TW202210084A - Cd30陽性癌症之治療 - Google Patents

Abstract

本案揭示用於治療一個體中之一CD30陽性癌症的方法，其中該等方法包括投予一淋巴清除化學療法及表現CD30特異性嵌合抗原受體(CAR)之細胞。

Description

CD30陽性癌症之治療

本發明係在美國國家衛生研究院之HL114564項下的政府贊助下進行。該政府對於本發明擁有一定的權利。 本發明係關於醫學治療及預防之方法。

CD30.CAR-T療法包含T細胞，其係經基因修飾以表現對CD30具有特異性之嵌合抗原受體(CAR)，用以靶向並殺死表現CD30跨膜醣蛋白之癌細胞。該藥物產物係由取自患有CD30陽性淋巴瘤之患者的周邊血液單核細胞(PBMC)來產生。

在患有CD30陽性血液惡性病(包括典型何杰金氏淋巴瘤(cHL))之患者的初始第1期臨床研究中，CD30.CAR-T的投予經證實為安全的但僅少數患者具有持久反應(NCT01316146; Ramos et al., J Clin Invest. (2017) 127(9):3462-3471)。

CD30.CAR-T療法已證實耐受良好並具有顯著臨床活性，其係於經重度預處理之患有CD30陽性復發或頑抗性典型HL的患者以及一些NHL患者上驗證，並在淋巴清除化學療法之後進行(NCT02917083 (RELY-30)；Ramos et al., Biol Blood Marrow Transplant 25 (2019) S7-S75, Abstract 79)。

在一第一方面中，本揭露內容提供一種治療一個體中之一CD30陽性癌症的方法，其包含： (i)對該個體投予一淋巴清除化學療法，及 (ii)隨後對該個體投予表現CD30特異性嵌合抗原受體(CAR)之T細胞。

本揭露內容亦提供一種表現CD30特異性嵌合抗原受體(CAR)的T細胞群體，其係供使用在一治療CD30陽性癌症之方法中，其中該方法包含： (i)對該個體投予一淋巴清除化學療法，及 (ii)隨後對該個體投予CD30特異性CAR-T細胞。

本揭露內容亦提供一種表現CD30特異性嵌合抗原受體(CAR)的T細胞群體於製造一藥劑之用途，該藥劑係供使用在一治療CD30陽性癌症之方法中，其中該方法包含： (i)對該個體投予一淋巴清除化學療法，及 (ii)隨後對該個體投予CD30特異性CAR-T細胞。

在一些實施態樣中，對該個體投予淋巴清除化學療法包含投予氟達拉濱(fludarabine)及苯達莫司汀(bendamustine)。

在一些實施態樣中，該方法包含以每天15至60mg/m² 之一劑量投予氟達拉濱連續2至6天。

在一些實施態樣中，該方法包含以每天30mg/m² 之一劑量投予氟達拉濱連續3天。

在一些實施態樣中，該方法包含以每天35至140mg/m² 之一劑量投予苯達莫司汀連續2至6天。

在一些實施態樣中，該方法包含以每天70mg/m² 之一劑量投予苯達莫司汀連續3天。

在一些實施態樣中，該方法包含對該個體投予5x10⁷ 個表現CD30特異性CAR之T細胞/m² 至1x10⁹ 個表現CD30特異性CAR之T細胞/m² 。

在一些實施態樣中，該方法包含對該個體投予1x10⁸ 個表現CD30特異性CAR之T細胞/m² 至6x10⁸ 個表現CD30特異性CAR之T細胞/m² 。

在一些實施態樣中，該方法包含： (i)對一個體以每天30mg/m² 之一劑量投予氟達拉濱且以每天70mg/m² 之一劑量投予苯達莫司汀連續3天，及 (ii)隨後對該個體以一劑量投予表現CD30特異性CAR之T細胞，該劑量為2x10⁸ 個表現CD30特異性CAR之T細胞/m² 至6x10⁸ 個表現CD30特異性CAR之T細胞/m² 。

在一些實施態樣中，該CD30陽性癌症係選自於：一血液癌、一實體癌、一造血系統惡性病、何杰金氏淋巴瘤、退行性大細胞淋巴瘤、周邊T細胞淋巴瘤、非特定周邊T細胞淋巴瘤、T細胞白血病、T細胞淋巴瘤、皮膚T細胞淋巴瘤、NK-T細胞淋巴瘤、結外NK-T細胞淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、B細胞非何杰金氏淋巴瘤、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、非特定瀰漫性大B細胞淋巴瘤、EBV陽性B細胞淋巴瘤、EBV陽性瀰漫性大B細胞淋巴瘤、原發性縱膈腔B細胞淋巴瘤、晚期全身性肥胖細胞增多症、一生殖細胞瘤、及睪丸胚胎性癌。

在一些實施態樣中，該CD30陽性癌症係選自：何杰金氏淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、退行性大細胞淋巴瘤、非特定周邊T細胞淋巴瘤、結外NK-T細胞淋巴瘤、非特定瀰漫性大B細胞淋巴瘤及原發性縱膈腔B細胞淋巴瘤。

在一些實施態樣中，該個體先前已對CD30陽性癌症治療失敗。

在一些實施態樣中，該CD30陽性癌症係一復發或頑抗性CD30陽性癌症。

在一些實施態樣中，表現CD30特異性CAR的T細胞包含一CAR，其包含：(i)一抗原結合域，其特異性地結合CD30，(ii)一跨膜域，及(iii)一信號傳導域，其中該信號傳導域包含：(a)一胺基酸序列，其衍生自CD28的細胞內域，及(b)一胺基酸序列，其包含一基於免疫受體酪胺酸的活化模體(ITAM)。

在一些實施態樣中，該信號傳導域包含與SEQ ID NO:26具有至少80%胺基酸序列同一性之胺基酸序列。

在一些實施態樣中，該跨膜域係衍生自CD28的跨膜域。

在一些實施態樣中，該跨膜域包含與SEQ ID NO:20具有至少80%胺基酸序列同一性之胺基酸序列。

在一些實施態樣中，該抗原結合域包含與SEQ ID NO:14具有至少80%胺基酸序列同一性之胺基酸序列，及與SEQ ID NO:15具有至少80%胺基酸序列同一性之胺基酸序列。

在一些實施態樣中，該抗原結合域包含與SEQ ID NO:18具有至少80%胺基酸序列同一性之胺基酸序列。

在一些實施態樣中，該信號傳導域包含：(a)衍生自CD3ζ之細胞內域的胺基酸序列。

在一些實施態樣中，該信號傳導域包含與SEQ ID NO:25具有至少80%胺基酸序列同一性之胺基酸序列。

在一些實施態樣中，該CAR另外包含一鉸鏈區，其被提供在介於該抗原結合域與該跨膜域之間。

在一些實施態樣中，該鉸鏈區包含與SEQ ID NO:33具有至少80%胺基酸序列同一性之胺基酸序列。

在一些實施態樣中，該CAR包含與SEQ ID NO:35或36具有至少80%胺基酸序列同一性之胺基酸序列。 說明 CD30陽性癌症

本揭露內容係關於癌症之治療，更特定而言為CD30陽性癌症。

CD30(亦稱為TNFRSF8)為由UniProt: P28908鑑別之蛋白質。CD30是腫瘤壞死因子受體超家族之一I型單次跨膜醣蛋白。CD30結構及功能描述於例如van der Weydenet al. , Blood Cancer Journal (2017) 7: e603及Muta and Podack Immunol. Res. (2013) 57(1-3):151-8中，該等文獻均以全文引用方式併入本文中。

由人類TNFRSF8 基因編碼之mRNA的選擇式剪接係產生三種同功異型體：同功異型體1(『長』同功異型體; UniProt: P28908-1; v1; SEQ ID NO:1)；同功異型體2(『細胞質』、『短』或『C30V』同功異型體，UniProt: P28908-2; SEQ ID No:2)，其中缺少對應於SEQ ID NO:1之位置1至463的胺基酸序列；及同功異型體3(UniProt: P28908-3; SEQ ID No:3)，其中缺少對應於SEQ ID NO:1之位置1至111及位置446的胺基酸序列。SEQ ID NO:1之N端18個胺基酸形成一信號胜肽(SEQ ID NO:4)，其後為一367個胺基酸之細胞外域(SEQ ID NO:1之位置19至385，示於SEQ ID NO:5中)、一21個胺基酸之跨膜域(SEQ ID NO:1之位置386至406，示於SEQ ID NO:6中)，及一189個胺基酸之細胞質域(SEQ ID NO:1之位置407至595，示於SEQ ID NO:7中)。

在本說明書中，「CD30」係指來自任何物種之CD30且包括來自任何物種之CD30同功異型體、片段、變異體或同源物。  於本文使用時，一參考蛋白質之「片段」、「變異體」或「同源物」可以可選地表徵為與該參考蛋白質(例如一參考同功異型體)之胺基酸序列具有至少60%之胺基酸序列一致性，且較佳為70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者。在一些實施態樣中，一參考蛋白質之片段、變異體、同功異型體及同源物可表徵為能夠執行該參考蛋白質所執行之功能。

在一些實施態樣中，該CD30來自哺乳動物(例如靈長類動物(恆河猴、獼猴或人類)及/或嚙齒動物(例如大鼠或鼠類)CD30)。在較佳實施態樣中，該CD30係人類CD30。同功異型體、片段、變異體或同源物可以可選地表徵為與來自既定物種(例如人類)之未成熟或成熟CD30同功異型體之胺基酸序列具有至少70%之胺基酸序列一致性，且較佳為80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者。CD30的片段可具有10、20、30、40、50、100、200、300、400、500或590個胺基酸之一者的最小長度，且可具有10、20、30、40、50、100、200、300、400、500或595個胺基酸中之一者的最大長度。

在一些實施態樣中，CD30包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO:1、2或3具有至少70%胺基酸序列同一性，且較佳為80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者。

在一些實施態樣中，CD30包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO:5具有至少70%胺基酸序列同一性，且較佳為80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者。

在一些實施態樣中，CD30之一片段包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO:5或19具有至少70%胺基酸序列同一性，較佳為80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之者。

本揭露內容涉及CD30相關癌症之治療。

於本文使用時，「癌症」可指任何不希望之細胞增殖(或任何藉由不希望的細胞增殖來表現的疾病)、贅生物或腫瘤。癌症可為良性或惡性，並可為原發性或繼發性(轉移性)。贅生物或是腫瘤可為任何異常的細胞生長或增殖，並可位於任何組織中。癌症可係衍生自以下之組織/細胞，例如腎上腺腺體、腎上腺髓質、肛門、闌尾、膀胱、血液、骨骼、骨髓、大腦、乳房、盲腸、中樞神經系統(包括或不包括大腦)小腦、子宮頸、結腸、十二指腸、子宮內膜、上皮細胞(例如腎上皮)、膽囊、食管、膠細胞、心臟、迴腸、空腸、腎臟、淚腺、喉、肝臟、肺、淋巴、淋巴結、淋巴母細胞、上頜骨、縱隔、腸系膜、子宮肌層、鼻咽、腸網膜、口腔、卵巢、胰腺、腮腺、周邊神經系統、腹膜、胸膜、前列腺、唾液腺、乙狀結腸、皮膚、小腸、軟組織、脾、胃、睪丸、胸腺、甲狀腺、舌、扁桃體、氣管、子宮、外陰、及/或白血球。

在一些實施態樣中，該癌症為在病理學上牽涉CD30之癌症。亦即，在一些實施態樣中，該癌症為：由CD30表現引起或加劇之癌症；CD30表現為一風險因素之癌症；及/或CD30表現與癌症之發病、發展、進展、嚴重程度或轉移正相關之癌症。該癌症之特徵可在於CD30表現，例如該癌症可包含表現CD30之細胞。此等癌症可稱為CD30陽性癌症。

CD30陽性癌症可為包含表現CD30之細胞(例如於細胞表面表現CD30蛋白的細胞)的癌症。CD30陽性癌症可過度表現CD30。CD30之過度表現可藉由下述來判定：偵測到一CD30之基因或蛋白質表現位準，其係大於等效之非癌細胞/非腫瘤組織的表現位準。可藉由習於此藝者所周知的技術來評估一特定癌症/樣本之CD30基因/蛋白表現，例如藉由qRT-PCR(用於基因表現)、基於抗體之檢定(例如西方墨點法、流動式細胞測量術等，用於蛋白表現)。

CD30陽性癌症描述於例如van der Weydenet al. , Blood Cancer Journal (2017) 7:e603及Muta and Podack, Immunol Res (2013), 57(1-3):151-8中，該等文獻均以全文引用之方式併入本文中。CD30表現在活化之T和B淋巴球的小子集上，並以各種淋巴贅生物來表現，包括典型何杰金氏淋巴瘤及退行性大細胞淋巴瘤。CD30多變化的表現亦已展現於非特定周邊T細胞淋巴瘤(PTCL-NOS)、成人T細胞白血病/淋巴瘤、皮膚T細胞淋巴瘤(CTCL)、結外NK-T細胞淋巴瘤、各種B細胞非何杰金氏淋巴瘤(包括瀰漫性大B細胞淋巴瘤，尤其是EBV陽性瀰漫性大B細胞淋巴瘤)及晚期全身性肥胖細胞增多症。亦已在一些非造血系統惡性病觀察到CD30表現，包括生殖細胞瘤及睪丸胚胎性癌。

跨膜醣蛋白CD30係腫瘤壞死因子受體超家族的成員(Falini et al., Blood (1995) 85(1):1-14)。TNF/TNF受體(TNF-R)超家族的成員係於多位準協調免疫反應，而CD30在調節正常淋巴樣細胞的功能或增殖上發揮作用。CD30最初被描述為以單株抗體Ki-1識別的抗原，Ki-1係藉由以HL衍生細胞株L428使小鼠免疫而產生(Muta and Podack, Immunol Res (2013) 57: 151-158)。CD30抗原表現已使用於鑑別ALCL與何杰金氏病中之Reed-Sternberg二氏細胞(Falini et al., Blood (1995) 85(1):1-14)。在廣泛表現於淋巴瘤惡性細胞中的情況下，CD30遂為一頗具潛力的標靶以供用於發展基於抗體之免疫療法及細胞療法兩者中。重要的是，CD30典型地在生理條件下並不表現於正常組織上，因此尤其不會存在於休眠中的成熟或前驅B或T細胞上(Younes及Ansell,Semin Hematol(2016)53:186-189)。靶向CD30之抗體-藥物軛合物維多汀本妥昔單抗，最初被批准用於治療CD30陽性HL(Adcetris® US Package Insert 2018)。維多汀本妥昔單抗試驗的數據支持CD30作為治療CD30陽性淋巴瘤用之治療性標靶，雖其使用上相關的毒性令人關注。

何杰金氏淋巴瘤(HL)為涉及淋巴結及淋巴系統的惡性腫瘤。HL之發病率為雙峰，其中大部分患者在15至30歲之間被診斷出，其後是在55歲以上成年人有另一峰。於2019年，估計在美國此疾病將會有8,110個新病例(女性3,540及男性4570)以及1,000例死亡(女性410及男性590)(American Cancer Society 2019)。基於美國國家癌症研究所(National Cancer Institute)之SEER資料庫中2012-2016案例，美國兒科HL患者的HL發病率如下：每100,000年齡1-4:0.1；年齡5-9:0.3；年齡10-14:1.3；年齡15-19: 3.3(SEER Cancer Statics Review,1975-2016])。

世界衛生組織(WHO)分類成2主要類型：典型何杰金氏淋巴瘤(cHL)及結節性淋巴球為主型之何杰金氏淋巴瘤(NLPHL)。於西方國家，cHL佔所有HL的95%而NLPHL佔5%(National Comprehensive Cancer Network Guidelines 2019)。

用於患晚期疾病之cHL患者的第一線化學療法伴有介於70%與75%之間的治癒率(Karantanos et al., Blood Lymphat Cancer (2017) 7:37-52)。在初級療法後復發的患者上，常使用救援性化學療法再加上自體幹細胞移植(ASCT)。令人遺憾的是，有多達50%的cHL患者在ASCT後疾病復發。在ASCT後復發之患者的中位整體存活期係約兩年(Alinari Blood (2016) 127:287-295)。儘管有積極的合併化學療法，但10%與40%之間的患者對救援性化學療法未達反應，且並無隨機臨床試驗數據支持於無反應者中的ASCT。就對救援性化學療法無反應的患者、在ASCT後復發的患者或非此方法之候選者來說，其預後狀況始終嚴峻並迫切需要新的治療方法(Keudell British Journal of Haematology (2019) 184:105–112)。

雖然大部分的兒科族群(兒童、青少年及年輕成人)以目前可用的療法會被治癒，但小部分的患者可能患有頑抗性或復發疾病而需要新穎療法，其具有可接受之安全性概況及改良的療效獲益(Flerlage et al., Blood (2018) 132: 376-384；Kelly, Blood (2015) 126: 2452-2458；McClain and Kamdar, in UpToDate 2019; Moskowitz, ASCO Educational Book (2019) 477-486)。在兒童期經歷以高劑量化學療法治療過的HL患者通常會有治療相關的長期後遺症，諸如心臟、肺、性腺及內分泌的毒性還有第二惡性贅生物(Castellino et al., Blood (2011) 117(6): 1806-1816)。

在一些實施態樣中，根據本揭露內容之一CD30陽性癌症係選自於：一血液癌、一實體癌、一造血系統惡性病、何杰金氏淋巴瘤、退行性大細胞淋巴瘤、周邊T細胞淋巴瘤、非特定周邊T細胞淋巴瘤、T細胞白血病、T細胞淋巴瘤、皮膚T細胞淋巴瘤、NK-T細胞淋巴瘤、結外NK-T細胞淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、B細胞非何杰金氏淋巴瘤、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、非特定瀰漫性大B細胞淋巴瘤、EBV陽性B細胞淋巴瘤、EBV陽性瀰漫性大B細胞淋巴瘤、原發性縱膈腔B細胞淋巴瘤、晚期全身性肥胖細胞增多症、一生殖細胞瘤、及睪丸胚胎性癌。

該CD30陽性癌症可為一復發CD30陽性癌症。如本文所用，「復發」癌症係指對一治療有反應(例如對該癌症之第一線療法)但隨後(例如在緩解期之後)已再次出現/進展的癌症。舉例而言，一復發癌症可為下述癌症：成長/進展曾被一治療(例如該癌症之第一線療法)所抑制且隨後已成長/進展。

CD30陽性癌症可為頑抗性CD30陽性癌症。於本文使用時，「頑抗性」癌症係指對一治療(例如該癌症之第一線療法)無反應之癌症。舉例而言，頑抗性癌症可為成長/進展並未被一治療(例如該癌症之第一線療法)所抑制的癌症。在一些實施態樣中，頑抗性癌症可為下述癌症：接受該癌症之治療的個體對該治療並未展現部分或完全的反應。

