TW202214565A

TW202214565A - 磺醯苯甲醯胺類衍生物及其偶聯物、其製備方法及其應用

Info

Publication number: TW202214565A
Application number: TW110125329A
Authority: TW
Inventors: 許建烟; 高建紅; 章瑛; 賀峰; 陶維康
Original assignee: 大陸商江蘇恆瑞醫藥股份有限公司; 大陸商上海恆瑞醫藥有限公司
Priority date: 2020-07-10
Filing date: 2021-07-09
Publication date: 2022-04-16
Also published as: AU2021306781A1; CN115697967B; MX2023000346A; EP4180422A4; KR20230038231A; EP4180422A1; US20230250077A1; CA3184959A1; JP2023533735A; CN115697967A; WO2022007940A1; BR112023000320A2

Abstract

本公開涉及磺醯苯甲醯胺類衍生物及其偶聯物、其製備方法及其應用。具體而言，本公開提供了一種具有式(D)所示結構的磺醯苯甲醯胺類衍生物及其偶聯物，其製備方法，含有其的醫藥組成物，以及其藉由受體調節在製備治療癌症的藥物中的用途。其中通式(D)中的各取代基與說明書中的定義相同。

Description

磺醯苯甲醯胺類衍生物及其偶聯物、其製備方法及其應用

本公開涉及磺醯苯甲醯胺類衍生物及其配體-藥物偶聯物(ADC)。具體地，本公開涉及一種含全新結構的磺醯苯甲醯胺類衍生物及其抗體-藥物偶聯物，及其製備方法，和包含該偶聯物的醫藥組成物，以及該偶聯物或醫藥組成物的用途。

腫瘤細胞區別於正常細胞的一個重要特點就是細胞凋亡受到抑制，從而使得它們具有更大的生存優勢。BCL-2家族蛋白是調節凋亡抑制的重要因子。

BCL-2家族蛋白主要存在於線粒體膜上，根據功能可分為抗凋亡蛋白和促凋亡蛋白兩大類。抗凋亡蛋白包括BCL-2、BCL-xL、BCL-w和MCL-1等。促凋亡蛋白包括Bax、Bak以及BH3-only蛋白。Bax和Bak被激活的時候，會形成多聚體空洞，使細胞線粒體膜的通透性增加，促進細胞色素C等釋放到細胞質中，導致細胞死亡。BH3-only蛋白只包含BH3結構域。在細胞存活的狀態下，BH3-only蛋白(如Bim)與抗凋亡蛋白結合。當細胞受到外界壓力時，結合的平衡被打破，BH3-only蛋白被釋放出來與線粒體上BAX結合，促進BAX/BAK形成多聚體，促進細胞色素C和SMAC釋放到細胞質中，激活下游凋亡通路。

現有的臨床前數據表明BCL2/BCL-xL雙靶抑制劑ABT263除了對血液瘤有效外，對實體瘤，特別是小細胞肺癌也有很好的抑制效果。但是，ABT263在臨床上表現出對血小板的毒性限制了其藥效，最後導致臨床試驗終止。

目前仍然需要對BCL2/BCL-xL雙靶抑制劑進行研究，以使其可作為單藥或聯合用藥或用於ADC中，以滿足臨床的需求。

本公開提供了一種具有通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽：

其中，

R¹選自氘原子、氫原子、烷基和氘代烷基；

R²選自烷基和羥烷基；

或者R¹和R²與它們所連接的原子一起形成雜環基，該雜環基任選進一步被選自鹵素、羥基、烷基、羥烷基、烷氧基和環烷基的取代基所取代；

R³選自氫原子、羥烷基、烷基、氘代烷基、環烷基和環烷基烷基；

R⁴選自氫原子、鹵素、氘代烷基和烷基；

R⁵選自鹵素和鹵烷基；

R⁶選自烷基、胺基、羥基和烷氧基；

R⁷選自氫原子、鹵素、烷基、氘代烷基、羥基和烷氧基；

R⁸、R⁹各自獨立地選自氫原子、烷基、氘代烷基和環烷基；或者R⁸和R⁹與它們所連接的原子一起形成環烷基；

R¹⁰、R¹¹各自獨立地選自氫原子、烷基、氘代烷基和環烷基；或者R¹⁰和R¹¹與它們所連接的原子一起形成環烷基；

R¹²選自氫原子、氘原子、氘代烷基、鹵素、羥基、烷基、羥烷基、烷氧基和環烷基；

R¹³選自氫原子、氘原子、氘代烷基、鹵素、羥基、烷基、羥烷基、烷氧基和環烷基；

R¹⁴選自氫原子、氘原子、氘代烷基、鹵素、羥基、烷基、羥烷基、烷氧基和環烷基；

r選自0、1、2和3；

條件是，當R¹和R²不與它們所連接的原子一起形成雜環基時，R⁵為鹵烷基。

在本公開的另一些實施方案中，該通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中該R¹為氫原子，R²為烷基。

在本公開的另一些實施方案中，該通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中該R¹和R²與它們所連接的原子一起形成雜環基；較佳地，該雜環基任選進一步包含1-3個選自氮原子或氧原子的雜原子；更佳地，該R¹和R²與它們所連接的原子一起形成3-6員雜環基；較佳地，該3-6員雜環基任選進一步包含1-3個選自氮原子或氧原子的雜原子；最佳地，R¹和R²與它們所連接的原子一起形成吡咯烷基。

在本公開的另一些實施方案中，該通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其為通式(D-I)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽：

其中，m選自0、1、2和3；

r、R³-R¹⁴如通式(D)中所定義。

在本公開的另一些實施方案中，該通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其為通式(D-II)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽：

其中，m選自0、1、2和3；

r、R³-R¹¹如通式(D)中所定義。

在本公開的另一些實施方案中，該通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其為通式(D-III)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽：

其中，m選自0、1、2和3；

r、R³-R¹¹如通式(D)中所定義。

在本公開的另一些實施方案中，該通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其為通式(D-IV)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽：

其中，m選自0、1、2和3；

R³-R⁹如通式(D)中所定義。

在本公開的另一些實施方案中，該通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中m為2。

在本公開的另一些實施方案中，該通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中該R⁵為氯原子。

在本公開的另一些實施方案中，該通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中該R⁵為三氟甲基。

在本公開的另一些實施方案中，該通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中該R³選自氫原子、羥烷基和烷基；較佳為羥烷基；更佳C_1-6羥烷基。

在本公開的另一些實施方案中，該通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其為通式(D-V)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽：

其中，t選自0、1、2和3，較佳1；

r、R¹、R²、R⁴、R⁶-R¹⁴如通式(D)中所定義。

在本公開的另一些實施方案中，該通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其為通式(D-VI)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽：

其中，t選自0、1、2和3，較佳1；

r、R¹、R²、R⁴、R⁶-R¹¹如通式(D)中所定義。

在本公開的另一些實施方案中，該通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其為通式(D-VII)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽：

其中，t選自0、1、2和3，較佳1；

r、R¹-R¹¹如通式(D)中所定義。

在本公開的另一些實施方案中，該通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中該R⁴選自氫原子和烷基；較佳為氫原子和C_1-6烷基；更佳為氫原子。

在本公開的另一些實施方案中，該通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中該R⁶選自羥基和烷氧基；較佳為羥基和C_1-6烷氧基；更佳為羥基。

在本公開的另一些實施方案中，該通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中該R⁷、R⁸和R⁹為氫原子。

在本公開的另一些實施方案中，該通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中該R¹⁰和R¹¹各自獨立地選自氫原子和烷基；較佳為氫原子和C_1-6烷基；更佳為氫原子。

在本公開的另一些實施方案中，該通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中該r為0或1；較佳為0。

在本公開的另一些實施方案中，該通式(D)所示的化合物，包括但不限於：

或其藥學上可接受的鹽。

本公開進一步提供一種通式(DA1)或(DB1)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，

其中，

G₁為胺基保護基，較佳Boc；

m選自0、1、2和3；

r、R⁴-R¹¹如通式(D)中所定義。

在本公開的另一些實施方案中，該通式(DA1)或(DB1)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其選自以下任一化合物：

本公開進一步提供一種製備通式(D-III)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽的方法，該方法包括：

通式(DA1)的化合物或其藥學上可接受的鹽在酸性條件下發生脫保護反應，得到通式(D-III)的化合物或其藥學上可接受的鹽；較佳地，用於該酸性條件的試劑為HCl；

其中，

G₁為胺基保護基，較佳Boc；

m選自0、1、2和3；

R³為氫原子；

r、R⁴-R¹¹如通式(D)中所定義。

本公開進一步提供一種通式(DA2)或(DB2)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，

其中，

m選自0、1、2和3；

r、R⁴-R¹¹如通式(D)中所定義。

在本公開的另一些實施方案中，該通式(DA2)或(DB2)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其選自以下任一化合物：

通式(DA2)的化合物或其藥學上可接受的鹽在鹼性條件下發生取代反應，得到通式(D-III)的化合物或其藥學上可接受的鹽；較佳地，用於該鹼性條件的試劑為三乙胺；

其中，

m選自0、1、2和3；

R³為羥烷基；

r、R⁴-R¹¹如通式(D)中所定義。

本公開進一步提供一種通式(DA3)、(DB3)或(DC3)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，

其中，

G₂為羥基保護基，較佳為TBS；

t選自0、1、2和3；

r、R¹、R²、R⁴-R¹¹如通式(D)中所定義。

在本公開的另一些實施方案中，該通式(DA3)、(DB3)或(DC3)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其選自以下任一化合物：

本公開進一步提供一種製備通式(D-VI)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽的方法，該方法包括：

通式(DA3)的化合物或其藥學上可接受的鹽在鹼性條件下發生脫保護反應，得到通式(D-VI)的化合物或其藥學上可接受的鹽；該鹼性條件的試劑為四丁基氟化銨；

其中，

G₂為羥基保護基，較佳為TBS；

t選自0、1、2和3；

r、R¹、R²、R⁴-R¹¹如通式(D)中所定義。

本公開進一步提供一種包含式(-D)所示結構的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽：

其中，

R¹選自氘原子、氫原子、烷基和氘代烷基；

R²選自烷基和羥烷基；

R^3a選自鍵或者-(CH₂)_t-CH₂-O-；烷基端與藥物部分的N原子所相連，-O-端與連接子相連；

R⁴選自氫原子、鹵素、氘代烷基和烷基；

R⁵選自鹵素和鹵烷基；

R⁶選自烷基、胺基、羥基和烷氧基；

R⁷選自氫原子、鹵素、烷基、氘代烷基、羥基和烷氧基；

r選自0、1、2和3；

t選自0、1、2和3；

波浪線表示與接頭單元或與配體共價連接。

在本公開的另一些實施方案中，該包含式(-D)所示結構的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中該式(-D)選自式(-DI)和(-DII)所示的結構：

其中，t選自0、1、2和3；

波浪線、r、R¹、R²、R⁴-R¹⁴如通式(-D)中所定義。

在本公開的另一些實施方案中，該包含式(-D)所示結構的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，該式(-D)選自式(-DIII)、(-DIV)和(-DV)所示的結構：

其中，

t選自0、1、2和3；

m選自0、1、2和3；

波浪線、r、R¹、R²、R⁴-R¹¹如通式(-D)中所定義；

較佳地，該式(-DV)中，R¹和R²不形成雜環基。

在本公開的另一些實施方案中，該包含式(-D)所示結構的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，該式(-D)選自式(-DVI)和(-DVII)所示的結構：

其中，

t選自0、1、2和3；

m選自0、1、2和3；

波浪線、r、R⁵-R⁹如通式(-D)中所定義。

在本公開的另一些實施方案中，該包含式(-D)所示結構的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其為通式(Pc-L-D)所示的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽：

其中，

R¹選自氘原子、氫原子、烷基和氘代烷基；

R²選自烷基和羥烷基；

R^3a選自鍵和-(CH₂)_t-CH₂-O-；

R⁴選自氫原子、鹵素、氘代烷基和烷基；

R⁵選自鹵素和鹵烷基；

R⁶選自烷基、胺基、羥基和烷氧基；

R⁷選自氫原子、鹵素、烷基、氘代烷基、羥基和烷氧基；

r選自0、1、2和3；

t選自0、1、2和3；

n為1至10的整數或小數；

Pc為配體；L為接頭單元。

在本公開的另一些實施方案中，該包含式(-D)所示結構的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其為通式(Pc-L-DIII)、(Pc-L-DIV)和(Pc-L-DV)所示的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽：

其中，

t選自0、1、2和3；

m選自0、1、2和3；

r、R¹、R²、R⁴-R¹¹、Pc、L、n如通式(Pc-L-D)中所定义。

在本公開的另一些實施方案中，該配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中n為1至8的整數或小數；較佳為2至8的整數或小數。

在本公開的另一些實施方案中，該配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中該Pc為抗體。

在本公開的另一些實施方案中，該配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中該抗體選自抗HER2(ErbB2)抗體、抗Trop-2抗體、抗CD79b抗體、抗EGFR抗體、抗B7-H3抗體、抗c-Met抗體、抗HER3(ErbB3)抗體、抗HER4(ErbB4)抗體、抗CD20抗體、抗CD22抗體、抗CD30抗體、抗CD33抗體、抗CD44抗體、抗CD56抗體、抗CD70抗體、抗CD73抗體、抗CD105抗體、抗CEA抗體、抗A33抗體、抗Cripto抗體、抗EphA2抗體、抗G250抗體、抗MUCl抗體、抗Lewis Y抗體、抗VEGFR抗體、抗GPNMB抗體、抗Integrin抗體、抗PSMA抗體、抗Tenascin-C抗體、抗SLC44A4抗體和抗Mesothelin抗體，較佳自曲妥珠單抗(Trastuzumab)、帕妥珠單抗(Pertuzumab)、尼妥珠單抗(Nimotuzumab)、恩諾比妥珠單抗(Enoblituzumab)、恩貝妥珠單抗(Emibetuzumab)、伊諾妥珠單抗(Inotuzumab)、品那妥珠單抗(Pinatuzumab)、布瑞妥昔單抗(Brentuximab)、吉妥珠單抗(Gemtuzumab)、必伐妥珠單抗(Bivatuzumab)、洛維妥珠單抗(Lorvotuzumab)、cBR96和格來木單抗(Glematumamab)。

在本公開的另一些實施方案中，該配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中接頭單元-L-為-L^a-L^b-L^c-，

L^a選自

、

、

、

、

和

，其中，W選自-C_1-6烷基-、-C_1-6烷基-環烷基-和1至6個原子的直鏈-雜烷基-，該雜烷基包含1至3個雜原子選自N、O和S，其中該-C_1-6烷基-、-C_1-6烷基-環烷基-或1至6個原子的直鏈-雜烷基-各自獨立地任選進一步被選自鹵素、羥基、氰基、胺基、烷基、氯烷基、氘代烷基、烷氧基和環烷基的一個或多個取代基所取代；

L^b為由2至7個胺基酸構成的肽殘基或化學鍵，其中胺基酸任選被選自鹵素、羥基、氰基、胺基、烷基、氯烷基、氘代烷基、烷氧基和環烷基中的一個或多個取代基所取代；

L^c選自-NR¹⁷(CR¹⁸R¹⁹)t-、-NH-C(R¹⁸R¹⁹)-O-C(R²⁰R²¹)-C(O)-、-NH-R²²-(CH₂)_q-OC(O)-、-C(O)NR¹⁷、-C(O)NR¹⁷(CH₂)_q-和化學鍵，其中q為1至6的整數；

