TW202140069A

TW202140069A - Hpv疫苗

Info

Publication number: TW202140069A
Application number: TW110104887A
Authority: TW
Inventors: 瑪麗安Ｅ金迪; 強恩Ｐ畢雷羅; 艾咪Ｓ艾斯貝賽斯; 安德魯Ｊ貝特; 董民傅
Original assignee: 美商默沙東藥廠
Priority date: 2020-02-14
Filing date: 2021-02-09
Publication date: 2021-11-01
Also published as: IL295234A; US20210252138A1; WO2021163002A1; AU2021219652A1; DOP2022000168A; US11638754B2; JOP20220187A1; EP4103227A1; JP2023516904A; ECSP22063122A; AR121292A1; US20230270850A1; CA3166256A1; CN115103687A; CL2022002167A1; KR20220140901A; US20230123584A1; BR112022015313A2; MX2022009964A; PE20230493A1

Abstract

本發明尤其提供一種醫藥組合物，其包括脂質奈米粒子佐劑及抗人類乳突狀瘤病毒(HPV)，該HPV包含至少一種類型之人類乳突狀瘤病毒(HPV)的HPV病毒樣粒子(VLP)，該HPV係選自由HPV類型：6、11、16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、55、56、58、59、66、68、73及82組成之群。

Description

HPV疫苗

本發明大體上係關於人類乳突狀瘤病毒(HPV)感染之預防。更特定而言，本發明係關於以單劑量疫苗形式投與之醫藥組合物及調配物，其包括HPV之病毒樣粒子(VLP)及脂質奈米粒子(LNP)佐劑。此外，本發明提供包括脂質奈米粒子及人類乳突狀瘤病毒(HPV)疫苗之單劑量疫苗組合物，其中相較於多次投與在無LNP佐劑之情況下調配的相同HPV疫苗(或在無LNP佐劑之情況下投與的相同HPV疫苗)，單次投與該疫苗組合物提供類似或增強之免疫反應。本發明進一步提供使用所揭示之組合物及調配物的方法。

人類乳突狀瘤病毒(HPV)係感染男性及女性之皮膚及內部鱗狀黏膜上皮之小型雙股DNA病毒。HPV之分類係基於其致癌特性。HPV包括主要(L1)及次要(L2)衣殼蛋白。已鑑認超過200種獨特的HPV基因型(Li等人,「Rational design of a triple-type human papillomavirus vaccine by compromising viral-type specificity」,Nature, 9:5360 (2018))，其中許多種類已與良性增生性疣至惡性子宮頸癌瘤範圍內的病變相關(綜述參見McMurray等人, Int. J. Exp. Pathol. 82(1): 15-33 (2001))。標記為「高風險」之彼等基因型包括以下HPV類型：16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、68及59。(Chan等人, 「Human Papillomavirus Infection and Cervical Cancer: Epidemiology, Screening, and Vaccination-Review of Current Perspectives」, Journal of Oncology, 第2019卷, 文章ID 3257939, 第11頁, 2019.)

HPV係宮頸癌中之主要病因媒介物，宮頸癌係女性中最常見的癌症之一，HPV亦係肛門、扁桃體、舌部、外陰、陰道及陰莖之鱗狀細胞癌中之主要病因媒介物。HPV16及HPV18作為高風險HPV類型中最具毒性之類型而為人所熟知，此係因為在全球所有侵襲性宮頸癌中，其係約70%之病因。

乳突狀瘤病毒係編碼早期(E1-E7)及晚期(L1-L2)基因之小型(50-60 mm直徑)非包膜二十面體DNA病毒。L1蛋白係主要衣殼蛋白且具有55-60 kDa之分子量。酵母、昆蟲細胞、哺乳動物細胞或細菌中之L1蛋白的表現或L1與L2蛋白的組合導致病毒樣粒子(VLP)之自組裝(綜述參見Schiller及Roden, in Papillomavirus Reviews: Current Research on Papillomaviruses;Lacey編, 利茲, UK: Leeds Medical Information,第101-12頁(1996))。

VLP之形態與真實病毒粒子相似且能夠在投與至動物或人類時誘發高效價之中和抗體。因為VLP不含潛在致癌病毒基因體,故而其對活病毒在HPV疫苗研發中之用途呈現出安全替代性(綜述參見Schiller及Hidesheim, J Clin. Virol. 19: 67-74 (2000))。因此,已將L1及L2基因鑑定為針對研發用於HPV感染及疾病之預防性及治療性疫苗的免疫學標靶。

已證實基於VLP之疫苗在接種以下之人類患者中有效誘發免疫反應:基於HPV 16及18 VLP之二價疫苗(Harper等人, Lancet 364(9447): 1757-65 (2004));基於HPV 6、11、16及18 VLP之四價疫苗(Villa等人, Vaccine 24: 5571-5583 (2006));及基於HPV 6、11、16、18、31、33、45、52及58 VLP之多價疫苗。根據2或3給藥方案投與三種審批通過之基於VLP的抗HPV疫苗。CERVARIX® (葛蘭素史克生物公司(GlaxoSmithKline Biologics)，里克桑薩爾(Rixensart)，比利時)係抗HPV 16及18之防護性二價疫苗。GARDASIL®及GARDASIL®9(默克公司(Merck & Co., Inc.)，肯尼爾沃斯(Kenilworth)，新澤西州，美國)分別防止兩種及七種其他HPV類型，且預防與HPV相關之其他肛殖疾病，疾病包括疣形成。優於GARDASIL®之GARDASIL®9中之其他五種高風險病毒株使針對約70%至約90%之肛殖惡性腫瘤的防護提高。(Id., M. Nygård等人, 「Evaluation of the long-term anti-human papillomavirus 6 (HPV6), 11, 16, and 18 immune responses generated by the quadrivalent HPV vaccine,」 Clinical and Vaccine Immunology, 第22卷, 第8號, 第943-948頁, 2015.)

儘管正在改良，但全球HPV疫苗接種率仍欠佳。可藉由以下提高全球HPV疫苗接種率之覆蓋度：減少接種疫苗所需之醫療從業者問診次數，加強針對HPV疾病預防之教育，且減輕與接種疫苗相關之社會歧視。據估計，美國及歐洲青少年完成兩次劑量疫苗接種系列之比例係低於50%。因此，需要藉由經由所提供之免疫反應與現存2-3劑HPV疫苗類似之單次投與產生針對HPV之免疫性而提高HPV疫苗接種率。

意外地發現，在與已知含鋁佐劑之多價HPV疫苗的標準多劑量方案相比時，單次注射與HPV疫苗組合之LNP佐劑提供類似或增強之初步抗HPV免疫反應。

本發明提供一種醫藥組合物，其包含至少一種類型之來自人類乳突狀瘤病毒(HPV)的VLP，該HPV係選自由以下HPV類型組成之群：6、11、16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、55、56、58、59、66、68、73及82；脂質奈米粒子(LNP)佐劑；及醫藥學上可接受之載劑。在一個態樣中，本發明亦提供一種醫藥組合物，其包含鋁佐劑及至少一種類型之HPV的VLP，該HPV係選自由以下HPV類型組成之群：6、11、16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、55、56、58、59、66、68、73及82；LNP佐劑；及醫藥學上可接受之載劑。

本發明進一步提供一種醫藥組合物，其包含：(a)至少一種HPV類型之VLP (HPV VLP)，其中至少一種類型之HPV係選自由以下HPV類型組成之群：6、11、16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、55、56、58、59、66、68、73及82；及(b)約1 μg至約200 mg之LNP佐劑，其中HPV VLP包含至少一種HPV之重組L1或重組L1 + L2蛋白；其中至少一種HPV類型中之任一者的VLP係以每0.5 mL醫藥組合物約1 μg至約100 μg之濃度存在；其中總VLP濃度係在每0.5 mL醫藥組合物1 μg與2000 μg之間。

本發明進一步提供一種醫藥組合物，其包含：(a)至少一種HPV類型之HPV VLP，其中至少一種類型之HPV係選自由以下HPV類型組成之群：6、11、16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、55、56、58、59、66、68、73及82；(b)約100 μg至約900 μg之鋁佐劑；及(c)約1 μg至約200 mg之脂質奈米粒子(LNP)佐劑，其中HPV VLP包含至少一種HPV之重組L1或重組L1 + L2蛋白；其中至少一種HPV類型中之任一者的VLP係以每0.5 mL醫藥組合物約1 μg至約100 μg之濃度存在；其中總VLP濃度係在每0.5 mL醫藥組合物1 μg與2000 μg之間；且其中HPV VLP係吸附於鋁佐劑上。

本發明進一步提供一種單劑量疫苗組合物，其包括(a)脂質奈米粒子(LNP)佐劑，其中LNP佐劑包含一或多種陽離子脂質，其量係約30莫耳%至約65莫耳%；一或多種聚合物-脂質結合物，其量係約0.5莫耳%至約4.0莫耳%；一或多種磷脂，其量係約5莫耳%至約30莫耳%；膽固醇，其量係約 10mol%至約40莫耳%；(b) HPV疫苗組合物，其包含至少一種類型之HPV的VLP，該HPV係選自由以下HPV類型組成之群：6、11、16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、55、56、58、59、66、68、73及82，或至少一種類型之HPV的HPV VLP，該HPV係選自由以下HPV類型組成之群：6、11、16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、55、56、58、59、66、68、73及82，其中相對於在無LNP佐劑之情況下調配或投與之多劑量之相同組合物，單劑量疫苗組合物提供提高或類似的抗HPV免疫反應。

本發明亦提供一種在人類患者中誘發針對HPV之免疫反應的方法，其包含向患者投與一種醫藥組合物，其包含至少一種類型之HPV的HPV VLP，該HPV係選自由以下HPV類型組成之群：6、11、16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、55、56、58、59、66、68、73及82；LNP佐劑；醫藥學上可接受之載劑；及視情況選用之鋁佐劑。

本發明亦提供一種在人類患者中誘發針對HPV之免疫反應的方法，其包含向患者投與包含以下之醫藥組合物：(a)至少一種HPV類型之HPV VLP，其中至少一種人類乳突狀瘤病毒(HPV)類型係選自由以下HPV類型組成之群：6、11、16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、55、56、58、59、66、68、73及82；(b)視情況選用之約100 μg至約900 μg之鋁佐劑；及(c)約1 μg至約200 mg之脂質奈米粒子(LNP)佐劑，其中HPV VLP包含至少一種HPV類型之重組L1或重組L1 + L2蛋白；其中至少一種HPV類型中之任一者的HPV VLP係以每0.5 mL醫藥組合物約1 μg至約100 μg之濃度存在；其中總VLP濃度係在每0.5 mL醫藥組合物1 μg與2000 μg之間；且其中當存在鋁佐劑時，HPV VLP係吸附於鋁佐劑上。

本發明亦提供一種在人類患者中誘發針對HPV之免疫反應的方法，其包含向患者投與包括以下之單劑量疫苗組合物：(a) LNP佐劑，其中LNP佐劑包含一或多種陽離子脂質，其量係約30莫耳%至約65莫耳%；一或多種聚合物-脂質結合物，其量係約0.5莫耳%至約4.0莫耳%；一或多種磷脂，其量係約5莫耳%至約30mol%；膽固醇，其量係約10莫耳%至約40莫耳%；(b) (i) HPV疫苗組合物，其包含至少一種類型之HPV的HPV VLP，該HPV係選自由以下HPV類型組成之群：6、11、16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、55、56、58、59、66、68、73及82，或(ii)至少一種類型之人類乳突狀瘤病毒(HPV)的HPV VLP，該HPV係選自由以下HPV類型組成之群：6、11、16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、55、56、58、59、66、68、73及82，其中相對於在無LNP佐劑之情況下調配或投與之多劑量之相同組合物，單劑量疫苗組合物提供提高或類似的抗HPV免疫反應。

本發明亦提供一種在人類患者中誘發針對HPV之免疫反應的方法，其包含向患者投與(a)一種醫藥組合物，其包含至少一種類型之HPV的HPV VLP，該HPV係選自由以下HPV類型組成之群：6、11、16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、55、56、58、59、66、68、73及82，及(b) LNP佐劑。

本發明亦提供一種防止人類患者經HPV感染之方法，其包含向患者投與一種醫藥組合物，其包含至少一種類型之人類乳突狀瘤病毒(HPV)的HPV VLP，該HPV係選自由以下HPV類型組成之群：6、11、16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、55、56、58、59、66、68、73及82，及LNP佐劑；醫藥學上可接受之載劑；及視情況選用之鋁佐劑。

本發明亦提供一種防止人類患者經HPV感染之方法，其包含向患者投與包含以下之醫藥組合物：(a)至少一種HPV類型之HPV VLP，其中至少一種類型之HPV係選自由以下HPV類型組成之群：6、11、16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、55、56、58、59、66、68、73及82；(b)視情況選用之約100 μg至約900 μg之鋁佐劑；及(c)約1 μg至約200 mg之脂質奈米粒子(LNP)佐劑，其中HPV VLP包含至少一種HPV之重組L1或重組L1 + L2蛋白；其中至少一種HPV類型中之任一者的VLP係以每0.5 mL醫藥組合物約1 μg至約100 μg之濃度存在；其中總VLP濃度係在每0.5 mL醫藥組合物1 μg與2000 μg之間；且其中當存在鋁佐劑時，HPV VLP係吸附於鋁佐劑上。

本發明亦提供一種防止人類患者經HPV感染之方法，其包含向患者投與包括以下之單劑量疫苗組合物：(a) LNP佐劑，其中佐劑包含一或多種陽離子脂質，其量係約30莫耳%至約65莫耳%；一或多種聚合物-脂質結合物，其量係約0.5莫耳%至約4.0莫耳%；一或多種磷脂，其量係約5莫耳%至約30莫耳%；膽固醇，其量係約10莫耳%至約40莫耳%；(b) (i) HPV疫苗組合物，其包含至少一種類型之HPV的VLP，該HPV係選自由以下HPV類型組成之群：6、11、16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、55、56、58、59、66、68、73及82，或(ii)至少一種類型之HPV的HPV VLP，該HPV係選自由以下HPV類型組成之群：6、11、16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、55、56、58、59、66、68、73及82，其中相對於在無LNP佐劑之情況下調配或投與之多劑量之相同組合物，單劑量疫苗組合物提供提高或類似的抗HPV免疫反應。

