAS 85:2444-2448；W. R. Pearson (1996) 「Effective protein sequence comparison」 Meth. Enzymol. 266:227- 258；及Pearson等人 (1997) Genomics 46:24-36撰寫，且公開獲自www.fasta.bioch.virginia.edu/fasta_www2/fasta_down.shtml或www.  ebi.ac.uk/Tools/sss/fasta。可替代地，可使用可以fasta.bioch.virginia.edu/fasta_www2/index.cgi訪問之公共伺服器，使用ggsearch (整體蛋白質:蛋白質)程式及預設選項(BLOSUM50；開通：-10；ext：-2；Ktup = 2)以確保執行整體比對而非局部比對來比較序列。胺基酸一致性百分比係在輸出比對標題中給出。
術語「醫藥組合物」或「醫藥調配物」係指呈便於准許其中所含活性成分之生物活性有效之形式且不含有對投與有醫藥組合物之個體具有不可接受毒性之額外組分的製劑。
「醫藥學上可接受之載劑」係指醫藥組合物或調配物中除活性成分以外之對個體無毒之成分。醫藥學上可接受之載劑包括但不限於緩衝劑、賦形劑、穩定劑或防腐劑。
除非另外指示，否則所提及之如本文所使用之目標抗原係指來自任何脊椎動物來源之任何原生目標抗原，該任何脊椎動物來源包括諸如靈長類動物(例如人類)及嚙齒動物(例如小鼠及大鼠)之哺乳動物。該術語涵蓋「全長」、未經加工之目標抗原以及由細胞中之加工產生之目標抗原之任何形式。該術語亦涵蓋目標抗原之天然存在之變異體，例如剪接變異體或對偶基因變異體。舉例而言，目標抗原CEA可具有示於UniProt (www.uniprot.org)寄存編號P06731 (型號119)或NCBI (www.ncbi.nlm.nih.gov/) RefSeq NP_004354.2中之人類CEA，詳言之癌胚抗原相關細胞黏附分子5 (CEACAM5)之胺基酸序列。目標抗原之另一實例為纖維母細胞活化蛋白(FAP)。人類FAP之胺基酸序列示於UniProt (www.uniprot.org)寄存編號Q12884 (型號149)或NCBI (www.ncbi.nlm.nih.gov/) RefSeq NP_004451.2中。目標抗原之另一實例為GPRC5D (對於人類序列，參見UniProt編號Q9NZD1 (型號115)；NCBI RefSeq編號NP_061124.1)。
如本文中所提及之術語「分裂抗體(split antibody/split antibodies)」、「單域分裂抗體」或「SPLIT PRIT」意謂一起形成能夠結合至放射性標記化合物之抗原結合位點之VH域及VL域在兩個抗體之間分裂，且不作為同一抗體之一部分存在(在活體內裝配之前)。「靶向CEA之SPLIT PRIT」係指靶向CEA之分裂抗體。術語「SPLIT PRIT」亦可與術語「TA-分裂-DOTAM-VH/VL」(例如其中「TA」或目標抗原為CEA、FAP或GPRC5D)互換使用。術語「靶向CEA之SPLIT PRIT」可與術語「CEA-分裂-DOTAM-VH/VL」互換使用。
如本文所使用之「治療(treatment)」(及其文法變化形式，諸如「治療(treat/treating)」)係指試圖更改所治療個體之疾病之自然過程且可出於預防或在臨床病理學過程期間執行的臨床介入。所需治療效果包括但不限於預防疾病發生或復發、緩解症狀、減輕疾病之任何直接或間接病理性結果、預防轉移、減緩疾病惡化速率、改善或緩和疾病狀態以及緩解或改進預後。在一些態樣中，本發明抗體用於延緩疾病發展或用於減慢疾病惡化。
術語「可變區」或「可變域」係指參與抗體與抗原結合之抗體重鏈或輕鏈之域。原生抗體之重鏈及輕鏈之可變域(分別為VH及VL)一般具有類似結構，其中各域包含四個保守構架區(FR)及三個互補決定區(CDR)。(參見例如, Kindt等人 Kuby Immunology, 第6版, W.H. Freeman and Co., 第91頁(2007))。單一VH或VL域可足以賦予抗原結合特異性。此外，結合特定抗原之抗體可使用來自結合抗原之抗體之VH域或VL域以分別篩選互補VL域或VH域之庫來進行分離。參見例如Portolano等人, J. Immunol.150:880-887 (1993)；Clarkson等人, Nature352:624-628 (1991)。
如本文所使用之術語「載體」係指能夠傳播其所連接之另一核酸之核酸分子。該術語包括呈自我複製核酸結構形式之載體以及併入已引入有其之宿主細胞基因體中之載體。某些載體能夠導引其可操作地連接之核酸之表現。該等載體在本文中稱為「表現載體」。
如本文所使用之術語「Pb」或「鉛」包括例如Pb(II)之其離子。所提及之其他金屬亦包括其離子。因此，舉例而言，熟練讀者理解術語鉛、Pb、 212Pb或 203Pb意欲涵蓋該元素之離子形式，詳言之，Pb(II)。
II.    組合物及方法 在一個態樣中，本發明部分基於包含第一抗體及第二抗體之抗體組，其中各抗體可結合至目標細胞上之抗原，但其中用於效應劑之功能抗原結合位點僅在第一抗體及第二抗體彼此締合時形成。本發明抗體例如可用於預靶向免疫療法及/或預靶向成像之方法。在較佳態樣中，該等方法去除投與清除劑或阻斷劑之步驟。
A.    目標抗原  於目標細胞表面上表現之抗原亦在本文中稱為「目標抗原」或「目標細胞抗原」。此等術語在本文中可互換地使用。
在本發明係關於治療方法且關於用於該等治療方法中之產品之情況下，其適用於可藉由靶向患者細胞，例如病變細胞之細胞毒性活性治療之任何病況。因此，目標細胞為細胞毒性需要靶向之任何細胞，例如任何病變細胞。治療較佳屬於腫瘤或癌症。然而，本發明之適用性不限於腫瘤及癌症。舉例而言，治療亦可屬於病毒感染(藉由靶向經感染細胞)或經T細胞驅動之自體免疫疾病(藉由靶向T細胞)。已針對諸如HIV、狂犬病及EBV之各種病毒感染研究針對於經感染細胞表面上表現之病毒抗原之免疫毒素。Cai及Berger 2011 Antiviral Research 90(3):143-50使用含有PE38之免疫毒素以靶向殺滅感染卡波西氏肉瘤相關疱疹病毒(Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus)之細胞。另外，Resimmune® (A-dmDT390-bisFv(UCHT1))選擇性地殺滅人類惡性T細胞且短暫耗乏正常T細胞，且視為能夠治療諸如多發性硬化症及移植物抗宿主疾病之經T細胞驅動之自體免疫疾病以及其所經歷之臨床試驗所針對之T細胞血癌。同樣，本發明之方法可適用於需要放射成像之任何細胞類型，包括但不限於癌細胞或腫瘤細胞。
因此，合適目標抗原可包括癌細胞抗原、病毒抗原或微生物抗原。
抗原通常為過度表現或在異常時間表現之正常細胞表面抗原。理想地，目標抗原僅在病變細胞(諸如腫瘤細胞)上表現，然而，在實踐中很少觀測到此種情況。因此，目標抗原通常基於病變組織與健康組織之間的差異表現來加以選擇。
舉例而言，細胞表面標記物或目標抗原可為腫瘤相關抗原。
如本文所使用之術語「腫瘤相關抗原」或「腫瘤特異性抗原」係指僅僅或主要由腫瘤細胞及/或癌細胞或由諸如癌症相關纖維母細胞之其他腫瘤基質細胞表現或過度表現以使得抗原與一或多種腫瘤及/或一或多種癌症相關聯的任何分子(例如蛋白質、肽、脂質、碳水化合物等)。腫瘤相關抗原可另外由正常、非腫瘤或非癌細胞表現。然而，在該等情況下，由正常、非腫瘤或非癌細胞進行之腫瘤相關抗原表現不如由腫瘤細胞或癌細胞進行之表現穩健。在此方面，與由正常、非腫瘤或非癌細胞進行之抗原表現相比，腫瘤細胞或癌細胞可能會過度表現抗原或以顯著較高位準表現抗原。此外，腫瘤相關抗原可另外由發育或成熟之不同狀態之細胞表現。舉例而言，腫瘤相關抗原可另外由胚胎或胎階段之細胞表現，該等細胞通常在成年宿主中找不到。可替代地，腫瘤相關抗原可另外由幹細胞或前驅細胞表現，該等細胞通常在成年宿主中找不到。
腫瘤相關抗原可為由任何癌症或腫瘤，包括本文所描述之癌症及腫瘤之任何細胞表現之抗原。腫瘤相關抗原可為僅一種類型之癌症或腫瘤之腫瘤相關抗原以使得腫瘤相關抗原與僅一種類型之癌症或腫瘤相關聯或為僅一種類型之癌症或腫瘤之特徵。可替代地，腫瘤相關抗原可為超過一種類型之癌症或腫瘤之腫瘤相關抗原(例如可為特徵性的)。舉例而言，腫瘤相關抗原可由乳癌細胞及前列腺癌細胞表現，且完全不由正常、非腫瘤或非癌細胞表現。
本發明抗體可結合之例示性腫瘤相關抗原包括但不限於黑色素瘤相關硫酸軟骨素蛋白多醣(MCSP)、黏蛋白1 (MUCl；腫瘤相關上皮黏蛋白)、經優先表現之黑色素瘤抗原(PRAME)、癌胚抗原(CEA)、前列腺特異性膜抗原(PSMA)、PSCA、EpCAM、Trop2 (滋胚層-2，亦稱為EGP-1)、顆粒球-巨噬細胞群落刺激因子受體(GM-CSFR)、CD56、人類表皮生長因子受體2 (HER2/neu) (亦稱為erbB-2)、CDS、CD7、酪胺酸酶相關蛋白(TRP) I及TRP2。在另一實施例中，腫瘤抗原可選自由以下組成之群：分化簇(CD) 19、CD20、CD21、CD22、CD25、CD30、CD33 (唾液酸結合Ig樣凝集素3，骨髓細胞表面抗原)、CD79b、CD123 (介白素3受體α)、運鐵蛋白受體、EGF受體、間皮素、鈣黏蛋白、路易斯Y (Lewis Y)、磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3、FAP (纖維母細胞活化蛋白α)、GPRC5D (G蛋白偶合受體C類第5群成員D)、PSMA (前列腺特異性膜抗原)、CA9 = CAIX (碳酸酐酶IX)、Ll CAM (神經細胞黏附分子L 1)、內皮唾酸蛋白、HER3 (表皮生長因子受體家族成員3之經活化構形)、Alkl/BMP9複合物(未分化淋巴瘤激酶1/骨成形性蛋白9)、TPBG = 5T4 (滋胚層醣蛋白)、ROR1 (受體酪胺酸激酶樣表面抗原)、HER1 (表皮生長因子受體之經活化構形)及CLL1 (C型凝集素域家族12成員A)。間皮素在例如卵巢癌、間皮瘤、非小細胞肺癌、肺腺癌、輸卵管癌、頭頸癌、子宮頸癌及胰臟癌中表現。CD22在例如毛細胞白血病、慢性淋巴球性白血病(CLL)、前淋巴球白血病(PLL)、非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma)、小淋巴球淋巴瘤(SLL)及急性淋巴白血病(ALL)中表現。CD25在例如白血病及淋巴瘤，包括毛細胞白血病及霍奇金氏淋巴瘤中表現。路易斯Y抗原在例如膀胱癌、乳癌、卵巢癌、結腸直腸癌、食道癌、胃癌、肺癌及胰臟癌中表現。CD33在例如急性骨髓白血病(AML)、慢性骨髓單核球性白血病(CML)及骨髓增生病中表現。
特異性結合至腫瘤相關抗原之例示性抗體包括但不限於抗運鐵蛋白受體抗體(例如HB21及其變異體)、抗CD22抗體(例如RFB4及其變異體)、抗CD25抗體(例如Tac抗體及其變異體)、抗間皮素抗體(例如SS 1、MORAb-009、SS、HN1、HN2、MN、MB及其變異體)及抗路易斯Y抗原抗體(例如B3及其變異體)。在此方面，靶向部分(細胞結合劑)可為選自由B3、RFB4、SS、SS1、MN、MB、HN1、HN2、HB21及MORAb-009組成之群的抗體及其抗原結合部分。適用於本發明嵌合分子中之另外例示性靶向部分揭示於例如以下中：美國專利5,242,824 (抗運鐵蛋白受體)；美國專利5,846,535 (抗CD25)；美國專利5,889,157 (抗路易斯Y)；美國專利5,981,726 (抗路易斯Y)；美國專利5,990,296 (抗路易斯Y)；美國專利7,081,518 (抗間皮素)；美國專利7,355,012 (抗CD22及抗CD25)；美國專利7,368,110 (抗間皮素)；美國專利7,470,775 (抗CD30)；美國專利7,521,054 (抗CD25)；及美國專利7,541,034 (抗CD22)；美國專利申請公開案2007/0189962 (抗CD22)；Frankel等人, Clin. Cancer Res., 6: 326-334 (2000)；以及Kreitman等人, AAPS Journal, 8(3): E532-E551 (2006)，該等案及文獻中之各者以引用之方式併入本文中。
已培養靶向包括以下之特異性腫瘤相關抗原之另外抗體：畸胎瘤衍化生長因子(Cripto)、CD30、CD19、CD33、醣蛋白NMB、CanAg、Her2 (ErbB2/Neu)、CD56 (NCAM)、CD22 (Siglec2)、CD33 (Siglec3)、CD79、CD138、PSCA、PSMA (前列腺特異性膜抗原)、BCMA、CD20、CD70、E-選滯蛋白、EphB2、黑色素運鐵蛋白、Muc16及TMEFF2。以上抗體中之任一者或其抗原結合片段可適用於本發明中，亦即可併入本文所描述之抗體中。
在本發明之一些實施例中，可較佳地，腫瘤相關抗原為癌胚抗原(CEA)。
CEA在本發明之上下文中係有利的，此係因為其內化相對緩慢，且因此在初始處理之後高百分比之抗體將保持在細胞表面上可用，以結合至放射核種。其他低內化目標/腫瘤相關抗原亦可為較佳的。腫瘤相關抗原之其他實例包括CD20或HER2。在再另一實施例中，目標可為EGP-1 (上皮醣蛋白-1，亦稱為滋胚層-2)、結腸特異性抗原-p (CSAp)或胰臟黏蛋白MUC1。參見例如以引用之方式併入本文中之Goldenberg等人2012 (Theranostics 2(5))。此參考文獻亦描述諸如以下之抗體：結合至CSAp之Mu-9 (亦參見Sharkey等人Cancer Res. 2003; 63: 354-63)、結合至MUC1之hPAM4 (亦參見Gold等人Cancer Res. 2008: 68: 4819-26)、結合至CD20之維妥珠單抗(veltuzumab) (亦參見Sharkey等人Cancer Res. 2008; 68: 5282-90)及結合至EGP-1之hRS7 (亦參見Cubas等人Biochim Biophys Acta 2009; 1796: 309-14)。以上抗體中之任一者或其抗原結合部分可適用於本發明中，亦即可併入本文所描述之抗體中。已培養之抗CEA抗體之一個實例為T84.66 (如NCBI寄存編號：用於重鏈之CAA36980及用於輕鏈之CAA36979中所示，或如WO2016/075278之SEQ ID NO 317及318中所示)以及其人類化及嵌合型式，諸如如WO2016/075278 A1及/或WO2017/055389中所描述之T84.66-LCHA。另一實例為作為如WO2012/117002及WO2014/131712中所描述之抗CEA抗體之CH1A1a；及CEA hMN-14 (亦參見US 6 676 924及US 5 874 540)。另一抗CEA抗體為如M.J. Banfield等人, Proteins 1997, 29(2), 161-171中所描述之A5B7。來源於鼠抗體A5B7之人類化抗體已揭示於WO 92/01059及WO 2007/071422中。亦參見共同未決申請案PCT/EP2020/067582。A5B7之人類化型式之實例為A5H1EL1(G54A)。另一例示性抗CEA抗體為US7626011及/或共同未決申請案PCT/EP2020/067582中所描述之MFE23及其人類化型式。抗CEA抗體之再另一實例為28A9。以上抗體中之任一者或其抗原結合片段可用於形成本發明中之CEA結合部分。
在一些實施例中，FAP (纖維母細胞活化蛋白α)或GPRC5D (G蛋白偶合受體C類第5群成員D)亦可為較佳的。FAP為成像及療法之已建立目標，此係歸因於其在例如胰臟癌、乳癌及肺癌之多個腫瘤類型之微環境中之廣泛表現(Lindner, T., Loktev, A., Giesel, F.等人Targeting of activated fibroblasts for imaging and therapy. EJNMMI radiopharm. chem. 4, 16 (2019))。因此，期望使用FAP作為目標抗原之SPLIT PRIT在經活化癌症相關纖維母細胞上生成 212Pb-DOTAM之特異性積聚。因此，期望除鄰接腫瘤細胞上之受限直接腫瘤殺滅效應之外，所發射之α輻射亦不利地影響表現FAP之惡性腫瘤之免疫抑制。G蛋白偶合受體家族C第5群成員D (GPRC5D)在多發性骨髓瘤漿細胞上過度表現(Atamaniuk J, Gleiss A, Porpaczy E, Kainz B, Grunt TW, Raderer M,等人Overexpression of G protein-coupled receptor 5D in the bone marrow is associated with poor prognosis in patients with multiple myeloma. Eur J Clin Invest. 2012;42:953-60.)，且已建立SC (皮下)活體內模型反映在多發性骨髓瘤患者中發現之例如OPM-2及NCI-H929表現(Kodama T, Kochi Y, Nakai W, Mizuno H, Baba T, Habu K,等人Anti-GPRC5D/CD3 bispecific T-cell-redirecting antibody for the treatment of multiple myeloma. Mol Cancer Ther. (2019) 18:1555-64)。因此，吾等期望使用GPRC5D-分裂-DOTAM作為目標抗原之SPLIT PRIT生成 212Pb-DOTAM之腫瘤特異性積聚、接著為經輻射誘導之腫瘤細胞死亡。
在一些實施例中，本發明抗體可特異性結合至目標抗原(例如本文所論述之目標抗原中之任一者)。在一些實施例中，其可以≤ 1 μM、≤ 100 nM、≤ 10 nM、≤ 1 nM、≤ 0.1 nM、≤ 0.01 nM或≤ 0.001 nM (例如10 -7M或更小，例如10 -7M至10 -13M；10 -8M或更小，例如10 -8M至10 -13M、例如10 -9M至10 -13M)之解離常數(K D)結合。
在一個實施例中，第一抗體及第二抗體可各自結合至可稱為「抗原A」之相同目標抗原(亦即該等抗體對相同目標抗原具有結合特異性)。該等抗體可各自對抗原A上之相同抗原決定基具有結合特異性。可替代地，第一抗體可結合至抗原A上之第一抗原決定基且第二抗體可結合至不同之抗原A上之第二抗原決定基。舉例而言，在一個實施例中，該等抗體中之一者可結合至CEA之T84.66抗原決定基且另一者可結合至CEA之A5B7抗原決定基。
在一些實施例中，對於抗原A而言，第一抗體及/或第二抗體中之一者或兩者可為雙互補位的-亦即，個別抗體中之各者可結合至抗原A之兩個不同抗原決定基。第一抗體可包含分別結合至抗原A之第一抗原決定基及第二抗原決定基之第一結合位點及第二結合位點，其中第一抗原決定基及第二抗原決定基彼此不同。可替代地或另外，第二抗體可包含結合至抗原A之第一抗原決定基及第二抗原決定基之第一結合位點及第二結合位點，其中第一抗原決定基及第二抗原決定基彼此不同。在一些實施例中，第一抗體所結合之抗原決定基中之一者或兩者可與第二抗體所結合之抗原決定基中之一者或兩者不同。在其他實施例中，第一抗體所結合之兩個抗原決定基可與第二抗體所結合之兩個抗原決定基相同。
在另一實施例中，第一抗體及第二抗體可各別地結合至不同目標抗原，該等不同目標抗原可各別地稱為抗原A及抗原B。
B.  放射性標記化合物  根據本發明，第一抗體及第二抗體之締合形成用於效應分子之功能結合位點。本發明之效應分子為包含放射性同位素之放射性標記化合物，例如為放射性標記半抗原。
在一些實施例中，效應分子可包含經螯合放射性同位素。
在一些實施例中，用於效應分子之功能結合位點可結合至包含螯合劑及放射性同位素之螯合物。在其他實施例中，抗體可結合至與經螯合放射性同位素接合之部分，例如組織胺-丁二醯基-甘胺酸(HSG)、地穀新配質(digoxigenin)、生物素或咖啡鹼。
舉例而言，螯合劑可為諸如胺基多羧酸或胺基多硫羧酸或其鹽或功能變異體之多齒分子。舉例而言，螯合劑可為雙齒或三齒或四齒的。合適金屬螯合劑之實例包括包含以下之分子：EDTA (乙二胺四乙酸或諸如CaNa 2EDTA之鹽形式)、DTPA (二伸乙三胺五乙酸)、DOTA (1,4,7,10-四氮雜環十二烷-1,4,7,10-四乙酸)、NOTA (2,2',2''-(1,4,7-三氮雜壬烷-1,4,7-三基)三乙酸)、IDA (亞胺二乙酸)、MIDA ((甲基亞胺基)二乙酸)、TTHA (3,6,9,12-肆(羧甲基)-3,6,9,12-四氮雜十四烷二酸)、TETA (2,2',2'',2'''-(1,4,8,11-四氮雜環十四烷- 1,4,8,11-四基)四乙酸)、DOTAM (1,4,7,10-肆(胺甲醯基甲基)-1,4,7,10-四氮雜環十二烷)、HEHA (1,4,7,10,13,16-六氮雜環十六烷-1,4,7,10,13,16-六乙酸，可獲自Macrocyclics公司, Plano, Texas)、NTA (氮基三乙酸)、EDDHA (乙二胺-N, N'-雙(2-羥基苯乙酸)、BAL (2,3,-二巰基丙醇)、DMSA (2,3-二巰基丁二酸)、DMPS (2,3-二巰基-1-丙磺酸)、D-青黴胺(B-二甲基半胱胺酸)、MAG 3(巰基乙醯基三甘胺酸)、Hynic (6-肼基吡啶-3-甲酸)、對異硫氰基苄基-去鐵胺(例如經鋯標記以進行成像)及其能夠螯合金屬之鹽或功能變異體/衍生物。在一些實施例中，可較佳地，螯合劑為DOTA或DOTAM或其能夠螯合金屬之鹽或功能變異體/衍生物。因此，螯合劑可為或可包含具有與其螯合之放射性同位素之DOTA或DOTAM。
效應分子可包含以下或由以下組成：上文螯合劑之功能變異體或衍生物以及放射核種。合適變異體/衍生物具有在某種有限程度上有所不同之結構且保持充當螯合劑之能力(亦即，保持足以用於本文所描述之目的中之一或多個之活性)。功能變異體/衍生物亦可包括接合至一或多個額外部分或取代基之如上文所描述之螯合劑，包括小分子、多肽或碳水化合物。此連接可例如在螯合劑之主鏈部分中經由構成碳中之一者發生。舉例而言，合適取代基可為烴基，諸如烷基、烯基、芳基或炔基；羥基；醇基；鹵素原子；硝基；氰基；磺醯基；硫醇基；胺基；側氧基；羧基；硫羧基；羰基；醯胺基；酯基；或雜環基，包括雜芳基。舉例而言，取代基可為下文針對基團「R 1」所定義之取代基中之一者。舉例而言，小分子可為染料(諸如Alexa 647或Alexa 488)、生物素或生物素部分或苯基或苄基部分。舉例而言，多肽可為例如具有兩個或三個胺基酸之寡肽之寡肽。例示性碳水化合物包括聚葡萄糖、直鏈或分支鏈聚合物或共聚物(例如聚伸烷基、聚(乙烯-離胺酸)、聚甲基丙烯酸酯、聚胺基酸、多醣或寡醣、樹枝狀聚合物)。衍生物亦可包括其中如上文所闡述之化合物經由連接子部分連接之螯合劑化合物之多聚體。衍生物亦可包括保持螯合金屬離子之能力之上文化合物之功能片段。
衍生物之特定實例包括苄基-EDTA及羥乙基-硫脲基-苄基EDTA、DOTA-苯(例如(S-2-(4-胺基苄基)-1,4,7,10-四氮雜環十二烷四乙酸)、DOTA-生物素及DOTA-TyrLys-DOTA。
在本發明之一些實施例中，藉由締合第一抗體及第二抗體形成之功能結合位點結合至包含DOTAM及例如鉛(Pb)之金屬之金屬螯合物。如上文所提及，「DOTAM」具有化學名稱： 1,4,7,10-肆(胺甲醯基甲基)-1,4,7,10-四氮雜環十二烷， 其為下式化合物：
Figure 02_image001
在某些態樣及實施例中，本發明亦可利用併有金屬離子之DOTAM之功能變異體或衍生物。合適之DOTAM之變異體/衍生物具有在某種有限程度上與DOTAM之結構有所不同之結構且保持起作用之能力(亦即，保持足以用於本文所描述之目的中之一或多個之活性)。在該等態樣及實施例中，DOTAM或DOTAM之功能變異體/衍生物可為WO 2010/099536中所揭示之活性變異體中之一者。合適功能變異體/衍生物可為下式化合物：
Figure 02_image003
或其醫藥學上可接受之鹽；其中 R N為H、C 1-6烷基、C 1-6鹵烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-7環烷基、C 3-7環烷基-C 1-4烷基、C 2-7雜環烷基、C 2-7雜環烷基-C 1-4烷基、苯基、苯基-C 1-4烷基、C 1-7雜芳基及C 1-7雜芳基-C 1-4烷基；其中C 1-6烷基、C 1-6鹵烷基、C 2-6烯基及C 2-6炔基各自視情況經1、2、3或4個經獨立選擇之R w基團取代；且其中該C 3-7環烷基、C 3-7環烷基-C 1-4烷基、C 2-7雜環烷基、C 2-7雜環烷基-C 1-4烷基、苯基、苯基-C 1-4烷基、C 1-7雜芳基及C 1-7雜芳基-C 1-4烷基各自視情況經1、2、3或4個經獨立選擇之R x基團取代； L 1獨立地為C 1-6伸烷基、C 1-6伸烯基或C 1-6伸炔基，其中之各者視情況經1、2或3個獨立地選自R 1基團之基團取代； L 2為C 2-4直鏈伸烷基，其視情況由經獨立選擇之R 1基團取代；且其視情況經1、2、3或4個獨立地選自C 1-4烷基及/或C 1-4鹵烷基之基團取代； R 1獨立地選自D 1-D 2-D 3、鹵素、氰基、硝基、羥基、C 1-6烷氧基、C 1-6鹵烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6烷基亞磺醯基、C 1-6烷基磺醯基、胺基、C 1-6烷胺基、二C 1-6烷胺基、C 1-4烷基羰基、羧基、C 1-6烷氧基羰基、C 1-6烷基羰基胺基、二C 1-6烷基羰基胺基、C 1-6烷氧基羰基胺基、C 1-6烷氧基羰基-(C 1-6烷基)胺基、胺甲醯基、C 1-6烷基胺甲醯基及二C 1-6烷基胺甲醯基； 各D 1獨立地選自C 6-10芳基-C 1-4烷基、C 1-9雜芳基-C 1-4烷基、C 3-10環烷基-C 1-4烷基、C 2-9雜環烷基-C 1-4烷基、C 1-8伸烷基、C 1-8伸烯基及C 1-8伸炔基；其中該C 1-8伸烷基、C 1-8伸烯基及C 1-8伸炔基視情況經1、2、3或4個經獨立選擇之R 4基團取代；且其中該C 6-10芳基-C 1-4烷基、C 1-9雜芳基-C 1-4烷基、C 3-10環烷基-C 1-4烷基、C 2-9雜環烷基-C 1-4烷基各自視情況經1、2、3或4個經獨立選擇之R 5基團取代； 各D 2獨立地不存在或為C 1-20直鏈伸烷基，其中該C 1-20直鏈伸烷基之1至6個非鄰接亞甲基各自視情況由經獨立選擇之-D 4-部分置換，其限制條件為該C 1-20直鏈伸烷基中之至少一個亞甲基單元不視情況經-D 4-部分置換；其中該C 1-20直鏈伸烷基視情況經一或多個獨立地選自以下之基團取代：鹵素、氰基、硝基、羥基、C 1-4烷基、C 1-4鹵烷基、C 1-4烷氧基、C 1-4鹵烷氧基、胺基、C 1-4烷胺基、二C 1-4烷胺基、C 1-4烷基羰基、羧基、C 1-4烷氧基羰基、C 1-4烷基羰基胺基、二C 1-4烷基羰基胺基、C 1-4烷氧基羰基胺基、C 1-4烷氧基羰基-(C 1-4烷基)胺基、胺甲醯基、C 1-4烷基胺甲醯基及二C 1-4烷基胺甲醯基； 各D 3獨立地選自H、鹵素、氰基、硝基、羥基、C 1-6烷基、C 1-6鹵烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-14環烷基、C 3-14環烷基-C 1-4烷基、C 2-14雜環烷基、C 2-14雜環烷基-C 1-4烷基、C 6-14芳基、C 6-14芳基-C 1-4烷基、C 1-13雜芳基、C 1-13雜芳基-C 1-4烷基；其中該C 1-6烷基、C 1-6鹵烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基各自視情況經1、2、3或4個經獨立選擇之R 6基團取代；且其中該C 3-14環烷基、C 3-14環烷基-C 1-4烷基、C 2-14雜環烷基、C 2-14雜環烷基-C 1-4烷基、C 6-14芳基、C 6-14芳基-C 1-4烷基、C 1-13雜芳基、C 1-13雜芳基-C 1-4烷基各自視情況經1、2、3或4個經獨立選擇之R 7基團取代； 各D 4獨立地選自-O-、-S-、-NR aC(=O)-、-NR aC(=S)-、-NR bC(=O)NR c-、-NR bC(=S)NR c-、-S(=O)-、-S(=O) 2-、-S(=O)NR a-、-C(=O)-、-C(=S)-、-C(=O)O-、-OC(=O)NR a-、-OC(=S)NR a-、-NR a-、-NR bS(=O)NR c-及NR bS(=O) 2NR O-； 各R 4及R 6獨立地選自鹵素、氰基、硝基、羥基、C 1-4烷氧基、C 1-4鹵烷氧基、C 1-4烷硫基、C 1-4烷基亞磺醯基、C 1-4烷基磺醯基、胺基、C 1-4烷胺基、二C 1-4烷胺基、C 1-4烷基羰基、羧基、C 1-4烷氧基羰基、C 1-4烷基羰基胺基、二C 1-4烷基羰基胺基、C 1-4烷氧基羰基胺基、C 1-4烷氧基羰基-(C 1-4烷基)胺基、胺甲醯基、C 1-4烷基胺甲醯基及二C 1-4烷基胺甲醯基； 各R 5獨立地選自鹵素、氰基、氰酸根、異硫氰酸根、硝基、羥基、C 1-4烷基、C 2-4烯基、C 2-4炔基、C 1-4烷氧基、C 1-4鹵烷氧基、C 1-4烷硫基、C 1-4烷基亞磺醯基、C 1-4烷基磺醯基、胺基、C 1-4烷胺基、二C 1-4烷胺基、C 1-4烷基羰基、羧基、C 1-4烷氧基羰基、C 1-4烷基羰基胺基、二C 1-4烷基羰基胺基、C 1-4烷氧基羰基胺基、C 1-4烷氧基羰基-(C 1-4烷基)胺基、胺甲醯基、C 1-4烷基胺甲醯基及二C 1-4烷基胺甲醯基； 各R 7獨立地選自鹵素、氰基、硝基、羥基、C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-7環烷基、C 3-7環烷基-C 1-4烷基、C 2-7雜環烷基、C 2-7雜環烷基-C 1-4烷基、苯基、苯基-C 1-4烷基、C 1-7雜芳基、C 1-7雜芳基-C 1-4烷基、-OR O、-SR O、-S(=O)R P、-S(=O) 2R P、-S(=O)NR sR t、-C(=O)R P、-C(=O)OR P、-C(=O)NR sR t、-OC(=O)R P、-OC(=O)NR sR t、-NR sR t、-NR qC(=O)R r、-NR qC(=O)OR r、-NR qC(=O)NR r、-NR qS(=O) 2R r及-NR PS(=O) 2NR sR t；其中該C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基各自視情況經1、2、3或4個經獨立選擇之R'基團取代；且其中該C 3-7環烷基、C 3-7環烷基-C 1-4烷基、C 2-7雜環烷基、C 2-7雜環烷基-C 1-4烷基、苯基、苯基-C 1-4烷基、C 1-7雜芳基、C 1-7雜芳基-C 1-4烷基各自視情況經1、2、3或4個經獨立選擇之R''基團取代； 各R a、R b及R c獨立地選自H、C 1-6烷基、C 1-6鹵烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-7環烷基、C 3-7環烷基-C 1-4烷基、C 2-7雜環烷基、C 2-7雜環烷基-C 1-4烷基、苯基、苯基-C 1-4烷基、C 1-7雜芳基、C 1-7雜芳基-C 1-4烷基；其中該C 1-6烷基、C 1-6鹵烷基、C 2-6烯基及C 2-6炔基各自視情況經1、2、3或4個經獨立選擇之R w基團取代；且其中該C 3-7環烷基、C 3-7環烷基-C 1-4烷基、C 2-7雜環烷基、C 2-7雜環烷基-C 1-4烷基、苯基、苯基-C 1-4烷基、C 1-7雜芳基、C 1-7雜芳基-C 1-4烷基各自視情況經1、2、3或4個經獨立選擇之R x基團取代； 各R o、R p、R q、R r、R s及R t獨立地選自H、C 1-6烷基、C 1-6鹵烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-7環烷基、C 3-7環烷基-C 1-4烷基、C 2-7雜環烷基、C 2-7雜環烷基-C 1-4烷基、苯基、苯基-C 1-4烷基、C 1-7雜芳基、C 1-7雜芳基-C 1-4烷基；其中該C 1-6烷基、C 1-6鹵烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基各自視情況經1、2、3或4個經獨立選擇之R y基團取代；且其中該C 3-7環烷基、C 3-7環烷基-C 1-4烷基、C 2-7雜環烷基、C 2-7雜環烷基-C 1-4烷基、苯基、苯基-C 1-4烷基、C 1-7雜芳基、C 1-7雜芳基-C 1-4烷基各自視情況經1、2、3或4個經獨立選擇之R z基團取代； 各R'、R w及R y獨立地選自羥基、氰基、硝基、C 1-4烷氧基、C 1-4鹵烷氧基、胺基、C 1-4烷胺基及二C 1-4烷胺基；以及 各R''、R x及R z獨立地選自羥基、鹵素、氰基、硝基、C 1-4烷基、C 1-4鹵烷基、C 1-4烷氧基、C 1-4鹵烷氧基、胺基、C 1-4烷胺基及二C 1-4烷胺基； 其限制條件為不超出視情況經取代之部分中各原子之價數。
適當地，上式功能變異體/衍生物對本發明抗體之親和力與DOTAM對本發明抗體之親和力相當或超過DOTAM對本發明抗體之親和力，且對Pb之結合強度與DOTAM對Pb之結合強度相當或超過DOTAM對Pb之結合強度(「親和力」係如上文所描述藉由解離常數來量測)。舉例而言，功能變異體/衍生物與本發明抗體/Pb之解離常數可為DOTAM與同一抗體/Pb之解離常數的1.1倍或更小、1.2倍或更小、1.3倍或更小、1.4倍或更小、1.5倍或更小或2倍或更小。
各R N可為H、C 1-6烷基或C 1-6鹵烷基；較佳H、C 1-4烷基或C 1-4鹵烷基。最佳地，各R N為H。
對於DOTAM變異體，較佳地，1、2、3個或最佳各個L 2為C 2伸烷基。有利地，DOTAM之C 2伸烷基變異體可對Pb具有特別地高之親和力。L 2之視情況選用之取代基可為R 1、C 1-4烷基或C 1-4鹵烷基。適當地，L 2之視情況選用之取代基可為C 1-4烷基或C 1-4鹵烷基。
視情況，各L 2可為未經取代之C 2伸烷基-CH 2CH 2-。
各L 1較佳為C 1-4伸烷基、更佳C 1伸烷基，諸如-CH 2-。
DOTAM之功能變異體/衍生物可為下式化合物：
Figure 02_image005
其中各Z獨立地為如上文所定義之R 1；p、q、r及s為0、1或2；且p+q+r+s為1或更大。較佳地，p、q、r及s為0或1且/或p+q+r+s為1。舉例而言，該化合物可具有p+q+r+s = 1，其中Z為對SCN-苄基部分-此類化合物可商購自Macrocyclics公司(Plano, Texas)。
可用於本發明中之放射核種可包括諸如鉛(Pb)、鎦(Lu)或釔(Y)之金屬之放射性同位素。
特別可用於成像應用中之放射核種可為作為γ發射體之放射核種。舉例而言，其可選自 203Pb或 205Bi。
特別可用於治療應用中之放射核種為作為α或β發射體之放射核種。舉例而言，其可選自 212Pb、 212Bi、 213Bi、 90Y、 177Lu、 225Ac、 211At、 227Th、 223Ra。
在一些實施例中，可較佳地，DOTAM (或其鹽或功能變異體)與諸如上文所列之Pb或Bi放射性同位素中之一者之Pb或Bi螯合。在其他實施例中，可較佳地，DOTA (或其鹽或功能變異體)與諸如上文所列之Lu或Y放射性同位素中之一者之Lu或Y螯合。
在一些實施例中，方法及用途可包含利用例如適用於療法之放射性同位素及適用於成像之放射性同位素之放射性同位素混合物的組合療法及成像方法。舉例而言，以上放射性同位素可為藉由相同螯合劑螯合之相同金屬之不同放射性同位素。在一個實施例中，該方法可包含投與呈混合物形式之 203Pb-DOTAM及 212Pb-DOTAM。在另一實施例中，該方法可包含使用諸如 203Pb或 205Bi之γ發射體之劑量測定法之第一循環，接著為使用諸如 212Pb、 212Bi、 213Bi、 90Y、 177Lu、 225Ac、 211At、 227Th或 223Ra之α或β發射體之一或多輪治療。該等方法進一步描述於下文中。
在一些實施例中，藉由締合第一抗體及第二抗體形成之功能結合位點可結合至Pb-DOTAM螯合物。
在一些實施例中，藉由締合第一抗體及第二抗體形成之功能結合位點可特異性結合至放射性標記化合物。在一些實施例中，其可結合至諸如Pb-DOTAM螯合物之放射性標記化合物，其中與Pb-DOTAM及/或目標之解離常數(Kd)為≤ 1 μM、≤ 100 nM、≤ 10 nM、≤ 1 nM、≤ 0.1 nM、≤ 0.01 nM或≤ 0.001 nM (例如10 -7M或更小，例如10 -7至10 -13；10 -8M或更小，例如10 -8M至10-13 M、例如10 -9M至10 -13M)。在一些實施例中，可較佳地，其以100 pM、50 pM、20 pM、10 pM、5 pM、1 pM或更小，例如0.9 pM或更小、0.8 pM或更小、0.7 pM或更小、0.6 pM或更小或0.5 pM或更小之結合親和力Kd值結合。舉例而言，功能結合位點可以約1 pM-1 nM，例如約1-10 pM、1-100 pM、5-50 pM、100-500 pM或500 pM-1 nM之Kd結合金屬螯合物。
C.    例示性用於DOTA之抗原結合位點  在本發明之一個特定實施例中，第一抗體及第二抗體締合以形成用於DOTA (或其功能衍生物或變異體)，例如與Lu或Y (例如 177Lu或 90Y)螯合之DOTA之功能結合位點。舉例而言，功能結合位點可以約1 pM-1 nM，例如約1-10 pM、1-100 pM、5-50 pM、100-500 pM或500 pM-1 nM之Kd結合放射性標記化合物。
C825為已知之對與諸如 177Lu及 90Y之放射性金屬複合之DOTA-Bn (S-2-(4-胺基苄基)-1,4,7,10-四氮雜環十二烷四乙酸)具有高親和力的scFv (參見例如以引用之方式併入本文中之Cheal等人2018, Theranostics 2018及WO2010099536)。本文提供C825之CDR序列以及VL及VH序列。在一個實施例中，形成放射性標記化合物之抗原結合位點之一部分之重鏈可變區可包含至少一個、兩個或全部三個選自以下之CDR：(a)包含35之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含36之胺基酸序列之CDR-H2；(c)包含37之胺基酸序列之CDR-H3。在一替代性實施例中，CDR-H1可具有序列GFSLTDYGVH (SEQ ID NO.: 148)。形成放射性標記化合物之結合位點之一部分之輕鏈可變區可包含至少一個、兩個或全部三個選自以下之CDR：(d)包含38之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含39之胺基酸序列之CDR-L2；以及(f)包含40之胺基酸序列之CDR-L3。
在另一實施例中，(在第一抗體上)形成放射性標記化合物之功能抗原結合位點之一部分之重鏈可變域包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列或包含與SEQ ID NO: 41具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體。在某些實施例中，相對於參考序列而言，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列含有取代(例如保守取代)、插入或刪除，但包含該序列之結合位點保持較佳以如本文所描述之親和力結合至與Lu或Y複合之DOTA的能力。在某些實施例中，總計1至10個胺基酸已在SEQ ID NO:41中經取代、插入及/或刪除。在某些實施例中，取代、插入或刪除發生在CDR外部區域中(亦即在FR中)。視情況，抗體包含SEQ ID NO:41中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:35之胺基酸序列或序列GFSLTDYGVH (SEQ ID NO.: 148)之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:36之胺基酸序列之CDR-H2；以及(c)包含SEQ ID NO:37之胺基酸序列之CDR-H3。
視情況，(在第二抗體上)形成放射性標記化合物之功能抗原結合位點之一部分之輕鏈可變域包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列或包含與SEQ ID NO: 42具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體。在某些實施例中，相對於參考序列而言，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列含有取代(例如保守取代)、插入或刪除，但包含該序列之結合位點保持較佳以如本文所描述之親和力結合至與Lu或Y複合之DOTA的能力。在某些實施例中，總計1至10個胺基酸已在SEQ ID NO: 42中經取代、插入及/或刪除。在某些實施例中，取代、插入或刪除發生在CDR外部區域中(亦即在FR中)。視情況，抗體包含SEQ ID NO:42中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:38之胺基酸序列之CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO:39之胺基酸序列之CDR-L2；以及(c)包含SEQ ID NO:40之胺基酸序列之CDR-L3。
明確地考慮關於重鏈可變區及輕鏈可變區之實施例組合。因此，功能抗原結合位點可分別在第一抗體及第二抗體上由如上文所定義之重鏈可變區及如上文所定義之輕鏈可變區形成。
在上文任一個實施例中，形成用於DOTA複合物之結合位點之輕鏈可變區及重鏈可變區可為人類化。在一個實施例中，輕鏈可變區及重鏈可變區包含如同上文任一個實施例之CDR，且進一步包含例如人類免疫球蛋白構架或人類共同構架之接受體人類構架。
在一些實施例中，如下文進一步論述，重鏈可變域可藉由諸如一或多個C端丙胺酸殘基之一或多個C端殘基或來自CH1域N端之一或多個殘基延伸。
D.    例示性用於DOTAM之抗原結合位點  在本發明之另一特定實施例中，第一抗體及第二抗體締合以形成用於Pb-DOTAM螯合物(Pb-DOTAM)之功能抗原結合位點。
例示性抗原結合位點描述於WO2019/201959中，該案以全文引用之方式併入本文中。
在某些實施例中，結合至Pb-DOTAM之功能抗原結合位點可具有以下特性中之一或多者： •  特異性結合至Pb-DOTAM且特異性結合至Bi-DOTAM； •  與諸如Cu-DOTAM之其他經螯合金屬相比，對Pb-DOTAM (及視情況選用之Bi-DOTAM)具選擇性； •  以極高親和力結合至Pb-DOTAM； •  與例如PRIT-0213或PRIT-0214之WO2019/201959中所描述之抗體結合至Pb-DOTAM上相同之抗原決定基，且/或具有與該等抗體相同之接觸殘基。
Pb之放射性同位素可用於診斷及療法方法中。可用於本發明中之鉛之特定放射性同位素包括 212Pb及 203Pb。
因為短路徑長度及高線性能量傳遞之組合，故作為α-粒子發射體之放射核種能夠比β-發射體在對周圍組織損傷更小之情況下更特異性地殺滅腫瘤細胞。 212Bi為α-粒子發射體，但其短半衰期妨礙其直接使用。 212Pb為 212Bi之母放射核種且可充當 212Bi之活體內生成劑，由此有效地克服 212Bi之短半衰期(Yong及Brechbiel, Dalton Trans. 2001年6月21日; 40(23)6068-6076)。
203Pb可用作成像同位素。因此，結合至 203Pb-DOTAM之抗體可用於放射免疫成像(RII)中。
一般而言，放射性金屬係以經螯合形式使用。在本發明之某些態樣中，DOTAM用作螯合劑。DOTAM為Pb(II)之穩定螯合劑(Yong及Brechbiel, Dalton Trans. 2001年6月21日; 40(23)6068-6076；Chappell等人Nuclear Medicine and Biology, 第27卷, 第93-100頁, 2000)。因此，DOTAM與諸如 212Pb及 203Pb之如上文所論述之鉛之同位素的組合為特別可用的。
在一些實施例中，可較佳地，抗體以100 pM、50 pM、20 pM、10 pM、5 pM、1 pM或更小，例如0.9 pM或更小、0.8 pM或更小、0.7 pM或更小、0.6 pM或更小或0.5 pM或更小之結合親和力Kd值結合Pb-DOTAM。舉例而言，功能結合位點可以約1 pM-1 nM，例如約1-10 pM、1-100 pM、5-50 pM、100-500 pM或500 pM-1 nM之Kd結合放射性標記化合物。
在某個實施例中，抗體另外結合至經DOTAM螯合之Bi。在一些實施例中，可較佳地，抗體以1 nM、500 pM、200 pM、100 pM、50 pM、10 pM或更小，例如9 pM、8 pM、7 pM、6 pM、5 pM或更小之結合親和力Kd值結合Bi-DOTAM (亦即，包含與鉍複合之DOTAM之螯合物，在本文中亦稱為「Bi-DOTAM螯合物」)。舉例而言，功能結合位點可以約1 pM-1 nM，例如約1-10 pM、1-100 pM、5-50 pM、100-500 pM或500 pM-1 nM之Kd結合金屬螯合物。
在一些實施例中，抗體可以類似親和力結合至Bi-DOTAM且結合至Pb-DOTAM。舉例而言，可較佳地，對Bi-DOTAM/Pb-DOTAM之親和力之比率，例如Kd值之比率介於0.1-10，例如1-10之範圍內。
在一個實施例中，形成用於Pb-DOTAM之抗原結合位點之一部分之重鏈可變區可包含至少一個、兩個或全部三個選自以下之CDR：(a)包含GFSLSTYSMS (SEQ ID NO:1)之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含FIGSRGDTYYASWAKG (SEQ ID NO:2)之胺基酸序列之CDR-H2；(c)包含ERDPYGGGAYPPHL (SEQ ID NO:3)之胺基酸序列之CDR-H3。形成用於Pb-DOTAM之結合位點之一部分之輕鏈可變區可包含至少一個、兩個或全部三個選自以下之CDR：(d)包含QSSHSVYSDNDLA (SEQ ID NO:4)之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含QASKLAS (SEQ ID NO:5)之胺基酸序列之CDR-L2；以及(f)包含LGGYDDESDTYG (SEQ ID NO:6)之胺基酸序列之CDR-L3。
在一些實施例中，抗體可包含與分別SEQ ID NO: 1-6之胺基酸序列相比具有取代，例如1、2或3個取代之CDR-H1、CDR-H2及/或CDR-H3中之一或多個、或CDR-L1、CDR-L2及/或CDR-L3中之一或多個。
在一些實施例中，抗體可共享與本文所描述之接觸殘基相同之接觸殘基：例如此等殘基可為不變異的。此等殘基可包括以下： a)在重鏈CDR2中：Phe50、Asp56及/或Tyr58及此外視情況選用之Gly52及/或Arg 54； b)在重鏈CDR3中：Glu95、Arg96、Asp97、Pro98、Tyr99、Ala100C及/或Tyr100D及此外視情況選用之Pro100E； c)在輕鏈CDR1中：Tyr28及/或Asp32； d)在輕鏈CDR3中：Gly91、Tyr92、Asp93、Thr95c及/或Tyr96； e)在輕鏈CDR2中：視情況選用之Gln50； 全部係根據Kabat編號。
舉例而言，在一些實施例中，CDR-H2可包含胺基酸序列FIGSRGDTYYASWAKG (SEQ ID NO:2)或在SEQ ID NO: 2中具有至多1、2或3個取代之其變異體，其中此等取代不包括Phe50、Asp56及/或Tyr58，且視情況亦不包括Gly52及/或Arg 54，全部係根據Kabat編號。
在一些實施例中，CDR-H2可在如下文所示之一或多個位置處經取代。此處及在隨後取代表中，取代係基於生殖系殘基(加下劃線)或藉由理論上空間上配合且亦在經結晶組庫中在位點處存在之胺基酸進行。在一些實施例中，如上文所提及之殘基可固定且其他殘基可根據下表經取代：在其他實施例中，任何殘基之取代可根據下表進行。
WolfGuy Kabat AA 取代
251 50 F Y、 H
252 51 I   
253 52 G   
254 53 S A 、 G 、 T、I、N
288 54 R A 、 D 、 G 、 N 、 S 、T、F、Y
289 55 G D、 S、Y、T、A、N、R、V
290 56 D   
291 57 T K、 I、A、P、S
292 58 Y F、W、H
293 59 Y N、F、H、L、S
294 60 A G、 N、 S、 T
295 61 S A、 G、 N、 Q、 T
296 62 W K、 P、 S、A、T、D、N、R、Q
297 63 A F、 L、 V、M、I
298 64 K N、 Q、R、E
299 65 G S、 T、D、N、A
視情況，CDR-H3可包含胺基酸序列ERDPYGGGAYPPHL (SEQ ID NO:3)或在SEQ ID NO: 3中具有至多1、2或3個取代之其變異體，其中此等取代不包括Glu95、Arg96、Asp97、Pro98，且視情況亦不包括Ala100C、Tyr100D及/或Pro100E，且/或視情況亦不包括Tyr99。舉例而言，在一些實施例中，取代不包括Glu95、Arg96、Asp97、Pro98、Tyr99、Ala100C及Tyr100D。
在某些實施例中，CDR-H3可在如下文所示之一或多個位置處經取代。在一些實施例中，如上文所提及之殘基可固定且其他殘基可根據下表經取代：在其他實施例中，任何殘基之取代可根據下表進行。
WolfGuy Kabat AA 取代
351 95 E   
352 96 R K、E
353 97 D   
354 98 P   
355 99 Y F、G、S、T、D
356 100 G   
392 100A G   
393 100B G   
394 100C A S、T
395 100D Y F
396 100E P   
397 100F P   
398 101 H A、T、V、D
399 102 L Y、V、I、H、F
視情況，CDR-L1可包含胺基酸序列QSSHSVYSDNDLA (SEQ ID NO:4)或在SEQ ID NO: 4中具有至多1、2或3個取代之其變異體，其中此等取代不包括Tyr28及/或Asp32 (Kabat編號)。
在某些實施例中，CDR-L1可在如下文所示之一或多個位置處經取代。此外，在一些實施例中，如上文所提及之殘基可固定且其他殘基可根據下表經取代：在其他實施例中，任何殘基之取代可根據下表進行。
WolfGuy Kabat AA 取代
551 24 Q R、 K
552 25 S A、 G
554 26 S T
555 27 H Q、 S、R、K
556 27A S Q
557 27B V I、 D、 N
561 28 Y F
562 29 S T、 V
571 30 D R、 S、 N、 G
572 31 N K
597 32 D   
598 33 L I、 V、 M
599 34 A S
視情況，CDR-L3可包含胺基酸序列LGGYDDESDTYG (SEQ ID NO:6)或在SEQ ID NO: 6中具有至多1、2或3個取代之其變異體，其中此等取代不包括Gly91、Tyr92、Asp93、Thr95c及/或Tyr96 (Kabat)。
在某些實施例中，CDR-L3可在如下文所示之以下位置處經取代。(因為大部分殘基為溶劑暴露的且無抗原接點，故許多取代為可設想的)。此外，在一些實施例中，如上文所提及之殘基可固定且其他殘基可根據下表經取代：在其他實施例中，任何殘基之取代可根據下表進行。
WolfGuy Kabat AA 取代
751 89 L A、V、Q
752 90 G A
753 91 G   
754 92 Y A、D、E、F、G、H、I、K、L、N、Q、R、S、T、V
755 93 D A、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T、V、W、Y
756 94 D A、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T、V、W、Y
794 95 E A、D、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T、V、W、Y
795 95A S A、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、T、V、W、Y
796 95B D A、E、F、G、H、I、L、M、N、Q、S、T、V、W、Y
797 95C T S
798 96 Y F、H、R
799 97 G A、E、I、K、L、M、N、Q、S、T、V
抗體可進一步包含視情況分別具有SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 5之序列或相對於其而言具有至少1、2或3個取代，視情況保守取代之其變異體的CDR-H1或CDR-L2。
因此，形成用於Pb-DOTAM之抗原結合位點之一部分之重鏈可變域可至少包含： a)包含胺基酸序列FIGSRGDTYYASWAKG (SEQ ID NO:2)或在SEQ ID NO: 2中具有至多1、2或3個取代之其變異體之重鏈CDR2，其中此等取代不包括Phe50、Asp56及/或Tyr58，且視情況亦不包括Gly52及/或Arg54； b)包含胺基酸序列ERDPYGGGAYPPHL (SEQ ID NO:3)或在SEQ ID NO: 3中具有至多1、2或3個取代之其變異體之重鏈CDR3，其中此等取代不包括Glu95、Arg96、Asp97、Pro98，且視情況亦不包括Ala100C、Tyr100D及/或Pro100E，且/或視情況亦不包括Tyr99。
在一些實施例中，重鏈可變域另外包括視情況為以下之重鏈CDR1： c)包含胺基酸序列GFSLSTYSMS (SEQ ID NO:1)或在SEQ ID NO: 1中具有至多1、2或3個取代之其變異體之重鏈CDR1。
在另一實施例中，形成用於Pb-DOTAM之抗原結合位點之一部分之輕鏈可變域至少包含： d)包含胺基酸序列QSSHSVYSDNDLA (SEQ ID NO:4)或在SEQ ID NO: 4中具有至多1、2或3個取代之其變異體之輕鏈CDR1，其中此等取代不包括Tyr28及Asp32； e)包含胺基酸序列LGGYDDESDTYG (SEQ ID NO:6)或在SEQ ID NO: 6中具有至多1、2或3個取代之其變異體之輕鏈CDR3，其中此等取代不包括Gly91、Tyr92、Asp93、Thr95c及Tyr96。
在一些實施例中，輕鏈可變域另外包括視情況為以下之輕鏈CDR2： f)包含胺基酸序列QASKLAS (SEQ ID NO: 5)或在SEQ ID NO: 5中具有至少1、2或3個取代之其變異體之輕鏈CDR2，該等取代視情況不包括Gln50。
在包括包含如上文所闡述之CDR (例如具有可變域)之序列變異體之本發明任何實施例中，蛋白質可在如上文所闡述之CDR殘基中之一或多個中為不變異的。
視情況，(在第一抗體上)形成用於Pb-DOTAM之功能抗原結合位點之一部分之重鏈可變域包含選自由SEQ ID NO: 7及SEQ ID NO 9組成之群的胺基酸序列或包含與SEQ ID NO: 7或SEQ ID NO: 9具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體。在某些實施例中，相對於參考序列而言，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列含有取代(例如保守取代)、插入或刪除，但包含該序列之結合位點保持較佳以如本文所描述之親和力結合至Pb-DOTAM的能力。VH序列可保留如上文所闡述之不變異殘基。在某些實施例中，總計1至10個胺基酸已在SEQ ID NO: 7或SEQ ID NO 9中經取代、插入及/或刪除。在某些實施例中，取代、插入或刪除發生在CDR外部區域中(亦即在FR中)。視情況，抗體包含SEQ ID NO:7或SEQ ID NO: 9中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列之CDR-H2；以及(c)包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列之CDR-H3。
在另外的特定實施例中，形成用於Pb-DOTAM之功能抗原結合位點之一部分之重鏈可變域包含如上文所闡述之胺基酸序列或變異序列，該序列具有另一N端胺基酸，較佳地對應於來自原始人類生殖系序列之N端胺基酸的N端胺基酸，亦即就SEQ ID NO: 7或SEQ ID NO: 9而言之Q (麩醯胺酸)。允許構築體之所需表現量之在此位置處之其他合適殘基可由技術人員識別。舉例而言，在一些實施例中，合適的替代胺基酸可為諸如E、K、R、S、T、A、L或Y之在此位置處在V生殖系基因中天然存在之另一胺基酸。在一些實施例中，合適的替代胺基酸可為E。在其他實施例中，合適的替代胺基酸可為諸如D、N或V之保守取代。
因此，在一個實施例中，(在第一抗體上)形成用於Pb-DOTAM之功能抗原結合位點之一部分之重鏈可變域包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列或包含與SEQ ID NO: 7具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體，例如如上文所描述之變異體，且進一步包含另一N端殘基。在另一實施例中，(在第一抗體上)形成用於Pb-DOTAM之功能抗原結合位點之一部分之重鏈可變域包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列或包含與SEQ ID NO: 9具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體，例如如上文所描述之變異體，且進一步包含另一N端殘基。在一個實施例中，另一N端胺基酸可選自由以下組成之群：Q、E、K、R、S、T、A、L、Y、D、N或V，且較佳地為Q。在另一實施例中，另一N端胺基酸可選自由以下組成之群：Q、E、K、R、S、T、A、L或Y，或選自由以下組成之群：Q或E。在又另一實施例中，另一N端胺基酸可選自由以下組成之群：Q、D、N或V。
在另一實施例中，(在第一抗體上)形成用於Pb-DOTAM之功能抗原結合位點之一部分之重鏈可變域包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 143之胺基酸序列，包括該序列之轉譯後修飾。可替代地，其可包含有包含與SEQ ID NO: 143具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體。在一些實施例中，SEQ ID NO: 143之N端Q殘基可保持不變或可經引起蛋白質之所需表現量之另一胺基酸取代，該另一胺基酸可由技術人員識別。在一個實施例中，該殘基可經選自由E、K、R、S、T、A、L、Y、D、N及V組成之群之殘基取代。在另一實施例中，該殘基可經選自由E、K、R、S、T、A、L及Y組成之群之殘基取代。在另一實施例中，該殘基可經E取代。在另一實施例中，該殘基可經選自由D、N及V組成之群之殘基取代。在另一實施例中，重鏈可變域可包含相對於SEQ ID NO: 143而言具有一或多個取代、但不具有缺失之SEQ ID NO: 143之變異體—因此，在一個實施例中，重鏈可變域與SEQ ID NO: 143之不同之處可僅在於一或多個取代，且可與SEQ ID NO: 143具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性。VH序列可如上文所闡述在CDR中進一步保留不變殘基。在某些實施例中，總計1至10個胺基酸已在SEQ ID NO: 143中經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，變異(例如取代、插入或缺失)發生在CDR外部區域中(亦即發生在FR中)。
視情況，(在第二抗體上)形成用於Pb-DOTAM之功能抗原結合位點之一部分之輕鏈可變域包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列或包含與SEQ ID NO: 8具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體。在某些實施例中，相對於參考序列而言，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列含有取代(例如保守取代)、插入或刪除，但包含該序列之抗Pb-DOTAM結合位點保持較佳以如本文所描述之親和力結合至Pb-DOTAM的能力。VL序列可保留如上文所闡述之不變異殘基。在某些實施例中，總計1至10個胺基酸已在SEQ ID NO:8中經取代、插入及/或刪除。在某些實施例中，取代、插入或刪除發生在CDR外部區域中(亦即在FR中)。視情況，抗Pb-DOTAM抗體包含SEQ ID NO:8中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:4之胺基酸序列之CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列之CDR-L2；以及(c)包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列之CDR-L3。
在另外的特定實施例中，形成用於Pb-DOTAM之功能抗原結合位點之一部分之輕鏈可變域包含如上文所闡述之胺基酸序列或變異序列，該序列具有另一N端胺基酸，較佳地對應於來自原始人類生殖系序列之N端胺基酸的N端胺基酸，亦即就SEQ ID NO: 8而言之A。允許構築體之所需表現量之在此位置處之其他合適殘基可由技術人員識別。舉例而言，在一些實施例中，合適的替代胺基酸可為諸如D、N、E、Q、S、V或L之在此位置處在V生殖系基因中天然存在之另一胺基酸。在其他實施例中，合適的替代胺基酸可為諸如T、Y、K或R之保守取代。
因此，在一個實施例中，(在第二抗體上)形成用於Pb-DOTAM之功能抗原結合位點之一部分之輕鏈可變域包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列或包含與SEQ ID NO: 8具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體，例如如上文所描述之變異體，且進一步包含另一N端殘基。在一個實施例中，另一N端胺基酸可選自由以下組成之群：D、N、E、Q、S、A、V、L、T、Y、K及R，且較佳地為A或S。在另一個實施例中，另一N端胺基酸選自由以下組成之群：D、N、E、Q、S、A、V及L，或選自由以下組成之群：A及S。在另一實施例中，另一N端胺基酸選自由以下組成之群：A、T、Y、K及R。
在另一實施例中，(在第二抗體上)形成用於Pb-DOTAM之功能抗原結合位點之一部分之輕鏈可變域包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 144之胺基酸序列，包括該序列之轉譯後修飾。可替代地，其可包含有包含與SEQ ID NO: 144具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體，其中SEQ ID NO: 144之N端A殘基保持不變或經可由技術人員識別之另一合適胺基酸取代。在一個實施例中，該殘基可經選自由D、N、E、Q、S、A、V、L、T、Y、K及R組成之群之殘基取代。在另一實施例中，該殘基可經選自由D、N、E、Q、S、V及L組成之群之殘基取代。在另一實施例中，該殘基可經S取代。在另一實施例中，該殘基可經選自由T、Y、K及R組成之群之殘基取代。在另一實施例中，輕鏈可變域可包含相對於SEQ ID NO: 144而言具有一或多個取代、但不具有缺失之SEQ ID NO: 144之變異體-因此，在一個實施例中，輕鏈可變域與SEQ ID NO: 144之不同之處可僅在於一或多個取代，且可與SEQ ID NO: 144具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性。VL序列可如上文所闡述在CDR中進一步保留不變殘基。在某些實施例中，總計1至10個胺基酸已在SEQ ID NO: 144中經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，變異(例如取代、插入或缺失)發生在CDR外部區域中(亦即發生在FR中)。
明確地考慮關於重鏈可變區及輕鏈可變區之實施例組合。因此，用於Pb-DOTAM之功能抗原結合位點可分別在第一抗體及第二抗體上由如上文所定義之重鏈可變區及如上文所定義之輕鏈可變區形成。
視情況，對Pb-DOTAM螯合物具有特異性之抗原結合位點可由包含選自由SEQ ID NO: 7或SEQ ID NO: 9組成之群的胺基酸序列或如上文所定義之其變異體(包括具有如上文所論述之N端延伸部分之變異體)的重鏈可變域及包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列之輕鏈可變域或如上文所定義之其變異體(包括具有如上文所論述之N端延伸部分之變異體)形成。舉例而言，對Pb-DOTAM螯合物具有特異性之抗原結合位點可包含有包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列或其變異體之重鏈可變域及包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列或其變異體之輕鏈可變域，該等胺基酸序列或其變異體包括彼等序列之轉譯後修飾。在另一實施例中，其可包含有包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列或其變異體的重鏈可變域及包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列或其變異體之輕鏈可變域，該等胺基酸序列或其變異體包括彼等序列之轉譯後修飾。
在另一實施例中，對Pb-DOTAM螯合物具有特異性之抗原結合位點可由包含如上文所定義之143之胺基酸序列或其變異體的重鏈可變域及包含如上文所定義之SEQ ID NO: 144之胺基酸序列或其變異體的輕鏈可變域形成。
在上文任一個實施例中，形成抗Pb-DOTAM結合位點之輕鏈可變區及重鏈可變區可為人類化。在一個實施例中，輕鏈可變區及重鏈可變區包含如同上文任一個實施例之CDR，且進一步包含例如人類免疫球蛋白構架或人類共同構架之接受體人類構架。在另一實施例中，輕鏈可變區及/或重鏈可變區包含如同上文任一個實施例之CDR，且進一步包含來源於vk 1 39及/或vh 2 26之構架區。在一些實施例中，對於vk 1 39，可不存在回復突變。對於vh 2 26，生殖系Ala49殘基可經回復突變成Gly49。
E.    例示性CEA之抗原結合位點  在可與上文所論述之實施例組合之本發明之另一特定實施例中，第一抗體及/或第二抗體所結合之目標抗原可為CEA (癌胚抗原)。已培養之抗CEA抗體包括T84.66以及其人類化及嵌合型式，諸如如WO2016/075278 A1及/或WO2017/055389中所描述之T84.66-LCHA、CH1A1a、如WO2012/117002及WO2014/131712中所描述之抗CEA抗體以及CEA hMN -14或拉貝珠單抗(labetuzumab) (例如如US 6 676 924及US 5 874 540中所描述)。另一例示性抗CEA抗體為A5B7 (例如如M.J. Banfield等人, Proteins 1997, 29(2), 161-171中所描述)或如WO 92/01059及WO 2007/071422中所描述之來源於鼠A5B7之人類化抗體。亦參見共同未決申請案PCT/EP2020/067582。A5B7之人類化型式之實例為A5H1EL1(G54A)。另一例示性抗CEA抗體為US 7 626 011及/或共同未決申請案PCT/EP2020/067582中所描述之MFE23及其人類化型式。抗CEA抗體之又另一實例為28A9。以上抗體中之任一者或其抗原結合片段可用於形成本發明中之CEA結合部分。
視情況，對於單價結合而言，結合至CEA之抗原結合部分可以1 nM或更小、500 pM或更小、200 pM或更小或100 pM或更小之K D值結合。
在一些實施例中，第一抗體及/或第二抗體可結合至CEA之CH1A1a抗原決定基、A5B7抗原決定基、MFE23抗原決定基、T84.66抗原決定基或28A9抗原決定基。
在一些實施例中，第一抗體及第二抗體中之至少一者結合至不存在於可溶CEA (sCEA)上之CEA抗原決定基。可溶CEA為藉由GPI磷脂酶裂解且釋放至血液中之CEA分子之一部分。在可溶CEA上找不到之抗原決定基之實例為CH1A1A抗原決定基。視情況，第一抗體及/或第二抗體中之一者結合至不存在於可溶CEA上之抗原決定基，且另一者結合至存在於可溶CEA上之抗原決定基。
用於CH1A1a及其親本鼠抗體PR1A3之抗原決定基描述於WO2012/117002A1及Durbin H.等人, Proc. Natl. Scad. Sci. USA, 91:4313-4317, 1994中。結合至CH1A1a抗原決定基之抗體結合至CEA分子之B3域及GPI錨內之構形抗原決定基。在一個態樣中，該抗體結合至與具有本文中之具有SEQ ID NO: 25之VH及具有SEQ ID NO 26之VL之CH1A1a抗體相同的抗原決定基。A5B7抗原決定基描述於共同未決申請案PCT/EP2020/067582中。結合至A5B7抗原決定基之抗體結合至CEA之A2域，亦即，結合至包含具有SEQ ID NO: 141之胺基酸之域：
Figure 02_image007
在一個態樣中，抗體結合至與具有本文中之具有SEQ ID NO: 49之VH及具有SEQ ID NO: 50之VL之A5B7抗體相同的抗原決定基。
在一個態樣中，抗體結合至與WO2016/075278中所描述之T84.66相同之抗原決定基。抗體可結合至與具有本文中之具有SEQ ID NO: 17之VH及具有SEQ ID NO:18之VL之抗體相同的抗原決定基。
MFE23抗原決定基描述於共同未決申請案PCT/EP2020/067582中。結合至MFE23抗原決定基之抗體結合至CEA之A1域，亦即，結合至包含具有SEQ ID NO: 142之胺基酸之域：
Figure 02_image009
在一個態樣中，抗體可結合至與具有本文中之具有SEQ ID NO: 127之VH域及具有SEQ ID NO: 128之VL域之抗體相同的抗原決定基。
在一些實施例中，第一抗體及/或第二抗體可結合至與本文所提供之抗體，例如P1AD8749、P1AD8592、P1AE4956、P1AE4957、P1AF0709、P1AF0298、P1AF0710或P1AF0711相同之CEA-抗原決定基。
在一些實施例中，第一抗體及第二抗體結合彼此相同之CEA之抗原決定基。因此，舉例而言，第一抗體及第二抗體均可結合至CH1A1a抗原決定基、A5B7抗原決定基、MFE23抗原決定基、T84.66抗原決定基或28A9抗原決定基。
在一些實施例中，第一抗體及第二抗體均可具有來自CH1A1A之CEA結合序列(亦即CDR及/或VH/VL域)；或第一抗體及第二抗體均可具有來自A5B7或其人類化型式之CEA結合序列；或第一抗體及第二抗體均可具有來自T84.66或其人類化型式之CEA結合序列；或第一抗體及第二抗體均可具有來自MFE23或其人類化型式之CEA結合序列；或第一抗體及第二抗體均可具有來自28A9或其人類化型式之CEA結合序列。例示性序列揭示於本文中。
在其他實施例中，第一抗體及第二抗體結合至CEA之不同抗原決定基。因此，舉例而言，i)一個抗體可結合CH1A1A抗原決定基且另一抗體可結合A5B7抗原決定基、T84.66抗原決定基、MFE23抗原決定基或28A9抗原決定基；ii)一個抗體可結合A5B7抗原決定基且另一抗體可結合CH1A1A抗原決定基、T84.66抗原決定基、MFE23抗原決定基或28A9抗原決定基；iii)一個抗體可結合MFE23抗原決定基且另一抗體可結合CH1A1A抗原決定基、A5B7抗原決定基、T84.66抗原決定基或28A9抗原決定基；iv)一個抗體可結合T84.66抗原決定基且另一抗體可結合CH1A1A抗原決定基、A5B7抗原決定基、MFE23抗原決定基或28A9抗原決定基；或v)一個抗體可結合28A9抗原決定基且另一抗體可結合CH1A1a抗原決定基、A5B7抗原決定基、MFE23抗原決定基或T84.66抗原決定基。
在一些實施例中，i)一個抗體可具有來自CH1A1A之CEA結合序列(亦即CDR或VH/VL域)且另一抗體可具有來自A5B7或其人類化型式、來自T84.66或其人類化型式、來自MFE23或其人類化型式或來自28A9或其人類化型式之CEA結合序列；ii)一個抗體可具有來自A5B7或其人類化型式之CEA結合序列且另一抗體可具有來自CH1A1A、來自T84.66或其人類化型式、來自MFE23或其人類化型式或來自28A9或其人類化型式之CEA結合序列；iii)一個抗體可具有來自MFE23或其人類化型式之CEA結合序列且另一抗體可具有來自CH1A1A、來自A5B7或其人類化型式、來自T84.66或其人類化型式或來自28A9或其人類化型式之CEA結合序列；iv)一個抗體可具有來自T84.66或其人類化型式之CEA結合序列且另一抗體可具有來自CH1A1A、來自A5B7或其人類化型式、來自MFE23或其人類化型式或來自28A9或人類化型式之CEA結合序列；v)一個抗體可具有來自28A9或其人類化型式之CEA結合序列且另一抗體可具有來自CH1A1A、來自A5B7或其人類化型式、來自T84.66或其人類化型式或來自MFE23或其人類化型式之CEA結合序列。
在一個特定實施例中，一個抗體可結合CH1A1A抗原決定基且另一抗體可結合A5B7抗原決定基。第一抗體可具有來自抗體CH1A1A之CEA結合序列且第二抗體可具有來自A5B7 (包括其人類化型式)之CEA結合序列；或第一抗體可具有來自抗體A5B7 (包括其人類化型式)之CEA結合序列且第二抗體可具有來自CH1A1A之CEA結合序列。
在另一特定實施例中，一個抗體可結合CH1A1A抗原決定基且另一抗體可結合T84.66抗原決定基。第一抗體可具有來自抗體CH1A1A之CEA結合序列且第二抗體可具有來自T84.66 (包括其人類化型式)之CEA結合序列；或第一抗體可具有來自抗體T84.66 (包括其人類化型式)之CEA結合序列且第二抗體可具有來自CH1A1A之CEA結合序列。在一些實施例中，第一抗體可結合T84.66抗原決定基且/或具有如下文(i)中所描述之抗原結合位點，且第二抗體可結合CH1A1A抗原決定基且/或具有如下文(ii)中所描述之抗原結合位點。
例示性CEA結合序列i)-v)揭示於下文中。該等例示性CEA結合序列i)-v)提供來自i) T84.66、ii) CH1A1A、iii) A5B7、iv) 28A9及v) MFE23 (或來自其人類化型式)之CEA結合序列之實例。
i). 在一個實施例中，結合至CEA之抗原結合位點可包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列之CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:13之胺基酸序列之CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:14之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:15之胺基酸序列之CDR-L2；以及(f)包含SEQ ID NO:16之胺基酸序列之CDR-L3。
視情況，結合至CEA之抗原結合位點可包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列：(a)包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列之CDR-H2；以及(c)包含SEQ ID NO:13之胺基酸序列之CDR-H3。
視情況，結合至CEA之抗原結合位點包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列：(a)包含SEQ ID NO:14之胺基酸序列之CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO:15之胺基酸序列之CDR-L2；以及(c)包含SEQ ID NO:16之胺基酸序列之CDR-L3。
視情況，結合至CEA之抗原結合位點包含(a)包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列之VH域：(i)包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列之CDR-H1、(ii)包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列之CDR-H2及(iii)包含選自SEQ ID NO:13之胺基酸序列之CDR-H3；以及(b)包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列之VL域：(i)包含SEQ ID NO:14之胺基酸序列之CDR-L1、(ii)包含SEQ ID NO:15之胺基酸序列之CDR-L2及(c)包含SEQ ID NO:16之胺基酸序列之CDR-L3。
在另一態樣中，結合至CEA之抗原結合位點包含(a)包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列之CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:13之胺基酸序列之CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:14之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:15之胺基酸序列之CDR-L2；以及(f)包含SEQ ID NO:16之胺基酸序列之CDR-L3。
在上文任一個實施例中，多特異性抗體可為人類化。在一個實施例中，抗CEA抗原結合位點包含如同上文任一個實施例之CDR，且進一步包含例如人類免疫球蛋白構架或人類共同構架之接受體人類構架。
在另一實施例中，結合至CEA之抗原結合位點包含與SEQ ID NO:17之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變域(VH)序列。在某些實施例中，相對於參考序列而言，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列含有取代(例如保守取代)、插入或刪除，但包含該序列之抗原結合位點保持較佳以如上文所闡述之親和力結合至CEA之能力。在某些實施例中，總計1至10個胺基酸已在SEQ ID NO:17中經取代、插入及/或刪除。在某些實施例中，取代、插入或刪除發生在HVR外部區域中(亦即在FR中)。視情況，結合至CEA之抗原結合位點包含SEQ ID NO:17中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列之CDR-H1、(b)包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列之CDR-H2及(c)包含SEQ ID NO:13之胺基酸序列之CDR-H3。
在另一實施例中，結合至CEA之抗原結合位點包含與SEQ ID NO:18之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變域(VL)。在某些實施例中，相對於參考序列而言，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列含有取代(例如保守取代)、插入或刪除，但包含該序列之抗原結合位點保持較佳以上文所闡述之親和力結合至CEA之能力。在某些實施例中，總計1至10個胺基酸已在SEQ ID NO:18中經取代、插入及/或刪除。在某些實施例中，取代、插入或刪除發生在HVR外部區域中(亦即在FR中)。視情況，CEA之抗原結合位點包含SEQ ID NO:18中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:14之胺基酸序列之CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO:15之胺基酸序列之CDR-L2；以及(c)包含SEQ ID NO:16之胺基酸序列之CDR-L3。
在另一實施例中，結合至CEA之抗原結合位點包含如同上文所提供任一個實施例中之VH及如同上文所提供任一個實施例中之VL。在一個實施例中，抗體分別包含SEQ ID NO:17及SEQ ID NO:18中之VH序列及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。
ii). 在另一特定實施例中，結合至CEA之抗原結合位點可包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列之CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:21之胺基酸序列之CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:22之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:23之胺基酸序列之CDR-L2；以及(f)包含SEQ ID NO:24之胺基酸序列之CDR-L3。
