TW202203936A - 啟動內源性抗菌藥物治療ｓａｒｓ－ｃｏｖ－２感染 - Google Patents

啟動內源性抗菌藥物治療ｓａｒｓ－ｃｏｖ－２感染 Download PDF

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Abstract

本文提供了在需要其的受試者中治療COVID-19的方法，包括向受試者 施用25-羥基維生素D化合物。本文還提供了25-羥基維生素的硬膠囊劑型。在一些方面中，25-羥基維生素D作為控釋製劑給藥，任選地為緩釋口服製劑，例如Rayaldee®緩釋骨化二醇膠囊。提供了治療SARS-CoV-2感染的方法，包括減少SARS-CoV-2病毒載量。提供了治療SARS-CoV-2感染的方法，包括增強免疫應答。

Description

啟動內源性抗菌藥物治療SARS-COV-2感染
【相關申請的交叉參考】
特此聲明，根據35 U.S.C.§119(e)，於2020年4月6日提交的第63/006034號美國臨時專利申請、於2020年4月7日提交的第63/006563號美國臨時專利申請、於2020年4月13日提交的第63/009155號美國臨時專利申請、於2020年4月20日提交的第63/012781號美國臨時專利申請和於2020年5月31日提交的第63/032714號美國臨時專利申請的利益，並通過引用將其公開併入本文。
【序列表以引用的方式併入】
通過引用將電腦可讀的核苷酸/氨基酸序列列表整體併入本文中，該清單同時提交並標識如下：名為31138/55530ESeq.txt的ASCII(文本)檔；大小：156198位元組，創建於2021年4月4日。
本公開一般涉及SARS-CoV-2感染的治療。更具體地說，本發明涉及用骨化二醇(包括緩釋骨化二醇(ERC))治療SARS-CoV-2感染，其特徵在於靶血清總25-羥基維生素D濃度閾值。
嚴重急性呼吸綜合征冠狀病毒2型(SARS-CoV-2)是一種屬於冠狀病毒科包膜病毒的新型病毒。SARS-CoV-2是一種與蝙蝠冠狀病毒基因相似的正鏈RNA病毒，於2020年1月首次從武漢地區患者體內分離(Hui et al.,International J Infectious Diseases 91：264-266(2020))。截至2020年3月底，超過90萬人感染SARS-CoV-2，超過45000人死於由SARS-CoV-2感染引起的冠狀病毒2019(COVID-19)。到2020年5月底，全世界有近600萬人被診斷為感染，死亡人數超過35萬。
目前，還沒有政府監管機構批准的治療COVID-19或SARS-CoV-2感染的藥物。儘管抗瘧藥物、氯喹和羥氯喹(含有或不含抗生素(如阿奇黴素))已被評估用於治療SARS-CoV-2患者(Liu et al.,Cell Discov 6：16(2020)；Yao et al.,Clin Infect Dis PMID 32150618；and Gautret et al.,Int J Antimicro Agents PMID 32205204,105949(2020))，治療效果尚未在大型的、適當控制的臨床試驗環境中得到證實。參考例如，Yazdany and Kim,Annals of Internal Medicine DOI：10.7326/M20-1334(2020)。因此，需要預防SARS-CoV-2感染和治療SARS-CoV-2受試者或COVID-19受試者的方法。
已在例如美國專利號82207149、8426391、9861644、美國專利申請公開號2019/0083513A1和國際專利申請公開號WO2020/044314A1中描述了緩釋骨化二醇(ERC)劑型和相關方法，其全部公開內容通過引用併入本文中。FDA批准的相關產品以Rayaldee®骨化二醇緩釋膠囊的形式銷售。
本公開的一個方面提供了治療或預防SARS-CoV-2感染或COVID-19疾病的方法，所述方法包括向需要其的受試者施用有效量的25-羥基維生素D，任選地，其緩釋製劑以實現血清總25-羥基維生素D水準至少為50ng/mL，或至少60ng/mL。
本公開的一個方面提供了降低有需要的和感染SARS-CoV-2的受試者的病毒載量的方法，所述方法包括向需要其的受試者施用有效量的25-羥基維生素D，任選地，其緩釋製劑以實現血清總25-羥基維生素D水準至少為50ng/mL，或至少60ng/mL。
本公開的另一個方面提供了用於治療SARS-CoV-2感染或COVID-19疾病的方法中的25-羥基維生素D組合物，如本文進一步描述的，任選地為緩釋25-羥基維生素D組合物。
本公開的另一方面提供了25-羥基維生素D在製造用於治療SARS-CoV-2感染或COVID-19疾病的藥物中的用途，如本文進一步描述的，任選地為25-羥基維生素D的緩釋製劑。
本公開的另一方面提供了包含25-羥基維生素D和基於蠟的控釋劑的軟膠囊控釋劑型，其中劑型的體外和體內釋放曲線比參考劑型RAYALDEE快，任選地快1-10%。
本公開的另一方面提供了治療患者中與SARS-CoV-2感染相關的病症的方法，包括向患者施用藥物有效量的口服劑型的25-羥基維生素D3的維持劑量，其中患者的維生素D代謝物比率(VMR，以血清24，25-二羥基維 生素D3與血清25-羥基維生素D3的比例的100倍計算)在整個維持劑量給藥期間保持基本恒定或降低。
本公開的另一方面提供了用於治療患有或懷疑患有SARS-CoV-2感染的患者的給藥方案，包括向患者施用包含控釋賦形劑和藥學有效量的25-羥基維生素D3的緩釋劑型，並且其中劑型在維持給藥期間以30至70μg/天的量施用並且在治療的第一天，第二天或第三天，任選地在負荷劑量給藥期之前以300至900μg/天的範圍的量進行，其中患者的維生素D代謝物比率(VMR，以血清24,25-二羥基維生素D3與血清25-羥基維生素D3的比例的100倍計算)在維持劑量給藥期間保持基本恒定或降低。
本公開的另一方面提供了一種硬膠囊劑型，其包括一種硬殼膠囊，其包含包括25-羥基維生素D化合物的固體或半固體組合物。
對於本文所述的組合物和方法，預期任選特徵，包括但不限於組分，其組成範圍，取代基，條件和步驟，選自本文提供的各個方面，實施方案和實施例。
通過結合附圖回顧以下詳細描述，本領域普通技術人員將顯而易見的其他方面和優點。儘管這些方法，用途和組合物易受各種形式的實施例的影響，但以下描述包括具體實施例，但理解為本公開是說明性的，並且不打算將本發明限制于本文所述的具體實施例。
為了方便理解本發明，附上十副附圖。
顯示了通過在第1天給藥532mcg和在第3、7、14、21、28天給藥266mcg，給予成人速釋的25-羥基維生素D3(生物利用度約75%)劑量與預計血清總25-羥基維生素D水準的函數，假設基線血清總25-羥基維生素D水準為25ng/mL。
圖2-4顯示了根據實施例4中描述的給藥方法的受試者的模擬血清25-羥基維生素D3水準，在禁食給藥的受試者(圖2)，餐後給藥的受試者(圖3)和以平均的餐後和禁食劑量給藥的受試者(圖4)。
圖5和圖6顯示了根據實施例4恢復日常活動並恢復正常健康的受試者的頻率分佈。
圖7顯示口服900mcg的改性釋放(modified release)骨化二醇膠囊後25-羥基維生素D3的平均血清濃度曲線。
圖8顯示了根據公開內容的劑型的體外溶出曲線。
圖9顯示了在患有繼發性甲狀旁腺功能亢進症(SHPT)，3期或4期慢性腎病(CKD)和維生素D不足的成年患者中重複給予ERC(Rayaldee®型製劑)，IR骨化二醇，高劑量膽骨化醇和帕立骨化醇加低劑量膽骨化醇的血清總25-D濃度隨時間的變化。
圖10顯示了在患有繼發性甲狀旁腺功能亢進症(SHPT)、3期或4期慢性腎病(CKD)和維生素D不足的成年患者中重複給予ERC(Rayaldee®型製劑)，IR骨化二醇，高劑量膽骨化醇和帕立骨化醇加低劑量膽骨化醇的VMR隨時間的變化。
抗原呈遞細胞(單核/巨噬細胞和樹突狀細胞)中的先天免疫應答是由感染病毒的病原體相關分子模式(PAMPs)與模式識別受體(如，Toll樣受體【TLR】)相互作用而啟動和持續的。TLR啟動導致細胞內維生素D受體(VDR)和CYP27B1(25-羥基維生素D【25D】-1α-羥化酶)的表達上調；後者上調了活性維生素D代謝物、1,25-二羥基維生素D的局部生成。然後，1,25-二羥基維生素D可以以內分泌模式與VDR結合，其反過來控制Cathelicidin抗微生物肽(CAMP)和白細胞介素1β(IL-1β)基因表達，IL-1β是適應性免疫應答的中心啟動子。當25-羥基維生素D以足夠的量供應給巨噬細胞時，細胞局部產生1,25-二羥基維生素D，其與維生素D受體(VDR)結合。由於在該基因的啟動子中存在維生素D應答元件，免疫細胞(如巨噬細胞)中VDR的啟動導致Cathelicidin抗微生物肽(CAMP)基因的上調。CAMP的表達導致稱為CAP-18的前體肽的產生增加，其裂解導致兩種抗微生物肽(AMPs)的產生，稱為LL37和FALL 39。
1,25-二羥基維生素D的酶促產生取決於底物25-羥基維生素D的血清供應。25-羥基維生素D是人體內維生素D的主要迴圈代謝產物。LL37的表達和分泌，以及許多其他內源性抗微生物活性，需要誘導和引發。維生素D，特別是25-羥基維生素D是一種關鍵的調節信號，其可以引發人類巨噬細胞快速而強大的抗菌應答，包括在感染部位使用LL37(Gombart AF,Saito T,Koeffler HP.Exaptation of an ancient Alu short interspersed element provides a highly conserved vitamin D-mediated innate immune response in humans and primates.BMC Genomics.2009；10：321)。
沒有足夠血清總25-羥基維生素D的巨噬細胞無法釋放LL37，從而保護宿主。人血清中總25-羥基維生素D水準不足禁止i)足夠的細胞內產生1,25D，ii)VDR的充分啟動，iii)Cathelicidin基因的充分反式啟動和iv)LL37的充分產生和釋放以對抗微生物入侵宿主。最終結果是先天和隨後適應性免疫缺陷。
不希望受到任何特定理論的約束，據信將血清總25-羥基維生素D提高到足夠高的水準可以解決人宿主中的免疫受損狀態並避免感染和相關併發症的進展惡化。從另一個角度來看，據信將血清總25-羥基維生素D提高到足夠高的水準可以預防人類宿主中的免疫受損狀態或更嚴重的免疫受損狀態，並避免感染或感染和相關併發症的進展惡化。用維生素D補充劑來實現這一點是不可靠的，並且其由於非極性維生素的分佈體積增加而難以用於肥胖症。根據最新報告的美國資料，預計許多SARS-CoV-2受試者的體重指數(BMI)高於正常水準。相反，提高25-羥基維生素D和/或ERC更為快速，可靠，並且取決於給藥劑量，可花費時間少至4、8或9至12小時。用25-羥基維生素D治療並且其已被證明是安全的。美國FDA批准Rayaldee®(骨化二醇)緩釋膠囊的證據表明，用ERC治療對於3或4期慢性腎病(CKD)患者是安全的。Rayaldee®(骨化二醇)緩釋膠囊於2016年獲得美國食品和藥品管理局(FDA)的批准，通過將血清總25-羥基維生素D從<30ng/mL提升至30~100ng/mL的範圍內，來治療3或4期CKD成人患者的繼發性甲狀旁腺功能亢進症(SHPT)。最近已經表明，25-羥基維生素D需要血清總25-羥基維生素D水準
Figure 110112408-A0202-12-0007-16
50ng/mL才能在慢性腎病(CKD)患者中產生維生素D響應終點，可能經腎外CYP27B1 啟動(Strugnell SA,Sprague SM,Ashfaq A et al.Rationale for Raising Current Clinical Practice Guideline Target for Serum 25-Hydroxyvitamin D in Chronic Kidney Disease.Am J Nephrol.2019；49：284-293)。不希望受任何特定理論的約束，25-羥基維生素D似乎需要誘導25-羥基維生素D的腎外活化的類似水準，通過在病毒刺激的巨噬細胞中表達的CYP27B1，在體內被活化。此外，顯示出可用ERC安全有效地達到至少50ng/mL的血清總25-羥基維生素D水準(隨著時間的推移在1,25-二羥基維生素D中升高)。不希望受到任何特定理論約束，可以預期的是，通過改性釋放(緩釋和/或延遲釋放)遞送25-羥基維生素D參與腎外產生1,25-二羥基維生素D，而不會上調分解代謝25-羥基維生素D和1,25-二羥基維生素D化合物的CYP24酶，從而提供更有效的治療。
因此，本文公開的一個方面是治療成人中由SARS-CoV-2引起的無併發症急性疾病的方法，例如症狀不超過7天的成人。還提供了在兒科受試者(任選年齡為12歲至17歲的受試者)中治療由SARS-CoV-2引起的無併發症急性疾病的方法，例如症狀不超過7天的受試者。任選地，感染的受試者可以是症狀性的不超過5天，或不超過3天。在其他方面，感染的受試者可以是有症狀前的。在其他方面，感染的受試者可以是症狀不超過10天，或不超過14天的。
該方法的另一個方面是用骨化二醇(任選ERC)治療SARS-CoV-2感染，包括使患者的血清總25-羥基維生素D水準達到至少50ng/mL，任選地至少60ng/mL，並且任選地大於60ng/mL。任選地，血清總25-羥基維生素D水準維持所有或基本上所有治療持續時間，例如至少13天、或至少14天、或19天、或20天、或21天、或27天、或28天、或2至30天、或2至28天、或2 至27天、或2至21天、或2至20天、或2至19天、或7至30天、7至14天、7至20天、或13至30天、或14至30天。
另一方面包括治療已經接種SARS-CoV-2或COVID-19疫苗(第一劑和/或第二劑，如果可適用的)的受試者和在接種疫苗預防疾病之前導致症狀性COVID-19疾病具有傳染性的受試者。
另一方面包括治療已經接種SARS-CoV-2或COVID-19疫苗(第一劑和/或第二劑，如果適用)的受試者和基於SARS-CoV-2變體(例如在整個基因組核苷酸序列上與SEQ ID NO：1具有至少80%序列同一性)導致症狀性COVID-19疾病的受試者。
在不受特定理論約束的情況下，如本文所述在被SARS-CoV-2感染的受試者中血清總25-羥基維生素D的升高導致AMP的產生，例如LL37，其中AMP提供對這些受試者的治療性治療。
因此，本公開提供了治療SARS-CoV-2感染的方法。在實施例中，該方法包括向需要其的受試者施用有效量的25-羥基維生素D化合物以治療SARS-CoV-2感染。該公開還提供了25-羥基維生素D用於治療SARS-CoV-2感染的相關用途，以及2-羥基維生素D在製造用於治療SARS-CoV-2感染的藥物中的用途。
本公開還提供了降低需要其並感染SARS-CoV-2的受試者的病毒載量的方法。在示例性實施方案中，該方法包括向受試者施用有效量的25-羥基維生素D化合物以減少受試者的SARS-CoV-2病毒載量。
本公開進一步提供了在感染SARS-CoV-2的受試者中增強免疫應答的方法。在實施方案中，該方法包括向受試者施用足量的25-羥基維生素D化合物。
在一些方面，治療SARS-CoV-2感染的方法包括治療和/或避免過度炎症反應，例如細胞因數釋放綜合征，即細胞因數風暴。越來越多的資料表明，對COVID-19的過度活躍的免疫反應對心血管系統構成獨特的風險，並在疾病嚴重程度上發揮作用。隨著疾病的進展，炎性細胞因數水準的伴隨升高可能導致T細胞群的消耗和耗盡。在其他方面，維生素D是一種免疫調節劑，與自身免疫性疾病的病理生理學有關，包括系統性紅斑狼瘡和多發性硬化症。維生素D不足是多發性硬化症的危險因素，並與疾病嚴重程度相關。因此，除了上調抗微生物蛋白LL37以對抗COVID-19之外，預期用25-羥基維生素D進行適當的治療可以幫助減輕過度活躍的免疫系統並改善免疫細胞耗盡。用25-羥基維生素D適當治療可能有助於減輕過度活躍的、適應性T淋巴細胞和B淋巴細胞免疫系統。研究顯示住院COVID-19患者血液中炎症誘導細胞因數水準升高。Huang等人描述了ICU患者和非ICU患者的血漿IL-1β、IL-1RA、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、鹼性FGF、GCSF、GMCSF、IFNγ、IP10、MCP1、MIP1A、MIP1B、PDGF、TNFα和VEGF濃度均高於健康成人(Huang et al.“Clinical features of patients infected with 2019 novel coronavirus in Wuhan,China”Lancet.2020 15-21 February；395(10223)：497-506)。Zhang等人描述了SARS-Cov-2感染患者中IL-6水準升高(Zhang et al.“The cytokine release syndrome(CRS)of severe COVID-19 and Interleukin-6 receptor(IL-6R)antagonist Tocilizumab may be the key to reduce the mortality”Int J Antimicrob Agents.2020 Mar 29：105954)。 在實施方案中，該方法包括向受試者施用足夠量的25-羥基維生素D化合物以使一種或多種促炎性細胞因數正常化，或避免一種或多種促炎性細胞因數升高，例如與未治療的患者相比。Herold等人報告了IL-6升高與機械通氣的需要密切相關，並且疾病期間每位患者達到最大IL-6水準(截止值80pg/mL)預示著呼吸衰竭。IL-6水準為80pg/mL的患者呼吸衰竭的風險是IL-6水準較低的患者的22倍。(Herold et al.“Level of IL-6 predicts respiratory failure in hospitalized symptomatic COVID-19 patients”medRxiv preprint April 10,2020(doi：https：//doi.org/10.1101/2020.04.01.20047381))。Gong等報告了IL-6，IL-8，IL-10和TNFα水準與疾病嚴重程度之間的相關性，包括危重患者具有較高比例的IL-6>100pg/mL、IL-8>62pg/mL、IL-10>20pg/mL和TNFα>11pg/mL的患者。(Gong et al.“Correlation Analysis Between Disease Severity and Inflammation-related Parameters in Patients with COVID-19 Pneumonia”medRxiv preprint February 27,2020(doi：https：//doi.org/10.1101/2020.02.25.20025643))。另外，Gong等人報告了嚴重患者具有較高比例的IL-6>30pg/mL、IL-8>31pg/mL、IL-10>9.1pg/mL和TNFα>8.1pg/mL的患者。因此，本文方法的一個方面包括施用25-羥基維生素D療法以避免促炎細胞因數的過量產生。本文方法的一個方面包括施用25-羥基維生素D療法以保持IL-6水準低於100pg/mL，或80pg/mL或30pg/mL。本文方法的另一方面包括施用25-羥基維生素D療法以保持IL-8水準低於62pg/mL或31pg/mL。本文方法的另一方面包括施用25-羥基維生素D療法以保持IL-10水準低於20pg/mL或9.1pg/mL。本文方法的另一方面包括施用25-羥基維生素D療法以保持TNFα水準低於11pg/mL或8.1pg/mL。
在一些方面，治療SARS-CoV-2感染的方法包括治療和/或避免與SARS-CoV-2感染相關的小兒炎症綜合征，其被稱為與SARS-CoV-2暫時相關的小兒多系統炎症綜合征(PIMS-TS)和兒童多系統炎症綜合征(MIS-C)。懷疑在患有PMIS-TS的兒童中，病毒導致對免疫系統的過度反應並引起全身廣泛的炎症。世界衛生組織科學簡報介紹伴有高炎症綜合征的急性疾病，導致多器官衰竭和休克。(“Multisystem inflammatory syndrome in children and adolescents temporally related to COVID-19”,WHO Scientific Brief,May 15,2020(在此閱讀https：//www.who.int/news-room/commentaries/detail/multisystem-inflammatory-syndrome-in-children-and-adolescents-with-covid-19))。該綜合征的定義是：(a)0-19歲，發燒>3天的兒童和青少年；和(b)以下兩項：(1)皮疹或雙側非化膿性結膜炎或粘膜皮膚炎症跡象(口，手或足)，(2)低血壓或休克，(3)心肌功能障礙，心包炎，瓣膜炎或冠狀動脈異常的特徵(包括ECHO發現或肌鈣蛋白/NT-proBNP升高)，(4)凝血病的證據(通過PT，PTT，升高的d-二聚體)，(5)急性胃腸道問題(腹瀉，嘔吐或腹痛)；和(c)升高的炎症標誌物如ESR，c-反應蛋白或降鈣素原；和(d)沒有其他明顯的微生物炎症原因，包括細菌性敗血症，葡萄球菌或鏈球菌休克綜合征；(e)SARS-CoV-2感染的證據(通過RT-PCR，抗原檢測或血清學陽性)，或可能與SARS-CoV-2感染患者接觸。在實施方案中，該方法包括向受試者施用足夠量的25-羥基維生素D化合物以使炎症標誌物正常化，或減輕相關症狀，或避免一種或多種炎症標誌物升高，或避免相關症狀，例如與未治療的患者相比。
在一些方面，與未治療的患者相比，治療SARS-CoV-2感染的方法包括減少從症狀發作到恢復正常健康的時間持續時間。例如，從症狀發作到 恢復正常健康的持續時間可以少於20天，或少於13天。在一些方面，與未治療的患者相比，治療SARS-CoV-2感染的方法包括減少從症狀發作到恢復日常活動的時間持續時間。例如，從症狀發作到恢復日常活動的持續時間可以少於10天或少於7天。
可以使用流感患者報告的結果(FLU-PRO©)問卷評估症狀，例如通過跟蹤隨時間記錄的結果。參見Powers et al.Development of the Flu-PRO：a patient-reported outcome(PRO)instrument to evaluate symptoms of influenza.BMC Infect Dis 2016；16：1和Powers et al.Reliability,Validity,and Responsiveness of InFLUenza Patient-Reported Outcome(FLU-PRO©)Scores in Influenza-Positive Patients,Value in Health,Vol.21,Issue 2,2018,p.210-218。
FLU-PRO©問卷是一份32項每日日記，用於衡量患者報告的流感症狀的存在和嚴重程度。FLU-PRO是一份32項每日日記，用於衡量六個身體系統中患者報告症狀的存在和嚴重程度：鼻子(4項：流鼻涕或滴鼻水，充血或鼻塞，打噴嚏，鼻竇壓力)，喉嚨(3項：喉嚨搔癢或發癢，喉嚨痛或疼痛，吞咽困難)，眼睛(3項：淚眼或眼睛流淚，眼睛痛或疼痛，眼睛對光敏感)，胸部/呼吸道(respiratory)(7項：呼吸困難，胸部充血，胸悶，乾燥或咳嗽，濕咳或散咳，咳嗽，咳出粘液或痰)，胃腸道(4項：感到噁心(感覺想吐)，胃痛，嘔吐(頻率)，腹瀉(頻率))和身體/全身性(11項：頭暈，頭部充血，頭痛，食欲不振，睡眠多於平常，身體疼痛或疼痛，虛弱或疲倦，發冷或發抖，感覺冷，感覺熱，出汗)。要求受試者以五分制序量評分對每個體征或症狀進行評分，分數越高表示體征或症狀越頻繁。對於其中的27個項目，程度為：0(一點也不)，1(一點點)，2(有點)，3(相當多)和4(非常 多)。對於剩下的五個專案，嚴重程度根據發生的次數頻率進行評估：在0(從不)到4(總是)的範圍內評估嘔吐或腹瀉(0次，1次，2次，3次或4次或更多次)，打噴嚏，咳嗽和咳出粘液或痰。參見Han et al.,Using the Influenza Patient-reported Outcome(FLU-PRO)diary to evaluate symptoms of influenza viral infection in a healthy human challenge model.BMC Infect Dis 18,353(2018)。
Blair等人在“The Clinical Course of COVID-19 in the Outpatient Setting：A Prospective Cohort Study,”Open Forum Infect Dis.2021 Jan 5；8(2)：ofab007中報告了未經治療的COVID-19參與者從症狀發作開始恢復其正常健康的中位數(IQR)為20(13-38)天，並且從症狀發作開始恢復其日常活動的中位數(IQR)為17(11-28)天。Blair等人也報告了各種症狀的持續時間和患病率。
在一些方面，與未治療的患者相比，治療SARS-CoV-2感染的方法包括降低平均總FLU-PRO©症狀評分。在一些方面，與未治療的患者相比，治療SARS-CoV-2感染的方法包括使用FLU-PRO©問卷降低一個或多個區域(鼻，喉，眼，胸/呼吸道，胃腸道和身體/全身性)的平均症狀評分。在一些方面，與未治療的患者相比，治療SARS-CoV-2感染的方法包括使用FLU-PRO©問卷降低平均鼻部區域症狀評分。在一些方面，與未治療的患者相比，治療SARS-CoV-2感染的方法包括使用FLU-PRO©問卷降低平均喉部區域症狀評分。在一些方面，與未治療的患者相比，治療SARS-CoV-2感染的方法包括使用FLU-PRO©問卷降低平均眼部區域症狀評分。在一些方面，與未治療的患者相比，治療SARS-CoV-2感染的方法包括使用FLU-PRO©問卷降低平均胸/呼吸道區域症狀評分。在一些方面，與未治療的患者相比，治療SARS-CoV-2感染 的方法包括使用FLU-PRO©問卷降低平均胃腸部區域症狀評分。在一些方面，與未治療的患者相比，治療SARS-CoV-2感染的方法包括使用FLU-PRO©問卷降低平均身體/全身區域症狀評分。在一些方面，與未治療的患者相比，治療SARS-CoV-2感染的方法包括使用FLU-PRO©問卷降低平均個體症狀評分。在一些方面，與未治療的患者相比，治療SARS-CoV-2感染的方法包括降低味覺缺失的患病率和/或持續時間。在一些方面，與未治療的患者相比，治療SARS-CoV-2感染的方法包括降低嗅覺喪失的患病率和/或持續時間。在一些方面，與未治療的患者相比，治療SARS-CoV-2感染的方法包括降低發冷的患病率和/或持續時間。在一些方面，與未治療的患者相比，治療SARS-CoV-2感染的方法包括降低咳嗽的患病率和/或持續時間。在一些方面，與未治療的患者相比，治療SARS-CoV-2感染的方法包括降低腹瀉的患病率和/或持續時間。在一些方面，與未治療的患者相比，治療SARS-CoV-2感染的方法包括降低呼吸困難的患病率和/或持續時間。在一些方面，與未治療的患者相比，治療SARS-CoV-2感染的方法包括降低發熱的患病率和/或持續時間。在一些方面，與未治療的患者相比，治療SARS-CoV-2感染的方法包括降低頭痛的患病率和/或持續時間。在一些方面，與未治療的患者相比，治療SARS-CoV-2感染的方法包括降低肌痛的患病率和/或持續時間。在一些方面，與未治療的患者相比，治療SARS-CoV-2感染的方法包括降低喉嚨痛的患病率和/或持續時間。在一些方面，與未治療的患者相比，治療SARS-CoV-2感染的方法包括降低虛弱/疲勞的患病率和/或持續時間。
