TW202214589A - Shp2抑制劑及其應用 - Google Patents

Shp2抑制劑及其應用 Download PDF

Info

Publication number
TW202214589A
TW202214589A TW109102505A TW109102505A TW202214589A TW 202214589 A TW202214589 A TW 202214589A TW 109102505 A TW109102505 A TW 109102505A TW 109102505 A TW109102505 A TW 109102505A TW 202214589 A TW202214589 A TW 202214589A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
amino
compound
dihydrospiro
pharmaceutically acceptable
thio
Prior art date
Application number
TW109102505A
Other languages
English (en)
Inventor
吳顥
吳文茂
陳忠研
李玲
朱林強
張展
吳雲飛
林遠望
馮東傑
趙新濤
餘軍
束慶玉
程見洪
韓晗
郭晶
宏 蘭
家炳 王
丁列明
Original Assignee
大陸商貝達藥業股份有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 大陸商貝達藥業股份有限公司 filed Critical 大陸商貝達藥業股份有限公司
Publication of TW202214589A publication Critical patent/TW202214589A/zh

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/10—Spiro-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/10—Spiro-condensed systems
    • C07D491/107—Spiro-condensed systems with only one oxygen atom as ring hetero atom in the oxygen-containing ring

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)

Abstract

本發明涉及一種作為含Src同源區2蛋白質酪氨酸磷酸酶2(SHP2)抑制劑應用的化合物(如式I所示)，及其藥物組合物、製備方法，以及其在治療SHP2介導的疾病中的用途。本發明的化合物通過參與調節細胞增殖、凋亡、遷移、新生血管生成等多個過程而發揮作用。

