TW202204336A

TW202204336A - 標靶tem-1之放射免疫結合物及其用途

Info

Publication number: TW202204336A
Application number: TW110112424A
Authority: TW
Inventors: 約翰Ｒ福伯斯; 芮恩Ｗ席姆斯; 艾瑞克Ｓ布瑞科
Original assignee: 加拿大商融合製藥公司
Priority date: 2020-04-06
Filing date: 2021-04-06
Publication date: 2022-02-01
Also published as: WO2021207086A1; AR122411A1

Abstract

本發明係關於放射免疫結合物，其包含螯合部分或其金屬錯合物、連接子及TEM-1標靶部分。此類放射免疫結合物之醫藥組合物及使用此類醫藥組合物治療病狀(例如癌症)之方法。

Description

標靶TEM-1之放射免疫結合物及其用途

TEM-1 (腫瘤上皮標記物-1) (亦稱為內皮唾液酸蛋白或CD248)已識別為癌症治療劑之標靶，此係由於其跨許多人類腫瘤之基質表現且因為其在正常組織中表現低或不存在。迄今為止，僅少數的使用TEM-1作為靶標之治療劑正在開發中。例如，正在研究歐土希珠單抗(ontuxizumab) (MORAb-004，Morphotek) (一種TEM-1單株抗體)作為多種癌症之治療劑。此等治療劑試圖憑藉因抗體直接結合至癌細胞所致之直接介導細胞殺死來治療癌症。

已追求放射療法作為癌症之治療多年，遠長於免疫療法。儘管利用一些放射治療劑看到腫瘤體積之極佳減小，但放射療法之臨床使用受到健康組織附近或健康組織中因有害輻射所引起之毒性的限制，將該等健康組織暴露於輻射，該輻射一般持續直至最終放射性核種衰變。由於健康組織上之此等「脫靶」效應所致之，可能需要減少劑量，從而降低功效；否則，嚴重副作用(包括永久性器官或組織損傷)係臨床風險。

因此，仍需要改良之治療劑(例如，癌症治療劑)。使放射治療劑臨床上有效之對放射治療劑之改良(例如，對癌性組織相對於健康組織之極佳特異性與可耐受之副作用組合)將為癌症療法中之重大進步。

本發明包括針對表現TEM-1之癌細胞之有效療法之發現。本發明採用標靶TEM-1 (例如，人類TEM-1)之放射免疫結合物之投與。令人意外地，本發明之放射免疫結合物展現戲劇且特異性TEM-1腫瘤殺死且還證實更低而非更高之脫靶效應。此似乎是高功效及降低之毒性之矛盾組合。針對TEM-1腫瘤之該治療效應係意外的，相對於a)單獨TEM-1抗體或b)採用相對於本發明之彼等的替代結構組合之放射治療劑。其為以下之組合：由本發明之結構組合所提供的放射免疫結合物之針對表現TEM-1之腫瘤細胞之特異性及改良之排泄，其允許對治療與TEM-1相關聯之癌細胞為獨特有效的治療劑。本質上，由於本發明之放射免疫結合物所致之駐留於所治療個體的健康組織中之減低之總輻射會降低有害「脫靶」效應但亦允許遞送高程度之治療劑功效的用劑程度。由於抗腫瘤功效及不存在顯著副作用之戲劇組合所致之，本發明提供用於治療TEM-1相關聯癌症之無與倫比的治療劑。

在一個態樣中，提供包含以下結構之放射免疫結合物： A-L-B (式I-a) 或其醫藥上可接受之鹽，其中：A為螯合部分或其金屬錯合物；B為TEM-1標靶部分；及L為連接子。

在一些實施例中，螯合部分係選自由以下組成之群：DOTA、DOTMA、DOTAM、DOTPA、DO3AM-乙酸、DOTA-GA酸酐、DOTP、DOTMP、DOTA-4AMP、CB-TE2A、NOTA、NOTP、TETPA、TETA、HEHA、PEPA、H₄ octapa、H₂ dedpa、H₆ phospa、TTHA、DO2P、HP-DO3A、EDTA、去鐵胺(Deferoxamine)、DTPA、DTPA-BMA、八齒-HOPO及卟啉。在一些實施例中，A為螯合部分之金屬錯合物。在一些此類實施例中，金屬錯合物包含放射性核種。在一些實施例中，放射性核種為α發射體，例如選自由砈-211 (²¹¹ At)、鉍-212 (²¹² Bi)、鉍-213 (²¹³ Bi)、錒-225 (²²⁵ Ac)、鐳-223 (²²³ Ra)、鉛-212 (²¹² Pb)、釷-227 (²²⁷ Th)及鋱-149 (¹⁴⁹ Tb)或其次級粒子組成之群之α發射體。在一些實施例中，放射性核種為²²⁵ Ac或其次級粒子。

在一些實施例中，L具有結構-L¹ -(L² )_n -，如式I-b內所示： A-L¹ -(L² )_n -B (式I-b) 其中： A為螯合部分或其金屬錯合物；B為TEM-1標靶部分； L¹ 為鍵、視需要經取代之C₁ -C₆ 烷基、視需要經取代之C₁ -C₆ 雜烷基或視需要經取代之芳基或雜芳基； n為介於1與5 (含)之間的整數；及各L² 獨立地具有結構： -X¹ -L³ -Z¹ - (式III) 其中： X¹ 為C=O(NR¹ )、C=S(NR¹ )、OC=O(NR¹ )、NR¹ C=O(O)、NR¹ C=O(NR¹ )、-CH₂ PhC=O(NR¹ )、-CH₂ Ph(NH)C=S(NR¹ )、O或NR¹ ；且各R¹ 獨立地為H、視需要經取代之C₁ -C₆ 烷基、視需要經取代之C₁ -C₆ 雜烷基或視需要經取代之芳基或雜芳基，其中C₁ -C₆ 烷基可經側氧基(=O)、雜芳基或其組合取代； L³ 為視需要經取代之C₁ -C₅₀ 烷基或視需要經取代之C₁ -C₅₀ 雜烷基；且Z¹ 為CH₂ 、C=O、C=S、OC=O、NR¹ C=O或NR¹ ，其中R¹ 為氫或視需要經取代之C₁ -C₆ 烷基或吡咯啶-2,5-二酮。

在一些實施例中，L³ 為C₅ -C₂₀ 聚乙二醇。在一些實施例中，L³ 為(CH₂ CH₂ O)_m (CH₂ )_w ，且m及w獨立地為介於0與10 (含)之間的整數。

在一些實施例中，放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽包含以下結構：

，其中B為TEM-1標靶部分。

在一些實施例中，L具有結構-L¹ -(L² )_n -，如式I-b內所示： A-L¹ -(L² )_n -B (式I-b) 其中： A為DOTA或其金屬錯合物； B為TEM-1標靶部分； L¹ 為鍵或C₁ -C₆ 烷基； n為1；且 L² 具有結構： -X¹ -L³ -Z¹ - (式III) 其中： X¹ 為C=O(NR¹ )，且R¹ 為H或C₁ -C₆ 烷基； L³ 為(CH₂ CH₂ O)_m (CH₂ )_w ，且m及w獨立地為介於0與10 (含)之間的整數；及 Z¹ 為C=O。

在一些實施例中，TEM-1標靶部分為至少100 kDa大小，例如至少150 kDa大小、至少200 kDa大小、至少250 kDa大小、或至少300 kDa大小。

在一些實施例中，TEM-1標靶部分能夠結合至人類TEM-1。

在一些實施例中，TEM-1標靶部分包含抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段係經人源化的。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段能夠結合包含SRDHQIPVIAAN (SEQ ID NO: 2)之胺基酸序列之抗原決定基。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含至少一個互補決定區(CDR)，其係選自由以下組成之群： CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 3或4之胺基酸序列、或與SEQ ID NO: 3或4在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列；或 CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含至少兩個CDR，其係選自由以下組成之群： CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 3或4之胺基酸序列、或與SEQ ID NO: 3或4在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列；或 CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含至少三個CDR，其係選自由以下組成之群： CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 3或4之胺基酸序列、或與SEQ ID NO: 3或4在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列；或 CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含至少四個CDR，其係選自由以下組成之群： CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 3或4之胺基酸序列、或與SEQ ID NO: 3或4在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列；或 CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含至少五個CDR，其係選自由以下組成之群： CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 3或4之胺基酸序列、或與SEQ ID NO: 3或4在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列；或 CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含： CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 3或4之胺基酸序列、或與SEQ ID NO: 3或4在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列；或 CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含： (i) 重鏈可變域，其包含至少一個CDR，其係選自由以下組成之群： CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 3或4之胺基酸序列、或與SEQ ID NO: 3或4在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列；及 (ii) 輕鏈可變域，其包含至少一個CDR，其係選自由以下組成之群： CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列；及 CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含： (i) 重鏈可變域，其包含至少一個CDR，其係選自由以下組成之群： CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 3或4之胺基酸序列； CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列； CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列；及 (ii) 輕鏈可變域，其包含至少一個CDR，其係選自由以下組成之群： CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列； CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列；及 CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含： (i) 重鏈可變域，其包含至少兩個CDR，其係選自由以下組成之群： CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 3或4之胺基酸序列、或與SEQ ID NO: 3或4在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列；及 (ii) 輕鏈可變域，其包含至少兩個CDR，其係選自由以下組成之群： CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列；及 CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含： (i) 重鏈可變域，其包含至少兩個CDR，其係選自由以下組成之群： CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 3或4之胺基酸序列； CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列； CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列；及 (ii) 輕鏈可變域，其包含至少兩個CDR，其係選自由以下組成之群： CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列。 CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列；及 CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含： (i) 重鏈可變域，其包含： CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 3或4之胺基酸序列、或與SEQ ID NO: 3或4在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列；及 (ii) 輕鏈可變域，其包含： CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列；及 CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含 (i) 重鏈可變域，其包含： CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 3或4之胺基酸序列； CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列； CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列；及 (ii) 輕鏈可變域，其包含： CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列； CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列；及 CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含： (i) 重鏈可變域，其具有與SEQ ID NO: 16之胺基酸序列具有至少85%同一性之胺基酸序列；及 (ii) 輕鏈可變域，其具有與SEQ ID NO: 21之胺基酸序列具有至少85%同一性之胺基酸序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含： (i) 重鏈可變域，其具有與SEQ ID NO: 16之胺基酸序列具有至少90%同一性之胺基酸序列；及 (ii) 輕鏈可變域，其具有與SEQ ID NO: 21之胺基酸序列具有至少90%同一性之胺基酸序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含： (i) 重鏈可變域，其具有與SEQ ID NO: 16之胺基酸序列具有至少95%同一性之胺基酸序列；及 (ii)輕鏈可變域，其具有與SEQ ID NO: 21之胺基酸序列具有至少95%同一性之胺基酸序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含： (i) 重鏈可變域，其包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列；及 (ii) 輕鏈可變域，其包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列。

在一些實施例中，抗體為hMP-E-8.3。

在一些實施例中，在對哺乳動物投與放射免疫結合物或其組合之後，藉由腸途徑、腎途徑或兩種途徑所排泄之輻射之比例比由已投與參考放射免疫結合物的可比較哺乳動物藉由相同途徑所排泄的輻射之比例高至少2倍。

在一些實施例中，在對哺乳動物投與放射免疫結合物或其組合之後，藉由腸途徑、腎途徑或兩種途徑所排泄之輻射之比例比由已投與參考放射免疫結合物的可比較哺乳動物藉由相同途徑所排泄的輻射之比例高至少3倍。

在一些實施例中，A-L-為選自由以下組成之群之部分之金屬錯合物： (i)

( 部分 1) (ii)

( 部分 2) (iii)

( 部分 3) ；及 (iv)

( 部分 4) 。

在一些實施例中，A-L-為部分1之金屬錯合物：

。( 部分 1)

在一些實施例中，A-L-為部分1之金屬錯合物：

，( 部分 1) 其中該金屬錯合物包含放射性核種，諸如α發射體(例如砈-211 (²¹¹ At)、鉍-212 (²¹² Bi)、鉍-213 (²¹³ Bi)、錒-225 (²²⁵ Ac)、鐳-223 (²²³ Ra)、鉛-212 (²¹² Pb)、釷-227 (²²⁷ Th)及鋱-149 (¹⁴⁹ Tb)或其次級粒子)。在一些實施例中，TEM-1標靶部分包含抗體或其抗原結合片段(例如人源化抗體或其抗原結合片段)。

在一些實施例中，A-L-為部分1之金屬錯合物：

，( 部分 1) 其中該金屬錯合物包含²²⁵ Ac或其次級粒子，且該TEM-1標靶部分為hMP-E-8.3或其抗原結合片段。在一些實施例中，TEM-1標靶部分為抗體或其抗原結合片段，其包含(i)重鏈可變域，其包含：CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 3或4之胺基酸序列；CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列；及CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列；及(ii)輕鏈可變域，其包含：CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列；CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列；及CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列。

在一些實施例中，A-L-為部分1之金屬錯合物：

，( 部分 1) 其中該金屬錯合物包含²²⁵ Ac或其次級粒子，且該TEM-1標靶部分為hMP-E-8.3或其抗原結合片段。在一些實施例中，TEM-1標靶部分為hMP-E-8.3。

，其中

為hMP-E-8.3。

在另一個態樣中，提供醫藥組合物，其包含如本文所述的放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽及醫藥上可接受之載劑。

在另一個態樣中，提供治療癌症之方法，該方法包括對有需要之個體投與包含有效量之如本文所述的放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽之醫藥組合物。

在一些實施例中，個體為哺乳動物，例如人類。

在一些實施例中，癌症相關聯腫瘤基質細胞表現TEM-1。

在一些實施例中，癌症包括表現TEM-1之細胞。

在一些實施例中，癌症為實體腫瘤癌。例如，實體腫瘤癌可為肉瘤，例如該肉瘤係選自由血管肉瘤或血管內皮瘤、星形細胞瘤、軟骨肉瘤、尤因氏肉瘤(Ewing’s sarcoma)、纖維肉瘤、膠質瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、惡性纖維組織細胞瘤(MFH)、間葉瘤(mesenchymous)或混合中胚層腫瘤、間皮肉瘤或間皮瘤、黏液肉瘤、骨肉瘤、橫紋肌肉瘤及滑膜肉瘤組成之群。在一些實施例中，肉瘤為骨肉瘤。在一些實施例中，肉瘤為尤因氏肉瘤。

在一些實施例中，實體腫瘤癌為癌，例如該癌係選自由腺樣囊狀癌、腎上腺皮質癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮內膜癌、膽囊癌、胃癌、頭頸癌、肺癌(例如小細胞肺癌或非小細胞肺癌、或肺腺癌)、神經母細胞瘤、神經內分泌癌、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、腎癌、睾丸癌組成之群。