對於本文所述的組合物和方法，預期任選特徵，包括但不限於組分，其組成範圍，取代基，條件和步驟，選自本文提供的各個方面，實施方案和實施例。儘管本文所述的方法和組合物能夠以各種形式實施，但以下描述包括具體實施方案，但理解本公開是說明性的，並且不打算將本發明限制于本文所述的具體實施方案。
SARS-CoV-2是一種正義單鏈RNA病毒，與蝙蝠冠狀病毒具有遺傳相似性，於2020年1月首次從中國武漢患者中分離出來(Hui et al.,(2020)supra)。SARS-CoV-2是β新冠病毒(Betacoronavirus)屬的一個物種，它是正新冠病毒(Orthocornoavirinae)亞科的一部分，而正新冠病毒(Orthocornoavirinae)亞科又是冠狀病毒科的一部分。已經確定了不同SARS-CoV-2菌株的完整基因組序列，並可在國家生物技術資訊中心(NCBI)網站的GenBank資料庫線上公開獲得。被認為是參考基因組序列的一個完整的基因組序列可以作為GenBank登錄號NC_045512獲得。該GenBank記錄也提供了編碼蛋白質的氨基酸序列，在此提供為(SEQ ID No：1)。SARS-CoV-2基因組序列編碼幾種蛋白質，包括但不限於刺突蛋白(SEQ ID NO：2)，膜蛋白(SEQ ID NO：3)，包膜蛋白(SEQ ID NO：4)或核衣殼蛋白(SEQ ID NO：5)。其他SARS CoV-2蛋白包括但不限於ORF1ab多蛋白(QIQ50091.1)(SEQ ID NO：6)、ORF3a蛋白(QIQ50093.1)(SEQ ID NO：7)、包膜蛋白(QIQ50094.1)(SEQ ID NO：8)、膜糖蛋白(QIQ50095.1)(SEQ ID NO：9)、ORF6蛋白(QIQ50096.1)(SEQ ID NO：10)、ORF7a蛋白(QIQ50097.1)(SEQ ID NO：11)、ORF8蛋白(QIQ50098.1)(SEQ ID NO：12)、核衣殼蛋白(QIQ50099.1)(SEQ ID NO：13)和ORF10 蛋白(QIQ50100.1)(SEQ ID NO：14)。如本文所用，除非另有明確說明，否則術語“SARS-CoV-2”包括以SEQ ID NO：1為特徵的病毒及其衍生物或其變體，其在整個基因組核苷酸序列上具有至少80%的序列同一性。在實施方案中，衍生物在整個基因組核苷酸序列上可具有至少85%、88%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%、99.8%、99.9%、或99.99%的序列同一性百分比。
目前，據信SARS-CoV-2進入宿主細胞需要將病毒刺突蛋白結合到與宿主細胞表達的ACE2。SARS-Cov-2成功進入宿主細胞還需要絲氨酸蛋白酶TMPRSS對S蛋白進行蛋白水解加工。參見，例如，Hoffmann et al.,Cell 181：1-10(2020)。宿主細胞進入後，單鏈RNA病毒繼續利用宿主細胞機制(例如宿主細胞核糖體)在宿主細胞質中複製其RNA基因組及其病毒蛋白。
SARS-CoV-2感染的治療
本公開提供了治療SARS-CoV-2感染的方法。在示例性實施方案中，該方法包括向需要其的受試者施用有效量的25-羥基維生素D化合物以治療SARS-CoV-2感染。為了本文的目的，而不管臨床體征和症狀如何，可以基於咽拭子或鼻拭子樣品上的陽性病毒核酸測試結果來診斷SARS-CoV-2感染。在某些方面，SARS-CoV-2感染可能僅基於症狀和暴露進行臨床診斷。在示例性方面，SARS-CoV-2感染可能是基於存在與冠狀病毒肺炎一致的肺部影像特徵而進行臨床診斷。
如本文所用，術語“治療”以及與之相關的詞語不一定意味著100%或完全治療。相反，其不同程度的治療被本領域普通技術人員認為其具有 潛在的益處或治療效果。在這方面，原則上，本公開內容的治療SARS-CoV-2感染的方法可以提供超過未治療患者的任何量或任何水準的治療益處。
此外，該方法提供的治療可包括治療正在治療的SARS-CoV-2感染的一種或多種症狀或體征。例如，本公開的治療方法可以降低SARS-CoV-2感染的嚴重程度或消除一種或多種症狀，包括但不限於發熱、疲勞、咳嗽、呼吸短促、呼吸困難、發冷、肌痛、頭痛、喉嚨痛、味覺喪失或嗅覺喪失。在一個方面，SARS-CoV-2感染的症狀包括疼痛、發冷、喉嚨痛、噁心和腹瀉的一種或多種。在另一方面，SARS-CoV-2感染的症狀包括發燒、咳嗽、呼吸短促、呼吸困難、發冷、肌痛、頭痛、喉嚨痛、味覺或嗅覺喪失等一種或多種。因此，本公開提供了在患有SARS-CoV-2感染的感染者中減少發熱、疲勞、咳嗽、呼吸短促、呼吸困難、疼痛、發冷、肌痛、頭痛、咽喉痛、噁心、味覺喪失、嗅覺喪失和腹瀉中的一種或多種的方法。在各個方面，患有SARS-CoV-2感染的受試者表現出緊急警告信號(emergency warning sign)，包括但不限於呼吸困難，持續疼痛或胸部壓力，新的意識錯亂或無法喚起，嘴唇發藍。因此，本公開提供了防止或減少一個或多個緊急警告標誌的方法。在各個方面，患有SARS-CoV-2感染的受試者發展為肺炎(例如，冠狀病毒性肺炎)或表現出肺炎樣症狀。因此，本公開提供了預防或治療肺炎或減少SARS-CoV-2感染受試者的肺炎樣症狀的方法。
此外，本公開方法提供的治療可能包括減緩SARS-CoV-2感染的進展。例如，通過本公開的方法提供的治療可以減少受試者中的SARS-CoV-2病毒載量。因此，本公開還提供了減少需要其並感染SARS-CoV-2的受試者的 病毒載量的方法。在示例性實施方案中，該方法包括向受試者施用有效量的25-羥基維生素D化合物以減少受試者的SARS-CoV-2病毒載量。此外，例如，據報導SARS-CoV-2感染的幅度是從輕度到危重。非肺炎或輕度肺炎病例被認為是“輕度”，而“嚴重”病例表現為呼吸困難、呼吸頻率
Figure 110112408-A0202-12-0019-17
30/min，血氧飽和度
Figure 110112408-A0202-12-0019-18
93%，動脈氧分壓與吸入氧分數之比<300和/或肺在24至48小時內浸潤>50%，並且“危重”病例表現出呼吸衰竭，感染性休克和/或多器官功能障礙或衰竭(Wu and McGoogan,JAMA doi：10.1001/jama.2020.2648)。因此，本公開的方法可以減緩，延遲或阻止輕度SARS-CoV-2感染發展為嚴重SARS-CoV-2感染或減緩，延遲或阻止嚴重的SARS-CoV-2感染發展為危重的SARS-CoV-2感染。此外，本公開還提供了治療輕度SARS-CoV-2感染、嚴重SARS-CoV-2感染或危重SARS-CoV-2感染的方法。
術語“治療”也包括預防性治療。例如，受試者可能感染SARS-CoV-2，但受試者尚未發展為由SARS-CoV-2感染引起的輕度至重度呼吸系統疾病COVID-19，其中受試者表現出發燒，深度乾咳，呼吸短促，很快就會危及生命。因此，目前公開的方法提供的治療可以延遲COVID-19的發作或再發(reoccurrence)/復發(relapse)。在一些方面，該方法將COVID-19的發病延遲了1天、2天、4天、6天、8天、10天、15天、30天、2個月、4個月、6個月、1年、2年、4年或更長時間。預防性治療包括降低COVID-19的風險。在一些方面，該方法將疾病的風險降低2倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍或更多。因此，本公開提供了在感染SARS-CoV-2的受試者中延遲COVID-19發作的方法。
如果患者未接受治療，例如基於治療和未治療人群的比較，例如如本文實施例中所述，改善程度(例如，症狀或結果的發生率和/或嚴重程度的降低)可以與預測的方法進行比較。
如本文所用，術語“減少/減輕/降低(reduce)”和由其產生的詞可能不是100%或完全減少。相反，其不同程度的減少被本領域普通技術人員認為其具有潛在的益處或治療效果。與未治療的患者相比，目前公開的方法原則上可以減輕症狀，減少病毒載量或將COVID-19的風險降低至任何量或水準。在實施方案中，所述方法提供的減少為至少或約10%的減少(例如，至少或約20%的減少、至少或約30%的減少、至少或約40%的減少、至少或約50%的減少、至少或約60%的減少、至少或約70%的減少、至少或約80%的減少、至少或約90%的減少、至少或約95%的減少、至少或約98%的減少)。
【0055】本公開還提供了在感染SARS-CoV-2的受試者中增強免疫應答的方法。在示例性實施方案中，該方法包括向受試者施用25-羥基維生素D化合物。在各種情況下，免疫應答是適應性免疫應答，而不會過度啟動適應性免疫系統。在各個方面，25-羥基維生素D化合物的施用增加了針對SARS-CoV-2的體液免疫(humor immunity)和/或細胞介導的免疫。例如，施與受試者的25-羥基維生素D化合物可導致產生與SARS-CoV-2蛋白結合並阻止其進入宿主細胞的中和抗體。此外，例如，施與受試者的25-羥基維生素D化合物可導致吞噬細胞，抗原特異性細胞毒性T淋巴細胞，以及回應病毒釋放各種細胞因數的啟動。
如本文所用，術語“增加(reduce)”和由其產生的詞可能不是100%或完全減少。相反，其不同程度的增加被本領域普通技術人員認為其具有潛在的益處或治療效果。與未治療的患者相比，目前公開的方法原則上可以增加對任何量或水準的免疫應答。在實施方案中，由所述方法提供的增加是至少或約10%的增加(例如，至少或約20%的增加，至少或約30%的增加，至少或約40%的增加，至少或約50%的增加，至少或約60%的增加，至少或約70%的增加，至少或約80%的增加，至少或約90%的增加，至少或約95%的增加，至少或約98%的增加)。
在一些方面，免疫應答是先天免疫應答。在一些方面，先天免疫應答包括通過白細胞(例如肥大細胞、吞噬細胞，包括巨噬細胞、嗜中性粒細胞和樹突細胞、嗜鹼性粒細胞、嗜酸性粒細胞天然殺傷細胞等)將免疫細胞募集到感染部位、啟動補體級聯或去除器官組織、血液和淋巴中存在的抗原。在各個方面，該量對於增加受試者中免疫細胞介導的抗微生物狀(AMP)的合成是有效的。在某些情況下，AMP是LL37，或FALL-39，或兩者都有。介導AMP合成的免疫細胞可以是單核細胞，巨噬細胞和樹突細胞組中的一種或多種細胞類型。
在實施方案中，與未治療的受試者相比，本公開的方法將減少受治療的受試者的住院治療(例如，住院治療的發生率和/或持續時間)。在實施方案中，與未治療的受試者相比，本公開的方法將減少受治療的受試者的急診室就診(例如，急診室就診的發生率和/或持續時間)。在實施方案中，與未治療的受試者相比，本公開的方法將減少對受治療的受試者的機械通氣的要求。 在實施方案中，與未治療的受試者相比，本公開的方法將降低受治療的受試者的死亡率。在實施方案中，與未治療的受試者相比，本公開的方法將減少受治療的受試者的嚴重不良事件的發生率，其中SAE被定義為1)死亡；2)住院治療；3)危及生命的事件(定義為事件發生時有直接死亡風險的參與者)；4)導致持續或重大殘疾/無行為能力的事件；5)任何其他可能不會導致上述結果之一的重要醫療事件，如果根據適當的醫療判斷，該事件可能危及受試者，並且可能需要醫療或外科干預以防止上述結果之一，則視為嚴重事件。在實施方案中，與安慰劑相比，所述治療將降低COVID-19疾病的嚴重性和/或持續時間，這通過記錄的六個症狀的嚴重性來證明，單獨或平均的(咳嗽、呼吸困難、疲勞、頭痛、肌痛和發燒)，或者八個症狀的嚴重性，單獨或平均的(發熱、咳嗽、喉嚨痛、不適、頭痛、肌痛(肌肉疼痛)、胃腸道症狀和用力呼吸短促)，所述治療使用4分數位等級評分(4-point numeric rating scale)(NRS；0，不存在；3，嚴重)，每天兩次，持續14天、或20天、或21天、或35天、或42天(Treanor et al.,JAMA vol.283,no.8,February 23,2000)。在實施方案中，與安慰劑相比，治療將降低COVID-19疾病的嚴重程度和/或持續時間，如通過記錄一種或多種症狀(發熱，咳嗽，呼吸短促(任選用力呼吸短促)，呼吸困難，發冷，不適，肌痛，頭痛，胃腸道症狀，喉嚨痛，和味覺或嗅覺喪失)使用4分NRS(0，不存在；3，嚴重)，每天兩次，持續14天，或20天，或21天，或27天，或28天，或35天，或42天(Treanor et al.,JAMA vol.283,no.8,February 23,2000)。例如，本公開的方法將減少(與安慰劑相比)在SARS-COV-2感染個體中疾病消退的時間，定義為從研究藥物開始到症狀緩解的時間。可以認為症狀緩解發 生在開始的第一個24小時期間，其中所有六個症狀評分為1或更低(輕度或無)並且保持24小時。另外或替代地，治療對疾病嚴重程度的影響可以通過總症狀評分的曲線分析下面積來評估，其中，與安慰劑相比，根據本文公開的方法提供改善的效果。此外，在本文所述的給藥期間的每一天，接受治療的受試者可以使用11分NRS(不能執行正常活動，0；完全能夠進行正常活動，10)記錄他們在日記卡上進行日常活動的能力，其中恢復正常活動被定義為從治療開始到受試者恢復正常活動水準的第一個24小時期間的時間(以小時為單位)，其中，與安慰劑相比，方法根據本文公開內容提供了縮短的持續時間。此外，接受治療的受試者可以在11分制評分(0分，最差健康狀況和10分，最佳健康狀況)上完成他們對整體健康狀況(包括正常，SARS-CoV-2前健康狀況)看法的視覺類比量表。在此之後，他們可以記錄他們對基線和24小時內健康狀況的評估，每天晚上一次，其中恢復正常健康是指從治療開始到受試者恢復正常健康水準的第一個24小時期間的時間(小時)，其中，與安慰劑相比，根據本文公開的方法提供縮短的持續時間。這些量表的使用已經在1997年澳大利亞流感季節對講英語的志願者進行的試點研究中得到驗證(Treanor et al 2000)。患者還可以使用數位溫度計每天測量兩次口腔溫度並記錄在日記卡上，其中，與安慰劑相比，根據本文公開的方法提供了縮短的恢復正常溫度的持續時間。如本文所用，與安慰劑的比較可以是基於群體基礎(population basis)的個體測量。
在實施方案中，接受25-羥基維生素D的SARS-CoV-2受試者可在給藥期間的每一天：i)使用4分NRS(0，無；3，嚴重)，每天兩次記錄六 種SARS CoV-2症狀(咳嗽、呼吸困難、疲勞、頭痛、肌痛和發燒)的嚴重程度；ii)使用11分NRS(無法進行正常活動，0；完全能夠進行正常活動，10)，每天一次在日記卡上記錄他們進行日常活動的能力；以及，iii)使用11分NRS(0分，最差健康，10分，最佳可能健康)每天一次填寫他們對整體健康狀況的看法記錄。這些措施(單獨或組合)可用於與未經治療的受試者進行比較，以衡量治療效果。
在實施方案中，接受25-羥基維生素D的SARS-CoV-2受試者可在給藥期間的每一天：i)使用4分NRS(0，無；3，嚴重)，每天兩次記錄八種SARS CoV-2症狀(
發熱、咳嗽、喉嚨痛、不適、頭痛、肌痛、胃腸道症狀和勞力性呼吸短促(shortness of breath with exertion))的嚴重程度；ii)使用11分NRS(無法進行正常活動，0；完全能夠進行正常活動，10)，每天一次記錄他們進行日常活動的能力；以及，iii)使用11分NRS(0分，最差健康，10分，最佳可能健康)每天一次填寫他們對整體健康狀況的看法記錄。這些措施(單獨或組合)可用於與未經治療的受試者進行比較，以衡量治療效果。
在本公開方法的方面中，受治療的受試者的特徵不同於未接受25-羥基維生素D的受試者的特徵，以及具有較低血清25-羥基維生素D水準活性的受試者的特徵。在某些方面，與安慰劑相比，施用25-羥基維生素D可加速外周血單核細胞中與急性、亞急性和晚期炎症反應相關的甲基組和轉錄組。在各個方面，與安慰劑相比，施用25-羥基維生素D會導致受試者外周血單核細胞(PBMC)計數增加。在一些情況下，與安慰劑相比，施用25-羥基維生素 D會導致受試者外周血中性粒細胞計數增加。此外，與安慰劑相比，施用25-羥基維生素D可導致受試者的SARS-CoV-2滴度水準或病毒載量降低。或者，與安慰劑相比，施用25-羥基維生素D可導致受試者在治療第7天時的SARS-CoV-2滴度水準或病毒載量降低。此外，與安慰劑相比，施用25-羥基維生素D可導致受試者在治療第14天時的SARS-CoV-2滴度水準或病毒載量降低。此外，例如，與安慰劑相比，施用25-羥基維生素D可能導致受試者在治療第20天時的SARS-CoV-2滴度水準或病毒載量降低。在某些方面，與安慰劑相比，施用25-羥基維生素D導致受試者的抗SARS-CoV-2抗體水準(例如血清水準)升高。在各種情況下，與安慰劑相比，施用25-羥基維生素D會導致受試者在治療第7天的抗SARS-CoV-2抗體水準升高。在各種情況下，與安慰劑相比，施用25-羥基維生素D會導致受試者在治療第14天的抗SARS-CoV-2抗體水準升高。在各種情況下，與安慰劑相比，施用25-羥基維生素D會導致受試者在治療第20天的抗SARS-CoV-2抗體水準升高。在各種情況下，與安慰劑相比，服用25-羥基維生素D會導致受試者在治療第27天或第28天的抗SARS-CoV-2抗體水準升高。在示例性方面，與未治療的受試者相比，施用25-羥基維生素D導致受試者的LL37血清水準和抗SARS-CoV2抗體水準升高。在示例性方面，與未治療的受試者相比，施用25-羥基維生素D導致受試者血清中嗜酸性粒細胞趨化因數，單核細胞趨化蛋白(MCP-1)、IL-12、IL-6、IL-1β和半胱天冬酶-3的一種或多種的水準降低。
在方面，與安慰劑相比，施用25-羥基維生素D導致受試者的臨床疾病嚴重性評分降低。任選地，關於上述升高，所述升高是在治療的第28天 或第27天與治療前水準相比，或在治療的第28天或第27天與治療第7天的水準相比，或在第28天或第27天與治療第14天的水準相比。可選地，關於上述升高，所述升高是在治療的第7天與治療前水準相比，在治療的第14天與治療前水準相比，在治療的第20天與治療前水準相比，或在治療的第20天與治療第7天的水準相比，或在治療的第20天與治療第14天的水準相比，或在治療的第14天與治療第7天的水準相比。任選地，關於上述降低，所述降低或減少在治療的第7天與治療前水準相比，在治療的第14天與治療前水準相比，在治療的第20天與治療前水準相比，在治療的第27天與治療前水準相比，在治療的第28天與治療前水準相比，在治療的第27天或第28天與治療第7天的水準相比，在治療的第20天與治療第7天的水準相比，在治療的第20天與治療第14天的水準相比，或在治療的第14天與治療第7天的水準相比。
例如，本文公開的方法可以基於COVID-19的症狀評分的變化來改善結果(例如，在第1天和第42天之間比較)，這取決於在第7天、第14天、第21天和第28天達到的血清25D濃度(25D<50ng/mL或
Figure 110112408-A0202-12-0026-19
50ng/mL)。本文公開的方法可以在第0天具有嚴重維生素D缺乏症(血清25D<20ng/mL)的患者中，基於COVID-19的症狀評分的變化來改善結果(例如，在第1天和第42天之間比較)，取決於在第7天、第14天、第21天和第28天達到的血清25D濃度(25D<50ng/mL或
Figure 110112408-A0202-12-0026-20
50ng/mL)。
關於目前公開的方法，在治療期間，25-羥基維生素D化合物的量對於在受試者中可以有效實現並維持血清總25-羥基維生素D水準在至少50ng/mL。任選地，該量在治療期間有效實現並維持血清總25-羥基維生素D水 準在至少60ng/mL。該方法可包括在治療的前24小時內達到例如至少或大於50ng/mL，或至少或大於60ng/mL的血清水準。在實施方案中，治療期間的血清水準可以是200ng/mL或更低，或100ng/mL或更低。例如，該方法可以包括在治療的前24小時內達到至少50ng/mL和低於100ng/mL的血清水準。在各種情況下，在治療期間，該量可有效實現並維持受試者血清總25-羥基維生素D水準大於60ng/mL，例如大於70ng/mL、大於80ng/mL、大於90ng/mL、大於100ng/mL、大於125ng/mL、大於150納ng/mL、大於175ng/mL、大於200ng/mL、大於250ng/mL、大於300ng/mL、大於350ng/mL、大於400ng/mL、大於450ng/mL、或高達500ng/mL、在治療期間，在或約50ng/mL至約100ng/mL的範圍內、或約60ng/mL至約100ng/mL的範圍內、或大於60ng/mL至約100ng/mL。
在各個方面，25-羥基維生素D化合物根據任何方案施用，包括例如每天(每天1次、每天2次、每天3次、每天4次、每天5次、每天6次)、每週三次、每週兩次、每兩天、每三天、每四天、每五天、每六天、每週、每兩周、每三周、每月或每兩個月一次。
在一些情況下，該方法包括在一次或多次維持劑量的25-羥基維生素D化合物之前給予受試者的負荷劑量的25-羥基維生素D化合物。在各個方面，負荷劑量大於約90μg、或至少100μg、或至少200μg、或至少250μg、或大於約250μg或大於約500μg。任選地，負荷劑量小於約1000μg。在各個方面，負荷劑量為約90μg至約250μg、或約500μg至約900μg、約500μg至約800μg、約500μg至約700μg、約500μg至約600μg、約600μg至約1000μg、約700μg至約1000μg、約800μg至約1000μg、或約900μg至約1000μg。在各種 情況下，負荷劑量是至少或約900μg±90μg的25-羥基維生素D化合物。前述劑量中的任何一種可以在空腹狀態下施用，例如在飯後至少3小時，包括在睡前，和未進食。如本文所述，前述劑量中的任何一種可以作為Rayaldee型製劑或作為具有約25%生物利用度的緩釋口服製劑施用。另一方面，負荷劑量是速釋的25-羥基維生素D製劑。例如，可以以約200μg至約750μg、或約200μg至400μg、或500μg至600μg、或500μg至550μg、或532μg、或600μg至700μg、或650μg至750μg的負荷劑量來提供生物利用度為Rayaldee®型製劑的3倍，或約70%-80%的速釋口服製劑。速釋負荷劑量之後可以通過速釋或緩釋製劑進行維持給藥，並且在一種實施方案中，將隨後用緩釋製劑進行維持劑量給藥。在實施方案中，負荷劑量可以是第一劑量，例如第1天的劑量。在其他實施方案中，負荷劑量以分劑量施用，例如在一天或多天的時間內施用。例如，負荷劑量可以在兩天或更多天或三天的時間內施用，例如，對於第1天、第2天和第3天，900μg負荷劑量可以以300μg/天施用，接著維持劑量如本文所述，或者對於第1天和第2天，900μg負荷劑量可以以450μg/天施用，然後如本文所述維持劑量。在實施方案中，負荷劑量在空腹狀態施用。
在各個方面，一種或多種每日維持劑量為至少25μg，或至少30μg，或大於30μg，或大於約50μg 25-羥基維生素D化合物。任選地，每個維持劑量為小於或約100μg的25-羥基維生素D化合物。在各種情況下，每種維持劑量為約50μg至約100μg、約50μg至約80μg、約50μg至約70μg、約50μg至約60μg、約60μg至約100μg、約70μg至約100μg、約80μg至約100μg、或約90μg至約100μg。在各種情況下，每種維持劑量約為60μg±6μg的25-羥基維生素D 化合物。前述劑量中的任何一種可以在空腹狀態下施用，例如在飯後至少3小時，包括在睡前，和未進食。如本文所述，前述劑量中的任何一種可以作為Rayaldee型製劑或作為具有約25%生物利用度的緩釋口服製劑施用。在替代方案中，維持劑量可以以速釋製劑給藥，例如具有約70-80%的生物利用度的製劑。在實施方案中，維持劑量以空腹狀態施用。維持劑量可以每天施用，或者每日維持劑量可以全天以分開的劑量施用，或者可以以小於每天的頻率施用等量的25-羥基維生素D，例如每隔一天施用60μg代替每天30μg，或每週約210μg代替每日30μg。
可以基於受試者的體重進一步調整負荷劑量和維持劑量，即，對具有相對高的BMI水準的患者施用相對更多的25-羥基維生素D。
負荷劑量和維持劑量可以根據受試者的血清總25-羥基維生素D水準進一步調整。例如，與維生素D不足或缺乏的受試者相比，不存在維生素D不足或缺乏但血清總25-羥基維生素D水準仍低於50ng/ml或60ng/ml的患者能接受相對較低的負荷劑量。
預期維持劑量的量可以維持受試者的血清總25-羥基維生素D水準至少為40ng/ml、或至少50ng/ml、或至少60ng/ml，例如，範圍為40ng/ml至100ng/ml、或50ng/ml至100ng/ml、或60ng/ml至100ng/ml、或40ng/ml至80ng/ml。
在各種情況下，該方法包括任選地向受試者施用每日維持劑量至少3天、5天、1周、10天、12天、13天、2周、19天、20天、3周、26天、4周或更長時間。任選地，該方法包括向受試者施用900μg 25-羥基維生素D化 合物的負荷劑量，接著施用每日維持劑量至少1周、或至少2周、或至少19天、至少20天、或至少26天。在各種情況下，每種每日維持劑量約為60μg的25-羥基維生素D化合物。任選地，所述方法包括施用每日維持劑量至少13天、或至少2周、或至少19天、至少20天‘任選地至少3周、或至少26天、或至少4周或更多。例如，在預防SARS-Cov-2感染或感染進展(例如從潛伏期育到前驅症狀階段，或從前驅症狀階段到COVID-19疾病階段)的方法中，該方法可以包括施用沒有初始負荷劑量，或具有相對低的負荷劑量的維持劑量給藥(例如60μg/天的Rayaldee®型製劑)。