視情況，結合至CEA之抗原結合位點可包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列：(a)包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列之CDR-H2；以及(c)包含SEQ ID NO:21之胺基酸序列之CDR-H3。
視情況，結合至CEA之抗原結合位點包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列：(a)包含SEQ ID NO:22之胺基酸序列之CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO:23之胺基酸序列之CDR-L2；以及(c)包含SEQ ID NO:24之胺基酸序列之CDR-L3。
視情況，結合至CEA之抗原結合位點包含(a)包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列之VH域：(i)包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列之CDR-H1、(ii)包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列之CDR-H2及(iii)包含選自SEQ ID NO:21之胺基酸序列之CDR-H3；及(b)包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列之VL域：(i)包含SEQ ID NO:22之胺基酸序列之CDR-L1、(ii)包含SEQ ID NO:23之胺基酸序列之CDR-L2；以及(c)包含SEQ ID NO:24之胺基酸序列之CDR-L3。
在另一態樣中，結合至CEA之抗原結合位點包含(a)包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列之CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:21之胺基酸序列之CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:22之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:23之胺基酸序列之CDR-L2；以及(f)包含SEQ ID NO:24之胺基酸序列之CDR-L3。
在上文任一個實施例中，多特異性抗體可為人類化。在一個實施例中，抗CEA抗原結合位點包含如同上文任一個實施例之CDR，且進一步包含例如人類免疫球蛋白構架或人類共同構架之接受體人類構架。
在另一實施例中，結合至CEA之抗原結合位點包含與SEQ ID NO:25之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變域(VH)序列。在某些實施例中，相對於參考序列而言，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列含有取代(例如保守取代)、插入或刪除，但包含該序列之抗原結合位點保持較佳以如上文所闡述之親和力結合至CEA之能力。在某些實施例中，總計1至10個胺基酸已在SEQ ID NO:25中經取代、插入及/或刪除。在某些實施例中，取代、插入或刪除發生在HVR外部區域中(亦即在FR中)。視情況，結合至CEA之抗原結合位點包含SEQ ID NO:25中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列之CDR-H1、(b)包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列之CDR-H2及(c)包含SEQ ID NO:21之胺基酸序列之CDR-H3。
在另一實施例中，結合至CEA之抗原結合位點包含與SEQ ID NO:26之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變域(VL)。在某些實施例中，相對於參考序列而言，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列含有取代(例如保守取代)、插入或刪除，但包含該序列之抗原結合位點保持較佳以上文所闡述之親和力結合至CEA之能力。在某些實施例中，總計1至10個胺基酸已在SEQ ID NO:26中經取代、插入及/或刪除。在某些實施例中，取代、插入或刪除發生在HVR外部區域中(亦即在FR中)。視情況，CEA之抗原結合位點包含SEQ ID NO:26中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:22之胺基酸序列之CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO:23之胺基酸序列之CDR-L2；以及(c)包含SEQ ID NO:24之胺基酸序列之CDR-L3。
在另一實施例中，結合至CEA之抗原結合位點包含如同上文所提供任一個實施例中之VH及如同上文所提供任一個實施例中之VL。在一個實施例中，抗體分別包含SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26中之VH序列及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。
iii) 在另一特定實施例中，結合至CEA之抗原結合位點可包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:43之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:44之胺基酸序列之CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:45之胺基酸序列之CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:46之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:47之胺基酸序列之CDR-L2；以及(f)包含SEQ ID NO:48之胺基酸序列之CDR-L3。在一些實施例中，CDR-H1可具有序列GFTFTDYYMN (SEQ ID NO.: 149)。
視情況，結合至CEA之抗原結合位點可包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列：(a)包含SEQ ID NO:43之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:44之胺基酸序列之CDR-H2；以及(c)包含SEQ ID NO:45之胺基酸序列之CDR-H3。在一些實施例中，CDR-H1可具有序列GFTFTDYYMN (SEQ ID NO.: 149)。
視情況，結合至CEA之抗原結合位點包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列：(a)包含SEQ ID NO:46之胺基酸序列之CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO:47之胺基酸序列之CDR-L2；以及(c)包含SEQ ID NO:48之胺基酸序列之CDR-L3。
視情況，結合至CEA之抗原結合位點包含(a)包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列之VH域：(i)包含SEQ ID NO:43之胺基酸序列之CDR-H1、(ii)包含SEQ ID NO:44之胺基酸序列之CDR-H2及(iii)包含選自SEQ ID NO:45之胺基酸序列之CDR-H3；以及(b)包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列之VL域：(i)包含SEQ ID NO:46之胺基酸序列之CDR-L1、(ii)包含SEQ ID NO:47之胺基酸序列之CDR-L2及(c)包含SEQ ID NO:48之胺基酸序列之CDR-L3。在一些實施例中，CDR-H1可具有序列GFTFTDYYMN (SEQ ID NO.: 149)。
在另一態樣中，結合至CEA之抗原結合位點包含(a)包含SEQ ID NO:43之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:44之胺基酸序列之CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:45之胺基酸序列之CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:46之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:47之胺基酸序列之CDR-L2；以及(f)包含SEQ ID NO:48之胺基酸序列之CDR-L3。在一些實施例中，CDR-H1可具有序列GFTFTDYYMN (SEQ ID NO.: 149)。
在上文任一個實施例中，多特異性抗體可為人類化。在一個實施例中，抗CEA抗原結合位點包含如同上文任一個實施例之CDR，且進一步包含例如人類免疫球蛋白構架或人類共同構架之接受體人類構架。
在另一實施例中，結合至CEA之抗原結合位點包含與SEQ ID NO:49之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變域(VH)序列。在某些實施例中，相對於參考序列而言，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列含有取代(例如保守取代)、插入或刪除，但包含該序列之抗原結合位點保持較佳以如上文所闡述之親和力結合至CEA之能力。在某些實施例中，總計1至10個胺基酸已在SEQ ID NO:49中經取代、插入及/或刪除。在某些實施例中，取代、插入或刪除發生在HVR外部區域中(亦即在FR中)。視情況，結合至CEA之抗原結合位點包含SEQ ID NO:49中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:43之胺基酸序列或序列GFTFTDYYMN (SEQ ID NO.: 149)之CDR-H1、(b)包含SEQ ID NO:44之胺基酸序列之CDR-H2及(c)包含SEQ ID NO:45之胺基酸序列之CDR-H3。
在另一實施例中，結合至CEA之抗原結合位點包含與SEQ ID NO:50之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變域(VL)。在某些實施例中，相對於參考序列而言，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列含有取代(例如保守取代)、插入或刪除，但包含該序列之抗原結合位點保持較佳以上文所闡述之親和力結合至CEA之能力。在某些實施例中，總計1至10個胺基酸已在SEQ ID NO:50中經取代、插入及/或刪除。在某些實施例中，取代、插入或刪除發生在HVR外部區域中(亦即在FR中)。視情況，CEA之抗原結合位點包含SEQ ID NO:50中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:46之胺基酸序列之CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO:47之胺基酸序列之CDR-L2；以及(c)包含SEQ ID NO:48之胺基酸序列之CDR-L3。
在另一實施例中，結合至CEA之抗原結合位點包含如同上文所提供任一個實施例中之VH及如同上文所提供任一個實施例中之VL。在一個實施例中，抗體分別包含SEQ ID NO:49及SEQ ID NO:50中之VH序列及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。
iv) 在再另一特定實施例中，結合至CEA之抗原結合位點可包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:59之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:60之胺基酸序列之CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:61之胺基酸序列之CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:62之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:63之胺基酸序列之CDR-L2；以及(f)包含SEQ ID NO:64之胺基酸序列之CDR-L3。
視情況，結合至CEA之抗原結合位點可包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列：(a)包含SEQ ID NO:59之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:60之胺基酸序列之CDR-H2；以及(c)包含SEQ ID NO:61之胺基酸序列之CDR-H3。
視情況，結合至CEA之抗原結合位點包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列：(a)包含SEQ ID NO:62之胺基酸序列之CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO:63之胺基酸序列之CDR-L2；以及(c)包含SEQ ID NO:64之胺基酸序列之CDR-L3。
視情況，結合至CEA之抗原結合位點包含(a)包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列之VH域：(i)包含SEQ ID NO:59之胺基酸序列之CDR-H1、(ii)包含SEQ ID NO:60之胺基酸序列之CDR-H2及(iii)包含選自SEQ ID NO:61之胺基酸序列之CDR-H3；及(b)包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列之VL域：(i)包含SEQ ID NO:62之胺基酸序列之CDR-L1、(ii)包含SEQ ID NO:63之胺基酸序列之CDR-L2；以及(c)包含SEQ ID NO:64之胺基酸序列之CDR-L3。
在另一態樣中，結合至CEA之抗原結合位點包含(a)包含SEQ ID NO:59之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:60之胺基酸序列之CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:61之胺基酸序列之CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:62之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:63之胺基酸序列之CDR-L2；以及(f)包含SEQ ID NO:64之胺基酸序列之CDR-L3。
在上文任一個實施例中，多特異性抗體可為人類化。在一個實施例中，抗CEA抗原結合位點包含如同上文任一個實施例之CDR，且進一步包含例如人類免疫球蛋白構架或人類共同構架之接受體人類構架。
在另一實施例中，結合至CEA之抗原結合位點包含與SEQ ID NO:65之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變域(VH)序列。在某些實施例中，相對於參考序列而言，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列含有取代(例如保守取代)、插入或刪除，但包含該序列之抗原結合位點保持較佳以如上文所闡述之親和力結合至CEA之能力。在某些實施例中，總計1至10個胺基酸已在SEQ ID NO:65中經取代、插入及/或刪除。在某些實施例中，取代、插入或刪除發生在HVR外部區域中(亦即在FR中)。視情況，結合至CEA之抗原結合位點包含SEQ ID NO:65中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:59之胺基酸序列之CDR-H1、(b)包含SEQ ID NO:60之胺基酸序列之CDR-H2及(c)包含SEQ ID NO:61之胺基酸序列之CDR-H3。
在另一實施例中，結合至CEA之抗原結合位點包含與SEQ ID NO:66之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變域(VL)。在某些實施例中，相對於參考序列而言，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列含有取代(例如保守取代)、插入或刪除，但包含該序列之抗原結合位點保持較佳以上文所闡述之親和力結合至CEA之能力。在某些實施例中，總計1至10個胺基酸已在SEQ ID NO:66中經取代、插入及/或刪除。在某些實施例中，取代、插入或刪除發生在HVR外部區域中(亦即在FR中)。視情況，CEA之抗原結合位點包含SEQ ID NO:66中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:62之胺基酸序列之CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO:63之胺基酸序列之CDR-L2；以及(c)包含SEQ ID NO:64之胺基酸序列之CDR-L3。
在另一實施例中，結合至CEA之抗原結合位點包含如同上文所提供任一個實施例中之VH及如同上文所提供任一個實施例中之VL。在一個實施例中，抗體分別包含SEQ ID NO:65及SEQ ID NO:66中之VH序列及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。
v) 在再另一特定實施例中，結合至CEA之抗原結合位點可包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:116之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:117或118之胺基酸序列之CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:119之胺基酸序列之CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:120、121或122之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:123、124或125之胺基酸序列之CDR-L2；以及(f)包含SEQ ID NO:126之胺基酸序列之CDR-L3。
視情況，結合至CEA之抗原結合位點可包含： VH CDR序列，其(a)包含SEQ ID NO:116之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:117或118之胺基酸序列之CDR-H2；以及(c)包含SEQ ID NO:119之胺基酸序列之CDR-H3；及/或 VL CDR序列，其(a)包含SEQ ID NO:120、121或122之胺基酸序列之CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO:123、124或125之胺基酸序列之CDR-L2；以及(c)包含SEQ ID NO:126之胺基酸序列之CDR-L3。
在一個實施例中，CEA之抗原結合位點包含有包含SEQ ID NO: 127或(更佳地)選自SEQ ID NO: 129、130、131、132、133或134之胺基酸序列之重鏈可變區(VH)以及包含SEQ ID NO: 128或(更佳地)選自SEQ ID NO: 135、136、137、138、139或140之胺基酸序列之輕鏈可變區(VL)。
在上文任一個實施例中，多特異性抗體可為人類化。在一個實施例中，抗CEA抗原結合位點包含如同上文任一個實施例之CDR，且進一步包含例如人類免疫球蛋白構架或人類共同構架之接受體人類構架。
在一特定態樣中，能夠結合至CEA之抗原結合域包含： (a)包含SEQ ID NO:129之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:139之胺基酸序列之VL域，或 (b)包含SEQ ID NO:133之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:139之胺基酸序列之VL域，或 (c)包含SEQ ID NO:130之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:139之胺基酸序列之VL域，或 (d)包含SEQ ID NO:134之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:138之胺基酸序列之VL域，或 (e)包含SEQ ID NO:133之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:138之胺基酸序列之VL域，或 (f)包含SEQ ID NO:131之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:138之胺基酸序列之VL域，或 (g)包含SEQ ID NO:129之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:138之胺基酸序列之VL域。
在另一實施例中，結合至CEA之抗原結合位點包含與如上文a)至g)中所提及之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變域(VH)序列。在某些實施例中，相對於參考序列而言，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列含有取代(例如保守取代)、插入或刪除，但包含該序列之抗原結合位點保持較佳以如上文所闡述之親和力結合至CEA之能力。在某些實施例中，總計1至10個胺基酸已經取代、插入及/或刪除。在某些實施例中，取代、插入或刪除發生在HVR外部區域中(亦即在FR中)。
在另一實施例中，結合至CEA之抗原結合位點包含與如上文a)至g)中所提及之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變域(VL)。在某些實施例中，相對於參考序列而言，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列含有取代(例如保守取代)、插入或刪除，但包含該序列之抗原結合位點保持較佳以上文所闡述之親和力結合至CEA之能力。在某些實施例中，總計1至10個胺基酸已經取代、插入及/或刪除。在某些實施例中，取代、插入或刪除發生在HVR外部區域中(亦即在FR中)。
在另一實施例中，結合至CEA之抗原結合位點包含如同上文所提供任一個實施例中之VH及如同上文所提供任一個實施例中之VL。
F.     例示性用於其他目標之抗原結合位點  在可與上文所論述之實施例(例如用於DOTA或DOTAM之結合位點)組合之本發明之另一特定實施例中，第一抗體及/或第二抗體所結合之目標抗原可為GPRC5D或FAP。
視情況，對於單價結合而言，結合至GPRC5D或FAP之抗原結合部分可以1 nM或更小、500 pM或更小、200 pM或更小或100 pM或更小之K D值結合。
例示性GPRC5D結合序列描述於下文中。
在一個實施例中，結合至GPRC5D之抗原結合位點可包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:67之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:68之胺基酸序列之CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:69之胺基酸序列之CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:70之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:71之胺基酸序列之CDR-L2；以及(f)包含SEQ ID NO:72之胺基酸序列之CDR-L3。
視情況，結合至GPRC5D之抗原結合位點可包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列：(a)包含SEQ ID NO:67之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:68之胺基酸序列之CDR-H2；以及(c)包含SEQ ID NO:69之胺基酸序列之CDR-H3。
視情況，結合至GPRC5D之抗原結合位點包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列：(a)包含SEQ ID NO:70之胺基酸序列之CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO:71之胺基酸序列之CDR-L2；以及(c)包含SEQ ID NO:72之胺基酸序列之CDR-L3。
視情況，結合至GPRC5D之抗原結合位點包含(a)包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列之VH域：(i)包含SEQ ID NO:67之胺基酸序列之CDR-H1、(ii)包含SEQ ID NO:68之胺基酸序列之CDR-H2及(iii)包含選自SEQ ID NO:69之胺基酸序列之CDR-H3；及(b)包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列之VL域：(i)包含SEQ ID NO:70之胺基酸序列之CDR-L1、(ii)包含SEQ ID NO:71之胺基酸序列之CDR-L2；以及(c)包含SEQ ID NO:72之胺基酸序列之CDR-L3。
在另一態樣中，結合至GPRC5D之抗原結合位點包含(a)包含SEQ ID NO:67之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:68之胺基酸序列之CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:69之胺基酸序列之CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:70之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:71之胺基酸序列之CDR-L2；以及(f)包含SEQ ID NO:72之胺基酸序列之CDR-L3。
在上文任一個實施例中，多特異性抗體可為人類化。在一個實施例中，抗GPRC5D抗原結合位點包含如同上文任一個實施例之CDR，且進一步包含例如人類免疫球蛋白構架或人類共同構架之接受體人類構架。
在另一實施例中，結合至GPRC5D之抗原結合位點包含與SEQ ID NO:73之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變域(VH)序列。在某些實施例中，相對於參考序列而言，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列含有取代(例如保守取代)、插入或刪除，但包含該序列之抗原結合位點保持較佳以如上文所闡述之親和力結合至GPRC5D之能力。在某些實施例中，總計1至10個胺基酸已在SEQ ID NO:73中經取代、插入及/或刪除。在某些實施例中，取代、插入或刪除發生在HVR外部區域中(亦即在FR中)。視情況，結合至GPRC5D之抗原結合位點包含SEQ ID NO:73中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:67之胺基酸序列之CDR-H1、(b)包含SEQ ID NO:68之胺基酸序列之CDR-H2及(c)包含SEQ ID NO:69之胺基酸序列之CDR-H3。
在另一實施例中，結合至GPRC5D之抗原結合位點包含與SEQ ID NO:74之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變域(VL)。在某些實施例中，相對於參考序列而言，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列含有取代(例如保守取代)、插入或刪除，但包含該序列之抗原結合位點保持較佳以上文所闡述之親和力結合至GPRC5D之能力。在某些實施例中，總計1至10個胺基酸已在SEQ ID NO:74中經取代、插入及/或刪除。在某些實施例中，取代、插入或刪除發生在HVR外部區域中(亦即在FR中)。視情況，用於GPRC5D之抗原結合位點包含SEQ ID NO:74中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:70之胺基酸序列之CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO:71之胺基酸序列之CDR-L2；以及(c)包含SEQ ID NO:72之胺基酸序列之CDR-L3。
在另一實施例中，結合至GPRC5D之抗原結合位點包含如同上文所提供任一個實施例中之VH及如同上文所提供任一個實施例中之VL。在一個實施例中，抗體分別包含SEQ ID NO:73及SEQ ID NO:74中之VH序列及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。
例示性FAP結合序列描述於下文中。
在一個實施例中，結合至FAP之抗原結合位點可包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:75之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:76之胺基酸序列之CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:77之胺基酸序列之CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:78之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:79之胺基酸序列之CDR-L2；以及(f)包含SEQ ID NO:80之胺基酸序列之CDR-L3。
視情況，結合至FAP之抗原結合位點可包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列：(a)包含SEQ ID NO:75之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:76之胺基酸序列之CDR-H2；以及(c)包含SEQ ID NO:77之胺基酸序列之CDR-H3。
視情況，結合至FAP之抗原結合位點包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列：(a)包含SEQ ID NO:78之胺基酸序列之CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO:79之胺基酸序列之CDR-L2；以及(c)包含SEQ ID NO:80之胺基酸序列之CDR-L3。
視情況，結合至FAP之抗原結合位點包含(a)包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列之VH域：(i)包含SEQ ID NO:75之胺基酸序列之CDR-H1、(ii)包含SEQ ID NO:76之胺基酸序列之CDR-H2及(iii)包含選自SEQ ID NO:77之胺基酸序列之CDR-H3；及(b)包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列之VL域：(i)包含SEQ ID NO:78之胺基酸序列之CDR-L1、(ii)包含SEQ ID NO:79之胺基酸序列之CDR-L2；以及(c)包含SEQ ID NO:80之胺基酸序列之CDR-L3。
在另一態樣中，結合至FAP之抗原結合位點包含(a)包含SEQ ID NO:75之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:76之胺基酸序列之CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:77之胺基酸序列之CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:78之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:79之胺基酸序列之CDR-L2；以及(f)包含胺基酸序列SEQ ID NO:80之CDR-L3。
在上文任一個實施例中，多特異性抗體可為人類化。在一個實施例中，抗FAP抗原結合位點包含如同上文任一個實施例之CDR，且進一步包含例如人類免疫球蛋白構架或人類共同構架之接受體人類構架。
在另一實施例中，結合至FAP之抗原結合位點包含與SEQ ID NO:81之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變域(VH)序列。在某些實施例中，相對於參考序列而言，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列含有取代(例如保守取代)、插入或刪除，但包含該序列之抗原結合位點保持較佳以如上文所闡述之親和力結合至FAP之能力。在某些實施例中，總計1至10個胺基酸已在SEQ ID NO:81中經取代、插入及/或刪除。在某些實施例中，取代、插入或刪除發生在HVR外部區域中(亦即在FR中)。視情況，結合至FAP之抗原結合位點包含SEQ ID NO:81中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:75之胺基酸序列之CDR-H1、(b)包含SEQ ID NO:76之胺基酸序列之CDR-H2及(c)包含SEQ ID NO:77之胺基酸序列之CDR-H3。
在另一實施例中，結合至FAP之抗原結合位點包含與SEQ ID NO:82之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變域(VL)。在某些實施例中，相對於參考序列而言，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列含有取代(例如保守取代)、插入或刪除，但包含該序列之抗原結合位點保持較佳以上文所闡述之親和力結合至FAP之能力。在某些實施例中，總計1至10個胺基酸已在SEQ ID NO:82中經取代、插入及/或刪除。在某些實施例中，取代、插入或刪除發生在HVR外部區域中(亦即在FR中)。視情況，用於FAP之抗原結合位點包含SEQ ID NO:82中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:78之胺基酸序列之CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO:79之胺基酸序列之CDR-L2；以及(c)包含SEQ ID NO:80之胺基酸序列之CDR-L3。
在另一實施例中，結合至FAP之抗原結合位點包含如同上文所提供任一個實施例中之VH及如同上文所提供任一個實施例中之VL。在一個實施例中，抗體分別包含SEQ ID NO:81及SEQ ID NO:82中之VH序列及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。
G.    抗體格式  如上文所描述，本發明係關於抗體組，其包含： i)第一抗體，其包含結合至於目標細胞表面上表現之抗原之抗原結合部分，且進一步包含放射性標記化合物之抗原結合位點之VH域，但不包含放射性標記化合物之抗原結合位點之VL域；以及 ii)第二抗體，其包含結合至於目標細胞表面上表現之抗原之抗原結合部分，且進一步包含放射性標記化合物之抗原結合位點之VL域，但不包含放射性標記化合物之抗原結合位點之VH域， 其中第一抗體之該VH域及第二抗體之該VL域能夠一起形成放射性標記化合物之功能抗原結合位點。
在一些實施例中，抗原結合部分可為抗體片段，諸如Fv、Fab、交叉Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2；雙功能抗體；線性抗體；單鏈抗體分子(例如scFv或scFab)；或單域抗體(dAb)，諸如VHH；或可為非抗體結合骨架，諸如DARPin (經設計之錨蛋白重複蛋白)；親和抗體；Sso7d；單功能抗體或抗運載蛋白。
在本發明之實施例中，第一抗體及第二抗體可各自包含Fc域。在放射免疫療法及放射成像之情形下Fc區之存在具有效益，例如延長蛋白質之循環半衰期及/或引起腫瘤吸收高於可在較小片段情況下觀測到之腫瘤吸收。
在一特定實施例中，Fc域為IgG Fc域。在一特定實施例中，Fc域為IgG1 Fc域。在另一具體實施例中，Fc域為IgG4 Fc域。在一甚至更具體實施例中，Fc域為包含胺基酸取代S228P (Kabat編號)之IgG4 Fc域。在特定實施例中，Fc域為人類Fc域。
在一些實施例中，可較佳地，Fc區經工程改造以減弱或消除效應功能。此工程改造可包括Fc區殘基234、235、238、265、269、270、297、327及/或329中之一或多個，例如234、235及/或329中之一或多個之取代。在一些實施例中，Fc區可經工程改造以包括Pro 329至Gly、Leu 234至Ala及/或Leu 235至Ala (根據EU索引編號)之取代。
在一些實施例中，可較佳地，當第一抗體及第二抗體締合時，其形成對於放射性標記化合物而言為單價之抗體複合物，亦即，兩種相關抗體為放射性標記化合物提供單價結合。因此，第一抗體可包含放射性標記化合物之抗原結合位點之僅一個VH域，且第二抗體可包含放射性標記化合物之抗原結合位點之僅一個VL域，以使得其一起形成放射性標記化合物之僅一個完整功能結合位點。
融合可為直接融合或間接融合，例如經由肽連接子進行之間接融合。在一些實施例中，融合可經由連接子進行。舉例而言，Fc區可經由鉸鏈區或另一合適連接子融合至抗原結合部分。類似地，放射性標記化合物之抗原結合位點之VL或VH域與抗體結構之其餘部分的連接可經由連接子進行。在一些實施例中，連接子可為具有2至20個胺基酸之肽。在其他實施例中，連接子可為具有至少5個或至少10個胺基酸，例如5至100個、5至70個、5至60個、或5至50個；或10至100個、10至70個、10至60個、或10至50個，例如25至50個胺基酸之肽。在一些實施例中，可較佳地，連接子之長度為15-30個胺基酸，例如長度為15-25個，例如16、17、18、19、20、21、22、23或24個胺基酸。連接子可為剛性連接子或可撓性連接子。在一些實施例中，其為包含以下或由以下組成之可撓性連接子：Thr、Ser、Gly及/或Ala殘基。舉例而言，其可包含以下或由以下組成：Gly及Ser殘基。在一些實施例中，其可具有諸如(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)n之重複模體，其中n為例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一實施例中，該肽連接子為(GxS)n或(GxS)nGm，其中G =甘胺酸，S =絲胺酸，且(x = 3，n= 3、4、5或6，且m= 0、1、2或3)或(x = 4，n= 2、3、4或5，且m= 0、1、2或3)，例如x = 4且n= 2或3，例如其中x = 4，n= 2。其他合適肽連接子包括例如(G4S)n、(SG4)n、(G4S)n或G4(SG4)n肽連接子，其中「n」一般為在1與10之間、通常在2與4之間的數值。在另一實施例中，該肽連接子為(GxS)n或(GxS)nGm，其中G =甘胺酸，S =絲胺酸，且(x = 3，n = 3、4、5或6，且m = 0、1、2或3)或(x = 4，n= 2、3、4或5，且m = 0、1、2或3)，例如x = 4且n = 2或3，例如其中x = 4，n = 2。在一些實施例中，連接子可為或可包含序列GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO.: 31)。在另一實施例中，連接子可為或包含GGGGSGGGGSGGGGSGGSGG (SEQ ID NO: 150)或GGGGSGGGGSGGGGSGGSGGS (SEQ ID NO: 152)或GGGGSGGGGSGGGGSGGSGGG (SEQ ID NO: 151)。另一例示性肽連接子為EPKSC(D)-(G 4S) 2。另外，在抗原結合部分與Fc域次單元之N端融合之情況下，其可在具有或不具有另一肽連接子之情況下經由免疫球蛋白鉸鏈區或其部分融合。可使用其他連接子且該等其他連接子可藉由技術人員識別。
如上文所論述，本發明人已確定在由y個胺基酸組成之肽連接子中，y位置中之Ser (亦即，作為連接子之最末/C端胺基酸之Ser)可視y+2胺基酸(亦即，在C端方向上距離連接子中之最末胺基酸2個殘基定位之胺基酸)之性質而誘導此y+2胺基酸之醣基化。因此，可較佳地，將連接子之最末絲胺酸殘基置於y-2或y-3位置中(亦即，連接子之最末絲胺酸殘基處於在N端方向上距離連接子中之最末胺基酸2或3個胺基酸之位置處)。合適連接子為如本文所描述之新穎連接子中之任一者。在一些特定實施例中，連接子可由y個選自由Gly及Ser組成之群之連續胺基酸殘基組成，例如其中y = 5至100、5至70、5至60、5至50、10至100、10至70、10至60或10至50，例如15至31或15至30，例如15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25，且其中最末絲胺酸處於y-2或y-3位置中。(因此，在y-2位置中可存在絲胺酸且在y-1及y位置中可存在甘胺酸；或在y-3位置中可存在絲胺酸且在y-2、y-1及y位置中可存在甘胺酸)。在一些實施例中，可較佳地，y = 20或21。在一些實施例中，可較佳地，連接子為(GxS)n(GGSGG)或(GxS)n(GGSGGG)，其中G =甘胺酸，S =絲胺酸，x = 4且n = 1至20、2至20、1至10、2至10，例如2、3、4、5、6、7、8或9，例如n = 2至5或n = 2至4。舉例而言，連接子可為GGGGSGGGGSGGGGSGGSGG (SEQ ID NO: 150)或GGGGSGGGGSGGGGSGGSGGG (SEQ ID NO: 151)。
如上文所提及，在一些實施例中，對於目標抗原(例如腫瘤相關抗原)而言，第一抗體及/或第二抗體可各自為多價的，例如二價的。此抗體可具有漸增親合力之優勢。抗體可為多價的，例如二價的，且可各自對特定抗原決定基(其可為用於第一抗體及第二抗體之相同抗原決定基，或可為用於第一抗體及第二抗體之不同抗原決定基)具有單特異性。因此，在一些實施例中，第一抗體可包含i)包含對目標抗原之相同抗原決定基具有特異性之抗原結合位點之兩個或更多個抗原結合部分，例如抗體片段、ii)用於放射性標記化合物之抗原結合位點之VL域或VH域(但非兩者)及iii) Fc區。第二抗體可包含i)包含對目標抗原之相同抗原決定基具有特異性之抗原結合位點之兩個或更多個例如抗體片段之抗原結合部分、ii)放射性標記化合物之抗原結合位點之VL域或VH域(但非兩者)及iii)Fc區。如上文所陳述，抗原決定基可對於第一抗體及第二抗體而言為相同的，或可對於第一抗體及第二抗體而言為不同的。
舉例而言，第一抗體及第二抗體中之各者可包含經由肽繫鏈連接之串聯Fab (Fab-繫鏈-Fab)，亦即兩個Fab片段，其中第一Fab經由其C端連接至第二Fab之N端。
在該等實施例中，輕鏈與其各別重鏈之正確裝配可藉由使用交叉mab技術來輔助。舉例而言，在一個實施例中，各抗體可包含有包含一個Fab及一個交叉Fab之串聯Fab，其中選自Fab及交叉Fab之一個片段對第一抗原決定基具有特異性且另一片段對第二抗原決定基具有特異性。
在串聯Fab實施例(包括涉及交叉Fab之串聯Fab實施例)中之任一個中，在第一抗體及第二抗體中連接Fab片段之肽繫鏈/連接子可為如本文所描述之任何連接子。在一些實施例中，其可為具有長度為至少5個胺基酸、較佳長度為5至100個、更佳10至50個胺基酸之胺基酸序列的肽。在一個實施例中，該肽連接子為(GxS)n或(GxS)nGm，其中G =甘胺酸，S =絲胺酸，且(x = 3，n= 3、4、5或6，且m= 0、1、2或3)或(x = 4，n= 2、3、4或5，且m= 0、1、2或3)，較佳地x = 4且n= 2或3，更佳地其中x = 4，n= 2。在一個實施例中，該肽繫鏈為(G4S) 2。在其他實施例中，連接子可為如本文所描述之新穎連接子。
在一特定實施例中，第一抗體及第二抗體中之各者可包含a) Fc域；b)至少一個抗原結合部分，其包含用於目標抗原之抗原結合位點；及c)包含用於放射性標記化合物之抗原結合位點之VL域或VH域(但非兩者)的多肽，其中(b)之抗原結合部分與Fc域之一個鏈之N端融合，且(c)之多肽之C端與Fc域之另一鏈之N端融合。在一些實施例中，(b)之抗原結合部分之C端與Fc域之另一鏈之N端融合。
因此，第一抗體可包含以下或由以下組成： a)包含第一次單元及第二次單元之Fc域； b)包含用於目標抗原之結合位點之抗原結合部分；及 c)包含用於放射性標記化合物之抗原結合位點之抗體重鏈可變域(VH)或由其組成之多肽； 其中(b)之抗原結合部分與(a)之Fc域之第一次單元之N端融合，且(c)之多肽藉由其C端與(a)之Fc域之第二次單元之N端融合， 且其中第一抗體不包含用於放射性標記化合物之抗原結合位點之VL域。
第二抗體可包含以下或由以下組成： a)包含第一次單元及第二次單元之Fc域； b)包含用於目標抗原之結合位點之抗原結合部分；及 c)包含用於放射性標記化合物之抗原結合位點之抗體輕鏈可變域(VL)或由其組成之多肽； 其中(b)之抗原結合部分與(a)之Fc域之第一次單元之N端融合，且(c)之多肽藉由其C端與(a)之Fc域之第二次單元之N端融合， 且其中第二抗體不包含用於放射性標記化合物之抗原結合位點之VH域。
此格式避免分裂抗原結合位點之VH域之游離C端，且因此降低涉及預先存在之人類抗VH (HAVH)自體抗體之抗藥物抗體反應的可能性。
在一些實施例中，可較佳地，抗原結合部分為抗體片段。在一些實施例中，可較佳地，其為Fab。
可較佳地，在第一抗體及/或第二抗體中，抗原結合部分為Fab且Fab藉由其重鏈之C端與Fc域之第一次單元之N端融合。在一些實施例中，Fab片段包含有包含VL域及CL域之輕鏈及包含VH域及CH1域之重鏈片段，且CH1域之C端與Fc域之第一次單元之N端融合。
(b)之例如抗體片段之抗原結合部分之融合較佳經由鉸鏈區進行。(c)之多肽之融合可經由位於多肽C端與Fc區N端之間的連接子及/或經由上鉸鏈區中之一些或全部(例如根據EU編號索引，Asp221及其C端殘基)進行。在一個實施例中，(b)之抗體片段可為Fab片段。在一個實施例中，在第一抗體中，(c)之多肽由放射性標記化合物之抗原結合位點之VH域組成；且在第二抗體中，(c)之多肽由放射性標記化合物之抗原結合位點之VL域組成。
因此，在一個實施例中，第一抗體可包含以下或由以下組成： i)完整輕鏈； ii)完整重鏈； iii)另一Fc鏈；以及 iv)包含放射性標記化合物之抗原結合位點之VH域或由其組成之多肽； 其中(i)之輕鏈及(ii)之重鏈一起提供用於目標抗原之抗原結合位點；且其中包含放射性標記化合物之抗原結合位點之VH域或由其組成之多肽藉由其C端，較佳經由連接子融合至(iii)的N端。
第二抗體可包含以下或由以下組成： v)完整輕鏈； vi)完整重鏈； vii)另一Fc鏈；以及 viii)包含放射性標記化合物之抗原結合位點之VL域或由其組成之多肽； 其中(v)之輕鏈及(vi)之重鏈一起提供用於目標抗原之抗原結合位點；且其中包含放射性標記化合物之抗原結合位點之VL域或由其組成之多肽藉由其C端，較佳經由連接子融合至(vii)的N端。
連接子可包含如熟習此項技術者已知或如本文所描述之任何可撓性連接子，例如，其可為如本文所描述之新穎連接子，例如連接子GGGGSGGGGSGGGGSGGSGG (SEQ ID NO.: 150)。連接子可進一步包括全部上鉸鏈區之一部分，例如可自Asp221延伸至(例如Cys226處之) Fc鏈開始處。
可較佳地，包含用於放射性標記化合物之抗原結合位點之VH或VL域的多肽不包含恆定區(例如CH1或CL)。在一些實施例中，其可由用於放射性標記化合物之抗原結合位點之VH或VL域組成。
在一些實施例中，第一抗體及第二抗體對目標抗原而言為單特異性及單價的，亦即，抗體僅包含一個包含用於目標抗原之抗體結合位點之抗原結合部分(諸如抗體片段)。
在其他實施例中，抗體可包含超過一個，例如兩個抗原結合部分(例如抗體片段)。此等抗原結合部分可以串聯方式連接。舉例而言，組分(b)可包含有包含第一Fab片段及第二Fab片段之串聯Fab，其中第一Fab片段藉由其C端經由肽連接子與第二Fab片段之N端連接(且其中第二Fab片段之C端與(a)之Fc域之第一次單元之N端連接)。在一些實施例中，第一Fab片段結合至目標抗原A之第一抗原決定基且第二Fab片段結合目標抗原A之第二抗原決定基。視情況而言，選自第一片段及第二片段之Fab片段中之一者為習知Fab且另一者為交叉Fab或scFab。
雜二聚體重鏈之正確裝配可藉由杵-臼技術來輔助。
如本文所使用之術語「全長抗體」指示由兩個「全長抗體重鏈」及兩個「全長抗體輕鏈」組成之抗體。「全長抗體重鏈」可為在N端至C端方向上由抗體重鏈可變域(VH)、抗體恆定重鏈域1 (CH1)、抗體鉸鏈區(HR)、抗體重鏈恆定域2 (CH2)及抗體重鏈恆定域3 (CH3) (縮寫為VH-CH1-HR-CH2-CH3)以及在子類IgE之抗體情況下視情況選用之抗體重鏈恆定域4 (CH4)組成的多肽。較佳地，「全長抗體重鏈」為在N端至C端方向上由VH、CH1、HR、CH2及CH3組成之多肽。交叉Mab形成之可能性不意欲由所提及之「全長」排除-因此，重鏈可具有調換為VL域之VH域或調換為CL域之CH1域。「全長抗體輕鏈」可為在N端至C端方向上由抗體輕鏈可變域(VL)及抗體輕鏈恆定域(CL) (縮寫為VL-CL)組成之多肽。可替代地，在交叉Mab之情況下，VL域可調換為VH域，或CL域可調換為CH1域。抗體輕鏈恆定域(CL)可為κ或λ。兩個全長抗體鏈係經由CL域與CH1域之間及全長抗體重鏈之鉸鏈區之間的多肽間雙硫鍵連接在一起。典型全長抗體之實例為天然抗體，如IgG (例如IgG1及IgG2)、IgM、IgA、IgD及IgE。本發明之全長抗體可來自例如人類之單一物種，或其可為嵌合或人類化抗體。本文所描述之全長抗體包含各自藉由一對VH及VL形成之兩個抗原結合位點，在一些實施例中該兩個抗原結合位點均可特異性結合至相同抗原或可結合至不同抗原。該全長抗體之重鏈或輕鏈之C端指示該重鏈或輕鏈之C端處的最末胺基酸。
b)下之多肽之抗體重鏈可變域(VH)之N端及d)下之多肽之抗體輕鏈可變域(VL)指示VH域或VL域之N端處的最末胺基酸。
已知用於製造多特異性抗體之技術亦可用於製造本文所描述之雜二聚體中之任一個。該等技術包括但不限於具有不同特異性之兩個免疫球蛋白重鏈-輕鏈對之重組共表現(參見Milstein及Cuello, Nature 305: 537 (1983))及「杵-臼」工程改造(參見例如美國專利第5,731,168號及Atwell等人, J. Mol. Biol. 270:26 (1997))。其他方法包括工程改造用於製造抗體Fc-雜二聚體分子之靜電操縱效應(參見例如WO 2009/089004)；交聯兩個或更多個抗體或片段(參見例如美國專利第4,676,980號及Brennan等人, Science, 229: 81 (1985))；使用白胺酸拉鏈(參見例如Kostelny等人, J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992)及WO 2011/034605)；以及使用常用於規避輕鏈錯配問題之輕鏈技術(參見例如WO 98/50431)。
如上文所描述之全長抗體之CH3域可藉由「杵-臼」技術進行更改，該技術以若干實例詳細描述於例如WO 96/027011、Ridgway, J.B.,等人, Protein Eng 9 (1996) 617-621以及Merchant, A.M.,等人, Nat Biotechnol 16 (1998) 677-681中。在此方法中，兩個CH3域之相互作用表面經更改以增加含有此兩個CH3域之兩個重鏈的雜二聚。(兩個重鏈之)兩個CH3域中之各者可為「杵」，而另一者為「臼」。舉例而言，根據EU索引編號，一個CH3域包含所謂之「杵突變」(T366W及視情況選用之S354C或Y349C中之一者)，且另一CH3域包含所謂之「臼突變」(T366S、L368A及Y407V以及視情況選用之Y349C或S354C)(參見例如Carter, P.等人, Immunotechnol. 2 (1996) 73)。
另外或可替代地，雙硫橋鍵之引入可用於穩定化雜二聚體(Merchant, A.M.,等人, Nature Biotech 16 (1998) 677-681；Atwell, S.,等人, J. Mol. Biol. 270 (1997) 26-35)且增加產率。
因此，在一些實施例中，第一抗體及/或第二抗體之特徵進一步在於：全長抗體之一個重鏈之CH3域及全長抗體之另一重鏈之CH3域各自在包含抗體CH3域之間的原始介面之介面處接合(meet)；其中該介面經更改以促進抗體形成，其中更改之特徵在於： a)一個重鏈之CH3域經更改以使得在接合抗體內另一重鏈之CH3域原始介面之一個重鏈之CH3域原始介面內，胺基酸殘基經具有較大側鏈體積之胺基酸殘基置換，由此在可位於另一重鏈之CH3域介面內之空腔中的一個重鏈之CH3域介面內生成隆凸 以及 b)另一重鏈之CH3域經更改以使得在接合抗體內第一CH3域原始介面之第二CH3域原始介面內，胺基酸殘基經具有較小側鏈體積之胺基酸殘基置換，由此在第二CH3域介面內生成空腔，第一CH3域介面內之隆凸可定位於該空腔內。
該具有較大側鏈體積之胺基酸殘基可視情況選自由以下組成之群：精胺酸(R)、苯丙胺酸(F)、酪胺酸(Y)、色胺酸(W)。該具有較小側鏈體積之胺基酸殘基可視情況選自由以下組成之群：丙胺酸(A)、絲胺酸(S)、蘇胺酸(T)、纈胺酸(V)。
視情況，在一些實施例中，兩個CH3域係藉由引入半胱胺酸(C)作為各CH3域之對應位置中之胺基酸以使得可在兩個CH3域之間形成雙硫橋鍵來進行進一步更改。
本發明之多特異性(例如雙互補位)抗體可包含其中所包含之Fab分子(包括交叉Fab分子)中之胺基酸取代(Bence-Jones型副產物)，該等胺基酸取代特別有效地減少輕鏈與非匹配重鏈之錯配，該等Bence-Jones型副產物可存在於基於Fab之雙特異性/多特異性抗原結合分子生產中，其中其結合臂中之一個(或在包含超過兩個抗原結合Fab分子之分子之情況下多個)中具有VH/VL互換(亦參見PCT公開案第WO 2015/150447號，特定言之，其中之實例，該案以全文引用之方式併入本文中)。所需多特異性抗體與非所需副產物，詳言之存在於其結合臂中之一個中之Bence Jones型副產物之比可藉由在Fab分子之CH1域及CL域中之特異性胺基酸位置處引入具有相反電荷之帶電胺基酸(有時在本文中稱為「電荷修飾」)來改善。
因此，在一些實施例中，包含Fab分子之本發明抗體包含至少一個具有包含如本文所描述之電荷修飾之重鏈恆定域CH1域及包含如本文所描述之電荷修飾之輕鏈恆定CL域的Fab。
電荷修飾可在本發明抗體中所包含之一或多個習知Fab分子中或在本發明抗體中所包含之一或多個交換Fab分子中進行(但非在兩者中均進行)。在特定實施例中，電荷修飾係在本發明抗體中所包含之一或多個習知Fab分子中進行。
在一些實施例中，在包含有包含電荷修飾之輕鏈恆定域CL及包含電荷修飾之重鏈恆定域CH1之Fab或交叉Fab中，輕鏈恆定域CL中之電荷修飾係在位置124處且視情況在位置123處(根據Kabat編號)，且重鏈恆定域CH1中之電荷修飾係在位置147及/或213處(根據Kabat EU索引編號)。在一些實施例中，在輕鏈恆定域CL中，位置124處之胺基酸獨立地經離胺酸(K)、精胺酸(R)或組胺酸(H)取代(根據Kabat編號) (在一個較佳實施例中，獨立地經離胺酸(K)取代)，且在重鏈恆定域CH1中，位置147處之胺基酸及/或位置213處之胺基酸獨立地經麩胺酸(E)或天冬胺酸(D)取代(根據Kabat EU索引編號)。
H.    例示性抗體  在一些實施例中，關於目標結合(例如CEA結合、FAP結合或GPRC5D結合)之態樣及實施例以及關於DOTA結合之態樣及實施例可組合。亦即，可較佳地，第一抗體及第二抗體各自包含用於CEA、FAP或GPRC5D之例如包含如上文所描述序列中之任一個之結合位點，且第一抗體及第二抗體締合以形成用於DOTA螯合物之具有如上文所描述序列中之任一個之結合位點。亦經明確地考慮，關於CEA結合、FAP或GPRC5D及/或DOTA結合之態樣及實施例可與如上文所描述抗體之較佳格式組合-亦即在較佳格式中之任一個中，結合目標抗原之部分可包含如上文所描述之CDR或可變區序列，且/或結合放射核種標記化合物之部分可為具有如上文所描述之CDR及/或可變區序列的DOTA結合子。
類似地，在一些實施例中，關於目標結合(例如CEA結合、FAP結合或GPRC5D結合)之態樣及實施例以及關於Pb-DOTAM結合之態樣及實施例可組合。亦即，可較佳地，第一抗體及第二抗體各自包含用於CEA、FAP或GPRC5D之例如包含如上文所描述序列中之任一個之結合位點，且第一抗體及第二抗體締合以形成用於Pb-DOTAM螯合物之具有如上文所描述序列中之任一個之結合位點。亦經明確地考慮，關於CEA結合、FAP或GPRC5D及/或Pb-DOTAM結合之態樣及實施例可與如上文所描述抗體之較佳格式組合-亦即在較佳格式中之任一個中，結合目標抗原之部分可包含如上文所描述之CDR或可變區序列，且/或結合放射核種標記化合物之部分可為具有如上文所描述之CDR及/或可變區序列的Pb-DOTAM結合子。
在一些實施例中，第一抗體可包含以下或由以下組成： a)包含第一次單元及第二次單元之Fc域； b)包含用於選自CEA、GPRC5D、FAP，視情況CEA之目標抗原之抗體結合位點之抗體片段；及 c)包含用於Pb-DOTAM之抗原結合位點之抗體重鏈可變域(VH)或由其組成之多肽，其中重鏈可變域包含SEQ ID No 1-3之重鏈CDR，且/或其中重鏈可變域與SEQ ID NO 143具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性； 其中(b)之抗體片段與(a)之Fc域之第一次單元之N端融合，且(c)之多肽藉由其C端與(a)之Fc域之第二次單元之N端融合， 且其中第一抗體不包含用於放射性標記化合物之抗原結合位點之VL域。
在用於Pb-DOTAM之抗原結合位點之抗體重鏈可變域(VH)之情況下，本發明人已確定可將諸如N端Q之N端殘基添加至SEQ ID NO: 7中且可引起良好表現。用於DOTAM之抗原結合位點最初由兔抗體發展，且在人類化過程期間，移除人類生殖系序列之N端殘基以與兔序列類似。N端Q殘基表示來自人類生殖系序列之原始N端殘基之再插入。因此，在重鏈可變域為SEQ ID NO: 143之變異體之情況下，N端Q殘基可不變或可經可由技術人員識別之另一合適胺基酸取代，從而得到蛋白質之良好表現量。在一個實施例中，該殘基可經選自由E、K、R、S、T、A、L、Y、D、N及V組成之群之殘基取代。在另一實施例中，該殘基可經選自由E、K、R、S、T、A、L及Y組成之群之殘基取代。在另一實施例中，該殘基可經E取代。在另一實施例中，該殘基可經選自由D、N及V組成之群之殘基取代。
第二抗體可包含以下或由以下組成： a)包含第一次單元及第二次單元之Fc域； b)包含用於選自CEA、GPRC5D、FAP，視情況CEA之目標抗原之抗體結合位點之抗體片段；及 c)包含用於Pb-DOTAM之抗原結合位點之抗體輕鏈可變域(VL)或由其組成之多肽，其中輕鏈可變域包含SEQ ID NO: 4-6之CDR且/或其中輕鏈可變域與SEQ ID NO 8具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性；且/或其中輕鏈可變域與SEQ ID NO 144具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性； 其中(b)之抗體片段與(a)之Fc域之第一次單元之N端融合，且(c)之多肽藉由其C端與(a)之Fc域之第二次單元之N端融合， 且其中第二抗體不包含用於放射性標記化合物之抗原結合位點之VH域。
對於用於Pb-DOTAM之抗原結合位點之抗體輕鏈可變域(VL)，本發明人已確定可將諸如N端A或S之另一N端殘基添加至SEQ ID NO: 8中且可得到良好表現。N端A殘基表示來自人類生殖系序列之原始N端殘基之再插入。當用於Pb-DOTAM之抗原結合位點之抗體輕鏈可變域(VL)為SEQ ID NO 144之變異體之情況下，N端A殘基可不變或可經可由技術人員識別之另一合適胺基酸取代。在一個實施例中，該殘基可經選自由D、N、E、Q、S、A、V、L、T、Y、K及R組成之群之殘基取代。在另一實施例中，該殘基可經選自由D、N、E、Q、S、V及L組成之群之殘基取代。在另一實施例中，該殘基可經S取代。在另一實施例中，該殘基可經選自由T、Y、K及R組成之群之殘基取代。
在一個特定實施例中，第一抗體可包含以下肽： i)完整輕鏈； ii)完整重鏈； iii)另一Fc鏈；以及 iv)包含用於Pb-DOTAM之抗原結合位點之VH域或由其組成之多肽，其中重鏈可變域包含SEQ ID No 1-3之重鏈CDR，且/或其中重鏈可變域與SEQ ID NO 143具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性； 其中(i)之輕鏈及(ii)之重鏈一起提供用於例如CEA、GPRC5D或FAP，視情況CEA之目標抗原之抗原結合位點；且其中包含用於放射性標記化合物之抗原結合位點之VH域或由其組成之多肽藉由其C端，較佳地經由連接子與(iii)之N端融合。
第二抗體可包含以下或由以下組成： v)完整輕鏈； vi)完整重鏈； vii)另一Fc鏈；以及 viii)包含用於Pb-DOTAM之抗原結合位點之VL域或由其組成之多肽，其中輕鏈可變域包含SEQ ID NO: 4-6之CDR，且/或其中輕鏈可變域與SEQ ID NO 8具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性，且/或其中輕鏈可變域與SEQ ID NO 144具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性； 其中(v)之輕鏈及(vi)之重鏈一起提供用於例如CEA、GPRC5D或FAP，視情況CEA之目標抗原之抗原結合位點；且其中包含用於放射性標記化合物之抗原結合位點之VL域或由其組成之多肽藉由其C端，較佳地經由連接子與(vii)之N端融合。
在以上實施例中之任一者中，第一抗體可具有來自抗體CH1A1A之CEA結合序列(亦即CDR或VH/VL域)。
舉例而言，完整輕鏈可包含SEQ ID No 22-24之CDR且/或可包含與SEQ ID NO 26具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之輕鏈可變域。在一些實施例中，其可與SEQ ID NO 34具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性。
完整重鏈可包含SEQ ID No: 19-21之CDR且/或完整重鏈可包含與SEQ ID NO 25具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之可變域。
在另一特定實施例中，第一抗體可具有來自抗體A5B7 (包括其人類化型式)之CEA結合序列(亦即CDR或VH/VL域)。
舉例而言，完整輕鏈可包含SEQ ID No 46-48之CDR且/或可包含與SEQ ID NO 50具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之輕鏈可變域。在一些實施例中，其可與SEQ ID NO: 54具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性。
在一些實施例中，完整重鏈可包含SEQ ID No: 43-45之CDR且/或可包含與SEQ ID NO 49具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之可變域。
在另一特定實施例中，第一抗體可具有來自抗體T84.66 (包括其人類化型式)之CEA結合序列(亦即CDR或VH/VL域)。
舉例而言，完整輕鏈可包含SEQ ID No 14-16之CDR且/或可包含與SEQ ID NO 18具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之輕鏈可變域。在一些實施例中，其可與SEQ ID NO: 89具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性。
在一些實施例中，完整重鏈可包含SEQ ID No: 11-13之CDR且/或可包含與SEQ ID NO 17具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之可變域。
在另一特定實施例中，第一抗體可具有來自抗體28A9 (包括其人類化型式)之CEA結合序列(亦即CDR或VH/VL域)。
舉例而言，完整輕鏈可包含SEQ ID No 62-64之CDR且/或可包含與SEQ ID NO: 66具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之輕鏈可變域。在一些實施例中，其可與SEQ ID NO: 96具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性。
在一些實施例中，完整重鏈可包含SEQ ID No: 59-61之CDR且/或可包含與SEQ ID NO 65具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之可變域。
在一些實施例中，第二抗體可具有來自抗體CH1A1A之CEA結合序列(亦即CDR或VH/VL域)。
舉例而言，完整輕鏈可包含SEQ ID No 22-24之CDR且/或可包含與SEQ ID NO 26具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之輕鏈可變域。在一些實施例中，其可與SEQ ID NO 34具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性。
在一些實施例中，完整重鏈包含SEQ ID No: 19-21之CDR且/或包含與SEQ ID NO 25具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之可變域。
在另一特定實施例中，第二抗體可具有來自A5B7 (包括其人類化型式)之CEA結合序列(亦即CDR或VH/VL域)。
舉例而言，完整輕鏈可包含SEQ ID No 46-48之CDR且/或可包含與SEQ ID NO 50具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之輕鏈可變域。在一些實施例中，其可與SEQ ID NO 58具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性。
在一些實施例中，完整重鏈包含SEQ ID No: 43-45之CDR且/或包含與SEQ ID NO 49具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之可變域。
在另一特定實施例中，第二抗體可具有來自抗體T84.66 (包括其人類化型式)之CEA結合序列(亦即CDR或VH/VL域)。
舉例而言，完整輕鏈可包含SEQ ID No 14-16之CDR且/或可包含與SEQ ID NO 18具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之輕鏈可變域。在一些實施例中，其可與SEQ ID NO: 89具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性。
在一些實施例中，完整重鏈可包含SEQ ID No: 11-13之CDR且/或可包含與SEQ ID NO 17具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之可變域。
在另一特定實施例中，第二抗體可具有來自抗體28A9 (包括其人類化型式)之CEA結合序列(亦即CDR或VH/VL域)。
舉例而言，完整輕鏈可包含SEQ ID No 62-64之CDR且/或可包含與SEQ ID NO 66具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之輕鏈可變域。在一些實施例中，其可與SEQ ID NO: 96具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性。
在一些實施例中，完整重鏈可包含SEQ ID No: 59-61之CDR且/或可包含與SEQ ID NO 65具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之可變域。
在一些實施例中，第一抗體及第二抗體結合CEA之相同抗原決定基。因此，舉例而言，第一抗體及第二抗體均可具有來自抗體CH1A1A之CEA結合序列；或第一抗體及第二抗體均可具有來自A5B7 (包括其人類化型式)之CEA結合序列；或第一抗體及第二抗體均可具有來自T84.66 (包括其人類化型式)之CEA結合序列；或第一抗體及第二抗體均可具有來自28A9 (包括其人類化型式)之CEA結合序列；或第一抗體及第二抗體均可具有來自MFE23 (包括其人類化型式)之CEA結合序列。在一些實施例中，可較佳地，(ii)中之輕鏈多肽與(v)中之輕鏈具有相同序列。
在其他實施例中，第一抗體及第二抗體結合至如上文所論述之CEA之不同抗原決定基。因此，舉例而言，第一抗體可具有來自抗體CH1A1A之CEA結合序列且第二抗體可具有來自A5B7之CEA結合序列；或第一抗體可具有來自抗體A5B7之CEA結合序列且第二抗體可具有來自CH1A1A之CEA結合序列。
在再另一特定實施例中，目標可為例如具有來自抗體CH1A1A之CEA結合序列之CEA，且格式可如圖25C中所示。視情況，第一抗體及第二抗體締合以形成用於Pb-DOTAM螯合物(Pb-DOTAM)之功能抗原結合位點。
因此，在一個實例中： i)第一抗體包含具有SEQ ID NO:112之第一重鏈、具有SEQ ID NO: 114之第二重鏈及具有SEQ ID NO: 115之輕鏈；以及 ii)第二抗體包含具有SEQ ID NO:112之第一重鏈、具有SEQ ID NO: 113之第二重鏈及具有SEQ ID NO: 115之輕鏈。
在一較佳實施例中： i)該第一抗體包含具有SEQ ID NO:112之第一重鏈、具有SEQ ID NO: 146之第二重鏈及具有SEQ ID NO: 115之輕鏈；以及 ii)該第二抗體包含具有SEQ ID NO:112之第一重鏈、具有SEQ ID NO: 145之第二重鏈及具有SEQ ID NO: 115之輕鏈。
I.   抗體變異體  在某些實施例中，考慮本文所提供之抗體之胺基酸序列變異體。舉例而言，可能需要改善抗體之結合親和力及/或其他生物特性。抗體之胺基酸序列變異體可藉由將適當修飾引入編碼該抗體之核苷酸序列中或藉由肽合成來製備。該等修飾包括例如自以下之刪除及/或向以下中之插入及/或以下之取代：抗體之胺基酸序列內之殘基。可進行刪除、插入及取代之任何組合以獲得最終構築體，其限制條件為最終構築體具有例如抗原結合之所需特徵。
取代、插入及刪除變異體在某些實施例中，提供具有一或多個胺基酸取代之抗體變異體。所關注之取代型突變誘發位點包括HVR (CDR)及FR。保守取代顯示於表1中「較佳取代」標題下。更多實質性變化提供於表1中「例示性取代」標題下，且如下文參考胺基酸側鏈類別進一步描述。可將胺基酸取代引入所關注之抗體中，且篩檢產物之例如所保持/經改善之抗原結合、經降低之免疫原性或經減弱或消除之ADCC或CDC的所需活性。 表 1
原始 殘基 例示性 取代 較佳 取代
Ala (A) Val；Leu；Ile Val
Arg (R) Lys；Gln；Asn Lys
Asn (N) Gln；His；Asp, Lys；Arg Gln
Asp (D) Glu；Asn Glu
Cys (C) Ser；Ala Ser
Gln (Q) Asn；Glu Asn
Glu (E) Asp；Gln Asp
Gly (G) Ala Ala
His (H) Asn；Gln；Lys；Arg Arg
Ile (I) Leu；Val；Met；Ala；Phe；正白胺酸 Leu
Leu (L) 正白胺酸；Ile；Val；Met；Ala；Phe Ile
Lys (K) Arg；Gln；Asn Arg
Met (M) Leu；Phe；Ile Leu
Phe (F) Trp；Leu；Val；Ile；Ala；Tyr Tyr
Pro (P) Ala Ala
Ser (S) Thr Thr
Thr (T) Val；Ser Ser
Trp (W) Tyr；Phe Tyr
Tyr (Y) Trp；Phe；Thr；Ser Phe
Val (V) Ile；Leu；Met；Phe；Ala；正白胺酸 Leu
胺基酸可根據共同側鏈特性分組： (1)疏水性：正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile； (2)中性親水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln； (3)酸性：Asp、Glu； (4)鹼性：His、Lys、Arg； (5)影響鏈定向之殘基：Gly、Pro； (6)芳族：Trp、Tyr、Phe。
非保守取代將需要此等類別中之一者之成員更換成另一類別。
一種類型之取代型變異體涉及取代親本抗體(例如人類化或人類抗體)之一或多個高變區殘基。一般而言，經選擇以用於進一步研究之一或多個所得變異體相對於親本抗體而言將在某些生物特性方面具有修改(例如改善)(例如親和力提高、免疫原性降低)且/或將實質上保持親本抗體之某些生物特性。例示性取代型變異體為親和力成熟抗體，該親和力成熟抗體可例如使用諸如本文所描述之技術之基於噬菌體呈現之親和力成熟技術便利地生成。簡言之，使一或多個CDR殘基突變且在噬菌體上呈現變異抗體且針對特定生物活性(例如結合親和力)進行篩檢。
更改(例如取代)可在CDR中進行例如以提高抗體親和力。該等更改可在CDR「熱點」，亦即由在體細胞成熟過程期間經歷高頻突變之密碼子編碼之殘基(參見例如Chowdhury, Methods Mol. Biol.207:179-196 (2008))及/或接觸抗原之殘基中進行，其中測試所得變異VH或VL之結合親和力。藉由構築二級庫且自二級庫再選擇達成之親和力成熟已描述於例如Hoogenboom等人之 Methods in Molecular Biology178:1-37 (O'Brien等人, 編, Human Press, Totowa, NJ, (2001).)中。在親和力成熟之一些態樣中，藉由各種方法(例如易錯PCR、鏈改組或寡核苷酸導引之突變誘發)中之任一種將多樣性引入經選擇以用於成熟之可變基因中。隨後產生二級庫。隨後，對該庫進行篩檢以識別具有所需親和力之任何抗體變異體。另一用於引入多樣性之方法涉及CDR導引方法，其中將若干CDR殘基(例如一次4-6個殘基)隨機分組。可例如使用丙胺酸掃描突變誘發或模型化特異性地識別參與抗原結合之CDR殘基。特定言之，常常靶向CDR-H3及CDR-L3。
在某些態樣中，取代、插入或刪除可發生在一或多個CDR內，只要該等更改不實質上減弱抗體結合抗原之能力即可。舉例而言，不實質上減弱結合親和力之保守更改(例如如本文所提供之保守取代)可在CDR中進行。舉例而言，該等更改可在CDR中接觸抗原之殘基外部進行。在上文所提供之某些變異VH及VL序列中，各CDR未經更改或含有不超過一個、兩個或三個胺基酸取代。
如Cunningham及Wells (1989) Science, 244:1081-1085所描述，可用於識別可針對突變誘發進行靶向之抗體殘基或區域之方法稱為「丙胺酸掃描突變誘發」。在此方法中，殘基或目標殘基群(例如帶電殘基，諸如arg、asp、his、lys及glu)經識別且經中性或帶負電胺基酸(例如丙胺酸或聚丙胺酸)置換以判定抗體與抗原之相互作用是否受影響。可在對初始取代展現功能敏感性之胺基酸位置處引入另外取代。可替代地或另外，抗原-抗體複合物之晶體結構可用於識別抗體與抗原之間的接觸點。該等接觸殘基及相鄰殘基可作為用於取代之候選物進行靶向或消除。可對變異體進行篩檢以判定其是否含有所需特性。
胺基酸序列插入包括長度範圍為一個殘基至含有一百個或更多個殘基之多肽的胺基端及/或羧基端融合以及單個或多個胺基酸殘基之序列內插入。末端插入之實例包括具有N端甲硫胺醯基殘基之抗體。抗體分子之其他插入變異體包括與抗體之N端或C端至延長抗體血清半衰期之酶(例如針對ADEPT (抗體導引之酶前驅藥療法))或多肽的融合。
醣基化變異體在某些態樣中，本文所提供之抗體經更改以提高或降低抗體醣基化之程度。向抗體中添加醣基化位點或刪除抗體之醣基化位點可藉由更改胺基酸序列以使得產生或移除一或多個醣基化位點來便利地實現。
在抗體包含Fc區之情況下，可更改與其連接之寡醣。由哺乳動物細胞產生之原生抗體通常包含一般藉由N鍵連接至Fc區之CH2域之Asn297的分支雙觸角寡醣。參見例如Wright等人 TIBTECH15:26-32 (1997)。寡醣可包括例如甘露糖、N-乙醯基葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖及唾液酸之各種碳水化合物以及連接至雙觸角寡醣結構之「主幹」中之GlcNAc的岩藻糖。在一些態樣中，可對本發明抗體中之寡醣進行修飾以便產生具有某些經改善特性之抗體變異體。
在一個態樣中，提供具有非岩藻糖基化寡醣，亦即缺乏(直接地或間接地)連接至Fc區之岩藻糖之寡醣結構的抗體變異體。特定言之，該非岩藻糖基化寡醣(亦稱為「無岩藻糖基化」寡醣)為缺乏連接至雙觸角寡醣結構之主幹中之第一GlcNAc之岩藻糖殘基的N鍵聯寡醣。在一個態樣中，提供相較於原生或親本抗體而言具有經增加比例之Fc區中非岩藻糖基化寡醣之抗體變異體。舉例而言，非岩藻糖基化寡醣之比例可為至少約20%、至少約40%、至少約60%、至少約80%或甚至約100% (亦即不存在岩藻糖基化寡醣)。非岩藻糖基化寡醣之百分比為如藉由例如如WO 2006/082515中所描述之MALDI-TOF質譜法所量測，相對於連接至Asn 297之全部寡醣(例如複合、雜交及高甘露糖結構)之總和而言缺乏岩藻糖殘基之寡醣的(平均)量。Asn297係指位於Fc區中約位置297 (Fc區殘基之EU編號)處之天冬醯胺酸殘基；然而，由於抗體中之少量序列變體，故Asn297亦可位於位置297上游或下游約±3個胺基酸處，亦即位置294與300之間。具有經增加比例之Fc區中非岩藻糖基化寡醣之該等抗體可具有經改善之FcγRIIIa受體結合及/或經改善之效應功能，詳言之經改善之ADCC功能。參見例如US 2003/0157108；US 2004/0093621。
能夠產生具有經減少之岩藻糖基化之抗體之細胞株之實例包括缺乏蛋白質岩藻糖基化之Lec13 CHO細胞(Ripka等人 Arch. Biochem. Biophys.249:533-545 (1986)；US 2003/0157108；以及WO 2004/056312，尤其在實例11處)；及基因剔除細胞株，諸如α-1,6-岩藻糖基轉移酶基因、 FUT8、基因剔除CHO細胞(參見例如Yamane-Ohnuki等人 Biotech. Bioeng.87:614-622 (2004)；Kanda, Y.等人, Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006)；以及WO 2003/085107)；或具有經減弱或消除之GDP-岩藻糖合成或轉運蛋白活性之細胞(參見例如US2004259150、US2005031613、US2004132140、US2004110282)。
在另一態樣中，提供具有對分寡糖之抗體變異體，例如其中連接至抗體之Fc區之雙觸角寡醣經GlcNAc對分。該等抗體變異體可具有如上文所描述之經減少之岩藻糖基化及/或經改善之ADCC功能。該等抗體變異體之實例描述於例如以下中：Umana等人, Nat Biotechnol 17, 176-180 (1999)；Ferrara等人, Biotechn Bioeng 93, 851-861 (2006)；WO 99/54342；WO 2004/065540；WO 2003/011878。
亦提供具有連接至Fc區之寡醣中至少一個半乳糖殘基之抗體變異體。該等抗體變異體可具有經改善之CDC功能。該等抗體變異體描述於例如以下中：WO 1997/30087；WO 1998/58964；以及WO 1999/22764。
可較佳地，抗體經修飾以降低醣基化程度。在一些實施例中，抗體可為無醣基化或去醣基化的。抗體可包括例如N297D/A之N297處之取代。
