TW202116803A - Gipr抗體及其與glp-1的融合蛋白質，以及其藥物組合物和應用 - Google Patents

Gipr抗體及其與glp-1的融合蛋白質，以及其藥物組合物和應用 Download PDF

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Abstract

本文提供GIPR抗體及其與GLP-1之融合蛋白質，以及其藥物組合物。本文還提供了GIPR抗體及其與GLP-1之融合蛋白質用於治療、預防或改善非酒精性脂肪性肝病、非酒精性脂肪性肝炎、二型糖尿病或肥胖症之一或多種症狀之方法。

Description

GIPR抗體及其與GLP-1的融合蛋白質，以及其藥物組合物和應用
本文提供了能與GIPR特異性結合之抗體及其與GLP-1之融合蛋白質，以及其藥物組合物。本文還提供了GIPR抗體及其與GLP-1之融合蛋白質用於治療、預防或改善非酒精性脂肪性肝病、非酒精性脂肪性肝炎、二型糖尿病或肥胖症之一或多種症狀方法。
腸抑胃肽(Gastric Inhibitory Polypeptide，GIP)是人體在進食後，由腸道K細胞分泌的一種多肽荷爾蒙，其形式包括42肽與30肽兩種。GIP藉由激活胰臟β細胞表面的腸抑胃肽受體(Gastric Inhibitory Polypeptide Receptor，GIPR)參與刺激胰島素分泌的生理過程(Tseng等，1996，J. Clin. Invest. 98:2440-2445；Ravn等，2013，J. Biol. Chem . 288:19760-72)。因此GIP之經典生物學功能與GLP-1類似，所以二者被統稱為腸激肽。但是，GIPR除了胰臟外具有廣泛的分佈，包括了骨骼、心臟、胃、腸道及脂肪組織等(Peter等，2013，J. Biol. Chem . 288:19760-72)。多樣化的分佈表明了GIP/GIPR通路在血糖調節之外還有更多的生物學作用。實驗證據顯示GIP/GIPR信號通路至少與此等組織中之脂肪代謝密切相關(Yip與Wolfe，2000，Life Sci. 66:91-103)。實驗資料還顯示肥胖症或者糖尿病患者的血液循環GIP濃度會升高(Creutzfeldt等，1978，Diabetologia 14:15-24；Flatt等，1984，J. Endocrinol. 101:249-256；Salera等，1982，J. Clin. Endocrinol. Metab. 55:329-336；Vilsbøll等，2003，J. Clin. Endocrinol. Metab. 88:2706-2713)。使用GIPR抑制劑阻斷GIPR信號後，可以觀測到高脂飼料誘導肥胖小鼠的體重大幅下降、胰島素抵抗症狀減輕，甚至逆轉由高脂飼料引起之二型糖尿病(Peter等，2013，J. Biol. Chem . 288:19760-72)。
長效胰高血糖素樣肽-1類似物(Glucagon Like Peptide-1 analogue，GLP-1 analogue)是新一代，亦為目前療效最佳的二型糖尿病藥物(Tomlinson等，2015，Expert Opin. Investig. Drugs 25:1744-7658；Gallwitz，2015，Eur. Endocr . 11:21-25)。長效GLP-1類藥物亦正在臨床試驗上嘗試用於非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的治療。研究結果顯示其對NAFLD患者的肝組織形態改善、丙胺酸轉胺酶/天冬胺酸轉胺酶比例下調、肝脂肪含量降低均具有顯著作用(Samson等，2013，J. Diabetes Complications 27:401-6；Portillo-Sanchez與Cusi，2016，Clin. Diabetes Endocrinol . 2:9)。
若能夠把GLP-1類藥物與GIPR抑制劑兩者配合使用，包括二者聯用，或者融合在一起使用，則有可能達成同時改善胰島素抵抗及脂肪過度積累(亦即肥胖症)的效應。這樣，在降低血糖的同時，還干涉脂肪代謝，亦即GLP-1部分改善糖代謝，降低食慾，降糖減重；GIPR抗體部分降低脂肪的進一步蓄積，改善肝臟的功能。GIPR抗體部分的減脂效應與GLP-1部分減重的效應疊加，藉由雙重作用來治療非酒精性脂肪性肝病/非酒精性脂肪性肝炎。本文提供一種融合蛋白質藥物，將有利於治療彼等同時患有非酒精性脂肪性肝病/非酒精性脂肪性肝炎、二型糖尿病及肥胖症中一或多種疾病的患者。
本文提供了能與GIPR特異性結合之抗體，該抗體是GIPR之拮抗劑。
本文還提供了一種能與GIPR特異性結合之抗體，其抗體包含一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸序列，其中每個胺基酸序列獨立地選自於以下所列之胺基酸序列： a.  輕鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 13及SEQ ID NO: 15； b.  輕鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 11及SEQ ID NO: 16； c.  輕鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 14及SEQ ID NO: 17； d.  重鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 23及SEQ ID NO: 26； e.  重鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 27及SEQ ID NO: 29；及 f.   重鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 28及SEQ ID NO: 30。
本文進一步提供了一種GLP-1融合蛋白質，其包含一個能與GIPR特異性結合之抗體及一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個或八個GLP-1片段；該融合蛋白質藉由一個肽接頭序列(Linker)將GLP-1片段之羧基端與GIPR抗體輕鏈或重鏈之胺基端連接或者將一GLP-1片段之胺基端與GIPR抗體輕鏈或重鏈之羧基端連接。
本文提供了一個GLP-1融合蛋白質，其包含一個GIPR抗體與二個GLP-1片段；該融合蛋白質藉由一個肽接頭序列(Linker)將GLP-1片段之羧基端與GIPR抗體輕鏈之胺基端連接：N'-GLP-1-Linker-R-C'；或者將GLP-1片段之羧基端與GIPR抗體重鏈之胺基端連接：N'-GLP-1-Linker-R-C'；其中：N'代表融合蛋白質多肽鏈之胺基端，C'代表融合蛋白質多肽鏈之羧基端，GLP-1代表GLP-1片段，R為GIPR抗體之輕鏈或者重鏈之胺基酸序列，及Linker代表肽接頭序列。
本文提供了一個多核苷酸，其編碼本文中所述之一個GIPR抗體。
本文提供了一個多核苷酸，其編碼本文中所述之一個GIPR抗體與GLP-1融合蛋白質。
本文提供了一個載體，其包含編碼本文中所述之一個GIPR抗體之多核苷酸。
本文提供了一個載體，其包含編碼本文中所述之一個GIPR抗體與GLP-1融合蛋白質的多核苷酸。
本文提供了一個宿主細胞，其包含本文中所述之一個載體。
本文提供了一個藥用組合物，其包含本文所述之一個GIPR抗體與一個藥用可接受載體。
本文提供了一個藥用組合物，其包含本文所述之一個GIPR抗體與GLP-1之融合蛋白質及一個藥用可接受載體。本文提供了本文所述之一個GIPR抗體在製備用於治療、預防或改善非酒精性脂肪性肝炎類疾病的藥物中之用途。
本文提供了本文所述之一個GIPR抗體與GLP-1之融合蛋白質在製備用於治療、預防或改善非酒精性脂肪性肝炎類疾病的藥物中之用途。
本文提供了本文所述之一個GIPR抗體在製備用於治療、預防或改善二型糖尿病的藥物中之用途。
本文提供了本文所述之一個GIPR抗體與GLP-1之融合蛋白質在製備用於治療、預防或改善二型糖尿病的藥物中之用途。
本文提供了本文所述之一個GIPR抗體在製備用於減肥或者治療、預防或改善肥胖症以及肥胖症相關病症的藥物中之用途。
本文提供了本文所述之一個GIPR抗體與GLP-1之融合蛋白質在製備用於減肥或者治療、預防或改善肥胖症以及肥胖症相關病症的藥物中之用途。
本文提供了本文所述之一個GIPR抗體在製備用於同時治療、預防或改善非酒精性脂肪性肝炎類疾病，肥胖症或者二型糖尿病二種及二種以上病症的藥物中之用途。
本文提供了本文所述之一個GIPR抗體與GLP-1之融合蛋白質在製備用於同時治療、預防或改善非酒精性脂肪性肝炎類疾病，二型糖尿病或者肥胖症二種及二種以上病症的藥物中之用途。
本文提供了治療、預防或改善非酒精性脂肪性肝炎類疾病之一或多種症狀方法，其包括給予個體治療有效量的本文所述之一個GIPR抗體。
本文提供了治療、預防或改善非酒精性脂肪性肝炎類疾病之一或多種症狀方法，其包括給予個體治療有效量的本文所述之一個GIPR抗體與GLP-1之融合蛋白質。
本文提供了治療、預防或改善二型糖尿病之一或多種症狀方法，其包括給予個體治療有效量的本文所述之一個GIPR抗體。
本文提供了治療、預防或改善二型糖尿病之一或多種症狀方法，其包括給予個體治療有效量的本文所述之一個GIPR抗體與GLP-1之融合蛋白質。
本文提供了治療、預防或改善肥胖症之一或多種症狀方法，其包括給予個體治療有效量的本文所述之一個GIPR抗體。
本文提供了治療、預防或改善肥胖症之一或多種症狀方法，其包括給予個體治療有效量的本文所述之一個GIPR抗體與GLP-1之融合蛋白質。
定義 除非本文另外定義，與本文相關的科學及技術術語應具有一般熟習此項技術者所理解的含義。通常，與本文所述藥物學、生物學、生物化學、細胞及組織培養學、生物學、分子生物學、免疫學、微生物學、遺傳學及蛋白質核酸化學以及雜交相關的命名法及技術為此項技術中熟知且經常使用的。
本文使用標準的單字母或三字母縮寫表明多聚核苷酸及多肽序列。多肽序列在書寫時，帶有胺基的首個胺基酸殘基(N')在最左而帶有羧基的最末胺基酸殘基(C')在最右，例如本文所涉及的GLP-1片段序列：SEQ ID NO:105、SEQ ID NO:106、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:108及SEQ ID NO:109。反向多肽序列指將多肽序列的胺基酸出現順序逆向排列後形成之序列，例如上述GLP-1片段序列所形成的反向GLP-1片段序列：SEQ ID NO: 119、SEQ ID NO: 120、SEQ ID NO: 121、SEQ ID NO: 122及SEQ ID NO: 123。單鏈核酸序列及雙鏈核酸序列之上游鏈之5'端在左而它們之3'端在右。多肽之具體部分可由胺基酸殘基編號表示，例如胺基酸80至130，或由該位點的實際殘基表示例如Lys80至Lys130。亦可藉由解釋其與參比序列的差異描述具體的多肽或多聚核苷酸序列。
術語「肽」、「多肽」及「蛋白」均指包含兩個或多個藉由肽健相互連接之胺基酸的分子。此等術語涵蓋例如天然及人工蛋白及蛋白序列的多肽類似物(例如突變蛋白、變異體及融合蛋白)以及轉錄後或否則為共價或非共價修飾的蛋白。肽、多肽或蛋白可為單體或多聚體。
術語「多肽片段」指與對應的全長蛋白相比具有胺基端及/或羧基端缺失的多肽。片段長度可為，例如，至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、50、70、80、90、100、150或200個胺基酸。片段長度可為，例如，最多1000、750、500、250、200、175、150、125、100、90、80、70、60、50、40、30、20、15、14、13、12、11或10個胺基酸。片段可在其一端或兩端進一步包含一或多個附加胺基酸，例如，來自不同天然蛋白質之胺基酸序列(例如，Fc或白胺酸拉鏈結構域)或人工胺基酸序列(例如，人工接頭序列)。
本文之多肽包括以任何原因及經任何方法修飾的多肽，例如，以：(1)降低蛋白水解敏感性，(2)降低氧化敏感性，(3)改變形成蛋白複合物的親和性，(4)改變結合親和性，以及(5)賦予或修飾其他物理化學或功能性質。類似物包含多肽之突變蛋白。例如，可在天然序列(例如在形成分子內接觸的結構域之外的多肽部分)中進行單個或多個胺基酸替換(例如，保守胺基酸替換)。「保守胺基酸替換」為不顯著改變母體序列結構特性者(例如，替換胺基酸不應破壞母體序列中出現的螺旋或干擾其他賦予母體序列特性或對其功能是必須的二級結構類型)。
多肽之「變異體」包含相對於另一多肽序列在胺基酸序列中插入、缺失及/或替換了一或多個胺基酸殘基之胺基酸序列。本文之變異體包括融合蛋白。
多肽之「衍生物」為經化學修飾的多肽，例如藉由與其他化學部分例如聚乙二醇、白蛋白(例如人血清白蛋白)結合、磷酸化及糖基化。
除非另外說明，術語「抗體」包括兩個全長重鏈及兩個全長輕鏈之抗體，以及其衍生物，變異體、片段及突變蛋白，其實例見下文。
術語「抗體」為包含與抗原結合部分且視情況為允許抗原結合部分採取促進該抗體與該抗原結合之構象之支架或構架部分的蛋白。抗體之實例包括完整抗體、抗體片段(例如抗體之抗原結合部分)、抗體衍生物及抗體類似物。該抗體可包含例如可選擇的蛋白支架或具有移植CDRs或CDRs衍生物的人工支架。該支架包括但不限於包含被引入的例如以穩定化該抗體之三維結構之抗體衍生支架以及包含例如生物相容性多聚體的全合成支架。參見，例如，Korndorfer等，2003，Proteins 53:121-129；Roque等，2004,Biotechnol. Prog. 20:639-654。此外，該抗體可以是模擬肽抗體(「PAMs」)或包含模擬抗體之支架，其如支架一樣利用纖維蛋白連接素。
抗體可具有例如天然免疫球蛋白的結構。「免疫球蛋白」為四聚體分子。在天然的免疫球蛋白中，各四聚體由兩個相同的多肽鏈對組成，各對具有一個「輕」鏈(約25 kDa)及一個「重」鏈(約50-70kDa)。各鏈之胺基端包括約100至110胺基酸的可變結構域，主要與抗原識別相關。各鏈之羧基端部分判定了主要與效應子作用相關的恆定區。人之抗體輕鏈分為κ及λ輕鏈。重鏈分為μ、δ、α或ε，且判定了抗原的同種型，例如分別為IgM、IgD、IgG、IgA及IgE。在輕鏈與重鏈中，可變及恆定區由約12或更多個胺基酸的「J」區連接，重鏈亦包括約10多個胺基酸的「D」區。參見，Fundamental Immunology Ch.7 (Paul編，第2版，Raven Press，1989)。各輕/重鏈對之可變區形成抗體結合位點，這樣一個完整之免疫球蛋白具有兩個結合位點。
天然免疫球蛋白鏈顯示出由三個高度可變區連接之相對保守骨架區(FR)的相同基本結構，亦被稱作互補決定區或CDRs。自N端至C端，輕及重鏈均包含結構域FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4。各結構域胺基酸的分配與Kabat等在Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，U.S. Dept. of Health and Human Services, PHS，NIH，NIH Publication No. 91-3242，1991中之定義一致。
除非另外指明，「抗體」指完整之免疫球蛋白或其可與完整抗體競爭特異性結合之抗原結合部分。可由重組DNA技術或藉由酶或化學裂解完整抗體生產抗原結合部分。抗原結合部分包括，尤其是，Fab、Fab'、F(ab')2 、Fv、結構域抗體(dAbs)，包括互補決定區(CDRs)之片段、單鏈抗體(scFv)、嵌合抗體、雙鏈抗體(diabodies)、三鏈抗體(triabodies)、四鏈抗體(tetrabodies)及至少包含足以賦予多肽特異抗原結合之免疫球蛋白之一部分的多肽。
Fab片段為具有VL 、VH 、CL 及CH1 結構域之單價片段；F(ab')2 片段為具有兩個在鉸鏈區由二硫鍵連接之Fab片段之二價片段；Fv片段具有VH 及VL 結構域；dAb片段具有VH 結構域、VL 結構域或VH 或VL 結構域之抗原結合片段(美國專利號US 6,846,634及US 6,696,245；美國專利申請案公開號US 2005/0202512、US 2004/0202995、US 2004/0038291、US 2004/0009507及US 2003/0039958；Ward等，1989，Nature 341:544-546)。
單鏈抗體(scFv)為一融合蛋白，其中之VL 及VH 區由接頭(例如，合成之胺基酸殘基序列)連接以形成連續蛋白質之抗體，其中該接頭足夠長以允許該蛋白鏈摺疊回自身且形成單價抗原結合位點(參見，例如，Bird等，1988，Science 242:423-26；及Huston等，1988,Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85:5879-83)。
雙鏈抗體為包含兩個多肽鏈的二價抗體，其中各多肽鏈包含由接頭連接之VH 及VL 結構域，該接頭很短以致於不允許兩個結構域在相同鏈上的配對，因此允許各結構域與另一多肽鏈上的互補結構域配對(參見，例如，Holliger等，1993，Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90:6444-48；及Poljak等，1994，Structure 2:1121-23)。若雙鏈抗體之兩個多肽鏈是相同的，則由它們配對得到的雙鏈抗體將具有相同的抗原結合位點。具有不同序列的多肽鏈可用於製備具有不同抗原結合位點的雙鏈抗體。相似地，三鏈抗體及四鏈抗體分別為包含三個及四個多肽鏈之抗體且分別形成三個及四個抗原結合位點，其可相同或不同。
本文使用Kabat等在Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版, U.S. Dept. of Health and Human Services, PHS, NIH, NIH Publication No.91-3242，1991中描述之方法鑑別給定抗體之互補決定區(CDRs)及構架區(FR)。可向分子中共價或非共價併入一或多個CDRs使其成為抗體。抗體可以較大多肽鏈併入CDR(s)。可將CDR(s)共價連接至另一鄉肽鏈，或非共價併入CDR(s)。CDRs允許抗體與具體的相關抗原特異性結合。
抗體可有一或多個結合位點。若多於一個結合位點，則該結合位點可與另一個相同或不同。例如，天然人免疫球蛋白通常具有兩個相同之結合位點，而「雙特異性」或「雙功能」抗體具有兩個不同之結合位點。
術語「鼠源抗體」包括具有一或多個來源於小鼠免疫球蛋白序列之可變區及恆定區之抗體。
術語「人類化抗體」是將小鼠抗體分子的互補決定區序列移植至人抗體可變區構架中而製成之抗體。
術語「抗原結合結構域」、「抗原結合區」或「抗原結合位點」為包含與抗原相互作用的胺基酸殘基且有助於抗體對抗原的特異性及親和力之抗體之部分。對與其抗原特異性結合之抗體而言，此將包括至少部分的至少一個其CDR結構域。
術語「抗原決定基」為與抗體(例如，藉由抗體)結合之分子部分。抗原決定基可包含分子的非連續部分(例如，在多肽中，在多肽之一級序列中不連續的胺基酸殘基在該多肽之三級及四級結構中相互足夠接近以致於被一個抗體結合)。
兩個多聚核苷酸或兩個多肽序列的「相同百分比」由使用GAP電腦程式(GCG Wisconsin Package；版本10.3 (Accelrys，San Diego，CA)之一部分)使用其預設參數比較序列測定。
術語「多聚核苷酸」、「寡聚核苷酸」及「核酸」可在全文中交替使用且包括DNA分子(例如，cDNA或基因組DNA)、RNA分子(例如mRNA)、使用核苷酸類似物(例如，肽核酸及非天然核苷酸類似物)生成的DNA或RNA類似物及其雜交體。核酸分子可為單鏈或雙鏈。在一個實施方案中，本文之核酸分子包含編碼本文提供抗體或其片段、衍生物、突變蛋白或變異體連續的開放閱讀框。
若它們之序列可反向平行排列則兩個單鏈多聚核苷酸是相互「互補的」，則這樣一個多聚核苷酸中之各核苷酸與另一多聚核苷酸中之互補核苷酸相反，不會引入空隙且各序列的5'或3'端沒有未配對的核苷酸。若兩個多聚核苷酸可在中等嚴格條件下相互雜交，則一個多聚核苷酸與另一多聚核苷酸「互補」。因此，一個多聚核苷酸可與另一多聚核苷酸互補，但並不是它的互補序列。
術語「載體」為可用於將與其相連的另一核酸引入細胞之核酸。載體之一種類型為「質體」，其指可連接附加核酸區段的線性或環狀雙鏈DNA分子。載體之另一類型為病毒載體(例如，複製缺陷逆轉錄病毒、腺病毒及腺病毒伴隨病毒)，其中可將附加DNA區段引入病毒基因組。某些載體可在它們被引入的宿主細胞中自主複製(例如，包含細菌複製起點的細菌載體以及游離型哺乳動物載體)。其他載體(例如，非游離型哺乳動物載體)在引入宿主細胞時整合入宿主細胞的基因組中且因此與宿主基因組一起複製。「表現載體」為可引導所選多聚核苷酸表現的載體類型。
若調控序列影響核苷酸序列之表現(例如，表現量、時間或位點)，則核苷酸序列「可操作地相連」於調控序列。「調控序列」為可影響與其可操作相連之核酸之表現(例如，表現量、時間或位點)之核酸。調控基因，例如，直接對受調控核酸發揮作用或藉由一或多個其他分子(例如，與調控序列及/或核酸結合之多聚核苷酸)的作用。調控序列之實例包括啟動子、增強子及其他表現控制元件(例如，多腺苷酸化信號)。調控序列的進一步實例描述於例如Goeddel，1990, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology, 第185卷, Academic Press, San Diego, CA；及Baron等, 1995,Nucleic Acids Res. 23:3605-06。
術語「宿主細胞」為用於表現核酸例如本文提供核酸之細胞。宿主細胞可為原核生物，例如大腸桿菌，或者其可為真核生物，例如單細胞真核生物(例如，酵母或其他真菌)、植物細胞(例如菸草或番茄植物細胞)、動物細胞(例如，人細胞、猴細胞、倉鼠細胞、大鼠細胞、小鼠細胞或昆蟲細胞)或雜交瘤。通常，宿主細胞為可用多肽編碼核酸轉型或轉染的培養細胞，其可接著在宿主細胞中表現。片語「重組宿主細胞」可用於表述用預期表現之核酸轉型或轉染的宿主細胞。宿主細胞亦可為包含該核酸但是不以期望水準表現之細胞，除非向該宿主細胞引入了調控序列這樣其可操作地連接於核酸。應理解的是術語宿主細胞不僅指具體之個體細胞亦指該細胞的子代或可能的子代。由於例如突變或環境影響後續世代會出現某些修飾，該子代事實上可能與母體細胞不同但是仍然屬於本文使用之術語範圍。
腸抑胃肽受體 腸抑胃肽受體屬於七次跨膜的G蛋白偶聯受體家族的B型，其藉由異源三聚體鳥嘌呤核苷酸結合蛋白(G蛋白)與一或多個胞內信號傳導途徑偶聯(Drucker等，2006，Cell Metab . 3:153-65)。截止目前的研究發現，GIPR主要表現於胰島β細胞及脂肪細胞表面(Ravn等，2013，J. Biol. Chem . 288:19760-72)，同時參與人體內的糖代謝與脂代謝過程，因此亦與糖尿病、肥胖症及相關病症緊密關聯(Skaw等，2016，Diabetes Obes. Metab . 18:847-854)。本文中所使用之「人GIPR」與「hGIPR」均指代人源的腸抑胃肽受體，可交替使用。本文中所使用之「鼠GIPR」與「mGIPR」均指代鼠源的腸抑胃肽受體，亦可交替使用。
在一個實施方案中，本文提供之抗體是與人GIPR特異性結合之抗體。在另一個實施方案中，本文提供之抗體是與細胞膜上的GIPR特異性結合之抗體，且該抗體能抑制或者阻斷GIP信號在此等細胞內的傳導。在另一個實施方案中，本文提供之抗體是與人GIPR特異性結合之抗體，且該抗體能與其他物種的GIPR結合(例如猴或小鼠)，且阻斷在此等物種中GIP之信號傳導。在進一步之實施例中，本文提供之抗體是與人GIPR結合之鼠源抗體，且該抗體能與其他物種的GIPR結合(例如猴)。
