TW202208444A - 蛋白質ｓ抗體、其製造方法及其用途 - Google Patents

蛋白質ｓ抗體、其製造方法及其用途 Download PDF

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Abstract

本文提供結合蛋白質S之抗體，以及製造及使用該等抗體之方法。在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體可用於治療出血性病症或血小板病症，或以血液凝固及/或凝結減少或受損為特徵的病況，例如藉由消耗TFPI之循環含量、藉由破壞蛋白質S-TFPI複合物及/或藉由阻止蛋白質S-TFPI複合物形成。

Description

蛋白質S抗體、其製造方法及其用途
蛋白質S (亦稱為ProS、ProS1)為參與凝血級聯之維生素K依賴性血漿蛋白質。該蛋白質為多模組的，包含γ-羧基-麩胺酸域(Gla域)、表皮生長因子樣域(EGF域)、凝血酶敏感區(TSR)及性激素結合球蛋白樣域(SHBG樣域)。該蛋白質以游離形式及作為與諸如C4結合蛋白(C4BP)及組織因子路徑抑制劑(TFPI)之蛋白質之複合物的一部分存在。咸信蛋白質S及TFPI在循環中以複合物形式存在。除其他功能外，呈游離形式之蛋白質S為至少兩個凝血級聯路徑中之輔因子：(1)蛋白質S為血漿活化蛋白質C (APC)之輔因子，參與凝血因子-因子Va及因子VIIIa之失活及降解；且(2)蛋白質S亦為TFPI之輔因子，亦存在於血漿中，參與凝血因子-因子Xa及因子VIIa之失活。
因為蛋白質S及TFPI在循環中結合在一起且共同作用於下調凝血酶形成及凝血，所以蛋白質S為潛在治療目標，可用於治療出血性病症。因此，需要在凝血路徑內結合及調節其活性的藥劑。
本文中提供結合蛋白質S之抗體以及製造及使用該等抗體之方法。在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體可用於治療出血性病症，或以血液凝固及/或凝結減少或受損為特徵的病況。
因此，在一個態樣中，本文提供結合蛋白質S之抗體，其中該抗體與蛋白質S之結合減少循環TFPI含量。
在另一態樣中，本文提供結合蛋白質S之抗體，其中該抗體與蛋白質S之結合破壞蛋白質S-TFPI複合物，或阻止蛋白質S-TFPI複合物形成。
在另一態樣中，本文提供結合蛋白質S之抗體，其中該等抗體為蛋白質S對TFPI之輔因子活性的抑制劑。
在另一態樣中，本文提供結合蛋白質S之抗體，其中該等抗體能夠促進凝血及/或調節凝血級聯中之組分。
在另一態樣中，本文提供例示性蛋白質S抗體，其包含表1A、1B、1C、2A、2B及2C中提供之互補決定區(CDR)序列之胺基酸序列中之任一或多者。在另一態樣中，例示性蛋白質S抗體包含表1A之CDR-L1胺基酸序列中之任一者；表1B之CDR-L2胺基酸序列中之任一者；表1C之CDR-L3胺基酸序列中之任一者；表2A之CDR-H1胺基酸序列中之任一者；表2B之CDR-H2胺基酸序列中之任一者；及表2C之CDR-H3胺基酸序列中之任一者。在另一態樣中，本文提供例示性蛋白質S抗體，其包含表4C中呈現之可變輕鏈及可變重鏈之編號組合。在另一態樣中，本文提供表6中所呈現之三種不同抗體的序列。在另一態樣中，本文提供編碼本文所揭示之蛋白質S抗體中之任一者的核酸。
在另一態樣中，本文提供一種醫藥組合物，其包含本文所提供之蛋白質S抗體中之任一者及視情況存在之醫藥學上可接受之賦形劑。
本文提供使用本文所述之例示性蛋白質S抗體之方法。因此，在一個態樣中，本文提供一種促進血液凝固之活體外方法，該方法包含使本文所提供之例示性蛋白質S抗體中之任一者與血液樣品接觸。
在另一態樣中，本文提供一種促進有需要之個體之血液凝固的方法，其包含向個體投與本文所提供之例示性蛋白質S抗體中之任一者或本文所提供之醫藥組合物。在例示性實施例中，投與途徑為皮下投與。
在另一態樣中，本文提供一種促進有需要之個體之凝血酶產生的方法，其包含向個體投與本文所提供之例示性蛋白質S抗體中之任一者或本文所提供之醫藥組合物。
在另一態樣中，本文提供一種治療有需要之個體之病況的方法，其包含向個體投與本文所提供之例示性蛋白質S抗體中之任一者或本文所提供之醫藥組合物，其中該病況選自由以下組成之群：出血性病症、血小板病症、創傷及由手術或醫療程序造成之出血及其組合。
相關申請案之交叉引用
本申請案主張2020年5月5日申請之美國臨時專利申請案第63/020,505號及2021年4月1日申請之美國臨時專利申請案第63/169,755號的優先權。前述申請案中之各者之內容以全文引用之方式併入本文中。
本文提供結合蛋白質S之抗體以及製造及使用該等抗體之方法。結合至蛋白質S且抑制TFPI之其輔因子活性、或破壞其與TFPI之複合、或阻止其與TFPI之複合的抗體可用於藉由促進凝血塊形成而治療出血性病症及其他相關疾病。因此，蛋白質S抗體可用於治療出血性病症。舉例而言，蛋白質S抗體可用於治療與血液凝結減少相關或特徵為血液凝結減少之病況的方法。
在要素以清單型式(例如以Markush組形式)呈現的情況下，應理解，亦揭示該等要素之各可能的子組，且任何一或多種要素可自該清單或組移除。
應理解，除非在包括超過一個動作之本文所描述或揭示之任何方法中明確指示，否則動作之次序不必限制於所述之方法動作之次序，但本發明涵蓋動作之次序因此受限的例示性實施例。
除非在特定情況下另外限制，否則在整個說明書中使用之術語定義如下。除非上下文另外明確指示，否則如本說明書及隨附申請專利範圍中所使用，單數形式「一(a/an)」及「該(the)」包括複數個指示物。除非另外定義或陳述，否則本說明書及申請專利範圍中所用之所有技術及科學術語、首字母縮寫詞及縮寫一般具有與本發明所涉及之領域之一般熟習此項技術者通常所理解相同之含義。除非另外指示或定義，否則所有數值範圍包括界定範圍之值以及中間的所有整數值。
如本文整篇所用之術語「抗體」以最廣泛意義使用，且可包括單株抗體、多株抗體、人類抗體、人類化抗體、非人類抗體、嵌合抗體、單價抗體、抗原結合片段(例如，Fab片段、Fab'2片段、scFv)及保留蛋白質S之特異性及結合的其他抗體片段。在一些實施例中，該等抗體為單株抗體。在一些實施例中，該等抗體為單株抗體。在一些實施例中，該等抗體為單株人類抗體。在一些實施例中，該等抗體為單株人類化抗體。在一些實施例中，該等抗體為單株嵌合抗體。在一些實施例中，抗體含有Fc域。
本文亦提供抗體-藥物結合物、雙特異性抗體及多特異性抗體，其呈現蛋白質S之特異性及結合。
術語「多核苷酸」及「核酸」在本文中可互換使用，且係指可為核糖核苷酸或脫氧核糖核苷酸的任何長度之核苷酸之聚合形式。該等術語包括但不限於單股、雙股或多股DNA或RNA、基因體DNA、cDNA、DNA-RNA雜交體或包含嘌呤及嘧啶鹼基或其他天然、經化學或生物化學修飾、非天然或衍生之核苷酸鹼基的聚合物。除非特別限制或另外陳述，否則該等術語涵蓋含有天然核苷酸之已知類似物的核酸，該等核酸具有類似的結合特性且以類似於天然存在之核苷酸的方式代謝。
當核酸或胺基酸序列被稱為與另一核酸或胺基酸序列具有某一百分比「序列一致性」或「一致性」或某一百分比「一致」時，在比對序列時，在比較兩個序列時，鹼基或胺基酸之該百分比相同，且在相同相對位置中。
如本文所用之術語「個體」係指為其提供治療或療法之任何個體。個體可為哺乳動物個體。哺乳動物個體包括例如人類、非人類靈長類動物(例如，食蟹獼猴)、嚙齒動物(例如，大鼠、小鼠)、兔類動物(例如，兔)、有蹄動物(例如，奶牛、綿羊、豬、馬、山羊及其類似有蹄動物)等。在一些實施例中，個體為人類。在一些實施例中，個體為非人類靈長類動物，例如食蟹獼猴。在一些實施例中，個體為伴侶動物(例如貓、狗)。
本說明書中所提及之所有公開案、專利及專利申請案均以引用的方式併入本文中，其引用的程度如同各個別公開案、專利或專利申請案經具體且個別地指示以引用的方式併入一般。I. 結合及調節蛋白質 S 活性之抗體 A. 蛋白質 S 抗體
本文提供結合至蛋白質S之抗體，且在一些實施例中，對蛋白質S具有特異性之抗體。蛋白質S可屬於任何物種，例如任何哺乳動物物種。在一些實施例中，蛋白質S抗體結合至人類蛋白質S。在一些實施例中，蛋白質S抗體結合至非人類靈長類動物之蛋白質S。在一些實施例中，非人類靈長類動物為食蟹獼猴。
本發明之抗體所靶向之人類蛋白質S之胺基酸序列在下文以SEQ ID. NO: 136展示。
Figure 02_image003
Figure 02_image005
在結合時，包括例如選擇性地降低或抑制蛋白質S對TFPI輔因子活性(在本文中可互換地稱為TFPI輔因子抑制劑、TFPI輔因子特異性抑制劑或TFPI路徑抑制劑)、調節蛋白質S充當TFPI之載劑的能力(例如藉由破壞蛋白質S-TFPI複合物、或藉由阻止蛋白質S-TFPI複合物形成)、減少循環TFPI含量以及促進凝血及改變與凝血相關之標誌物的含量及調節凝血級聯中之組分時，本文所提供之蛋白質S抗體能夠調節一或多種蛋白質S之活性。
TFPI為促凝血活性之抑制劑，且在人類中以至少兩種可替代地剪接異構體、TFPIα及TFPIβ形式產生，其不同之處在於用於細胞表面締合之域結構及機制。TFPIα而非TFPIβ含有Kunitz域3，咸信該域參與與蛋白質S之結合。在不受任何理論或機制束縛之情況下，咸信本發明之蛋白質S抗體抑制至少TFPIα之蛋白質S之輔因子活性，因為其含有Kunitz域3。
在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體可破壞蛋白質S與TFPI之間之相互作用(複合)。蛋白質S及TFPI在血漿中以蛋白複合物形式存在，其形成可延長血漿中之TFPI的半衰期。在不受理論或機制束縛情況下，藉由本文所提供之蛋白質S抗體破壞蛋白質S與TFPI之間之相互作用可縮短血漿中之TFPI的半衰期且引起TFPI含量降低。在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體之作用可為阻止TFPI-蛋白質S複合物形成。因此，在一些實施例中，向個體活體內投與本文所提供之蛋白質S抗體導致血漿中之TFPI含量更低。
在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體能夠調節蛋白質S在凝血級聯之路徑內充當輔因子之能力。在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體可用於降低或抑制蛋白質S對TFPI之輔因子活性(該等抗體在本文中稱為TFPI輔因子抑制劑(在本文中可互換地稱為TFPI輔因子特異性抑制劑或TFPI路徑抑制劑)。如本文所論述，TFPI之輔因子活性之該降低導致凝血活性提高。本文所提供之抗體展示最小或可忽略的APC輔因子抑制。
在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體能夠減少循環TFPI之含量。舉例而言，與蛋白質S抗體不存在相比，TFPI含量可減少約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%或約100%。在一些實施例中，TFPI含量降低伴隨著蛋白質S含量同時降低。在其他實施例中，TFPI含量降低不伴隨著蛋白質S含量同時降低。
在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體能夠使得TFPI之活性降低。舉例而言，與蛋白質S抗體不存在相比，TFPI活性可降低約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%或約100%。
在一些實施例中，抗體能夠藉由降低蛋白質S充當TFPI之輔因子的能力、或降低蛋白質S充當TFPI之載劑的能力(藉由破壞蛋白質S-TFPI複合物、或藉由阻止蛋白質S-TFPI複合物形成)來促進血液凝結。舉例而言，與蛋白質S抗體不存在相比，血液凝結可藉由將TFPI活性降低約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%或約100%來促進。
在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體能夠促進與凝血活性相關之標誌物產生，且此可活體外(例如在樣品中)及/或活體內(例如在向個體投與後)呈現。該等標誌物包括但不限於凝血酶、血纖維蛋白、D-二聚體、凝結形成、凝血酶-抗凝血酶複合物、血纖維蛋白降解產物及凝血酶原片段F1.2。
在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體能夠促進凝血酶產生，恢復凝血酶產生或恢復例如有需要之個體內或樣品中之凝血酶的含量。在一些實施例中，抗體能夠促進有需要之個體之凝血酶產生。在一些實施例中，凝血酶之產生不超過預定臨限值。在一些實施例中，凝血酶之產生部分地恢復。在一些實施例中，凝血酶之產生不超過最大凝血酶產生之預定百分比。在一些實施例中，凝血酶之產生不超過最大凝血酶產生之曲線下面積之預定百分比。在一些實施例中，抗體對凝血酶產生之作用為抗體濃度依賴性的或抗體劑量依賴性的。在一些實施例中，與蛋白質S抗體不存在相比，凝血酶產生可增加約5倍至50倍，例如約5倍、約10倍、約15倍、約20倍、約25倍、約30倍、約35倍、約40倍、約45倍或甚至約50倍。
在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體可恢復或促進缺乏凝血因子(例如因子VII缺陷症、因子VIII缺乏症、因子IX缺乏症、因子XI缺乏症)之個體之凝血酶產生。在一些例示性實施例中，凝血因子缺乏症為先天性的。在一些例示性實施例中，凝血因子缺乏症為後天性的。在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體可促進缺乏因子VII、因子VIII、因子IX、因子XI之個體之凝血酶產生。舉例而言，與蛋白質S抗體不存在相比，凝血酶產生可增加約5倍至50倍，例如約5倍、約10倍、約15倍、約20倍、約25倍、約30倍、約35倍、約40倍、約45倍或甚至約50倍。
在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體可促進患有馮威里氏病(vWD)之個體之凝血酶產生。在一些實施例中，vWD為選自以下之亞型：1型vWD、2A型vWD、2B型vWD、2N型vWD、2M型vWD、3型vWD及後天性vWD。在一些例示性實施例中，vWD為選自1型、2型或3型之亞型。舉例而言，與蛋白質S抗體不存在相比，凝血酶產生可增加約5倍至50倍，例如約5倍、約10倍、約15倍、約20倍、約25倍、約30倍、約35倍、約40倍、約45倍或甚至約50倍。
在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體能夠促進例如有需要之個體內或樣品中之血纖維蛋白產生。在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體能夠促進例如樣品中之血纖維蛋白沈積。在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體能夠促進凝血活性，其中該凝血活性以促進血纖維蛋白產生為標誌。在一些實施例中，與蛋白質S抗體不存在相比，血纖維蛋白產生可增加約5倍至50倍，例如約5倍、約10倍、約15倍、約20倍、約25倍、約30倍、約35倍、約40倍、約45倍或甚至約50倍。
在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體能夠促進增加例如有需要之個體內或樣品中之D-二聚體含量。在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體能夠促進活體內凝血活性，其中該凝血活性以投與蛋白質S抗體之後D-二聚體含量增加為標誌。舉例而言，D-二聚體含量可增加約兩倍至約1000倍。
在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體能夠促進樣品中或個體體內之凝血。在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體改變樣品中或個體內與凝血活性相關之標誌物之含量。舉例而言，在一些實施例中，抗體能夠恢復樣品中或個體之凝血酶產生。在一些實施例中，抗體能夠恢復樣品中或個體體內之血纖維蛋白沈積。在一些實施例中，本文所提供之抗體能夠促進恢復血纖維蛋白沈積。在一些實施例中，本文所提供之抗體能夠增加樣品中或個體體內之D-二聚體含量。在一些實施例中，本文所提供之抗體能夠促進D-二聚體增加。在一些實施例中，本文所提供之抗體之活性為劑量依賴性的。在一些實施例中，本文所提供之抗體之活性經活體外量測。在一些實施例中，本文所提供之抗體之活性經活體內量測。
在一些實施例中，本文提供蛋白質S抗體，其與蛋白質S之結合親和力(KD)為約0.001 nM或更低、0.005 nM或更低、0.01 nM或更低、0.05 nM或更低、約0.1 nM或更低、約0.5 nM或更低、約1 nM或更低、約5 nM或更低、約10 nM或更低、約50 nM或更低、約100 nM或更低、約500 nM或更低或約1 μM或更低。
在一些實施例中，向個體投與本文所提供之蛋白質S抗體，其中該抗體在個體體內保持活性一段時間。在一些實施例中，該時間段為抗體劑量依賴性的。
在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體呈現分級抑制。在該等實施例中，舉例而言，分級抑制可允許增加向個體投與蛋白質S抗體之劑量以使得功效增加，或減少劑量以防止過量凝血酶產生及/或潛在的血栓栓塞併發症。有效地，可調整劑量以達成抑制所要程度。呈現分級抑制之抗體展示活體外濃度依賴性抑制，其中抗體之濃度增加引起在寬濃度範圍內凝血酶產生遞增。
在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體呈現開關樣抑制，其中抑制可經接通或關閉。呈現開關樣抑制之抗體展示活體外凝血酶產生之突然濃度依賴性增大，其中在達至能夠促進凝血酶產生之濃度時，實現在窄濃度範圍內產生之最大凝血酶。
在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體為抗體片段。在一些實施例中，抗體片段為抗原結合片段(Fab)、含有VH及VL之可變片段(Fv)、含有一起連接成一條鏈之VH及VL的單鏈可變片段(scFv)以及其他抗體可變區片段，諸如Fab'、F(ab)2、F(ab')2、dsFv雙功能抗體、Fc及Fd多肽片段。抗體片段可含有Fc域。
