TW202210071A

TW202210071A - 用於治療癌症的pd-1/pd-l1相互作用的小分子抑制劑和抗pd-1抗體的組合

Info

Publication number: TW202210071A
Application number: TW109133314A
Authority: TW
Inventors: 玉光王; 飛瀾王; 張農
Original assignee: 大陸商廣州再極醫藥科技有限公司
Priority date: 2020-09-11
Filing date: 2020-09-25
Publication date: 2022-03-16

Abstract

本發明提供了治療癌症的方法，其包括向有需要的受試者施用治療有效量的PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑、其藥學上可接受的鹽或其前藥，和治療有效量的抗PD-1抗體，其中，所述PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑不是蛋白質。

Description

用於治療癌症的PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑和抗PD-1抗體的組合

本發明涉及使用靶向PD-1和PD-L1相互作用的小分子抑制劑和抗PD-1抗體的組合治療癌症的方法。

PD-1（程序性死亡-1，CD279）是CD28超家族的成員，其主要分佈在例如T細胞、B細胞和NK細胞等免疫相關細胞中。它在例如自身免疫性疾病、腫瘤、感染、器官移植或變態反應的免疫應答過程中發揮重要作用。

程序性死亡-1（PD-1）是PD-L1的主要受體。程序性死亡-配體1（PD-L1）也稱為B7-H1，屬於B7家族，廣泛分佈於周圍組織和造血細胞中。它由多種例如IFN-γ的細胞因子誘導，並在T細胞、NK細胞、巨噬細胞、髓系樹突狀細胞（DCs），B細胞、上皮細胞和血管內皮細胞上表達。PD-L1在各種腫瘤，例如肺癌、胃癌、黑素瘤和乳腺癌中高度表達，據認為可以幫助癌症逃避宿主免疫系統。

PD-1/PD-L1發揮負免疫調節作用。例如，當T細胞表面的PD-1與腫瘤細胞或腫瘤相關巨噬細胞表面的PD-L1相互作用時，這種相互作用會引起一系列信號傳導應答，從而導致T淋巴細胞增殖和相關細胞因子的分泌受到抑制，腫瘤抗原特異性T細胞的凋亡和/或無法免疫，最終抑制免疫應答並促進腫瘤細胞的逃逸。靶向PD-1或PD-L1的單克隆抗體可通過特異性阻斷PD-1/PD-L1的相互作用來破壞腫瘤的免疫耐受性，恢復腫瘤特異性T細胞對腫瘤細胞的殺傷功能，並實現腫瘤清除。到目前為止，在中國和美國有四種PD-1抗體藥物和四種PD-L1抗體藥物。被批准的PD-1抗體藥物包括默克公司（Merck）的Keytruda^® （pembrolizumab）、必治妥施貴寶公司（Bristol-Myers Squibb）的Opdivo^® （nivolumab）、君實生物醫藥公司（Junshi Bioscience）的特瑞普利單抗（Toripalimab）、恒瑞醫藥（Hengrui Medicine）的卡瑞利珠單抗（Camrelizumab）和信達公司（Innovent）的信迪利單抗（Sintilimab）。被批准的PD-L1抗體藥物包括羅氏公司（Roche）的Atezolizumab^® 、阿斯利康公司（AstraZeneca）的Durvalumab^® 、輝瑞公司（Pfizer）和默克公司（Merck）（德國）的Avelumab^® 以及雷傑納榮公司（Regeneron）的Cemiplimab^® 。另外，許多其他公司正在開發靶向PD-1/PD-L1的抗體藥物。

許多癌症患者受益於針對PD-1/PD-L1的單克隆抗體。但是，研究發現PD-1/PD-L1抗體並非對所有癌症患者都是有效的。臨床試驗數據表明，單獨的PD-1/PD-L1抗體的有效應答率為約20%。

與PD-1/PD-L1結合的小分子抑制劑也在被積極開發。WO2018006795和WO2019128918（通過引用將其全部內容併入本文）公開了新型靶向PD-1和PD-L1相互作用的小分子抑制劑。其中公開的小分子抑制劑在小鼠腫瘤模型中表現出抗腫瘤效果。

需要提高癌症免疫療法中的有效應答率，特別是在對針對PD-1/PD-L1的單克隆抗體沒有應答的患者的情況下。

發明概述

本發明基於以下發現：與單獨的任何一種藥物相比，PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑和抗PD-1抗體的組合在治療癌症方面更有效。

在一方面，本發明提供了治療癌症的方法，其包括向有需要的受試者施用治療有效量的PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑、其藥學上可接受的鹽或其前藥，和治療有效量的抗PD-1抗體，其中所述PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑不是蛋白質。在一些實施方案中，所述抗PD-1抗體是單克隆抗體。例如，所述抗PD-1抗體可以是派姆單抗（pembrolizumab（Keytruda^® ））、納武單抗（nivolumab（Opdivo^® ））、西米單抗（cemiplimab（Libtayo^® ））、特瑞普利單抗、卡瑞利珠單抗或信迪利單抗。在一些實施方案中，所述PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑的分子量（MW）小於1500道耳頓。在一些實施方案中，所述PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑在PD-1/PD-L1結合試驗中的IC₅₀ 小於100nM。在一些實施方案中，所述PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑是芳香乙烯或芳香乙基類衍生物。在一優選實施方案中，所述PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑為呈游離或藥學上可接受的鹽形式的

化合物1 。

在一些實施方案中，所述方法進一步包括向所述受試者施用另外抗癌劑（例如，其他檢查點抑制劑（例如，抗CTLA-4抗體）或化學治療劑）。

在另一方面，本發明提供了PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑、其藥學上可接受的鹽或其前藥在製備用於與抗PD-1抗體聯合使用以治療癌症的藥物中的應用，其中，所述小分子抑制劑不是蛋白質。

發明內容

除非本文另有特別說明，否則單數形式的引用也可以包括複數形式。例如，「一個/種」可以指一個，或一個或多個。

下面列出用於描述本公開的各種術語的定義。除非在特定情況下另有限定外，這些定義適用於如整個說明書中所使用的術語，無論它們是單獨使用或是作為更大基團的一部分使用。本文闡述的定義優先於通過引用併入本文的任何專利、專利申請和/或專利申請公開中闡述的定義。

如本文所用，「藥學上可接受的」是指在合理的醫學判斷範圍內適用於與人類和動物的組織接觸而無過度毒性、刺激、變態反應或其他問題或併發症，與合理的收益/風險比相稱的那些化合物、材料、組合物和/或劑型。

如本文所用，「個體」或「受試者」是哺乳動物。哺乳動物包括但不限於家養動物（例如牛、綿羊、貓、狗和馬）、靈長類動物（例如人類和非人類靈長類動物，例如猴子）、兔子和齧齒動物（例如小鼠和大鼠）。在一些實施例中，個體或受試者是人類。

如本文所用，「蛋白質」是指由鏈中連接（每個胺基酸的α-羧基通過醯胺鍵與下一個胺基酸的α-氨基連接）的至少50個胺基酸組成的化合物，包括蛋白質多聚體，例如，抗體、翻譯後修飾的蛋白質（例如糖基化的蛋白質）以及與金屬複合的蛋白質。

如本文所用，「治療有效量」旨在包括單獨的本公開的化合物的量或所要求保護的化合物的組合的量或本公開的化合物與其他活性成分的組合的量，該化合物有效充當PD-1和PD-L1相互作用的抑制劑或有效治療或預防癌症。

如本文所用，「治療(“treatment” or “treating”)」是用於獲得有益的或期望的結果（包括並優選包括臨床結果）的方法。出於本發明的目的，有益的或期望的臨床結果包括但不限於以下一種或多種：減少由疾病引起的症狀，提高罹患疾病的人的生活質量，減少治療疾病所需的其他藥物的劑量，延緩疾病的進展，和/或延長個體的存活。

在本文中對「約」值或參數的提及包括（並描述）涉及該值或參數本身的實施例。例如，提及「約X」的描述包括「X」的描述。

應當理解，本文描述的本發明的實施例、方面和變型包括 “由實施例、方面和變型組成” 和/或 “基本上由實施例、方面和變型組成”。

在過去的50年，癌症藥物治療已經歷了從化學療法到靶向療法再到免疫療法的多個階段。雖然化學療法和靶向療法涉及藥物直接靶向癌細胞，而免疫療法則依靠藥物調節患者自身的免疫系統，進而殺死腫瘤細胞。因此，三種療法在治療效果和毒性方面存在差異。當前，免疫療法由於其對某些腫瘤的持久應答和副作用的低發生率而獲得了領導作用。

最成功的免疫療法是免疫檢查點抑制（ICI）療法。自2011年FDA批准伊匹單抗（ipilimumab, 抗CTLA4）用於治療轉移性黑素瘤以來，更多的全部靶向PD-1/PD-L1通路的免疫檢查點抑制劑已被批准用於治療多種腫瘤類型。ICI靶向腫瘤微環境（TME）內的T細胞和免疫抑制細胞之間的抑制性配體-受體相互作用，特別是腫瘤細胞介導的相互作用（Pardoll, D. M.Nat. Rev. Cancer[ 自然癌症綜述] 2012, 12, 252-264）。惡性腫瘤通常選擇免疫抑制和耐受機制以避免免疫破壞。抗PD-1或抗PD-L1抗體抑制T細胞負性共刺激以釋放識別腫瘤抗原的抗腫瘤T細胞應答。

在T和B淋巴細胞活化後表達的PD-1通過與PD-L1和PD-L2的相互作用來調節T細胞活化。（Wei, S. C.等人Cancer Discov. [癌症發現] 2018, 8(9), 1069-86）。當與PD-L1結合時，PD-1主要通過酪胺酸磷酸酶SHP2傳遞負性共刺激信號以減弱T細胞活化。因此，用抗PD-1/PD-L1抗體抑制PD-1/PD-L1通路可阻止負性共刺激信號，並恢復T細胞活化以實現腫瘤抑制。

對市售的PD-1/L1抗體藥物的廣泛研究已揭示了這些抗體藥物如何與它們的靶蛋白相互作用。已經公開了抗PD-1抗體派姆單抗與PD-1蛋白的結合結構。（Tan, S.等人Protein Cell [蛋白質與細胞] 2016, 7:866-877）。與hPD-1複合的派姆單抗片段的晶體結構顯示了對腫瘤的基於治療性抗體的免疫檢查點抑制的分子基礎。派姆單抗與hPD-1的相互作用主要位於兩個區域：柔性 C’D 環和 C, C’ 鏈。

抗PD-L1抗體藥物如德瓦魯單抗（Durvalumab）的蛋白結合模型也已經發表在Tan, S.等人Protein Cell [蛋白質與細胞] 2017中。基於德瓦魯單抗的PD-1/PD-L1阻斷的分子基礎是德瓦魯單抗VH和VL與PD-L1的無偏結合提供了空間位阻（steric clash）以消除PD-1/PD-L1的結合。因其殘基參與和配體的競爭性結合，該德瓦魯單抗完全不同於抗PD-1抗體派姆單抗。

這些抗PD1/L1抗體藥物在分子水平上的結合信息為我們設計下一代免疫檢查點抑制劑提供了關鍵起點。由於當前的抗體ICI療法僅適用於20%-30%的患者，因此迫切需要儘快開發下一代藥物。因此，下一代免疫檢查點抑制劑需要：1)相比當前的抗體療法對更多腫瘤具有更寬的治療應答；2)患者友好的口服給藥方案；3)有效的腦滲透力，以及4)對於副作用管理具有較短的半衰期。