在空腹狀態下，900μgRayaldee®型製劑的負荷劑量(約25%生物利用度)將在約10小時內將血清總25-羥基維生素D水準提高約20ng/mL至30ng/mL，具體取決於受試者的體重(體重越高，血清總25-羥基維生素D的預期增加就越低)。每日60μg維持劑量的Rayaldee®型製劑將使血清總25-羥基維生素D再增加0.6ng/mL。因此，基線血清總25-羥基維生素D水準約為25ng/mL的受試者在負荷劑量給藥後將達到約45ng/mL至55ng/mL水準，在維持劑量給藥14天后達到約53-63ng/mL，維持劑量給藥26天后達到61-71ng/mL。在其他實施方案中，在初始劑量後的前24小時，可以選擇該方法和製劑以提供至少50ng/mL、或至少60ng/mL和高達200ng/mL、或高達100ng的血清總25-羥基維生素D水準/mL。
【0075】在進食狀態下，與空腹狀態相比，用ERC(例如Rayaldee®型製劑)給藥後血清總25-羥基維生素D水準將增加約3至4倍。出於這個原因，並且提高給藥吸收的一致性，預期所有給藥可以在睡前進行(在 空腹狀態下，定義為受試者最後一餐後至少約3小時，任選地最後一餐後至少約4小時)。
即釋的骨化二醇(配製在MCT油中)具有比Rayaldee®型製劑高約3倍的生物利用度。因此，上述在空腹狀態下的負荷和維持劑量可以被縮放(減少)三分之二。口服和通過其他劑量途徑的其他製劑的劑量可以由普通技術人員基於其生物利用度和/或藥代動力學來縮放。例如，由於Rayaldee®型製劑具有約25%的生物利用度，因此具有三倍生物利用度的另一種類型製劑的負荷劑量可大於製劑遞送的約63μg生物可利用量的25-羥基維生素D，或大於約125μg生物可利用量。任選地，負荷劑量小於由製劑遞送的約250μg生物可利用量的25-羥基維生素D。在各個方面，負荷劑量為約125μg至約225μg、約125μg至約200μg、約125μg至約175μg、約125μg至約150μg、約150μg至約25μg、約175μg至約250μg、約200μg至約250μg、或約225μg至約250μg生物可利用量。類似地，一種或多種維持劑量可以是至少約7μg，或大於7μg，或大於約12μg的生物可利用的25-羥基維生素D。任選地，每種維持劑量為小於或約25μg的生物可利用的25-羥基維生素D。在各種情況下，每種維持劑量可以是約12μg至約25μg、約12μg至約20μg、約12μg至約17μg、約12μg至約15μg、約15μg至約25μg、約17μg至約25μg、約20μg至約25μg、或約22μg至約25μg的生物可利用的25-羥基維生素D。在各種情況下，這種製劑中的每種維持劑量約為15μg±1.5μg生物可利用的25-羥基維生素D。
從另一個角度來看，由於Rayaldee®型製劑的生物利用度約為25%，因此可以基於任何類型製劑中25-羥基維生素D的生物可利用量來表示 給藥量。在各個方面，負荷劑量為大於約22μg、或至少25μg、或至少50μg、或至少62μg、或大於約62μg或大於約125μg的生物可利用的25-羥基維生素D。任選地，負荷劑量小於約250μg。在各個方面，負荷劑量為約22μg至約62μg、或約125μg至約225μg、約125μg至約200μg、約125μg至約175μg、約125μg至約150μg、約150μg至約250μg、約175μg至約250μg、約200μg至約250μg、或約225μg至約250μg。在各種情況下，負荷劑量至少為或約為225μg±22μg的生物可利用的25-羥基維生素D。前述劑量中的任何一種可以在空腹狀態下施用，例如在飯後至少3小時，包括在睡前，並且未進食。在各個方面，一種或多種每日維持劑量為至少6μg、或至少7μg、或大於7μg、或大於約12μg的生物可利用的25-羥基維生素D。任選地，每個維持劑量小於或約25μg的生物可利用的25-羥基維生素D。在各種情況下，每種維持劑量為約12μg至約25μg、約12μg至約20μg、約12μg至約18μg、約12μg至約15μg、約15μg至約25μg、約17μg至約25μg、約20μg至約25μg、或約22μg至約25μg的生物可利用的25-羥基維生素D。在各種情況下，每種維持劑量約為15μg±1.5μg的25-羥基維生素D化合物。前述劑量中的任何一種可以在空腹狀態下施用，例如在飯後至少3小時，包括在睡前，和未進食。
快速上升或過量的細胞內維生素D激素水準刺激含有維生素D受體的細胞中稱為CYP24A1的細胞色素P450酶的表達。CYP24A1酶以高特異性分解代謝1,25-二羥基維生素D，25-羥基維生素D和維生素D，從而恢復正常的細胞內維生素D激素水準。這是一個重要的回饋機制，其限制過量和潛在有害的維生素D激素局部暴露。因此，考慮在不存在上調CYP24A1表達的 情況下施用25-羥基維生素D。另一方面，為了提供基於25-羥基維生素D的可用性的快速免疫應答，例如維生素D缺乏症的矯正，考慮在給藥的前24小時內安全地提高血清總25-羥基維生素D水準，例如至少50ng/mL、或大於50ng/mL、或至少60ng/mL、或大於60ng/mL、並且任選地高達200ng/mL、或高達100ng/mL。類似地，例如，預期用於本方法的製劑可提供在4至24小時，或4至18小時，或4至16小時，或4至12小時或4至8小時範圍內的體內Tmax。
患者的維生素D代謝產物比率(VMR，以血清24,25-二羥基維生素D3與血清25-羥基維生素D3的比例的100倍計算，或施用維生素D3型產品(例如25-羥基維生素D3)後24,25-二羥基維生素D3與血清25-羥基維生素D3的比例)可用作誘導CYP24A1的指示劑。參見Strugnell SA,Sprague SM,Ashfaq A et al.“Rationale for Raising Current Clinical Practice Guideline Target for Serum 25-Hydroxyvitamin D in Chronic Kidney Disease”Am.J.Nephrol.2019；49(4)：284-293。Strugnell等人示出在患有維生素D功能不全和SHPT並用30或60μg ERC治療26周的3期和4期CKD患者中，平均治療後VMR僅適度上升(最高4.8)，表明沒有實質性的CYP24A1誘導。類似地，如下面的實施例7所述，在患有維生素D不足和SHPT並且用60μg ERC治療8周的3期和4期CKD患者中，平均治療後VMR也保持在5以下(最大約4.2)。用25-羥基維生素D給藥後的VMR是呈劑量依賴性的。當施用足夠高劑量的25-羥基維生素D時，特別是速釋25-羥基維生素D時，VMR可以達到更高的水準。同樣，用25-羥基維生素D重複給藥足夠頻繁，VMR可隨時間增加，並達到比所需更高的水準。此外，隨著25-羥基維生素D的足夠快速和有效的遞送，VMR 的速率成比例地增加。因此，在一個方面，本文中的治療方法任選地將採用其中VMR在至少28天的時間內保持基本恒定的給藥方案，進一步任選地在維持給藥期間。另一方面，本文中的治療方法任選地將採用其中VMR在至少28天的時間內降低的給藥方案，進一步任選地在維持劑量給藥期間。另一方面，本文所述的治療方法任選地將採用緩釋給藥方案，其為例如在28天的時間內，VMR的變化率小於通過速釋施用的生物等效量的25-羥基維生素D的VMR的變化率。另一方面，本文中的治療方法任選地將採用其中VMR不超過12、或不超過11、或不超過5、或不超過4.8的給藥方案。在另一方面，認識到患者可以受益于糾正維生素D不足並實現如本文所述的至少50ng/ml的血清總25-羥基維生素D水準，本文的治療方法任選地將採用其中VMR可以在負荷劑量階段超過4.8、或5、或11、或12，在維持劑量階段不超過11、或不超過5、或不超過4.8。又一方面，本文中的治療方法任選地將採用其中在負荷劑量階段期間VMR不超過12(例如在4至12的範圍內)，並且在維持劑量給藥階段期間不超過11的給藥方案(例如在3至11的範圍內)。
在各個方面，25-羥基維生素D化合物以改性釋放製劑給藥。如本文所用，術語“控釋(controlled release)”和“改性釋放(modified release)”可互換使用，是指以不同於速釋的方式釋放施用的維生素D化合物。改性釋放製劑可以是緩釋製劑。可選地，改性釋放製劑可以包括延遲釋放方面。如本文所用，術語“持續釋放”，“緩釋”和“延長釋放”可互換使用，並且是指與可比較的速釋製劑相比，施用的維生素D化合物在更長時間內的釋放。
25-羥基維生素D化合物可以以適宜的方式施用於受試者。適用於口服給藥的製劑可以由或包括(a)液體溶液或懸浮液，例如溶解或懸浮在稀釋劑中的有效量的25-羥基維生素D化合物，例如水、鹽水、橙汁、牛奶、油或其他運載體；(b)膠囊、小袋、片劑、錠劑和藥片(troches)，各自含有預定量的25-羥基維生素D化合物，如固體或顆粒；(c)粉末；和(d)合適的乳液。液體製劑可以包括稀釋劑，例如水或醇，例如乙醇、苄醇和聚乙二醇，加入或不加入藥學上可接受的表面活性劑。膠囊形式可以是普通的硬殼或軟殼明膠類型，包含例如載體，如油，蠟或其他脂質，表面活性劑，潤滑劑和惰性填料，例如乳糖、蔗糖、磷酸鈣和玉米澱粉。片劑形式可以包括一種或多種乳糖、蔗糖、甘露醇、玉米澱粉、馬鈴薯澱粉、海藻酸、微晶纖維素、阿拉伯膠，明膠，瓜爾膠，膠體二氧化矽，交聯羧甲基纖維素鈉，滑石粉，硬脂酸鎂，硬脂酸鈣，硬脂酸鋅，硬脂酸和其他賦形劑，著色劑，稀釋劑，緩衝劑，崩解劑，潤濕劑，防腐劑，調味劑和其他藥理學相容的賦形劑。錠劑形式可以包含在調味劑(通常是蔗糖和阿拉伯膠或黃蓍膠)中的本發明的25-羥基維生素D化合物，以及在惰性基質(例如明膠和甘油，或蔗糖和阿拉伯膠)中的包含本發明類似物的錠劑、乳劑、凝膠等，其除了含有本領域已知的其它賦形劑之外還含有其它賦形劑。可以將25-羥基維生素D化合物溶解在醇(例如乙醇)中，以分佈在載體或賦形劑中。
25-羥基維生素D化合物可以分散在聚合物組合物中。25-羥基維生素D化合物可以嵌入式在聚合物網路中。例如，聚合物可以是水不溶性的，並且任選地可溶脹的。該製劑可以是包含25-羥基維生素D化合物和藥學上可 接受的賦形劑的滾圓顆粒製劑。所述顆粒任選地可以是腸溶包衣的；在替代方案中，顆粒可以置於腸溶包衣的膠囊殼(例如明膠，蔬菜基或聚合物基)中。該製劑可包括分散在脂肪酸-甘油酯混合物中的25-羥基維生素D化合物。該製劑可以由包含25-羥基維生素D化合物和藥學上可接受的賦形劑的納米/微粒製劑組成或包括包含25-羥基維生素D化合物和藥學上可接受的賦形劑的納米/微粒製劑。該製劑可以由包含25-羥基維生素D化合物和藥學上可接受的脂質的脂質微粒製劑組成或包括包含25-羥基維生素D化合物和藥學上可接受的脂質脂質微粒製劑。該製劑可以由包含25-羥基維生素D化合物和藥學上可接受的賦形劑的糖粒種子(non-pareil seed)製劑組成或包括包含25-羥基維生素D化合物和藥學上可接受的賦形劑的糖粒種子製劑。該製劑可以由25-羥基維生素D化合物和選自吸收促進劑，滾圓助劑，水不溶性聚合物和結合劑組中的一種或多種賦形劑的藥學上可接受的賦形劑組成或包括25-羥基維生素D化合物和選自吸收促進劑，滾圓助劑，水不溶性聚合物和結合劑組中的一種或多種賦形劑的藥學上可接受的賦形劑。該製劑可以由包含25-羥基維生素D化合物，緩釋劑和表面活性劑的噴霧凝固的脂質-維生素D製劑組成或包括包含25-羥基維生素D化合物，緩釋劑和表面活性劑的噴霧凝固的脂質-維生素D製劑。在實施方案中，製劑可以是例如口服使用的緩釋製劑。
本公開的25-羥基維生素D化合物，可以單獨或與其他合適的成分組合通過肺部給藥遞送，並且可以製成氣溶膠製劑通過吸入給藥。可以將這些氣溶膠製劑放入加壓的可接受的推進劑中，例如二氯二氟甲烷，丙烷，氮氣等。它們還可以配製成用於非加壓製劑的藥物，例如在霧化器或噴霧器中。這 種噴霧製劑也可用於噴霧粘膜。在一些實施方案中，將25-羥基維生素D化合物配製成粉末混合物或微粒或納米顆粒。本領域已知合適的肺製劑類型。參見Qian et al.,Int J Pharm 366：218-220(2009)；Adjei and Garren,Pharmaceutical Research,7(6)：565-569(1990)；Kawashima et al.,J Controlled Release 62(1-2)：279-287(1999)；Liu et al.,Pharm Res 10(2)：228-232(1993)；International Patent Application Publication Nos.WO 2007/133747 and WO 2007/141411。
適用於腸胃外給藥的製劑包括含水和非含水，等滲無菌注射溶液，其可含有使製劑與預期受體的血液等滲的抗氧化劑，緩衝液，抑菌劑和溶質，和可以包括懸浮劑，增溶劑，增稠劑，穩定劑和防腐劑的水性和非水性無菌懸浮液。術語“腸胃外”不是指通過消化道，而是通過一些其他途徑，例如局部(包括透皮貼劑)，皮下，肌內，脊柱內或靜脈內。本公開的25-羥基維生素D化合物可以在藥物載體中與生理學上可接受的稀釋劑一起施用，例如無菌液體或液體混合物，包括水，鹽水，葡萄糖水溶液和相關的糖溶液，醇，例如乙醇或十六烷醇，乙二醇，如丙二醇或聚乙二醇，二甲基亞碸，甘油，縮酮如2,2-二甲基-1,3-二氧戊環-4-甲醇，醚，聚(乙二醇)400，油，脂肪酸，脂肪酸酯或甘油酯，或乙醯化脂肪酸甘油酯，加入或不加入藥學上可接受的表面活性劑，例如肥皂或洗滌劑，懸浮劑，例如果膠，卡波姆，甲基纖維素，羥丙基甲基纖維素或羧甲基纖維素，或乳化劑和其他藥物佐劑。局部製劑可以採取任何合適的形式，例如乳膏，軟膏，糊劑，乳液，凝膠或貼劑。
可用於腸內和腸胃外製劑的油包括石油，動物，植物油或合成油。油的具體實例包括花生，大豆，芝麻，棉籽，玉米，橄欖，凡士林和礦物質。 對於一些實施方案考慮了不易消化的油。用於腸胃外製劑的合適脂肪酸包括油酸，硬脂酸和異硬脂酸。油酸乙酯和肉豆蔻酸異丙酯是合適的脂肪酸酯的實例。
腸胃外製劑可在溶液中含有約0.5重量%至約25重量%的本公開的25-羥基維生素D化合物。可以使用防腐劑和緩沖劑。為了最小化或消除注射部位的刺激，此類組合物可含有一種或多種非離子表面活性劑，其親水-親油平衡(HLB)為約12至約17。這種製劑中表面活性劑的量通常為約5%至約15重量%。合適的表面活性劑包括聚乙二醇脫水山梨糖醇脂肪酸酯，例如脫水山梨糖醇單油酸酯和環氧乙烷與疏水性堿的高分子量加合物，其通過環氧丙烷與丙二醇的縮合形成。腸胃外製劑可以以單位劑量或多劑量密封容器(例如安瓿和小瓶)存在，並且可以在冷凍乾燥(凍幹)條件下儲存，在使用前只需要立即加入無菌液體賦形劑，例如水，用於注射。可以從前述種類的無菌粉末，顆粒和片劑製備臨時注射溶液和懸浮液。
可注射製劑符合本發明。對於可注射組合物的有效藥物載體的要求對於本領域普通技術人員是眾所周知的(參見Pharmaceutics and Pharmacy Practice,J.B.Lippincott Company,Philadelphia,PA,Banker and Chalmers,eds.,pages 238-250(1982),and ASHP Handbook on Injectable Drugs,Toissel,4th ed.,pages 622-630(1986))。
在各個方面，25-羥基維生素D化合物是口服給藥的。在各種情況下，25-羥基維生素D化合物包含25-羥基維生素D2或25-羥基維生素D3，或25-羥基維生素D2和25-羥基維生素D3的組合。具體考慮到，在本文公開的組合物和方法的任何方面和每個方面和實施方案中，25-羥基維生素D化合物可以是25-羥基維生素D3。如本文所用，術語“25-羥基維生素D化合物”是指25- 羥基維生素D3，25-羥基維生素D2，25-羥基維生素D4，25-羥基維生素D5或25-羥基維生素D7中的一種或多種，並且可以預期考慮到，在任何參考文獻優選的實施方案是25-羥基維生素D3和25-羥基維生素D2中的一種或多種，優選25-羥基維生素D3。因此，在本文所述的任何和所有制劑中，具體考慮活性劑可包括25-羥基維生素D2和25-羥基維生素D3中的一種或兩種都有，特別是25-羥基維生素D3。
如本文所用，包含25-羥基維生素D化合物的製劑可以是穩定製劑，其中“穩定製劑”是指表現出穩定的體外溶出曲線(根據本文進一步描述的任何參數)和維生素D化合物在體內的控釋(例如，緩釋)持續初始製備後一段時間，例如在實際儲存或加速穩定儲存條件之後。活性成分的釋放可以使用合適的體外溶出方法測量，例如本領域已知的方法之一。原則上，the United States Pharmacopeia,USP 43-NF 38 2S，Dissolution<711>physical tests and determinations United States Pharmacopeial Convention,Inc.,Rockville,Md.,2020；European Pharmacopoeia 2.9.3 Dissolution Test for Solid Dosage Forms，或the Japanese Pharmacopoeia 6.10 Dissolution Test中描述的任何溶出度研究可用於確定製劑是否穩定。出於本公開的目的，單一培養基體外溶出方法是United States Pharmacopeia,USP 43-NF 38 2S,Dissolution<711>physical tests and determinations,United States Pharmacopeial Convention,Inc.,Rockville,Md.,2020,使用裝置2(漿法paddle method)，如下面的實施方案中所述。在一種替代方案中，可以使用2相方法(2-phase method)，例如USP 43-NF38 S，溶出<711>(USP 43-NF 38 2S,Dissolution<711>)中的方法2，使用裝置1或2，任選地裝置2，測量溶解特性。
根據本文公開的穩定化製劑在儲存一段時間後，在體外溶出中釋放一定量的25-羥基維生素D，所述體外溶出與製造後和儲存前相同製劑的溶出沒有實質性差異。例如，在一個實施方式中，在暴露於25℃和60%相對濕度下兩個月的儲存條件後，製劑在體外溶出期間釋放一定量的25-羥基維生素D，與在將製劑暴露於儲存條件前進行的體外溶出期間在相同溶解時間點釋放的量(即，新鮮製備的產品)相比，所述量在四小時後的任何給定溶出時間點變化30%或更少。
下表提供了本發明實施方案在25℃和60%相對濕度下和可替代的在40℃和75%相對濕度下，在初始製造後的不同時間和溶出測試期間的不同時間儲存後的預期的有利儲存穩定性程度的實例。儲存穩定性的程度以與標稱活性效力的最大偏差表示，即與LC的最大%變化。還提供了最大偏差的替代實施例。
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Figure 110112408-A0202-12-0041-134
在一種類型的實施方案中，製劑在整個溶出度測試的多個時間點，例如至少2小時和4小時時間點，任選地也在6小時時間點，還任選地在8小時時間點，並且還任選地在12小時的時間點，將具有上表中立即描述的有利程 度的穩定性，使得儲存後的溶出曲線遵循新鮮產品的溶出曲線。或者，該製劑至少在2，6和12小時的時間點具有上表中所述的有利的穩定性程度。或者，該製劑至少在4，8和12小時的時間點具有上表中所述的有利的穩定性程度。或者，該製劑至少在2，4和6小時的時間點具有上表中所述的有利的穩定性程度。或者，該製劑至少在4，6，8和12小時的時間點，或在4小時及之後的所有時間，將具有上表中所述的有利的穩定性程度。
在上表所述的任何和所有實施方案中，可以預期相對於新鮮產品，偏差可以是正的(更多釋放)或負的(更少釋放)。在一種類型的實施方案中，預期偏差將在多個時間點處於負(更少釋放)方向。此外，在一種類型的實施方案中，預期如果不是製劑中存在穩定劑，溶出釋放的偏差在多個時間點會是負的(釋放較少)。
在本文考慮的任何實施方案中，製劑的溶出釋放曲線可具有本文提供的任何一個實施方案的特徵。例如，該製劑的特徵在於溶出釋放曲線，其提供維生素D化合物在2小時時的釋放小於30%，在6小時時大於45%，在12小時時大於80%，並且還任選地在6小時時小於60%。
在另一類實施方案中，製劑的特徵在於體外溶出曲線，其提供維生素D化合物在100至140分鐘時釋放小於30%，在5至7小時時大於45%，且在11至13小時時大於80%。在另一類實施方案中，製劑可以通過體外溶出曲線來表徵，其提供維生素D化合物在2小時時釋放小於30%，在6小時時大於45%和在12小時時大於80%。在這些類型的實施方案中，任選地，維生素D化合物在5至7小時的釋放小於60%，或在6小時的釋放小於60%。
在另一類實施方案中，製劑可以通過體外溶出曲線來表徵，其在提供維生素D化合物在2小時時釋放約20%至約40%，在6小時時釋放至少35%和在12小時時釋放至少70%。在另一類實施方案中，製劑可以通過體外溶出曲線來表徵，其在提供維生素D化合物在2小時時釋放約25%至約35%，在6小時時釋放至少40%和在12小時時釋放至少75%。在這些類型的實施方案中，任選地，維生素D化合物在6小時時釋放75%或更少，或在6小時時釋放65%或更少，或在6小時時釋放60%或更少。
在各種情況下，包含25-羥基維生素D化合物的製劑包含可釋放結合維生素D化合物並可控制地釋放維生素D化合物(例如親脂性基質)和穩定劑(例如纖維素化合物)的基質成分。在各種情況下，穩定劑是纖維素化合物如本文所用，除非另有說明，否則術語“纖維素化合物”可以包括纖維素(C6H10O5)n或纖維素衍生物。在各個方面，纖維素化合物是纖維素醚。“纖維素醚”是經過化學修飾以導致纖維素分子中羥基部分或完全醚化的纖維素衍生物。可以用作穩定劑的纖維素衍生物的實例包括但不限於，例如纖維素酸，羧甲基纖維素，乙基纖維素，羥乙基纖維素，羥丙基纖維素，羥丙基甲基纖維素，甲基纖維素，聚陰離子纖維素及其組合。這些術語還包括對應於分子量，粘度，溶解度和水合作用變化的不同等級的每種纖維素化合物或穩定劑。
在一個實施方案中，穩定化製劑包含25-羥基維生素D2和25-羥基維生素D3的一種或兩種，蠟基質和纖維素化合物。在一個方面，穩定化製劑包含25-羥基維生素D2和25-羥基維生素D3中的一種或兩種，蠟基質和纖維素穩定劑。在另一方面，該製劑包含25-羥基維生素D2和25-羥基維生素D3中的 一種或兩種，蠟基質和有效量的纖維素化合物，以提供如本文所述的有利程度的穩定性，例如就上表而言或與下述任何實施例一致。例如，該量可以有效地提供在25℃和60%相對濕度的儲存條件下暴露至少一個月之後體外溶出過程中釋放的活性物質的量與在將製劑暴露於儲存條件之前進行的體外溶出過程中相同溶出時間點釋放的量之間30%或更小的差異，而缺乏穩定劑的對比製劑在相同儲存條件下會導致更大的溶出釋放差異。
在一個方面，該製劑是用於在攝入該製劑的受試者的胃腸道中控釋維生素D化合物的改進製劑。在一個實施方案中，該改進包括將纖維素穩定劑混合到製劑中，用於維生素D化合物在攝入該製劑的受試者的胃腸道中的控釋。在另一個實施方案中，所述改進包括將有效量的纖維素化合物摻入到用於在受試者的胃腸道中控釋維生素D化合物的製劑中，所述受試者攝入所述製劑以提供如本文所述的有利的穩定性程度，例如相對於上表或與下述任何實施例一致。例如，該量可以有效地提供在25℃和60%相對濕度的儲存條件下暴露至少一個月之後體外溶出過程中釋放的活性物質的量與在將製劑暴露於儲存條件之前進行的體外溶出過程中相同溶出時間點釋放的量之間30%或更小的差異，而缺乏穩定劑的對比製劑在相同儲存條件下會導致更大的溶出釋放差異。
穩定劑可以包括纖維素化合物。用於本公開的穩定製劑中的纖維素化合物和穩定劑的例子可以包括但不限於纖維素酸、羧甲基纖維素、乙基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、甲基纖維素、聚陰離子纖維素及其組合。還考慮了泊洛沙姆(例如，polaxamer 407)、聚(環氧乙烷)聚合物(例如，陶氏聚烯烴聚合物)、聚維酮和熱解二氧化矽(例如，德國埃森埃 沃尼克工業公司的AEROSIL 200)的一種或多種。穩定劑，例如纖維素化合物，優選以製劑的至少約5%的量存在，基於製劑的總重量，不包括任何額外的塗層或殼(重量%)。例如，纖維素化合物可以以製劑的至少5重量%、或製劑的至少10重量%、或製劑的至少15重量%、或製劑的大於5重量%、或製劑的大於10重量%、或製劑的大於15重量%的量存在。合適的範圍包括5重量%至30重量%、10重量%至20重量%、10重量%至15重量%、5重量%至15重量%和7.5重量%至12.5重量%。實例包括約5重量%、約6重量%、約7重量%、約8重量%、約9重量%、約10重量%、約11重量%、約12重量%、約13重量%、約14重量%和約15重量%。將理解，本文所述的穩定劑是在儲存條件(例如典型的貨架儲存條件(typical shelf storage conditions))期間穩定溶出釋放曲線(因此也穩定體內釋放曲線)以防止隨時間的實質變化的試劑。本領域已知作為防止活性成分本身降解的防腐劑的其它試劑不打算包含在術語“穩定劑(stabilizing agent、stabilizer)”內，儘管這些防腐劑也被考慮用於本發明的製劑中。
在一類實施方案中，纖維素化合物是纖維素醚。纖維素醚的實例包括但不限於甲基纖維素，羥丙基甲基纖維素，羥乙基甲基纖維素，羥乙基纖維素，羥丙基纖維素及其組合。
特別考慮羥丙基甲基纖維素(HPMC)。HPMC的特徵在於以下一個或多個特徵，這些特徵是單獨地或組合地特別考慮的。HPMC的甲氧基成分可以在19%到24%的範圍內。羥丙基成分可以在7%至12%的範圍內。表觀粘度(20℃水中2%溶液)可以是至少50000cp、或至少80000cp、或在約80至 120000cp、或3000至120000cp、或11000至120000cp的範圍內、或80000至120000cP。特別地，表觀粘度(20℃水中2%溶液)可以在80000至120000cp的範圍內。pH(1%水溶液)可以在5.5至8.0的範圍內。例如，具有所有上述性質的合適的羥丙基甲基纖維素，包括在80000至120000cp範圍內的表觀粘度(在20℃水中的2%溶液)，是METHOCEL K100M CR(Dow Wolff Cellulosics，Midland，Mich)。
在一種類型的實施方式中，纖維素化合物在基質的主要組分的熔點，例如在65℃或60℃至75℃的範圍內將不溶於基質製劑。
