TW202143955A - 含有乙二胺四乙酸或其鹽的艾日布林或其可藥用鹽脂質體 - Google Patents

含有乙二胺四乙酸或其鹽的艾日布林或其可藥用鹽脂質體 Download PDF

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Abstract

本發明提供了含有乙二胺四乙酸或其鹽及艾日布林或其可藥用鹽的脂質體。具體而言，本發明提供了內水相含有乙二胺四乙酸或其鹽及艾日布林或其可藥用鹽的脂質體。另一方面，本發明還提供內水相含有磷酸或其鹽及艾日布林或其可藥用鹽的脂質體及其製備方法。該類脂質體具有良好包覆率穩定性，貯存條件溫和。進一步地，本發明還提供了含有前述脂質體的藥物組合物及其製備方法。

Description

含有乙二胺四乙酸或其鹽的艾日布林或其可藥用鹽脂質體
本發明要求申請日為2020年5月29日的中國專利申請CN202010475697.3的優先權。本發明引用上述中國專利申請的全文。
本發明屬於製藥領域，關於一種含有乙二胺四乙酸或其鹽的艾日布林或其可藥用鹽的脂質體。
艾日布林/艾立布林(Eribulin)是一種合成的軟海綿素(halichondrin B)類似物，一種具有新穎作用機制的微管蛋白聚合抑制劑，於2010年首次獲美國FDA批准用於轉移性乳腺癌的治療。
但是臨床上經靜脈給藥後，游離藥物直接處在偏鹼性的生理環境下，易發生降解，從而失去活性，間接的降低了藥物的療效。而且，製劑的毒副作用較大，主要表現為嗜中性白血球減少和遲發性腹瀉。
脂質體作為藥物載體具有提高藥物療效、減輕藥物不良反應的及提供靶向作用的特點。但是，想要真正的實現脂質體的治療優勢是不容易的，必須滿足以下要求：1）藥物能夠以有效的包覆效率和足夠的載藥量包覆在脂質體內；2）在體外貯存期內，藥物不會從脂質體中釋放出來；3）脂質體藥物在血液迴圈的過程中，藥物不會發生顯著的滲漏；4）當脂質體聚集在腫瘤區以後，藥物能夠有效地釋放，從而發揮藥物的治療作用。
WO2010113984公開了一種脂質體內水相中含有艾日布林、銨鹽和檸檬酸的脂質體組合物，解決艾日布林或其鹽在脂質體組合物中穩定性及包覆率的問題。同時，實施例表明，相比其他銨鹽體系如乙酸銨、磷酸銨或琥珀酸銨，含有檸檬酸銨或硫酸銨的脂質體包覆率較好。然而長期放置，該脂質體會發生活性成分的滲漏，包覆率降低，不利於樣品的長期儲存。
另外CN105163720公開了一種製備封裝略微水溶性試劑的脂質體的方法，包括通過將略微水溶性試劑完全溶於非質子溶劑或多元醇來製備所述略微水溶性試劑的溶液，在通過具有橫跨脂質體膜的質子或離子梯度進行遠端裝載活性成分，所述活性成分包括卡非佐米、艾日布林等。但是實施例沒有實際製備艾日布林脂質體，而且艾日布林水溶性佳，採用前述方法並不能獲得包覆率高且穩定性艾日布林脂質體。
本發明提供了一種脂質體，其中脂質體內水相中含有活性化合物艾日布林或其可藥用鹽，和選自乙二胺四乙酸、磷酸、噴替酸或其鹽中的一種或多種。
在一些實施方案中，乙二胺四乙酸鹽是乙二胺四乙酸與胺、金屬離子或銨離子形成的鹽。乙二胺四乙酸鹽示例包括但不限於乙二胺四乙酸銨、乙二胺四乙酸鈉、乙二胺四乙酸鈣。
另一方面，本發明磷酸鹽是磷酸與有機鹼或無機鹼形成的，示例包括但不限於磷酸鈉鹽、磷酸鉀鹽、磷酸銨。
另一方面，本發明噴替酸鹽是噴替酸與有機鹼或無機鹼形成的，示例包括但不限於噴替酸鈉鹽、噴替酸鉀鹽、噴替酸銨。
在一些實施方案中，所述脂質體內水相中還含有銨鹽，所述胺鹽優選硫酸銨、乙基硫酸銨、乙二胺四乙酸銨鹽、氯化銨、氫氧化銨、乙酸銨、磷酸銨、蔗糖八硫酸酯三乙胺、葡聚糖硫酸銨或三乙基葡聚糖硫酸銨，更優選硫酸銨、氯化銨或乙二胺四乙酸銨。
在一些實施方案中，所述脂質體內水相中含有磷酸銨。
在一些實施方案中，所述脂質體內水相中含有活性化合物艾日布林或其可藥用鹽、乙二胺四乙酸或其鹽和銨鹽。
在一些實施方案中，所述脂質體內水相中含有活性化合物艾日布林或其可藥用鹽、磷酸或其鹽和銨鹽。
在一些實施方案中，所述脂質體內水相中含有活性化合物艾日布林或其可藥用鹽、噴替酸或其鹽和銨鹽。
在一些實施方案中，所述脂質體內水相中還含有至少一種pH調節劑，pH調節劑可以選自精胺酸、組胺酸、甘胺酸等胺基酸，乙二胺四乙酸、噴替酸、鹽酸、磷酸或硫酸等酸；前述酸的鈉鹽、鉀鹽、銨鹽等鹽；氨水、氫氧化鈉、氫氧化鉀等鹼性化合物（鹼）等。優選氫氧化鈉、鹽酸、氨水、磷酸、乙二胺四乙酸。另外，pH調節劑可以組合前述兩種以上的銨鹽使用。
在一些實施方案中，所述脂質體內水相中乙二胺四乙酸、磷酸、噴替酸或其鹽的濃度選自1~300mM，可以為1mM、2mM、3mM、4mM、5mM、6mM、7mM、8mM、9mM、10mM、15mM、20mM、25mM、30mM、35mM、40mM、45mM、50mM、55mM、60mM、65mM、70mM、75mM、80mM、85mM、90mM、95mM、100mM、105mM、110mM、115mM、120mM、125mM、130mM、135mM、140mM、145mM、150mM、155mM、160mM、165mM、170mM、175mM、180mM、185mM、190mM、195mM、200mM、205mM、210mM、215mM、220mM、225mM、230mM、235mM、240mM、245mM、250mM、255mM、260mM、265mM、270mM、275mM、280mM、285mM、290mM、295mM、300mM或任意兩數值間任意值，優選20~200mM。
在另一些實施方案中，所述脂質體內水相中銨鹽如硫酸銨的濃度選自10~400mM，可以為10mM、15mM、20mM、25mM、30mM、35mM、40mM、45mM、50mM、55mM、60mM、65mM、70mM、75mM、80mM、85mM、90mM、95mM、100mM、105mM、110mM、115mM、120mM、125mM、130mM、135mM、140mM、145mM、150mM、155mM、160mM、165mM、170mM、175mM、180mM、185mM、190mM、195mM、200mM、205mM、210mM、215mM、220mM、225mM、230mM、235mM、240mM、245mM、250mM、255mM、260mM、265mM、270mM、275mM、280mM、285mM、290mM、295mM、300mM或任意兩數值間任意值，優選20~200mM。