在本發明中，已經發現，與單獨的任一藥物相比，PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑與抗PD-1抗體的組合在抑制腫瘤生長方面更有效。因此，本發明涉及用於治療癌症的PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑和抗PD-1抗體的組合。PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑和抗PD-1抗體聯合使用可為患者，尤其是對單獨的抗PD-1抗體治療無應答的患者，提供改善的免疫治療功效。此外，使用抗PD-1抗體的免疫療法的一個問題是，它們允許免疫系統攻擊體內的某些正常器官，這可能導致某些患者出現多種副作用。降低劑量的抗PD-1抗體和PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑的聯合使用可能有助於避免或減少由抗PD-1抗體引起的副作用。

在一個方面，本發明提供了一種治療癌症的方法（方法1），其包括向有需要的受試者施用治療有效量的PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑、其藥學上可接受的鹽或其前藥，和治療有效量的抗PD-1抗體，其中，所述PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑不是蛋白質，例如， 1.1 方法1，其中，所述小分子抑制劑與PD-L1結合。

1.2 方法1或1.1，其中，所述小分子抑制劑是芳香乙烯基或芳香乙基類衍生物。

1.3 上述任一方法，其中，所述小分子抑制劑的分子量（MW）小於1500道耳頓。

1.4 上述任一方法，其中，所述小分子抑制劑在PD-1/PD-L1結合試驗中（例如WO2018006795所述的試驗）的IC₅₀ 小於100nM。

1.5 方法1，其中，所述小分子抑制劑是芳香乙炔或芳香乙烯類PD-L1抑制劑，例如WO2018006795中所描述的，其通過引用併入本文。

1.6 方法1，其中，所述小分子抑制劑是芳香乙烯或芳香乙基類PD-L1抑制劑，例如WO2019128918中所描述的，其通過引用併入本文。

1.7 方法1，其中，所述小分子抑制劑是苄基苯基醚類PD-L1抑制劑，例如WO2015034820和/或WO2015160641中所描述的，其通過引用併入本文，例如BMS-1001或BMS-1166。

1.8 方法1，其中，所述小分子抑制劑是式（I）所示的芳香乙烯或芳香乙基類衍生物，或其藥學上可接受的鹽、代謝物、代謝前體或前藥；

（I）其中，

為單鍵或雙鍵；每個R¹ 相同或不同，各自獨立地為氘、鹵素、取代或未取代的羥基、取代或未取代的氨基、取代或未取代的烷基、或取代或未取代的烷氧基；或者相鄰的兩個R¹ 和與它們相連的苯基上碳原子共同形成一個5-7元的碳環或雜環；所述雜環中，雜原子為氧和/或氮，雜原子數為1-4個； R² 為取代或未取代的烷基或鹵素；每個R³ 相同或不同，各自獨立地為氘、鹵素、取代或未取代的烷硫基、取代或未取代的羥基、取代或未取代的氨基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烷氧基、

或

，其中，R^1a 為C₁ -C₄ 烷基，或者相鄰的兩個R³ 和與它們相連的苯基上碳原子共同形成一個5-7元的碳環或雜環；所述雜環中，雜原子為氧和/或氮，雜原子數為1-4個；當兩個R³ 相鄰，且相鄰的兩個R³ 和與它們相連的苯基上碳原子共同形成一個5-7元的碳環或雜環時，所述的碳環或雜環還進一步被C_1-4 的烷基中的一個或多個所取代；每個R¹ 、R² 和每個R³ 中所述的取代的烷基、每個R¹ 和每個R³ 中所述的取代的烷氧基，和每個R³ 中所述的取代的烷硫基中的取代基選自下列基團中的一個或多個：鹵素、C_1-4 烷基、羥基、

、C_1-4 烷氧基、C_1-4 羧基、C_1-4酯基和C_1-4 醯胺基；當取代基為多個時，所述的取代基相同或不同；R^a 和R^b 獨立地為鹵素、或、取代或未取代的烷基；R^a 和R^b 還可以獨立地為氫、或、取代或未取代的烷基；R^a 或R^b 中，所述的取代的烷基中的取代基選自下列基團中的一個或多個：鹵素、C₁ -C₄ 烷基、羥基、

、C₁ -C₄ 烷氧基、C₁ -C₄ 羧基、C₁ -C₄ 酯基或C₁ -C₄ 醯胺基；R^a1 和R^b1 獨立地為氫或C₁ -C₄ 烷基；每個R¹ 或每個R³ 中，所述的取代的羥基或所述的取代的氨基中的取代基選自下列基團中的一個或多個：C_1-4 烷基、C_1-4 烷氧基、C_1-4 羧基、C_1-4酯基和C_1-4 醯胺基； m為1、2或3； n為0、1、2或3；當

為雙鍵，m為2時，兩個R¹ 分別位於苯環的鄰位和間位，兩個R¹ 相同或不同；當

為雙鍵，m為3時，兩個R¹ 相鄰，且相鄰的兩個R¹ 和與它們相連的苯基上碳原子共同形成一個5-7元的雜環；或所述的式（I）所示的芳香乙烯或芳香乙基類衍生物中，

替換為取代或未取代的雜芳環，所述的雜芳環中的雜原子選自N、O和S，雜原子數為1-4個；所述的取代的雜芳環中的取代基選自下列基團中的一個或多個：鹵素、C_1-4 烷基、羥基、

、C_1-4 烷氧基、C_1-4 羧基、C_1-4酯基和C_1-4 醯胺基；所述的取代的雜芳環中的取代基還可以選自下列基團中的一個或多個：鹵素、C_1-4 烷基、羥基、

、C₁ -C₄ 烷氧基、C₁ -C₄ 羧基、C₁ -C₄ 酯基或C₁ -C₄ 醯胺基；R^a1 和R^b1 獨立地為氫或C₁ -C₄ 烷基；所述的式（I）所示的芳香乙烯或芳香乙基類衍生物不為下列化合物：

、

或

。

1.9 方法1，其中，所述小分子抑制劑為呈游離或藥學上可接受的鹽形式的式（II）所示的芳香乙炔或芳香乙烯類衍生物：

（II）其中，環A和環B獨立地為芳環或雜芳環； L為炔基、-C(R⁴ )=C(R⁵ )-或包含至少一個N的C₂ -C₁₀ 的雜芳基； X¹ 為N或-CR⁶ ； X² 為N或-CR⁷ ； X³ 為N或-CR⁸ ； X¹ 、X² 和X³ 不同時為N；每個R¹ 獨立地為氫、氘、取代或未取代的羥基、取代或未取代的氨基、鹵素、取代或未取代的烷基或取代或未取代的烷氧基；每個R² 獨立地為氫、氘、取代或未取代的羥基、取代或未取代的氨基、鹵素、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烷氧基、

或

，其中，R^1a 為C₁ -C₄ 烷基，或者相鄰的兩個R² 和與它們相連的B環上的兩個原子共同形成一個5-7元的取代或未取代的碳環或取代或未取代的雜環；所述雜環中，雜原子為氧和/或氮，雜原子數為1-4個； R³ 為氘、鹵素、氰基或取代或未取代的烷基； R⁴ 和R⁵ 分別獨立地為氫、氘、取代或未取代的烷基或取代或未取代的環烷基，或者R⁴ 、R⁵ 和與它們相連接的碳碳雙鍵一起形成一個5-7元的取代或未取代的碳環或取代或未取代的雜環；所述雜環中，雜原子為氧和/或氮，雜原子數為1-4個； R⁶ 、R⁷ 和R⁸ 分別獨立地為氫、氘、取代或未取代的羥基、鹵素、取代或未取代的氨基、取代或未取代的烷基或取代或未取代的烷氧基，或者R⁶ 、R⁷ 和與它們相連接的環C上的兩個原子共同形成一個5-7元的取代或未取代的雜環；或者R⁷ 、R⁸ 和與它們相連接的環C上的兩個原子共同形成一個5-7元的取代或未取代的雜環；所述雜環中，雜原子為氧和/或氮，雜原子數為1-4個； m為1、2或3； n為1或2；每個R¹ 中，所述的取代的烷基或所述的取代的烷氧基中的取代基為下列基團中的一個或多個：鹵素、C₁ -C₄ 烷基、羥基、

、苄基、氰基取代基的苄基、C₁ -C₄ 烷氧基、C₁ -C₄ 羧基、C₁ -C₄ 酯基或C₁ -C₄ 醯胺基；所述的取代的羥基或所述的取代的氨基中的取代基為下列基團中的一個或多個：C₁ -C₄ 烷基、苄基、氰基取代基的苄基、C₁ -C₄ 烷氧基、C₁ -C₄ 羧基、C₁ -C₄ 酯基或C₁ -C₄ 醯胺基；每個R² 中，所述的取代的烷基或所述的取代的烷氧基中的取代基為下列基團中的一個或多個：鹵素、C₁ -C₄ 烷基、羥基、

、C₁ -C₄ 烷氧基、C₁ -C₄ 羧基、C₁ -C₄ 酯基或C₁ -C₄ 醯胺基；所述的取代的羥基或所述的取代的氨基中的取代基為下列基團中的一個或多個：C₁ -C₄ 烷基、苄基、氰基取代基的苄基、C₁ -C₄ 烷氧基、C₁ -C₄ 羧基、C₁ -C₄ 酯基或C₁ -C₄ 醯胺基；當相鄰的兩個R² 和與它們相連的環B上的兩個原子共同形成一個5-7元的取代的碳環或取代的雜環時；所述的取代的碳環或所述的取代的雜環中的取代基為下列基團中的一個或多個：鹵素、C₁ -C₄ 烷基、羥基、

、C₁ -C₄ 烷氧基、C₁ -C₄ 羧基、C₁ -C₄ 酯基或C₁ -C₄ 醯胺基；當取代基為多個時，所述的取代基相同或不同； R⁴ 或R⁵ 中，所述取代的烷基或所述的取代的環烷基中的取代基為下列基團中的一個或多個：鹵素、C₁ -C₄ 烷基、羥基、氨基、C₁ -C₄ 烷氧基、C₁ -C₄ 羧基、C₁ -C₄ 酯基或C₁ -C₄ 醯胺基；當R⁴ 、R⁵ 和與它們相連接的碳碳雙鍵一起形成一個5-7元的取代的碳環或取代的雜環時，所述取代的碳環或所述的取代的雜環中的取代基為下列基團中的一個或多個：鹵素、C₁ -C₄ 烷基、羥基、

、C₁ -C₄ 羧基、C₁ -C₄ 酯基或C₁ -C₄ 醯胺基；當取代基為多個時，所述的取代基相同或不同； R⁶ 、R⁷ 或R⁸ 中，所述的取代的烷基或所述的取代的烷氧基中的取代基為下列基團中的一個或多個：鹵素、C₁ -C₄ 烷基、羥基、

、C₁ -C₄ 烷氧基、C₁ -C₄ 羧基、C₁ -C₄ 酯基或C₁ -C₄ 醯胺基；所述的取代的羥基或所述的取代的氨基中的取代基為下列基團中的一個或多個：C₁ -C₄ 烷基、苄基、氰基取代的苄基、C₁ -C₄ 烷氧基、C₁ -C₄ 羧基、C₁ -C₄ 酯基或C₁ -C₄ 醯胺基；當R⁶ 、R⁷ 和與它們相連接的環C上的兩個原子共同形成一個5-7元的取代的雜環；或者當R⁷ 、R⁸ 和與它們相連接的環C上的兩個原子共同形成一個5-7元的取代的雜環時；所述的取代的雜環中的取代基為下列基團中的一個或多個：鹵素、C_1-4 烷基、羥基、

、C₁ -C₄ 烷氧基、C₁ -C₄ 羧基、C₁ -C₄ 酯基或C₁ -C₄ 醯胺基；當取代基為多個時，所述的取代基相同或不同；

中，R¹¹ 和R¹² 獨立地為氫、取代或未取代的烷基、烷氧基、羥烷基、氨基烷基、取代或未取代的C₆ -C₁₄ 芳基、或取代或未取代的C₃ -C₆ 環烷基；或者R¹¹ 、R¹² 和與它們相連接的氮原子一起形成一個5-7元的取代或未取代的雜環；所述雜環中，雜原子為氮，或氮和氧，雜原子數為1-4個； R¹¹ 或R¹² 中，所述的取代的烷基、所述的取代的C₆ -C₁₄ 芳基或所述的取代的C₃ -C₆ 環烷基中的取代基為下列基團中的一個或多個：鹵素、C₁ -C₄ 烷基、羥基、

、C₁ -C₄ 烷氧基、C₁ -C₄ 羧基、C₁ -C₄ 酯基或C₁ -C₄ 醯胺基；R¹¹ 、R¹² 和與它們相連接的氮原子一起形成一個5-7元的取代或未取代的雜環時，所述的取代的雜環中的取代基為下列基團中的一個或多個：鹵素、C₁ -C₄ 烷基、取代的C₁ -C₄ 烷基、羥基、

、C₁ -C₄ 烷氧基、C₁ -C₄ 羧基、C₁ -C₄ 酯基或C₁ -C₄ 醯胺基；所述的取代的C₁ -C₄ 烷基中的取代基為下列基團中的一個或多個：鹵素、C₁ -C₄ 烷基、羥基、

中，R^a1 和R^b1 獨立地為氫、C₁ -C₄ 烷基或

，R^a11 為C₁ -C₄ 烷基。

1.10 方法1，其中，所述小分子抑制劑選自呈游離或藥學上可接受的鹽形式的下列化合物：

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

.