在一種類型的實施方案中，纖維素化合物將是親水的。穩定化蠟基質製劑(例如Rayaldee®型)可以具有填充到SoftOptiShell®植物多糖殼中的以下組合物：骨化二醇0.02%重量的膠囊填充劑、石蠟20.0%重量的膠囊填充劑、礦物油35.34%重量的膠囊填充劑、羥丙甲纖維素10.0%重量的膠囊填充劑、單甘油酯和二甘油酯22.56%重量的膠囊填充劑、月桂醯聚氧甘油酯9.75%重量的膠囊填充劑、無水乙醇2.32%重量的膠囊填充劑和BHT 0.02%重量的膠囊填充劑。
與不含纖維素化合物的製劑相比，包含25-羥基維生素D2和25-羥基維生素D3中的一種或多種以及纖維素化合物的根據本公開的藥物製劑具有改善的穩定性。在一個實施方案中，根據本公開的穩定化製劑包含含有25-羥基維生素D2和25-羥基維生素D3中的一種或兩種的負載活性物質的親脂性基質(active-loaded lipophilic matrix)和纖維素穩定劑的混合物，其中該製劑在暴露於25℃和60%相對濕度下至少一個月的儲存條件後，在體外溶出過程中釋 放一定量的25-羥基維生素D，與在新鮮製成的產品上進行的體外溶出過程中在相同溶出時間點釋放的量相比，在任何給定的溶出時間點釋放的量變化30%或更小。
在組合物儲存一段時間後，未穩定的製劑表現出活性成分釋放量的變化。一種不穩定的製劑在暴露於在給定溶出時間點變化的儲存條件下後釋放一定量的25-羥基維生素D，例如與在新鮮製成的產品上進行體外溶出過程中在相同溶出時間點釋放的量相比，釋放量超過30%。這些變化可以是在給定時間點溶出速率的增加或減少，並且這些變化產生的溶出曲線不同於初始溶處曲線的形狀。在如本文所述儲存後，例如在25℃和60%相對濕度下儲存3個月或更長時間後，與根據本公開的穩定製劑相比，不穩定製劑還表現出不同的體內效果。與不穩定的製劑相比，穩定的製劑在如本文所述儲存後，例如在25℃和60%相對濕度下儲存3個月或更長時間後，表現出不同的臨床藥代動力學參數，例如改善的生物利用度。根據本公開的穩定製劑可以具有儲存不穩定的基礎製劑，如本文所述，與穩定劑結合，穩定劑使製劑儲存穩定。
可釋放地結合和可控地釋放活性成分的基質可以是例如親脂性基質，包括蠟基質。蠟基質可提供製劑，其在室溫下為固體或半固體且在體溫下為固體、半固體或液體、優選在體溫下為半固體或液體。在一方面，蠟基質包含受控釋放劑、乳化劑和吸收促進劑。
適合使用的控釋劑的實例包括但不限於蠟，包括合成蠟、微晶蠟、石蠟、巴西棕櫚蠟和蜂蠟；聚乙氧基化菌麻油衍生物、氫化植物油、甘油單酯， 二酯或三苯甲酸酯；長鏈醇，如硬脂醇、十六醇和聚乙二醇；以及上述物質的混合物。不易消化的蠟狀物質，如硬石蠟，是優選的。
控釋劑可以至少5wt%穩定基質製劑，或大於約5wt%基質的量存在。例如，根據所用的控釋劑，控釋劑可占製劑的至少5重量%或製劑的至少10重量%，或製劑的至少15重量%，或製劑的至少20重量%，或製劑的至少25重量%，或製劑的大於5重量%，或製劑的大於10重量%，或大於製劑的15重量%，或大於製劑的20重量%，和或大於製劑的25重量%。控釋劑可以以50重量%或更少、40重量%或更少、35重量%或更少、或30重量%或更少的量存在。合適的範圍包括5重量%至40重量%、10重量%至30重量%和15重量%至25重量%。實例包括約15重量%、約16重量%、約17重量%、約18重量%、約19重量%、約20重量%、約21重量%、約22重量%、約23重量%、約24重量%和約25重量%。
在穩定基質製劑中適用的乳化劑的例子包括但不限於HLB值小於7的親脂性試劑，如混合脂肪酸單甘油酯；混合脂肪酸甘油二酯；脂肪酸單甘油酯和二甘油酯的混合物；親脂性聚甘油酯；甘油酯，包括單油酸甘油酯、二油酸甘油酯、單硬脂酸甘油酯、二硬脂酸甘油酯、單棕櫚酸甘油酯和二棕櫚酸甘油酯；脂肪酸的甘油酯；丙二醇酯，包括丙二醇單棕櫚酸酯、丙二醇單硬脂酸酯和丙二醇單油酸酯；脫水山梨醇酯，包括脫水山梨醇單硬脂酸酯、脫水山梨醇倍半油酸酯；脂肪酸及其皂，包括硬脂酸、棕櫚酸和油酸；以及它們的混合物。單油酸甘油酯、二油酸甘油酯、單硬脂酸甘油酯、二硬脂酸甘油酯、單棕櫚酸甘油酯和二棕櫚酸甘油酯；脂肪酸的甘油酯；丙二醇酯，包括丙二醇 單棕櫚酸酯、丙二醇單硬脂酸酯和丙二醇單油酸酯；脫水山梨醇酯，包括脫水山梨醇單硬脂酸酯、脫水山梨醇倍半油酸酯；脂肪酸及其皂，包括硬脂酸、棕櫚酸和油酸；和它們的混合物。
在穩定基質製劑中使用的優選類脂劑選自甘油酯及其衍生物。優選的甘油酯選自由中鏈或長鏈甘油酯、辛基丙烯基聚乙二醇甘油酯、和其混合物組成的組。優選的中鏈甘油酯包括但不限於中鏈單甘油酯、中鏈甘油二酯、辛酸/癸酸甘油三酯、單月桂酸甘油酯、單硬脂酸甘油酯、辛酸/癸酸甘油酯、單辛酸甘油酯、單辛酸甘油酯、單二辛酸甘油酯、辛酸/癸酸亞油酸甘油三酯和辛酸/癸酸/琥珀酸甘油三酯。
具有低熔點的甘油單酯優選用於製備穩定的基質製劑。優選的單甘油酯包括但不限於單硬脂酸甘油酯、單棕櫚酸甘油酯、單油酸甘油酯、單辛酸甘油酯、單辛酸甘油酯、單辛酸甘油酯、單月桂酸甘油酯等，優選單硬脂酸甘油酯。GMS是一種天然乳化劑。它是油溶性的，但難溶于水。GMS的HLB值為3.8。親脂性乳化劑可以以例如約10重量%至約40重量%，或約20重量%至約25重量%的量存在。其他實例包括約20重量%、約21重量%、約22重量%、約23重量%、約24重量%和約25重量%。
在穩定的基質製劑中適用的吸收促進劑的例子包括，但不限於，辛醯己醯聚乙二醇甘油酯，如聚乙烯糖基化甘油酯，也稱為聚乙二醇化甘油酯或聚乙二醇化甘油酯。可用於組合物中的聚乙二醇化甘油酯包括但不限於甘油一酯、甘油二酯和甘油三酯以及聚乙二醇的單酯和二酯的混合物、聚乙二醇糖 基化杏仁甘油酯、聚乙二醇糖基化玉米甘油酯和聚乙二醇糖基化辛酸/癸酸甘油三酯。吸收促進劑可以具有13至18或13至15的HLB值。
一種優選的吸收促進劑已知為商品名GELUCIRE(GattefosséCorporation，Paramus，N.J.，USA)。GELUCIRE是一種眾所周知的賦形劑，它是甘油和聚乙二醇酯(PEG esters)的脂肪酸酯家族，也稱為聚乙二醇化甘油酯。GELUCIRE用於各種應用，包括製備緩釋藥物組合物。GELUCIRE化合物是一種惰性、半固態蠟狀材料，具有兩親性，且具有各種物理特性(如熔點、HLB和在各種溶劑中的溶解度)。它們本質上具有表面活性，可分散或溶解在水介質中，形成膠束、微小球或囊泡。它們由熔點/HLB值確定。熔點以攝氏度表示。可選擇一種或多種不同等級的GELUCIRE賦形劑，以實現所需的熔點和/或HLB值特性。優選的GELUCIRE組合物是GELUCIRE 44/14，它是月桂醯聚乙二醇甘油酯(lauroyl macrogolglycerides)和月桂醯聚氧甘油酯(lauroyl polyoxylglycerides)的混合物，熔點為44℃，HLB值為14。吸收促進劑可以以例如約5重量%至約20重量%，或約8重量%至約15重量%的量存在。其它實例包括約8重量%、約9重量%、約10重量%、約11重量%、約12重量%、約13重量%、約14重量%和約15重量%。
蠟基質的低熔點提供了在高於蠟基質熔點約0℃至約50℃的溫度下摻入藥物活性成分(例如維生素D化合物如25-羥基維生素D2、25-羥基維生素D3或兩者)，然後將熔體(溶液和/或分散體)填充在合適的膠囊中的方法。膠囊可以是與熔體填充溫度相容的任何種類，包括軟或硬明膠膠囊，以及動物或植物明膠膠囊。熔體在冷卻至室溫後在膠囊內部固化。
在一個方面，穩定的基質製劑可以進一步包含25-羥基維生素D2和/或25-羥基維生素D3的油性載體。可以使用任何藥學上可接受的油。實例包括動物(例如魚)，蔬菜(例如大豆)和礦物油。油將優選易於溶出所用的25-羥基維生素D化合物。優選的油性載體包括不易消化的油，例如礦物油，特別是液體石蠟和角鯊烯。油性載體可以以例如占製劑的約10重量%至約50重量%、或約15重量%至約45重量%、或約20重量%至約40重量%、或約30重量%至約40重量%的濃度存在。在一種類型的實施方案中，合適的液體石蠟可以通過一個或多個以下參數表徵：比重約0.88至0.89；運動粘度(40℃)約64cSt至約70cSt；分子量424；%石蠟烴約59；和傾點-24℃。可優化蠟基質和油性載體之間的比例，以達到所需的維生素D化合物釋放速率。因此，如果使用的油的成分較重，可以使用相對較少的蠟基質，如果使用的油的成分較輕，則可以使用相對較多的蠟基質。
根據本公開的穩定化控釋組合物優選設計成例如每單位劑量含有1至1000μg的25-羥基維生素D2和/或25-羥基維生素D3的濃度，並且在延長的時間段內實現25-羥基維生素D2/25-羥基維生素D3的受控或基本上值定的釋放，任選釋放到人或動物的胃腸道回腸中。示例劑量包括每單位劑量1μg至1000μg、1μg至600μg、1μg至400μg、1μg至200μg、1μg至100μg、5μg至90μg、30μg至80μ.g、20μg至60μg、30μg至60μg、35μg至50μg、5μg至50μg和10μg至25μg，例如20μg、25μg、30μg、40μg、50μg、60μg、70μg、80μg、90μg和100μg。
前述製劑可以任選作為硬膠囊製劑存在。因此，本文公開的另一方面是含有25-羥基維生素D化合物的緩釋硬膠囊製劑，例如用於口服給藥。該製劑還可以任選地具有延遲釋放特性。在本文描述的任何方法中，25-羥基維生素D化合物可以以本文描述的硬膠囊製劑的形式給藥。
25-羥基維生素D的硬膠囊製劑可用於治療任何需要25-羥基維生素D的患者。需要補充維生素D的患者包括健康受試者和有維生素D不足或缺乏風險的受試者，例如，患有1、2、3、4或5期慢性腎病的受試者；不喝維生素D強化牛奶的嬰兒、兒童和成人(如乳糖不耐受受試者、牛奶過敏受試者、不吃奶的素食者和母乳餵養的嬰兒)；患有佝僂病的受試者；皮膚黝黑的受試者(例如，在美國，15至49歲的非裔美國女性中有42%缺乏維生素D，而白人女性中這一比例為4%)；老年人(在陽光照射下，皮膚合成維生素D的能力降低，也更容易呆在室內的人)；被收容的成年人(可能呆在室內的人，包括患有阿爾茨海默病或精神疾病的受試者)；覆蓋所有暴露皮膚的受試者(如某些宗教或文化的成員)；始終使用防曬霜的受試者(例如，應用孫安保護因數(SPF)為8的防曬霜可減少95%的維生素D產生，較高的SPF可能會進一步減少皮膚維生素D的產生)；患有脂肪吸收不良綜合征的受試者(包括但不限於囊性纖維化、膽汁淤積性肝病、其他肝病、膽囊疾病、胰酶缺乏症、克羅恩病、炎症性腸病、注入性或乳糜瀉，或部分或全部胃和/或腸的手術切除和/或旁路)；患有炎症性腸病的受試者；克羅恩病受試者；做過小腸切除術的受試者；患有牙齦疾病的受試者；服用增加維生素D分解代謝的藥物的受試者，包括苯妥英、福西苯妥英、苯巴比妥、卡馬西平和利福平；服用減少維生素D吸收的藥物的受試者， 包括消膽胺、考來替泊、奧利司他、礦物油和脂肪替代品；服用抑制維生素D活化的藥物(包括酮康唑)的受試者；服用減少鈣吸收藥物(包括皮質類固醇)的受試者；患有肥胖症的受試者(儲存在體脂庫中的維生素D生物利用度較低)；患有骨質疏鬆症的受試者和/或絕經後婦女。根據醫學研究所關於維生素D膳食參考攝入量的報告，食物消費資料表明，年輕和老年婦女維生素D的中位攝入量都低於目前的建議量；資料顯示，超過50%的年輕和老年女性沒有攝入推薦量的維生素D。
在其他方面，本發明的組合物和方法可用於維生素D反應性疾病的預防或治療，即維生素D，25-羥基維生素D或活性維生素D(例如1,25-二羥基維生素D)預防疾病發作或進展的疾病，或減少疾病的體征或症狀。這種維生素D反應性疾病包括癌症(例如乳腺癌，肺癌，皮膚癌，黑素瘤，結腸癌，結腸直腸癌，直腸癌，前列腺癌和骨癌)。已經觀察到1，25-二羥基維生素D在體外對許多細胞誘導細胞分化和/或抑制細胞增殖。維生素D反應性疾病還包括自身免疫性疾病，例如，I型糖尿病、多發性硬化、類風濕性關節炎、多發性肌炎、皮肌炎、硬皮病、纖維化、格雷夫斯病、橋本氏病、急性或慢性移植排斥、急性或慢性移植物抗宿主病、炎症性腸病、克羅恩病、系統性紅斑狼瘡、乾燥綜合征、濕疹和銀屑病、皮炎，包括特應性皮炎、接觸性皮炎、過敏性皮炎和/或慢性皮炎。維生素D反應性疾病還包括其他炎症性疾病，例如哮喘、慢性阻塞性肺病、多囊腎病、多囊卵巢綜合征、胰腺炎、腎炎、肝炎和/或感染。據報導，維生素D反應性疾病還包括高血壓和心血管疾病。因此，本發明考慮對有心血管疾病風險或患有心血管疾病的受試者進行預防性或治療性 治療，例如，患有動脈粥樣硬化、動脈硬化、冠狀動脈疾病、腦血管疾病、外周血管疾病、心肌梗塞、心肌缺血、腦缺血、中風、充血性心力衰竭、心肌病、肥胖症或其他體重病症、脂質病症(例如，高脂血症、包括相關糖尿病性血脂異常和混合血脂異常的血脂異常低α脂蛋白血症、高甘油三酯血症、高膽固醇血症和低HDL(高密度脂蛋白))、代謝障礙(例如，代謝綜合征，II型)i型糖尿病、高胰島素血症、葡萄糖耐量受損、胰島素抵抗、糖尿病併發症(包括神經病變、腎病、視網膜病、糖尿病足潰瘍和白內障)和/或血栓形成。
可受益於維生素D化合物水準調節的疾病包括但不限於：(i)位於甲狀旁腺--甲狀旁腺機能減退、假性甲狀旁腺機能減退、繼發性甲狀旁腺功能亢進；(ii)位於胰腺--糖尿病；(iii)位於甲狀腺髓樣癌；(iv)位於皮膚--牛皮癬；傷口癒合；(v)位於肺部--肺結節病和肺結核；(六)位於腎臟--慢性腎臟病、VDRR低磷血症、維生素D依賴性佝僂病；(vii)位於骨--抗驚厥治療，聽小骨纖維化不全、纖維性囊腫性骨炎、骨軟化症、骨質疏鬆症、骨質減少症、骨硬化症、腎性骨質疏鬆症、佝僂病；(viii)位於腸內-糖皮質激素拮抗、伊多病性高鈣血症、吸收不良綜合征、脂肪瀉、熱帶性腹瀉；和(ix)自身免疫性疾病。
在實施方案中，受益於維生素D化合物水準調節的疾病選自癌症、皮膚病(例如銀屑病)、甲狀旁腺疾病(例如，甲狀旁腺功能亢進和繼發性甲狀旁腺功能亢進)、骨疾病(例如骨質疏鬆症)和自身免疫性疾病。在實施方案中，硬膠囊25-羥基維生素D製劑可用於治療SARS-CoV-2感染。在實施方案中，硬膠囊製劑可用於治療患有慢性腎病(任選的3、4或5期慢性腎病、任選的3 或4期慢性腎病、任選的5期慢性腎病和任選的血液透析患者)的繼發性甲狀旁腺功能亢進。25-羥基維生素D的硬膠囊製劑可用於降低血清iPTH水準。
不限於此，本文所述的製劑和劑型可用於治療患有慢性腎病(3、4或5期)和繼發性甲狀旁腺功能亢進的患者，以及治療維生素D不足和與COVID-19相關的症狀。該製劑特別適用於長時間控制骨化二醇的釋放，以實現CKD患者甲狀旁腺激素的有效減少和/或治療感染SARS-CoV-2的患者。硬膠囊製劑還能有效防止給藥後前兩小時API的過早釋放。因此，本發明包括骨化二醇的緩釋劑型，其在兩相酸性/中性條件下，例如2小時pH 1.2或1.5，然後轉移到pH 6.5或6.8的緩衝水性介質中時具有體外溶出曲線，其中在第一個兩小時期間釋放不超過約5%、或約4%、或約3%、或約2%、或約1%的骨化二醇。在一個方面，溶出方法可以是在pH 1.5下2小時，然後轉移至pH 6.5緩衝介質。在另一方面，溶出方法可以是在pH 1.2下2小時，然後轉移到pH 6.8緩衝介質。例如，溶出方法可以根據USP-NF方法<711>使用裝置1或2和方法B(1000毫升的0.1N鹽酸在37℃保持2小時，瀝幹，然後加入1000毫升pH 6.8磷酸鹽緩衝液)，任選地使用裝置2。此後，在pH 6.8的緩衝介質中，骨化二醇的釋放在4小時可高達約40%或36%(從2相溶出度測試程式開始測量)，在6小時至少為60%或62%，在8小時至少為80%或84%。在實施方案中，劑型可以是膠囊，任選地是硬膠囊。溶出條件可以是本文進一步描述的標準條件。
一種類型的硬膠囊製劑具有釋放調節劑，包括親脂性(任選蠟質)填充劑、乳化劑和吸收促進劑，例如與上述蠟基基質製劑相同或相似，或者省略蠟(omitting wax)並包含更高濃度的其它親脂性釋放劑。在室溫和人體正常 溫度下，基質可以是固體或半固體。它以基本恒定的方式開始緩慢釋放，控制活性物質釋放至少4小時、或至少8小時、或至少10小時、或至少12小時，任選在4至24小時、或6至20小時、或8至18小時、或10至16小時、或約12小時的範圍內。例如，釋放機制可以通過機械侵蝕和/或逐漸崩解到下小腸和/或結腸的內腔內容物中來控制。
硬膠囊殼可以由任何合適的組合物製成，包括硬明膠膠囊和羥丙基甲基纖維素。HPMC膠囊可以任選地用其他試劑改性，例如凝膠化劑(gelatinizing agent)或膠凝助劑。硬膠囊殼可包含約0.01至約10重量%的凝膠化劑。凝膠化劑可以包括結冷膠(gellan gum)。
美國專利第5264223號和第5431917號描述了通過使用HPMC和凝膠化劑(如角叉菜膠)生產的膠囊。據稱這種膠囊的生產是在與明膠膠囊相似的溫度下進行的。鹽野義製藥株式會社(Shionogi Qualicaps Co.)(日本)(Shionogi Qualicaps Co.)生產含有角叉菜膠作為膠凝助劑(例如κ-和/或iota-角叉菜膠)和氯化鉀作為膠凝促進劑的HPMC膠囊。美國專利6410050 B1描述了含有果膠和甘油的纖維素膠囊(包括HPMC)。美國專利第6517865 B2描述了具有水膠體如結冷膠和螯合劑(如乙二胺四乙酸、檸檬酸鈉和檸檬酸)的HPMC膠囊。例如，它描述了一種膠囊材料，其具有90至99.98重量%的至少一種纖維素醚，該纖維素醚具有2至10%的水含量和在20℃的2%水溶液中測得的粘度為3-15cps；0.01至5重量%的結冷膠；和0.01-8重量%的螯合劑，其選自由乙二胺四乙酸、檸檬酸鈉、檸檬酸及其組合組成的組。例如，考慮使用含有至少一種纖維素醚(任選HPMC)和膠凝劑(任選結冷膠)的HPMC膠囊，所述纖維 素醚的水含量為2-10%，在20℃的2%水溶液中測得的粘度為3-15cps，和凝膠劑，所述膠凝劑的量為約0.01-約10重量%，或約1-約8重量%，或約2-約7重量%，或約4-約6重量%，或約5重量%。與沒有凝膠化助劑(gelatinizing aid)的HPMC膠囊相比，這種凝膠化HPMC膠囊(gelatinized HPMC capsules)被認為提供了更慢的破裂或崩解時間，例如在胃中。此外或可選地，HPMC膠囊可以包含腸溶衣，以延緩或防止膠囊殼在胃環境中的溶解或崩解。在酸性介質中抗溶解和在中性和鹼性介質中溶出的腸溶包衣材料是已知的，包括例如丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物、醋酸鄰苯二甲酸纖維素、醋酸琥珀酸纖維素、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯、羥丙基甲基纖維素醋酸琥珀酸酯、聚醋酸鄰苯二甲酸酯、甲基丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物、蟲膠、醋酸纖維素偏苯三酸酯、海藻酸鈉、玉米醇溶蛋白，以及包括乙基纖維素、中鏈甘油三酯、油酸、海藻酸鈉和硬脂酸的混合物的包衣溶液。不含凝膠化劑或含少量凝膠化劑百分比(如0-4% w/w)的硬膠囊可任選為腸溶包衣，以在給藥後0-2小時內實現最小至零釋放。
在硬明膠殼中包含25-羥基維生素D化合物的組合物可以包括本文所述的任何一種，例如固體或半固體組合物，任選蠟基質。基於固體或半固體組合物的重量，蠟的量可以是約20重量%至約36重量%。蠟基質的蠟可以包括不可消化的蠟，任選石蠟。包含25-羥基維生素D化合物的組合物可以進一步包含油性載體，基於固體或半固體組合物的重量，任選地含量為約25重量%至約41重量%。油性載體可以包括不可消化的油或由不可消化的油組成，任選礦物油。包含25-羥基維生素D化合物的組合物可以進一步包含穩定劑，基 於固體或半固體組合物的重量，其量任選在約2重量%到18重量%的範圍內。穩定劑可以包括纖維素醚，例如羥丙基甲基纖維素。包含25-羥基維生素D化合物的組合物可以進一步包含乳化劑，例如，基於固體或半固體組合物的重量，其量在約10重量%至約26重量%的範圍內。乳化劑可以包括例如長鏈飽和和不飽和脂肪酸的單甘油酯和二甘油酯。包含25-羥基維生素D化合物的組合物可以進一步包含吸收促進劑，基於固體或半固體組合物的重量，其量任選在約3重量%至約17重量%的範圍內。吸收促進劑可以包括甘油和聚乙二醇酯的脂肪酸酯或由甘油和聚乙二醇酯的脂肪酸酯組成，任選月桂醯聚氧甘油酯。包含25-羥基維生素D化合物的組合物可以進一步包含用於25-羥基維生素D的溶劑，基於固體或半固體組合物的重量，任選地其量在約0.2重量%至約6重量%的範圍內。溶劑可以包括醇或由醇組成，任選乙醇。硬膠囊劑型可以包括例如約0.1μg至約2mg範圍內的量的25-羥基維生素D化合物。25-羥基維生素D化合物可以包括25-羥基維生素D3或由25-羥基維生素D3組成。例如，劑型可以包括6μg至500μg生物可利用的25-羥基維生素D。該硬膠囊劑型可用於治療患有3、4或5期慢性腎病的患者的繼發性甲狀旁腺功能亢進。
骨化二醇硬膠囊製劑可以通過任何合適的方法製備，包括例如用可流動材料填充膠囊殼，或用一堆或一塊固體或半固體材料填充膠囊殼，或用殼組合物包裹或塗覆固體或半固體塊。硬膠囊的尺寸可以根據石蠟和其他賦形劑的特定填充比來調節，例如從3號尺寸到4號尺寸，以進一步控制藥物的釋放。
下表提供了含有不同百分比賦形劑的25-羥基維生素D的HPMC硬膠囊製劑實例(所有百分比均以重量計，基於膠囊中填充材料的重量)。
Figure 110112408-A0202-12-0059-135
進行了實驗設計(DOE)研究，石蠟在配方重量的20-40%之間變化(不包括殼材料)，月桂醯聚氧甘油酯在4.75-14.75%之間變化，單甘油酯和二甘油酯在22.5-12.5%之間變化，HPMC在6-14%之間變化。礦物油在所有配方中保持恒定為30%。從該DOE發現，為了獲得比Rayaldee ERC製劑更慢的體外釋放曲線，石蠟百分比可以大於>35%，月桂醯聚氧甘油酯約為4.75%。
下表提供了額外的蠟基硬膠囊製劑、具有植物基膠囊殼的Rayaldee型軟膠囊製劑(參考)和改性蠟基植物基軟膠囊製劑的例子。軟膠囊可以是基於OptiShell®植物基膠囊，例如含有改性澱粉和iota-角叉菜膠。
Figure 110112408-A0202-12-0060-136
下表描述了另一種25-羥基維生素D的硬膠囊製劑，具有凝膠化HPMC膠囊殼。結冷膠是一種親水性聚合物，與上述參考軟膠囊製劑的植物膠囊殼中使用的角叉菜膠具有相似的性質。凝膠化HPMC膠囊在胃中的破裂/崩解時間比非凝膠化HPMC膠囊慢。
Figure 110112408-A0202-12-0060-137
Figure 110112408-A0202-12-0061-138
該組合物可以裝入4號大小的凝膠化HPMC膠囊殼中，例如含有結冷膠的HPMC膠囊。
因此，本文公開的另一方面是25-羥基維生素D的凝膠化HPMC硬膠囊製劑。該製劑每單位劑量可包含0.1μg至約2mg的25-羥基維生素D化合物，任選地包含25-羥基維生素D2和/或25-羥基維生素D3。25-羥基維生素D化合物的量可以進一步為約1μg至約1mg、或約10μg至約900μg、或約20μg至約600μg、或約30μg至約300μg、或約60μg至約300μg的範圍內，例如約20μg、或約25μg、或約30μg、或約40μg、或約50μg、或約60μg、或約70μg、或約80μg、或約200μg、或約300μg、或約600μg、或約900μg。基於硬膠囊殼中填充材料的總重量，該製劑可包含約20重量%至約36重量%的蠟，任選不可消化的蠟，例如石蠟。蠟的量還可以在約22重量%至約34重量%、或約24重量%至約32重量%、或約26重量%至約30重量%的範圍內，例如約25重量%、約26重量%、約27重量%、約28重量%、約29重量%、約30重量%、約31重量%、約32重量%、或約33重量%。基於硬膠囊殼中填充材料的總重量，該製劑可以包括約25重量%至約41重量%的油性載體，任選地如上所述的一種，例如不可消化的油，例如礦物油。油性載體的量還可以在約27重量%至約 39重量%、或約29重量%至約37重量%、或約31重量%至約35重量%的範圍內，例如約29重量%、約30重量%、約31重量%、約32重量%、約33重量%、約34重量%、約35重量%、約36重量%、或約37重量%。基於硬膠囊殼中填充材料的總重量，該製劑可以包括約2重量%至約18重量%的穩定劑，任選地如上所述的一種，例如纖維素醚，例如羥丙甲纖維素。穩定劑的量還進一步可以在約4重量%至約16重量%、或約6重量%至約14重量%、或約8重量%至約12重量%的範圍內，例如約5重量%、約6重量%、約7重量%、約8重量%、約9重量%、約10重量%、約11重量%、約12重量%、或約13重量%。基於硬膠囊殼中填充材料的總重量，該製劑可包括約10重量%至約26重量%的乳化劑，任選如上所述的一種，例如包括長鏈、飽和和不飽和脂肪酸的單甘油酯和二甘油酯的混合物，例如單甘油酯和二甘油酯NF。乳化劑的量還可以在約12重量%至約24重量%、或約14重量%至約22重量%、或約16重量%至約20重量%的範圍內，例如約13重量%、約14重量%、約15重量%、約16重量%、約17重量%、約18重量%、約19重量%、約20重量%、或約21重量%、約22重量%、約23重量%。基於硬膠囊殼中填充材料的總重量，該製劑可以包括約3重量%至約17重量%的吸收促進劑，任選地如上所述的一種，例如甘油的脂肪酸酯和甘油和聚乙二醇酯，例如月桂醯聚氧甘油酯(44/14)。吸收促進劑的量還進一步可以在約5重量%至約15重量%、或約7重量%至約13重量%、或約9重量%至約11重量%的範圍內，例如約6重量%、約7重量%、約8重量%、約9重量%、約10重量%、約11重量%、約12重量%、或約13重量%。25-羥基維生素D活性物質可溶於醇載體(如乙醇)中，醇載體製劑中的 含量約為0.2重量%至約6重量%、或約0.5重量%至約5重量%、或約1重量%至約4重量%、或約2重量%至約4重量%的範圍內例如約1.5重量%、或約2.0重量%、或約2.5重量%、或約3重量%、，或約3.5重量%、或約4重量%。該製劑可以包含少量的防腐劑，例如抗氧化劑，例如BHT，例如在約0.005重量%至約1重量%、或約0.01重量%至約0.05重量%的範圍內，例如約0.02重量%