R¹⁷選自氫原子、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；

R¹⁸和R¹⁹相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；

R²⁰選自烷基、環烷基烷基和環烷基；

R²¹選自氫原子、烷基和鹵烷基；

或者，R²⁰和R²¹與其相連接的碳原子一起形成C_3-6環烷基；

R²²選自芳基或雜芳基。

在本公開的另一些實施方案中，該配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中W選自-(CH₂)₂-和-(CH₂)₅-。

在本公開的另一些實施方案中，該配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中該L^b的肽殘基為由一個或多個選自苯丙胺酸、甘胺酸、纈胺酸、賴胺酸、瓜胺酸、絲胺酸、谷胺酸、天冬胺酸中的胺基酸形成的胺基酸殘基；較佳為四肽殘基、二肽殘基和化學鍵；更佳為甘胺酸-甘胺酸-苯丙胺酸-甘胺酸的四肽殘基或者纈胺酸-瓜胺酸的二肽殘基。

在本公開的另一些實施方案中，該配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中接頭單元L^c選自-NH-C(R¹⁸R¹⁹)-O-C(R²⁰R²¹)-C(O)-、-NH-R²²-(CH₂)_q-OC(O)-或化學鍵，q為1至6的整數；R²²選自芳基和雜芳基；

較佳地，L^c選自以下結構式：

R²⁰選自烷基、環烷基烷基和環烷基；

R²¹選自氫原子、烷基和鹵烷基；

或者，R²⁰和R²¹與其相連接的碳原子一起形成C_3-6環烷基。

在本公開的另一些實施方案中，該配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中接頭單元-L-為-L^a-，-L^a-如前所定義。

L^a選佳

、

、

、

、

和

，其中W選自-(CH₂)₂-和-(CH₂)₅-；

L^b選自四肽殘基和二肽殘基；較佳為甘胺酸-甘胺酸-苯丙胺酸-甘胺酸的四肽殘基或者纈胺酸-瓜胺酸的二肽殘基；

L^c選自以下結構式：

R¹⁸或R¹⁹相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；

R²⁰選自烷基、環烷基烷基或環烷基；

R²¹選自氫原子、烷基或鹵烷基；

或者，R²⁰和R²¹與其相連接的碳原子一起形成C_3-6環烷基。

在本公開的另一些實施方案中，該配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，包含連接單元-L-，其中-L-選自：

其中a端與配體Pc相連，b端與藥物端R^3a相連。

L^a選佳

、

、

、

、

和

，其中W選自-(CH₂)₂-和-(CH₂)₅-；

L^c為如下結構式：

本公開進一步提供一種通式(Lu-D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽：

其中，

L^a’選自

、

，其中W選自-(CH₂)₂-和-(CH₂)₅-；

L^c為如下結構式：

R¹選自氘原子、氫原子、烷基和氘代烷基；

R²選自烷基和羥烷基；

R^3a選自鍵和-(CH₂)_t-CH₂-O-；

R⁴選自氫原子、鹵素、氘代烷基和烷基；

R⁵選自鹵素和鹵烷基；

R⁶選自烷基、胺基、羥基和烷氧基；

R⁷選自氫原子、鹵素、烷基、氘代烷基、羥基和烷氧基；

r選自0、1、2和3；

t選自0、1、2和3。

在本公開的另一些實施方案中，該通式(Lu-D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其為如下所示的化合物：

本公開進一步提供一種醫藥組成物，其含有治療有效量的通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，或包含式(-D)所示結構的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，或通式(Pc-L-D)所示的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，以及藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。

本公開進一步提供通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽或者包含式(-D)所示結構的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或者通式(Pc-L-D)所示的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或者如前所述的醫藥組成物在製備Bcl-2和/或Bcl-XL抑制劑中的用途。

本公開進一步提供通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽或者包含式(-D)所示結構的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或者通式(Pc-L-D)所示的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或者如前所述的醫藥組成物在製備用於治療或預防腫瘤的藥物中的用途。

本公開進一步提供通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽或者包含式(-D)所示結構的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或者通式(Pc-L-D)所示的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或者如前所述的醫藥組成物在製備治療和/或預防癌症的藥物中的用途，其中該癌症較佳黑色素瘤、肝癌、腎癌、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、鼻咽癌、結腸直腸癌、結腸癌、直腸癌、胰腺癌、宮頸癌、卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌、前列腺癌、白血病、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、慢性淋巴細胞白血病、急性淋巴細胞白血病、急性粒細胞性白血病、套細胞淋巴瘤、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、濾泡中心淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、T細胞淋巴瘤、B細胞淋巴瘤、頭頸鱗狀細胞癌、子宮頸癌、甲狀腺癌、淋巴瘤、肉瘤、成神經細胞瘤、腦瘤、骨髓瘤、星形細胞瘤和膠質瘤。

本公開的另一方面，進一步涉及一種用於治療或預防癌症的方法，該方法包括向有需要的受試者施用治療有效劑量的通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽或者包含式(-D)所示結構的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或者通式(Pc-L-D)所示的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或者如前所述的醫藥組成物；其中該癌症較佳黑色素瘤、肝癌、腎癌、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、鼻咽癌、結腸直腸癌、結腸癌、直腸癌、胰腺癌、宮頸癌、卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌、前列腺癌、白血病、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、慢性淋巴細胞白血病、急性淋巴細胞白血病、急性粒細胞性白血病、套細胞淋巴瘤、彌漫性大B細胞淋巴瘤、濾泡中心淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、T細胞淋巴瘤、B細胞淋巴瘤、頭頸鱗狀細胞癌、子宮頸癌、甲狀腺癌、淋巴瘤、肉瘤、成神經細胞瘤、腦瘤、骨髓瘤、星形細胞瘤和膠質瘤。

可將活性化合物(例如根據本公開所述的配體-藥物偶聯物、或其藥學上可接受的鹽)製成適合於藉由任何適當途徑給藥的形式，活性化合物較佳是以單位劑量的方式，或者是以受試者可以以單劑進行自我給藥的方式。本公開所述的活性化合物或組成物的單位劑量的方式可以是片劑、膠囊、扁囊劑、瓶裝藥水、藥粉、顆粒劑、錠劑、栓劑、再生藥粉或液體製劑。

本公開治療方法中所用活性化合物或組成物的施用劑量通常將隨疾病的嚴重性、受試者的體重和活性化合物的相對功效而改變。作為一般性指導，合適的單位劑量可以是0.1mg~1000mg。

本公開的醫藥組成物除活性化合物外，可含有一種或多種輔料，該輔料選自以下成分：填充劑、稀釋劑、黏合劑、潤濕劑、崩解劑或賦形劑等。根據給藥方法的不同，組成物可含有0.1至99重量%的活性化合物。

含活性成分的醫藥組成物可以是適用於口服的形式，例如片劑、糖錠劑、錠劑、水或油混懸液、可分散粉末或顆粒、乳液、硬或軟膠囊，或糖漿劑或酏劑。可按照本領域任何已知製備醫藥組成物的方法製備口服組成物，此類組成物可含有黏合劑、填充劑、潤滑劑、崩解劑或藥學上可接受的潤濕劑等，此類組成物還可以含有一種或多種選自以下的成分：甜味劑、矯味劑、著色劑和防腐劑，以提供悅目和可口的藥用製劑。

水懸浮液含有活性物質和用於混合的適宜製備水懸浮液的賦形劑。水混懸液也可以含有一種或多種防腐劑例、一種或多種著色劑、一種或多種矯味劑和一種或多種甜味劑。

油混懸液可藉由使活性成分懸浮於植物油中配製而成。油懸浮液可含有增稠劑。可加入上述的甜味劑和矯味劑，以提供可口的製劑。

醫藥組成物還可以是用於製備水混懸液的可分散粉末和顆粒提供活性成分，藉由加入水混合分散劑、濕潤劑、懸浮劑或防腐劑中的一種或多種。也可加入其他賦形劑例如甜味劑、矯味劑和著色劑。藉由加入抗氧化劑例如抗壞血酸保存這些組成物。

本公開的醫藥組成物也可以是水包油乳劑的形式。

醫藥組成物可以是無菌注射水溶液形式。可以使用的可接受的溶媒或溶劑有水、林格氏液和等滲氯化鈉溶液。無菌注射製劑可以是其中活性成分溶於油相的無菌注射水包油微乳。例如將活性成分溶於大豆油和卵磷脂的混合物中。然後將油溶液加入水和甘油的混合物中處理形成微乳。可藉由局部大量注射，將注射液或微乳注入受試者的血流中。或者，最好按可保持本公開化合物恆定循環濃度的方式給予溶液和微乳。為保持這種恆定濃度，可使用連續靜脈內遞藥裝置。這種裝置的示例是Deltec CADD-PLUS.TM.5400型靜脈注射泵。

醫藥組成物可以是用於肌內和皮下給藥的無菌注射水或油混懸液的形式。可按已知技術，用上述那些適宜的分散劑或濕潤劑和懸浮劑配製該混懸液。無菌注射製劑也可以是在腸胃外可接受的無毒稀釋劑或溶劑中製備的無菌注射溶液或混懸液。此外，可方便地用無菌固定油作為溶劑或懸浮介質。

可按用於直腸給藥的栓劑形式給予本公開化合物。可藉由將藥物與在普通溫度下為固體但在直腸中為液體，因而在直腸中會溶化而釋放藥物的適宜的無刺激性賦形劑混合來製備這些醫藥組成物。此類物質包括可可脂、甘油明膠、氫化植物油、各種分子量的聚乙二醇和聚乙二醇的脂肪酸酯的混合物。

如所屬技術領域具有通常知識者所熟知的，藥物的給藥劑量依賴於多種因素，包括但並非限定於以下因素：所用具體化合物的活性、受試者的年齡、受試者的體重、受試者的健康狀況、受試者的行為、受試者的飲食、給藥時間、給藥方式、排泄的速率、藥物的組合等；另外，最佳的治療方式如治療的模式、通式化合物的日用量或藥學上可接受的鹽的種類可以根據傳統的治療方案來驗證。

本公開涉及靶向不同癌細胞、傳染病生物體的能力改進和/或用於治療自身免疫性疾病的偶聯物，該偶聯物包含靶向(結合)部分和屬於藥物的治療部分。抗體靶向部分與化合物治療部分經由增加治療效力的胞內可裂解的鍵連接。

多年來，在特異性靶向藥物療法領域中科學家的一個目的是使用單株抗體(MAb)用於向人癌症特異性遞送毒性劑。已經開發了腫瘤相關MAb與適當毒性劑的偶聯物，但在癌症的治療中成敗參半，在其他疾病諸如傳染病和自身免疫性疾病中幾乎無應用。毒性劑是最通常的化療藥物。目前對開發更有效的用於治療癌症、病原體和其他疾病的帶有胞內可裂解接頭的抗體偶聯物存在進一步的需要。

[發明的詳細說明]

除非另有限定，本文所用的所有技術和科學術語均與本公開所屬技術領域具有通常知識者的通常理解一致。雖然也可採用與本文所述相似或等同的任何方法和材料實施或測試本公開，但本文描述了較佳的方法和材料。描述和要求保護本公開時，依據以下定義使用下列術語。

當本公開中使用商品名時，旨在包括該商品名產品的製劑、該商品名產品的藥物和活性藥物部分。

術語“配體”是能識別和結合目標細胞相關的抗原或受體的大分子化合物。配體的作用是將藥物呈遞給與配體結合的目標細胞群，這些配體包括但不限於蛋白類激素、凝集素、生長因子、抗體或其他能與細胞結合的分子。在本公開實施方式中，配體表示為Pc，配體可藉由配體上的雜原子與連接單元形成連接鍵，較佳為抗體或其抗原結合片段，該抗體選自嵌合抗體、人源化抗體、全人抗體或鼠源抗體；較佳為單株抗體。

術語“藥物”是指細胞毒性藥物或免疫調節劑。細胞毒性藥物能在腫瘤細胞內具有較強破壞其正常生長的化學分子。細胞毒性藥物原則上在足夠高的濃度下都可以殺死腫瘤細胞，但是由於缺乏特異性，在殺傷腫瘤細胞的同時，也會導致正常細胞的凋亡，導致嚴重的副作用。該術語包括如細菌、真菌、植物或動物來源的小分子毒素或酶活性毒素，放射性同位素(例如At²¹¹、I¹³¹、I¹²⁵、Y⁹⁰、Re¹⁸⁶、Re¹⁸⁸、Sm¹⁵³、Bi²¹²、P³²和Lu的放射性同位素)，化療藥物，抗生素和核溶酶。本公開的一此實施方案中，藥物表示為D，可以是BCL2抑制劑、BCL-XL抑制劑或BCL2/BCL-XL雙靶抑制劑。

術語“接頭單元”、“接頭”或“連接片段”是指一端與配體連接而另一端與藥物相連的化學結構片段或鍵，也可以連接其他接頭後再與配體或藥物相連。

接頭，包括延伸物、間隔物和胺基酸單元，可以藉由本領域已知方法合成，諸如US2005-0238649A1中所記載的。接頭可以是便於在細胞中釋放藥物的“可切割接頭”。例如，可使用酸不穩定接頭(例如腙)、蛋白酶敏感(例如肽酶敏感)接頭、光不穩定接頭、二甲基接頭或含二硫化物接頭(Chari等，Cancer Research 52：127-131(1992)；美國專利No.5,208,020)。

術語“配體-藥物偶聯物”，指配體藉由穩定的連接單元與具有生物活性的藥物相連。在本公開中“配體-藥物偶聯物”較佳為抗體-藥物偶聯物(antibody drug conjugate，ADC)，指把單株抗體或者抗體片段藉由穩定的連接單元與具有生物活性的毒性藥物相連。

本公開所用胺基酸三字母代碼和單字母代碼如J.biol.chem,243,p3558(1968)中所述。

本公開所述的“抗體”在本文中以最廣意義使用，並且包括不同的抗體結構，包括但不限於，單株抗體、多株抗體、鼠源抗體、嵌合抗體、人源化抗體、多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)和抗原結合片段，只要它們顯示所需的抗原節合活性和特異性即可。

現有技術中熟知生產和純化抗體和抗原結合片段的方法，如冷泉港的抗體實驗技術指南，5-8章和15章。抗原結合片段同樣可以用常規方法製備。本公開所述的抗體或抗原結合片段用基因工程方法在非人源的CDR區加上一個或多個人源FR區。人FR種系序列可以藉由比對IMGT人類抗體可變區種系基因數據庫和MOE軟體，從ImMunoGeneTics(IMGT)的網站http：//imgt.cines.fr得到，或者從免疫球蛋白雜誌，2001ISBN012441351上獲得。

術語“烷基”指飽和脂肪族烴基團，其為包含1至20個碳原子的直鏈或支鏈基團，較佳含有1至12個(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12個)碳原子的烷基，更佳含有1至10個碳原子的烷基，最佳含有1至6個碳原子的烷基。非限制性示例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第三丁基、第二丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、 1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基，及其各種支鏈異構體等。更佳地是含有1至6個碳原子的低級烷基，非限制性實施例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第三丁基、第二丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基和2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代的或非取代的，當被取代時，取代基可以在任何可使用的連接點上被取代，該取代基較佳為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基和側氧基。