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

或

。

1.11 上述任一方法，其中，所述小分子抑制劑為呈游離或藥學上可接受的鹽形式的

化合物1 。

1.12 上述任一方法，其中，所述呈游離或藥學上可接受的鹽形式的小分子抑制劑為前藥形式，例如為生理上可水解的和可接受的酯的形式（例如，其中術語「生理上可水解的和可接受的酯」是指這類含有羥基或羧基的化合物的酯，它們在生理條件下可分別水解產生酸或醇，它們本身在一定劑量下具有生理耐受性，例如胺基酸酯）；例如，方法1.8-1.11中任何一所公開的化合物，其中，所述小分子抑制劑是羧酸或醇，所述前藥是此類小分子抑制劑羧酸或醇的生理可水解的和可接受的酯。

1.13 上述任一方法，其中，所述癌症為骨癌、胰腺癌、皮膚癌、頭或頸癌、皮膚或眼內惡性黑素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛門區域癌、胃癌、睾丸癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮內膜癌、子宮頸癌、陰道癌、外陰癌、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、食道癌、小腸癌、內分泌系統癌、甲狀腺癌、甲狀旁腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、慢性或急性白血病（包括急性髓性白血病、慢性髓性白血病、急性淋巴細胞性白血病、慢性淋巴細胞性白血病）、兒童實體瘤、淋巴細胞性淋巴瘤、膀胱癌、腎癌或尿道癌、腎盂癌、中樞神經系統（CNS）腫瘤、原發性CNS淋巴瘤、腫瘤血管生成、脊髓軸腫瘤、腦幹神經膠質瘤、垂體腺瘤、卡波西氏肉瘤、表皮樣癌、鱗狀細胞癌、T細胞淋巴瘤、環境誘導的癌症（包括由石棉誘導的那些）、不可切除或轉移性黑色素瘤、轉移性非小細胞肺癌、晚期腎細胞癌、復發性或進展性經典霍奇金淋巴瘤、復發性或轉移性頭頸部鱗狀細胞癌、局部晚期或轉移性尿道上皮癌、晚期肝細胞癌、轉移性小細胞肺癌、MSI-H/dMMR轉移性結直腸癌、原發性縱隔大B細胞淋巴瘤、胃或胃食管交界處腺癌、肝細胞癌、默克爾細胞癌、具有至少10 mmHg的間質液壓（IFP）的癌症或這些癌症的組合。

1.14 上述任一方法，其中，所述癌症為不可切除或轉移性黑色素瘤、轉移性非小細胞肺癌、晚期腎細胞癌、復發性或進展性經典霍奇金淋巴瘤、復發性或轉移性頭頸部鱗狀細胞癌、局部晚期或轉移性尿道上皮癌、晚期肝細胞癌、轉移性小細胞肺癌、MSI-H/dMMR轉移性結直腸癌、原發性縱隔大B細胞淋巴瘤、胃或胃食管交界處腺癌、子宮頸癌、肝細胞癌或默克爾細胞癌。

1.15 上述任一方法，其中，所述癌症為子宮頸癌、腎細胞癌、黑色素瘤、乳腺癌、結直腸癌或頭頸鱗狀細胞癌（HNSCC）。

1.16 上述任一方法，其中，所述癌症為乳腺癌。

1.17 上述任一方法，其中，所述癌症為黑色素瘤。

1.18 上述任一方法，其中，所述癌症為結直腸癌。

1.19 上述任一方法，其中，所述癌症為具有至少10 mmHg的間質液壓（IFP）的癌症。

1.20 上述任一方法，其中，所述受試者為人類。

1.21 上述任一方法，其中，所述小分子抑制劑口服施用。

1.22 上述任一方法，其中，所述小分子抑制劑以每天20-300 mg/kg、30-240 mg/kg、40-200 mg/kg、50-190 mg/kg、60-180 mg/kg、70-170 mg/kg、80-160 mg/kg、90-150 mg/kg或100-140 mg/kg的總劑量施用。

1.23 方法1-1.22中任一方法，其中，所述小分子抑制劑以約10-150 mg/kg、15-120 mg/kg、20-100 mg/kg、30-90 mg/kg或40-80 mg/kg體重的量每天兩次（BID）施用。

1.24 方法1-1.22中任一方法，其中，所述小分子抑制劑以約30 mg/kg、35 mg/kg、40 mg/kg、45 mg/kg、50 mg/kg、55 mg/kg、60 mg/kg、65 mg/kg、70 mg/kg、75 mg/kg、80 mg/kg、85 mg/kg、90 mg/kg、95 mg/kg、100 mg/kg、105 mg/kg、110 mg/kg、115 mg/kg、120 mg/kg、125 mg/kg、130 mg/kg、135 mg/kg、140 mg/kg、145 mg/kg或150 mg/kg體重的量BID施用。

1.25 方法1-1.22中任一方法，其中，所述小分子抑制劑以約30 mg/kg體重的量BID施用。

1.26 方法1-1.22中任一方法，其中，所述小分子抑制劑以約60 mg/kg體重的量BID施用。

1.27 方法1-1.22中任一方法，其中，所述小分子抑制劑以約90 mg/kg體重的量BID施用。

1.28 方法1-1.22中任一方法，其中，所述小分子抑制劑以約120 mg/kg體重的量BID施用。

1.29 上述任一方法，其中，所述小分子抑制劑與所述抗體同時施用。

1.30 上述任一方法，其中，所述小分子抑制劑和所述抗體按順序施用。

1.31 上述任一方法，其中，所述抗體為單克隆抗體。

1.32 上述任一方法，其中，所述抗體為派姆單抗（pembrolizumab）、納武單抗（nivolumab）、西米單抗（cemiplimab）、特瑞普利單抗（toripalimab）、卡瑞利珠單抗（camrelizumab）或信迪利單抗（sintilimab）。

1.33 上述任一方法，其中，所述抗體為派姆單抗。

1.34 上述任一方法，其中，所述抗體為納武單抗。

1.35 上述任一方法，其中，所述抗體經靜脈內或皮下施用。

1.36 上述任一方法，其中，所述抗體經靜脈內施用。

1.37 上述任一方法，其中，所述抗體以0.1-50 mg/kg、0.2-10 mg/kg、0.3-5mg/kg、0.4-5 mg/kg、0.5-5 mg/kg、0.6-4 mg/kg、0.6-3 mg/kg、0.6-2 mg/kg、0.8-4 mg/kg、0.8-3 mg/kg、0.8-2 mg/kg、1-10 mg/kg、1-5 mg/kg、1-4 mg/kg、1-3 mg/kg、1-2 mg/kg或2-3 mg/kg的量，每週兩次（BIW）、每週一次、兩週一次、三週一次或四周一次施用。

1.38 上述任一方法，其中，所述抗體的劑量低於用作單一療法時的抗體劑量。

1.39 上述任一方法，其中，所述抗體為納武單抗，所述納武單抗以靜脈輸注的方式在30分鐘內以每2周至多240 mg或每4周至多480 mg的劑量施用。

1.40 上述任一方法，其中，所述抗體為派姆單抗，所述派姆單抗以靜脈輸注的方式在30分鐘內以每3周至多200 mg的劑量施用，直至疾病進展或出現不可接受的毒性。

1.41 上述任一方法，其中，所述受試者先前已經接受癌症治療。

1.42 方法1.41，其中，先前已經接受的癌症治療為化療。

1.43 方法1.42，其中，所述化療包括含鉑的化療劑。

1.44 方法1.42，其中，所述化療為含鉑的雙藥化療。

1.45 方法1.41，其中，先前已經接受的癌症治療包括施用抗PD-1抗體而不共同施用PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑。

1.46 方法1.41-1.45中任一方法，其中，所述受試者對先前已經接受的癌症治療無應答。

1.47 方法1.46，其中，先前已經接受的癌症治療產生了副作用，並且其中將相比於先前已經接受的癌症治療劑量降低的抗PD-1抗體和PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑共同施用。

1.48 上述任一方法，其中，所述受試者沒有明顯的自身免疫疾病的病史。

1.49 上述任一方法，其中，所述受試者尚未接受器官或骨髓移植。

1.50 上述任一方法進一步包括施用另外抗癌劑（例如，抗CTLA-4抗體（例如，伊匹單抗（ipilimumab））、激酶抑制劑（例如，與血管內皮生長因子（VEGF）結合的抑制劑）或化療藥物（例如，Ziv-阿柏西普（Ziv-aflibercept）、本妥昔單抗維多汀（Brentuximab Vedotin）、去鐵酮（Deferiprone）、吉西他濱（Gemcitabine）、普拉曲沙（Pralatrexate）、更昔洛韋（Ganciclovir）、纈更昔洛韋（Valganciclovir）、沙利度胺（Thalidomide）、羅米地辛（Romidepsin）、博賽潑維（Boceprevir）、地西他濱（Decitabine）、伊馬替尼（Imatinib）、托泊替康（Topotecan）、來那度胺（Lenalidomide）、紫杉醇（Paclitaxel）、奧氮平（Olanzapine）、伊立替康（Irinotecan）、帕利哌酮（Paliperidone）、干擾素（Interferons）、脂多糖（Lipopolysaccharide）、他莫昔芬（tamoxifen）、氟卡尼（Flecainide）（1C類心臟抗心律失常藥）、苯妥英（Phenytoin）、吲哚美辛（Indomethacin）、丙硫氧嘧啶（Propylthiouracil）、卡比馬唑（Carbimazole）、氯丙嗪（Chlorpromazine）、甲氧苄氨嘧啶(Trimethoprim)/磺胺甲噁唑(sulfamethoxazole)[複方新諾明(cotrimoxazole)]、氯氮平（Clozapine）、噻氯匹定（Ticlodipine）及其衍生物、環磷醯胺（Cyclophosphamide）、氮芥（Mechlorethanime）、苯丁酸氮芥（Chlorambucil）、米爾法蘭（Melphalan）、卡莫司汀（Carmustine）、洛莫司汀（Lomustine）、甲基苄肼（Procarbazine）、達卡巴嗪（Dacarbazine）、阿勒密胺（Altretamine）、順鉑（Cisplatin）、卡鉑（Carboplatin）、放線菌素D（Actinomycin D）、依託泊苷（Etoposide）、阿黴素、柔紅黴素（Doxorubicin & daunorubicin）、6-巰基嘌呤（6-Mercaptopurine）、6-硫鳥嘌呤（6-Thioguanine）、依達比星（Idarubicin）、表柔比星（Epirubicin）、米托蒽醌（Mitoxantrone）、硫唑嘌呤（Azathioprine）、2-氯脫氧腺苷（2-Chloro deoxyadenosine）、羥基脲（Hydroxyurea）、甲氨蝶呤（Methotrexate）、5-氟尿嘧啶（5-Fluorouracil）、阿糖胞苷（Cytosine arabinoside）、阿扎胞苷（Azacytidine）、磷酸氟達拉濱（Fludarabine phosphate）、長春新鹼（Vincristine）、長春鹼（Vinblastine）、長春瑞濱（Vinorelbine）、多西他賽（Docetaxel）、培美曲塞（Pemetrexed）、Nab-紫杉醇（Nab-paclitaxel）、達沙替尼（Dasatinib）、Paralatrexate、舒尼替尼（Sunitinib）或奧沙利鉑（Oxaliplatin））。

