KR20220029724A - 항-조직 인자 항체-약물 접합체 및 관련 방법 - Google Patents

항-조직 인자 항체-약물 접합체 및 관련 방법 Download PDF

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KR20220029724A
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cdr2
cdr3
seq
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얀-빌렘 테우니센
앨런 지. 차이
티-사우 미고네
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아이코닉 테라퓨틱스, 인코포레이티드
자임워크스 인코포레이티드
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Abstract

인간 조직 인자 (TF)에 특이적으로 결합하는 항체, 항-TF 항체-약물 접합체 (ADC), 및 상기 항체 또는 ADC를 포함하는 조성물이 본 명세서에 제공된다. 또한 항체 또는 ADC를 제조하고 사용하는 방법, 예컨대 치료적 및 진단 방법이 본 명세서에 제공된다.

Description

항-조직 인자 항체-약물 접합체 및 관련 방법
관련 출원의 교차 참조
본원은 2019년 7월 3일자로 출원된 미국 가특허출원 제62/870,644호의 우선권 및 이익을 주장하며, 그 전체 내용은 모든 목적을 위해 본 명세서에 참조로 포함된다.
혈액 응고는 응혈을 초래하는 복잡한 일련의 과정을 수반한다. 조직 인자 (TF)는 이들 응고 과정에서 중요한 역할을 한다. TF는 세린 프로테아제 인자 VIIa (FVIIa)에 대한 세포 표면 수용체이다. TF/FVIIa 복합체는 불활성 프로테아제 인자 X (FX)의 활성 프로테아제 인자 Xa (FXa)로의 전환을 촉진한다. FXa 및 그것의 보조인자 FVa는 프로트롬빈으로부터 트롬빈을 생성하는 프로트롬빈분해효소 복합체를 형성한다. 트롬빈은 가용성 피브리노겐을 피브린의 불용성 가닥으로 전환시키고 많은 다른 응고-관련된 과정을 촉진한다.
TF는 다중 유형의 고형 종양 상에서 과-발현된다. 암에서, TF/FVIIa 신호전달은 혈관신생, 종양 진전, 및 전이를 지지할 수 있다
항-TF 항체-약물 접합체, 및 관련된 방법이 본 명세서에 제공된다.
하기를 포함하는 항체-약물 접합체가 본 명세서에 제공된다:
a. 인간 조직 인자(TF)(서열 번호: 810)의 세포외 도메인에 결합하는 항원 결합 단백질(Ab)로서, 상기 Ab는 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3을 포함하고,
i. 상기 VH-CDR1은 서열번호: 872를 포함하고, 상기 VH-CDR2는 서열번호: 873을 포함하고, 상기 VH-CDR3은 서열번호: 874를 포함하고, 상기 VL-CDR1은 서열번호: 875를 포함하고, 상기 VL-CDR2는 서열번호: 876을 포함하고, 그리고 상기 VL-CDR3은 서열번호: 877을 포함하고,
ii. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A3으로 지정된 항체에서 유래하고,
iii. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A로 지정된 항체에서 유래하고,
iv. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A5로 지정된 항체에서 유래하고,
v. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A5-T로 지정된 항체에서 유래하거나, 또는
vi. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25G1로 지정된 항체에서 유래하고; 그리고
b. 하기 화학식 IV로 나타낸 하나 이상의 링커-독소 모이어티:
Figure pct00001
화학식 IV
상기 식에서:
X는 *-C(O)NHCH(CH2(R2))-+이고, * 및 +는 화학식 IV에서 표시된 각각의 부착점을 나타내거나, 또는 X는 부재하고;
L은 링커이고;
!는 Ab에 대한 L의 부착점을 나타내고 L은 공유 결합을 통해 Ab에 부착되고;
R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:
Figure pct00002
Figure pct00003
및
Figure pct00004
# 및 %는 화학식 IV에서 표시된 각각의 부착점을 나타내고; 그리고
R2는 페닐이다.
일부 구현예에서, R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00005
및
Figure pct00006
일부 구현예에서, X는 부재한다.
일부 구현예에서, 화학식 IV의 링커-독소 모이어티는 화학식 V로 나타낸다:
Figure pct00007
화학식 V
일부 구현예에서, R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00008
및
Figure pct00009
일부 구현예에서, R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00010
및
Figure pct00011
일부 구현예에서, R1은
Figure pct00012
이다.
일부 구현예에서, L은 절단 가능한 링커이다.
