TW202128127A

TW202128127A - 高分子量美容組合物

Info

Publication number: TW202128127A
Application number: TW109142275A
Authority: TW
Inventors: 喬漢奧桑; 莫甘卡爾森
Original assignee: 瑞士商葛德瑪控股公司
Priority date: 2019-12-02
Filing date: 2020-12-01
Publication date: 2021-08-01
Also published as: BR112022010831A2; WO2021111303A1; ZA202206990B; JP2023504528A; CN115335414B; CN115335414A; US11730691B2; US20230346680A1; CA3160575A1; KR20220110786A; AU2020395955A1; AR122343A1; IL293540A; EP4069753A1; MX2022006677A; US20210161796A1

Abstract

本發明描述包含與碳水化合物交聯劑共價交聯之GAG之高分子量葡糖胺聚糖(GAG)水凝膠組合物及製備該等高分子量GAG水凝膠組合物之方法。進一步描述了將該等高分子量葡糖胺聚糖(GAG)水凝膠組合物用於修復或整形手術、美容皮膚學、面部輪廓整形、身體輪廓整形及齒齦豐隆之方法。

Description

高分子量美容組合物

本發明係關於高分子量美容組合物(諸如，含有交聯多醣之水凝膠)之領域，及此類水凝膠在醫療及/或美容應用(諸如，用於皮下或皮內注射之植入物)中之用途，其可用於人類修復或整形手術及美容皮膚學中。更特定言之，本發明係關於水凝膠，其包含交聯高分子量葡糖胺聚糖(GAG)，尤其交聯玻尿酸、軟骨素或硫酸軟骨素。

水凝膠廣泛用於醫藥中，其係藉由使聚合物化學交聯以形成大聚合網狀結構來製備。儘管單體及最低限度聚合之多醣均吸收水至飽和點，但多醣在飽和點溶解，而包含相同多醣之水凝膠(即使交聯)通常可吸收水而不溶解，導致水凝膠溶脹。

所有葡糖胺聚糖(GAG)均為帶負電之長線性雜多醣，其具有吸收大量水之能力。玻尿酸、軟骨素及硫酸軟骨素為用於醫療及美容應用中之熟知的生物相容GAG。最廣泛使用之用於醫療用途之生物相容聚合物中之一者為玻尿酸及其衍生物。經由交聯及其他手段對玻尿酸分子進行改性對於改良活體內玻尿酸之持續時間為必需的，諸如使玻尿酸交聯以形成玻尿酸水凝膠。

由諸如玻尿酸之高分子量GAG製造水凝膠產生適用於多種類型之醫療或美容應用之填充劑；然而，水凝膠在儲存期間或在降解條件(諸如熱滅菌或加速穩定性研究)期間可能會降解或水解。提高水凝膠穩定性之方法包括提高水凝膠中之交聯數目，但提高高分子量GAG之交聯數目可產生在降解條件下穩定但導致水凝膠相分離之水凝膠。此給隨後稀釋水凝膠而不獲得相分離帶來問題。

本發明之目的為克服與由高分子量GAG製備水凝膠相關之問題，該等高分子量GAG展現提高的穩定性且能夠在降解條件(諸如熱滅菌)期間維持水凝膠之完整性，同時維持將水凝膠稀釋至所需GAG濃度的能力，以用於諸如用水凝膠填充注射器之應用。

本發明大體上係關於由交聯高分子量葡糖胺聚糖(GAG)產生水凝膠之方法，該等交聯高分子量葡糖胺聚糖能夠在將以其他方式水解水凝膠或引起水凝膠相分離之條件下維持結構完整性。本發明進一步關於藉由該等方法產生之水凝膠組合物。

在一些態樣中，本發明大體上係關於一種製備包含交聯葡糖胺聚糖(GAG)分子之水凝膠的方法，該方法包含(a)使分子量為至少1.5 MDa之GAG與交聯劑交聯，其中GAG濃度在2%至10% (w/w)之間，且交聯劑與GAG之莫耳比小於或等於2%，以獲得藉由醯胺鍵交聯之葡糖胺聚糖水凝膠。

在一些態樣中，若(a)中之GAG濃度在1%至4.5% (w/w)之間，則交聯劑濃度在每GAG雙醣0.8 mol%至2 mol%之間；且若(a)中之GAG濃度在4.6%至5.9% (w/w)之間，則交聯劑濃度在每GAG雙醣0.5 mol%至0.8 mol%之間；並且若(a)中之GAG濃度在6%至12%之間，則交聯劑濃度在每GAG雙醣0.3 mol%至0.5 mol%之間。

在一些態樣中，(a)中之交聯劑為二親核或多親核官能性交聯劑。在一些態樣中，二親核或多親核官能性交聯劑為脂族或芳族二胺基衍生物、肽或肽序列。在一些態樣中，二親核或多親核官能性交聯劑包含選自由以下組成之群的間隔基團：二醣、三醣、四醣及寡醣。在一些態樣中，二親核或多親核官能性交聯劑為二胺基海藻糖(DATH)。

在一些態樣中，(a)之交聯包含：a1)提供或獲得葡糖胺聚糖(GAG)分子之溶液；a2)用偶合劑活化葡糖胺聚糖分子上之羧基以形成活化葡糖胺聚糖分子；以及a3)使用二親核或多親核官能性交聯劑經由其活化羧基交聯活化葡糖胺聚糖(GAG)分子，以獲得藉由醯胺鍵交聯之葡糖胺聚糖水凝膠。在一些態樣中，a2)中所用之偶合劑為基於三

之偶合劑，諸如4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三

-2-基)-4-氯化甲基嗎福啉鎓(DMTMM)。

在一些態樣中，(a)中之交聯係在5.0-9.0之pH下，較佳在6.0-8.0之pH下進行。在一些態樣中，該等方法進一步包含將由(a)獲得之交聯水凝膠調配至10 mg/mL至30 mg/mL之最終葡糖胺聚糖(GAG)濃度。在一些態樣中，該等方法進一步包含(b)對由(a)獲得之交聯水凝膠進行滅菌。

在一些態樣中，葡糖胺聚糖(GAG)為玻尿酸(HA)。在一些態樣中，(a)中之GAG之分子量為2.0-10 MDa，較佳為2.5-3.5 MDa。在一些態樣中，GAG濃度在3%-5% (w/w)之間。在一些態樣中，交聯劑與GAG之莫耳比在0.9%-1.1%之間。在一些態樣中，GAG為分子量為2.5-3.5 MDa之玻尿酸(HA)且交聯劑為二胺基海藻糖(DATH)，且另外其中HA之濃度在3%-5% (w/w)之間並且DATH與HA之莫耳比在0.9%-1.1%之間。

在一些態樣中，本發明大體上係關於一種由本文所描述之方法中之任一者獲得之水凝膠產品。在一些態樣中，本發明大體上係關於一種包含葡糖胺聚糖(GAG)分子作為可溶脹聚合物之水凝膠產品，其中葡糖胺聚糖分子係藉由醯胺鍵交聯，且其中交聯葡糖胺聚糖分子之表觀分子量(Mwapp)高於1.0 MDa；且其中在24小時之後，該可溶脹聚合物(NormGelC)之熱穩定度高於80%。

在一些態樣中，葡糖胺聚糖分子係經由交聯而共價交聯，該等交聯包含選自由以下組成之群的間隔基團：二醣、三醣、四醣及寡醣。在一些態樣中，間隔基團為海藻糖。在一些態樣中，葡糖胺聚糖(GAG)為玻尿酸(HA)。在一些態樣中，水凝膠產品經滅菌。

根據前述態樣中之任一者或多者，GAG之分子量不小於1.5 MDa，或視情況不小於1.4 MDa、1.3 MDa、1.2 MDa、1.1 MDa、1.0 MDa、0.9 MDa、0.8 MDa或0.7 MDa。

根據上述態樣中之任一者或多者，水凝膠未經歷葡糖胺聚糖之交聯後降解。根據上述態樣中之任一者或多者，水凝膠在交聯後經歷環境降解；然而，水凝膠並未展現低於最終C_final /2值之C_min 值。根據上述態樣中之任一者或多者，水凝膠展現大於水凝膠之最終C_final /2的C_min 值。