在該CD30陽性癌症係退行性大細胞淋巴瘤的實施態樣中，該癌症可針對化學療法、維多汀本妥昔單抗(brentuximab vedotin)或克唑替尼(crizotinib)之治療而為復發或頑抗性的。

在該CD30陽性癌症係非特定周邊T細胞淋巴瘤的實施態樣中，該癌症可針對化學療法或維多汀本妥昔單抗的治療而為復發或頑抗性的。

在該CD30陽性癌症係結外NK-T細胞淋巴瘤之實施態樣中，該癌症可針對化學療法(有或無天冬醯胺酸)或維多汀本妥昔單抗之治療而為復發或頑抗性的。

在該CD30陽性癌症係非特定瀰漫性大B細胞淋巴瘤的實施態樣中，該癌症可針對用化學療法(有或無利妥昔單抗)或CD19 CAR-T療法之治療而為復發或頑抗性的。

在該CD30陽性癌症係原發性縱膈腔B細胞淋巴瘤的實施態樣中，該癌症可針對用化學療法、免疫檢查點抑制劑(如PD-1抑制劑)或CD 19 CAR-T療法之治療而為復發或頑抗性的。 CD30特異性CAR CAR

本發明涉及包含/表現CD30特異性嵌合抗原受體(CAR)之免疫細胞。

嵌合抗原受體(CAR)為重組受體分子，其提供抗原結合及T細胞活化功能兩者。CAR結構及工程設計係綜述於例如Dottiet al. , Immunol Rev (2014) 257(1)中，其以全文引用之方式併入本文中。

CAR包含一抗原結合域，其經由一跨膜域連接至一信號傳導域。一可選的鉸鏈或間隔域可將抗原結合域與跨膜域隔開，並可作用為一撓性連接子。當由細胞表現時，該抗原結合域係位於細胞外空間中，且該信號傳導域為細胞內。

該抗原結合域介導與CAR特異性標靶抗原的結合。一CAR之抗原結合域可基於一抗體之抗原結合域，該抗體係對該CAR靶定之抗原有特異性。舉例而言，一CAR之抗原結合域可包含一抗體之互補決定區(CDR)的胺基酸序列，該抗體係特異性結合至該標靶抗原。一CAR之抗原結合域可包含下述或由下述所組成：特異性結合至該標靶抗原之一抗體的輕及重鏈變異區胺基酸序列。該抗原結合域可提供為一單鏈可變片段(scFv)，其包含一抗體之輕鏈及重鏈變異區胺基酸序列的序列。CAR之抗原結合域可以根據其他的蛋白:蛋白交互作用來靶定抗原，諸如配體:受體結合；舉例而言，已開發出一種IL-13Rα2靶定之CAR，其係使用一根據IL-13的抗原結合域(參見譬如Kahlonet al. 2004 Cancer Res 64(24): 9160-9166)。

該跨膜域係呈介於該CAR之抗原結合域與信號傳導域之間。該跨膜域係供用於使CAR錨定至一表現CAR之細胞的細胞膜，且該抗原結合域於細胞外空間中而信號傳導域在該細胞內部。CAR之跨膜域可衍生自細胞膜結合蛋白的跨膜區序列(譬如CD28、CD8等等)。

在本說明書通篇中，「衍生自」一參考多肽/域/胺基酸序列的多肽、域及胺基酸序列，係與該參考多肽/域/胺基酸序列的胺基酸序列具有至少60%之胺基酸序列一致性，較佳為70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者。「衍生自」一參考多肽/域/胺基酸序列的多肽、域及胺基酸序列，較佳保留該參考多肽/域/胺基酸序列之功能及/或結構特性。

作為例示，衍生自CD28細胞內域之一胺基酸序列可包含與CD28之細胞內域(例如示於SEQ ID NO:26)具有60%胺基酸序列同一性的胺基酸序列，較佳為70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者。再者，衍生自CD28細胞內域之一胺基酸序列較佳保留SEQ ID NO: 26胺基酸序列的功能特性，亦即活化CD28介導之信號傳導的能力。

給定多肽或其域之胺基酸序列可獲自熟於此藝者周知之資料庫，或由獲自資料庫之一核酸序列來判定。該資料庫包括GenBank、EMBL與UniProt。

該信號傳導域包含免疫細胞功能活化所需之胺基酸序列。該CAR信號傳導域可包含CD3-ζ之細胞內域的胺基酸序列，其提供基於免疫受體酪胺酸之活化模體(ITAM)以供該表現CAR之細胞的磷酸化及活化。包含其他含ITAM蛋白的序列之信號傳導域亦已經使用於CAR，諸如包含FcγRI之含ITAM區域的結構域(Hayneset al. , 2001 J Immunol 166(1):182-187)。包含衍生自CD3-ζ細胞內域之信號傳導域的CAR常稱為第一代CAR。

該CAR之信號傳導域典型亦包含一共刺激蛋白之信號傳導域(例如CD28、4-1BB等)，以提供針對增強免疫細胞活化及效應功能所需之共刺激信號。具有一包括額外共刺激序列之信號傳導域的CAR，常稱為第二代CAR。在一些情況中，CAR係經工程改造以提供不同細胞內信號傳導途徑的共刺激。舉例而言，CD28共刺激優先活化磷脂醯肌醇3-激酶(P13K)路徑，而4-1BB共刺激觸發信號傳導係經由TNF受體相關因子(TRAF)接附蛋白。CAR之信號傳導域因而有時含有共刺激序列，其衍生自超過一個共刺激分子之信號傳導域。包含帶有多重共刺激序列之信號傳導域的CAR，常稱為第三代CAR。

一可選的鉸鏈區或間隔區可分隔該抗原結合域與該跨膜域，並可作用為一撓性連接子。此類區域可為或可包含允許結合部分定向於不同方向上的撓性域，其可例如衍生自IgG之CH1-CH2鉸鏈區。

經由工程改造以表現針對特定標靶抗原有特異性之一CAR，免疫細胞(典型為T細胞但亦可為其他免疫細胞諸如NK細胞)可被導引至表現該標靶抗原之殺手細胞。表現CAR之T細胞(CAR-T細胞)與對其有特異性之標靶抗原的結合，係觸發細胞內信號傳導並從而活化T細胞。經活化之CAR-T細胞係經刺激以分開並產生導致殺死該等表現該標靶抗原之細胞的因子。 CD30特異性CAR

由於cHL對細胞免疫反應(移植物抗淋巴瘤效應)及抗體治療顯然敏感，故經由產生人工嵌合抗原受體(CAR)來結合兩種方式頗獲青睞。

在臨床前研究中，靶向CAR之CD30已顯示，經工程改造以表現此受體之T淋巴球係重定向以殺死CD30陽性HL細胞株(Hombachet al. Cancer Res. (1998) 58(6):1116-9、Savoldoet al. Blood (2007) 110(7):2620-30)。再者，用以檢查潛在標靶毒性的活體外及活體內實驗顯示：抗CD30 CAR-T細胞證實對CD30陽性淋巴瘤細胞有特異性細胞毒性，同時留下CD30陽性活化HSPC及B淋巴球(Hombach et al., Mol Ther (2016) 24: 1423-1434)。

執行CD30.CAR T細胞之活體外評價，該細胞係作為正在進行之一臨床研究的一部分而製出(NCT01316146；Ramos et al., J Clin Invest. (2017) 127(9):3462-3471)。經工程改造之T細胞的起始材料為來自淋巴瘤患者之周邊血液單核細胞。於此一公開研究中製造的CD30.CAR T細胞，係以與所提出臨床試驗之最終藥物產物相同的反轉錄病毒載體予以轉導。  使用IL-2(11種產物)或IL-7/IL-15(11種產物)製造總計22批CD30.CAR T細胞。

於培養第15天，生長於IL-7/IL-15中的CD30.CAR T細胞具有自基線起較大的擴增及較高的最終細胞數(分別為45 ± 13及1.2 × 10⁹ ± 5.5 × 10⁸ )，相對於在IL-2中所擴增者(分別為27.4 ± 13及6.5 × 10⁸ ± 3.3 × 10⁸ )。  CAR表現於兩組中相當(＞ 89%)。

CD30.CAR T細胞之特異性活體外細胞毒性係於一4小時51Cr釋放檢定中證實，其係使用40:1、20:1、10:1及5:1的效靶比。HDLM-2細胞株係用作CD30陽性標靶細胞，而CD30陰性Raji腫瘤細胞用作對照(Ctr-Ts)。測試總計n=9批於IL-2中培養之細胞，同時測試總計n=8批於IL-7/IL-15中擴增之細胞。Ramos et al., J Clin Invest. (2017) 127(9):3462-3471的圖2D顯示平均特異性溶解，為所提出之CD30.CAR-T的作用機制提供證據，如藉由對抗CD30陽性腫瘤細胞的直接特異性細胞毒性所示。 抗原結合域

「抗原結合域」係指一能夠結合至標靶抗原之域。本揭露內容之CAR的標靶抗原係CD30或其片段。根據本揭露內容之抗原結合域，可衍生自直接對抗CD30或另一CD30結合分子(例如一標靶抗原結合胜肽或核酸適體、配體或其他分子)的一抗體/抗體片段(例如Fv、scFv、Fab、單鏈Fab(scFab)、單域抗體(例如VhH)等)。

在一些實施態樣中，該抗原結合域包含一能與CD30特異性結合之抗體的一抗體重鏈變異區(VH)及一抗體輕鏈變異區(VL)。在一些實施態樣中，能夠結合至標靶抗原的域包含一CD30結合胜肽/多肽或由其所組成，例如肽適體、硫氧還蛋白、單功能抗體、抗運載蛋白、Kunitz域、高親和性多聚體、打結素、菲諾體(fynomer)、阿特里體(atrimer)、DARPin、親和抗體、奈米抗體(亦即單域抗體(sdAb))、阿菲林(affilin)、犰狳重複蛋白(ArmRP)、OBody或纖維結合蛋白，綜述於例如Reverdattoet al. , Curr Top Med Chem. 2015; 15(12): 1082–1101，其以全文引用之方式併入本文中(亦參見例如Boersmaet al. , J Biol Chem (2011) 286:41273-85及Emanuelet al. , Mabs (2011) 3:38-48)。

本揭露內容的抗原結合域可衍生自一能與CD30特異性結合之抗體的VH與VL。抗體通常包含六個互補決定區CDR；三個在重鏈變異區(VH)中：HC-CDR1、HC-CDR2及HC-CDR3，而三個在輕鏈變異區(VL)中：LC-CDR1、LC-CDR2及LC-CDR3中。六個CDR一起定義抗體之互補位，其為結合至標靶抗原的抗體之一部分。VH區及VL區在各CDR之任一側包含框架區(FR)，其向CDR提供骨架。自N端至C端，VH包含以下結構：N端-[HC-FR1]-[HC-CDR1]-[HC-FR2]-[HC-CDR2]-[HC-FR3]-[HC-CDR3]-[HC-FR4]-C端；而VL包含以下結構：N端-[LC-FR1]-[LC-CDR1]-[LC-FR2]-[LC-CDR2]-[LC-FR3]-[LC-CDR3]-[LC-FR4]-C端。

VH及VL序列可呈任何適合的形式提供，只要該抗原結合域可連接至該CAR的其他域。針對本揭露內容之抗原結合域考量到的形式包括在Carter, Nat. Rev. Immunol 2006, 6: 343-357中所描述者，諸如scFv、dsFV、(scFv)₂ 雙功能抗體、三功能抗體、四功能抗體、Fab、微型抗體及F(ab)₂ 形式。

在一些實施態樣中，該抗原結合域包含能夠結合至CD30之一抗體/抗體片段的CDR。在一些實施態樣中，該抗原結合域包含能夠結合至CD30之一抗體/抗體片段的VH區及VL區。由一抗體之VH及VL組成的部分在本文中亦可稱為可變片段(Fv)。VH及VL可提供於相同多肽鏈上，且經由一連接子序列接合；此等部分稱為單鏈可變片段(scFv)。用於製備scFv之適合連接子序列已為習於此藝者所知，並可包含絲胺酸及甘胺酸殘基。

在一些實施態樣中，該抗原結合域包含能夠結合至CD30的Fv或由其所組成。在一些實施態樣中，該抗原結合域包含能夠結合至CD30的scFv或由其所組成。

本揭露內容之CAR的CD30結合域較佳展現對CD30或其一片段之特異性結合作用。本揭露內容之CAR的CD30結合域較佳展現對CD30細胞外域之特異性結合作用。該CD30結合域可衍生自一抗CD30抗體或其他CD30結合劑，例如一CD30結合胜肽或一CD30結合小分子。

CD30結合域可衍生自一抗CD30抗體之抗原結合部分。

抗CD30抗體包括：HRS3及HRS4(描述於例如Hombach et al., Scand J Immunol (1998) 48(5):497-501)、描述於Schlapschyet al. , Protein Engineering, Design and Selection (2004) 17(12): 847–860, BerH2的HRS3衍生物 (MBL International Cat# K0145-3, RRID:AB_590975)、SGN-30(亦稱為cAC10，描述於例如Forero-Torreset al. , Br J Haematol (2009) 146:171–9)、MDX-060(描述於例如Ansellet al. , J Clin Oncol (2007) 25:2764–9; 亦稱為5F11, 伊妥木單抗(iratumumab)), 以及MDX-1401 (描述於例如Cardarelliet al. , Clin Cancer Res. (2009) 15(10):3376-83), 以及描述於WO 2020/068764 A1、WO 2003/059282 A2、WO 2006/089232 A2、 WO 2007/084672 A2、WO 2007/044616 A2、WO 2005/001038 A2、US 2007/166309 A1、US 2007/258987 A1、WO 2004/010957 A2及US 2005/009769 A1中的抗CD30抗體。

在一些實施態樣中，根據本揭露內容的一CD30結合域包含一抗CD30抗體之CDR。在一些實施態樣中，根據本揭露內容之一CD30結合域包含一抗CD30抗體的VH及VL區。在一些實施態樣中，根據本揭露內容之一CD30結合域包含一scFv，其包含一抗CD30抗體之VH及VL區。

存在若干用於定義抗體CDR及FR之不同慣例，諸如Kabatet al. , Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)、Chothiaet al. ,J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)中所描述者；及VBASE2，如Retteret al. ,Nucl. Acids Res . (2005) 33 (suppl 1): D671-D674中所描述。本文所述之抗體的VH區及VL區之CDR及FR係依據VBASE2界定。

在一些實施態樣中，本揭露內容之抗原結合域包含： 一VH，其併入有下列CDR： 具有SEQ ID NO:8之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:9之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:10之胺基酸序列的HC-CDR3， 或其於HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中之一或多者有一或二或三個胺基酸被另一胺基酸所取代之一變異體； 以及 一VL，其併入有下列CDR： 具有SEQ ID NO:11之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:12之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:13之胺基酸序列的LC-CDR3， 或其於LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中之一或多者有一或二或三個胺基酸被另一胺基酸取代之一變異體。

在一些實施態樣中，該抗原結合域包含： 一VH，包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO:14之胺基酸序列具有至少80%序列同一性(例如至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)； 以及 一VL，包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO:15之胺基酸序列具有至少80%序列同一性(例如至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)。

在一些實施態樣中，一CD30結合域可包含一單鏈可變片段(scFv)或由其所組成，該片段包含一VH序列及一VL序列，如本文所述。該VH序列及VL序列可為共價連接。在一些實施態樣中，該VH及VL序列係藉由一撓性連接子序列連接，例如如本文所描述之撓性連接子序列。該撓性連接子序列可接合至該VH序列及VL序列之末端，藉此連接VH及VL序列。在一些實施態樣中，VH及VL經由一連接子序列接合，該連接子序列包含SEQ ID NO:16或17之胺基酸序列或由其所組成。

在一些實施態樣中，該CD30結合域包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO: 18之胺基酸序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性。

在一些實施態樣中，該CD30結合域能夠結合至CD30於例如CD30的細胞外域。在一些實施態樣中，該CD30結合域能夠結合至CD30的表位，其係藉由抗體HRS3結合在例如根據SEQ ID NO:1編號之人類CD30胺基酸位置185-335區間內，示於SEQ ID NO:19(Schlapschyet al. , Protein Engineering, Design and Selection (2004) 17(12): 847–860,，其以全文引用之方式併入本文)。

在一些實施態樣中，一CD30結合域可包含一單鏈可變片段(scFv)或由其所組成，該片段包含一VH序列及一VL序列，如本文所述。該VH序列及VL序列可為共價連接。在一些實施態樣中，該VH及VL序列係藉由一撓性連接子序列連接，例如如本文所描述之撓性連接子序列。該撓性連接子序列可接合至該VH序列及VL序列之末端，藉此連接VH及VL序列。在一些實施態樣中，該VH及VL經由一連接子序列接合，該連接子序列包含SEQ ID NO:16之胺基酸序列或由其所組成。

在一些實施態樣中，該抗原結合域(且因此CAR)為多特異性的。「多特異性」意謂，抗原結合域展現出對多於一個標靶之特異性結合作用。在一些實施態樣中，該抗原結合域為雙特異性抗原結合域。在一些實施態樣中，抗原結合分子包含至少二個不同的抗原結合部分(即至少二個抗原結合部分，例如包含非同一的VH及VL)。多特異性抗原結合域之個別抗原結合部分，可例如經由連接子序列來連接。

在一些實施態樣中，該抗原結合域結合至至少兩個非同一的標靶抗原，而因此為至少雙特異性。術語「雙特異性」意謂抗原結合域能夠特異性結合至至少二個有區別的抗原決定子。在一些實施態樣中，多特異性抗原結合域/CAR之標靶抗原中的至少一者為CD30。

應瞭解，根據本揭露內容之一抗原結合域(例如多特異性抗原結合域)包含能夠結合至標靶的抗原結合部分，其中該抗原結合域對該標靶有特異性。舉例而言，能夠結合至CD30及除CD30外之抗原的一抗原結合域可包含：(i)能夠結合至CD30之一抗原結合部分，及(ii)能夠結合至除CD30外之標靶抗原的一抗原結合部分。

除CD30外之標靶抗原可為任何標靶抗原。在一些實施態樣中，該標靶抗原為一抗原，其表現/活性或其經上調之表現/活性係與一疾病或障礙(例如癌症、感染性疾病或自體免疫疾病)正相關。該標靶抗原較佳係表現在一表現該標靶抗原之細胞的細胞表面處。應瞭解，CAR主導了該表現CAR之細胞在對抗該表現標靶抗原之細胞/組織的效應活性，其中該CAR包含針對該標靶抗原之一特異性抗原結合域。