在另一方面，本發明提供了如本文所公開的PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑（例如，上述方法1.8-1.11中任一方法所公開的）在製備用於與抗PD-1抗體（例如，派姆單抗、納武單抗、西米單抗、特瑞普利單抗、卡瑞利珠單抗或信迪利單抗；又例如，派姆單抗或納武單抗）聯合使用以治療癌症的藥物中的應用，其中所述小分子抑制劑不是蛋白質，例如，根據方法1及以下任一種（Methods 1, et seq）。

在另一方面，本發明提供了抗PD-1抗體（例如，派姆單抗、納武單抗、西米單抗、特瑞普利單抗、卡瑞利珠單抗或信迪利單抗；又例如，派姆單抗或納武單抗）在製備用於與如本文所公開的PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑（例如，上述方法1.8-1.11中任一方法所公開的）聯用的藥物中的應用，其中所述小分子抑制劑不是蛋白質，例如，根據方法1及以下任一種。

在另一方面，本發明提供了抗PD-1抗體（例如，派姆單抗、納武單抗、西米單抗、特瑞普利單抗、卡瑞利珠單抗或信迪利單抗；又例如，派姆單抗或納武單抗）在製備用於與如本文所公開的PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑（例如，上述方法1.8-1.11中任一項所公開的）聯合使用以治療癌症的藥物中的應用，其中所述小分子抑制劑不是蛋白質，例如，根據方法1及以下任一種。

在另一方面，本發明提供了如本文所公開的PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑（例如，上述方法1.8-1.11中任一項所公開的），其用於與抗PD-1抗體（例如，派姆單抗、納武單抗、西米單抗、特瑞普利單抗、卡瑞利珠單抗或信迪利單抗；又例如，派姆單抗或納武單抗）聯合使用以治療癌症，其中所述小分子抑制劑不是蛋白質，例如，根據方法1及以下任一種。

在另一方面，本發明提供了抗PD-1抗體（例如，派姆單抗、納武單抗、西米單抗、特瑞普利單抗、卡瑞利珠單抗或信迪利單抗；又例如，派姆單抗或納武單抗），其用於與如本文所公開的PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑（例如，上述方法1.8-1.11中任一項所公開的）聯合，其中所述小分子抑制劑不是蛋白質，例如，根據方法1及以下任一種。

在另一方面，本發明提供了抗PD-1抗體（例如，派派姆單抗、納武單抗、西米單抗、特瑞普利單抗、卡瑞利珠單抗或信迪利單抗；又例如，派姆單抗或納武單抗），其用於與如本文所公開的PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑（例如，上述方法1.8-1.11中任一項所公開的）聯合使用以治療癌症，其中所述小分子抑制劑不是蛋白質，例如，根據方法1及以下任一種。

如本文所公開的PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑可以通過本領域已知的方法合成，例如，WO2018006795和WO2019128918中公開的方法。

在一些實施方案中，本發明提供了藥物組合物，其包含治療有效量的如本發明上文公開的PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑（例如，上述方法1.8-1.11中任一項所公開的），與治療有效量的抗PD-1抗體（例如，派姆單抗、納武單抗、西米單抗、特瑞普利單抗、卡瑞利珠單抗或信迪利單抗；又例如，派姆單抗或納武單抗）聯合使用以治療癌症。

用於與抗PD-1抗體聯合使用的藥物組合物可用於治療各種癌症，例如骨癌、胰腺癌、皮膚癌、頭或頸癌、皮膚或眼內惡性黑素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛門區域癌、胃癌、睾丸癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮內膜癌、子宮頸癌、陰道癌、外陰癌、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、食道癌、小腸癌、內分泌系統癌、甲狀腺癌、甲狀旁腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、慢性或急性白血病（包括急性髓性白血病、慢性髓性白血病、急性淋巴細胞性白血病、慢性淋巴細胞性白血病）、兒童實體瘤、淋巴細胞性淋巴瘤、膀胱癌、腎癌或尿道癌、腎盂癌、中樞神經系統（CNS）腫瘤、原發性CNS淋巴瘤、腫瘤血管生成、脊髓軸腫瘤、腦幹神經膠質瘤、垂體腺瘤、卡波西氏肉瘤、表皮樣癌、鱗狀細胞癌、T細胞淋巴瘤、環境誘導的癌症（包括由石棉誘導的那些）、不可切除或轉移性黑色素瘤、轉移性非小細胞肺癌、晚期腎細胞癌、復發性或進展性經典霍奇金淋巴瘤、復發性或轉移性頭頸部鱗狀細胞癌、局部晚期或轉移性尿道上皮癌、晚期肝細胞癌、轉移性小細胞肺癌、MSI-H/dMMR轉移性結直腸癌、原發性縱隔大B細胞淋巴瘤、胃或胃食管交界處腺癌、默克爾細胞癌、具有至少10 mmHg的間質液壓（IFP）的癌症或這些癌症的組合。

在一些實施方案中，可以將PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑和抗PD-1抗體的組合施用於先前已經接受過癌症治療的受試者，例如接受過化學療法或抗PD-1抗體療法而沒有和PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑共同施用。在一些實施方案中，本發明的聯合療法用於對先前的癌症治療無應答的患者。對於先前的抗PD-1抗體療法已引起副作用的受試者，可以將與先前的抗PD-1抗體療法相比劑量降低的抗PD-1抗體和PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑共同施用。

包含PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑的藥物組合物可以包括常規的藥學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。「治療有效量」可以根據受試者的類別、年齡、性別、嚴重程度和疾病類型、藥物活性、對藥物的敏感性、給藥時間、給藥途徑、排泄率等來確定。藥物組合物中的小分子抑制劑的量可以沒有特別限制地廣泛地變化，並且可以具體地為，相對於組合物的總量，0.00001重量％至10重量％，例如0.0001重量％至5重量％，或0.001重量％至1重量％。可以將藥物組合物配製成用於口服或非口服給藥的固體、液體、凝膠或混懸劑形式，例如片劑、大丸劑、散劑、顆粒劑、諸如硬或軟明膠膠囊的膠囊劑、乳劑、混懸劑、糖漿劑、乳化劑、濃縮液、滅菌水溶液、非水溶液、凍乾製劑、栓劑等。對於口服施用，包含PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑的藥物組合物可以呈例如片劑、膠囊、液體膠囊、懸浮液或液體的形式。藥物組合物優選地製成含有特定量的活性成分的劑量單位形式。例如，藥物組合物可以以包含約0.1至1000 mg範圍內的活性成分的量的片劑或膠囊提供。

本文考慮的任何藥物組合物可以例如通過任何可接受和合適的口服製劑口服遞送。示例性口服製劑包括但不限於例如片劑、糖錠、錠劑、水性和油性懸浮液、可分散的粉劑或顆粒劑、乳劑、硬膠囊和軟膠囊、液體膠囊、糖漿和酏劑。用於口服施用的藥物組合物可以根據本領域已知的用於製造用於口服施用的藥物組合物的任何方法來製備。為了提供藥學上可口的製劑，根據本公開的藥物組合物可以包含至少一種選自以下的試劑：甜味劑、調味劑、著色劑、緩和劑、抗氧化劑和防腐劑。

用於腸胃外施用的製劑可以呈水性或非水性等滲無菌注射溶液或懸浮液的形式。這些溶液和懸浮液可以由無菌粉末或顆粒、使用一種或多種提到的用於口服施用製劑中的載體或稀釋劑或者通過使用其他合適的分散劑或潤濕劑和懸浮劑來製備。化合物可溶於水、聚乙二醇、丙二醇、乙醇、玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、苯甲醇、氯化鈉、黃蓍膠和/或各種緩衝劑中。其他助劑和施用方式在製藥領域是眾所周知的。活性成分還可以作為與合適的載體（包括鹽水、右旋糖或水）或與環糊精（即Captisol）、增溶助溶劑（即丙二醇）或增溶膠束（即吐溫80）的組合物通過注射施用。

無菌可注射製劑還可以是在無毒的腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌可注射溶液或懸浮液，例如在1,3-丁二醇中的溶液。可以使用的可接受的媒介物和溶劑是水、林格氏溶液和等滲氯化鈉溶液。另外，通常採用無菌不揮發性油作為溶劑或懸浮介質。為此目的，可以使用任何溫和的不揮發性油，包括合成的單甘油單酯或甘油二酯。另外，發現脂肪酸（如油酸）可用於製備可注射劑。

無菌可注射的水包油微乳劑可以例如通過以下製備：1)將至少一種PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑溶解在油相，例如大豆油和卵磷脂的混合物中；2)將含有小分子抑制劑的油相與水和甘油的混合物合併；以及3)加工所述組合以形成微乳劑。

可以根據本領域已知的方法製備無菌水性或油性懸浮液。例如，無菌水溶液或懸浮液可以用無毒的腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑（例如1,3-丁二醇）製備；並且無菌油性懸浮液可以用無菌無毒的可接受的溶劑或懸浮介質（例如無菌的不揮發性油，例如合成的甘油單酯或甘油二酯）；和脂肪酸（例如油酸）製備。

可以在本公開的藥物組合物中使用的藥學上可接受的載體、助劑和媒介物包括但不限於離子交換劑，氧化鋁，硬脂酸鋁，卵磷脂，自乳化藥物遞送系統（SEDDS）例如d-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯，用於藥物劑型中的表面活性劑如吐溫，聚乙氧基化蓖麻油如CREMOPHOR表面活性劑（BASF）或其他類似的聚合物遞送基質，血清蛋白如人血清白蛋白，緩衝物質如磷酸鹽、甘胺酸、山梨酸、山梨酸鉀、飽和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物、水、鹽或電解質（如硫酸魚精蛋白、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽），膠體二氧化矽，三矽酸鎂，聚乙烯吡咯烷酮，纖維素基物質，聚乙二醇，羧甲基纖維素鈉，聚丙烯酸酯，蠟，聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物，聚乙二醇以及羊毛脂。環糊精（例如α-、β-和γ-環糊精）或化學修飾的衍生物（例如羥烷基環糊精，包括2-和3-羥丙基-環糊精）或其他可溶的衍生物也可以有利地用於增強具有文中所述式的化合物的遞送。

可以根據藥劑學的常規方法加工本公開的藥物活性PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑，以產生用於施用給患者（包括人類和其他哺乳動物）的藥劑。可以對藥物組合物進行常規的製藥操作，如滅菌，和/或其可以包含常規的助劑，例如防腐劑、穩定劑、潤濕劑、乳化劑、緩衝劑等。片劑和丸劑可另外用腸溶包衣製備。此類組合物還可包含助劑，例如潤濕劑、甜味劑、調味劑和芳香劑。