本發明的活性化合物為艾日布林或其可藥用鹽。所謂可藥用鹽，可以為無機酸鹽、有機酸鹽中的任一種，只要與艾日布林形成鹽即可，沒有特別限定，例如可以舉出鹽酸鹽、硫酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硝酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、過磷酸鹽、異煙酸鹽、乙酸鹽、乳酸鹽、水楊酸鹽、酒石酸鹽、甲磺酸鹽、抗壞血酸鹽、琥珀酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、葡萄糖酸鹽、糖精酸鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽，優選鹽酸鹽、硫酸鹽、乙酸鹽、磷酸鹽、甲磺酸鹽等，更優選甲磺酸鹽。在一些實施方案中，所述活性化合物為甲磺酸艾日布林。
另外，作為艾日布林的藥理學上允許的鹽，可以為艾日布林與鋁、鈣、鋰、鎂、鈣、鈉、鋅、二乙醇胺形成的鹽。
在一些實施方案中，所述活性化合物的濃度選自0.01~100mg/mL，可以0.01mg/mL、0.05mg/mL、0.10mg/mL、0.15mg/mL、0.20mg/mL、0.25mg/mL、0.30mg/mL、0.35mg/mL、0.40mg/mL、0.45mg/mL、0.50mg/mL、0.55mg/mL、0.60mg/mL、0.65mg/mL、0.70mg/mL、0.75mg/mL、0.80mg/mL、0.85mg/mL、0.90mg/mL、0.95mg/mL、1mg/mL、2mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL、6mg/mL、7mg/mL、8mg/mL、9mg/mL、10mg/mL、15mg/mL、20mg/mL、25mg/mL、30mg/mL、35mg/mL、40mg/mL、45mg/mL、50mg/mL、55mg/mL、60mg/mL、65mg/mL、70mg/mL、75mg/mL、80mg/mL、85mg/mL、90mg/mL、95mg/mL、100mg/mL或任意兩數值間任意值，優選0.05~5mg/mL。
另一方面，本發明所述脂質體內水相中實質上不含有檸檬酸。所謂實質上不含有檸檬酸，是指不添加檸檬酸。需要說明的是，只要確定如脂質體包覆率穩定性不是由於添加的檸檬酸而引起的即可。
在一些實施方案中，所述脂質體內水相中含有活性化合物艾日布林或其可藥用鹽、選自乙二胺四乙酸、磷酸、噴替酸或其鹽中的一種或多種以及銨鹽。
在一些實施方案中，所述脂質體內水相中含有活性化合物艾日布林或其可藥用鹽、選自乙二胺四乙酸、磷酸、噴替酸或其鹽中的一種或多種以及硫酸銨。
在一些實施方案中，所述脂質體內水相中含有活性化合物艾日布林或其可藥用鹽、乙二胺四乙酸和乙二胺四乙酸銨。
在一些實施方案中，所述脂質體內水相中含有活性化合物艾日布林或其可藥用鹽、磷酸和磷酸銨。
另一方面，本發明所述脂質體還含有磷脂，所述磷脂選自但不限於二棕櫚醯磷脂醯膽鹼(DPPC)、二硬脂醯磷脂醯膽鹼(DSPC)、二肉豆蔻醯磷脂醯膽鹼(DMPC)、1-棕櫚醯-2-亞油醯-sn-甘油-3-磷脂醯膽鹼(PLPC)、磷酸膽鹼(DOPC)、蛋黃磷脂醯膽鹼(EPC)、二月桂醯磷脂醯膽鹼(DLPC)、氫化卵磷脂(HEPC)、l-肉豆蔻醯-2-棕櫚醯磷脂醯膽鹼(MPPC)、l-棕櫚醯-2-肉豆蔻醯磷脂醯膽鹼(PMPC)、l-棕櫚醯-2-硬脂醯磷脂醯膽鹼(PSPC)、l-硬脂醯-2-棕櫚醯磷脂醯膽鹼(SPPC)、棕櫚醯油醯磷脂醯膽鹼(POPC)、溶血磷脂醯膽鹼、二亞油醯磷脂醯膽鹼、二硬脂醯磷脂醯乙醇胺(DSPE)、二肉豆蔻醯磷脂醯乙醇胺(DMPE)、二棕櫚醯磷脂醯乙醇胺(DPPE)、二油醯基磷脂醯甘油(DOPG)、二肉豆蔻醯磷脂醯甘油(DMPG)、二硬脂醯基磷脂醯甘油(DSPG)、二棕櫚醯基甘油磷酸甘油 (DPPG)、二棕櫚醯基磷脂醯絲胺酸(DPPS)、1,2-二油醯基-sn-甘油-3-磷脂醯絲胺酸(DOPS)、二肉豆蔻醯基磷脂醯絲胺酸(DMPS)、二硬脂醯基磷脂醯絲胺酸(DSPS)、二棕櫚醯基磷脂酸(DPPA)、1,2-二油醯基-sn-甘油-3-磷脂酸(DOPA)、二肉豆蔻醯基磷脂酸(DMPA)、二硬脂醯基磷脂酸(DSPA)、二棕櫚醯基磷脂醯肌醇(DPPI)、1,2-二油醯基-sn-甘油-3-磷脂醯肌醇(DOPI)、二肉豆蔻醯基磷脂醯肌醇(DMPI)、二硬脂醯基磷脂醯肌醇(DSPI)中的至少一種。
在一些實施方案中，所述磷脂選自氫化卵磷脂、二硬脂醯磷脂醯膽鹼、二棕櫚醯磷脂醯膽鹼、二硬脂醯磷脂醯膽鹼、磷酸膽鹼和二肉豆蔻醯磷脂醯膽鹼中的一種或多種；所述氫化卵磷脂優選氫化大豆磷脂醯膽鹼。
在一些實施方案中，所述脂質體中磷脂含量（相對全部脂質體膜成分，莫耳分率）選自10~80%，包括但不限於10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%或任意兩數值間任意值，優選30~70%。
另一方面，在一些實施方案中，所述脂質體還含有類固醇，包括但不限於膽固醇(CHOL)。
一些實施方案中，所述脂質體中類固醇含量（相對全部脂質體膜成分，莫耳分率）選自1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%或任意兩數值間任意值，優選10~40%。
在一些實施方案中，所述脂質體含有磷脂和類固醇如膽固醇。
在一些實施方案中，本發明所述脂質體含有10~80%的磷脂和1~60%類固醇如膽固醇。
在一些實施方案中，所述脂質體含有磷脂、膽固醇及二硬酯醯磷脂醯乙醇胺-聚乙二醇縮合物，其內水相中含有活性化合物艾日布林或其可藥用鹽、選自乙二胺四乙酸、磷酸、噴替酸或其鹽中的一種或多種以及銨鹽。
脂質體膜材料中加入一種或者一種以上的親水性聚合物脂質衍生物，可用於改善脂質體-封裝活性化合物的迴圈次數，避免或減少活性化合物從脂質體組合物中過早滲漏。將PEG附接至脂質體上稱為聚乙二醇化。
在本發明示例性實施方式中，脂質體是聚乙二醇化的脂質體。所述親水性聚合物修飾的脂類物質包括但限於聚乙二醇修飾的二硬脂醯磷脂醯乙醇胺(PEG-DSPE)、聚乙二醇修飾的二硬脂醯磷脂醯甘油(PEG-DSPG)、聚乙二醇修飾的膽固醇(PEG-CHOL)。PEG的分子量為200-10000道爾頓，優選1000-5000道爾頓，更優選2000-5000道爾頓。
在一些實施方案中，所述脂質體還含有親水性聚合物修飾的脂類物質，所述親水性聚合物修飾的脂類物質選自聚乙二醇修飾的二硬脂醯磷脂醯乙醇胺(PEG-DSPE)、聚乙二醇修飾的二硬脂醯磷脂醯甘油(PEG-DSPG)、聚乙二醇修飾的膽固醇(PEG-CHOL)中的一種或多種。