Description

SHP2抑制劑及其應用
本發明關於一系列作為含Src同源區2蛋白質酪氨酸磷酸酶2(Src homologyregion 2-containing protein tyrosine phosphatase 2, SHP2)抑制劑的化合物及其製備方法、藥物組合物。本發明還關於上述化合物或其藥物組合物在治療SHP2介導的疾病中的用途。
含Src同源區2蛋白質酪氨酸磷酸酶2(Src homologyregion 2-containing protein tyrosine phosphatase 2, SHP2)是由一種由PTPN11基因編碼的非受體型蛋白質酪氨酸磷酸酶，PTPN11是首個被發現的編碼酪氨酸激酶的原癌基因(Chan R J et al. PTPN11 is the first identified proto-oncogene that encodes a tyrosine phosphatase. Blood, 2007, 109:862-867)，其編碼的SHP2蛋白包含N端的SHP2結構域(N-SHP2)、C端SHP2結構域(C-SHP2)、蛋白質磷酸酶催化結構域(PTP)，兩個C端的酪氨酸殘基(Y542和Y580)以及一個富含脯氨酸(Pro)的模體。
近年研究主要認為Ras/ERK通路是SHP2發揮作用最重要的一條訊號轉導通路，其機制(Dance M et al. The molecular functions of Shp2 in the RAS/mitogen-activated protein kinase (ERK1/2) pathway. Cell Signal, 2008, 20:453-459)大致為：生長因子受體活化後，其酪氨酸殘基發生自體磷酸化，為Grb2和SHP2(含有SH2結構域的銜接蛋白)磷酸酪氨酸結合區域SH2提供停靠位點。Grb2與磷酸化的生長因子受體的結合導致SOS蛋白在胞膜的聚集。SOS作為一種鳥嘌呤核苷酸交換因子(guanine nucleotide exchange factor, GEF)，可以催化膜結合蛋白Ras從無活性的Ras-GDP轉換為有活性的Ras-GTP。Ras-GTP再進一步與下游的訊號系統發生聯繫，啟動Ser/Thr激酶Raf1等，進而在調節激酶MEK的作用下使ERK活化，ERK活化後直接作用於細胞質的靶分子或轉移到細胞核內調節基因轉錄，使細胞增殖或分化。這一過程可能還受到SHP2結合蛋白和底物(SHP substrate-1, SHPS-1)、Ras-GTP酶活化蛋白(Ras-GAP)以及其他Src成員的影響。
SHP2蛋白不僅調節Ras/ERK訊號通路，另有報導其還調節JAK-STAT3、NF-κB、PI3K/Akt、RHO和NFAT等多條訊號通路，進而調節細胞增殖、分化、遷移、凋亡等生理學功能。
SHP2被證明與多種疾病相關，Tartaglia等(Tartaglia M et al. Mutations in PTPN11, encoding the protein tyrosine phosphatase SHP-2, cause Noonan syndrome. Nat Genet, 2001, 29:465-468)發現大約50%的努南綜合症患者伴有PTPN11的錯義突變。另外，研究發現PTPN11突變是JMML以及多種白血病發病的重要原因(Tartaglia M et al. Nat Genet, 2003, 34: 148-150; Loh ML et al. Blood, 2004, 103:2325-2331; Tartaglia M et al. Br J Haematol, 2005, 129:333-339; Xu R et al. Blood, 2005, 106:3142-3149.)。隨著對PTPN11/SHP2研究的深入，發現其與肺癌、胃癌、結腸癌、黑色素瘤、甲狀腺癌等多種癌症的發生均有的關係(唐春蘭等.中國肺癌雜誌，2010,13:98-101; Higuchi M et al. Cancer Sci, 2004, 95:442-447; Bentires-Al j M et al. Cancer Res, 2004, 64:8816-8820; Martinelli S et al. Cancer Genet Cytogenet, 2006, 166:124-129.)。
因此，SHP2抑制劑作為潛在的治療手段得到了越來越多的關注。目前在開發的SHP2抑制劑有多種，諾華開發的TNO155在2017年進入治療實體瘤的I期臨床試驗。加科思設計開發的JAB-3068於2018年4月進入治療實體瘤的I期臨床試驗。Revolution開發的RMC-4630於2018年8月進行首次人體臨床試驗。目前，該靶點在國內外還未見上市品種，因此，開發出能夠靶向抑制SHP2活性的小分子藥物，為患者提供更加安全有效的SHP2抑制劑具有重要的研究意義。
本發明關於一種作為含Src同源區2蛋白質酪氨酸磷酸酶2(SHP2)抑制劑應用的化合物。本發明所述化合物具有如式I所示通式結構或其藥學上可接受的鹽、互變異構體、溶劑化物、螯合物、非共價複合物或前體藥物，
Figure 02_image003
式I 其中， R 1選自氫、羥基、C 1-8烷基、含取代基的C 1-8烷基、C 1-8烷氧基、含取代基的C 1-8烷氧基、C 2-8烯基、含取代基的C 2-8烯基、C 2-8炔基或含取代基的C 2-8炔基； R 2選自氫、C 1-4烷基或含取代基的C 1-4烷基； R 3選自氫、氨基、-C(O)NH 2、-C≡N、羥基、C 1-8烷基、含取代基的C 1-8烷基、C 1-8烷氧基或含取代基的C 1-8烷氧基； R 4選自氫、鹵素、氨基、醯胺基、-C≡N、羧基、羥基、羥甲基、C 1-8烷基、含取代基的C 1-8烷基、C 1-8烷氧基、含取代基的C 1-8烷氧基、C 2-8烯基、含取代基的C 2-8烯基、C 2-8炔基或含取代基的C 2-8炔基； A 1任意地選自CR 5或N； A 2任意地選自CR 6或N； A 3任意地選自CR 7或N； U任意地選自C(R 8) 2、O或NR 9； 其中，R 5、R 6、R 7、R 8或R 9獨立地選自氫、鹵素、氨基、C 1-8烷基、含取代基的C 1-8烷基、C 1-8烷氧基、含取代基的C 1-8烷氧基、C 2-8烯基、含取代基的C 2-8烯基、C 2-8炔基或含取代基的C 2-8炔基； 環A任意地選自C 6-10芳基或C 5-10雜芳基，所述C 5-10雜芳基含有一個或兩個N或S雜原子； Rx任意地選自氫、鹵素、氨基、含取代基的氨基、磺醯基、C 1-8烷基、含取代基的C 1-8烷基、C 1-8烷氧基、含取代基的C 1-8烷氧基、C 3-8環烷基或含取代基的C 3-8環烷基； n為0、1、2、3或4。
較佳地，式I中的A 3為N。出乎意料地，當A 3為N而不是CR 7時，不僅可以保持SHP2抑制活性，而且可以顯著改善hERG。
一些實施方式中，式I中的R 1選自C 1-3烷基。
一些實施方式中，式I中的R 1為甲基。
一些實施方式中，式I中的R 2選自氫或C 1-3烷基。
一些實施方式中，式I中的R 2為氫。
一些實施方式中，式I中的R 3選自氫、氨基或C 1-3烷基。
一些實施方式中，式I中的R 3為氫或氨基。
一些實施方式中，式I中的R 4選自氫、鹵素、氨基、C 1-3烷基或含取代基的C 1-3烷基。
一些實施方式中，式I中的R 4為氫、氟或氯。
一些實施方式中，式I中的R 4為氫或氯。
一些實施方式中，式I中的A 1選自CR 5或N，其中R 5選自鹵素或鹵素取代的C 1-3烷基。
一些實施方式中，式I中的A 1選自CR 5或N，其中R 5選自F、Cl或三氟甲基。
一些實施方式中，式I中的A 1選自CR 5或N，其中R 5選自Cl或三氟甲基。
一些實施方式中，式I中的A 2選自CR 6或N，其中R 6選自氨基或C 1-3烷氧基。
一些實施方式中，式I中的A 2選自CR 6或N，其中R 6選自氨基或甲氧基。
一些實施方式中，式I中的A 3選自CH或N。
一些實施方式中，式I中的U選自CH 2或O。
一些實施方式中，式I中的環A選自苯基或C 5-6雜芳基，所述C 5-10雜芳基含有一個或兩個N或S雜原子。
一些實施方式中，式I中的環A選自苯基、
Figure 02_image005
或
Figure 02_image007
。
一些實施方式中，式I中的
Figure 02_image009
任意地選自
Figure 02_image011
，
Figure 02_image013
，
Figure 02_image015
，
Figure 02_image017
，
Figure 02_image019
，
Figure 02_image021
，
Figure 02_image023
，
Figure 02_image025
，
Figure 02_image027
,
Figure 02_image029
,
Figure 02_image031
,
Figure 02_image033
,
Figure 02_image035
,或
Figure 02_image037
。
一些實施方式中，式I中的
Figure 02_image009
任意地選自
Figure 02_image011
，
Figure 02_image013
，
Figure 02_image015
，
Figure 02_image017
，
Figure 02_image019
，
Figure 02_image021
，
Figure 02_image023
，
Figure 02_image025
，
Figure 02_image027
,
Figure 02_image029
。
本發明進一步提供了式I所示化合物的一些較佳技術方案。例如，本發明所述化合物具有如式II所示通式結構或其藥學上可接受的鹽、互變異構體、溶劑化物、螯合物、非共價複合物或前體藥物，
Figure 02_image039
式II 其中， R 1選自C 1-8烷基； R 2選自氫； R 3選自H或氨基； R 4選自氫、鹵素； A 1選自CR 5； A 2選自CR 6； U選自C(R 8) 2； 其中，R 5、R 6、R 8獨立地選自氫、鹵素、C 1-8烷基、含取代基的C 1-8烷基； 環A任意地選自C 6-10芳基。
在一些實施方式中，所述含取代基的C 1-8烷基可以是鹵代C 1-8烷基，例如三氟甲基。
一些實施方式中，式II中的環A任意地被氫或C 1-8烷氧基取代。
一些實施方式中，式II中的環A任意地被氫或甲氧基取代。
一些實施方式中，式II中的R 1為甲基。
一些實施方式中，式II中的R 4為氫。
一些實施方式中，式II中的U選自CH 2。
一些實施方式中，式II中的R 5選自Cl。
一些實施方式中，式II中的R 6選自NH 2。
一些實施方式中，式II中的環A選自苯基。
本發明進一步提供了一種化合物或其藥學上可接受的鹽，其中，所述化合物選自： (1)( S)-2-(1-氨基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (2)( S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-6-甲氧基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]  -1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (3)( S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-6-氯-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (4)( S)-2-(1-氨基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-5-((3-氯-2-甲氧基吡啶-4-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3 H) -酮； (5)( S)-2-(1-氨基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶] -1'-基)-5-((2,3-二氯苯基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (6)( S)-2-(1-氨基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶] -1'-基)-3-甲基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫基)嘧啶-4(3 H)-酮； (7)( S)-2-(1-氨基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶] -1'-基)-5-((6-氨基-3-氯吡啶-2-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (8)( S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-4-溴-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (9)( S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-6-(三氟甲基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶] -1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (10)( S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-4-甲氧基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]  -1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (11)( S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-2-(5-氨基-5,7-二氫螺[環戊二烯并[ b]吡啶-6,4'-呱啶]- 1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (12)( S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-5,6-二甲氧基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-  呱啶] -1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (13)( S)-2-(4-氨基-2-氯-4,6-二氫螺[環戊二烯并[ d]噻唑-5,4'-呱啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (14)( S)-2-(5-氨基-2-甲氧基-5,7-二氫螺[環戊二烯并[ b]吡啶-6,4'-呱啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (15)( S)-6-氨基-2-(1-氨基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶] -1'-基)-5-((2,3-二氯苯基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (16)(S)-6-氨基-2-(1-氨基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (17)(S)-6-氨基-2-(1-氨基-6-氟代-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-5-((2-氨基嘧啶-4-基) 硫代)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (18)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-yl) 硫代)-2-(1-氨基-6-氟代-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (19)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基) 硫代)-2-(1-氨基-5-氟代-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (20)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基) 硫代)-2-(1-氨基-7-氟代-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (24)(S)-2-(1-氨基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氟吡啶-4-基) 硫代)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (25)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基) 硫代)-2-(1-氨基-4,7-二氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (26)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基) 硫代)-2-(1-氨基-6-氯-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮；或 (27)(S)-6-氨基-2-(1-氨基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-5-((2-氨基嘧啶-4-基) 硫代)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮。