在一些實施例中，實體腫瘤癌為胰臟癌。

在一些實施例中，實體腫瘤癌為乳癌。

在一些實施例中，實體腫瘤癌為頭頸癌。

在一些實施例中，實體腫瘤癌為肝癌。

在一些實施例中，實體腫瘤癌為肺癌。

在一些實施例中，實體腫瘤癌為腦癌。

在一些實施例中，實體腫瘤癌為神經母細胞瘤。

在一些實施例中，實體腫瘤癌為黑色素瘤。

在一些實施例中，醫藥組合物係經全身投與的。例如，在一些實施例中，醫藥組合物係非經腸投與的，例如經靜脈內、經動脈內、經腹膜內、經皮下或經皮內。在一些實施例中，醫藥組合物係經腸道，例如跨胃腸道或經口投與的。

在一些實施例中，醫藥組合物係經口，例如藉由瘤周注射或藉由瘤內注射投與。

相關申請案

本申請案主張2020年4月6日申請之美國臨時專利申請案第63/006,040號之優先權，其全部內容係出於所有目的以引用之方式併入本文中。

放射免疫結合物經設計成可標靶在疾病狀態中上調之蛋白質或受體以遞送放射性有效負載來破壞且殺死所關注的細胞(放射免疫療法)。經由放射性衰變遞送此種有效負載之過程會產生α、β或γ粒子或Auger電子，其可導致對DNA之直接效應(諸如單股或雙股DNA斷裂)或間接效應諸如旁觀者(by-stander)或串擾(crossfire)效應。

放射免疫結合物通常包含生物標靶部分(例如，能夠特異性結合至人類TEM-1之抗體或其抗原結合片段)、放射性同位素及連接此二者之分子。當將雙官能螯合物附加至生物標靶分子使得結構改變最小同時維持靶親和力時形成結合物。一旦進行放射性標記，就形成最終放射免疫結合物。

雙官能螯合物在結構上包含螯合物、連接子及交聯基團(圖 1A )。當開發新雙官能螯合物時，大多數努力集中於分子之螯合部分上。已描述雙官能螯合物之幾個實例，其具有結合至靶標部分之各種環狀及無環結構。[Bioconjugate Chem. 2000，11，510至519；Bioconjugate Chem. 2012，23，1029-1039；Mol Imaging Biol. 2011，13，215-221；Bioconjugate Chem. 2002，13，110-115。]

開發安全且有效之放射免疫結合物之關鍵因素之一係將功效最大化同時將正常組織中之脫靶毒性最小化。儘管此聲明係開發新藥物之核心原則之一，但對於放射免疫治療劑之應用提出新的挑戰。放射免疫結合物不需要阻斷受體，這如利用治療性抗體所需要，或細胞內釋放細胞毒性有效負載，這如抗體藥物結合物所需要，以便具有治療功效。然而，毒性粒子之放射係由於一階(放射性)衰變所致發生之事件且可在投與後體內任何地方隨機發生。一旦放射發生，在放射範圍內可對周圍細胞造成破壞而導致脫靶毒性之可能性。因此，限制此等放射對正常組織之暴露係開發新的藥物之關鍵。

減少脫靶暴露之一種潛在方法係更有效地自身體內(例如自身體內正常組織)移除放射性。一種機轉係增加生物標靶劑之清除率。此種方法可能需要識別縮短生物標靶劑之半衰期之方式，此對於生物標靶劑沒有明確描述。不論機轉為何，增加藥物清除率將亦負面影響藥效動力學/功效，因為自身體內更快速移除藥物將降低在作用部位處之有效濃度，此繼而將需要更高總劑量且將不達成降低對正常組織之總放射性劑量之所需結果。

其他努力集中於加速分子之包含放射性部分之部分之代謝。為此，已進行一些努力以使用稱為「可裂解之連接子」者來增加藉由生物標靶劑裂解放射性之速率。然而，可裂解之連接子因其與放射免疫結合物有關而採用不同含義。Cornelissen等人已描述可裂解之連接子，作為藉由其將雙官能螯合物透過經還原之半胱胺酸連接至生物標靶劑之彼等，而其他人描述一種可酵素裂解之系統之用途，其需要將放射免疫結合物與裂解劑/酵素共同投與來釋放[Mol Cancer Ther. 2013，12(11)，2472至2482；Methods Mol Biol. 2009，539，191至211；Bioconjug Chem. 2003，14(5)，927至933]。在半胱胺酸鍵聯之情況下，此等方法改變生物標靶部分之性質，或自藥物開發觀點(可酵素裂解之系統)不實際，因為在所提供之引用之情況下，需要投與兩種藥劑。

本發明尤其提供放射免疫結合物，其在分解代謝及/或代謝後更有效地自體內消除，同時維持治療功效。在一些實施例中，與已知雙官能結合物相比，所揭示的免疫結合物可例如藉由增加分解代謝/代謝產物之排泄程度同時維持完整分子之藥物動力學來達成總身體放射性之降低。在一些實施例中，放射性之此種降低係由於清除分解代謝/代謝副產物而不影響其他活體外及活體內性質諸如結合特異性(活體外結合)、細胞滯留及活體內腫瘤吸收所致。因此，在一些實施例中，所提供的放射免疫結合物達成人體內降低之放射性同時維持中靶活性(on-target activity)。定義

如本文所用，「抗體」係指其胺基酸序列包括特異性結合至指定抗原或其片段之免疫球蛋白及其片段之多肽。根據本發明之抗體可為任何類型(例如IgA、IgD、IgE、IgG或IgM)或亞型(例如IgA1、IgA2、IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)。熟習此項技術者當明瞭，抗體之特徵性序列或部分可包含存在於抗體之一或多個區域(例如可變區、超變區、恆定區、重鏈、輕鏈及其組合)中之胺基酸。此外，熟習此項技術者當明瞭，抗體之特徵性序列或部分可包含一或多個多肽鏈，且可包含存在於相同多肽鏈或不同多肽鏈中之序列元件。

如本文所用，「抗原結合片段」係指抗體之保留親本抗體之結合特徵之一部分。

如本文所用，術語標靶部分之「結合(bind/binding)」意指與標靶分子(例如如本文所述的人類TEM-1，例如野生型或突變型TEM-1)至少暫時相互作用或締合至其。

術語「雙官能螯合物」如本文所用係指包含螯合物、連接子及交聯基團之化合物。參見，例如圖 1A 。「交聯基團」係能夠藉由共價鍵接合兩個或更多個分子，例如接合雙官能螯合物及標靶部分之反應性基團。

術語「雙官能結合物」如本文所用係指包含螯合物或其金屬錯合物、連接子及標靶部分之化合物，例如抗體或其抗原結合片段。參見，例如式I-a或圖 1B 。

術語「癌症」係指由惡性腫瘤細胞之增殖引起之任何癌症，諸如腫瘤(tumor)、贅瘤(neoplasm)、癌、肉瘤、白血病及淋巴瘤。「實體腫瘤癌」為包含異常多組織之癌症，例如肉瘤、癌及淋巴瘤。「血液性癌症」或「液體癌症」如本文可互換使用為存在於體液中之癌症，例如淋巴瘤及白血病。

術語「螯合物」如本文所用係指可在兩個或更多個點處結合至中心金屬或放射性金屬原子之有機化合物或其一部分。

術語「結合物」如本文所用係指包含螯合基團或其金屬錯合物、連接子基團之分子，且其視需要包含標靶部分，例如抗體或其抗原結和片段。

如本文所用，術語「化合物」意欲包括所描繪結構之所有立體異構體、幾何異構體及互變異構體。

本文列舉或描述的化合物可係不對稱的(例如具有一或多個立體中心)。除非另有指示，否則所有立體異構體，諸如對映異構體及非對映異構體係預期。論述本發明中之包含不對稱取代之碳原子之化合物可以光學活性或外消旋形式分離。此項技術中已知關於如何自光學活性起始物質製備光學活性形式之方法，諸如藉由解析外消旋混合物或藉由立體選擇性合成。

如本文所用，「檢測劑」係指藉由定位包含抗原之細胞可用於診斷疾病之分子或原子。此項技術中已知用檢測劑標記多肽之各種方法。檢測劑之實例包括但不限於放射性同位素及放射性核種、染料(諸如與生物素-鏈黴親和素複合物)、造影劑、發光劑(例如異硫氰酸螢光素或FITC、若丹明(rhodamine)、鑭系元素磷光體、花青(cyanine)及近IR染料)及磁性劑(諸如釓螯合物)。

如本文所用，術語「放射性核種」係指能夠經歷放射性衰變之原子(例如，³ H、¹⁴ C、¹⁵ N、¹⁸ F、³⁵ S、⁴⁷ Sc、⁵⁵ Co、⁶⁰ Cu、⁶¹ Cu、⁶² Cu、⁶⁴ Cu、⁶⁷ Cu、⁷⁵ Br、⁷⁶ Br、⁷⁷ Br、⁸⁹ Zr、⁸⁶ Y、⁸⁷ Y、⁹⁰ Y、⁹⁷ Ru、⁹⁹ Tc、^99m Tc、¹⁰⁵ Rh、¹⁰⁹ Pd、¹¹¹ In、¹²³ I、¹²⁴ I、¹²⁵ I、¹³¹ I、¹⁴⁹ Pm、¹⁴⁹ Tb、¹⁵³ Sm、¹⁶⁶ Ho、¹⁷⁷ Lu、¹⁸⁶ Re、¹⁸⁸ Re、¹⁹⁸ Au、¹⁹⁹ Au、²⁰³ Pb、²¹¹ At、²¹² Pb、²¹² Bi、²¹³ Bi、²²³ Ra、²²⁵ Ac、²²⁷ Th、^229Th 、⁶⁶ Ga、⁶⁷ Ga、⁶⁸ Ga、⁸² Rb、^117m Sn、²⁰¹ Tl)。術語放射性核種、放射性同位素(radioisotope)或放射性同位素(radioactive isotope)亦可用於描述放射性核種。如本文所述，放射性核種可用作檢測劑。在一些實施例中，放射性核種可為發射α之放射性核種。

藥劑(例如前述結合物中之任何者)之術語「有效量」如本文所用係足以實現有益或所需結果(諸如臨床結果)之量，且因此，「有效量」取決於其中應用其之上下文。例如，在治療應用中，「有效量」可係足以治癒或至少部分遏制病症及其併發症之症狀，且/或實質上改良與疾病或醫學病狀相關之至少一種症狀之量。例如，在癌症之治療中，減少、預防、延遲、抑制或遏制疾病或病狀之任何症狀之藥劑或化合物將係治療有效的。不需要治療有效量之藥劑或化合物來治癒疾病或病狀但可例如提供對疾病或病狀之治療使得疾病或病狀之發作延遲、阻礙或預防，使得疾病或病狀症狀減輕，或使得疾病或病狀之術語改變。例如，該疾病或病狀可能變得不太嚴重及/或個體之恢復加快。有效量可藉由投與單一劑量或多個(例如至少兩個、至少三個、至少四個、至少五個或至少六個)劑量來投與。

術語「免疫結合物」如本文所用係指包含標靶部分，諸如抗體(或其抗原結合片段)、奈米抗體、親和抗體(affibody)或來自纖連蛋白III型域之一致序列之結合物。在一些實施例中，免疫結合物包含至少0.10個結合物/標靶部分之平均值(例如至少0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、4、5或8個結合物/標靶部分之平均值)。

術語「放射結合物」如本文所用係指包含放射性同位素或放射性核種之任何結合物，諸如本文所述的放射性同位素或放射性核種中之任何者。

術語「放射免疫結合物」如本文所用係指包含放射性同位素或放射性核種之任何免疫結合物，諸如本文所述的放射性同位素或放射性核種中之任何者。本發明中提供的放射免疫結合物通常係指包含由放射性同位素或放射性核種形成之金屬錯合物之雙官能結合物。

術語「放射免疫療法」如本文所用係指一種使用放射免疫結合物以產生治療效應之方法。在一些實施例中，放射免疫療法可包括對有需要之個體投與放射免疫結合物，其中該放射免疫結合物之投與在該個體中產生治療效應。在一些實施例中，放射免疫療法可包括對細胞投與放射免疫結合物，其中該放射免疫結合物之投與會殺死細胞。其中放射免疫療法涉及選擇性殺死細胞，在一些實施例中該細胞為患有癌症的個體中之癌細胞。

術語「醫藥組合物」如本文所用表示包含與醫藥上可接受之賦形劑一起調配之本文所述的放射免疫結合物之組合物。在一些實施例中，該醫藥組合物係在政府監管機構的批准下製造或出售作為用於治療哺乳動物疾病之治療方案之一部分。可將醫藥組合物調配成例如以單位劑型(例如錠劑、膠囊、膠囊型錠劑(caplet)、軟明膠膠囊(gelcap)或糖漿)用於經口投與；用於局部投與(例如呈霜劑、凝膠、乳劑或軟膏)；用於靜脈內投與(例如呈不含微粒栓塞且在適於靜脈內使用之溶劑系統中之無菌溶液)；或本文描述的任何其他調配物。

「醫藥上可接受之賦形劑」如本文所用係指除本文所述的化合物以外且在患者中具有非毒性且非發炎之性質之任何成分(例如能夠懸浮或溶解活性化合物之媒劑)。賦形劑可包括例如：抗黏著劑、抗氧化劑、黏合劑、包衣、壓縮助劑、崩解劑、染料(著色劑)、潤膚劑、乳化劑、填充劑(稀釋劑)、成膜劑或包衣、矯味劑、香味劑、滑動劑(流動增強劑)、潤滑劑、防腐劑、印刷墨水、輻射保護劑、吸附劑、懸浮劑或分散劑、甜味劑或水合用水(waters of hydration)。示例性賦形劑包括但不限於：抗壞血酸、組胺酸、磷酸鹽緩衝液、丁基化羥基甲苯(BHT)、碳酸鈣、磷酸鈣(二元酸)、硬脂酸鈣、交聯羧甲基纖維素、交聯聚乙烯吡咯啶酮、檸檬酸、交聯普維酮(crospovidone)、半胱胺酸、乙基纖維素、明膠、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、乳糖、硬脂酸鎂、麥芽糖醇、甘露醇、甲硫胺酸、甲基纖維素、對羥基苯甲酸甲酯、微晶纖維素、聚乙二醇、聚乙烯吡咯啶酮、聚維酮、預膠化澱粉、對羥基苯甲酸丙酯、棕櫚酸視黃酯、蟲膠、二氧化矽、羧甲基纖維素鈉、檸檬酸鈉、澱粉羥乙酸鈉、山梨糖醇、澱粉(玉米)、硬脂酸、硬脂酸、蔗糖、滑石、二氧化鈦、維生素A、維生素E、維生素C及木糖醇。