Fc 區變異體在某些實施例中，可將一或多個胺基酸修飾引入本文所提供之抗體之Fc區中，由此生成Fc區變異體。Fc區變異體可包含在一或多個胺基酸位置處包含胺基酸修飾(例如取代)之人類Fc區序列(例如人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc區)。
在某些實施例中，本發明考慮具有經減弱之效應功能，例如經減弱或消除之CDC、ADCC及/或FcyR結合之抗體變異體。在某些態樣中，本發明考慮具有一些但非全部效應功能之抗體變異體，該等效應功能使其成為其中抗體活體內半衰期至關重要、但某些效應功能(諸如補體依賴性細胞毒性(CDC)及抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC))不必要或有害之應用的所需候選物。
可進行活體外及/或活體內細胞毒性分析以確認CDC及/或ADCC活性之降低/耗乏。舉例而言，可進行Fc受體(FcR)結合分析以確保抗體缺乏FcyR結合(因此可能缺乏ADCC活性)，但保持FcRn結合能力。用於調節ADCC之原代細胞NK細胞僅表現FcγRIII，而單核球表現FcγRI、FcγRII及FcγRIII。FcR在造血細胞上之表現概述於Ravetch及Kinet, Annu. Rev. Immunol.9:457-492 (1991)之第464頁之表3中。用於評估所關注分子之ADCC活性之活體外分析之非限制性實例描述於以下中：美國專利第5,500,362號(參見例如Hellstrom, I.等人 Proc. Nat'l Acad. Sci. USA83:7059-7063 (1986))及Hellstrom, I等人, Proc. Nat'l Acad. Sci. USA82:1499-1502 (1985)；美國專利第5,821,337號(參見Bruggemann, M.等人, J. Exp. Med.166:1351-1361 (1987))。可替代地，可採用非放射性分析方法(參見例如用於流動式細胞量測術之ACTI™非放射性細胞毒性分析(CellTechnology公司Mountain View, CA)及CytoTox 96 ®非放射性細胞毒性分析(Promega, Madison, WI))。可用於該等分析之效應細胞包括周邊血液單核細胞(PBMC)及自然殺手(NK)細胞。可替代地或另外，可例如在諸如揭示於Clynes等人 Proc. Nat'l Acad. Sci. USA95:652-656 (1998)中之動物模型之動物模型中活體內評估所關注分子之ADCC活性。亦可進行C1q結合分析以確認抗體不能結合C1q且因此缺乏CDC活性。參見例如WO 2006/029879及WO 2005/100402中之C1q及C3c結合ELISA。為評估補體活化，可執行CDC分析(參見例如Gazzano-Santoro等人, J. Immunol. Methods202:163 (1996)；Cragg, M.S.等人, Blood101:1045-1052 (2003)；以及Cragg, M.S.及M.J. Glennie, Blood103:2738-2743 (2004))。亦可使用此項技術中已知之方法執行FcRn結合及活體內清除率/半衰期測定(參見例如Petkova, S.B.等人, Int'l. Immunol.18(12):1759-1769 (2006)；WO 2013/120929 Al)。
具有經減弱之效應功能之抗體包括具有Fc區殘基238、265、269、270、297、327及329中之一或多個之取代的抗體(美國專利第6,737,056號)，例如P329G。該等Fc突變體包括具有胺基酸位置265、269、270、297及327中之兩個或更多個處之取代的Fc突變體，包括具有殘基265及297成丙胺酸之取代的所謂「DANA」Fc突變體(美國專利第7,332,581號)。
在某些態樣中，抗體變異體包含具有減少FcyR結合之一或多個胺基酸取代之Fc區，該一或多個胺基酸取代例如Fc區之位置234及235 (殘基之EU編號)處之取代。在一個態樣中，取代為L234A及L235A (LALA)。在某些態樣中，抗體變異體進一步包含來源於人類IgG1 Fc區之Fc區中之D265A及/或P329G。在一個態樣中，取代為來源於人類IgG1 Fc區之Fc區中之L234A、L235A及P329G (LALA-PG)。(參見例如WO 2012/130831)。在另一態樣中，取代為來源於人類IgG1 Fc區之Fc區中之L234A、L235A及D265A (LALA-DA)。替代性取代包括L234F及/或L235E以及視情況選用之D265A及/或P329G及/或P331S。
在其他實施例中，或許有可能使用諸如IgG4或IgG2之具有經減弱之效應功能之IgG亞型。
描述具有經改善或減少之與FcR結合之某些抗體變異體。(參見例如美國專利第6,737,056號；WO 2004/056312；以及Shields等人 , J. Biol. Chem.9(2): 6591-6604 (2001))。
在一些實施例中，例如如美國專利第6,194,551號、WO 99/51642以及Idusogie等人 J. Immunol.164: 4178-4184 (2000)中所描述，在Fc區中進行更改，產生經更改(亦即經改善或經減少，較佳經減少)之C1q結合及/或補體依賴性細胞毒性(CDC)。
在某些態樣中，抗體變異體包含具有減少FcRn結合之一或多個胺基酸取代之Fc區，該一或多個胺基酸取代例如Fc區之位置253及/或310及/或435 (殘基之EU編號)處之取代。在某些態樣中，抗體變異體包含具有位置253、310及435處之胺基酸取代之Fc區。在一個態樣中，取代為來源於人類IgG1 Fc區之Fc區中之I253A、H310A及H435A。參見例如Grevys, A.,等人, J. Immunol. 194 (2015) 5497-5508。
在某些態樣中，抗體變異體包含具有減少FcRn結合之一或多個胺基酸取代之Fc區，該一或多個胺基酸取代例如Fc區之位置310及/或433及/或436 (殘基之EU編號)處之取代。在某些態樣中，抗體變異體包含具有位置310、433及436處之胺基酸取代之Fc區。在一個態樣中，取代為來源於人類IgG1 Fc區之Fc區中之H310A、H433A及Y436A。(參見例如WO 2014/177460 Al)。舉例而言，在一些實施例中，可使用正常FcRn結合。
亦參見關於Fc區變異體之其他實例之Duncan及Winter, Nature322:738-40 (1988)；美國專利第5,648,260號；美國專利第5,624,821號；以及WO 94/29351。
如本文所報導之全長抗體之重鏈之C端可為以胺基酸殘基PGK終止之完整C端。重鏈之C端可為經縮短之C端，其中已移除C端胺基酸殘基中之一或兩個。重鏈之C端可為以PG終止之經縮短之C端。在如本文所報導之全部態樣中之一個態樣中，如本文所規定，包含包括C端CH3域之重鏈之抗體包含C端甘胺酸殘基(G446，胺基酸位置之EU索引編號)。如本文所使用之術語「全長抗體」或「全長重鏈」仍明確地涵蓋C端甘胺酸殘基。
抗體衍生物在某些態樣中，可對本文所提供之抗體進行進一步修飾以含有此項技術中已知且可易於獲得之額外非蛋白質部分。適用於抗體衍生化之部分包括但不限於水可溶聚合物。水可溶聚合物之非限制性實例包括但不限於聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纖維素、聚葡萄糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯啶酮、聚1,3-二氧雜環戊烷、聚1,3,6-三噁烷、乙烯/順丁烯二酸酐共聚物、聚胺基酸(均聚物或無規共聚物)及聚葡萄糖或聚(n-乙烯吡咯啶酮)聚乙二醇、聚丙二醇均聚物、聚環氧丙烷/環氧乙烷共聚物、聚氧乙烯多元醇(例如甘油)、聚乙烯醇及其混合物。聚乙二醇丙醛因其在水中之穩定性而可在製造中具有優勢。聚合物可具有任何分子量，且可為分支鏈或非分支鏈的。連接至抗體之聚合物之數目可變化，且若連接超過一個聚合物，則其可為相同或不同分子。一般而言，用於衍生化之聚合物之數目及/或類型可基於包括但不限於待改善之抗體之特定特性或功能的考慮因素來確定，不論抗體衍生物是否用於限定條件下之療法中等。
J.   重組方法及組合物  抗體可使用例如如美國專利第4,816,567號中所描述之重組方法及組合物來產生。在一個實施例中，提供編碼本文所描述之抗體組之經分離核酸或經分離核酸組。
舉例而言，核酸組可包含以下編碼第一抗體之核酸： i)編碼第一抗體之第一重鏈之核酸，其中該第一重鏈包含特異性結合目標抗原之全長抗體之重鏈； ii)編碼第一抗體之第二重鏈之核酸，其中該第二重鏈自N端至C端包含用於放射性標記化合物之抗原結合位點之VH域；視情況選用之連接子；及Fc次單元(例如CH2-CH3)； iii)編碼第一抗體之輕鏈之核酸。
另外或可替代地，本發明之核酸組可包含以下編碼第二抗體之核酸： iv)編碼第二抗體之第一重鏈之核酸，其中該第一重鏈包含特異性結合目標抗原之全長抗體之重鏈； v)編碼第二抗體之第二重鏈之核酸，其中該第二重鏈自N端至C端包含用於放射性標記化合物之抗原結合位點之VL域；視情況選用之連接子；及Fc次單元(例如CH2-CH3)；以及 vi)編碼第二抗體之輕鏈之核酸。
在一些實施例中，此等核酸中之某些可彼此相同。舉例而言，(iii)中之核酸可與(vi)中之核酸相同以使得整組僅包含5個不同核酸序列。
核酸可包含於一或多個核酸分子或表現載體中。
因此，在另一實施例中，提供包含該一或多個核酸之一或多個載體(例如表現載體)。在一個實施例中，各各別重鏈及輕鏈係由個別質體表現。
在另一實施例中，提供包含該一或多個核酸或一或多個載體之宿主細胞或宿主細胞組。在一個實施例中，提供表現第一抗體之第一宿主細胞，且提供表現第二抗體之第二宿主細胞。
在一個該實施例中，第一宿主細胞包含以下(例如已經以下轉型)：共同編碼第一抗體之核酸的一或多種載體。第二宿主細胞包含以下(例如已經以下轉型)：共同編碼第二抗體之核酸的一或多種載體。
在一個實施例中，宿主細胞為真核細胞，例如中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或淋巴細胞(例如Y0、NS0、Sp20細胞)。在一個實施例中，提供製造本發明抗體之方法，其中該方法包含在適用於表現如上文所提供之抗體之條件下培養包含編碼抗體之核酸的宿主細胞，且視情況自宿主細胞(或宿主細胞培養基)回收抗體。
對於抗體之重組產生，分離例如如上文所描述之編碼抗體之核酸且將其插入一或多個載體中以進行進一步選殖且/或在宿主細胞中表現。該核酸可使用習知程序(例如藉由使用能夠特異性地結合至編碼抗體重鏈及輕鏈之基因之寡核苷酸探針)容易地分離且定序。
適用於選殖或表現編碼抗體之載體之宿主細胞包括本文所描述之原核細胞或真核細胞。舉例而言，抗體可在細菌中產生，尤其在不需要醣基化及Fc效應功能時如此。對於抗體片段及多肽在細菌中之表現，參見例如US 5,648,237、US 5,789,199及US 5,840,523。(亦參見描述抗體片段在大腸桿菌(E. coli)中之表現之Charlton, K.A.之Methods in Molecular Biology, 第248卷, Lo, B.K.C. (編), Humana Press, Totowa, NJ (2003), 第245-254頁)。在表現之後，抗體可以可溶溶離份與細菌細胞糊狀物分離且可經進一步純化。
除原核生物之外，諸如絲狀真菌或酵母之真核微生物為適用於編碼抗體之載體之選殖或表現宿主，包括其醣基化路徑已經「人類化」，引起具有部分或完全人類醣基化型態之抗體產生的真菌及酵母菌株。參見Gerngross, T.U., Nat. Biotech. 22 (2004) 1409-1414；及Li, H.等人, Nat. Biotech. 24 (2006) 210-215。
適用於表現(醣基化)抗體之宿主細胞亦來源於多細胞生物體(無脊椎動物及脊椎動物)。無脊椎動物細胞之實例包括植物細胞及昆蟲細胞。已識別出可與昆蟲細胞結合使用，尤其用於轉染草地黏蟲(Spodoptera frugiperda)細胞之許多桿狀病毒株。
植物細胞培養物亦可用作宿主。參見例如US 5,959,177、US 6,040,498、US 6,420,548、US 7,125,978及US 6,417,429 (描述用於在基因轉殖植物中產生抗體之PLANTIBODIESTM技術)。
脊椎動物細胞亦可用作宿主。舉例而言，適合於在懸浮液中生長之哺乳動物細胞株可為適用的。有用哺乳動物宿主細胞株之其他實例為經SV40轉型之猴腎CV1株(COS-7)；人類胚腎細胞株(如例如Graham, F.L.等人, J. Gen Virol. 36 (1977) 59-74中所描述之293或293T細胞)；幼倉鼠腎細胞(BHK)；小鼠塞特利氏細胞(mouse sertoli cell) (如例如Mather, J.P., Biol. Reprod. 23 (1980) 243-252中所描述之TM4細胞)；猴腎細胞(CV1)；非洲綠猴腎細胞(VERO-76)；人類子宮頸癌細胞(HELA)；犬腎細胞(MDCK；水牛鼠肝細胞(BRL 3A)；人類肺細胞(W138)；人類肝細胞(Hep G2)；小鼠乳房腫瘤(MMT 060562)；TRI細胞(如例如Mather, J.P.等人, Annals N.Y. Acad. Sci. 383 (1982) 44-68中所描述)；MRC 5細胞；以及FS4細胞。其他有用哺乳動物宿主細胞株包括中國倉鼠卵巢(CHO)細胞，包括DHFR-CHO細胞(Urlaub, G.等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77 (1980) 4216-4220)；及骨髓瘤細胞株，諸如Y0、NS0及Sp2/0。對於適用於抗體產生之某些哺乳動物宿主細胞株之綜述，參見例如Yazaki, P.及Wu, A.M., Methods in Molecular Biology, 第248卷, Lo, B.K.C. (編), Humana Press, Totowa, NJ (2004), 第255-268頁。
在一個態樣中，宿主細胞為真核細胞，例如中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或淋巴細胞(例如Y0、NS0、Sp20細胞)。
K.  分析  可藉由此項技術中已知之各種分析識別本文所提供之抗體，針對其物理/化學特性及/或生物活性對其加以篩檢或表徵。
在一個態樣中，例如藉由諸如ELISA、西方墨點法等之已知方法針對本發明抗體之抗原結合活性對其進行測試。
抗體親和力在某些實施例中，本文所提供之抗體針對目標抗原之解離常數(K D)為≤ 1 μM、≤ 100 nM、≤ 10 nM、≤ 1 nM、≤ 0.1 nM、≤ 0.01 nM或≤ 0.001 nM (例如10 -8M或更小，例如10 -8M至10 -13M，例如10 -9M至10 -13M)或如本文在其他方面所陳述。
在某些實施例中，放射性標記化合物之抗原結合位點針對放射性標記化合物之解離常數(K D)為≤ 1 μM、≤ 100 nM、≤ 10 nM、≤ 1 nM、≤ 0.1 nM、≤ 0.01 nM或≤ 0.001 nM (例如10-8 M或更小，例如10-8 M至10-13 M，例如10-9 M至10-13 M)。在一些實施例中，K D為1 nM或更小、500 pM或更小、200 pM或更小、100 pM或更小、50 pM或更小、20 pM或更小、10 pM或更小、5 pM或更小或1 pM或更小或如本文在其他方面所陳述。舉例而言，功能結合位點可以約1 pM-1 nM，例如約1-10 pM、1-100 pM、5-50 pM、100-500 pM或500 pM-1 nM之K D結合放射性標記化合物/金屬螯合物。
在一個實施例中，K D係藉由放射性標記抗原結合分析(RIA)來量測。在一個實施例中，用Fab型式之所關注抗體及其抗原執行RIA。舉例而言，Fab對抗原之溶液結合親和力係藉由以下來量測：在存在未標記抗原之滴定系列之情況下用最低濃度之( 125I)標記抗原平衡Fab，隨後用經抗Fab抗體塗佈盤捕獲經結合抗原(參見例如Chen等人, J. Mol. Biol.293:865-881(1999))。為建立分析條件，用含5 µg/ml捕獲抗Fab抗體(Cappel Labs)之50 mM碳酸鈉(pH 9.6)塗佈MICROTITER ®多孔盤(Thermo Scientific)隔夜，且隨後在室溫(約23℃)下用含2% (w/v)牛血清白蛋白之PBS阻斷兩至五小時。在非吸附盤(Nunc編號269620)中，將100 pM或26 pM [ 125I]抗原與所關注Fab之連續稀釋液混合(例如與Presta等人, Cancer Res.57:4593-4599 (1997)中對抗VEGF抗體Fab-12之評估一致)。隨後，培育所關注Fab隔夜；然而，培育可持續較長時段(例如約65小時)以確保達到平衡。其後，在室溫下將混合物轉移至捕獲盤中以進行培育(例如達一小時)。隨後，移除溶液且用含0.1%聚山梨醇酯20 (TWEEN-20 ®)之PBS洗滌盤八次。當盤已經乾燥時，添加150微升/孔之閃爍體(MICROSCINT-20 TM；Packard)，且在TOPCOUNT TMγ計數器(Packard)上對盤計數十分鐘。選定提供小於或等於20%最大結合之各Fab之濃度以用於競爭性結合分析中。
根據另一實施例，使用BIACORE ®表面電漿子共振分析量測K D。舉例而言，使用BIACORE ®-2000或BIACORE ®-3000 (BIAcore公司, Piscataway, NJ)之分析係在25℃下用固定抗原CM5晶片以~10個反應單位(RU)執行。在一個實施例中，根據供應商說明書，用 N-乙基- N'-(3-二甲胺基丙基)-碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC)及 N-羥基丁二醯亞胺(NHS)活化羧基甲基化聚葡萄糖生物感測器晶片(CM5，BIACORE公司)。用10 mM乙酸鈉(pH 4.8)將抗原稀釋至5 μg/ml (~0.2 μM)，之後以5微升/分鐘之流動速率注射以達成約10個反應單位(RU)之偶合蛋白質。在注射抗原後，注射1 M乙醇胺以阻斷未反應基團。對於動力學量測，在25℃下以約25 µl/min之流動速率在具有0.05%聚山梨醇酯20 (TWEEN-20 TM)表面活性劑(PBST)之PBS中注射Fab之兩倍連續稀釋液(0.78 nM至500 nM)。使用簡單一比一朗謬結合模型(one-to-one Langmuir binding model) (BIACORE ®評估軟體3.2版)，藉由同時擬合締合感測器圖譜及解離感測器圖譜來計算締合速率(k on)及解離速率(k off)。平衡解離常數(K D)經計算為比率k off/k on。參見例如Chen等人, J. Mol. Biol.293:865-881 (1999)。若根據上文表面電漿子共振分析，締合速率(on-rate)超過10 6M -1s -1，則可藉由使用螢光淬滅技術測定締合速率，該螢光淬火技術在存在如於諸如具有攪拌式光析槽之停流裝備型分光光度計(Aviv Instruments)或8000-系列SLM-AMINCO TM分光光度計(ThermoSpectronic))之光譜儀中所量測之漸增濃度之抗原情況下，在25℃下量測含20 nM抗抗原抗體(Fab形式)之PBS (pH 7.2)之螢光發射強度(激發= 295 nm；發射= 340 nm，16 nm帶通)的增加或降低。
在另一實施例中，K D係使用SET (溶液平衡滴定)分析來量測。根據此分析，測試抗體通常以恆定濃度施用且與測試抗原之連續稀釋液混合。在進行培育以建立平衡之後，在經抗原塗佈表面上捕獲游離抗體之部分且一般使用電化學發光用經標記/加標籤之抗物種抗體對其進行偵測(例如如Haenel等人Analytical Biochemistry 339 (2005) 182-184中所描述)。
舉例而言，在一個實施例中，將384孔抗生蛋白鏈菌素盤(Nunc，Microcoat編號11974998001)與25微升/孔之抗原-生物素-異構體混合物在濃度為20 ng/ml之PBS-緩衝液中在4℃下培育隔夜。對於用游離抗原進行之抗體樣品平衡：在以2500 nM、500 nM或100 nM抗原之濃度起始之1:3、1:2或1:1.7稀釋步驟中用相關抗原滴定0.01 nM-1 nM抗體。將樣品在經密封REMP儲存聚丙烯微量盤(Brooks)中在4℃下培育隔夜。在隔夜培育之後，用90 µl PBST/孔洗滌抗生蛋白鏈菌素盤3次。將15 µl來自平衡盤之各樣品轉移至分析盤且在RT下培育15 min，接著用PBST緩衝液進行3次90 µl洗滌步驟。藉由添加25 µl山羊抗人類IgG抗體-POD接合物(Jackson，109-036-088，在OSEP中1:4000)，接著用PBST緩衝液進行6次90 µl洗滌步驟來進行偵測。將25 µl TMB受質(Roche Diagnostics有限責任公司，目錄號：11835033001)添加至各孔中。在Safire2讀取器(Tecan)上在370/492 nm處進行量測。
在另一實施例中，K D係使用KinExA (動力學排除)分析來量測。根據此分析，通常將抗原滴定至恆定濃度之抗體結合位點中，使樣品平衡，且隨後快速抽吸通過流槽，在該流槽中在經抗原塗佈珠粒上捕獲游離抗體結合位點，同時將抗原飽和抗體複合物洗掉。隨後，用標記抗物種抗體，例如螢光標記抗物種抗體偵測珠粒捕獲抗體(Bee等人PloS One, 2012; 7(4): e36261)。舉例而言，在一個實施例中，在室溫(RT)下使用PBS (pH 7.4)作為運行緩衝液執行KinExA實驗。在補充有1 mg/ml BSA之運行緩衝液(「樣品緩衝液」)中製備樣品。使用0.25 ml/min之流動速率。藉由以100 pM起始之兩倍連續稀釋(濃度範圍0.049 pM-100 pM)用抗原滴定恆定量之具有5 pM結合位點濃度之抗體。一個不具有抗原之抗體樣品充當100%信號(亦即不具有抑制)。將抗原-抗體複合物在RT下培育至少24 h以允許達到平衡。隨後，以5 ml之體積將經平衡混合物抽吸通過KinExA系統中之抗原偶合珠粒管柱，准許在不擾亂溶液平衡狀態之情況下由珠粒捕獲未結合抗體。使用含250 ng/ml Dylight 650©接合抗人類Fc片段特異性二級抗體之樣品緩衝液偵測所捕獲抗體。對於全部平衡實驗，各樣品一式兩份量測。使用KinExA軟體(4.0.11版)內所含之單位點均質結合模型，使用「標準分析」法，由資料之非線性回歸分析獲得K D。
L.  治療方法及組合物  如本文所描述之抗體組可用於治療方法中。在一個態樣中，提供用作藥劑之如本文所描述之抗體組。在某些態樣中，提供用於治療方法中之抗體組。
如上文所論述，在一些態樣中，本發明之抗體組適用於其中需要向個體中之目標細胞遞送放射核種之任何治療。舉例而言，提供用於預靶向放射免疫療法方法中例如以進行癌症治療之如本文所描述之抗體組。
在某些態樣中，本發明提供用於個體中之預靶向放射免疫療法方法中之抗體組，該方法包含向個體投與有效量之抗體組。如上文態樣中任一個之「個體」較佳為人類。
如上文所提及，治療可屬於可藉由靶向患者病變細胞之細胞毒性活性治療之任何病況。治療較佳屬於腫瘤或癌症。然而，本發明之適用性不限於腫瘤及癌症。舉例而言，治療亦可屬於病毒感染或例如原核生物之另一病原性生物體感染。視情況，亦可靶向T細胞以治療經T細胞驅動之自體免疫疾病或T細胞血癌。因此，待治療之病況可包括諸如HIV、狂犬病、EBV及卡波西氏肉瘤相關疱疹病毒之病毒感染以及諸如多發性硬化症及移植物抗宿主疾病之自體免疫疾病。
如本文所使用之術語「癌症」包括實體癌症及血液癌，諸如淋巴瘤、淋巴球性白血病、肺癌、非小細胞肺(NSCL)癌、細支氣管肺泡細胞肺癌、骨癌、包括胰管腺癌(PDAC)之胰臟癌、皮膚癌、頭頸癌、皮膚或眼內黑色素瘤、子宮癌、卵巢癌、肛門區癌、胃癌(stomach cancer/gastric cancer)、可為結腸癌及/或直腸癌之結腸直腸癌、乳癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮內膜癌、子宮頸癌、陰道癌、外陰癌、霍奇金氏病(Hodgkin's Disease)、食道癌、小腸癌、內分泌系統癌、甲狀腺癌、副甲狀腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、前列腺癌、膀胱癌、腎或輸尿管癌、腎細胞癌、腎盂癌、間皮瘤、肝細胞癌、膽癌、中樞神經系統(CNS)贅瘤、脊髓軸腫瘤、腦幹神經膠質瘤、多形性神經膠質母細胞瘤、星形細胞瘤、神經鞘瘤、室管膜瘤、神經管胚細胞瘤、腦膜瘤、鱗狀細胞癌、垂體腺瘤及尤文氏肉瘤(Ewings sarcoma)，包括上文癌症中之任一種之難治癒型式、上文癌症中之任一種之檢查點抑制劑經歷型式或上文癌症中之一或多種的組合。
使放射性同位素靶向細胞、組織或器官以用於療法之方法可包含： i)向個體投與如本文所描述之第一抗體及第二抗體(同時或以任一次序依序)，其中抗體結合至目標抗原且定位至表現目標抗原之細胞表面；且其中第一抗體及第二抗體之締合形成放射性標記化合物之功能結合位點； 以及 ii)隨後投與放射性標記化合物，其中放射性標記化合物結合至放射性標記化合物之功能結合位點。
放射性標記化合物經對細胞具細胞毒性之放射性同位素標記。合適放射性同位素包括如上文所論述之α及β發射體。
在利用雙特異性抗體(亦即非本發明之「分裂」抗體)之預靶向放射免疫療法方法中，慣例為在投與抗體與投與放射性標記化合物之間投與清除劑或阻斷劑。清除劑結合至抗體且增強其自身體清除之速率。其包括抗個體基因型抗體。阻斷劑通常為結合至放射性標記化合物之抗原結合位點、但未經自身放射性標記之藥劑。舉例而言，在放射性標記化合物包含負載有特定化學元素(例如金屬)之放射性同位素之螯合劑情況下，阻斷劑可包含負載有相同元素(例如金屬)之非放射性同位素之相同螯合劑，或可包含非負載螯合劑或負載有不同非放射性部分(例如不同元素之非放射性同位素)之螯合劑，其限制條件為其仍可與抗原結合位點結合。在一些情況下，阻斷劑可另外包含增大分子之尺寸及/或流體動力學半徑之部分。阻斷劑在循環中阻礙分子接近腫瘤之能力，而不干擾分子結合至抗體之能力。例示性部分包括親水性聚合物。部分可為例如聚葡萄糖、糊精、PEG、聚唾液酸(PSA)、玻尿酸、羥乙基澱粉(HES)或聚(2-乙基2-噁唑啉) (PEOZ)之聚合物或共聚物。在其他實施例中，部分可為非結構化肽或蛋白質，諸如XTEN多肽(非結構化親水性蛋白質聚合物)、高胺基酸聚合物(HAP)、脯胺酸-丙胺酸-絲胺酸聚合物(PAS)、彈性蛋白樣肽(ELP)或明膠樣蛋白(GLK)。另外例示性部分包括諸如白蛋白(例如牛血清白蛋白)或IgG之蛋白質。適用於部分/聚合物之分子量可介於例如至少50 kDa，例如50 kDa與2000 kDa之間的範圍內。舉例而言，分子量可為200-800 kDa，視情況大於300、350、400或450 kDa，且視情況小於700、650、600或550 kDa，視情況約500 kDa。
根據本發明之某些態樣，不存在向個體投與清除劑或阻斷劑之步驟。在某些態樣中，不存在於投與抗體與投與放射性標記化合物之間投與結合至第一抗體或第二抗體之任何藥劑的步驟。在某些態樣中，不存在於投與抗體與放射性標記化合物之間投與任何藥劑之步驟，選自化學治療劑、免疫治療劑及放射增敏劑之視情況選用之化合物除外。在一些實施例中，在投與抗體與投與放射性標記化合物之間不投與藥劑。在一些實施例中，在投與抗體與投與放射性標記化合物之間可不向個體注射或輸注任何其他藥劑。
在一些實施例中，該方法可為由以下步驟組成或基本上由以下步驟組成之預靶向放射免疫療法兩步法：i)投與抗體組(其中第一抗體及第二抗體可同時或以任一次序依序投與)，及ii)隨後投與放射性標記化合物。治療可涉及該療法之多個循環，亦即此兩個步驟之多個循環。例示性治療循環持續時間為28天，其中抗體組係在循環第1天投與，且放射性標記化合物視情況在循環第1、2、3、4、5、6、7或8天，例如在第7天投與。治療循環數可變化。在一個實施例中，可存在4、5或6個治療循環。
本發明人出乎意料地判定，使用本發明之抗體有可能獲得腫瘤對放射性標記化合物之治療上有效吸收，同時避免正常組織中放射性之過量積聚。實際上，在實例中，發現非目標組織中放射性積聚位準低於使用雙特異性抗體及清除步驟、同時亦利用較簡單程序之三步PRIT方法中之放射性積聚位準。
在一些實施例中，一旦已給予第一抗體及第二抗體合適時間段以定位至目標細胞，則可向個體投與放射性標記化合物。舉例而言，在一些實施例中，在第一抗體及第二抗體之後立即或在第一抗體及第二抗體之後至少4小時、8小時、1天或2天可向個體投與放射性標記化合物。視情況，其可在第一抗體及第二抗體之後不超過3天、5天或7天投與。在一個特定實施例中，在第一抗體及第二抗體之後2至7天可向個體投與放射性標記化合物。
在一些實施例中，本文所描述之抗體可作為組合療法之一部分投與。舉例而言，其可與一或多種化學治療劑組合投與：化學治療劑及抗體可同時或以任一次序依序投與。另外或可替代地，其可與一或多種免疫治療劑組合投與：免疫治療劑及抗體可同時或以任一次序依序投與。
在一些實施例中，另外或可替代地，本文所描述之抗體可與放射增敏劑組合投與。放射增敏劑及抗體可同時或以任一次序依序投與。
本發明抗體(及例如放射性標記化合物之任何額外治療劑)可藉由包括非經腸、肺內及鼻內之任何合適手段投與，且視需要用於局部治療、病灶內投與。非經腸輸注包括肌內、靜脈內、動脈內、腹膜內或皮下投與。給藥可藉由任何合適途徑，例如藉由諸如靜脈內或皮下注射之注射進行。
在一些實施例中，可在如上文所描述之一或多個治療循環之前使用一或多個劑量測定法循環。劑量測定法循環可包含以下步驟：i)投與抗體組(其中第一抗體及第二抗體可同時或以任一次序依序投與)，及ii)隨後投與經γ-發射體放射性標記之適用於成像之化合物(其中該放射性標記化合物結合至放射性標記化合物之功能結合位點)。該化合物可與後續治療循環中所使用之化合物相同，不同之處在於其經γ發射體而非α或β發射體標記。舉例而言，在一個實施例中，劑量測定法循環中所使用之放射性標記化合物可為 203Pb-DOTAM，且治療循環中所使用之放射性標記化合物可為 212Pb-DOTAM。患者可經過成像以測定腫瘤對化合物之吸收且/或以估計化合物之吸收劑量。此資訊可用於估計後續治療步驟中之預期輻射暴露且用於將治療步驟中所使用之放射性標記化合物之劑量調節至安全位準。
M.   醫藥調配物  本文所描述之第一抗體及第二抗體可在單一醫藥組合物中或在單獨醫藥組合物中調配。因此，在另一態樣中，本發明提供例如用於本文所描述之治療或診斷方法中之任一種中的包含本發明之第一抗體及第二抗體之醫藥組合物或包含本發明之第一抗體之第一醫藥調配物及包含本發明之第二抗體之第二醫藥組合物。在一個實施例中，醫藥組合物進一步包含醫藥學上可接受之載劑。在另一實施例中，醫藥組合物進一步包含例如如下文所描述之至少一種額外治療劑。
具有如本文所描述之抗體之醫藥調配物可藉由混合具有所需純度之該抗體與一或多種視情況選用之醫藥學上可接受之載劑來以凍乾調配物或水溶液之形式製備( Remington's Pharmaceutical Sciences第16版, Osol, A.編(1980))。
在所採用劑量及濃度下之醫藥學上可接受之載劑一般對接受者無毒，且包括但不限於：緩衝劑，諸如組胺酸、磷酸鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑(諸如十八烷基二甲基苯甲基氯化銨；氯化六羥季銨；苯紮氯銨；苄索氯銨；苯酚、丁醇或苯甲醇；對羥苯甲酸烷酯，諸如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；以及間甲酚)；低分子量(少於約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺酸、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單醣、雙醣及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖，諸如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽相對離子，諸如鈉；金屬複合物(例如Zn-蛋白質複合物)；及/或非離子界面活性劑，諸如聚乙二醇(PEG)。本文中之例示性醫藥學上可接受之載劑進一步包括間質藥物分散劑，諸如可溶中性活性玻尿酸酶醣蛋白(sHASEGP)，例如人類可溶PH-20玻尿酸酶醣蛋白，諸如rHuPH20 (HYLENEX®, Halozyme公司)。某些例示性sHASEGP (包括rHuPH20)及使用方法描述於美國專利公開案第2005/0260186號及第2006/0104968號中。在一個態樣中，sHASEGP與一或多種諸如軟骨素酶之額外葡萄糖胺聚糖酶組合。
例示性凍乾抗體組合物描述於美國專利第6,267,958號中。水性抗體組合物包括美國專利第6,171,586號及WO 2006/044908中所描述之水性抗體組合物，後者組合物包括組胺酸-乙酸鹽緩衝液。
本文中之調配物亦可含有為所治療之特定適應症所必需之超過一種活性成分，較佳具有不會彼此不利影響之互補活性的活性成分。舉例而言，可能需要進一步提供如上文所論述之化學治療劑、免疫治療劑及/或放射增敏劑。該等活性成分適當地以有效達成預期目的之量以組合形式存在。
活性成分可包覆於微膠囊中，其係例如藉由凝聚技術或藉由介面聚合來製備，例如分別為羥甲基纖維素或明膠微膠囊及聚(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊；包覆於膠體藥物遞送系統(例如脂質體、白蛋白微球體、微乳液、奈米粒子及奈米膠囊)中或巨乳液中。該等技術揭示於 Remington's Pharmaceutical Sciences第16版, Osol, A.編(1980)中。
可製備持續釋放製劑。持續釋放製劑之合適實例包括含有抗體之固體疏水性聚合物之半通透性基質，該等基質係呈例如膜或微膠囊之成形物品形式。
待用於活體內投與之調配物一般為無菌。無菌性很容易例如藉由經過無菌過濾膜過濾來達成。
N.  用於診斷及偵測之方法及組合物  如本文所描述之抗體組亦可用於診斷或成像方法，較佳為預靶向放射免疫成像方法或包含預靶向放射免疫成像之方法。因此，本發明提供診斷及成像方法。其進一步提供抗體組在如本文所描述之成像方法中之用途，及如本文所描述之抗體組(亦即如本文所描述之第一抗體及第二抗體)用於在個體上，例如在人類或動物身體上進行之診斷方法中的用途。
成像方法適用於對身體中之目標抗原之存在及/或分佈進行成像。舉例而言，該方法可為對表現疾病相關抗原之細胞進行成像之方法，該疾病諸如上文所論述之疾病病況中之任一者。視情況，該方法係用於對腫瘤或癌症進行成像。該方法可用於診斷疑似患有諸如癌症之增生性病症或感染性疾病之個體的目的。
在一些實施例中，該個體較佳為人類。
使放射性同位素靶向組織或器官以進行成像或診斷之方法可包含： i)向個體投與如本文所描述之第一抗體及第二抗體(同時或以任一次序依序投與)，其中抗體結合至目標抗原且定位至表現目標抗原之細胞表面，其中第一抗體及第二抗體之締合會形成放射性標記化合物之功能結合位點； 以及 ii)隨後投與放射性標記化合物，其中放射性標記化合物結合至放射性標記化合物之功能結合位點。
視情況，該方法可進一步包含： iii)對其中定位或期望定位放射性標記化合物之組織或器官進行成像。
視情況，該方法可進一步包含一或多個形成診斷、向個體遞送診斷及/或基於診斷確定且/或投與合適治療之步驟。
在另一實施例中，本發明之方法可包含對個體之組織或器官進行成像，其中個體先前已投與有： i)如本文所描述之第一抗體及第二抗體(同時或以任一次序依序)，其中抗體結合至目標抗原且定位至表現目標抗原之細胞表面，且其中第一抗體及第二抗體之締合形成放射性標記化合物之功能結合位點；以及 ii)放射性標記化合物，其中放射性標記化合物結合至藉由第一抗體及第二抗體之締合形成之該放射性標記化合物之抗原結合位點。
在如本文所描述之成像及/或診斷方法中，放射性標記化合物經適用於成像之放射性同位素標記。合適放射性同位素包括如上文所論述之γ發射體。
在習知預靶向放射成像方法中，慣例為在投與抗體與投與放射性標記化合物之間投與清除劑或阻斷劑，例如如上文所描述之清除劑或阻斷劑。
在本發明之某些實施例中，不存在投與清除劑或阻斷劑之步驟。在某些態樣中，不存在於投與抗體與投與放射性標記化合物之間投與結合至第一抗體或第二抗體之任何藥劑的步驟。在某些態樣中，不存在於投與抗體與放射性標記化合物之間投與任何藥劑之步驟，選自化學治療劑、免疫治療劑及放射增敏劑之視情況選用之化合物除外。在一些實施例中，在投與抗體與投與放射性標記化合物之間不投與藥劑。在一些實施例中，在投與抗體與投與放射性標記化合物之間可不向個體注射或輸注任何其他藥劑。
在一些實施例中，一旦已給予第一抗體及第二抗體合適時間段以定位至目標細胞，則可向個體投與放射性標記化合物。舉例而言，在一些實施例中，在第一抗體及第二抗體之後立即或在第一抗體及第二抗體之後至少4小時、8小時、1天或2天可向個體投與放射性標記化合物。視情況，其可在第一抗體及第二抗體之後不超過3天、5天或7天投與。在一個特定實施例中，在第一抗體及第二抗體之後2至7天可向個體投與放射性標記化合物。
在一些實施例中，成像方法可為由以下步驟組成或基本上由以下步驟組成之預靶向放射成像方法：i)投與抗體組(其中第一抗體及第二抗體可同時或以任一次序依序投與)，ii)隨後投與放射性標記化合物，及iii)對所關注之組織或器官進行成像。診斷方法可由以下組成或基本上由以下組成：該步驟，接著為形成診斷之步驟，該步驟可隨後遞送至患者且可用作用於所選擇治療方案及/或投與治療方案之基礎。
目標抗原可為如本文所論述之任何目標抗原。在一些實施例中，目標抗原可為如上文所論述之腫瘤特異性抗原，且成像可為對一或多種腫瘤進行成像之方法。個體可已知或疑似患有腫瘤。
舉例而言，該方法可為對患有或疑似患有以下之個體之腫瘤進行成像之方法：肺癌、非小細胞肺(NSCL)癌、細支氣管肺泡細胞肺癌、骨癌、包括PDAC之胰臟癌、皮膚癌、頭頸癌、皮膚或眼內黑色素瘤、子宮癌、卵巢癌、可為直腸癌及/或結腸癌之結腸直腸癌、肛門區癌、胃癌(stomach cancer/gastric cancer)、乳癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮內膜癌、子宮頸癌、陰道癌、外陰癌、霍奇金氏病、食道癌、小腸癌、內分泌系統癌、甲狀腺癌、副甲狀腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、前列腺癌、膀胱癌、腎或輸尿管癌、腎細胞癌、腎盂癌、間皮瘤、肝細胞癌、膽癌、中樞神經系統(CNS)贅瘤、脊髓軸腫瘤、腦幹神經膠質瘤、多形性神經膠質母細胞瘤、星形細胞瘤、神經鞘瘤、室管膜瘤、神經管胚細胞瘤、腦膜瘤、鱗狀細胞癌、垂體腺瘤及尤文氏肉瘤，包括上文癌症中之任一種之難治癒型式或此等癌症中之任一種之檢查點抑制劑經歷型式或上文癌症中之一或多種的組合。
本發明之額外實施例  本發明之額外實施例在下文闡述於以下編號段落中。
1. 一種抗體組，該抗體組包含： i)第一抗體，其包含結合至於目標細胞表面上表現之抗原之抗原結合部分，且進一步包含用於放射性標記化合物之抗原結合位點之VH域，但不包含用於該放射性標記化合物之抗原結合位點之VL域；以及 ii)第二抗體，其包含結合至於該目標細胞表面上表現之抗原之抗原結合部分，且進一步包含用於該放射性標記化合物之抗原結合位點之VL域，但不包含用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之VH域， 其中該第一抗體之該VH域及該第二抗體之該VL域能夠一起形成用於該放射性標記化合物之功能抗原結合位點。
2. 如段落1之抗體組，其中該第一抗體及該第二抗體各自包含i)包含對於目標細胞表面上表現之抗原具有特異性之抗原結合位點的抗體片段及ii)用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之VL域或VH域。
3. 如段落2之抗體組，其中該抗體片段選自至少一個Fv、scFv或Fab或交叉Fab片段。
4. 如段落1至3中任一項之抗體組，其中該第一抗體及該第二抗體各自進一步包含Fc域。
5. 如段落4之抗體組，其中該第一抗體及該第二抗體各自包含i)包含對於目標細胞表面上表現之抗原具有特異性之抗原結合位點的抗體片段、ii) Fc區以及iii)與該Fc區融合之用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之VL域或VH域。
6. 如段落4或5之抗體組，其中該Fc域經修飾以減弱或消除效應功能。
7. 如段落4至6中任一項之抗體組，其中該第一抗體及該第二抗體中之各者包含a) Fc域；b)至少一個抗原結合部分，其包含用於目標抗原之抗原結合位點；及c)包含用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之VL域或VH域的多肽，其中(b)之該抗原結合部分與該Fc域之一個鏈之N端融合，且(c)之該多肽之C端與該Fc域之另一鏈之N端融合。
8. 如段落7之抗體組，其中(b)之該抗原結合部分為諸如scFv、Fv、Fab或交叉Fab之抗體片段。
9. 如段落8之抗體組，其中(b)之該抗原結合部分為Fab。
10.  如段落7至9中任一項之抗體組，其中該第一抗體包含： i)完整輕鏈； ii)完整重鏈； iii)另一Fc鏈；以及 iv)包含用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之該VH域或由其組成之多肽； 其中(i)之該輕鏈及(ii)之該重鏈一起提供用於目標抗原之抗原結合位點；且其中包含用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之該VH域或由其組成之該多肽係經由連接子藉由其C端與(iii)之N端融合；且 該第二抗體包含： v)完整輕鏈； vi)完整重鏈； vii)另一Fc鏈；以及 viii)包含用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之該VL域或由其組成之多肽； 其中(v)之該輕鏈及(vi)之該重鏈一起提供用於目標抗原之抗原結合位點；且其中包含用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之該VL域或由其組成之該多肽係經由連接子藉由其C端與(vii)之N端融合。
11.     如前述段落中任一項之抗體組，其中該放射性標記化合物包含放射性標記DOTA或其鹽或功能變異體。
12.     如前述段落中任一項之抗體組，其中該放射性標記化合物為放射性標記有Lu或Y放射性同位素之DOTA或其鹽或功能變異體。
13.     如段落11或12之抗體組，其中用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之該VH域包含(a)包含SEQ ID NO: 35之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列之CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列之CDR-H3。
14.     如段落11至13中任一項之抗體組，其中用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之該VH域包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列或包含與SEQ ID NO: 41具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體。
15.     如段落11至14中任一項之抗體組，其中用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之該VL域包含(d)包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列之CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列之CDR-L3。
16.     如段落11至15中任一項之抗體組，其中用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之該VL域包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列或包含與SEQ ID NO: 42具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體。
17.     如段落1至10中任一項之抗體組，其中該放射性標記化合物包含Pb-DOTAM。
18.     如段落17之抗體組，其中用於Pb-DOTAM之功能結合位點係以100 pM、50 pM、20 pM、10 pM、5 pM、1 pM或更小，例如0.9 pM或更小、0.8 pM或更小、0.7 pM或更小、0.6 pM或更小或0.5 pM或更小之結合親和力KD值結合。
19.     如段落17或段落18之抗體組，其中該用於Pb-DOTAM之功能結合位點結合至Pb-DOTAM且結合至Bi-DOTAM。
20.     如段落17至19中任一項之抗體組，其中用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之該VH域包含： a)包含胺基酸序列FIGSRGDTYYASWAKG (SEQ ID NO:2)或在SEQ ID NO: 2中具有至多1、2或3個取代之其變異體之重鏈CDR2，其中此等取代不包括Phe50、Asp56及/或Tyr58，且視情況亦不包括Gly52及/或Arg54； b)包含胺基酸序列ERDPYGGGAYPPHL (SEQ ID NO:3)或在SEQ ID NO: 3中具有至多1、2或3個取代之其變異體之重鏈CDR3，其中此等取代不包括Glu95、Arg96、Asp97、Pro98，且視情況亦不包括Ala100C、Tyr100D及/或Pro100E，且/或視情況亦不包括Tyr99； 以及重鏈CDR1，其視情況為： c)包含胺基酸序列GFSLSTYSMS (SEQ ID NO:1)或在SEQ ID NO: 1中具有至多1、2或3個取代之其變異體之重鏈CDR1。
21.     如段落20之抗體組，其中用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之該VH域包含(a)包含GFSLSTYSMS (SEQ ID NO:1)之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含FIGSRGDTYYASWAKG (SEQ ID NO:2)之胺基酸序列之CDR-H2；以及(c)包含ERDPYGGGAYPPHL (SEQ ID NO:3)之胺基酸序列之CDR-H3。
22.     如段落17至21中任一項之抗體組，其中用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之該VH域包含： i) SEQ ID NO: 143之胺基酸序列；或 ii)包含與SEQ ID NO:143具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之SEQ ID NO: 143之變異體，視情況其中N端Q殘基保持不變或經選自由E、K、R、S、T、A、L、Y、D、N及V組成之群之殘基取代；或 iii)包含在僅經過一或多個取代之SEQ ID NO: 143範圍內變化且與SEQ ID NO:143具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之SEQ ID NO: 143之變異體；視情況其中N端Q殘基保持不變。
23.     如段落17至21中任一項之抗體組，其中用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之該VH域包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列或包含與SEQ ID NO: 7具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體，視情況其中用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之該VH域進一步包含例如Q或選自由E、K、R、S、T、A、L、Y、D、N及V組成之群之殘基的另一N端殘基。
24.     如段落17至21中任一項之抗體組，其中用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之該VH域包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列或包含與SEQ ID NO: 9具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體，且視情況進一步包含例如Q或選自由E、K、R、S、T、A、L、Y、D、N及V組成之群之殘基的N端殘基。
25.     如段落17至24中任一項之抗體組，其中用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之該VL域包含 d)包含胺基酸序列QSSHSVYSDNDLA (SEQ ID NO:4)或在SEQ ID NO: 4中具有至多1、2或3個取代之其變異體之輕鏈CDR1，其中此等取代不包括Tyr28及Asp32； e)包含胺基酸序列LGGYDDESDTYG (SEQ ID NO:6)或在SEQ ID NO: 6中具有至多1、2或3個取代之其變異體之輕鏈CDR3，其中此等取代不包括Gly91、Tyr92、Asp93、Thr95c以及Tyr96， 以及輕鏈CDR2，其視情況為 f)包含胺基酸序列QASKLAS (SEQ ID NO: 5)或在SEQ ID NO: 5中具有至少1、2或3個取代之其變異體之輕鏈CDR 2，該等取代視情況不包括Gln50。
26.     如段落25之抗體組，其中用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之該VL域包含(d)包含QSSHSVYSDNDLA (SEQ ID NO:4)之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含QASKLAS (SEQ ID NO:5)之胺基酸序列之CDR-L2；以及(f)包含LGGYDDESDTYG (SEQ ID NO:6)之胺基酸序列之CDR-L3。
27.     如段落17至26中任一項之抗體組，其中用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之該VL域包含 i) SEQ ID NO: 144之胺基酸序列，或 ii)包含與SEQ ID NO:144具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之SEQ ID NO: 144之變異體，視情況其中N端A殘基保持不變或經選自由D、N、E、Q、S、A、V、L、T、Y、K及R組成之群之另一胺基酸取代；或 iii)包含在僅經過一或多個取代之SEQ ID NO: 144範圍內變化且與SEQ ID NO:144具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之SEQ ID NO: 144之變異體；視情況其中N端A殘基保持不變。
28.     如段落17至26中任一項之抗體組，其中用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之該VL域包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列或包含與SEQ ID NO: 8具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體，且視情況進一步包含諸如A或選自由D、N、E、Q、S、A、V、L、T、Y、K及R組成之群之殘基的另一N端殘基。
29.     如前述段落中任一項之抗體組，其中該第一抗體及該第二抗體結合至相同目標抗原。
30.     如段落29之抗體組，其中該第一抗體及該第二抗體結合至該目標抗原之相同抗原決定基。
31.     如段落29之抗體組，其中該第一抗體與該第二抗體結合至該目標抗原之不同抗原決定基。
32.     如前述段落中任一項之抗體組，其中於目標細胞表面上表現之該抗原為腫瘤相關抗原。
33.     如前述段落中任一項之抗體組，其中於目標細胞表面上表現之該抗原選自由以下組成之群：癌胚抗原(CEA)、CD20、HER2、EGP-1 (上皮醣蛋白-1，亦稱為滋胚層-2)、結腸特異性抗原-p (CSAp)、胰臟黏蛋白MUC1、GPRC5D以及FAP。
34.     如前述段落中任一項之抗體組，其中於目標細胞表面上表現之該抗原選自由以下組成之群：CEA、GPRC5D以及FAP。
35.     如前述段落中任一項之抗體組，其中於目標細胞表面上表現之該抗原為CEA。
36.     如段落35之抗體組，其中該第一抗體包含結合至CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含 重鏈可變區，其包含(a)包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列之CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO:21之胺基酸序列之CDR-H3；及 輕鏈可變區，其包含(d)包含SEQ ID NO:22之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:23之胺基酸序列之CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO:24之胺基酸序列之CDR-L3。
37.     如段落35或36之抗體組，其中該第一抗體包含用於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含：包含選自由SEQ ID NO: 25組成之群之胺基酸序列或包含與SEQ ID NO: 25具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體的VH序列。
38.     如段落35至37中任一項之抗體組，其中該第一抗體包含用於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含：包含選自由SEQ ID NO: 26組成之群之胺基酸序列或包含與SEQ ID NO: 26具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體的VL序列。
39.     如段落35之抗體組，其中該第一抗體包含結合至CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含：重鏈可變區，其包含(a)包含SEQ ID NO:43之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:44之胺基酸序列之CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO:45之胺基酸序列之CDR-H3；及輕鏈可變區，其包含(d)包含SEQ ID NO:46之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:47之胺基酸序列之CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO:48之胺基酸序列之CDR-L3。
40.     如段落35或39之抗體組，其中該第一抗體包含用於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含：包含選自由SEQ ID NO: 49組成之群之胺基酸序列或包含與SEQ ID NO: 49具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體的VH序列。
41.     如段落35、39或40中任一項之抗體組，其中該第一抗體包含用於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含：包含選自由SEQ ID NO: 50組成之群之胺基酸序列或包含與SEQ ID NO: 50具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體的VL序列。
42.     如段落35之抗體組，其中該第一抗體包含結合至CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含 重鏈可變區，其包含(a)包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列之CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO:13之胺基酸序列之CDR-H3；及 輕鏈可變區，其包含(d)包含SEQ ID NO:14之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:15之胺基酸序列之CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO:16之胺基酸序列之CDR-L3。
43.     如段落35或42之抗體組，其中該第一抗體包含用於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含：包含選自由SEQ ID NO: 17組成之群之胺基酸序列或包含與SEQ ID NO: 17具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體的VH序列。
44.     如段落35、42或43之抗體組，其中該第一抗體包含用於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含：包含選自由SEQ ID NO: 18組成之群之胺基酸序列或包含與SEQ ID NO: 18具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體的VL序列。
45.     如段落35之抗體組，其中該第一抗體包含結合至CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含 重鏈可變區，其包含(a)包含SEQ ID NO:59之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:60之胺基酸序列之CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO:61之胺基酸序列之CDR-H3；及 輕鏈可變區，其包含(d)包含SEQ ID NO:62之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:63之胺基酸序列之CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO:64之胺基酸序列之CDR-L3。
46.     如段落35或段落45之抗體組，其中該第一抗體包含用於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含：包含選自由SEQ ID NO: 65組成之群之胺基酸序列或包含與SEQ ID NO: 65具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體的VH序列。
47.     如段落35、45或46之抗體組，其中該第一抗體包含用於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含：包含選自由SEQ ID NO: 66組成之群之胺基酸序列或包含與SEQ ID NO: 66具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體的VL序列。
48.     如段落45之抗體組，其中該第一抗體包含結合至CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含：重鏈可變區，其包含(a)包含SEQ ID NO:116之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:117或118之胺基酸序列之CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO:119之胺基酸序列之CDR-H3；及輕鏈可變區，其包含(d)包含SEQ ID NO:120、121或122之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:123、124或125之胺基酸序列之CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO:126之胺基酸序列之CDR-L3。
49.     如段落35或48之抗體組，其中該第一抗體包含結合至CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含：重鏈可變區(VH)，其包含選自SEQ ID NO: 129、130、131、132、133或134之胺基酸序列或與其具有90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之序列；及輕鏈可變區(VL)，其包含選自SEQ ID NO: 135、136、137、138、139或140之胺基酸序列或與其具有90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之序列。
50.     如段落35、48或49之抗體組，其中該第一抗體包含結合至CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含： (a)包含SEQ ID NO:129之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:139之胺基酸序列之VL域，或 (b)包含SEQ ID NO:133之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:139之胺基酸序列之VL域，或 (c)包含SEQ ID NO:130之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:139之胺基酸序列之VL域，或 (d)包含SEQ ID NO:134之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:138之胺基酸序列之VL域，或 (e)包含SEQ ID NO:133之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:138之胺基酸序列之VL域，或 (f)包含SEQ ID NO:131之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:138之胺基酸序列之VL域，或 (g)包含SEQ ID NO:129之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:138之胺基酸序列之VL域。
51.     如段落35至50中任一項之抗體組，其中該第二抗體包含結合至CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含 重鏈可變區，其包含(a)包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列之CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO:21之胺基酸序列之CDR-H3；及 輕鏈可變區，其包含(d)包含SEQ ID NO:22之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:23之胺基酸序列之CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO:24之胺基酸序列之CDR-L3。
52.     如段落35至51中任一項之抗體組，其中該第二抗體包含用於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含：包含選自由SEQ ID NO: 25組成之群之胺基酸序列或包含與SEQ ID NO: 25具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體的VH序列。
53.     如段落35至52中任一項之抗體組，其中該第二抗體包含用於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含：包含選自由SEQ ID NO: 26組成之群之胺基酸序列或包含與SEQ ID NO: 26具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體的VL序列。
54.     如段落35至50中任一項之抗體組，其中該第二抗體包含結合至CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含：重鏈可變區，其包含(a)包含SEQ ID NO:43之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:44之胺基酸序列之CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO:45之胺基酸序列之CDR-H3；及輕鏈可變區，其包含(d)包含SEQ ID NO:46之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:47之胺基酸序列之CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO:48之胺基酸序列之CDR-L3。
55.     如段落35至50或54中任一項之抗體組，其中該第二抗體包含用於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含：包含選自由SEQ ID NO: 49組成之群之胺基酸序列或包含與SEQ ID NO: 49具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體的VH序列。
56.     如段落35至50、54或55中任一項之抗體組，其中該第二抗體包含用於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含：包含選自由SEQ ID NO: 50組成之群之胺基酸序列或包含與SEQ ID NO: 50具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體的VL序列。
57.     如段落35至50中任一項之抗體組，其中該第二抗體包含結合至CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含 重鏈可變區，其包含(a)包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列之CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO:13之胺基酸序列之CDR-H3；及 輕鏈可變區，其包含(d)包含SEQ ID NO:14之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:15之胺基酸序列之CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO:16之胺基酸序列之CDR-L3。
58.     如段落35至50或57中任一項之抗體組，其中該第二抗體包含用於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含：包含選自由SEQ ID NO: 17組成之群之胺基酸序列或包含與SEQ ID NO: 17具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體的VH序列。
59.     如段落35至50、57或58中任一項之抗體組，其中該第二抗體包含用於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含：包含選自由SEQ ID NO: 18組成之群之胺基酸序列或包含與SEQ ID NO: 18具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體的VL序列。
60.     如段落35至50中任一項之抗體組，其中該第二抗體包含結合至CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含 重鏈可變區，其包含(a)包含SEQ ID NO:59之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:60之胺基酸序列之CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO:61之胺基酸序列之CDR-H3；及 輕鏈可變區，其包含(d)包含SEQ ID NO:62之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:63之胺基酸序列之CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO:64之胺基酸序列之CDR-L3。
61.     如段落35至50或60中任一項之抗體組，其中該第二抗體包含用於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含：包含選自由SEQ ID NO: 65組成之群之胺基酸序列或包含與SEQ ID NO: 65具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體的VH序列。
62.     如段落35至50、60或61之抗體組，其中該第二抗體包含用於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含：包含選自由SEQ ID NO: 66組成之群之胺基酸序列或包含與SEQ ID NO: 66具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體的VL序列。
63.     如段落35至50之抗體組，其中該第二抗體包含結合至CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含：重鏈可變區，其包含(a)包含SEQ ID NO:116之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:117或118之胺基酸序列之CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO:119之胺基酸序列之CDR-H3；及輕鏈可變區，其包含(d)包含SEQ ID NO:120、121或122之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:123、124或125之胺基酸序列之CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO:126之胺基酸序列之CDR-L3。
64.     如段落35至50或63之抗體組，其中該第二抗體包含結合至CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含：重鏈可變區(VH)，其包含選自SEQ ID NO: 129、130、131、132、133或134之胺基酸序列或與其具有90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之序列；及輕鏈可變區(VL)，其包含選自SEQ ID NO: 135、136、137、138、139或140之胺基酸序列或與其具有90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之序列。
65.     如段落35至50、63或64之抗體組，其中該第二抗體包含結合至CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含： (a)包含SEQ ID NO:129之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:139之胺基酸序列之VL域，或 (b)包含SEQ ID NO:133之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:139之胺基酸序列之VL域，或 (c)包含SEQ ID NO:130之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:139之胺基酸序列之VL域，或 (d)包含SEQ ID NO:134之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:138之胺基酸序列之VL域，或 (e)包含SEQ ID NO:133之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:138之胺基酸序列之VL域，或 (f)包含SEQ ID NO:131之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:138之胺基酸序列之VL域，或 (g)包含SEQ ID NO:129之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:138之胺基酸序列之VL域。
66.     如段落35之抗體組，其中該第一抗體為如段落36至38中任一項之抗體且該第二抗體為如段落51至53中任一項之抗體。
67.     如段落1之抗體組，其中： i)該第一抗體包含具有SEQ ID NO:112之第一重鏈、具有SEQ ID NO: 146之第二重鏈及具有SEQ ID NO: 115之輕鏈；以及 ii)該第二抗體包含具有SEQ ID NO:112之第一重鏈、具有SEQ ID NO: 145之第二重鏈及具有SEQ ID NO: 115之輕鏈。
68.     一種核酸組，其表現如前述段落中任一項之抗體組。
69.     一種表現載體或表現載體組，其包含如段落68之核酸組。
70.     一種宿主細胞或宿主細胞組，其包含如段落69之表現載體或表現載體組。
71.     一種預靶向放射免疫療法之方法，其包含 i)向個體投與如段落1至67中任一項之抗體組，其中該第一抗體與該第二抗體係同時或以任一次序依序投與，其中該等抗體結合至該目標抗原且定位至表現該目標抗原之細胞之表面；且其中該第一抗體與該第二抗體之締合形成用於該放射性標記化合物之功能結合位點； 及 ii)隨後投與放射性標記化合物，其中該放射性標記化合物結合至用於該放射性標記化合物之功能結合位點。
72.     如段落71之方法，其中該方法不包含投與清除劑或阻斷劑之步驟。
73.     如段落71或72之方法，其中該個體為人類。
74.     如段落71至73中任一項之方法，其中該目標抗原為癌症或腫瘤相關抗原，且該方法為腫瘤或癌症之放射免疫療法之方法。
75.     如段落1至67中任一項之抗體組，其用於如段落71至74中任一項之預靶向放射免疫療法之方法中。
76.     一種使放射性同位素靶向組織或器官以用於放射成像之方法，其包含： i)向個體投與如段落1至67中任一項之抗體組，其中該第一抗體與該第二抗體係同時或以任一次序依序投與，其中該等抗體結合至目標抗原且定位至表現該目標抗原之細胞之表面；且其中該第一抗體與該第二抗體之締合形成用於該放射性標記化合物之功能結合位點； 及 ii)隨後投與放射性標記化合物，其中該放射性標記化合物結合至用於該放射性標記化合物之該功能結合位點。
77.     如段落76之方法，其中該方法不包含投與清除劑或阻斷劑之步驟。
78.     如段落76或77之方法，其中該方法進一步包含成像步驟。
79.     如段落78之方法，其中該目標抗原為癌症或腫瘤相關抗原，且該方法為對腫瘤或癌症進行成像之方法。
80.     一種肽連接子，其由y個連續殘基組成，該等殘基選自由Gly及Ser組成之群，其中y = 5至100、5至70、5至60、5至50、或10至100、10至70、10至60、或10至50，且其中最末絲胺酸處於y-2或y-3位置中。
81.     如段落80之肽連接子，其中y = 10至50。
82.     如段落80之肽連接子，其中y = 15至31、或15至30。
83.     如段落82之肽連接子，其中y = 15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25。
84.     如段落83之肽連接子，其中y = 20或21。
85.     如段落80之肽連接子，其由序列(GxS)n(GGSGG)或(GxS)n(GGSGGG)組成，其中G =甘胺酸，S =絲胺酸，x = 4且n = 1至20、2至20、1至10、或2至10。
86.     如段落85之肽連接子，其中n = 2、3、4或5。
87.     如段落85之肽連接子，其中n = 2、3或4。
88.     如段落80之肽連接子，其由序列GGGGSGGGGSGGGGSGGSGG (SEQ ID NO: 150)或GGGGSGGGGSGGGGSGGSGGG (SEQ ID NO: 151)組成。
89.     一種如段落80至88中任一項之肽連接子之用途，其用於接合多域蛋白之第一域與第二域。
90.     一種多域蛋白，其包含至少一第一域及一第二域，其中該第一域與該第二域經如段落80至88中任一項之肽連接子連接。
91.     如段落89之用途或如段落90之多域蛋白，其中該多域蛋白為抗體。
92.     如段落89之用途或如段落90之多域蛋白，其中該多域蛋白為雙特異性抗體。
93.     如段落89之用途或如段落90之多域蛋白，其中該第一域為抗原結合部分，且該第二域為VH或VL域。
94.     如段落93之用途或多域結合蛋白，其中該抗原結合部分為抗體片段。
95.     如段落89之用途或如段落90之多域蛋白，其中該第一域為Fc域，且該第二域為VH或VL域。 III.   序列
SEQ ID NO 描述 序列
1 重鏈CDR1，＜Pb-Dotam＞ GFSLSTYSMS
2 重鏈CDR2 ＜Pb-Dotam＞ FIGSRGDTYYASWAKG
3 重鏈CDR3 ＜Pb-Dotam＞ ERDPYGGGAYPPHL
4 輕鏈CDR1, ＜Pb-Dotam＞ QSSHSVYSDNDLA
5 輕鏈CDR2 ＜Pb-Dotam＞ QASKLAS
6 輕鏈CDR3 ＜Pb-Dotam＞ LGGYDDESDTYG
7 重鏈可變域＜Pb-Dotam＞  PRIT-0213 VTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLSTYSMSWIRQPPGKALEWLGFIGSRGDTYYASWAKGRLTISKDTSKSQVVLTMTNMDPVDTATYYCARERDPYGGGAYPPHLWGRGTLVTVSS
8 輕鏈可變域＜Pb-Dotam＞ PRIT-0213 IQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQSSHSVYSDNDLAWYQQKPGKAPKLLIYQASKLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLGGYDDESDTYGFGGGTKVEIK
9 重鏈可變域＜Pb-Dotam＞  PRIT-0214 VQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGFSLSTYSMSWIRQPPGKGLEWIGFIGSRGDTYYASWAKGRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARERDPYGGGAYPPHLWGRGTLVTVSS
10 輕鏈可變域＜Pb-Dotam＞ PRIT-0214 IQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQSSHSVYSDNDLAWYQQKPGKAPKLLIYQASKLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLGGYDDESDTYGFGGGTKVEIK
11 重鏈CDR1 ＜CEA＞ T84.66 GFNIKDTYMH
12 重鏈CDR2  ＜CEA＞ T84.66 RIDPANGNSKYVPKFQG
13 重鏈CDR3  ＜CEA＞ T84.66 FGYYVSDYAMAY
14 輕鏈CDR1  ＜CEA＞ T84.66 RAGESVDIFGVGFLH
15 輕鏈CDR2  ＜CEA＞ T84.66 RASNRAT
16 輕鏈CDR3  ＜CEA＞ T84.66 QQTNEDPYT