術語“雜烷基”指含有一個或多個選自N、O或S的雜原子的烷基，其中烷基如上所定義。

術語“伸烷基”指飽和的直鏈或支鏈脂肪族烴基，其具有2個從母體烷的相同碳原子或兩個不同的碳原子上除去兩個氫原子所衍生的殘基，其為包含1至20個碳原子的直鏈或支鏈基團，較佳含有1至12個(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12個)碳原子，更佳含有1至6個碳原子的伸烷基。伸烷基的非限制性示例包括但不限於亞甲基(-CH₂-)、1,1-伸乙基(-CH(CH₃)-)、1,2-伸乙基(-CH₂CH₂)-、1,1-伸丙基(-CH(CH₂CH₃)-)、1,2-伸丙基(-CH₂CH(CH₃)-)、1,3-伸丙基(-CH₂CH₂CH₂-)、1,4-伸丁基(-CH₂CH₂CH₂CH₂-)和1,5-伸丁基(-CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂-)等。伸烷基可以是取代的或非取代的，當被取代時，取代基可以在任何可使用的連接點上被取代，該取代基較佳獨立地任選選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基和側氧基中的一個或多個取代基所取代。

術語“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(非取代的環烷基)，其中烷基或環烷基的定義如上所述。烷氧基的非限制性示例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、環丙氧基、環丁氧基、環戊氧基、環己氧基。烷氧基可以是任選取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基和雜環烷硫基。

術語“環烷基”指飽和或部分不飽和單環或多環環狀烴取代基，環烷基環包含3至20個碳原子，較佳包含3至12個碳原子，更佳包含3至10個碳原子，最佳包含3至8個碳原子。單環環烷基的非限制性示例包括環丙基、環丁基、環戊基、環戊烯基、環己基、環己烯基、環己二烯基、環庚基、環庚三烯基、環辛基等；多環環烷基包括螺環、稠環和橋環的環烷基。

術語“亞環烷基”指環烷基上具有2個從母體環烷基的環原子上除去兩個氫原子所衍生的殘基。該環烷基如上所定義。

術語“雜環基”指飽和或部分不飽和單環或多環環狀烴取代基，其包含3至20個環原子，其中一個或多個環原子為選自氮、氧或S(O)_m(其中m是整數0至2)的雜原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的環部分，其餘環原子為碳。較佳包含3至12個環原子，其中1~4個(例如1、2、3和4個)是雜原子；更佳環烷基環包含3至10個環原子；更佳包含3至8個環原子(例如3、4、5、6、7和8個)，其中1-3是雜原子(例如1、2和3個)；更佳包含3至6個環原子，其中1-3個是雜原子；最佳包含5或6個環原子，其中1-3個是雜原子。單環雜環基的非限制性示例包括吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、硫嗎啉基、高哌嗪基等。多環雜環基包括螺環、稠環和橋環的雜環基。

術語“螺雜環基”指5至20員，單環之間共用一個原子(稱螺原子)的多環雜環基團，其中一個或多個環原子為選自氮、氧或S(O)_m(其中m是整數0至2)的雜原子，其餘環原子為碳。其可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子系統。較佳為6至14員，更佳為7至10員(例如7、8、9或10員)。根據環與環之間共用螺原子的數目將螺雜環基分為單螺雜環基、雙螺雜環基或多螺雜環基，較佳為單螺雜環基和雙螺雜環基。更佳為4員/4員、4員/5員、4員/6員、5員/5員或5員/6員單螺雜環基。螺雜環基的非限制性示例包括：

術語“稠雜環基”指5至20員，系統中的每個環與體系中的其他環共享毗鄰的一對原子的多環雜環基團，一個或多個環可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子系統，其中一個或多個環原子為選自氮、氧或S(O)_m(其中m是整數0至2)的雜原子，其餘環原子為碳。較佳為6至14員，更佳為7至10員(例如7、8、9或10員)。根據組成環的數目可以分為雙環、三環、四環或多環稠雜環基，較佳為雙環或三環，更佳為5員/5員或5員/6員雙環稠雜環基。稠雜環基的非限制性示例包括：

術語“橋雜環基”指5至14員，任意兩個環共用兩個不直接連接的原子的多環雜環基團，其可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子系統，其中一個或多個環原子為選自氮、氧或S(O)_m(其中m是整數0至2)的雜原子，其餘環原子為碳。較佳為6至14員，更佳為7至10員(例如7、8、9或10員)。根據組成環的數目可以分為雙環、三環、四環或多環橋雜環基，較佳為雙環、三環或四環，更佳為雙環或三環。橋雜環基的非限制性示例包括：

、

、

、

、

、

、

、

該雜環基環可以稠合於芳基、雜芳基或環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為雜環基，其非限制性示例包括：

、

、

和

等。

雜環基可以是任選取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基和側氧基。

術語“亞雜環基”指雜環基上具有2個從母體雜環基的相同或不同的環原子上除去兩個氫原子所衍生的殘基。該雜環基如上所定義。

術語“芳基”指具有共軛的π電子體系的6至14員全碳單環或稠合多環(也就是共享毗鄰碳原子對的環)基團，較佳為6至10員，例如苯基和萘基，較佳苯基。該芳基環可以稠合於雜芳基、雜環基或環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為芳基環，其非限制性示例包括：

芳基可以是取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基和雜環烷硫基。

術語“雜芳基”指包含1至4個雜原子、5至14個環原子的雜芳族體系，其中雜原子選自氧、硫和氮。雜芳基較佳為5至10員，更佳為5員或6員，例如呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基和四唑基等。該雜芳基環可以稠合於芳基、雜環基或環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為雜芳基環，其非限制性示例包括：

雜芳基可以是任選取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基和雜環烷硫基。

術語“胺基保護基”是為了使分子其它部位進行反應時胺基保持不變，用易於脫去的基團對胺基進行保護。非限制性實施例包含9-芴甲氧羰基、第三丁氧羰基、乙醯基、苄基、烯丙基和對甲氧苄基等。這些基團可任選地被選自鹵素、烷氧基或硝基中的1-3個取代基所取代。該胺基保護基較佳為9-芴甲氧羰基。

術語“烯基”指分子中含有碳碳雙鍵的烷基化合物，其中烷基的定義如上所述。烯基可以是取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，其獨立地選自氫原子、烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、鹵烷氧基、環烷基氧基、雜環基氧基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基。

術語“炔基”指分子中含有碳碳三鍵的烷基化合物，其中烷基的定義如上所述。炔基可以是取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，其獨立地選自氫原子、烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、鹵烷氧基、環烷基氧基、雜環基氧基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基。

術語“環烷基烷基”指烷基被一個或多個環烷基取代，較佳被一個環烷基取代，其中烷基如上所定義，其中環烷基如上所定義。

術語“鹵烷基”指烷基被一個或多個鹵素取代，其中烷基如上所定義。

術語“氘代烷基”指烷基被一個或多個氘原子取代，其中烷基如上所定義。

術語“羥基”指-OH基團。

術語“鹵素”指氟、氯、溴或碘。

術語“胺基”指-NH₂。

術語“硝基”指-NO₂。

術語“醯胺基”指-C(O)N(烷基)或(環烷基)，其中烷基、環烷基如上所定義。

術語“羧酸酯基”指-C(O)O(烷基)或(環烷基)，其中烷基、環烷基如上所定義。

化學式中簡稱“Me”為甲基。

化學式中簡稱“Ph”為苯基。

本公開還包括各種氘化形式的式(D)化合物。與碳原子連接的各個可用的氫原子可獨立地被氘原子替換。所屬技術領域具有通常知識者能夠參考相關文獻合成氘化形式的式(D)化合物。在製備氘代形式的式(D)化合物時可使用市售的氘代起始物質，或它們可使用常規技術採用氘代試劑合成，氘代試劑包括但不限於氘代硼烷、三氘代硼烷四氫呋喃溶液、氘代氫化鋰鋁、氘代碘乙烷和氘代碘甲烷等。

“任選”或“任選地”意味著隨後所描述的事件或環境可以但不必發生，該說明包括該事件或環境發生或不發生地場合。例如，“任選被烷基取代的雜環基團”意味著烷基可以但不必須存在，該說明包括雜環基團被烷基取代的情形和雜環基團不被烷基取代的情形。

“取代的”指基團中的一個或多個氫原子，較佳為最多5個，更佳為1~3個氫原子彼此獨立地被相應數目的取代基取代。不言而喻，取代基僅處在它們的可能的化學位置，所屬技術領域具有通常知識者能夠在不付出過多努力的情況下確定(藉由實驗或理論)可能或不可能的取代。例如，具有游離氫的胺基或羥基與具有不飽和(如烯屬)鍵的碳原子結合時可能是不穩定的。

術語“醫藥組成物”表示含有一種或多種本文所述化合物或其生理學上/藥學上可接受的鹽或前體藥物與其他化學組分的混合物，以及其他組分例如生理學/可藥用的載體和賦形劑。醫藥組成物的目的是促進對生物體的給藥，利於活性成分的吸收進而發揮生物活性。

術語“藥學上可接受的鹽”或“可藥用鹽”是指本公開配體-藥物偶聯物的鹽，或本公開中所述的化合物的鹽，這類鹽用於哺乳動物體內時具有安全性和有效性，且具有應有的生物活性，本公開抗體-抗體藥物偶聯化合物至少含有一個胺基，因此可以與酸形成鹽，可藥用鹽的非限制性示例包括：鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽、琥珀酸鹽、抗壞血酸鹽、草酸鹽、硝酸鹽、梨酸鹽、磷酸氫鹽、磷酸二氫鹽、水楊酸鹽、檸檬酸氫鹽、酒石酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽。

術語“載藥量”是指偶聯物分子中每個配體上加載的細胞毒性藥物平均數量，也可以表示為藥物量和抗體量的比值(Drug-to-Antibody Ratio，DAR值)，藥物載量的範圍可以是每個配體(Pc)連接0-12個，較佳1-10個細胞毒性藥物(D)。在本公開的實施方式中，載藥量表示為n，示例性的可以為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10的均值，範圍為0-12，較佳1-10，更佳1-8，或2-8，或2-7，或3-8，或3-7，或3-6，或4-7，或4-6，或4-5的均值。可用常規方法如UV/可見光光譜法，質譜，ELISA試驗、CE-SDS法和HPLC特徵鑑定偶聯反應後每個ADC分子的載藥量。

可以用以下非限制性方法控制配體細胞毒性藥物偶聯物的載量，包括：

(1)控制連接試劑和配體的摩爾比，

(2)控制反應時間和溫度，

(3)選擇不同的反應試劑。

常規的醫藥組成物的製備見中國藥典。

術語“載體”用於本公開的藥物，是指能改變藥物進入人體的方式和在體內的分佈、控制藥物的釋放速度並將藥物輸送到靶向器官的體系。藥物載體釋放和靶向系統能夠減少藥物降解及損失，降低副作用，提高生物利用度。如可作為載體的高分子表面活性劑由於其獨特的兩親性結構，可以進行自組裝，形成各種形式的聚集體，較佳地示例如膠束、微乳液、凝膠、液晶和囊泡等。這些聚集體具有包載藥物分子的能力，同時又對膜有良好的滲透性，可以作為優良的藥物載體。

術語“賦形劑”是在藥物製劑中除主藥以外的附加物，也可稱為輔料。如片劑中的黏合劑、填充劑、崩解劑和潤滑劑；半固體製劑、軟膏劑、霜劑中的基質部分；液體製劑中的防腐劑、抗氧劑、矯味劑、芳香劑、助溶劑、乳化劑、增溶劑、滲透壓調節劑和著色劑等均可稱為賦形劑。

術語“稀釋劑”又稱填充劑，其主要用途是增加片劑的重量和體積。稀釋劑的加入不僅保證一定的體積大小，而且減少主要成分的劑量偏差，改善藥物的壓縮成型性等。當片劑的藥物含有油性組分時，需加入吸收劑吸收油性物，使保持“乾燥”狀態，以利於製成片劑。如澱粉、乳糖、鈣的無機鹽和微晶纖維素等。

提供鹼性條件的試劑包括有機鹼和無機鹼類，該有機鹼類包括但不限於三乙胺、二乙胺、N-甲基嗎啉、吡啶、六氫吡啶、N,N-二異丙基乙胺、正丁基鋰、二異丙基胺基鋰、醋酸鉀、第三丁醇鈉、四丁基氟化銨或第三丁醇鉀，該無機鹼類包括但不限於氫化鈉、磷酸鉀、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸銫、氫氧化鈉和氫氧化鋰，較佳N,N-二異丙基乙胺。

圖1顯示本公開化合物對人急性淋巴細胞白血病RS4；11小鼠皮下移植瘤抑制作用。

圖2顯示本公開化合物抑制小鼠皮下移植瘤人急性淋巴細胞白血病RS4；11引起的體重變化。

以下結合實施例進一步描述本公開，但這些實施例並非限制本公開的範圍。

本公開實施例中未註明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，或按照原料或商品製造廠商所建議的條件。未註明具體來源的試劑，為市場購買的常規試劑。

一、化合物的合成

[實施例]

化合物的結構是藉由核磁共振(NMR)或/和質譜(MS)來確定的。NMR位移(δ)以10^-6(ppm)的單位給出。NMR的測定是用Bruker AVANCE NEO 500M核磁儀，測定溶劑為氘代二甲基亞碸(DMSO-d ₆)、氘代氯仿(CDCl₃)、氘代甲醇(CD₃OD)，內標為四甲基矽烷(TMS)。

MS的測定用Agilent 1200/1290 DAD-6110/6120 Quadrupole MS液質聯用儀(生產商：Agilent，MS型號：6110/6120 Quadrupole MS)、waters ACQuity UPLC-QD/SQD(生產商：waters，MS型號：waters ACQuity Qda Detector/waters SQ Detector)、THERMO Ultimate 3000-Q Exactive(生產商：THERMO，MS型號：THERMO Q Exactive)。

高效液相色譜法(HPLC)分析使用Agilent HPLC 1200DAD、Agilent HPLC 1200VWD和Waters HPLC e2695-2489高壓液相色譜儀。

手性HPLC分析測定使用Agilent 1260 DAD高效液相色譜儀。

高效液相製備色譜法使用Waters 2545-2767、Waters 2767-SQ Detecor2、Shimadzu LC-20AP和Gilson GX-281製備型色譜儀。

手性製備使用Shimadzu LC-20AP製備型色譜儀。

CombiFlash快速製備儀使用Combiflash Rf200(TELEDYNE ISCO)。

薄層層析矽膠板使用煙臺黃海HSGF254或青島GF254矽膠板，薄層色譜法(TLC)使用的矽膠板採用的規格是0.15mm~0.2mm，薄層層析分離純化產品採用的規格是0.4mm~0.5mm。

矽膠管柱色譜法一般使用煙臺黃海矽膠200~300目矽膠為載體。

激酶平均抑制率及IC₅₀值的測定用NovoStar酶標儀(德國BMG公司)。

本公開的已知的起始原料可以採用或按照本領域已知的方法來合成，或可購買自ABCR GmbH & Co.KG、Acros Organics、Aldrich Chemical Company、韶遠化學科技(Accela ChemBio Inc)、達瑞化學品等公司。

實施例中無特殊說明，反應能夠均在氬氣氛或氮氣氛下進行。

氬氣氛或氮氣氛是指反應瓶連接一個約1L容積的氬氣或氮氣氣球。

氫氣氛是指反應瓶連接一個約1L容積的氫氣氣球。

加壓氫化反應使用Parr 3916EKX型氫化儀和清藍QL-500型氫氣發生器或HC2-SS型氫化儀。

氫化反應通常抽真空，充入氫氣，重複操作3次。

微波反應使用CEM Discover-S 908860型微波反應器。

實施例中無特殊說明，溶液是指水溶液。

實施例中無特殊說明，反應的溫度為室溫，為20℃~30℃。

實施例中的反應進程的監測採用薄層色譜法(TLC)，反應所使用的展開劑，純化化合物採用的管柱層析的沖提劑的體系和薄層色譜法的展開劑體系包括：A：二氯甲烷/甲醇體系，B：正己烷/乙酸乙酯體系，溶劑的體積比根據化合物的極性不同而進行調節，也可以加入少量的三乙胺和醋酸等鹼性或酸性試劑進行調節。