術語「醫藥上可接受之鹽」如本文所用表示本文描述的化合物之其等鹽，其在合理範圍的醫學判斷下適用於與人類及動物之組織接觸而無異常毒性、刺激、過敏性反應。此項技術中熟知醫藥上可接受之鹽。例如，醫藥上可接受之鹽描述於：Berge等人，J. Pharmaceutical Sciences 66:1-19，1977及Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use (編輯 P.H. Stahl與C.G.Wermuth)，Wiley-VCH，2008。鹽可在本文描述的化合物之最終分離及純化期間原位製備或藉由使游離鹼基與適宜有機酸反應而分開製備。

本發明之化合物可具有可離子化之基團以便能夠製備為醫藥上可接受之鹽。此等鹽可為涉及無機酸或有機酸之酸加成鹽或該等鹽在本發明化合物之酸性形式情況下可自無機鹼或有機鹼製備。通常，將該等化合物製備為或用作製備為醫藥上可接受之酸或鹼之加成產物之醫藥上可接受之鹽。此項技術中熟知適宜醫藥上可接受之酸及鹼，諸如用於形成酸加成鹽之鹽酸、硫酸、氫溴酸、乙酸、乳酸、檸檬酸或酒石酸、及用於形成鹼性鹽之氫氧化鉀、氫氧化鈉、氫氧化銨、咖啡因(caffeine)、各種胺。此項技術中明確確立用於製備適宜鹽之方法。

代表性酸加成鹽包括乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、抗壞血酸鹽、天冬胺酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、環戊烷丙酸鹽、二葡萄糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡庚糖酸鹽、半硫酸鹽、庚糖酸鹽(heptonate)、己酸鹽、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基-乙磺酸鹽、乳糖醛酸鹽、乳酸鹽、月桂酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、菸鹼酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、撲酸鹽(pamoate)、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、磷酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽、十一烷酸鹽、戊酸酯鹽等。代表性鹼金屬或鹼土金屬鹽包括鈉、鋰、鉀、鈣及鎂、以及非毒性銨、三級銨及胺陽離子，包括但不限於銨、四甲基銨、四乙基銨、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺及乙胺。

術語「多肽」如本文所用係指經肽鍵彼此連接的一串至少兩個胺基酸。在一些實施例中，多肽可包含至少3至5個胺基酸，該等胺基酸中之各者係藉由至少一個肽鍵連接至其他胺基酸。熟習此項技術者當明瞭，多肽可包含一或多個「非天然」胺基酸或仍然能夠整合至多肽鏈中之其他實體。在一些實施例中，多肽可經醣基化，例如多肽可包含一或多個共價鍵連之糖部分。在一些實施例中，單個「多肽」 (例如抗體多肽)可包含兩個或更多個個別多肽鏈，其在一些情況下可例如藉由一或多個二硫鍵或其他方式彼此連接。

「個體」意指人類或非人類的動物(例如哺乳動物)。

「實質同一性」或「實質上相同」意指多肽序列具有分別與參考序列相同之多肽序列，或在兩個序列進行最佳比對時具有分別在參考序列內的相應位置處相同之特定百分比之胺基酸殘基。例如，與參考序列「實質上相同」之胺基酸序列與參考胺基酸序列具有至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性。對於多肽，比較序列之長度將一般為至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、50、75、90、100、150、200、250、300或350個連續胺基酸(例如全長序列)。可使用基於預設設置之序列分析軟體(例如Genetics Computer Group之序列分析軟體包，University of Wisconsin Biotechnology Center，1710 University Avenue，Madison, WI 53705)來測定序列同一性。此種軟體可藉由將同源性程度指派給各種取代、缺失及其他修飾來匹配相似序列。

如本文所用，術語「標靶部分」係指能夠結合至給定標靶之任何分子或分子之任何部分。術語「TEM-1標靶部分」係指能夠結合TEM-1分子(例如人類TEM-1分子，例如野生型或突變型TEM-1分子)之標靶部分。

如本文所用，且如此項技術中所充分瞭解，「用以治療(to treat)」病狀或病狀(例如本文描述的病狀，諸如癌症)之「治療(treatment)」係用於獲得有益或所需結果，諸如臨床結果之方法。有益或所需結果可包括但不限於緩解或改善一或多種症狀或病狀；減輕疾病、病症或病狀之程度；穩定化(亦即不惡化)疾病、病症或病狀狀態；防止疾病、病症或病狀擴散；延遲或減慢疾病、病症或病狀之進展；改善減輕疾病、病症或病狀；及緩解(無論部分還是總體)，無論是可檢測到還是不可檢測到。「減輕」疾病、病症或病狀意指與沒有治療之程度或時程相比，疾病、病症或病狀之程度及/或非所欲臨床表現減少及/或進展之時程減慢或延長。

如本文所用，除非另外具體陳述，否則術語「約(about/approximately)」在關於定量值使用時包括所列舉的定量值本身。如本文所用，除非另有指示或自上下文推斷，否則術語「約(about/approximately)」係指與所列舉的定量值之±10%的變化。放射免疫結合物

在一個態樣中，本發明提供具有式I-a之結構之放射免疫結合物： A-L-B (式I-a) 其中A為螯合部分或其金屬錯合物，其中B為TEM-1標靶部分，且其中L為連接子。

在一些實施例中，放射免疫結合物具有或包含以式II所示之結構：

， (式II) 其中B為TEM-1標靶部分。

( 部分 1) (ii)

( 部分 2) (iii)

( 部分 3) ；及 (iv)

( 部分 4) 。

在一些實施例中，如本文進一步所述，放射免疫結合物包含螯合部分或其金屬錯合物，該金屬錯合物可包含放射性核種。在一些此種放射免疫結合物中，螯合部分與TEM-1標靶部分之平均比或中值比為八或更小、七或更小、六或更小、五或更小、四或更小、三或更小、二或更小、或約一。在一些放射免疫結合物中，螯合部分與TEM-1標靶部分之平均比或中值比為約一。

在一些實施例中，在對哺乳動物投與放射免疫結合物後，藉由腸途徑、腎途徑或兩種途徑所排泄之輻射(佔所投與的輻射之總量)之比例大於由已投與參考放射免疫結合物之可比較哺乳動物所排泄之輻射之比例。「參考免疫結合物」意指已知放射免疫結合物，其與本文描述的放射免疫結合物之不同之處至少在於：(1)具有不同連接子；(2)具有不同大小之標靶部分及/或(3)缺乏標靶部分。在一些實施例中，參考放射免疫結合物係選自由[⁹⁰ Y]-替伊莫單抗(ibritumomab tiuxetan) (Zevalin (90Y))及[¹¹¹ In]-替伊莫單抗(Zevalin (¹¹¹ In))組成之群。

在一些實施例中，藉由給定途徑或途徑集所排泄之輻射之比例比藉由相同途徑由已投與參考放射免疫結合物之可比較哺乳動物所排泄之輻射之比例大至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%或至少95%。在一些實施例中，所排泄的輻射之比例比由已投與參考放射免疫結合物之可比較哺乳動物所排泄之輻射之比例大至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少3.5倍、至少4倍、至少4.5倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍或至少10-倍。排泄之程度可藉由此項技術中已知的方法來測定，例如藉由測定尿液及/或糞便中之放射性及/或藉由測定一段時間期內的全身放射性。亦可參見，例如國際專利公開案WO 2018/024869。

在一些實施例中，以在投與後至少或約12小時、在投與後至少或約24小時、在投與後至少或約2天、在投與後至少或約3天、在投與後至少或約4天、在投與後至少或約5天、在投與後至少或約6天或在投與後至少或約7天之時間段測定排泄之程度。

在一些實施例中，在已對哺乳動物投與放射免疫結合物之後，與參考結合物(例如參考免疫結合物，諸如參考放射免疫結合物)相比，該放射免疫結合物展現降低之脫靶結合效應(例如毒性)。在一些實施例中，此種降低之脫靶結合效應係放射免疫結合物之特徵，該放射免疫結合物亦展現如本文所述的更大排泄速率。標靶部分

標靶部分包括能夠結合至給定標靶例如TEM-1之任何分子或分子之任何部分。在一些實施例中，標靶部分能夠結合至人類TEM-1內的抗原決定基，其一個示例性序列以SEQ ID NO: 1所示：

在一些實施例中，標靶部分包含蛋白質或多肽。在一些實施例中，標靶部分係選自由抗體或其抗原結合片段、奈米抗體、親和抗體及來自纖連蛋白III型域之一致序列(例如Centyrins或Adnectins)組成之群。在一些實施例中，部分既為標靶部分又為治療部分，亦即該部分能夠結合至給定標靶且亦賦予治療益處。在一些實施例中，標靶部分包含小分子。

在一些實施例中，標靶部分具有至少50 kDa、至少75 kDa、至少100 kDa、至少125 kDa、至少150 kDa、至少175 kDa、至少200 kDa、至少225 kDa、至少250 kDa、至少275 kDa或至少300 kDa之分子量。

通常，該標靶部分能夠結合至TEM-1，例如野生型及/或突變型TEM-1。在一些實施例中，該標靶部分能夠結合至人類TEM-1，例如野生型及/或突變型人類TEM-1。

在一些實施例中，該標靶部分能夠特異性結合至TEM-1 (例如能夠結合至TEM-1同時展現相對很少地或沒有結合至其他蛋白質，諸如其他C-凝集素家族蛋白質)。

在一些實施例中，該標靶部分能夠結合至TEM-1之胞外區域，例如C型凝集素域、Sushi樣域、該三個EGF重複域中之一者或黏蛋白域。在一些實施例中，該標靶部分能夠結合至不為C型凝集素域(例如Sushi樣域、EGF重複域或黏蛋白域)之胞外區域之一部分。

在一些實施例中，該標靶部分抑制TEM-1。「抑制」意指標靶部分至少部分抑制TEM-1 (例如人類TEM-1)之一或多種功能。在一些實施例中，該標靶部分至少部分抑制野生型TEM-1 (例如野生型人類TEM-1)之一或多種功能。

在一些實施例中，該標靶部分阻斷TEM-1結合至其蛋白結合搭配物中之一者或多者。例如，在一些實施例中，該標靶部分阻斷TEM-1結合至胞外基質蛋白(例如介導細胞黏附及遷移之胞外基質蛋白，諸如纖連蛋白或膠原蛋白I)。在一些實施例中，該標靶部分阻斷TEM-1結合至LGALS3BP6。

在一些實施例中，該標靶部分損及TEM-1下游之信號傳導。抗體

抗體通常包含經二硫鍵連接在一起之兩個相同輕多肽鏈及兩個相同重多肽鏈。位於各鏈的胺基端處的第一域之胺基酸序列可變，提供各單獨抗體之抗體結合特異性。此等稱為可變重鏈(VH)區及可變輕鏈(VL)區。各鏈之其他域之胺基酸序列相對不變且稱為恆定重鏈(CH)區及恆定輕鏈(Cl)區。輕鏈通常包含一個可變區(VL)及一個恆定區(CL)。IgG重鏈包含可變區(VH)、第一恆定區(CH1)、鉸鏈區、第二恆定區(CH2)及第三恆定區(CH3)。在IgE及IgM抗體中，重鏈包含一個另外恆定區(CH4)。

適於併與本發明使用之抗體可包括例如單株抗體、多株抗體、多特異性抗體、人類抗體、人源化抗體、駱駝科抗體、嵌合抗體、單鏈Fvs (scFv)、二硫鍵連接之Fvs (sdFv)、及抗獨特型(抗Id)抗體及上述中任何者之抗原結合片段。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段係人源化的。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段係係嵌合的。抗體可係任何類型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA及IgY)、類別(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)或亞類。

術語抗體之「抗原結合片段」如本文所用係指抗體之保留特異性結合至抗原之能力之一或多個片段。術語抗體之「抗原結合片段」內涵蓋的結合片段之實例包括Fab片段、F(ab')2片段、Fd片段、Fv片段、scFv片段、dAb片段(Ward等人，(1989) Nature 341:544-546)、及分離的互補決定區(CDR)。在一些實施例中，「抗原結合片段」包含重鏈可變區及輕鏈可變區。此等抗體片段可使用熟習此項技術者已知的習知技術來獲得，且該等片段可以與完整抗體相同的方式進行效用篩選。

本文所描述的抗體或抗原結合片段可藉由此項技術中已知的用於抗體之合成之任何方法來產生(參見，例如Harlow等人，Antibodies：A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press，第2版，1988)；Brinkman等人，1995，J. Immunol. Methods 182:41至50；WO 92/22324；WO 98/46645)。嵌合抗體可使用描述於例如Morrison，1985，Science 229:1202中之方法來產生，及人源化抗體藉由描述於例如美國專利第6,180,370號中之方法來產生。

本文描述的另外抗體為雙特異性抗體及多價抗體，如例如Segal等人，J. Immunol. Methods 248:1-6 (2001)；及Tutt等人，J. Immunol. 147: 60 (1991)中所述、或任何本文所述分子。

「艾菲爾親和聚體(Avimer)」係關於使用例如活體外外顯子改組及噬菌體呈現工程化之多聚體結合蛋白或肽。將多個結合域連接，從而導致與單抗原決定基免疫球蛋白域相比更大的親和力及特異性。

「奈米抗體」為由單個單體可變抗體域組成之抗體片段。奈米抗體亦可稱為單域抗體。像抗體一樣，奈米抗體選擇性結合至特異性抗原。奈米抗體可為重鏈可變域或輕鏈域。奈米抗體可天然存在或可係生物工程化之產物。奈米抗體可藉由定點誘變或誘變篩選(例如噬菌體展示、酵母展示、細菌展示、mRNA展示、核糖體展示)進行生物工程改造。「親和體」係經工程改造以結合至特異性抗原之多肽或蛋白質。因此，親合體可被視為模擬抗體之某些功能。

親和體可為葡萄球菌蛋白A之免疫球蛋白結合區中B域之經工程改造之變異體。親和體可為Z域(一種對Fab區具有較低親和力之B域)之經工程改造之變異體。親和體可藉由定點誘變或誘變篩選(例如噬菌體展示、酵母展示、細菌展示、mRNA展示、核糖體展示)進行生物工程改造。

已產生顯示特異性結合至多種不同蛋白質(例如胰島素、纖維蛋白原、轉鐵蛋白、腫瘤壞死因子-α、IL-8、gp120、CD28、人類血清白蛋白、IgA、IgE、IgM、HER2及EGFR)之親和體分子，證實在μM至pM範圍內之親和力(Kd)。「雙抗體」為具有兩個抗原結合位點(其可為二價或雙特異性)之抗體片段。參見例如Hudson等人，(2003)。單鏈抗體為包含抗體之重鏈可變域之全部或一部分或輕鏈可變域之全部或一部分之抗體片段。抗體片段可藉由各種技術製備，包括但不限於完整抗體之蛋白水解消化以及藉由如本文所述的重組宿主(例如大腸桿菌(E. coli )或噬菌體)之產生。