本發明亦提供一種防止人類患者經HPV感染之方法，其包含向患者共同投與(a)一種醫藥組合物，其包含至少一種類型之HPV的HPV VLP，該HPV係選自由以下HPV類型組成之群：6、11、16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、55、56、58、59、66、68、73及82，及(b) LNP佐劑。

本發明亦提供一種投遞醫藥組合物之方法，該醫藥組合物在宿主中誘發針對HPV抗原之中和效價，方法包括：投與包含以下之單劑量疫苗組合物：(a) LNP佐劑，及(b) (i) HPV組合物，其包含至少一種類型之HPV的VLP，該HPV係選自由以下HPV類型組成之群：6、11、16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、55、56、58、59、66、68、73及82，或(ii)至少一種類型之HPV的VLP，該HPV係選自由以下HPV類型組成之群：6、11、16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、55、56、58、59、66、68、73及82，及(c)視情況選用之鋁佐劑，且該醫藥組合物在宿主中誘發抗抗原之中和效價，其中在與無LNP佐劑之情況下調配或投與之多劑量之相同組合物相比時，單劑量疫苗組合物提供增強或類似的中和效價。

本發明亦提供一種投遞醫藥組合物之方法，該醫藥組合物在宿主中誘發針對HPV抗原之中和效價，方法包括：共同投與(a) LNP佐劑，及(b)包含以下之組合物：至少一種類型之HPV的HPV VLP，該HPV係選自由以下HPV類型組成之群：6、11、16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、55、56、58、59、66、68、73及82，且該醫藥組合物在宿主中誘發針對HPV抗原之中和效價，其中在與無LNP佐劑之情況下投與之多劑量之相同組合物相比時，單次共同投與(a)與(b)提供增強或類似的中和效價。

本發明亦提供一種包含HPV疫苗組合物及LNP佐劑之套組。

定義除非上下文另外明確指示，否則如本說明書通篇及所附申請專利範圍中所使用，單數形式「一(a/an)」及「該」包括複數個指示物。

如本說明書通篇及所附申請專利範圍所使用，以下定義及縮寫均適用：

約：如本文所使用，當在本文中關於數值使用時，術語「約」係指與提及值相同或在上下文中與提及值相似的值。一般而言，在熟悉上下文之情況下，熟習此項技術者應瞭解由該上下文中之「約」所涵蓋的絕對量及/或相對差異度。舉例而言，在一些實施例中，術語「約」可涵蓋25%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或小於提及值之數值內的一系列值。

佐劑：如本文所使用，術語「佐劑」係指能夠增強抗相關抗原之免疫反應的組合物或化合物。佐劑係與疫苗抗原結合使用之物質或物質之組合，其用於增強(例如，提高、促進、延長及/或可能靶向)針對疫苗抗原之特定免疫反應或將免疫反應調節為不同類型(例如，將Th1免疫反應轉換為Th2反應，或將體液反應轉換為細胞毒性T細胞反應)以增強疫苗之臨床效力。在一些實施例中，佐劑可改變(Th1/Th2)免疫反應。在一些實施例中，佐劑可提昇免疫反應之強度及耐久性。在一些實施例中，佐劑可擴展針對同時投與之抗原的免疫反應。在一些實施例中，佐劑能夠誘發強力抗體及T細胞反應。在一些實施例中，佐劑可用於減小刺激所需免疫反應所必需之抗原的量且提供針對疾病之防護。在一些實施例中，佐劑可用於減少臨床方案中所需注射之次數以誘發持久免疫反應且提供針對疾病之防護。含有本文所描述之調配物的佐劑可促進例如次單位疫苗抗原之疫苗抗原的體液及/或細胞免疫原性。本發明之佐劑不用於投遞抗原、抗體API或VLP。

投與：如本文所使用，術語「投與」係指向個體提供活性劑、組合物或調配物之行為。針對人體之例示性投與途徑可經由眼部(經眼)、口部(經口)、皮膚(經皮)、鼻子(經鼻)、肺部(吸入劑)、直腸、陰道、口腔黏膜(經頰)、耳部、藉由注射(例如，經靜脈內(IV)、皮下、瘤內、腹膜內、肌內(IM)、皮內(ID)等)及類似者實現。

試劑：如本文所使用，術語「試劑」係指粒子、化合物分子或任何化學類別之實體物，其包括(例如)VLP、小分子、多肽(例如，蛋白)、多核苷酸(例如，DNA多核苷酸或RNA多核苷酸)、醣、脂質或其組合或錯合物。在一些實施例中，術語「試劑」可指包括聚合物或複數種聚合物之化合物、分子或實體物。

抗體：如本文所使用，術語「抗體」 (或「Ab」)係指呈現所需生物活性之抗體的任何形式。因此，其以最廣泛意義使用且特定涵蓋(但不限於)單株抗體(包括全長單株抗體)、多株抗體、多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)、人類化、全人類抗體及嵌合抗體。

抗原：如本文所使用，術語「抗原係指」可產生一或多種免疫反應之任何抗原。抗原可為蛋白(包括重組蛋白)、VLP、多肽或肽(包括合成肽)。在某些實施例中，抗原係脂質或碳水化合物(多醣)。在某些實施例中，抗原係蛋白提取物、細胞(包括腫瘤細胞)或組織。抗原可為產生體液及/或CTL免疫反應之物質。

API ：如本文所使用，術語「API」係指例如HPV VLP之活性醫藥成分，其係具有生物活性(例如，能夠誘發恰當免疫反應)且賦予有需要之人類或動物治療效益或預防效益之本文所揭示之組合物或調配物的組分。如本文所使用，API係疫苗活性成份。

陽離子脂質 ：如本文所使用，術語「陽離子脂質」係指在諸如生理pH之所選pH下攜帶淨正電荷之脂質物質。熟習此項技術者應瞭解陽離子脂質可包括(但不限於)美國專利申請公開案第US 2008/0085870號、第US 2008/0057080號、第US 2009/0263407號、第US 2009/0285881號、第US 2010/0055168號、第US 2010/0055169號、第US 2010/0063135號、第US 2010/0076055號、第US 2010/0099738號、第US 2010/0104629號、第US 2013/0017239號及第US 2016/0361411號、國際專利申請公開案第WO2011/022460 A1號；第WO2012/040184號、第WO2011/076807號、第WO2010/021865號、第WO 2009/132131號、第WO2010/042877號、第WO2010/146740號、第WO2010/105209號及美國專利第5,208,036號、第5,264,618號、第5,279,833號、第5,283,185號、第6,890,557號及第9,669,097號中。

共同投與 ：如本文所使用，術語「共同投與(co-administration或co-administering)」係指同時(亦即，在時間上同步)或依次(亦即，投與HPV疫苗，接著投與LNP佐劑(或反之亦然))投與LNP佐劑及醫藥調配物(例如，HPV疫苗)。亦即，在投與HPV疫苗(或LNP佐劑)後，可實質上立即在HPV疫苗(或LNP佐劑)後投與LNP佐劑(或HPV疫苗)，或可在投與HPV疫苗(或LNP佐劑)後的有效時間段後投與LNP佐劑(或HPV疫苗)；有效時間段係通常在1、2、3、5、10、15、20、25、30、45或60分鐘內的時間段之量。

劑量：如本文所使用，術語「劑量」意謂在具體時間服用或建議服用之試劑、API、調配物或醫藥組合物之量。

調配物 ：如本文所使用，術語「調配物」係指含有活性醫藥或生物成份以及一或多種其他組分之組合物。術語「調配物」可與「醫藥組合物」互換使用。調配物可為液體或固體(例如，凍乾形式)。可視需要包含之其他組分包括醫藥學上可接受之賦形劑、添加劑、稀釋劑、緩衝劑、糖、胺基酸胺基酸螯合劑、界面活性劑、多元醇、膨化劑、穩定劑、凍乾保護劑、增溶劑、乳化劑、鹽、佐劑、張力增強劑、投遞媒劑及抗微生物防腐劑。調配物在所用劑量及濃度下對接受者而言無毒。在一些實施例中，調配物係指可以任何適於注射之體積所包括之單劑量疫苗。

HPV 及 PV ：如本文所使用，術語「HPV」及「PV」分別係指人類乳突狀瘤病毒及乳突狀瘤病毒。

脂質：如本文所使用，術語「脂質」係指一群有機化合物中之任一者，其係脂肪酸之酯且特徵在於不溶於水或具有較低水溶性但可溶解於許多有機溶劑中。脂質可劃分為至少三個類別：(1) 「簡單脂質」，其包括例如脂肪及油以及蠟；(2) 「化合物脂質」，其包括例如磷脂及醣脂；及(3) 「衍生脂質」，其包括例如類固醇。

脂質奈米粒子 ：如本文所使用，術語「脂質奈米粒子」 (或「LNP」)係指一種脂質組合物，其形成具有10與1000奈米之間的長度或寬度量測值(例如，最大長度或寬度量測值)的粒子。在一些實施例中，當LNP用作疫苗之組分時，其可用作佐劑以提高或增強抗相關抗原之免疫反應。在一些實施例中，脂質奈米粒子可用作佐劑或與非LNP佐劑組合使用。

MAA ：如本文所使用，術語「MAA」 (或默克公司鋁佐劑(Merck aluminum adjuvant))係指非晶形硫酸羥基磷酸鋁佐劑(「AAHS」)。術語「MAA」在本文中可與術語「AAHS」互換使用。

多劑量 ：如本文所使用，術語「多劑量」係指在臨床方案中需要多於一劑或多於一次投與或注射其中之組分以誘發持久免疫反應且提供疾病防護之疫苗組合物或醫藥組合物。熟習此項技術者應瞭解如何測定持久免疫反應，例如在特定時間段內藉由量測抗體效價進行測定。

中性脂質 ：如本文所使用，術語「中性脂質」係指在所選pH下以不帶電或中性兩性離子形式存在之脂質物質。在生理pH下，此類脂質包括例如二醯基磷脂醯膽鹼、二醯基磷脂醯乙醇胺、腦醯胺、鞘磷脂、腦磷脂、膽固醇、腦苷脂及二醯基甘油。

患者：如本文所使用，術語「患者」係指待接收本文所描述之HPV疫苗或醫藥組合物的任何人類。如本文所定義，「患者」包括已感染HPV之彼等患者以及將避免其感染HPV之彼等患者。

醫藥學上可接受 ：如本文所使用，就醫藥組合物之載劑、稀釋劑或賦形劑而言，術語「醫藥學上可接受」表示載劑、稀釋劑或賦形劑必須與組合物之其他成分相容且對其接受者無毒。

醫藥組合物 ：如本文所使用，術語「醫藥組合物」係指活性劑連同一或多種醫藥學上可接受之載劑一起調配之組合物。在一些實施例中，活性劑以適合於投與之單位給藥量存在於治療方案中，該治療方案在向相關人群投與時顯示統計學上顯著之達成預定療效之概率。在一些實施例中，活性劑以適合於投與之單位給藥量存在於治療方案中，該治療方案在向相關群體投與時顯示統計學上顯著的達成預定治療作用之概率。在一些實施例中，醫藥組合物可專門調配為用於以固體或液體形式投與，包括適用於以下之彼等醫藥組合物：經口投與，例如頓服藥(水性或非水性溶液或懸浮液)、錠劑(例如靶向頰內、舌下及全身吸收之彼等錠劑)、大丸劑、粉劑、顆粒劑、施用於舌部之糊劑；非經腸投與，例如藉由皮下、肌內、靜脈內或硬膜外注射以例如無菌溶液或懸浮液或緩釋調配物形式投與；局部施用，例如以施用於皮膚、肺部或口腔之乳膏、軟膏或控制釋放貼片或噴霧形式施用；陰道內或直腸內，例如以子宮托、乳膏或泡沫形式投與；舌下；經眼；經皮；或經鼻、經肺及向其他黏膜表面投與。

單劑量 ：如本文所使用，術語「單劑量」係指在臨床方案中僅需要一次投與或注射以誘發持久免疫反應且提供疾病防護之疫苗組合物。熟習此項技術者應瞭解如何測定持久免疫反應，例如在特定時間段內藉由量測抗體效價進行測定。

個體：如本文所使用，術語「個體」係指有機體，通常係哺乳動物(例如，人類，在一些實施例中包括產前人類形式)。在一些實施例中，個體患有相關疾病、病症或病狀。在一些實施例中，個體易患疾病、病症或病狀。在一些實施例中，個體呈現疾病、病症或病狀之一或多種症狀或特徵。在一些實施例中，個體未呈現疾病、病症或病狀之任何症狀或特徵。在一些實施例中，個體係具有一或多個特點之某人，該一或多個特點之特徵在於易患疾病、病症或病狀或具有罹患疾病、病症或病狀之風險。在一些實施例中，個體係患者。在一些實施例中，個體係正投與及/或已投與診斷及/或療法之個體。

治療有效量 ：如本文所使用，術語「治療有效量」係指足以在人類或動物中產生所需療效之活性成份(例如，治療蛋白、疫苗或抗體)的量，例如引發免疫反應、治療、治癒、預防或抑制疾病或其症狀之發展及進程所必需的量及/或減輕症狀或使疾病消退所必需的量。治療有效量可視活性成份之結構及效能及預期投與模式而變化。熟習此項技術者可輕易測定給定抗體或治療蛋白或疫苗抗原之治療有效量。

