TW202116357A - 抗組織因子抗體-藥物結合物及相關方法 - Google Patents

抗組織因子抗體-藥物結合物及相關方法 Download PDF

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Abstract

本文提供特異性結合至人類組織因子(TF)的抗體、抗TF抗體-藥物結合物(ADC)以及包含該等抗體或ADC之組成物。本文亦提供製備及使用該等抗體或ADC之方法，諸如治療及診斷方法。

Description

抗組織因子抗體-藥物結合物及相關方法
血液凝固涉及導致血液凝結的一系列複雜的過程。組織因子(TF)在這些凝固過程中起重要作用。TF為絲胺酸蛋白酶因子VIIa (FVIIa)之細胞表面受體。TF/FVIIa複合物催化非活性蛋白酶因子X (FX)轉化為活性蛋白酶因子Xa (FXa)。FXa及其輔因子FVa形成凝血酶原酶複合物，其從凝血酶原生成凝血酶。凝血酶將可溶性纖維蛋白原轉化為不溶性纖維蛋白股，且催化許多其他凝固相關過程。
TF在多種類型的實性瘤上過表現。在癌症中，TF/FVIIa傳訊可支持血管生成、腫瘤進展及轉移。
本文提供抗TF抗體-藥物結合物及相關方法。
本文提供一種抗體-藥物結合物，其包含：  a. 抗原結合蛋白(Ab)，其結合人類組織因子(TF)之細胞外域(SEQ ID NO: 810)，其中該Ab包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3，其中 i. 該VH-CDR1包含SEQ ID NO: 872，該VH-CDR2包含SEQ ID NO: 873，該VH-CDR3包含SEQ ID NO: 874，該VL-CDR1包含SEQ ID NO: 875，該VL-CDR2包含SEQ ID NO: 876，且該VL-CDR3包含SEQ ID NO: 877， ii. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A3之抗體， iii. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A之抗體， iv. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5之抗體， v. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5-T之抗體，或 vi. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25G1之抗體； 及 b. 一或多個連接子-毒素部分，其由式IV表示：
Figure 02_image003
式 IV 其中： X為* -C(O)NHCH(CH2 (R2 ))-+ ，其中*及+表示如式IV中所指示之各別連接點，或X不存在； L為連接子； !表示L與該Ab之連接點，其中L通過共價鍵連接至該Ab； R1 選自由以下組成之群：
Figure 02_image005
、
Figure 02_image007
、
Figure 02_image009
、
Figure 02_image011
及
Figure 02_image013
， 其中#及%表示如式IV中所指示之各別連接點；且 R2 為苯基。
在一些實施例中，R1 選自由以下組成之群：
Figure 02_image015
、
Figure 02_image017
及
Figure 02_image019
。
在一些實施例中，X不存在。
在一些實施例中，具有式IV之連接子-毒素部分由式V表示：
Figure 02_image021
。 式 V
在一些實施例中，R1 選自由以下組成之群：
Figure 02_image015
、
Figure 02_image017
及
Figure 02_image019
。
在一些實施例中，R1 選自由以下組成之群：
Figure 02_image015
及
Figure 02_image017
。
在一些實施例中，R1 為：
Figure 02_image015
。
在一些實施例中，L為可裂解的連接子。
在一些實施例中，L為含肽連接子。
在一些實施例中，L為蛋白酶可裂解的連接子。
在一些實施例中，L為選自以下之一的連接子：N-(β-順丁烯二醯亞胺基丙氧基)-N-羥基琥珀醯亞胺酯(BMPS)、N-(ε-順丁烯二醯亞胺基己醯基氧基)琥珀醯亞胺酯(EMCS)、N-[γ-順丁烯二醯亞胺基丁醯基氧基]琥珀醯亞胺酯(GMBS)、1,6-己烷-雙-乙烯基碸(HBVS)、琥珀醯亞胺基4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-羧基-(6-醯胺基己酸酯)(LC-SMCC)、間順丁烯二醯亞胺基苯甲醯基-N-羥基琥珀醯亞胺酯(MBS)、4-(4-N-順丁烯二醯亞胺基苯基)丁醯肼(MPBH)、3-(溴乙醯胺基)丙酸琥珀醯亞胺酯(SBAP)、碘乙酸琥珀醯亞胺酯(SIA)、(4-碘乙醯基)胺基苯甲酸琥珀醯亞胺酯(SIAB)、N-琥珀醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫)丙酸酯(SPDP)、N-琥珀醯亞胺基-4-(2-吡啶基硫)戊酸酯(SPP)、4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸琥珀醯亞胺酯(SMCC)、4-(對順丁烯二醯亞胺基苯基)丁酸琥珀醯亞胺酯(SMPB)、琥珀醯亞胺基6-[(β-順丁烯二醯亞胺基丙醯胺基)己酸酯](SMPH)、亞胺基硫雜環戊烷(IT)、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SIAB、磺基-SMCC、磺基-SMPB及琥珀醯亞胺基-(4-乙烯基碸)苯甲酸酯(SVSB)。
在一些實施例中，L包含具有下式之聚乙二醇鏈：
Figure 02_image023
其中g為1-20之整數。
在一些實施例中，g為3。
本文提供一種具有式VI之抗體-藥物結合物：
Figure 02_image025
式 VI 其中： Ab表示組織因子(TF)抗體； n為大於或等於1之整數； X為* -C(O)NHCH(CH2 (R2 ))-+ ，其中*及+表示如式VI中所指示之各別連接點，或X不存在； L為連接子； R1 選自由以下組成之群：
Figure 02_image005
、
Figure 02_image007
、
Figure 02_image009
、
Figure 02_image011
及
Figure 02_image013
， 其中#及%表示如式VI中所指示之各別連接點；且 R2 為苯基；且其中 該Ab包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3，其中 i. 該VH-CDR1包含SEQ ID NO: 872，該VH-CDR2包含SEQ ID NO: 873，該VH-CDR3包含SEQ ID NO: 874，該VL-CDR1包含SEQ ID NO: 875，該VL-CDR2包含SEQ ID NO: 876，且該VL-CDR3包含SEQ ID NO: 877， ii. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A3之抗體， iii. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A之抗體， iv. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5之抗體， v. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5-T之抗體，或 vi. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25G1之抗體。
在一些實施例中，R1 選自由以下組成之群：
Figure 02_image015
、
Figure 02_image017
及
Figure 02_image019
。
在一些實施例中，X不存在。
在一些實施例中，R1 選自由以下組成之群：
Figure 02_image015
及
Figure 02_image017
。
在一些實施例中，R1 為：
Figure 02_image015
。
在一些實施例中，L為可裂解的連接子。
在一些實施例中，L為含肽連接子。
在一些實施例中，L為蛋白酶可裂解的連接子。
在一些實施例中，L為選自以下之一的連接子：N-(β-順丁烯二醯亞胺基丙氧基)-N-羥基琥珀醯亞胺酯(BMPS)、N-(ε-順丁烯二醯亞胺基己醯基氧基)琥珀醯亞胺酯(EMCS)、N-[γ-順丁烯二醯亞胺基丁醯基氧基]琥珀醯亞胺酯(GMBS)、1,6-己烷-雙-乙烯基碸(HBVS)、琥珀醯亞胺基4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-羧基-(6-醯胺基己酸酯)(LC-SMCC)、間順丁烯二醯亞胺基苯甲醯基-N-羥基琥珀醯亞胺酯(MBS)、4-(4-N-順丁烯二醯亞胺基苯基)丁醯肼(MPBH)、3-(溴乙醯胺基)丙酸琥珀醯亞胺酯(SBAP)、碘乙酸琥珀醯亞胺酯(SIA)、(4-碘乙醯基)胺基苯甲酸琥珀醯亞胺酯(SIAB)、N-琥珀醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫)丙酸酯(SPDP)、N-琥珀醯亞胺基-4-(2-吡啶基硫)戊酸酯(SPP)、4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸琥珀醯亞胺酯(SMCC)、4-(對順丁烯二醯亞胺基苯基)丁酸琥珀醯亞胺酯(SMPB)、琥珀醯亞胺基6-[(β-順丁烯二醯亞胺基丙醯胺基)己酸酯](SMPH)、亞胺基硫雜環戊烷(IT)、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SIAB、磺基-SMCC、磺基-SMPB及琥珀醯亞胺基-(4-乙烯基碸)苯甲酸酯(SVSB)。
在一些實施例中，L包含具有下式之聚乙二醇鏈：
Figure 02_image023
其中g為1-20之整數。
在一些實施例中，g為3。
在一些實施例中，L由式VII表示：
Figure 02_image029
式 VII 其中： Z表示結合至該TF抗體之標靶基團的官能基； D表示與如式VI中所指示之胺基的連接點； Str為延伸子； AA1 及AA2 各自獨立地為胺基酸，其中AA1 -[AA2 ]m 形成蛋白酶裂解位點； X1 為自降解(self-immolative)基團； s為選自0及1之整數； m為選自由1、2、3及4組成之群之整數； o為選自0、1及2之整數。
在一些實施例中，n為選自由1、2、3、4及5組成之群之整數。
在一些實施例中，[Str]s 選自由以下組成之群：伸烷基、基於脂族酸之延伸子、基於脂族二酸之延伸子、基於脂族胺之延伸子及基於脂族二胺之延伸子。
在一些實施例中，[Str]s 選自由以下組成之群：基於二乙醇酸酯之延伸子、基於丙二酸酯之延伸子、基於己酸酯之延伸子及基於己醯胺之延伸子。
在一些實施例中，[Str]s 選自由以下組成之群：基於甘胺酸之延伸子、基於聚乙二醇之延伸子及基於單甲氧基聚乙二醇之延伸子。
在一些實施例中，[Str]s 為：
Figure 02_image031
其中 h為1-20之整數， CC係指與AA1 之連接點；且 DD係指與Z之連接點。
在一些實施例中，[Str]s 選自：
Figure 02_image033
、
Figure 02_image035
、
Figure 02_image037
、
Figure 02_image039
、
Figure 02_image041
及
Figure 02_image043
； 其中： EE及FF分別表示與Z及AA1 之連接點； R選自氫及C1 -C6 烷基； p每次出現時獨立地為2至10之整數；且 q每次出現時獨立地為1至10之整數。
在一些實施例中，[Str]s 選自由以下組成之群：
Figure 02_image033
、
Figure 02_image037
及
Figure 02_image039
， 其中： EE及FF分別表示與Z及AA1 之連接點； p每次出現時獨立地為2至10之整數；且 q每次出現時獨立地為1至10之整數。
在一些實施例中，[Str]s 選自：
Figure 02_image033
及
Figure 02_image039
， 其中： EE及FF分別表示與Z及AA1 之連接點； p每次出現時獨立地為2至6之整數，且 q為2至8之整數。
在一些實施例中，AA1 -[AA2 ]m 選自Val-Lys、Ala-Lys、Phe-Lys、Val-Cit、Phe-Cit、Leu-Cit、Ile-Cit、Trp-Cit、Phe-Arg、Ala-Phe、Val-Ala、Met-Lys、Asn-Lys、Ile-Pro、Ile-Val、Asp-Val、His-Val、Met-(D)Lys、Asn-(D)Lys、Val-(D)Asp、NorVal-(D)Asp、Ala-(D)Asp、Me3 Lys-Pro、苯基Gly-(D)Lys、Met-(D)Lys、Asn-(D)Lys、Pro-(D)Lys、Met-(D)Lys、Met-Cit-Val、Gly-Cit-Val、(D)Phe-Phe-Lys、(D)Ala-Phe-Lys、Gly-Phe-Leu-Gly (SEQ ID NO: 922)及Ala-Leu-Ala-Leu (SEQ ID NO: 923)。
在一些實施例中，m選自1、2及3。
在一些實施例中，m為1。
在一些實施例中，AA1 -[AA2 ]m 為選自以下之二肽：Val-Lys、Ala-Lys、Phe-Lys、Val-Cit、Phe-Cit、Leu-Cit、Ile-Cit及Trp-Cit。
在一些實施例中，各X1 獨立地選自：對胺基苯甲氧基羰基(PABC)、對胺基苯甲醚(PABE)及甲基化乙二胺(MED)。
在一些實施例中，s為1且h為3。
在一些實施例中，s為1。
在一些實施例中，o為0。
本文提供一種抗體-藥物結合物，其包含具有式VIII之連接子-毒素部分：
Figure 02_image047
式 VIII 其中##表示該連接子-毒素部分與TF抗體之連接點，且該連接子-毒素部分通過共價鍵連接至TF抗體。
本文提供一種具有式IX 之 抗體-藥物結合物：
Figure 02_image001
式 IX 其中： Ab為組織因子(TF)抗體，其中該Ab包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3，其中 i. 該VH-CDR1包含SEQ ID NO: 872，該VH-CDR2包含SEQ ID NO: 873，該VH-CDR3包含SEQ ID NO: 874，該VL-CDR1包含SEQ ID NO: 875，該VL-CDR2包含SEQ ID NO: 876，且該VL-CDR3包含SEQ ID NO: 877， ii. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A3之抗體， iii. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A之抗體， iv. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5之抗體， v. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5-T之抗體，或 vi. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25G1之抗體， n為大於或等於1之整數，且 琥珀醯亞胺基通過共價鍵連接至該Ab。
在一些實施例中，n選自由1、2、3、4及5組成之群。
在一些實施例中，n選自由2、3及4組成之群。
本文提供一種抗體-藥物結合物，其包含如式X所表示之連接子：
Figure 02_image049
式 X 其中： ##為與抗體之連接點，且琥珀醯亞胺基通過共價鍵連接至抗體； Y為一或多種額外連接子組分或不存在；且 D1 為與細胞毒性劑之連接點，且其中 該Ab包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3，其中 i. 該VH-CDR1包含SEQ ID NO: 872，該VH-CDR2包含SEQ ID NO: 873，該VH-CDR3包含SEQ ID NO: 874，該VL-CDR1包含SEQ ID NO: 875，該VL-CDR2包含SEQ ID NO: 876，且該VL-CDR3包含SEQ ID NO: 877， ii. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A3之抗體， iii. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A之抗體， iv. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5之抗體， v. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5-T之抗體，或 vi. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25G1之抗體。
本文提供一種抗體-藥物結合物，其包含如式XI所表示之連接子：
Figure 02_image051
式 XI 其中： ##為與抗體之連接點，且琥珀醯亞胺基通過共價鍵連接至抗體； Y為一或多種額外連接子組分或不存在；且 D1 為與細胞毒性劑之連接點，且其中 該Ab包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3，其中 i. 該VH-CDR1包含SEQ ID NO: 872，該VH-CDR2包含SEQ ID NO: 873，該VH-CDR3包含SEQ ID NO: 874，該VL-CDR1包含SEQ ID NO: 875，該VL-CDR2包含SEQ ID NO: 876，且該VL-CDR3包含SEQ ID NO: 877， ii. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A3之抗體， iii. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A之抗體， iv. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5之抗體， v. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5-T之抗體，或 vi. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25G1之抗體。
在一些實施例中，該細胞毒性劑選自由以下組成之群：診斷劑、金屬螯合劑、酶、螢光化合物、生物發光化合物或化學發光化合物。
在一些實施例中，該細胞毒性劑為具有改良安全性(safety profile)之細胞毒性有效載荷(payload)。
在一些實施例中，該Ab包含： a.    VH序列，其為SEQ ID NO: 868；及VL序列，其為SEQ ID NO: 869， b.    VH序列，其為SEQ ID NO: 151；及VL序列，其為SEQ ID NO: 152， c.    VH序列，其為SEQ ID NO: 113；及VL序列，其為SEQ ID NO: 114， d.    VH序列，其為SEQ ID NO: 189；及VL序列，其為SEQ ID NO: 190， e.    VH序列，其為SEQ ID NO: 836；及VL序列，其為SEQ ID NO: 837，或 f.    VH序列，其為SEQ ID NO: 265；及VL序列，其為SEQ ID NO: 266。
在一些實施例中，該Ab包含： a.    重鏈序列，其為QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDx[V/A]YGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYx[N/S]GNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 924)；及輕鏈序列，其為DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCx[R/Q]ASx[Q/E]SIx[S/N]x[S/N]WLAWYQQKPGKAPKLLIYKAx[S/Y]x[S/N]LEx[S/Y]GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQx[Q/L]FQx[S/K]LPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 925)， b.    重鏈序列，其為QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 926)；及輕鏈序列，其為DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSINNWLAWYQQKPGKAPKLLIYKAYNLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQLFQSLPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 927)， c.    重鏈序列，其為QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 926)；及輕鏈序列，其為DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQFQSLPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 928)， d.    重鏈序列，其為QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDAYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 929)；及輕鏈序列，其為DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASESISNWLAWYQQKPGKAPKLLIYKAYSLEYGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQFQKLPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 930)， e.    重鏈序列，其為QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFRSYGISWVRQAPGQGLEWMGWVAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPYGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 931)；及輕鏈序列，其為DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASHSIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASYLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQLFQSLPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 932)，或 f.    重鏈序列，其為QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 926)；及輕鏈序列，其為DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASESISNWLAWYQQKPGKAPKLLIYKAYSLEYGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQFQKLPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 930)。
本文提供一種具有式IX之抗體-藥物結合物：
Figure 02_image001
式 IX 其中： Ab為組織因子(TF)抗體，其中該Ab包含來自命名為25A3之抗體之VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3，且 n為大於或等於1之整數。
在一些實施例中，n選自由1、2、3、4及5組成之群。
在一些實施例中，n選自由2、3及4組成之群。
在一些實施例中，該Ab包含：VH序列，其為SEQ ID NO: 151；及VL序列，其為SEQ ID NO: 152。
在一些實施例中，該Ab包含：完全重鏈序列，其為QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC DKTHTC PPC PAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG；及輕鏈序列，其為DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSINNWLAWYQQKPGKAPKLLIYKAYNLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQLFQSLPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 。
本文提供一種具有式IX 之 抗體-藥物結合物：
Figure 02_image001
式 IX 其中： Ab為組織因子(TF)抗體，其中該Ab包含：重鏈序列，其為QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC DKTHTC PPC PAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 926)；及輕鏈序列，其為DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSINNWLAWYQQKPGKAPKLLIYKAYNLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQLFQSLPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 927)，且 n為大於或等於1之整數。
在一些實施例中，n選自由1、2、3、4及5組成之群。
在一些實施例中，n選自由2、3及4組成之群。
本文提供一種抗體-藥物結合物，其包含抗體(Ab)及一或多種具有以下結構之連接子-毒素：
Figure 02_image054
； 其中： Ab為組織因子(TF)抗體，其中該Ab包含來自命名為25A3之抗體之VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3； 該一或多種連接子-毒素通過共價鍵連接至該Ab；且 ##表示該連接子-毒素與該Ab之連接點。
本文提供一種抗體-藥物結合物組成物，其包含本文所揭示之抗體-藥物結合物，其中該組成物包含多重藥物-抗體比率(DAR)種類，其中該組成物之平均DAR為2-4。
本文提供一種抗體-藥物結合物，其包含抗體(Ab)及一或多種具有以下結構之連接子-毒素：
Figure 02_image054
； 其中： Ab為組織因子(TF)抗體，其中該Ab包含：重鏈序列，其為QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC DKTHTC PPC PAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 926)；及輕鏈序列，其為DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSINNWLAWYQQKPGKAPKLLIYKAYNLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQLFQSLPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 927)，且 該一或多種連接子-毒素通過共價鍵連接至該Ab；且 ##表示該連接子-毒素與該Ab之連接點。
本文提供一種抗體-藥物結合物組成物，其包含本文所揭示之抗體-藥物結合物，其中該組成物包含多重藥物-抗體比率(DAR)種類，其中該組成物之平均DAR為2-4。
在一些實施例中，Ab具有多特異性。
在一些實施例中，該Ab為Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、scFv、(scFv)2、單鏈抗體分子、雙可變域抗體、單可變域抗體、線性抗體或V域抗體。
在一些實施例中，該抗體包含支架，視情況其中該支架為Fc，視情況為人類Fc。
在一些實施例中，該抗體包含選自IgG、IgA、IgD、IgE及IgM之類之重鏈恆定區。
在一些實施例中，該抗體包含IgG類之重鏈恆定區，其中該重鏈恆定區來自選自IgG1、IgG2、IgG3及IgG4之亞類。
在一些實施例中，該抗體包含IgG1之重鏈恆定區。
在一些實施例中，該Fc包含一或多個修飾，其中與無該一或多個修飾之Fc相比，該一或多個修飾導致半衰期增加、抗體依賴性細胞毒性(ADCC)增加、抗體依賴性細胞吞噬作用(ADCP)增加、補體依賴性細胞毒性(CDC)增加或效應子功能減小。
本文提供一種醫藥組成物，其包含如本文所揭示之抗體-藥物結合物及醫藥學上可接受之載劑。
本文提供一種在有需要之個體中治療或預防疾病或疾患之方法，其包含向該個體投與有效量之本文所揭示之抗體-藥物結合物或如本文所揭示之醫藥組成物。
在一些實施例中，該疾病或疾患為癌症。
在一些實施例中，該癌症選自由以下組成之群：頭頸癌、卵巢癌、胃癌、食道癌、子宮頸癌、前列腺癌、胰臟癌、雌激素受體陰性(ER-)乳癌、黃體素受體陰性(PR-)乳癌、HER2陰性(HER2-)三陰性乳癌、神經膠質母細胞瘤、肺癌、膀胱癌、黑色素瘤及腎癌。
在一些實施例中，該疾病或疾患涉及新血管生成。
在一些實施例中，該涉及新血管生成之疾病或疾患為癌症。
在一些實施例中，該疾病或疾患涉及血管發炎。
在一些實施例中，該方法進一步包含向該個體投與一或多種額外治療劑。
在一些實施例中，該組成物進一步包含該一或多種額外治療劑。
在一些實施例中，該額外治療劑調配於不同的醫藥組成物中。
在一些實施例中，該額外治療劑在投與該組成物之前投與。
在一些實施例中，該額外治療劑在投與該組成物之後投與。
在一些實施例中，該額外治療劑與該組成物同時投與。
在一些實施例中，該個體為人類個體。
本文提供一種用於製備抗體-藥物結合物之製程，該製程包含： (A) 使結合人類組織因子(TF)之細胞外域(SEQ ID NO:810)的抗原結合蛋白(Ab)上之親核或親電子基團與雙官能連接子反應以形成Ab-連接子中間物，且使該Ab-連接子中間物與具有通式I 之-NH2 基團反應以提供該抗體藥物結合物
Figure 02_image057
式 I 其中： X為* -C(O)NHCH(CH2 (R2 ))-+ ，其中*及+表示如式I 中所指示之各別連接點，或X不存在； R1 選自由以下組成之群：
Figure 02_image005
、
Figure 02_image007
、
Figure 02_image009
、
Figure 02_image011
及
Figure 02_image013
， 其中#及%表示如式I 中所指示之各別連接點；且R2 為苯基；或 (B) 使具有通式I 之阿司他丁(auristatin)衍生物上之-NH2 基團與雙官能連接子反應以形成連接子-毒素中間物，且使該連接子-毒素中間物與結合人類組織因子(TF)之細胞外域(SEQ ID NO: 810)的抗原結合蛋白(Ab)上之親核或親電子基團反應以提供該抗體-藥物結合物，其中，在(A)或(B)中， (a) 該Ab包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3，其中 i. 該VH-CDR1包含SEQ ID NO: 872，該VH-CDR2包含SEQ ID NO: 873，該VH-CDR3包含SEQ ID NO: 874，該VL-CDR1包含SEQ ID NO: 875，該VL-CDR2包含SEQ ID NO: 876，且該VL-CDR3包含SEQ ID NO: 877， ii. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A3之抗體， iii. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A之抗體， iv. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5之抗體， v. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5-T之抗體，或 vi. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25G1之抗體；且 (b) 該抗體-藥物結合物包含一或多種由式IV表示之部分：
Figure 02_image003
式 IV 其中： X為* -C(O)NHCH(CH2 (R2 ))-+ ，其中*及+表示如式IV中所指示之各別連接點，或X不存在； L為連接子； !表示L與該Ab之連接點，其中L通過共價鍵連接至該Ab； R1 選自由以下組成之群：
Figure 02_image005
、
Figure 02_image007
、
Figure 02_image009
、
Figure 02_image011
及
Figure 02_image013
， 其中#及%表示如式VI中所指示之各別連接點；且 R2 為苯基。
本文提供一種用於製備抗體-藥物結合物之製程，該製程包含： (A)使結合人類組織因子(TF)之細胞外域(SEQ ID NO:810)的抗原結合蛋白(Ab)上之親核或親電子基團與包含二或更多種連接子組分之雙官能連接子之第一連接子組分反應，繼之以依序添加一或多種剩餘連接子組分以形成Ab-連接子中間物，且使該Ab-連接子中間物與具有通式I 之化合物之-NH2 基團反應以提供該抗體藥物結合物：
Figure 02_image057
式 I 其中： X為* -C(O)NHCH(CH2 (R2 ))-+ ，其中*及+表示如式I 中所指示之各別連接點，或X不存在； R1 選自由以下組成之群：
Figure 02_image005
、
Figure 02_image007
、
Figure 02_image009
、
Figure 02_image011
及
Figure 02_image013
， 其中#及%表示如式I 中所指示之各別連接點；且R2 為苯基；或 (B) 使具有通式I 之化合物上之-NH2 基團與包含二或更多種連接子組分之雙官能連接子之第一連接子組分反應，繼之以依序添加一或多種剩餘連接子組分以形成連接子-毒素中間物，且使該連接子-毒素中間物與結合人類組織因子(TF)之細胞外域(SEQ ID NO: 810)的抗原結合蛋白(Ab)上之親核或親電子基團反應以提供該抗體-藥物結合物，其中，在(A)或(B)中， (a) 該Ab包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3，其中 i. 該VH-CDR1包含SEQ ID NO: 872，該VH-CDR2包含SEQ ID NO: 873，該VH-CDR3包含SEQ ID NO: 874，該VL-CDR1包含SEQ ID NO: 875，該VL-CDR2包含SEQ ID NO: 876，且該VL-CDR3包含SEQ ID NO: 877， ii. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A3之抗體， iii. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A之抗體， iv. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5之抗體， v. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5-T之抗體，或 vi. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25G1之抗體；且 (b) 該抗體-藥物結合物包含一或多種由式IV表示之部分：
Figure 02_image003
式 IV 其中： X為* -C(O)NHCH(CH2 (R2 ))-+ ，其中*及+表示如式IV中所指示之各別連接點，或X不存在； L為連接子； !表示L與該Ab之連接點，其中L通過共價鍵連接至該Ab； R1 選自由以下組成之群：
Figure 02_image005
、
Figure 02_image007
、
Figure 02_image009
、
Figure 02_image011
及
Figure 02_image013
， 其中#及%表示如式VI中所指示之各別連接點；且 R2 為苯基。
在一些實施例中，該Ab上之該親核或親電子基團為硫醇或胺。
在一些實施例中，該製程進一步包含用還原劑處理該Ab以還原該Ab中之一或多個二硫鍵聯，以提供該親核硫醇基。
在一些實施例中，L由以下表示：
Figure 02_image063
式 VII 其中： Z表示結合該Ab之標靶基團的官能基； D表示與如式X中所指示之胺基的連接點； Str為延伸子； AA1 及AA2 各自獨立地為胺基酸，其中AA1 -[AA2 ]m 形成蛋白酶裂解位點； X為自降解基團； s為選自0及1之整數； m為選自由1、2、3及4組成之群之整數；且 o為選自0、1及2之整數。
本文提供一種套組，其包含如本文所揭示之抗體-藥物結合物或如本文所揭示之醫藥組成物及使用說明書。
相關申請案之交叉引用
本申請案主張於2019年7月3日提交之美國臨時專利申請案第62/870,644號之優先權，該申請案之全部內容出於所有目的以引用之方式併入本文中。序列表
本申請案含有序列表，該序列表已以ASCII格式以電子方式提交且由此以引用之方式整體併入。該ASCII複本創建于2020年8月12日，名為ITI-003WO_SL.txt且大小為286,038位元組。 1. 定義
除非另外定義，否則本文所用之所有技術術語、符號及其他科學術語均意欲具有熟習此項技術者通常所理解的含義。在一些情況下，為了清楚及/或便於參考起見，本文定義了具有通常理解的含義的術語，並且本文此類定義的包括不應被解釋為表示與此項技術中通常理解的差異。本文所述或引用之技術及程序通常被很好地理解且通常由熟習此項技術者使用習知方法來採用，諸如，例如，描述於Sambrook等人,Molecular Cloning: A Laboratory Manual 第4版 (2012) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY中之廣泛使用的分子選殖方法。適當時，除非另外說明，否則通常根據製造商限定之方案及條件來進行涉及市售套組及試劑之使用的程序。
如本文所用，除非上下文中另外明確指示，否則單數形式「一種」、「一個」及「該」包括複數個指示物。除非另外明確指示，否則術語「包括」、「諸如」及其類似術語意欲傳達包括但不受限制。
如本文所用，除非另外明確指出，否則術語「包含」亦明確包括實施例「由所列舉之元件組成」且「基本上由所列舉之元件組成」。
術語「約」指示並涵蓋所指示之值以及高於及低於該值之範圍。在某些實施例中，術語「約」指示指定值± 10%、± 5%或±1%。在某些實施例中，在適用的情況下，術語「約」指示一或多個指定值±該一或多個值之一個標準偏差。
術語「組織因子」、「TF」、「血小板組織因子」、「因子III」、「凝血質」及「CD142」在本文中可互換用於指代TF或由細胞自然表現或由用TF基因轉染之細胞表現之TF之任何變異體(例如 ，剪接變異體及對偶基因變異體)、同功型及種類同系物。在一些態樣中，TF蛋白為由靈長類動物(例如 ，猴子或人類)、齧齒動物(例如 ，小鼠或大鼠)、狗、駱駝、貓、母牛、山羊、馬、豬或綿羊自然表現之TF蛋白。在一些態樣中，TF蛋白為人類TF (hTF；SEQ ID NO:809)。在一些態樣中，TF蛋白為石蟹獼猴TF (cTF；SEQ ID NO:813)。在一些態樣中，TF蛋白為小鼠TF (mTF；SEQ ID NO:817)。在一些態樣中，TF蛋白為豬TF (pTF；SEQ ID NO:824)。TF為絲胺酸蛋白酶因子VIIa之細胞表面受體。它通常由血管周圍及一些疾病環境中之某些細胞組成性表現。
術語「抗體-藥物結合物」或「ADC」係指包含視情況通過一或多個連接子與一或多種細胞毒性劑結合的抗體的結合物。術語「抗TF抗體-藥物結合物」或「抗TF ADC」係指包含視情況通過一或多個連接子與一或多種細胞毒性劑結合的抗TF抗體的結合物。
如本文所用，術語「TF抗體」、「抗TF抗體」同義。
如本文所用，術語「細胞毒性劑」係指抑制或阻止細胞功能及/或引起細胞死亡或破壞的物質。細胞毒性劑可為抗血管生成劑、促凋亡劑、抗有絲分裂劑、抗激酶劑、烷化劑、激素、激素促效劑、激素拮抗劑、趨化介素、藥物、前藥、毒素、酶、抗代謝藥、抗生素、生物鹼或放射性同位素。示範性細胞毒性劑包括：卡奇黴素、喜樹鹼、卡鉑、伊立替康、SN-38、卡鉑、喜樹鹼(camptothecan)、環磷醯胺、阿糖胞苷、達卡巴仁(dacarbazine)、歐洲紫杉醇(docetaxel)、更生黴素(dactinomycin)、道諾黴素、多柔比星(doxorubicin)、多柔比星、依託泊苷(etoposide)、伊達比星(idarubicin)、拓撲替康(topotecan)、長春花屬生物鹼、美登木素生物鹼(maytansinoid)、美登木素生物鹼類似物、吡咯并苯二氮䓬、類紫杉醇、倍癌黴素(duocarmycin)、尾海兔素、阿司他丁及其衍生物。
「連接子」係指將一種組成物連接至另一組成物(例如，將抗體連接至劑)的分子。本文所述之連接子可將抗體結合至細胞毒性劑。示範性連接子包括不穩定的連接子、酸不穩定的連接子、光不穩定的連接子、帶電荷的連接子、含二硫鍵的連接子、肽酶敏感的連接子、β-葡萄糖醛酸苷連接子、二甲基連接子、硫醚連接子及親水連接子。連接子可為可裂解或不可裂解的。
術語「免疫球蛋白」係指一類結構上相關的蛋白，其通常包含兩對多肽鏈：一對輕(L)鏈及一對重(H)鏈。在「完整的免疫球蛋白」中，所有這四條鏈均由二硫鍵相互連接。免疫球蛋白之結構已得到很好地表徵。參見，例如，Paul,Fundamental Immunology 第7版, 第5章 (2013) Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, PA。簡而言之，各重鏈通常包含重鏈可變區(VH )及重鏈恆定區(CH )。重鏈恆定區通常包含三個域，縮寫為CH1 、CH2 及CH3 。各輕鏈通常包含輕鏈可變區(VL )及輕鏈恆定區。輕鏈恆定區通常包含一個域，縮寫為CL 。
術語「抗體」在本文中以其最廣泛的意義使用且包括包含一或多個特異性結合抗原或抗原決定區的抗原結合域的某些類型的免疫球蛋白分子。抗體具體包括完整抗體(例如， 完整免疫球蛋白)、抗體片段及多特異性抗體。
術語「替代支架」係指以下分子，在該分子中一或多個區域可經多樣化以產生一或多個特異性結合抗原或抗原決定區的抗原結合域。在一些實施例中，抗原結合域以類似於抗體的特異性及親和力結合抗原或抗原決定區。示範性替代支架包括來源於以下的那些：纖網蛋白(例如 ，AdnectinsTM)、β三明治(例如 ，iMab)、脂質運載蛋白(例如 ，抗Anticalins® )、EETI-II/AGRP、BPTI/LACI-D1/ITI-D2(例如 ，Kunitz域)、硫氧還蛋白肽適體、蛋白A(例如 ，Affibody® )、錨蛋白重複序列(例如 ，DARPins)、γ-B-晶體蛋白/泛素(例如 ，人泛素(Affilins))、CTLD3(例如 ，四連接素(Tetranectins))、Fynomer及(LDLR-A模組)(例如 ，高親和性多聚體(Avimers))。關於替代支架的額外資訊提供於Binz等人,Nat. Biotechnol. , 2005 23:1257-1268；Skerra,Current Opin. in Biotech. , 2007 18:295-304；及Silacci等人,J. Biol. Chem. , 2014, 289:14392-14398中；其各自以引用之方式整體併入。
術語「抗原結合域」意謂抗體之能夠與抗原或抗原決定區特異性結合的部分。抗原結合域之一個實例為由抗體之VH -VL 二聚體形成之抗原結合域。抗原結合域之另一實例為藉由自Adnectin之第十纖網蛋白III型域之某些環之多樣化而形成的抗原結合域。可在各種情況下發現抗原結合域，包括抗體及嵌合抗原受體(CAR)，例如來源於抗體或抗體片段(諸如scFv)的CAR。
術語「全長抗體」、「完整抗體」及「完全抗體」在本文中可互換用於指代具有與天然存在之抗體結構實質上類似的結構且具有包含Fc區之重鏈的抗體。例如，當用於指代IgG分子時，「全長抗體」為包含兩條重鏈及兩條輕鏈的抗體。
術語「Fc區」意謂免疫球蛋白重鏈之C端區，其在天然存在之抗體中與Fc受體及補體系統之某些蛋白相互作用。各種免疫球蛋白之Fc區之結構以及其中所含之醣基化位點為此項技術中已知的。參見Schroeder及Cavacini,J. Allergy Clin. Immunol. , 2010, 125:S41-52，其以引用之方式整體併入。Fc區可為天然存在之Fc區，或如此項技術或本揭露其他地方所述經修飾之Fc區。
可將VH 及VL 區進一步細分為散佈在更保守的區中的具有高度變異性的區(「高度變異區(HVR)」；也稱為「互補決定區」(CDR))。更保守的區被稱為框架區(FR)。各VH 及VL 通常包含三個CDR及四個FR，其以以下順序(自N端至C端)排列：FR1 - CDR1 - FR2 - CDR2 - FR3 - CDR3 - FR4。CDR參與抗原結合，且影響抗體之抗原特異性及結合親和力。參見 Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest 第 5 版 (1991) Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD，其以引用之方式整體併入。
「互補決定區(CDR)」係指免疫球蛋白(Ig或抗體)VH β-褶板框架之非框架區內的三個高度變異區(H1、H2或H3)中之一者，或抗體VL β-褶板框架之非框架區內的三個高度變異區(L1、L2或L3)中之一者。CDR為散佈在框架區序列內的可變區序列。CDR為此項技術中眾所周知的且已由例如Kabat定義為抗體可變(V)域內最具高度變異性的區。參見 Kabat等人,J Biol Chem , 1977, 252:6609-6616及Kabat,Adv Protein Chem , 1978, 32:1-75，其各自以引用之方式整體併入。CDR在結構上亦由Chothia定義為不為保守的β-褶板框架之部分的那些殘基，且因此能夠適應不同的構形。參見Chothia及Lesk,J Mol Biol , 1987, 196:901-917，其以引用之方式整體併入。Kabat及Chothia命名法為此項技術中熟知的。AbM、Contact及IMGT亦定義了CDR。藉由比較許多結構已確定了典型抗體可變域內的CDR位置。參見Morea等人,Methods , 2000, 20:267-279及Al-Lazikani等人,J Mol Biol , 1997, 273:927-48，其各自以引用之方式整體併入。由於高度變異區內的殘基數在不同的抗體中不同，因此相對於典型位置的其他殘基照慣例在典型可變域編號方案中的殘基編號旁邊用a、b、c等編號(Al-Lazikani等人,同上 )。此種術語為熟習此項技術者熟知的。
許多高度變異區描述正被使用且包括在本文中。Kabat CDR係基於序列變異性且為最常用的。參見 Kabat等人 (1992)Sequences of Proteins of Immunological Interest , DIANE Publishing: 2719，其以引用之方式整體併入。相反，Chothia係指結構環之位置(Chothia及Lesk,同上 )。AbM高度變異區表示Kabat CDR與Chothia結構環之間的折衷，且由Oxford Molecular之AbM抗體建模軟體使用。Contact高度變異區係基於對可用複雜晶體結構的分析。來自這些高度變異區中之各者之殘基在表 1 中指出。
最近，通用編號系統ImMunoGeneTics (IMGT) Information SystemTM已得到開發並廣泛採用。參見Lefranc等人,Dev Comp Immunol , 2003, 27:55-77，其以引用之方式整體併入。IMGT為整合資訊系統，其專門研究人類及其他脊椎動物之免疫球蛋白(IG)、T細胞受體(TR)及主要組織相容性複合體(MHC)。IMGT CDR係關於胺基酸序列及在輕鏈或重鏈內之位置經指代。由於免疫球蛋白可變域之結構內CDR之「位置」在種類之間為保守的且存在於稱為環之結構中，所以藉由使用根據結構特徵排列可變域序列的編號系統，CDR及框架殘基易於鑑別。Kabat、Chothia及IMGT編號之間的對應關係亦為此項技術中熟知的(Lefranc等人,同上 )。本文所示之示範性系統組合了Kabat及Chothia CDR定義。表 1
   示範性(Kabat + Chothia) Kabat Chothia AbM Contact IMGT
VH CDR1 26-35 31-35 26-32 26-35 30-35 27-38
VH CDR2 50-65 50-65 52a-55 50-58 47-58 56-65
VH CDR3 95-102 95-102 96-101 95-102 93-101 105-117
VL CDR1 24-34 24-34 26-32 24-34 30-36 27-38
VL CDR2 50-56 50-56 50-52 50-56 46-55 56-65
VL CDR3 89-97 89-97 91-96 89-97 89-96 105-117
來自任何脊椎動物種類之輕鏈可基於其恆定域之序列經分配為兩種類型κ及λ中之一種。
來自任何脊椎動物種類之重鏈可分配為五種不同類(或同型)中之一種：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。這些類別亦分別命名為α、δ、ε、γ及µ。基於序列及功能之差異，IgG及IgA類經進一步分為亞類。人類表現以下亞類：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2。
術語「恆定區」或「恆定域」係指輕鏈及重鏈之羧基端部分，其不直接參與抗體與抗原之結合但表現出各種效應子功能，諸如與Fc受體之相互作用。該等術語係指免疫球蛋白分子之一部分，其相對於免疫球蛋白之另一部分(含有抗原結合位點的可變域)具有更保守的胺基酸序列。恆定域含有重鏈之CH1 、CH2 及CH3 域以及輕鏈之CL 域。
當指代抗體重鏈恆定區中之殘基時，通常使用「EU編號方案」(例如 ，如Kabat等,同上 中所報導)。除非另外說明，否則EU編號方案用於指代本文所述之抗體重鏈恆定區中之殘基。
「抗體片段」包含完整抗體之一部分，諸如完整抗體之抗原結合區或可變區。抗體片段包括例如Fv片段、Fab片段、F(ab')2 片段、Fab'片段、scFv (sFv)片段及scFv-Fc片段。
「Fv」片段包含一個重鏈可變域及一個輕鏈可變域之非共價連接二聚體。
除了重鏈及輕鏈可變域，「Fab」片段還包含輕鏈之恆定域及重鏈之第一恆定域(CH1 )。Fab片段可例如藉由重組方法或藉由全長抗體之木瓜蛋白酶消化來生成。
「F(ab’)2 」片段含有兩個在鉸鏈區附近由二硫鍵接合之Fab’片段。F(ab’)2 片段可例如藉由重組方法或藉由完整抗體之胃蛋白酶消化來生成。F(ab’)片段可例如藉由用β-巰基乙醇進行處理來解離。
「單鏈Fv」或「sFv」或「scFv」抗體片段包含在單個多肽鏈中之VH 域及VL 域。VH 及VL 通常藉由肽連接子連接。參見 Plückthun A. (1994)。可使用任何適合連接子。在一些實施例中，連接子為(GGGGS)n (SEQ ID NO:823)。在一些實施例中，n = 1、2、3、4、5或6。參見 Antibodies fromEscherichia coli 。於Rosenberg M.及Moore G.P. (編),The Pharmacology of Monoclonal Antibodies 第113卷 (第269-315頁), Springer-Verlag, New York，其以引用之方式整體併入。
「scFv-Fc」片段包含連接至Fc域之scFv。例如，Fc域可連接至scFv之C端。視scFv中之可變域的定向(即， VH -VL 或VL -VH )而定，Fc域可在VH 或VL 之後。可使用此項技術中已知或本文所述之任何合適Fc域。
術語「單域抗體」係指抗體之一個可變域在不存在另一可變域之情況下特異性結合抗原的分子。單域抗體及其片段描述於Arabi Ghahroudi等人,FEBS Letters , 1998, 414:521-526以及Muyldermans等人,Trends in Biochem. Sci. , 2001, 26:230-245中，其各自以引用之方式整體併入。單域抗體亦稱為sdAb或奈米抗體。
「多特異性抗體」為包含二或更多個共同地特異性結合二或更多個不同抗原決定區的不同抗原結合域的抗體。該二或更多個不同抗原決定區可為同一抗原(例如 由細胞表現之單一TF分子)上或不同抗原(例如 TF分子及非TF分子)上的抗原決定區。在一些態樣中，多特異性抗體結合兩個不同抗原決定區(即 「雙特異性抗體」)。在一些態樣中，多特異性抗體結合三個不同抗原決定區(即 「三特異性抗體」)。在一些態樣中，多特異性抗體結合四個不同抗原決定區(即 「四特異性抗體」)。在一些態樣中，多特異性抗體結合五個不同抗原決定區(即 「五特異性抗體」)。在一些態樣中，多特異性抗體結合6個、7個、8個或更多個不同抗原決定區。各結合特異性可以任何合適的價存在。本揭露中其他地方提供了多特異性抗體之實例。
「單特異性抗體」為包含一或多個特異性結合單一抗原決定區的結合位點的抗體。單特異性抗體之實例為天然存在之IgG分子，其儘管為二價的(即 具有兩個抗原結合域)，但在兩個抗原結合域中之各者處識別相同抗原決定區。結合特異性可以任何合適的價存在。
術語「單株抗體」係指來自實質上同質抗體之群體的抗體。實質上同質抗體之群體包含實質上類似且結合一或多個相同抗原決定區的抗體，例外為可通常在單株抗體之產生期間產生的變異體。此類變異體通常僅少量存在。單株抗體通常藉由包括自複數種抗體選擇單一抗體的方法來獲得。例如，選擇方法可為自複數種殖株諸如融合瘤殖株、噬菌體殖株、酵母殖株、細菌殖株或其他重組DNA殖株之庫選擇獨特殖株。所選抗體可經進一步改變，例如以改良對標靶的親和力(「親和力成熟」)、使抗體人源化、改良其在細胞培養中之產生及/或使其在個體中的免疫原性降低。
術語「嵌合抗體」係指以下抗體，在該抗體中重鏈及/或輕鏈之一部分來源於特定來源或種類，而重鏈及/或輕鏈之其餘部分來源於不同來源或種類。
非人類抗體之「人源化」形式為含有來源於非人類抗體的最小序列的嵌合抗體。人源化抗體一般為人類抗體(接受者抗體)，在該抗體中來自一或多個CDR之殘基由來自非人類抗體(供給者抗體)之一或多個CDR之殘基替換。供給者抗體可為具有所需特異性、親和力或生物作用的任何合適非人類抗體，諸如小鼠、大鼠、兔、雞或非人類靈長類動物抗體。在一些情況下，接受者抗體之所選框架區殘基由來自供給者抗體之對應框架區殘基替換。人源化抗體亦可包含不見於接受者抗體或供給者抗體中的殘基。可進行此類修飾以進一步改進抗體功能。對於其他細節，參見 Jones等人,Nature , 1986, 321:522-525；Riechmann等人,Nature , 1988, 332:323-329；以及Presta,Curr. Op. Struct. Biol. , 1992, 2:593-596，其各自以引用之方式整體併入。
「人類抗體」為具有對應於由人類或人類細胞產生或來源於非人類來源的抗體的胺基酸序列的胺基酸序列的抗體，該非人類來源利用人類抗體組庫或人類抗體編碼序列(例如 從人類來源獲得或重新 設計)。人類抗體明確排除人源化抗體。
「經分離之抗體」或「經分離之核酸」為已自天然環境之組分中分離及/或回收的抗體或核酸分子。天然環境之組分可包括酶、激素及其他蛋白或非蛋白物質。在一些實施例中，例如藉由使用旋轉杯定序儀，將經分離之抗體純化至足以獲得N端或內部胺基酸序列之至少15個殘基的程度。在一些實施例中，在還原或非還原條件下藉由凝膠電泳(例如 ，SDS-PAGE)將經分離之抗體純化至同質，且藉由考馬斯藍染色或銀染色進行偵測。在一些實施例中，經分離之抗體可包括在重組細胞內原位 的抗體，因為抗體天然環境之至少一種組分不存在。在一些態樣中，藉由至少一個純化步驟製備經分離之抗體或經分離之核酸。在一些實施例中，將經分離之抗體或經分離之核酸純化至按重量計至少80%、85%、90%、95%或99%。在一些實施例中，將經分離之抗體或經分離之核酸純化至按體積計至少80%、85%、90%、95%或99%。在一些實施例中，將經分離之抗體或經分離之核酸提供為包含按重量計至少85%、90%、95%、98%、99%至100%抗體或核酸的溶液。在一些實施例中，將經分離之抗體或經分離之核酸提供為包含按體積計至少85%、90%、95%、98%、99%至100%抗體或核酸的溶液。
「親和力」係指分子(例如 抗體)之單一結合位點與其結合配偶體(binding partner)(例如 抗原或抗原決定區)之間的非共價相互作用之總和之強度。除非另外指示，否則如本文所用，「親和力」係指反映結合對之成員(例如 抗體與抗原或抗原決定區)之間的1:1相互作用的固有結合親和力。分子X對其配偶體Y之親和力可由解離平衡常數(KD )表示。以下更詳細描述促成解離平衡常數的動力學分量。親和力可藉由此項技術中已知的常用方法量測，該等方法包括本文所述的那些，諸如表面電漿子共振(SPR)技術(例如 BIACORE® )或生物層干涉術(例如 FORTEBIO® )。
關於抗體與標靶分子之結合，術語「結合」、「特異性結合」、「特異性結合至」特定抗原(例如 多肽標靶)或特定抗原上之抗原決定區、 「對其具有特異性」、「選擇性結合」特定抗原(例如 多肽標靶)或特定抗原上之抗原決定區及「對其具有選擇性」意謂結合可量測地不同於非特異性或非選擇性相互作用(例如 與非標靶分子之相互作用)。特異性結合可例如藉由量測與標靶分子的結合併將其與與非標靶分子之結合進行比較來量測。特異性結合亦可藉由與模擬在標靶分子上識別之抗原決定區的對照分子的競爭來確定。在該情況下，若抗體與標靶分子之結合由對照分子競爭性抑制，則指示特異性結合。在一些態樣中，TF抗體對非標靶分子之親和力小於對TF之親和力之約50%。在一些態樣中，TF抗體對非標靶分子之親和力小於對TF之親和力之約40%。在一些態樣中，TF抗體對非標靶分子之親和力小於對TF之親和力之約30%。在一些態樣中，TF抗體對非標靶分子之親和力小於對TF之親和力之約20%。在一些態樣中，TF抗體對非標靶分子之親和力小於對TF之親和力之約10%。在一些態樣中，TF抗體對非標靶分子之親和力小於對TF之親和力之約1%。在一些態樣中，TF抗體對非標靶分子之親和力小於對TF之親和力之約0.1%。
如本文所用，術語「kd 」(s-1 )係指特定抗體-抗原相互作用之解離速率常數。此值亦稱為k解離 值。
如本文所用，術語「ka 」(M-1 ×s-1 )係指特定抗體-抗原相互作用之締合速率常數。此值亦稱為k締合 值。
如本文所用，術語「KD 」(M)係指特定抗體-抗原相互作用之解離平衡常數。KD = kd /ka 。在一些實施例中，抗體之親和力以關於此類抗體與其抗原之間的相互作用之KD 描述。為明晰起見，如此項技術中所知，較小KD 值指示較高親和相互作用，而較大KD 值指示較低親和相互作用。
如本文所用，術語「KA 」(M-1 )係指特定抗體-抗原相互作用之締合平衡常數。KA = ka /kd 。
「親和力成熟之」抗體為相對於親體抗體(即改變之抗體自其衍生或設計的抗體)具有一或多種改變(例如 ，在一或多個CDR或FR中)的抗體，與不具有該一或多種改變的親體抗體相比，其導致抗體對其抗原的親和力提高。在一些實施例中，親和力成熟之抗體對靶抗原具有奈莫耳或皮莫耳的親和力。親和力成熟之抗體可使用此項技術中已知之多種方法來產生。例如，Marks等人 (Bio/Technology , 1992, 10:779-783，其以引用之方式整體併入)描述了藉由VH 及VL 域混排的親和力成熟。CDR及/或框架殘基之隨機突變描述於例如Barbas等人,Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A. , 1994, 91:3809-3813；Schier等人,Gene , 1995, 169:147-155；Yelton等人,J. Immunol. , 1995, 155:1994-2004；Jackson等人,J. Immunol. , 1995, 154:3310-33199；以及Hawkins等人,J. Mol. Biol. , 1992, 226:889-896；其各自以引用之方式整體併入。
「Fc效應子功能」係指由抗體之Fc區介導之那些生物活性，該等活性可視抗體同型而變化。抗體效應子功能之實例包括使補體依賴性細胞毒性(CDC)活化的C1q結合、使抗體依賴性細胞性細胞毒性(ADCC)及抗體依賴性細胞性吞噬(ADCP)活化的Fc受體結合。
當在本文中在二或更多種抗體之情形下使用時，術語「與……競爭」或「與……交叉競爭」指示該二或更多種抗體競爭結合抗原(例如 TF)。在一個示範性檢定中，將TF包被在表面上且使其與第一TF抗體接觸，此後，添加第二TF抗體。在另一示範性檢定中，將第一TF抗體包被在表面上且使其與TF接觸，接著添加第二TF抗體。若在任一檢定中，第一TF抗體之存在使第二TF抗體之結合降低，則抗體彼此競爭。術語「與……競爭」亦包括抗體之組合，在該等組合中一種抗體使另一抗體之結合降低，但在以相反順序添加抗體時觀察不到競爭。然而，在一些實施例中，第一抗體及第二抗體抑制彼此之結合，無論添加它們的順序如何。在一些實施例中，一種抗體使另一抗體與其抗原之結合降低至少25%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少85%、至少90%或至少95%。熟練技術人員可基於抗體對TF之親和力以及抗體之價來選擇競爭檢定中所用之抗體之濃度。此定義中所述之檢定為說明性的，且熟練技術人員可利用任何合適檢定來確定抗體是否彼此競爭。合適檢定描述於例如Cox等人, 「Immunoassay Methods」,Assay Guidance Manual [Internet] , 2014年12月24日更新 (www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK92434/；2015年9月29日訪問)；Silman等人,Cytometry , 2001, 44:30-37；以及Finco等人,J. Pharm. Biomed. Anal. , 2011, 54:351-358中；其各自以引用之方式整體併入。如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之實例 8 中所提供，第25組之抗體及第43組之抗體彼此競爭結合至人類TF，而來自第1組、第29組、第39組及第54組之抗體並不與第25組及第43組之抗體競爭結合至人類TF。
如本文所用，當可在ForteBio Octet上用小鼠抗原量測KD 值時，認為特異性結合至人類抗原的抗體與小鼠來源之相同抗原結合。當小鼠抗原之KD 值不大於相應人類抗原之對應KD 值的20倍時，認為特異性結合至人類抗原的抗體與小鼠來源之相同抗原「交叉反應」。例如，以下抗體不結合小鼠TF：抗體M1593，其描述於美國專利第8,722,044號、第8,951,525號及第8,999,333號中，其各自出於所有目的以引用之方式整體併入本文；人源化5G9抗體，其描述於Ngo等人, 2007,Int J Cancer , 120(6):1261-1267，其以引用之方式整體併入；以及嵌合ALT-836抗體，其描述於Hong等人, 2012,J Nucl Med , 53(11):1748-1754，其以引用之方式整體併入。如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之實例 1 及實例 2 中所提供，來自第25組及第43組之TF抗體結合小鼠TF，例如 ，TF抗體25G、25G1、25G9及43D8與小鼠TF交叉反應。
如本文所用，當石蟹獼猴抗原之KD 值不大於相應人類抗原之對應KD 值的15倍時，認為特異性結合人類抗原的抗體與石蟹獼猴來源之相同抗原「交叉反應」。如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之實例 1 中 所提供，來自第1組、第25組、第29組、第39組、第43組及第54組之所有測試抗體與石蟹獼猴TF交叉反應。
術語「抗原決定區」意謂抗原之由抗體特異性結合的部分。抗原決定區常常包括表面可及胺基酸殘基及/或糖側鏈，且可具有特定三維結構特徵以及特定電荷特徵。構形性抗原決定區及非構形性抗原決定區之區別在於在變性溶劑存在下，與前者之結合可喪失而與後者之結合不喪失。抗原決定區可包含直接參與結合的胺基酸殘基以及不直接參與結合的其他胺基酸殘基。抗體結合的抗原決定區可使用用於抗原決定區確定的已知技術來確定，諸如像測試抗體與具有不同點突變的TF變異體或與嵌合TF變異體的結合。
多肽序列與參考序列之間的「一致性」百分比經定義為在比對序列並引入空位(如果需要的話)以實現最大百分比的序列一致性之後，多肽序列中與參考序列中的胺基酸殘基相同的胺基酸殘基的百分比。出於確定胺基酸序列一致性百分比的目的的比對可以屬於此項技術中的技能的各種方式達成，例如使用可公開獲得之電腦軟體，諸如BLAST、BLAST-2、ALIGN、MEGALIGN (DNASTAR)、CLUSTALW、CLUSTAL OMEGA或MUSCLE軟體。熟習此項技術者可確定用於比對序列的適當參數，包括達成在所比較序列之全長上的最大比對所需的任何算法。
「保守性取代」或「保守性胺基酸取代」係指用化學或功能類似的胺基酸取代胺基酸。提供類似胺基酸的保守性取代表為此項技術中熟知的。以舉例之方式，在一些實施例中，表 2 至表 4 中提供之胺基酸基團被認為是彼此之保守性取代。表 2 ： 在某些實施例中，被認為是彼此之保守性取代的所選胺基酸組。
酸性殘基 D及E
鹼性殘基 K、R及H
親水性不帶電荷的殘基 S、T、N及Q
脂族不帶電荷的殘基 G、A、V、L及I
非極性不帶電荷的殘基 C、M及P
芳族殘基 F、Y及W
表 3 ： 在某些實施例中，被認為是彼此之保守性取代的其他所選胺基酸組。
第 1 組 A、S及T
第 2 組 D及E
第 3 組 N及Q
第 4 組 R及K
第 5 組 I、L及M
第 6 組 F、Y及W
表 4 ： 在某些實施例中，被認為是彼此之保守性取代的其他所選胺基酸組。
A 組 A及G
B 組 D及E
C 組 N及Q
D 組 R、K及H
E 組 I、L、M、V
F 組 F、Y及W
G 組 S及T
H 組 C及M
其他保守性取代可見於例如Creighton,Proteins: Structures and Molecular Properties 第2版 (1993) W. H. Freeman & Co., New York, NY中。藉由對親體抗體中之胺基酸殘基進行一或多個保守性取代所生成之抗體稱為「經保守修飾之變異體」。
術語「胺基酸」係指二十種常見的天然存在之胺基酸。天然存在之胺基酸包括丙胺酸(Ala；A)、精胺酸(Arg；R)、天冬醯胺(Asn；N)、天冬胺酸(Asp；D)、半胱胺酸(Cys；C)；麩胺酸(Glu；E)、麩醯胺(Gln；Q)、甘胺酸(Gly；G)；組胺酸(His；H)、異白胺酸(Ile；I)、白胺酸(Leu；L)、離胺酸(Lys；K)、甲硫胺酸(Met；M)、苯丙胺酸(Phe；F)、脯胺酸(Pro；P)、絲胺酸(Ser；S)、蘇胺酸(Thr；T)、色胺酸(Trp；W)、酪胺酸(Tyr；Y)及纈胺酸(Val；V)。
如本文所用，術語「載體」係指以下核酸分子，其能夠使與其連接的另一核酸繁殖。該術語包括呈自我複製核酸結構的載體以及併入已引入載體的宿主細胞之基因體內的載體。某些載體能夠引導與其可操作地連接的核酸之表現。本文將此類載體稱為「表現載體」。
術語「宿主細胞」、「宿主細胞株」及「宿主細胞培養物」可互換使用且指代已經引入外源核酸的細胞，以及此類細胞之後代。宿主細胞包括「轉形體」(或「轉形細胞」)及「轉染子」(或「轉染細胞」)，其各自包括初代轉形或轉染細胞及自其衍生之後代。此類後代之核酸含量可能不與親體細胞完全相同，且可能含有突變。
術語「治療(treating)」(及其變型，諸如「治療(treat)」或「治療(treatment)」)係指試圖在有需要之個體中改變疾病或疾患的自然進程的臨床介入。可針對預防及在臨床病理過程期間進行治療。理想的治療效果包括：防止疾病之發生或復發、緩解症狀、消除疾病之任何直接或間接的病理學後果、防止轉移、降低疾病進展之速率、改善或減輕疾病狀態以及緩解或改善預後。
如本文所用，術語「治療有效量」或「有效量」係指當向個體投與時有效治療疾病或病症的抗體或醫藥組成物之量。
如本文所用，術語「個體」意謂哺乳動物個體。示範性個體包括人類、猴子、狗、貓、小鼠、大鼠、母牛、馬、駱駝、山羊、兔子、豬及綿羊。在某些實施例中，個體為人類。在一些實施例中，個體患有可用本文所提供之抗體治療之疾病或疾患。在一些態樣中，疾病或疾患為癌症。在一些態樣中，疾病或疾患涉及新血管生成或血管發炎。在某些態樣中，涉及新血管生成之疾病或疾患為癌症。
術語「藥品仿單」用於指代通常在治療或診斷產品(例如 ，套組)的商業包裝中所包括之說明書，其含有關於使用此類治療或診斷產品的適應症、用法、劑量、投與、組合療法、禁忌及/或警告的資訊。
「化學治療劑」係指可用於治療癌症的化合物。化學治療劑包括「抗激素劑」或「內分泌治療劑」，其起調控、減少、阻斷或抑制可促進癌症生長的激素的作用。
術語「細胞生長抑制劑」係指體外或體內阻滯細胞生長的化合物或組成物。在一些實施例中，細胞生長抑制劑為減少S期細胞百分比的劑。在一些實施例中，細胞生長抑制劑將S期細胞百分比減少至少約20%、至少約40%、至少約60%、或至少約80%。
術語「醫藥組成物」係指以下製劑，其以允許含於其中的活性成分之生物活性對治療個體有效的形式，且不含有以醫藥組成物中所提供之量對個體具有不可接受之毒性的其他組分。
術語「調節(modulate/modulation)」係指降低或抑制，或替代地，活化或增加所敘述變項。
術語「增加」及「活化」係指所敘述變項增加10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、100%、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍或更多。
術語「降低」及「抑制」係指所敘述變項降低10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍更多。
術語「激動」係指使受體傳訊活化以誘導與受體之活化相關的生物反應。「促效劑」為結合受體並使受體激動的實體。
術語「拮抗」係指使受體傳訊抑制以抑制與受體之活化相關的生物反應。「拮抗劑」為結合受體並使受體拮抗的實體。
「烷基」係指具有1至20個碳原子之直鏈或分枝飽和烴基之基團(「C1–20 烷基」)。在一些實施例中，烷基具有1至12個碳原子(「C1–12 烷基」)。在一些實施例中，烷基具有1至10個碳原子(「C1–10 烷基」)。在一些實施例中，烷基具有1至9個碳原子(「C1–9 烷基」)。在一些實施例中，烷基具有1至8個碳原子(「C1–8 烷基」)。在一些實施例中，烷基具有1至7個碳原子(「C1–7 烷基」)。在一些實施例中，烷基具有1至6個碳原子(「C1–6 烷基」，本文亦稱為「低級烷基」)。在一些實施例中，烷基具有1至5個碳原子(「C1–5 烷基」)。在一些實施例中，烷基具有1至4個碳原子(「C1–4 烷基」)。在一些實施例中，烷基具有1至3個碳原子(「C1–3 烷基」)。在一些實施例中，烷基具有1至2個碳原子(「C1–2 烷基」)。在一些實施例中，烷基具有1個碳原子(「C1 烷基」)。在一些實施例中，烷基具有2至6個碳原子(「C2–6 烷基」)。C1-6 烷基之實例包括甲基(C1 )、乙基(C2 )、正丙基(C3 )、異丙基(C3 )、正丁基(C4 )、三級丁基(C4 )、二級丁基(C4 )、異丁基(C4 )、正戊基(C5 )、3-戊基(C5 )、戊基(C5 )、新戊基(C5 )、3-甲基-2-丁基(C5 )、三級戊基(C5 )及正己基(C6 )。烷基之額外實例包括正戊基(C7 )、正辛基(C8 )及其類似基團。除非另外指定，否則烷基之各實例獨立地視情況經取代，即，未經取代(「未經取代之烷基」)或經一或多個取代基(例如，1至5個取代基、1至3個取代基或1個取代基)取代(「經取代之烷基」)。在某些實施例中，烷基為未經取代之C1-10 烷基(例如， -CH3 )。在某些實施例中，烷基為經取代之C1-10 烷基。常用烷基縮寫包括Me (-CH3 )、Et (-CH2 CH3 )、iPr (-CH(CH3 )2 )、nPr (-CH2 CH2 CH3 )、n-Bu (-CH2 CH2 CH2 CH3 )或i-Bu (-CH2 CH(CH3 )2 )。
「伸烷基」係指其中移除了兩個氫以提供二價基團且可經取代或未經取代的烷基。未經取代之伸烷基包括但不限於亞甲基(-CH2 -)、伸乙基(-CH2 CH2 -)、伸丙基(-CH2 CH2 CH2 -)、伸丁基(-CH2 CH2 CH2 CH2 -)、伸戊基(-CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 -)、伸己基(-CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 -)及其類似基團。例如經一或多個烷基(甲基)取代之示範性經取代之伸烷基包括但不限於經取代之亞甲基(-CH(CH3 )-、(-C(CH3 )2 -)、經取代之伸乙基(-CH(CH3 )CH2 -、-CH2 CH(CH3 )-、-C(CH3 )2 CH2 -、-CH2 C(CH3 )2 -)、經取代之伸丙基(-CH(CH3 )CH2 CH2 -、-CH2 CH(CH3 )CH2 -、-CH2 CH2 CH(CH3 )-、-C(CH3 )2 CH2 CH2 -、-CH2 C(CH3 )2 CH2 -、-CH2 CH2 C(CH3 )2 -)及其類似基團。
「鹵基」或「鹵素」係指氟基(F)、氯基(Cl)、溴基(Br)及碘基(I)。在某些實施例中，鹵基為氟基或氯基。
如本文所用，術語「自降解基團」係指在化合物或結合物之兩個基團之間提供穩定的鍵形成但在導致部分或殘基之快速斷裂及兩個基團之分離的活化(例如 ，親核攻擊)時變得不穩定的部分或殘基。自降解基團之化學性質描述於例如Alouane, A.等人 , 「Self-immolative spacers: kinetic aspects, structure-property relationships, and applications」,Angew. Chem. Int. Ed. , 2015, 54, 7492-7509以及Kolakowski, R. V.等人 , 「The methylene alkoxy carbamate self-immolative unit: Utilization of the targeted delivery of alcohol-containing payloads with antibody-drug conjugates」,Angew. Chem. Int. Ed. , 2016, 55, 7948-7951。 2. TF抗體 2.1. TF結合
本文提供了特異性結合TF的經分離之抗體。在一些態樣中，TF為hTF (SEQ ID NO:809)。在一些態樣中，TF為cTF (SEQ ID NO:813)。在一些態樣中，TF為mTF (SEQ ID NO:817)。在一些態樣中，TF為兔TF (SEQ ID NO:832)。在一些態樣中，TF為pTF (SEQ ID NO:824)。在一些實施例中，本文所提供之抗體特異性結合hTF (SEQ ID NO:809)、cTF (SEQ ID NO:813)、mTF (SEQ ID NO:817)、兔TF (SEQ ID NO:832)及pTF (SEQ ID NO:824)。在一些實施例中，本文所提供之抗體特異性結合hTF (SEQ ID NO:809)、cTF (SEQ ID NO:813)、mTF (SEQ ID NO:817)及pTF (SEQ ID NO:824)。在一些實施例中，本文所提供之抗體特異性結合hTF (SEQ ID NO:809)、cTF (SEQ ID NO:813)及mTF (SEQ ID NO:817)。在一些實施例中，本文所提供之抗體特異性結合hTF (SEQ ID NO:809)及cTF (SEQ ID NO:813)。在一些實施例中，本文所提供之抗體不結合mTF (SEQ ID NO:817)。在一些實施例中，本文所提供之抗體不結合pTF (SEQ ID NO:824)。在一些實施例中，本文所提供之抗體不結合兔TF (SEQ ID NO:832)。
在各種實施例中，本文所提供之抗體特異性結合人類TF之胞外域(SEQ ID NO:810)。
在一些實施例中，如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，本文所提供之抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基149處的突變的變異體TF胞外域之間的結合小於本文所提供之抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%。在一些實施例中，SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基149處的突變為K149N。
在一些實施例中，如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，本文所提供之抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基68處的突變的變異體TF胞外域之間的結合大於本文所提供之抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%。在一些實施例中，SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基68處的突變為K68N。
在一些實施例中，如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，本文所提供之抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基171及197處的突變的變異體TF胞外域之間的結合小於本文所提供之抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%。在一些實施例中，SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基171及197處的突變為N171H及T197K。
在一些實施例中，如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，本文所提供之抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基1-77經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基1-76替換)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%。
在一些實施例中，如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，本文所提供之抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基39-77經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基38-76替換)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%。
在一些實施例中，如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，本文所提供之抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基94-107經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基99-112替換)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%。
在一些實施例中，如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，本文所提供之抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基146-158經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基151-163替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%。
在一些實施例中，如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，本文所提供之抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基159-219經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基164-224替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%。
在一些實施例中，如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，本文所提供之抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基159-189經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基164-194取代)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%。
在一些實施例中，如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，本文所提供之抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基159-174經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基164-179替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%。
在一些實施例中，如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，本文所提供之抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基167-174經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基172-179替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%。
在一些實施例中，如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，本文所提供之抗體與大鼠TF胞外域(其中SEQ ID NO:838中所示之序列之胺基酸殘基141-194經SEQ ID NO:810中所示之序列之人類TF胞外域胺基酸殘基136-189替換)之間的結合大於本文所提供之抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%。
在一些實施例中，如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，本文所提供之抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基149處的突變的變異體TF胞外域之間的結合小於本文所提供之抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；本文所提供之抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基68處的突變的變異體TF胞外域之間的結合大於本文所提供之抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；本文所提供之抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基1-77經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基1-76替換)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；本文所提供之抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基39-77經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基38-76替換)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；本文所提供之抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基94-107經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基99-112替換)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；本文所提供之抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基146-158經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基151-163替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；且本文所提供之抗體與大鼠TF胞外域(其中SEQ ID NO:838中所示之序列之胺基酸殘基141-194經SEQ ID NO:810中所示之序列之人類TF胞外域胺基酸殘基136-189替換)之間的結合大於本文所提供之抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%。在一些實施例中，SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基149處的突變為K149N；且SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基68處的突變為K68N。