在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段係多特異性的，例如雙特異性的。多特異性抗體(或其抗原結合片段)包括對至少兩個不同位點具有結合特異性之單株抗體(或其抗原結合片段)。

在某些實施例中，經考慮抗體或其抗原結合片段之胺基酸序列變異體；例如結合至TEM-1，例如人類TEM-1之變異體。例如，可能期望改良抗體或其抗原結合片段之結合親和力及/或其他生物性質。抗體或其抗原結合片段之胺基酸序列變異體可藉由將適宜修飾引入至編碼抗體或其抗原結合片段之核苷酸序列中，或藉由肽合成來製備。此種修飾包括例如抗體或其抗原結合片段之胺基酸序列內的殘基之缺失及/或插入及/或取代。可進行缺失、插入及取代之任何組合以得到最終構築體，限制條件為最終構築體具有所需特性，例如抗原結合。

在一些實施例中，該抗體或其抗原結合片段為抑制抗體(亦稱為「拮抗抗體」)或其抗原結合片段，例如，該抗體或其抗原結合片段至少部分地抑制標靶分子(例如TEM-1)之一或多種功能，如本文進一步解釋。

抑制抗體之非限制性實例包括人源化單株抗體，諸如hMP-E-8.3 (Mediapharma)、歐土希珠單抗(ontuxizumab) (亦稱為MORAb-004) (Morphotek)及來自Kirin Brewery之抗TEM-1抗體。(參見，例如美國專利第8,895,000號及國際專利公開案第WO 2017/134234 A1號及第WO 2006/017759 A2號。)

在一些實施例中，該抗體或其抗原結合片段為激動抗體(亦稱為刺激抗體)。

在一些實施例中，該抗體或其抗原結合片段既非激動性亦非拮抗性，或沒有被表徵為激動性或拮抗性的。

另外已知TEM-1抗體包括例如人源化抗體，諸如人源化FB5；小鼠單株抗體，諸如例如mMP-E-8.3 (Mediapharma) (參見，例如WO 2017/134234)、FB5、1F9B4 (Proteintech Group)、G-9 (sc-377221) (Santa Cruz Biotechnology)、及B1/35 (MilliporeSigma)；大鼠單株抗體，諸如例如9G5、16D2、7H12、15F8、9A5、11D1、15D10、7D3或來自Morphotek之16D2 (參見例如WO 2013/148250)、純系458606 (R&D systems)、CBFYE-0326 (Creative Biolabs)；兔單株抗體，諸如EPR17081 (Abcam)；及嵌合抗體，諸如cMP-E-8.3 (Mediapharma) (參見例如WO 2017/134234)。

在一些實施例中，TEM-1抗體或其抗原結合片段能夠結合包含SRDHQIPVIAAN (SEQ ID NO:2)之胺基酸序列之抗原決定基。

在本發明之某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含如本文所述的特異性重鏈互補決定區CDR-H1、CDR-H2及/或CDR-H3。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段之互補決定區(CDR)係側接框架區。包含三個CDR之抗體或其抗原結合片段之重鏈或輕鏈通常包含四個框架區。

在一些實施例中，TEM-1抗體或其抗體結合片段之重鏈可變區包含一個、兩個或三個互補決定區(CDR) CDR-H1、CDR-H2及/或CDR-H3 (其中胺基酸序列如下所示)或具有與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列之CDR區：CDR-H1: GYGVN (SEQ ID NO: 3) 或 GFSLTGYGVN (SEQ ID NO: 4)CDR-H2: MIWVDGSTDYNSALKS (SEQ ID NO: 5)CDR-H3: GGYGAMDY (SEQ ID NO: 6)

在一些實施例中，TEM-1抗體或其抗體結合片段之輕鏈可變區包含一個、兩個或三個互補決定區(CDR) CDR-L1、CDR-L2及/或CDR-L3 (其中胺基酸序列如下所示)或具有與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列之CDR區：CDR-L1: HASQNINVWLT (SEQ ID NO: 7)CDR-L2: KASNLHT (SEQ ID NO: 8)CDR-L3: QQGQSYPWT (SEQ ID NO: 9)

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含： (i) 重鏈，其包含：重鏈互補決定區1 (CDR-H1)，其具有以SEQ ID NO: 3所示之胺基酸序列或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列，重鏈互補決定區2 (CDR-H2)，其具有以SEQ ID NO: 5所示之胺基酸序列或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列，及重鏈互補決定區3 (CDR-H3)，其具有以SEQ ID NO: 6所示之胺基酸序列或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列，及 (ii) 輕鏈，其包含：輕鏈互補決定區1 (CDR-L1)，其具有以SEQ ID NO: 7所示之胺基酸序列或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列，輕鏈互補決定區2 (CDR-L2)，其具有以SEQ ID NO: 8所示之胺基酸序列或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列，及輕鏈互補決定區3 (CDR-L3)，其具有以SEQ ID NO: 9所示之胺基酸序列或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列，或識別人類TEM-1上的相同抗原決定基(例如具有SEQ ID NO:2之序列之抗原決定基)之單株抗體。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO: 3及5至9之胺基酸序列而無任何變化之CDR序列。例如，在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO: 3、5及6之胺基酸序列之重鏈互補決定區CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3、及具有SEQ ID NO: 7、8及9之胺基酸序列之輕鏈互補決定區CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO: 4至9之胺基酸序列而無任何變化之CDR序列。例如，在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO: 4、5及6之胺基酸序列之重鏈互補決定區CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3、及具有SEQ ID NO: 7、8及9之胺基酸序列之輕鏈互補決定區CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3。

在一些實施例中，TEM-1抗體或其抗原結合片段之重鏈可變區包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列或與之在1、2、3或4個胺基酸不同之胺基酸序列、或與SEQ ID NO: 10具有至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%同一性之胺基酸序列：

在一些實施例中，TEM-1抗體或其抗原結合片段之輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列或與之在1、2、3或4個胺基酸不同之胺基酸序列、或與SEQ ID NO: 11具有至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%同一性之胺基酸序列：

在一些實施例中，TEM-1抗體或其抗原結合片段之重鏈可變區包含SEQ ID NO: 12或13之胺基酸序列或與之在1、2、3或4個胺基酸不同之胺基酸序列、或與SEQ ID NO: 12或13具有至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%同一性之胺基酸序列：

在一些實施例中，TEM-1抗體或其抗原結合片段之輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 14或15之胺基酸序列或與之在1、2、3或4個胺基酸不同之胺基酸序列、或與SEQ ID NO: 14或15具有至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%同一性之胺基酸序列：

在一些實施例中，TEM-1抗體或其抗原結合片段為人源化抗體或其抗原結合片段。

在一些實施例中，TEM-1抗體或其抗原結合片段之重鏈可變區包含選自由SEQ ID NO: 16、17、18及19組成之群之胺基酸序列、或與之在1、2、3或4個胺基酸不同之胺基酸序列、或與SEQ ID NO: 16、17、18及19具有至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%同一性之胺基酸序列：人源化 VH1 ：

人源化 VH2 ：

人源化 VH3 ：

人源化 VH4 ：

在一些實施例中，TEM-1抗體或其抗原結合片段之輕鏈可變區包含選自由SEQ ID NO: 20、21、22及23組成之群之胺基酸序列、或與之在1、2、3或4個胺基酸不同之胺基酸序列、或與SEQ ID NO: 20、21、22及23具有至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%同一性之胺基酸序列：人源化 VL1 ：

人源化 VL2 ：

人源化 VL3 ：

人源化 VL4 ：

。

在一些實施例中，抗體或其抗體結合片段具有包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列之重鏈可變域、及包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列之輕鏈可變域。

在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段具有≤ 1 µM、≤ 100 nM、≤ 10 nM、≤ 1 nM、≤ 0.1 nM、≤ 0.01 nM或≤ 0.001 nM之解離常數(Kd)。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段具有1 nM至10 nM (含端點)或0.1 nM至1 nM (含端點)之解離常數(Kd)。

在一個實施例中，Kd藉由利用所關注的抗體或其抗原結合片段及其抗原之Fab形式進行之經放射標記抗原結合分析(放射免疫分析，RIA)來測定。

根據另一個實施例，Kd係使用利用固定化抗原之表面電漿子共振分析來測定。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段為針對TEM-1 (例如人類TEM-1)之抗原決定基之人類單株抗體。

抗體或其抗原結合片段可為天然及/或合成來源之任何抗體或其抗原結合片段，例如哺乳動物來源之抗體。在一些實施例中，恆定域若存在則為人類恆定域。在一些實施例中，可變域為哺乳動物可變域，例如人源化或人類可變域。

在一些實施例中，根據本發明使用的抗體為單株抗體。在一些實施例中，抗體為重組鼠類抗體、嵌合、人源化或完全人類抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)或其抗原結合片段。

在一些實施例中，係進一步偶聯至其他部分以用於例如藥物標靶及成像應用。

在一些實施例中，例如出於診斷目的，抗體或其抗原結合片段係經標記，亦即偶聯至標記基團。適宜標記之非限制性實例包括放射性標記、螢光標記、適宜染料基團、酵素標記、發色團(chromogene)、化學發光基團、生物素基團、藉由二級報導子識別之預定多肽抗原決定基等。在一些實施例中，一或多個標記係共價結合至抗體或其抗原結合片段。

其等經標記抗體或其抗原結合片段(亦稱為「抗體結合物」)可尤其用於免疫組織化學分析或活體內分子成像。

在一些實施例中，例如出於治療目的，抗體或其抗原結合片段係進一步與效應基團，特別是治療性效應基團，諸如細胞毒性劑或放射性基團劑結合。多肽

多肽包括例如任何多種血液學試劑(包括例如紅血球生成素、凝血因子等)、干擾素、群落刺激因子、抗體、酵素及激素。特定多肽之身份無意於限制本發明，且所關注的任何多肽可係本發明方法中之多肽。

本文所述的參考多肽可包括能夠結合至所關注的標靶(例如能夠結合至抗原，例如TEM-1)之靶標結合域。例如，多肽(諸如抗體)可係能夠結合至跨膜多肽(例如受體)或配位體(例如生長因子)。經修飾之多肽

適於併與本發明之組合物及方法使用之多肽可具有經修飾之胺基酸序列。經修飾之多肽可與相應參考多肽實質上相同(例如經修飾之多肽之胺基酸序列可與參考多肽之胺基酸序列具有至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性)。在某些實施例中，該修飾不會顯著破壞所需生物活性(例如結合至TEM-1)。該修飾可將原始多肽之生物活性減少(例如至少5%、10%、20%、25%、35%、50%、60%、70%、75%、80%、90%或95%)，可對原始多肽之生物活性沒有影響，或可將原始多肽之生物活性增加(例如至少5%、10%、25%、50%、100%、200%、500%或1000%)。經修飾之多肽可具有或可最佳化多肽之特性，諸如活體內穩定性、生物利用度、毒性、免疫活性、免疫同一性及結合性質。

修飾包括藉由自然過程，諸如轉譯後處理，或藉由此項技術中已知的化學修飾技術之其等修飾。修飾可發生在多肽中的任何地方，包括多肽主鏈、胺基酸側鏈及胺基端或羧基端。相同類型之修飾可以相同或不同程度存在於給定多肽之幾個位點，且多肽可包含超過一種類型之修飾。多肽可由於泛素化所致分支化，且其可係環狀，具有或不具有分支。環狀、分支鏈及分支鏈環狀多肽可由於轉譯後天然過程所致或可合成製備。其他修飾包括聚乙二醇化、乙醯化、乙醯胺基甲基(Acm)基團之添加、ADP-核糖基化、烷基化、醯胺化、生物素化、胺甲醯化、羧乙基化、酯化、共價鍵連至黃素、共價鍵連至原血紅素部分、核苷酸或核苷酸衍生物之共價鍵連、藥物之共價鍵連、標記物(例如螢光或放射性)之共價鍵連、脂質或脂質衍生物之共價鍵連、磷脂醯肌醇之共價鍵連、交聯、環化、二硫鍵形成、去甲基化、共價交聯之形成、胺胱酸之形成、焦麩胺酸之形成、甲醯化、γ-羧化、醣基化、GPI固著點(anchor)形成、羥基化、碘化、甲基化、豆蔻醯化、氧化、蛋白質水解處理、磷酸化、異戊二烯化、外消旋化、硒醯化、硫酸鹽化、胺基酸至蛋白質之轉運-RNA介導之加成(諸如精胺醯化)及泛素化。

經修飾之多肽亦可在多肽序列中包含保守或非保守之胺基酸插入、缺失或取代(例如D-胺基酸、去胺基酸) (例如其中此類變化實質上不改變多肽之生物活性)。特別地，添加一或多個半胱胺酸殘基至本文多肽的胺基端或羧基端可藉由例如二硫鍵結合促進此等多肽之結合。例如，多肽可經修飾以包含單個半胱胺酸殘基在胺基端或包含單個半胱胺酸殘基在羧基端。胺基酸取代可係保守的(亦即其中一個殘基係經相同一般類型或群組之另一者置換)或非保守的(亦即其中一個殘基係經另一種類型之胺基酸置換)。另外，天然生成之胺基酸可代替非天然生成之胺基酸(亦即非天然生成之保守胺基酸取代或非天然生成之非保守胺基酸取代)。

合成製備的多肽可包括非天然地由DNA編碼之胺基酸(例如非天然生成之胺基酸或非天然胺基酸)之取代。非天然生成之胺基酸之實例包括D-胺基酸、N-保護之胺基酸、具有鍵連至半胱胺酸之硫原子之乙醯胺基甲基基團之胺基酸、聚乙二醇化胺基酸、式NH₂ (CH₂ )_n COOH (其中n為2至6)之ω胺基酸、中性非極性胺基酸(諸如肌胺酸)、第三丁基丙胺酸、第三丁基甘胺酸、N-甲基異白胺酸及正白胺酸。苯基甘胺酸可替代Trp、Tyr或Phe；瓜胺酸及甲硫胺酸亞碸係中性非極性的，半胱胺酸係酸性的，及鳥胺酸係鹼性的。脯胺酸可經羥脯胺酸取代且保留賦予性質之構象。

類似物可藉由取代誘變產生且保留原始多肽之生物活性。識別為「保守取代」之取代之實例顯示於表1中。若此種取代導致非所需的變化，則引入表1中命名為「示例性取代」或如本文中參考胺基酸類別所進一步描述之其他類型之取代且產物經篩選。

