TW202208366A - 抑制HIF2α活性的化合物和組成物及其使用方法 - Google Patents

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Abstract

本發明關於具有式 (I) 之化合物

Description

抑制HIF2α活性的化合物和組成物及其使用方法
本發明提供了螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶類化合物、其用於抑制或調節HIF2α之用途和使用其治療疾病之方法。
缺氧誘導因子（HIF）（如HIF1α和HIF2α）係眾所周知的作為氧穩態之主要調節因子的轉錄因子，該轉錄因子控制對O2 可用性減少（缺氧）的轉錄反應。HIF是由O2 調節的HIF-α亞基和組成型表現的HIF-1β亞基組成的異源二聚體蛋白，也稱為ARNT。在充分充氧或常氧條件下，HIF-α與希佩爾-林道（von Hippel-Lindau）（VHL）蛋白結合，該蛋白募集靶向HIF-α的泛素連接酶用於蛋白酶體降解（Kaelin和Ratcliffe, 2008）。VHL結合取決於脯胺醯基羥化酶PHD對HIF-α中特定脯胺酸殘基的羥基化，該脯胺醯基羥化酶PHD使用O2 作為底物，使得其在缺氧條件下的活性受到抑制。HIF1α和HIF2α係調節許多基因的表現的轉錄因子，該等基因參與關鍵的生理功能，如發育、代謝、血管生成、細胞增殖和細胞存活。儘管HIF1α廣泛表現，但HIF2α轉錄物受限於特定的細胞類型，包括血管內皮細胞、神經脊細胞衍生物、肺II型肺細胞、肝實質和腎臟中的間質細胞。HIF2α被描述為細胞對缺氧（hypoxia）適應的關鍵介質，在生理過程（如紅血球生成和血管形成）中起著重要作用。正常胚胎發育需要HIF2α，而產後消融導致嚴重的貧血和紅系發育受損。與該等發現一致的是，據報導，紅血球生成素（EPO）主要由HIF2α控制，而一些其他HIF依賴性基因可以由兩種HIF-α同種型調節。
缺氧在許多常見障礙的進展中起著至關重要的作用，並且已有證據表明HIF轉錄程序的調節可為多種疾病的有益治療策略，該等疾病像缺血、炎症、慢性肺病和癌症（Semenza, 2011）。特別地，在癌症中，腫瘤內缺氧與患者預後不良和對放射和化學療法治療抗性相關。
在許多晚期人類癌症（如腦癌、乳癌、大腸癌、肺癌和腎細胞癌）中報導了HIF激活。與透明細胞腎細胞癌（ccRCC）中的氧水平無關，VHL基因中經常報導的遺傳改變（例如突變或緘默）導致腫瘤中HIF-α的累積。儘管在大多數ccRCC腫瘤樣本中表現HIF2α，但只有一個子集累積HIF1α（Gordan, 2008）。此外，在ccRCC中，HIF2α被描述為關鍵的致癌事件，而HIF1α顯示出腫瘤抑制特性（Shen和Kaelin, 2013, Gordan 2008）。例如，HIF2α的過表現導致VHL缺陷型786-0 RCC腫瘤異種移植的體內生長的增加。相反，在VHL缺陷型786-0和A498 RCC模型中，藉由誘導型shRNA或藥理學抑制下調HIF2α似乎足以抑制腫瘤生長（Kondo等人, 2002；Kondo等人, 2003；Zimmer等人, 2004；Cho等人, 2016）。該等結果支持HIF2α作為抗癌療法的有吸引力的靶標。
本發明提供了如下所定義的具有式 (I) 之化合物或其藥學上可接受的鹽。具有式 (I) 之化合物係HIF2α抑制劑或調節劑，並且因此潛在地可用於治療由HIF2α介導的病症、疾病和障礙。
在本發明之一個方面，提供了具有式 (I) 之化合物，
Figure 02_image001
(I) 或其藥學上可接受的鹽， 其中： R1 係F、Cl、Br、OCH3 、OCH2 F、OCHF2 、或OCF3 ； R2 係F、Cl、CF3 、或CN； X係(CH2 )1-2 、CHF、CHD、CD2 或CF2 ； Y係(CH2 )0-2 、CHF、CHD、CD2 、O、S、OCH2 或CF2 ； Z係CH2 、CD2 、CHF、CDF、CF2 、CH(OH)、CO、CH(CH3 )、O、或S， 其中，當Y係O、OCH2 、或S時，那麼Z係CH2 ； 其中，當Z係O、S、或NCH3 時，那麼Y係(CH2 )0-2 或CF2 ； 其中，當Z係CH(OH)時，那麼Y係CHF或CF2 ； J係CRJ ； 其中RJ 係H、F、Cl、Br、CH3 、CD3 、CF3 、CHF2 、CDF2 、或CN； E係CRE 或N； 其中RE 係H、F、Cl、Br、I、CN、CH3 、CH2 CH3 、CH(CH3 )2 、CD3 、CHD2 、CH2 D、CHF2 、CDF2 、C(CH3 )F2 、C(CD3 )F2、CF3 、環丙基、OCH3 、OCH2 CH2 OH、OCF3 、SCH3 或SCHF2 ；以及 G係CH或N； 該化合物呈游離形式或藥學上可接受的鹽形式。
在另一個方面，本發明提供了藥物組成物，該藥物組成物包含具有式 (I) 或其子式之化合物或其藥學上可接受的鹽以及一或多種藥學上可接受的載體。
在另一個方面，本發明提供了組合、特別是藥物組合，該組合包含具有式 (I) 或其子式之化合物或其藥學上可接受的鹽以及一或多種治療劑。在某些情況下，將本發明之化合物與其他治療劑（如其他抗癌劑（特別是mTOR抑制劑，如依維莫司（everolimus））、抗噁心劑（或抗嘔劑）、化學療法、鎮痛劑、細胞保護劑、及其組合）組合。
該等mTOR抑制劑包括西羅莫司（Temsirolimus）（Torisel®）；地磷莫司（ridaforolimus）（正式地稱為deferolimus，(1R ,2R ,4S )-4-[(2R )-2 [(1R ,9S ,12S ,15R ,16E ,18R ,19R ,21R ,23S ,24E ,26E ,28Z ,30S ,32S ,35R )-1,18-二羥基-19,30-二甲氧基-15,17,21,23,29,35-六甲基-2,3,10,14,20-五氧雜-11,36-二氧雜-4-氮雜三環[30.3.1.04,9 ] 三十六碳-16,24,26,28-四烯-12-基]丙基]-2-甲氧基環己基二甲基次膦酸酯，也稱為AP23573和MK8669，並且描述於PCT公開案號WO 03/064383中）；依維莫司（Afinitor®或RAD001）；雷帕黴素（Rapamycin）（AY22989，Sirolimus®）；塞馬莫德（simapimod）（CAS 164301-51-3）；(5-{2,4-雙[(3S )-3-甲基𠰌啉-4-基]吡啶并[2,3-d ]嘧啶-7-基}-2-甲氧基苯基)甲醇（AZD8055）；2-胺基-8-[反式-4-(2-羥基乙氧基)環己基]-6-(6-甲氧基-3-吡啶基)-4-甲基-吡啶并[2,3-d ]嘧啶-7(8H )-酮（PF04691502，CAS 1013101-36-4）；N 2 -[1,4-二側氧基-4-[[4-(4-側氧基-8-苯基-4H -1-苯并哌喃-2-基)𠰌啉鎓-4-基]甲氧基]丁基]-L-精胺醯甘胺醯-L-α-天冬胺醯L-絲胺酸-，內鹽（SF1126，CAS 936487-67-1）；和N-[4-[[[3-[(3,5-二甲氧基苯基)胺基]-2-喹㗁啉基]胺基]磺醯基]苯基]-3-甲氧基-4-甲基-苯甲醯胺（XL765,也稱為SAR245409）；以及(1r,4r)-4-(4-胺基-5-(7-甲氧基-1H-吲哚-2-基)咪唑并[1,5-f][1,2,4]三𠯤-7-基)環己烷甲酸（OSI-027）。
考慮用於組合療法的一般化學治療劑包括阿那曲唑（Arimidex®）、比卡魯胺（Casodex®）、硫酸博來黴素（Blenoxane®）、白消安（Myleran®）、白消安注射液（Busulfex®）、卡培他濱（Xeloda®）、N4-戊氧羰基-5-去氧-5-氟胞苷、卡鉑（Paraplatin®）、卡莫司汀（BiCNU®）、苯丁酸氮芥（Leukeran®）、順鉑（Platinol®）、克拉屈濱（Leustatin®）、環磷醯胺（Cytoxan®或Neosar®）、阿糖胞苷、胞嘧啶阿拉伯糖苷（Cytosar-U®）、阿糖胞苷脂質體注射液（DepoCyt®）、達卡巴𠯤（DTIC-Dome®）、更生黴素（放線菌素D、Cosmegan）、鹽酸柔紅黴素（Cerubidine®）、檸檬酸柔紅黴素脂質體注射液（DaunoXome®）、地塞米松、多西他賽（Taxotere®）、鹽酸多柔比星（Adriamycin®、Rubex®）、依託泊苷（Vepesid®）、磷酸氟達拉濱（Fludara®）、5-氟尿嘧啶（Adrucil®、Efudex®）、氟他胺（Eulexin®）、替紮他濱（tezacitibine）、吉西他濱（二氟去氧胞苷）、羥基脲（Hydrea®）、伊達比星（Idamycin®）、異環磷醯胺（IFEX®）、伊立替康（Camptosar®）、L-天冬醯胺酶（ELSPAR®）、亞葉酸鈣、黴法蘭（Alkeran®）、6-巰基嘌呤（Purinethol®）、甲胺蝶呤（Folex®）、米托蒽醌（Novantrone®）、麥羅塔、紫杉醇（Taxol®）、nab-紫杉醇（Abraxane®）、費尼克斯（phoenix）（釔90/MX-DTPA）、噴司他丁、聚苯丙生（polifeprosan）20與卡莫司汀的植入物（Gliadel®）、枸櫞酸他莫昔芬（Nolvadex®）、替尼泊苷（Vumon®）、6-硫代鳥嘌呤、噻替派、替拉紮明（Tirazone®）、注射用鹽酸托泊替康（Hycamptin®）、長春花鹼（Velban®）、長春新鹼（Oncovin®）和長春瑞濱（Navelbine®）。
在另一個方面，本發明提供了抑制或調節有需要的受試者中HIF2α活性之方法，該方法包括向有需要的受試者投與具有式 (I) 或其子式之化合物或其藥學上可接受的鹽。
在另一個方面，本發明提供了具有式 (I) 或其子式之化合物或其藥學上可接受的鹽，用於在治療或預防癌症中使用，其中該癌症選自腎上腺皮質癌、乳癌、透明細胞腎細胞癌（ccRCC）、結直腸癌（可以包括大腸癌）、生殖細胞腫瘤（例如顱和顱外生殖細胞腫瘤、性腺和性腺外生殖細胞腫瘤）、多形性成膠質細胞瘤（GBM）、膠質瘤、頭頸癌（可以包括唇癌、口腔癌（oral cavity，mouth cancer）、肝細胞癌、腎癌、肺癌、惡性膠質瘤、眼癌、胰臟癌、副神經節瘤、嗜鉻細胞瘤、前列腺癌、和腎細胞癌。
在另一個方面，本發明提供了(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]游離形式的結晶形式。
在另一個方面，本發明提供了(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]的延胡索酸鹽的結晶形式。
在另一個方面，本發明提供了用於式 (I)，
Figure 02_image001
(I) 或其藥學上可接受的鹽之方法， 該方法包括以下步驟：視需要在鹼的存在下，使具有式 (IV) 之化合物、
Figure 02_image005
或其鹽、溶劑化物、立體異構物、複合物、共晶體、酯、或㗁唑啉， 和具有式 (II) 之化合物、
Figure 02_image007
或其鹽、溶劑化物、立體異構物、複合物、共晶體、酯、或㗁唑啉， 與具有式 (III) 之化合物
Figure 02_image009
或其鹽、溶劑化物、立體異構物、複合物、共晶體、酯、或㗁唑啉反應， 其中 R1 係F、Cl、Br、OCH3 、OCH2 F、OCHF2 、或OCF3 ； R2 係F、Cl、CF3 、或CN； X係CH2 、CHF、或CF2 ； Y係CH2 、CHF、O、S、單鍵、CH2 CH2 、OCH2 、或CF2 ； Z係CH2 、CD2 、CHF、CDF、CF2 、CH(OH)、CO、CH(CH3 )、O或S； 其中，當Y係O、OCH2 、或S時，那麼Z係CH2 ； 其中，當Z係O、S、或NCH3 時，那麼Y係CH2 、單鍵、CH2 CH2 或CF2 ； 其中，當Z係CH(OH)時，那麼Y係CHF或CF2 ； J係CRJ ； 其中RJ 係H、F、Cl、Br、CH3 、CD3 、CF3 、CHF2 、CDF2 、CN； E係CRE 或N； 其中RE 係H、F、Cl、Br、I、CN、CH3 、CH2 CH3 、CH(CH3 )2 、CD3 、CHD2 、CH2 D、CHF2 、CDF2 、C(CH3 )F2 、C(CD3 )F2、CF3 、環丙基、OCH3 、OCH2 CH2 OH、OCF3 、SCH3 、或SCHF2 ； G係CH或N；以及 LG係選自F、Cl、或Br的離去基團； 該鹼選自K2 CO3 或Et3 N， 以獲得具有式 (1) 之化合物或其藥學上可接受的鹽。
本發明提供了具有式 (I) 之化合物
Figure 02_image001
(I) 或其藥學上可接受的鹽， 其中 R1 係F、Cl、Br、OCH3 、OCH2 F、OCHF2 、或OCF3 ； R2 係F、Cl、CF3 、或CN； X係(CH2 )1-2 、CHF、CHD、CD2 或CF2 ； Y係(CH2 )0-2 、CHF、CHD、CD2 、O、S、OCH2 或CF2 ； Z係CH2 、CD2 、CHF、CDF、CF2 、CH(OH)、CO、CH(CH3 )、O、或S， 其中，當Y係O、OCH2 、或S時，那麼Z係CH2 ； 其中，當Z係O、S、或NCH3 時，那麼Y係(CH2 )0-2 或CF2 ； 其中，當Z係CH(OH)時，那麼Y係CHF或CF2 ； J係CRJ ； 其中RJ 係H、F、Cl、Br、CH3 、CD3 、CF3 、CHF2 、CDF2 、OCH3或CN； E係CRE 或N； 其中RE 係H、F、Cl、Br、I、CN、CH3 、CH2 CH3 、CH(CH3 )2 、CD3 、CHD2 、CH2 D、CHF2 、CDF2 、C(CH3 )F2 、C(CD3 )F2、CF3 、環丙基、OCH3 、OCH2 CH2 OH、OCF3 、SCH3 或SCHF2 ；並且 G係CH或N； 該化合物呈游離形式或藥學上可接受的鹽形式。
在本文中描述了本發明之各種實施方式，應認識到，每個實施方式中指定的特徵可以與其他指定特徵組合以提供本發明之另外實施方式。
在實施方式1中，本發明提供了如上所述之具有式 (I) 之化合物、或其藥學上可接受的鹽。
在實施方式2中，本發明提供了如實施方式1所述之具有式 (I) 之化合物、或其藥學上可接受的鹽，其中 R1 係F、Cl或OCHF2 ； R2 係CF3 或CN； X係CH2 或CHF； Y係(CH2 )0-2 或CHF； Z係CHF、CDF、CF2 、O、或S； J係CRJ ； 其中RJ 係H、F、Cl、CH3 或CD3 ； E係CRE 或N； 其中RE 係H、F、Br、或CF3 ；並且 G係CH。
在實施方式3中，本發明提供了如實施方式1或2所述之具有式 (I) 之化合物、或其藥學上可接受的鹽，其中 R1 係OCHF2 ； R2 係CF3 ； X係CH2 或CHF； Y係(CH)0 -2 ； Z係CF2 或O； J係CRJ ； 其中RJ 係H、F、Cl、CH3 或CD3 ； E係CRE 或N； 其中RE 係H、F、Br、或CF3 ；並且 G係CH。
在實施方式4中，本發明提供了如實施方式1至3中所述之具有式 (I) 之化合物，該化合物呈游離形式或藥學上可接受的鹽形式，其中如式 (Ia) 所示定義立體化學
Figure 02_image012
(Ia)。
在實施方式5中，本發明提供了如請求項1至4中任一項所述之具有式 (I) 之化合物，該化合物呈游離形式的或藥學上可接受的鹽形式，其中如式 (Ib) 所示定義立體化學
Figure 02_image014
(Ib)。
在實施方式6中，本發明提供了如實施方式5所述之具有式 (I) 之化合物、或其藥學上可接受的鹽， 其中 X係CH2 或CHF； Y係(CH2 )0-2 ； Z係O、S或CF2 ； E係CRE 或N； 其中RE 係H、F、Br、或CF3 ；並且 J係CRJ ； 其中RJ 係H、F、Cl、CH3 或CD3 。
在實施方式7中，本發明提供了如實施方式1所述之具有式 (I) 之化合物、或其藥學上可接受的鹽，該化合物選自由以下組成之群組： (S )-5'-溴-8-(二氟甲氧基)-4'-氟-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-茚]； (S )-8-(二氟甲氧基)-4',5'-二氟-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-茚]； (S )-8'-(二氟甲氧基)-3,6'-雙(三氟甲基)-5,6-二氫-3'H -螺[環戊并[c ]吡啶-7,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-5'-溴-8-(二氟甲氧基)-4'-氟-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-茚]-6-甲腈； (S )-5'-溴-4'-氟-8-(氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-茚]； (S )-8-(二氟甲氧基)-5',6-雙(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-茚]； (S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]； (S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-6-(三氟甲基)-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'(3'H )-酮； (1'S ,3'R )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-3',5'-二氟-6-(三氟甲基)-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'(3'H )-酮； (1'S ,3'R ,4'S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-3',5'-二氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'-醇； (S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]； (S )-8-(二氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]； (S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6-甲腈； (S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-4',4',5'-三氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]； (S )-8-(二氟甲氧基)-4',4',5'-三氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6'-甲腈； (S )-6'-溴-8-氯-5'-氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]； (S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-3',3',5'-三氟-6-(三氟甲基)-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'(3'H )-酮； (1'S ,4'S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-3',3',5'-三氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'-醇； (1'S ,4'R )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-3',3',5'-三氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'-醇； (1'S ,3'R )-8-(二氟甲氧基)-3',5'-二氟-6-(三氟甲基)-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'(3'H )-酮； (1'S ,3'R )-8-(二氟甲氧基)-3',5'-二氟-6-(三氟甲基)-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'(3'H )-酮； (S )-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6'-甲腈； (S )-8-(二氟甲氧基)-4',4',5'-三氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]； (2S,4'S)-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-4',5'-二氟-3',4'-二氫-2'H,3H-螺[咪唑并[1,2-a]吡啶-2,1'-萘]-6-甲腈； (1'S,4'S)-8-(二氟甲氧基)-4',5'-二氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H,3H-螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6'-甲腈； (S )-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6-甲腈；d 2 -(S )-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6-甲腈； (S )-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]； (S )-5',6',8-三氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]； (S )-1'-氯-8',8'-二氟-8-甲氧基-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]； (S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]； (S)-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-1'-甲基-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H,6'H-螺[咪唑并[1,2-a]吡啶-2,5'-異喹啉]； (S)-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-1'-(甲基-d3)-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H,6'H-螺[咪唑并[1,2-a]吡啶-2,5'-異喹啉]； (S )-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-1'-甲氧基-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]； (S )-8-(二氟甲氧基)-6'-氟-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6-甲腈； (S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]； (S )-3'-氯-8-(二氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-6',7'-二氫-3H ,5'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,8'-異喹啉]； (S )-8-(二氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6'-甲腈； (S )-7-溴-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-6',7-雙(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-7-氯-8'-(二氟甲氧基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]；(S )-7-溴-8-氟-8'-(氟甲氧基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-7-氯-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-8'-(二氟甲氧基)-6',7-雙(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-8'-(二氟甲氧基)-7,8-二氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-7-甲基-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]；(S )-8-氯-8'-(二氟甲氧基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]；(S )-7-溴-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]-6'-甲腈； (S )-7-溴-8'-(二氟甲氧基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]；(S )-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-7-碘-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]-6'-甲腈；(S )-7-溴-6'-氯-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]；(S )-8'-氯-6',7-雙(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-7,8'-雙(二氟甲氧基)-8-氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-8'-(二氟甲氧基)-8-(二氟甲基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-8'-氯-8-(二氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-哌喃并[2,3-c ]吡啶]； (2'S ,3R )-7-溴-8'-(二氟甲氧基)-3,8-二氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (2'S ,3S )-7-溴-8'-(二氟甲氧基)-3,8-二氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (2'S ,3R )-7-溴-8'-(二氟甲氧基)-3-氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (2'S ,3R )-8'-(二氟甲氧基)-3-氟-7-碘-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (2'S ,3R )-8'-(二氟甲氧基)-3-氟-6',7-雙(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (2'S ,3R )-8'-(二氟甲氧基)-3,8-二氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-8-(二氟甲氧基)-8'-氟-6-(三氟甲基)-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-異口克唍]；(S )-7'-氯-8-(二氟甲氧基)-8'-氟-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-硫代口克唍]-6-甲腈； (S )-8-(二氟甲氧基)-8'-氟-6-(三氟甲基)-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-硫代口克唍]； (S )-8-(二氟甲氧基)-8'-氟-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-硫代口克唍]-6-甲腈； (S )-8-(二氟甲氧基)-8'-氟-6,7'-雙(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-硫代哌喃并[3,2-c ]吡啶]； (S )-8-(二氟甲氧基)-8'-氟-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-異硫代口克唍]-6-甲腈；(S )-8'-(二氟甲氧基)-9-氟-6'-(三氟甲基)-3,4-二氫-2H ,3'H -螺[苯并[b ]㗁呯-5,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-8-(二氟甲氧基)-1'-(二氟甲基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]； (S )-5'-溴-4',8-二氯-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-茚]； (S )-5'-溴-8-(二氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-茚]； (S )-8-(二氟甲氧基)-5'-碘-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-茚]-6-甲腈； (S )-8-(二氟甲氧基)-4'-氟-5',6-雙(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H-螺[咪唑并[1,2-a]吡啶-2,1'-茚]； (S )-8-(二氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H-螺[咪唑并[1,2-a]吡啶-2,1'-茚]；(S )-5',8-二氟-6'-甲氧基-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]； (S )-8-氟-6,6'-雙(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]；外消旋 -5',6',8-三氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]； (S )-8-氯-5'-氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]； (S )-6'-溴-5'-氟-8-甲氧基-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]；外消旋 -5'-溴-8-(二氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]； (S )-5'-氯-8-(二氟甲氧基)-6'-氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]； (2S ,3'R ,4'R )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-3',4',5'-三氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]； (S )-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-6'-甲氧基-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]； (S )-8-(二氟甲氧基)-5',6'-二氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]； (S )-8-(二氟甲氧基)-6,6'-雙(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]；外消旋 -8-(二氟甲氧基)-5',6-雙(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H,3H-螺[咪唑并[1,2-a]吡啶-2,1'-萘]； (S )-5'-氯-8-(二氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]； (S )-6'-溴-6-氯-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]； (S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H ,4'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'-酮； (S )-8-(二氟甲氧基)-5',6'-二氟-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6-甲腈； (S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-4',4',5'-三氟-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6-甲腈；外消旋 -8-(二氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]； (S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]-6-甲腈； (S )-8-氯-8'-(氟甲氧基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]；(S )-8-氯-8'-(二氟甲氧基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]-7-甲腈； (3R ,4S )-7-氯-8'-(二氟甲氧基)-3,8-二氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (3R ,4S )-8'-(二氟甲氧基)-3,7,8-三氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-7-(甲硫基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-7-溴-8-氯-8'-(二氟甲氧基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]；外消旋 -8'-(二氟甲氧基)-3,8-二氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-7,8-二溴-8'-(二氟甲氧基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-7-甲氧基-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-8'-(二氟甲氧基)-6',8-雙(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-7-(三氟甲氧基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-8'-(二氟甲氧基)-7-((二氟甲基)硫代)-8-氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-8-溴-8'-(二氟甲氧基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]；外消旋 -8-(二氟甲氧基)-8'-氟-6,7'-雙(三氟甲基)-3H-螺[咪唑并[1,2-a]吡啶-2,4'-異口克唍]； (2S)-8-(二氟甲氧基)-8'-氟-3H-螺[咪唑并[1,2-a]吡啶-2,4'-硫代口克唍]-6-甲腈-2',2',3'-d3； (S )-7'-溴-8-(二氟甲氧基)-8'-氟-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-硫代口克唍]-6-甲腈； (S )-8-(二氟甲氧基)-8'-氟-6-(三氟甲基)-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-硫代口克唍]-7'-甲腈； (S )-8-(二氟甲氧基)-7',8'-二氟-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-硫代口克唍]-6-甲腈； (S )-8-(二氟甲氧基)-7',8'-二氟-6-(三氟甲基)-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-硫代口克唍]； (S )-8'-氟-8-(氟甲氧基)-6,7'-雙(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-硫代哌喃并[3,2-c ]吡啶]； (S )-8-(二氟甲氧基)-8'-氟-6-(三氟甲基)-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-異硫代口克唍]； (S )-8-(二氟甲氧基)-7'-氟-6-(三氟甲基)-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-異硫代口克唍]； (S )-8'-(二氟甲氧基)-8,9-二氟-6'-(三氟甲基)-3,4-二氫-2H ,3'H -螺[苯并[b ]㗁呯-5,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]；外消旋 -9-氯-8'-(二氟甲氧基)-6'-(三氟甲基)-3,4-二氫-2H ,3'H -螺[苯并[b ]㗁呯-5,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]；以及 (S )-8-氯-8'-(二氟甲氧基)-9-氟-6'-(三氟甲基)-3,4-二氫-1H ,3'H -螺[苯并[c ]㗁呯-5,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]。 在實施方式8中，本發明提供了如實施方式1所述之具有式 (I) 之化合物、或其藥學上可接受的鹽，該化合物選自由以下組成之群組： (S )-8-(二氟甲氧基)-8'-氟-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-硫代口克唍]-6-甲腈； (S )-8'-(二氟甲氧基)-9-氟-6'-(三氟甲基)-3,4-二氫-2H ,3'H -螺[苯并[b ]㗁呯-5,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-8'-(二氟甲氧基)-6',7-雙(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-7-溴-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (2'S ,3R )-8'-(二氟甲氧基)-3,8-二氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-8'-(二氟甲氧基)-7,8-二氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]； (S )-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-1'-(甲基-d 3 )-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]；以及 (S )-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-1'-甲基-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]。
在實施方式9中，本發明提供了化合物或藥學上可接受的鹽形式，該化合物選自由以下組成之群組：
Figure 02_image016
。
在實施方式10中，本發明提供了化合物或其藥學上可接受的鹽，該化合物係：
Figure 02_image018
。
在實施方式11中，本發明提供了一種藥物組成物，該藥物組成物包含治療有效量的如實施方式1至10中任一項所述之化合物或其藥學上可接受的鹽、以及一或多種藥學上可接受的載體。
在實施方式12中，本發明提供了一種組合，該組合包含治療有效量的如實施方式1至10中任一項所述之化合物或其藥學上可接受的鹽、以及一或多種治療活性劑。
在實施方式13中，本發明提供了如實施方式8所述之組合，其中所述治療劑選自mTOR抑制劑，該mTOR抑制劑選自西羅莫司；地磷莫司；依維莫司（RAD001）；雷帕黴素；塞馬莫德；(5-{2,4-雙[(3S )-3-甲基𠰌啉-4-基]吡啶并[2,3-d ]嘧啶-7-基}-2-甲氧基苯基)甲醇（AZD8055）；2-胺基-8-[反式-4-(2-羥基乙氧基)環己基]-6-(6-甲氧基-3-吡啶基)-4-甲基-吡啶并[2,3-d ]嘧啶-7(8H )-酮；N 2 -[1,4-二側氧基-4-[[4-(4-側氧基-8-苯基-4H -1-苯并哌喃-2-基)𠰌啉鎓-4-基]甲氧基]丁基]-L-精胺醯甘胺醯-L-α-天冬胺醯L-絲胺酸-；N-[4-[[[3-[(3,5-二甲氧基苯基)胺基]-2-喹㗁啉基]胺基]磺醯基]苯基]-3-甲氧基-4-甲基-苯甲醯胺；或(1r,4r)-4-(4-胺基-5-(7-甲氧基-1H-吲哚-2-基)咪唑并[1,5-f][1,2,4]三𠯤-7-基)環己烷甲酸。
在實施方式14中，本發明提供了如實施方式9所述之組合，其中所述mTOR抑制劑係依維莫司。
在實施方式15中，本發明提供了一種調節受試者中HiF2α活性之方法或用途，其中該方法包括向該受試者投與治療有效量的如實施方式1至10中任一項所述之化合物或其藥學上可接受的鹽。
在實施方式16中，本發明提供了一種治療障礙或疾病之方法或用途，該障礙或疾病係癌症，該方法包括向該受試者投與治療有效量的如實施方式1至10中任一項所述之化合物或其藥學上可接受的鹽。
在實施方式17中，本發明提供了一種如實施方式12所述之治療方法或用途，其中該癌症選自：腎上腺皮質癌、乳癌、透明細胞腎細胞癌（ccRCC）、結直腸癌、生殖細胞腫瘤、多形性成膠質細胞瘤（GBM）、膠質瘤、頭頸癌、肝細胞癌、腎癌、肺癌、惡性膠質瘤、眼癌、胰臟癌、副神經節瘤、嗜鉻細胞瘤、前列腺癌、和腎細胞癌，該方法包括向該受試者投與治療有效量的如實施方式1至10中任一項所述之化合物或其藥學上可接受的鹽。
在實施方式18中，本發明提供了如實施方式1至10中任一項所述之化合物或其藥學上可接受的鹽，用於作為藥物使用。
在實施方式19中，本發明提供了如實施方式1至10中任一項所述之化合物或其藥學上可接受的鹽，用於在治療障礙或疾病中使用，該障礙或疾病係癌症。
在實施方式20中，本發明提供了如實施方式1至10中任一項所述之化合物或其藥學上可接受的鹽，用於在治療障礙或疾病中使用，該障礙或疾病選自：腎上腺皮質癌、乳癌、透明細胞腎細胞癌（ccRCC）、結直腸癌、生殖細胞腫瘤、多形性成膠質細胞瘤（GBM）、膠質瘤、頭頸癌、肝細胞癌、腎癌、肺癌、惡性膠質瘤、眼癌、胰臟癌、副神經節瘤、嗜鉻細胞瘤、前列腺癌、和腎細胞癌。
在實施方式21中，本發明提供了一種(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]延胡索酸鹽的結晶形式，該結晶形式特徵在於當在20°C至30°C範圍內的溫度、用具有0.15406 nm的波長的Cu-Kα1,2輻射測量時，具有粉末X射線繞射圖，該粉末X射線繞射圖包含在2-θ角為（24.9 ± 0.2）°、（6.2 ± 0.2）°和（20.9 ± 0.2）°處的反射。
在實施方式22中，本發明提供了一種(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]延胡索酸鹽的結晶形式，該結晶形式特徵在於當在20°C至30°C範圍內的溫度、用具有0.15406 nm的波長的Cu-Kα1,2輻射測量時，具有粉末X射線繞射圖，該粉末X射線繞射圖包含在2-θ角為（24.9 ± 0.2）°、（6.2 ± 0.2）°、（20.9 ± 0.2）°、（10.9 ± 0.2）°和（18.5 ± 0.2）°處的反射。
在實施方式23中，本發明提供了一種(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]延胡索酸鹽的結晶形式，該結晶形式特徵在於當在20°C至30°C範圍內的溫度、用具有0.15406 nm的波長的Cu-Kα1,2輻射測量時，具有粉末X射線繞射圖，該粉末X射線繞射圖包含在2-θ角為（24.9 ± 0.2）°、（6.2 ± 0.2）°、（20.9 ± 0.2）°、（10.9 ± 0.2）°、（18.5 ± 0.2）°、（22.8 ± 0.2）°、（12.9 ± 0.2）°和（16.1 ± 0.2）°處的反射。
在實施方式24中，本發明提供了實施方式21-23中任一項所述之結晶形式，該結晶形式特徵在於當以10 K/min的速率從10°C加熱到250°C時，具有熱重量分析曲線，該熱重量分析曲線顯示出基於所述結晶形式的重量不超過0.4重量%的品質損失。
在實施方式25中，本發明提供了一種(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]游離形式的結晶形式，該結晶形式特徵在於當在20°C至30°C範圍內的溫度、用具有0.15406 nm的波長的Cu-Kα1,2輻射測量時，具有粉末X射線繞射圖，該粉末X射線繞射圖包含在2-θ角為（9.7 ± 0.2）°、（18.4 ± 0.2）°和（19.4 ± 0.2）°處的反射。
在實施方式26中，本發明提供了一種(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]游離形式的結晶形式，該結晶形式特徵在於當在20°C至30°C範圍內的溫度、用具有0.15406 nm的波長的Cu-Kα1,2輻射測量時，具有粉末X射線繞射圖，該粉末X射線繞射圖包含在2-θ角為（9.7 ± 0.2）°、（18.4 ± 0.2）°、（19.4 ± 0.2）°、（13.4 ± 0.2）°和（20.7 ± 0.2）°處的反射。
在實施方式27中，本發明提供了一種(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]游離形式的結晶形式，該結晶形式特徵在於當在20°C至30°C範圍內的溫度、用具有0.15406 nm的波長的Cu-Kα1,2輻射測量時，具有粉末X射線繞射圖，該粉末X射線繞射圖包含在2-θ角為（9.7 ± 0.2）°、（18.4 ± 0.2）°、（19.4 ± 0.2）°、（13.4 ± 0.2）°、（20.7 ± 0.2）°、（24.2 ± 0.2）°、（22.1 ± 0.2）°和（10.3 ± 0.2）°處的反射。
在實施方式28中，本發明提供了實施方式25-27中任一項所述之結晶形式，該結晶形式特徵在於當以10 K/min的速率從10°C加熱到250°C時，具有熱重量分析曲線，該熱重量分析曲線顯示出基於所述結晶形式的重量不超過0.2重量%的品質損失。
在實施方式29中，本發明提供了如實施方式21至28中任一項所述之化合物或其藥學上可接受的鹽，用於作為藥物使用。
在實施方式30中，本發明提供了如實施方式29所述之化合物或其藥學上可接受的鹽，用於在治療障礙或疾病中使用，該障礙或疾病係癌症。
在實施方式31中，本發明提供了如實施方式30所述之化合物或其藥學上可接受的鹽，用於在治療障礙或疾病中使用，該障礙或疾病選自：腎上腺皮質癌、乳癌、透明細胞腎細胞癌（ccRCC）、結直腸癌、生殖細胞腫瘤、多形性成膠質細胞瘤（GBM）、膠質瘤、頭頸癌、肝細胞癌、腎癌、肺癌、惡性膠質瘤、眼癌、胰臟癌、副神經節瘤、嗜鉻細胞瘤、前列腺癌、和腎細胞癌。
在實施方式32中，本發明提供了一種用於產生具有式 (I) 之化合物
Figure 02_image001
(I) 或其藥學上可接受的鹽之方法， 該方法包括以下步驟：視需要在鹼的存在下，使具有式 (IV) 之化合物、
Figure 02_image005
或其鹽、溶劑化物、立體異構物、複合物、共晶體、酯、或㗁唑啉， 和具有式 (II) 之化合物、
Figure 02_image007
或其鹽、溶劑化物、立體異構物、複合物、共晶體、酯、或㗁唑啉， 與具有式 (III) 之化合物
Figure 02_image009
或其鹽、溶劑化物、立體異構物、複合物、共晶體、酯、或㗁唑啉反應， 其中 R1 係F、Cl、Br、OCH3 、OCH2 F、OCHF2 或OCF3 ； R2 係F、Cl、CF3 或CN； X係(CH2 )1-2 、CHF、CHD、CD2 或CF2 ； Y係(CH2 )0-2 、CHF、CHD、CD2 、O、S、OCH2 或CF2 ； Z係CH2 、CD2 、CHF、CDF、CF2 、CH(OH)、CO、CH(CH3 )、O、或S， 其中，當Y係O、OCH2 、或S時，那麼Z係CH2 ； 其中，當Z係O、S、或NCH3 時，那麼Y係(CH2 )0-2 或CF2 ； 其中，當Z係CH(OH)時，那麼Y係CHF或CF2 ； J係CRJ ； 其中RJ 係H、F、Cl、Br、CH3 、CD3 、CF3 、CHF2 、CDF2 、OCH3或CN； E係CRE 或N； 其中RE 係H、F、Cl、Br、I、CN、CH3 、CH2 CH3 、CH(CH3 )2 、CD3 、CHD2 、CH2 D、CHF2 、CDF2 、C(CH3 )F2 、C(CD3 )F2、CF3 、環丙基、OCH3 、OCH2 CH2 OH、OCF3 、SCH3 、SCHF2 ， G係CH或N；並且 LG係選自F、Cl、或Br的離去基團； 該鹼選自K2 CO3 或Et3 N， 以獲得具有式 (1) 之化合物或其藥學上可接受的鹽。
在實施方式33中，本發明提供了如實施方式32所述之方法，其中在選自吡啶或Et3 N的鹼的存在下，將具有式 (II) 之化合物用試劑環化，該試劑選自甲苯中的SOCl2 、甲苯磺醯氯、或甲磺醯氯，以給出具有式 (I) 之化合物。定義
如本文所用，術語「鹽（salt或salts）」係指本發明之化合物的酸加成鹽或鹼加成鹽。「鹽」特別包括「藥學上可接受的鹽」。術語「藥學上可接受的鹽」係指保留本發明化合物的生物有效性和特性，並且典型地不是生物學上或其他方面不希望的鹽。在許多情況下，由於胺基和/或羧基基團或與其類似的基團的存在，本發明之化合物能夠形成酸鹽和/或鹼鹽。
可以用無機酸和有機酸形成藥學上可接受的酸加成鹽。
可以衍生出鹽的無機酸包括，例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。
可以衍生出鹽的有機酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、馬來酸、丙二酸、琥珀酸、延胡索酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、苦杏仁酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、磺基水楊酸等。
可以用無機鹼和有機鹼形成藥學上可接受的鹼加成鹽。
可以衍生出鹽的無機鹼包括例如銨鹽和來自元素週期表第I至XII列的金屬。在某些實施方式中，鹽衍生自鈉、鉀、銨、鈣、鎂、鐵、銀、鋅和銅；特別合適的鹽包括銨鹽、鉀鹽、鈉鹽、鈣鹽和鎂鹽。
可以衍生出鹽的有機鹼包括例如一級胺、二級胺和三級胺；取代的胺（包括天然存在的取代的胺）；環胺；鹼性離子交換樹脂等。某些有機胺包括異丙胺、苄星（benzathine）、膽鹼鹽、二乙醇胺、二乙胺、離胺酸、葡甲胺、哌𠯤和胺丁三醇。
本文中給出的任何式還旨在代表所述化合物的非標記形式以及同位素標記形式。除了一或多個原子被具有選定原子量或質量數的原子替換以外，同位素標記的化合物具有本文中給出的式所描述的結構。可以摻入本發明化合物中的同位素包括例如氫的同位素。
此外，摻入某些同位素，特別是氘（即2 H或D）可以提供更高代謝穩定性導致的某些治療優勢，例如增加的體內半衰期或減少的劑量要求或治療指數或耐受性的改善。應當理解，在本上下文中氘被認為是本發明之化合物的取代基。氘的濃度可以由同位素富集因子定義。如本文所用的術語「同位素富集因子」係指同位素豐度與指定同位素的天然豐度之間的比率。如果本發明化合物中的取代基指示為氘，則這種化合物具有的針對每個指定的氘原子的同位素富集因子為至少3500（在每個指定的氘原子上52.5%氘摻入）、至少4000（60%氘摻入）、至少4500（67.5%氘摻入）、至少5000（75%氘摻入）、至少5500（82.5%氘摻入）、至少6000（90%氘摻入）、至少6333.3（95%氘摻入）、至少6466.7（97%氘摻入）、至少6600（99%氘摻入）、或至少6633.3（99.5%氘摻入）。應理解，術語「同位素富集因子」可以以與對氘描述的相同方式應用於任何同位素。
可以摻入本發明之化合物的同位素的其他實例包括氫、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，如分別是3 H、11 C、13 C、14 C、15 N、18 F、31 P、32 P、35 S、36 Cl、123 I、124 I、125 I。因此，應當理解，本發明包括摻入任何上述同位素中一或多種的化合物，包括例如放射性同位素，如3 H和14 C，或其中摻入非放射性同位素如2 H和13 C的那些。此類同位素標記的化合物可用於代謝研究（用14 C）、反應動力學研究（例如用2 H或3 H）、檢測或成像技術（如正電子發射斷層掃描（PET）或單光子發射電腦斷層掃描（SPECT），包括藥物或底物組織分佈測定），或用於患者的放射性治療。特別地，18 F或標記的化合物對於PET或SPECT研究可能是特別期望的。同位素標記的本發明之化合物通常可以藉由熟悉該項技術者已知的常規技術或藉由與所附實例和製備中所述之那些類似的方法，使用適當的同位素標記的試劑代替未標記的先前使用的試劑來製備。
如本文所用，術語「藥物組成物」係指呈適於口服或腸胃外投與的形式的本發明化合物、或其藥學上可接受的鹽，以及至少一種藥學上可接受的載體。
如本文使用的，術語「藥學上可接受的載體」係指可用於製備或使用藥物組成物的物質，並且包括例如適合的稀釋劑、溶劑、分散介質、界面活性劑、抗氧化劑、防腐劑、等滲劑、緩衝液、乳化劑、吸收延遲劑、鹽、藥物穩定劑、黏合劑、賦形劑、崩解劑、潤滑劑、潤濕劑、甜味劑、調味劑、染料及其組合，如熟悉該項技術者已知的（參見，例如，Remington The Science and Practice of Pharmacy [雷明頓：藥物科學與實踐], 第22版, Pharmaceutical Press [藥物出版社], 2013, 第1049-1070頁）。
術語「治療有效量」的本發明之化合物係指將引起受試者的生物或醫學應答（例如，酶或蛋白活性的減小或抑制，或改善症狀、緩解病症、減緩或延遲疾病進展或預防疾病等）的本發明之化合物的量。在一個實施方式中，術語「治療有效量」係指本發明之化合物的以下量，當向受試者投與時，該量有效地：(1) 至少部分地緩解、預防和/或改善 (i) 由HIF2α介導、或 (ii) 與HIF2α活性相關、或 (iii) 以HIF2α的活性（正常或異常）為特徵的病症或障礙或疾病；或 (2) 降低或抑制HIF2α的活性；或 (3) 降低或抑制HIF2α的表現。在另一個實施方式中，術語「治療有效量」係指本發明化合物的如下量，該量當被投與至細胞、或組織、或非細胞生物材料、或介質時有效地至少部分降低或抑制HIF2α的活性；或至少部分地降低或抑制HIF2α的表現。
如本文所用，術語「受試者」係指靈長類（例如，人（男性或女性））、狗、兔、豚鼠、豬、大鼠和小鼠。在某些實施方式中，受試者為靈長類。在又其他的實施方式中，受試者係人。
如本文所用，術語「抑制（inhibit、inhibition或inhibiting）」係指減少或抑制給定的病症、症狀或障礙、或疾病，或在生物活性或過程的基線活性方面的顯著降低。
如本文所用，術語任何疾病或障礙的「治療（treat、treating或treatment）」係指緩解或改善疾病或障礙（即，減慢或阻止疾病或其至少一種臨床症狀的發展）；或緩解或改善與該疾病或障礙相關的至少一種物理參數或生物標記，包括患者可能無法辨別的那些物理參數或生物標記。
如本文所用，術語任何疾病或障礙的「預防（prevent、preventing或prevention）」係指疾病或障礙的預防性治療；或延遲疾病或障礙的發作或進展。
如本文所用，如果受試者將在生物學上、在醫學上或在生活品質上從治療中獲益，則這樣的受試者係「需要」這種治療的。
如本文所用，術語「一個/種（a，an）」，「該等/該（the）」以及在本發明之上下文中使用的類似術語（特別是在請求項的上下文中）應被解釋為涵蓋單數和複數兩者，本文中除非另外指示或與上下文明顯相矛盾。
在本文描述的所有方法能夠以任何適合順序進行，除非本文另外指示或另外與上下文明顯矛盾。本文提供的任何和所有實例或示例性語言（例如「如」）的使用僅旨在更好地說明本發明，而不對另外要求保護的本發明範圍做出限制。
本發明之一或多種化合物的任何非對稱原子（例如，碳等）可以以外消旋或鏡像異構物富集的形式存在，例如，(R )-、(S )-或(R,S )-構型。在某些實施方式中，每個非對稱原子具有至少50%鏡像異構物過量、至少60%鏡像異構物過量、至少70%鏡像異構物過量、至少80%鏡像異構物過量、至少90%鏡像異構物過量、至少95%鏡像異構物過量、或至少99%鏡像異構物過量的 (R )-或 (S )-構型。如果可能，在具有不飽和雙鍵的原子上的取代基可以以順式- (Z )-或反式- (E )-形式存在。
因此，如本文所用，本發明之化合物可以呈可能的立體異構物、旋轉異構物、阻轉異構物、互變異構物或其混合物之一的形式，例如，作為基本上純的幾何（順式或反式）立體異構物、非鏡像異構物、光學異構物（對映體）、外消旋物或其混合物。
可以基於組分的物理化學差異，例如藉由層析法和/或分級結晶法將任何所得的立體異構物混合物分離成純的或基本上純的幾何或光學異構物、非鏡像異構物、外消旋物。
對於單獨的實例的子集、或結合在HIF2α的PAS-B結構域中，或來自用於製備該等實例的中間體，藉由單晶X射線結構分析指定螺環中心的立體化學。基於其HIF2α親和力，藉由模擬指定其餘實例的立體化學：例如，在實例44的Hif2α SPA測定中發現測定的IC50 比對應的鏡像異構物(R )-8'-(二氟甲氧基)-6',7-雙(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]低大於700倍（HIF2α SPA IC50 ＞ 10000 nM）。通用條件：
通常，具有式 (I) 之化合物可根據下文提供的方案製備。
下文提供的方案旨在代表單個非對映立體異構物/鏡像異構物及其異構物混合物。非對映立體異構物/鏡像異構物的分離可以根據本文所述之技術進行。
方案1：具有式 (I) 之化合物的通用合成
Figure 02_image024
步驟1：將具有式 (IV) 之化合物用具有式 (III) 之吡啶進行芳基化，以給出具有式 (II) 之化合物，其中LG係離去基團。芳基化反應可為親核芳香族取代反應，其中LG係基團（如氟、氯或溴），並且該反應可以在鹼（如K2 CO3 或Et3 N）的存在下，伴隨加熱進行。可替代地，該反應可為過渡金屬催化的偶合反應，例如布赫瓦爾德（Buchwald）反應或烏爾曼（Ullmann）型胺化反應，其中LG係基團（如氯、溴或溴），在鹼（如KOtBu或K3 PO4 ）的存在下，使用例如Pd催化劑或Cu催化劑（如CuI、CuBr、或噻吩-2-甲酸銅鹽(I)）。
步驟2：將具有式 (II) 之化合物環化以給出具有式 (I) 之化合物。可藉由加熱使用試劑（如甲苯中的SOCl2 ），或在鹼（如吡啶或Et3 N）的存在下伴隨或不伴隨加熱使用甲苯磺醯氯或甲磺醯氯，將醇基團活化為離去基團。
在一些情況下，步驟1和步驟2均可以在以下中進行：在用兩個或更多個當量的吡啶 (III) 進行步驟1的一鍋反應中，在醇也被該吡啶進行芳基化以提供用於環化反應的離去基團的反應中。
方案2：具有式 (I) 之化合物的通用合成
Figure 02_image026
步驟1：在一些情況下，用受保護的胺基醇進行芳基化反應。胺基醇 (IV) 之合適的受保護的形式係㗁唑啶酮 (VI)，其藉由與光氣或光氣等價物（如羰基二咪唑或三光氣）反應製備，並且該反應可以在鹼的存在下進行。
步驟2：將具有式 (VI) 之化合物用吡啶 (III) 進行芳基化，以給出具有式 (II) 之化合物，其中LG係離去基團。芳基化反應可為過渡金屬催化的偶合反應，在鹼（如KOtBu）的存在下，使用例如Pd催化劑。可替代地，該芳基化反應可為烏爾曼型胺化反應，在鹼（如KOtBu或K3 PO4 ）的存在下，使用例如Cu催化劑（如CuI、CuBr、或噻吩-2-甲酸銅鹽(I)）。
步驟3：具有式 (V) 之㗁唑啶酮在水解反應中去保護以給出水性酸或鹼中具有式 (II) 之胺基醇，如EtOH中的NaOH、MeOH中的Cs2 CO3 ，這種水解反應可以在另外的溶劑（如THF）的存在下進行。
步驟4：可以類似於方案1的步驟2所述之方式進行環化反應。
方案3：具有式 (I) 之化合物的通用合成
Figure 02_image028
步驟1：在醯化反應中，具有式 (VIII) 之醇轉化為具有式 (VII) 之胺基甲酸酯。可以用醯化劑（如三氯乙醯基異氰酸酯）進行反應，然後在第二步驟中在鹼性條件下（如MeOH中的K2 CO3 或EtOH水溶液中的NaOH）將該醯化劑水解。
步驟2：在氮烯插入反應中，具有式 (VII) 之胺基甲酸酯環化為具有式 (VI) 之㗁唑啶酮。可以藉由氧化過程，使用氧化劑（如亞碘醯苯二乙酸酯）形成氮烯中間體，並且藉由添加催化劑，如Rh2 (OAc)4 、Rh2 [OC(O)Ph]4 、Rh2 (esp)2 ，並且使用添加劑（如MgO）使其穩定以在插入步驟中反應。
步驟3 - 5：可以類似於方案2的等效步驟所述之方式進行㗁唑啶酮 (VI) 向具有式 (I) 之化合物的轉化。
方案4：具有式 (I) 之化合物的通用合成
Figure 02_image030
步驟1：具有式 (I) 之化合物（其中R1 係F、Cl、或Br）可以與鈉或鉀醇鹽進行親核芳香族親核取代反應，以給出中間體（其中R1 係醚基），該中間體可以進一步去保護為相應的具有式 (IX) 之苯酚。當醇鹽衍生自2-(甲基磺醯基)乙醇和DMF中的NaH時，將醚原位去保護，以直接給出具有式 (IX) 之化合物。
步驟2：可以將具有式 (IX) 之化合物的苯酚基烷基化以給出具有式 (I) 之化合物，其中R1 係OCH2 F、OCHF2 。可以用試劑如溴二氟甲基)三甲基矽烷和KOH、或二溴二氟甲烷和NaH，然後藉由DCM中的AgBF4 進行烷基化反應。
藉由具有式 (I) 之化合物（其中R1 係F、Cl、或Br）與MeOH和NaOtBu的反應，可以直接獲得具有式 (I) 之化合物（其中R1 係OMe）。
方案5：具有式 (I) 之化合物的通用合成
Figure 02_image032
步驟1：可以使用過渡金屬催化的偶合反應將具有式 (I) 之化合物（其中E或J係CRJ 或CRE ，其中RJ 和RE 獨立地係Cl、Br、或I）並且轉化為具有式 (I) 之化合物（其中RJ 或RE 係Cl、H、CN、Me、d 3 -Me、SCF3 、CHF2 、CF2 Me、MeO））。過渡金屬催化的偶合反應可為醚的形成，如用三級丁基BrettPhos-Pd-G3、NaOtBu和1,4-二㗁𠮿中的MeOH；硫醇的形成，如用3-巰基丙酸2-乙基己酯、Pd2 (dba)3 、xantphos、和1,4-二㗁𠮿中的iPr2 NEt；然後在與EtOH中的NaOEt的反應中形成游離硫醇；如與2,2-二氟-1-苯基乙酮、Pd(dba)2 、SPhos、和甲苯中的Cs2 CO3 的二氟甲基化反應；然後用試劑（如甲苯中的KOH水溶液）將中間體脫醯基；如與DMSO、CuI和DABCO的硫代甲基化；如用Pd碳催化劑、用MeOH和THF中的氫的氫化反應；如與六氰基高鐵酸鉀(II)、XPhos、XPhos Pd G3和水中的KOAc以及1,4-二㗁𠮿的氰化反應；如與二苯基(三氟甲基)鋶三氟甲烷磺酸鹽和DMF中的Cu粉的三氟甲基化反應；如與雙(頻哪醇)二硼、PdCl2 (dppf).CH2 Cl2 加合物和1,4-二㗁𠮿中的KOAc的硼基化反應；然後藉由用試劑（如MeOH和水中的CuCl2 ）處理，硼酸酯可以進一步轉化為相應的氯衍生物。
利用反應，如三氟甲基化以轉化硫醇為三氟甲基硫醇，使用(溴二氟甲基)膦酸二乙酯和AcCN中的KOH，可以將具有式 (I) 之過渡金屬催化的偶合反應的產物轉化為式 (I) 之另外的衍生物。
方案6：具有式 (I) 之化合物的通用合成
Figure 02_image034
步驟1：利用氟化反應（如矽基烯醇醚中間體與AcCN中的Selectfluor反應），可以將具有式 (I) 之化合物（其中Z=C=O）轉化為具有式 (I) 之化合物（其中Z=C=O且Y=CHF），如藉由與三級丁基二甲基矽基三氟甲烷磺酸酯和DCM中的Et3 N的矽基化反應，可以從具有式 (I) 之化合物（其中Z=C=O）製備該矽基烯醇醚中間體，利用如與EtOH中的NaBH4 的還原反應，重複該順序以給出具有式 (I) 之化合物（其中Z=C=O且Y=CF2 ，其中Z=CH(OH)），利用如與DCM中的DAST的氟化反應，可以將醇進一步轉化為具有式 (I) 之化合物（其中Z=CHF）。
藉由具有式 (I) 之化合物（其中Z=CH2 ）的氧化，藉由例如與氧、N -羥基鄰苯二甲醯亞胺和AcCN中的硝酸鐵(III)氧化，或者由具有式 (I) 之化合物（其中Z = 硫縮酮）藉由例如與丙酮水溶液中的N -溴琥珀醯亞胺的去保護反應製備具有式 (I) 之化合物（其中Z=C=O）。
方案7：具有式 (I) 之化合物的通用合成
Figure 02_image036
步驟1：藉由鋰化反應並向羰基化合物中添加所得的有機鋰中間體，隨後藉由如與THF中的nBuLi的氟化反應將具有式 (I) 之化合物（其中CRJ 或CRE 係Br或I）轉化為具有式 (I) 之化合物（其中CRJ 或CRE 係CHF2 ），隨後添加DMF，然後在如與DCM中的DAST的氟化反應中，將甲醯化中間體氟化。
本發明進一步包括本發明方法的任何變型，其中將可在其任何階段獲得的中間體產物用作起始材料並進行其餘步驟，或其中起始物質在反應條件下原位形成，或其中將反應組分以其鹽或光學純物質的形式使用。本發明化合物和中間體還可以根據熟悉該項技術者通常已知的方法彼此轉化。
在另一方面，本發明提供了藥物組成物，該藥物組成物包含本發明化合物、或其藥學上可接受的鹽，和藥學上可接受的載體。在另外的實施方式中，組成物包含至少兩種藥學上可接受的載體，例如本文所述之那些。藥物組成物可以配製用於特定的投與途徑，如口服投與、腸胃外投與（例如藉由注射、輸注、透皮或局部投與）、和直腸投與。局部投與也可以涉及吸入或鼻內應用。本發明之藥物組成物可以以固體形式（包括但不限於膠囊、片劑、丸劑、顆粒、粉末或栓劑）、或以液體形式（包括但不限於溶液、混懸液或乳液）製成。片劑可根據本領域已知的方法添加薄膜包衣或腸溶包衣。典型地，藥物組成物係包含活性成分及以下中的一或多種的片劑或明膠膠囊： a)      稀釋劑，例如乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纖維素和/或甘胺酸； b)      潤滑劑，例如二氧化矽、滑石、硬脂酸、其鎂或鈣鹽和/或聚乙二醇；就片劑而言還包含 c)      黏合劑，例如矽酸鋁鎂、澱粉糊、明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯啶酮；如果希望的話 d)      崩解劑，例如澱粉、瓊脂、海藻酸或其鈉鹽、或泡騰混合物；以及 e)      吸附劑、著色劑、調味劑和甜味劑。本發明之使用方法
呈游離形式或藥學上可接受的鹽形式的具有式 (I) 和 (Ia) 中任一種的化合物展示出有價值的藥理學特性，例如，抑制或調節HIF2α，例如，如在下一個部分中提供的體外和體內測試所示，並且因此指示用於療法或用作研究化學品，例如作為工具化合物。
本發明之化合物可用於治療或預防癌症，其中該癌症選自腎上腺皮質癌、乳癌、透明細胞腎細胞癌（ccRCC）、結直腸癌（可以包括大腸癌）、生殖細胞腫瘤（例如顱和顱外生殖細胞腫瘤、性腺和性腺外生殖細胞腫瘤）、多形性成膠質細胞瘤（GBM）、膠質瘤、頭頸癌（可以包括唇癌、口腔癌（oral cavity，mouth cancer）、肝細胞癌、腎癌、肺癌、惡性膠質瘤、眼癌、胰臟癌、副神經節瘤、嗜鉻細胞瘤、前列腺癌、和腎細胞癌。
因此，作為另外的方面，本發明提供了具有式 (I) 或 (Ia) 之化合物，或如前述實施方式中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽在療法中之用途。在另外的實施方式中，該療法選自可以藉由抑制或調節HIF2α而治療的疾病。在另一個實施方式中，該疾病選自腎上腺皮質癌、乳癌、透明細胞腎細胞癌（ccRCC）、結直腸癌（可以包括大腸癌）、生殖細胞腫瘤（例如顱和顱外生殖細胞腫瘤、性腺和性腺外生殖細胞腫瘤）、多形性成膠質細胞瘤（GBM）、膠質瘤、頭頸癌（可以包括唇癌、口腔癌（oral cavity，mouth cancer）、肝細胞癌、腎癌、肺癌、惡性膠質瘤、眼癌、胰臟癌、副神經節瘤、嗜鉻細胞瘤、前列腺癌、和腎細胞癌。
因此，作為另外的方面，本發明提供了具有式 (I) 或 (Ia) 中任一種的化合物，或如前述實施方式中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽，用於在療法中使用。在另外的實施方式中，該療法選自可以藉由抑制或調節HIF2α而治療的疾病。在另一個實施方式中，該疾病選自前述列表，合適地選自特別是癌症。
因此，作為另外的方面，本發明提供了具有式 (I) 或 (Ia) 中任一種的化合物，或如前述實施方式中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽用於製造藥物之用途。在另外的實施方式中，該藥物用於治療或預防疾病，該疾病可以藉由抑制或調節HIF2α治療。在另一個實施方式中，該疾病選自前述列表，合適地選自特別是癌症。
對於約50-70 kg的受試者，本發明之藥物組成物或組合可以呈約1-1000 mg一或多種活性成分，或約1-500 mg或約1-250 mg或約1-150 mg或約0.5-100 mg或約1-50 mg活性成分的單位劑量。化合物、藥物組成物、或其組合的治療有效劑量取決於受試者的物種、體重、年齡和所治療的個體病症、障礙或疾病或其嚴重程度。具有普通技能的醫師、臨床醫生或獸醫可以容易地確定預防、治療或抑制障礙或疾病進展所必需的每種活性成分的有效量。
有利地使用哺乳動物（例如，小鼠、大鼠、狗、猴）或其分離的器官、組織和製品使用體外和體內測試證明上述劑量特性。本發明化合物可以以溶液（例如水溶液）的形式體外應用，和例如以混懸劑或以水溶液的形式腸內、腸胃外（有利地，靜脈內）體內應用。體外劑量可以在約10-3 莫耳濃度和10-9 莫耳濃度之間的範圍內。根據投與途徑，體內治療有效量的範圍可以在約0.1-500 mg/kg之間、或在約1-100 mg/kg之間。
「組合」係指呈一種劑量單位形式的固定組合，或組合投與，其中本發明化合物與組合伴侶（例如下文所解釋的另一種藥物，也稱為「治療劑」或「共藥劑」）可以同時獨立地投與或在時間間隔內分開地投與，特別是在該等時間間隔允許組合伴侶顯示協作（例如協同）效應的情況下。單個組分可以包裝在一個套組（kit）中或分開包裝。可以在投與之前將一種或兩種組分（例如粉末或液體）重構或稀釋至所希望的劑量。如本文所用，術語「共同投與」或「組合投與」等旨在涵蓋將所選擇的組合伴侶投與至有需要的單一受試者（例如患者），並且旨在包括其中藥劑不一定藉由相同的投與途徑投與或同時投與的治療方案。如本文所用，術語「藥物組合」意指由多於一種治療劑的混合或組合所產生的產品，並且包括治療劑的固定和非固定組合兩者。術語「固定組合」意指治療劑（例如，本發明化合物和組合伴侶）以單一實體或劑量的形式同時地投與至患者。術語「非固定組合」意指治療劑（例如，本發明化合物和組合伴侶）作為分開的實體同時地、並行地或依序地投與至患者（沒有特定的時間限制），其中這種投與在患者體內提供治療有效水平的兩種化合物。後者也適用於雞尾酒療法，例如三種或更多種治療劑的投與。
如本文所用，術語「藥物組合」係指呈一個劑量單位形式的固定組合、或用於組合投與的非固定組合或成套藥盒，其中兩種或更多種治療劑可以同時獨立地投與或在時間間隔內分開地投與，特別是在該等時間間隔允許組合伴侶顯示協作（例如協同）效應的情況下。
術語「組合療法」係指投與兩種或更多種治療劑以治療在本揭露中描述的治療性病症或障礙。這種投與涵蓋以基本上同時的方式共同投與該等治療劑，如以具有固定比率的活性成分的單個膠囊投與。可替代地，這種投與涵蓋在多個容器中、或在每種活性成分的獨立容器（例如，片劑、膠囊、粉末、和液體）中共同投與。可以將粉末和/或液體在投與之前重構或稀釋到所希望的劑量。另外，這種投與也涵蓋在大致相同的時間或在不同的時間順序使用每種類型的治療劑。在任何一種情況下，治療方案將在治療本文所述之病症或障礙方面提供藥物組合的有益作用。
本發明化合物可以與一或多種其他治療劑同時投與或者在其之前或之後投與。本發明化合物可以藉由與其他藥劑相同或不同的投與途徑分開投與，或在相同的藥物組成物中一起投與。治療劑係例如化學化合物、肽、抗體、抗體片段或核酸，當將該治療劑與本發明之化合物組合投與患者時，該治療劑具有治療活性或增強治療活性。
在一個實施方式中，本發明提供了作為組合製劑的產品，該產品包含具有式 (I) 或 (Ia) 之化合物，或如前述實施方式中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽，以及至少一種其他治療劑，用於在療法中同時、分開或依序使用。
在一個實施方式中，該療法係治療或預防由抑制或調節HIF2α介導的疾病或病症。作為組合製劑提供的產品包括組成物，該組成物包含一起在同一藥物組成物中的具有式 (I) 或 (Ia) 中任一種的化合物或其藥學上可接受的鹽以及一或多種其他治療劑，或者呈分開的形式（例如呈套組的形式）的具有式 (I) 或 (Ia) 中任一種的化合物或其藥學上可接受的鹽以及一或多種其他治療劑。
在一個實施方式中，本發明提供了一種藥物組合，該藥物組合包含具有式 (I) 或 (Ia) 中任一種的化合物，或如前述實施方式中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽，以及另一或多種治療劑。視需要，該藥物組合可以包含如上所述之藥學上可接受的載體。
在一個實施方式中，本發明提供了一種套組，該套組包含兩種或更多種單獨的藥物組成物，其中至少一種含有具有式 (I) 或 (Ia) 中任一種的化合物，或如前述實施方式中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，該套組包含用於分別保留所述組成物的裝置（例如容器、分開的瓶子、或分開的箔包）。這種套組的實例係泡罩包裝，如典型地用於片劑、膠囊及類似物的包裝。
本發明之套組可以用於投與不同劑型（例如，口服和腸胃外），用於以不同劑量間隔投與單獨組成物或用於相對在彼此滴定單獨組成物。為了有助於依從性，本發明之套組典型地包含用於投與的用法說明書。
在本發明之組合療法中，本發明之化合物和其他治療劑可以由相同或不同的製造商製造和/或配製。此外，可以以下述方式將本發明化合物和其他治療劑一起形成組合療法：(i) 在將組合產品發放給醫師之前（例如在包含本發明化合物和其他治療劑的套組的情況下）進行；(ii) 在投與前不久，由醫師自己（或在醫師的指導下）進行；(iii) 由患者自己、例如在依次投與本發明之化合物和其他治療劑期間進行。
因此，本發明提供了具有式 (I) 或 (Ia) 中任一種的化合物，或如前述實施方式中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽用於治療或預防由抑制或調節HIF2α介導的疾病或病症之用途，其中藥物被製備用於與另一種治療劑一起投與。本發明還提供了另一種治療劑用於治療或預防由抑制或調節HIF2α介導的疾病或病症之用途，其中將藥物與具有式 (I) 或 (Ia) 中任一種的化合物或其藥學上可接受的鹽一起投與。
本發明還提供了具有式 (I) 或 (Ia) 中任一種的化合物，或如前述實施方式中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽，其用於在治療或預防由抑制或調節HIF2α介導的疾病或病症的方法中使用，其中具有式 (I) 或 (Ia) 之化合物，或如前述實施方式中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽被製備用於與另一種治療劑一起投與。本發明還提供了另一種治療劑，該治療劑用於在治療或預防由抑制或調節HIF2α介導的疾病或病症的方法中使用，其中其他治療劑被製備用於與具有式 (I) 或 (Ia) 之化合物，或如前述實施方式中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽一起投與。本發明還提供了具有式 (I) 或 (Ia) 之化合物，或如前述實施方式中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽，用於治療或預防由抑制或調節HIF2α介導的疾病或病症的方法，其中具有式 (I) 或 (Ia) 之化合物，或如前述實施方式中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽與另一種治療劑一起投與。本發明還提供了另一種治療劑，該治療劑用於在治療或預防由抑制或調節HIF2α介導的疾病或病症的方法中使用，其中將其他治療劑與具有式 (I) 或 (Ia) 之化合物，或如前述實施方式中任一項所述之化合物，或其藥學上可接受的鹽一起投與。
使用電噴灑方法、化學方法和電子衝擊電離方法在LC-MS、SFC-MS或GC-MS系統上使用一系列以下配置的儀器中獲取質譜：帶有沃特世SQ檢測器的Waters Acquity UPLC，[M+H]+ 係指化學物質的質子化分子離子，以及[M-H]- 係指化學物質的去質子化分子離子。
NMR光譜使用Bruker Ultrashield™ 400（400 MHz）和Bruker Ultrashield™ 600（600 MHz）光譜儀運行，均以或不以四甲基矽烷作為內標。將化學位移（δ值）以四甲基矽烷的低場ppm報告，光譜分裂模式被指定為，單信號（s）、雙信號（d）、三重信號（t）、四重信號（q）、多重信號、未解析的或更多重疊信號（m）、寬信號（br）。溶劑在括弧中給出。
Celite：Celite® （Celite公司）= 基於矽藻土的助濾劑
相分離器：Biotage - 溶質相分離器 -（部件號：120-1908-F，70 mL，部件號：120-1909-J，150 mL）儀器法
微波： 除非另有說明，否則所有微波反應均在Biotage引發器中進行，以0-400 W從磁控管在2.45 GHz在Robot Eight/ Robot Sixty的處理能力情況下進行輻照。
UPLC-MS 方法： 使用帶沃特世SQ檢測器的沃特世Acquity UPLC。
綜述 柱                    Acquity HSS T3，1.8 µm，2.1 x 50 mm， 柱溫                60°C 洗脫液             A：水 + 0.05%甲酸 + 3.75 mM銨 乙酸鹽（pH 3.8），B：乙腈 + 0.04%甲酸 流速                1.0 mL/min
方法
   初始 梯度 保持/平穩（Plateau）
UPLC-MS 1 5% B 在1.40 min內5%至98% B 98% B持續0.40 min
UPLC-MS 2 5% B 在1.40 min內5%至98% B 98% B持續0.40 min
UPLC-MS 3 1% B 在1.40 min內1%至98% B 98% B持續0.40 min
UPLC-MS 4 5% B 在9.40 min內5%至98% B 98% B持續0.40 min
UPLC-MS 5 5% B 在2.40 min內5%至98% B 98% B持續0.40 min
UPLC-MS 6 柱                  Acquity HSS T3，1.8 µm，2.1 x 100 mm 柱溫              60°C 洗脫液           A：水 + 0.05%甲酸 + 3.75 mM銨 乙酸鹽（pH 3.8），B：乙腈 + 0.04%甲酸 梯度              在9.4 min內5%至98% B 流速              0.8 mL/min
UPLC-MS 7 柱                  Acquity UPLC BEH C18，1.7 μm，2.1 x 50 mm 柱溫              80°C 洗脫液           A：水 + 0.05%甲酸 + 3.75 mM銨 乙酸鹽，B：iPrOH + 0.05%甲酸 梯度              在1.7 min內5%至98% B 流速              0.6 mL/min