在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體為單株抗體(mAb)。在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體為人類抗體。在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體為單株人類抗體。在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體為人類化抗體。在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體為單株人類化抗體。在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體為嵌合抗體。在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體為單株嵌合抗體。
在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體為全長抗體。
在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體含有Fc域(全長或例如與Fc域有關之單鏈抗體)。
在一些實施例中，蛋白質S抗體之恆定區(本文中亦稱為Fc域、Fc序列或簡稱為Fc)為人類Fc域。在一些實施例中，全長蛋白質S抗體之Fc域為人類IgG1、人類IgG2、人類IgG3或人類IgG4。在一些實施例中，全長蛋白質S抗體之Fc域為大鼠之Fc域。在一些實施例中，全長蛋白質S抗體之Fc域為大鼠IgG1或大鼠IgG2b。在一些實施例中，全長蛋白質S抗體之Fc域為非人類靈長類動物之Fc域，例如其為食蟹獼猴Fc域。
在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體為嵌合抗體，且包含來自一種物種之可變區及來自另一種物種之恆定區，例如包含人類可變區及大鼠恆定區。在一些實施例中，大鼠恆定區為大鼠IgG1或IgG2b。在一些實施例中，抗體包含人類可變區及人類恆定區。在例示性實施例中人類恆定區為人類IgG1或人類IgG4。
在一些實施例中，蛋白質S抗體含有Fc域，且抗體之Fc域為人類IgG1 Fc。例示性但非限制性人類IgG1 Fc域序列以SEQ ID NO: 138提供。
Figure 02_image007
在一些實施例中，蛋白質S抗體含有Fc域，且抗體之Fc域為人類IgG4 Fc。例示性人類IgG4重鏈Fc域序列以SEQ ID NO: 139提供。
Figure 02_image009
EU編號方案為基於分配給典型抗體序列之殘基編號的許多可用抗體編號方案中之一者。因此，熟習此項技術者應瞭解，使用EU編號方案提及特定殘基可恰好為或可恰好不為本發明之抗體中之一者中的殘基。舉例而言，若本發明之蛋白質S抗體在Fc中包含V215A取代，其中胺基酸殘基之位置編號屬於EU編號方案，則殘基可能不為該特定蛋白質S抗體中之實際殘基215。其可為實際殘基編號213、或214、或215、或216。因此，熟習此項技術者將理解如何使用EU編號方案將所述殘基對應於本發明之蛋白質S抗體中之實際殘基。抗體之EU編號系統為此項技術中已知的，且描述於例如imgt.org/IMGTScientificChart/Numbering/Hu_IGHGnber.html。
在一些實施例中，蛋白質S抗體之Fc域為IgG1或IgG4人類Fc域，且Fc變異體在選自由以下組成之群的位置處包含至少一個胺基酸取代：215、221、222、228、234、235、236、239、240、241、243、244、245、247、250、252、254、256、262、263、264、265、266、267、268、269、270、292、296、297、298、299、300、305、313、324、325、326、327、328、329、330、332、333、334、345、396、428、430、433、434及440，其中胺基酸殘基之位置編號屬於EU編號方案。
在一些實施例中，蛋白質S抗體之Fc域為人類IgG1，且引入取代以降低效應功能，包括N297A、N297Q、N297G、L235E、L234A及L235A，其中胺基酸殘基之位置編號屬於EU編號方案。在一些實施例中，全長蛋白質S抗體之Fc域為人類IgG4，且引入取代以降低效應功能，包括L235E及F234A/L235A，其中胺基酸殘基之位置編號屬於EU編號方案。在一些實施例中，全長蛋白質S抗體之Fc域為人類IgG2，且引入取代以降低效應功能，包括H268Q/V309L/A330S/P331S及V234A/G237A/P238S/H268A/V309L/A330S/P331S，其中胺基酸殘基之位置編號屬於EU編號方案。
在一些實施例中，蛋白質S抗體之Fc域為人類IgG1，且引入取代以增加效應功能，包括G236A/S239D/I332E、K326W/E333S、S267E/H268F/S324T及E345R/E430G/S440Y，其中胺基酸殘基之位置編號屬於EU編號方案。
在一些實施例中，蛋白質S抗體之Fc域為IgG4人類Fc域，且抗體易於進行Fab-臂交換之動態處理。因此，在一些實施例中，IgG4 Fc域包含S228P取代，引起此處理減少，其中胺基酸殘基之位置編號屬於EU編號方案。
在其他實施例中，改變蛋白質S抗體之Fc域以延長其血清半衰期。該等改變包括人類IgG1 (例如SEQ ID NO: 138)之取代，諸如T250Q/M428L、M252Y/S254T/T256E、M428L/N434S、S267E/L328F、N325S/L328F及H433K/N434F，其中胺基酸殘基之位置編號屬於EU編號方案。
在其他實施例中，改變蛋白質S抗體之Fc域以延長其血清半衰期。該等改變包括人類IgG4 (例如SEQ ID NO: 139)之取代，諸如T250Q/M428L、M252Y/S254T/T256E、M428L/N434S、S267E/L328F、N325S/L328F及H433K/N434F，其中胺基酸殘基之位置編號屬於EU編號方案。
在一些實施例中，蛋白質S抗體之Fc域為IgG1人類Fc域，且引入取代以增強效應功能，包括F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L、S239D/I332E、S298A/E333A /K334A、L234Y/L235Q/G236W/S239M/H268D/D270E/S298A、D270E/ K326D/A330M/K334E，其中胺基酸殘基之位置編號屬於EU編號方案。例示性蛋白質 S 抗體 - 互補決定區 (CDR) 序列
本文提供本文所揭示之蛋白質S抗體之例示性CDR序列。
例示性CDR序列呈現於下表1A-1C及2A-2C中。如下文所提及，輕鏈可變(VL)域CDR1區稱為CDR-L1；VL CDR2區稱為CDR-L2；VL CDR3區稱為CDR-L3；重鏈可變(VH)域CDR1區稱為CDR-H1；VH CDR2區稱為CDR-H2；及VH CDR3區稱為CDR-H3。
表 1A ： 例示性蛋白質 S 抗體 CDR-L1 序列
QSVGSN (SEQ ID NO: 7)
QSVRSN (SEQ ID NO: 8)
QSIRSY (SEQ ID NO: 132)
表 1B ： 例示性蛋白質 S 抗體 CDR-L2 序列
GAS (SEQ ID NO: 17)
AAS (SEQ ID NO: 118)
表 1C ： 例示性蛋白質 S 抗體 CDR-L3 序列
QQYNNWPLT (SEQ ID NO: 28)
QQYNSWPFT (SEQ ID NO: 29)
QQSYSTPRT (SEQ ID NO: 129)
表 2A ： 例示性蛋白質 S 抗體 CDR-H1 序列
GYTFTSYD (SEQ ID NO: 40)
RFSFSSYA (SEQ ID NO: 41)
GFTLNSFW (SEQ ID NO: 133)
表 2B ： 例示性蛋白質 S 抗體 CDR-H2 序列
VNPNSDNI (SEQ ID NO: 52)
ISDSGSNT (SEQ ID NO: 53)
IKEDGSEK (SEQ ID NO: 134)
表 2C ： 例示性蛋白質 S 抗體 CDR-H3 序列
VRGAAAAWDAFAI (SEQ ID NO: 64)
AKNYESGGYYTFFDY (SEQ ID NO: 65)
ARETDILTAYYSDYYSYYGMDV (SEQ ID NO: 135)
在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體包括表1A、1B、1C、2A、2B及2C中提供的CDR序列之胺基酸序列中之任一或多者。
在一些實施例中，本文提供蛋白質S抗體，其中該等抗體包含： (a)       表1A之CDR-L1胺基酸序列中之任一者； (b)       表1B之CDR-L2胺基酸序列中之任一者； (c)       表1C之CDR-L3胺基酸序列中之任一者； (d)       表2A之CDR-H1胺基酸序列中之任一者； (e)       表2B之CDR-H2胺基酸序列中之任一者； (f)       表2C之CDR-H3胺基酸序列中之任一者；及/或 (g)       以上之任何組合。
在一些實施例中，本文提供蛋白質S抗體，其中該等抗體之輕鏈可變域包含： (a)       包含SEQ ID NO: 7、8及132中之任一者之胺基酸序列之CDR-L1； (b)       包含SEQ ID NO: 17及118中之任一者之胺基酸序列之CDR-L2；及 (c)       包含SEQ ID NO: 28、29及129中之任一者之胺基酸序列之CDR-L3。
在一些實施例中，本文提供蛋白質S抗體，其中該等抗體之重鏈可變域包含： (a)       包含SEQ ID NO: 40、41及133中之任一者之胺基酸序列之CDR-H1； (b)       包含SEQ ID NO: 52、53及134中之任一者之胺基酸序列之CDR-H2；及 (c)       包含SEQ ID NO: 64、65及135中之任一者之胺基酸序列之CDR-H3。
在一些實施例中，本文提供蛋白質S抗體，其中該抗體之輕鏈可變域包含： (a)       包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列之CDR-L1； (b)       包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列之CDR-L2；及 (c)       包含SEQ ID NO: 28之胺基酸序列之CDR-L3。
在一些實施例中，本文提供蛋白質S抗體，其中該抗體之輕鏈可變域包含： (a)       包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列之CDR-L1； (b)       包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列之CDR-L2；及 (c)       包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列之CDR-L3。
在一些實施例中，本文提供蛋白質S抗體，其中該抗體之輕鏈可變域包含： (a)       包含SEQ ID NO: 132之胺基酸序列之CDR-L1； (b)       包含SEQ ID NO: 118之胺基酸序列之CDR-L2；及 (c)       包含SEQ ID NO: 129之胺基酸序列之CDR-L3。
在一些實施例中，本文提供蛋白質S抗體，其中該等抗體之重鏈可變域包含： (a)       包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列之CDR-H1； (b)       包含SEQ ID NO: 52之胺基酸序列之CDR-H2；及 (c)       包含SEQ ID NO: 64之胺基酸序列之CDR-H3。
在一些實施例中，本文提供蛋白質S抗體，其中該等抗體之重鏈可變域包含： (a)       包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列之CDR-H1； (b)       包含SEQ ID NO: 53之胺基酸序列之CDR-H2；及 (c)       包含SEQ ID NO: 65之胺基酸序列之CDR-H3。
在一些實施例中，本文提供蛋白質S抗體，其中該等抗體之重鏈可變域包含： (a)       包含SEQ ID NO: 133之胺基酸序列之CDR-H1； (b)       包含SEQ ID NO: 134之胺基酸序列之CDR-H2；及 (c)       包含SEQ ID NO: 135之胺基酸序列之CDR-H3。
在一些實施例中，本文提供蛋白質S抗體，其中該等抗體之輕鏈可變域包含來自表1A之CDR-L1、來自表1B之CDR-L2及來自表1C之CDR-L3，且其中該等抗體之重鏈可變域包含： (a)       包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列之CDR-H1； (b)       包含SEQ ID NO: 52之胺基酸序列之CDR-H2；及 (c)       包含SEQ ID NO: 64之胺基酸序列之CDR-H3。
在一些實施例中，本文提供蛋白質S抗體，其中該等抗體之輕鏈可變域包含來自表1A之CDR-L1、來自表1B之CDR-L2及來自表1C之CDR-L3，且其中該等抗體之重鏈可變域包含： (a)       包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列之CDR-H1； (b)       包含SEQ ID NO: 53之胺基酸序列之CDR-H2；及 (c)       包含SEQ ID NO: 65之胺基酸序列之CDR-H3。
在一些實施例中，本文提供蛋白質S抗體，其中該等抗體之輕鏈可變域包含來自表1A之CDR-L1、來自表1B之CDR-L2及來自表1C之CDR-L3，且其中該等抗體之重鏈可變域包含： (a)       包含SEQ ID NO: 133之胺基酸序列之CDR-H1； (b)       包含SEQ ID NO: 134之胺基酸序列之CDR-H2；及 (c)       包含SEQ ID NO: 135之胺基酸序列之CDR-H3。
在一些實施例中，本文提供蛋白質S抗體，其中該等抗體之重鏈可變域包含來自表2A之CDR-H1、來自表2B之CDR-H2及來自表2C之CDR-H3，且其中該等抗體之輕鏈可變域包含： (a)       包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列之CDR-L1； (b)       包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列之CDR-L2；及 (c)       包含SEQ ID NO: 28之胺基酸序列之CDR-L3。
在一些實施例中，本文提供蛋白質S抗體，其中該等抗體之重鏈可變域包含來自表2A之CDR-H1、來自表2B之CDR-H2及來自表2C之CDR-H3，且其中該等抗體之輕鏈可變域包含： (a)       包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列之CDR-L1； (b)       包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列之CDR-L2；及 (c)       包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列之CDR-L3。
在一些實施例中，本文提供蛋白質S抗體，其中該等抗體之重鏈可變域包含來自表2A之CDR-H1、來自表2B之CDR-H2及來自表2C之CDR-H3，且其中該等抗體之輕鏈可變域包含： (a)      包含SEQ ID NO: 132之胺基酸序列之CDR-L1； (b)       包含SEQ ID NO: 118之胺基酸序列之CDR-L2；及 (c)       包含SEQ ID NO: 129之胺基酸序列之CDR-L3。
在一些實施例中，本文提供蛋白質S抗體，其中該等抗體包含SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 52及SEQ ID NO: 64之CDR胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供蛋白質S抗體，其中該等抗體包含SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 53及SEQ ID NO: 65之重鏈及輕鏈CDR胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供蛋白質S抗體，其中該等抗體包含SEQ ID NO: 132、SEQ ID NO: 118、SEQ ID NO: 129、SEQ ID NO: 133、SEQ ID NO: 134及SEQ ID NO: 135之CDR胺基酸序列。例示性蛋白質 S 抗體 - κ 及 λ 輕鏈
本文提供本發明之例示性蛋白質S抗體之κ及λ輕鏈恆定區的胺基酸序列。本文所提供之蛋白質S抗體可具有κ輕鏈恆定區或λ輕鏈恆定區。κ及λ輕鏈恆定區之序列提供於表3中。表 3
κ輕鏈序列 RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 214)
λ輕鏈序列 GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS (SEQ ID NO: 215)
在例示性實施例中，具有SEQ ID NO: 214之輕鏈序列的蛋白質S抗體包含具有如SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 52及SEQ ID NO: 64中所闡述之胺基酸序列的CDR。
在例示性實施例中，具有SEQ ID NO: 215之輕鏈序列的蛋白質S抗體包含具有如SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 52及SEQ ID NO: 64中所闡述之胺基酸序列的CDR。
在例示性實施例中，具有SEQ ID NO: 214之輕鏈序列的蛋白質S抗體包含具有如SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 53及SEQ ID NO: 65中所闡述之胺基酸序列的CDR。