表1：胺基酸取代

原始殘基	示例性取代	保守性取代
Ala (A)	Val、Leu、Ile	Val
Arg (R)	Lys、Gln、Asn	Lys
Asn (N)	Gln、His、Lys、Arg	Gln
Asp (D)	Glu	Glu
Cys (C)	Ser	Ser
Gln (Q)	Asn	Asn
Glu (E)	Asp	Asp
Gly (G)	Pro	Pro
His (H)	Asn、Gln、Lys、Arg	Arg
Ile (I)	Leu、Val、Met、Ala、Phe、正白胺酸	Leu
Leu (L)	正白胺酸、Ile、Val、Met、Ala、Phe	Ile
Lys (K)	Arg、Gln、Asn	Arg
Met (M)	Leu、Phe、Ile	Leu
Phe (F)	Leu、Val、Ile、Ala	Leu
Pro (P)	Gly	Gly
Ser (S)	Thr	Thr
Thr (T)	Ser	Ser
Trp (W)	Tyr	Tyr
Tyr (Y)	Trp、Phe、Thr、Ser	Phe
Val (V)	Ile、Leu、Met、Phe、Ala、正白胺酸	Leu

在功能或免疫學同一性上之實質性修飾係藉由選擇在其於維持以下上之效應方面顯著不同之取代來達成：(a)取代區域中多肽主鏈之結構，例如呈片狀或螺旋狀構型，(b)標靶位點處分子之電荷或疏水性，及/或(c)龐大側鏈。螯合部分或其金屬錯合物： 螯合部分

適宜螯合部分之實例包括但不限於DOTA (1,4,7,10-四氮雜環十二烷-1,4,7,10-四乙酸)、DOTMA (1R,4R,7R,10R)-α,α’,α”,α’”-四甲基-1,4,7,10-四氮雜環十二烷-1,4,7,10-四乙酸、DOTAM (1,4,7,10-肆(胺甲醯基甲基)-1,4,7,10-四氮雜環十二烷)、DOTPA (1,4,7,10-四氮雜環十二烷-1,4,7,10-四丙酸)、DO3AM-乙酸(2-(4,7,10-參(2-胺基-2-側氧基乙基)-1,4,7,10-四氮雜環十二烷-1-基)乙酸)、DOTA-GA酸酐(2,2’,2”-(10-(2,6-二側氧基四氫-2H-哌喃-3-基)-1,4,7,10-四氮雜環十二烷-1,4,7-三基)三乙酸、DOTP (1,4,7,10-四氮雜環十二烷-1,4,7,10-四(亞甲基膦酸))、DOTMP (1,4,6,10-四氮雜環十二烷-1,4,7,10-四亞甲基膦酸、DOTA-4AMP (1,4,7,10-四氮雜環十二烷-1,4,7,10-肆(乙醯胺基-亞甲基膦酸)、CB-TE2A (1,4,8,11-四氮雜雙環[6.6.2]十六烷-4,11-二乙酸)、NOTA (1,4,7-三氮雜環壬烷-1,4,7-三乙酸)、NOTP (1,4,7-三氮雜環壬烷-1,4,7-三(亞甲基膦酸)、TETPA (1,4,8,11-四氮雜環十四烷-1,4,8,11-四丙酸)、TETA (1,4,8,11-四氮雜環十四烷-1,4,8,11-四乙酸)、HEHA (1,4,7,10,13,16-六氮雜環十六烷-1,4,7,10,13,16-六乙酸)、PEPA (1,4,7,10,13-五氮雜環十五烷-N,N’,N”,N’’’, N’’’’-五乙酸)、H₄ octapa (N,N’-雙(6-羧基-2-吡啶基甲基)-伸乙基二胺-N,N’-二乙酸)、H₂ dedpa (1,2-[[6-(羧基)-吡啶-2-基]-甲基胺基]乙烷)、H₆ phospa (N,N’-(亞甲基膦酸酯基)-N,N’-[6-(甲氧基羰基)吡啶-2-基]-甲基-1,2-二胺基乙烷)、TTHA (三伸乙基四胺-N,N,N’,N”,N’’’,N’’’-六乙酸)、DO2P (四氮雜環十二烷二甲烷膦酸)、HP-DO3A (羥基丙基四氮雜環十二烷三乙酸)、EDTA (伸乙基二胺四乙酸)、去鐵胺、DTPA (二伸乙基三胺五乙酸)、DTPA-BMA (二伸乙基三胺五乙酸-雙甲基醯胺)、八齒-HOPO (八齒羥基吡啶酮)或卟啉。

在一些實施例中，放射免疫結合物包含螯合部分之金屬錯合物。例如，螯合基團可以與金屬(諸如錳、鐵及釓)及同位素(例如在60至10,000 keV之一般能量範圍內之同位素) (諸如本文論述的任何放射性同位素及放射性核種)之金屬螯合物組合使用。

在一些實施例中，螯合部分可用作檢測劑，且包含此類可檢測之螯合部分之放射免疫結合物可因此用作診斷劑或治療診斷劑。放射性同位素及放射性核種

在一些實施例中，金屬錯合物包含放射性核種。適宜放射性同位素及放射性核種之實例包括但不限於³ H、¹⁴ C、¹⁵ N、¹⁸ F、³⁵ S、⁴⁷ Sc、⁵⁵ Co、⁶⁰ Cu、⁶¹ Cu、⁶² Cu、⁶⁴ Cu、⁶⁶ Ga、⁶⁷ Ga、⁶⁷ Cu、⁶⁸ Ga、⁷⁵ Br、⁷⁶ Br、⁷⁷ Br、⁸² Rb、⁸⁹ Zr、⁸⁶ Y、⁸⁷ Y、⁹⁰ Y、⁹⁷ Ru、⁹⁹ Tc、^99m Tc、¹⁰⁵ Rh、¹⁰⁹ Pd、¹¹¹ In、¹²³ I、¹²⁴ I、¹²⁵ I、¹³¹ I、¹⁴⁹ Pm、¹⁴⁹ Tb、¹⁵³ Sm、¹⁶⁶ Ho、¹⁷⁷ Lu、^117m Sn、¹⁸⁶ Re、¹⁸⁸ Re、¹⁹⁸ Au、¹⁹⁹ Au、²⁰¹ Tl、²⁰³ Pb、²¹¹ At、²¹² Pb、²¹² Bi、²¹³ Bi、²²³ Ra、²²⁵ Ac、²²⁷ Th及²²⁹ Th。

在一些實施例中，放射性核種為α發射體，例如砈-211 (²¹¹ At)、鉍-212 (²¹² Bi)、鉍-213 (²¹³ Bi)、錒-225 (²²⁵ Ac)、鐳-223 (²²³ Ra)、鉛-212 (²¹² Pb)、釷-227 (²²⁷ Th)或鋱-149 (¹⁴⁹ Tb)或其次級粒子。在一些實施例中，α-發射體為錒Act-225 (²²⁵ Ac)或其次級粒子。連接子

在一些實施例中，連接子如式I-b之結構內所示，作為式I-b不存在A及B之該部分： A-L¹ -(L² )_n -B (式I-b) (A及B係如式I-a中所定義。)

因此，在一些實施例中，連接子為-L¹ -(L² )_n -，其中： L¹ 為鍵、視需要經取代之C₁ -C₆ 烷基、視需要經取代之C₁ -C₆ 雜烷基或視需要經取代之芳基或雜芳基； n為介於1與5 (含)之間的整數；及各L² 獨立地具有結構： -X¹ -L³ -Z¹ - (式III) 其中X¹ 為C=O(NR¹ )、C=S(NR¹ )、OC=O(NR¹ )、NR¹ C=O(O)、NR¹ C=O(NR¹ )、-CH₂ PhC=O(NR¹ )、-CH₂ Ph(NH)C=S(NR¹ )、O或NR¹ ；且各R¹ 獨立地為H、視需要經取代之C₁ -C₆ 烷基、視需要經取代之C₁ -C₆ 雜烷基或視需要經取代之芳基或雜芳基，其中C₁ -C₆ 烷基可經側氧基(=O)、雜芳基或其組合取代； L³ 為視需要經取代之C₁ -C₅₀ 烷基或視需要經取代之C₁ -C₅₀ 雜烷基(例如C₅ -C₂₀ 聚乙二醇)；及 Z¹ 為CH₂ 、C=O、C=S、OC=O、NR¹ C=O或NR¹ ，其中R¹ 為氫或視需要經取代之C₁ -C₆ 烷基或吡咯啶-2,5-二酮。

在一些實施例中，L¹ 為經取代之C₁ -C₆ 烷基或經取代之C₁ -C₆ 雜烷基，該取代基包含雜芳基基團(例如六員含氮雜芳基)。

在一些實施例中，L³ 為經取代之C₁ -C₅₀ 烷基或經取代之C₁ -C₅₀ 雜烷基，該取代基包含雜芳基基團(例如六員含氮雜芳基)。在一些實施例中，L³ 為C₁ -C₅₀ 雜烷基。在一些實施例中，L³ 為C₅ -C₂₀ 聚乙二醇。在一些實施例中，L³ 為(CH₂ CH₂ O)_m (CH₂ )_w ，且m及w獨立地為介於0與10 (含)之間的整數。

在一些實施例中，A為包含一或多個雜芳基基團之巨環螯合部分(例如六員含氮雜芳基)。交聯基團

在一些實施例中，放射免疫結合物係使用包含螯合物、連接子及交聯基團之雙官能螯合物來合成。一旦形成放射免疫結合物，則放射免疫結合物可不存在交聯基團。

在一些實施例中，代替或除了標靶部分外，放射免疫結合物包含交聯基團(例如在一些實施例中，式I中之B包含交聯基團)。

交聯基團係能夠經共價鍵接合兩個或更多個分子之反應性基團。交聯基團可用於將連接子及螯合部分鍵連至治療或標靶部分。交聯基團亦可用於將連接子及螯合部分體內鍵連至標靶。在一些實施例中，交聯基團係胺基反應性、甲硫胺酸反應性或硫醇反應性交聯基團，或包含分選酶(sortase)識別序列。在一些實施例中，胺基反應性或硫醇反應性交聯基團包括經活化之酯，諸如羥基琥珀醯亞胺酯、2,3,5,6-四氟苯酚酯、4-硝基苯酚酯或醯亞胺酸酯、酸酐、硫醇、二硫化物、馬來醯亞胺、疊氮化物、炔烴、應變炔烴、應變烯烴、鹵素、磺酸酯、鹵乙醯基、胺、醯肼、二氮環丙烯、膦、四嗪、異硫氰酸酯或氧氮環丙烷。在一些實施例中，分選酶識別序列可包含末端甘胺酸-甘胺酸-甘胺酸(GGG)及/或LPTXG胺基酸序列，其中X為任何胺基酸。一般技術者將明瞭交聯基團之使用不限於本文揭示的特異性構築體，而是可包括其他已知交聯基團。醫藥組合物

在一個態樣中，本發明提供包含本文揭示的放射免疫結合物之醫藥組合物。可將此類醫藥組合物調配成用於各種藥物遞送系統中。一或多種生理上可接受之賦形劑或載劑亦可包含在醫藥組合物中以進行適當調配。適合併與本發明使用的適宜調配物之非限制性實例包括描述於Remington’s Pharmaceutical Sciences ，Mack Publishing Company，Philadelphia，PA，第17版，1985中之彼等。關於藥物遞送方法之簡要概述，參見，例如Langer (Science . 249:1527至1533，1990)。

可將醫藥組合物調配成用於本文論述的任何多種投與途徑(參見，例如本文的「投與及劑量」子節)，經考慮持續釋放型投與，藉由諸如積存注射或易蝕植入物或組件之此種方式。因此，本發明提供包含溶解或懸浮於可接受之載劑，較佳水性載劑，例如水、緩衝水、鹽水或PBS等等中之本文揭示的試劑(例如放射免疫結合物)之醫藥組合物。在一些實施例中，醫藥組合物包含醫藥上可接受之輔助物質以接近生理條件，諸如pH調整及緩衝試劑、張度調整劑、濕潤劑或清潔劑等等。在一些實施例中，將醫藥組合物調配成用於口服遞送且可視需要包含用於單位劑型(諸如錠劑或膠囊)之調配之惰性成分，諸如黏結劑或填充劑。在一些實施例中，將醫藥組合物調配成用於局部投與且可視需要包含用於霜劑、軟膏、凝膠、糊劑或滴眼劑之調配之惰性成分，諸如溶劑或乳化劑。

在一些實施例中，藉由習知滅菌技術滅菌所提供的醫藥組合物，例如可進行無菌過濾。所得的水溶液可經包裝以直接使用或進行凍乾。可例如在投與之前將凍乾製劑與無菌水性載劑組合。製劑之pH通常將為3至11，更佳5至9或6至8，且最佳6至7，諸如6至6.5。呈固體形式之所得組合物可例如以多個單劑量單位(各包含固定量之一或多種以上提及的試劑)，諸如以錠劑或膠囊之經密封之包裝來包裝。呈固體形式之醫藥組合物亦可以靈活數量包裝在容器中，諸如在設計成用於局部適用之霜劑或軟膏之可擠壓管中。治療方法

在一個態樣中，本發明提供治療方法，該治療方法包括向個體投與如本文所揭示的放射免疫結合物。個體

在一些所揭示方法中，將療法(例如包含治療劑)投與個體。在一些實施例中，個體為哺乳動物，例如人類。

在一些實施例中，個體患有癌症或處在發展出癌症之風險中。例如，個體可能已經診斷患有癌症。例如，癌症可為原發性癌症或轉移性癌症。個體可能患有任何癌症期，例如I期、II期、III期或IV期，有或沒有淋巴結受累及有或沒有轉移。所提供的放射免疫結合物及組合物可預防或減少癌症之進一步生長及/或以其他方式減輕癌症(例如預防或減少轉移)。在一些實施例中，個體未患有癌症但已確定為處在發展出癌症之風險中，例如由於存在一或多種風險因素，諸如環境暴露，存在一或多種遺傳突變或變異、家族史等。在一些實施例中，尚未診斷出個體患有癌症。

在許多實施例中，癌症與TEM-1表現相關。例如，在一些實施例中，TEM-1在腫瘤基質細胞(例如周細胞(pericyte)、肌纖維母細胞或上皮細胞(諸如血管上皮細胞))中表現。在一些實施例中，癌症包括自身表現TEM-1之癌細胞。

在一些實施例中，癌症為實體腫瘤癌，例如癌、肉瘤、黑色素瘤或淋巴瘤。

在一些實施例中，實體腫瘤癌為癌，例如腺癌、鱗狀細胞癌或腺鱗狀癌。癌之非限制性實例包括腺樣囊狀癌、腎上腺皮質癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮內膜癌、膽囊癌、胃癌、頭頸癌、肺癌(例如小細胞肺癌或非小細胞肺癌、或肺腺癌)、神經母細胞瘤、神經內分泌癌、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、腎癌、睾丸癌。