手性 HPLC/SFC 方法：
C-HPLC 1 儀器：           安捷倫1200 HPLC系統 進樣：           10 μL 流動相：       庚烷 : EtOH : [MeOH + 0.05% Et2 NH] 80 : 10 : 10 流速：           1 mL/min 柱：              Chiralcel OZ-I 20 μm 4.6 x 250 mm 檢測UV：     220或260 nm
C-HPLC 7 儀器：           安捷倫1200 HPLC系統 進樣：           10 μL 流動相：       庚烷 : TBME : EtOH + 0.05% Et2 NH 80 : 10 : 10 流速：           1 mL/min 柱：              Chiralcel ID 5 μm 4.6 x 250 mm 檢測UV：     230 nm
C-SFC 8 儀器：           沃特世UPC2分析型SFC 流動相：       CO2 : 含有0.05% Et2 NH的MeOH 流速：           2.5 mL/min 柱：              ChiralPak AD 3 μm 4.6 x 150 mm 溫度：           35°C 背壓：           100巴 檢測UV：     220 nm
C-HPLC 9 儀器：           安捷倫1100 HPLC系統 進樣：           5 μL 流動相：       庚烷 : DCM : MeOH 80 : 10 : 10 流速：           1 mL/min 柱：              Chiralcel IC 5 μm 4.6 x 250 mm 檢測UV：     270 nm
C-SFC 10 儀器：           沃特世UPC2 分析型SFC 流動相：       CO2 : [MeOH + 0.05% Et2 NH] 梯度：           5%-40% B 流速：           2.5 mL/min 柱：              Chiralpak AD，150 × 4.6 mm I.D.，3 μm，35°C BPR：           100巴 檢測UV：     220 nm
C-HPLC 12 儀器：           安捷倫1100 HPLC系統 進樣：           10 μL 流動相：       庚烷 : MeOH : EtOH + 0.1% Et2 NH 80 : 10 : 10 流速：           1 mL/min 柱：              Chiralcel AD-H 5 μm 4.6 x 250 mm 檢測UV：     220 nm
C-HPLC 15 儀器：           安捷倫1100 HPLC系統 進樣：           10 μL 流動相：       庚烷 : iPrOH + 0.05% Et2 NH 60 : 40 流速：           1 mL/min 柱：              Chiralpak IC 5 μm 4.6 x 250 mm 檢測UV：     280 nm
C-HPLC 16 儀器：           安捷倫1100 HPLC系統 進樣：           10 μL 流動相：       庚烷 : MeOH : EtOH + 0.1% Et2 NH 80 : 10 : 10 流速：           1 mL/min 柱：              Chiralcel AD-H 5 μm 4.6 x 250 mm 檢測UV：     230 nm
C-HPLC 17 儀器：           島津（Shimadzu）prominence HPLC系統 進樣：           5 μL 流動相：       庚烷 : MeOH : EtOH : Et2 NH 90 : 5 : 5 : 0.1 流速：           1 mL/min 柱：              Chiralpak OZ-H 5 μm 4.6 x 250 mm 檢測UV：     225 nm
C-SFC 19 儀器：           Thar分析型SFC（SFC-A） 流動相：       CO2 : [MeOH + 0.05% Et2 NH] 梯度：           5%-40% B 流速：           2.4 mL/min 柱：              Chiralpak AD，150 × 4.6 mm I.D.，3 μm，35°C BPR：           100巴 檢測UV：     220 nm
C-SFC 20 儀器：           沃特世ACQUITY UPLC系統 流動相：       CO2 : 含有0.1% Et2 NH的iPrOH 流速：           2.5 mL/min 柱：              Chiralpak IG 5 μm 4.6 x 100 mm 溫度：           35°C 背壓：           100巴 檢測UV：     DAD 190-400 nm
HPLC 22 流動相：       等度使用溶劑，A：0.05% TFA水溶液，B：0.05% TFA乙腈溶液；梯度：0 min 56% B；13 min 56% B；13.5 min 100% B；21.5 min 100% B；22 min 56% B；254 nm 流速：           1.0 mL/min 柱：              Macherey + Nagel Nucleodur Sphinx RP 5 μm，4.6 x 250 mm 溫度：      30°C
C-HPLC 28 儀器：           島津SCL-10A prominence HPLC系統 進樣：           10 μL 流動相：       庚烷 : EtOH 80 : 20 + 0.1% Et2 NH，RT 流速：           1 mL/min 柱：              Chiralpak ID 5 μm 4.6 x 250 mm 檢測UV：     250 nm
C-HPLC 29 儀器：           島津Prominence HPLC系統 進樣：           10 μL 流動相：       正庚烷 : iPrOH + 0.1% Et2 NH 90 : 10 流速：           1 mL/min 柱：              Chiralcel AD-H 5 μm 4.6 x 250 mm，RT 檢測UV：     230 nm
C-SFC 30 儀器：           沃特世UPC2 分析型SFC（SFC-H） 柱：              Chiralpak AD，150 × 4.6mm I.D.，3 μm 流動相：       A為CO2 並且B為乙醇 + 0.05% Et2 NH 梯度：           B 5%-40% 流速：           2.5 mL/min 柱溫：           35°C 波長：           220 nm
C-HPLC 31 儀器：           島津Prominence HPLC系統 進樣：           10 μL 流動相：       庚烷 : iPrOH + 0.1% Et2 NH 80 : 20 流速：           1 mL/min 柱：              Chiralcel OD-H 5 μm 4.6 x 250 mm，RT 檢測UV：     250 nm
C-HPLC 33 儀器：           Gilson PLC2020 HPLC系統 流動相：       庚烷 : EtOH + 0.1% Et2 NH 80 : 20 流速：           1 mL/min 柱：              Chiralpak ID 5 μm 250 x 20 mm，25°C 檢測UV：     220 nm
C-HPLC 37 儀器：           Ultimate 3000 進樣：           0.5 μL 流動相：       庚烷 : EtOH +0.1% Et2 NH 70 : 30 流速：           0.42 mL/min 柱：              Chiralpak OJ-3 3 μm 3.0 x 100 mm，30°C 檢測UV：     265 nm
C-SFC 42 儀器：           沃特世UPC2 分析型SFC（SFC-H） 流動相：       CO2 : [EtOH + 0.05% Et2 NH] 梯度：           5%-40% B 流速：           2.5 mL/min 柱：              Chiralpak IC 3 μm 150 x 4.6 mm，35°C 檢測UV：     220 nm
C-SFC 43 儀器：           沃特世UPC2 分析型SFC（SFC-H） 流動相：       CO2 : [MeOH + 0.05% Et2 NH] 梯度：           5%-40% B 流速：           2.5 mL/min 柱：              Chiralpak IC 3 μm 150 x 4.6 mm，35°C BPR：           100巴 檢測UV：     220 nm
C-HPLC 44 儀器：           安捷倫1200 HPLC系統 進樣：           10 μL 流動相：       庚烷 : EtOH : [MeOH + 0.1% Et2 NH] 80 : 10 : 10 流速：           1 mL/min 柱：              Chiralpak AD 20 μm 4.6 x 250 mm，RT 檢測UV：     225 nm
C-HPLC 45 儀器：           安捷倫1200 DAD 流動相：       庚烷 : MeOH（+ 0.1% Et2 NH] 洗脫液：       等度80 : 20 流速：           1.0 mL/min 柱：              Chiralpak AD-H 檢測UV：     220 nm
C-HPLC 47 儀器：           安捷倫1200 DAD Magellan系統 進樣：           5 μL 流動相：       庚烷 : EtOH : MeOH + 0.1% Et2 NH 90 : 5 : 5 流速：           1 mL/min 柱：              Chiralcel OD-H 5 μm 4.6 x 250 mm，RT 檢測UV：     225 nm
C-HPLC 49 流動相：       庚烷 : EtOH : MeOH 洗脫液：       等度70 : 15 : 15 流速：           1.0 mL/min 柱：              Chiralpak IC 檢測UV：     225 nm
C-SFC 50 流動相：       CO2 : EtOH（1% iPrNH2 ） 梯度：           70 : 30等度 流速：           4 mL/min 柱：              Chiralcel ID 4.6 μm 250 x 4.6 mm，40°C 檢測UV：     220 nm製備型方法：
正相層析法：
除非另有說明，否則正相層析法是在使用矽膠的預填充柱（如下所述）上進行的，或者是根據標準快速層析法使用玻璃柱進行的。 系統1             泰裡迪尼愛斯科公司（Teledyne ISCO），CombiFlash Rf 系統2             Biotage Isolera 柱                  預填充的RediSep Rf柱，或SNAP柱 樣本吸附       在Isolute上，或在矽膠上，或作為溶液使用
超臨界流體層析法SFC 1：
在帶有沃特世2998光電二極體陣列檢測器和沃特世MS單四極桿檢測器的沃特世製備型SFC-100-MS系統上進行純化。 修飾劑           甲醇 壓力              120巴 柱溫              40°C 流速              100 g/min
逆相 HPLC ：
RP-HPLC 1 系統              Gilson PLC 2020 柱                  Dr. Maisch Reprosil 100 C18 5 um；250 x 30 mm 柱溫              RT 洗脫液           A：水 + 0.1% TFA，B：乙腈
RP-HPLC 2 系統              沃特世 柱                  沃特世Sunfire C18，OBD 5 um；100 x 30 mm 柱溫              RT 洗脫液           A：水 + 0.1% TFA，B：乙腈 流速              40 mL/min 標準梯度       在20 min內5%至100% B，並且在100%下平穩持續1 min
RP-HPLC 3 系統              沃特世 柱                  沃特世X-Bridge C18，OBD 5 um；100 x 30 mm 柱溫              RT 洗脫液           A：水 + 7.3 mM NH4 OH，B：乙腈 + 7.3 mM NH4 OH 流速              40 mL/min 標準梯度       在20 min內5%至100% B，並且在100%下平穩持續1 min
RP-HPLC 6 系統              Macherey + Nagel Nucleodur Sphinx RP（5 μm，10 x 250 mm） 柱溫              20°C 洗脫液           等度使用溶劑，A：0.1% TFA水溶液；B：0.1% TFA乙腈溶液；0 min 57% B；13 min 57% B；13.5 min 100% B；21 min 100% B；21.5 min 57% B 流速              4.7 ml/min 檢測UV         254 nm和240 nm
固體樣本 ：使用以下儀器和方法分析固體。
TGA 方法
儀器： TA Discovery/Q5000
溫度範圍 在30°C下平衡；以10°C/min的速度上升至300°C
掃描速度 10°C/min
氮流 20 mL/min
樣本品質 約2 mg
DSC 方法
儀器： TA Q2000
溫度範圍 在30°C下平衡； 以10°C/min的速度上升至300°C
掃描速度 10°C/min
氮流 50 mL/min
樣本品質 約2 mg
XRPD 方法（ CPP ）
儀器： Bruker D8 Advance
檢測器 VANTEC -500（1D模式）
輻射 CuKα（0.15406 nm）
X射線發生器功率 40 kV、40 mA
步長、解析度 0.02度
掃描範圍 3°至45°（2θ值）
掃描時間 4.50 min
源狹縫 初級狹縫：0.6 mm，二級狹縫：5 mm，軸向索拉（soller）：2.5°
DVS
儀器： 固有/優點/SPS100n
樣本品質 2-5 mg
溫度                                  25°C
方法 2個週期，dm/dt = 0.005，從50%RH到90%RH，從90%RH到0%RH，從0%RH到90%RH，從90%RH到50%RH。
NMR
儀器： Bruker AVANCE III 400MHZ
探針 5 mm PABBO BB-1H/D Z-GRD Z108618/0226
溫度 295.7 K
鬆弛時間 1秒
     
儀器： 600 MHz Brucker Ultrashield儀器
  
UPLC 方法   
儀器： 沃特世Acquity UPLC
柱化學 ACQUITY UPLC BEH C18
柱製造 沃特世
細微性（um） 1.7
尺寸（mm） 2.1 x 100
柱溫（°C） 30
流速（mL/分鐘） 0.50
進樣體積（uL） 1
樣本溶劑 乙腈/水（80 : 20）
樣本濃度（μg/mL） 300
波長（nm） 248
流動相A 在95%水/5%乙腈中的0.05% TFA
流動相B 在95%乙腈/5%水中的0.05% TFA
執行時間（分鐘） 12
梯度 % B 分鐘
   5 初始
   95 9.0
   95 10.0
   5 10.1
   5 12.0
縮寫：
縮寫 描述
AcCN 乙腈
aq 水性
Ar 氬氣
BPR 背壓
鹽水 飽和氯化鈉水溶液
cataCXium a Pd G3 [(二(1-金剛烷基)-丁基膦)-2-(2′-胺基-1,1′-聯苯)]甲磺酸鈀(II)
(S ,R ,R )-Chenphos 1-二環己基膦基-1′-{(R )-{(R P )-2-[(S )-1-(二甲基胺基)乙基]二茂鐵基}苯基膦基}二茂鐵
conc 濃縮的
C-Phos 2-二環己基膦基-2′,6′-雙(N,N-二甲基胺基)聯苯
DAST (二乙基胺基)三氟化硫
dba 二亞苄基丙酮
DCM 二氯甲烷
DEA 二乙醇胺
DIPEA N ,N -二異丙基乙胺，N -乙基-N -異丙基丙-2-胺
DMA N ,N -二甲基乙醯胺
DMAP 4-二甲基胺基吡啶
DMF N ,N -二甲基甲醯胺
DMSO 二甲亞碸
DMSO-d6 六氘代二甲基亞碸
dppf 1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵
DSC 差示掃描量熱法
ee 鏡像異構物過量
ESI-MS 電灑遊離質譜
h、hr 小時
HPLC 高效液相層析法
IPA 2-丙醇
IPAC 乙酸異丙酯
L/mL 升/毫升
LDA 二異丙基醯胺鋰
LC-MS 液相層析法和質譜法
LHMDS 六甲基二矽疊氮化鋰
M 莫耳
min 分鐘
mp 熔點
MTBE 甲基三級丁醚
MW、mw 微波
m/z 質荷比
NaOtBu 三級丁醇鈉
NBS N-溴琥珀醯亞胺
ORTEP 橡樹嶺（Oak Ridge）熱橢球圖
n-BuLi 正丁基鋰
NEt3 ，Et3 N 三乙胺
NMP N -甲基吡咯啶酮
NMR 核磁共振
org 有機
Rh2 (esp)2 雙[銠(α,α,α′,α′-四甲基-1,3-苯二丙酸)]
Rh(NBD)2 BF4 雙(降冰片二烯)銠(I)四氟硼酸鹽
RM或rm 反應混合物
RP 逆相
RPM 每分鐘轉數
RT 室溫
sat 飽和的
SFC 超臨界流體層析法
TBAF 四丁基氟化銨
TBME 2-甲氧基-2-甲基丙烷
TFA 三氟乙酸
THF 四氫呋喃
TPGS-750-M H2O中的DL-α-生育酚甲氧基聚乙二醇琥珀酸酯溶液2 wt%
Rt 滯留時間（如果未指明，單位為分鐘）
UPLC 超高效液相層析法
XRPD X射線粉末繞射
以下實例旨在說明本發明，而不應被解釋為對其的限制。溫度以攝氏度給出。如果沒有另外提及，所有蒸發都在減壓下進行，典型地在約15 mm Hg與100 mm Hg（= 20-133毫巴）之間。使用的縮寫為本領域中常規縮寫。
用於合成本發明化合物的所有起始物質、結構單元、試劑、酸、鹼、脫水劑、溶劑和催化劑係可商購獲得的或可藉由熟悉該項技術者已知的有機合成方法製備。此外，本發明之化合物可以藉由熟悉該項技術者已知的有機合成方法生產，如以下實例所示。最終化合物的製備
實例1：(S )-5'-溴-8-(二氟甲氧基)-4'-氟-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-茚]
Figure 02_image038
將(S )-5'-溴-8-(二氟甲氧基)-4'-氟-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-茚]（中間體G，12.5 g，21.5 mmol）溶解於Ar沖洗的燒瓶中的甲苯（100 mL）中。逐滴添加甲苯（10 mL）中的SOCl2 （9.89 mL，135 mmol），並且將RM加熱至80°C，持續2小時。將RM在TBME（100 mL）、EtOAc（100 mL）、MeOH（100 mL）和NaHCO3 飽和水溶液（200 mL）之間分配。將水層用EtOAc萃取，然後將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥並蒸發。將粗產物吸附在Isolute上並藉由正相層析法（2 x 120 g SiO2 柱；洗脫液：己烷 : [DCM : MeOH 5 : 1] 100 : 0至50 : 50）純化，然後藉由逆相層析法（RP-HPLC 1）純化。將含有級分的產物合併，並且將AcCN藉由蒸發除去。將剩餘的主要係水性的溶液用固體NaHCO3 處理直至鹼性，然後用DCM萃取3x。將有機層合併，經Na2 SO4 乾燥，並且蒸發以給出呈黃色固體的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.97 (s, 1H), 7.57 - 7.12 (m, 2H), 7.07 (d, 1H), 6.98 (s, 1H), 4.27 (q, 2H), 3.06 - 2.88 (m, 2H), 2.29 - 2.19 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 0.91 min；MS m/z [M+H]+ 453/455；UPLC-MS 1。
實例2：(S )-8-(二氟甲氧基)-4',5'-二氟-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-茚]
Figure 02_image040
將(S )-(1-胺基-4,5-二氟-2,3-二氫-1H -茚-1-基)甲醇（中間體K，504 mg，2.53 mmol）、2-氯-3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶（中間體A，1.38 g，5.56 mmol）、CuI（337 mg，1.77 mmol）、K3 PO4 （1.01 g，5.06 mmol）和DMF（1.8 mL）的混合物在微波中在160°C下加熱1小時。將RM冷卻並且添加另外的CuI（337 mg，1.77 mmol），然後在160°C下再加熱1小時。將甲苯（1.8 mL）和SOCl2 （922 μL，12.64 mmol）添加至冷卻的RM中，然後將其在80°C下加熱40 min。然後將冷卻的RM用EtOAc稀釋，將有機相用NaHCO3 飽和水溶液和鹽水洗滌，並且將有機層蒸發，並在高真空下維持1小時。然後將殘餘物吸收到DCM中，並且將有機相用NaHCO3 飽和水溶液和鹽水洗滌（相分離筒），然後蒸發。將粗產物藉由正相層析法（25 g SiO2 SNAP柱，洗脫液：己烷 : EtOAc 100 : 0至75 : 25）純化，然後藉由逆相層析法（RP-HPLC 3，梯度：經20 min，30%至70% B）純化，並且從MeOH中結晶，給出呈黃色粉末的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, MeOH-d 4 ) δ 7.81 (s, 1H), 7.00 - 7.08 (m, 1H), 6.97 (s, 1H), 6.67 - 7.24 (m, 2H), 4.22 - 4.45 (m, 2H), 3.08 - 3.19 (m, 1H), 2.88 - 3.05 (m, 1H), 2.23 - 2.51 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 0.71 min；MS m/z [M+H]+ 393.0；UPLC-MS 1。
實例3：(S )-8'-(二氟甲氧基)-3,6'-雙(三氟甲基)-5,6-二氫-3'H -螺[環戊并[c ]吡啶-7,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image042
向50 mL燒瓶中裝入(S )-3,6'-雙(三氟甲基)-5,6-二氫-3'H -螺[環戊并[c]吡啶-7,2'-咪唑并[1,2-a]吡啶]-8'-醇（中間體M，50 mg，133 μmol）、KOH（4.1 M，114 μL，466 μmol）水溶液和DCM（6 mL）。使用冰浴將RM冷卻至0°C，並且逐滴添加(溴二氟甲基)三甲基矽烷（27 μL，173 μmol）。將RM在0°C下攪拌5 min，然後用水淬滅並且用乙酸乙酯萃取。將有機層依次用鹽水洗滌，經相分離器乾燥並且在真空中濃縮。將粗混合物藉由逆相層析法（RP HPLC 3）純化。將含有產物的級分合併並凍乾以得到標題化合物。
1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d6 ): δ 8.69 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.52-7.15 (t, 1H), 7.03 (s, 1H), 4.44 - 4.35 (q, 2H), 3.13 - 2.98 (m, 2H), 2.31 - 2.28 (t, 2H)。
LC-MS：Rt = 2.95 min；MS (m/z ) = [M+H]+ 426.2；UPLC-MS 4。
實例4：(S )-5'-溴-8-(二氟甲氧基)-4'-氟-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-茚]-6-甲腈
Figure 02_image044
向(S )-(1-胺基-5-溴-4-氟-2,3-二氫-1H -茚-1-基)甲醇（中間體J，50.0 mg，0.19 mmol）在DMF（1.80 mL）中之溶液中添加6-氯-5-(二氟甲氧基)菸鹼甲腈（中間體B，89.0 mg，0.30 mmol）、K3 PO4 （81.0 mg，0.38 mmol）和CuBr（8.19 mg，0.06 mmol），並且將RM在120°C下在微波中攪拌2.5小時。將RM在TBME和H2 O之間分配，並且將各層分離。將水層用TBME洗滌，然後將合併的有機層用鹽水洗滌，用Na2 SO4 乾燥，過濾並蒸發。將殘餘物溶解於MeOH中，並且藉由SFC（SFC 1）純化。將含有級分的產物合併並且蒸發，以給出呈黃色泡沫的標題化合物。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.21 (d, 1H), 7.58 - 7.53 (m, 1H), 7.32 (t, 1H), 7.11 - 7.05 (m, 2H), 4.36 - 4.25 (m, 2H), 3.07 - 2.92 (m, 2H), 2.34 - 2.22 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 0.76 min；MS m/z [M+H]+ 409.9/411.9；UPLC-MS 1。
實例5：(S )-5'-溴-4'-氟-8-(氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-茚]
Figure 02_image046
將(S )-5-溴-4-氟-3'-(3-(氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2,3-二氫螺[茚-1,4'-㗁唑啶]-2'-酮（中間體N，40 mg，62 μmol）在4 M NaOH水溶液（0.154 mL，618 μmol）和EtOH（2 mL）中之溶液在80°C下攪拌20 min。將冷卻的RM用EtOAc稀釋，並且將有機層用NaHCO3 飽和水溶液洗滌，使用相分離器將各層分離並且濃縮。將殘餘物再次溶解於甲苯（2 mL）中並添加SOCl2 （6.76 µl，0.093 mmol），並且將RM在80°C下加熱20 min。冷卻後，將RM用MeOH淬滅，濃縮，在EtOAc和NaHCO3 飽和水溶液之間分配，將有機層乾燥並濃縮。將殘餘物藉由逆相層析法（RP-HPLC 3）純化，並且將含有級分的產物合併並蒸發以給出呈黃色固體的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.90 (s, 1H), 7.55 (t, 1H), 7.07 (d, 1H), 6.78 (s, br, 1H), 5.89 (d, 2H), 4.34 - 4.35 (m, 2H), 3.09 - 2.91 (m, 2H), 2.32 - 2.22 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 3.25 min；MS m/z [M+H]+ 435.1/437.1；UPLC-MS 4。
實例6：(S )-8-(二氟甲氧基)-5',6-雙(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-茚]
Figure 02_image048
向(S )-5',6-雙(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-茚]-8-醇（中間體Q，138 mg，369 μmol）在DCM（1 mL）中之溶液（用冰浴冷卻）中添加KOH（20%在水中，352 μL，1.25 mmol）和(溴二氟甲基)三甲基矽烷（82 mg，396 μmol）。將RM在0°C下攪拌30 min，用DCM稀釋，將有機相用H2 O洗滌並且然後用鹽水洗滌，藉由穿過相分離筒分離並且濃縮。藉由逆相層析法（RP-HPLC 3）純化，隨後將含有級分的產物凍乾，用MeOH稀釋並蒸發以給出呈黃色固體的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, MeOH-d 4 ) δ7.82 (s, 1 H), 7.49 - 7.66 (m, 2H), 7.43 (d, 1H), 6.99 (s, 1H), 6.95 (br t, 1 H), 4.22 - 4.51 (m, 2H), 3.08 - 3.22 (m, 1H), 2.93 - 3.07 (m, 1H), 2.24 - 2.52 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 3.66 min；MS m/z [M+H]+ 424.2；UPLC-MS 4。
實例7：(S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]
Figure 02_image050
將(S )-(1-胺基-6-溴-5-氟-1,2,3,4-四氫化萘-1-基)甲醇（中間體R，1.0 g，3.61 mmol）、2-氯-3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶（中間體A，1.81 g，7.22 mmol）、CuBr（264 mg，1.81 mmol）、K3 PO4 （1.53 g，7.22 mmol）、和DMF（12 mL）的混合物在氬氣下在微波中在140°C下加熱7小時。將冷卻的RM用NaHCO3 飽和水溶液稀釋，並用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並蒸發。將殘餘物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（120 g SiO2 柱；洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至75 : 25）純化。將含有級分的產物合併，並且蒸發以給出棕色的固體，將該棕色的固體溶解於甲苯（10.5 mL）中並且添加SOCl2 （0.17 mL，2.33 mmol）。將RM加熱至70°C，持續45 min。將RM用NaHCO3 飽和水溶液淬滅，並用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，並蒸發。將殘餘物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（80 g SiO2 柱，洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至75 : 25）純化。將含有級分的產物合併，蒸發並乾燥以給出呈黃色固體的標題化合物。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.93 (s, 1H), 7.53 - 7.45 (m, 1H), 7.32 (d, 1H), 7.07 (d, 1H), 7.01 (s, 1H), 4.22 (d, 1H), 4.07 (d, 1H), 2.83 - 2.75 (m, 1H), 2.75 - 2.67 (m, 1H), 1.96 (s, 1H), 1.85 (dd, 2H), 1.72 (s, 1H)。
LC-MS：Rt = 0.87 min；MS m/z [M+H]+ 467.1/469.1；UPLC-MS 1。
實例8：(S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-6-(三氟甲基)-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'(3'H )-酮
Figure 02_image052
將水（6 mL）添加至(S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H ,4'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'-酮（中間體S，2.66 g，4.58 mmol）在丙酮（60 mL）中之溶液中，並且將RM冷卻至0°C。添加NBS（6.52 g，36.7 mmol）並且將RM在0°C下攪拌5 min，然後用硫代硫酸鈉飽和水溶液淬滅，然後用NaHCO3 飽和水溶液鹼化並用EtOAc萃取2x。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥並蒸發。將殘餘物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（80 g SiO2 柱，洗脫液：DCM : MeOH 100 : 0至95 : 5）純化。將含有級分的產物合併並且蒸發，以給出呈橙色固體的標題化合物。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.03 - 7.88 (m, 2H), 7.54 - 7.23 (m, 2H), 7.07 (s, 1H), 4.44 (d, 1H), 4.18 (d, 1H), 2.77 (dtq, 2H), 2.24 (dtd, 2H)。
LC-MS：Rt = 0.76 min；MS m/z [M+H]+ 480.9/482.9；UPLC-MS 1。
實例9：(1'S ,3'R )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-3',5'-二氟-6-(三氟甲基)-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'(3'H )-酮
Figure 02_image054
在氬氣下，將(S )-6'-溴-4'-((三級丁基二甲基矽基)氧基)-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-6-(三氟甲基)-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]（中間體U，137 mg，228 μmol）溶解於AcCN（2 mL）中。將RM冷卻至0°C並且添加Selectfluor® （89 mg，251 μmol）。將RM在0°C下攪拌30 min，然後在RT下攪拌1.3小時。將RM用NaHCO3 飽和水溶液淬滅並用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥並蒸發。將殘餘物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（40 g SiO2 柱，洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至75 : 25）純化。將含有級分的產物合併，蒸發並經受SFC（SFC 1）。將含有級分的產物蒸發以給出作為第一洗脫峰的(1'S ,3'S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-3',5'-二氟-6-(三氟甲基)-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'(3'H )-酮，Rt 5.86 min（SFC 1）。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.03 - 7.97 (m, 2H), 7.36 (t, 1H), 7.26 (d, 1H), 7.13 (s, 1H), 5.61 (ddd,1H), 4.69 (d, 1H), 4.03 (d, 1H), 2.75 - 2.67 (m, 1H), 2.49 - 2.41 (m, 1H)。
LC-MS：Rt = 0.98 min；MS m/z [M+H]+ 499.0/500.9；UPLC-MS 1。
獲得作為第二洗脫峰的(1'S ,3'R )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-3',5'-二氟-6-(三氟甲基)-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'(3'H )-酮，Rt 8.32 min（SFC 1）。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.07 (d, 1H), 7.99 - 7.95 (m 1H), 7.32 (t, 1H), 7.28 (d, 1H), 7.06 (d, 1H), 5.86 - 5.63 (m, 1H), 4.61 (d, 1H), 4.28 (d, 1H), 2.72 - 2.54 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 0.89 min；MS m/z [M+H]+ 499.0/500.9；UPLC-MS 1。
實例10 (1'S ,3'R ,4'S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-3',5'-二氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'-醇
Figure 02_image056
將(1'S ,3'R )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-3',5'-二氟-6-(三氟甲基)-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'(3'H )-酮（實例9，60 mg，118 μmol）溶解於EtOH（2 mL）中。將RM冷卻至0°C並且添加四氫硼酸鈉（5.11 mg，0.13 mmol）。將RM在0°C下攪拌30 min。將RM用2 M HCl水溶液淬滅並且在RT下攪拌5 min，用NaHCO3 飽和水溶液鹼化並用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥並蒸發。將殘餘物藉由SFC（SFC 1）純化，並且將含有級分的產物蒸發以給出作為第一洗脫峰的(1'S ,3'R ,4'R )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-3',5'-二氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'-醇，Rt 6.06 min。（SFC 3）。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.93 (s, 1H), 7.63 (t, 1H), 7.36 (t, 1H), 7.05 (d, 2H), 6.07 (d, 1H), 4.96 (dt, 2H), 4.83 (d, 1H), 4.39 (d, 1H), 4.03 (d, 1H), 2.39 (d, 1H), 2.15 (q, 1H)。
LC-MS：Rt = 0.74 min；MS m/z [M+H]+ 501.1/503.1；UPLC-MS 1。
獲得作為第二洗脫峰的(1'S ,3'R ,4'S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-3',5'-二氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'-醇，Rt 7.79 min。（SFC 3）。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.91 (s, 1H), 7.66 (t, 1H), 7.36 (t, 1H), 7.14 - 6.95 (m, 2H), 5.79 (d, 1H), 5.06 (s, 1H), 4.88 (dd, 1H), 4.42 (d, 1H), 3.84 (d, 1H), 2.09 (t, 1H)。
LC-MS：Rt = 0.74 min；MS m/z [M+H]+ 501.0/503.0；UPLC-MS 1。
實例11：(S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]
Figure 02_image058
將(S )-6'-溴-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-8-醇（中間體W，305 mg，764 μmol）溶解於DCM（7 mL）中並且冷卻至0°C。將KOH水溶液（20%，0.4 mL，1.64 mmol）添加至RM中，隨後添加至(溴二氟甲基)三甲基矽烷（127 μL，802 μmol）中。將RM在0°C下攪拌10 min，然後用DCM稀釋並用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥並且蒸發。將殘餘物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（40 g SiO2 柱，洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至75 : 25）純化。將含有級分的產物合併並且蒸發，以給出標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.05 - 7.80 (br, m, 1H), 7.34 - 6.90 (br, m, 4H), 7.32 (t, 1H), 4.30 - 3.96 (br, m, 2H), 2.79 - 2.72 (m, 2H), 1.98 - 1.62 (br, m, 4H)。
LC-MS：Rt = 0.85 min；MS m/z [M+H]+ 449.1/451.1；UPLC-MS 1。
實例12：(S )-8-(二氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]
Figure 02_image060
將(S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]（實例11，43 mg，85 μmol）溶解於MeOH : THF（1 : 1）溶液中並且添加5% Pd/C（20 mg）。將RM在正氫氣壓力（0.1巴）下在RT下攪拌10.5小時。用N2 沖洗後，將RM通過矽藻土墊過濾，用MeOH洗滌，並且將濾液蒸發。將殘餘物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（24 g SiO2 柱，洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至75 : 25）純化。將含有級分的產物合併並且蒸發，以給出呈黃色薄膜的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.91 (s, 1H), 7.59 - 7.98 (m, 6H), 4.30 - 3.98 (m, 2H), 2.77 (t, 2H), 1.97 - 1.83 (m, 3H), 1.73 (dt, 1H)。
LC-MS：Rt = 0.76 min；MS m/z [M+H]+ 371.2；UPLC-MS 1。
實例13：(S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6-甲腈
Figure 02_image062
在Ar下，向微波小瓶中裝入(S )-(1-胺基-6-溴-5-氟-1,2,3,4-四氫化萘-1-基)甲醇（中間體R，1.5 g，5.42 mmol）、6-氯-5-(二氟甲氧基)菸鹼甲腈（中間體B，2.22 g，10.8 mmol）、K3 PO4 （2.3 g，10.8 mmol）、CuBr（0.389 g，2.65 mmol）和DMF（15 mL）。將RM在微波中在120°C下加熱145 min，用NaHCO3 飽和水溶液稀釋並且用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並蒸發。將殘餘物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（120 g SiO2 柱，洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至70 : 30）純化。將含有級分的產物合併並且蒸發，以給出呈黃色固體的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.12 (s, 1H), 7.57 - 6.97 (m, 4H), 4.35 - 3.92 (m, 2H), 2.72 (dt, 2H), 1.84 (dt, 4H)。
LC-MS：Rt = 0.82 min；MS m/z [M+H]+ 424.2/426.2；UPLC-MS 1。
實例14：(S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-4',4',5'-三氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]
Figure 02_image064
將NIS（194 mg，861 μmol）在Ar下懸浮於DCM（3 mL）中並且冷卻至-78°C。向RM中逐滴添加吡啶氫氟化物（107 μL，861 μmol；70%），隨後逐滴添加(S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -二螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘-4',2''-[1,3]二硫環戊烷]（中間體S，120 mg，215 μmol）在DCM（5 mL）中之溶液。將RM在-78°C下攪拌4.5小時，然後用EtOAc稀釋並用硫代硫酸鈉飽和水溶液淬滅，並且用EtOAc萃取2x。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並蒸發。將殘餘物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（40 g SiO2 柱；洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至50 : 50）純化。經含有級分的產物合併並蒸發，並且進一步藉由SFC（SFC 1）純化，並且將含有級分的產物蒸發並乾燥以給出標題化合物。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.97 (s, 1H), 7.87 (t, 1H), 7.49 - 7.21 (m, 2H), 7.06 (s, 1H), 4.36 (d, 1H), 4.21 (d, 1H), 2.58 (d, 1H), 2.38 (s, 1H), 2.09 (s, 1H), 2.03 (t, 1H)。
LC-MS：Rt = 0.94 min；MS m/z [M+H]+ 503.0/505.0；UPLC-MS 1。
實例15：(S )-8-(二氟甲氧基)-4',4',5'-三氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6'-甲腈
Figure 02_image066
在Ar下，向微波小瓶中裝入(S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-4',4',5'-三氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]（實例14，160 mg，312 μmol）、XPhos Pd G3（26.4 mg，31 μmol）、XPhos（30.3 mg，62 μmol）、六氰基高鐵酸鉀(II)（65.8 mg，156 μmol）、乙酸鉀（6.12 mg，62 μmol）和1,4-二㗁𠮿（1.5 mL）和水（1.5 mL）。將RM在微波中在100°C下加熱1.5小時，用NaHCO3 飽和水溶液稀釋並且用EtOAc萃取2x。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並蒸發。將殘餘物用THF稀釋並添加SiliaMetS® 硫醇（0.212 mmol，150 mg，細微性：40-63 µm，載量1.41 mmol/g，Silicycle），並且將RM在40°C下攪拌1小時。將RM過濾，用THF洗滌並且將濾液蒸發。將殘餘物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（SiO2 柱；洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至75 : 25）純化。將含有級分的產物合併，並且蒸發。將殘餘物用己烷研磨，過濾，並且乾燥以給出呈黃色固體的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.08 (t, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.56 - 7.13 (m, 2H), 7.08 (s, 1H), 4.38 (d, 1H), 4.25 (d, 1H), 2.60 (s, 2H), 2.13 (d, 1H), 2.05 (d, 1H)。
LC-MS：Rt = 0.87 min；MS m/z [M+H]+ 450.1；UPLC-MS 1。
實例16：(S )-6'-溴-8-氯-5'-氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]
Figure 02_image068
在Ar下，將(S )-(6-溴-1-((3-氯-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-5-氟-1,2,3,4-四氫化萘-1-基)甲醇（中間體P1，215 mg，427 μmol）溶解於甲苯（2 mL）中並且添加SOCl2 （0.05 mL，685 μmol）。將RM加熱到80°C，持續1小時，冷卻，然後用NaHCO3 飽和水溶液淬滅並且用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並蒸發。將殘餘物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（40 g SiO2 柱；洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至70 : 30）純化。將含有級分的產物合併，並且蒸發。將殘餘物用幾滴EtOAc溶解於Et2 O中，然後添加庚烷。將所得溶液保存在冰箱中在4°C持續18小時。將沈澱的雜質藉由過濾除去。將母液蒸發並且將剩餘的固體乾燥以給出呈黃色泡沫的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.00 (s, 1H), 7.57 - 7.39 (m, 2H), 7.05 (d, 1H), 4.20 (dd, 2H), 2.86 - 2.63 (m, 2H), 2.05 - 1.92 (m, 1H), 1.92 - 1.77 (m, 2H), 1.77 - 1.63 (m, 1H)。
LC-MS：Rt = 0.82 min；MS m/z [M+H]+ 435.1/437.1；UPLC-MS 1。
實例17：(S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-3',3',5'-三氟-6-(三氟甲基)-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'(3'H )-酮
Figure 02_image070
在Ar下，將(S )-6'-溴-4'-((三級丁基二甲基矽基)氧基)-8-(二氟甲氧基)-3',5'-二氟-6-(三氟甲基)-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]（中間體X，177 mg，274 μmol）溶解於AcCN（5 mL）中。將RM冷卻至0°C並且添加Selectfluor® （126 mg，356 μmol）。將RM在RT下攪拌5小時，然後用NaHCO3 飽和水溶液淬滅並且用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並蒸發。將殘餘物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（24 g SiO2 柱；洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至75 : 25）純化。將含有級分的產物合併並蒸發，並且乾燥以給出標題化合物。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.11 (dd, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.49 - 7.21 (m, 2H), 7.15 (d, 1H), 4.54 (d, 1H), 4.21 (d, 1H), 3.10 - 2.95 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 1.08 min，寬峰；MS m/z [M+H]+ 516.9/518.9；UPLC-MS 1。
實例18和19：(1'S ,4'S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-3',3',5'-三氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'-醇和(1'S ,4'R )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-3',3',5'-三氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'-醇
Figure 02_image072
在Ar下，將(S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-3',3',5'-三氟-6-(三氟甲基)-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a]吡啶-2,1'-萘]-4'(3'H )-酮（實例17，116 mg，213 μmol）溶解於EtOH（5 mL）中。將RM冷卻至0°C並且添加硼氫化鈉（9.2 mg，234 μmol）。將RM在0°C下攪拌1小時，然後用4滴2 M HCl 水溶液淬滅並且將RM在RT下攪拌5 min。將RM用NaHCO3 飽和水溶液稀釋並用EtOAc萃取2x。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並蒸發。將殘餘物藉由SFC（SFC 1）純化，並且將含有級分的產物合併並蒸發以給出作為第一洗脫峰的(1'S ,4'S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-3',3',5'-三氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'-醇，Rt 7.54 min（SFC 1）。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.97 (q, 1H), 7.73 (dd, 1H), 7.35 (t, 1H), 7.15 (dd, 1H), 7.11 (d, 1H), 6.69 (d, 1H), 4.87 - 4.81 (m, 1H), 4.46 (d, 1H), 3.95 (d, 1H), 2.69 - 2.53 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 0.86 min；MS m/z [M+H]+ 518.9/520.9；UPLC-MS 1。
獲得作為第二洗脫峰的(1'S ,4'R )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-3',3',5'-三氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'-醇，Rt 8.80 min（SFC 1）。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.01 (q, 1H), 7.70 (dd, 1H), 7.34 (t, 1H), 7.12 (dd, 1H), 7.06 (d, 1H), 6.54 (d, 1H), 4.99 - 4.93 (m, 1H), 4.41 (d, 1H), 4.25 (d, 1H), 2.76 - 2.66 (m, 1H), 2.53 - 2.43 (m, 1H)。
LC-MS：Rt = 0.77 min；MS m/z [M+H]+ 519.0/521.0；UPLC-MS 1。
實例20和21：(1'S ,3'R )-8-(二氟甲氧基)-3',5'-二氟-6-(三氟甲基)-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'(3'H )-酮和(1'S ,3'R )-8-(二氟甲氧基)-3',5'-二氟-6-(三氟甲基)-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'(3'H )-酮
Figure 02_image074
在Ar下，將Selectfluor® （1.64 g，4.62 mmol）添加至AcCN（40 mL）中的(S )-4'-((三級丁基二甲基矽基)氧基)-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-6-(三氟甲基)-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]（中間體AB，2.05 g，3.85 mmol）中並且冷卻至0°C。將RM在0°C下攪拌3.5小時，然後用NaHCO3 飽和水溶液淬滅並且用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並蒸發。將殘餘物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（120 g SiO2 柱；洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至70 : 30）純化。將含有級分的產物合併並且蒸發，以給出標題化合物。將非對映立體異構物藉由手性HPLC：（儀器：Gilson Trilution I系統；柱：Lux Cellulose-5，5 μM 250 x 30 mm，25°C；洗脫液：正庚烷（用MeOH飽和）/iPrOH 8 : 2；檢測: UV 230 nm；流速20 mL/min；進樣體積1.0 mL）分離以給出作為第二洗脫峰的(1'S ,3'R )-8-(二氟甲氧基)-3',5'-二氟-6-(三氟甲基)-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'(3'H )-酮，Rt 8.8 min（C-HPLC-18）。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.99 (s, 1H), 7.71 (m, 1H), 7.57 - 7.22 (m, 3H), 7.12 (s, 1H), 5.61 (m, 1H), 4.69 (d, 1H), 4.03 (d, 1H), 2.71 (m, 1H), 2.47 - 2.38 (m, 1H)。
LC-MS：Rt = 0.68 min；MS m/z [M+H]+ 421.0；UPLC-MS 1。
獲得作為第一洗脫峰的(1'S ,3'S )-8-(二氟甲氧基)-3',5'-二氟-6-(三氟甲基)-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'(3'H )-酮，Rt 4.9 min（C-HPLC-18）。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.08 (s, 1H), 7.70 (td, 1H), 7.58 - 7.17 (m, 3H), 7.06 (s, 1H), 5.69 (m, 1H), 4.64 (d, 1H), 4.29 (d, 1H), 2H 由於溶劑峰未指定。
LC-MS：Rt = 0.77 min；MS m/z [M+H]+ 421.0；UPLC-MS 1。
實例22：(S )-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6'-甲腈
Figure 02_image076
在Ar下，向微波小瓶中裝入(S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]（實例7，245 mg，524 μmol）、XPhos Pd G3（44.4 mg，52 μmol）、XPhos（51 mg，105 μmol）、六氰基高鐵酸鉀(II)（111 mg，262 μmol）、乙酸鉀（6.4 mg，66 μmol）、1,4-二㗁𠮿（2 mL）和水（1 mL）。將RM在微波中在100°C下加熱1.5小時。將RM用NaHCO3 飽和水溶液稀釋並用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並蒸發。將殘餘物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（80 g SiO2 柱；洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至75 : 25）純化。將含有級分的產物合併，並且蒸發。將殘餘物溶解於MeOH（4 mL）中並且通過Stratosphere SPE PL-硫醇筒（500 mg/6mL；安捷倫科技公司（Agilent Technologies））過濾並且將濾液蒸發。將殘餘物藉由逆相層析法（RP-HPLC 2）再次純化。將含有級分的產物合併，並且在DCM和NaHCO3 飽和水溶液之間分配。將合併的有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾並且蒸發以給出呈黃色泡沫的標題化合物。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 , 用TFA添加劑) δ 8.76 (s, 1H), 8.22 (d, 1H), 7.90 (dd, 1H), 7.77 (d, 1H), 7.51 (t, 1H), 4.93 (d, 1H), 4.71 (d, 1H), 2.87 - 2.79 (m, 1H), 2.78 - 2.71 (m, 1H), 2.35 - 2.28 (m, 1H), 2.09 - 1.98 (m, 2H), 1.86 - 1.76 (m, 1H)。
LC-MS：Rt = 0.77 min；MS m/z [M+H]+ 414.2；UPLC-MS 1。
實例23：(S )-8-(二氟甲氧基)-4',4',5'-三氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]
Figure 02_image078
將NIS（261 mg，1.16 mmol）在Ar下懸浮於DCM（5 ml）中並且冷卻至-78°C。向RM中逐滴添加吡啶氫氟化物（0.144 mL，1.16 mmol），隨後逐滴添加(S )-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -二螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘-4',2''-[1,3]二硫環戊烷]（中間體Y，140 mg，0.29 mmol）在DCM（10 mL）中之溶液。將RM在78°C下攪拌4小時。將RM用EtOAc和硫代硫酸鈉飽和水溶液稀釋並用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並蒸發。將殘餘物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（40 g SiO2 柱；洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至80 : 20）純化。將含有級分的產物合併並蒸發，並且乾燥以給出呈黃色固體的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.96 (s, 1H), 7.62 - 7.13 (m, 4H), 7.04 (s, 1H), 4.36 (d, 1H), 4.22 (d, 1H), 2.64 - 2.27 (m, 2H), 2.10 1.95 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 0.78 min；MS m/z [M+H]+ 425.0；UPLC-MS 1。
實例24：(2S ,4'S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-4',5'-二氟-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6-甲腈和(2S ,4'R )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-4',5'-二氟-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6-甲腈
Figure 02_image080
在Ar下，將DAST（6.5 µL，48 μmol）添加至DCM（0.5 mL）（冷卻至-78°C）中的(1'S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-4'-羥基-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6-甲腈（中間體AC和AD，11 mg，24 μmol）中。將RM在RT下攪拌1小時，然後添加另外的DAST（6.5 µL，48 μmol），並且將RM在RT下再攪拌45 min。將RM用NaHCO3 飽和水溶液淬滅並用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並蒸發。將殘餘物藉由SFC（SFC 1）純化，並且將含有級分的產物蒸發以給出具有對HIF2 PAS-B結構域的最高親合力的第一洗脫的非鏡像異構物，其數據包括在活性表中。
LC-MS：Rt = 0.82 min；MS m/z [M+H]+ 442.0/444.0；UPLC-MS 1。
將第二洗脫的非鏡像異構物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（12 g SiO2 柱；洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至30 : 70）純化。將含有級分的產物合併，並且蒸發。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.13 (d, 1H), 7.79 - 7.72 (m, 1H), 7.31 (t, 1H), 7.14 - 7.09 (m, 2H), 5.86 (d, 1H), 4.33 (d, 1H), 3.85 (d, 1H), 2.26 - 1.95 (m, 3H), 1.88 - 1.80 (m, 1H)。
LC-MS：Rt = 0.78 min；MS m/z [M+H]+ 442.0/444.0；UPLC-MS 1。
實例25：(1'S ,4'S )-8-(二氟甲氧基)-4',5'-二氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6'-甲腈
Figure 02_image082
在Ar下在，將DAST（0.02 ml，151 μmol）添加至來自DCM（2 mL）（冷卻至-78°C）中的(S )-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-4'-側氧基-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a]吡啶-2,1'-萘]-6'-甲腈（中間體AE/AF，30 mg，68 μmol）的還原的第一洗脫的非對映立體異構物中。將RM在0°C下攪拌2.5小時，然後用NaHCO3 飽和水溶液淬滅並且用EtOAc萃取。將含有級分的產物合併並蒸發，並且將非對映立體異構物藉由SFC（SFC-1）分離以給出呈黃色固體的作為第一洗脫峰的標題化合物，Rt = 5.7 min。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.99 - 7.91 (m, 2H), 7.44 (d, 1H), 7.31 (t, 1H), 7.07 (d, 1H), 5.89 (dd, 1H), 4.36 (d, 1H), 3.88 (d, 1H), 2.31 - 2.20 (m, 1H), 2.18 - 1.98 (m, 2H), 1.94 - 1.87 (m, 1H)。
LC-MS：Rt = 0.79 min；MS m/z [M+H]+ 432.1；UPLC-MS 1。
獲得呈黃色固體的作為第二洗脫峰的(1'S ,4'R )-8-(二氟甲氧基)-4',5'-二氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6'-甲腈，Rt = 8.1 min。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.02 - 7.99 (m, 1H), 7.97 - 7.93 (m, 1H), 7.48 (d, 1H), 7.29 (t, 1H), 7.02 (d, 1H), 5.96 (d, 1H), 4.53 (d, 1H), 4.26 (d, 1H), 2.46 - 2.32 (m, 1H), 2.17 - 2.08 (m, 2H), 1.94 - 1.89 (m, 1H)。
LC-MS：Rt = 0.74 min；MS m/z [M+H]+ 432.1；UPLC-MS 1。
實例26：(S )-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6-甲腈
Figure 02_image084
向(S )-(1-胺基-5-氟-1,2,3,4-四氫化萘-1-基)甲醇（中間體AA，700 mg，3.59 mmol）、6-氯-5-(二氟甲氧基)菸鹼甲腈（中間體B，1.47 g，7.17 mmol）、碘化銅（205 mg，1.08 mmol）和磷酸鉀（1.52 g，7.17 mmol）在DMF（18 mL）中之溶液在140°C下在微波中加熱1.5小時。將RM倒入NaHCO3 飽和水溶液中並且用EtOAc萃取3x。將合併的有機萃取物用2x水洗滌，乾燥（相分離器）並蒸發。將粗材料溶解於THF（20 mL）中，添加SiliaMetS® 硫醇（細微性：40-63 µm，載量1.35 mmol/g，6.45 mmol，4.78 g）並且將混合物在40°C下渦旋1小時。將混合物過濾，並且將濾液蒸發。將粗殘餘物藉由正相快速層析法（120 g SiO2 柱，洗脫液：EtOAc : c-己烷 0 : 100至25 : 75）純化以給出呈黃色泡沫的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.14 (d, 1H), 7.30 (t, 1H), 7.22 (m, 1H), 7.07-7.03 (m, 2H), 7.06 (d, 1H), 4.22 (d, 1H), 4.09 (d, 1H), 2.77-2.72 (m, 1H), 2.69-2.64 (m, 1H), 1.97 (m, 1H), 1.90-1.82 (m, 2H), 1.73 (m, 1H)。
LC-MS：Rt = 2.51 min；MS m/z [M+H]+ 346.2；UPLC-MS 6。
實例27：d 2 -(S )-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6-甲腈
Figure 02_image086
向(S )-(1-胺基-5-氟-1,2,3,4-四氫化萘-1-基-4,4-d 2 )甲醇（中間體AG，22 mg，0.10 mmol）、6-氯-5-(二氟甲氧基)菸鹼甲腈（中間體B，39.7 mg，0.19 mmol）、碘化銅（5.54 mg，0.03 mmol）和磷酸鉀（41.2 mg，0.19 mmol）在DMF（0.5 mL）中之溶液在140°C下在微波中加熱1.5小時。將RM倒入NaHCO3 飽和水溶液中並且用3x EtOAc萃取。將合併的有機萃取物用水洗滌2x，乾燥（相分離器）並蒸發。將粗殘餘物溶解於THF（2 mL）中，添加SiliaMetS® 硫醇（細微性：40-63 µm，載量1.35 mmol/g，0.09 mmol，64 mg）並且將混合物在40°C下渦旋1小時。將混合物過濾，用THF洗滌並且將濾液蒸發。將粗產物藉由逆相製備型HPLC（RP-HPLC 2）純化，將含有級分的產物用NaHCO3 飽和水溶液中和，用DCM萃取並且蒸發。將殘餘物再次藉由逆相製備型HPLC（RP-HPLC 3）純化，並且將含有級分的產物用DCM萃取並蒸發以給出呈黃色泡沫的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.14 (s, 1H), 7.30 (t, 1H), 7.23 (m, 1H), 7.09-7.02 (m, 3H), 4.24 (d, 1H), 4.10 (d, 1H), 2.00-1.94 (m, 1H), 1.91-1.82 (m, 2H), 1.76-1.68 (m, 1H)。
LC-MS：Rt = 2.52 min；MS m/z [M+H]+ 348.2；UPLC-MS 6。
實例28：(S )-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]
Figure 02_image088
在Ar下，將SOCl2 （0.07 mL，0.959 mmol）添加至溶解於甲苯（6 mL）中的(S )-(1-((3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-5-氟-1,2,3,4-四氫化萘-1-基)甲醇（中間體CK，290 mg，607 μmol）中。將RM加熱到80°C，持續45 min，冷卻，然後用NaHCO3 飽和水溶液淬滅並且用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並蒸發。將殘餘物溶解於MeOH中並且通過Stratosphere SPE PL-硫醇筒（500 mg/6 mL；安捷倫科技公司）過濾並且將濾液蒸發。將殘餘物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（80 g SiO2 柱；洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至80 : 20）純化。將含有級分的產物合併並蒸發，並且乾燥以給出標題化合物。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.92 (s, 1H), 7.37 (t, 1H), 7.20 (dt, 1H), 7.08 (dd, 1H), 7.03 (ddd, 1H), 6.99 (d, 1H), 4.21 (d, 1H), 4.07 (d, 1H), 2.78 - 2.70 (m, 1H), 2.70 - 2.59 (m, 1H), 2.00 - 1.92 (m, 1H), 1.91 - 1.80 (m, 2H), 1.76 - 1.65 (m, 1H)。
LC-MS：Rt = 0.78 min；MS m/z [M+H]+ 389.2；UPLC-MS 1。
實例29：(S )-5',6',8-三氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]
Figure 02_image090
向(S )-(5,6-二氟-1-((3-氟-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-1,2,3,4-四氫化萘-1-基)甲醇（中間體O1，90 mg，167 μmol）在甲苯（5 mL）中之溶液中添加SOCl2 （122 μL，1.67 mmol）。將小瓶密封並且在80°C下攪拌5 min，冷卻至RT並用EtOAc稀釋。將該混合物用Na2 SO4 飽和水溶液洗滌2x。將水層用EtOAc萃取，將合併的有機相用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並在真空中濃縮。將殘餘物藉由正相層析法（矽膠，洗脫液：庚烷 : MeOH中的含有1% 7 M NH3 的EtOAc）純化以得到呈淺棕色固體的標題化合物。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.90 (s, 1H), 7.32 - 7.18 (m, 2H), 7.137.09 (m, 1H), 4.22 (d, 1H), 4.09 (d, 1H), 2.82 - 2.69 (m, 2H), 2.01 - 1.94 (m, 1H), 1.93 - 1.80 (m, 2H), 1.77 - 1.70 (m, 1H)。
LC-MS：Rt = 0.74 min；MS m/z [M+H]+ 359.2；UPLC-MS 1。
實例30：(S )-1'-氯-8',8'-二氟-8-甲氧基-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]
Figure 02_image092
在RT下在氬氣氣氛下，將MeOH（41 μL，1.006 mmol）添加至在1,4-二㗁𠮿（2 mL）中之混合物(S )-1'-氯-8,8',8'-三氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]（中間體AH，80 mg，201 μmol）和NaOtBu（26 mg，262 μmol）。將RM在50°C下加熱18小時，冷卻並且用NaHCO3 飽和水溶液稀釋。將混合物用DCM萃取3x，將合併的有機層藉由穿過相分離器乾燥並且濃縮。將殘餘物藉由正相柱層析法（矽膠，洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至0 : 100）純化，然後藉由手性SFC（柱：Chiralpak IC，5 μm，250 x 30 mm；洗脫液：40% iPrOH + 0.1% NH4 OH水溶液；溫度：40°C；流速：80 mL/min；壓力：120巴）純化以給出呈白色粉末的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.47 (d, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.38 (d, 1H), 6.50 (s, 1H), 4.31 (q, 2H), 3.77 (s, 3H), 2.69 - 2.31 (m, 2H), 2.18 - 1.91 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 0.64 min；MS m/z [M+H]+ 406.1/408.0；UPLC-MS 1。
實例31：(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]
Figure 02_image094