17 重鏈可變域＜CEA＞  T84.66 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFNIKDTYMHWVRQAPGQGLEWMGRIDPANGNSKYVPKFQGRVTITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAPFGYYVSDYAMAYWGQGTLVTVSS   
18 輕鏈可變域＜CEA＞ T84.66 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRAGESVDIFGVGFLHWYQQKPGQAPRLLIYRASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQTNEDPYTFGQGTKLEIK
19 重鏈CDR1 ＜CEA＞ CH1A1A GYTFTEFGMN
20 重鏈CDR2  ＜CEA＞ CH1A1A WINTKTGEATYVEEFKG
21 重鏈CDR3  ＜CEA＞ CH1A1A WDFAYYVEAMDY
22 輕鏈CDR1  ＜CEA＞ CH1A1A KASAAVGTYVA
23 輕鏈CDR2  ＜CEA＞ CH1A1A SASYRKR
24 輕鏈CDR3  ＜CEA＞ CH1A1A HQYYTYPLFT
25 重鏈可變域＜CEA＞  CH1A1A QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWDFAYYVEAMDYWGQGTTVTVSS
26 輕鏈可變域＜CEA＞  CH1A1A DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASAAVGTYVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRKRGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCHQYYTYPLFTFGQGTKLEIK
27 不具有連接子及＜DOTAM-VH＞之P1AD8749之重鏈＜CEA＞ à與SeqID32相同之質體，缺少連接子及＜DOTAM＞ QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMNWVRQAPGQGLEWMGW INTKTGEATYVEEFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWD FAYYVEAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLV KDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQ TYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREP QVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPP VLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
28 P1AD8749重鏈臼＜CEA＞ CH1A1A QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWDFAYYVEAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
29 不具有連接子及＜DOTAM-VL＞之P1AD8592之重鏈＜CEA＞ à與SeqID33相同之質體，缺少連接子及＜DOTAM＞ QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMNWVRQAPGQGLEWMGW INTKTGEATYVEEFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWD FAYYVEAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLV KDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQ TYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREP QVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPP VLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
30 P1AD8592重鏈杵＜CEA＞CH1A1A    QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWDFAYYVEAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
31 連接子 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS
32 P1AD8749重鏈杵＜CEA＞CH1A1A＜Dotam-VH＞ QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWDFAYYVEAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS VTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLSTYSMSWIRQPPGKALEWLGFIGSRGDTYYASWAKGRLTISKDTSKSQVVLTMTNMDPVDTATYYCARERDPYGGGAYPPHLWGRGTLVTVSS
33 P1AD8592重鏈臼＜CEA＞CH1A1A＜Dotam-VL＞ QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWDFAYYVEAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS IQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQSSHSVYSDNDLAWYQQKPGKAPKLLIYQASKLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLGGYDDESDTYGFGGGTKVEIK
34 P1AD8749及P1AD8592 輕鏈＜CEA＞ CH1A1A DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASAAVGTYVAWYQQKPGKAPKLLIYS ASYRKRGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCHQYYTYPLFTFG QGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWK VDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQ GLSSPVTKSFNRGEC
35 重鏈CDR 1，＜C825＞ DYGVH
36 重鏈CDR 2，＜C825＞ VIWSGGGTAYNTALIS
37 重鏈CDR 3，＜C825＞ RGSYPYNYFDA
38 輕鏈CDR 1，＜C825＞ GSSTGAVTASNYAN
39 輕鏈CDR 2，＜C825＞ GHNNRPP
40 輕鏈CDR 3，＜C825＞ ALWYSDHWV
41 重鏈可變域＜C825＞ HVKLQESGPGLVQPSQSLSLTCTVSGFSLTDYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGGTAYNTALISRLNIYRDNSKNQVFLEMNSLQAEDTAMYYCARRGSYPYNYFDAWGQGTTVTVSS
42 輕鏈可變域，＜C825＞ QAVVIQESALTTPPGETVTLTCGSSTGAVTASNYANWVQEKPDHLFTGLIGGHNNRPPGVPARFSGSLIGDKAALTIAGTQTEDEAIYFCALWYSDHWVIGGGTKLTVL
43 重鏈CDR1 ＜CEA＞ A5B7 DYYMN
44 重鏈CDR2  ＜CEA＞ A5B7 FIGNKANAYTTEYSASVKG
45 重鏈CDR3  ＜CEA＞ A5B7 DRGLRFYFDY
46 輕鏈CDR1  ＜CEA＞ A5B7 RASSSVTYIH
47 輕鏈CDR2  ＜CEA＞ A5B7 ATSNLAS
48 輕鏈CDR3  ＜CEA＞ A5B7 QHWSSKPPT
49 重鏈可變域＜CEA＞  A5B7 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYYMNWVRQAPGKGLEWLGFIGNKANAYTTEYSASVKGRFTISRDKSKNTLYLQMNSLRAEDTATYYCTRDRGLRFYFDYWGQGTTVTVSS
50 輕鏈可變域＜CEA＞  A5B7 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSSVTYIHWYQQKPGQAPRSWIYATSNLASGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQHWSSKPPTFGQGTKLEIK
51 P1AE4956重鏈臼＜CEA＞  A5B7    EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYYMNWVRQAPGKGLEWLGFIGNKANAYTTEYSASVKGRFTISRDKSKNTLYLQMNSLRAEDTATYYCTRDRGLRFYFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
52 P1AE4956重鏈杵＜CEA＞ A5B7 ＜Dotam-VH＞    EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYYMNWVRQAPGKGLEWLGFIGNKANAYTTEYSASVKGRFTISRDKSKNTLYLQMNSLRAEDTATYYCTRDRGLRFYFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP GGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS VTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLSTYSMSWIRQPPGKALEWLGFIGSRGDTYYASWAKGRLTISKDTSKSQVVLTMTNMDPVDTATYYCARERDPYGGGAYPPHLWGRGTLVTVSS
53 不具有連接子及DOTAM-VH＞之P1AE4956之重鏈＜CEA＞  à與SeqID 52相同之質體，缺少連接子及＜DOTAM＞ EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYYMNWVRQAPGKGLEWLGFIGNKANAYTTEYSASVKGRFTISRDKSKNTLYLQMNSLRAEDTATYYCTRDRGLRFYFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP
54 P1AE4956 輕鏈＜CEA＞  A5B7 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSSVTYIHWYQQKPGQAPRSWIYATSNLASGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQHWSSKPPTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
55 P1AE4957重鏈杵＜CEA＞  A5B7 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYYMNWVRQAPGKGLEWLGFIGNKANAYTTEYSASVKGRFTISRDKSKNTLYLQMNSLRAEDTATYYCTRDRGLRFYFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
56 P1AE4957重鏈臼＜CEA＞ A5B7 ＜Dotam-VL＞ EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYYMNWVRQAPGKGLEWLGFIGNKANAYTTEYSASVKGRFTISRDKSKNTLYLQMNSLRAEDTATYYCTRDRGLRFYFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP GGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS IQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQSSHSVYSDNDLAWYQQKPGKAPKLLIYQASKLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLGGYDDESDTYGFGGGTKVEIK
57 不具有連接子及DOTAM-VL＞之P1AE4957之重鏈＜CEA＞ à與SeqID 56相同之質體，缺少連接子及＜DOTAM＞ EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYYMNWVRQAPGKGLEWLGFIGNKANAYTTEYSASVKGRFTISRDKSKNTLYLQMNSLRAEDTATYYCTRDRGLRFYFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP
58 P1AE4957輕鏈＜CEA＞  A5B7 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSSVTYIHWYQQKPGQAPRSWIYATSNLASGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQHWSSKPPTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
59 重鏈CDR1 ＜CEA＞ 28A9 GGTFSYYAIS
60 重鏈CDR2 ＜CEA＞ 28A9 GILPAFGAANYAQKFQG
61 重鏈CDR3 ＜CEA＞ 28A9 LPPLPGAGLDY
62 輕鏈CDR1 ＜CEA＞ 28A9 RASQSISSWLA
63 輕鏈CDR2 ＜CEA＞ 28A9 DASSLES
64 輕鏈CDR3 ＜CEA＞ 28A9 QQNTQYPMT
65 重鏈可變域＜CEA＞  28A9 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSYYAISWVRQAPGQGLEWMGGILPAFGAANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLPPLPGAGLDYWGQGTTVTVSS
66 輕鏈可變域＜CEA＞  28A9 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITC RASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIY DASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYC QQNTQYPMTFGQGTKVEIK
67 重鏈CDR1 ＜GPRC5D＞ GFTFSKYAMA
68 重鏈CDR2 ＜GPRC5D＞ SISTGGVNTYYADSVKG
69 重鏈CDR3 ＜GPRC5D＞ HTGDYFDY
70 輕鏈CDR1 ＜GPRC5D＞ RASQSVSISGINLMN
71 輕鏈CDR2 ＜GPRC5D＞ HASILAS
72 輕鏈CDR3 ＜GPRC5D＞ QQTRESPLT
73 重鏈可變域＜GPRC5D＞ EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSKYAMAWVRQAPGKGLEWVASISTGGVNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATHTGDYFDYWGQGTMVTVSS
74 輕鏈可變域＜GPRC5D＞ EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSISGINLMNWYQQKPGQQPKLLIYHASILASGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQTRESPLTFGQGTRLEIK
75 重鏈CDR1 ＜FAP＞ 4B9 GFTFSSYAMS
76 重鏈CDR2 ＜FAP＞ 4B9 AIIGSGASTYYADSVKG
77 重鏈CDR3 ＜FAP＞ 4B9 GWFGGFNY
78 輕鏈CDR1 ＜FAP＞ 4B9 RASQSVTSSYLA
79 輕鏈CDR2 ＜FAP＞ 4B9 VGSRRAT
80 輕鏈CDR3 ＜FAP＞ 4B9 QQGIMLPPT
81 重鏈可變域＜FAP＞ 4B9 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAIIGSGASTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKGWFGGFNYWGQGTLVTVSS
82 輕鏈可變域＜FAP＞ 4B9 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVTSSYLAWYQQKPGQAPRLLINVGSRRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQGIMLPPTFGQGTKVEIK
83 P1AF0709 HC杵＜CEA＞ T84.66 (D1AE4688) QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFNIKDTYMHWVRQAPGQGLEWMGRIDPANGNSKYVPKFQGRVTITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAPFGYYVSDYAMAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
84 P1AF0709 HC臼＜CEA＞ T84.66 Dotam-VL (D1AA4920) QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFNIKDTYMHWVRQAPGQGLEWMGRIDPANGNSKYVPKFQGRVTITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAPFGYYVSDYAMAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQSSHSVYSDNDLAWYQQKPGKAPKLLIYQASKLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLGGYDDESDTYGFGGGTKVEIK
85 不具有連接子及DOTAM之P1AF0709 HC臼＜CEA＞ T84.66 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFNIKDTYMHWVRQAPGQGLEWMGRIDPANGNSKYVPKFQGRVTITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAPFGYYVSDYAMAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
86 PIAF0298 HC臼＜CEA＞ T84.66 (D1AE4687) QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFNIKDTYMHWVRQAPGQGLEWMGRIDPANGNSKYVPKFQGRVTITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAPFGYYVSDYAMAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
87 PIAF0298 HC杵＜CEA＞ T84.66 Dotam-VH-AST (D1AE3668) QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFNIKDTYMHWVRQAPGQGLEWMGRIDPANGNSKYVPKFQGRVTITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAPFGYYVSDYAMAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLSTYSMSWIRQPPGKALEWLGFIGSRGDTYYASWAKGRLTISKDTSKSQVVLTMTNMDPVDTATYYCARERDPYGGGAYPPHLWGRGTLVTVSSAST
88 不具有連接子及DOTAM之PIAF0298 HC杵＜CEA＞ T84.66 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFNIKDTYMHWVRQAPGQGLEWMGRIDPANGNSKYVPKFQGRVTITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAPFGYYVSDYAMAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
89 P1AF0709及 PIAF0298輕鏈(D1AA4120)    EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRAGESVDIFGVGFLHWYQQKPGQAPRLLIYRASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQTNEDPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
90 P1AF0710 HC杵＜CEA＞ 28A9 (D1AE4690) QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSYYAISWVRQAPGQGLEWMGGILPAFGAANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLPPLPGAGLDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
91 P1AF0710 HC臼＜CEA＞ 28A9 Dotam-VL (D1AC3172) QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSYYAISWVRQAPGQGLEWMGGILPAFGAANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLPPLPGAGLDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQSSHSVYSDNDLAWYQQKPGKAPKLLIYQASKLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLGGYDDESDTYGFGGGTKVEIK
92 不具有連接子或DOTAM之P1AF0710 HC臼＜CEA＞ 28A9 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSYYAISWVRQAPGQGLEWMGGILPAFGAANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLPPLPGAGLDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
93 P1AF0711 HC臼＜CEA＞ 28A9 (D1AE4689) QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSYYAISWVRQAPGQGLEWMGGILPAFGAANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLPPLPGAGLDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
94 P1AF0711 HC杵＜CEA＞ 28A9 Dotam-VH-AST (D1AE3671) QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSYYAISWVRQAPGQGLEWMGGILPAFGAANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLPPLPGAGLDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLSTYSMSWIRQPPGKALEWLGFIGSRGDTYYASWAKGRLTISKDTSKSQVVLTMTNMDPVDTATYYCARERDPYGGGAYPPHLWGRGTLVTVSSAST
95 不具有連接子及DOTAM之P1AF0711 HC杵＜CEA＞ 28A9 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSYYAISWVRQAPGQGLEWMGGILPAFGAANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLPPLPGAGLDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
96 P1AF0710及P1AF0711輕鏈(D1AA2299) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQNTQYPMTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
97 P1AF0712 HC杵＜CEA＞ CH1A1A (D1AC4023) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWDFAYYVEAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
98 P1AF0712 HC臼＜CEA＞ CH1A1A DOTA-VL (D1AE4684) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWDFAYYVEAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQAVVIQESALTTPPGETVTLTCGSSTGAVTASNYANWVQEKPDHLFTGLIGGHNNRPPGVPARFSGSLIGDKAALTIAGTQTEDEAIYFCALWYSDHWVIGGGTKLTVL
99 不具有連接子或DOTA之P1AF0712 HC臼＜CEA＞ QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWDFAYYVEAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
100 P1AF0713 HC臼＜CEA＞ CH1A1A (D1AC4022) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWDFAYYVEAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
101 P1AF0713 HC杵＜CEA＞ CH1A1A DOTA-VH-AST (D1AE3670) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWDFAYYVEAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSHVKLQESGPGLVQPSQSLSLTCTVSGFSLTDYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGGTAYNTALISRLNIYRDNSKNQVFLEMNSLQAEDTAMYYCARRGSYPYNYFDAWGQGTTVTVSSAST
102 不具有連接子及DOTA之P1AF0713 HC杵＜CEA＞ CH1A1A QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWDFAYYVEAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
103 P1AF0712及P1AF0713輕鏈(D1AA3384) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASAAVGTYVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRKRGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCHQYYTYPLFTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
104 P1AF8284及P1AF8285 HC杵＜GPRC5D＞ (D1AF6517) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSKYAMAWVRQAPGKGLEWVASISTGGVNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATHTGDYFDYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
105 P1AF8284 HC臼Dotam-VL (D1AG3592) DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSSIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQSSHSVYSDNDLAWYQQKPGKAPKLLIYQASKLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLGGYDDESDTYGFGGGTKVEIK
106 P1AF8285 H臼Dotam-VHA (D1AG3591) DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLSTYSMSWIRQPPGKALEWLGFIGSRGDTYYASWAKGRLTISKDTSKSQVVLTMTNMDPVDTATYYCARERDPYGGGAYPPHLWGRGTLVTVSSA
107 P1AF8284及P1AF8285輕鏈 (D1AF6469) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSISGINLMNWYQQKPGQQPKLLIYHASILASGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQTRESPLTFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
108 P1AF8286及P1AF8287 HC杵＜FAP＞ 4B9 (D1AF6515) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAIIGSGASTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKGWFGGFNYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
109 P1AF8286 HC臼Dotam-VL (D1AG3592) DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSSIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQSSHSVYSDNDLAWYQQKPGKAPKLLIYQASKLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLGGYDDESDTYGFGGGTKVEIK
110 P1AF8287 HC臼Dotam-VHA (D1AG3591) DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLSTYSMSWIRQPPGKALEWLGFIGSRGDTYYASWAKGRLTISKDTSKSQVVLTMTNMDPVDTATYYCARERDPYGGGAYPPHLWGRGTLVTVSSA
111 P1AF8286及P1AF8287輕鏈(D1AB9974) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVTSSYLAWYQQKPGQAPRLLINVGSRRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQGIMLPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
112 P1AF7782及P1AF7784 HC杵＜CEA＞ CH1A1A (D1AD3419) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWDFAYYVEAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
113 P1AF7782 HC臼Dotam-VL (D1AG2237) SIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQSSHSVYSDNDLAWYQQKPGKAPKLLIYQASKLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLGGYDDESDTYGFGGGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGSGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
114 P1AF7784 HC臼Dotam-VH (D1AG2236) GVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLSTYSMSWIRQPPGKALEWLGFIGSRGDTYYASWAKGRLTISKDTSKSQVVLTMTNMDPVDTATYYCARERDPYGGGAYPPHLWGRGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGSGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
115 P1AF7782及P1AF7784輕鏈(D1AD3421) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASAAVGTYVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRKRGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCHQYYTYPLFTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
116 重鏈CDR1 ＜CEA＞ MFE23 DSYMH
117 重鏈CDR2 ＜CEA＞ MFE23 WIDPENGDTEYAPKFQG
118 重鏈CDR2 ＜CEA＞ MFE23-H26 WIDPENGGTNYAQKFQG
119 重鏈CDR3 ＜CEA＞ MFE23 GTPTGPYYFDY
120 輕鏈CDR1 ＜CEA＞ MFE23 SASSSVSYMH
121 輕鏈CDR1 ＜CEA＞ MFE23-L24、L25 RASSSVSYMH
122 輕鏈CDR1 ＜CEA＞ MFE23-L26 RASQSISSYM
123 輕鏈CDR2 ＜CEA＞ MFE23 STSNLAS
124 輕鏈CDR2 ＜CEA＞ MFE23-L26 YTSNLAS
125 輕鏈CDR2 ＜CEA＞ MFE23-L29 STSSLQS
126 輕鏈CDR3 ＜CEA＞ MFE23 QQRSSYPLT
127 重鏈可變域＜CEA＞ MFE23 QVKLQQSGAELVRSGTSVKLSCTASGFNIKDSYMHWLRQGPEQGLEWIGWIDPENGDTEYAPKFQGKATFTTDTSSNTAYLQLSSLTSEDTAVYYCNEGTPTGPYYFDYWGQGTTVTVSS
128 輕鏈可變域＜CEA＞ MFE23 ENVLTQSPAIMSASPGEKVTITCSASSSVSYMHWFQQKPGTSPKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQRSSYPLTFGAGTKLELK
129 MFE-H24 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDSYMHWVRQAPGQGLEWMGWIDPENGDTEYAPKFQGRVTMTTDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCNEGTPTGPYYFDYWGQGTLVTVSS
130 MFE-H25 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFKDSYMHWVRQAPGQGLEWMGWIDPENGDTEYAPKFQGRVTMTTDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCNEGTPTGPYYFDYWGQGTLVTVSS
131 MFE-H26 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDSYMHWVRQAPGQGLEWMGWIDPENGGTNYAQKFQGRVTMTTDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCNEGTPTGPYYFDYWGQGTLVTVSS
132 MFE-H27 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDSYMHWVRQAPGQGLEWMGWIDPENGDTEYAPKFQGRVTMTTDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARGTPTGPYYFDYWGQGTLVTVSS
133 MFE-H28 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDSYMHWVRQAPGQGLEWMGWIDPENGDTEYAPKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCNEGTPTGPYYFDYWGQGTLVTVSS
134 MFE-H29 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFNIKDSYMHWVRQAPGQGLEWMGWIDPENGDTEYAPKFQGRVTITTDESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCNEGTPTGPYYFDYWGQGTLVTVSS
135 MFE-L24 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSSVSYMHWYQQKPGKAPKLLIYSTSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQRSSYPLTFGGGTKLEIK
136 MFE-L25 EIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSSVSYMHWYQQKPGKAPKLLIYSTSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQRSSYPLTFGGGTKLEIK
137 MFE-L26 EIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYMHWYQQKPGKAPKLLIYSTSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQRSSYPLTFGGGTKLEIK
138 MFE-L27 EIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSSVPYMHWYQQKPGKAPKLLIYSTSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSVQPEDFATYYCQQRSSYPLTFGGGTKLEIK
139 MFE-L28 EIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSSVPYMHWLQQKPGKAPKLLIYSTSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSVQPEDFATYYCQQRSSYPLTFGGGTKLEIK
140 MFE-L29 EIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSSVPYMHWLQQKPGKAPKLLIYSTSSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSVQPEDFATYYCQQRSSYPLTFGGGTKLEIK
141 CEA之A2域 PKPFITSNNSNPVEDEDAVALTCEPEIQNTTYLWWVNNQSLPVSPRLQLSNDNRTLTLLSVTRNDVGP YECGIQNKLSVDHSDPVILN
142 CEA之A1域 PKPSISSNNSKPVEDKDAVAFTCEPETQDATYLWWVNNQSLPVSPRLQLSNGNRTLTLFNVTRNDTAS YKCETQNPVSARRSDSVILN
143 VH DOTAM QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLSTYSMSWIRQPPGKALEWLGFIGSRGDTYYASWAKGRLTISKDTSKSQVVLTMTNMDPVDTATYYCARERDPYGGGAYPPHLWGRGTLVTVSS
144 VL DOTAM AIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQSSHSVYSDNDLAWYQQKPGKAPKLLIYQASKLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLGGYDDESDTYGFGGGTKVEIK
145 D1AG8023 HC臼Dotam-VL    AIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQSSHSVYSDNDLAWYQQKPGKAPKLLIYQASKLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLGGYDDESDTYGFGGGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGSGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
146 D1AG8022 HC臼Dotam-VH QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLSTYSMSWIRQPPGKALEWLGFIGSRGDTYYASWAKGRLTISKDTSKSQVVLTMTNMDPVDTATYYCARERDPYGGGAYPPHLWGRGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGSGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
147 D1AE3669 (HC杵＜CEA＞ CH1A1A Dotam-VH-AST) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWDFAYYVEAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLSTYSMSWIRQPPGKALEWLGFIGSRGDTYYASWAKGRLTISKDTSKSQVVLTMTNMDPVDTATYYCARERDPYGGGAYPPHLWGRGTLVTVSSAST 
148 CDR-H1 GFSLTDYGVH
149 CDR-H1 GFTFTDYYMN
150 連接子 GGGGSGGGGSGGGGSGGSGG
151 連接子 GGGGSGGGGSGGGGSGGSGGG
152 連接子 GGGGSGGGGSGGGGSGGSGGS
IV. 實例 以下為本發明之方法及組合物之實例。應理解，在上文所提供之一般描述之情況下，可實踐各種其他實施例。
縮寫詞彙表 ADA        抗藥物抗體 AST         丙胺酸、絲胺酸、蘇胺酸 BsAb       雙特異性抗體 CA           清除劑 CEA         癌胚抗原 DOTAM   1,4,7,10-肆(胺甲醯基甲基)-1,4,7,10-四氮雜環十二烷 ID           注射劑量 ELISA      酶聯結免疫吸附分析 FAP         纖維母細胞活化蛋白 GPRC5D  G蛋白偶合受體家族C第5群成員D IV           靜脈內 MW         分子量 PBS         磷酸鹽緩衝鹽水 p.i.          注射後 PK           藥物動力學 PRIT        預靶向放射免疫療法 RIT          放射免疫療法 RT           室溫 SC           皮下 SCID       嚴重合併性免疫缺失病 SD           標準差 SOPF       不含特異性及機會性病原體 SPLIT      SeParated v域鍵聯技術 TA           目標抗原 TGI         腫瘤生長抑制 TR           腫瘤消退
實例1：生成CEA-分裂-DOTAM VH/VL抗體 使用具有用於目標抗原之結合位點及放射性標記化合物之結合位點之雙特異性抗體之PRIT (預靶向放射免疫療法)方法通常在投與抗體與放射性配位體之間使用清除劑(CA)，以確保有效靶向及高腫瘤與正常組織吸收劑量比(參見圖3)。在一種該方法之實例中，允許所注射BsAb足夠時間，一般4-10天滲透至腫瘤中，其後使用Pb-DOTAM-聚葡萄糖-500 CA中和循環BsAb。CA在不滲透至腫瘤中之情況下阻斷 212Pb-DOTAM結合至未經靶向BsAb，此舉將阻斷預靶向位點。此預靶向方案允許隨後投與之放射性標記螯合物 212Pb-DOTAM之有效腫瘤積聚。
然而，在涉及清除劑之方法中，CA之使用將另一步驟引入低效方法中。此外，重要之處可在於謹慎選擇作為複雜因素之CA投與之時序及用量。
為解決清除劑使用相關問題，本發明人提出分裂DOTAM VL域及VH域以使得在獨立抗體上找到其之策略。
下文進一步論述例示性分裂DOTAM VH/VL抗體之生成。
生成用於抗體重鏈或輕鏈之重組表現之質體  藉由短暫轉染人類胚腎細胞(HEK 293)表現所需蛋白質。對於所需基因/蛋白質(例如全長抗體重鏈、全長抗體輕鏈或含有額外域(例如其C端處之免疫球蛋白重鏈或輕鏈可變域)之全長抗體重鏈)之表現，使用包含以下功能元素之轉錄單元： -  包括內含子A之來自人類巨細胞病毒(P-CMV)之即刻早期強化子及啟動子， -  人類重鏈免疫球蛋白5'-非轉譯區(5'UTR)， -  鼠免疫球蛋白重鏈信號序列(SS)， -  待表現之基因/蛋白質，以及 -  牛生長激素聚腺苷酸化序列(BGH pA)。
除包括待表現之所需基因之表現單元/卡匣之外，基礎/標準哺乳動物表現質體亦含有 -   允許在大腸桿菌中複製此質體之來自載體pUC18之複製起點，以及 -   在大腸桿菌中賦予安比西林抗性之β-內醯胺酶基因。
a) 用於抗體重鏈之表現質體藉由將編碼各自藉由G4Sx4連接子分離之各別序列元素(V重或V輕)之DNA片段融合至人類IgG分子之CH3域之C端來裝配抗體重鏈(VH-CH1-鉸鏈-CH2-CH3-連接子-VH或VH-CH1-鉸鏈-CH2-CH3-連接子-VL)編碼基因，該等基因包括包含完整且功能抗體重鏈、接著為額外抗體V重域或V輕域之C端融合基因。使用杵-臼技術表現在兩個CH3域之C端處分別攜帶一個VH域及一個VL域之重組抗體分子。
除具有C端VH域或VL域表現卡匣之抗體重鏈片段之外，用於在HEK293細胞中短暫表現具有C端VH域或VL域之抗體重鏈之表現質體亦包含允許在大腸桿菌中複製此質體之來自載體pUC18之複製起點及在大腸桿菌中賦予安比西林抗性之β-內醯胺酶基因。具有C端VH域或VL域融合基因之抗體重鏈片段之轉錄單元包含以下功能元素： - 包括內含子A之來自人類巨細胞病毒(P-CMV)之即刻早期強化子及啟動子， -  人類重鏈免疫球蛋白5'-非轉譯區(5'UTR)， -  鼠免疫球蛋白重鏈信號序列， -  抗體重鏈(VH-CH1-鉸鏈-CH2-CH3-連接子-VH或VH-CH1-鉸鏈-CH2-CH3-連接子-VL)編碼核酸，以及 -  牛生長激素聚腺苷酸化序列(BGH pA)。
b) 用於抗體輕鏈之表現質體藉由融合編碼各別序列元素之DNA片段來裝配包含完整且功能抗體輕鏈之抗體輕鏈編碼基因。
除抗體輕鏈片段之外，用於短暫表現抗體輕鏈之表現質體亦包含允許在大腸桿菌中複製此質體之來自載體pUC18之複製起點及在大腸桿菌中賦予安比西林抗性之β-內醯胺酶基因。抗體輕鏈片段之轉錄單元包含以下功能元素： - 包括內含子A之來自人類巨細胞病毒(P-CMV)之即刻早期強化子及啟動子， -  人類重鏈免疫球蛋白5'-非轉譯區(5'UTR)， -  鼠免疫球蛋白重鏈信號序列， -  抗體輕鏈(VL-CL)編碼核酸，以及 -  牛生長激素聚腺苷酸化序列(BGH pA)。
抗體分子之短暫表現  在於F17培養基(Invitrogen公司)中培養之經短暫轉染之HEK293細胞(人類胚腎細胞株293源性)中生成抗體分子。對於轉染，使用「293-Free」轉染劑(Novagen)。如上文所描述之各別抗體重鏈及輕鏈分子係由個別表現質體表現。如製造商說明中所規定執行轉染。在轉染之後三至七(3-7)天，收取含有免疫球蛋白之細胞培養上清液。將上清液儲存於低溫(例如-80℃)下直至純化為止。
關於人類免疫球蛋白在例如HEK293細胞中之重組表現之總體資訊提供於Meissner, P.等人, Biotechnol. Bioeng. 75 (2001) 197-203中。
藉由MabSelect Sure (親和力層析法)且接著為Superdex 200 (粒徑排阻層析法)來純化PRIT半抗體(分裂抗體)。
例示性抗體之序列概述如下。
抗體名稱 第一重鏈 第二重鏈 輕鏈
P1AD8592 SEQ ID NO: 30 SEQ ID NO: 33 SEQ ID NO: 34
P1AD8749 SEQ ID NO: 28 SEQ ID NO: 32 SEQ ID NO: 34
P1AE4956 SEQ ID NO: 51 SEQ ID NO: 52 SEQ ID NO: 54
P1AE4957 SEQ ID NO 55 SEQ ID NO 56 SEQ ID NO: 58
對於具有DOTAM-VL-P1AD8592之PRIT分裂抗體，基於分析性SEC及CE-SDS產生5 mg濃度為1.372 mg/mL且純度為＞ 96%之該PRIT分裂抗體。對於具有DOTAM-VH-P1AD8749之PRIT分裂抗體，基於分析性SEC及CE-SDS產生14 mg濃度為2.03 mg/mL且純度為＞91%之該PRIT分裂抗體。
亦生成抗體P1AE4956及P1AE4957。對於具有DOTAM-VL-P1AE4957之PRIT分裂抗體，基於分析性SEC及CE-SDS產生19 mg濃度為2.6 mg/mL且純度為＞ 81.6%之該PRIT分裂抗體。對於具有DOTAM-VH-P1AE4956之PRIT分裂抗體，基於分析性SEC及CE-SDS產生6.9 mg濃度為1.5 mg/mL且純度為＞ 90%之該PRIT分裂抗體。使用ESI-MS以確認PRIT半抗體之一致性。
實例2：分裂抗體功能之FACS分析 為評估分裂抗體或半抗體之功能，在37℃下使用阿庫酶(accutase)自培養容器剝離MKN-45細胞10分鐘。隨後，將細胞在PBS中洗滌兩次，且接種至96孔v形底盤中以達到4 × 10 6個細胞/孔之最終密度。
將半抗體P1AD8749及P1AD8592以及人類ISO對照1:1混合，以如圖5中所指示之濃度添加至細胞中。隨後，將細胞在冰上培育1 h且在PBS中洗滌兩次。使細胞集結粒再懸浮且添加40 µl/孔之偵測試劑，亦即含＜人類IgG(H+L)＞FITC (10 µg/ml)或Pb_Dotam_FITC 1:100 =＞ (10 µg/ml)之PBS / 5% FCS。在於冰上培育60 min之後，將細胞在PBS中洗滌兩次且再懸浮於200 µl PBS / 5% FCS中以使用FACS canto量測FITC螢光。
為評估半抗體與CEA在MKN-45細胞上之結合能力，使用抗體，使用人類IgG特異性二級抗體對該等半抗體進行偵測(圖5)。如所期望，未在此等細胞上觀測到大量人類ISO對照結合。當調節至相同IgG濃度時，兩個半抗體以及兩者組合顯示與MKN-45細胞之劑量依賴性結合，其中如所期望在極高濃度下具有明顯鉤狀效應(hook effect)。此實驗證實，CEA結合在半抗體中起作用。
為評估半抗體與DOTAM之結合能力，在存在人類ISO對照或其各別分裂抗體搭配物之情況下以1:1比將該等半抗體結合至細胞。在其結合至MKN-45細胞之後，洗滌細胞以移除未經結合抗體。隨後，添加Pb-DOTAM-FITC (螢光標記之Pb-DOTAM)以偵測DOTAM結合勝任細胞結合之抗體(圖6)。如所期望，當分裂抗體搭配物中之一者與人類ISO對照組合時未在此等細胞上觀測到大量FITC。僅呈1:1比之兩個半抗體之組合顯示劑量依賴性FITC信號。此實驗顯示，當兩個半抗體在一個細胞上合於一起時，DOTAM結合位點可以發揮作用。
實例3：活體內研究  實例3a：材料及方法-概要 全部實驗方案均由地方當局(Comité Régional d'Ethique de l'Expérimentation Animale du Limousin [CREEAL], Laboratoire Départemental d'Analyses et de Recherches de la Haute-Vienne)審查及批准。根據倫理準則，將雌性嚴重合併性免疫缺失病(SCID)小鼠(Charles River)維持在具有每日光/暗(12 h/12 h)循環之不含特異性及機會性病原體(SOPF)條件下。在到達之後前5天期間不執行操縱以使動物習慣新環境。每日控制動物之臨床症狀且偵測不良事件。
藉由皮下(SC)注射在與Corning® Matrigel®基底膜基質(生長因子減少；目錄號354230) 1:1混合之細胞培養基中之表現CEA之腫瘤細胞來建立實體異種移植物。腫瘤體積係經由每週3次手動測徑規量測來估計，根據下式來計算： 體積 = 0.5× 長度 × 寬度 2 。視腫瘤生長速率而定需要時進行額外腫瘤量測。
若小鼠由於腫瘤負荷、注射副作用或其他原因而顯示難以消除之痛苦或疼痛徵象，則在排定的終點之前對其進行安樂死。疼痛、痛苦或不適之指示包括但不限於急性體重(BW)損失、毛皮不整潔(scruffy fur)、下痢、駝背姿勢及嗜睡。每週3次量測經治療動物之BW，其中視健康狀況而定需要時進行額外量測。在放射性注射之後當天開始向全部小鼠提供濕食，持續7天或直至全部個體自任何急性BW損失中充分恢復為止。對BW損失超過其初始BW 20%或腫瘤體積達到3000 mm 3之小鼠立即施以安樂死。出於倫理原因考慮施以安樂死之其他因素為腫瘤狀態(例如壞死區域、血液/液體滲出、自殘徵象)及動物一般外觀(例如毛皮、姿勢、動作)。
為將放射性尿液/糞便之再攝取減至最少，在投與 212Pb-DOTAM之後將全部功效研究小鼠置於具有格子地板之籠中4小時，之後轉移至具有標準墊料之新籠。隨後，在注射(p.i.)後24小時更換全部籠。在放射性注射之後24小時內不對出於生物分佈目的而處死之小鼠執行此程序。
如由方案所指定，在進行安樂死時，對經麻醉小鼠使用眼眶後採血自靜脈竇收集血液，之後經由頸椎脫位術終止，接著進行額外組織收取以進行放射性量測及/或組織學分析。記載意外或異常狀況。將經收集以用於福馬林固定之組織立即置於10%中性緩衝福馬林(4℃)中，且隨後在5天之後轉移至磷酸鹽緩衝鹽水(PBS；4℃)。將出於生物分佈之目的而收集之器官及組織稱重且使用2470 WIZARD 2自動γ計數器(PerkinElmer)量測放射性，且隨後計算每公克組織之注射劑量百分比(ID/g %)，包括針對衰變及背景進行之校正。
使用GraphPad Prism 7 (GraphPad Software公司)及JMP 12 (SAS Institute公司)執行統計分析。基於平均腫瘤體積使用下式執行腫瘤生長抑制(TGI)曲線分析：
Figure 02_image011
其中 d指示研究日且 0指示基線值。媒劑選為參考組。腫瘤消退(TR)係根據以下計算：
Figure 02_image013
其中正值指示腫瘤消退，且低於-1之值指示超出雙倍基線值之生長。
測試化合物  用於所描述研究中之化合物分別針對雙特異性抗體、清除劑及放射性標記螯合物呈現於下表中。
CEA-DOTAM (RO7198427，PRIT-0213)為靶向CEA之T84.66抗原決定基之完全人類化BsAb (亦參見WO2019/201959)。PRIT-0213由以下構成： i)如下文所示之第一重鏈； ii)如下文所示之第二重鏈；及 iii)如下文所示之兩個抗體輕鏈。
   描述 序列
 PRIT-00213之輕鏈  1  eivltqspat lslspgerat lscragesvd ifgvgflhwy qqkpgqaprl  51  liyrasnrat giparfsgsg sgtdftltis slepedfavy ycqqtnedpy 101  tfgqgtklei krtvaapsvf ifppsdeqlk sgtasvvcll nnfypreakv 151  qwkvdnalqs gnsqesvteq dskdstysls stltlskady ekhkvyacev 201  thqglsspvt ksfnrgec (SEQ ID NO: 89)
 PRIT-0213之重鏈1   1  qvqlvqsgae vkkpgssvkv sckasgfnik dtymhwvrqa pgqglewmgr  51  idpangnsky vpkfqgrvti tadtststay melsslrsed tavyycapfg 101  yyvsdyamay wgqgtlvtvs sastkgpsvf plapssksts ggtaalgclv 151  kdyfpepvtv swnsgaltsg vhtfpavlqs sglyslssvv tvpssslgtq 201  tyicnvnhkp sntkvdkkve pkscdkthtc ppcpapeaag gpsvflfppk 251  pkdtlmisrt pevtcvvvdv shedpevkfn wyvdgvevhn aktkpreeqy 301  nstyrvvsvl tvlhqdwlng keykckvsnk algapiekti skakgqprep 351  qvytlppcrd eltknqvslw clvkgfypsd iavewesngq pennykttpp 401  vldsdgsffl yskltvdksr wqqgnvfscs vmhealhnhy tqkslslspg 451  ggggsggggs ggggsggggs vtlkesgpvl vkptetltlt ctvsgfslst 501  ysmswirqpp gkalewlgfi gsrgdtyyas wakgrltisk dtsksqvvlt 551  mtnmdpvdta tyycarerdp ygggaypphl wgrgtlvtvs s (SEQ ID NO: 153)
PRIT-0213之重鏈2   1  qvqlvqsgae vkkpgssvkv sckasgfnik dtymhwvrqa pgqglewmgr  51  idpangnsky vpkfqgrvti tadtststay melsslrsed tavyycapfg 101  yyvsdyamay wgqgtlvtvs sastkgpsvf plapssksts ggtaalgclv 151  kdyfpepvtv swnsgaltsg vhtfpavlqs sglyslssvv tvpssslgtq 201  tyicnvnhkp sntkvdkkve pkscdkthtc ppcpapeaag gpsvflfppk 251  pkdtlmisrt pevtcvvvdv shedpevkfn wyvdgvevhn aktkpreeqy 301  nstyrvvsvl tvlhqdwlng keykckvsnk algapiekti skakgqprep 351  qvctlppsrd eltknqvsls cavkgfypsd iavewesngq pennykttpp 401  vldsdgsffl vskltvdksr wqqgnvfscs vmhealhnhy tqkslslspg 451  ggggsggggs ggggsggggs iqmtqspssl sasvgdrvti tcqsshsvys 501  dndlawyqqk pgkapklliy qasklasgvp srfsgsgsgt dftltisslq 551  pedfatyycl ggyddesdty gfgggtkvei k (SEQ ID NO: 84)
DIG-DOTAM (RO7204012)為用作陰性對照之非CEA結合BsAb。
P1AD8749、P1AD8592、P1AE4956及P1AE4957為靶向CEA之CH1A1A或A5B7抗原決定基之CEA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體。其序列描述如上。將全部抗體構築體儲存於-80℃下直至注射之日為止，在注射之日將其解凍且在標準媒劑緩衝液(20 mM組胺酸、140 mM NaCl；pH 6.0)或0.9% NaCl中稀釋至其最終各別濃度以用於靜脈內(IV)或腹膜內(IP)投與。
將Pb-DOTAM-聚葡萄糖-500 CA (RO7201869)儲存於-20℃下直至注射之日為止，在注射之日將其解凍且在PBS中稀釋以用於IV或IP投與。
用於放射性標記之DOTAM螯合物係由Macrocyclics提供且在藉由Orano Med  (Razès, France)執行放射性標記之前維持在-20℃下。 212Pb-DOTAM (RO7205834)係藉由用DOTAM溶離由釷生成劑生成，且隨後在標記之後用Ca淬滅。將 212Pb-DOTAM溶液用0.9% NaCl稀釋以獲得IV注射所需之 212Pb活性濃度。
媒劑對照組中之小鼠接受多次代替BsAb、CA及 212Pb-DOTAM之媒劑緩衝液注射。 雙特異性抗體
化合物 目標 方案
CEA-DOTAM (RO7198427, PRIT-0213 ) T84.66 144、158、160
DIG-DOTAM (RO7204012) 地穀新配質 160
CEA-分裂-DOTAM-VH P1AD8749 CH1A1A 144、158
CEA-分裂-DOTAM-VH-AST P1AF0171 CH1A1A 175、185、189
CEA-分裂-DOTAM-VL P1AD8592 CH1A1A 144、158、175、185、189
CEA-分裂-DOTAM-VH P1AE4956 A5B7 158
CEA-分裂-DOTAM-VL P1AE4957 A5B7 158
CEA-分裂-DOTAM-VH-AST P1AF0298 T84.66 185、189
CEA-分裂-DOTAM-VL P1AF0709 T84.66 185、189
清除劑
化合物 方案
Ca-DOTAM-聚葡萄糖-500 (RO7201869) 144、158、160
放射性標記螯合物
化合物 淬滅 方案
212Pb-DOTAM (RO7205834) Ca 144、158、160、175、185、189
212Pb-DOTAM-CEA-DOTAM Ca 160
腫瘤模型  用於小鼠接種之所用腫瘤細胞株及注射量描述於下表中。BxPC3為天然表現CEA之人類原代胰臟腺癌細胞株。在增濃有10%胎牛血清(GE Healthcare Hyclone SH30088.03)之RPMI 1640培養基、GlutaMAX™補充劑、HEPES (Gibco，參考編號72400-021)中培養細胞。在研究第0天在各SCID小鼠中藉由將在與Corning® Matrigel®基底膜基質(生長因子減少；目錄號354230) 1:1混合之RPMI培養基中之細胞皮下注射至右側腹中來建立實體異種移植物。 腫瘤細胞株
細胞株 細胞/ 隻小鼠 注射體積 方案 供應商
BxPC3 5×10 6 100 µL 144、158、160、175、185、189 ECACC*
*歐洲認證細胞培養物保藏中心(Salisbury, UK)
實例3b：方案144 方案144之目標在於在使用CEA-分裂-DOTAM-VH/VL BsAb進行2步PRIT之後提供攜有SC BxPC3腫瘤之SCID小鼠中預靶向 212Pb-DOTAM之PK及活體內分佈資料。
藉由分開或一起注射CEA-分裂-DOTAM-VH及CEA-分裂-DOTAM-VL (P1AD8749及P1AD8592)，7天後接著注射 212Pb-DOTAM來執行二步PRIT。在放射性注射之後6小時處死小鼠，且收取血液及器官以進行放射性量測。將2步流程與3步PRIT作比較，該3步PRIT係使用標準CEA-DOTAM雙特異性抗體，7天後接著使用Ca-DOTAM-聚葡萄糖-500 CA且在CA之後24小時使用 212Pb-DOTAM。
藉由在抗體注射之後1小時至7天重複血液取樣來收集CEA-分裂-DOTAM-VH/VL清除之PK資料，且隨後藉由ELISA進行分析。
研究概述示於圖7中。圖7a顯示2步PRIT方案之概述，該方案包括在攜有SC BxPC3腫瘤之SCID小鼠中CEA-分裂-DOTAM-VH/VL PK之血液取樣。圖7b顯示3步PRIT方案之概述，該方案係在攜有SC BxPC3腫瘤之SCID小鼠中執行(h =小時，d =天)。
研究設計  方案144之時程及設計示於下表中。 方案 144 之 時程
研究日 日期 實驗程序
0 2018-05-02 製備BxPC3細胞且填充注射器
0 2018-05-02  SC注射BxPC3細胞
14 2018-05-16  IV注射CEA-DOTAM BsAb (D組)
15 2018-05-17  IV注射CEA-分裂-DOTAM-VH/VL BsAb (Aa、Ab、Ba、Bb、Ca、Cb組)
15 2018-05-17 眼眶後採血(1及4 h p.i.；分別為Aa、Ba、Ca及Ab、Bb、Cb組)
16 2018-05-18 眼眶後採血(24 h p.i.；Aa、Ba、Ca組)
18 2018-05-20 眼眶後採血(72 h p.i.；Ab、Bb、Cb組)
21 2018-05-23  IV注射CA (D組)
21 2018-05-23 溶離 212Pb-DOTAM且填充注射器
22 2018-05-24  IV注射 212Pb-DOTAM (Aa、Ba、Ca、D組)
22 2018-05-24 眼眶後採血(168 h p.i.)且安樂死(Ab、Bb、Cb組)
22 2018-05-24 安樂死及組織收取，包括眼眶後採血(6 h p.i.) + γ計數(AA、Ba、Ca、D組)
方案 144 中之 研究組
組 P1AD8749 (VH) CH1A1A(µg) P1AD8592 (VL) CH1A1A(µg) CEA-DOTAM BsAb(µg) PK(h p.i.) CA(µg) 212Pb (µCi) BD(h p.i.) n(小鼠)
Aa 100 0 0 1、24、168 0 10 6 4
Ab 100 0 0 4、72、168 0 0 — 4
Ba 0 100 0 1、24、168 0 10 6 4
Bb 0 100 0 4、72、168 0 0 — 4
Ca 100 100 0 1、24、168 0 10 6 4
Cb 100 100 0 4、72、168 0 0 — 4
D 0 0 100 — 25 10 6 4
在研究第0天在各SCID小鼠中藉由將含5×10 6個細胞(第26代)之RPMI/基質膠SC注射至右側腹中來建立實體異種移植物。在腫瘤細胞注射之後十四天，以116 mm 3之平均腫瘤體積將小鼠分選至實驗組中。在接種之後第22天注射 212Pb-DOTAM；在第21天平均腫瘤體積為140 mm 3。
在CEA-分裂-DOTAM-VH/VL注射之後1 h (右眼)、24 h (左眼)及168 h (右眼，終止時)經由麻醉眼眶後採血來收集來自Aa、Ba及Ca組中之小鼠之血液。類似地，在CEA-分裂-DOTAM-VH/VL注射之後4 h (右眼)、72 h (左眼)及168 h (右眼，終止時)自Ab、Bb及Cb組中之小鼠採集樣品。
在注射 212Pb-DOTAM之後6小時，將Aa、Ba、Ca及D組中之小鼠處死且進行屍體剖檢，且收取以下器官及組織以量測放射性含量：血液、皮膚、膀胱、胃、小腸、結腸、脾、胰臟、腎、肝、肺、心臟、骰骨、肌肉、腦、尾、耳及腫瘤。
結果  注射之後6小時全部所收集組織中之平均 212Pb積聚及清除展現於圖8中。單獨CEA-分裂-DOTAM-VH或CEA-分裂-DOTAM-VL預靶向不引起腫瘤中之放射性積聚。與標準3步PRIT方案之87 ± 15% ID/g相比，組合之兩個互補抗體引起65 ± 12% ID/g之2步PRIT之後之腫瘤吸收。利用杜凱氏多重比較檢定(Tukey's multiple comparisons test)之雙向變異數分析(ANOVA)顯示，兩個PRIT治療之間的腫瘤吸收差異顯著，如於膀胱中之差異一般(對於2步及3步PRIT，分別為1 ± 2% ID/g 及38 ± 17% ID/g)；使用此測試之組織積聚中無統計學上顯著之其他差異(p = 0.05)。
如藉由酶聯結免疫吸附分析(ELISA)所分析之IV注射之CEA-分裂-DOTAM-VH/VL構築體的清除示於圖9中。
不良事件及毒性  不存在與此研究相關之不良事件或毒性。
結論  研究結果證實使用互補CEA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體之CA非依賴性2步預靶向之概念驗證。使用2步PRIT及標準3步PRIT達成 212Pb-DOTAM之高且特異性腫瘤吸收，且在使用互補CEA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體之正常組織中具有極少放射性積聚。
實例3c：方案158 方案158之目標在於評估由用於清除劑非依賴性2步CEA-PRIT之CEA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體之雙互補位(CH1A1A及A5B7)對預靶向的小鼠中 212Pb-DOTAM與皮下BxPC3腫瘤的締合。將腫瘤吸收與標準3步CEA-PRIT之腫瘤吸收作比較。
使攜有皮下BxPC3腫瘤之小鼠注射 •  CEA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體，7天後接著為放射性標記 212Pb-DOTAM (2步PRIT)，或 •  CEA-DOTAM BsAb，7天後接著為CA，且最後在24小時後為放射性標記 212Pb-DOTAM (3步PRIT)。
在放射性注射之後6小時評估 212Pb-DOTAM之活體內分佈。研究概述示於圖10中。
研究設計  方案158之時程及設計示於下表中。 方案 158 之時程
研究日 日期 實驗程序
0 2018-11-26 製備BxPC3細胞且填充注射器
0 2018-11-26  SC注射BxPC3細胞
15 2018-12-11 IV注射CEA-DOTAM BsAb (C組)
16 2018-12-12 IV注射CEA-分裂-DOTAM-VH/VL BsAb (A、B組)
22 2018-12-18 IV注射CA (C組)
22 2018-12-18 溶離 212Pb-DOTAM且填充注射器
23 2018-12-19 IV注射 212Pb-DOTAM (全部)
23 2018-12-19 安樂死及組織收取，包括眼眶後採血(6 h p.i.) + γ計數(全部)
方案 158 中之研究組
組 P1AD8749 (VH) CH1A1A(µg) P1AD8592 (VL) CH1A1A(µg) P1AE4956 (VH) A5B7(µg) P1AE4957 (VL) A5B7(µg) CEA-DOTAM BsAb(µg) CA(µg) 212 Pb(µCi) n(小鼠)
A 154* 0 0 100 0 0 10 4
B 0 100 167** 0 0 0 10 4
C 0 0 0 0 100 25 10 4
*P1AD8749劑量調節至154 µg以補償35%臼/臼雜質；**P1AD8592劑量調節至167 µg以補償40%臼/臼雜質。
在研究第0天在各SCID小鼠中藉由將含5×10 6個細胞(第27代)之RPMI/基質膠SC注射至右側腹中來建立實體異種移植物。在腫瘤細胞注射之後十四天，以177 mm 3之平均腫瘤體積將小鼠分選至實驗組中。在接種之後第20天注射 212Pb-DOTAM；在第21天平均腫瘤體積為243 mm 3。
在注射 212Pb-DOTAM之後6小時，將全部組中之小鼠處死且進行屍體剖檢，且收取以下器官及組織以量測放射性含量：血液、皮膚、膀胱、胃、小腸、結腸、脾、胰臟、腎、肝、肺、心臟、骰骨、肌肉、腦、尾及腫瘤。
結果  注射之後6小時全部所收集組織中之平均 212Pb分佈示於圖11中。利用杜凱氏多重比較檢定之雙向ANOVA顯示，三種治療之間正常組織中無顯著 212Pb吸收差異，膀胱除外，其中兩個雙互補位CEA-分裂-DOTAM-VH/VL對產生低於標準3步PRIT之積聚。對於全部三種治療，腎吸收為3-4% ID/g。與對於3步PRIT之67% ID/g相比，雙互補位組合引起約56% ID/g之腫瘤積聚；2步與3步PRIT之間的差異為統計學上顯著的(p ＜ 0.0001)。
不良事件及毒性  不存在與此研究相關之不良事件或毒性。
結論  此研究評估與標準3步PRIT相比由用於CA非依賴性2步CEA-PRIT之CEA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體之雙互補位對預靶向的小鼠中 212Pb-DOTAM與SC BxPC3腫瘤的締合。對於2步及3步PRIT，注射之後6小時之 212Pb分佈為相當的，其中腫瘤中之積聚高且健康組織中之放射性極少。此種情況證實使用CEA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體之2步CEA-PRIT之表現CEA之腫瘤的雙互補位預靶向概念驗證。
實例3d：方案160 方案160之目標在於比較攜有SC BxPC3腫瘤之小鼠中使用互補CEA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體之CA非依賴性2步CEA-PRIT之3個循環之後的治療功效與標準3步CEA-PRIT的治療功效。亦與使用在注射之前與 212Pb-DOTAM一起預培育之BsAb之1步CEA-RIT進行比較。
使攜有SC BxPC3腫瘤之小鼠注射 •  CEA-DOTAM BsAb，7天後接著為CA，且最後在24小時後為放射性標記 212Pb-DOTAM (3步PRIT)， •  CEA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體，7天後接著為放射性標記 212Pb-DOTAM (2步PRIT)，或 • 212Pb-DOTAM-CEA-DOTAM BsAb (經預培育；1步RIT)。
在20 µCi 212Pb-DOTAM之3個重複循環中投與療法，該等循環亦包括與非CEA結合對照抗體(DIG-DOTAM)及無治療(媒劑)進行比較。出於生物分佈目的處死專用小鼠以確認各治療循環時之 212Pb-DOTAM靶向及清除。就TGI及TR而言評估治療功效，且謹慎地監測小鼠達用於評估治療耐受性之研究持續時間。研究概述示於圖12中。
方案160之時程及設計示於下表中。 方案 160 之時程
研究日 日期 實驗程序
0 2019-01-29 製備BxPC3細胞且填充注射器
0 2019-01-29 SC注射BxPC3細胞
15 2019-02-13  IP注射BsAb或組胺酸緩衝液(A、B、C、F、G、H、I組)
16 2019-02-14  IP注射CEA-分裂-DOTAM-VH/VL或組胺酸緩衝液(D、J、K、L組)
22 2019-02-20 IP注射CA或PBS (A、B、C、F、G、H、I組)
23 2019-02-21 溶離 212Pb-DOTAM且填充注射器
23 2019-02-21  IV注射 212Pb-DOTAM-CEA-DOTAM或組胺酸緩衝液(E、M組)
23 2019-02-21 IV注射 212Pb-DOTAM或0.9% NaCl (B、C、D、F、G、H、I、J、K、L組)
24 2019-02-22 安樂死及組織收取(24 h p.i.) + γ計數(F、G、J、M組)
29 2019-02-27 IP注射PRIT BsAb或PBS (A、B、C、H、I組)
30 2019-02-28  IP注射CEA-分裂-DOTAM-VH/VL或組胺酸緩衝液(D、K、L組)
36 2019-03-06 IP注射CA或PBS (A、B、C、H、I組)
37 2019-03-07 溶離 212Pb-DOTAM且填充注射器
37 2019-03-07 IV注射 212Pb-DOTAM或0.9% NaCl (B、C、D、H、I、K、L組)
38 2019-03-08 安樂死及組織收取(24 h p.i.) + γ計數(H、K組)
43 2019-03-13 IP注射PRIT BsAb或PBS (A、B、C、I組)
44 2019-03-14  IP注射CEA-分裂-DOTAM-VH/VL或組胺酸緩衝液(D、L組)
50 2019-03-20 IP注射CA或PBS (A、B、C、I組)
51 2019-03-21 溶離 212Pb-DOTAM且填充注射器
51 2019-03-21 IV注射 212Pb-DOTAM或0.9% NaCl (B、C、D、I、L組)
52 2019-03-22 安樂死及組織收取(24 h p.i.) + γ計數(I、L組)
方案 160 中之 研究組
組 BsAb BsAb / 個循環(µg) CA / 個循環(µg) 212 Pb-DOTAM / 個循環(µCi) 循環(數目) n(小鼠)
A — 0 0 0 3 10
B DIG-DOTAM 100 25 20 3 10
C CEA-DOTAM 100 25 20 3 10
D CEA-分裂-DOTAM 154* + 100** 0 20 3 10
E 212Pb-DOTAM-CEA-DOTAM 100 0 20 1*** 10
F DIG-DOTAM 100 25 20 1 3
G CEA-DOTAM 100 25 20 1 3
H CEA-DOTAM 100 25 20 2 3
I CEA-DOTAM 100 25 20 3 3
J CEA-分裂-DOTAM 154* + 100** 0 20 1 3
K CEA-分裂-DOTAM 154* + 100** 0 20 2 3