在一些實施方案中，所述脂質體含有聚乙二醇修飾的二硬脂醯磷脂醯乙醇胺。在一些實施方案中，所述聚乙二醇修飾的二硬脂醯磷脂醯乙醇胺中聚乙二醇分子量為200-10000道爾頓。在一些實施方案中，所述聚乙二醇修飾的二硬脂醯磷脂醯乙醇胺中聚乙二醇分子量為1000-5000道爾頓。在一些實施方案中，所述聚乙二醇修飾的二硬脂醯磷脂醯乙醇胺中聚乙二醇分子量為2000-5000道爾頓。
在一些實施方案中，所述聚乙二醇修飾的二硬脂醯磷脂醯乙醇胺選自聚乙二醇2000-磷脂醯乙醇胺(mPEG2000-DSPE)。
在一些實施方案中，所述脂質體含有聚乙二醇修飾的二硬脂醯磷脂醯甘油。
在一些實施方案中，所述脂質體含有聚乙二醇修飾的膽固醇。
另一方面，在一些實施方案中，所述脂質體含有氫化卵磷脂、膽固醇及二硬酯醯磷脂醯乙醇胺-聚乙二醇縮合物。
在一些實施方案中，所述脂質體含有氫化大豆磷脂醯膽鹼、膽固醇及聚乙二醇2000-磷脂醯乙醇胺。
另一方面，在一些實施方案中，所述親水性聚合物修飾的脂類物質含量（相對全部脂質體膜成分，莫耳分率）選自0.1~50%，包括但不限於0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%或任意兩數值間任意值，優選0.5~20%。
在一些實施方案中，所述脂質體含有10~80%的氫化卵磷脂、1~60%的膽固醇及0~50%的二硬酯醯磷脂醯乙醇胺-聚乙二醇縮合物。
另一方面，所述脂質體中磷脂與類固醇的莫耳比選自1:0.01~1:1，包括但不限於1:0.01、1:0.02、1:0.03、1:0.04、1:0.05、1:0.06、1:0.07、1:0.08、1:0.09、1:0.1、9:1、9:2、9:4、9:5、9:7、9:8、8:1、8:3、8:7、7:1、7:2、7:3、7:4、7:5、7:6、6:1、5:1、5:2、5:3、4:1、3:1、3:2、2:1、4:3、1:1或任意兩數值間任意值，1:1~3:1，例如3:2。
在一些實施方案中，所述脂質體中磷脂與親水性聚合物修飾的脂類物質的莫耳比20:1~1:1，包括但限於20:1、19:1、18:1、17:1、16:1、15:1、14:1、13:1、12:1、11:1、10:1、10:1、10:1、10:1、9:1、9:2、9:4、9:5、9:7、9:8、8:1、8:3、8:7、7:1、7:2、7:3、7:4、7:5、7:6、6:1、5:1、5:2、5:3、4:1、3:1、3:2、2:1、4:3、1:1或任意兩數值間任意值，優選15:1~2:1，例如9.45:1。
在一些實施方案中，所述活性成分與脂類質量比（藥脂比）選自1:5~1:45，包括但不限於1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19、1:20、1:21、1:22、1:23、1:24、1:25、1:26、1:27、1:28、1:29、1:30、1:31、1:32、1:33、1:34、1:35、1:36、1:37、1:38、1:39、1:40、1:41、1:42、1:43、1:44、1:45、1:46、1:47、1:48、1:49、1:50或任意兩數值間任意值，優選1:10~1:45，例如1:27。
另一方面，本發明脂質體選自多層微脂粒(MLV)、大單室脂質體(LUV)、小單室脂質體、寡層微脂粒(OLV)、疏層膜泡(PLV)或逆向蒸發囊泡(REV)。
另一方面，為了改善艾日布林或其可藥用鹽在脂質體中的包覆率，可以向脂質體外相中添加含有電解質的溶液(鹽類溶液)使離子強度增大，由此增加包覆率。脂質體外相中含有的電解質(鹽類)沒有特別限定，優選為氯化鈉、氯化鉀，較優選為氯化鈉。另外，也可以使用生理鹽水。另外，作為脂質體分散液等的脂質體外相，可以含有糖、電解質、及/或胺基酸，也可以含有糖或電解質、及胺基酸。作為示例，糖選自蔗糖或海藻糖或葡萄糖，電解質選自生理鹽水或氯化鈉或氯化鉀，胺基酸可以選自組胺酸。
在一些實施方案中，所述脂質體外相中含有氯化鈉和組胺酸。
在一些實施方案中，所述脂質體外相中含有氯化鈉和蔗糖。
在一些實施方案中，所述脂質體外相中含有氯化鈉、蔗糖及組胺酸。
在一些實施方案中，脂質體外相中所述糖的濃度選自2~20%，包括但不限於2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%或任意兩數值間任意值，優選4-15%。
在一些實施方案中，脂質體外相中所述胺基酸的濃度選自1~300mM，可以為1mM、2mM、3mM、4mM、5mM、6mM、7mM、8mM、9mM、10mM、15mM、20mM、25mM、30mM、35mM、40mM、45mM、50mM、55mM、60mM、65mM、70mM、75mM、80mM、85mM、90mM、95mM、100mM、105mM、110mM、115mM、120mM、125mM、130mM、135mM、140mM、145mM、150mM、155mM、160mM、165mM、170mM、175mM、180mM、185mM、190mM、195mM、200mM、205mM、210mM、215mM、220mM、225mM、230mM、235mM、240mM、245mM、250mM、255mM、260mM、265mM、270mM、275mM、280mM、285mM、290mM、295mM、300mM或任意兩數值間任意值，優選5~200mM。
本發明還提供一種製備前述脂質體的方法，包括：製備含有選自乙二胺四乙酸、磷酸、噴替酸或其鹽中的一種或多種的內水相的空白脂質體，去除空白脂質體的外水相中乙二胺四乙酸、磷酸、噴替酸或其鹽，以及將艾日布林或其可藥用鹽導入空白脂質體內水相的步驟。
進一步地，製備脂質體內水相還含有銨鹽，所述銨鹽可以為硫酸銨、乙基硫酸銨、乙二胺四乙酸銨鹽、氯化銨、氫氧化銨、乙酸銨、磷酸銨、葡聚糖硫酸銨或三乙基葡聚糖硫酸銨中的至少一種，優選硫酸銨、氯化銨或乙二胺四乙酸銨中的至少一種，更優選乙二胺四乙酸銨或硫酸銨。
在一些實施方案中，製備前述脂質體的方法，包括：製備含有乙二胺四乙酸或其鹽和銨鹽內水相的空白脂質體，去除空白脂質體的外水相中乙二胺四乙酸或其鹽和銨鹽，和將艾日布林或其可藥用鹽導入空白脂質體內水相的步驟。
在一些實施方案中，製備前述脂質體的方法，包括：製備含有磷酸或其鹽和銨鹽內水相的空白脂質體，去除空白脂質體的外水相中磷酸或其鹽和銨鹽，和將艾日布林或其可藥用鹽導入空白脂質體內水相的步驟。