所施用的小分子抑制劑的量以及用本公開的小分子抑制劑和/或組合物治療疾病症狀的給藥方案取決於多種因素，包括年齡、體重、性別、受試者的醫學病症、疾病類型、疾病的嚴重程度、施用途徑和頻率以及所用的特定化合物。因此，給藥方案可以廣泛變化，但是可以使用標準方法常規地確定。約0.001至250 mg/kg體重、優選地約0.0025與約150 mg/kg體重之間、最優選地約0.005至120 mg/kg體重之間的日劑量可能是合適的。日劑量可以以每天一到四個劑量施用。其他給藥方案包括每週一個劑量和每兩天的週期一個劑量。在一些實施方案中，小分子製劑的可以以20-300 mg/kg體重、30-240 mg/kg體重、40-200 mg/kg體重、50-190 mg/kg體重、60-180 mg/kg體重、70-170 mg/kg體重、80-160 mg/kg體重、90-150 mg/kg體重或100-140 mg/kg體重的量每天施用。在其他實施方案中，小分子抑制劑可以以10-150 mg/kg體重、15-120 mg/kg體重、20-100 mg/kg體重、30-90 mg/kg體重或40-80 mg/kg體重的量每天兩次（BID）施用。

出於治療目的，PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑通常與適合於指定施用途徑的一種或多種助劑組合。如果口服施用，可將化合物與乳糖、蔗糖、澱粉粉末、鏈烷酸的纖維素酯、纖維素烷基酯、滑石、硬脂酸、硬脂酸鎂、氧化鎂、磷酸和硫酸的鈉鹽和鈣鹽、明膠、阿拉伯膠、海藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮和/或聚乙烯醇混合，然後壓片或封裝以方便施用。這樣的膠囊或片劑可以包含控釋製劑，其可以以活性化合物在羥丙基甲基纖維素中的分散體的形式提供。

抗PD-1抗體可以與藥學上可接受的載體一起配製，所述載體包括生理學上相容的任何溶劑、分散介質、等滲和吸收延遲劑等。所述載體可以適合於靜脈內、肌肉內、皮下、腸胃外、直腸、脊柱或表皮給藥（例如通過注射或輸液）。包含抗PD-1抗體的組合物可以是多種形式，其包括例如液體、半固體和固體劑型，諸如液體溶液（例如可注射和可輸液的溶液）、分散體或混懸劑、脂質體和栓劑。優選的形式取決於預期的給藥方式和治療應用。典型的優選組合物為可注射或可輸液溶液的形式。優選的給藥方式是腸胃外的（例如，靜脈內、皮下、腹膜內、肌肉內）。在一個優選的實施方案中，所述抗體通過靜脈內輸液或注射施用。在另一個優選的實施方案中，所述抗體通過肌肉內或皮下注射施用。

可以調節抗PD-1抗體的劑量方案以提供所需的最佳應答（例如，治療應答）。例如，可以單次推注、可以隨時間施用數個分開的劑量、或者可以根據治療情況的要求按比例減少或增加劑量。當抗PD-1抗體與PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑共同給藥時，抗PD-1抗體的劑量可以減少。在一些實施方案中，抗PD-1抗體可以以0.1-50 mg/kg、0.2-10 mg/kg、0.3-5 mg/kg、0.4-5 mg/kg、0.5-5 mg/kg、0.6-4 mg/kg，0.6-3 mg/kg、0.6-2 mg/kg、0.8-4 mg/kg、0.8-3 mg/kg、0.8-2 mg/kg、1-10 mg/kg、1-5 mg/kg、1-4 mg/kg、1-3 mg/kg、1-2 mg/kg或2-3 mg/kg的劑量，每週兩次（BIW）、每週一次、每兩週一次、每三週一次或每四周一次施用。

PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑和抗PD-1抗體可以與標準癌症治療，例如一種或多種其他治療劑（例如細胞毒性劑、放射毒性劑或免疫抑制劑）共同施用。PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑和抗PD-1抗體的組合可以在另一種治療劑之前、之後或同時施用，或者可以與其他已知的療法（例如抗癌療法，例如放射）共同施用。此類治療劑尤其包括抗腫瘤劑，例如多柔比星（阿黴素）、順鉑硫酸博來黴素、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、氮烯咪胺和環磷醯胺羥基脲，它們自身僅在對患者有毒性或亞毒性的水平上是有效的。順鉑每四周一次以100 mg/劑量經靜脈內施用，阿黴素每21天一次以60-75 mg/mL劑量經靜脈內施用。與不用化療劑的共同施用提供了兩種抗癌劑，這兩種抗癌劑通過對人類腫瘤細胞產生細胞毒性作用的不同機制起作用。這種共同施用可以解決由於腫瘤細胞抗藥性的發展或抗原性的改變（使得腫瘤細胞不與抗體反應）而引起的問題。

腫瘤通過多種機制逃避宿主免疫監視。可以通過由腫瘤表達並且具有免疫抑制性的蛋白質的失活來克服這些機制中的許多機制。這些尤其包括TGF-β（Kehrl, J.等人 (1986)J. Exp. Med.[ 實驗醫學雜誌] 163: 1037-1050）、IL-10（Howard, M.和O'Garra, A. (1992)Immunology Today [今日免疫學] 13: 198-200）和Fas配體（Hahne, M.等人 (1996) Science [科學] 274: 1363-1365）。關於這些實體中的每一種的大環肽可以與本公開的化合物組合使用，以抵消免疫抑制劑的作用並有助於宿主的腫瘤免疫應答。

激活宿主免疫應答的大環肽可以與抗PD-1組合使用。這些包括樹突狀細胞表面上的激活DC功能和抗原呈遞的分子。抗CD40大環肽能夠有效代替輔助性T細胞活性（Ridge, J.等人 (1998)Nature [自然] 393: 474-478），並可與PD-1大環肽結合使用（Ito, N.等人 (2000)Immunobiology [免疫生物學] 201 (5) 527-40）。將大環肽激活成T細胞共刺激分子也可提供增加的T細胞激活水平，所述T細胞共刺激分子例如CTLA-4（例如美國專利號5,811,097）、OX-40（Weinberg, A.等人 (2000)Immunol [免疫學] 164: 2160-2169）、4-1BB（Melero, I.等人 (1997)Nature Medicine [自然醫學] 3: 682-685 (1997)）和ICOS（Hutloff, A.等人 (1999)Nature [自然] 397: 262-266）。

血管內皮生長因子（VEGF）是促進血管生成的最重要的蛋白質之一，血管生成是從預先存在的血管網絡形成新血管的嚴格調控的過程（Ferrara, N., (2004),Endocrine Reviews [內分泌綜述], 25(4): 581-611）。在發育和諸如傷口癒合等正常生理過程中需要血管生成，並且血管生成還涉及許多疾病發病機理，包括AMD、RA、糖尿病性視網膜病變、腫瘤生長和轉移。已顯示抑制血管生成在治療應用中是有效的。

當與PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑和抗PD-1抗體聯合使用時，上述其他治療劑可以例如以醫生桌上參考手冊（Physicians' Desk Reference，PDR）中指示的量或由本領域通常知識者另外確定的量使用。在本公開的方法中，此類其他治療劑可以在如方法1及以下中所公開的PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑和抗PD-1抗體的施用之前、同時或之後施用。

在以下實施例中進一步限定本公開。應當理解，實施例僅以舉例說明的方式給出。根據以上討論和實施例，本領域通常知識者可以確定本公開的基本特徵，並且在不脫離其精神和範圍的情況下，可以進行各種改變和修改以使本公開適應多種用途和條件。因此，本公開不限於下文闡述的說明性實施例，而是由所附申請專利範圍限定。

實施例1：化合物1的體外結合研究

生物學試驗：使用PD-1/PD-L1均相時間分辨螢光（HTRF）結合試驗法研究本文公開的化合物結合PD-L1的能力。

化合物1

所有結合研究均在HTRF試驗緩衝液中進行，該緩衝液由補充了0.1%（w/v）牛血清白蛋白和0.05%（v/v）吐溫-20的dPBS組成。對於PD-1-Ig/PD-L1-His結合試驗，將抑制劑與PD-L1-His（最終10 nM）在4 μL試驗緩衝液中預孵育15分鐘，然後加入在1.mu.l試驗緩衝液中的PD-1-Ig（最終20 nM），再孵育15分鐘。使用來自人類、食蟹猴或小鼠的PD-L1。使用銪穴狀物標記的抗Ig（最終1 nM）和別藻藍蛋白（APC）標記的抗His（最終20 nM）來實現HTRF檢測。將抗體在HTRF檢測緩衝液中稀釋，並將5.mu.l分配在結合反應的頂部。使反應混合物平衡30分鐘，並使用EnVision螢光計獲得信號（665 nm/620 nm比率）。在PD-i-Ig/PD-L2-His（分別為20和5 nM）、CD80-His/PD-L1-Ig（分別為100和10 nM）和CD80-His/CTLA4-Ig（分別為10和5 nM）之間建立另外的結合試驗。如下進行生物素化多肽（AISGGGGSTYYADSVKD）與人PD-L1-His之間的競爭研究。將抑制劑與PD-L1-His（最終10 nM）在4 .mu.l測定緩衝液中預孵育60分鐘，然後加入在1 .mu.l測定緩衝液中的生物素化多肽（最終0.5 nM）。使結合平衡30分鐘，然後加入在5 μL HTRF緩衝液中的銪穴狀物標記的鏈黴親和素（最終2.5 pM）和APC標記的抗His（最終20 nM）。使反應平衡30分鐘，並使用EnVision螢光計獲得信號（665 nm/620 nm比率）。在HTRF試驗中，化合物有效抑制hPD-1和hPD-L1之間的結合，IC₅₀ 為19 nM。

為了測量該化合物的細胞活性，使用了PD-L1抑制的T細胞的激活方案。在此方案中，用人PD-L1穩定轉染人Hep3B細胞。通過與這些PD-L1轉染的細胞共培養使含有PD-1的人T細胞失活。然後選擇抗PD-1抗體Keytruda^® 作為參考，以分析該化合物對PD-L1抑制的人T細胞的激活。以劑量依賴性方式，該化合物有效地恢復了PD-L1抑制的人T細胞的激活，這通過將Keytruda用作陽性對照時細胞因子IFN-g的增加來表明。

實施例2：化合物1在BALB/c小鼠的皮下4T1鼠乳腺癌模型中的抗腫瘤功效的體內試驗

4T1鼠類乳腺癌是一種可移植的腫瘤細胞系，具有高度致瘤性、侵襲性，能夠自乳腺原發腫瘤轉移至多個遠處，包括淋巴結、血液、肝臟、肺、腦和骨。

實驗所需的材料：抗體：小鼠PD-1抗體，產品規格：7.09 mg/mL（50 mg/mL），批號：695318A1，購自BioXcell公司，在4°C下儲存。實驗動物：60只BALB/C小鼠，雌性，約6-8周齡，約20-23 g，購自上海靈昌生物技術有限公司（Shanghai Lingchang Biotechnology Co. Ltd.）。配製材料：蓖麻油（Cremophor RH40），CAS號：61788-85-0，批號：29761847G0，購自上海協泰化工有限公司（Shanghai Xietai Chemical Co. Ltd.）；β-環糊精（SBE-β-CD），CAS號：128446-35-5，批號：20180110，購自上海韶遠化工有限公司（Shanghai Shaoyuan Chemical Co. Ltd.）；RPMI-1640培養基，產品號：1869036，批號：11875-093，購自Gibco有限公司（Gibco Co. Ltd.）；PBS，產品號：SH30256.01，批號：AB10141338，購自HyClone有限公司（HyClone Co. Ltd.）；胎牛血清：CAS號：10099-141，批號：1966174C，購自Gibco有限公司。