L CEA-分裂-DOTAM 154* + 100** 0 20 3 3
M 212Pb-DOTAM-CEA-DOTAM 100 0 20 1 3
*P1AD8749：調節至154 µg以補償儲備溶液中之35%臼/臼雜質之劑量；**P1AD8592；***由於第一治療循環時之急劇輻射誘發毒性而自3個循環調節至1個循環。
在研究第0天在SCID小鼠中藉由將含5×10 6個細胞(第24代)之RPMI/基質膠SC注射至右側腹中來建立實體異種移植物。在腫瘤細胞注射之後十五天，以122 mm 3之平均腫瘤體積將小鼠分選至實驗組中。在接種之後第23天注射 212Pb-DOTAM；在第22天平均腫瘤體積為155 mm 3。
根據上表(方案160中之研究組)，將CEA-DOTAM及DIG-DOTAM抗體在媒劑緩衝液中稀釋至100 µg/200 µL之最終濃度以用於IP投與。將CEA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體一起混合至一種單一注射溶液中以用於IP投與，每200 µL含有100 µg各構築體。對於P1AD8749，將劑量調節至154 µg以補償儲備溶液中之35%臼/臼雜質(不攜有VH/VL之分子側)。根據圖12中之實驗排程，在BsAb注射之後7天IP投與CA-DOTAM-聚葡萄糖-500 CA (25 µg/200 µL PBS)，24小時後接著為 212Pb-DOTAM (RO7205834)。使經PRIT治療小鼠(2步及3步) IV注射100 µL經Ca淬滅之 212Pb-DOTAM溶液(於100 µL 0.9% NaCl中20 µCi)。
經1步RIT治療之小鼠僅接受一種注射：預結合 212Pb-DOTAM-CEA-DOTAM (於100 µL 0.9% NaCl中20 µCi/20 µg BsAb以用於IV注射)。藉由在37℃下將 212Pb-DOTAM與CEA-DOTAM BsAb一起培育10分鐘來製備經直接標記抗體。
在安樂死時自A-E組中之小鼠收取以下器官及組織：血清、肝、脾、腎、胰臟及腫瘤。在安樂死之前，對活小鼠進行麻醉以收集眼眶後血液。在5分鐘期間以10 000 rcf離心所收集血液樣品，且將所得血清溶離份分離、冷凍且儲存於-20℃下。緊接著將所切離組織置於10%中性緩衝福馬林(4℃)中且隨後在24小時之後轉移至1× PBS (4℃)。將經福馬林固定樣品運送至Roche Pharma Research and Early Development，Roche Innovation Center Basel以供進一步處理及分析。
在F、G、J及M組中之小鼠第一次且唯一一次注射 212Pb-DOTAM或 212Pb-DOTAM-BsAb之後24小時處死小鼠且進行屍體剖檢；在H及K組中之小鼠第二次注射 212Pb-DOTAM之後24小時處死小鼠且進行屍體剖檢；在I及L組中之小鼠第三次注射 212Pb-DOTAM之後24小時處死小鼠且進行屍體剖檢。在安樂死時在經麻醉小鼠上使用眼眶後採血來自靜脈竇收集血液，之後經由頸椎脫位術終止。出於生物分佈目的亦收取以下器官及組織：膀胱、脾、腎、肝、肺、肌肉、尾、皮膚及腫瘤。
結果  注射之後24小時全部所收集組織中之平均 212Pb積聚及清除係針對各療法及治療循環示於圖13中。陰性對照引起腫瘤中無吸收(0.4% ID/g)。利用杜凱氏多重比較檢定之雙向變異數分析(ANOVA)顯示，對於2步及3步PRIT，任何循環時之分佈非顯著地不同；然而，與陰性對照及1步RIT相比，全部循環時之差異為統計學上顯著的(p ＜ 0.05)。腫瘤吸收對於3步PRIT為25-45% ID/g且對於2步PRIT為25-30% ID/g，其中任一治療或循環之間無任何統計學上顯著之差異。對於1步RIT，一次且唯一一次治療循環時之腫瘤吸收為99%。對於兩個PRIT方案，正常組織中之吸收極低，但在1步RIT之後在全部器官及組織中顯著地較高，此係由於與小放射性標記DOTAM螯合物相比經預培育抗體之循環時間長得多。
平均腫瘤發展及個別腫瘤生長曲線分別示於圖14及圖15中。未經治療媒劑組及DIG-DOTAM組中之腫瘤穩定地生長，但在第三治療之後，後者中之倍增速率略微地較低。相比之下，在第一治療循環之後PRIT及RIT組中之腫瘤尺寸減小，且維持腫瘤對照直至接種之後約10週為止，在接種之後約10週時腫瘤尺寸開始增大。2步及3步PRIT治療產生幾乎一致之腫瘤對照。無腫瘤完全消退。
在研究第83天，亦即可基於平均值分析全部治療組之最後一天，與媒劑對照相比，對於使用CEA-DOTAM之PRIT(3步)及使用CEA-分裂-DOTAM-VH/VL之PRIT(2步)，TGI分別為91.7%及88.4%。對於1步RIT，對應數值為72.6%，而對於非特異性DIG-DOTAM對照，TGI為-59.7%。在同一天，基於平均值之TR對於3步CEA-DOTAM PRIT為-1.9，對於2步CEA-分裂-DOTAM-VH/VL PRIT為-2.9，對於1步RIT為-4.7，對於DIG-DOTAM PRIT為-28.8，且對於媒劑對照為-39.3。
由於下文所描述之不良事件，故存活分析視為統計學上非相關的。
不良事件及毒性  全部療法組中之BW發展示於圖16中。利用20 µCi 212Pb-DOTAM之2步及3步PRIT之多個循環具有良好耐受性，但急劇BW損失出現在接受1步RIT之小鼠中，其中在第一RIT循環之後(在 212Pb照射之後6-11天)由於20%或更多之BW下降而對E組中之8/10小鼠進行安樂死。不給予剩餘2隻RIT小鼠任何另外 212Pb-DOTAM-CEA-DOTAM注射，但連續地追蹤以用於腫瘤生長評估。
另外，出於倫理原因，由於腫瘤狀態衰弱，亦即腫瘤敞開或滲漏而處死多隻小鼠。在DIG-DOTAM組中，出於此原因對9/10小鼠進行安樂死，之後達到3000 mm 3之腫瘤體積；對於未經治療之媒劑對照，對應數目為5/10。在PRIT組及RIT組中問題不太明顯，其中出於此原因而分別在3步PRIT組、2步PRIT組及1步RIT組中對1/10、2/10及2/10小鼠進行安樂死。此種情況反映於圖15中之個別腫瘤生長曲線中。
最後，由於肛門下創傷退化，故對C組中之1隻小鼠進行安樂死。
全部不良事件均列於下表中。 方案 160 中之 不良事件
組 經處死小鼠(n/組) 研究日 終止原因
A：媒劑 5(10) 53、71、71、73、75 腫瘤狀態衰弱
B：DIG-DOTAM 9(10) 55、55、55、55、61、73、73、73、74 腫瘤狀態衰弱
C：CEA -DOTAM 1(10) 83 肛門下創傷
C：CEA -DOTAM 1(10) 85 腫瘤狀態衰弱
D：CEA-分裂-DOTAM 2(10) 83、83 腫瘤狀態衰弱
E： 212Pb-DOTAM-CEA-DOTAM 8(10) 29、29、30、31、31、32、32、34 BW損失≥  20%
E： 212Pb-DOTAM-CEA-DOTAM 2(10) 83、83 腫瘤狀態衰弱
在研究第23天(循環1)、第37天(循環2)及第51天(循環3)執行 212Pb照射。
結論  在使用3步流程(CEA-DOTAM BsAb、CA及 212Pb-DOTAM)與2步流程(CEA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體及 212Pb-DOTAM)之CEA-PRIT之間未看見差異；對於兩種治療，TGI為相當大的且幾乎一致的，且20 µCi之3個循環可在兩種情況下安全地投與。對比地，20 µCi在注射之前預結合至CEA-DOTAM之 212Pb-DOTAM (1步RIT)不為大部分經治療小鼠耐受。
因此，研究證實使用所研發之CEA-分裂-DOTAM-VH/VL構築體之CA非依賴性2步PRIT之耐受性及治療功效。
實例4：方案175 方案175之目標在於評估經增加之預靶向抗體注射量對後續腫瘤及健康組織中之 212Pb積聚的影響。比較兩個不同劑量之CEA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體：標準量(100 µg)及2.5倍高之劑量(250 µg)。此外，對CEA-分裂-DOTAM-VH構築體進行修飾以延伸其VH來避免抗藥物抗體(ADA)形成(該ADA係與先前所測試之CEA-分裂-DOTAM-VL構築體一起使用)。VH經延伸以包含來自抗體CH1域之前三個胺基酸：丙胺酸、絲胺酸及蘇胺酸(AST)，且此後構築體稱為CEA-分裂-DOTAM-VH-AST。
抗體P1AD8592已描述於上文實例4中。P1AF0171與P1AD8749相同，不同之處在於融合HC係藉由殘基AST延伸-因此，抗體P1AD0171由如上文所描述之輕鏈D1AA3384 (SEQ ID NO: 34)、如上文所描述之第一重鏈D1AC4022 (SEQ ID NO: 28)及如下文所示之第二重鏈D1AE3669組成： D1AE3669 (HC杵＜CEA＞ CH1A1A Dotam-VH-AST)
Figure 02_image015
使攜有SC BxPC3腫瘤之小鼠注射 ●   1×標準劑量之CEA-分裂-DOTAM-VH/VL BsAb，7天後接著為放射性標記 212Pb-DOTAM，或 ●   2.5×標準劑量之CEA-分裂-DOTAM-VH/VL BsAb，7天後接著為放射性標記 212Pb-DOTAM。
在放射性注射之後24小時評估 212Pb-DOTAM之活體內分佈。研究概述示於圖17中。
研究設計方案175之時程及設計顯示如下。 方案 175 之 時程
研究日 實驗程序
0 製備BxPC3細胞且填充注射器
0 SC注射BxPC3細胞
22 IP*注射CEA-分裂-DOTAM-VH/VL BsAb
29 溶離 212Pb-DOTAM且填充注射器
29 IV注射 212Pb-DOTAM
30 安樂死及組織收取(24 h p.i.) + γ計數
*由於低化合物濃度(200 µL/構築體=總計400 µL)而所需之IP注射 方案 175 中之 研究組
組 P1AF0171 (VH-AST)(µg) P1AD8592 (VL)(µg) 212 Pb(µCi) BD(h p.i.) n(小鼠)
A 143* 100 10 24 4
B 357* 250 10 24 4
*P1AF0171劑量調節至143及357 µg以補償~30%臼/臼雜質。
在研究第0天在各SCID小鼠中藉由將含5×10 6個細胞(第24代)之RPMI/基質膠SC注射至右側腹中來建立實體異種移植物。在腫瘤細胞注射之後二十一天，以310 mm 3之平均腫瘤體積將小鼠分選至實驗組中。在接種之後第29天注射 212Pb-DOTAM；在第30天平均腫瘤體積為462 mm 3。
在 212Pb-DOTAM注射之後24小時處死全部小鼠且進行屍體剖檢，且收取以下器官及組織以量測放射性含量：血液、皮膚、脾、胰臟、腎、肝、肌肉、尾及腫瘤。
結果  注射之後24小時全部所收集組織中之平均 212Pb分佈示於圖18中。在腫瘤或正常組織中不存在介於兩個劑量位準之間的顯著 212Pb吸收差異。對於兩個治療組，腫瘤積聚為30%-31% ID/g，且此時腎吸收為＜2% ID/g。一隻小鼠由於 212Pb-DOTAM注射問題而具有尾中之~1% ID/g，但其他所收集健康組織不顯示任何可觀 212Pb積聚。
不良事件及毒性  不存在與此研究相關之不良事件或毒性。
結論在此活體內模型中將預靶向CEA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體之劑量增加2.5倍並不改善隨後投與之 212Pb-DOTAM之腫瘤積聚。然而，其亦並不增加正常組織中之放射性積聚，突出顯示使用此2步預靶向方案達成之強特異性。最後，結果驗證經延伸-VH CEA-分裂-DOTAM-VH-AST構築體之功能。
實例5：方案185 方案185之目標在於評估靶向T84.66抗原決定基之CEA-分裂-DOTAM-VH/VL。本文提供P1AF0709及P1AF0298之序列。P1AF0709具有D1AE4688 (SEQ ID NO: 83)之第一重鏈及D1AA4920 (SEQ ID NO: 84)之第二重鏈。P1AF0298具有D1AE4687 (SEQ ID NO: 86)之第一重鏈及D1AE3668 (SEQ ID NO: 87)之第二重鏈。兩者均具有D1AA4120 (SEQ ID NO: 89)之輕鏈。
使攜有SC BxPC3腫瘤之小鼠注射標準劑量之CEA-分裂-DOTAM-VH/VL BsAb (100 µg/抗體)，6天後接著為放射性標記 212Pb-DOTAM。在放射性注射之後6小時評估 212Pb-DOTAM之活體內分佈。研究概述示於圖19中。
研究設計  方案185之時程及設計顯示如下。 方案185之時程
研究日 日期 實驗程序
0 2020-03-04 製備BxPC3細胞且填充注射器
0 2020-03-04 SC注射BxPC3細胞
22 2020-03-26 IV注射CEA-分裂-DOTAM-VH/VL BsAb
27 2020-03-31 溶離 212Pb-DOTAM且填充注射器
28 2020-04-01 IV注射 212Pb-DOTAM
28 2020-04-01 安樂死及組織收取(6 h p.i.) + γ計數
方案185中之研究組
組 P1AF0298 T84.66 (VH-AST)(µg) P1AF0709 T84.66 (VL)(µg) P1AF0171 CH1A1A (VH-AST)(µg) P1AD8592 CH1A1A (VL)(µg) 212 Pb(µCi) BD(h p.i.) n(小鼠)
A 100 100 0 0 10 6 5
B 0 0 143* 100 10 6 5
*P1AF0171劑量調節至143 µg以補償~30%臼/臼雜質。
在研究第0天在各SCID小鼠中藉由將含5×10 6個細胞(第27代)之RPMI/基質膠SC注射至右側腹中來建立實體異種移植物。在腫瘤細胞注射之後二十二天，以224 mm 3之平均腫瘤體積將小鼠分選至實驗組中。在接種之後第28天注射 212Pb-DOTAM，此時平均腫瘤體積達到385 mm 3。
在 212Pb-DOTAM注射之後6小時處死全部小鼠且進行屍體剖檢，且收取以下器官及組織以量測放射性含量：血液、皮膚、脾、胰臟、腎、肝、肌肉、尾及腫瘤。將所收集腫瘤分成兩塊：一塊針對放射性含量加以量測，且另一塊置於含有Tissue-Tek®最佳切割溫度(OCT)嵌式培養基之冰凍模具中，且置於乾冰上以快速凝固。將OCT中之冷凍樣品維持在-80℃下，之後進行冷凍切片、免疫螢光染色，且使用Zeiss Axio Scope.A1模組顯微鏡進行分析。
結果  注射之後6小時全部所收集組織中之平均 212Pb分佈示於圖20中。腫瘤積聚為40% ID/g (CH1A1A)或44% ID/g (T84.66)。唯一其他可觀放射性積聚係在腎中發現：對於兩個組，在6 h p.i.下3%-5% ID/g。
靶向T84.66 (A組)或CH1A1A (B組)之CEA-分裂-DOTAM-VH/VL對之瘤內分佈之實例示於圖21中。圖A及C顯示BxPC3腫瘤中之CEA表現高且均質，且圖B及D展示注射之後7天之抗體分佈為類似分佈。然而，與來自B組之腫瘤樣品相比，來自A組之樣品展現總體更強信號，提供T84.66為強於CH1A1A之結合子之證明。
不良事件及毒性  不存在與此研究相關之不良事件或毒性。
結論  結果驗證靶向CEA之T84.66抗原決定基之CEA-分裂-DOTAM-VH/VL構築體之功能。預靶向表現CEA之腫瘤中之所得212Pb積聚為高且特異性的，且靶向CH1A1A或T84.66抗原決定基之CEA-分裂-DOTAM-VH/VL對均質地分佈於表現CEA之腫瘤內部。
實例6：方案189  方案189之目標在於與靶向CH1A1A VH-AST/VL之陽性對照對相比評估靶向T84.66 VH-AST/CH1A1A VL及T84.66 VL/CH1A1 VH-AST之雙互補位CEA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體對。此雙互補位組合排除可溶CEA上全Pb-DOTAM結合子之形成，該可溶CEA僅表現兩個抗原決定基中之一者(例如T84.66)，由此減少其潛在副作用，諸如經提高循環放射性及相關輻射誘發毒性以及經降低之與腫瘤外目標競爭方面之功效。
使攜有SC BxPC3腫瘤之小鼠注射標準劑量之CEA-分裂-DOTAM-VH/VL BsAb (100 µg/抗體)，7天後接著為放射性標記 212Pb-DOTAM。在放射性注射之後6小時評估 212Pb-DOTAM之活體內分佈。研究概述示於圖22中。
研究設計方案189之時程及設計顯示如下。 方案189之時程
研究日 實驗程序
0 製備BxPC3細胞且填充注射器
0 SC注射BxPC3細胞
15 IV注射CEA-分裂-DOTAM-VH/VL BsAb
21 溶離 212Pb-DOTAM且填充注射器
22 IV注射 212Pb-DOTAM
22 安樂死及組織收取(6 h p.i.) + γ計數
方案189中之研究組
組 P1AF0298 T84.66 (VH-AST)(µg) P1AF0709 T84.66 (VL)(µg) P1AF0171 CH1A1A (VH-AST)(µg) P1AD8592 CH1A1A (VL)(µg) 212 Pb(µCi) BD(h p.i.) n(小鼠)
A 100 0 0 100 10 6 5
B 0 100 143* 0 10 6 5
C 0 0 143* 100 10 6 3
*P1AF0171劑量調節至143 µg以補償~30%臼/臼雜質。
在研究第0天在各SCID小鼠中藉由將含5×10 6個細胞(第31代)之RPMI/基質膠SC注射至右側腹中來建立實體異種移植物。在腫瘤細胞注射之後十四天，以343 mm 3之平均腫瘤體積將小鼠分選至實驗組中。在接種之後第22天注射 212Pb-DOTAM；在第21天平均腫瘤體積達到557 mm 3。
在 212Pb-DOTAM注射之後6小時處死全部小鼠且進行屍體剖檢，且收取以下器官及組織以量測放射性含量：血液、皮膚、脾、胰臟、腎、肝、肌肉、尾及腫瘤。
結果  注射之後6小時全部所收集組織中之平均 212Pb分佈示於圖23中。對於T84.66 VH-AST + CH1A1A VL及T84.66 VL + CH1A1A VH-AST，雙互補位變體之腫瘤積聚分別為71% ID/g及46% ID/g。陽性CH1A1A對照引起37% ID/g。利用杜凱氏多重比較檢定之雙向ANOVA顯示，就腫瘤吸收而言，全部三個組彼此顯著地不同(相對於兩個其他組，對於T84.66 VH-AST + CH1A1A VL為p＜0.0001；僅相對於CH1A1A，對於T84.66 VL + CH1A1A VH-AST為p = 0.0020)。其他器官不顯示各組間統計學上顯著之差異，但血液中略微高之滯留指示與兩個其他組相比之T84.66 VH-AST + CH1A1A VL組合：與＜1% ID/g相比之2% ID/g。腎吸收類似地略微高，但並非統計學上顯著地如此：與對於另兩個之3% ID/g相比，對於T84.66 VH-AST + CH1A1A之4.5% ID/g。
不良事件及毒性  不存在與此研究相關之不良事件或毒性。然而，在此研究中與標準生長速率相比，BxPC3腫瘤生長顯著地較快且伴以較大變化性。在屍體剖檢時，得出結論：大腫瘤(大部分)填充有液體，當在放射性量測之前將腫瘤切成兩半時將其清空；此液體有可能導致生長速率加速，但並不任何大程度地影響% IA/g，此係因為腫瘤係在敞開之後稱重且量測。
結論  結果使用所測試CEA-分裂-DOTAM-VH/VL構築體驗證CEA之T84.66及CH1A1A抗原決定基之雙互補位靶向之功能，且展現與陽性CH1A1A對照相比，此組合之意外高的功效。在T84.66 VH-AST + CH1A1A VL對之特定優勢之指示下， 212Pb在表現預靶向CEA之腫瘤中之所得積聚較高且具有特異性。
實例7  此等實例研究藉由如本文所述之分裂抗體將Pb-DOTA募集至細胞。
P1AF0712具有具備SEQ ID NO:97之第一重鏈、具備SEQ ID NO: 98之第二重鏈及具備SEQ ID NO: 103之輕鏈。P1AF0713具有具備SEQ ID NO: 100之第一重鏈、具備SEQ ID NO: 101之第二重鏈及具備SEQ ID NO: 103之輕鏈。
使用胰蛋白酶自培養瓶分離MKN-45細胞且使用Casy細胞計數器計數。在4℃下粒化之後，使300 g細胞再懸浮於FACS緩衝液(含2.5% FCS之PBS)中，調節至2.0E+06個細胞/毫升，分配至96孔V形底PP盤(25微升/孔 = 5.0E+04Zellen/孔)。
使用DOTA-FITC進行FACS染色  將CEA特異性SPLIT抗體(分別為P1AF0712或P1AF0713)調節至40 µg/mL於FACS緩衝液中，使得最終濃度為10 µg/mL。將兩種抗體添加至細胞中，組合或分離，且隨後添加至緩衝液中，且在4℃下培育1小時。隨後，將經FITC標記之Pb-DOTA以與抗體呈等莫耳比添加至細胞中，且在4℃下培育1小時。隨後將細胞在FACS緩衝液中洗滌兩次且再懸浮於70 µl/孔FACS緩衝液中以使用FACS Canto (BD, Pharmingen)進行量測。其展示(圖24) SPLIT兩半均不產生螢光信號，指示Pb-DOTA結合能力缺乏。僅SPLIT兩半之組合能夠將Pb-DOTAM-FITC募集至目標細胞(圖24)。
使用＜huIgG(H+L)A488＞進行FACS染色  將CEA特異性SPLIT抗體(分別為P1AF0712或P1AF0713)調節至40 µg/mL於FACS緩衝液中，使得最終濃度為10 µg/mL。將兩種抗體添加至細胞中，分離，隨後添加至緩衝液中，或合併，且在4℃下培育1小時。隨後在FACS緩衝液中洗滌細胞兩次。在洗滌之後，使細胞再懸浮於50 µL含有二級抗體(＜huIgG(H+L)＞-Alexa488，c=10 µg/mL)之FACS-緩衝液中，在4℃下培育1小時。隨後將細胞在FACS緩衝液中洗滌兩次且再懸浮於70 µl/孔FACS緩衝液中以使用FACS Canto (BD, Pharmingen)進行量測。兩種SPLIT抗體之EC50相當，指示兩種SPLIT抗體之CEA特異性細胞結合。由於抗體在混合物中之量更高，在此等情形下獲得較低EC50，如下表中所示。
SPLIT 抗體之 EC50 測定
      EC50 µg/ml絕對值
＜hu＞A488 P1AF0712+ PBS 2.7
P1AF0713+ PBS 2.3
P1AF0712+ P1AF0713 0.9
hu ISO + PBS   
DOTA-FITC P1AF0712+ PBS na
P1AF0713+ PBS na
P1AF0712+ P1AF0713 2.4
hu ISO + PBS   
使用基於二級抗體之偵測 (＜hu＞488 ， 上圖 ) 或 Pb-DOTA-FITC (DOTA-FITC 下圖 ) 測定 SPLIT 抗體之 EC50
實例8：Biacore結合實驗  此實例測試與參考抗體CEA-DOTAM (RO7198427、PRIT-0213)相比，單獨TA-分裂-DOTAM-VH及TA-分裂-DOTAM-VL與DOTAM之結合。其進一步測試與參考抗體相比，DOTAM與TA-分裂-DOTAM-VH/VL對之結合。
此等實例中所使用之編碼與本申請案中其他地方所使用之蛋白質編號之間的對應性顯示如下。亦提供序列。在此實例中，參考抗體編碼為「PRIT_RS」。
目標結合子 SPR 碼( 前驅藥A+B) SPR 碼 DOTAM 蛋白質 LC (SEQ ID NO) HC (SEQ ID NO) 融合 HC (SEQ ID NO)
＜CEA＞ CH1A1A P1_AB P1_A VL P1AD8592 34 30 33
P1_B VH P1AD8749 34 28 32
＜CEA＞ CH1A1A P2_AB P2_A VL P1AD8592 34 30 33
P2_B VH P1AF0171 34 28 147
＜CEA＞ T84.66 P3_AB P3_A VL P1AF0709 89 83 84
P3_B VH P1AF0298 89 86 89
＜CEA＞ 28A9 P4_AB P4_A VL P1AF0710 96 90 91
P4_B VH P1AF0711 96 93 94
＜CEA＞ A5H1EL1(G54A) P5_AB P5_A VL P1AE4957 58 55 56
P5_B VH P1AE4956 54 51 52
＜CEA＞ CH1A1A P6_AB P6_A VL P1AF0712 103 97 98
P6_B VH P1AF0713 103 100 101
＜GPRC5D＞ P7_AB P7_A VL P1AF8284 107 104 105
P7_B VH P1AF8285 107 104 106
對於此等實驗，藉由MabSelect Sure (親和力層析法)之第一步驟及離子交換層析法(例如POROS XS)之第二步驟純化PRIT SPLIT抗體，且隨後藉由Superdex 200 (粒徑排阻層析法)對其進行拋光。
在25℃下用Biacore T200執行量測溫度之實驗。全部Biacore T200實驗均在HBS-P+ (GE Healthcare, Br-1008-27) pH 7.4運行緩衝液中進行。使用不同DOTAM溶離份對各測試抗體 /抗體對執行兩項實驗。
1. 在第一實驗中，相對於參考抗體而言，評估個別TA-分裂-DOTAM-VH及TA-分裂-DOTAM-VL抗體與在晶片上捕獲之經生物素標記DOTAM之結合。
在CAP晶片表面上以高密度捕獲DOTAM (含120 nM溶液之HBS-P+) (10微升/分鐘，60秒)。隨後，在DOTAM表面上注射含600 nM前驅藥_A或前驅藥_B溶液之HBS-P+ (10微升/分鐘，90秒)。在10微升/分鐘之流動速率下監測解離240秒。使用T200評估軟體評估相對最大反應測定。
結果示於圖26中。個別抗體中無一者顯示結合至所捕獲DOTAM。
2. 在第二實驗中，首先在晶片中使用固定hFab抗體捕獲個別TA-分裂-DOTAM-VH及TA-分裂-DOTAM-VL抗體，且隨後評估DOTAM-單抗生蛋白鏈菌素複合物之結合(DOTAM +單抗生蛋白鏈菌素偶合600 nM，1:1 mol，在RT下1 h)。
在hFab抗體(GE Healthcare, BR-1008-27) CM5晶片表面上注射含600 nM前驅藥_A或前驅藥B溶液之HBS-P+ (10微升/分鐘，120秒)。在高密度捕獲前驅藥A或B溶液之後，注射DOTAM-單抗生蛋白鏈菌素複合物(20微升/分鐘，90秒)。在20微升/分鐘之流動速率下監測解離180秒。對於新循環，藉由使用甘胺酸2.1及75秒再生時間以10微升/分鐘再生表面。使用T200評估軟體評估相對最大反應測定。
結果顯示於圖27中。咸信低最大反應百分比(如在圖中標記有*)為與DOTAM-SA之「痕量」或非特異性相互作用，且反映使分析最佳化之需要。
3. 在第三實驗中，與參考抗體相比，評估TA-分裂-DOTAM-VH/VL對與DOTAM之結合。首先在晶片中使用固定hFab抗體捕獲抗體，且隨後評估DOTAM-單抗生蛋白鏈菌素複合物之結合(DOTAM +單抗生蛋白鏈菌素偶合600 nM，1:1 mol，在RT下1 h)。
在hFab抗體(GE Healthcare, BR-1008-27) CM5晶片表面上注射含300 nM前驅藥_A或前驅藥B溶液之HBS-P+ (10微升/分鐘，120秒)。在高密度捕獲前驅藥A及B溶液之後，注射DOTAM-單抗生蛋白鏈菌素複合物(20微升/分鐘，90秒)。在20微升/分鐘之流動速率下監測解離180秒。對於新循環，藉由使用甘胺酸2.1及75秒再生時間以10微升/分鐘再生表面。使用T200評估軟體評估相對最大反應測定。
結果示於圖28中。全部TA-分裂-DOTAM-VH/VL對均顯示大量針對DOTAM之結合，為DOTA結合子之P6_AB (P1AF0712/P1AF0713)對除外。
FAP-結合子P1AF8286及P1AF8287亦獲得類似結果，該等結果顯示TA-分裂-DOTAM-VH/VL對而非該對之個別成員的大量DOTAM結合。P1AF8286由具有SEQ ID NO: 108之第一重鏈、具有SEQ ID NO: 109之第二重鏈及具有SEQ ID NO: 111之輕鏈構成，且P1AF8287由具有SEQ ID NO: 108之第一重鏈、具有SEQ ID NO: 110之第二重鏈及具有SEQ ID NO: 111之輕鏈構成。然而，此分析仍需要經最佳化。
實例9生成CEA-分裂-DOTAM VH/VL抗體  此實例描述具有如圖25C中所示之格式之抗體之生成。
生成用於抗體重鏈或輕鏈之重組表現之質體  藉由短暫轉染人類胚腎細胞(HEK 293)表現所需蛋白質。為了表現所需基因/蛋白質，使用包含以下功能元件之轉錄單元： -  包括內含子A之來自人類巨細胞病毒(P-CMV)之即刻早期強化子及啟動子， -  人類重鏈免疫球蛋白5'-非轉譯區(5'UTR)， -  鼠類免疫球蛋白重鏈信號序列(SS)， -  待表現之基因/蛋白質，以及 -  牛生長激素多腺苷酸化序列(BGH pA)。
除包括待表現之所需基因之表現單元/卡匣之外，基礎/標準哺乳動物表現質體亦含有 -  允許在大腸桿菌中複製此質體之來自載體pUC18之複製起點，以及 -  在大腸桿菌中賦予安比西林抗性之β-內醯胺酶基因。
SPLIT抗體分子之短暫表現  在經懸浮液調適之HEK Expi293F TM(Life Technologies)細胞中用轉染劑Expifectamine TM293 (Life Technologies)執行SPLIT分子之短暫表現。
細胞在解凍之後在125 ml搖瓶中藉由稀釋至少四次(體積30 ml)來繼代(在37℃、7% CO2、85%濕度、135 rpm下培育/搖晃)。將細胞擴增至250 ml體積中0.5-2.4 × 10 6個細胞/毫升。隨後，細胞經分裂且將其以250 ml體積中6 × 10 5個細胞/毫升之密度接種於1公升搖瓶中。24小時後以約2.2-2.8×10 6個細胞/毫升之細胞密度執行轉染。
在轉染之前，用經預加熱(水浴；37℃)之Opti-MEM (Life Technologies)將250 µg質體-DNA稀釋至12.5 ml之最終體積。同時，在12.5 ml Optim-MEM中製備ExpiFectamine轉染劑。將兩種溶液在室溫下培育不超過5分鐘且隨後藉由輕輕混合來合併，接著在室溫下培育15-20分鐘。將總體積之混合物與250 ml體積之HEK-細胞培養物一起以逐滴方式添加至1 L搖瓶中。
在37℃、7% CO2、85%濕度、135 rpm下培育/搖晃6或7天。16-24小時後，將1.25 ml增強劑1 (Life Technologies)、12.5 ml增強劑2 (Life Technologies)及葡萄糖添加至各250 ml培養物中，達到3 g/L最終濃度。
藉由在2,000 rpm、4℃下進行第一離心步驟10分鐘來收取上清液。隨後，將上清液轉移至新的離心燒瓶中以在4,000 rpm、4℃下進行第二次旋轉達20分鐘。其後，經由0.22 µm瓶頂過濾器過濾不含細胞之上清液且將其儲存於冷凍器(-20℃)中。
純化SPLIT抗體構築體  將含有抗原結合分子之培養上清液過濾且藉由兩個或三個層析步驟純化。藉由親和力層析法使用經PBS (1 mM KH 2PO 4、10 mM Na 2HPO 4、137 mM NaCl、2.7 mM KCl) pH 7.4平衡之HiTrap MabSelectSuRe (GE Healthcare)來捕獲抗體。藉由用平衡緩衝液洗滌來移除未結合蛋白，且用100 mM乙酸鈉緩衝液pH 3.0回收抗原結合分子，且在溶離之後立即用1 M Tris-鹼pH 9.0中和至pH 6.0。於POROSTM 50 XS (ThermoFisher)上進行之離子交換層析法用作用於N端融合構築體之中間純化步驟。用作為負載物之40 mM乙酸鈉緩衝液pH 5.5及洗滌緩衝液執行離子交換層析法。以750 mM乙酸鈉pH 5.5之梯度執行溶離。收集溶離份且藉由CE-SDS及粒徑排阻層析法對其進行分析。彙集含有所需產物之溶離份且在最後一個層析步驟中對其進行拋光。於Superdex 200 TM(GE Healthcare)上進行之粒徑排阻層析法用作最後一個純化步驟。在20 mM組胺酸緩衝液，0.14 M NaCl，pH 6.0中執行粒徑排阻層析法。用配備有纖維素膜之Amicon Ultra離心過濾器單元(Millipore, Billerica, MA)濃縮含有雙特異性抗原結合分子之溶液，且將其儲存於-80℃下。
實例10：表現分析  量測具有如圖25C中所示之N端融合體格式之兩組不同抗體之蛋白質產量。在第一組中，人類化DOTAM結合子之VH及VL域含有VH域之N端Q及VL域之N端A。在第二組中，其各別地含有N端G及S。觀測到，在此格式中，含有人類化DOTAM結合子之VH域之抗體未成功地用N端G表現，但成功地用N端Q表現。G不為VH域中之此位置處之典型殘基。含有VL域之抗體成功地用N端S或A殘基表現，兩個殘基均為VL域中之此位置處之典型殘基。結果示於下表中。
目標結合子 效應子 蛋白質 LC HC 融合HC ProtA之後的產量 最終產量
＜CEA＞ CH1A1A ＜CEA＞ CH1A1A DOTAM VL P1AG1807 D1AD3421 (SEQ ID NO: 115) D1AD3419 (SEQ ID NO: 112) D1AG8023 (SEQ ID NO: 145) 200 mg/L 65.6 mg/L
DOTAM VH P1AG1806 D1AD3421 (SEQ ID NO: 115) D1AD3419 (SEQ ID NO: 112) D1AG8022 (SEQ ID NO: 146) 88.4 mg/L 13.9 mg/L
＜CEA＞ CH1A1A ＜CEA＞ CH1A1A DOTAM VL P1AF7782 D1AD3421 (SEQ ID NO: 115) D1AD3419 (SEQ ID NO: 112) D1AG2237 (SEQ ID NO: 113) 382 mg/L 67.7 mg/L
DOTAM VH P1AF7784 D1AD3421 (SEQ ID NO: 115) D1AD3419 (SEQ ID NO: 112) D1AG2236 (SEQ ID NO: 114) 2.0 mg/L 0
實例11：Biacore結合實驗  此實例測試具有如圖25C中所示之N端融合體格式之抗體與DOTAM的結合。測試半抗體為如上文所描述之P1AG1807 (TA-分裂-DOTAM-VL)及P1AG1806 (TA-分裂-DOTAM-VH)。此等測試半抗體亦在以下論述中稱為「前驅藥A」及「前驅藥B」。
使用兩種實驗設置。
1. 在第一實驗設置中，首先使用固定抗hFab在晶片上捕獲個別TA-分裂-DOTAM-VH及TA-分裂-DOTAM-VL抗體，且隨後評估經生物素標記Pb-DOTAM之兩種對映異構體之結合。
在25℃量測溫度下用Biacore T200執行實驗。全部Biacore T200實驗均在HBS-P+ (GE Healthcare, Br-1008-27) pH 7,4運行緩衝液中進行。在抗hFc (GE Healthcare，BR-1008-39) CM5晶片表面上注射前驅藥_A或前驅藥_B於HBS-P+中之30 nM溶液(10微升/分鐘，60秒)。在高密度捕獲前驅藥A或B溶液之後，注射50 nM DOTAM溶液(10微升/分鐘，120秒)且隨後注射200 nM單抗生蛋白鏈菌素溶液(10微升/分鐘，90秒)。在10微升/分鐘之流動速率下監測解離120秒。對於新循環，藉由使用3 M MgCl2及60秒再生時間再生表面。藉由T200評估軟體評估相對反應測定。
評估相對於參考抗體CEA-DOTAM (RO7198427，PRIT-0213)之結合。結果示於圖29中。可看出，前驅藥對(P1AG1807及P1AG1806)係穩定的且與參考抗體具有相當的DOTAM結合。
亦評估該對之個別成員之結合以及兩個成員之間的結合。(VH= P1AG1806；VL= P1AG1807)。未見到單一前驅藥VL或VH有DOTAM相互作用，而見到VL及VH兩者之間有顯著結合。參見圖30。
2. 在第二實驗設置中，首先使用固定CEA在晶片上捕獲個別TA-分裂-DOTAM-VH及TA-分裂-DOTAM-VL抗體，且隨後評估經生物素標記Pb-DOTAM之兩種對映異構體之結合。
在25℃量測溫度下用Biacore T200執行實驗。全部Biacore T200實驗均在HBS-P+ (GE Healthcare, Br-1008-27) pH 7,4運行緩衝液中進行。在CEA目標(P1AA4176，藉由在pH 5.0、＞ 3000 RU下進行胺偶合來固定) CM5晶片表面上注射前驅藥_A或前驅藥_B於HBS-P+中之30 nM溶液(10微升/分鐘，60秒)。在高密度捕獲前驅藥A或B溶液之後，注射50 nM DOTAM溶液(10微升/分鐘，120秒)且隨後注射200 nM單抗生蛋白鏈菌素溶液(10微升/分鐘，90秒)。在10微升/分鐘之流動速率下監測解離120秒。對於新循環，藉由使用10 mM甘胺酸pH 1.5溶液及60秒再生時間再生表面。藉由T200評估軟體評估相對反應測定。
圖31如下顯示CEA目標表面上之相互作用： a.注射前驅藥A+B 1. 前驅藥A及B與CEA目標表面(單價CEA結合)之強解離； 2. 在表面上注射DOTAM且複合前驅藥A+B引起前驅藥A+B+ DOTAM之有效複合物之較強結合及與CEA目標表面之較少解離； 3. 單抗生蛋白鏈菌素之讀取。
亦顯示「雙重參考」之資料對象。在「雙重參考」之情況下，吾等減除與CEA目標表面之解離且僅顯示DOTAM淨反應及前驅藥A/B相互作用。
此等資料(圖29-31)表明，本發明之半抗體(亦即P1AG1806/P1AG1807對)在目標(例如CEA)上裝配，提供有效DOTAM結合且因此將放射性核苷酸遞送至目標細胞。DOTAM結合與參考分子Prit-0213所獲得之結果相當。
儘管出於清楚理解之目的，已藉助於說明及實例相當詳細地描述前述本發明，但描述及實例不應解釋為限制本發明之範疇。本文所引用之全部專利及科學文獻之揭示內容均以全文引用之方式明確併入。
圖1顯示屬於比較實例之目標抗原(TA)-DOTAM雙特異性抗體(TA-DOTAM BsAb)及例示性TA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體的示意結構。 圖2為顯示腫瘤細胞上之分裂-VH/VL DOTAM結合子之裝配之示意圖。TA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體不大量結合 212Pb-DOTAM，除非結合至靶向細胞上之腫瘤抗原(TA)，其中DOTAM結合子之兩個域得以裝配。 圖3顯示涉及清除劑使用之三步TA-PRIT概念實例之示意綜述。 圖4顯示其中不使用清除劑之二步TA-PRIT概念實例之示意綜述。 圖5顯示用於展現CEA結合能力之分裂抗體與MKN45細胞之結合。使用人類IgG特異性二級抗體進行抗體偵測。 圖6顯示用於展現DOTAM結合能力之分裂抗體與MKN45細胞之結合。使用Pb-DOTAM-FITC進行抗體偵測。 圖7A顯示在攜有SC BxPC3腫瘤之SCID小鼠中進行之利用CEA-分裂-DOTAM-VH/VL之二步PRIT之例示性方案(h =小時，d =天，w =週)。 圖7B顯示在攜有SC BxPC3腫瘤之SCID小鼠中進行之三步PRIT對照之例示性方案(h =小時，d =天，w =週)。 圖8顯示在注射經單獨CEA-分裂-DOTAM-VH、單獨CEA-分裂-DOTAM-VL或合併兩個互補抗體預靶向或使用標準三步PRIT之 212Pb-DOTAM之後6小時預靶向 212Pb-DOTAM在攜有SC BxPC3腫瘤之SCID小鼠中之生物分佈(ID/g % ± SD，n = 4)。 圖9顯示在SCID小鼠中IV注射之後之CEA-分裂-DOTAM-VH/VL藥物動力學。 圖10顯示在攜有SC BxPC3腫瘤之SCID小鼠中在2步(頂部)或3步(底部)中包含CEA-PRIT之方案158之實驗設計。*CEA分裂DOTAM BsAb劑量經調節以補償2/4構築體中之臼/臼雜質。 圖11顯示預靶向 212Pb-DOTAM在攜有SC BxPC3腫瘤之SCID小鼠中之生物分佈(6 h p.i.)。分佈屬於在注射經CEA-DOTAM BsAb或CEA-分裂-DOTAM抗體之雙互補位組合預靶向之 212Pb-DOTAM之後6小時攜帶腫瘤之SCID小鼠中之 212Pb。器官及組織中之放射性含量表示為平均ID/g % ± SD (n = 4)。 圖12顯示在攜有SC BxPC3腫瘤之SCID小鼠中包含3步CEA-PRIT (頂部)、2步CEA-PRIT (中間)或1步CEA-RIT之一個循環之方案160的實驗排程。在放射性注射之後24小時對生物分佈(BD)偵察小鼠進行安樂死，而謹慎地維持且監測功效組中之小鼠直至達到終止準則為止。 圖13顯示預靶向 212Pb-DOTAM及 212Pb-DOTAM-CEA-DOTAM在攜有SC BxPC3腫瘤之SCID小鼠中之生物分佈(24 h p.i.)。分佈屬於在注射經CEA-DOTAM預靶向之 212Pb-DOTAM或經預培育之 212Pb-DOTAM-CEA-DOTAM之後24小時攜帶腫瘤之SCID小鼠中之 212Pb。器官及組織中之放射性含量表示為平均ID/g % ± SD (n = 3)。 圖14顯示BxPC3模型中PRIT治療組及對照(A-E組)之腫瘤生長平均值+標準誤差(n=10)。曲線截短在n＜5。豎點線指示根據研究設計之一些組或所有組之 212Pb-DOTAM投與(20 µCi)。 圖15顯示BxPC3模型中PRIT治療組及對照(A-E組)之個別腫瘤生長曲線(n=10)。豎點線指示 212Pb標記化合物投與(20 µCi)。 圖16顯示BxPC3模型中經CEA-PRIT及CEA-RIT治療之小鼠(A-E組，n=10)之平均體重損失。曲線截短在n＜5。豎點線指示根據研究設計之一些組或所有組之 212Pb標記化合物投與。 圖17顯示在攜有SC BxPC3腫瘤之SCID小鼠中包含二步CEA-PRIT之方案175之實驗設計，其中在注射 212Pb-DOTAM之後24小時進行處死及屍體剖檢。CEA-分裂-DOTAM-VH-AST劑量經調節以補償臼/臼雜質。 圖18顯示在注射經CEA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體預靶向之 212Pb-DOTAM之後24小時 212Pb在攜帶腫瘤之SCID小鼠中之分佈(方案175)。器官及組織中之放射性含量表示為平均ID/g % ± SD (n = 4)。 圖19顯示在攜有SC BxPC3腫瘤之SCID小鼠中包含二步CEA-PRIT之方案185之實驗設計，其中在注射 212Pb-DOTAM之後6小時進行處死及屍體剖檢。CEA-分裂-DOTAM-VH-AST (CH1A1A)劑量經調節以補償臼/臼雜質。 圖20顯示在注射經CEA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體預靶向之 212Pb-DOTAM之後6小時 212Pb在攜帶腫瘤之SCID小鼠中之分佈(方案185)。器官及組織中之放射性含量表示為平均ID/g % ± SD (n = 5)。 圖21顯示在注射之後7天CEA-分裂-DOTAM-VH/VL對(合併VH及VL抗體)在兩個所選SC BxPC3腫瘤中之分佈。A及B顯示來自注射有靶向T84.66之CEA-分裂-DOTAM-VH/VL之小鼠A3之腫瘤切片，其中A顯示CEA表現且B顯示對應CEA-分裂-DOTAM-VH/VL分佈。C及D顯示來自注射有靶向CH1A1A之CEA-分裂-DOTAM-VH/VL之小鼠C5之腫瘤切片：C顯示CEA表現且D顯示對應CEA-分裂-DOTAM-VH/VL分佈。 圖22顯示在攜有SC BxPC3腫瘤之SCID小鼠中包含二步CEA-PRIT之方案189之實驗設計，其中在注射 212Pb-DOTAM之後6小時進行處死及屍體剖檢。CEA-分裂-DOTAM-VH-AST (CH1A1A)劑量經調節以補償臼/臼雜質。 圖23顯示與陽性對照(僅CH1A1A)相比在注射經CEA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體(T84.66及CH1A1A)之雙互補位對預靶向之 212Pb-DOTAM之後6小時 212Pb在攜帶腫瘤之SCID小鼠中之分佈。器官及組織中之放射性含量表示為平均ID/g % ± SD。 圖24顯示如藉由FACS所測定之SPLIT抗體之平均螢光強度(MFI)。藉由FACS測定之Pb-DOTA-FITC之結合可僅針對兩個SPLIT抗體與Pb-DOTA-FITC之共培育而顯示。單SPLIT抗體不產生有效信號。 圖25A-C顯示如本文所描述之分裂抗體之例示性格式。 圖26顯示評估個別TA-分裂-DOTAM-VH及TA-分裂-DOTAM-VL抗體與於晶片上捕獲之經生物素標記DOTAM之結合之實例8實驗1的結果。 圖27顯示評估DOTAM與於晶片上捕獲之個別TA-分裂-DOTAM-VH及TA-分裂-DOTAM-VL抗體之結合之實例8實驗2的結果。 圖28顯示評估DOTAM與於晶片上捕獲之TA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體(抗體對)之結合之實例8實驗3的結果。 圖29顯示評估DOTAM與相對於參考抗體而言使用固定抗hFab於晶片上捕獲之TA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體(抗體對)之結合的實例11實驗1的結果。 圖30顯示評估相較於DOTAM與抗體對之結合而言DOTAM與使用固定抗hFab於晶片上捕獲之個別TA-分裂-DOTAM-VH及TA-分裂-DOTAM-VL抗體之結合的實例11實驗1的結果。 圖31顯示評估DOTAM與使用固定CEA於晶片上捕獲之TA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體(抗體對)之結合的實例11實驗2的結果。頂部影像顯示CEA目標表面上之相互作用：1.前驅藥A及B與CEA目標表面(單價CEA結合)之強解離；2.在表面上注射DOTAM且複合前驅藥A+B引起前驅藥A+B+ DOTAM之有效複合物之較強結合及與CEA目標表面之較少解離；3.單抗生蛋白鏈菌素之讀取。底部影像顯示「雙重參考」之資料對象。在「雙重參考」之情況下，吾等減除與CEA目標表面之解離且僅顯示DOTAM淨反應及前驅藥A/B相互作用。 

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          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  4]]>
          Gln Ser Ser His Ser Val Tyr Ser Asp Asn Asp Leu Ala 
          1               5                   10              
          <![CDATA[<210>  5]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  5]]>
          Gln Ala Ser Lys Leu Ala Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  6]]>
          <![CDATA[<211>  12]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  6]]>
          Leu Gly Gly Tyr Asp Asp Glu Ser Asp Thr Tyr Gly 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210>  7]]>
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          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  7]]>
          Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu Thr 
          1               5                   10                  15      
          Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr Ser 
                      20                  25                  30          
          Met Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu Gly 
                  35                  40                  45              
          Phe Ile Gly Ser Arg Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly 
              50                  55                  60                  
          Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Leu Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg 
                          85                  90                  95      
          Glu Arg Asp Pro Tyr Gly Gly Gly Ala Tyr Pro Pro His Leu Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120     
          <![CDATA[<210>  8]]>
          <![CDATA[<211>  111]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  8]]>
          Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp 
          1               5                   10                  15      
          Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser His Ser Val Tyr Ser Asp Asn 
                      20                  25                  30          
          Asp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 
                  35                  40                  45              
          Ile Tyr Gln Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Asp Asp Glu 
                          85                  90                  95      
          Ser Asp Thr Tyr Gly Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110     
          <![CDATA[<210>  9]]>
          <![CDATA[<211>  121]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  9]]>
          Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu Thr 
          1               5                   10                  15      
          Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr Ser 
                      20                  25                  30          
          Met Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly 
                  35                  40                  45              
          Phe Ile Gly Ser Arg Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly 
              50                  55                  60                  
          Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 
                          85                  90                  95      
          Glu Arg Asp Pro Tyr Gly Gly Gly Ala Tyr Pro Pro His Leu Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120     
          <![CDATA[<210>  10]]>
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          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  10]]>
          Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp 
          1               5                   10                  15      
          Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser His Ser Val Tyr Ser Asp Asn 
                      20                  25                  30          
          Asp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 
                  35                  40                  45              
          Ile Tyr Gln Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Asp Asp Glu 
                          85                  90                  95      
          Ser Asp Thr Tyr Gly Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110     
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          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  11]]>
          Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Met His 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  12]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  12]]>
          Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ser Lys Tyr Val Pro Lys Phe Gln 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  13]]>
          <![CDATA[<211>  12]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  13]]>
          Phe Gly Tyr Tyr Val Ser Asp Tyr Ala Met Ala Tyr 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210>  14]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  14]]>
          Arg Ala Gly Glu Ser Val Asp Ile Phe Gly Val Gly Phe Leu His 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  15]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  15]]>
          Arg Ala Ser Asn Arg Ala Thr 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  16]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  16]]>
          Gln Gln Thr Asn Glu Asp Pro Tyr Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  17]]>
          <![CDATA[<211>  121]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  17]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ser Lys Tyr Val Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Pro Phe Gly Tyr Tyr Val Ser Asp Tyr Ala Met Ala Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120     
          <![CDATA[<210>  18]]>
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          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  18]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Gly Glu Ser Val Asp Ile Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Val Gly Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 
                  35                  40                  45              
          Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala 
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Asn 
                          85                  90                  95      
          Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110     
          <![CDATA[<210>  19]]>
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          <![CDATA[<400>  19]]>
          Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe Gly Met Asn 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  20]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  20]]>
          Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe Lys 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  21]]>
          <![CDATA[<211>  12]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  21]]>
          Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210>  22]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  22]]>
          Lys Ala Ser Ala Ala Val Gly Thr Tyr Val Ala 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  23]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  23]]>
          Ser Ala Ser Tyr Arg Lys Arg 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  24]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  24]]>
          His Gln Tyr Tyr Thr Tyr Pro Leu Phe Thr 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  25]]>
          <![CDATA[<211>  121]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  25]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120     
          <![CDATA[<210>  26]]>
          <![CDATA[<211>  108]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  26]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Ala Ala Val Gly Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Lys Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Tyr Thr Tyr Pro Leu 
                          85                  90                  95      
          Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105             
          <![CDATA[<210>  27]]>
          <![CDATA[<211>  450]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  27]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly 
              450 
          <![CDATA[<210>  28]]>
          <![CDATA[<211>  450]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  28]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly 
              450 
          <![CDATA[<210>  29]]>
          <![CDATA[<211>  450]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  29]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly 
              450 
          <![CDATA[<210>  30]]>
          <![CDATA[<211>  450]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  30]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly 
              450 
          <![CDATA[<210>  31]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  31]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Gly Gly Ser 
                      20  
          <![CDATA[<210>  32]]>
          <![CDATA[<211>  591]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  32]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
              450                 455                 460                 
          Ser Gly Gly Gly Gly Ser Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu 
          465                 470                 475                 480 
          Val Lys Pro Thr Glu Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe 
                          485                 490                 495     
          Ser Leu Ser Thr Tyr Ser Met Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys 
                      500                 505                 510         
          Ala Leu Glu Trp Leu Gly Phe Ile Gly Ser Arg Gly Asp Thr Tyr Tyr 
                  515                 520                 525             
          Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys 
              530                 535                 540                 
          Ser Gln Val Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala 
          545                 550                 555                 560 
          Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Arg Asp Pro Tyr Gly Gly Gly Ala Tyr 
                          565                 570                 575     
          Pro Pro His Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                      580                 585                 590     
          <![CDATA[<210>  33]]>
          <![CDATA[<211>  581]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  33]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
              450                 455                 460                 
          Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu 
          465                 470                 475                 480 
          Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser His 
                          485                 490                 495     
          Ser Val Tyr Ser Asp Asn Asp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly 
                      500                 505                 510         
          Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly 
                  515                 520                 525             
          Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu 
              530                 535                 540                 
          Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu 
          545                 550                 555                 560 
          Gly Gly Tyr Asp Asp Glu Ser Asp Thr Tyr Gly Phe Gly Gly Gly Thr 
                          565                 570                 575     
          Lys Val Glu Ile Lys 
                      580     
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  34]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Ala Ala Val Gly Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Lys Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Tyr Thr Tyr Pro Leu 
                          85                  90                  95      
          Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 
                      100                 105                 110         
          Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 
                  115                 120                 125             
          Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 
              130                 135                 140                 
          Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 
                          165                 170                 175     
          Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 
                      180                 185                 190         
          Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 
                  195                 200                 205             
          Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 215 
          <![CDATA[<210>  35]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  35]]>
          Asp Tyr Gly Val His 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  36]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  36]]>
          Val Ile Trp Ser Gly Gly Gly Thr Ala Tyr Asn Thr Ala Leu Ile Ser 
          1               5                   10                  15      
          <![CDATA[<210>  37]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  37]]>
          Arg Gly Ser Tyr Pro Tyr Asn Tyr Phe Asp Ala 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  38]]>
          <![CDATA[<211>  14]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  38]]>
          Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ala Ser Asn Tyr Ala Asn 
          1               5                   10                  
          <![CDATA[<210>  39]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  39]]>
          Gly His Asn Asn Arg Pro Pro 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  40]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  40]]>
          Ala Leu Trp Tyr Ser Asp His Trp Val 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  41]]>
          <![CDATA[<211>  119]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  41]]>
          His Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 
                  35                  40                  45              
          Gly Val Ile Trp Ser Gly Gly Gly Thr Ala Tyr Asn Thr Ala Leu Ile 
              50                  55                  60                  
          Ser Arg Leu Asn Ile Tyr Arg Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Phe Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Met Asn Ser Leu Gln Ala Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Arg Gly Ser Tyr Pro Tyr Asn Tyr Phe Asp Ala Trp Gly Gln Gly 
                      100                 105                 110         
          Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 
          <![CDATA[<210>  42]]>
          <![CDATA[<211>  109]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  42]]>
          Gln Ala Val Val Ile Gln Glu Ser Ala Leu Thr Thr Pro Pro Gly Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ala Ser 