在一些實施方案中，製備前述脂質體的方法，包括：製備含有噴替酸或其鹽和銨鹽內水相的空白脂質體，去除空白脂質體的外水相中噴替酸或其鹽和銨鹽，和將艾日布林或其可藥用鹽導入空白脂質體內水相的步驟。
另一方面，為實現本發明目的，本發明採用薄膜分散法、逆相蒸發法、直接水化法、表面活性劑去除法、乙醇注入法以及改良乙醇注入法製備空白脂質體。
在一些實施方案中，製備含有乙二胺四乙酸內水相的空白脂質體的步驟，包括：1）配製脂質體水相溶液，2）乙醇注入法製備脂質體，3）置換或稀釋步驟2）脂質體溶液的步驟。
另一方面，採用超音波探針、高壓均質機、微射流儀、擠壓器等裝置處理獲得所需粒徑大小空白脂質體。
在一些實施方案中，秤取脂質混合物溶解於乙醇中，將該脂質乙醇溶液注入前述脂質體水相溶液中，攪拌，蒸發去除乙醇，擠壓機擠出得空白脂質體。
含有銨鹽的溶液中銨鹽的濃度，可以根據包覆的艾日布林等的量適當調整，濃度越高越好，優選為10mM以上，較優選為50mM以上，更優選為100mM以上。優選含有銨鹽的溶液的pH為3、4、5、6、7、8、9或任意兩數值間任意值，從包覆率與穩定性的均衡性考慮，較優選為4~9，更優選為5~8。
為了調節含有銨鹽的溶液的pH，可以使用pH調節劑。含有銨鹽的溶液中的各個pH調節劑的濃度沒有特別限定，優選為1~300mM，較優選為5~100mM。
pH調節劑可以選自精氨酸、組胺酸、甘胺酸等胺基酸，乙二胺四乙酸、鹽酸、磷酸或硫酸等酸；前述酸的鈉鹽、鉀鹽、銨鹽等鹽；氨水、氫氧化鈉、氫氧化鉀等鹼性化合物（鹼）等。優選氫氧化鈉、鹽酸、氨水、磷酸、噴替酸、乙二胺四乙酸。另外，pH調節劑可以組合前述2種以上的銨鹽使用。
在一些實施方案中，pH調節劑選自組胺酸、磷酸、噴替酸、鹽酸、硫酸、乙二胺四乙酸、氨水(氨)、氫氧化鈉、氫氧化鉀。在一些實施方案中，pH調節劑選自鹼，選自氨水(氨)、氫氧化鈉或氫氧化鉀。
另一方面，本發明製備脂質體內水相中實質上不含有檸檬酸。所謂實質上不含有檸檬酸，是指不添加檸檬酸。需要說明的是，只要確定如脂質體包覆率穩定性不是由於檸檬酸添加引起的即可。
另外，脂質體的製備過程中各種參數(如膜成分的量、溫度等)可以根據脂質體的製備方法或目標的脂質體的組成、粒徑等適當調整確定。
另一方面，本發明置換或稀釋操作可以通過透析、離心分離、凝膠過濾等方法進行。另外，通過置換或稀釋脂質體外相，也可以有效地將艾日布林或其可藥用鹽包覆在脂質體內水相中。
透析、離心分離和凝膠過濾均為本領域常規操作，例如透析可以使用透析膜進行。透析膜可選用聚醚碸材質的膜。
根據需要，也可以利用pH梯度將艾日布林等導入脂質體內水相。此時，脂質體分散液中的脂質體內水相的pH優選為3~9，包括3、4、5、6、7、8、9或任意兩數值間任意值，較優選為4~9，更優選為5~8。
另外，可以將脂質體外相的pH設定為高於脂質體內水相的pH，賦予pH梯度。優選的pH梯度為1~5，較優選為2~3。
進而，通過使脂質體外相的pH在艾日布林的pKa附近，可以提高包覆到脂質體中的包覆率。優選為7.5~12.5，較優選為8.5~11.5，更優選為9~10.5(甲磺酸艾日布林的pKa＝9.6)。
另一方面，本發明製備前述脂質體的方法還包括：包括調節載藥後脂質體外水相pH的步驟。調節的外相的pH沒有特別限定，但從構成脂質體的磷脂的化學穩定性的觀點考慮，優選為4~10，包括4、5、6、7、8、9、10或任意兩數值間任意值，較優選為5~9，更優選為6~8的中性pH，例如pH 7.5。
另一方面，本發明脂質體為固體或液體形態。
在一些實施方案中，脂質體為液體的，可以將由上述導入的步驟得到的脂質體組合物可以直接作為最終的脂質體，或可以通過調節(置換等)得到的脂質體組合物的脂質體外相，從而獲得最終的脂質體。
在另一些實施方案中，脂質體為固體的，可以通過對由上述導入步驟得到的脂質體組合物進行乾燥（包括但不限於冷凍乾燥），作為最終的固態脂質體。對脂質體組合物進行乾燥的方法，可以包括但不限於冷凍乾燥及噴霧乾燥等。
本發明還提供一種含有前述脂質體的藥物組合物或由前述脂質體製備獲得。進一步地，所述藥物組合物還含有緩衝液，所述緩衝液優選自醋酸鹽緩衝液或組胺酸緩衝液或磷酸鹽緩衝液或琥珀酸鹽緩衝液或4-羥乙基哌嗪乙磺酸鹽緩衝液中的至少一種，更優選組胺酸緩衝液或磷酸鹽緩衝液（如PBS）或4-羥乙基哌嗪乙磺酸鹽緩衝液（如HEPES）中的至少一種，例如組胺酸緩衝液。
「緩衝液」指通過其酸-鹼共軛組分的作用而耐受pH變化的緩衝液。將pH控制在適當範圍中的緩衝液的例子包括醋酸鹽、琥珀酸鹽、葡萄糖酸鹽、組胺酸、草酸鹽、乳酸鹽、磷酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、延胡索酸鹽、甘胺醯甘胺酸和其它有機酸緩衝液。
「組胺酸緩衝液」是包含組胺酸離子的緩衝液。組胺酸緩衝液的實例包括組胺酸-鹽酸鹽，組胺酸-醋酸鹽，組胺酸-磷酸鹽，組胺酸-硫酸鹽等緩衝液，優選的組胺酸緩衝液是組胺酸-鹽酸鹽緩衝液。組胺酸-鹽酸鹽緩衝液是組胺酸與鹽酸或組胺酸與組胺酸鹽酸鹽配製而成。
「琥珀酸鹽緩衝液」是包括琥珀酸離子的緩衝液。琥珀酸鹽緩衝液的實例包括琥珀酸-琥珀酸鈉、琥珀酸組胺酸鹽、琥珀酸-琥珀酸鉀、琥珀酸-琥珀酸鈣鹽等。優選的琥珀酸鹽緩衝液是琥珀酸-琥珀酸鈉緩衝液。
「磷酸鹽緩衝液」是包括磷酸離子的緩衝液。磷酸鹽緩衝液的實例包括磷酸氫二鈉酸-磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉酸-磷酸二氫鉀等。優選的磷酸鹽緩衝液是磷酸氫二鈉酸-磷酸二氫鈉緩衝液。
「醋酸鹽緩衝液」是包括醋酸根離子的緩衝液。醋酸鹽緩衝液的實例包括醋酸-醋酸鈉、醋酸組胺酸鹽、醋酸-醋酸鉀、醋酸-醋酸鈣、醋酸-醋酸鎂等。優選的醋酸鹽緩衝液是醋酸-醋酸鈉緩衝液。
另一方面，本發明藥物組合物中還含有糖或電解質。
作為示例，糖選自蔗糖或海藻糖或葡萄糖，電解質選自生理鹽水或氯化鈉或氯化鉀，胺基酸可以選自組胺酸。
在一些實施方案中，所述藥物組合物中還含有氯化鈉和組胺酸。
在一些實施方案中，所述藥物組合物中還含有氯化鈉和蔗糖。
在一些實施方案中，所述藥物組合物中還含有氯化鈉、蔗糖及組胺酸。
在一些實施方案中，所述藥物組合物中含有生理鹽水和蔗糖。
在一些實施方案中，所述藥物組合物中含有生理鹽水、蔗糖及組胺酸。
在一些實施方案中，所述糖的濃度選自2~20%，包括但不限於2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%或任意兩數值間任意值，優選4~15%。