細胞製備和植入：將4T1細胞（CRL-2539™）與補充有10%熱滅活的FBS的RPMI 1640一起在37℃下在5% CO₂ 培養箱中進行培養。每週將細胞傳代3次。收穫細胞，計數並傳代，約70%匯合時進行接種。

腫瘤細胞接種和分組施用：將含有1 x 10⁵ 4T1腫瘤細胞（懸浮在基礎RPMI-1640培養基中的細胞）的50 uL細胞懸浮液接種到小鼠左腹部的第四個脂肪墊中。接種後第二天，根據腫瘤接種的順序，採用分層隨機進行分組，並在分組當天開始給藥。

測試物質的製備：製劑的製備：在磁力攪拌下將490 mL無菌水加入容量瓶中以形成渦流。用勺子將100 g蓖麻油（Cremophor RH40）緩慢地加入渦流中，並保持溶液攪拌。加入200 g β-環糊精（SBE-β-CD），同時保持溶液攪拌直至溶液澄清，將總體積設定為1000 mL，其含有10%（w/v）Cremophor RH40 + 20%（w/v）SBE-β-CD水溶液。

化合物懸浮液的製備：稱量178.88 mg化合物，並加入14.817 mL 10%（w/v）Cremophor RH40 + 20%（w/v）SBE-β-CD水溶液。通過在磁力攪拌下充分混合，獲得濃度為12.0 mg/mL的懸浮液。移液7.0 mL濃度為12.0 mg/mL的化合物懸浮液，並加入7.0 mL水性製劑溶液。通過在磁力攪拌下充分混合，獲得濃度為6.0 mg/mL的懸浮液。移液7.0 mL濃度為6.0 mg/mL的化合物懸浮液，並加入7.0 mL水性製劑溶液。通過在磁力攪拌下充分混合，獲得濃度為3.0 mg/mL的懸浮液。移液7.0 mL濃度為3.0 mg/mL的化合物懸浮液，並加入7.0 mL水性製劑溶液。通過在磁力攪拌下充分混合，獲得濃度為1.5 mg/mL的懸浮液。每天製備化合物懸浮液一次。

mPD-1抗體的製備：移液0.339 mL mPD-L1抗體（7.09 mg/mL）原始溶液，並加入2.061 mL PBS溶液。將溶液充分混合，獲得最終濃度為1 mg/mL的溶液。

步驟：將媒介物組中的小鼠秤重並根據其體重數記錄在電子天秤中。對媒介物組中的小鼠根據其體重通過口服施用每天兩次給予所製備的製劑溶液，容量為0.1 mL/10 g。

將抗體（10 mg/kg）組中的小鼠秤重並根據其體重數記錄在電子天秤中。對抗體組中的小鼠根據其體重通過IP施用每週兩次給予所製備的抗體溶液，容量為0.1 mL/10 g。

將化合物（15 mg/kg）組中的小鼠秤重並根據其體重數記錄在電子天秤中。對該組中的小鼠根據其體重通過口服施用每天兩次給予所製備的化合物懸浮液，容量為0.1 mL/10 g。

將化合物（30 mg/kg）組中的小鼠秤重並根據其體重數記錄在電子天秤中。對該組中的小鼠根據其體重通過口服施用每天兩次給予所製備的化合物懸浮液，容量為0.1 mL/10 g。

將化合物（60 mg/kg）組中的小鼠秤重並根據其體重數記錄在電子天秤中。對該組中的小鼠根據其體重通過口服施用每天兩次給予所製備的化合物懸浮液，容量為0.1 mL/10 g。

將化合物（120 mg/kg）組中的小鼠秤重並根據其體重數記錄在電子天秤中。對該組中的小鼠根據其體重通過口服施用每天兩次給予所製備的化合物懸浮液，容量為0.1 mL/10 g。

每週用數字遊標卡尺測量腫瘤三次並計算腫瘤體積。如果腫瘤的大小超過2000 mm³ ，或當動物具有嚴重的疾病、疼痛或不能自由進食和飲水時，則實施安樂死。每天通過電子天秤測量動物的體重。當動物明顯瘦弱並且其體重減少超過20%時，則需要安樂死。在施用化合物後20天，實驗結束。

如下計算腫瘤抑制率： TGI（%）=(1-(給藥當天的腫瘤體積-給藥第一天的腫瘤體積)/(給藥當天的腫瘤體積-媒介物組第一天的腫瘤體積) x 100%。

使用GraphPad Prism 5.0軟件，通過雙因子變異數分析來分析小鼠的腫瘤體積變化，並根據邦費羅尼（Bonferroni）事後檢驗方法與媒介物組比較，P ＜ 0.05被認為是顯著不同的。

在該測定中，化合物1和mPD-1抗體在腫瘤生長抑制（TGI）中表現出相似的功效。此外，化合物1的最小有效劑量為30 mpk（p ＜ 0.05）。結果總結在表1中。

表1：化合物1在BALB/c小鼠的皮下4T1鼠乳腺癌模型中的抗腫瘤功效的體內試驗結果。

組	腫瘤體積（mm³ ）	TGI（%）	p-值
媒介物對照	860.89 ± 42.52	--	--
mPD-1抗體，10 mg/kg，IP，BIW	700.96 ± 39.56	18.58	＜ 0.001
化合物1，15 mg/kg，PO，BID	689.03 ± 43.97	19.96	＜ 0.001
化合物1，30 mg/kg，PO，BID	573.9 ± 43.18	33.34	＜ 0.001
化合物1，60 mg/kg，PO，BID	548.24 ± 31.39	36.32	＜ 0.001
化合物1，120 mg/kg，PO，BID	503.16 ± 32.93	41.55	＜ 0.001

實施例3：化合物1和mPD-1抗體在B16F10模型中的抗腫瘤功效的體內試驗

實驗所需的材料：抗體：小鼠PD-1抗體，產品規格：7.09 mg/mL（50 mg/mL），批號：695318A1，購自BioXcell公司，在4°C下儲存。實驗動物：60只C57BL/6小鼠，雌性，約6-8周齡，約17-21 g，購自上海靈昌生物技術有限公司。配製材料：蓖麻油（Cremophor RH40），CAS號：61788-85-0，批號：29761847G0，購自上海協泰化工有限公司；β-環糊精（SBE-β-CD），CAS號：128446-35-5，批號：20180110，購自上海韶遠化工有限公司；DMEM培養基，產品號：11995-065，批號：2025378，購自Gibco有限公司；PBS，產品號：SH30256.01，批號：AB10141338，購自HyClone有限公司；胎牛血清：產品號：04-002-1A，批號：1625436，購自百靈佳殷格翰公司（Boehringer Ingelheim Co. Ltd.）；甲基纖維素（MC），產品號：M7027-250G，批號：079K0054V，購自西格瑪公司（Sigma）。

細胞製備和植入：在37°C下在5% CO₂ 的空氣氣氛中，將B16-F10腫瘤細胞（ATCC CRL-6475™）在補充有10%熱滅活的胎牛血清的DMEM培養基中作為單層培養物體外保存。通過胰蛋白酶-EDTA處理，每週三次常規傳代培養腫瘤細胞。收穫生長到約70%-80%匯合的細胞，並計數用於腫瘤接種。

腫瘤細胞接種和分組施用：將含有1 x 10⁶ B16F10腫瘤細胞（懸浮在基礎DMEM培養基中的細胞）的100 μL細胞懸浮液接種到小鼠的右側皮下。接種後第二天，根據腫瘤接種的順序，採用分層隨機進行分組，並在分組當天開始給藥。

測試物質的製備：製劑的製備：在磁力攪拌下將700 mL無菌水加入容量瓶中以形成渦流。用勺子將100 g蓖麻油（Cremophor RH40）緩慢地加入渦流中，並保持溶液攪拌。加入200 g β-環糊精（SBE-β-CD），同時保持溶液攪拌直至溶液澄清，將總體積設定為1000 mL，其含有10%（w/v）Cremophor RH40 + 20%（w/v）SBE-β-CD水溶液。

化合物懸浮液的製備：稱量169.16 mg化合物，並加入14.012 mL 10%（w/v）Cremophor RH40 + 20%（w/v）SBE-β-CD水溶液，通過在磁力攪拌下充分混合，獲得濃度為12.0 mg/mL的懸浮液。移液6.0 mL濃度為12.0 mg/mL的化合物懸浮液，並加入6.0 mL水性製劑溶液。通過在磁力攪拌下充分混合，獲得濃度為6.0 mg/mL的懸浮液。移液6.0 mL濃度為6.0 mg/mL的化合物懸浮液，並加入6.0 mL水性製劑溶液。通過在磁力攪拌下充分混合，獲得濃度為3.0 mg/mL的懸浮液。每天製備化合物懸浮液一次。

mPD-1抗體的製備：移液0.564 mL mPD-L1抗體（7.09 mg/mL）原始溶液，並加入3.307 mL PBS溶液。將溶液充分混合，獲得最終濃度為1 mg/mL的溶液。

將組合組（化合物，60 mg/kg；mPD-1，10 mg/kg）中的小鼠秤重並根據其體重數記錄在電子天秤中。對該組中的小鼠根據其體重通過口服施用每天兩次給予所製備的化合物懸浮液，容量為0.1mL/10 g，並且根據其體重通過IP施用每週兩次給予小鼠抗體溶液，容量為0.1 mL/10 g。

每週用數字遊標卡尺測量腫瘤三次並計算腫瘤體積。如果腫瘤的大小超過2000 mm³ ，或動物具有嚴重的疾病、疼痛或不能自由進食和飲水，則實施安樂死。每天通過電子天秤測量動物的體重。當動物明顯瘦弱並且其體重減少超過20%時，則需要安樂死。在施用化合物後20天，實驗結束。

如下計算腫瘤抑制率： TGI（%）= (1-(給藥當天的腫瘤體積-給藥第一天的腫瘤體積)/(給藥當天的腫瘤體積-媒介物組第一天的腫瘤體積) x 100%。

使用GraphPad Prism 5.0軟件，通過雙因子變異數分析來分析小鼠的腫瘤體積變化，並根據邦費羅尼事後檢驗方法與媒介物組比較，P ＜ 0.05被認為是顯著不同的。

結果表明，該化合物可以顯著抑制小鼠皮下移植的黑素瘤細胞系的生長，並且其在C57BL/6小鼠中具有良好的耐受性，且沒有明顯的不良反應。此外，結果表明，相比於單獨的任何一種藥物，化合物1和小鼠PD-1抗體的組合在抑制腫瘤生長方面更加有效。結果總結在表2中。

表2：化合物在B16F10模型中的抗腫瘤功效的體內試驗結果

組	腫瘤體積（mm³ ）	TGI（%）	p-值
媒介物對照	1235.87 ± 220.28	--	--
mPD-1抗體，10 mg/kg，IP，BIW	693.74 ± 272.23	43.87	0.0007
化合物，30 mg/kg，PO，BID	795.99 ± 112.92	35.59	0.0098
化合物，60 mg/kg，PO，BID	755.48 ± 155.85	38.87	0.0037
化合物，120 mg/kg，PO，BID	650.67 ± 157.53	47.35	0.0002
mPD-1抗體，10 mg/kg，IP，BIW + 化合物，60 mg/kg，PO，BID	487.05 ± 131.39	60.59	＜ 0.0001