在RT下在氬氣的氣氛下，將SOCl2 （3.87 ml，53.1 mmol）逐滴添加至(S )-(1-氯-5-((3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-8,8-二氟-5,6,7,8-四氫異喹啉-5-基)甲醇（中間體AJ，12.84 g，26.5 mmol）在甲苯（160 mL）中之溶液中。然後將RM在80°C下加熱30 min，冷卻至0°C，添加MeOH並且蒸發。將殘餘物在EtOAc和NaHCO3 飽和水溶液之間分配，用EtOAc萃取，將合併的有機層經Na2 SO4 乾燥並且濃縮。將殘餘物藉由正相層析法（330 g矽膠，洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至70 : 30）純化並且將含有級分的產物蒸發，並吸收到最小體積的MeOH中並且在RT下靜置18小時。在真空下乾燥後，藉由過濾獲得呈黃色固體的標題化合物。在正相層析法和從MeOH中結晶後，可以從濾液中獲得第二批標題化合物。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.49 (d, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.51 (d, 1H), 7.33 (t, 1H), 7.09 (d, 1H), 4.37 (d, 1H), 4.27 (d, 1H), 2.68 - 2.54 (m, 1H), 2.47 - 2.33 (m, 1H), 2.17 - 2.10 (m, 1H), 2.06 - 1.97 (m, 1H)。
LC-MS：Rt = 0.80 min；MS m/z [M+H]+ 442.4/444.4；UPLC-MS 1。
藉由用適當的抗衡離子沈澱，從上述(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]的游離鹼形式製備以下鹽。
具有1 : 1化學計量比的延胡索酸鹽（mw 557.77），mp（DSC）171.9以及179.8°C（起始）：將游離鹼（76.0 mg，172 μmol）置於2 mL玻璃小瓶中並添加iPrOH（500 μL），並且將黃色懸浮液在55°C下攪拌。在55°C下攪拌4小時後，添加延胡索酸（19.95 mg，172 μmol），RM保持為漿液。停止加熱並且將漿液在RT下攪拌18小時，將固體藉由離心分離，並且將粉末在真空下在40°C下乾燥以給出標題化合物。
具有1 : 1化學計量比的硫酸鹽（mw 539.78），mp（DSC）135.8°C（起始）：將游離鹼（56.67 mg，128 μmol）置於2 mL玻璃小瓶中並添加iPrOH（400 μL），並且將黃色懸浮液在RT下攪拌。然後添加H2 SO4 水溶液（1 N，128 μL），在大約10 min內將RM轉換為灰白色漿液。將漿液在RT下攪拌18小時，將固體藉由離心分離，並且將粉末在真空下在40°C下乾燥18小時以給出標題化合物。
實例32：(S )-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-1'-甲基-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]
Figure 02_image096
將(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]（實例31，50 mg，112 μmol）、三甲基環三硼氧烷（13 µL，90 μmol）、Cs2 CO3 （73 mg，224 μmol）和PdCl2 (dppf).CH2 Cl2 複合物（9.2 mg，11 µmol）在1,4-二㗁𠮿（0.9 mL）和水（0.1 mL）中之混合物在氬氣氣氛下在100°C下加熱20小時，然後在120°C下加熱4小時。將冷卻的RM在NaHCO3 飽和水溶液和DCM之間分配，用DCM萃取2x，將合併的有機層藉由穿過相分離筒乾燥並且蒸發。將殘餘物吸收到MeOH中並且用Biotage SPE-PL硫醇樹脂渦旋，然後藉由SFC純化（用Princeton 4-EP 60 A 5 μm 250x30 mm柱的SFC 1，洗脫液：2%-22% MeOH）以給出作為第一洗脫峰的(S )-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-1'-甲基-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]，Rt 6.73 min。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.51 (d, 1H), 7.97 (m, 1H), 7.34 (t, 1H), 7.26 (d, 1H), 7.06 (s, 1H), 4.36 (d, 1H), 4.21 (d, 1H), 2.67 (s, 3H), 2.61 - 2.36 (m, 2H), 2.11 - 1.98 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 0.68 min；MS m/z [M+H]+ 422.1；UPLC-MS 1。
獲得作為第二洗脫峰的(S )-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]，Rt 7.36 min。
1 H NMR (400 MHz, 氯仿-d ) δ 8.97 (s, 1H), 8.72 (d, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.28 - 7.22 (m, 1H), 7.06 (s, 1H), 7.03 (t, 1H), 4.39 (d, 1H), 4.27 (d, 1H), 2.78 - 2.69 (m, 1H), 2.51 - 2.27 (m, 2H), 2.25 - 2.19 (m, 1H)。
LC-MS：Rt = 0.64 min；MS m/z [M+H]+ 408.1；UPLC-MS 1。
通過以下替代程序也可以合成實例32：
在N2 氣氛下，將三甲基環三硼氧烷（5.1 g，40. 7 mmol）在iPrOAc（10 mL）中之溶液添加至(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]（實例31，18.0 g，40.7 mmol）和Cs2 CO3 （26.6 g，81.5 mmol）在iPrOAc（290 mL）中之混合物中。然後在N2 保護下添加PdCl2 (dppf)（298 mg，0.4 mmol）並且將混合物用N2 吹掃10 min。將反應器轉移到預熱的油浴中並且在100°C下攪拌24小時。在N2 保護下，添加另外的PdCl2 (dppf)（298 mg，0.4 mmol）和三甲基環三硼氧烷（1.4 g，11.2 mmol），並且將RM再次回流17小時。將冷卻的RM過濾並用iPrOAc（150 mL）洗滌，然後將濾液用水（250 mL）洗滌。將分離的水相用iPrOAc（200 mL）萃取。將合併的有機相用10% NaCl水溶液（200 mL）洗滌，經無水MgSO4 乾燥，過濾並且濃縮。將殘餘物藉由正相層析法（200-300目矽膠，洗脫液：庚烷 : EtOAc 77 : 34至50 : 50）純化以給出灰白色固體。添加MTBE/庚烷 1 : 5（240 mL）並且將混合物在無真空下在旋轉蒸發儀上攪拌並且浴溫為60°C。溶解後變成亮紅色/黃色溶液，固體從混合物中沈澱，允許將混合物冷卻至RT。將固體藉由過濾收集，並且將庚烷（120 mL）添加至母液中以給出第二批材料。從MTBE : 庚烷 1 : 5中進一步重結晶後獲得標題化合物並且將其乾燥。
藉由接種並藉由用適當的抗衡離子沈澱，從上述(S )-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-1'-甲基-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]的游離鹼形式製備以下結晶形式和鹽。
結晶變型A mp（DSC）129.9°C（起始）：將游離鹼（3.13 g，7.06 mmol，測定95.5%）和iPrOH（3 mL）添加至100 mL容器中並且將混合物在以250 RPM機械攪拌下加熱至65°C（夾套溫度）。將正庚烷（9 mL）經1小時添加至混合物中，隨後在65°C下添加變型A的晶種（30 mg）。所得混合物變渾濁，並且將其在65°C下維持約1小時。經10小時添加另外的正庚烷（51 mL），將溫度在65°C下再維持1小時，然後將混合物經4小時冷卻至4°C。在4°C下漿液維持2.5小時後，在25°C下使用玻璃過濾器將固體藉由過濾收集，並且用iPrOH和正庚烷的混合物（v/v = 1 : 20，4.2 mL）洗滌。將固體在真空下在60°C下乾燥3.5小時，以給出呈粉末的標題化合物（2.46 g）。
具有1 : 1化學計量比的延胡索酸鹽（mw 537.37），mp（DSC）172.3（起始）：將游離鹼（2.0 g）置於100 mL EasyMax反應器中，並且添加iPrOH和庚烷的混合物（80 : 20，40 mL）。添加延胡索酸（1.73 mg），並且將RM加熱至50°C，然後在50°C下維持18-24小時。將混合物經4小時冷卻至25°C，然後在25°C下攪拌4-6小時。在25°C下使用玻璃過濾器將所得固體藉由過濾收集，並且用iPrOH和正庚烷的混合物（4 : 1，10 mL）洗滌。將固體在真空下在40°C下乾燥12小時，以給出呈灰白色粉末的標題化合物。
實例33：(S )-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-1'-(甲基-d 3 )-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]
Figure 02_image098
在氬氣下，將2-(甲基-d 3 )-1,3,2-二側氧基硼雜（中間體AV，127 mg，1.11 mmol）添加至(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]（實例31，200 mg，444 μmol）、K2 CO3 （153 mg，1.11 mmol）和四(三苯基膦)鈀（51 mg，44 μmol）在1,4-二㗁𠮿（1.5 mL）、THF（1.5 mL）和水（1.5 mL）中之混合物中。將RM在90°C下攪拌48小時並添加另外的d 3 -2-(甲基-d 3 )-1,3,2-二側氧基硼雜（23 mg，222 μmol）、K2 CO3 （31 mg，222 μmol）和四(三苯基膦)鈀（26 mg，22 μmol），並且將RM在90°C下再攪拌5小時。將冷卻的RM在EtOAc和NaHCO3 飽和水溶液之間分配，將水層用EtOAc再次萃取，將合併的有機層用鹽水洗滌，藉由穿過相分離器乾燥並且蒸發。將殘餘物溶解於MeOH中並用2.0 g的SPE-PL硫醇樹脂從Biotage中處理，並且在40°C下渦旋1小時然後過濾，用MeOH洗滌，並且將濾液蒸發。將粗產物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（40 g SiO2 筒，洗脫液：庚烷/EtOAc 10 : 90至50 : 50）純化，然後藉由手性SFC：（柱：Chiralcel OD-H，250 x 30 mm I.D.，5 µm，40°C；洗脫液：CO2 /iPrOH（+ 0.1% NH3 ）94 : 6；流速：80 mL/min；檢測：DAD 190-400 nm）純化以給出作為第一洗脫峰的標題化合物（RT 10.5 min）。(S )-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]在RT為16.7 min洗脫。將所希望的產物（360 mg）溶解於EtOH（1.5 mL）中，並且添加H2 O（1.5 mL），隨後添加(S )-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-1'-甲基-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]的晶種。將所得懸浮液超音波處理5 min並且將固體藉由過濾收集，用H2 O洗滌，然後乾燥，以給出呈黃色晶體的標題化合物。
通過以下替代程序也可以合成實例33：
在手套箱中，向圓底燒瓶中裝入Ni(甘醇二甲醚)Br2 （6.46 g，20.9 mmol）、1,10-啡啉（7.54 g，41.8 mmol）和DMF（300 mL）。允許反應混合物在手套箱中在室溫下攪拌30 min以形成深綠色懸浮液。向上述混合物中添加Co(salen)（3.40 g，10.5 mmol），並且將混合物在手套箱中攪拌10 min以形成深棕色溶液。平行地，向第二圓底燒瓶中裝入(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]（實例31，61.6 g，139.5 mmol）、Mn（38.31 g，697.3 mmol）、DMF（300 mL）和TsOCD3 （84.0 g，94.3%測定，418.6 mmol）。在手套箱中，將含有Ni催化劑的第一溶液轉移到第二反應混合物中，將燒瓶用橡膠塞密封並且在40°C-45°C下在N2 下攪拌16小時。然後將反應混合物冷卻至室溫，將固體材料藉由過濾除去，用EtOH洗滌。將濾液合併並且在50°C下濃縮，然後伴隨劇烈的攪拌添加EtOAc（1.0 L）。形成沈澱物並且將懸浮液通過矽膠墊（100 g）過濾，用EtOAc（1.5 L）洗滌。將濾液濃縮以形成深綠色油狀物，然後通過具有庚烷/EtOAc = 2 : 1（3 L）的矽膠墊（200 g）再次過濾。將濾液濃縮並且添加IPA（60 mL）和水（300 mL）。藉由過濾獲得呈淺黃色固體的粗產物。將粗產物用IPA（240 mL）和H2 O（480 mL）漿化，過濾並在真空中在40°C下乾燥以給出呈黃色固體的標題化合物。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.52 (d, 1H), 7.98 (d, 1H), 7.49 - 7.19 (m, 2H), 7.08 (d, 1H), 4.29 (dd, 2H), 2.58 (dd, 1H), 2.43 - 2.39 (m, 1H), 2.17 - 1.95 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 0.59 min；MS m/z [M+H]+ 425.2；UPLC-MS 7。
實例34：(S )-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-1'-甲氧基-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]
Figure 02_image100
將(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]（實例31，1.99 g，4.37 mmol）藉由正相層析法（220 g RediSep Gold柱，洗脫液：c-己烷/EtOAc 100-0至73-27）純化，在所希望的產物之前洗脫次要組分。將次要組分藉由正相層析法（4 g RediSep Gold柱，洗脫液：c-己烷 : EtOAc 100 : 0至81 : 19）再次純化給出呈黃色固體的標題化合物。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.24 (d, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.34 (t, 1H), 7.07 (s, 1H), 6.98 (d, 1H), 4.34 (d, 1H), 4.20 (d, 1H), 3.92 (s, 3H), 2.60 - 2.49 (m, 1H), 2.37 - 2.26 (m, 1H), 2.10 - 1.94 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 3.11 min；MS m/z [M+H]+ 438.0；UPLC-MS 6。
實例35：(S )-8-(二氟甲氧基)-6'-氟-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6-甲腈
Figure 02_image102
將(S )-(1-胺基-6-氟-1,2,3,4-四氫化萘-1-基)甲醇游離鹼（中間體AO，100 mg，461 μmol）、6-氯-5-(二氟甲氧基)菸鹼甲腈（中間體B，277 mg，1.01 mmol）、K3 PO4 （196 mg，922 μmol）和CuI（62 mg，323 μmol）在DMF（3 mL）中之混合物在微波中在氬氣的氣氛下在160°C下加熱30 min。將RM在TBME（20 mL）和H2 O（20 mL）之間分配，將水層用TBME萃取，並且將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥並蒸發。將殘餘物藉由正相層析法（12 g SiO2 柱，洗脫液：己烷 : TBME從0%-50%）純化，然後藉由逆相層析法（RP-HPLC 1）純化。將含有級分的產物合併，將AcCN在真空下除去，將主要係水性的相用Na2 CO3 鹼化並且用DCM萃取3x，將合併的有機層經Na2 SO4 乾燥，並且蒸發以給出呈黃色固體的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.10 (s, 1H), 7.27 (t, 1H), 7.25 - 7.20 (m, 1H), 7.03 - 6.89 (m, 3H), 4.19 (d, 1H), 4.02 (d, 1H), 2.79 - 2.73 (m, 2H), 1.95 - 1.62 (m, 4H)。
LC-MS：Rt = 0.62 min；MS m/z [M+H]+ 346.1；UPLC-MS 1。
手性HPLC（C-HPLC 9）表明樣本具有72%的ee：標題化合物在Rt = 17.8分鐘洗脫，並且(R )-8-(二氟甲氧基)-6'-氟-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6-甲腈在Rt = 15.7分鐘洗脫。
實例36：(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]
Figure 02_image104
向(S )-(1-氯-5-((3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-5,6,7,8-四氫異喹啉-5-基)甲醇（中間體AP，330 mg，0.78 mmol）在甲苯（4.8 mL）中之溶液中添加亞硫醯氯（0.11 mL，1.56 mmol）並且將反應混合物在80°C下攪拌45 min。將冷卻的RM倒入NaHCO3 飽和水溶液中並且用DCM萃取2x。將合併的有機萃取物乾燥（相分離器）並且蒸發。將粗化合物藉由正相快速層析法（12 g SiO2 柱，洗脫液：EtOAc : c-己烷 0 : 100至23 : 77）純化以給出呈黃色泡沫的標題化合物。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.20 (d, 1H), 7.96 (m, 1H), 7.36 (t, 1H), 7.34 (d, 1H), 7.05 (d, 1H), 4.25 (d, 1H), 4.13 (d, 1H), 2.80 - 2.68 (m, 2H), 2.01 (m, 1H), 1.91 (m, 1H), 1.84 (td, 1H), 1.78 (m, 1H)。
LC-MS：Rt = 2.64 min；MS m/z [M+H]+ 406.2/408.2；UPLC-MS 6。
實例37：(S )-3'-氯-8-(二氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-6',7'-二氫-3H ,5'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,8'-異喹啉]
Figure 02_image106
在Ar下,將SOCl2 （0.04 mL，548 μmol）添加至甲苯（2 mL）中的(3-氯-8-((3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-5,6,7,8-四氫異喹啉-8-基)甲醇（中間體AQ，130 mg，279 μmol）中。將RM加熱到80°C，持續45 min，冷卻，然後用NaHCO3 飽和水溶液淬滅並且用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並蒸發。將殘餘物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（40 g SiO2 柱；洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至70 : 30）純化。將含有級分的產物合併，蒸發並乾燥以給出呈黃色固體的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.30 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.30 (t, 1H), 7.27 (s, 1H), 7.02 (d, 1H), 4.24 (d, 1H), 4.14 (d, 1H), 2.79 (t, 2H), 1.95 - 1.66 (m, 4H)。
LC-MS：Rt = 0.68 min；MS m/z [M+H]+ 406.1/408.1；UPLC-MS 1。
實例38：(S )-8-(二氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6'-甲腈
Figure 02_image108
在Ar下，向微波小瓶中裝入(S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]（實例11，223 mg，402 μmol）、XPhos Pd G3（34 mg，40 μmol）、XPhos（39.1 mg，80 μmol）、六氰基高鐵酸鉀(II)（85 mg，201 μmol）、乙酸鉀（4.93 mg，50 μmol）、1,4-二㗁𠮿（2 mL）和水（1 mL）。將RM在微波中在100°C下加熱1.5小時。將冷卻的RM用NaHCO3 飽和水溶液稀釋並用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並蒸發。將殘餘物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（80 g SiO2 柱；洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至70 : 30）純化。將含有級分的產物合併，並且蒸發。將殘餘物溶解於MeOH（4 mL）中並且通過Stratosphere SPE PL-硫醇筒（500 mg/6 mL；安捷倫科技公司）過濾並將濾液蒸發，並且乾燥以給出呈黃色泡沫的標題化合物。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 , 用TFA添加劑) δ 8.75 (t, 1H), 8.21 (d, 1H), 7.90 (d, 1H), 7.78 (dd, 1H), 7.75 (d, 1H), 7.51 (t, 1H), 4.93 (d, 1H), 4.72 (d, 1H), 2.87 (d, 2H), 2.36 - 2.29 (m, 1H), 2.13 - 2.05 (m, 1H), 1.99 (td, 1H), 1.86 - 1.76 (m, 1H)。
LC-MS：Rt = 0.71 min；MS m/z [M+H]+ 396.2；UPLC-MS 1。
實例39：(S )-7-溴-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image110
向(S )-(7-溴-4-((3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-8-氟口克唍-4-基)甲醇（中間體AR，5.32 g，10.9 mmol）在甲苯（43 mL）中之溶液中添加亞硫醯氯（1.59 mL，21.8 mmol）並且將RM在80°C下攪拌15 min。將冷卻的RM用MeOH淬滅並且蒸發。將殘餘物溶解於DCM中並且倒入NaHCO3 飽和水溶液中。分離各層，並且將水層用DCM反萃取2x。將合併的有機萃取物乾燥（相分離器）並且蒸發。將粗材料藉由正相快速層析法（120 g SiO2 柱，洗脫液：EtOAc : c-己烷0 : 100至20 : 80，然後轉換為MeOH : CH2 Cl2 0 : 100至40 : 60）純化以給出呈黃色泡沫的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.98 (br s, 1H), 7.36 (t, 1H), 7.16 (dd, 1H), 7.06 (dd, 1H), 7.03 (d, 1H), 4.46 (m, 1H), 4.49 (m, 1H), 4.27 (s, 2H), 2.17-2.04 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 3.70 min；MS m/z [M+H]+ 469.0/ 471.0；UPLC-MS 6。
實例40：(S )-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-6',7-雙(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image112
將(S )-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-7-碘-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]（中間體AW，147 mg，285 μmol）、二苯基(三氟甲基)鋶三氟甲烷磺酸鹽（173 mg，427 μmol）和Cu粉（54 mg，854 μmol）在DMF（2.5 mL）中之混合物在密封管中在60°C下加熱18小時。將冷卻的RM在EtOAc和NaHCO3 飽和水溶液之間分配，將水相用EtOAc萃取，將合併的有機層用鹽水洗滌，乾燥並且濃縮。將殘餘物藉由逆相層析法（RP-HPLC 2）純化並且將含有級分的產物用NaHCO3 飽和水溶液中和，用DCM萃取，將合併的有機相藉由穿過相分離筒乾燥並且濃縮以給出呈黃色固體的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.00 (s, 1 H), 7.33 - 7.25 (m, 1H), 7.25 - 7.18 (m, 1H), 7.62 - 7.11 (m, 1H), 7.05 (s, 1H), 4.58 - 4.43 (m, 1H), 4.40 - 4.19 (m, 2H), 4.27 (br s, 1H), 2.24 - 1.98 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 4.09 min；MS m/z [M+H]+ 459.2；UPLC-MS 4。
實例41：(S )-7-氯-8'-(二氟甲氧基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image114
向(S )-(7-氯-4-((3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基) 口克唍-4-基)甲醇（中間體AX，4.79 g，11.3 mmol）在甲苯（75 mL）中之溶液中添加亞硫醯氯（1.65 mL，22.6 mmol）並且將反應混合物在80°C下攪拌1小時。將冷卻的RM藉由添加NaHCO3 飽和溶液淬滅。添加EtOAc並分離各層。將水層用EtOAc反萃取2x並將合併的有機萃取物乾燥（相分離器）並蒸發。將粗材料藉由正相層析法（220 g RediSep Gold柱，洗脫液：c-己烷 : EtOAc 70 : 30）純化以給出標題化合物。
TLC，Rf（環己烷/EtOAc 1 : 1）: 0.55
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.96 (br s, 1 H), 7.36 (t, 1H), 7.27 (d, 1H), 7.02 (br s, 1H), 7.94 (dd, 1H), 6.87 (d, 1H), 4.37 (m, 1H), 4.25 (s, 2H), 4.19 (m, 1H), 2.06 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 3.49 min；MS m/z [M+H]+ 407.1/ 409.1；UPLC-MS 6。
實例42：(S )-7-溴-8-氟-8'-(氟甲氧基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image116
將(S )-7-溴-8-氟-3'-(3-(氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)螺[口克唍-4,4'-㗁唑啶]-2'-酮（中間體AY，70 mg，117 μmol）在NaOH水溶液（2 M，293 μL，1.17 mmol）和EtOH（3 mL）中之溶液在80°C下攪拌20 min。將RM用EtOAc稀釋，用NaHCO3 飽和水溶液洗滌，乾燥並且濃縮。將殘餘物溶解於甲苯（3 mL）中並添加SOCl2 （13 μL，176 μmol），並且將RM在80°C下攪拌20 min。將MeOH添加至冷卻的RM中，然後將其濃縮，在EtOAc和NaHCO3 飽和水溶液之間分配，乾燥並且濃縮。將殘餘物藉由正相層析法（矽膠，洗脫液：c-己烷 : EtOAc 100 : 0至50 : 50）純化以給出呈黃色固體的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.87 (s, br, 1H), 7.15 (t, 1H), 7.02 (d, 1H), 6.79 (s, br, 1H), 5.90 (d, 2H), 4.52 - 4.40 (m, 1H), 4.31 - 4.18 (m, 3H), 2.20 - 2.05 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 0.79 min；MS m/z [M+H]+ 451.2/453.2；UPLC-MS 1。
實例43：(S )-7-氯-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image118
將(S )-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊硼烷-2-基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]（中間體AZ，550 mg，1.07 mmol）和氯化銅(II)（430 mg，3.20 mmol）在MeOH（5 mL）和水（5 mL）的混合物中之溶液在100°C下攪拌8小時。將RM倒入NaHCO3 飽和水溶液中並且用EtOAc萃取2x。向合併的有機萃取物中添加NH4 Cl飽和水溶液，然後將混合物在RT下攪拌1小時。將有機層分離，用NH4 Cl飽和水溶液洗滌，乾燥（相分離器）並且蒸發。將粗材料溶解於THF（10 mL）中，添加SiliaMetS® 硫醇（細微性：40-63 µm，載量1.39 mmol/g，13 mmol，9.86 g）並且將混合物在40°C下渦旋1小時。將混合物過濾，並且將濾液蒸發。將粗殘餘物藉由逆相製備型HPLC（RP HPLC 3）純化，並且將含有級分的產物用DCM萃取並蒸發以給出呈黃色固體的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.94 (s, br, 1H), 7.33 (t, 1H), 7.12 (m, 1H), 7.02 (m, 2H), 4.50 (m, 1H), 4.34 - 4.29 (m, 3H), 2.16 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 3.65 min；MS m/z [M+H]+ 425.1/ 427.1；UPLC-MS 6。
實例44：(S )-8'-(二氟甲氧基)-6',7-雙(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image120
向(S )-(4-((3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-7-(三氟甲基) 口克唍-4-基)甲醇（中間體BA，3.18 g，6.24 mmol）在甲苯（40 mL）中之溶液中添加亞硫醯氯（0.91 mL，12.5 mmol）並且將黃色懸浮液在80°C下攪拌1小時。將冷卻的RM藉由添加NaHCO3 飽和溶液淬滅，並且用EtOAc萃取2x。將合併的有機萃取物乾燥（相分離器）並且蒸發。將殘餘物藉由正相快速層析法（120 g SiO2 柱；洗脫液：c-己烷 : EtOAc 100 : 0至70 : 30）純化以給出呈黃色固體的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.98 (br, s, 1H), 7.49 (d, 1H), 7.37 (t, 1H), 7.22 (d, 1H), 7.10 (s, 1H), 7.04 (s, 1H), 4.41 (m, 1H), 4.29 (s, 2H), 4.23 (m, 1H), 2.16-2.03 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 3.92 min；MS m/z [M+H]+ 441.1；UPLC-MS 6。
藉由用適當的抗衡離子沈澱，從上述(S )-8'-(二氟甲氧基)-6',7-雙(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]的游離鹼形式製備以下鹽。
具有1 : 1化學計量比的鹽酸鹽（mw 476.76），mp（DSC）58.3°C（起始）：將游離鹼（50.12 mg，114 μmol）置於2 mL玻璃小瓶中並添加EtOAc（100 μL），並且將澄清黃色溶液在RT下攪拌。然後在RT下添加鹽酸（1 N，114 μL）並且將溶液在RT下攪拌18小時。然後在RT下將庚烷（500 μL）添加至溶液中，導致在添加10 min內沈澱。將懸浮液在RT下攪拌2小時，將固體藉由離心分離，並且將粉末在真空下在40°C下乾燥18小時以給出標題化合物。
實例45：(S )-8'-(二氟甲氧基)-7,8-二氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image122
將(S )-(4-((3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-7,8-二氟口克唍-4-基)甲醇（中間體BC，2.7 g，6.33 mmol）和亞硫醯氯（0.93 mL，12.7 mmol）在甲苯（38 mL）中之溶液在80°C下攪拌1小時。將冷卻的RM藉由添加MeOH淬滅並且蒸發。將殘餘物用DCM稀釋，用NaHCO3 飽和水溶液洗滌，乾燥（相分離器）並且蒸發。將殘餘物藉由正相快速層析法（120 g SiO2 柱；洗脫液：c-己烷 : EtOAc 100 : 0至75 : 25）純化以給出呈黃色泡沫的標題化合物。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.99 (br, s, 1H), 7.37 (t, 1H), 7.15 - 7.09 (m, 1H), 7.04 (d, 1H), 6.97 - 6.89 (m, 1H), 4.49 - 4.45 (m, 1H), 4.34 - 4.27 (m, 1H), 4.26 (s, 2H), 2.16 - 2.04 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 3.12 min；MS m/z [M+H]+ 409.2；UPLC-MS 6。
藉由用適當的抗衡離子沈澱，從上述(S )-8'-(二氟甲氧基)-7,8-二氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]的游離鹼形式製備以下鹽。
具有1 : 1化學計量比的鹽酸鹽（mw 444.76），mp（DSC）67°C（起始）：將游離鹼（44.24 mg，108 μmol）置於2 mL玻璃小瓶中，添加tBuOMe（500 μL），並且將混合物在55°C下攪拌以給出澄清黃色溶液。在55°C下添加鹽酸（1 N，108 μL）並且將溶液在55°C下攪拌4小時，隨後在RT下攪拌18小時。然後添加庚烷（200 μL），並且將澄清的溶液蒸發以給出玻璃狀物質。向玻璃狀物質中再次添加庚烷（200 μL）並且將混合物在RT下攪拌24小時，導致形成漿液。將漿液分離，並且將固體在真空下在40°C下乾燥18小時以給出標題化合物。
實例46：(S )-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-7-甲基-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image124
將(S )-7-溴-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-6'-(三氟甲基)-3'H-螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a]吡啶]（實例39，100 mg，0.21 mmol）、三甲基環三硼氧烷（26.8 mg，0.21 mmol）、tBuOK（71.8 mg，0.64 mmol）、XPhos-Pd-G3（18.0 mg，0.021 mmol）、THF（2 mL）和水（1 mL）添加至微波小瓶中，用氬氣吹掃，密封並在微波下攪拌，在100°C下加熱1.5小時。將RM倒入NaHCO3 飽和水溶液中並且用EtOAc萃取2x。將合併的有機萃取物乾燥（相分離器）並且蒸發。將粗材料溶解於THF（3 mL）中，添加SiliaMetS® 硫醇（細微性：40-63 µm，載量1.39 mmol/g，0.085 mmol，64 mg）並且將混合物在40°C下渦旋1小時。將混合物過濾，並且將濾液蒸發。將粗殘餘物藉由逆相製備型HPLC（RP-HPLC 3）純化並且將含有級分的產物凍乾以給出標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.97 (br, s, 1H), 7.37 (t, 1H), 7.01 (br s, 1H), 6.93 (d, 1H), 6.75 (t, 1H), 4.40 (m, 1H), 4.24 (s, 2H), 4.22 (m, 1H), 2.19 (s, 3H), 2.09 - 2.05 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 3.37 min；MS m/z [M+H]+ 405.1；UPLC-MS 6。
實例47：(S )-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image126
將Pd-C（5%，75 mg，0.71 mmol）添加至(S )-7-溴-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]（實例39，600 mg，1.28 mmol）在THF（15 mL）和MeOH（15 mL）中之溶液中，並且將混合物在RT下在氫氣氣氛下振盪3小時。將RM藉由矽藻土墊過濾，用MeOH洗滌，將濾液蒸發，並且將粗殘餘物藉由正相層析法（80 g SiO2 柱，洗脫液：DCM : MeOH 100 : 0至70 : 30）純化，然後藉由逆相製備型HPLC（RP-HPLC 3）純化。將含有級分的產物用DCM萃取並且蒸發以給出呈黃色固體的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.97 (br, s, 1H), 7.37 (t, 1H), 7.13 - 7.05 (m, 2H), 7.02 (d, 1H), 6.89 - 6.81 (m, 1H), 4.45 - 4.37 (m, 1H), 4.30 - 4.19 (m, 3H), 2.14 - 2.06 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 2.85 min；MS m/z [M+H]+ 391.1；UPLC-MS 6。
實例48：(S )-8-氯-8'-(二氟甲氧基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image128
將(S )-(4-胺基-8-氯口克唍-4-基)甲醇（中間體BE，423 mg，1.98 mmol）、2-氯-3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶（中間體A，1.00 g，4.05 mmol）、CuBr（113 mg，791 μmol）和K3 PO4 （839 mg，3.95 mmol）在DMF（5 mL）中之混合物在密封的小瓶中在N2 氣氛下在140°C下加熱90 min。向冷卻的RM中添加另外的2-氯-3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶（1.00 g，4.05 mmol）、CuBr（113 mg，791 μmol）和K3 PO4 （839 mg，3.95 mmol），並且在140°C下繼續加熱90 min。將RM在EtOAc和NaHCO3 飽和水溶液之間分配，用EtOAc萃取2x，乾燥並且蒸發。將殘餘物藉由正相層析法（50 g SNAP SiO2 筒，洗脫液：己烷 : EtOAc 100 : 0至65 : 35）純化，然後藉由逆相層析法（RP-HPLC 2）純化，並且將含有級分的產物蒸發以留下主要係水性的相，將該主要係水性的相用NaHCO3 飽和水溶液鹼化，用DCM萃取，將有機層乾燥並蒸發以給出呈黃色泡沫的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.97 (s, 1H), 7.34 - 7.19 (m, 2H), 7.61 - 7.14 (m, 1H), 7.02 (d, 1H), 6.90 (t, 1H), 4.55 - 4.38 (m, 1H), 4.35 - 4.20 (m, 3H), 2.17 - 2.00 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 3.10 min；MS m/z [M+H]+ 407.2/409.2；UPLC-MS 4。
實例49：(S )-7-溴-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]-6'-甲腈
Figure 02_image130
將(S )-(4-胺基-7-溴-8-氟口克唍-4-基)甲醇（中間體AT，200 mg，0.72 mmol）、6-氯-5-(二氟甲氧基)菸鹼甲腈（中間體B，326 mg，1.59 mmol）、溴化銅(I)（31.2 mg，0.22 mmol）和磷酸鉀（308 mg，1.45 mmol）在DMF（4.8 mL）中之溶液在120°C下在微波中加熱1.5小時。將RM倒入NaHCO3 飽和水溶液中並且用EtOAc萃取3x。將合併的有機萃取物用水洗滌2x，乾燥（相分離器）並濃縮。將殘餘物溶解於THF（3 mL）中，添加，SiliaMetS® 硫醇（細微性：40-63 µm，載量1.35 mmol/g，0.087 mmol，64 mg）並且將混合物在40°C下渦旋1小時。將混合物過濾，並且將濾液蒸發。將粗殘餘物藉由正相快速層析法（40 g SiO2 柱，洗脫液：EtOAc : c-己烷 0 : 100至50 : 50）純化以給出呈黃色泡沫的標題化合物。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.21 (d, 1H), 7.28 (t, 1H), 7.19 - 7.15 (m, 1H), 7.11 (d, 1H), 7.05 (dd, 1H), 4.48 - 4.43 (m, 1H), 4.33 - 4.27 (m, 1H), 4.27 (s, 2H), 2.19 - 2.05 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 3.34 min；MS m/z [M+H]+ 426.1/428.1；UPLC-MS 6。
實例50：(S )-7-溴-8'-(二氟甲氧基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image132
在Ar下，將SOCl2 （0.15 mL，2.06 mmol）添加至甲苯（10 mL）中的(S )-(7-溴-4-((3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基) 口克唍-4-基)甲醇（中間體BF，615 mg，1.11 mmol）中。將RM加熱到80°C，持續1小時，冷卻，然後用NaHCO3 飽和水溶液淬滅並且用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並蒸發。將殘餘物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（80 g SiO2 柱；洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至70 : 30）純化。將含有級分的產物合併並且蒸發，以給出黃色泡沫。將產物溶解於iPrOH（12 mL）中並且在80°C下攪拌5 min，然後允許溶液冷卻至RT並攪拌5天以重結晶。將晶體藉由過濾分離，用iPrOH洗滌，然後乾燥以給出呈黃色晶體的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.96 (s, 1H), 7.36 (t, 2H), 7.20 (d, 1H), 7.07 (dd, 1H), 7.04 - 6.97 (m, 2H), 4.44 - 4.31 (m, 1H), 4.23 (s, 2H), 4.21 - 4.13 (m, 1H), 2.11 - 1.98 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 0.79 min；MS m/z [M+H]+ 451.1/453.1；UPLC-MS 1。
實例51：(S )-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-7-碘-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]-6'-甲腈
Figure 02_image134
將(S )-7-溴-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]-6'-甲腈（實例49，232 mg，544 μmol）、CuI（52 mg，272 mmol）、NaI（163 mg，1.09 mmol）和反式-N ,N '-二甲基-1,2-環己烷二胺（8.6 μL，54 μmol）在1,4-二㗁𠮿（2 mL）中之混合物在密封管中在110°C下在氮氣的氣氛下加熱18小時。將冷卻的RM在DCM和30% NH3 水溶液之間分配，將水相用DCM萃取3x，將合併的有機相藉由穿過相分離筒乾燥並且濃縮。將殘餘物藉由逆相層析法（RP-HPLC 2）純化，並且將含有級分的產物凍乾，然後用MeOH研磨以給出呈黃色粉末的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, MeOH-d 4 ) δ 7.95 (s, 1H), 7.29 (dd, 1H), 7.01 (s, 1H), 6.86 (d, 1H), 7.20 - 6.71 (m, 1H), 4.56 - 4.42 (m, 1H), 4.41 - 4.22 (m, 3H), 2.33 - 2.06 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 3.45 min；MS m/z [M+H]+ 474.1；UPLC-MS 4。
實例52：(S )-7-溴-6'-氯-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image136
將(S )-(4-胺基-7-溴-8-氟口克唍-4-基)甲醇（中間體AT，100 mg，0.36 mmol）、2-溴-5-氯-3-(二氟甲氧基)吡啶（中間體F、186 mg、0.72 mmol）、CuBr（15.6 mg，0.11 mmol）和磷酸鉀（154 mg，0.72 mmol）在DMF（3.6 mL）中之混合物在140°C在微波中加熱4小時。將RM倒入NaHCO3 飽和水溶液中，用EtOAc萃取3x。將合併的有機萃取物乾燥（相分離器）並且濃縮。將粗材料溶解於THF（5 mL）中，添加SiliaMetS®硫醇（細微性：40-63 µm，載量1.35 mmol/g，0.44 mmol，323 mg）並且將混合物在40°C下渦旋1小時，過濾並且將濾液蒸發。將粗殘餘物藉由正相快速層析法（12 g SiO2 柱，洗脫液：c-己烷 : EtOAc 100 : 0至50 : 50）純化，然後藉由逆相製備型HPLC（RP-HPLC 2）純化，並且將含有級分的產物用NaHCO3 飽和水溶液鹼化，用DCM萃取，將有機層乾燥並蒸發以給出呈黃色固體的標題化合物。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.60 (br, s, 1H), 7.36 (t, 1H), 7.16 (dd, 1H), 7.04 (d, 1H), 6.98 (br, s, 1H), 4.45 (m, 1H), 4.29 (m, 1H), 4.20 (s, 2H), 2.12 - 2.03 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 3.20 min；MS m/z [M+H]+ 435.1/ 437.1；UPLC-MS 6。
實例53：(S )-8'-氯-6',7-雙(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image138
向(4-((3-氯-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-7-(三氟甲基) 口克唍-4-基)甲醇（中間體P2，57 mg，135 μmol）在甲苯（2 mL）中之溶液中添加亞硫醯氯（0.05 mL，0.67 mmol）並且將RM在80°C下攪拌2.5小時。允許RM冷卻至RT，將其倒入NaHCO3 飽和水溶液中並用DCM萃取3x。將合併的有機萃取物乾燥（相分離器）並且濃縮。將粗殘餘物藉由逆相製備型HPLC（RP-HPLC 2）純化並且將含有級分的產物用NaHCO3 飽和水溶液鹼化，用DCM萃取，將有機層乾燥（相分離器）並蒸發以給出外消旋標題化合物。將鏡像異構物藉由製備型手性HPLC（儀器：Gilson PLC2020；柱：Chiralpak ID；5 μm，250 x 20 mm，RT；洗脫液：庚烷/EtOH 80/20 + 0.1% Et2 NH；流速：10 mL/min；檢測：250 nm；進樣體積：1.5 mL）分離以給出作為第二洗脫峰的標題化合物（黃色固體）。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.08 (br, s, 1H), 7.53 (d, 1H), 7.48 (d, 1H), 7.24 (dd, 1H), 7.12 (d, 1H), 4.44 - 4.39 (m, 1H), 4.37 (d, 1H), 4.33 (d, 1H), 4.27 - 4.22 (m, 1H), 2.18 - 2.05 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 3.68 min；MS m/z [M+H]+ 409.2/411.2；UPLC-MS 6。
手性-HPLC：Rt = 9.99 min；以(R )-8'-氯-6',7-雙(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]洗脫作為手性-HPLC第一峰：Rt = 3.95 min；（C-HPLC 28）。
實例54：(S )-7,8'-雙(二氟甲氧基)-8-氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image140
向(S )-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]-7-醇（中間體BI，20 mg，46 μmol）和KOH（52 mg，925 μmol）在AcCN（1 mL）和水（1 mL）的混合物中之溶液中添加(溴二氟甲基)膦酸二乙酯（37.1 mg，139 μmol）並且將RM在RT下攪拌30 min。然後將RM用EtOAc萃取並且將合併的有機層用鹽水洗滌，通過相分離器過濾並且將濾液蒸發。將殘餘物藉由逆相層析法（RP-HPLC 2）純化。將含有級分的產物合併，並且在DCM和NaHCO3 飽和水溶液之間分配。將合併的有機層通過相分離器過濾並且將濾液蒸發。將殘餘物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（4 g SiO2 柱；洗脫液：DCM : MeOH 100 : 0至80 : 20）再次純化。將含有級分的產物合併，蒸發並且乾燥以給出標題化合物。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.99 (s, 1H), 7.52 - 7.32 (m, 1H), 7.24 (d, 1H), 7.17 - 7.08 (m, 1H), 7.05 (d, 1H), 6.88 (t, 1H), 4.47 (ddd, 1H), 4.33 - 4.23 (m, 3H), 2.18 - 2.05 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 0.84 min；MS m/z [M+H]+ 457.2；UPLC-MS 1。
實例55：(S )-8'-(二氟甲氧基)-8-(二氟甲基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image142
在RT下，將DAST（20 μL，148 μmol）添加到(S )-8'-(二氟甲氧基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]-8-甲醛（中間體BJ，40 mg，74 μmol）在DCM（1 mL）中之溶液中並且攪拌16小時。添加另外的DAST（10 μL，74 μmol）並且將RM在RT下攪拌5天。然後將RM在DCM（20 mL）和NaHCO3 飽和水溶液（20 mL）之間分配，用DCM（5 mL）萃取2x，將合併的有機層藉由穿過相分離筒乾燥並且蒸發。將殘餘物藉由正相層析法（4 g SiO2 柱；洗脫液：己烷 : TBME 90 : 10至10 : 90）純化以給出呈米色固體的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, 氯仿-d ) δ 7.52 - 7.42 (m, 2H), 7.30 - 7.21 (m, 1H), 7.04 - 6.72 (m, 4H), 4.61 - 4.56 (m, 1H), 4.40 - 4.21 (m, 3H), 2.45 - 2.36 (m, 1H), 2.21 - 2.08 (m, 1H)。
LC-MS：Rt = 0.78 min；MS m/z [M+H]+ 423.2；UPLC-MS 1。
實例56：(S )-8'-氯-8-(二氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-哌喃并[2,3-c ]吡啶]
Figure 02_image144
將(S )-8'-氯-3-(3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2',3'-二氫螺[㗁唑啶-4,4'-哌喃并[2,3-c]吡啶]-2-酮（中間體BK，408 mg，813 μmol）、NaOH水溶液（4 M，2.03 mL，8.13 mmol）和EtOH（10 mL）的混合物在80°C下攪拌20 min。將冷卻的RM用EtOAc萃取，用NaHCO3 飽和水溶液洗滌，乾燥並且濃縮。將殘餘物吸收到甲苯（10 mL）中並添加SOCl2 （89 μL，1.22 mmol），並且將RM在80°C下攪拌20 min。將MeOH添加至冷卻的RM中，然後將其濃縮，在EtOAc和NaHCO3 飽和水溶液之間分配，將合併的有機層乾燥並且濃縮。將殘餘物藉由逆相層析法（RP-HPLC 2）純化，並且將含有級分的產物合併並蒸發。將殘餘物在DCM和NaHCO3 飽和水溶液之間分配，將合併的有機層乾燥並濃縮以給出呈黃色固體的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.03 (s, br, 1H), 7.93 (d, 1H), 7.61 - 6.96 (m, 3H), 4.56 - 4.46 (m, 1H), 4.39 - 4.20 (m, 3H), 2.24 - 2.05 (m, br, 2H)。
LC-MS：Rt = 2.42 min；MS m/z [M+H]+ 408.1/410.1；UPLC-MS 4。
實例57：(2'S ,3R )-7-溴-8'-(二氟甲氧基)-3,8-二氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image146
將((3R ,4S )-4-胺基-7-溴-3,8-二氟口克唍-4-基)甲醇（中間體BO，273 mg，928 μmol）、2-氯-3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶（中間體A，306 mg，1.11 mmol）、CuBr（53 mg，371 μmol）、K3 PO4 （394 mg，1.86 mmol）和DMF（1.5 mL）的混合物在N2 氣氛下密封在小瓶中並且在140°C下在微波中加熱90 min。將冷卻的RM在NaHCO3 飽和水溶液和EtOAc之間分配，將合併的有機層乾燥並且濃縮。添加另外的2-氯-3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶（306 mg，1.11 mmol）、CuBr（53 mg，371 μmol）、K3 PO4 （394 mg，1.86 mmol）和DMF（1.5 mL）並且將混合物在N2 氣氛下密封在小瓶中，並且在140°C下在微波中再次加熱90 min。將冷卻的RM在NaHCO3 飽和水溶液和EtOAc之間分配，將合併的有機層乾燥並且濃縮。將殘餘物藉由正相層析法（50 g SiO2 SNAP筒，洗脫液：己烷 :（95 : 5 TBME : MeOH）100 : 0至65 : 35）純化，然後藉由逆相層析法（RP-HPLC 3）純化並且將含有級分的產物用DCM萃取，將合併的有機層乾燥並濃縮。將殘餘物吸收到MeOH中並且體積減少以使得標題化合物結晶為黃色固體，將該黃色固體藉由過濾收集。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.98 (s,1H), 7.63 - 7.17 (m, 2H), 7.16 - 6.97 (m, 2H), 5.23 - 4.93 (m, 1H), 4.73 - 4.53 (m, 1H), 4.51 - 4.33 (m, 1H), 4.33 - 4.08 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 3.83 min；MS m/z [M+H]+ 487.1/489.0；UPLC-MS 4。
實例58：(2'S ,3S )-7-溴-8'-(二氟甲氧基)-3,8-二氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image148
藉由與實例57相似的方法，藉由用((3S ,4S )-4-胺基-7-溴-3,8-二氟口克唍-4-基)甲醇（中間體BU）代替((3R ,4S )-4-胺基-7-溴-3,8-二氟口克唍-4-基)甲醇（中間體BO）製備標題化合物。正相層析法（25 g SiO2 SNAP筒，洗脫液：己烷 : EtOAc 100 : 0至80 : 20）後，獲得呈淡橙色粉末的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.10 (br, s, 1H), 7.57 - 7.11 (m, 4H), 5.12 - 4.85 (m, 1H), 4.69 - 4.35 (m, 4H)。LC-MS：Rt = 5.20 min；MS m/z [M+H]+ 487.1/489.0；UPLC-MS 4。
實例59：(2'S ,3R )-7-溴-8'-(二氟甲氧基)-3-氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image150
藉由與實例57相似的方法，藉由用((3R ,4S )-4-胺基-7-溴-3-氟口克唍-4-基)甲醇（中間體BV）代替((3R ,4S )-4-胺基-7-溴-3,8-二氟口克唍-4-基)甲醇（中間體BO）製備標題化合物。正相層析法（50 g二氧化矽SNAP柱，洗脫液：己烷 : EtOAc 100 : 0至80 : 20）後，獲得呈淡黃色固體的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.97 (s, 1H), 7.63 - 7.17 (m, 2H), 7.16 - 7.11 (m, 1H), 7.08 (dd, 2H), 5.14 - 4.89 (m, 1H), 4.59 - 4.42 (m, 1H), 4.40 - 4.14 (m, 3H)。
LC-MS：Rt = 3.42 min；MS m/z [M+H]+ 469.0/471.0；UPLC-MS 4。
實例60：(2'S ,3R )-8'-(二氟甲氧基)-3-氟-7-碘-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image152
藉由與實例51相似的方法，藉由用(2'S ,3R )-7-溴-8'-(二氟甲氧基)-3-氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]（實例59）代替(S )-7-溴-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]-6'-甲腈（實例49）製備標題化合物。用MeOH研磨後，獲得呈黃色粉末的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.96 (br, s, 1H), 7.66 - 7.14 (m, 3H), 7.12 - 6.92 (m, 2H), 5.14 - 4.85 (m, 1H), 4.47-4.34 (m, 1H), 4.38 - 4.10 (m, 3H)。
LC-MS：Rt = 3.69 min；MS m/z [M+H]+ 517.0；UPLC-MS 4。
實例61：(2'S ,3R )-8'-(二氟甲氧基)-3-氟-6',7-雙(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image154
藉由與實例40相似的方法，藉由用(2'S ,3R )-8'-(二氟甲氧基)-3-氟-7-碘-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]（實例60）代替(S )-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-7-碘-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]（中間體AW）製備標題化合物。正相層析法（40 g SiO2 Redisep筒，洗脫液：己烷 : TBME 100 : 0至0 : 100）純化，然後藉由逆相層析法（RP-HPLC 2）純化後，獲得呈黃色針狀物的標題化合物，並且將含有級分的產物在DCM和NaHCO3飽和水溶液之間分配，用DCM萃取2x，將合併的有機層藉由穿過相分離筒乾燥並且蒸發。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.98 (s, 1H), 7.61 - 7.21 (m, 4H), 7.12 (s, 1H), 5.21 - 4.93 (m, 1H), 4.65 - 4.48 (m, 1H), 4.46 - 4.15 (m, 3H)。
LC-MS：Rt = 4.06 min；MS m/z [M+H]+ 459.1；UPLC-MS 4。
實例62：(2'S ,3R )-8'-(二氟甲氧基)-3,8-二氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image156
將((3R ,4S )-4-胺基-3,8-二氟口克唍-4-基)甲醇（中間體BW，5.0 g，22.77 mmol）、2-氯-3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶（中間體A，11.27 g，45.5 mmol）、CuBr（1.31 g，9.11 mmol）和K2 PO4 （9.67 g，45.5 mmol）在DMF（24 mL）中之混合物在密封的小瓶中在氬氣氣氛下在140°C下加熱1.5小時。將冷卻的RM過濾，用EtOAc（150 mL）洗滌，將濾液用NaHCO3 飽和水溶液洗滌，乾燥並且濃縮。將另外的2-氯-3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶（11.27 g，45.5 mmol）、CuBr（1.31 g，9.11 mmol）、K2 PO4 （9.67 g，45.5 mmol）和DMF（5 mL）添加至殘餘物中並且將混合物在密封的小瓶中在氬氣氣氛下在140°C下加熱1.5小時。將冷卻的RM過濾，用EtOAc（150 mL）洗滌，將濾液用NaHCO3 飽和水溶液洗滌，乾燥並且濃縮。將殘餘物藉由正相層析法（340 g矽膠，洗脫液：c-己烷 : EtOAc 100 : 0至70 : 30）純化。將含有級分的產物合併並且蒸發，將殘餘物吸收到1 N HCl水溶液中並且將水層用EtOAc洗滌，並用EtOAc再次洗滌3x。將酸性水層用NaHCO3 飽和水溶液（pH 8）變成鹼性，用DCM萃取3x，將合併的DCM層乾燥並且蒸發。然後將殘餘物吸收到最小體積的MeOH中並且將溶液在旋轉蒸發儀上緩慢蒸發，直至第一固體材料沈澱。然後允許溶液在RT下靜置3小時並將形成的沈澱藉由過濾收集，並且乾燥以給出呈淡黃色粉末的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.98 (s, 1H), 7.40 (t, 1H), 7.19 (t, 1H), 7.11 (s, 1H), 7.07 (d, 1H), 6.97 - 6.89 (m, 1H), 5.08 (dd, 1H), 4.62 - 4.53 (m, 1H), 4.42 - 4.22 (m, 3H)。
LC-MS：Rt = 0.67 min；MS m/z [M+H]+ 409.0；UPLC-MS 1。
藉由用適當的抗衡離子沈澱，從上述(2'S ,3R )-8'-(二氟甲氧基)-3,8-二氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]的游離鹼形式製備以下鹽。
具有1 : 1化學計量比的鹽酸鹽（mw 444.76）：將游離鹼（50.8 mg，124 μmol）置於2 mL玻璃小瓶中並添加tBuOMe（1 mL），並且將澄清溶液在55°C下攪拌。然後在55°C下緩慢添加鹽酸（1 N，124 μL），並且溶液緩慢變成懸浮液。在55°C下持續攪拌4小時，然後在RT下攪拌18小時，將固體藉由離心分離，並且將粉末在真空下在40°C下乾燥18小時以給出標題化合物。
具有1 : 1化學計量比的硫酸鹽iPrOH溶劑化物（1 : 1）（mw 506.38），mp（DSC）廣泛的吸熱轉變147°C以及206°C（起始）：將游離鹼（50.74 mg，124 μmol）置於2 mL玻璃小瓶中並添加iPrOH（1.2 mL）。然後在55°C下添加鹽酸（1 N，124 μL）並且將溶液在55°C下攪拌4小時，然後在RT下攪拌18小時導致沈澱。將固體藉由離心分離，並且將粉末在真空下在40°C下乾燥18小時以給出標題化合物。
具有1 : 1化學計量比的檸檬酸鹽AcCN溶劑化物（1 : 1）（mw 600.42），mp（DSC）廣泛的吸熱轉變140°C以及176°C（起始）：將游離鹼（51.84 mg，126 μmol）置於2 mL玻璃小瓶中並添加AcCN（0.6 mL）。然後在55°C下添加檸檬酸（24.4 mg，127 μmol）並且將漿液在55°C下攪拌4小時，然後在RT下攪拌18小時。將固體藉由離心分離，並且將粉末在真空下在40°C下乾燥18小時以給出標題化合物。
實例63：(S )-8-(二氟甲氧基)-8'-氟-6-(三氟甲基)-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-異口克唍]
Figure 02_image158
向外消旋 -(4-((3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-8-氟異口克唍-4-基)甲醇（中間體BZ，598 mg，1.39 mmol）在甲苯（9 mL）中之溶液中添加亞硫醯氯（0.20 mL，2.78 mmol）並且將RM在80°C下攪拌1小時。將RM藉由添加NaHCO3 飽和溶液淬滅，並且用EtOAc萃取2x。將合併的有機萃取物乾燥（相分離器），蒸發，並且將粗殘餘物藉由正相快速層析法（80 g二氧化矽柱，洗脫液：c-己烷 : EtOAc 100 : 0至50 : 50）純化以給出外消旋標題化合物。將鏡像異構物藉由製備型手性HPLC（儀器：Trilution HPLC系統；柱：Chiralcel OJ-H；5 μm，250 x 30 mm，RT；洗脫液：庚烷/iPrOH 70/30 + 0.1% Et2 NH；流速：20 mL/min；檢測：230 nm；進樣體積：1.5 mL）分離以給出作為第二洗脫峰的標題化合物（黃色固體）。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.97 (br s, 1H), 7.36 (t, 1H), 7.33 (m, 1H), 7.21 (d, 1H), 7.11 (t, 1H), 7.07 (br s, 1H), 4.75 (d, 1H), 4.87 (d, 1H), 4.43 (d, 1H), 4.00 (d, 1H), 3.86 (d, 1H), 3.58 (d, 1H)。
LC-MS：Rt = 2.85 min；MS m/z [M+H]+ 391.1；UPLC-MS 6。
手性-HPLC：Rt = 7.37 min；獲得作為第一洗脫峰的((R )-8-(二氟甲氧基)-8'-氟-6-(三氟甲基)-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-異口克唍]，Rt = 5.89 min；（C-HPLC 29）。
實例64：(S )-7'-氯-8-(二氟甲氧基)-8'-氟-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-硫代口克唍]-6-甲腈
Figure 02_image160
將Cs2 CO3 （1.15 g，3.54 mmol）添加至6-(7'-氯-8'-氟-2-側氧基螺[㗁唑啶-4,4'-硫代口克唍]-3-基)-5-(二氟甲氧基)煙腈（中間體CA，3.43 g，5.90 mmol）在MeOH（113 mL）中的懸浮液中並且將RM在90°C下攪拌2小時。允許RM冷卻至RT並用EtOAc萃取。將有機相用NaHCO3 飽和水溶液洗滌，經相分離器乾燥並且在真空中濃縮。將殘餘物溶解於甲苯（113 mL）中並添加SOCl2 （1.29 mL，17.70 mmol），並且將所得混合物在90°C下攪拌1小時。將RM冷卻至RT，緩慢添加MeOH，並且將所得混合物在真空中濃縮。將殘餘物吸收到EtOAc中，用NaHCO3 飽和水溶液洗滌，經相分離器乾燥並且濃縮。將殘餘物藉由快速柱層析法（矽膠，洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至30 : 70）純化以給出外消旋標題化合物。將鏡像異構物藉由手性SFC：（儀器：MG II製備型SFC；柱：Chiralpak AD，250 × 30 mm 5 μm在38°C下；洗脫液：CO2 : 含有0.1% NH3 水溶液的EtOH；梯度：35%含有0.1% aq. NH3 水溶液的EtOH；流速：50 mL/min；檢測：220 nm）分離以給出作為第二洗脫峰的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.16 (s, 1H), 7.50 - 7.15 (m, 3H), 7.10 (s, 1H), 4.36 - 4.08 (m, 2H), 3.26 - 3.08 (m, 2H), 2.30 - 2.01 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 3.78 min；MS m/z [M+H]+ 398.0；UPLC-MS 4。
手性-SFC：Rt = 5.28 min；(R )-7'-氯-8-(二氟甲氧基)-8'-氟-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-硫代口克唍]-6-甲腈作為第一洗脫峰，Rt = 4.83 min；C-SFC 30。
實例65：(S )-8-(二氟甲氧基)-8'-氟-6-(三氟甲基)-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-硫代口克唍]
Figure 02_image162
將(4-胺基-8-氟硫代口克唍-4-基)甲醇（中間體CE，100 mg，445 μmol）、2-溴-3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶（中間體CC，199 mg，668 μmol）、K2 CO3 （123 mg，891 μmol）和CuI（8.48 mg，45 μmol）溶解於DMF（2.6 mL）中。將所得綠色懸浮液在160°C下在微波爐中輻照30 min。將冷卻的RM用EtOAc稀釋，將有機層用NaHCO3 飽和水溶液和鹽水洗滌，通過相分離器過濾並且濃縮。將殘餘物藉由正相層析法（矽膠，洗脫液：庚烷 : EtOAc）純化以給出外消旋標題化合物。將鏡像異構物藉由手性HPLC（儀器：Gilson PLC2020 HPLC系統；柱：Chiralcel OD-H；5 μm，250 x 20 mm在25°C下；洗脫液：庚烷 : 異丙醇 = 80 : 20 + 0.1% Et2 NH；流速：10 mL/min；檢測：250 nm）分離以給出作為第二洗脫峰的呈黃色粉末的標題化合物。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.94 (d, 1H), 7.38 (ddd, 1H), 7.17 (d, 1H), 7.14 - 7.06 (m, 2H), 7.04 (d, 1H), 4.30 - 4.12 (m, 2H), 3.25 - 3.01 (m, 2H), 2.25 - 2.05 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 3.20 min；MS m/z [M+H]+ 407.1；UPLC-MS 4。
手性-HPLC：Rt = 11.52 min；(R )-8-(二氟甲氧基)-8'-氟-6-(三氟甲基)-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-硫代口克唍作為第一洗脫峰，Rt = 6.10 min；C-HPLC 31。
實例66：(S )-8-(二氟甲氧基)-8'-氟-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-硫代口克唍]-6-甲腈
Figure 02_image164
將(S )-5-(二氟甲氧基)-6-(8'-氟-2-側氧基螺[㗁唑啶-4,4'-硫代口克唍]-3-基)菸鹼甲腈（中間體CD，4.11 g，9.99 mmol）溶解於MeOH（75 mL）中以給出澄清黃色溶液，將該澄清黃色溶液置於兩個微波小瓶中。向每個小瓶中添加Cs2 CO3 （976 mg，2x 2.99 mmol）。將小瓶密封，加熱至90°C並在此溫度下攪拌60 min。將RM冷卻至RT，用EtOAc（300 mL）和水（100 mL）稀釋，並且將各相分離。將水相用EtOAc（2 x 200 mL）萃取，將合併的有機相用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並在真空中濃縮。將殘餘物溶解於甲苯（75 mL）中並添加SOCl2 （2.5 mL，35.0 mmol），得到黃色漿液，將該黃色漿液在90°C下攪拌15 min。將冷卻的RM藉由添加NaHCO3 飽和溶液淬滅。然後將混合物用EtOAc萃取2x，將合併的有機相用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並濃縮。將殘餘物藉由正相層析法（矽膠，洗脫液：庚烷 : EtOAc）純化以提供標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.14 (d, 1H), 7.28 (t, 1H), 7.17 - 7.02 (m, 4H), 4.25 (d, 1H), 4.16 (d, 1H), 3.21 - 3.13 (m, 1H), 3.12 - 3.03 (m, 1H), 2.21 - 2.15 (m, 1H), 2.14 - 2.07 (m, 1H)。
LC-MS：Rt = 0.72 min；MS m/z [M+H]+ 364.2；UPLC-MS 1。
實例67：(S )-8-(二氟甲氧基)-8'-氟-6,7'-雙(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-硫代哌喃并[3,2-c ]吡啶]
Figure 02_image166
將SOCl2 （88 μL，1.20 mmol）添加至(S )-(4-((3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-8-氟-7-(三氟甲基)-3,4-二氫-2H -硫代哌喃并[3,2-c ]吡啶-4-基)甲醇（中間體CF，66 mg，120 μmol）在甲苯（2 mL）中之溶液中，並且將RM在80°C下攪拌1小時。將冷卻的RM在Na2 CO3 飽和水溶液（20 mL）和DCM（20 mL）之間分配，用DCM（20 mL）萃取，將合併的有機層用鹽水（20 mL）洗滌，乾燥並且蒸發。將殘餘物溶解於EtOAc中並且吸收在Isolute上用於正相純化（12 g SiO2 柱，洗脫液：己烷 :（TBME : MeOH 95 : 5）從90 : 10至50 : 50）以給出呈黃色固體的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.47 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.34 (t, 1H), 7.08 (s, 1H), 4.31(dd, 2H), 3.34 -3.26 (m, 1H), 3.23 - 3.16 (m, 1H), 2.24 - 2.17 (m, 1H), 2.16 - 2.09 (m, 1H)。
LC-MS：Rt = 0.97 min；MS m/z [M+H]+ 476.1；UPLC-MS 1。
實例68：(S )-8-(二氟甲氧基)-8'-氟-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-異硫代口克唍]-6-甲腈
Figure 02_image168