在一些實施例中，如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，本文所提供之抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基149處的突變的變異體TF胞外域之間的結合小於本文所提供之抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列的TF胞外域之間的結合的50%；本文所提供之抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基68處的突變的變異體TF胞外域之間的結合大於本文所提供之抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；本文所提供之抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基171及197處的突變的變異體TF胞外域之間的結合小於本文所提供之抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；本文所提供之抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基1-77經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基1-76替換)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；本文所提供之抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基39-77經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基38-76替換)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；本文所提供之抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基94-107經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基99-112替換)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；本文所提供之抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基146-158經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基151-163取代)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；本文所提供之抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基159-219經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基164-224替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；本文所提供之抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基159-189經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基164-194替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；本文所提供之抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基159-174經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基164-179替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；本文所提供之抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基167-174經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基172-179替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；且本文所提供之抗體與大鼠TF胞外域(其中SEQ ID NO:838中所示之序列之胺基酸殘基141-194經SEQ ID NO:810中所示之序列之人類TF胞外域胺基酸殘基136-189替換)之間的結合大於本文所提供之抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%。在一些實施例中，SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基149處的突變為K149N；SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基68處的突變為K68N；且SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基171及197處的突變為N171H及T197K。
在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與參考抗體M1593相比，本文所提供之抗體在抑制人類凝血酶生成方面為惰性的，其中參考抗體M1593包含VH 序列SEQ ID NO:821及VL 序列SEQ ID NO:822。
在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，本文所提供之抗體不抑制人類凝血酶生成。在某些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，本文所提供之抗體允許人類凝血酶生成。
在一些實施例中，本文所提供之抗體在與由人類FX結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF。在某些實施例中，本文所提供之抗體不干擾TF:FVIIa將FX轉化為FXa的能力。
在一些實施例中，本文所提供之抗體在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF。在某些實施例中，本文所提供之抗體不與人類FVIIa競爭結合至人類TF。
在一些實施例中，本文所提供之抗體結合人類TF胞外域；在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF；在與由人類FX結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF；且如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，允許人類凝血酶生成。
在一些實施例中，本文所提供之抗體結合人類TF胞外域；如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，不抑制人類凝血酶生成；不干擾TF:FVIIa將FX轉化為FXa的能力；且不與人類FVIIa競爭結合至人類TF。
在一些實施例中，本文所提供之抗體在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF胞外域；如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，不抑制人類凝血酶生成；如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，允許人類凝血酶生成；在與由人類FX結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF；不干擾TF:FVIIa將FX轉化為FXa的能力；且不與人類FVIIa競爭結合至人類TF。
在一些實施例中，本文所提供之抗體抑制FVIIa依賴性TF傳訊。
在一些實施例中，本文所提供之抗體在與由人類FVIIa結合的人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF胞外域；如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，不抑制人類凝血酶生成；如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，允許人類凝血酶生成；在與由人類FX結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF；不干擾TF:FVIIa將FX轉化為FXa的能力；不與人類FVIIa競爭結合至人類TF；且結合至石蟹獼猴及小鼠TF。
在一些實施例中，本文所提供之抗體在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF胞外域；如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，不抑制人類凝血酶生成；如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，允許人類凝血酶生成；在與由人類FX結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF；不干擾TF:FVIIa將FX轉化為FXa的能力；不與人類FVIIa競爭結合至人類TF；結合至石蟹獼猴、小鼠及豬TF。
在一些實施例中，本文所提供之抗體結合人類TF胞外域；抑制FVIIa依賴性TF傳訊；且結合至石蟹獼猴TF。 2.2. TF抗體之序列 2.2.1 重鏈
在一些實施例中，本文所提供之抗體包含重鏈序列。說明性重鏈序列提供於表22中。重鏈序列可為鑑別為25A之抗體殖株之重鏈序列。重鏈序列可為鑑別為25A3之抗體殖株之重鏈序列。重鏈序列可為鑑別為25A5之抗體殖株之重鏈序列。重鏈序列可為鑑別為25A5T之抗體殖株之重鏈序列。重鏈序列可為鑑別為25G之抗體殖株之重鏈序列。重鏈序列可為鑑別為25G1之抗體殖株之重鏈序列。重鏈序列可為鑑別為25G9之抗體殖株之重鏈序列。 2.2.2 輕鏈
在一些實施例中，本文所提供之抗體包含輕鏈序列。說明性輕鏈鏈序列提供於表22中。輕鏈序列可為鑑別為25A之抗體殖株之輕鏈序列。輕鏈序列可為鑑別為25A3之抗體殖株之輕鏈序列。輕鏈序列可為鑑別為25A5之抗體殖株之輕鏈序列。輕鏈序列可為鑑別為25A5T之抗體殖株之輕鏈序列。輕鏈序列可為鑑別為25G之抗體殖株之輕鏈序列。輕鏈序列可為鑑別為25G1之抗體殖株之輕鏈序列。輕鏈序列可為鑑別為25G9之抗體殖株之輕鏈序列。 2.2.3. VH 域
在一些實施例中，本文所提供之抗體包含選自SEQ ID NO: 113、151、189、836、227、265、303、763、868及870之VH 序列。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含VH 序列SEQ ID NO:113。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含VH 序列SEQ ID NO:151。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含VH 序列SEQ ID NO:189。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含VH 序列SEQ ID NO:836。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含VH 序列SEQ ID NO:227。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含VH 序列SEQ ID NO:265。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含VH 序列SEQ ID NO:303。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含VH 序列SEQ ID NO:763。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含VH 序列SEQ ID NO:868。
在一些實施例中，本文所提供之抗體包含與選自SEQ ID NO: 113、151、189、836、227、265、303、763、868及870之說明性VH 序列具有至少約50%、60%、70%、80%、90%、95%或99%一致性的VH 序列。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含選自SEQ ID NO: 113、151、189、836、227、265、303、763、868及870之VH 序列，其具有多達1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25個胺基酸取代。在一些態樣中，胺基酸取代為保守性胺基酸取代。在一些實施例中，此段中所述之抗體在本文中稱為「變異體」。在一些實施例中，此類變異體例如藉由親和力成熟、定點誘變、隨機誘變或此項技術中已知或本文所述之任何其他方法來由本文所提供之序列獲得。在一些實施例中，此類變異體不由本文所提供之序列獲得，且可例如根據本文提供之用於獲得抗體的方法來重新 分離。 2.2.4. VL 域
在一些實施例中，本文所提供之抗體包含選自SEQ ID NO: 114、152、190、837、228、266、304、764、869及871之VL 序列。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含VL 序列SEQ ID NO:114。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含VL 序列SEQ ID NO:152。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含VL 序列SEQ ID NO:190。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含VL 序列SEQ ID NO:837。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含VL 序列SEQ ID NO:228。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含VL 序列SEQ ID NO:266。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含VL 序列SEQ ID NO:304。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含VL 序列SEQ ID NO:342。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含VL 序列SEQ ID NO:869。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含VL 序列SEQ ID NO:871。
在一些實施例中，本文所提供之抗體包含與選自SEQ ID NO: 114、152、190、837、228、266、304、764、869及871之說明性VL序列具有至少約50%、60%、70%、80%、90%、95%或99%一致性的VL 序列。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含選自SEQ ID NO: 114、152、190、837、228、266、304、764、869及871之VL 序列，其具有多達1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25個胺基酸取代。在一些態樣中，胺基酸取代為保守性胺基酸取代。在一些實施例中，此段中所述之抗體在本文中稱為「變異體」。在一些實施例中，此類變異體例如藉由親和力成熟、定點誘變、隨機誘變或此項技術中已知或本文所述之任何其他方法來由本文所提供之序列獲得。在一些實施例中，此類變異體不由本文所提供之序列獲得，且可例如根據本文提供之用於獲得抗體的方法來重新分離。 2.2.5. VH -VL 組合
在一些實施例中，本文所提供之抗體包含選自SEQ ID NO: 113、151、189、836、227、265、303、763、868及870之VH 序列以及選自SEQ ID NO: 114、152、190、837、228、266、304、764、869及871之VL 序列。
在一些實施例中，本文所提供之抗體包含VH序列SEQ ID NO:113及VL 序列SEQ ID NO:114。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含VH序列SEQ ID NO:151及VL序列SEQ ID NO:152。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含VH序列SEQ ID NO:189及VL序列SEQ ID NO:190。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含VH序列SEQ ID NO:836及VL序列SEQ ID NO:837。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含VH序列SEQ ID NO:227及VL序列SEQ ID NO:228。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含VH序列SEQ ID NO:265及VL序列SEQ ID NO:266。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含VH序列SEQ ID NO:303及VL序列SEQ ID NO:304。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含VH序列SEQ ID NO:763及VL序列SEQ ID NO:764。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含VH序列SEQ ID NO:868及VL序列SEQ ID NO:869。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含VH序列SEQ ID NO:870及VL序列SEQ ID NO:871。
在一些實施例中，本文所提供之抗體包含：與選自SEQ ID NO: 113、151、189、836、227、265、303、763、868及870之說明性VH 序列具有至少約50%、60%、70%、80%、90%、95%或99%一致性的VH 序列；以及與選自SEQ ID NO: 114、152、190、837、228、266、304、764、869及871之說明性VL序列具有至少約50%、60%、70%、80%、90%、95%或99%一致性的VL 序列。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含選自SEQ ID NO: 113、151、189、836、227、265、303、763、868及870之VH 序列，其具有多達1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25個胺基酸取代；以及選自SEQ ID NO: 114、152、190、837、228、266、304、764、869及871之VL 序列，其具有多達1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25個胺基酸取代。在一些態樣中，胺基酸取代為保守性胺基酸取代。在一些實施例中，此段中所述之抗體在本文中稱為「變異體」。在一些實施例中，此類變異體例如藉由親和力成熟、定點誘變、隨機誘變或此項技術中已知或本文所述之任何其他方法來由本文所提供之序列獲得。在一些實施例中，此類變異體不由本文所提供之序列獲得，且可例如根據本文提供之用於獲得抗體的方法來重新分離。 2.2.6. CDR
在一些實施例中，本文所提供之抗體包含選自SEQ ID NO: 113、151、189、836、227、265、303、763、868及870之VH 域中之一至三個CDR。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含選自SEQ ID NO: 113、151、189、836、227、265、303、763、868及870之VH 域中之二至三個CDR。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含選自SEQ ID NO: 113、151、189、836、227、265、303、763、868及870之VH 域中之三個CDR。在一些態樣中，CDR為示範性CDR。在一些態樣中，CDR為Kabat CDR。在一些態樣中，CDR為Chothia CDR。在一些態樣中，CDR為AbM CDR。在一些態樣中，CDR為Contact CDR。在一些態樣中，CDR為IMGT CDR。
在一些實施例中，CDR為與SEQ ID NO: 113、151、189、836、227、265、303、763、868及870之CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3具有至少約50%、75%、80%、85%、90%或95%一致性的CDR。在一些實施例中，CDR-H1為選自SEQ ID NO: 113、151、189、836、227、265、303、763、868及870之VH 域之CDR-H1，其具有多達1、2、3、4或5個胺基酸取代。在一些實施例中，CDR-H2為選自SEQ ID NO: 113、151、189、836、227、265、303、763、868及870之 VH 域之CDR-H2，其具有多達1、2、3、4、5、6、7或8個胺基酸取代。在一些實施例中，CDR-H3為選自SEQ ID NO: 113、151、189、836、227、265、303、763、868及870之VH 域之CDR-H3，其具有多達1、2、3、4、5、6、7或8個胺基酸取代。在一些態樣中，胺基酸取代為保守性胺基酸取代。在一些實施例中，此段中所述之抗體在本文中稱為「變異體」。在一些實施例中，此類變異體例如藉由親和力成熟、定點誘變、隨機誘變或此項技術中已知或本文所述之任何其他方法來由本文所提供之序列獲得。在一些實施例中，此類變異體不由本文所提供之序列獲得，且可例如根據本文提供之用於獲得抗體的方法來重新分離。
在一些實施例中，本文所提供之抗體包含選自SEQ ID NO: 114、152、190、837、228、266、304、764、869及871之VL 域之一至三個CDR。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含選自SEQ ID NO: 114、152、190、837、228、266、304、764、869及871之VL 域之二至三個CDR。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含選自SEQ ID NO: 114、152、190、837、228、266、304、764、869及871之VL 域之三個CDR。在一些態樣中，CDR為示範性CDR。在一些態樣中，CDR為Kabat CDR。在一些態樣中，CDR為Chothia CDR。在一些態樣中，CDR為AbM CDR。在一些態樣中，CDR為Contact CDR。在一些態樣中，CDR為IMGT CDR。
在一些實施例中，CDR為與SEQ ID NO: 114、152、190、837、228、266、304、764、869及871之CDR-L1、CDR-L2或CDR-L3具有至少約50%、75%、80%、85%、90%或95%一致性的CDR。在一些實施例中，CDR-L1為選自SEQ ID NO: 114、152、190、837、228、266、304、764、869及871之VL 域之CDR-L1，其具有多達1、2、3、4或5個胺基酸取代。在一些實施例中，CDR-L2為選自SEQ ID NO: 114、152、190、837、228、266、304、764、869及871之VL 域之CDR-L2，其具有多達1、2、3、4、5、6、7或8個胺基酸取代。在一些實施例中，CDR-L3為選自SEQ ID NO: 114、152、190、837、228、266、304、764、869及871之VL 域之CDR-L3，其具有多達1、2、3、4、5、6、7或8個胺基酸取代。在一些態樣中，胺基酸取代為保守性胺基酸取代。在一些實施例中，此段中所述之抗體在本文中稱為「變異體」。在一些實施例中，此類變異體例如藉由親和力成熟、定點誘變、隨機誘變或此項技術中已知或本文所述之任何其他方法來由本文所提供之序列獲得。在一些實施例中，此類變異體不由本文所提供之序列獲得，且可例如根據本文提供之用於獲得抗體的方法來重新分離。
在一些實施例中，本文所提供之抗體包含：選自SEQ ID NO: 113、151、189、836、227、265、303、763、868及870之VH 域之一至三個CDR；以及選自SEQ ID NO: 114、152、190、837、228、266、304、764、869及871之VL 域之一至三個CDR。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含選自SEQ ID NO: 113、151、189、836、227、265、303、763、868及870之VH 域之二至三個CDR；以及選自SEQ ID NO: 114、152、190、837、228、266、304、764、869及871之VL 域之二至三個CDR。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含：選自SEQ ID NO: 113、151、189、836、227、265、303、763、868及870之VH 域之三個CDR；以及選自SEQ ID NO: 114、152、190、837、228、266、304、764、869及871之VL 域之三個CDR。在一些態樣中，CDR為示範性CDR。在一些態樣中，CDR為Kabat CDR。在一些態樣中，CDR為Chothia CDR。在一些態樣中，CDR為AbM CDR。在一些態樣中，CDR為Contact CDR。在一些態樣中，CDR為IMGT CDR。
在一些實施例中，CDR為與SEQ ID NO: 113、151、189、836、227、265、303、763、868及870之CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3具有至少約50%、75%、80%、85%、90%或95%一致性以及與SEQ ID NO: 114、152、190、837、228、266、304、764、869及871之CDR-L1、CDR-L2或CDR-L3具有至少約50%、75%、80%、85%、90%或95%一致性的CDR。在一些實施例中，CDR-H1為選自SEQ ID NO: 113、151、189、836、227、265、303、763、868及870之VH 域之CDR-H1，其具有多達1、2、3、4或5個胺基酸取代；CDR-H2為選自SEQ ID NO: 113、151、189、836、227、265、303、763、868及870之VH 域之CDR-H2，其具有多達1、2、3、4、5、6、7或8個胺基酸取代；CDR-H3為選自SEQ ID NO: 113、151、189、836、227、265、303、763、868及870之VH 域之CDR-H3，其具有多達1、2、3、4、5、6、7或8個胺基酸取代；CDR-L1為選自SEQ ID NO: 114、152、190、837、228、266、304、764、869及871之VL 域之CDR-L1，其具有多達1、2、3、4、5或6個胺基酸取代；CDR-L2為選自SEQ ID NO: 114、152、190、837、228、266、304、764、869及871之VL 域之CDR-L2，其具有多達1、2、3或4個胺基酸取代；且CDR-L3為選自SEQ ID NO: 114、152、190、837、228、266、304、764、869及871之VL 域之CDR-L3，其具有多達1、2、3、4或5個胺基酸取代。在一些態樣中，胺基酸取代為保守性胺基酸取代。在一些實施例中，此段中所述之抗體在本文中稱為「變異體」。在一些實施例中，此類變異體例如藉由親和力成熟、定點誘變、隨機誘變或此項技術中已知或本文所述之任何其他方法來由本文所提供之序列獲得。在一些實施例中，此類變異體不由本文所提供之序列獲得，且可例如根據本文提供之用於獲得抗體的方法來重新分離。 25A CDR
在一些實施例中，抗體包含抗體殖株25A之重鏈CDR序列。如藉由示範性、Kabat、Chothia、AbM、Contact及IMGT編號系統所確定之抗體25A CDR序列顯示於表7中。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A之CDR-H3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-H3序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A之CDR-H2序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-H2序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A之CDR-H1序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-H1序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A之對應的兩個重鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的兩個重鏈CDR。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A之三個重鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的三個重鏈CDR。
在一些實施例中，抗體包含抗體殖株25A之輕鏈CDR。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A之CDR-L3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L3序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A之CDR-L2序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L2序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A之CDR-L1序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L1序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A之對應的兩個輕鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的兩個輕鏈CDR。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A之三個輕鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的三個輕鏈CDR。
在一些實施例中，抗體包含：與抗體殖株25A之CDR-H3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-H3序列；以及與抗體殖株25A之CDR-L3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L3序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A之對應的六個CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的六個CDR序列。 25A3 CDR
在一些實施例中，抗體包含抗體殖株25A3之重鏈CDR序列。如藉由示範性、Kabat、Chothia、AbM、Contact及IMGT編號系統所確定之抗體25A3 CDR序列顯示於表8中。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A3之CDR-H3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-H3序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A3之CDR-H2序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-H2序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A3之CDR-H1序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-H1序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A3之對應的兩個重鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的兩個重鏈CDR。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A3之三個重鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的三個重鏈CDR。
在一些實施例中，抗體包含抗體殖株25A3之輕鏈CDR。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A3之CDR-L3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L3序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A3之CDR-L2序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L2序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A3之CDR-L1序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L1序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A3之對應的兩個輕鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的兩個輕鏈CDR。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A3之三個輕鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的三個輕鏈CDR。
在一些實施例中，抗體包含：與抗體殖株25A3之CDR-H3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-H3序列；以及與抗體殖株25A3之CDR-L3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L3序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A3之對應的六個CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的六個CDR序列。 25A5 CDR
在一些實施例中，抗體包含抗體殖株25A5之重鏈CDR序列。如藉由示範性、Kabat、Chothia、AbM、Contact及IMGT編號系統所確定之抗體25A5 CDR序列顯示於表9中。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A5之CDR-H3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-H3序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A5之CDR-H2序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-H2序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A5之CDR-H1序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-H1序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A5之對應的兩個重鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的兩個重鏈CDR。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A5之三個重鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的三個重鏈CDR。
在一些實施例中，抗體包含抗體殖株25A5之輕鏈CDR。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A5之CDR-L3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L3序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A5之CDR-L2序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L2序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A5之CDR-L1序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L1序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A5之對應的兩個輕鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的兩個輕鏈CDR。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A5之三個輕鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的三個輕鏈CDR。
在一些實施例中，抗體包含：與抗體殖株25A5之CDR-H3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-H3序列；以及與抗體殖株25A5之CDR-L3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L3序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A5之對應的六個CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的六個CDR序列。 25A5-T CDR
在一些實施例中，抗體包含抗體殖株25A5-T之重鏈CDR序列。如藉由示範性、Kabat、Chothia、AbM、Contact及IMGT編號系統所確定之抗體25A5-T CDR序列顯示於表10中。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A5-T之CDR-H3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-H3序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A5-T之CDR-H2序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-H2序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A5-T之CDR-H1序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-H1序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A5-T之對應的兩個重鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的兩個重鏈CDR。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A5-T之三個重鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的三個重鏈CDR。
在一些實施例中，抗體包含抗體殖株25A5-T之輕鏈CDR。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A5-T之CDR-L3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L3序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A5-T之CDR-L2序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L2序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A5-T之CDR-L1序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L1序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A5-T之對應的兩個輕鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的兩個輕鏈CDR。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A5-T之三個輕鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的三個輕鏈CDR。
在一些實施例中，抗體包含：與抗體殖株25A5-T之CDR-H3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性-t的CDR-H3序列；以及與抗體殖株25A5-T之CDR-L3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L3序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25A5-T之對應的六個CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的六個CDR序列。 25G CDR
在一些實施例中，抗體包含抗體殖株25G之重鏈CDR序列。如藉由示範性、Kabat、Chothia、AbM、Contact及IMGT編號系統所確定之抗體25G CDR序列顯示於表11中。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25G之CDR-H3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-H3序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25G之CDR-H2序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-H2序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25G之CDR-H1序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-H1序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25G之對應的兩個重鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的兩個重鏈CDR。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25G之三個重鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的三個重鏈CDR。
在一些實施例中，抗體包含抗體殖株25G之輕鏈CDR。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25G之CDR-L3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L3序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25G之CDR-L2序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L2序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25G之CDR-L1序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L1序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25G之對應的兩個輕鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的兩個輕鏈CDR。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25G之三個輕鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的三個輕鏈CDR。
在一些實施例中，抗體包含：與抗體殖株25G之CDR-H3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-H3序列；以及與抗體殖株25G之CDR-L3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L3序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25G之對應的六個CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的六個CDR序列。 25G1 CDR
在一些實施例中，抗體包含抗體殖株25G1之重鏈CDR序列。如藉由示範性、Kabat、Chothia、AbM、Contact及IMGT編號系統所確定之抗體25G1 CDR序列顯示於表12中。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25G1之CDR-H3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-H3序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25G1之CDR-H2序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-H2序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25G1之CDR-H1序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-H1序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25G1之對應的兩個重鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的兩個重鏈CDR。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25G1之三個重鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的三個重鏈CDR。
在一些實施例中，抗體包含抗體殖株25G1之輕鏈CDR。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25G1之CDR-L3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L3序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25G1之CDR-L2序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L2序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25G1之CDR-L1序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L1序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25G1之對應的兩個輕鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的兩個輕鏈CDR。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25G1之三個輕鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的三個輕鏈CDR。
在一些實施例中，抗體包含：與抗體殖株25G1之CDR-H3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-H3序列；以及與抗體殖株25G1之CDR-L3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L3序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25G1之對應的六個CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的六個CDR序列。 25G9 CDR
在一些實施例中，抗體包含抗體殖株25G9之重鏈CDR序列。如藉由示範性、Kabat、Chothia、AbM、Contact及IMGT編號系統所確定之抗體25G9 CDR序列顯示於表13中。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25G9之CDR-H3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-H3序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25G9之CDR-H2序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-H2序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25G9之CDR-H1序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-H1序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25G9之對應的兩個重鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的兩個重鏈CDR。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25G9之三個重鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的三個重鏈CDR。
在一些實施例中，抗體包含抗體殖株25G9之輕鏈CDR。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25G9之CDR-L3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L3序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25G9之CDR-L2序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L2序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25G9之CDR-L1序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L1序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25G9之對應的兩個輕鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的兩個輕鏈CDR。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25G9之三個輕鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的三個輕鏈CDR。
在一些實施例中，抗體包含：與抗體殖株25G9之CDR-H3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-H3序列；以及與抗體殖株25G9之CDR-L3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L3序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體殖株25G9之對應的六個CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的六個CDR序列。 25 共通 CDR
在一些實施例中，抗體包含鑑別為第25組之抗體組之共通重鏈CDR序列。如藉由Kabat及Chothia編號系統所確定之第25抗體組共通CDR序列顯示於表14中。在一些實施例中，抗體包含與鑑別為第25組之抗體組之CDR-H3共同序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-H3序列。在一些實施例中，抗體包含與鑑別為第25組之抗體組之共通CDR-H2序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-H2序列。在一些實施例中，抗體包含與鑑別為第25組之抗體組之共通CDR-H1序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-H1序列。在一些實施例中，抗體包含與鑑別為第25組之抗體組之對應的兩個共通重鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的兩個重鏈CDR。在一些實施例中，抗體包含與鑑別為第25組之抗體組之三個共通重鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的三個重鏈CDR。
在一些實施例中，抗體包含鑑別為第25組之抗體組之輕鏈共通CDR。在一些實施例中，抗體包含與鑑別為第25組之抗體組之共通CDR-L3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L3序列。在一些實施例中，抗體包含與鑑別為第25組之抗體組之共通CDR-L2序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L2序列。在一些實施例中，抗體包含與鑑別為第25組之抗體組之共通CDR-L1序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L1序列。在一些實施例中，抗體包含與鑑別為第25組之抗體組之對應的兩個共通輕鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的兩個輕鏈CDR。在一些實施例中，抗體包含與鑑別為第25組之抗體組之對應的三個共通輕鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的三個輕鏈CDR。
在一些實施例中，抗體包含：與鑑別為第25組之抗體組之共通CDR-H3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CHR-H3序列；以及與鑑別為第25組之抗體組之共通CDR-L3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L3序列。在一些實施例中，抗體包含與鑑別為第25組之抗體組之對應的六個共通CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的六個CDR。 25A 共通 CDR
在一些實施例中，抗體包含抗體組譜系25A之共通重鏈CDR序列。如藉由Kabat及Chothia編號系統所確定之抗體組譜系25A之共通CDR序列顯示於表21中。在一些實施例中，抗體包含與抗體組譜系25A之共通CDR-H3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-H3序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體組譜系25A之共通CDR-H2序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-H2序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體組譜系25A之共通CDR-H1序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-H1序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體組譜系25A之對應的兩個共通重鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的兩個重鏈CDR。在一些實施例中，抗體包含與抗體組譜系25A之三個共通重鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的三個重鏈CDR。
在一些實施例中，抗體包含抗體組譜系25A之輕鏈CDR。在一些實施例中，抗體包含與抗體組譜系25A之共通CDR-L3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L3序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體組譜系25A之共通CDR-L2序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L2序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體組譜系25A之共通CDR-L1序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L1序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體組譜系25A之對應的兩個共通輕鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的兩個輕鏈CDR。在一些實施例中，抗體包含與抗體組譜系25A之三個共通輕鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的三個輕鏈CDR。
在一些實施例中，抗體包含：與抗體組譜系25A之共通CDR-H3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-H3序列；以及與抗體組譜系25A之共通CDR-L3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L3序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體組譜系25A之對應的六個共通CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的六個CDR序列。 25G 共通 CDR
在一些實施例中，抗體包含抗體組譜系25G之共通重鏈CDR序列。如藉由Kabat及Chothia編號系統所確定之抗體組譜系25G之共通CDR序列顯示於表21中。在一些實施例中，抗體包含與抗體組譜系25G之共通CDR-H3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-H3序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體組譜系25G之共通CDR-H2序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-H2序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體組譜系25G之共通CDR-H1序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-H1序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體組譜系25G之對應的兩個共通重鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的兩個重鏈CDR。在一些實施例中，抗體包含與抗體組譜系25G之三個共通重鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的三個重鏈CDR。
在一些實施例中，抗體包含抗體組譜系25G之輕鏈CDR。在一些實施例中，抗體包含與抗體組譜系25G之共通CDR-L3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L3序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體組譜系25G之共通CDR-L2序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L2序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體組譜系25G之共通CDR-L1序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L1序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體組譜系25G之對應的兩個共通輕鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的兩個輕鏈CDR。在一些實施例中，抗體包含與抗體組譜系25G之三個共通輕鏈CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的三個輕鏈CDR。
在一些實施例中，抗體包含：與抗體組譜系25G之共通CDR-H3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-H3序列；以及與抗體組譜系25G之共通CDR-L3序列有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的CDR-L3序列。在一些實施例中，抗體包含與抗體組譜系25G之對應的六個共通CDR有50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%一致性的六個CDR序列。 變異體 CDR
在本文所提供之任一抗體之一些實施例中，抗體CDR可包含本文所述之任一CDR序列之多達1、2、3、4、5、6、7或8個胺基酸取代。在一些態樣中，胺基酸取代為保守性胺基酸取代。在一些實施例中，此段中所述之抗體在本文中稱為「變異體」。在一些實施例中，此類變異體例如藉由親和力成熟、定點誘變、隨機誘變或此項技術中已知或本文所述之任何其他方法來由本文所提供之序列獲得。在一些實施例中，此類變異體不由本文所提供之序列獲得，且可例如根據本文提供之用於獲得抗體的方法來重新分離。 2.2.7. 抗體變異體的功能特性
如上文以及本揭露中之其他地方所述，本文提供了基於與本文所提供之說明性抗體序列的一致性百分比或與本文所提供之說明性抗體序列相比的胺基酸殘基之取代所定義之抗體變異體。
在一些實施例中，本文所提供之抗體之變異體對hTF具有特異性。在一些實施例中，本文所提供之抗體之變異體對cTF具有特異性。在一些實施例中，本文所提供之抗體之變異體對mTF具有特異性。在一些實施例中，本文所提供之抗體之變異體對hTF及cTF具有特異性。在一些實施例中，本文所提供之抗體之變異體對hTF及mTF具有特異性。在一些實施例中，本文所提供之抗體之變異體對cTF及mTF具有特異性。在一些實施例中，本文所提供之抗體之變異體對hTF、cTF及mTF具有特異性。
在一些實施例中，來源於本文所提供之說明性抗體序列的抗體之變異體保留對hTF的親和力，如藉由KD 所量測，該親和力在此類說明性抗體之親和力的約1.5倍、約2倍、約3倍、約4倍、約5倍、約6倍、約7倍、約8倍、約9倍或約10倍內。在一些實施例中，來源於本文所提供之說明性抗體序列的抗體之變異體保留對cTF的親和力，如藉由KD 所量測，該親和力在此類說明性抗體之親和力的約1.5倍、約2倍、約3倍、約4倍、約5倍、約6倍、約7倍、約8倍、約9倍或約10倍內。在一些實施例中，來源於本文所提供之說明性抗體序列的抗體之變異體保留對mTF的親和力，如藉由KD 所量測，該親和力在此類說明性抗體之親和力的約1.5倍、約2倍、約3倍、約4倍、約5倍、約6倍、約7倍、約8倍、約9倍或約10倍內。在一些實施例中，來源於本文所提供之說明性抗體序列的抗體之變異體保留對hTF及cTF的親和力，如藉由KD 所量測，該親和力在此類說明性抗體之親和力的約1.5倍、約2倍、約3倍、約4倍、約5倍、約6倍、約7倍、約8倍、約9倍或約10倍內。在一些實施例中，來源於本文所提供之說明性抗體序列的抗體之變異體保留對hTF及mTF的親和力，如藉由KD 所量測，該親和力在此類說明性抗體之親和力的約1.5倍、約2倍、約3倍、約4倍、約5倍、約6倍、約7倍、約8倍、約9倍或約10倍內。在一些實施例中，來源於本文所提供之說明性抗體序列的抗體之變異體保留對cTF及mTF的親和力，如藉由KD 所量測，該親和力在此類說明性抗體之親和力的約1.5倍、約2倍、約3倍、約4倍、約5倍、約6倍、約7倍、約8倍、約9倍或約10倍內。在一些實施例中，來源於本文所提供之說明性抗體序列的抗體之變異體保留對hTF、cTF及mTF中之所有三者的親和力，如藉由KD 所量測，該親和力在此類說明性抗體之親和力的約1.5倍、約2倍、約3倍、約4倍、約5倍、約6倍、約7倍、約8倍、約9倍或約10倍內。
在一些實施例中，本文所提供之抗體之變異體保留抑制TF傳訊的能力，如藉由本文所述之一或多種檢定或生物學效應所量測。在一些實施例中，本文所提供之抗體之變異體保留血液凝固過程中TF之正常功能。
在一些實施例中，本文所提供之抗體之變異體與選自25A、25A3、25A5、25A5-T、25G、25G1及25G9之抗體競爭結合至TF，其各自如本揭露之表 5 中所提供。
在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，本文所提供之抗體之變異體允許人類凝血酶生成。在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，本文所提供之抗體之變異體不抑制人類凝血酶生成。
在一些實施例中，本文所提供之抗體之變異體在與由人類FX結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF。在一些實施例中，本文所提供之抗體之變異體不干擾TF:FVIIa將FX轉化為FXa的能力。
在一些實施例中，本文所提供之抗體之變異體在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF。在一些實施例中，本文所提供之抗體之變異體不與人類FVIIa競爭結合至人類TF。
在一些實施例中，本文所提供之抗體之變異體抑制FVIIa依賴性TF傳訊。
在一些實施例中，本文所提供之抗體之變異體結合小鼠TF (SEQ ID NO:817)。在一些實施例中，本文所提供之抗體之變異體以比該抗體對hTF之親和力低的親和力(如由較高的KD 所指示)結合小鼠TF。在一些實施例中，本文所提供之抗體之變異體不結合mTF。
在一些實施例中，本文所提供之抗體之變異體結合豬TF (SEQ ID NO:824)。在一些實施例中，本文所提供之抗體之變異體以比該抗體對hTF之親和力低的親和力(如由較高的KD 所指示)結合豬TF。在一些實施例中，本文所提供之抗體之變異體不結合pTF。
在一些實施例中，本文所提供之抗體之變異體結合與此種抗體相同的TF抗原決定區。 2.2.8. 抗體之其他功能特性
在一些實施例中，本文所提供之抗體具有以下(a)至(dd)中列出之特徵中之一或多者：(a)在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF；(b)如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，不抑制人類凝血酶生成；(c)與同型對照相比，不降低凝血酶生成曲線上之凝血酶峰(峰IIa)；(d)與同型對照相比，不增加凝血酶生成曲線上自檢定開始至凝血酶峰的時間(ttPeak)；(e)如藉由凝血酶生成曲線下之面積所確定，與同型對照相比，不降低內源性凝血酶潛力(ETP)；(f)如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，允許人類凝血酶生成；(g)與同型對照相比，保持凝血酶生成曲線上之凝血酶峰(峰IIa)；(h)與同型對照相比，保持凝血酶生成曲線上自檢定開始至凝血酶峰的時間(ttPeak)；(i)如藉由凝血酶生成曲線下之面積所確定，與同型對照相比，保留內源性凝血酶潛力(ETP)；(j)在與由人類FX結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF；(k)不干擾TF:FVIIa將FX轉化為FXa的能力；(l)不與人類FVIIa競爭結合至人類TF；(m)抑制FVIIa依賴性TF傳訊；(n)結合至石蟹獼猴TF；(o)結合至小鼠TF；(p)結合至兔TF；(q)結合至豬TF；(s)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基149處的突變的變異體TF胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(t)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基68處的突變的變異體TF胞外域之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(u)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基171及197處的突變的變異體TF胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(v)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基1-77經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基1-76取代)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(w)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基39-77經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基38-76取代)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(x)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基94-107經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基99-112取代)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(y)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基146-158經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基151至163取代)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(z)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基159-219經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基164-224取代)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(aa)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基159-189經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基164-194取代)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(bb)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基159-174經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基164-179取代)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(cc)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基167-174經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基172-179取代)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；且(dd)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與大鼠TF胞外域(其中SEQ ID NO:838中所示之序列之胺基酸殘基141-194經SEQ ID NO:810中所示之序列之人類TF胞外域胺基酸殘基136-189取代)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之二或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之三或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之四或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之五或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之六或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之七或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之八或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之九或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之十或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之十一或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之十二或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之十三或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之十四或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之十五或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之十六或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之十七或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之十八或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之十九或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之二十或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之二十一或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之二十二或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之二十三個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之二十四個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之二十五個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之二十六個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之二十七個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之二十八個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之二十九個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之所有三十個特徵。
在一些實施例中，本文所提供之抗體具有以下(a)-(dd)中列出之特徵中之一或多者：(a)在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF；(b)如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，不抑制人類凝血酶生成；(c)與同型對照相比，不降低凝血酶生成曲線上之凝血酶峰(峰IIa)；(d)與同型對照相比，不增加凝血酶生成曲線上自檢定開始至凝血酶峰的時間(ttPeak)；(e)如藉由凝血酶生成曲線下之面積所確定，與同型對照相比，不降低內源性凝血酶潛力(ETP)；(f)如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，允許人類凝血酶生成；(g)與同型對照相比，保持凝血酶生成曲線上之凝血酶峰(峰IIa)；(h)與同型對照相比，保持凝血酶生成曲線上自檢定開始至凝血酶峰的時間(ttPeak)；(i)如藉由凝血酶生成曲線下之面積所確定，與同型對照相比，保留內源性凝血酶潛力(ETP)；(j)在與由人類FX結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF；(k)不干擾TF:FVIIa將FX轉化為FXa的能力；(l)不與人類FVIIa競爭結合至人類TF；(m)抑制FVIIa依賴性TF傳訊；(n)結合至石蟹獼猴TF；(o)結合至小鼠TF；(p)結合至兔TF；(q)結合至豬TF；(s)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之突變K149N之變異體TF胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(t)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之突變K68N之變異體TF胞外域之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(u)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之突變N171H及T197K之變異體TF胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(v)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基1-77經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基1-76取代)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(w)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基39-77經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基38-76取代)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(x)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基94-107經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基99-112取代)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(y)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基146-158經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基151-163取代)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(z)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基159-219經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基164-224取代)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(aa)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基159-189經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基164-194取代)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(bb)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基159-174經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基164-179取代)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(cc)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基167-174經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基172-179取代)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；且(dd)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與大鼠TF胞外域(其中SEQ ID NO:838中所示之序列之胺基酸殘基141-194經SEQ ID NO:810中所示之序列之人類TF胞外域胺基酸殘基136-189取代)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之二或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之三或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之四或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之五或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之六或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之七或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之八或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之九或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之十或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之十一或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之十二或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之十三或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之十四或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之十五或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之十六或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之十七或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之十八或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之十九或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之二十或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之二十一或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之二十二或更多個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之二十三個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之二十四個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之二十五個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之二十六個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之二十七個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之二十八個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之二十九個特徵。在一些實施例中，本文所提供之抗體具有前述(a)-(dd)中列出之所有三十個特徵。