                      20                  25                  30          
          Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 
                  35                  40                  45              
          Leu Ile Gly Gly His Asn Asn Arg Pro Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ala Gly Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asp 
                          85                  90                  95      
          His Trp Val Ile Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 
                      100                 105                 
          <![CDATA[<210>  43]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  43]]>
          Asp Tyr Tyr Met Asn 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  44]]>
          <![CDATA[<211>  19]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  44]]>
          Phe Ile Gly Asn Lys Ala Asn Ala Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala Ser 
          1               5                   10                  15      
          Val Lys Gly 
          <![CDATA[<210>  45]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  45]]>
          Asp Arg Gly Leu Arg Phe Tyr Phe Asp Tyr 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  46]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  46]]>
          Arg Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Ile His 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  47]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  47]]>
          Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  48]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  48]]>
          Gln His Trp Ser Ser Lys Pro Pro Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  49]]>
          <![CDATA[<211>  121]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  49]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 
                  35                  40                  45              
          Gly Phe Ile Gly Asn Lys Ala Asn Ala Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala 
              50                  55                  60                  
          Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ser Lys Asn Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Thr Arg Asp Arg Gly Leu Arg Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120     
          <![CDATA[<210>  50]]>
          <![CDATA[<211>  106]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  50]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Ile 
                      20                  25                  30          
          His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Ser Trp Ile Tyr 
                  35                  40                  45              
          Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Trp Ser Ser Lys Pro Pro Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105     
          <![CDATA[<210>  51]]>
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          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  51]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 
                  35                  40                  45              
          Gly Phe Ile Gly Asn Lys Ala Asn Ala Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala 
              50                  55                  60                  
          Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ser Lys Asn Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Thr Arg Asp Arg Gly Leu Arg Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly 
              450 
          <![CDATA[<210>  52]]>
          <![CDATA[<211>  591]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  52]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 
                  35                  40                  45              
          Gly Phe Ile Gly Asn Lys Ala Asn Ala Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala 
              50                  55                  60                  
          Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ser Lys Asn Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Thr Arg Asp Arg Gly Leu Arg Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
              450                 455                 460                 
          Ser Gly Gly Gly Gly Ser Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu 
          465                 470                 475                 480 
          Val Lys Pro Thr Glu Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe 
                          485                 490                 495     
          Ser Leu Ser Thr Tyr Ser Met Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys 
                      500                 505                 510         
          Ala Leu Glu Trp Leu Gly Phe Ile Gly Ser Arg Gly Asp Thr Tyr Tyr 
                  515                 520                 525             
          Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys 
              530                 535                 540                 
          Ser Gln Val Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala 
          545                 550                 555                 560 
          Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Arg Asp Pro Tyr Gly Gly Gly Ala Tyr 
                          565                 570                 575     
          Pro Pro His Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                      580                 585                 590     
          <![CDATA[<210>  53]]>
          <![CDATA[<211>  449]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  53]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 
                  35                  40                  45              
          Gly Phe Ile Gly Asn Lys Ala Asn Ala Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala 
              50                  55                  60                  
          Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ser Lys Asn Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Thr Arg Asp Arg Gly Leu Arg Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro 
          <![CDATA[<210>  54]]>
          <![CDATA[<211>  213]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  54]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Ile 
                      20                  25                  30          
          His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Ser Trp Ile Tyr 
                  35                  40                  45              
          Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Trp Ser Ser Lys Pro Pro Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 
                      100                 105                 110         
          Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr 
                  115                 120                 125             
          Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 
              130                 135                 140                 
          Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 
                          165                 170                 175     
          Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 
                      180                 185                 190         
          Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 
                  195                 200                 205             
          Asn Arg Gly Glu Cys 
              210             
          <![CDATA[<210>  55]]>
          <![CDATA[<211>  450]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  55]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 
                  35                  40                  45              
          Gly Phe Ile Gly Asn Lys Ala Asn Ala Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala 
              50                  55                  60                  
          Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ser Lys Asn Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Thr Arg Asp Arg Gly Leu Arg Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly 
              450 
          <![CDATA[<210>  56]]>
          <![CDATA[<211>  581]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  56]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 
                  35                  40                  45              
          Gly Phe Ile Gly Asn Lys Ala Asn Ala Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala 
              50                  55                  60                  
          Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ser Lys Asn Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Thr Arg Asp Arg Gly Leu Arg Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
              450                 455                 460                 
          Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu 
          465                 470                 475                 480 
          Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser His 
                          485                 490                 495     
          Ser Val Tyr Ser Asp Asn Asp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly 
                      500                 505                 510         
          Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly 
                  515                 520                 525             
          Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu 
              530                 535                 540                 
          Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu 
          545                 550                 555                 560 
          Gly Gly Tyr Asp Asp Glu Ser Asp Thr Tyr Gly Phe Gly Gly Gly Thr 
                          565                 570                 575     
          Lys Val Glu Ile Lys 
                      580     
          <![CDATA[<210>  57]]>
          <![CDATA[<211>  449]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  57]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 
                  35                  40                  45              
          Gly Phe Ile Gly Asn Lys Ala Asn Ala Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala 
              50                  55                  60                  
          Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ser Lys Asn Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Thr Arg Asp Arg Gly Leu Arg Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro 
          <![CDATA[<210>  58]]>
          <![CDATA[<211>  213]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  58]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Ile 
                      20                  25                  30          
          His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Ser Trp Ile Tyr 
                  35                  40                  45              
          Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Trp Ser Ser Lys Pro Pro Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 
                      100                 105                 110         
          Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr 
                  115                 120                 125             
          Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 
              130                 135                 140                 
          Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 
                          165                 170                 175     
          Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 
                      180                 185                 190         
          Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 
                  195                 200                 205             
          Asn Arg Gly Glu Cys 
              210             
          <![CDATA[<210>  59]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<400>  59]]>
          Gly Gly Thr Phe Ser Tyr Tyr Ala Ile Ser 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  60]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  60]]>
          Gly Ile Leu Pro Ala Phe Gly Ala Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  61]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  61]]>
          Leu Pro Pro Leu Pro Gly Ala Gly Leu Asp Tyr 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  62]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  62]]>
          Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  63]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  63]]>
          Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  64]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  64]]>
          Gln Gln Asn Thr Gln Tyr Pro Met Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  65]]>
          <![CDATA[<211>  120]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  65]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Tyr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Gly Ile Leu Pro Ala Phe Gly Ala Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Leu Pro Pro Leu Pro Gly Ala Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120 
          <![CDATA[<210>  66]]>
          <![CDATA[<211>  107]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  66]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Thr Gln Tyr Pro Met 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210>  67]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  67]]>
          Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr Ala Met Ala 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  68]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  68]]>
          Ser Ile Ser Thr Gly Gly Val Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  69]]>
          <![CDATA[<211>  8]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  69]]>
          His Thr Gly Asp Tyr Phe Asp Tyr 
          1               5               
          <![CDATA[<210>  70]]>
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          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  70]]>
          Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ile Ser Gly Ile Asn Leu Met Asn 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  71]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  71]]>
          His Ala Ser Ile Leu Ala Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  72]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  72]]>
          Gln Gln Thr Arg Glu Ser Pro Leu Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  73]]>
          <![CDATA[<211>  117]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  73]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Ser Ile Ser Thr Gly Gly Val Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Thr His Thr Gly Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Met 
                      100                 105                 110         
          Val Thr Val Ser Ser 
                  115         
          <![CDATA[<210>  74]]>
          <![CDATA[<211>  111]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  74]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ile Ser 
                      20                  25                  30          
          Gly Ile Asn Leu Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Gln Pro 
                  35                  40                  45              
          Lys Leu Leu Ile Tyr His Ala Ser Ile Leu Ala Ser Gly Ile Pro Asp 
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Arg 
                          85                  90                  95      
          Glu Ser Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110     
          <![CDATA[<210>  75]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  75]]>
          Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  76]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  76]]>
          Ala Ile Ile Gly Ser Gly Ala Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  77]]>
          <![CDATA[<211>  8]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  77]]>
          Gly Trp Phe Gly Gly Phe Asn Tyr 
          1               5               
          <![CDATA[<210>  78]]>
          <![CDATA[<211>  12]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  78]]>
          Arg Ala Ser Gln Ser Val Thr Ser Ser Tyr Leu Ala 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210>  79]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  79]]>
          Val Gly Ser Arg Arg Ala Thr 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  80]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  80]]>
          Gln Gln Gly Ile Met Leu Pro Pro Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  81]]>
          <![CDATA[<211>  117]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  81]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Ala Ile Ile Gly Ser Gly Ala Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Lys Gly Trp Phe Gly Gly Phe Asn Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 
                      100                 105                 110         
          Val Thr Val Ser Ser 
                  115         
          <![CDATA[<210>  82]]>
          <![CDATA[<211>  108]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  82]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Thr Ser Ser 
                      20                  25                  30          
          Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 
                  35                  40                  45              
          Ile Asn Val Gly Ser Arg Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ile Met Leu Pro 
                          85                  90                  95      
          Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105             
          <![CDATA[<210>  83]]>
          <![CDATA[<211>  450]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  83]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ser Lys Tyr Val Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Pro Phe Gly Tyr Tyr Val Ser Asp Tyr Ala Met Ala Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly 
              450 
          <![CDATA[<210>  84]]>
          <![CDATA[<211>  581]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  84]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ser Lys Tyr Val Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Pro Phe Gly Tyr Tyr Val Ser Asp Tyr Ala Met Ala Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
              450                 455                 460                 
          Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu 
          465                 470                 475                 480 
          Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser His 
                          485                 490                 495     
          Ser Val Tyr Ser Asp Asn Asp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly 
                      500                 505                 510         
          Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly 
                  515                 520                 525             
          Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu 
              530                 535                 540                 
          Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu 
          545                 550                 555                 560 
          Gly Gly Tyr Asp Asp Glu Ser Asp Thr Tyr Gly Phe Gly Gly Gly Thr 
                          565                 570                 575     
          Lys Val Glu Ile Lys 
                      580     
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          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  85]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ser Lys Tyr Val Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Pro Phe Gly Tyr Tyr Val Ser Asp Tyr Ala Met Ala Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly 
              450 
          <![CDATA[<210>  86]]>
          <![CDATA[<211>  450]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  86]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ser Lys Tyr Val Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Pro Phe Gly Tyr Tyr Val Ser Asp Tyr Ala Met Ala Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly 
              450 
          <![CDATA[<210>  87]]>
          <![CDATA[<211>  594]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  87]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ser Lys Tyr Val Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Pro Phe Gly Tyr Tyr Val Ser Asp Tyr Ala Met Ala Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
              450                 455                 460                 
          Ser Gly Gly Gly Gly Ser Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu 
          465                 470                 475                 480 
          Val Lys Pro Thr Glu Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe 
                          485                 490                 495     
          Ser Leu Ser Thr Tyr Ser Met Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys 
                      500                 505                 510         
          Ala Leu Glu Trp Leu Gly Phe Ile Gly Ser Arg Gly Asp Thr Tyr Tyr 
                  515                 520                 525             
          Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys 
              530                 535                 540                 
          Ser Gln Val Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala 
          545                 550                 555                 560 
          Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Arg Asp Pro Tyr Gly Gly Gly Ala Tyr 
                          565                 570                 575     
          Pro Pro His Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala 
                      580                 585                 590         
          Ser Thr 
          <![CDATA[<210>  88]]>
          <![CDATA[<211>  450]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  88]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ser Lys Tyr Val Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Pro Phe Gly Tyr Tyr Val Ser Asp Tyr Ala Met Ala Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly 
              450 
          <![CDATA[<210>  89]]>
          <![CDATA[<211>  218]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<400>  89]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Gly Glu Ser Val Asp Ile Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Val Gly Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 
                  35                  40                  45              
          Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala 
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Asn 
                          85                  90                  95      
          Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 
                  115                 120                 125             
          Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 
              130                 135                 140                 
          Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 
                          165                 170                 175     
          Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 
                      180                 185                 190         
          His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 
                  195                 200                 205             
          Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 215             
          <![CDATA[<210>  90]]>
          <![CDATA[<211>  449]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  90]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Tyr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Gly Ile Leu Pro Ala Phe Gly Ala Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Leu Pro Pro Leu Pro Gly Ala Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 
                  115                 120                 125             
          Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 
                          165                 170                 175     
          Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 
                  195                 200                 205             
          Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 
              210                 215                 220                 
          Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 
                          245                 250                 255     
          Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 
                      260                 265                 270         
          Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 
                  275                 280                 285             
          Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 
              290                 295                 300                 
          Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu 
                          325                 330                 335     
          Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 
                      340                 345                 350         
          Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 
                  355                 360                 365             
          Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 
              370                 375                 380                 
          Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 
                          405                 410                 415     
          Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 
                      420                 425                 430         
          Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                  435                 440                 445             
          Gly 
          <![CDATA[<210>  91]]>
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          <![CDATA[<400>  91]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Tyr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Gly Ile Leu Pro Ala Phe Gly Ala Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Leu Pro Pro Leu Pro Gly Ala Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 
                  115                 120                 125             
          Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 
                          165                 170                 175     
          Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 
                  195                 200                 205             
          Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 
              210                 215                 220                 
          Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 
                          245                 250                 255     
          Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 
                      260                 265                 270         
          Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 
                  275                 280                 285             
          Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 
              290                 295                 300                 
          Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu 
                          325                 330                 335     
          Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys 
                      340                 345                 350         
          Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 
                  355                 360                 365             
          Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 
              370                 375                 380                 
          Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp 
                          405                 410                 415     
          Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 
                      420                 425                 430         
          Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                  435                 440                 445             
          Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
              450                 455                 460                 
          Gly Gly Gly Gly Ser Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser 
          465                 470                 475                 480 
          Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser His Ser 
                          485                 490                 495     
          Val Tyr Ser Asp Asn Asp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 
                      500                 505                 510         
          Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val 
                  515                 520                 525             
          Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 
              530                 535                 540                 
          Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly 
          545                 550                 555                 560 
          Gly Tyr Asp Asp Glu Ser Asp Thr Tyr Gly Phe Gly Gly Gly Thr Lys 
                          565                 570                 575     
          Val Glu Ile Lys 
                      580 
          <![CDATA[<210>  92]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  92]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Tyr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Gly Ile Leu Pro Ala Phe Gly Ala Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Leu Pro Pro Leu Pro Gly Ala Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 
                  115                 120                 125             
          Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 
                          165                 170                 175     
          Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 
                  195                 200                 205             
          Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 
              210                 215                 220                 
          Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 
                          245                 250                 255     
          Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 
                      260                 265                 270         
          Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 
                  275                 280                 285             
          Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 
              290                 295                 300                 
          Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu 
                          325                 330                 335     
          Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys 
                      340                 345                 350         
          Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 
                  355                 360                 365             
          Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 
              370                 375                 380                 
          Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp 
                          405                 410                 415     
          Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 
                      420                 425                 430         
          Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                  435                 440                 445             
          Gly 
          <![CDATA[<210>  93]]>
          <![CDATA[<211>  449]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  93]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Tyr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Gly Ile Leu Pro Ala Phe Gly Ala Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Leu Pro Pro Leu Pro Gly Ala Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 
                  115                 120                 125             
          Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 
                          165                 170                 175     
          Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 
                  195                 200                 205             
          Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 
              210                 215                 220                 
          Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 
                          245                 250                 255     
          Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 
                      260                 265                 270         
          Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 
                  275                 280                 285             
          Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 
              290                 295                 300                 
          Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu 
                          325                 330                 335     
          Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys 
                      340                 345                 350         
          Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 
                  355                 360                 365             
          Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 
              370                 375                 380                 
          Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp 
                          405                 410                 415     
          Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 
                      420                 425                 430         
          Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                  435                 440                 445             
          Gly 
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          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Tyr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Gly Ile Leu Pro Ala Phe Gly Ala Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Leu Pro Pro Leu Pro Gly Ala Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 
                  115                 120                 125             
          Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 
                          165                 170                 175     
          Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 