將(4-胺基-8-氟異硫代口克唍-4-基)甲醇（中間體CG，50 mg，232 μmol）、6-氯-5-(二氟甲氧基)菸鹼甲腈（中間體B，99 mg，348 μmol）、K3 PO4 （99 mg，464 μmol）和CuI（4.42 mg，23 μmol）懸浮於DMF（1.37 mL）中。然後將棕色懸浮液在160°C下在微波爐中輻照30 min。將EtOAc添加至冷卻的RM中，將有機層用NaHCO3 飽和水溶液和鹽水洗滌，經過相分離器過濾並且濃縮。將殘餘物藉由正相層析法（矽膠，洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至30 : 70，然後藉由DCM : MeOH 100 : 0至90 : 10第二次純化）純化以得到外消旋標題化合物。將鏡像異構物藉由手性HPLC（儀器：Gilson PLC2020 HPLC系統；柱：Chiralcel ID；5 μm，250 x 20 mm在25°C下；洗脫液：庚烷 : EtOH 80 : 20 + 0.1% Et2 NH；流速：10 mL/min；檢測：220 nm）分離以給出作為第二洗脫峰的呈黃色粉末的標題化合物。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.18 (d, 1H), 7.44 -7.07 (m, 5H), 4.54 (d, 1H), 4.04 (d, 1H), 3.95 (d, 1H), 3.65 (d, 1H), 2.98 (dd, 1H), 2.80 (dd, 1H)。
LC-MS：Rt = 2.84 min；MS m/z [M+H]+ 364.1；UPLC-MS 4。
手性-HPLC：Rt = 10.82 min；(R )-8-(二氟甲氧基)-8'-氟-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-異硫代口克唍]-6-甲腈作為第一洗脫峰，Rt = 7.04 min；C-HPLC 33。
實例69：(S )-8'-(二氟甲氧基)-9-氟-6'-(三氟甲基)-3,4-二氫-2H ,3'H -螺[苯并[b ]㗁呯-5,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image170
將NaOH水溶液（2 M，20.18 mL，40.4 mmol）添加至3'-(3-(二氟甲氧基)-5-(三氟-甲基)吡啶-2-基)-9-氟-3,4-二氫-2H -螺[苯并[b ]㗁呯-5,4'-㗁唑啶]-2'-酮（中間體CH，2.08 g，4.04 mmol）在EtOH（42.9 mL）中之溶液中，並且將RM在80°C下攪拌1小時。LC-MS分析顯示形成了中間體(5-((3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-9-氟-2,3,4,5-四氫苯并[b ]㗁呯-5-基)甲醇。允許RM冷卻至RT並且將其用EtOAc相稀釋，將有機層用NaHCO3 飽和水溶液洗滌，經相分離器乾燥並且濃縮。將甲苯（43 mL）添加至殘餘物中，隨後添加SOCl2 （2.95 mL，40.4 mmol）並且在90°C下加熱15 min。將冷卻的RM藉由添加MeOH淬滅並且濃縮。將殘餘物吸收到EtOAc中，並且用NaHCO3 飽和水溶液洗滌，經相分離器乾燥並且濃縮。將殘餘物藉由正相層析法（矽膠，洗脫液：庚烷 : EtOAc = 100 : 0至60 : 40）純化以得到外消旋標題化合物。將鏡像異構物藉由手性HPLC（儀器：Gilson Trilution I系統；柱：Chiralpak AD-H；5 μm，250 x 30 mm在25°C下；洗脫液：正庚烷（用MeOH飽和）: EtOH 80 : 20 + 0.1% Et2 NH；流速：20 mL/min；檢測：265 nm）分離以給出作為第一洗脫峰的呈黃色粉末的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.88 (s, 1H), 7.48 (t, 1H), 7.24 (d, 1H), 7.15 - 7.11 (m, 1H), 7.09 - 7.02 (m, 1H), 7.01 (s, 1H), 4.59 (d, 1H), 4.47 - 4.41 (m, 1H), 3.96 (d, 1H), 3.60 - 3.53 (m, 1H), 2.26 - 2.18 (m, 1H), 1.96 -1.92 (m, 2H), 1.82 -1.76 (m, 1H)。
LC-MS：Rt = 3.15 min，寬峰；MS m/z [M+H]+ 405.1；UPLC-MS 4。
手性-HPLC：Rt = 3.06 min；(R )-8'-(二氟甲氧基)-9-氟-6'-(三氟甲基)-3,4-二氫-2H ,3'H -螺[苯并[b ]㗁呯-5,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]作為第二洗脫峰，Rt = 5.23 min；C-HPLC 37。
實例70：(S )-8-(二氟甲氧基)-1'-(二氟甲基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]
Figure 02_image172
在正Ar壓力下，將DAST（58 μL，436 μmol）添加至(S )-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]-1'-甲醛（中間體CI，80 mg，175 μmol）在DCM（1 mL）中之攪拌溶液（用冰浴冷卻）中。在0°C下1小時後，添加另外的DAST（58 μL，436 μmol）並且將RM在0°C下攪拌1小時，隨後在rt下攪拌1小時。將RM在DCM和NaHCO3 飽和水溶液之間分配，將水層用DCM萃取，藉由穿過相分離器乾燥並且蒸發。將殘餘物藉由正相層析法（12 g SiO2 筒，洗脫液：庚烷 : EtOAc 90 : 10至0 : 100）純化以給出呈黃色泡沫的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.83 (d, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.70 (d, 1H), 7.32 (t, 1H), 7.24 (t, 1H), 7.09 (d, 1H), 4.35 (dd, 2H), 2.73 - 2.40 (m, 2H), 2.22 - 2.02 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 0.83 min；MS m/z [M+H]+ 458.3；UPLC-MS 1。
使用與用於製備實例1至70類似的方法製備以下實例。
實例71：(S )-5'-溴-4',8-二氯-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-茚]
Figure 02_image174
按照與所述之製備中間體J（步驟4A）、K、P和實例28之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.89 min；MS m/z [M+H]+ 437.0/439.0/441.0；UPLC-MS 1。
實例72：(S )-5'-溴-8-(二氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-茚]
Figure 02_image176
按照與所述之製備中間體A、AT（步驟2）和實例4之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.83 min；MS m/z [M+H]+ 434.9/436.9；UPLC-MS 1。
實例73：(S )-8-(二氟甲氧基)-5'-碘-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-茚]-6-甲腈
Figure 02_image178
按照與所述之製備中間體AT（步驟2B）和實例2之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 3.18 min；MS m/z [M+H]+ 440.1；UPLC-MS 4。
實例74：(S )-8-(二氟甲氧基)-4'-氟-5',6-雙(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H-螺[咪唑并[1,2-a]吡啶-2,1'-茚]
Figure 02_image180
按照與所述之製備中間體J（步驟4A和5A），中間體P、Q、AW和實例28、40和3之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.87 min；MS m/z [M+H]+ 443.2；UPLC-MS 1。
實例75：(S )-8-(二氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H-螺[咪唑并[1,2-a]吡啶-2,1'-茚]
Figure 02_image182
按照與所述之製備中間體A、AT（步驟2）和實例4之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.71 min；MS m/z [M+H]+ 357.0；UPLC-MS 1。
實例76：(S )-5',8-二氟-6'-甲氧基-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]
Figure 02_image184
按照與所述之製備中間體K、P、實例28和一般程序方案5之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.72 min；MS m/z [M+H]+ 371.2；UPLC-MS 1。
實例77：(S )-8-氟-6,6'-雙(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]
Figure 02_image186
按照與所述之製備中間體J（步驟1和2），中間體K、P和實例16之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.83 min；MS m/z [M+H]+ 391.2；UPLC-MS 1。
實例78：外消旋 -5',6',8-三氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]
Figure 02_image188
按照與所述之製備中間體J（步驟1和2），中間體K、P和實例16之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.74 min；MS m/z [M+H]+ 359.2；UPLC-MS 1。
實例79：(S )-8-氯-5'-氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]
Figure 02_image190
按照與所述之製備中間體AT（步驟1和2），中間體P和實例28之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.72 min；MS m/z [M+H]+ 357.2/359.1；UPLC-MS 1。
實例80：(S )-6'-溴-5'-氟-8-甲氧基-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]
Figure 02_image192
按照與所述之製備中間體K、P、實例28和一般程序方案5之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.84 min；MS m/z [M+H]+ 431.2/433.2 UPLC-MS 2。
實例81：外消旋 -5'-溴-8-(二氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]
Figure 02_image194
按照與所述之製備中間體A、J（步驟1和2），中間體K、P和實例28之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.84 min；MS m/z [M+H]+ 449.1/ 451.1；UPLC-MS 1。
實例82：(S )-5'-氯-8-(二氟甲氧基)-6'-氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]
Figure 02_image196
按照與所述之製備中間體A、J（步驟1和2），中間體K、P和實例28之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.89 min；MS m/z [M+H]+ 423.2/425.2；UPLC-MS 1。
實例83：(2S ,3'R ,4'R )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-3',4',5'-三氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]
Figure 02_image198
按照與所述之製備實例10和24之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.91 min；MS m/z [M+H]+ 503.1/505.1；UPLC-MS 1。
實例84：(S )-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-6'-甲氧基-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]
Figure 02_image200
按照與所述之製備中間體K、P，實例28和一般程序方案5之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.80 min；MS m/z [M+H]+ 419.2；UPLC-MS 1。
實例85：(S )-8-(二氟甲氧基)-5',6'-二氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]
Figure 02_image202
按照與所述之製備中間體A、J（步驟1和2）、K、P和實例28之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.79 min；MS m/z [M+H]+ 407.1；UPLC-MS 1。
實例86：(S )-8-(二氟甲氧基)-6,6'-雙(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]
Figure 02_image204
按照與所述之製備中間體A、J（步驟1和2）、K、O、Q和實例28和3的程式類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.90 min；MS m/z [M+H]+ 439.2；UPLC-MS 1。
實例87：外消旋 -8-(二氟甲氧基)-5',6-雙(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H,3H-螺[咪唑并[1,2-a]吡啶-2,1'-萘]
Figure 02_image206
按照與所述之製備中間體J（步驟1和2）、K、O、Q和實例28和3之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.88 min；MS m/z [M+H]+ 439.2；UPLC-MS 1。
實例88：(S )-5'-氯-8-(二氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]
Figure 02_image208
按照與所述之製備中間體J（步驟1和2）、K、O、Q和實例3和28之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.84 min；MS m/z [M+H]+ 405.2/407.2；UPLC-MS 1。
實例89：(S )-6'-溴-6-氯-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]
Figure 02_image210
按照與所述之製備中間體K、O、Q和實例3和28之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.85 min；MS m/z [M+H]+ 433.1/435.1/437.1；UPLC-MS 1。
實例90：(S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H ,4'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'-酮
Figure 02_image212
按照與所述之製備中間體A、AQ（步驟1-4）、K、Z（步驟1-3）和實例23之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 3.32 min；MS m/z [M+H]+ 463.2/465.2；UPLC-MS 4。
實例91：(S )-8-(二氟甲氧基)-5',6'-二氟-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6-甲腈
Figure 02_image214
按照與所述之製備中間體B、J（步驟1和2）、K和實例2之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.72 min；MS m/z [M+H]+ 364.2；UPLC-MS 1。
實例92：(S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-4',4',5'-三氟-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6-甲腈
Figure 02_image216
按照與所述之製備中間體B、J（步驟1和2）、K、Z（步驟1-3）、G，實例4和23之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 4.17 min；MS m/z [M+H]+ 460.2/462.2；UPLC-MS 4。
實例93：外消旋 -8-(二氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]
Figure 02_image218
按照與所述之製備中間體A、K和實例4之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.52 min；MS m/z [M+H]+ 372.3；UPLC-MS 1。
實例94：(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]-6-甲腈
Figure 02_image220
按照與所述之製備中間體B、J（步驟1和2）、K和實例2之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.59 min；MS m/z [M+H]+ 363.2；UPLC-MS 1。
實例95：(S )-8-氯-8'-(氟甲氧基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image222
按照與所述之製備中間體E、J（步驟1和2）、K和實例4之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.70 min；MS m/z [M+H]+ 389.1/391.2；UPLC-MS 1。
實例96：(S )-8-氯-8'-(二氟甲氧基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]-7-甲腈
Figure 02_image224
按照與所述之製備中間體A、AQ（步驟1-4）、G、H、I和實例28之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.82 min；MS m/z [M+H]+ 432.1/434.1；UPLC-MS 1。
實例97：(3R ,4S )-7-氯-8'-(二氟甲氧基)-3,8-二氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image226
按照與所述之製備中間體A、AB、AQ（步驟1-4）、K、G、H、I和實例9和28以及一般程序方案5之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.84 min；MS m/z [M+H]+ 443.1/445.0；UPLC-MS 1。
實例98：(3R ,4S )-8'-(二氟甲氧基)-3,7,8-三氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image228
按照與所述之製備中間體A、AB、AQ（步驟1-4）、K和實例4和9之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.78 min；MS m/z [M+H]+ 427.1；UPLC-MS 1。
實例99：(S )-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-7-(甲硫基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image230
按照與所述之製備中間體A、J（步驟1和2）、K、AW、BH和實例4之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.80 min；MS m/z [M+H]+ 437.0；UPLC-MS 1。
實例100：(S )-7-溴-8-氯-8'-(二氟甲氧基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image232
按照與所述之製備中間體A、AQ（步驟1-4）、K、G、H、I和實例28之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.88 min；MS m/z [M+H]+ 485.1/487.0/489.0；UPLC-MS 1。
實例101：外消旋 -8'-(二氟甲氧基)-3,8-二氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image234
按照與所述之製備中間體A、AB、AQ（步驟1-4）、K、G、H、I和實例9和28之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.71 min；MS m/z [M+H]+ 409.2；UPLC-MS 1。
實例102：(S )-7,8-二溴-8'-(二氟甲氧基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image236
按照與所述之製備中間體A、AQ（步驟1-4）、K、G、H、I和實例28之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.89 min；MS m/z [M+H]+ 529.0/531.0/533.0；UPLC-MS 1。
實例103：(S )-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-7-甲氧基-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image238
按照與所述之製備中間體A、J（步驟1和2）、K，實例4以及一般程序方案5之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.71 min；MS m/z [M+H]+ 421.2；UPLC-MS 1。
實例104：(S )-8'-(二氟甲氧基)-6',8-雙(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image240
按照與所述之製備中間體A、J（步驟1和2）、K和實例28之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 3.79 min；MS m/z [M+H]+ 441.2；UPLC-MS 4。
實例105：(S )-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-7-(三氟甲氧基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image242
按照與所述之製備中間體A、AQ（步驟1-4）、K、G、H、I和實例28之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.92 min；MS m/z [M+H]+ 475.2；UPLC-MS 1。
實例106：(S )-8'-(二氟甲氧基)-7-((二氟甲基)硫代)-8-氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image244
按照與所述之製備中間體A、AQ（步驟1-4）、K、AW、L（步驟1和2）和實例28之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.89 min；MS m/z [M+H]+ 473.1；UPLC-MS 1。
實例107：(S )-8-溴-8'-(二氟甲氧基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image246
按照與所述之製備中間體A、J（步驟1和2）、K、G、H、I和實例28之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.77 min；MS m/z [M+H]+ 451.0/453.0；UPLC-MS 1。
實例108：外消旋 -8-(二氟甲氧基)-8'-氟-6,7'-雙(三氟甲基)-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-異口克唍]
Figure 02_image248
按照與所述之製備中間體A、BZ（步驟1-6）、O和實例28之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.97 min；MS m/z [M+H]+ 459.1；UPLC-MS 1。
實例109：(2S )-8-(二氟甲氧基)-8'-氟-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-硫代口克唍]-6-甲腈-2',2',3'-d 3
Figure 02_image250
按照與所述之製備中間體B、AQ（步驟1-4）、K、G、H、I、CF（步驟2）、CB（步驟3）和實例28之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 2.71 min；MS m/z [M+H]+ 367.3/368.3；UPLC-MS 4。
實例110：(S )-7'-溴-8-(二氟甲氧基)-8'-氟-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-硫代口克唍]-6-甲腈
Figure 02_image252
按照與所述之製備中間體B、CB（步驟1-4）、AO、J（步驟1和2）、K和實例2之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 3.94 min；MS m/z [M+H]+ 442.1/444.1；UPLC-MS 4。
實例111：(S )-8-(二氟甲氧基)-8'-氟-6-(三氟甲基)-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-硫代口克唍]-7'-甲腈
Figure 02_image254
按照與所述之製備中間體A、CB（步驟1-4）、AO，實例2和實例15之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 3.43 min；MS m/z [M+H]+ 432.2/433.2；UPLC-MS 4。
實例112：(S )-8-(二氟甲氧基)-7',8'-二氟-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-硫代口克唍]-6-甲腈
Figure 02_image256
按照與所述之製備中間體B、CB（步驟1-4）、AO、G、H、I和實例28之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.79 min；MS m/z [M+H]+ 382.2；UPLC-MS 1。
實例113：(S )-8-(二氟甲氧基)-7',8'-二氟-6-(三氟甲基)-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-硫代口克唍]
Figure 02_image258
按照與所述之製備中間體A、CB（步驟1-4）、AO、G、H、I和實例28之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.81 min；MS m/z [M+H]+ 425.2；UPLC-MS 1。
實例114：(S )-8'-氟-8-(氟甲氧基)-6,7'-雙(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-硫代哌喃并[3,2-c ]吡啶]
Figure 02_image260
按照與所述之製備中間體E、CF（步驟1-9）和實例4之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.82 min；MS m/z [M+H]+ 458.1；UPLC-MS 1。
實例115：(S )-8-(二氟甲氧基)-8'-氟-6-(三氟甲基)-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-異硫代口克唍]
Figure 02_image262
按照與所述之製備中間體A、CG、J（步驟1和2）、K和實例2之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 3.43 min；MS m/z [M+H]+ 407.1；UPLC-MS 4。
實例116：(S )-8-(二氟甲氧基)-7'-氟-6-(三氟甲基)-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-異硫代口克唍]
Figure 02_image264
按照與所述之製備中間體A、CB（步驟1和2）、J（步驟1和2）、K和實例2之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 3.33 min；MS m/z [M+H]+ 407.1；UPLC-MS 4。
實例117：(S )-8'-(二氟甲氧基)-8,9-二氟-6'-(三氟甲基)-3,4-二氫-2H ,3'H -螺[苯并[b ]㗁呯-5,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image266
按照與所述之製備中間體A、CH（步驟1-9）、G和實例28之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.78 min；MS m/z [M+H]+ 423.2；UPLC-MS 1。
實例118：外消旋 -9-氯-8'-(二氟甲氧基)-6'-(三氟甲基)-3,4-二氫-2H ,3'H -螺[苯并[b ]㗁呯-5,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image268
按照與所述之製備中間體A、CH（步驟1和2）、J（步驟1和2）和實例2之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.76 min；MS m/z [M+H]+ 421.1/423.1；UPLC-MS 1。
實例119：(S )-8-氯-8'-(二氟甲氧基)-9-氟-6'-(三氟甲基)-3,4-二氫-1H ,3'H -螺[苯并[c ]㗁呯-5,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image270
按照與所述之製備中間體A、CJ（步驟1-10）、G和實例28之程序類似的程序製備。LC-MS：Rt = 0.78 min；MS m/z [M+H]+ 439.2/441.2；UPLC-MS 1。中間體的製備
中間體A：2-氯-3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶
Figure 02_image272
使用Vapourtec（R2C/R4/Vapourtec Flow Commander R系列平臺報告版本：1.9.9.5）將2-氯-5-(三氟甲基)吡啶-3-醇在乙腈（0.5 mol/L，流速3.08 mL/min）中之溶液與KOH在水中之溶液（6 mol/L，流速3.85 mL/min）混合，隨後藉由第二T型件（T-piece）添加(溴二氟甲基)膦酸二乙酯在乙腈中之溶液（1 mol/L，流速3.08 mL/min），然後在10 mL PFA線圈中反應，停留時間為1 min。將所得的兩相混合物在RT下攪拌過夜，分離各層並且將水層用TBME萃取。將合併的有機層用2 N NaOH水溶液洗滌2x，然後用鹽水洗滌2x，經Na2 SO4 乾燥，過濾並且使用旋轉蒸發儀濃縮（最低壓力10毫巴/浴溫40°C）。將粗產物蒸餾並且將含有級分的產物合併以給出呈無色液體的標題化合物。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.77 (dd, 1H), 8.30 (d, 1H), 7.50 (t, 1H)。
通過以下替代路線也可以合成中間體A：
將(溴二氟甲基)膦酸二乙酯（17.4 mL，101 mmol）逐滴添加至2-氯-5-(三氟甲基)吡啶-3-醇（10 g，50.6 mmol）和KOH（56.8 g，1012 mmol）在乙腈（100 mL）和水（100 mL）中之溶液（用冰浴冷卻）中：注意：放熱反應! 在0°C下攪拌10 min後，將反應混合物在RT下再攪拌1小時，然後在水和DCM之間分配。將有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥並且在真空下濃縮以給出呈黃色油狀物的標題化合物。
中間體B：6-氯-5-(二氟甲氧基)菸鹼甲腈
Figure 02_image274
在氬氣氣氛下，將四(三苯基膦靶(0)（0.61 g，0.52 mmol）添加至2-氯-3-(二氟甲氧基)-5-碘吡啶（中間體C，2.0 g，5.24 mmol）和氰化鋅（0.62 g，5.24 mmol）在DMF（15 mL）中之混合物中並且將RM在油浴中在90°C下加熱16小時。然後將冷卻的RM在TBME和H2 O之間分配，然後將懸浮液通過Hyflo過濾並且分離各層。將水層用TBME洗滌，然後將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並蒸發。將殘餘物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（24 g矽膠筒；洗脫液：己烷 : DCM從95 : 5至50 : 50）純化。將含有級分的產物合併並且蒸發，以給出呈白色固體的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.80 (d, 1H), 8.47 (d, 1H), 7.39 (t, 1H)。
中間體C：2-氯-3-(二氟甲氧基)-5-碘吡啶
Figure 02_image276
在110°C下在N2 下，將5-溴-2-氯-3-(二氟甲氧基)吡啶（中間體D，20.8 g，72.4 mmol）、碘化鈉（21.7 g，145 mmol）、碘化銅(I)（0.69 g，3.62 mmol）和反式-N ,N '-二甲基-1,2-環己烷二胺（1.14 mL，7.24 mmol）在1,4-二㗁𠮿（150 mL）中之混合物伴隨攪拌加熱16小時。將冷卻的RM通過Hyflo過濾，蒸發並且將殘餘物在TBME和鹽水之間分配。將水層用TBME再萃取2x，將合併的有機層用NH4 Cl飽和水溶液洗滌，隨後用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，並蒸發以給出呈棕色固體的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.54 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.38 (t, 1H)。
LC-MS：Rt = 1.04 min；MS m/z [M+H]+ ；305.8/307.8；UPLC-MS 1。
中間體D：5-溴-2-氯-3-(二氟甲氧基)吡啶
Figure 02_image278
藉由與中間體A相似的方法，藉由用5-溴-2-氯-3-羥基吡啶代替2-氯-5-(三氟甲基)吡啶-3-醇來製備標題化合物。反應後，將兩相系統收集並且在RT下攪拌。分離各層，並且將水層用TBME萃取。將合併的有機層用2 N NaOH水溶液洗滌2x，然後用鹽水洗滌3x，經Na2 SO4 乾燥，過濾並且在旋轉蒸發器上濃縮（175毫巴/40°C）。將殘餘物溶解於DCM中並且用2 N HCl水溶液萃取2x，用鹽水洗滌並且使用相分離器將各相分離。將有機層在旋轉蒸發器（最低壓力100毫巴/浴溫40°C）上濃縮以給出呈黃色液體的標題化合物。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.50 (d, 1H), 8.22 (d, 1H), 7.42 (t, 1H)。
中間體E：2-氯-3-(氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶
Figure 02_image280
在RT下，將氫化鈉（在礦物油中的60%分散體，0.81 g，20.2 mmol）分批添加至2-氯-5-(三氟甲基)吡啶-3-醇（3.50 g，17.5 mmol）在DMF（40 mL）中之溶液中。在RT下攪拌30 min後，經2 min逐滴添加乙腈（17.5 mL，35.1 mmol）中的溴氟甲烷並且將RM在RT下攪拌18小時。然後將RM在EtOAc和H2 O之間分配，將水層用EtOAc進一步萃取，然後將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥並蒸發。將粗產物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（80 g矽膠筒；洗脫液：己烷 : TBME 100 : 0至50 : 50）純化。將含有級分的產物合併並且蒸發，以給出呈白色結晶固體的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.71 - 8.52 (m, 1H), 8.13 (s, 1H), 6.12 (d, 2H)。
中間體F：2-溴-5-氯-3-(二氟甲氧基)吡啶
Figure 02_image282
在RT下，將2-氯-2,2-二氟乙酸鈉（731 mg，4.80 mmol）添加至2-溴-5-氯吡啶-3-醇（500 mg，2.40 mmol）和碳酸鉀（398 mg，2.88 mmol）在DMF（6 mL）和水（0.75 mL）中之混合物中，然後將RM加熱至100°C持續17小時。將冷卻的RM倒入水中並用EtOAc萃取3x，將合併的有機層用水洗滌2x，並且用相分離器分離。將有機層在真空中濃縮以給出呈黃色液體油狀物的標題化合物。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ8.44 (d, 1H), 8.07 (d, 1H), 7.43 (t, 1H)。
中間體G：(S )-(5-溴-1-((3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-4-氟-2,3-二氫-1H -茚-1-基)甲醇
Figure 02_image284
向(S )-5-溴-3'-(3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-4-氟-2,3-二氫螺[茚-1,4'-㗁唑啶]-2'-酮（中間體H，820 mg，1.24 mmol）在EtOH（4 mL）中的懸浮液中添加THF（10 mL），隨後添加30% NaOH水溶液（2.47 mL，9.90 mmol）。將RM在70°C下攪拌4小時，冷卻並且在Na2 CO3 飽和水溶液和EtOAc之間分配。將水層用EtOAc萃取，將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥並蒸發。將粗產物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（40 g SiO2 柱，洗脫液：己烷 : [DCM-MeOH 95 : 5] 90 : 10至40 : 60）純化。將含有級分的產物合併並且蒸發，以給出呈棕色樹脂的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ8.02 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.55 - 7.16 (m, 2H), 6.88 (d, 1H), 6.61 (s, 1H), 5.54 (t, 1H), 3.59 (m, 2H), 3.12 (dd, 1H), 2.94 (m, 1H), 2.65 (q, 1H), 2.34 - 2.18 (m, 1H)。
LC-MS：Rt = 1.30 min；MS m/z [M+H]+ 471.0/472.9；UPLC-MS 1。
中間體H：(S )-5-溴-3'-(3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-4-氟-2,3-二氫螺[茚-1,4'-㗁唑啶]-2'-酮
Figure 02_image286
在Ar氣氛下，向(S )-5-溴-4-氟-2,3-二氫螺[茚-1,4'-㗁唑啶]-2'-酮（中間體I，1.0 g，3.29 mmol）在DMF（12 mL）中之溶液中添加2-氯-3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶（中間體A，1.06 g，4.27 mmol）、Cs2 CO3 （2.14 g，6.57 mmol）和溴化銅(I)（0.24 g，1.64 mmol）。將RM在120°C下在加熱塊中攪拌1小時，然後在140°C下在微波中持續1小時。添加另外的2-氯-3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶（中間體A，400 mg，1.62 mmol），並且將RM在120°C下在加熱塊中再攪拌1.5小時。然後將冷卻的RM通過Hyflo助濾劑墊過濾並且將濾液在NaHCO3 飽和水溶液和EtOAc之間分配。將水層用EtOAc萃取，將合併的有機層用H2 O和鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥並蒸發。將粗產物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（40 g SiO2 柱，洗脫液：己烷 : TBME 100 : 0至40 : 60）純化。將含有級分的產物合併並且蒸發，以給出呈紅棕色固體的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ8.63 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.64 - 7.16 (m, 2H), 7.13 (d, 1H), 4.67 (dd, 2H), 2.97 (q, 3H), 2.57 (dt, 1H)。
LC-MS：Rt = 1.26 min；MS m/z [M+H]+ 496.8/498.8；UPLC-MS 1。
中間體I：(S )-5-溴-4-氟-2,3-二氫螺[茚-1,4'-㗁唑啶]-2'-酮
Figure 02_image288
向(S )-(1-胺基-5-溴-4-氟-2,3-二氫-1H -茚-1-基)甲醇（中間體J，10 g，38.1 mmol）和Et3 N（11.1 mL，80 mmol）在DCM（150 mL）中之溶液中經1小時逐滴添加DCM（50 mL）中的三光氣（4.52 g，15.2 mmol），同時保持溫度低於25°C。將RM在RT下攪拌1小時，用NH4 Cl飽和水溶液（100 mL）淬滅然後在RT下攪拌15 min。將混合物用NH4 Cl飽和水溶液和DCM稀釋。將水層用DCM萃取2x，將合併的有機層經Na2 SO4 乾燥並蒸發以給出呈米色固體的標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.85 min；MS m/z [M+H]+ 286.0/287.9；UPLC-MS 1。
中間體J：(S )-(1-胺基-5-溴-4-氟-2,3-二氫-1H -茚-1-基)甲醇
步驟1：外消旋 -5'-溴-4'-氟-2',3'-二氫螺[咪唑烷-4,1'-茚]-2,5-二酮
Figure 02_image290
向5-溴-4-氟二氫茚酮（100 g，436 mmol）和碳酸銨（502 g，5.23 mol）在甲醇（1.2 L）和水（1.2 L）中之混合物中添加KCN（35.5 g，545 mmol），並且將反應混合物在60°C下攪拌24小時。然後在減壓下將MeOH從冷卻的RM中除去並且藉由過濾將沈澱的產物收集。將固體用水（500 mL）洗滌3x，並且在高真空下在50°C下乾燥8小時以給出呈黑色固體的標題化合物。
1 H NMR: (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.93 (br, s, 1H), 8.49 (s, 1H), 7.60 - 7.55 (m, 1H), 6.99 (d, 1H), 3.12 - 2.98 (m, 2H), 2.65 - 2.54 (m, 1H), 2.26 - 15 (m, 1H)。
步驟2：外消旋 -1-胺基-5-溴-4-氟-2,3-二氫-1H -茚-1-甲酸
Figure 02_image292
向H2 O（1.2 L）中的5'-溴-4'-氟-2',3'-二氫螺[咪唑烷-4,1'-茚]-2,5-二酮（步驟1，120 g，401 mmol）中添加KOH（225 g，4.01 mol），並且將RM加熱至回流16小時。將RM冷卻至RT，用6 N HCl水溶液中和至pH = 6 ~ 7，並且將沈澱藉由過濾收集，用水（500 mL）和TBME（500 mL）洗滌。將固體在真空下在50°C下乾燥6小時以給出呈黑色固體的標題化合物。
1 H NMR: (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.58 - 7.51 (m, 1H), 7.19 - 7.12 (m, 1H), 3.13 - 2.99 (m, 2H), 2.75 - 2.60 (m, 1H), 2.16 -2.02 (m, 1H)。
步驟3：外消旋 -乙基 1-胺基-5-溴-4-氟-2,3-二氫-1H -茚-1-甲酸酯
Figure 02_image294
將SOCl2 （156 mL）添加至EtOH（2.0 L）中，在-10°C下冷卻並且將溶液在-10°C下攪拌30 min。然後將DMF（7 mL）和1-胺基-5-溴-4-氟-2,3-二氫-1H -茚-1-甲酸（步驟2，130 g，474 mmoL）添加至溶液中，並且將混合物在80°C下加熱4.5小時。將RM蒸發並且將殘餘物溶解於H2 O（500 mL）和DCM（1.0 L）中。添加K2 CO3 飽和水溶液（400 mL），將水相用EtOAc萃取2x，將合併的有機層用鹽水洗滌，乾燥並濃縮以給出呈黑色油狀物的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.64 - 7.49 (m, 1H), 7.17 (d, 1H), 4.13 - 4.01 (m, 2H), 3.19 - 2.91 (m, 2H), 2.77 -2.58 (m, 1H), 2.24 - 2.04 (m, 1H), 1.13 (t, 3H)。
步驟4：(S )-(1-胺基-5-溴-4-氟-2,3-二氫-1H -茚-1-基)甲醇
Figure 02_image296
將乙基 1-胺基-5-溴-4-氟-2,3-二氫-1H -茚-1-甲酸酯（步驟3，135 g，447 mmol）溶解於THF（1.5 L）中並且將溶液用冰浴冷卻。然後在0°C下將LiAlH4 （22 g，581 mmol）分批添加至攪拌的RM中，並且在RT下再繼續攪拌3小時。然後將RM重新冷卻至0°C，小心地逐滴添加水（20 mL），隨後添加15% NaOH水溶液（60 mL）和水（20 mL）。添加MgSO4 並將懸浮液攪拌30 min，並且將混合物過濾。將濾液濃縮，並且將粗產物藉由正相層析法（矽膠，洗脫液：石油醚 : EtOAc 50 : 50至0 : 100）純化以給出呈灰色固體的外消旋產物。然後將外消旋物藉由SFC（儀器：Thar 200製備型SFC；柱：Cellulose-2，300 × 50 mm I.D.，10 μm，38°C；洗脫液：CO2 : [異丙醇 + 0.1% NH4 OH] 80 : 20；流速：200 mL/min；檢測：220 nm；BPR：100巴；進樣：600 x 5 mL）分離以給出作為第一洗脫峰的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.51 - 7.40 (m, 1H), 7.08 (d, 1H), 3.34 (d, 2H), 3.00 - 2.84 (m, 1H), 2.84 - 2.65 (m, 1H), 2.33 - 2.19 (m, 1H), 1.88 - 1.71 (m, 1H)。
LC-MS：Rt = 0.55 min；MS m/z [M+H]+ 260.1/ 262.0；UPLC-MS 2。
手性-HPLC：Rt = 6.19 min；(R )-(1-胺基-5-溴-4-氟-2,3-二氫-1H -茚-1-基)甲醇作為第二峰洗脫 Rt = 7.31 min；C-HPLC 3。
通過以下替代路線也可以合成中間體J：
步驟1A：外消旋 -5-溴-1-((三級丁氧羰基)胺基)-4-氟-2,3-二氫-1H -茚-1-甲酸
Figure 02_image298
將Boc-酸酐（11.14 ml，48.0 mmol）和Na2 CO3 （8.48 g，80 mmol）添加至外消旋 -1-胺基-5-溴-4-氟-2,3-二氫-1H -茚-1-甲酸（步驟2，10.96 g，40 mmol）在水（20 mL）和AcCN（100 mL）中之混合物中並且在RT下攪拌2小時。然後將RM用冰浴冷卻並用20% KHSO4 水溶液酸化，並且將混合物用EtOAc萃取，將合併的有機層用鹽水洗滌，經MgSO4 乾燥，過濾並濃縮。將殘餘物用Et2 O-己烷2 : 1研磨，過濾，並且乾燥以給出呈米色固體的標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.07 min；MS m/z [M-H]- 372.0/374.0；UPLC-MS 1。
步驟2A：(S )-5-溴-1-((三級丁氧羰基)胺基)-4-氟-2,3-二氫-1H -茚-1-甲酸
向外消旋 -5-溴-1-((三級丁氧羰基)胺基)-4-氟-2,3-二氫-1H -茚-1-甲酸（步驟1A，12.72 g，34 mmol）在EtOH（50 mL）中的懸浮液中添加辛可尼汀（6.01 g，20.40 mmol）和NEt3 （1.90 mL，13.60 mmol）並且將混合物加熱以給出澄清溶液。將澄清溶液濃縮（除去約90%-95%的EtOH）並且在55°C下將剩餘的油狀物溶解於TBME（80 mL）中，然後用(R )-5-溴-1-((三級丁氧羰基)胺基)-4-氟-2,3-二氫-1H -茚-1-甲酸辛可尼汀鹽的晶體引晶，並允許RM緩慢冷卻至RT。將己烷（25 mL）添加至懸浮液中並且繼續攪拌18小時。添加另外的己烷（10 mL）並將RM用冰浴冷卻，並且藉由過濾收集米色固體。在75°C下，將固體溶解於iPrOH（40 mL）中並添加TBME（30 mL）和庚烷（40 mL），並且將溶液用(R )-5-溴-1-((三級丁氧羰基)胺基)-4-氟-2,3-二氫-1H -茚-1-甲酸辛可尼汀鹽的晶體引晶。允許混合物靜置18小時並將晶體藉由過濾收集，並且乾燥以給出(R )-5-溴-1-((三級丁氧羰基)胺基)-4-氟-2,3-二氫-1H -茚-1-甲酸辛可尼汀鹽（99% ee）。將母液從iPrOH-TBME-己烷的第二結晶2x中結晶，給出呈淺米色固體的標題化合物的辛可尼汀鹽（99.6% ee）。
步驟3A：(S )-5-溴-1-((三級丁氧羰基)胺基)-4-氟-2,3-二氫-1H -茚-1-甲酸
Figure 02_image300
將(S )-5-溴-1-((三級丁氧羰基 )胺基)-4-氟-2,3-二氫-1H -茚-1-甲酸辛可尼汀鹽（步驟2A，1.34 g，2.0 mmol）的懸浮液懸浮在EtOH中並且用冰浴冷卻。添加HCl水溶液（4 N）至pH 3-4，並且將RM攪拌10 min並用EtOAc萃取3x。將合併的有機層用冷的HCl水溶液（0.2 N）洗滌，用鹽水洗滌2x，經MgSO4 乾燥，過濾並濃縮以給出呈泡沫的標題化合物。
可替代地，可以將外消旋 -5-溴-1-((三級丁氧羰基 )胺基)-4-氟-2,3-二氫-1H -茚-1-甲酸藉由手性SFC（儀器：Thar 200製備型SFC；柱：Chiralpak AD 300 × 50 mm I.D. 10 μm，38°C；洗脫液：CO2 ：[MeOH + 0.1% NH4 OH] 70 : 30；流速：200 mL/min；檢測：220 nm；BPR：100巴）分離以給出作為第一洗脫峰的標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.03 min；MS m/z [M-H]- 372.1/374.1；UPLC-MS 2。
手性-HPLC：Rt = 2.74 min；(R )-5-溴-1-((三級丁氧羰基 )胺基)-4-氟-2,3-二氫-1H -茚-1-甲酸作為第二峰洗脫 Rt = 3.82 min；C-SFC 19。
步驟4A：(S )-1-胺基-5-溴-4-氟-2,3-二氫-1H -茚-1-甲酸鹽酸鹽
Figure 02_image302
將1,4-二㗁𠮿（4 N，10 mL，40 mmol）中的HCl的溶液添加至(S )-5-溴-1-((三級丁氧羰基 )胺基)-4-氟-2,3-二氫-1H -茚-1-甲酸（步驟3A，2.13 g，5.7 mmol）在DCM（3 mL）中之溶液中並且將RM在RT下攪拌1小時。將RM濃縮並將殘餘物用Et2 O研磨。過濾並乾燥後獲得呈白色結晶固體的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.72 - 7.63 (m, 1H), 7.35 (d, 1H), 3.33 - 3.25 (m, 1H), 3.23 - 3.15 (m, 1H), 2.86 -2.82 (m, 1H), 2.51 - 2.42 (m, 1H)。
步驟5A：(S )-(1-胺基-5-溴-4-氟-2,3-二氫-1H -茚-1-基)甲醇鹽酸鹽
Figure 02_image304
在RT下在正氬氣壓力下，向(S )-1-胺基-5-溴-4-氟-2,3-二氫-1H -茚-1-甲酸鹽酸鹽（步驟4A，1.77 g，5.7 mmol）在THF（30 mL）中的懸浮液中添加BH3 在THF（1 M，17.10 mL，17.10 mmol）中之溶液。將RM在RT下攪拌18小時然後藉由逐滴添加MeOH/THF混合物淬滅。將RM用MeOH蒸發3x，添加HCl在Et2 O（2 M，3.1 mL，6.2 mmol）中之溶液，並且將混合物用Et2 O再次稀釋並伴隨冰浴冷卻攪拌1小時。將白色固體藉由過濾收集並乾燥以給出標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.62 (s, 2H), 7.63 (t, 1H), 7.47 (d, 1H), 3.81 - 3.69 (m, 2H), 3.25 - 2.90 (m, 2H), 2.52 - 2.43 (m, 1H), 2.35 - 2.22 (m, 1H)。
中間體K：(S )-(1-胺基-4,5-二氟-2,3-二氫-1H -茚-1-基)甲醇
Figure 02_image306
藉由與中間體M，步驟7相似的方法，藉由用外消旋 -1-胺基-4,5-二氟-2,3-二氫-1H -茚-1-甲酸代替7-胺基-3-(三氟甲基)-6,7-二氫-5H -環戊并[c ]吡啶-7-甲酸（中間體M，步驟6）製備標題化合物。將鏡像異構物藉由手性HPLC（儀器：VWR LaPrep HPLC製備型；柱：Chiralcel OZ-I 20 μm，5 x 42 cm；洗脫液：庚烷 : EtOH : MeOH 95 : 2.5 : 2.5 + 0.1% Et2 NH；流速：100 mL/min；檢測：260 nm）分離以給出作為第一洗脫峰的標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.41 min；MS m/z [M+H]+ 200.1；UPLC-MS 1。
手性-HPLC：Rt = 5.60 min；(R )-(1-胺基-4,5-二氟-2,3-二氫-1H -茚-1-基)甲醇作為第二洗脫峰，Rt = 8.8 min；C-HPLC 1。
中間體L：(S )-8-(二氟甲氧基)-4'-氟-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-茚]-5'-硫醇
步驟1：2-乙基己基3-(((S )-8-(二氟甲氧基)-4'-氟-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-茚]-5'-基)硫代)丙酸酯
Figure 02_image308
將(S )-5'-溴-8-(二氟甲氧基)-4'-氟-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-茚]（實例1，30.0 mg，0.07 mmol）、3-巰基丙酸2-乙基己酯（0.023 mL，0.10 mmol）、xantphos（3.83 mg，6.62 µmol）、DIPEA（0.017 mL，0.10 mmol）、Pd2 (dba)3 （6.06 mg，6.62 µmol）和1,4-二㗁𠮿（0.5 mL）的混合物在100°C下攪拌24小時。將冷卻的RM在EtOAc和水之間分配，將水相用EtOAc萃取2x，並且將乾燥的有機層蒸發。將分離出的材料藉由正相層析法（10 g SNAP筒，洗脫液：己烷 : EtOAc 100 : 0至0 : 100）純化並且將含有級分的產物蒸發以給出標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.22 min；MS m/z [M+H]+ 591.3；UPLC-MS 1。
步驟2：(S )-8-(二氟甲氧基)-4'-氟-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a]吡啶-2,1'-茚]-5'-硫醇
Figure 02_image310
將EtOH（28 µl，0.075 mmol）中的NaOEt添加至2-乙基己基3-(((S )-8-(二氟甲氧基)-4'-氟-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-茚]-5'-基)硫代)丙酸酯（步驟1，22.49 mg，0.038 mmol）在EtOH（0.5 mL）中之溶液中。在RT下攪拌1小時後，將RM在NH4 Cl飽和水溶液和EtOAc之間分配，並且將乾燥的有機層蒸發。將分離出的材料藉由正相層析法（10 g SNAP筒，洗脫液：己烷 : EtOAc 100 : 0至50 : 50）純化並且將含有級分的產物蒸發以給出呈黃色固體的標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.76 min；MS m/z [M+H]+ 407.2；UPLC-MS 1。
中間體M：(S )-3,6'-雙(三氟甲基)-5,6-二氫-3'H -螺[環戊并[c ]吡啶-7,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]-8'-醇
步驟1：5-溴-2-(三氟甲基)異菸醛
Figure 02_image312
使用丙酮/乾冰浴，將二異丙基醯胺鋰（2 M，11.68 mL，23.36 mmol）在THF（25 mL）中之溶液冷卻至-78°C，並且逐滴添加5-溴-2-(三氟甲基)吡啶（4.4 g，19.47 mmol）在THF（5 mL）中之溶液。將RM在此溫度下攪拌1小時，然後添加DMF（1.81 mL，23.36 mmol），並且將RM再攪拌1小時。將RM用NaHCO3 飽和水溶液淬滅，緩慢溫熱至RT並用EtOAc萃取。將有機層依次用鹽水洗滌，用相分離器乾燥並且在真空中濃縮。將殘餘物藉由正相層析法（洗脫液：環己烷 : EtOAc 100 : 0至80 : 20）純化以給出標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ): δ 10.18 (s, 1H), 9.19 (s, 1H), 8.10 (s, 1H)。
步驟2：(E )-3-(5-溴-2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-N -甲氧基-N -甲基丙烯醯胺
Figure 02_image314
向5-溴-2-(三氟甲基)異菸醛（步驟1，2.0 g，7.64 mmol）在DCM（50 mL）中之溶液中添加N -甲氧基-N -甲基-2-(三苯基亞正膦基)-乙醯胺（4.16 g，11.46 mmol）。將RM在RT下攪拌30 min，然後用鹽水淬滅並且用DCM萃取。將有機層合併，用相分離器乾燥並在真空中濃縮。將粗殘餘物藉由正相層析法（洗脫液：環己烷 : EtOAc 100 : 0至80 : 20）純化以得到標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.00 min；MS m/z [M+H]+ 339.0；UPLC-MS 1。
步驟3：3-(5-溴-2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-N -甲氧基-N -甲基丙醯胺
Figure 02_image316
向玻璃高壓滅菌器（Hastelloy）中裝入(E )-3-(5-溴-2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-N -甲氧基-N -甲基丙烯醯胺（步驟2，2.69 g，7.93 mmol）、Rh氧化鋁粉5%（Engelhard 8011，675m g）和EtOAc（100 mL）。將高壓滅菌器密封並且施加2.1巴H2 壓力。將反應在此條件下在RT下攪拌5小時。然後添加另外的催化劑（0.2 g）並且將反應在H2 氣氛（2.1巴）下攪拌2小時。將RM通過矽藻土墊過濾。將矽藻土用EtOAc洗滌兩次，並將合併的濾液在真空中濃縮。將粗產物不經進一步純化即用於下一步驟。
LC-MS：Rt = 0.98 min；MS m/z [M+H]+ 341.1；UPLC-MS 1。
步驟4：3-(三氟甲基)-5,6-二氫-7H -環戊并[c ]吡啶-7-酮
Figure 02_image318
使用丙酮/乾冰浴，將3-(5-溴-2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-N -甲氧基-N -甲基丙醯胺（步驟3，2.64 g，7.20 mmol）在THF（60 mL）中之溶液冷卻至-78°C，並且逐滴添加n -BuLi在己烷中之溶液（1.6 M，6.75 mL，10.80 mmol）。將反應在-78°C下攪拌1小時。然後將反應混合物用NH4 OH飽和水溶液淬滅，溫熱至RT並用EtOAc萃取。將有機層依次用1 N HCl水溶液洗滌，經相分離器乾燥並且濃縮。將殘餘物藉由正相層析法（洗脫液：環己烷 : EtOAc 100 : 0至70 : 30）純化以給出標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.77 min；MS m/z [M+H]+ 202.1；UPLC-MS 1。
步驟5：3-(三氟甲基)-5,6-二氫螺[環戊并[c ]吡啶-7,4'-咪唑烷]-2',5'-二酮
Figure 02_image320
將3-(三氟甲基)-5,6-二氫-7H -環戊并[c]吡啶-7-酮（步驟4，1.25 g，5.66 mmol）、碳酸銨（6.52 g，67.9 mmol）、EtOH（25 mL）、水（25 mL）和KCN（921 mg，14.1 mmol）的混合物在50°C下加熱15小時。向冷卻的RM中添加水並且將RM用EtOAc萃取。將合併的有機層依次用1 N HCl水溶液洗滌，經相分離器乾燥並在真空中濃縮以給出標題化合物，將其不經進一步純化直接使用。
LC-MS：Rt = 0.62 min；MS m/z [M+H]+ 272.1；UPLC-MS 1。
步驟6：7-胺基-3-(三氟甲基)-6,7-二氫-5H -環戊并[c ]吡啶-7-甲酸
Figure 02_image322
將3-(三氟甲基)-5,6-二氫螺[環戊并[c]吡啶-7,4'-咪唑烷]-2',5'-二酮（步驟5，1.31 g，4.83 mmol）、KOH（1.491 g，26.6 mmol）和水（20 mL）的混合物在100°C下伴隨攪拌加熱2天。使用1 N HCl水溶液將冷卻的RM酸化至pH 3-4並用EtOAc洗滌。將水層凍乾以得到標題化合物，其含有NaCl，並且將其不經進一步純化用於下一步驟。
LC-MS：Rt = 0.34 min；MS m/z [M+H]+ 247.2；UPLC-MS 1。
步驟7：(S )-(7-胺基-3-(三氟甲基)-6,7-二氫-5H -環戊并[c ]吡啶-7-基)甲醇
Figure 02_image324
在RT下，向7-胺基-3-(三氟甲基)-6,7-二氫-5H -環戊并[c ]吡啶-7-甲酸（步驟6，2.40 g，4.84 mmol）在THF（30 mL）中之溶液中添加硼烷四氫呋喃複合物（1 M，15.0 mL，15.0 mmol）。將RM在RT下攪拌4小時，然後小心地用甲醇淬滅並且濃縮。將殘餘物再次溶解於甲醇中並濃縮至乾（再濃縮兩次）。然後添加乙醇（1.25 N，50 mL）中的HCl，將所得混合物在RT下攪拌15 min並使用旋轉蒸發儀濃縮至乾。將殘餘物用NaHCO3 飽和水溶液鹼化並用乙酸乙酯萃取。將合併的有機層依次用鹽水洗滌，經相分離器乾燥並且在真空中濃縮以得到外消旋產物。然後將外消旋物藉由手性HPLC（儀器：Gilson Prep HPLC系統；柱：LuxCel-2，5 μM，21.2 x 250 mm，25°C；洗脫液：庚烷 : MeOH : EtOH 90 : 5 : 5 + 0.1% Et2 NH；流速：10 mL/min；檢測：254 nm；進樣體積：2 mL）分離以給出作為第一洗脫峰的標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.41 min；MS m/z [M+H]+ 233.2；UPLC-MS 1。
手性-HPLC：Rt = 11.82 min；(R )-(7-胺基-3-(三氟甲基)-6,7-二氫-5H -環戊并[c ]吡啶-7-基)甲醇作為第二峰洗脫，Rt = 16.08 min；C-HPLC 17。
步驟8：(S )-(7-((3-氟-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-3-(三氟甲基)-6,7-二氫-5H -環戊并[c ]吡啶-7-基)甲醇
Figure 02_image326
向微波小瓶中裝入(S )-(7-胺基-3-(三氟甲基)-6,7-二氫-5H -環戊并[c]吡啶-7-基)甲醇（步驟7，148 mg，637 μmol）、2,3-二氟-5-(三氟甲基)吡啶（95 μL，765 μmol）、iPrOH（3 mL）和二異丙基乙胺（334 μL，1.91 mmol）。將小瓶密封在微波中加熱至160°C持續6小時。將RM用NaHCO3 飽和水溶液淬滅並用EtOAc萃取。將有機層經相分離器乾燥並且濃縮。將粗殘餘物藉由正相層析法（洗脫液：環己烷 : EtOAc 100 : 0至50 : 50）純化以得到標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.16 min；MS m/z [M+H]+ 396.2；UPLC-MS 1。
步驟9：(S )-8'-氟-3,6'-雙(三氟甲基)-5,6-二氫-3'H -螺[環戊并[c ]吡啶-7,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image328
向(S )-(7-((3-氟-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-3-(三氟甲基)-6,7-二氫-5H -環戊并[c ]吡啶-7-基)甲醇（步驟8，140 mg，350 μmol）在甲苯（5 mL）中之溶液中添加亞硫醯氯（260 μL，3.54 mmol）。將RM加熱至80°C持續1小時然後用MeOH淬滅並且濃縮至乾。使用NaHCO3 飽和水溶液將殘餘物鹼化並用EtOAc萃取。將有機經相分離器乾燥並在真空中濃縮。將粗殘餘物藉由正相層析法（洗脫液：環己烷 : EtOAc 100 : 0至0 : 100）純化以得到標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.66 min；MS m/z [M+H]+ 378.2；UPLC-MS 1。
步驟10：(S )-3,6'-雙(三氟甲基)-5,6-二氫-3'H -螺[環戊并[c ]吡啶-7,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]-8'-醇
Figure 02_image330
使用冰浴，將2-(甲基磺醯基)乙醇（92 mg，0.73 mmol）在DMF（3 mL）中之溶液冷卻0°C並添加NaH（60%在礦物油中，35.0 mg，0.88 mmol）。30 min後，逐滴添加(S )-8'-氟-3,6'-雙(三氟甲基)-5,6-二氫-3'H -螺[環戊并[c ]吡啶-7,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]（步驟9，110 mg，290 μmol）在DMF（1 mL）中之溶液。允許RM溫熱至RT並攪拌4小時。將RM用水淬滅並用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，乾燥（相分離器）並濃縮。將粗殘餘物藉由正相層析法（洗脫液：DCM : MeOH 100 : 0至80 : 20）純化以得到標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.67 min；MS m/z [M+H]+ 376.2；UPLC-MS 1。
中間體N：(S )-5-溴-4-氟-3'-(3-(氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2,3-二氫螺[茚-1,4'-㗁唑啶]-2'-酮
Figure 02_image332
將(S )-5-溴-4-氟-2,3-二氫螺[茚-1,4'-㗁唑啶]-2'-酮（中間體I，40 mg，0.120 mmol）、2-氯-3-(氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶（中間體E，41.4 mg，0.180 mmol）、CuI（11.45 mg，0.060 mmol）和Cs2 CO3 （78 mg，0.240 mmol）在DMF（2 mL）中之混合物在120°C下在ace壓力管中攪拌4小時。將冷卻的RM用EtOAc稀釋，將有機相用NaHCO3 飽和水溶液洗滌2x，乾燥並且濃縮。將殘餘物藉由逆相層析法（矽膠，洗脫液：c-己烷/EtOAc 100/0至50/50）純化，並且將含有級分的產物合併並蒸發以給出呈黃色固體的標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.24 min；MS m/z [M+H]+ 479.1/481.1；UPLC-MS 1。
中間體O：(S )-(5-溴-4-氟-1-((3-氟-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-2,3-二氫-1H -茚-1-基)甲醇
Figure 02_image334
將(S )-(1-胺基-5-溴-4-氟-2,3-二氫-1H -茚-1-基)甲醇（中間體J，900 mg，3.39 mmol）、2,3-二氟-5-(三氟甲基)吡啶（517 µL，4.07 mmol）和DIPEA（2.4 mL，13.56 mmol）在iPrOH（2.6 mL）中之混合物在160°C下在微波中加熱2小時。將冷卻的RM蒸發，將殘餘物吸收到DCM中並且蒸發到Isolute上用於藉由正相層析法（12 g柱，洗脫液：c-己烷中從0%至60% EtOAc）純化。將含有級分的產物合併並且蒸發，以給出標題化合物。
LC-MS：Rt = 6.59 min；MS m/z [M+H]+ 423.2/425.1；UPLC-MS 4。
使用用於製備中間體O的方法來製備以下中間體O1、O2和O3。
中間體 結構 表徵數據
O1
Figure 02_image336
(S )-(5,6-二氟-1-((3-氟-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-1,2,3,4-四氫化萘-1-基)甲醇		 LC-MS：Rt = 1.27 min；MS m/z [M+H]+ 377.2；UPLC-MS 1。
O2
Figure 02_image338
(S )-(1-((3-氟-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-5-(三氟甲基)-2,3-二氫-1H -茚-1-基)甲醇		 LC-MS：Rt = 1.28 min；MS m/z [M+H]+ 395.1；UPLC-MS 1。
O3
Figure 02_image340
(S )-(6-溴-1-((3-氟-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-1,2,3,4-四氫化萘-1-基)甲醇		 LC-MS：Rt = 1.36 min；MS m/z [M+H]+ 419.1/421.1；UPLC-MS 1。
中間體P：(S )-(5-溴-1-((3-氯-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-2,3-二氫-1H -茚-1-基)甲醇
Figure 02_image342
在RT下，向(S )-(1-胺基-5-溴-2,3-二氫-1H -茚-1-基)甲醇（中間體CL，5.15 g，21.27 mmol）在iPrOH（22 mL）中之溶液中添加3-氯-2-氟-5-(三氟甲基)吡啶（4.80 g，24.04 mmol）和DIPEA（7.43 mL，42.5 mmol）。將RM進行超音波處理並且在RT下攪拌10 min，然後在170°C下在微波中加熱80 min。將RM倒入NaHCO3 飽和水溶液中並且用EtOAc萃取2x。將有機層用NaHCO3 飽和水溶液和鹽水洗滌並且蒸發。將殘餘物藉由正相層析法（120 g二氧化矽RediSep柱，洗脫液：庚烷 : EtOAc）純化以給出標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.36 min；MS m/z [M+H]+ 421.1/423.1；UPLC-MS 1。
使用用於製備中間體P的方法來製備以下中間體P1和P2。
中間體 結構 表徵數據
P1
Figure 02_image344
(S )-(6-溴-1-((3-氯-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-5-氟-1,2,3,4-四氫化萘-1-基)甲醇		 LC-MS：Rt = 1.43 min；MS m/z [M+H]+ 453.1/455.1；UPLC-MS 1。
P2
Figure 02_image346
外消旋 -(4-((3-氯-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-7-(三氟甲基) 口克唍-4-基)甲醇		 LC-MS：Rt = 1.96 min；MS m/z [M+H]+ 427.2/ 429.2；UPLC-MS 5
中間體Q：(S )-5',6-雙(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-茚]-8-醇
步驟1：(S )-8-氟-5',6-雙(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-茚]
Figure 02_image348
在RT下在密封的小瓶中，將SOCl2 （0.54 mL，7.41 mmol）添加至(S )-(1-((3-氟-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-5-(三氟甲基)-2,3-二氫-1H -茚-1-基)甲醇（中間體O2，292 mg，0.741 mmol）在甲苯（2 mL）中之溶液中。將RM攪拌並且在80°C下加熱30 min，冷卻，然後用DCM稀釋。將有機相用NaHCO3 飽和水溶液洗滌，隨後用鹽水洗滌，用相分離筒分離。濃縮有機層給出黃色油狀物，將其用MeOH研磨，過濾並乾燥以給出呈黃色粉末的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, MeOH-d4 ) δ 7.80 (s, 1 H), 7.49 - 7.64 (m, 2 H), 7.45 (d, 1 H), 7.11 (d, 1 H), 4.23 - 4.51 (m, 2 H), 3.08 - 3.22 (m, 1 H), 2.91 - 3.08 (m, 1 H), 2.26 - 2.52 (m, 2 H)。
LC-MS：Rt = 3.30 min；MS m/z [M+H]+ 377.1；UPLC-MS 4。
步驟2：(S )-5',6-雙(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-茚]-8-醇
Figure 02_image350
將氫化鈉（57 mg，1.35 mmol）添加至2-(甲基磺醯基)乙醇（57 mg，459 μmol）在DMF（1.5 mL）中之攪拌溶液（用冰浴冷卻）中。將RM在0°C下攪拌10 min，然後添加(S )-8-氟-5',6-雙(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-茚]（步驟1 169 mg，450 μmol）。攪拌90 min後，將RM重新冷卻至0°C，並且製備並添加另外的0.3當量的DMF中的醇鈉溶液。在RT下再攪拌30 min後，然後將RM倒入NH4 Cl飽和水溶液中，用EtOAc萃取2x，將合併的有機相用鹽水洗滌，並且濃縮。將殘餘物藉由正相層析法（10 g SiO2 SNAP筒，洗脫液：DCM : MeOH 100 : 0至90 : 10）純化以給出呈灰色粉末的標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.78 min；MS m/z [M+H]+ 375.1；UPLC-MS 1。
中間體R：(S )-(1-胺基-6-溴-5-氟-1,2,3,4-四氫化萘-1-基)甲醇鹽酸鹽
Figure 02_image352
在Ar下，將(S )-1-胺基-6-溴-5-氟-1,2,3,4-四氫化萘-1-甲酸（5 g，15.3 mmol）懸浮於THF（10 mL）中，並且冷卻至0°C。向RM中經30 min逐滴添加THF（1 M，100 ml，100 mmol）中的硼烷THF複合物。將RM在RT下攪拌18小時，然後小心地用MeOH淬滅並且蒸發，用MeOH再共蒸發3x。將殘餘物用MeOH稀釋並添加Et2 O（10 ml，20 mmol）中的2 M HCl溶液。添加另外的Et2 O直至形成沈澱，並且將RM在RT下攪拌30 min。將固體藉由過濾收集並乾燥以給出呈白色固體的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.52 (s, 3H), 7.65 (t, 1H), 7.51 (d, 1H), 5.79 (t, 1H), 3.65 (d, 2H), 2.85 - 2.73 (m, 1H), 2.73 - 2.60 (m, 1H), 2.22 (dd, 1H), 1.95 - 1.82 (m, 1H), 1.82 - 1.69 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 0.57 min；MS m/z [M+H]+ 274.1/276.1；UPLC-MS 1。