在一些態樣中，(a)及(b)自(a)逐步進行至(b)。在一些態樣中，a1)、a2)及a3)自a1)逐步進行至a2)至a3)。在一些態樣中，(a)及(b)並未自(a)逐步進行至(b)。在一些態樣中，a1)、a2)及a3)並未自a1)逐步進行至a2)至a3)。

在一些態樣中，本發明大體上係關於一種美容性治療皮膚之方法，其包含向皮膚投與根據本文所描述之水凝膠組合物中之任一者之水凝膠產品。

以下詳細描述係例示性及說明性的，且意圖提供本發明之進一步解釋。

相關申請案之交叉參考

本申請案主張2019年12月2日申請之美國申請案第62/942,624號之優先權，該申請案以全文引用之方式併入本文中。I. 定義

儘管一般熟習此項技術者咸信以下術語能得到充分地理解，但闡述以下定義以便於解釋本發明所揭示之主題。

術語「一(a/an)」可指彼實體中之一或多者，亦即，可指複數個指示物。因此，術語「一(a/an)」、「一或多個(種)」及「至少一個(種)」在本文中可互換地使用。另外，藉由不定冠詞「一(a/an)」提及「一要素」並不排除存在多於一種要素之可能性，除非上下文明確要求存在一個且僅存在要素中之一者。

在本說明書通篇中提及「一個實施例」、「一實施例」、「一個態樣」或「一態樣」意謂結合實施例描述之特定特點、結構或特徵包括於本發明之至少一個實施例中。因此，片語「在一個實施例中」或「在一實施例中」貫穿本說明書在各處之出現未必皆指同一實施例。此外，可在一或多個實施例中以任何適合的方式組合特定特點、結構或特徵。

如本文所用，術語「約」或「大致」當在一個數字值之前時指示該值加上或減去該值之10%的範圍。

熟習此項技術者應理解，出於任何及所有目的，尤其就提供書面說明而言，本文所揭示之所有範圍亦涵蓋其任何及所有可能的子範圍及子範圍之組合。任何所列範圍均可因充分說明而容易地識別且使得同一範圍可分解為至少相同的兩份、三份、四份、五份、十份等。作為非限制性實例，本文所論述之各範圍可容易地分解為下部三分之一、中間三分之一及上部三分之一等。如熟習此項技術者亦應理解，所有語言，諸如「至多」、「至少」、「大於」、「小於」及其類似者均包括所列舉之數字且指代可隨後如上文所論述分解為子範圍之範圍。最終，如熟習此項技術者將理解，範圍包括各個別成員。因此，舉例而言，具有1-3個單元之群組係指具有1、2或3個單元之群組。類似地，具有1-5個單元之群組係指具有1、2、3、4或5個單元等之群組。

如本文所用，「對照」係出於比較目的而用於實驗中的替代樣品。對照可為「陽性」對照或「陰性」對照。如本文所用，「對照樣品」或「參照樣品」係指充當對照與實驗樣品進行比較之樣品或參照物。舉例而言，實驗樣品包含於小瓶中之化合物A、B及C，且對照可為以與實驗樣品相同之方式處理，但不含化合物A、B或C中之一或多者的相同類型之樣品。

如本文所用，術語「有效量」係指足以達成所期望治療及/或預防作用之量，例如引起一或多個結果得到預防或另一個結果增加之量。

如本文所用，術語「個體(individual)」、「患者」或「個體(subject)」可為個別生物體、脊椎動物、哺乳動物或人類。在一個較佳態樣中，個體(individual)、患者或個體(subject)為人類。

如本文所用，片語「軟組織」係指連接、支撐或包圍身體之其他結構及器官的組織。軟組織包括肌肉、纖維組織及脂肪。

如本文所用，片語「軟組織豐隆」係指軟組織之任何類型之體積豐隆，其包括(但不限於)：面部輪廓整形(例如使面頰、下頜或嘴唇更明顯)、凹陷變形矯正(例如創傷後或HIV相關的脂萎縮)及年齡相關之深層面部褶皺矯正。因此，軟組織豐隆可用於美容目的或用於醫學目的，諸如外傷或退化性疾病之後的彼等軟組織豐隆。軟組織豐隆進一步指真皮填充、身體輪廓整形及齒齦填充。

如本文所用，片語「非動物源」係指不包括動物之來源，但包括諸如酵母、細菌或合成來源。

如本文所用，術語「生物可再吸收的」係指降解事件或生物可再吸收物質可溶解、可吞噬或可僅在一段時間內降解，使得該等物質在一段時間內自身體、器官、組織、位置或細胞清除之事件。該等物質或其降解產品可經代謝、併入其他分子或化合物中、或經排泄。

如本文所用，術語「無菌的」係指某物不含或不存在病原微生物。

如本文所用，術語「滅菌的」係指某物不含活生物體，大體上不含活微生物。

如本文所用，術語「可注射的」係指能夠經由針頭注射本發明之組合物。

如本文所用，術語「MW」或「Mw」係指質量平均分子量。

如本文所用，術語「MW_app 」係指表觀MW，其為水凝膠中之GAG之分子量之模擬值。

如本文所用，術語「SwF」係指鹽水中之溶脹因子分析，其為溶脹至其最大值之1公克凝膠之鹽水體積，通常以mL/g為單位表示)。

如本文所用，「凝膠含量」或「GelC」係指以凝膠形式結合之總HA的比例之百分比，其進一步描述為未通過0.22微米過濾器之樣品中之HA的量。GelC係根據在濾液中所收集之HA的量計算且報導為凝膠樣品中之HA之總量的百分比。

如本文所用，「SwD」係指溶脹度，其為在0.9%鹽水中完全溶脹之凝膠中之凝膠形式GAG之濃度倒數，亦即每公克無水交聯GAG可形成之完全溶脹凝膠之體積或質量。SwD大體上描述產品之最大吸收液體(0.9%鹽水)能力。SwD較佳以g/g、mL/g或無因次數表示。

SwD亦可表示為

如本文所用，「CrR_DATH 」係指使用LC-SEC-MS分析之有效交聯比，更特定言之，其定義為

CrR為1.0指示所有交聯劑均經交聯。

如本文所用，「C_min 」為最小理論GAG濃度，其為在0.9%鹽水中完全溶脹之凝膠中之凝膠形式GAG之濃度，通常以mg/g或mg/mL表示。 C_min ^-1 = SwD

如本文所用，「C_final 」為最終水凝膠產品中之GAG之預期濃度。在一些態樣中，C_final 大於2×C_min 。

本發明技術就描述於本申請案中之特定態樣而言不受限，特定態樣預期為本發明技術之個別態樣之單一說明。如熟習此項技術者將顯而易知，在不背離本發明技術之精神及範疇之情況下可對其作出諸多修改及改變。除本文所列舉之方法及裝置外，熟習此項技術者自前述描述將顯而易知在本發明技術之範疇內之功能上等效之方法及裝置。此類修改及改變意欲屬於本發明技術之範疇內。應理解，本發明技術不限於特定方法、試劑、化合物組合物或生物系統，其理所當然可有所變化。亦應理解，本文所用之術語僅出於描述特定實施例之目的，且並不意欲為限制性的。II. 水凝膠及製備水凝膠之方法

填充劑，諸如真皮填充劑已用於修復、恢復或豐隆由面部、身體及內臟之衰老、損傷或後天性或先天性變形引起的身體硬組織或軟組織輪廓缺陷。填充劑可為用於減少皺紋及/或細紋、恢復喪失之體積、使皮膚保濕、軟化鼻唇溝、對嘴唇進行豐隆及輪廓整形、改善瘢痕(凹陷性、肥厚性及瘤樣瘢痕)、加強弱化之聲帶及提供其他軟組織改善的天然或合成物質。所用物質包括脂肪、石蠟、人膠原蛋白、牛膠原蛋白、聚矽氧、玻尿酸、乳酸及乙醇酸。在1981年，隨著FDA批准使用牛膠原蛋白，軟組織填充劑出現一個新時代。此後，出現了諸多軟組織填充劑。諸多因素，包括生物技術之改進及社會對美容外觀之重視在內，均促進當前及研究用填充劑數量之顯著增加。隨著較新填充劑之引入，不斷需要評估其風險/效益概況且確定其侷限性，以便使患者美容效果及安全性達至最大。常用的填充劑/水凝膠組合物包括GAG，諸如玻尿酸。