일부 구현예에서, L은 펩타이드 함유 링커이다.
일부 구현예에서, L은 프로테아제 절단 가능한 링커이다.
일부 구현예에서, L은 N-(β-말레이미도프로필옥시)-N-하이드록시 석신이미드 에스테르 (BMPS), N-(ε-말레이미도카프로일옥시) 석신이미드 에스테르 (EMCS), N-[γ-말레이미도부티릴옥시]석신이미드 에스테르 (GMBS), 1,6-헥산-비스-비닐설폰 (HBVS), 석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카복시-(6-아미도카프로에이트) (LC-SMCC), m-말레이미도벤조일-N-하이드록시석신이미드 에스테르 (MBS), 4-(4-N-말레이미도페닐)부티르산 하이드라자이드 (MPBH), 석신이미딜 3-(브로모아세트아미도)프로피오네이트 (SBAP), 석신이미딜 아이오도아세테이트 (SIA), 석신이미딜 (4-아이오도아세틸)아미노벤조에이트 (SIAB), N-석신이미딜-3-(2-피리딜디티오) 프로피오네이트 (SPDP), N-석신이미딜-4-(2-피리딜티오)펜타노에이트 (SPP), 석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카복실레이트 (SMCC), 석신이미딜 4-(p-말레이미도페닐)부티레이트 (SMPB), 석신이미딜 6-[(β-말레이미도프로피온아미도)헥사노에이트] (SMPH), 이미노티올란 (IT), 설포-EMCS, 설포-GMBS, 설포-KMUS, 설포-MBS, 설포-SIAB, 설포-SMCC, 설포-SMPB, 및 석신이미딜-(4-비닐설폰)벤조에이트 (SVSB) 중 하나로부터 선택된 링커이다.
일부 구현예에서, L은 하기 식의 폴리(에틸렌)글라이콜 사슬을 포함한다:
Figure pct00013
식 중, g는 1 내지 20의 정수이다.
일부 구현예에서, g는 3이다.
화학식 VI의 항체-약물 접합체가 본 명세서에 제공된다:
Figure pct00014
화학식 VI
상기 식에서:
Ab는 조직 인자 (TF) 항체를 나타내고;
n은 1 이상의 정수이고;
X는 *-C(O)NHCH(CH2(R2))-+이고, * 및 +는 화학식 VI에서 표시된 각각의 부착점을 나타내거나, 또는 X는 부재하고;
L은 링커이고;
R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:
Figure pct00015
Figure pct00016
및
Figure pct00017
식 중, # 및 %는 화학식 VI에서 표시된 각각의 부착점을 나타내고; 그리고
R2는 페닐이고; 그리고
상기 Ab는 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3을 포함하고,
i. 상기 VH-CDR1은 서열번호: 872를 포함하고, 상기 VH-CDR2는 서열번호: 873을 포함하고, 상기 VH-CDR3은 서열번호: 874를 포함하고, 상기 VL-CDR1은 서열번호: 875를 포함하고, 상기 VL-CDR2는 서열번호: 876을 포함하고, 그리고 상기 VL-CDR3은 서열번호: 877을 포함하고,
ii. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A3으로 지정된 항체에서 유래하고,
iii. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A로 지정된 항체에서 유래하고,
iv. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A5로 지정된 항체에서 유래하고,
v. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A5-T로 지정된 항체에서 유래하거나, 또는
vi. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25G1로 지정된 항체에서 유래한다.
일부 구현예에서, R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00018
및
Figure pct00019
일부 구현예에서, X는 부재한다.
일부 구현예에서, R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00020
및
Figure pct00021
일부 구현예에서, R1은
Figure pct00022
이다.
일부 구현예에서, L은 절단 가능한 링커이다.
일부 구현예에서, L은 펩타이드 함유 링커이다.
일부 구현예에서, L은 프로테아제 절단 가능한 링커이다.