疫苗：如本文所使用，術語「疫苗」或「免疫性組合物」係指以下物質：其用於刺激抗體之生成且提供抗一種或數種疾病之免疫性，由疾病之病原體、其產物或合成性取代物製備，經處理以在不誘發疾病之情況下用作抗原。疫苗組合物可包括至少一種抗原或HPV VLP於醫藥學上可接受之媒劑中，其適用於誘發宿主中之免疫反應。疫苗組合物係藉由醫藥或獸醫領域中之彼等技術者所已知的劑量及技術投與，投與時考慮諸如年齡、性別、體重、物種及受體動物之病狀及投與途徑之因素。

價：如本文所使用，術語「價」係指分子中存在特定數目之抗原。舉例而言，術語二-價、二價、2價或2-價係指兩種不同抗原。類似地，術語4價或4-價係指四種不同抗原。9價或9-價係指九種不同抗原。

病毒樣粒子 ：如本文所使用，術語「病毒樣粒子」或「VLP」係指形態與真實病毒粒子相似或呈現陣列式抗原且能夠在投與至動物中後誘發較高抗體中和率之試劑。VLP缺少真實病毒粒子之病毒性基因物質因此無感染性。

相關申請之交叉引用

本申請案主張於2020年2月14日申請之U.S.S.N. 62/976,673的權益，其係以全文引用之方式併入本文中。

當前，存在多種經批准之HPV疫苗，其係由經改造之病毒樣粒子(VLP)組成，且當9歲及更年長之個體自然感染之前作為多劑量方案投與時高效保護接種患者避免癌前病變及肛殖癌及生殖器疣。根據本發明，已顯示在與無LNP佐劑之情況下調配或投與之包括靶向HPV類型之VLP的多劑量疫苗組合物相比時，包括至少一種HPV類型(「靶向HPV類型」)之HPV VLP及LNP佐劑的單劑量HPV疫苗組合物能夠針對相同靶向HPV類型提供類似或經增強之抗體效價。本發明之組合物意欲經由單次注射方案產生抗HPV子類型之免疫性，該免疫性係與此類HPV疫苗(包括經批准之二價、四價或九價HPV疫苗)之2-3次注射方案之免疫性類似。

LNP 佐劑本發明之脂質奈米粒子(LNP)佐劑在本文中係用於提昇HPV疫苗之免疫學反應。大體而言，本發明之免疫學組合物的LNP佐劑包括一或多種陽離子脂質、一或多種聚合物-脂質結合物(例如，聚(乙二醇)-脂質(PEG脂質))、一或多種膽固醇及一或多種磷脂。

在一些實施例中，LNP佐劑包括以下文獻中所提及之任何陽離子脂質：美國專利申請公開案第US 2008/0085870號、第US 2008/0057080號、第US 2009/0263407號、第US 2009/0285881號、第US 2010/0055168號、第US 2010/0055169號、第US 2010/0063135號、第US 2010/0076055號、第US 2010/0099738號、第US 2010/0104629號、第US 2013/0017239號及第US 2016/0361411號、國際專利申請公開案第WO2011/022460 A1號；第WO2012/040184號、第WO2011/076807號、第WO2010/021865號、第WO 2009/132131號、第WO2010/042877號、第WO2010/146740號、第WO2010/105209號及美國專利第5,208,036號、第5,264,618號、第5,279,833號、第5,283,185號、第6,890,557號及第9,669,097號中。在一些實施例中，LNP佐劑可包括具有以下由式1說明之結構的陽離子脂質：

式1 其中： R¹ 及R² 各自係甲基； R³ 係H； n係1或2； L₁ 係選自C₈ -C₂₄ 烷基及C₈ -C₂₄ 烯基；且 L₂ 係選自C₄ -C₉ 烷基及C₄ -C₉ 烯基；或其任何醫藥學上可接受之鹽或立體異構體。

在一些實施例中，陽離子脂質係胺基烷基脂質。在一些實施例中，陽離子脂質係不對稱胺基烷基脂質。在一些實施例中，陽離子脂質係(13Z, 16Z) - N, N-二甲基-3-壬基二十二碳13, 16-二烯-1-胺(參見美國專利第9,669,097號)。

在一些實施例中，LNP佐劑包括30-65莫耳%陽離子脂質。在一些實施例中，LNP佐劑包括30-55莫耳%陽離子脂質。在一些實施例中，LNP佐劑包括30-45莫耳%陽離子脂質。在一些實施例中，LNP佐劑包括55-65莫耳%陽離子脂質。在一些實施例中，LNP佐劑包括58莫耳%陽離子脂質。

在一些實施例中，LNP佐劑可包括選自以下之中性脂質：磷脂、二醯基磷脂醯膽鹼、二醯基磷脂醯乙醇胺、腦醯胺、鞘磷脂、腦磷脂、膽固醇、腦苷脂、二醯基甘油及其組合。在一些實施例中，中性脂質可包括磷脂及膽固醇。

在一些實施例中，中性脂質可包括諸如膽固醇之固醇。在一些實施例中，中性脂質包括膽固醇。在一些實施例中，LNP佐劑包括10-40莫耳%膽固醇。在一些實施例中，LNP佐劑包括15-25莫耳%膽固醇。在一些實施例中，LNP佐劑包括10-20莫耳%膽固醇。在一些實施例中，LNP包括20-30莫耳%膽固醇。在一些實施例中，LNP佐劑包括10-15莫耳%膽固醇。在一些實施例中，LNP佐劑包括25-35莫耳%膽固醇。在一些實施例中，LNP佐劑包括30莫耳%膽固醇。

在一些實施例中，LNP佐劑可包括選自以下之磷脂：磷脂、胺脂質及鞘脂。在一些實施例中，LNP可包括選自以下之磷脂：磷脂醯膽鹼、磷脂醯乙醇胺、磷脂醯絲胺酸、磷脂醯肌醇、磷脂酸、棕櫚醯基油醯基磷脂醯膽鹼、溶血磷脂醯膽鹼、溶血磷脂醯乙醇胺、二棕櫚醯基磷脂醯膽鹼、二油醯基磷脂醯膽鹼、二硬脂醯基磷脂醯膽鹼或二亞油醯基磷脂醯膽鹼。在一些實施例中，LNP佐劑可包括選自以下之中性脂質：鞘脂、鞘醣脂家族、二醯基甘油及S-醯氧基酸。在一些實施例中，LNP可包括選自以下之中性脂質：磷脂醯膽鹼(PC)、磷脂醯乙醇胺(PE)及磷脂醯甘油(PG)、磷脂醯絲胺酸(PS)、磷脂醯肌醇(PI)、磷脂酸(磷脂酸鹽) (PA)、二棕櫚醯基磷脂醯膽鹼、單醯基-磷脂醯膽鹼(溶血性PC)、1-棕櫚醯基-2-油醯基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼(POPC)、N-醯基-PE、磷酸肌醇及鞘磷脂。在一些實施例中，LNP可包括選自以下中性脂質：磷脂酸(DMPA、DPPA、DSPA)、磷脂醯膽鹼(DDPC、DLPC、DMPC、DPPC、DSPC、DOPC、POPC、DEPC)、磷脂醯甘油(DMPG、DPPG、DSPG、POPG)、磷脂醯乙醇胺(DMPE、DPPE、DSPE DOPE)及磷脂醯絲胺酸(DOPS)。在一些實施例中，LNP可包括選自以下之中性脂質：脂肪酸，包括C14:0、棕櫚酸(C16:0)、硬脂酸(C18:0)、油酸(C18:1)、亞麻油酸(C18:2)、次亞麻油酸(C18:3)、二十碳四烯酸(C20:4)、C20:0、C22:0及卵磷脂。在一些實施例中，磷脂可包括1,2-二硬脂醯基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼(DSPC)。

在一些實施例中，中性脂質可包括磷脂。在一些實施例中，LNP佐劑包括5-30莫耳%磷脂。在一些實施例中，LNP佐劑包括5-15莫耳%磷脂。在一些實施例中，LNP包括10-20莫耳%磷脂。在一些實施例中，LNP佐劑包括20-30莫耳%磷脂。在一些實施例中，LNP佐劑包括10-15莫耳%磷脂。在一些實施例中，LNP佐劑包括25-30莫耳%磷脂。在一些實施例中，LNP佐劑包括10莫耳%磷脂。

在一些實施例中，聚合物-脂質結合物可包括PEG-脂質。在一些實施例中PEG係經由直接鍵聯與脂質結合(參見例如，下文所描述之cPEG2000-DMG)或經由連接子與脂質結合(參見例如，ePEG2000-DMG)。在一些實施例中，PEG-脂質係與二醯基甘油結合(PEG-DAG)。在一些實施例中，如例如美國專利公開案第2003/0077829號及第2005/008689號中所描述，PEG係與DAG結合。在一實施例中，PEG-DAG結合物係PEG雙十四烷基甘油(c14)結合物。在一些實施例中，PEG-脂質係PEG-二肉豆蔻醯基甘油(PEG-DMG)。

在某些實施例中，例如如Abrams等人, 2010, Molecular Therapy 18(1):171及美國專利申請公開案第US 2006/0240554號及第US 2008/0020058號中所描述，PEG-脂質係PEG結合於二肉豆蔻醯基甘油(PEG-DMG)。

在某些實施例中，PEG-脂質包含具有約500道爾頓至約10,000道爾頓、約75道爾頓至約5,000道爾頓、約1,000道爾頓至約5,000道爾頓、約1,500道爾頓至約3,000道爾頓或約2,000道爾頓之平均分子量的聚乙二醇。在某些實施例中，PEG-脂質包含PEG1500、PEG2000或PEG5000。

在一些實施例中，LNP佐劑可包括選自以下之PEG-脂質： 1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油甲氧基-聚(乙二醇)；具有以下結構之1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油甲氧基-聚(乙二醇)-2000 (cPEG2000-DMG(s))：

； 1,2-二肉豆蔻醯基-rac-甘油甲氧基-聚(乙二醇)；具有以下結構之1,2-二肉豆蔻醯基-rac-甘油甲氧基-聚(乙二醇)-2000 (cPEG2000-DMG)：

； α-[8'-(1,2-二肉豆蔻醯基-3-丙氧基)-甲醯胺-3', 6'-二氧雜辛基]胺甲醯基-ω-甲基-聚(乙二醇)；具有以下結構之α-[8'-(1,2-二肉豆蔻醯基-3-丙氧基)-甲醯胺-3', 6'-二氧雜辛基]胺甲醯基-ω-甲基-聚(乙二醇)-2000 (ePEG2000-DMG)：

；具有以下結構之(R)-α-[8'-(1,2-二肉豆蔻醯基-3-丙氧基)-甲醯胺-3', 6'-二氧雜辛基]胺甲醯基-ω-甲基-聚(乙二醇)-2000：

； 1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)；具有以下結構之1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000]：

； 1,2-二癸醯基-rac-甘油基-3-甲基聚氧基乙烯； 1,2-二(十二醯基)-rac-甘油基-3-甲基聚氧基乙烯；或 1,2-二硬脂醯基-rac-甘油基-3-甲基聚氧基乙烯。

在一些實施例中，LNP佐劑包括0.05-5莫耳%聚合物-脂質結合物。在一些實施例中，LNP佐劑包括1-4莫耳%聚合物-脂質結合物。在一些實施例中，LNP佐劑包括0.5-2 聚合物-脂質結合物。在一些實施例中，LNP佐劑包括1-4莫耳%聚合物-脂質結合物。在一些實施例中，LNP佐劑包括1-3莫耳%聚合物-脂質結合物。在一些實施例中，LNP佐劑包括1-2.5莫耳%聚合物-脂質結合物。在一些實施例中，LNP佐劑包括2莫耳%聚合物-脂質結合物。(在各情況下，其表達為粒子中之脂質的總莫耳%)

在一些實施例中，LNP佐劑包括30-65莫耳%陽離子脂質、10-30莫耳%膽固醇、5-30莫耳%磷脂及0.05-4莫耳% PEG-脂質。在一些實施例中，LNP佐劑包括55-65莫耳%陽離子脂質、25-35莫耳%膽固醇、5-15莫耳%磷脂及1-2.5莫耳% PEG-脂質。在一些實施例中，LNP佐劑包括40-50莫耳%陽離子脂質、15-20莫耳%膽固醇、18-20莫耳%磷脂及1.5-2.5莫耳% PEG-脂質。在一些實施例中，LNP佐劑包括56-59莫耳%陽離子脂質、15-20莫耳%膽固醇、18-20莫耳%磷脂及0.5-1.5莫耳% PEG-脂質。在一些實施例中，LNP佐劑包括56-59莫耳%陽離子脂質、28-32莫耳%膽固醇、8-12莫耳%磷脂及1-3莫耳% PEG-脂質。在一些實施例中，LNP佐劑包括58莫耳%陽離子脂質、30莫耳%膽固醇、10莫耳% PEG-脂質及2莫耳% PEG-脂質。

製造 LNP 佐劑之方法 在一些實施例中，LNP佐劑係例如藉由快速沈澱法形成，該方法需要使用諸如有限體積T-混合器、多入口渦流混合器、微流體混合器裝置或其他之有限體積混合設備使溶解於低碳烷醇溶液(例如，乙醇)中之脂質組分與水溶液微混合。脂質溶液可包括以特定莫耳比存在於乙醇中之一或多種陽離子脂質、一或多種中性脂質(例如，磷脂、DSPC、膽固醇)、一或多種聚合物-脂質結合物(例如，cPEG2000-DMG、cPEG-2000-DMG或ePEG2000-DMG)。

在一些實施例中，視情況將水性溶液及有機溶液加熱至25℃-45℃、較佳30℃-40℃範圍內之溫度，且隨後在有限體積混合器中混合以形成LNP。在使用有限體積T-混合器時，T-混合器可具有0.25至10.0 mm範圍內之內部直徑。在一些實施例中，可使用可程式化注射器泵且以10毫升/分鐘-600升/分鐘之總流速將酒精及水溶液投遞至T-混合器之入口。在一些實施例中，可在有限體積混合器中以1:1至4:1體積比範圍內之比率合併水性溶液及酒精溶液。在一些實施例中，可以1.1:1至4:1、1.2:1至4:1、1.25:1至4:1、1.3:1至4:1、1.5:1至4:1、1.6:1至4:1、1.7:1至4:1、1.8:1至4:1、1.9:1至4:1、2.0:1至4:1、2.5:1至4:1、3.0:1至4:1及3.5:1至4:1範圍內之比率合併水性溶液及酒精溶液。