產生GAG水凝膠之方法揭示於PCT公開案第WO2017/114867號、第WO2017/114861號、第WO2017/114864號及第WO2017/114865號；美國專利公開案第US20190023812A1號、第US20190016830A1號、第US20190023855A1號及第US20070066816A1；以及美國專利申請案第8,858,999號、第6,831,172號、第8,887,243號及第6,703,444號中。

交聯玻尿酸之常用途徑為使用二縮水甘油醚，例如1,4-丁二醇二縮水甘油醚(BDDE)。作為替代方案，使用二胺或多胺官能性交聯劑以及偶合劑之醯胺偶合為用於製備適用於水凝膠產品之交聯玻尿酸分子之一種有吸引力之途徑。舉例而言，已顯示使用4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三

-2-基)-4-氯化甲基嗎福啉鎓(DMTMM)活化羧酸酯且隨後與二胺基結構(例如二胺基海藻糖(DATH))縮合為產生由交聯玻尿酸構成之水凝膠，而生物聚合物降解很少的高效方法。

在一些態樣中，交聯係經由包含選自由以下組成之群的間隔基團的交聯劑進行：二醣、三醣、四醣及寡醣。此提供完全基於碳水化合物結構或其衍生物之水凝膠產品，其將交聯對用於產生水凝膠之GAG之原生特性之干擾降至最低。

在一些態樣中，交聯劑自身有助於水凝膠之特性之維持或增加，例如當與玻尿酸相關之結構(例如二胺基玻尿酸四醣)交聯時或當與具有高保水特性之結構(例如海藻糖)交聯時。

在一些態樣中，GAG為硫酸化或非硫酸化GAG，諸如玻尿酸、硫酸軟骨素、硫酸乙醯肝素、肝素前體、肝素、硫酸皮膚素及硫酸角質素。在一些態樣中，GAG為玻尿酸、軟骨素或硫酸軟骨素。在一個態樣中，GAG為玻尿酸。在一些態樣中，GAG為原生GAG。在一些態樣中，GAG為天然存在之GAG。在一些態樣中，GAG係以其天然狀態使用(亦即，GAG之化學結構尚未藉由添加官能基或其類似者而改變或改性)。使用呈其原生狀態之GAG為較佳的，因為此將得到更接近於天然分子之交聯結構，其保留GAG自身之原生特性及作用，且可在將交聯GAG引入至身體中時使免疫反應降至最低。

在一些態樣中，GAG係經共價交聯。在一些態樣中，共價交聯之GAG分子係由碳水化合物類型結構或其衍生物組成或基本上由碳水化合物類型結構或其衍生物組成。在一些態樣中，交聯GAG或水凝膠不含或基本上不含合成非碳水化合物結構或連接基團。此可藉由使用呈其原生狀態之GAG以及交聯劑來達成，該交聯劑包含以下、由以下組成或基本上由以下組成：碳水化合物類型結構或其衍生物。在一些態樣中，交聯劑之官能基直接共價鍵結至GAG之羧基。在一些態樣中，共價交聯之GAG之交聯包含以下、由以下組成或基本上由以下組成：二醣、三醣、四醣、及寡醣間隔基團。

在一些態樣中，交聯GAG包含GAG分子鏈之間的交聯，其產生藉由共價交聯結合在一起之GAG分子之連續網狀結構。

在一些態樣中，交聯GAG在液體，通常水性液體條件下形成凝膠或水凝膠，其為水不溶性但實質上稀釋的GAG之交聯系統。

在一些態樣中，製備包含交聯葡糖胺聚糖分子之水凝膠產品的方法包含以下、由以下組成或基本上由以下組成：(a)提供葡糖胺聚糖分子之溶液；(b)用偶合劑活化葡糖胺聚糖分子上之羧基以形成活化葡糖胺聚糖分子；以及(c)經由其活化羧基使用包含選自由以下組成之群的間隔基團的二親核或多親核官能性交聯劑來交聯活化葡糖胺聚糖分子以獲得交聯葡糖胺聚糖分子：二醣、三醣、四醣及寡醣。

在一些態樣中，GAG係藉由共價鍵(諸如醯胺鍵)，通常使用GAG分子主鏈上之羧基之活化劑及包含選自由以下組成之群的間隔基團的二親核或多親核官能性交聯劑來交聯：二醣、三醣、四醣及寡醣。在一些態樣中，GAG之交聯可藉由溫和及高效途徑達成，產生高產率以及最少量的GAG分子降解。

在一些態樣中，二親核或多親核官能性交聯劑含有選自由以下組成之群的間隔基團：二醣、三醣、四醣及寡醣，其保持在GAG分子之間的交聯中。在一些態樣中，二親核或多親核官能性二醣、三醣、四醣及寡醣包含至少兩個連接至其之親核官能基。在一些態樣中，至少兩個親核官能基係由選自由以下組成之群的間隔基團隔開：二醣、三醣、四醣及寡醣。

在一些態樣中，二親核或多親核官能性交聯劑包含兩個或更多個能夠與GAG之官能羧基反應之官能基，引起形成諸如醯胺鍵之共價鍵。在一些態樣中，親核官能基能夠與葡糖胺聚糖分子上之羧基反應以形成醯胺鍵。在一些態樣中，二醣、三醣、四醣及寡醣之親核官能基選自由以下組成之群：一級胺、肼、醯肼、肼甲酸酯、半卡肼、硫半卡肼、硫肼甲酸酯及胺氧基。在一些態樣中，二親核或多親核官能性二醣、三醣、四醣及寡醣可衍生自親核官能性多醣，諸如衍生自甲殼素之殼質雙糖。在一些態樣中，二親核或多親核官能性二醣、三醣、四醣及寡醣亦可為二醣、三醣、四醣及寡醣，其已藉由引入兩個或更多個親核官能基而經改性。

在一些態樣中，二親核或多親核官能性交聯劑包括均雙官能性或異雙官能性一級胺、肼、醯肼、肼甲酸酯、半卡肼、硫半卡肼、硫肼甲酸酯及胺氧基。

在一些態樣中，交聯劑係選自由以下組成之群：二胺基玻尿酸四醣、二胺基玻尿酸六醣、二胺基海藻糖(DATH)、二胺基乳糖、二胺基麥芽糖、二胺基蔗糖、二胺基殼質雙糖、殼質雙糖或二胺基棉子糖。

在一些態樣中，活化步驟及交聯步驟同時進行。在一些態樣中，活化步驟在交聯步驟之前及與交聯步驟分開進行。

在一些態樣中，交聯之後的步驟包含提供交聯GAG分子之粒子，該等粒子之平均大小在0.01 mm-5 mm、較佳0.1 mm-0.8 mm範圍內。

在一些態樣中，粒子大小在20 μm至800 μm之間。在一些態樣中，粒子大小在約100 μm至約500 μm之間。在一些態樣中，該大小可為長度、直徑或寬度。一般而言，其係指直徑。在一些態樣中，粒子大小在20 μm至800 μm之間、在20 μm至700 μm之間、在20 μm至600 μm之間、在20 μm至500 μm之間、在20 μm至400 μm之間、在20 μm至300 μm之間、在20 μm至200 μm之間、在100 μm至800 μm之間、在100 μm至700 μm或在100 μm至300 μm之間。

在一些態樣中，偶合劑為肽偶合劑。在一些態樣中，偶合劑係選自4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三

-2-基)-4-氯化甲基嗎福啉鎓(DMTMM)及2-氯-4,6-二甲氧基-1,3,5-三

(CDMT)。較佳的基於三

之肽偶合劑為DMTMM。其他較佳的肽偶合劑為碳化二亞胺偶合劑，較佳為與N-羥基丁二醯亞胺(NHS)組合之N-(3-二甲基胺丙基)-N'-乙基碳化二亞胺(EDC)。

在一些態樣中，活化GAG分子之交聯係經由其羧基使用交聯劑進行。在一些態樣中，交聯劑為包含選自由以下組成之群的間隔基團的二親核或多親核官能性交聯劑：二醣、三醣、四醣及寡醣。在一些態樣中，交聯劑經由GAG主鏈上之羧基使GAG鏈彼此連接。在一些態樣中，間隔基團可為玻尿酸四醣、玻尿酸六醣、海藻糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖、纖維二糖或棉子糖殘基。在本文中，術語「殘基」意謂化合物之結構分別與專利化合物玻尿酸四醣、玻尿酸六醣、海藻糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖、纖維二糖或棉子糖類似而非相同。殘基之結構可不同於母體化合物之結構，不同之處在於其已具備兩個或更多個親核官能基且視情況經由GAG主鏈上之該等親核官能基羧基共價鍵聯。