較佳地，本發明進一步提供了一種化合物或其藥學上可接受的鹽，其中，所述化合物選自： (1)( S)-2-(1-氨基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (2)( S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-6-甲氧基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]  -1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (3)( S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-6-氯-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (4)( S)-2-(1-氨基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-5-((3-氯-2-甲氧基吡啶-4-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3 H) -酮； (8)( S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-4-溴-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (9)( S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-6-(三氟甲基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶] -1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (10)( S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-4-甲氧基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]  -1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (11)( S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-2-(5-氨基-5,7-二氫螺[環戊二烯并[ b]吡啶-6,4'-呱啶]- 1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (12)( S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-5,6-二甲氧基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-  呱啶] -1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (13)( S)-2-(4-氨基-2-氯-4,6-二氫螺[環戊二烯并[ d]噻唑-5,4'-呱啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (14)( S)-2-(5-氨基-2-甲氧基-5,7-二氫螺[環戊二烯并[ b]吡啶-6,4'-呱啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (16)(S)-6-氨基-2-(1-氨基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮； (17)(S)-6-氨基-2-(1-氨基-6-氟代-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-5-((2-氨基嘧啶-4-基) 硫代)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮； (18)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-yl) 硫代)-2-(1-氨基-6-氟代-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮； (19)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基) 硫代)-2-(1-氨基-5-氟代-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮； (20)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基) 硫代)-2-(1-氨基-7-氟代-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮； (24)(S)-2-(1-氨基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氟吡啶-4-基) 硫代)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮； (25)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基) 硫代)-2-(1-氨基-4,7-二氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮； (26)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基) 硫代)-2-(1-氨基-6-氯-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；或 (27)(S)-6-氨基-2-(1-氨基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-5-((2-氨基嘧啶-4-基) 硫代)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮。
本發明還提供了一種藥物組合物，其特徵在於，包含治療有效量的至少一種式I或式II所示化合物和至少一種藥學上可接受的輔料。
本發明進一步提供了一種藥物組合物，其特徵在於，所述的結構式I所示化合物和藥學上可接受的輔料的質量百分比為0.0001:1-10。
本發明提供了結構式I所示化合物或藥物組合物在製備藥物中的應用。
本發明進一步提供了所述應用的較佳技術方案：
作為較佳，所述應用為用於製備治療、預防、延遲或阻止癌症，癌症轉移，心血管疾病，免疫疾病，纖維化或眼部疾病的藥物的應用。
作為較佳，所述應用為用於製備治療由SHP2介導的疾病的藥物的應用。
作為較佳，所述疾病是癌症。
作為較佳，所述癌症選自Noonan綜合症、豹斑綜合症、青少年髓單核細胞白血病、神經母細胞瘤、黑色素瘤、頭頸部鱗狀細胞癌、急性髓性白血病、乳腺癌、食道腫瘤、肺癌、結腸癌、頭癌、胃癌、淋巴瘤、膠質母細胞瘤、胃癌、胰腺癌或其組合。
作為較佳，所述應用為用於製備SHP2抑制劑的應用。
本發明還提供了一種治療和/或預防由SHP2介導的疾病的方法，包括向治療物件施用治療有效量的至少任意一種結構式I所示化合物或藥物組合物。
作為較佳，在上述方法中，所述SHP2介導的疾病是癌症。
本發明還提供了一種治療癌症的方法，包括向治療物件施用治療有效量的至少任意一種結構式I所示化合物或藥物組合物。
作為較佳，在上述方法中，所述癌症是Noonan綜合症、豹斑綜合症、青少年髓單核細胞白血病、神經母細胞瘤、黑色素瘤、頭頸部鱗狀細胞癌、急性髓性白血病、乳腺癌、食道腫瘤、肺癌、結腸癌、頭癌、胃癌、淋巴瘤、膠質母細胞瘤、胃癌、胰腺癌或其組合。
作為較佳，在上述方法中，所述治療物件為人類。
除非另有說明，本發明所用術語含義如下：
術語“烷基”包括直鏈、支鏈或環狀的飽和烷基。例如，烷基包括但不限於甲基、乙基、丙基、異丙基、環丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、環丁基、正戊基、3-(2-甲基)丁基、2-戊基、2-甲基丁基、新戊基、環戊基、n-己基、2-己基、2-甲基戊基及環己基等類似基團。類似的，“C 1-8烷基”中的“C 1-8”是指包含有1、2、3、4、5、6、7或8個碳原子的直鏈、支鏈或環狀形式排列的基團。
“烯基”和“炔基”包括直鏈、支鏈或環狀的烯基和炔基。同樣地，“C 2-8烯基”和“C 2-8炔基”是指含有2、3、4、5、6、7或8個碳原子以直鏈、支鏈或環狀形式排列的烯基或炔基。
術語“烷氧基”是指前述的直鏈、支鏈或環狀烷基的氧醚形式。
術語“芳基”是指未取代或取代的包括碳原子的單環或多環芳香基團。較佳為6到10員的單環或雙環芳香基團。較佳為苯基、萘基。最佳為苯基。
術語“雜芳基”是指，從一個母體雜芳環系統的一個碳原子上移走一個氫原子所形成的單價的雜原子基團。雜芳基包括：5-到7-員芳香、單環，包括至少一個選自N、O或S的雜原子，例如，1到4個雜原子，或較佳為1到3個雜原子，環上的其他原子為碳；多雜芳基環包括至少一個選自N、O或S的雜原子，例如，1到4個雜原子，或較佳為1到3個雜原子，環上的其他原子為碳，且其中至少一個雜原子在芳環上。特別較佳的雜芳基基團是C 3-10的雜芳基，包括但不限於，吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡喃基、吡唑基、嘧啶基、噠嗪基、吡嗪基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、異噁唑基、三氮唑基、吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、苯并三氮唑基、哢唑基、喹啉基、異喹啉基、嘌呤基等類似基團。
但是，在任何情況下，雜芳基和芳基都不會彼此交叉或相互包含。因此，根據以上定義，如果至少一個全碳芳香環與一個雜環基相稠合，得到的是雜芳基，而不是芳基。
“雜環基”是指飽和的或不飽和的但不具有芳香性的環狀基團，而且其中一個或多個碳原子(以及所連接的氫原子)可分別被相同的或不相同的雜原子和相應所連接的氫原子所取代。有代表性的取代碳原子的雜原子包括但不限於N、P、O、S和Si。當需要描述特定的飽和度時，分別採用術語“雜環烷基”或“雜環烯基”。具有代表性的雜環基基團包括但不限於環氧化合物、咪唑烷、嗎啉、呱嗪、呱啶、吡唑烷、吡咯烷、奎寧環、四氫呋喃或四氫吡喃等類似基團。含取代基的雜環基也包含被至少一個含氧的(=O)或氧化物(-O-)取代基取代的環系統，如：呱啶-氮-氧化物、嗎啉基-氮-氧化物、1-氧代-1-硫嗎啉基和1-二氧-1-硫嗎啉基。
但是，在任何情況下，雜環烷基和環烷基都不會彼此交叉或相互包含。因此，根據上述定義，如果至少一個全碳環與一個雜環烷基稠合形成一個二-、多-或螺-環，將仍然定義為雜環烷基。
另外，如果一個雜芳基與一個雜環基稠和形成一個二-、多-或螺-環，將定義為雜環基而不是雜芳基。
“鹵素”是指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)或碘(I)。較佳的鹵素是指氟、氯和溴。
“鹵代基”是指氟代、氯代、溴代或碘代基團。較佳的鹵代基是指氟代和氯代。
“取代”是指一個基團中的一個或多個氫原子分別被相同的或不同的取代基所取代。具有代表性的取代基包括但不限於鹵素、氨基、氧代基、羰基、烷基、烷氧基、芳基、環烷基、雜環基、雜芳基。在一些實施例中，取代基包含但不限於鹵素、氨基、甲基、-CH 3、三氟甲基、-CH 3。
無論何時，術語“烷基”或“芳基”或者其首碼詞根出現在取代基名稱中(如芳烷基，或二烷基氨基)，均應按前述的“烷基”和“芳基”定義對取代基進行限定性解釋。碳原子的指定數量(如C l-6)將獨立的表示在一個烷基部分或在一個更大的取代基中的烷基部分(其中烷基作為首碼詞根)中的碳原子的數量。
本發明所述“化合物”包括式I所示的化合物，及其所有藥學上可接受的形式。這些藥學上可接受的形式包括鹽、溶劑化物、非共價複合物、螯合物或其前體藥物、或上述所有形式的任意混合物。
所述“藥學上可接受的”是指公知的用於動物的，特別是可用於人體的。
本發明中術語“組合物”包括含有特定數量的特定組分的產品，也包括任何由特定數量的特定組分直接或間接得到的產品。因此，包括本發明中的化合物作為活性組分的藥物組合物和製備該化合物的方法都是本發明的內容。
“治療有效量”是指一個化合物施用于治療主體時治療並且預防和/或抑制一種疾病、病情、症狀、適應症和/或不適的至少一種臨床症狀時，足以這種疾病、病情、症狀、適應症或不適的治療產生一定效果的劑量。具體的“有效治療劑量”可以根據化合物，給藥途徑、患者年齡、患者體重，所治療的疾病或不適的類型、症狀和嚴重程度等的不同而變化。在任意可能的情況下，一個合適的劑量對那些在本領域的專業人員可以是顯而易見的，也可以是用常規實驗方法確定的。
本發明提供的化合物可以以“藥學上可接受的鹽”的形式存在。藥物應用方面，本發明提供的化合物的鹽是指無毒的藥學上可接受的鹽。藥學上可接受的鹽的形式包括藥學上可接受的酸/陰離子或鹼/陽離子鹽。藥學上可接受的酸/陰離子鹽一般以鹼性氮與無機酸或有機酸質子化的形式存在。典型的有機或無機酸包括鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、高氯酸、硫酸、硝酸、磷酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、乳酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、α-酮戊二酸、馬尿酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、羥乙基磺酸、苯磺酸、草酸、撲酸、2-萘磺酸、對甲苯磺酸、環己胺磺酸、水楊酸、糖精酸或三氟乙酸。藥學上可接受的鹼/陽離子鹽，包括但不限於，鋁鹽、鈣鹽、氯普魯卡因鹽、膽鹼、二乙醇胺鹽、乙二胺鹽、鋰鹽、鎂鹽、鉀鹽、鈉鹽和鋅鹽。
本發明化合物的藥物前體包含在本發明的保護範圍內。通常，所述藥物前體是很容易在體內轉化成所需要的化合物的功能性衍生物。因此，本發明提供的治療方法涉及的術語“給藥”包括施用本發明公開的化合物，或雖未明確公開但對主體給藥後能夠在體內轉化為本發明公開的化合物治療所述的各種疾病。有關選擇和製備合適藥物前體衍生物的常規方法，已記載在例如《藥物前體設計》(Design of Prodrugs, ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985)這類書中。
顯然的，一個分子中任何取代基或特定位置的變數的定義，與其他分子中的任何取代基或特定位置的變數的定義是無關的。很容易理解，本發明中的化合物可以根據本學科現有技術選擇合適的取代基或取代形式，以提供化學上穩定且容易用本學科現有技術或本發明中所述的方法進行製備合成。
當式I所示化合物及其藥學上可接受的鹽為溶劑化物或多晶型的形式時，本發明包括任何可能的溶劑化物和多晶型。形成溶劑化物的溶劑類型沒有特別的限定，只要該溶劑是藥理學上可以接受的。例如，水、乙醇、丙醇、丙酮等類似的溶劑都可以採用。
術語“藥學上可接受的鹽”是指從藥學上可接受的無毒的鹼或酸製備的鹽。當本發明提供的化合物是酸時，可以從藥學上可接受的無毒的鹼，包括無機鹼和有機鹼，製得其相應的鹽。從無機鹼衍生的鹽包括鋁、銨、鈣、銅(ic和ous)、鐵、亞鐵、鋰、鎂、錳(ic和ous)、鉀、鈉、鋅之類的鹽。特別地，較佳銨、鈣、鎂、鉀和鈉的鹽。能夠衍生成藥學上可接受的鹽的無毒有機鹼包括伯胺、仲胺和叔胺，也包括環胺及含有取代基的胺，如天然存在的和合成的含取代基的胺。能夠成鹽的其他藥學上可接受的無毒有機鹼，包括離子交換樹脂以及精氨酸、甜菜鹼、咖啡因、膽鹼、N',N'-二苄乙烯二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲胺基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N－乙基嗎啉、N-乙基呱啶、還原葡萄糖胺、氨基葡萄糖、組氨酸、哈胺、異丙胺、賴氨酸，甲基葡萄糖胺、嗎啉、呱嗪、呱啶、多胺樹脂、普魯卡因、嘌呤、可哥鹼、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等。
當本發明提供的化合物是鹼時，可以從藥學上可接受的無毒的酸，包括無機酸和有機酸，製得其相應的鹽。這樣的酸包括，如，醋酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、乙磺酸、羥乙基磺酸、甲酸、富馬酸、葡萄糖酸、谷氨酸、氫溴酸、鹽酸、乳酸、馬來酸、蘋果酸、扁桃酸、α-酮戊二酸、馬尿酸、甲磺酸、黏酸、硝酸、撲酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、對甲苯磺酸等。較優地，蘋果酸、檸檬酸、氫溴酸、鹽酸、甲磺酸、馬來酸、磷酸、硫酸和酒石酸。更優地，磷酸、鹽酸和蘋果酸。由於式I所示化合物將作為藥物應用，所以較佳使用基本上純的形式，例如，至少60%純度，更適當至少75%的純度，特別適當至少98%的純度(%是重量比)。
本發明提供的藥物組合物包括作為活性組分的式I所示化合物(或其藥學上可接受的鹽)，一種藥學上可接受的賦形劑及其他可選的治療組分或輔料。儘管任何給定的情況下，最適合的活性組分給藥方式取決於接受給藥的特定的主體、主體性質和病情嚴重程度，但是本發明的藥物組合物包括適於口腔、直腸、局部和腸外(包括皮下給藥、肌肉注射、靜脈給藥)給藥的藥物組合物。本發明的藥物組合物可以方便地以本領域公知的單位劑型存在和藥學領域公知的任何製備方法製備。
實際上，根據常規的藥物混合技術，本發明式I所示化合物，或藥物前體，或代謝物，或藥學上可接受的鹽，可以合併用藥作為活性組分，與藥物載體混合成藥物組合物。所述藥物載體可以採取各種各樣的形式，取決於想採用的給藥方式，例如，口服或注射(包括靜脈注射)。因此，本發明的藥物組合物可以採用適於口服給藥的獨立單位的形式，如包含預先確定劑量的活性組分的膠囊劑，扁囊劑或片劑。進一步地，本發明的藥物組合物可採用粉末、顆粒、溶液、水性懸浮液、非水液體、水包油型乳液，或油包水型乳液形式。另外，除了上述提到的常見的劑型，式I所示化合物或其藥學上可接受的鹽，也可以通過控釋的方式和/或輸送裝置給藥。本發明的藥物組合物可以採用任何製藥學上的方法製備。一般情況下，這種方法包括使活性組分和構成一個或多個必要組分的載體締合的步驟。一般情況下，所述藥物組合物經由活性組分與液體載體或精細分割的固體載體或兩者的混合物經過均勻的的密切混合製得。另外，該產品可以方便地製備成所需要的外觀。
因此，本發明的藥物組合物包括藥學上可接受的載體和式I所示化合物，或其藥學上可接受的鹽。式I所示化合物，或其藥學上可接受的鹽，與其他一種或多種具有治療活性聯合用藥的化合物的也包括在本發明的藥物組合物中。
本發明採用的藥物載體可以是，例如，固體載體、液體載體或氣體載體。固體載體的例子，包括，乳糖、石膏粉、蔗糖、滑石粉、明膠、瓊脂、果膠、阿拉伯膠、硬脂酸鎂、硬脂酸、甘露醇、山梨醇、微晶纖維素、無機鹽類、澱粉、預膠化澱粉、糖粉、糊精等。液體載體的例子包括，糖漿、花生油、橄欖油和水。氣體載體的例子包括二氧化碳和氮氣。製備藥物口服製劑時，可以使用任何方便的製藥學上的介質。例如，水、乙二醇、油類、醇類、增味劑、防腐劑、著色劑等可用於口服的液體製劑如懸浮劑、酏劑和溶液劑；而載體，如澱粉類、糖類、微晶纖維素、稀釋劑、造粒劑、潤滑劑、黏合劑、崩解劑等可用於口服的固體製劑如散劑、膠囊劑和片劑。考慮到易於施用，口服製劑首選片劑和膠囊。可選地，片劑包衣可使用標準的水製劑或非水製劑技術。
含有本發明化合物或藥物組合物的片劑可通過，可選地，可以與一種或多種輔助組分或輔藥一起混合、壓製或成型製備。活性組分以可以自由流動的形式如粉末或顆粒，與潤滑劑、惰性稀釋劑、表面活性或分散劑混合，在適當的機器中，通過壓製可以製得壓製片劑。用一種惰性液體稀釋劑浸濕粉末狀的化合物或藥物組合物，然後在適當的機器中，通過成型可以製得模製片。較佳地，每個片劑含有大約0.01mg到5g的活性組分，每個扁襄劑或膠囊劑含有大約0.1mg到0.5g的活性組分。例如，擬用於人類口服給藥的劑型包含約0.1mg到約0.5g的活性組分，與合適且方便計量的輔助材料複合，該輔助材料約占藥物組合物總量的5%至99.99％。單位劑型一般包含約0.1mg到約0.5g的有效組分，典型的是0.1mg、0.2mg、0.5mg、1mg、2mg、2.5mg、5mg、10mg、25mg、50mg、100mg、200mg、300mg、400mg或500mg。
本發明提供的適用於胃腸外給藥的藥物組合物可將活性組分加入水中製備成水溶液或懸浮液。可以包含適當的表面活性劑如十二烷基硫酸鈉、聚山梨酯-80(吐溫-80)、聚氧乙烯氫化蓖麻油、泊洛沙姆。在甘油、液態聚乙二醇，及其在油中的混合物，也可以製得分散體系。進一步地，防腐劑也可以，包含在本發明的藥物組合物中用於防止有害的微生物生長。