中間體S：(S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -二螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘-4',2''-[1,3]二硫環戊烷]
步驟1：(S )-6'-溴-3-(3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-5'-氟-2',3'-二氫二螺[㗁唑啶-4,1'-萘-4',2''-[1,3]二硫環戊烷]-2-酮
Figure 02_image354
在Ar下在微波中在120°C下，將(S )-6'-溴-5'-氟-2',3'-二氫二螺[㗁唑啶-4,1'-萘-4',2''-[1,3]二硫環戊烷]-2-酮（中間體T，795 mg，1.96 mmol）、2-氯-3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶（中間體A，963 mg，3.85 mmol）、碘化銅(I)（235 mg，1.23 mmol）和碳酸銫（1.28 g，3.91 mmol）在DMF（13 mL）中之混合物加熱2.5小時。添加另外的2-氯-3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶（中間體A，198 mg，0.8 mmol）和碘化銅(I)（50 mg，260 μmol），並且在120°C下繼續加熱2小時。用2-氯-3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶（中間體A，198 mg，0.8 mmol）和碘化銅(I)（50 mg，260 μmol）將該程序重複。將冷卻的RM用NaHCO3 飽和水溶液稀釋並用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並蒸發。將殘餘物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（120 g SiO2 柱；洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至85 : 15）純化。將含有級分的產物合併並且蒸發，以給出呈灰白色泡沫的標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.36 min；MS m/z [M+H]+ 600.8/603.0；UPLC-MS 1。
步驟2：(S )-(7'-溴-4'-((3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-8'-氟-3',4'-二氫-2'H -螺[[1,3]二硫環戊烷-2,1'-萘]-4'-基)甲醇
Figure 02_image356
將NaOH水溶液（2 M，11 mL，22 mmol）添加至懸浮在EtOH（15 mL）中的(S )-6'-溴-3-(3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-5'-氟-2',3'-二氫二螺[㗁唑啶-4,1'-萘-4',2''-[1,3]二硫環戊烷]-2-酮（步驟1，1.8 g，2.84 mmol）中，並且將RM在80°C下攪拌135 min。將RM用水稀釋並用EtOAc萃取2x。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並且蒸發以給出呈灰白色泡沫的標題化合物，將其直接用於下一步驟。
LC-MS：Rt = 1.37 min；MS m/z [M+H]+ 575.0/577.0；UPLC-MS 1。
步驟3：(S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -二螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘-4',2''-[1,3]二硫環戊烷]
Figure 02_image358
將SOCl2 （0.35 ml，4.8 mmol）逐滴添加至(S )-(7'-溴-4'-((3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-8'-氟-3',4'-二氫-2'H -螺[[1,3]二硫環戊烷-2,1'-萘]-4'-基)甲醇（步驟2，1.6 g，2.59 mmol）在甲苯（15 mL）中之溶液中，並且將RM在Ar下在80°C下加熱1小時。將RM用NaHCO3 飽和水溶液淬滅並用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並蒸發。將殘餘物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（120 g SiO2 柱；洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至75 : 25）純化。將含有級分的產物合併並且蒸發，以給出呈黃色固體的標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.96 min；MS m/z [M+H]+ 557.0/559.1；UPLC-MS 1。
中間體T : (S )-6'-溴-5'-氟-2',3'-二氫二螺[㗁唑啶-4,1'-萘-4',2''-[1,3]二硫環戊烷]-2-酮
步驟1：(S )-6-溴-5-氟-3,4-二氫-2H -螺[萘-1,4'-㗁唑啶]-2'-酮
Figure 02_image360
在0°C下，將三光氣（1.06 g，3.57 mmol）在DCM（50 mL）中之溶液逐滴添加至(S )-(1-胺基-6-溴-5-氟-1,2,3,4-四氫化萘-1-基)甲醇（中間體R，2.5 g，8.94 mmol）和Et3 N（2.62 mL，18.77 mmol）在DCM（50 mL）中之溶液中，並且在RT下攪拌45 min。將RM用NH4 Cl飽和水溶液和DCM淬滅。將RM在RT下攪拌20 min，用DCM萃取，將合併的有機層用鹽水洗滌，乾燥（相分離器）並濃縮以給出標題化合物，將其直接用於下一步驟。
LC-MS：Rt = 0.96 min；MS m/z [M+H]+ 300.1/302.1；UPLC-MS 1。
步驟2：(S )-6-溴-5-氟-2H -螺[萘-1,4'-㗁唑啶]-2',4(3H )-二酮
Figure 02_image362
將九水合硝酸鐵(III)（662 mg，1.61 mmol）添加至(S )-6-溴-5-氟-3,4-二氫-2H -螺[萘-1,4'-㗁唑啶]-2'-酮（步驟1，2.51 g，8.03 mmol）和N -羥基鄰苯二甲醯亞胺（0.327 g，2.01 mmol）在AcCN（50 mL）中之溶液中，並且將RM在O2 氣氛下在35°C下攪拌18小時。將RM用DCM萃取，將有機層用鹽水洗滌，乾燥（相分離器）並濃縮。將殘餘物用DCM研磨，並且過濾後獲得呈白色固體的標題化合物。藉由對母液進行純化可以獲得另外的材料，用DCM研磨後，藉由正相層析法（矽膠：c-己烷 : EtOAc 100 : 0至50 : 50）以給出標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.69 min；無明顯的分子離子信號；UPLC-MS 1。
步驟3：(S )-6'-溴-5'-氟-2',3'-二氫二螺[㗁唑啶-4,1'-萘-4',2''-[1,3]二硫環戊烷]-2-酮
Figure 02_image364
在0°C下，將三氟化硼醚化物（303 μL，2.39 mmol）逐滴添加至(S )-6-溴-5-氟-2H -螺[萘-1,4'-㗁唑啶]-2',4(3H )-二酮（步驟2，1.5 g，4.78 mmol）和乙烷-1,2-二硫醇（803 μL，9.55 mmol）在DCM（30 mL）中之溶液中，並且將RM在RT下攪拌18小時。將RM混合物倒入NaOH水溶液（1 N，100 mL）中，用DCM萃取，乾燥（相分離器）並濃縮。將殘餘物藉由正相層析法（矽膠，洗脫液：c-己烷 : EtOAc 100 : 0至50 : 50）純化以給出標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.98 min；無明顯的分子離子信號；UPLC-MS 1。
中間體U：(S )-6'-溴-4'-((三級丁基二甲基矽基)氧基)-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-6-(三氟甲基)-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]
Figure 02_image366
在0°C下在Ar下，將三級丁基二甲基矽基三氟甲烷磺酸酯（90 μL，381 μmol）逐滴添加至DCM（2 mL）中的(S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-6-(三氟甲基)-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'(3'H )-酮（實例8，121 mg，249 μmol）和三乙胺（173 μL，1.25 mmol）中。將RM在0°C下攪拌10 min，然後在RT下攪拌20 min，用水稀釋並且用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥並蒸發。將殘餘物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（40 g SiO2 柱，洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至75 : 25）純化。將含有級分的產物合併，蒸發並乾燥以給出呈黃色固體的標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.38 min；MS m/z [M+H]+ 595.1/597.1；UPLC-MS 1。
中間體V：(S )-(1-胺基-6-溴-1,2,3,4-四氫化萘-1-基)甲醇
Figure 02_image368
藉由與中間體M，步驟7相似的方法，藉由用外消旋 -1-胺基-6-溴-1,2,3,4-四氫化萘-1-甲酸（中間體AU8）代替7-胺基-3-(三氟甲基)-6,7-二氫-5H -環戊并[c ]吡啶-7-甲酸（中間體M，步驟6）製備標題化合物。將鏡像異構物藉由手性HPLC：（儀器：Gilson Trilution HPLC製備型系統；柱：Chiralpak ID 5 μm，3 x 25 cm，25°C；洗脫液：庚烷 : TBME : EtOH 80 : 10 : 10 + 0.05% Et2 NH；流速：10 mL/min；檢測：230 nm）分離以給出作為第一洗脫峰的標題化合物，Rt = 8.82 min；C-HPLC 7。
LC-MS：Rt = 0.56 min；MS m/z [M+H]+ 256.1/258.1；UPLC-MS 1。
手性-HPLC：Rt = 8.82 min；(R )-(1-胺基-6-溴-1,2,3,4-四氫化萘-1-基)甲醇作為第二洗脫峰，Rt = 11.87 min；C-HPLC 7。
中間體W：(S )-6'-溴-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-8-醇
步驟1：(S )-6'-溴-8-氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]
Figure 02_image370
在氬氣下，將SOCl2 （74 μl，1.01 mmol）添加至甲苯（2.5 mL）中的(6-溴-1-((3-氟-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-1,2,3,4-四氫化萘-1-基)甲醇（中間體O3，330 mg，779 μmol）中。將RM加熱至80°C，持續75 min。將RM用NaHCO3 飽和水溶液淬滅並用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥並蒸發。將殘餘物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（40 g SiO2 柱，洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至70 : 30）純化。將含有級分的產物合併，蒸發並且乾燥以給出標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.79 min；MS m/z [M+H]+ 401.2/403.2；UPLC-MS 1。
步驟2：(S )-6'-溴-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-8-醇
Figure 02_image372
在RT下在Ar下，將NaH（在礦物油中的55%分散體，98 mg，2.24 mmol）添加至在DMF（1.5 mL）中的2-(甲基磺醯基)乙醇（122 mg，972 μmol）中。將RM冷卻至0°C，在0°C下攪拌15 min並且添加(S )-6'-溴-8-氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]（步驟1，300 mg，748 μmol）在DMF（4.5 mL）中之溶液。將RM在RT下攪拌30 min，然後用NH4 Cl飽和水溶液淬滅並且用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，並且蒸發以給出呈橙色固體的標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.83 min；MS m/z [M+H]+ 399.1/401.1；UPLC-MS 1。
中間體X：(S )-6'-溴-4'-((三級丁基二甲基矽基)氧基)-8-(二氟甲氧基)-3',5'-二氟-6-(三氟甲基)-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]
Figure 02_image374
與中間體U中該方法相似的方法，藉由用(1'S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-3',5'-二氟-6-(三氟甲基)-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'(3'H )-酮（實例9，作為非鏡像異構物混合物）代替(S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-6-(三氟甲基)-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'(3'H )-酮（實例8）製備標題化合物。將粗產物藉由正相層析法（40 g SiO2 柱；洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至80 : 20）純化以給出呈黃色固體的標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.49 min；MS m/z [M+H]+ 613.0/614.9；UPLC-MS 1。
中間體Y：(S )-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -二螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘-4',2''-[1,3]二硫環戊烷]
Figure 02_image376
藉由與中間體S相似的方法，藉由用(S )-5'-氟-2',3'-二氫二螺[㗁唑啶-4,1'-萘-4',2''-[1,3]二硫環戊烷]-2-酮（中間體Z）代替(S )-6'-溴-5'-氟-2',3'-二氫二螺[㗁唑啶-4,1'-萘-4',2''-[1,3]二硫環戊烷]-2-酮（中間體T）製備標題化合物。將粗產物不經純化直接用於下一步驟。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.91 (s, 1H), 7.51 - 7.23 (m, 2H), 7.07 (q, 2H), 7.01 (s, 1H), 4.31 (d, 1H), 4.12 (d, 1H), 3.65 - 3.50 (m, 3H), 3.43 - 3.36 (m, 1H), 2.47 (dd, 1H), 2.32 (dd, 1H), 2.09 - 2.00 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 0.84 min；MS m/z [M+H]+ 479.0；UPLC-MS 1。
中間體Z：(S )-5'-氟-2',3'-二氫二螺[㗁唑啶-4,1'-萘-4',2''-[1,3]二硫環戊烷]-2-酮
步驟1：(S )-5-氟-3,4-二氫-2H -螺[萘-1,4'-㗁唑啶]-2'-酮
Figure 02_image378
在0°C-5°C下，向(S )-(1-胺基-5-氟-1,2,3,4-四氫化萘-1-基)甲醇（中間體AA，1.08 g，5.53 mmol）和Et3 N（1.62 mL，11.6 mmol）在DCM（30 mL）中之溶液中逐滴添加三光氣（0.66 g，2.21 mmol）在DCM（30 mL）中之溶液。將黃色溶液在RT下攪拌30 min。將RM倒入NaHCO3 飽和水溶液中並且用DCM萃取2x。將合併的有機萃取物乾燥（相分離器）並且蒸發以給出呈米色固體的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.22 (s, 1H), 7.33-7.29 (m, 2H), 7.11 (m, 1H), 4.35 (d, 1H), 4.18 (d, 1H), 2.70-2.57 (m, 2H), 2.02-1.72 (m, 4H)。
LC-MS：Rt = 0.81 min；MS m/z [M+NH4 ]+ 239.2；UPLC-MS 1。
步驟2：(S )-5-氟-2H -螺[萘-1,4'-㗁唑啶]-2',4(3H )-二酮
Figure 02_image380
將(S )-5-氟-3,4-二氫-2H -螺[萘-1,4'-㗁唑啶]-2'-酮（500 mg，2.26 mmol）、N -羥基鄰苯二甲醯亞胺（92 mg，0.56 mmol）和九水合硝酸鐵(III)（186 mg，0.45 mmol）置於微波小瓶中。添加CH3 CN（14 mL）並且將混合物用O2 沖洗。將小瓶蓋上，並且通過針將充滿O2 的氣球連接到小瓶上。將RM在O2 氣氛下在35°C下攪拌16小時。然後將RM通過矽藻土墊過濾，用EtOAc和MeOH洗滌並且將濾液蒸發。將粗混合物懸浮於CH2 Cl2 中並且過濾以給出呈褐色固體的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.45 (s, 1H), 7.76 (m, 1H), 7.43 (d, 1H), 7.30 (dd, 1H), 4.59 (d, 1H), 4.26 (d, 1H), 2.87-2.79 (m, 1H), 2.66-2.60 (m, 1H), 2.31-2.27 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 0.53 min；MS m/z [M-H]- 234.2；UPLC-MS 1。
步驟3：(S )-5'-氟-2',3'-二氫二螺[㗁唑啶-4,1'-萘-4',2''-[1,3]二硫環戊烷]-2-酮
Figure 02_image382
藉由與中間體T相似的方法，藉由用(S )-(1-胺基-5-氟-1,2,3,4-四氫化萘-1-基)甲醇（中間體AA）代替(S )-(1-胺基-6-溴-5-氟-1,2,3,4-四氫化萘-1-基)甲醇（中間體R）製備標題化合物。將粗產物藉由正相層析法（80 g SiO2 柱；洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至40 : 60）純化以給出呈棕色固體的標題化合物。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.26 (s, 1H), 7.42 (td, 1H), 7.28 (d, 1H), 7.14 (dd, 1H), 4.45 (d, 1H), 4.21 (d, 1H), 3.66 - 3.58 (m, 1H), 3.53 (dd, 2H), 3.38 - 3.35 (m, 1H), 2.44 - 2.30 (m, 2H), 2.11 (t, 2H)。
LC-MS：Rt = 0.87 min；MS m/z [M+H]+ 312.0；UPLC-MS 1。
中間體AA：(S )-(1-胺基-5-氟-1,2,3,4-四氫化萘-1-基)甲醇
Figure 02_image384
藉由與中間體M，步驟7相似的方法，藉由用外消旋 -1-胺基-5-氟-1,2,3,4-四氫化萘-1-甲酸（中間體AU9）代替7-胺基-3-(三氟甲基)-6,7-二氫-5H -環戊并[c ]吡啶-7-甲酸（中間體M，步驟6）製備標題化合物。將鏡像異構物藉由手性SFC：（儀器：Sepiatec SFC 100；柱：Lux i-Cel 5；5 μm；250 x 30 mm，40°C；洗脫液：CO2 /MeOH 80 : 20 + 1% iPrNH2 ；流速：80 mL/min；檢測：260 nm；進樣體積：4 mL 乙醇（300 mg/進樣））分離以給出呈米色固體的作為第一洗脫峰的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.40 (d, 1H), 7.16 (m, 1H), 6.95 (m, 1H), 4.79 (br s, 1H), 3.45 (d, 1H), 3.29 (d, 1H), 2.65-2.61 (m, 2H), 2.13-1.98 (m, 3H), 1.84-1.76 (m, 1H), 1.75-1.66 (m, 1H), 1.48 (m, 1H)。
LC-MS：Rt = 0.45 min；MS m/z [M+H]+ 196.1；UPLC-MS 1。
手性-HPLC：Rt = 7.45 min；(R )-(1-胺基-5-氟-1,2,3,4-四氫化萘-1-基)甲醇作為第二峰洗脫，Rt = 8.79 min；C-HPLC 47。
中間體AB：(S )-4'-((三級丁基二甲基矽基)氧基)-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-6-(三氟甲基)-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]
步驟1：(S )-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-6-(三氟甲基)-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a]吡啶-2,1'-萘]-4'(3'H )-酮
Figure 02_image386
將丙酮（120 mL）和水（12 mL）中的(S )-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -二螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘-4',2''-[1,3]二硫環戊烷]（中間體Y，4.27 g，8.03 mmol）冷卻至0°C並添加NBS（11.4 g，64.3 mmol）。在0°C下攪拌5 min後，將硫代硫酸鈉飽和水溶液添加至RM中。將RM用NaHCO3 飽和水溶液鹼化並用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並蒸發。將殘餘物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（120 g SiO2 柱；洗脫液：DCM : MeOH 100 : 0至94 : 6）純化。將含有級分的產物合併並且蒸發，以給出標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.59 min；MS m/z [M+H]+ 403.0；UPLC-MS 1。
步驟2：(S )-4'-((三級丁基二甲基矽基)氧基)-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-6-(三氟甲基)-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]
Figure 02_image388
藉由與中間體U相似的方法，藉由用(S )-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-6-(三氟甲基)-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a]吡啶-2,1'-萘]-4'(3'H )-酮（步驟1）代替(S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-6-(三氟甲基)-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'(3'H )-酮（實例8）製備標題化合物。將粗產物藉由正相層析法（120 g SiO2 柱，洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至75 : 25）純化以給出呈黃色固體的標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.21 min；MS m/z [M+H]+ 517.1；UPLC-MS 1。
中間體AC和AD：(2S ,4'S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-4'-羥基-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6-甲腈和(2S ,4'R )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-4'-羥基-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6-甲腈
步驟1：(S )-6-(6'-溴-5'-氟-2-側氧基-2',3'-二氫二螺[㗁唑啶-4,1'-萘-4',2''-[1,3]二硫環戊烷]-3-基)-5-(二氟甲氧基)菸鹼甲腈
Figure 02_image390
藉由與中間體S，步驟1相似的方法，藉由用6-氯-5-(二氟甲氧基)菸鹼甲腈代替2-氯-3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶（中間體A）製備標題化合物。將粗產物藉由正相層析法（80 g SiO2 柱；洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至70 : 30）純化以給出呈白色泡沫的標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.24 min；MS m/z [M+H]+ 558.1/559.9；UPLC-MS 1。
步驟2：(S )-6-((7'-溴-8'-氟-4'-(羥基甲基)-3',4'-二氫-2'H -螺[[1,3]二硫環戊烷-2,1'-萘]-4'-基)胺基)-5-(二氟甲氧基)菸鹼甲腈
Figure 02_image392
在Ar下，將(S )-6-(6'-溴-5'-氟-2-側氧基-2',3'-二氫二螺[㗁唑啶-4,1'-萘-4',2''-[1,3]二硫環戊烷]-3-基)-5-(二氟甲氧基)菸鹼甲腈（步驟1，1.57 g，2.53 mmol）和碳酸銫（495 mg，1.52 mmol）懸浮於MeOH（16 mL）中。將RM在80°C下攪拌35 min，然後用水稀釋並且用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾，蒸發並乾燥以給出呈白色泡沫的標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.22 min；MS m/z [M+H]+ 532.0/534.0；UPLC-MS 1。
步驟3：(S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-2',3'-二氫-3H -二螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘-4',2''-[1,3]二硫環戊烷]-6-甲腈
Figure 02_image394
藉由中間體S，步驟3相似的方法，藉由用(S )-6-((7'-溴-8'-氟-4'-(羥基甲基)-3',4'-二氫-2'H -螺[[1,3]二硫環戊烷-2,1'-萘]-4'-基)胺基)-5-(二氟甲氧基)菸鹼甲腈（中間體AC和AD，步驟2）代替(S )-(7'-溴-4'-((3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-8'-氟-3',4'-二氫-2'H -螺[[1,3]二硫環戊烷-2,1'-萘]-4'-基)甲醇（中間體S，步驟2）製備標題化合物。將粗產物藉由正相層析法（40 g SiO2 柱；洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至70 : 30）純化以給出呈黃色固體的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.13 (d, 1H), 7.61 (dt, 1H), 7.46 - 6.99 (m, 3H), 4.31 (dd, 1H), 4.12 (dd, 1H), 3.69 - 3.59 (m, 1H), 3.57 (d, 2H), 3.40 (s, 1H), 2.35 (d, 2H), 2.03 (d, 2H)。
LC-MS：Rt = 0.93 min；MS m/z [M+H]+ 514.0/516.0；UPLC-MS 1。
步驟4：(S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-4'-側氧基-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6-甲腈
Figure 02_image396
將水（2.5 mL）添加至丙酮（25 mL）中的(S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-2',3'-二氫-3H -二螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘-4',2''-[1,3]二硫環戊烷]-6-甲腈（步驟3，867 mg，1.65 mmol）（用冰浴冷卻）中。添加NBS（2.94 g，16.5 mmol）並且將RM在0°C下攪拌5 min。將反應用硫代硫酸鈉飽和水溶液淬滅，用NaHCO3 飽和水溶液鹼化並且用EtOAc萃取兩次。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並蒸發。將殘餘物藉由SFC（SFC 1）純化，並且將含有級分的產物合併並蒸發以給出標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.72 min，寬峰；MS m/z [M+H]+ 438.0/440.0；UPLC-MS 1。
步驟5：(2S ,4'S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-4'-羥基-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6-甲腈和(2S ,4'R )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-4'-羥基-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6-甲腈
Figure 02_image398
在Ar下，將四氫硼酸鈉（20.3 mg，514 μmol）添加至懸浮在EtOH（5 mL）中的(S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-4'-側氧基-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6-甲腈（步驟4，256 mg，467 μmol）中，冷卻至0°C。將RM在0°C下攪拌30分鐘，然後用NaHCO3 飽和水溶液淬滅並且用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥並蒸發。將殘餘物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（40 g SiO2 柱；洗脫液 DCM : MeOH 100 : 0至95 : 5）純化，然後藉由SFC（SFC 1）純化以給出呈非鏡像異構物混合物的標題化合物。將非鏡像異構物藉由手性SFC（沃特世SFC100製備型系統，柱：Chiralpak IG，5 μm，250 x 30 mm；洗脫液：CO2 : MeOH + 0.1% NH3 65 : 35；溫度：23°C；流速：80 mL/min）分離以給出作為第一洗脫峰的(1'S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-4'-羥基-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6-甲腈（未指定醇立體化學），Rt 1.03 min。
LC-MS：Rt = 0.59 min；MS m/z [M+H]+ 440.0/442.0；UPLC-MS 1。
獲得作為第二洗脫峰的(1'S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-4'-羥基-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6-甲腈（未指定醇立體化學），Rt 2.01 min。
LC-MS：Rt = 0.59 min；MS m/z [M+H]+ 440.1/442.1；UPLC-MS 1。
中間體AE和AF：(1'S ,4'S )-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-4'-羥基-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6'-甲腈和(1'S ,4'R )-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-4'-羥基-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6'-甲腈
步驟1：(S )-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -二螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘-4',2''-[1,3]二硫環戊烷]-6'-甲腈
Figure 02_image400
在微波中在100°C下，將(S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -二螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘-4',2''-[1,3]二硫環戊烷]（中間體S，150 mg，223 μmol）、XPhos Pd G3（18.91 mg，22 μmol）、XPhos（21.73 mg，45 μmol）、三水合鐵氰化鉀（47.2 mg，112 μmol）和KOAc（3.29 mg，34 μmol）在1,4-二㗁𠮿（2 mL）和水（2 mL）中之混合物攪拌1.5小時。將RM用EtOAc稀釋，用NaHCO3 飽和水溶液洗滌，乾燥並且濃縮。將殘餘物吸收到DCM（5 mL）中並且添加SiliaMetS®硫醇（66 μmol，48 mg），將混合物攪拌0.5小時，然後過濾，用DCM洗滌，並且將濾液濃縮。將殘餘物藉由正相柱層析法（矽膠；洗脫液：c-己烷 : EtOAc 100 : 0至70 : 30）純化以給出標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.90 min；MS m/z [M+H]+ 504.3；UPLC-MS 1。
步驟2：(S )-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-4'-側氧基-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6'-甲腈
Figure 02_image402
向N -碘代琥珀醯亞胺（168 mg，0.747 mmol）在DCM（1.5 mL）中之溶液（用乾冰/丙酮浴冷卻）中逐滴添加氟化氫吡啶（70%，93 μL，0.747 mmol），隨後逐滴添加(S )-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -二螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘-4',2''-[1,3]二硫環戊烷]-6'-甲腈（步驟1，100 mg，0.187 mmol）在DCM（1 mL）中之溶液。將RM在-70°C下攪拌1小時，然後倒入NaHCO3 飽和水溶液（50 mL）（用冰浴冷卻）中。添加Na2 S2 O3 的水溶液（10%，50 mL）並且將混合物用DCM萃取，將有機層藉由穿過相分離筒乾燥，並且濃縮。將殘餘物藉由逆相層析法（RP-HPLC 3）純化以給出(S )-8-(二氟甲氧基)-4',4',5'-三氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a]吡啶-2,1'-萘]-6'-甲腈（實例15），然後是呈黃色固體的標題化合物。
LC-MS：Rt = 2.67 min；MS m/z [M+H]+ 428.3；UPLC-MS 4。
步驟3：(1'S ,4'S )-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-4'-羥基-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6'-甲腈和(1'S ,4'R )-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-4'-羥基-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6'-甲腈
Figure 02_image404
藉由與中間體AC和AD相似的方法，藉由用(S )-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-4'-側氧基-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6'-甲腈（中間體AE和AF，步驟2）代替(S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-4'-側氧基-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6-甲腈（中間體AC和AD，步驟1）製備標題化合物。將非鏡像異構物藉由SFC（SFC 1）分離以給出第一洗脫的非鏡像異構物，Rt 6.65 min。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.00 (s, 1H), 7.79 (t, 1H), 7.50 - 7.09 (m, 2H), 7.00 (s, 1H), 5.41 (d, 1H), 4.93 (s, 1H), 4.45 (d, 1H), 4.22 (d, 1H), 2.16 (d, 2H), 1.80 (d, 2H)。
LC-MS：Rt = 0.62 min；MS m/z [M+H]+ 430.2；UPLC-MS 1。
隨後是第二洗脫的非鏡像異構物，Rt 8.51 min。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.91 (t, 1H), 7.80 (dd, 1H), 7.41 (t, 1H), 7.33 (d, 1H), 7.06 (d, 1H), 5.46 (d, 1H), 4.90 (s, br, 1H), 4.30 (d, 1H), 3.84 (d, 1H), 2.25 - 2.19 (m, 1H), 1.96 -1.80 (m, 2H), 1.76 - 1.72 (m, 1H)。
LC-MS：Rt = 0.63 min；MS m/z [M+H]+ 430.2；UPLC-MS 1。
中間體AG：(S )-(1-胺基-5-氟-1,2,3,4-四氫化萘-1-基-4,4-d 2 )甲醇
步驟1：(1S ,4S )-5-氟-4-羥基-3,4-二氫-2H -螺[萘-1,4'-㗁唑啶]-2'-酮-4-d 和(1S ,4R )-5-氟-4-羥基-3,4-二氫-2H -螺[萘-1,4'-㗁唑啶]-2'-酮-4-d
Figure 02_image406
在RT下在氮氣氣氛下，將(S )-5-氟-2H -螺[萘-1,4'-㗁唑啶]-2',4(3H )-二酮（中間體Z 步驟2，32 mg，0.16 mmol）和NaBD4 （劍橋同位素實驗室（Cambridge Isotope Laboratories），99原子% D；11.5 mg，0.27 mmol）在MeOD（1.4 mL）中之混合物攪拌1.5小時。將反應混合物倒入水中並用DCM萃取3x。將合併的有機萃取物乾燥（相分離器）並且蒸發以給出呈白色固體的標題化合物作為混合物非鏡像異構物（比例6 : 4）。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.42 (s, 0.6H), 8.22 (s, 0.4H), 7.42 (m, 1H), 7.29 (m, 1H), 7.15 (m, 1H), 5.24 (s, 0.4H), 5.17 (s, 0.6H), 4.51 (d, 0.6H), 4.37 (d, 0.4H), 4.34 (d, 0.6H), 3.94 (d, 0.4H), 2.24 (m, 1H), 2.02 (m, 0.6H), 1.85-1.74 (m, 2.4H)。
LC-MS：Rt = 0.44和0.54 min；MS m/z [M+NH4 ]+ 256.3；UPLC-MS 1。
步驟2：(S )-5-氟-3,4-二氫-2H -螺[萘-1,4'-㗁唑啶]-2'-酮-4,4-d 2
Figure 02_image408
在氮氣氣氛下，向懸浮於DCM（0.65 mL）中的(1S ,4S )-5-氟-4-羥基-3,4-二氫-2H -螺[萘-1,4'-㗁唑啶]-2'-酮-4-d 和(1S ,4R )-5-氟-4-羥基-3,4-二氫-2H -螺[萘-1,4'-㗁唑啶]-2'-酮-4-d （步驟1，25 mg，0.10 mmol）之混合物（在-65°C下冷卻）中添加Et3 SiD（50 µL，0.31 mmol）和BF3 .Et2 O（27 µL，0.21 mmol）。允許RM溫熱至RT並攪拌2小時。將RM倒入NaHCO3 飽和水溶液中並且用DCM萃取3x。將合併的有機萃取物乾燥（相分離器）並且蒸發以給出呈白色固體的標題化合物。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.25 (s, 1H), 7.35 - 7.30 (m, 2H), 7.11 (t, 1H), 4.36 (d, 1H), 4.18 (d, 1H), 1.99 (m, 1H), 1.90 (m, 1H), 1.84 (m, 1H), 1.74 (m, 1H)。
LC-MS：Rt = 0.79 min；MS m/z [M+NH4 ]+ 241.3；UPLC-MS 1。
步驟3：(S )-(1-胺基-5-氟-1,2,3,4-四氫化萘-1-基-4,4-d 2 )甲醇
Figure 02_image410
將(S )-5-氟-3,4-二氫-2H -螺[萘-1,4'-㗁唑啶]-2'-酮-4,4-d 2 （步驟2，23 mg，0.10 mmol）和NaOH（4 N，0.25 mL，1.01 mmol）在乙醇（0.4 mL）中之溶液在80°C下攪拌15小時。將RM倒入水中並且用EtOAc萃取3x。將合併的有機萃取物乾燥（相分離器）並蒸發以給出呈白色固體的標題化合物，將其不經純化用於下一步驟。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.40 (d, 1H), 7.17 (m, 1H), 6.95 (t, 1H), 4.79 (t, 1H), 3.45 (dd, 1H), 3.29 (dd, 1H), 2.03-1.98 (m, 1H), 1.97-1.76 (m, 3H), 1.71 (m, 1H), 1.47 (m, 1H)。
LC-MS：Rt = 0.45 min；MS m/z [M+H]+ 198.3；UPLC-MS 1。
中間體AH：(S )-1'-氯-8,8',8'-三氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]
步驟1：(S )-1'-氯-3-(3-氟-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-6',7'-二氫二螺[㗁唑啶-4,5'-異喹啉-8',2''-[1,3]二氧戊環]-2-酮
Figure 02_image412
在130°C下在氬氣氣氛下在密封反應容器中，將(S)-1'-氯-6',7'-二氫二螺[㗁唑啶-4,5'-異喹啉-8',2''-[1,3]二氧戊環]-2-酮（中間體AI，500 mg，1.57 mmol）、2-氯-3-氟-5-(三氟甲基)吡啶（494 mg，2.35 mmol）、CuBr（112 mg，0.784 mmol）、Cs2 CO3 （1.02 g，3.13 mmol）和DMF（15 mL）的混合物加熱1.5小時。將NH4 Cl飽和水溶液添加至冷卻的RM中，將其用EtOAc萃取2x，將合併的有機層乾燥並濃縮。將殘餘物藉由正相層析法（矽膠，洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至20 : 80）純化以給出呈黃色粉末的標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.03 min；MS m/z [M+H]+ 460.1/462.1；UPLC-MS 1。
步驟2：(S )-1-氯-3'-(3-氟-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-6,7-二氫-8H -螺[異喹啉-5,4'-㗁唑啶]-2',8-二酮
Figure 02_image414
在80°C下在密封的反應容器中，將(S)-1'-氯-3-(3-氟-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-6',7'-二氫二螺[㗁唑啶-4,5'-異喹啉-8',2''-[1,3]二氧戊環]-2-酮（步驟1，761 mg，1.39 mmol）在THF（7.8 mL）和1 N HCl水溶液（6.95 ml，6.95 mmol）中之溶液加熱18小時。將冷卻的RM倒入NaHCO3 飽和水溶液中，用DCM萃取3x，將合併的有機層藉由穿過相分離器乾燥並且濃縮。將殘餘物藉由正相層析法（矽膠，洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至20 : 80）純化以給出呈白色粉末的標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.00 min；MS m/z [M+H]+ 416.1/418.1；UPLC-MS 1。
步驟3：(S )-1-氯-8,8-二氟-3'-(3-氟-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-7,8-二氫-6H -螺[異喹啉-5,4'-㗁唑啶]-2'-酮
Figure 02_image416
在RT下在氬氣下，將DAST（1.49 ml，11.24 mmol）添加至(S )-1-氯-3'-(3-氟-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-6,7-二氫-8H -螺[異喹啉-5,4'-㗁唑啶]-2',8-二酮（步驟2，492 mg，1.12 mmol）在DCM（6 mL）中之溶液中，並且將RM在40°C下在密封的反應容器中加熱2天。將冷卻的RM緩慢添加至NaHCO3 飽和水溶液中，用冰浴冷卻，注意：放熱!將混合物用DCM萃取3x，將合併的有機層藉由穿過相分離器乾燥並且濃縮。將殘餘物藉由快速柱層析法（矽膠；洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至30 : 70）純化以給出呈白色粉末的標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.13 min；MS m/z [M+H]+ 438.1/440.1；UPLC-MS 1。
步驟4：(S )-(1-氯-8,8-二氟-5-((3-氟-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-5,6,7,8-四氫異喹啉-5-基)甲醇
Figure 02_image418
在RT下，將(S )-1-氯-8,8-二氟-3'-(3-氟-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-7,8-二氫-6H -螺[異喹啉-5,4'-㗁唑啶]-2'-酮（步驟3，487.4 mg，1.10 mmol）懸浮於EtOH（9 mL）中並且添加NaOH水溶液（4 M，2.76 ml，11.02 mmol）。將RM在RT下攪拌30 min，然後在NaHCO3 飽和水溶液和DCM之間分配，用DCM萃取3x，將合併的有機層藉由穿過相分離器乾燥並且蒸發以給出標題化合物，將其未經進一步純化而直接使用。
LC-MS：Rt = 1.14 min；MS m/z [M+H]+ 412.1/414.1；UPLC-MS 1。
步驟5：(S )-1'-氯-8,8',8'-三氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]
Figure 02_image420
在RT下，將SOCl2 （0.140 mL，1.91 mmol）添加至(S )-(1-氯-8,8-二氟-5-((3-氟-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-5,6,7,8-四氫異喹啉-5-基)甲醇（步驟4，458 mg，957 μmol）在甲苯（7 mL）中之溶液中。將RM在80°C下加熱20 min，冷卻，添加MeOH並且蒸發。將殘餘物溶解於含有1%-2% MeOH的DCM中，並用NaHCO3 飽和水溶液分配，將水相用DCM萃取2x，將合併的有機層藉由穿過相分離器乾燥並且濃縮。將殘餘物藉由正相柱層析法（矽膠，洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至40 : 60）純化以給出呈黃色粉末的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.49 (d, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.51 (d, 1H), 7.33 (d, 1H), 4.35 (q, 2H), 2.71 - 2.28 (m, 2H), 2.21 - 1.98 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 3.03 min；MS m/z [M+H]+ 394.3/396.3；UPLC-MS 4。
中間體AI：(S )-1'-氯-6',7'-二氫二螺[㗁唑啶-4,5'-異喹啉-8',2''-[1,3]二氧戊環]-2-酮
步驟1：外消旋 -1-(2-氯-4-碘吡啶-3-基)戊-4-烯-1-醇
Figure 02_image422
在正氬氣壓力下，將2-氯-4-碘吡啶（38 g，157 mmol）在THF（140 mL）中之溶液逐滴添加至THF中的LDA的溶液中[藉由將正丁基鋰（2.5 M，79 mL，196 mmol）添加至二異丙胺（28.0 mL，196 mmol）在THF（90 mL）中之溶液中製備，同時保持內部溫度低於0°C]，並且用乾冰丙酮浴冷卻以便保持內部溫度低於-75°C。將RM在低於-75°C下攪拌30 min，經30 min添加戊-4-烯（23.47 mL，238 mmol）在THF（40 mL）中之溶液，然後將RM用冰浴升溫至0°C，並且在0°C下攪拌15 min。添加NaHCO3 飽和水溶液（250 mL）和水（11 mL），並且將混合物用EtOAc（1x 300 mL，1x 200 mL）萃取，將合併的有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，並且濃縮。將殘餘物吸收在矽膠上並且藉由正相柱層析法（2x 220 g矽膠柱，洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至70 : 30）純化以給出呈澄清橙色油狀物的標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.97 min；MS m/z [M+H]+ 324.1/326.1；UPLC-MS 1。
通過以下替代路線也可以合成中間體AI，步驟1：
在正N2 壓力下，以內部溫度保持低於15°C的速率，將丁-3-烯-1-基溴化鎂在THF（0.5 M，1 L）中之溶液添加至LiCl（21.7 g，508 mmol）和ZnCl2 （71.4 g，508 mmol）在THF（80 mL）中之混合物（用冰浴冷卻）中。將RM在室溫下攪拌1小時。然後添加2-氯-4-碘代菸醛（27.0 g，100 mmol）在THF（80 mL）中之溶液，並且允許RM在室溫下攪拌2小時。將RM冷卻至0°C並且緩慢添加四水合酒石酸鈉鉀飽和水溶液（240 mL）並將混合物攪拌1小時，然後過濾，將濾餅用EtOAc（300 mL）洗滌。將兩相濾液分離，並且將水相用EtOAc（3x 300 mL）萃取。將合併的有機層用鹽水（500 mL）洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥並蒸發以給出標題化合物。
步驟2：1-(2-氯-4-碘吡啶-3-基)戊-4-烯-1-酮
Figure 02_image424
向外消旋 -1-(2-氯-4-碘吡啶-3-基)戊-4-烯-1-醇（步驟1，32.0 g，94 mmol）在DCM（400 mL）中之攪拌溶液中經30 min分批添加戴斯-馬丁高碘烷試劑（47.8 g，113 mmol）（輕微放熱），並且將RM溫熱至35°C。將RM在RT下攪拌1.5小時，然後添加Na2 S2 O3 飽和水溶液並在RT下繼續攪拌0.5小時。將混合物用DCM萃取3x，將合併的有機層用NaHCO3 飽和水溶液洗滌，藉由穿過相分離筒乾燥並蒸發。將殘餘物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（2x 120 g SiO2 柱，洗脫液：己烷 : EtOAc 從0-15%）純化以給出呈黃色油狀物的標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.12 min；MS m/z [M+H]+ 321.9/323.9；UPLC-MS 1。
通過以下替代路線也可以合成中間體AI，步驟2：
將PhI(OAc)2 （4.45 g，13.8 mmol，1.95當量）添加至1-(2-氯-4-碘吡啶-3-基)戊-4-烯-1-醇（步驟1，2.7 g，7.1 mmol）和TEMPO（0.28 g，1.8 mmol）在DCM（25 mL）中之混合物（用冰浴冷卻）中。將混合物在RT下攪拌1小時，添加水（50 mL），隨後添加Na2 SO3 （1.5 g）。分離各相並且將水相用DCM（2x 25 mL）萃取。將合併的有機層經無水Na2 SO4 乾燥，並且濃縮以給出呈棕色油狀物的標題化合物。
步驟3：1-氯-5-亞甲基-6,7-二氫異喹啉-8(5H )-酮
Figure 02_image426
在氬氣的氣氛下在55°C-60下°C，將1-(2-氯-4-碘吡啶-3-基)戊-4-烯-1-酮（步驟2，34.7 g，106 mmol）、Ag2 CO3 （21.98 g，79 mmol）、P(2-furyl)3 （3.76 g，15.86 mmol）、Pd(OAc)2 （1.80 g，7.93 mmol）和AcCN（563 mL）的混合物加熱3.5小時。將RM通過Hyflo助濾劑過濾，用乙腈洗滌，並且蒸發。將殘餘物藉由正相層析法（2x 220 g矽膠柱，洗脫液：庚烷 : EtOAc 10 : 90至45 : 55）純化，將含有級分的產物合併，蒸發並用庚烷 : EtOAc 60 : 40研磨以給出呈黃色粉末的標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.78 min；MS m/z [M+H]+ 194.0/196.0；UPLC-MS 1。
步驟4：1-氯-5-亞甲基-6,7-二氫-5H -螺[異喹啉-8,2'-[1,3]二氧戊環]
Figure 02_image428
在氬氣的氣氛下在60°C下，將1-氯-5-亞甲基-6,7-二氫異喹啉-8(5H )-酮（步驟3，16 g，79 mmol）、HC(OEt)3 （39.2 ml，236 mmol）、對甲苯磺酸（2.70 g，15.70 mmol）和乙二醇（88 ml，1570 mmol）的混合物加熱1.5小時。將RM在DCM和NaHCO3 飽和水溶液之間分配，將水相用DCM萃取2x，將合併的有機層藉由穿過相分離器乾燥並且濃縮。將殘餘物藉由正相柱層析法（2x 220 g矽膠柱，洗脫液：庚烷 : EtOAc 0 : 100至40 : 60）純化，給出呈澄清淡黃色油狀物的標題化合物。
LC-MS：Rt = 3.71 min；MS m/z [M+H]+ 238.2/240.2；UPLC-MS 4。
步驟5：(R )-(1-氯-6,7-二氫-5H -螺[異喹啉-8,2'-[1,3]二氧戊環]-5-基)甲醇
Figure 02_image430
在氬氣的氣氛下，將9-BBN在THF（0.5 M，616 mL，308 mmol）中之溶液逐滴添加至1-氯-5-亞甲基-6,7-二氫-5H -螺[異喹啉-8,2'-[1,3]二氧戊環]（步驟4，37 g，154 mmol）在THF（118 mL）中之溶液（用冰浴冷卻）中。將RM在0°C下攪拌1小時，在RT下攪拌30 min，在50°C下攪拌2小時，在RT下攪拌18小時。然後將RM用冰浴冷卻並且添加NaOH水溶液（4 N，193 ml，771 mmol），隨後逐滴添加過氧化氫水溶液（30%，79 ml，771 mmol），注意放熱! 將RM在RT下攪拌30 min，用鹽水稀釋，用EtOAc萃取2x，將合併的有機層用10% Na2 S2 O3 水溶液（有機層陰性過氧化物試驗）洗滌2x，經硫酸鈉乾燥並且濃縮。將殘餘物藉由正相層析法（矽膠，330 g柱，洗脫液：DCM : EtOH 98 : 2至90 : 10）純化，將含有級分的產物蒸發並用含有2% DCM的二乙醚研磨以給出呈白色粉末的外消旋產物。藉由正相層析法（矽膠，330 g柱，洗脫液：DCM : EtOH 98 : 2至90 : 10）對濾液純化，獲得另外的外消旋產物。將鏡像異構物藉由手性SFC：（儀器：Thar 350製備型SFC；柱：Chiralpak AD 10 μm，300 x 50 mm 38°C；洗脫液：CO2 : 含有0.1% NH4 OH的MeOH，80 : 20；流速：200 mL/min；檢測：254 nm）分離以給出作為主要的第二洗脫峰的標題化合物。
LC-MS：Rt = 2.02 min；MS m/z [M+H]+ 256.3/258.3；UPLC-MS 4。
手性-SFC：Rt = 3.45 min；以(S )-(1-氯-6,7-二氫-5H -螺[異喹啉-8,2'-[1,3]二氧戊環]-5-基)甲醇作為第一洗脫峰，Rt = 3.78 min；C-SFC 8。
步驟6：(R )-(1-氯-6,7-二氫-5H -螺[異喹啉-8,2'-[1,3]二氧戊環]-5-基)甲基胺基甲酸酯
Figure 02_image432
在氬氣氣氛下，將三氯乙醯基異氰酸酯（9.28 mL，78 mmol）緩慢添加至(R )-(1-氯-6,7-二氫-5H -螺[異喹啉-8,2'-[1,3]二氧戊環]-5-基)甲醇（步驟5，16.76 g，64.9 mmol）在DCE（300 mL）中之溶液（用冰浴冷卻）中。在0°C下攪拌30 min後，添加K2 CO3 （897 mg，6.49 mmol），隨後添加MeOH（300 mL）並且將RM在RT下攪拌過夜。將RM倒入NaHCO3 飽和水溶液中，將混合物用DCM萃取2x。靜置後，在有機萃取物中形成沈澱，將其藉由過濾收集並乾燥以給出呈白色粉末的標題化合物。將濾液經硫酸鈉乾燥，蒸發並用二乙醚研磨後，獲得另外的產物。
LC-MS：Rt = 2.26 min；MS m/z [M+H]+ 299.3/301.3；UPLC-MS 4。
步驟7：(S )-1'-氯-6',7'-二氫二螺[㗁唑啶-4,5'-異喹啉-8',2''-[1,3]二氧戊環]-2-酮
Figure 02_image434
在氬氣的氣氛下在45°C下，在Ace壓力管中將(R )-(1-氯-6,7-二氫-5H -螺[異喹啉-8,2'-[1,3]二氧戊環]-5-基)甲基胺基甲酸酯（步驟6，4.0 g，13.26 mmol）、二乙醯氧基碘苯（6.10 g，18.56 mmol）、MgO（1.29 g，30.5 mmol）和Rh2 (esp)2 （262 mg，331 μmol）在DCM（133 mL）中之混合物加熱21小時。將另外的二乙醯氧基碘苯（1.28 g，3.98 mmol）、MgO（267 mg，6.63 mmol）和Rh2 (esp)2 （50 mg，66 μmol）添加至RM中，將容器用氬氣沖洗並且在45°C下再加熱21小時。將冷卻的RM倒入NaHCO3 飽和水溶液中，將混合物用DCM萃取3x，將合併的有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾並濃縮。將殘餘物藉由正相柱層析法（矽膠，洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至0 : 100）純化，給出呈米色粉末的標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.57 min；MS m/z [M+H]+ 297.3/299.3；UPLC-MS 1。
通過以下替代路線也可以合成中間體AI：
步驟1A：(S )-1-氯-5-亞甲基-5,6,7,8-四氫異喹啉-8-醇
Figure 02_image436
在正氬氣壓力下，將RuCl(對異丙基甲苯)[(S ,S )-Ts-DPEN]（371 mg，583 μmol）在DCM（20 mL）中之溶液逐滴添加至1-氯-5-亞甲基-6,7-二氫異喹啉-8(5H )-酮（步驟3，8.0 g，38.8 mmol）在DCM（100 mL）中之溶液中。將RM用冰浴冷卻並且逐滴添加甲酸（4.47 mL，117 mmol）。在5°C下攪拌2小時並在RT下攪拌18小時後，將RM在DCM（200 mL）和NaHCO3 飽和水溶液（100 mL）之間分配，用DCM（50 mL）萃取2x，將合併的有機層藉由穿過相分離筒乾燥並蒸發。將殘餘物藉由正相層析法（120 g SiO2 柱；洗脫液：己烷 : EtOAc 100 : 0至70 : 30）純化以給出呈米色固體的標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.70 min；MS m/z [M+H]+ 196.1/198.1；UPLC-MS 1。
步驟2A：(S )-8-((三級丁基二甲基矽基)氧基)-1-氯-5-亞甲基-5,6,7,8-四氫異喹啉
Figure 02_image438
在RT下在正氬氣壓力下，將三級丁基二甲基矽基氯化物（9.31 g，61.8 mmol）添加至(S )-1-氯-5-亞甲基-5,6,7,8-四氫異喹啉-8-醇（步驟1A，8.95 g，41.2 mmol）和咪唑（4.48 g，65.9 mmol）在DCM（150 mL）中之溶液中。將RM在RT下攪拌20小時，在40°C下攪拌8小時並且在RT下靜置66小時，用水（150 mL）稀釋，用DCM（30 mL）萃取2x，將合併的有機層用NaHCO3 飽和水溶液洗滌，乾燥並蒸發。將殘餘物懸浮於二乙醚（30 mL）和己烷（120 mL）中，在RT下攪拌30 min並且過濾。將濾液藉由正相層析法（40 g SiO2 柱；洗脫液：己烷 : EtOAc 100 : 0至70 : 30）純化以給出呈白色固體的標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.59 min；MS m/z [M+H]+ 310.2/312.1；UPLC-MS 1。
步驟3A：((5R ,8S )-8-((三級丁基二甲基矽基)氧基)-1-氯-5,6,7,8-四氫異喹啉-5-基)甲醇
Figure 02_image440
在RT下在正氬氣壓力下，將9-硼雜雙環[3.3.1]壬烷在THF（0.5 M，167 mL，84 mmol）中之溶液逐滴添加至(S )-8-((三級丁基二甲基矽基)氧基)-1-氯-5-亞甲基-5,6,7,8-四氫異喹啉（步驟2A，10.9 g，33.4 mmol）在1,2-DCE（100 mL）中之溶液中。將RM在60°C下攪拌4小時，冷卻至5°C，並且添加NaOH水溶液（4 M，37.6 mL，150 mmol）和H2 O2 水溶液（30%，17.1 mL，167 mmol），並且在RT下繼續攪拌30 min。將RM在DCM和NaHCO3 飽和水溶液之間分配，用DCM萃取2x，將合併的有機層用Na2 S2 O3 水溶液洗滌，藉由穿過相分離筒乾燥並蒸發。將殘餘物藉由正相層析法（220 g SiO2 柱；洗脫液：己烷 : EtOAc 95 : 5至60 : 40）純化以給出呈白色固體的標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.31 min；MS m/z [M+H]+ 328.1/320.1；UPLC-MS 1。
步驟4A：((5R ,8S )-8-((三級丁基二甲基矽基)氧基)-1-氯-5,6,7,8-四氫異喹啉-5-基)甲基胺基甲酸酯
Figure 02_image442
將三氯乙醯基異氰酸酯（4.69 mL，39.6 mmol）逐滴添加至((5R ,8S )-8-((三級丁基二甲基矽基)氧基)-1-氯-5,6,7,8-四氫異喹啉-5-基)甲醇（步驟3A，11.5 g，33.0 mmol）在1,2-DCE（150 mL）中之溶液（用冰浴冷卻）中。將RM在0°C下攪拌2.5小時並添加K2 CO3 （0.46 g，3.30 mmol）和MeOH（150 mL），並且在RT下繼續攪拌16小時。將RM用NaHCO3 飽和水溶液（200 mL）和DCM（150 mL）稀釋，將水層用DCM（100 mL）萃取2x，將合併的有機層藉由穿過相分離器乾燥並蒸發以給出呈白色結晶固體的標題化合物，將其未經進一步純化而直接使用。
LC-MS：Rt = 1.27 min；MS m/z [M+H]+ 371.2/373.2；UPLC-MS 1。
步驟5A：(5S ,8S )-8-((三級丁基二甲基矽基)氧基)-1-氯-7,8-二氫-6H -螺[異喹啉-5,4'-㗁唑啶]-2'-酮
Figure 02_image444
在45°C下在正N2 壓力下，將((5R ,8S )-8-((三級丁基二甲基矽基)氧基)-1-氯-5,6,7,8-四氫異喹啉-5-基)甲基胺基甲酸酯（步驟4A，14.0 g，32.1 mmol）、二乙醯氧基碘苯（14.76 g，44.9 mmol）、MgO（2.97 g，73.8 mmol）和Rh2 (esp)2 （487 mg，642 μmol）在DCM（170 mL）中之混合物攪拌48小時。添加另外的Rh2 (esp)2 （122 mg，160 μmol）並且將RM在45°C下再攪拌24小時。將RM在NaHCO3 飽和水溶液（150 mL）和DCM（100 mL）之間分配，將水層用DCM（60 mL）萃取2x，將合併的有機層藉由穿過相分離筒乾燥並且蒸發。將殘餘物藉由正相層析法（120 g SiO2 柱；洗脫液：己烷 : EtOAc 90 : 10至50 : 50）純化以給出標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.21 min；MS m/z [M+H]+ 369.2/371.1；UPLC-MS 1。
步驟6A：(5S ,8S )-1-氯-8-羥基-7,8-二氫-6H -螺[異喹啉-5,4'-㗁唑啶]-2'-酮
Figure 02_image446
將四-正丁基氟化銨在THF（1 M，30.0 mL，30.0 mmol）中之溶液添加至(5S ,8S )-8-((三級丁基二甲基矽基)氧基)-1-氯-7,8-二氫-6H -螺[異喹啉-5,4'-㗁唑啶]-2'-酮（步驟5A，9.72 g，25.03 mmol）在THF（100 mL）中之溶液（用冰浴冷卻）中。將RM在0°C攪拌1小時並在RT下攪拌16小時，然後用NaHCO3 飽和水溶液（250 mL）和DCM（150 mL）稀釋，將水層用DCM（150 mL）萃取3x並用EtOAc（100 mL）萃取2x，將合併的有機層藉由穿過相分離筒乾燥，並且蒸發。將殘餘物用EtOAc研磨2x並且將灰白色固體藉由過濾收集以給出標題化合物，將其未經進一步純化而直接使用。
LC-MS：Rt = 0.36 min；MS m/z [M+H]+ 255.1/257.1；UPLC-MS 1。
步驟7A：(S )-1-氯-6,7-二氫-8H -螺[異喹啉-5,4'-㗁唑啶]-2',8-二酮
Figure 02_image448
在RT下，將戴斯-馬丁高碘烷（4.41 g，10.41 mmol）添加至(5S ,8S )-1-氯-8-羥基-7,8-二氫-6H -螺[異喹啉-5,4'-㗁唑啶]-2'-酮（步驟6A，5.3 g，5.20 mmol）在DCM（80 mL）中的懸浮液中並且在RT下攪拌1.5小時。然後將RM用Na2 S2 O3 水溶液（40 mL）稀釋並且在RT下攪拌30 min，用DCM : MeOH 3 : 1的混合物萃取4x，將合併的有機層藉由穿過相分離器乾燥並蒸發。將殘餘物藉由正相層析法（矽膠，洗脫液：庚烷 : EtOAc 80 : 20至0 : 100）純化。將含有級分的產物合併，蒸發，並且用DCM/庚烷的混合物在RT下攪拌20 min。將不溶性材料藉由過濾除去並將濾液乾燥蒸發以給出呈灰白色固體的標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.48 min；MS m/z [M-H]- 251.0/253.0；UPLC-MS 1。
步驟8A：(S )-1'-氯-6',7'-二氫二螺[㗁唑啶-4,5'-異喹啉-8',2''-[1,3]二氧戊環]-2-酮
Figure 02_image450
將(S )-1-氯-6,7-二氫-8H -螺[異喹啉-5,4'-㗁唑啶]-2',8-二酮（步驟7A，600 mg，950 μmol），乙二醇（159 μL，2.85 mmol），原甲酸三乙酯（506 μL，3.04 μmol）和對甲苯磺酸（32.7 mg，190 μmol）在甲苯（10 mL）中之混合物在70°C下攪拌2小時並且在RT下攪拌18小時。添加另外的乙二醇（2 mL）並且將RM在70°C下攪拌4小時。將RM用NaHCO3 飽和水溶液（40 mL）稀釋，用DCM萃取3x，將合併的有機層藉由穿過相分離筒乾燥並且蒸發。將殘餘物藉由正相層析法（40 g SiO2 柱；洗脫液：庚烷 : EtOAc 90 : 10至0 : 100）純化以給出呈灰白色固體的標題化合物。
中間體AJ：(S )-(1-氯-5-((3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-8,8-二氟-5,6,7,8-四氫異喹啉-5-基)甲醇
步驟1：(S )-1-氯-3'-(3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-8,8-二氟-7,8-二氫-6H -螺[異喹啉-5,4'-㗁唑啶]-2'-酮
Figure 02_image452
在密封的小瓶中在氬氣的氣氛下，將DAST（2.76 mL，20.9 mmol）添加至(S )-1-氯-3'-(3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-6,7-二氫-8H -螺[異喹啉-5,4'-㗁唑啶]-2',8-二酮（中間體AK，1.0 g，2.16 mmol）在DCM（10 mL）中之溶液中，並且將RM在40°C下加熱72小時。將冷卻的反應混合物逐滴添加至NaHCO3 飽和水溶液中，注意：放熱!，用DCM萃取3x，將合併的有機層經硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮。將殘餘物藉由正相層析法（330 g矽膠柱，洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至20 : 80）純化以給出呈黃色粉末的標題化合物。
LC-MS：Rt = 5.74 min；MS m/z [M+H]+ 486.4/488.4；UPLC-MS 4。
步驟2：(S )-(1-氯-5-((3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-8,8-二氟-5,6,7,8-四氫異喹啉-5-基)甲醇
Figure 02_image454
將NaOH水溶液（4 M，66.7 ml，267 mmol）小心地添加至EtOH（200 mL）中的(S )-1-氯-3'-(3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-8,8-二氟-7,8-二氫-6H -螺[異喹啉-5,4'-㗁唑啶]-2'-酮（步驟1，13.22 g，26.7 mmol）（用冰浴冷卻）中。然後將RM在RT下攪拌1小時，稀釋到NaHCO3 飽和水溶液中，用DCM萃取3x，將合併的有機層經硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮。將殘餘物藉由正相層析法（330 g矽膠柱，洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至0 : 100，在40 min內）純化，獲得呈黃色粉末的標題化合物。
通過以下替代程序也可以合成中間體AJ 步驟2：
將NaOH水溶液（2 wt%，181.2 g，90.58 mmol）小心地添加至EtOH（200 mL）中的(S )-1-氯-3'-(3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-8,8-二氟-7,8-二氫-6H -螺[異喹啉-5,4'-㗁唑啶]-2'-酮（步驟1，20.0 g，41.17 mmol）（用冰浴冷卻）中。然後將反應混合物在40°C下攪拌16小時。將反應混合物用DCM（200 mL）萃取。將水相分離並且用DCM（200 mL）再次萃取。將有機相合併並用H2 O（200 mL）洗滌，將粗油狀物藉由穿過50 g的矽膠過濾而純化，藉由MTBE洗脫。將含有產物的洗脫液在減壓下濃縮以給出呈棕色油狀物的標題化合物。
LC-MS：Rt = 5.84 min；MS m/z [M+H]+ 460.4/462.4；UPLC-MS 4。
中間體AK：(S )-1-氯-3'-(3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-6,7-二氫-8H -螺[異喹啉-5,4'-㗁唑啶]-2',8-二酮
Figure 02_image456
在RT下，將HCl（1 N，174 ml，174 mmol）逐滴添加至(S )-1'-氯-3-(3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-6',7'-二氫二螺[㗁唑啶-4,5'-異喹啉-8',2''-[1,3]二氧戊環]-2-酮（中間體AL，18.23 g，34.8 mmol）在THF（200 mL）中之溶液中，並且將RM在80°C下加熱18小時。將RM倒入NaHCO3 飽和水溶液中，用DCM萃取3x，將合併的有機層經硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮。將殘餘物藉由正相層析法（2x 330 g矽膠柱，洗脫液：在30 min內，庚烷 : EtOAc 95 : 5至0 : 100）純化以給出呈米色粉末的標題化合物。
LC-MS：Rt = 5.00 min；MS m/z [M+H]+ 464.1/466.0；UPLC-MS 4。
通過以下替代路線也可以合成中間體AK：
步驟1：(4'R ,5'R )-1-氯-4',5'-二甲基-5-亞甲基-6,7-二氫-5H -螺[異喹啉-8,2'-[1,3]二氧戊環]
Figure 02_image458
在N2 氣氛下，將1-氯-5-亞甲基-6,7-二氫異喹啉-8(5H )-酮（中間體AI，步驟3，3.5 g，17.2 mmol）、(2R ,3R )-丁烷-2,3-二醇（3.14 mL，34.3 mmol）、HC(OEt)3 （8.58 mL，51.5 mmol）和對甲苯磺酸（591 mg，3.43 mmol）在甲苯（50 mL）中之混合物在60°C下加熱5小時。將冷卻的RM在DCM和NaHCO3 飽和水溶液之間分配，將水層用DCM再萃取2x，將合併的有機層藉由穿過相分離筒乾燥並且蒸發。將殘餘物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（40 g SiO2 柱；洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至20 : 80）純化以給出呈黃色固體的標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.10 min；MS m/z [M+H]+ 266.4/268.4；UPLC-MS 1。
步驟2：((4'R ,5R ,5'R )-1-氯-4',5'-二甲基-6,7-二氫-5H -螺[異喹啉-8,2'-[1,3]二氧戊環]-5-基)甲醇和((4'R ,5S ,5'R )-1-氯-4',5'-二甲基-6,7-二氫-5H -螺[異喹啉-8,2'-[1,3]二氧戊環]-5-基)甲醇
Figure 02_image460
在RT下在正氬氣壓力下，將9-硼雜雙環[3.3.1]壬烷在THF（0.5 M，36.9 mL，18.44 mmol）中之溶液逐滴添加至(4'R ,5'R )-1-氯-4',5'-二甲基-5-亞甲基-6,7-二氫-5H -螺[異喹啉-8,2'-[1,3]二氧戊環]（步驟1，2.0 g，7.38 mmol）在1,2-DCE（35 mL）中之溶液中。將RM在60°C下攪拌2小時然後冷卻至5°C，並且緩慢添加NaOH水溶液（4 M，8.30 mL，33.2 mmol）和H2 O2 水溶液（30%，3.77 mL，36.9 mmol）注意：放熱反應! 將RM在RT下攪拌2小時，在DCM和NaHCO3 飽和水溶液之間分配，將水層用DCM萃取2x，將合併的有機層用Na2 S2 O3 水溶液洗滌，藉由穿過相分離筒乾燥並蒸發。將殘餘物藉由正相層析法（40 g SiO2 柱；洗脫液：庚烷 : EtOAc 80 : 20至0 : 100）純化以給出呈灰白色泡沫的標題化合物作為非對映立體異構物的3 : 1混合物。
LC-MS：Rt = 3.06和3.08 min；MS m/z [M+H]+ 284.3/286.3；UPLC-MS 4。
步驟3：((4'R ,5R ,5'R )-1-氯-4',5'-二甲基-6,7-二氫-5H -螺[異喹啉-8,2'-[1,3]二氧戊環]-5-基)甲基胺基甲酸酯和((4'R ,5S ,5'R )-1-氯-4',5'-二甲基-6,7-二氫-5H -螺[異喹啉-8,2'-[1,3]二氧戊環]-5-基)甲基胺基甲酸酯
Figure 02_image462
將三氯乙醯基異氰酸酯（1.25 mL，10.57 mmol）逐滴添加至((4'R ,5R ,5'R )-1-氯-4',5'-二甲基-6,7-二氫-5H -螺[異喹啉-8,2'-[1,3]二氧戊環]-5-基)甲醇和((4'R ,5S ,5'R )-1-氯-4',5'-二甲基-6,7-二氫-5H -螺[異喹啉-8,2'-[1,3]二氧戊環]-5-基)甲醇（步驟2，2.0 g，7.05 mmol）在1,2-DCE（15 mL）中之溶液（用冰浴冷卻）中。將RM在0°C下攪拌30 min並在RT下攪拌30 min，然後添加K2 CO3 （97 mg，705 μmol），隨後添加MeOH（15 mL），並且在RT下繼續攪拌48小時。將RM在NaHCO3 飽和水溶液（50 mL）和DCM（50 mL）之間分配，將水層用DCM萃取2x，將合併的有機層藉由穿過相分離筒乾燥並且蒸發。將殘餘物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（40 g SiO2 柱；洗脫液：庚烷 : EtOAc 95 : 5至20 : 80）純化以給出呈白色泡沫的標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.77 min；MS m/z [M+H]+ 327.3/329.3；UPLC-MS 1。