在另一種硬膠囊製劑類型中，可以省略蠟，並且例如增加乳化劑和/或吸收促進劑的濃度。該製劑可包含每單位劑量0.1μg至約2mg的25-羥基維生素D化合物，任選地包含25-羥基維生素D2和/或25-羥基維生素D3。25-羥基維生素D化合物的量可以進一步為約1μg至約1mg、或約10μg至約900μg、或約20μg至約600μg、或約30μg至約300μg、或約60μg至約300μg的範圍內，例如約20μg、或約25μg、或約30μg、或約40μg、或約50μg、或約60μg、或約70μg、或約80μg、或約200μg、或約300μg、或約600μg、或約900μg。基於硬膠囊殼中填充材料的總重量，該製劑可以包括約25重量%至約50重量%的油性載體，任選地如上所述的一種，例如不可消化的油，例如礦物油。油性載體的量還可以在約25重量%至約45重量%、或27重量%至約45重量%、或27重量%至約39重量%、或約29重量%至約37重量%、或約31重量%至約35重量%的範圍內，例如約30重量%、約32重量%、約34重量%、約36重量%、約38重量%、約40重量%、約42重量%、約44重量%、或約46重量%。基於硬膠囊殼中填充材料的總重量，該製劑可以包括約2重量%至約20重量%的穩定劑，任選地如上所述的一種，例如纖維素醚，例如羥丙甲纖維素。穩定劑的 量還進一步可以在約4重量%至約16重量%、或約6重量%至約14重量%、或約8重量%至約12重量%的範圍內，例如約5重量%、約6重量%、約7重量%、約8重量%、約9重量%、約10重量%、約11重量%、約12重量%、或約14重量%。基於硬膠囊殼中填充材料的總重量，該製劑可包括約15重量%至約45重量%的乳化劑，任選如上所述的一種，例如包括長鏈、飽和和不飽和脂肪酸的單甘油酯和二甘油酯的混合物，例如單甘油酯和二甘油酯NF。乳化劑的量還可以在約
17重量%至約42重量%、或18重量%至約40重量%、或20重量%至約36重量%、或20重量%至約34重量%、或約20重量%至約32重量%、或約20重量%至約30重量%、或約22重量%至約28重量%，或例如約18重量%、約20重量%、約22重量%、約24重量%、約26重量%、約28重量%、約30重量%、約32重量%、約34重量%、約36重量%、或約40重量%。基於硬膠囊殼中填充材料的總重量，該製劑可以包括約8重量%至約22重量%的吸收促進劑，任選地如上所述的一種，例如甘油的脂肪酸酯和甘油和聚乙二醇酯，例如月桂醯聚氧甘油酯(44/14)。吸收促進劑的量還進一步可以在約8重量%至約20重量%、或約9重量%至約18重量%、或約10重量%至約16重量%的範圍內，例如約9重量%、約10重量%、約11重量%、約12重量%、約13重量%、約14重量%、約15重量%、或約16重量%。25-羥基維生素D活性物質可溶於醇載體(如乙醇)中，醇載體製劑中的含量約為0.2重量%至約6重量%、或約0.5重量%至約5重量%、或約1重量%至約4重量%、或約2重量%至約4重量%的範圍內例如約1.5重量%、或約2.0重量%、或約2.5重量%、 或約3重量%、，或約3.5重量%、或約4重量%。該製劑可以包含少量的防腐劑，例如抗氧化劑，例如BHT，例如在約0.005重量%至約1重量%、或約0.01重量%至約0.05重量%的範圍內，例如約0.02重量%
在另一個方面，25-羥基維生素D化合物可以以國際(PCT)申請公開WO 2020/044314 A1中所述的製劑的形式給藥，包括適於對兒科患者給藥的這種製劑。
這種製劑可以包括嵌入聚合物網路中的維生素D化合物，任選地25-羥基維生素D或骨化二醇。該聚合物可以是不溶于水的，並且可選地是可溶脹的。在實施方案中，製劑可以是例如口服使用的緩釋製劑。
這種製劑可以包括包含維生素D化合物、任選的25-羥基維生素D或骨化二醇以及藥學上可接受的賦形劑的滾圓微丸製劑。在實施方案中，製劑可以是例如口服使用的緩釋製劑。在實施方案中，製劑可以是延遲釋放製劑，或延遲-持續釋放製劑。滾圓的小丸可以置於膠囊中，該膠囊任選被腸溶包衣。或者，微丸可以是腸溶包衣的。
這種製劑可以包括維生素D製劑，其包含分散在脂肪酸甘油酯混合物中的維生素D化合物，任選地25-羥基維生素D或骨化二醇。在實施方案中，製劑可以是例如口服使用的緩釋製劑。
這種製劑可以包括納米/微粒製劑，其包含維生素D化合物、任選的25-羥基維生素D或骨化二醇以及藥學上可接受的賦形劑。在實施方案中，納米/微粒製劑可以提供維生素D化合物的緩釋，例如通過使用緩釋聚合物作為賦形劑。
這種製劑可以包括脂質微粒製劑，其包含維生素D化合物、任選的25-羥基維生素D或骨化二醇以及藥學上可接受的脂質。在實施方案中，製劑可以是例如口服使用的緩釋製劑。
這種製劑可以包括含有維生素D化合物的糖粒種子、其任選的25-羥基維生素D或骨化二醇以及藥學上可接受的賦形劑。在實施方案中，製劑可以是例如口服使用的緩釋製劑。在實施方案中，賦形劑可以包括緩釋聚合物包衣。
這種製劑可以包括藥物組合物，該藥物組合物包含維生素D化合物、任選的25-羥基維生素D或骨化二醇，以及藥學上可接受的賦形劑，該賦形劑選自吸收促進劑、滾圓助劑、水不溶性聚合物和結合劑中的一種或多種賦形劑。在實施方案中，製劑可以是例如口服使用的緩釋製劑。
這種製劑可以包括噴霧凝結的脂質維生素D製劑，其包含維生素D化合物、任選的25-羥基維生素D或骨化二醇、緩釋劑和表面活性劑。在實施方案中，製劑可以是例如口服使用的緩釋製劑。
在優選實施方案中，硬膠囊或軟膠囊的殼組合物可以是在低酸鹼度環境中穩定存在的組合物。
本文所述的25-羥基維生素D的給藥和COVID-19治療可以在額外治療存在或不存在的情況下進行。例如，COVID-19的額外治療可以包括抗病毒藥、抗瘧藥(氯喹、羥氯喹)和抗生素類的一種或多種化合物。作為另一個例子，可以施用增強維生素D作用的藥劑，例如CYP24抑制劑，其可以減緩25-羥基維生素D化合物和1，25-二羥基維生素D化合物的分解代謝。
抗病毒劑可以包括抗逆轉錄病毒劑、抗SARS-CoV-2病毒的抗體、逆轉錄酶抑制劑，並且可以包括馬拉威羅(maraviroc)、恩夫韋地(enfuvirtide)、金剛烷胺、拉米夫定、奈韋拉平、依法韋侖、多盧泰韋、埃替拉韋(elvitegravir)、雷特格韋(raltegravir)、阿昔洛韋以及阿昔洛韋、更昔洛韋、西多福韋、福卡奈、利巴韋林、干擾素α、聚乙二醇化干擾素α、博塞韋韋韋、阿塔紮那韋、達魯納韋的任何核苷類似物中的一種或多種。其他抗病毒劑包括能夠靶向病毒/非病毒靶標的肽基化合物和能夠靶向病毒/非病毒靶標的DNA基化合物。
用於組合的抗病毒劑可以是，例如，來自葛蘭素史克公司的Retrovir®(3’-疊氮基-3’-去氧嘧啶，齊多夫定)和3’-疊氮基-3’-去氧胸苷(AZT)，來自霍夫曼-拉羅奇公司的HMD®(2’,3’-雙去氧胞苷，紮爾西他濱)，來自Bristol-Myers-Squibb的Videx®或VidexEC®(2',3'dideoxyinosine,Didanosine)，來自GlaxoSmithKline的Epivir®(Lamivudine)，來自Bristol Myers-Squibb的Zerit®(stavudine)，來自Gilead的Viread®(tenofovir DF)，來自葛蘭素史克的ziagen®(阿巴卡韋)，來自吉利德科學的Emtriva®(恩曲他濱，FTC)；或非核苷類似物，例如來自輝瑞的瑞司特(地拉韋定)、來自布里斯托爾邁耶施貴寶的蘇司提瓦(依非韋倫)、來自勃林格殷格翰的維拉明(奈韋拉平，11-環丙基-4-甲基-5，11-二氫-6H-雙嘧達莫【3,2-b：2',3'-e】【1,4】二氮雜-6-酮)、磷酸三鈉、銨-21-鎢-9-銻酸鹽、1-β病毒或逆轉錄病毒蛋白酶抑制劑，如病毒天冬氨酸蛋白酶抑制劑，如HIV蛋白酶抑制劑，如來自葛蘭素史克的Aganerase®(安潑那韋amprenavir)、來自百時美施貴寶的reyataz®(atazanavir)、來自GSK的lexiva®(fosampreavir)、來自默克公司的Crixivan®(Indinavir)；阿古龍的 Viracept®(奈非那韋)，雅培的Norvir®(利托那韋)；霍夫曼-拉羅徹的福托維酶Fortovase®和因維拉酶Invirase®(沙喹那韋saquinavir)；以及其他化合物，例如來自GlaxoWellcome的拉西那韋(lasinavir)(5(S)-(叔丁氧基羰基氨基)-4(S)-羥基-6-苯基-2(R)(2，3，4-三甲氧基苯基甲基)-己醯基-(L)-纈醯-N-(2-甲氧基-乙基)-醯胺)、阿黴素、KVX-478；來自Vertex的VX-478；來自基賽製藥的141W94；來自阿古龍的AG-1343；日本礦業公司的KNI-272；來自Upjohn的u-96988；勃林格殷格翰公司的BILA-2011 BS；防止病毒滲透的化合物，例如聚番荔枝酸鹽；融合抑制劑，例如來自霍夫曼-拉羅徹公司的Fuzeon(enfuvirtide，T-20)；或者它們的任意組合，例如來自葛蘭素史克公司的Epzicom®(阿巴卡韋和拉米夫定)、來自葛蘭素史克公司的Trizivir®(阿巴卡韋、拉米夫定和齊多夫定)、來自Gilead Sciences公司的Truvada®(恩曲他濱和替諾菲爾DF)、來自葛蘭素史克公司的Combivir®(拉米夫定和齊多夫定)、來自雅培公司的Kaletra®(洛匹那韋和利托那韋)的一種或多種。
抗菌藥物可以包括磺醯胺類、兩性黴素類如氯黴素、大觀黴素、甲氧苄啶、替加環素、紅黴素、克拉黴素、阿奇黴素、利奈唑胺、去氧克林、碳青黴烯類如亞胺培南、美羅培南、氨曲南、替凱西林酸鹽、呱拉西林-他唑巴坦、頭孢菌素類如頭孢噻肟、頭孢曲松、頭孢他啶和頭孢吡肟、慶大黴素、妥布黴素和阿米卡星、酮內酯類、喹諾酮類包括axaquin(洛美沙星)、Floxin(氧氟沙星)、Noroxin(諾氟沙星)、Tequin(加替沙星)、Cipro(環丙沙星)、Avelox(莫西沙星)、Levaquin(左氧氟沙星)、Factive(吉氟沙星)、Cinobac(西諾沙星)、NegGram(萘啶酸)、Trovan(特氟沙星)和Zagam(司帕沙星)、氟喹諾酮類、例如 左氧氟沙星，環丙沙星和氧氟沙星，萬古黴素、多粘菌素如多粘菌素B和粘菌素、頭孢菌素，卡賓，大環內酯類、包括axaquin(洛美沙星)、Floxin(氧氟沙星)、Noroxin(諾氟沙星)、Tequin(加替沙星)、Cipro(環丙沙星)、Avelox(莫西沙星)、Levaquin(左氧氟沙星)、Factive(吉氟沙星)、Cinobac(西諾沙星)、NegGram(萘啶酸)、Trovan(特氟沙星)和Zagam(司帕沙星)、萬古黴素，克林黴素，異煙肼，licosamides，莫匹羅星，利福平，乙胺丁醇，吡嗪醯胺，桿菌肽，多粘菌素，磺醯胺，糖肽和硝基咪唑、替凱西林，羧基青黴素，苯酚，四環素，鏈黴素，惡唑烷酮，氯黴素，利福黴素和青黴素，例如青黴素V，青黴素G，普魯卡因青黴素G，苄星青黴素G，甲氧西林，苯唑西林，氯唑西林，雙氯西林和氟氯西林，氨苄青黴素，阿莫西林，丙西林，苯乙西林，疊氮西林，氯美托西林和培那西林或其組合的一種或多種。
在另一個方面，該治療可以包括皮質類固醇的給藥，例如A類(氫化可的松型)、B類(曲安奈德型)、C類(倍他米松型)和D類(氫化可的松-17-丁酸鹽和洛貝他松-17-丁酸鹽型)中的一種或多種。例如，皮質類固醇可以包括可的松、氫化可的松、甲基強的松龍、潑尼松龍、潑尼松、布地奈德、氟輕鬆、曲安奈德、倍氯米松、地塞米松、倍他米松、氟替卡松和莫米松。皮質類固醇可通過吸入給藥，如潑尼松、潑尼松龍、二丙酸倍氯米松(Beclovent®、Qvar®和Vanceril®)、曲安奈德(Azmacort®)、莫米松(Asthmanex®)、布地奈德(Pulmocort®、Symbicort®)、、氟尼索利德(Aerobid®)、氟替卡松與沙美特羅(Adviar®)和糠酸莫米松與富馬酸福莫特羅二水合物(Dulera®)。
受試者可以是哺乳動物，包括但不限於齧齒動物目的哺乳動物，例如小鼠和倉鼠，以及象形目的哺乳動物，例如兔子，食肉動物目的哺乳動物，包括貓科動物(貓)和犬科動物(狗)，偶蹄目的哺乳動物，包括牛類(牛)和豬類(豬)，或者奇蹄目的哺乳動物，包括馬科動物(馬)。在一些方面，哺乳動物是靈長目、猴亞科(Ceboids)或類人猿下目(Simoids)(猴)或類人猿亞目(人和猿)。在某些方面，哺乳動物是人類。
在各個方面，受試者感染了SARS-CoV-2。在各個方面，受試者被診斷為SARS-CoV-2感染。在某些情況下，診斷可以基於實驗室化驗，而不考慮臨床症狀和體征。例如，診斷可以基於咽拭子樣本的陽性病毒核酸檢測結果。在某些方面，受試者臨床診斷為SARS-CoV-2感染僅基於症狀和暴露，而不是通過病毒核酸測試。在多個方面，臨床診斷的受試者是證明存在與冠狀病毒肺炎一致的肺成像特徵的受試者。在各種情況下，受試者是感染了SARS-CoV-2的人，並且未被診斷出感染，或者不知道感染。在某些情況下，受試者可能無症狀。
在各方面中，患者的基線血清總25-羥基維生素D水準可在小於約30ng/mL、或小於約20ng/mL、或在20ng/mL至30ng/mL範圍內、或在約20ng/mL至約25ng/mL範圍內。
在各個方面，受試者表現出以下一種或多種症狀：發燒、疲勞、咳嗽和/或呼吸困難。在示例性實例中，受試者表現出肺炎或肺炎樣症狀。另外，受試者被診斷為冠狀病毒病2019(COVID-19)。世界衛生組織對確診的COVID-19病例的定義是，無論臨床症狀和體征如何，實驗室化驗結果顯示感染了 SARS-CoV-2的人。在各種情況下，受試者至少或大於50歲、60歲、70歲或80歲。在多個方面中，受試者具有至少一種潛在的醫學共病，包括但不限於心血管疾病、糖尿病、肥胖、高血壓、慢性肺病、癌症、慢性腎病(CKD)。任選地，該受試者具有3期或4期CKD。可選地，受試者具有5期CKD。任選地，患者具有至少15mL/min/1.73m2的eGFR，並且還任選地eGFR<60mL/min/1.73m2。在各個方面，患者正在接受透析治療，例如血液透析治療。
除非另有說明，否則考慮該方法包括實施例，該實施例包括下文進一步描述的一個或多個附加可選元素，特徵和步驟(包括圖中所示的那些)的任何組合。
在禁止在人體上實施的方法專利的管轄區內，組合物對人類受試者的“施用”的含義應限於規定人體將通過任何技術自我施用(例如，口服，吸入，局部施用，注射，插入，等等)的受控物質。意在提供與定義可授予專利主題的法律或法規一致的最廣泛合理解釋。在不禁止在人體上實施方法的專利的管轄區中，組合物的“施用”包括在人體上實施的方法和前述活動。
如本文所用，術語“包含”表示除了指定的那些之外，還可能包含其他代理，元素，步驟或特徵。
實例
提供以下實施例用於說明，並不意在限制本發明的範圍。
實例1
這是一項針對SARS-CoV-2患者的ERC(商業上可作為Rayaldee®而獲得)的雙盲隨機安慰劑對照試驗，該患者在“免下車”測試中心(“drive through”testing center)測試。
一個目的是證明，在SARS-CoV-2感染的患者中血清總25-羥基維生素D快速升高到足夠升高的水準，或維持足夠高的血清總25-羥基維生素D水準導致改善的結果，這通過以下一項或多項來證明：(1)與安慰劑相比(Treanor et al.,JAMA vol.283,no.8,February 23,2000)，由六種症狀(咳嗽、呼吸困難、疲勞、頭痛、肌痛和發燒)證明的COVID-19疾病的嚴重性和持續時間，使用4分NRS(0，不存在；3，嚴重)，每天兩次記錄14天或20天或21天，(2)與安慰劑相比，SARS-CoV-2感染的入院數顯著減少，(3)與安慰劑相比，由於SARS-CoV-2感染的死亡率顯著降低，(4)與安慰劑相比，SARS-CoV-2感染的入院持續時間顯著減少，和(5)與安慰劑相比，在2周、3周、20周、或更快速的病毒滴度降低；和(6)與安慰劑相比，在2周時間、或20天時間、或3周時間內血清抗SARS-CoV-2抗體滴度更快下降。升高的血清總25-羥基維生素D水準至少為50ng/mL，或至少60ng/mL，或大於60ng/mL。另一個目的是證明與安慰劑相比，900μg負荷劑量和60μg/天維持劑量的ERC快速可靠地增加並維持血清總25-羥基維生素D水準至至少50ng/mL。
【00162】另一個目的是證明ERC治療可增強SARS-CoV-2感染患者的先天性和適應性免疫應答的血清生物標誌物。另一個目標是證明與安慰劑組SARS-CoV-2感染患者相比，ERC治療加速了外周血單核細胞中急性， 亞急性和晚期炎症反應相關的甲基組和轉錄組，後者在ERC治療和安慰劑治療的受試者的匹配亞組中本體(in bulk)進行和進行單細胞RNA測序。
在ERC和安慰劑組中的受試者數量大約為平均的。ERC治療組和安慰劑組各約有83名受試者，總共約166名受試者。
納入的標準規定為參與者必須年滿18歲，並在過去三天內確認患有SARS-CoV-2感染。此外，參與者i)可以是男性和女性，ii)可以在18-70歲之間，iii)如果排卵的女性，必須在登記時和服用第一次研究藥物之前通過尿液樣本確認陰性妊娠試驗劑量，iv)如果排卵的女性，必須願意在研究期間使用有效的避孕方法(女性參與者應避免懷孕)，v)必須願意在2周的研究過程中限制維生素D補充劑的使用，除了正常強化的食品(如牛奶)，vi)必須證明符合所有研究要求的能力，並且vii)必須沒有任何可能損害安全性評估的疾病狀態或身體狀況，或者研究者認為這會干擾研究參與。
排除的標準規定為，符合以下任何標準的受試者被排除在研究之外：i)懷孕，ii)過去六個月曾服用糖皮質激素藥物，iii)有甲狀旁腺功能亢進，腎結石，高鈣尿症或高鈣血症史，iv)有慢性肉芽腫形成病史(例如結節病)，v)有任何可能顯著改變維生素D或25-羥基維生素D的吸收，分佈，代謝或排泄的手術或醫療的情況(例如小腸切除術)，vi)正在接受噻嗪類藥物或高劑量利尿劑的治療，vii)在抽血時篩選血清肌酐時，腎功能損害測量為eGFR<60ml/min/1.73m2，和/或viii)抽血時血清總鈣>9.8mg/dL，ix)顯示存在或即將發生脫水的證據，x)已知或懷疑對研究藥物的任何成分的過敏，和/或xi)在研究篩選前30天內目前正在參與，或已經參與介入/研究性研究。在試驗過程中 報告高鈣血症的體征或症狀並且確認血清鈣>10.3mg/dL的任何受試者從試驗中移除，並且將其隨機化狀態披露給負責的研究者和使適當的醫療保健提供者警覺。如果在第7天或第14天血清總25-羥基維生素D超過100ng/mL，則暫停給藥。
治療組中符合條件的受試者在第1天接受900μg負荷劑量的口服ERC(Rayaldee®緩釋骨化二醇膠囊)，隨後19天(第2-20天)維持劑量為每天60μg。在睡前或一天中禁食至少3小時後的其他時間口服給藥。負荷劑量後，受試者繼續禁食至少3小時。
安慰劑組的合格受試者按照與治療組相同的時間表接受類似口服製劑。
允許聯合用藥，但(1)噻嗪類或高劑量非噻嗪類利尿劑，(2)可能損害脂溶性營養素吸收的藥物，以及(3)每天提供超過1.0g元素鈣的膳食補充劑除外。
如下所述，在研究期間定期採集血樣，隨機尿樣，鼻拭子SARS-CoV-2滴度水準和血清抗SARS-CoV-2抗體滴度。測定血樣：i)血清總25-羥基維生素D ii)血清游離25-羥基維生素D(serum free 25-hydroxyvitamin D)，iii)血清完整甲狀旁腺激素(iPTH；25-羥基維生素D不足引起的甲狀旁腺功能亢進的標誌物)，iv)LL37，v)增強先天免疫的三種迴圈生物標誌物：嗜酸性粒細胞趨化因數，單核細胞趨化蛋白MCP1(也稱為CCL2)和白細胞介素12(IL-12)T細胞干擾素-γ(IFN-γ)產生的有效誘導劑，vi)血清白細胞介素-6(IL-6)作為對SARS-COv-2感染的適應性免疫應答的標誌物。對收穫的外周血中 性粒細胞和單核單核細胞(PBMC)進行差異細胞計數，通過螢光啟動細胞分選(FACS)進行免疫細胞表面標誌物表型分析，以及通過反卷積分析進行差異全基因組亞硫酸氫鹽DNA測序，以確定單核細胞和中性粒細胞中未甲基化、轉錄活性基因的“特徵”。通過每日評分評估干預前和干預後臨床疾病嚴重程度的對比。分析隨機尿液樣本的鈣：肌酐比例(正常<0.2)。
在給藥期間的每一天，接受治療的受試者使用11分NRS(不能進行正常活動，0；完全能夠進行正常活動，10)在日記卡上記錄他們的日常活動的能力。接受治療的受試者在11分NRS(0分，最差健康狀況和10分，最佳健康狀況)上完成他們對總體健康狀況的看法記錄，包括正常，SARS-CoV-2前健康狀況；在此之後，他們記錄他們在基線和24小時內每天晚上一次的健康狀況的評估。受試者還每天兩次用數位溫度計記錄口腔溫度。其他詳細資訊在下表和時間表中描述。
Figure 110112408-A0202-12-0075-139
Figure 110112408-A0202-12-0076-140
在第0天，第1天，第7天，第14天和第21天抽血並按照表2中的明確規定進行分析。還收集樣品用於分析與SARS-CoV-2感染，宿主免疫狀態和維生素D代謝相關的生物標誌物。
調整所有血清鈣值以使血清白蛋白水準<4.0g/dL。在第1天，第7天，第14天和第21天獲得隨機尿液樣品並按照表2中的明確規定進行分析。取第-3天至第0天，第1天，第7天，第14天和第21天的鼻拭子樣本，並按表2所述進行分析。
Figure 110112408-A0202-12-0076-141
Figure 110112408-A0202-12-0077-142
研究活動將在下面進一步詳細描述。
篩選期(第-3至0天)
篩選訪視(訪視1/天-3至0)
在SARS-CoV-2感染陽性測試的3天內篩選訪視。進行身體檢查(體重，身高和BMI)和生命體征評估。獲得用於SARS-CoV-2感染的鼻拭子。抽取血樣用於臨床化學(全面板和eGFR測定)，血液學，血清iPTH和血清總25-羥基維生素D。
隨機化和治療期(第1-20天)
訪視2(第1天)
第一天早上進行空隨機尿液採集(可以根據訪視時間進行訪視前採集)。進行身體檢查(體重，身高和BMI)和生命體征評估。獲得用於SARS-CoV-2感染的鼻拭子。抽取血樣用於臨床化學(全面板和eGFR測定)，血液學，生物標誌物，PD和PK參數(參見表2)，抗SARS-CoV-2抗體滴度和血液PBMC和血清用於宿主免疫應答檢測和定量。受試者隨機接受ERC或安慰劑治療。
受試者在訪視時評估並記錄在日記卡上：使用4分NRS(0，不存在)記錄六種COVID-19症狀(咳嗽，呼吸困難，疲勞，頭痛，肌痛和發熱)的嚴重程度；3，嚴重)和使用數位溫度計的口腔溫度。
受試者在禁食至少3小時後，從“負荷劑量”瓶中自行施用900μg劑量的指定藥物產品膠囊。給藥後至少3小時不攝入食物。劑量記錄在日記卡上。
受試者在睡前評估並記錄在日記卡上：使用4分NRS(0，不存在；3，嚴重)記錄六種COVID-19症狀(咳嗽，呼吸困難，疲勞，頭痛，肌痛和發熱)的嚴重程度；使用11分視覺類比NRS(0，不能執行正常活動；10，完全能夠進行正常活動)記錄進行日常活動的能力；使用11分NRS(0，最差健康狀況；10，最佳健康狀況)記錄他們對整體健康狀況的看法，和使用數位溫度計的口腔溫度。
第2-6天
第2-6天不進行研究訪視或程式。受試者在早晨自我評估並記錄在日記卡上：使用4分NRS(0，不存在)記錄六種COVID-19症狀(咳嗽，呼吸困難，疲勞，頭痛，肌痛和發熱)的嚴重程度；3，嚴重)和使用數位溫度計的口腔溫度。受試者在睡前每天從指定的“維持劑量”瓶中自行施用60μg劑量的膠囊並將劑量記錄在日記中。受試者在睡前自我評估並記錄在日記卡上：使用4分NRS(0，不存在；3，嚴重)記錄六種COVID-19症狀(咳嗽，呼吸困難，疲勞，頭痛，肌痛和發熱)的嚴重程度；使用11分NRS(0，不能執行正常活動；10，完全能夠進行正常活動)記錄進行日常活動的能力；使用11分NRS(0，最差健康狀況；10，最佳健康狀況)記錄他們對整體健康狀況的看法，和使用數位溫度計的口腔溫度。
訪視3(第7天)
受試者在早晨自我評估並記錄在日記卡上：使用4點NTR(0，不存在；3，嚴重)記錄六種COVID-19症狀(咳嗽，呼吸困難，疲勞，頭痛，肌痛和發熱)的嚴重程度和使用數位溫度計的口腔溫度。
在現場訪視期間進行的活動包括第一次早晨排出隨機尿液的採集(可根據訪視時間在訪視前進行採集)，生命體征評估和SARS-CoV-2感染的鼻拭子。抽取血樣用於臨床化學(包括eGFR測定的全組)，生物標誌物，PD和PK參數(參見表2)，抗COVID-19抗體滴度，以及用於宿主免疫應答檢測和定量的血液PBMC和血清。
受試者在睡前每天從指定的“維持劑量”瓶中自行施用60μg劑量的膠囊並將劑量記錄在日記中。受試者在睡前自我評估並記錄在日記卡上：使用4分NRS(0，不存在；3，嚴重)記錄六種COVID-19症狀(咳嗽，呼吸困難，疲勞，頭痛，肌痛和發熱)的嚴重程度；使用11分NRS(0，不能執行正常活動；10，完全能夠進行正常活動)記錄進行日常活動的能力；使用11分NRS(0，最差健康狀況；10，最佳健康狀況)記錄他們對整體健康狀況的看法，和使用數位溫度計的口腔溫度。
第8-13天
第8-13天不進行研究訪視或程式。受試者在早晨自我評估並記錄在日記卡上：使用4分NRS(0，不存在)記錄六種COVID-19症狀(咳嗽，呼吸困難，疲勞，頭痛，肌痛和發熱)的嚴重程度；3，嚴重)和使用數位溫度計的口腔溫度。受試者在睡前每天從指定的“維持劑量”瓶中自行施用60μg劑量的膠囊並將劑量記錄在日記中。受試者在睡前自我評估並記錄在日記卡上： 使用4分NRS(0，不存在；3，嚴重)記錄六種COVID-19症狀(咳嗽，呼吸困難，疲勞，頭痛，肌痛和發熱)的嚴重程度；使用11分NRS(0，不能執行正常活動；10，完全能夠進行正常活動)記錄進行日常活動的能力；使用11分NRS(0，最差健康狀況；10，最佳健康狀況)記錄他們對整體健康狀況的看法，和使用數位溫度計的口腔溫度。
訪視4(第14天)
受試者在早晨自我評估並記錄在日記卡上：使用4分NRS(0，不存在)記錄六種COVID-19症狀(咳嗽，呼吸困難，疲勞，頭痛，肌痛和發熱)的嚴重程度；3，嚴重)和使用數位溫度計的口腔溫度。
在現場訪視期間進行的活動包括第一次早晨排出隨機尿液的採集(可根據訪視時間在訪視前進行採集)，生命體征評估和SARS-CoV-2感染的鼻拭子。抽取血樣用於臨床化學(包括eGFR測定的全組)，生物標誌物，PD和PK參數(參見表2)，抗SARS-Cov-2抗體滴度，以及用於宿主免疫應答檢測和定量的血液PBMC和血清。
受試者在睡前每天從指定的“維持劑量”瓶中自行施用60μg劑量的膠囊並將劑量記錄在日記中。受試者在睡前自我評估並記錄在日記卡上：使用4分NRS(0，不存在；3，嚴重)記錄六種COVID-19症狀(咳嗽，呼吸困難，疲勞，頭痛，肌痛和發熱)的嚴重程度；使用11分NRS(0，不能執行正常活動；10，完全能夠進行正常活動)記錄進行日常活動的能力；使用11分NRS(0，最差健康狀況；10，最佳健康狀況)記錄他們對整體健康狀況的看法，和使用數位溫度計的口腔溫度。
第15-20天
第15-20天不進行研究訪視或程式。受試者在早晨自我評估並記錄在日記卡上：使用4分NRS(0，不存在)記錄六種COVID-19症狀(咳嗽，呼吸困難，疲勞，頭痛，肌痛和發熱)的嚴重程度；3，嚴重)和使用數位溫度計的口腔溫度。受試者在睡前每天從指定的“維持劑量”瓶中自行施用60μg劑量的膠囊並將劑量記錄在日記中。受試者在睡前自我評估並記錄在日記卡上：使用4分NRS(0，不存在；3，嚴重)記錄六種COVID-19症狀(咳嗽，呼吸困難，疲勞，頭痛，肌痛和發熱)的嚴重程度；使用11分NRS(0，不能執行正常活動；10，完全能夠進行正常活動)記錄進行日常活動的能力；使用11分NRS(0，最差健康狀況；10，最佳健康狀況)記錄他們對整體健康狀況的看法，和使用數位溫度計的口腔溫度。