本發明提供適用於注射使用的藥物組合物，包括無菌水溶液或分散體系。進一步地，上述藥物組合物可以製備成可用於即時配製無菌注射液的無菌粉末的形式。無論如何，最終的注射形式必須是無菌的，且為了易於注射，必須是易於流動的。此外，所述藥物組合物在製備和儲存過程中必須穩定。因此，較佳抗微生物如細菌和真菌的污染的保存。載體可以是溶劑或分散介質，例如，水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、液態聚乙二醇)、植物油，及其適當的混合物。
本發明提供的藥物組合物，可以是適於局部用藥的形式，例如，氣溶膠、乳劑、軟膏、洗液、撒粉，或其他類似的劑型。進一步地，本發明提供的藥物組合物可以採用適於經皮給藥裝置使用的形式。利用本發明式I所示化合物，或其藥學上可接受的鹽，通過常規的加工方法，可以製備這些製劑。作為一個例子，乳劑或軟膏劑的製備是通過在上述化合物中加入親水性材料和水(二者總量約為化合物的5wt%到50wt%)，製得具有預期一致性的乳劑或軟膏。
本發明提供的藥物組合物，可以製成以固體為載體、適用於直腸給藥的形式。混合物形成單位劑量的栓劑是最較佳的劑型。適當的輔料包括本領域常用的可哥脂和其他材料。栓劑可以方便地製備，首先藥物組合物與軟化或熔化的輔料混合，然後冷卻和模具成型而製得。
除了上述提到的載體組分外，上述藥學製劑還可以包括，適當的，一種或多種附加的輔料組分，如稀釋劑、緩衝劑、調味劑、黏合劑、表面活性劑、增稠劑、潤滑劑、防腐劑(包括抗氧化劑)等。進一步地，其他的輔藥還可以包括調節藥物與血液等滲壓的促滲劑。包含有式I所示化合物，或其藥學上可接受的鹽的藥物組合物，也可以製備成粉劑或濃縮液的形式。
為使上述內容更清楚、明確，本發明將用以下實施例來進一步闡述本發明的技術方案。以下實施例僅用於說明本發明的具體實施方式，以使本領域的技術人員能夠理解本發明，但不用於限制本發明的保護範圍。本發明的具體實施方式中，未作特別說明的技術手段或方法等為本領域的常規技術手段或方法等。
除非另有說明，本發明所有的一部分和百分比均按重量計算，所有溫度均指攝氏度。
實施例中使用了下列縮略語： ACE-Cl：1-氯乙基氯甲酸酯； (Boc) 2O：二碳酸二叔丁酯； BOP：苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸鹽； DBU：1,8-二氮雜二環十一碳-7-烯； DCE：1,2-二氯乙烷； DCM：二氯甲烷； DIPEA或DIEA：N,N-二異丙基乙胺； DMAc：N,N-二甲基乙醯胺； DMF：N,N-二甲基甲醯胺； DMSO：二甲基亞碸； EA或EtOAc：乙酸乙酯； EGTA：乙二醇雙氨乙基醚四乙酸； EtOH：乙醇； EtONa：乙醇鈉； h、hr或hrs：小時； Hex：正己烷； HEPES：4-(2-羥乙基)-1-呱嗪乙磺酸； LC-MS：液相色譜-質譜聯用； LDA：二異丙基氨基鋰； MeCN：乙腈； MeOH：甲醇； MeONa：甲醇鈉； min或mins：分鐘； MsCl：甲烷磺醯氯； NEt 3：三乙胺 NBS：N-溴代琥珀醯亞胺； NMP：N-甲基-2-吡咯烷酮； Pd 2(dba) 3：三(二亞苄基丙酮)二鈀； Pd(OAc) 2：乙酸鈀(II)； PE：石油醚； PPA：多聚磷酸； rt或RT：室溫； TFA：三氟乙酸； THF：四氫呋喃； Ti(OEt) 4：鈦酸四乙酯； TLC：薄層色譜； TMEDA：四甲基乙二胺；和 xantphos：4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽。
中間體化合物M1的製備：
Figure 02_image041
步驟1：化合物M1-3的製備
將15.00g化合物M1-1和7.08g化合物M1-2溶解於150mL二氧六環中，加入198mg Pd(OAc) 2，1.70g Xantphos 和15.00g DIEA。氮氣置換三次，氮氣保護下反應升至85 oC攪拌反應12hrs。TLC檢測反應完全，將反應液過濾，濾餅用DCM(50mL×2)洗滌，濾液減壓濃縮，殘餘物經柱層析純化得20.00g化合物M1-3。
步驟2：化合物M1的製備
將20.00g化合物M1-3溶解於200mL THF中，-30 oC下滴加EtONa(35mL，20%的EtOH溶液)，RT攪拌反應3hrs。TLC檢測反應完全，減壓濃縮，加入200mL 的DCM攪拌30mins，反應液過濾，濾餅用DCM(50mL×2)洗滌，得固體15.00g化合物M1。
中間體化合物M2的製備：
Figure 02_image043
步驟1：化合物M2-2的製備
將1.00g化合物M2-1溶解於10mL的DMSO中，加入MeONa的MeOH溶液(15mL，0.5M)，然後70 oC反應1hr。TLC檢測反應完全，將反應液倒入30mL水中，加EtOAc萃取(40mL×3)，合併有機相，用50mL飽和NaCl洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘餘物經柱層析純化得1.10g淡黃色油狀物化合物M2-2。
步驟2：化合物M2-3的製備
將化合物1.10g M2-2溶解於15mL二氧六環中，加入491mg 化合物M1-2，46mg Xantphos，35mg Pd(OAc) 2，1.05g DIEA，混合物用氮氣置換3次，加熱至90 oC反應5hrs。TLC檢測反應完全，反應液冷卻至室溫，過濾，濾餅用EtOAc(5mL×3)洗滌，濾液減壓濃縮，殘餘物經柱層析純化得1.03g淡黃色固體M2-3。
步驟3：化合物M2的製備
將1.03g化合物M2-3溶解於10mL無水THF中，降溫至-30 oC，將EtONa的EtOH溶液(2mL，20%)緩慢滴加入上述溶液中，-30 oC攪拌反應30mins，緩慢升至室溫攪拌反應2hrs。TLC檢測反應完全，將反應液減壓濃縮，殘餘物加入20mL DCM打漿30mins，過濾，濾餅用DCM(5mL×3)洗滌，取濾餅真空乾燥得990mg棕色固體M2。
中間體化合物M3的製備：
Figure 02_image045
步驟1：化合物M3-2的製備
將3.00g化合物M3-1和1.60g化合物M1-2溶解於30mL二氧六環中，加入243mg Pd 2(dba) 3，384g Xantphos和3.40g DIPEA，氮氣置換三次，反應液升至110 oC攪拌反應3hrs。TLC檢測反應完全，將反應液過濾，濾餅用DCM(30mL×2)洗滌，濾液減壓濃縮，殘餘物經柱層析純化得4.80g化合物M3-2。
步驟2：化合物M3的製備
將4.80g化合物M3-2溶解於50mL THF中，-30 oC下滴加EtONa(7.4mL，20%的EtOH溶液)，RT攪拌反應2hrs。TLC檢測反應完全，減壓濃縮，加入50mL DCM攪拌30mins，反應液過濾，濾餅用DCM(10mL×2)洗滌，抽乾得3.60g化合物M3。
中間體化合物M4的製備：
Figure 02_image047
步驟1：化合物M4-3的製備
將300mg化合物M4-1和174mg化合物M4-2溶解於10mL 二氧六環中，加入4mg Pd(OAc) 2，34mg Xantphos 和300mg DIEA。氮氣置換三次，氮氣保護下反應升至85 oC攪拌反應12hrs。TLC檢測反應完全，將反應液過濾，濾餅用DCM(10mL×2)洗滌，濾液減壓濃縮，殘餘物經柱層析純化得266mg化合物M4-3。
步驟2：化合物M4的製備
將266mg化合物M4-3溶解於5mL THF中，-30 oC下滴加EtONa(0.47mL，20%的EtOH溶液)，RT攪拌反應3hrs。TLC檢測反應完全，減壓濃縮，加入15mL的DCM攪拌30mins，反應液過濾，濾餅用DCM(20mL×2)洗滌，得固體182mg化合物M4。
中間體化合物M5的製備：
Figure 02_image049
步驟1：化合物M5-3的製備
氮氣保護下，將25.00g化合物M5-1溶解於200mL 的DMF中，降溫至0 oC，分批加入22.70g NaH，0 oC保溫1hr，然後將54.96g化合物M5-2緩慢滴加到反應液中，滴完後0 oC下反應1hr，升溫至60 oC繼續反應1hr。反應液降溫至0 oC，用500mL冰水淬滅反應，EtOAc(500mL×3)萃取，合併有機相，有機相用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘餘物經柱層析純化得29.00g棕色油狀物M5-3。
步驟2：化合物M5-5的製備
將29.00g化合物M5-3溶解於50mL 的Ti(OEt) 4中，加入34.99 g化合物M5-4，然後加熱至90 oC反應12hrs。TCL檢測反應完全，將反應液倒入500 mL的冰水中，加入300mL EtOAc攪拌1hr，用EtOAc(300mL×3)萃取，合併有機相，有機相用飽和食鹽水(100mL×4)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得39.00g棕色油狀物化合物M5-5粗品。
步驟3：化合物M5-6的製備
氮氣保護下，將48.00g化合物M5-5溶解於500mL無水THF中，降溫至-20 oC，緩慢加入6.73g NaHB 4，然後自然升溫至RT攪拌2hrs。反應完畢， 反應液降溫至0 oC，用300mL水淬滅，EtOAc(300mL×3)萃取，合併有機相，有機相用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘餘物經柱層析純化得25.40g棕色油狀物的化合物M5-6。
步驟4：化合物M5的製備
將10.00g化合物M5-6溶解於100mL DCM溶液中，滴加28.04g TFA溶液，然後RT下反應1hr。反應液降溫至0 oC，用100mL飽和NaHCO 3水溶液淬滅，EtOAc:THF=3:1(100mL×3)萃取，合併有機相，有機相用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得7.64g棕色固體即化合物M5粗品，直接用於下一步反應。
1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6): δ 7.26-7.16 (m, 4H), 5.50 (d, J= 10.0 Hz, 1H), 4.30 (d, J= 10.0 Hz, 1H), 3.04 (d, J= 16.0 Hz, 1H), 2.87-2.80 (m, 2H), 2.67-2.58 (m, 3H), 1.88-1.82 (m, 1H), 1.59-1.53 (m, 1H), 1.37-1.34 (m, 1H), 1.21(s, 9H) , 1.12-1.09 (m, 1H)。
中間體化合物M6的製備：
Figure 02_image051
步驟1：化合物M6-3的製備
將10.00g化合物M6-1和19.50g化合物M6-2溶解於100mL的MeCN中，加入26.20g K 2CO 3。反應升至90 oC攪拌反應3hrs。TLC檢測反應完全，將反應液過濾，濾餅用EtOAc(50mL×2)洗滌，濾液減壓濃縮，殘餘物經柱層析純化得5.90g化合物M6-3。
步驟2：化合物M6-4的製備
將1.50g化合物M6-3溶解於15mL甲苯中，滴加1.1mL PBr 3，反應液升至105 oC攪拌反應12hrs。TLC檢測反應完全，減壓濃縮，加入15mL水，用NaOH溶液調至pH=9，用EtOAc (30mL×3)萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得1.50g化合物M6-4。
步驟3：化合物M6-6的製備
將450mg化合物M6-5溶解於6mL DMF中，0 oC下分批加入271mg NaH，氮氣保護下，60 oC攪拌反應1hr後加入1.20g化合物M6-4，60 oC攪拌反應1hr。TLC檢測反應完全，加入30mL 水淬滅反應，用EtOAc(25mL×2)和水(30mL×3)萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘餘物經柱層析純化得160mg化合物M6-6。
步驟4：化合物M6-7的製備
在0 oC下將160mg化合物M6-6溶解於2mL DCE中，滴加入155mg ACE-Cl，RT攪拌反應2hrs。TLC檢測反應完全，減壓濃縮，加入4mL MeOH，反應升至80 oC攪拌反應3hrs。TLC檢測反應完全，減壓濃縮，加入4mL DCM，242mg (B OC) 2O和239mg DIEA，RT攪拌反應12hrs。TLC檢測反應完全，減壓濃縮，殘餘物經柱層析純化得25mg化合物M6-7。
步驟5：化合物M6的製備
由化合物M6-7製備化合物M6的步驟類似於由化合物M5-3到化合物M5的步驟。
中間體化合物M7的製備：
Figure 02_image053
步驟1：化合物M7-3的製備
將4.00g化合物M7-1溶解於50mL無水THF中，氮氣置換三次，降溫至-78 oC，緩慢滴加入LDA的THF溶液(11.70mL，2.0M)，然後-78 oC反應1hr，將化合物M7-2 的THF(10mL)溶液緩慢滴加入上述反應液中，-78 oC反應30mins，緩慢升至室溫反應2hrs。TLC檢測反應完全，用30mL飽和NH 4Cl溶液淬滅反應，加入50mL水，加EtOAc萃取(60mL×3)，合併有機相，用50mL飽和NaCl洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘餘物經柱層析純化得4.30g無色油狀物M7-3。
步驟2：化合物M7-4的製備
將4.30g化合物M7-3溶解於THF/MeOH(40mL/40mL)中，加入NaOH水溶液(20mL，2.4N)，加熱至80 oC反應18hrs。TLC檢測反應完全，反應液冷卻至室溫，減壓濃縮蒸除有機溶劑，殘餘物用濃鹽酸調至pH為3-4，過濾，濾餅用水(10mL×3)洗滌，將濾餅進行真空乾燥得白色固體3.40g化合物M7-4。
步驟3：化合物M7-5的製備
將3.40g化合物M7-4溶解於40mL PPA中，升溫至120 oC反應2hrs。TLC檢測反應完全，將反應液緩慢滴加入200mL碎冰中，用2.4N NaOH水溶液調至pH為9-10，加入4.40g (B OC) 2O，RT攪拌反應18hrs。TLC檢測反應完全，加EtOAc萃取(100mL×3)，合併有機相，用100mL飽和NaCl洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘餘物經柱層析純化得2.40g白色固體M7-5。
步驟4：化合物M7的製備
由化合物M7-5製備化合物M7的步驟類似於由化合物M5-3到化合物M5的步驟。
中間體化合物M8的製備：
Figure 02_image055
步驟1：化合物M8-2的製備
將10.00g化合物M8-1溶於100mL MeOH中，加入2.0mL濃硫酸，加熱70 oC反應3 hrs。反應完畢後，旋乾溶劑，加20mL水，用飽和Na 2CO 3水溶液調至pH=9，EtOAc(100mL×3)萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘餘物經柱層析純化得9.23g白色固體，即化合物M8-2。
步驟2：化合物M8-3的製備
將9.23g化合物M8-2溶於150mL MeOH中，冰浴冷至0 oC，分批加入6.97g NaHB 4，自然升溫至RT反應5hrs。反應完畢後，加入20mL飽和NH 4Cl溶液，旋乾溶劑，加入EtOAc(100mL×3)萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘餘物經柱層析純化得6.40g無色液體，即化合物M8-3。
步驟3：化合物M8-4的製備
氮氣保護下，將3.00g化合物M8-3溶於50mL二氯甲烷中，反應液降溫至-15 oC，加入2.81mL NEt 3，然後滴加1.04mL的MsCl溶液，滴加完畢後，升溫至0 oC反應1 hr。反應完畢後，加入水分層，有機相用20mL飽和食鹽水洗滌，有機相無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘餘物經柱層析純化得4.05g白色固體的化合物M8-4。
步驟4：化合物M8-6的製備
氮氣保護下，將3.39g化合物M8-5溶於20mL無水THF中，降溫至-50 oC，滴加1.71g LDA溶液，滴完後-50°C保溫反應1hr後。滴加3.00g化合物M8-4的無水THF(10mL)溶液，滴畢，升溫至RT反應1hr。反應完畢後，加入50mL食鹽水，EtOAc(50mL×3)萃取，合併有機相，有機相用水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘餘物經柱層析純化得4.61g白色固體的化合物M8-6。
步驟5：化合物M8-7的製備
將4.61g化合物M8-6溶于8mL水和40mL MeOH中，加入2.07g NaOH。升溫至65 oC攪拌過夜。 反應完畢後，加入30mL水，旋乾溶劑甲醇，濃縮物用2N鹽酸調至pH=6，EtOAc(50mL×3)萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘餘物經柱層析純化得3.98g白色固體，即化合物M8-7。
步驟6：化合物M8-8的製備
氮氣保護下，將3.98g化合物M8-7溶於20mL無水THF中，反應液降溫至-15 oC，分批加入NaH(60%，0.42g)，然後-15 oC保溫反應1hr，然後降溫至-60 oC，滴加正丁基鋰(1.6M，7.8mL)，保溫反應1hr。反應完畢，加入50mL水，用EtOAc(50mL×3)萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘餘物經柱層析純化得2.36g淡黃色固體，即化合物M8-8。
步驟7：化合物M8的製備
由化合物M8-8製備化合物M8的步驟類似於由化合物M5-3到化合物M5的步驟。
中間體化合物M9的製備：
Figure 02_image057
步驟1：化合物M9-3的製備
氮氣保護下，將2.83g化合物M9-2溶解於50mL 的無水THF中，降溫至-78 oC，滴加LDA(2M，6mL)的THF/Hex溶液。在-78 oC保溫1hr，然後將1.69g化合物M9-1的THF(3mL)溶液緩慢滴加到反應液中，滴完後-78 oC下反應1hr。反應液用50mL飽和食鹽水淬滅反應，EtOAc(30mL×2)萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘餘物經柱層析純化得1.44g淡黃色油狀物化合物M9-3。
步驟2：化合物M9-4的製備
氮氣保護下，將900mg化合物M9-3溶解於50mL無水THF中，降溫至-78 oC。滴加LDA(2M，3mL)的THF/Hex溶液。在-78 oC保溫反應1hr。反應液用50mL飽和食鹽水淬滅反應，EtOAc(30mL×2)萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘餘物經柱層析純化得300mg淡黃色固體化合物M9-4。
步驟3：化合物M9的製備
由化合物M9-4製備化合物M9的步驟類似於由化合物M5-3到化合物M5的步驟。
經由不同的反應起始原料和合適的試劑，例如合成M11的起始原料為6-甲氧基-1-茚酮，採用與前述中間體5-9類似的方法製備表1的中間體化合物M10-M14。
表1
中間體編號 化學結構 中間體編號 化學結構
M10
Figure 02_image059
 M11
Figure 02_image061
M12
Figure 02_image063
 M13
Figure 02_image065
M14
Figure 02_image067
      