在一些實施例中，在此混合階段所使用之乙醇體積分數、溶液流速、脂質濃度、混合器配置及內部直徑及混合器管道內部直徑之組合可提供粒度在30與300 nm之間的LNP。可將所得LNP懸浮液稀釋於6-8範圍內之較高pH緩衝液中。

在一些實施例中，亦可經由超過濾法濃縮且過濾LNP以移除酒精。在一些實施例中，亦可移除高pH緩衝液且更換為最終緩衝溶液。在一些實施例中，最終緩衝溶液可選自磷酸鹽緩衝鹽水或任何適於低溫保存之緩衝液系統(例如，含有蔗糖、海藻糖或其組合之緩衝液)。過濾後，可將小瓶裝LNP產物儲存在合適儲存條件下(諸如，2℃至8℃，或若冷凍，則係-80℃至-20℃)或可將其凍乾。

VLP 如上所陳述，本發明之醫藥組合物及調配物包含至少一種HPV VLP類型，諸如HPV 16或18。在本文所揭示之組合物的特定實施例中，疫苗進一步包含至少一種其他HPV類型之VLP。在其他實施例中，至少一種其他HPV係選自由以下組成之群：6、11、16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、55、56、58、59、66、68、73及82。本發明之醫藥組合物包含由HPV之重組L1或重組L1 + L2蛋白組成之HPV VLP。HPV L1或L1 + L2蛋白可藉由以下以重組方式表現：將L1或L1 + L2 DNA分子選殖至含有合適啟動子及其他恰當轉錄調控元素之表現載體中，且轉移至原核或真核宿主細胞中以產生重組蛋白。此類操作之技術係由Sambrook等人 (Molecular Cloning: A Laboratory Manual; Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, 紐約, (1989))充分描述，該文獻係以引用方式併入本文中。當L1蛋白以重組方式表現於宿主細胞中時，VLP可自組裝。

本發明之重組HPV L1蛋白可為任何可在自然界中發現之全長L1蛋白序列或任何能夠自組裝至VLP中之突變型或截短型L1蛋白。在本發明之特定實施例中，本文所描述之醫藥組合物及疫苗包含由重組HPV L1蛋白組成之HPV VLP且不含HPV L蛋白。在某些實施例中，本文所描述之疫苗組合物或醫藥組合物包含由全長重組HPV L1蛋白組成之HPV VLP。可藉由以下測定用於本發明之L1蛋白序列：自一或多種含有所選HPV類型之臨床樣品中分離DNA，對HPV L1 DNA序列進行測序，且使用基因密碼將該DNA序列轉譯為胺基酸序列。許多適用於本發明之例示性L1序列可見於文獻中。參見例如美國專利第5,820,870號；第7,250,170號；第7,276,243號；第7,482,428號；第7,976,848號；第7,498,036號；第7,700,103號；第7,744,892號及第5,437,951號；Kirii等人. (Virology 185(1): 424-427 (1991))。其他適用於本發明之組合物及調配物之L1蛋白包括HPV L1序列之生物活性片段及/或突變體，突變包括(但未必限於)胺基酸取代、刪除、添加、胺基端截斷及羧基端截斷，使得此等突變體提供能夠形成VLP之L1蛋白或蛋白片段。參見例如國際公開案WO 2006/114312及美國專利案第6,599,508號。用於表現重組HPV L1或重組L1 + L2及後續VLP自組裝之合適宿主細胞包括(但不限於)酵母細胞、昆蟲細胞、哺乳動物細胞或細菌。在本發明之例示性實施例中，VLP係在酵母細胞中產生，諸如選自由以下組成之群的酵母：釀酒酵母、多形漢遜酵母 (Hansenula polymorpha) 、甲醇酵母、脆弱克魯維酵母菌 (Kluyvermyces fragili) 、乳酸克魯維酵母菌 (Kluveromyces lactis) 及粟酒裂殖酵母 。在特定實施例中，HPV VLP係在釀酒酵母細胞 中產生。酵母細胞中HPV VLP之表現提供低本高效之優勢且易於適於醱酵槽中之大規模生長。

本發明亦包括包含HPV VLP之突變形式的醫藥組合物，諸如包含HPV L1或L2蛋白之生物活性片段及/或突變體的HPV VLP，突變形式包括(但未必限於)胺基酸取代、刪除、添加、胺基端截斷及羧基端截斷，使得此等突變體為蛋白或蛋白片段提供治療性或預防性用途且將適用於HPV VLP疫苗研發。當投與至人類時，任何此類HPV L1蛋白之突變形式均應能夠形成VLP且能夠引起抗所需HPV類型之免疫反應。

此外，熟習此項技術者將認識到，用於自組裝VLP以包括於本文所揭示之組合物中的L1或L1 + L2蛋白可由全長野生型HPV L1或L2多核苷酸編碼，或可由已知野生型序列之片段或突變體編碼。對mRNA表現型HPV L1或L2蛋白進行編碼之野生型多核苷酸序列係本領域中可用的。任何突變多核苷酸均將編碼至少大體上模擬HPV L1或L2蛋白之藥理學特性的蛋白或蛋白片段，特性包括能夠形成在投與至人類時能夠刺激抗相關HPV類型之免疫反應的VLP。任何此類多核苷酸包括(但未必限於)：核苷酸取代、刪除、添加、胺基端截斷及羧基端截斷。

包括於本發明之調配物及組合物中之各HPV類型的病毒樣粒子之量將取決於所表現之基因產物的免疫原性。一般而言，至少一種HPV類型中之任一者的VLP之治療有效劑量係約1 μg至約100 μg。在一些實施例中，至少一種HPV類型中之任一者的VLP之治療有效劑量較佳係約10 μg至80 μg。在一些實施例中，至少一種HPV類型中之任一者的VLP之治療有效劑量較佳係約20 μg至60 μg。

在一些實施例中，0.5 mL劑量之包括至少一種HPV類型之VLP的組合物或疫苗包括： • 15-40 μg HPV類型6 L1蛋白之VLP， • 20-50 μg HPV類型11 L1蛋白之VLP， • 30-70 μg HPV類型16 L1蛋白之VLP， • 20-50 μg HPV類型18 L1蛋白之VLP， • 10-30 μg HPV類型31 L1蛋白之VLP， • 10-30 μg HPV類型33 L1蛋白之VLP， • 10-30 μg HPV類型45 L1蛋白之VLP， • 10-30 μg HPV類型52 L1蛋白之VLP， • 10-30 μg HPV類型58 L1蛋白之VLP。

在一些實施例中，0.5 mL劑量之包括至少一種HPV類型之VLP的組合物或疫苗包括： • 30 μg HPV類型6 L1蛋白之VLP， • 40 μg HPV類型11 L1蛋白之VLP， • 60 μg HPV類型16 L1蛋白之VLP， • 40 μg HPV類型18 L1蛋白之VLP， • 20 μg HPV類型31 L1蛋白之VLP， • 20 μg HPV類型33 L1蛋白之VLP， • 20 μg HPV類型45 L1蛋白之VLP， • 20 μg HPV類型52 L1蛋白之VLP， • 20 μg HPV類型58 L1蛋白之VLP。

鋁佐劑 本發明之鋁佐劑可呈以下形式：氫氧化鋁(Al(OH)₃ )、磷酸鋁(AlPO₄ )、羥基磷酸鋁、非晶形硫酸羥基磷酸化鋁(AAHS)或所謂「礬」 (KAl(SO₄ )- 12H₂ O) (參見Klein等人, Analysis of aluminum hydroxyphosphate vaccine adjuvants by (27)A1 MAS NMR., J Pharm. Sci. 89(3): 311-21 (2000))。在本文所提供之本發明的例示性實施例中，鋁佐劑係羥基磷酸鋁或AAHS。鋁佐劑中之磷酸鹽與鋁之比率可在0至1.3範圍內。在本發明之此態樣的較佳實施例中，磷酸鹽與鋁之比率係在0.1至0.70範圍內。在尤佳實施例中，磷酸鹽與鋁之比率係在0.2至0.50範圍內。

在本發明之一些實施例中，鋁佐劑係呈AAHS形式 (在本文中可互換地稱為默克公司鋁佐劑(MAA))。MAA在中性pH下攜帶零電荷，而AlOH在中性pH下攜帶淨正電荷且AlPO₄ 通常攜帶淨負電荷。相較於AlOH，MAA針對HPV VLP之結合能力更高。此外，在小鼠中，相較於吸附於AlOH之VLP，吸附於MAA之VLP可誘發更強體液性免疫反應。Caulfield等人, Human Vaccines 3: 139-146 (2007)。在不希望受理論束縛之情況下，鋁佐劑之淨電荷可能影響其與VLP抗原結合之能力，而帶強電荷之佐劑結合抗原之能力不如攜帶中性電荷之佐劑強。因此，較佳地，本發明之醫藥組合物的鋁佐劑在中性pH下具有零點表面電荷。熟習此項技術者應能夠改變緩衝液、鹽濃度及/或游離磷酸鹽之百分比以保證中性pH下的零點表面電荷。

熟習此項技術者應能夠確定在提昇針對靶向HPV類型之免疫反應時安全且有效的鋁佐劑之理想劑量。對於鋁安全概況以及包括於FDA授權疫苗中之鋁含量的討論參見Baylor等人, Vaccine 20: S18-S23 (2002)。大體而言，鋁佐劑之有效及安全劑量係在100至900 微克/劑(200至1800 μg/mL濃縮物)範圍內變化，在本發明之調配物及組合物的特定實施例中，每劑疫苗存在200與300 μg之間的鋁佐劑。在本發明之調配物及組合物的替代性實施例中，每劑疫苗存在300與500 μg之間的鋁佐劑。

基於 HPV VLP 之疫苗 任何基於HPV VLP之疫苗均適用於本發明之醫藥組合物及方法。已知HPV VLP疫苗可經改質以同時包括鋁佐劑及LNP佐劑。可根據本文所描述之本發明研發新疫苗，其包含：至少一種HPV類型，其視情況呈吸附於鋁佐劑上的HPV VLP形式；以及LNP佐劑。此外，可根據本文所描述之本發明研發新疫苗，其包含：至少一種HPV類型，其呈吸附於鋁佐劑上的HPV VLP形式；以及LNP佐劑。

一種例示性HPV疫苗係抗HPV 16及18之防護性二價疫苗，其商業上已知為CERVARIX® (葛蘭素史克生物學公司(GlaxoSmithKline Biologics)，里克桑薩爾(Rixensart)，比利時)。另一例示性HPV VLP疫苗係非感染性重組型四價疫苗，其係由HPV類型6、11、16及18之主要衣殼(L1)蛋白的極純VLP製備，且在本文中以其專用名稱GARDASIL^® 提及(默克公司，肯尼沃斯(Kenilworth)，新澤西州，美國)，參見Bryan, J.T. Vaccine 25(16): 3001-6 (2007)；Shi等人. Clinical Pharmacology and Therapeutics 81(2): 259-64 (2007)。另一例示性HPV VLP疫苗係預防HPV所出售之九價疫苗(其包括HPV類型6、11、16、18、31、33、45、52及58之衣殼(L1)蛋白)，其在本文中以其專用名稱GARDASIL^® 9提及(默克公司，肯尼沃斯，新澤西州，美國)。

除VLP外，各GARDASIL^® 及GARDASIL^® 9疫苗劑量亦可包括鋁佐劑(呈非晶形硫酸羥基磷酸鋁形式)、氯化鈉、L-組胺酸、聚山梨醇酯80、硼酸鈉及注射用水。在一些實施例中，HPV疫苗可包括100-900 μg鋁、1-50 mg氯化鈉、0.05-10 mg L-組胺酸、1-100 μg聚山梨醇酯、1-100 μg硼酸鈉及注射用水。在一些實施例中，HPV疫苗可包括約500 μg鋁、約9.56 mg氯化鈉、約0.78 mg L-組胺酸、約50 μg 聚山梨醇酯80、約35 μg硼酸鈉及注射用水。已知HPV VLP疫苗可經改質以同時包括根據本發明之鋁佐劑及LNP佐劑。

在本發明之一些實施例中，醫藥組合物及調配物包含基於HPV VLP之疫苗或如本文所描述之HPV VLP，該等疫苗係單價、二價、三價及四價、5價、6價、7價、8價或9價。在特定實施例中，醫藥組合物及調配物係9價。在一些實施例中，醫藥組合物包含基於HPV VLP之疫苗或如本文所描述之HPV VLP，其具有多於四種不同類型之HPV VLP。舉例而言，本發明之醫藥組合物及調配物可包括基於HPV VLP之疫苗或如本文所描述之HPV VLP，該等疫苗係8價、9價、10價等。舉例而言，在不包括其他HPV VLP類型之情況下，包含HPV 16及/或HPV 18之VLP的醫藥組合物係包括於本發明之範疇內。相較於包括於GARDASIL^® 或GARDASIL^® 9中之HPV類型，包含不同HPV VLP之多價疫苗亦涵蓋於本文中。

在一些實施例中，HPV類型6及11之VLP係包括於本發明之醫藥組合物、疫苗及方法中。在一些實施例中，包括HPV類型16、31及35之VLP。在一些實施例中，包括HPV類型18、45及59之VLP。在一些實施例中，包括HPV類型26、51及69之VLP。在一些實施例中，包括HPV類型33、52及58之VLP。在一些實施例中，包括HPV類型39、68及70之VLP。在一些實施例中，包括HPV類型53、56及66之VLP。