일부 구현예에서, L은 N-(β-말레이미도프로필옥시)-N-하이드록시 석신이미드 에스테르 (BMPS), N-(ε-말레이미도카프로일옥시) 석신이미드 에스테르 (EMCS), N-[γ-말레이미도부티릴옥시]석신이미드 에스테르 (GMBS), 1,6-헥산-비스-비닐설폰 (HBVS), 석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카복시-(6-아미도카프로에이트) (LC-SMCC), m-말레이미도벤조일-N-하이드록시석신이미드 에스테르 (MBS), 4-(4-N-말레이미도페닐)부티르산 하이드라자이드 (MPBH), 석신이미딜 3-(브로모아세트아미도)프로피오네이트 (SBAP), 석신이미딜 아이오도아세테이트 (SIA), 석신이미딜 (4-아이오도아세틸)아미노벤조에이트 (SIAB), N-석신이미딜-3-(2-피리딜디티오) 프로피오네이트 (SPDP), N-석신이미딜-4-(2-피리딜티오)펜타노에이트 (SPP), 석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카복실레이트 (SMCC), 석신이미딜 4-(p-말레이미도페닐)부티레이트 (SMPB), 석신이미딜 6-[(β-말레이미도프로피온아미도)헥사노에이트] (SMPH), 이미노티올란 (IT), 설포-EMCS, 설포-GMBS, 설포-KMUS, 설포-MBS, 설포-SIAB, 설포-SMCC, 설포-SMPB, 및 석신이미딜-(4-비닐설폰)벤조에이트 (SVSB) 중 하나로부터 선택된 링커이다.
일부 구현예에서, L은 하기 식의 폴리(에틸렌)글라이콜 사슬을 포함한다:
Figure pct00023
식 중, g는 1 내지 20의 정수이다.
일부 구현예에서, g는 3이다.
일부 구현예에서, L은 화학식 VII로 나타낸다:
Figure pct00024
화학식 VII
상기 식에서:
Z는 TF 항체의 표적 기에 결합하는 작용기를 나타내고;
D는 화학식 VI로 표시된 바와 같이 아미노 기에 대한 부착점을 나타내고;
Str은 스트레처이고;
AA1 및 AA2 각각은 독립적으로 아미노산이고, AA1-[AA2]m은 프로테아제 절단 부위를 형성하고;
X1은 자기 희생성 기이고;
s는 0 및 1로부터 선택된 정수이고;
m은 1, 2, 3, 및 4로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이고;
o는 0, 1, 및 2로부터 선택된 정수이다.
일부 구현예에서, n은 1, 2, 3, 4, 및 5로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이다.
일부 구현예에서, [Str]s는 알킬렌, 지방족 산을 기반으로 하는 스트레처, 지방족 이산을 기반으로 하는 스트레처, 지방족 아민을 기반으로 하는 스트레처 및 지방족 디아민을 기반으로 하는 스트레처로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, [Str]s는 디글라이콜레이트계 스트레처, 말로네이트계 스트레처, 카프로에이트계 스트레처 및 카프로아미드계 스트레처로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, [Str]s는 글리신계 스트레처, 폴리에틸렌 글라이콜계 스트레처, 및 모노메톡시 폴리에틸렌 글라이콜계 스트레처로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, [Str]s은 하기이다:
Figure pct00025
상기 식에서,
h는 1 내지 20의 정수이고,
CC는 AA1에 대한 부착점을 지칭하고; 그리고
DD는 Z에 대한 부착점을 지칭한다.
일부 구현예에서, [Str]s는 하기로부터 선택된다:
Figure pct00026
Figure pct00027
및
Figure pct00028
상기 식에서:
EE 및 FF는 각각 Z 및 AA1에 대한 부착점을 나타내고;
R는 수소 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고;
p의 각 경우는 독립적으로 2 내지 10의 정수이고; 그리고
q의 각 경우는 독립적으로 1 내지 10의 정수이다.
일부 구현예에서, [Str]s는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00029
및
Figure pct00030
상기 식에서:
EE 및 FF는 각각 Z 및 AA1에 대한 부착점을 나타내고;
p의 각 경우는 독립적으로 2 내지 10의 정수이고; 그리고
q의 각 경우는 독립적으로 1 내지 10의 정수이다.
일부 구현예에서, [Str]s는 하기로부터 선택된다:
Figure pct00031
및
Figure pct00032
상기 식에서:
EE 및 FF는 각각 Z 및 AA1에 대한 부착점을 나타내고;
p의 각 경우는 독립적으로 2 내지 6의 정수이고, 그리고
q는 2 내지 8의 정수이다.