實施例2-1

4-(4-((R)-(4'-氯-[1,1'-聯苯基]-2-基)(羥基)甲基)哌啶-1-基)-N-((4-(((R)-1-(苯基硫基)-3-((R)-吡咯烷-2-基)丙-2-基)胺基)-3-((三氟甲基)磺醯基)苯基)磺醯基)苯甲醯胺1

第一步

(R,Z)-2-(2-(((苄基氧基)羰基)胺基)-3-甲氧基-3-側氧丙-1-烯-1-基)吡咯烷-1-羧酸第三丁酯1c

將2-(((苄基氧基)羰基)胺基)-2-(二甲氧基膦醯基)乙酸甲酯1b(1g，3.02mmol，韶遠)溶解於二氯甲烷(10mL)中，冰浴冷卻至0℃，滴加1,8-二氮雜雙環[5.4.0]十一碳-7-烯(356mg，2.34mmol，供應商韶遠)，0℃攪拌反應20分鐘後滴加(R)-2-甲醯基吡咯烷-1-羧酸第三丁酯1a(500mg，2.51mmol，藥石)的5mL二氯甲烷溶液，滴完後撤去冰浴，升至室溫反應48小時。反應液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化所得殘餘物得到標題產物1c(830mg，產率：81.8%)。

MS m/z(ESI)：305.0[M+H-100]。

第二步

(R)-2-((R)-2-胺基-3-甲氧基-3-側氧丙基)吡咯烷-1-羧酸第三丁酯1d

將1c(520mg，1.28mmol)溶於異丙醇(10mL)中，加入鈀碳(100mg，含量10%，乾型)，氫氣置換3次，室溫攪拌16小時。反應液用矽藻土過濾，濾液濃縮，得到標題產物1d(300mg，產率：85.7%)。產品不經純化直接進行下一步反應。

MS m/z(ESI)：273.1[M+1]。

第三步

(R)-2-((R)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-甲氧基-3-側氧丙基)吡咯烷-1-羧酸第三丁酯1e

將粗品1d(300mg，1.10mmol)溶於1,4-二噁烷(4mL)中，加入水(1mL)、碳酸氫鈉(278mg，3.31mmol)和芴甲氧羰醯氯(285mg，1.10mmol，韶遠)，室溫攪拌1.5小時。反應液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合併有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化，得到標題產物1e(396mg，產率：72.7%)。

MS m/z(ESI)：395.1[M+H-100]。

第四步

(R)-2-((R)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-羥基丙基)吡咯烷-1-羧酸第三丁酯1f

將1e(200mg，0.40mmol)溶於四氫呋喃(10mL)中，加入乙醇(10mL)，依次加入硼氫化鈉(92mg，2.43mmol)和氯化鋰(112mg，2.64mmol)，反應液在28℃攪拌2.5小時。將反應液用冰浴冷卻，滴加飽和氯化銨溶液(10mL)淬滅反應，加入水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合併有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化，得到標題產物1f(144mg，76.3%)。

MS m/z(ESI)：367.1[M+H-100]。

第五步

(R)-2-((R)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-(苯基硫基)丙基)吡咯烷-1-羧酸第三丁酯1g

將1f(144mg，0.31mmol)溶於甲苯(5mL)中，加入二苯基二硫醚(225mg，1.03mmol，adamas)和三丁基膦(208mg，1.03mmol)，將反應體系用氮氣置換3次後升溫至80℃攪拌12小時。將反應液減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化，得到標題產物1g(168mg，97.4%)。

MS m/z(ESI)：459.1[M+H-100]。

第六步

(R)-2-((R)-2-胺基-3-(苯基硫基)丙基)吡咯烷-1-羧酸第三丁酯1h

將1g(168mg，0.30mmol)溶於二氯甲烷(2mL)中，加入二乙胺(2mL)，室溫攪拌3小時，反應液減壓濃縮除去有機溶劑，與甲苯(5mL)一起減壓濃縮，得到粗品標題產物1h(101mg)，產品不經純化直接進行下一步。

MS m/z(ESI)：337.1[M+1]。

第七步

(R)-2-((R)-3-(苯基硫基)-2-((4-胺基磺醯基-2-((三氟甲基)磺醯基)苯基)胺基)丙基)吡咯烷-1-羧酸第三丁酯1j

將粗品1h(101mg，0.30mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(5mL)中，加入4-氟-3-(三氟甲基磺醯基)苯磺醯胺1i(102mg，0.33mmol，畢得)和N,N-二異丙基乙胺(388mg，3.00mmol)，反應體系用氮氣置換3次後升溫至50℃攪拌8小時。反應液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合併有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化，得到標題產物1j(129mg，68.9%)。

MS m/z(ESI)：524.0[M+H-100]。

第八步

(R)-2-((R)-2-((4-(N-(4-(4-((R)-(4'-氯-[1,1'-聯苯基]-2-基)(羥基)甲基)哌啶-1-基)苯甲醯基)胺基磺醯基)-2-((三氟甲基)磺醯基)苯基)胺基)-3-(苯基硫基)丙基)吡咯烷-1-羧酸第三丁酯1l

將1j(22mg，0.035mmol)溶於二氯甲烷(3mL)，加入1k(16mg，0.038mmol，參照專利“CN103153954 B”中說明書第79頁的中間體40提供的方法合成)，再加入4-二甲胺基吡啶(8.6mg，0.070mmol)和1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(20.3mg，0.106mmol)，加完後在氮氣氛下，室溫攪拌4小時，補加1k(11mg，0.026mmol)，加完後室溫攪拌過夜。反應液依次用水(5mL)和飽和氯化鈉溶液(5mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物1l(28mg，產率：77.2%)。

MS m/z(ESI)：1027.0[M+1]。

第九步

將1l(14mg，0.014mmol)溶於二氯甲烷(0.2mL)中，加入4M的氯化氫二噁烷溶液(0.5mL)，室溫攪拌30分鐘。反應液減壓濃縮除去有機溶劑。殘餘物加入乙醚打漿，過濾，所得固體用高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：Sharpsil-T Prep C18；流動相：碳酸氫銨、水、乙腈，收集其相應組分，減壓濃縮得到標題產物1(5mg，產率：39.6%)。

MS m/z(ESI)：927.2[M+1]。

¹H NMR(500MHz,CD₃OD)δ 8.25(s,1H),8.06(d,1H),7.82(d,2H),7.62(d,1H),7.48-7.31(m,8H),7.26(t,2H),7.20(t,2H),6.82(d,2H),6.74(d,1H),4.44(d,1H),4.00-3.95(m,1H),3.78(d,1H),3.61(d,1H),3.52-3.45(m,2H),3.26-3.17(m,2H),2.68(t,2H),2.53(t,2H),2.27-1.92(m,6H),1.81-1.59(m,4H),1.27-1.21(m,1H),1.18-1.12(m,1H),1.02-0.90(m,2H)。

實施例2-2

4-(4-((R)-(4'-氯-[1,1'-聯苯基]-2-基)(羥基)甲基)哌啶-1-基)-N-((4-(((R)-1-((R)-1-(2-羥乙基)吡咯烷-2-基)-3-(苯基硫基)丙-2-基)胺基)-3-((三氟甲基)磺醯基)苯基)磺醯基)苯甲醯胺2

將1(13mg，0.014mmol)置於反應瓶中，加入乙腈(5mL)，加入2-溴乙醇(26mg，0.210mmol，adamas)和三乙胺(11mg，0.112mmol)，反應體系用氮氣置換3次後升溫至70℃攪拌7小時。反應液減壓濃縮，所得殘餘物用高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：Sharpsil-T Prep C18；流動相：碳酸氫銨、水、乙腈)，收集其相應組分，減壓濃縮得到標題產物2(3mg，產率：22.0%)。

MS m/z(ESI)：971.2[M+1]。

¹H NMR(500MHz,CD₃OD)δ 8.26(s,1H),8.03(d,1H),7.80(d,2H),7.62(d,1H),7.46-7.36(m,5H),7.35-7.27(m,5H),7.24(d,1H),7.18(d,1H),6.81(d,2H),6.63(d,1H),4.42(d,1H),3.91-3.77(m,4H),3.63(d,2H),3.25-3.16(m,2H),2.67(t,2H),2.54(t,2H),2.36-2.29(m,2H),2.23-2.13(m,3H),2.09-1.97(m,4H),1.81-1.71(m,2H),1.65-1.59(m,2H),1.27-1.21(m,1H),1.17-1.11(m,1H),1.02-0.90(m,2H)。

實施例2-3

4-(4-((R)-(4'-氯-[1,1'-聯苯基]-2-基)(甲氧基)甲基)哌啶-1-基)-N-((4-(((R)-1-(苯基硫基)-3-((R)-吡咯烷-2-基)丙-2-基)胺基)-3-((三氟甲基)磺醯基)苯基)磺醯基)苯甲醯胺3

第一步

(R)-4-(4-((4'-氯-[1,1'-聯苯基]-2-基)(甲氧基)甲基)哌啶-1-基)苯甲酸乙酯3b

將(R)-4-(4-((4'-氯-[1,1'-聯苯基]-2-基)(羥基)甲基)哌啶-1-基)苯甲酸乙酯3a(60mg，0.133mmol，參照專利“CN103153954 B”中說明書第63頁的中間體11 提供的方法合成)溶於2mL N,N-二甲基甲醯胺和四氫呋喃(V：V=1：1)混合溶劑中，氮氣置換三次，依次加入碘甲烷(190mg，1.34mmol)和60%鈉氫(11mg，0.275mmol)，室溫攪拌3小時。將反應液用冰浴冷卻，加入飽和氯化銨溶液(5mL)淬滅反應，加入水(5mL)，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合併有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化，得到標題產物3b(57mg，產率：92.1%)。

MS m/z(ESI)：464.1[M+1]。

第二步

(R)-4-(4-((4'-氯-[1,1'-聯苯基]-2-基)(甲氧基)甲基)哌啶-1-基)苯甲酸3c

將3b(57mg，0.122mmol)溶於3mL四氫呋喃、甲醇和水(V：V：V=4：1：1)混合溶劑中，加入一水合氫氧化鋰(26mg，0.620mmol)，反應液升溫至50℃攪拌16小時。反應液減壓濃縮，加入1M鹽酸調節pH值至2~3，過濾，濾餅用二氯甲烷10mL溶解，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到標題產物3c(53mg，產率：98.9%)。

MS m/z(ESI)：436.1[M+1]。

第三步

(R)-2-((R)-2-((4-(N-(4-(4-((R)-(4'-氯-[1,1'-聯苯基]-2-基)(甲氧基)甲基)哌啶-1-基)苯甲醯基)胺基磺醯基)-2-((三氟甲基)磺醯基)苯基)胺基)-3-(苯基硫基)丙基)吡咯烷-1-羧酸第三丁酯3d

將1j(32mg，0.051mmol)溶於二氯甲烷(5mL)，加入3c(24mg，0.055mmol)，再加入4-二甲胺基吡啶(13mg，0.106mmol)和1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(30mg，0.156mmol)，加完後在氮氣氛下，室溫攪拌4小時，補加3c(22mg，0.051mmol)，加完後室溫攪拌過夜。反應液依次用水(10mL)和飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物3d(53mg，產率：99.6%)。

MS m/z(ESI)：1041.1[M+1]。

第四步

將3d(30mg，0.028mmol)溶於二氯甲烷(0.4mL)中，加入4M的氯化氫二噁烷溶液(1.2mL)，室溫攪拌40分鐘。反應液減壓濃縮除去有機溶劑。殘餘物加入乙醚打漿，過濾，所得固體用高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：Sharpsil-T Prep C18；流動相：碳酸氫銨、水、乙腈)，收集其相應組分，減壓濃縮得到標題產物3(10mg，產率：36.9%)。

MS m/z(ESI)：941.1[M+1]。

¹H NMR(500MHz,CD₃OD)δ 8.26(s,1H),8.04(dd,1H),7.81(d,2H),7.50(d,1H),7.47-7.41(m,3H),7.40-7.32(m,3H),7.30-7.23(m,4H),7.22-7.16(m,2H),6.81(d,2H),6.72(d,1H),4.06(d,1H),3.99-3.93(m,1H),3.77(d,1H),3.66(d,1H),3.55-3.49(m,1H),3.23(d,2H),3.17(s,3H),2.61(t,2H),2.51(t,2H),2.25-1.93(m,6H),1.72-1.58(m,4H),1.27-1.23(m,1H),1.20-1.11(m,2H),0.91(t,1H)。

實施例2-4

4-(4-((R)-(4'-氯-[1,1'-聯苯基]-2-基)(甲氧基)甲基)哌啶-1-基)-N-((4-(((R)-1-((R)-1-(2-羥乙基)吡咯烷-2-基)-3-(苯基硫基)丙-2-基)胺基)-3-((三氟甲基)磺醯基)苯基)磺醯基)苯甲醯胺4

將3(15mg，0.015mmol)置於反應瓶中，加入乙腈(5mL)，加入2-溴乙醇(29mg，0.232mmol)和三乙胺(16mg，0.158mmol)，反應體系用氮氣置換3次後升溫至70℃攪拌16小時。反應液用高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：Sharpsil-T Prep C18；流動相：碳酸氫銨、水、乙腈)，收集其相應組分，減壓濃縮得到標題產物4(2.5mg，產率：16.5%)。

MS m/z(ESI)：985.1[M+1]。

¹H NMR(500MHz,CD₃OD)δ 8.27(s,1H),8.03(dd,1H),7.81(d,2H),7.51(d,1H),7.47-7.39(m,5H),7.35(t,1H),7.32-7.21(m,5H),7.18(d,1H),6.82(d,2H),6.63(d,1H),4.06(d,1H),3.90-3.75(m,4H),3.69-3.63(m,1H),3.27-3.20(m,2H),3.17(s,3H),2.62(t,2H),2.52(t,2H),2.36-2.28(m,2H),2.23-2.13(m,3H),2.09-1.94(m,4H),1.78-1.58(m,4H),1.28-1.24(m,1H),1.21-1.13(m,2H),0.91(t,1H)。

實施例2-5

4-(4-((R)-(4'-氯-[1,1'-聯苯基]-2-基)(羥基)甲基)哌啶-1-基)-N-((4-(((R)-1-((R)-1-(3-羥基丙基)吡咯烷-2-基)-3-(苯基硫基)丙-2-基)胺基)-3-((三氟甲基)磺醯基)苯基)磺醯基)苯甲醯胺5

將1(10mg，0.011mmol)置於反應瓶中，加入乙腈(3mL)，加入3-溴丙醇(15mg，0.108mmol，供應商adamas)和三乙胺(11mg，0.108mmol)，反應體系用氮氣置換3次後升溫至70℃攪拌16小時。反應液用高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：Sharpsil-T Prep C18；流動相：碳酸氫銨、水、乙腈)，收集其相應組分，減壓濃縮得到標題產物5(2.5mg，產率：23.5%)。