在例示性實施例中，具有SEQ ID NO: 215之輕鏈序列的蛋白質S抗體包含具有如SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 53及SEQ ID NO: 65中所闡述之胺基酸序列的CDR。
在例示性實施例中，具有SEQ ID NO: 214之輕鏈序列的蛋白質S抗體包含具有如SEQ ID NO: 132、SEQ ID NO: 118、SEQ ID NO: 129、SEQ ID NO: 133、SEQ ID NO: 134及SEQ ID NO: 135中所闡述之胺基酸序列的CDR。
在例示性實施例中，具有SEQ ID NO: 215之輕鏈序列的蛋白質S抗體包含具有如SEQ ID NO: 132、SEQ ID NO: 118、SEQ ID NO: 129、SEQ ID NO: 133、SEQ ID NO: 134及SEQ ID NO: 135中所闡述之胺基酸序列的CDR。例示性蛋白質 S 抗體 - 可變區序列
本文提供本發明之例示性蛋白質S抗體之可變域的胺基酸序列。例示性可變輕鏈胺基酸序列及例示性可變重鏈胺基酸序列呈現於下表4A及4B中。表4C呈現可變重鏈及可變輕鏈之例示性組合。
因此，在一些實施例中，本發明之蛋白質S抗體包含表4C中提供之組合中之任一者的可變鏈胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供蛋白質S抗體，其中該等抗體包含有包含選自SEQ ID NO: 83、85及154之胺基酸序列的可變輕鏈。在一些實施例中，本文提供蛋白質S抗體，其中該等抗體包含有包含選自SEQ ID NO: 84、86及155之胺基酸序列的可變重鏈。
表 4A ：蛋白質 S 單株抗體之例示性可變輕鏈胺基酸序列
EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVGSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGGPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 83)
EIVMTQSPATLSVFPGERATLSCRASQSVRSNLAWHQQKLGQAPRLLLYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLAISSLQSEDFAVYYCQQYNSWPFTFGGGTKVGIK (SEQ ID NO: 85)
DIQMTQSPSSLSASVRDRVTINCRASQSIRSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQGGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPRTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 154)
表 4B ： 蛋白質 S 單株抗體之例示性可變重鏈胺基酸序列
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYDINWVRQATGQGLEWMGWVNPNSDNIGYAQKFQGRVTMTRNTSISTAYMELSSLRSEDSAVYYCVRGAAAAWDAFAIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO: 84)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASRFSFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISDSGSNTYYADSVKGLFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKNYESGGYYTFFDYWGQGTLVTVST (SEQ ID NO: 86)
EVQVVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLNSFWMSWVRQAPGKGLEWVANIKEDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNGLRAEDTALYYCARETDILTAYYSDYYSYYGMDVWGQGTTVTVSA (SEQ ID NO: 155)
表 4C ： 蛋白質 S 單株抗體之例示性可變輕鏈及可變重鏈胺基酸序列
組合編號 可變輕鏈胺基酸序列 可變重鏈胺基酸序列
組合 8 SEQ ID NO: 83 SEQ ID NO: 84
組合 9 SEQ ID NO: 85 SEQ ID NO: 86
組合 16 SEQ ID NO: 154 SEQ ID NO: 155
在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體之重鏈及輕鏈可變域包括表4C中所呈現的經編號組合中之任一者之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供蛋白質S抗體，其中該等抗體之輕鏈可變域包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供蛋白質S抗體，其中該抗體之重鏈可變域包含SEQ ID NO: 84之胺基酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供蛋白質S抗體，其中該等抗體之輕鏈可變域包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的胺基酸序列；及/或其中該抗體之重鏈可變域包含SEQ ID NO: 84之胺基酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的胺基酸序列。在該等實施例中，該等抗體可包含SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 52及SEQ ID NO: 64之CDR胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供蛋白質S抗體，其中該等抗體之輕鏈可變域包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供蛋白質S抗體，其中該抗體之重鏈可變域包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供蛋白質S抗體，其中該等抗體之輕鏈可變域包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的胺基酸序列；及/或其中該抗體之重鏈可變域包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的胺基酸序列。在該等實施例中，該等抗體可包含SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 53及SEQ ID NO: 65之CDR胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供蛋白質S抗體，其中該等抗體之輕鏈可變域包含SEQ ID NO: 154之胺基酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供蛋白質S抗體，其中該抗體之重鏈可變域包含SEQ ID NO: 155之胺基酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供蛋白質S抗體，其中該等抗體之輕鏈可變域包含SEQ ID NO:  154之胺基酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的胺基酸序列；及/或其中該抗體之重鏈可變域包含SEQ ID NO: 155之胺基酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的胺基酸序列。在該等實施例中，該等抗體可包含SEQ ID NO: 132、SEQ ID NO: 118、SEQ ID NO: 129、SEQ ID NO: 133、SEQ ID NO: 134及SEQ ID NO: 135之CDR胺基酸序列。
在一些實施例中，蛋白質S抗體引起循環TFPI之含量降低。引起循環TFPI之含量降低的例示性抗體(1)包含：輕鏈可變域，其包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列；及重鏈可變域，其包含SEQ ID NO: 84之胺基酸序列；(2)包含：輕鏈可變域，其包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列；及重鏈可變域，其包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列；(3)包含：輕鏈可變域，其包含SEQ ID NO: 154之胺基酸序列；及重鏈可變域，其包含SEQ ID NO: 155之胺基酸序列；(4)包含SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 52及SEQ ID NO: 64之輕鏈及重鏈CDR胺基酸序列；(5)包含SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 53及SEQ ID NO: 65之輕鏈及重鏈CDR胺基酸序列；且(6)包含SEQ ID NO: 132、SEQ ID NO: 118、SEQ ID NO: 129、SEQ ID NO: 133、SEQ ID NO: 134及SEQ ID NO: 135之輕鏈及重鏈CDR胺基酸序列。
在一些實施例中，蛋白質S抗體增加血纖維蛋白沈積。增加血纖維蛋白沈積之例示性抗體(1)包含：輕鏈可變域，其包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列；及重鏈可變域，其包含SEQ ID NO: 84之胺基酸序列；(2)包含：輕鏈可變域，其包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列；及重鏈可變域，其包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列；(3)包含SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 52及SEQ ID NO: 64之輕鏈及重鏈CDR胺基酸序列；且(4)包含SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 53及SEQ ID NO: 65之輕鏈及重鏈CDR胺基酸序列。
在一些實施例中，所提供之蛋白質S抗體促進凝血酶產生。促進凝血酶產生之例示性抗體(1)包含：輕鏈可變域，其包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列；及重鏈可變域，其包含SEQ ID NO: 84之胺基酸序列；(2)包含：輕鏈可變域，其包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列；及重鏈可變域，其包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列；(3)包含：輕鏈可變域，其包含SEQ ID NO: 154之胺基酸序列；及重鏈可變域，其包含SEQ ID NO: 155之胺基酸序列；(4)包含SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 52及SEQ ID NO: 64之輕鏈及重鏈CDR胺基酸序列；(5)包含SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 53及SEQ ID NO: 65之輕鏈及重鏈CDR胺基酸序列；且(6)包含SEQ ID NO: 132、SEQ ID NO: 118、SEQ ID NO: 129、SEQ ID NO: 133、SEQ ID NO: 134及SEQ ID NO: 135之輕鏈及重鏈CDR胺基酸序列。
在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體阻止TFPI與蛋白質S之間之相互作用。阻止TFPI與蛋白質S之間之相互作用之例示性抗體(1)包含：輕鏈可變域，其包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列；及重鏈可變域，其包含SEQ ID NO: 84之胺基酸序列；(2)包含：輕鏈可變域，其包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列；及重鏈可變域，其包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列；(3)包含SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 52及SEQ ID NO: 64之輕鏈及重鏈CDR胺基酸序列；且(4)包含SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 53及SEQ ID NO: 65之輕鏈及重鏈CDR胺基酸序列。
如上文所指出，蛋白質S包含四個域：γ-羧基-麩胺酸域(Gla域)、凝血酶敏感區(TSR)、表皮生長因子樣域(EGF域)及性激素結合球蛋白樣域(SHBG域)。圖1描繪展示蛋白質S之此等構件域的蛋白質S之示意圖。TSR在蛋白質S之重鏈內。蛋白質S之重鏈表示蛋白質S之胺基酸42-296，TSR表示胺基酸88-116，信號肽表示胺基酸1-24，且前肽表示胺基酸25-41。
在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體不結合蛋白質S重鏈。不結合蛋白質S重鏈之例示性抗體(1)包含：輕鏈可變域，其包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列；及重鏈可變域，其包含SEQ ID NO: 84之胺基酸序列；(2)包含：輕鏈可變域，其包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列；及重鏈可變域，其包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列；(3)包含：輕鏈可變域，其包含SEQ ID NO: 154之胺基酸序列；及重鏈可變域，其包含SEQ ID NO: 155之胺基酸序列；(4)包含SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 52及SEQ ID NO: 64之輕鏈及重鏈CDR胺基酸序列；(5)包含SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 53及SEQ ID NO: 65之輕鏈及重鏈CDR胺基酸序列；且(6)包含SEQ ID NO: 132、SEQ ID NO: 118、SEQ ID NO: 129、SEQ ID NO: 133、SEQ ID NO: 134及SEQ ID NO: 135之輕鏈及重鏈CDR胺基酸序列。
本文所提供之蛋白質S抗體在除TSR外的區域處結合蛋白質S。在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體結合至蛋白質S之重鏈，但不結合重鏈之TSR區。在一些實施例中，所提供之蛋白質S抗體為TFPI之抑制劑，且不結合至蛋白質S之TSR。
在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體不結合至蛋白質S之TSR，且引起TFPI之活性的抑制、破壞蛋白質S-TFPI之結合、阻止蛋白質S-TFPI複合物形成及/或使得TFPI之循環含量降低。
在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體結合至構形抗原決定基，亦即非線性抗原決定基。
如上文所論述，可發現蛋白質S呈游離形式，或呈複合形式。蛋白質S可與至少TFPI，且與C4b結合蛋白(C4BP)形成複合物。
在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體能夠結合至呈游離形式及複合形式，例如與TFPI或C4BP複合的蛋白質S。在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體能夠結合至呈游離或複合形式的蛋白質S。
在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體結合至複合蛋白質S，其中蛋白質S結合至TFPI。在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體結合至複合蛋白質S，其中蛋白質S結合至C4BP。在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體阻止在蛋白質S與TFPI之間形成複合物。
在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體結合蛋白質S，且抗體對蛋白質S之結合親和力為鈣非依賴性的。展示與蛋白質S之結合為鈣非依賴性的本發明之例示性抗體包含(1) SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 52及SEQ ID NO: 64；(2) SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 53及SEQ ID NO: 65；及(3) SEQ ID NO: 132、SEQ ID NO: 118、SEQ ID NO: 129、SEQ ID NO: 133、SEQ ID NO: 134及SEQ ID NO: 135之CDR胺基酸序列。