步驟4：(4S ,4''R ,5''R )-1'-氯-4'',5''-二甲基-6',7'-二氫二螺[㗁唑啶-4,5'-異喹啉-8',2''-[1,3]二氧戊環]-2-酮和(4R ,4''R ,5''R )-1'-氯-4'',5''-二甲基-6',7'-二氫二螺[㗁唑啶-4,5'-異喹啉-8',2''-[1,3]二氧戊環]-2-酮
Figure 02_image464
在60°C下在正N2 壓力下，將((4'R ,5R ,5'R )-1-氯-4',5'-二甲基-6,7-二氫-5H -螺[異喹啉-8,2'-[1,3]二氧戊環]-5-基)甲基胺基甲酸酯和((4'R ,5S ,5'R )-1-氯-4',5'-二甲基-6,7-二氫-5H -螺[異喹啉-8,2'-[1,3]二氧戊環]-5-基)甲基胺基甲酸酯（步驟3，2.2 g，6.46 mmol）、二乙醯氧基碘苯（2.97 g，9.05 mmol）、MgO（599 mg，14.87 mmol）和Rh2 (esp)2 （98 mg，129 μmol）在甲苯（15 mL）中之混合物攪拌3小時。添加另外Rh2 (esp)2 （25 mg，32 μmol）並且將RM在60°C下再攪拌2小時。將冷卻的RM用NaHCO3 飽和水溶液（50 mL）和DCM（50 mL）稀釋，將水層用DCM（30 mL）萃取2x，將合併的有機層藉由穿過相分離筒乾燥並且蒸發。將殘餘物藉由正相層析法（40 g SiO2 柱，洗脫液：庚烷 : EtOAc 90 : 10至0 : 100）純化以給出呈米色泡沫的標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.74 min；MS m/z [M+H]+ 325.3/327.3；UPLC-MS 1。
步驟5：(4S ,4''R ,5''R )-1'-氯-3-(3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-4'',5''-二甲基-6',7'-二氫二螺[㗁唑啶-4,5'-異喹啉-8',2''-[1,3]二氧戊環]-2-酮
Figure 02_image466
在密封的容器中在氬氣氣氛下，將(4S ,4''R ,5''R )-1'-氯-4'',5''-二甲基-6',7'-二氫二螺[㗁唑啶-4,5'-異喹啉-8',2''-[1,3]二氧戊環]-2-酮和(4R ,4''R ,5''R )-1'-氯-4'',5''-二甲基-6',7'-二氫二螺[㗁唑啶-4,5'-異喹啉-8',2''-[1,3]二氧戊環]-2-酮（步驟4，1.45 g，4.29 mmol）、2-氯-3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶（中間體A，1.68 g，6.43 mmol）、CuBr（307 mg，2.14 mmol）和Cs2 CO3 （2.79 g，8.57 mmol）在DMF（20 mL）中之混合物在130°C下加熱2小時。將冷卻的RM用EtOAc稀釋，過濾並用NH4 Cl飽和水溶液分配。將水層用EtOAc進一步萃取，將合併的有機層用鹽水洗滌，乾燥並蒸發。將殘餘物藉由正相層析法（矽膠，洗脫液：庚烷 : TBME 60 : 40）純化以給出產物的2 : 1非鏡像異構物混合物。將非鏡像異構物藉由手性SFC：（儀器：Spiatec Prep SFC100；柱：Chiralpak IG 5 μm，250 x 30 mm 40°C；洗脫液：CO2 : 含有0.1% NH4 OH的iPrOH，85 : 15；流速：80 mL/min；檢測：276 nm）分離以給出作為主要的第一洗脫峰的標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.19 min；MS m/z [M+H]+ 536.2/538.2；UPLC-MS 1。
手性-SFC：Rt = 1.04 min；(4R ,4''R ,5''R )-1'-氯-3-(3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-4'',5''-二甲基-6',7'-二氫二螺[㗁唑啶-4,5'-異喹啉-8',2''-[1,3]二氧戊環]-2-酮作為第二洗脫峰，Rt = 2.21 min；C-SFC 20。
步驟6：(S )-1-氯-3'-(3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-6,7-二氫-8H -螺[異喹啉-5,4'-㗁唑啶]-2',8-二酮
Figure 02_image468
將(S )-1-氯-3'-(3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-6,7-二氫-8H -螺[異喹啉-5,4'-㗁唑啶]-2',8-二酮（步驟5，722 mg，1.35 mmol）、HCl水溶液（5 M，1.35 mL，6.75 mmol）和THF（5 mL）的混合物在80°C下攪拌24小時。將冷卻的RM在EtOAc和Na2 CO3 飽和水溶液之間分配，將水層用EtOAc萃取2x，將合併的水層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥並且蒸發。將殘餘物藉由正相層析法（矽膠，洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至50 : 50）純化以給出標題化合物。
藉由與上述路線相似的路線也可以合成中間體AK，在合成中間體AK的路線中藉由(S ,S )-1,2-二苯基-1,2-乙二醇代替(2R ,3R )-丁烷-2,3-二醇。使用該路線獲得非鏡像異構物硼氫化產物作為3 : 1混合物。
中間體AL：(S )-1'-氯-3-(3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-6',7'-二氫二螺[㗁唑啶-4,5'-異喹啉-8',2''-[1,3]二氧戊環]-2-酮
Figure 02_image470
在氬氣氣氛下在密封的Ace壓力管中，將(S )-1'-氯-6',7'-二氫二螺[㗁唑啶-4,5'-異喹啉-8',2''-[1,3]二氧戊環]-2-酮（中間體AI，15.0 g，48.0 mmol）、2-氯-3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶（中間體A，18.01 g，72.0 mmol）、和Cs2 CO3 （31.3 g，96 mmol）和CuBr（3.44 g，24.01 mmol）在DMF（150 mL）中之混合物在130°C下加熱3.5小時。將冷卻的RM用NaHCO3 飽和水溶液稀釋，用EtOAc萃取3x，將合併的有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾並濃縮。向殘餘物中添加DMF（150 mL）中的2-氯-3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶（18.01 g，72.0 mmol）、和Cs2 CO3 （31.3 g，96 mmol）和CuBr（3.44 g，24.01 mmol），並且將RM在130°C下加熱8小時。將冷卻的RM稀釋到NH4 Cl飽和水溶液中並且在RT下攪拌30 min，用EtOAc萃取3x，將合併的有機層用鹽水洗滌，乾燥並濃縮。將殘餘物藉由正相層析法（2x 220 g矽膠柱，洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至0 : 100）純化，將含有級分的產物合併，蒸發並用EtOAc : Et2 O 1 : 3的混合物研磨以給出呈棕色粉末的標題化合物。
通過以下替代程序也可以合成中間體AL：
在室溫下，在N2 條件下，向反應器中裝入(S )-1'-氯-6',7'-二氫二螺[㗁唑啶-4,5'-異喹啉-8',2''-[1,3]二氧戊環]-2-酮（中間體AI，1.15 g，86.9%測定，3.37 mmol）、CuTC（0.032 g，0.168 mmol）、Cs2 CO3 （2.20 g，6.76 mmol）和乾DMSO（10 mL）。向所得混合物中添加2-氯-3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶（1.30 g，98.2%測定，4.36 mmol）在乾DMSO（10 mL）中之溶液。允許反應混合物在80°C下攪拌3 h。將反應混合物冷卻至室溫。添加H2 O（60 mL）和IPAC（60 mL）並且分離各層。將水相用IPAC萃取2x。將合併的有機層用H2 O洗滌3x，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾，在減壓下濃縮。將殘餘物溶解於EtOAc中，穿過矽膠墊，並且在減壓下濃縮以給出呈淡灰色固體的標題化合物。
LC-MS：Rt = 5.07 min；MS m/z [M+H]+ 508.4/510.4；UPLC-MS 4。
中間體AM：(R )-(1-氯-5,6,7,8-四氫異喹啉-5-基)甲醇
步驟1：1-氯-5-亞甲基-5,6,7,8-四氫異喹啉
Figure 02_image472
在氮氣氣氛下，向(三甲基矽基)甲基氯化鎂（1 M在Et2 O中，165 mL，165 mmol）的溶液（冷卻至0°C-5°C）中緩慢添加1-氯-7,8-二氫異喹啉-5(6H )-酮（10 g，55.1 mmol）在Et2 O/CH2 Cl2 （120 mL/10 mL）中之溶液。允許所得溶液經45 min達到RT。將RM小心地倒入冷NH4 Cl飽和水溶液中，將各層分離並且將水層用CH2 Cl2 萃取2x。將合併的有機萃取物乾燥（相分離器）並蒸發以給出米色固體，將該米色固體溶解於CH2 Cl2 （260 mL）中。在氮氣氣氛下，向該溶液中緩慢添加BF3 .Et2 O（2.72 mL，22.0 mmol）並且將RM在RT下攪拌30 min。將RM倒入NaHCO3 飽和水溶液中並且用DCM萃取2x。將合併的有機萃取物乾燥（相分離器）並且蒸發以給出呈黃色固體的標題化合物。將化合物未經純化而用於下一步驟。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.18 (d, 1H), 7.68 (d, 1H), 5.86 (s, 1H), 5.30 (s, 1H), 2.78 (t, 2H), 2.49 (m, 2H, 與DMSO峰重疊), 1.85 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 1.09 min；MS m/z [M+H]+ 180.1/182.1；UPLC-MS 1。
步驟2：(R )-(1-氯-5,6,7,8-四氫異喹啉-5-基)甲醇
Figure 02_image474
在氮氣氣氛下，向1-氯-5-亞甲基-5,6,7,8-四氫異喹啉（步驟1，10.1 g，54.8 mmol）在THF（365 mL）中之溶液（冷卻至0°C-5°C）中添加BH3 .THF（137 mL，137 mmol）。將RM在0°C-5°C下攪拌40 min並再次添加BH3 .THF（71 mL，71 mmol）。將RM再攪拌40 min直至起始材料消耗。在0°C-5°C下，向RM中依次逐滴添加NaOH（4 M在水中，61.7 mL，247 mmol）和H2 O2 （35%，24 mL，274 mmol）（放熱）並且將混合物在RT下攪拌50 min。將RM用鹽水稀釋並用EtOAc萃取2x。將合併的有機萃取物用10% Na2 S2 O3 水溶液洗滌3x並且將有機層乾燥（相分離器）並蒸發。將粗材料藉由正相快速柱層析法（120 g SiO2 柱；洗脫液：c-己烷 : EtOAc 100 : 0至30 : 70）純化以給出呈白色固體的標題化合物。將鏡像異構物藉由手性SFC：（儀器：MG 製備型SFC（SFC-1）；柱：Chiralpak IC，250 x 30 mm I.D.，5 µm，38°C；洗脫液：CO2 /iPrOH 60 : 40；流速：60 mL/min；檢測：220 nm）分離以給出作為第二洗脫峰的標題化合物（淺黃色油狀物）。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.12 (d, 1H), 7.34 (d, 1H), 4.86 (t, 1H), 3.58 (m, 2H), 2.86 (m, 1H), 2.73-2.59 (m, 2H), 1.88 - 1.79 (m, 2H), 1.76 - 1.66 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 0.73 min；MS m/z [M+H]+ 198.1/ 200.1；UPLC-MS 1。
手性-SFC：Rt = 4.40 min；(S )-(1-氯-5,6,7,8-四氫異喹啉-5-基)甲醇作為第一峰洗脫，Rt = 4.10 min；C-SFC 42。
中間體AN：(S )-1-氯-7,8-二氫-6H -螺[異喹啉-5,4'-㗁唑啶]-2'-酮
步驟1：(R )-(1-氯-5,6,7,8-四氫異喹啉-5-基)甲基胺基甲酸酯
Figure 02_image476
在0°C-5°C下，在氮氣氣氛下，向(R )-(1-氯-5,6,7,8-四氫異喹啉-5-基)甲醇（中間體AM，1.6 g，8.09 mmol）在1,2-二氯乙烷（40 mL）中之溶液中緩慢添加三氯乙醯基異氰酸酯（1.16 mL，9.71 mmol）。將RM在0°C-5°C下攪拌30 min。UPLC指示中間體（三氯乙醯基胺基甲酸酯 LC-MS：Rt = 1.09 min；MS m/z [M+H]+ 385.1/ 387.1；UPLC-MS 2）的形成未完成。再次添加三氯乙醯基異氰酸酯（1.16 mL，9.71 mmol）並且將RM再攪拌10 min。再次添加三氯乙醯基異氰酸酯（1.16 mL，9.71 mmol）以驅動反應完成。添加K2 CO3 （112 mg，0.81 mmol）並繼續攪拌10 min，隨後添加MeOH（40 mL）並且在RT下再攪拌14小時。再次添加K2 CO3 （224 mg，1.62 mmol），並且將混合物在RT下攪拌3小時，直至反應完成。將RM倒入水中並且用CH2 Cl2 萃取2x。將合併的有機萃取物乾燥（相分離器）並且蒸發。將粗殘餘物吸收在Et2 O中並濾出以給出呈白色固體的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.15 (d, 1H), 7.35 (d, 1H), 6.56 (m, 2H), 4.16 - 4.08 (m, 2H), 3.09 (m, 1H), 2.72 - 2.59 (m, 2H), 1.89 - 1.72 (m, 4H)。
LC-MS：Rt = 0.76 min；MS m/z [M+H]+ 241.1/ 243.1；UPLC-MS 1。
步驟2：(S )-1-氯-7,8-二氫-6H -螺[異喹啉-5,4'-㗁唑啶]-2'-酮
Figure 02_image478
在Ace壓力管中，將(R )-(1-氯-5,6,7,8-四氫異喹啉-5-基)甲基胺基甲酸酯（步驟1，1.46 g，6.07 mmol）、Rh2 (三苯基乙酸酯)4 在與CH2 Cl2 （38 mL）中CH2 Cl2 （218 mg，0.15 mmol）、PhI(OAc)2 （2.74 g，8.49 mmol）、和MgO（562 mg，13.9 mmol）的複合物的懸浮液用氮氣吹掃。將小瓶密封並且將混合物在45°C下攪拌15小時。再次添加與CH2 Cl2 （218 mg，0.15 mmol）、PhI(OAc)2 （2.74 g，8.49 mmol）、和MgO（562 mg，13.9 mmol）的複合物中的Rh2 (tpa)4 ，並且將RM在45°C下攪拌22小時。將RM倒入NaHCO3 飽和水溶液中並且用DCM萃取3x。將合併的有機萃取物乾燥（相分離器）並且蒸發。將粗殘餘物藉由正相快速層析法（80 g SiO2 柱；洗脫液：c-己烷 : EtOAc 100 : 0至0 : 100）純化以給出呈白色固體的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.32 (s, 1H), 8.30 (d, 1H), 7.48 (d, 1H), 4.36 (d, 1H), 4.22 (d, 1H), 2.76 - 2.61 (m, 2H), 2.03 - 1.90 (m, 2H), 1.86 - 1.74 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 0.64 min；MS m/z [M+H]+ 239.1/ 241.2；UPLC-MS 1。
中間體AO：(S )-(1-胺基-6-氟-1,2,3,4-四氫化萘-1-基)甲醇
步驟1：(S )-N -(6-氟-3,4-二氫萘-1(2H )-亞基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺
Figure 02_image480
在正N2 壓力下，將(S )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺（4.35 g，35.2 mmol）逐滴添加至6-氟-1-四氫萘酮（4.58 mL，33.5 mmol）和Ti(OiPr)4 （22.58 mL，77 mmol）的混合物中並且在50°C下加熱3天。添加另外的Ti(OiPr)4 （3.93 ml，13.40 mmol）並且將RM在50°C下攪拌1天。然後添加THF（100 mL）和鹽水（60 mL）並且將混合物在RT下攪拌15 min，通過Hyflo過濾，用THF（30 mL）洗滌3x。將濾液蒸發以留下主要係水性的相，將該主要係水性的相用水（100 mL）稀釋，並且用TBME（200於100mL）萃取2x，然後將合併的有機層用鹽水（60 mL）洗滌，經Na2 SO4 乾燥，並且蒸發。將殘餘物藉由正相層析法（120 g二氧化矽柱，洗脫液：庚烷 : TBME 100 : 0至70 : 30）純化以給出標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.06 min；MS m/z [M+H]+ 268.2；UPLC-MS 1。
步驟2：N -((S )-1-氰基-6-氟-1,2,3,4-四氫化萘-1-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺
Figure 02_image482
向(S )-N -(6-氟-3,4-二氫萘-1(2H )-亞基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺（步驟1，1.23 g，4.37 mmol）在DCM（10 mL）中之攪拌溶液中添加CsF（1.33 g，8.74 mmol）和tert.BuOH（836 μL，8.74 mmol），隨後經4小時逐滴添加三甲基矽基氰化物（1.17 mL，8.74 mmol）：注意釋放HCN的可能性! 將RM在RT下攪拌18小時，然後一次性添加另外的三甲基矽基氰化物（2.34 mL，17.48 mmol）並且將RM在RT下攪拌4天。將RM在EtOAc（30 mL）和Na2 CO3 水溶液（40 mL）之間分配，用EtOAc（30 mL）萃取1x，將合併的有機層用鹽水（30 mL）洗滌，經Na2 SO4 乾燥，並且蒸發。將殘餘物藉由正相層析法（24 g SiO2 柱，洗脫液：己烷 : TBME 70 : 30至10 : 90）純化，將含有級分的產物合併，蒸發並且將殘餘物用己烷 : (iPr)2 O研磨，過濾並乾燥以給出標題化合物作為8 : 1非鏡像異構物的混合物。
LC-MS：Rt = 0.94 min；MS m/z [M+H]+ 295.2；UPLC-MS 1。
步驟3：(S )-1-胺基-6-氟-1,2,3,4-四氫化萘-1-甲酸
Figure 02_image484
將N -((S )-1-氰基-6-氟-1,2,3,4-四氫化萘-1-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺（步驟2，5.75 g，18.95 mmol）和濃鹽酸（57.6 mL，1.90 mol）的混合物在100°C下攪拌10 min，在RT下攪拌18小時，在100°C下攪拌1小時，並且在RT下攪拌18小時。將RM用H2 O（30 mL）稀釋並用DCM（50 mL）洗滌，將有機層用H2 O（40 mL）萃取，並且將合併的水層用DCM（20 mL）洗滌。將合併的水層蒸發，並且將甲苯添加至殘餘物中，將該混合物蒸發以給出呈棕色樹脂的標題化合物，將其未經進一步純化而直接使用。
步驟4：(S )-(1-胺基-6-氟-1,2,3,4-四氫化萘-1-基)甲醇
Figure 02_image486
在RT下，將BH3 .THF複合物（1 M，50 mL，50.0 mmol）逐滴添加至THF（80 mL）中的(S )-1-胺基-6-氟-1,2,3,4-四氫化萘-1-甲酸（步驟3，6.75 g，13.74 mmol）中，並且將RM在RT下攪拌3天。逐滴添加另外的BH3 .THF複合物（55.0 mL，55.0 mmol），並且將RM在RT下攪拌24小時，隨後添加另外的BH3 .THF複合物（20 mL，20.00 mmol）並且在RT下攪拌24小時。藉由向RM中添加H2 O（50 mL）/HCl水溶液（4 N，2 mL），將將RM淬滅：注意氣體釋放! 在40°C下攪拌30 min後，將THF藉由蒸發除去，並且將剩餘的主要係水性的相用水（100 mL）稀釋並用TBME（100 mL）洗滌2x。將水層用Na2 CO3 處理直至約pH 9，轉移至分液漏斗中並且用DCM（80 mL）萃取5x，將合併的有機層用鹽水（70 mL）洗滌，經Na2 SO4 乾燥，並且蒸發。將殘餘物藉由逆相層析法（RP-HPLC 1）純化以給出呈白色固體的標題化合物的三氟乙酸鹽。藉由將鹽吸收到DCM和NaOH水溶液中獲得游離鹼，用DCM再萃取2x，將合併的有機層經Na2 SO4 乾燥，並且蒸發。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.60 - 7.56 (m, 1H), 6.96 - 6.90 (m, 1H), 6.87 - 6.82 (m, 1H), 4.77 (t, 1H), 3.43 - 3.39 (m, 1H), 3.27 - 3.23 (m, 1H), 2.75 - 2.67 (m, 2H), 2.05 - 1.98 (m, 1H), 1.79 - 1.69 (m, 4H), 1.50 - 1.43 (m, 1H)。
中間體AP：(S )-(1-氯-5-((3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-5,6,7,8-四氫異喹啉-5-基)甲醇
步驟1：(S )-1-氯-3'-(3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-7,8-二氫-6H -螺[異喹啉-5,4'-㗁唑啶]-2'-酮
Figure 02_image488
在Ace壓力管中，將(S )-1-氯-7,8-二氫-6H -螺[異喹啉-5,4'-㗁唑啶]-2'-酮（中間體AN，270 mg，1.13 mmol）、2-氯-3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶（中間體A，420 mg，1.69 mmol）、CuBr（81 mg，0.57 mmol）和Cs2 CO3 （737 mg，2.26 mmol）在DMF（11 mL）中之溶液在120°C下攪拌3.5小時。將RM倒入NaHCO3 飽和水溶液中並且用EtOAc萃取3x。將合併的有機萃取物用水洗滌2x，乾燥（相分離器）並蒸發。將粗材料溶解於THF（5 mL）中，添加SiliaMetS®硫醇（細微性：40-63 µm，載量1.40 mmol/g，1.70 mmol，1.21 g）並且將混合物在40°C下渦旋1小時。將粗產物藉由正相快速層析法（40 g SiO2 柱，洗脫液：c-己烷 : EtOAc 100 : 0至75 : 25）純化以給出呈米色固體的標題化合物。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.61 (m, 1H), 8.25 (d, 1H), 8.16 (m, 1H), 7.46 (t, 1H), 7.34 (d, 1H), 4.72 (d, 1H), 4.52 (d, 1H), 2.82 (dd, 1H), 2.64 - 2.58 (m, 1H), 2.46 (m, 1H), 2.16 (m, 1H), 2.01 (m, 1H), 1.82 (m, 1H)。
LC-MS：Rt = 1.17 min；MS m/z [M+H]+ 450.2/ 452.2；UPLC-MS 1。
步驟2：(S )-(1-氯-5-((3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-5,6,7,8-四氫異喹啉-5-基)甲醇
Figure 02_image490
將NaOH（1.97 mL，7.89 mmol）添加至(S )-1-氯-3'-(3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-7,8-二氫-6H -螺[異喹啉-5,4'-㗁唑啶]-2'-酮（355 mg，0.79 mmol）在EtOH（6.8 mL）中之混合物中並且將RM在90°C下攪拌15 min。將反應混合物倒入NaHCO3 飽和水溶液中，用DCM萃取3x，將合併的有機萃取物乾燥（相分離器）並且蒸發。將粗殘餘物不經純化而用於下一步驟。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.01 (d, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.37 (t, 1H), 7.21 (d, 1H), 6.71 (s, 1H), 5.74 (t, 1H), 3.71 (dd, 1H), 3.45 (dd, 1H), 2.87 (m, 1H), 2.65 (m, 1H), 2.37 (m, 1H 與DMSO重疊), 1.98 - 1.82 (m, 3H)。
LC-MS：Rt = 1.19 min；MS m/z [M+H]+ 424.2/ 426.2；UPLC-MS 1。
中間體AQ：(S )-(3-氯-8-((3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-5,6,7,8-四氫異喹啉-8-基)甲醇
步驟1：(S )-N -(3-氯-6,7-二氫異喹啉-8(5H )-亞基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺
Figure 02_image492
在RT下在N2 流下，將(S )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺（712 mg，5.75 mmol）添加至3-氯-6,7-二氫異喹啉-8(5H )-酮（1 g，5.23 mmol）和Ti(OiPr)4 （4 ml，12.8 mmol）中，並且將RM在50°C下伴隨N2 流攪拌22.5小時。將冷卻的RM用THF和鹽水稀釋，並且在RT下攪拌15 min。將RM過濾，用THF洗滌。將濾液蒸發並且在水和EtOAc之間分配。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥並蒸發。將殘餘物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（80 g SiO2 柱；洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至40 : 60）純化。將含有級分的產物合併並且蒸發，以給出呈黃色固體的標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.98 min；MS m/z [M+H]+ 285.1/287.2；UPLC-MS 1。
步驟2：(S )-N -(3-氯-8-氰基-5,6,7,8-四氫異喹啉-8-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺
Figure 02_image494
在RT下在Ar下，將三甲基矽烷甲腈（6.5 ml，48.5 mmol）隨後是t -BuOH（0.764 ml，7.98 mmol）添加至DCM（12 mL）中的(S ,E )-N -(3-氯-6,7-二氫異喹啉-8(5H )-亞基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺（步驟1，1.16 g，3.99 mmol）和氟化銫（1.21 g，7.98 mmol）中。將RM在RT下攪拌135 min並且添加另外的三甲基矽烷甲腈（2 mL，14.9 mmol），隨後在RT下攪拌18小時，然後添加另外的三甲基矽烷甲腈（1.5 mL，11.2 mmol）。在RT下再攪拌2.5小時後，將RM用EtOAc稀釋，將有機層用鹽水和NaHCO3 飽和水溶液洗滌，經Na2 SO4 乾燥並蒸發。將殘餘物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（80 g SiO2 柱；洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至30 : 70）純化。將含有級分的產物合併並且蒸發，以給出呈灰白色泡沫的標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.87 min；MS m/z [M+H]+ 312.1/314.2；UPLC-MS 1。
步驟3：3-氯-8-((S )-1,1-二甲基乙基亞磺醯胺基)-5,6,7,8-四氫異喹啉-8-甲醯胺
Figure 02_image496
將(S )-N -(3-氯-8-氰基-5,6,7,8-四氫異喹啉-8-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺（步驟2，1.05 g，3.3 mmol）和(氫化(二甲基亞膦酸-kP)[氫雙(二甲基膦-kP)]鉑(II)（Parkin催化劑，142 mg，330 μmol）懸浮於EtOH（10 mL）和水（2.5 mL）的混合物中。將RM在60°C下攪拌70 min，然後過濾，用MeOH洗滌並且將濾液蒸發。將濾液用NaHCO3 飽和水溶液稀釋並用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥並蒸發。將殘餘物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（80 g SiO2 柱；洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至70 : 30）純化。將含有級分的產物合併並且蒸發，以給出標題化合物作為非鏡像異構物的混合物。
LC-MS：Rt = 0.69/0.72 min；MS m/z [M+H]+ 330.1/332.1；UPLC-MS 1。
步驟4：8-胺基-3-氯-5,6,7,8-四氫異喹啉-8-甲酸
Figure 02_image498
將3-氯-8-((S )-1,1-二甲基乙基亞磺醯胺基)-5,6,7,8-四氫異喹啉-8-甲醯胺（步驟3，952 mg，2.83 mmol）在HCl水溶液（6 M，5 mL，30 mmol）中之溶液在100°C下攪拌18小時。將冷卻的RM用NaOH水溶液（2 M，16 mL，32 mmol）中和至約pH 7並蒸發以給出呈白色固體的標題化合物，將其不經進一步純化而用於下一步驟。
LC-MS：Rt = 0.53 min；MS m/z [M+H]+ 227.1/229.1；UPLC-MS 3。
步驟5：(S )-(8-胺基-3-氯-5,6,7,8-四氫異喹啉-8-基)甲醇
Figure 02_image500
在0°C下在Ar下，將硼烷-THF複合物溶液在THF（1 M，10 ml，10 mmol）中之溶液經15 min逐滴添加至THF（10 mL）中的8-胺基-3-氯-5,6,7,8-四氫異喹啉-8-甲酸（步驟4，635 mg，2.8 mmol）中。將RM在RT下攪拌16小時，然後小心地用MeOH淬滅並且蒸發，用MeOH共蒸發3x。將殘餘物用MeOH稀釋並添加Et2 O（2 M，1.5 ml，3 mmol）中的HCl。添加另外的Et2 O直至形成沈澱並且將RM在RT下攪拌30 min。將RM過濾，並且將NaHCO3 飽和水溶液添加至固體中，並將水相用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，並且蒸發以給出標題化合物作為鏡像異構物的混合物。將鏡像異構物藉由手性HPLC：（儀器：Gilson Trilution I HPLC製備型系統；柱：Lux i-Cel-5，5 μm，250 x 30 mm 25°C；洗脫液：庚烷 EtOH : MeOH 80 : 10 : 10 + 0.05% Et2 NH；流速：15 mL/min；檢測：220 nm）分離以給出作為第一洗脫峰的標題化合物。手性-HPLC：Rt = 7.60 min。
LC-MS：Rt = 0.38 min；MS m/z [M+H]+ 213.1/215.1；UPLC-MS 1。
(R )-(8-胺基-3-氯-5,6,7,8-四氫異喹啉-8-基)甲醇作為第二洗脫峰，Rt = 9.13 min；C-HPLC 49。
步驟6：(S )-3-氯-6,7-二氫-5H -螺[異喹啉-8,4'-㗁唑啶]-2'-酮
Figure 02_image502
在0°C下在Ar下，將雙(三氯甲基)碳酸酯（86 mg，288 μ mol）在DCM（3 mL）中之溶液逐滴添加至DCM（5 mL）中的(S )-(8-胺基-3-氯-5,6,7,8-四氫異喹啉-8-基)甲醇（步驟5，125 mg，576 μmol）和三乙胺（169 μL，1.21 mmol）中。將RM在RT下攪拌1小時，然後用NH4 Cl飽和水溶液淬滅並且用DCM萃取3x。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，並且蒸發以給出呈灰白色固體的標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.64 min；MS m/z [M+H]+ 239.1/241.1；UPLC-MS 1。
步驟7：(S )-3-氯-3'-(3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-6,7-二氫-5H -螺[異喹啉-8,4'-㗁唑啶]-2'-酮
Figure 02_image504
將(S )-3-氯-6,7-二氫-5H -螺[異喹啉-8,4'-㗁唑啶]-2'-酮（步驟6，140 mg，557 μmol）、碘化銅(I)（53.3 mg，280 μmol）、碳酸銫（363 mg，1.12 mmol）和2-氯-3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶（中間體A，248 mg，1.0 mmol）在DMF（5 mL）中之混合物在Ar下在120°C下加熱2小時。添加另外的2-氯-3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶（中間體A，74 mg，0.3 mmol）和碘化銅(I)（15.2 mg，80 μmol），並且將RM在120°C下再加熱1.5小時。將RM用NaHCO3 飽和水溶液稀釋並用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥並蒸發。將殘餘物用THF（15 mL）稀釋並添加SiliaMetS®硫醇（0.141 mmol，141 mg，細微性：40-63 µm，載量1.41 mmol/g，Silicycle），並且將RM在40°C下攪拌1小時。將RM過濾，用THF洗滌，並且將濾液蒸發。將殘餘物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（40 g SiO2 柱，洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至80 : 20）純化。將含有級分的產物合併，並且蒸發。將殘餘物用己烷研磨並且過濾以給出呈白色泡沫的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.61 (d, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.14 (d, 1H), 7.47 (t, 1H), 7.34 (s, 1H), 4.72 (d, 1H), 4.52 (dd, 1H), 2.79 - 2.65 (m, 2H), 2.57 (d, 1H), 2.22 (d, 1H), 1.96 - 1.87 (m, 1H), 1.85 - 1.75 (m, 1H)。
LC-MS：Rt = 1.15 min；MS m/z [M+H]+ 450.1/452.1；UPLC-MS 1。
步驟8：(S )-(3-氯-8-((3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-5,6,7,8-四氫異喹啉-8-基)甲醇
Figure 02_image506
將(S )-3-氯-3'-(3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-6,7-二氫-5H -螺[異喹啉-8,4'-㗁唑啶]-2'-酮（步驟7，160 mg，334 μmol）懸浮於EtOH（3 mL）中，並且添加NaOH水溶液（2 M，1 mL，2 mmol）。將RM在80°C下攪拌1.5小時，將冷卻的RM用水稀釋並且用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥並蒸發以給出標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.19 min；MS m/z [M+H]+ 424.1/426.2；UPLC-MS 1。
中間體AR：(S )-(7-溴-4-((3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-8-氟口克唍-4-基)甲醇
步驟1：(S )-7-溴-3'-(3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-8-氟螺[口克唍-4,4'-㗁唑啶]-2'-酮
Figure 02_image508
在Ace壓力管中，將(S )-7-溴-8-氟螺[口克唍-4,4'-㗁唑啶]-2'-酮（中間體AS，5.4 g，17.9 mmol）、2-氯-3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶（中間體A，5.75 g，23.2 mmol）、CuI（1.70 g，8.94 mmol）和碳酸銫（11.6 g，35.8 mmol）在DMF（140 mL）中之溶液在130°C下攪拌2.5小時。將2-氯-3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶（中間體A，1.99 g，8.04 mmol）添加至RM中，將該混合物在130°C下再加熱2小時。將RM倒入NH4 Cl飽和水溶液（200 mL）中，在RT下攪拌1小時，然後用EtOAc萃取3x。將合併的有機萃取物用NH4 Cl飽和水溶液洗滌2x，經Na2 SO4 乾燥，過濾並蒸發。將粗殘餘物藉由正相快速層析法（220 g RediSep Gold柱；洗脫液，c-己烷 : EtOAc 100 : 0至65 : 35）純化以給出呈黃色固體的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.64 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.46 (t, 1H), 7.15 (dd, 1H), 7.04 (dd, 1H), 4.80 (d, 1H), 4.56 - 4.52 (m, 2H), 4.32 (m, 1H), 3.12 (m, 1H), 2.48 - 2.39 (m, 1H 與DMSO峰重疊)。
LC-MS：Rt = 1.24 min；MS m/z [M+HCOO]- 557.0/ 559.0；UPLC-MS 1。
步驟2：(S )-(7-溴-4-((3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-8-氟口克唍-4-基)甲醇
Figure 02_image510
將(S )-7-溴-3'-(3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-8-氟螺[口克唍-4,4'-㗁唑啶]-2'-酮（步驟1，5.65 g，11.0 mmol）和NaOH（4 M，27.5 mL，110 mmol）在EtOH（55 mL）中之混合物在90°C下攪拌50 min。將RM倒入水中並且用DCM萃取2x。將合併的有機萃取物經Na2 SO4 乾燥，過濾並蒸發以得到呈淺黃色泡沫的標題化合物，將其不經進一步純化用於下一步驟。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.04 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.38 (t, 1H), 7.00 (dd, 1H), 6.94 (br s, 1H), 5.73 (br t, 1H), 4.46 (m, 1H), 4.33 (m, 1H), 3.87 (dd, 1H), 3.61 (dd, 1H), 2.90 (dt, 1H), 2.05 (dt, 1H)。
LC-MS：Rt = 1.25 min；MS m/z [M+H]+ 487.0/ 489.0；UPLC-MS 1。
中間體AS：(S )-7-溴-8-氟螺[口克唍-4,4'-㗁唑啶]-2'-酮
Figure 02_image512
在0°C-5°C下，向(S )-(4-胺基-7-溴-8-氟口克唍-4-基)甲醇（中間體AT，5 g，18.1 mmol）和三乙胺（5.30 mL，38.0 mmol）在DCM（100 mL）中之溶液中逐滴添加三光氣（2.15 g，7.24 mmol）在DCM（100 mL）中之溶液。將黃色溶液在RT下攪拌50 min。將RM倒入NaHCO3 飽和水溶液中並且用DCM萃取3x。將合併的有機萃取物乾燥（相分離器）並且蒸發以給出呈米色泡沫的標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.82 min；MS m/z [M+NH4 ]+ 319.1/ 321.0；UPLC-MS 1。
中間體AT：(S )-(4-胺基-7-溴-8-氟口克唍-4-基)甲醇
步驟1：外消旋 -甲基4-胺基-7-溴-8-氟口克唍-4-甲酸酯
Figure 02_image514
將4-胺基-7-溴-8-氟口克唍-4-甲酸（中間體AU，250 g，765 mmol，HCl鹽）和SOCl2 （910 g，7.66 mol）在MeOH（2 L）中的懸浮液在65°C下攪拌16小時。將RM在減壓下濃縮，並且將殘餘物在Na2 CO3 飽和水溶液（1 L）和DCM（1 L）之間分配。將水相用DCM（500 mL）再萃取2x，將合併的有機層用鹽水（600 mL）洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並濃縮以給出呈淡黃色固體的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.83 (br, s, 3H), 7.51 (dd, 1H), 7.29 (dd, 1H), 5.87 (br s, 1H), 4.49 - 4.40 (m, 1H), 4.38 - 4.26 (m, 1H), 3.78 (s, 2H), 3.36 (br s, 2H), 2.44 - 2.34 (m, 1H), 2.18 - 2.07 (m, 1H)。
步驟2：(S )-(4-胺基-7-溴-8-氟口克唍-4-基)甲醇
Figure 02_image516
在28°C下，向外消旋 -甲基4-胺基-7-溴-8-氟口克唍-4-甲酸酯（步驟1，240 g，723 mmol）在MeOH（2 L）中之溶液中添加NaBH4 （137 g，3.62 mol）並且將RM在28°C下攪拌16小時。將溶劑在減壓下除去並且將殘餘物吸收到DCM（1 L）中，並且用鹽水（600 mL）洗滌。將水相用DCM（200 mL）萃取2x並且將合併的有機層用鹽水（300 mL）洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並濃縮。將殘餘物重新溶解於MeOH（1.5 L）中，並且添加HCl/MeOH（4 M，1 L），將混合物在25°C下攪拌1小時然後濃縮。將殘餘物用MTBE（200 mL）研磨以給出呈灰白色固體的外消旋標題化合物。將鏡像異構物藉由手性SFC：（儀器：Thar 350製備型SFC；柱：Chiralpak AD，10 μm，50 x 300 cm；溫度38°C；洗脫液：CO2 : MeOH + 0.1% NH4 OH，100 : 0至65 : 35；流速：200 mL/min；背壓：100巴；檢測：220 nm）分離以給出作為第二洗脫峰的標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.75 min；MS m/z [M+H]+ 276.2/278.2；UPLC-MS 4。
手性-HPLC：Rt = 4.78 min；以(R )-(4-胺基-7-溴-8-氟口克唍-4-基)甲醇作為第一洗脫峰，Rt = 4.16 min；C-HPLC 10。
中間體AU：4-胺基-7-溴-8-氟口克唍-4-甲酸
步驟1：3-(3-溴-2-氟苯氧基)丙酸
Figure 02_image518
在0°C下，向礦物油中的NaH（60%，201 g，5.03 mol，60%純度）在DMF（2 L）中的分散體中添加3-溴-2-氟苯酚（800 g，4.19 mol）並且將混合物在28°C下攪拌3小時。向RM中添加β-丙內酯（362 g，5.03 mol）並且將混合物在28°C下攪拌32小時。將RM倒入冰水（8 L）中，以給出灰白色沈澱。將固體藉由過濾收集並且用乙腈（800 mL）漿化以給出呈白色固體的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.46 (s, 1H), 7.29 - 7.18 (m, 2H), 7.14 - 7.06 (m, 1H), 4.26 (t, 2H), 2.72 (t, 2H)。
步驟2：7-溴-8-氟口克唍-4-酮
Figure 02_image520
在80°C下，向P2 O5 （421 g，2.97 mol）在甲磺酸（2 L）中的懸浮液中添加3-(3-溴-2-氟苯氧基)丙酸（步驟1，400 g 1.48 mol）。在80°C下攪拌15 min後，將RM倒入冰水（4 L）中，然後用乙酸乙酯（800 mL）萃取3x。將合併的有機層用鹽水（300 mL）洗滌2x，經Na2 SO4 乾燥，過濾並濃縮。將殘餘物用AcCN（500 mL）漿化以給出呈黃色固體的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.50 (dd, 1H), 7.35 (dd, 1H), 4.69 (t, 2H), 2.87 (t, 2H)。
步驟3：外消旋 -7-溴-8-氟螺[口克唍-4,4'-咪唑烷]-2',5'-二酮
Figure 02_image522
在密封管中，將7-溴-8-氟口克唍-4-酮（步驟2，452 g，1.84 mol）、KCN（179 g，2.75 mol）和(NH4 )2 CO3 （1.94 kg，20.2 mol）在EtOH（4 L）和H2 O（4 L）的混合物中之溶液在100°C下攪拌16小時。將反應混合物在減壓下濃縮並且過濾以給出粗產物。將粗產物用AcCN（500 mL）漿化以給出呈淺黃色固體的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.08 (br, s, 1H), 8.62 (br, s, 1H), 7.34 - 7.15 (m, 1H), 6.91 (br, d, 1H), 4.62 (br, t, 1H), 4.33 (td, 1H), 2.70 - 2.64 (m, 1H), 2.38 - 2.29 (m, 1H), 2.23 - 2.12 (m, 1H)。
步驟4：外消旋 -4-胺基-7-溴-8-氟口克唍-4-甲酸
Figure 02_image524
將外消旋 -7-溴-8-氟螺[口克唍-4,4'-咪唑烷]-2',5'-二酮（步驟3，400 g 1.27 mol）和KOH（712 g 12.7 mol）在水（2 L）中的懸浮液在105°C下攪拌54小時。將RM調節至pH 7導致淡黃色沈澱形成，將該沈澱藉由過濾收集。將固體用水（300 mL）洗滌並且乾燥以給出呈淺黃色固體的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.02 (br, s, 2H), 7.20 - 7.16 (m, 2H), 4.62 (br, t, 1H), 4.33 (dt, 1H), 2.46 - 2.40 (m, 1H), 2.07 - 1.99 (m, 1H)。
通過以下替代路線也可以合成中間體AU，作為非外消旋混合物，富集(S )-鏡像異構物：
步驟1A：(S )-N -(7-溴-8-氟口克唍-4-亞基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺
Figure 02_image526
在氮氣流下在RT下，向7-溴-8-氟口克唍-4-酮（步驟2，4.36 g，17.8 mmol）和Ti(OiPr)4 （12.0 mL，40.9 mmol）的混合物中添加(S )-(-)-三級丁烷亞磺醯胺（2.26 g，18.7 mmol）。將RM在50°C下在連續N2 流下加熱18小時。添加水（110 mL）隨後添加EtOAc（110 mL）並且將所得懸浮液攪拌15 min。將混合物通過矽藻土過濾並且將固體依次用水和EtOAc沖洗。向濾液中添加鹽水（100 mL）並且將混合物用EtOAc萃取。將有機層乾燥（相分離器）並蒸發。將粗殘餘物藉由正相快速層析法（SiO2 柱；洗脫液，c-己烷 : EtOAc 100 : 0至80 : 20）純化以給出呈黃色油狀物的標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.16 min；MS m/z [M+H]+ 348.2/350.0；UPLC-MS 1。
步驟2A：(S )-N -(7-溴-4-氰基-8-氟口克唍-4-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺
Figure 02_image528
向Ace壓力管中裝入(S )-N -(7-溴-8-氟口克唍-4-亞基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺（步驟1A，3.87 g，11.1 mmol）和氟化銫（3.38 g，22.2 mmol）。添加DCM（55 mL），隨後添加三級丁醇（2.24 mL，22.2 mmol）和三甲基矽基氰化物（6.95 mL，55.6 mmol）。將管密封並且將RM在RT下攪拌16小時。再次添加三甲基矽基氰化物（6.95 mL，27.8 mmol）並且將RM再攪拌5小時。將RM倒入NaHCO3 飽和水溶液中並且用CH2 Cl2 萃取2x。將合併的有機萃取物乾燥（相分離器）並且蒸發。將粗材料藉由正相快速層析法（100 g SiO2 柱；洗脫液：c-己烷 : EtOAc 100 : 0至50 : 50）純化以給出呈白色泡沫的標題化合物作為非鏡像異構物的混合物（dr = 75 : 25）。
LC-MS：Rt = 4.79和4.84 min；MS m/z [M+NH4 ]+ 392.1./394.1；UPLC-MS 6。
步驟3A：7-溴-4-((S )-1,1-二甲基乙基亞磺醯胺基)-8-氟口克唍-4-甲醯胺
Figure 02_image530
將(S )-N -(7-溴-4-氰基-8-氟口克唍-4-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺（步驟2A，3 : 1非鏡像異構物混合物，2.97 g，7.91 mmol）溶解於THF/水3 : 1的混合物（31.6 mL）中。添加乙醯胺（1.96 g，33.2 mmol）和PdCl2 （140 mg，0.79 mmol）並且將混合物在RT下在氮氣氣氛下攪拌19小時。將RM倒入鹽水中並且用CH2 Cl2 萃取2x。將合併的有機層乾燥（相分離器）並蒸發以給出呈棕色泡沫的標題化合物（3 : 1非鏡像異構物的混合物），將其不經進一步純化用於下一步驟。
LC-MS：Rt = 0.85和0.87 min；MS m/z [M+NH4 ]+ 393.1/395.1；UPLC-MS 1。
步驟4A：4-胺基-7-溴-8-氟口克唍-4-甲酸鹽酸鹽
Figure 02_image524
將7-溴-4-((S )-1,1-二甲基乙基亞磺醯胺基)-8-氟口克唍-4-甲醯胺（步驟3A，3 : 1非鏡像異構物混合物，3.10 g，7.17 mmol）在HCl（5 M，32.7 mL）中稀釋並且將混合物回流14小時。允許RM冷卻至RT並添加CH2 Cl2 。分離各層並且將水層濃縮以給出呈棕色固體的標題化合物（3 : 1非鏡像異構物混合物），將其不經進一步純化用於下一步驟。
LC-MS：Rt = 0.43 min；MS m/z [M+H]+ 290.0/292.1；UPLC-MS 1。
使用用於製備中間體AU的方法來製備以下中間體AU1和AU9。
中間體 結構 表徵數據
AU1
Figure 02_image533
4-胺基-7-氯口克唍-4-甲酸		 LC-MS：Rt = 0.38 min；MS m/z [M+H]+ 228.1/230.1；UPLC-MS 1
AU2
Figure 02_image535
4-胺基-7-(三氟甲基) 口克唍-4-甲酸		 LC-MS：Rt = 0.48 min；MS m/z [M+H]+ 262.3；UPLC-MS 1
AU3
Figure 02_image537
4-胺基-7,8-二氟口克唍-4-甲酸		 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.85 (br s, 1H), 7.27 (m, 1H), 7.05 (dd, 1H), 4.57 (m, 1H), 4.43 (m, 1H), 2.52 (m, 1H, 與DMSO峰重疊), 2.29 (m, 1H)。
AU4
Figure 02_image539
4-胺基-8-氯口克唍-4-甲酸		 LC-MS：Rt = 0.34 min；MS m/z [M+H]+ 227.8/230.0；UPLC-MS 1
AU5
Figure 02_image541
4-胺基-7-溴口克唍-4-甲酸		 LC-MS：Rt = 0.41 min；MS m/z [M-H]- 270.0/272.0；UPLC-MS 1
AU6
Figure 02_image543
4-胺基-8-溴口克唍-4-甲酸		 LC-MS：Rt = 0.36 min；MS m/z [M-H]- 270.0/271.9；UPLC-MS 1
AU7
Figure 02_image545
4-胺基-8-氟硫代口克唍-4-甲酸		 LC-MS：Rt = 0.34 min；MS m/z [M-H]- 226.1；UPLC-MS 2
AU8
Figure 02_image547
外消旋 -1-胺基-6-溴-1,2,3,4-四氫化萘-1-甲酸		 LC-MS：Rt = 0.43 min；MS m/z [M+H]+ 270.1/272.1；UPLC-MS 2。   
AU9
Figure 02_image549
外消旋 -1-胺基-5-氟-1,2,3,4-四氫化萘-1-甲酸		 LC-MS：Rt = 0.30 min；MS m/z [M+H]+ 210.1；UPLC-MS 1   
中間體AV：2-(甲基-d 3 )-1,3,2-二側氧基硼雜
步驟1：1,3-雙((1,3,2-二側氧基硼雜-2-基)氧基)丙烷
Figure 02_image551
在迪安-斯達克（Dean-Stark）設備中，將丙烷-1,3-二醇（52.1 mL，721 mmol）和硼酸（30 g，480 mmol）在甲苯（400 mL）中之混合物在回流下加熱13小時，同時除去水。然後將冷卻的RM蒸發並且將殘餘物在0.5毫巴真空下藉由球到球蒸餾（bulb-to-bulb distillation）純化。將級分在200-220°C之間蒸餾，獲得呈黏性澄清無色油狀物的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 3.93 (t, 8H), 3.69 (t, 4H), 1.83 (五重, 4H), 1.62 (五重, 2H)。
步驟2：2-(甲基-d 3 )-1,3,2-二側氧基硼雜
Figure 02_image553
將1,3-雙((1,3,2-二側氧基硼雜-2-基)氧基)丙烷（步驟1，10.0 g，36.9 mmol）和硼酸三甲酯（3.84 g，36.9 mmol）的混合物在RT下攪拌0.5小時。然後將RM用Et2 O（110 mL）稀釋，用乾冰/丙酮浴冷卻，並且經1小時逐滴添加(甲基-d 3 )碘化鎂在Et2 O中之溶液（1 M，111 mL，由d 3 -甲基碘化物和Mg製備，並且以I2 開始）。將RM在-75°C下再攪拌2小時，然後允許其升溫至RT，並且逐滴添加HCl在Et2 O（2 M，55.4 mL，111 mmol）中之溶液。在RT下攪拌1小時後，將RM過濾，並在700毫巴的壓力和35°C的浴溫下，在旋轉蒸發儀上減少濾液的體積。將殘餘物轉移至蒸餾設備中，並且用100毫巴的真空分級蒸餾。在40-45°C之間蒸餾，收集呈澄清淡黃色油狀物的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, 氯仿-d ) δ 4.00 (t, 4H), 1.96 (五聯, 2 H)。
中間體AW：(S )-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-7-碘-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image555
將(S )-7-溴-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]（實例39，150 mg，320 μmol）、CuI（30 mg，160 mmol）、NaI（96 mg，639 μmol）和反式-N ,N '-二甲基-1,2-環己烷二胺（5 μL，32 μmol）在1,4-二㗁𠮿（3 mL）中之混合物在密封管中在110°C下在氮氣的氣氛下加熱18小時。向冷卻的RM中添加另外的CuI（30 mg，160 mmol）、NaI（96 mg，639 μmol）和反式-N ,N '-二甲基-1,2-環己烷二胺（5 μL，32 μmol）並且在110°C下繼續加熱18小時。將冷卻的RM在DCM和30% NH3 水溶液之間分配，將水相用DCM萃取3x，將合併的有機相藉由穿過相分離筒乾燥並且濃縮。將殘餘物藉由正相層析法（50 g SiO2 SNAP筒；洗脫液：己烷 : EtOAc 100 : 0至50 : 50）純化以給出呈黃色固體的標題化合物。
LC-MS：Rt = 3.70 min；MS m/z [M+H]+ 517.0；UPLC-MS 4。
中間體AX：(S )-(7-氯-4-((3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基) 口克唍-4-基)甲醇
步驟1：(S )-(4-胺基-7-氯口克唍-4-基)甲醇
Figure 02_image557
藉由與中間體M，步驟7相似的方法，藉由用4-胺基-7-氯口克唍-4-甲酸（中間體AU1）代替7-胺基-3-(三氟甲基)-6,7-二氫-5H -環戊并[c ]吡啶-7-甲酸（中間體M，步驟6）製備標題化合物。將鏡像異構物藉由手性SFC：（儀器：MG製備型SFC；柱：Chiralpak IC，250 x 30 mm I.D.，5 µm，38°C；洗脫液：CO2 /MeOH (+ 0.1% NH4 OH) 75 : 25；流速：60 mL/min；檢測：220 nm）分離以給出呈米色粉末的作為第一洗脫峰的標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.43 min；MS m/z [M+H]+ 214.1/ 216.1；UPLC-MS 1。
手性-HPLC：C-SFC 10：Rt = 3.48 min；(R )-(4-胺基-7-氯口克唍-4-基)甲醇作為第二洗脫峰，Rt = 3.77 min；C-SFC 10。
步驟2和3：(S )-(7-氯-4-((3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基) 口克唍-4-基)甲醇
Figure 02_image559
藉由與中間體AR和AS相似的方法，藉由用(S )-(4-胺基-7-氯口克唍-4-基)甲醇（步驟1）代替(S )-(4-胺基-7-溴-8-氟口克唍-4-基)甲醇（中間體AT）製備標題化合物。將粗產物不經純化而用於下一步驟。
LC-MS：Rt = 1.25 min；MS m/z [M+H]+ 425.1/ 427.1；UPLC-MS 1。
中間體AY：(S )-7-溴-8-氟-3'-(3-(氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)螺[口克唍-4,4'-㗁唑啶]-2'-酮
Figure 02_image561
藉由與中間體N相似的方法，藉由用(S )-7-溴-8-氟螺[口克唍-4,4'-㗁唑啶]-2'-酮（中間體AS）代替(S )-5-溴-4-氟-2,3-二氫螺[茚-1,4'-㗁唑啶]-2'-酮（中間體I）製備標題化合物。將粗產物藉由正相層析法（矽膠，洗脫液：c-己烷 : EtOAc 100 : 0至70 : 30）純化。
LC-MS：Rt = 1.24 min；MS m/z [M+HCO2 - ]- 539.3/541.2；UPLC-MS 1。
中間體AZ：(S )-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊硼烷-2-基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image563
在微波小瓶中，裝入(S )-7-溴-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]（實例39，500 mg，1.07 mmol）、雙(頻哪醇)二硼（541 mg，2.13 mmol）、PdCl2 (dppf).CH2 Cl2 加合物（43.5 mg，0.05 mmol）和KOAc（314 mg，3.20 mmol）。將小瓶置於氬氣下並添加1,4-二㗁𠮿（8 mL），並且將小瓶封閉。將RM在100°C下攪拌5小時。將RM倒入NaHCO3 飽和水溶液中並且用EtOAc萃取2x。將合併的有機萃取物乾燥（相分離器）並且蒸發以給出呈棕色油狀物的標題化合物。將化合物未經純化而用於下一步驟。
LC-MS：Rt = 0.96 min；MS m/z [M+H]+ 517.2；UPLC-MS 1。
中間體BA：(S )-(4-((3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-7-(三氟甲基) 口克唍-4-基)甲醇
Figure 02_image565
藉由與中間體AR和AS相似的方法，藉由用(S )-(4-胺基-7-(三氟甲基) 口克唍-4-基)甲醇（中間體BB）代替(S )-(4-胺基-7-溴-8-氟口克唍-4-基)甲醇（中間體AT）製備標題化合物。將粗產物不經純化而用於下一步驟。
LC-MS：Rt = 1.27 min；MS m/z [M+H]+ 459.1；UPLC-MS 1。
中間體BB：(S )-(4-胺基-7-(三氟甲基) 口克唍-4-基)甲醇
Figure 02_image567
藉由與中間體M，步驟7相似的方法，藉由用4-胺基-7-(三氟甲基) 口克唍-4-甲酸（中間體AU2）代替7-胺基-3-(三氟甲基)-6,7-二氫-5H -環戊并[c ]吡啶-7-甲酸（中間體M，步驟6）製備標題化合物。將鏡像異構物藉由手性HPLC：（儀器：THAR 200製備型SFC；柱：Chiralpak lC，10 μm，300 x 50 mm I.D.，38°C；洗脫液：CO2 /MeOH (+ 0.1% NH4 OH) 85 : 15；流速：200 mL/min；檢測：220 nm）分離以給出作為第一洗脫峰的標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.54 min；MS m/z [M+H]+ 248.2；UPLC-MS 1。
手性-SFC：Rt = 2.11 min；(R )-(4-胺基-7-(三氟甲基) 口克唍-4-基)甲醇作為第二洗脫峰，Rt = 2.34 min；C-SFC 43。
中間體BC：(S )-(4-((3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-7,8-二氟口克唍-4-基)甲醇
步驟1：(S )-7,8-二氟螺[口克唍-4,4'-㗁唑啶]-2'-酮
Figure 02_image569
藉由與中間體AS相似的方法，藉由用(S )-(4-胺基-7,8-二氟口克唍-4-基)甲醇（中間體BD）代替(S )-(4-胺基-7-溴-8-氟口克唍-4-基)甲醇（中間體AT）製備標題化合物。將粗產物不經純化而用於下一步驟。
LC-MS：Rt = 0.72 min；MS m/z [M-H]- 240.1；UPLC-MS 1。
步驟2和3：(S )-(4-((3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-7,8-二氟口克唍-4-基)甲醇
Figure 02_image571
藉由與中間體AR相似的方法，藉由用(S )-7,8-二氟螺[口克唍-4,4'-㗁唑啶]-2'-酮（步驟1）代替(S )-7-溴-8-氟螺[口克唍-4,4'-㗁唑啶]-2'-酮（中間體AS）製備標題化合物。將粗產物不經純化而用於下一步驟。
LC-MS：Rt = 1.19 min；MS m/z [M+H]+ 427.2；UPLC-MS 1。
通過以下替代路線也可以合成中間體BC，步驟1 (S )-7,8-二氟螺[口克唍-4,4'-㗁唑啶]-2'-酮：
步驟1：1,2-二氟-3-(丙-2-炔-1-基氧基)苯
Figure 02_image573
將2,3-二氟苯酚（20 g，151 mmol）、甲苯（21.1 mL，196 mmol）中的80% 3-溴丙-1-炔和K2 CO3 （41.6 g，301 mmol）在DMF（350 mL）中之混合物在50°C下加熱2.5小時。將冷卻的RM用EtOAc稀釋，並且將有機相用水和鹽水洗滌。將合併的水層用EtOAc再次萃取，將合併的有機相經Na2 SO4 乾燥，過濾並濃縮。將殘餘物吸收在來自DCM的矽膠上並且藉由正相層析法（二氧化矽，洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至60 : 40）純化以給出呈黃色油狀物的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.24 - 7.00 (m, 3H), 4.94 (s, 2H), 3.65 (s, 1H)。
步驟2：4-(2,3-二氟苯氧基)丁-2-炔-1-醇
Figure 02_image575
將n -BuLi在己烷（1.6 M，52.5 mL，84 mmol）中之溶液逐滴添加至1,2-二氟-3-(丙-2-炔-1-基氧基)苯（步驟1，11.88 g，69.9 mmol）在THF（253 mL）中之溶液中，用乾冰乙醇浴冷卻，以此速率使得維持內部溫度低於-60°C。將RM在-70°C下攪拌45 min，然後添加多聚甲醛（3.15 g，105 mmol）。然後將RM升溫至RT並在RT下攪拌18小時。將RM在NaHCO3 飽和水溶液和EtOAc之間分配，將有機相用水和鹽水洗滌，將合併的水層用EtOAc萃取，將合併的有機相經Na2 SO4 乾燥，過濾並濃縮。將殘餘物藉由正相層析法（矽膠，庚烷 : EtOAc 100 : 0至20 : 80）純化以給出呈黃色油狀物的標題化合物，將其在4°C下靜置時固化。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.23 - 6.98 (m, 3H), 5.24 (t, 1H), 4.97 (s, 2H), 4.12 (d, 2H)。
步驟3：(7,8-二氟-2H -口克唍-4-基)甲醇
Figure 02_image577
將4-(2,3-二氟苯氧基)丁-2-炔-1-醇（步驟2，22.2 g，104 mmol）和碘化銦(III)（6.09 g，31.3 mmol）在1,2-DCE（651 mL）中之混合物在60°C下加熱2天。將矽膠直接添加至冷卻的RM中，然後將其蒸發。將殘餘物藉由正相層析法（矽膠，洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至10 : 90）純化以給出呈米色固體的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.06 - 7.00 (m, 1H), 6.95 - 6.86 (m, 1H), 5.91 - 5.87 (m, 1H), 5.27 (t, 1H), 4.89 (dt, 2H), 4.26 (d, 2H)。
步驟4：(R )-(7,8-二氟口克唍-4-基)甲醇
Figure 02_image579
在Hastelloy高壓滅菌器中，將Rh(NBD)2 BF4 （215 mg，575 μmol）和(S ,R ,R )-Chenphos（429 mg，575 μmol）在DCM（150 mL）中之混合物在N2 氣氛下在RT下攪拌30 min。添加(7,8-二氟-2H -口克唍-4-基)甲醇（步驟3，6.0 g，28.8 mmol）在DCM（25 mL）中之溶液，並且將H2 氣氛引入高達25巴的壓力。將RM在25巴的H2 壓力下在RT下攪拌16小時。將反應容器用N2 沖洗，並且將RM在NaHCO3 飽和水溶液和DCM之間分配，將水層用DCM萃取，將合併的有機層藉由穿過相分離器乾燥並且蒸發。將殘餘物藉由正相層析法（矽膠，洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至0 : 100）純化以給出呈黃色油狀物的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.10 - 7.03 (m, 1H), 6.89 - 6.80 (m ,1H), 4.87 (t, 1H), 4.31 - 4.14 (m, 2H), 3.68 - 3.61 (m, 1H), 3.56 - 3.38 (m, 1H), 2.90 - 2.82 (m, 1H), 2.04 - 1.90 (m, 2H)。
步驟5：(R )-(7,8-二氟口克唍-4-基)甲基胺基甲酸酯
Figure 02_image581
將三氯乙醯基異氰酸酯（8.49 ml，71.2 mmol）逐滴添加至(R )-(7,8-二氟口克唍-4-基)甲醇（步驟4，12.51 g，59.5 mmol）在1,2-DCE（171 mL）中之溶液（用冰浴冷卻）中並且將RM在0°C下攪拌1小時。然後添加K2 CO3 （2.46 g，17.81 mmol）並且將RM在0°C下攪拌10 min，然後緩慢添加MeOH（171 mL）和水（49 mL），然後將RM在RT下攪拌18小時。將RM在NaHCO3 飽和水溶液和DCM之間分配，將水層用DCM萃取，將合併的有機層藉由穿過相分離筒乾燥並且蒸發。將殘餘物藉由正相層析法（矽膠，庚烷 : EtOAc 100 : 0至0 : 100）純化以給出89% ee的呈白色粉末的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.13 - 7.08 (m, 1H), 6.95 - 6.85 (m, 1H), 6.54 (s, br, 2H), 4.34 - 4.03 (m, 4H), 3.13 - 3.04 (m, 1H), 2.08 - 1.83 (m, 2H)。
藉由手性HPLC（C-HPLC 21）測定光學純度，以標題化合物作為第二洗脫鏡像異構物，Rt = 1.98 min，並且以(S )-(7,8-二氟口克唍-4-基)甲基胺基甲酸酯作為第一洗脫鏡像異構物，Rt = 1.80 min。
步驟6：(S )-7,8-二氟螺[口克唍-4,4'-㗁唑啶]-2'-酮
Figure 02_image583
將(R )-(7,8-二氟口克唍-4-基)甲基胺基甲酸酯（步驟5，4.3 g，17.15 mmol）、二乙醯氧基碘苯（7.73 g，24.0 mmol）、MgO（1.59 g，39.4 mmol）和銠(II)三苯基乙酸酯二聚物 DCM加合物（617 mg，429 μmol）在DCM（90 mL）中之混合物伴隨攪拌在45°C下在氬氣氣氛下加熱18小時。添加另外的二乙醯氧基碘苯（2.32 g，7.2 mmol）、MgO（0.80 g，19.7 mmol）和銠(II)三苯基乙酸酯二聚物 DCM加合物（123 mg，86 μmol）並且在45°C下繼續加熱24小時。將冷卻的RM通過Hyflo過濾並且將濾液在NaHCO3 飽和水溶液和DCM之間分配。將水層用DCM再次萃取，將合併的有機層藉由穿過相分離筒乾燥並蒸發。將殘餘物藉由正相層析法（矽膠，洗脫液：DCM : MeOH 100 : 0至85 : 15，隨後第二個柱，用DCM : EtOAc 100 : 0至50 : 50洗脫）純化以給出呈米色粉末的標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.72 min；MS m/z [M-H]- 240.1；UPLC-MS 1。
中間體BD：(S )-(4-胺基-7,8-二氟口克唍-4-基)甲醇
Figure 02_image585
將4-胺基-7,8-二氟口克唍-4-甲酸（中間體AU3，24.6 mmol）懸浮於THF（123 mL）中並冷卻至0-5°C（冰浴），在氮氣氣氛下，通過滴液漏斗緩慢添加BH3 .THF（1 M在THF中，61.6 ml，61.6 mmol），並且允許黃色懸浮液升溫至RT並且攪拌16小時。緩慢添加MeOH（220 mL），將混合物在RT下攪拌2小時並且蒸發。將殘餘物溶解於MeOH（220 mL）中並且添加Biotage MP-SO3 H樹脂（載量4.56 mmol/g，28.6 g）。將混合物在RT下振盪3小時，過濾並用MeOH洗滌。將樹脂（批次-1）放在一邊。將濾液蒸發，溶解於MeOH（220 mL）中並且用Biotage MP-SO3 H樹脂（載量4.56 mmol/g，28.6 g）再次處理，振盪2天並過濾以給出樹脂批次-2。將樹脂批次1和2合併，並且添加NH3 （2 N在MeOH中，100 mL）的溶液，將混合物在RT下振盪 15 min並且過濾。將濾液蒸發以給出呈米色固體的(外消旋 )-(4-胺基-7,8-二氟口克唍-4-基)甲醇。將鏡像異構物藉由手性HPLC（儀器：VWR LaPrep HPLC製備型；柱：Chiralpak AD 20 μm，7.65 x 39.3 cm；洗脫液：庚烷 : EtOH : MeOH 85 : 7.5 : 7.5 + 0.05% Et2 NH；流速：120 mL/min；檢測：220 nm）分離以給出呈黃色固體的作為第二洗脫峰的標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.42 min；MS m/z [M+H]+ 216.1；UPLC-MS 1。
手性-HPLC：Rt = 13.8 min；以(R )-(4-胺基-7,8-二氟口克唍-4-基)甲醇作為第一洗脫峰，Rt = 7.8 min；C-HPLC 44。
中間體BE：(S )-(4-胺基-8-氯口克唍-4-基)甲醇
Figure 02_image587
藉由與中間體M，步驟7相似的方法，藉由用4-胺基-8-氯口克唍-4-甲酸（中間體AU4）代替7-胺基-3-(三氟甲基)-6,7-二氫-5H -環戊并[c ]吡啶-7-甲酸（中間體M，步驟6）製備標題化合物。將鏡像異構物藉由手性HPLC：（儀器：Gilson Trilution；柱：Chiralpak AD-H 5 μm，30 x 250 mm；洗脫液：庚烷 : EtOH : MeOH 80 : 10 : 10 + 0.1% Et2 NH；流速：20 mL/min；檢測：220 nm）分離以給出作為第二洗脫峰的標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.40 min；MS m/z [M-NH2 ]+ 197.1/199.2；UPLC-MS 1。
製備型手性HPLC：Rt = 12.2 min；以(R )-(4-胺基-8-氯口克唍-4-基)甲醇作為第一洗脫峰，Rt = 8.27 min。
中間體BF：(S )-(7-溴-4-((3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基) 口克唍-4-基)甲醇
步驟1：(S )-7-溴螺[口克唍-4,4'-㗁唑啶]-2'-酮
Figure 02_image589
與中間體I中所述相似的方法，藉由用(S )-(4-胺基-7-溴口克唍-4-基)甲醇（中間體BG）代替(S )-(1-胺基-5-溴-4-氟-2,3-二氫-1H -茚-1-基)甲醇（中間體J）製備(S )-7-溴螺[口克唍-4,4'-㗁唑啶]-2'-酮。將粗產物不經純化而用於下一步驟。
1 H NMR (400 MHz, 氯仿-d 6 ) δ 7.33 (d, 1H), 7.12 (dd, 1H), 7.01 (d, 1H), 5.49 (s, 1H), 4.35 - 4.26 (m, 1H), 4.21 - 4.07 (m, 1H), 3.09 (dq, 2H), 2.22 (dd, 2H)。
步驟2：(S )-(7-溴-4-((3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基) 口克唍-4-基)甲醇
Figure 02_image591
藉由與中間體AR和AS相似的方法，藉由用(S )-(4-胺基-7-溴口克唍-4-基)甲醇（步驟1）代替(S )-(4-胺基-7-溴-8-氟口克唍-4-基)甲醇（中間體AT）製備標題化合物。將分離出的材料未經進一步純化用於下一反應。
LC-MS：Rt = 1.29 min；MS m/z [M+H]+ 469.2/471.2；UPLC-MS 1。
中間體BG：(S )-(4-胺基-7-溴口克唍-4-基)甲醇
Figure 02_image593
藉由與中間體M，步驟7相似的方法，藉由用4-胺基-7-溴口克唍-4-甲酸（中間體AU5）代替7-胺基-3-(三氟甲基)-6,7-二氫-5H -環戊并[c ]吡啶-7-甲酸（中間體M，步驟6）製備標題化合物。將鏡像異構物藉由手性HPLC：（儀器：Gilson Trilution HPLC系統；柱：Chiralpak ID，5 μm，250 x 20 mm 25°C；洗脫液：庚烷 : EtOH 80 : 20 + 0.1% Et2 NH；流速：10 mL/min；檢測：220 nm）分離以給出作為第一洗脫峰的標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.50 min；MS m/z [M+H]+ 258.0/260.0；UPLC-MS 1。
手性-SFC：Rt = 6.9 min；(R )-(4-胺基-7-溴口克唍-4-基)甲醇作為第二峰洗脫，Rt = 13.0 min；C-SFC 50。
中間體BH：(S )-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-7-(甲硫基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image595
在密封的容器中在N2 氣氛下，將(S )-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-7-碘-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]（中間體AW，134 mg，259 μmol）、CuI（53 mg，272 μmol）和DABCO（58 mg，517 μmol）在DMSO（2 mL）中之混合物在140°C下加熱24小時。將冷卻RM用DCM稀釋，將有機相用H2 O洗滌，然後用鹽水洗滌，藉由穿過相分離筒乾燥，並且濃縮以給出標題化合物，將其未經進一步純化而直接使用。