MS m/z(ESI)：985.1[M+1]。

¹H NMR(500MHz,CD₃OD)δ 8.26(s,1H),8.03(d,1H),7.81(d,2H),7.61(d,1H),7.46-7.39(m,5H),7.35-7.26(m,5H),7.22(t,1H),7.18(d,1H),6.81(d,2H),6.62(d,1H),4.43(d,1H),3.89-3.84(m,1H),3.79(d,1H),3.67(t,2H),3.63(d,2H),3.25-3.15(m,2H),2.67(t,2H),2.53(t,2H),2.32-2.26(m,2H),2.19(t,2H),2.15-2.11(m,1H),2.08-1.95(m,4H),1.92-1.84(m,2H),1.79-1.67(m,2H),1.65-1.58(m,2H),1.26-1.22(m,1H),1.16-1.12(m,1H),1.02-0.96(m,1H),0.91(t,1H)。

實施例2-6

4-(4-((S)-羥基(4'-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯基]-2-基)甲基)哌啶-1-基)-N-((4-(((R)-4-((2-羥乙基)(甲基)胺基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)胺基)-3-((三氟甲基)磺醯基)苯基)磺醯基)苯甲醯胺6

第一步

4-(羥基(4'-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯基]-2-基)甲基)哌啶-1-羧酸第三丁酯6b

將2-溴-4'-(三氟甲基)-1,1’-聯苯6a(3.3g，10.95mmol，依據專利“US2004/171833,2004,A1”第53頁Example53所公開的方法合成而來)置於瓶中，加入四氫呋喃(50mL)，氮氣氛下，降至-78℃，將正丁基鋰(1.40g,21.92mmol)滴入反應瓶中，保持內溫低於-65℃，加完後-78℃攪拌40分鐘，加入甲醯基哌啶-1-羧酸第三丁酯(4.67g,21.92mmol)的四氫呋喃(20mL)溶液，加完後升至0℃反應三小時，滴入飽和氯化銨水溶液淬滅，減壓濃縮，乙酸乙酯萃取(40mL×3)，合併有機相，水洗(40mL)，飽和食鹽水(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後濾液減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化，得到標題產物6b(5.5g，產率：>100%)。

MS m/z(ESI)：434.1[M-1]。

第二步

哌啶-4-基(4'-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯基]-2-基)甲醇6c

將6b(5.5g，12.63mmol)置於反應瓶中，冰浴下，加入4M的鹽酸二噁烷溶液(20mL)，加畢自然升至室溫攪拌反應2小時，反應液減壓濃縮，殘餘物中加入甲苯(10mL)，繼續減壓濃縮，油泵抽乾，得到粗品標題產物6c(4.23g，產率：100%)，產品不經純化直接進行下一步反應。

MS m/z(ESI)：336.0[M+1]。

第三步

(R)-4-(4-(羥基(4'-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯基]-2-基)甲基)哌啶-1-基)苯甲酸乙酯6d

(S)-4-(4-(羥基(4'-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯基]-2-基)甲基)哌啶-1-基)苯甲酸乙酯6e

將粗品6c(270mg，0.805mmol)置於反應瓶中，加入二甲亞碸(3mL)，加入對氟苯甲酸乙酯(270mg，1.61mmol，韶遠)，加入N,N-二異丙基乙胺(1.04g，8.05mmol)，加完後氮氣氛下，升至120℃反應24小時。相反應液中加入5mL水，乙酸乙酯萃取(4mL×5)，合併有機相，水洗(4mL)，飽和食鹽水洗(4mL)，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，得到的殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化，得到360mg混合物，送手性製備(製備條件：色譜管柱：CHIRALPAK IG,0.50cm I.D*25cm L,01um；流動相：MeOH=100%；檢測波長：UV 214nm；溫度：38℃)，得到兩個組分，保留時間較小的Peak1，為6d(73mg)，保留時間較大的Peak2，為6e(72mg)。

MS m/z(ESI)：484.1[M+1]。

Peak 1：手性HPLC分析：保留時間4.008分鐘，手性純度：100%(色譜管柱：CHIRALPAK IG 150*4.6mm,5um(帶保護管柱)；流動相：正己烷/乙醇=70/30(v/v))。

Peak 2：手性HPLC分析：保留時間6.289分鐘，手性純度：100%(色譜管柱：CHIRALPAK IG 150*4.6mm,5um(帶保護管柱)；流動相：正己烷/乙醇=70/30(v/v))。

第四步

(R)-4-(4-(羥基(4'-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯基]-2-基)甲基)哌啶-1-基)苯甲酸6f

將6e(70mg，0.145mmol)置於瓶中，加入四氫呋喃(2mL)，水(0.5mL)，甲醇(0.5mL)，再加入一水合氫氧化鋰(30.3mg，0.723mmol)，氮氣氛下，升至50℃反應16小時。反應液減壓濃縮，殘餘物中加入水(5mL)，冰浴冷卻，用1N的鹽酸溶液調至pH=4，過濾，濾餅用正己烷淋洗(5mL)，油泵抽乾，得到標題產物6f(63mg，產率：95.54%)

MS m/z(ESI)：456.0[M+1]。

第五步

N-((4-(((R)-4-((2-((第三丁基二甲基矽基)氧基)乙基)(甲基)胺基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)胺基)-3-((三氟甲基)磺醯基)苯基)磺醯基)-4-(4-((S)-羥基(4'-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯基]-2-基)甲基)哌啶-1-基)苯甲醯胺6h

將6g(30mg，0.040mmol，參照專利“CN103153954 B”中說明書第90頁的中間體67提供的方法合成)溶於二氯甲烷(3mL)中，加入6f(25mg，0.055mmol)，再依次加入1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(17.5mg，0.091mmol)和4-二甲胺基吡啶(11.2mg，0.091mmol)，加完後氮氣氛下，室溫攪拌4小時，補加6f(16.6mg，0.037mmol)，1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(10.5mg，0.055mmol)和4-二甲胺基吡啶(6.7mg，0.055mmol)，加完後室溫攪拌過夜。反應液用水(5mL)洗，飽和食鹽水(5mL)洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用薄層色譜法以沖提體系A純化，得到標題產物6h(40mg，產率：79.9%)。

MS m/z(ESI)：1093.4[M+1]。

第六步

將6h(40mg，0.036mmol)加入到四氫呋喃(2mL)中，加入四丁基氟化銨(16.4mg，0.073mmol)，室溫攪拌4小時。反應液減壓濃縮，殘餘物用二氯甲烷(8mL)溶解，飽和氯化銨溶液(10mL×2)洗滌，有機相減壓濃縮，殘餘物用乙酸乙酯(8mL)溶解，用飽和氯化銨溶液(10mL×6)洗滌，水洗滌(10mL)，飽和食鹽水洗滌(10mL)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：Sharpsil-T Prep C18；流動相：碳酸氫銨、水、乙腈)，收集其相應組分，減壓濃縮得到標題產物6(17mg，產率：47.5%)。

MS m/z(ESI)：979.2[M+1]。

¹H NMR(500MHz,CD₃OD)δ 8.28(d,1H),8.09-8.03(m,1H),7.80(d,2H),7.74(d,2H),7.66(d,1H),7.55(d,2H),7.48(t,1H),7.42-7.34(m,2H),7.29-7.16(m,3H),6.81(dd,2H),4.41(d,1H),4.02-3.97(m,1H),3.84-3.75(m,2H),3.64(d,1H),3.37(s,2H),3.30-3.18(m,3H),3.12-3.06(m,2H),2.75(s,2H),2.72-2.63(m,1H),2.59- 2.50(m,1H),2.29-2.19(m,2H),2.08-2.02(m,2H),1.82-1.72(m,1H),1.66-1.58(m,1H),1.39-1.31(m,4H),1.27-1.12(m,2H),1.03-0.89(m,2H)。

實施例2-7

4-(4-((R)-羥基(4'-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯基]-2-基)甲基)哌啶-1-基)-N-((4-(((3R)-1-((2-羥基乙基)(甲基)胺基)-4-(苯基硫基)戊-3-基)胺基)-3-((三氟甲基)磺醯基)苯基)磺醯基)苯甲醯胺7

第一步

(R)-3-(((苄氧基)羰基)胺基)-4-側氧丁酸甲酯7b

將草醯氯(772mg，6.08mmol)溶於二氯甲烷(5mL)中，氮氣置換三次，冷卻至-78℃，滴加二甲亞碸(950mg，12.16mmol)的二氯甲烷溶液(5mL)，滴完後於 -78℃攪拌30分鐘，滴加(R)-3-(((苄氧基)羰基)胺基)-4-羥基丁酸甲酯7a(650mg，2.43mmol，參照專利“CN103153954 B”中說明書第59頁的中間體4提供的方法合成)的二氯甲烷溶液(5mL)，滴完後於-78℃攪拌1小時，滴加N,N-二異丙基乙胺(3.14g，24.29mmol)，滴完後將反應液升至-60℃攪拌30分鐘，然後升至0℃攪拌30分鐘。0℃加入1M冰冷的鹽酸(20mL)淬滅反應，分層，有機相用pH=7的磷酸鹽緩衝溶液(30mL)和飽和氯化鈉溶液(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化，得到標題產物7b(540mg，產率：83.7%)。

MS m/z(ESI)：266.2[M+1]。

第二步

(3R)-3-(((苄氧基)羰基)胺基)-4-羥基戊酸甲酯7c

將7b(490mg，1.95mmol)溶於乙醚(15mL)中，氮氣置換三次，冷卻至-78℃，滴加1M甲基溴化鎂的四氫呋喃溶液(2mL，2.03mmol)，滴完後自然升溫至0℃攪拌3小時。0℃加入飽和氯化銨溶液(20mL)淬滅反應，加入水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合併有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化，得到標題產物7c(188mg，產率：36.2%)。

MS m/z(ESI)：282.1[M+1]。

第三步

(3R)-3-(((苄氧基)羰基)胺基)-4-((甲基磺醯基)氧基)戊酸甲酯7d

將7c(220mg，0.782mmol)溶於二氯甲烷(8mL)中，加入吡啶(93mg，1.176mmol)和4-二甲胺基吡啶(9.5mg，0.078mmol)，氮氣置換三次，冷卻至0℃，慢慢加入甲烷磺酸酐(164mg，0.941mmol)，加完後反應液升至室溫攪拌1.5小時。反應液加入水(20mL)，用二氯甲烷(8mL×3)萃取，合併有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化，得到標題產物7d(216mg，產率：76.8%)。

MS m/z(ESI)：360.0[M+1]。

第四步

(3R)-3-(((苄氧基)羰基)胺基)-4-(苯基硫基)戊酸甲酯7e

將7d(216mg，0.601mmol)溶於甲苯(8mL)中，加入苯硫酚鈉(397mg，3.004mmol)，氮氣置換三次，升溫至105℃攪拌16小時。反應液冷卻至室溫後加入水(20mL)，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合併有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化，得到標題產物7e(120mg，產率：53.5%)。

MS m/z(ESI)：374.1[M+1]。

第五步

(3R)-4-(苯基硫基)-3-((4-胺基磺醯基-2-((三氟甲基)磺醯基)苯基)胺基)戊酸甲酯7f

將7e(112mg，0.300mmol)溶於四氫呋喃(1.5mL)中，加入三氟乙酸(5mL)，將反應液升至72℃攪拌1.5小時，減壓濃縮，用二氯甲烷(20mL)減壓濃縮，真空乾燥2小時。將殘餘物溶於N,N-二甲基甲醯胺(4mL)中，加入1i(93mg，0.302mmol)和N,N-二異丙基乙胺(388mg，3.00mmol)，反應體系用氮氣置換3次後升溫至50℃攪拌24小時。反應液中加入水(20mL)，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合併有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化，得到標題產物7f(119mg，75.3%)。

MS m/z(ESI)：524.9[M-1]。

第六步

(3R)-4-(苯基硫基)-3-((4-胺基磺醯基-2-((三氟甲基)磺醯基)苯基)胺基)戊酸7g

將7f(119mg，0.226mmol)溶於5mL四氫呋喃、甲醇和水(V：V：V=3：1：1)混合溶劑中，加入一水合氫氧化鋰(29mg，0.691mmol)，反應液於室溫攪拌3小時。反應液減壓濃縮，加入1M鹽酸調節pH值至3~4，用二氯甲烷(8mL×3)萃取，合併有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓濃縮，得到標題產物7g(115mg，產率：99.3%)。

MS m/z(ESI)：511.0[M-1]。

第七步

(3R)-N-(2-((第三丁基二甲基矽基)氧基)乙基)-N-甲基-4-(苯基硫基)-3-((4-胺基磺醯基-2-((三氟甲基)磺醯基)苯基)胺基)戊醯胺7h

將7g(115mg，0.224mmol)溶於四氫呋喃(3mL)中，依次加入2-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-N-甲基乙-1-胺(43mg，0.227mmol，韶遠)、3-(二乙氧基鄰醯氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4-酮(134mg，0.448mmol)和N,N-二異丙基乙胺(58mg，0.448mmol)，加完後氮氣氛下，室溫攪拌反應3小時。反應液濃縮，殘餘物用乙酸乙酯(10mL)溶解，依次用飽和氯化銨水溶液(20mL)，飽和碳酸氫鈉溶液(20mL)和飽和氯化鈉溶液(20mL)洗滌，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化，得到標題產物7h(107mg，產率：69.7%)。

MS m/z(ESI)：684.0[M+1]。

第八步

4-(((3R)-1-((2-((第三丁基二甲基矽基)氧基)乙基)(甲基)胺基)-4-(苯基硫基)戊-3-基)胺基)-3-((三氟甲基)磺醯基)苯磺醯胺7i

將7h(107mg，0.156mmol)置於反應瓶中，加入1M的硼烷-四氫呋喃絡合物溶液(5mL)，加完後升至60℃攪拌24小時。將反應體系冷卻至0℃，滴加4mL甲醇淬滅，減壓濃縮，殘餘物中加入7M的氨的甲醇溶液(10mL)，密封後室溫攪拌48小時，減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化，得到標題產物7i(10mg，產率：9.5%)。

MS m/z(ESI)：670.1[M+1]。

第九步

(R)-4-(4-(羥基(4'-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯基]-2-基)甲基)哌啶-1-基)苯甲酸7j

將6d(70mg，0.145mmol)置於反應瓶中，加入四氫呋喃(2mL)、水(0.5mL)、甲醇(0.5mL)，再加入一水合氫氧化鋰(30mg，0.72mmol)，氮氣氛下，升至50℃反應16小時。反應液減壓濃縮，殘餘物中加入水(5mL)，冰浴冷卻，用1M的鹽酸溶液調至pH=4，過濾，濾餅用正己烷淋洗(5mL)，油泵抽乾，得到標題產物7j(63mg，產率：95.5%)。

MS m/z(ESI)：456.0[M+1]。

第十步

N-((4-(((3R)-1-((2-((第三丁基二甲基矽基)氧基)乙基)(甲基)胺基)-4-(苯基硫基)戊-3-基)胺基)-3-((三氟甲基)磺醯基)苯基)磺醯基)-4-(4-((R)-羥基(4'-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯基]-2-基)甲基)哌啶-1-基)苯甲醯胺7k

將7i(16mg，0.024mmol)溶於二氯甲烷(4mL)中，加入7j(13mg，0.028mmol)，再加入4-二甲胺基吡啶(6mg，0.049mmol)和1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(14mg，0.073mmol)，反應液用氮氣置換三次，室溫攪拌4小時後補加7j(13mg，0.028mmol)，加完後室溫攪拌16小時。反應液依次用水(8mL)和飽和氯化鈉溶液(8mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物7k(14mg，產率：52.9%)。