在一些實施例中，實體腫瘤癌為肉瘤。肉瘤之非限制性實例包括血管肉瘤或血管內皮瘤、星形細胞瘤、軟骨肉瘤、尤因氏肉瘤、纖維肉瘤、膠質瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、惡性纖維組織細胞瘤(MFH)、間葉瘤或混合中胚層腫瘤、間皮肉瘤或間皮瘤、黏液肉瘤、骨肉瘤、橫紋肌肉瘤及滑膜肉瘤。

在一些實施例中，癌症為神經母細胞瘤。

在一些實施例中，癌症為腦癌。在一些實施例中，癌症為神經膠質瘤。

在一些實施例中，癌症為黑色素瘤。

在一些實施例中，癌症為非實體腫瘤癌，例如液體癌或血液癌。在一些實施例中，癌症為骨髓瘤，例如多發性骨髓瘤。在一些實施例中，癌症為白血病，例如急性骨髓性白血病。

在一些實施例中，癌症為混合型癌症，例如混合型中胚層腫瘤、癌肉瘤或畸胎癌。投與及劑量

本文揭示的放射免疫結合物及其醫藥組合物可藉由任何多種投與途徑，包括全身及局部投與途徑來投與

全身投與途徑包括非經腸途徑及腸內途徑。在一些實施例中，放射免疫結合物或其醫藥組合物係藉由非經腸途徑，例如靜脈內、動脈內、腹膜內、皮下或皮內投與。在一些實施例中，放射免疫結合物或其醫藥組合物經靜脈內投與。在一些實施例中，放射免疫結合物或其醫藥組合物經腸內投與途徑，例如跨胃腸道或經口投與。

局部投與途徑包括但不限於瘤周注射及瘤內注射。

可投與醫藥組合物以進行放射治療計劃治療、診斷性治療及/或治療性治療。當出於放射治療計劃或診斷目的而投與時，可以診斷有效劑量及/或有效確定治療有效劑量之量對個體投與放射免疫結合物。在治療應用中，醫藥組合物可以足以治癒或至少部分遏阻病症及其併發症之症狀之量投與已經罹患病狀(例如癌症)的個體(例如人類)。足以達成此目的之量定義為「治療有效量」，即足以實質上改良與疾病或醫學病狀相關之至少一種症狀之化合物之量。例如，在癌症之治療中，減少、預防、延遲、抑制或遏制疾病或病狀之任何症狀之藥劑或化合物將係治療有效的。不要求治療有效量之藥劑或化合物來治癒疾病或病狀但可例如提供對疾病或病狀之治療使得疾病或病狀之發作延遲、阻礙或預防，使得疾病或病狀症狀減輕，或使得疾病或病狀之階段改變。例如，該疾病或病狀可能變得不太嚴重及/或個體之恢復加快。在一些實施例中，以以對於放射治療計劃有效之量對個體投與第一劑量之放射免疫結合物或組合物，然後以治療有效量投與第二劑量或第二組劑量之放射免疫結合物或組合物。

有效量可取決於疾病或病狀之嚴重度及個體之其他特徵(例如體重)。所揭示的放射免疫結合物及組合物之對於個體(例如哺乳動物，諸如人類)之治療有效量可由普通技術者考慮個體差異(例如個體的年齡、體重及病狀之差異)來確定。

在一些實施例中，所揭示的放射免疫結合物展現標靶癌細胞之增強之能力。在一些實施例中，所揭示的放射免疫結合物之有效量比未經結合及/或未經放射標記之標靶部分之治療效應之相當劑量低 (例如小於或等於約90%、75%、50%、40%、30%、20%、15%、12%、10%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%)。

本文揭示的包括有效量之醫藥組合物之單次或多次投與可由治療醫師選擇劑量水平及模式來進行。可基於個體中疾病或病狀之嚴重度來確定及調整劑量及投與方案，該嚴重度可根據臨床醫生通常實踐的方法或本文描述的彼等方法在整個治療過程中進行監測。

以下特定實例應被解釋為僅係說明性，且無論如何不以任何方式限制本發明之其餘部分。實例實例 1. 一般材料及方法

鎦-177可自Perkin Elmer呈在0.05N鹽酸溶液中之三氯化鎦獲得；銦-111 (呈三氯化物鹽)可自BWX Technologies獲得及錒-225可呈三硝酸錒-225自Oak Ridge National Laboratories獲得。

可使用Waters Acquity HPLC-MS系統來進行分析型HPLC-MS，該系統包含Waters Acquity二元溶劑管理器、Waters Acquity樣品管理器(樣品經冷卻至10℃)、Water Acquity管柱管理器(管柱溫度30℃)、Waters Acquity光電二極體陣列檢測器(在254 nm及214 nm處監測)、具有電噴霧電離之Waters Acquity TQD及Waters Acquity BEH C18，2.1 × 50 (1.7 μm)管柱。可使用Waters HPLC系統來進行製備型HPLC，該系統包含Waters 1525二元HPLC泵、Waters 2489 UV/可見光檢測器(在254 nm及214 nm處監測)及Waters XBridge Prep phenyl或C18 19 × 100 mm (5 μm)管柱。

HPLC溶離方法1：Waters Acquity BEH C18 2.1×50 mm (1.7 μm)管柱；流動相A：H₂ O (0.1% v/v TFA)；流動相B：乙腈(0.1% v/v TFA)；流速 = 0.3 mL/min；初始 = 90% A，3至3.5 min = 0% A，4 min = 90% A，5 min = 90% A。

HPLC溶離方法2：Waters XBridge Prep Phenyl 19×100 mm (5 μm)管柱；流動相A：H₂ O (0.1% v/v TFA)；流動相B：乙腈 (0.1% v/v TFA)；流速：10 mL/min；初始 = 80% A，13 min = 0% A。

HPLC溶離方法3：Waters Acquity BEH C18 2.1×50 mm (1.7 μm)管柱；流動相A：H₂ O (0.1% v/v TFA)；流動相B：乙腈(0.1% v/v TFA)；流速 = 0.3 mL/min；初始 = 90% A，8 min = 0% A，10 min = 0% A，11 min = 90% A，12 min = 90% A。

HPLC溶離方法4：Waters XBridge Prep C18 OBD 19×100 mm (5 μm)管柱；流動相A：H₂ O (0.1% v/v TFA)；流動相B：乙腈(0.1% v/v TFA)；流速：10 mL/min；初始 = 80% A，3 min = 80% A，13 min = 20% A，18 min = 0% A。

HPLC溶離方法5：Waters XBridge Prep C18 OBD 19×100 mm (5 μm)管柱；流動相A：H₂ O (0.1% v/v TFA)；流動相B：乙腈 (0.1% v/v TFA)；流速：10 mL/min；初始 = 90% A，3 min = 90% A，13 min = 0% A，20 min = 0% A。

HPLC溶離方法6：Waters XBridge Prep C18 OBD 19×100 mm (5 μm)管柱；流動相A：H₂ O (0.1% v/v TFA)；流動相B：乙腈(0.1% v/v TFA)；流速：10 mL/min；初始 = 75% A，13 min = 0% A，15 min = 0% A。

HPLC溶離方法7：Waters XBridge Prep C18 OBD 19×100 mm (5 μm)管柱；流動相A：H₂ O (0.1% v/v TFA)；流動相B：乙腈(0.1% v/v TFA)；流速：10 mL/min；初始 = 80% A，12 min = 0% A，15 min = 0% A。

HPLC溶離方法8：Waters XBridge Prep C18 OBD 19×100 mm (5 μm)管柱；流動相A：H₂ O (0.1% v/v TFA)；流動相B：乙腈(0.1% v/v TFA)；流速：10 mL/min；初始 = 90% A，12 min = 0% A，15 min = 0% A。

分析型尺寸排除層析(SEC)可使用Waters系統來進行，該系統包含Waters 1525二元HPLC泵、Waters 2489 UV/可見光檢測器(在280 nm處進行檢測)、Bioscan流動式計數放射檢測器(FC-3300)及TOSOH TSKgel G3000SWxl，7.8×300 mm管柱。等濃度SEC方法可具有例如mL/min之流速，其中流動相為0.1M磷酸鹽、0.6M NaCl、0.025%疊氮化鈉，pH = 7。

MALDI-MS (正離子)可使用MALDI Bruker Ultraflextreme光譜儀來進行。

放射性薄層層析(radioTLC)可利用Bioscan AR-2000成像掃描儀來進行，且可在使用檸檬酸鹽緩衝液(0.1M，pH 5.5)之iTLC-SG玻璃微纖維層析紙(Agilent Technologies，SGI0001)板上進行。實例 2. 4-{[11- 側氧基 -11-(2,3,5,6- 四氟苯氧基 ) 十一烷基 ] 胺甲醯基 }-2-[4,7,10- 參 ( 羧甲基 )-1,4,7,10- 四氮雜環十二烷 -1- 基 ] 丁酸 ( 化合物 B) 之合成

雙官能螯合物4-{[11-側氧基-11-(2,3,5,6-四氟苯氧基)十一烷基]胺甲醯基}-2-[4,7,10-參(羧甲基)-1,4,7,10-四氮雜環十二烷-1-基]丁酸(化合物B)可根據提供於圖 2 中之反應圖來合成。將DSC (50 mg，0.21 mmol)添加至5-(第三丁氧基)-5-側氧基-4-(4,7,10-參(2-(第三丁氧基)-2-側氧基乙基)-1,4,7,10-四氮雜環十二烷-1-基)戊酸(DOTA-GA-(tBu)₄ ，50 mg，0.07 mmol)在ACN (2.0 mL)中之溶液，接著添加吡啶(0.20 mL，2.48 mmol)。使反應在室溫下攪拌1小時。在室溫下，將11-胺基十一烷酸(70 mg，0.36 mmol)添加至反應混合物接著添加PBS溶液(1.0 mL)。使反應在室溫下攪拌72小時。用針筒過濾器過濾反應混合物且藉由使用方法6之Prep-HPLC直接純化以得到中間物2-A。

在室溫下，將吡啶(0.05 mL，50 mg，0.62 mmol)添加至中間物2-A (40 mg，0.03 mmol)、TFP (90 mg，0.54 mmol)及EDC (40 mg，0.27 mmol)在ACN (1.0 mL)中之溶液。使溶液在室溫下攪拌24小時。藉由使用方法7之Prep-HPLC直接純化反應，以提供在使用Biotage V10快速蒸發器濃縮後呈蠟之中間物2-B。

將中間物2-B溶解於DCM/TFA (1.0 mL/2.0 mL)中且允許在室溫下攪拌24小時。藉由空氣流濃縮反應且藉由使用方法8之Prep-HPLC直接純化，得到在濃縮後呈透明蠟之化合物B。實例 3. [²²⁵ Ac]- 化合物 B-hMP-E-8.3 ([²²⁵ Ac]-hMP-E-8.3 結合物 1) 之合成

將化合物B (1 μmol)溶解於鹽酸溶液(0.001M)中。將等分試樣之化合物B溶液(5 μL，70 nmol)添加至包含MP-hE-8.3 (1.8 nmol) (人源化抗TEM-1單株抗體)在磷酸鹽緩衝液(pH 8)中之溶液。在環境溫度下3小時後，經由Sephadex G-50樹脂填充柱純化所得的免疫結合物。用乙酸鹽緩衝液(pH 6.5)自管柱溶離免疫結合物化合物B-hMP-E-8.3。(貫穿全文，名稱「化合物B-hMP-E-8.3」係指在使包含交聯部分之化合物B與hMP-E-8.3反應之後形成之結合物。該結合物不包含交聯部分。)

將Ac-225 (15 μCi，10 μL)添加至化合物B-hMP-E-8.3 (300 μg在乙酸鹽緩衝液(pH 6.5)中)之溶液。將放射性標記反應在30℃下培養1小時。粗產物[²²⁵ Ac]-化合物B-抗hMP-E-8.3經由用乙酸鹽緩衝液溶離之Sephadex G-50樹脂填充管柱純化。實例 4. 4-{[2-(2-{2-[3- 側氧基 -3-(2,3,5,6- 四氟苯氧基 ) 丙氧基 ] 乙氧基 } 乙氧基 ) 乙基 ] 胺甲醯基 }-2-[4,7,10- 參 ( 羧甲基 )-1,4,7,10- 四氮雜環十二烷 -1- 基 ] 丁酸 ( 化合物 C) 之合成

根據提供於圖 3 中之反應圖來合成雙官能螯合物4-{[2-(2-{2-[3-側氧基-3-(2,3,5,6-四氟苯氧基)丙氧基]乙氧基}乙氧基)乙基]胺甲醯基}-2-[4,7,10-參(羧甲基)-1,4,7,10-四氮雜環十二烷-1-基]丁酸(化合物C)。

將DSC (73 mg，0.285 mmol)及吡啶(0.80 mL，9.89 mmol)添加至5-(第三丁氧基)-5-側氧基-4-(4,7,10-參(2-(第三丁氧基)-2-側氧基乙基)-1,4,7,10-四氮雜環十二烷-1-基)戊酸(DOTA-GA(tBu)₄ ，100 mg，0.143 mmol)在ACN (8.0 mL)中之溶液。使反應混合物在環境溫度下攪拌90分鐘。將此溶液添加至100 mL圓底燒瓶內的胺基-PEG3-酸之半溶液(63 mg，0.285 mmol含在1.2 mL DMF中)。在環境溫度下4小時後，藉由在空氣流下濃縮至乾來處理反應。粗物質藉由HPLC溶離方法2 (將粗料溶解於6 mL 20% ACN/H₂ O中)純化。將包含產物之溶離份組併在一起並在真空下濃縮然後與ACN (3 x 2 mL)共蒸發。

將ACN (2 mL)、NEt₃ (50 μL，360 μmol，6當量)、HBTU (23 mg，60 μmol，1當量)及TFP溶液(50 mg，300 μmol，5當量，溶解於250 μL ACN中)添加至裝納中間物1-A (82 mg，60 μmol)的小瓶。使所得的澄清溶液在環境溫度下攪拌3小時。藉由在空氣流下濃縮溶液至乾來處理反應且然後用ACN/H₂ O (1:1，總計3 mL)稀釋並使用溶離方法4在製備型HPLC上純化。將包含產物之溶離份組併在一起並在真空下濃縮，然後與ACN (3 x 2 mL)共蒸發。獲得呈澄清殘餘物之中間物1-B。

將DCM (2 mL)及TFA (2 mL)添加至裝納中間物1-B (67 mg，64 μmol)的小瓶。使所得的溶液在環境溫度下攪拌16小時。另外，添加TFA (2 mL)，且使反應在環境溫度下攪拌6小時。將反應在空氣流下濃縮至乾，且最終將粗產物溶解於ACN/H₂ O (1 mL 10% ACN/H₂ O)中。然後使用溶離方法5藉由製備型HPLC純化粗反應溶液。將包含產物之溶離份組併在一起，冷凍然後凍乾。獲得呈白色固體之化合物C。實例 5. [¹⁷⁷ Lu]- 化合物 C-hMP-E-8.3 及 [²²⁵ Ac]- 化合物 C-hMP-E-8.3 之合成