在一些實施例中，本文所提供之抗體表現出包含以下(a)-(dd)中列出之二或更多個特徵之特徵組合：(a)在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF；(b)如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，不抑制人類凝血酶生成；(c)與同型對照相比，不降低凝血酶生成曲線上之凝血酶峰(峰IIa)；(d)與同型對照相比，不增加凝血酶生成曲線上自檢定開始至凝血酶峰的時間(ttPeak)；(e)如藉由凝血酶生成曲線下之面積所確定，與同型對照相比，不降低內源性凝血酶潛力(ETP)；(f)如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，允許人類凝血酶生成；(g)與同型對照相比，保持凝血酶生成曲線上之凝血酶峰(峰IIa)；(h)與同型對照相比，保持凝血酶生成曲線上自檢定開始至凝血酶峰的時間(ttPeak)；(i)如藉由凝血酶生成曲線下之面積所確定，與同型對照相比，保留內源性凝血酶潛力(ETP)；(j)在與由人類FX結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF；(k)不干擾TF:FVIIa將FX轉化為FXa的能力；(l)不與人類FVIIa競爭結合至人類TF；(m)抑制FVIIa依賴性TF傳訊；(n)結合至石蟹獼猴TF；(o)結合至小鼠TF；(p)結合至兔TF；(q)結合至豬TF；(s)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基149處的突變之變異體TF胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(t)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基68處的突變之變異體TF胞外域之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(u)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基171及197處的突變之變異體TF胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(v)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基1-77經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基1-76取代)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(w)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基39-77經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基38-76取代)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(x)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基94-107經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基99-112取代)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(y)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基146-158經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基151-163取代)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(z)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基159-219經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基164-224取代)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(aa)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基159-189經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基164-194取代)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(bb)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基159-174經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基164-179取代)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(cc)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基167-174經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基172-179取代)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；且(dd)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與大鼠TF胞外域(其中SEQ ID NO:838中所示之序列之胺基酸殘基141-194經SEQ ID NO:810中所示之序列之人類TF胞外域胺基酸殘基136-189取代)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%。
在一些實施例中，本文所提供之抗體表現出包含以下(a)-(dd)中列出之二或更多個特徵之特徵組合：(a)在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF；(b)如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，不抑制人類凝血酶生成；(c)與同型對照相比，不降低凝血酶生成曲線上之凝血酶峰(峰IIa)；(d)與同型對照相比，不增加凝血酶生成曲線上自檢定開始至凝血酶峰的時間(ttPeak)；(e)如藉由凝血酶生成曲線下之面積所確定，與同型對照相比，不降低內源性凝血酶潛力(ETP)；(f)如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，允許人類凝血酶生成；(g)與同型對照相比，保持凝血酶生成曲線上之凝血酶峰(峰IIa)；(h)與同型對照相比，保持凝血酶生成曲線上自檢定開始至凝血酶峰的時間(ttPeak)；(i)如藉由凝血酶生成曲線下之面積所確定，與同型對照相比，保留內源性凝血酶潛力(ETP)；(j)在與由人FX結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF；(k)不干擾TF:FVIIa將FX轉化為FXa的能力；(l)不與人類FVIIa競爭結合至人類TF；(m)抑制FVIIa依賴性TF傳訊；(n)結合至石蟹獼猴TF；(o)結合至小鼠TF；(p)結合至兔TF；(q)結合至豬TF；(s)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之突變K149N之變異體TF胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(t)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之突變K68N之變異體TF胞外域之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(u)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之突變N171H及T197K之變異體TF胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(v)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基1-77經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基1-76取代)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(w)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基39-77經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基38-76取代)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(x)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基94-107經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基99-112取代)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(y)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基146-158經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基151-163取代)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(z)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基159-219經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基164-224取代)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(aa)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基159-189經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基164-194取代)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(bb)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基159-174經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基164-179取代)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；(cc)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與人類TF胞外域(其中SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基167-174經SEQ ID NO:838中所示之序列之大鼠TF胞外域胺基酸殘基172-179取代)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；且(dd)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與大鼠TF胞外域(其中SEQ ID NO:838中所示之序列之胺基酸殘基141-194經SEQ ID NO:810中所示之序列之人類TF胞外域胺基酸殘基136-189取代)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%。
在一些實施例中，本文所提供之抗體表現出以下中列出之特徵之組合：在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF；如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，不抑制人類凝血酶生成；且如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基171及197處的突變之變異體TF胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%。
在一些實施例中，本文所提供之抗體表現出以下中列出之特徵之組合：在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF；如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，不抑制人類凝血酶生成；且如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之突變N171H及T197K之變異體TF胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%。
在一些實施例中，本文所提供之抗體表現出以下中列出之特徵之組合：在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF；如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，允許人類凝血酶生成；且如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基171及197處的突變之變異體TF胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%。
在一些實施例中，本文所提供之抗體表現出以下中列出之特徵之組合：在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF；如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，允許人類凝血酶生成；且如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之突變N171H及T197K之變異體TF胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%。
在一些實施例中，本文所提供之抗體表現出以下中列出之特徵之組合：在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF；如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，不抑制人類凝血酶生成；如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基149處的突變之變異體TF胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；且如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基171及197處的突變之變異體TF胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%。
在一些實施例中，本文所提供之抗體表現出以下中列出之特徵之組合：在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF；如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，不抑制人類凝血酶生成；如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之突變K149N之變異體TF胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；且如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之突變N171H及T197K之變異體TF胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%。
在一些實施例中，本文所提供之抗體表現出以下中列出之特徵之組合：在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF；如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，允許人類凝血酶生成；如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基149處的突變之變異體TF胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；且如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基171及197處的突變之變異體TF胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%。
在一些實施例中，本文所提供之抗體表現出以下中列出之特徵之組合：在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF；如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，允許人類凝血酶生成；如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之突變K149N之變異體TF胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；且如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之突變N171H及T197K之變異體TF胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%。
在一些實施例中，本文所提供之抗體表現出以下中列出之特徵之組合：在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF；如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，不抑制人類凝血酶生成；結合至石蟹獼猴TF；如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基149處的突變之變異體TF胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；且如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基171及197處的突變之變異體TF胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%。
在一些實施例中，本文所提供之抗體表現出以下中列出之特徵之組合：在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF；如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，不抑制人類凝血酶生成；結合至石蟹獼猴TF；如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之突變K149N之變異體TF胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；且如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之突變N171H及T197K之變異體TF胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%。
在一些實施例中，本文所提供之抗體表現出以下中列出之特徵之組合：在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF；如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，允許人類凝血酶生成；結合至石蟹獼猴TF；如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基149處的突變之變異體TF胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；且如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之胺基酸殘基171及197處的突變之變異體TF胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%。
在一些實施例中，本文所提供之抗體表現出以下中列出之特徵之組合：在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF；如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，允許人類凝血酶生成；結合至石蟹獼猴TF；如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之突變K149N之變異體TF胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%；且如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中位數螢光強度值所確定，抗體與包含SEQ ID NO:810中所示之序列之突變N171H及T197K之變異體TF胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810中所示之序列之TF胞外域之間的結合的50%。 2.3. TF抗體之親和力及其他特性 2.3.1. TF抗體之親和力
在一些實施例中，如由KD 所指示，本文所提供之抗體對TF之親和力小於約10-5 M、小於約10-6 M、小於約10-7 M、小於約10-8 M、小於約10-9 M、小於約10-10 M、小於約10-11 M或小於約10-12 M。在一些實施例中，抗體之親和力在約10-7 M與10-12 M之間。在一些實施例中，抗體之親和力在約10-7 M與10-11 M之間。在一些實施例中，抗體之親和力在約10-7 M與10-10 M之間。在一些實施例中，抗體之親和力在約10-7 M與10-9 M之間。在一些實施例中，抗體之親和力在約10-7 M與10-8 M之間。在一些實施例中，抗體之親和力在約10-8 M與10-12 M之間。在一些實施例中，抗體之親和力在約10-8 M與10-11 M之間。在一些實施例中，抗體之親和力在約10-9 M與10-11 M之間。在一些實施例中，抗體的親和力在約10-10 M與10-11 M之間。
在一些實施例中，本文所提供之抗體對cTF之KD 值不大於該抗體對hTF之KD 值的15倍。在一些實施例中，本文所提供之抗體對cTF之KD 值不大於該抗體對hTF之KD 值的10倍。在一些實施例中，本文所提供之抗體對cTF之KD 值不大於該抗體對hTF之KD 值的8倍。在一些實施例中，本文所提供之抗體對cTF之KD 值不大於該抗體對hTF之KD 值的5倍。在一些實施例中，本文所提供之抗體對cTF之KD 值不大於該抗體對hTF之KD 值的3倍。在一些實施例中，本文所提供之抗體對cTF之KD 值不大於該抗體對hTF之KD 值的2倍。
在一些實施例中，本文所提供之抗體對mTF之KD 值不大於該抗體對hTF之KD 值的20倍。在一些實施例中，本文所提供之抗體對mTF之KD 值不大於該抗體對hTF之KD 值的15倍。在一些實施例中，本文所提供之抗體對mTF之KD 值不大於該抗體對hTF之KD 值的10倍。在一些實施例中，本文所提供之抗體對mTF之KD 值不大於該抗體對hTF之KD 值的5倍。在一些實施例中，本文所提供之抗體對mTF之KD 值不大於該抗體對hTF之KD 值的2倍。
在一些實施例中，如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之表 5 中所示，如藉由Biacore所量測之KD 所指示之本文所提供之抗體對hTF之親和力選自約0.31 nM、約6.20 nM、約0.36 nM、約0.08 nM、約23.0 nM、約0.94 nM、約13.3 nM、約0.47 nM、約0.09 nM、約1.75 nM、約0.07 nM、約0.14 nM、約2.09 nM、約0.06 nM、約0.15 nM、約1.46 nM、約1.60 nM及約0.42 nM。在一些實施例中，如藉由KD 所指示之此種親和力在約23.0 nM至約0.06 nM的範圍內。在一些實施例中，此種為約23.0 nM或更小。
在一些實施例中，如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之表 5 中所示，如藉由ForteBio所量測之KD 所指示之本文所提供之抗體對hTF之親和力選自約1.28 nM、約2.20 nM、約8.45 nM、約1.67 nM、約0.64 nM、約21.9 nM、約3.97 nM、約35.8 nM、約3.30 nM、約2.32 nM、約0.83 nM、約2.40 nM、約0.96 nM、約0.86 nM、約3.84 nM、約1.02 nM、約1.61 nM、約2.52 nM、約2.28 nM及約1.59 nM。在一些實施例中，如藉由KD 所指示之此種親和力在約35.8 nM至約0.64 nM的範圍內。在一些實施例中，此種KD 為約35.8 nM或更小。
在一些實施例中，如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之表 5 中所示，如藉由Biacore所量測之KD 所指示之本文所提供之抗體對cTF之親和力選自約0.26 nM、約5.42 nM、約0.21 nM、約0.04 nM、約18.0 nM、約0.78 nM、約16.4 nM、約5.06 nM、約0.08 nM、約5.64 nM、約0.12 nM、約0.24 nM、約5.66 nM、約0.39 nM、約5.69 nM、約6.42 nM及約1.83 nM。在一些實施例中，如藉由KD 所指示之此種親和力在約18.0 nM至約0.04 nM的範圍內。在一些實施例中，此種KD 為約18.0 nM或更小。
在一些實施例中，如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之表 5 中所示，如藉由ForteBio所量測之KD 所指示之本文所提供之抗體對cTF之親和力選自約1.43 nM、約2.70 nM、約7.65 nM、約1.36 nM、約0.76 nM、約17.5 nM、約4.99 nM、約42.9 nM、約12.0 nM、約15.0 nM、約0.57 nM、約3.40 nM、約1.05 nM、約0.94 nM、約4.12 nM、約1.11 nM、約1.96 nM、約4.07 nM、約2.71 nM及約4.16 nM。在一些實施例中，如藉由KD 所指示之此種親和力在約42.9 nM至約0.57 nM的範圍內。在一些實施例中，此種KD 為約42.9 nM或更小。
在一些實施例中，如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之表 5 中所示，如藉由Biacore所量測之KD 所指示之本文所提供之抗體對mTF之親和力選自約5.4 nM、約2.9 nM、約21 nM及約2.4 nM。在一些實施例中，如藉由KD 所指示之此種親和力在約21 nM至約2.4 nM的範圍內。在一些實施例中，此種KD 為約21 nM或更小。
在一些實施例中，如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之表 5 中示，如藉由ForteBio所量測之KD 所指示之本文所提供之抗體對mTF之親和力選自約263 nM、約131 nM、約188 nM、約114 nM、約34.2 nM、約9.16 nM、約161 nM、約72.1 nM、約360 nM、約281 nM、約41.4 nM、約6.12 nM、約121 nM及約140 nM。在一些實施例中，如藉由KD 所指示之此種親和力在約360 nM至約6.12 nM的範圍內。在一些實施例中，此種KD 為約360 nM或更小。
在一些實施例中，如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之圖 1A 及圖 1B 中所示，如藉由用人類TF陽性HCT-116細胞所量測之EC50 所指示之本文所提供之抗體對hTF之親和力選自約50 pM、約58 pM、約169 pM、約77 pM、約88 pM、約134 pM、約85 pM、約237 pM、約152 pM、約39 pM、約559 pM、約280 pM、約255 pM、約147 pM、約94 pM、約117 pM、約687 pM、約532 pM及約239 pM。在一些實施例中，此種親和力在約687 pM至約39 pM的範圍內。在一些實施例中，此種EC50 為約687 pM或更小。
在一些實施例中，如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之圖 2A 及圖 2B 中所示，如藉由用小鼠TF陽性CHO細胞所量測之EC50 所指示之本文所提供之抗體對mTF之親和力選自約455 nM、約87 nM、約11 nM、約3.9 nM、約3.0 nM、約3.4 nM、約255 nM、約2.9 nM、約3.6 nM及約4.0 nM。在一些實施例中，此種親和力在約455 nM至約2.9 nM的範圍內。在一些實施例中，此種EC50 為約455 pM或更小。
在一些實施例中，本文所提供之抗體對pTF之KD 值不大於該抗體對hTF之KD 值的20倍。在一些實施例中，本文所提供之抗體對pTF之KD 值不大於該抗體對hTF之KD 值的15倍。在一些實施例中，本文所提供之抗體對pTF之KD 值不大於該抗體對hTF之KD 值的10倍。在一些實施例中，本文所提供之抗體對pTF之KD 值不大於該抗體對hTF之KD 值的5倍。在一些實施例中，本文所提供之抗體對pTF之KD 值不大於該抗體對hTF之KD 值的2倍。
在一些實施例中，如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之表40中所示，如藉由Biacore所量測之KD 所指示之本文所提供之抗體對pTF之親和力為3.31 nM或12.9 nM。 2.3.2. TF抗體存在下的凝血酶生成
在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，本文所提供之TF抗體不抑制人類凝血酶生成。在某些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，本文所提供之TF抗體允許人類凝血酶生成。
在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在少小於100 nM TF抗體的存在下，凝血酶生成之峰百分比(峰IIa %)為至少40%。在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在不少於100 nM TF抗體的存在下，峰IIa %為至少50%。在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在不少於100 nM TF抗體的存在下，峰IIa %為至少60%。在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在不少於100 nM TF抗體的存在下，峰IIa %為至少70%。在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在不少於100 nM TF抗體的存在下，峰IIa %為至少80%。在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在不少於100 nM TF抗體的存在下，峰IIa %為至少90%。在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在不少於100 nM TF抗體的存在下，峰IIa %為至少95%。在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在不少於100 nM TF抗體的存在下，峰IIa %為至少99%。
在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在不少於50 nM TF抗體的存在下，峰IIa %為至少40%。在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在不少於50 nM TF抗體的存在下，峰IIa %為至少50%。在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在不少於50 nM TF抗體的存在下，峰IIa %為至少60%。在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在不少於50 nM TF抗體的存在下，峰IIa %為至少70%。在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在不少於50 nM TF抗體的存在下，峰IIa %為至少80%。在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在不少於50 nM TF抗體的存在下，峰IIa %為至少90%。在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在不少於50 nM TF抗體的存在下，峰IIa %為至少95%。在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在不少於50 nM TF抗體的存在下，峰IIa %為至少99%。
在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在不少於10 nM TF抗體的存在下，峰IIa %為至少60%。在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在不少於10 nM TF抗體的存在下，峰IIa %為至少70%。在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在不少於10 nM TF抗體的存在下，峰IIa %為至少80%。在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在不少於10 nM TF抗體的存在下，峰IIa %為至少90%。在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在不少於10 nM TF抗體的存在下，峰IIa %為至少95%。在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在不少於10 nM TF抗體的存在下，峰IIa %為至少99%。
在一些實施例中，如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之表 6 及表 37 中所示，如藉由無需抗體預孵育之凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在100 nM TF抗體的存在下，峰IIa %選自約99%、約100%、約103%、約64%、約52%、約87%、約96%、約98%及約53%。在一些實施例中，此種峰IIa %在約52%至約103%的範圍內。在一些實施例中，此種峰IIa %為約52%或更高。
在一些實施例中，如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之表 6 及表 37 中所示，如藉由無需抗體預孵育之凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在50 nM TF抗體的存在下，峰IIa %選自約99%、約100%、約103%、約67%、約58%、約89%、約96%、約98%、約68%、約62%及約88%。在一些實施例中，此種峰IIa %在約58%至約103%的範圍內。在一些實施例中，此種峰值IIa %為約58%或更高。
在一些實施例中，如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之表 6 及表 37 中所示，如藉由無需抗體預孵育之凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在10 nM TF抗體的存在下，峰IIa %選自約100%、約99%、約103%、約87%、約83%、約95%、約98%、約86%及約96%。在一些實施例中，此種峰IIa %在約83%至約103%的範圍內。在一些實施例中，此種峰IIa %為約83%或更高。
在一些實施例中，如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之表 7 及表 38 中所示，如藉由在10 min抗體預孵育之情況下之凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在100 nM TF抗體的存在下，峰IIa %選自約108%、約105%、約111%、約58%、約47%、約91%、約103%、約109%、約107%及約45%。在一些實施例中，此種峰IIa %在約45%至約111%的範圍內。在一些實施例中，此種峰IIa %為約45%或更高。
在一些實施例中，如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之表 7 及表 38 中所示，如藉由在10 min抗體預孵育之情況下之凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在50 nM TF抗體的存在下，峰IIa %選自約107%、約104%、約114%、約62%、約49%、約87%、約105%、約109%、約55%及約92%。在一些實施例中，此種峰IIa %在約49%至約114%的範圍內。在一些實施例中，此種峰IIa %為約49%或更高。
在一些實施例中，如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之表 7 及表 38 中所示，如藉由在10 min抗體預孵育之情況下之凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在10 nM TF抗體的存在下，峰IIa %選自約105%、約114%、約76%、約68%、約94%、約108%、約104%、約74%及約93%。在一些實施例中，此種峰IIa %在約68%至約114%的範圍內。在一些實施例中，此種峰IIa %為約68%或更高。
在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在不少於100 nM TF抗體的存在下，內源性凝血酶潛力百分比(ETP %)為至少80%。在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在不少於100 nM TF抗體的存在下，ETP %為至少90%。在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在不少於100 nM TF抗體的存在下，ETP %為至少95%。在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在不少於100 nM TF抗體的存在下，ETP %為至少99%。
在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在不少於50 nM TF抗體的存在下，ETP %為至少80%。在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在不少於50 nM TF抗體的存在下，ETP %為至少90%。在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在不少於50 nM TF抗體的存在下，ETP %為至少95%。在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在不少於50 nM TF抗體的存在下，ETP %為至少99%。
在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在不少於10 nM TF抗體的存在下，ETP %為至少80%。在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在不少於10 nM TF抗體的存在下，ETP %為至少90%。在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在不少於10 nM TF抗體的存在下，ETP %為至少95%。在一些實施例中，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在不少於10 nM TF抗體的存在下，ETP %為至少99%。
在一些實施例中，如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之表 6 及表 37 中所示，如藉由無需抗體預孵育之凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在100 nM TF抗體的存在下，ETP %選自約108%、約103%、約109%、約100%、約96%、約102%、約105%及約92%。在一些實施例中，此種ETP %在約92%至約109%的範圍內。在一些實施例中，此種ETP %為約92%或更高。
在一些實施例中，如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之表 6 及表 37 中所示，如藉由無需抗體預孵育之凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在50 nM TF抗體的存在下，ETP %選自約108%、約103%、約111%、約101%、約97%、約104%、約106%、約93%、約96%及約105%。在一些實施例中，此種ETP %在約93%至約111%的範圍內。在一些實施例中，此種ETP %為約93%或更高。
在一些實施例中，如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之表 6 及表 37 中所示，與不含抗體之對照條件相比，在10 nM TF抗體的存在下，ETP %選自約106%、約109%、約105%、約104%、約107%、約99%、約101%及約102%。在一些實施例中，此種ETP %在約99%至約109%的範圍內。在一些實施例中，此種ETP %為約99%或更高。
在一些實施例中，如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之表 7 及表 38 中所示，如藉由在10 min抗體預孵育之情況下之凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在100 nM TF抗體的存在下，ETP %選自約110%、約104%、約106%、約98%、約95%、約108%、約107%、約96%、約92%及約103%。在一些實施例中，此種ETP %在約92%至約110%的範圍內。在一些實施例中，此種ETP %為約92%或更高。
在一些實施例中，如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之表 7 及表 38 中所示，如藉由在10 min抗體預孵育之情況下之凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在50 nM TF抗體的存在下，ETP %選自約110%、約106%、約108%、約103%、約96%、約109%、約102%、約104%、約94%及約98%。在一些實施例中，此種ETP %在約94%至約110%的範圍內。在一些實施例中，此種ETP %為約94%或更高。
在一些實施例中，如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之表 7 及表 38 中所示，如藉由在10 min抗體預孵育之情況下之凝血酶生成檢定(TGA)所確定，與不含抗體之對照條件相比，在10 nM TF抗體的存在下，ETP %選自約107%、約106%、約110%、約103%、約100%、約105%、約102%及約101%。在一些實施例中，此種ETP %在約100%至約110%的範圍內。在一些實施例中，此種ETP %為約100%或更高。 2.3.3. TF抗體存在下的FXa轉化
在一些實施例中，本文所提供之抗體在與由人類FX結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF。在某些實施例中，本文所提供之抗體不干擾TF:FVIIa將FX轉化為FXa的能力。
在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於100 nM TF抗體的存在下，FXa轉化之百分比(FXa %)為至少75%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於100 nM TF抗體的存在下，FXa %為至少80%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於100 nM TF抗體的存在下，FXa %為至少85%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於100 nM TF抗體的存在下，FXa %為至少90%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於100 nM TF抗體的存在下，FXa %為至少95%。
在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於50 nM TF抗體的存在下，FXa %為至少75%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於50 nM TF抗體的存在下，FXa %為至少80%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於50 nM TF抗體的存在下，FXa %為至少85%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於50 nM TF抗體的存在下，FXa %為至少90%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於50 nM TF抗體的存在下，FXa %為至少95%。
在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於25 nM TF抗體的存在下，FXa %為至少75%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於25 nM TF抗體的存在下，FXa %為至少80%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於25 nM TF抗體的存在下，FXa %為至少85%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於25 nM TF抗體的存在下，FXa %為至少90%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於25 nM TF抗體的存在下，FXa %為至少95%。
在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於12.5 nM TF抗體的存在下，FXa %為至少75%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於12.5 nM TF抗體的存在下，FXa %為至少80%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於12.5 nM TF抗體的存在下，FXa %為至少85%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於12.5 nM TF抗體的存在下，FXa %為至少90%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於12.5 nM TF抗體的存在下，FXa %為至少95%。
在一些實施例中，如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之表 8 中所示，與不含抗體之對照條件相比，在100 nM TF抗體的存在下，FXa %選自約89%、約96%、約116%、約108%、約117%、約105%、約112%、約106%、約103%、約111%、約98%及約101%。在一些實施例中，此種FXa %在約89%至約117%的範圍內。在一些實施例中，此種FXa %為約89%或更高。
在一些實施例中，如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之表 8 中所示，與不含抗體之對照條件相比，在50 nM TF抗體的存在下，FXa %選自約94%、約93%、約78%、約102%、約99%、約104%、約105%、約108%、約107%、約97%及約106%。在一些實施例中，此種FXa %在約78%至約108%的範圍內。在一些實施例中，此種FXa %為約78%或更高。
在一些實施例中，如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之表 8 中所示，與不含抗體之對照條件相比，在25 nM TF抗體的存在下，FXa %選自約81%、約89%、約85%、約109%、約96%、約97%、約108%、約104%、約103%、約112%及約89%。在一些實施例中，此種FXa %在約81%至約112%的範圍內。在一些實施例中，此種FXa %為約81%或更高。
在一些實施例中，如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之表 8 中所示，與不含抗體之對照條件相比，在12.5 nM TF抗體的存在下，FXa %選自約87%、約89%、約82%、約99%、約101%、約98%、約113%、約106%、約115%、約110%、約120%、約85%及約108%。在一些實施例中，此種FXa %在約82%至約120%的範圍內。在一些實施例中，此種FXa %為約82%或更高。 2.3.4. TF抗體存在下的FVIIa結合
在一些實施例中，本文所提供之抗體在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF。在某些實施例中，本文所提供之抗體不與人類FVIIa競爭結合至人類TF。
在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於250 nM TF抗體的存在下，FVIIa結合之百分比(FVIIa %)為至少75%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於250 nM TF抗體的存在下，FVIIa %為至少80%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於250 nM TF抗體的存在下，FVIIa %為至少85%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於250 nM TF抗體的存在下，FVIIa %為至少90%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於250 nM TF抗體的存在下，FVIIa %為至少95%。
在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於83 nM TF抗體的存在下，FVIIa %為至少75%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於83 nM TF抗體的存在下，FVIIa %為至少80%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於83 nM TF抗體的存在下，FVIIa %為至少85%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於83 nM TF抗體的存在下，FVIIa %為至少90%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於83 nM TF抗體的存在下，FVIIa %為至少95%。
在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於28 nM TF抗體的存在下，FVIIa %為至少75%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於28 nM TF抗體的存在下，FVIIa %為至少80%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於28 nM TF抗體的存在下，FVIIa %為至少85%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於28 nM TF抗體的存在下，FVIIa %為至少90%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於28 nM TF抗體的存在下，FVIIa %為至少95%。
在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於9.25 nM TF抗體的存在下，FVIIa %為至少75%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於9.25 nM TF抗體的存在下，FVIIa %為至少80%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於9.25 nM TF抗體的存在下，FVIIa %為至少85%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於9.25 nM TF抗體的存在下，FVIIa %為至少90%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於9.25 nM TF抗體的存在下，FVIIa %為至少95%。
在一些實施例中，如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之表 9 中所示，與不含抗體之對照條件相比，在250 nM TF抗體的存在下，FVIIa %選自約98%、約87%、約80%、約92%、約95%、約89%、約91%、約97%、約94%、約101%及約96%。在一些實施例中，此種FVIIa %在約80%至約101%的範圍內。在一些實施例中，此種FVIIa %為約80%或更高。
在一些實施例中，如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之表 9 中所示，與不含抗體之對照條件相比，在83 nM TF抗體的存在下，FVIIa %選自約97%、約88%、約77%、約93%、約94%、約91%、約98%、約100%及約92%。在一些實施例中，此種FVIIa %在約77%至約100%的範圍內。在一些實施例中，此種FVIIa %為約77%或更高。
在一些實施例中，如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之表 9 中所示，與不含抗體之對照條件相比，在28 nM TF抗體的存在下，FVIIa %選自約101%、約87%、約79%、約96%、約93%、約95%、約98%、約100%、約102%、約99%、約92%及約91%。在一些實施例中，此種FVIIa %在約79%至約102%的範圍內。在一些實施例中，此種FVIIa %為約79%或更高。
在一些實施例中，如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之表 9 中所示，與不含抗體之對照條件相比，在9.25 nM TF抗體的存在下，FVIIa %選自約100%、約90%、約76%、約97%、約93%、約99%、約98%、約102%、約101%及約95%。在一些實施例中，此種FVIIa %在約76%至約102%的範圍內。在一些實施例中，此種FVIIa %為約76%或更高。 2.3.5. TF抗體存在下的FVIIa依賴性TF傳訊
在一些實施例中，本文所提供之抗體抑制FVIIa依賴性TF傳訊。在一些實施例中，藉由IL8之減少來量測對FVIIa依賴性TF傳訊的抑制。在一些實施例中，藉由GM-CSF之減少來量測對FVIIa依賴性TF傳訊的抑制。
在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於100 nM TF抗體的存在下，介白素8濃度(IL8濃度)降低至少70%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於100 nM TF抗體的存在下，IL8濃度降低至少80%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於100 nM TF抗體的存在下，IL8濃度降低至少90%。
在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於40 nM TF抗體的存在下，IL8濃度降低至少70%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於40 nM TF抗體的存在下，IL8濃度降低至少80%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於40 nM TF抗體的存在下，IL8濃度降低至少90%。
在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於16 nM TF抗體的存在下，IL8濃度降低至少60%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於16 nM TF抗體的存在下，IL8濃度降低至少70%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於16 nM TF抗體的存在下，IL8濃度降低至少80%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於16 nM TF抗體的存在下，IL8濃度降低至少90%。
在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於6.4 nM TF抗體的存在下，IL8濃度降低至少50%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於6.4 nM TF抗體的存在下，IL8濃度降低至少60%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於6.4 nM TF抗體的存在下，IL8濃度降低至少70%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於6.4 nM TF抗體的存在下，IL8濃度降低至少80%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於6.4 nM TF抗體的存在下，IL8濃度降低至少90%。
在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於100 nM TF抗體的存在下，顆粒球-巨噬細胞群落刺激因子濃度(GM-CSF濃度)降低至少70%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於100 nM TF抗體的存在下，GM-CSF濃度降低至少80%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於100 nM TF抗體的存在下，GM-CSF濃度降低至少90%。
在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於40 nM TF抗體的存在下，GM-CSF濃度降低至少70%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於40 nM TF抗體的存在下，GM-CSF濃度降低至少80%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於40 nM TF抗體的存在下，GM-CSF濃度降低至少90%。
在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於16 nM TF抗體的存在下，GM-CSF濃度降低至少60%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於16 nM TF抗體的存在下，GM-CSF濃度降低至少70%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於16 nM TF抗體的存在下，GM-CSF濃度降低至少80%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於16 nM TF抗體的存在下，GM-CSF濃度降低至少90%。
在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於6.4 nM TF抗體的存在下，GM-CSF濃度降低至少50%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於6.4 nM TF抗體的存在下，GM-CSF濃度降低至少60%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於6.4 nM TF抗體的存在下，GM-CSF濃度降低至少70%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於6.4 nM TF抗體的存在下，GM-CSF濃度降低至少80%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不少於6.4 nM TF抗體的存在下，GM-CSF濃度降低至少90%。
在一些實施例中，如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之表 10 中所示，與不含抗體之對照條件相比，在100 nM TF抗體的存在下，介白素8之百分比(IL8 %)選自約2%、約9%、約8%、約6%、約13%、約1%、約3%、約4%及約5%。在一些實施例中，此種IL8 %在約1%至約13%的範圍內。在一些實施例中，此種IL8 %為約13%或更少。
在一些實施例中，如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之表 10 中所示，與不含抗體之對照條件相比，在40 nM TF抗體的存在下，IL8 %選自約2%、約8%、約7%、約10%、約14%、約4%、約5%及約6%。在一些實施例中，此種IL8 %在約2%至約14%的範圍內。在一些實施例中，此種IL8 %為約14%或更少。
在一些實施例中，如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之表 10 中所示，與不含抗體之對照條件相比，在16 nM TF抗體的存在下，IL8 %選自約2%、約3%、約10%、約8%、約7%、約16%、約9%、約15%、約5%及約6%。在一些實施例中，此種IL8 %在約2%至約16%的範圍內。在一些實施例中，此種IL8 %為約16%或更少。
在一些實施例中，如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之表 10 中所示，與不含抗體之對照條件相比，在6.4 nM TF抗體的存在下，IL8 %選自約3%、約4%、約11%、約9%、約14%、約22%、約12%、約6%、約5%、約15%、約21%及約8%。在一些實施例中，此種IL8 %在約3%至約22%的範圍內。在一些實施例中，此種IL8 %為約22%或更少。
在一些實施例中，如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之表 11 中所示，與不含抗體之對照條件相比，在100 nM TF抗體的存在下，顆粒球-巨噬細胞群落刺激因子之百分比(GM-CSF %)選自約6%、約7%、約22%、約20%、約12%、約19%、約17%、約25%、約5%、約14%、約11%及約10%。在一些實施例中，此種GM-CSF %在約5%至約25%的範圍內。在一些實施例中，此種GM-CSF %為約25%或更少。
在一些實施例中，如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之表 11 中所示，與不含抗體之對照條件相比，在40 nM TF抗體的存在下，GM-CSF %選自約6%、約7%、約19%、約15%、約18%、約16%、約26%、約5%、約13%、約11%及約10%。在一些實施例中，此種GM-CSF %在約5%至約26%的範圍內。在一些實施例中，此種GM-CSF %為約26%或更少。
在一些實施例中，如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之表 11 中所示，與不含抗體之對照條件相比，在16 nM TF抗體的存在下，GM-CSF %選自約6%、約7%、約22%、約19%、約14%、約32%、約17%、約26%、約5%、約12%、約13%、約9%、約11%及約15%。在一些實施例中，此種GM-CSF %在約5%至約32%的範圍內。在一些實施例中，此種GM-CSF %為約32%或更少。
在一些實施例中，如2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427之表 11 中所示，與不含抗體之對照條件相比，在6.4 nM TF抗體的存在下，GM-CSF %選自約8%、約9%、約24%、約20%、約18%、約39%、約34%、約15%、約21%、約16%、約17%及約10%。在一些實施例中，此種GM-CSF %在約8%至約39%的範圍內。在一些實施例中，此種GM-CSF %為約39%或更少。 2.4. 生殖系列
本文所提供之抗體可包含任何合適的VH 及VL 生殖系列序列。
在一些實施例中，本文所提供之抗體之VH 區來自VH3生殖系列。在一些實施例中，本文所提供之抗體之VH 區來自VH1生殖系列。在一些實施例中，本文所提供之抗體之VH 區來自VH4生殖系列。
在一些實施例中，本文所提供之抗體之VH 區來自VH3-23生殖系列。在一些實施例中，本文所提供之抗體之VH 區來自VH1-18生殖系列。在一些實施例中，本文所提供之抗體之VH 區來自VH3-30生殖系列。在一些實施例中，本文所提供之抗體之VH 區來自VH1-69生殖系列。在一些實施例中，本文所提供之抗體之VH 區來自VH4-31生殖系列。在一些實施例中，本文所提供之抗體之VH 區來自VH4-34生殖系列。在一些實施例中，本文所提供之抗體之VH 區來自VH1-46生殖系列。
在一些實施例中，本文所提供之抗體之VL 區來自VK1生殖系列。在一些實施例中，本文所提供之抗體之VL 區來自VK4生殖系列。在一些實施例中，本文所提供之抗體之VL 區來自VK3生殖系列。
在一些實施例中，本文所提供之抗體之VL 區來自VK1-05生殖系列。在一些實施例中，本文所提供之抗體之VL 區來自VK4-01生殖系列。在一些實施例中，本文所提供之抗體之VL 區來自VK3-15生殖系列。在一些實施例中，本文所提供之抗體之VL 區來自VK3-20生殖系列。在一些實施例中，本文所提供之抗體之VL 區來自VK1-33生殖系列。 2.5. 單特異性及多特異性TF抗體
在一些實施例中，本文所提供之抗體為單特異性抗體。
在一些實施例中，本文所提供之抗體為多特異性抗體。
在一些實施例中，本文所提供之多特異性抗體結合多於一種抗原。在一些實施例中，多特異性抗體結合兩種抗原。在一些實施例中，多特異性抗體結合三種抗原。在一些實施例中，多特異性抗體結合四種抗原。在一些實施例中，多特異性抗體結合五種抗原。
在一些實施例中，本文所提供之多特異性抗體結合TF抗原上之多於一個抗原決定區。在一些實施例中，多特異性抗體結合TF抗原上之兩個抗原決定區。在一些實施例中，多特異性抗體結合TF抗原上之三個抗原決定區。
許多多特異性抗體構築體為此項技術中已知的，且本文所提供之抗體可以任何合適的多特異性合適構築體之形式提供。
在一些實施例中，多特異性抗體包含免疫球蛋白，該免疫球蛋白包含至少兩個不同的重鏈可變區，其各自與共有輕鏈可變區(即 ，「共有輕鏈抗體」)配對。共有輕鏈可變區與兩個不同的重鏈可變區中之各者形成不同的抗原結合域。參見 Merchant等人,Nature Biotechnol. , 1998, 16:677-681，其以引用之方式整體併入。
在一些實施例中，多特異性抗體包含免疫球蛋白，該免疫球蛋白包含連接於此種免疫球蛋白之重鏈或輕鏈之N端或C端中之一或多者的抗體或其片段。參見 Coloma及Morrison,Nature Biotechnol. , 1997, 15:159-163，其以引用之方式整體併入。在一些態樣中，此種抗體包含四價雙特異性抗體。
在一些實施例中，多特異性抗體包含雜交免疫球蛋白，該雜交免疫球蛋白包含至少兩個不同的重鏈可變區及至少兩個不同的輕鏈可變區。參見 Milstein及Cuello,Nature , 1983, 305:537-540；以及Staerz及Bevan,Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 1986, 83:1453-1457；其各自以引用之方式整體併入。
在一些實施例中，多特異性抗體包含免疫球蛋白鏈，其具有減少不具有多特異性的副產物之形成的改變。在一些態樣中，抗體包含一或多個「杵臼(knobs-into-holes)」修飾，如美國專利第5,731,168號中所述，其以引用之方式整體併入。
在一些實施例中，多特異性抗體包含具有一或多個靜電修飾以促進Fc異源多聚體之組裝的免疫球蛋白鏈。參見 WO 2009/089004，其以引用之方式整體併入。
在一些實施例中，多特異性抗體包含雙特異性單鏈分子。參見 Traunecker等人,EMBO J. , 1991, 10:3655-3659；以及Gruber等人,J. Immunol. , 1994, 152:5368-5374；其各自以引用之方式整體併入。
在一些實施例中，多特異性抗體包含藉由多肽連接子連接之重鏈可變域及輕鏈可變域，其中選擇連接子之長度以促進具有所要多特異性之多特異性抗體之組裝。例如，當重鏈可變域及輕鏈可變域藉由具有多於12個胺基酸殘基的多肽連接子連接時，一般形成單特異性scFv。參見 美國專利第4,946,778號及第5,132,405號，其各自以引用之方式整體併入。在一些實施例中，將多肽連接子之長度減少至少於12個胺基酸殘基防止同一多肽鏈上之重鏈及輕鏈可變域之配對，從而使來自一條鏈的重鏈及輕鏈可變域與另一條鏈上的互補域配對。因此，所得的抗體具有多特異性，其中各結合位點之特異性由多於一條多肽鏈貢獻。包含藉由3與12個胺基酸殘基之間的連接子連接之重鏈及輕鏈可變域之多肽鏈主要形成二聚體(稱為雙功能抗體)。在0與2個胺基酸殘基之間的連接子之情況下，三聚體(稱為三功能抗體)及四聚體(稱為四功能抗體)為有利的。然而，除連接子長度之外，寡聚合之確切類型似乎亦取決於胺基酸殘基組成及各多肽鏈中可變域之順序(例如 ，VH -連接子-VL 相對於VL -連接子-VH )。技術人員可基於所要多特異性選擇適當的連接子長度。
在一些實施例中，多特異性抗體包含雙功能抗體。參見 Hollinger等人,Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 1993, 90:6444-6448，其以引用之方式整體併入。在一些實施例中，多特異性抗體包含三功能抗體。參見 Todorovska等人,J. Immunol. Methods , 2001, 248:47-66，其以引用之方式整體併入。在一些實施例中，多特異性抗體包含四功能抗體。參見同上 ，其以引用之方式整體併入。
在一些實施例中，多特異性抗體包含三特異性F(ab’)3衍生物。參見 Tutt等人J. Immunol. , 1991, 147:60-69，其以引用之方式整體併入。
在一些實施例中，多特異性抗體包含交聯抗體。參見 美國專利第4,676,980號；Brennan等人,Science , 1985, 229:81-83；Staerz等人,Nature , 1985, 314:628-631；及EP 0453082；其各自以引用之方式整體併入。
在一些實施例中，多特異性抗體包含由白胺酸拉鍊組裝之抗原結合域。參見 Kostelny等人,J. Immunol. , 1992, 148:1547-1553，其以引用之方式整體併入。
在一些實施例中，多特異性抗體包含互補蛋白域。在一些態樣中，互補蛋白域包含錨定域(AD)以及二聚合及對接域(dimerization and docking domain；DDD)。在一些實施例中，AD及DDD彼此結合，且從而能夠經由「對接及鎖定」(dock and lock；DNL)方法組裝多特異性抗體結構。可組裝具有許多特異性的抗體，包括雙特異性抗體、三特異性抗體、四特異性抗體、五特異性抗體及六特異性抗體。包含互補蛋白域之多特異性抗體描述於例如美國專利第7,521,056號、第7,550,143號、第7,534,866號及第7,527,787號中；其各自以引用之方式整體併入。
在一些實施例中，多特異性抗體包含如美國專利公開案第2008/0069820號中所述之雙重作用Fab(DAF)抗體，該案以引用之方式整體併入。
在一些實施例中，多特異性抗體包含藉由還原兩個親體分子繼之以混合兩個親體分子並再氧化以組裝雜交結構所形成之抗體。參見 Carlring等人,PLoS One , 2011, 6:e22533，其以引用之方式整體併入。
在一些實施例中，多特異性抗體包含DVD-IgTM 。DVD-IgTM 為可結合二或更多種抗原的雙重可變域免疫球蛋白。DVD-IgsTM 描述於美國專利第7,612,181號中，其以引用之方式整體併入。
在一些實施例中，多特異性抗體包含DARTTM 。DARTsTM 描述於Moore等人,Blood , 2011, 117:454-451中，其以引用之方式整體併入。
在一些實施例中，多特異性抗體包含DuoBody® 。DuoBodies® 描述於Labrijn等人,Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 2013, 110:5145-5150；Gramer等人,mAbs , 2013, 5:962-972；以及Labrijn等人,Nature Protocols , 2014, 9:2450-2463中；其各自以引用之方式整體併入。
在一些實施例中，多特異性抗體包含連接於另一抗體或片段的抗體片段。連接可為共價或非共價的。當連接為共價的時，其可呈融合蛋白之形式或經由化學連接子。包含連接於其他抗體的抗體片段之多特異性抗體之說明性實例包括四價雙特異性抗體，在該等抗體中scFv與之IgG之CH3 之C端融合。參見 Coloma及Morrison,Nature Biotechnol. , 1997, 15:159-163。其他實例包括Fab分子連接於免疫球蛋白之恆定區的抗體。參見 Miler等人,J. Immunol. , 2003, 170:4854-4861，其以引用之方式整體併入。可使用任何合適的片段，包括本文所述或此項技術中已知的任何片段。
在一些實施例中，多特異性抗體包含CovX-Body。CovX-Bodies描述於例如Doppalapudi等人,Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 2010, 107:22611-22616中，其以引用之方式整體併入。
在一些實施例中，多特異性抗體包含Fcab抗體，在該抗體中一或多個抗原結合域經引入Fc區。Fcab抗體描述於Wozniak-Knopp等人,Protein Eng. Des. Sel. , 2010, 23:289-297中，其以引用之方式整體併入。
在一些實施例中，多特異性抗體包含TandAb® 抗體。TandAb® 抗體描述於Kipriyanov等人,J. Mol. Biol. , 1999, 293:41-56以及Zhukovsky等人,Blood , 2013, 122:5116中，其各自以引用之方式整體併入。
在一些實施例中，多特異性抗體包含串聯Fab。串聯Fab描述於WO 2015/103072中，其以引用之方式整體併入。
在一些實施例中，多特異性抗體包含ZybodyTM 。ZybodiesTM 描述於LaFleur等人,mAbs , 2013, 5:208-218中，其以引用之方式整體併入。 2.6. 醣基化變異體
在某些實施例中，可改變本文所提供之抗體以提高、降低或消除其醣基化的程度。多肽之醣基化通常為「N連接的」或「O連接的」。
「N連接的」醣基化係指醣部分與天冬醯胺殘基側鏈的連接。三肽序列天冬醯胺-X-絲胺酸及天冬醯胺-X-蘇胺酸(其中X為除脯胺酸之外的任何胺基酸)為將醣部分酶連接至天冬醯胺側鏈的識別序列。因此，多肽中這些三肽序列中任一者之存在產生潛在的醣基化位點。
「O連接的」醣基化係指糖N-乙醯基半乳糖胺、半乳糖或木糖中之一者與羥基胺基酸(最常見的為絲胺酸或蘇胺酸)的連接，但亦可使用5-羥基脯胺酸或5-羥基離胺酸。
可藉由改變胺基酸序列以使得產生或移除上述三肽序列中之一或多者來實現對本文所提供之抗體或來自本文所提供之抗體之N連接的醣基化位點之添加或缺失。可藉由在抗體序列中或向抗體序列(視情況而定)添加、缺失或取代一或多個絲胺酸或蘇胺酸殘基來實現O連接的醣基化位點之添加或缺失。
在一些實施例中，本文所提供之抗體包含不同於天然存在之抗體的醣基化模體。可在本文所提供之抗體中對任何合適的天然存在之醣基化模體進行修飾。例如，免疫球蛋之的結構及醣基化特性為此項技術中已知的且概述於例如Schroeder及Cavacini,J. Allergy Clin. Immunol. , 2010, 125:S41-52中，其以引用之方式整體併入。
在一些實施例中，本文所提供之抗體包含對連接於天冬醯胺297 (Asn 297)的寡醣進行修飾的IgG1 Fc區。由哺乳動物細胞產生之天然存在之IgG1抗體通常包含分支的雙觸角寡醣，其一般藉由N鍵聯連接於Fc區之CH2 域之Asn 297。參見 Wright等人,TIBTECH , 1997, 15:26-32，其以引用之方式整體併入。連接於Asn 297之寡醣可包括各種醣，諸如甘露糖、N-乙醯葡萄胺糖(GlcNAc)、半乳糖及唾液酸，以及連接於雙觸角寡醣結構「主幹(stem)」中之GlcNAc的岩藻醣。
在一些實施例中，連接於Asn 297之寡醣經修飾以產生具有改變之ADCC之抗體。在一些實施例中，寡醣經改變以改進ADCC。在一些實施例中，寡醣經改變以減少ADCC。
在一些態樣中，本文所提供之抗體包含相較於天然存在之IgG1域，在位置Asn 297處具有降低之岩藻醣含量的IgG1域。已知此類Fc域具有改進的ADCC。參見 Shields等人,J. Biol. Chem. , 2002, 277:26733-26740，其以引用之方式整體併入本文。在一些態樣中，此類抗體在位置Asn 297處不包含任何岩藻醣。岩藻醣之量可使用任何合適的方法來確定，例如如WO 2008/077546中所述之方法，該案以引用之方式整體併入。
在一些實施例中，本文所提供之抗體包含等分寡醣，諸如連接於抗體之Fc區之由GlcNAc等分雙觸角寡醣。此類抗體變異體可具有降低之岩藻醣基化及/或改進之ADCC功能。此類抗體變異體之實例描述於例如WO 2003/011878、美國專利第6,602,684號以及美國專利公開案第2005/0123546號中；其各自以引用之方式整體併入。
可併入本文所提供之抗體中的其他說明性醣基化變異體描述於例如美國專利公開案第2003/0157108號、第2004/0093621號、第2003/0157108號、第2003/0115614號、第2002/0164328號、第2004/0093621號、第2004/0132140號、第2004/0110704號、第2004/0110282號、第2004/0109865號；國際專利公開案第2000/61739號、第2001/29246號、第2003/085119號、第2003/084570號、第2005/035586號、第2005/035778號、第2005/053742號、第2002/031140號；Okazaki等人,J. Mol. Biol. , 2004, 336:1239-1249；以及Yamane-Ohnuki等人,Biotech. Bioeng. , 2004, 87: 614-622中，其各自以引用之方式整體併入。
在一些實施例中，本文所提供之抗體包含在連接於Fc區之寡醣中具有至少一個半乳糖殘基的Fc區。此類抗體變異體可具有改進之CDC功能。此類抗體變異體之實例描述於例如WO 1997/30087、WO 1998/58964及WO 1999/22764中；其各自以引用之方式整體併入。
能夠產生去岩藻醣基化抗體的細胞株之實例包括：Lec13 CHO細胞，其為蛋白岩藻醣基化缺陷的(參見 Ripka等人,Arch. Biochem. Biophys. , 1986, 249:533-545；美國專利公開案第2003/0157108號；WO 2004/056312；其各自以引用之方式整體併入)；以及剔除細胞株，諸如α-1,6-岩藻醣基轉移酶基因或FUT8剔除CHO細胞(參見 Yamane-Ohnuki等人,Biotech. Bioeng. , 2004, 87: 614-622；Kanda等人,Biotechnol. Bioeng. , 2006, 94:680-688；及WO 2003/085107；其各自以引用之方式整體併入)。
在一些實施例中，本文所提供之抗體為無醣基化(aglycosylated)抗體。可使用此項技術中已知或本文所述之任何方法來產生無無醣基化抗體。在一些態樣中，藉由修飾抗體以移除所有醣基化位點來產生無醣基化抗體。在一些態樣中，僅自抗體之Fc區移除醣基化位點。在一些態樣中，藉由在不能醣基化的生物體諸如大腸桿菌(E. coli )中表現抗體或藉由在無細胞反應混合物中表現抗體來產生無醣基化抗體。
在一些實施例中，與天然IgG1抗體相比，本文所提供之抗體具有效應子功能降低的恆定區。在一些實施例中，本文所提供之抗體之Fc區之恆定區對Fc受體之親和力小於天然IgG1恆定區對此種Fc受體之親和力。 2.7. 恆定區、Fc區及胺基酸序列變異體
在一些實施例中，本文所提供之抗體包含一或多個恆定區。
在一些實施例中，抗體包含人類Ig恆定域。在一些實施例中，抗體包含來自人類IgA、IgG、IgE、IgD或IgM抗體之恆定區。在一些實施例中，抗體包含來自人類IgG之恆定區。人類IgG可為人類IgG1、人類IgG2、人類IgG3或人類IgG4。
在一些實施例中，抗體包含人類IgG1 CH1域。在一些實施例中，人類IgG1 CH1域序列為如下：ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV (SEQ ID NO: 933)。
在一些實施例中，人類IgG1 CH1域來自特定異型。合適於本文之任何抗體之人類IgG1異型描述於http://www.imgt.org/IMGTrepertoire/Proteins/allotypes/human/IGH/IGHC/G1m_allotypes.html中，其據此以引用之方式整體併入。在特定實施例中，異型為G1m3，本文中亦稱為IGHG1*03.。G1m3，亦稱為IGHG1*03異型，描述於http://www.imgt.org/IMGTrepertoire/Proteins/allotypes/human/IGH/IGHC/G1m_allotypes.html中，其據此以引用之方式併入。