在一個實施方案中，GIPR之胺基酸及多聚核苷酸序列如下所列，序列資料來源於美國國立生物技術資訊中心的GeneBank資料庫以及歐洲生物資訊研究所的Uniprot資料庫： 智人(Homo sapiens)多聚核苷酸(SEQ ID NO：114)；登錄號：S79852； 智人(Homo sapiens)胺基酸(SEQ ID NO：113)；登錄號：AAB35419.2； 恆河猴(Rhesus macaque)多聚核苷酸(SEQ ID NO：116)；登錄號：XM_015124289.1； 恆河猴(Rhesus macaque)胺基酸(SEQ ID NO：115)；登錄號：XP_014979775； 小家鼠(Mus musculus)多聚核苷酸(SEQ ID NO：118)；登錄號：CCDS39795；及小家鼠(Mus musculus)胺基酸(SEQ ID NO：117)；登錄號：Q0P543。
腸抑胃肽受體抗體(GIPR抗體) 在一個實施方案中，本文提供之是GIPR抗體。在另一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體是完整GIPR抗體。在另一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體是GIPR抗體片段。在另一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體是GIPR抗體衍生物。在另一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體是GIPR抗體突變蛋白質。在進一步之實施方案中，本文提供之GIPR抗體是GIPR抗體變異體。
在一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體包含一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸序列，其中每個胺基酸序列獨立地選自於以下所列胺基酸序列： a.  輕鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 13及SEQ ID NO: 15； b.  輕鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 11及SEQ ID NO: 16； c.  輕鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 14及SEQ ID NO: 17； d.  重鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 23及SEQ ID NO: 26； e.  重鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 27及SEQ ID NO: 29；及 f.   重鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 28及SEQ ID NO: 30。
表1列出本文提供之GIPR抗體之輕鏈CDRs之胺基酸序列，以及其相應之多聚核苷酸編碼序列。表2列出本文提供之GIPR抗體之重鏈CDRs之胺基酸序列，以及其相應之多聚核苷酸編碼序列。 表1：輕鏈CDRs之胺基酸序列及其多聚核苷酸編碼序列
CDR1 CDR2 CDR3
A-1 核苷酸 aaggccagtcaggatgtgggtactgctgtagcc (SEQ ID NO: 31) tgggcatacatccggcacact (SEQ ID NO: 32) cagcaatatagcagctatccgtggacg (SEQ ID NO: 33)
A-1 胺基酸 KASQDVGTAVA (SEQ ID NO: 1) WAYIRHT (SEQ ID NO: 2) QQYSSYPWT (SEQ ID NO: 3)
A-2 核苷酸 agacccagtgaaagtgttgatagttatggcaatagttttatgcac (SEQ ID NO: 34) cttgcatccaacctagaatct (SEQ ID NO: 35) cagcaaaataatgaggatcctcggacg (SEQ ID NO: 36)
A-2 胺基酸 RPSESVDSYGNSFMH (SEQ ID NO: 4) LASNLES (SEQ ID NO: 5) QQNNEDPRT (SEQ ID NO: 6)
A-3 核苷酸 aaggcaagtgaggacatatataatcggttcgcc (SEQ ID NO: 37) gatgcaaccagtttggaaact (SEQ ID NO: 38) caacagtattggagtattccgtggacg (SEQ ID NO: 39)
A-3 胺基酸 KASEDIYNRFA (SEQ ID NO: 7) DATSLET (SEQ ID NO: 8) QQYWSIPWT (SEQ ID NO: 9)
A-4 核苷酸 agggccagccaaagtgtcaatacatctgtctatagttatatacac (SEQ ID NO: 40) tatgcatccaacctagaatct (SEQ ID NO: 41) caacacagttgggattttccttacacg (SEQ ID NO: 42)
A-4 胺基酸 RASQSVNTSVYSYIH (SEQ ID NO: 10) YASNLES (SEQ ID NO: 11) QHSWDFPYT (SEQ ID NO: 12)
A-5 核苷酸 agagccagccagtccgtgaacacagccgtgtactcttatatccac (SEQ ID NO: 43) tatgcatccaacctagaatct (SEQ ID NO: 41) cagcacagcttcgatttcccctacacc (SEQ ID NO: 44)
A-5 胺基酸 RASQSVNTAVYSYIH (SEQ ID NO: 13) YASNLES (SEQ ID NO: 11) QHSFDFPYT (SEQ ID NO: 14)
A-6 核苷酸 aaggcgagtcaggacattaatagctatttaagc (SEQ ID NO: 45) gcaaacagattggtagat    (SEQ ID NO: 46) ctacagtatgatgagtttccattcacg (SEQ ID NO: 47)
A-6 胺基酸 KASQDINSYLS (SEQ ID NO: 15) ANRLVD (SEQ ID NO: 16) LQYDEFPFT (SEQ ID NO: 17)
表2：重鏈CDRs之胺基酸序列及其多聚核苷酸編碼序列
CDR1 CDR2 CDR3
A-1 核苷酸 ggattcactttcagtagctatgccatgtct (SEQ ID NO: 48) tccattagtagtggtggtgccacctactatccagacagtgtgaag (SEQ ID NO: 49) ggcgagggcggtagtagctacccggcctggtttgctttc (SEQ ID NO: 50)
A-1 胺基酸 GFTFSSYAMS    (SEQ ID NO: 18) SISSGGATYYPDSVKG (SEQ ID NO: 19) GEGGSSYPAWFAF    (SEQ ID NO: 20)
A-2 核苷酸 ggattcactttcagtagctatgccatgtct    (SEQ ID NO: 48) gaaattagtagtggtggtagttacacctactatccagacactgtgacgggc (SEQ ID NO: 51) gataaggcgactcgaactggcatgggatttttttaccatactatggactac (SEQ ID NO: 52)
A-2 胺基酸 GFTFSSYAMS    (SEQ ID NO: 18) EISSGGSYTYYPDTVTG (SEQ ID NO: 21) DKATRTGMGFFYHTMDY (SEQ ID NO: 22)
A-3 核苷酸 ggctacacattcagtaggtactggatagag    (SEQ ID NO: 53) gagattttacctggaagtgatagtcctaactacaatgagaagttcaagggc (SEQ ID NO: 54) acggtagtagctacaaggtttgcttac    (SEQ ID NO: 55)
A-3 胺基酸 GYTFSRYWIE (SEQ ID NO: 23) EILPGSDSPNYNEKFK (SEQ ID NO: 24) TVVATRFAY (SEQ ID NO: 25)
A-4 核苷酸 ggctactcaatcaccagtgattatgcctggaac (SEQ ID NO: 56) tacataagctacagaggcatcgctacctataaaccatctctcaaaagt (SEQ ID NO: 57) ggggaatacggccccggcaactttgacttc (SEQ ID NO: 58)
A-4 胺基酸 GYSITSDYAWN (SEQ ID NO: 26) YISYRGIATYKPSLKS (SEQ ID NO: 27) GEYGPGNFDF (SEQ ID NO: 28)
A-5 核苷酸 ggctactcaatcaccagtgattatgcctggaac (SEQ ID NO: 56) tacataagctacagaggcatcgctacctataaaccatctctcaaaagt (SEQ ID NO: 57) ggggaatacggccccggcaactttgacttc (SEQ ID NO: 58)
A-5 胺基酸 GYSITSDYAWN (SEQ ID NO: 26) YISYRGIATYKPSLKS (SEQ ID NO: 27) GEYGPGNFDF (SEQ ID NO: 28)
A-6 核苷酸 ggctactcaatcaccagtgattatgcctggaac    (SEQ ID NO: 56) tacatgagctaccgtggtaccgcaacgtacaatccatttctcaaaagt (SEQ ID NO: 59) tatgattacgacgttccccggtttccttac    (SEQ ID NO: 60)
A-6 胺基酸 GYSITSDYAWN    (SEQ ID NO: 26) YMSYRGTATYNPFLKS (SEQ ID NO: 29) YDYDVPRFPY    (SEQ ID NO: 30)
在一個實施方案中，本文提供之抗體包含與表1與表2中所列之CDR胺基酸序列中之一相差5、4、3、2或1個單胺基酸添加、替換及/或缺失之序列。在另一個實施方案中，本文提供之抗體包含與表1與表2中所列之CDR胺基酸序列中之一相差4、3、2或1個單胺基酸添加、替換及/或缺失之序列。
在另一個實施方案中，本文提供之抗體包含與表1與表2中所列之CDR胺基酸序列中之一相差3、2或1個單胺基酸添加、替換及/或缺失之序列。
在另一個實施方案中，本文提供之抗體包含與表1與表2中所列之CDR胺基酸序列中之一相差2或1個單胺基酸添加、替換及/或缺失之序列。
在進一步之實施方案中，本文提供之抗體包含與表1與表2中所列之CDR胺基酸序列中之一相差1個單胺基酸添加、替換及/或缺失之序列。
在一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體包含一個或兩個胺基酸序列，其中每個胺基酸序列獨立地選自於以下所列胺基酸序列： a.   輕鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 13及SEQ ID NO: 15；及 b.   重鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 23及SEQ ID NO: 26。
在另一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體包含一個或兩個胺基酸序列，其中每個胺基酸序列獨立地選自於以下所列胺基酸序列： a.   輕鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 11及SEQ ID NO: 16；及 b.   重鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 27及SEQ ID NO: 29。
在另一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體包含一個或兩個胺基酸序列，其中每個胺基酸序列獨立地選自於以下所列胺基酸序列： a.   輕鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 14及SEQ ID NO: 17；及 b.   重鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 28及SEQ ID NO: 30。
在另一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體包含一個、二個、三個或四個胺基酸序列，其中每個胺基酸序列獨立地選自於以下所列之胺基酸序列： a.  輕鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 13及SEQ ID NO: 15； b.  重鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 23及SEQ ID NO: 26； c.  輕鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 11及SEQ ID NO: 16；及 d.  重鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 27及SEQ ID NO: 29。
在另一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體包含一個、二個、三個或四個胺基酸序列，其中每個胺基酸序列獨立地選自於以下所列之胺基酸序列： a.  輕鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 13及SEQ ID NO: 15； b.  重鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 23及SEQ ID NO: 26； c.  輕鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 14及SEQ ID NO: 17；及 d.  重鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 28及SEQ ID NO: 30。
在進一步之實施方案中，本文提供之GIPR抗體包含一個、二個、三個或四個胺基酸序列，其中每個胺基酸序列獨立地選自於以下所列之胺基酸序列： a.  輕鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 11及SEQ ID NO: 16； b.  重鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 27及SEQ ID NO: 29； c.  輕鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 14及SEQ ID NO: 17；及 d.  重鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 28及SEQ ID NO: 30。
在一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體包含一個、兩個或三個胺基酸序列，其中每個胺基酸序列獨立地選自於以下所列之胺基酸序列：SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 16及SEQ ID NO: 17。
在另一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體包含一個、兩個或三個胺基酸序列，其中每個胺基酸序列獨立地選自於以下所列之胺基酸序列：SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29及SEQ ID NO: 30。
在一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體包含一個獨立地選自於以下所列之輕鏈與重鏈CDR1胺基酸序列之組合：SEQ ID NO: 1與SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 4與SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 7與SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 10與SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 13與SEQ ID NO: 26及SEQ ID NO: 15與SEQ ID NO: 26。
在另一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體包含一個獨立地選自於以下所列之輕鏈與重鏈CDR2胺基酸序列之組合：SEQ ID NO: 2與SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 5與SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 8與SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 11與SEQ ID NO: 27及SEQ ID NO: 16與SEQ ID NO: 29。
在進一步之實施方案中，本文提供之GIPR抗體包含一個獨立地選自於以下所列之輕鏈與重鏈CDR3胺基酸序列之組合：SEQ ID NO: 3與SEQ ID NO:20、SEQ ID NO: 6與SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 9與SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 12與SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 14與SEQ ID NO: 28及SEQ ID NO: 17與SEQ ID NO: 30。
在一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體包含： a.  一個獨立地選自於以下所列之輕鏈與重鏈CDR1胺基酸序列之組合：SEQ ID NO: 1與SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 4與SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 7與SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 10與SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 13與SEQ ID NO: 26及SEQ ID NO: 15與SEQ ID NO: 26；及 b.  一個獨立地選自於以下所列之輕鏈與重鏈CDR2胺基酸序列之組合：SEQ ID NO: 2與SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 5與SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 8與SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 11與SEQ ID NO: 27及SEQ ID NO: 16與SEQ ID NO: 29。
在另一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體包含： a.  一個獨立地選自於以下所列之輕鏈與重鏈CDR1胺基酸序列之組合：SEQ ID NO: 1與SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 4與SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 7與SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 10與SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 13與SEQ ID NO: 26及SEQ ID NO: 15與SEQ ID NO: 26；及 b.  一個獨立地選自於以下所列之輕鏈與重鏈CDR3胺基酸序列之組合：SEQ ID NO: 3與SEQ ID NO:20、SEQ ID NO: 6與SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 9與SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 12與SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 14與SEQ ID NO: 28及SEQ ID NO: 17與SEQ ID NO: 30。
在另一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體包含： a.  一個獨立地選自於以下所列之輕鏈與重鏈CDR2胺基酸序列之組合：SEQ ID NO: 2與SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 5與SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 8與SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 11與SEQ ID NO: 27及SEQ ID NO: 16與SEQ ID NO: 29；及 b.  一個獨立地選自於以下所列之輕鏈與重鏈CDR3胺基酸序列之組合：SEQ ID NO: 3與SEQ ID NO:20、SEQ ID NO: 6與SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 9與SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 12與SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 14與SEQ ID NO: 28及SEQ ID NO: 17與SEQ ID NO: 30。