將化合物C溶解在鹽酸溶液(0.001M)中。將等分試樣之化合物C溶液添加至包含hMP-E-8.3在磷酸鹽緩衝液(pH 9)中之溶液。在環境溫度下1小時後，經由Sephadex G-50樹脂填充管柱純化所得的免疫結合物。用乙酸鹽緩衝液(pH 6.5)自管柱溶離免疫結合物化合物C-hMP-E-8.3。溶離物之身份藉由MALDI-TOF確認。(貫穿全文，名稱「化合物C-hMP-E-8.3」係指在使包含交聯部分之化合物C與hMP-E-8.3反應之後形成之結合物。該結合物不包含交聯部分。)

為了製備[¹⁷⁷ Lu]-化合物C-hMP-E-8.3，將Lu-177 (0.98 mCi)添加至化合物C-hMP-E-8.3 (100 μg含在SABST (pH 6.5)中)之溶液。將放射性標記反應在37℃下培養30分鐘。粗產物經由用乙酸鹽緩衝液溶離之Sephadex G-50樹脂填充管柱純化。[¹⁷⁷ Lu]-化合物C-hMP-E-8.3之螯合物-抗體比為約4.9。

為了製備[²²⁵ Ac]-化合物C-hMP-E-8.3，將Ac-225 (20 μCi，10 μL)添加至化合物C-hMP-E-8.3 (400 μg含在SABST (pH 6.5)中)之溶液。將放射性標記反應在37℃下培養1小時。粗產物經由用乙酸鹽緩衝液溶離之Sephadex G-50樹脂填充管柱純化。[²²⁵ Ac]-化合物C-hMP-E-8.3之螯合物-抗體比為約4.9。

將[¹⁷⁷ Lu]-化合物C-hMP-E-8.3及[²²⁵ Ac]-化合物C-hMP-E-8.3在SABST (pH 6.5)中與10 mM抗壞血酸鹽及1 mM DTPA進行調配，且藉由尺寸排除層析及放射性薄層層析分析產物純度。[¹⁷⁷ Lu]-化合物C-hMP-E-8.3展現＞ 99%之放射化學純度(RCP)及[²²⁵ Ac]-化合物C-hMP-E-8.3展現＞ 98%之放射化學純度。兩種產物之放射化學產率均＞ 75%。實例 6. hMP-E-8.3 及免疫結合物對骨肉瘤細胞之 活 體外結合

藉由流動式細胞測量術，使用經ALEXA FLUOR® 647標記之抗人類TEM-1 (CD248) (純系B1/35；BD PHARMINGEN^TM )來評估SK-N-AS (神經母細胞瘤細胞系)及SJSA-1 (骨肉瘤細胞系)中TEM-1之表現。圖 4A 顯示SK-N-AS細胞之結果，及圖 4B 顯示SJSA-1細胞之結果。TEM-1在SJSA-1細胞中以高程度表現(圖 4A )及在SK-N-AS細胞中以中等程度表現( 圖 4B )。

為了評估hMP-E-8.3及化合物C-hMP-E-8.3結合物(參見實例5)是否亦可結合至TEM-1，用以下染色SJSA-1細胞：1)來自原始儲備溶液之hMP-E-8.3；2)來自經再純化之儲備溶液之hMP-E-8.3；3)化合物C-hMP-E-8.3結合物；或4)同型匹配之對照抗體，然後用FITC標記之二級抗體染色。圖 5 顯示此實驗之流動式細胞測量術結果。如圖5 中所示，化合物C-hMP-E-8.3結合物會結合SJSA-1細胞中之TEM-1以及未修飾之hMP-E-8.3，這證實如實例5中所述的hMP-E-8.3之結合未導致標靶結合之損失。

使用飽和結合研究在SJSA-1細胞中評估[¹⁷⁷ Lu]-化合物C-hMP-E-8.3對TEM-1之結合親和力。如圖 6 中所示，[¹⁷⁷ Lu]-化合物C-hMP-E-8.3證實對SJSA-1細胞之高親和力結合，以及低程度之非特異性結合。[¹⁷⁷ Lu]-化合物C-hMP-E-8.3之K_d 為4.7 nM。(與hMP-E-8.3之為5.0 nM之K_d 相比。)實例 7. 骨肉瘤異種移植模型中 [¹⁷⁷ Lu]- 化合物 C-hMP-E-8.3 之生物分佈

在骨肉瘤異種移植模型中評估[¹⁷⁷ Lu]-化合物C-hMP-E-8.3之生物分佈。藉由將SJSA-1細胞注射至Balb/c裸小鼠中來建立腫瘤。對小鼠(3隻動物/組)給料[¹⁷⁷ Lu]-化合物C-hMP-E-8.3 (放射性為10 µCi；1 µg抗體)且然後在4小時、24小時、48小時、96小時或168小時時殺死，端視其組別而定。評估各組腫瘤及組織中之吸收。

圖 7 顯示在各時間點時血液、骨骼、心臟、腸、腎臟及腎上腺、肝臟及膽囊、肺、肌肉、胰臟、脾臟、胃及腫瘤中之注射劑量/公克百分比(% ID/g)。如圖 7 中所示，[¹⁷⁷ Lu]-化合物hMP-E-8.3在SJSA-1腫瘤中證實高吸收但組織吸收低。在168小時(7天)時，[¹⁷⁷ Lu]-化合物C-hMP-E-8.3具有約85% ID/g之高腫瘤累積。此水平對應於約20%之總劑量(%ID)之累積。

圖 7 亦顯示放射免疫結合物之快速血液清除率，在本實例中，自在4小時時的約44% ID/g降至在7天時的約9% ID/g。脫靶組織中之分佈很低，7天後＜5% ID/g。(hMP-E-8.3不會與小鼠TEM-1交叉反應。)實例 8. [²²⁵ Ac]- 化合物 C-hMP-E-8.3 在 骨肉瘤異種移植模型中之 功效

在人類骨肉瘤癌異種移植模型中測試[²²⁵ Ac]-化合物C-hMP-E-8.3。對雌性Balb/c小鼠(5隻/組)注射SJSA-1細胞以誘導皮下腫瘤異種移植。一旦腫瘤達到約200 mm³ 之體積，對小鼠給料單次劑量為10 nCi、50 nCi、100 nCi、200 nCi或400 nCi之[²²⁵ Ac]-化合物C-hMP-E-8.3。亦包括媒劑及僅抗體之對照。用劑後28天監測並評估腫瘤體積。

圖 8 顯示隨時間之相對腫瘤體積。[²²⁵ Ac]-化合物C-hMP-E-8.3在減少腫瘤生長方面極有效，且腫瘤似乎在較高劑量下消退。實例 9. [²²⁵ Ac]- 化合物 C-hMP-E-8.3 在 神經母細胞瘤異種移植模型中之 功效

在人類神經母細胞瘤癌異種移植模型中測試[²²⁵ Ac]-化合物C-hMP-E-8.3。對雌性Balb/c小鼠(5隻/組)注射SK-N-AS細胞以誘導皮下腫瘤異種移植。一旦腫瘤達到約200 mm³ 之體積，對小鼠給料單次劑量為10 nCi、50 nCi、100 nCi、200 nCi或400 nCi之[²²⁵ Ac]-化合物C-hMP-E-8.3。亦包括媒劑及僅抗體之對照。用劑後28天監測並評估腫瘤體積。

圖 9 顯示隨時間之相對腫瘤體積。[²²⁵ Ac]-化合物C-hMP-E-8.3在減少腫瘤生長方面極有效，且腫瘤似乎在較高劑量下消退。實例 10. [²²⁵ Ac]- 化合物 C-hMP-E-8.3 在 尤因氏肉瘤異種移植模型中之 功效

在人類尤因氏肉瘤癌異種移植模型中測試[²²⁵ Ac]-化合物C-hMP-E-8.3。對雌性Balb/c小鼠(5隻/組)注射A673細胞以誘導皮下腫瘤異種移植。一旦腫瘤達到約200 mm³ 之體積，對小鼠給料單次劑量為10 nCi、50 nCi、100 nCi、200 nCi或400 nCi之[²²⁵ Ac]-化合物C-hMP-E-8.3。亦包括媒劑及僅抗體之對照。用劑後28天監測並評估腫瘤體積。

圖 10 顯示隨時間之相對腫瘤體積。[²²⁵ Ac]-化合物C-hMP-E-8.3在高劑量下降低腫瘤生長。已知用於本實例中之尤因氏肉瘤細胞系與用於實例7至9中之骨肉瘤及神經母細胞瘤細胞系相比表現較低程度之TEM-1且因此證實[²²⁵ Ac]-化合物C-hMP-E-8.3有效抗表現低程度之TEM-1之腫瘤之能力。實例 11. [²²⁵ Ac]- 化合物 C-hMP-E-8.3 對 於腫瘤基質之效應

在人類癌症中，TEM-1通常在與腫瘤相關聯之基質細胞中表現。在一些情況下，包括但不限於乳癌、肺癌、結腸癌、卵巢癌或其他癌症，TEM-1可能不會在癌細胞本身中表現(或僅在低程度下表現)但仍在基質隔室中表現。hMP-E-8.3結合至人類TEM-1但顯示對小鼠TEM-1幾乎沒有交叉反應性且因此在習知腫瘤異種移植模型中不能結合至小鼠衍生之基質細胞，在該模型中人類TEM-1係在由小鼠衍生之基質細胞支撐的人類癌細胞中表現。

為了在TEM-1標靶部分(hMP-E-8.3)能夠僅結合至與腫瘤相關聯之基質細胞之模型中測試[²²⁵ Ac]-化合物C-hMP-E-8.3之治療效應，使用植入於人源化TEM-1-轉殖基因小鼠模型中之腫瘤來測試[²²⁵ Ac]-化合物C-hMP-E-8.3。此模型中之小鼠經基因工程改造以在細胞(包括基質細胞)中表現人類TEM-1，而不是小鼠TEM-1。為了形成腫瘤，將不表現內源性人類TEM-1之癌細胞系之細胞植入至轉殖基因小鼠中。依此方式，在所得腫瘤中表現的僅人類TEM-1標靶係衍生自人源化小鼠基質細胞且可確定其等基質細胞中利用[²²⁵ Ac]-化合物C-hMP-E-8.3標靶人類TEM-1之治療效應。

為了確定於hTEM-1轉殖基因小鼠中形成之腫瘤之基質隔室中標靶人類TEM-1之效應，類似於實例7至10中所述地投與[²²⁵ Ac]-化合物C-hMP-E-8.3，且相對於對照評估腫瘤體積。亦可評估存活率。其他實施例

雖然已結合本發明之特定實施例描述本發明，但應明瞭，本發明能夠進一步修改且本申請案意欲涵蓋一般遵循本發明之原理且包括自本發明之此種偏離的任何變化、使用或調適，該等變化、使用或調適在本發明所屬技術範圍內的已知或慣用實踐之內及可適用於本文在之前所闡述的基本特徵。

圖 1A 為描繪包含螯合物、連接子及交聯基團之雙官能螯合物之一般結構之示意圖。圖 1B 為描繪包含螯合物、連接子及標靶部分之雙官能結合物之一般結構之示意圖。

圖 2 為描繪雙官能螯合物4-{[11-側氧基-11-(2,3,5,6-四氟苯氧基)十一烷基]胺甲醯基}-2-[4,7,10-參(羧甲基)-1,4,7,10-四氮雜環十二烷-1-基]丁酸(化合物B)之合成之示意圖。化合物B之合成描述於實例2中。(參見實例2。）

圖 3 為描繪雙官能螯合物4-{[2-(2-{2-[3-側氧基-3-(2,3,5,6-四氟苯氧基)丙氧基]乙氧基}乙氧基)乙基]胺甲醯基}-2-[4,7,10-參(羧甲基)-1,4,7,10-四氮雜環十二烷-1-基]丁酸(化合物C)之合成之示意圖。化合物C之合成描述於實例4中。(參見實例4。)

圖 4A 及圖 4B 顯示經市售抗人類TEM-1 (CD248)抗體染色之SK-N-AS (神經母細胞瘤)細胞及SJSA-1 (骨肉瘤)細胞之各自流動式細胞測量術結果。圖4A及4B中之最左側峰表示經同型匹配之對照抗體而不是經抗人類TEM-1染色之細胞。(參見實例6。)

圖 5 顯示經以下染色：1)來自原始儲備溶液之hMP-E-8.3；2) 來自再純化之儲備溶液之hMP-E-8.3；3)化合物C-hMP-E-8.3結合物；或4)同型匹配之對照抗體，然後經FITC標記之二級抗體染色之SJSA-1細胞之流動式細胞測量術結果。最左側峰指示未經染色之細胞。(參見實例6。)

圖 6 顯示使用SJSA-1細胞之飽和結合研究以測定[¹⁷⁷ Lu]-化合物C-hMP-E-8.3之結合親和力之結果。(參見實例6。)

圖 7 顯示在SJSA-1骨肉瘤小鼠模型中之生物分佈研究之結果。對小鼠注射[¹⁷⁷ Lu]-化合物C-hMP-E-8.3且在4小時、24小時、48小時、96小時或168小時時殺死。評估血液、骨骼、心臟、腸、腎臟+腎上腺、肝臟+膽囊、肺、肌肉、胰臟、脾臟、胃或腫瘤中之注射劑量/公克百分比(% ID/g)。(參見實例7。)

圖 8 顯示經[²²⁵ Ac]-化合物C-hMP-E-8.3 (10 nCi、50 nCi、100 nCi、200 nCi或400 nCi)或經媒劑或抗體對照注射之小鼠之SJSA-1骨肉瘤小鼠模型中之腫瘤生長曲線。(參見實例8。)

圖 9 顯示經[²²⁵ Ac]-化合物C-hMP-E-8.3 (10 nCi、50 nCi、100 nCi、200 nCi或400 nCi)或經媒劑或抗體對照注射之小鼠之SK-N-AS神經母細胞瘤小鼠模型中之腫瘤生長曲線。(參見實例9。)

圖 10 顯示經[²²⁵ Ac]-化合物C-hMP-E-8.3 (10 nCi、50 nCi、100 nCi、200 nCi或400 nCi)或經媒劑或抗體對照注射之小鼠之A673尤因氏肉瘤小鼠模型中之腫瘤生長曲線。(參見實例10。)