在一些實施方案中，所述胺基酸的濃度選自1~300mM，可以為1mM、2mM、3mM、4mM、5mM、6mM、7mM、8mM、9mM、10mM、15mM、20mM、25mM、30mM、35mM、40mM、45mM、50mM、55mM、60mM、65mM、70mM、75mM、80mM、85mM、90mM、95mM、100mM、105mM、110mM、115mM、120mM、125mM、130mM、135mM、140mM、145mM、150mM、155mM、160mM、165mM、170mM、175mM、180mM、185mM、190mM、195mM、200mM、205mM、210mM、215mM、220mM、225mM、230mM、235mM、240mM、245mM、250mM、255mM、260mM、265mM、270mM、275mM、280mM、285mM、290mM、295mM、300mM或任意兩數值間任意值，優選5~200mM。
另外，藥物組合物pH值影響藥物穩定性。在一些實施方案中，所述藥物組合物pH選自5.0至8.0，包括但不限於5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0或任意兩數值間任意值，優選5.5至7.5。
另一方面，本發明所述藥物組合物中還含有抗氧化劑，所述抗氧化劑選自但不限於α-生育酚、α-生育酸琥珀酸酯、α-醋酸生育酚、抗壞血酸、亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、偏亞硫酸氫鈉、L-半胱氨酸。在一些實施方案中，抗氧劑加入量0~0.5%，包括但不限於0%、0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%。
在一些實施方案中，藥物組合物為液體製劑，可以將由上述導入的步驟得到的脂質體組合物可以直接作為最終的脂質體組合物（藥物組合物），或可以通過調節(置換等)得到的脂質體組合物的脂質體外相，從而獲得最終的脂質體組合物（藥物組合物）。
在另一些實施方案中，藥物組合物為固體製劑，可以通過對由上述導入步驟得到的脂質體組合物進行乾燥，作為最終的固態脂質體組合物（藥物組合物）。對脂質體組合物進行乾燥的方法，可以包括但不限於冷凍乾燥及噴霧乾燥等。
另一方面，藥物組合物為固體製劑，藥物組合物可以通過溶解或混合懸浮在適當的溶劑中，作為液體製劑使用。溶劑可以根據脂質體組合物的使用目的等適當設定，例如藥物組合物作為注射劑時，溶劑優選為滅菌蒸餾水。
本發明還提供一種冷凍乾燥組合物，其由前述藥物組合物冷凍乾燥得到，或者所述冷凍乾燥組合物經液體介質回溶後得到前述藥物組合物，其中回溶使用的液體介質選自生理鹽水、注射用水、葡萄糖注射液或葡萄糖氯化鈉注射液。
另一方面，本發明的脂質體/藥物組合物/冷凍乾燥組合物在保藏期間相當穩定。例如從本發明脂質體初始裝載起的一段時間階段之後，由釋放在脂質體外的包載/包覆的活性成分與依然保持在脂質體內的活性成分的百分比所測定的。在一些實施方案中，本發明脂質體/藥物組合物在25℃下穩定至少3月，例如在最初裝載活性成分之後25℃、3個月，至少70%的所述活性成分保持包覆在所述脂質體中。例如在最初裝載活性成分之後25℃、3個月，至少75%的所述活性成分保持包覆在所述脂質體中。例如在最初裝載活性成分之後25℃、3個月，至少80%的所述活性成分保持包覆在所述脂質體中。例如在最初裝載活性成分之後25℃、3個月，至少85%的所述活性成分保持包覆在所述脂質體中。例如在最初裝載活性成分之後25℃、3個月，至少90%的所述活性成分保持包覆在所述脂質體中。例如在最初裝載活性成分之後25℃、3個月，至少95%或更高的所述活性成分保持包覆在所述脂質體中。
另一方面，例如在最初裝載活性成分之後25℃、3個月，10％以下包載/包覆的活性成分釋放出來。例如在最初裝載活性成分之後25℃、3個月，15％以下包載/包覆的活性成分釋放出來。例如在最初裝載活性成分之後25℃、3個月，20％以下包載/包覆的活性成分釋放出來。例如在最初裝載活性成分之後25℃、3個月，30％以下包載/包覆的活性成分釋放出來。
在一些實施方案中，本發明脂質體/藥物組合物/冷凍乾燥組合物在2-8℃中穩定至少3個月，例如在最初裝載實體之後6個月，10％以下包載的實體釋放出來。在一些實施方案中，本發明脂質體/藥物組合物在4℃中穩定至少2年，例如在最初裝載實體之後2年，20％以下包載的實體釋放出來。
例如在對並哺乳動物如人施用脂質體抗腫瘤藥物情況下，直到脂質體到達腫瘤之前，脂質體包載的實體一直保持包囊在脂質體中是有利的。在體內條件下，例如在哺乳動物如人血液中，本發明脂質體/藥物組合物/冷凍乾燥組合物對於包載的活性成分的釋放(滲漏)顯示出驚人的穩定性。
在一些實施方案中，前述脂質體/藥物組合物/冷凍乾燥組合物中活性成分在哺乳動物中提供不少於12小時的藥物的持續釋放，優選提供不少於24小時的藥物的持續釋放，更優選提供不少於48小時的藥物的持續釋放，最優選提供不少於72小時的藥物的持續釋放。
本發明脂質體既提高了包載/包覆活性成分的治療功效，也降低了活性成分的毒性。一般而言，本發明包囊/包覆入脂質體的活性成分在哺乳動物中的活性，例如甲磺酸艾日布林的抗腫瘤活性，與以相同的數量通過其常規非脂質體製劑如艾日布林注射液(Halaven)相比，至少相等、提高至少2~20倍（包括2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20倍），而包囊/包覆在脂質體中活性成分的毒性，與以相同的數量通過其常規非脂質體製劑如艾日布林注射液(Halaven)相比，至少降低2倍、至少降低4倍、至少降低4倍。
本發明的脂質體/藥物組合物可以以多種方式給藥，包括但不限於局部、胃腸外等給藥。所述組合物可以包含眼用劑型和可注射劑型，並可以包含醫學診斷產品。
另一方面，本發明還提供了一種前述脂質體/藥物組合物/冷凍乾燥組合物或由前述方法製備獲得脂質體/藥物組合物/冷凍乾燥組合物在製備治療或預防腫瘤的藥物中的用途，其中所述癌症優選乳腺癌、卵巢癌、子宮頸癌、子宮癌、前列腺癌、腎癌、尿道癌、膀胱癌、肝癌、胃癌、子宮內膜癌、唾液腺癌、胰腺癌和淋巴瘤。
術語：
藥脂比，是指藥物與磷脂的重量比。
脂質含量如類固醇含量，是指其在脂質體雙分子層中磷脂成分總莫耳數的百分率。
脂質體，是指有雙層磷脂或任何類似的封裝內部水性介質的兩性脂質組成的顯微脂質囊泡。本發明的脂質體可以是多層微脂粒(MLV)、大單室脂質體(LUV)、小單室脂質體。尺寸通常從30mM至200mM。另外，對本發明中脂質體膜結構沒有具體限制。
脂質體膜，是指分離內部水性介質與外部水性介質的雙層磷脂。