隨訪期，訪視5(第21天)
受試者在早晨自我評估並記錄在日記卡上：使用4分NRS(0，不存在)記錄六種COVID-19症狀(咳嗽，呼吸困難，疲勞，頭痛，肌痛和發熱)的嚴重程度；3，嚴重)和使用數位溫度計的口腔溫度。
在現場訪視期間進行的活動包括第一次早晨排出隨機尿液的採集(可根據訪視時間在訪視前進行採集)，生命體征評估和SARS-CoV-2感染的鼻拭子。抽取血樣用於化學(包括eGFR測定的全組)和血液學，生物標誌物，PD和PK參數(參見表2)，抗SARS-CoV-2抗體滴度，以及用於宿主免疫應答檢測和定量的血液PBMC和血清。
在受試者被證實感染後，在安排的篩選訪視時儘快取得基線受試者特徵，包括年齡、性別、種族、身高、體重、BMI、生命體征(血壓和心率)和COVID-19疾病嚴重性的評估。主要、次要和探索性(如可得)結果按研究組和隨訪時間點進行總結，使用CONSORT指南提供描述性統計資料，包括受試者在現場、整體和治療組中的平均值、中位數、標準差、四分位數、四分位數區間、最小值和最大值。連續變數使用均值、標準差和四分位數進行匯總，而分類變數使用頻率和百分比進行匯總。
使用雙樣本對數秩檢驗來比較各組之間症狀消退的時間終點。次要分析使用Cox比例風險回歸模型調整協變數(例如，年齡、性別、從症狀出現到隨機化的時間)。額外分析計算每個人一天的症狀分值，並計算曲線下面積(AUC)，即隨訪期間這些評分的總和。兩樣本的T檢驗用於比較研究組之間的AUC。將血清總25-羥基維生素D水準始終
Figure 110112408-A0202-12-0082-21
50ng/mL的比例用Fisher精確檢驗進行比較。二次分析使用logistic回歸來調整上述額外的協變數。
【00202】使用線性混合效應模型進行定量結果中自基線的變化的分析，所述線性混合效應模型包括固定研究組效應(ERC)、線性時間效應(研究組與時間相互作用效應)、作為協變數的基線受試者特徵(例如年齡、性別、種族)和考慮重複測量的隨機受試者效應。使用模型對比法估計各組間的變化差異。
與安慰劑組相比，治療組受試者的血清總25-羥基維生素D水準顯著升高，例如至少>50ng/mL。與安慰劑組相比，治療組受試者在初始試驗(第7天、第14天、第20天、第21天)後的病毒滴度顯著數量化降低(quantitative reduction)。與安慰劑組相比，治療組受試者的血清抗SARS-CoV-2抗體(第7天、第14天、第20天、第21天)也顯著加速和定量增加。與安慰劑組相比，治療組受試者在第7天、第14天、第20天、第21天的六種COVID-19症狀(咳嗽、呼吸困難、疲勞、頭痛、肌痛和發燒)中的一種或多種的嚴重程度也顯著降低。與安慰劑組相比，治療組患者表現出加速了外周血單核細胞中急性、亞急性和晚期炎症反應相關的甲基組和轉錄組；後者在治療組和安慰劑組受試者的匹配亞組中本體(in bulk)進行和進行單細胞RNA測序。
病程縮短了。與安慰劑組相比，治療組COVID-19的住院率顯著降低。與安慰劑相比，治療組的病毒滴度在2周、20天或3周內下降更快。與安慰劑相比，這種治療方法縮短了SARS-COV-2感染者從開始服用研究藥物到症狀緩解的時間，即疾病消退時間。症狀緩解被認為發生於所有六個症狀的得分均為1分或更少(輕度或無)的前24小時期間的開始，並持續24小時。與安慰劑相比，治療方法降低了疾病的嚴重程度，這是通過對症狀總得分的曲線下面積分析來評估的。與安慰劑相比，這種治療方法縮短了恢復正常活動的時間。與安慰劑相比，這種治療方法縮短了恢復正常健康的時間。與安慰劑相比，這種治療方法縮短了恢復正常口腔溫度的時間。
實例2
這是一項針對COVID-19患者的ERC(商品名為Rayaldee®)的雙盲隨機安慰劑對照試驗。
在第1天以900μg負荷劑量給藥30μg ERC膠囊，然後在隨後的26天(第2-27天)內每天維持60μg劑量。安慰劑在第1天以相似的900μg負 荷劑量給藥，隨後的26天(第2-27天)以相似的維持劑量每天60μg給藥。在禁食至少3小時後，在睡前口服ERC和安慰劑。
每個受試者符合以下標準進行登記並隨機分為本研究的兩個治療組之一：1)50-85歲；2)最近3天內確診感染SARS-CoV-2。參與者i)可以是男性或女性，ii)必須願意在為期4周的研究過程中限制維生素D補充劑的使用，除了正常強化食品(如牛奶)，iii)必須證明符合所有研究要求的能力，並且iv)必須沒有任何可能影響安全性評估或研究者認為會干擾研究參與的疾病狀態或身體狀況。
符合以下任何標準的受試者被排除在研究之外：i)在過去六個月內服用過糖皮質激素藥物的參與者，ii)有甲狀旁腺功能亢進症、腎結石、高鈣尿症或高鈣血症的病史，iii)有以下病史：慢性肉芽腫形成疾病(如結節病)，iv)有任何手術或醫療狀況，可能會顯著改變維生素D(膽骨化醇或麥角鈣化醇)或25-羥基維生素D(如小腸切除術)，v)持續使用噻嗪類藥物或高劑量利尿劑治療，vi)腎功能損害，篩選時eGFR<60mL/min/1.73m2，vii)顯示存在或即將脫水的證據，viii)已知或懷疑對研究藥物的任何成分有超敏反應，或ix)目前正在參與或在研究篩選前30天內參與過研究性研究。
允許聯合用藥，但以下情況除外：(1)噻嗪類或高劑量的非噻嗪類利尿劑；(2)損害脂溶性營養素吸收的藥物；(3)每天提供超過1.0克元素鈣的膳食補充劑。
ERC治療組和安慰劑組各招收83名受試者，總共約166名受試者。
該研究遵循以下程式順序。
篩選訪視/第1天---完成簡短的臨床檢查(包括身高、體重和體重指數)。人口統計資訊、健康史、藥物使用、任何不良事件以及使用4分NRS(0，不存在；3，嚴重)和口腔溫度來記錄COVID-19症狀(發燒、咳嗽、呼吸急促、呼吸困難、寒戰、肌痛、頭痛、喉嚨痛和味覺或嗅覺喪失)的類型和嚴重程度。獲得血樣以確定相關的血清參數。對符合受試者選擇標準的患者進行隨機分組。每位登記的受試者在睡前空腹狀態服用900μg ERC(30 x 30μg膠囊)或同等數量的安慰劑膠囊。每位登記的受試者額外收到兩瓶(30 x 30μg膠囊)ERC或安慰劑帶回家，並按照指示在接下來的26天內在睡前服用兩瓶(60μg)膠囊。
第7天訪視-採集血樣以確定血清總25-羥基維生素D、肌酐、鈣和磷濃度。
第14天訪視-記錄治療中出現的不良事件(TEAE)和聯合用藥的使用。
第28天訪視-記錄治療中出現的不良事件(TEAE)和聯合用藥的使用。獲得血樣以確定相關的血清參數。
在給藥期間的每一天，在睡前，受試者：(i)使用11分NRS在日記卡上記錄他們進行日常活動的能力(無法進行正常活動，0；完全能夠進行正常活動，10)；(ii)使用11分NRS(0，最差健康和10，可能的最佳健康)完成他們對整體健康狀況的看法的記錄。
主要結果測量指標是通過每天兩次使用4分NRS(0，不存在；3，嚴重)記錄COVID-19症狀(發燒、咳嗽、呼吸急促、呼吸困難、發冷、肌痛、頭痛、喉嚨痛和味覺或嗅覺喪失)所證明的COVID-19疾病的嚴重程度和持續時間和記錄口腔溫度。次要結果測量是達到和維持血清總25-羥基維生素D水準等於或高於50ng/mL。
主要療效終點是疾病持續時間，定義為從研究藥物開始到症狀緩解的時間。症狀緩解被認為發生在所有記錄的COVID-19症狀(發燒、咳嗽、呼吸急促、呼吸困難、發冷、肌痛、頭痛、喉嚨痛和味覺或嗅覺喪失)得分為1分或更少(輕度或無)的前24小時開始，並在整個週期內保持如此。受試者每天兩次使用4分NRS(0，不存在；3，嚴重)記錄每種COVID-19症狀的嚴重程度，並使用數位溫度計記錄他們的口腔溫度。
次要結果指標是(1)死亡率；(2)住院治療的發生率和持續時間；(3)機械通風要求；(4)至少發生一次嚴重不良事件(SAE)的受試者數量；(5)先天性和適應性免疫反應的血清生物標誌物；(6)COVID-19 lness的嚴重程度和持續時間，其由生活品質指標證明，包括恢復正常健康和活動狀態的時間；(7)第0天和第14天之間的臨床演變，基於COVID-19症狀評分的變化，取決於第7天達到的血清總25-羥基維生素D濃度(25D<30ng/mL或
Figure 110112408-A0202-12-0086-22
30ng/mL)；(8)第0天和第28天之間的臨床演變，基於COVID-19症狀評分的變化，取決於第7天達到的血清總25-羥基維生素D濃度(25D<50ng/mL或
Figure 110112408-A0202-12-0086-23
50ng/mL)；(9)在第0天嚴重維生素D缺乏症(血清總25-羥基維生素D<20ng/mL)患者中，根據COVID-19症狀評分的變化，第0天和第14天之 間的臨床演變，取決於血清總量在第7天達到的25-羥基維生素D濃度(25D<30ng/mL或
Figure 110112408-A0202-12-0087-24
30ng/mL或25D<50ng/mL且
Figure 110112408-A0202-12-0087-25
50ng/mL)；(10)在第0天嚴重維生素D缺乏症(血清總25-羥基維生素D<20ng/mL)患者中，根據COVID-19症狀評分的變化，第0天和第28天之間的臨床演變，取決於血清總25-羥基維生素D在第7天達到的濃度(25D<50ng/mL或
Figure 110112408-A0202-12-0087-26
50ng/mL)。
探索性目標包括：(1)外周血單核細胞(PBMC)中急性、亞急性和晚期炎症反應相關的甲基組和轉錄組；(2)血清總1,25-二羥基維生素D；(3)血清白細胞介素1-ß(IL-1ß)；(4)血清caspase-3。
安全性評價包括：(1)血清鈣(校正血清白蛋白)；見下文)(2)血清磷；和(3)估算腎小球濾過率(eGFR)。
任何表現出血鈣>10.3mg/dL的受試者(例如基於第1天或第7天獲得的血樣)將從研究中移除，並將隨機化狀態披露給負責的研究者。如果在第7天血清總25-羥基維生素D超過100ng/mL，則暫停給藥。
分別於第1天、第7天和第28天採集血樣和血清抗SARS-CoV-2抗體滴度。血樣檢測：(1)血清總25-羥基維生素D(主要療效指標)，(2)血清總1,25-二羥維生素D，(3)血清LL37，(4)血清白細胞介素-1β(IL-1β)、caspase-3和白細胞介素-6(IL-6)作為SARS-CoV-2感染適應性免疫反應的標誌物。
與安慰劑組相比，治療組受試者的血清總25-羥基維生素D水準顯著升高，例如至少>50ng/mL。與安慰劑組相比，治療組受試者在初始試驗(第7、14或28天)時的病毒滴度顯著數量化降低。與安慰劑組相比，治療組 受試者的血清抗SARS-CoV-2抗體(在第7天、第14天或第28天)也顯著加速和定量增加。與安慰劑組相比，治療組受試者在(第7天、第14天或第28天)記錄的一個或多個COVID-19症狀的嚴重程度也顯著降低。與安慰劑組相比，治療組受試者在(第7天、第14天或第28天)記錄的一個或多個COVID-19症狀中的得分為1分或更少的持續時間也顯著縮短。與安慰劑組受試者相比，治療組受試者外周血單核細胞中急性、亞急性和晚期炎症反應相關的甲基組和轉錄組出現加速。
病程縮短了。與安慰劑組相比，治療組COVID-19的住院率顯著降低。與安慰劑組相比，治療組COVID-19導致的死亡率顯著降低。與安慰劑組相比，治療組對機械通氣的需求顯著減少。與安慰劑相比，治療組的嚴重不良事件顯著減少。與安慰劑相比，治療組的病毒滴度下降更快(在第7天、第14天或第28天)。與安慰劑相比，這種治療方法縮短了SARS-COV-2感染者從開始服用研究藥物到症狀緩解的時間，即疾病消退時間。症狀緩解被認為發生於所有六個症狀的得分均為1分或更少(輕度或無)的前24小時期間的開始，並持續24小時。與安慰劑相比，治療方法降低了疾病的嚴重程度，這是通過對症狀總得分的曲線下面積分析來評估的。與安慰劑相比，這種治療方法縮短了恢復正常健康的時間。與安慰劑相比，這種治療方法縮短了恢復正常口腔溫度的時間。與安慰劑相比，這種治療方法縮短了恢復正常活動的時間。
實例3
這是一項針對COVID-19患者的ERC(商品名為Rayaldee®)的雙盲隨機安慰劑對照試驗。
主要目的是評估ERC與安慰劑治療對輕度至中度COVID-19患者的療效：1)使用4分NRS(不存在，0；嚴重，3)通過八種COVID-19症狀(發燒、咳嗽、喉嚨痛、不適、頭痛、肌肉疼痛、胃腸道症狀和勞力性呼吸短促)證明的疾病嚴重程度；和，2)達到和維持血清總25D水準始終在50ng/mL或以上。
次要目標是評估ERC與安慰劑治療對以下方面的影響：1)使用4分NRS(不存在，0；嚴重，3)以八種COVID-19症狀(發燒、咳嗽、喉嚨痛、不適、頭痛、肌肉疼痛、胃腸道症狀和勞力性呼吸短促)證明的疾病持續時間；2)死亡率；3)住院治療的發生率和持續時間；4)急診室就診(emergency room visit)的發生率和持續時間；5)機械通風要求；6)具有至少一種嚴重不良事件(SAE)的受試者數量；7)使用11分NRS，通過生活品質指標證明COVID-19疾病的嚴重程度和持續時間，包括進行日常活動的能力(無法進行正常活動，0；完全能夠進行正常活動，10)和對整體健康狀況的看法(最差健康狀況，0；可能的最佳健康狀況，10)；8)基於COVID-19症狀評分的變化，第1天和第42天之間的臨床演變，取決於第7天、第14天、第21天和第28天達到的血清25D濃度(25D<30ng/mL或
Figure 110112408-A0202-12-0089-27
30ng/mL)；9)基於COVID-19症狀評分的變化，第1天和第42天之間的臨床演變，取決於第7天、第14天、第21天和第28天達到的血清25D濃度(25D<50ng/mL或
Figure 110112408-A0202-12-0089-28
50ng/mL)；和， 10)根據第0天嚴重維生素D缺乏症(血清25D<20ng/mL)患者COVID-19症狀評分的變化，第1天和第42天之間的臨床演變，取決於第7天、第14天、第21天和第28天達到的血清25D濃度(25D<30ng/mL或
Figure 110112408-A0202-12-0090-29
30ng/mL或25D<50ng/mL或
Figure 110112408-A0202-12-0090-30
50ng/mL)。
探索性目標包括評估ERC與安慰劑治療對以下方面的影響：1)與安慰劑組受試者相比，治療組受試者外周血單核細胞中急性、亞急性和晚期炎症反應相關的甲基組和轉錄組出現加速；2)血清骨化二醇(25D3)(盲法)；3)血清總量1,25D；4)血清LL37；5)血清完整甲狀旁腺激素(iPTH)；6)血清IL-1β；7)血清半胱天冬酶-3；8)血清IL-6；和，9)體重的變化。
大約83名受試者被隨機分配到ERC和安慰劑治療組中，總共166名受試者。每組中的大多數受試者患有3期或4期CKD，定義為估算腎小球濾過率(eGFR)為15至<60mL/min/1.73m2。
受試者參與研究最多45天，最多3天的篩選和隨機化，28天的治療和14天的隨訪(FU)，一旦被登記並隨機化。
ERC與安慰劑治療受試者的療效評估包括：
1)對疾病的嚴重程度和持續時間進行評分(見下文)；
2)達到和維持血清總25D水準
Figure 110112408-A0202-12-0090-31
50ng/mL。
3)死亡率；
4)住院治療的發生率和持續時間；
5)急診室就診(emergency room visit)的發生率和持續時間；
6)機械通風要求；
7)宿主PBMC的急性、亞急性和晚期炎症反應相關的甲基組和轉錄組的變化；
8)血清25D3的變化；
9)血清總1,25D的變化；
10)血清IL-1β的變化；
11)血清caspase-3的變化；
12)血清IL-6的變化；和，
13)體重的變化。
主要療效終點是疾病的嚴重程度，定義為從研究藥物開始(第1天)到研究結束(第42天)的總症狀評分。治療組之間在症狀總分平均值有利於ERC治療方面的統計學顯著差異(P<0.05)是成功的結果。次要療效終點是疾病的持續時間，定義為從開始研究藥物(第1天)到觀察到全部八種COVID-19症狀完全不存在時的第一天的時間。
在給藥期間的每一天，參與者：i)使用4分NRS(不存在，0；嚴重，3)每天記錄兩次(早上受試者醒來時一次，晚上受試者入睡前一次)記錄八種COVID-19症狀(發燒、咳嗽、喉嚨痛、不適、頭痛、肌肉疼痛、胃腸道症狀和勞力性呼吸短促)；ii)使用11點NRS每天在日記卡上記錄他們進行日常活動的能力(無法進行正常活動，0；完全能夠進行正常活動，10)；iii)使用11分NRS(最差健康，0和最佳健康，10)每天完成一次整體健康狀況評估。
通過以下變化評估所有受試者的安全性：1)血清總鈣(低血清白蛋白校正；見下文)；2)血清磷；和，3)eGFR。
根據在第7天、第14天和第21天採集的血樣，任何表現出血清總鈣>10.5mg/dL(校正血清白蛋白)的受試者將每日維持劑量從60μg降低至30μg，直至血清鈣正常化，此時給藥劑量增加到60μg。根據第7天、第14天和第21天的血樣，當血清總25D超過100ng/mL時，給藥劑量類似地減少到每天30μg。根據在第7天、第14天和第21天獲得的血樣，對於表現出血清總鈣>11.0mg/dL(針對血清白蛋白校正)的任何受試者暫停給藥，直到血清鈣正常化，此時給藥劑量恢復到每天30μg。
下表總結了事件時間表。
事件時間表
Figure 110112408-A0202-12-0093-143
1所有評估由受試者在家自行進行。
2每次訪視時，受試者在計畫抽血前至少坐2分鐘後，測量並記錄血壓、心率和呼吸頻率、體溫和血氧飽和度(脈搏血氧飽和度)。
3如果QT間期延長，受試者將被轉診給心臟病專家。
Figure 110112408-A0202-12-0094-144
4研究藥物(30粒膠囊)將在禁食3小時後在睡前服用。服用研究藥物後，受試者必須繼續禁食3小時。
5僅第2天和第3天。
6禁食3小時後睡前服用研究藥物(2粒膠囊)。服用研究藥物後，受試者必須繼續禁食3小時。
7從第4天開始。
8篩選期間在現場完成，此後每天兩次，一次在受試者早上醒來時完成，一次在睡前完成(第42天除外-受試者醒來時完成)。
Figure 110112408-A0202-12-0095-145
9每天睡前完成一次(第42天除外-受試者醒來時完成一次)。
10紅細胞壓積、血紅蛋白、血小板計數、紅細胞計數、白細胞計數、外周血中性粒細胞、外周血單核細胞。
11白蛋白、鹼性磷酸酶、穀丙轉氨酶(ALT)、穀草轉氨酶(AST)、血尿素氮、總鈣(校正)、二氧化碳、氯化物、肌酐、估算腎小球濾過率(eGFR)、葡萄糖、乳酸脫氫酶、鎂、磷、鉀、鈉、總膽紅素、直接膽紅素、總膽固醇、總蛋白、甘油三酯、尿酸。
12僅在尿液妊娠試驗結果呈陽性後，在篩選和後續訪視時進行
研究期間定期採集血樣，如上述時間表所述。血樣分析：i)血清總25D(主要功效測量)和25D3；ii)血清總1,25D，iii)血清LL37，iv)血清iPTH，v)臨床化學和血液學，以及i)作為對SARS-CoV-2感染適應性免疫反應標誌物的血清IL-1β、caspase-3和IL-6。採集的外周血中性粒細胞和單核單核細胞進行差異細胞計數、通過螢光啟動細胞分選(FACS)進行的免疫細胞表面標誌物表型分析以及具有解卷積分析的差異全基因組亞硫酸氫鹽DNA測序，以確定單核細胞和中性粒細胞中未甲基化、轉錄活性基因的“特徵”。比較干預前後的臨床疾病嚴重程度和生活品質指標通過每日評分進行評估。
曲線下面積(AUC)的相等性的0.05水準雙側對數秩檢驗至少有80%的能力檢測ERC治療組和安慰劑組第1天和第42天之間總症狀得分的25%差異。
基線受試者特徵，包括年齡、性別、種族、種族、身高、體重、體重指數(BMI)和表皮生長因數受體(eGFR)，由研究組(ERC和安慰劑)匯總。主要、次要和探索性結果按研究組和隨訪時間點進行總結，使用CONSORT指南提供描述性統計資料，包括受試者在現場、整體和治療組中的平均值、中位數、標準差(SD)、四分位數、四分位數區間、最小值和最大值。連續變數使用均值、標準差和四分位數進行匯總，而分類變數使用頻率和百分比進行匯總。
對於主要療效終點，計算每個人每日的COVID-19症狀總分，並計算AUC，即42天研究期間這些得分的總和。兩樣本的T檢驗用於比較研究組之間的AUC。類似的方法也用於評估與生活品質自我評估相關的次要療 效終點。使用Fisher精確檢驗比較兩個治療組之間血清總25D水準始終
Figure 110112408-A0202-12-0097-32
50ng/mL的比例。對於疾病持續時間的次要療效終點，採用雙樣本對數秩檢驗比較兩組之間完成症狀消退的平均時間終點(從第1天開始)。次要分析使用Cox比例風險回歸模型調整協變數(例如，年齡、性別、從症狀出現到隨機化的時間)。使用線性混合效應模型進行定量結果中自基線的變化的分析，所述線性混合效應模型包括固定研究組效應(ERC)、線性時間效應(研究組與時間相互作用效應)、作為協變數的基線受試者特徵(例如年齡、性別、種族、種族特點、表皮生長因數受體)和考慮重複測量的隨機受試者效應。使用模型對比法估計各組間的變化差異。
每名受試者必須符合以下標準進行登記並隨機分為本研究的兩個治療組之一：1)
Figure 110112408-A0202-12-0097-33
18歲的男性或女性；2)用RT-PCR檢測鼻咽拭子呈陽性證明的在過去7天內確認有SARS-CoV-2感染；3)根據八種症狀(發燒、咳嗽、喉嚨痛、不適、頭痛、肌肉疼痛、胃腸道症狀和勞力性呼吸短促)中的一種或多種症狀，以及沒有表明更嚴重疾病的臨床症狀，確診為輕度或中度SARS-CoV-2感染；4)在為期6周的研究過程中，願意限制維生素D療法或補充劑的使用，除了正常強化食品(如牛奶)；5)必須證明符合所有學習要求的能力；而且，6)必須沒有任何可能影響安全性評估或研究者認為會干擾研究參與的疾病狀態或身體狀況。
符合以下任一標準的受試者被排除在研究之外： 1)表明嚴重或危重COVID-19嚴重性的臨床體征；2)正在哺乳的孕婦或哺乳期婦女；3)過去六個月內使用全身性糖皮質激素藥物的情況；4)原發性甲狀旁腺功能亢進、腎結石、高鈣尿症和/或高鈣血症的近期病史(前12個月)；5)慢性肉芽腫形成疾病史(如結節病)；6)肺結核或組織胞漿菌病病史；7)慢性肝病史；8)指示慢性心血管疾病的心臟事件史(前12個月)，包括充血性心力衰竭、高血壓控制不良和心律失常；9)過去五年多發性骨髓瘤或乳腺癌、肺癌或前列腺癌病史；10)可能顯著改變維生素D或25-羥基維生素D吸收、分佈、代謝或排泄的任何外科或醫學狀況(如小腸切除術、克羅恩病或潰瘍性結腸炎病史)；11)用噻嗪類利尿劑持續治療；12)高磷血症、高尿酸血症和痛風史；13)在過去三個月中測量血清肌酐的eGFR<15mL/min/1.73m2的腎功能損傷；14)過去三個月血清鈣
Figure 110112408-A0202-12-0098-34
9.8mg/dL；15)現有或即將脫水的證據；16)已知或懷疑對研究藥物的任何成分過敏；和/或，17)目前在研究篩選前30天內參加或參與了介入性/研究性研究。
將900μg負荷劑量的ERC膠囊分成三個相等劑量，每個300μg，在三天內(第1天，第2天和第3天)給藥，然後在隨後的24天(第4-27 天)維持劑量為每天60μg。禁食至少3小時後，在睡前口服給藥。研究藥物給藥後患者應保持禁食至少3小時。
對照產品是安慰劑，外觀相似的900μg負荷劑量，分成三個相等劑量的300μg，每個劑量在三天內(第1天，第2天和第3天)給藥，然後在隨後的24天(第4-27天)外觀相似的維持劑量為每天60μg。禁食至少3小時後，在睡前口服給藥。給藥後患者應保持禁食至少3小時。
允許聯合用藥，但以下情況除外：1)骨化三醇，帕立骨化醇和多塞骨化醇；2)噻嗪類利尿劑；3)可能損害脂溶性營養素吸收的藥物；和，4)膳食補充劑每天提供超過1.0克的元素鈣。
與安慰劑組相比，治療組受試者的血清總25-羥基維生素D水準顯著升高，例如至少>50ng/mL。
與安慰劑組相比，由於治療，治療組受試者顯示出改善。使用4分NRS(缺席，0；嚴重，3)通過八種COVID-19症狀(發熱、咳嗽、喉嚨痛、不適、頭痛，肌肉疼痛，胃腸道症狀和勞力性呼吸短促)證明治療組受試者顯示出疾病嚴重程度的顯著數量化降低。使用4分NRS(缺失，0；嚴重，3)通過八個COVID-19症狀(發熱、咳嗽、喉嚨痛、不適、頭痛、肌肉疼痛、胃腸道症狀和勞力性呼吸短促)證明治療組受試者表現出明顯減少的疾病持續時間。治療組受試者顯示死亡率顯著數量化降低。治療組受試者顯示出住院治療的發生率和持續時間的顯著數量化降低。治療組受試者顯示急診室就診的發生率和持續時間顯著數量化降低。治療組受試者顯示機械通風要求顯著 數量化減少。治療組受試者顯示具有至少一種嚴重不良事件(SAE)的受試者數量顯著減少。分別使用11分NRS，治療組受試者通過生活品質指標來證明COVID-19疾病的嚴重程度和持續時間顯著數量化減少，包括進行日常活動的能力(無法進行正常活動，0；完全能夠進行正常活動，10)和對整體健康狀況的看法(最差健康狀況，0；可能的最佳健康狀況，10)；基於COVID-19症狀評分的變化，第1天和第42天之間的臨床演變中治療組受試者顯示出顯著的數量化減少，取決於第7天、第14天、第21天和第28天達到的血清25D濃度(25D<30ng/mL或
Figure 110112408-A0202-12-0100-35
30ng/mL)；基於COVID-19症狀評分的變化，第1天和第42天之間的臨床演變中治療組受試者顯示出顯著的數量化減少，取決於第7天、第14天、第21天和第28天達到的血清25D濃度(25D<50ng/mL或
Figure 110112408-A0202-12-0100-36
50ng/mL)；根據第0天嚴重維生素D缺乏症(血清25D<20ng/mL)患者COVID-19症狀評分的變化，第1天和第42天之間的臨床演變中治療組受試者顯示出顯著的數量化減少，取決於第7天、第14天、第21天和第28天達到的血清25D濃度(25D<30ng/mL或
Figure 110112408-A0202-12-0100-37
30ng/mL或25D<50ng/mL或
Figure 110112408-A0202-12-0100-38
50ng/mL)。與安慰劑組受試者相比，治療組受試者外周血單核細胞中急性、亞急性和晚期炎症反應相關的甲基組和轉錄組出現加速。
實例4
【00249】正在進行一項多中心，雙盲隨機，安慰劑對照試驗，以評估ERC(市售為Rayaldee®)治療感染SARS-CoV-2的症狀患者的安全性和有效性。主要目的是評估ERC治療與安慰劑對輕度至中度COVID-19患者的療效： 1)使用流感患者報告結果(FLU-PRO©)問卷*的COVID-19症狀證明疾病的嚴重程度和持續時間；和，2)達到和維持血清總25D水準在50ng/mL或以上。*John Powers博士，Leidos生物醫學和國家過敏研究所和傳染病(NIAID)，國立衛生研究院。