根據一相關態樣，本發明亦提供水凝膠產品作為藥劑之用途，諸如用於治療軟組織病症。提供一種治療罹患軟組織病症之患者之方法，其係藉由向該患者投與治療有效量之水凝膠產品。亦提供一種向患者提供矯正性或美容性治療之方法，其係藉由向患者投與治療有效量之水凝膠產品。

在一些態樣中，水凝膠主要含有液體重量且可含有90%-99.9%水，但其由於液體內之三維交聯GAG分子網狀結構而表現得像固體一樣。由於其顯著液體含量，水凝膠在結構上為可撓性的且類似於天然組織，此使得其極其適用作組織工程改造中之骨架及用於組織豐隆。其亦適用於治療軟組織病症及用於矯正性或美容性治療。在一些態樣中，水凝膠係用作可注射調配物。

本文所揭示之方法係將可注射組合物用於修復或整形手術、美容皮膚學、面部輪廓整形、身體輪廓整形及齒齦豐隆之方法。在一些態樣中，組合物係經冷凍乾燥或凍乾。在一些態樣中，組合物包含水凝膠，其包含水溶液。

在一些態樣中，諸如玻尿酸產品之交聯葡糖胺聚糖產品係使用醯胺交聯由高分子量(HMW)葡糖胺聚糖產生。

在一些態樣中，使用DATH/DMTMM化學方法調配利用HMW玻尿酸之交聯玻尿酸產品以產生適合的GAG濃度供使用(C_final 為10 mg/mL-45 mg/mL)。在一些態樣中，GAG為玻尿酸。在一些態樣中，適合的GAG濃度用於皮膚用途、牙科用途、醫療用途或再造手術用途。

在一些態樣中，適合的GAG濃度為10 mg/mL至50 mg/mL、10 mg/mL至45 mg/mL、10 mg/mL至40 mg/mL、10 mg/mL至35 mg/mL、10 mg/mL至30 mg/mL、10 mg/mL至25 mg/mL、10 mg/mL至20 mg/mL、10 mg/mL至15 mg/mL、15 mg/mL至40 mg/mL、15 mg/mL至40 mg/mL、15 mg/mL至35 mg/mL、15 mg/mL至30 mg/mL、15 mg/mL至25 mg/mL、15 mg/mL至20 mg/mL、20 mg/mL至50 mg/mL、20 mg/mL至45 mg/mL、20 mg/mL至40 mg/mL、20 mg/mL至35 mg/mL、20 mg/mL至30 mg/mL、20 mg/mL至25 mg/mL、25 mg/mL至50 mg/mL、25 mg/mL至45 mg/mL、25 mg/mL至40 mg/mL、25 mg/mL至35 mg/mL、25 mg/mL至30 mg/mL、30 mg/mL至50 mg/mL、30 mg/mL至45 mg/mL、30 mg/mL至40 mg/mL、30 mg/mL至35 mg/mL、35 mg/mL至50 mg/mL、35 mg/mL至45 mg/mL、35 mg/mL至40 mg/mL、40 mg/mL至50 mg/mL或40 mg/mL至45 mg/mL。

在一些態樣中，適合的GAG濃度為約10 mg/mL至約50 mg/mL、約10 mg/mL至約45 mg/mL、約10 mg/mL至約40 mg/mL、約10 mg/mL至約35 mg/mL、約10 mg/mL至約30 mg/mL、約10 mg/mL至約25 mg/mL、約10 mg/mL至約20 mg/mL、約10 mg/mL至約15 mg/mL、約15 mg/mL至約40 mg/mL、約15 mg/mL至約40 mg/mL、約15 mg/mL至約35 mg/mL、約15 mg/mL至約30 mg/mL、約15 mg/mL至約25 mg/mL、約15 mg/mL至約20 mg/mL、約20 mg/mL至約50 mg/mL、約20 mg/mL至約45 mg/mL、約20 mg/mL至約40 mg/mL、約20 mg/mL至約35 mg/mL、約20 mg/mL至約30 mg/mL、約20 mg/mL至約25 mg/mL、約25 mg/mL至約50 mg/mL、約25 mg/mL至約45 mg/mL、約25 mg/mL至約40 mg/mL、約25 mg/mL至約35 mg/mL、約25 mg/mL至約30 mg/mL、約30 mg/mL至約50 mg/mL、約30 mg/mL至約45 mg/mL、約30 mg/mL至約40 mg/mL、約30 mg/mL至約35 mg/mL、約35 mg/mL至約50 mg/mL、約35 mg/mL至約45 mg/mL、約35 mg/mL至約40 mg/mL、約40 mg/mL至約50 mg/mL或約40 mg/mL至約45 mg/mL。

在一些態樣中，玻尿酸涵蓋具有各種鏈長及電荷狀態以及各種化學改性(包括交聯)之玻尿酸、玻尿酸鹽或玻糖醛酸之所有變體及變體組合。

在一些態樣中，玻尿酸涵蓋具有各種相對離子之玻尿酸之各種玻尿酸鹽，諸如玻尿酸鈉。在一些態樣中，玻尿酸之各種改性亦由玻尿酸之列舉涵蓋，諸如氧化，例如-CH₂ OH基團氧化為-CHO及/或-COOH；鄰近羥基之過碘酸氧化，其可接著還原，例如-CHO還原為-CH₂ OH或與胺偶合以形成亞胺，接著還原為二級胺；硫酸化；脫醯胺，其可接著用新酸脫胺或醯胺化反應；酯化；交聯；用各種化合物之取代，例如使用交聯劑或碳化二亞胺輔助之偶合；誘發不同分子之偶合，諸如蛋白質、肽及活性藥物組分與玻尿酸偶合；以及脫乙醯化。在一些態樣中，玻尿酸可藉由異脲、醯肼、溴氰、單環氧化物及單碸偶合來進一步改性。

在一些態樣中，玻尿酸可由動物及非動物源之各種來源獲得。在一些態樣中，非動物源之來源包括酵母或細菌。在一些態樣中，單一玻尿酸分子之分子量通常在0.1 mDa至10 mDa範圍內，但其他分子量亦為可能的。

在一些態樣中，本發明係關於包含乙醯基之生物聚合物/水凝膠之至少部分脫乙醯化，其包含：a)提供包含乙醯基之生物聚合物；b)使包含乙醯基之生物聚合物與羥胺或其鹽在100℃或更低之溫度下反應2至200小時以形成至少部分脫乙醯化之生物聚合物，以及c)回收至少部分脫乙醯化之生物聚合物。在一些態樣中，水凝膠係經由本文所描述之方法由HMW GAG製備。

在一些態樣中，本發明係關於一種製備包含交聯GAG之水凝膠產品的方法，該方法包含：a)提供藉由醯胺鍵交聯之GAG，其中交聯GAG包含殘餘胺基，及b)醯化a)中所提供之交聯GAGS之殘餘胺基以形成醯化交聯GAG。在一些態樣中，水凝膠係經由本文所描述之方法由HMW GAG製備。

在一些態樣中，本發明係關於一種製備包含交聯GAG之水凝膠產品的方法，該方法包含：a)提供藉由胺鍵交聯之GAG，其中交聯GAG包含在醯胺交聯期間作為副產物形成之酯交聯；以及b)對交聯GAG進行鹼性處理以水解在醯胺交聯期間作為副產物形成之酯交聯。在一些態樣中，水凝膠係經由本文所描述之方法由HMW GAG製備。

當用使用低DATH負載量之DATH/DMTMM系統由諸如玻尿酸之高分子量(HMW)葡糖胺聚糖產生水凝膠時，最初形成適用於填充劑組合物之凝膠，但水凝膠可能在儲存後或在暴露於降解條件(例如熱滅菌、加速穩定性研究)期間水解。此指示需要較大交聯數目以使凝膠保持完好且保護其免於水解。然而，增加DATH/DMTMM之量以增加凝膠中之交聯數可產生具有高C_min 之凝膠，其在適合的GAG濃度下相分離。換言之，當由具有足夠交聯之HMW GAG產生凝膠以使其在高壓處理期間穩定時，不可能在不獲得相分離之情況下將凝膠稀釋至20 mg/ml (10 mg/ml-45 mg/ml)。此將轉而增加方法之複雜性，例如將凝膠填充於注射器。在一些態樣中，水凝膠為均質的。均質產品並非相分離的。在一些態樣中，將水凝膠調配成適用於皮膚用之濃度(諸如10 mg/mL-45 mg/mL)，但保留在過量鹽水存在下之溶脹能力。