在一些實施例中，異型IGHG1*03之人類IgG1 CH1區包含CH1域序列ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRV (SEQ ID NO: 934)。
在一些實施例中，本文所提供之抗體包含Fc區。Fc區可來自人類IgA、IgG、IgE、IgD或IgM抗體。
在一些實施例中，抗體包含人類IgG Fc區。人類IgG Fc區可為人類IgG1 Fc區、人類IgG2 Fc區、人類IgG3 Fc區、人類IgG4 Fc區。
在特定實施例中，抗體包含人類IgG1 Fc區。人類IgG1 Fc區可包含鉸鏈序列。在一些實施例中，鉸鏈序列為EPKSCDKTHTCP。
人類IgG1 Fc區可包含人類IgG1 CH2域序列。在一些實施例中，人類IgG1 CH2域序列為如下：PCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK (SEQ ID NO: 935)。
人類IgG1 Fc區可包含人類IgG1 CH3域序列。人類IgG1 CH3域序列為如下：GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 936)。在一些實施例中，人類IgG1 CH3域序列進一步包含C端離胺酸(K)。
在一些實施例中，人類IgG1 Fc區包含以下序列：PCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 937)。在一些實施例中，人類IgG1 Fc區序列進一步包含C端離胺酸(K)。
在一些實施例中，人類IgG1 Fc區包含以下序列：EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 938)。在一些實施例中，人類IgG1 Fc區序列進一步包含C端離胺酸(K)。
在一些實施例中，人類IgG1 Fc區屬於特定異型。合適於本文之任何抗體之人類IgG1異型描述於http://www.imgt.org/IMGTrepertoire/Proteins/allotypes/human/IGH/IGHC/G1m_allotypes.html中，其據此以引用之方式整體併入。在特定實施例中，異型為G1m3，本文中亦稱為IGHG1*03.。G1m3，亦稱為IGHG1*03異型，描述於http://www.imgt.org/IMGTrepertoire/Proteins/allotypes/human/IGH/IGHC/G1m_allotypes.html中，其據此以引用之方式併入。
在一些實施例中，人類IgG1異型IGHG1*03 Fc區包含以下CH2序列：PCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK (SEQ ID NO: 935)。
在一些實施例中，人類IgG1異型IGHG1*03 Fc區包含以下CH3序列：GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 939)。在一些實施例中，人類IgG1異型IGHG1*03 Fc區之CH3區進一步包含C端離胺酸(K)。
在一些實施例中，人類IgG1異型IGHG1*03 Fc區包含以下Fc序列：PCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 940)。在一些實施例中，人類IgG1異型IGHG1*03 Fc區序列進一步包含C端離胺酸(K)。
在一些實施例中，人類IgG1異型IGHG1*03 Fc區包含以下Fc序列：EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 941)。在一些實施例中，人類IgG1異型IGHG1*03 Fc區序列進一步包含C端離胺酸(K)。
在某些實施例中，本文所提供之抗體包含與天然存在之Fc區相比具有一或多個胺基酸取代、插入或缺失的Fc區。在一些態樣中，此類取代、插入或缺失產生具有改變之穩定性、醣基化或其他特徵的抗體。在一些態樣中，此類取代、插入或缺失產生無醣基化抗體。
在一些態樣中，本文所提供之抗體之Fc區經修飾以產生對Fc受體之親和力改變的抗體或更具免疫惰性的抗體。在一些實施例中，本文所提供之抗體變異體具有一些但非所有效應子功能。例如，當抗體之半衰期在體內 很重要，但是當某些效應子功能(例如 ，補體激活及ADCC)不必要或有害時，此類抗體可為有用的。
在一些實施例中，本文所提供之抗體之Fc區為包含鉸鏈穩定突變S228P及L235E中之一或多者之人類IgG4 Fc區。參見 Aalberse等人,Immunology , 2002, 105:9-19，其以引用之方式整體併入。在一些實施例中，IgG4 Fc區包含以下突變中之一或多者：E233P、F234V及L235A。參見 Armour等人,Mol. Immunol. , 2003, 40:585-593，其以引用之方式整體併入。在一些實施例中，IgG4 Fc區包含在位置G236處的缺失。
在一些實施例中，本文所提供之抗體之Fc區為包含一或多個降低Fc受體結合的突變之人類IgG1 Fc區。在一些態樣中，該一或多個突變在選自S228 (例如 ，S228A)、L234 (例如 ，L234A)、L235 (例如 ，L235A)、D265 (例如 ，D265A)及N297 (例如 ，N297A)之殘基中。在一些態樣中，抗體包含PVA236突變。PVA236意謂來自IgG1之胺基酸位置233至236的胺基酸序列ELLG (SEQ ID NO: 920)或IgG4之EFLG (SEQ ID NO: 921)經PVA替換。參見 美國專利第9,150,641號，其以引用之方式整體併入。
在一些實施例中，本文所提供之抗體之Fc區如Armour等人,Eur. J. Immunol. , 1999, 29:2613-2624；WO 1999/058572；及/或英國專利申請案第98099518號中所述經修飾；其各自以引用之方式整體併入。
在一些實施例中，本文所提供之抗體之Fc區為包含突變A330S及P331S中之一或多者的人類IgG2 Fc區。
在一些實施例中，本文所提供之抗體之Fc區在選自238、265、269、270、297、327及329之一或多個位置處具有胺基酸取代。參見 美國專利第6,737,056號，其以引用之方式整體併入。此類Fc突變體包括在胺基酸位置265、269、270、297及327中之二或更多者處具有取代的Fc突變體，包括用丙胺酸取代殘基265及297的所謂的「DANA」 Fc突變體。參見 美國專利第7,332,581號，其以引用之方式整體併入。在一些實施例中，抗體包含在胺基酸位置265處的丙胺酸。在一些實施例中，抗體包含在胺基酸位置297處的丙胺酸。
在某些實施例中，本文所提供之抗體包含具有一或多個改進ADCC的胺基酸取代的Fc區，諸如在Fc區之位置298、333及334中之一或多者處的取代。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含具有在位置239、332及330處的一或多個胺基酸取代的Fc區，如Lazar等人,Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 2006,103:4005-4010中所述，其以引用之方式整體併入本文。
在一些實施例中，本文所提供之抗體包含一或多個改進或減弱C1q結合及/或CDC的改變。參見 美國專利第6,194,551號；WO 99/51642；以及Idusogie等人,J. Immunol. , 2000, 164:4178-4184；其各自以引用之方式整體併入本文。
在一些實施例中，本文所提供之抗體包含一或多個增加半衰期的改變。具有增加之半衰期及改進之與新生兒Fc受體(FcRn)結合的抗體描述於例如Hinton等人,J. Immunol. , 2006, 176:346-356；以及美國專利公開案第2005/0014934號中，其各自以引用之方式整體併入。此類Fc變異體包括在IgG之以下Fc區殘基238、250、256、265、272、286、303、305、307、311、312、314、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424、428及434中之一或多者處具有取代的那些變異體。
在一些實施例中，本文所提供之抗體包含一或多種Fc區變異體，如美國專利第7,371,826號、第5,648,260號及第5,624,821號；Duncan及Winter,Nature , 1988, 322:738-740；以及WO 94/29351中所述；其各自以引用之方式整體併入。 2.8. 焦麩胺酸
如此項技術中所已知，在重組蛋白N端處的麩胺酸(E)及麩醯胺(Q)在體外 及體內 可自發地環化以形成焦麩胺酸(pE)。參見 Liu等人,J. Biol. Chem. , 2011, 286:11211-11217，其以引用之方式整體併入本文。
在一些實施例中，本文提供了包含在N端位置處具有pE殘基的多肽序列之抗體。在一些實施例中，本文提供了包含N端殘基自Q轉化為pE的多肽序列之抗體。在一些實施例中，本文提供了包含N端殘基自E轉化為pE的多肽序列之抗體。 2.9. 經半胱胺酸工程改造之抗體變異體
在某些實施例中，本文提供了經半胱胺酸工程改造之抗體，亦稱為「thioMAb」，其中抗體之一或多個殘基經半胱胺酸殘基取代。在特定實施例中，經取代之殘基存在於抗體之溶劑可接觸位點。藉由用半胱胺酸取代此類殘基，反應性硫醇基團經引入抗體之溶劑可接觸位點處，且可用於將抗體與其他部分(諸如藥物部分或連接子-藥物部分)結合，以例如產生免疫結合物。
在某些實施例中，可用半胱胺酸取代下列殘基中之任何一或多者：輕鏈之V205；重鏈Fc區之A118；及重鏈Fc區之S400。可生成經半胱胺酸工程改造之抗體，如例如美國專利第7,521,541號中所述，其以引用之方式整體併入。 3. 抗TF抗體-藥物結合物
本文提供了抗體-藥物結合物(ADC)，其包含與TF及細胞毒性劑特異性結合的抗體。在一些實施例中，細胞毒性劑直接連接至抗TF抗體。在一些實施例中，細胞毒性劑間接連接至抗TF抗體。
在一些實施例中，ADC進一步包含連接子。在一些實施例中，連接子將抗TF抗體連接至細胞毒性劑。
ADC中與抗體結合之細胞毒性劑之數目定義為藥物-抗體比率或DAR。如此項技術中已知，大多數結合方法產生包括各種DAR種類之ADC組成物，其中報導之DAR為個別DAR種類之平均值。因此，當將本文所述之ADC定義為具有特定DAR時，應理解，所提供之數目代表ADC組成物中個別DAR種類之平均值。在一些實施例中，本文所提供之ADC之藥物-抗體比率(DAR)為1。在一些實施例中，本文所提供之ADC之DAR為2。在一些實施例中，本文所提供之ADC之DAR為3。在一些實施例中，本文所提供之ADC之DAR為4。在一些實施例中，本文所提供之ADC之DAR為5。在一些實施例中，本文所提供之ADC之DAR為1-2、1-3、1-4、1-5、2-3、2-4、2-5、3-4、3-5、4-5、1、2、3、4或5。在一些實施例中，本文所提供之ADC之DAR大於5。在一些實施例中，藉由UV/vis光譜、疏水性相互作用層析法(HIC)及/或逆相液相層析法分離聯飛行時間偵測及質量表徵(RP-UPLC/質譜)來量測DAR。在一些實施例中，亦可藉由此項技術中已知的各種技術來分析藥物連接之形式之分佈(例如，DAR0、DAR1、DAR2等種類之分數)，包括MS (具有或不具有伴隨的色譜分離步驟)、疏水性相互作用層析法、逆相HPLC或等電聚焦凝膠電泳(IEF)(參見例如Sun等人, Bioconj Chem., 28:1371-81 (2017)；Wakankar等人, mAbs, 3:161-172 (2011))。 4. 用於製備TF抗體之方法 4.1. TF抗原製備
用於分離本文所提供之抗體的TF抗原可為完整TF或TF之片段。TF抗原可為例如經分離之蛋白或在細胞表面上表現之蛋白之形式。
在一些實施例中，TF抗原為TF之非天然存在之變異體，諸如具有自然界中不存在的胺基酸序列或轉譯後修飾的TF蛋白。
在一些實施例中，藉由移除例如細胞內或跨膜序列或訊息序列來截短TF抗原。在一些實施例中，TF抗原在其C端處融合至人類IgG1 Fc域或聚組胺酸標籤。 4.2. 單株抗體之製備方法
單株抗體可例如使用Kohler等人,Nature , 1975, 256:495-497 (其以引用之方式整體併入)首先描述之融合瘤方法及/或藉由重組DNA方法(參見例如， 美國專利第4,816,567號，其以引用之方式整體併入)獲得。單株抗體亦可例如使用噬菌體顯示文庫(參見例如 ，美國專利第8,258,082號，其以引用之方式整體併入)，或替代地，使用基於酵母之文庫(參見例如， 美國專利低8,691,730號，其以引用之方式整體併入)獲得。
在融合瘤方法中，小鼠或其他適當的宿主動物經免疫以引發產生或能夠產生將與用於免疫之蛋白特異性結合的抗體的淋巴球。替代地，可在體外 免疫淋巴球。然後使用合適的融合劑諸如聚乙二醇將淋巴球與骨髓瘤細胞融合，以形成融合瘤細胞。參見 Goding J.W.,Monoclonal Antibodies: Principles and Practice 第3版 (1986) Academic Press, San Diego, CA，其以引用之方式整體併入。
將融合瘤細胞接種於合適的培養基中並在其中生長，該培養基含有一或多種抑制未融合的親代骨髓瘤細胞之生長或存活的物質。例如，如果親代骨髓瘤細胞缺乏次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖基轉移酶(HGPRT或HPRT)，則融合瘤之培養基通常將包括次黃嘌呤、胺基蝶呤及胸腺嘧啶(HAT培養基)，這些物質阻止HGPRT缺陷型細胞之生長。
有用的骨髓瘤細胞為有效融合所選抗體產生細胞、支持其穩定地高水準產生抗體且對培養基條件(諸如存在或不存在HAT培養基)敏感的那些骨髓瘤細胞。其中，較佳骨髓瘤細胞株為鼠骨髓瘤細胞株，諸如來源於MOP-21及MC-11小鼠腫瘤(可購自Salk Institute Cell Distribution Center, San Diego, CA)以及SP-2或X63-Ag8-653細胞(可購自American Type Culture Collection, Rockville, MD)的那些。亦描述了用於產生人類單株抗體的人類骨髓瘤及小鼠-人類異源骨髓瘤細胞株。參見例如， Kozbor,J. Immunol. , 1984, 133:3001，其以引用之方式整體併入。
在鑑別出產生具有所要特異性、親和力及/或生物學活性之抗體的融合瘤細胞之後，可藉由限制稀釋程序來對所選殖株進行亞選殖，並藉由標準方法使其生長。參見 Goding，同上 。用於此目的的合適培養基包括例如D-MEM或RPMI-1640培養基。此外，融合瘤細胞可在動物中作為腹水腫瘤在體內 生長。
編碼單株抗體之DNA可經容易地分離並使用習知程序(例如 ，藉由使用能夠特異性結合編碼單株抗體之重鏈及輕鏈的基因的寡核苷酸探針)進行定序。因此，融合瘤細胞可充當編碼具有所要特性的抗體之DNA之有用來源。一旦分離，可將DNA置於表現載體中，然後將其轉染至宿主細胞中，諸如細菌(例如 ，大腸桿菌)、酵母(例如 ，釀酒酵母(Saccharomyces )或畢赤酵母(Pichia sp. ))、COS細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或不以其他方式產生抗體的骨髓瘤細胞中，以產生單株抗體。 4.3. 製備嵌合抗體之方法
製備嵌合抗體之說明性方法描述於例如美國專利第4,816,567號；以及Morrison等人,Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 1984, 81:6851-6855；其各自以引用之方式整體併入。在一些實施例中，藉由使用重組技術將非人類可變區(例如 ，來源於小鼠、大鼠、倉鼠、兔或非人類靈長類諸如猴之可變區)與人類恆定區組合來製備嵌合抗體。 4.4. 製備人源化抗體之方法
可藉由用對應的人類抗體序列替換非人類單株抗體之大部分或所有結構部分來生成人源化抗體。因此，生成了雜交分子，在該雜交分子中僅抗原特異性變項或CDR由非人類序列組成。獲得人源化抗體的方法包括描述於例如以下中的那些：Winter及Milstein,Nature , 1991, 349:293-299；Rader等人,Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A. , 1998, 95:8910-8915；Steinberger等人,J. Biol. Chem. , 2000, 275:36073-36078；Queen等人,Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. , 1989, 86:10029-10033；以及美國專利第5,585,089號、第5,693,761號、第5,693,762號及第6,180,370號；其各自以引用之方式整體併入。 4.5. 製備人類抗體之方法
人類抗體可藉由此項技術中已知的多種技術生成，例如藉由使用基因轉殖動物(例如 ，人源化小鼠)。參見，例如， Jakobovits等人,Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A ., 1993, 90:2551；Jakobovits等人,Nature , 1993, 362:255-258；Bruggermann等人,Year in Immuno. , 1993, 7:33；以及美國專利第5,591,669號、第5,589,369號及第5,545,807號；其各自以引用之方式整體併入。人類抗體亦可來源於噬菌體顯示文庫(參見例如， Hoogenboom等人,J. Mol. Biol. , 1991, 227:381-388；Marks等人,J. Mol. Biol. , 1991, 222:581-597；以及美國專利第5,565,332號及第5,573,905號；其各自以引用之方式整體併入)。亦可藉由體外 激活之B細胞來生成人類抗體(參見例如， 美國專利第5,567,610號及第5,229,275號，其各自以引用之方式整體併入)。人類抗體亦可來源於基於酵母之文庫(參見例如， 美國專利第8,691,730號，其以引用之方式整體併入)。 4.6. 製備抗體片段之方法
本文所提供之抗體片段可藉由任何合適的方法來製備，包括本文所述之說明性方法或此項技術中已知的那些方法。合適的方法包括重組技術及全抗體之蛋白水解消化。製備抗體片段之說明性方法描述於例如Hudson等人,Nat. Med. , 2003, 9:129-134中，其以引用之方式整體併入。製備scFv抗體之方法描述於例如Plückthun,The Pharmacology of Monoclonal Antibodies , 第113卷, Rosenburg及Moore編, Springer-Verlag, New York, 第269-315頁 (1994)；WO 93/16185；以及美國專利第5,571,894號及第5,587,458號中；其各自以引用之方式整體併入。 4.7. 替代性支架的製備方法
本文所提供之替代性支架可藉由任何合適的方法來製備，包括本文所述之說明性方法或此項技術中已知的那些方法。例如，製備AdnectinsTM 之方法描述於Emanuel等人,mAbs , 2011, 3:38-48中，其以引用之方式整體併入。製備iMab之方法描述於美國專利公開案第2003/0215914號中，其以引用之方式整體併入。製備Anticalin® 之方法描述於Vogt及Skerra,Chem. Biochem. , 2004, 5:191-199中，其以引用之方式整體併入。製備Kunitz域之方法描述於Wagner等人,Biochem. & Biophys. Res. Comm. , 1992, 186:118-1145中，其以引用之方式整體併入。製備硫氧還蛋白肽適體之方法提供於Geyer及Brent,Meth. Enzymol. , 2000, 328:171-208中，其以引用之方式整體併入。製備親和抗體之方法提供於Fernandez,Curr. Opinion in Biotech. , 2004, 15:364-373中，其以引用之方式整體併入。製備DARPins之方法提供於Zahnd等人,J. Mol. Biol. , 2007, 369:1015-1028中，其以引用之方式整體併入。製備人泛素之方法提供於Ebersbach等人,J. Mol. Biol. , 2007, 372:172-185中，其以引用之方式整體併入。製備四連接素之方法提供於Graversen等人,J. Biol. Chem. , 2000, 275:37390-37396中，其以引用之方式整體併入。製備高親和性多聚體之方法提供於Silverman等人,Nature Biotech. , 2005, 23:1556-1561中，其以引用之方式整體併入。製備Fynomer之方法提供於Silacci等人,J. Biol. Chem. , 2014, 289:14392-14398中，其以引用之方式整體併入。
關於替代性支架之進一步資訊提供於Binz等人,Nat. Biotechnol. , 2005 23:1257-1268；以及Skerra,Current Opin. in Biotech. , 2007 18:295-304中，其各自以引用之方式整體併入。 4.8. 製備多特異性抗體之方法
本文所提供之多特異性抗體可藉由任何合適的方法來製備，包括本文所述之說明性方法或此項技術中已知的那些方法。製備常見輕鏈抗體之方法描述於Merchant等人,Nature Biotechnol. , 1998, 16:677-681中，其以引用之方式整體併入。製備四價雙特異性抗體之方法描述於Coloma及Morrison,Nature Biotechnol ., 1997, 15:159-163中，其以引用之方式整體併入。製備雜交免疫球蛋白之方法描述於Milstein及Cuello,Nature , 1983, 305:537-540；以及Staerz及Bevan,Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 1986, 83:1453-1457中；其各自以引用之方式整體併入。製備具有杵臼修飾之免疫球蛋白之方法描述於美國專利第5,731,168號中，其以引用之方式整體併入。製備具有靜電修飾之免疫球蛋白之方法提供於WO 2009/089004中，其以引用之方式整體併入。製備雙特異性單鏈抗體之方法描述於Traunecker等人,EMBO J. , 1991, 10:3655-3659；及Gruber等人,J. Immunol. , 1994, 152:5368-5374中；其各自以引用之方式整體併入。製備連接子長度可變化的單鏈抗體之方法描述於美國專利第4,946,778號及第5,132,405號中，其各自以引用之方式整體併入。製備雙功能抗體之方法描述於Hollinger等人,Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 1993, 90:6444-6448中，其以引用之方式整體併入。製備三功能抗體及四功能抗體之方法描述於Todorovska等人,J. Immunol. Methods , 2001, 248:47-66中，其以引用之方式整體併入。製備三特異性F(ab')3衍生物之方法描述於Tutt等人J. Immunol. , 1991, 147:60-69中，其以引用之方式整體併入。製備交聯抗體之方法描述於美國專利第4,676,980號；Brennan等人,Science , 1985, 229:81-83；Staerz等人,Nature , 1985, 314:628-631；及EP 0453082中；其各自以引用之方式整體併入。製備由白胺酸拉鍊組裝之抗原結合域之方法描述於Kostelny等人,J. Immunol. , 1992, 148:1547-1553中，其以引用之方式整體併入。經由DNL方法製備抗體之方法描述於美國專利第7,521,056號；第7,550,143號；第7,534,866號及第7,527,787號中；其各自以引用之方式整體併入。製備抗體及非抗體分子之雜交種之方法描述於WO 93/08829 (其以引用之方式整體併入)之此類抗體之實例中。製備DAF抗體之方法描述於美國專利公開案第2008/0069820號中，其以引用之方式整體併入。經由還原及氧化製備抗體之方法描述於Carlring等人,PLoS One , 2011, 6:e22533中，其以引用之方式整體併入。製備DVD-IgsTM 之方法描述於美國專利第7,612,181號中，其以引用之方式整體併入。製備DARTsTM 之方法描述於Moore等人,Blood , 2011, 117:454-451中，其以引用之方式整體併入。製備DuoBodies® 之方法描述於Labrijn等人,Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 2013, 110:5145-5150；Gramer等人,mAbs , 2013, 5:962-972；及Labrijn等人,Nature Protocols , 2014, 9:2450-2463中；其各自以引用之方式整體併入。製備包含與IgG之CH3 之C端融合之scFv的抗體之方法描述於Coloma及Morrison,Nature Biotechnol. , 1997, 15:159-163中，其以引用之方式整體併入。製備Fab分子連接至免疫球蛋白之恆定區的抗體之方法描述於Miler等人,J. Immunol. , 2003, 170:4854-4861中，其以引用之方式整體併入。製備CovX-Bodies之方法描述於Doppalapudi等人,Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 2010, 107:22611-22616中，其以引用之方式整體併入。製備Fcab抗體之方法描述於Wozniak-Knopp等人,Protein Eng. Des. Sel. , 2010, 23:289-297中，其以引用之方式整體併入。製備TandAb® 抗體之方法描述於Kipriyanov等人,J. Mol. Biol. , 1999, 293:41-56及Zhukovsky等人,Blood , 2013, 122:5116中，其各自以引用之方式整體併入。製備串聯Fab之方法描述於WO 2015/103072中，其以引用之方式整體併入。製備ZybodiesTM 之方法描述於LaFleur等人,mAbs , 2013, 5:208-218中，其以引用之方式整體併入。 4.9. 製備變異體之方法
在一些實施例中，本文所提供之抗體為親體抗體之親和力成熟的變異體，其可例如使用基於噬菌體文庫之親和力成熟技術來生成。簡而言之，可使一或多個CDR殘基突變，且將變異體抗體或其部分在噬菌體上顯示並篩選親和力。此類改變可在CDR「熱點」或在體細胞成熟過程期間經歷高頻突變的由密碼子編碼之殘基(參見 Chowdhury,Methods Mol. Biol. , 2008, 207:179-196，其以引用之方式整體併入)及/或與抗原接觸的殘基中進行。
可使用任何適合方法將可變性引入編碼抗體之一或多個多核苷酸序列中，包括易錯PCR、鏈混排及寡核苷酸定向誘變諸如三核苷酸定向誘變(TRIM)。在一些態樣中，若干CDR殘基(例如 ，一次4-6個殘基)經隨機化。可例如使用丙胺酸掃描誘變或建模來特異性鑑別參與抗原結合的CDR殘基。特別是CDR-H3及CDR-L3通常為突變之標靶。
將多樣性引入可變區及/或CDR中可用於產生次級文庫。然後，篩選次級文庫以鑑別具有改進之親和力的抗體變異體。藉由自次級文庫之構築及再選擇進行的親和力成熟已描述於例如Hoogenboom等人,Methods in Molecular Biology , 2001, 178:1-37中，其以引用之方式整體併入。 4.10. 載體、宿主細胞及重組方法
亦提供了編碼TF抗體的經分離之核酸、包含核酸之載體以及包含載體及核酸之宿主細胞以及用於產生抗體的重組技術。
為了重組產生抗體，可將編碼其的一或多個核酸分離並插入可複製載體中以用於進一步選殖(即 DNA之擴增)或表現。在一些態樣中，可藉由同源重組產生核酸，例如，如美國專利第5,204,244號中所述，其以引用之方式整體併入。
許多不同的載體在此項技術中為已知的。載體組分通常包括以下種之一或多者：訊息序列、複製起點、一或多個標記基因、增強子元件、啟動子及轉錄終止序列，例如，如美國專利第5,534,615號中所述，其以引用之方式整體併入。
下面提供了合適的宿主細胞之說明性實例。這些宿主細胞並不意謂具有限制性，且任何合適的宿主細胞可用於產生本文所提供之抗體。
合適的宿主細胞包括任何原核(例如 ，細菌)細胞、低等真核(例如 ，酵母)細胞或高等真核(例如 ，哺乳動物)細胞。合適的原核生物包括真細菌，諸如革蘭氏陰性或革蘭氏陽性生物體，例如腸桿菌科諸如艾氏菌屬(Escherichia )(大腸桿菌)、腸桿菌屬(Enterobacter )、伊文氏桿菌屬(Erwinia )、克留氏菌屬(Klebsiella )、變形桿菌屬(Proteus )、沙氏桿菌屬(Salmonella )(鼠傷寒沙氏桿菌(S. typhimurium ))、沙雷氏菌屬(Serratia )(黏質沙雷氏菌(S. marcescans ))、志賀桿菌屬(Shigella )、桿菌(Bacilli )(枯草桿菌(B.subtilis )及地衣桿菌(B.licheniformis ))、假單胞菌屬(Pseudomonas )(銅綠假單胞菌(P. aeruginosa ))及鏈黴菌屬(Streptomyces )。一種有用的大腸桿菌選殖宿主為大腸桿菌294，但其他菌株諸如大腸桿菌B、大腸桿菌X1776及大腸桿菌W3110亦為合適的。
除原核生物外，真核微生物諸如絲狀真菌(filamentous fungi)或酵母亦為TF抗體編碼載體之合適的選殖或表現宿主。釀酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae )或普通烘焙用酵母(common baker's yeast)為低等真核宿主微生物中常用的。然而，許多其他屬、種及菌株為可獲得且為有用的，諸如粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe )、克魯維酵母屬(Kluyveromyces ) (乳酸克魯維酵母(K. lactis )、脆壁克魯維酵母(K. fragilis )、保加利亞克魯維酵母(K. bulgaricus )、威肯克魯維酵母(K. wickeramii )、瓦爾特克魯維酵母(K. waltii )、果蠅克魯維酵母(K. drosophilarum )、耐熱克魯維酵母(K. thermotolerans )及馬克斯克魯維酵母(K. marxianus ))、耶氏酵母屬(Yarrowia )、巴氏畢赤酵母(Pichia pastoris )、念珠菌屬(Candida ) (白色念珠菌(C. albicans ))、瑞氏木黴(Trichoderma reesia )、粗糙鏈孢黴(Neurospora crassa )、許旺酵母屬(Schwanniomyces ) (西方許旺酵母(S. occidentalis ))以及絲狀真菌諸如例如青黴菌屬(Penicillium )、彎頸黴屬(Tolypocladium )及麯黴屬(Aspergillus ) (構巢麯黴(A. nidulans )和黑麯黴(A. niger ))。
有用的哺乳動物宿主細胞包括COS-7細胞、HEK293細胞、幼倉鼠腎(BHK)細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞、小鼠賽特利細胞、非洲綠猴腎細胞(VERO-76)及其類似細胞。
用於產生本發明之TF抗體的宿主細胞可在多種培養基中培養。可商購獲得之培養基，諸如例如Ham's F10、最小必需培養基(Minimal Essential Medium；MEM)、RPMI-1640以及達爾伯克氏改良伊格爾培養基(Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium；DMEM)，適於培養宿主細胞。此外，可使用Ham等人,Meth. Enz. , 1979, 58:44；Barnes等人,Anal. Biochem. , 1980, 102:255；以及美國專利第4,767,704號、第4,657,866號、第4,927,762號、第4,560,655號及第5,122,469號；或WO 90/03430及WO 87/00195中所述之任何培養基。前述參考文獻各自以引用之方式整體併入。
這些培養基中之任一者均可根據需要補充有激素及/或其他生長因子(諸如胰島素、轉鐵蛋白或表皮生長因子)、鹽(諸如氯化鈉、鈣、鎂及磷酸鹽)、緩衝液(諸如HEPES)、核苷酸(諸如腺嘌呤核苷及胸腺嘧啶核苷)、抗生素、微量元素(定義為通常以在微莫耳範圍內的最終濃度存在之無機化合物)以及葡萄糖或等效的能量源。也可以熟習此項技術者已知的適當濃度包含任何其他必需補充劑。
培養條件，諸如溫度、pH及其類似者，為先前與選擇用於表現的宿主細胞一起使用的那些條件且對於普通技術人員而言為顯而易見的。
當使用重組技術時，抗體可在細胞內、在周質空間中產生或直接分泌至培養基中。如果抗體在細胞內產生，則作為第一步，例如藉由離心或超濾移除顆粒碎片(宿主細胞或裂解片段)。例如，Carter等人 (Bio/Technology , 1992, 10:163-167，其以引用之方式整體併入)描述了用於分離出分泌至大腸桿菌之周質空間的抗體之程序。簡而言之，在約30分鐘內，在乙酸鈉(pH 3.5)、EDTA及苯甲基磺醯氟(PMSF)之存在下解凍細胞漿(cell paste)。可藉由離心移除細胞碎片。
在一些實施例中，抗體在無細胞體系中產生。在一些態樣中，無細胞體系為體外轉錄及轉譯系統，如Yin等人,mAbs , 2012, 4:217-225中所述，其以引用之方式整體併入。在一些態樣中，無細胞體系利用來自真核細胞或原核細胞之無細胞提取物。在一些態樣中，原核細胞為大腸桿菌 。抗體之無細胞表現可為有用的，例如，在抗體以不溶性聚集體形式在細胞中積累的情況下或在周質表現之產率較低的情況下。
在將抗體分泌到培養基中的情況下，通常首先使用可商購獲得之蛋白濃縮過濾器(例如，Amicon® 或Millipore® Pellcon® 超濾單元)濃縮此類表現體系之上清液。前述任一步驟中均可包括蛋白酶抑制劑諸如PMSF以抑制蛋白水解，且可包括抗生素以防止不定污染物之生長。
可使用例如氫氧磷灰石層析法、凝膠電泳、透析及親和層析法來純化由細胞製備之抗體組成物，其中親和層析法為特別有用的純化技術。蛋白A作為親和配體之適用性取決於抗體中存在之任何免疫球蛋白Fc域之種類及同型。蛋白A可用於純化包含人類γ1、γ2或γ4重鏈之抗體(Lindmark等人,J. Immunol. Meth. , 1983, 62:1-13，其以引用之方式整體併入)。蛋白G可用於所有小鼠同型及人類γ3 (Guss等人,EMBO J. , 1986, 5:1567-1575，其以引用之方式整體併入)。
親和配體所連接的基質最通常為瓊脂糖，但亦可使用其他基質。力學穩定的基質(諸如孔受控之玻璃(controlled pore glass)或聚(苯乙烯二乙烯基)苯)實現與用瓊脂糖所達成的相比更快的流速及更短的處理時間。在抗體包含CH3 域之情況下，BakerBond ABX® 樹脂可用於純化。
用於蛋白純化的其他技術，諸如離子交換柱上分餾、乙醇沉澱、逆相HPLC、矽膠層析法、肝素Sepharose® 層析法、層析聚焦、SDS-PAGE及硫酸銨沉澱亦為可用的，並且可由熟習此項技術者應用。
在任何一或多個初步純化步驟之後，可使用pH在約2.5至約4.5之間的溶析緩衝液對包含感興趣之抗體及污染物之混合物進行低pH疏水性相互作用層析法，通常在低鹽濃度下(例如 ，約0至約0.25 M鹽)進行。 5. 細胞毒性劑
在一些實施例中，本文所提供之ADC包含細胞毒性劑。本文所提供之細胞毒性劑包括此項技術中已知之各種抗腫瘤劑或抗癌劑。在一些實施例中，細胞毒性劑引起癌細胞之破壞。在一些實施例中，細胞毒性劑抑制癌細胞之生長或增殖。
合適的細胞毒性劑包括抗血管生成劑、促凋亡劑、抗有絲分裂劑、抗激酶劑、烷化劑、激素、激素促效劑、激素拮抗劑、趨化介素、藥物、前藥、毒素、酶、抗代謝藥、抗生素、生物鹼及放射性同位素。
在一些實施例中，細胞毒性劑包含以下中的至少一種：卡奇黴素、喜樹鹼、卡鉑、伊立替康、SN-38、環磷醯胺、阿糖胞苷、達卡巴仁、歐洲紫杉醇、更生黴素、道諾黴素、多柔比星、依託泊苷、伊達比星、拓撲替康、長春花屬生物鹼、美登木素生物鹼、美登木素生物鹼類似物、吡咯并苯二氮䓬、類紫杉醇、倍癌黴素、尾海兔素、阿司他丁及其衍生物。
在某些實施例中，細胞毒性劑為阿司他丁衍生物。在某些實施例中，阿司他丁衍生物為單甲基阿司他丁E部分(MMAE)。在某些實施例中，阿司他丁衍生物為單甲基阿司他丁F (MMAF)。在一些實施例中，阿司他丁衍生物為國際專利申請公開案第WO 2016/041082號中所述之阿司他丁衍生物之一。在一些實施例中，阿司他丁衍生物為來源於具有通式I 之化合物之部分：
Figure 02_image057
式 I 其中：X為* -C(O)NHCH(CH2 (R2 ))-+ ，其中*及+表示如式I 中所指示之各別連接點，或X不存在；R1 選自由以下組成之群：
Figure 02_image005
、
Figure 02_image007
、
Figure 02_image009
、
Figure 02_image011
及
Figure 02_image013
， 其中#及%表示如式I 中所指示之各別連接點；且R2 為苯基。
在一些實施例中，在具有通式I 之化合物中，R1 選自由以下組成之群：
Figure 02_image015
、
Figure 02_image017
及
Figure 02_image019
。
在一些實施例中，在具有通式I 之化合物中，化合物由式II 表示：
Figure 02_image069
。式 II
在一些實施例中，在具有通式II 之化合物中，R1 選自由以下組成之群：
Figure 02_image015
、
Figure 02_image017
及
Figure 02_image019
。
在一些實施例中，在具有通式II 之化合物中，R1 選自由以下組成之群：
Figure 02_image015
及
Figure 02_image017
。
在一些實施例中，在具有通式II 之化合物中，R1 為：
Figure 02_image015
。
在一些實施例中，在具有通式I 之化合物中，化合物由式III 表示：
Figure 02_image071
。式 III
在一些實施例中，在具有通式III 之化合物中，R1 選自由以下組成之群：
Figure 02_image015
、
Figure 02_image017
及
Figure 02_image019
。
在一些實施例中，在具有通式III 之化合物中，R1 選自由以下組成之群：
Figure 02_image017
及
Figure 02_image019
。
在一些實施例中，在具有通式III 之化合物中，R1 為：
Figure 02_image017
。
在某些實施例中，具有式I 之 化合物為化合物9 ：
Figure 02_image073
化合物9
應理解，在多個實施例中，在本揭露之剩餘部分中對具有通式I 之化合物之提及包括具有通式II 及通式III 之化合物，其程度就如同個別地陳述此等式中之各者之實施例均特定地經陳述一般。
在一些實施例中，細胞毒性劑為診斷劑，諸如放射性同位素、金屬螯合劑、酶、螢光化合物、生物發光化合物或化學發光化合物。
在一些實施例中，細胞毒性劑為安全性改良之細胞毒性有效載荷例如XMT-1267以及Trail等人,Pharmacol Ther , 2018, 181:126-142中所述之其他細胞毒性有效載荷。
在某些實施例中，本揭露之ADC包含經由連接子(L)與阿司他丁衍生物(毒素)結合之TF抗體。在某些實施例中，ADC包含：(a) 抗原結合蛋白(Ab)，其結合人類組織因子(TF)之細胞外域，其中該Ab包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3，其中 (i) 該VH-CDR1包含SEQ ID NO: 872，該VH-CDR2包含SEQ ID NO: 873，該VH-CDR3包含SEQ ID NO: 874，該VL-CDR1包含SEQ ID NO: 875，該VL-CDR2包含SEQ ID NO: 876，且該VL-CDR3包含SEQ ID NO: 877，(ii) 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A3之抗體，(iii) 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A之抗體，(i) 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5之抗體，(v) 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5-T之抗體，或(vi) 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25G1之抗體；且(b) 一或多個連接子-毒素部分，其由式IV 表示：
Figure 02_image003
式 IV 其中：X為* -C(O)NHCH(CH2 (R2 ))-+ ，其中*及+表示如式IV 中所指示之各別連接點，或X不存在；L為連接子；!表示L與該Ab之連接點，其中L通過共價鍵連接至該Ab；R1 選自由以下組成之群：
Figure 02_image005
、
Figure 02_image007
、
Figure 02_image009
、
Figure 02_image011
及
Figure 02_image013
， 其中#及%表示如式IV 中所指示之各別連接點；且R2 為苯基。
在一些實施例中，在具有通式IV 之連接子-毒素部分中，X不存在。
在一些實施例中，在具有通式IV之連接子-毒素部分中，L為可裂解的連接子。
在一些實施例中，在具有通式IV之連接子-毒素部分中，L為含肽連接子。
在一些實施例中，具有通式IV之連接子-毒素部分由通式V 表示：
Figure 02_image021
式 V 其中R1 、L及!如上文針對通式IV 所定義。
在一些實施例中，在具有通式V 之連接子-毒素部分中，R1 選自由以下組成之群：
Figure 02_image015
、
Figure 02_image017
及
Figure 02_image019
。
在一些實施例中，在具有通式V 之連接子-毒素部分中，R1 選自由以下組成之群：
Figure 02_image015
及
Figure 02_image017
。
在一些實施例中，在具有通式V 之連接子-毒素部分中，R1 為：
Figure 02_image015
。
在一些實施例中，在具有通式V 之連接子-毒素部分中，L為可裂解的連接子。
在一些實施例中，在具有通式V 之連接子-毒素部分中，L為含肽連接子。
在一些實施例中，在具有通式V 之連接子-毒素部分中，L為蛋白酶可裂解的連接子。
在一些實施例中，在具有通式IV 或通式V 之連接子-毒素部分中，L為選自以下之一的連接子：N-(β-順丁烯二醯亞胺基丙氧基)-N-羥基琥珀醯亞胺酯(BMPS)、N-(ε-順丁烯二醯亞胺基己醯基氧基)琥珀醯亞胺酯(EMCS)、N-[γ-順丁烯二醯亞胺基丁醯基氧基]琥珀醯亞胺酯(GMBS)、1,6-己烷-雙-乙烯基碸(HBVS)、琥珀醯亞胺基4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-羧基-(6-醯胺基己酸酯)(LC-SMCC)、間順丁烯二醯亞胺基苯甲醯基-N-羥基琥珀醯亞胺酯(MBS)、4-(4-N-順丁烯二醯亞胺基苯基)丁醯肼(MPBH)、3-(溴乙醯胺基)丙酸琥珀醯亞胺酯(SBAP)、碘乙酸琥珀醯亞胺酯(SIA)、(4-碘乙醯基)胺基苯甲酸琥珀醯亞胺酯(SIAB)、N-琥珀醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫)丙酸酯(SPDP)、N-琥珀醯亞胺基-4-(2-吡啶基硫)戊酸酯(SPP)、4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸琥珀醯亞胺酯(SMCC)、4-(對順丁烯二醯亞胺基苯基)丁酸琥珀醯亞胺酯(SMPB)、琥珀醯亞胺基6-[(β-順丁烯二醯亞胺基丙醯胺基)己酸酯](SMPH)、亞胺基硫雜環戊烷(IT)、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SIAB、磺基-SMCC、磺基-SMPB及琥珀醯亞胺基-(4-乙烯基碸)苯甲酸酯(SVSB)。
在一些實施例中，在具有通式IV 或通式V 之連接子-毒素部分中，L包含具有下式之聚乙二醇鏈：
Figure 02_image023
其中g為1-20之整數。
在一些實施例中，在具有通式IV 或通式V 之連接子-毒素部分中，g為3。
本文亦涵蓋包含與具有通式IV 或通式V 之連接子-毒素結合之TF抗體之ADC，其中連接子具有如下文所述之通式VIII 或通式IX 。
在某些實施例中，本揭露之包含經由連接子(L)與阿司他丁衍生物(毒素)結合之組織因子(TF)抗體之ADC具有通式VI ：
Figure 02_image025
式 VI 其中：Ab表示TF抗體；n為大於或等於1之整數；X為* -C(O)NHCH(CH2 (R2 ))-+ ，其中*及+表示如式VI 中所指示之各別連接點，或X不存在；L為連接子；其中L通過共價鍵連接至Ab；R1 選自由以下組成之群：
Figure 02_image005
、
Figure 02_image007
、
Figure 02_image009
、
Figure 02_image011
及
Figure 02_image013
， 其中#及%表示如式VI 中所指示之各別連接點；且R2 為苯基。
在一些實施例中，在具有通式VI 之ADC中，n為1至10之整數。在一些實施例中，在具有通式VI 之ADC中，n為選自由1、2、3、4及5組成之群之整數。在一些實施例中，在具有通式VI 之ADC中，n為選自由2、3及4組成之群之整數。
在一些實施例中，在具有通式VI 之ADC中，R1 選自由以下組成之群：
Figure 02_image015
、
Figure 02_image017
及
Figure 02_image019
。
在一些實施例中，在具有通式VI 之ADC中，X不存在。
在一些實施例中，在具有通式VI 之ADC中，R1 選自由以下組成之群：
Figure 02_image015
、
Figure 02_image017
及
Figure 02_image019
，且X不存在。
在一些實施例中，在具有通式VI 之ADC中，R1 選自由以下組成之群：
Figure 02_image015
及
Figure 02_image017
。
在一些實施例中，在具有通式VI 之ADC中，R1 選自由以下組成之群：
Figure 02_image015
及
Figure 02_image017
，且X不存在。
在一些實施例中，在具有通式VI 之ADC中，R1 為：
Figure 02_image015
。
在一些實施例中，在具有通式VI 之ADC中，R1 為：
Figure 02_image015
，且X不存在。
在一些實施例中，在具有通式VI 之ADC中，L為可裂解的連接子。在一些實施例中，在具有通式VI 之ADC中，L為含肽連接子。在一些實施例中，在具有通式VI 之ADC中，L為蛋白酶可裂解的連接子。
在一些實施例中，在具有通式VI 之ADC中，L為選自以下之一的連接子：N-(β-順丁烯二醯亞胺基丙氧基)-N-羥基琥珀醯亞胺酯(BMPS)、N-(ε-順丁烯二醯亞胺基己醯基氧基)琥珀醯亞胺酯(EMCS)、N-[γ-順丁烯二醯亞胺基丁醯基氧基]琥珀醯亞胺酯(GMBS)、1,6-己烷-雙-乙烯基碸(HBVS)、琥珀醯亞胺基4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-羧基-(6-醯胺基己酸酯)(LC-SMCC)、間順丁烯二醯亞胺基苯甲醯基-N-羥基琥珀醯亞胺酯(MBS)、4-(4-N-順丁烯二醯亞胺基苯基)丁醯肼(MPBH)、3-(溴乙醯胺基)丙酸琥珀醯亞胺酯(SBAP)、碘乙酸琥珀醯亞胺酯(SIA)、(4-碘乙醯基)胺基苯甲酸琥珀醯亞胺酯(SIAB)、N-琥珀醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫)丙酸酯(SPDP)、N-琥珀醯亞胺基-4-(2-吡啶基硫)戊酸酯(SPP)、4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸琥珀醯亞胺酯(SMCC)、4-(對順丁烯二醯亞胺基苯基)丁酸琥珀醯亞胺酯(SMPB)、琥珀醯亞胺基6-[(β-順丁烯二醯亞胺基丙醯胺基)己酸酯](SMPH)、亞胺基硫雜環戊烷(IT)、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SIAB、磺基-SMCC、磺基-SMPB及琥珀醯亞胺基-(4-乙烯基碸)苯甲酸酯(SVSB)。
在一些實施例中，在具有通式VI 之ADC中，L包含具有下式之聚乙二醇鏈：
Figure 02_image023
其中g為1-20之整數。
在一些實施例中，在具有通式VI 之ADC中，g為3。
在具有通式VI 之ADC之某些實施例中，L由具有通式VII 之連接子表示：
Figure 02_image029
式 VII 其中：Z表示結合TF抗體之標靶基團(例如，半胱胺酸之硫醇或離胺酸之一級胺基團)的官能基；D表示與如式VI 中所指示之胺基的連接點；Str為延伸子；AA1 及AA2 各自獨立地為胺基酸，其中AA1 -[AA2 ]m 形成蛋白酶裂解位點；X1 為自降解基團；s為選自0及1之整數；m為選自由1、2、3及4組成之群之整數；且o為選自0、1及2之整數。
在一些實施例中，在具有通式VI 之ADC中，在L為具有通式VII 之連接子之情況下，[Str]s 選自由以下組成之群：伸烷基、基於脂族酸之延伸子、基於脂族二酸之延伸子、基於脂族胺之延伸子及基於脂族二胺之延伸子。
在一些實施例中，在具有通式VI 之ADC中，在L為具有通式VII 之連接子之情況下，[Str]s 選自由以下組成之群：基於二乙醇酸酯之延伸子、基於丙二酸酯之延伸子、基於己酸酯之延伸子及基於己醯胺之延伸子。
在一些實施例中，在具有通式VI 之ADC中，在L為具有通式VII 之連接子之情況下，[Str]s 選自由以下組成之群：基於甘胺酸之延伸子、基於聚乙二醇之延伸子及基於單甲氧基聚乙二醇之延伸子。
在一些實施例中，在具有通式VI 之ADC中，在L為具有通式VII 之連接子之情況下，[Str]s 為：
Figure 02_image080
其中h為1-20之整數，CC係指與AA1 之連接點；且DD係指與Z之連接點。
在一些實施例中，在具有通式VI 之ADC中，在L為具有通式VII 之連接子之情況下，[Str]s 選自：
Figure 02_image033
、
Figure 02_image035
、
Figure 02_image037
、
Figure 02_image039
、
Figure 02_image041
及
Figure 02_image043
； 其中：EE及FF分別表示與Z及AA1 之連接點；R選自氫及C1 -C6 烷基；p每次出現時獨立地為2至10之整數；且q每次出現時獨立地為1至10之整數。
在一些實施例中，在具有通式VI 之ADC中，在L為具有通式VII 之連接子之情況下，[Str]s 選自由以下組成之群：
Figure 02_image033
、
Figure 02_image037
及
Figure 02_image039
， 其中：EE及FF分別表示與Z及AA1 之連接點；p每次出現時獨立地為2至10之整數；且q每次出現時獨立地為1至10之整數。
在一些實施例中，在具有通式VI 之ADC中，在L為具有通式VII 之連接子之情況下，[Str]s 選自：
Figure 02_image033
及
Figure 02_image039
， 其中：EE及FF分別表示與Z及AA1 之連接點；p每次出現時獨立地為2至6之整數，且q為2至8之整數。
在一些實施例中，在具有通式VI 之ADC中，在L為具有通式VII 之連接子之情況下，AA1 -[AA2 ]m 選自：Val-Lys、Ala-Lys、Phe-Lys、Val-Cit、Phe-Cit、Leu-Cit、Ile-Cit、Trp-Cit、Phe-Arg、Ala-Phe、Val-Ala、Met-Lys、Asn-Lys、Ile-Pro、Ile-Val、Asp-Val、His-Val、Met-(D)Lys、Asn-(D)Lys、Val-(D)Asp、NorVal-(D)Asp、Ala-(D)Asp、Me3 Lys-Pro、苯基Gly-(D)Lys、Met-(D)Lys、Asn-(D)Lys、Pro-(D)Lys、Met-(D)Lys、Met-Cit-Val、Gly-Cit-Val、(D)Phe-Phe-Lys、(D)Ala-Phe-Lys、Gly-Phe-Leu-Gly (SEQ ID NO: 922)及Ala-Leu-Ala-Leu (SEQ ID NO: 923)。
在一些實施例中，在具有通式VI 之ADC中，在L為具有通式VII 之連接子之情況下，s為1。
在一些實施例中，在具有通式VI 之ADC中，在L為具有通式VII 之連接子之情況下，o為0。
在一些實施例中，在具有通式VI 之ADC中，在L為具有通式VII 之連接子之情況下，m選自1、2及3。
在一些實施例中，在具有通式VI 之ADC中，在L為具有通式VII 之連接子之情況下，m為1。
在一些實施例中，在具有通式VI 之ADC中，在L為具有通式VII 之連接子之情況下，AA1 -[AA2 ]m 為選自以下之二肽：Val-Lys、Ala-Lys、Phe-Lys、Val-Cit、Phe-Cit、Leu-Cit、Ile-Cit及Trp-Cit。
在一些實施例中，在具有通式VI 之ADC中，在L為具有通式VII 之連接子之情況下，各X1 獨立地選自：對胺基苯甲氧基羰基(PABC)、對胺基苯甲醚(PABE)及甲基化乙二胺(MED)。
在一些實施例中，在具有通式VI 之ADC中，在L為具有通式VII 之連接子，且[Str]s 為以下之情況下：
Figure 02_image080
， s為1且h為3。
在某些實施例中，ADC包含具有式VIII 結構之連接子-毒素部分：
Figure 02_image047
式 VIII 其中##表示該連接子-毒素部分與TF抗體之連接點，且該連接子-毒素部分通過共價鍵連接至TF抗體。
在一些實施例中，本文提供一種具有式IX 之抗體-藥物結合物：
Figure 02_image001
式 IX 其中： Ab為組織因子(TF)抗體，且n為大於或等於1之整數。在一些實施例中，在具有式IX 之ADC中，n為1至10之整數。在具有式IX 之ADC之一些實施例中，n選自由1、2、3、4及5組成之群。在一些實施例中，在具有式IX 之ADC中，n為選自由2、3及4組成之群之整數。在一些實施例中，在具有式IX 之ADC中，琥珀醯亞胺基通過共價鍵連接至Ab。
在具有式IX 之ADC之一些實施例中，Ab包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3，其中 i. 該VH-CDR1包含SEQ ID NO: 872，該VH-CDR2包含SEQ ID NO: 873，該VH-CDR3包含SEQ ID NO: 874，該VL-CDR1包含SEQ ID NO: 875，該VL-CDR2包含SEQ ID NO: 876，且該VL-CDR3包含SEQ ID NO: 877， ii. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A3之抗體， iii. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A之抗體， iv. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5之抗體， v. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5-T之抗體，或 vi. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25G1之抗體，n為大於或等於1之整數。
在具有式IX 之ADC之一些實施例中，Ab包含來自命名為25A3之抗體之VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3。
在一實施例中，本文所述之ADC包含有包含以下之抗體： 完全重鏈序列，其為QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDx[V/A]YGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYx[N/S]GNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 924)；及輕鏈序列，其為DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCx[R/Q]ASx[Q/E]SIx[S/N]x[S/N]WLAWYQQKPGKAPKLLIYKAx[S/Y]x[S/N]LEx[S/Y]GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQx[Q/L]FQx[S/K]LPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 942)， 重鏈序列，其為QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 926)；及輕鏈序列，其為DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSINNWLAWYQQKPGKAPKLLIYKAYNLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQLFQSLPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 927)， 重鏈序列，其為QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 926)；及輕鏈序列，其為DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQFQSLPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 928)， 重鏈序列，其為QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDAYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 929)；及輕鏈序列，其為DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASESISNWLAWYQQKPGKAPKLLIYKAYSLEYGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQFQKLPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 930)， 重鏈序列，其為QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFRSYGISWVRQAPGQGLEWMGWVAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPYGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 931)；及輕鏈序列，其為DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASHSIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASYLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQLFQSLPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 932)，或 完全重鏈序列，其為QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 926)；及輕鏈序列，其為DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASESISNWLAWYQQKPGKAPKLLIYKAYSLEYGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQFQKLPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 930)。
在一實施例中，本文所述之ADC包含有包含以下之抗體： 重鏈序列，其為QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC DKTHTC PPC PAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 926)；及輕鏈序列，其為DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSINNWLAWYQQKPGKAPKLLIYKAYNLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQLFQSLPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 927)。
在一實施例中，本文描述一種抗體-藥物結合物，其包含抗體(Ab)及一或多種具有式VIII 結構之連接子-毒素：
Figure 02_image054
式 VIII 其中：Ab為組織因子(TF)抗體，其中該Ab包含來自命名為25A3之抗體之VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3；該一或多種連接子-毒素通過共價鍵連接至該Ab；且##表示該連接子-毒素與該Ab之連接點。
在一些實施例中，本文提供一種組成物，其包含有包含抗體(Ab)及一或多個具有式VIII 之連接子-毒素之ADC。在一實施例中，組成物包含多重藥物-抗體比率(DAR)種類。在一些實施例中，組成物之平均DAR為2-4。
在一實施例中，本文提供一種抗體-藥物結合物，其包含抗體(Ab)及一或多種具有式VIII 結構之連接子-毒素：
Figure 02_image054
； 其中： Ab為組織因子(TF)抗體，其中該Ab包含：重鏈序列，其為QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC DKTHTC PPC PAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 926)；及輕鏈序列，其為DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSINNWLAWYQQKPGKAPKLLIYKAYNLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQLFQSLPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 927)，該一或多種連接子-毒素通過共價鍵連接至該Ab；且##表示該連接子-毒素與該Ab之連接點。
在另一實施例中，本文描述一種抗體-藥物結合物組成物，其包含本揭露之ADC，其中組成物包含多重藥物-抗體比率(DAR)種類，其中組成物之平均DAR為2-4。 連接子
在一些實施例中，本文所提供之ADC包含連接子。在一些實施例中，未結合之連接子包含兩個反應性末端：抗體結合反應性末端及細胞毒性劑結合反應性末端。例如，連接子可通過抗體上之半胱胺酸硫醇或離胺酸胺基來與抗體結合，在此情況下，抗體結合反應性末端通常為硫醇反應性基團(諸如雙鍵)、脫離基(諸如氯基、溴基或碘基)、R-氫硫基或磺醯基或者胺反應性基團(諸如羧基)。連接子之細胞毒性劑結合反應性末端可例如通過與細胞毒素上之鹼性胺或羧基形成醯胺鍵來與細胞毒性劑結合。
在一些實施例中，連接子為不可裂解的連接子。在一些實施例中，連接子為可裂解的連接子。在一些實施例中，細胞毒性劑在細胞中自ADC釋放。
ADC之合適的連接子包括不穩定的連接子、酸不穩定的連接子(例如，腙連接子)、光不穩定的連接子、帶電荷的連接子、含二硫鍵之連接子、肽酶敏感性連接子(例如，包含胺基酸(例如纈胺酸及/或瓜氨酸胺酸諸如瓜胺酸-纈胺酸或苯丙胺酸-離胺酸)之肽連接子)、□-葡糖醛酸苷連接子(參見例如，Graaf等人,Curr Pharm Des , 2002, 8:1391-1403)、二甲基連接子(參見例如，Chari等人,Cancer Research , 1992, 52:127-131；美國專利第5,208,020號)、硫-醚連接子或親水連接子(參見例如，Kovtun等人,Cancer Res. , 2010, 70:2528-2537)。
其他連接子包括具有允許橋聯抗體上之兩個鏈間半胱胺酸的官能基之連接子，諸如ThioBridgeTM 連接子(Badescu等人, Bioconjug. Chem., 25:1124–1136 (2014))、二硫順丁烯二醯亞胺(DTM)連接子(Behrens等人, Mol. Pharm., 12:3986–3998 (2015))、基於二硫芳基(TCEP)噠嗪二酮之連接子(Lee等人, Chem. Sci., 7:799-802 (2016))、基於二溴噠嗪二酮之連接子(Maruani等人, Nat. Commun., 6:6645 (2015))及此項技術中已知之其他連接子。
連接子可包含一或多種連接子組分。通常，連接子將包含二或更多種連接子組分。示範性連接子組分包括用於與抗體反應之官能基、用於與毒素反應之官能基、延伸子、肽組分、自降解基團、自消除基團、親水性部分及其類似者。各種連接子組分為此項技術中為已知的，其中一些在以下描述。
某些可用的連接子組分可獲自多個商業來源，諸如Pierce Biotechnology, Inc. (現為Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA)及Molecular Biosciences Inc. (Boulder, Colo.)，或可根據此項技術中所述之程序合成(參見例如Toki等人, J. Org. Chem., 67:1866-1872 (2002)；Dubowchik等人, Tetrahedron Letters, 38:5257-60 (1997)；Walker, M. A., J. Org. Chem., 60:5352-5355 (1995)；Frisch等人, Bioconjugate Chem., 7:180-186 (1996)；美國專利第6,214,345號及第7,553,816號以及國際專利申請公開案第WO 02/088172號)。
連接子組分之實例包括但不限於：N-(β-順丁烯二醯亞胺基丙氧基)-N-羥基琥珀醯亞胺酯(BMPS)、N-(ε-順丁烯二醯亞胺基己醯基氧基)琥珀醯亞胺酯(EMCS)、N-[γ-順丁烯二醯亞胺基丁醯基氧基]琥珀醯亞胺酯(GMBS)、1,6-己烷-雙-乙烯基碸(HBVS)、琥珀醯亞胺基4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-羧基-(6-醯胺基己酸酯)(LC-SMCC)、間順丁烯二醯亞胺基苯甲醯基-N-羥基琥珀醯亞胺酯(MBS)、4-(4-N-順丁烯二醯亞胺基苯基)丁醯肼(MPBH)、3-(溴乙醯胺基)丙酸琥珀醯亞胺酯(SBAP)、碘乙酸琥珀醯亞胺酯(SIA)、(4-碘乙醯基)胺基苯甲酸琥珀醯亞胺酯(SIAB)、N-琥珀醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫)丙酸酯(SPDP)、N-琥珀醯亞胺基-4-(2-吡啶基硫)戊酸酯(SPP)、4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸琥珀醯亞胺酯(SMCC)、4-(對順丁烯二醯亞胺基苯基)丁酸琥珀醯亞胺酯(SMPB)、琥珀醯亞胺基6-[(β-順丁烯二醯亞胺基丙醯胺基)己酸酯](SMPH)、亞胺基硫雜環戊烷(IT)、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SIAB、磺基-SMCC、磺基-SMPB及琥珀醯亞胺基-(4-乙烯基碸)苯甲酸酯(SVSB)。
額外實例包括雙-順丁烯二醯亞胺試劑，諸如二硫雙順丁烯二醯亞胺基乙烷(DTME)、雙-順丁烯二醯亞胺基-三氧基乙二醇(BMPEO)、1,4-雙順丁烯二醯亞胺基丁烷(BMB)、1,4雙順丁烯二醯亞胺基-2,3-二羥基丁烷(BMDB)、雙順丁烯二醯亞胺基己烷(BMH)、雙順丁烯二醯亞胺基乙烷(BMOE)、BM(PEG)2 及BM(PEG)3 ；醯亞胺酯之雙官能衍生物(諸如己二亞胺酸二甲酯鹽酸鹽)、活性酯(諸如辛二酸二丁二醯亞胺酯)、醛(諸如戊二醛)、雙-疊氮基化合物(諸如雙(對疊氮基苯甲醯基)己二胺)、雙-重氮衍生物(諸如雙-(對重氮苯甲醯基)-乙二胺)、二異氰酸酯(諸如甲苯2,6-二異氰酸酯)及雙-活性氟化合物(諸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。
在某些實施例中，連接子包含具有下式之聚乙二醇鏈：
Figure 02_image023
其中g為1-20之整數。在一些實施例中，g為3。
在某些實施例中，連接子為包含肽組分之可裂解的連接子，該肽組分包括二或更多個胺基酸且可藉由細胞內蛋白酶(諸如溶酶體蛋白酶或內體蛋白酶)裂解。肽組分可包含天然存在之胺基酸殘基及/或次要胺基酸及/或非天然存在之胺基酸類似物(諸如瓜胺酸)。肽組分可針對特定酶之酶裂解而經設計且最佳化，例如腫瘤相關蛋白酶、組織蛋白酶B、C或D或血纖維蛋白溶酶(plasmin)蛋白酶。
在某些實施例中，包括於ADC中之連接子可為含二肽之連接子，諸如含有纈胺酸-瓜胺酸(Val-Cit)或苯丙胺酸-離胺酸(Phe-Lys)之連接子。用於包括於連接子中之合適的二肽之其他實例包括Val-Lys、Ala-Lys、Me-Val-Cit、Phe-homoLys、Phe-Cit、Leu-Cit、Ile-Cit、Trp-Cit、Phe-Arg、Ala-Phe、Val-Ala、Met-Lys、Asn-Lys、Ile-Pro、Ile-Val、Asp-Val、His-Val、Met-(D)Lys、Asn-(D)Lys、Val-(D)Asp、NorVal-(D)Asp、Ala-(D)Asp、Me3 Lys-Pro、苯基Gly-(D)Lys、Met-(D)Lys、Asn-(D)Lys、Pro-(D)Lys及Met-(D)Lys。可裂解的連接子亦可包括較長的肽組分，諸如三肽、四肽或五肽。實例包括但不限於三肽Met-Cit-Val、Gly-Cit-Val、(D)Phe-Phe-Lys及(D)Ala-Phe-Lys以及四肽Gly-Phe-Leu-Gly (SEQ ID NO: 922)及Ala-Leu-Ala-Leu (SEQ ID NO: 923)。
在某些實施例中，使用包含纈胺酸-瓜胺酸(vc)之連接子將細胞毒性劑與抗體結合。
可裂解的連接子可視情況進一步包含一或多種額外組分，諸如自降解及自消除基團、延伸子或親水性部分。
用於連接子之自降解及自消除基團包括例如對胺基苯甲氧基羰基(PABC)及對胺基苯甲基醚(PABE)基團以及甲基化乙二胺(MED)。自降解基團之其他實例包括但不限於在電子上類似於PABC或PABE基團之芳族化合物，諸如雜環衍生物，例如，如美國專利第7,375,078號中所述之2-胺基咪唑-5-甲醇衍生物。其他實例包括在醯胺鍵水解時經受環化之基團，諸如經取代及未經取代之4-胺基丁酸醯胺(Rodrigues等人, Chemistry Biology, 2:223-227 (1995))及2-胺基苯基丙酸醯胺(Amsberry等人, J. Org. Chem., 55:5867-5877 (1990))。
用於ADC之連接子之延伸子包括例如伸烷基以及基於脂族酸、二酸、胺或二胺之延伸子，諸如二乙醇酸酯、丙二酸酯、己酸酯及己醯胺。其他延伸子包括例如基於甘胺酸之延伸子、聚乙二醇(PEG)延伸之及單甲氧基聚乙二醇(mPEG)延伸子。PEG及mPEG延伸子亦充當親水性部分。
在一些實施例中可用於本揭露之ADC中之可裂解的連接之中通常存在之組分之實例包括但不限於SPBD、磺基-SPBD、腙、Val-Cit、順丁烯二醯亞胺基己醯基(MC或mc)、mc-Val-Cit、mc-Val-Cit-PABC、Phe-Lys、mc-Phe-Lys、mc-Phe-Lys-PABC、順丁烯二醯亞胺基三伸乙基乙醇酸酯(MT)、MT-Val-Cit、MT-Phe-Lys及己二酸酯(AD)。
在某些實施例中，包括於本揭露之ADC中之連接子為基於肽之連接子，其具有通式VII ：
Figure 02_image029
式 VII 其中：Str為延伸子；AA1 及AA2 各自獨立地為胺基酸，其中AA1 -[AA2 ]m 形成蛋白酶裂解位點；X1 為自降解基團；Z為與結合抗體上之標靶基團(例如，半胱胺酸之硫醇或離胺酸之一級胺基團)之官能基之連接點；D為與細胞毒性劑之連接點；s為0或1；m為1與4之間的整數，且o為0、1或2。
在一些實施例中，在具有通式VII 之連接子中，Z為：
Figure 02_image089
， 其中##表示琥珀醯亞胺基與TF抗體之連接點，且琥珀醯亞胺基通過共價鍵連接至TF抗體，且，&表示與[Str]s 之連接點。
在一些實施例中，在具有通式VII 之連接子中，[Str]s 選自由以下組成之群：伸烷基、基於脂族酸之延伸子、基於脂族二酸之延伸子、基於脂族胺之延伸子及基於脂族二胺之延伸子。
在一些實施例中，在具有通式VII 之連接子中，[Str]s 選自由以下組成之群：基於二乙醇酸酯之延伸子、基於丙二酸酯之延伸子、基於己酸酯之延伸子及基於己醯胺之延伸子。
在一些實施例中，在具有通式VII 之連接子中，[Str]s 選自由以下組成之群：基於甘胺酸之延伸子、基於聚乙二醇之延伸子及基於單甲氧基聚乙二醇之延伸子。
在一些實施例中，在具有通式VII 之連接子中，[Str]s 為：
Figure 02_image080
其中h為1-20之整數，CC係指與AA1 之連接點；且DD係指與Z之連接點。
在一些實施例中，在具有通式VII 之連接子中，[Str]s 選自：
Figure 02_image033
、
Figure 02_image035
、
Figure 02_image037
、
Figure 02_image039
、
Figure 02_image041
及
Figure 02_image092
； 其中：EE及FF分別表示與Z及AA1 之連接點；R選自氫及C1 -C6 烷基；p每次出現時獨立地為2至10之整數；且q每次出現時獨立地為1至10之整數。
在一些實施例中，在具有通式VII 之連接子中，[Str]s 選自由以下組成之群：
Figure 02_image033
、
Figure 02_image037
及
Figure 02_image039
， 其中：EE及FF分別表示與Z及AA1 之連接點；p每次出現時獨立地為2至10之整數；且q每次出現時獨立地為1至10之整數。
在一些實施例中，在具有通式VII 之連接子中，[Str]s 選自：
Figure 02_image033
及
Figure 02_image039
， 其中：EE及FF分別表示與Z及AA1 之連接點；p每次出現時獨立地為2至6之整數，且q為2至8之整數。
在一些實施例中，在具有通式VII 之連接子中，AA1 -[AA2 ]m 選自Val-Lys、Ala-Lys、Phe-Lys、Val-Cit、Phe-Cit、Leu-Cit、Ile-Cit、Trp-Cit、Phe-Arg、Ala-Phe、Val-Ala、Met-Lys、Asn-Lys、Ile-Pro、Ile-Val、Asp-Val、His-Val、Met-(D)Lys、Asn-(D)Lys、Val-(D)Asp、NorVal-(D)Asp、Ala-(D)Asp、Me3 Lys-Pro、苯基Gly-(D)Lys、Met-(D)Lys、Asn-(D)Lys、Pro-(D)Lys、Met-(D)Lys、Met-Cit-Val、Gly-Cit-Val、(D)Phe-Phe-Lys、(D)Ala-Phe-Lys、Gly-Phe-Leu-Gly (SEQ ID NO: 922)及Ala-Leu-Ala-Leu (SEQ ID NO: 923)。
在一些實施例中，在具有通式VII 之連接子中，m為1 (即，AA1 -[AA2 ]m 為二肽)。
在一些實施例中，在具有通式VII 之連接子中，AA1 -[AA2 ]m 為選自以下之二肽：Val-Lys、Ala-Lys、Phe-Lys、Val-Cit、Phe-Cit、Leu-Cit、Ile-Cit及Trp-Cit。
在一些實施例中，在具有通式VII 之連接子中，各X1 獨立地選自對胺基苯甲氧基羰基(PABC)、對胺基苯甲基醚(PABE)及甲基化乙二胺(MED)。
在一些實施例中，在具有通式VII 之連接子中，m為1、2或3。
在一些實施例中，在具有通式VII 之連接子中，s為1。
在一些實施例中，在具有通式VII 之連接子中，o為0。
在一些實施例中，在具有通式VII 之連接子中： Z為
Figure 02_image089
； 其中##表示琥珀醯亞胺基與TF抗體之連接點，且琥珀醯亞胺基通過共價鍵連接至TF抗體，&表示與[Str]s 之連接點； [Str]s 選自
Figure 02_image094
及
Figure 02_image039
； EE及FF分別表示與Z及AA1 之連接點；p為2與6之間的整數；q為2與8之間的整數；m為1；AA1 -AA2 為選自由以下組成之群之二肽：Val-Lys、Ala-Lys、Phe-Lys、Val-Cit、Phe-Cit、Leu-Cit、Ile-Cit及Trp-Cit；s為1；且o為0。
在某些實施例中，包括於本揭露之ADC中之連接子具有通式X ：
Figure 02_image049
式 X 其中：##為與抗體之連接點，且琥珀醯亞胺基通過共價鍵連接至抗體；Y為一或多種額外連接子組分或不存在，且D1 為與細胞毒性劑之連接點。在通式X 之一些實施例中，Ab包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3，其中 i. 該VH-CDR1包含SEQ ID NO: 872，該VH-CDR2包含SEQ ID NO: 873，該VH-CDR3包含SEQ ID NO: 874，該VL-CDR1包含SEQ ID NO: 875，該VL-CDR2包含SEQ ID NO: 876，且該VL-CDR3包含SEQ ID NO: 877， ii. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A3之抗體， iii. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A之抗體， iv. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5之抗體， v. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5-T之抗體，或 vi. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25G1之抗體。
在一些實施例中，在通式X ，Y為[X1 ]o ，其中X1 為自降解基團，且o為選自1及2之整數。在一些實施例中，在通式X 中，各X1 選自由以下組成之群：對胺基苯甲氧基羰基(PABC)、對胺基苯甲醚(PABE)及甲基化乙二胺(MED)。在一些實施例中，在通式X 中，Y不存在。
在某些實施例中，包括於本揭露之ADC中之連接子具有通式XI ：
Figure 02_image051
式 XI 其中：##為與抗體之連接點，且琥珀醯亞胺基通過共價鍵連接至抗體；Y為一或多種額外連接子組分或不存在，且D1 為與細胞毒性劑之連接點。在一些實施例中，ADC包含具有通式XI 之連接子，且Ab包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3，其中 i. 該VH-CDR1包含SEQ ID NO: 872，該VH-CDR2包含SEQ ID NO: 873，該VH-CDR3包含SEQ ID NO: 874，該VL-CDR1包含SEQ ID NO: 875，該VL-CDR2包含SEQ ID NO: 876，且該VL-CDR3包含SEQ ID NO: 877， ii. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A3之抗體， iii. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A之抗體， iv. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5之抗體， v. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5-T之抗體，或 vi. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25G1之抗體。
在一些實施例中，Y為[X1 ]o ，其中X1 為自降解基團，且o為選自1及2之整數。在一些實施例中，各X1 選自由以下組成之群：對胺基苯甲氧基羰基(PABC)、對胺基苯甲醚(PABE)及甲基化乙二胺(MED)。在一些實施例中，Y不存在。在具有式X 或式XI 之連接子之一些實施例中，該細胞毒性劑選自由以下組成之群：診斷劑、金屬螯合劑、酶、螢光化合物、生物發光化合物或化學發光化合物。
在具有式X 或式XI 之連接子之一些實施例中，該細胞毒性劑為具有改良安全性之細胞毒性有效載荷。
在另一實施例中，包含具有通式XII 之連接子之化合物能夠與組織因子(TF)抗體上之標靶基團(例如，半胱胺酸之硫醇或離胺酸之一級胺基團)化學結合以形成本揭露之ADC：
Figure 02_image097
式 XII 其中：Str為延伸子；AA1 及AA2 各自獨立地為胺基酸，其中AA1 -[AA2 ]m 形成蛋白酶裂解位點；X1 為自降解基團；D2 為與細胞毒性劑之連接點；Z2 為能夠與TF抗體上之標靶基團反應以與TF抗體形成鍵的官能基；s為0或1；m為1與4之間的整數，且o為0、1或2。
在一些實施例中，在具有通式XII 之連接子中，Z2 為：
Figure 02_image099
， 且&表示與[Str]s 之連接點。
在一些實施例中，在具有通式XII 之連接子中，[Str]s 選自由以下組成之群：伸烷基、基於脂族酸之延伸子、基於脂族二酸之延伸子、基於脂族胺之延伸子及基於脂族二胺之延伸子。
在一些實施例中，在具有通式XII 之連接子中，[Str]s 選自由以下組成之群：基於二乙醇酸酯之延伸子、基於丙二酸酯之延伸子、基於己酸酯之延伸子及基於己醯胺之延伸子。
在一些實施例中，在具有通式XII 之連接子中，[Str]s 選自由以下組成之群：基於甘胺酸之延伸子、基於聚乙二醇之延伸子及基於單甲氧基聚乙二醇之延伸子。
在一些實施例中，在具有通式XII 之連接子中，[Str]s 為：
Figure 02_image080
其中h為1-20之整數，CC係指與AA1 之連接點；且DD係指與Z之連接點。
在一些實施例中，在具有通式XII 之連接子中，[Str]s 選自：
Figure 02_image033
、
Figure 02_image035
、
Figure 02_image037
、
Figure 02_image039
、
Figure 02_image041
及
Figure 02_image092
； 其中：EE及FF分別表示與Z及AA1 之連接點；R選自氫及C1 -C6 烷基；p每次出現時獨立地為2至10之整數；且q每次出現時獨立地為1至10之整數。
在一些實施例中，在具有通式XII 之連接子中，[Str]s 選自由以下組成之群：
Figure 02_image033
、
Figure 02_image037
及
Figure 02_image039
， 其中：EE及FF分別表示與Z及AA1 之連接點；p每次出現時獨立地為2至10之整數；且q每次出現時獨立地為1至10之整數。
在一些實施例中，在具有通式XII 之連接子中，[Str]s 選自：
Figure 02_image033
及
Figure 02_image039
， 其中：EE及FF分別表示與Z及AA1 之連接點；p每次出現時獨立地為2至6之整數，且q為2至8之整數。
在一些實施例中，在具有通式XII 之連接子中，AA1 -[AA2 ]m 選自Val-Lys、Ala-Lys、Phe-Lys、Val-Cit、Phe-Cit、Leu-Cit、Ile-Cit、Trp-Cit、Phe-Arg、Ala-Phe、Val-Ala、Met-Lys、Asn-Lys、Ile-Pro、Ile-Val、Asp-Val、His-Val、Met-(D)Lys、Asn-(D)Lys、Val-(D)Asp、NorVal-(D)Asp、Ala-(D)Asp、Me3 Lys-Pro、苯基Gly-(D)Lys、Met-(D)Lys、Asn-(D)Lys、Pro-(D)Lys、Met-(D)Lys、Met-Cit-Val、Gly-Cit-Val、(D)Phe-Phe-Lys、(D)Ala-Phe-Lys、Gly-Phe-Leu-Gly (SEQ ID NO: 922)及Ala-Leu-Ala-Leu (SEQ ID NO: 923)。
在一些實施例中，在具有通式XII 之連接子中，m為1 (即，AA1 -[AA2 ]m 為二肽)。
在一些實施例中，在具有通式XII 之連接子中，AA1 -[AA2 ]m 為選自以下之二肽：Val-Lys、Ala-Lys、Phe-Lys、Val-Cit、Phe-Cit、Leu-Cit、Ile-Cit及Trp-Cit。
在一些實施例中，在具有通式XII 之連接子中，各X1 獨立地選自對胺基苯甲氧基羰基(PABC)、對胺基苯甲基醚(PABE)及甲基化乙二胺(MED)。
在一些實施例中，在具有通式XII 之連接子-毒素化合物中，m為1、2或3。
在一些實施例中，在具有通式XII 之連接子中，s為1。
在一些實施例中，在具有通式XII 之連接子中，o為0。
在一些實施例中，在具有通式XII 之連接子中： Z為
Figure 02_image099
； &表示與[Str]s 之連接點； [Str]s 選自
Figure 02_image094
及
Figure 02_image039
； EE及FF分別表示與Z及AA1 之連接點；p為2與6之間的整數；q為2與8之間的整數；m為1；AA1 -AA2 為選自由以下組成之群之二肽：Val-Lys、Ala-Lys、Phe-Lys、Val-Cit、Phe-Cit、Leu-Cit、Ile-Cit及Trp-Cit；s為1；且o為0。
在某些實施例中，包含具有通式XII 之連接子之化合物具有以下結構：
Figure 02_image106
。連接子 - 毒素 A 用於製備抗體-藥物結合物之方法
可使用如此項技術中所揭示之採用熟悉此項技術者已知的有機化學反應、條件及試劑的任何合適的方法來製備ADC，參見例如，Bioconjugate Techniques, 第2版, G. T. Hermanson編, Elsevier, San Francisco, 2008。