在進一步實施方案中，本文提供之GIPR抗體包含： a.  一個獨立地選自於以下所列之輕鏈與重鏈CDR1胺基酸序列之組合：SEQ ID NO: 1與SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 4與SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 7與SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 10與SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 13與SEQ ID NO: 26及SEQ ID NO: 15與SEQ ID NO: 26； b.  一個獨立地選自於以下所列之輕鏈與重鏈CDR2胺基酸序列之組合：SEQ ID NO: 2與SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 5與SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 8與SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 11與SEQ ID NO: 27及SEQ ID NO: 16與SEQ ID NO: 29；及 c.  一個獨立地選自於以下所列之輕鏈與重鏈CDR3胺基酸序列之組合：SEQ ID NO: 3與SEQ ID NO:20、SEQ ID NO: 6與SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 9與SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 12與SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 14與SEQ ID NO: 28及SEQ ID NO: 17與SEQ ID NO: 30。
在一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體包含： a.  輕鏈與重鏈CDR1、CDR2及CDR3胺基酸序列之組合：SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19及SEQ ID NO: 20； b.  輕鏈與重鏈CDR1、CDR2及CDR3胺基酸序列之組合：SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 21及SEQ ID NO: 22； c.  輕鏈與重鏈CDR1、CDR2及CDR3胺基酸序列之組合：SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 24及SEQ ID NO: 25； d.  輕鏈與重鏈CDR1、CDR2及CDR3胺基酸序列之組合：SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27及SEQ ID NO: 28； e.  輕鏈與重鏈CDR1、CDR2及CDR3胺基酸序列之組合：SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27及SEQ ID NO: 28；或 f.   輕鏈與重鏈CDR1、CDR2及CDR3胺基酸序列之組合：SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 29及SEQ ID NO: 30。
在一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體包含一個或兩個胺基酸序列，其中每個胺基酸序列獨立地選自於以下所列胺基酸序列： a.  輕鏈可變結構域胺基酸序列：SEQ ID NO: 61、SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO: 63、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 65、SEQ ID NO: 66、SEQ ID NO: 67、SEQ ID NO: 68、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO: 70及SEQ ID NO: 71；及與其任一序列有至少80%、至少85%、至少90%或至少95%相同之胺基酸序列；及 b.  重鏈可變結構域胺基酸序列：SEQ ID NO: 72、SEQ ID NO: 73、SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 75、SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 77、SEQ ID NO: 78、SEQ ID NO: 79及SEQ ID NO: 80；及與其任一序列有至少80%、至少85%、至少90%或至少95%相同之胺基酸序列。
在另一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體之多聚核苷酸編碼序列包含一個或兩個多聚核苷酸編碼序列，其中每個多聚核苷酸編碼序列獨立地選自於以下所列多聚核苷酸序列： a.  輕鏈可變結構域多聚核苷酸編碼序列：SEQ ID NO: 81、SEQ ID NO: 82、SEQ ID NO: 83、SEQ ID NO: 84、SEQ ID NO: 85、SEQ ID NO: 86、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO: 88、SEQ ID NO: 89、SEQ ID NO: 90及SEQ ID NO: 91；及與其任一序列有至少80%、至少85%、至少90%或至少95%相同之多聚核苷酸編碼序列；及 b.  重鏈可變結構域多聚核苷酸編碼序列：SEQ ID NO: 92、SEQ ID NO: 93、SEQ ID NO: 94、SEQ ID NO: 95、SEQ ID NO: 96、SEQ ID NO: 97、SEQ ID NO: 98、SEQ ID NO: 99及SEQ ID NO: 100；及與其任一序列有至少80%、至少85%、至少90%或至少95%相同之多聚核苷酸編碼序列。
在一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體包含一個獨立地選自於以下所列之胺基酸序列：SEQ ID NO: 61、SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO: 63、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 65、SEQ ID NO: 66、SEQ ID NO: 67、SEQ ID NO: 68、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO: 70及SEQ ID NO: 71。
在另一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體包含一個獨立地選自於以下所列之胺基酸序列：SEQ ID NO: 72、SEQ ID NO: 73、SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 75、SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 77、SEQ ID NO: 78、SEQ ID NO: 79及SEQ ID NO: 80。
在一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體包含一個獨立地選自於以下所列之輕鏈與重鏈可變結構域胺基酸序列之組合：SEQ ID NO: 61與SEQ ID NO: 72、SEQ ID NO: 62與SEQ ID NO: 73、SEQ ID NO: 63與SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 64與SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 65與SEQ ID NO: 75、SEQ ID NO: 66與SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 67與SEQ ID NO: 77、SEQ ID NO: 68與SEQ ID NO: 77、SEQ ID NO: 69與SEQ ID NO: 78、SEQ ID NO: 70與SEQ ID NO: 79及SEQ ID NO: 71與SEQ ID NO: 80。
在一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體包含一個獨立地選自於以下所列之胺基酸序列：SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO: 63、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 66、SEQ ID NO: 67、SEQ ID NO: 68、SEQ ID NO: 73、SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 76及SEQ ID NO: 77。
在另一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體包含一個獨立地選自於以下所列之輕鏈與重鏈可變結構域胺基酸序列之組合：SEQ ID NO: 61與SEQ ID NO: 72 (L1H1)、SEQ ID NO: 62與SEQ ID NO: 73 (L2H2)、SEQ ID NO: 63與SEQ ID NO: 74 (L3H3)、SEQ ID NO: 64與SEQ ID NO: 74 (L4H3)、SEQ ID NO: 65與SEQ ID NO: 75 (L5H4)、SEQ ID NO: 66與SEQ ID NO: 76 (L6H5)、SEQ ID NO: 67與SEQ ID NO: 77 (L7H6)、SEQ ID NO: 68與SEQ ID NO: 77 (L8H6)、SEQ ID NO: 69與SEQ ID NO: 78 (L9H7)、SEQ ID NO: 70與SEQ ID NO: 79 (L10H8)及SEQ ID NO: 71與SEQ ID NO: 80 (L11H9)。
本文亦可用「LxHy」符號來指代所提供的GIPR抗體，其中「x」對應於輕鏈可變區序列代號；「y」對應於重鏈可變區序列代號。例如，L2H2指具有包含SEQ ID NO: 62 (L2)胺基酸序列的輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 73 (H2)胺基酸序列的重鏈可變區的完整抗體。
在一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體包含一或兩個胺基酸序列，其中每個胺基酸序列獨立地選自於以下所列之胺基酸序列： a.  輕鏈恆定胺基酸序列：SEQ ID NO: 101及SEQ ID NO: 102；及 b.  重鏈恆定胺基酸序列：SEQ ID NO: 103、 SEQ ID NO: 104及SEQ ID NO: 124。
在一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體包含一或兩個胺基酸序列，其中每個胺基酸序列獨立地選自於以下所列之輕鏈與重鏈恆定胺基酸序列之組合：SEQ ID NO: 101及SEQ ID NO: 103、SEQ ID NO: 101及SEQ ID NO: 104、SEQ ID NO: 102及SEQ ID NO: 103及SEQ ID NO: 102及SEQ ID NO: 104。在另一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體包含一或兩個胺基酸序列，其中每個胺基酸序列獨立地選自於以下所列之輕鏈與重鏈恆定胺基酸序列之組合：SEQ ID NO: 101及SEQ ID NO: 124及SEQ ID NO: 102及SEQ ID NO: 124。
在一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體包含本文所列輕鏈及重鏈CDRs，以及FRs(構架)之胺基酸序列。FRs之胺基酸序列包含於輕鏈或者重鏈可變結構域胺基酸序列中，未單獨陳列。在一個實施方案中，該抗體包含一個本文所列之輕鏈CDR1序列。在另一個實施方案中，該抗體包含一個本文所列之輕鏈CDR2序列。在另一個實施方案中，該抗體包含一個本文所列之輕鏈CDR3序列。在另一個實施方案中，該抗體包含一個本文所列之重鏈CDR1序列。在另一個實施方案中，該抗體包含一個本文所列之重鏈CDR2序列。在另一個實施方案中，該抗體包含一個本文所列之重鏈CDR3序列。在另一個實施方案中，該抗體包含一個本文之輕鏈FR1序列。在另一個實施方案中，該抗體包含一個本文之輕鏈FR2序列。在另一個實施方案中，該抗體包含一個本文之輕鏈FR3序列。在另一個實施方案中，該抗體包含一個本文之輕鏈FR4序列。在另一個實施方案中，該抗體包含一個本文之重鏈FR1序列。在另一個實施方案中，該抗體包含一個本文之重鏈FR2序列。在另一個實施方案中，該抗體包含一個本文之重鏈FR3序列。在進一步之實施方案中，該抗體包含一個本文之重鏈FR4序列。
在一個實施方案中，該抗體之輕鏈CDR3序列與本文所列輕鏈CDR3胺基酸序列SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 12及SEQ ID NO: 14之一相差不得超過6、5、4、3、2或1個單胺基酸添加、替換及/或缺失。在另一個實施方案中，該抗體之重鏈CDR3序列與本文所列重鏈CDR3胺基酸序列SEQ ID NO: 22或SEQ ID NO: 28相差最多不超過6、5、4、3、2或1個單胺基酸添加、替換及/或缺失。在進一步之實施方案中，該抗體之輕鏈CDR3序列與本文所列輕鏈CDR3胺基酸序列SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 12及SEQ ID NO: 14之一相差不得超過6、5、4、3、2或1個單胺基酸添加、替換及/或缺失，且該抗體之重鏈CDR3序列與本文所列重鏈CDR3胺基酸序列SEQ ID NO: 22或SEQ ID NO: 28相差最多不超過6、5、4、3、2或1個單胺基酸添加、替換及/或缺失。在另一個實施方案中，該抗體進一步包含1、2、3、4、5或6個本文所列輕重鏈CDR輕重鏈序列組合。
在一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體包含一個輕鏈可變結構域胺基酸序列，該序列選擇於本文所列之L2 (SEQ ID NO:62)、L3 (SEQ ID NO:63)、L4 (SEQ ID NO:64)、L6 (SEQ ID NO:66)、L7 (SEQ ID NO:67)及L8 (SEQ ID NO:68)輕鏈可變結構域序列。在一個實施方案中，該GIPR抗體之輕鏈可變結構域胺基酸序列與L2 (SEQ ID NO:62)、L3 (SEQ ID NO:63)、L4 (SEQ ID NO:64)、L6 (SEQ ID NO:66)、L7 (SEQ ID NO:67)及L8 (SEQ ID NO:68) 之一的輕鏈可變結構域胺基酸序列存在15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸的差異的，其中各序列的差異獨立為一個胺基酸殘基的缺失、插入或替換。在另一個實施方案中，該GIPR抗體之輕鏈可變結構域胺基酸序列與L2 (SEQ ID NO:62)、L3 (SEQ ID NO:63)、L4 (SEQ ID NO:64)、L6 (SEQ ID NO:66)、L7 (SEQ ID NO:67)及L8 (SEQ ID NO:68) 之一的輕鏈可變結構域胺基酸序列有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%相同。在另一個實施方案中，該GIPR抗體之輕鏈可變結構域多聚核苷酸編碼序列與L2 (SEQ ID NO:62)、L3 (SEQ ID NO:63)、L4 (SEQ ID NO:64)、L6 (SEQ ID NO:66)、L7 (SEQ ID NO:67)、及L8 (SEQ ID NO:68)之一之多聚核苷酸編碼序列有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%相同。在另一個實施方案中，該GIPR抗體之輕鏈可變結構域多聚核苷酸編碼序列包含在中等條件下與L2 (SEQ ID NO:62)、L3 (SEQ ID NO:63)、L4 (SEQ ID NO:64)、L6 (SEQ ID NO:66)、L7 (SEQ ID NO:67)及L8 (SEQ ID NO:68)之一的輕鏈可變結構域之多聚核苷酸編碼序列互補序列雜交之多聚核苷酸序列。在進一步之實施方案中，該GIPR抗體之輕鏈可變結構域多聚核苷酸編碼序列包含在嚴格條件下與L2 (SEQ ID NO:62)、L3 (SEQ ID NO:63)、L4 (SEQ ID NO:64)、L6 (SEQ ID NO:66)、L7 (SEQ ID NO:67)及L8 (SEQ ID NO:68)之一的輕鏈可變結構域之多聚核苷酸編碼序列互補序列雜交之多聚核苷酸序列。
在一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體包含一個重鏈可變結構域胺基酸序列，該序列選擇於本文所列H2 (SEQ ID NO:73)、H3 (SEQ ID NO:74)、H5 (SEQ ID NO:76)及H6 (SEQ ID NO:77)重鏈可變結構域序列。在另一個實施方案中，該GIPR抗體之重鏈可變結構域胺基酸序列與H2 (SEQ ID NO:73)、H3 (SEQ ID NO:74)、H5 (SEQ ID NO:76)及H6 (SEQ ID NO:77)之一的重鏈可變結構域序列存在15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸差異，其中各序列的差異獨立為一個胺基酸殘基的缺失、插入或替換。在另一個實施方案中，該GIPR抗體之重鏈可變結構域胺基酸序列與H2 (SEQ ID NO:73)、H3 (SEQ ID NO:74)、H5 (SEQ ID NO:76)及H6 (SEQ ID NO:77)之一的重鏈可變結構域序列有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%相同。在另一個實施方案中，該GIPR抗體之重鏈可變結構域多聚核苷酸編碼序列與H2 (SEQ ID NO:73)、H3 (SEQ ID NO:74)、H5 (SEQ ID NO:76)及H6 (SEQ ID NO:77)之一的重鏈可變結構域多聚核苷酸編碼序列有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%相同。在另一個實施方案中，該GIPR抗體之重鏈可變結構域多聚核苷酸編碼序列包含在中等嚴格條件下與H2 (SEQ ID NO:73)、H3 (SEQ ID NO:74)、H5 (SEQ ID NO:76)、及H6 (SEQ ID NO:77)之一的重鏈可變結構域之多聚核苷酸編碼序列互補序列雜交之多聚核苷酸序列。在一個實施方案中，該GIPR抗體之重鏈可變結構域多聚核苷酸編碼序列包含在嚴格條件下與H2 (SEQ ID NO:73)、H3 (SEQ ID NO:74)、H5 (SEQ ID NO:76)、及H6 (SEQ ID NO:77)之一的重鏈可變結構域之多聚核苷酸編碼序列互補序列雜交之多聚核苷酸序列。
在一個實施方案中，本文提供之抗體是一包含L1H1(SEQ ID NO:61及SEQ ID NO:72)、L2H2 (SEQ ID NO:62及SEQ ID NO:73)、L3H3 (SEQ ID NO:63及SEQ ID NO:74)、L4H3 (SEQ ID NO:64及SEQ ID NO:74)、L5H4 (SEQ ID NO:65及SEQ ID NO:75)、L6H5 (SEQ ID NO:66及SEQ ID NO:76)、L7H6 (SEQ ID NO:67及SEQ ID NO:77)、L8H6 (SEQ ID NO:68及SEQ ID NO:77)、L9H7 (SEQ ID NO:69及SEQ ID NO:78)、L10H8 (SEQ ID NO:70及SEQ ID NO:79)或L11H9 (SEQ ID NO:71及SEQ ID NO:80)組合之抗體，或其一的期望表型(例如，IgA、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgM、IgE或IgD)，或其一Fab或F(ab')2片段。
在一個實施方案中，本文提供之抗體是一包含L2H2 (SEQ ID NO:62及SEQ ID NO:73)、L3H3 (SEQ ID NO:63及SEQ ID NO:74)、L4H3 (SEQ ID NO:64及SEQ ID NO:74)、L6H5 (SEQ ID NO:66及SEQ ID NO:76)、L7H6 (SEQ ID NO:67及SEQ ID NO:77)或L8H6 (SEQ ID NO:68及SEQ ID NO:77)組合之抗體，或其一類轉換之抗體(例如，IgA、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgM、IgE及IgD)，或其一Fab或F(ab')2片段。
本文提供之抗體可包含此項技術中已知的恆定區中任何一個。輕鏈恆定區可為例如κ或λ型輕鏈恆定區，例如小鼠κ或λ型輕鏈恆定區。重鏈恆定區可為例如α、δ、ε、γ或μ型重鏈恆定區，例如小鼠α、δ、ε、γ或μ型重鏈恆定區。在一個實施方案中，該輕鏈或重鏈恆定區為天然恆定區之片段、衍生物、變異體或突變蛋白。
在一個實施方案中，本文提供之抗體進一步包含人恆定輕鏈κ或λ結構域或其片段。輕鏈恆定區之胺基酸序列如下： 人恆定輕鏈κ結構域胺基酸序列：(SEQ ID NO: 101)；及 人恆定輕鏈λ結構域胺基酸序列：(SEQ ID NO: 102)。
在一個實施方案中，本文提供之抗體進一步包含人重鏈恆定結構域或其片段。
重鏈恆定區胺基酸序列序列如下： 人重鏈恆定區胺基酸序列(hIgG2)：(SEQ ID NO: 103)； 人重鏈恆定區胺基酸序列(hIgG4)：(SEQ ID NO: 104)；及 人重鏈恆定區胺基酸序列(hIgG4)：(SEQ ID NO: 124)。