可利用至少抗體觀測到之分級抑制(1)包含：輕鏈可變域，其包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列；及重鏈可變域，其包含SEQ ID NO: 84之胺基酸序列；(2)包含：輕鏈可變域，其包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列；及重鏈可變域，其包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列；(3)包含SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 52及SEQ ID NO: 64之輕鏈及重鏈CDR胺基酸序列；且(4)包含SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 53及SEQ ID NO: 65之輕鏈及重鏈CDR胺基酸序列。B. 蛋白質 S 抗體之產生
本文所提供之蛋白質S抗體之製造可藉由使用一般熟習此項技術者已知之任何方法。在一些實施例中，抗體藉由融合瘤產生。在一些實施例中，抗體由核酸編碼，且經表現、經純化及經分離。
因此，本文提供編碼本文所揭示之抗體中之任一者的核酸、包含編碼該等抗體之核酸中之任一者的載體及包含該等載體之宿主細胞。本文亦提供編碼本文所揭示之蛋白質S抗體之可變重鏈及可變輕鏈的例示性核酸序列。
表5A及5B提供例示性可變輕鏈核酸序列及例示性可變重鏈核酸序列。編碼本文所揭示之蛋白質S抗體之可變重鏈域及輕鏈域的核酸序列之例示性組合呈現於表5C中。表4A-4C之例示性胺基酸序列對應於表5A-5C之核酸序列。表5C之例示性組合對應於表4C中呈現之經編號組合。
一般熟習此項技術者應瞭解，由於三重碼之冗餘，多個核酸可編碼同一胺基酸序列。因此，與下表中所闡述之核酸序列不相同的核酸序列仍可編碼本發明之蛋白質S抗體。
表 5A ： 抗蛋白質 S 單株抗體之例示性可變輕鏈核酸序列
GAAATAGTGATGACGCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTGTGTCTCCAGGAGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTGGCAGCAACTTAGCCTGGTACCAGCAAAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCGTCCACCAGGGCCACTGGTGGCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGTCTGAAGATTTTGCAGTTTACTACTGTCAGCAGTATAATAACTGGCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA (SEQ ID NO: 107)
GAAATAGTGATGACGCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTGTGTTTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCTTGTAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGAAGCAACTTAGCCTGGCACCAGCAGAAACTTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCCTCTATGGAGCATCCACCAGGGCCACTGGTATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGAGTTCACTCTCGCCATCAGCAGCCTGCAGTCTGAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGTATAATAGCTGGCCTTTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGGGATCAAA (SEQ ID NO: 109)
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAAGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGGAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAGGTGGGGTCCCATCACGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTACCCCTCGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA (SEQ ID NO: 168)
表 5B ： 抗蛋白質 S 單株抗體之例示性可變重鏈核酸序列
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCACCAGTTATGATATCAACTGGGTGCGACAGGCCACTGGACAAGGCCTTGAGTGGATGGGATGGGTGAACCCTAACAGTGATAACATAGGCTATGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCAGGAACACCTCCATAAGCACAGCCTACATGGAACTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACTCGGCCGTGTATTATTGTGTGAGAGGAGCAGCAGCAGCTTGGGATGCTTTTGCTATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA (SEQ ID NO: 108)
GAGGTGCAGTTGCTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCGGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTAGATTCAGCTTTAGCAGCTACGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGGTCTCAGCCATTAGTGACAGTGGTAGTAACACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCTATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGTTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAAAAACTATGAGTCGGGGGGTTATTATACCTTCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCACA (SEQ ID NO: 110)
GAGGTGCAGGTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTAATAGTTTTTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCCAACATAAAGGAAGATGGAAGTGAGAAATACTATGTGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACGGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTCTGTATTACTGTGCGAGAGAAACCGATATTTTGACTGCTTATTATTCGGATTACTACTCCTATTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCGCA (SEQ ID NO: 169)
表 5C ： 抗蛋白質 S 單株抗體之例示性可變輕鏈及可變重鏈核酸序列
組合編號 可變輕鏈核酸序列 可變重鏈核酸序列
組合8 SEQ ID NO: 107 SEQ ID NO: 108
組合9 SEQ ID NO: 109 SEQ ID NO: 110
組合16 SEQ ID NO: 168 SEQ ID NO: 169
在一些實施例中，本文提供編碼本文所揭示之蛋白質S抗體中之任一者的核酸。在一些實施例中，本文提供包含表5A-5B之核酸序列中之任一或多者的核酸。在一些實施例中，本文所揭示之蛋白質S抗體之重鏈及輕鏈可變域由包含表5A-5B之核酸序列中之任一或多者的核酸編碼。
在一些實施例中，本發明之蛋白質S抗體之可變域由核酸編碼，其中該抗體之輕鏈可變域由SEQ ID NO: 107之核酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的核酸序列編碼。
在一些實施例中，本發明之蛋白質S抗體之可變域由核酸編碼，其中該抗體之重鏈可變域由SEQ ID NO: 108之核酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的核酸序列編碼。
在一些實施例中，本發明之蛋白質S抗體之可變域由核酸編碼，其中該抗體之輕鏈可變域由SEQ ID NO: 107之核酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的核酸序列編碼；及/或其中該抗體之重鏈可變域由SEQ ID NO: 108之核酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的核酸序列編碼。
在一些實施例中，本發明之蛋白質S抗體之可變域由核酸編碼，其中該抗體之輕鏈可變域由SEQ ID NO: 109之核酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的核酸序列編碼。
在一些實施例中，本發明之蛋白質S抗體之可變域由核酸編碼，其中該抗體之重鏈可變域由SEQ ID NO: 110之核酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的核酸序列編碼。
在一些實施例中，本發明之蛋白質S抗體之可變域由核酸編碼，其中該抗體之輕鏈可變域由SEQ ID NO: 109之核酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的核酸序列編碼；及/或其中該抗體之重鏈可變域由SEQ ID NO: 110之核酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的核酸序列編碼。
在一些實施例中，本發明之蛋白質S抗體之可變域由核酸編碼，其中該抗體之輕鏈可變域由SEQ ID NO: 168之核酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的核酸序列編碼。
在一些實施例中，本發明之蛋白質S抗體之可變域由核酸編碼，其中該抗體之重鏈可變域由SEQ ID NO: 169之核酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的核酸序列編碼。
在一些實施例中，本發明之蛋白質S抗體之可變域由核酸編碼，其中該抗體之輕鏈可變域由SEQ ID NO: 168之核酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的核酸序列編碼；及/或其中該抗體之重鏈可變域由SEQ ID NO: 169之核酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的核酸序列編碼。
本發明亦提供包含本發明之任何核酸之載體。在一些實施例中，載體之核酸包含選自表5A-5B之核酸序列中之任一或多者。在一些實施例中，載體為表現載體或表現構築體。在一些實施例中，載體為哺乳動物載體。在一些實施例中，載體為病毒載體。
在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體藉由在適用於引起蛋白質S抗體表現之條件下培養細胞產生，其中該細胞包含載體。II. 蛋白質 S 抗體之用途 A. 治療蛋白質 S 抗體
本文提供識別及選擇性及/或特異性結合至蛋白質S，包括可溶性蛋白質S (游離蛋白質S)及作為(例如與TFPI或C4BP之)複合物之一部分的蛋白質S的抗體。本文所揭示之抗體可用於個體中之療法。在一些實施例中，個體為哺乳動物個體。在一些實施例中，哺乳動物個體為人類個體。在一些實施例中，哺乳動物個體為非人類靈長類動物，例如食蟹獼猴。
在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體可用於治療個體之病況，其中該病況與凝血級聯相關聯。在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體可用於降低蛋白質S充當凝血級聯內之輔因子以治療個體之病況的能力。
在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體可用於降低蛋白質S充當TFPI之輔因子以藉由促進凝血酶產生治療出血性病症或其他疾病，例如血小板病症的能力。
在一些實施例中，本文中提供一種促進血液凝固之方法，該方法包含使本文所揭示之蛋白質S抗體中之任一者與蛋白質S接觸。在一些實施例中，接觸發生於血漿中。在一些實施例中，該方法係在活體外進行。在一些實施例中，該方法係在活體內進行。在一些實施例中，該方法係在活體內進行，且該方法進一步包含向有需要之個體投與本文所揭示之蛋白質S抗體中之任一者。
在一些實施例中，本文提供一種促進血液凝固、減少TFPI含量、破壞TFPI及蛋白質S複合及/或阻止蛋白質S-TFPI複合物形成的方法，該方法包含使本文所揭示之蛋白質S抗體中之任一者與血液樣品接觸。在一些實施例中，結果以凝血酶產生增加為標誌。在一些實施例中，結果以血纖維蛋白產生增加為標誌。
在一些實施例中，本文提供結合蛋白質S之抗體，其中該抗體與蛋白質S之結合減少循環TFPI含量。
在一些實施例中，本文提供結合蛋白質S之抗體，其中該抗體與蛋白質S之結合減少或破壞蛋白質S-TFPI複合物，或阻止蛋白質S-TFPI複合物形成。
在一些實施例中，抗體之作用以D-二聚體增加為標誌。
在一些實施例中，本文中提供一種促進有需要之個體之血液凝固的方法，該方法包含向個體投與本文所揭示之蛋白質S抗體中之任一者或本文所揭示之醫藥組合物中之任一者。在一些實施例中，抗體在個體體內保持活性一段時間，其中該時間段為抗體劑量依賴性的。在一些實施例中，該時間段為約50小時至約170小時。在一些實施例中，抗體呈現開關樣抑制。在一些實施例中，抗體呈現分級抑制。
在一些實施例中，本文中提供一種降低有需要之個體體內之TFPI之循環含量的方法，該方法包含向個體投與本文所揭示之蛋白質S抗體中之任一者或本文所揭示之醫藥組合物中之任一者。在一些實施例中，個體罹患選自由出血性病症及血小板病症組成之群的疾病或病況。在一些實施例中，個體罹患創傷及/或由手術或醫療程序造成之出血。舉例而言，醫學程序可為其中可能出現出血但未必如此之程序。在一些實施例中，醫療程序為牙科程序。
在一些實施例中，本文中提供一種促進有需要之個體之凝血酶產生的方法，該方法包含向個體投與本文所揭示之蛋白質S抗體中之任一者或本文所揭示之醫藥組合物中之任一者。在一些實施例中，個體罹患選自由出血性病症及血小板病症組成之群的疾病或病況。在一些實施例中，個體罹患創傷及/或由手術或醫療程序造成之出血。舉例而言，醫學程序可為其中可能出現出血但未必如此之程序。在一些實施例中，醫療程序為牙科程序。
在一些實施例中，本文中提供一種治療有需要之個體之病況的方法，其中該疾病選自由出血性病症及血小板病症組成之群，且該方法包含向個體投與本文所揭示之蛋白質S抗體中之任一者或本文所揭示之醫藥組合物中之任一者。在一些實施例中，病況為出血性病症。在一些實施例中，出血性病症選自由以下組成之群：A型血友病、B型血友病、馮威里氏病(vWD，其可為選自以下之亞型：1型vWD、2A型vWD、2B型vWD、2N型vWD、2M型vWD、3型vWD及後天性vWD)、月經過多，包括因先天性或後天性因子缺乏症、因子I缺乏症、因子II缺乏症、因子V缺乏症、因子VII缺乏症、因子X缺乏症、因子XI缺乏症(C型血友病)、因子VIII缺乏症(A型血友病)、因子IX缺乏症(B型血友病)、創傷及遺傳出血性毛細血管擴張所致之月經過多。在一些實施例中，出血與例如患有一種類型之血友病之個體的手術相關聯。在一些實施例中，出血與醫療程序，例如牙科程序相關聯。在一些實施例中，出血性病症為vWD，且個體亦罹患月經過多。在一些實施例中，出血性病症為vWD，且個體正在進行預防性治療。在一些實施例中，個體罹患與任何一或多種出血性病症及/或血小板病症相關之月經過多。在一些實施例中，個體為血友病載體。在一些實施例中，個體為血友病攜帶者，且罹患月經過多。在一些實施例中，病況為血小板病症。在一些實施例中，血小板病症包括但不限於伯納德-蘇利耶症候群(Bernard-Soulier syndrome)、格蘭茨曼氏血小板無力症(Glanzmann's thrombasthenia)及血小板儲存池缺乏症。在一些實施例中，血小板病症為血小板儲存池缺乏症。在一些實施例中，血小板儲存池缺乏症包括但不限於：灰色血小板症候群(Gray platelet syndrome)、魁北克血小板病症(Quebec platelet disorder)及MYH9相關血小板減少症(MYH9-related thrombocytopenia；MYH9RD)。在一些實施例中，該個體患有出血性病症，且服用抑制劑。在一些實施例中，出血性病症為A型血友病或B型血友病，其中該個體服用抑制劑。在一些實施例中，出血性病症為vWD。舉例而言，抑制劑可隨著針對因子替代療法之反應而在個體中出現。
在一些實施例中，有需要之個體可用本文所提供之蛋白質S抗體中之任一者治療，其中該治療為預防出血發作或減少出血發作之頻率的常規預防。在一些實施例中，有需要之個體可用本文所提供之蛋白質S抗體中之任一者治療，其中該治療為用於控制出血發作之隨需要治療。在一些實施例中，有需要之個體可用本文所提供之蛋白質S抗體中之任一者治療，其中該治療為出血之圍手術期管理。舉例而言，圍手術期管理治療可用於在手術或其他醫療程序之前、期間及/或之後或在創傷之前、期間及/或之後治療個體。
在一些實施例中，以長期療法形式提供用本文所提供之蛋白質S抗體中之任一者進行之治療，其中給藥隨時間推移連續地進行。在一些實施例中，以間歇性療法形式提供用本文所提供之蛋白質S抗體中之任一者進行之治療，其中給藥以不規律時間間隔進行。作為一實例，此類間歇性療法可用於患有月經過多之個體。在一些實施例中，以急性療法形式提供用本文所提供之蛋白質S抗體中之任一者進行之治療，其中給藥在短的有限時間段內進行。舉例而言，急性療法可針對自發出血發作投與，或與手術或其他醫療程序結合投與，或在經歷創傷之後投與。