實施例4：化合物1和人PD-1抗體在4T1人源化小鼠模型中的抗腫瘤功效的體內試驗

在37°C下在5% CO₂ 的空氣氣氛中，4T1腫瘤細胞（ATCC，CRL-2539^TM ）在補充有10％熱滅活的胎牛血清的RPMI 1640培養基中作為單層培養物體外保存。通過胰蛋白酶-EDTA處理，每週常規將腫瘤細胞傳代培養3次。每只小鼠在第四對乳腺處皮下注射0.05mL基礎培養基中的1x10⁵ 細胞用於腫瘤生長。

化合物1+Opdivo（納武單抗）：將40只BALB/c小鼠在第四對乳腺處皮下注射4T1細胞用於腫瘤生長。接種後六天，基於腫瘤體積，使用分層隨機分組法將小鼠分為4組，每組10只。從隨機分組當天開始治療，各組分別接受以下治療：第一組：媒介物對照；第二組：Opdivo（10 mg/kg，i.p.，BIW）；第三組：化合物1（60mg/kg，p.o.，BID）和第四組：化合物1（60 mg/kg，p.o.，BID）+ Opdivo（10 mg/kg，i.p.，BIW）。在治療期間每週測量三次腫瘤大小。

評價化合物1和Opdivo的組合對於腫瘤生長抑制作用。如下計算腫瘤抑制率： TGI（%）=(1-(給藥當天的腫瘤體積-給藥第一天的腫瘤體積)/(給藥當天的腫瘤體積-媒介物組第一天的腫瘤體積) x 100%。

表3中總結的結果顯示了在第13天時四組的腫瘤生長抑制率（％）。聯用組（Opdivo+化合物1）在第14天的腫瘤生長抑制率（％）為34.65％，而Opdivo組和化合物1組在第13天的腫瘤生長抑制率（％）分別為21.88％和21.70％。結果顯示，相比於單獨使用任一藥物，化合物1和Opdivo的組合在第10天能夠更有效地抑制腫瘤生長。備註：Opdivo是一種人PD-1人源化抗體，對小鼠有一定毒性。在第14天接受第5劑Opdivo後，在給藥1小時內發現小鼠死亡。因此，在第13天收集數據。

表3：化合物1和PD-1抗體Opdivo在4T1人源化小鼠模型中的抗腫瘤功效的體內試驗結果

組	第13天的TGI（%）	p-值
媒介物對照	--	--
Opdivo（抗-hPD-1），10 mg/kg，IP，BIW	21.88	＜0.0001
化合物1，60 mg/kg， PO，BID	21.70	＜0.0001
化合物1，60 mg/kg，PO，BID +Opdivo（抗hPD-L1），10 mg/kg，IP，BIW	34.65	＜0.0001

化合物1+Keytruda（派姆單抗）：將40只BALB/c小鼠在第四對乳腺處皮下注射4T1細胞用於腫瘤生長。接種後六天，基於腫瘤體積，使用分層隨機分組法將小鼠分為4組，每組10只。從隨機分組當天開始治療，各組分別接受以下治療：第一組：媒介物對照；第二組：Keytruda（10 mg/kg，i.p.，BIW）；第三組：化合物1（60mg/kg，p.o.，BID）和第四組：化合物1（60 mg/kg，p.o.，BID）+ Keytruda（10 mg/kg，i.p.，BIW）。在治療期間每週測量三次腫瘤大小。

評價化合物1和Keytruda的組合對於腫瘤生長抑制作用。如下計算腫瘤抑制率： TGI（%）=(1-(給藥當天的腫瘤體積-給藥第一天的腫瘤體積)/(給藥當天的腫瘤體積-媒介物組第一天的腫瘤體積) x 100%。

表4中總結的結果顯示了在第10天時四組的腫瘤生長抑制率（％）。聯用組（Keytruda+化合物1）在第10天的腫瘤生長抑制率（％）為23.85％，而Keytruda組和化合物1組在第10天的腫瘤生長抑制率（％）分別為9.12％和22.36％。結果顯示，相比於單獨使用任一藥物，化合物1和Keytruda的組合在第10天能夠更有效地抑制腫瘤生長。備註：Keytruda是一種人PD-1人源化抗體，對小鼠有一定毒性。在第10天接受第4劑Keytruda注射後，在給藥1小時內發現小鼠死亡。因此，在第10天給藥Keytruda之前收集數據。

表4：化合物1和PD-1抗體Keytruda在4T1人源化小鼠模型中的抗腫瘤功效的體內試驗結果

組	第10天的TGI（%）	p-值
媒介物對照	--	--
Keytruda（抗-hPD-1），10 mg/kg，IP，BIW	9.12	＞0.5
化合物1，60 mg/kg， PO，BID	22.36	＜0.0001
化合物1，60 mg/kg，PO，BID +Keytruda（抗hPD-1），10 mg/kg，IP，BIW	23.85	＜0.0001