LC-MS：Rt = 0.80 min；MS m/z [M+H]+ 436.9；UPLC-MS 1。
中間體BI：(S )-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]-7-醇
Figure 02_image597
向微波小瓶中裝入THF（1 mL）中的(S )-7-溴-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]（實例39，50 mg，0.11 mmol）、𠰌啉（11 µL，0.13 mmol）、RuPhos-Pd-G3（8.9 mg，10.7 µmol）、RuPhos（5 mg，10.7 µmol）和三級丁醇鈉（15.4 mg，0.16 mmol）。將小瓶用氮氣沖洗，密封並且將RM在100°C下在微波輻射下攪拌1.5小時。再次添加𠰌啉（11 µL，0.13 mmol）、RuPhos-Pd-G3（8.9 mg，10.7 µmol）、RuPhos（5 mg，10.7 µmol）和三級丁醇鈉（60 mg，0.63 mmol），並且將RM在100°C下在微波加熱下再攪拌2小時。將RM倒入水中並且用CH2 Cl2 萃取2x。將合併的有機萃取物乾燥（相分離器）並在真空中濃縮，並且將粗殘餘物藉由正相快速層析法（12 g SiO2 柱，洗脫液：c-己烷 : EtOAc 100 : 0至0 : 100，然後DCM : MeOH 100 : 0至90 : 10）純化以給出呈黃色泡沫的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.23 (s, 1H), 7.06 (d, 1H), 6.65 (t, 1H), 6.20 (s, 1H), 4.76 (d, 1H), 4.68 (d, 1H), 4.50 (m, 1H), 4.27 (m, 1H), 3.74 (m, 4H), 3.20 (m, 4H), 2.30 (m, 2H)。
LC-MS：Rt = 0.70 min；MS m/z [M+H]+ 426.2；UPLC-MS 1。
中間體BJ：(S )-8'-(二氟甲氧基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]-8-甲醛
步驟1：(S )-(4-胺基-8-溴口克唍-4-基)甲醇
Figure 02_image599
藉由與中間體M，步驟7相似的方法，藉由用外消旋 -4-胺基-8-溴口克唍-4-甲酸（中間體AU6）代替7-胺基-3-(三氟甲基)-6,7-二氫-5H -環戊并[c ]吡啶-7-甲酸（中間體M，步驟6）製備標題化合物。將鏡像異構物藉由手性HPLC：（儀器：Gilson Trilution；柱：Chiralpak AD-H 5 μm，25 x 250 mm；洗脫液：庚烷 : EtOH : MeOH 80 : 10 : 10 + 0.1% Et2 NH；流速：15 mL/min；檢測：220 nm）分離以給出作為第二洗脫峰的標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.32 min；MS m/z [M+H]+ 241.0/242.9；UPLC-MS 4。
手性-HPLC：Rt = 11.40 min；(R )-(4-胺基-8-溴口克唍-4-基)甲醇作為第二洗脫峰，Rt = 7.92 min；C-HPLC 12。
步驟2：(S )-8'-(二氟甲氧基)-8-碘-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]
Figure 02_image601
藉由與中間體AS、AR、Y和AW相似的方法，藉由用(S )-(4-胺基-8-溴口克唍-4-基)甲醇（步驟1）代替(S )-(4-胺基-7-溴-8-氟口克唍-4-基)甲醇（中間體AT）製備標題化合物。正相層析法（二氧化矽柱，洗脫液：己烷 : TBME 90 : 10至30 : 70）後，獲得呈米色泡沫的標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.83 min；MS m/z [M+H]+ 499.0；UPLC-MS 1。
步驟3：(S )-8'-(二氟甲氧基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]-8-甲醛
Figure 02_image603
在正氬氣壓力下，將n-BuLi在己烷（1 M，298 μL，298 μmol）中之溶液逐滴添加至(S )-8'-(二氟甲氧基)-8-碘-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]（步驟1，150 mg，271 μmol）在THF（2.5 mL）中之溶液中，用乾冰丙酮浴冷卻。將RM在-75°C下攪拌10 min並添加DMF（210 μL，2.71 mmol）。在-75°C下攪拌1小時後，添加NaHCO3 飽和水溶液並且將混合物用DCM萃取3x，將合併的有機層藉由穿過相分離筒乾燥並蒸發。將殘餘物藉由正相層析法（4 g SiO2 柱；洗脫液：己烷 : TBME 90 : 10至10 : 90）純化以給出呈米色泡沫的標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.64 min；MS m/z [M+H]+ 401.2；UPLC-MS 1。
中間體BK：(S )-8'-氯-3-(3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2',3'-二氫螺[㗁唑啶-4,4'-哌喃并[2,3-c ]吡啶]-2-酮
Figure 02_image605
藉由與中間體AS和AR相似的方法，藉由用(S )-(4-胺基-8-氯-3,4-二氫-2H -哌喃并[2,3-c ]吡啶-4-基)甲醇（中間體BL）代替(S )-(4-胺基-7-溴-8-氟口克唍-4-基)甲醇（中間體AT）製備標題化合物。正相層析法（二氧化矽柱，洗脫液：c-己烷 : EtOAc 100 : 0至50 : 50）後，獲得標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.07 min；MS m/z [M+H]+ 452.1/454.0；UPLC-MS 1。
中間體BL：(S )-(4-胺基-8-氯-3,4-二氫-2H -哌喃并[2,3-c ]吡啶-4-基)甲醇
Figure 02_image607
藉由與中間體AU和M，步驟7相似的方法，藉由用8-氯-2,3-二氫-4H -哌喃并[2,3-c ]吡啶-4-酮（中間體BM）代替7-溴-8-氟口克唍-4-酮製備標題化合物。使用具有Ellman (S )-亞磺醯胺助劑的路線，鏡像異構物比例為3 : 2 S : R。將鏡像異構物藉由手性HPLC：（儀器：Knauer HPLC系統；柱：Chiralpak IC 20 μm，375 x 76.5 mm；洗脫液：庚烷 : iPrOH 70 : 30 + 0.1% Et2 NH持續120 min，然後50 : 50持續50 min；流速：120 mL/min；檢測：280 nm）分離以給出作為第一洗脫峰的標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.32 min；MS m/z [M+H]+ 215.1/217.1；UPLC-MS 2。
手性-HPLC：Rt = 6.70 min；(R )-(4-胺基-8-氯-3,4-二氫-2H -哌喃并[2,3-c ]吡啶-4-基)甲醇作為第二洗脫峰，Rt = 17.2 min；C-HPLC 15。
中間體BM：8-氯-2,3-二氫-4H -哌喃并[2,3-c ]吡啶-4-酮
步驟1：三級丁基 3-((2-氯-4-碘吡啶-3-基)氧基)丙酸酯
Figure 02_image609
在20°C下，向2-氯-4-碘吡啶-3-醇（中間體BN，7.3 g，28.6 mmol）、DIAD（6.67 mL，34.3 mmol）和PPh3 （8.99 g，34.3 mmol）在THF（120 mL）中之溶液中添加三級丁基 3-羥基丙酸酯（5.06 mL，34.3 mmol）。將RM攪拌2小時，然後另外添加三級丁基 3-羥基丙酸酯（0.42 mL，2.86 mmol）、PPh3（749 mg，2.86 mmol）和DIAD（0.56 mL，2.86 mmol）。將RM再攪拌0.5小時，濃縮並且將殘餘物藉由正相層析法（矽膠，洗脫液：c-己烷 : EtOAc 100 : 0至80 : 20）純化以給出標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.24 min；MS m/z [M+H]+ 384.1/386.1；UPLC-MS 1。
步驟2：3-((2-氯-4-碘吡啶-3-基)氧基)丙酸
Figure 02_image611
在20°C下，向三級丁基 3-((2-氯-4-碘吡啶-3-基)氧基)丙酸酯（步驟1，10.58 g，27.3 mmol）在DCM（120 mL）中之溶液中添加CF3 CO2 H（42.1 mL，546 mmol）。將RM在20°C下1.5 小時攪拌並濃縮以給出標題化合物，將其未經進一步純化而直接使用。
LC-MS：Rt = 0.74 min；MS m/z [M+H]+ 328.0/ 330.0；UPLC-MS 1。
步驟3：3-((2-氯-4-碘吡啶-3-基)氧基)-N -甲氧基-N -甲基丙醯胺
Figure 02_image613
向3-((2-氯-4-碘吡啶-3-基)氧基)丙酸（步驟2，13.67 g，27.2 mmol）在DCM（90 mL）中之溶液中添加草醯氯（4.77 mL，54.5 mmol）和DMF（105 μL，1.36 mmol）。將RM在20°C下攪拌1小時並且濃縮。將殘餘物再次溶解於DCM（90 mL）中，並且將所得溶液添加至NaHCO3 （4.81 g，57.2 mmol）和N ,O -二甲基羥胺鹽酸鹽（2.92 g，30.0 mmol）在水（90 mL）中之攪拌溶液中。將RM在20°C下攪拌1小時，分離各相並且將水層用DCM萃取，將合併的有機層用NaHCO3 飽和水溶液洗滌，藉由穿過相分離筒乾燥並濃縮。將殘餘物藉由正相層析法（矽膠，洗脫液：c-己烷 : EtOAc 100 : 0至70 : 30）純化以給出標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.88 min；MS m/z [M+H]+ 371.1/373.1；UPLC-MS 1。
步驟4：8-氯-2H -哌喃并[2,3-c ]吡啶-4(3H )-酮
Figure 02_image615
以維持內部溫度低於-70°C的速率，向3-((2-氯-4-碘吡啶-3-基)氧基)-N -甲氧基-N -甲基丙醯胺（步驟3，9.38 g，24.55 mmol）在THF（120 mL）中之溶液（用乾冰/丙酮批冷卻）中逐滴添加nBuLi在己烷（1.6M，30.7 mL，49.1 mmol）中之溶液。將RM在-75°C下攪拌1小時，藉由添加NH4 Cl飽和水溶液淬滅，升溫至rt，用EtOAc萃取，將有機層用鹽水洗滌，乾燥並濃縮。正相層析法（二氧化矽柱，洗脫液：c-己烷 : EtOAc 100 : 0至0 : 100）後，獲得標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.12 (t, 1H), 7.63 (d, 1H), 4.80 - 4.74 (m, 2H), 3.01 - 2.92 (m, 2H)。
中間體BN：2-氯-4-碘吡啶-3-醇
步驟1：2-氯-4-碘-3-(甲氧基甲氧基)吡啶
Figure 02_image617
將n-BuLi在己烷（1.6 M，23.5 mL，37.6 mmol）中之溶液逐滴添加至2-氯-3-(甲氧基甲氧基)吡啶（5.93 g，34.2 mmol）在THF（100 mL）中之溶液中，用乾冰/丙酮浴冷卻。將RM在-78°C下攪拌1小時，然後逐滴添加I2 （13.0 g，51.2 mmol）在THF（50 mL）中之溶液並且將RM在-78°C下再攪拌2小時。將RM用NH4 Cl飽和水溶液淬滅，升溫至RT，用EtOAc萃取，將合併的有機層用10% Na2 S2 O3 水溶液洗滌，然後用鹽水洗滌，乾燥並濃縮。將殘餘物藉由正相層析法（矽膠，洗脫液：c-己烷/EtOAc 100/0至70/30）純化以給出標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.96 min；MS m/z [M+H]+ 300.0/302.0；UPLC-MS 1。
步驟2：2-氯-4-碘吡啶-3-醇
Figure 02_image619
在RT下，向2-氯-4-碘-3-(甲氧基甲氧基)吡啶（步驟1，8.6 g，28.5 mmol）在MeOH（50 mL）中之溶液中添加1,4-二㗁𠮿（4 M，71 mL，285 mmol）中的HCl。將RM在RT下攪拌0.5小時然後濃縮。將殘餘物吸收到NaHCO3 飽和水溶液中並用EtOAc洗滌，將水層用1 N HCl（pH 2-3）酸化，用EtOAc萃取，將合併的有機層乾燥並濃縮以給出標題化合物，將其未經進一步純化而直接使用。
LC-MS：Rt = 0.69 min；MS m/z [M+H]+ 255.9/258.0；UPLC-MS 1。
中間體BO：((3R ,4S )-4-胺基-7-溴-3,8-二氟口克唍-4-基)甲醇
Figure 02_image621
藉由與中間體M，步驟7相似的方法，藉由用(3R ,4S )-4-胺基-7-溴-3,8-二氟口克唍-4-甲酸（中間體BP）代替7-胺基-3-(三氟甲基)-6,7-二氫-5H -環戊并[c ]吡啶-7-甲酸（中間體M，步驟6）製備標題化合物。將標題化合物未經進一步純化而直接使用。
LC-MS：Rt = 0.51 min；MS m/z [M+H]+ 338.1/340.1；UPLC-MS 1。
中間體BP：(3R ,4S )-4-胺基-7-溴-3,8-二氟口克唍-4-甲酸
Figure 02_image623
藉由與中間體AU，步驟4相似的方法，藉由用(3R ,4S )-7-溴-4-(((S )-三級丁基亞磺醯基)胺基)-3,8-二氟口克唍-4-甲醯胺（中間體BQ）代替7-溴-4-((S )-1,1-二甲基乙基亞磺醯胺基)-8-氟口克唍-4-甲醯胺（中間體AU，步驟3）製備標題化合物。獲得呈淡米色固體的標題化合物的鹽酸鹽，將其未經進一步純化而直接使用。
LC-MS：Rt = 0.47 min；MS m/z [M+H]+ 308.0/310.0；UPLC-MS 1。
中間體BQ：(3R ,4S )-7-溴-4-(((S )-三級丁基亞磺醯基)胺基)-3,8-二氟口克唍-4-甲醯胺
Figure 02_image625
在N2 氣氛下在密封的小瓶，將(S )-N -((3S ,4R )-7-溴-4-氰基-3,8-二氟口克唍-4-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺和(S )-N -((3R ,4S )-7-溴-4-氰基-3,8-二氟口克唍-4-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺（中間體BR，1.45 g，3.17 mmol）、乙醯胺（1.22 g，19.0 mmol）和PdCl2 （140 mg，475 μmol）在THF（40 mL）和水（13 mL）中之混合物在50°C下加熱140 min。將冷卻的RM用鹽水稀釋，用DCM萃取，將合併的有機層乾燥並濃縮。將殘餘物藉由正相層析法（矽膠，洗脫液：DCM :（TBME : EtOH 2 : 1）100 : 0至50 : 50）純化以給出呈米色泡沫的作為第二洗脫峰的標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.85 min；MS m/z [M+H]+ 411.1/413.1；UPLC-MS 1。
獲得呈米色泡沫的作為第一洗脫峰的(3S ,4R )-7-溴-4-(((S )-三級丁基亞磺醯基)胺基)-3,8-二氟口克唍-4-甲醯胺。
LC-MS：Rt = 0.88 min；MS m/z [M+H]+ 411.1/413.1；UPLC-MS 1。
中間體BR和BS：(S )-N -((3S ,4R )-7-溴-4-氰基-3,8-二氟口克唍-4-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺和(S )-N -((3R ,4S )-7-溴-4-氰基-3,8-二氟口克唍-4-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺和(S )-N -((3S ,4S )-7-溴-4-氰基-3,8-二氟口克唍-4-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺以及(S )-N -((3R ,4R )-7-溴-4-氰基-3,8-二氟口克唍-4-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺
Figure 02_image627
在RT下在正N2 壓力下，向(S )-N -((R )-7-溴-3,8-二氟口克唍-4-亞基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺和(S )-N -((S )-7-溴-3,8-二氟口克唍-4-亞基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺（中間體BT，3.64 g，8.24 mmol）在DCM（40 mL）中之溶液中添加CsF（2.5 g，16.5 mmol）、三甲基矽基氰化物（5.52 mL，41.2 mmol）和叔BuOH（1.58 mL，16.5 mmol）：注意釋放HCN的可能性! 將RM在RT下攪拌4.5小時，用NaHCO3 飽和水溶液（150 mL）稀釋，用DCM萃取，將合併的有機層經Na2 SO4 乾燥並濃縮。將殘餘物藉由正相層析法（50 g SiO2 SNAP柱，洗脫液：己烷 : TBME 100 : 0至0 : 100）純化以給出作為第一洗脫峰的回收的中間體BT。獲得呈白色泡沫的作為第二洗脫峰的中間體BR（(S )-N -((3S ,4R )-7-溴-4-氰基-3,8-二氟口克唍-4-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺和(S )-N -((3R ,4S )-7-溴-4-氰基-3,8-二氟口克唍-4-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺，比例6 : 4）。
LC-MS：Rt = 1.01和1.02 min；MS m/z [M+H]+ 393.1/395.1；UPLC-MS 1。
獲得呈粉色固體的作為第三洗脫峰的中間體BS（(S )-N -((3S ,4S )-7-溴-4-氰基-3,8-二氟口克唍-4-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺和(S )-N -((3R ,4R )-7-溴-4-氰基-3,8-二氟口克唍-4-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺，比例6 : 4）。
LC-MS：Rt = 1.01和1.02 min；MS m/z [M+H]+ 393.1/395.1；UPLC-MS 1。
中間體BT：(S )-N -((R )-7-溴-3,8-二氟口克唍-4-亞基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺和(S )-N -((S )-7-溴-3,8-二氟口克唍-4-亞基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺
步驟1：((7-溴-8-氟-2H -口克唍-4-基)氧基)(三級丁基)二甲基矽烷
Figure 02_image629
將三級丁基二甲基矽基三氟甲烷磺酸酯（7.1 mL，30.6 mmol）逐滴添加至7-溴-8-氟口克唍-4-酮（中間體AU步驟2，5.0 g，20.40 mmol）和Et3 N（14.1 mL，102 mmol）在DCM（50 mL）中之溶液（用冰浴冷卻）中。將RM在0°C下攪拌10 min，將冷卻浴除去並且再繼續攪拌20 min。將RM用H2 O稀釋，將有機相用H2 O洗滌，然後用鹽水洗滌，藉由穿過相分離筒乾燥並濃縮。將殘餘物藉由正相層析法（50 g SiO2 SNAP筒；洗脫液：己烷 : EtOAc 100 : 0至90 : 10）純化以給出呈無色油狀物的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.23 (dd, 1H), 7.01 (dd, 1H), 5.14 (t, 1H), 4.92 (d, 2H), 0.96 (s, 9H), 0.22 (s, 6H)。
步驟2：外消旋 -7-溴-3,8-二氟口克唍-4-酮
Figure 02_image631
在正N2 壓力下，將Selectfluor（7.25 g，20.46 mmol）添加至((7-溴-8-氟-2H -口克唍-4-基)氧基)(三級丁基)二甲基矽烷（步驟1，7.0 g，19.48 mmol）在AcCN（50 mL）中之溶液（用冰浴冷卻）中。將RM在0°C下攪拌30 min然後蒸發。將殘餘物吸收到DCM中，將有機層用H2 O洗滌，然後用NaHCO3 飽和水溶液和鹽水洗滌2x。將有機相藉由穿過相分離筒乾燥並濃縮以給出呈白色固體的標題化合物，將其未經進一步純化而直接使用。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.56 (dd, 1H), 7.45 (dd, 1H), 5.57 - 5.35 (m, 1H), 5.02 - 4.77 (m, 2H)。
步驟3：(S )-N -((R )-7-溴-3,8-二氟口克唍-4-亞基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺和(S )-N -((S )-7-溴-3,8-二氟口克唍-4-亞基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺
Figure 02_image633
將外消旋 -7-溴-3,8-二氟口克唍-4-酮（步驟2，4.98 g，18.93 mmol）、(S )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺（2.81 g，22.72 mmol）和四乙氧基鈦（10.36 g，45.4 mmol）在THF（10 mL）中之混合物在72°C（加熱塊溫度）下伴隨穿過反應容器頂部的連續N2 流加熱4.5小時。然後將冷卻的RM用EtOAc稀釋，倒入鹽水中並且將混合物在RT下攪拌15 min。然後將所得懸浮液通過Hyflo過濾，用EtOAc洗滌。將兩相濾液分離並且將有機層用H2 O洗滌，然後用鹽水洗滌，乾燥並濃縮。將殘餘物藉由正相層析法（2x 50 g SiO2 SNAP筒；洗脫液：己烷 : EtOAc 100 : 0至70 : 30）純化以給出呈黃色泡沫的標題化合物（3 : 2比例）。
LC-MS：Rt = 1.18和1. 20 min；MS m/z [M+H]+ 366.0/368.0；UPLC-MS 1。
中間體BU：((3S ,4S )-4-胺基-7-溴-3,8-二氟口克唍-4-基)甲醇
Figure 02_image635
藉由與中間體BO、BP和BQ相似的方法，藉由用(S )-N -((3S ,4S )-7-溴-4-氰基-3,8-二氟口克唍-4-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺和(S )-N -((3R ,4R )-7-溴-4-氰基-3,8-二氟口克唍-4-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺（中間體BS）代替(S )-N -((3S ,4R )-7-溴-4-氰基-3,8-二氟口克唍-4-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺和(S )-N -((3R ,4S )-7-溴-4-氰基-3,8-二氟口克唍-4-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺（中間體BR）製備標題化合物。將鏡像異構物藉由手性HPLC：（儀器：Gilson Trilution HPLC系統；柱：Chiralpak AD-H 5 μm，250 x 25 mm；洗脫液：庚烷 : EtOH : MeOH 80 : 10 : 10 + 0.05% Et2 NH；流速：15 mL/min；檢測：230 nm）分離以給出作為第二洗脫峰的標題化合物。
LC-MS：Rt = 2.25 min；MS m/z [M+H]+ 294.1/296.1；UPLC-MS 4。
手性-HPLC：Rt = 16.27 min；以((3R ,4R )-4-胺基-7-溴-3,8-二氟口克唍-4-基)甲醇作為第一洗脫峰，Rt = 9.62 min；C-HPLC 16。
LC-MS：Rt = 2.25 min；MS m/z [M+H]+ 294.0/296.0；UPLC-MS 4。
中間體BV：((3R ,4S )-4-胺基-7-溴-3-氟口克唍-4-基)甲醇
Figure 02_image637
藉由與中間體BT、BR、BQ、BP和BO相似的方法，藉由用7-溴口克唍-4-酮代替7-溴-8-氟口克唍-4-酮（中間體AU 步驟2）製備標題化合物。獲得呈白色粉末的標題化合物，將其未經進一步純化而直接使用。
LC-MS：Rt = 0.51 min；MS m/z [M+H]+ 276.1/278.1；UPLC-MS 1。
中間體BW：((3R ,4S )-4-胺基-3,8-二氟口克唍-4-基)甲醇
步驟1：(R )-N -((3R ,4S )-3,8-二氟-4-(羥基甲基) 口克唍-4-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺
Figure 02_image639
將氧氣鼓泡通過(R )-N -((3R ,4R )-3,8-二氟-4-乙烯基口克唍-4-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺（中間體BX，17.64 g，52.6 mmol）在DCM（180 mL）和MeOH（180 mL）中之溶液，用乾冰/丙酮浴冷卻。在O2 鼓泡通過溶液5 min後，然後將O3 /O2 的混合物在-78°C下鼓泡通過溶液直至灰色/藍色在溶液中持續（約40 min），然後將氬氣鼓泡穿過溶液，以從系統中吹掃O3 /O2 ，並且添加硼氫化鈉（4.38 g，116 mmol）。在-78°C下攪拌40 min後，添加NH4 Cl飽和水溶液，將混合物升溫至RT，用DCM萃取3x，將合併的有機層用NaHCO3 飽和水溶液洗滌，乾燥並濃縮。將殘餘物藉由正相層析法（矽膠，洗脫液：DCM :（TBME : MeOH 2 : 1）100 : 0至80 : 20）純化以給出標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.77 min；MS m/z [M+H]+ 320.1；UPLC-MS 1。
步驟2：((3R ,4S )-4-胺基-3,8-二氟口克唍-4-基)甲醇
Figure 02_image641
在RT下，將(R )-N -((3R ,4S )-3,8-二氟-4-(羥基甲基) 口克唍-4-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺（步驟1，27.1 g，83 mmol）在MeOH（300 mL）和HCl水溶液（4 N，104 mL，416 mmol）中之混合物攪拌30 min。將RM濃縮，在NaHCO3 飽和水溶液和EtOAc之間分配，用EtOAc萃取2x，將合併的有機層乾燥並濃縮以給出標題化合物，將其未經進一步純化而直接使用。
LC-MS：Rt = 0.32 min；MS m/z [M+H]+ 216.1；UPLC-MS 2。
中間體BX：(R )-N -((3R ,4R )-3,8-二氟-4-乙烯基口克唍-4-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺
Figure 02_image643
在RT下，將二甲基鋅在甲苯（2 M，126 mL，252 mmol）中之溶液逐滴添加至乙烯基溴化鎂在THF（1 M，126 mL，126 mmol）中之溶液中，將RM在RT下攪拌30 min，然後用乾冰/丙酮浴冷卻至-78°C。逐滴添加(R )-N -((R )-3,8-二氟口克唍-4-亞基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺和(R )-N -((S )-3,8-二氟口克唍-4-亞基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺（中間體BY，18.64 g，62.9 mmol）在THF（200 mL）中之溶液，並且將RM在-78°C下攪拌0.5小時並伴隨冰浴持續0.5小時。然後將RM重新冷卻至-70°C並且逐滴添加NH4 Cl飽和水溶液（200 mL）：注意! 放熱反應。將混合物升溫至RT，用Et2 O萃取2x，將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並濃縮。將殘餘物藉由正相層析法（矽膠，洗脫液：DCM :（TBME/EtOH 2 : 1）100 : 0至90 : 10）純化以給出標題化合物，該標題化合物在非鏡像異構物的混合物中作為主要成分和回收的(R )-N -((S )-3,8-二氟口克唍-4-亞基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺。將非鏡像異構物藉由手性SFC：（儀器：Thar 350製備型SFC（SFC-18）；柱：Chiralcel OJ 10 μm，300 x 50 mm；溫度：38°C；洗脫液：CO2 : MeOH + 0.1% NH4 OH 90 : 10；流速：200 mL/min；檢測：220 nm）分離以給出標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.00 min；MS m/z [M+H]+ 316.1；UPLC-MS 1。
中間體BY：(R )-N -((R )-3,8-二氟口克唍-4-亞基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺和(R )-N -((S )-3,8-二氟口克唍-4-亞基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺
Figure 02_image645
藉由與中間體BT相似的方法，藉由用8-氟口克唍-4-酮代替7-溴-8-氟口克唍-4-酮（中間體AU，步驟2）製備標題化合物。正相層析法純化（矽膠，洗脫液：c-己烷 : EtOAc 100 : 0至70 : 30）後，獲得標題化合物作為1 : 1非鏡像異構物的混合物。
LC-MS：Rt = 1.05和1.07 min；MS m/z [M+H]+ 288.1；UPLC-MS 1。
中間體BZ：外消旋 -(4-((3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-8-氟異口克唍-4-基)甲醇
步驟1：(2-溴-6-氟苯基)甲醇
Figure 02_image647
在氮氣氣氛下在0°C下，向2-溴-6-氟苯甲酸（6 g，27.4 mmol）在THF（120 mL）中之溶液中添加BH3 .THF（1 M在THF中，54.8 mL，54.8 mmol），並且將RM在50°C下攪拌16小時。將RM緩慢倒入HCl（2 N溶液）中並且用EtOAc萃取2x。將合併的有機萃取物乾燥（相分離器）並濃縮以給出呈黃色固體的標題化合物，將其不經純化用於下一步驟。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.45 (d, 1H), 7.31- 7.20 (m, 2H), 5.20 (m, 1H), 4.57 (m, 2H)。
步驟2：2-((2-溴-6-氟苄基)氧基)-N -甲氧基-N -甲基乙醯胺
Figure 02_image649
在0°C下在氮氣氣氛下，向NaH（1.07 g，26.8 mmol）在THF（150 mL）中的懸浮液中緩慢添加(2-溴-6-氟苯基)甲醇（步驟1，5.25 g，24.33 mmol）。將混合物在0°C下攪拌15 min，然後添加2-溴-N -甲氧基-N -甲基乙醯胺（3.48 mL，26.8 mmol）。將RM在0°C下攪拌1小時。將RM倒入水中並且用EtOAc萃取2x。將合併的有機萃取物乾燥（相分離器）並且蒸發。將粗殘餘物藉由正相快速層析法（120 g SiO2 柱；洗脫液：c-己烷 : EtOAc 100 : 0至30 : 70）純化兩次以給出含有15% 2-溴-N -甲氧基-N -甲基乙醯胺的標題化合物。將混合物溶解於THF（100 mL）中，添加PL-TPP樹脂（細微性：150-300 µm，載量1.52 mmol/g，14.6 mmol，9.60 g）並且將混合物在RT下振盪16小時，過濾並濃縮以給出呈淡黃色油狀物的標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.90 min；MS m/z [M+H]+ 306.2/308.2；UPLC-MS 1。
步驟3：8-氟異口克唍-4-酮
Figure 02_image651
在氬氣氣氛下，在-78°C下向2-((2-溴-6-氟苄基)氧基)-N -甲氧基-N-甲基乙醯胺（步驟2，6.4 g，20.9 mmol）在THF（110 mL）中之溶液中逐滴添加nBuLi（1.6 M在己烷中，17.0 mL，27.2 mmol）。將RM在-78°C下攪拌1小時，然後倒入NH4 Cl飽和水溶液中，用用EtOAc萃取2x。將合併的有機萃取物乾燥（相分離器）並且蒸發。將粗殘餘物藉由正相快速層析法（80 g SiO2 柱；洗脫液：c-己烷 : EtOAc 100 : 0至30 : 70）純化以給出呈白色固體的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.78 (d, 1H), 7.62 - 7.52 (m, 2H), 4.99 (s, 2H), 4.41 (s, 2H)。
步驟4：8'-氟螺[咪唑烷-4,4'-異口克唍]-2,5-二酮
Figure 02_image653
向Ace壓力管中裝入8-氟異口克唍-4-酮（步驟3，2.36 g，14.2 mmol）、碳酸銨（15.01 g，156 mmol）、EtOH（20 mL）、水（20 mL）和KCN（1.39 g，21.3 mmol）。將反應混合物密封並且在70°C下攪拌16小時。將冷卻的RM用EtOAc萃取4x。將合併的有機萃取物經Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。將粗殘餘物藉由正相快速層析法（80 g SiO2 柱；洗脫液：c-己烷 : EtOAc 100 : 0至0 : 100）純化以給出呈白色固體的標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.52 min；MS m/z [M-H]- 235.2；UPLC-MS 1。
步驟5：4-胺基-8-氟異口克唍-4-甲酸
Figure 02_image655
將KOH（4.22 g，75 mmol）在水（25 mL）中之溶液添加至8'-氟螺[咪唑烷-4,4'-異口克唍]-2,5-二酮（步驟4，1.87 g，7.52 mmol）中，並且將RM在100°C下攪拌5天。將RM緩慢倒入HCl水溶液（6 M，12.5 mL，75 mmol）中並且將酸性混合物在減壓下濃縮並乾燥（高真空，40°C）以給出標題化合物（含有KCl），將其不經純化用於下一步驟。
1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.03 (m, 3H), 7.48 (q, 1H), 7.35 (t, 1H), 7.20 (d, 1H), 4.94 (d, 1H), 4.85 (d, 1H), 4.30 (d, 1H), 4.16 (d, 1H)。
步驟6：(4-胺基-8-氟異口克唍-4-基)甲醇
Figure 02_image657
在氮氣氣氛下，在0-5°C下向4-胺基-8-氟異口克唍-4-甲酸（含有KCl，7.52 mmol）在THF（45 mL）中的懸浮液中添加BH3 .THF（1 M在THF中，18.8 mL，18.8 mmol）。允許RM達到RT並攪拌24小時。緩慢添加MeOH，將溶劑蒸發並且將殘餘物懸浮於MeOH中。添加Biotage MP-SO3 H（5.45 g，載量4.14 mmol/g）並且將混合物在RT下振盪16小時，並過濾。向殘餘的樹脂中添加NH3 （2 N在MeOH中，70 mL）並且將混合物在RT下振盪30 min，過濾並蒸發以給出呈淡黃色固體的標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.38 min；MS m/z [M+H]+ 198.3；UPLC-MS 1。
步驟7-9：外消旋 -(4-((3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-8-氟異口克唍-4-基)甲醇
Figure 02_image659
藉由與中間體AS和AR相似的方法，藉由用(4-胺基-8-氟-2-甲基口克唍-4-基)甲醇代替(4-胺基-8-氟異口克唍-4-基)甲醇（中間體AT）製備標題化合物。將標題化合物未經純化而用於下一步驟。
LC-MS：Rt = 1.18 min；MS m/z [M+H]+ 409.2；UPLC-MS 1。
中間體CA：外消旋 -6-(7'-氯-8'-氟-2-側氧基螺[㗁唑啶-4,4'-硫代口克唍]-3-基)-5-(二氟甲氧基)菸鹼甲腈
Figure 02_image661
藉由與所述之製備中間體AS和AR相似的方法，藉由用外消旋 -(4-胺基-7-氯-8-氟硫代口克唍-4-基)甲醇（中間體CB）代替(S )-(4-胺基-7-溴-8-氟口克唍-4-基)甲醇（中間體AT）製備標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.15 min；MS m/z [M+Na]+ 465.0；UPLC-MS 1。
中間體CB：外消旋 -(4-胺基-7-氯-8-氟硫代口克唍-4-基)甲醇
步驟1：甲基 3-((3-氯-2-氟苯基)硫代)丙酸酯
Figure 02_image663
在氬氣氣氛下，將1-氯-2-氟-3-碘苯（8.47 ml，66.3 mmol）、甲基 3-巰基丙酸（8.99 ml，80 mmol）、Pd2 dba3 （3.04 g，3.31 mmol）、DPPF（2.57 g，4.64 mmol）、Et3 N（15.92 mL）和DMF（80 mL）的混合物在110°C下加熱3小時。將冷卻的RM用EtOAc稀釋並且用NaHCO3 飽和水溶液洗滌2x。然後將有機相用鹽水洗滌，乾燥（相分離器）並濃縮。將殘餘物藉由正相層析法（矽膠，洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至70 : 30）純化以給出呈黃色油狀物的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.49 - 7.42 (m, 2H), 7.23 (t, 1H), 2.93 (s, 3H), 3.21 (t, 2H), 2.65 (t, 2H)。
步驟2：3-((3-氯-2-氟苯基)硫代)丙酸
Figure 02_image665
將LiOH（2.82 g，118 mmol）添加至THF（337 mL）和水（112 mL）中的甲基 3-((3-氯-2-氟苯基)硫代)丙酸酯（14.64 g，58.9 mmol）中，並且在RT下攪拌5小時。將RM濃縮，用1 N HCl水溶液稀釋，並且用EtOAc萃取2x。將合併的有機層乾燥（相分離器）並濃縮以給出呈黃色粉末的標題化合物，將其不經純化用於下一步驟。
LC-MS：Rt = 0.92 min；MS m/z [M-H]- 233.0/235.0；UPLC-MS 1。
步驟3：7-氯-8-氟硫代口克唍-4-酮
Figure 02_image667
將DMF（459 μL，5.92 mmol）添加至3-((3-氯-2-氟苯基)硫代)丙酸（13.9 g，59.2 mmol）和草醯氯（9.33 ml，107 mmol）在DCM（147 mL）中之溶液中。將RM在RT下攪拌30 min，然後濃縮以給出酸性氯化物。在氬氣下，將殘餘物分批溶解於DCM（147 mL）和AlCl3 （23.69 g，178 mmol）中。將RM在RT下攪拌30 min然後冷卻至0-5°C，並且用甲醇和6 M HCl水溶液淬滅。將混合物在RT下攪拌30 min，用水稀釋，並且用DCM萃取2x。將合併的有機層乾燥（相分離器）並蒸發以給出呈棕色粉末的標題化合物，將其不經純化用於下一步驟。
LC-MS：Rt = 1.06 min；無明顯的分子離子信號；UPLC-MS 1。
步驟4：外消旋 -(4-胺基-7-氯-8-氟硫代口克唍-4-基)甲醇
Figure 02_image669
藉由與所述之製備中間體AO相似的方法，用7-氯-8-氟硫代口克唍-4-酮（步驟3）代替6-氟-1-四氫萘酮製備標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.43 min；MS m/z [M+H]+ 214.1；UPLC-MS 1。
中間體CC：2-溴-3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶
Figure 02_image671
將(溴二氟甲基)膦酸二乙酯（711 μL，4.13 mmol）添加至2-溴-5-(三氟甲基)吡啶-3-醇（500 mg，2.07 mmol）和KOH（2.32 g，41.3 mmol）在AcCN（5 mL）和水（5 mL）中之溶液中。將RM在RT下攪拌1小時，然後用DCM萃取，將有機層用鹽水洗滌，乾燥（相分離器）並且小心地在真空下濃縮。將殘餘物藉由正相層析法（矽膠，洗脫液：DCM : MeOH 100 : 0至90 : 10）純化以給出標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.72 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.48 (t, 1H)。
中間體CD：(S )-5-(二氟甲氧基)-6-(8'-氟-2-側氧基螺[㗁唑啶-4,4'-硫代口克唍]-3-基)菸鹼甲腈
Figure 02_image673
藉由與所述之製備中間體AS和AR相似的方法，藉由用(S )-( 4-胺基-8-氟硫代口克唍-4-基)甲醇（中間體CE）代替(S )-(4-胺基-7-溴-8-氟口克唍-4-基)甲醇（中間體AT）製備標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.11 min；MS m/z [M+H]+ 408.2；UPLC-MS 1。
中間體CE：(S )-(4-胺基-8-氟硫代口克唍-4-基)甲醇
Figure 02_image675
在氬氣下，將4-胺基-8-氟硫代口克唍-4-甲酸（中間體AU7，79 g，59.1 mmol）溶解於THF（80 mL）中並冷卻至0°C。將THF（1 M，148 mL，148 mmol）中的BH3 .THF複合物緩慢添加至RM中，注意氣體釋放! 將RM在0°C下攪拌1小時，將冰浴除去並且將RM在RT下攪拌2天。將RM重新冷卻至0°C，並且藉由緩慢添加HCl（37%，24.26 mL，295 mmol）在水（100 mL）中之混合物淬滅，隨後添加MeOH（100 mL）。將RM在RT下攪拌1小時，然後在真空中濃縮並且與MeOH共蒸發3x。將殘餘物用水稀釋並藉由添加2 N NaOH鹼化，隨後用DCM萃取3x。將合併的有機相用鹽水洗滌，通過相分離筒過濾並在真空中濃縮以給出呈棕色油狀物的外消旋標題化合物。將鏡像異構物藉由手性柱層析法（柱：AmyC 20 mm x 250mm，5 μm，40°C，流速50 mL/min，BPR 100 BarG，檢測：210 nm，等度條件：20 : 80 EtOH : CO2 （0.2% v/v NH3 ））分離以給出作為第一洗脫峰的標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.44 min；MS m/z [M+H]+ 214.1；UPLC-MS 1。
手性-HPLC：Rt = 9.39 min；(R )-(4-胺基-8-氟硫代口克唍-4-基)甲醇作為第二峰洗脫，Rt = 11.77 min；C-HPLC 45。
中間體CF：(S )-(4-((3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-8-氟-7-(三氟甲基)-3,4-二氫-2H -硫代哌喃并[3,2-c ]吡啶-4-基)甲醇
步驟1：5-溴-3-氟-2-(三氟甲基)吡啶-4-硫醇
Figure 02_image677
在正氬氣壓力下，藉由逐滴添加nBuLi在己烷（1.6 M，10.8 mL，17.21 mmol）中之溶液至iPr2 NH（2.25 mL，15.78 mmol）（用冰浴冷卻）中來製備LDA在THF中之溶液。在低於5°C下攪拌20 min後；將RM用THF（35 mL）稀釋並且將所得溶液逐滴添加至5-溴-3-氟-2-(三氟甲基)吡啶（3.5 g，14.35 mmol）在THF（60 mL）中之溶液中，用乾冰/丙酮浴冷卻。在-75°C下繼續攪拌1小時，並且將RM升溫至0°C，並在0°C下攪拌30 min，然後添加硫（0.55 g，17.21 mmol）。將RM在0°C下攪拌30 min，添加NH4 Cl水溶液，並用TBME萃取2x，將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥並蒸發以給出呈棕色固體的標題化合物，將其未經進一步純化而直接使用。
LC-MS：Rt = 0.61 min；MS m/z [M-H]- 274.0/276.0；UPLC-MS 1。
步驟2：3-((5-溴-3-氟-2-(三氟甲基)吡啶-4-基)硫代)丙酸
Figure 02_image679
經30 min，分四步將3-溴丙酸（2.0 g，13.04 mmol）添加至K2 CO3 （5.41 g，39.1 mmol）和5-溴-3-氟-2-(三氟甲基)吡啶-4-硫醇（步驟1，4.5 g，13.04 mmol）在DMF（40 mL）中的懸浮液（用冰浴冷卻）中。將RM在0°C下攪拌30 min，允許升溫至RT，並且在RT下攪拌4小時。添加另外的3-溴丙酸（600 mg，3.94 mmol）並且將RM在RT下攪拌16小時。隨後添加另外的3-溴丙酸（600 mg，3.94 mmol）和K2 CO3 （1.8 g，13.0 mmol）並且將RM在RT下再攪拌2小時。將RM在DCM（150 mL）和H2 O（200 mL）之間分配，將水層用DCM（100 mL）萃取2x，將合併的有機層用鹽水（100 mL）洗滌，藉由穿過相分離筒乾燥並蒸發以給出含有痕量DMF的標題化合物，將其未經進一步純化而直接使用。
LC-MS：Rt = 0.98 min；MS m/z [M+H]+ 348.1/350.0；UPLC-MS 1。
步驟3：3-((5-溴-3-氟-2-(三氟甲基)吡啶-4-基)硫代)-N -甲氧基-N -甲基丙醯胺
Figure 02_image681
在RT下，將草醯氯（980 μL，11.20 mmol）添加至3-((5-溴-3-氟-2-(三氟甲基)吡啶-4-基)硫代)丙酸（步驟2，5.0 g，8.62 mmol）在DCM（40 mL）中之溶液中，並且將RM在RT下攪拌2.5小時。添加另外的草醯氯（226 μL，2.59 mmol）並且將RM在RT下攪拌0.5小時並將RM蒸發。將殘餘物吸收到DCM（40.0 mL）中，並且逐滴添加至NaHCO3 （1.52 g，18.10 mmol）和N ,O -二甲基羥胺鹽酸鹽（925 mg，9.48 mmol）在水（40.0 mL）中之攪拌溶液中。將兩相RM在RT下攪拌18小時，用DCM（100 mL）和NaHCO3 飽和水溶液（120 mL）稀釋，將水層用DCM（50 mL）再萃取2x，將合併的有機層用鹽水（100 mL）洗滌，藉由穿過相分離筒乾燥並蒸發。將殘餘物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（80 g SiO2 柱；洗脫液：己烷 : TBME 從100 : 0至40 : 60）純化以給出呈黃色油狀物的標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.09 min；MS m/z [M+H]+ 391.1/393.1；UPLC-MS 1。
步驟4：8-氟-7-(三氟甲基)-2,3-二氫-4H -硫代哌喃并[3,2-c ]吡啶-4-酮
Figure 02_image683
在正氬氣壓力下，將叔BuLi在戊烷（7.11 mL，12.08 mmol）中之溶液添加至3-((5-溴-3-氟-2-(三氟甲基)吡啶-4-基)硫代)-N -甲氧基-N -甲基丙醯胺（步驟3，2.14 g，5.25 mmol）在THF（30 mL）中之溶液中，用乾冰/丙酮批冷卻。將RM在-75°C下攪拌45 min，然後允許升溫至RT並添加NH4 Cl飽和水溶液（50 mL）和TBME（30 mL）。將水層用TBME（50 mL）萃取，將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥並蒸發。將殘餘物藉由正相層析法（40 g SiO2 柱；洗脫液：己烷 : TBME 100 : 0至40 : 60）純化以給出呈米色固體的標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.97 min；MS m/z [M+H]+ 252.1；UPLC-MS 1。
步驟5：(S )-N -(8-氟-7-(三氟甲基)-2,3-二氫-4H -硫代哌喃并[3,2-c ]吡啶-4-亞基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺
Figure 02_image685
在RT下，將(S )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺（552 mg，4.46 mmol）添加至8-氟-7-(三氟甲基)-2,3-二氫-4H -硫代哌喃并[3,2-c ]吡啶-4-酮（步驟4，880 mg，3.43 mmol）和Ti(OiPr)4 （3.02 mL，10.30 mmol）在THF（10 mL）中之混合物中。將RM在70°C下攪拌4小時，冷卻，並且添加DCM（50 mL）、H2 O（30 mL）和鹽水（20 mL）。將水層用DCM（30 mL）再萃取2x，將合併的有機層藉由穿過相分離器乾燥並蒸發以給出呈棕色樹脂的標題化合物，將其未經進一步純化而直接使用。
LC-MS：Rt = 1.14 min；MS m/z [M+H]+ 355.1；UPLC-MS 1。
步驟6：(S )-N -((S )-4-氰基-8-氟-7-(三氟甲基)-3,4-二氫-2H -硫代哌喃并[3,2-c ]吡啶-4-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺和(S )-N -((R )-4-氰基-8-氟-7-(三氟甲基)-3,4-二氫-2H -硫代哌喃并[3,2-c ]吡啶-4-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺
Figure 02_image687
向(S )-N -(8-氟-7-(三氟甲基)-2,3-二氫-4H -硫代哌喃并[3,2-c ]吡啶-4-亞基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺（步驟5，1.03 g，2.47 mmol）在THF（12 mL）中之溶液中依次添加CsF（751 mg，4.94 mmol）、三甲基矽基氰化物（994 μL，7.41 mmol）和叔BuOH（473 μL，4.94 mmol），並且將RM在RT下攪拌2.5小時。將RM在DCM（70 mL）、NaHCO3 飽和水溶液（20 mL）和H2 O（70 mL）之間分配，將水層用DCM（40 mL）再萃取2x，將合併的有機層用鹽水洗滌，藉由穿過相分離筒乾燥並蒸發。將殘餘物藉由正相層析法（40 g SiO2 柱；洗脫液：己烷 : TBME 90 : 10至0 : 100）純化以給出呈米色固體的標題化合物（1 : 4非鏡像異構物的混合物）。
LC-MS：Rt = 1.01 min；MS m/z [M+H]+ 382.1；UPLC-MS 1。
步驟7：(S )-4-(((S )-三級丁基亞磺醯基)胺基)-8-氟-7-(三氟甲基)-3,4-二氫-2H -硫代哌喃并[3,2-c ]吡啶-4-甲醯胺
Figure 02_image689
在RT下在正氬氣壓力下，向(S )-N -((S )-4-氰基-8-氟-7-(三氟甲基)-3,4-二氫-2H -硫代哌喃并[3,2-c ]吡啶-4-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺和(S )-N -((R )-4-氰基-8-氟-7-(三氟甲基)-3,4-二氫-2H -硫代哌喃并[3,2-c ]吡啶-4-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺（步驟6，780 mg，1.74 mmol）在EtOH（10 mL）和水（2 mL）中之溶液中添加氫化(二甲基亞膦酸-kP)[氫雙(二甲基膦-kP)]鉑(II)（74.6 mg，174 μmol）。將RM在80°C下攪拌1小時，冷卻，並且在DCM（50 mL）和鹽水（30 mL）之間分配，將水層用DCM（20 mL）萃取2x，將合併的有機層藉由穿過相分離筒乾燥並蒸發。將殘餘物藉由正相層析法（24 g SiO2 Gold柱，洗脫液：己烷 :（TBME : MeOH 95 : 5）80 : 20至0 : 100）純化以給出兩種主要成分。將標題化合物分離為呈白色固體的第一洗脫峰。
LC-MS：Rt = 0.86 min；MS m/z [M+H]+ 400.1；UPLC-MS 1。
將(R )-4-(((S )-三級丁基亞磺醯基)胺基)-8-氟-7-(三氟甲基)-3,4-二氫-2H -硫代哌喃并[3,2-c ]吡啶-4-甲醯胺分離為呈白色結晶固體的第二洗脫峰。
LC-MS：Rt = 0.89 min；MS m/z [M+H]+ 400.2；UPLC-MS 1。
步驟8：(S )-4-胺基-8-氟-7-(三氟甲基)-3,4-二氫-2H -硫代哌喃并[3,2-c ]吡啶-4-甲酸
Figure 02_image691
將(S )-4-(((S )-三級丁基亞磺醯基)胺基)-8-氟-7-(三氟甲基)-3,4-二氫-2H -硫代哌喃并[3,2-c ]吡啶-4-甲醯胺（步驟7，154 mg，308 μmol）在HCl水溶液（4 M，3.1 mL，12.34 mmol）中的懸浮液在80°C下加熱20小時。添加另外的HCl水溶液（4 M，1.0 mL）並且將RM在80°C下再攪拌24小時。將冷卻RM蒸發，再次溶解於甲苯中並且蒸發至乾（兩次），以給出標題化合物，將其未經進一步純化而直接使用。
LC-MS：Rt = 0.50 min；MS m/z [M+H]+ 297.1；UPLC-MS 1。
步驟9：(S )-(4-胺基-8-氟-7-(三氟甲基)-3,4-二氫-2H -硫代哌喃并[3,2-c ]吡啶-4-基)甲醇
Figure 02_image693
在RT下，將硼烷在THF（1 M，1.06 mL，1.06 mmol）中之溶液逐滴添加至(S )-4-胺基-8-氟-7-(三氟甲基)-3,4-二氫-2H -硫代哌喃并[3,2-c ]吡啶-4-甲酸（步驟8，250 mg，211 μmol）在THF（5 mL）中之溶液中。在RT下，在1小時（1 mL）、20小時（2 mL）、48小時（2 mL）、72小時（1.5 mL）後，將另外的等分試樣的THF（1 M）中的硼烷添加至攪拌的RM中。在RT下，將反應混合物再攪拌24小時並逐滴添加MeOH 注意：氣體釋放! 將RM蒸發並且將殘餘物在4 M HCl水溶液中在40°C下加熱30 min，然後冷卻並蒸發至乾。將殘餘物在DCM（20 mL）和水（20 mL）之間分配，將水層藉由添加Na2 CO3 飽和水溶液（10 mL）鹼化，並且用DCM（10 mL）萃取2x，將來自鹼性萃取物的合併的有機層藉由穿過相分離筒乾燥並蒸發以給出呈黃色樹脂的標題化合物，將其未經進一步純化而直接使用。
LC-MS：Rt = 0.54 min；MS m/z [M+H]+ 283.1；UPLC-MS 1。
步驟10：(S )-8'-氟-7'-(三氟甲基)-2',3'-二氫螺[㗁唑啶-4,4'-硫代哌喃并[3,2-c ]吡啶]-2-酮
Figure 02_image695
將三光氣（26.8 mg，90 μmol）在DCM（1 mL）中之溶液在RT下逐滴添加至(S )-(4-胺基-8-氟-7-(三氟甲基)-3,4-二氫-2H -硫代哌喃并[3,2-c ]吡啶-4-基)甲醇（步驟9，60 mg，181 μmol）和Et3 N（63 μL，452 μmol）在DCM（2 mL）中之溶液中。將RM在RT下攪拌1小時並添加NH4 Cl飽和水溶液（3 mL）。在RT下攪拌30 min後，將兩相混合物用NH4 Cl飽和水溶液（10 mL）和H2 O（10 mL）稀釋，用DCM（10 mL）萃取3x，將合併的有機層藉由穿過相分離筒乾燥，並且蒸發。將殘餘物藉由正相層析法（12 g SiO2 柱；洗脫液：己烷 :（TBME : MeOH 95 : 5 90 : 10至10 : 90）純化以給出呈無色樹脂的標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.80 min；MS m/z [M+H]+ 309.1；UPLC-MS 1。
步驟11：(S )-3-(3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-8'-氟-7'-(三氟甲基)-2',3'-二氫螺[㗁唑啶-4,4'-硫代哌喃并[3,2-c ]吡啶]-2-酮
Figure 02_image697
將(S )-8'-氟-7'-(三氟甲基)-2',3'-二氫螺[㗁唑啶-4,4'-硫代哌喃并[3,2-c ]吡啶]-2-酮（步驟10，44 mg，134 μmol）、2-氯-3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶（中間體A，40 μL，242 μmol）、Cs2 CO3 （87 mg，268 μmol）和CuBr（3.85 mg，27 μmol）在DMF（2.0 mL）中之混合物在微波中在120°C下加熱1小時。將冷卻的RM通過Hyflo過濾，將濾液用EtOAc（30 mL）和H2 O（20 mL）稀釋，將水層用EtOAc萃取2x，將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，並且蒸發。將殘餘物吸收在Isolute上並且藉由正相層析法（12 g SiO2 柱，洗脫液：己烷 : TBME 從100 : 0至60 : 40）純化以給出呈米色樹脂的標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.22 min；MS m/z [M+H]+ 520.0；UPLC-MS 1。
步驟12：(S )-(4-((3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-8-氟-7-(三氟甲基)-3,4-二氫-2H -硫代哌喃并[3,2-c ]吡啶-4-基)甲醇
Figure 02_image699
將(S )-3-(3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-8'-氟-7'-(三氟甲基)-2',3'-二氫螺[㗁唑啶-4,4'-硫代哌喃并[3,2-c ]吡啶]-2-酮（步驟11，72 mg，125 μmol）、NaOH水溶液（4 M，156 μL，624 μmol）、EtOH（1 mL）和THF（2 mL）的混合物在50°C下攪拌1小時。將冷卻的RM用Na2 CO3 飽和水溶液稀釋並用DCM萃取2x，將合併的有機層用鹽水洗滌，並且蒸發以給出呈米色泡沫的標題化合物，將其未經進一步純化而直接使用。
LC-MS：Rt = 1.25 min；MS m/z [M+H]+ 494.1；UPLC-MS 1。
中間體CG：(4-胺基-8-氟異硫代口克唍-4-基)甲醇
Figure 02_image701
藉由與所述之製備中間體AU，步驟3和4，和中間體CF，步驟9相似的方法，用8-氟異硫代口克唍-4-酮代替7-溴-8-氟口克唍-4-酮（體AU，步驟2）製備標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.25 min；MS m/z 214.1 [M+H]+ ；UPLC-MS 4。
中間體CH：3'-(3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-9-氟-3,4-二氫-2H -螺[苯并[b ]㗁呯-5,4'-㗁唑啶]-2'-酮
步驟1：1-(2-(2-溴乙氧基)-3-氟苯基)乙酮
Figure 02_image703
在RT下，將1,2-二溴乙烷（28.0 mL，324 mmol）添加至1-(3-氟-2-羥基苯基)乙酮（10 g，64.9 mmol）和K2 CO3 （18.83 g，136 mmol）在丁酮（125 mL）中之混合物中。將黃色懸浮液在回流下加熱18小時，冷卻至RT，過濾，用EtOAc洗滌。將濾液用水洗滌3x，乾燥（相分離器）並濃縮以給出呈黃色油狀物的標題化合物，將其不經進一步純化用於下一步驟。
LC-MS：Rt = 1.00 min；MS m/z 261.1 [M+H]+ ；UPLC-MS 1。
步驟2：9-氟-3,4-二氫苯并[b ]㗁呯-5(2H )-酮
Figure 02_image705
在RT下在正氬氣壓力下，將1-(2-(2-溴乙氧基)-3-氟苯基)乙酮（步驟1，17.51 g，57.7 mmol）在THF（30 mL）中之溶液緩慢添加至NaH（60%在礦物油中，3.69 g，92 mmol）在THF（45 mL）中之漿液中。將RM加熱至70°C，持續1.5小時，冷卻至RT，藉由添加水淬滅並用EtOAc萃取。將有機相用鹽水洗滌。將合併的水相再次用EtOAc萃取。將所有有機相合併，乾燥（相分離筒）並濃縮。將殘餘物藉由正相層析法（矽膠，洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至70 : 30）純化以給出呈黃色粉末的標題化合物。
LC-MS：Rt = 3.53 min；MS m/z 181.1 [M+H]+ ；UPLC-MS 4。
步驟3、4、5、6、7和8：外消旋 -9-氟-3,4-二氫-2H -螺[苯并[b ]㗁呯-5,4'-㗁唑啶]-2'-酮
Figure 02_image707
藉由與所述之製備中間體CF，步驟5至10相似的方法，藉由用9-氟-3,4-二氫苯并[b ]㗁呯-5(2H )-酮（步驟2）代替8-氟-7-(三氟甲基)-2,3-二氫-4H -硫代哌喃并[3,2-c ]吡啶-4-酮（中間體CF，步驟4）製備標題化合物。
LC-MS：Rt = 2.81 min；MS m/z 238.1 [M+H]+ ；UPLC-MS 4。
步驟9：外消旋 -3'-(3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-9-氟-3,4-二氫-2H -螺[苯并[b ]㗁呯-5,4'-㗁唑啶]-2'-酮
Figure 02_image709
在氬氣下，將外消旋 -9-氟-3,4-二氫-2H -螺[苯并[b ]㗁呯-5,4'-㗁唑啶]-2'-酮（步驟8，1.86 g，7.76 mmol）、2-氯-3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶（中間體A，2.88 g，11.64 mmol）、CuI（739 mg，3.88 mmol）和Cs2 CO3 （5.06 g，15.52 mmol）在DMF（58 mL）中之混合物在120°C下加熱3小時。將RM用EtOAc稀釋，用NaHCO3 水溶液洗滌，並且將水層用EtOAc萃取2x。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，並濃縮。將殘餘物藉由正相層析法（矽膠，洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至0 : 100）純化以給出呈黃色粉末的標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.19 min；MS m/z 449.2 [M+H]+ ；UPLC-MS 1。
中間體CI：(S )-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]-1'-甲醛
Figure 02_image711
在RT下，將SeO2 （78 mg，705 μmol）添加至1,4-二㗁𠮿（4 mL）中的(S )-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-1'-甲基-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]（實例32，200 mg，470 μmol）中。將RM在110°C下加熱20小時，冷卻並在DCM和NaHCO3 飽和水溶液之間分配。將水層用DCM萃取，將合併的有機層乾燥（相分離器）並蒸發。將殘餘物藉由正相層析法（12g SiO2 -柱，洗脫液：庚烷 : EtOAc 90 : 10至20 : 80）純化以給出呈米色泡沫的標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.64/0.68 min 寬雙峰；MS m/z [M+H]+ 436.5；UPLC-MS 1。
中間體CJ：3'-(3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-9-氟-3,4-二氫-1H -螺[苯并[c ]㗁呯-5,4'-㗁唑啶]-2'-酮
步驟1：1-溴-2-((丁-3-烯-1-基氧基)甲基)-3-氟苯
Figure 02_image713
在0°C下，將油狀物中作為分散體的NaH（21.27 mg，532 μmol）添加至丁-3-烯-1-醇（48 μL，532 μmol）在THF（1 mL）中之攪拌溶液中。將RM在0°C下攪拌15 min並且添加THF（1 ml）中的1-溴-2-(溴甲基)-3-氟苯（100 mg，355 μmol）。允許黃色的RM溫熱至RT並且在RT下攪拌18小時，用水稀釋並用EtOAc萃取2x。將合併的有機相乾燥（相分離器）並且濃縮。將殘餘物藉由正相層析法（矽膠，洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至80 : 20）純化以給出呈無色油狀物的標題化合物（大約85%的純度）。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.56 (d, 1H), 7.40 - 7.26 (m, 2H), 5.85 - 5.74 (m, 1H), 5.13 - 4.97 (m, 2H), 4.58 (d, 2H), 3.52 (t, 2H), 2.28 (q, 2H)。
步驟2：9-氟-5-亞甲基-1,3,4,5-四氫苯并[c ]㗁呯
Figure 02_image715
在RT下在氬氣氣氛下，將Ag2 CO3 （77 mg，279 μmol）然後Pd[P(C6 H5 )3 ]4 （26.9 mg，23 μmol）添加至1-溴-2-((丁-3-烯-1-基氧基)甲基)-3-氟苯（步驟1，71 mg，233 μmol）在AcCN（3 mL）中之溶液中。將RM在100°C下加熱18小時，冷卻至RT，濃縮，並且將殘餘物用水稀釋並用EtOAc萃取2x。將合併的有機相乾燥（相分離器）並且濃縮。將殘餘物藉由正相層析法（矽膠，洗脫液：庚烷 : EtOAc =100 : 0至70 : 30）純化以給出呈黃色油狀物的標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.06 min；無明顯的分子離子信號；UPLC-MS 1。
步驟3：9-氟-3,4-二氫苯并[c ]㗁呯-5(1H )-酮
Figure 02_image717
在0°C下，將NaIO4 （42.9 mg，200 μmol）和OsO4 水溶液（4%，157 µL，20 μmol）添加至9-氟-5-亞甲基-1,3,4,5-四氫苯并[c ]㗁呯（步驟2，22.9 mg，100 μmol）在THF/水（1 : 1，1 mL）中之攪拌溶液中。將RM升溫至RT並攪拌1小時，用水稀釋並且用EtOAc萃取。將有機相用鹽水洗滌，乾燥（相分離器）並濃縮以給出呈棕色油狀物的標題化合物，將其不經進一步純化用於下一步驟。
LC-MS：Rt = 0.78 min；無明顯的分子離子信號；UPLC-MS 1。
步驟4、5、6、7、8和9：9-氟-3,4-二氫-1H -螺[苯并[c ]㗁呯-5,4'-㗁唑啶]-2'-酮
Figure 02_image719
藉由與所述之製備中間體CF，步驟5至10相似的方法，藉由用9-氟-3,4-二氫苯并[c ]㗁呯-5(1H )-酮（步驟3）代替8-氟-7-(三氟甲基)-2,3-二氫-4H -硫代哌喃并[3,2-c ]吡啶-4-酮（中間體CF，步驟4）製備標題化合物。
LC-MS：Rt = 0.67 min；MS m/z [M+H]+ 238.2；UPLC-MS 1。
步驟10：3'-(3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-9-氟-3,4-二氫-1H -螺[苯并[c ]㗁呯-5,4'-㗁唑啶]-2'-酮
Figure 02_image721
將9-氟-3,4-二氫-1H -螺[苯并[c ]㗁呯-5,4'-㗁唑啶]-2'-酮（步驟9，144 mg，577 μmol）、2-氯-3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶（中間體A，214 mg，865 μmol）、CuI（54.9 mg，288 μmol）和Cs2 CO3 （376 mg，1.15 mmol）在DMF（4.4 mL）中之混合物在120°C下加熱4小時。將冷卻的RM用EtOAc稀釋，將有機層用NaHCO3 飽和水溶液洗滌2x，乾燥（相分離器）並且濃縮。藉由正相層析法（矽膠，洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至50 : 50）純化，給出呈黃色油狀物的標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.19 min；MS m/z [M+H]+ 449.2；UPLC-MS 1。
中間體CK：(S )-(1-((3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-5-氟-1,2,3,4-四氫化萘-1-基)甲醇
步驟1：(S )-3'-(3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-5-氟-3,4-二氫-2H -螺[萘-1,4'-㗁唑啶]-2'-酮
Figure 02_image723
藉由與中間體S，步驟1相似的方法，藉由用(S )-5-氟-3,4-二氫-2H -螺[萘-1,4'-㗁唑啶]-2'-酮（中間體Z，步驟1）代替(S )-6'-溴-5'-氟-2',3'-二氫二螺[㗁唑啶-4,1'-萘-4',2''-[1,3]二硫環戊烷]-2-酮（中間體T）製備標題化合物。將粗產物藉由正相層析法（80 g SiO2 柱; 洗脫液：庚烷 : EtOAc 100 : 0至85 : 25）純化以給出呈米色固體的標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.27 min；MS m/z [M+H]+ 433.3；UPLC-MS 1。
步驟2：(S )-(1-((3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)胺基)-5-氟-1,2,3,4-四氫化萘-1-基)甲醇
Figure 02_image725
將(S )-3'-(3-(二氟甲氧基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-5-氟-3,4-二氫-2H -螺[萘-1,4'-㗁唑啶]-2'-酮（步驟1，308 mg，570 μmol）、NaOH水溶液（2 M，3 mL，6 mmol）和EtOH（6 mL）的混合物在80°C下攪拌1小時。然後將RM用水稀釋並用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，並且蒸發以給出呈油狀物的標題化合物。
LC-MS：Rt = 1.28 min；MS m/z [M+H]+ 407.2；UPLC-MS 1。
中間體CL：(S )-(1-胺基-5-溴-2,3-二氫-1H -茚-1-基)甲醇
Figure 02_image727
藉由與所述之製備中間體J 步驟1至4相似的方法，用5-溴-2,3-二氫-1H -茚-1-酮代替5-溴-4-氟二氫茚酮製備標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.34 (s, 1H), 7.31 (d, 1H), 7.21 (d, 1H), 4.75 (t, 1H), 3.30 - 3.23 (m, 2H), 2.88 - 2.68 (m, 2H), 2.20 (m, 1H), 1.88 (s, 2H), 1.73 (m, 1H)。
本發明提供了(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]的結晶形式，其在本文中也稱為(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]的「形式A」。
(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]可以藉由根據以下式 (A) 之化學結構表示
Figure 02_image094
式 (A)。
本發明還提供了(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]延胡索酸鹽的結晶形式，其在本文中也稱為(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]延胡索酸鹽的「形式A」。
本發明之(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]的結晶形式A和(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]延胡索酸鹽的結晶形式A可以藉由製藥工業領域中眾所周知的用於表徵固體的分析方法來表徵。此類方法包括但不限於XRPD、SXRD、FTIR、拉曼（Raman）、DSC、TGA、和DVS。它可以藉由前述分析方法之一或者藉由將它們中的兩種或更多種組合來表徵。特別地，本發明之(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]或(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]延胡索酸鹽的形式A可以藉由以下實施方式中的任何一個或藉由組合以下實施方式中的兩個或更多個來表徵。
XRPD實施方式的示例：
在一個實施方式中，本發明關於(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]（形式A）的結晶形式，該結晶形式特徵在於具有XRPD，其包含在2-θ角為以下處的反射： (9.7 ± 0.2)°、(18.4 ± 0.2)°和(19.4 ± 0.2)°；或 (9.7 ± 0.2)°、(18.4 ± 0.2)°、(19.4 ± 0.2)°和(13.4 ± 0.2)°；或 (9.7 ± 0.2)°、(18.4 ± 0.2)°、(19.4 ± 0.2)°、(13.4 ± 0.2)°和(20.7 ± 0.2)°；或 (9.7 ± 0.2)°、(18.4 ± 0.2)°、(19.4 ± 0.2)°、(13.4 ± 0.2)°、(20.7 ± 0.2)°和(24.2 ± 0.2)°；或 (9.7 ± 0.2)°、(18.4 ± 0.2)°、(19.4 ± 0.2)°、(13.4 ± 0.2)°、(20.7 ± 0.2)°、(24.2 ± 0.2)°和(22.1 ± 0.2)°；或 (9.7 ± 0.2)°、(18.4 ± 0.2)°、(19.4 ± 0.2)°、(13.4 ± 0.2)°、(20.7 ± 0.2)°、(24.2 ± 0.2)°、(22.1 ± 0.2)°和(10.3 ± 0.2)°； （當在20°C至30°C範圍內的溫度、用具有0.15406 nm的波長的Cu-Kα1,2 輻射測量時）。
在另一個實施方式中，本發明關於(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]延胡索酸鹽（形式A）的結晶形式，該結晶形式特徵在於具有XRPD，其包含在2-θ角為以下處的反射： (24.9 ± 0.2)°、(6.2 ± 0.2)°和(20.9 ± 0.2)°；或 (24.9 ± 0.2)°、(6.2 ± 0.2)°、(20.9 ± 0.2)°和(10.9 ± 0.2)°；或 (24.9 ± 0.2)°、(6.2 ± 0.2)°、(20.9 ± 0.2)°、(10.9 ± 0.2)°和(18.5 ± 0.2)°；或 (24.9 ± 0.2)°、(6.2 ± 0.2)°、(20.9 ± 0.2)°、(10.9 ± 0.2)°、(18.5 ± 0.2)°和(22.8 ± 0.2)°；或 (24.9 ± 0.2)°、(6.2 ± 0.2)°、(20.9 ± 0.2)°、(10.9 ± 0.2)°、(18.5 ± 0.2)°、(22.8 ± 0.2)°和(12.9 ± 0.2)°；或 (24.9 ± 0.2)°、(6.2 ± 0.2)°、(20.9 ± 0.2)°、(10.9 ± 0.2)°、(18.5 ± 0.2)°、(22.8 ± 0.2)°、(12.9 ± 0.2)°和(16.1 ± 0.2)°； （當在20°C至30°C範圍內的溫度、用具有0.15406 nm的波長的Cu-Kα1,2 輻射測量時）。
在另一個實施方式中，本發明關於(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]（形式A）的結晶形式，該結晶形式特徵在於當在20°C至30°C範圍內的溫度、用具有0.15406 nm的波長的Cu-Kα1,2 輻射測量時，具有與本發明之圖1所示基本上相同的XRPD。
在另一個實施方式中，本發明關於(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]延胡索酸鹽（形式A）的結晶形式，該結晶形式特徵在於當在20°C至30°C範圍內的溫度、用具有0.15406 nm的波長的Cu-Kα1,2 輻射測量時，具有與本發明之圖5所示基本上相同的XRPD。
DSC實施方式的示例：
在一個實施方式中，本發明關於(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]（形式A）的結晶形式，該結晶形式特徵在於當以10 K/min的加熱速率測量時，具有包含起始溫度為約162.5°C的吸熱峰（較佳的是，單吸熱峰）的如圖2所示的DSC曲線。
在另外的實施方式中，本發明關於(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]延胡索酸鹽（形式A）的結晶形式，該結晶形式特徵在於當以10 K/min的加熱速率測量時，具有峰最高溫度為約172.2°C的吸熱峰（較佳的是，單吸熱峰）的如圖6所示的DSC曲線。
在又另一個實施方式中，本發明關於(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]（形式A）的結晶形式，該結晶形式特徵在於當以10 K/min的加熱速率用DSC測量時，具有(163.9 ± X)°C的熔點起始溫度。
在又另一個實施方式中，本發明關於(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]延胡索酸鹽（形式A）的結晶形式，該結晶形式特徵在於當以10 K/min的加熱速率用DSC測量時，具有約173.5°C的熔點峰最高溫度。
TGA實施方式的示例：
在一個實施方式中，本發明關於(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]（形式A）的結晶形式，該結晶形式特徵在於當以10 K/min的速率從10°C加熱到250°C時，具有如圖3所示的TGA，其顯示出基於該結晶形式的重量不超過0.4 w-%的品質損失。