脂質體內水相，是指被脂質體的脂質雙層包圍的水性區域，以「內水相」及「脂質體內水相」的相同含義進行使用。在脂質體分散在液體中時，「脂質體外相」是指沒有被脂質體的脂質雙層包圍的區域(即除內水相及脂質雙層之外的區域)。
脂質體組合物，是指含有脂質體、並且在脂質體內水相中還含有甲磺酸艾日布林的組合物。在本發明中，脂質體組合物包括固態及液態。
空白脂質體，是指脂質體內水相中不含有待裝載的活性成分如本發明艾日布林。
包覆率，是指被包裹物質（如某藥物）在脂質體懸浮液中占藥物總量的百分比。它是脂質體和奈米粒品質控制的一個重要的指標，反映了藥物被載體包覆的程度。
包覆率包括百分包覆率和包裹容積的測定，一般文獻主要觀察百分包覆率(Encapsulation percentage, EN%)。其運算式是EN%=(1－Cf/Ct )×100%。式中Cf 為游離藥物的量；Ct為脂質體懸液中藥物的總量。
Figure 02_image001
可採用常規的包覆率的測定方法測定包覆率，例如HPLC法。在一些實施方案中，HPLC條件：管柱層析法 ODS-A，150×4.6mm,5µm；流動相甲醇-醋酸-三乙胺；流速1.0mL/min；柱溫25℃；樣本數量20µL。
本發明中「聚合物分子量」採用數目平均分子量，是指樣品中所有聚合鏈分子量的統計平均值，其定義如下其中Mi 代表單鏈分子量，Ni 代表具有相應分子量的鏈數目。Mn 可以通過聚合機制來進行預測，並通過測定給定品質樣品中的分子數量來確定；例如端基分析(end group analysis)等依數性方法。如果用Mn 來表示分子量分佈，則Mn 兩側分佈有同等數量的分子。
本發明中數值如包覆率為測定計算的資料，不可避免存在一定程度的誤差。一般而言，正負10%均屬於合理誤差範圍內。隨其所用之處的上下文而有一定程度的誤差變化，該誤差變化不超過正負10%，可以為正負9%、正負8%、正負7%、正負6%、正負5%、正負4%、正負3%、正負2%或正負1%，優選正負5%。
實施例1
處方 用量
HSPC 1215mg
CHOL 398.09mg
mPEG2000-DSPE 460.29mg
甲磺酸艾日布林 45mg
秤取上述處方量的脂質混合物加入無水乙醇中，60℃溶解後，將脂質乙醇溶液注入脂質體內水相溶液（300mM硫酸銨/60mM檸檬酸），攪拌15min-30min，減壓去除乙醇，通過擠壓機擠出整粒得空白脂質體。
用於180mL0.9%氯化鈉/10mM組胺酸緩衝液(pH=7.5)對空白脂質體透析（切向流過濾），待外水相中大部分硫酸銨被去除，用於氫氧化鈉調節脂質體外水相pH至10.5。
用0.9%氯化鈉/10mM組胺酸水溶液(pH 7.5)溶解處方量的甲磺酸艾立布林，攪拌溶解，得到5mg/mL的甲磺酸艾立布林溶液。
將上述空白脂質體（外水相pH為10.5）和甲磺酸艾立布林溶液混合，60℃孵化，由此將甲磺酸艾日布林導入脂質體內的脂質體，調節脂質體外水相pH至7.5，濃縮，定容。
包覆率的測定：
將包覆有活性成分的脂質體以13000rpm離心10~30分鐘，用HPLC測定上清液中活性成分濃度，並通過包覆率公式計算得相應數值。
甲磺酸艾日布林包覆率為95.70%。
實施例2：
處方 用量
HSPC 1215mg
CHOL 398.09mg
mPEG2000-DSPE 460.29mg
甲磺酸艾日布林 45mg
秤取上述處方量的脂質混合物加入無水乙醇中，60℃溶解後，將脂質乙醇溶液注入脂質體內水相溶液（300mM硫酸銨/60mM 乙二胺四乙酸），攪拌15min~30min，減壓去除乙醇，通過擠壓機擠出整粒得空白脂質體。
用於180mL0.9%氯化鈉/10mM組胺酸緩衝液(pH=7.5)對空白脂質體透析（切向流過濾），待外水相中大部分硫酸銨被去除，用於氫氧化鈉調節脂質體外水相pH至10.5。
用0.9%氯化鈉/10mM組胺酸水溶液(pH 7.5)溶解處方量的甲磺酸艾立布林，攪拌溶解，得到5mg/mL的甲磺酸艾立布林溶液。
將上述空白脂質體（外水相pH為10.5）和甲磺酸艾立布林溶液混合，60℃孵化，由此將甲磺酸艾日布林導入脂質體內的脂質體，調節脂質體外水相pH至7.5，濃縮，定容。
包覆率的測定：
甲磺酸艾日布林包覆率為96.85%。
實施例3：
處方 用量
HSPC 1215mg
CHOL 398.09mg
mPEG2000-DSPE 460.29mg
甲磺酸艾日布林 45mg
秤取上述處方量的脂質混合物加入無水乙醇中，60℃溶解後，將脂質乙醇溶液注入脂質體內水相溶液（300mM硫酸銨/60mM 磷酸），攪拌15min-30min，減壓去除乙醇，通過擠壓機擠出整粒得空白脂質體。
用於180mL0.9%氯化鈉/10mM組胺酸緩衝液(pH=7.5)對空白脂質體透析（切向流過濾），待外水相中大部分硫酸銨被去除，用於氫氧化鈉調節脂質體外水相pH至10.5。
用0.9%氯化鈉/10mM組胺酸水溶液(pH 7.5)溶解處方量的甲磺酸艾立布林，攪拌溶解，得到5mg/mL的甲磺酸艾立布林溶液。
將上述空白脂質體（外水相pH為10.5）和甲磺酸艾立布林溶液混合，60℃孵化，由此將甲磺酸艾日布林導入脂質體內的脂質體，調節脂質體外水相pH至7.5，濃縮，定容。
包覆率的測定：
甲磺酸艾日布林包覆率為99.46%。
實施例4：
處方 用量
HSPC 1215mg
CHOL 398.09mg
mPEG2000-DSPE 460.29mg
甲磺酸艾日布林 45mg
秤取上述處方量的脂質混合物加入無水乙醇中，60℃溶解後，將脂質乙醇溶液注入脂質體內水相溶液（300mM硫酸銨/60mM 酒石酸），攪拌15min-30min，減壓去除乙醇，通過擠壓機擠出整粒得空白脂質體。
用於180mL0.9%氯化鈉/10mM組胺酸緩衝液(pH=7.5)對空白脂質體透析（切向流過濾），待外水相中大部分硫酸銨被去除，用於氫氧化鈉調節脂質體外水相pH至10.5。
用0.9%氯化鈉/10mM組胺酸水溶液(pH 7.5)溶解處方量的甲磺酸艾立布林，攪拌溶解，得到5mg/mL的甲磺酸艾立布林溶液。
將上述空白脂質體（外水相pH為10.5）和甲磺酸艾立布林溶液混合，60℃孵化，由此將甲磺酸艾日布林導入脂質體內的脂質體，調節脂質體外水相pH至7.5，濃縮，定容。
包覆率的測定：
甲磺酸艾日布林包覆率為94.92%。
實施例5：
處方 用量
HSPC 1215mg
CHOL 398.09mg
mPEG2000-DSPE 460.29mg
甲磺酸艾日布林 45mg
秤取上述處方量的脂質混合物加入無水乙醇中，60℃溶解後，將脂質乙醇溶液注入脂質體內水相溶液（300mM硫酸銨/60mM烏頭酸），攪拌15min-30min，減壓去除乙醇，通過擠壓機擠出整粒得空白脂質體。