Claims

一種放射免疫結合物，其包含以下結構： A-L-B (式I-a) 或其醫藥上可接受之鹽，其中： A為螯合部分或其金屬錯合物， B為TEM-1標靶部分，及 L為連接子。
如請求項1之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該螯合部分係選自由以下組成之群：DOTA、DOTMA、DOTAM、DOTPA、DO3AM-乙酸、DOTA-GA酸酐、DOTP、DOTMP、DOTA-4AMP、CB-TE2A、NOTA、NOTP、TETPA、TETA、HEHA、PEPA、H₄ octapa、H₂ dedpa、H₆ phospa、TTHA、DO2P、HP-DO3A、EDTA、去鐵胺(Deferoxamine)、DTPA、DTPA-BMA、八齒-HOPO及卟啉。
如請求項1之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中A為螯合部分之金屬錯合物。
如請求項3之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該金屬錯合物包含放射性核種。
如請求項4之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該放射性核種為α發射體。
如請求項5之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該放射性核種為選自由砈-211 (²¹¹ At)、鉍-212 (²¹² Bi)、鉍-213 (²¹³ Bi)、錒-225 (²²⁵ Ac)、鐳-223 (²²³ Ra)、鉛-212 (²¹² Pb)、釷-227 (²²⁷ Th)及鋱-149 (¹⁴⁹ Tb)或其次級粒子組成之群之α發射體。
如請求項6之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該放射性核種為²²⁵ Ac或其次級粒子。
如請求項1之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中L具有結構-L¹ -(L² )_n -，如式I-b內所示： A-L¹ -(L² )_n -B (式I-b) 其中： A為螯合部分或其金屬錯合物； B為TEM-1標靶部分； L¹ 為鍵、視需要經取代之C₁ -C₆ 烷基、視需要經取代之C₁ -C₆ 雜烷基或視需要經取代之芳基或雜芳基； n為介於1與5 (含)之間的整數；及各L² 獨立地具有結構： -X¹ -L³ -Z¹ - (式III) 其中： X¹ 為C=O(NR¹ )、C=S(NR¹ )、OC=O(NR¹ )、NR¹ C=O(O)、NR¹ C=O(NR¹ )、-CH₂ PhC=O(NR¹ )、-CH₂ Ph(NH)C=S(NR¹ )、O或NR¹ ；且各R¹ 獨立地為H、視需要經取代之C₁ -C₆ 烷基、視需要經取代之C₁ -C₆ 雜烷基或視需要經取代之芳基或雜芳基，其中C₁ -C₆ 烷基可經側氧基(=O)、雜芳基或其組合取代； L³ 為視需要經取代之C₁ -C₅₀ 烷基或視需要經取代之C₁ -C₅₀ 雜烷基；且 Z¹ 為CH₂ 、C=O、C=S、OC=O、NR¹ C=O或NR¹ ，其中R¹ 為氫或視需要經取代之C₁ -C₆ 烷基或吡咯啶-2,5-二酮。
如請求項8之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中L³ 為C₅ -C₂₀ 聚乙二醇。
如請求項8之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中L³ 為(CH₂ CH₂ O)_m (CH₂ )_w ，且m及w獨立地為介於0與10 (含)之間的整數。
如請求項8之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該放射免疫結合物包含以下結構：
，其中B為TEM-1標靶部分。
如請求項1之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中L具有結構-L¹ -(L² )_n -，如式I-b內所示： A-L¹ -(L² )_n -B (式I-b) 其中： A為DOTA或其金屬錯合物； B為TEM-1標靶部分； L¹ 為鍵或C₁ -C₆ 烷基； n為1；且 L² 具有結構： -X¹ -L³ -Z¹ - (式III) 其中： X¹ 為C=O(NR¹ )，且R¹ 為H或C₁ -C₆ 烷基； L³ 為(CH₂ CH₂ O)_m (CH₂ )_w ，且m及w獨立地為介於0與10 (含)之間的整數；及 Z¹ 為C=O。
如請求項1至12中任一項之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該TEM-1標靶部分為至少100 kDa大小。
如請求項13之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該TEM-1標靶部分為至少150 kDa大小。
如請求項14之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該TEM-1標靶部分為至少200 kDa大小。
如請求項15之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該TEM-1標靶部分為至少250 kDa大小。
如請求項16之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該TEM-1標靶部分為至少300 kDa大小。
如請求項1至17中任一項之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該TEM-1標靶部分能夠結合至人類TEM-1。
如請求項1至18中任一項之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該TEM-1標靶部分包含抗體或其抗原結合片段。
如請求項19之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該抗體或其抗原結合片段係經人源化。
如請求項19或20之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該抗體或其抗原結合片段能夠結合包含SRDHQIPVIAAN (SEQ ID NO: 2)之胺基酸序列之抗原決定基。
如請求項19至21中任一項之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該抗體或其抗原結合片段包含至少一個選自由以下組成之群之互補決定區(CDR)： CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 3或4之胺基酸序列、或與SEQ ID NO: 3或4在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列；或 CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列。
如請求項22之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該抗體或其抗原結合片段包含至少兩個選自由以下組成之群之CDR： CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 3或4之胺基酸序列、或與SEQ ID NO: 3或4在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列；或 CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列。
如請求項23之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該抗體或其抗原結合片段包含至少三個選自由以下組成之群之CDR： CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 3或4之胺基酸序列、或與SEQ ID NO: 3或4在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列；或 CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列。
如請求項24之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該抗體或其抗原結合片段包含至少四個選自由以下組成之群之CDR： CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 3或4之胺基酸序列、或與SEQ ID NO: 3或4在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列；或 CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列。
如請求項25之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該抗體或其抗原結合片段包含至少五個選自由以下組成之群之CDR： CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 3或4之胺基酸序列、或與SEQ ID NO: 3或4在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列；或 CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列。
如請求項26之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該抗體或其抗原結合片段包含： CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 3或4之胺基酸序列、或與SEQ ID NO: 3或4在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列；或 CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列。
如請求項19至21中任一項之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該抗體或其抗原結合片段包含 (i) 重鏈可變域，其包含至少一個CDR，該CDR係選自由以下組成之群： CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 3或4之胺基酸序列、或與SEQ ID NO: 3或4在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列；及 (ii) 輕鏈可變域，其包含至少一個CDR，該CDR係選自由以下組成之群： CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列；及 CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列。
如請求項28之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該抗體或其抗原結合片段包含 (i) 重鏈可變域，其包含至少一個CDR，該CDR係選自由以下組成之群： CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 3或4之胺基酸序列； CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列； CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列；及 (ii) 輕鏈可變域，其包含至少一個CDR，該CDR係選自由以下組成之群： CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列； CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列；及 CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列。
如請求項28或29之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該抗體或其抗原結合片段包含 (i) 重鏈可變域，其包含至少兩個CDR，該CDR係選自由以下組成之群： CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 3或4之胺基酸序列、或與SEQ ID NO: 3或4在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列；及 (ii) 輕鏈可變域，其包含至少兩個CDR，該CDR係選自由以下組成之群： CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列；及 CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列。
如請求項30之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該抗體或其抗原結合片段包含 (i) 重鏈可變域，其包含至少兩個CDR，該CDR係選自由以下組成之群： CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 3或4之胺基酸序列； CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列； CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列；及 (ii) 輕鏈可變域，其包含至少兩個CDR，該CDR係選自由以下組成之群： CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列； CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列；及 CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列。
如請求項30或31之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該抗體或其抗原結合片段包含 (i) 重鏈可變域，其包含： CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 3或4之胺基酸序列、或與SEQ ID NO: 3或4在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列；及 CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列；及 (ii) 輕鏈可變域，其包含： CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列； CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列；及 CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列、或與之在1或2個胺基酸不同之胺基酸序列。
如請求項32之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該抗體或其抗原結合片段包含 (i) 重鏈可變域，其包含： CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 3或4之胺基酸序列； CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列； CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列；及 (ii) 輕鏈可變域，其包含： CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列； CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列；及 CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列。
如請求項19至21中任一項之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該抗體或其抗原結合片段包含 (i) 重鏈可變域，其具有與SEQ ID NO: 16之胺基酸序列具有至少85%同一性之胺基酸序列；及 (ii) 輕鏈可變域，其具有與SEQ ID NO: 21之胺基酸序列具有至少85%同一性之胺基酸序列。
如請求項34之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該抗體或其抗原結合片段包含 (i) 重鏈可變域，其具有與SEQ ID NO: 16之胺基酸序列具有至少90%同一性之胺基酸序列；及 (ii) 輕鏈可變域，其具有與SEQ ID NO: 21之胺基酸序列具有至少90%同一性之胺基酸序列。
如請求項35之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該抗體或其抗原結合片段包含 (i) 重鏈可變域，其具有與SEQ ID NO: 16之胺基酸序列具有至少95%同一性之胺基酸序列；及 (ii) 輕鏈可變域，其具有與SEQ ID NO: 21之胺基酸序列具有至少95%同一性之胺基酸序列。
如請求項36之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該抗體或其抗原結合片段包含 (i) 重鏈可變域，其包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列；及 (ii) 輕鏈可變域，其包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列。
如請求項37之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該抗體為hMP-E-8.3。
如請求項1至38中任一項之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中，在對哺乳動物投與該放射免疫結合物或其組合物之後，藉由腸途徑、腎途徑或兩種途徑所排泄之輻射之比例比由已投與參考放射免疫結合物的可比較哺乳動物藉由相同途徑所排泄的輻射之比例高至少2倍。
如請求項39之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中，在對哺乳動物投與該放射免疫結合物或其組合之後，藉由腸途徑、腎途徑或兩種途徑所排泄之輻射之比例比由已投與參考放射免疫結合物的可比較哺乳動物藉由相同途徑所排泄的輻射之比例高至少3倍。
如請求項1之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中A-L-為選自由以下組成之群之部分之金屬錯合物： (i)
( 部分 1) (ii)
( 部分 2) (iii)
( 部分 3) ；及 (iv)
( 部分 4) 。
如請求項41之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中A-L-為部分1之金屬錯合物：
。( 部分 1)
如請求項42之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該金屬錯合物包含放射性核種。
如請求項43之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該放射性核種為α發射體。
如請求項44之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該放射性核種為選自由以下組成之群之α發射體：砈-211 (²¹¹ At)、鉍-212 (²¹² Bi)、鉍-213 (²¹³ Bi)、錒-225 (²²⁵ Ac)、鐳-223 (²²³ Ra)、鉛-212 (²¹² Pb)、釷-227 (²²⁷ Th)及鋱-149 (¹⁴⁹ Tb)或其次級粒子。
如請求項45之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該放射性核種為²²⁵ Ac或其次級粒子。
如請求項46之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該TEM-1標靶部分包含抗體或其抗原結合片段。
如請求項47之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該抗體或其抗原結合片段係經人源化。
如請求項48之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該抗體或其抗原結合片段包含 (i) 重鏈可變域，其包含： CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 3或4之胺基酸序列； CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列；及 CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列；及 (ii) 輕鏈可變域，其包含： CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列； CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列；及 CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列。
如請求項48之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該抗體或其抗原結合片段包含 (i) 重鏈可變域，其具有與SEQ ID NO: 16之胺基酸序列具有至少95%同一性之胺基酸序列；及 (ii) 輕鏈可變域，其具有與SEQ ID NO: 21之胺基酸序列具有至少95%同一性之胺基酸序列。
如請求項50之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該抗體或其抗原結合片段包含 (i) 重鏈可變域，其包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列；及 (ii) 輕鏈可變域，其包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列。
如請求項51之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該抗體或其抗原結合片段為hMP-E-8.3或其抗原結合片段。
如請求項52之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該抗體或其抗原結合片段為hMP-E-8.3。
如請求項42之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽，其包含以下結構
，其中
為hMP-E-8.3。
一種醫藥組合物，其包含如請求項1至54中任一項之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽及醫藥上可接受之載劑。
一種治療癌症之方法，該方法包括對有需要之個體投與包含有效量之如請求項1至54中任一項之放射免疫結合物或其醫藥上可接受之鹽之醫藥組合物。
如請求項56之方法，其中該個體為哺乳動物。
如請求項57之方法，其中該哺乳動物為人類。
如請求項56至58中任一項之方法，其中與該癌症相關聯之腫瘤基質細胞表現TEM-1。
如請求項56至59中任一項之方法，其中該癌症包括表現TEM-1之細胞。
如請求項56至60中任一項之方法，其中該癌症為實體腫瘤癌。
如請求項61之方法，其中該實體腫瘤癌為肉瘤。
如請求項62之方法，其中該肉瘤係選自由以下組成之群：血管肉瘤或血管內皮瘤、星形細胞瘤、軟骨肉瘤、尤因氏肉瘤(Ewing’s sarcoma)、纖維肉瘤、膠質瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、惡性纖維組織細胞瘤(MFH)、間葉瘤(mesenchymous)或混合型中胚層腫瘤、間皮肉瘤或間皮瘤、黏液肉瘤、骨肉瘤、橫紋肌肉瘤及滑膜肉瘤。
如請求項63之方法，其中該肉瘤為骨肉瘤。
如請求項63之方法，其中該肉瘤為尤因氏肉瘤。
如請求項61之方法，其中該實體腫瘤癌為癌。
如請求項66之方法，其中該癌係選自由以下組成之群：腺樣囊狀癌、腎上腺皮質癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮內膜癌、膽囊癌、胃癌、頭頸癌、肺癌(例如小細胞肺癌或非小細胞肺癌、或肺腺癌)、神經母細胞瘤、神經內分泌癌、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、腎癌、睾丸癌。
如請求項61之方法，其中該實體腫瘤癌為胰臟癌。
如請求項61之方法，其中該實體腫瘤癌為乳癌。
如請求項61之方法，其中該實體腫瘤癌為頭頸癌。
如請求項61之方法，其中該實體腫瘤癌為肝癌。
如請求項61之方法，其中該實體腫瘤癌為肺癌。
如請求項61之方法，其中該實體腫瘤癌為腦癌。
如請求項61之方法，其中該實體腫瘤癌為神經母細胞瘤。
如請求項61之方法，其中該實體腫瘤癌為黑色素瘤。
如請求項56至75中任一項之方法，其中該醫藥組合物係經全身性投與的。
如請求項76之方法，其中該醫藥組合物係非經腸投與的。
如請求項77之方法，其中該醫藥組合物係經靜脈內投與的。
如請求項77之方法，其中該醫藥組合物係經動脈內投與的。
如請求項77之方法，其中該醫藥組合物係經腹膜內投與的。
如請求項77之方法，其中該醫藥組合物係經皮下投與的。
如請求項77之方法，其中該醫藥組合物係經皮內投與的。
如請求項77之方法，其中該醫藥組合物係經腸道投與的。
如請求項83之方法，其中該醫藥組合物係跨胃腸道投與的。
如請求項83之方法，其中該醫藥組合物係經口投與的。
如請求項56至75中任一項之方法，其中該醫藥組合物係經局部投與的。
如請求項86之方法，其中該醫藥組合物係藉由瘤周注射投與的。
如請求項86之方法，其中該醫藥組合物係藉由瘤內注射投與的。