在一些實施例中，治療個體之方法可為以上中之一者的組合，例如治療方法可為預防性的，且隨需要。在一些實施例中，預防性治療方法可為長期療法。在一些實施例中，預防性治療方法可為急性療法。在一些實施例中，預防性治療方法可為間歇性療法。在一些實施例中，隨需要治療可為急性療法。在一些實施例中，隨需要治療可為間歇性治療。
在一些實施例中，治療有需要之個體包含向個體投與本文所提供之蛋白質S抗體中之任一者，其中本文所提供之蛋白質S抗體為Fab片段。不受任何理論束縛，在一些實施例中，與具有相同VH/VL之全長抗體有關的Fab片段之較短半衰期可有益於急性治療或隨需要。在一些實施例中，向有需要之個體投與Fab片段蛋白質S抗體以降低出血之風險。B. 組合療法
本文所提供之治療蛋白質S抗體中之任一者之投與可為單一療法，或可與疾病或病況之任何其他已知藥物或治療組合。在一些實施例中，其他已知藥物或治療可用於治療與凝結減少或受損相關之病症、疾病或病況。在一些實施例中，病症、病況為出血性病症。在一些實施例中，疾病、病症或病況為出血性病症或血小板病症。
在一些實施例中，本文所提供之治療蛋白質S抗體中之任一者之投與可與因子替代療法一起。在一些實施例中，本文所提供之治療蛋白質S抗體中之任一者之投與可與重組因子VIIa之投與一起。C. 治療蛋白質 S 抗體之投與
活體內投與本文所述之治療蛋白質S抗體可經靜脈內、經肌肉內、經皮下、經體表、經口、經皮、經腹膜內、經眶內、經鞘內、經腦室內、經鼻內、經黏膜、經由植入或經由吸入實現。治療蛋白質S抗體之投與可利用任何適合賦形劑、載劑或其他藥劑進行以提供適合或經改進的耐受性、轉移、遞送及其類似物。
在一些實施例中，本文所提供之治療蛋白質S抗體中之任一者之活體內投與可為靜脈內投與。在一些實施例中，靜脈內投與可以預防性治療形式提供。在一些實施例中，預防性治療可為常規預防。在一些實施例中，常規預防可具有規律的給藥排程。在一些例示性實施例中，規律的給藥排程可為每週一次、每週兩次、每月一次、每月兩次或每月三次。在一些實施例中，靜脈內投與可以隨需要治療提供。在一些實施例中，靜脈內投與可以長期療法形式提供。在一些實施例中，靜脈內投與可以間歇性療法形式提供。在一些實施例中，靜脈內投與可以急性療法形式提供。在一些實施例中，間歇性療法可在間歇性療法之持續時間內具有規律的給藥排程。在一些實施例中，急性療法可在急性療法之持續時間內具有規律的給藥排程。舉例而言，針對急性療法藉由靜脈內投與來投與本文所提供之治療蛋白質S抗體中之任一者可在數天，例如7天、14天或更多天之預定持續時間內按照規律的給藥排程進行。
在一些實施例中，本文所提供之治療蛋白質S抗體中之任一者之活體內投與可為皮下投與。在一些實施例中，皮下投與可以預防性治療形式提供。在一些實施例中，預防性治療可為常規預防。在一些實施例中，常規預防可具有規律的給藥排程。在一些例示性實施例中，規律的給藥排程可為每週一次、每週兩次、每月一次、每月兩次或每月三次。在一些實施例中，皮下投與可以隨需要治療提供。在一些實施例中，皮下投與可以長期療法形式提供。在一些實施例中，皮下投與可以間歇性療法形式提供。在一些實施例中，皮下投與可以急性療法形式提供。在一些實施例中，間歇性療法可在間歇性療法之持續時間內具有規律的給藥排程。在一些實施例中，急性療法可在急性療法之持續時間內具有規律的給藥排程。舉例而言，針對急性療法藉由皮下投與來投與本文所提供之治療蛋白質S抗體中之任一者可在數天，例如7天、14天或更多天之預定持續時間內按照規律的給藥排程進行。
在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體可以適用於注射，諸如適用於皮下投與之小體積形式提供。在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體可藉由使用筆樣自動注射器裝置以適用於注射之小體積形式提供。在一些實施例中，裝置為針筒，例如預填充針筒。
在一些實施例中，本文提供可用於皮下或靜脈內投與之單劑量小瓶。
因此，治療有效量之本文所提供之蛋白質S抗體可以小體積提供以向有需要之個體皮下投與。在一些實施例中，本文所提供之蛋白質S抗體可藉由皮下輸注裝置以適用於投與之大體積提供以向有需要之個體皮下輸注。D. 醫藥組合物
本發明亦提供醫藥組合物，其包含本文所揭示之蛋白質S抗體中之任一者及視情況存在之醫藥可接受之賦形劑或載劑。在一些實施例中，醫藥組合物無菌。醫藥組合物可經調配以與其預期投與途徑相容。在一些實施例中，本發明之醫藥組合物適合於向人類個體投與。E. 診斷性抗體
本文所提供之抗體亦可出於診斷性目的使用。舉例而言，診斷性抗體可用於偵測蛋白質S缺乏症，或用於偵測給藥之前血漿中之蛋白質S含量(例如作為伴隨診斷)。
因此，在一些實施例中，本發明之蛋白質S抗體與標記結合，例如可偵測標記、自旋標記、比色標記、放射性標記、酶標記、螢光標記或磁性標記。標記可藉由光譜、光化學、生物化學、免疫化學、螢光、電、光學或化學方法偵測。適用的標記包括但不限於磁珠(例如DYNABEADS®)、螢光染料(例如螢光異硫氰酸鹽、紅色、若丹明(rhodamine)及其類似物)、放射性標記(例如3H、125I、35S、14C或32P)、酶(例如LacZ、CAT、辣根過氧化酶、鹼性磷酸酶及常用作標記基因產物或用於ELISA中之可偵測酶的其他酶)、生物素、抗生物素蛋白或卵白素及諸如膠態金著色玻璃或塑膠(例如聚苯乙烯、聚丙烯、乳膠等)珠粒及奈米粒子之比色標記。在一些實施例中，本文提供一或多種本發明之蛋白質S抗體所連接之受質。
偵測可在獲自個體之任何生物樣品上實現。生物樣品包括但不限於全血、血漿、血清、唾液、尿液、糞便、滑液、腦脊髓液、支氣管灌洗物、腹水、骨髓抽出物、胸膜滲出液、組織、細胞、生檢、間質液、淋巴液或衍生自個體之其餾份。在一些實施例中，生物樣品包含細胞，且細胞在培養物中、在懸浮液中、在載片中、在完整組織中或在準備用於FAC分析之製劑中。III. 套組及製品
本發明亦提供套組或製品，其包含本文所揭示之抗體中之任一者或本文所揭示之任何醫藥組合物。在一些實施例中，套組可進一步包括用於進行本文所揭示之方法中之任一者的指令材料。在一些實施例中，套組可進一步包括用於容納本文所揭示之抗體及/或醫藥組合物的無菌容器或小瓶。在一些實施例中，套組可進一步包括用於投與本文所揭示之抗體及/或醫藥組合物的無菌遞送裝置。在一些實施例中，製品包含本發明之任何醫藥組合物。IV. 例示性所列舉實施例
本發明之例示性所列舉實施例如下。
本發明之例示性所列舉實施例如下。
實施例I-1.  一種結合蛋白質S之抗體，其中該抗體與蛋白質S之結合降低循環組織因子路徑抑制劑(TFPI)含量。
實施例I-2. 一種結合蛋白質S之抗體，其中該抗體與蛋白質S之結合破壞蛋白質S-TFPI複合物，或阻止蛋白質S-TFPI複合物形成。
實施例I-3.如實施例I-1至I-2中任一例之抗體，其中該抗體為蛋白質S對TFPI之輔因子活性的抑制劑。
實施例I-4. 如實施例I-1至I-3中任一例之抗體，其中該抗體與蛋白質S之結合誘導循環TFPI含量降低至少10%。
實施例I-5. 如實施例I-1至I-4中任一例之抗體，其中該抗體與蛋白質S之結合破壞該蛋白質S-TFPI複合物。
實施例I-6. 如實施例I-1至I-5中任一例之抗體，其中該抗體與蛋白質S之結合阻止該蛋白質S-TFPI複合物形成。
實施例I-7. 如實施例I-1至I-6中任一例之抗體，其中該抗體結合至蛋白質S之C端。
實施例I-8. 如實施例I-1至I-7中任一例之抗體，其中該抗體結合至蛋白質S之性激素結合球蛋白樣域(SHBG樣域)。
實施例I-9. 如實施例I-1至I-8中任一例之抗體，其中該抗體與蛋白質S之結合促進與凝血活性相關之標誌物產生。
實施例I-10. 如實施例I-1至I-9中任一例之抗體，其中該抗體與蛋白質S之結合促進凝血酶產生。
實施例I-11. 如實施例I-1至I-10中任一例之抗體，其中該抗體與蛋白質S之結合提高D-二聚體含量。
實施例I-12. 如實施例I-1至I-11中任一例之抗體，其中該抗體與蛋白質S之結合促進血纖維蛋白產生。
實施例I-13. 如實施例I-1至I-12中任一例之抗體，其中該抗體之活性為劑量依賴性的。
實施例I-14.如實施例I-1至I-13中任一例之抗體，其中該抗體之活性在活體外量測。
實施例I-15. 如實施例I-1至I-13中任一例之抗體，其中該抗體之活性在活體內量測。
實施例I-16. 如實施例I-1至I-15中任一例之抗體，其中該抗體結合至游離蛋白質S。
實施例I-17.  如實施例I-1至I-15中任一例之抗體，其中該抗體結合至複合蛋白質S。
實施例I-18. 如實施例I-17之抗體，其中該蛋白質S與C4BP複合。
實施例I-19. 如實施例I-17之抗體，其中該蛋白質S與TFPI複合。
實施例I-20. 如實施例I-1至I-19中任一例之抗體，其中該抗體為單株抗體。
實施例I-21. 如實施例I-1至I-20中任一例之抗體，其中該抗體為全長抗體。
實施例I-22. 如實施例I-1至I-20中任一例之抗體，其中該抗體為抗體片段。
實施例I-23. 如實施例I-1至I-22中任一例之抗體，其中該抗體為人類化抗體。
實施例I-24. 如實施例I-1至I-23中任一例之抗體，其中該抗體含有Fc域。 實施例I-25. 如實施例I-24之抗體，其中該Fc域為人類Fc域。
實施例I-26. 如實施例I-25之抗體，其中該Fc域為人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。
實施例I-27.如實施例I-25之抗體，其中該Fc域為人類IgG4。
實施例I-28. 如實施例I-27之抗體，其中該抗體之該Fc域為人類IgG4，視情況為SEQ ID NO: 139，且在選自由以下組成之群的位置處包含至少一個胺基酸取代：215、221、222、228、234、235、236、239、240、241、243、244、245、247、250、252、254、256、262、263、264、265、266、267、268、269、270、292、296、297、298、299、300、305、313、324、325、326、327、328、329、330、332、333、334、345、396、428、430、433、434及440，或包含選自由以下組成之群的取代中之一或多者：T250Q/M428L、M252Y/S254T/T256E、M428L/N434S、S267E/L328F、N325S/L328F及H433K/N434F，其中胺基酸殘基之位置編號屬於EU編號方案。
實施例I-29.如實施例I-1至I-22中任一例之抗體，其中該抗體為人類抗體。
實施例I-30. 如實施例I-1至I-22中任一例之抗體，其中該抗體為嵌合抗體。
實施例I-31. 如實施例I-1至I-30中任一例之抗體，其中該抗體經結合。
實施例I-32. 如實施例I-31之抗體，其中該抗體與標記結合。
實施例I-33.如實施例I-1至I-32中任一例之抗體，其中該抗體包含表1A、1B、1C、2A、2B及2C中提供之CDR序列之胺基酸序列中之任一或多者。
實施例I-34.  如實施例I-1至I-33中任一例之蛋白質S抗體，其中該抗體包含： (a)    表1A之CDR-L1胺基酸序列中之任一者； (b)    表1B之CDR-L2胺基酸序列中之任一者； (c)    表1C之CDR-L3胺基酸序列中之任一者； (d)    表2A之CDR-H1胺基酸序列中之任一者； (e)    表2B之CDR-H2胺基酸序列中之任一者；及 (f)    表2C之CDR-H3胺基酸序列中之任一者。
實施例I-35.如實施例I-1至I-34中任一例之蛋白質S抗體，其中該抗體之輕鏈可變域包含： (a)    包含SEQ ID NO: 7、8及132中之任一者之胺基酸序列之CDR-L1； (b)    包含SEQ ID NO: 17及118中之任一者之胺基酸序列之CDR-L2；及 (c)    包含SEQ ID NO: 28、29及129中之任一者之胺基酸序列之CDR-L3。
實施例I-36.如實施例I-1至I-35中任一例之蛋白質S抗體，其中抗體之重鏈可變域包含： (a)    包含SEQ ID NO: 40、41及133中之任一者之胺基酸序列之CDR-H1； (b)    包含SEQ ID NO: 52、53及134中之任一者之胺基酸序列之CDR-H2；及 (c)    包含SEQ ID NO: 64、65及135中之任一者之胺基酸序列之CDR-H3。
實施例I-37.如實施例I-1至I-36中任一例之蛋白質S抗體，其中該抗體之輕鏈可變域包含： (a)    包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列之CDR-L1； (b)    包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列之CDR-L2；及 (c)    包含SEQ ID NO: 28之胺基酸序列之CDR-L3。
實施例I-38.如實施例I-1至I-36中任一例之蛋白質S抗體，其中該抗體之輕鏈可變域包含： (a)    包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列之CDR-L1； (b)    包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列之CDR-L2；及 (c)    包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列之CDR-L3。
實施例I-39.如實施例I-1至I-36中任一例之蛋白質S抗體，其中該抗體之輕鏈可變域包含： (a)    包含SEQ ID NO: 132之胺基酸序列之CDR-L1； (b)    包含SEQ ID NO: 118之胺基酸序列之CDR-L2；及 (c)    包含SEQ ID NO: 129之胺基酸序列之CDR-L3。
實施例I-40.如實施例I-1至I-39中任一例之蛋白質S抗體，其中該抗體之重鏈可變域包含： (a)    包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列之CDR-H1； (b)    包含SEQ ID NO: 52之胺基酸序列之CDR-H2；及 (c)    包含SEQ ID NO: 64之胺基酸序列之CDR-H3。
實施例I-41.如實施例I-1至I-39中任一例之蛋白質S抗體，其中該抗體之重鏈可變域包含： (a)    包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列之CDR-H1； (b)    包含SEQ ID NO: 53之胺基酸序列之CDR-H2；及 (c)    包含SEQ ID NO: 65之胺基酸序列之CDR-H3。
實施例I-42.  如實施例I-1至I-39中任一例之蛋白質S抗體，其中該抗體之重鏈可變域包含： (a)    包含SEQ ID NO: 133之胺基酸序列之CDR-H1； (b)    包含SEQ ID NO: 134之胺基酸序列之CDR-H2；及 (c)    包含SEQ ID NO: 135之胺基酸序列之CDR-H3。
實施例I-43.  如實施例I-1至I-32中任一例之蛋白質S抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 52及SEQ ID NO: 64之輕鏈及重鏈CDR胺基酸序列。
實施例I-44.  如實施例I-1至I-32中任一例之蛋白質S抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 53及SEQ ID NO: 65之輕鏈及重鏈CDR胺基酸序列。
實施例I-45.  如實施例I-1至I-32中任一例之蛋白質S抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO: 132、SEQ ID NO: 118、SEQ ID NO: 129、SEQ ID NO: 133、SEQ ID NO: 134及SEQ ID NO: 135之輕鏈及重鏈CDR胺基酸序列。
實施例I-46.  如實施例I-1至I-32中任一例之蛋白質S抗體，其中該抗體包含表4A中提供之胺基酸序列中之任一者的可變鏈胺基酸序列及/或表4B中提供之胺基酸序列中之任一者的可變鏈胺基酸序列。
實施例I-47.  如實施例I-1至I-32中任一例之蛋白質S抗體，其中該抗體包含表4C中提供之胺基酸序列組合中之任一者的輕鏈及重鏈可變胺基酸序列。
實施例I-48.  如實施例I-1至I-32中任一例之蛋白質S抗體，其中該抗體之輕鏈可變域包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的胺基酸序列；及/或其中該抗體之重鏈可變域包含SEQ ID NO: 84之胺基酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的胺基酸序列。
實施例I-49.  如實施例I-1至I-32中任一例之蛋白質S抗體，其中該抗體之輕鏈可變域包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的胺基酸序列；及/或其中該抗體之重鏈可變域包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的胺基酸序列。
實施例I-50.  如實施例I-1至I-32中任一例之蛋白質S抗體，其中該抗體之輕鏈可變域包含SEQ ID NO: 154之胺基酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的胺基酸序列；及/或其中該抗體之重鏈可變域包含SEQ ID NO: 155之胺基酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的胺基酸序列。
實施例I-51.  如實施例I-1至I-50中任一例之蛋白質S抗體，其中該抗體包含輕鏈恆定區，且該輕鏈恆定區包含SEQ ID NO: 214之胺基酸序列。
實施例I-52.  如實施例I-1至I-50中任一例之蛋白質S抗體，其中該抗體包含輕鏈恆定區，且該輕鏈恆定區包含SEQ ID NO: 215之胺基酸序列。
實施例I-53.  如實施例I-1至I-52中任一例之蛋白質S抗體，其中對蛋白質S之親和力為約0.001 nM或更低、0.005 nM或更低、0.01 nM或更低、0.05 nM或更低、約0.1 nM或更低、約0.5 nM或更低、約1 nM或更低、約5 nM或更低、約10 nM或更低或約50 nM或更低。
實施例I-54.   一種醫藥組合物，其包含如實施例I-1至I-53之抗體中之任一者及視情況存在之醫藥學上可接受之賦形劑。
實施例I-55.   一種複合物，其包含蛋白質S及如實施例I-1至I-53中任一例之抗體，其中該抗體結合至該蛋白質S，且該蛋白質S係游離的。