일부 구현예에서, AA1-[AA2]m은 Val-Lys, Ala-Lys, Phe-Lys, Val-Cit, Phe-Cit, Leu-Cit, Ile-Cit, Trp-Cit, Phe-Arg, Ala-Phe, Val-Ala, Met-Lys, Asn-Lys, Ile-Pro, Ile-Val, Asp-Val, His-Val, Met-(D)Lys, Asn-(D)Lys, Val-(D)Asp, NorVal-(D)Asp, Ala-(D)Asp, Me3Lys-Pro, 페닐Gly-(D)Lys, Met-(D)Lys, Asn-(D)Lys, Pro-(D)Lys, Met-(D)Lys, Met-Cit-Val, Gly-Cit-Val, (D)Phe-Phe-Lys, (D)Ala-Phe-Lys, Gly-Phe-Leu-Gly, 및 Ala-Leu-Ala-Leu로부터 선택된다.
일부 구현예에서, m은 1, 2 및 3으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, m은 1이다.
일부 구현예에서, AA1-[AA2]m은 Val-Lys, Ala-Lys, Phe-Lys, Val-Cit, Phe-Cit, Leu-Cit, Ile-Cit 및 Trp-Cit로부터 선택된 디펩타이드이다.
일부 구현예에서, 각각의 X1은 p-아미노벤질옥시카보닐 (PABC), p-아미노벤질 에테르 (PABE) 및 메틸화된 에틸렌 디아민 (MED)로부터 독립적으로 선택된다.
일부 구현예에서, s는 1이고 h는 3이다.
일부 구현예에서, s는 1이다.
일부 구현예에서, o는 0이다.
화학식 VIII의 링커-독소 모이어티를 포함하는 항체 약물-접합체가 본 명세서에 제공된다:
Figure pct00033
화학식 VIII
식 중, ##는 TF 항체에 대한 링커-독소 모이어티의 부착점을 나타내고 링커-독소 모이어티는 공유결합을 통해 TF 항체에 부착된다.
화학식 IX의 항체-약물 접합체가 본 명세서에 제공된다:
Figure pct00034
화학식 IX
상기 식에서:
Ab는 조직 인자 (TF) 항체이고, Ab는 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3을 포함하고,
i. 상기 VH-CDR1은 서열번호: 872를 포함하고, 상기 VH-CDR2는 서열번호: 873을 포함하고, 상기 VH-CDR3은 서열번호: 874를 포함하고, 상기 VL-CDR1은 서열번호: 875를 포함하고, 상기 VL-CDR2는 서열번호: 876을 포함하고, 그리고 상기 VL-CDR3은 서열번호: 877을 포함하고,
ii. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A3으로 지정된 항체에서 유래하고,
iii. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A로 지정된 항체에서 유래하고,
iv. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A5로 지정된 항체에서 유래하고,
v. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A5-T로 지정된 항체에서 유래하거나, 또는
vi. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25G1로 지정된 항체에서 유래하고,
n은 1 이상의 정수이고, 그리고
석신이미딜 기는 공유 결합을 통해 Ab에 부착된다.
일부 구현예에서, n은 1, 2, 3, 4, 및 5로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, n은 2, 3, 및 4로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 X로 나타낸 링커를 포함하는 항체-약물 접합체가 본 명세서에 제공된다:
Figure pct00035
화학식 X
상기 식에서:
##는 항체에 대한 부착점이고 석신이미딜 기는 공유결합을 통해 항체에 부착되고;
Y는 하나 이상의 추가의 링커 성분이거나, 부재하고; 그리고
D1은 세포독성제에 대한 부착점이고, 그리고
상기 Ab는 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3을 포함하고,
i. 상기 VH-CDR1은 서열번호: 872를 포함하고, 상기 VH-CDR2는 서열번호: 873을 포함하고, 상기 VH-CDR3은 서열번호: 874를 포함하고, 상기 VL-CDR1은 서열번호: 875를 포함하고, 상기 VL-CDR2는 서열번호: 876을 포함하고, 그리고 상기 VL-CDR3은 서열번호: 877을 포함하고,
ii. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A3으로 지정된 항체에서 유래하고,
iii. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A로 지정된 항체에서 유래하고,
iv. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A5로 지정된 항체에서 유래하고,
v. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A5-T로 지정된 항체에서 유래하거나, 또는
vi. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25G1로 지정된 항체에서 유래한다.