MS m/z(ESI)：1107.2[M+1]。

第十一步

4-(4-((R)-羥基(4'-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯基]-2-基)甲基)哌啶-1-基)-N-((4-(((3R)-1-((2-羥乙基)(甲基)胺基)-4-(苯基硫基)戊-3-基)胺基)-3-((三氟甲基)磺醯基)苯基)磺醯基)苯甲醯胺7

將7k(14mg，0.013mmol)溶於四氫呋喃(3mL)中，加入四丁基氟化銨(6mg，0.027mmol)，室溫攪拌1小時。反應液減壓濃縮，殘餘物用二氯甲烷(5mL)溶解，飽和氯化銨溶液(5mL×2)洗滌，有機相減壓濃縮，殘餘物用乙酸乙酯(8mL)溶解，依次用飽和氯化銨溶液(5mL×6)、水(10mL)和飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：Sharpsil-T Prep C18；流動相：碳酸氫銨、水、乙腈)，收集其相應組分，減壓濃縮得到標題產物7(4.5mg，產率：35.8%)。

MS m/z(ESI)：993.2[M+1]。

¹H NMR(500MHz,CD₃OD)δ 8.33(s,1H),8.02(d,1H),7.76(dd,4H),7.65(d,1H),7.56(dd,4H),7.48(t,1H),7.44-7.33(m,4H),7.21(d,1H),6.81(d,2H),6.60(d,1H),4.41(d,1H),3.97-3.92(m,1H),3.84-3.72(m,3H),3.69-3.56(m,3H),2.76-2.62(m,4H),2.55(t,2H),2.32-2.17(m,3H),2.10-1.87(m,4H),1.82-1.72(m,2H),1.64-1.58(m,2H),1.27-1.22(m,1H),1.21-1.12(m,2H),1.03-0.96(m,1H),0.92(t,1H)。

實施例2-8

4-(4-((R)-(4'-氯-[1,1'-聯苯基]-2-基)(羥基)甲基)哌啶-1-基)-N-((4-(((R)-1-(苯基硫基)-3-((S)-吡咯烷-2-基)丙-2-基)胺基)-3-((三氟甲基)磺醯基)苯基)磺醯基)苯甲醯胺8

第一步

(S)-2-(2-(((苄氧基)羰基)胺基)-3-甲氧基-3-側氧丙-1-烯-1-基)吡咯烷-1-羧酸第三丁酯8b

將1b(2.49g，7.53mmol，韶遠)溶解於四氫呋喃(20mL)中，冰浴冷卻至0℃，滴加N,N-二異丙基胺基鋰(661mg，6.17mmol)，0℃攪拌反應1小時後，將反應體系降至-78℃，向其中滴加(S)-2-甲醯基吡咯烷-1-羧酸第三丁酯8a(1.00g，5.02mmol，藥石)的20mL四氫呋喃溶液，滴完後撤去乾冰丙酮浴，升至室溫反應12小時。加飽和氯化銨(20mL)淬滅，乙酸乙酯(20mL×3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化所得殘餘物得到標題產物8b(1.90g，產率：94.1%)。

MS m/z(ESI)：305.0[M+H-100]。

第二步

(2S)-2-(2-胺基-3-甲氧基-3-側氧丙基)吡咯烷-1-羧酸第三丁酯8c

將8b(1.90g，4.7mmol)溶於異丙醇(50mL)中，加入鈀碳(380mg，含量10%，乾型)，氫氣置換3次，室溫攪拌8小時。反應液用矽藻土過濾，濾餅用乙酸乙酯(20mL)和甲醇(20mL)淋洗，濾液濃縮，得到粗品標題產物8c(1.28g)，產品不經純化直接進行下一步。

第三步

(S)-2-((S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-甲氧基-3-側氧丙基)吡咯烷-1-羧酸第三丁酯8d

(S)-2-((R)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-甲氧基-3-側氧丙基)吡咯烷-1-羧酸第三丁酯8e

將粗品8c(1.28g，4.7mmol)溶於1,4-二噁烷(40mL)中，加入水(10mL)、碳酸氫鈉(1.17g，14.1mmol)和芴甲氧羰醯氯(1.21g，4.7mmol)，室溫攪拌3小時。加水(30mL)淬滅，乙酸乙酯萃取(20mL×3)，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化，得到標題產物8d(1.03g，44.2%，峰1)和8e(513mg，22.1%，峰2)。

MS m/z(ESI)：495.2[M+1]。

峰1：UPLC分析：保留時間2.77分鐘(色譜管柱：ACQUITY UPLC BEHC18 50*2.1mm，1.7um；流動相：乙腈/水/甲酸=10/90/0.1(v/v/v)至95/5/0.1(v/v/v)梯度淋洗)。

峰2：UPLC分析：保留時間2.69分鐘(色譜管柱：ACQUITY UPLC BEHC18 50*2.1mm，1.7um；流動相：乙腈/水/甲酸=50/50/0.1(v/v/v)至95/5/0.1(v/v/v)梯度淋洗)。

第四步

(S)-2-((R)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-羥基丙基)吡咯烷-1-羧酸第三丁酯8f

將8e(169mg，0.34mmol)溶於四氫呋喃(8mL)中，加入乙醇(8mL)、硼氫化鈉(77mg，2.05mmol)和氯化鋰(94mg，2.22mmol)，28℃攪拌2.5小時，滴加飽和氯化銨(5mL)淬滅反應。溶劑濃縮乾，殘餘物用乙酸乙酯(10mL)溶解，用水(10mL)洗滌，飽和氯化鈉(10mL)洗滌，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化，得到標題產物8f(125mg，78.4%)。

MS m/z(ESI)：467.2[M+1]。

第五步

(S)-2-((R)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-(苯基硫基)丙基)吡咯烷-1-羧酸第三丁酯8g

將8f(120mg，0.26mmol)溶於甲苯(5mL)中，加入二苯基二硫醚(168mg，0.77mmol)和三丁基膦(156mg，0.77mmol)，將反應體系在氮氣氛下，升溫至80℃攪拌12小時。溶劑濃縮至乾，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化，得到標題產物8g(135mg，93.9%)。

MS m/z(ESI)：559.2[M+1]。

第六步

(S)-2-((R)-2-胺基-3-(苯基硫基)丙基)吡咯烷-1-羧酸第三丁酯8h

將8g(135mg，0.24mmol)溶於二氯甲烷(4mL)中，加入二乙胺(4mL)，室溫攪拌4小時，反應液減壓濃縮除去有機溶劑，得到標題產物8h(81.6mg)，產品不經純化直接進行下一步。

第七步

(S)-2-((R)-4-(苯基硫基)-3-((4-胺基磺醯基-2-((三氟甲基)磺醯基)苯基)胺基)丁基)吡咯烷-1-羧酸第三丁酯8i

將粗品8h(81.6mg，0.24mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(5mL)中，加入1i(82mg，0.27mmol)和N,N-二異丙基乙胺(314mg，2.4mmol)，反應體系在氮氣氛下，升溫至50℃攪拌12小時。加水(10mL)淬滅，用乙酸乙酯(5mL×3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化，得到標題產物8i(105mg，69.3%)。

MS m/z(ESI)：622.1[M-1]。

第八步

(S)-2-((R)-2-((4-(N-(4-(4-((R)-(4'-氯-[1,1'-聯苯基]-2-基)(羥基)甲基)哌啶-1-基)苯甲醯基)胺基磺醯基)-2-((三氟甲基)磺醯基)苯基)胺基)-3-(苯基硫基)丙基)吡咯烷-1-羧酸第三丁酯8j

將8i(30mg，0.048mmol)溶於二氯甲烷(3mL)，加入1k(24mg，0.058mmol)，再依次加入1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(19mg，0.096mmol)和4-二甲胺基吡啶(12mg，0.096mmol)，加完後氮氣氛下，室溫攪拌4小時，補加1k(12mg，0.038mmol)、1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(19mg，0.096mmol)和4-二甲胺基吡啶(12mg，0.096mmol)，加完後室溫攪拌過夜。反應液用水(5mL)洗滌，飽和食鹽水(5mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物8j(30mg，產率：60.7%)。

MS m/z(ESI)：1027.2[M+1]。

第九步

將8j(30mg，0.029mmol)溶於二氯甲烷(2mL)中，加入4M氯化氫的1,4-二噁烷溶液(2mL)，室溫攪拌20分鐘，反應液減壓濃縮除去有機溶劑。殘餘物溶於二氯甲烷，然後減壓濃縮乾，重複三次，所得殘餘物用高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：Sharpsil-T Prep C18；流動相：碳酸氫銨、水、乙腈)，收集其相應組分，減壓濃縮得到標題產物8(25mg，產率：92.3%)。

MS m/z(ESI)：927.1[M+1]。

¹H NMR(500MHz,CD₃OD)δ 8.24(d,1H),8.05-8.01(m,1H),7.82(d,2H),7.60(d,1H),7.45-7.39(m,3H),7.37(d,2H),7.34-7.28(m,3H),7.23(t,2H),7.20-7.14(m,2H),6.80(d,2H),6.72(d,1H),4.42(d,1H),3.97(br,1H),3.84-3.74(m,1H),3.27-3.21(m,2H),3.19-3.07(m,3H),3.06-2.97(m,1H),2.69-2.61(m,1H),2.55-2.48(m,1H),2.16-2.00(m,5H),1.98-1.89(m,2H),1.88-1.80(m,1H),1.78-1.69(m,1H),1.63-1.57(m,2H),1.54-1.49(m,1H),1.26-1.20(m,1H),1.15-1.04(m,1H),1.01-0.94(m,1H)。

實施例2-9

4-(4-((R)-(4'-氯-[1,1'-聯苯基]-2-基)(羥基)甲基)哌啶-1-基)-N-((4-(((R)-1-((S)-1-(2-羥乙基)吡咯烷-2-基)-3-(苯基硫基)丙-2-基)胺基)-3-((三氟甲基)磺醯基)苯基)磺醯基)苯甲醯胺9

將8(15mg，0.016mmol)溶於乙腈(2mL)中，依次加入三乙胺(16mg，0.16mmol)和溴乙醇(20mg，0.16mmol)，反應體系在氮氣氛下，升至70℃反應12小時。用高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：Sharpsil-T Prep C18；流動相：碳酸氫銨、水、乙腈)，收集其相應組分，減壓濃縮得到標題產物9(10mg，產率：63.4%)。

MS m/z(ESI)：971.2[M+1]。

¹H NMR(500MHz,CD₃OD)δ 8.25(d,1H),8.06(dd,1H),7.80(d,2H),7.61(dd,1H),7.49-7.35(m,5H),7.35-7.28(m,3H),7.24(dd,2H),7.20-7.14(m,2H),6.79(t,3H),4.42(d,1H),4.02(t,1H),3.84-3.70(m,3H),3.61(d,2H),3.28-3.14(m,2H),3.06(br,1H),2.96(br,1H),2.71-2.59(m,1H),2.56-2.45(m,1H),2.45-2.35(m,1H),2.32-2.22(m,1H),2.10-1.97(m,4H),1.96-1.86(m,1H),1.85-1.69(m,2H),1.60(t,2H),1.26-1.18(m,1H),1.06-1.08(m,1H),1.01-0.92(m,1H),0.92-1.86(m,1H)。

實施例2-10

4-(4-((R)-羥基(4'-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯基]-2-基)甲基)哌啶-1-基)-N-((4-(((R)-4-((2-羥乙基)(甲基)胺基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)胺基)-3-((三氟甲基)磺醯基)苯基)磺醯基)苯甲醯胺10

第一步

N-((4-(((R)-4-((2-((第三丁基二甲基矽基)氧基)乙基)(甲基)胺基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)胺基)-3-((三氟甲基)磺醯基)苯基)磺醯基)-4-(4-((R)-羥基(4'-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯基]-2-基)甲基)哌啶-1-基)苯甲醯胺10a

將6g(30mg，0.040mmol)溶於二氯甲烷(3mL)中，加入7j(25mg，0.055mmol)，再依次加入1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(17.5mg，0.091mmol)和4-二甲胺基吡啶(11.2mg，0.091mmol)，加完後氮氣氛下，室溫攪拌4小時，補加7j(16.6mg，0.037mmol)，1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(10.5mg，0.055mmol)和4-二甲胺基吡啶(6.7mg，0.055mmol)，加完後室溫攪拌過夜。反應液用水(5mL)洗滌，飽和食鹽水(5mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物10a(40mg，產率：79.9%)。

MS m/z(ESI)：1093.4[M+1]。

第二步

將10a(40mg，0.036mmol)加入到四氫呋喃(2mL)中，加入四丁基氟化銨(16mg，0.073mmol)，室溫攪拌4小時。反應液減壓濃縮，殘餘物用二氯甲烷(8mL)溶解，飽和氯化銨溶液(10mL×2)洗滌，有機相減壓濃縮，殘餘物用乙酸乙酯(8mL)溶解，用飽和氯化銨溶液(10mL×6)洗滌，水(10mL)洗滌，飽和食鹽水(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：Sharpsil-T Prep C18；流動相：碳酸氫銨、水、乙腈)，收集其相應組分，減壓濃縮得到標題產物10(17mg，產率：47.5%)。

MS m/z(ESI)：979.2[M+1]。

¹H NMR(500MHz,CD₃OD)δ 8.26(d,1H),8.04(dd,1H),7.79(d,2H),7.72(d,2H),7.64(d,1H),7.53(d,2H),7.46(t,1H),7.40-7.31(m,3H),7.29-7.12(m,4H),6.86-6.71(m,3H),4.39(d,1H),3.98(br,1H),3.84-3.71(m,3H),3.62(d,1H),3.26-3.16(m,3H),3.14-2.96(m,2H),2.80-2.60(m,4H),2.56-2.49(m,1H),2.19(t,1H),2.11-1.93(m,3H),1.76(d,1H),1.27-1.18(m,1H),1.17-1.10(m,1H),1.03-0.93(m,1H),0.94-0.83(m,1H)。

實施例2-11

4-(4-((R)-(4'-氯-[1,1'-聯苯基]-2-基)(羥基)甲基)哌啶-1-基)-N-((4-(((R)-1-((S)-1-(3-羥丙基)吡咯烷-2-基)-3-(苯基硫基)丙-2-基)胺基)-3-((三氟甲基)磺醯基)苯基)磺醯基)苯甲醯胺11

將8(20mg，0.021mmol)溶於乙腈(2mL)中，依次加入三乙胺(22mg，0.22mmol)和溴乙醇(30mg，0.22mmol)，反應體系在氮氣氛下，升至70℃反應12小時。用高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：Sharpsil-T Prep C18；流動相：碳酸氫銨、水、乙腈)，收集其相應組分，減壓濃縮得到標題產物11(13mg，產率：61.1%)。

MS m/z(ESI)：985.1[M+1]。

¹H NMR(500MHz,CD₃OD)δ 8.28(d,1H),8.09(dd,1H),7.86-7.78(m,2H),7.63(dd,1H),7.48-7.38(m,5H),7.37-7.31(m,3H),7.27(dd,2H),7.23-7.17(m,2H),6.81(t,3H),4.44(d,1H),4.08-4.00(m,1H),3.81(d,1H),3.72-3.55(m,4H),3.25(dd,2H),3.05(s,1H),2.94(s,1H),2.73-2.63(m,1H),2.59-2.50(m,1H),2.48-2.39(m,1H),2.29(s,1H),2.21(t,1H),2.10-2.01(m,4H),1.97-1.70(m,5H),1.62(s,1H),1.31-1.20(m,3H),1.15(d,1H),1.04-0.95(m,1H),0.93(d,1H)。