在一些實施例中，包括HPV類型16及18之VLP。在一些實施例中，包括HPV類型6、11、16及18之VLP。在一些實施例中，包括HPV類型6、11、16、18、31、33、45、52及58之VLP。在一些實施例中，包括HPV類型6、11、16、18、31、33、35、45、52及58之VLP。在一些實施例中，包括HPV類型6、11、16、18、31、33、35、45、52、58及59之VLP。在一些實施例中，包括HPV類型6、11、16、18、26、31、33、35、45、51、52、58、59及69之VLP。在一些實施例中，包括HPV類型6、11、16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、58、59、68、69及70之VLP。在一些實施例中，包括HPV類型6、11、16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、69及70之VLP。

在一些實施例中，醫藥組合物及調配物包含基於HPV VLP之疫苗及/或如下文表I中所列舉之抗原：表 I ：

名稱	抗原	佐劑	供應方
CERVARIX® (2vHPV疫苗)	HPV-16及HPV-18之L1 VLP	氫氧化鋁及MPL	葛蘭素史克生物公司(里克桑薩爾，比利時)
GARDASIL® (4vHPV疫苗)	HPV-6、HPV-11、HPV-16及HPV-18之L1 VLP	AHSS	默沙東公司(Merck Sharp & Dohme Corp.)，肯尼沃斯，新澤西州，美國
GARDASIL® 9 (9vHPV疫苗)	HPV-6、HPV-11、HPV-16、HPV-18、HPV-31、HPV-33、HPV-45、HPV-52及HPV-58之L1 VLP	AHSS	默沙東公司，肯尼沃斯，新澤西州，美國
CECOLIN®	HPV-16及HPV-18之L1 VLP	氫氧化鋁	廈門萬泰(Xiamen Innovax)
GEOCOLIN®	HPV-6及HPV-11之L1 VLP	氫氧化鋁	廈門萬泰
L1衣殼體	HPV-16之L1衣殼體	未知	R. Garcea，科羅拉多-博爾德大學(University of Colorado- Boulder)
RG1-VLP	HPV-16 L1-L2 (17-36) VLP	氫氧化鋁	R. Kirnbauer, NCI, Pathovax LLC
L2-AAV	呈現於AAV VLP上的HPV-16及HPV-31之L2肽	未知	2A製藥(2A Pharma)
L2多聚體	HPV-6、HPV-16、HPV-18、HPV-31及HPV-39之L2 ~11-88的融合蛋白	礬	賽諾菲，博沃(Sanofi, BravoVax)
L2硫化還原蛋白	呈現於硫化還原蛋白上的L2肽	未知	M. Muller, DKFZ
AX03	呈現於噬菌體上的L2肽	未知	Agilvax, NIAID
L1-E7 VLP	HPV-16 L1-E7 VLP	無	Medigene AG
TA-CIN	HPV-16 L2E7E6融合蛋白	無	Cantab Pharmaceuticals, Xenova
TA-GW	HPV-6 L2E7融合蛋白	氫氧化鋁或AS03	Cantab Pharmaceuticals, GSK

單劑量疫苗組合物 在一些實施例中，提供一種單劑量疫苗組合物，其係醫藥組合物(亦即，包括醫藥學上可接受之載劑)且包括LNP佐劑及至少一種HPV類型之HPV VLP粒子。在一些實施例中，提供一種單劑量疫苗組合物，其包括LNP佐劑及至少兩種HPV類型之HPV VLP粒子。在一些實施例中，提供一種單劑量疫苗組合物，其包括LNP佐劑及至少四種HPV類型之HPV VLP粒子。在一些實施例中，提供一種疫苗組合物，其包括LNP佐劑及至少九種HPV類型之HPV VLP粒子。

在一些實施例中，提供一種單劑量疫苗組合物，其包括LNP佐劑及至少一種HPV類型之HPV VLP粒子及鋁佐劑。在一些實施例中，提供一種單劑量疫苗組合物，其包括LNP佐劑及至少兩種HPV類型之HPV VLP粒子及鋁佐劑。在一些實施例中，提供一種單劑量疫苗組合物，其包括LNP佐劑及至少四種HPV類型之HPV VLP粒子及鋁佐劑。在一些實施例中，提供一種疫苗組合物，其包括LNP佐劑及至少九種HPV類型之HPV VLP粒子及鋁佐劑。

在一些實施例中，提供一種單劑量疫苗組合物，其包括約1 µg至約200 mg LNP佐劑、約100 μg至約900 μg鋁佐劑及至少一種HPV類型之HPV VLP粒子，其中若HPV VLP存在於單劑量疫苗組合物中，則其教示內容表示HPV VLP係以每0.5 mL單劑量疫苗組合物約1 μg至約100 μg之濃度存在，且其中總VLP濃度係在每0.5 mL單劑量疫苗組合物約10 μg至約2000 μg之間。

在一些實施例中，提供一種單劑量疫苗組合物，其包括約1 µg至約200 mg LNP佐劑、約1 μg至約2000 μg至少兩種HPV類型之HPV VLP粒子及約100 μg至約900 μg鋁佐劑。在一些實施例中，提供一種單劑量疫苗組合物，其包括LNP佐劑、至少四種HPV類型之HPV VLP粒子及約100 μg至約900 μg鋁佐劑。在一些實施例中，提供一種單劑量疫苗組合物，其包括LNP佐劑、至少九種HPV類型之HPV VLP粒子及約100 μg至約900 μg鋁佐劑。

在一些實施例中，提供一種單劑量疫苗組合物，其包括1 µg至200 mg LNP佐劑及1 μg至約100 μg存在於單劑量疫苗組合物中之各HPV VLP。在一些實施例中，提供一種單劑量疫苗組合物，其包括1 µg至200 mg LNP佐劑及2 μg至約200 μg兩種HPV類型之HPV VLP (亦即，單劑量疫苗係二價VLP HPV疫苗)。在一些實施例中，提供一種單劑量疫苗組合物，其包括1 µg至200 mg LNP佐劑及4 μg至約400 μg四種HPV類型之HPV VLP (亦即，單劑量疫苗係四價VLP HPV疫苗)。在一些實施例中，提供一種單劑量疫苗組合物，其包括1 µg至200 mg LNP佐劑及9 μg至約900 μg九種(9種) HPV類型之HPV VLP (亦即，單劑量疫苗係9-價VLP HPV疫苗)。在一些實施例中，提供一種單劑量疫苗組合物，其包括1 µg至200 mg LNP佐劑及20 μg至約2000 μg二十種(20種)HPV類型之HPV VLP (亦即，單劑量疫苗係20-價VLP HPV疫苗)。

在一些實施例中，提供一種單劑量疫苗組合物，其包括1 µg至200 mg LNP佐劑、1 μg至約100 μg單價VLP HPV及100 μg至約900 μg鋁佐劑。在一些實施例中，提供一種單劑量疫苗組合物，其包括1 µg至200 mg LNP佐劑及每VLP 1 μg至約100 μg二價VLP HPV (亦即，兩種HPV類型之HPV VLP)及100 μg至約900 μg鋁佐劑。在一些實施例中，提供一種單劑量疫苗組合物，其包括1 µg至200 mg LNP佐劑及每VLP 1 μg至約100 μg四價VLP HPV (亦即，四種HPV類型之HPV VLP)及100 μg至約900 μg鋁佐劑。在一些實施例中，提供一種單劑量疫苗組合物，其包括1 µg至200 mg LNP佐劑及每VLP 1 μg至約100 μg 9-價VLP HPV (亦即，9種HPV類型之HPV VLP)及100 μg至約900 μg鋁佐劑。在一些實施例中，提供一種單劑量疫苗組合物，其包括1 µg至200 mg LNP佐劑、每VLP 1 μg至約100 μg 20-價VLP HPV (亦即，20種HPV類型之HPV VLP)及100 μg至約900 μg鋁佐劑。

在一些實施例中，單劑量疫苗組合物包括每VLP 1 μg至約100 μg HPV VLP (HPV類型16及18)及1 µg至200 mg LNP佐劑，該LNP佐劑係由以下組成：(1)陽離子脂質，(2)膽固醇，(3)磷脂、DSPC及(4)聚乙二醇脂質(例如，cPEG2000-DMG、cPEG2000-DMG或ePEG2000-DMG)。在一些實施例中，單劑量疫苗組合物包括每VLP 1 μg至約100 μg HPV VLP (HPV類型6、11、16及18)及1 µg至200 mg LNP佐劑，該LNP佐劑係由以下組成：(1)陽離子脂質，(2)膽固醇，(3)磷脂、DSPC及(4)聚乙二醇脂質(例如，cPEG2000-DMG、cPEG2000-DMG或ePEG2000-DMG)。在一些實施例中，單劑量疫苗組合物包括每VLP 1 μg至約100 μg HPV VLP (HPV類型6、11、16、18、31、33、45、52及58)及1 µg至200 mg LNP佐劑，該LNP佐劑係由以下組成：(1)陽離子脂質，(2)膽固醇，(3)磷脂、DSPC及(4)聚乙二醇脂質(例如，cPEG2000-DMG、cPEG2000-DMG或ePEG2000-DMG)。

在一些實施例中，單劑量疫苗組合物包括每VLP 1 μg至約100 μg HPV VLP (HPV類型16及18)、100 μg至約900 μg鋁佐劑及1 µg至200 mg LNP佐劑，該LNP佐劑係由以下組成：(1)陽離子脂質，(2)膽固醇，(3)磷脂、DSPC及(4)聚乙二醇脂質(例如，cPEG2000-DMG、cPEG2000-DMG或ePEG2000-DMG)。在一些實施例中，單劑量疫苗組合物包括每VLP 1 μg至約100 μg HPV VLP (HPV類型6、11、16及18)、100 μg至約900 μg鋁佐劑及1 µg至200 mg LNP佐劑，該LNP佐劑係由以下組成：(1)陽離子脂質，(2)膽固醇，(3)磷脂、DSPC及(4)聚乙二醇脂質(例如，cPEG2000-DMG、cPEG2000-DMG或ePEG2000-DMG)。在一些實施例中，單劑量疫苗組合物包括每VLP 1 μg至約100 μg HPV VLP (HPV類型6、11、16、18、31、33、45、52及58)、100 μg至約900 μg鋁佐劑及1 µg至200 mg LNP佐劑，該LNP佐劑係由以下組成：(1)陽離子脂質，(2)膽固醇，(3)磷脂、DSPC及(4)聚乙二醇脂質(例如，cPEG2000-DMG、cPEG2000-DMG或ePEG2000-DMG)。

本發明之疫苗包含含有在宿主中誘發中和抗體之生成所需的抗原決定子之VLP。該等疫苗投與時足夠安全且無臨床感染之風險、不具有毒副作用、較穩定、與習知載劑相容且可有效投與。在一些實施例中，本發明之LNP佐劑可與重組性人類乳突狀瘤病毒二價(類型16及18)疫苗組合。在一些實施例中，本發明之LNP佐劑可與CERVARIX^® 組合。在一些實施例中，本發明之LNP佐劑可與重組性人類乳突狀瘤病毒四價(類型6、11、16、18)疫苗組合。在一些實施例中，本發明之LNP佐劑可與GARDASIL^® 組合。在一些實施例中，本發明之LNP佐劑可與重組性人類乳突狀瘤病毒9-價疫苗組合。在一些實施例中，本發明之LNP佐劑可與GARDASIL^® 9組合。

可皮下、局部、經口、經黏膜、經靜脈內或肌內投與本發明之醫藥組合物、調配物及單劑量疫苗。以足以引發保護性反應之量投與醫藥組合物、調配物及疫苗。可藉由例如經口、非經腸、皮下、經黏膜或肌內之各種途徑投與疫苗、醫藥組合物及調配物。投與之劑量可視病患之一般狀況、性別、體重及年齡、投與途徑及疫苗中HPV VLP之類型而變化。用於調配之疫苗、醫藥組合物可呈膠囊、懸浮液、酏劑或溶液形式。其可使用免疫學上可接受之載劑進行調配。

本發明之套組 本發明亦提供包括以下之套組：如上文所描述之單劑量疫苗的醫藥組合物中之任一者及使用說明書。

本發明亦提供包括以下之套組：(a)包含至少一種類型之HPV的HPV VLP之醫藥組合物及(b) LNP佐劑。

在套組之一些實施例中，(a)之醫藥組合物包含含有至少一種類型之人類乳突狀瘤病毒(HPV)的HPV VLP，該HPV係選自由以下HPV類型組成之群：6、11、16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、55、56、58、59、66、68、73及82。在一些實施例中，(a)之醫藥組合物係HPV疫苗。在一些實施例中，HPV疫苗係重組性人類乳突狀瘤病毒二價(類型16及18)疫苗。在一些實施例中，HPV疫苗係CERVARIX^® 。在一些實施例中，HPV疫苗係重組性人類乳突狀瘤病毒四價(類型6、11、16、18)疫苗。在一些實施例中，HPV疫苗係GARDASIL^® 。在一些實施例中，HPV疫苗係重組型乳突狀瘤病毒9-價疫苗。在一些實施例中，HPV疫苗係GARDASIL^® 9。

在套組之一些實施例中，LNP佐劑係上文所描述之LNP佐劑中之任一者。在一些實施例中，套組包括1 µg至200 mg LNP佐劑。在一些實施例中，LNP佐劑係由以下組成：(1)陽離子脂質，(2)膽固醇，(3)磷脂(例如，DSPC)及(4)聚乙二醇脂質(例如，cPEG2000-DMG、cPEG2000-DMG或ePEG2000-DMG)。在一些實施例中，LNP佐劑包括30-65莫耳%陽離子脂質、10-30莫耳%膽固醇、5-30莫耳%磷脂及0.05-4莫耳% PEG-脂質。在一些實施例中，LNP佐劑包括55-65莫耳%陽離子脂質、25-35莫耳%膽固醇、5-15莫耳%磷脂及1-2.5莫耳% PEG-脂質。在一些實施例中，LNP佐劑包括40-50莫耳%陽離子脂質、15-20莫耳%膽固醇、18-20莫耳%磷脂及1.5-2.5莫耳% PEG-脂質。在一些實施例中，LNP佐劑包括56-59莫耳%陽離子脂質、15-20莫耳%膽固醇、18-20莫耳%磷脂及0.5-1.5莫耳% PEG-脂質。在一些實施例中，LNP佐劑包括58莫耳%陽離子脂質、30莫耳%膽固醇、10莫耳% PEG-脂質及2莫耳% PEG-脂質。