                  195                 200                 205             
          Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 
              210                 215                 220                 
          Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 
                          245                 250                 255     
          Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 
                      260                 265                 270         
          Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 
                  275                 280                 285             
          Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 
              290                 295                 300                 
          Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu 
                          325                 330                 335     
          Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 
                      340                 345                 350         
          Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 
                  355                 360                 365             
          Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 
              370                 375                 380                 
          Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 
                          405                 410                 415     
          Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 
                      420                 425                 430         
          Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                  435                 440                 445             
          Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
              450                 455                 460                 
          Gly Gly Gly Gly Ser Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val 
          465                 470                 475                 480 
          Lys Pro Thr Glu Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser 
                          485                 490                 495     
          Leu Ser Thr Tyr Ser Met Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala 
                      500                 505                 510         
          Leu Glu Trp Leu Gly Phe Ile Gly Ser Arg Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala 
                  515                 520                 525             
          Ser Trp Ala Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser 
              530                 535                 540                 
          Gln Val Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr 
          545                 550                 555                 560 
          Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Arg Asp Pro Tyr Gly Gly Gly Ala Tyr Pro 
                          565                 570                 575     
          Pro His Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 
                      580                 585                 590         
          Thr 
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          <![CDATA[<400>  95]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Tyr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Gly Ile Leu Pro Ala Phe Gly Ala Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Leu Pro Pro Leu Pro Gly Ala Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 
                  115                 120                 125             
          Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 
                          165                 170                 175     
          Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 
                  195                 200                 205             
          Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 
              210                 215                 220                 
          Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 
                          245                 250                 255     
          Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 
                      260                 265                 270         
          Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 
                  275                 280                 285             
          Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 
              290                 295                 300                 
          Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu 
                          325                 330                 335     
          Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 
                      340                 345                 350         
          Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 
                  355                 360                 365             
          Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 
              370                 375                 380                 
          Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 
                          405                 410                 415     
          Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 
                      420                 425                 430         
          Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                  435                 440                 445             
          Gly 
          <![CDATA[<210>  96]]>
          <![CDATA[<211>  214]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  96]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Thr Gln Tyr Pro Met 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 
          <![CDATA[<210>  97]]>
          <![CDATA[<211>  450]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  97]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly 
              450 
          <![CDATA[<210>  98]]>
          <![CDATA[<211>  579]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  98]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
              450                 455                 460                 
          Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Val Val Ile Gln Glu Ser Ala Leu 
          465                 470                 475                 480 
          Thr Thr Pro Pro Gly Glu Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr 
                          485                 490                 495     
          Gly Ala Val Thr Ala Ser Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro 
                      500                 505                 510         
          Asp His Leu Phe Thr Gly Leu Ile Gly Gly His Asn Asn Arg Pro Pro 
                  515                 520                 525             
          Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala 
              530                 535                 540                 
          Leu Thr Ile Ala Gly Thr Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys 
          545                 550                 555                 560 
          Ala Leu Trp Tyr Ser Asp His Trp Val Ile Gly Gly Gly Thr Lys Leu 
                          565                 570                 575     
          Thr Val Leu 
          <![CDATA[<210>  99]]>
          <![CDATA[<211>  450]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  99]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly 
              450 
          <![CDATA[<210>  100]]>
          <![CDATA[<211>  450]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  100]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly 
              450 
          <![CDATA[<210>  101]]>
          <![CDATA[<211>  592]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  101]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
              450                 455                 460                 
          Ser Gly Gly Gly Gly Ser His Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly 
          465                 470                 475                 480 
          Leu Val Gln Pro Ser Gln Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly 
                          485                 490                 495     
          Phe Ser Leu Thr Asp Tyr Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly 
                      500                 505                 510         
          Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile Trp Ser Gly Gly Gly Thr Ala 
                  515                 520                 525             
          Tyr Asn Thr Ala Leu Ile Ser Arg Leu Asn Ile Tyr Arg Asp Asn Ser 
              530                 535                 540                 
          Lys Asn Gln Val Phe Leu Glu Met Asn Ser Leu Gln Ala Glu Asp Thr 
          545                 550                 555                 560 
          Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gly Ser Tyr Pro Tyr Asn Tyr Phe 
                          565                 570                 575     
          Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 
                      580                 585                 590         
          <![CDATA[<210>  102]]>
          <![CDATA[<211>  450]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  102]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly 
              450 
          <![CDATA[<210>  103]]>
          <![CDATA[<211>  215]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  103]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Ala Ala Val Gly Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Lys Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Tyr Thr Tyr Pro Leu 
                          85                  90                  95      
          Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 
                      100                 105                 110         
          Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 
                  115                 120                 125             
          Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 
              130                 135                 140                 
          Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 
                          165                 170                 175     
          Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 
                      180                 185                 190         
          Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 
                  195                 200                 205             
          Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 215 
          <![CDATA[<210>  104]]>
          <![CDATA[<211>  447]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  104]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Ser Ile Ser Thr Gly Gly Val Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Thr His Thr Gly Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Met 
                      100                 105                 110         
          Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 
                  115                 120                 125             
          Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 
              130                 135                 140                 
          Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 
                      180                 185                 190         
          Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 
                  195                 200                 205             
          Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 
              210                 215                 220                 
          Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val 
          225                 230                 235                 240 
          Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 
                          245                 250                 255     
          Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 
                      260                 265                 270         
          Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 
                  275                 280                 285             
          Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 
              290                 295                 300                 
          Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 
                          325                 330                 335     
          Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 
                      340                 345                 350         
          Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu 
                  355                 360                 365             
          Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 
              370                 375                 380                 
          Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 
                          405                 410                 415     
          Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 
                      420                 425                 430         
          His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  435                 440                 445         
          <![CDATA[<210>  105]]>
          <![CDATA[<211>  359]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  105]]>
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                      20                  25                  30          
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                  35                  40                  45              
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
              50                  55                  60                  
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
                          85                  90                  95      
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                      100                 105                 110         
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                  115                 120                 125             
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
              130                 135                 140                 
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                  195                 200                 205             
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
              210                 215                 220                 
          Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser 
                          245                 250                 255     
          Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser 
                      260                 265                 270         
          Ser His Ser Val Tyr Ser Asp Asn Asp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys 
                  275                 280                 285             
          Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Lys Leu Ala 
              290                 295                 300                 
          Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 
          305                 310                 315                 320 
          Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr 
                          325                 330                 335     
          Cys Leu Gly Gly Tyr Asp Asp Glu Ser Asp Thr Tyr Gly Phe Gly Gly 
                      340                 345                 350         
          Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                  355                 
          <![CDATA[<210>  106]]>
          <![CDATA[<211>  369]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  106]]>
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                      20                  25                  30          
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                  35                  40                  45              
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
              50                  55                  60                  
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
                          85                  90                  95      
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                      100                 105                 110         
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                  115                 120                 125             
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
              130                 135                 140                 
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                  195                 200                 205             
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
              210                 215                 220                 
          Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val 
                          245                 250                 255     
          Leu Val Lys Pro Thr Glu Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly 
                      260                 265                 270         
          Phe Ser Leu Ser Thr Tyr Ser Met Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly 
                  275                 280                 285             
          Lys Ala Leu Glu Trp Leu Gly Phe Ile Gly Ser Arg Gly Asp Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Ser Gln Val Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr 
                          325                 330                 335     
          Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Arg Asp Pro Tyr Gly Gly Gly Ala 
                      340                 345                 350         
          Tyr Pro Pro His Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  355                 360                 365             
          Ala 
          <![CDATA[<210>  107]]>
          <![CDATA[<211>  218]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  107]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ile Ser 
                      20                  25                  30          
          Gly Ile Asn Leu Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Gln Pro 
                  35                  40                  45              
          Lys Leu Leu Ile Tyr His Ala Ser Ile Leu Ala Ser Gly Ile Pro Asp 
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Arg 
                          85                  90                  95      
          Glu Ser Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 
                  115                 120                 125             
          Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 
              130                 135                 140                 
          Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 
                          165                 170                 175     
          Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 
                      180                 185                 190         
          His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 
                  195                 200                 205             
          Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 215             
          <![CDATA[<210>  108]]>
          <![CDATA[<211>  447]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  108]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Ala Ile Ile Gly Ser Gly Ala Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Lys Gly Trp Phe Gly Gly Phe Asn Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 
                      100                 105                 110         
          Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 
                  115                 120                 125             
          Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 
              130                 135                 140                 
          Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 
                      180                 185                 190         
          Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 
                  195                 200                 205             
          Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 
              210                 215                 220                 
          Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val 
          225                 230                 235                 240 
          Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 
                          245                 250                 255     
          Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 
                      260                 265                 270         
          Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 
                  275                 280                 285             
          Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 
              290                 295                 300                 
          Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 
                          325                 330                 335     
          Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 
                      340                 345                 350         
          Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu 
                  355                 360                 365             
          Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 
              370                 375                 380                 
          Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 
                          405                 410                 415     
          Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 
                      420                 425                 430         
          His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  435                 440                 445         
          <![CDATA[<210>  109]]>
          <![CDATA[<211>  359]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  109]]>
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                      20                  25                  30          
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                  35                  40                  45              
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
              50                  55                  60                  
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
                          85                  90                  95      
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                      100                 105                 110         
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                  115                 120                 125             
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
              130                 135                 140                 
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                  195                 200                 205             
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
              210                 215                 220                 
          Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser 
                          245                 250                 255     
          Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser 
                      260                 265                 270         
          Ser His Ser Val Tyr Ser Asp Asn Asp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys 
                  275                 280                 285             
          Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Lys Leu Ala 
              290                 295                 300                 
          Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 
          305                 310                 315                 320 
          Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr 
                          325                 330                 335     
          Cys Leu Gly Gly Tyr Asp Asp Glu Ser Asp Thr Tyr Gly Phe Gly Gly 
                      340                 345                 350         
          Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                  355                 
          <![CDATA[<210>  110]]>
          <![CDATA[<211>  369]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  110]]>
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                      20                  25                  30          
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                  35                  40                  45              
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
              50                  55                  60                  
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
                          85                  90                  95      
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                      100                 105                 110         
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                  115                 120                 125             
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
              130                 135                 140                 
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                  195                 200                 205             
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
              210                 215                 220                 
          Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val 
                          245                 250                 255     
          Leu Val Lys Pro Thr Glu Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly 
                      260                 265                 270         
          Phe Ser Leu Ser Thr Tyr Ser Met Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly 
                  275                 280                 285             
          Lys Ala Leu Glu Trp Leu Gly Phe Ile Gly Ser Arg Gly Asp Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Ser Gln Val Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr 
                          325                 330                 335     
          Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Arg Asp Pro Tyr Gly Gly Gly Ala 
                      340                 345                 350         
          Tyr Pro Pro His Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  355                 360                 365             
          Ala 
          <![CDATA[<210>  111]]>
          <![CDATA[<211>  215]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  111]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Thr Ser Ser 
                      20                  25                  30          
          Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 
                  35                  40                  45              
          Ile Asn Val Gly Ser Arg Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ile Met Leu Pro 
                          85                  90                  95      
          Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 
                      100                 105                 110         
          Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 
                  115                 120                 125             
          Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 
              130                 135                 140                 
          Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 
                          165                 170                 175     
          Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 
                      180                 185                 190         
          Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 
                  195                 200                 205             
          Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 215 
          <![CDATA[<210>  112]]>
          <![CDATA[<211>  451]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  112]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly Lys 
              450     
          <![CDATA[<210>  113]]>
          <![CDATA[<211>  359]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  113]]>
          Ser Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser His Ser Val Tyr Ser Asp 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 
                  35                  40                  45              
          Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Asp Asp 
                          85                  90                  95      
          Glu Ser Asp Thr Tyr Gly Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 
              130                 135                 140                 
          Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 
          145                 150                 155                 160 
          Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 
                          165                 170                 175     
          Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 
                      180                 185                 190         
          Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 
                  195                 200                 205             
          Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 
              210                 215                 220                 
          Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 
                          245                 250                 255     
          Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys 
                      260                 265                 270         
          Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 
                  275                 280                 285             
          Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 
              290                 295                 300                 
          Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 
                          325                 330                 335     
          Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 
                      340                 345                 350         
          Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  355                 
          <![CDATA[<210>  114]]>
          <![CDATA[<211>  369]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  114]]>
          Gly Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ser Met Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu 
                  35                  40                  45              
          Gly Phe Ile Gly Ser Arg Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Glu Arg Asp Pro Tyr Gly Gly Gly Ala Tyr Pro Pro His Leu Trp 
                      100                 105                 110         
          Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Asp Lys 
              130                 135                 140                 
          Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 
                          165                 170                 175     
          Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 
                  195                 200                 205             
          Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 
              210                 215                 220                 
          Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 
          225                 230                 235                 240 
          Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys 
                          245                 250                 255     
          Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr 
                      260                 265                 270         
          Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser 
                  275                 280                 285             
          Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 
              290                 295                 300                 
          Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 
                          325                 330                 335     
          Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 
                      340                 345                 350         
          Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
                  355                 360                 365             
          Lys 
          <![CDATA[<210>  115]]>
          <![CDATA[<211>  215]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  115]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Ala Ala Val Gly Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Lys Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Tyr Thr Tyr Pro Leu 
                          85                  90                  95      
          Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 
                      100                 105                 110         
          Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 
                  115                 120                 125             
          Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 
              130                 135                 140                 
          Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 
                          165                 170                 175     
          Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 
                      180                 185                 190         
          Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 
                  195                 200                 205             
          Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 215 
          <![CDATA[<210>  116]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
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          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  116]]>
          Asp Ser Tyr Met His 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  117]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  117]]>
          Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Pro Lys Phe Gln 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  118]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  118]]>
          Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  119]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  119]]>
          Gly Thr Pro Thr Gly Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  120]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  120]]>
          Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met His 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  121]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  121]]>
          Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met His 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  122]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  122]]>
          Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Met 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  123]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
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          <![CDATA[<400>  123]]>
          Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  124]]>
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          Tyr Thr Ser Asn Leu Ala Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  125]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  125]]>
          Ser Thr Ser Ser Leu Gln Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  126]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  126]]>
          Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  127]]>
          <![CDATA[<211>  120]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  127]]>
          Gln Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Ser Gly Thr 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Ser 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Leu Arg Gln Gly Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Lys Ala Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Asn Glu Gly Thr Pro Thr Gly Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120 
          <![CDATA[<210>  128]]>
          <![CDATA[<211>  106]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  128]]>
          Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met 
                      20                  25                  30          
          His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr 
                  35                  40                  45              
          Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Met Glu Ala Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 
                      100                 105     
          <![CDATA[<210>  129]]>
          <![CDATA[<211>  120]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  129]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Ser 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Asn Glu Gly Thr Pro Thr Gly Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120 
          <![CDATA[<210>  130]]>
          <![CDATA[<211>  120]]>
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          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  130]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Lys Asp Ser 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Asn Glu Gly Thr Pro Thr Gly Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120 
          <![CDATA[<210>  131]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  131]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Ser 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Asn Glu Gly Thr Pro Thr Gly Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120 
          <![CDATA[<210>  132]]>
          <![CDATA[<211>  120]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  132]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Ser 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
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          Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
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                      100                 105                 110         
          Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120 
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          <![CDATA[<400>  133]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Ser 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Asn Glu Gly Thr Pro Thr Gly Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120 
          <![CDATA[<210>  134]]>
          <![CDATA[<211>  120]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  134]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Ser 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Thr Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Asn Glu Gly Thr Pro Thr Gly Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120 
          <![CDATA[<210>  135]]>
          <![CDATA[<211>  106]]>
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          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  135]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met 
                      20                  25                  30          
          His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 
                  35                  40                  45              
          Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105     
          <![CDATA[<210>  136]]>
          <![CDATA[<211>  106]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  136]]>
          Glu Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met 
                      20                  25                  30          
          His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 
                  35                  40                  45              
          Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105     
          <![CDATA[<210>  137]]>
          <![CDATA[<211>  107]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  137]]>
          Glu Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210>  138]]>
          <![CDATA[<211>  106]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  138]]>
          Glu Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Pro Tyr Met 
                      20                  25                  30          
          His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 
                  35                  40                  45              
          Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105     
          <![CDATA[<210>  139]]>
          <![CDATA[<211>  106]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  139]]>
          Glu Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Pro Tyr Met 
                      20                  25                  30          
          His Trp Leu Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 
                  35                  40                  45              
          Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105     
          <![CDATA[<210>  140]]>
          <![CDATA[<211>  106]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  140]]>
          Glu Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Pro Tyr Met 
                      20                  25                  30          
          His Trp Leu Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 
                  35                  40                  45              
          Ser Thr Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105     
          <![CDATA[<210>  141]]>
          <![CDATA[<211>  88]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  141]]>
          Pro Lys Pro Phe Ile Thr Ser Asn Asn Ser Asn Pro Val Glu Asp Glu 
          1               5                   10                  15      
          Asp Ala Val Ala Leu Thr Cys Glu Pro Glu Ile Gln Asn Thr Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Leu Trp Trp Val Asn Asn Gln Ser Leu Pro Val Ser Pro Arg Leu Gln 
                  35                  40                  45              
          Leu Ser Asn Asp Asn Arg Thr Leu Thr Leu Leu Ser Val Thr Arg Asn 
              50                  55                  60                  
          Asp Val Gly Pro Tyr Glu Cys Gly Ile Gln Asn Lys Leu Ser Val Asp 
          65                  70                  75                  80  
          His Ser Asp Pro Val Ile Leu Asn 
                          85              
          <![CDATA[<210>  142]]>
          <![CDATA[<211>  88]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  142]]>
          Pro Lys Pro Ser Ile Ser Ser Asn Asn Ser Lys Pro Val Glu Asp Lys 
          1               5                   10                  15      
          Asp Ala Val Ala Phe Thr Cys Glu Pro Glu Thr Gln Asp Ala Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Leu Trp Trp Val Asn Asn Gln Ser Leu Pro Val Ser Pro Arg Leu Gln 
                  35                  40                  45              
          Leu Ser Asn Gly Asn Arg Thr Leu Thr Leu Phe Asn Val Thr Arg Asn 
              50                  55                  60                  
          Asp Thr Ala Ser Tyr Lys Cys Glu Thr Gln Asn Pro Val Ser Ala Arg 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Ser Asp Ser Val Ile Leu Asn 
                          85              
          <![CDATA[<210>  143]]>
          <![CDATA[<211>  122]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  143]]>
          Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ser Met Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu 
                  35                  40                  45              
          Gly Phe Ile Gly Ser Arg Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Glu Arg Asp Pro Tyr Gly Gly Gly Ala Tyr Pro Pro His Leu Trp 
                      100                 105                 110         
          Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120         
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          <![CDATA[<400>  144]]>
          Ala Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser His Ser Val Tyr Ser Asp 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 
                  35                  40                  45              
          Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Asp Asp 
                          85                  90                  95      
          Glu Ser Asp Thr Tyr Gly Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
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          Ala Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser His Ser Val Tyr Ser Asp 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 
                  35                  40                  45              
          Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Asp Asp 
                          85                  90                  95      
          Glu Ser Asp Thr Tyr Gly Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 
              130                 135                 140                 
          Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 
          145                 150                 155                 160 
          Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 
                          165                 170                 175     
          Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 
                      180                 185                 190         
          Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 
                  195                 200                 205             
          Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 
              210                 215                 220                 
          Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 
                          245                 250                 255     
          Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys 
                      260                 265                 270         
          Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 
                  275                 280                 285             
          Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 
              290                 295                 300                 
          Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 
                          325                 330                 335     
          Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 
                      340                 345                 350         
          Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  355                 
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          <![CDATA[<400>  146]]>
          Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ser Met Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu 
                  35                  40                  45              
          Gly Phe Ile Gly Ser Arg Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Glu Arg Asp Pro Tyr Gly Gly Gly Ala Tyr Pro Pro His Leu Trp 
                      100                 105                 110         
          Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Asp Lys 
              130                 135                 140                 
          Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 
                          165                 170                 175     
          Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 
                  195                 200                 205             
          Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 
              210                 215                 220                 
          Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 
          225                 230                 235                 240 
          Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys 
                          245                 250                 255     
          Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr 
                      260                 265                 270         
          Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser 
                  275                 280                 285             
          Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 
              290                 295                 300                 
          Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 
                          325                 330                 335     
          Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 
                      340                 345                 350         
          Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
                  355                 360                 365             
          Lys 
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          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
              450                 455                 460                 
          Ser Gly Gly Gly Gly Ser Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu 
          465                 470                 475                 480 
          Val Lys Pro Thr Glu Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe 
                          485                 490                 495     
          Ser Leu Ser Thr Tyr Ser Met Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys 
                      500                 505                 510         
          Ala Leu Glu Trp Leu Gly Phe Ile Gly Ser Arg Gly Asp Thr Tyr Tyr 
                  515                 520                 525             
          Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys 
              530                 535                 540                 
          Ser Gln Val Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala 
          545                 550                 555                 560 
          Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Arg Asp Pro Tyr Gly Gly Gly Ala Tyr 
                          565                 570                 575     
          Pro Pro His Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala 
                      580                 585                 590         
          Ser Thr 
          <![CDATA[<210>  148]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  148]]>
          Gly Phe Ser Leu Thr Asp Tyr Gly Val His 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  149]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  149]]>
          Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met Asn 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  150]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  150]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Ser Gly Gly 
                      20  
          <![CDATA[<210>  151]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  151]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Ser Gly Gly 
                      20  
          <![CDATA[<210>  152]]>
          <![CDATA[<211>  21]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  152]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Ser Gly Gly Ser 
                      20      
          <![CDATA[<210>  153]]>
          <![CDATA[<211>  591]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  153]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ser Lys Tyr Val Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Pro Phe Gly Tyr Tyr Val Ser Asp Tyr Ala Met Ala Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
              450                 455                 460                 
          Ser Gly Gly Gly Gly Ser Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu 
          465                 470                 475                 480 
          Val Lys Pro Thr Glu Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe 
                          485                 490                 495     
          Ser Leu Ser Thr Tyr Ser Met Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys 
                      500                 505                 510         
          Ala Leu Glu Trp Leu Gly Phe Ile Gly Ser Arg Gly Asp Thr Tyr Tyr 
                  515                 520                 525             
          Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys 
              530                 535                 540                 
          Ser Gln Val Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala 
          545                 550                 555                 560 
          Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Arg Asp Pro Tyr Gly Gly Gly Ala Tyr 
                          565                 570                 575     
          Pro Pro His Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                      580                 585                 590
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Claims (90)

  1. 一種抗體組，該抗體組包含： i)第一抗體，其包含有包含對於目標細胞表面上表現之抗原具有特異性之抗原結合位點的抗體片段、Fc域及包含用於放射性標記化合物之抗原結合位點之VH域的多肽，其中該抗體片段之C端與該Fc域之一個鏈之N端融合，且該多肽之C端與該Fc域之另一鏈之N端融合，且其中該第一抗體不包含用於該放射性標記化合物之抗原結合位點之VL域；及 ii)第二抗體，其包含有包含對於目標細胞表面上表現之抗原具有特異性之抗原結合位點的抗體片段、Fc域及包含用於該放射性標記化合物之抗原結合位點之VL域的多肽，其中該抗體片段之C端與該Fc域之一個鏈之N端融合，且該多肽之C端與該Fc域之另一鏈之N端融合，且其中該第二抗體不包含用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之VH域； 其中該第一抗體之該VH域及該第二抗體之該VL域能夠一起形成用於該放射性標記化合物之功能抗原結合位點。
  2. 如請求項1之抗體組，其中該抗體片段選自至少一個Fv、scFv或Fab或交叉Fab片段。
  3. 如請求項2之抗體組，其中該抗體片段為Fab。
  4. 如請求項1至3中任一項之抗體組，其中該Fc域經修飾以減弱或消除效應功能。
  5. 如請求項1至4中任一項之抗體組，其中該第一抗體包含： i)完整輕鏈； ii)完整重鏈； iii)另一Fc鏈；以及 iv)包含用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之該VH域或由其組成之多肽； 其中(i)之該輕鏈及(ii)之該重鏈一起提供用於目標抗原之抗原結合位點；且其中包含用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之該VH域或由其組成之該多肽係經由連接子藉由其C端與(iii)之N端融合；且 該第二抗體包含： v)完整輕鏈； vi)完整重鏈； vii)另一Fc鏈；以及 viii)包含用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之該VL域或由其組成之多肽； 其中(v)之該輕鏈及(vi)之該重鏈一起提供用於目標抗原之抗原結合位點；且其中包含用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之該VL域或由其組成之該多肽係經由連接子藉由其C端與(vii)之N端融合。
  6. 如前述請求項中任一項之抗體組，其中該放射性標記化合物包含放射性標記DOTA或其鹽或功能變異體。
  7. 如前述請求項中任一項之抗體組，其中該放射性標記化合物為放射性標記有Lu或Y放射性同位素之DOTA或其鹽或功能變異體。
  8. 如請求項6或7之抗體組，其中用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之該VH域包含(a)包含SEQ ID NO: 35之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列之CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列之CDR-H3。
  9. 如請求項6至8中任一項之抗體組，其中用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之該VH域包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列或包含與SEQ ID NO: 41具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體。
  10. 如請求項6至9中任一項之抗體組，其中用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之該VL域包含(d)包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列之CDR-L2；以及(f)包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列之CDR-L3。
  11. 如請求項6至10中任一項之抗體組，其中用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之該VL域包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列或包含與SEQ ID NO: 42具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體。
  12. 如請求項1至5中任一項之抗體組，其中該放射性標記化合物包含Pb-DOTAM。
  13. 如請求項12之抗體組，其中用於Pb-DOTAM之功能結合位點係以100 pM、50 pM、20 pM、10 pM、5 pM、1 pM或更小，例如0.9 pM或更小、0.8 pM或更小、0.7 pM或更小、0.6 pM或更小或0.5 pM或更小之結合親和力K D值結合。
  14. 如請求項12或請求項13之抗體組，其中該用於Pb-DOTAM之功能結合位點結合至Pb-DOTAM且結合至Bi-DOTAM。
  15. 如請求項12至14中任一項之抗體組，其中用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之該VH域包含： a)包含胺基酸序列FIGSRGDTYYASWAKG (SEQ ID NO:2)或在SEQ ID NO: 2中具有至多1、2或3個取代之其變異體之重鏈CDR2，其中此等取代不包括Phe50、Asp56及/或Tyr58，且視情況亦不包括Gly52及/或Arg54； b)包含胺基酸序列ERDPYGGGAYPPHL (SEQ ID NO:3)或在SEQ ID NO: 3中具有至多1、2或3個取代之其變異體之重鏈CDR3，其中此等取代不包括Glu95、Arg96、Asp97、Pro98，且視情況亦不包括Ala100C、Tyr100D及/或Pro100E，且/或視情況亦不包括Tyr99； 以及重鏈CDR1，其視情況為： c)包含胺基酸序列GFSLSTYSMS (SEQ ID NO:1)或在SEQ ID NO: 1中具有至多1、2或3個取代之其變異體之重鏈CDR1。
  16. 如請求項15之抗體組，其中用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之該VH域包含(a)包含GFSLSTYSMS (SEQ ID NO:1)之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含FIGSRGDTYYASWAKG (SEQ ID NO:2)之胺基酸序列之CDR-H2；以及(c)包含ERDPYGGGAYPPHL (SEQ ID NO:3)之胺基酸序列之CDR-H3。
  17. 如請求項12至16中任一項之抗體組，其中用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之該VH域包含： i) SEQ ID NO: 143之胺基酸序列；或 ii)包含與SEQ ID NO:143具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之SEQ ID NO: 143之變異體，視情況其中N端Q殘基保持不變或經選自由E、K、R、S、T、A、L、Y、D、N及V組成之群之殘基取代；或 iii)包含在僅經過一或多個取代之SEQ ID NO: 143範圍內變化且與SEQ ID NO:143具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之SEQ ID NO: 143之變異體；視情況其中N端Q殘基保持不變。
  18. 如請求項12至16中任一項之抗體組，其中用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之該VH域包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列或包含與SEQ ID NO: 7具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體，視情況其中用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之該VH域進一步包含例如Q或選自由E、K、R、S、T、A、L、Y、D、N及V組成之群之殘基的另一N端殘基。
  19. 如請求項12至16中任一項之抗體組，其中用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之該VH域包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列或包含與SEQ ID NO: 9具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體，且視情況進一步包含例如Q或選自由E、K、R、S、T、A、L、Y、D、N及V組成之群之殘基的N端殘基。
  20. 如請求項12至19中任一項之抗體組，其中用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之該VL域包含 d)包含胺基酸序列QSSHSVYSDNDLA (SEQ ID NO:4)或在SEQ ID NO: 4中具有至多1、2或3個取代之其變異體之輕鏈CDR1，其中此等取代不包括Tyr28及Asp32； e)包含胺基酸序列LGGYDDESDTYG (SEQ ID NO:6)或在SEQ ID NO: 6中具有至多1、2或3個取代之其變異體之輕鏈CDR3，其中此等取代不包括Gly91、Tyr92、Asp93、Thr95c以及Tyr96， 以及輕鏈CDR2，其視情況為 f)包含胺基酸序列QASKLAS (SEQ ID NO: 5)或在SEQ ID NO: 5中具有至少1、2或3個取代之其變異體之輕鏈CDR 2，該等取代視情況不包括Gln50。
  21. 如請求項20之抗體組，其中用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之該VL域包含(d)包含QSSHSVYSDNDLA (SEQ ID NO:4)之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含QASKLAS (SEQ ID NO:5)之胺基酸序列之CDR-L2；以及(f)包含LGGYDDESDTYG (SEQ ID NO:6)之胺基酸序列之CDR-L3。
  22. 如請求項12至21中任一項之抗體組，其中用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之該VL域包含 i) SEQ ID NO: 144之胺基酸序列，或 ii)包含與SEQ ID NO:144具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之SEQ ID NO: 144之變異體，視情況其中N端A殘基保持不變或經選自由D、N、E、Q、S、A、V、L、T、Y、K及R組成之群之另一胺基酸取代；或 iii)包含在僅經過一或多個取代之SEQ ID NO: 144範圍內變化且與SEQ ID NO:144具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之SEQ ID NO: 144之變異體；視情況其中N端A殘基保持不變。
  23. 如請求項12至21中任一項之抗體組，其中用於該放射性標記化合物之該抗原結合位點之該VL域包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列或包含與SEQ ID NO: 8具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體，且視情況進一步包含諸如A或選自由D、N、E、Q、S、A、V、L、T、Y、K及R組成之群之殘基的另一N端殘基。
  24. 如前述請求項中任一項之抗體組，其中該第一抗體及該第二抗體結合至相同目標抗原。
  25. 如請求項24之抗體組，其中該第一抗體及該第二抗體結合至該目標抗原之相同抗原決定基。
  26. 如請求項24之抗體組，其中該第一抗體與該第二抗體結合至該目標抗原之不同抗原決定基。
  27. 如前述請求項中任一項之抗體組，其中於目標細胞表面上表現之該抗原為腫瘤相關抗原。
  28. 如前述請求項中任一項之抗體組，其中於目標細胞表面上表現之該抗原選自由以下組成之群：癌胚抗原(CEA)、CD20、HER2、EGP-1 (上皮醣蛋白-1，亦稱為滋胚層-2)、結腸特異性抗原-p (CSAp)、胰臟黏蛋白MUC1、GPRC5D以及FAP。
  29. 如前述請求項中任一項之抗體組，其中於目標細胞表面上表現之該抗原選自由以下組成之群：CEA、GPRC5D以及FAP。
  30. 如前述請求項中任一項之抗體組，其中於目標細胞表面上表現之該抗原為CEA。
  31. 如請求項30之抗體組，其中該第一抗體包含結合至CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含 重鏈可變區，其包含(a)包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列之CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO:21之胺基酸序列之CDR-H3；及 輕鏈可變區，其包含(d)包含SEQ ID NO:22之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:23之胺基酸序列之CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO:24之胺基酸序列之CDR-L3。
  32. 如請求項30或31之抗體組，其中該第一抗體包含用於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含VH序列，其包含：選自由SEQ ID NO: 25組成之群的胺基酸序列或包含與SEQ ID NO: 25具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體。
  33. 如請求項30至32中任一項之抗體組，其中該第一抗體包含用於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含VL序列，其包含：選自由SEQ ID NO: 26組成之群的胺基酸序列或包含與SEQ ID NO: 26具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體。
  34. 如請求項30之抗體組，其中該第一抗體包含結合至CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含以下：重鏈可變區，其包含(a)包含SEQ ID NO:43之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:44之胺基酸序列之CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO:45之胺基酸序列之CDR-H3；以及輕鏈可變區，其包含(d)包含SEQ ID NO:46之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:47之胺基酸序列之CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO:48之胺基酸序列之CDR-L3。
  35. 如請求項30或34之抗體組，其中該第一抗體包含用於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含VH序列，其包含：選自由SEQ ID NO: 49組成之群的胺基酸序列或包含與SEQ ID NO:49具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體。
  36. 如請求項30、34或35中任一項之抗體組，其中該第一抗體包含用於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含VL序列，其包含：選自由SEQ ID NO: 50組成之群的胺基酸序列或包含與SEQ ID NO:50具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體。
  37. 如請求項30之抗體組，其中該第一抗體包含結合至CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含 重鏈可變區，其包含(a)包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列之CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO:13之胺基酸序列之CDR-H3；及 輕鏈可變區，其包含(d)包含SEQ ID NO:14之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:15之胺基酸序列之CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO:16之胺基酸序列之CDR-L3。
  38. 如請求項30或37之抗體組，其中該第一抗體包含用於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含VH序列，其包含：選自由SEQ ID NO: 17組成之群的胺基酸序列或包含與SEQ ID NO:17具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體。
  39. 如請求項30、37或38之抗體組，其中該第一抗體包含用於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含VL序列，其包含：選自由SEQ ID NO: 18組成之群的胺基酸序列或包含與SEQ ID NO:18具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體。
  40. 如請求項30之抗體組，其中該第一抗體包含結合至CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含 重鏈可變區，其包含(a)包含SEQ ID NO:59之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:60之胺基酸序列之CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO:61之胺基酸序列之CDR-H3；及 輕鏈可變區，其包含(d)包含SEQ ID NO:62之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:63之胺基酸序列之CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO:64之胺基酸序列之CDR-L3。
  41. 如請求項30或請求項40之抗體組，其中該第一抗體包含用於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含VH序列，其包含：選自由SEQ ID NO: 65組成之群的胺基酸序列或包含與SEQ ID NO:65具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體。
  42. 如請求項30、40或41之抗體組，其中該第一抗體包含用於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含VL序列，其包含：選自由SEQ ID NO: 66組成之群的胺基酸序列或包含與SEQ ID NO:66具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體。
  43. 如請求項40之抗體組，其中該第一抗體包含結合至CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含以下：重鏈可變區，其包含(a)包含SEQ ID NO:116之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:117或118之胺基酸序列之CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO:119之胺基酸序列之CDR-H3；以及輕鏈可變區，其包含(d)包含SEQ ID NO:120、121或122之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:123、124或125之胺基酸序列之CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO:126之胺基酸序列之CDR-L3。
  44. 如請求項30或43之抗體組，其中該第一抗體包含結合至CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含以下：重鏈可變區(VH)，其包含選自SEQ ID NO: 129、130、131、132、133或134之胺基酸序列或與其具有90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之序列；以及輕鏈可變區(VL)，其包含選自SEQ ID NO: 135、136、137、138、139或140之胺基酸序列或與其具有90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之序列。
  45. 如請求項30、43或44之抗體組，其中該第一抗體包含結合至CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含： (a)包含SEQ ID NO:129之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:139之胺基酸序列之VL域，或 (b)包含SEQ ID NO:133之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:139之胺基酸序列之VL域，或 (c)包含SEQ ID NO:130之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:139之胺基酸序列之VL域，或 (d)包含SEQ ID NO:134之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:138之胺基酸序列之VL域，或 (e)包含SEQ ID NO:133之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:138之胺基酸序列之VL域，或 (f)包含SEQ ID NO:131之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:138之胺基酸序列之VL域，或 (g)包含SEQ ID NO:129之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:138之胺基酸序列之VL域。
  46. 如請求項30至45中任一項之抗體組，其中該第二抗體包含結合至CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含 重鏈可變區，其包含(a)包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列之CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO:21之胺基酸序列之CDR-H3；及 輕鏈可變區，其包含(d)包含SEQ ID NO:22之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:23之胺基酸序列之CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO:24之胺基酸序列之CDR-L3。
  47. 如請求項30至46中任一項之抗體組，其中該第二抗體包含用於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含VH序列，其包含：選自由SEQ ID NO: 25組成之群的胺基酸序列或包含與SEQ ID NO:25具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體。
  48. 如請求項30至47中任一項之抗體組，其中該第二抗體包含用於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含VL序列，其包含：選自由SEQ ID NO: 26組成之群的胺基酸序列或包含與SEQ ID NO:26具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體。
  49. 如請求項30至45中任一項之抗體組，其中該第二抗體包含結合至CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含以下：重鏈可變區，其包含(a)包含SEQ ID NO:43之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:44之胺基酸序列之CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO:45之胺基酸序列之CDR-H3；以及輕鏈可變區，其包含(d)包含SEQ ID NO:46之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:47之胺基酸序列之CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO:48之胺基酸序列之CDR-L3。
  50. 如請求項30至45或49中任一項之抗體組，其中該第二抗體包含用於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含VH序列，其包含：選自由SEQ ID NO: 49組成之群的胺基酸序列或包含與SEQ ID NO:49具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體。
  51. 如請求項30至45、49或50中任一項之抗體組，其中該第二抗體包含用於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含VL序列，其包含：選自由SEQ ID NO: 50組成之群的胺基酸序列或包含與SEQ ID NO:50具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體。
  52. 如請求項30至45中任一項之抗體組，其中該第二抗體包含結合至CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含 重鏈可變區，其包含(a)包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列之CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO:13之胺基酸序列之CDR-H3；及 輕鏈可變區，其包含(d)包含SEQ ID NO:14之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:15之胺基酸序列之CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO:16之胺基酸序列之CDR-L3。
  53. 如請求項30至45或52中任一項之抗體組，其中該第二抗體包含用於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含VH序列，其包含：選自由SEQ ID NO: 17組成之群的胺基酸序列或包含與SEQ ID NO:17具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體。
  54. 如請求項30至45、52或53中任一項之抗體組，其中該第二抗體包含用於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含VL序列，其包含：選自由SEQ ID NO: 18組成之群的胺基酸序列或包含與SEQ ID NO:18具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體。
  55. 如請求項30至45中任一項之抗體組，其中該第二抗體包含結合至CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含 重鏈可變區，其包含(a)包含SEQ ID NO:59之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:60之胺基酸序列之CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO:61之胺基酸序列之CDR-H3；及 輕鏈可變區，其包含(d)包含SEQ ID NO:62之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:63之胺基酸序列之CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO:64之胺基酸序列之CDR-L3。
  56. 如請求項30至45或55中任一項之抗體組，其中該第二抗體包含用於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含VH序列，其包含：選自由SEQ ID NO: 65組成之群的胺基酸序列或包含與SEQ ID NO:65具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體。
  57. 如請求項30至45、55或56之抗體組，其中該第二抗體包含用於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含VL序列，其包含：選自由SEQ ID NO: 66組成之群的胺基酸序列或包含與SEQ ID NO:66具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之胺基酸序列之其變異體。
  58. 如請求項30至45之抗體組，其中該第二抗體包含結合至CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含以下：重鏈可變區，其包含(a)包含SEQ ID NO:116之胺基酸序列之CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:117或118之胺基酸序列之CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:119之胺基酸序列之CDR-H3；以及輕鏈可變區，其包含(d)包含SEQ ID NO:120、121或122之胺基酸序列之CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:123、124或125之胺基酸序列之CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO:126之胺基酸序列之CDR-L3。
  59. 如請求項30至45或58之抗體組，其中該第二抗體包含結合至CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含以下：重鏈可變區(VH)，其包含選自SEQ ID NO: 129、130、131、132、133或134之胺基酸序列或與其具有90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之序列；以及輕鏈可變區(VL)，其包含選自SEQ ID NO: 135、136、137、138、139或140之胺基酸序列或與其具有90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之序列。
  60. 如請求項30至45、58或59之抗體組，其中該第二抗體包含結合至CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含： (a)包含SEQ ID NO:129之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:139之胺基酸序列之VL域，或 (b)包含SEQ ID NO:133之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:139之胺基酸序列之VL域，或 (c)包含SEQ ID NO:130之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:139之胺基酸序列之VL域，或 (d)包含SEQ ID NO:134之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:138之胺基酸序列之VL域，或 (e)包含SEQ ID NO:133之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:138之胺基酸序列之VL域，或 (f)包含SEQ ID NO:131之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:138之胺基酸序列之VL域，或 (g)包含SEQ ID NO:129之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:138之胺基酸序列之VL域。
  61. 如請求項30之抗體組，其中該第一抗體為如請求項31至33中任一項之抗體且該第二抗體為如請求項46至48中任一項之抗體。
  62. 如請求項1之抗體組，其中： i)該第一抗體包含具有SEQ ID NO:112之第一重鏈、具有SEQ ID NO: 146之第二重鏈及具有SEQ ID NO: 115之輕鏈；以及 ii)該第二抗體包含具有SEQ ID NO:112之第一重鏈、具有SEQ ID NO: 145之第二重鏈及具有SEQ ID NO: 115之輕鏈。
  63. 一種核酸組，其表現如前述請求項中任一項之抗體組。
  64. 一種表現載體或表現載體組，其包含如請求項63之核酸組。
  65. 一種宿主細胞或宿主細胞組，其包含如請求項64之表現載體或表現載體組。
  66. 一種預靶向放射免疫療法之方法，其包含 i)向個體投與如請求項1至62中任一項之抗體組，其中該第一抗體與該第二抗體係同時或以任一次序依序投與，其中該等抗體結合至該目標抗原且定位至表現該目標抗原之細胞之表面；且其中該第一抗體與該第二抗體之締合形成用於該放射性標記化合物之功能結合位點； 及 ii)隨後投與放射性標記化合物，其中該放射性標記化合物結合至用於該放射性標記化合物之功能結合位點。
  67. 如請求項66之方法，其中該方法不包含投與清除劑或阻斷劑之步驟。
  68. 如請求項66或67之方法，其中該個體為人類。
  69. 如請求項66至67中任一項之方法，其中該目標抗原為癌症或腫瘤相關抗原，且該方法為腫瘤或癌症之放射免疫療法之方法。
  70. 如請求項1至62中任一項之抗體組，其用於如請求項66至69中任一項之預靶向放射免疫療法之方法中。
  71. 一種使放射性同位素靶向組織或器官以用於放射成像之方法，其包含： i)向個體投與如請求項1至62中任一項之抗體組，其中該第一抗體與該第二抗體係同時或以任一次序依序投與，其中該等抗體結合至目標抗原且定位至表現該目標抗原之細胞之表面；且其中該第一抗體與該第二抗體之締合形成用於該放射性標記化合物之功能結合位點； 及 ii)隨後投與放射性標記化合物，其中該放射性標記化合物結合至用於該放射性標記化合物之該功能結合位點。
  72. 如請求項71之方法，其中該方法不包含投與清除劑或阻斷劑之步驟。
  73. 如請求項71或72之方法，其中該方法進一步包含成像步驟。
  74. 如請求項73之方法，其中該目標抗原為癌症或腫瘤相關抗原，且該方法為對腫瘤或癌症進行成像之方法。
  75. 一種肽連接子，其由y個連續殘基組成，該等殘基選自由Gly及Ser組成之群，其中y = 5至100、5至70、5至60、5至50、或10至100、10至70、10至60、或10至50，且其中最末絲胺酸處於y-2或y-3位置中。
  76. 如請求項75之肽連接子，其中y = 10至50。
  77. 如請求項75之肽連接子，其中y = 15至31或15至30。
  78. 如請求項77之肽連接子，其中y = 15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25。
  79. 如請求項78之肽連接子，其中y = 20或21。
  80. 如請求項75之肽連接子，其由序列(GxS)n(GGSGG)或(GxS)n(GGSGGG)組成，其中G =甘胺酸，S =絲胺酸，x = 4且n = 1至20、2至20、1至10、或2至10。
  81. 如請求項80之肽連接子，其中n = 2、3、4或5。
  82. 如請求項80之肽連接子，其中n = 2、3或4。
  83. 如請求項75之肽連接子，其由序列GGGGSGGGGSGGGGSGGSGG (SEQ ID NO: 150)或GGGGSGGGGSGGGGSGGSGGG (SEQ ID NO: 151)組成。
  84. 一種如請求項75至83中任一項之肽連接子之用途，其用於接合多域蛋白之第一域與第二域。
  85. 一種多域蛋白，其包含至少一個第一域及一個第二域，其中該第一域及該第二域係經如請求項75至83中任一項之肽連接子連接。
  86. 如請求項84之用途或如請求項85之多域蛋白，其中該多域蛋白為抗體。
  87. 如請求項84之用途或如請求項85之多域蛋白，其中該多域蛋白為雙特異性抗體。
  88. 如請求項84之用途或如請求項85之多域蛋白，其中該第一域為抗原結合部分，且該第二域為VH或VL域。
  89. 如請求項88之用途或多域結合蛋白，其中該抗原結合部分為抗體片段。
  90. 如請求項84之用途或如請求項85之多域蛋白，其中該第一域為Fc域，且該第二域為VH或VL域。
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