用於180mL 0.9%氯化鈉/10mM組胺酸緩衝液(pH=7.5)對空白脂質體透析（切向流過濾），待外水相中大部分硫酸銨被去除，用於氫氧化鈉調節脂質體外水相pH至10.5。
用0.9%氯化鈉/10mM組胺酸水溶液(pH 7.5)溶解處方量的甲磺酸艾立布林，攪拌溶解，得到5mg/mL的甲磺酸艾立布林溶液。
將上述空白脂質體（外水相pH為10.5）和甲磺酸艾立布林溶液混合，60℃孵化，由此將甲磺酸艾日布林導入脂質體內的脂質體，調節脂質體外水相pH至7.5，濃縮，定容。
包覆率的測定：
甲磺酸艾日布林包覆率為98.02%。
測試例1：
將前述實施例1-5所得樣品分別放置在2~8℃或25℃條件下觀察其包覆率穩定性，相關資料如下表： 表1
實施例 1 2 3 4 5
起始（%） 95.70 96.85 99.46 94.92 98.02
2-8℃ 1月（%） 95.31 96.84 N/A N/A 94.25
2月（%） 98.04 97.29 98.80 95.35 89.93
3月（%） 98.10 96.64 99.18 94.24 89.37
25℃ 15天（%） 93.49 94.71 99.25 96.61 N/A
1月（%） 81.43 93.31 93.64 92.01 73.40
2月（%） 83.08 93.25 90.93 83.20 62.65
3月（%） 44.06 91.64 91.45 74.67 56.29
測試例2：
將前述實施例1-5所得樣品分別放置在2~8℃或25℃條件下觀察其含量，相關資料如下表2： 表2
實施例 1 2 3 4 5
起始（%） 0.5368 0.5347 0.5715 0.5225 0.5136
2-8℃ 1月（%） 0.5602 0.5454 N/A N/A 0.4804
2月（%） 0.5401 0.5319 0.5799 0.5218 0.4922
3月（%） 0.5586 0.5582 0.5606 0.5551 0.4927
25℃ 15天（%） 0.5697 0.5593 0.5734 0.5256 N/A
1月（%） 0.5437 0.5595 0.5512 0.5375 0.4961
2月（%） 0.5577 0.5445 0.5544 0.5378 0.5005
3月（%） 0.5859 0.5583 0.5333 0.5455 0.5117
結論：從表2中可以看出，不同成分的脂質體的含量穩定性均表現不錯。在體外貯存期內，藥物會不會從脂質體中釋放出來更為重要，從表1中不難看出，相較於內水相含有檸檬酸或酒石酸或烏頭酸脂質體而言，內水相含有磷酸或乙二銨四乙酸的包覆率穩定性表現優異，尤其在加速條件下（25℃），預期含有該類脂質體的組合物適合長期儲存，且保存條件溫和。
實施例6：
參照實施例1方法製備如下表3所示藥物組合物（脂質體）A、B、C和D。對雌性Balb/c裸鼠（北京維通利華實驗動物技術有限公司）右側背部皮下接種腫瘤細胞（人咽鱗癌細胞FaDu）。
試劑：藥物組合物（脂質體）A、B、C和D，甲磺酸艾日布林注射液（自製）。
給藥方法：每週一次，靜脈注射0.15mg/mL×10mL。
給藥後經過一定時間（0.5h、2h、6h、24h、48h）後採集血液或摘除腫瘤組織。血液樣本將於採集後在1小時內離心（離心條件：2~8℃下約11000 rpm 離心5分鐘），收集後最初可放於冰上，長期存放時則放於-80℃冰箱內。腫瘤組織摘取後，用PBS清洗後，用吸水紙擦拭後，測定並記錄組織重量。將組織裝入試管中，在冰水中冷卻後，在-80℃保存待分析。
用於LC/MS測定血漿中及腫瘤組織中甲磺酸艾日布林量。
甲磺酸艾日布林的血漿PK資料及腫瘤組織PK資料結果分別如表4和5中所示。 表3
處方 A B C
HSPC 13.5mg/mL 13.5mg/mL 13.5mg/mL
CHOL 4.42 mg/mL 4.42 mg/mL 4.42 mg/mL
mPEG2000-DSPE 5.11 mg/mL 5.11 mg/mL 5.11 mg/mL
藥物/脂比 1:27 1:27 1:27
內水相 硫酸銨/乙二胺四乙酸 硫酸銨/磷酸 硫酸銨/檸檬酸
外水相 氯化鈉/組胺酸 氯化鈉/組胺酸 氯化鈉/組胺酸
表4：血漿PK數據
組別 Tmax (h) Cmax (ug/mL) AUC0-t (h*ug/mL) T1/2 (h) 比值
甲磺酸艾日布林注射液 0.5 0.154 0.654 3.38 --
A 0.5 20.3 304 8.17 465
B 0.5 21.1 285 8.71 436
C 0.5 21.1 307 8.94 469
比值：AUC脂質體 /AUC甲磺酸艾日布林注射液 表5：腫瘤組織PK資料
組別 Tmax (h) Cmax (ug/mL) AUC0-t (h*ug/mL) T1/2 (h) 比值
甲磺酸艾日布林注射液 2 0.272 4.05 16.6 --
A 24 1.31 43 NA 10.6
B 6 1.2 40.6 39.6 10.0
C 24 0.936 36.7 NA 9.1
比值：AUC脂質體 /AUC甲磺酸艾日布林注射液
結論：相比甲磺酸艾日布林，藥物組合物A、B、C在血漿和腫瘤組織中AUC增大，釋放半衰期得到明顯提高。而在腫瘤組織中，與內水相為檸檬酸的脂質體相比，藥物組合物A、B的Cmax 更優，AUC脂質體 /AUC甲磺酸艾日布林注射液更高 。
無

Claims (30)

  1. 一種脂質體，其中內水相中含有活性化合物艾日布林或其可藥用鹽，和選自乙二胺四乙酸、磷酸、噴替酸或其鹽中的一種或多種。
  2. 如請求項1所述之脂質體，其中脂質體內水相中還含有銨鹽，所述胺鹽優選硫酸銨、乙基硫酸銨、乙二胺四乙酸銨鹽、氯化銨、氫氧化銨、乙酸銨、磷酸銨、蔗糖八硫酸酯三乙銨、葡聚糖硫酸銨或三乙基葡聚糖硫酸銨，更優選硫酸銨、磷酸銨、氯化銨或乙二胺四乙酸銨，最優選硫酸銨。
  3. 如請求項1或2所述之脂質體，其中所述活性化合物選自甲磺酸艾日布林。
  4. 如請求項1至3任一項所述之脂質體，其中所述乙二胺四乙酸、磷酸、噴替酸或其鹽的濃度選自1~300mM，優選20~200mM。
  5. 如請求項3所述之脂質體，其中所述銨鹽的濃度選自10~400mM，優選20~300mM。
  6. 如請求項1至5任一項所述之脂質體，其中所述活性化合物的濃度選自0.01~100mg/mL，優選0.05~5mg/mL。
  7. 如請求項1至6任一項所述之脂質體，其中所述脂質體內水相中實質上不含有檸檬酸。