在一些態樣中，產生水凝膠之方法不會引起水凝膠發生相分離。在一些態樣中，由本文所揭示之方法產生或衍生之水凝膠並非相分離的。在一些態樣中，在熱滅菌之後稀釋水凝膠之方法不會引起水凝膠發生相分離。

在一些態樣中，將水凝膠稀釋於PBS緩衝液中。在一些態樣中，將水凝膠稀釋於1 mM、2 mM、3 mM、4 mM、5 mM、6 mM、7 mM、8 mM、9 mM、10 mM、11 mM、12 mM、13 mM、14 mM、15 mM、16 mM、17 mM、18 mM、19 mM或20 mM之磷酸鹽緩衝液中。在一些態樣中，將水凝膠稀釋於約1 mM、約2 mM、約3 mM、約4 mM、約5 mM、約6 mM、約7 mM、約8 mM、約9 mM、約10 mM、約11 mM、約12 mM、約13 mM、約14 mM、約15 mM、約16 mM、約17 mM、約18 mM、約19 mM或約20 mM之磷酸鹽緩衝液中。在一些態樣中，將水凝膠稀釋至1 mM至20 mM、1 mM至15 mM、1 mM至10 mM、1 mM至5 mM、5 mM至20 mM、5 mM至15 mM、5 mM至10 mM、10 mM至20 mM、10 mM至15 mM或15 mM至20 mM之間之磷酸鹽緩衝液中。在一些態樣中，將水凝膠稀釋至約1 mM至約20 mM、約1 mM至約15 mM、約1 mM至約10 mM、約1 mM至約5 mM、約5 mM至約20 mM、約5 mM至約15 mM、約5 mM至約10 mM、約10 mM至約20 mM、約10 mM至約15 mM或約15 mM至約20 mM之間之磷酸鹽緩衝液中。

在一些態樣中，將水凝膠稀釋於pH為約6.0、約6.2、約6.4、約6.6、約6.8、約7.0、約7.2、約7.4、約7.6、約7.8或約8.0之溶液中。在一些態樣中，將水凝膠稀釋於pH為6.0、6.2、6.4、6.6、6.8、7.0、7.2、7.4、7.6、7.8或8.0之溶液中。在一些態樣中，將水凝膠稀釋於pH在6.0至8.0之間、在6.0至7.0之間、在7.0與8.0之間、在6與7.5之間、在7.0與7.5之間或在6.5與7.5之間之溶液中。

在一些態樣中，交聯反應之HA濃度為約1%、約1.5%、約2%、約2.5%、約3%、約3.5%、約4%、約4.5%、約5%、約5.5%、約6%、約6.5%、約7%、約7.5%、約8%、約8.5%、約9%、約9.5%、約10%、約11%、約12%、約13%、約14%、約15%、約16%、約17%、約18%、約19%或約20%。在一些態樣中，交聯反應之HA濃度為1%、1.5%、2%、2.5%、3%、3.5%、4%、4.5%、5%、5.5%、6%、6.5%、7%、7.5%、8%、8.5%、9%、9.5%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%或20%。在一些態樣中，交聯反應之HA濃度在1%至3%、2%至5%、3%至5%、4%至5%、2%至3%、2%至4%、3%至5%、3%至4%、1%至20%、1%至15%、1%至10%、1%至5%、1%至2%、2%至5%、2%至10%、2%至15%、2%至20%、5%至20%、5%至15%、5%至10%、10%至20%、10%至15%或15%至20%之間。

在一些態樣中，交聯反應之HA濃度不大於10%。在一些態樣中，交聯反應之HA濃度不大於9%。在一些態樣中，交聯反應之HA濃度不大於8%。在一些態樣中，交聯反應之HA濃度不大於7%。在一些態樣中，交聯反應之HA濃度不大於6%。在一些態樣中，交聯反應之HA濃度不大於5%。在一些態樣中，交聯反應之HA濃度不大於4%。在一些態樣中，交聯反應之HA濃度不大於3%。

在一些態樣中，交聯反應中之DATH之mol%為0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9%、1%、1.1%、1.2%、1.3%、1.4%、1.5%、1.6%、1.7%、1.8%、1.9%或2%。在一些態樣中，交聯反應中之DATH之mol%為約0.1%、約0.2%、約0.3%、約0.4%、約0.5%、約0.6%、約0.7%、約0.8%、約0.9%、約1%、約1.1%、約1.2%、約1.3%、約1.4%、約1.5%、約1.6%、約1.7%、約1.8%、約1.9%或約2%。在一些態樣中，交聯反應中之DATH之mol%為0.1%至2%、0.1%至1.5%、0.1%至1%、0.1%至0.5%、0.2%至1%、0.2%至0.5%、0.2%至0.3%、0.5%至1%、0.5%至1.5%、0.5%至2%、1%至2%或1%至1.5%。

在一些態樣中，GAG之分子量高於700 kDa、800 kDa、900 kDa、1000 kDa、1100 kDa、1200 kDa、1300 kDa、1400 kDa、1500 kDa、1600 kDa、1700 kDa、1800 kDa、1900 kDa、2000 kDa、2500 kDa、3000 kDa、3500 kDa、4000 kDa、4500 kDa、5000 kDa、5500 kDa、6000 kDa、6500 kDa、7000 kDa、7500 kDa、8000 kDa、8500 kDa、9000 kDa、9500 kDa或10000 kDa。

在一些態樣中，GAG之分子量高於約700 kDa、約800 kDa、約900 kDa、約1000 kDa、約1100 kDa、約1200 kDa、約1300 kDa、約1400 kDa、約1500 kDa、約1600 kDa、約1700 kDa、約1800 kDa、約1900 kDa、約2000 kDa、約2500 kDa、約3000 kDa、約3500 kDa、約4000 kDa、約4500 kDa、約5000 kDa、約5500 kDa、約6000 kDa、約6500 kDa、約7000 kDa、約7500 kDa、約8000 kDa、約8500 kDa、約9000 kDa、約9500 kDa或約10000 kDa。

在一些態樣中，在24小時之後，水凝膠之熱穩定度(NormGelC或GelC)為至少80%。在一些態樣中，在48小時之後，水凝膠之熱穩定度(NormGelC或GelC)為至少80%。在一些態樣中，在約90℃下24小時之後，水凝膠之熱穩定度(NormGelC或GelC)為至少80%。在一些態樣中，在至少70℃之溫度下24小時或48小時之後，水凝膠之熱穩定度(NormGelC或GelC)為至少80%。在一些態樣中，在至少90℃之溫度下24小時或48小時之後，水凝膠之熱穩定度(NormGelC或GelC)為至少80%。

在一些態樣中，在24小時或48小時之後，水凝膠之熱穩定度(NormGelC或GelC)為至少70%、75%、80%、85%、90%或95%。在一些態樣中，在至少70℃或至少90℃之溫度下24小時或48小時之後，水凝膠之熱穩定度(NormGelC或GelC)為至少70%、75%、80%、85%、90%或95%。

在一些態樣中，在24小時或48小時之後，水凝膠之熱穩定度(NormGelC或GelC)為至少約70%、約75%、約80%、約85%、約90%或約95%。在一些態樣中，在至少70℃或至少90℃之溫度下24小時或48小時之後，水凝膠之熱穩定度(NormGelC或GelC)為至少70%、75%、80%、85%、90%或95%。

在一些態樣中，在至少70℃或至少90℃之溫度下24小時或48小時之後，水凝膠之熱穩定度(NormGelC或GelC)降低小於5%、10%、15%、20%、25%或30%。在一些態樣中，在至少70℃或至少90℃之溫度下24小時或48小時之後，水凝膠之熱穩定度(NormGelC或GelC)降低小於約5%、約10%、約15%、約20%、約25%或30%。