在一些實施態樣中，一標靶抗原可為一癌細胞抗原。一癌細胞抗原為由一癌細胞表現或過度表現之抗原。一癌細胞抗原可為任何胜肽/多肽、醣蛋白、脂蛋白、聚醣、醣脂、脂質，或其片段。一癌細胞抗原之表現可能與一癌症相關。一癌細胞抗原可由一癌細胞而異常表現(例如該癌細胞抗原可表現有異常定位)，或可由一癌細胞而表現有異常結構。一癌細胞抗原可能能夠引發一免疫反應。在一些實施態樣中，該抗原係在癌細胞之細胞表面表現(亦即該癌細胞抗原為一癌細胞表面抗原)。在一些實施例中，由本文中所描述之抗原結合分子結合之抗原部分顯示於該癌細胞之外表面(即細胞外)上。該癌細胞抗原可為一癌症相關抗原。在一些實施態樣中，該癌細胞抗原為一抗原，其表現係與一癌症之發展、進展或症狀嚴重程度相關。該癌症相關抗原可能與該癌症之病因或病理相關，或可能由於該癌症導致異常表現。在一些實施態樣中，該癌細胞抗原為由癌細胞上調表現(例如在RNA及/或蛋白質位準方面)之一抗原，其係相較於例如由可對比之非癌細胞(例如衍生自相同組織/細胞類型之非癌細胞)所致表現位準而言。在一些實施態樣中，該癌症相關抗原可優先由癌細胞表現，且不由可對比之非癌細胞(例如衍生自相同組織/細胞類型之非癌細胞)表現。在一些實施態樣中，該癌症相關抗原可為一突變致癌基因或突變腫瘤抑制基因的產物。在一些實施態樣中，該癌症相關抗原可為一過度表現細胞蛋白質、一由致癌病毒產生之癌症抗原、一致癌胚胎抗原或一細胞表面醣脂或醣蛋白的產物。

癌細胞抗原係綜述於Zarour HM, DeLeo A, Finn OJ,et al. Categories of Tumor Antigens. In: Kufe DW, Pollock RE、Weichselbaum RR,et al. , editors. Holland-Frei Cancer Medicine. 6th edition. Hamilton (ON): BC Decker; 2003。癌細胞抗原包括致癌胚胎抗原：CEA、未成熟層連結蛋白受體、TAG-72；致癌病毒抗原，諸如HPV E6及E7；過度表現蛋白：BING-4、鈣活化氯通道2、週期蛋白-B1、9D7、Ep-CAM、EphA3、HER2/neu、端粒酶、間皮素、 SAP-1、存活素；癌-睪丸抗原：BAGE、CAGE、GAGE、MAGE、SAGE、XAGE、CT9、CT10、NY-ESO-1、PRAME、SSX-2；譜系限制性抗原：MART1、Gp100、酪胺酸酶、TRP-1/2、MC1R、前列腺特異性抗原；突變抗原： β-連環蛋白、BRCA1/2、CDK4、CML66、纖維接合素、MART-2、p53、Ras、TGF-βRII；轉譯後改變之抗原：MUC1；遺傳型抗原：Ig、TCR。其他的癌細胞抗原包括熱休克蛋白70(HSP70)、熱休克蛋白90(HSP90)、葡萄糖調節蛋白78(GRP78)、波形蛋白、核仁素、胎兒腺泡胰蛋白(FAPP)、鹼性磷酸酶胎盤樣2(ALPPL-2)、唾液酸結合免疫球蛋白樣凝集素5(siglec-5)、壓力誘導磷蛋白1(STIP1)、蛋白質酪胺酸激酶7(PTK7)及親環素B。

在一些實施態樣中，該癌細胞抗原為Zhao and Cao, Front Immunol. 2019; 10: 2250中所描述之癌細胞抗原，其以全文引用的方式併入本文中。在一些實施態樣中，一癌細胞抗原係選自於CD30、CD19、CD20、CD22、ROR1R、CD4、CD7、CD38、BCMA、間皮素、EGFR、GPC3、MUC1、HER2、GD2、CEA、EpCAM、LeY及PSCA。

在一些實施態樣中，癌細胞抗原係由血液惡性病細胞所表現之抗原。在一些實施態樣中，癌細胞抗原係選自於CD30、CD19、CD20、CD22、ROR1R、CD4、CD7、CD38及BCMA。

在一些實施態樣中，一癌細胞抗原係由實體腫瘤細胞所表現之抗原。在一些實施態樣中，一癌細胞抗原係選自間皮素、EGFR、GPC3、MUC1、HER2、GD2、CEA、EpCAM、LeY及PSCA。 跨膜域

本揭露內容之CAR包含一跨膜域。一跨膜域係指由一胺基酸序列形成的任何三維結構，其於一生物膜(例如一細胞膜)中呈熱力學穩定。就本揭露內容而論，該跨膜域可為一胺基酸序列其跨越一表現CAR之細胞的細胞膜。

該跨膜域可包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列形成一疏水α螺旋或β桶形。本揭露內容之CAR跨膜域的胺基酸序列可為或可衍生自一包含跨膜域之蛋白的跨膜域胺基酸序列。跨膜域係記錄於資料庫中，諸如GenBank、UniProt、Swiss-Prot、TrEMBL、Protein Information Resource、Protein Data Bank、Ensembl及Inter Pro，及/或可使用例如胺基酸序列分析工具諸如TMHMM來鑑別/預估(Kroghet al. , 2001 J Mol Biol 305: 567-580)。

在一些實施態樣中，本揭露內容之CAR跨膜域的胺基酸序列可為或可衍生自在細胞表面處表現之一蛋白之跨膜域的胺基酸序列。在一些實施態樣中，在細胞表面處表現的蛋白為一受體或配體，例如一免疫受體或配體。在一些實施態樣中，該跨膜域之胺基酸序列可為或可衍生自下列之一的跨膜域之胺基酸序列：ICOS、ICOSL、CD86、CTLA-4、CD28、CD80、MHC第一型α、MHC第二型α、MHC第二型β、CD3ε、CD3δ、CD3γ、CD3-ζ、TCRα TCRβ、CD4、CD8α、CD8β、CD40、CD40L、PD-1、PD-L1、PD-L2、4-1BB、4-1BBL、OX40、OX40L、GITR、GITRL、TIM-3、半乳醣凝集素9、LAG3、CD27、CD70、LIGHT、HVEM、TIM-4、TIM-1、ICAM1、LFA-1、LFA-3、CD2、BTLA、CD160、LILRB4、LILRB2、VTCN1、CD2、CD48、2B4、SLAM、CD30、CD30L、DR3、TL1A、CD226、CD155、CD112及CD276。在一些實施態樣中，該跨膜域係為或係衍生自CD28、CD3-ζ、CD8α、CD8β或CD4之跨膜域的胺基酸序列。在一些實施態樣中，該跨膜域係為或係衍生自CD28之跨膜域的胺基酸序列。

在一些實施態樣中，該跨膜域包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO: 20之胺基酸序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的序列同一性。

在一些實施態樣中，該跨膜域包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO: 21之胺基酸序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的序列同一性。

在一些實施態樣中，該跨膜域包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO: 22之胺基酸序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的序列同一性。 信號傳導域

本發明之嵌合抗原受體包含一信號傳導域。該信號傳導域提供序列以在表現CAR之細胞中起始細胞內信號傳導作用。

該信號傳導域包含含ITAM之序列。含ITAM之序列包含一或多個基於免疫受體酪胺酸之活化模體(ITAM)。ITAM包含胺基酸序列YXXL/I (SEQ ID NO:23)，其中"X"表示任何胺基酸。在含ITAM之蛋白質中，根據SEQ ID NO:23之序列通常係經6至8個胺基酸分離；YXXL/I(X)_6-8 YXXL/I (SEQ ID NO:24)。當磷酸酯基藉由酪胺酸激酶而添加至ITAM之酪胺酸殘基時，一信號傳導級聯反應係於該細胞內被起始。

在一些實施態樣中，該信號傳導域包含根據SEQ ID NO:23或SEQ ID NO:24之胺基酸序列的一或多個拷貝。在一些實施態樣中，該信號傳導域包含根據SEQ ID NO:23之胺基酸序列的至少1、2、3、4、5或6個拷貝。在一些實施態樣中，該信號傳導域包含根據SEQ ID NO:24之胺基酸序列之至少1、2或3個拷貝。

在一些實施態樣中，該信號傳導域包含一胺基酸序列，其係為或係衍生自一蛋白質之含ITAM序列的胺基酸序列，該蛋白質具有一含ITAM之胺基酸序列。在一些實施態樣中，該信號傳導域包含一胺基酸序列，其係為或係衍生自CD3-ζ、FcγRI、CD3ε、CD3δ、CD3γ、CD79α、CD79β、FcγRIIA、FcγRIIC、FcγRIIIA、FcγRIV或DAP12中之一者的細胞內域之胺基酸序列。在一些實施態樣中，該信號傳導域包含一個胺基酸序列，其係為或係衍生自CD3-ζ的細胞內域。

在一些實施態樣中，該信號傳導域包含一胺基酸序列，其包含與SEQ ID NO:25之胺基酸序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性之一胺基酸序列或由其所組成。

該信號傳導域可額外包含一或多個共刺激序列。一共刺激序列係一胺基酸序列，供用於本揭露內容之該等表現CAR之細胞的共刺激作用。共刺激促進一表現CAR之細胞在結合至標靶抗原時起的增殖及存活，且亦可促進藉由該表現CAR之細胞的細胞激素生成、分化、細胞毒功能及記憶形成。T細胞共刺激之分子機制綜述於Chen and Flies, 2013 Nat Rev Immunol 13(4):227-242中。

一共刺激序列可為或可衍生自一共刺激蛋白的胺基酸序列。在一些實施態樣中，該共刺激序列係一胺基酸序列，其係為或係衍生自一共刺激蛋白之細胞內域的胺基酸序列。

在CAR與標靶抗原結合時起，該共刺激序列即向表現CAR之細胞提供共刺激作用，類似於藉同源配體的連接而衍生該共刺激序列的共刺激蛋白會提供的共刺激作用。舉例而言，在CAR包含一信號傳導域且其該信號傳導域包含衍生自CD28之一共刺激序列的情形時，與標靶抗原的結合係觸發在表現該CAR的細胞中的信號傳導，其類似於會被CD80及/或CD86與CD28的結合而觸發者。因此，一共刺測序列能夠傳遞衍生該共刺激序列之共刺激蛋白的共刺激信號。

在一些實施態樣中，該共刺激蛋白可為B7-CD28超家族的一成員(例如CD28、ICOS)或TNF受體超家族的一成員(例如4-1BB、OX40、CD27、DR3、GITR、CD30、HVEM)。在一些實施態樣中，該共刺激序列係為或係衍生自下列之一的細胞內域：CD28、4-1BB、ICOS、CD27、OX40、HVEM、CD2、SLAM、TIM-1、CD30、GITR、DR3、CD226及LIGHT。在一些實施態樣中，該共刺激序列係為或係衍生自CD28之細胞內域。

在一些實施態樣中，該信號傳導域包含多於一個非重疊共刺激序列。在一些實施態樣中，該信號傳導域包含1、2、3、4、5或6個共刺激序列。多個共刺激序列可呈串列方式提供。

一給定的胺基酸序列是否能起始藉由一給定共刺激蛋白所介導之信號傳導，可以藉由例如分析共刺激蛋白所介導之信號傳導的一相關物來檢視(例如一因子之表現/活性，且該因子的表現/活性係因該共刺激蛋白所介導之信號傳導而造成上調或下調)。

共刺激蛋白經由數種轉導路徑上調基因表現，而促進細胞生長、效應功能及存活。舉例而言，CD28及ICOS信號經由磷脂酸肌醇3激酶(PI3K)及AKT上調基因之表現而促進細胞生長、效應功能及存活，其係通過NF-κB、mTOR、NFAT及AP1/2。CD28亦經由CDC42/RAC1活化AP1/2，經由RAS活化ERK1/2，且ICOS活化C-MAF。4-1BB、OX40及CD27經由MAPK路徑募集TNF受體相關因子(TRAF)及信號，亦經由PI3K募集。

在一些實施態樣中，該信號傳導域包含一共刺激序列，其係為或係衍生自CD28。

在一些實施態樣中，該信號傳導域包含一共刺激序列，其包含與SEQ ID NO:26之胺基酸序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性之一胺基酸序列或由其所組成。

Kofleret al. Mol. Ther. (2011) 19: 760-767描述一變異體CD28細胞內域，其中Lck激酶結合位點係突變以便減少CAR連接時對IL-2生成的誘導，從而使調節T細胞介導之CAR-T細胞活性抑止作用最小化。變異體CD28細胞內域的胺基酸序列係示於SEQ ID NO:27。

在一些實施態樣中，該信號傳導域包含一共刺激序列，其包含與SEQ ID NO:27之胺基酸序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性之一胺基酸序列或由其所組成。

在一些實施態樣中，該信號傳導域包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO: 28之胺基酸序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的序列同一性。 鉸鏈區

CAR可進一步包含一鉸鏈區。該鉸鏈區可被提供在介於該抗原結合域與該跨膜域之間。該鉸鏈區亦可稱為一間隔區。一鉸鏈區係一胺基酸序列，其提供CAR之抗原結合和跨膜域之撓性連接。

鉸鏈區之存在、不存在及長度，已顯示會影響CAR功能(綜述於例如前述Dottiet al. , Immunol Rev (2014) 257(1))。

在一些實施態樣中，CAR包含一鉸鏈區，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列係為或係一衍生自人類IgG1之CH1-CH2鉸鏈區、一衍生自CD8α之鉸鏈區(例如WO 2012/031744 A1中所描述者)、或一衍生自CD28之鉸鏈區(例如WO 2011/041093 A1中所描述者)。在一些實施態樣中，CAR包含衍生自人類IgG1之CH1-CH2鉸鏈區的鉸鏈區。

在一些實施態樣中，該鉸鏈區包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO: 29或30之胺基酸序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的序列同一性。

在一些實施態樣中，CAR包含一鉸鏈區，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列係為或係衍生自人類IgG1之CH2-CH3區(亦即Fc區)。

在一些實施態樣中，該鉸鏈區包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO: 31之胺基酸序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的序列同一性。

Hombachet al. , Gene Therapy (2010) 17:1206-1213描述活性降低之表現FcγR之細胞(諸如單核球及NK細胞)的變異體CH2-CH3區。變異體CH2-CH3區之胺基酸序列係示於SEQ ID NO:32。

在一些實施態樣中，該鉸鏈區包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO: 32之胺基酸序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的序列同一性。

在一些實施態樣中，鉸鏈區包含下述或由下述所組成：一胺基酸序列，其係為或係衍生自人類IgG1之CH1-CH2鉸鏈區；及一胺基酸序列，其係為或係衍生自人類IgG1之CH2-CH3區(亦即Fc區)。

在一些實施態樣中，該鉸鏈區包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO: 33之胺基酸序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的序列同一性。 額外序列

CAR可額外包含一信號胜肽(亦稱為一前導序列或信號序列)。信號胜肽通常由5-30個疏水性胺基酸之序列組成，其形成單一α螺旋。分泌蛋白及在細胞表面處表現之蛋白質常包含信號胜肽。信號胜肽對於多種蛋白質係已知且記錄於諸如GenBank、UniProt及Ensembl之資料庫中，及/或可使用例如胺基酸序列分析工具來鑑別/預估，諸如SignalP(Petersenet al. , 2011 Nature Methods 8: 785-786)或Signal-BLAST (Frank and Sippl, 2008 Bioinformatics 24: 2172-2176)。

該信號胜肽可存在於CAR之N端處，且可存在於新合成之CAR中。該信號胜肽提供CAR向細胞表面之高效運輸。信號胜肽係藉由裂解移除，因此不含於該細胞表面所表現的成熟CAR中。

在一些實施態樣中，該信號胜肽包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO: 34之胺基酸序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的序列同一性。

在一些實施態樣中，CAR在不同域(亦即抗原結合域、鉸鏈區、跨膜域、信號傳導域)之間包含一或多個連接子序列。在一些實施態樣中，CAR在該等域之子序列間(例如在一抗原結合域的VH與VL之間)包含一或多個連接子序列。

連接子序列為習於此藝者所知，並且描述於例如Chenet al. , Adv Drug Deliv Rev (2013) 65(10): 1357-1369，其以全文引用之方式併入本文中。在一些實施態樣中，一連接子序列可為一撓性連接子序列。撓性連接子序列允許由該連接子序列連接之胺基酸序列的相對移動。撓性連接子為習於此藝者所知，並且有數種鑑別於Chenet al. , Adv Drug Deliv Rev (2013) 65(10): 1357-1369。撓性連接子序列常包含高比例之甘胺酸及/或絲胺酸殘基。在一些實施態樣中，該連接子序列包含至少一甘胺酸殘基及/或至少一絲胺酸殘基。在一些實施態樣中，該連接子序列係由甘胺酸及絲胺酸殘基所組成。在一些實施態樣中，該連接子序列具有1-2、1-3、1-4、1-5、1-10、1-20、1-30、1-40或1-50個胺基酸的長度。

在一些實施態樣中，一連接子序列包含SEQ ID NO:16所示胺基酸序列或由其所組成。在一些實施態樣中，一連接子序列包含SEQ ID NO:16所示胺基酸序列之1、2、3、4或5個串聯拷貝或由其所組成。

CAR可額外包含另外的胺基酸或胺基酸序列。舉例而言，該抗原結合分子及多肽可包含有助於表現、摺疊、運輸、加工、純化或偵測的胺基酸序列。舉例而言，CAR可任擇地在N端或C端處包含一編碼His(例如6XHis)、Myc、GST、MBP、FLAG、HA、E或生物素標籤的序列。在一些實施態樣中，CAR包含可偵測部分，例如螢光、發光、免疫可偵測、放射、化學、核酸或酶標記。 特定的例示性CAR

在本揭露內容的一些實施態樣中，該CAR係包含下述或由下述所組成：抗CD30 HRS3 scFv域之一細胞外部分，其連接至衍生自人類IgG1之CH2-CH3的間隔及鉸鏈區、CD28之跨膜域及細胞內域，及CD3ζ之細胞內域。

在本揭露內容的一些實施態樣中，該CAR係包含下述或由下述所組成： 一抗原結合域，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO:18之胺基酸序列具有至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的序列同一性； 一鉸鏈區，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO:33之胺基酸序列具有至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的序列同一性； 一跨膜域，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO:20具有至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的序列同一性；以及 一信號傳導域，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO:28之胺基酸序列具有至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的序列同一性。

在本揭露內容的一些實施態樣中，該CAR包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列係與SEQ ID NO:35或36之胺基酸序列具有至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的序列同一性。 在一些實施態樣中，該CAR係選自下述文獻所描述之CD30特異性CAR的一實施態樣：Hombachet al. Cancer Res. (1998) 58(6):1116-9、Hombachet al. Gene Therapy (2000) 7:1067-1075、Hombachet al. J Immunother. (1999) 22(6):473-80、Hombachet al. Cancer Res. (2001) 61:1976-1982、Hombachet al. J Immunol (2001) 167:6123-6131、Savoldoet al. Blood (2007) 110(7):2620-30、Koehleret al. Cancer Res. (2007) 67(5):2265-2273、Di Stasiet al. Blood (2009) 113(25):6392-402、Hombachet al. Gene Therapy (2010) 17:1206-1213、Chmielewskiet al. Gene Therapy (2011) 18:62-72、Kofleret al. Mol. Ther. (2011) 19(4):760-767、Gilham, Abken and Pule. Trends in Mol. Med. (2012) 18(7):377-384、Chmielewskiet al. Gene Therapy (2013) 20:177-186、Hombachet al. Mol. Ther. (2016) 24(8):1423-1434、Ramos et al. J. Clin. Invest. (2017) 127(9):3462-3471、WO 2015/028444 A1或WO 2016/008973 A1，其等均以全文引用之方式併入本文中。