實施例I-56.   一種複合物，其包含蛋白質S及如實施例I-1至I-53中任一例之抗體，其中該抗體結合至該蛋白質S，且該蛋白質S係複合的。
實施例I-57.  如實施例I-56之複合物，其中該蛋白質S結合至C4BP。
實施例I-58.  如實施例I-56之複合物，其中該蛋白質S結合至TFPI。
實施例I-59.  一種核酸，其編碼如實施例I-1至I-53之抗體中之任一者。
實施例I-60.   如實施例I-59之核酸，其包含選自表5A之核酸序列中之任一者。
實施例I-61.   如實施例I-59至I-60中任一例之核酸，其包含選自表5B之核酸序列中之任一者。
實施例I-62.   如實施例I-59至I-61中任一例之核酸，其中該核酸包含表5C中提供之核酸序列組合中之任一者的核酸序列。
實施例I-63.   如實施例I-59至I-62中任一例之核酸，其中如實施例I-1至I-36中任一例之蛋白質S抗體之輕鏈可變域由SEQ ID NO: 107之核酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的核酸序列編碼；及/或其中該抗體之重鏈可變域由SEQ ID NO: 108之核酸序列編碼或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的核酸序列。
實施例I-64.   如實施例I-59至I-62中任一例之核酸，其中如實施例I-1至I-36中任一例之蛋白質S抗體之輕鏈可變域由SEQ ID NO: 109之核酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的核酸序列編碼；及/或其中該抗體之重鏈可變域由SEQ ID NO: 110之核酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的核酸序列編碼。
實施例I-65.   如實施例I-59至I-62中任一例之核酸，其中如實施例I-1至I-36中任一例之蛋白質S抗體之輕鏈可變域由SEQ ID NO: 168之核酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的核酸序列編碼；及/或其中該抗體之重鏈可變域由SEQ ID NO: 169之核酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的核酸序列編碼。
實施例I-66.   一種載體，其包含如實施例I-59至I-65中任一例之核酸。
實施例I-67.   一種促進血液凝固、破壞蛋白質S-TFPI複合物或阻止蛋白質S-TFPI複合物形成之活體外方法，該方法包含使如實施例I-1至I-53中任一例之抗體與血液樣品接觸。
實施例I-68.    如實施例I-67之方法方法，其中該血液樣品包含血漿。
實施例I-69.   如實施例I-67至I-68中任一例之方法，其中與凝血活性相關之標誌物增加。
實施例I-70.   如實施例I-67至I-69中任一例之方法，其中凝血酶產生得到促進。
實施例I-71.   如實施例I-67至I-70中任一例之方法，其中血纖維蛋白產生得到促進。
實施例I-72.   如實施例I-67至I-71中任一例之方法，其中D-二聚體含量得到提高。
實施例I-73.   如實施例I-67至I-72中任一例之方法，其中該血液樣品係獲自患有凝血因子缺乏症、馮威里氏病或血小板病症之個體。
實施例I-74.  一種促進有需要之個體之血液凝固的方法，其包含向該個體投與如實施例I-1至I-53中任一例之抗體或如實施例I-54之醫藥組合物。
實施例I-75.   一種促進有需要之個體之凝血酶產生的方法，其包含向該個體投與如實施例I-1至I-53中任一例之抗體或如實施例I-54之醫藥組合物。
實施例I-76.   一種降低有需要之個體之血液中循環TFPI含量的方法，其包含向該個體投與如實施例I-1至I-53中任一例之抗體或如實施例I-54之醫藥組合物。
實施例I-77.   如實施例I-76之方法，其中該等循環TFPI含量降低至少10%。
實施例I-78.   如實施例I-76至I-77中任一例之方法，其中該抗體破壞該個體體內之TFPI-蛋白質S複合物。
實施例I-79.   如實施例I-76至I-78中任一例之方法，其中該抗體阻止該個體體內之TFPI-蛋白質S複合物形成。
實施例I-80.   如實施例I-74至I-79中任一例之方法，其中與凝血活性相關之標誌物增加。
實施例I-81.   如實施例I-74至I-80中任一例之方法，其中該個體之凝血酶產生得到促進。
實施例I-82.如實施例I-74至I-81中任一例之方法，其中該個體之血纖維蛋白產生得到促進。
實施例I-83.如實施例I-74至I-82中任一例之方法，其中該個體之D-二聚體含量增加。
實施例I-84.如實施例I-74至I-83中任一例之方法，其中該抗體在該個體體內保持活性一段時間。
實施例I-85.如實施例I-74至I-84中任一例之方法，其中該抗體之活性為劑量依賴性的。
實施例I-86.如實施例I-74至I-85中任一例之方法，其中該個體患有凝血因子缺乏症、馮威里氏病或血小板病症，且該抗體恢復或促進凝血酶產生。
實施例I-87.如實施例I-74至I-86中任一例之方法，其中該抗體之投與為皮下投與。
實施例I-88.一種治療有需要之個體之病況的方法，其包含向該個體投與如實施例1至53中任一例之抗體或如實施例I-54之醫藥組合物，其中該病況選自由以下組成之群：出血性病症、血小板病症、創傷及由手術或醫療程序造成之出血。
實施例I-89. 如實施例I-88之方法，其中該治療方法係預防性的。 實施例I-90.如實施例I-88之方法，其中該治療方法隨需要。
實施例I-91.如實施例I-88至I-90中任一例之方法，其中該方法係預防性的且隨需要。
實施例I-92. 如實施例I-89或I-91中任一例之方法，其中該預防性治療方法為常規預防。
實施例I-93. 如實施例I-88至I-92中任一例之方法，其中該抗體之投與為皮下投與。
實施例I-94.如實施例I-74至I-93中任一例之方法，其中該治療方法係急性的。
實施例I-95. 如實施例I-74至I-93中任一例之方法，其中該治療方法係長期的。
實施例I-96. 如實施例I-74至I-93中任一例之方法，其中該治療方法係圍手術期的。
實施例I-97.如實施例I-74至I-93中任一例之方法，其中該治療方法係間歇性的。
實施例I-98.如實施例I-74至I-97中任一例之方法，其中該抗體呈現分級抑制。
實施例I-99. 如實施例I-74至I-97中任一例之方法，其中該抗體呈現開關樣抑制。
實施例I-100.如實施例I-88至I-99中任一例之方法，其中該個體罹患兩種或更多種選自由以下組成之群的病況：出血性病症、血小板病症、創傷及由手術或醫療程序造成之出血。
實施例I-101. 如實施例I-86至I-100中任一例之方法，其中該個體罹患選自由以下組成之群的出血性病症：A型血友病、B型血友病、馮威里氏病(vWD)、月經過多、因子I缺乏症、因子II缺乏症、因子V缺乏症、因子VII缺乏症、因子X缺乏症、因子XI缺乏症、因子VIII缺乏症(A型血友病)、因子IX缺乏症(B型血友病)、創傷及遺傳出血性毛細血管擴張。
實施例I-102. 如實施例I-74至I-101中任一例之方法，其中該個體為血友病攜帶者。
實施例I-103.如實施例I-75至I-102中任一例之方法，其中該個體罹患月經過多。
實施例I-104.如實施例I-74至I-103中任一例之方法，其中該個體罹患與該等出血性病症或該等血小板病症中之一或多者相關之月經過多。
實施例I-105.如實施例I-101之方法，其中該出血性病症為vWD，且其中該個體正在進行預防性治療。
實施例I-106.如實施例I-101之方法，其中該出血性病症為vWD，且該vWD為選自以下之亞型：1型vWD、2A型vWD、2B型vWD、2N型vWD、2M型vWD、3型vWD及後天性vWD。
實施例I-107.如實施例I-88至I-106中任一例之方法，其中該病況為選自由以下組成之群的血小板病症：伯納德-蘇利耶症候群、格蘭茨曼氏血小板無力症及血小板儲存池缺乏症。
實施例I-108.如實施例I-107之方法，其中該血小板病症為選自由以下組成之群的血小板儲存池缺乏症：灰色血小板症候群、魁北克血小板病症及MYH9相關血小板減少(MYH9RD)。
實施例I-109.如實施例I-101之方法，其中該出血性病症選自因子I缺乏症、因子II缺乏症、因子V缺乏症、因子VII缺陷症、因子X缺乏症、因子XI缺乏症、因子VIII缺乏症(A型血友病)、因子IX缺乏症(B型血友病)及vWD病，且其中該個體服用抑制劑。
實施例I-110.如實施例I-88至I-109中任一例之方法，其中該抗體或該醫藥組合物能夠促進該個體之凝血酶產生。
實施例I-111.如實施例I-75至I-86中任一例之方法，其中該凝血酶產生不超過預定臨限值。
實施例I-112.如實施例I-75至I-86及I-111中任一例之方法，其中該凝血酶產生係抗體濃度依賴性的。
實施例I-113.一種套組或製品，其包含如實施例I-1至I-53中任一例之抗體或如實施例I-54之醫藥組合物。
實施例I-114. 一種如實施例I-1至I-53中任一例之抗體或如實施例I-54之醫藥組合物的用途，其用於治療有需要之個體之疾病或病症。
實施例I-115.如實施例I-1至I-53中任一例之抗體或如實施例I-54之醫藥組合物的用途，其用於製造用以治療有需要之個體之疾病或病症的醫藥。
本發明不限於本文所述之特定實施例的範疇，該等特定實施例意欲作為本發明之個別態樣或實施例之說明。在功能上等效的方法及組分在本發明之範疇內。根據前述描述及附圖，除了本文所述之修改之外，本發明之各種修改對熟習此項技術者而言為顯而易見的。該等修改屬於本發明之範疇內。
現參考以下實例描述本發明。僅出於說明之目的提供此等實例，且本發明決不應解釋為限於此等實例，而應解釋為涵蓋由於本文所提供之教示而變得顯而易見的任何及所有變化形式。
無需進一步描述，咸信一般熟習此項技術者可使用前述描述及以下說明性實例製造及利用本發明之抗體且實踐所主張之方法。因此，以下實例具體指出本發明之較佳實施例，且不應理解為以任何方式限制本發明之其餘部分。實例 實例 1 ： 蛋白質 S 抗體之產生
本發明之蛋白質S抗體如下產生。用全長純化人類血漿蛋白質S使動物(例如，小鼠、大鼠)免疫。進行三次免疫活動，且使用標準技術自動物產生融合瘤庫。使用流式細胞量測術及單細胞分選以產生單細胞純系。隨後針對與人類及食蟹獼猴蛋白質S之結合篩選此等單一純系之上清液。選擇表現出與人類及食蟹獼猴蛋白質S之結合的純系用於擴增生長。隨後使用標準技術在蛋白質G或蛋白質A瓊脂糖(Sepharose)上純化擴增培養物。此等純化抗體製劑用於後續功能分析。所選蛋白質S抗體具有人類可變區及大鼠Fc域。
將具有人類可變區及大鼠Fc域(親本大鼠抗體)之抗體製成完全人類抗體，維持相同人類可變域作為親本抗體，且具有人類IgG4 Fc域。表6在第一行列出用於指定人類抗體之抗體編號，且在第二行列出用於指定相應親本大鼠抗體(具有人類可變區)之抗體編號。後續行提供可變輕鏈/可變重鏈胺基酸序列及核酸序列，且最後一行提供定位至各抗體之六個CDR之集合的胺基酸序列。表 6
人類抗體 ： 具有人類 Fc 之蛋白質 S 抗體 大鼠抗體 ： 具有大鼠 Fc 之蛋白質 S 抗體 可變輕鏈、可變重鏈 ( 胺基酸序列 ) 可變輕鏈、可變重鏈 ( 核酸序列 ) CDR 組合 ( 胺基酸序列 )
抗體5 抗體17 SEQ ID NO: 83、SEQ ID NO: 84 SEQ ID NO: 107、SEQ ID NO: 108 SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 64
抗體10 抗體22 SEQ ID NO: 85、SEQ ID NO: 86 SEQ ID NO: 109、SEQ ID NO: 110 SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 53、SEQ ID NO: 65
抗體26 抗體32 SEQ ID NO: 154、SEQ ID NO: 155 SEQ ID NO: 168、SEQ ID NO: 169 SEQ ID NO: 132、SEQ ID NO: 118、SEQ ID NO: 129、SEQ ID NO: 133、SEQ ID NO: 134、SEQ ID NO: 135
實例 2 ： 在 APC 及 TFPI 輔因子活性篩選分析中評估凝血酶產生 利用篩選分析評估 APC 及 TFPI 輔因子活性
圖2A-2B分別描繪為評估APC及TFPI輔因子活性而進行之例示性分析，且展現TFPI輔因子抑制劑將如何在分析中表現。
凝血酶產生分析(TGA)用於此實例中，且使用Thermo Fluoroskan Ascent微量盤螢光計及Thrombinoscope軟體進行。PPP試劑(磷脂及組織因子之混合物) (Diagnostica Stago)用於此實例中。
對於圖2A中描繪之APC輔因子活性篩選分析，測試以下：蛋白質S耗盡之貧血小板血漿、用蛋白質S及APC混合物復原之蛋白質S耗盡之血漿以及在已知顯示APC輔因子抑制劑活性的不同濃度之抗蛋白質S單株抗體(mAb)存在之情況下用蛋白質S及APC混合物復原之蛋白質S耗盡之血漿。由於APC在蛋白質S不存在下不展示凝血酶產生之抑制，所以藉由預混合蛋白質S及APC製造蛋白質S及APC混合物，且將其添加至蛋白質S耗盡之血漿中以形成蛋白質S依賴性分析。如圖所示，比起單獨的蛋白質S耗盡之血漿，將預混合蛋白質S及APC混合物添加至蛋白質S耗盡之血漿中展示顯著更低的組織因子誘導之凝血酶產生。將抗蛋白質S抗體添加至蛋白質S耗盡之血漿+蛋白質S及APC混合物中以濃度依賴性方式恢復組織因子誘導之凝血酶產生。
對於圖2B中描繪之TFPI輔因子活性篩選分析，測試以下：無處理之富含血小板血漿(在本文中亦稱為富血小板血漿或PRP)、商業因子VIII (FVIII)中和抗體及FVIII抗體與蛋白質S多株抗體(pAB)混合物。FVIII抗體充當中和抗體，且抑制組織因子誘導之凝血酶產生。在FVIII抗體存在之情況下添加中和蛋白質S抗體會增強凝血酶產生。中和蛋白質C抗體在TFPI輔因子活性分析中不展示對凝血酶產生之作用，指示內源蛋白質C或活化蛋白質C在此分析中不抑制凝血酶產生。實例 3 ： 經選擇之蛋白質 S 抗體之表徵 藉由輔因子活性分析表徵抑制劑類型
作為一般物質，蛋白質S抗體可經鑑別為APC及TFPI兩者、僅APC (可互換地稱為APC輔因子抑制劑、APC輔因子特異性抑制劑或APC路徑抑制劑)或僅TFPI (可互換地稱為TFPI輔因子抑制劑、TFPI輔因子特異性抑制劑或TFPI路徑抑制劑)之蛋白質S輔因子活性之雙重抑制劑。當使用圖2A-2B中所述之輔因子活性分析來分析各抗體時，抗體可藉由評估所示凝血酶產生概況來進行分類。蛋白質 S 抗體之表徵
圖3A-6F中所描繪之分析結果用於表徵本文所提供之例示性蛋白質S抗體。亦測定結合區及鈣相關性。表徵分析之結果概述於下表7及8中，且更詳細地描述於以下章節中。所測試之抗體經測定為TFPI輔因子抑制劑。表 7
蛋白質 S 抗體 Fc 路徑抑制劑 (APC 、 TFPI 或雙重 ) IC50 APC (nM) 希爾係數 (Hill Coefficient) IC50 TFPI (nM) 希爾係數
抗體22 大鼠 TFPI N/A N/A 4.4E-09 7.1
抗體17 大鼠 TFPI N/A N/A 1.033E-08 1.86
抗體32 大鼠 TFPI N/A N/A 5.02E-09 1.99
表 8
具有大鼠 Fc 之蛋白質 S 抗體 路徑抑制劑 結合重鏈 鈣依賴性結合 結合蛋白質 S 之凝血酶敏感區
抗體22 TFPI No No No
抗體17 TFPI No No No
抗體32 TFPI No No No
蛋白質 S 抗體之結合特徵
亦測定本文所提供之蛋白質S抗體之結合親和力。
結合相互作用分析在Biacore X100儀器中藉由表面電漿子共振獲得。經由游離胺方法，將人類抗IgG (Fc)抗體固定至感測器晶片表面(CM5)上之羧基甲基化聚葡萄糖膜，接觸時間為420秒。將在0.15 M NaCl中25 μg/mL之人類抗IgG抗體固定至9,785 RU於pH 5.0的10 mM乙酸鈉中。每個所測試之單株抗體以不變濃度(0.25 μg/mL)用固定人類抗IgG抗體捕獲。以實驗方式，所測試之抗體的捕獲配位體含量經測定為66-99 RL，對應於61-91 RU之Rmax 。未觀測到質量運輸限制之徵象。
使用以下實驗條件：以2-128 nM之濃度，1:2倍稀釋注射經純化之蛋白質S。稀釋及操作緩衝液如下：Hbs-EP + 5 mM CaCl2 。藉由3 M MgCl2 獲得再生。結合常數(ka、kd及KD)使用Biacore X100評價軟體測定，假設研究中的蛋白質S與所測試單株抗體之相互作用為1:1。所得資料呈現於下表9A中。抗體5及10展示在Biacore分析中結合之KD小於50 nM。表 9A
   Ka (1/MS) Kd (1/S) KD nM
抗體5 8.12E+04 2.27E-03 28
抗體10 1.67E+05 5.14E-03 31
亦使用Octet系統(Sartorius)進一步表徵本文所提供之蛋白質S抗體之結合親和力。測定各抗體與人類及食蟹獼猴(「cyno」)蛋白質S兩者的結合。藉由將探針置放於10 μg/mL抗體溶液於10 mg/ml牛血清白蛋白、20 mM Tris pH 7.0、150 mM NaCl及4 mM氯化鈣中，將人類Fc抗體固定至抗人類Fc捕獲探針上。接著，將結合抗體置放於含有500 nM、250 nM、125 nM、62.5 nM、31.25 nM、15.625 nM及7.81 nM 蛋白質S之溶液中，且量測締合速率。接著，將探針置放於緩衝液中，且量測解離速率。所得資料之概述提供於下表9B中。抗體5展示在Octet系統中小於10 nM之KD。抗體10展示在Octet系統中小於50 nM之KD。抗體26展示在Octet系統中小於0.5 nM之KD。表 9B
抗體 kon (1/Ms) kdis (1/s) KD (M) ( 人類) kon (1/Ms) kdis (1/s) KD (M) (cyno)
抗體5 6.33E+04 4.93E-04 7.80E-09 6.75E+04 2.83E-04 4.19E-09
抗體10 1.27E+05 2.13E-03 1.68E-08 1.07E+05 1.32E-03 1.23E-08
抗體26 9.85E+04 4.58E-05 4.66E-10 9.03E+04 3.15E-05 3.49E-10