在套組之一些實施例中，套組包括標籤或包裝插頁，其包括組分之描述及/或組分在活體內使用中說明書。在一些實施例中，套組包括共同投與(或接種) (a)醫藥組合物或HPV疫苗與(b)LNP佐劑之說明書。在一些實施例中，套組包括混合(a)醫藥組合物或HPV疫苗與(b)LNP佐劑且後續向患者投與(或接種)混合物之說明書。

在實施例1中，提供一種醫藥組合物，其包含至少一種類型之人類乳突狀瘤病毒(HPV)的病毒樣粒子(VLP) (HPV VLP)，該HPV係選自由HPV類型：6、11、16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、55、56、58、59、66、68、73及82組成之群；脂質奈米粒子(LNP)佐劑；及醫藥學上可接受之載劑。

在實施例2中，提供如實施例1之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含至少HPV類型16及18之VLP。

在實施例3中，提供如實施例1至2之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含至少HPV類型6、11、16及18之VLP。

在實施例4中，提供如實施例1至3之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含至少HPV類型31、45、52及58之VLP。

在實施例5中，提供如實施例1至4中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含至少HPV類型6、11、16、18、31、33、45、52及58之VLP。

在實施例6中，提供如實施例1至5中任一項之醫藥組合物，其中該LNP佐劑包含陽離子脂質、磷脂、膽固醇及PEG-脂質。

在實施例7中，提供如實施例1至6中任一項之醫藥組合物，其中該LNP佐劑包含30-65莫耳%陽離子脂質、5-30莫耳%磷脂、10-40%膽固醇及0.5-4莫耳% PEG-脂質。

在實施例8中，提供如實施例1至7中任一項之醫藥組合物，其中該LNP佐劑包含55-65莫耳%陽離子脂質、5-15莫耳%磷脂、25-35% 膽固醇及1-2.5莫耳% PEG-脂質。

在實施例9中，提供如實施例1至8中任一項之醫藥組合物，其中該LNP佐劑包含DSPC、膽固醇、ePEG2000-DMG及(13Z, 16Z) - N, N-二甲基-3-壬基二十二碳-13, 16-二烯-1-胺。

在實施例10中，提供如實施例1至9中任一項之醫藥組合物，其中該LNP佐劑包含5-15莫耳% DSPC、25-35莫耳%膽固醇、1-2.5莫耳% ePEG2000-DMG及55-65莫耳% (13Z, 16Z) - N, N-二甲基-3-壬基二十二碳-13, 16-二烯-1-胺。

在實施例11中，提供如實施例1至10中任一項之醫藥組合物，其進一步包含鋁佐劑。

在實施例12中，提供一種醫藥組合物，其包含： (a)至少一種類型之人類乳突狀瘤病毒(HPV)的病毒樣粒子(VLP) (HPV VLP)，其中該至少一種類型之HPV係選自由以下HPV類型組成之群：6、11、16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、55、56、58、59、66、68、73及82； (b)約100 μg至約900 μg之鋁佐劑；及 (c)約1 μg至約200 mg之脂質奈米粒子(LNP)佐劑，其中該等HPV VLP中之各者包含重組L1或重組L1 + L2蛋白；其中若醫藥組合物中存在HPV VLP，則該等HPV VLP中之各者係以每0.5 mL醫藥組合物約1 μg至約100 μg之濃度存在；其中總VLP濃度係在每0.5 mL醫藥組合物1 μg與2000 μg之間；及其中該等HPV VLP係吸附於該鋁佐劑上。

在實施例13中，提供如實施例12之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含至少HPV類型16及18之HPV VLP。

在實施例14中，提供如實施例12至13之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含至少HPV類型6、11、16及18之HPV VLP。

在實施例15中，提供如實施例12至14之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含至少HPV類型31、45、52及58之HPV VLP。

在實施例16中，提供如實施例12至15之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含至少HPV類型6、11、16、18、31、33、45、52及58之HPV VLP。

在實施例17中，提供如實施例12至16之醫藥組合物，其中該LNP佐劑包含陽離子脂質、磷脂、膽固醇及PEG-脂質。

在實施例18中，提供如實施例12至17之醫藥組合物，其中該LNP佐劑包含30-65莫耳%陽離子脂質、5-30莫耳%磷脂、10-40莫耳%膽固醇及0.5-4莫耳% PEG-脂質。

在實施例19中，提供如實施例12至18之醫藥組合物，其中該LNP佐劑包含DSPC、膽固醇、ePEG2000-DMG及(13Z, 16Z) - N, N-二甲基-3-壬基二十二碳-13, 16-二烯-1-胺。

在實施例20中，提供如實施例12至19之醫藥組合物，其中該LNP佐劑包含5-15莫耳% DSPC、25-35莫耳%膽固醇、1-2.5莫耳% ePEG2000-DMG及55-65莫耳% (13Z, 16Z) - N, N-二甲基-3-壬基二十二碳-13, 16-二烯-1-胺。

在實施例20a中，提供如實施例12至20之醫藥組合物，其中該LNP佐劑包含10莫耳% DSPC、30莫耳%膽固醇、2莫耳%聚合物脂質結合物及58莫耳% (13Z, 16Z) - N, N-二甲基-3-壬基二十二碳-13, 16-二烯-1-胺。

在實施例20b中，提供如實施例12至20之醫藥組合物，其中該LNP佐劑包含10莫耳% DSPC、30莫耳%膽固醇、2莫耳% ePEG2000-DMG及58莫耳% (13Z, 16Z) - N, N-二甲基-3-壬基二十二碳-13, 16-二烯-1-胺。

在實施例20c中，提供如實施例12至20之醫藥組合物，其中該LNP佐劑包含10莫耳% DSPC、30莫耳%膽固醇、2莫耳% cPEG2000-DMG及58莫耳% (13Z, 16Z) - N, N-二甲基-3-壬基二十二碳-13, 16-二烯-1-胺。

在實施例20d中，提供如實施例12至20之醫藥組合物，其中該LNP佐劑包含10莫耳% DSPC、30莫耳%膽固醇、2莫耳% cPEG2000-DMG及58莫耳% (13Z, 16Z) - N, N-二甲基-3-壬基二十二碳-13, 16-二烯-1-胺。

在實施例21中，提供如實施例12至20及20a至20d之醫藥組合物，其中該等HPV VLP包含HPV L1蛋白且不包含HPV L2蛋白。

在實施例22中，提供如實施例12至20及20a至20d之醫藥組合物，其中該等HPV VLP係由HPV L1蛋白組成。

在實施例23中，提供一種單劑量疫苗組合物，其包含：脂質奈米粒子(LNP)佐劑，其中該佐劑包含30-65莫耳%陽離子脂質、5-30莫耳%磷脂、10-40%膽固醇及0.5-4莫耳% PEG-脂質，至少一種類型之人類乳突狀瘤病毒(HPV)的病毒樣粒子(VLP) (HPV VLP)，該HPV係選自由以下HPV類型組成之群：6、11、16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、55、56、58、59、66、68、73及82，其中相對於在無LNP佐劑之情況下調配或投與之多劑量之相同組合物，該單劑量疫苗組合物提供提高或類似的抗HPV免疫反應。

在實施例24中，提供如實施例23之單劑量疫苗組合物，其中該HPV疫苗進一步包含鋁佐劑。

在實施例25中，提供如實施例24之單劑量疫苗組合物，其中該等HPV VLP係吸附於鋁佐劑上。

在實施例26中，提供實施例23至25之單劑量疫苗組合物，其中若單劑量疫苗組合物中存在HPV VLP，則該等HPV VLP中之各者係以每0.5 mL醫藥組合物約10 μg至約100 μg之濃度存在，且其中總HPV VLP濃度係在每0.5 mL醫藥組合物10 μg與2000 μg之間。

在實施例26a中，提供如實施例23至26之單劑量疫苗組合物，其中該單劑量疫苗組合物包含至少HPV類型16及18之HPV VLP。

在實施例26b中，提供如實施例23至26之單劑量疫苗組合物，其中該單劑量疫苗組合物包含至少HPV類型6、11、16及18之HPV VLP。

在實施例26c中，提供如實施例23至26之單劑量疫苗組合物，其中該單劑量疫苗組合物包含至少HPV類型31、45、52及58之HPV VLP。

在實施例26d中，提供如實施例23至26之單劑量疫苗組合物，其中該單劑量疫苗組合物包含至少HPV類型6、11、16、18、31、33、45、52及58之HPV VLP。

在實施例26e中，提供如實施例23至26d之單劑量疫苗組合物，其中該等HPV VLP包含HPV L1蛋白且不包含HPV L2蛋白。

在實施例26f中，提供如實施例23至26d之醫藥組合物，其中該等HPV VLP係由HPV L1蛋白組成。

在實施例27中，提供一種在人類患者中誘發針對人類乳突狀瘤病毒(HPV)之免疫反應的方法，其包含向患者投與如實施例1至22之醫藥組合物或如實施例23至26f之單劑量疫苗組合物。

在實施例28中，提供一種在人類患者中誘發針對人類乳突狀瘤病毒(HPV)之免疫反應的方法，其包含向患者共同投與(a)醫藥組合物，其包含至少一種類型之人類乳突狀瘤病毒(HPV)的病毒樣粒子(VLP) (HPV VLP)，該HPV係選自由以下HPV類型組成之群：6、11、16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、55、56、58、59、66、68、73及82；及(b) LNP佐劑。

在實施例28a中，提供如實施例28之方法，其中該醫藥組合物包含至少HPV類型16及18之HPV VLP。

在實施例28b中，提供如實施例28之方法，其中該醫藥組合物包含至少HPV類型6、11、16及18之HPV VLP。

在實施例28c中，提供如實施例28之方法，其中該醫藥組合物包含至少HPV類型31、45、52及58之HPV VLP。

在實施例28d中，提供如實施例28之方法，其中該醫藥組合物包含至少HPV類型6、11、16、18、31、33、45、52及58之HPV VLP。

在實施例28e中，提供如實施例28及28a至28d之方法，其中包含HPV VLP之該醫藥組合物係HPV疫苗。

在實施例28f中，提供如實施例28e之方法，其中該HPV疫苗係重組性人類乳突狀瘤病毒9-價疫苗。

在實施例28g中，提供如實施例28e及28f之方法，其中該HPV疫苗係GARDASIL^® 9。

在實施例29中，提供一種預防人類患者經人類乳突狀瘤病毒(HPV)感染之方法，其包含向病患投與如實施例1至22之醫藥組合物或如實施例23及26f之單劑量疫苗組合物。

在實施例30中，提供一種預防人類患者經人類乳突狀瘤病毒(HPV)感染之方法，其包含向患者共同投與(a)醫藥組合物，其包含至少一種類型之人類乳突狀瘤病毒(HPV)的病毒樣粒子(VLP)，該HPV係選自由以下HPV類型組成之群：6、11、16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、55、56、58、59、66、68、73及82；及(b) LNP佐劑。

在實施例30a中，提供如實施例30之方法，其中該醫藥組合物包含至少HPV類型16及18之HPV VLP。

在實施例30b中，提供如實施例30之方法，其中該醫藥組合物包含至少HPV類型6、11、16及18之HPV VLP。

在實施例30c中，提供如實施例30之方法，其中該醫藥組合物包含至少HPV類型31、45、52及58之HPV VLP。

在實施例30d中，提供如實施例30之方法，其中該醫藥組合物包含至少HPV類型6、11、16、18、31、33、45、52及58之HPV VLP。

在實施例30e中，提供如實施例30及30a至30d之方法，其中包含HPV VLP之該醫藥組合物係HPV疫苗。

在實施例30f中，提供如實施例30e之方法，其中該HPV疫苗係重組性人類乳突狀瘤病毒9-價疫苗。

在實施例30g中，提供如實施例30e及30f之方法，其中該HPV疫苗係GARDASIL^® 9。

在實施例31中，提供一種套組，其包含(a)人類乳突狀瘤病毒(HPV)疫苗；及(b)LNP佐劑。

在實施例32中，提供如實施例31之套組，其進一步包含向人類患者共同投與HPV疫苗與LNP佐劑之說明書。

在實施例32a中，提供如實施例31之套組，其進一步包含混合HPV疫苗與LNP佐劑且向人類患者投與混合物之說明書。

在實施例33中，提供如實施例31至32a之套組，其中該HPV疫苗包含至少一種類型之人類乳突狀瘤病毒(HPV)的病毒樣粒子(VLP)，該HPV係選自由以下HPV類型組成之群：6、11、16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、55、56、58、59、66、68、73及82。

在實施例33a中，提供如實施例31至33之套組，其中該HPV疫苗係重組性人類乳突狀瘤病毒9-價疫苗。

在實施例33b中，提供如實施例31至33a之套組，其中該HPV疫苗係GARDASIL^® 9。

在實施例34中，提供一種投遞在宿主中誘發抗抗原之中和效價之醫藥組合物的方法，其包含： (a) 投與單劑量疫苗組合物，其包含：脂質奈米粒子(LNP)佐劑，及至少一種類型之人類乳突狀瘤病毒(HPV)的病毒樣粒子(VLP)，該HPV係選自由以下HPV類型組成之群：6、11、16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、55、56、58、59、66、68、73及82，及 (b) 在宿主中誘發抗抗原之中和效價，其中相對於在無LNP佐劑之情況下調配或投與之多劑量之相同組合物，該單劑量疫苗組合物提供增強或類似的中和效價。