實施例1：化合物 (S)-2-(1-氨基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮的製備
Figure 02_image069
步驟1：化合物1-2的製備
將2.00g化合物1-1溶解於40mL THF中，加入NaOH(30mL，1N)，然後RT反應2hrs。TLC檢測反應完全，將反應液倒入100mL水中，用6N HCl調至pH為4-5，加EtOAc萃取(100mL×4)，合併有機相，用50mL飽和NaCl洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘餘物用正己烷打漿得1.67g淡黃色固體1-2。
步驟2：化合物1-3的製備
將1.28g化合物1-2溶解於13mL DMF中，降溫0 oC，加入3.26g Cs 2CO 3，然後滴加2.13g CH 3I，滴完後升溫至10 oC反應1hr。TLC檢測反應完全，反應液降溫至0 oC，加入20mL EtOAc和20mL 水，分出有機相，水相繼續用20mL EtOAc萃取，合併有機相，飽和NaCl(5×4mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘餘物經柱層析純化得635mg化合物1-3。
步驟3：化合物1-5的製備
將359mg化合物1-3和448mg化合物M5溶解於6mL DMAc中，加入860mg DIPEA，氮氣置換三次，微波120 oC反應1hr。TLC檢測反應完全，將反應液冷卻至室溫，加20mL水，加EtOAc(20mL×3)萃取，合併有機相，飽和NaCl(5 mL×4)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘餘物經柱層析純化得290mg化合物1-5。
步驟4：化合物1-6的製備
將250mg化合物1-5和127mg化合物M1溶解於8mL二氧六環中，加入18mg CuI，22mg TMEDA和293mg K 3PO 4，混合物通過氮氣置換三次，加熱至100 oC反應48hrs。反應液冷卻至室溫，過濾，濾餅用EtOAc(10mL×3)洗滌，濾液減壓濃縮，殘餘物經柱層析純化得153mg化合物1-6。
步驟5：化合物1的製備
將29mg化合物1-6溶解於0.5mL EtOAc和0.5mL MeOH中，加入0.1mL 2N HCl的MeOH溶液，RT反應2hrs。TLC檢測反應完全，減壓濃縮，加NaHCO 3調至pH為7-8，用EtOAc(10mL×3)萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘餘物經柱層析純化得11.9mg化合物1。
[M+H +]=469.16。
1H NMR (500MHz, DMSO- d 6) :δ 8.12 (s, 1H), 7.65 (d, J = 5.5Hz, 1H), 7.32-7.31 (m,1H), 7.20-7.15 (m, 3H), 6.27 (s, 2H), 6.02(d, J= 5.5 Hz, 1H), 3.87 (s, 1H), 3.71-3.65 (m, 2H), 3.41 (s, 3H), 3.21-3.11 (m, 2H), 3.04(d, J = 15.5 Hz, 1H), 2.63 (d, J= 15.5 Hz, 1H), 1.92-1.87 (m, 1H), 1.83-1.78 (m, 1H), 1.56-1.54 (m, 1H), 1.17-1.14 (m, 1H)。
實施例2：化合物 ( S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-6-甲氧基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮的製備
Figure 02_image071
步驟1：化合物2-1的製備
向205mg化合物M11和150mg化合物1-3的二氧六環(2mL)溶液中加入215mg DIEA，60 oC下攪拌2hrs。反應液減壓蒸餾除去有機溶劑， 粗品經Pre-TLC(PE:EtOAc=1:1)分離純化，得到180mg化合物 2-1。
[M+H +]:571.10。
步驟2：化合物2-2的製備
氮氣保護下，向160mg化合物2-1和61mg化合物M1的DMSO(2mL)溶液中加入179mg K 3PO 4，11mg CuI和13mg TMEDA，氮氣置換三次，100 oC下攪拌12hrs。反應液用20mL水稀釋，EtOAc(20mL×3)萃取，合併有機相，有機相用飽和NaCl水洗滌，無水硫酸鈉乾燥後濃縮，粗品經Pre-TLC(DCM:MeOH=20:1)分離純化，得到70mg化合物2-2。
[M+H +]=603.28。
步驟3：化合物2的製備
0 oC下，向70mg化合物2-2的二氧六環(3mL)溶液中滴加鹽酸的甲醇溶液 (2M, 0.5mL) ，25 oC下攪拌1hr。反應液用飽和NaHCO 3水溶液調節pH為8-9，淬滅反應，EtOAc:THF=5:1(10mL×3)萃取，合併有機相，有機相用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥後濃縮，粗品經Pre-TLC(DCM:MeOH=20:1)分離純化後接著用Pre-HPLC(鹼性)分離純化，得到12mg化合物2。
[M+H+]=499.17
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ：8.12 (s, 1H), 7.65 (d, J= 5.5 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.90 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 6.70 (dd, J= 8.0, 2.5 Hz, 1H), 6.27 (s, 2H), 6.02 (d, J= 5.5 Hz, 1H), 3.82 (s, 1H), 3.73 (s, 3H), 3.70 – 3.62 (m, 2H), 3.40 (s, 3H), 3.21 – 3.07 (m, 2H), 2.96 (d, J= 15.0 Hz, 1H), 2.53 (d, J= 15.0 Hz, 1H), 1.93 – 1.87 (m, 1H), 1.82 – 1.76 (m, 1H),1.56 – 1.53 (m, 1H) ,1.14 – 1.12 (m, 1H)
實施例3：化合物 ( S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-6-氯-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮的製備
Figure 02_image073
步驟1：化合物3-1的製備
向150mg化合物M10和208mg化合物1-3的二氧六環(2mL)溶液中加入215mg DIEA，60 oC下攪拌2hrs。反應液減壓蒸餾除去有機溶劑， 粗品經Pre-TLC(PE:EtOAc=1:1)分離純化，得到200mg化合物 3-1。
[M+H +]:575.08。
步驟2：化合物3-2的製備
氮氣保護下，將200mg化合物3-1和76.23mg化合物M1溶解於DMSO (2mL)中，加入221.53mg K 3PO 4，13.25mg CuI和16.17mg TMEDA，氮氣置換三次，100 oC下攪拌12hrs。反應液用20mL水稀釋，EtOAc(20mL×3)萃取，合併有機相，有機相用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥後濃縮，粗品經Pre-TLC(DCM:MeOH=20:1)分離純化，得到95mg化合物3-2為棕色固體。
[M+H +]=607.21。
步驟3：化合物3的製備
0 oC下，向95mg化合物3-2的二氧六環(3mL)溶液中滴加鹽酸的甲醇溶液 (2M, 0.5mL) ，25 oC下攪拌1hr。反應液用飽和NaHCO 3水溶液調節pH為8-9淬滅反應，用EA:THF=5:1(10mL×3)萃取，合併有機相，有機相用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥後濃縮，粗品經Pre-TLC(DCM:MeOH=20:1)分離純化後接著用Pre-HPLC(鹼性)分離純化，得到11mg化合物3。
[M+H +]:503.13。
經由不同的反應起始原料和合適的試劑，採用與前述實施例1-3類似的方法製備表2中的化合物4-化合物14、24。
表2
化合物編號 化學結構 化學名稱 LC-MS [M+H +]
4
Figure 02_image075
 ( S)-2-(1-氨基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-5-((3-氯-2-甲氧基吡啶-4-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3 H) -酮 484.17
5
Figure 02_image077
 ( S)-2-(1-氨基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶] -1'-基)-5-((2,3-二氯苯基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮 487.14
6
Figure 02_image079
 ( S)-2-(1-氨基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶] -1'-基)-3-甲基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫基)嘧啶-4(3 H)-酮 488.20
7
Figure 02_image081
 ( S)-2-(1-氨基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶] -1'-基)-5-((6-氨基-3-氯吡啶-2-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮 469.21
8
Figure 02_image083
 ( S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-4-溴-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮 547.07
9
Figure 02_image085
 ( S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-6-(三氟甲基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶] -1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮 537.14
10
Figure 02_image087
 ( S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-4-甲氧基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]  -1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮 499.20
11
Figure 02_image089
 ( S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-2-(5-氨基-5,7-二氫螺[環戊二烯并[ b]吡啶-6,4'-呱啶]- 1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮 470.13
12
Figure 02_image091
 ( S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-5,6-二甲氧基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-  呱啶] -1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮 529.14
13
Figure 02_image093
 ( S)-2-(4-氨基-2-氯-4,6-二氫螺[環戊二烯并[ d]噻唑-5,4'-呱啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮 510.07
14
Figure 02_image095
 ( S)-2-(5-氨基-2-甲氧基-5,7-二氫螺[環戊二烯并[ b]吡啶-6,4'-呱啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮 500.10
24
Figure 02_image097
 (S)-2-(1-氨基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氟吡啶-4-基) 硫代)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮 453.18
化合物6，8，9，10，12和24的核磁資料如下：
1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6) :δ 8.46 (d, J= 4.4 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.60 (d, J=  8.2 Hz, 1H), 7.53 (dd, J= 8.2, 4.5 Hz, 1H), 7.33 (m, 1H), 7.20-7.15 (m, 3H), 3.90 (s, 1H), 3.75-3.60 (m, 2H), 3.39 (s, 3H), 3.22-3.13 (m, 3H), 3.05 (d, J= 15.6 Hz, 1H), 2.65 (d, J= 15.5 Hz, 1H), 1.92-1.87 (m, 1H), 1.83-1.79 (m, 1H),1.57-1.54 (m, 1H), 1.20-1.17 (m, 1H)。(化合物6)
1H NMR (500 MHz, CDCl 3) :δ 8.11 (s, 1H), 7.72 (d, J= 5.5 Hz, 1H), 7.39 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.27 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 7.13 (t, J= 7.5 Hz, 1H), 6.14 (d, J= 5.5 Hz, 1H), 4.85 (s, 2H), 4.08 (s, 1H), 3.67-3.61(m, 2H), 3.55 (s, 3H), 3.28-3.22(m, 2H), 3.11(d, J= 16.0 Hz, 1H), 2.73(d, J= 16.0 Hz, 1H), 2.03-1.97(m, 1H), 1.93-1.87(m, 1H), 1.70-1.68(m, 1H), 1.43-1.40(m, 1H)。(化合物8)
1H NMR (500 MHz, CDCl 3) :δ 8.10 (s, 1H), 7.74 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.49 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.32 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 6.18 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 4.08 (s, 1H), 3.71-3.60 (m, 2H), 3.54 (s, 3H), 3.2-3.17 (m, 2H), 3.13 (d, J= 16.0 Hz, 1H), 2.76 (d, J= 16.0 Hz, 1H), 2.03-1.99 (m, 1H), 1.89-1.87 (m, 1H), 1.69-1.67(m, 1H), 1.38-1.34 (m, 1H)。(化合物9)
1H NMR (500 MHz, CDCl 3) :δ 8.11 (s, 1H), 7.72 (d, J= 5.5 Hz, 1H), 7.24 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 6.95 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 6.76 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 6.15 (d, J= 5.5 Hz, 1H),4.85 (s, 2H), 4.00 (s, 1H),3.84 (s, 3H), 3.66-3.61(m, 2H), 3.54 (s, 3H), 3.28-3.19(m, 2H), 3.05(d, J= 16.0 Hz, 1H), 2.64(d, J= 16.0 Hz, 1H), 2.00-1.94(m, 1H), 1.93-1.88(m, 1H), 1.69-1.66(m, 1H), 1.45-1.43(m, 1H)。(化合物10)
1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6) :δ 8.12 (s, 1H), 7.65 (d, J= 5.5 Hz, 1H), 6.93 (s, 1H), 6.80 (s, 1H), 6.28 (s, 2H), 6.02 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 3.79 (s, 1H), 3.73 (s, 3H), 3.72 (s, 3H), 3.68-3.65(m, 2H), 3.41 (s, 3H), 3.20-3.12(m, 2H), 2.93(d, J= 15.5 Hz, 1H), 2.56(d, J= 15.5 Hz, 1H), 1.88-1.79(m, 2H), 1.54-1.52(m, 1H), 1.23-1.20(m, 1H)。(化合物12)
1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6) δ 8.12 (s, 1H), 7.52 (d, J= 5.3 Hz, 1H), 7.36 – 7.31 (m, 1H), 7.21-7.16 (m, 3H), 6.16 (s, 2H), 6.05 (t, J= 5.1 Hz, 1H), 3.93 (s, 1H), 3.68-3.64 (m, 2H), 3.40 (s, 3H), 3.20-3.11 (m, 2H), 3.05 (d, J= 15.6 Hz, 1H), 2.66 (d, J= 15.7 Hz, 1H), 1.92-1.78 (m, 2H), 1.56-1.53 (m, 1H), 1.21-1.18 (m, 1H). (化合物24)
實施例15：化合物 ( S)-6-氨基-2-(1-氨基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-5-((2,3-二氯苯基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮的製備
Figure 02_image099
步驟1：化合物15-2的製備
將1.50g化合物15-1溶解於10mL無水DMF中，冰浴下將2.36g NBS分批加入上述溶液中，緩慢升至RT反應4hrs。LC-MS檢測反應完全，將反應液倒入100mL水中，攪拌30mins，過濾，濾餅用水(15mL×3)洗滌，濾餅烘乾得1.57g白色固體15-2。
步驟2：化合物15-4的製備
將1.57g化合物15-2和2.56g化合物15-3加入20mL二氧六環中，加入0.27g CuI，0.33g TMEDA和4.54g K 3PO 4，混合物氮氣置換三次，加熱100 oC反應12hrs。反應液冷卻至室溫，加入50mL MeOH過濾，濾餅用MeOH(10mL×5)洗滌，濾液減壓濃縮，殘餘物經柱層析純化得0.50g白色固體15-4。
步驟3：化合物15-5的製備
將200mg化合物15-4和288mg化合物M5溶解於5mL DMF中，加入832mg BOP，480mg DBU，RT攪拌反應4hrs。TLC檢測反應完全，將反應液加入20mL水中，加EtOAc(20mL×3)萃取，合併有機相，飽和NaCl(20mL×3)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘餘物經柱層析純化得69mg化合物15-5。
步驟4：化合物15的製備
將69mg化合物15-5溶解於2mL MeOH中，加入0.2mL的2N HCl的甲醇溶液，RT反應2hrs。TLC檢測反應完全，減壓濃縮，加飽和NaHCO 3水溶液調至pH為7-8，EtOAc(10mL×3)萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘餘物經柱層析純化得44mg化合物15。
[M+H +]:502.10。
1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6) :δ 7.35-7.1 (m, 2H), 7.22-7.15 (m, 4H), 6.72-6.70 (m, 1H), 3.89 (s, 1H), 3.57-3.51 (m, 2H), 3.29 (s, 3H), 3.09-2.99 (m, 2H), 2.64 (d, J= 15.0 Hz, 1H), 2.53 (d, J= 15.0 Hz, 1H), 1.89-1.86(m, 1H), 1.81-1.76(m, 1H),1.55-1.52(m, 1H), 1.17-1.14 (m, 1H)。
實施例16：化合物(S)-6-氨基-2-(1-氨基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮的製備：
Figure 02_image101
步驟1：化合物16-2的製備
將0.50 g化合物16-1和1.19 g化合物M5溶解於15 ML 無水N,N-二甲基甲醯胺中，在冰浴下依次加入3.13g苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸鹽、3.78g DBU，在室溫下攪拌反應18小時。LCMS檢測反應完全，加入25 mL水，再用DCM(20 mL×3)萃取，合併有機層，飽和食鹽水(20 mL×3)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥後脫溶，經柱層析純化(DCM:MeOH=95%-92%)得0.59 g化合物16-2。
步驟2：化合物16-3的製備
氮氣保護下，將0.59 g化合物16-2溶解於10 mL無水N,N-二甲基甲醯胺中，在冰浴下，將0.39g N-碘代丁二醯亞胺加入上述反應液中。TLC檢測反應完全，加入15 mL水，再用DCM(20 mL×3)萃取，合併有機層，飽和食鹽水(10mL×3)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥後脫溶，經柱層析純化(DCM:MeOH=95%-92%)得0.42 g化合物16-3。
步驟3：化合物16-4的製備
依次將300mg化合物16-3，198mg化合物M1溶解於5mL的1,4-二氧六環中，加入25mg TMEDA，344mg K 3PO 4和21mg CuI，氮氣保護95 oC下攪拌反應24hrs。LCMS檢測反應完全，將反應液過濾，減壓濃縮，殘餘物用製備板純化得77mg白色固體化合物16-4。
步驟4：化合物16的製備
將77 mg化合物16-4，溶於3 mL二氧六環中，滴加鹽酸甲醇溶液(2 N, 0.3 mL)，TLC跟蹤反應。反應完全後，減壓除去溶劑，用少量正己烷固化後，傾倒掉正己烷，加入2.0 mL水溶解固體，再滴入飽和碳酸氫鈉水溶液調pH=9-10，析出固體。過濾，濾餅用少量水洗滌後，真空乾燥得到33.6 mg白色固體化合物16。
[M+H +]=484.17。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.62 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 7.31 (d, J= 6.9 Hz, 1H),  7.19 – 7.13 (m, 3H), 6.15 (s, 2H), 5.97 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 3.86 (s, 1H), 3.56 – 3.49 (m, 2H), 3.25 (s, 3H), 3.10 – 2.98 (m, 3H), 2.61 (d, J= 15.6 Hz, 1H) , 1.91 – 1.81 (m, 1H), 1.82 – 1.76 (m, 1H), 1.54 – 1.52 (m, 1H) ,1.19 – 1.12 (m, 1H)。