在一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體包含一個輕鏈結構域胺基酸序列，該序列選擇於本文所列之V1 (SEQ ID NO: 125)及V2 (SEQ ID NO: 126)。在一個實施方案中，該GIPR抗體之輕鏈結構域胺基酸序列與V1及V2之一的輕鏈結構域胺基酸序列存在15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸的差異，其中各序列的差異獨立為一個胺基酸殘基的缺失、插入或替換。在另一個實施方案中，該GIPR抗體之輕鏈結構域胺基酸序列與V1及V2之一的輕鏈結構域胺基酸序列有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%相同。在另一個實施方案中，該GIPR抗體之輕鏈結構域多聚核苷酸編碼序列與V1及V2之一之多聚核苷酸編碼序列有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%相同。在另一個實施方案中，該GIPR抗體之輕鏈結構域多聚核苷酸編碼序列包含在中等條件下與V1及V2之一的輕鏈結構域之多聚核苷酸編碼序列互補序列雜交之多聚核苷酸序列。在進一步之實施方案中，該GIPR抗體之輕鏈結構域多聚核苷酸編碼序列包含在嚴格條件下與V1及V2之一的輕鏈結構域之多聚核苷酸編碼序列互補序列雜交之多聚核苷酸序列。
在一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體包含一個重鏈結構域胺基酸序列，該序列選擇於本文所列W1 (SEQ ID NO: 127)、W2 (SEQ ID NO: 128)、W3 (SEQ ID NO: 129)、W4 (SEQ ID NO: 130)、W5 (SEQ ID NO: 131)、W6 (SEQ ID NO: 132)、 W7 (SEQ ID NO: 133)、W8 (SEQ ID NO: 134)及W9 (SEQ ID NO: 135)。在另一個實施方案中，該GIPR抗體之重鏈結構域胺基酸序列與W1、W2、W3、W4、W5、W6、W7、W8及W9之一的重鏈結構域序列存在15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸的差異，其中各序列的差異獨立為一個胺基酸殘基的缺失、插入或替換。在另一個實施方案中，該GIPR抗體之重鏈結構域胺基酸序列與W1、W2、W3、W4、W5、W6、W7、W8、及W9之一的重鏈結構域序列有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%相同。在另一個實施方案中，該GIPR抗體之重鏈結構域多聚核苷酸編碼序列與W1、W2、W3、W4、W5、W6、W7、W8、及W9之一之多聚核苷酸編碼序列有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%相同。在另一個實施方案中，該GIPR抗體之重鏈結構域多聚核苷酸編碼序列包含在中等嚴格條件下與W1、W2、W3、W4、W5、W6、W7、W8、及W9之一的重鏈結構域之多聚核苷酸編碼序列互補序列雜交之多聚核苷酸序列。在一個實施方案中，該GIPR抗體之重鏈結構域多聚核苷酸編碼序列包含在嚴格條件下與W1、W2、W3、W4、W5、W6、W7、W8、及W9之一的重鏈結構域之多聚核苷酸編碼序列互補序列雜交之多聚核苷酸序列。
在另一個實施方案中，本文提供之抗體是一包含V1W1 (SEQ ID NO: 125及SEQ ID NO: 127)、V1W2 (SEQ ID NO: 125及SEQ ID NO: 128)、V1W3 (SEQ ID NO: 125及SEQ ID NO: 129)、V1W4 (SEQ ID NO: 125及SEQ ID NO: 130)、V1W5 (SEQ ID NO: 125及SEQ ID NO: 131)、V1W6 (SEQ ID NO: 125及SEQ ID NO: 132)、V1W7 (SEQ ID NO: 125及SEQ ID NO: 133)、V1W8 (SEQ ID NO: 125及SEQ ID NO: 134)、V1W9 (SEQ ID NO: 125及SEQ ID NO: 135)、V2W1 (SEQ ID NO: 126及SEQ ID NO: 127)、V2W2 (SEQ ID NO: 126及SEQ ID NO: 128)、V2W3 (SEQ ID NO: 126及SEQ ID NO: 129)、V2W4 (SEQ ID NO: 126及SEQ ID NO: 130)、V2W5 (SEQ ID NO: 126及SEQ ID NO: 131)、V2W6 (SEQ ID NO: 126及SEQ ID NO: 132)、V2W7 (SEQ ID NO: 126及SEQ ID NO: 133)、V2W8 (SEQ ID NO: 126及SEQ ID NO: 134)或V2W9 (SEQ ID NO: 12及SEQ ID NO: 135)組合之抗體。
在一個實施方案中，本文提供之抗體是一包含V1W1 (SEQ ID NO: 125及SEQ ID NO: 127)組合之抗體。在一個實施方案中，本文提供之抗體是一包含V1W2 (SEQ ID NO: 125及SEQ ID NO: 128)組合之抗體。在一個實施方案中，本文提供之抗體是一包含V1W3 (SEQ ID NO: 125及SEQ ID NO: 129)組合之抗體。在一個實施方案中，本文提供之抗體是一包含V1W4 (SEQ ID NO: 125及SEQ ID NO: 130)組合之抗體。在一個實施方案中，本文提供之抗體是一包含V1W5 (SEQ ID NO: 125及SEQ ID NO: 131)組合之抗體。在一個實施方案中，本文提供之抗體是一包含V1W6 (SEQ ID NO: 125及SEQ ID NO: 132)組合之抗體。在一個實施方案中，本文提供之抗體是一包含V1W7 (SEQ ID NO: 125及SEQ ID NO: 133)組合之抗體。在一個實施方案中，本文提供之抗體是一包含V1W8 (SEQ ID NO: 125及SEQ ID NO: 134)組合之抗體。在一個實施方案中，本文提供之抗體是一包含V1W9 (SEQ ID NO: 125及SEQ ID NO: 135)組合之抗體。在一個實施方案中，本文提供之抗體是一包含V2W1 (SEQ ID NO: 126及SEQ ID NO: 127)組合之抗體。在一個實施方案中，本文提供之抗體是一包含V2W2 (SEQ ID NO: 126及SEQ ID NO: 128)組合之抗體。在一個實施方案中，本文提供之抗體是一包含V2W3 (SEQ ID NO: 126及SEQ ID NO: 129)組合之抗體。在一個實施方案中，本文提供之抗體是一包含V2W4 (SEQ ID NO: 126及SEQ ID NO: 130)組合之抗體。在一個實施方案中，本文提供之抗體是一包含V2W5 (SEQ ID NO: 126及SEQ ID NO: 131)組合之抗體。在一個實施方案中，本文提供之抗體是一包含V2W6 (SEQ ID NO: 126及SEQ ID NO: 132)組合之抗體。在一個實施方案中，本文提供之抗體是一包含V2W7 (SEQ ID NO: 126及SEQ ID NO: 133)組合之抗體。在一個實施方案中，本文提供之抗體是一包含V2W8 (SEQ ID NO: 126及SEQ ID NO: 134)組合之抗體。在一個實施方案中，本文提供之抗體是一包含V2W9 (SEQ ID NO: 126及SEQ ID NO: 135)組合之抗體。
在一個實施方案中，本文所提供的GIPR抗體選自鼠源抗體、人類化抗體、嵌合抗體、單株抗體、多株抗體、重組抗體、抗原結合抗體片段、單鏈抗體、雙鏈抗體、三鏈抗體、四鏈抗體、Fab片段、F(ab')x片段、結構域抗體、IgD抗體、IgE抗體、IgM抗體、IgGl抗體、IgG2抗體、IgG3抗體或IgG4抗體。
在一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體為GIPR單株抗體。
在另一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體為單株抗體，該單株抗體包含一個選自於以下所列之胺基酸序列之組合：SEQ ID NO: 61與SEQ ID NO: 72、SEQ ID NO: 62與SEQ ID NO: 73、SEQ ID NO: 63與SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 64與SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 65與SEQ ID NO: 75、SEQ ID NO: 66與SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 67與SEQ ID NO: 77、SEQ ID NO: 68與SEQ ID NO: 77、SEQ ID NO: 69與SEQ ID NO: 78、SEQ ID NO: 70與SEQ ID NO: 79及SEQ ID NO: 71與SEQ ID NO: 80。
在一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體為鼠源GIPR抗體。在另一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體為人類化GIPR抗體。
在一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體降低人GIP信號傳導之IC50 值為大約1 nM至大約200 nM或大約1 nM至大約100 nM。
抗體及抗體片段 在一個實施方案中，本文提供之抗體為完整抗體(包括具有全長重及/或輕鏈的多株、單株、嵌合、人類化或人類抗體)。在另一個實施方案中，本文提供之抗體為抗體片段，列如F(ab')2 、Fab、Fab'、Fv、Fc或Fd片段，單結構域抗體、單鏈抗體、最大抗體(maxibodies)、微抗體(minibodies)、內抗體(intrabodies)、二鏈抗體、三鏈抗體、四鏈抗體、v-NAR或bis-scFv(參見，例如Hollinger及Hudson，2005，Nature Biotechnology 23:1126-1136)。在另一個實施方案中，本文提供之抗體包括如美國專利號6703199中所公開之抗體多肽，包括纖維結合素多肽單抗體。在進一步之實施方案中，本文提供之抗體包括如美國專利出版物2005/0238646中所公開之單鏈多肽。
在一個實施方案中，單株抗體之基因之可變區是使用核苷酸引子擴增在雜交瘤中表現。此等引子可由一般熟習此項技術者合成或自商業來源購買。鼠及人可變區引子包括VHa 、VHb 、VHc 、VHd 、CH1 、VL 及CL 區的引子可自商業來源購買。此等引子可用於擴增重鏈或輕鏈可變區，然後將其分別插入載體例如IMMUNOZAPTM H或IMMUNOZAPTM L (Stratagene)中。然後將此等載體引入大腸桿菌、酵母或哺乳動物為基礎之表現系統。此等方法可使用於生產大量包含VH 及VL 結構域融合的單鏈蛋白(參見Bird等，1988，Science 242:423-426)。
熟習此項技術者應理解的是一些蛋白質，例如抗體，可能進行可多種轉錄後修飾。此等修飾之類型與程度取決於用於表現該蛋白的宿主細胞株以及培養條件。該類修飾包括糖基化作用、甲硫胺酸氧化、二酮哌𠯤形成、天冬胺酸異構化及天冬醯胺脫醯胺作用之變化。抗體之羧端鹼性殘基(例如離胺酸或精胺酸)因羧肽酶的頻繁修飾作用而可能丟失(參見，Harris，1995，Journal of Chromatography 705:129-134)。
鼠單株抗體可使用常用的雜交瘤細胞方法來生產。該單株抗體可藉由多種已確立的技術分離及純化。該類分離技術包括蛋白A-瓊脂糖的親和層析法、分子排阻層析法及離子交換層析法(參見，例如，Coligan第2.7.1-2.7.12頁及第2.9.1-2.9.3頁；Baines等，「Purification of Immunoglobulin G(IgG),」 Methods in Molecular Biology，第10卷，第79-104頁(The Humana Press公司，1992))。該單株抗體可使用基於抗體之特殊性質(例如，重鏈或輕鏈同種型、結合特異性等)篩選的適當配基藉由親和層析法來純化。親和層析法的適當配基之實例包括蛋白A、蛋白G、抗恆定區(輕鏈或重鏈)抗體、抗獨特型抗體以及TGF-β結合蛋白或其片段或變異體。
可使用抗體結合位點中央的互補決定區(CDRs)對分子進行親和力成熟化的改造，來得到親和性增加之抗體，例如針對c-erbB-2的親和性增加之抗體(Schier等，1996，J.Mol. Biol. 263:551-567)。因此，該類技術可用於製備人GIPR之抗體。
例如可在偵測是否存在人GIPR之體外或體內測定法中使用針對人GIPR之抗體。
亦可藉由任何傳統技術製備抗體。例如，可自天然表現此等抗體之細胞將其純化(例如，可自生產抗體之雜交瘤將其純化)或使用此項技術中任何已知的技術在重組表現系統中生產。參見，例如，Monoclonal Antibodies, Hybridomas: A New Dimension in Biological Analyses, Kennet等編，Plenum Press (1980)；及Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow及Land編, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1988)。此在下文之核酸部分討論。
可藉由任何已知技術製備抗體且篩選期望性質。一些技術涉及分離編碼相關抗體(例如，抗GIPR抗體)的多肽鏈(或其部分)之核酸，且藉由重組DNA技術操作核酸。該核酸可與另一相關核酸融合或經修飾(例如藉由誘變或其他傳統技術)以添加、缺失或替換一或多個胺基酸殘基。
當需要提高根據本文包含一或多個上述CDRs之抗體之親和性時，可藉由多種親和成熟方案包括維持CDRs(Yang等，1995，J.Mol. Biol. 254: 392-403)、鏈替換(Marks等，1992，Bio/Technology 10:779-783)、使用大腸桿菌的突變株(Low等，1996，J.Mol. Biol. 250:350-368)DNA重排(Patten等，1997，Curr. Opin. Biotechnol. 8:724-733)、噬菌體展示(Thompson等，1996，J.Mol. Biol. 256:7-88)以及其他PCR技術(Crameri等，1998，Nature 391：288-291)。所有此等親和力成熟方法討論於Vaughan等，1998，Nature Biotechnology 16:535-539 中。
在一個實施方案中，本文提供之抗體為抗GIPR片段。該片段可完全由抗體衍生序列組成或可包含附加序列。抗原結合片段之實例包括Fab、F(ab')2、單鏈抗體、雙鏈抗體、三鏈抗體、四鏈抗體及結構域抗體，其他實例提供於Lunde等，2002，Biochem. Soc. Trans. 30:500-06。
可經胺基酸橋(短肽接頭)連接重鏈與輕鏈可變結構域(Fv區)形成單鏈抗體，從而得到單多肽鏈。已藉由將編碼肽接頭的DNA融合在編碼兩個可變結構域多肽(VL 及VH )的DNAs之間製備該單鏈Fvs (scFvs)。所得多肽可摺疊回自身形成抗原結合單體，或它們可形成多聚體(例如，二聚體、三聚體或四聚體)，取決於兩個可變結構域之間的柔性接頭的長度(Kortt等，1997，Prot. Eng. 10:423；Kortt等2001，Biomol. Eng. 18:95-108)。藉由組合包含多肽之不同VL 及VH ，可形成與不同表型結合之多體scFvs (Kriangkum等，2001，Biomol. Eng. 18:31-40)。已研發的用於生產單鏈抗體之技術包括美國專利號4946778；Bird，1988，Science 242:423；Huston等，1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883；Ward等，1989，Nature 334:544-546；de Graaf等，2002，Methods Mol Biol. 178:379-87中描述的彼等者。來源於本文提供之抗體之單鏈抗體包括但不限於包含可變結構域組合L1H1之scFvs，均涵蓋於本文。
亦可藉由抗體之蛋白水解作用例如根據傳統方法用胃蛋白酶或木瓜蛋白酶消化完整之抗體獲得來源於抗體之抗原結合片段。舉例而言，可用胃蛋白酶酶裂解抗體提供稱作F(ab')2的SS片段生產抗體片段。可使用巰基還原劑進一步裂解此片段產生3.5S Fab'單價片段。可選擇的方案有，使用巰基保護基團進行該裂解反應得到二硫鍵之裂解；另外還可以使用木瓜蛋白酶的酶裂解直接產生兩個單價Fab片段及一個Fc片段。此等方法描述於例如Goldenberg，美國專利號4,331,647，Nisonoff等，1960，Arch. Biochem. Biophys. 89:230；Porter，1959，Biochem. J. 73:119；Edelman等，Methods in Enzymology l:422 (Academic Press，1967)；以及Andrews及Titus, J.A. Current Protocols in Immunology (Coligan等編，John Wiley & Sons, 2003)，第2.8,1-2.8.10頁及第2.10A.1-2.10A.5頁。其他裂解抗體之方法，例如製備重鏈以形成單價重、輕鏈片段(Fd)，進一步裂解片段或亦可使用其他酶、化學或基因技術，只要片段與可被該完整抗體識別的抗原結合。
另一種形式之抗體片段為包含一或多個抗體互補決定區(CDRs)的肽。可藉由構建編碼相關CDR的多肽獲得CDRs。例如可藉由使用聚合酶鏈式反應用抗體生成細胞的mRNA作為模板合成可變區製備該類多肽，參見，例如，Larrick等，1991，Methods: A Companion to Methods in Enzymology 2:106；Courtenay-Luck，「Genetic Manipulation of Monoclonal Antibodies,」 Monoclonal Antibodies: Production, Engineering and Clinical Application，Ritter等編，166頁(Cambridge University Press，1995)；及Ward等，「Genetic Manipulation and Expression of Antibodies,」 Monoclonal Antibodies: Principles and Applications，Birch等編，137頁(Wiley-Liss公司，1995)。該抗體片段可進一步包含本文所述抗體之至少一個可變結構域。因此，例如，V區結構域可為單體且是VH 或VL 結構域，其可以如下文所述之至少等於1 × 10-7 M或更高的親和力獨立與GIPR結合。
該可變區結構域可為任何天然可變結構域或其基因工程改造形式。基因工程改造形式指使用重組DNA工程技術生產之可變區結構域。該基因工程改造形式包括例如藉由向特異抗體之胺基酸序列插入、缺失或改變由特異抗體可變區產生的。具體實例包括包含只含一個CDR以及視情況來自一個抗體之一或多個構架胺基酸及來自另一抗體之可變區結構域剩餘部分，且由基因工程改造組裝成之可變區結構域。
可變區結構域可與至少一個其他抗體結構域或其片段在C端胺基酸共價連接。因此，舉例而言，存在於可變區結構域的VH 結構域可與免疫球蛋白CH1 結構域或其片段相連。相似地，VL 結構域可與CK 結構域或其片段相連。以此種方式，例如，該抗體可為Fab片段，其中抗原結合結構域包含它們的C端分別與CH1 及CK 結構域共價連接之聯合VH 及VL 結構域。可用其他胺基酸延長CH1 結構域，例如以提供鉸鏈區或如Fab'片段中之部分鉸鏈結構域或提供其他結構域，例如抗體CH2 及CH3 結構域。
抗體之衍生物及變異體 例如可藉由隨機誘變或藉由定點誘變(例如寡聚核苷酸誘導之定點誘變)改變編碼對應於胺基酸序列L1及H1的核苷酸序列以產生與未突變多聚核苷酸相比包含一或多個具體核苷酸替換、缺失或插入的經改變之多聚核苷酸。用於產生該類改變的技術實例描述於Walder等，1986，Gene 42:133；Bauer等，1985，Gene 37:73；Craik, 1985, BioTechniques, 3:12-19；Smith等，1981, Genetic Engineering: Principles and Methods，Plenum Press；以及美國專利號4518584及4737462。此等及其他方法可用於產生例如與未衍生化抗體相比具有期望性質例如親和性、親和力或對GIPR之特異性增強、體內或體外活性或穩定性增強或體內副作用降低的抗GIPR抗體之衍生物。
本文領域之其他抗GIPR抗體衍生物包括抗GIPR抗體或其片段與它蛋白或多肽之共價或聚集結合物，例如藉由表現包含與抗GIPR抗體多肽之N端或C端融合的異源多肽之重組融合蛋白。例如，該結合肽可為異源信號(或引導)多肽，例如酵母α因子前導肽或例如抗原決定基標籤的肽。包含融合蛋白之抗體可包含被添加以輔助抗體之純化或鑑別的肽(例如多聚組胺酸)。抗體亦可與FLAG肽連接，如Hopp等，1988, Bio/Technology 6:1204及美國專利5011912所述。FLAG肽具有高抗原性且提供被特異單株抗體(mAb)可逆結合之抗原決定基，允許已表現重組蛋白的快速偵測及方便純化。可商業購買(Sigma-Aldrich，St. Louis，MO)用於製備其中FLAG肽與給定多肽融合的融合蛋白的試劑，在另一個實施方案中，包含一或多個抗體之寡聚體可用作GIPR拮抗劑或用更高級的寡聚體。寡聚體可以是共價連接之或非共價連接之二聚體、三聚體或更高的寡聚體形式。可使用包含兩個或更多個抗體之寡具體，其中一個實例為同型二聚體。其他寡聚體包括異二聚體、同型三聚體、異三聚體、同型四聚體、雜四聚體等。
一個實施方案是針對包含多個抗體之寡聚體，它們藉由與抗體融合的肽部分之間的共價或非共價相互作用連接。該類肽可為肽接頭(spacers)或具有促進寡聚化作用性質的肽。白胺酸拉鏈及某些來源於抗體之多肽為可促進抗體寡聚化的肽，如下文詳細描述。
在具體的實施方案中，寡聚體包含兩個至四個抗體。寡聚體之抗體可為任何形式，如上文所述任何形式，例如變異體或片段。較佳地，該寡聚體包含具有GIPR結合活性之抗體。
在一個實施方案中，使用來源於免疫球蛋白的多肽製備寡聚體。製備包含一些與抗體衍生多肽(包括Fc結構域)的不同部位融合的異源多肽已描述於例如Ashkenazi等，1991，PNAS USA 88:10535；Byrn等，1990, Nature 344:677；及Hollenbaugh等，Construction of Immunoglobulin Fusion Proteins, Current Protocols in Immunology, 增刊4，第10.19.1-10.19.11頁。本文之一個實施方案是針對包含兩個由融合抗GIPR抗體之GIP結合片段與抗體之Fc區產生的融合蛋白的二聚體。可藉由以下方式製備二聚體：例如在適當之表現載體中插入編碼融合蛋白的基因融合，在用重組表現載體轉型的宿主細胞中表現該融合基因且允許已表現融合蛋白像抗體分子一樣組裝，其中Fc部分之間的鏈間二硫鍵形成二聚體。
如本文所使用術語「Fc多肽」包括來源於抗體Fc區的天然及突變蛋白形式的多肽。亦包括包含促進二聚體化的鉸鏈區的該類多肽之截短形式。包含Fc部分(以及由其形成的寡聚體)的融合蛋白提供了在蛋白A或蛋白G柱子上進行親和層析法方便純化的優勢。