使用基於ELISA之方法測定與蛋白質S之重鏈的結合。簡言之，高結合ELISA盤用由HEK293細胞表現及純化之重組重鏈蛋白質S塗佈。蛋白質S之「重鏈」表示跨越胺基酸42-296的蛋白質S之片段。經塗佈之盤用1%酪蛋白溶液阻斷。隨後，含有1 μg/ml抗體之緩衝液施加至具有含1 mM氯化鈣之緩衝液的孔。下表10概述所有抗體之重鏈結合分析的結果。所測試之抗體不呈現與蛋白質S之重鏈任何顯著的結合。(確實結合此區域之抗體的OD為大於約0.5 OD)。表 10
與重鏈之結合 (OD)
抗體17 0.07
抗體22 0.06
抗體32 0.10
使用基於ELISA之方法測定結合之鈣相關性。簡言之，高結合ELISA盤用人類蛋白質S塗佈。隨後，將含有1 μg/ml抗體之緩衝液施加至具有含1 mM EDTA或1 mM氯化鈣之緩衝液的孔中。在添加EDTA時，若蛋白質S之結合含量降低(大於在鈣存在之情況下觀測到之吸光度的85%)，得出結論：結合為鈣依賴性的。表11概述所有抗體之鈣相關性分析的結果。所測試之抗體不呈現鈣依賴性結合。表 11
在EDTA 中與蛋白質S 之結合(OD) 在CaCl2 中與蛋白質S 之結合(OD)
抗體17 0.39 0.54
抗體22 0.07 0.20
抗體32 0.33 0.82
抗體 17 及抗體 5
圖 3A-3G 描繪抗體17及抗體5之表徵，該等抗體共用相同人類可變區，且表徵為TFPI輔因子抑制劑。
如本文所述，使用基於ELISA之方法測定與蛋白質S之重鏈的結合。測定抗體17不與蛋白質S之重鏈結合。亦如本文所述測定鈣相關性，且抗體17展示結合為鈣非依賴性的。
圖3A-3C分別描繪使用蛋白質S缺乏型人類PPP、食蟹獼猴PPP之抗體17的APC輔因子分析及使用人類PRP的TFPI輔因子分析的結果。
圖3D及3E分別描繪在人類PRP中使用抗體5及對照組之TFPI輔因子分析的結果。兔多株人類蛋白質S抗體標記之Dako用作陽性對照。
圖3F及3G分別描繪用抗體5及對照組進行之APC輔因子分析的結果。
此等結果指示，抗體17及抗體5為TFPI輔因子抑制劑。抗體 22 及抗體 10
圖4A-4E描繪抗體22及抗體10之表徵，該等抗體共用相同人類可變區，且表徵為TFPI輔因子特異性抑制劑。
如本文所述，使用基於ELISA之方法測定與蛋白質S之重鏈的結合。測定抗體22不與蛋白質S之重鏈結合。亦如本文所述測定鈣相關性，且抗體22展示結合為鈣非依賴性的。
圖4A-4C分別描繪使用蛋白質S缺乏型人類PPP、食蟹獼猴PPP之抗體22的APC輔因子分析及使用人類PRP的TFPI輔因子分析的結果。
圖4D及4E分別描繪在人類PRP中使用抗體10及對照組之TFPI輔因子分析的結果。
此等結果指示，抗體22及抗體10為TFPI輔因子抑制劑。抗體 18
圖4F描繪抗體26之表徵，且其經表徵為TFPI輔因子抑制劑。圖4F描繪在人類PRP中使用抗體26之TFPI輔因子分析的結果。
此等結果指示，抗體26為TFPI輔因子特異性抑制劑。實例 4 ： 蛋白質 S 抗體與蛋白質 S-C4BP 複合物之結合 Octet分析用於測定本文所提供之蛋白質S抗體單獨或與C4BP複合時結合至蛋白質S的能力。表12中提供與蛋白質S或蛋白質S-C4BP複合物之結合的概述。表12呈現X，其中所測試之抗體能夠結合至蛋白質S-C4BP複合物及/或僅蛋白質S。虛線指示結合未發生。
使用Octet系統(Sartorius)，測定各抗體與蛋白質S及與C4BP之複合之蛋白質S兩者的結合。先前已確定，來自Complement Technologies之C4BP製劑含有與人類C4BP預複合之蛋白質S。因此，此製劑表示，來自Haematologic Technologies之蛋白質S-C4BP複合物及血漿純化之蛋白質S用作游離蛋白質S之來源。藉由將探針置放於10 μg/mL抗體溶液於10 mg/ml牛血清白蛋白、20 mM Tris pH 7.0、150 mM NaCl及4 mM氯化鈣中，將人類Fc抗體固定至抗人類Fc捕獲探針上。隨後，將結合抗體置放於含有75 μg/mL 蛋白質S或100 μg/mL C4BP (C4BP-蛋白質S複合物)之溶液中。在抗體不結合與C4BP複合之蛋白質S的情況下，未觀測到結合。在抗體結合呈游離形式或與C4BP複合之蛋白質S的情況下，在兩種條件下均觀測到締合。所有所測試之抗體均結合游離蛋白質S。抗體5展示在與C4BP複合時結合蛋白質S的能力。表 12
具有人類 Fc 之抗體 與ProS-C4BP 複合物之結合 與 ProS 之結合
抗體5 X X
抗體10 - X
抗體26 - X
實例 5 ： 蛋白質 S 抗體對血纖維蛋白沈積之作用
血纖維蛋白沈積實驗如下進行。實驗中所採用之Bioflux 1000z 48孔高剪切微流體盤(0-200達因/平方公分)係購自Bioflux。裝置具有1.5號硼矽酸鹽玻璃蓋玻片，其形成微流體通道之底部，且經工程改造以促進膠原蛋白之塗層。1型膠原蛋白購自Chrono-Par collagen (chrono-Log公司, Havertown, PA)。在室溫下自該等孔灌注膠原蛋白，且將其培育1小時。預塗有1型膠原蛋白之盤用PBS沖洗，且在將經標記之血液添加至該等孔中之前在PBS中用0.5% (v/v) BSA阻斷通道10分鐘。檸檬酸鈉抗凝固全人類血液(ALLCells, Oakland, CA)在收集之4-8小時內使用。全血與100 µg/mL綿羊抗人類因子VIII (Haematologic Technologies, Essex, VT)一起培育1小時。添加VGA抗體，且將其與全血一起培育。在生物學實驗之前以50 µg/mL之最終濃度添加來自人類血漿之血纖維蛋白原Alexa Fluor 546 (Invitrogen, Carlsbad, CA)。將全血添加至輸入孔中，且使用BioFlux控制器及軟體以30 dyn/cm2灌注。對於每次捕獲，照射樣品不超過30 ms。BioFlux軟體成像模組用於控制影像獲取設置且處理螢光強度量測值。使用倒置顯微鏡(ZEISS Axio Observer 7)及sCMOS相機用流動中的血液捕獲螢光顯微照片。使用BioFlux 1000成像系統(Fluxion Biosciences)隨時間記錄影像。使用BioFlux Montage軟體處理資料。
圖5A-5B描繪由添加至用因子VIII中和抗體處理之全血中的蛋白質S抗體引起之血纖維蛋白沈積之含量。此實驗測試蛋白質S抗體恢復或增加活體外微流體A型血友病模型中之血纖維蛋白沈積的能力。全血用因子VIII抗體處理以減少血纖維蛋白沈積。圖5A描繪抗體10之作用及對血纖維蛋白沈積之控制，且圖5B描繪抗體5之作用及對抗FVIII處理之人類血漿中之血纖維蛋白沈積的控制。此等結果證實，蛋白質S抗體5及10可恢復或增加活體外微流體A型血友病模型中之血纖維蛋白沈積。實例 6 ： 活體外微流體 A 型血友病出血模型中之蛋白質 S 抗體之作用
此等實驗使用完全內皮化微流體系統進行，該系統耦接至模擬血管損壞之微工程改造之氣動閥(Sakurai等人Nature Communications 2018)。簡言之，自健康志願者收集之全血用綿羊抗人類FVIII抗體處理以模擬來自A型血友病患者之全血。在處理之後，全血灌注至微流體系統中，此時使用氣動閥引入「損傷」。監測血小板及血纖維蛋白兩者在「損傷」部位處之位置，且量測停止「出血」之時間。
圖6A-6B描繪藉由微流體實驗量測的活體外微流體A型血友病出血模型中之蛋白質S抗體之作用。進行此等實驗以量測各種蛋白質S抗體停止出血之時間，且測定此等抗體分別在經微工程改造之血管化A型血友病出血模型中誘導血纖維蛋白沈積的程度。所測試之抗體為抗體5。此等結果證實，抗體能夠恢復或增加A型血友病出血模型中之血纖維蛋白沈積，且因此停止出血。實例 7 ：蛋白質 S 抗體對凝血酶產生之作用
此等分析如下進行。使用Thermo Fluoroskan Ascent微量盤螢光計及Thrombinoscope軟體進行凝血酶產生分析(TGA)。PPP低試劑(Diagnostica Stago)用於此實驗。簡言之，來自患馮威里氏病之患者的血漿與增加含量之蛋白質S抗體混合，且在室溫下培育。隨後，在反應起始之前添加或不添加可溶性人類血栓調節蛋白。為了開始反應，將PPP低試劑與鈣及凝血酶受質一起添加。隨後隨時間監測凝血酶之含量。
圖7A-7B描繪分別在外源地添加之血栓調節蛋白不存在或存在下，將蛋白質S抗體添加至獲自患有各種類型之馮威里氏病之患者的血漿中時劑量依賴性凝血酶產生增強的結果。該等圖描繪當將抗體5添加至先天性因子缺乏型血漿的各種樣品中時凝血酶產生增強。利用血栓調節蛋白觀測到顯著更低的凝血酶產生，該血栓調節蛋白為參與將蛋白質C轉化為活化蛋白質C，亦即抗凝血酶的凝血酶之輔因子。血漿樣品獲自患有1型、2B型或3型馮威里氏病(vWD)之患者。
抗體5能夠有效地恢復凝血酶產生。實例 8 ： 來自接受蛋白質 S 抗體之皮下及靜脈內注射液的食蟹獼猴之結果
此實例描繪分別用於量測皮下或靜脈內注射有本發明之蛋白質S抗體之食蟹獼猴中之抑製程度以及游離抗體濃度之活體外藥效動力學(PD)分析及活體外藥物動力學(PK)分析的結果。此等結果亦描繪在猴中觀測到之用作凝血活性之標誌物的D-二聚體之含量。用在食蟹獼猴中以3 mg/kg皮下及靜脈內給藥之投與蛋白質S抗體之後收集的血漿樣品進行分析。
更特定言之，為評估活體內投與之蛋白質S抗體之藥效動力學作用，使用Thermo Fluoroskan Ascent微量盤螢光計及Thrombinoscope軟體對血漿樣品進行TGA。PPP試劑(Diagnostica Stago)用於此實驗。簡言之，食蟹獼猴血漿與PPP試劑及5 μg/mL活化蛋白質C連同鈣及受質一起混合，且監測凝血酶產生之含量超過1小時。PK分析藉由將稀釋的食蟹獼猴血漿培育至用人類蛋白質S固定之盤上進行。所用盤為MSD 96孔盤。2 μg/ml血漿純化之蛋白質S於含鈣Tris緩衝液中之30 μl用於塗佈該盤隔夜。在阻斷之後，該等孔與樣品、標準物及QC一起培育。2 μg/ml磺酸基標記之山羊抗人類IgG、猴中之25微升/孔在室溫下培育1小時。洗滌後，向各孔中添加150 μl 1× MDS讀取緩衝液且在MSD盤讀取器上對盤進行讀數。遵循製造商建議之方案，D-二聚體之含量使用來自Diagnostica Stago之D-二聚體分析套組來量測。
圖8A描繪當以3 mg/kg向食蟹獼猴皮下或靜脈內投與抗體5時血漿中之游離抗體之含量。圖8B描繪在注射有抗體5之食蟹獼猴中隨時間量測之作為凝血活性之標誌物的D-二聚體之含量。
圖8C及8D描繪當分別以3 mg/kg向食蟹獼猴皮下及靜脈內投與抗體10時，TGA中之游離抗體之含量(左軸，實心圓)及蛋白質S活性之抑制百分比(右軸，實心三角形)。圖8E描繪在注射有抗體10之食蟹獼猴中隨時間量測之作為凝血活性之標誌物的D-二聚體之含量。
圖8F及8G描繪當分別以3 mg/kg向食蟹獼猴皮下及靜脈內投與抗體26時，TGA中之游離抗體之含量(圖8F之左軸，實心方塊；圖8G之左軸，實心圓)及蛋白質S活性之抑制百分比(右軸，實心三角形)。圖8H描繪在注射有抗體26之食蟹獼猴中隨時間量測之作為凝血活性之標誌物的D-二聚體之含量。
基於該等結果，以3 mg/kg皮下或靜脈內注射之抗體10及26之投與在168小時的研究之持續時間內呈現藥效動力學作用。所測試之抗體展示如TGA中所分析之蛋白質S活性之抑制。另外，血漿樣品亦展示，D-二聚體含量隨時間增加，證實蛋白質S抗體給藥之猴中之凝血系統之活性增加的預期藥效動力學作用。實例 9 ： 蛋白質 S 抗體對蛋白質 S 與 TFPI 之結合的作用
量測本發明之抗體對蛋白質S與TFPI之結合的作用。
使用Octet系統(Sartorius)，開發量測TFPI與蛋白質S之結合的分析。簡言之，藉由將探針置放於10 μg/mL抗體溶液於10 mg/ml牛血清白蛋白、20 mM Tris pH 7.0、150 mM NaCl及4 mM氯化鈣中，將人類Fc抗體固定至抗人類Fc捕獲探針(抗hIgG探針)上。隨後，將結合抗體置放於含有10 μg/ml人類蛋白質S之溶液，隨後含有人類TFPI之10 μg/ml溶液中。最終，將探針置放於緩衝溶液(洗液)中以觀測TFPI與蛋白質S之解離。量測TFPI與蛋白質S之締合及解離之動力學。此分析之各步驟描繪於圖9A-9C中。
圖9A描繪在蛋白質S與抗體5結合(以*為標誌)之後人類TFPI與蛋白質S之結合的缺乏。此等結果證實，抗體5阻止TFPI-蛋白質S複合物形成。
圖9B描繪在蛋白質S與抗體10結合(以*為標誌)之後人類TFPI與蛋白質S之結合的缺乏。此等結果證實，抗體10阻止TFPI-蛋白質S複合物形成。
圖9C描繪使用不阻斷TFPI與蛋白質S之結合至(以*為標誌)之對照抗體所獲得的結果。此對照抗體不阻止TFPI-蛋白質S複合物形成。
此等結果支持本文所提供之蛋白質S抗體用於藉由阻止其與蛋白質S締合、藉由破壞TFPI-蛋白質S複合物或藉由阻止TFPI-蛋白質S複合物形成而消耗TFPI之用途。實例 10 ： 食蟹獼猴這之蛋白質 S 抗體對 TFPI 血漿含量之作用
遵循製造商建議之方案，使用來自R&D systems之人類TFPI Quantikine ELISA套組來量測TFPI含量。將食蟹獼猴血漿稀釋20倍以用於分析。
圖10描繪在0小時、72小時及144小時時重複3 mg/kg之所給藥蛋白質S抗體之皮下投與之後，食蟹獼猴之血漿中之TFPI含量隨時間減少。簡言之，向五隻猴投與抗體5，且經給藥後大約175小時之時段量測TFPI含量。此等結果證實，在重複抗體投與之後，TFPI含量隨時間減少，且蛋白質S-TFPI相互作用之破壞降低了TFPI之血漿含量。
圖11為來自獲自以3 mg/kg給藥一次蛋白質S抗體之食蟹獼猴之血漿樣品的TFPI ELISA資料。資料展示，用抗體5、10及26給藥誘導循環TFPI含量降低。具有相同Fc但不同抗原結合域之對照抗體不誘導此類下降。
資料未示出，但至少抗體5之給藥不導致蛋白質S含量同時下降。實例 11 ： TFPI 輔因子分析中蛋白質 S 抗體對凝血酶產生之作用
由於TFPI及蛋白質S以蛋白複合物形式存在於血液中，用蛋白質S抗體處理全血僅允許檢查抗體抑制蛋白質S之能力，其中蛋白質S已經與TFPI複合，或允許檢查蛋白質S-TFPI複合物之破壞。為檢查某些蛋白質S抗體是否可阻止TFPI及蛋白質S之複合，使用蛋白質S耗盡之血漿。蛋白質S耗盡之血漿亦耗盡TFPI。
將蛋白質S與緩衝液(對照物)或增加含量之蛋白質S抗體一起添加至蛋白質S耗盡之血漿中。在培育之後，添加重組TFPI (R&D Systems)，其在TFPI之C端缺乏最後20個胺基酸，且量測凝血酶產生之含量。對於抗體5及10，觀測到凝血酶產生之劑量依賴性增加。
圖12A-12B描繪不同劑量之抗體5及抗體10對蛋白質S耗盡之人類血漿中凝血酶含量之作用，其中將蛋白質S (+/-抗體)及TFPI添加回至蛋白質S耗盡之血漿中。
基於此TFPI輔因子分析之結果，抗體5及抗體10可藉由阻止蛋白質S與TFPI締合而促進凝血酶產生。
圖 1 描繪展示蛋白質S之模組化域的蛋白質S之示意圖。
圖 2A-2B 分別描繪為評估APC及TFPI輔因子活性，使用對照蛋白質S抗體進行之篩選分析的結果。在此圖及後續圖中，ProS =蛋白質S；mAb =單株抗體；pAb =多株抗體；PRP =富含血小板血漿。
圖 3A-3G 描繪抗體5及抗體17，亦即共用相同人類可變區，且表徵為TFPI輔因子抑制劑之抗體的表徵。
圖 4A-4E 描繪抗體10及抗體22之表徵，該等抗體共用相同人類可變區，且表徵為TFPI輔因子抑制劑。
圖 4F 描繪作為TFPI輔因子抑制劑之抗體26之表徵。
圖 5A-5B 描繪經選擇之蛋白質S抗體對血纖維蛋白沈積之作用。
圖 6A-6B 描繪抗體5在活體外微流體A型血友病出血模型中之作用。
圖 7A-7B 描繪抗體5對增強之劑量依賴性凝血酶產生的作用，其中將蛋白質S抗體添加至獲自患有各種類型之馮威里氏病(von Willebrand disease)之患者的血漿中。
圖 8A-8H 描繪在獲自用蛋白質S抗體給藥之食蟹獼猴(cynomolgus monkey)之樣品上進行的活體外藥效動力學及藥物動力學分析的結果。
圖 9A-9C 藉由量測TFPI結合至蛋白質S-蛋白質S抗體複合物的能力描繪本發明之蛋白質S抗體阻止蛋白質S-TFPI複合物形成的能力。圖9A描繪利用抗體5所獲得之結果；圖9B描繪利用抗體10所獲得之結果；且圖9C描繪利用不阻止該形成之對照抗體所獲得之結果。
圖 10 描繪如藉由ELISA所評估，在重複投與抗體5之後，食蟹獼猴之血漿中之TFPI含量隨時間減少。
圖 11 描繪在各抗體在食蟹獼猴中以3 mg/kg IV給藥之後所觀測到的血漿TFPI含量之變化。資料展示，用抗體5、10及26給藥誘導循環TFPI含量降低。
圖 12A-12B 描繪不同濃度之抗體5及抗體10在使用蛋白質S耗盡之人類血漿之活體外凝血酶產生分析中的作用。進行此等分析以量測抗體5對阻止TFPI-蛋白質S複合物形成之作用。
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
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Claims (115)

  1. 一種結合蛋白質S之抗體，其中該抗體與蛋白質S之結合降低循環組織因子路徑抑制劑(TFPI)含量。
  2. 一種結合蛋白質S之抗體，其中該抗體與蛋白質S之結合破壞蛋白質S-TFPI複合物，或阻止蛋白質S-TFPI複合物形成。
  3. 如請求項1至2中任一項之抗體，其中該抗體為蛋白質S對TFPI之輔因子活性的抑制劑。
  4. 如請求項1至3中任一項之抗體，其中該抗體與蛋白質S之結合誘導循環TFPI含量降低至少10%。
  5. 如請求項1至4中任一項之抗體，其中該抗體與蛋白質S之結合破壞該蛋白質S-TFPI複合物。
  6. 如請求項1至5中任一項之抗體，其中該抗體與蛋白質S之結合阻止該蛋白質S-TFPI複合物形成。
  7. 如請求項1至6中任一項之抗體，其中該抗體結合至蛋白質S之C端。
  8. 如請求項1至7中任一項之抗體，其中該抗體結合至蛋白質S之性激素結合球蛋白樣域(SHBG樣域)。
  9. 如請求項1至8中任一項之抗體，其中該抗體與蛋白質S之結合促進與凝血活性相關之標誌物產生。
  10. 如請求項1至9中任一項之抗體，其中該抗體與蛋白質S之結合促進凝血酶產生。
  11. 如請求項1至10中任一項之抗體，其中該抗體與蛋白質S之結合提高D-二聚體含量。
  12. 如請求項1至11中任一項之抗體，其中該抗體與蛋白質S之結合促進血纖維蛋白產生。
  13. 如請求項1至12中任一項之抗體，其中該抗體之活性為劑量依賴性的。
  14. 如請求項1至13中任一項之抗體，其中該抗體之活性在活體外量測。
  15. 如請求項1至13中任一項之抗體，其中該抗體之活性在活體內量測。
  16. 如請求項1至15中任一項之抗體，其中該抗體結合至游離蛋白質S。
  17. 如請求項1至15中任一項之抗體，其中該抗體結合至複合蛋白質S。