次要目標是評估ERC治療與安慰劑對以下方面的影響：1)急診室/緊急護理就診(emergency room/urgent care visit)的發生率；2)氧飽和度低於94%(無補充氧氣)的發生率；3)住院治療的發生率和持續時間；4)機械通風要求；5)死亡率；6)具有至少一種嚴重不良事件(SAE)的受試者數量；7)使用FLU-PRO©問卷調查的生活品質指標證明了COVID-19疾病的嚴重程度和持續時間；和，7)第7、14、21和28天，COVID-19的臨床進程為血清25-羥基維生素D濃度<或
Figure 110112408-A0202-12-0101-39
30ng/mL和<或
Figure 110112408-A0202-12-0101-40
50ng/mL。
探索性目標包括評估ERC療法與安慰劑在以下方面的效果：1)血清骨化二醇(25-羥基維生素D3)；2)血清24,25-二羥基維生素D3(24,25D)；3)血清總1,25-二羥基維生素D；4)血清LL37；5)血清完整甲狀旁腺激素(iPTH)；6)血清IL-1β； 7)血清半胱天冬酶-1；8)血清白細胞介素6(IL-6)；9)DNA和RNA測序的變化；和，10)體重的變化。
大約80名受試者被隨機分配到每個ERC治療組和安慰劑組，總共160名受試者。受試者隨機接受口服ERC或匹配的安慰劑，按照以下方案給藥：負荷劑量(900mcg為三個相等劑量，每個300mcg，在第1天，第2天和第3天給藥)，接下來24天每天在晚餐後禁食至少3小時後在睡前服用維持劑量(第4至27天為60mcg)。研究藥物給藥後患者禁食至少3小時。允許聯合用藥，但以下情況除外：骨化三醇，帕立骨化醇，多塞骨化醇，噻嗪類利尿劑，可能損害脂溶性營養素吸收的藥物，以及每天提供超過0.55克元素鈣的膳食補充劑。
受試者參與研究最多45天，最多3天的篩選和隨機化，28天的治療和14天的隨訪(FU)，一旦被登記並隨機化。
主要功效終點是：
(1)症狀的消退，定義為研究藥物開始(第1天)的FLU-PRO©症狀總分平均值降低至或低於0.5，連續至少三天。消退時間定義為從第1天到連續至少三天達到0.5分的第一天的天數。治療組之間在症狀消退時間有利於ERC治療方面的統計學顯著差異(P<0.025一側)被認為是成功的結果。
(2)在第21天和第28天評估血清總25D水準達到或高於50ng/mL，其中成功定義為這兩天的水準都是
Figure 110112408-A0202-12-0102-41
50ng/mL。
在研究期間的每一天，指示受試者使用FLU-PRO©問卷每天記錄一次(在受試者入睡前的晚上)COVID-19症狀的嚴重程度。本調查問卷包括使用FLU-PRO©進行日常活動的能力和整體健康狀況意見等生活品質指標。
Rayaldee®緩釋膠囊的安全性和耐受性正在通過不良事件(AE)，體格檢查(PE)，生命體征(VS)，心電圖(ECG)，血液學和臨床化學評估。特別注意以下參數的變化：
(1)血清總鈣(校正血清白蛋白)；
(2)血清磷；和，
(3)估算腎小球濾過率(eGFR)。
下表總結了研究的事件時間表。
事件時間表
a通過電話進行訪視。
b受試者在家進行的所有評估。
c簡單的身體檢查。
Figure 110112408-A0202-12-0104-146
d每次訪視時，受試者在計畫抽血前至少靜坐2分鐘後，測量並記錄血壓、心率和呼吸頻率、體溫和血氧飽和度(脈搏血氧飽和度)。篩選時的身高，體重和BMI；體重和BMI在訪視5。
e如果QT間期延長，受試者將被轉診給心臟病專家。
f確認隨機化後，研究藥物被運送到患者家中。收到日期為第1天(第一劑)。
Figure 110112408-A0202-12-0105-147
g研究藥物(10粒膠囊)將在禁食3小時後在睡前服用。服用研究藥物後，受試者必須繼續禁食3小時。
h僅第2天和第3天。研究藥物(每天10粒膠囊)將在禁食3小時後在睡前服用。服用研究藥物後，受試者必須繼續禁食3小時。
i維持劑量從第4天到第27天開始(2粒膠囊，除非另有說明，在禁食3小時後的睡前給藥。服用研究藥物後，受試者必須繼續禁食3小時)。
j在現場進行篩選訪視時完成，然後在睡前每天進行一次(第42天除外-受試者 醒來時一次)。
Figure 110112408-A0202-12-0106-16
k紅細胞壓積、血紅蛋白、血小板計數、紅細胞計數、白細胞計數、外周血中性粒細胞、外周血單核細胞。
l白蛋白、鹼性磷酸酶、穀丙轉氨酶(ALT)、穀草轉氨酶(AST)、血尿素氮、總鈣(校正)、二氧化碳、氯化物、肌酐、估算腎小球濾過率(eGFR)(計算 的)、葡萄糖、乳酸脫氫酶、鎂、磷、鉀、鈉、總膽紅素、直接膽紅素、總膽固醇、總蛋白、甘油三酯、尿酸。
m僅在尿液妊娠試驗結果呈陽性後，在篩選和後續訪視時進行。
n血清總1,25D、骨化二醇、24,25D3、LL37、IL-1β、caspase-1和IL-6；血漿iPTH和血清總25D；PBMCs(用於去氧核糖核酸和核糖核酸測序的變化)。
圖2顯示了治療組中根據方案以禁食狀態給藥的受試者的預測血清25-羥基維生素D3水準，圖3顯示了給藥於進食的受試者的預測，圖4顯示了對其中間組合的預測，其基於本發明人已知的對Rayaldee®給藥的血清反應建模。在這些圖中的每一個中，曲線從上到下依次對應於體重為73kg，85kg，119kg和128kg的患者。
從第21天開始，根據第7天和第14天獲得的血樣，任何表現出確認的血清總鈣>10.5且
Figure 110112408-A0202-12-0107-122
11.0mg/dL(校正血清白蛋白)的受試者將每日的維持劑量減少一粒膠囊(從60mcg減少到30mcg)。如果從第21天開始，血清總25D被確認超過100ng/mL，則基於第7天和第14天獲得的血液樣本，劑量類似地減少。
根據第7天、第14天和第21天獲得的血液樣本，顯示確認血清總鈣>11.0mg/dL(校正血清白蛋白)的受試者暫停給藥，直到血清鈣正常化，此時(如果適用)恢復每天一粒膠囊(每天30mcg)的給藥。受試者被要求在下一次預約訪視的最早可能的一天(例如，第12天為第14天就診)返回臨床進行確認性抽血。
出現嚴重的(CTCAE
Figure 110112408-A0202-12-0108-123
3)血清磷、尿酸或血漿iPTH異常(低或高)的受試者退出研究藥物治療。
基線受試者特徵，包括年齡、性別、種族、種族、身高、體重、體重指數(BMI)和表皮生長因數受體(eGFR)，將由研究組(ERC和安慰劑)匯總。主要、次要和探索性結果將按研究組和隨訪時間點進行總結，使用CONSORT指南呈現描述性統計資料，包括受試者在研究地點、總體和治療組的平均值、中位數、標準差(SD)、四分位數、四分位數間範圍、最小值和最大值。連續變數將使用均值、標準差和四分位數進行匯總，而分類變數使用頻率和百分比進行匯總。
將對兩個主要終點進行分級測試，以保持0.025的整體單側α水準。因此，只有症狀消退顯著在<0.025時，才會進行血清25D水準達到
Figure 110112408-A0202-12-0108-124
50ng/mL的檢測。
主要療效終點是症狀消退，定義為研究藥物開始給藥(第1天)時FLU-PRO症狀總分平均值降至或低於0.5，持續至少三天。消退時間定義為從第1天到連續至少三天達到0.5分的第一天的天數。消退時間將顯示為卡普蘭-邁耶曲線，並使用對數秩檢驗進行比較。因疾病死亡、住院或其他原因而無法報告症狀評分的受試者將被視為未解決，且不會被審查。
血清25D水準達到或維持在
Figure 110112408-A0202-12-0108-125
50ng/mL將在第21天和第28天用卡方統計進行評估，其中成功定義為這兩天的水準
Figure 110112408-A0202-12-0108-126
50ng/mL。
Cox比例風險模型也將用於評估協變數。
每個受試者使用FLU-PRO©問卷記錄疾病嚴重程度和生活品質指標的每日評估。此外，每天要求受試者回答(是/否)他們是否恢復了日常活動和日常健康狀況；評級他們的身體健康(5分制評分)；感染症狀的嚴重程度(5分制評分)；感染症狀干擾日常活動的程度(5分制評分)；以及他們的感染症狀與前一天(7分制評分)相比如何。為了進一步評估與COVID-19相關的症狀，每天詢問受試者在過去一天是否經歷過嗅覺喪失(嗅覺喪失)和味覺喪失(味覺缺失)。
每個受試者符合以下標準進行登記並隨機分為本研究的兩個治療組之一：1)
Figure 110112408-A0202-12-0109-127
18歲的男性或女性；2)RT-PCR檢測鼻咽拭子呈陽性證明的在過去3天內確認有SARS-CoV-2感染；3)根據每個胸部/呼吸道和身體/全身區域的FLU-PRO評分至少為1.5，確認只有輕度或中度COVID-19，並且沒有指示更嚴重疾病的臨床體征(例如，室內空氣中的氧飽和度<94%或呼吸速率>30BPM)；4)自我評估表明，目前的COVID-19症狀與平時的健康狀況不一致，其與前一天相同或更糟；5)在為期6周的研究過程中，願意限制維生素D療法或補充劑的使用，除了正常強化食品(如牛奶)；6)必須證明符合所有學習要求的能力；而且， 7)必須沒有任何可能影響安全性評估或研究者認為會干擾研究參與的疾病狀態或身體狀況。
符合以下任一標準的受試者被排除在研究之外：1)表明嚴重或危重COVID-19疾病的臨床體征(例如，室內空氣中氧飽和度<94%或呼吸速率>30BPM)；2)正在哺乳的孕婦或哺乳期婦女；3)過去六個月內使用全身性糖皮質激素藥物的情況；4)原發性甲狀旁腺功能亢進、腎結石、高鈣尿症和/或高鈣血症的近期病史(前12個月)；5)慢性肉芽腫形成疾病史(如結節病)；6)肺結核或組織胞漿菌病病史；7)慢性肝病史；8)表明慢性心血管疾病的心臟事件史(前12個月)，包括充血性心力衰竭、高血壓控制不良和心律失常；9)過去五年多發性骨髓瘤或乳腺癌、肺癌或前列腺癌病史；10)可能顯著改變維生素D或25-羥基維生素D吸收、分佈、代謝或排泄的任何外科或醫學狀況(如小腸切除術、克羅恩病或潰瘍性結腸炎病史)；11)用噻嗪類利尿劑持續治療；12)高磷血症、高尿酸血症和痛風史；13)在過去三個月中測量血清肌酐的eGFR<15mL/min/1.73m2的腎功能損傷； 14)過去三個月血清鈣
Figure 110112408-A0202-12-0111-128
9.8mg/dL；15)現有或即將脫水的證據；16)已知或懷疑對研究藥物的任何成分過敏；和/或，17)目前在研究篩選前30天內參加或參與了介入性/研究性研究。
參與調查的受試者使用流感專業問卷【Powers et al,BMC Infect Dis 2016；16：1 and Value in Health,Vol.21,Issue 2,2018,p.210-218】在每天臨睡前自我評估他們的COVID-19症狀。症狀評分平均值是按每個症狀、按區域計算的，並且作為總評分。參見Powers et al,Value in Health,Vol.21,Issue 2,2018,p.210-218。每日日記還包括上述附加問題(味覺和嗅覺喪失，以及生活品質問題)。
指示受試者在第1,2和3天的晚餐後禁食至少3小時後的睡前每天服用10粒膠囊(300mcg)研究藥物的負荷劑量，用任何非酒精液體通過口服途徑給藥。在第4-27天，除非另有說明，否則指示受試者在睡前每天服用2粒維持劑量。還指示患者在施用研究藥物後應保持禁食至少3小時。
在為期6周的研究過程中，受試者願意限制維生素D療法或補充劑的使用，除了正常強化食品(如牛奶)；CKD的標準治療藥物(維生素D，骨化三醇，帕立骨化醇和多塞骨化醇)在治療期間暫停使用。登記時排除的療法包括噻嗪類利尿劑，1α-羥基化維生素D類似物(骨化三醇，帕立骨化醇和多塞鈣化醇)和維生素D補充劑(膽骨化醇和麥角鈣化醇)。
此時，對前70名受試者的FLU-PRO©問卷評估的兩項生活品質測量資料進行了盲法分析，即受試者自我報告恢復日常活動的研究日期，以及 受試者自我報告恢復正常健康的研究日期。圖5顯示了這些恢復日常活動的受試者的頻率分佈。這種頻率分佈表明，受試者通常分為兩組，大小大致相等：一組較早恢復正常活動(峰值頻率僅在4-6天后發生)，另一組稍後恢復正常活動(峰值頻率發生在18-19天)。後一組中恢復常規活動的速度較慢，這與布雷爾及其同事針對未接受ERC治療的COVID-19患者發表的類似資料一致。Blair et al.Open Forum Infect Dis.2021 Jan 5；8(2)：ofab007.。圖6顯示了恢復正常健康的受試者的頻率分佈。該頻率分佈表明受試者通常也分為兩組：一組較早恢復正常健康，另一組稍後恢復正常健康。前組更快速地恢復日常活動和健康狀況表明，ERC正在有效緩解COVID-19症狀並促進更快速的康復。
與安慰劑組相比，預期ERC治療組受試者將顯示血清總25-羥基維生素D水準顯著升高，例如至少>50ng/mL。
與安慰劑組相比，預期治療組受試者將顯示由ERC治療引起的一種或多種改善，如下所述。治療組受試者將顯示疾病嚴重程度的顯著數量化降低，如使用FLU-PRO©問卷的COVID-19症狀所證明的。治療組受試者將顯示疾病持續時間的顯著數量化減少，如使用FLU-PRO©問卷的COVID-19症狀所證明的。
治療組受試者將顯示急診室/緊急護理就診的發生率和持續時間的顯著數量化降低。治療組受試者將顯示氧飽和度發生率顯著數量化降低至94%以下(無補充氧氣)。治療組受試者將顯示住院治療發生率的顯著數量化降低。治療組受試者將顯示住院治療持續時間的顯著數量化減少。治療組受試者顯示機械通風要求顯著數量化減少。治療組受試者顯示死亡率顯著數量 化降低。治療組受試者將顯示COVID-19疾病嚴重程度的顯著量化降低，這可通過使用FLU-PRO©問卷中的生活品質指標來證明。治療組受試者將顯示COVID-19疾病持續時間的顯著量化降低，這可通過使用FLU-PRO©問卷中的生活品質測量來證明。
治療組受試者將顯示COVID-19疾病嚴重程度和持續時間的顯著數量化降低，如通過使用FLU-PRO©問卷中的一個或多個區域(鼻，喉，眼，胸/呼吸道，胃腸道和身體/全身)中的平均症狀評分降低來證明。治療組受試者將顯示COVID-19疾病嚴重程度和持續時間的顯著數量化降低，這可通過使用FLU-PRO©問卷中鼻區的平均症狀評分降低來證明。治療組受試者將顯示COVID-19疾病嚴重程度和持續時間的顯著數量化降低，這可通過使用FLU-PRO©問卷中喉區的平均症狀評分降低來證明。治療組受試者將顯示COVID-19疾病嚴重程度和持續時間的顯著數量化降低，這可通過使用FLU-PRO©問卷中眼部區域的平均症狀評分降低來證明。治療組受試者將顯示COVID-19疾病嚴重程度和持續時間的顯著數量化降低，這可通過使用FLU-PRO©問卷中胸/呼吸道區域的平均症狀評分降低來證明。治療組受試者將顯示COVID-19疾病嚴重程度和持續時間的顯著數量化降低，這可通過使用FLU-PRO©問卷中胃腸區域的平均症狀評分降低來證明。治療組受試者將顯示COVID-19疾病嚴重程度和持續時間的顯著數量化降低，這可通過使用FLU-PRO©問卷中身體/全身區域的平均症狀評分降低來證明。
治療組受試者在第7、14、21和28天將顯示COVID-19的臨床進程中顯著的量減少，這是血清25-羥基維生素D濃度<或
Figure 110112408-A0202-12-0114-129
30ng/mL和<或
Figure 110112408-A0202-12-0114-130
50ng/mL的函數。
與安慰劑組受試者相比，治療組受試者外周血單核細胞中急性，亞急性和晚期炎症反應相關的甲基組和轉錄組將出現加速。
實例5
下表中提供了具有不同百分比的石蠟和礦物油(重量百分比)的25-羥基維生素D的HPMC硬膠囊製劑，以及相關的體外溶出釋放速率。
Figure 110112408-A0202-12-0114-17
與20重量%石蠟製劑相比，將石蠟降低至20%以下(至10%和0%)並相應增加礦物油，與含有20%石蠟的對比軟膠囊製劑相比，不能提供顯著更快的釋放曲線。另一方面，將石蠟提高到20%以上至30%和40%，同時礦 物油相應降低，但體外釋放速率卻顯示相當大的降低，尤其是在2小時時間點之後。
實例6
下表提供了另外的蠟基硬膠囊製劑、具有植物基膠囊殼的RayaldeTM型軟膠囊製劑(參考)和以提供與參考製劑相比相對更慢和更快的釋放為目標而改進的改性蠟基植物基軟膠囊製劑的實例。軟膠囊是以是基於OptiShell®植物基膠囊，例如含有改性澱粉和iota-角叉菜膠。通過調節賦形劑的濃度，配製快速軟膠囊(試驗1)以得到與參照相比更快的釋放速率。軟膠囊快速配料加入了增加量的月桂醯聚氧甘油酯和減少量的石蠟。不希望受任何特定理論的約束，與參比製劑相比，對基質性質的這種改進，使其具有更低的固體含量和更高的吸收促進劑濃度，旨在增強活性物質的溶解度，從而提高釋放速率和體內吸收量，儘管它在體外沒有表現出更快的釋放速率。該表還包括對16名成年受試者中的每一名施用900g劑量產生的藥代動力學特徵(摘自平均基線校正血清濃度曲線，圖7)。
Figure 110112408-A0202-12-0116-18
圖7顯示口服900μg改性釋放的骨化二醇膠囊後25-羥基維生素D3的相關的平均血清濃度曲線。與參考相比，石蠟從20%增加到39%確實減緩了體外和體內釋放，而石蠟從20%減少到5%在測試的溶出條件下沒有表現出快速的體外釋放速率。這一結果表明，石蠟含量低於20%時，侵蝕機制可能不是這些配方的主要釋放機制。快速批次和參考批次中的骨化二醇被溶解到相同 的程度，並且添加更多的乳化劑不會增加溶解度。在試驗條件下，將吸收促進劑的百分比從9.75%增加到14.75%在體外幾乎沒有影響，而它增加了體內吸收，據信是通過其他機制，例如組織滲透。硬膠囊和軟膠囊中的慢批次(The slow batch)在體外表現如預期。慢批次的軟膠囊在體內也表現出預期的效果。該批中的基質是相對剛性的，活性物質從剛性基質中的侵蝕可能是該配方中的主要機理。
根據USP儀器II(帶沉降片的槳)，該表提供了上述製劑的溶出時間曲線。
Figure 110112408-A0202-12-0117-19
Figure 110112408-A0202-12-0118-21
實例7
下表描述了另一種25-羥基維生素D的硬膠囊配方，具有凝膠化的HPMC膠囊殼。結冷膠是一種親水性聚合物，與參考軟膠囊製劑的植物膠囊 殼中使用的角叉菜膠具有相似的性質。凝膠化HPMC膠囊在胃中的破裂/崩解時間比非凝膠化HPMC膠囊慢。
Figure 110112408-A0202-12-0119-23
使用蠟含量為27.95%的石蠟，而不是上述參考軟膠囊製劑中的20%，礦物油和單甘油酯和二甘油酯的濃度略有變化。基質填充減少到每膠囊155mg而不是170mg，組合物填充在4號大小凝膠化HPMC膠囊殼中。
凝膠化HPMC硬膠囊製劑、參考軟膠囊製劑和上述試驗4製劑在75轉/分鐘下的體內溶出曲線(USP儀器二(帶沉降片的槳)，培養基為0.5% SDS溶於5毫米磷酸二氫鈉一水合物，pH6.8，37±0.5℃，體積為500毫升)如下表所示。
Figure 110112408-A0202-12-0120-24
類似地，使用改進的體外溶出度方法測量膠囊溶出度(容器中有2個膠囊，900毫升培養基，60轉/分)，結果如下表所示(5個參考批次的平均值)。
Figure 110112408-A0202-12-0120-25
還使用了兩階段溶出法(在pH 1.2下2小時，然後轉移至pH 6.8)，結果如下和圖8所示(3個參考批次的平均值，菱形標記，與凝膠化HPMC製劑，三角形標記)。凝膠化硬膠囊製劑的溶出曲線與植物基軟膠囊製劑的溶出曲線非常匹配。
Figure 110112408-A0202-12-0121-27
凝膠化HPMC硬膠囊製劑和參考軟膠囊製劑在空腹狀態下給藥於受試者。如上所述，與施用非凝膠化HPMC硬膠囊產生的值和曲線相比，施用凝膠化HPMC硬膠囊產生的藥代動力學值和曲線(Cmax、AUC、Tmax)與施用參比製劑產生的值和曲線更接近匹配。
實例8
在患有繼發性甲狀旁腺功能亢進症(SHPT)、3或4期慢性腎病(CKD)和維生素D不足的成年患者中，進行了一項重複給藥ERC(Rayaldee®型製劑)、胰島素抵抗骨化二醇、高劑量膽骨化醇和帕立骨化醇加低劑量膽骨化醇的研究。
這是一項開放性研究，旨在收集對比資料，評估ERC、IR骨化二醇、高劑量膽骨化醇和帕立骨化醇加低劑量膽骨化醇。合格的受試者以1：1：1：1的比例隨機接受8周的治療，使用一種所列的研究藥物，以及足夠量的非酒精飲料，以便吞咽膠囊：
1)ERC膠囊60g，每日睡前一次，除了在第1天和第29天，在第1期單元中，給藥發生在早餐前的早晨；
2)在1期單元中，第1天和第29天的早餐前，IR骨化二醇266μg；
3)在1期單元中第1天和第29天早晨早餐前300,000IU(高劑量)膽骨化醇；以及
4)帕立骨化醇1克(可能在第29天增加到每天2克)加膽骨化醇800IU(低劑量)，每天早餐前一次，除了第1天和第29天的早晨，當在1期單元在早餐前給藥時。治療4周後，每天早晨早餐前一次接受帕立骨化醇的受試者將劑量加倍至2μg加800IU膽骨化醇，條件是(a)血漿iPTH與預處理BL相比沒有降低至少30%，並且保持在70pg/mL以上，(b)校正的血清鈣<9.8mg/dL，並且(c)血清磷<5.5mg/dL。
在研究開始時和在研究第29天，受試者在1期單位中居住約14至26小時以提供所需的血液樣品。
在研究前接受鈣三醇或其它1α-羥基化維生素D類似物或維生素D補充治療的受試者在基線(BL)評估前完成4周清除期，並在研究期間保持不使用這些非研究藥物。如果受試者在篩選前12周內接受過擬鈣劑治療，則被排除在登記範圍之外。
在篩選期和BL期以及8周治療期內，每週從所有受試者收集血樣。在研究期間，受試者通過飲食諮詢每天維持約1000-1500mg的鈣元素飲食攝入，如有必要，每天補充規定的鈣。
當血漿iPTH被證實<30pg/mL，校正血鈣被證實>10.3mg/dL，或血清磷被證實>5.5mg/dL時，受試者根據以下計畫減少研究藥物的劑量。如果證實血漿iPTH<15pg/mL或校正血鈣>11.0mg/dL，受試者暫停給藥，並在當血漿iPTH
Figure 110112408-A0202-12-0123-131
30pg/mL，校正血鈣<9.8mg/dL時，按照以下劑量方案恢復給藥。
ERC：降至每天30μg(從每天60μg)
IR骨化二醇：保持第29天劑量
膽骨化醇300000IU：保持第29天劑量
帕立骨化醇：降至每天1μg(從每天2μg)
膽骨化醇800IU將不被調整
如果接受最小劑量ERC(30g/天)或帕立骨化醇(1g/天)治療的受試者需要減少劑量，則受試者將暫停給藥，並在相同最小劑量下iPTH
Figure 110112408-A0202-12-0123-132
30pg/mL且校正血清鈣<9.8mg/dL時恢復給藥。
劑量恢復(如果需要)：
ERC：每天30μg
帕立骨化醇：每天1μg
作為隨時間的函數的血清總25-羥基維生素D濃度平均值如圖9所示(菱形表示ERC組，三角形表示IR骨化二醇組，圓形表示膽骨化醇組，正方形表示帕立骨化醇+膽骨化醇組)。ERC組的血清濃度大於50ng/ml，接近90ng/ml，而該組的VMR保持在5以下(治療結束時的最大平均值約為4.2)。VMR隨時間的函數如圖10所示。
給出上述描述僅僅是為了清楚地理解，並且不應當從中理解不必要的限制，因為對於本領域的普通技術人員來說，在本發明的範圍內的修改是顯而易見的。
術語“一個”和“該”以及在描述本公開的上下文中(尤其是在以下請求項的上下文中)的使用應被解釋為同時包括單數和複數，除非本文中另有說明或與上下文明顯矛盾。除非另有說明，否則術語“包括”、“具有”、“含有”和“包含”應解釋為開放式術語(即，意味著“包括但不限於”)。因此，在本說明書和隨後的請求項書中，除非上下文另有要求，單詞“包括”和變體將被理解為意味著包括所述整數或步驟或整數或步驟組，而不是排除任何其他整數或步驟或整數或步驟組。
除非本文中另有說明，否則本文中對值的範圍的列舉僅旨在作為單獨引用落在範圍內的每個單獨值和每個端點的簡寫方法，並且每個單獨值和端點併入說明書中，如同其在本文中單獨列舉一樣。
在整個說明書中，在將組合物描述為包括元件或材料的情況下，預期除非另有描述，否則所述組合物還可以基本上由所述元件或材料的任何組合組成或由所述元件或材料的任何組合組成。同樣地，在方法被描述為包括特定步驟的情況下，除非另外描述，否則可以設想，所述方法還可以基本上包括或包括所述步驟的任何組合。本文例示性地公開的本發明可以在沒有本文未具體公開的任何元件或步驟的情況下適當地實施。
本文公開的方法的實施及其各個步驟可以手動和/或借助於電子設備或由電子設備提供的自動化來執行。儘管已經參考特定實施例描述了過程，但是本領域的一般技術人員將容易理解，可以使用執行與這些方法相關聯的動作的其他方式。例如，除非另有描述，否則可以在不脫離方法的範圍或精神的 情況下改變各種步驟的順序。此外，一些單獨的步驟可以被組合、省略或進一步細分為附加步驟。
本文引用的所有專利、出版物和參考文獻在此全部引入作為參考。在本公開與併入的專利、出版物和參考文獻之間存在衝突的情況下，以本公開為准。
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Claims (163)

  1. 一種治療SARS-Cov-2感染的方法，其中，包括給有需要的受試者施用有效量的25-羥基維生素D化合物的緩釋製劑，以達到至少50ng/mL的血清總25-羥基維生素D水準，並治療SARS-CoV-2感染。
  2. 一種降低有需要且感染SARS-CoV-2的受試者的病毒載量的方法，其中，包括向該受試者投與有效量的25-羥基維生素D化合物的緩釋製劑以達到至少50ng/mL的總血清總25-羥基維生素D水準並降低該受試者的SARS-CoV-2病毒載量。
  3. 一種治療被證實患有SARS-CoV-2感染的受試者中的輕度到中度SARS-CoV-2感染的方法，其中，包括向受試者施用25-羥基維生素D化合物以達到至少50ng/mL的血清總25-羥基維生素D水準。
  4. 如請求項3所述之方法，其中，每個胸部/呼吸道和身體/全身區域的FLU-PRO©評分至少為1.5，並且沒有指示更嚴重疾病的臨床體征。
  5. 如請求項4所述之方法，其中，指示更嚴重疾病的臨床體征選自室內空氣中氧飽和度<94%和呼吸速率>30bpm中的一種或兩種。
  6. 一種增強感染SARS-Cov-2的受試者的免疫應答之方法，其中，包括向受試者施用25-羥基維生素D化合物的緩釋製劑以達到至少50ng/mL的血清總25-羥基維生素D水準。
  7. 如請求項6所述之方法，其中，免疫反應是一種適應性免疫反應。
  8. 如請求項6所述之方法，其中，免疫反應是一種體液免疫反應。