例如，結合可藉由以下來達成：(1)抗體之親核基團或親電子基團與雙官能連接子經由共價鍵反應以形成抗體-連接子中間物Ab-L，繼之以與經活化之細胞毒性劑(D)反應；或(2)細胞毒性劑之親核基團或親電子基團與雙官能連接子經由共價鍵反應以形成連接子-毒素D-L，繼之以與抗體之親核基團或親電子基團反應。
在某些實施例中，本文描述一種用於製備抗體-藥物結合物之製程，該製程包含：(A)使結合人類組織因子(TF)之細胞外域(SEQ ID NO:810)的抗原結合蛋白(Ab)上之親核或親電子基團與雙官能連接子反應以形成Ab-連接子中間物，且使該Ab-連接子中間物與具有通式I 之阿司他丁衍生物之-NH2 基團反應以得到抗體藥物結合物
Figure 02_image057
式 I 其中：X為* -C(O)NHCH(CH2 (R2 ))-+ ，其中*及+表示如式I 中所指示之各別連接點，或X不存在；R1 選自由以下組成之群：
Figure 02_image005
、
Figure 02_image007
、
Figure 02_image009
、
Figure 02_image011
及
Figure 02_image013
， 其中#及%表示如式I 中所指示之各別連接點；且R2 為苯基；或(B)使具有通式I 之阿司他丁(auristatin)衍生物上之-NH2 基團與雙官能連接子反應以形成連接子-毒素中間物，且使該連接子-毒素中間物與結合人類組織因子(TF)之細胞外域(SEQ ID NO: 810)的抗原結合蛋白(Ab)上之親核或親電子基團反應以提供該抗體-藥物結合物，其中，在(A)或(B)中，(a) 該Ab包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3，其中 i. 該VH-CDR1包含SEQ ID NO: 872，該VH-CDR2包含SEQ ID NO: 873，該VH-CDR3包含SEQ ID NO: 874，該VL-CDR1包含SEQ ID NO: 875，該VL-CDR2包含SEQ ID NO: 876，且該VL-CDR3包含SEQ ID NO: 877， ii. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A3之抗體， iii. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A之抗體， iv. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5之抗體， v. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5-T之抗體，或 vi. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25G1之抗體；且 (b) 該抗體-藥物結合物包含一或多種由式IV表示之部分：
Figure 02_image003
式 IV 其中：X為* -C(O)NHCH(CH2 (R2 ))-+ ，其中*及+表示如式IV 中所指示之各別連接點，或X不存在；L為連接子；!表示L與該Ab之連接點，其中L通過共價鍵連接至該Ab；R1 選自由以下組成之群：
Figure 02_image005
、
Figure 02_image007
、
Figure 02_image009
、
Figure 02_image011
及
Figure 02_image013
， 其中#及%表示如式IV 中所指示之各別連接點；且R2 為苯基。
在某些實施例中，本文描述一種用於製備抗體-藥物結合物之製程，該製程包含：(A)使結合人類組織因子(TF)之細胞外域(SEQ ID NO:810)的抗原結合蛋白(Ab)上之親核或親電子基團與包含二或更多種連接子組分之雙官能連接子之第一連接子組分反應，繼之以依序添加一或多種剩餘連接子組分，以形成Ab-連接子中間物，且使該Ab-連接子中間物與具有通式I 之阿司他丁衍生物上之-NH2 基團反應：
Figure 02_image057
式 I 其中：X為* -C(O)NHCH(CH2 (R2 ))-+ ，其中*及+表示如式I 中所指示之各別連接點，或X不存在；R1 選自由以下組成之群：
Figure 02_image005
、
Figure 02_image007
、
Figure 02_image009
、
Figure 02_image011
及
Figure 02_image013
， 其中#及%表示如式I 中所指示之各別連接點；且R2 為苯基；或(B)使具有通式I 之阿司他丁衍生物上之-NH2 基團與包含二或更多種連接子組分之雙官能連接子之第一連接子組分反應，繼之以依序添加一或多種剩餘連接子組分，以形成連接子-毒素中間物，且使該連接子-毒素中間物與結合人類組織因子(TF)之細胞外域(SEQ ID NO: 810)的抗原結合蛋白(Ab)上之親核或親電子基團反應以提供該抗體-藥物結合物，其中，在(A)或(B)中，(a) 該Ab包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3，其中 i. 該VH-CDR1包含SEQ ID NO: 872，該VH-CDR2包含SEQ ID NO: 873，該VH-CDR3包含SEQ ID NO: 874，該VL-CDR1包含SEQ ID NO: 875，該VL-CDR2包含SEQ ID NO: 876，且該VL-CDR3包含SEQ ID NO: 877， ii. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A3之抗體， iii. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A之抗體， iv. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5之抗體， v. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5-T之抗體，或 vi. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25G1之抗體；且 (b) 該抗體-藥物結合物包含一或多種由式IV表示之部分：
Figure 02_image003
式 IV 其中：X為* -C(O)NHCH(CH2 (R2 ))-+ ，其中*及+表示如式IV中所指示之各別連接點，或X不存在；L為連接子；!表示L與該Ab之連接點，其中L通過共價鍵連接至該Ab；R1 選自由以下組成之群：
Figure 02_image005
、
Figure 02_image007
、
Figure 02_image009
、
Figure 02_image011
及
Figure 02_image013
， 其中#及%表示如式IV 中所指示之各別連接點；且R2 為苯基。
在某些實施例中，該Ab上之該親核或親電子基團為硫醇或胺。在用於製備ADC之製程之某些實施例中，該製程進一步包含用還原劑處理該Ab以還原該Ab中之一或多個二硫鍵聯，以提供該親核硫醇基。在用於製備ADC之製程之某些實施例中，L由式VII 表示：
Figure 02_image029
式 VII 其中：Z表示結合該Ab之標靶基團的官能基；D表示與如式I 中所指示之胺基的連接點；Str為延伸子；AA1 及AA2 各自獨立地為胺基酸，其中AA1 -[AA2 ]m 形成蛋白酶裂解位點；X1 為自降解基團；s為選自0及1之整數；m為選自由1、2、3及4組成之群之整數；且o為選自0、1及2之整數。
在細胞毒性劑為具有通式I 之化合物的某些實施例中，ADC可藉由包含以下之方法來製備：(A)(i) 使抗體上之親核或親電子基團與雙官能連接子反應以形成抗體-連接子中間物，或(ii) 使抗體上之親核或親電子基團與包含二或更多種連接子組分之雙官能連接子之第一連接子組分反應，繼之以依序添加一或多種剩餘連接子組分以形成抗體-連接子中間物，及(B) 使抗體-連接子組分與具有通式I 之化合物上之-NH2 基團反應以得到ADC。
在細胞毒性劑為具有通式I 之化合物的某些實施例中，ADC可藉由包含以下之方法來製備：(A)(I) 使具有通式I 之化合物上之NH2 基團與雙官能連接子反應以形成連接子-毒素中間物，或(ii) 使具有通式I 之化合物上之NH2 基團與包含二或更多種連接子組分之雙官能連接子之第一連接子組分反應，繼之以依序添加一或多種剩餘連接子組分以形成連接子-毒素中間物，及(B) 使連接子-毒素中間物與抗體上之親核或親電子基團反應以形成抗體-藥物結合物。
在一些實施例中，抗體上之親電子或親核基團為硫醇(例如，來自抗體上之半胱胺酸殘基)或胺(例如，來自抗體上之離胺酸殘基)。在一些實施例中，雙官能連接子具有通式VII 、通式X 或通式XI 。具有通式I 之化合物及包含具有通式I 之化合物之連接子-毒素可藉由標準合成有機化學方案由可商購獲得之起始材料製備。示範性方法提供於國際專利申請公開案第WO 2016/041082號中及下文實例部分中。
在某些實施例中，本揭露之ADC係藉由將連接子-細胞毒性劑與半胱胺酸殘基結合來製備，該等半胱胺酸殘基已藉由還原抗體上之一或多個鏈間二硫鍵聯經釋放。合適的還原劑為此項技術中已知的且包括例如二硫蘇糖醇(DTT)、參(2-羧基乙基)膦(TCEP)、2-巰基乙醇、半胱胺及多種水溶性膦。
在一些實施例中，ADC係用位點特異性結合技術製備的，導致均勻的藥物負載並避免抗原結合或藥物動力學改變的ADC亞群。在一些實施例中，在重鏈及輕鏈上的位置處包含半胱胺酸取代之「thiomab」經工程改造以提供不破壞免疫球蛋白摺疊及組裝或改變抗原結合的反應性硫醇基(Junutula等人,J. Immunol. Meth. , 2008, 332: 41-52；Junutula等人,Nat. Biotechnol. , 2008, 26: 925-932, )。在一些實施例中，藉由重新編碼自末端至硒代半胱胺酸插入的終止密碼子UGA，將硒代半胱胺酸共轉譯地插入至抗體序列中，從而實現在其他天然胺基酸的存在下，在硒代半胱胺酸之親核硒醇基團處的位點特異性共價結合(參見例如，Hofer等人,Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 2008, 105:12451-12456；Hofer等人,Biochemistry , 2009, 48(50):12047-12057)。替代地，抗體可經修飾以包括提供反應性把手之其他非天然胺基酸，諸如對乙醯基苯丙胺酸、甲醯基甘胺酸或對疊氮基甲基-L-苯丙胺酸(參見例如，Axup等人,PNAS , 109:16101-16106 (2012)；Wu等人, PNAS, 106:3000-3005 (2009)；Zimmerman等人,Bioconj. Chem ., 25:351-361 (2014))。在某些實施例中，如Behrens等人,Mol Pharm , 2015, 12:3986-98中所述合成ADC。 6. 檢定
此項技術中已知之多種檢定均可用於鑑別及表徵本文所提供之抗TF抗體及抗TF ADC。 6.1  結合、競爭及抗原決定區作圖檢定
如本揭露中別處所述，可藉由任何合適的方法，包括使用SPR、BLI、RIA及MSD-SET，來評估本文所提供之抗體之特異性抗原結合活性。此外，可藉由ELISA檢定及西方墨點檢定來評估抗原結合活性。
用於量測兩種抗體或一種抗體與另一種分子(例如，TF之一或多種配體)之間的競爭的檢定描述於本揭露中別處，例如，Harlow及Lane,Antibodies: A Laboratory Manual 第14章, 1988, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y，其以引用之方式整體併入。
用於對本文所提供之抗體所結合之抗原決定區作圖的檢定描述於例如Morris 「Epitope Mapping Protocols,」Methods in Molecular Biology 第66卷, 1996, Humana Press, Totowa, N.J.中，其以引用之方式整體併入。在一些實施例中，藉由肽競爭來確定抗原決定區。在一些實施例中，藉由質譜法來確定抗原決定區。在一些實施例中，藉由結晶學來確定抗原決定區。 6.2  凝血酶生成、FXa轉化及TF傳訊檢定
如本揭露中別處所述，可藉由凝血酶生成檢定(TGA)來確定在本文所提供之抗體存在下的凝血酶生成。
本揭露中別處描述了用於量測在本文所提供之抗體存在下的FXa轉化的檢定。
可藉由量測由TF傳訊調控之細胞介素(諸如IL8及GM-CSF)之產生來確定TF傳訊之抑制。用於確定IL8及/或GM-CSF水準的檢定提供於本揭露中別處及例如Hjortoe等人,Blood , 2004, 103:3029-3037中。 6.3  效應子功能之檢定
可使用此項技術中已知的多種體外及體內檢定來評估用本文所提供之抗體治療之後的效應子功能，包括以下中所述之檢定：Ravetch及Kinet,Annu. Rev. Immunol. , 1991, 9:457-492；美國專利第5,500,362號、第5,821,337號；Hellstrom等人,Proc. Nat'l Acad. Sci. USA , 1986, 83:7059-7063；Hellstrom等人,Proc. Nat'l Acad. Sci. USA , 1985, 82:1499-1502；Bruggemann等人,J. Exp. Med. , 1987, 166:1351-1361；Clynes等人,Proc. Nat'l Acad. Sci. USA , 1998, 95:652-656；WO 2006/029879；WO 2005/100402；Gazzano-Santoro等人,J. Immunol. Methods , 1996, 202:163-171；Cragg等人,Blood , 2003, 101:1045-1052；Cragg等人,Blood , 2004, 103:2738-2743；及Petkova等人,Int'l. Immunol. , 2006, 18:1759-1769；其各自以引用之方式整體併入。 6.4  細胞毒性檢定及體內研究
本揭露中別處描述了用於評估本文所提供之抗體-藥物結合物(ADC)之細胞毒性的檢定。
本揭露中別處描述了用於評估本文所提供之ADC之體內功效的在免疫受損小鼠中的異種移植物研究。
本揭露中包括用於評估ADC之體內功效的在免疫活性小鼠中的同基因研究。 6.5  免疫組織化學(IHC)檢定
本揭露中別處描述了用於評估TF在患者樣品中之表現的免疫組織化學(IHC)檢定。 6.6  嵌合構築體作圖及抗原決定區分箱檢定
本文所提供之抗人類TF抗體之間的抗原決定區結合差異可藉由嵌合TF構築體作圖實驗及抗原決定區分箱檢定來確定，如本揭露中別處所述。 7     醫藥組成物
可將本文所提供之抗體或ADC調配於任何適當的醫藥組成物中且藉由任何合適的投與途徑來投與。合適的投與途徑包括但不限於玻璃體內、動脈內、真皮內、肌肉內、腹膜內、靜脈內、經鼻、腸胃外、經肺及皮下途徑。
醫藥組成物可包含一或多種醫藥賦形劑。可使用任何合適的醫藥賦形劑，且一般熟習此項技術者能夠選擇合適的醫藥賦形劑。據此，以下所提供之醫藥賦形劑意欲為說明性且不為限制性的。額外醫藥賦形劑包括例如以下中所述之醫藥賦形劑：Handbook of Pharmaceutical Excipients , Rowe等人(編) 第6版 (2009)，其以引用之方式整體併入。 7.1  腸胃外劑型
在某些實施例中，本文所提供之抗體或ADC經調配為腸胃外劑型。腸胃外劑型可藉由各種途徑向個體投與，包括但不限於皮下、靜脈內(包括輸注及彈丸注射)、肌肉內及動脈內。因為投與通常繞過個體對污染物之天然防禦，所以腸胃外劑型通常為無菌的或能夠在向個體投與之前經滅菌。腸胃外劑型之實例包括但不限於準備注射的溶液、準備溶解或懸浮於醫藥學上可接受之注射用媒劑中的乾燥(例如，凍乾)產品、準備注射的懸液劑以及乳劑。 8     劑量及單位劑型
在人類療法中，醫生將根據預防性或治療性治療且根據欲治療個體之年齡、體重、狀況及其他特定因素來確定其認為最適當的劑量學。
在某些實施例中，本文所提供之組成物為醫藥組成物或單一單位劑型。本文所提供之醫藥組成物及單一單位劑型包含預防或治療有效量的一或多種預防性或治療性抗體或ADC。
將在預防或治療病症或其一或多種症狀中有效的抗體/ADC之量可隨疾病或疾患之性質及嚴重性以及投與抗體/ADC的途徑而變化。頻率及劑量亦可根據各個體之特定因素而變化，其取決於所投與之特定療法(例如，治療劑或預防劑)、病症、疾病或疾患之嚴重性、投與途徑以及個體之年齡、體重、反應及既往病史。可由來源於體外或動物模型測試系統之劑量-反應曲線來外推有效劑量。
如一般熟習此項技術者容易知道的，不同的治療有效量可適用於不同的疾病及疾患。類似地，本文所提供之劑量的量及劑量頻率方案亦包括足以預防、控制、治療或改善此類病症但不足以引起或足以減輕與本文所提供之抗體或ADC有關的不良影響的量。此外，當向個體投與多個劑量的本文所提供之組成物時，並不是所有劑量均需要相同。例如，可增加向個體投與之劑量以改善組成物之預防或治療效果，或可降低其以減少特定個體正在經歷的一或多種副作用。
如本揭露中別處所更詳細地討論，本文所提供之抗體或ADC可視情況與一或多種可用於預防或治療疾病或病症的額外劑一起投與。此類額外劑之有效量可取決於調配物中存在之ADC之量、病症或治療之類型以及此項技術中已知或本文所述之其他因素。 9     治療應用
對於治療應用，本發明之抗體或ADC以醫藥學上可接受之劑型諸如此項技術中已知之劑型及上文所討論之劑型向哺乳動物(一般為人類)投與。例如，本發明之抗體或ADC可作為彈丸或藉由在一段時間內的連續輸注而靜脈內地、藉由玻璃體內、肌肉內、腹膜內、腦脊髓內、皮下、關節內、滑膜內、鞘內或腫瘤內途徑來向人類投與。亦藉由腫瘤周圍、病灶內或病灶周圍途徑合適地投與抗體或ADC，以發揮局部以及全身治療作用。例如在卵巢腫瘤之治療中，腹膜內途徑可能特別有用。
本文所提供之抗體或ADC可用於治療涉及TF之任何疾病或疾患。在一些實施例中，疾病或疾患為可受益於用抗TF抗體或ADC治療的疾病或疾患。
在一些實施例中，提供本文所提供之抗體或ADC以用作藥劑。在一些實施例中，提供本文所提供之抗體或ADC以用於藥劑之製造或製備。在一些實施例中，藥劑用於治療可受益於抗TF抗體或ADC的疾病或疾患。
在一些實施例中，本文提供了一種藉由向個體投與有效量的本文所提供之抗TF抗體或ADC來在有需要之個體中治療疾病或疾患的方法。
在一些實施例中，可受益於用抗TF抗體或ADC治療的疾病或病症為癌症。在一些實施例中，提供本文所提供之抗TF抗體或ADC用作用於治療癌症的藥劑。在一些實施例中，提供本文所提供之抗TF抗體或ADC以用於治療癌症之藥劑之製造或製備。在一些實施例中，本文提供了一種藉由向個體投與有效量的本文所提供之抗TF抗體或ADC來在有需要之個體中治療癌症的方法。
TF參與多種類型的癌症之血栓形成、轉移、腫瘤生長及/或腫瘤血管生成，諸如卵巢癌(參見Sakurai等人,Int J Gynecol Cancer , 2017, 27:37-43；Koizume等人,Biomark Cancer , 2015, 7:1-13；其各自以引用之方式整體併入)、子宮頸癌(參見Cocco等人,BMC Cancer , 2011, 11:263，其以引用之方式整體併入)、頭頸癌(參見Christensen等人,BMC Cancer , 2017, 17:572，其以引用之方式整體併入)、前列腺癌(參見Yao等人,Cancer Invest. , 2009, 27:430-434；Abdulkadir等人,Hum Pathol. , 2009, 31:443-447；其各自以引用之方式整體併入)、胰臟癌(參見Zhang等人,Oncotarget , 2017, 8:59086-59102，其以引用之方式整體併入)、三陰性乳癌(參見Zhang等人,Oncotarget , 2017, 8:59086-59102，其以引用之方式整體併入)、神經膠質母細胞瘤(參見Guan等人,Clin Biochem. , 2002, 35:321-325；Carneiro-Lobo等人,J Thromb Haemost , 2009, 7:1855-1864；其各自以引用之方式整體併入)、肺癌(參見Yeh等人,PLoS One , 2013, 8:e75287；Regina等人,Clin Chem. , 2009, 55:1834-42；其各自以引用之方式整體併入)、胃癌(參見Lo等人,Br J Cancer. , 2012, 107:1125-1130，其各自以引用之方式整體併入)、食道癌(參見Chen等人,Acta Histochem. , 2010, 3:233-239，其以引用之方式整體併入)、膀胱癌(參見Patry等人,Int J Cancer. , 2008, 122:1592-1597，其以引用之方式整體併入)、黑色素瘤(參見Bromberg等人,Proc Natl Acad Sci U S A. , 1995, 92:8205-8209，其以引用之方式整體併入)及腎癌(參見Silva等人,Int Braz J Urol. , 2014, 40:499-506，其以引用之方式整體併入)。
任何合適的癌症菌可用本文所提供之抗體或ADC治療。在一些實施例中，癌症為頭頸癌。在一些實施例中，癌症為卵巢癌。在一些實施例中，癌症為胃癌。在一些實施例中，癌症為食道癌。在一些實施例中，癌症為子宮頸癌。在一些實施例中，癌症為前列腺癌。在一些實施例中，癌症為胰臟癌。在一些實施例中，癌症為雌激素受體陰性(ER-)、黃體素受體陰性(PR-)及HER2陰性(HER2-)三陰性乳癌。在一些實施例中，癌症為神經膠質母細胞瘤。在一些實施例中，癌症為肺癌。在一些實施例中，癌症為膀胱癌。在一些實施例中，癌症為黑色素瘤。在一些實施例中，癌症為腎癌。在一些實施例中，癌症為眼睛黑色素瘤。關於可用抗TF抗體或ADC治療之癌症類型的其他資訊提供於van den Berg等人,Blood , 2012, 119:924-932中，其以引用之方式整體併入。
在一些實施例中，本文提供了一種藉由向個體投與有效量的本文所提供之抗體或ADC來在有需要之個體中延遲癌症發作的方法。在一些實施例中，本文提供一種用於在有需要之個體中癌症之晚期介入治療的方法。例如，ADC可以在有需要之個體中減小腫瘤大小(例如，腫瘤體積)或在有需要之個體中抑制腫瘤生長。
在一些實施例中，本文提供了一種藉由向個體投與有效量的本文所提供之抗體或ADC來在有需要之個體中預防癌症發作的方法。
在一些實施例中，本文提供了一種藉由向個體投與有效量的本文所提供之抗體或ADC來在有需要之個體中減少腫瘤大小(例如，腫瘤體積)的方法。在一些實施例中，本文所提供之ADC使腫瘤大小(例如，腫瘤體積)減小了至少約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%或約99%。在一些實施例中，本文所提供之ADC使腫瘤生長抑制了至少約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%或約99%。
在一些實施例中，本文提供了一種藉由向個體投與有效量的本文所提供之抗體或ADC來在有需要之個體中減少轉移數目的方法。
在一些實施例中，本文提供了一種用於藉由向個體投與有效量的本文所提供之抗體或ADC來在有需要之個體中延長總體存活、中位數存活時間或無進展存活之時期的方法。
在一些實施例中，本文提供了一種用於藉由向個體投與有效量的本文所提供之抗體或ADC來治療已對治療照護標準具有抗性的個體的方法。
在一些實施例中，可受益於用抗TF抗體治療的疾病或疾患為涉及新血管生成的疾病或疾患。在某些實施例中，該涉及新血管生成之疾病或疾患為癌症。在一些實施例中，可受益於用抗TF抗體或ADC治療的疾病或疾患為涉及血管發炎的疾病或疾患。
在一些實施例中，提供本文所提供之抗TF抗體及ADC以用作用於治療涉及新血管生成的疾病或疾患的藥物。在一些實施例中，提供本文所提供之抗TF抗體及ADC以用於治療涉及新血管生成之疾病或疾患的藥劑之製造或製備。在某些實施例中，該涉及新血管生成之疾病或疾患為癌症。在一些實施例中，提供本文所提供之抗TF抗體及ADC以用作用於治療涉及血管發炎的疾病或疾患的藥物。在一些實施例中，提供本文所提供之抗TF抗體及ADC以用於治療涉及血管發炎之疾病或疾患的藥劑之製造或製備。
在一些實施例中，本文提供了一種藉由向個體投與有效量的本文所提供之抗TF抗體或ADC來在有需要之個體中治療涉及新血管生成之疾病或疾患的方法。在某些實施例中，該涉及新血管生成之疾病或疾患為癌症。在一些實施例中，本文提供了一種藉由向個體投與有效量的本文所提供之抗TF抗體或ADC來在有需要之個體中治療涉及血管發炎之疾病或疾患的方法。
在一些實施例中，本文提供了一種藉由向個體投與有效量的本文所提供之抗體或ADC來在有需要之個體中延遲涉及新血管生成之疾病或疾患發作的方法。
在一些實施例中，本文提供了一種藉由向個體投與有效量的本文所提供之抗體或ADC來在有需要之個體中預防涉及新血管生成之疾病或疾患發作的方法。
在一些實施例中，本文提供了一種藉由向個體投與有效量的本文所提供之抗體或ADC來在有需要之個體中延遲涉及血管發炎之疾病或疾患發作的方法。
在一些實施例中，本文提供了一種藉由向個體投與有效量的本文所提供之抗體或ADC來在有需要之個體中預防涉及血管發炎之疾病或疾患發作的方法。
在一些實施例中，本文所提供之ADC在向個體投與之後被個體很好地耐受。在一些實施例中，本文所提供之ADC在向個體投與之後相對於其他抗TF-ADC (諸如與MMAE連接之殖株25A3)具有更好的耐受性。例如，ADC例如相對於其他抗TF-ADC可導致降低之皮膚毒性。皮膚毒性之指標包括但不限於皮膚刺激、皮膚潰瘍、皮疹、皮膚發炎、瘙癢、抓痕、龜裂、酸痛、對光或日光曝露之敏感度增加、麻木、灼熱感、刺痛、腫塊、水泡、蕁麻疹、脫皮及疼痛。
在一些實施例中，本文所提供之一或多種ADC在向個體投與之後不需要投與一或多種消炎劑(例如，類固醇，例如，局部或全身的)。在一些態樣中，本文所提供之一或多種ADC在向個體投與之後相對於其他抗TF ADC (諸如與MMAE連接之殖株25A3)導致對投與一或多種消炎劑(例如，類固醇，例如，局部或全身的)之需要減少。
在一些實施例中，本文所提供之ADC在向個體投與之後例如相對於基線或相對於不同抗TF ADC導致低肝毒性或無肝毒性。在一些實施例中，本文所提供之ADC在向個體投與之後相對於其他抗TF ADC (諸如與MMAE連接之殖株25A3)導致降低之肝毒性。這可例如使用肝損傷之標記物來評估。肝損傷之標記物之非限制性實例包括白蛋白、膽紅素、球蛋白、γ-麩胺醯轉移酶(γGT或GGT)、麩胺酸丙酮酸轉胺酶(GPT)、鹼性磷酸酶(ALP)、丙胺酸轉胺酶(ALT)、天門冬胺酸轉胺酶(AST)、AST與血小板比率指數(APRI)、增強肝纖維化(ELF)、Fibrosis-4 (FIB-4)及Fibro指數。例如，藉由血清ALP、AST、ALT、γGT或膽紅素水準之降低來量測肝損傷之減少或肝損傷進展之減少。
在一些實施例中，本文所提供之ADC在向個體投與之後，抗體-藥物結合物相對於基線水準在個體中不增加天門冬胺酸轉胺酶(AST)水準。在一些實施例中，本文所提供之ADC在向個體投與之後相對於基線水準或相對於不同抗TF ADC在個體中導致天門冬胺酸轉胺酶(AST)水準降低。在一些實施例中，本文所提供之ADC在向個體投與之後相對於基線水準在個體中不增加丙胺酸轉胺酶水準。在一些實施例中，本文所提供之ADC在向個體投與之後相對於基線水準或相對於不同抗TF ADC在個體中導致降低之丙胺酸轉胺酶水準。
在一些實施例中，本文所提供之ADC在向個體投與之後例如相對於基線導致減輕、低或無嗜中性球減少症。這可相對於不同抗TF抗體-藥物結合物，諸如與MMAE連接之殖株25A3。
在一些實施例中，本文所提供之ADC在向個體投與之後例如相對於基線在個體中不改變、增加或減少單核球之數目。這可相對於不同抗TF抗體-藥物結合物，諸如與MMAE連接之殖株25A3。
消炎劑之非限制性實例包括非類固醇消炎藥(NSAID)、類固醇消炎藥、β-促效劑、抗膽鹼劑、抗組織胺(例如，乙醇胺、乙二胺、哌嗪及酚噻嗪)及甲基黃嘌呤。NSAID之實例包括但不限於阿司匹靈、伊布洛芬、柳酸鹽、乙醯胺酚、塞來昔布、雙氯芬酸(diclofenac)、依託度酸(etodolac)、非諾洛芬(fenoprofen)、吲哚美辛(indomethacin)、克多羅多克(ketoralac)、奧沙普秦(oxaprozin)、萘丁曼酮(nabumentone)、舒林酸(sulindac)、托曼汀(tolmentin)、羅非昔布(rofecoxib)、萘普生(naproxen)、可多普洛菲(ketoprofen)及萘丁美酮(nabumetone)。此類NSAID藉由抑制環氧化酶(例如，COX-1及/或COX-2)起作用。類固醇消炎藥之實例包括但不限於醣皮質素、地塞米松(dexamethasone)、可體松(cortisone)、氫化可體松(hydrocortisone)、普賴鬆(prednisone)、普賴蘇穠(prednisolone)、曲安西龍(triamcinolone)、柳氮磺胺嘧啶(azulfidine)及類花生酸諸如前列腺素、凝血脂素及白三烯。這些消炎劑可為局部或全身的。
消炎劑及其劑量、投與途徑及推薦用法為此項技術中已知的且已描述於諸如Physician's Desk Reference (第60版, 2006)之文獻中。 10   組合療法
在一些實施例中，本文所提及之抗體或ADC與至少一種額外治療劑一起投與。任何合適的額外治療劑均可與本文所提供之抗體或ADC一起投與。在一些態樣中，額外治療劑選自輻射、細胞毒性劑、化學治療劑、細胞生長抑制劑、抗激素劑、免疫刺激劑、抗血管生成劑及其組合。
額外治療劑可藉由任何適合的手段投與。在一些實施例中，本文所提供之抗體或ADC及額外治療劑包括在同一醫藥組成物中。在一些實施例中，本文所提供之抗體或ADC及額外治療劑包括在不同醫藥組成物中。
在本文所提供之抗體或ADC及額外治療劑包括在不同醫藥組成物中的實施例中，抗體或ADC之投與可發生在額外治療劑之投與之前、同時及/或之後。 11   診斷方法
亦提供了用於偵測個體之細胞上TF之存在的方法。此類方法可用於例如預測及評估對用本文所提供之抗體或ADC治療的反應性。
在一些實施例中，該方法可用於偵測患有或疑似患有疾病或疾患的個體中之TF。在一些實施例中，該等方法包含：(a) 接收來自個體之樣品；及(b)藉由使樣品與本文所提供之抗體接觸來偵測樣品中TF之存在或水準。在一些實施例中，該等方法包含：(a) 向個體投與本文所提供之抗體；及(b)偵測個體中TF之存在或水準。在一些實施例中，疾病或疾患為癌症。在一些實施例中，癌症為頭頸癌。在一些實施例中，癌症為卵巢癌。在一些實施例中，癌症為胃癌。在一些實施例中，癌症為食道癌。在一些實施例中，癌症為子宮頸癌。在一些實施例中，癌症為前列腺癌。在一些實施例中，癌症為胰臟癌。在一些實施例中，癌症為雌激素受體陰性(ER-)、黃體素受體陰性(PR-)及HER2陰性(HER2-)三陰性乳癌。在一些實施例中，癌症為神經膠質母細胞瘤。在一些實施例中，癌症為肺癌。在一些實施例中，癌症為膀胱癌。在一些實施例中，癌症為黑色素瘤。在一些實施例中，癌症為腎癌。在一些實施例中，該疾病或疾患涉及新血管生成。在某些實施例中，該涉及新血管生成之疾病或疾患為癌症。在一些實施例中，該疾病或疾患涉及血管發炎。
在一些實施例中，該等方法包含：(a) 向個體投與本文所提供之ADC；及(b)偵測個體中TF之存在或水準。在一些實施例中，疾病或疾患為癌症。在一些實施例中，癌症為頭頸癌。在一些實施例中，癌症為卵巢癌。在一些實施例中，癌症為胃癌。在一些實施例中，癌症為食道癌。在一些實施例中，癌症為子宮頸癌。在一些實施例中，癌症為前列腺癌。在一些實施例中，癌症為胰臟癌。在一些實施例中，癌症為雌激素受體陰性(ER-)、黃體素受體陰性(PR-)及HER2陰性(HER2-)三陰性乳癌。在一些實施例中，癌症為神經膠質母細胞瘤。在一些實施例中，癌症為肺癌。在一些實施例中，癌症為膀胱癌。在一些實施例中，癌症為黑色素瘤。在一些實施例中，癌症為腎癌。
在一些實施例中，本文所提供之抗體與螢光標記結合。在一些實施例中，本文所提供之抗體與放射性標記結合。在一些實施例中，本文所提供之抗體與酶標記結合。
在一些實施例中，本文所提供之ADC包含螢光標記。在一些實施例中，本文所提供之ADC包含放射性標記。在一些實施例中，本文所提供之ADC包含酶標記。
在一些實施例中，確定此類細胞表現之TF之相對量。表現TF之細胞之分數及此類細胞表現之TF之相對量可藉由任何合適的方法來確定。在一些實施例中，使用流動式細胞測量術進行此類量測。在一些實施例中，使用螢光輔助細胞分選(FACS)進行此類量測。 12   套組
亦提供了包含本文所提供之抗體或ADC之套組。套組可用於如本文所述治療、預防及/或診斷疾病或疾患。
在一些實施例中，套組包含容器及在容器上或與容器結合之標籤或藥品仿單。合適的容器包括例如瓶子、小瓶、注射器及IV溶液袋。容器可由諸如玻璃或塑膠之多種材料形成。容器容納本身或當與另一組成物組合時有效治療、預防及/或診斷疾病或疾患的組成物。容器可具有無菌進入口。例如，如果容器為靜脈內溶液袋或小瓶，則其可具有可被針刺穿的口。組成物中之至少一種活性劑為本文所提供之抗體或ADC。標籤或藥品仿單指示組成物用於治療所選疾患。
在一些實施例中，套組可包含(a) 第一容器及其中所容納之第一組成物，其中第一組成物包含本文所提供之抗體或ADC；及(b)第二容器及其中所容納之第二組成物，其中第二組成物包含另一治療劑。本發明之此實施例中之套組可進一步包含指示組成物可用於治療特定疾患之藥品仿單。
替代地或另外，套組亦可包括容納醫藥學上可接受之賦形劑之第二(或第三)容器。在一些態樣中，賦形劑為緩衝液。套組可進一步包括自商業及使用者觀點來看合乎需要之其他材料，包括過濾器、針及注射器。實例
以下為本發明之方法及組成物之實例。應理解，鑒於上文所提供之一般描述，可實施各種其他實施例。
以下為執行本發明之具體實施例之實例。實例僅出於說明性目的而提供，且不意欲以任何方式限制本發明之範圍。已努力確保關於所用數值(例如量、溫度等)之準確性，但應慮及一些實驗誤差及偏差。
除非另外指示，本發明之實踐使用此技術之技能範圍內之蛋白化學、生物化學、重組DNA技術及藥理學之習知方法。此類技術在文獻中得到充分說明。參見例如，T.E. Creighton,Proteins: Structures and Molecular Properties (W.H. Freeman and Company, 1993)；A.L. Lehninger,Biochemistry (Worth Publishers, Inc., 本期新增)；Sambrook等人,Molecular Cloning: A Laboratory Manual (第2版, 1989)；Methods In Enzymology (S. Colowick及N. Kaplan編, Academic Press, Inc.)；Remington's Pharmaceutical Sciences , 第18版 (Easton, Pennsylvania: Mack Publishing Company, 1990)；Carey及Sundberg,Advanced Organic Chemistry 第3版 (Plenum Press) A卷及B卷(1992)。實例 1 ：抗體 - 藥物結合物 (ADC) 之合成
如下所述製備抗TF抗體及連接子-毒素A (本文中亦稱為「LT-A」)之抗體-藥物結合物(ADC)。連接子-毒素A之結構(未連接)顯示於圖 1 中。抗TF抗體描述於2019年1月4日申請之PCT/US2019/12427中；其出於所有目的以引用之方式整體併入本文。
簡而言之，藉由添加參(2-羧乙基)膦(2.0-2.5或3.2莫耳當量)或最終濃度0.8 mM的二伸乙三胺五乙酸來使在pH 7.4磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)中之5至10 mg/mL 25A3抗體(殖株25A3之CDR及V區序列參見表8)還原。在37℃下2 h之後，將部分還原之抗體在冰上冷卻10分鐘，隨後在冰上與8莫耳當量的連接子-毒素A結合1 h。用過量的N-乙醯基-L-半胱胺酸淬滅反應。使淬滅之反應在冰上靜置30分鐘，之後進行純化。根據製造商之方案，將ADC各自通過兩輪40kDa MWCO Zeba™離心去鹽管柱(Spin Desalting Columns)(10 mL管柱，產品編號8772，批號RL240689)進行純化。純化之前，兩組管柱均用無菌PBS灌注。首先通過一組PBS灌注之灌注純化ADC，隨後收集樣品並通過另一組純化第二次。第二次純化之後，將ADC儲集回一起並無菌過濾且在-80℃下冷凍。
可藉由UV/vis光譜法、疏水性相互作用層析法(HIC)及/或逆相液相層析法分離聯飛行時間偵測及質量表徵(RP-UPLC/質譜法)來量測藥物-抗體比率(DAR)，如WO 2016/041082中所述。藥物連接形式之分佈(例如，DAR0、DAR1、DAR2等種類之分數)亦可藉由此項技術中已知之多種技術來分析，包括MS (具有或不具有伴隨層析分離步驟)、疏水性相互作用層析法、逆相HPLC或等電聚焦凝膠電泳(IEF)，亦如WO 2016/041082中所述。
對於此實例，所得ADC之藥物-抗體比率(DAR)為約3。藉由疏水性相互作用層析法確定DAR：平均DAR =(0×(DAR0面積%)+2×(DAR2面積%)+4×(DAR4面積%)+6×(DAR6面積%)+8×(DAR8面積%)/100。使用粒徑篩析層析法確保ADC製劑為至少95%單體的。
包含LT-A之ADC之描繪顯示於圖 2 。包含25A3及LT-A之ADC (例如，如此實例中所製備)用於以下實例2-8之檢定及研究中。實例 2 ：抗體 - 藥物結合物 (ADC) 之細胞毒性檢定
為了評估ADC之細胞毒性，將TF陽性A431細胞以每孔在40 µL培養基中之4×103 個細胞鋪板於384孔板(Greiner Bio-One，Monroe，NC，USA)中。如實例1中所述製備包含與連接子-毒素A結合之抗TF抗體25A3或同型對照抗體之ADC，隨後以5 nM開始進行連續稀釋。將細胞與ADC儀器孵育4 h，接著沖洗並在新鮮培養基中再培養68 h，或與ADC一起孵育3天。隨後藉由在CellTiter-Glo (CTG)檢定試劑(Promega，Madison，WI，USA)中之裂解來評估細胞生存力。在Envision板讀數器上量測CTG發光，且在Prism中對4次重複之平均值及及標準偏差進行作圖。對於各ADC，使用4參數結合模型在Prism中計算IC50 。
圖 3A 顯示細胞生存力，如藉由在與同型對照或25A3-LT-A一起孵育4 h，接著沖洗並培養68 h之後，TF陽性A431細胞中之CTG發光及計算IC50 所指示。圖 3B 顯示細胞生存力，如藉由在與同型對照或25A3-LT-A一起孵育3天之後，TF陽性A431細胞中之CTG發光及計算IC50 所指示。僅抗TF ADC在TF陽性A431細胞中導致細胞毒性。
這些資料指示，抗TF抗體-藥物結合物降低體外TF陽性細胞之生存力。實例 3 ：抗 TF ADC 在 MDA MB213 異種移植物模型中之作用
進行了在免疫受損小鼠中之異種移植物研究以評估體內ADC之功效。將TF陽性MDA-MB231三陰性乳癌細胞株皮下植入無胸腺裸鼠(Charles River Laboratories，Wilmington，MA)之側腹中。當腫瘤達到平均大小150-200 mm3時將動物隨機化並每週一次用指示劑量的抗TF抗體-藥物結合物25A3-LT-A (如實例1中所述經製備)、同型對照-LT-A或媒劑(PBS)腹膜內(i.p.)治療達2週。每兩週進行體重及腫瘤大小評估。一旦腫瘤大小達到1200 mm3 或皮膚潰瘍明顯，便將動物自研究移除並進行安樂死。結果描繪於圖 4A 。與任一劑量的同型對照LT-A相比，用5 mg/kg 25A3-LT-A之治療減小了腫瘤且延遲了腫瘤生長。與任一劑量的同型對照LT-A相比，用15 mg/kg 25A3-LT-A之治療減小了腫瘤且預防了腫瘤生長。這些資料指示，抗TF抗體-藥物結合物25A3-LT-A在體內有效減小腫瘤大小。實例 4 ：抗 TF ADC 在 HPAF-II 異種移植物模型中之作用
進行了在免疫受損小鼠中之異種移植物研究以評估體內ADC之功效。將TF陽性HPAF-II胰臟癌細胞皮下植入無胸腺裸鼠(Charles River Laboratories，Wilmington，MA)之側腹中。團當腫瘤達到平均大小150-200 mm3 時將動物隨機化至治療組並每週一次用指示劑量的抗TF抗體-藥物結合物25A3-LT-A (如實例1中所述經製備)、同型對照-LT-A或媒劑(PBS)腹膜內(i.p.)處理達2週。每兩週進行體重及腫瘤大小評估。一旦腫瘤大小達到1200 mm3 或皮膚潰瘍明顯，便將動物自研究移除並進行安樂死。結果描繪於圖 4B 。與媒劑治療或同型對照LT-A治療之組相比，包含與LT-A結合之抗TF抗體25A3之ADC降低了腫瘤大小。這些資料指示，抗TF抗體-藥物結合物25A3-LT-A在體內有效減小腫瘤大小。
對於劑量反應研究，當腫瘤達到大小200 mm3 時，i.p.投與指示劑量的抗TF抗體-藥物結合物25A3-LT-A一次。圖 5A 至圖 5D 顯示在範圍為1.25 mg/kg至10 mg/kg之劑量下投與之25A3-LT-A對腫瘤體積的影響。用1.25 mg/kg或媒劑治療之小鼠在接受治療15天內腫瘤超過1000 mm3 。相比之下，用5 mg/kg、7.5 mg/kg或10 mg/kg 25A3-LT-A治療之小鼠在治療之後的前五週顯示較慢的腫瘤生長。
對於藥物動力學(PK)研究，當腫瘤達到大小200 mm3 時開始，用2.5 mg/kg或10 mg/kg抗TF抗體-藥物結合物25A3-LT-A i.p.治療小鼠一次。簡而言之，藉由下頜骨出血(0.1 mL)每24小時收集樣品達5天。在PK檢定中量測25A3-LT-A濃度，在該檢定中hTF為塗佈試劑且二級抗hIgG為偵測劑。PK檢定之結果顯示於圖 6 及表23。資料顯示，抗TF抗體-藥物結合物25A3-LT-A具有線性藥物動力學。 表23. 用25A3-LT-A治療之小鼠之PK檢定之結果。
劑量 cmax (µg/mL) tmax (h) AUC0-t (µg/mL *h) AUCinf (ug/mL *h) T1/2 (h) CL (mL/kg/h) Vss (mL/kg)
2.5 mg/kg 25A3-LT-A 26.3 2 1190 1670 71.7 1.50 139
10 mg/kg 25A3-LT-A 136 2 6740 10500 86.3 0.951 111
為了評估在後期介入期間投與之抗TF ADC之作用，當腫瘤達到大小500 mm3 時開始，用7.5 mg/kg或10 mg/kg抗TF抗體-藥物結合物25A3-LT-A i.p.治療小鼠一次。結果顯示於圖 7A 至圖 7D 。相對於對照組(媒劑)中之小鼠，用7.5 mg/kg 25A3-LT-A治療之小鼠顯示腫瘤生長減輕。資料亦顯示用較高劑量10 mg/kg治療之小鼠相對於對照組(媒劑)中之小鼠的負腫瘤生長(即，腫瘤體積減小)。實例 5 ： 抗 TF ADC 在各種患者來源之異種移植物模型中之作用
進行了在無胸腺裸鼠(Envigo，Indianapolis，IN)中之患者來源之異種移植物(PDX)研究以評估體內25A3-LT-A ADC之功效。簡而言之，使腫瘤在家畜中繼代並收穫以供重新植入。將研究動物之左側腹單邊植入腫瘤碎片且當其腫瘤達到平均大小150-200 mm3 時隨機化至治療組。將動物用10 mg/kg 25A3-LT-A或媒劑對照(PBS) i.p.處理一次。每兩週進行體重及腫瘤體積量測。一旦腫瘤大小達到1200 mm3 或當皮膚潰瘍明顯時，便將動物自研究移除並在30天後進行安樂死。繪製隨時間推移的平均腫瘤體積(MTV)與平均值標準誤差(SEM)。藉由計算腫瘤生長抑制來確定腫瘤功效(TGI% = 100%×[1-(治療組之最終MTV-初始MTV)/(對照組之最終MTV-初始MTV)])，之後媒劑組中之任一動物均由於腫瘤大小≥ 1200 mm3 而進行安樂死。
將免疫組織化學(IHC)分析用於偵測TF表現及細胞定位(膜對細胞質)。在95-97℃水浴中使用Rip Tide (Mosaic Laboratories，Lake Forest，CA)將未治療小鼠之組織預處理40 min，在工作台上冷卻10 min，用蒸餾水淋洗3次且用Splash-T緩衝液(Mosaic Laboratories)淋洗5 min。將組織切片在EnVision過氧化物酶封閉試劑(EnVision+小鼠HRP偵測套組，Agilent，Carpinteria，CA)中封閉5 min，接著在Splash-T緩衝液中淋洗2次各5 min。接下來，用抗TF抗體(小鼠殖株HTF-1)或小鼠陰性對照試劑將組織切片染色30 min，接著在Splash-T緩衝液中淋洗2次各5 min。用EnVision+小鼠HRP (EnVision+小鼠HRP偵測套組)進行組織切片之第二染色步驟達30 min，接著在Splash-T緩衝液中淋洗2次各5 min。為了可視化抗TF染色，用DAB色素原(EnVision+小鼠HRP偵測套組)對組織切片進行顯影達5 min，接著在蒸餾水中浸泡10次並淋洗5 min。將組織切片用蘇木精複染5 min，接著在蒸餾水中淋洗3次。
在0 (負)至3 (或「3+」)之半定量整數量表上由認證之解剖病理學家對染色強度進行評分。記錄在各強度水準下陽性染色之細胞之百分比。評分係基於TF對於細胞膜的定位。H分數將染色強度之分量與陽性細胞之百分比組合。其值在0與300之間且定義為：1×(在1+強度下染色之細胞之百分比)+2×(在2+強度下染色之細胞之百分比)+3×(在3+強度下染色之細胞之百分比)=H分數。3+為強染色，2+為中等染色，1+為弱染色且0為無染色。 PDX 研究 1
使用上文所揭示之方法，評估了五隻小鼠(模型)之25A3-LT-A ADC之功效。結果顯示於表24-29及圖 8A 至圖 8E 。如所示，五個模型中的四個顯示出顯著的腫瘤生長抑制。這些資料表明在多種腫瘤類型及TF表現癌症中功效高。模型之IHC分析顯示不同腫瘤模型之間相當的H分數(所有均在100與200之間)(指示相當的TF表現水準)以及異質性的TF分佈(圖 9A 至圖 9E )。 表24. PDX研究1中報導之腫瘤生長抑制。
模型編號 腫瘤類型 腫瘤生長抑制
CTG-0353 胃 97%
CTG-0707 胃 10%
CTG-0786 頭頸 100%
CTG-1076 膀胱 88%
CTG-1130 頭頸 101%
圖 9A 及表25顯示CTG-0707胃模型之IHC分析之結果。在下表中，SCL=亞細胞定位。M=膜染色；C=細胞質染色；MC＝膜/細胞質染色CM＝細胞質/膜染色。 表25. CTG-0707胃模型之H分數確定。
在各強度下的細胞染色% 正百分比 H分數
3+ SCL 2+ SCL 1+ SCL 0      
0    60 CM 20 CM 20 80 140
圖 9B 及表26顯示CTG-0353胃模型之IHC分析之結果。 表26. CTG-0353胃模型之H分數確定。
在各強度下的細胞染色% 正百分比 H分數
3+ SCL 2+ SCL 1+ SCL 0      
10 MC 40 MC 20 MC 30 70 130
圖 9C 及表27顯示CTG-1076膀胱模型之IHC分析之結果。 表27. CTG-1076膀胱模型之H分數確定
在各強度下的細胞染色% 正百分比 H分數
3+ SCL 2+ SCL 1+ SCL 0
0    70 MC 10 MC 20 80 150
圖 9D 及表28顯示CTG-0786頭頸模型之IHC分析之結果。 表28. CTG-0786頭頸模型之H分數確定。
在各強度下的細胞染色% 正百分比 H分數
3+ SCL 2+ SCL 1+ SCL 0
0    50 MC 30 MC 20 80 130
圖 9E 及表29顯示CTG-1130頭頸模型之IHC分析之結果。 表29. CTG-1130頭頸模型之H分數確定。
在各強度下的細胞染色% 正百分比 H分數
3+ SCL 2+ SCL 1+ SCL 0
20 MC 30 MC 40 MC 10 90 160
PDX 研究 2
使用上文所揭示之方法，評估了五隻小鼠之25A3-LT-A ADC之功效。結果顯示於以下表30-35及圖 10A 至圖 10E 。如所示，五個模型中的兩個顯示出顯著的腫瘤生長抑制。相對於PDX研究1中所測試之模型，PDX研究2中所測試之模型中有較大變異，其由不同的第三方供應商進行。具體而言，兩個食道癌模型及一個胰臟癌模型(PA6262)表現出低腫瘤生長抑制。這些模型中所觀察之低腫瘤生長抑制之一些潛在解釋包括： ● 植入後，相對於其他模型，TF表現低或不存在；及/或 ● 腫瘤內壞死；及/或 ● 實驗變異或誤差。 模型之IHC分析顯示不同腫瘤模型之間相當的H分數(指示相當的TF表現水準)以及異質性的TF分佈(圖 11A 至圖 12 )。表 30 . PDX研究2中報導之腫瘤生長抑制。
模型編號 腫瘤類型 腫瘤生長抑制
HN2574 HN-頭頸癌 90%
ES0147 ES-食道癌 36%
ES0214 ES-食道癌 -4%
PA1332 PA-胰臟癌 60%
PA6262 PA-胰臟癌 30%
圖 11A 及表31顯示HN2574頭頸模型之IHC分析之結果。 表31. HN2574頭頸模型之H分數確定。
在各強度下的細胞染色% 正百分比 H分數
3+ SCL 2+ SCL 1+ SCL 0
10 MC 30 MC 50 MC 10 90 140
圖 11B 及表32顯示ES0214食道模型之IHC分析之結果。 表32. ES0214食道模型之H分數確定。
在各強度下的細胞染色% 正百分比 H分數
3+ SCL 2+ SCL 1+ SCL 0
10 CM 20 CM 40 MC 30 70 110
圖 11C 及表33顯示ES0147食道模型之IHC分析之結果。 表33. ES0147食道模型之H分數確定。
在各強度下的細胞染色% 正百分比 H分數
3+ SCL 2+ SCL 1+ SCL 0
15 MC 15 MC 30 MC 40 60 105
圖 11D 及表34顯示PA1332胰臟模型之IHC分析之結果。 表34. PA1332胰臟模型之H分數確定。
在各強度下的細胞染色% 正百分比 H分數
3+ SCL 2+ SCL 1+ SCL 0
10 CM 60 CM 25 CM 5 95 175
圖 11E 及表35顯示PA6262胰臟模型之IHC分析之結果。 表35. PA6262胰臟模型之H分數確定。
在各強度下的細胞染色% 正百分比 H分數
3+ SCL 2+ SCL 1+ SCL 0        
10 MC 30 CM 50 MC 10 90 140  
圖12顯示三個額外小鼠模型之免疫染色，該等小鼠模型植入了卵巢或宮頸癌腫瘤患者來源之異種移植物且使用上文在實例5中所揭示之方法進行了IHC分析。實例 6 ： 抗 TF ADC 在胃癌患者來源之異種移植物模型中之作用
進行 了在免疫受損小鼠中之異種移植物研究以評估體內ADC之功效。將TF陽性胃癌患者來源之異種移植物皮下植入於無胸腺裸鼠(Envigo，Indianapolis，IN)之側腹中。當腫瘤達到平均大小150-200 mm3時將動物隨機化並每週一次用指示劑量的抗TF抗體-藥物結合物25A3-LT-A (如實例1中所述經製備)、同型對照-LT-A或媒劑(PBS)腹膜內(i.p.)治療達2週。每兩週進行體重及腫瘤大小評估。一旦腫瘤大小達到1200 mm3 或皮膚潰瘍明顯，便將動物自研究移除並進行安樂死。結果描繪於圖 13A 。與媒劑治療或同型對照LT-A治療之組相比，包含與LT-A結合之抗TF抗體25A3之ADC (25A3-LT-A)降低了腫瘤大小。與12 mg/kg同型對照LT-A相比，用4 mg/kg 25A3-LT-A之治療減小了腫瘤且延遲了腫瘤生長。與12 mg/kg同型對照LT-A相比，用12 mg/kg 25A3-LT-A之治療減小了腫瘤且預防了腫瘤生長。這些資料指示，抗TF抗體-藥物結合物25A3-LT-A在體內有效減小腫瘤大小。實例 7 ：抗 TF ADC 在肺癌患者來源之異種移植物模型中之作用
進行 了在免疫受損小鼠中之異種移植物研究以評估體內ADC之功效。將TF陽性肺癌患者來源之異種移植物皮下植入於NSG™ (NOD.Cg‐Prkdcscid Il2rgtm1Wjl /SzJ)小鼠(Jackson Laboratories，Sacramento，CA)之側腹中。當腫瘤達到平均大小150-200 mm3時將動物隨機化並每週一次用指示劑量的抗TF抗體藥物結合物25A3-LT-A (如實例1中所述經製備)或同型對照-LT-A腹膜內(i.p.)治療達2週。每兩週進行體重及腫瘤大小評估。一旦腫瘤大小達到1200 mm3 或皮膚潰瘍明顯，便將動物自研究移除並進行安樂死。結果描繪於圖 13B 。與同型對照LT-A治療之組相比，包含與LT-A結合之抗TF抗體25A3之ADC延遲了腫瘤生長。這些資料指示，抗TF抗體-藥物結合物25A3-LT-A在體內有效延遲腫瘤進展。實例 8 ：前導 Cyno 毒物學研究： 25A3-LT-A 相對於 25A3-MMAE
此項研究之目的為評估ADC 25A3-LT-A相對於抗TF抗體-藥物結合物25A3-MMAE之毒性參數以及確定前者是否相對於另一包含MMAE之抗TF抗體藥物結合物(托西莫單抗維度汀(tisotumab vedotin)(Genmab))之公開可獲得之資料表現出類似(如果不是更好)的中靶毒物學。托西莫單抗維度汀為用蛋白酶可裂解的連接子與MMAE結合之抗TF完全人類單株抗體。(Chenard-Poirier等人,Annals of Oncology 28.增刊_5 (2017))。托西莫單抗維度汀在先前研究中顯示當在2.2 mg/kg之劑量下投與時引起劑量限制性毒性(例如，嗜中性球減少症)。(de Bono等人,The Lancet Oncology 20.3 (2019): 383-393)。亦在3 mg/kg托西莫單抗維度汀之劑量下觀察到嗜中性球減少症及皮膚毒性。其在6 mg/kg下導致劑量限制性毒性，在該劑量下，一或多個個體表現出4級嗜中性球減少症以及嚴重的皮膚刺激及皮膚潰瘍。(Parren, P., Advancing Towards the Clinic As Soon As Possible: Pre-Clinical Development of a Therapeutic ADC Targeting Tissue Factor. World ADC Conference, 2013年10月16日；Geoij, B.E.C.G.Antibody-drug conjugates in cancer . Diss. Faculty of Medicine, Leiden University Medical Center (LUMC), Leiden University, 2016。)使用與LT-A結合之HER-2靶向抗體之先前研究顯示，HER-2-LT-A直至18 mg/kg仍不導致顯著的嗜中性球減少症。此外，已報導了托西莫單抗維度汀之暫時ALT及AST升高。
為了進行當前前導毒物學研究，雌性石蟹獼猴(「cyno」)(每組n =3)用25A3-LT-A或25A3-MMAE (藉由靜脈內注射)進行治療且在研究第1、22及36天接受指示劑量。用25A3-MMAE治療之動物接受每劑量1.5 mg/kg、3 mg/kg或6 mg/kg，而用25A3-LT-A治療之動物接受每劑量3 mg/kg、6 mg/kg或18 mg/kg。所有直到研究第43仍存活的猴子均接受計劃之安樂死。 臨床觀察：皮膚毒性
表36提供了到研究結束時各種治療組中與皮膚毒性有關之定性資料。如所示，與用25A3-LT-A治療之動物相比，在用25A3-MMAE治療之動物中有更嚴重的皮膚刺激。例如，在6.0 mg/kg 25A3-LT-A中，三隻動物中僅一只需要局部類固醇治療，而在6.0 mg/kg 25A3-MMAE組中，三隻動物中有兩只需要局部及全身類固醇以抵抗皮膚刺激。在所有25A3 LT-A治療組(n =12)中，僅一隻動物需要全身類固醇，且該動物已接受最高測試劑量18.0 mg/kg，其為25A3-MMAE組中所測試之最高劑量的3倍。這些資料指示，與對應體基於LT-A之抗TF抗體-ADC相比，當使用基於MMAE之抗TF ADC時，皮膚毒性較大(且耐受性較低)。 表36. 與皮膚毒性有關之臨床觀察。
組別 觀察結果 治療
1.5 mg/kg 25A3-MMAE 所有動物在第一劑之後鼠蹊區中之皮膚泛紅，且1只動物直到第43天皮膚仍泛紅   
3.0 mg/kg 25A3-MMAE 第一劑之後鼠蹊區、後肢及口鼻部之皮膚泛紅   
6.0 mg/kg 25A3-MMAE 第一劑之後有大範圍的皮膚泛紅及乾燥，第二劑之後更有限 兩隻動物：局部及全身類固醇
3.0 mg/kg 25A3-LT-A 鼠蹊區域及後肢中之皮膚泛紅   
6.0 mg/kg 25A3- LT-A 皮膚泛紅擴大至更多區域 一隻動物中有過度抓痕 一隻動物：局部類固醇
12.0 mg/kg 25A3- LT-A 皮膚泛紅擴大至更多區域 過度抓痕 一隻動物：局部類固醇
18.0 mg/kg 25A3- LT-A 皮膚泛紅擴大至更多區域 1只動物中有結膜炎/眼感染 一隻動物：局部及全身類固醇
臨床化學：肝毒性
為了評估與25A3-MMAE及25A3-LT-A治療有關之肝毒性參數，量測了球蛋白、白蛋白、丙胺酸轉胺酶(ALT)及天門冬胺酸轉胺酶(AST)。在研究第0 (治療前)、8、15、29及36天以及安樂死之前，收集各猴子之血液樣品。圖 14A 及圖 14B 分別顯示指示之治療組之AST及ALT水準。這些資料顯示，在研究過程中，在用12 mg/kg 25A3-LT-A及18 mg/kg 25A3-LT-A治療之猴子中AST暫時增加。這兩個治療組均表現出2級AST升高。此外，12 mg/kg 25A3-LT-A及18 mg/kg 25A3-LT-A治療組均表現出球蛋白略微增加且白蛋白略微增加。25A3-MMAE及25A3-LT-A均不導致暫時ALT升高。 血液學
為了進一步評估25A3-MMAE及25A3-LT-A潛在的脫靶效應，量測了猴子中之嗜中性球及單核球。在研究第0 (治療前)、4、8、15、25、29、36及43天以及安樂死之前，收集各猴子之血液樣品。使用樣品完成血液計數，其確定了血液學參數，包括但不限於單核球計數及嗜中性球計數。
圖 15A 至圖 17D 顯示研究過程中之嗜中性球水準。在3 mg/kg 25A3-MMAE及6 mg/kg 25A3-MMAE組中所有動物之嗜中性球均顯著減少。相比之下，25A3-LT-A組中之大部分猴子均停留在高於歷史平均值或具有單次下降。一個例外為猴子4502；然而，應當注意，猴子4502係以極低嗜中性球計數開始(圖 17A )。資料顯示，用6 mg/kg 25A3-MMAE治療之猴子中有3級及4級嗜中性球且25A3-LT-A治療組中之猴子無嗜中性球。這指示當用25A3-MMAE治療而不是用25A3-LT-A治療時在6 mg/kg下之劑量限制性嗜中性球。
除18 mg/kg 25A3-LT-A治療組之外，25A3-MMAE及25A3-LT-A治療組中之單核球水準為相當的(圖 18 )。在18 mg/kg 25A3-LT-A治療組內，暫時單核球升高歸因於猴子7503，其患有眼感染。 PK 及免疫原性
為了檢查ADC PK，在投與第一劑及第二劑之後收集猴子之血液樣品，且使用單株抗體(mAB)檢定及完整ADC檢定進行評估。mAB檢定使用hTF作為塗佈試劑且使用二級抗hIgG作為偵測劑。完整ADC檢定使用抗毒素mAb作為塗佈試劑且使用抗IgG作為偵測劑。表37及38顯示mAb檢定及完整ADC檢定之結果。 表37. 平均mAB檢定結果與標準偏差。
分子 劑量水準(mg/kg) 第一劑 第二劑
      Cmax (µg/mL) AUC-00-21 (ug*d/mL) t1/2 ( 天數) Cmax AUC21-42 (ug*d/mL) t1/2 ( 天數)
25A3-MMAE 1.5 33.7 (2.79) 53.0 (10.4) 1.15 (0.166) 14.0 (15.6) 17.1 (23.5) 0.679 (0.371)
25A3-MMAE 3 66.2 (5.10) 137 (16.3) 1.45 (0.166) 36.7 (12.3) 21.7 (12.5) 0.462 (0.202)
25A3-MMAE 6 139 (6.40) 358 (64.2) 1.67 (0.164) 95.3 (55.4) 146 (137) 1.04 (0.779)
25A3-LT-A 3 62.9 (9.17) 200 (19.1) 1.67 (0.230) 54.7 (31.6) 137 (97.8) 1.15 (0.282)
25A3- LT-A 6 162 (23.7) 504 (74.1) 1.81 (0.220) 142 (26.8) 259 (59.1) 1.62 (0.536)
25A3- LT-A 12 291 (15.2) 1290 (84.2) 2.67 (0.562) 273 (140) 748 (117) 1.67 (0.139)
25A3- LT-A 18 466 (37.6) 1970 (207) 4.73 (0.423) 375 (82.2) 2000 (145) 3.97 (0.229)
表38. 平均完整ADC檢定結果與標準偏差
分子 劑量水準(mg/kg) 第一劑 第二劑
      Cmax (µg/mL) AUC-00-21 (ug*d/mL) t1/2 (天數) Cmax AUC21-42 (ug*d/mL) t1/2 (天數)
25A3-MMAE 1.5 31.6 (1.63) 38.4 (5.87) 1.12 (0.169) 15.8 (14.1) 16.4 (15.8) 0.820 (0.201)
25A3-MMAE 3 57.1 (7.17) 88.9 (11.5) 1.34 (0.161) 39.2 (14.0) 26.4 (16.1) 0.582 (0.234)
25A3-MMAE 6 157 (15.7) 265 (45.0) 1.64 (0.172) 99.2 (56.7) 103 (86.4) 0.957 (0.681)
25A3-LT-A 3 68.1 (6.23) 214 (27.4) 1.91 (0.250) 59.4 (32.3) 170 (110) 1.39 (0.369)
25A3-LT-A 6 165 (10.7) 511 (84.2) 2.23 (0.436) 152 (13.6) 302 (35.2) 2.26 (0.823)
25A3-LT-A 12 281 (18.7) 1250 (86.7) 3.03 (0.589) 278 (22.4) 805 (118) 2.12 (0.179)
25A3-LT-A 18 464 (24.5) 2000 (212) 5.10 (0.816) 378 (90.4) 2100 (205) 4.14 (0.410)
對於25A3-MMAE及25A3-LT-A，時間濃度輪廓為類似的，如用mAB及完整ADC檢定所確定。這表明各ADC均不快速降解。
表39中概述了分析PK及免疫原性資料之結果。在25A3-MMAE之情況下，PK隨第一劑近似線性地增加，且在第二劑投與之後濃度顯著低於第一劑投與之後。在25A3-LT-A之情況下，在各組中，第二劑投與之後濃度與第一次投與之後觀察到之濃度類似(除3 mg/kg劑量之外)。資料表明略微標靶介導之藥物處置，其隨劑量增加而減少。資料亦顯示，在3及6 mg/kg下，與25A3-LT-A相比，25A3-MMAE之清除較快，表明非標靶介導之攝取。
如表39中所示，所有猴子均發展了抗藥物-抗體(ADA)。儘管觀察到免疫原性，但一般而言，石蟹獼猴中之ADA不能預測人類中之ADA。 表39. PK及免疫原性結果。
組別 PK 免疫原性
1.5 mg/kg 25A3-MMAE 第一劑與第二劑之間暴露顯著降低 在第22天(效價105-2080)及第43天(效價30-7385)所有動物均為陽性
3.0 mg/kg 25A3-MMAE 第一劑與第二劑之間暴露顯著降低 在第22天(效價410-1429)及第43天(效價1176-1387)所有動物均為陽性
6.0 mg/kg 25A3-MMAE 第一劑與第二劑之間暴露顯著降低 在第22天(效價301-6066)及第43天(效價27-2177)所有動物均為陽性
3.0 mg/kg 25A3-LT-A 第一劑與第二劑之間暴露中等降低 在第22天(效價5-874)所有動物均為陽性且在第43天(效價301-1341) 2只動物為陽性
6.0 mg/kg 25A3- LT-A 第一劑與第二劑之間暴露中等降低 在第22天(效價219-395)及第43天(效價198-1432)所有動物均為陽性
12.0 mg/kg 25A3- LT-A 第一劑與第二劑之間暴露略微降低 在第22天(效價63-92)及第43天(效價26-53)所有動物均為陽性
18.0 mg/kg 25A3- LT-A 第一劑與第二劑之間暴露略微降低 在第22天(效價4-46)及第43天(效價2-32)所有動物均為陽性
實例 9 ：連接子 - 毒素 A 之合成
以下實例描述了包含阿司他丁衍生物化合物9 之示範性連接子-毒素(連接子-毒素A，亦稱為LT-A)之製備：
Figure 02_image109
9
可採用類似方案製備包含如本文所述之具有通式I 之其他阿司他丁衍生物之連接子-毒素(亦參見國際專利申請公開案第WO 2016/041082號)。 7.1 (2R,3R)-3- 甲氧基 -2- 甲基 -3-((S)- 吡咯啶 -2- 基 ) 丙酸乙酯 ( 化合物 1)
Figure 02_image111
在0℃下以逐滴方式向(2R,3R)-3-((S)-1-(三級丁氧羰基)吡咯啶-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸(Boc-Dap-OH，4.31 g，15.0 mmol)於絕對乙醇(27.0 mL)中之經攪拌溶液中添加亞硫醯氯(3.0 mL)。使所得溶液升溫至室溫且藉由HPLC-MS監測進展。18 h之後，未偵測到剩餘起始材料且在減壓下將溶液濃縮至乾。將所得油狀物懸浮於甲苯(10 mL)中並在減壓下濃縮兩次，隨後懸浮於乙醚(5 mL)中並在減壓下濃縮兩次以得到呈白色固體泡沫之標題化合物(3.78 g，定量產率%)。MSm/z 觀察值= 216.5 (M+1)。 7.2 (3R,4S,5S)-4-((S)-2-((( 苯甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-N,3- 二甲基丁醯胺基 )-3- 甲氧基 -5- 甲基庚酸 ( 化合物 3)
Figure 02_image113
如國際專利申請公開案第WO 2016/041082號中所述製備化合物2 。
向化合物2 (6.965 g，14.14 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之經攪拌溶液中添加三氟乙酸(5.0 mL)。藉由HPLC-MS監測反應之完成且40 h之後無起始材料剩餘。將反應在減壓下濃縮，與甲苯(2×10 mL)及二氯甲烷(2×10 mL)共蒸發以獲得泡沫狀白色固體(6.2 g，用殘餘TFA定量產率)。將此材料溶解於200 mL熱1:3 EtOAc:己烷中且使其冷卻至室溫。在冷卻期間，形成沉澱物以及一些小晶體。添加5 mL EtOAc且再次加熱懸浮液以充分地溶解沉澱物。在冷卻至室溫時形成更多晶體且將燒瓶置於-30℃下隔夜。次日上午，傾析母液且用2×50 mL己烷沖洗晶體並在高真空下乾燥。回收5.67 g呈晶體產物之標題化合物。MSm/z 觀察值= 405.7 (M+1)。 7.3 (2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((( 苯甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-N,3- 二甲基丁醯胺基 )-3- 甲氧基 -5- 甲基庚醯基 ) 吡咯啶 -2- 基 )-3- 甲氧基 -2- 甲基丙酸乙酯 ( 化合物 4)
Figure 02_image115
在室溫下向化合物3 (6.711 g，15.37 mmol，1.025當量)於二氯甲烷(5.0 mL)及N,N -二甲基甲醯胺(5.0 mL)之混合物中之經攪拌溶液中添加HATU (5.732 g，15.07 mmol，1.005當量)及N,N -二異丙基乙胺(7.84 mL，3當量)。在室溫下攪拌30分鐘之後，逐滴添加化合物1 (3.776 g，15.00 mmol，1.0當量)於二氯甲烷(1.0 mL)及N,N -二甲基甲醯胺(1.0 mL)之混合物中之溶液，且用額外3 mL 1:1二氯甲烷:N,N -二甲基甲醯胺沖洗殘餘化合物1 。藉由HPLC-MS監測反應且15分鐘之後未觀察到剩餘化合物1 。將反應在減壓下濃縮，用乙酸乙酯(約125 mL)稀釋且用1 M HCl (2×50 mL)、1 × dH2 O (1×50 mL)、飽和NaHCO3 (3×50 mL)、鹽水(25 mL)萃取有機相。用25 mL EtOAc洗滌酸性及鹼性水層。然後彙集所有有機物且經MgSO4 乾燥，過濾且濃縮以得到紅色油狀物。將殘餘物溶解於微量二氯甲烷(約10 mL)中，裝載於Biotage® SNAP Ultra 360 g矽膠管柱(IsoleraTM Flash System；Biotage AB，Sweden)上以供純化(在己烷中之20-100% EtOAc，經10個管柱體積)。彙集含有純產物之級分以回收7.9 g泡沫狀白色固體。將不純部分在Biotage® SNAP Ultra 100 g矽膠管柱上進行第二次純化且與純產物彙集以回收呈白色泡沫狀固體之標題化合物(8.390 g，88.3%)。MSm/z 觀察值= 634.7 (M+1)。 7.4 (2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((( 苯甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-N,3- 二甲基丁醯胺基 )-3- 甲氧基 -5- 甲基庚醯基 ) 吡咯啶 -2- 基 )-3- 甲氧基 -2- 甲基丙酸 ( 化合物 5)
Figure 02_image117
向化合物4 (8.390 g，13.24 mmol)於1,4-二噁烷(158 mL)中之經攪拌溶液中添加dH2 O (39.7 ml)及氫氧化鋰單水合物(1 M於H2 O中，39.7 mL，3當量)。將反應在4℃下進行攪拌且藉由HPLC-MS監測起始材料之消耗，其耗時3天直至僅剩餘痕量化合物4 。在反應過程期間，除所需材料以外亦形成小百分率的新產物，其對應於甲醇之損失(β-消除，＜2%)。將反應以添加1 M HCl水溶液(50 mL)來酸化且在減壓下濃縮以移除二噁烷。剩餘反應混合物用乙酸乙酯(4×50 mL)萃取且將有機相彙集，用鹽水(15 mL+2 mL 2 M HCl)洗滌，經MgSO4 乾燥，過濾且在減壓下濃縮以得到淺色油狀物。將油狀物再溶解於乙醚(約50 mL)中且在減壓下濃縮(3x)以促進殘餘二噁烷之移除，從而得到呈黏稠油狀物之標題產物(7.81 g，97%產率，具有一些殘餘二噁烷及化合物4 )。MSm/z 觀察值= 606.7 (M+1)。 7.5 ((S)-1-(((3R,4S,5S)-3- 甲氧基 -1-((S)-2-((1R,2R)-1- 甲氧基 -2- 甲基 -3- 側氧基 -3-((4-(2,2,2- 三氟乙醯胺基 ) 苯基 ) 磺醯胺基 ) 丙基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-5- 甲基 -1- 側氧基庚 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-3- 甲基 -1- 側氧基丁 -2- 基 ) 胺基甲酸苯甲酯 ( 化合物 7)
Figure 02_image119
如國際專利申請公開案第WO 2016/041082號中所述製備化合物6 。
向化合物5 (7.12 g，11.754 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之經攪拌溶液中添加2,2,2-三氟-N-(4-胺磺醯基苯基)乙醯胺(化合物6 ，4.095 g，1.3當量，溶解於3 mL DMF中)、N,N -二甲基吡啶(1.867 g，1.3當量)及N,N -二甲基甲醯胺(1.5 mL)以生成淺黃色懸浮液。進一步添加5 mL DMF不使溶液變得澄清。一次性添加N -(3-二甲基胺基丙基)-N '-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDCI)(2.817 g，1.25當量)且藉由HPLC-MS監測反應。48 h之後，反應不再進展且添加額外的400 mg EDCI。18 h之後，未觀察到剩餘起始材料且將反應在減壓下濃縮以得到黃色油狀物。將油狀物溶解於乙酸乙酯(約150 mL)及1 M HCl (20 mL)中，且用冷2 M HCl (2×10 mL)、飽和NaHCO3 (1×10 mL)、鹽水(20 mL+5 mL 2 M HCl)洗滌有機相。用EtOAc (1×20 mL)萃取酸性及鹼性水性部分，將所有有機級分彙集，經MgSO4 乾燥且在減壓下濃縮以得到油性粗固體(13 g)。將殘餘物溶解於二氯甲烷(約10 mL)中，裝載於Biotage® SNAP Ultra 360 g矽膠管柱上且在10-100% EtOAc (2% AcOH)/己烷梯度下經12個管柱體積與在50% EtOAc下之3-管柱體積平台進行純化。將含有純產物之級分彙集，在減壓下濃縮，溶解於甲苯(2×10 mL)及乙醚(2×10 mL)中且濃縮以得到所需產物(7.1 g白色泡沫狀固體)。在Isolera™儀器上使用Biotage® SNAP Ultra 100 g矽膠管柱在較窄梯度條件下對不純級分進行重複純化。將所有純級分彙集以回收呈白色泡沫狀固體之純產物(8.60 g，86%)。MSm/z 觀察值= 856.7 (M+1)。 7.6 (S)-2- 胺基 -N-((3R,4S,5S)-3- 甲氧基 -1-((S)-2-((1R,2R)-1- 甲氧基 -2- 甲基 -3- 側氧基 -3-((4-(2,2,2- 三氟乙醯胺基 ) 苯基 ) 磺醯胺基 ) 丙基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-5- 甲基 -1- 側氧基庚 -4- 基 )-N,3- 二甲基丁醯胺 ( 化合物 7a)
Figure 02_image121
在容納磁攪拌器且配備有三通氣體管線接頭之圓底燒瓶中，將化合物7 (3.71 g，4.33 mmol)溶解於含10%N,N -二甲基甲醯胺之乙酸乙酯(30 mL)中。將容器在減壓下抽真空兩次且饋入氮氣。一次性添加10%鈀/碳(0.461 g，0.1當量)，將三通接頭配備至燒瓶，將氫氣球配備至接頭且將容器在減壓下抽真空兩次並饋入氫氣。使反應攪拌2天，期間偶爾再饋入氫氣球。大約48 h之後，HPLC-MS分析指示無起始材料剩餘。將反應用甲醇(20 mL)稀釋且經矽藻土塞過濾。將矽藻土用甲醇(2×50 mL)洗滌。將所有濾液彙集並在減壓下濃縮且將所得油狀物溶解於二氯甲烷中並濃縮。在減壓下乾燥之後，將標題化合物分離成無色粉末(3.10 g，99%)。MSm/z 觀察值= 722.6 (M+1)。 7.7 (S)-2-((S)-2-( 二甲基胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-N-((3R,4S,5S)-3- 甲氧基 -1-((S)-2-((1R,2R)-1- 甲氧基 -2- 甲基 -3- 側氧基 -3-((4-(2,2,2- 三氟乙醯胺基 ) 苯基 ) 磺醯胺基 ) 丙基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-5- 甲基 -1- 側氧基庚 -4- 基 )-N,3- 二甲基丁醯胺 ( 化合物 8)
Figure 02_image123
向N,N -(L )-二甲基纈胺酸(1.696 g，9.35 mmol)於N,N -二甲基甲醯胺(10 mL)中之經攪拌溶液中添加HATU (3.216 g，8.46 mmol)及二異丙基乙胺(3.10 mL，17.8 mmol)。5分鐘之後產生澄清的黃色溶液。再繼續攪拌持續10分鐘，隨後一次性添加化合物7a (3.213 g，4.45 mmol)。再攪拌1 h之後，HPLC-MS指示剩餘痕量化合物7a 且使反應持續16 h。隨後將反應在減壓下濃縮，用乙酸乙酯(120 mL)及40 mL 1:1 NaHCO3 (飽和):5% LiCl稀釋且轉移至分液漏斗。移除水層且將有機相用LiCl (1×20 mL)、NaHCO3 (飽和，2×20 mL)洗滌。將水層彙集且用EtOAC (3×50 mL)萃取。將有機層彙集且用鹽水(1×20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮以得到帶有DMF之油狀物，將其經由旋轉蒸發儀濃縮以移除殘餘DMF，得到7 g粗稻草色油狀物。將油狀物溶解於微量含10%甲醇之二氯甲烷(約11 mL)中且裝載於Biotage® SNAP Ultra 360 g矽膠管柱上以用於純化(含2-20% MeOH之CH2 Cl2 ，經15個管柱體積，產物溶離約10-13%)。將含有所需產物之級分彙集且在減壓下濃縮以得到呈無色泡沫狀之標題化合物。將不純級分合併，蒸發且在Isolera™儀器上之Biotage® SNAP Ultra 100 g矽膠管柱上進行重複純化且與來自第一管柱之純產物合併以得到無色泡沫狀固體(3.78 g)。MSm/z 觀察值= 850.6 (M+1)。 7.8 (S)-N-((3R,4S,5R)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-((4- 胺基苯基 ) 磺醯胺基 )-1- 甲氧基 -2- 甲基 -3- 側氧基丙基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3- 甲氧基 -5- 甲基 -1- 側氧基庚 -4- 基 )-2-((S)-2-( 二甲基胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-N,3- 二甲基丁醯胺 ( 化合物 9)
Figure 02_image125
向化合物8 (0.980 g，1.154 mmol)於1,4-二噁烷(15 mL)中之經攪拌溶液中添加水(3.5 mL)及1 M氫氧化鋰單水合物(3當量，3.46 mL)。使所得淺色懸浮液在4℃下攪拌且藉由HPLC-MS監測起始材料之消耗。當轉化完成時(約5天)，將反應用3.46 mL 1 M HCl中和且在減壓下濃縮以移除二噁烷。將所得水相用60 mL EtOAc及5 mL鹽水稀釋，隨後用乙酸乙酯(2×30 mL)萃取。將有機級分彙集，經Na2 SO4 乾燥，過濾且蒸發以得到呈褐色固體之標題化合物(0.930 g)。Rf = 0.5 (在CH2 Cl2 中之8% MeOH)。MSm/z 觀察值= 753.7 (M+1)。 7.9 3-(2-(2-(2-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 丙酸 2,3,5,6- 四氟苯酯 ( 化合物 15)
Figure 02_image127
在經乾燥50 mL錐形瓶中，將3-(2-(2-(2-胺基乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸(化合物14 ，1.000 g，4.52 mmol)及順丁烯二酐(0.443 g，4.52 mmol)溶解於無水N,N -二甲基甲醯胺(5 mL)中。將反應在室溫、N2 下攪拌持續6 h，隨後冷卻至0℃且逐滴添加同向-柯林鹼(1.263 mL，2.1 eq)。在另一經乾燥50 mL錐形瓶中，將四氟苯酚(3.002 g，4當量)溶解於無水N,N -二甲基甲醯胺(10 mL)中。使燒瓶在冰浴中冷卻至0℃且逐滴添加三氟乙酸酐(2.548 mL，4當量)。攪拌15分鐘之後，逐滴添加同向 -柯林鹼(2.407 mL，4當量)。使燒瓶再攪拌15分鐘，然後經由注射器將內含物逐滴添加至第一燒瓶中。使反應升溫至室溫且在N2 下繼續攪拌。藉由HPLC-MS監測反應中起始材料之消耗。6天之後，反應完成，其中化合物14 全部消耗，僅留下化合物15 及少量(約5%)雙-TFP順丁烯二醯胺中間物。將反應轉移至分液漏斗，用乙醚(75 ml)稀釋且用5% LiCl (1×20 mL)、1 M HCl (2×20 mL)、飽和NaHCO3 (5×20 mL)及鹽水(1×20 mL)洗滌。將有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且蒸發以得到具有殘餘DMF之棕色粗油狀物。將粗油狀物溶解於8 mL 1:1 DMF:H2 O + 0.1% TFA中，裝載於60 g Biotage® SNAP Ultra C18管柱(Biotage AB，Uppsala，Sweden)上且在ACN/H2 O + 0.1% TFA之線性30-100%梯度下經8個管柱體積進行純化。將純級分彙集且用鹽水(20 mL)稀釋，隨後用3×50 mL Et2 O萃取。將經彙集之有機物經MgSO4 乾燥，過濾且蒸發以回收呈淺黃色油狀物之標題化合物(1.34 g，66%產率)。 7.10 ((S)-1-(((S)-1-((4-(N-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-( 二甲基胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-N,3- 二甲基丁醯胺基 )-3- 甲氧基 -5- 甲基庚醯基 ) 吡咯啶 -2- 基 )-3- 甲氧基 -2- 甲基丙醯基 ) 胺磺醯基 ) 苯基 ) 胺基 )-1- 側氧基 -5- 脲基戊 -2- 基 ) 胺基 )-3- 甲基 -1- 側氧基丁 -2- 基 ) 胺基甲酸三級丁酯 ( 化合物 12)
Figure 02_image129
如國際專利申請公開案第WO 2016/041082號中所述製備化合物11 。
向空的25 mL梨形燒瓶中添加化合物11 (1.342 g，3.58 mmol，3.0當量)、1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(0.664 g，3.46 mmol，2.9當量)及7-羥基-氮雜苯并三唑(HOAT)(0.472 g，3.46 mmol，2.9當量)。將這些固體在室溫下在攪拌下經30分鐘溶解於N,N -二甲基甲醯胺(0.5 mL)及二氯甲烷(4.5 mL)之混合物中。單獨地，將化合物9 (0.900 g，1.20 mmol)溶解於N,N -二甲基甲醯胺(0.2 mL)及二氯甲烷(1.8 mL)之混合物中且添加至梨形燒瓶中，用二氯甲烷(1.0 mL)沖洗。將攪拌速率增加至1000 rpm，產生渦旋。在添加化合物9 之2分鐘內，將氯化銅(II)(0.514 g，3.83 mmol，3.2當量)通過狹窄粉體漏斗直接一次性地添加至渦旋之中心中。最初淺黃色溶液變為深棕色懸浮液，其經10分鐘改變為深綠色懸浮液。藉由HPLC-MS監測反應之完成且在30分鐘及1 h時取得之樣品之間未觀察到反應進展之改變(約95%完成)。使反應在室溫下攪拌隔夜，隨後將2-(2-胺基乙基胺基)乙醇(0.483 mL，4.781 mmol，4當量)、EtOAc (10 mL)及dH2 O (5 mL)添加至經攪拌懸浮液中，其顏色改變為深藍色。將懸浮液劇烈地攪拌4 h，因為經懸浮固體逐漸地溶解於兩相混合物中。將此混合物轉移至分液漏斗並用EtOAc (100 mL)及鹽水(10 mL)稀釋，且用10% IpOH/ EtOAc (4×50 mL)萃取水層。將有機層彙集且用鹽水(10 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，且蒸發以得到淡藍色粗固體。將此粗固體溶解於甲醇(0.5 mL)及二氯甲烷(6 mL)之混合物中且在Biotage® SNAP Ultra 100 g矽膠管柱上純化(含2-20% MeOH之CH2 Cl2 ，經10個管柱體積，繼之以在20% MeOH下8-管柱體積平台)。產物在1-2個管柱體積之後在含約20% MeOH之CH2 Cl2 下溶離為寬峰。將含有所需材料之級分彙集且在減壓下濃縮以得到呈白色固體之標題化合物(1.105 g，83%)。MS m/z觀察值= 555.9 ((M+2)/2), 1109.8 (M+1)。 7.11 (S)-2-((S)-2- 胺基 -3- 甲基丁醯胺基 )-N-(4-(N-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5R)-4-((S)-2-((S)-2-( 二甲基胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-N,3- 二甲基丁醯胺基 )-3- 甲氧基 -5- 甲基庚醯基 ) 吡咯啶 -2- 基 )-3- 甲氧基 -2- 甲基丙醯基 ) 胺磺醯基 ) 苯基 )-5- 脲基戊醯胺 ( 化合物 13)
Figure 02_image131
向化合物12 (0.926 g，0.834 mmol)之溶液中添加二氯甲烷(10 mL)及三氟乙酸(2.0 mL)之混合物。藉由HPLC-MS監測反應中起始材料之消耗(約45分鐘)。將反應在減壓下用乙腈(2×10 mL)及二氯甲烷(2×10 mL)共蒸發以移除過量三氟乙酸。將所得殘餘物溶解於微量二氯甲烷及甲醇(3:1，v/v，約2 mL)中，且經由移液管逐滴添加至乙醚(200 mL)及己烷(100 mL)之經攪拌溶液中，產生淺白色固體之懸浮液。將固體濾出且在真空下乾燥以得到以白色粉末形式之標題化合物，呈三氟乙酸鹽(1.04 g，定量產率，具有一些殘餘溶劑)。MSm/z 觀察值= 505.8 ((M+2)/2)。 7.12 (S)-N-(4-(N-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5R)-4-((S)-2-((S)-2-( 二甲基胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-N,3- 二甲基丁醯胺基 )-3- 甲氧基 -5- 甲基庚醯基 ) 吡咯啶 -2- 基 )-3- 甲氧基 -2- 甲基丙醯基 ) 胺磺醯基 ) 苯基 )-2-((S)-1-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 )-14- 異丙基 -12- 側氧基 -3,6,9- 三氧雜 -13- 氮雜十五烷醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺 ( 連接子 - 毒素 A)
Figure 02_image133
向化合物13 (0.722 g，0.584 mmol)於N,N -二甲基甲醯胺(4 mL)中之經攪拌溶液中添加化合物15 (0.314 g，1.2當量)及二異丙基乙胺(0.305 mL，3.0當量)。2 h時之HPLC-MS分析指示無剩餘起始材料。將反應用TFA (300 μL)酸化，然後用diH2 O + 0.1% TFA (9 mL)稀釋。將所得溶液裝載於120 g Biotage® SNAP Ultra C18管柱(Biotage，Uppsala，Sweden)上且在ACN/H2 O + 0.1% TFA梯度下純化：經10個管柱體積20-60% ACN，經5個管柱體積60-100% ACN。產物在40% ACN附近溶離。將如藉由LCMS所以鑑別之純級分彙集且凍乾。自凍乾器回收白色粉末固體。在較高濃度(大約50 mg/mL於2:1 H2 O/ACN中)下重複凍乾至小瓶中以產生呈較緻密、較少絮凝劑凍乾固體之標題化合物(754.2 mg，91%)。MSm/z 觀察值= 647.4 ((M+2)/2), 1292.8 (M+1)。
儘管本發明已參考較佳實施例及各種替代實施例經特別顯示及描述，但熟習相關技術者應理解，在不脫離本發明之精神及範圍之情況下，可在其中進行形式及細節之各種改變。
本說明書之主體內引用之所有參考文獻、頒佈之專利及專利申請案均出於所有目的在此以引用之方式整體併入。序列 表 5 ：可變區序列
殖株 VH 域(SEQ ID NO) VL 域(SEQ ID NO)
        