實施例2-12

4-(4-((R)-羥基(4'-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯基]-2-基)甲基)哌啶-1-基)-N-((4-(((R)-1-(苯基硫基)-3-((S)-吡咯烷-2-基)丙-2-基)胺基)-3-((三氟甲基)磺醯基)苯基)磺醯基)苯甲醯胺12

第一步

(S)-2-((R)-2-((4-(N-(4-(4-((R)-羥基(4'-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯基]-2-基)甲基)哌啶-1-基)苯甲醯基)胺基磺醯基)-2-((三氟甲基)磺醯基)苯基)胺基)-3-(苯基硫基)丙基)吡咯烷-1-羧酸第三丁酯12a

將8i(80mg，0.13mmol)溶於二氯甲烷(3mL)中，加入7j(70mg，0.15mmol)，再依次加入1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(49mg，0.26mmol)和4-二甲胺基吡啶(32mg，0.26mmol)，加完後氮氣氛下，室溫攪拌4小時，補加7j(47mg，0.10mmol)、1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(49mg，0.26mmol)和4-二甲胺基吡啶(32mg，0.26mmol)，加完後室溫攪拌過夜。反應液用水(5mL)洗滌，飽和食鹽水(5mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物12a(80mg，產率：58.8%)。

MS m/z(ESI)：1059.0[M-1]。

第二步

將12a(50mg，0.047mmol)溶於二氯甲烷(2mL)中，加入4M的氯化氫的1,4-二噁烷溶液(2mL)，室溫攪拌20分鐘，反應液減壓濃縮除去有機溶劑。殘餘物溶於二氯甲烷，減壓濃縮，重複三次，所得殘餘物用高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：Sharpsil-T Prep C18；流動相：碳酸氫銨、水、乙腈)，收集其相應組分，減壓濃縮得到標題產物12(6mg，產率：66.2%)。

MS m/z(ESI)：961.2[M+1]。

¹H NMR(500MHz,CD₃OD)δ 8.23(s,1H),8.03(d,1H),7.80(d,2H),7.72(d,2H),7.64(d,1H),7.53(d,2H),7.47(t,1H),7.35(t,3H),7.27-7.14(m,4H),6.79(d,2H),6.73(d,1H),4.39(d,1H),3.98(s,1H),3.81-3.73(m,1H),3.63-3.58(m,1H),3.56-3.50(m,1H),3.21-3.13(m,2H),2.64(t,1H),2.50(t,1H),2.33-2.25(m,1H),2.25-2.20(m,1H),2.11-1.91(m,6H),1.80-1.65(m,2H),1.64-1.54(m,2H),1.25-1.17(m,2H),1.16-1.10(m,1H),1.00-0.93(m,1H)。

實施例2-13

4-(4-((R)-羥基(4'-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯基]-2-基)甲基)哌啶-1-基)-N-((4-(((R)-1-((S)-1-(2-羥乙基)吡咯烷-2-基)-3-(苯基硫基)丙-2-基)胺基)-3-((三氟甲基)磺醯基)苯基)磺醯基)苯甲醯胺13

將12(30mg，0.031mmol)溶於乙腈(4mL)中，依次加入三乙胺(32mg，0.31mmol)和溴乙醇(39mg，0.31mmol)，反應體系在氮氣氛下，升至70℃反應12小時。反應液減壓濃縮，殘餘物用高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：Sharpsil-T Prep C18；流動相：碳酸氫銨、水、乙腈)，收集其相應組分，減壓濃縮得到標題產物13(25mg，產率：56.9%)。

MS m/z(ESI)：1005.1[M+1]。

¹H NMR(500MHz,CD₃OD)δ 8.27(d,1H),8.08(dd,1H),7.85-7.79(m,2H),7.74(d,2H),7.68-7.63(m,1H),7.55(d,2H),7.50-7.46(m,1H),7.42-7.35(m,3H),7.29- 7.18(m,4H),6.87-6.69(m,3H),4.41(d,1H),4.03(br,1H),3.83-3.73(m,3H),3.67-3.56(m,2H),3.25-3.18(m,2H),3.14-2.86(m,2H),2.72-2.59(m,1H),2.58-2.47(m,1H),2.46-2.36(m,1H),2.33-2.23(m,1H),2.10-1.97(m,4H),1.96-1.87(m,1H),1.84-1.72(m,2H),1.66-1.55(m,1H),1.28-1.19(m,1H),1.16(d,1H),1.03-0.95(m,1H),0.95-0.89(m,1H)。

實施例2-14

4-(4-((R)-羥基(4'-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯基]-2-基)甲基)哌啶-1-基)-N-((4-(((2R)-4-((2-羥乙基)(甲基)胺基)-3-甲基-1-(苯基硫基)丁-2-基)胺基)-3-((三氟甲基)磺醯基)苯基)磺醯基)苯甲醯胺14

實施例2-15

4-(4-((R)-羥基(4'-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯基]-2-基)甲基)哌啶-1-基)-N-((4-(((R)-5-((2-羥乙基)(甲基)胺基)-1-(苯基硫基)戊-2-基)胺基)-3-((三氟甲基)磺醯基)苯基)磺醯基)苯甲醯胺15

實施例2-16

4-(4-((R)-羥基(4'-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯基]-2-基)甲基)哌啶-1-基)-N-((4-(((R)-1-((R)-1-(2-羥乙基)吡咯烷-2-基)-3-(苯基硫基)丙-2-基)胺基)-3-((三氟甲基)磺醯基)苯基)磺醯基)苯甲醯胺16

實施例2-17

4-(4-((R)-(4'-氯-[1,1'-聯苯基]-2-基)(羥基)甲基)哌啶-1-基)-N-((4-(((R)-1-((R)-1-甲基吡咯烷-2-基)-3-(苯基硫基)丙-2-基)胺基)-3-((三氟甲基)磺醯基)苯基)磺醯基)苯甲醯胺17

實施例2-18

4-(4-((R)-(4'-氯-[1,1'-聯苯基]-2-基)(羥基)甲基)哌啶-1-基)-N-((4-(((R)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)-3-(苯基硫基)丙-2-基)胺基)-3-((三氟甲基)磺醯基)苯基)磺醯基)苯甲醯胺18

實施例2-19

4-(4-((R)-羥基(4'-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯基]-2-基)甲基)哌啶-1-基)-N-((4-(((R)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)-3-(苯基硫基)丙-2-基)胺基)-3-((三氟甲基)磺醯基)苯基)磺醯基)苯甲醯胺19

實施例2-20

4-(4-((R)-(4'-氯-[1,1'-聯苯基]-2-基)(羥基)甲基)哌啶-1-基)-N-((4-(((R)-1-((S)-1-(2-羥乙基)-2-甲基吡咯烷-2-基)-3-(苯基硫基)丙-2-基)胺基)-3-((三氟甲基)磺醯基)苯基)磺醯基)苯甲醯胺20

實施例2-21

4-(4-((R)-羥基(4'-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯基]-2-基)甲基)哌啶-1-基)-N-((4-(((R)-1-((S)-1-(2-羥乙基)-2-甲基吡咯烷-2-基)-3-(苯基硫基)丙-2-基)胺基)-3-((三氟甲基)磺醯基)苯基)磺醯基)苯甲醯胺21

實施例2-22

4-(4-((R)-(4'-氯-[1,1'-聯苯基]-2-基)(羥基)甲基)哌啶-1-基)-N-((4-(((2R)-1-(1-(2-(羥乙基)氮雜環丁烷-2-基)-3-(苯基硫基)丙-2-基)胺基)-3-((三氟甲基)磺醯基)苯基)磺醯基)苯甲醯胺22

實施例2-23 23

實施例2-24 AZD4320

參考專利WO2012017251中的第160-161頁，實施例3(陽性對照化合物AZD4320)製備。

實施例3-1 LD-1

4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苄基(R)-2-((R)-2-((4-(N-(4-(4-((R)-(4'-氯-[1,1'-聯苯基]-2-基)(羥基)甲基)哌啶-1-基)苯甲醯基)胺基磺醯基)-2-((三氟甲基)磺醯基)苯基)胺基)-3-(苯基硫基)丙基)吡咯烷-1-羧酸酯LD-1

將1(3mg，0.003mmol)加入到0.5mL N,N-二甲基甲醯胺中，加入4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苄基(4-硝基苯基)碳酸酯LD-1a(3.1mg，0.004mmol，皓元)，再加入0.1mL吡啶，氬氣置換三次，再加入1-羥基苯并三唑(2mg，0.014mmol)和N,N-二異丙基乙胺(2mg，0.015mmol)，室溫攪拌反應16小時。反應液進行高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：XBridge Prep C18；流動相：醋酸銨、水、乙腈)，收集其相應組分，減壓濃縮，得到標題產物LD-1(2mg，產率：40.5%)。

MS m/z(ESI)：1525.0[M+1]。

¹H NMR(500MHz,CD₃OD)δ 8.17(s,1H),7.92-7.80(m,3H),7.64-7.51(m,3H),7.46-7.09(m,12H),6.84-6.74(m,3H),6.48-6.40(m,2H),5.35(t,4H),4.41(d,1H),4.15(d,1H),4.00-3.71(m,6H),3.66-3.54(m,2H),3.44(t,2H),3.22-3.05(m,6H),2.77(t,1H),2.72-2.62(m,2H),2.53(t,2H),2.23(t,2H),2.18(t,4H),2.11-2.06(m,2H),1.96-1.82(m,4H),1.80-1.71(m,2H),1.65-1.51(m,8H),1.17-1.09(m,2H),1.00-0.89(m,9H)。

生物學評價

測試例1、本公開化合物對BCL-xL結合活性的測定

體外BCL-xL結合活性藉由以下的方法進行測試。

本實驗使用的試劑：His標簽BCL-xL蛋白(R&D，貨號894-BX-050)；生物素標記的BIM蛋白(R&D，貨號3526/1)；結合緩衝液(cisbio，貨號62DLBDDF)；檢測緩衝液(cisbio，貨號62DB1FDG)；標記銪穴狀化合物抗6His抗體(cisbio，貨號61HI2KLA)；親和鏈黴素鏈接XL665(cisbio，貨號611SAXLA)。

以下所述的體外結合實驗可測定受試化合物對BCL-xL結合活性。

將測試化合物溶解於二甲亞碸中，並根據實驗需要稀釋至各濃度梯度，再將用二甲亞碸配製的各濃度化合物100倍稀釋於結合緩衝液中。用結合緩衝液將BCL-xL稀釋至相應的濃度，4μL/孔加入白色384孔板中，再將稀釋好的測試化合物2μL/孔加入白色384孔板中，混合均勻後在25℃孵育1小時。用結合緩衝液將生物素標記的BIM蛋白稀釋至相應的濃度，4μL/孔加入白色384孔板中，混合均勻後在25℃孵育2小時。用檢測緩衝液將標記銪穴狀化合物抗6His抗體和親和鏈黴素鏈接XL665分別稀釋至相應的濃度，然後各取5μL/孔加入到白色384孔板中，混合均勻後在25℃孵育2-4小時。用酶標儀(BMG Labtech，型號PHERAstar FS)中HTRF程序讀取信號值。

測試結果見表1。

測試例2：本公開化合物對BCL-2結合活性的測定

體外BCL-2結合活性藉由以下的方法進行測試。

本實驗使用的試劑：His標簽BCL-2蛋白(R&D systems，貨號827-BC-050)；生物素標記的BIM蛋白(R&D，貨號3526/1)；結合緩衝液(cisbio，貨號62DLBDDF)；檢測緩衝液(cisbio，貨號62DB1FDG)；標記銪穴狀化合物抗6His抗體(cisbio，貨號61HI2KLA)；親和鏈黴素鏈接XL665(cisbio，貨號611SAXLA)。

以下所述的體外結合實驗可測定受試化合物對BCL-2結合活性。

將測試化合物溶解於二甲亞碸中，並根據實驗需要稀釋至各濃度梯度，再將用二甲亞碸配製的各濃度化合物100倍稀釋於結合緩衝液中；用結合緩衝液將BCL-2稀釋至相應的濃度，4μL/孔加入白色384孔板中，再將稀釋好的測試化合物2μL/孔加入白色384孔板中，混合均勻後在25℃孵育1小時。用結合緩衝液將生物素標記的BIM蛋白稀釋至相應的濃度，4μL/孔加入白色384孔板中，混合均勻後在25℃孵育2小時。用檢測緩衝液將標記銪穴狀化合物抗6His抗體和親和鏈黴素鏈接XL665分別稀釋至相應的濃度，然後各取5μL/孔加入到白色384孔板中，混合均勻後在25℃孵育2-4小時。用酶標儀(BMG Labtech，型號PHERAstar FS)中HTRF程序讀取信號值。

測試結果見表2。

測試例3：本公開化合物對RS4；11細胞和NCI-H146細胞增殖抑制活性的測定

體外RS4；11細胞和NCI-H146細胞增殖抑制活性藉由以下的方法進行測試。

本實驗使用的試劑：RPMI-1640培養基(HyCLone，貨號SH30243018)；胎牛血清(Gibco，貨號10099-141)；胰酶(Gibco，貨號25200-072)；Cell Titer-Glo(Promega，貨號G7571)。

使用材料：RS4；11細胞(南京科佰生物科技有限公司，貨號CBP60641)；NCI-H146細胞(ATCC，貨號HTB-173)。

以下所述的體外細胞增殖實驗可測定受試化合物對RS4；11細胞和NCI-H146細胞增殖抑制活性。

RS4；11細胞(或NCI-H146細胞)培養在含10%FBS的RPMI-1640培養基中，一週傳代2~3次，傳代比列1：3或1：5。傳代時，將細胞轉至離心管中，1200rpm離心3分鐘，棄去上清培養基殘液，加入新鮮培養基重新懸浮細胞。在96孔細胞培養板中加入90μL的細胞懸液，RS4；11細胞和NCI-H146細胞密度為2.22×10⁵細胞/ml，96孔板外圍只加入100μL的完全培養基(含10%FBS的RPMI-1640培養基)。將培養板在培養箱培養24小時(37℃，5% CO₂)。

根據實驗需要將待測樣品用二甲亞碸稀釋成合適的濃度梯度；取配製成梯度濃度的待測化合物溶液5μL加入到95μL新鮮培養基中混勻，再向細胞培養板中加入10μL上述含化合物的培養基溶液。將細胞培養板在培養箱孵育3天(37℃，5% CO₂)。在96孔細胞培養板中，每孔加入50μL CellTiter-Glo試劑，室溫避光放置5-10分鐘，用酶標儀(BMG Labtech，型號PHERAstar FS)讀取化學發光信號值，數據使用GraphPad軟體處理。結果見表3。

測試例4、對SD大鼠靜脈重複給藥7天毒性測試

1、實驗目的

評估化合物9及AZD4320靜脈重複給藥7天，對SD大鼠毒性。

2、實驗藥品

儲存條件：室溫乾燥器避光保存。

化合物9，純度100%計，分子量976.1。

化合物AZD4320，純度100%計，分子量945.5。

3、實驗設計和實驗方法

3.1、實驗動物和飼養條件

SD大鼠，購入30隻，180~200g左右，6-7週齡，雌雄各半，訂購於浙江維通利華試驗動物有限責任公司，SPF級。動物合格證號：200917Aazz0619000298和20200917Aazz0619000104。生產許可證號：SCXK(浙)2019-0001。

飼養條件：SPF級，動物飼養於塑料透明大鼠飼養籠中，每籠2-3隻。室溫20-26℃，相對濕度40~70%。控制光照12小時/黑暗12小時交替。自由不限量攝取鼠用顆粒飼料。