表現CD30特異性CAR之T細胞

本揭露內容之多個方面涉及包含/表現CD30特異性嵌合抗原受體(CAR)的免疫細胞，特別是表現CD30特異性CAR之T細胞。

應瞭解，當本文將細胞記載為單數形時(亦即「一/該細胞」)，亦涵蓋該細胞之複數形/群體。

表現CAR之T細胞可表現或包含如本揭露內容的CAR。表現CAR之T細胞可包含或表現編碼如本揭露內容之CAR的核酸。將可以理解的是一表現CAR之細胞包含其所表現的CAR。亦應瞭解，一表現編碼CAR之核酸的細胞，亦表現並包含由該核酸所編碼之CAR。

T細胞可表現例如CD3多肽(例如CD3γ、CD3ε、CD3ζ或CD3δ)、TCR多肽(TCRα或TCRβ)、CD 27、CD28、CD4或CD8。在一些實施態樣中，該T細胞係一CD3+ T細胞。在一些實施態樣中，該T細胞係一CD3+、CD4+ T細胞。在一些實施態樣中，該T細胞係一CD3+、CD8+ T細胞。在一些實施態樣中，該T細胞係一T輔助細胞(T_H 細胞))。在一些實施態樣中，該T細胞係一胞毒型T細胞(例如一胞毒型T淋巴球(CTL))。

用於產生表現CAR之T細胞的方法為習於此藝者所熟知。彼等一般涉及將T細胞修飾以表現/包含一CAR，例如將編碼一CAR的核酸導入T細胞內。

T細胞(可經修飾以包含/表現一本文所述之CAR或編碼CAR之核酸，根據習於此藝者所熟知的方法進行。該等方法通常包含核酸轉送，以供永久(穩定)或暫時表現所轉送之核酸。

可使用任何適宜的基因工程改造平臺來修飾如本揭露內容之一細胞。適用於修飾細胞之方法包括使用基因工程改造平臺，諸如γ逆轉錄病毒載體、慢病毒載體、腺病毒載體、DNA轉染作用、轉位子式基因遞送及RNA轉染作用，例如Mauset al. , Annu Rev Immunol (2014) 32:189-225所描述者，其以全文引用方式併入本文中。

方法亦包括例如Wang and Rivière Mol Ther Oncolytics. (2016) 3:16015所描述者，其以全文引用的方式併入本文中。將核酸/載體導入至細胞中之適宜方法包括轉導、轉染及電穿孔。

用於產生/擴增表現CAR之T細胞群體的活體外/離體方法為習於此藝者所熟知。適宜的培養條件(亦即細胞培養基、添加劑、刺激、溫度、氣體氛圍)、細胞數目、培養期間及用於將編碼CAR之核酸導入細胞內之方法等等可參考例如下述文獻來測定：Hombachet al. J Immunol (2001) 167:6123-6131、Ramoset al. J. Clin. Invest. (2017) 127(9):3462-3471及WO 2015/028444 A1，其等皆以全文引用之方式併入本文中。

合宜地，如本揭露內容之細胞培養物可保持在37℃下於含有5% CO₂ 之潮濕氛圍中。細胞培養物的細胞可在任何適宜之密度下建立及/或維持，其可由習於此藝者容易地測定。

培養可在任何適合培養體積的器皿內執行，例如於細胞培養盤之孔、細胞培養瓶、生物反應器等等。在一些實施態樣中，細胞係培養於一生物反應器內，例如Somerville and Dudley, Oncoimmunology (2012) 1(8):1435-1437所描述的生物反應器，其係以全文引用方式併入本文中。在一些實施態樣中，細胞係於一GRex細胞培養器皿中培養，例如一GRex燒瓶或一GRex 100生物反應器。

T細胞可在編碼CAR之核酸導入前活化。舉例而言，PBMC群體內之T細胞可藉由活體外刺激而非特異性活化，該刺激係以促效劑抗CD3及促效劑抗CD28抗體在IL-2存在下進行。

將核酸/載體導入至一細胞中可包含轉導，例如反轉錄病毒轉導。因此，在一些實施態樣中，該(等)核酸係含於病毒載體中，或該(等)載體為病毒載體。以病毒載體轉導免疫細胞係例如描述於Simmons and Alberola-Ila, Methods Mol Biol. (2016) 1323:99-108，其係以全文引用方式併入本文中。

可運用試劑來增強轉導效率。海美溴銨(聚凝胺)為一陽離子性聚合物，其通常用於改良轉導，係經由中和病毒粒子與表現在細胞表面上之唾液酸殘基間的電荷互斥作用來進行。常用於增強轉導之其他試劑包括例如基於泊洛沙姆之試劑，諸如LentiBOOST (Sirion Biotech)、Retronectin (Takara)、Vectofusin (Miltenyi Biotech)還有SureENTRY (Qiagen)及ViraDuctin (Cell Biolabs)。

在一些實施態樣中，該等方法包含將細胞離心，並需要在細胞培養基的存在下將編碼CAR之核酸導入該細胞中，且該細胞培養基包含含有該核酸之病毒載體(於本技藝中稱為『離心感染』) 。

在一些實施態樣中，該方法包含藉由電穿孔將如本揭露內容之核酸或載體導入，例如Kohet al. , Molecular Therapy – Nucleic Acids (2013) 2, e114所描述者，其係以全文引用方式併入本文中。

該等方法通常包含將一編碼CAR之核酸導入一細胞中，及在適合該細胞表現該核酸/CAR的條件下培養該細胞。在一些實施態樣中，該等方法包含培養T細胞，且該等T細胞已被導入編碼CAR之核酸以便擴增其數目。在一些實施態樣中，該等方法包含培養T細胞，且該等T細胞已在IL-7及/或IL-15(例如重組IL-7及/或IL-15)的存在下被導入編碼CAR之核酸。

在一些實施態樣中，該等方法進一步包含從例如其他細胞(例如不表現CAR之細胞)純化/分離表現CAR之T細胞。從異質細胞群體純化/分離免疫細胞的方法係本技藝所熟知，並可使用例如基於FACS或MACS之方法，根據免疫細胞標記物之表現來分選細胞群體。在一些實施態樣中，該等方法純化/分離一特定類型的細胞，例如表現CAR的CD8+T細胞、表現CAR之CTL)。

於較佳的實施態樣中，可藉由一程序而從PBMC群體內之T細胞產生表現CD30特異性CAR之T細胞，該程序包含：以拮抗劑抗CD3及抗CD28抗體來刺激PBMC，以一編碼該CD30特異性CAR之病毒載體(例如γ-反轉錄病毒載體)來轉導細胞，以及隨後於IL-7及IL-15存在下培養細胞。

根據本揭露內容之表現CD30特異性CAR之T細胞，可展現一T細胞在對CD30或包含/表現CD30之細胞反應時的某些功能特性。在一些實施態樣中，該等特性為與效應T細胞(例如胞毒型T細胞)有關連的功能特性。

在一些實施態樣中，表現CD30特異性CAR之T細胞可展現以下特性中之一或多者：對包含/表現CD30之細胞的細胞毒性；對CD30帶來之刺激反應時、或對暴露於包含/表達CD30之細胞而反應時的增殖、IFNγ表現、CD107a表現、IL-2表現、TNFα表現、穿孔蛋白表現、顆粒酶表現、顆粒溶解素表現，及/或FAS配體(FASL)表現；抗癌活性(例如對癌細胞之細胞毒性、腫瘤生長抑制、轉移減少等)，其係針對包含表現CD30之細胞的癌症。

可藉由分析細胞分裂或細胞隨時間推移之數目來研究細胞增殖/群體擴增。細胞分裂可例如藉由活體外分析³ H-胸苷之併入或藉由CFSE稀釋檢定來分析，如Fulcher and Wong, Immunol Cell Biol (1999) 77(6): 559-564所述，其以全文引用之方式併入本文中。增殖性細胞亦可藉由分析5-乙炔基-2'-脫氧尿苷(EdU)之併入，藉由適當檢定來鑑別，例如Bucket al. , Biotechniques. 2008 Jun; 44(7):927-9及Sali and Mitchison, PNAS USA 2008 Feb 19; 105(7): 2415–2420中所描述者，兩者以全文引用之方式併入本文中。

在本文使用時，「表現」可為基因或蛋白質表現。基因表現涵蓋DNA至RNA之轉錄，且可藉由習於此藝者已知之各種手段來量測，例如藉由利用定量即時PCR(qRT-PCR)或藉由基於報導子之方法來量測mRNA之位準。類似地，蛋白質表現可藉由本技藝所熟知之各種方法來量測，例如藉由基於抗體之方法，舉例而言為藉由西方墨點法、免疫組織化學、免疫細胞化學、流動式細胞測量術、ELISA、ELISPOT或基於報導子的方法。

細胞毒性及細胞殺滅可例如使用Zaritskayaet al. , Expert Rev Vaccines (2011), 9(6):601-616所綜述之任一方法來探究，其以全文引用之方式併入本文中。細胞毒性/細胞殺滅檢定之活體外檢定實例包括釋放檢定，諸如⁵¹ Cr釋放檢定、乳酸脫氫酶(LDH)釋放檢定、3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑鎓溴化物(MTT)釋放檢定，及鈣黃綠素-乙醯氧基甲基(鈣黃綠素-AM)釋放檢定。此等檢定係根據自溶解細胞釋放之因子的偵測來量測細胞殺滅。一給定之細胞類型之細胞殺滅可例如藉由以下方式分析：將測試細胞與給定細胞類型共培養，並在適當的時間期間後量測活/死亡測試細胞的細胞數目/比例。

細胞可以藉由就適當的活體外檢定或相關癌症之體內模型進行分析來評估抗癌活性。 淋巴清除化學療法

本揭露內容之多個方面係使用淋巴清除化學療法。

在本文使用時，「淋巴清除化學療法」係指以一化學治療劑進行的治療，該化學治療劑在投予治療之個體內導致淋巴球(例如T細胞、B細胞、NK細胞、NKT細胞或先天性淋巴樣細胞(ILC)或其前體)的清除。「淋巴清除化學治療劑」係指導致淋巴球清除的化學治療劑。

淋巴清除化學療法及其在藉由過繼細胞轉移之治療方法中的用途，係描述於例如Klebanoff et al., Trends Immunol. (2005) 26(2):111-7及Muranski et al., Nat Clin Pract Oncol. (2006) (12):668-81中，兩者均以全文引用之方式併入本文中。淋巴清除化學療法之目標是清除受領個體之內源性淋巴球群體。

在藉由免疫細胞之過繼轉移進行疾病治療的情況中，淋巴清除化學療法通常在過繼細胞轉移前投予，用以調整該受領個體以接受經過繼轉移的細胞。淋巴清除化學療法被認為藉由下述而促進過繼轉移之細胞的持續性與活性：經由例如將表現免疫抑止性細胞激素的細胞去除，而產生一許可環境；及產生『淋巴空間』，其係過繼轉移之淋巴樣細胞之擴增及活性所需。

常用於淋巴清除化學療法中之化學治療劑包括例如氟達拉濱、苯達莫司汀、環磷醯胺及噴司他丁(pentostatin)。 本揭露內容之多個方面與實施態樣係特別關注於淋巴清除化學療法，其包含投予可氟達拉濱及/或苯達莫司汀。在特定實施態樣中，根據本揭露內容之淋巴清除化學療法包含投予氟達拉濱及苯達莫司汀。

氟達拉濱是一種嘌呤類似物，其藉由干擾核糖核苷酸還原酶及DNA聚合酶而抑制DNA合成。其通常用作一化學治療劑，用於治療白血病(尤其慢性淋巴球性白血病、急性骨髓性白血病、急性淋巴球性白血病)及淋巴瘤(尤其非何杰金氏淋巴瘤)。可靜脈內或經口投予氟達拉濱。

苯達莫司汀是一種烷化劑，其在DNA鹼基之間引起股內與股內交聯。其通常用作一化學治療劑，用於治療慢性淋巴球性白血病、多發性骨髓瘤及非何杰金氏淋巴瘤。苯達莫司汀通常為靜脈內投予。 治療方法

本揭露內容提供用於治療CD30陽性癌症之方法、用於此類方法之製品，及該製品用於製造該等方法所用藥劑的用途。

該等方法通常包含對患有CD30陽性癌症之個體投予一淋巴清除化學療法，且隨後對該個體投予表現CD30特異性CAR之T細胞。

具體而言，本揭露內容提供一種治療一個體中之一CD30陽性癌症的方法，其包括：(i)對該個體投予一淋巴清除化學療法，及(ii)隨後對該個體投予表現CD30特異性CAR之T細胞。

本揭露內容亦提供一種表現CD30特異性CAR之T細胞(例如此等細胞之群體)，其係供使用在治療一CD30陽性癌症之方法中，其中該方法包含：(i)對該個體投予一淋巴清除化學療法，及(ii)隨後對該個體投予CD30特異性CAR-T細胞。本揭露內容亦提供一種表現CD30特異性CAR之T細胞(例如此等細胞之群體)於製造一藥劑之用途，該藥劑係供使用在治療一CD30陽性癌症之方法中，其中該方法包含：(i)對該個體投予一淋巴清除化學療法，及(ii)隨後對該個體投予CD30特異性CAR-T細胞。

本揭露內容亦提供一種淋巴清除化學治療劑(例如氟達拉濱及/或良性)，供使用在一治療CD30陽性癌症之方法中，其中該方法包含：(i)對該個體投予一淋巴清除化學療法(例如包含投予氟達拉濱及/或苯達莫司汀)，及(ii)隨後對該個體投予CD30特異性CAR-T細胞。本揭露內容亦提供一種淋巴清除化學治療劑(例如氟達拉濱及/或苯達莫司汀)於製造一藥劑之用途，該藥劑係供使用在一治療CD30陽性癌症之方法中，其中該方法包含：(i)對該個體投予一淋巴清除化學療法(例如包含投予氟達拉濱及/或苯達莫司汀)，及(ii)隨後對該個體投予CD30特異性CAR-T細胞。

本揭露內容亦提供一種用於一治療CD30陽性癌症之方法中的氟達拉濱，其中該方法包含：(i)對該個體投予一淋巴清除化學療法，其包含投予氟達拉濱(例如一種包含投予氟達拉濱及苯達莫司汀的淋巴清除化學療法)，及(ii)隨後對該個體投予CD30特異性CAR-T細胞。本揭露內容亦提供一種氟達拉濱於製造一藥劑之用途，該藥劑係供使用在一治療CD30陽性癌症之方法中，其中該方法包含：(i)該個體投予一淋巴清除化學療法，其包含投予氟達拉濱(例如一種包含投予氟達拉濱及苯達莫司汀的淋巴清除化學療法)，及(ii)隨後對該個體投予CD30特異性CAR-T細胞。

本揭露內容亦提供一種用於一治療CD30陽性癌症之方法中的苯達莫司汀，其中該方法包含：(i)對該個體投予一淋巴清除化學療法，其包含投予苯達莫司汀(例如一種包含投予氟達拉濱及苯達莫司汀的淋巴清除化學療法)，及(ii)隨後對該個體投予CD30特異性CAR-T細胞。本揭露內容亦提供一種苯達莫司汀於製造一藥劑之用途，該藥劑係供使用在一治療CD30陽性癌症之方法中，其中該方法包含：(i)該個體投予一淋巴清除化學療法，其包含投予苯達莫司汀(例如一種包含投予氟達拉濱及苯達莫司汀的淋巴清除化學療法)，及(ii)隨後對該個體投予CD30特異性CAR-T細胞。

本揭露內容亦提供氟達拉濱與苯達莫司汀之組合物(例如一包含氟達拉濱及苯達莫司汀之醫藥組成物或組合物)，供使用在一治療CD30陽性癌症之方法中，其中該方法包含：(i)對該個體投予一淋巴清除化學療法，其包含投予氟達拉濱及苯達莫司汀，及(ii)隨後對該個體投予CD30特異性CAR-T細胞。本揭露內容亦提供氟達拉濱與苯達莫司汀之組合物(例如一包含氟達拉濱及苯達莫司汀之藥學組成物或組合物)於製造一藥劑之用途，該藥劑係供使用在一治療CD30陽性癌症之方法中，其中該方法包含：(i)對該個體投予一淋巴清除性化學療法，其包含投予氟達拉濱及苯達莫司汀，及(ii)隨後對該個體投予CD30特異性CAR-T細胞。

根據本揭露內容之方法的細胞及化學治療劑之投予，較佳係呈一「治療有效 」量，此係足以對該個體展現治療效益。

實際投予量及投予之速率與時程，將依所欲治療之癌症的性質與嚴重程度性及該劑之性質而定。例如對劑量之決定等治療處方屬於全科醫師及其他醫生之責任，且典型地考慮要治療之癌症、個別個體之病況、遞送部位、投予方法及醫師已知之其他因素。上文所提及之技術及方案之實例可見於Remington’s Pharmaceutical Sciences, 20th Edition, 2000, pub. Lippincott, Williams & Wilkins。

針對根據本揭露內容之投藥，細胞及化學治療劑較佳係調配為藥劑或醫藥組成物，其包含習於此藝者熟知之藥學上可接受之成分，包括(但不限於)藥學上可接受之載劑、佐劑、賦形劑、稀釋劑、填充劑、緩衝劑、防腐劑、抗氧化劑、潤滑劑、穩定劑、增溶劑、界面活性劑(例如潤濕劑)、掩蔽劑、著色劑、調味劑及甜味劑。

在本文使用時，術語「藥學上可接受」係關於化合物、成分、材料、組成物、劑型等，其在合理的醫療判斷之範疇內，適用於與所討論之個體(例如人類)的組織接觸，而無過度毒性、刺激、過敏性反應或其他問題或併發症，與合理的益處/風險比相匹配。各載劑、佐劑、賦形劑等必須在與調配物之其他成分相容的意義上亦為「可接受」。適合載劑、佐劑、賦形劑等可見於標準醫藥教材，例如Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1990；及Handbook of Pharmaceutical Excipients, 2nd edition, 1994。

調配物可藉由藥劑學技術中熟知之任何方法來製備。此類方法包括使相關活性劑與構成一或多種附屬成分之載劑締合的步驟。一般而言，調配物藉由均一地且緊密地使活性化合物與載劑(例如，液體載劑、細粉狀固體載劑等)締合，且隨後必要時使產物進行成形來製備。

本揭露內容之細胞與化學治療劑可針對一投藥模式調配，該模式係依據該劑與要治療之癌症而為可接受。舉例而言，根據本發明之細胞及化學治療劑可經調配以供血管內投藥，例如對一個體作靜脈注射或輸注。適宜的調配物可在無菌或等張培養基中包含所選藥劑。