        
25A QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:113) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQFQSLPPFTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:114)
25A3 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:151) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSINNWLAWYQQKPGKAPKLLIYKAYNLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQLFQSLPPFTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:152)
25A5 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:189) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASESISNWLAWYQQKPGKAPKLLIYKAYSLEYGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQFQKLPPFTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:190)
25A5-T QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDAYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:836) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASESISNWLAWYQQKPGKAPKLLIYKAYSLEYGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQFQKLPPFTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:837)
25G QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFRSYGISWVRQAPGQGLEWMGWVAPYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPYGYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:227) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQFQSLPPFTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:228)
25G1 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFRSYGISWVRQAPGQGLEWMGWVAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPYGYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:265) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASHSIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASYLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQLFQSLPPFTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:266)
25G9 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFRSYGISWVRQAPGQGLEWMGWVAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPYGYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:303) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYSASYLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQRFQSLPPFTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:304)
表 6 ：可變區序列共通
組別 VH 域共通(SEQ ID NO) VL 域共通(SEQ ID NO)
        
25 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFx[D/R]x[S/V/A]YGISWVRQAPGQGLEWMGWx[I/V]APYx[S/N]GNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPx[F/Y]GYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:763) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCx[R/Q]ASx[Q/E/H]SIx[S/D/N]x[S/N]WLAWYQQKPGKAPKLLIYx[K/S]Ax[S/Y]x[S/Y/N]LEx[S/Y]GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQx[Q/L/R]FQx[S/K]LPPFTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:764)
表 7 ：抗體 25A-CDR 序列
                   