  18. 如請求項17之抗體，其中該蛋白質S與C4BP複合。
  19. 如請求項17之抗體，其中該蛋白質S與TFPI複合。
  20. 如請求項1至19中任一項之抗體，其中該抗體為單株抗體。
  21. 如請求項1至20中任一項之抗體，其中該抗體為全長抗體。
  22. 如請求項1至20中任一項之抗體，其中該抗體為抗體片段。
  23. 如請求項1至22中任一項之抗體，其中該抗體為人類化抗體。
  24. 如請求項1至23中任一項之抗體，其中該抗體含有Fc域。
  25. 如請求項24之抗體，其中該Fc域為人類Fc域。
  26. 如請求項25之抗體，其中該Fc域為人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。
  27. 如請求項25之抗體，其中該Fc域為人類IgG4。
  28. 如請求項27之抗體，其中該抗體之Fc域為人類IgG4，視情況為SEQ ID NO: 139，且包含至少一個胺基酸取代在選自由以下組成之群的位置：215、221、222、228、234、235、236、239、240、241、243、244、245、247、250、252、254、256、262、263、264、265、266、267、268、269、270、292、296、297、298、299、300、305、313、324、325、326、327、328、329、330、332、333、334、345、396、428、430、433、434及440，或包含一或多個選自由以下組成之群的取代：T250Q/M428L、M252Y/S254T/T256E、M428L/N434S、S267E/L328F、N325S/L328F及H433K/N434F，其中胺基酸殘基之位置編號屬於EU編號方案。
  29. 如請求項1至22中任一項之抗體，其中該抗體為人類抗體。
  30. 如請求項1至22中任一項之抗體，其中該抗體為嵌合抗體。
  31. 如請求項1至30中任一項之抗體，其中該抗體經結合。
  32. 如請求項31之抗體，其中該抗體與標記結合。
  33. 如請求項1至32中任一項之抗體，其中該抗體包含表1A、1B、1C、2A、2B及2C中提供之CDR序列之胺基酸序列中之任一或多者。
  34. 如請求項1至33中任一項之蛋白質S抗體，其中該抗體包含： (a)    表1A之CDR-L1胺基酸序列中之任一者； (b)    表1B之CDR-L2胺基酸序列中之任一者； (c)    表1C之CDR-L3胺基酸序列中之任一者； (d)    表2A之CDR-H1胺基酸序列中之任一者； (e)    表2B之CDR-H2胺基酸序列中之任一者；及 (f)    表2C之CDR-H3胺基酸序列中之任一者。
  35. 如請求項1至34中任一項之蛋白質S抗體，其中該抗體之輕鏈可變域包含： (a)    包含SEQ ID NO: 7、8及132中之任一者之胺基酸序列之CDR-L1； (b)    包含SEQ ID NO: 17及118中之任一者之胺基酸序列之CDR-L2；及 (c)    包含SEQ ID NO: 28、29及129中之任一者之胺基酸序列之CDR-L3。
  36. 如請求項1至35中任一項之蛋白質S抗體，其中抗體之重鏈可變域包含： (a)    包含SEQ ID NO: 40、41及133中之任一者之胺基酸序列之CDR-H1； (b)    包含SEQ ID NO: 52、53及134中之任一者之胺基酸序列之CDR-H2；及 (c)    包含SEQ ID NO: 64、65及135中之任一者之胺基酸序列之CDR-H3。
  37. 如請求項1至36中任一項之蛋白質S抗體，其中該抗體之輕鏈可變域包含： (a)    包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列之CDR-L1； (b)    包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列之CDR-L2；及 (c) 包含SEQ ID NO: 28之胺基酸序列之CDR-L3。
  38. 如請求項1至36中任一項之蛋白質S抗體，其中該抗體之輕鏈可變域包含： (a)    包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列之CDR-L1； (b)    包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列之CDR-L2；及 (c)    包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列之CDR-L3。
  39. 如請求項1至36中任一項之蛋白質S抗體，其中該抗體之輕鏈可變域包含： (a)    包含SEQ ID NO: 132之胺基酸序列之CDR-L1； (b)    包含SEQ ID NO: 118之胺基酸序列之CDR-L2；及 (c) 包含SEQ ID NO: 129之胺基酸序列之CDR-L3。
  40. 如請求項1至39中任一項之蛋白質S抗體，其中該抗體之重鏈可變域包含： (a)    包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列之CDR-H1； (b)    包含SEQ ID NO: 52之胺基酸序列之CDR-H2；及 (c)    包含SEQ ID NO: 64之胺基酸序列之CDR-H3。
  41. 如請求項1至39中任一項之蛋白質S抗體，其中該抗體之重鏈可變域包含： (a)    包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列之CDR-H1； (b)    包含SEQ ID NO: 53之胺基酸序列之CDR-H2；及 (c)    包含SEQ ID NO: 65之胺基酸序列之CDR-H3。
  42. 如請求項1至39中任一項之蛋白質S抗體，其中該抗體之重鏈可變域包含： (a)    包含SEQ ID NO: 133之胺基酸序列之CDR-H1； (b)    包含SEQ ID NO: 134之胺基酸序列之CDR-H2；及 (c)    包含SEQ ID NO: 135之胺基酸序列之CDR-H3。
  43. 如請求項1至32中任一項之蛋白質S抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 52及SEQ ID NO: 64之輕鏈及重鏈CDR胺基酸序列。
  44. 如請求項1至32中任一項之蛋白質S抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 53及SEQ ID NO: 65之輕鏈及重鏈CDR胺基酸序列。
  45. 如請求項1至32中任一項之蛋白質S抗體，其中該抗體包含SEQ ID NO: 132、SEQ ID NO: 118、SEQ ID NO: 129、SEQ ID NO: 133、SEQ ID NO: 134及SEQ ID NO: 135之輕鏈及重鏈CDR胺基酸序列。
  46. 如請求項1至32中任一項之蛋白質S抗體，其中該抗體包含表4A中提供之胺基酸序列中之任一者的可變鏈胺基酸序列及/或表4B中提供之胺基酸序列中之任一者的可變鏈胺基酸序列。
  47. 如請求項1至32中任一項之蛋白質S抗體，其中該抗體包含表4C中提供之胺基酸序列組合中之任一者的可變輕鏈及重鏈胺基酸序列。
  48. 如請求項1至32中任一項之蛋白質S抗體，其中該抗體之輕鏈可變域包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的胺基酸序列；及/或其中該抗體之重鏈可變域包含SEQ ID NO: 84之胺基酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的胺基酸序列。
  49. 如請求項1至32中任一項之蛋白質S抗體，其中該抗體之輕鏈可變域包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的胺基酸序列；及/或其中該抗體之重鏈可變域包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的胺基酸序列。
  50. 如請求項1至32中任一項之蛋白質S抗體，其中該抗體之輕鏈可變域包含SEQ ID NO: 154之胺基酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的胺基酸序列；及/或其中該抗體之重鏈可變域包含SEQ ID NO: 155之胺基酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的胺基酸序列。
  51. 如請求項1至50中任一項之蛋白質S抗體，其中該抗體包含輕鏈恆定區，且該輕鏈恆定區包含SEQ ID NO: 214之胺基酸序列。
  52. 如請求項1至50中任一項之蛋白質S抗體，其中該抗體包含輕鏈恆定區，且該輕鏈恆定區包含SEQ ID NO: 215之胺基酸序列。
  53. 如請求項1至52中任一項之蛋白質S抗體，其中對蛋白質S之親和力為約0.001 nM或更低、0.005 nM或更低、0.01 nM或更低、0.05 nM或更低、約0.1 nM或更低、約0.5 nM或更低、約1 nM或更低、約5 nM或更低、約10 nM或更低，或約50 nM或更低。
  54. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至53之抗體中之任一者及視情況醫藥學上可接受之賦形劑。
  55. 一種複合物，其包含蛋白質S及如請求項1至53中任一項之抗體，其中該抗體結合至該蛋白質S，且該蛋白質S係游離的。
  56. 一種複合物，其包含蛋白質S及如請求項1至53中任一項之抗體，其中該抗體結合至該蛋白質S，且該蛋白質S係複合的。
  57. 如請求項56之複合物，其中該蛋白質S結合至C4BP。
  58. 如請求項56之複合物，其中該蛋白質S結合至TFPI。
  59. 一種核酸，其編碼如請求項1至53之抗體中之任一者。
  60. 如請求項59之核酸，其包含選自表5A之核酸序列中之任一者。
  61. 如請求項59至60中任一項之核酸，其包含選自表5B之核酸序列中之任一者。
  62. 如請求項59至61中任一項之核酸，其中該核酸包含表5C中提供之核酸序列組合中之任一者的核酸序列。
  63. 如請求項59至62中任一項之核酸，其中如請求項1至36中任一項之蛋白質S抗體之輕鏈可變域由SEQ ID NO: 107之核酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的核酸序列編碼；及/或其中該抗體之重鏈可變域由SEQ ID NO: 108之核酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的核酸序列編碼。
  64. 如請求項59至62中任一項之核酸，其中如請求項1至36中任一項之蛋白質S抗體之輕鏈可變域由SEQ ID NO: 109之核酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的核酸序列編碼；及/或其中該抗體之重鏈可變域由SEQ ID NO: 110之核酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的核酸序列編碼。
  65. 如請求項59至62中任一項之核酸，其中如請求項1至36中任一項之蛋白質S抗體之輕鏈可變域由SEQ ID NO: 168之核酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的核酸序列編碼；及/或其中該抗體之重鏈可變域由SEQ ID NO: 169之核酸序列或與其具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的核酸序列編碼。
  66. 一種載體，其包含如請求項59至65中任一項之核酸。
  67. 一種促進血液凝固、破壞蛋白質S-TFPI複合物或阻止蛋白質S-TFPI複合物形成之活體外方法，該方法包含使如請求項1至53中任一項之抗體與血液樣品接觸。
  68. 如請求項67之方法，其中該血液樣品包含血漿。
  69. 如請求項67至68中任一項之方法，其中與凝血活性相關之標誌物增加。
  70. 如請求項67至69中任一項之方法，其中促進凝血酶產生。
  71. 如請求項67至70中任一項之方法，其中促進血纖維蛋白產生。
  72. 如請求項67至71中任一項之方法，其中提高D-二聚體含量。
  73. 如請求項67至72中任一項之方法，其中該血液樣品係獲自患有凝血因子缺乏症、馮威里氏病(von Willebrand disease)或血小板病症之個體。
  74. 一種促進有需要之個體之血液凝固的方法，其包含向該個體投與如請求項1至53中任一項之抗體或如請求項54之醫藥組合物。
  75. 一種促進有需要之個體之凝血酶產生的方法，其包含向該個體投與如請求項1至53中任一項之抗體或如請求項54之醫藥組合物。
  76. 一種降低有需要之個體之血液中循環TFPI含量的方法，其包含向該個體投與如請求項1至53中任一項之抗體或如請求項54之醫藥組合物。
  77. 如請求項76之方法，其中該等循環TFPI含量降低至少10%。
  78. 如請求項76至77中任一項之方法，其中該抗體破壞該個體內之TFPI-蛋白質S複合物。
  79. 如請求項76至78中任一項之方法，其中該抗體阻止該個體內之TFPI-蛋白質S複合物形成。
  80. 如請求項74至79中任一項之方法，其中與凝血活性相關之標誌物增加。
  81. 如請求項74至80中任一項之方法，其中促進該個體中凝血酶產生。
  82. 如請求項74至81中任一項之方法，其中促進該個體中血纖維蛋白產生。
  83. 如請求項74至82中任一項之方法，其中該個體中D-二聚體含量增加。
  84. 如請求項74至83中任一項之方法，其中該抗體在該個體內保持活性一段時間。
  85. 如請求項74至84中任一項之方法，其中該抗體之活性為劑量依賴性的。
  86. 如請求項74至85中任一項之方法，其中該個體患有凝血因子缺乏症、馮威里氏病或血小板病症，且該抗體恢復或促進凝血酶產生。
  87. 如請求項74至86中任一項之方法，其中該抗體之投與為皮下投與。
  88. 一種治療有需要之個體之病況的方法，其包含向該個體投與如請求項1至53中任一項之抗體或如請求項54之醫藥組合物，其中該病況選自由以下組成之群：出血性病症、血小板病症、創傷，及由手術或醫療程序造成之出血。
  89. 如請求項88之方法，其中該治療方法係預防性的。
  90. 如請求項88之方法，其中該治療方法隨需要。
  91. 如請求項88至90中任一項之方法，其中該方法係預防性的且隨需要。
  92. 如請求項89或91中任一項之方法，其中該預防性治療方法為常規預防。
  93. 如請求項88至92中任一項之方法，其中該抗體之投與為皮下投與。
  94. 如請求項74至93中任一項之方法，其中該治療方法係急性的。
  95. 如請求項74至93中任一項之方法，其中該治療方法係長期的。
  96. 如請求項74至93中任一項之方法，其中該治療方法係圍手術期的(perioperative)。
  97. 如請求項74至93中任一項之方法，其中該治療方法係間歇性的。
  98. 如請求項74至97中任一項之方法，其中該抗體呈現分級抑制。
  99. 如請求項74至97中任一項之方法，其中該抗體呈現開關樣抑制。
  100. 如請求項88至99中任一項之方法，其中該個體罹患兩種或更多種選自由以下組成之群的病況：出血性病症、血小板病症、創傷，及由手術或醫療程序造成之出血。
  101. 如請求項86至100中任一項之方法，其中該個體罹患選自由以下組成之群的出血性病症：A型血友病、B型血友病、馮威里氏病(vWD)、月經過多、因子I缺乏症、因子II缺乏症、因子V缺乏症、因子VII缺乏症、因子X缺乏症、因子XI缺乏症、因子VIII缺乏症(A型血友病)、因子IX缺乏症(B型血友病)、創傷，及遺傳出血性毛細血管擴張。
  102. 如請求項74至101中任一項之方法，其中該個體為血友病攜帶者。
  103. 如請求項75至102中任一項之方法，其中該個體罹患月經過多。
  104. 如請求項74至103中任一項之方法，其中該個體罹患與出血性病症或血小板病症中之一或多者相關之月經過多。
  105. 如請求項101之方法，其中該出血性病症為vWD，且其中該個體正在進行預防性治療。
  106. 如請求項101之方法，其中該出血性病症為vWD，且該vWD為選自以下之亞型：1型vWD、2A型vWD、2B型vWD、2N型vWD、2M型vWD、3型vWD及後天性vWD。
  107. 如請求項88至106中任一項之方法，其中該病況為選自由以下組成之群的血小板病症：伯納德-蘇利耶症候群(Bernard-Soulier syndrome)、格蘭茨曼氏血小板無力症(Glanzmann's thrombasthenia)及血小板儲存池缺乏症。
  108. 如請求項107之方法，其中該血小板病症為選自由以下組成之群的血小板儲存池缺乏症：灰色血小板症候群(Gray platelet syndrome)、魁北克血小板病症(Quebec platelet disorder)及MYH9相關血小板減少症(MYH9-related thrombocytopenia；MYH9RD)。
  109. 如請求項101之方法，其中該出血性病症選自因子I缺乏症、因子II缺乏症、因子V缺乏症、因子VII缺陷症、因子X缺乏症、因子XI缺乏症、因子VIII缺乏症(A型血友病)、因子IX缺乏症(B型血友病)及vWD病，且其中該個體具有抑制劑。
  110. 如請求項88至109中任一項之方法，其中該抗體或該醫藥組合物能夠促進該個體之凝血酶產生。
  111. 如請求項75至86中任一項之方法，其中該凝血酶產生不超過預定臨限值。
  112. 如請求項75至86及111中任一項之方法，其中該凝血酶產生係抗體濃度依賴性的。
  113. 一種套組或製品，其包含如請求項1至53中任一項之抗體或如請求項54之醫藥組合物。
  114. 一種如請求項1至53中任一項之抗體或如請求項54之醫藥組合物的用途，其用於治療有需要之個體之疾病或病症。
  115. 一種如請求項1至53中任一項之抗體或如請求項54之醫藥組合物的用途，其用於製造用以治療有需要之個體之疾病或病症的醫藥。
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