在一些實施態樣中，根據本揭露內容投予一淋巴清除化學療法，較佳係包含投予氟達拉濱及苯達莫司汀。

根據本揭露內容之淋巴清除化學療法之療程可包含多次投予一或多個化學治療劑。淋巴清除化學療法之療程可包含以本文所述之一劑量投予氟達拉濱及苯達莫司汀，並持續本文所述之天數。作為例示，一淋巴清除化學療法之療程可包含以每天30mg/m² 之一劑量投予氟達拉濱連續3天，且以每天70mg/m² 之一劑量投予苯達莫司汀連續3天。

根據一淋巴清除化學療法之療程的化學治療劑最終劑量投予日，可視為該淋巴清除化學療法之療程完成當天。

在一些實施態樣中，氟達拉濱係以每天5至100mg/m² 之一劑量投予，例如下述之一者：每天15至90mg/m² 、每天15至80mg/m² 、每天15至70mg/m² 、每天15至60mg/m² 、每天15至50mg/m² 、每天10至40mg/m² 、每天5至60mg/m² 、每天10至60mg/m² 、每天15至60mg/m² 、20至60mg/m² ，或每天25至60mg/m² 。在一些實施態樣中，氟達拉濱係以每天20至40mg/m² 之一劑量投予，例如每天25至35mg/m² ，例如每天約30mg/m² 。

在一些實施態樣中，係以根據前述段落之一劑量投予氟達拉濱連續大於一天且小於14天。在一些實施態樣中，係以根據前述段落之一劑量投予氟達拉濱連續2至14、例如2至13、2至12、2至11、2至10、2至9、2至8、2至7、2至6、2至5或2至4天中之一者。在一些實施態樣中，係以根據前述段落之一劑量投予氟達拉濱連續2至6天，例如連續2至4天，例如連續3天。

在一些實施態樣中，係以每天15至60mg/m² 之一劑量投予氟達拉濱連續2至6天，例如以每天30mg/m² 之一劑量連續3天。

在一些實施態樣中，苯達莫司汀係以每天10至200mg/m² 之劑量投予，例如下述之一者：每天35至180mg/m² 、每日35至160mg/m² 、每天35至140mg/m² 、每天35至120mg/m² 、每天35至100mg/m² 、每天35至80mg/m² 、每天10至100mg/m² 、每天15至100mg/m² 、每天20至100mg/m² 、每天25至100mg/m² 、每天30至100mg/m² 、每天35至100mg/m² 、每天40至100mg/m² 、每日45至100mg/m² 、每天50至100mg/m² 、55至100mg/m² 、60至100mg/m² 、或每天65至100mg/m² 。

在一些實施態樣中，係以根據前述段落之一劑量投予苯達莫司汀連續大於一天且小於14天。在一些實施態樣中，係以根據前述段落之一劑量投予苯達莫司汀連續2至14、例如2至13、2至12、2至11、2至10、2至9、2至8、2至7、2至6、2至5或2至4天中之一者。在一些實施態樣中，係以根據前述段落之一劑量投予苯達莫司汀連續2至6天，例如連續2至4天，例如連續3天。

在一些實施態樣中，係以每天35至140mg/m² 之一劑量投予苯達莫司汀連續2至6天，例如以每天70mg/m² 之一劑量連續3天。

在一些實施態樣中，該等方法包含以每天15至60mg/m² (例如每天30mg/m² )之一劑量投予氟達拉濱並以每天35至140mg/m² (例如每天70mg/m² )之一劑量投予苯達莫司汀，連續2至6天(例如連續3天)。

在一些實施態樣中，氟達拉濱及苯達莫司汀可同時或依序投予。同時投予係指一起投予(例如作為含有兩種試劑之一醫藥組合物(即組合製劑))或緊接著先後投予，且可選地經由相同投予途徑，例如投予至相同動脈、靜脈或其他血管。依序投予係指投予其中一試劑，繼而在一給定時間間隔後單獨投予另一試劑。該等試劑並不需要由相同途徑投予，但在一些實施態樣中確實相同。

在根據本揭露內容之淋巴清除化學療法療程的一些實施態樣中，氟達拉濱及苯達莫司汀係在同一天或數天投予。作為例示，在包含以每天30mg/m² 之一劑量投予氟達拉濱連續3天並以每天70mg/m² 之一劑量投予苯達莫司汀連續3天的一淋巴清除化學療法之療程的實例中，可在相同的連續3天投予氟達拉濱及苯達莫司汀。在此一實例中，淋巴清除化學療法之療程，可謂在對該個體投予氟達拉濱及苯達莫司汀連續3天的最後一天完成。

淋巴清除化學療法可藉由靜脈輸注經適當的時間期間投予。在一些實施態樣中，一淋巴清除化學治療劑可藉由靜脈輸注歷經於15至60分鐘的期間投予，例如20至40分鐘，例如約30分鐘。

本揭露內容之多個方面亦包含投予表現CD30特異性CAR之T細胞至一患有CD30陽性癌症的個體。因此，該等方法涉及過繼細胞轉移。

過繼細胞轉移一般係指從一個體獲得細胞(例如免疫細胞)之程序，典型藉由抽取一血液樣本並從中分離細胞。該等細胞典型地會再經修飾及/或擴增，然後投予至相同個體(若為自體/同體細胞的過繼轉移)或至不同個體(若為同種異體細胞的過繼轉移)。過繼細胞轉移之典型目標係在於將具有特定所欲特徵的一細胞群體提供給一個體，或者增加該個體中具有該等特徵的該等細胞之頻率。執行過繼轉移之目標可為將一細胞或細胞群體導入一個體中，及/或增加一個體中的一細胞或細胞群體之頻率。

CD30特異性CAR之T細胞的過繼轉移係描述於例如Hombachet al. J Immunol (2001) 167:6123-6131、Ramoset al. J. Clin. Invest. (2017) 127(9):3462-3471及WO 2015/028444 A1，其等皆以引用之方式併入本文中。習於此藝者在參考該等文獻下能夠決定適當試劑與步驟順序以供過繼轉移依據本揭露內容之方法的細胞。

本揭露內容提供多種方法，其包含對一個體投予一包含/表現CD30特異性CAR之T細胞、或一包含/表現編碼CD30特異性CAR之核酸的T細胞。

在一些實施態樣中，該等方法包含修飾一T細胞以包含/表現CD30特異性CAR。在一些實施態樣中，該方法包含修飾一T細胞以包含/表現編碼CD30特異性CAR之核酸。

在一些實施態樣中，該等方法包含： (a)修飾一T細胞以表現或包含一CD30特異性CAR，或者以表現或包含編碼CD30特異性CAR之核酸；以及 (b)對一個體投予T細胞，其係經修飾以表現或包含CD30特異性CAR，或經修飾以表現或包含編碼CD30特異性CAR之核酸。

在一些實施態樣中，該等方法包含： (a)分離或獲得一包含T細胞之免疫細胞群體(例如PBMC)； (b)修飾一T細胞以表現或包含CD30特異性CAR，或以表現或包含編碼CD30特異性CAR之核酸；以及 (c)對一個體投予一T細胞，其係經修飾以表現或包含CD30特異性CAR，或經修飾以表現或包含編碼CD30特異性CAR之核酸。

在一些實施態樣中，該等方法包含： (a)從一個體分離或獲得一包含T細胞之免疫細胞群體(例如PBMC)； (b)修飾一T細胞以表現或包含一CD30特異性CAR，或者以表現或包含編碼CD30特異性CAR之核酸；以及 (c)對一個體投予一T細胞，其係經修飾以表現或包含CD30特異性CAR，或經修飾以表現或包含編碼CD30特異性CAR之核酸。

在一些實施態樣中，分離出包含T細胞之免疫細胞群體(例如PBMC)的個體係與該等細胞要投予的個體相同(亦即過繼轉移可出自自體/同體細胞)。在一些實施態樣中，分離出包含T細胞之免疫細胞群體(例如PBMC)的個體係與該等細胞要投予的個體為不同的個體(亦即過繼轉移可出自同種異體細胞)。

在一些實施態樣中，該等方法可包括下列一或多者： 從一個體獲得一血液樣本； 從獲自一個體之一血液樣本分離出一包含T細胞的免疫細胞群體(例如PBMC)； 於活體外或離體之細胞培養物中培養該免疫細胞； 修飾一T細胞以表現或包含CD30特異性CAR，或以表現或包含編碼CD30特異性CAR之核酸(藉由例如以一編碼此CAR之病毒載體或一包含此核酸之病毒載體進行轉導)； 於活體外或離體之細胞培養物中培養T細胞，其係經修飾以表現或包含CD30特異性CAR，或經修飾以表現或包含編碼CD30特異性CAR之核酸； 收集/分離T細胞，其係經修飾以表現或包含CD30特異性CAR，或經修飾以表現或包含編碼CD30特異性CAR之核酸； 將經修飾以表現或包含CD30特異性CAR、或經修飾以表現或包含編碼CD30特異性CAR之核酸的T細胞調配至一醫藥組成物中，例如藉由使細胞與一藥學上可接受的佐劑、稀釋劑或載劑混合； 對一個體投予經修飾以表現或包含CD30特異性CAR、或經修飾以表現或包含編碼CD30特異性CAR之核酸的T細胞，或一包含此等細胞的醫藥組成物。

在一些實施態樣中，該等方法可額外包含治療該細胞或個體以誘發/提升CAR表現及/或以誘發/提升包含/表現該CAR之細胞的增生或存活。

在一些實施態樣中，血液樣本可藉由靜脈切開放血術或白血球分離術獲得，兩者均為習於此藝者所熟知。藉由靜脈切開放血術獲得之血液樣本的總血液體積較佳係介於100ml至500ml之間，例如150ml至300ml，例如約200ml。血液樣本的收集，較佳為在對一個體依規劃投予表現CD30特異性CAR之T細胞前有足夠時間期間執行，以針對要投予個體的劑量生產足夠量的表現CD30特異性CAR之T細胞。在一些實施態樣中，一血液樣本係在對一個體依規劃投予表現CD30特異性CAR之T細胞前的6至8週獲得。

在本揭露內容之方法中，係於已對該個體投予淋巴清除化學療法之後，對該個體投予表現CD30特異性CAR之T細胞。

在一些實施態樣中，係於一淋巴清除化學療法療程(諸如本文所述之淋巴清除化學療法療程)完成後一特定的時間期間內，對一個體投予表現CD30特異性CAR之T細胞。亦即是在根據如本揭露內容之一淋巴清除化學療法的投予而進行之一化學治療劑的最終劑量投予日之後一特定時間期間內，對一個體投予表現CD30特異性CAR之T細胞。

在一些實施態樣中，係於本文所述之淋巴清除化學療法之一療程完成後1至28天內，例如1至21天、1至14天、1至7天、2至7天、2至5天或3至5天中之一者，對一個體投予表現CD30特異性CAR之T細胞。在一些實施態樣中，係於本文所述之淋巴清除化學療法之一療程完成後2至14天內，對一個體投予表現CD30特異性CAR之T細胞。在一些實施態樣中，係於本文所述之淋巴清除化學療法之一療程完成後3至5天內，對一個體投予表現CD30特異性CAR之T細胞。

在一些實施態樣中，表現CD30特異性CAR的T細胞係以1x10⁷ 個細胞/m² 至1x10⁹ 個細胞/m² 之劑量來投予，例如5x10⁷ 個細胞/m² 至1x10⁹ 個細胞/m² 、1x10⁸ 個細胞/m² 至9x10⁸ 個細胞/m² 、2x10⁸ 個細胞/m² 至8x10⁸ 個細胞/m² 、或2x10⁸ 個細胞/m² 至8x10⁸ 個細胞/m² 中之一者。在一些實施態樣中，表現CD30特異性CAR之T細胞係以1x10⁸ 個細胞/m² 至6x10⁸ 個細胞/m² 之劑量來投予。

在一些實施態樣中，表現CD30特異性CAR之T細胞係以2x10⁸ 個細胞/m² 之劑量來投予。在一些實施態樣中，表現CD30特異性CAR之T細胞係以4x10⁸ 個細胞/m² 之劑量來投予。在一些實施態樣中，表現CD30特異性CAR之T細胞係以6x10⁸ 個細胞/m² 之劑量來投予。

在一些實施態樣中，表現CD30特異性CAR之T細胞係以大於1x10⁸ 個細胞/m² 的劑量來投予，例如大於下述之之一劑量：2x10⁸ 個細胞/m² 、3x10⁸ 個細胞/m² 、4x10⁸ 個細胞/m² 、5x10⁸ 個細胞/m² 、6x10⁸ 個細胞/m² 、7x10⁸ 個細胞/m² 、8x10⁸ 個細胞/m² 。特別是在要治療的癌症為非何杰金氏淋巴瘤時考量此等實施態樣。在一些實施態樣中，表現CD30特異性CAR之T細胞係以2x10⁸ 個細胞/m² 至8x10⁸ 個細胞/m² 之劑量來投予。在一些實施態樣中，表現CD30特異性CAR之T細胞係以3x10⁸ 個細胞/m² 至8x10⁸ 個細胞/m² 之劑量來投予。在一些實施態樣中，表現CD30特異性CAR之T細胞係以4x10⁸ 個細胞/m² 至8x10⁸ 個細胞/m² 之劑量來投予。在一些實施態樣中，表現CD30特異性CAR之T細胞係以5x10⁸ 個細胞/m² 至8x10⁸ 個細胞/m² 之劑量來投予。在一些實施態樣中，表現CD30特異性CAR之T細胞係以6x10⁸ 個細胞/m² 至8x10⁸ 個細胞/m² 之劑量來投予。

在一些實施態樣中，表現CD30特異性CAR之T細胞係以每公斤體重1x10⁶ 至1x10⁷ 個細胞之劑量來投予，例如每公斤體重1.5x10⁶ 至9x10⁶ 個細胞、每公斤體重2.0x10⁶ 至8x10⁶ 個細胞、每公斤體重2.0x10⁶ 至6x10⁶ 個細胞或每公斤體重2.0x10⁶ 至5x10⁶ 個細胞中之一者。特別是在待治療之個體為50 kg以下時考量以此方式計算的劑量投予。

表現CD30特異性CAR之T細胞的投予可藉由靜脈輸注投予。投予可呈含有0.5至6×10⁷ 個細胞/ml之體積，例如1至3×10⁷ 個細胞/ml。

可提供多次(例如2、3、4以上)劑量的表現CD30特異性CAR之T細胞。多次劑量可相隔一預定的時間間隔，其可選自於下列中之一者：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或更多小時，或是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、或31天，或是1、2、3、4、5、或6個月。可依據該個體對治療之反應及/或表現CD30特異性CAR之T細胞的可用性，來決定再投予一或多劑表現CD30特異性CAR之T細胞。

在一些實施態樣中，本揭露內容之方法可包含進一步的治療性或預防性介入，例如額外的化學療法、免疫療法、放射線療法、外科手術、疫苗接種及/或荷爾蒙療法。根據本揭露內容之方法，此等進一步的治療性或預防性介入可在投予如本揭露內容之方法的淋巴清除化學療法或表現CD30特異性CAR之T細胞之前、期間及/或之後發生，並可有相同或不同投予途徑。

額外的化學療法可以使用一化學實體，例如小分子醫藥、抗生素、DNA嵌入劑、蛋白質抑制劑(例如激酶抑制劑)或生物製劑，例如抗體、抗體片段、適體、核酸(例如DNA、RNA)、胜肽、多肽或蛋白質。該藥物可調配成一醫藥組成物或藥劑。該調配物可以包含一或多種藥物(諸如一或多種活性製劑)連同一或多種藥學上可接受之稀釋劑、賦形劑或載劑。放射療法可採用游離輻射，例如使用X射線或γ射線之放射療法。

在投予依據本揭露內容之多個方面的淋巴清除化學療法及/或表現CD30特異性嵌合抗原受體(CAR)之T細胞之前，一個體可投予過渡性療法。可在血液樣本收集後且淋巴清除化學療法投予前，對該個體投予過渡性療法。過渡性療法係經設計的療法，用以協助該個體渡過根據本揭露內容之方法的治療。投予過渡性療法的決定取決於醫學從業者之裁量並由其控管。過渡性療法可包含對個體投予類固醇、化學療法、姑息性放射療法、一免疫檢查點抑制劑或抗CD30抗體中之一或多者。

在過渡性療法後可繼之以一廓清期，其係在投予根據本揭露內容之方法的淋巴清除化學療法之前。在根據如本揭露內容之淋巴清除化學療法投予第一劑淋巴清除化學治療劑之前，該廓清期確保對過渡性療法相關之毒性的充分恢復。適當的廓清期取決於所使用的特定過渡性療法。在投予類固醇作為過渡性療法時，廓清期可為1週。在投予化學療法作為過渡性療法時，廓清期可為3週。在投予姑息性放射療法作為過渡性療法時，廓清期可為2週。在投予免疫檢查點抑制劑作為過渡性療法時，廓清期可為3週。在投予抗CD30抗體作為過渡性療法時，廓清期可為8週。

下文描述根據本揭露內容之治療方法的特定例示性實施態樣。

在一些實施態樣中，該方法包含： (i)對一個體以30mg/m² /天之一劑量投予氟達拉濱且以70mg/m² /天之一劑量投予苯達莫司汀連續3天，及 (ii)在氟達拉濱及苯達莫司汀最後投予日後2至5天(例如2天)，對該個體以1x10⁸ 個細胞/m² 之劑量投予表現CD30特異性CAR之T細胞。

在一些實施態樣中，該方法包含： (i)對一個體以30mg/m² /天之一劑量投予氟達拉濱且以70mg/m² /天之一劑量投予苯達莫司汀連續3天，及 (ii)在氟達拉濱及苯達莫司汀最後投予日後2至5天(例如2天)，對該個體以2x10⁸ 個細胞/m² 之劑量投予表現CD30特異性CAR之T細胞。

在一些實施態樣中，該方法包含： (i)對一個體以30mg/m² /天之一劑量投予氟達拉濱且以70mg/m² /天之一劑量投予苯達莫司汀連續3天，及 (ii)在氟達拉濱及苯達莫司汀最後投予日後2至5天(例如2天)，對該個體以2x10⁸ 至6x10⁸ 個細胞/m² (例如4x10⁸ 個細胞/m² )之劑量投予表現CD30特異性CAR之T細胞。 個體