                         
示範性* Kabat Chothia AbM Contact IMGT  
VH CDR Seq. VH CDR1 GYTFDVYGIS (SEQ ID NO:77) VYGIS (SEQ ID NO:83) GYTFDVY (SEQ ID NO:89) GYTFDVYGIS (SEQ ID NO:95) DVYGIS (SEQ ID NO:101) GYTFDVYG (SEQ ID NO:107)  
VH CDR2 WIAPYNGNTNYAQKLQG (SEQ ID NO:78) WIAPYNGNTNYAQKLQG (SEQ ID NO:84) PYNG (SEQ ID NO:90) WIAPYNGNTN (SEQ ID NO:96) WMGWIAPYNGNTN (SEQ ID NO:102) IAPYNGNT (SEQ ID NO:108)  
VH CDR3 DAGTYSPFGYGMDV (SEQ ID NO:79) DAGTYSPFGYGMDV (SEQ ID NO:85) AGTYSPFGYGMD (SEQ ID NO:91) DAGTYSPFGYGMDV (SEQ ID NO:97) ARDAGTYSPFGYGMD (SEQ ID NO:103) ARDAGTYSPFGTGMDV (SEQ ID NO:109)  
VL CDR Seq. VL CDR1 RASQSISSWLA (SEQ ID NO:80) RASQSISSWLA (SEQ ID NO:86) SQSISSW (SEQ ID NO:92) RASQSISSWLA (SEQ ID NO:98) SSWLAWY (SEQ ID NO:104) QSISSW (SEQ ID NO:110)  
VL CDR2 KASSLES (SEQ ID NO:81) KASSLES (SEQ ID NO:87) KAS (SEQ ID NO:93) KASSLES (SEQ ID NO:99) LLIYKASSLE (SEQ ID NO:105) KAS (SEQ ID NO:111)  
VL CDR3 QQFQSLPPFT (SEQ ID NO:82) QQFQSLPPFT (SEQ ID NO:88) FQSLPPF (SEQ ID NO:94) QQFQSLPPFT (SEQ ID NO:100) QQFQSLPPF (SEQ ID NO:106) QQFQSLPPFT (SEQ ID NO:112)  
VH序列*： QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYGIS WVRQAPGQGLEWMGWIAPYNGNTNYAQKLQG RVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDV WGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:113)  
VL序列*： DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLA WYQQKPGKAPKLLIYKASSLES GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQFQSLPPFT FGGGTKVEIK (SEQ ID NO:114)  
*示範性CDR序列涵蓋如藉由Kabat加Chothia所確定之胺基酸   
表8 ：抗體25A3-CDR 序列                 
                         
示範性* Kabat Chothia AbM Contact IMGT  
VH CDR Seq. VH CDR1 GYTFDVYGIS (SEQ ID NO:115) VYGIS (SEQ ID NO:121) GYTFDVY (SEQ ID NO:127) GYTFDVYGIS (SEQ ID NO:133) DVYGIS (SEQ ID NO:139) GYTFDVYG (SEQ ID NO:145)  
VH CDR2 WIAPYSGNTNYAQKLQG (SEQ ID NO:116) WIAPYSGNTNYAQKLQG (SEQ ID NO:122) PYSG (SEQ ID NO:128) WIAPYSGNTN (SEQ ID NO:134) WMGWIAPYSGNTN (SEQ ID NO:140) IAPYSGNT (SEQ ID NO:146)  
VH CDR3 DAGTYSPFGYGMDV (SEQ ID NO:117) DAGTYSPFGYGMDV (SEQ ID NO:123) AGTYSPFGYGMD (SEQ ID NO:129) DAGTYSPFGYGMDV (SEQ ID NO:135) ARDAGTYSPFGYGMD (SEQ ID NO:141) ARDAGTYSPFGTGMDV (SEQ ID NO:147)  
VL CDR Seq. VL CDR1 QASQSINNWLA (SEQ ID NO:118) QASQSINNWLA (SEQ ID NO:124) SQSINNW (SEQ ID NO:130) QASQSINNWLA (SEQ ID NO:136) NNWLAWY (SEQ ID NO:142) QSINNW (SEQ ID NO:148)  
VL CDR2 KAYNLES (SEQ ID NO:119) KAYNLES (SEQ ID NO:125) KAY (SEQ ID NO:131) KAYNLES (SEQ ID NO:137) LLIYKAYNLE (SEQ ID NO:143) KAY (SEQ ID NO:149)  
VL CDR3 QLFQSLPPFT (SEQ ID NO:120) QLFQSLPPFT (SEQ ID NO:126) FQSLPPF (SEQ ID NO:132) QLFQSLPPFT (SEQ ID NO:138) QLFQSLPPF (SEQ ID NO:144) QLFQSLPPFT (SEQ ID NO:150)  
VH序列*：QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYGIS WVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQG RVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDV WGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:151)  
VL序列*： DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSINNWLA WYQQKPGKAPKLLIYKAYNLES GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQLFQSLPPFT FGGGTKVEIK (SEQ ID NO:152)  
*示範性CDR序列涵蓋如藉由Kabat加Chothia所確定之胺基酸   
表9 ：抗體25A5-CDR 序列                 
                         
示範性* Kabat Chothia AbM Contact IMGT  
VH CDR Seq. VH CDR1 GYTFDVYGIS (SEQ ID NO:153) VYGIS (SEQ ID NO:159) GYTFDVY (SEQ ID NO:165) GYTFDVYGIS (SEQ ID NO:171) DVYGIS (SEQ ID NO:177) GYTFDVYG (SEQ ID NO:183)  
VH CDR2 WIAPYSGNTNYAQKLQG (SEQ ID NO:154) WIAPYSGNTNYAQKLQG (SEQ ID NO:160) PYSG (SEQ ID NO:166) WIAPYSGNTN (SEQ ID NO:172) WMGWIAPYSGNTN (SEQ ID NO:178) IAPYSGNT (SEQ ID NO:184)  
VH CDR3 DAGTYSPFGYGMDV (SEQ ID NO:155) DAGTYSPFGYGMDV (SEQ ID NO:161) AGTYSPFGYGMD (SEQ ID NO:167) DAGTYSPFGYGMDV (SEQ ID NO:173) ARDAGTYSPFGYGMD (SEQ ID NO:179) ARDAGTYSPFGTGMDV (SEQ ID NO:185)  
VL CDR Seq. VL CDR1 RASESISNWLA (SEQ ID NO:156) RASESISNWLA (SEQ ID NO:162) SESISNW (SEQ ID NO:168) RASESISNWLA (SEQ ID NO:174) SNWLAWY (SEQ ID NO:180) ESISNW (SEQ ID NO:186)  
VL CDR2 KAYSLEY (SEQ ID NO:157) KAYSLEY (SEQ ID NO:163) KAY (SEQ ID NO:169) KAYSLEY (SEQ ID NO:175) LLIYKAYSLE (SEQ ID NO:181) KAY (SEQ ID NO:187)  
VL CDR3 QQFQKLPPFT (SEQ ID NO:158) QQFQKLPPFT (SEQ ID NO:164) FQKLPPF (SEQ ID NO:170) QQFQKLPPFT (SEQ ID NO:176) QQFQKLPPF (SEQ ID NO:182) QQFQKLPPFT (SEQ ID NO:188)  
VH序列*： QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYGIS WVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQG RVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDV WGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:189)  
VL序列*： DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASESISNWLA WYQQKPGKAPKLLIYKAYSLEY GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQFQKLPPFT FGGGTKVEIK (SEQ ID NO:190)  
*示範性CDR序列涵蓋如藉由Kabat加Chothia所確定之胺基酸   
表 10 ： 抗體 25A5-T-CDR 序列                 
                         
示範性* Kabat Chothia AbM Contact IMGT  
VH CDR Seq. VH CDR1 GYTFDAYGIS (SEQ ID NO:884) AYGIS (SEQ ID NO:890) GYTFDAY (SEQ ID NO:896) GYTFDAYGIS (SEQ ID NO:902) DAYGIS (SEQ ID NO:908) GYTFDAYG (SEQ ID NO:914)  
VH CDR2 WIAPYSGNTNYAQKLQG (SEQ ID NO:885) WIAPYSGNTNYAQKLQG (SEQ ID NO:891) PYSG (SEQ ID NO:897) WIAPYSGNTN (SEQ ID NO:903) WMGWIAPYSGNTN (SEQ ID NO:909) IAPYSGNT (SEQ ID NO:915)  
VH CDR3 DAGTYSPFGYGMDV (SEQ ID NO:886) DAGTYSPFGYGMDV (SEQ ID NO:892) AGTYSPFGYGMD (SEQ ID NO:898) DAGTYSPFGYGMDV (SEQ ID NO:904) ARDAGTYSPFGYGMD (SEQ ID NO:910) ARDAGTYSPFGTGMDV (SEQ ID NO:916)  
VL CDR Seq. VL CDR1 RASESISNWLA (SEQ ID NO:887) RASESISNWLA (SEQ ID NO:893) SESISNW (SEQ ID NO:899) RASESISNWLA (SEQ ID NO:905) SNWLAWY (SEQ ID NO:911) ESISNW (SEQ ID NO:917)  
VL CDR2 KAYSLEY (SEQ ID NO:888) KAYSLEY (SEQ ID NO:894) KAY (SEQ ID NO:900) KAYSLEY (SEQ ID NO:906) LLIYKAYSLE (SEQ ID NO:912) KAY (SEQ ID NO:918)  
VL CDR3 QQFQKLPPFT (SEQ ID NO:889) QQFQKLPPFT (SEQ ID NO:895) FQKLPPF (SEQ ID NO:901) QQFQKLPPFT (SEQ ID NO:907) QQFQKLPPF (SEQ ID NO:913) QQFQKLPPFT (SEQ ID NO:919)  
VH序列*： QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDAYGIS WVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQG RVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDV WGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:836)  
VL序列*： DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASESISNWLA WYQQKPGKAPKLLIYKAYSLEY GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQFQKLPPFT FGGGTKVEIK (SEQ ID NO:837)  
*示範性CDR序列涵蓋如藉由Kabat加Chothia所確定之胺基酸   
表11 ：抗體25G-CDR 序列                 
                         
示範性* Kabat Chothia AbM Contact IMGT  
VH CDR Seq. VH CDR1 GYTFRSYGIS (SEQ ID NO:191) SYGIS (SEQ ID NO:197) GYTFRSY (SEQ ID NO:203) GYTFRSYGIS (SEQ ID NO:209) RSYGIS (SEQ ID NO:215) GYTFRSYG (SEQ ID NO:221)  
VH CDR2 WVAPYNGNTNYAQKLQG (SEQ ID NO:192) WVAPYNGNTNYAQKLQG (SEQ ID NO:198) PYNG (SEQ ID NO:204) WVAPYNGNTN (SEQ ID NO:210) WMGWVAPYNGNTN (SEQ ID NO:216) VAPYNGNT (SEQ ID NO:222)  
VH CDR3 DAGTYSPYGYGMDV (SEQ ID NO:193) DAGTYSPYGYGMDV (SEQ ID NO:199) AGTYSPYGYGMD (SEQ ID NO:205) DAGTYSPYGYGMDV (SEQ ID NO:211) ARDAGTYSPYGYGMD (SEQ ID NO:217) ARDAGTYSPYGYGMDV (SEQ ID NO:223)  
VL CDR Seq. VL CDR1 RASQSISSWLA (SEQ ID NO:194) RASQSISSWLA (SEQ ID NO:200) SQSISSW (SEQ ID NO:206) RASQSISSWLA (SEQ ID NO:212) SSWLAWY (SEQ ID NO:218) QSISSW (SEQ ID NO:224)  
VL CDR2 KASSLES (SEQ ID NO:195) KASSLES (SEQ ID NO:201) KAS (SEQ ID NO:207) KASSLES (SEQ ID NO:213) LLIYKASSLE (SEQ ID NO:219) KAS (SEQ ID NO:225)  
VL CDR3 QQFQSLPPFT (SEQ ID NO:196) QQFQSLPPFT (SEQ ID NO:202) FQSLPPF (SEQ ID NO:208) QQFQSLPPFT (SEQ ID NO:214) QQFQSLPPF (SEQ ID NO:220) QQFQSLPPFT (SEQ ID NO:226)  
VH序列*： QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFRSYGIS WVRQAPGQGLEWMGWVAPYNGNTNYAQKLQG RVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPYGYGMDV WGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:227)  
VL序列*： DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLA WYQQKPGKAPKLLIYKASSLES GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQFQSLPPFT FGGGTKVEIK (SEQ ID NO:228)  
*示範性CDR序列涵蓋如藉由Kabat加Chothia所確定之胺基酸   
表12 ：抗體25G1-CDR 序列                 
                         
示範性* Kabat Chothia AbM Contact IMGT  
VH CDR Seq. VH CDR1 GYTFRSYGIS (SEQ ID NO:229) SYGIS (SEQ ID NO:235) GYTFRSY (SEQ ID NO:241) GYTFRSYGIS (SEQ ID NO:247) RSYGIS (SEQ ID NO:253) GYTFRSYG (SEQ ID NO:259)  
VH CDR2 WVAPYSGNTNYAQKLQG (SEQ ID NO:230) WVAPYSGNTNYAQKLQG (SEQ ID NO:236) PYSG (SEQ ID NO:242) WVAPYSGNT N (SEQ ID NO:248) WMGWVAPYSGNTN (SEQ ID NO:254) VAPYSGNT (SEQ ID NO:260)  
VH CDR3 DAGTYSPYGYGMDV (SEQ ID NO:231) DAGTYSPYGYGMDV (SEQ ID NO:237) AGTYSPYGYGMD (SEQ ID NO:243) DAGTYSPYGYGMDV (SEQ ID NO:249) ARDAGTYSPYGYGMD (SEQ ID NO:255) ARDAGTYSPYGYGMDV (SEQ ID NO:261)  
VL CDR Seq. VL CDR1 RASHSIDSWLA (SEQ ID NO:232) RASHSIDSWLA (SEQ ID NO:238) SHSIDSW (SEQ ID NO:244) RASHSIDSWLA (SEQ ID NO:250) DSWLAWY (SEQ ID NO:256) HSIDSW (SEQ ID NO:262)  
VL CDR2 KASYLES (SEQ ID NO:233) KASYLES (SEQ ID NO:239) KAS (SEQ ID NO:245) KASYLES (SEQ ID NO:251) LLIY KASYLE (SEQ ID NO:257) KAS (SEQ ID NO:263)  
VL CDR3 QLFQSLPPFT (SEQ ID NO:234) QLFQSLPPFT (SEQ ID NO:240) FQSLPPF (SEQ ID NO:246) QLFQSLPPFT (SEQ ID NO:252) QLFQSLPPF (SEQ ID NO:258) QLFQSLPPFT (SEQ ID NO:264)  
VH序列*： QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFRSYGIS WVRQAPGQGLEWMGWVAPYSGNTNYAQKLQG RVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPYGYGMDV WGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:265)  
VL序列*： DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASHSIDSWLA WYQQKPGKAPKLLIYKASYLES GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQLFQSLPPFT FGGGTKVEIK (SEQ ID NO:266)  
*示範性CDR序列涵蓋如藉由Kabat加Chothia所確定之胺基酸   
表13 ：抗體25G9-CDR 序列                 
                         
示範性* Kabat Chothia AbM Contact IMGT  
VH CDR Seq. VH CDR1 GYTFRSYGIS (SEQ ID NO:267) SYGIS (SEQ ID NO:273) GYTFRSY (SEQ ID NO:279) GYTFRSYGIS (SEQ ID NO:285) RSYGIS (SEQ ID NO:291) GYTFRSYG (SEQ ID NO:297)  
VH CDR2 WVAPYSGNT NYAQKLQG (SEQ ID NO:268) WVAPYSGNTNYAQKLQG (SEQ ID NO:274) PYSG (SEQ ID NO:280) WVAPYSGNTN (SEQ ID NO:286) WMGWVAPYSGNTN (SEQ ID NO:292) VAPYSGNT (SEQ ID NO:298)  
VH CDR3 DAGTYSPYGY GMDV (SEQ ID NO:269) DAGTYSPYGYGMDV (SEQ ID NO:275) AGTYSPYGYGMD (SEQ ID NO:281) DAGTYSPYGYGMDV (SEQ ID NO:287) ARDAGTYSPYGYGMD (SEQ ID NO:293) ARDAGTYSPYGYGMDV (SEQ ID NO:299)  
VL CDR Seq. VL CDR1 QASQSIDSWLA (SEQ ID NO:270) QASQSIDSWLA (SEQ ID NO:276) SQSIDSW (SEQ ID NO:282) QASQSIDSWLA (SEQ ID NO:288) DSWLAWY (SEQ ID NO:294) QSIDSW (SEQ ID NO:300)  
VL CDR2 SASYLES (SEQ ID NO:271) SASYLES (SEQ ID NO:277) SAS (SEQ ID NO:283) SASYLES (SEQ ID NO:289) LLIYSASYLE (SEQ ID NO:295) SAS (SEQ ID NO:301)  
VL CDR3 QRFQSLPPFT (SEQ ID NO:272) QRFQSLPPFT (SEQ ID NO:278) FQSLPPF (SEQ ID NO:284) QRFQSLPPFT (SEQ ID NO:290) QRFQSLPPF (SEQ ID NO:296) QRFQSLPPFT (SEQ ID NO:302)  
VH序列*： QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFRSYGIS WVRQAPGQGLEWMGWVAPYSGNTNYAQKLQG RVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPYGYGMDV WGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:303)  
VL序列*： DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSIDSWLA WYQQKPGKAPKLLIYSASYLES GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQRFQSLPPFT FGGGTKVEIK (SEQ ID NO:304)  
*示範性CDR序列涵蓋如藉由Kabat加Chothia所確定之胺基酸   
表14：共通CDR                 
                         