實施例17：化合物17的製備：
Figure 02_image103
步驟1：化合物17-2的製備
氮氣保護下，將7.30 g化合物17-1和6.77 g化合物M1-2溶解於100 mL 二氧六環中，加入1.55 g Pd 2(dba) 3，1.95 g Xantphos和14.57 g DIEA, 升溫至100°C反應16hrs。TLC檢測反應完全，反應液濃縮，加入100mL乙酸乙酯和50mL水分層，分出有機相，水相繼續用50mL乙酸乙酯萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘餘物50mL(PE:EA=4:1)打漿，得淡黃色固體8.5 g化合物17-2，直接用於下一步。
步驟2：化合物17-3的製備
將8.5 g化合物17-2溶解於30 mL二氯甲烷中，RT下滴加EtONa(16.27 g，20%的EtOH溶液)，RT攪拌反應0.5hrs。TLC檢測反應完全，減壓濃縮，加入10mL 的二氯甲烷攪拌30mins，反應液過濾，濾餅用二氯甲烷(15mL×2)洗滌，得到類白色固體4 g化合物17-3，直接用於下一步。
步驟3：化合物17-4的製備
氮氣保護下，將44 mg化合物18-2和23 mg化合物17-3溶解於2 mL 二氧六環中，加入5.8 mg CuI，7.1 mg TMEDA和48.8 mg K 3PO 4, 升溫至100°C反應48hrs。TLC檢測反應完全，濃縮，殘餘物經製備薄層色譜法純化得8.5 mg白色化合物17-4。
步驟3：化合物17的製備
氮氣氛圍下，將8.5mg化合物17-4溶解於1.5mL 二氧六環中和0.5mL MeOH中，加入鹽酸甲醇溶液(2 N, 0.3 mL)，RT攪拌反應1hrs，TLC檢測反應完全，反應液減壓濃縮。殘餘物加入H 2O(2mL)溶解，用飽和NaHCO 3調節溶液至pH=8，固體析出，過濾，濾餅用H 2O(2mL)洗滌，取濾餅真空乾燥得2.8 mg類白色固體化合物17。
[M+H +]=469.25。
1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6) δ 7.88 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 7.21-7.18 (m, 1H), 7.10 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 6.97-6.94 (m, 1H), 6.54 (s, 2H), 6.04 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 3.88 (s, 1H), 3.56 – 3.46 (m, 2H), 3.28 (s, 3H), 3.07 – 2.93 (m, 3H), 2.63 (d, J= 15.6 Hz, 1H), 1.92 – 1.87 (m, 1H), 1.80 – 1.75 (m, 1H) 1.56 – 1.51 (m, 1H) , 1.14– 1.12 (m, 1H).
中間體化合物18-2的製備：
化合物18-2的合成參考化合物16-3的製備方法。
中間體化合物19-6的製備：
Figure 02_image105
步驟1：化合物19-3的製備
將33.00g化合物19-1溶解於400mL無水THF中，氮氣置換三次，降溫至-78 oC，緩慢滴加入LDA的THF溶液(64.00mL，2.0M)，然後-78 oC反應1hr，將化合物19-2 的THF(50mL)溶液緩慢滴加入上述反應液中，-78 oC反應30mins，緩慢升至室溫反應18hrs。TLC檢測反應完全，用200mL飽和NH 4Cl溶液淬滅反應，加入150mL水，加EtOAc萃取(200mL×3)，合併有機相，用200mL飽和NaCl洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘餘物經柱層析純化得34.31g無色油狀物19-3。
步驟2：化合物19-4的製備
將34.31g化合物19-3溶解於二氧六環/MeOH(400mL/160mL)中，加入NaOH水溶液(80mL，6N)，加熱至100 oC反應18hrs。TLC檢測反應完全，反應液冷卻至室溫，減壓濃縮蒸除有機溶劑，殘餘物用濃鹽酸調至pH為3-4，過濾，濾餅用水(80mL×3)洗滌，將濾餅進行真空乾燥得白色固體28.00g化合物19-4。
步驟3：化合物19-5的製備
將28.00g化合物19-4溶解於200mL PPA中，升溫至120 oC反應0.5hrs。TLC檢測反應完全，將反應液緩慢滴加入400mL碎冰中，用2.4N NaOH水溶液調至pH為9-10，加入23.30g (Boc) 2O，RT攪拌反應1hrs。TLC檢測反應完全，加EtOAc萃取(150mL×3)，合併有機相，用200mL飽和NaCl洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘餘物經柱層析純化得8.50g白色固體19-5和900mg白色固體20-1。
步驟4：化合物19-6的製備
由化合物19-5製備化合物19-6的步驟類似於由化合物M5-3到化合物M5的步驟。
由化合物20-1製備化合物20-2的步驟類似於由化合物M5-3到化合物M5的步驟
經由不同的反應起始原料和合適的試劑，採用與前述實施例16類似的方法製備表4中的化合物18-化合物20、化合物25-化合物27。
表4
化合物編號 化學結構 化學名稱 LC-MS [M+H +]
18
Figure 02_image107
 (S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-yl) 硫代)-2-(1-氨基-6-氟代-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮 483.21
19
Figure 02_image109
 (S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基) 硫代)-2-(1-氨基-5-氟代-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮 502.24
20
Figure 02_image111
 (S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基) 硫代)-2-(1-氨基-7-氟代-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮 502.22
25
Figure 02_image113
 (S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基) 硫代)-2-(1-氨基-4,7-二氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮 520.25
26
Figure 02_image115
 (S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基) 硫代)-2-(1-氨基-6-氯-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮 518.16
27
Figure 02_image117
 (S)-6-氨基-2-(1-氨基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-5-((2-氨基嘧啶-4-基) 硫代)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮 451.36
化合物18-化合物20、化合物25-化合物27的核磁資料分別如下：
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.62 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 7.22-7.19 (m, 1H), 7.11 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 6.99-6.95 (m, 1H), 6.15 (s, 2H), 5.97 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 3.91 (s, 1H), 3.57-3.50 (m, 2H), 3.28 (s, 3H), 3.03-2.97 (m, 3H), 2.60 (d, J = 15.6 Hz,1H),1.92-1.88(m, 1H), 1.80-1.76 (m 1H), 1.56-1.54 (m, 1H), 1.16-1.14 (m, 1H). (化合物18)
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.62 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 7.31 (d, J= 6.9 Hz, 1H),  7.02 – 6.96 (m, 2H), 6.15 (s, 2H), 5.97 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 3.82 (s, 1H), 3.55 – 3.49 (m, 2H), 3.28 (s, 3H), 3.06 – 2.97 (m, 3H), 2.61 (d, J= 16.1 Hz, 1H) , 1.89 – 1.83 (m, 1H), 1.81 – 1.76 (m, 1H), 1.55 – 1.52 (m, 1H) ,1.16 – 1.13 (m, 1H). (化合物19)
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.63 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 7.22 (d, J= 7.0 Hz, 1H),  7.05 – 7.03 (m, 1H), 6.96 – 6.93 (m, 1H)，6.16 (s, 2H), 5.97 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 4.08 (s, 1H), 3.49 – 3.39 (m, 2H), 3.28 (s, 3H), 3.19 – 3.08 (m, 3H), 2.76 (d, J= 16.0 Hz, 1H) , 2.02 – 1.90 (m, 2H), 1.62 – 1.59 (m, 1H) ,1.44 – 1.41 (m, 1H).(化合物20)
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.62 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 7.08 – 7.02 (m, 2H), 5.97 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 4.10 (s, 1H), 3.51 – 3.38 (m, 2H), 3.28 (s, 3H), 3.20 – 3.12 (m, 2H), 2.94 (d, J= 15.6 Hz, 1H), 2.80 (d, J= 15.6 Hz, 1H), 2.03 – 1.88 (m, 1H), 1.62 – 1.57 (m, 1H), 1.47 – 1.44 (m, 1H) ,1.24 – 1.19 (m, 1H). (化合物25) 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.62 (d, J= 5.3 Hz, 1H), 7.33 (s, 1H), 7.21 – 7.17 (m, 2H), 6.14 (s, 2H), 5.97 (d, J= 5.3 Hz, 1H), 3.87 (s, 1H), 3.56 – 3.49 (m, 2H), 3.28 (s, 3H), 3.06 – 2.96 (m, 3H), 2.58 (d, J= 15.7 Hz, 1H) , 1.92 – 1.87 (m, 1H), 1.79 – 1.74 (m, 1H), 1.56 – 1.53 (m, 1H) ,1.12 – 1.09 (m, 1H).(化合物26)
1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6) δ 7.88 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 7.32 (d, J= 6.9 Hz, 1H), 7.19-7.13 (m, 3H), 6.53 (s, 2H), 6.05 (d, J= 5.3 Hz, 1H), 3.87 (s, 1H), 3.55-3.51 (m, 2H), 3.29 (s, 3H), 3.09 – 2.96 (m, 3H), 2.61 (d, J= 15.7 Hz, 1H), 1.91-1.86 (m, 1H), 1.81-1.76 (m, 1H), 1.54-1.52 (m, 1H), 1.16-1.13 (m, 1H). (化合物27)
對照例
按照WO2018172984中的EXAMPLE 48所描述的方法，製備如下對照例。
Figure 02_image119
對照例
藥理試驗
實施例A：SHP2變構抑制酶活測定
SHP2通過雙-酪氨醯-磷醯化的肽與其Src同源2(SH2)結構域的結合而變構活化。該在後的活化步驟導致SHP2的自動抑制介面的釋放，這又使該SHP2蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)活化並可用於底物識別和反應催化。在迅速螢光測定版式中使用替代物DiFMUP監測SHP2的催化活性。
試驗步驟：
(1)化合物配製：
用100% DMSO將本發明化合物(10mM儲液)稀釋成合適倍數，本發明化合物最終測試濃度為10μM、3.3333μM、1.1111μM、0.3704μM、0.1235μM、0.0412μM、0.0137μM、0.0046μM、0.0015μM、0.00μM；
(2)準備酶反應工作液：
在室溫下在96孔黑色聚苯乙烯板(平底、低凸緣、非結合表面)(PE, Cat#6005270)中，使用50μL的最終反應體積和以下測定緩衝條件進行磷酸酶酶活檢測：60mM的HEPES，75mM NaCl，75mM KCl，0.05% BRIJ-35，1mM EDTA，5mM DTT。
(3)酶催化反應及資料監測：
取5μL的本發明化合物加到對應的96孔板中，設置不加化合物和酶只加緩衝液的做為空白試驗孔。將SHP2 Activating Peptide(IRS1_pY1172(dPEG8)pY1222)置於冰上融化，每孔加入25uM，然後取0.2ng SHP2蛋白樣品加到對應孔板中，室溫培養1小時。加入替代底物DiFMUP(Invitrogen，Cat#D6567)加入反應，室溫反應2小時後。採用分別使用340nm和450nm的激發波長和發射波長的酶標儀(Envision，Perki Elmer)監測螢光訊號。
(4)資料分析：
計算公式： 抑制率%= [1-( Conversion_ sample-Conversion_ min )/( Conversion_ max-Conversion_ min )]×100% 其中：Conversion_sample是樣品的轉化率讀數；Conversion_min是空白對照孔均值，代表沒有酶活孔的轉化率讀數；Conversion_max是陽性對照孔比值均值，代表沒有化合物抑制孔的轉化率讀數。採用分析軟體GraphPad Prism的log(inhibitor) vs. response-Variable slope擬合量效曲線，並計算化合物對酶活性的IC 50值。
部分實施例的IC50資料如表3所示。
表3
化合物序號 化合物對SHP2磷酸酶IC 50(nM)
化合物1 7.98
化合物2 25.45
化合物3 25.06
化合物4 7.13
化合物5 2.77
化合物6 6.28
化合物8 9.55
化合物9 25.72
化合物10 11.90
化合物11 27.1
化合物12 15.98
化合物13 10
化合物15 4.51
化合物16 15.6
化合物17 6.8
化合物18 2.2
化合物19 2.5
化合物20 2.0
化合物24 0.8
化合物25 4.4
化合物26 1.9
化合物27 3.5
本發明的化合物對SHP2磷酸酶具有變構抑制作用。
實施例B：細胞增殖試驗
使用體外細胞試驗評估本發明的化合物對肺鱗癌細胞KYSE-520細胞和白血病細胞MV-4-11細胞增殖的影響。試驗中所用的檢測方法是CELL TITER-GLO(CTG)發光法，該法可通過對ATP進行定量測定來檢測活細胞數目。因為ATP參與生物體內多種酶促反應，是活細胞新陳代謝的一個指標，其含量直接反應了細胞的數量及細胞狀態，實驗過程中向細胞培養基加入CellTiter-Glo™試劑，測量發光值，發光值與ATP量成正比，而ATP又和活細胞數正相關，因此可通過檢測ATP含量考察細胞活力。
試驗步驟：
(1) 細胞鋪板：
取一瓶對數生長期的KYSE-520細胞，消化重懸細胞後計數，調整細胞密度後接種到96孔板中，每孔接種1000個細胞，孔板置於37 oC、5%CO 2的培養箱中培養24hrs後加入本發明化合物進行處理；
取一瓶對數生長期的MV-4-11細胞，消化重懸細胞後計數，調整細胞密度後接種到96孔板中，每孔接種4000個細胞，孔板置於37 oC、5%CO 2的培養箱中培養24hrs後加入本發明化合物進行處理。
(2) 細胞化合物處理：
配取適量本發明化合物進行細胞處理，化合物終濃度從高至低依次為1000nM、333.3nM、111.1nM、37.04nM、12.35nM、4.115nM、1.372nM、0.4572nM、0.1524nM、0nM，孔板放入37 oC, 5%CO 2培養箱培養120hrs。只加培養基不加細胞孔設為調零組；化合物濃度為0nM組為空白組。
(3) CTG檢測：
細胞培養120hrs後每孔加入50μL的CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay溶液，輕輕震盪2mins，室溫繼續培養10mins，在多功能酶標儀上讀取各孔的檢測數值。
(4) 資料分析：
根據發光值讀數計算抑制率， 抑制率%=(1-(給藥組值-調零組值)/(空白組值-調零組值)*100
GraphPad Prism的log(inhibitor) vs. response-Variable slope擬合量效曲線並計算化合物抑制細胞增殖的IC 50。部分實施例化合物的實驗資料如表5所示。
表5
化合物序號 化合物對KYSE-520(EGFR amplification)細胞IC 50(nM) 化合物對MV-4-11細胞IC 50(nM)
化合物1 2.39 2.06
化合物2 16.42 6.36
化合物3 15.04 4.36
化合物4 40 1.12
化合物5 16.78 2.65
化合物6 14.76 3.82
化合物7 48 21.9
化合物8 50.5 7.39
化合物9 13.17 5.19
化合物10 25.67 3.16
化合物11 90.0 8.64
化合物12 43.9 6.32
化合物13 40.5 8.5
化合物15 3.633 1.16
化合物16 6.8 0.86
化合物17 234.2 15.3
化合物18 7.7 1.0
化合物19 10.8 0.9
化合物20 11.2 1.3
化合物24 35.6 2.8
化合物25 15.0 2.6
化合物26 5.5 0.9
化合物27 70.4 0.8
本發明的化合物對KYSE-520細胞的增殖和MV-4-11細胞的增殖具有良好的抑制作用。
實施例C：hERG鉀離子通道的抑制試驗
採用全細胞膜片鉗技術檢測待測化合物對hERG通道的阻斷作用。
細胞培養
hERG鉀通道穩定表達的HEK293細胞系在含有10%胎牛血清及0.8 mg/mL G418的DMEM培養基中培養，培養溫度為37 oC，二氧化碳濃度為5%。
細胞傳代：除去舊培養基並用PBS洗一次，然後加入1 mL TrypLE™ Express溶液，37°C培養0.5分鐘。當細胞從皿底脫離，加入5 mL 37°C預熱的完全培養基。將細胞懸液用吸管輕輕吹打使聚集的細胞分離。將細胞懸液轉移至無菌的離心管中，1000 rpm離心5分鐘收集細胞。擴增或維持培養，將細胞接種於6釐米細胞培養皿，每個細胞培養皿，接種細胞量為2.5*105 cells(最終體積：5 mL)。
為維持細胞的電生理活性，細胞密度必須不能超過80%。
膜片鉗檢測，實驗之前細胞用TrypLE™ Express分離，將3*10 3細胞鋪到蓋玻片上，在24孔板中培養(最終體積：500 µL)，18個小時後，進行實驗檢測。
細胞內外液
細胞外液: 140 mM NaCl, 3.5 mM KCl, 1 mM MgCl 2•6H 2O, 2 mM CaCl 2, 10 mM D-葡萄糖, 10 mM HEPES, 1.25 mM NaH 2PO 4, NaOH調節pH=7.4。
細胞內液: 20 mM KCl, 115 mM K-Aspartic, 1 mM MgCl 2•6H 2O, 5 mM EGTA, 10 mM HEPES, 2 mM Na 2-ATP, KOH調節pH=7.2。 化合物的配製
用細胞外液將被測化合物儲液進行稀釋，配成10 µΜ工作液，或者梯度稀釋為0.3 µΜ, 1 µΜ, 3 µΜ, 10 µM, 30 µM溶液。
目測被測化合物的溶解性，被測化合物全部溶解沒有肉眼可見的沉澱。
西沙必利 (陽性對照)
將稱量出的1.2 mg西沙必利用243 µL DMSO配製成10 mM的儲液。
將西沙必利儲液用DMSO依次以10倍的稀釋倍數由高到低稀釋至10 µM的稀釋液。
用細胞外液將10 µM 西沙必利稀釋液進行稀釋，配成10 nΜ工作液。
目測西沙必利的溶解性，西沙必利全部溶解沒有肉眼可見的沉澱。
實驗方法參照：
全細胞膜片鉗記錄全細胞hERG鉀電流的電壓刺激方案如下：當形成全細胞封接後細胞膜電壓鉗制於-80 mV。鉗制電壓由-80 mV除極至-50 mV維持0.5秒，然後階躍至30 mV維持2.5秒，再迅速恢復至-50 mV維持4秒可以激發出hERG通道的尾電流。每隔10秒重複採集資料，觀察藥物對hERG尾電流的作用。以0.5秒的-50 mV刺激為漏電流檢測。實驗資料由 EPC-10 放大器(HEKA)進行採集並儲存於PatchMaster(HEKA)軟體中。
用微電極拉製儀將毛細玻璃管拉製成記錄電極。在倒置顯微鏡下操縱微電極操縱儀將記錄電極接觸到細胞上，給予負壓抽吸，形成GΩ封接。形成GΩ封接後進行快速電容補償，然後繼續給予負壓，吸破細胞膜，形成全細胞記錄模式。然後進行慢速電容的補償並記錄膜電容及串聯電阻。不給予漏電補償。
當全細胞記錄的hERG電流穩定後開始給藥，每個藥物濃度作用至5分鐘(或者電流至穩定)。將鋪有細胞的蓋玻片置於倒置顯微中的記錄浴槽中，測試化合物以及不含化合物的外液利用重力灌流的方法依次流經記錄浴槽從而作用於細胞，在記錄中利用真空泵進行液體交換。每一個細胞在不含化合物的外液中檢測到的電流作為自己的對照組。獨立重複檢測多個細胞。所有電生理實驗在室溫下進行。
資料質量標準
以下標準用來判斷資料是否可以接受： (1) 串聯電阻 ≤ 20 MΩ (2) 封接電阻 ≥ 1 GΩ (3) 起始尾電流峰值≥ 400 pA (4) 起始尾電流峰值大於啟動電流峰值 (5) 尾電流沒有明顯的自發性衰減(5分鐘內自發性衰減小於5%) (6) 在膜電位為-80 mV下無明顯的漏電流 (漏電流 ≤ 100 pA)
資料分析
首先將每一個藥物濃度作用後的電流和空白對照電流標準化 (
Figure 02_image123
)，然後計算每一個藥物濃度對應的抑制率
Figure 02_image125
。
對每一個濃度計算平均數和標準誤， 並用以下的方程計算每種化合物的半抑制濃度：
Figure 02_image127
用以上方程對劑量依賴效應進行非線性擬合， 其中c代表藥物濃度，IC50為半抑制濃度， h代表希爾係數。曲線擬合以及IC 50的計算利用IGOR軟體完成。
實施例化合物hERG 測試結果見表6。
表6
編號 抑制率@10µM IC 50
對照例 95.12% 1.94μM
化合物1 73.30% 5μM
化合物2 65.08% 6.9μM
化合物3 84.54% /
化合物5 99.87% /
化合物9 36.41% /
化合物10 48.50% /
化合物11 20.53% /
化合物13 42.63% /
化合物15 88.92% /
化合物16 25.53% ＞30μM
化合物24 54.50% 13.6μM
註：“/”表示未測試。
我們出乎意料地發現，本發明的化合物在普遍對SHP2有較好的抑制活性的同時，當其通式I中A 3的位置為N而非C時，例如本發明具體實施例，化合物1、化合物2、化合物3、化合物9、化合物10、化合物11、化合物13、化合物16、化合物24對hERG有顯著改善作用。
雖然本發明已通過其實施方式進行了全面的描述，但是值得注意的是，各種變化和修改對於本領域技術人員都是顯而易見的。這樣的變化和修改都應該包括在本發明所附申請專利範圍的範圍內。
無。
無。
Figure 109102505-A0101-11-0002-2
無。