PCT申請案W0 93/10151 (以參考形式併於本文)中一種適當的Fc多肽為自N端鉸鏈區延伸至人IgG1抗體之Fc區的天然C端的單鏈多肽。另一種可用的Fc多肽為美國專利5457035及Baum等，1994, EMBO J.13:3992-4001中描述的Fc突變蛋白。該突變蛋白之胺基酸序列與W0 93/10151中所示天然Fc序列之胺基酸序列相同，除了胺基酸19自白胺酸變為丙胺酸，胺基酸20自白胺酸變為麩醯胺酸以及胺基酸22自甘胺酸變為丙胺酸。該突變蛋白表現出對Fc受體的親和力降低。在其他實施方案中，抗GIPR抗體之重鏈及/或輕鏈可被取代為抗體重鏈及/或輕鏈之可變部分。
或者，該寡聚體為包含多個抗體之融合蛋白，包含或不包含間隔肽(spacer peptides)。此等適當的間隔肽描述於美國專利4751180及4935233。
製備寡聚抗體之另一種方法涉及使用白胺酸拉鏈。白胺酸拉鏈結構域為促進它們所存在的蛋白寡聚化作用的肽。最初發現白胺酸拉鏈存在於數種DNA結合蛋白中(Landschulz等，1988，Science 240:1759)，此後發現存在於各種不同蛋白中。在已知的白胺酸拉鏈中為可二聚體化或三聚體化的天然肽或其衍生物。適用於生產可溶寡聚蛋白的白胺酸拉鏈結構域之實例描述於PCT申請案W0 94/10308，來源於肺表面活性蛋白D (SPD)的白胺酸拉鏈描述於Hoppe箏，1994，FEBS Letters 344:191，以參考形式併於本文。允許與其融合的異源蛋白穩定三聚體化的經修飾的白胺酸拉鏈的使用描述於Fanslow等，1994，Semin. Immunol. 6:267-78。在一種方法中，在適當的宿主細胞中表現包含與白胺酸拉鏈肽融合的抗GIPR抗體片段或衍生物的重組融合蛋白，自培養物上清中收集可溶寡聚抗GIPR抗體片段或其衍生物。
在另一個實施方案中，該抗體衍生物可包含至少本文公開之CDRs之一。舉例而言，可將一或多個CDR整合入已知之抗體骨架區(IgG1，IgG2等)或與適當的載體結合以增強其半衰期。適當載體包括但不限於Fc、白蛋白、轉鐵蛋及類似物質。此等及其他適當的載體為此項技術中已知的。該結合CDR肽可為單體、二聚體、四聚體或其他形式。在一個實施方案中，一或多個水溶性多聚體在結合劑的一或多個特異位點結合，例如在胺基端。在一個實例中，抗體衍生物包含一或多個水溶性多聚體附著物包括但不限於聚乙二醇、聚氧乙烯二醇或聚丙二醇。參見，例如，美國專利號4640835、4496689、4301144、4670417、4791192及4179337，在一些實施方案中，衍生物包含一或多種甲氧基．聚乙二醇、葡聚糖、纖維素或其他基於碳水化合物的聚合物，聚(N-乙烯基吡咯啶酮)．聚乙二醇、聚氧乙烯多元醇(例如甘油)及聚乙烯醇，以及該類聚合物的混合物。在一些實施方案中，一或多個水溶性聚合物與一或多個側鏈隨機結合。在一些實施方案中。PEG可提高結合劑例如抗體之治療作用。一些該類方法描述於例如美國專利號6133426，其以參考形式以任何目的併於本文。
應當理解的是本文提供之抗體可具有至少一個胺基酸替換，只要該抗體保留了結合特異性。因此，抗體結構的修飾包含於本文範疇。此等可包括不破壞抗體GIPR結合能力的胺基酸替換，其可為保守或非保守的。保守胺基酸替換可包括非天然胺基酸殘基，其通常經化學肽合成整合而不是生物系統合成。此等包括擬肽及其他反向或倒轉形式的胺基酸部分。保守胺基酸替換亦可涉及用非天然殘基替換天然胺基酸殘基這樣對該位點胺基酸殘基的極性或電荷作用很小或沒有作用。非保守替換可涉及一類胺基酸或胺基酸類似物的一個成員與具有不同物理性質(例如，體積、極性、疏水性、電荷)的另一類胺基酸的成員交換。
而且，熟習此項技術者可生成在各期望胺基酸殘基上包含胺基酸替換的待測變異體。可使用熟習此項技術者已知的活性測定法篩選該類變異體。該類變異體可用於收集關於適當變異體的資訊。舉例而言，若發現某一胺基酸殘基可引起活性破壞、非期望之降低或不當的活性，則可避免具有該類變化的變異體。換言之，基於自此等常規試驗收集的資訊，熟習此項技術者可輕鬆判定應避免進一步替換(單獨或與其他突變組合)的胺基酸。
技術人員可使用已知技術判定如本文所列之多肽之適當變異體。在一些實施方案中，熟習此項技術者可藉由靶向對於活性不重要的區域鑑別經改變後不會破壞活性的分子適當區域。在一些實施方案中，可鑑別在相似多肽中保守的殘基或分子部分。在一些實施方案中，甚至可保守替換對於生物活性或結構重要的區域而不破壞生物活性或不會有不利作用於多肽結構。此外，熟習此項技術者可考察結構．功能研究鑑別對活性或結構重要的相似多肽中之殘基。鑒於此對比，可預測對應於在相似蛋白中對活性或結構重要的胺基酸殘基的蛋白質中胺基酸殘基的重要性。熟習此項技術者可為此等經預測重要的胺基酸殘基選擇化學相似胺基酸替換。
熟習此項技術者亦可分析與相似多肽之結構相關的三維結構及胺基酸序列。鑒於該類資訊，熟習此項技術者可預測就三維結構而言抗體之胺基酸殘基比對。在一些實施方案中，熟習此項技術者可選擇不對經預測在蛋白質表面的胺基酸殘基進行顯著改變，因為該類殘基可能參與與其他分子的重要相互作用。許多科學出版物致力於二級結構的預測。參見，Moult，1996，Curr. Op. Biotech. 7:422-427，Chou等，1974，Biochemistry  13:222-245；Chou等，1974，Biochemistry 113:211-222；Chou等，1978，Adv. Enzymol. Relat. Areas Mol. Biol. 47:45-148；Chou等，1979，Ann. Rev. Biochem. 47:251-276及Chou等，Biophys. J.26:367-384。此外，目前可使用電腦程式輔助預測二級結構。舉例而言，序列同一性大於30%或相似性大於40%的兩個多肽或蛋白質通常具有相似的高級結構。近期蛋白結構資料庫(PDB)的增長增強了二級結構的可預測性，包括多肽或蛋白結構中潛在的摺疊數量。參見，Holm等，1999，Nucl. Acid. Res. 27:244-247。已表明(Brenner等，1997，Curr.Op. Struct. Biol. 7:369-376)在給定多肽或蛋白質中存在有限數量的摺疊且一旦判定了臨界數量的結構，結構預測將變得顯著更加精確。
預測二級結構的其他方法包括「穿接(threading)」(Jones，1997，Curr. Opin. Struct. Biol., 7:377-87；Sippl等，1996，Structure 4:15-19；「圖譜分析(profile analysis)」 (Bowie等，1991，Science 253:164-170；Gribskov等，1990，Meth. Enzym. 183:146-159；Gribskov等，1987，Proc. Nat. Acad. Sci. USA 84:4355-4358及「進化聯繫(evolutionary linkage)」(參見Holm，見上文(1999)及Brenner，見上文(1997))。在一些實施方案中，抗體變異體包括糖基化變異體，其中與母體多肽之胺基酸序列相比改變了糖基化位點的數量及/或類型。在一些實施方案中，變異體與天然蛋白質相比具有更多或更少數量的N連接糖基化位點。或者，移除該序列的替換可移除現有的N連接糖鏈。亦提供了N連接糖鏈的重排，其中移除了一或多個N連接糖鏈位點(通常為天然存在的彼等者)且創造了一或多個新的N連接位點。其他較佳抗體變異體包括半胱胺酸變異體，與母體胺基酸序列相比其中缺失或由另一胺基酸(例如絲胺酸)替換一或多個半胱胺酸殘基。當抗體必須摺疊成生物活性構象時(例如在分離可溶包涵體之後)可用半胱胺酸變異體。半胱胺酸變異體通常比天然蛋白質具有較少的半胱胺酸殘基，且通常具有偶數個半胱胺酸以最小化未配對半胱胺酸引起之相互作用。
熟習此項技術者可在需要該類替換時判定期望的胺基酸替換(保守或非保守)。在一些實施方案中，胺基酸替換可用於鑑別人GIPR抗體之重要殘基或者增加或降低本文所述人GIPR抗體之親和力。
根據一些實施方案，較佳胺基酸替換為以下：(1)降低蛋白質水解敏感性，(2)降低氧化敏感性，(3)改變形成蛋白質複合物之結合親和力，(4)改變結合親和力及/或(4)賦予或修飾該類多肽上的其他物理化學或功能性質。根據一些實施方案，可在天然存在序列中(在一些實施方案中，在形成分子間接觸的結構域之外的多肽部分)進行單個或多個胺基酸替換(在一些實施方案中為保守胺基酸替換)。在一些實施方案中，保守胺基酸替換通常不會本質上改變母體序列的結構特性(例如，替換胺基酸不應破解存在於母體序列中之螺旋或干擾特徵化母體序列的其他類型二級結構)。此項技術中認可的多肽二級與三級結構之實例描述於Proteins，Structures and Molecular Principles，Creighton編，W.H. Freeman and Company (1984)；Introduction to Protein Structure，Branden與Tooze編, Garland Publishing (1991)；以及Thornton等，1991, Nature 354:105，其以參考形式併於本文。
在一些實施方案中，本文提供之抗體可與多聚體、脂類或其他部分(moieties)化學鍵合。
抗原結合試劑可包含至少一個本文描述的CDRs，其摻入生物相容性骨架結構中。在一個實例中，該生物相容性骨架結構包含足以形成構象穩定結構支持或骨架或支架的多肽或其部分，其可在侷限的表面區域展示可與抗原結合之一或多個胺基酸序列(例如，CDRs、可變區等)。該類結構可為天然存在多肽或多肽「摺疊」(結構基序)，或相對與天然多肽或摺疊可具有一或多個修飾，例如胺基酸添加、缺失或替換。此等支架可來源於任何物種(或多於一種物種)的多肽，例如，人類、其他哺乳動物、其他脊椎動物、無脊椎動物、細菌或病毒。
生物可溶性骨架結構通常係基於蛋白質支架或骨架而不是免疫球蛋白結構域。舉例而言，可使用基於纖維結合素、錨蛋白、脂質運載蛋白(lipocalin)、新抑癌蛋白、細胞色素b、CP1鋅指蛋白、PST1、捲曲螺旋、LACI-D1、Z結構域及澱粉酶抑肽結構域(參見，例如，Nygren及Uhlen, 1997, Current Opinion in Structural Biology 7:463-469)。
此外，熟習此項技術者可認識到適當之結合劑包括此等抗體之部分，例如一或多個重鏈CDR1、CDR2、CDR3，輕鏈CDR1、CDR2及CDR3，如本文所具體公開。至少一個重鏈CDR1、CDR2、CDR3、CDR1，CDR2及CDR3區具有至少一個胺基酸替換，只要該抗體保留了非替換CDR之結合特異性。該抗體之非CDR部分可為非蛋白分子，其中該結合劑交叉阻斷本文公開之抗體與人GIPR之結合及/或抑制經該受體的GIP之信號傳導。該抗體之非CDR部分可為非蛋白質分子，其中該抗體在競爭結合測定法中顯示出與至少抗體L2H2/L6H5之一所顯示相似的與人GIP肽之結合類型，及/或中和GIP之活性。抗體之非CDR部分可由胺基酸組成，其中該抗體為重組結合蛋白或合成肽，且該重組結合蛋白交叉阻斷本文公開之抗體與人GIPR之結合及/或中和體內或體外GIP活性。抗體之非CDR部分可由胺基酸組成，其中該抗體為重組抗體，且該重組抗體在競爭結合測定法中顯示出與至少抗體L2H2/L6H5之一所顯示相似的與人GIPR肽之結合類型，及/或中和GIP信號傳導。
GIPR抗體與GLP-1或反向GLP-1之融合蛋白質 在一個實施方案中，本文提供了一個GIPR抗體與GLP-1之融合蛋白質，其包含一個能與GIPR特異性結合之抗體及一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個或八個GLP-1片段或反向GLP-1片段；該融合蛋白質藉由肽接頭序列(Linker)將GLP-1片段之羧基端與GIPR抗體輕鏈或重鏈之胺基端連接，或者將一反向GLP-1片段之胺基端與GIPR抗體輕鏈或重鏈之羧基端連接。
在另一個實施方案中，本文提供了一個GIPR抗體與GLP-1之融合蛋白質，其包含一個能與GIPR特異性結合之抗體及一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個或八個GLP-1片段；該融合蛋白質藉由肽接頭序列(Linker)將GLP-1片段之羧基端與GIPR抗體輕鏈或重鏈之胺基端連接。
在另一個實施方案中，本文提供了一個GIPR抗體與GLP-1之融合蛋白質，其包含一個能與GIPR特異性結合之抗體及一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個或八個反向GLP-1片段；該融合蛋白質藉由肽接頭序列(Linker)將一反向GLP-1片段之胺基端與GIPR抗體輕鏈或重鏈之羧基端連接。
在另一個實施方案中，本文提供了一個GIPR抗體與GLP-1之融合蛋白質，其包含一個與GIPR特異性結合之抗體及一個、二個、三個或四個GLP-1片段；該融合蛋白質藉由一個肽接頭序列(Linker)將GLP-1片段之羧基端與GIPR抗體輕鏈或重鏈之胺基端連接。
在另一個實施方案中，本文提供了一個GIPR抗體與GLP-1之融合蛋白質，其包含一個能與GIPR特異性結合之抗體及一個、二個、三個或四個反向GLP-1片段；該融合蛋白質藉由一個肽接頭序列(Linker)將一反向GLP-1片段之胺基端與GIPR抗體輕鏈或重鏈之羧基端連接。
在另一個實施方案中，本文提供了一個GIPR抗體與GLP-1之融合蛋白質，其包含一個能與GIPR特異性結合之抗體及二個GLP-1片段；該融合蛋白質藉由一個肽接頭序列(Linker)將GLP-1片段之羧基端與GIPR抗體輕鏈或者重鏈之胺基端連接。
在另一個實施方案中，本文提供了一個GIPR抗體與GLP-1之融合蛋白質，其包含一個能與GIPR特異性結合之抗體與二個反向GLP-1片段；該融合蛋白質藉由一個肽接頭序列(Linker)將一反向GLP-1片段之胺基端與GIPR抗體輕鏈或者重鏈之羧基端連接。
在另一個實施方案中，本文提供了一個GLP-1融合蛋白質，其包含一個GIPR抗體與二個GLP-1片段；該融合蛋白質藉由一個肽接頭序列(Linker)將GLP-1片段之羧基端與GIPR抗體輕鏈之胺基端連接：N'-GLP-1-Linker-R-C'；或者將GLP-1片段之羧基端與GIPR抗體重鏈之胺基端連接：N'-GLP-1-Linker-R-C'；其中：N'代表融合蛋白質多肽鏈之胺基端，C'代表融合蛋白質多肽鏈之羧基端，GLP-1代表一GLP-1片段，R為GIPR抗體之輕鏈或者重鏈之胺基酸序列，且Linker代表肽接頭序列。
另一個實施方案中，本文提供了一個GLP-1融合蛋白質，其包含一個GIPR抗體與二個反向GLP-1片段；該融合蛋白質藉由一個肽接頭序列(Linker)將一反向GLP-1片段之胺基端與GIPR抗體輕鏈之羧基端連接：N'-R-Linker-反向GLP-1-C'；或者將一反向GLP-1片段之胺基端與GIPR抗體重鏈之羧基端連接：N'-R-Linker-反向GLP-1-C'；其中：N'代表融合蛋白質多肽鏈之胺基端，C'代表融合蛋白質多肽鏈之羧基端，反向GLP-1代表一反向GLP-1片段，R為GIPR抗體之輕鏈或者重鏈之胺基酸序列，且Linker代表肽接頭序列。
在進一步之實施方案中，本文提供了一個GLP-1融合蛋白質，其包含一個GIPR抗體與二個GLP-1片段；該融合蛋白質藉由一個肽接頭序列(Linker)將GLP-1片段之羧基端與GIPR抗體輕鏈之胺基端連接：N'-GLP-1-Linker-R-C'；其中：N'代表融合蛋白質多肽鏈之胺基端，C'代表融合蛋白質多肽鏈之羧基端，GLP-1代表一GLP-1片段，R為GIPR抗體之輕鏈之胺基酸序列，且Linker代表肽接頭序列。
在一實施方案中，在本文提供之GLP-1融合蛋白質中，所述之GLP-1片段各自獨立地選自於以下之一的胺基酸序列：SEQ ID NO: 105、SEQ ID NO: 106、SEQ ID NO: 107、SEQ ID NO: 108及SEQ ID NO: 109。在一實施方案中，在本文提供之GLP-1融合蛋白質中，所述之反向GLP-1片段各自獨立地選自於以下之一的胺基酸序列：SEQ ID NO: 119、SEQ ID NO: 120、SEQ ID NO: 121、SEQ ID NO: 122及SEQ ID NO: 123。
在一實施方案中，在本文提供之GLP-1融合蛋白質中，所述之肽接頭(Linker)之序列自獨立包含1個至200個胺基酸胺，2個至100個胺基酸胺，5個至50個胺基酸胺，6個至25個胺基酸胺，或10個至20個胺基酸胺。
在另一個實施方案中，在本文提供之GLP-1融合蛋白質中，所述之肽接頭(Linker)之序列各自獨立地選自於以下的胺基酸序列：SEQ ID NO: 110、SEQ ID NO: 111及SEQ ID NO: 112。
核酸 在一態樣中，本文提供分離之核酸分子。該核酸分子包含例如編碼全部或部分抗體之多聚核苷酸，例如本文抗體或GLP-1融合蛋白質的一條鏈或兩條鏈，或其片段、衍生物、突變蛋白或變異體；足以用作雜交探針之多聚核苷酸；PCR引子或用於鑑別、分析、突變或擴增編碼多肽之多聚核苷酸的定序引子；用於抑制多聚核苷酸表現的反義核酸以及其互補序列。該核酸可為任何長度。例如它們的長度可為5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、75、100、125、150、175、200、250、300、350、400、450、500、750、1000、1500、3000、5000或更多個核苷酸，及/或包含一或多個附加序列，例如調控序列，及/或是較大核酸例如載體之一部分。該核酸可為單鏈或雙鏈且包含RNA及/或DNA核苷酸以及其人工變異體(例如，肽核酸)。
可自經GIPR抗原免疫的小鼠B細胞中分離編碼抗體多肽(例如，重鏈或輕鏈、僅可變結構域或全長)之核酸。可藉由常規方法例如聚合酶鏈式反應(PCR)分離抗體或GLP-1融合蛋白質之核酸。
編碼重鏈與輕鏈可變區之核酸序列如上文所示。熟練的技術人員可理解由於遺傳密碼的簡併性，本文公開之各多肽序列可由更多數量的其他核酸序列編碼。本文提供編碼本文提供之抗體或GLP-1融合蛋白質的各簡併核苷酸序列。
本文進一步提供在具體雜交條件下與其他核酸(例如，包含任何L2H2/L6H5的核苷酸序列之核酸)雜交之核酸。雜交核酸之方法為此項技術中熟知的。參見，例如，Current Protocols in Molecular Biology，John Wiley & Son (1989)，6.3.1-6.3.6。如本文定義，例如，中等嚴格條件使用包含5×氯化鈉/檸檬酸鈉(SSC)的預洗溶液、0.5% SDS、1.0 mM EDTA (pH 8.0)、約50%甲醯胺的雜交緩衝液、6× SSC及55℃的雜交溫度(或其他相似的雜交溶液，例如包含絢50%甲醯胺的，以42℃雜交)，且溶離條件為60℃，使用0.5× SSC、0.1% SDS。嚴格雜交條件在6× SSC中於45℃雜交，然後於68℃在0.1× SSC、0.2% SDS中洗滌一或多次。此外，熟習此項技術者可操作雜交及/或洗滌條件以增加或降低雜交嚴格度這樣包含相互之間至少65、70、75、80、85、90、95、98或99%同源的核苷酸序列之核酸通常仍可以相互雜交。影響雜交條件選擇的基本參數及設計適當條件的指導列於例如Sambrook，Fritsch及Maniatis，1989， Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press，第9及11章；Current Protocols in Molecular Biology，1995，Ausubel等編，John Wiley & Sons公司，第2.10及6.3-6.4節)且可由一般熟習此項技術者基於例如DNA之長度及/或鹼基組成輕鬆判定。可藉由突變在核酸中引入變化，藉此導致其編碼的多肽(例如，抗原結合蛋白)胺基酸序列之變化。可使用此項技術中已知的任何技術引入突變。在一個實施方案中，使用例如定點誘變方案改變一或多個具體胺基酸殘基。在另一個實施方案中，使用例如隨機誘變方案改變一或多個隨機選擇的殘基。無論其如何生成，可表現突變多肽且篩選期望性質。
可將突變引入核酸而不顯著改變其編碼多肽之生物學活性。例如，可進行引起非必需胺基酸殘基處胺基酸替換的核苷酸替換。在一個實施方案中，突變本文為L1至L11及H1至H9或GLP-1融合蛋白質提供的核苷酸序列或其片段、變異體或衍生物這樣其編碼包含本文所示L1至L11及H1至H9的胺基酸殘基的一或多個缺失或替換，成為兩個或多個序列相異的殘基。在另一個實施方案中，誘變作用在本文所示L1至L11及H1至H9或GLP-1融合蛋白質的一或多個胺基酸殘基附近插入一個胺基酸成為兩個或多個序列相異之殘基。或者，可將一或多個突變引入核酸以選擇性改變其編碼多肽之生物學活性(例如，與GIPR結合)。例如，該突變可在數量上或性質上改變生物學活性。量變之實例包括增加、降低或消除該活性。質變之實例包括改變抗體或GLP-1融合蛋白質之抗原特異性。
在另一態樣中，本文提供適於用做引子或偵測本文核酸序列的雜交探針之核酸分子。本文之核酸分子可僅包含編碼本文全長多肽之核酸序列之一部分，例如，可用作探針或引子或編碼本文多肽活性部分之片段(例如，GIPR結合部分)之片段。
基於本文核酸序列的探針可用於偵測該核酸或相似核酸，例如編碼本文多肽之轉錄物。該探針可包含標記基團，例如放射性同位素、螢光化合物、酶或酶輔因子。該類探針可用於鑑別表現該多肽之細胞。
在另一態樣中本文提供包含編碼本文多肽或其部分之核酸的載體。載體之實例包括但不限於質體、病毒載體、非游離基因哺乳動物載體及表現載體，例如重組表現載體。
本文之重組表現載體可包含適於該核酸在宿主細胞中表現的形式的本文核酸。該重組表現載體包括一或多個調控序列，基於用於表現的宿主細胞進行篩選，其與該預表現之核酸序列可操作性相連。調控序列包括引導核苷酸序列在多個種類宿主細胞中組成型表現的(例如，SV40早期基因增強劑、勞斯氏肉瘤病毒啟動子及細胞巨化病毒啟動子)，引導僅在某些宿主細胞中核苷酸序列之表現的(例如，組織特異調控序列，參見Voss等，1986，Trends Biochem. Sci.11:287，Maniatis等，1987，Science 236:1237，其完整內容以參考形式併於本文)以及引導核苷酸序列響應具體處理或條件的誘導型表現的(例如，哺乳動物細胞中之金屬硫堇啟動子及原核及真核系統二者中之四環黴素反應(tet-sesponsive)啟動子及/或鏈黴素反應啟動子(同前))。熟習此項技術者應理解表現載體之設計取決於例如用於轉型的宿主細胞的選擇、所需蛋白表現量等因素。本文之表現載體可引入宿主細胞，藉此生產由本文所述核酸編碼的蛋白或肽，包括融合蛋白或肽。
在另一態樣中，本文提供可引入本文表現載體之宿主細胞。宿主細胞可為任何原核或真核細胞。原核宿主細胞包括革蘭氏陰性或革蘭氏陽性生物體，例如大腸桿菌或桿菌。更高級的真核細胞包括昆蟲細胞、酵母細胞以及哺乳動物源的確立細胞株。適當哺乳動物宿主細胞株之實例包括中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或它們的衍生物例如Veggie CHO及在無血清培養基中生長的相關細胞株(參見Rasmussen等，1998，Cytotechnology 28:31)或CHO株DXB-11，其缺失DHFR (參見Urlaub等，1980，Proc. Natl. Acad, Sci. USA 77:4216-20)。其他CHO細胞株包括CHO-K1 (ATCC #CCL-61)、EM9 (ATCC #CRL-1861)及UV20 (ATCC# CRL-1862)，其他宿主細胞包括猴腎細胞的COS-7系(ATCC #CRL-1651) (參見Gluzman等，1981，Cell 23:175)、L細胞、C127細胞、3T3細胞(ATCC CCL-163)，AM-1/D細胞(描述於美國專利序列號6210924)、海拉(Hela)細胞、BHK (ATCC CRL-10)細胞株、來源於非洲綠猴腎細胞株CV1的CV1/EBNA細胞株(ATCC CCL-70) (參見McMahan等，1991，EMBO J. 10:2821)、人胚腎細胞例如293，293 EBNA或MSR 293、人上皮A431細胞、人C010205細胞、其他經轉型靈長動物細胞株、正常二倍體細胞、來源於原生組織體外培養物之細胞株、初移植體、HL-60、U937、HaK或傑卡特(Jurkat)細胞。用於細菌、真菌、酵母及哺乳細胞宿主的適當純系及表現載體描述於Pouwels等(Cloning Vectors: A Laboratory Manual, Elsevier, 1985)。