在一些態樣中，測定熱穩定度之溫度為至少70℃、72℃、74℃、76℃、78℃、80℃、82℃、84℃、86℃、88℃、90℃、92℃、94℃、96℃、98℃、100℃、102℃、104℃、106℃、108℃或110℃。在一些態樣中，測定熱穩定度之溫度為至少約70℃、約72℃、約74℃、約76℃、約78℃、約80℃、約82℃、約84℃、約86℃、約88℃、約90℃、約92℃、約94℃、約96℃、約98℃、約100℃、約102℃、約104℃、約106℃、約108℃或約110℃。

在一些態樣中，測定熱穩定度之製造後時段為至少24小時、26小時、28小時、30小時、32小時、34小時、36小時、38小時、40小時、42小時、44小時、46小時、48小時、50小時、52小時、54小時、56小時、58小時、60小時、62小時、64小時、66小時、68小時、70小時、72小時、74小時、76小時、78小時或80小時。在一些態樣中，測定熱穩定度之製造後時段為至少約24小時、約26小時、約28小時、約30小時、約32小時、約34小時、約36小時、約38小時、約40小時、約42小時、約44小時、約46小時、約48小時、約50小時、約52小時、約54小時、約56小時、約58小時、約60小時、約62小時、約64小時、約66小時、約68小時、約70小時、約72小時、約74小時、約76小時、約78小時或約80小時。

在一些態樣中，組合物為生物可再吸收的。在一些態樣中，水凝膠為生物可再吸收的。在一些態樣中，組合物在約1年至約3年之時段內經生物再吸收。在一些態樣中，組合物在1年至3年之時段內經生物再吸收。在一些態樣中，水凝膠在約1年至約3年之時段內經生物再吸收。在一些態樣中，水凝膠在1年至3年之時段內經生物再吸收。

在一些態樣中，組合物進一步包含局部麻醉劑。在一些態樣中，組合物包含至少一種局部麻醉劑。在一些態樣中，局部麻醉劑為醯胺型局部麻醉劑。在一些態樣中，局部麻醉劑為酯型局部麻醉劑。

在一些態樣中，局部麻醉劑係選自由以下組成之群：布比卡因(bupivacaine)、布坦卡因(butanilicaine)、卡替卡因(carticaine)、辛可卡因(cinchocaine) (狄布卡因(dibucaine))、氯丁卡因(clibucaine)、對哌啶乙醯基胺基苯甲酸乙酯、依替卡因(etidocaine)、里格卡因(lignocaine) (利多卡因(lidocaine))、甲哌卡因(mepivacaine)、奧昔卡因(oxethazaine)、丙胺卡因(prilocaine)、羅比卡因(ropivacaine)、托利卡因(tolycaine)、三甲卡因(trimecaine)、伐多卡因(vadocaine)、阿替卡因(articaine)、左布比卡因(levobupivacaine)、阿米洛卡因(amylocaine)、可卡因(cocaine)、丙美卡因(propanocaine)、氯美卡因(clormecaine)、環甲卡因(cyclomethycaine)、丙美卡因(proxymetacaine)、阿美索卡因(amethocaine) (四卡因(tetracaine))、苯佐卡因(benzocaine)、布他卡因(butacaine)、丁托西卡因(butoxycaine)、胺基苯甲酸丁酯、氯普魯卡因(chloroprocaine)、二甲卡因(dimethocaine) (拉羅卡因(larocaine))、奧布卡因(oxybuprocaine)、哌羅卡因(piperocaine)、對乙氧卡因(parethoxycaine)、普魯卡因(procaine) (奴佛卡因(novocaine))、丙氧卡因(propoxycaine)及三卡因(tricaine)；或其組合。

在一些態樣中，組合物中之局部麻醉劑之濃度在1 mg/mL至5 mg/mL之間。在一些態樣中，組合物中之局部麻醉劑之濃度在約1 mg/mL至約5 mg/mL之間。在一些態樣中，組合物中之局部麻醉劑之濃度在2 mg/mL至4 mg/mL之間。在一些態樣中，組合物中之局部麻醉劑之濃度在約2 mg/mL至約4 mg/mL之間。在一些態樣中，組合物中之局部麻醉劑之濃度為0.5 mg/mL、1 mg/mL、1.5 mg/mL、2 mg/mL、2.5 mg/mL、3 mg/mL、3.5 mg/mL、4 mg/mL、4.5 mg/mL或5 mg/mL。在一些態樣中，組合物中之局部麻醉劑之濃度為約0.5 mg/mL、約1 mg/mL、約1.5 mg/mL、約2 mg/mL、約2.5 mg/mL、約3 mg/mL、約3.5 mg/mL、約4 mg/mL、約4.5 mg/mL或約5 mg/mL。

在一些態樣中，組合物係可注射的。在一些態樣中，可注射組合物係可注射植入物。在一些態樣中，本發明係關於一種可注射植入物，其包含本文所揭示之組合物中之任一者。在一些態樣中，該可注射植入物係用於真皮下、真皮內、皮下、肌肉內、肌肉下、齒齦內注射。

在一些態樣中，本發明係關於一種預填充注射器，其包含本文所揭示之組合物中之任一者。在一些態樣中，本發明係關於一種預填充小瓶，其包含本文所揭示之組合物中之任一者。

在一些態樣中，套組包含預填充注射器，該預填充注射器包含本文所揭示之組合物中之任一者。在一些態樣中，套組包含預填充小瓶，該預填充小瓶包含本文所揭示之組合物中之任一者、注射器及一或多個皮下注射針。在一些情況下，該套組包含供向注射部位投與之抗微生物組合物。

在一些態樣中，涵蓋用於實踐本文所描述之方法的套組。在一些態樣中，套組包含足以執行本文所描述之方法的所有溶液、緩衝液、化合物、容器及/或說明書。

在一些態樣中，組合物進一步包含氯化鈉。在一些態樣中，組合物展現0.9% w/v之氯化鈉濃度。在一些態樣中，組合物進一步包含磷酸鹽緩衝液。在一些態樣中，組合物進一步包含醫藥學上可接受之載劑。在一些態樣中，組合物進一步包含氯化鈉、磷酸鹽緩衝液及醫藥學上可接受之載劑。

在一些態樣中，組合物包含一或多種密度增強劑。在一些態樣中，密度增強劑可選自山梨糖醇、甘露糖醇及果糖。

在一些態樣中，組合物包含緩衝劑。緩衝劑係添加至溶液中以使溶液能夠抵抗由稀釋或少量添加酸或鹼引起之pH值變化的一或多種化合物。有效緩衝液系統採用含有較大且大致相等濃度之共軛酸-鹼對(或緩衝劑)的溶液。本文所採用之緩衝劑可為醫藥學上可接受之一或多種任何此類化合物，包括(但不限於)磷酸鹽及檸檬酸鹽(共軛酸及/或鹼)。在一些態樣中，緩衝劑包含磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)或替代磷酸鹽緩衝液。

在一些態樣中，組合物係無菌的。在一些態樣中，組合物係滅菌的。在一些態樣中，組合物經由過濾滅菌、加熱滅菌或照射滅菌而進行滅菌。在一些態樣中，組合物之組分在混合或形成整個組合物之前經滅菌，由此得到包含在形成組合物之前得到滅菌之兩種或更多種組分的組合物。

在一些態樣中，GAG之分子量不小於1.5 MDa。在一些態樣中，GAG之分子量不小於1.4 MDa。在一些態樣中，GAG之分子量不小於1.3 MDa。在一些態樣中，GAG之分子量不小於1.2 MDa。在一些態樣中，GAG之分子量不小於1.1 MDa。在一些態樣中，GAG之分子量不小於1.0 MDa。在一些態樣中，GAG之分子量不小於0.9 MDa。在一些態樣中，GAG之分子量不小於0.8 MDa。在一些態樣中，GAG之分子量不小於0.7 MDa。

在一些態樣中，水凝膠未經歷葡糖胺聚糖之交聯後降解。在一些態樣中，水凝膠在交聯後經歷環境降解；然而，水凝膠並未展現低於C_final /2之值的C_min 值。在一些態樣中，水凝膠展現大於水凝膠之C_final /2的C_min 值。

本發明之其他態樣及較佳實施例將自以下本發明之詳細揭示內容及隨附申請專利範圍而顯而易見。II. 使用水凝膠之方法

在一些態樣中，本發明包含進行修復或美容皮膚學治療之方法。在一些態樣中，該修復或美容皮膚學治療包含向個體注射本文所揭示之組合物。在一些態樣中，注射為真皮下、皮內、皮下、肌肉內、肌肉下或齒齦內注射。