Claims (40)

  1. 一種式I所示的化合物，或其藥學上可接受的鹽、互變異構體、溶劑化物、螯合物、非共價複合物或前體藥物，
    Figure 03_image129
    式I 其中， R 1選自氫、羥基、C 1-8烷基、含取代基的C 1-8烷基、C 1-8烷氧基、含取代基的C 1-8烷氧基、C 2-8烯基、含取代基的C 2-8烯基、C 2-8炔基或含取代基的C 2-8炔基； R 2選自氫、C 1-4烷基或含取代基的C 1-4烷基； R 3選自氫、氨基、-C(O)NH 2、-C≡N、羥基、C 1-8烷基、含取代基的C 1-8烷基、C 1-8烷氧基或含取代基的C 1-8烷氧基； R 4選自氫、鹵素、氨基、醯胺基、-C≡N 、羧基、羥基、羥甲基、C 1-8烷基、含取代基的C 1-8烷基、C 1-8烷氧基、含取代基的C 1-8烷氧基、C 2-8烯基、含取代基的C 2-8烯基、C 2-8炔基或含取代基的C 2-8炔基； A 1任意地選自CR 5或N； A 2任意地選自CR 6或N； A 3任意地選自CR 7或N； U任意地選自C(R 8) 2、O或NR 9； 其中，R 5、R 6、R 7、R 8或R 9獨立地選自氫、鹵素、氨基、C 1-8烷基、含取代基的C 1-8烷基、C 1-8烷氧基、含取代基的C 1-8烷氧基、C 2-8烯基、含取代基的C 2-8烯基、C 2-8炔基或含取代基的C 2-8炔基； 環A任意地選自C 6-10芳基或C 5-10雜芳基，所述C 5-10雜芳基含有一個或兩個N或S雜原子； Rx任意地選自氫、鹵素、氨基、含取代基的氨基、磺醯基、C 1-8烷基、含取代基的C 1-8烷基、C 1-8烷氧基、含取代基的C 1-8烷氧基、C 3-8環烷基或含取代基的C 3-8環烷基； n為0、1、2、3或4。
  2. 如請求項1所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽、互變異構體、溶劑化物、螯合物、非共價複合物或前體藥物，其中，A 3選自N。
  3. 如請求項1或2所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽、互變異構體、溶劑化物、螯合物、非共價複合物或前體藥物，其中，R 1選自C 1-3烷基。
  4. 如請求項1至3中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽、互變異構體、溶劑化物、螯合物、非共價複合物或前體藥物，其中，R 1為甲基。
  5. 如請求項1至4中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽、互變異構體、溶劑化物、螯合物、非共價複合物或前體藥物，其中，R 2選自氫或C 1-3烷基。
  6. 如請求項1至5中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽、互變異構體、溶劑化物、螯合物、非共價複合物或前體藥物，其中，R 2為氫。
  7. 如請求項1至6中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽、互變異構體、溶劑化物、螯合物、非共價複合物或前體藥物，其中，R 3選自氫、氨基或C 1-3烷基。
  8. 如請求項1至7中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽、互變異構體、溶劑化物、螯合物、非共價複合物或前體藥物，其中，R 3為氫或氨基。
  9. 如請求項1至8中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽、互變異構體、溶劑化物、螯合物、非共價複合物或前體藥物，其中，R 4選自氫、鹵素、氨基、C 1-3烷基或含取代基的C 1-3烷基。
  10. 如請求項1至9中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽、互變異構體、溶劑化物、螯合物、非共價複合物或前體藥物，其中，R 4為氫、氟或氯。
  11. 如請求項1至10中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽、互變異構體、溶劑化物、螯合物、非共價複合物或前體藥物，其中，R 4為氫、氯。
  12. 如請求項1至11中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽、互變異構體、溶劑化物、螯合物、非共價複合物或前體藥物，其中，A 1選自CR 5或N，其中R 5選自鹵素或鹵素取代的C 1-3烷基。
  13. 如請求項1至12中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽、互變異構體、溶劑化物、螯合物、非共價複合物或前體藥物，其中，A 1選自CR 5或N，其中R 5選自F、Cl或三氟甲基。
  14. 如請求項1至13中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽、互變異構體、溶劑化物、螯合物、非共價複合物或前體藥物，其中，A 1選自CR 5或N，其中R 5選自Cl或三氟甲基。
  15. 如請求項1至14中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽、互變異構體、溶劑化物、螯合物、非共價複合物或前體藥物，其中，A 2選自CR 6或N，其中R 6選自氨基或C 1-3烷氧基。
  16. 如請求項1至15中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽、互變異構體、溶劑化物、螯合物、非共價複合物或前體藥物，其中，A 2選自CR 6或N，其中R 6選自氨基或甲氧基。
  17. 如請求項1至16中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽、互變異構體、溶劑化物、螯合物、非共價複合物或前體藥物，其中，U選自CH 2或O。
  18. 如請求項1至17中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽、互變異構體、溶劑化物、螯合物、非共價複合物或前體藥物，其中，環A選自苯基或C 5-6雜芳基，所述C 5-10雜芳基含有一個或兩個N或S雜原子。
  19. 如請求項1至18中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽、互變異構體、溶劑化物、螯合物、非共價複合物或前體藥物，其中，環A選自苯基、
    Figure 03_image005
    或
    Figure 03_image007
    。
  20. 如請求項1至19中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽、互變異構體、溶劑化物、螯合物、非共價複合物或前體藥物，其中，
    Figure 03_image009
    任意地選自
    Figure 03_image011
    ，
    Figure 03_image013
    ，
    Figure 03_image015
    ，
    Figure 03_image017
    ，
    Figure 03_image019
    ，
    Figure 03_image021
    ，
    Figure 03_image023
    ，
    Figure 03_image025
    ，
    Figure 03_image027
    ,
    Figure 03_image029
    ,
    Figure 03_image031
    ,
    Figure 03_image033
    ,
    Figure 03_image035
    ,或
    Figure 03_image133
    。
  21. 如請求項1至20中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽、互變異構體、溶劑化物、螯合物、非共價複合物或前體藥物，其中，
    Figure 03_image009
    任意地選自
    Figure 03_image011
    ，
    Figure 03_image013
    ，
    Figure 03_image015
    ，
    Figure 03_image017
    ，
    Figure 03_image019
    ，
    Figure 03_image021
    ，
    Figure 03_image023
    ，
    Figure 03_image025
    ，
    Figure 03_image027
    ,
    Figure 03_image029
    。
  22. 如請求項1所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽、互變異構體、溶劑化物、螯合物、非共價複合物或前體藥物，其中，所述化合物具有式II所示的結構，
    Figure 03_image039
    式II 其中， R 1選自C 1-8烷基； R 2選自氫； R 3選自H或氨基； R 4選自氫或鹵素； A 1選自CR 5； A 2選自CR 6； U選自C(R 8) 2； 其中，R 5、R 6、R 8獨立地選自氫、鹵素、C 1-8烷基、含取代基的C 1-8烷基； 環A任意地選自C 6-10芳基。
  23. 如請求項22所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽、互變異構體、溶劑化物、螯合物、非共價複合物或前體藥物，其中，環A任意地被氫或C 1-8烷氧基取代。
  24. 如請求項22或23所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽、互變異構體、溶劑化物、螯合物、非共價複合物或前體藥物，其中，環A任意地被選自氫或甲氧基取代。
  25. 如請求項22至24中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽、互變異構體、溶劑化物、螯合物、非共價複合物或前體藥物，其中，R 1為甲基。
  26. 如請求項22至25中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽、互變異構體、溶劑化物、螯合物、非共價複合物或前體藥物，其中，R 4為氫。
  27. 如請求項22至26中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽、互變異構體、溶劑化物、螯合物、非共價複合物或前體藥物，其中，U選自CH 2。
  28. 如請求項22至27中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽、互變異構體、溶劑化物、螯合物、非共價複合物或前體藥物，其中，R 5選自Cl。
  29. 如請求項22至28中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽、互變異構體、溶劑化物、螯合物、非共價複合物或前體藥物，其中，R 6選自NH 2。
  30. 如請求項22至29中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽、互變異構體、溶劑化物、螯合物、非共價複合物或前體藥物，其中，環A選自苯基。
  31. 一種化合物，或其藥學上可接受的鹽、互變異構體、溶劑化物、螯合物、非共價複合物或前體藥物，其中，所述化合物選自： (1)( S)-2-(1-氨基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (2)( S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-6-甲氧基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶] -1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (3)( S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-6-氯-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (4)( S)-2-(1-氨基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-5-((3-氯-2-甲氧基吡啶-4-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3 H) -酮； (5)( S)-2-(1-氨基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶] -1'-基)-5-((2,3-二氯苯基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (6)( S)-2-(1-氨基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶] -1'-基)-3-甲基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫基)嘧啶-4(3 H)-酮； (7)( S)-2-(1-氨基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶] -1'-基)-5-((6-氨基-3-氯吡啶-2-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (8)( S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-4-溴-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (9)( S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-6-(三氟甲基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶] -1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (10)( S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-4-甲氧基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶] -1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (11)( S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-2-(5-氨基-5,7-二氫螺[環戊二烯并[ b]吡啶-6,4'-呱啶]- 1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (12)( S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-5,6-二甲氧基-1,3-二氫螺[茚-2,4'- 呱啶] -1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (13)( S)-2-(4-氨基-2-氯-4,6-二氫螺[環戊二烯并[ d]噻唑-5,4'-呱啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (14)( S)-2-(5-氨基-2-甲氧基-5,7-二氫螺[環戊二烯并[ b]吡啶-6,4'-呱啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (15)( S)-6-氨基-2-(1-氨基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶] -1'-基)-5-((2,3-二氯苯基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (16)(S)-6-氨基-2-(1-氨基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮； (17)(S)-6-氨基-2-(1-氨基-6-氟代-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-5-((2-氨基嘧啶-4-基) 硫代)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮； (18)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-yl) 硫代)-2-(1-氨基-6-氟代-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮； (19)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-5-氟代-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮； (20)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-7-氟代-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮； (24)(S)-2-(1-氨基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氟吡啶-4-基) 硫代)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮； (25)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-4,7-二氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮； (26)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-6-氯-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；或 (27)(S)-6-氨基-2-(1-氨基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-5-((2-氨基嘧啶-4-基)硫代)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮。
  32. 一種化合物，或其藥學上可接受的鹽、互變異構體、溶劑化物、螯合物、非共價複合物或前體藥物，其中，所述化合物選自： (1)( S)-2-(1-氨基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (2)( S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-6-甲氧基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶] -1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (3)( S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-6-氯-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (4)( S)-2-(1-氨基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-5-((3-氯-2-甲氧基吡啶-4-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3 H) -酮； (8)( S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-4-溴-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (9)( S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-6-(三氟甲基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶] -1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (10)( S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-4-甲氧基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (11)( S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-2-(5-氨基-5,7-二氫螺[環戊二烯并[ b]吡啶-6,4'-呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (12)( S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-5,6-二甲氧基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-  呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (13)( S)-2-(4-氨基-2-氯-4,6-二氫螺[環戊二烯并[ d]噻唑-5,4'-呱啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (14)( S)-2-(5-氨基-2-甲氧基-5,7-二氫螺[環戊二烯并[ b]吡啶-6,4'-呱啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3 H)-酮； (16)(S)-6-氨基-2-(1-氨基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮； (17)(S)-6-氨基-2-(1-氨基-6-氟代-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-5-((2-氨基嘧啶-4-基) 硫代)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮； (18)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-yl)硫代)-2-(1-氨基-6-氟代-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮； (19)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-5-氟代-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮； (20)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-7-氟代-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮； (24)(S)-2-(1-氨基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氟吡啶-4-基)硫代)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮； (25)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-4,7-二氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮； (26)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-6-氯-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；或 (27)(S)-6-氨基-2-(1-氨基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-呱啶]-1'-基)-5-((2-氨基嘧啶-4-基)硫代)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮。
  33. 一種藥物組合物，包含治療有效量的至少一種請求項1至32中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽、互變異構體、溶劑化物、螯合物、非共價複合物或前體藥物；和至少一種藥學上可接受的輔料。
  34. 如請求項33所述之藥物組合物，其中，所述化合物，或其藥學上可接受的鹽、互變異構體、溶劑化物、螯合物、非共價複合物或前體藥物和藥學上可接受的輔料的質量百分比為0.0001:1-10。
  35. 一種請求項1至32中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽、互變異構體、溶劑化物、螯合物、非共價複合物或前體藥物，或請求項33或34所述之藥物組合物在製備藥物中的應用。
  36. 如請求項35所述之應用，其中，所述藥物用於治療、預防、延遲或阻止癌症，癌症轉移，心血管疾病，免疫疾病，纖維化或眼部疾病。
  37. 一種請求項1至32中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽、互變異構體、溶劑化物、螯合物、非共價複合物或前體藥物，或請求項33或34所述之藥物組合物在製備治療由SHP2介導的疾病的藥物中的應用。
  38. 如請求項37所述之應用，其中，所述疾病是癌症。
  39. 如請求項38所述之應用，其中，所述癌症選自Noonan綜合症、豹斑綜合症、青少年髓單核細胞白血病、神經母細胞瘤、黑色素瘤、頭頸部鱗狀細胞癌、急性髓性白血病、乳腺癌、食道腫瘤、肺癌、結腸癌、頭癌、胃癌、淋巴瘤、膠質母細胞瘤、胃癌、胰腺癌或其組合。
  40. 如請求項39所述之應用，其中，所述藥物用作SHP2抑制劑。
TW109102505A 2019-01-31 2020-01-22 Shp2抑制劑及其應用 TW202214589A (zh)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
WOPCT/CN2019/074140 2019-01-31
CN2019074140 2019-01-31
WOPCT/CN2019/114785 2019-10-31
CN2019114785 2019-10-31