根據本揭露內容之多個方面，該個體可為任何動物或人類。該個體較佳為哺乳動物，更佳為人類。該個體可以為一非人類哺乳動物，但更佳為人類。該個體可為一患者。該個體可為雄性或雌性。該個體可為一成年個體(年齡≥18歲)、一兒科個體(年齡≤18歲)或一青春期個體(年齡≥12且≤21歲；例如青春早期(年齡≥12且≤14歲)、青春中期(年齡≥15且≤17歲)或青春晚期(年齡≥18且≤21歲))。該個體可為年齡≤75歲。 該個體可患有CD30陽性癌症(例如根據本文所述之一實施態樣的CD30陽性癌症)。該個體可具有CD30陽性腫瘤。該個體可為已確定患有CD30陽性癌症，可為已診斷出CD30陽性癌症，可為疑似患有CD30陽性癌症，或可處於患上CD30陽性癌症之風險下。在一些實施態樣中，可基於該個體患有CD30陽性癌症之確診選擇該個體來進行根據本揭露內容之方法的治療。根據經修訂之反應評價標準(Revised Criteria for Response Assessment)，該個體可具有至少一個可量測之病變：

盧加諾分類系統(描述於例如Cheson et al., J Clin Oncol (2014) 32: 3059-3068中，其以全文引用之方式併入本文中)。

該個體可為在對該癌症之治療後已復發的一個體。該個體可為已對該癌症之一治療(例如對該癌症之第一線療法)有反應，但該癌症可能隨後已再次出現/進展，例如在緩解期之後。

該個體可為對該癌症之一治療沒有反應的個體。該個體可能尚未對該癌症之一治療有反應(例如對該癌症之第一線療法)。個體可能未對該癌症之一治療(例如對該癌症之第一線療法)展現部分或完全反應。

就衍生依據本揭露內容之方法投予之表現CD30特異性CAR之T細胞的細胞來源而論，該個體可為同體/自體。待投予該表現CD30特異性CAR之T細胞的個體，可與提供血液樣本或細胞的個體相同，該血液樣本或細胞係用於產生表現CD30特異性CAR之T細胞。待投予該表現CD30特異性CAR之T細胞的個體，可與提供血液樣本或細胞的個體在基因上一致，該血液樣本或細胞係用於產生表現CD30特異性CAR之T細胞。待投予該表現CD30特異性CAR之T細胞的個體，可包含編碼MHC/HLA分子的MHC/HLA基因，該MHC/HLA分子等同於提供血液樣本或細胞的個體之MHC/HLA基因所編碼的MHC/HLA分子，該血液樣本或細胞係用於產生表現CD30特異性CAR之T細胞。

或者，就衍生依據本揭露內容之方法投予之表現CD30特異性CAR之T細胞的細胞來源而論，該個體可為同種異體/非自體。待投予該表現CD30特異性CAR之T細胞的個體，可為與提供血液樣本或細胞的個體為不同的個體，該血液樣本或細胞係用於產生表現CD30特異性CAR之T細胞。待投予該表現CD30特異性CAR之T細胞的個體，可與提供血液樣本或細胞的個體在基因上不一致，該血液樣本或細胞係用於產生表現CD30特異性CAR之T細胞。待投予該表現CD30特異性CAR之T細胞的個體，可包含編碼MHC/HLA分子的MHC/HLA基因，該MHC/HLA分子等同於提供血液樣本或細胞的個體之MHC/HLA基因所編碼的MHC/HLA分子，該血液樣本或細胞係用於產生表現CD30特異性CAR之T細胞。 以根據本揭露內容之治療達成的效應

本揭露內容之方法，可藉由參照下述來表徵：以該方法達成之治療效應及/或臨床結果。

以根據本揭露內容之方法治療一個體，係實現下列治療效應中之一或多者：減少該個體中CD30陽性癌細胞之數目、減少該個體中CD30陽性腫瘤/病變的大小、抑制(例如預防或減緩)該個體中CD30陽性癌細胞的成長、抑制(例如預防或減緩)該個體中CD30陽性腫瘤/病變的成長、抑制(例如預防或減緩)CD30陽性癌症之發展/進展(例如對晚期或轉移)、降低該個體中CD30陽性癌症之症狀的嚴重程度、增加該個體之存活(例如無進展存活或整體存活)、減少該個體中CD30陽性癌細胞中一相關物之數目或活性，及/或減少該個體中之CD30陽性癌症負擔。

個體可根據經修訂之反應評價標準來評估：盧加諾分類系統(描述於例如Cheson et al., J Clin Oncol (2014) 32: 3059-3068中，其係以引用方式併入上文中)以便確定其對治療之反應。在一些實施態樣中，根據本揭露內容之方法治療一個體係達成下列之一者：完全反應、部分反應或穩定性疾病。

本揭露內容之方法可藉由參照下述來表徵：在群體水準上觀察到之達成效應/反應。亦即，在一些實施態樣中，本揭露內容的方法可藉由參照下述來表徵：當治療係投予多於一個體(如個體群體)時所觀察到的達成效應/反應。一個體群體可包含2或更多個體，例如下列之一：5、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90或100或更多個體。

在群體水準下觀察到的達成效應/反應，可就展現一給定臨床結果(例如完全反應、部分反應、整體反應(完全反應+部分反應)、穩定性疾病、進行性疾病)的經治療個體之比例(例如百分比)來表示。展現一給定臨床結果的經治療個體之比例可稱為該臨床結果之「比率」。作為例示，對治療展現完全反應的個體百分比可稱為完全反應率。

在一些實施態樣中，根據本揭露內容之方法的治療係達成一50%以上之整體反應率(即完全反應加部分反應)，例如55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%以上中之一者，或是一100%之整體反應率。在一些實施態樣中，根據本揭露內容之方法的治療係達成一70%以上之整體反應率，例如下列之一：71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%或81%以上。

在一些實施態樣中，根據本揭露內容之方法的治療係達成一50%以上之完全反應率，例如55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%以上中之一者，或是一100%之完全反應率。在一些實施態樣中，根據本揭露內容之方法的治療係達成70%以上的完全反應率，例如71%、72%、73%、74%或75%以上中之一者。

在一些實施態樣中，根據本揭露內容之方法的治療係達成一50%以下的進行性疾病率，例如45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、10%或5%以下中之一者，或是一0%之進行性疾病率。在一些實施態樣中，根據本揭露內容之方法的治療達成一30%以下之進行性疾病率，例如29%、28%、27%、26%、25%、24%、23%、22%、21%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%或13%以下中之一者。

在一些實施態樣中，根據本揭露內容之方法的治療達成一20%以上之1年無進展存活率，例如25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%以上中之一者，或是一100%之1年無進展存活率。在一些實施態樣中，根據本揭露內容之方法的治療達成一40%以上之完全反應率，例如41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%或57%以上中之一者。

在一些實施態樣中，根據本揭露內容之方法的治療達成一1個月以上之中位無進展存活期，例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24個月以上中之一者。在一些實施態樣中，根據本揭露內容之方法的治療達成一9個月以上之中位無進展存活期，例如10、11、12或13個月以上中之一者。

在一些實施態樣中，根據本揭露內容之方法的治療達成一90%以上之1年整體存活率為，例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%以上中之一者，或是一100%之1年整體存活率。

在一些實施態樣中，根據本揭露內容之方法的治療達成一6個月以上之中位整體存活期，例如7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24個月以上中之一者。

在一些實施態樣中，根據本揭露內容之方法的治療達成一20%以上之1年持續反應率(於例如達成完全反應或部分反應的個體) ，例如25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%以上中之一者，或是一100%之1年持續反應率。

在一些實施態樣中，根據本揭露內容之方法的治療達成一1個月以上之中位反應持續時間(於例如達成完全反應或部分反應的個體)，例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24個月以上中之一者。

在本揭露內容之實施態樣中，治療效應及臨床結果可藉由參照下述來表徵：根據一參考方法進行治療所達成之效應/結果(例如臨床反應)。一參考方法可為一包含下述之方法：對一個體投予表現CD30特異性CAR之T細胞。

在一些實施態樣中，一參考方法可包含藉由投予表現CD30特異性CAR之T細胞進行治療(以例如2x10⁷ 個細胞/m² 、1x10⁸ 個細胞/m² 或2x10⁸ 個細胞/m² 之劑量)，且先前未進行淋巴清除化學療法。在一些實施態樣中，一參考方法可包含一CD30陽性癌症的治療，其係藉由對一個體投予表現CD30特異性CAR之T細胞來進行，且係如Ramos et al., J Clin Invest. (2017) 127(9):3462-3471中所述，或根據NCT01316146所描述之介入處置(轉錄如下)： 藥物：CAR.CD30 T細胞 三個劑量位準： 第一組、2x10^7個細胞/m^2 第二組、1x10^8個細胞/m^2 第三組，2x10個^8個細胞/m^2；

細胞投予：藉由靜脈注射給予CAR+活化T淋巴球，經由一周邊或中心導管歷時1至10分鐘。預期體積=1-50 cc。

於一些實施態樣中，一參考方法可包含藉由投予淋巴清除化學療法之治療，其包含投予氟達拉濱及環磷醯胺(例如以30mg/m² /天之氟達拉濱及500mg/m² /天之環磷醯胺的劑量連續三天)，且隨後(例如完成淋巴清除化學療法療程的2至14天內)投予表現CD30特異性CAR之T細胞(以例如2x10⁷ 細胞/m² 、1x10⁸ 細胞/m² 或2x10⁸ 細胞/m² 的劑量)。在一些實施態樣中，一參考方法可包含一CD30陽性癌症的治療，其係如Ramos et al., Biol Blood Marrow Transplant 25 (2019) S7-S75, Abstract 79中所述，或是依據NCT02917083所述之介入處置(轉錄如下)： 遺傳基因：CAR T細胞

三個劑量位準。各患者依據下列給藥時程，接受一次經CAR修飾T細胞的輸注： 劑量位準一：2 x10^7個細胞/m² 。劑量位準二：1×10^8個細胞/m² 。劑量位準三：2x10^8個細胞/m² 。 藥物：環磷醯胺

並未經自體移植之患者將接受三次每日劑量之環磷醯胺(Cy：500mg/m² /天)在T細胞輸注之前至少48小時結束，但在該細胞輸注之前不超過2週。 其他名稱：Cytoxan 藥物：氟達拉濱

並未經自體移植之患者將接受氟達拉濱(Flu：30mg/m² /天)，在T細胞輸注之前至少48小時結束，但在該細胞輸注之前不超過2週。

與根據一參考方法進行之治療相比，根據本揭露內容之方法的治療可關聯於一改良的治療效應及/或一改良的臨床結果。

與根據一參考方法的治療相比，根據本揭露內容之方法的治療可實現以下中之一或多者：更為減少該個體中CD30陽性癌細胞之數目、更為減少該個體中CD30陽性腫瘤/病變的大小、更為抑制該個體中CD30陽性癌細胞的成長、更為抑制該個體中CD30陽性腫瘤/病變的成長、更為抑制CD30陽性癌症之發展/進展(例如對晚期或轉移)、更為降低該個體中CD30陽性癌症之症狀的嚴重程度、更為增加該個體之存活(例如無進展存活或整體存活)、更為減少該個體中CD30陽性癌細胞中一相關物之數目或活性，及/或更為減少該個體中之CD30陽性癌症負擔。

「更為」減少/抑制/增加可為一減少/抑制/增加，其大於根據一參考方法的治療所達成的減少/抑制/增加程度1倍，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥3倍、≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍或≥10倍中之一者。

減少/抑制可為一程度，其小於根據一參考方法的治療所達成之程度1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍或≤0.01倍。

增加可為可為一程度，其大於根據一參考方法的治療所達成之程度1倍，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥3倍、≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍或≥10倍中之一者。

在一些實施態樣中，與根據一參考方法進行之治療相比，根據本揭露內容之方法的治療係關聯於一改良的臨床結果(例如臨床反應)。

與根據一參考方法進行之治療相比，根據本揭露內容之方法的治療可達成下列一或多者：一增加的總體反應(即完全反應加部分反應)率、一增加的完全反應率、一降低的進行性疾病率、一增加的1年無進展存活率、一增加的中位無進展存活期、一增加的1年整體存活率、一增加的中位整體存活期、一增加的1年持續反應率、或一增加的中位反應持續時間。

「增加的」率/中位可為一比率/中位數其大於根據一參考方法的治療所達成之比率/中位數的1倍，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥3倍、≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍或≥10倍中之一者。

「降低的」率可為一比率其小於根據一參考方法的治療所達成之比率1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍或≤0.01倍。

與根據一參考方法進行之治療相比，根據本揭露內容之方法可關聯於降低的出現不良事件之個體比例。

與根據一參考方法進行之治療相比，根據本揭露內容之方法的治療可關聯於一降低的出現下列一或多者之個體的比例：淋巴球減少症、白血球減少症、嗜中性球減少症、血小板減少症、貧血、低白蛋白血症、低血鈉症、呼吸困難、皮疹、頭痛、咽炎、肺部感染、細胞激素釋放症候群、第28天第3/4級嗜中性球減少症、第28天第3/4級血小板減少症、第28天第3/4級貧血、長期第3/4級嗜中性球減少症(例如在第3個月)、長期第3/4級血小板減少症(例如在第3個月)、或長期第3/4級貧血(例如在第3個月)。 序列同一性

為了要測定二或多個胺基酸或核酸序列之間的同一性百分比，可藉習於此藝者所知之各種方式達成成對及多個序列比對，例如使用可供公開使用的電腦軟體，諸如ClustalOmega (Söding, J. 2005, Bioinformatics 21, 951-960)、T-coffee (Notredameet al. 2000, J. Mol. Biol. (2000) 302, 205-217)、Kalign (Lassmann and Sonnhammer 2005, BMC Bioinformatics, 6(298))以及MAFFT (Katoh and Standley 2013, Molecular Biology and Evolution, 30(4) 772–780軟體。當使用此類軟體時，在例如空隙罰分或擴展罰分上較佳使用預設參數。 序列

SEQ ID NO:	說明	序列
1	人類CD30同功異型體1(UniProt: P28908-1, v1)	MRVLLAALGLLFLGALRAFPQDRPFEDTCHGNPSHYYDKAVRRCCYRCPMGLFPTQQCPQRPTDCRKQCEPDYYLDEADRCTACVTCSRDDLVEKTPCAWNSSRVCECRPGMFCSTSAVNSCARCFFHSVCPAGMIVKFPGTAQKNTVCEPASPGVSPACASPENCKEPSSGTIPQAKPTPVSPATSSASTMPVRGGTRLAQEAASKLTRAPDSPSSVGRPSSDPGLSPTQPCPEGSGDCRKQCEPDYYLDEAGRCTACVSCSRDDLVEKTPCAWNSSRTCECRPGMICATSATNSCARCVPYPICAAETVTKPQDMAEKDTTFEAPPLGTQPDCNPTPENGEAPASTSPTQSLLVDSQASKTLPIPTSAPVALSSTGKPVLDAGPVLFWVILVLVVVVGSSAFLLCHRRACRKRIRQKLHLCYPVQTSQPKLELVDSRPRRSSTQLRSGASVTEPVAEERGLMSQPLMETCHSVGAAYLESLPLQDASPAGGPSSPRDLPEPRVSTEHTNNKIEKIYIMKADTVIVGTVKAELPEGRGLAGPAEPELEEELEADHTPHYPEQETEPPLGSCSDVMLSVEEEGKEDPLPTAASGK
2	人類CD30同功異型體2(UniProt: P28908-2)	MSQPLMETCHSVGAAYLESLPLQDASPAGGPSSPRDLPEPRVSTEHTNNKIEKIYIMKADTVIVGTVKAELPEGRGLAGPAEPELEEELEADHTPHYPEQETEPPLGSCSDVMLSVEEEGKEDPLPTAASGK
3	人類CD30同功異型體3(UniProt: P28908-3)	MFCSTSAVNSCARCFFHSVCPAGMIVKFPGTAQKNTVCEPASPGVSPACASPENCKEPSSGTIPQAKPTPVSPATSSASTMPVRGGTRLAQEAASKLTRAPDSPSSVGRPSSDPGLSPTQPCPEGSGDCRKQCEPDYYLDEAGRCTACVSCSRDDLVEKTPCAWNSSRTCECRPGMICATSATNSCARCVPYPICAAETVTKPQDMAEKDTTFEAPPLGTQPDCNPTPENGEAPASTSPTQSLLVDSQASKTLPIPTSAPVALSSTGKPVLDAGPVLFWVILVLVVVVGSSAFLLCHRRACRKRIRQKLHLCYPVQTSQPKLELVDSRPRRSSTLRSGASVTEPVAEERGLMSQPLMETCHSVGAAYLESLPLQDASPAGGPSSPRDLPEPRVSTEHTNNKIEKIYIMKADTVIVGTVKAELPEGRGLAGPAEPELEEELEADHTPHYPEQETEPPLGSCSDVMLSVEEEGKEDPLPTAASGK
4	人類CD30信號胜肽	MRVLLAALGLLFLGALRA
5	人類CD30細胞外域	FPQDRPFEDTCHGNPSHYYDKAVRRCCYRCPMGLFPTQQCPQRPTDCRKQCEPDYYLDEADRCTACVTCSRDDLVEKTPCAWNSSRVCECRPGMFCSTSAVNSCARCFFHSVCPAGMIVKFPGTAQKNTVCEPASPGVSPACASPENCKEPSSGTIPQAKPTPVSPATSSASTMPVRGGTRLAQEAASKLTRAPDSPSSVGRPSSDPGLSPTQPCPEGSGDCRKQCEPDYYLDEAGRCTACVSCSRDDLVEKTPCAWNSSRTCECRPGMICATSATNSCARCVPYPICAAETVTKPQDMAEKDTTFEAPPLGTQPDCNPTPENGEAPASTSPTQSLLVDSQASKTLPIPTSAPVALSSTGKPVLDAG
6	人類CD30跨膜域	PVLFWVILVLVVVVGSSAFLL
7	人類CD30細胞質域	CHRRACRKRIRQKLHLCYPVQTSQPKLELVDSRPRRSSTQLRSGASVTEPVAEERGLMSQPLMETCHSVGAAYLESLPLQDASPAGGPSSPRDLPEPRVSTEHTNNKIEKIYIMKADTVIVGTVKAELPEGRGLAGPAEPELEEELEADHTPHYPEQETEPPLGSCSDVMLSVEEEGKEDPLPTAASGK
8	HRS3 HC-CDR1	GYTFTTYT
9	HRS3 HC-CDR2	INPSSGCS
10	HRS3 HC-CDR3	ARRADYGNYEYTWFAY
11	HRS3 LC-CDR1	QNVGTN
12	HRS3 LC-CDR2	SAS
13	HRS3 LC-CDR3	QQYHTYPLT
14	HRS3 VH	QVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTTYTIHWVRRRPGHDLEWIGYINPSSGCSDYNQNFKGKTTLTADKSSNTAYMQLNSLTSEDSAVYYCARRADYGNYEYTWFAYWGQGTTVTVSS
15	HRS3 VL	VIELTQSPKFMSTSVGDRVNVTYKASQNVGTNVAWFQQKPGQSPKVLIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFCQQYHTYPLTFGGGTKLEIK
16	G4 S	GGGGS
17	HRS3 scFv連接子	SGGGSGGGGSGGGGS
18	HRS3 scFv	QVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTTYTIHWVRRRPGHDLEWIGYINPSSGCSDYNQNFKGKTTLTADKSSNTAYMQLNSLTSEDSAVYYCARRADYGNYEYTWFAYWGQGTTVTVSSSGGGSGGGGSGGGGSVIELTQSPKFMSTSVGDRVNVTYKASQNVGTNVAWFQQKPGQSPKVLIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFCQQYHTYPLTFGGGTKLEIK
19	HRS3表位	ATSSASTMPVRGGTRLAQEAASKLTRAPDSPSSVGRPSSDPGLSPTQPCPEGSGDCRKQCEPDYYLDEAGRCTACVSCSRDDLVEKTPCAWNSSRTCECRPGMICATSATNSCARCVPYPICAAETVTKPQDMAEKDTTFEAPPLGTQPDC
20	人類CD28跨膜域	FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFII
21	人類CD3ζ跨膜域	LCYLLDGILFIYGVILTALFL
22	人類CD8α跨膜域	IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRN
23	ITAM共有	YXXL/I 其中X=任何胺基酸
24	較大ITAM共有	YXXL/I(X)6-8 YXXL/I 其中X=任何胺基酸
25	人類CD3ζ細胞內域	RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
26	人類CD28細胞內域	FWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS
27	具有突變lck結合位點之人類CD28細胞內域	FWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQAYAAARDFAAYRS
28	CAR信號傳導域1	FWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
29	人類IgG1 CH1-CH2鉸鏈區	EPKSCDKTHTCP
30	人類IgG1 CH1-CH2鉸鏈區C103P變異體	EPKSPDKTHTCP
31	人類IgG1 CH2-CH3鉸鏈區	PCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
32	人類IgG1 CH2-CH3鉸鏈區變異體	PCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMIARTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKKDPK
33	CAR鉸鏈區	EPKSPDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
34	信號胜肽1	MDFQVQIFSFLLISASVIMS
35	CD30.CAR(缺乏信號胜肽)	QVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTTYTIHWVRRRPGHDLEWIGYINPSSGCSDYNQNFKGKTTLTADKSSNTAYMQLNSLTSEDSAVYYCARRADYGNYEYTWFAYWGQGTTVTVSSSGGGSGGGGSGGGGSVIELTQSPKFMSTSVGDRVNVTYKASQNVGTNVAWFQQKPGQSPKVLIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFCQQYHTYPLTFGGGTKLEIKRSDPAEPKSPDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKKDPKFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
36	CD30.CAR(具有信號胜肽)	MDFQVQIFSFLLISASVIMSRMAQVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTTYTIHWVRRRPGHDLEWIGYINPSSGCSDYNQNFKGKTTLTADKSSNTAYMQLNSLTSEDSAVYYCARRADYGNYEYTWFAYWGQGTTVTVSSSGGGSGGGGSGGGGSVIELTQSPKFMSTSVGDRVNVTYKASQNVGTNVAWFQQKPGQSPKVLIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFCQQYHTYPLTFGGGTKLEIKRSDPAEPKSPDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKKDPKFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR

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本發明包括所描述之方面及較佳特徵之組合，除非該組合係顯然不允許或明確表示需避免者。

本文中所使用之部分標題僅出於組織目的且不應理解為限制所描述之主題。

現將參考隨附圖式，藉助於實施例說明本發明之多個方面及實施態樣。其他方面及實施態樣對習於此藝者而言將為顯而易見。本文中所提及之所有文獻均以引用之方式併入本文中。

在整個本說明書，包括隨後之申請專利範圍中，除非本文另有規定，否則「包含(comprise)」一詞及其變化形(諸如「包含(comprises/comprising)」)應理解為暗示包括所陳述整體或步驟、或是整體或步驟之群，但不排除任何其他整體或步驟、或是整體或步驟之群。

應注意，除非上下文明確另外指定，否則在本說明書及隨附申請專利範圍中使用時，單數形「一(a/an)」及「該(the)」包括多個指示物。範圍在本文中可表示為「約」一個特定值，及/或至「約」另一特定值。當此類範圍被表述時，另一實施態樣包括自該一個特定值及/或至該另一特定值。類似地，當數值藉由使用前述「約」來表示為近似值時，應理解該特定值形成另一實施態樣。

當在本文中揭示核酸序列時，亦明確考慮其反向互補序列。

本文所述之方法可在活體外或活體內執行。在一些實施態樣中，本文所述之方法係在活體外進行。術語「活體外」意欲涵蓋使用培養物中之細胞的實驗，而術語「活體內」意欲涵蓋使用完整多細胞生物體之實驗。

實施例 在下列實施例中，本發明人說明CD30陽性癌症的治療，其使用了運用淋巴清除化學療法及表現CD30特異性CAR之T細胞之過繼轉移的方法。 實施例1：LCCC 1532-ATL (NCT02690545)研究：針對復發或頑抗性CD30+何杰金氏淋巴瘤及CD30+非何杰金氏淋巴瘤投予表現CD30嵌合抗原受體(CAR)之T淋巴球的第1/2期研究 1.1 概述

一項針對患有復發或頑抗性何杰金氏淋巴瘤之患者的第1/2期研究係依臨床試驗計畫書NCT02690545在北卡羅萊納大學(UNC, 教堂山校區, 北卡羅萊納)進行。

患者接受自體CD30.CAR-T，其係使用一臨床級反轉錄病毒載體並依循一標準操作程序(SOP)而在遵從優良藥品製造規範(GMP)之設施製得。

患有復發/頑抗性CD30⁺ 淋巴瘤且已進展到至少2線療法後的患者符合招募資格。允許BV治療，但不可於CD30.CAR-T細胞輸注時程之4週內。需要基於制度化血液病理學標準藉由免疫組織化學記錄CD30表現，但在CD30⁺ 腫瘤細胞百分比方面並沒有具體的臨界值(cutoff)。

亦募得具有CD30⁺ T細胞或退行性大細胞淋巴瘤以及CD30⁺ B細胞淋巴瘤之患者，惟本案實施例僅報導34名患有HL(26名患者)之結果。

過渡性化學療法於主治醫師之裁量下允許在淋巴清除前進行。調理方案由以下組成：第一群8名患者為90mg/m² /天劑量之苯達莫司汀2天，而後續於第二群加入的18名患者為70mg/m² /天之苯達莫司汀及30mg/m² /天之氟達拉濱3天。

CD30.CAR-T細胞之輸注係於淋巴清除後2至5天進行。  患者接受1x10⁸ 個CAR-T細胞/m² 或2x10⁸ 個CAR-T細胞/m² 。  一擴大群組之患者接受最高劑量位準2x10⁸ 個CAR-T細胞/m² 。  在第一次治療後具穩定性疾病或部分反應的患者，允許進行在最高劑量位準下之第二次CD30.CAR-T細胞輸注。

研究之第1期部分的主要目標係建立CD30.CAR-T細胞之安全劑量，用以於淋巴清除後輸注。  次要終點包括ORR、反應持續時間(DOR)、整體存活(OS)，及輸注後周邊血液中CD30.CAR-T之擴增與持續性的量測。  對接受非基於氟達拉濱之淋巴清除之患者、和接受含氟達拉濱方案之患者的數據分別進行分析。

使用盧加諾標準，在CD30.CAR-T細胞輸注後6-8週評價反應(Cheson et al., J Clin Oncol (2014) 32: 3059-3068)。  僅就進行淋巴清除時具有活動性疾病之患者評估反應率。 1.2患者人口統計數據

在2016年九月與2020年二月14日之間，有29名HL患者加入LCCC 1532-ATL研究，且26名接受了CD30.CAR-T細胞。至2020年二月14日截止，有3名加入LCCC 1532-ATL研究的患者並未接受治療。在該3名患者中，1名患者選擇不進行臨床試驗，1名在採集時點未具有活動性疾病，1名未能製出CAR-T細胞，歸因於先前密集的自體幹細胞移植(ASCT)、同種異體幹細胞移植(alloSCT)及多捐贈者淋巴球輸注。表1 ：來自LCCC 1532-ATL 之典型HL 患者特徵：

特徵	Benda n=8* (%)	Flu/Benda n=18 (%)
HL子類型：n (%)	NS	6 (75)	11 (61)
MC	2 (25)	2 (11)
NOS	0	5 (28)
診斷階段：n(%)	I-II	1 (13)	7 (39)
III-IV	7 (88)	11 (61)
年齡(歲)、中位數(範圍)	49 (23-67)	31.5 (15-45)
男性：n(%)	5 (63)	13 (72)
先前療法，中位數(範圍)	7.5 (5-17)	8 (3-23)
過渡性療法：n(%)	8 (100)	10 (56)
先前BV：n (%)	8 (100)	17 (94)
先前CPI：n (%)	7 (88)	13 (72)
先前ASCT：n (%)	7 (88)	14 (78)
先前alloSCT：n (%)	2 (25)	8 (44)
CAR-T細胞/m2 ：n(%)	2×107	0	0
1×108	3 (38)	1 (6)
2×108	5 (63)	17 (94)

alloSCT=同種異體幹細胞移植；ASCT=自體幹細胞移植；Benda=苯達莫司汀；BV=維多汀本妥昔單抗；CPI=檢查點抑制劑；Flu=氟達拉濱；HL=何杰金氏淋巴瘤；MC=混合細胞性；NOS=非特定；NS=結節性硬化症。

*考慮了一名接受兩種治療(一種在UNC而第二種兩年後在BCM2)的患者。 1.3 療效

十八名患者於LCCC 1532-ATL研究中接受苯達莫司汀及氟達拉濱。其中2名患者在輸注時呈CR並維持CR，而未納入療效分析中。表2 ：來自LCCC 1532-ATL 並於治療時具有可量測疾病的典型HL 患者之臨床反應

	苯達莫司汀* n = 5 (%)	Flu/Benda** n = 16 (%)
ORR: n (%)	CR + PR	0 (0%)	13 (81.3%)
RR: n (%)	CR	0 (0%)	12 (75.0%)
PR	0 (0%)	1 (6.3%)
SD	1 (20%)	1 (6.3%)
PD	4 (80%)	2 (12.5%)

CR：完全反應；ORR：客觀反應率；PR：部分反應；RR：反應率；SD：穩定性疾病，Benda：苯達莫司汀；Flu：氟達拉濱

*有3名患者在LD前因過渡性療法而呈CR，並未納入分析。

**有2名患者在LD前因過渡性療法而呈CR，並未納入分析。表3 ：來自LCCC 1532-ATL 未滿18 歲之典型HL 患者之特徵、臨床反應及安全性資料

個體 ID	年齡	性別	先前療法數目	LD 方案	CD30. CAR-T 劑量	反應	淋巴清除相關 AE	CAR-T 細胞相關 AE
UNC 33	15	女性	4	Flu/ Benda	1x108 /m2	CR	貧血(G1) 厭食症(G1) 轉胺酶升高(G1) 咳嗽(G1) 低血鈉症(G1) 低血磷症(G1) 淋巴球減少症(G4) 嗜中性球減少症(G2) 血小板減少症(G1) 嘔吐(G1) 白血球減少症(G2)	丙胺酸轉胺酶升高(G1)

經苯達莫司汀及氟達拉濱之淋巴清除化學療法治療的患者中，ORR為81%，且12名患者報告呈CR(75%)，1名患者PR(6%)，1名患者SD(6%)，及2名患者PD(13%)(表2)。其中，一名未滿18歲的患者係經治療達到CR(表3)。

八位患者在CD30.CAR-T細胞輸注前接受單獨使用苯達莫司汀的淋巴清除。在此等8位患者中，有3名患者在淋巴清除前即因過渡性療法而呈CR，並未納入分析(表2)。具活動性疾病之5名患者中無一者在治療時顯示客觀臨床反應(表2)。

在治療時具可量測之疾病的患者之反應持續時間(DOR)係示於圖1中。在呈CR之12名患者中，6名患者在第1次輸注後反應持續進行。

以苯達莫司汀與氟達拉濱方案治療之16位患者的1年PFS率為57%(95%CI: 28%-78%)，且中位PFS為13.0個月(95%CI: 5.4-NE)，參見圖2。 1.4 安全性

沒有觀察到與CD30.CAR-T細胞輸注有關的劑量限制性毒性。  未滿18歲經治療的患者並未受到CRS或其他CAR-T細胞相關毒性，除了第1級ALT(表3)。

在3名患者(24%)中觀察到細胞激素釋放症候群(CRS)(表4)。所有CRS事件皆為第1級且自發地解除，不需要投予托珠單抗或類固醇。與CRS的發生相關的細胞激素，諸如IL-6及IL1Rα，還有C-反應蛋白(CRP)在發展出CRS臨床症狀之患者的血漿中升高。未觀察到神經毒性。

六名患者發展出非搔癢性非觸痛性斑丘疹性皮疹。患者中無一者需要針對皮疹的特別治療，因其於3-7天內自發性地解除。 表4：來自LCCC 1532-ATL之典型HL患者的第3級以上不良事件及特別關注之不良事件

不良事件 (特別關注或＞第3級)：n(%)	Benda (n = 8)	Flu/Benda (n = 18)
淋巴球減少症	8 (100)	18 (100)
白血球減少症	3 (38)	8 (44)
嗜中性球減少症	2 (25)	7 (39)
血小板減少症	1 (13)	7 (39)
貧血	0	3 (17)
低白蛋白血症	0	0
低血鈉症	0	0
呼吸困難	0	0
皮疹	0	0
頭痛	0	0
咽炎	0	1 (6)
肺部感染	0	1 (6)
細胞激素釋放症候群(均第1級)	1 (13)	2 (11)
第28天第3/4級嗜中性球減少症	0	2 (11)
第28天第3/4級血小板減少症	0	6 (33)
第28天第3/4級貧血	0	0
長期第3/4級嗜中性球減少症(在第3個月*)	0	0
長期第3/4級血小板減少症(在第3個月*)	0	3 (17)
長期第3/4級貧血(在第3個月*)	0	1 (6)
皮疹(任何級別)	2 (25)	4 (22)

Benda=苯達莫司汀；Flu=氟達拉濱；LD=淋巴清除； * 3名患者在3個月時因退出研究而無資料。

在頭6周有第3級以上毒性被報導，其大部分為血液性且符合調節化學療法造成的毒性。第3級以上的毒性包括淋巴球減少症、白血球減少症、嗜中性球減少症、血小板減少症、貧血、低白蛋白血症、低血鈉症、呼吸困難、咽炎、肺部感染及頭痛(表4)。有2位患者出現在第28天尚未解除的第3/4級嗜中性球減少症(ANC ＜1.0/mL)。然而，兩名患者均於第90天解除他們的第3/4級嗜中性球減少症。六名患者具有第3/4級血小板減少症(血小板＜50,000/mL)，其在第28天並未解除。三名患者於第3個月具有第3/4級血小板減少症(表4)。

在經苯達莫司汀與氟達拉濱治療的患者中第3級以上AE發病率低(表4)，其包括白血球減少症(44%)、嗜中性球減少症(39%)、低白蛋白血症(0%)、低血鈉症(0%)、呼吸困難、咽炎、肺部感染及頭痛(0%)。一名患者在接受氟達拉濱與苯達莫司汀之第一劑後經歷第3級急性腎損傷與低血壓，惟係於CD30.CAR-T細胞輸注之前。此患者並未完成排定的淋巴清除方案，但其症狀隨後解除並接受CD30.CAR-T細胞之排定劑量。 1.5 結論

與Ramos et al., Biol Blood Marrow Transplant 25 (2019) S7-S75, Abstract 79中接受使用了苯達莫司汀與氟達拉濱之淋巴清除然後進行CD30.CAR-T細胞輸液的患者所報導的反應率相比，接受使用了苯達莫司汀與氟達拉濱之淋巴清除然後進行CD30.CAR-T細胞輸注的患者，展現改善的整體反應率及完全反應率。

Ramos等人報導NCT02917083 (RELY-30)之初步資料，其中10名復發/頑抗性HL患者接受每天500mg/m² 環磷醯胺及30mg/m² 氟達拉濱持續3天，隨後投予CD30.CAR T細胞。於輸注後6週評估的9位患者中，6名具有CR，且3名患者具有疾病進展(即ORR=66.6%，CR=66.6%)。9名患者中有三名進展(PD=33.3%)。

相比之下，在本實施例中，接受每天70mg/m² 苯達莫司汀及30mg/m² 氟達拉濱持續3天隨後投予CD30.CAR T細胞的16名患者中，13名展現臨床反應(亦即CR+PR；ORR=81.3%)，且該等患者中12名展現完全反應(CR=75%)。16名患者中只有兩名進展(PD=12.5%)。

該結果鑑定benda/flu治療為一相當有希望的調節性淋巴清除療法，供用於運用了CD30.CAR-T細胞的治療方法中。 實施例2：TESSCAR001 (NCT04268706)研究：一項第2期多中心開放性單臂研究，旨在評估具復發或頑抗性CD30陽性cHL之成年及兒科患者中CD30導向基因改造自體T細胞(CD30.CAR-T)之療效及安全性 2.1 研究基本原理

由於現有標準療法已治療失敗的復發或頑抗性cHL患者的治療效果不佳，故迫切需要針對此群體的新穎治療方法。實施例證明CD30.CAR-T細胞療法具有良好耐受性，且該等細胞在經重度預處理之復發或頑抗性cHL患者中具有顯著的臨床活性。相對於Ramos et al., J Clin Invest. (2017) 127(9):3462-3471中針對不進行淋巴清除化學療法且使用CD30.CAR-T細胞的療法(NCT01316146)所報導的反應率，發現較高臨床反應率係與使用淋巴清除化學療法相關。自體CD30.CAR-T之有利的毒性特徵和令人鼓舞的抗腫瘤活性係經實施例1證明，其對復發或頑抗性cHL患者的進一步探究提供了強有力的支持。 2.2 目標及終點 2.2.1 主要目標

自體CD30.CAR-T之抗腫瘤效應係使用ORR進行評估(由一放射學獨立評審委員會(IRRC)評定，其係依據經修訂之反應評價標準：盧加諾分類系統(Cheson et al., J Clin Oncol (2014) 32: 3059-3068))。

ORR定義為具有最佳整體反應(BOR)之CR或PR的患者比例。BOR被定義為從CD30.CAR-T輸注直到呈進行性疾病或開始新的抗癌治療(先發生者為準)所記錄到的最佳疾病反應。 2.2.2 次要目標

評價下列項目： ‧自體CD30.CAR-T之安全性 ‧自體CD30.CAR-T之額外抗腫瘤效應，包括： o 客觀反應率(ORR)，由試驗主持人評定，其係基於經修訂之反應評價標準：盧加諾分類系統(Cheson et al., J Clin Oncol (2014) 32: 3059-3068) o 反應持續時間(DOR) o 無進展存活(PFS) o 總體存活 (OS) ‧ 健康相關之生活品質(HRQoL)評價

除非另有說明，否則所有次要療效終點均在全分析集(FAS)中進行分析。 2.3 研究群體

研究群體包括年齡在12至75歲之間的復發或頑抗性CD30陽性cHL成人和兒科患者，且其先前至少3線療法失敗，包括： ‧ 化學療法 ‧ *BV及/或 ‧ *PD-1抑制劑