  9. 如請求項7所述之方法，其中，體液免疫反應包括與SARS-CoV-2蛋白結合的中和抗體的產生。
  10. 如前述請求項中任一項所述之方法，其中，該量有效地增加受試者的免疫細胞介導的抗微生物肽(AMP)的合成。
  11. 如請求項10所述之方法，其中，抗微生物肽是LL37。
  12. 如請求項11所述之方法，其中，免疫細胞是單核細胞、巨噬細胞和樹突細胞組中的一種或多種細胞類型。
  13. 如前述請求項中任一項所述之方法，其中，該量可有效使受試者的血清總25-羥基維生素D水準達到50ng/mL至100ng/mL。
  14. 如前述請求項中任一項所述之方法，其中，該量可有效使受試者的血清總25-羥基維生素D水準達到至少60ng/mL，或大於60ng/mL。
  15. 如前述請求項中任一項所述之方法，其中，血清總25-羥基維生素D水準維持在至少50ng/mL、或至少60ng/mL、或大於60ng/mL的升高水準達至少7天。
  16. 如前述請求項中任一項所述之方法，其中，血清總25-羥基維生素D水準維持在至少50ng/mL、或至少60ng/mL、或大於60ng/mL的升高水準，達至少14天、或至少21天、或至少28天、或至少35天、或至少42天。
  17. 如前述請求項中任一項所述之方法，其中，包括向受試者施用負荷劑量的緩釋25-羥基維生素D製劑，隨後施用一種或多種維持劑量的25-羥基維生素D化合物。
  18. 如請求項17所述之方法，其中，所述負荷劑量大於約500μg。
  19. 如請求項17至18中任一項所述之方法，其中，所述負荷劑量小於約1000μg。
  20. 如請求項17至19中任一項所述之方法，其中，所述負荷劑量為至少或約900μg的25-羥基維生素D化合物。
  21. 如請求項17至20中任一項所述之方法，其中，所述負荷劑量分為兩天或兩天以上。
  22. 如請求項17至20中任一項所述之方法，其中，所述負荷劑量分為三天。
  23. 如請求項17至22中任一項所述之方法，其中，治療前三天的負荷劑量為每天300μg。
  24. 如請求項17所述之方法，其中，所述負荷劑量為至少22μg生物可利用量的25羥基維生素D，任選地，在22μg到250μg生物可利用量的25羥基維生素D範圍內。
  25. 如請求項17至24中任一項所述之方法，其中，一種或多種維持劑量大於約50μg的25-羥基維生素D化合物。
  26. 如請求項25所述之方法，其中，一種或多種維持劑量小於或約100μg的25-羥基維生素D化合物。
  27. 如請求項17至26中任一項所述之方法，其中，一種或多種維持劑量為約60μg的25-羥基維生素D化合物。
  28. 如請求項17至27中任一項所述之方法，其中，包括向受試者施用900μg的25-羥基維生素D化合物的負荷劑量，隨後每日維持劑量為至少1周，或至少13天，或至少14天，或19天，或至少20天， 或至少26天，或在1天到20天的範圍內，或在1天到19天的範圍內，或者在1天到30天的範圍內。
  29. 如請求項28所述之方法，其中，每日維持劑量為60μg的25-羥基維生素D化合物。
  30. 如請求項17至24中任一項所述之方法，其中，所述維持劑量為至少6μg生物可利用量的25-羥基維生素D，任選地，在約6μg到25μg生物可利用量的25-羥基維生素D的範圍內。
  31. 如前述請求項的任一項所述之方法，其中，在空腹狀態下服用25-羥基維生素D。
  32. 如請求項31所述之方法，其中，患者的維生素D代謝物比例VMR，在可選的第一負荷劑量期內是在4到12的範圍內，並且在維持劑量給藥期內是在3到11的範圍內，維生素D代謝物比例是通過計算血清24,25-二羥基維生素D3與血清25-羥基維生素D3之比的100倍來得出的。
  33. 如請求項31至32中任一項所述之方法，其中，在維持劑量給藥期間，患者的VMR小於5，或小於4.8。
  34. 如前述請求項的任一項所述之方法，其中，患者的維生素D代謝物比例VMR在至少28天的時間內保持基本恒定或降低，可選地在維持劑量給藥期間。
  35. 如前述請求項的任一項所述之方法，其中，患者通過緩釋施用25-羥基維生素D，並且患者在28天期間的維生素D代謝物比例VMR 的變化率小於通過速釋施用的生物等效量的25-羥基維生素D所發生的維生素D代謝物比例VMR的變化率。
  36. 如請求項17至34中任一項所述之方法，其中，包括施用每日維持劑量至少13天、或至少2周、或至少19天、或至少20天、或至少21天、或至少24天。
  37. 如前述請求項的任一項所述之方法，其中，25-羥基維生素D化合物以改性釋放劑型，任選地，緩釋劑型，和進一步任選地，延遲釋放劑型來施用。
  38. 如前述請求項的任一項所述之方法，其中，口服25-羥基維生素D化合物。
  39. 如請求項1至17或請求項36中任一項所述之方法，其中，25-羥基維生素D化合物局部施用。
  40. 如請求項39所述之方法，其中，25-羥基維生素D化合物通過透皮貼片施用。
  41. 如請求項1至2或請求項36中任一項所述之方法，其中，靜脈注射25-羥基維生素D化合物。
  42. 如前述請求項中任一項所述之方法，其中，25-羥基維生素D化合物包含25-羥基維生素D2或25-羥基維生素D3，或25-羥基維生素D2和25-羥基維生素D3的組合。
  43. 如前述請求項中任一項所述之方法，其中，25-羥基維生素D化合物是25-羥基維生素D3。
  44. 如前述請求項中任一項所述之方法，其中，受試者表現出以下一種或多種症狀：發燒、疲勞、咳嗽和/或呼吸困難。
  45. 如前述請求項中任一項所述之方法，其中，受試者表現出肺炎或肺炎樣症狀。
  46. 如前述請求項中任一項所述之方法，其中，受試者患有冠狀病毒疾病2019，即COVID-19。
  47. 如前述請求項中任一項所述之方法，其中，與安慰劑相比，給予25-羥基維生素D可加速外周血單核細胞中急性，亞急性和晚期炎症反應相關的甲基組和轉錄組。
  48. 如前述請求項中任一項所述之方法，其中，與安慰劑相比，受試者的外周血單核細胞PBMC計數增加。
  49. 如前述請求項中任一項所述之方法，其中，與安慰劑相比，受試者的外周血中性粒細胞計數增加。
  50. 如前述請求項中任一項所述之方法，其中，與安慰劑相比，受試者的SARS-CoV-2滴度水準或病毒載量降低。
  51. 如請求項50所述之方法，其中，與安慰劑相比，受試者在治療第7天的SARS-CoV-2滴度水準或病毒載量降低。
  52. 如請求項50至51中任一項所述之方法，其中，與安慰劑相比，受試者在治療第14天、治療第20天、治療第28天、治療第35天或治療第42天的SARS-CoV-2滴度水準或病毒載量降低。
  53. 如前述請求項中任一項所述之方法，其中，與安慰劑相比，如在治療的第7天、治療的第14天、治療的第21天或治療的第27天， 受試者的COVID-19疾病持續時間縮短，其通過一個或多個與COVID-19相關的症狀的嚴重程度來衡量，相關症狀例如一個或多個FLU-PRO©症狀評分，或發熱、咳嗽、呼吸急促、勞力性呼吸短促、呼吸困難、發冷、腹瀉、呼吸困難、胃腸道症狀、不適、肌肉疼痛、肌痛、頭痛、喉嚨痛、虛弱/疲勞、味覺喪失和嗅覺喪失。
  54. 如前述請求項中任一項所述之方法，其中，與安慰劑相比，受試者的COVID-19疾病持續時間縮短，其通過一種或多種平均FLU-PRO©症狀區域評分的嚴重程度來衡量，所述症狀區域選自鼻子、喉嚨、眼腈、胸部/呼吸道、胃腸道和身體/全身，任選地，選自胸部/呼吸道和身體/全身中的一種或兩種。
  55. 如請求項53所述之方法，其中，與安慰劑相比，受試者的COVID-19疾病持續時間縮短，其通過FLU-PRO©總分平均值來衡量。
  56. 如前述請求項中任一項所述之方法，其中，受試者的COVID-19疾病持續時間縮短，其通過(a)從症狀出現到恢復正常健康的時間和/或(b)從症狀出現到恢復日常活動的時間來衡量。
  57. 如前述請求項中任一項所述之方法，其中，受試者的COVID-19疾病持續時間縮短，期通過症狀消退的時間來衡量，症狀消退定義為至少連續三天內，FLU-PRO©症狀總分平均值降至或低於0.5。
  58. 如前述請求項中任一項所述之方法，其中，與安慰劑相比，受試者的抗SARS-CoV-2抗體水準升高。
  59. 如請求項58所述之方法，其中，與安慰劑相比，受試者在治療第7天的抗SARS-CoV-2抗體水準升高。
  60. 如請求項59所述之方法，其中，與安慰劑相比，受試者在治療第14天、治療第20天或治療第28天的抗SARS-CoV-2抗體水準升高。
  61. 如前述請求項中任一項所述之方法，其中，與安慰劑相比，受試者的血清LL37水準升高。
  62. 如前述請求項中任一項所述之方法，其中，與安慰劑相比，受試者的嗜酸性粒細胞趨化因數水準降低。
  63. 如前述請求項中任一項所述之方法，其中，與安慰劑相比，受試者的單核細胞趨化蛋白水準降低。
  64. 如前述請求項中任一項所述之方法，其中，與安慰劑相比，受試者的IL-12水準降低。
  65. 如前述請求項中任一項所述之方法，其中，與安慰劑相比，受試者的IL-6水準降低。
  66. 如前述請求項中任一項所述之方法，其中，受試者的IL-6水準維持在100pg/mL以下，或80pg/mL以下，或30pg/mL以下。
  67. 如前述請求項中任一項所述之方法，其中，受試者的IL-8水準維持在62pg/mL或31pg/mL以下。
  68. 如前述請求項中任一項所述之方法，其中，受試者的TNFα水準維持在11pg/mL或8.1pg/mL以下。
  69. 如前述請求項中任一項所述之方法，其中，病人患有慢性腎病。
  70. 如請求項69所述之方法，其中，患者患有3期或4期慢性腎病。
  71. 如請求項69所述之方法，其中，患者患有5期慢性腎病。
  72. 如請求項69或71中任一項所述之方法，其中，患者正在接受透析治療。
  73. 如請求項72所述之方法，其中，患者正在接受血液透析治療。
  74. 如前述請求項中任一項所述之方法，其中，患者的基線血清總25-羥基維生素D水準在約20ng/mL到約25ng/mL的範圍內。
  75. 一種25-羥基維生素D3的緩釋製劑在製備任選地如前述請求項中的任一項治療SARS-CoV-2感染的藥物中的用途。
  76. 如請求項75所述之用途，其中，劑量包括在空腹狀態下施用的多個30μg軟膠囊，其中所述劑量將血清總25-羥基維生素D水準提高至至少50ng/mL。
  77. 一種治療SARS-CoV-2感染的方法，其中，包括向有需要的受試者施用有效量的25-羥基維生素D化合物的速釋製劑以達到至少50ng/mL，或至少60ng/mL的血清總25-羥基維生素D水準，並治療SARS-CoV-2感染。
  78. 一種降低有需要且感染SARS-CoV-2的受試者的病毒載量的方法，其中，包括向受試者施用有效量的25-羥基維生素D化合物的速釋製劑，以達到至少50ng/mL，或至少60ng/mL的血清總25-羥基維生素D水準，並降低受試者的SARS-CoV-2病毒載量。
  79. 一種增強感染SARS-CoV-2的受試者免疫應答或輕度至中度COVID-19的受試者的免疫應答的方法，其中，向受試者施用25-羥基維生素D化合物的速釋製劑以達到至少50ng/mL，或至少60ng/mL的血清總25-羥基維生素D水準。
  80. 如請求項79所述之方法，其中，免疫反應是一種適應性免疫反應。
  81. 如請求項79所述之方法，其中，免疫反應是一種體液免疫反應。
  82. 如請求項81所述之方法，其中，體液免疫反應包括與SARS-CoV-2蛋白結合的中和抗體的產生。
  83. 如請求項77至82中任一項所述之方法，其中，該量有效地增加受試者的免疫細胞介導的抗微生物肽AMP的合成。
  84. 如請求項83所述之方法，其中，抗微生物肽是LL37。
  85. 如請求項84所述之方法，其中，免疫細胞是單核細胞、巨噬細胞和樹突細胞組中的一種或多種細胞類型。
  86. 如請求項77至85中任一項所述之方法，其中，該量可有效使受試者的血清總25-羥基維生素D水準達到50ng/mL至100ng/mL。
  87. 如請求項77至86中任一項所述之方法，其中，該量可有效使受試者的血清總25-羥基維生素D水準達到至少60ng/mL，或大於60ng/mL。
  88. 如前述請求項中任一項所述之方法，其中，血清總25-羥基維生素D水準維持在至少50ng/mL、或至少60ng/mL、或大於60ng/mL的升高水準達至少7天。
  89. 如前述請求項中任一項所述之方法，其中，血清總25-羥基維生素D水準維持在至少50ng/mL、或至少60ng/mL、或大於60ng/mL的升高水準，達至少14天、或至少21天、或至少28天、或至少35天、或至少42天。
  90. 如請求項77至89中任一項所述之方法，其中，包括向受試者施用負荷劑量的緩釋25-羥基維生素D製劑，隨後施用一種或多種維持劑量的25-羥基維生素D化合物。
  91. 如請求項90所述之方法，其中，所述負荷劑量大於約160μg。
  92. 如請求項90至91中任一項所述之方法，其中，所述負荷劑量小於約350μg。
  93. 如請求項90至92中任一項所述之方法，其中，所述負荷劑量為至少或約300μg的25-羥基維生素D化合物。
  94. 如請求項90至93中任一項所述之方法，其中，所述負荷劑量重複兩天或兩天以上。
  95. 如請求項90至94中任一項所述之方法，其中，所述負荷劑量重複三天。
  96. 如請求項90至95中任一項所述之方法，其中，治療前三天的負荷劑量為每天300μg。
  97. 如請求項90所述之方法，其中，所述負荷劑量為至少22μg生物可利用量的25羥基維生素D，任選地，在22μg到250μg生物可利用量的25羥基維生素D範圍內。
  98. 如請求項90至97中任一項所述之方法，其中，一種或多種維持劑量大於約30μg的25-羥基維生素D化合物。
  99. 如請求項90至98中任一項所述之方法，其中，一種或多種維持劑量小於或約100μg的25-羥基維生素D化合物。
  100. 如請求項90至99中任一項所述之方法，其中，一種或多種維持劑量為約60μg的25-羥基維生素D化合物。
  101. 如請求項90至100中任一項所述之方法，其中，包括向受試者施用300μg的25-羥基維生素D化合物的負荷劑量三天，隨後每日維持劑量為至少1周，或至少13天，或至少14天，或19天，或至少20天，或至少26天，或在1天到20天的範圍內，或在1天到19天的範圍內，或者在1天到30天的範圍內。
  102. 如請求項101所述之方法，其中，每日維持劑量為60μg的25-羥基維生素D化合物。
  103. 如請求項90至102中任一項所述之方法，其中，所述維持劑量為至少6μg生物可利用量的25-羥基維生素D，任選地，在約6μg到25μg生物可利用量的25-羥基維生素D的範圍內。
  104. 如請求項77至103中任一項所述之方法，其中，在空腹狀態下服用25-羥基維生素D。
  105. 如請求項77至104中任一項所述之方法，其中，患者的維生素D代謝物比例VMR，在可選的第一負荷劑量期內是在4到12的範圍內，並且在維持劑量給藥期內是在3到11的範圍內，維生素D代謝物比例是通過計算血清24，25-二羥基維生素D3與血清25-羥基維生素D3之比的100倍來得出的。
  106. 如請求項105所述之方法，其中，在維持劑量給藥期間，患者的VMR小於5，或小於4.8。
  107. 如請求項77至106中任一項所述之方法，其中，患者的維生素D代謝物比例VMR在至少28天的時間內保持基本恒定或降低，可選地在維持劑量給藥期間。
  108. 如請求項77至107中任一項所述之方法，其中，患者通過緩釋施用25-羥基維生素D，並且患者在28天期間的維生素D代謝物比例VMR的變化率小於通過速釋施用的生物等效量的25-羥基維生素D所發生的維生素D代謝物比例VMR的變化率。
  109. 如請求項77至108中任一項所述之方法，其中，包括施用每日維持劑量至少13天、或至少2周、或至少19天、或至少20天、或至少21天、或至少24天。
  110. 如請求項77至109中任一項所述之方法，其中，25-羥基維生素D化合物以改性釋放劑型，任選地，緩釋劑型，和進一步任選地，延遲釋放劑型來施用。
  111. 如請求項77至110中任一項所述之方法，其中，口服用25-羥基維生素D化合物。
  112. 如請求項77至90或請求項110中任一項所述之方法，其中，25-羥基維生素D化合物局部施用。
  113. 如請求項112所述之方法，其中，25-羥基維生素D化合物通過透皮貼片施用。
  114. 如請求項77至90或請求項110中任一項所述之方法，其中，靜脈注射25-羥基維生素D化合物。
  115. 如請求項77至114中任一項所述之方法，其中，25-羥基維生素D化合物包含25-羥基維生素D2或25-羥基維生素D3，或25-羥基維生素D2和25-羥基維生素D3的組合。
  116. 如請求項77至115中任一項所述之方法，其中，25-羥基維生素D化合物是25-羥基維生素D3。
  117. 如請求項77至116中任一項所述之方法，其中，受試者表現出以下一種或多種症狀：發燒、疲勞、咳嗽和/或呼吸困難。
  118. 如請求項77至117中任一項所述之方法，其中，受試者表現出肺炎或肺炎樣症狀。
  119. 如請求項77至118中任一項所述之方法，其，受試者患有冠狀病毒疾病2019，即COVID-19。
  120. 如請求項77至119中任一項所述之方法，其中，與安慰劑相比，給予25-羥基維生素D可加速外周血單核細胞中急性，亞急性和晚期炎症反應相關的甲基組和轉錄組。
  121. 如請求項77至120中任一項所述之方法，其中，與安慰劑相比，受試者的外周血單核細胞PBMC計數增加。
  122. 如請求項77至121中任一項所述之方法，其中，與安慰劑相比，受試者的外周血中性粒細胞計數增加。
  123. 如請求項77至122中任一項所述之方法，其中，與安慰劑相比，受試者的SARS-CoV-2滴度水準或病毒載量降低。
  124. 如請求項123所述之方法，其中，與安慰劑相比，受試者在治療第7天的SARS-CoV-2滴度水準或病毒載量降低。
  125. 如請求項123至124中任一項所述之方法，其中，與安慰劑相比，受試者在治療第14天、第20天或第28天的SARS-CoV-2滴度水準或病毒載量降低。
  126. 如請求項77至125中任一項所述之方法，其中，與安慰劑相比，受試者的COVID-19疾病持續時間縮短，通過每天兩次採用4分制評分(0分，無；3，嚴重)持續14天、或20天、或21天、或27天、或28天、或35天、或42天，記錄一個或多個與COVID-19相關的症狀(例如，一個或多個FLU-PRO©症狀評分、發熱、咳嗽、氣短、用力氣短、呼吸困難、發冷、胃腸道症狀、不適、肌肉痛、肌痛、頭痛、，喉嚨痛、味覺喪失和嗅覺喪失)來證明。
  127. 如請求項126所述之方法，其中，與安慰劑相比，受試者的COVID-19疾病持續時間縮短，其通過一種或多種平均FLU-PRO©症狀區域評分的嚴重程度來衡量，所述症狀區域選自鼻子、喉嚨、眼睛、胸部/呼吸道、胃腸道和身體/全身的，任選地，選自胸部/呼吸道和身體/全身中的一種或兩種。
  128. 如請求項126所述之方法，其中，與安慰劑相比，受試者的COVID-19疾病持續時間縮短，其通過FLU-PRO©總分平均值來衡量。
  129. 如請求項77至128中任一項所述之方法，其中，受試者的COVID-19疾病持續時間縮短，其通過(a)從症狀出現到恢復正常健康的時間和/或(b)從症狀出現到恢復日常活動的時間來衡量。
  130. 如請求項77至129中任一項所述之方法，其中，受試者的COVID-19疾病持續時間縮短，期通過症狀消退的時間來衡量，症狀消退定義為至少連續三天內，FLU-PRO©症狀總分平均值降至或低於0.5。
  131. 如請求項77至130中任一項所述之方法，其中，與安慰劑相比，受試者的抗SARS-CoV-2抗體水準升高。
  132. 如請求項131所述之方法，其中，與安慰劑相比，受試者在治療第7天的抗SARS-CoV-2抗體水準升高。
  133. 如請求項132所述之方法，其中，與安慰劑相比，受試者在治療第14天、治療第20天或治療第28天的抗SARS-CoV-2抗體水準升高。
  134. 如請求項77至133中任一項所述之方法，其中，與安慰劑相比，受試者的血清LL37水準升高。
  135. 如請求項77至134中任一項所述之方法，其中，與安慰劑相比，受試者的嗜酸性粒細胞趨化因數水準降低。
  136. 如請求項77至135中任一項所述之方法，其中，與安慰劑相比，受試者的單核細胞趨化蛋白水準降低。
  137. 如請求項77至136中任一項所述之方法，其中，與安慰劑相比，受試者的IL-12水準降低。
  138. 如請求項77至137中任一項所述之方法，其中，其中，與安慰劑相比，受試者的IL-6水準降低。
  139. 如請求項77至138中任一項所述之方法，其中，受試者的IL-6水準維持在100pg/mL以下，或80pg/mL以下，或30pg/mL以下。
  140. 如請求項77至139中任一項所述之方法，其中，受試者的IL-8水準維持在62pg/mL或31pg/mL以下。
  141. 如請求項77至140中任一項所述之方法，其中，受試者的TNFα水準維持在11pg/mL或8.1pg/mL以下。
  142. 如請求項77至141中任一項所述之方法，其中，與安慰劑相比，受試者的臨床疾病嚴重程度評分降低。
  143. 如請求項121、122、和131至134中任一項所述之方法，其中，所述增加是第42天與第1天水準相比、第28天與第0天預處理水準相比、或第28天與第1天水準相比、或第28天與第14天水準相比、或第28天與第7天水準相比、或第21天與第0天預處理水準相比、或第21天與第1天治療水準相比、或第21天與第7天治療水準相比、或第21天與第14天治療水準相比、或第20天治療水準與第0天預處理水準相比、或第20天治療水準與第1天治療水準相比、或第20天治療水準與第7天治療水準相比、或第14天治療水準與第0天預處理水準相比、或治療第14天治療水準與第1天治療水準比較、第14天治療水準與第7天治療水準相比。
  144. 如請求項121、122、和131至134中任一項所述之方法，其中，所述增加是在第28天的治療與第1天的水準相比。
  145. 如請求項121、122、和131至134中任一項所述之方法，其中，所述增加是在第28天的治療與第7天的水準相比。
  146. 如請求項123至130和135至138中任一項所述之方法，其中，所述降低是第42天與第1天水準相比、第28天與第0天預處理水準相比、或第28天與第1天水準相比、或第28天與第14天水準相比、或第28天與第7天水準相比、或第21天與第0天預處理水準相比、或第21天與第0天預處理水準相比、或第21天與第1天治療水準相比、或第21天與第7天治療水準相比、或第21天與第14天治療水準相比、或第20天治療水準與第0天預處理水準相比、或第20天治療水準與第1天治療水準相比、或第20天治療水準與第7天治療水準相比、或第14天治療水準與第0天預處理水準相比、或治療第14天治療水準與第1天治療水準比較、第14天治療水準與第7天治療水準相比。
  147. 如請求項123至130和135至138中任一項所述之方法，其中，所述增加是在第28天的治療與第1天的水準相比。
  148. 如請求項123至130和135至138中任一項所述之方法，其中，所述增加是在第28天的治療與第7天的水準相比。
  149. 如請求項77至148中任一項所述之方法，其中，患者患有慢性腎病。
  150. 如請求項149所述之方法，其中，患者患有3期或4期慢性腎病。
  151. 如請求項149所述之方法，其中，患者患有5期慢性腎病。
  152. 如請求項149或151中任一項所述之方法，其中，患者正在接受透析治療。
  153. 如請求項152所述之方法，其中，患者正在接受血液透析治療。
  154. 如請求項77至153中任一項所述之方法，其中，患者的基線血清總25-羥基維生素D水準在約20ng/mL到約25ng/mL的範圍內。
  155. 一種25-羥基維生素D3製劑製備速釋藥物的用途，其中，其將受試者的血清總25-羥基維生素D提高至至少50ng/mL或大於50ng/mL或至少60ng/mL，或大於60ng/mL，並治療SARS-CoV-2感染。
  156. 一種預防受試者感染SARS-CoV-2的方法，其中，包括施用預防劑量的藥物組合物，其具有足以將血清總25-羥基維生素D水準提高至約50至100ng/mL的藥學有效量的25-羥基維生素D，其中所述組合物相對於具有相等強度的推注劑型具有約25至50%的25-羥基維生素D生物利用度。
  157. 一種硬膠囊劑型，其中，包括一種硬殼膠囊，其包含包括25-羥基維生素D化合物的固體或半固體組合物。
  158. 一種軟膠囊控釋劑型，其中，包含25-羥基維生素D和蠟基控釋劑，其中劑型的體外和體內釋放曲線比參考劑型RAYALDEE快，任選快1-10%。
  159. 一種治療患者中與SARS-CoV-2感染相關的病症的方法，其中，包括以口服劑型向患者施用藥學有效量的維持劑量的25-羥基維生素D3，其中患者的維生素D代謝物比例VMR在整個維持給藥期間保持基本恒定或降低，維生素D代謝物比例是通過計算血清24，25-二羥基維生素D3與血清25-羥基維生素D3之比的100倍來得出的。
  160. 一種治療患有或懷疑患有SARS-CoV-2感染的患者的給藥方案，其中，包括向患者施用包含控釋賦形劑和藥學有效量的25-羥基維生素D3的緩釋劑型，並且其中劑型在維持劑量給藥期間以每天30至70μg的量施用並且，任選地，在治療的第一天，第二天或第三天以每天300至900μg範圍的量進行負荷劑量給藥，其中患者的維生素D代謝物比例VMR在維持給藥期間保持基本恒定或降低，維生素D代謝物比例是通過計算血清24，25-二羥基維生素D3與血清25-羥基維生素D3之比的100倍來得出的。
  161. 如請求項160所述之給藥方案，其中，在可選的第一次負荷劑量期間，患者的VMR在4至12的範圍內，並且在維持給藥期間在3-11的範圍內。
  162. 如請求項160至161中任一項所述之給藥方案，其中，患者在28天內的VMR變化率小於通過速釋施用生物等效量的25-羥基維生素D時發生的VMR變化率。
  163. 如請求項160至162中任一項所述之給藥方案，其中，劑量以空腹狀態施用於受試者。
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