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW202214589A true TW202214589A (zh) 2022-04-16

Family

ID=71841621

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW109102505A TW202214589A (zh) 2019-01-31 2020-01-22 Shp2抑制劑及其應用

Country Status (3)

Country Link
CN (1) CN113316574B (zh)
TW (1) TW202214589A (zh)
WO (1) WO2020156242A1 (zh)

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11179397B2 (en) 2018-10-03 2021-11-23 Gilead Sciences, Inc. Imidazopyrimidine derivatives
CN111704611B (zh) * 2019-07-25 2022-01-14 上海凌达生物医药有限公司 一类芳基螺环类shp2抑制剂化合物、制备方法和用途
CN112778276B (zh) * 2019-11-08 2024-08-20 南京圣和药业股份有限公司 作为shp2抑制剂的化合物及其应用
CN115916194A (zh) 2020-06-18 2023-04-04 锐新医药公司 用于延迟、预防和治疗针对ras抑制剂的获得性抗性的方法
WO2022060583A1 (en) 2020-09-03 2022-03-24 Revolution Medicines, Inc. Use of sos1 inhibitors to treat malignancies with shp2 mutations
AU2021345111A1 (en) 2020-09-15 2023-04-06 Revolution Medicines, Inc. Indole derivatives as Ras inhibitors in the treatment of cancer
WO2022063190A1 (zh) * 2020-09-23 2022-03-31 南京明德新药研发有限公司 吡嗪硫联苯基类化合物及其应用
WO2022235866A1 (en) 2021-05-05 2022-11-10 Revolution Medicines, Inc. Covalent ras inhibitors and uses thereof
CN117616031A (zh) 2021-05-05 2024-02-27 锐新医药公司 用于治疗癌症的ras抑制剂
WO2022235864A1 (en) 2021-05-05 2022-11-10 Revolution Medicines, Inc. Ras inhibitors
TW202313041A (zh) 2021-06-09 2023-04-01 瑞士商諾華公司 包含達拉菲尼、曲美替尼和shp2抑制劑之三重藥物組合
TW202317100A (zh) 2021-06-23 2023-05-01 瑞士商諾華公司 包含ｋｒａｓ ｇ１２ｃ抑制劑的藥物組合及其用於治療癌症之用途
WO2023031781A1 (en) 2021-09-01 2023-03-09 Novartis Ag Pharmaceutical combinations comprising a tead inhibitor and uses thereof for the treatment of cancers
AR127308A1 (es) 2021-10-08 2024-01-10 Revolution Medicines Inc Inhibidores ras
WO2023172940A1 (en) 2022-03-08 2023-09-14 Revolution Medicines, Inc. Methods for treating immune refractory lung cancer
CN115611868B (zh) * 2022-05-09 2024-07-23 山东大学 一种呋喃酰胺类衍生物及其制备方法与应用
TW202404581A (zh) 2022-05-25 2024-02-01 美商醫肯納腫瘤學公司 Ｍｅｋ抑制劑及其用途
WO2023240263A1 (en) 2022-06-10 2023-12-14 Revolution Medicines, Inc. Macrocyclic ras inhibitors
WO2024206858A1 (en) 2023-03-30 2024-10-03 Revolution Medicines, Inc. Compositions for inducing ras gtp hydrolysis and uses thereof
WO2024211663A1 (en) 2023-04-07 2024-10-10 Revolution Medicines, Inc. Condensed macrocyclic compounds as ras inhibitors
WO2024211712A1 (en) 2023-04-07 2024-10-10 Revolution Medicines, Inc. Condensed macrocyclic compounds as ras inhibitors

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JO3517B1 (ar) * 2014-01-17 2020-07-05 Novartis Ag ان-ازاسبيرو الكان حلقي كبديل مركبات اريل-ان مغايرة وتركيبات لتثبيط نشاط shp2
JP6878316B2 (ja) * 2015-06-19 2021-05-26 ノバルティス アーゲー Ｓｈｐ２の活性を阻害するための化合物および組成物
JP6718889B2 (ja) * 2015-06-19 2020-07-08 ノバルティス アーゲー Ｓｈｐ２の活性を阻害するための化合物および組成物
JP6916279B2 (ja) * 2016-07-12 2021-08-11 レヴォリューション・メディスンズ，インコーポレイテッド アロステリックｓｈｐ２阻害剤としての２，５−二置換３−メチルピラジンおよび２，５，６−三置換３−メチルピラジン
KR20220113545A (ko) * 2017-03-23 2022-08-12 자코바이오 파마슈티칼스 컴퍼니 리미티드 Shp2 억제제로서 유용한 신규한 헤테로환형 유도체
WO2019152454A1 (en) * 2018-01-30 2019-08-08 Research Development Foundation Shp2 inhibitors and methods of use thereof
IL301106A (en) * 2018-03-21 2023-05-01 Relay Therapeutics Inc SHP2 phosphatase inhibitors and methods of using them

Also Published As

Publication number Publication date
WO2020156242A1 (zh) 2020-08-06
CN113316574B (zh) 2024-01-30
CN113316574A (zh) 2021-08-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TW202214589A (zh) Shp2抑制劑及其應用
TW202043212A (zh) Shp2抑制劑及其應用
TWI765908B (zh) 苯並咪唑類化合物激酶抑制劑及其製備方法和應用
RU2629194C2 (ru) Производные 1,5- и 1,7-нафтиридина, полезные при лечении заболеваний, опосредованных fgfr
CN105461714B (zh) 并环类pi3k抑制剂
AU2015266453C1 (en) Alk kinase inhibitor, and preparation method and use thereof
US20220259235A1 (en) EGFR Inhibitor, Composition, and Preparation Method Therefor
CN115515947B (zh) Shp2抑制剂及其组合物和应用
CN113135910A (zh) 嘧啶-4(3h)-酮类杂环化合物、其制备方法及其在医药学上的应用
CN103153994A (zh) 双环杂芳基激酶抑制剂及使用方法
KR102607934B1 (ko) 바닌 억제제로서의 헤테로방향족 화합물
WO2020038460A1 (zh) 一种新型的喹啉衍生物抑制剂
AU2021244180A1 (en) Indazole based compounds and associated methods of use
EP2504331B1 (en) Compound, certain novel forms thereof, pharmaceutical compositions thereof and methods for preparation and use
US20240131167A1 (en) EGFR Degraders and Associated Methods of Use
WO2023109751A1 (zh) 嘧啶或吡啶类衍生物及其医药用途
WO2020114519A1 (zh) 作为cdk-hdac双通路抑制剂的杂环化合物
US20180362498A1 (en) Forms and compositions of an erk inhibitor
CN117157288A (zh) 一种吡啶类衍生物、其制备方法及用途
CN104804016B (zh) 四并环类间变性淋巴瘤激酶抑制剂
CN115353512A (zh) 一种杂环脲类化合物及其制备方法和用途
WO2015014283A1 (zh) 蛋白酪氨酸激酶抑制剂及其应用
CN114555597A (zh) 异柠檬酸脱氢酶（idh）抑制剂
RU2827549C2 (ru) Соединения тиенопиридинона
US20240132490A1 (en) Inhibitors of protein kinase a