在實施例35中，提供如實施例34之方法，其進一步包含鋁佐劑。

在實施例36中，提供一種醫藥組合物，其包含 (a) HPV 類型6、11、16、18、31、33、45、52及58之病毒樣粒子(VLP) (HPV VLP); (b) LNP佐劑； (c) 視情況選用之鋁佐劑；及 (d) 醫藥學上可接受之載劑。

在實施例37中，提供如實施例37之醫藥組合物，其中該等HPV VLP包含30 µg HPV類型6 L1蛋白之HPV VLP、40 µg HPV類型11 L1蛋白之HPV VLP、60 µg HPV類型16 L1蛋白之HPV VLP、40 µg HPV類型18 L1蛋白之HPV VLP、20 µg HPV類型31 L1蛋白之HPV VLP、20 µg HPV類型33 L1蛋白之HPV VLP、20 µg HPV類型45 L1蛋白之HPV VLP、20 µg HPV類型52 L1蛋白之HPV VLP及20 µg HPV類型58 L1蛋白之HPV VLP。

在實施例38中，提供如實施例36至37之醫藥組合物，其中該LNP佐劑包含約1 µg至約200 mg LNP佐劑。

在實施例39中，提供如實施例36至38之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含約100 µg至約900 µg鋁佐劑。

在實施例39a中，提供如實施例39之醫藥組合物，其中該等HPV VLP係吸附於鋁佐劑上。

在實施例40中，提供如實施例36至39之醫藥組合物，其中該LNP佐劑包含陽離子脂質、磷脂、膽固醇及PEG-脂質。

在實施例41中，提供如實施例36至40之醫藥組合物，其中該LNP佐劑包含30-65莫耳%陽離子脂質、5-30莫耳%磷脂、10-40%膽固醇及0.5-4莫耳% PEG-脂質。

在實施例42中，提供如實施例36至41之醫藥組合物，其中該LNP佐劑包含DSPC、膽固醇、ePEG2000-DMG及(13Z, 16Z) - N, N-二甲基-3-壬基二十二碳-13, 16-二烯-1-胺。

在實施例43中，提供如實施例36至42之醫藥組合物，其中該LNP佐劑包含5-15莫耳% DSPC、25-35莫耳%膽固醇、1-2.5莫耳% ePEG2000-DMG及55-65莫耳% (13Z, 16Z) - N, N-二甲基-3-壬基二十二碳-13, 16-二烯-1-胺。

在實施例44中，提供如實施例36至43之醫藥組合物，其中該LNP佐劑包含10莫耳% DSPC、30莫耳%膽固醇、2莫耳% ePEG2000-DMG及58莫耳% (13Z, 16Z) - N, N-二甲基-3-壬基二十二碳-13, 16-二烯-1-胺。

在實施例45中，提供一種在人類患者中誘發針對人類乳突狀瘤病毒(HPV)之免疫反應的方法，其包含向患者投與如實施例36至44之醫藥組合物。

在實施例46中，提供一種預防人類患者經人類乳突狀瘤病毒(HPV)感染之方法，其包含向病患投與如實施例36至44之醫藥組合物。

出於描述及揭示可結合本發明使用之方法及材料的目的，本文提及之所有公開案均以引用之方式併入。不應將本文中之任何內容解釋為承認本發明無權先於憑藉先前發明之此類揭示內容。

已參考附圖描述本發明之較佳實施例，應理解，本發明不限於彼等確切實施例，且各種變化及修改可由熟習此項技術者在不脫離本發明之如所附申請專利範圍中所定義之範疇或精神的情況下於其中實現。

以下實例闡明但不限制本發明。實例

實例 1 ： 製備脂質奈米粒子佐劑 根據以下方法製造包括本發明之LNP佐劑的組合物。首先，將脂質組分(DSPC、膽固醇、ePEG2000-DMG及(13Z, 16Z) - N, N-二甲基-3-壬基二十二碳-13, 16-二烯-1-胺)溶解於乙醇中以形成有機溶液。隨後使脂質/乙醇組合物曝露於快速沈澱法，從而使用有限體積T-混合器設備使脂質/乙醇溶液與pH係約2-6之檸檬酸鈉緩衝鹽溶液之水溶液微混合。以約1:1至4:1體積比範圍內之比率、以10毫升/分鐘至600升/分鐘之總流速在有限體積混合器中合併水性溶液與有機溶液以形成LNP佐劑。用pH為約6-8之檸檬酸鹽緩衝液稀釋所得LNP佐劑。

隨後濃縮LNP佐劑，且經由移除乙醇之超過濾法過濾，且用pH在6-8之間的磷酸鹽緩衝鹽水更換緩衝液。具有切向流過濾形式(tangential flow filtration，「TFF」)之超過濾法使用30-500 KD範圍內、目標100 KD之中空纖維膜標稱分子量截止值。TFF保留滯留物中之LNP，且濾過物或滲透物包含酒精及最終緩衝液廢料。TFF提供1-100 mg/mL之脂質濃度的最初LNP濃度。濃縮後，相對於最終緩衝液(例如，磷酸鹽緩衝鹽水(phosphate buffered saline，「PBS」)透濾LNP佐劑以移除酒精且進行緩衝液更換。隨後經由超過濾濃縮該物質。

隨後在無菌條件下將經濃縮之LNP佐劑無菌過濾至合適容器中。藉由使LNP懸浮液穿過預過濾器(Acropak 500 PES 0.45/0.8 μιη 包膜)及生物負荷減小過濾器(ropak 500 PES 0.2/0.8 μιη包膜)實現無菌過濾。過濾後，在合適條件下儲存小瓶裝LNP佐劑。

實例 2 ： 製備本發明組合物 使包括實例1中所描述之LNP佐劑(下文係「LNP佐劑」)的調配物與一劑9價HPV/鋁佐劑疫苗(下文係「9vHPV疫苗」)組合以製造單劑量疫苗組合物。

實例 3 ： 活體內藥理學 在使用與9vHPV疫苗組合之若干不同佐劑的兔中進行最初免疫原性篩檢後，進行下文所描述之研究以確認以下觀測結果：與LNP佐劑混合之9vHPV疫苗的單劑量疫苗組合物產生與使用2劑9vHPV疫苗後所獲得之彼等免疫反應類似的免疫反應。

實例 4. 兔中單劑量 9vHPV 疫苗 + LNP 佐劑之免疫原性及耐久性 如下文表1中所描述，評估兔非臨床免疫原性模型中9vHPV疫苗與LNP佐劑組合時的免疫原性。在第1組中，經由IM投與單劑量(亦即，在第0週投與一劑) 9vHPV疫苗對四隻紐西蘭白兔進行接種。在第2組中，經由IM投與多劑量(亦即，二劑，在第0週投與一劑且在第4週投與一劑) 9vHPV疫苗對四隻紐西蘭白兔進行接種。在第3組中，用單劑量(亦即，在第0週投與一劑)與LNP佐劑混合之9vHPV疫苗對四隻紐西蘭白兔進行接種。後者係由0.5 mL接種物組成，該接種物係藉由混合9vHPV疫苗與LNP佐劑而製備且在4小時內經由IM投與注射至兔後四頭肌中。表 1 兔中之組別、劑量及給藥時程

組別	兔之數目	接種物	劑量	ROA^a	給藥時程
9vHPV 疫苗^b	LNP 佐劑 ^c
1	4	9vHPV疫苗	一劑^b	NA	IM	第0週
2	4	9vHPV疫苗	NA	IM	第0週、第4週
3	4	9vHPV疫苗 + LNP佐劑	1 mg	IM	第0週
^a 所有劑量均以500 µL投遞至單四頭肌^b 一劑兔9vHPV疫苗係等效於一劑人類9vHPV疫苗之1/20。^c LNP佐劑之劑量係指總脂質劑量 IM =肌內；NA =不適用；ROA =投與途徑

為了分析免疫原性，使用多重分析評估來自個體動物之血清以量測疫苗中針對9種HPV類型之抗體含量。在研究之第4週、第6週、第12週、第24週、第36週及第48週測定HPV VLP抗體濃度。針對HPV VLP 16及HPV VLP 18之代表性效價係顯示於圖1中。第3組(亦即，接受單劑量(亦即，單次接種)與LNP佐劑組合之9vHPV疫苗的動物)產生與第2組(亦即，接受相隔4週注射之多劑量(亦即，二劑)9vHPV疫苗的動物)相似之抗體濃度。與第1組(亦即，僅接受單劑量9vHPV疫苗之動物)的彼等抗體含量相比，第3組(亦即，接受與LNP佐劑混合之9vHPV疫苗的動物)之抗體含量約高10倍。第3組(亦即，接受9vHPV疫苗 + LNP佐劑之彼等動物)的抗體含量在整個研究期間(48週)保持在相似水平。

使用單劑量方案(亦即，僅在第0週投與一劑)或多劑量方案(亦即，在第0週投與一劑且在第4週投與第二劑)之9vHPV疫苗(9vHPV)的劑量對兔(n = 4/組)進行肌內注射，且將其與接受單劑量(亦即，在第0週投與一劑)與1 mg LNP佐劑混合之9vHPV疫苗的組別比較。監測抗所有9種人類乳突狀瘤病毒(HPV)病毒樣粒子(VLP)類型之抗體(Ab)含量持續48週。圖1描繪在第4週、第6週、第12週、第24週、第36週及第48週於血清中所偵測之抗HPV VLP類型16 (圖1A)及18 (圖1B)的抗體濃度(µg/mL)。資料呈現為幾何平均濃度及95%信賴區間(CI)。在第48週針對所有9種VLP類型所觀測之免疫反應係呈現於圖2中。對於所有類型，第3組中之抗HPV VLP抗體含量係與第2組相似或高於第2組。

使用單劑量方案(亦即，在第0週投與一劑)或多劑量方案(亦即，在第0週投與一劑且在第4週投與第二劑)之9vHPV疫苗(9vHPV)對兔(n = 4/組)進行肌內注射，且將其與接受單劑量(亦即，在第0週投與一劑)與1 mg LNP佐劑混合之9vHPV疫苗的組別比較。監測抗所有9種HPV病毒樣粒子(VLP)類型之抗體(Ab)含量持續48週。顯示在第48週於血清中所偵測之抗九種HPV VLP類型的Ab濃度(µg/mL)。資料呈現為幾何平均濃度及95%信賴區間(CI)。

實例 5 ： 恆河猴中單劑量 9vHPV 疫苗 + LNP 佐劑之免疫原性及耐久性 在非人類靈長類非臨床免疫原性模型中評估9vHPV疫苗在與漸增之數量或量的LNP佐劑組合時的免疫原性。組別名稱係描述於表2中。在第1組、第3組、第4組及第5組中，在第0週單獨使用單劑量9vHPV疫苗或使用與1 mg、3 mg或6 mg LNP佐劑組合之9vHPV疫苗對6隻恆河猴進行接種。在第2組中，使用多劑量方案對6隻恆河猴進行接種，其中在第0週向動物提供第一劑量之9vHPV疫苗且在第4週提供第二劑量之9vHPV疫苗。藉由混合9vHPV疫苗與LNP佐劑製備1.0 mL劑量之與1 mg、3 mg或6 mg LNP佐劑組合的9vHPV疫苗，且在調配4小時內將組合物投與至恆河獼猴四頭肌中。表 2 非人類靈長類動物中之組別、劑量及給藥時程

組別	恆河獼猴之數目	接種物	劑量	ROA^a	給藥時程
9vHPV疫苗^b	LNP 佐劑 ^c
1	6	9vHPV疫苗	一劑^b	NA	IM	第0週
2	6	9vHPV疫苗	NA	IM	第0週、第4週
3	6	9vHPV疫苗 + LNP佐劑	1 mg	IM	第0週
4	6	9vHPV疫苗 + LNP佐劑	3 mg	IM	第0週
5	6	9vHPV疫苗 + LNP佐劑	6 mg	IM	第0週
^a 所有劑量均以1 mL投遞至單四頭肌^b 一劑恆河猴9vHPV疫苗係等效於一劑人類9vHPV疫苗之1/20。^c LNP佐劑之劑量係指總脂質劑量 IM =肌內；NA =不適用；ROA =投與途徑

使用一劑(第0週)或二劑(第0週及第4週)9vHPV疫苗(9vHPV)或一劑(第0週)與1 mg、3 mg或6 mg LNP佐劑組合之9vHPV疫苗對恆河猴(n = 6/組)進行肌內注射。監測抗所有9種HPV VLP類型之抗體(Ab)含量持續20週。圖3顯示在第4週、第6週、第8週、第12週及第20週於血清中所偵測之抗HPV VLP類型16 (圖3A)及18 (圖3B)的抗體濃度(µg/mL)。圖4顯示在第20週於血清中所偵測之抗九種HPV VLP類型的抗體濃度(µg/mL)。來自兩個圖示之資料呈現為幾何平均濃度及95%信賴區間(CI)。

為了分析免疫原性，使用多重分析評估來自個體動物之血清以量測疫苗中針對9種HPV類型之抗體含量。在研究之第4週、第6週、第8週、第12週及第20週測定HPV VLP抗體濃度。如圖3及圖4中所顯示，在所有經評估之LNP佐劑劑量下，單次接種與LNP佐劑組合之9vHPV疫苗產生與相隔4週注射之二劑9vHPV疫苗相似的抗體濃度。與LNP佐劑組合之9vHPV疫苗的單劑量方案(亦即，單次接種)產生與相隔4週注射之9vHPV疫苗的多劑量方案(亦即，分別二劑)相似之抗體濃度。直至疫苗接種後20週，單劑量9vHPV疫苗 + LNP 佐劑組中之抗體含量仍保持在相似水平。在接受與LNP佐劑組合之9vHPV疫苗的動物中，針對所有類型之抗HPV VLP抗體含量係與多劑量9vHPV疫苗組相似或高於多劑量9vHPV疫苗組。