在一些態樣中，本發明之方法係關於由於牙齦萎縮而進行齒齦內注射以填充牙齦。在一些態樣中，方法係關於在口腔之一或多個組織中注射該組合物。

在一些態樣中，注射係用於真皮填充、身體輪廓整形、面部輪廓整形及齒齦填充。

在一些態樣中，本文所揭示之組合物之注射係用於真皮填充。在一些態樣中，真皮填充之方法包括注射該組合物以填充皮膚裂紋。在一些態樣中，真皮填充之方法包括注射該組合物以填充面部、頸部、手部、腳部、膝部及肘部中之細紋。在一些態樣中，真皮填充之方法包括注射該組合物以填充面部、頸部、手部、腳部、膝部及肘部中之細皺紋。在一些態樣中，真皮填充之方法包括注射該組合物以填充面部、頸部、手部、腳部、膝部及肘部中之細紋。

在一些態樣中，真皮填充之方法包括注射該組合物以填充瘢痕。在一些態樣中，真皮填充之方法包括注射該組合物以填充凹陷性瘢痕。在一些態樣中，真皮填充之方法包括注射該組合物以填充肥厚性瘢痕。在一些態樣中，真皮填充之方法包括注射該組合物以填充瘤樣瘢痕。

在一些態樣中，真皮填充之方法包括注射該組合物以恢復及/或矯正患人類免疫缺乏病毒(HIV)者之面部脂肪損失(脂萎縮)症狀。

在一些態樣中，真皮填充之方法包括將該組合物注射至手背或腳背。

在一些態樣中，真皮填充之方法包括注射該組合物以加強弱化的聲帶。

在一些態樣中，真皮填充之方法包括注射該組合物以恢復由衰老、疾病或損傷引起的身體一部分之體積損失。

在一些態樣中，面部輪廓整形之方法包括將該組合物注射至面部以調整面部輪廓。在一些態樣中，面部輪廓整形之方法包括將該組合物注射至嘴唇以豐隆嘴唇之大小及/或形狀。

在一些態樣中，面部輪廓整形之方法包括將該組合物注射至面部以增加面部對稱性。在一些態樣中，面部輪廓整形之方法包括注射該組合物以將臉型改變成橢圓形、圓形、正方形、三角形、倒三角形、矩形或長橢圓形。在一些態樣中，面部輪廓整形之方法包括注射該組合物以增加面部之總寬度。在一些態樣中，面部輪廓整形之方法包括注射該組合物以增加面部之總長度。

在一些態樣中，面部輪廓整形之方法包括將該組合物注射至面部以增加前額及/或顴骨寬度。在一些態樣中，面部輪廓整形之方法包括將該組合物注射至面部以增加下頜線之長度。

在一些態樣中，面部輪廓整形之方法包括將該組合物注射至面部以改變下頜之大小及/或形狀。在一些態樣中，面部輪廓整形之方法包括將該組合物注射至面部以改變前額之大小及/或形狀。在一些態樣中，面部輪廓整形之方法包括將該組合物注射至面部以改變面頰之大小及/或形狀。在一些態樣中，面部輪廓整形之方法包括將該組合物注射至面部以改變眉毛之大小及/或形狀。

在一些態樣中，面部輪廓整形之方法包括將該組合物注射至面部以調整與縮頜相關之外觀。在一些態樣中，面部輪廓整形之方法包括將該組合物注射至面部以調整與凸頜畸形相關之外觀。

在一些態樣中，身體輪廓整形之方法包括將該組合物注射至身體以調整身體各部位之大小及形狀。在一些態樣中，身體輪廓整形之方法包括將該組合物注射至身體以調整身體各部位之大小及形狀，由此增加對稱性。

在一些態樣中，身體輪廓整形之方法包括將該組合物注射至身體以調整乳房、臀部、骶骨、腹股溝、髖部、腹部、胸部、腳部、腿部、膝部、膕肌、大腿、臂部、手部、肘部及/或前肘之大小及形狀。

在一些態樣中，身體輪廓整形之方法包括將該組合物注射至身體以填充凹陷變形。在一些態樣中，凹陷變形係由衰老、疾病、損傷或易患病體質引起。在一些態樣中，身體輪廓整形之方法包括將該組合物注射至身體以減少橘皮紋之出現。實例實例1 高分子量水凝膠產生

實例1提供用於製備本文所描述之高分子量GAG水凝膠的一般方法。

將玻尿酸(HA)及二胺基海藻糖(DATH)與4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三

-2-基)-4-氯化甲基嗎福啉鎓(DMTMM)之溶液混合以交聯。在交聯過程之後，將凝膠分割且稀釋至設定濃度。其後，將凝膠加熱至大致70℃持續大致24小時。隨後對凝膠進行粒度減小(PSR)及沈澱，且隨後洗滌且乾燥成粉末。隨後將凝膠粉末混合至適合的緩衝液且凝膠溶脹；隨後高壓處理凝膠。

表 1 ：對應於圖 1 之水凝膠組合物.

樣品	反應條件	凝膠特性
DATH/HA (mol%)	[HA] (%)	Mw (MDa)	SwF (mL/g)	GelC (%)	CrR	C_final (mg/g)
1-1	0.9	3.5	1.0	5,2	87	ND	20
1-2	0.9	4	1.0	4,2	87	ND	20
1-3	0.9	3.5	2.1	4	96	ND	20
1-4	0.9	4	2.1	3,2	98	0,31	19

ND =未測定

在90℃下在熱降解條件下分析凝膠含量且歷經剛好超過70小時之時程進行評估(圖 1 )。對凝膠含量值進行標準化以便於比較，其在圖 1 之y軸中描繪為「NormGelC (%)」。資料指示高分子量HA提供與由較低分子量HA製成之凝膠相比在熱降解條件下維持較高程度之凝膠含量的凝膠。實例2 製備及評估高分子量(HMW)及低分子量(LMW)玻尿酸(HA)水凝膠交聯HMW與LMW HA之一般程序

在水中新製DMTMM及DATH交聯劑中之每一者之儲備溶液。藉由向水中分別添加所需體積之DMTMM (mol% DATH×8.5)及DATH (參見表1)儲備溶液來製備反應溶液。將反應溶液混合且直接添加至反應容器中之預稱重HA (0.4 M Da或2.1 MDa)中。將混合物充分混合3分鐘且培育。在24±2小時之後，經由1 mm鋼網壓製所獲得之物質。物質在70℃下均質化24±2小時，隨後使用3×315 µm過濾器對凝膠進行粒度減小(PSR)，且隨後藉由添加EtOH來沈澱。將所得粉末在真空下乾燥隔夜且在中性pH下之7 mM磷酸鹽、0.7% NaCl及3 mg/g Lido-HCl中復原。將凝膠填充於注射器中且隨後進行高壓處理。

表 2 ：反應條件及所獲得之凝膠特性.

樣品	反應條件	凝膠特性
DATH/HA (mol%)	[HA] (%)	Mw (MDa)	SwF (mL/g)	GelC (%)	CrR	C_final (mg/g)
2-1	1.5	2	0.4	10.6	44	0.17	20
2-2	1.5	2	2.1	6.2	91	0.20	20
2-3	0.3	10	0.4	5.4	74	0.55	40
2-4	0.3	10	2.1	2.7	95	0.50	40
2-5	0.5	6	0.4	5.9	75	0.38	25
2-6	0.5	6	2.1	2.9	94	0.37	25
2-7	0.9	4	0.4	4.9	83	0.32	20
2-8	0.9	4	2.1	3.2	98	0.28	20

在90℃下在水浴中，將凝膠在密封玻璃瓶中培育24小時或48小時。在給定時間，將樣品冷卻至室溫且分析凝膠。參見圖 2-4

圖 2 描繪對應於表 2 中之樣品2-1及2-2之凝膠含量(GelC%)。圖 3 描繪對應於表 2 中之樣品2-3及2-4之凝膠含量(GelC%)。圖 4 描繪對應於表 2 中之樣品2-5及2-6之凝膠含量(GelC%)。圖 5 描繪對應於表 2 中之樣品2-7及2-8之凝膠含量(GelC%)。用於測定HMW凝膠中之MW_app 之一般程序

在反應容器中將預稱重HA (2.1 MDa)與水混合。將混合物充分混合3分鐘且在環境溫度下培育。在24小時之後，用水稀釋溶液，添加一或多份NaCl (最終濃度為0.9%)，且在70℃下培育所獲得之物質。在培育24小時之後，將溶液填充於注射器中。隨後高壓處理樣品2-10之注射器，但不處理樣品2-9之注射器。藉由SEC-MALLS測定溶液之Mw。

表 3 ：反應條件及所獲得之凝膠特性.