雖然已經參考實施例描述了本發明，但是本領域通常知識者應理解，在不脫離如所附權利要求限定的本發明的範圍的情況下，可以在其中進行各種修改和變化。

無

Claims

一種PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑、其藥學上可接受的鹽或其前藥在製備用於與抗PD-1抗體聯合使用以治療癌症的藥物中的應用，其中，所述小分子抑制劑不是蛋白質；或一種抗PD-1抗體在製備用於與PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制劑、其藥學上可接受的鹽或其前藥聯合使用以治療癌症的藥物中的應用，其中，所述小分子抑制劑不是蛋白質。
如請求項1所述的應用，其中所述小分子抑制劑的分子量小於1500道耳頓；和/或，所述小分子抑制劑在PD-1/PD-L1結合試驗中的IC₅₀ 小於100nM；和/或，所述小分子抑制劑與PD-L1結合。
如請求項1所述的應用，其中所述小分子抑制劑為式（I）所示的芳香乙烯或芳香乙基類衍生物，或其藥學上可接受的鹽、代謝物、代謝前體或前藥；
（I）其中，
為單鍵或雙鍵；每個R¹ 相同或不同，各自獨立地為氘、鹵素、取代或未取代的羥基、取代或未取代的氨基、取代或未取代的烷基、或取代或未取代的烷氧基；或者相鄰的兩個R¹ 和與它們相連的苯基上碳原子共同形成一個5-7元的碳環或雜環；所述雜環中，雜原子為氧和/或氮，雜原子數為1-4個； R² 為取代或未取代的烷基或鹵素；每個R³ 相同或不同，各自獨立地為氘、鹵素、取代或未取代的烷硫基、取代或未取代的羥基、取代或未取代的氨基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烷氧基、
或
，其中，R^1a 為C₁ -C₄ 烷基，或者相鄰的兩個R³ 和與它們相連的苯基上碳原子共同形成一個5-7元的碳環或雜環；所述雜環中，雜原子為氧和/或氮，雜原子數為1-4個；當兩個R³ 相鄰，且相鄰的兩個R³ 和與它們相連的苯基上碳原子共同形成一個5-7元的碳環或雜環時，所述的碳環或雜環還進一步被C_1-4 的烷基中的一個或多個所取代；每個R¹ 、R² 和每個R³ 中所述的取代的烷基、每個R¹ 和每個R³ 中所述的取代的烷氧基，和每個R³ 中所述的取代的烷硫基中的取代基選自下列基團中的一個或多個：鹵素、C_1-4 烷基、羥基、
、C_1-4 烷氧基、C_1-4 羧基、C_1-4酯基和C_1-4 醯胺基；當取代基為多個時，所述的取代基相同或不同；R^a 和R^b 獨立地為鹵素、或、取代或未取代的烷基；R^a 和R^b 還可以獨立地為氫、或、取代或未取代的烷基；R^a 或R^b 中，所述的取代的烷基中的取代基選自下列基團中的一個或多個：鹵素、C₁ -C₄ 烷基、羥基、
、C₁ -C₄ 烷氧基、C₁ -C₄ 羧基、C₁ -C₄ 酯基或C₁ -C₄ 醯胺基；R^a1 和R^b1 獨立地為氫或C₁ -C₄ 的烷基；每個R¹ 或每個R³ 中，所述的取代的羥基或所述的取代的氨基中的取代基選自下列基團中的一個或多個：C_1-4 烷基、C_1-4 烷氧基、C_1-4 羧基、C_1-4酯基和C_1-4 醯胺基； m為1、2或3； n為0、1、2或3；當
為雙鍵，m為2時，兩個R¹ 分別位於苯環的鄰位和間位，兩個R¹ 相同或不同；當
為雙鍵，m為3時，兩個R¹ 相鄰，且相鄰的兩個R¹ 和與它們相連的苯基上碳原子共同形成一個5-7元的雜環；或所述的式（I）所示的芳香乙烯或芳香乙基類衍生物中，
替換為取代或未取代的雜芳環，所述的雜芳環中的雜原子選自N、O和S，雜原子數為1-4個；所述的取代的雜芳環中的取代基選自下列基團中的一個或多個：鹵素、C_1-4 烷基、羥基、
、C_1-4 烷氧基、C_1-4 羧基、C_1-4酯基和C_1-4 醯胺基；所述的取代的雜芳環中的取代基還可以選自下列基團中的一個或多個：鹵素、C_1-4 的烷基、羥基、
、C_1-4 烷氧基、C_1-4 羧基、C_1-4酯基和C_1-4 醯胺基；當取代基為多個時，所述的取代基相同或不同；R^a 和R^b 獨立地為鹵素、或、取代或未取代的烷基；R^a 和R^b 還可以獨立地為氫、或、取代或未取代的烷基；R^a 或R^b 中，所述的取代的烷基中的取代基選自下列基團中的一個或多個：鹵素、C₁ -C₄ 烷基、羥基、
、C₁ -C₄ 烷氧基、C₁ -C₄ 羧基、C₁ -C₄ 酯基或C₁ -C₄ 醯胺基；R^a1 和R^b1 獨立地為氫或C₁ -C₄ 的烷基；所述的式（I）所示的芳香乙烯或芳香乙基類衍生物不為下列化合物：
、
或
。
如請求項1所述的應用，其中所述小分子抑制劑為呈游離或藥學上可接受的鹽形式的式（II）所示的芳香乙炔或芳香乙烯類衍生物：
（II）其中，環A和環B獨立地為芳環或雜芳環； L為炔基、-C(R⁴ )=C(R⁵ )-或包含至少一個N的C₂ -C₁₀ 的雜芳基； X¹ 為N或-CR⁶ ； X² 為N或-CR⁷ ； X³ 為N或-CR⁸ ； X¹ 、X² 和X³ 不同時為N；每個R¹ 獨立地為氫、氘、取代或未取代的羥基、取代或未取代的氨基、鹵素、取代或未取代的烷基或取代或未取代的烷氧基；每個R² 獨立地為氫、氘、取代或未取代的羥基、取代或未取代的氨基、鹵素、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烷氧基、
或
，其中，R^1a 為C₁ -C₄ 烷基，或者相鄰的兩個R² 和與它們相連的B環上的兩個原子共同形成一個5-7元的取代或未取代的碳環或取代或未取代的雜環；所述雜環中，雜原子為氧和/或氮，雜原子數為1-4個； R³ 為氘、鹵素、氰基或取代或未取代的烷基； R⁴ 和R⁵ 分別獨立地為氫、氘、取代或未取代的烷基或取代或未取代的環烷基，或者R⁴ 、R⁵ 和與它們相連接的碳碳雙鍵一起形成一個5-7元的取代或未取代的碳環或取代或未取代的雜環；所述雜環中，雜原子為氧和/或氮，雜原子數為1-4個； R⁶ 、R⁷ 和R⁸ 分別獨立地為氫、氘、取代或未取代的羥基、鹵素、取代或未取代的氨基、取代或未取代的烷基或取代或未取代的烷氧基，或者R⁶ 、R⁷ 和與它們相連接的C環上的兩個原子共同形成一個5-7元的取代或未取代的雜環；或者R⁷ 、R⁸ 和與它們相連接的C環上的兩個原子共同形成一個5-7元的取代或未取代的雜環；所述雜環中，雜原子為氧和/或氮，雜原子數為1-4個； m為1、2或3； n為1或2；每個R¹ 中，所述的取代的烷基或所述的取代的烷氧基中的取代基為下列基團中的一個或多個：鹵素、C₁ -C₄ 烷基、羥基、
、苄基、氰基取代的苄基、C₁ -C₄ 烷氧基、C₁ -C₄ 羧基、C₁ -C₄ 酯基或C₁ -C₄ 醯胺基；所述的取代的羥基或所述的取代的氨基中的取代基為下列基團中的一個或多個：C₁ -C₄ 烷基、苄基、氰基取代的苄基、C₁ -C₄ 烷氧基、C₁ -C₄ 羧基、C₁ -C₄ 酯基或C₁ -C₄ 醯胺基；每個R² 中，所述的取代的烷基或所述的取代的烷氧基中的取代基為下列基團中的一個或多個：鹵素、C₁ -C₄ 烷基、羥基、
、C₁ -C₄ 烷氧基、C₁ -C₄ 羧基、C₁ -C₄ 酯基或C₁ -C₄ 醯胺基；所述的取代的羥基或所述的取代的氨基中的取代基為下列基團中的一個或多個：C₁ -C₄ 烷基、苄基、氰基取代的苄基、C₁ -C₄ 烷氧基、C₁ -C₄ 羧基、C₁ -C₄ 酯基或C₁ -C₄ 醯胺基；當相鄰的兩個R² 和與它們相連的B環上的兩個原子共同形成一個5-7元的取代的碳環或取代的雜環時；所述的取代的雜環中的取代基為下列基團中的一個或多個：鹵素、C₁ -C₄ 烷基、羥基、
、C₁ -C₄ 烷氧基、C₁ -C₄ 羧基、C₁ -C₄ 酯基或C₁ -C₄ 醯胺基；當取代基為多個時，所述的取代基相同或不同； R⁴ 或R⁵ 中，所述取代的烷基或所述的取代的環烷基中的取代基為下列基團中的一個或多個：鹵素、C₁ -C₄ 烷基、羥基、氨基、C₁ -C₄ 烷氧基、C₁ -C₄ 羧基、C₁ -C₄ 酯基或C₁ -C₄ 醯胺基；當R⁴ 、R⁵ 和與它們相連接的碳碳雙鍵一起形成一個5-7元的取代的碳環或取代的雜環時，所述取代的碳環或所述的取代的雜環中的取代基為下列基團中的一個或多個：鹵素、C₁ -C₄ 烷基、羥基、
、C₁ -C₄ 羧基、C₁ -C₄ 酯基或C₁ -C₄ 醯胺基；當取代基為多個時，所述的取代基相同或不同； R⁶ 、R⁷ 或R⁸ 中，所述的取代的烷基或所述的取代的烷氧基中的取代基為下列基團中的一個或多個：鹵素、C₁ -C₄ 烷基、羥基、
、C₁ -C₄ 烷氧基、C₁ -C₄ 羧基、C₁ -C₄ 酯基或C₁ -C₄ 醯胺基；所述的取代的羥基或所述的取代的氨基中的取代基為下列基團中的一個或多個：C₁ -C₄ 烷基、苄基、氰基取代的苄基、C₁ -C₄ 烷氧基、C₁ -C₄ 羧基、C₁ -C₄ 酯基或C₁ -C₄ 醯胺基；當R⁶ 、R⁷ 和與它們相連接的C環上的兩個原子共同形成一個5-7元的取代的雜環；或者當R⁷ 、R⁸ 和與它們相連接的C環上的兩個原子共同形成一個5-7元的取代的雜環時；所述的取代的碳環或所述的取代的雜環中的取代基為下列基團中的一個或多個：鹵素、C_1-4 的烷基、羥基、
、C₁ -C₄ 烷氧基、C₁ -C₄ 羧基、C₁ -C₄ 酯基或C₁ -C₄ 醯胺基；當取代基為多個時，所述的取代基相同或不同；
中，R¹¹ 和R¹² 獨立地為氫、取代或未取代的烷基、烷氧基、羥烷基、氨基烷基、取代或未取代的C₆ -C₁₄ 芳基、或取代或未取代的C₃ -C₆ 環烷基；或者R¹¹ 、R¹² 和與它們相連接的氮原子一起形成一個5-7元的取代或未取代的雜環；所述雜環中，雜原子為氮，或氮和氧，雜原子數為1-4個； R¹¹ 或R¹² 中，所述的取代的烷基、所述的取代的C₆ -C₁₄ 芳基或所述的取代的C₃ -C₆ 環烷基中的取代基為下列基團中的一個或多個：鹵素、C₁ -C₄ 烷基、羥基、
、C₁ -C₄ 烷氧基、C₁ -C₄ 羧基、C₁ -C₄ 酯基或C₁ -C₄ 醯胺基；R¹¹ 、R¹² 和與它們相連接的氮原子一起形成一個5-7元的取代的雜環時，所述的取代的雜環中的取代基為下列基團中的一個或多個：鹵素、C₁ -C₄ 烷基、取代的C₁ -C₄ 烷基、羥基、
、C₁ -C₄ 烷氧基、C₁ -C₄ 羧基、C₁ -C₄ 酯基或C₁ -C₄ 醯胺基；所述的取代的C₁ -C₄ 烷基中的取代基為下列基團中的一個或多個：鹵素、C₁ -C₄ 烷基、羥基、
、C₁ -C₄ 烷氧基、C₁ -C₄ 羧基、C₁ -C₄ 酯基或C₁ -C₄ 醯胺基；當取代基為多個時，所述的取代基相同或不同；
中，R^a1 和R^b1 獨立地為氫、C₁ -C₄ 的烷基或
，R^a11 為C₁ -C₄ 的烷基。
如請求項1所述的應用，其中所述小分子抑制劑選自呈游離或藥學上可接受的鹽形式的下列化合物：
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
.
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
或
。
如請求項1所述的應用，其中所述小分子抑制劑為呈游離或藥學上可接受的鹽形式的
化合物1 。
如請求項1至6中任一項所述的應用，其中所述小分子抑制劑口服施用；和/或，所述小分子抑制劑以每天20-300 mg/kg或30-240 mg/kg的總劑量施用；和/或，所述小分子抑制劑與所述抗體同時施用；和/或，所述抗體為單克隆抗體；和/或，所述抗體經靜脈內或皮下施用；和/或，所述抗體以0.1-50 mg/kg、0.2-10 mg/kg、0.3-5mg/kg、0.4-5 mg/kg、0.5-5 mg/kg、0.6-4 mg/kg、0.6-3 mg/kg、0.6-2 mg/kg、0.8-4 mg/kg、0.8-3 mg/kg、0.8-2 mg/kg、1-10 mg/kg、1-5 mg/kg、1-4 mg/kg、1-3 mg/kg、1-2 mg/kg或2-3 mg/kg的量，每週兩次、每週一次、兩週一次、三週一次或四周一次施用；和/或，所述受試者對先前已經接受的癌症治療無應答；和/或，所述癌症為骨癌、胰腺癌、皮膚癌、頭或頸癌、皮膚或眼內惡性黑素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛門區域癌、胃癌、睾丸癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮內膜癌、子宮頸癌、陰道癌、外陰癌、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、食道癌、小腸癌、內分泌系統癌、甲狀腺癌、甲狀旁腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、慢性或急性白血病，例如急性髓性白血病、慢性髓性白血病、急性淋巴細胞性白血病、慢性淋巴細胞性白血病、兒童實體瘤、淋巴細胞性淋巴瘤、膀胱癌、腎癌或尿道癌、腎盂癌、中樞神經系統CNS腫瘤、原發性CNS淋巴瘤、腫瘤血管生成、脊髓軸腫瘤、腦幹神經膠質瘤、垂體腺瘤、卡波西氏肉瘤、表皮樣癌、鱗狀細胞癌、T細胞淋巴瘤、環境誘導的癌症，例如由石棉誘導的那些、不可切除或轉移性黑色素瘤、轉移性非小細胞肺癌、晚期腎細胞癌、復發性或進展性經典霍奇金淋巴瘤、復發性或轉移性頭頸部鱗狀細胞癌、局部晚期或轉移性尿道上皮癌、晚期肝細胞癌、轉移性小細胞肺癌、MSI-H/dMMR轉移性結直腸癌、原發性縱隔大B細胞淋巴瘤、胃或胃食管交界處腺癌、肝細胞癌、默克爾細胞癌、具有至少10 mmHg的間質液壓（IFP）的癌症或這些癌症的組合。
如請求項7所述的應用，其中所述抗體為派姆單抗、納武單抗、西米普利單抗、特瑞普利單抗、卡瑞利珠單抗或信迪利單抗；和/或，所述抗體經靜脈內施用；和/或，所述受試者先前已經接受的癌症治療為化療；和/或，所述癌症為子宮頸癌、腎細胞癌、黑色素瘤、乳腺癌、結直腸癌或頭頸鱗狀細胞癌。
如請求項8所述的應用，其中所述化療包括含鉑的化療劑；例如，所述化療為含鉑的雙藥化療；和/或，所述抗體為派姆單抗或納武單抗；和/或，所述癌症為乳腺癌、黑色素瘤或結直腸癌。
如請求項1至6中任一項所述的應用，其中所述藥物進一步包含另外抗癌劑；所述另外的抗癌劑為抗CTLA-4抗體、激酶抑制劑或化療藥物；和/或，所述藥物組合物還包括常規的藥學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑；和/或，所述藥物組合物呈用於口服或非口服給藥的固體、液體、凝膠或混懸劑形式。
如請求項10所述的應用，其中所述藥物組合物還包括常規的藥學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑；和/或，所述另外的抗癌劑中，所述抗CTLA-4抗體為伊匹單抗；和/或，所述另外的抗癌劑中，所述激酶抑制劑為與血管內皮生長因子結合的抑制劑；和/或，所述另外的抗癌劑中，所述化療藥物為Ziv-阿柏西普、本妥昔單抗維多汀、去鐵酮、吉西他濱、普拉曲沙、更昔洛韋、纈更昔洛韋、沙利度胺、羅米地辛、博賽潑維、地西他濱、伊馬替尼、托泊替康、來那度胺、紫杉醇、奧氮平、伊立替康、帕利哌酮、干擾素、脂多糖、他莫昔芬、氟卡尼、苯妥英、吲哚美辛、丙硫氧嘧啶、卡比馬唑、氯丙嗪、複方新諾明、氯氮平、噻氯匹定及其衍生物、環磷醯胺、氮芥、苯丁酸氮芥、米爾法蘭、卡莫司汀、洛莫司汀、甲基苄肼、達卡巴嗪、阿勒密胺、順鉑、卡鉑、放線菌素D、依託泊苷、阿黴素、柔紅黴素、6-巰基嘌呤、6-硫鳥嘌呤、依達比星、表柔比星、米托蒽醌、硫唑嘌呤、2-氯脫氧腺苷、羥基脲、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、阿扎胞苷、磷酸氟達拉濱、長春新鹼、長春鹼、長春瑞濱、多西他賽、培美曲塞、Nab-紫杉醇、達沙替尼、Paralatrexate、舒尼替尼或奧沙利鉑；和/或，所述藥物組合物呈片劑、大丸劑、散劑、顆粒劑、諸如硬或軟明膠膠囊的膠囊劑、乳劑、混懸劑、糖漿劑、乳化劑、濃縮液、滅菌水溶液、非水溶液、凍乾製劑或栓劑。