可藉由傳統轉型或轉染技術將載體DNA引入原核或真核細胞中。對於穩定的哺乳動物轉染而言，取決於使用之表現載體及轉染技術，已知只有一小部分細胞可將外源DNA鏊合入它們的基因組中。為了鑑別及篩選此等整合子，通常將編碼篩選標記(例如抗生素抗性)的基因與所關注基因一起引入宿主細胞。較佳篩選標記包括可賦予藥物(如G418、潮黴素及甲胺喋呤)抗性的彼等者。在其他方法中可藉由藥物篩選鑑別包含被引入核酸的穩定轉染細胞(例如，整合了篩選基因之細胞可存活，而其他細胞則死亡)。
可在提高多肽表現的條件下培養已轉型細胞，可藉由常規蛋白純化方法回收多肽。一種該純化方法描述於下文實施例。預用於本文之多肽包括基本同源的重組哺乳動物抗GIPR抗體或GLP-1融合蛋白質多肽，其基本不含污染性內源材料。
GIPR抗體之活性 GIPR抗體之活性係指本文提供之抗體具有與GIPR特異性結合，抑制或者阻斷GIP信號傳導後顯示出的治療性生物作用，例如治療肥胖症、二型糖尿病、及/或非酒精性脂肪性肝炎。術語「降低GIP信號傳導之生物學活性」或者「抑制或阻斷GIP信號傳導之生物學活性」指GIPR抗體或其與GLP-1融合蛋白質在體內與GIPR結合且抑制或者阻斷GIP引起該受體下游之細胞應急反應。反應包括但不限於提高胰島素分泌、促進脂肪儲存、及抑制脂肪分解。在一個實施方案中，本文提供了能與人GIPR特異性結合之鼠源抗體或人類化抗體。該類抗體包括可減少或中和GIP信號傳導的拮抗或中和抗體。
在一個實施方案中，本文提供之抗體與人GIPR結合時之Kd 為大約0.01 nM至大約1000 nM、大約0.1 nM至大約500 nM、大約0.5 nM至大約200 nM、大約1 nM至大約200 nM或大約10 nM至大約100 nM。在另一個實施方案中，本文提供之抗體與人GIPR結合時之Kd 為大約1 nM至大約200 nM。在另一個實施方案中，本文提供之抗體與人GIPR結合時之Kd 為大約1 nM至大約100 nM。在另一個實施方案中，本文提供之抗體與人GIPR結合時之Kd 為大約1 nM、大約2 nM、大約5 nM、大約10 nM、大約20 nM、大約30 nM、大約40 nM、大約50 nM、大約60 nM、大約70 nM、大約80 nM、大約90 nM或大約100 nM。
在一個實施方案中，本文提供之抗體在降低人GIP信號傳導之IC50 值為大約0.01 nM至大約500 nM、大約0.1 nM至大約200 nM、大約0.5 nM至大約200 nM、大約1 nM至大約200 nM或大約10 nM至大約100 nM。在另一個實施方案中，本文提供之抗體在降低人GIP信號傳導之IC50 值為大約1 nM至大約200 nM。在另一個實施方案中，本文提供之抗體在降低人GIP信號傳導之IC50 值為大約10 nM至大約100 nM。在另一個實施方案中，本文提供之抗體在降低人GIP信號傳導之IC50 值為大約1 nM、大約2 nM、大約5 nM、大約10 nM、大約20 nM、大約30 nM、大約40 nM、大約50 nM、大約60 nM、大約70 nM、大約80 nM、大約90 nM或大約100 nM。
在一個實施方案中，本文提供之GIPR抗體與人GIPR結合時，具有一或多個以下所列之性質： a.當與人GIPR結合時以與所述參比抗體基本類似之Kd ； b.當抑制人GIPR之GIP激活時以與所述參比抗體基本類似之IC50 ；及 c.在人GIPR上與所述參比抗體交叉競爭結合。
在另一個實施方案中，本文所述之GIPR抗體是一抗體具有一或多個以下所列之性質： a.當與人GIPR結合時，其Kd與參比GIPR抗體相同或更優； b.當抑制人GIPR之GIP激活時，其IC50 與參比GIPR抗體相同或更優；及 c.該GIPR抗體在人GIPR上，與參比GIPR抗體交叉競爭結合。
在一個實施方案中，所述參比抗體包含輕鏈可變結構域胺基酸序列SEQ ID NO: 66與重鏈可變結構域胺基酸序列SEQ ID NO: 76之組合。
在一個實施方案中，所述參比抗體包含輕鏈可變結構域胺基酸序列SEQ ID NO: 68與重鏈可變結構域胺基酸序列SEQ ID NO: 77之組合。
在另一實施方案中，所述參比抗體為單株抗體L2H2、L6H5或L10H8。
在本文中，術語「基本相似」意為與參比抗體之IC50 或Kd 可比或是參比抗體之IC50 或Kd 值的大約200%、大約180%、大約160%、大約150%、大約140%、大約120%、大約110%、大約100%、大約99%、大約98%、大約97%、大約95%、大約90%、大約85%、大約80%、大約75%、大約70%、大約65%或大約50%。在一個實施方案中，參比抗體包括，例如，具有輕鏈SEQ ID NO: 66與重鏈SEQ ID NO: 76組合之抗體。在另一個實施方案中，參比抗體包括GIPR抗體L2H2、L6H5或L10H8。
GIPR抗體與GLP-1之融合蛋白質之生物學活性 GIPR抗體與GLP-1之融合蛋白質之生物學活性包含GLP-1之生物學活性與GIPR抗體活性兩個態樣。GIPR抗體之活性如前文所述。「GLP-1生物學活性」指GIPR抗體與GLP-1之融合蛋白質在體內結合且激活GLP-1受體且引起細胞應激反應，且顯示出治療作用之生物學活性，例如肥胖症、二型糖尿病或非酒精性脂肪性肝炎。前述細胞應激反應包括但不限於提高胰島素之分泌、胰高血糖素分泌之抑制，抑制食慾、體重減輕、誘導過飽、抑制凋亡、誘導胰臟β細胞增殖、及胰臟β細胞分化。綜合了GLP-1與GIPR抗體之生物學活性，本文所述之GLP-1之融合蛋白質可以用於治療多種與GLP-1R與GIPR相關聯之疾病及病症。該融合蛋白質藉由作用於GLP-1R及/或GIPR發揮其生物學作用，因此可以用本文所述之GLP-1融合蛋白質治療對「增加GLP-1R刺激」或對「降低GIPR刺激」做出有利反應的疾病及病症之個體。此等個體稱為「需要GLP-1R刺激治療」或「需要降低GIPR刺激」之個體。包括非胰島素依賴性糖尿病、胰島素依賴性糖尿病、中風(GLP-1R參見WO 00/16797)、心肌梗死(GLP-1R參見WO 98/08531)、肥胖(GLP-1R參見WO 98/19698；GIPR參見Furija等，2008，PLoS ONE 3:e3163；US 2017/0275370 A1)、手術後分解代謝改變(GLP-1R參見US 6,006,753)、功能性消化不良與大腸急躁症(GLP-1R參見WO99/64060)、肝臟脂肪變性(GIPR參見US 2017/0275370A1)、非酒精性脂肪性肝病(GLP-1R參見Debra等，2016，Hepatobiliary Surg Nutr，5:515-518；GIPR參見US 2017/0275370 A1)、非酒精性脂肪性肝炎(GLP-1參見Armstrong等，2013，BMJ Open. 3:e003995；GIPR參見US 2017/0275370 A1)，亦包括具有發展為非胰島素依賴性糖尿病危險之個體(參見WO 00/07617)，糖耐量損傷或空腹葡萄糖損傷之個體、體重對於個體身高及體重高出正常體重約25%之個體、部分胰臟切除之個體。
在一個實施方案中，GIPR抗體或其與GLP-1融合蛋白質之生物學活性變化是用直接cAMP偵測方法來偵測的，量化GIPR抗體或GLP-1融合蛋白質在體外抑制GIPR之功能。
藥物組合物 在一個實施方案中，本文提供了一種藥物組合物，其中包含本文提供之一個GIPR抗體及一或多種可藥用載體。
在另一個實施方案中，本文提供了一種藥物組合物，其包括本文提供之一個GIPR抗體與GLP-1之融合蛋白質，與一或多種可藥用載體。
本文所使用之術語「載體」包括載體、藥用輔料或者在使用之劑量及濃度下將細胞或哺乳動物暴露於其中無害的穩定劑。
治療方法 在一個實施方案中，本文提供了治療、預防或改善二型糖尿病之方法，其包括給予個體治療有效量的本文提供之GIPR抗體或其藥用組合物。
在另一個實施方案中，本文提供了治療、預防或改善非酒精性脂肪性肝病之方法，其包括給予個體治療有效量的本文提供之GIPR抗體，或其藥用組合物。
在另一個實施方案中，本文提供了治療、預防或改善非酒精性脂肪性肝病之方法，其包括給予個體治療有效量的本文提供之GIPR抗體與GLP-1之融合蛋白質，或其藥用組合物。
在另一個實施方案中，本文提供了治療、預防或改善非酒精性脂肪性肝炎之方法，其包括給予個體治療有效量的本文提供之GIPR抗體，或其藥用組合物。
在另一個實施方案中，本文提供了治療、預防或改善非酒精性脂肪性肝炎之方法，其包括給予個體治療有效量的本文提供之GIPR抗體與GLP-1之融合蛋白質，或其藥用組合物。
在另一個實施方案中，本文提供了治療、預防或改善二型糖尿病之方法，其包括給予個體治療有效量的本文提供之GIPR抗體，或其藥用組合物。
在另一個實施方案中，本文提供了治療、預防或改善二型糖尿病之方法，其包括給予個體治療有效量的本文提供之GIPR抗體與GLP-1之融合蛋白質，或其藥用組合物。
在另一個實施方案中，本文提供了治療、預防或改善肥胖症之方法，其包括給予個體治療有效量的本文提供之GIPR抗體，或其藥用組合物。
在進一步之實施方案中，本文提供了治療、預防或改善肥胖症之方法，其包括給予個體治療有效量的本文提供之GIPR抗體與GLP-1之融合蛋白質，或其藥用組合物。
在本文提供之任意一項用途，其所述之藥用組合物是用於靜脈或皮下注射。
本文中，術語「個體」指哺乳動物，包括人類，可與術語「患者」交替使用。
術語「治療」包括減輕或預防至少一種症狀或病症的其他態樣，或者減輕疾病嚴重性。本文提供之GIPR抗體或GIPR抗體與GLP-1之融合蛋白質不需要產生完全治癒的效應，或根除疾病的所有症狀或表現，亦即可構成有效治療劑。如相關領域所公認，作為治療劑的藥物可減少給定疾病狀態的嚴重程度，但不需消除疾病的所有表現即可被認為是有效的治療劑。相似地，預防給藥治療不需在預防症狀出現上完全有效即可構成有效預防劑。只減少疾病之影響(例如，藉由減少其症狀的數量或嚴重度，或藉由提高另一治療效應，或藉由產生另一有效作用)，或者減少個體中疾病發生或加重的可能性就已經足夠。本文之一個實施方案涉及包含以足以誘導反應具體病症嚴重性的指示劑高於基線水準的持續改善的量及時間給予患者GIPR抗體或GIPR抗體與GLP-1融合蛋白質之方法。
GIPR抗體或GIPR抗體與GLP-1之融合蛋白質藥物組合物可採用任意適當技術包括但不限於腸道外、局部或吸入給藥。若注射，則可藉由例如關節內、靜脈內、肌肉內、損傷區內、腹膜內或皮下途徑，以快速注射或連續輸注給予藥用組合物。可考慮例如在疾病或損傷部位局部給藥，如透皮給藥及埋植劑持續釋放給藥。吸入給藥包括例如鼻腔或口腔吸入、採用噴霧劑、以氣霧劑形式吸入抗體等等。其他選擇包括口腔製劑包括片劑、糖漿劑或錠劑。
以包含一個或更多其他組分例如生理學可接受載體、輔料或稀釋劑之組合物形式給予本文提供之GIPR抗體或GLP-1融合蛋白質是有利的。組合物可視情況額外包含一個或更多如下所述之生理學活性劑。在多個具體實施方案中，組合物包含除一個或更多本文提供之抗體(例如鼠源抗體或人類化抗體)或GLP-1融合蛋白質之外的一個、兩個、三個、四個、五個或六個生理學活性劑。
在一個實施方案中，藥物組合物包含本文提供之鼠源抗體或人類化抗體或GLP-1融合蛋白質以及一個或更多選自以下的物質：pH適合於抗體或GLP-1融合蛋白質的緩衝液、抗氧化劑例如抗壞血酸、低分子量多肽(例如含少於10個胺基酸的多肽)、蛋白質、胺基酸、糖例如糊精、複合物例如EDTA、谷胱甘肽、穩定劑及輔料。根據適當行業標準，亦可加入防腐劑。可使用適當輔料溶液作為稀釋劑將組合物配製成凍幹粉末。適當組分在所用劑量及濃度下對受者無毒。可用於藥物處方組分的進一步實例見Remington's Pharmaceutical Sciences，第16版 (1980)及20版 (2000)，Mack Publishing Company提供醫學從業者使用之套組，其包括一種或更多本文提供之抗體或GLP-1融合蛋白質以及治療本文討論任何病症的標籤或其他說明。在一個實施方案中，套組包括以上述組合物形式裝在一或多個管型瓶中之一或多種抗體或GLP-1融合蛋白質的無菌製劑。
給藥劑量與頻率可根據以下因素而改變：給藥途徑、所用具體抗體或GLP-1融合蛋白質、所治疾病的性質與嚴重度、症狀為急性還是慢性以及患者的體積及總體症狀。可藉由此項技術中熟知之方法判定適當劑量，例如在臨床試驗中包括劑量放大研究。
本文提供之抗體或GLP-1融合蛋白質可在例如一段時間內按規律間隔給藥一或多次。在具體實施方案中，在至少一個月或更長時間給藥一次給予鼠源抗體或人類化抗體或GLP-1融合蛋白質，例如一個、兩個或三個月或者甚至不確定。對於治療慢性症狀，長期治療通常最有效。但是，對於治療急性症狀，短期給藥例如自一週至六週就已足夠。通常，給予人類抗體直至患者表現出所選體徵或指示劑高於基線水準的醫學相關改善度為止。
本文提供之治療方案的一個實例包括以適當劑量一週一次或者更長的皮下注射抗體或GLP-1融合蛋白質治療二型糖尿病、肥胖症或者非酒精性脂肪性肝炎等引起之症狀。可持續每週或每月給予抗體或GLP-1融合蛋白質直至達成所需結果例如病人症狀消退。可按需要重新治療，或者，可選擇地，給予維持劑量。
可在使用抗體或GLP-1融合蛋白質例如人類抗體或GLP-1融合蛋白質治療之前、進行中及/或之後監測病人之血糖濃度、體重，以偵測其壓力的任何變化。對於某些病症，血糖之變化可隨例如疾病進程等因素而變化。可用已知技術測定其血糖濃度。
本文之方法及組合物的具體實施方案涉及使用例如抗體或GLP-1融合蛋白質及一或多個GIP拮抗劑、兩個或更多本文提供之抗體或GLP-1融合蛋白質，或者本發明抗體或GLP-1融合蛋白質及一個或更多其他GIP拮抗劑。在進一步之實施方案中，單獨或與其他用於治療使患者痛苦之症狀的藥劑組合給予抗體或GLP-1融合蛋白質。此等藥劑之實例包括蛋白質以及非蛋白質藥物。當聯合給予多種藥物時，如此項技術中所熟知其劑量應相應調整。「聯合給藥」組合療法不限於同時給藥，亦包括在涉及給予患者至少一種其他治療劑的療程中至少給予一次抗原及蛋白的治療方案。
在另一態樣中，本文提供製備治療二型糖尿病、肥胖症及非酒精性脂肪性肝炎及相關病症藥劑之方法，其包含本文提供之抗體或GLP-1融合蛋白質與藥學可接受輔料中之混合物，用於治療上述疾病的相關病症。藥劑製備方法如上所述。
本文進一步提供可特異性結合至人GIPR之抗體或GLP-1融合蛋白質相關之組合物、套組及方法。亦提供了核酸分子及其衍生物及片段，其包含編碼與GIPR結合之多肽之全部或部分之多聚核苷酸，例如編碼全部或部分抗GIPR抗體、抗體片段、抗體衍生物或GLP-1融合蛋白質之核酸。本文進一步提供包含該類核酸的載體及質體以及包含該類核酸及/或載體及質體之細胞及細胞株。所提供方法包括，例如，製備、鑑別或分離與人GIPR結合之抗體或GLP-1融合蛋白質例如抗GIPR抗體或GLP-1融合蛋白質之方法，測定該抗體或GLP-1融合蛋白質是否與GIPR結合之方法、以及將與GIPR結合之抗體或GLP-1融合蛋白質給予動物模型之方法。
下面藉由具體實例，對本文之技術方案作進一步之說明。
本文中，若非特指，所採用的原料及設備等均可自市場購得或是此項技術中常用的。下述實例中之方法，如無特別說明，均為此項技術中之常規方法。
1、免疫用抗原的製備 接種CHO-DHFR-細胞至6孔盤中。培養24小時(hr)後，轉染選殖有hGIPR基因(核苷酸序列見SEQ ID NO: 114及胺基酸序列見SEQ ID NO: 113)的pTM15質體入6孔盤中之細胞。轉染是按照Invitrogen 公司推薦Lipofectamine 2000的轉染條件進行。48 hr後，將培養液換為含有300 μg/mL hygromycin的完全培養基，且每隔3天(d)換液。培養兩週左右，穩定生長的純系出現。消化分散細胞集落，將細胞傳代，繼續培養細胞，待傳代細胞長至100%匯合度。利用V5標籤之抗體(Life Technologies)對構建的穩定細胞株分別進行FACS偵測，根據FACS偵測結果鑑別加壓後之細胞群體。篩選後之CHO-DHFR-hGIPR細胞膜上有大量hGIPR表現。最後經由次選殖及進一步鑑別後，選出3株GIPR細胞為高表現穩定細胞株。此等高表現hGIPR之細胞株可被作為製備抗體之免疫原(參考實施例2)。此外，在某些實施方案中，hGIPR胞外區及hIgG Fc的融合蛋白亦可以作為製備抗體之免疫原，其製備方法如下：次選殖hGIPR胞外區，hIgG2 Fc及肽接頭(Linker)的融合蛋白序列基因於pTM5質體。藉由懸浮HEK293細胞進行大量短暫表現，獲得細胞上清液，然後藉由親和層析法純化得到hGIPR胞外區融合蛋白。
2、抗體之製備 可使用包括以下任意之一的免疫原產生hGIPR之抗體。例如，在某些實施方案中，使用表現hGIPR之全細胞作為免疫原以產生hGIPR之抗體。此外，在某些實施方案中，使用包含hGIPR之N端結構域之胺基酸序列與hFc的融合蛋白作為免疫原以產生hGIPR之抗體。將免疫原與氫氧化鋁佐劑混勻，皮下注射BALB/c小鼠(6-8週齡)，此後每週加強免疫小鼠一次。經由總共6次免疫後，藉由剪尾的方式採血。離心分離血清，用FACS偵測血清效價。達至適合抗體滴度時，斷頸處死小鼠，無菌狀態下獲取脾臟細胞。另外收集生長狀態處於對數生長期的SP2/0細胞，離心細胞，將沈澱細胞用無血清培養至重懸，再次離心-重懸，計數。混合脾臟細胞與SP2/0細胞，保證SP2/0與脾臟細胞數量接近，混合以後再「洗滌-離心」3次。彈散最後一次離心後之細胞沈澱，逐滴加入預溫之PEG-1500，上下吹吸後，緩慢加入30 mL預熱之無血清培養基以終止PEG的融合作用。再次離心後彈散細胞沈澱，加入融合培養基，將脾細胞與飼養層細胞鋪於96孔盤中，每孔加入100 µL培養基。融合後之雜交瘤細胞及飼養層細胞一起在96孔盤中進行培養，且進行HAT(次黃嘌呤、甲胺喋呤及胸苷)篩選，以移除非融合之細胞。10 d後收取培養盤中之雜交瘤細胞上清進行ELISA偵測。
3、ELISA篩選抗體 將過表現hGIPR之CHO-DHFR-hGIPR細胞及不表現hGIPR之CHO-DHFR-細胞分別接種至96孔盤。待細胞長至90%匯合度，移除細胞培養上清，PBS洗兩遍，加入100%甲醇4℃固定，然後加入100 µL新鮮配製的0.6% H2 O2 -PBS，室溫處理20分鐘，PBS洗兩遍。經由1% BSA (溶於PBS中)封閉後，加入雜交瘤細胞上清4℃孵育90分鐘。多次洗滌後，每孔加入100 µL稀釋之羊抗鼠Fc-HRP二抗(Sigma-Aldrich)，37℃孵育30分鐘。洗滌5次後，每孔加入100 µL TMB顯色底物，37℃反應15分鐘，加入50 µL 2 M H2 SO4 終止顯色，讀取OD 450值。此外，在某些實施方案中，使用包含hGIPR之N端結構域之胺基酸序列與hFc的融合蛋白作為包被抗原，包被96孔盤。經由1% BSA (溶於PBS中)封閉後，加入雜交瘤細胞上清4℃孵育90分鐘。之後步驟同上述ELISA方法篩選抗hGIPR單株抗體。陽性對照為免疫小鼠的血清；陰性對照為細胞培養基上清。經由ELISA的初步偵測，篩選到了數個分泌抗hGIPR抗體之陽性雜交瘤細胞株。選取此等分泌抗hGIPR抗體之雜交瘤株，進行選殖以獲得能穩定分泌抗hGIPR抗體之細胞株。最後選取陽性雜交瘤細胞上清進行FACS驗證(參考實例10)。
4、抗體基因的選殖與次選殖 收集分泌抗體之雜交瘤細胞，按照QIAGEN的mRNA抽提套組操作規程，提取雜交瘤細胞的mRNA。然後將提取後之mRNA反轉錄成cDNA，逆轉錄引子為小鼠輕、重鏈恆定區的特異性引子，重鏈逆轉錄引子為(5'-TTTGGRGGGAAGATGAAGAC-3')，輕鏈逆轉錄引子為(5'-TTAACACTCTCCCCTGTTGAA-3')及(5'-TTAACACTCATTCCTGTTGAA-3')。RT-PCR之反應條件為：25℃ 5分鐘；50℃ 60分鐘；70℃ 15分鐘。將反轉錄的cDNA用0.1 mM之TE稀釋至500 µL，加入至超濾離心管(Amicon Ultra-0.5)中，2000 g離心10分鐘；棄濾液，再加500 µL之0.1 mM之TE，2000 g離心10分鐘；棄濾液，將製備管倒置於新的離心管中，2000 g離心10分鐘，得到純化後之cDNA；取10 µL之純化後之cDNA作為模板，加入4 µL之5×加尾緩衝液(Promega)，4 µL之dATP (1 mM)及10 U的末端轉移酶(Promega)後混勻，37℃孵育5分鐘後再65℃孵育5分鐘；然後以加上PolyA尾的cDNA為模板，PCR擴增抗體之輕、重鏈可變區基因。上游引子均為OligodT，重鏈下游引子為(5'-TGGACAGGGATCCAGAGTTCC-3')及(5'-TGGACAGGGCTCCATAGTTCC-3')，輕鏈下游引子為(5'-ACTCGTCCTTGGTCAACGTG-3')。PCR反應條件：95℃ 5分鐘；95℃ 30秒，56℃ 30秒，72℃ 1分鐘 40次循環；72℃ 7分鐘；PCR產物連接於PMD 18-T載體(Takara Bio)後進行定序。基於已定序得到之抗體之DNA序列設計PCR引子，從而將完整輕鏈、重鏈信號肽與可變域以及小鼠IgG1恆定區與表現載體pTM5相連。
5、抗體之人類化及優化 首先，根據篩選所得的鼠源抗體輕、重鏈可變區序列，使用NCBI資料庫搜索與篩選所得的鼠源之抗體可變區序列同源的人源抗體生殖系基因序列(Ig Germline Gene Sequence)，且將除CDR序列外，同源性最高的人源基因序列做為模板序列進行CDR嫁接，得到人類化之抗體可變區序列。合成人類化抗體輕、重鏈之基因，與人IgG2或者IgG4恆定區序列拼接後得到完整之重組人類化抗體序列。重組抗體按照實例8進行表現，且按照步驟10中之FACS技術驗證其針對GIPR之親和力，遴選出親和力表現最優秀之抗體。最後藉由定點突變，對人類化抗體之可變區序列進行改造，進一步提高其對GIPR之親和力。
6、人類化hGIPR抗體之基因選殖與次選殖 優化後之人類化抗體重鏈及輕鏈可變區序列外包合成。合成時重鏈可變區5'端帶入Nhe1酶切位點，3'端帶入Sal1酶切位點，從而將完整之重鏈可變區序列與已裝入重鏈恆定區之表現載體pTM5相連。同樣，合成時輕鏈可變區5'端帶入Nhe1酶切位點，3'端帶入Bsiw1酶切位點，從而將完整之輕鏈可變區序列與已裝入輕鏈恆定區之表現載體pTM5相連。
7、人類化hGIPR抗體與GLP-1之融合蛋白質之構建 優化後之人類化抗體在輕鏈之N端或者C端與GLP-1及其衍生物序列進行融合組成GLP-1融合蛋白質。兩者之序列由肽接頭序列(Linker)做為橋樑進行連接。信號肽-GLP-1-Linker的核苷酸序列由金斯瑞生物科技有限公司合成。以合成基因為模板，PCR擴增「信號肽-GLP-1-Linker」部分之序列。另以人類化抗體之核苷酸序列為模板，擴增融合蛋白質之抗體部分之序列。然後藉由重疊PCR將融合蛋白質核酸序列的「信號肽-GLP-1-Linker」部分與抗體部分連接，引子兩端添加Nhe1與Not1的酶切位點，從而將完整之融合蛋白質序列與表現載體pTM5相連。