實例 6 ： 恆河猴中與較低劑量之 LNP 佐劑組合之單劑量 9vHPV 疫苗的免疫原性 在非人類靈長類非臨床免疫原性模型中評估9vHPV疫苗在與較低量之LNP佐劑(1 mg、0.33 mg及0.11 mg)組合時的免疫原性。組別名稱係描述於下文表3中。在第0週，單獨使用9vHPV疫苗或使用與1 mg、0.33 mg或0.11 mg LNP佐劑組合之9vHPV疫苗對各組進行接種。在第4週，向第2組中之動物提供第二劑9vHPV疫苗。未加打其他組別。藉由混合9vHPV疫苗與LNP佐劑製備1.0 mL劑量，且在4小時內投與至恆河猴四頭肌中。表 3 非人類靈長類動物中之組別、劑量及給藥時程

組別	恆河猴之數目	接種物	劑量	ROA^a	給藥時程
9vHPV 疫苗^b	LNP佐劑 ^c
1	5	9vHPV疫苗	一劑	NA	IM	第0週、第4週
2	5	9vHPV疫苗 + LNP佐劑	1 mg	IM	第0週
3	5	9vHPV疫苗 + LNP佐劑	一劑	0.33 mg	IM	第0週
4	5	9vHPV疫苗 + LNP佐劑	0.11 mg	IM	第0週
所有劑量均以1 mL投遞至單四頭肌一劑恆河猴9vHPV疫苗係等效於一劑人類9vHPV疫苗之1/20。^c LNP佐劑之劑量係指總脂質劑量 IM = 肌內；NA = 不適用；ROA = 投與途徑

為了分析免疫原性，使用多重分析評估來自個體動物之血清以量測9價HPV疫苗針對9種HPV類型之抗體含量。在第4週、第6週及第12週測定HPV VLP抗體濃度。針對HPV VLP 16及HPV VLP 18之代表性效價係顯示於圖5中。在接受單劑量(亦即，單次接種)與LNP佐劑組合之9vHPV疫苗的動物中所量測之抗體含量係取決於所投與之LNP佐劑的數量或劑量。接受與1 mg LNP佐劑組合之9vHPV疫苗的動物具有與接受相隔4週注射之多劑量方案(亦即，二劑9vHPV疫苗)的動物相似之抗體濃度。接受與0.33或0.11 mg劑量之LNP佐劑組合的9vHPV疫苗之動物具有低於接受1 mg LNP佐劑及多劑量方案(亦即，二劑9vHPV疫苗)之組別的抗體濃度。應指出，在接受單劑量與0.11 mg LNP佐劑組合之9vHPV疫苗的動物中所量測之抗體含量係與單獨接受單劑量之9vHPV疫苗(亦即，投與在無LNP佐劑之情況下調配之9vHPV疫苗)的動物相似。

使用二劑(第0週及第4週) 9vHPV疫苗或一劑(第0週)與1 mg、0.33 mg或0.11 mg LNP佐劑組合之9vHPV疫苗對恆河猴(n = 5/組)進行肌內注射。監測抗所有9種人類乳突狀瘤病毒(HPV)病毒樣粒子(VLP)類型之抗體(Ab)含量持續12週。圖5中顯示在第4週、第6週及第12週於血清中所偵測之抗HPV VLP類型16 (圖5A)及18 (圖5B)的抗體濃度(µg/mL)。圖6中顯示在第12週於血清中所偵測之抗九種HPV VLP類型的抗體濃度(µg/mL)。兩個圖示中之資料呈現為幾何平均濃度及95%信賴區間(CI)。

直至疫苗接種後12週，9vHPV疫苗 + LNP佐劑組中之抗體含量仍保持在相似水平。在第12週針對所有9種VLP類型所觀測之免疫反應係呈現於圖6中。在接受單劑量(亦即，單次接種)與LNP佐劑組合之9vHPV疫苗的動物中所量測之抗體含量係取決於所投與之LNP佐劑的劑量或數量。在接受單劑量與1 mg劑量之LNP佐劑組合的9vHPV疫苗之動物中，針對所有類型之抗HPV VLP抗體含量係與多劑量9vHPV疫苗組相似或高於多劑量9vHPV疫苗組。

實例 7 ： 評估使用 LNP 佐劑之單劑量 Gardasil® 9 的安全性及耐受性之 1 期臨床研究 1期研究之目標係分析與LNP佐劑組合之9價HPV疫苗(GARDASIL® 9)的安全性及耐受性，且確定在將LNP佐劑添加至9價HPV疫苗中時，LNP佐劑之劑量上升針對各HPV類型所刺激之抗體反應是否與使用經批准之2-3劑GARDASIL® 9臨床方案所獲得之彼等反應類似。該研究係關於LNP佐劑之單劑量遞增研究，其具有至多四個遞增組，每組具有至多16名健康年輕成年個體。各個體組均將以每組1 ml IM注射形式接受與特定LNP佐劑劑量組合之GARDASIL® 9組分(含有270 µg 9 HPV類型之VLP及500 µg AAHS)。向各組給藥，且隨後確定安全性及耐受性持續至多1週，隨後決定劑量遞增方案。第7月、第12月、第18月及第24月時間點處之HPV類型特異性IgG GMT (幾何平均效價)將用作主要功效指標。

圖1A及圖1B顯示在單次接種9價HPV疫苗以及LNP佐劑後兔中之縱向HPV VLP 16 (圖1A)及HPV VLP 18 (圖1B)抗體含量。圖2顯示在單次接種9價HPV疫苗以及LNP佐劑後於48週量測之兔中的個別HPV VLP抗體含量。圖3A及圖3B顯示在單次接種9價HPV疫苗以及LNP佐劑後恆河猴中之縱向HPV VLP 16 (圖3A)及HPV VLP 18 (圖3B)抗體含量。圖4顯示在單次接種9價HPV疫苗以及LNP佐劑後於20週量測之恆河猴中的個別HPV VLP抗體含量。圖5A及圖5B顯示在單次接種9價HPV疫苗以及LNP佐劑後恆河猴中之縱向HPV VLP 16 (圖5A)及HPV VLP 18 (圖5B)抗體含量。圖6顯示在單次接種9價HPV疫苗以及LNP佐劑後於12週量測之恆河猴中的個別HPV VLP抗體含量。

Claims

一種醫藥組合物，其包含：至少一種類型之人類乳突狀瘤病毒(HPV)的病毒樣粒子(VLP)，該HPV係選自由HPV類型：6、11、16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、55、56、58、59、66、68、73及82組成之群，脂質奈米粒子(LNP)佐劑，及醫藥學上可接受之載劑。
如請求項1之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含至少HPV類型16及18之VLP。
如請求項1之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含至少HPV類型6、11、16及18之VLP。
如請求項1之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含至少HPV類型31、45、52及58之VLP。
如請求項1之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含至少HPV類型6、11、16、18、31、33、45、52及58之VLP。
如請求項1至5中任一項之醫藥組合物，其中該LNP佐劑包含陽離子脂質、磷脂、膽固醇及PEG-脂質。
如請求項1至6中任一項之醫藥組合物，其中該LNP佐劑包含30-65莫耳%陽離子脂質、5-30莫耳%磷脂、10-40莫耳%膽固醇及0.5-4莫耳% PEG-脂質。
如請求項1至7中任一項之醫藥組合物，其中該LNP佐劑包含55-65莫耳%陽離子脂質、5-15莫耳%磷脂、25-35莫耳%膽固醇及1-2.5莫耳% PEG-脂質。
如請求項1至8中任一項之醫藥組合物，其中該LNP佐劑包含DSPC、膽固醇、ePEG2000-DMG及(13Z, 16Z) - N, N-二甲基-3-壬基二十二碳-13, 16-二烯-1-胺。
如請求項1至9中任一項之醫藥組合物，其中該LNP佐劑包含5-15莫耳% DSPC、25-35莫耳%膽固醇、1-2.5莫耳% ePEG2000-DMG及55-65莫耳% (13Z, 16Z) - N, N-二甲基-3-壬基二十二碳-13, 16-二烯-1-胺。
如請求項1至10中任一項之醫藥組合物，其進一步包含鋁佐劑。
一種醫藥組合物，其包含： (a)至少一種類型之人類乳突狀瘤病毒(HPV)的病毒樣粒子(VLP)，其中該至少一種類型之HPV係選自由HPV類型：6、11、16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、55、56、58、59、66、68、73及82組成之群； (b)約100 μg至約900 μg之鋁佐劑；及 (c)約10 μg至約200 mg之脂質奈米粒子(LNP)佐劑，其中該等HPV VLP中之各者包含重組L1或重組L1 + L2蛋白；其中該等HPV VLP中之各者係以每0.5 mL該醫藥組合物約10 μg至約100 μg之濃度存在；其中總HPV VLP濃度係在每0.5 mL該醫藥組合物10 μg與2000 μg之間；及其中該等HPV VLP係吸附於該鋁佐劑上。
如請求項12之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含至少HPV類型16及18之HPV VLP。
如請求項12之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含至少HPV類型6、11、16及18之HPV VLP。
如請求項12之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含至少HPV類型31、45、52及58之HPV VLP。
如請求項12之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含至少HPV類型6、11、16、18、31、33、45、52及58之HPV VLP。
如請求項12至16中任一項之醫藥組合物，其中該LNP佐劑包含陽離子脂質、磷脂、膽固醇及PEG-脂質。
如請求項17之醫藥組合物，其中該LNP佐劑包含30-65莫耳%陽離子脂質、5-30莫耳%磷脂、10-40莫耳%膽固醇及0.5-4莫耳% PEG-脂質。
如請求項18之醫藥組合物，其中該LNP佐劑包含DSPC、膽固醇、ePEG2000-DMG及(13Z, 16Z) - N, N-二甲基-3-壬基二十二碳-13, 16-二烯-1-胺。
如請求項19之醫藥組合物，其中該LNP佐劑包含5-15莫耳% DSPC、25-35莫耳%膽固醇、1-2.5莫耳% ePEG2000-DMG及55-65莫耳% (13Z, 16Z) - N, N-二甲基-3-壬基二十二碳-13, 16-二烯-1-胺。
如請求項1至20中任一項之醫藥組合物，其中該等HPV VLP包含HPV L1蛋白且不包含HPV L2蛋白。
如請求項1至20中任一項之醫藥組合物，其中該等HPV VLP係由HPV L1蛋白組成。
一種單劑量疫苗組合物，其包含：脂質奈米粒子(LNP)佐劑，其中該佐劑包含30-65莫耳%陽離子脂質、5-30莫耳%磷脂、10-40莫耳%膽固醇及0.5-4莫耳% PEG-脂質，至少一種類型之人類乳突狀瘤病毒(HPV)的病毒樣粒子(VLP)，該HPV係選自由HPV類型：6、11、16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、55、56、58、59、66、68、73及82組成之群，其中相對於在無LNP佐劑之情況下調配之多劑量之相同組合物，該單劑量疫苗組合物提供提高或類似的抗HPV免疫反應。
如請求項23之單劑量疫苗組合物，其中該疫苗進一步包含鋁佐劑。
如請求項24之單劑量疫苗組合物，其中該等HPV VLP係吸附於鋁佐劑上。
如請求項23至25中任一項之單劑量疫苗組合物，其中該等HPV VLP中之各者係以每0.5 mL該醫藥組合物約10 μg至約100 μg之濃度存在，且其中總HPV VLP濃度係在每0.5 mL該醫藥組合物10 μg與2000 μg之間。
一種如請求項1至22中任一項之醫藥組合物或如請求項23至26中任一項之單劑量疫苗組合物的用途，其用於製造在人類患者中誘發針對人類乳突狀瘤病毒(HPV)之免疫反應的藥劑。
一種醫藥組合物之用途，其用於製造在人類患者中誘發針對人類乳突狀瘤病毒(HPV)之免疫反應的藥劑，其中該藥劑係與LNP佐劑共同投與，且其中該醫藥組合物包含至少一種類型之人類乳突狀瘤病毒(HPV)的病毒樣粒子(VLP)，該HPV係選自由HPV類型：6、11、16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、55、56、58、59、66、68、73及82組成之群。
一種如請求項1至22中任一項之醫藥組合物或如請求項23至26中任一項之單劑量疫苗組合物的用途，其用於製造預防人類患者經人類乳突狀瘤病毒(HPV)感染之藥劑。
一種醫藥組合物之用途，其用於製造預防人類患者經人類乳突狀瘤病毒(HPV)感染之藥劑，其中該藥劑係與LNP佐劑共同投與，且其中該醫藥組合物包含至少一種類型之人類乳突狀瘤病毒(HPV)的病毒樣粒子(VLP)，該HPV係選自由HPV類型：6、11、16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、55、56、58、59、66、68、73及82組成之群。
一種套組，其包含： (a)人類乳突狀瘤病毒(HPV)疫苗；及 (b) LNP佐劑。
如請求項31之套組，其進一步包含向人類患者投與該HPV疫苗及該LNP佐劑之說明書。
如請求項25及26中任一項之套組，其中該HPV疫苗包含至少一種類型之人類乳突狀瘤病毒(HPV)的病毒樣粒子(VLP)，該HPV係選自由HPV類型：6、11、16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、55、56、58、59、66、68、73及82組成之群。
一種醫藥組合物之用途，其用於製造在宿主中誘發針對HPV抗原之中和效價的藥劑，其中： (a)該醫藥組合物包含：脂質奈米粒子(LNP)佐劑，及至少一種類型之人類乳突狀瘤病毒(HPV)的病毒樣粒子(VLP)，該HPV係選自由HPV類型：6、11、16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、55、56、58、59、66、68、73及82組成之群，及 (b)該藥劑在該宿主中誘發針對該HPV抗原之中和效價，其中當與在無佐劑之情況下調配該抗HPV組合物時的多劑量之相同醫藥組合物相比時，單劑量之該醫藥組合物提供增強或類似的中和效價。
如請求項34之用途，其中該醫藥組合物進一步包含鋁佐劑。