樣品	反應條件	特性	註解
DATH/HA (mol-%)	[HA] (%)	Mw (MDa)	Mw_app (MDa)	多分散度
2-9	0	4	2.1	2.2	2,2	未高壓處理
2-10	0	4	2.1	1.4	2,1	高壓處理

* * * * *

本文說明性描述之方法可在不存在本文未特定揭示之任何一或多個要素、一或多個限制之情況下適當地實踐。因此，舉例而言，術語「包含」、「包括」、「含有」等將廣泛地且非限制性地理解。另外，本文所採用之術語及表述亦用作描述而非限制之術語，且在使用此類術語及表述時，不意圖排除所顯示及描述之特徵或其部分之任何等效物。應認識到，各種修改均可在所主張之本發明之範疇內。因此，應理解，儘管已藉由較佳實施例及視情況存在之特徵特定地揭示本發明，但熟習此項技術者可採用本文所揭示之在本發明中體現之修改及變化，且認為此類修改及變化在本發明之範疇內。

已在本文中廣泛地且一般性地描述本發明。屬於一般性揭示內容之較狹義物種及子屬組中之每一者亦形成方法之一部分。此包括本方法之一般性描述，其限制條件或負面限制自該屬中移除任何主題，不管所刪除之材料是否在本文中特定敍述。本發明技術就描述於本申請案中之特定實施例而言不受限，特定實施例預期為本發明技術之個別態樣之單一說明。如熟習此項技術者將顯而易知，在不背離本發明技術之精神及範疇之情況下可對其作出諸多修改及改變。除本文所列舉之方法及裝置外，熟習此項技術者自前述描述將顯而易知在本發明技術之範疇內之功能上等效之方法及裝置。此類修改及改變意欲屬於本發明技術之範疇內。應理解，本發明技術不限於特定方法、試劑、化合物組合物或生物系統，其理所當然可有所變化。亦應理解，本文所用之術語僅出於描述特定實施例之目的，且並不意欲為限制性的。

熟習此項技術者將易於瞭解本發明極其適合於實施目標且獲得所提及之目的及優點，以及其中固有之彼等目的及優點。熟習此項技術者將知曉其中之修改及其他用途。此等修改涵蓋於本發明之精神內且由申請專利範圍之範疇界定，其闡述本發明之非限制性實施例。

另外，在根據馬庫西群組(Markush groups)描述本發明之特徵或態樣時，熟習此項技術者應認識到，本發明由此亦根據馬庫西群組之任何個別成員或成員子群加以描述。

出於所有目的，本文所引用之所有參考文獻、文章、公開案、專利、專利公開案以及專利申請案皆以全文引用之方式併入。

然而，本文所引用之任何參考文獻、文章、公開案、專利、專利公開案及專利申請案之提及並非且不應視為承認或以任何形式表明其構成有效的先前技術或形成全球任何國家之公共常識之一部分。

圖 1 描繪在90℃下歷經大致70小時之時段展現各種HA (MW)及HA交聯之四個凝膠樣品之標準化凝膠含量(NormGelC(%))。

圖 2 描繪凝膠在90℃下培育24或48小時後對應於表 2 中之樣品1及2之凝膠含量(GelC%)。

圖 3 描繪凝膠在90℃下培育24或48小時後對應於表 2 中之樣品3及4之凝膠含量(GelC%)。

圖 4 描繪凝膠在90℃下培育24或48小時後對應於表 2 中之樣品5及6之凝膠含量(GelC%)。

圖 5 描繪凝膠在90℃下培育24或48小時後對應於表 2 中之樣品7及8之凝膠含量(GelC%)。

Claims

一種製備包含交聯葡糖胺聚糖(GAG)分子之水凝膠的方法，其包含使分子量為至少1.5 MDa之GAG與交聯劑交聯，其中GAG濃度在2%至10% (w/w)之間且該交聯劑與GAG之莫耳比小於或等於2%，以獲得藉由醯胺鍵交聯之葡糖胺聚糖水凝膠。
如請求項1之製備水凝膠之方法，其中若該GAG濃度在1%至4.5% (w/w)之間，則交聯劑濃度在每GAG雙醣0.8 mol%至2 mol%之間；及若該GAG濃度在4.6%與5.9%之間(w/w)，則該交聯劑濃度在每GAG雙醣0.5 mol%至0.8 mol%之間；以及若該GAG濃度在6%至12% (w/w)之間，則該交聯劑濃度在每GAG雙醣0.3 mol%至0.5 mol%之間。
如請求項1或2之方法，其中該交聯劑為二親核或多親核官能性交聯劑。
如請求項3之方法，其中該二親核或多親核官能性交聯劑為脂族或芳族二胺基衍生物、肽或肽序列。
如請求項4之方法，其中該二親核或多親核官能性交聯劑包含選自由以下組成之群的間隔基團：二醣、三醣、四醣及寡醣。
如請求項5之方法，其中該二親核或多親核官能性交聯劑為二胺基海藻糖(DATH)。
如請求項3至6中任一項之方法，其中該交聯包含： (1) 提供葡糖胺聚糖(GAG)分子之溶液； (2) 用偶合劑活化該等葡糖胺聚糖分子上之羧基以形成活化葡糖胺聚糖分子； (3) 使用二親核或多親核官能性交聯劑經由其活化羧基交聯該等活化葡糖胺聚糖(GAG)分子，以獲得藉由醯胺鍵交聯之葡糖胺聚糖水凝膠。
如請求項7之方法，其中該偶合劑為基於三
之偶合劑，諸如4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三
-2-基)-4-氯化甲基嗎福啉鎓(DMTMM)。
如請求項1至8中任一項之方法，其中該交聯係在5.0-9.0之pH下，較佳在6.0-8.0之pH下進行。
如請求項1至9中任一項之方法，其進一步包含調配交聯水凝膠至10-45 mg/mL之最終葡糖胺聚糖(GAG)濃度。
如請求項1至10中任一項之方法，其進一步包含對該交聯水凝膠進行滅菌。
如請求項1至11中任一項之方法，其中該葡糖胺聚糖(GAG)為玻尿酸(HA)。
如請求項1至12中任一項之方法，其中該GAG之分子量為1.5-10 MDa，較佳為1.5-3.5 MDa。
如請求項1至13中任一項之方法，其中該GAG濃度在3%-5% (w/w)之間。
如請求項1至14中任一項之方法，其中交聯劑與GAG之該莫耳比在0.9%-1.1%之間。
如請求項1至15中任一項之方法，其中該GAG為分子量為1.5-3.5 MDa之玻尿酸(HA)且該交聯劑為二胺基海藻糖(DATH)，且另外其中HA之該濃度在3%-5% (w/w)之間並且DATH與HA之該莫耳比在0.9%-1.1%之間。
一種水凝膠產品，其係藉由如請求項1至16中任一項之方法獲得。
一種水凝膠產品，其包含葡糖胺聚糖(GAG)分子作為可溶脹聚合物，其中該等葡糖胺聚糖分子係藉由醯胺鍵交聯，且其中交聯葡糖胺聚糖分子之表觀分子量(Mw_app )高於1.0 MDa；且其中在24小時之後，該可溶脹聚合物(NormGelC)之熱穩定度高於80%。
如請求項18之水凝膠產品，其中該等葡糖胺聚糖分子係經由交聯而共價交聯，該等交聯包含選自由以下組成之群的間隔基團：二醣、三醣、四醣及寡醣。
如請求項19之水凝膠產品，其中該間隔基團為海藻糖。
如請求項18至20中任一項之水凝膠產品，其中該葡糖胺聚糖(GAG)為玻尿酸(HA)。
如請求項18至21中任一項之水凝膠產品，其中該水凝膠產品經滅菌。
一種美化治療皮膚之方法，其包含向該皮膚投與如請求項18至22中任一項之水凝膠產品。