抗體組 1 25 29 39 43 54  
VH CDR Seq.* VH CDR1 GFTFSx[D/S]YAMx[A/G] (SEQ ID NO:773) GYTFx[D/R]x[S/V]YGIS (SEQ ID NO:779) GFTFx[H/R]Sx[R/Y]GMH (SEQ ID NO:785) GGTFSSNAIG (SEQ ID NO:791) GGSx[I/L]SSGx[Q/Y]YWS (SEQ ID NO:797) GYTFANYYMH (SEQ ID NO:803)  
VH CDR2 x[A/T]ISGSGGLTYYADSVKG (SEQ ID NO:774) Wx[I/V]APYx[S/N]GNTNYAQKLQG (SEQ ID NO:780) VITYDGINKYYADSVEG (SEQ ID NO:786) SIIPIIGFANYAQKFQG (SEQ ID NO:792) EIx[Y/G]x[Y/A]SGSTRYNPSLKS (SEQ ID NO:798) IINPSGGITVYAQKFQG (SEQ ID NO:804)  
VH CDR3 APYGYYMDV (SEQ ID NO:775) DAGTYSPx[F/Y]GYGMDV (SEQ ID NO:781) DGVYYGVYDY (SEQ ID NO:787) DSGYYYGASSFGMDV (SEQ ID NO:793) Dx[T/A]PYYYx[E/G/D]GGYYYYMDV (SEQ ID NO:799) GGSKVAALAFDI (SEQ ID NO:805)  
VL CDR Seq.* VL CDR1 RASQSISSWLA (SEQ ID NO:776) x[R/Q]ASx[Q/E/H]SIx[S/D/N]x[S/N]WLA (SEQ ID NO:782) KSSQSVLFSSNNKNYLA (SEQ ID NO:788) RASQSVSSNLA (SEQ ID NO:794) RASx[Q/E/D]SVx[S/D]SSx[Y/F]LA (SEQ ID NO:800) QASQDISNSLN (SEQ ID NO:806)  
VL CDR2 KASSLES (SEQ ID NO:777) x[K/S]Ax[S/Y]x[S/Y/N]LEx[S/Y] (SEQ ID NO:783) WASTRES (SEQ ID NO:789) GASTRAT (SEQ ID NO:795) GAx[S/D/F/Y]x[S/T]Rx[A/Q]x[T/N] (SEQ ID NO:801) DASNLET (SEQ ID NO:807)  
VL CDR3 QQYKSYIT (SEQ ID NO:778) Qx[Q/L/R]FQx[S/K]LPPFT (SEQ ID NO:784) QQFHSYPLT (SEQ ID NO:790) EQYNNLPLT (SEQ ID NO:796) QQx[V/A/D]GVVPYT (SEQ ID NO:802) QQYNFHPLT (SEQ ID NO:808)  
*示範性CDR序列涵蓋如藉由Kabat加Chothia所確定之胺基酸   
表 15 ：人類、石蟹獼猴及小鼠 TF 序列
種類 人類( 智人(Homo sapiens )) 石蟹獼猴( 馬來猴(Macaca fascicularis )) 小鼠( 小家鼠(Mus musculus ))
全長序列[ 訊息序列以下劃線表示] METPAWPRVPRPETAVARTLLLGWVFAQVAGA SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFREIFYIIGAVVFVVIILVIILAISLHKCRKAGVGQSWKENSPLNVS (SEQ ID NO:809) METPAWPRVPRPETAVARTLLLGWVFAQVAGA SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPINQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTADTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGHVESTGSTEEPPYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVQDEWTLVRRNDTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRRTANRKSTDSPVECMGHEKGESREIFYIIGAVVFVVIILVIILAISLHKCKKARVGRSWKENSPLNVA (SEQ ID NO:813) MAILVRPRLLAALAPTFLGCLLLQVTAG AGIPEKAFNLTWISTDFKTILEWQPKPTNYTYTVQISDRSRNWKNKCFSTTDTECDLTDEIVKDVTWAYEAKVLSVPRRNSVHGDGDQLVIHGEEPPFTNAPKFLPYRDTNLGQPVIQQFEQDGRKLNVVVKDSLTLVRKNGTFLTLRQVFGKDLGYIITYRKGSSTGKKTNITNTNEFSIDVEEGVSYCFFVQAMIFSRKTNQNSPGSSTVCTEQWKSFLGETLIIVGAVVLLATIFIILLSISLCKRRKNRAGQKGKNTPSRLA (SEQ ID NO:817)
細胞外域(ECD) SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:810) SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPINQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTADTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGHVESTGSTEEPPYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVQDEWTLVRRNDTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRRTANRKSTDSPVECMGHEKGESRE (SEQ ID NO:814) AGIPEKAFNLTWISTDFKTILEWQPKPTNYTYTVQISDRSRNWKNKCFSTTDTECDLTDEIVKDVTWAYEAKVLSVPRRNSVHGDGDQLVIHGEEPPFTNAPKFLPYRDTNLGQPVIQQFEQDGRKLNVVVKDSLTLVRKNGTFLTLRQVFGKDLGYIITYRKGSSTGKKTNITNTNEFSIDVEEGVSYCFFVQAMIFSRKTNQNSPGSSTVCTEQWKSFLGE (SEQ ID NO:818)
TF ECD-His (TF-His) 蛋白之序列 SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRETGHHHHHH (SEQ ID NO:811) SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPINQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTADTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGHVESTGSTEEPPYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVQDEWTLVRRNDTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRRTANRKSTDSPVECMGHEKGESRETGHHHHHH (SEQ ID NO:815) AGIPEKAFNLTWISTDFKTILEWQPKPTNYTYTVQISDRSRNWKNKCFSTTDTECDLTDEIVKDVTWAYEAKVLSVPRRNSVHGDGDQLVIHGEEPPFTNAPKFLPYRDTNLGQPVIQQFEQDGRKLNVVVKDSLTLVRKNGTFLTLRQVFGKDLGYIITYRKGSSTGKKTNITNTNEFSIDVEEGVSYCFFVQAMIFSRKTNQNSPGSSTVCTEQWKSFLGETGHHHHHH (SEQ ID NO:819)
TF ECD-Fc (TF-Fc) 融合蛋白之序列 SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRETGENLYFQGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:812) SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPINQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTADTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGHVESTGSTEEPPYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVQDEWTLVRRNDTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRRTANRKSTDSPVECMGHEKGESRETGENLYFQGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:816) AGIPEKAFNLTWISTDFKTILEWQPKPTNYTYTVQISDRSRNWKNKCFSTTDTECDLTDEIVKDVTWAYEAKVLSVPRRNSVHGDGDQLVIHGEEPPFTNAPKFLPYRDTNLGQPVIQQFEQDGRKLNVVVKDSLTLVRKNGTFLTLRQVFGKDLGYIITYRKGSSTGKKTNITNTNEFSIDVEEGVSYCFFVQAMIFSRKTNQNSPGSSTVCTEQWKSFLGETGENLYFQGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:820)
表 16 ：抗 TF 抗體之序列
抗體 VH 域 VL 域
10H10 (M1593) EVQLVQSGAEVKKPGESLRISCKGSGYTFAPYWIEWVRQMPGKGLEWMGDILPGTGFTTYSPSFQGHVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARSGYYGNSGFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:821) DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCKSSQSLLSSGNQKNYLTWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQNDYTYPLTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:822)
TF-011 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSSISGSGDYTYYTDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSPWGYYLDSWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:828) DIQMTQSPPSLSASAGDRVTITCRASQGISSRLAWYQQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:829)
5G9 ( 人源化TF8-5G9 ，CNTO 860) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCKASGFNIKDYYMHWVRQAPGKGLEWIGLIDPENGNTIYDPKFQGRFTISADNSKNTLFLQMDSLRPEDTAVYYCARDNSYYFDYWGQGTPVTVSS (SEQ ID NO:830) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDIRKYLNWYQQKPGKAPKLLIYYATSLADGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCLQHGESPYTFGQGTKLEIT (SEQ ID NO:831)
表 17 ： 豬 TF 序列
種類 豬( 野豬(Sus scrofa ))
全長序列[ 訊息序列以下劃線表示] MATPTGPPVSCPKAAVARALLLGWVLVQVAGA TGTTDVIVAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPINYVYTVQISPRLGDWKNKCFHTTDTECDVTDEIMRNVKETYVARVLSYPADTVLTAQEPPFTNSPPFTPYLDTNLGQPVIQSFEQVGTKLNVTVEAARTLVRVNGTFLRLRDVFGKDLNYTLYYWRASSTGKKKATTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRRVNQKSPESRIECTSQEKAVSRELFLIVGAVVFAVIVFVLVLSVSLYKCRKERAGPSGKENAPLNVA (SEQ ID NO:824)
細胞外域(ECD) TGTTDVIVAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPINYVYTVQISPRLGDWKNKCFHTTDTECDVTDEIMRNVKETYVARVLSYPADTVLTAQEPPFTNSPPFTPYLDTNLGQPVIQSFEQVGTKLNVTVEAARTLVRVNGTFLRLRDVFGKDLNYTLYYWRASSTGKKKATTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRRVNQKSPESRIECTSQEKAVSRE (SEQ ID NO:825)
TF ECD-His (TF-His) 蛋白之序列 TGTTDVIVAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPINYVYTVQISPRLGDWKNKCFHTTDTECDVTDEIMRNVKETYVARVLSYPADTVLTAQEPPFTNSPPFTPYLDTNLGQPVIQSFEQVGTKLNVTVEAARTLVRVNGTFLRLRDVFGKDLNYTLYYWRASSTGKKKATTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRRVNQKSPESRIECTSQEKAVSRETGHHHHHH (SEQ ID NO:826)
TF ECD-Fc (TF-Fc) 融合蛋白之序列 TGTTDVIVAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPINYVYTVQISPRLGDWKNKCFHTTDTECDVTDEIMRNVKETYVARVLSYPADTVLTAQEPPFTNSPPFTPYLDTNLGQPVIQSFEQVGTKLNVTVEAARTLVRVNGTFLRLRDVFGKDLNYTLYYWRASSTGKKKATTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRRVNQKSPESRIECTSQEKAVSRETGENLYFQGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:827)
表 18 ：兔 TF 序列
種類 兔( 家兔(Oryctolagus cuniculus ))
全長序列[ 訊息序列以下劃線表示] MAPPTRLQVPRPGTAVPYTVLLGWLLAQVARA ADTTGRAYNLTWKSTNFKTILEWEPKSIDHVYTVQISTRLENWKSKCFLTAETECDLTDEVVKDVGQTYMARVLSYPARNGNTTGFPEEPPFRNSPEFTPYLDTNLGQPTIQSFEQVGTKLNVTVQDARTLVRRNGTFLSLRAVFGKDLNYTLYYWRASSTGKKTATTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRKRKQRSPESLTECTSREQGRAREMFFIIGAVVVVALLIIVLSVTVYKCRKARAGPSGKESSPLNIA (SEQ ID NO:832)
細胞外域(ECD) ADTTGRAYNLTWKSTNFKTILEWEPKSIDHVYTVQISTRLENWKSKCFLTAETECDLTDEVVKDVGQTYMARVLSYPARNGNTTGFPEEPPFRNSPEFTPYLDTNLGQPTIQSFEQVGTKLNVTVQDARTLVRRNGTFLSLRAVFGKDLNYTLYYWRASSTGKKTATTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRKRKQRSPESLTECTSREQGRAREM (SEQ ID NO:833)
TF ECD-His (TF-His) 蛋白之序列 ADTTGRAYNLTWKSTNFKTILEWEPKSIDHVYTVQISTRLENWKSKCFLTAETECDLTDEVVKDVGQTYMARVLSYPARNGNTTGFPEEPPFRNSPEFTPYLDTNLGQPTIQSFEQVGTKLNVTVQDARTLVRRNGTFLSLRAVFGKDLNYTLYYWRASSTGKKTATTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRKRKQRSPESLTECTSREQGRAREMTGHHHHHH (SEQ ID NO:834)
TF ECD-Fc (TF-Fc) 融合蛋白之序列 ADTTGRAYNLTWKSTNFKTILEWEPKSIDHVYTVQISTRLENWKSKCFLTAETECDLTDEVVKDVGQTYMARVLSYPARNGNTTGFPEEPPFRNSPEFTPYLDTNLGQPTIQSFEQVGTKLNVTVQDARTLVRRNGTFLSLRAVFGKDLNYTLYYWRASSTGKKTATTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRKRKQRSPESLTECTSREQGRAREMENLYFQGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:835)
表 19 ：大鼠 TF ECD 及嵌合構築體 ECD 序列
大鼠/ 嵌合構築體 細胞外域(ECD) 序列
rTF ( 大鼠TF) AGTPPGKAFNLTWISTDFKTILEWQPKPTNYTYTVQISDRSRNWKYKCTGTTDTECDLTDEIVKDVNWTYEARVLSVPWRNSTHGKETLFGTHGEEPPFTNARKFLPYRDTKIGQPVIQKYEQGGTKLKVTVKDSFTLVRKNGTFLTLRQVFGNDLGYILTYRKDSSTGRKTNTTHTNEFLIDVEKGVSYCFFAQAVIFSRKTNHKSPESITKCTEQWKSVLGE (SEQ ID NO:838)
h1-107_r AGTPPGKAFNLTWISTDFKTILEWQPKPTNYTYTVQISDRSRNWKYKCTGTTDTECDLTDEIVKDVNWTYEARVLSVPWRNSTHGKETLFGTHGEEPPFTNARKFLPYRDTKLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:839)
h1-77_r AGTPPGKAFNLTWISTDFKTILEWQPKPTNYTYTVQISDRSRNWKYKCTGTTDTECDLTDEIVKDVNWTYEARVLSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:840)
h1-38_r AGTPPGKAFNLTWISTDFKTILEWQPKPTNYTYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:841)
h39-77_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISDRSRNWKYKCTGTTDTECDLTDEIVKDVNWTYEARVLSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:842)
h78-107_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSVPWRNSTHGTHGEEPPFTNARKFLPYRDTKLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:843)
h78-107_r.v2 SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSVPWRNSTHGKETLFGTHGEEPPFTNARKFLPYRDTKLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:844)
h78-93_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSVPWRNSTHGKETLFGTHGEEPPYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:845)
h94-107_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLFTNARKFLPYRDTKLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:846)
h108-219_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNIGQPVIQKYEQGGTKLKVTVKDSFTLVRKNGTFLTLRQVFGNDLGYILTYRKDSSTGRKTNTTHTNEFLIDVEKGVSYCFFAQAVIFSRKTNHKSPESITKCTEQWKSVLGE (SEQ ID NO:847)
h108-158_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNIGQPVIQKYEQGGTKLKVTVKDSFTLVRKNGTFLTLRQVFGNDLGYILTYRKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:848)
h108-132_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNIGQPVIQKYEQGGTKLKVTVKDSFTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:849)
h133-158_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRKNGTFLTLRQVFGNDLGYILTYRKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:850)
h133-145_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRKNGTFLTLRQVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:851)
h133-139_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRKNGTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:852)
h140-145_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLTLRQVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:853)
h146-158_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGNDLGYILTYRKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:854)
h146-151_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGNDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:855)
h152-158_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLGYILTYRKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:856)
h159-219_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKDSSTGRKTNTTHTNEFLIDVEKGVSYCFFAQAVIFSRKTNHKSPESITKCTEQWKSVLGE (SEQ ID NO:857)
h159-189_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKDSSTGRKTNTTHTNEFLIDVEKGVSYCFFAQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:858)
h159-174_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKDSSTGRKTNTTHTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:859)
h159-166_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKDSSTGRKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:860)
h167-174_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTNTTHTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:861)
h175-189_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVEKGVSYCFFAQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:862)
h190-219_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIFSRKTNHKSPESITKCTEQWKSVLGE (SEQ ID NO:863)
hTF_K68N SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVNQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:865)
hTF_K149N SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGNDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:866)
hTF_N171H_T197K SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTHTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRKVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:867)
r141-194_h AGTPPGKAFNLTWISTDFKTILEWQPKPTNYTYTVQISDRSRNWKYKCTGTTDTECDLTDEIVKDVNWTYEARVLSVPWRNSTHGKETLFGTHGEEPPFTNARKFLPYRDTKIGQPVIQKYEQGGTKLKVTVKDSFTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIFSRKTNHKSPESITKCTEQWKSVLGE (SEQ ID NO:864)
表 20 ：可變區序列共通
組別 VH 域共通(SEQ ID NO) VL 域共通(SEQ ID NO)
譜系25A QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDx[V/A]YGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYx[N/S]GNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:868) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCx[R/Q]ASx[Q/E]SIx[S/N]x[S/N]WLAWYQQKPGKAPKLLIYKAx[S/Y]x[S/N]LEx[S/Y]GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQx[Q/L]FQx[S/K]LPPFTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:869)
譜系25G QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFRSYGISWVRQAPGQGLEWMGWVAPYx[N/S]GNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPYGYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:870) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCx[R/Q]ASx[Q/H]SIx[S/D]SWLAWYQQKPGKAPKLLIYx[K/S]ASx[S/Y]LESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQx[Q/L/R]FQSLPPFTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:871)
表 21 ：共通 CDR
抗體組 譜系25A 譜系25G
VH CDR Seq.* VH CDR1 GYTFDx[V/A]YGIS (SEQ ID NO:872) GYTFRSYGIS (SEQ ID NO:878)
VH CDR2 WIAPYx[N/S]GNTNYAQKLQG (SEQ ID NO:873) WVAPYx[N/S]GNTNYAQKLQG (SEQ ID NO:879)
VH CDR3 DAGTYSPFGYGMDV (SEQ ID NO:874) DAGTYSPYGYGMDV (SEQ ID NO:880)
VL CDR Seq.* VL CDR1 x[R/Q]ASx[Q/E]SIx[S/N]x[S/N]WLA (SEQ ID NO:875) x[R/Q]ASx[Q/H]SIx[S/D]SWLA (SEQ ID NO:881)
VL CDR2 KAx[S/Y]x[S/N]LEx[S/Y] (SEQ ID NO:876) x[K/S]ASx[S/Y]LES (SEQ ID NO:882)
VL CDR3 Qx[Q/L]FQx[S/K]LPPFT (SEQ ID NO:877) Qx[Q/L/R]FQSLPPFT (SEQ ID NO:883)
*示範性CDR序列涵蓋如藉由Kabat加Chothia所確定之胺基酸表 22 ：抗體序列 可變區以粗體表示；參與藥物結合之半胱胺酸以下劃線表示
殖株 重鏈 輕鏈
25A QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC DKTHTC PPC PAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 926) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQFQSLPPFTFGGGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 928)
25A3 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC DKTHTC PPC PAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 926) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSINNWLAWYQQKPGKAPKLLIYKAYNLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQLFQSLPPFTFGGGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 927)
25A5 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC DKTHTC PPC PAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 926) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASESISNWLAWYQQKPGKAPKLLIYKAYSLEYGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQFQKLPPFTFGGGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 930)
25A5T QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDAYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC DKTHTC PPC PAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 929) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASESISNWLAWYQQKPGKAPKLLIYKAYSLEYGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQFQKLPPFTFGGGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 930)
25G QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFRSYGISWVRQAPGQGLEWMGWVAPYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPYGYGMDVWGQGTTVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC DKTHTC PPC PAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 943) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQFQSLPPFTFGGGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 928)
25G1 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFRSYGISWVRQAPGQGLEWMGWVAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPYGYGMDVWGQGTTVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC DKTHTC PPC PAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 931) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASHSIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASYLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQLFQSLPPFTFGGGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 932)
25G9 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFRSYGISWVRQAPGQGLEWMGWVAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPYGYGMDVWGQGTTVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC DKTHTC PPC PAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 931) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYSASYLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQRFQSLPPFTFGGGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 944)
譜系25A共通 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDx[V/A]YGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYx[N/S]GNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC DKTHTC PPC PAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 924) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCx[R/Q]ASx[Q/E]SIx[S/N]x[S/N]WLAWYQQKPGKAPKLLIYKAx[S/Y]x[S/N]LEx[S/Y]GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQx[Q/L]FQx[S/K]LPPFTFGGGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 942)
參考以下描述及隨附圖式將更好地理解本發明之此等劑其他特徵、態樣及優點，在隨附圖式中：圖 1 顯示被稱為連接子-毒素A (本文中亦稱為LT-A)的連接子-毒素之結構。圖 2A 顯示連接至抗體時連接子-毒素A (LT-A)之連接子-毒素部分之結構，其中##表示與組織因子(TF)抗體之連接點。圖 2B 顯示包含連接子-毒素A (LT-A)之連接子-毒素部分及TF抗體之抗體藥物結合物之描繪。圖 3A 顯示細胞生存力，如藉由在與同型對照或25A3-LT-A一起孵育4 h，接著沖洗並培養68 h之後，TF陽性A431細胞中之CTG發光及計算IC50 所指示。圖 3B 顯示細胞生存力，如藉由在與同型對照或25A3-LT-A一起孵育3天之後，TF陽性A431細胞中之CTG發光及計算IC50 所指示。圖 4A 顯示在免疫受損小鼠中之MDA-MB231三陰性乳癌細胞株異種移植物研究之結果。每週一次用抗TF抗體結合物25A3-LT-A、同型對照LT-A或媒劑對照腹膜內(i.p.)治療動物達2週，且每兩週評估體重及腫瘤大小。圖 4B 顯示在免疫受損小鼠中之HPAF-II胰臟癌細胞株異種移植物研究之結果。每週一次用抗TF抗體結合物25A3-LT-A、同型對照LT-A或媒劑對照腹膜內(i.p.)治療動物達2週，且每兩週評估體重及腫瘤大小。圖 5A 至圖 5D 顯示單次投與、劑量範圍研究之結果。當平均腫瘤大小為200 mm3 (箭頭)時，用指示劑量的抗TF抗體藥物結合物25A3-LT-A或媒劑對照i.p.治療具有TF陽性HPAF-II胰臟癌細胞異種移植物之免疫受損小鼠。圖 5A 顯示各實驗組之平均腫瘤體積量測值±平均值標準誤差(SEM)。圖 5B 顯示用5 mg/kg 25A3-LT-A治療之個別小鼠之腫瘤體積量測值。圖 5C 顯示用7.5 mg/kg 25A3-LT-A治療之個別小鼠之腫瘤體積量測值。圖 5D 顯示用10 mg/kg 25A3-LT-A治療之個別小鼠之腫瘤體積量測值。圖 6 顯示在免疫受損小鼠中之HPAF-II胰臟癌細胞株異種移植物研究之平均濃度-時間輪廓。用2.5 mg/kg或10 mg/kg抗TF抗體-藥物結合物25A3-LT-A i.p.治療動物一次，且使用偵測完整分子的PK檢定量測25A3-LT-A濃度。圖 7A 至圖 7D 顯示後期介入研究之結果，在該研究中，當平均腫瘤大小為500 mm3 時，用7.5 mg/kg或10 mg/kg抗TF抗體藥物結合物25A3-LT-A或媒劑對照(PBS) i.p.治療TF陽性HPAF-II胰臟癌細胞異種移植物一次。圖 7A 顯示各實驗組之平均腫瘤體積量測值±SEM。圖 7B 顯示用媒劑對照(PBS)治療之個別小鼠之腫瘤體積量測值。圖 7C 顯示用7.5 mg/kg 25A3-LT-A治療之個別小鼠之腫瘤體積量測值。圖 7D 顯示用10 mg/kg 25A3-LT-A治療之個別小鼠之腫瘤體積量測值。圖 8A 至圖 8E 顯示當平均腫瘤大小為200 mm3 時，用10 mg/kg 25A3-LT-A或媒劑對照(PBS) i.p.治療之具有患者來源之異種移植物之免疫受損小鼠之結果。每兩週進行腫瘤大小評估。曲線圖顯示平均腫瘤體積±SEM。圖 8A 顯示CTG-0353小鼠之腫瘤體積量測值。在治療之前，這些小鼠已植入胃腫瘤碎片。圖 8B 顯示CTG-0707小鼠之腫瘤體積量測值。在治療之前，這些小鼠已植入胃腫瘤碎片。圖 8C 顯示CTG-0786小鼠之腫瘤體積量測值。在治療之前，這些小鼠已植入頭頸癌腫瘤碎片。圖 8D 顯示CTG-1076小鼠之腫瘤體積量測值。在治療之前，這些小鼠已植入膀胱腫瘤碎片。圖 8E 顯示CTG-1130小鼠之腫瘤體積量測值。在治療之前，這些小鼠已植入頭頸癌腫瘤碎片。圖 9A 至圖 9E 顯示自免疫受損小鼠收集之患者來源之異種移植物腫瘤樣品之免疫染色。將活檢標本切片並針對TF表現進行染色。圖 9A 顯示針對已植入胃腫瘤碎片的CTG-0353小鼠之代表性免疫染色。圖 9B 顯示針對已植入胃腫瘤碎片的CTG-0707小鼠之代表性免疫染色。圖 9C 顯示針對已植入頭頸癌腫瘤碎片的CTG-0786小鼠之代表性免疫染色。圖 9D 顯示針對已植入膀胱腫瘤碎片的CTG-1076小鼠之代表性免疫染色。圖 9E 顯示針對已植入頭頸癌腫瘤碎片的CTG-1130小鼠之代表性免疫染色。圖 10A 至圖 10E 顯示自免疫受損小鼠收集之患者來源之異種移植物腫瘤樣品之結果。曲線圖顯示平均腫瘤體積±SEM。圖 10A 顯示HN2574小鼠之腫瘤體積量測值。在治療之前，這些小鼠已植入頭頸癌腫瘤碎片。圖 10B 顯示ES0147小鼠之腫瘤體積量測值。在治療之前，這些小鼠已植入食道腫瘤碎片。圖 10C 顯示ES0214小鼠之腫瘤體積量測值。在治療之前，這些小鼠已植入食道腫瘤碎片。圖 10D 顯示PA1332小鼠之腫瘤體積量測值。在治療之前，這些小鼠已植入胰臟腫瘤碎片。圖 10E 顯示PA6262小鼠之腫瘤體積量測值。在治療之前，這些小鼠已植入胰臟腫瘤碎片。圖 11A 至圖 11E 顯示自免疫受損小鼠收集之患者來源之異種移植物腫瘤樣品之免疫染色。將活檢標本切片並針對TF表現進行染色。圖 11A 顯示針對已植入頭頸癌腫瘤碎片的HN2574小鼠之代表性免疫染色。圖 11B 顯示針對已植入食道腫瘤碎片的ES0147小鼠之代表性免疫染色。圖 11C 顯示針對已植入食道腫瘤碎片的ES0214小鼠之代表性免疫染色。圖 11D 顯示針對已植入胰臟腫瘤碎片的PA1332小鼠之代表性免疫染色。圖 11E 顯示針對已植入胰臟腫瘤碎片的PA6262小鼠之代表性免疫染色。圖 12 顯示如所指示之三隻卵巢或宮頸癌腫瘤患者來源之異種移植物之TF免疫染色及H分數。圖 13A 顯示在免疫受損小鼠中之TF陽性胃患者來源之異種移植物研究之結果。用25A3-LT-A或同型對照-LT-A i.p.治療動物一次，且每兩週評估體重及腫瘤大小。圖 13B 顯示在免疫受損小鼠中之TF陽性肺患者來源之異種移植物研究之結果。用25A3-LT-A或同型對照-LT-A i.p.治療動物一次，且每兩週評估體重及腫瘤大小。圖 14A 顯示在研究第1、22及36天，用指示劑量的25A3-LT-A或25A3-MMAE治療之石蟹獼猴(「cyno」)中之平均天門冬胺酸轉胺酶(AST)水準。圖 14B 顯示在研究第1、22及36天，用指示劑量的25A3-LT-A或25A3-MMAE治療之cyno猴中之平均丙胺酸轉胺酶(ALT)水準。圖 15A 顯示在研究第1、22及36天用，指示劑量的25A3-MMAE治療之cyno猴之平均嗜中性球計數。圖 15B 顯示在研究第1、22及36天，用指示劑量的25A3-LT-A治療之cyno猴之平均嗜中性球計數。歷史平均值係來自從Charles River之猴族群(猴之n ＞500)收集之基線值。圖 16A 至圖 16C 顯示在指示之治療組中用指示劑量的25A3-MMAE治療之個別cyno猴之嗜中性球計數。歷史平均值係來自從Charles River之猴族群(猴之n ＞500)收集之基線值。圖 16A 顯示用1.5 mg/kg 25A3-MMAE治療之猴子之嗜中性球計數。圖 16B 顯示用3 mg/kg 25A3-MMAE治療之猴子之嗜中性球計數。圖 16C 顯示用6 mg/kg 25A3-MMAE治療之猴子之嗜中性球計數。圖 17A 至圖 17D 顯示在指示之治療組-中用指示劑量的25A3-LT治療之個別cyno猴之嗜中性球計數。歷史平均值係來自從Charles River之猴族群(猴之n ＞500)收集之基線值。圖 17A 顯示用3 mg/kg 25A3-LT-A治療之猴子之嗜中性球計數。圖 17B 顯示用6 mg/kg 25A3-LT-A治療之猴子之嗜中性球計數。圖 17C 顯示用12 mg/kg 25A3-LT-A治療之猴子之嗜中性球計數。圖 17D 顯示用18 mg/kg 25A3-LT-A治療之猴子之嗜中性球計數。圖 18 顯示在研究第1、22及36天用指示劑量的25A3-LT-A或25A3-MMAE治療之cyno猴之單核球計數。
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Claims (103)

  1. 一種抗體-藥物結合物，其包含： a. 抗原結合蛋白(Ab)，其結合人類組織因子(TF)之細胞外域(SEQ ID NO: 810)，其中該Ab包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3，其中 i. 該VH-CDR1包含SEQ ID NO: 872，該VH-CDR2包含SEQ ID NO: 873，該VH-CDR3包含SEQ ID NO: 874，該VL-CDR1包含SEQ ID NO: 875，該VL-CDR2包含SEQ ID NO: 876，且該VL-CDR3包含SEQ ID NO: 877， ii. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A3之抗體， iii. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A之抗體， iv. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5之抗體， v. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5-T之抗體，或 vi. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25G1之抗體； 及 b. 一或多個連接子-毒素部分，其由式IV表示：
    Figure 03_image003
    式 IV 其中： X為* -C(O)NHCH(CH2 (R2 ))-+ ，其中*及+表示如式IV中所指示之各別連接點，或X不存在； L為連接子； !表示L與該Ab之連接點，其中L通過共價鍵連接至該Ab； R1 選自由以下組成之群：
    Figure 03_image005
    、
    Figure 03_image007
    、
    Figure 03_image009
    、
    Figure 03_image011
    及
    Figure 03_image013
    ， 其中#及%表示如式IV中所指示之各別連接點；且 R2 為苯基。
  2. 如請求項1之抗體-藥物結合物，其中R1 選自由以下組成之群：
    Figure 03_image015
    、
    Figure 03_image017
    及
    Figure 03_image019
    。
  3. 如請求項1或請求項2之抗體-藥物結合物，其中X不存在。
  4. 如請求項1-3中任一項之抗體-藥物結合物，其中具有式IV之該連接子-毒素部分由式V表示：
    Figure 03_image021
    。式 V
  5. 如請求項4之抗體-藥物結合物，其中R1 選自由以下組成之群：
    Figure 03_image015
    、
    Figure 03_image017
    及
    Figure 03_image019
    。
  6. 如請求項4或請求項5之抗體-藥物結合物，其中R1 選自由以下組成之群：
    Figure 03_image015
    及
    Figure 03_image017
    。
  7. 如請求項4-6中任一項之抗體-藥物結合物，其中R1 為：
    Figure 03_image015
    。
  8. 如前述請求項中任一項之抗體-藥物結合物，其中L為可裂解的連接子。
  9. 如前述請求項中任一項之抗體-藥物結合物，其中L為含肽連接子。
  10. 如前述請求項中任一項之抗體-藥物結合物，其中L為蛋白酶可裂解的連接子。
  11. 如請求項1-7中任一項之抗體-藥物結合物，其中L為選自以下之一的連接子：N-(β-順丁烯二醯亞胺基丙氧基)-N-羥基琥珀醯亞胺酯(BMPS)、N-(ε-順丁烯二醯亞胺基己醯基氧基)琥珀醯亞胺酯(EMCS)、N-[γ-順丁烯二醯亞胺基丁醯基氧基]琥珀醯亞胺酯(GMBS)、1,6-己烷-雙-乙烯基碸(HBVS)、琥珀醯亞胺基4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-羧基-(6-醯胺基己酸酯)(LC-SMCC)、間順丁烯二醯亞胺基苯甲醯基-N-羥基琥珀醯亞胺酯(MBS)、4-(4-N-順丁烯二醯亞胺基苯基)丁醯肼(MPBH)、3-(溴乙醯胺基)丙酸琥珀醯亞胺酯(SBAP)、碘乙酸琥珀醯亞胺酯(SIA)、(4-碘乙醯基)胺基苯甲酸琥珀醯亞胺酯(SIAB)、N-琥珀醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫)丙酸酯(SPDP)、N-琥珀醯亞胺基-4-(2-吡啶基硫)戊酸酯(SPP)、4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸琥珀醯亞胺酯(SMCC)、4-(對順丁烯二醯亞胺基苯基)丁酸琥珀醯亞胺酯(SMPB)、琥珀醯亞胺基6-[(β-順丁烯二醯亞胺基丙醯胺基)己酸酯](SMPH)、亞胺基硫雜環戊烷(IT)、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SIAB、磺基-SMCC、磺基-SMPB及琥珀醯亞胺基-(4-乙烯基碸)苯甲酸酯(SVSB)。
  12. 如請求項1-7中任一項之抗體-藥物結合物，其中L包含具有下式之聚乙二醇鏈：
    Figure 03_image023
    其中g為1-20之整數。
  13. 如請求項12之抗體-藥物結合物，其中g為3。
  14. 一種具有式VI之抗體-藥物結合物，
    Figure 03_image025
    式 VI 其中： Ab表示組織因子(TF)抗體； n為大於或等於1之整數； X為* -C(O)NHCH(CH2 (R2 ))-+ ，其中*及+表示如式VI中所指示之各別連接點，或X不存在； L為連接子； R1 選自由以下組成之群：
    Figure 03_image005
    、
    Figure 03_image007
    、
    Figure 03_image009
    、
    Figure 03_image011
    及
    Figure 03_image013
    ， 其中#及%表示如式VI中所指示之各別連接點；且 R2 為苯基；且其中 該Ab包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3，其中 i. 該VH-CDR1包含SEQ ID NO: 872，該VH-CDR2包含SEQ ID NO: 873，該VH-CDR3包含SEQ ID NO: 874，該VL-CDR1包含SEQ ID NO: 875，該VL-CDR2包含SEQ ID NO: 876，且該VL-CDR3包含SEQ ID NO: 877， ii. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A3之抗體， iii. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A之抗體， iv. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5之抗體， v. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5-T之抗體，或 vi. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25G1之抗體。
  15. 如請求項14之抗體-藥物結合物，其中R1 選自由以下組成之群：
    Figure 03_image015
    、
    Figure 03_image017
    及
    Figure 03_image019
    。
  16. 如請求項14或15之抗體-藥物結合物，其中X不存在。
  17. 如請求項15或請求項16之抗體-藥物結合物，其中R1 選自由以下組成之群：
    Figure 03_image015
    及
    Figure 03_image017
    。
  18. 如請求項15-17中任一項之抗體-藥物結合物，其中R1 為：
    Figure 03_image015
    。
  19. 如請求項16-17中任一項之抗體-藥物結合物，其中L為可裂解的連接子。
  20. 如請求項14-19中任一項之抗體-藥物結合物，其中L為含肽連接子。
  21. 如請求項14-19中任一項之抗體-藥物結合物，其中L為蛋白酶可裂解的連接子。
  22. 如請求項14-19中任一項之抗體-藥物結合物，其中L為選自以下之一的連接子：N-(β-順丁烯二醯亞胺基丙氧基)-N-羥基琥珀醯亞胺酯(BMPS)、N-(ε-順丁烯二醯亞胺基己醯基氧基)琥珀醯亞胺酯(EMCS)、N-[γ-順丁烯二醯亞胺基丁醯基氧基]琥珀醯亞胺酯(GMBS)、1,6-己烷-雙-乙烯基碸(HBVS)、琥珀醯亞胺基4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-羧基-(6-醯胺基己酸酯)(LC-SMCC)、間順丁烯二醯亞胺基苯甲醯基-N-羥基琥珀醯亞胺酯(MBS)、4-(4-N-順丁烯二醯亞胺基苯基)丁醯肼(MPBH)、3-(溴乙醯胺基)丙酸琥珀醯亞胺酯(SBAP)、碘乙酸琥珀醯亞胺酯(SIA)、(4-碘乙醯基)胺基苯甲酸琥珀醯亞胺酯(SIAB)、N-琥珀醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫)丙酸酯(SPDP)、N-琥珀醯亞胺基-4-(2-吡啶基硫)戊酸酯(SPP)、4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸琥珀醯亞胺酯(SMCC)、4-(對順丁烯二醯亞胺基苯基)丁酸琥珀醯亞胺酯(SMPB)、琥珀醯亞胺基6-[(β-順丁烯二醯亞胺基丙醯胺基)己酸酯](SMPH)、亞胺基硫雜環戊烷(IT)、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SIAB、磺基-SMCC、磺基-SMPB及琥珀醯亞胺基-(4-乙烯基碸)苯甲酸酯(SVSB)。
  23. 如請求項14-19中任一項之抗體-藥物結合物，其中L包含具有下式之聚乙二醇鏈：
    Figure 03_image023
    其中g為1-20之整數。
  24. 如請求項23之抗體-藥物結合物，其中g為3。
  25. 如請求項14之抗體-藥物結合物，其中L由式VII表示：
    Figure 03_image029
    式 VII 其中： Z表示結合至該TF抗體之標靶基團的官能基； D表示與如式VI中所指示之胺基的連接點； Str為延伸子； AA1 及AA2 各自獨立地為胺基酸，其中AA1 -[AA2 ]m 形成蛋白酶裂解位點； X1 為自降解基團； s為選自0及1之整數； m為選自由1、2、3及4組成之群之整數； o為選自0、1及2之整數。
  26. 如請求項25之抗體-藥物結合物，其中n為選自由1、2、3、4及5組成之群之整數。
  27. 如請求項25或請求項26之抗體-藥物結合物，其中[Str]s 選自由以下組成之群：伸烷基、基於脂族酸之延伸子、基於脂族二酸之延伸子、基於脂族胺之延伸子及基於脂族二胺之延伸子。
  28. 如請求項25-27中任一項之抗體-藥物結合物，其中[Str]s 選自由以下組成之群：基於二乙醇酸酯之延伸子、基於丙二酸酯之延伸子、基於己酸酯之延伸子及基於己醯胺之延伸子。
  29. 如請求項25或請求項26之抗體-藥物結合物，其中[Str]s 選自由以下組成之群：基於甘胺酸之延伸子、基於聚乙二醇之延伸子及基於單甲氧基聚乙二醇之延伸子。
  30. 如請求項25或請求項26之抗體-藥物結合物，其中[Str]s 為：
    Figure 03_image031
    其中 h為1-20之整數， CC係指與AA1 之連接點；且 DD係指與Z之連接點。
  31. 如請求項25或請求項26之抗體-藥物結合物，其中[Str]s 選自：
    Figure 03_image033
    、
    Figure 03_image035
    、
    Figure 03_image037
    、
    Figure 03_image039
    、
    Figure 03_image041
    及
    Figure 03_image043
    ； 其中： EE及FF分別表示與Z及AA1 之連接點； R選自氫及C1 -C6 烷基； p每次出現時獨立地為2至10之整數；且 q每次出現時獨立地為1至10之整數。
  32. 如請求項25、請求項26或請求項31之抗體-藥物結合物，其中[Str]s 選自由以下組成之群：
    Figure 03_image033
    、
    Figure 03_image037
    及
    Figure 03_image039
    ， 其中： EE及FF分別表示與Z及AA1 之連接點； p每次出現時獨立地為2至10之整數；且 q每次出現時獨立地為1至10之整數。
  33. 如請求項25、請求項26、請求項31或請求項32之抗體-藥物結合物，其中[Str]s 選自：
    Figure 03_image033
    及
    Figure 03_image039
    ， 其中： EE及FF分別表示與Z及AA1 之連接點； p每次出現時獨立地為2至6之整數，且 q為2至8之整數。
  34. 如請求項25-33中任一項之抗體-藥物結合物，其中AA1 -[AA2 ]m 選自Val-Lys、Ala-Lys、Phe-Lys、Val-Cit、Phe-Cit、Leu-Cit、Ile-Cit、Trp-Cit、Phe-Arg、Ala-Phe、Val-Ala、Met-Lys、Asn-Lys、Ile-Pro、Ile-Val、Asp-Val、His-Val、Met-(D)Lys、Asn-(D)Lys、Val-(D)Asp、NorVal-(D)Asp、Ala-(D)Asp、Me3 Lys-Pro、苯基Gly-(D)Lys、Met-(D)Lys、Asn-(D)Lys、Pro-(D)Lys、Met-(D)Lys、Met-Cit-Val、Gly-Cit-Val、(D)Phe-Phe-Lys、(D)Ala-Phe-Lys、Gly-Phe-Leu-Gly (SEQ ID NO: 922)及Ala-Leu-Ala-Leu (SEQ ID NO: 923)。
  35. 如請求項25-34中任一項之抗體-藥物結合物，其中m選自1、2及3。
  36. 如請求項25-35中任一項之抗體-藥物結合物，其中m為1。
  37. 如請求項25-36中任一項之抗體-藥物結合物，其中AA1 -[AA2 ]m 為選自以下之二肽：Val-Lys、Ala-Lys、Phe-Lys、Val-Cit、Phe-Cit、Leu-Cit、Ile-Cit及Trp-Cit。
  38. 如請求項25-37中任一項之抗體-藥物結合物，其中各X1 獨立地選自：對胺基苯甲氧基羰基(PABC)、對胺基苯甲醚(PABE)及甲基化乙二胺(MED)。
  39. 如請求項30之抗體-藥物結合物，其中s為1且h為3。
  40. 如請求項25-39中任一項之抗體-藥物結合物，其中s為1。
  41. 如請求項25-40中任一項之抗體-藥物結合物，其中o為0。
  42. 一種抗體-藥物結合物，其包含具有式VIII之連接子-毒素部分：
    Figure 03_image047
    式 VIII 其中##表示該連接子-毒素部分與TF抗體之連接點，且該連接子-毒素部分通過共價鍵連接至該TF抗體。
  43. 一種具有式IX之抗體-藥物結合物，
    Figure 03_image001
    式 IX 其中： Ab為組織因子(TF)抗體，其中該Ab包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3，其中 i. 該VH-CDR1包含SEQ ID NO: 872，該VH-CDR2包含SEQ ID NO: 873，該VH-CDR3包含SEQ ID NO: 874，該VL-CDR1包含SEQ ID NO: 875，該VL-CDR2包含SEQ ID NO: 876，且該VL-CDR3包含SEQ ID NO: 877， ii. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A3之抗體， iii. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A之抗體， iv. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5之抗體， v. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5-T之抗體，或 vi. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25G1之抗體， n為大於或等於1之整數，且 琥珀醯亞胺基通過共價鍵連接至該Ab。
  44. 如請求項43之抗體-藥物結合物，其中n選自由1、2、3、4及5組成之群。
  45. 如請求項43或44之抗體-藥物結合物，其中n選自由2、3及4組成之群。
  46. 一種抗體-藥物結合物，其包含如式X所表示之連接子：
    Figure 03_image049
    式 X 其中： ##為與抗體之連接點，且琥珀醯亞胺基通過共價鍵連接至該抗體； Y為一或多種額外連接子組分或不存在；且 D1 為與細胞毒性劑之連接點，且其中 該Ab包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3，其中 i. 該VH-CDR1包含SEQ ID NO: 872，該VH-CDR2包含SEQ ID NO: 873，該VH-CDR3包含SEQ ID NO: 874，該VL-CDR1包含SEQ ID NO: 875，該VL-CDR2包含SEQ ID NO: 876，且該VL-CDR3包含SEQ ID NO: 877， ii. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A3之抗體， iii. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A之抗體， iv. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5之抗體， v. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5-T之抗體，或 vi. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25G1之抗體。
  47. 一種抗體-藥物結合物，其包含如式XI所表示之連接子：
    Figure 03_image051
    式 XI 其中： ##為與抗體之連接點，且琥珀醯亞胺基通過共價鍵連接至該抗體； Y為一或多種額外連接子組分或不存在；且 D1 為與細胞毒性劑之連接點，且其中 該Ab包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3，其中 i. 該VH-CDR1包含SEQ ID NO: 872，該VH-CDR2包含SEQ ID NO: 873，該VH-CDR3包含SEQ ID NO: 874，該VL-CDR1包含SEQ ID NO: 875，該VL-CDR2包含SEQ ID NO: 876，且該VL-CDR3包含SEQ ID NO: 877， ii. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A3之抗體， iii. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A之抗體， iv. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5之抗體， v. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5-T之抗體，或 vi. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25G1之抗體。
  48. 如請求項46或請求項47之抗體-藥物結合物，其中該細胞毒性劑選自由以下組成之群：診斷劑、金屬螯合劑、酶、螢光化合物、生物發光化合物或化學發光化合物。
  49. 如請求項46或請求項47之抗體-藥物結合物，其中該細胞毒性劑為具有改良安全性之細胞毒性有效載荷。
  50. 如前述請求項中任一項之抗體-藥物結合物，其中該Ab包含： a. VH序列，其為SEQ ID NO: 868；及VL序列，其為SEQ ID NO: 869， b. VH序列，其為SEQ ID NO: 151；及VL序列，其為SEQ ID NO: 152， c. VH序列，其為SEQ ID NO: 113；及VL序列，其為SEQ ID NO: 114， d. VH序列，其為SEQ ID NO: 189；及VL序列，其為SEQ ID NO: 190， e. VH序列，其為SEQ ID NO: 836；及VL序列，其為SEQ ID NO: 837，或 f. VH序列，其為SEQ ID NO: 265；及VL序列，其為SEQ ID NO: 266。
  51. 如前述請求項中任一項之抗體-藥物結合物，其中該Ab包含： a. 重鏈序列，其為QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDx[V/A]YGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYx[N/S]GNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 924)；及輕鏈序列，其為DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCx[R/Q]ASx[Q/E]SIx[S/N]x[S/N]WLAWYQQKPGKAPKLLIYKAx[S/Y]x[S/N]LEx[S/Y]GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQx[Q/L]FQx[S/K]LPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 942)， b. 重鏈序列，其為QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 926)；及輕鏈序列，其為DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSINNWLAWYQQKPGKAPKLLIYKAYNLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQLFQSLPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 927)， c. 重鏈序列，其為QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 926)；及輕鏈序列，其為DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQFQSLPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 928)， d. 重鏈序列，其為QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDAYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 929)；及輕鏈序列，其為DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASESISNWLAWYQQKPGKAPKLLIYKAYSLEYGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQFQKLPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 930)， e. 重鏈序列，其為QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFRSYGISWVRQAPGQGLEWMGWVAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPYGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 931)；及輕鏈序列，其為DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASHSIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASYLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQLFQSLPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 932)，或 f. 重鏈序列，其為QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO: 926)；及輕鏈序列，其為DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASESISNWLAWYQQKPGKAPKLLIYKAYSLEYGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQFQKLPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 930)。
  52. 一種具有式IX之抗體-藥物結合物，
    Figure 03_image001
    式 IX 其中： Ab為組織因子(TF)抗體，其中該Ab包含來自命名為25A3之抗體之VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3，且 n為大於或等於1之整數。
  53. 如請求項52之抗體-藥物結合物，其中n選自由1、2、3、4及5組成之群。
  54. 如請求項52之抗體-藥物結合物，其中n選自由2、3及4組成之群。
  55. 如請求項52-54中任一項之抗體-藥物結合物，其中該Ab包含：VH序列，其為SEQ ID NO: 151；及VL序列，其為SEQ ID NO: 152。
  56. 如請求項52-55中任一項之抗體-藥物結合物，其中該Ab包含：完全重鏈序列，其為QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC DKTHTC PPC PAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO: 926)；及輕鏈序列，其為DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSINNWLAWYQQKPGKAPKLLIYKAYNLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQLFQSLPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 927)。
  57. 一種具有式IX之抗體-藥物結合物，
    Figure 03_image001
    式 IX 其中： Ab為組織因子(TF)抗體，其中該Ab包含：重鏈序列，其為QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC DKTHTC PPC PAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO: 926)；及輕鏈序列，其為DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSINNWLAWYQQKPGKAPKLLIYKAYNLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQLFQSLPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO: 927)，且 n為大於或等於1之整數。
  58. 如請求項57之抗體-藥物結合物，其中n選自由1、2、3、4及5組成之群。
  59. 如請求項57之抗體-藥物結合物，其中n選自由2、3及4組成之群。
  60. 一種抗體-藥物結合物，其包含抗體(Ab)及一或多種具有以下結構之連接子-毒素：
    Figure 03_image054
    ； 其中： Ab為組織因子(TF)抗體，其中該Ab包含來自命名為25A3之抗體之VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3； 該一或多種連接子-毒素通過共價鍵連接至該Ab；且 ##表示該連接子-毒素與該Ab之連接點。
  61. 一種抗體-藥物結合物組成物，其包含如請求項60之抗體-藥物結合物，其中該組成物包含多重藥物-抗體比率(DAR)種類，其中該組成物之平均DAR為2-4。
  62. 一種抗體-藥物結合物，其包含抗體(Ab)及一或多種具有以下結構之連接子-毒素：
    Figure 03_image054
    ； 其中： Ab為組織因子(TF)抗體，其中該Ab包含：重鏈序列，其為QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC DKTHTC PPC PAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 926)；及輕鏈序列，其為DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSINNWLAWYQQKPGKAPKLLIYKAYNLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQLFQSLPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 927)，且 該一或多種連接子-毒素通過共價鍵連接至該Ab；且 ##表示該連接子-毒素與該Ab之連接點。
  63. 一種抗體-藥物結合物組成物，其包含如請求項62之抗體-藥物結合物，其中該組成物包含多重藥物-抗體比率(DAR)種類，其中該組成物之平均DAR為2-4。
  64. 如前述請求項中任一項之抗體-藥物結合物，其中該Ab具有多特異性。
  65. 如前述請求項中任一項之抗體-藥物結合物，其中該Ab為Fab、Fab'、F(ab')2 、Fv、scFv、(scFv)2 、單鏈抗體分子、雙可變域抗體、單可變域抗體、線性抗體或V域抗體。
  66. 如前述請求項中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗體包含支架，視情況其中該支架為Fc，視情況為人類Fc。
  67. 如前述請求項中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗體包含選自IgG、IgA、IgD、IgE及IgM之類之重鏈恆定區。
  68. 如請求項67之抗體-藥物結合物，其中該抗體包含IgG類之重鏈恆定區，其中該重鏈恆定區來自選自IgG1、IgG2、IgG3及IgG4之亞類。
  69. 如請求項68之抗體-藥物結合物，其中該抗體包含IgG1之重鏈恆定區。
  70. 如請求項66之抗體-藥物結合物，其中該Fc包含一或多個修飾，其中與無該一或多個修飾之Fc相比，該一或多個修飾導致半衰期增加、抗體依賴性細胞毒性(ADCC)增加、抗體依賴性細胞吞噬作用(ADCP)增加、補體依賴性細胞毒性(CDC)增加或效應子功能減小。
  71. 如請求項1-70中任一項之抗體-藥物結合物，其中在向荷瘤個體投與時，該抗體-藥物結合物使腫瘤體積減小或抑制腫瘤生長。
  72. 如請求項1-71中任一項之抗體-藥物結合物，其中在向荷瘤個體投與時，該抗體-藥物結合物使腫瘤體積減小至少約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%或約99%。
  73. 如請求項1-72中任一項之抗體-藥物結合物，其中在向荷瘤個體投與時，該抗體-藥物結合物抑制腫瘤生長至少約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%或約99%。
  74. 如請求項1-73中任一項之抗體-藥物結合物，其中在向個體投與該抗體-藥物結合物時，該抗體-藥物結合物不導致可量測之皮膚毒性。
  75. 如請求項1-73中任一項之抗體-藥物結合物，其中在向個體投與該抗體-藥物結合物時，相對於不同的抗TF ADC，該抗體-藥物結合物導致皮膚毒性減小。
  76. 如請求項1-75中任一項之抗體-藥物結合物，其中向個體投與該抗體-藥物結合物不需要投與一或多種消炎劑。
  77. 如請求項1-75中任一項之抗體-藥物結合物，其中相對於不同的抗TF ADC，向個體投與該抗體-藥物結合物導致對一或多種消炎劑之需要減少。
  78. 如請求項76或77之抗體-藥物結合物，其中該一或多種消炎劑包含局部類固醇及全身類固醇中之至少一者。
  79. 如請求項1-78中任一項之抗體-藥物結合物，其中在向個體投與該抗體-藥物結合物時，相對於基線水準，該抗體-藥物結合物在該個體中導致嗜中性球減少症減輕或不存在。
  80. 如請求項1-78中任一項之抗體-藥物結合物，其中在向個體投與該抗體-藥物結合物時，相對於基線水準，該抗體-藥物結合物在該個體中不改變、增加或減少單核球之數目。
  81. 如請求項75-80中任一項之抗體-藥物結合物，其中該不同的抗TF ADC除與MMAE結合之外均與該抗體-藥物結合物相同。
  82. 一種醫藥組成物，其包含如前述請求項中任一項之抗體-藥物結合物及醫藥學上可接受之載劑。
  83. 一種在有需要之個體中治療或預防疾病或疾患之方法，其包含向該個體投與有效量之如請求項1-81中任一項之抗體-藥物結合物或如請求項82之醫藥組成物。
  84. 一種在有需要之個體中治療癌症或延遲其發作之方法，其包含向該個體投與有效量之如請求項1-81中任一項之抗體-藥物結合物。
  85. 如請求項83之方法，其中該疾病或疾患為癌症。
  86. 如請求項84或85之方法，其中該癌症選自由以下組成之群：頭頸癌、卵巢癌、胃癌、食道癌、子宮頸癌、前列腺癌、胰臟癌、雌激素受體陰性(ER-)乳癌、黃體素受體陰性(PR-)乳癌、HER2陰性(HER2-)三陰性乳癌、神經膠質母細胞瘤、肺癌、膀胱癌、黑色素瘤及腎癌。
  87. 如請求項83之方法，其中該疾病或疾患涉及新血管生成。
  88. 如請求項87之方法，其中涉及新血管生成之該疾病或疾患為癌症。
  89. 如請求項83之方法，其中該疾病或疾患涉及血管發炎。
  90. 如請求項83-89中任一項之方法，其進一步包含向該個體投與一或多種額外治療劑。
  91. 如請求項90之方法，其中該組成物進一步包含該一或多種額外治療劑。
  92. 如請求項90之方法，其中該額外治療劑調配於不同的醫藥組成物中。
  93. 如請求項90之方法，其中該額外治療劑在投與該組成物之前投與。
  94. 如請求項90之方法，其中該額外治療劑在投與該組成物之後投與。
  95. 如請求項90之方法，其中該額外治療劑與該組成物同時投與。
  96. 如前述請求項中任一項之方法，其中該個體為人類個體。
  97. 一種殺傷癌細胞之方法，其包含使該癌細胞與有效量之如請求項1-81中任一項之抗體-藥物結合物接觸。
  98. 一種用於製備抗體-藥物結合物之製程，該製程包含： (A) 使結合人類組織因子(TF)之細胞外域(SEQ ID NO: 810)的抗原結合蛋白(Ab)上之親核或親電子基團與雙官能連接子反應以形成Ab-連接子中間物，且使該Ab-連接子中間物與具有通式I 之化合物之-NH2 基團反應以提供該抗體藥物結合物：
    Figure 03_image057
    式 I 其中： X為* -C(O)NHCH(CH2 (R2 ))-+ ，其中*及+表示如式I 中所指示之各別連接點，或X不存在； R1 選自由以下組成之群：
    Figure 03_image005
    、
    Figure 03_image007
    、
    Figure 03_image009
    、
    Figure 03_image011
    及
    Figure 03_image013
    ， 其中#及%表示如式I 中所指示之各別連接點；且R2 為苯基；或 (B) 使該具有通式I 之化合物上之-NH2 基團與雙官能連接子反應以形成連接子-毒素中間物，且使該連接子-毒素中間物與結合人類組織因子(TF)之細胞外域(SEQ ID NO: 810)的抗原結合蛋白(Ab)上之親核或親電子基團反應以提供該抗體-藥物結合物，其中，在(A)或(B)中， (a) 該Ab包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3，其中 i. 該VH-CDR1包含SEQ ID NO: 872，該VH-CDR2包含SEQ ID NO: 873，該VH-CDR3包含SEQ ID NO: 874，該VL-CDR1包含SEQ ID NO: 875，該VL-CDR2包含SEQ ID NO: 876，且該VL-CDR3包含SEQ ID NO: 877， ii. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A3之抗體， iii. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A之抗體， iv. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5之抗體， v. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5-T之抗體，或 vi. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25G1之抗體；且 (b) 該抗體-藥物結合物包含一或多種由式IV表示之部分：
    Figure 03_image003
    式 IV 其中： X為* -C(O)NHCH(CH2 (R2 ))-+ ，其中*及+表示如式IV中所指示之各別連接點，或X不存在； L為連接子； !表示L與該Ab之連接點，其中L通過共價鍵連接至該Ab； R1 選自由以下組成之群：
    Figure 03_image005
    、
    Figure 03_image007
    、
    Figure 03_image009
    、
    Figure 03_image011
    及
    Figure 03_image013
    ， 其中#及%表示如式VI中所指示之各別連接點；且 R2 為苯基。
  99. 一種用於製備抗體-藥物結合物之製程，該製程包含： (A) 使結合人類組織因子(TF)之細胞外域(SEQ ID NO: 810)的抗原結合蛋白(Ab)上之親核或親電子基團與包含二或更多種連接子組分之雙官能連接子之第一連接子組分反應，繼之以依序添加一或多種剩餘連接子組分以形成Ab-連接子中間物，且使該Ab-連接子中間物與具有通式I 之化合物之-NH2 基團反應以提供該抗體藥物結合物：
    Figure 03_image057
    式 I 其中： X為* -C(O)NHCH(CH2 (R2 ))-+ ，其中*及+表示如式I 中所指示之各別連接點，或X不存在； R1 選自由以下組成之群：
    Figure 03_image005
    、
    Figure 03_image007
    、
    Figure 03_image009
    、
    Figure 03_image011
    及
    Figure 03_image013
    ， 其中#及%表示如式I 中所指示之各別連接點；且R2 為苯基；或 (B) 使該具有通式I 之化合物上之-NH2 基團與包含二或更多種連接子組分之雙官能連接子之第一連接子組分反應，繼之以依序添加一或多種剩餘連接子組分以形成連接子-毒素中間物，且使該連接子-毒素中間物與結合人類組織因子(TF)之細胞外域(SEQ ID NO: 810)的抗原結合蛋白(Ab)上之親核或親電子基團反應以提供該抗體-藥物結合物，其中，在(A)或(B)中， (a) 該Ab包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3，其中 i. 該VH-CDR1包含SEQ ID NO: 872，該VH-CDR2包含SEQ ID NO: 873，該VH-CDR3包含SEQ ID NO: 874，該VL-CDR1包含SEQ ID NO: 875，該VL-CDR2包含SEQ ID NO: 876，且該VL-CDR3包含SEQ ID NO: 877， ii. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A3之抗體， iii. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A之抗體， iv. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5之抗體， v. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25A5-T之抗體，或 vi. 該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3來自命名為25G1之抗體；且 (b) 該抗體-藥物結合物包含一或多種由式IV表示之部分：
    Figure 03_image003
    式 IV 其中： X為* -C(O)NHCH(CH2 (R2 ))-+ ，其中*及+表示如式IV中所指示之各別連接點，或X不存在； L為連接子； !表示L與該Ab之連接點，其中L通過共價鍵連接至該Ab； R1 選自由以下組成之群：
    Figure 03_image005
    、
    Figure 03_image007
    、
    Figure 03_image009
    、
    Figure 03_image011
    及
    Figure 03_image013
    ， 其中#及%表示如式VI中所指示之各別連接點；且 R2 為苯基。
  100. 如請求項98或請求項99之製程，其中該Ab上之該親核或親電子基團為硫醇或胺。
  101. 如請求項100之製程，其進一步包含用還原劑處理該Ab以還原該Ab中之一或多個二硫鍵聯以提供該親核硫醇基。
  102. 如請求項98-101中任一項之製程，其中L由以下表示：
    Figure 03_image063
    式 VII 其中： Z表示結合該Ab之標靶基團的官能基； D表示與如式I 中所指示之胺基的連接點； Str為延伸子； AA1 及AA2 各自獨立地為胺基酸，其中AA1 -[AA2 ]m 形成蛋白酶裂解位點； X為自降解基團； s為選自0及1之整數； m為選自由1、2、3及4組成之群之整數；且 o為選自0、1及2之整數。
  103. 一種套組，其包含如請求項1-81中任一項之抗體-藥物結合物或如請求項82之醫藥組成物及使用說明書。
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