3.2、動物分組

隨機分為溶媒對照組和化合物9-1mg/kg、化合物AZD4320-1mg/kg，共為3組，6隻/組，雌雄各半。

3.3、實驗方法

本次大鼠7天毒性試驗供試品劑量為：1mg/kg(qd)，連續給藥7天。給藥途徑：靜脈，給藥容量：10mL/kg，給藥頻率及給藥期：每日上午給藥，連續給藥7天。

溶媒：1.5%DMA+98.5%(10% HS-15)，DMA為N,N-二甲基乙醯胺，上海泰坦科技股份有限公司，貨號01013630；HS-15為聚乙二醇硬脂酸脂15(Solutol HS15)，上海協泰化工有限公司，貨號50253404。

3.4、實驗儀器

日立7100全自動生化分析儀

Siemens advia 2120i全自動血球分析儀

Sysmex ca1500全自動凝血分析儀

毒性代謝動力學數據檢測：AB 4000液相質譜聯用儀。

3.5、數據表達和統計學處理

檢查結果經計算機Excel錄入與統計處理；

臨床症狀、攝食量及解剖肉眼大體觀察結果不進行統計學計算處理，體重、臟器重量和臨檢等指標使用T-test進行統計。

4、結果

SD大鼠以5mL/kg重複7天靜脈給予1mg/kg化合物9和AZD4320：

給藥期間化合物9給藥組動物臨床觀察未見明顯異常。與溶媒對照組相比，各劑量組動物體重及體重增長率未見明顯差異(p>0.05)，攝食量均未見明顯變化。

化合物9給藥組大鼠血小板稍有降低但在背景正常範圍內，而AZD 4320大鼠上均表現出較顯著的血小板降低(p<0.01)。結果見表4。

5、結論

在本次實驗條件下，與溶媒對照組及陽性對照AZD 4320組相比，化合物9降低血小板比陽性少，具有更加安全的優勢。

測試例5：本公開化合物在小鼠體內的藥物代謝動力學評價

1、摘要

以小鼠為受試動物，應用LC/MS/MS法測定了小鼠靜脈(iv)給予化合物10和AZD4320後不同時刻血漿中的藥物濃度。研究本公開化合物在小鼠體內的藥物代謝動力學行為，評價其藥動學特徵。

2、試驗方案

2.1 試驗藥品

化合物10

2.2 試驗動物

C57小鼠18隻，雌性，隨機分為2組，購自浙江維通利華實驗動物有限公司，動物生產許可證號：SCXK(滬)2017-0005。

2.3 藥物配製

稱取一定量的化合物10，加5%體積的DMSO和5%吐溫80(上海泰坦科技有限公司)使其溶解，然後加入90%生理鹽水配製成0.1mg/mL澄明溶液。化合物AZD4320配製同化合物10。

2.4 給藥

靜脈給藥：化合物10與AZD4320分別小鼠靜脈給藥，給藥劑量均為2.0mg/kg，給藥體積均為20.0mL/kg。

3、操作

小鼠靜脈給藥化合物10，於給藥前及給藥後5分鐘、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、11.0、24.0小時採血，0.1mL，置EDTA-K2抗凝試管中，10000rpm離心1分鐘(4℃)，1小時內分離血漿，-20℃保存待測。採血至離心過程在冰浴條件下操作。

小鼠靜脈給藥化合物AZD4320，於給藥前及給藥後5分鐘、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、11.0、24.0小時採血，0.1mL，置EDTA-K2抗凝試管中，10000rpm離心1分鐘(4℃)，1小時內分離血漿，-20℃保存待測。採血至離心過程在冰浴條件下操作。

測定不同濃度的藥物給藥後小鼠血漿中的待測化合物含量：取給藥後各時刻的小鼠血漿10μL，加入甲醇200μL(含內標溶液喜樹鹼(100ng/mL))，渦旋混合1分鐘，離心10分鐘(18000轉/分鐘)，血漿樣品取上清液3μL進行LC/MS/MS分析。

4、藥物代謝動力學參數結果

測試例6：對人急性淋巴細胞白血病RS4；11小鼠皮下移植瘤的療效

本實驗用於評價並比較本公開化合物對人急性淋巴細胞白血病RS4；11小鼠皮下移植瘤的療效。

一、實驗動物和飼養條件

NOD-Scid小鼠，5週，♀，購自北京華阜康生物科技股份有限公司。生產許可證號：SCXK(京)2019-0008；動物合格證號110322211100992176。飼養環境：SPF級。溶媒組6隻，化合物組8隻。

二、測試化合物

化合物9、化合物10和溶媒組。

將5mg化合物加入250μLDMSO，渦旋溶解得到20mg/mL溶液，用30%羥丙基β環糊精(HP-β-CD，益諾思生物技術南通有限公司)溶液稀釋至所需濃度。

三、實驗設計和實驗方法

人急性淋巴細胞白血病RS4：11購自American Type Culture Collection。RS4；11細胞用10-cm培養皿培養，培養條件為RPMI 1640培養液(Gibco)中加10%胎牛血清(Gibco)以及青、鏈黴素，於37℃、含5% CO₂的培養箱中培養。一週2次傳代，當細胞呈指數生長期時，收集細胞，計數，接種。

每隻小鼠皮下接種1×10⁷ RS4；11細胞，待腫瘤長到100~200mm³，根據腫瘤體積分組，靜脈注射(IV)藥物，每週1次(QW)，共4次，注射體積0.1mL/10g體重；給藥量10mg/kg。

四、結果

實驗指標為考察藥物對腫瘤生長的影響，具體指標為T/C%或腫瘤生長抑制率(TGI%)。

每週二次用遊標卡尺測量腫瘤直徑，腫瘤體積(V)計算公式為：

V=1/2×a×b² 其中a、b分別表示長、寬。

T/C(%)=(T-T₀)/(C-C₀)×100 其中T、C為實驗結束時的腫瘤體積；T₀、C₀為實驗開始時的腫瘤體積。

腫瘤生長抑制率%(TGI%)=100-T/C(%)。

當腫瘤出現消退時，腫瘤生長抑制率%(TGI%)=100-(T-T₀)/T₀×100

如果腫瘤比起始體積縮小，即T<T₀或C<C₀時，即定義為腫瘤部分消退(PR)；如果腫瘤完全消失，即定義為腫瘤完全消退(CR)。

Claims

一種通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，

其中，

R¹選自氘原子、氫原子、烷基和氘代烷基；

R²選自烷基和羥烷基；

或者R¹和R²與它們所連接的原子一起形成雜環基，該雜環基任選進一步被選自鹵素、羥基、烷基、羥烷基、烷氧基和環烷基的取代基所取代；

R³選自氫原子、羥烷基、烷基、氘代烷基、環烷基和環烷基烷基；

R⁴選自氫原子、鹵素、氘代烷基和烷基；

R⁵選自鹵素和鹵烷基；

R⁶選自烷基、胺基、羥基和烷氧基；

R⁷選自氫原子、鹵素、烷基、氘代烷基、羥基和烷氧基；

R⁸、R⁹各自獨立地選自氫原子、烷基、氘代烷基和環烷基；或者R⁸和R⁹與它們所連接的原子一起形成環烷基；

R¹⁰、R¹¹各自獨立地選自氫原子、烷基、氘代烷基和環烷基；或者R¹⁰和R¹¹與它們所連接的原子一起形成環烷基；

R¹²選自氫原子、氘原子、氘代烷基、鹵素、羥基、烷基、羥烷基、烷氧基和環烷基；

R¹³選自氫原子、氘原子、氘代烷基、鹵素、羥基、烷基、羥烷基、烷氧基和環烷基；

R¹⁴選自氫原子、氘原子、氘代烷基、鹵素、羥基、烷基、羥烷基、烷氧基和環烷基；

r選自0、1、2和3；

條件是，當R¹和R²不與它們所連接的原子一起形成雜環基時，R⁵為鹵烷基。
如請求項1所述的通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中該R¹為氫原子，R²為烷基。
如請求項1所述的通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中該R¹和R²與它們所連接的原子一起形成雜環基；較佳地，該雜環基任選進一步包含1-3個選自氮原子或氧原子的雜原子；更佳地，R¹和R²與它們所連接的原子一起形成吡咯烷基。
如請求項1所述的通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其為通式(D-I)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽：

其中，m選自0、1、2和3；

r、R³-R¹⁴如請求項1中所定義。
如請求項1所述的通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其為通式(D-II)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽：

其中，m選自0、1、2和3；

r、R³-R¹¹如請求項1中所定義。
如請求項1所述的通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其為通式(D-III)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽：

其中，m選自0、1、2和3；

r、R³-R¹¹如請求項1中所定義。
如請求項1所述的通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其為通式(D-IV)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽：

其中，

m選自0、1、2和3；

R³-R⁹如請求項1中所定義。
如請求項4至7中任一項所述的通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中m為2。
如請求項1至8中任一項所述的通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中該R⁵為氯原子。
如請求項1至8中任一項所述的通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中該R⁵為三氟甲基。
如請求項1至10中任一項所述的通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中該R³選自氫原子、羥烷基和烷基；較佳為羥烷基。
如請求項1所述的通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其為通式(D-V)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽：

其中，t選自0、1、2和3，較佳1；

r、R¹、R²、R⁴、R⁶-R¹⁴如請求項1中所定義。
如請求項1所述的通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其為通式(D-VI)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽：

其中，t選自0、1、2和3，較佳1；

r、R¹、R²、R⁴、R⁶-R¹¹如請求項1中所定義。
如請求項1所述的通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其為通式(D-VII)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽：

其中，t選自0、1、2和3，較佳1；

r、R¹-R¹¹如請求項1中所定義。
如請求項1至14中任一項所述的通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中該R⁴選自氫原子和烷基；較佳為氫原子。
如請求項1至15中任一項所述的通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中該R⁶選自羥基和烷氧基；較佳為羥基。
如請求項1至16中任一項所述的通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中該R⁷、R⁸和R⁹為氫原子。
如請求項1至6、8至17中任一項所述的通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中該R¹⁰和R¹¹各自獨立地選自氫原子和烷基；較佳為氫原子。
如請求項1至6、8至18中任一項所述的通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中該r為0或1；較佳為0。
如請求項1所述的通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中該化合物選自：

或其藥學上可接受的鹽。
一種通式(DA1)或者(DB1)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，

其中，

G₁為胺基保護基，較佳Boc；

m選自0、1、2和3；

r、R⁴-R¹¹如請求項1中所定義。
如請求項21所述的通式(DA1)或(DB1)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其選自以下任一化合物：
一種製備通式(D-III)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽的方法，該方法包括：

通式(DA1)的化合物或其藥學上可接受的鹽在酸性條件下發生脫保護反應，得到通式(D-III)的化合物或其藥學上可接受的鹽；較佳地，用於該酸性條件的試劑為HCl；

其中，

G₁為胺基保護基，較佳Boc；

m選自0、1、2和3；

R³為氫原子；

r、R⁴-R¹¹如請求項1中所定義。
一種通式(DA2)或(DB2)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，

其中，

m選自0、1、2和3；

r、R⁴-R¹¹如請求項1中所定義。
如請求項24所述的通式(DA2)或(DB2)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其選自以下任一化合物：
一種製備通式(D-III)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽的方法，該方法包括：

通式(DA2)的化合物或其藥學上可接受的鹽在鹼性條件下發生取代反應，得到通式(D-III)的化合物或其藥學上可接受的鹽；用於該鹼性條件的試劑較佳三乙胺；

其中，

m選自0、1、2和3；

R³為羥烷基；

r、R⁴-R¹¹如請求項1中所定義。
一種通式(DA3)、(DB3)或(DC3)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，

其中，

G₂為羥基保護基，較佳為TBS；

t選自0、1、2和3；

r、R¹、R²、R⁴-R¹¹如請求項1中所定義。
如請求項27所述的通式(DA3)、(DB3)或(DC3)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其選自以下任一化合物：
一種製備通式(D-VI)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽的方法，該方法包括：

通式(DA3)的化合物或其藥學上可接受的鹽在鹼性條件下發生脫保護反應，得到通式(D-VI)的化合物或其藥學上可接受的鹽；

其中，

G₂為羥基保護基，較佳TBS；

t選自0、1、2和3；

r、R¹、R²、R⁴-R¹¹如請求項1中所定義。
一種包含式(-D)所示結構的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽：

其中，

R¹選自氘原子、氫原子、烷基和氘代烷基；

R²選自烷基和羥烷基；

或者R¹和R²與它們所連接的原子一起形成雜環基，該雜環基任選進一步被選自鹵素、羥基、烷基、羥烷基、烷氧基和環烷基的取代基所取代；

R^3a選自鍵和-(CH₂)_t-CH₂-O-；

R⁴選自氫原子、鹵素、氘代烷基和烷基；

R⁵選自鹵素和鹵烷基；

R⁶選自烷基、胺基、羥基和烷氧基；

R⁷選自氫原子、鹵素、烷基、氘代烷基、羥基和烷氧基；

R⁸、R⁹各自獨立地選自氫原子、烷基、氘代烷基和環烷基；或者R⁸和R⁹與它們所連接的原子一起形成環烷基；

R¹⁰、R¹¹各自獨立地選自氫原子、烷基、氘代烷基和環烷基；或者R¹⁰和R¹¹與它們所連接的原子一起形成環烷基；

R¹²選自氫原子、氘原子、氘代烷基、鹵素、羥基、烷基、羥烷基、烷氧基和環烷基；

R¹³選自氫原子、氘原子、氘代烷基、鹵素、羥基、烷基、羥烷基、烷氧基和環烷基；

R¹⁴選自氫原子、氘原子、氘代烷基、鹵素、羥基、烷基、羥烷基、烷氧基和環烷基；

r選自0、1、2和3；

t選自0、1、2和3；

波浪線表示與接頭單元或與配體共價連接。
如請求項30所述的包含式(-D)所示結構的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，該式(-D)選自(-DIII)、(-DIV)和(-DV)所示的結構：

其中，

t選自0、1、2和3，

m選自0、1、2和3；

波浪線、r、R¹、R²、R⁴-R¹¹如請求項30中所定義。
一種醫藥組成物，其含有治療有效量的如請求項1至20中任一項所述的通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，或如請求項30或31所述的包含式(-D)所示結構的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，以及藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
一種如請求項1至20中任一項所述的通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽或者如請求項30或31所述的包含式(-D)所示結構的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或者如請求項32所述的醫藥組成物在製備Bcl-2和/或Bcl-XL抑制劑中的用途。
一種如請求項1至20中任一項所述的通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽或者如請求項30或31所述的包含式(-D)所示結構的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或者如請求項32所述的醫藥組成物在製備用於治療或預防腫瘤的藥物中的用途。
一種如請求項1至20中任一項所述的通式(D)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽或者如請求項30或31所述的包含式(-D)所示結構的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或者如請求項32所述的醫藥組成物在製備治療和/或預防癌症的藥物中的用途，其中該癌症較佳黑色素瘤、肝癌、腎癌、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、鼻咽癌、結腸直腸癌、結腸癌、直腸癌、胰腺癌、宮頸癌、卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌、前列腺癌、白血病、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、慢性淋巴細胞白血病、急性淋巴細胞白血病、急性粒細胞性白血病、套細胞淋巴瘤、彌漫性大B細胞淋巴瘤、濾泡中心淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、T細胞淋巴瘤、B細胞淋巴瘤、頭頸鱗狀細胞癌、子宮頸癌、甲狀腺癌、淋巴瘤、肉瘤、成神經細胞瘤、腦瘤、骨髓瘤、星形細胞瘤和膠質瘤。