8、hGIPR抗體與GLP-1融合蛋白質之短暫表現 接種5×105 /mL的懸浮HEK293或者CHO表現細胞株至轉瓶中。經由37℃，5% CO2 旋轉培養24 hr後，密度達至1×106 /mL後被用於轉染。轉染過程中使用聚乙烯亞胺(PEI)作為轉染介質，將其與DNA混合。兩者混合物在靜置孵育15分鐘後被加入至細胞培養中。細胞在接受PEI與DNA混合物後繼續37℃，5% CO2 旋轉培養24 hr後，向細胞培養液中加入胰蛋白腖作為表現需要的添加物。最後在表現完成後(大於96 hr)收集細胞上清用於抗體之純化分離。
9、hGIPR抗體與GLP-1融合蛋白質之純化分離 收集之實例8中之細胞上清經由高速(8000 rpm)離心移除細胞以及細胞碎片後，再用0.22 µm濾膜過濾澄清。澄清後之上清被用於純化。純化過程由層析儀完成。上清首先流過蛋白A/G親和層析柱。上清中包含之抗體在此期間與蛋白A/G親和層析柱的配基相結合後被滯留於柱內。然後用低pH值(小於等於3.0)的溶離緩衝液灌洗層析柱解離與層析柱結合之抗體。收集到之抗體溶離液用1 M之Tris-HCl迅速中和。得到之抗體溶離液經由透析後置換成PBS或者其他緩衝體系。
10、流式細胞儀驗證功能性hGIPR抗體之結合活性 用含10 mM EDTA的PBS消化、收集105 個CHO-DHFR-hGIPR細胞，分別加入1.5 mL EP管，離心後棄上清。陰性對照樣本用流式上樣緩衝液(PBS，2% FBS)重懸。陽性處理組細胞每管加200 µL特定濃度的hGIPR抗體，室溫孵育；孵育完成後1500 rpm離心，棄上清，用流式上樣緩衝液洗一次細胞沈澱，再離心，將細胞重懸；向細胞重懸液加入1:50稀釋之FITC標記之羊抗鼠螢光二抗或者PE標記之羊抗人螢光二抗，200 µL/孔，室溫避光孵育30分鐘；離心，棄上清，再用流式上樣緩衝液洗一次，離心，最後用流式上樣緩衝液將細胞沈澱重懸，上機偵測。重組抗hGIPR之功能性抗體與表現GIPR之CHO-DHFR-GIPR細胞有特異性結合。在圖1顯示之實驗結果中，灰色峰與虛線峰為陰性對照，而1 μM之L10H8對應的實線峰有明顯右移，證明了L10H8與CHO-DHFR-GIP之特異性結合。
11、cAMP實驗偵測hGIPR抗體或hGIPR抗體/GLP-1融合蛋白質在體外拮抗GIPR之生物學活性 以每孔30000個接種表現hGIPR之CHO-DHFR細胞至96孔細胞培養盤，置於37℃，5% CO2 培養箱中隔夜。第二天移除細胞上清，加入雜交瘤細胞培養上清或梯度稀釋之抗體45 µL/孔。室溫置放30分鐘，再加入GIP多肽(Phoenix Pharmaceuticals，50 pM)45 µL/孔。然後將96孔細胞培養盤置於37℃，5% CO2 培養箱中繼續孵育30分鐘後，加10 µL/孔之10% Triton X-100，室溫裂解，用排槍混合均勻。採用cAMP套組(CisBio)偵測實驗中產生的cAMP。取上述10 µL/孔細胞裂解液於白色384孔盤中，加入5 µL/孔1:20稀釋之cAMP-d2，最後加5 µL/孔1:20稀釋之Anti-cAMP-Eu3±cryptate，室溫孵育1 hr。在Envision 2103酶標儀上讀取時差式螢光665 nm/620 nm信號比值，然後採用Prism5.0計算IC50 值。圖2顯示L7H6以IC50 =7.6 nM拮抗GIPR。圖3顯示GLP-1-Linker-L7H6以IC50 =14.9 nM拮抗GIPR。
12、報導基因實驗偵測hGIPR抗體/GLP-1融合蛋白質在體外激活GLP-1R 以每孔20000個接種共表現hGLP-1R-CRE-Luciferase的CHO-DHFR-細胞至96孔細胞培養盤，37℃培養隔夜。第二天移除培養基上清，用無血清培養基清洗細胞表面兩次，吸去殘液，再加入100 µL用無血清培養基稀釋純化抗體或GLP-1，37℃孵育4小時。刺激結束後，加入100 µL Bright Glo化學發光底物(Promega)，最後將細胞裂解物轉移至白色96孔盤，在SpectraMax L酶標儀(Molecular Devices)上讀取相對螢光強度。在圖4顯示GLP-1-Linker-L7H6以EC50 =0.04 nM激活hGLP-1R。
13、高脂飼料誘導之C57BL/6肥胖小鼠藥效實驗評價hGIPR抗體之體內藥效 60%高脂飼料誘導C57BL/6小鼠建立肥胖模型(DIO mice)。小鼠購入後正常飲食飼養一週後，隨機挑選一定數量的老鼠作為正常對照組給予普通小鼠飼料餵養，剩餘動物給予高脂飼料。連續飼餵8週(wk)，每週稱量一次體重及進食量。隨後將高脂飼料組老鼠按體重隨機分為L10H8組(10 mg/kg)與模型組，每兩天皮下注射藥物1次，共持續6 wk，正常對照組不給藥，模型組給予等量的空白製劑。實驗週期內採集小鼠體重、攝食量以及行為學觀測資料。實驗的最後一天前禁食12 hr (自由飲水)，動物眼眶採血分離血清並行安樂死術，解剖稱取肝臟，觀測肝臟形態，偵測肝臟TC及TG，偵測血清ALT、AST、GLU、TC及TG (結果見圖5與表三)。表三：給藥後各組之生化偵測結果
生化指標 正常對照組 L10H8組 模型組
ALT (IU/L) 37.88 ± 508** 92.08 ± 30.05** 158.37 ± 40.50
AST (IU/L) 136.20 ± 24.21** 157.20± 27.09 184.82± 35.49
GLU(mmol/L) 8.38± 1.15** 11.67± 2.04 10.91 ± 1.87
TC(mmol/L) 3.29 ± 0.25** 6.30± 0.31 6.62 ± 1.00
TG(mmol/L) 0.99 ± 0.07** 1.41± 0.13* 1.21 ± 0.11
肝臟TG(mmol/L) 26.83± 16.96** 88.23 ± 9.61* 159.08 ± 67.87
肝臟指數(g/100g) 3.65± 0.23 3.76 ± 0.44* 4.56 ± 1.28
註：平均值±標準誤差，與模型組比較，* P ＜0.05，** P ＜0.01；肝臟指數=肝臟重量/動物體重*100。
給L10H8抗體6 wk後，L10H8組體重增幅僅略低於模型組，但其肝臟重量顯著性低於模型組，而與正常對照組接近。L10H8組之肝臟TG顯著低於模型組，其血清TG顯著高於模型組。此等偵測結果顯示L10H8顯著減緩了肝臟對脂類之吸收與積累。圖5為各組小鼠的體重變化率。表三總結了各組小鼠在給L10H8抗體6 wk後之肝臟指標。
14、報導基因實驗偵測hGIPR抗體/GLP-1融合蛋白質GLP-1-Linker-V1W5在體外激活GLP-1R 以每孔20000個接種共表現hGLP-1R-CRE-Luciferase的CHO-DHFR-細胞至96孔細胞培養盤，37℃培養隔夜。第二天移除培養基上清，用無血清培養基清洗細胞表面兩次，吸去殘液，再加入100 µL用無血清培養基稀釋純化抗體或GLP-1，37℃孵育4小時。刺激結束後，加入100 µL Bright Glo化學發光底物(Promega)，最後將細胞裂解物轉移至白色96孔盤，在SpectraMax L酶標儀(Molecular Devices)上讀取相對螢光強度。在圖6顯示GLP-1-Linker-V1W5以EC50 =17.40 pM激活hGLP-1R。
15、cAMP實驗偵測hGIPR抗體或hGIPR抗體/GLP-1融合蛋白質GLP-1-Linker-V1W5在體外拮抗GIPR之生物學活性 以每孔30000個接種表現hGIPR之CHO-DHFR細胞至96孔細胞培養盤，置於37℃，5% CO2 培養箱中隔夜。第二天移除細胞上清，加入雜交瘤細胞培養上清或梯度稀釋之抗體45 µL/孔。室溫置放30分鐘，再加入GIP多肽(Phoenix Pharmaceuticals，50 pM)45 µL/孔。然後將96孔細胞培養盤置於37℃，5% CO2 培養箱中繼續孵育30分鐘後，加10 µL/孔之10% Triton X-100，室溫裂解，用排槍混合均勻。採用cAMP套組(CisBio)偵測實驗中產生的cAMP。取上述10 µL/孔細胞裂解液於白色384孔盤中，加入5 µL/孔1:20稀釋之cAMP-d2，最後加5 µL/孔1:20稀釋之Anti-cAMP-Eu3±cryptate，室溫孵育1 hr。在Envision 2103酶標儀上讀取時差式螢光665 nm/620 nm信號比值，然後採用Prism5.0計算IC50 值。圖7顯示GLP-1-Linker-V1W5以IC50 =7.03 nM拮抗人GIP受體(hGIPR)。圖8顯示GLP-1-Linker-V1W5以IC50 =4.30 nM拮抗猴GIP受體(maGIPR)。
16、hGIPR抗體/GLP-1融合蛋白質在食蟹猴上之藥代動力學實驗 給予雌雄各半共6隻食蟹猴皮下單次GLP-1/hGIPR抗體融合蛋白注射，劑量為2 mg/kg，且在給藥前(0分鐘)，給藥後2 hr，4 hr，8 hr，12 hr，24 hr，2 d，4 d，6 d，8 d，10 d，12 d，18 d，28 d進行給藥側肢靜脈取全血0.6 mL置於離心管中在冰上待其自然凝固後離心提取血清，超低溫保存(-80℃)至偵測為止。血清樣品中之GLP-1/hGIPR抗體融合蛋白的GLP-1部分以及hGIPR抗體部分是用ELISA方法對其進行分別定量，且藉由軟體分析測定兩者在食蟹猴體內之半衰期。
17、hGIPR抗體/GLP-1融合蛋白質在恆河猴上之藥代動力學實驗 給予9隻雄性健康恆河猴皮下單次hGIPR抗體/GLP-1融合蛋白質(GLP-1-Linker-V1W4、GLP-1-Linker-V1W5或GLP-1-Linker-V1W6)注射，每組3隻動物，劑量為4 mg/kg，且在給藥前(0分鐘)，給藥後2 hr、4 hr、8 hr、12 hr、24 hr、2天、4天、6天、8天、10天、12天、16天、20天、24天、30天、36天、42天、50天、60天經前臂靜脈取0.6 mL全血樣置於已有8 µL DDP-IV酶抑制劑的離心管中，放在冰上待其自然凝固後離心提取血清，超低溫保存(-80℃)至偵測為止。血清樣品中之GLP-1/hGIPR抗體融合蛋白的hGIPR抗體部分以及GLP-1部分是用ELISA方法對其進行分別定量，且藉由軟體分析測定兩者在恆河猴體內之半衰期。
PK結果顯示，上述三個GLP-1/hGIPR抗體融合蛋白構建之抗體部分半衰期T1/2 分別為360，679及614小時左右，而GLP-1部分之半衰期T1/2 分別為87，82及97小時左右。各組猴之PK曲線及參數見圖9與圖10及表四。 表四：各組猴之PK參數
抗體部分       GLP-1-Linker-V1W4 GLP-1-Linker-V1W5 GLP-1-Linker-V1W6
T1/2 小時 360±65 679±87 614±83
Tmax 小時 12-48 24-96 24-48
Cmax 奈克/毫升 82416±11141 32270±1097 49615±8410
GLP-1部分 T1/2 小時 87±0 82±5 97±18
Tmax 小時 12-24 24 12-24
Cmax 奈克/毫升 47634±5853 41440±1071 42251±14729
18、高脂飼料誘導之肥胖食蟹猴藥效實驗評價hGIPR抗體/GLP-1融合蛋白質在靈長類哺乳動物體內之藥效 60%高脂飼料誘導食蟹猴建立肥胖食蟹猴模型(DIO cynomolgus monkey)，用於評價皮下注射給予GLP-1-Linker-L7H6在該動物模型上之體內藥效。將高脂飼料組猴按體重隨機分為GLP-1-Linker-L7H6 (10 mg/kg)給藥組與模型組，每兩天皮下注射藥物1次，共持續8 wk，模型組給予等量的空白製劑。實驗週期內採集猴體重、攝食量以及行為學觀測資料。實驗週期結束後對動物行安樂死術，解剖稱取肝臟，觀測肝臟形態，偵測肝臟TC及TG；偵測血清ALT、AST、GLU、TC及TG。
用以上所述之同樣方法，對GLP-1-Linker-V1W5予以測定。將9隻肥胖食蟹猴按體重隨機分為製劑對照組、GLP-1-Linker-V1W5組及陽性對照(用GLP-1R抗體與GLP-1之融合蛋白質對照)組，每組3隻猴。每週皮下注射藥物2次，第一週1 mg/kg，第二週開始2 mg/kg，共持續8 wk，製劑對照組給予等量的空白製劑。實驗週期內採集猴攝食量(見圖11)、採集體重且計算體重變化率(見圖12與圖13)、行為學觀測、血常規/血生化偵測以及DEXA偵測資料，其包括軀幹脂肪變化及總脂肪變化時間曲線(見圖14與圖15)，以及總脂肪變化率時間曲線(見圖16)；而圖17顯示了猴的每1公斤體重之總脂肪量變化之時間曲線且圖18顯示了猴的每1公斤體重之總瘦組織量變化之時間曲線。
藥效研究顯示，GLP-1-Linker-V1W5與製劑對照及GLP-1R抗體與GLP-1之融合蛋白質比，動物攝食量降低，更顯著地降低肥胖食蟹猴地體重，值得指出的是，GLP-1-Linker-V1W5減少肥胖食蟹猴的總脂肪及軀幹脂肪，而增加猴之瘦組織。同時，行為學觀測、血常規及血生化偵測無異常發現。
實驗週期結束後對動物肝臟進行活檢，且偵測肝臟TP、TG及TC(結果見表五)。給藥後各組肝臟的生化偵測結果顯示GLP-1-Linker-V1W5降低肝臟的TC含量。 表五：給藥後各組肝臟之生化偵測結果
生化指標 製劑對照 GLP-1-Linker-V1W5 GMA102
TP (g/L) 5.25 ± 0.55 3.95 ± 0.65 4.60 ± 0.20
TG (mmol/L) 2.44 ± 1.01 2.11± 0.47 2.82 ± 1.19
TC (mmol/L) 0.83 ± 0.18 0.33± 0.04 1.11 ± 0.50
TG (mmol/g protein) 0.45± 0.14 0.57 ± 0.21 0.60 ± 0.23
TC (mmol/g protein) 0.16± 0.02 0.08 ± 0.00 0.24 ± 0.10
註：平均值±標準誤差
提供以上例用於向一般熟習此項技術者充分公開及說明如何製造及使用要求保護之實施方式，而不意味著限制本文披露之範圍。對熟習此項技術者而言顯而易見的修飾都在本文申請案專利範圍之範圍內。將本說明書中引用之所有出版物、專利及專利申請案都藉由參考併入本文，就如同每個出版物、專利或專利申請案均被具體及單獨地藉由參考併入本文一樣。
圖1：顯示了流式細胞術(FACS)偵測重組表現的hGIPR抗體L10H8 (其包含SEQ ID NO: 70與SEQ ID NO: 79)與hGIPR特異性結合之結果，其中灰色峰與虛線峰為陰性對照，灰色峰為空白細胞CHO-DHFR-的背景峰，虛線峰表示L10H8與空白細胞CHO-DHFR- 的陰性結合峰，實線峰表示L10H8與CHO-DHFR-hGIPR之特異性結合峰。 圖2：顯示了直接cAMP實驗偵測hGIPR抗體L7H6 (其包含SEQ ID NO: 67與SEQ ID NO: 77)拮抗GIP激活hGIPR信號通路的濃度抑制曲線(IC50 = 7.6 nM，R2 = 0.99)。 圖3：顯示了直接cAMP實驗偵測GIPR抗體/GLP-1融合蛋白質GLP-1-Linker-L7H6 (其包含SEQ ID NO: 67、SEQ ID NO: 77、SEQ ID NO: 106、SEQ ID NO: 111)拮抗GIP激活hGIPR信號通路的抑制性曲線(IC50 = 14.9 nM，R2 = 0.99)。 圖4：顯示了報導基因實驗偵測GIPR抗體/GLP-1融合蛋白質GLP-1-Linker-L7H6激活hGLP-1R信號通路的激活性曲線(EC50 = 0.04 nM，R2 = 0.99)。 圖5：顯示了高脂飼料誘導之C57BL/6肥胖小鼠藥效實驗週期內各組小鼠的體重變化率時間曲線。 圖6：顯示了報導基因實驗偵測GIPR抗體/GLP-1融合蛋白質GLP-1-Linker-V1W5 (其包含SEQ ID NO: 106、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO: 125與SEQ ID NO: 131)激活人GLP-1受體(hGLP-1R)信號通路的激活性曲線(EC50 = 17.40 pM，R2 = 0.99)。 圖7：顯示了直接cAMP實驗偵測hGIPR抗體GLP-1-Linker-V1W5拮抗GIP激活hGIPR信號通路的濃度抑制曲線(IC50 = 7.03 nM，R2 = 0.99)。 圖8：顯示了直接cAMP實驗偵測人GIP受體(hGIPR)抗體/GLP-1融合蛋白質GLP-1-Linker-V1W5拮抗GIP激活猴GIP受體(maGIPR)信號通路的抑制性曲線(IC50 = 4.30 nM，R2 = 0.99)。 圖9：顯示了恆河猴藥代實驗週期內hGIPR抗體/GLP-1融合蛋白質之抗體部分的藥代(PK)時間曲線。 圖10：顯示了恆河猴藥代實驗週期內hGIPR抗體/GLP-1融合蛋白質的GLP-1部分的藥代(PK)時間曲線。 圖11：顯示了高脂飼料誘導之肥胖食蟹猴藥效實驗週期內hGIPR抗體/GLP-1融合蛋白質對攝食量變化之影響之時間曲線。 圖12：顯示了高脂飼料誘導之肥胖食蟹猴藥效實驗週期內hGIPR抗體/GLP-1融合蛋白質對體重變化之影響之時間曲線。 圖13：顯示了高脂飼料誘導之肥胖食蟹猴藥效實驗週期內hGIPR抗體/GLP-1融合蛋白質對體重變化率之影響之時間曲線。第28天：與製劑對照組相比，GLP-1-Linker-V1W5與陽性對照組之統計學P值分別為0.000與0.003；第56天：與GLP-1-Linker-V1W5組相比，製劑對照與陽性對照組之統計學P值分別為0.003與0.028。 圖14：顯示了高脂飼料誘導之肥胖食蟹猴藥效實驗週期內hGIPR抗體/GLP-1融合蛋白質對軀幹脂肪變化之影響之時間曲線。 圖15：顯示了高脂飼料誘導之肥胖食蟹猴藥效實驗週期內hGIPR抗體/GLP-1融合蛋白質對總脂肪變化之影響之時間曲線。 圖16：顯示了高脂飼料誘導之肥胖食蟹猴藥效實驗週期內hGIPR抗體/GLP-1融合蛋對總脂肪變化率之影響之時間曲線。 圖17：顯示了高脂飼料誘導之肥胖食蟹猴藥效實驗週期內hGIPR抗體/GLP-1融合蛋對每1公斤體重的總脂肪量變化之影響之時間曲線。 圖18：顯示了高脂飼料誘導之肥胖食蟹猴藥效實驗週期內hGIPR抗體/GLP-1融合蛋對每1公斤體重的總瘦組織量變化之影響之時間曲線。
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Claims (51)

  1. 一種能與人GIPR特異性結合之抗體，上述抗體包含一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸序列，其中每個胺基酸序列獨立地選自以下所列之胺基酸序列： a.輕鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 13及SEQ ID NO: 15； b.輕鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 11及SEQ ID NO: 16； c.輕鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 14及SEQ ID NO: 17； d. 重鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 23及SEQ ID NO: 26； e.重鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 27及SEQ ID NO: 29；及 f.重鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 28及SEQ ID NO: 30。
  2. 如請求項1之抗體，其中上述抗體包含一或兩個胺基酸序列，其中每個胺基酸序列獨立地選自以下所列之胺基酸序列： a.輕鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 13及SEQ ID NO: 15；及 b.重鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 23及SEQ ID NO: 26。
  3. 如請求項1或2之抗體，其中上述抗體包含或還包含一或兩個胺基酸序列，其中每個胺基酸序列獨立地選自以下所列之胺基酸序列： a.輕鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 11及SEQ ID NO: 16；及 b.重鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 21及SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 27及SEQ ID NO: 29。
  4. 如請求項1至3中任一項之抗體，其中上述抗體包含或還包含一或兩個胺基酸序列，其中每個胺基酸序列獨立地選自以下所列之胺基酸序列： a.輕鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 14及SEQ ID NO: 17；及 b.重鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 28及SEQ ID NO: 30。
  5. 如請求項1至4中任一項之抗體，其中上述抗體包含或還包含一或兩個胺基酸序列，其中每個胺基酸序列獨立地選自以下所列之胺基酸序列：SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 16及SEQ ID NO: 17。
  6. 如請求項1至5中任一項之抗體，其中上述抗體包含或還包含一或兩個胺基酸序列，其中每個胺基酸序列獨立地選自以下所列之胺基酸序列：SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29及SEQ ID NO: 30。
  7. 如請求項1至6中任一項之抗體，其中上述抗體包含或還包含一個獨立地選自以下所列之輕鏈與重鏈CDR1胺基酸序列之組合：SEQ ID NO: 1與SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 4與SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 7與SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 10與SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 13與SEQ ID NO: 26及SEQ ID NO: 15與SEQ ID NO: 26。
  8. 如請求項1至7中任一項之抗體，其中上述抗體包含或還包含一個獨立地選自以下所列之輕鏈與重鏈CDR2胺基酸序列之組合：SEQ ID NO: 2與SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 5與SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 8與SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 11與SEQ ID NO: 27及SEQ ID NO: 16與SEQ ID NO: 29。
  9. 如請求項1至8中任一項之抗體，其中上述抗體包含或還包含一個獨立地選自以下所列之輕鏈與重鏈CDR3胺基酸序列之組合：SEQ ID NO: 3與SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 6與SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 9與SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 12與SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 14與SEQ ID NO: 28及SEQ ID NO: 17與SEQ ID NO: 30。