患者可先前已接受一自體及/或同種異體幹細胞移植。

*除非BV或PD-1抑制劑禁用。 2.4 研究設計

該研究為一第2期開放性多中心研究，係經設計以評估復發或頑抗性CD30陽性cHL之成年及兒科患者中CD30導向基因改造自體T細胞(CD30.CAR-T)的療效及安全性。

在美國、加拿大和歐盟中約30個調查地點招募了約82名患者(產出66名可評估之成年患者)。招募約5名≥12歲之兒科患者並與成年群體分別分析。

研究設計及研究流程之概述係於圖3及4中呈現。 2.5 研究治療 2.5.1 淋巴清除化學療法

患者將會經受LD化學療法，經由IV輸注給予氟達拉濱(30mg/m² /天)(IV輸注歷時30分鐘)及苯達莫司汀(70mg/m² /天)(IV輸注歷時30分鐘)連續3天，從CD30.CAR-T輸注前第5天開始(即第-5天)。 2.5.1 CD30.CAR-T輸注

CD30.CAR-T細胞將在第0天以單次IV輸注方式投予一2×10⁸ 個細胞/m² 之劑量。對於體重小於50 kg之患者，將使用每公斤體重2.0至5.0×10⁶ 個細胞之基於重量的給藥。 實施例3：TESSCAR002研究：CD30導向基因改造自體T細胞(CD30.CART)於復發或頑抗性CD30陽性非何杰金氏淋巴瘤患者中的第1期研究 3.1 研究基本原理

CD30係CD30陽性血液惡性病之一驗證標靶。其係進一步受下述所支持：抗CD30抗體-藥物軛合物維多汀本妥昔單抗批准用於典型HL及一些 NHL亞型，包括全身性和皮膚性ALCL、PTCL及蕈狀肉芽腫。

CD30廣泛地表現於NHL亞型腫瘤細胞中，其表現範圍從100%的ALCL(Gottesman, Pathology and Laboratory Medicine International (2016) 8: 27-36)至19%的PMBCL(Hoeller et al., Histopathology (2010) 56: 217-228)腫瘤細胞。NHL細胞中CD30陽性之高表現進一步支持CD30抗原對NHL惡性腫瘤的潛在靶向作用。

NHL惡性腫瘤之所有亞型的標準照護療法均非治愈性。現有標準療法已治療失敗的復發或頑抗性NHL患者之治療結果不佳。迫切需要針對此患者群體之新穎治療策略，以滿足未實現的臨床需求。

實施例1證明了自體CD30.CAR-T的有利毒性特徵和令人鼓舞的抗腫瘤活性，其對於將研究擴展至NHL患者以滿足未實現之臨床需求上提供強而有力的理由。 3.2 目標及終點 3.2.1 主要目標

評估自體CD30.CAR-T之安全性及劑量限制性毒性(DLT)，並決定第2期建議劑量(RP2D)。 3.2.2 次要目標

評估自體CD30.CAR-T之初步抗腫瘤效應及藥物動力學，其係藉由評價下述來進行： • 客觀反應率(ORR) • 自體CD30.CAR-T細胞於血液中之藥物動力學。 • 反應持續時間(DoR) • 無進展存活(PFS) • 整體存活(OS) 3.2.3 探索性目標

評價下述： • 在CD30.CAR-T於血液中輸注後對於抗CD30scFv(單鏈可變片段)的免疫原性 • 血液中細胞激素剖析 • 血液中免疫學參數 • 血液及腫瘤組織中之腫瘤標記 • 血液中循環腫瘤DNA(ctDNA) 3.3 研究群體

研究群體包括標準照護療法治療失敗之年齡≥ 18-75歲的復發或頑抗性CD30陽性NHL成年患者；患者可能接受或未接受自體或同種異體HSCT。

要評估的CD30陽性NHL亞群包括： • ALCL • PTCL-NOS • ENKTCL，鼻型 • DLBCL-NOS • PMBCL

不允許對招募和收案標準之試驗偏差的預先核准，其亦稱為試驗豁免或免除(protocol waivers or exemptions)。 3.4 研究設計

此為一項第1期開放性多中心劑量遞增研究，係經設計以評估復發或頑抗性CD30陽性NHL成年患者中CD30導向基因改造自體T細胞(CD30.CAR-T)的安全性及初步抗腫瘤效果，並決定R2PD。將招募標準療法已治療失敗且可能接受或不接受自體或同種異體HSCT的患者。多達4個研究中心將參與本研究。

要評估的CD30陽性NHL亞群包括： • ALCL • PTCL-NOS • ENKTCL，鼻型 • DLBCL-NOS • PMBCL

總的來說，此研究招募約12-21名患者。

篩選時需要新鮮腫瘤活體組織切片以確定CD30 陽性並確認研究資格。若一活體組織切片在醫學上禁用，並且從近期治療可取得一記錄CD30陽性的存檔腫瘤活體組織切片(包括原始診斷活體組織切片，若其為唯一可取得之組織)，則在與試驗委託單位或負責人討論後可能會被接受。CD30陽性係於當地確認以供資格認定。必須在採集血液以供製造CD30.CAR-T細胞之前確認CD30陽性。

在血液採集後於生產CD30.CAR-T期間，允許患者依據研究者的選擇接受過渡性療法。若投予過渡性療法，則在過渡性療法完成後需要廓清，以確保在開始第一劑淋巴清除化學療法之前從毒性中充分恢復。廓清期係基於用作過渡性療法之試劑類型。

所有患者均經過一針對安全性之基線評價，其係於淋巴清除化學療法前72小時內執行。可在淋巴清除化學療法前7天內進行用於腫瘤評估之造影掃描。在開始淋巴清除化學療法及CD30.CAR-T輸注前，患者必須有活動性疾病[PR、SD或進行性疾病(PD)]。在過渡性療法後出現CR之患者可能不會經CD30.CAR-T治療，直至記錄到進展/活動性疾病為止。

淋巴清除化學療法及CD30.CAR-T輸注可在門診投予。患者亦可依據機構導則，住院接受淋巴清除化學療法及CD30.CAR-T輸注。

由氟達拉濱(30mg/m² /天)及苯達莫司汀(70mg/m² /天)組成的淋巴清除化學療法係在第0天的自體CD30.CAR-T輸注前，從第-5天開始至第-3天連續投予3天。

在CD30.CAR-T輸注之前，所有患者均前置給藥，使用最多1mg/kg IV(上限50mg)的H1拮抗劑(例如苯海拉明、羥𠯤)以及每次口服10mg/kg乙醯胺酚(上限650mg)。可依據機構導則，開立替代的抗組織胺、消炎劑和止吐劑。類固醇諸如糖皮質素的使用必須避免。

CD30.CAR-T細胞係在第0天以單一IV輸注形式投予。個體在輸注後14 天內每天返回治療設施進行安全性監測，接著以每周頻率隨後在輸注後第3、4和6週返回。

從CD30.CAR-T輸注後至第28天，監測患者的DLT評價。經評價為與自體CD30.CAR-T細胞可能相關、很可能相關或肯定相關的任何毒性均視為DLT。DLT評價期間起於自體CD30.CAR-T開始輸注，並在CD30.CAR-T細胞輸注後持續28天。在DLT評價期間發生之DLT係使用於有關劑量升階的決定。該RP2D係在研究期間建立。

在治療期間的預定時點，評估所有患者在淋巴清除化學療法至CD30.CAR-T輸注後的安全性，直到第42天(EOT)。在CD30.CAR-T輸注後，患者需停留在治療設施中額外4小時，然後每天返回經14天(周末除外)，接著以每周頻率於第21天及第28天進行安全性監測，然後在第42天EOT就診。患者可依據機構導則在CD30.CAR-T輸注後仍繼續住院以供毒性監測。住院延長並不視為AE。

造影掃描係由研究者在當地審視，藉由經修訂之盧加諾反應標準進行評價(Cheson et al., J Clin Oncol (2014) 32: 3059-3068)。

患者經受探索性生物標記評價，以表徵自體CD30.CAR-T的藥物動力學特性以及免疫原性和免疫學特性。在採集血液樣本供用於分析的優先順序方面，詳細內容係收錄在實驗室手冊中。若研究者評定在臨床上可行，則於研究治療前和期間的各種時間點採集血液及組織生檢樣本。此等資料用於進一步分析主控治療結果的機制，以及鑑別出與治療功效及/或失敗相關的潛在生物標記。

在第42天EOT就診後，患者進入治療後追蹤期，其係於M12結束。每3個月續行對安全性、療效及存活的追蹤。其後，患者進入長期追蹤(LTFU)；每3個月續行對療效的追蹤直到M24；安全性及存活的追蹤則自M13至M60(第5年)每6個月續行然後每年進行達15年，直到疾病進展、死亡、撤銷同意書、開始新的抗癌治療或終止研究。

研究設計及研究流程之概述係呈現於圖4及5中。 3.5 研究治療 3.5.1 淋巴清除化學療法

患者將經歷LD化學療法，經由IV輸注給予氟達拉濱(30mg/m² /天)(IV輸注歷時30分鐘)及苯達莫司汀(70mg/m² /天)連續3天，從CD30.CAR-T輸注前第5天開始(即第-5天)。 3.5.2 CD30.CAR-T輸注 CD30.CAR-T細胞將在第0天以單次IV輸注投予： DL1: 2x10⁸ 個細胞/m² DL2: 4x10⁸ 個細胞/m² DL3: 6x10⁸ 個細胞/m²

(無)

現將參考隨附圖式論述說明本發明之原理的實施態樣及實驗。

圖1. Swimmer曲線圖顯示來自LCCC 1532-ATL並具有可量測疾病的典型HL患者在接受治療時之反應持續時間(數據截止時間：2020年二月14日)。

圖2. Kaplan-Meier曲線圖顯示來自LCCC 1532-ATL之典型HL患者的PFS。顯示經苯達莫司汀及氟達拉濱(=16)治療之來自LCCC 1532-ATL之可評估典型HL患者的無進展存活。

圖3. TESSCAR001 (NCT04268706)研究設計的示意性概觀。主要終點：由一放射學獨立評審委員會評定之ORR；次要終點：安全性、由試驗主持人評定之ORR、PFS、OS、HRQoL；探索終點：血液中CD30.CAR-T細胞之擴增及持續性；免疫原性；細胞激素剖析；免疫參數；腫瘤標記物及ctDNA；安全性評估：AE及併用藥劑收集；長期追蹤：額外安全性監測x15年。*CD30.CAR-T細胞之第2次輸注：在總主持人的裁量下，並在與試驗委託單位或負責人討論後，若患者在第一次反應評價時有CR、PR或SD且隨後在CD30.CAR-T輸注後至少3個月有疾病進展，則可投予第2次CD30.CAR-T輸注。縮寫：CR，完全反應；DOR，反應持續時間；HRQoL，健康相關生活品質；OS，整體存活；ORR，客觀反應率；PFS，無進展存活；PD，進行性疾病；PR，部分反應；SD，穩定性疾病。

圖4. TESSCAR001(NCT04268706)及TESSCAR002研究流程的示意性概觀。*再次造影掃描可在LD前1週內進行；**廓清期會依據所用療法之類型；# 自治療期執行LD及CD30.CAR-T協會安全性評估直到至LTFU期為止。↑ 腫瘤反應評價。縮寫：LTFU，長期追蹤；ICF，受試者同意書；LD，淋巴清除化學療法；EOT，治療結束；EOS，研究結束；M，月；YR，年。

圖5. TESSCAR002研究設計之示意性概觀。‡ 若個體在DLT期間因DLT以外之任何理由而無法完成追蹤，則可被替換。§ 在做出將下名患者之劑量升階的決定前，需要至少3名患者完成DLT評價期。在各新劑量位準下，第1及第2名患者將相隔4週給藥；若第1名患者未偵測到有DLT，則第2及第3名患者可同時給藥。執行劑量升階/降階直到至少6名患者已在具可接受之安全性的最高劑量下評估(即『可接受之安全性』是當BOIN建議留在原劑量位準或升階時)為止，或直到共計約21名患者已給藥為止。#於DL1下述事件時劑量會降階至DL0 1x10⁸ /m² CD30.CAR-T細胞：1名患者1例DLT、或2名患者中1例DLT、或3名患者中2例DLT。縮寫：DOR，反應持續時間；ORR，客觀反應率；OS，整體存活；PFS，無進展存活；PK，藥物動力學；RP2D，第2期建議劑量。

Claims (26)

1. 一種治療一個體中之一CD30陽性癌症之方法，其包含： (i)對該個體投予一淋巴清除化學療法，及 (ii)隨後對該個體投予表現CD30特異性嵌合抗原受體(CAR)之T細胞。
2. 一種表現CD30特異性嵌合抗原受體(CAR)之T細胞的群體，該群體係供使用在一治療CD30陽性癌症之方法中，其中該方法包含： (i)對該個體投予一淋巴清除化學療法，及 (ii)隨後對該個體投予CD30特異性CAR-T細胞。
3. 一種表現CD30特異性嵌合抗原受體(CAR)之T細胞的群體於製造一藥劑之用途，該藥劑係供使用在一治療CD30陽性癌症之方法中，其中該方法包含： (i)對該個體投予一淋巴清除化學療法，及 (ii)隨後對該個體投予CD30特異性CAR-T細胞。
4. 如請求項1之方法、請求項2之供使用之群體或請求項3之用途，其中對該個體投予一淋巴清除化學療法係包含投予氟達拉濱(fludarabine)與苯達莫司汀(bendamustine)。
5. 如請求項1至4中任一項之方法、供使用之群體或用途，其中該方法包含以每天15至60mg/m² 之一劑量投予氟達拉濱連續2至6天。
6. 如請求項1至5中任一項之方法、供使用之群體或用途，其中該方法包含以每天30mg/m² 之一劑量投予氟達拉濱連續3天。
7. 如請求項1至6中任一項之方法、供使用之群體或用途，其中該方法包含以每天35至140mg/m² 之一劑量投予苯達莫司汀連續2至6天。
8. 如請求項1至7中任一項之方法、供使用之群體或用途，其中該方法包含以每天70mg/m² 之一劑量投予苯達莫司汀連續3天。
9. 如請求項1至8中任一項之方法、供使用之群體或用途，其中該方法包含對該個體投予5x10⁷ 個表現CD30特異性CAR之T細胞/m² 至1x10⁹ 個表現CD30特異性CAR之T細胞/m² 。
10. 如請求項1至9中任一項之方法、供使用之群體或用途，其中該方法包含對該個體投予1x10⁸ 個表現CD30特異性CAR之T細胞/m² 至6x10⁸ 個表現CD30特異性CAR之T細胞/m² 。
11. 如請求項1至10中任一項之方法、供使用之群體或用途，其中該方法包含： (i)對一個體以每天30mg/m² 之一劑量投予氟達拉濱且以每天70mg/m² 之一劑量投予苯達莫司汀，連續3天，及 (ii)隨後對該個體以一劑量投予表現CD30特異性CAR之T細胞，該劑量為2x10⁸ 個表現CD30特異性CAR之T細胞/m² 至6x10⁸ 個表現CD30特異性CAR之T細胞/m² 。
12. 如請求項1至11中任一項之方法、供使用之群體或用途，其中該CD30陽性癌症係選自於：一血液癌、一實體癌、一造血系統惡性病、何杰金氏淋巴瘤、退行性大細胞淋巴瘤、周邊T細胞淋巴瘤、非特定周邊T細胞淋巴瘤、T細胞白血病、T細胞淋巴瘤、皮膚T細胞淋巴瘤、NK-T細胞淋巴瘤、結外NK-T細胞淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、B細胞非何杰金氏淋巴瘤、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、非特定瀰漫性大B細胞淋巴瘤、EBV陽性B細胞淋巴瘤、EBV陽性瀰漫性大B細胞淋巴瘤、原發性縱膈腔B細胞淋巴瘤、晚期全身性肥胖細胞增多症、一生殖細胞瘤、及睪丸胚胎性癌。
13. 如請求項1至12中任一項之方法、供使用之群體或用途，其中該CD30陽性癌症係選自於：何杰金氏淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、退行性大細胞淋巴瘤、非特定周邊T細胞淋巴瘤、結外NK-T細胞淋巴瘤、非特定瀰漫性大B細胞淋巴瘤及原發性縱膈腔大B細胞淋巴瘤。
14. 如請求項1至13中任一項之方法、供使用之群體或用途，其中該個體先前已對該CD30陽性癌症治療失敗。
15. 如請求項1至14中任一項之方法、供使用之群體或用途，其中該CD30陽性癌症係一復發或頑抗性CD30陽性癌症。
16. 如請求項1至15中任一項之方法、供使用之群體或用途，其中表現CD30特異性CAR之T細胞包含一CAR，其包含：(i)一抗原結合域，其特異性地結合CD30，(ii)一跨膜域，及(iii)一信號傳導域，其中該信號傳導域包含：(a)一胺基酸序列，其衍生自CD28的細胞內域，及(b)一胺基酸序列，其包含一基於免疫受體酪胺酸之活化模體(ITAM)。
17. 如請求項16之方法、供使用之群體或用途，其中該信號傳導域包含與SEQ ID NO:26具有至少80%胺基酸序列同一性之一胺基酸序列。
18. 如請求項16或請求項17之方法、供使用之群體或用途，其中該跨膜域係衍生自CD28之跨膜域。
19. 如請求項16至18中任一項之方法、供使用之群體或用途，其中該跨膜域包含與SEQ ID NO:20具有至少80%胺基酸序列同一性之一胺基酸序列。
20. 如請求項16至19中任一項之方法、供使用之群體或用途，其中該抗原結合域包含與SEQ ID NO:14具有至少80%胺基酸序列同一性之一胺基酸序列，及與SEQ ID NO:15具有至少80%胺基酸序列同一性之一胺基酸序列。
21. 如請求項16至20中任一項之方法、供使用之群體或用途，其中該抗原結合域包含與SEQ ID NO:18具有至少80%胺基酸序列同一性之一胺基酸序列。
22. 如請求項16至21中任一項之方法、供使用之群體或用途，其中該信號傳導域包含：(a)一胺基酸序列，其係衍生自CD3ζ之細胞內域。
23. 如請求項16至22中任一項之方法、供使用之群體或用途，其中該信號傳導域包含與SEQ ID NO:25具有至少80%胺基酸序列同一性之一胺基酸序列。
24. 如請求項16至23中任一項之方法、供使用之群體或用途，其中該CAR額外包含一鉸鏈區，其被提供在介於該抗原結合域與該跨膜域之間。
25. 如請求項16至24中任一項之方法、供使用之群體或用途，其中該鉸鏈區包含與SEQ ID NO:33具有至少80%胺基酸序列同一性之一胺基酸序列。
26. 如請求項16至25中任一項之方法、供使用之群體或用途，其中該CAR包含與SEQ ID NO:35或36具有至少80%胺基酸序列同一性之一胺基酸序列。

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