  8. 如請求項1至7任一項所述之脂質體，其中所述脂質體還含有磷脂，所述磷脂選自二棕櫚醯磷脂醯膽鹼(DPPC)、二硬脂醯磷脂醯膽鹼(DSPC)、二肉豆蔻醯磷脂醯膽鹼(DMPC)、1-棕櫚醯-2-亞油醯-sn-甘油-3-磷脂醯膽鹼(PLPC)、磷酸膽鹼(DOPC)、蛋黃磷脂醯膽鹼(EPC)、二月桂醯磷脂醯膽鹼(DLPC)、氫化卵磷脂(HEPC)、l-肉豆蔻醯-2-棕櫚醯磷脂醯膽鹼(MPPC)、l-棕櫚醯-2-肉豆蔻醯磷脂醯膽鹼(PMPC)、l-棕櫚醯-2-硬脂醯磷脂醯膽鹼(PSPC)、l-硬脂醯-2-棕櫚醯磷脂醯膽鹼(SPPC)、棕櫚醯油醯磷脂醯膽鹼(POPC)、溶血磷脂醯膽鹼、二亞油醯磷脂醯膽鹼、二硬脂醯磷脂醯乙醇胺(DSPE)、二肉豆蔻醯磷脂醯乙醇胺(DMPE)、二棕櫚醯磷脂醯乙醇胺(DPPE)、二油醯基磷脂醯甘油(DOPG)、二肉豆蔻醯磷脂醯甘油(DMPG)、二硬脂醯基磷脂醯甘油(DSPG)、二棕櫚醯基甘油磷酸甘油 (DPPG)、二棕櫚醯基磷脂醯絲胺酸(DPPS)、1,2-二油醯基-sn-甘油-3-磷脂醯絲胺酸(DOPS)、二肉豆蔻醯基磷脂醯絲胺酸(DMPS)、二硬脂醯基磷脂醯絲胺酸(DSPS)、二棕櫚醯基磷脂酸(DPPA)、1,2-二油醯基-sn-甘油-3-磷脂酸(DOPA)、二肉豆蔻醯基磷脂酸(DMPA)、二硬脂醯基磷脂酸(DSPA)、二棕櫚醯基磷脂醯肌醇(DPPI)、1,2-二油醯基-sn-甘油-3-磷脂醯肌醇(DOPI)、二肉豆蔻醯基磷脂醯肌醇(DMPI)、二硬脂醯基磷脂醯肌醇(DSPI)中的至少一種，優選氫化卵磷脂、二硬脂醯磷脂醯膽鹼、二棕櫚醯磷脂醯膽鹼、二硬脂醯磷脂醯膽鹼、磷酸膽鹼和二肉豆蔻醯磷脂醯膽鹼中的一種或多種；所述氫化卵磷脂優選氫化大豆磷脂醯膽鹼。
  9. 如請求項8所述之脂質體，其中所述磷脂含量選自10~80%，優選30~70%。
  10. 如請求項1至9任一項所述之脂質體，其中所述脂質體還含有類固醇，優選膽固醇。
  11. 如請求項10所述之脂質體，其中所述類固醇含量選自1~60%，優選10~40%。
  12. 如請求項1至11任一項所述之脂質體，其中所述脂質體還含有親水性聚合物修飾的脂類物質，優選聚乙二醇修飾的二硬脂醯磷脂醯乙醇胺、聚乙二醇修飾的二硬脂醯磷脂醯甘油或聚乙二醇修飾的膽固醇，更優選聚乙二醇2000-磷脂醯乙醇胺。
  13. 如請求項12所述之脂質體，其中所述親水性聚合物修飾的脂類物質含量選自0.1~50%，優選0.5~20%，例如6%。
  14. 如請求項1至13任一項所述之脂質體，其中所述脂質體含有磷脂、類固醇和親水性聚合物修飾的脂類物質，優選含有氫化卵磷脂、膽固醇及聚乙二醇修飾的二硬脂醯磷脂醯乙醇胺，優選含有氫化大豆磷脂醯膽鹼、膽固醇及聚乙二醇2000-磷脂醯乙醇胺。
  15. 如請求項10至14任一項所述之脂質體，其中所述磷脂與類固醇的莫耳比選自1:0.01~1:1，優選1:1~3:1，例如3:2。
  16. 如請求項13至15任一項所述之脂質體，其中所述磷脂與親水性聚合物修飾的脂類物質的莫耳比選自20:1~1:1，優選15:1~2:1，例如9.45:1。
  17. 如請求項1至16任一項所述之脂質體，其中所述活性成分與脂類質量比選自1:5~1:50，優選1:10~1:45，例如1:27。
  18. 如請求項1至17任一項所述之脂質體，其中含有磷脂、膽固醇及二硬酯醯磷脂醯乙醇胺-聚乙二醇縮合物，其內水相中含有活性化合物艾日布林或其可藥用鹽、乙二胺四乙酸、磷酸、噴替酸或其鹽以及銨鹽。
  19. 一種製備如請求項1至18任一項所述之脂質體的方法，包括：製備含有選自乙二胺四乙酸、磷酸、噴替酸或其鹽中的一種或多種的內水相的空白脂質體，去除空白脂質體的外水相中乙二胺四乙酸、磷酸、噴替酸或其鹽，和將艾日布林或其可藥用鹽導入空白脂質體內水相的步驟。
  20. 一種藥物組合物，含有如請求項1至18任一項所述之脂質體或由請求項1至18任一項所述之脂質體製備獲得，進一步地，所述藥物組合物優選還含有緩衝液，所述緩衝液優選自醋酸鹽緩衝液或組胺酸緩衝液或磷酸鹽緩衝液或琥珀酸鹽緩衝液或4-羥乙基哌嗪乙磺酸鹽緩衝液中的至少一種，更優選組胺酸緩衝液或磷酸鹽緩衝液或4-羥乙基哌嗪乙磺酸鹽緩衝液中的至少一種，例如組胺酸緩衝液。
  21. 如請求項20所述之藥物組合物，其中還含有糖或電解質，優選含有氯化鈉、海藻糖或蔗糖中的至少一種。
  22. 如請求項20所述之藥物組合物，其中所述糖的濃度優選2~20%，優選4~15%。
  23. 如請求項20至22任一項所述之藥物組合物，其中所述緩衝液濃度選自1~300mM，優選5~200mM。
  24. 如請求項20至22任一項所述之藥物組合物，所述藥物組合物的pH為5.0至8.0，優選5.5至7.5。
  25. 一種冷凍乾燥組合物，其由請求項20至24任一項所述之藥物組合物冷凍乾燥得到，或者所述冷凍乾燥組合物經液體介質回溶後得到請求項20至24任一項所述藥物組合物，其中回溶使用的液體介質選自生理鹽水、注射用水、葡萄糖注射液或葡萄糖氯化鈉注射液。
  26. 如請求項1至18任一項所述之脂質體或請求項20至24任一項所述之藥物組合物或請求項25所述之冷凍乾燥組合物，其在25℃下3月之後，至少70%、至少80%的所述活性成分保持包覆在所述脂質體中，優選至少85%的所述活性成分保持包覆在所述脂質體中。
  27. 如請求項1至18任一項所述之脂質體或請求項20至24任一項所述之藥物組合物或請求項25所述之冷凍乾燥組合物，其中所述組合物用於哺乳動物的毒性比以游離非脂質體形式降低至少兩倍，優選至少四倍。
  28. 如請求項1至18任一項所述之脂質體或請求項20至24任一項所述之藥物組合物或請求項25所述之冷凍乾燥組合物，其中活性成分在哺乳動物血液中半釋放期至少5小時，優選至少7小時，例如8小時。
  29. 如請求項1至18任一項所述之脂質體或請求項20至24任一項所述之藥物組合物或請求項25所述之冷凍乾燥組合物，其中活性成分在哺乳動物中提供不少於12小時的藥物的持續釋放，優選提供不少於24小時的藥物的持續釋放，更優選提供不少於48小時的藥物的持續釋放，最優選提供不少於72小時的藥物的持續釋放。
  30. 一種如請求項1至18任一項所述之脂質體或請求項20至24任一項所述之藥物組合物或如請求項25所述之冷凍乾燥組合物在製備治療或預防腫瘤的藥物中的用途，其中所述癌症優選乳腺癌、卵巢癌、子宮頸癌、子宮癌、前列腺癌、腎癌、尿道癌、膀胱癌、肝癌、胃癌、子宮內膜癌、唾液腺癌、胰腺癌和淋巴瘤。
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