  10. 如請求項1至9中任一項之抗體，其中上述抗體包含 (a)輕鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 1； 輕鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 2； 輕鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 3； 重鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 18； 重鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 19；及 重鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 20； (b)輕鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 4； 輕鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 5； 輕鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 6； 重鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 18； 重鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 21；及 重鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 22； (c)輕鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 7； 輕鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 8； 輕鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 9； 重鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 23； 重鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 24；及 重鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 25； (d)輕鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 10； 輕鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 11； 輕鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 12； 重鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 26； 重鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 27；及 重鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 28； (e)輕鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 13； 輕鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 11； 輕鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 14； 重鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 26； 重鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 27；及 重鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 28； (f)輕鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 15； 輕鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 16； 輕鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 17； 重鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 26； 重鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 29；及 重鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 30。
  11. 如請求項10之抗體，其中上述抗體包含 輕鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 15； 輕鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 16； 輕鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 17； 重鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 26； 重鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 29；及 重鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 30。
  12. 如請求項1至11中任一項之抗體，其中上述抗體包含一或兩個胺基酸序列，其中每個胺基酸序列獨立地選自於以下所列之胺基酸序列： a.輕鏈可變結構域胺基酸序列：SEQ ID NO: 61、SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO: 63、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 65、SEQ ID NO: 66、SEQ ID NO: 67、SEQ ID NO: 68、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO: 70及SEQ ID NO: 71；及與其任一序列有至少80%、至少85%、至少90%或至少95%相同之胺基酸序列；及 b.重鏈可變結構域胺基酸序列：SEQ ID NO: 72、SEQ ID NO: 73、SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 75、SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 77、SEQ ID NO: 78、SEQ ID NO: 79及SEQ ID NO: 80及與其任一序列有至少80%、至少85%、至少90%或至少95%相同之胺基酸序列。
  13. 如請求項1至12中任一項之抗體，其中上述抗體之多聚核苷酸編碼序列包含一或兩個多聚核苷酸序列，其中每個多聚核苷酸列獨立地選自於以下所列多聚核苷酸序列： a.輕鏈可變結構域多聚核苷酸編碼序列：SEQ ID NO: 81、SEQ ID NO: 82、SEQ ID NO: 83、SEQ ID NO: 84、SEQ ID NO: 85、SEQ ID NO: 86、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO: 88、SEQ ID NO: 89、SEQ ID NO: 90及SEQ ID NO: 91；及與其任一序列有至少80%、至少85%、至少90%或至少95%相同之多聚核苷酸序列；及 b.重鏈可變結構域多聚核苷酸編碼序列：SEQ ID NO: 92、SEQ ID NO: 93、SEQ ID NO: 94、SEQ ID NO: 95、SEQ ID NO: 96、SEQ ID NO: 97、SEQ ID NO: 98、SEQ ID NO: 99及SEQ ID NO: 100及與其任一序列有至少80%、至少85%、至少90%或至少95%相同之多聚核苷酸序列。
  14. 如請求項1至13中任一項之抗體，其中上述抗體包含或還包含一個獨立地選自於以下所列之胺基酸序列：SEQ ID NO: 61、SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO: 63、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 65、SEQ ID NO: 66、SEQ ID NO: 67、SEQ ID NO: 68、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO: 70及SEQ ID NO: 71。
  15. 如請求項1至14中任一項之抗體，其中上述抗體包含或還包含一個獨立地選自於以下所列之胺基酸序列：SEQ ID NO: 72、SEQ ID NO: 73、SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 75、SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 77、SEQ ID NO: 78、SEQ ID NO: 79及SEQ ID NO: 80。
  16. 如請求項1至15中任一項之抗體，其中上述抗體包含一個獨立地選自於以下所列之輕鏈與重鏈可變區胺基酸序列之組合：SEQ ID NO: 61與SEQ ID NO: 72、SEQ ID NO: 62與SEQ ID NO: 73、SEQ ID NO: 63與SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 64與SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 65與SEQ ID NO: 75、SEQ ID NO: 66與SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 67與SEQ ID NO: 77、SEQ ID NO: 68與SEQ ID NO: 77、SEQ ID NO: 69與SEQ ID NO: 78、SEQ ID NO: 70與SEQ ID NO: 79及SEQ ID NO: 71與SEQ ID NO: 80。
  17. 如請求項16中任一項之抗體，其中上述抗體包含或還包含一個獨立地選自於以下所列之胺基酸序列：SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO: 63、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 66、SEQ ID NO: 67、SEQ ID NO: 68、SEQ ID NO: 73、SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 76及SEQ ID NO: 77。
  18. 如請求項16中任一項之抗體，其中上述抗體包含一個獨立地選自於以下所列之輕鏈與重鏈可變區胺基酸序列之組合：SEQ ID NO: 62與SEQ ID NO: 73、SEQ ID NO: 63與SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 64與SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 66與SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 67與SEQ ID NO: 77及SEQ ID NO: 68與SEQ ID NO: 77。
  19. 如請求項16之抗體，其中上述抗體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 67或SEQ ID NO: 77。
  20. 如請求項16之抗體，其中上述抗體包含SEQ ID NO: 67及SEQ ID NO: 77胺基酸序列之組合。
  21. 如請求項1至20中任一項之抗體，其中上述抗體還包含一或兩個胺基酸序列，其中每個胺基酸序列獨立地選自於以下所列之胺基酸序列： a.輕鏈恆定胺基酸序列：SEQ ID NO: 101及SEQ ID NO: 102；及 b.重鏈恆定胺基酸序列：SEQ ID NO: 103、SEQ ID NO: 104及SEQ ID NO:124。
  22. 如請求項1至21中任一項之抗體，其中上述抗體為鼠源GIPR抗體或人類化GIPR抗體。
  23. 如請求項1至22中任一項之抗體，其中上述抗體為GIPR單株抗體。
  24. 如請求項1至23中任一項之抗體，其中上述抗體為單株抗體，該單株抗體包含一個選自於以下所列之胺基酸序列之組合：SEQ ID NO: 61與SEQ ID NO: 72、SEQ ID NO: 62與SEQ ID NO: 73、SEQ ID NO: 63與SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 64與SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 65與SEQ ID NO: 75、SEQ ID NO: 66與SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 67與SEQ ID NO: 77、SEQ ID NO: 68與SEQ ID NO: 77、SEQ ID NO: 69與SEQ ID NO: 78、SEQ ID NO: 70與SEQ ID NO: 79及SEQ ID NO: 71與SEQ ID NO: 80。
  25. 如請求項1至23中任一項之抗體，其中上述抗體為單株抗體，該單株抗體包含一個選自於以下所列之胺基酸序列之組合：SEQ ID NO: 61與SEQ ID NO: 72、SEQ ID NO: 62與SEQ ID NO: 73、SEQ ID NO: 63與SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 64與SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 65與SEQ ID NO: 75、SEQ ID NO: 66與SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 67與SEQ ID NO: 77、SEQ ID NO: 68與SEQ ID NO: 77、SEQ ID NO: 69與SEQ ID NO: 78、SEQ ID NO: 70與SEQ ID NO: 79及SEQ ID NO: 71與SEQ ID NO: 80。
  26. 如請求項1至25中任一項之抗體，其中上述抗體包含V1W1 (SEQ ID NO: 125及SEQ ID NO: 127)、V1W2 (SEQ ID NO: 125及SEQ ID NO: 128)、V1W3 (SEQ ID NO: 125及SEQ ID NO: 129)、V1W4 (SEQ ID NO: 125及SEQ ID NO: 130)、V1W5 (SEQ ID NO: 125及SEQ ID NO: 131)、V1W6 (SEQ ID NO: 125及SEQ ID NO: 132)、V1W7 (SEQ ID NO: 125及SEQ ID NO: 133)、V1W8 (SEQ ID NO: 125及SEQ ID NO: 134)、V1W9 (SEQ ID NO: 125及SEQ ID NO: 135)、V2W1 (SEQ ID NO: 126及SEQ ID NO: 127)、V2W2 (SEQ ID NO: 126及SEQ ID NO: 128)、V2W3 (SEQ ID NO: 126及SEQ ID NO: 129)、V2W4 (SEQ ID NO: 126及SEQ ID NO: 130)、V2W5 (SEQ ID NO: 126及SEQ ID NO: 131)、V2W6 (SEQ ID NO: 126及SEQ ID NO: 132)、V2W7 (SEQ ID NO: 126及SEQ ID NO: 133)、V2W8 (SEQ ID NO: 126及SEQ ID NO: 134)或V2W9 (SEQ ID NO: 12及SEQ ID NO: 135)組合之抗體。
  27. 如請求項1至25中任一項之抗體，其中上述抗體包含V1W4 (SEQ ID NO: 125及SEQ ID NO: 130)、V1W5 (SEQ ID NO: 125及SEQ ID NO: 131)或V1W6 (SEQ ID NO: 125及SEQ ID NO: 132)組合之抗體。
  28. 如請求項1至25中任一項之抗體，其中上述抗體包含VV1W5 (SEQ ID NO: 125及SEQ ID NO: 131)組合之抗體。
  29. 如請求項1至28中任一項之抗體，其中上述抗體具有一或多個以下所列之性質： a.當與人GIPR結合時，其Kd與參比GIPR抗體相同或更優； b.當抑制人GIPR之GIP激活時，其IC50 與參比GIPR抗體相同或更優；及 c.該GIPR抗體在人GIPR上與參比GIPR抗體交叉競爭結合。
  30. 如請求項29之抗體，其中上述抗體在人GIPR上與上述參比GIPR抗體交叉競爭結合。
  31. 如請求項29或30之抗體，其中上述參比GIPR抗體包含如請求項1至28中任一項之抗體。
  32. 如請求項31之抗體，其中上述參比GIPR抗體包含輕鏈可變結構域胺基酸序列SEQ ID NO: 67及重鏈可變結構域胺基酸序列SEQ ID NO: 77之組合。
  33. 如請求項1至32中任一項之抗體，其中上述抗體為鼠源抗體、人類抗體、人類化抗體、嵌合抗體、單株抗體、多株抗體、重組抗體、抗原結合抗體片段、單鏈抗體、雙鏈抗體、三鏈抗體、四鏈抗體、Fab片段、F(ab')x片段、結構域抗體、IgD抗體、IgE抗體、IgM抗體、IgGl抗體、IgG2抗體、IgG3抗體或IgG4抗體。
  34. 如請求項1至33中任一項之抗體，其中上述抗體之降低人GIP信號傳導之IC50 值大約為1 nM至200 nM或1 nM 至100 nM。
  35. 一種GLP-1融合蛋白質，其結構特徵在於：上述融合蛋白質包含如請求項1至34中任一項之一個GIPR抗體及一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個或八個GLP-1片段或反向GLP-1片段；該融合蛋白質藉由肽接頭序列(Linker)將GLP-1片段之羧基端與GIPR抗體輕鏈或重鏈之胺基端連接，或者將反向GLP-1片段之胺基端與GIPR抗體輕鏈或重鏈之羧基端連接。
  36. 如請求項35之融合蛋白質，其中上述融合蛋白質包含一個GIPR抗體及一個、二個、三個或四個GLP-1片段；該融合蛋白質藉由一個肽接頭序列(Linker)將GLP-1片段之羧基端與GIPR抗體輕鏈或重鏈之胺基端連接。
  37. 如請求項35之融合蛋白質，其中上述融合蛋白質包含一個GIPR抗體及一個、二個、三個或四個反向GLP-1片段；該融合蛋白質藉由一個肽接頭序列(Linker)將反向GLP-1片段之胺基端與GIPR抗體輕鏈或重鏈之羧基端連接。
  38. 如請求項35之融合蛋白質，其中上述融合蛋白質包含一個GIPR抗體與二個GLP-1片段；該融合蛋白質藉由一個肽接頭序列(Linker)將GLP-1片段之羧基端與GIPR抗體輕鏈或者重鏈之胺基端連接。
  39. 如請求項35之融合蛋白質，其中上述融合蛋白質包含一個GIPR抗體與二個反向GLP-1片段；該融合蛋白質藉由一個肽接頭序列(Linker)將反向GLP-1片段之胺基端與GIPR抗體輕鏈或者重鏈之羧基端連接。
  40. 如請求項35之融合蛋白質，其中上述GIPR抗體、GLP-1片段及肽接頭序列(Linker)係藉由以下中所述之方式融合形成上述融合蛋白質： 藉由肽接頭序列(Linker)將GLP-1片段之羧基端與GIPR抗體輕鏈之胺基端連接：N'-GLP-1-Linker-R-C'； 藉由肽接頭序列(Linker)將GLP-1片段之羧基端與GIPR抗體重鏈之胺基端連接：N'-GLP-1-Linker-R-C'； 其中：N'代表多肽鏈之胺基端，C'代表多肽鏈之羧基端，GLP-1代表GLP-1片段，R為如請求項1至34之GIPR抗體之輕鏈或者重鏈之胺基酸序列，且Linker代表肽接頭。
  41. 如請求項35至40中任一項之GLP-1融合蛋白質，上述肽接頭(Linker)之序列包含全長的、部分的或者重複的獨立選自以下之一的胺基酸序列：SEQ ID NO: 110、SEQ ID NO: 111及SEQ ID NO: 112。
  42. 如請求項35至40中任一項之GLP-1融合蛋白質，其中上述GLP-1片段包含獨立選自以下之一的胺基酸序列：SEQ ID NO: 105、SEQ ID NO: 106、SEQ ID NO: 107、SEQ ID NO: 108及SEQ ID NO: 109；或者其中上述反向GLP-1片段包含獨立選自以下之一的胺基酸序列：SEQ ID NO: 119、SEQ ID NO: 120、SEQ ID NO: 121、SEQ ID NO: 122及SEQ ID NO: 123。
  43. 一種多核苷酸，其編碼如請求項1至34中任一項之GIPR抗體或如請求項35至42中任一項之GLP-1融合蛋白質。
  44. 一種載體，其包含如請求項43之多核苷酸。
  45. 一種宿主細胞，其包含如請求項44之載體。
  46. 一種藥用組合物，其包含與藥用可接受載體混合的如請求項1至34中任一項之GIPR抗體或者如請求項35至42中任一項之GLP-1融合蛋白質。
  47. 一種包含如請求項1至34中任一項之GIPR抗體或者如請求項35至42中任一項之GLP-1融合蛋白質的藥用組合物在製備用於預防或治療非酒精性脂肪肝類疾病的藥物中之用途。
  48. 一種包含如請求項1至34中任一項之GIPR抗體或者如請求項34至42中任一項之GLP-1融合蛋白質的藥用組合物在製備用於預防或治療二型糖尿病的藥物中之用途。
  49. 一種包含如請求項1至34中任一項之GIPR抗體或者如請求項35至42中任一項之GLP-1融合蛋白質的藥用組合物在製備用於減肥或者治療肥胖症以及肥胖症相關病症的藥物中之用途。
  50. 一種包含如請求項1至34中任一項之GIPR抗體或者如請求項35至42中任一項之GLP-1融合蛋白質的藥用組合物在製備用於同時治療非酒精性脂肪肝類疾病，肥胖症或者二型糖尿病二種及以上病症的藥物中之用途。
  51. 如請求項47至50中任一項之用途，其中上述藥用組合物是用於靜脈或皮下注射。
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