在另一個實施方式中，本發明關於(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]延胡索酸鹽（形式A）的結晶形式，該結晶形式特徵在於當以10 K/min的速率從10°C加熱到250°C時，具有如圖7所示的TGA曲線，其顯示出基於該結晶形式的重量不超過0.2 w-%的品質損失。
DVS實施方式的示例：
在一個實施方式中，本發明關於(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]（形式A）的結晶形式，該結晶形式特徵在於當用如圖4所示的DVS在從0至95%的範圍內的相對濕度下並且在約25°C的溫度下測量時，顯示出基於該結晶形式的重量不超過0.05 w-%的品質變化。
在另一個實施方式中，本發明關於(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]延胡索酸鹽]（形式A）的結晶形式，該結晶形式特徵在於當用如圖8所示的DVS在從0至95%的範圍內的相對濕度下並且在約25°C的溫度下測量時，顯示出基於該結晶形式的重量不超過0.1 w-%的品質變化。
另外的實施方式的示例：
下列非限制性實例用來進一步闡述本揭露，但不用於限制本發明之範圍。
實例120：(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]的延胡索酸鹽
將約1107 mg的(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]和435 mg的延胡索酸添加至8.5 mL的乙醇中，加熱至50C，伴隨磁力攪拌過夜；冷卻至r.t.並保持攪拌3小時；然後將懸浮液過濾。在50°C下在真空下加熱後，獲得約1.2 g的白色粉末。
X射線繞射：
使用CuKα輻射（波長0.15406 nm）在Bruker D8 Advance繞射計上記錄本文所述之X射線粉末繞射（XRPD）圖。在2°與40°（2-θ）之間記錄XRPD圖。
熟悉該項技術者將理解，可以獲得具有取決於所採用的測量條件的測量誤差的XRPD圖。特別地，通常已知XRPD圖中的強度可以取決於所採用的測量條件而波動。應進一步理解，相對強度還可以取決於實驗條件和使用的X射線輻射的波長而變化。對於相同的晶體形式，樣本與參考之間的2-θ繞射角的一致性在0.2º以內，並且應考慮與上述繞射角有關的這種測量誤差程度。因此，應理解本發明之晶型不限於提供與本文揭露的附圖中描繪的XRPD圖完全相同的X射線繞射圖的晶型。任何能夠提供與附圖中所揭露的那些XRPD圖基本上一致的XRPD圖的晶型均包含在本發明之範圍內。確定XRPD圖基本相同的能力在熟悉該項技術者的能力範圍內。
本文圖1中顯示了(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]的結晶形式A之代表性繞射圖。下[表1]提供了相應的反射列表。
指數 角度 deg （ 2-θ ） d 值 Å 相對強度（ % ） 相對峰值
1 9.7 9.10 7（低） 1
2 10.3 8.61 7（低） 8
3 13.4 6.62 5（低） 4
4 14.4 6.14 5（低） 9
5 18.4 4.82 26（中等） 2
6 19.4 4.56 100（高） 3
7 20.7 4.29 14（中等） 5
8 22.1 4.02 11（低） 7
9 24.2 3.67 18（中等） 6
表1：在從2至30°2-θ的範圍內，(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]的結晶形式A的XRPD反射位置和相應的相對強度；2-θ值的典型精度在 ± 0.2°2-θ，較佳的是 ± 0.1°2-θ的範圍內。
差示掃描量熱法（DSC）：
用於測試結晶形式的DSC儀器係TA Discovery。將儀器程序設計為在50 mL/min的氮氣流量下、在30°C與300°C範圍內的溫度、以每分鐘10°C的速度加熱。
圖2中顯示了(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]的結晶形式A之代表性DSC曲線，並且顯示出單吸熱（起始溫度為約162.5°C並且峰值溫度為約163.9°C）。
熱重量分析方法：
用於測試結晶形式的TGA儀器係TA Discovery。在30°C與約300°C的溫度範圍內，以每分鐘10°C的加熱速率分析2至10毫克的樣本。
圖3中顯示了(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]的結晶形式A之代表性TGA曲線，並且顯示出從約48°C至190°C的步驟和基於該結晶形式的重量不超過0.4 w-%的品質損失。
動態蒸汽吸附（DVS）數據：
使用SMS Advantage系統進行動態蒸汽吸附。使約10 mg的樣本在25°C下經歷0%RH和95%RH之間的不同濕度。使用系統軟體進行評估。
圖4顯示了在從0%至40% RH的吸附循環（用三角形標記）期間，以及在從40%至0% RH（x軸上）的解吸附循環（用正方形標記）期間，(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]的結晶形式A之平衡品質變化（y軸上δ m, 單位為重量%）。在0和95% RH之間的品質差小於0.05重量%，並且在吸附曲線和解吸曲線之間沒有觀察到明顯的滯後現象。因此，本發明之(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]的結晶形式A可以被指定為非吸濕的。
(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]的形式A的表徵
X射線繞射：
使用CuKα輻射（波長0.15406 nm）在Bruker D8 Advance繞射計上記錄本文所述之X射線粉末繞射（XRPD）圖。在2°與40°（2-θ）之間記錄XRPD圖。
本文圖5中顯示了(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]延胡索酸鹽的結晶形式A之代表性繞射圖。下[表2]提供了相應的反射列表。
指數 角度 deg （ 2-θ ） d 值 Å 相對強度（ % ） 相對峰值
1 6.2 14.28 11（低） 2
2 10.9 8.11 62（高） 4
3 12.9 6.84 71（高） 7
4 16.1 5.50 43（中等） 8
5 18.5 4.79 23（中等） 5
6 20.9 4.25 66（高） 3
7 22.8 3.89 81（高） 6
8 24.9 3.59 100（高） 1
表2：在從2至30°2-θ的範圍內，(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]延胡索酸鹽的結晶形式A的XRPD反射位置和相應的相對強度；2-θ值的典型精度在 ± 0.2°2-θ，較佳的是 ± 0.1°2-θ的範圍內。
差示掃描量熱法（DSC）：
用於測試結晶形式的DSC儀器係TA Discovery。將儀器程序設計為在50 mL/min的氮氣流量下、在30°C與300°C範圍內的溫度、以每分鐘10°C的速度加熱。
圖6中顯示了(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]延胡索酸鹽的結晶形式A之代表性DSC曲線，並且顯示出單吸熱（起始溫度為約172.2°C並且峰值溫度為約173.5°C）。
熱重量分析方法：
用於測試結晶形式的TGA儀器係TA Discovery。在30°C與約300°C的溫度範圍內，以每分鐘10°C的加熱速率分析2至10毫克的樣本。
圖7中顯示了(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]延胡索酸鹽的結晶形式A之代表性TGA曲線，並且顯示出從約23°C至173°C的步驟和基於該結晶形式的重量不超過0.2 w-%的品質損失。
動態蒸汽吸附（DVS）數據：
使用SMS Advantage系統進行動態蒸汽吸附。使約10 mg的樣本在25°C下經歷0%RH和95%RH之間的不同濕度。使用系統軟體進行評估。
圖8顯示了在從0%至40% RH的吸附循環（用三角形標記）期間，以及在從40%至0% RH（x軸上）的解吸附循環（用正方形標記）期間，(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]延胡索酸鹽的結晶形式A的平衡品質變化（y軸上δ m, 單位為重量%）。在0和95% RH之間的品質差小於0.1重量%，並且在吸附曲線和解吸曲線之間沒有觀察到明顯的滯後現象。因此，本發明之(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]的結晶形式A可以被指定為非吸濕的。具有 HIF2α PAS-B 結構域的體外 SPA
閃爍鄰近測定法（SPA）基於放射性配體N -(3-氯-5-氟苯基-4-t)-4-硝基苯并[c ][1,2,5]㗁二唑-7-t-5-胺（1.8 TBq/mmol，非標記配體的親和力，IC50 = 82 ± 18 nM，n = 3）的競爭結合測定。使用384孔板（781207/葛萊娜公司（Greiner））進行測定，其中一個柱指定為高信號對照，並且包含DMSO，不含化合物，另一個柱指定為低信號對照，並且不含蛋白質。在添加放射性配體之前，將化合物（使用14點劑量反應和3倍化合物稀釋液從100 μM到60 pM進行測試）與HIF2α PAS-B結構域（236-350，N 端生物素化）預孵育30 min。測定體積為60 µL的最終濃度為5 nM HIF2α和25 nM放射性配體。測定緩衝液含有50 mM Tris-HCl pH7（西格瑪公司（Sigma））、20 mM NaCl（弗魯克公司（Fluka））、0.02% BSA（西格瑪公司）、0.005% Triton X-100（皮爾斯公司（Pierce））和1 mM DTT（弗魯克公司）。孵育30 min後，添加5 µL 鏈黴親和素PVT SPA微珠（珀金埃爾默公司（Perkin Elmer））（濃度為1.2 mg/mL，在緩衝液中稀釋）。孵育60 min後，將板離心，並在Topcount NXT 384（普克公司（Packard））上讀數。使用2個不同的板製作重複品，並使用Helios系統基於以下方程序確定平均IC50 值：%抑制 = [(高對照- 樣本)/(高對照-低對照)] x 100。列表中HIF2α活性的IC50 值是1到10個獨立實驗的平均值。在 N - 末端生物素化的 HIF2α PAS-B 結構域 236-350 的純化
在質體pBirA（生物素連接酶的共表現）存在下，在大腸桿菌Tuner（DE3）中在用抗生素、200 µM生物素、8 mg/mL L-阿拉伯糖和0.1 mM異丙基β-D-1-硫代半乳糖哌喃糖苷代替的極品液體培養基（Terrific Broth）（TB）培養基，在20°C下從質體pLAF727（內部產生的）表現人HIF2α（Uniprot Q99814）胺基酸D236 - N350 18小時。藉由離心收集細胞，並速凍直至進一步處理。將細胞融化並重懸浮於緩衝液A（50 mM NaH2 PO4 pH 8.0，300 mM NaCl，20 mM咪唑，Benzonase® 25 U/mL（諾維根公司（Novagen））），並在4°C下孵育20 min。添加4-(2-胺基乙基)苯磺醯氟（最終0.5 mM）後，將細胞用Avestin均質器在約20000 psi（5巴氮氣）下裂解，並藉由離心除去不溶性碎片。使用HisTrap HP 5 mL柱（GE）使用緩衝液A進行固定的金屬親和層析，並用梯度洗脫超過10個柱體積的緩衝液A（經300 mM咪唑取代）。藉由Novex NuPage 4%-12% PAGE分析洗脫的蛋白質級分，並在4°C下在孵育18小時中藉由HRV3C蛋白酶切割（內部產生的）除去親和標籤蛋白。在最終的精製步驟中，將蛋白質負載到用SEC-緩衝液（50 mM Tris - pH 7.4，150 mM NaCl，1 mM 3,3’,3」-膦三基三丙酸（TCEP），10%甘油）預先平衡的HiLoad Superdex 75 26/60粒徑排阻柱上。藉由PAGE（Novex NuPage 4%-12%BisTris）分析確定陽性級分。藉由RPLC-MS確定正確的品質，並表明蛋白質已完全生物素化。 N -(3- 氯 -5- 氟苯基 -4-t)-4- 硝基苯并 [c ][1,2,5] 㗁二唑 -7-t-5- 胺
Figure 02_image730
步驟1：7-溴-N -(4-溴-3-氯-5-氟苯基)-4-硝基苯并[c ][1,2,5]㗁二唑-5-胺
將5,7-二溴-4-硝基苯并[c ][1,2,5]㗁二唑（如J. Med. Chem. [藥物化學雜誌]1974 ,17 , 203-206.中所述製備，420 mg，1.2 mmol）、4-溴-3-氯-5-氟苯胺（如WO 2012/143599中所述製備，302 mg，1.3 mmol）和DMF（620 μL）在RT下組合，並且在氬氣氣氛下在90°C下加熱4小時。將MeOH（15 mL）添加至冷卻的RM中，並且將混合物在RT下攪拌15 min，過濾，用MeOH洗滌，以給出橙色結晶固體。然後將固體懸浮於MeOH（6 mL）中並且伴隨攪拌回流2小時，冷卻至RT，過濾，用MeOH洗滌，乾燥後以給出呈橙色固體的標題化合物。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.52 (s, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.65 - 7.62 (m, 1H), 7.58 - 7.54 (m, 1H)。
步驟2：N -(3-氯-5-氟苯基-4-t)-4-硝基苯并[c ][1,2,5]㗁二唑-7-t-5-胺
將7-溴-N -(4-溴-3-氯-5-氟苯基)-4-硝基苯并[c ][1,2,5]㗁二唑-5-胺（步驟1，6.86 mg，14.70 μmol）和Lindlar催化劑（20.63 mg）懸浮於DMF（0.7 mL）中，並且添加(iPr)2 NEt 11.8 μL（8.74 mg；67.6 μmol）。將深紅色懸浮液在高真空歧管中脫氣三次，並且在氚氣氣氛（9.0 Ci）下在RT下攪拌2小時。將溶劑在真空中除去，並藉由添加乙醇（1 mL），攪拌溶液並在真空下再次除去溶劑來交換不穩定的氚。將該過程重複三次。最後，將乾燥良好的固體用5 ml乙醇萃取，並將懸浮液通過0.2 μm尼龍膜過濾，獲得澄清深紅色溶液。粗產物的活性為281 mCi。測定放射化學純度為23%（HPLC 22）。藉由HPLC（RP-HPLC 6）進行250 mCi（9.25 GBq）的純化。將含有級分的產物用NaHCO3 水溶液（5%）處理，並且使用旋轉蒸發器將體積部分減少。將產物用Phenomenex StrataX筒（3 mL，100 mg）捕獲，然後用10 mL乙醇洗脫。萃取物含有標題化合物，其活性為41.6 mCi，放射化學純度＞ 99%。確定的特定活性為38.9 Ci/mmol。用於細胞測定的化合物溶液的製備
以DMSO中10 mM的濃度製備化合物的原液並在4°C下儲存。在需要得到完整的劑量反應曲線時，將原液在DMSO中預先稀釋至所需降低的起始濃度的1’000倍。細胞接種後當天，使用HP 300D非接觸式數位分配器（Digital Dispenser）（TECAN）或ATS100聲分發器（EDC生物系統公司（EDC Biosystems）），將每種化合物的十一種2倍系列稀釋液直接分配到細胞測定板中。HIF2α 的細胞 iScript 測定
採用定量RT-PCR方法，在786-O細胞（RRID CVCL_1051）中評估內源性靶基因hEGLN3（OMIM : 606426）和作為管家對照的β-肌動蛋白（OMIM : 102630）的HIF2α調節表現的化合物介導調節。簡而言之，將786-O細胞維持在由DMEM（GIBCO #11995-065）、2 mM L-麩醯胺酸（生物概念公司（BioConcept）#5-10K50-H）、1x青黴素/鏈黴素（生物概念公司#4-01F00-H）、10%胎牛血清（Gibco#A31608-01）、1 mM丙酮酸鈉（生物概念公司#5-60F00-H）構成的生長培養基中。將細胞 以1'000個細胞/20 µL/孔接種到白壁的透明底部384孔板（葛萊娜公司#781098）中，並在37°C下孵育過夜，然後添加上述系列化合物稀釋液。在37°C下孵育48小時後，將培養基上清液棄去並且將印跡的板藉由在組織上翻轉乾燥。用20 μL磷酸鹽緩衝液洗滌一次後，重複相同的程序。使用16-通道Matrix移液器添加25 µL/孔iScript樣本製備試劑（伯樂公司（BioRad）#170-8899），然後將板在室溫下孵育2 min。然後將20 µL裂解物上清液除去並轉移至新384孔板（科斯塔爾公司（Costar）#3656）中，並且使用Bravo液體處理器（安捷倫公司），藉由將5 µL的裂解物添加至10 µL H2 0中稀釋1 : 3。將2 µL的稀釋的裂解物添加至 8 µL的預混液中，該預混液含有5 µL iTaq通用探針一步套組（伯樂公司 #172-5141）、0.25 µL iScript reverse transcription supermix（伯樂公司 #1708840）、0.25 µL 40x HEX-ZEN-標記的β-肌動蛋白TaqMan探針（IDT #Hs.PT.39a.22214847：探針5' HEX- TCA TCC ATG/ZEN/GTG AGC TGG CGG -3' Iowa Black FQ，引物1：ACA GAG CCT CGC CTT TG；引物2：CCT TGC ACA TGC CGG AG）、0.25 µL 40x FAM-ZEN-標價的hEGLN3 TaqMan探針（IDT #Hs.PT.58.189348：探針5' 6-FAM-TTT GGC TTC/ZEN/TGC CCT TTC TTC AGC-3' Iowa Black FQ，引物1：CAC GGT CAG TCT TCA GTG AG；引物2：CGC AAC CAG ATA TGC TAT GAC T）、2.25 µL無RNA酶水，使用16-通道Matrix移液器添加在384孔板（ABI # 4309849）中。將板用PCR相容性光學薄膜（MicroAmp，ABI #4360954）密封，並且離心（1500 rpm，5 min，+ 4°C）以收集孔底部的全部試劑，並且除去氣泡。使用以下條件，將板內容物在7900HT熱循環儀（ABI）上擴增：步驟1：50°C持續10 min，步驟2：95°C持續3 min，步驟3（40x）：95°C持續15 s，60°C持續1 min。將ROX（反應體積10 µL）用作被動參考。通過手動調整Ct閾值（β-肌動蛋白：0.046，hEGLN3：0.06）收集數據，並使用2^(-ΔΔCt)方法進行分析。因此，對於每個樣本，計算出以下值：β-肌動蛋白為2^(-Ct)a，EGLN3為2^(-Ct)e，並且2^(-ΔCt)計算為(2^(-Ct)e/2^(-Ct)a)。計算每個樣本的平均2^(-ΔCt)以及相應的標準差。以DMSO處理的樣本為參考，每個樣本的2^(-ΔΔCt)計算如下：2^(-ΔΔCt) = 2^(-ΔCt)樣本/(2^(-ΔCt)DMSO)。在將每個樣本 的差異表現計算為2^(-ΔΔCt)後，將其表示為百分比（x 100），以獲得以DMSO對照的%表示的劑量反應曲線，並使用四參數擬合模型計算IC50。HIF1α 和 HIF2α 的體外細胞缺氧反應元件（ HRE ）報告基因測定（ RGA ）
分別在786-O-HRE-Luc和RCC4-HRE-Luc細胞中評估了化合物抑制HIF2α和HIF1α依賴性轉錄的能力。分別在786-O-UB6-Luc和RCC4-UB6-Luc細胞中評估了螢火蟲螢光素酶活性或表現的推定的非選擇性抑制。報告系如下產生：786-O（RRID：CVCL_1051）和RCC4（RRID：CVCL_0498）透明細胞腎癌細胞系分別從ATCC和Celeste Simon（賓夕法尼亞大學（University of Pennsylvania））獲得。將任一細胞系均用慢病毒載體轉導，其中PEST不穩定版本的螢火蟲螢光素酶的表現處於與最小缺氧反應元件（HRE）序列的四個拷貝偶合的最小啟動子（pLenti 4xHRE Luc PEST）的控制下，或來自管家UBC基因的啟動子（pLenti UB6 Luc PEST）的控制下。簡而言之，為了構建pLenti 4xHRE Luc PEST載體，合成了4xHRE DNA寡核苷酸，退火並選殖到用NheI和HindIII限制酶預先消化的pGL4.27質體載體（普洛麥格公司（Promega））中。兩個DNA寡核苷酸的序列如下：NheI 4xHRE HindIII FWD：ctagcctgcacgtactgcacgtactgcacgtactgcacgtacgctcgcttcgaa；NheI 4xHRE HindIII REVagctttcgaagcgagcgtacgtgcagtacgtgcagtacgtgcagtacgtgcagg。然後將4xHRE Luc PEST片段從該質體在兩端帶有限制性酶切位點NheI和XhoI地進行PCR，並且將其插入用NheI和XhoI限制性酶預先消化的pLenti6/BLOCK iT DEST（賽默飛世爾科技公司（Thermo Fisher Scientific））中。對於pLenti UB6 Luc PEST載體的構建，使用在兩端的EcoRV和XhoI限制性酶，將Luc PEST序列從pGL4.27（普洛麥格公司）進行PCR，並且將其插入用同樣的酶預先消化的pLenti6/UBC/V5/DEST（賽默飛世爾科技公司）中。在10 µg/ml聚凝胺的存在下，用以1.5 ml OptiMEM（賽默飛世爾科技公司 #31985062）的混合物（含有3 µg的所需質體和9 µl的ViralPower Packaging混合物（賽默飛世爾科技公司 # K497500））、以及含有36 µl Lipofectamine 2000（賽默飛世爾科技公司 #11668019）的1.5 ml OptiMEM轉染HEK293-FT（賽默飛世爾科技公司#R70007）細胞（100 cm2 培養皿中80%融合的）兩天後收穫的慢病毒感染786-O和RCC4細胞（6孔板的300’000/孔）。使用殺稻瘟菌素（Gibco #A11139-03）以5 µg/ml的終濃度選擇成功感染的細胞。將所得的穩定細胞系命名為786-O pLenti 4xHRE Luc PEST（簡稱：786-O-HRE-Luc）、786-O pLenti UB6 Luc PEST（簡稱：786-O-UB6-Luc）、RCC4 pLenti 4xHRE Luc PEST（簡稱：RCC4-HRE-Luc）和RCC4 pLenti UB6 Luc PEST（簡稱：RCC4-UB6-Luc）。在37°C下在濕潤的5% CO2 培養箱中，將全部4個細胞系維持在由DMEM（GIBCO #11995-065）、2 mM L-麩醯胺酸（生物概念公司 #5-10K50-H）、10%胎牛血清（Gibco #A31608-01）、1x 青黴素/鏈黴素（生物概念公司 #4-01F00-H）、1 mM丙酮酸鈉（生物概念公司 #5-60F00-H）和5 µg/ml殺稻瘟菌素（Gibco #A11139-03）構成的生長培養基中。
對於報告基因測定，將單個細胞以2'500個細胞/20 µL/孔接種到白壁的透明底部384孔板（葛萊娜公司#781098）中，並在37°C下孵育過夜，然後添加上述系列化合物稀釋液。在37°C下孵育24小時後，在添加20 µL BrightGlo（普洛麥格公司，Cat#E2620）5分鐘後，藉由測量M1000多模平板讀取器（TECAN）上的發光強度（積分時間為100 ms），對報告的基因活性的化合物介導的調節定量。對於數據分析，從所有數據點中減去在含有培養基但是不含細胞的孔中測定的試驗背景值。將劑量依賴性化合物作用表示為媒介物處理的對照（僅接受DMSO的細胞產生的發光信號）的百分比，並使用四參數擬合模型計算IC50。在所有孔中，將DMSO的濃度標準化為0.1%。繪示了體外 HIF2α 活性
實例 HIF2α SPA IC50 （ nM ） HIF2α iScript IC50 （ nM ） HIF2α HRE RGA IC50 （ nM ）
1 ≤ 3 65 232
2 12 152 1530
3 12 187 ＞ 10000
4 9 155 699
5 9 138 328
6 8 84 250
7 ≤ 3 32 82
8 14 198 271
9 15 173 2210
10 21 77 207
11 ≤ 3 33 89
12 8 59 250
13 5 42 113
14 9 57 146
15 16 128 392
16 ≤ 6 43 372
17 62 199 466
18 6 37 92
19 36 144 446
20 15 155 892
21 36 121 1100
22 8 37 185
23 4 30 92
24 15 151 364
25 19 83 202
26 ≤ 6 34 144
27 12 102 188
28 5 66 169
29 8 93 1310
30 27 129 1350
31 9 37 246
32 13 78 861
33 17 78 547
34 23 197 1430
35 9 83 267
36 6 73 147
37 25 89 308
38 12 84 322
39 ≤ 6 49 251
40 6 50 190
41 11 54 283
42 8 72 96
43 10 59 180
44 13 65 112
45 ≤ 10 85 313
46 13 50 68
47 11 82 694
48 ≤ 10 63 974
49 12 173 979
50 ≤ 10 61 153
51 9 81 509
52 11 87 416
53 14 184 839
54 33 85 317
55 9 115 7650
56 13 164 6660
57 12 62 196
58 8 173 183
59 12 55 73
60 6 27 65
61 17 51 143
62 13 102 484
63 11 197 465
64 10 51 236
65 ≤ 3 30 114
66 ≤ 8 47 385
67 15 57 107
68 11 111 670
69 9 44 273
70 20 96 1670
71 20 181 n.d.
72 7 84 n.d.
73 ≤ 6 135 542
74 ≤ 10 108 517
75 76 183 n.d.
76 49 175 777
77 ≤ 3 103 600
78 8 161 4230
79 5 70 n.d.
80 11 106 2040
81 ≤ 10 57 143
82 ≤ 3 39 155
83 9 30 27
84 3 69 184
85 4 71 204
86 13 64 179
87 n.d. 159 n.d.
88 ≤ 4 32 142
89 ≤ 7 34 220
90 10 162 n.d.
91 5 30 262
92 29 153 626
93 12 178 n.d.
94 33 197 2260
95 23 181 271
96 32 199 518
97 11 57 193
98 17 104 120
99 10 71 286
100 4 63 106
101 15 149 n.d.
102 11 48 66
103 42 109 417
104 ≤ 5 118 624
105 21 183 248
106 10 81 148
107 7 189 807
108 29 156 692
109 4 42 90
110 n.d. 35 n.d.
111 9 43 100
112 7 41 116
113 4 32 n.d.
114 42 84 356
115 ≤ 3 30 n.d.
116 6 46 n.d.
117 ≤ 4 24 281
118 16 161 1030
119 19 97 292
n.d. = 未確定的
體內 HIF2α 786-O 和 SKRC-01 腫瘤生長模型
動物和維持條件： -     小鼠：
實驗在雌性裸Crl：NU（NCr）-Foxn1nu-純合小鼠（查理斯河（Charles River），德國）中進行。在投與化合物時，動物為6-9週齡。在優化的衛生條件下，將動物圈養在Makrolon III型籠中（每籠最多5隻動物），可以自由獲取食物和水。在實驗開始之前，允許讓它們適應至少6天。 -     大鼠：
實驗在雌性裸Rowett大鼠Hsd：RH-Fox1rnu（哈蘭（Harlan），荷蘭）中進行。在投與化合物時，動物為6-9週齡。在優化的衛生條件下，將動物圈養在Makrolon III型籠中（每籠最多2隻動物），可以自由獲取食物和水。在實驗開始之前，允許讓它們適應至少6天。
基於針對每種化合物確定的藥物動力學譜，選擇用於腫瘤生長模型的齧齒動物物種。
細胞系和細胞培養物： 使SKRC-01細胞在500 ml RPMI1640培養基 + 5 ml L-麩醯胺酸 + 50 ml FCS + 5 ml丙酮酸鈉 + 5 ml HEPES中生長，並在37°C下在5% CO2 濕潤的氣氛下孵育。將細胞用胰蛋白酶-EDTA收穫，重懸於培養基（含添加劑）中，並用Casy®系統計數。最後，將細胞離心並懸浮於冰冷的漢克平衡鹽溶液（Hanks' balanced salt solution）（HBSS）中。細胞培養試劑購自生物概念公司（艾勒史威爾（Allschwil），瑞士）。
體內腫瘤異種移植的建立： 藉由將150 μL HBSS（西格瑪公司 #H8264）: 基質膠（50% : 50%）中的5 x 106 細胞皮下注射到裸小鼠或大鼠的右脅建立SKRC-01腫瘤。對於功效實驗，當小鼠的平均腫瘤體積約為300 mm3 （腫瘤細胞注射後21天）和大鼠的平均腫瘤體積約為350 mm3 （腫瘤細胞注射後21天）時開始治療。
化合物配製和動物治療： 製備化合物A用於以在10%乙醇 + 30% PEG400 + 60%水（含有0.5% MC + 0.5%吐溫80）中的均質懸浮液給藥。每7天一次製備新鮮的懸浮液，並保存在4°C下。以10 mL/kg的體積口服投與化合物A或媒介物。
抗腫瘤活性評價： 用卡尺測量腫瘤體積，並根據公式（長度 x 直徑2 x π⁄6）確定體積。除了呈現腫瘤體積隨著治療進程發生的變化，抗腫瘤活性表示為T/C%（治療的動物腫瘤體積變化的平均值/對照動物腫瘤體積變化的平均值）x 100。根據公式（（治療結束時的平均腫瘤體積 - 治療開始時的平均腫瘤體積）⁄治療開始時的平均腫瘤體積）x 100 計算回歸（%）。一週兩到三次記錄體重和腫瘤體積。
統計分析： 將原發性腫瘤生長和體重的絕對值用於各組之間的統計比較（對正態分佈數據進行單因素方差分析，隨後進行Dunnett或Tukey檢驗；對於非正態分佈數據，進行等級ANOVA；隨後對相同組的大小進行Dunnett檢驗；或對不同組的大小進行Dunn檢驗）。顯著水平設定為p ＜ 0.05。使用SigmaStat進行所有的統計計算。
PD 活性的評估： 對於每個腫瘤樣本，根據製造商的說明（克瓦斯公司（Covaris），沃本，麻塞諸塞州，美國），使用CryoPrep將冷凍的組織粉碎來製備腫瘤粉末。將10 mg腫瘤粉末的等分試樣在乾冰上轉移至預冷的預冷的Eppendorf管中，並在RNeasy微量套組（凱傑公司（Qiagen），#74104或#74106）中提供的700 µL的RLT緩衝液中裂解。
首先使用注射器和20G或21G針手動將裂解物勻漿，然後使用QiaShredder和RNeasy微量方案進行RNA提取（分別為凱傑公司，套組#79656和kit#74104或#74106）。使用NanoDrop分光光度計（拜爾泰克公司（BioTek），ND2000）測量RNA濃度。使用高容量cDNA逆轉錄套組（生命技術公司（Life Technologies），套組#4368813）對1微克RNA進行逆轉錄，並且使用Fast Advanced預混液將14 ng所得cDNA用於單重TaqMan分析，每個反應的最終體積為10 µL。所有反應在ABI 7900HT循環器上在用相應的光學膜（生命技術公司，#4311971）密封的MicroAmp光學384孔反應板（生命技術公司，#4309849）中進行，使用默認循環參數和ROX作為被動參考。
測試了目的基因的引物，人CCND1（整合的DNA技術，# Hs.PT.56a.3857509，探針5' -/56-FAM/TGCCAGGAG/ZEN/CAGATCGAAGCC/3IABkFQ/-3’，引物1：5’-CCAGAGTGATCAAGTGTGACC-3’；引物2：5’-CGCAGGCTTGACTCCAG-3’）和歸一化基因人β-肌動蛋白的引物（ABI，套組#4326315E）的線性範圍和等效的PCR效率，因此驗證了2^(-ΔΔCt)計算方法之用途。
通過手動調整Ct閾值收集數據，並使用2^(-ΔΔCt)方法進行分析。
Ct閾值
CCND1 β-肌動蛋白  
圖9a 0.3188 0.0268  
圖10a 0.0811 0.0312  
圖11a 0.1453 0.0482  
針對每組一式三份，計算平均值和標準差。
計算每個樣本的ΔCt（δ Ct），作為目的基因（CCND1）和參考基因（β-肌動蛋白）的Ct之差。該差的標準差等於各個平均值Ct的平方標準差之和的平方根。
ΔΔCt（δ Ct）係目的樣本（例如：處理樣本）的ΔCt與參考樣本（媒介物處理組）的ΔCt之間的差值。與之前相同，該差的標準差等於各個ΔCt的平方標準差之和的平方根。每個樣本的差異表現以2^(-ΔΔCt)進行計算。
將2^(-ΔΔCt)的誤差計算為範圍，其取決於ΔΔCt項的標準差（2^(x)係嚴格的正增長函數，但是非線性的）。
對於每個目的基因，然後將結果標準化，平均媒介物值設置為1.0。
實例121
在786-O小鼠模型中證實了實施方式31的抗腫瘤活性（圖9a和9b）。將攜帶786-O皮下異種移植的雌性裸小鼠用實例31以30 mg/kg p.o. qd或媒介物對照處理。治療在腫瘤接種後34天開始並持續21天。提供的值為平均值 ± SEM（樣本量為n = 6隻小鼠/組）。第0天的初始腫瘤體積約為260 mm3 。材料與方法
動物和維持條件： -     小鼠：
實驗在雌性裸Crl：NU（NCr）-Foxn1nu-純合小鼠（查理斯河（Charles River），德國）中進行。在投與化合物時，動物為6-9週齡。在優化的衛生條件下，將動物圈養在Makrolon III型籠中（每籠最多5隻動物），可以自由獲取食物和水。在實驗開始之前，允許讓它們適應至少6天。
細胞系和細胞培養物： 使786-O和SKRC-01細胞在500 ml RPMI1640培養基 + 5 ml L-麩醯胺酸 + 50 ml FCS + 5 ml丙酮酸鈉 + 5 ml HEPES中生長，並在37°C下在5% CO2 濕潤的氣氛下孵育。將細胞用胰蛋白酶-EDTA收穫，重懸於培養基（含添加劑）中，並用Casy®系統計數。最後，將細胞離心並懸浮於冰冷的漢克平衡鹽溶液（Hanks' balanced salt solution）（HBSS）中。細胞培養試劑購自生物概念公司（艾勒史威爾（Allschwil），瑞士）。
體內腫瘤異種移植的建立： 786-O藉由將150 μL HBSS（西格瑪公司 #H8264）: 基質膠（50% : 50%）中的5 x 106 細胞皮下注射到裸小鼠或大鼠的右脅建立786-O和SKRC-01腫瘤。對於功效實驗，當平均腫瘤體積約為300 mm3 （腫瘤細胞注射後34至45天）時開始治療。
患者源性 ccRCC 癌症腫瘤體內異種移植的建立： 將來自手術切除的患者腫瘤樣本直接皮下植入裸小鼠，無需進行任何體外操作。在小鼠體內連續傳代至少三次後，視為建立模型。腫瘤異種移植（HKIX1169、HKIX1569、HKIX2207、HKIX2347、HKIX2597、HKIX2967、HKIX3629、HKIX3717、HKIX5510、HKIX5739、28797-HX、28799-HX、28800-HX、28805-HX、28806-HX、28807-HX、28809-HX、28814-HX、28817-HX、28836-HX、28837-HX和29158-HX）藉由來自供體小鼠的基質膠包埋腫瘤片段的右脅s.c.植入，在裸小鼠中皮下生長。對於功效實驗，總是在每組平均腫瘤體積達到200-400 mm3 （細胞接種後約20至85天）時開始治療。
化合物配製和動物治療： 製備(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]（化合物A）用於以10% 乙醇 + 30% PEG400 + 60%水（含有0.5% MC + 0.5%吐溫80）中的均質懸浮液給藥。將依維莫司（RAD001（化合物C））製備為水溶液。每7天一次製備新鮮的懸浮液或溶液，並保存在4°C下。以10 mL/kg的體積口服投與(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]（化合物A）和依維莫司（RAD001（化合物C））或媒介物。HKIX2207和HKIX2967的實驗結果如圖12-14所示。
抗腫瘤活性評價： 用卡尺測量腫瘤體積，並根據公式（長度 x 直徑2 x π⁄6）確定體積。除了呈現腫瘤體積隨著治療進程發生的變化，抗腫瘤活性表示為T/C%（治療的動物腫瘤體積變化的平均值/對照動物腫瘤體積變化的平均值）x 100。根據公式（（治療結束時的平均腫瘤體積 - 治療開始時的平均腫瘤體積）⁄治療開始時的平均腫瘤體積）x 100 計算回歸（%）。一週兩到三次記錄體重和腫瘤體積。
統計分析： 將原發性腫瘤生長的絕對值用於各組之間的統計比較（對正態分佈數據進行單因素方差分析，隨後進行Dunnett或Tukey檢驗；對於非正態分佈數據，進行等級ANOVA；隨後對相同組的大小進行Dunnett檢驗；或對不同組的大小進行Dunn檢驗）。顯著水平設定為p ＜ 0.05。使用GraphPad Prism8進行所有的統計計算。
無
[圖1]：展示了本發明之(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]的形式A之代表性X射線粉末繞射（XRPD）。x軸顯示散射角（以°2-θ），y軸顯示散射的X射線束的強度（以檢測到的光子的計數）。
[圖2]：展示了本發明之(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8’-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]的形式A之代表性差示掃描量熱法曲線（DSC）。x軸顯示溫度（以攝氏度（°C）），y軸顯示隨吸熱峰上升的熱流速（以瓦/克（W/g））。
[圖3]：展示了本發明之(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]的結晶形式A之代表性熱重量分析（TGA）。x軸顯示溫度（以攝氏度（°C）），y軸顯示樣本的品質（損失）（以重量百分比（w-%））。
[圖4]：展示了本發明之(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]的結晶形式A在0至95%相對濕度的範圍內的代表性動態蒸汽吸附（DVS）分析。x軸顯示出在溫度為（25.0 ± 0.1）°C下測量的相對濕度（以百分比（%）），y軸顯示出平衡品質變化（以重量百分比（w-%））。吸附循環用三角形標記，而解吸附循環用正方形標記。該等值顯示為未校正的值。
[圖5]：展示了本發明之(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]延胡索酸鹽的形式A之代表性X射線粉末繞射（XRPD）。x軸顯示散射角（以°2-θ），y軸顯示散射的X射線束的強度（以檢測到的光子的計數）。
[圖6]：展示了本發明之(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8’-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]延胡索酸鹽的形式A之代表性差示掃描量熱法曲線（DSC）。x軸顯示溫度（以攝氏度（°C）），y軸顯示隨吸熱峰上升的熱流速（以瓦/克（W/g））。
[圖7]：展示了本發明之(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]延胡索酸鹽的結晶形式A之代表性熱重量分析（TGA）。x軸顯示溫度（以攝氏度（°C）），y軸顯示樣本的品質（損失）（以重量百分比（w-%））。
[圖8]：展示了本發明之(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]延胡索酸鹽的結晶形式A在0至95%相對濕度的範圍內的代表性動態蒸汽吸附（DVS）分析。x軸顯示出在溫度為（25.0 ± 0.1）°C下測量的相對濕度（以百分比（%）），y軸顯示出平衡品質變化（以重量百分比（w-%））。吸附循環用三角形標記，而解吸附循環用正方形標記。該等值顯示為未校正的值。
[圖9A]：展示了實例31對786-O小鼠模型中腫瘤生長的影響，其中*：p ＜ 0.05對比媒介物對照（秩ANOVA和圖基（Tukey）事後檢驗）。
[圖9B]：展示了實例31對786-O小鼠模型中hCCNDI轉錄水平的影響，其中*：p ＜ 0.05對比媒介物對照（非配對雙尾T檢驗）。
[圖10A]：展示了實例31對SKRC-01小鼠模型中腫瘤生長的影響，其中*：p ＜ 0.05對比媒介物對照（秩ANOVA和圖基（Tukey）事後檢驗）。
[圖10B]：展示了實例31對SKRC-01小鼠模型中hCCNDI轉錄水平的影響，其中*：p ＜ 0.05對比媒介物對照（非配對雙尾T檢驗）。
[圖11A]：展示了實例32對SKRC-01小鼠模型中腫瘤生長的影響，其中*：p ＜ 0.05對比媒介物對照（秩ANOVA和鄧尼特（Dunn）事後檢驗）。
[圖11B]：展示了實例32對SKRC-01小鼠模型中hCCNDI轉錄水平的影響，其中*：p ＜ 0.05對比媒介物對照（秩ANOVA和鄧尼特（Dunn）事後檢驗）。
[圖12]：展示了攜帶HKIX2207皮下異種移植的雌性裸小鼠，該等雌性裸小鼠用化合物A以30 mg/kg p.o. qd或化合物C以2 mg/kg p.o. Qd或其組合或媒介物對照處理。治療在腫瘤接種後25天開始並持續26天。值為平均值 ± SEM；樣本量（n = 5-6隻小鼠/組）。第0天的初始腫瘤體積約為307 mm3 。統計分析的顯著水平設定為p ＜ 0.05對比媒介物對照（秩ANOVA和圖基事後檢驗）和p ＜ 0.05對比最佳單一藥劑（單因素方差分析（圖基檢驗（Tukey's Test）））。
[圖13]：展示了攜帶HKIX2967皮下異種移植的雌性裸小鼠，該等雌性裸小鼠用化合物A以30 mg/kg p.o. qd或化合物C以2 mg/kg p.o. Qd或其組合或媒介物對照處理。治療在腫瘤接種後20天開始並持續35天。值為平均值 ± SEM；樣本量（n = 5-6隻小鼠/組）。第0天的初始腫瘤體積約為283 mm3 。統計分析的顯著水平設定為p ＜ 0.05對比媒介物對照（秩ANOVA和圖基事後檢驗）和p ＜ 0.05對比最佳單一藥劑（單因素方差分析（圖基檢驗））。
[圖14]：展示了攜帶HKIX2967皮下異種移植的雌性裸小鼠，該等雌性裸小鼠用化合物A以30 mg/kg p.o. qd或化合物C以10 mg/kg p.o. Qd或其組合或媒介物對照處理。治療在腫瘤接種後20天開始並持續35天。值為平均值 ± SEM；樣本量（n = 5-6隻小鼠/組）。第0天的初始腫瘤體積約為283 mm3 。統計分析的顯著水平設定為p ＜ 0.05對比媒介物對照（秩ANOVA和圖基事後檢驗）和p ＜ 0.05對比最佳單一藥劑（單因素方差分析（圖基檢驗））。
無
Figure 110115156-A0101-11-0002-3

Claims (35)

  1. 一種具有式 (I) 之化合物
    Figure 03_image001
    (I) 或其藥學上可接受的鹽， 其中 R1 係F、Cl、Br、OCH3 、OCH2 F、OCHF2 、或OCF3 ； R2 係F、Cl、CF3 、或CN； X係(CH2 )1-2 、CHF、CHD、CD2 或CF2 ； Y係(CH2 )0-2 、CHF、CHD、CD2 、O、S、OCH2 或CF2 ； Z係CH2 、CD2 、CHF、CDF、CF2 、CH(OH)、CO、CH(CH3 )、O、或S， 其中，當Y係O、OCH2 、或S時，那麼Z係CH2 ； 其中，當Z係O、S、或NCH3 時，那麼Y係(CH2 )0-2 或CF2 ； 其中，當Z係CH(OH)時，那麼Y係CHF或CF2 ； J係CRJ ； 其中RJ 係H、F、Cl、Br、CH3 、CD3 、CF3 、CHF2 、CDF2 、OCH3 或CN； E係CRE 或N； 其中RE 係H、F、Cl、Br、I、CN、CH3 、CH2 CH3 、CH(CH3 )2 、CD3 、CHD2 、CH2 D、CHF2 、CDF2 、C(CH3 )F2 、C(CD3 )F2 、CF3 、環丙基、OCH3 、OCH2 CH2 OH、OCF3 、SCH3 或SCHF2 ；並且 G係CH或N； 該化合物呈游離形式或藥學上可接受的鹽形式。
  2. 如請求項1所述之具有式 (I) 之化合物或其藥學上可接受的鹽，其中 R1 係F、Cl或OCHF2 ； R2 係CF3 或CN； X係CH2 或CHF； Y係(CH2 )0-2 或CHF； Z係CHF、CDF、CF2 、O、或S； J係CRJ ； 其中RJ 係H、F、Cl、CH3 或CD3 ； E係CRE 或N； 其中RE 係H、F、Br、或CF3 ；並且 G係CH。
  3. 如請求項1所述之具有式 (I) 之化合物或其藥學上可接受的鹽，其中 R1 係OCHF2 ； R2 係CF3 ； X係CH2 或CHF； Y係(CH2 )0-2 ； Z係CF2 或O； J係CRJ ； 其中RJ 係H、F、Cl、CH3 或CD3 ； E係CRE 或N； 其中RE 係H、F、Br、或CF3 ；並且 G係CH。
  4. 如請求項1至3中任一項所述之具有式 (I) 之化合物或其藥學上可接受的鹽，其中如式 (Ia) 所示定義立體化學
    Figure 03_image733
    (Ia)。
  5. 如請求項1至3中任一項所述之具有式 (I) 之化合物或其藥學上可接受的鹽，其中如式 (Ib) 所示定義立體化學
    Figure 03_image014
    (Ib)。
  6. 如請求項5中所述之具有式 (I) 之化合物或其藥學上可接受的鹽， 其中 X係CH2 或CHF； Y係(CH2 )0-2 ； Z係O、S或CF2 ； E係CRE 或N； 其中RE 係H、F、Br、或CF3 ；並且 J係CRJ ； 其中RJ 係H、F、Cl、CH3 或CD3 。
  7. 如請求項1所述之具有式 (I) 之化合物或其藥學上可接受的鹽，該化合物選自由以下組成之群組： (S )-5'-溴-8-(二氟甲氧基)-4'-氟-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-茚]； (S )-8-(二氟甲氧基)-4',5'-二氟-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-茚]； (S )-8'-(二氟甲氧基)-3,6'-雙(三氟甲基)-5,6-二氫-3'H -螺[環戊并[c ]吡啶-7,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-5'-溴-8-(二氟甲氧基)-4'-氟-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-茚]-6-甲腈； (S )-5'-溴-4'-氟-8-(氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-茚]； (S )-8-(二氟甲氧基)-5',6-雙(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-茚]； (S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]； (S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-6-(三氟甲基)-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'(3'H )-酮； (1'S ,3'R )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-3',5'-二氟-6-(三氟甲基)-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'(3'H )-酮； (1'S ,3'R ,4'S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-3',5'-二氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'-醇； (S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]； (S )-8-(二氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]； (S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6-甲腈； (S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-4',4',5'-三氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]； (S )-8-(二氟甲氧基)-4',4',5'-三氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6'-甲腈； (S )-6'-溴-8-氯-5'-氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]； (S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-3',3',5'-三氟-6-(三氟甲基)-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'(3'H )-酮； (1'S ,4'S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-3',3',5'-三氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'-醇； (1'S ,4'R )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-3',3',5'-三氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'-醇； (1'S ,3'R )-8-(二氟甲氧基)-3',5'-二氟-6-(三氟甲基)-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'(3'H )-酮； (1'S ,3'R )-8-(二氟甲氧基)-3',5'-二氟-6-(三氟甲基)-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'(3'H )-酮； (S )-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6'-甲腈； (S )-8-(二氟甲氧基)-4',4',5'-三氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]； (2S,4'S)-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-4',5'-二氟-3',4'-二氫-2'H,3H-螺[咪唑并[1,2-a]吡啶-2,1'-萘]-6-甲腈； (1'S,4'S)-8-(二氟甲氧基)-4',5'-二氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H,3H-螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6'-甲腈； (S )-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6-甲腈；d 2 -(S )-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6-甲腈； (S )-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]； (S )-5',6',8-三氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]； (S )-1'-氯-8',8'-二氟-8-甲氧基-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]； (S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]； (S)-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-1'-甲基-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H,6'H-螺[咪唑并[1,2-a]吡啶-2,5'-異喹啉]； (S)-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-1'-(甲基-d3)-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H,6'H-螺[咪唑并[1,2-a]吡啶-2,5'-異喹啉]； (S )-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-1'-甲氧基-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]； (S )-8-(二氟甲氧基)-6'-氟-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6-甲腈； (S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]； (S )-3'-氯-8-(二氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-6',7'-二氫-3H ,5'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,8'-異喹啉]； (S )-8-(二氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6'-甲腈； (S )-7-溴-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-6',7-雙(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-7-氯-8'-(二氟甲氧基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-7-溴-8-氟-8'-(氟甲氧基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-7-氯-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-8'-(二氟甲氧基)-6',7-雙(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-8'-(二氟甲氧基)-7,8-二氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-7-甲基-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-8-氯-8'-(二氟甲氧基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-7-溴-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]-6'-甲腈； (S )-7-溴-8'-(二氟甲氧基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-7-碘-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]-6'-甲腈； (S )-7-溴-6'-氯-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-8'-氯-6',7-雙(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-7,8'-雙(二氟甲氧基)-8-氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-8'-(二氟甲氧基)-8-(二氟甲基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-8'-氯-8-(二氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-哌喃并[2,3-c ]吡啶]； (2'S ,3R )-7-溴-8'-(二氟甲氧基)-3,8-二氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (2'S ,3S )-7-溴-8'-(二氟甲氧基)-3,8-二氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (2'S ,3R )-7-溴-8'-(二氟甲氧基)-3-氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (2'S ,3R )-8'-(二氟甲氧基)-3-氟-7-碘-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (2'S ,3R )-8'-(二氟甲氧基)-3-氟-6',7-雙(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (2'S ,3R )-8'-(二氟甲氧基)-3,8-二氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-8-(二氟甲氧基)-8'-氟-6-(三氟甲基)-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-異口克唍]； (S )-7'-氯-8-(二氟甲氧基)-8'-氟-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-硫代口克唍]-6-甲腈； (S )-8-(二氟甲氧基)-8'-氟-6-(三氟甲基)-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-硫代口克唍]； (S )-8-(二氟甲氧基)-8'-氟-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-硫代口克唍]-6-甲腈； (S )-8-(二氟甲氧基)-8'-氟-6,7'-雙(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-硫代哌喃并[3,2-c ]吡啶]； (S )-8-(二氟甲氧基)-8'-氟-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-異硫代口克唍]-6-甲腈； (S )-8'-(二氟甲氧基)-9-氟-6'-(三氟甲基)-3,4-二氫-2H ,3'H -螺[苯并[b ]㗁呯-5,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-8-(二氟甲氧基)-1'-(二氟甲基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]； (S )-5'-溴-4',8-二氯-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-茚]； (S )-5'-溴-8-(二氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-茚]； (S )-8-(二氟甲氧基)-5'-碘-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-茚]-6-甲腈； (S )-8-(二氟甲氧基)-4'-氟-5',6-雙(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H-螺[咪唑并[1,2-a]吡啶-2,1'-茚]； (S )-8-(二氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H-螺[咪唑并[1,2-a]吡啶-2,1'-茚]； (S )-5',8-二氟-6'-甲氧基-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]； (S )-8-氟-6,6'-雙(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]；外消旋 -5',6',8-三氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]； (S )-8-氯-5'-氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]； (S )-6'-溴-5'-氟-8-甲氧基-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]；外消旋 -5'-溴-8-(二氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]； (S )-5'-氯-8-(二氟甲氧基)-6'-氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]； (2S ,3'R ,4'R )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-3',4',5'-三氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]； (S )-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-6'-甲氧基-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]； (S )-8-(二氟甲氧基)-5',6'-二氟-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]； (S )-8-(二氟甲氧基)-6,6'-雙(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]；外消旋 -8-(二氟甲氧基)-5',6-雙(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H,3H-螺[咪唑并[1,2-a]吡啶-2,1'-萘]； (S )-5'-氯-8-(二氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]； (S )-6'-溴-6-氯-8-(二氟甲氧基)-5'-氟-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]； (S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H ,4'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-4'-酮； (S )-8-(二氟甲氧基)-5',6'-二氟-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6-甲腈； (S )-6'-溴-8-(二氟甲氧基)-4',4',5'-三氟-3',4'-二氫-2'H ,3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,1'-萘]-6-甲腈；外消旋 -8-(二氟甲氧基)-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]； (S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]-6-甲腈； (S )-8-氯-8'-(氟甲氧基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-8-氯-8'-(二氟甲氧基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]-7-甲腈； (3R ,4S )-7-氯-8'-(二氟甲氧基)-3,8-二氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (3R ,4S )-8'-(二氟甲氧基)-3,7,8-三氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-7-(甲硫基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-7-溴-8-氯-8'-(二氟甲氧基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]；外消旋 -8'-(二氟甲氧基)-3,8-二氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-7,8-二溴-8'-(二氟甲氧基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-7-甲氧基-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-8'-(二氟甲氧基)-6',8-雙(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-7-(三氟甲氧基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-8'-(二氟甲氧基)-7-((二氟甲基)硫代)-8-氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-8-溴-8'-(二氟甲氧基)-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]；外消旋 -8-(二氟甲氧基)-8'-氟-6,7'-雙(三氟甲基)-3H-螺[咪唑并[1,2-a]吡啶-2,4'-異口克唍]； (2S)-8-(二氟甲氧基)-8'-氟-3H-螺[咪唑并[1,2-a]吡啶-2,4'-硫代口克唍]-6-甲腈-2',2',3'-d3； (S )-7'-溴-8-(二氟甲氧基)-8'-氟-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-硫代口克唍]-6-甲腈； (S )-8-(二氟甲氧基)-8'-氟-6-(三氟甲基)-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-硫代口克唍]-7'-甲腈； (S )-8-(二氟甲氧基)-7',8'-二氟-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-硫代口克唍]-6-甲腈； (S )-8-(二氟甲氧基)-7',8'-二氟-6-(三氟甲基)-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-硫代口克唍]； (S )-8'-氟-8-(氟甲氧基)-6,7'-雙(三氟甲基)-2',3'-二氫-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-硫代哌喃并[3,2-c ]吡啶]； (S )-8-(二氟甲氧基)-8'-氟-6-(三氟甲基)-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-異硫代口克唍]； (S )-8-(二氟甲氧基)-7'-氟-6-(三氟甲基)-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-異硫代口克唍]； (S )-8'-(二氟甲氧基)-8,9-二氟-6'-(三氟甲基)-3,4-二氫-2H ,3'H -螺[苯并[b ]㗁呯-5,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]；外消旋 -9-氯-8'-(二氟甲氧基)-6'-(三氟甲基)-3,4-二氫-2H ,3'H -螺[苯并[b ]㗁呯-5,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]；以及 (S )-8-氯-8'-(二氟甲氧基)-9-氟-6'-(三氟甲基)-3,4-二氫-1H ,3'H -螺[苯并[c ]㗁呯-5,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]。
  8. 如請求項1所述之具有式 (I) 之化合物或其藥學上可接受的鹽，該化合物選自由以下組成之群組： (S )-8-(二氟甲氧基)-8'-氟-3H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,4'-硫代口克唍]-6-甲腈； (S )-8'-(二氟甲氧基)-9-氟-6'-(三氟甲基)-3,4-二氫-2H ,3'H -螺[苯并[b ]㗁呯-5,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-8'-(二氟甲氧基)-6',7-雙(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-7-溴-8'-(二氟甲氧基)-8-氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (2'S ,3R )-8'-(二氟甲氧基)-3,8-二氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-8'-(二氟甲氧基)-7,8-二氟-6'-(三氟甲基)-3'H -螺[口克唍-4,2'-咪唑并[1,2-a ]吡啶]； (S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]； (S )-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-1'-(甲基-d 3 )-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]；以及 (S )-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-1'-甲基-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]。
  9. 一種化合物或其藥學上可接受的鹽，該化合物選自由以下組成之群組：
    Figure 03_image736
    。
  10. 如請求項9所述之化合物或其藥學上可接受的鹽，該化合物係：
    Figure 03_image018
    。
  11. 一種藥物組成物，該藥物組成物包含治療有效量的如請求項1至10中任一項所述之化合物或其藥學上可接受的鹽、以及一或多種藥學上可接受的載體。
  12. 一種組合，該組合包含治療有效量的如請求項1至10中任一項所述之化合物或其藥學上可接受的鹽或如請求項11所述之藥物組成物、以及一種或多種治療活性劑。
  13. 如請求項12所述之組合，其中所述治療劑選自mTOR抑制劑，該mTOR抑制劑選自：西羅莫司；地磷莫司；依維莫司（RAD001）；雷帕黴素；塞馬莫德；(5-{2,4-雙[(3S )-3-甲基𠰌啉-4-基]吡啶并[2,3-d ]嘧啶-7-基}-2-甲氧基苯基)甲醇（AZD8055）；2-胺基-8-[反式 -4-(2-羥基乙氧基)環己基]-6-(6-甲氧基-3-吡啶基)-4-甲基-吡啶并[2,3-d ]嘧啶-7(8H )-酮；N 2 -[1,4-二側氧基-4-[[4-(4-側氧基-8-苯基-4H -1-苯并哌喃-2-基)𠰌啉鎓-4-基]甲氧基]丁基]-L-精胺醯甘胺醯-L-α-天冬胺醯L-絲胺酸-；N-[4-[[[3-[(3,5-二甲氧基苯基)胺基]-2-喹㗁啉基]胺基]磺醯基]苯基]-3-甲氧基-4-甲基-苯甲醯胺；或(1r,4r)-4-(4-胺基-5-(7-甲氧基-1H-吲哚-2-基)咪唑并[1,5-f][1,2,4]三𠯤-7-基)環己烷甲酸。
  14. 如請求項13所述之組合，其中所述mTOR抑制劑係依維莫司。
  15. 如請求項1至10中任一項所述之化合物或其藥學上可接受的鹽在製造藥物中之用途，該藥物用於受試者中調節HIF2α活性的治療。
  16. 如請求項1至10中任一項所述之化合物或其藥學上可接受的鹽在製造藥物中之用途，該藥物用於治療作為癌症的障礙或疾病。
  17. 如請求項16所述之用途，其中該癌症選自：腎上腺皮質癌、乳癌、透明細胞腎細胞癌（ccRCC）、結直腸癌、生殖細胞腫瘤、多形性成膠質細胞瘤（GBM）、膠質瘤、頭頸癌、肝細胞癌、腎癌、肺癌、惡性膠質瘤、眼癌、胰腺癌、副神經節瘤、嗜鉻細胞瘤、前列腺癌、和腎細胞癌。
  18. 如請求項1至10中任一項所述之化合物或其藥學上可接受的鹽在製造藥物中之用途，該藥物用於治療作為癌症的障礙或疾病。
  19. 如請求項1至10中任一項所述之化合物或其藥學上可接受的鹽在製造用於治療障礙或疾病的藥物中之用途，該障礙或疾病選自：腎上腺皮質癌、乳癌、透明細胞腎細胞癌（ccRCC）、結直腸癌、生殖細胞腫瘤、多形性成膠質細胞瘤（GBM）、膠質瘤、頭頸癌、肝細胞癌、腎癌、肺癌、惡性膠質瘤、眼癌、胰腺癌、副神經節瘤、嗜鉻細胞瘤、前列腺癌、和腎細胞癌。
  20. 如請求項1至10中任一項所述之化合物或其藥學上可接受的鹽在製造藥物中之用途。
  21. 如請求項1至10中任一項所述之化合物或其藥學上可接受的鹽在製造用於治療癌症的藥物中之用途。
  22. 如請求項1至10中任一項所述之化合物或其藥學上可接受的鹽在製造用於治療障礙或疾病的藥物中之用途，該障礙或疾病選自：腎上腺皮質癌、乳癌、透明細胞腎細胞癌（ccRCC）、結直腸癌、生殖細胞腫瘤、多形性成膠質細胞瘤（GBM）、膠質瘤、頭頸癌、肝細胞癌、腎癌、肺癌、惡性膠質瘤、眼癌、胰臟癌、副神經節瘤、嗜鉻細胞瘤、前列腺癌、和腎細胞癌。
  23. 一種(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]延胡索酸鹽的結晶形式，其特徵在於當在20°C至30°C範圍內的溫度、用具有0.15406 nm的波長的Cu-Kα1,2輻射測量時，具有粉末X射線繞射圖，該粉末X射線繞射圖包含在2-θ角為（24.9 ± 0.2）°、（6.2 ± 0.2）°和（20.9 ± 0.2）°處的反射。
  24. 一種(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]延胡索酸鹽的結晶形式，其特徵在於當在20°C至30°C範圍內的溫度、用具有0.15406 nm的波長的Cu-Kα1,2輻射測量時，具有粉末X射線繞射圖，該粉末X射線繞射圖包含在2-θ角為（24.9 ± 0.2）°、（6.2 ± 0.2）°、（20.9 ± 0.2）°、（10.9 ± 0.2）°和（18.5 ± 0.2）°處的反射。
  25. 一種(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]延胡索酸鹽的結晶形式，其特徵在於當在20°C至30°C範圍內的溫度、用具有0.15406 nm的波長的Cu-Kα1,2輻射測量時，具有粉末X射線繞射圖，該粉末X射線繞射圖包含在2-θ角為（24.9 ± 0.2）°、（6.2 ± 0.2）°、（20.9 ± 0.2）°、（10.9 ± 0.2）°、（18.5 ± 0.2）°、（22.8 ± 0.2）°、（12.9 ± 0.2）°和（16.1 ± 0.2）°處的反射。
  26. 如請求項23至25中任一項所述之結晶形式，該結晶形式特徵在於當以10 K/min的速率從10°C加熱到250°C時，具有熱重量分析曲線，該熱重量分析曲線顯示出基於該結晶形式的重量不超過0.4重量%的品質損失。
  27. 一種(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]游離形式的結晶形式,其特徵在於當在20°C至30°C範圍內的溫度、用具有0.15406 nm的波長的Cu-Kα1,2輻射測量時，具有粉末X射線繞射圖，該粉末X射線繞射圖包含在2-θ角為（9.7 ± 0.2）°、（18.4 ± 0.2）°和（19.4 ± 0.2）°處的反射。
  28. 一種(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]游離形式的結晶形式，其特徵在於當在20°C至30°C範圍內的溫度、用具有0.15406 nm的波長的Cu-Kα1,2輻射測量時，具有粉末X射線繞射圖，該粉末X射線繞射圖包含在2-θ角為（9.7 ± 0.2）°、（18.4 ± 0.2）°、（19.4 ± 0.2）°、（13.4 ± 0.2）°和（20.7 ± 0.2）°處的反射。
  29. 一種(S )-1'-氯-8-(二氟甲氧基)-8',8'-二氟-6-(三氟甲基)-7',8'-二氫-3H ,6'H -螺[咪唑并[1,2-a ]吡啶-2,5'-異喹啉]游離形式的結晶形式，其特徵在於當在20°C至30°C範圍內的溫度、用具有0.15406 nm的波長的Cu-Kα1,2輻射測量時，具有粉末X射線繞射圖，該粉末X射線繞射圖包含在2-θ角為（9.7 ± 0.2）°、（18.4 ± 0.2）°、（19.4 ± 0.2）°、（13.4 ± 0.2）°、（20.7 ± 0.2）°、（24.2 ± 0.2）°、（22.1 ± 0.2）°和（10.3 ± 0.2）°處的反射。
  30. 如請求項27至29中任一項所述之結晶形式，該結晶形式特徵在於當以10 K/min的速率從10°C加熱到250°C時，具有熱重量分析曲線，該熱重量分析曲線顯示出基於該結晶形式的重量不超過0.2重量%的品質損失。
  31. 如請求項23至30中任一項所述之結晶形式在製造藥物中之用途。
  32. 如請求項23至30中任一項所述之結晶形式在製造藥物中之用途，該藥物用於治療作為癌症的障礙或疾病。
  33. 如請求項23至30中任一項所述之結晶形式在製造用於治療障礙或疾病的藥物中之用途，該障礙或疾病選自：腎上腺皮質癌、乳癌、透明細胞腎細胞癌（ccRCC）、結直腸癌、生殖細胞腫瘤、多形性成膠質細胞瘤（GBM）、膠質瘤、頭頸癌、肝細胞癌、腎癌、肺癌、惡性膠質瘤、眼癌、胰腺癌、副神經節瘤、嗜鉻細胞瘤、前列腺癌、和腎細胞癌。
  34. 一種用於產生具有式 (I) 之化合物
    Figure 03_image001
    (I) 或其藥學上可接受的鹽之方法， 該方法包括以下步驟：視需要在鹼的存在下，使具有式 (IV) 之化合物、
    Figure 03_image005
    或其鹽、溶劑化物、立體異構物、複合物、共晶體、酯、或㗁唑啉， 和具有式 (II) 之化合物、
    Figure 03_image007
    或其鹽、溶劑化物、立體異構物、複合物、共晶體、酯、或㗁唑啉， 與具有式 (III) 之化合物
    Figure 03_image009
    或其鹽、溶劑化物、立體異構物、複合物、共晶體、酯、或㗁唑啉反應， 其中 R1 係F、Cl、Br、OCH3 、OCH2 F、OCHF2 、或OCF3 ； R2 係F、Cl、CF3 、或CN； X係(CH2 )1-2 、CHF、CHD、CD2 或CF2 ； Y係(CH2 )0-2 、CHF、CHD、CD2 、O、S、OCH2 或CF2 ； Z係CH2 、CD2 、CHF、CDF、CF2 、CH(OH)、CO、CH(CH3 )、O、或S， 其中，當Y係O、OCH2 、或S時，那麼Z係CH2 ； 其中，當Z係O、S、或NCH3 時，那麼Y係(CH2 )0-2 或CF2 ； 其中，當Z係CH(OH)時，那麼Y係CHF或CF2 ； J係CRJ ； 其中RJ 係H、F、Cl、Br、CH3 、CD3 、CF3 、CHF2 、CDF2 、OCH3或CN； E係CRE 或N； 其中RE 係H、F、Cl、Br、I、CN、CH3 、CH2 CH3 、CH(CH3 )2 、CD3 、CHD2 、CH2 D、CHF2 、CDF2 、C(CH3 )F2 、C(CD3 )F2、CF3 、環丙基、OCH3 、OCH2 CH2 OH、OCF3 、SCH3 、SCHF2 ， G係CH或N；並且 LG係選自F、Cl、或Br的離去基團； 該鹼選自K2 CO3 或Et3 N， 以獲得具有式 (1) 之化合物或其藥學上可接受的鹽。
  35. 如請求項34所述之方法，其中在選自吡啶或Et3 N的鹼的存在下，將具有式 (II) 之化合物用試劑環化，該試劑選自甲苯中的SOCl2 、甲苯磺醯氯、或甲磺醯氯，以給出具有式 (I) 之化合物。
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