화학식 XI로 나타낸 링커를 포함하는 항체-약물 접합체가 본 명세서에 제공된다:
Figure pct00036
화학식 XI
상기 식에서:
##는 항체에 대한 부착점이고 석신이미딜 기는 공유결합을 통해 항체에 부착되고;
Y는 하나 이상의 추가의 링커 성분이거나, 부재하고; 그리고
D1은 세포독성제에 대한 부착점이고, 그리고
상기 Ab는 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3을 포함하고,
i. 상기 VH-CDR1은 서열번호: 872를 포함하고, 상기 VH-CDR2는 서열번호: 873을 포함하고, 상기 VH-CDR3은 서열번호: 874를 포함하고, 상기 VL-CDR1은 서열번호: 875를 포함하고, 상기 VL-CDR2는 서열번호: 876을 포함하고, 그리고 상기 VL-CDR3은 서열번호: 877을 포함하고,
ii. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A3으로 지정된 항체에서 유래하고,
iii. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A로 지정된 항체에서 유래하고,
iv. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A5로 지정된 항체에서 유래하고,
v. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A5-T로 지정된 항체에서 유래하거나, 또는
vi. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25G1로 지정된 항체에서 유래한다.
일부 구현예에서, 세포독성제는 진단제, 금속 킬레이트제, 효소, 형광 화합물, 생물발광 화합물, 또는 화학발광 화합물로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 세포독성제는 개선된 안전성 프로파일을 갖는 세포독성 페이로드이다.
일부 구현예에서, Ab는 하기를 포함한다:
a. 서열번호: 868인 VH 서열 및 서열번호: 869인 VL 서열,
b. 서열번호: 151인 VH 서열 및 서열번호: 152인 VL 서열,
c. 서열번호: 113인 VH 서열 및 서열번호: 114인 VL 서열,
d. 서열번호: 189인 VH 서열 및 서열번호: 190인 VL 서열,
e. 서열번호: 836인 VH 서열 및 서열번호: 837인 VL 서열, 또는
f. 서열번호: 265인 VH 서열 및 서열번호: 266인 VL 서열.
일부 구현예에서, Ab는 하기를 포함한다:
a. 하기인 중쇄 서열:
Figure pct00037
Figure pct00038
Figure pct00039
및
하기인 경쇄 서열:
Figure pct00040
b. 하기인 중쇄 서열:
Figure pct00041
Figure pct00042
및
하기인 경쇄 서열:
Figure pct00043
c. 하기인 중쇄 서열:
Figure pct00044
Figure pct00045
및
하기인 경쇄 서열:
Figure pct00046
d. 하기인 중쇄 서열:
Figure pct00047
Figure pct00048
및
하기인 경쇄 서열:
Figure pct00049
e. 하기인 중쇄 서열:
Figure pct00050
Figure pct00051
및
하기인 경쇄 서열:
Figure pct00052
Figure pct00053
또는
f. 하기인 중쇄 서열:
Figure pct00054
Figure pct00055
및
하기인 경쇄 서열:
Figure pct00056
화학식 IX의 항체-약물 접합체가 본 명세서에 제공된다:
Figure pct00057
화학식 IX
상기 식에서:
Ab는 조직 인자 (TF) 항체이고, Ab는 25A3으로 지정된 항체로부터의 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3을 포함하고, 그리고
n은 1 이상의 정수이다.
일부 구현예에서, n은 1, 2, 3, 4, 및 5로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, n은 2, 3, 및 4로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, Ab는 서열번호: 151인 VH 서열 및 서열번호: 152인 VL 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, Ab는 하기를 포함한다:
하기인 전체 중쇄 서열:
Figure pct00058
Figure pct00059
및
하기인 경쇄 서열:
Figure pct00060
화학식 IX의 항체-약물 접합체가 본 명세서에 제공된다:
Figure pct00061
화학식 IX
상기 식에서:
Ab는 조직 인자 (TF) 항체이고, Ab는,
하기인 중쇄 서열:
Figure pct00062
Figure pct00063
및
하기인 경쇄 서열:
Figure pct00064
Figure pct00065
를 포함하고, 그리고
n은 1 이상의 정수이다.
일부 구현예에서, n은 1, 2, 3, 4, 및 5로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, n은 2, 3, 및 4로 이루어진 군으로부터 선택된다.
항체 (Ab) 및 하기의 구조의 하나 이상의 링커-독소를 포함하는 항체-약물 접합체가 본 명세서에 제공된다:
Figure pct00066
상기 식에서:
Ab는 조직 인자 (TF) 항체이고, Ab는 25A3으로 지정된 항체로부터의 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3을 포함하고;
하나 이상의 링커-독소는 공유 결합을 통해 Ab에 부착되고; 그리고
##는 Ab에 대한 링커-독소의 부착점을 나타낸다.
본 명세서에 기재된 항체-약물 접합체를 포함하는 항체-약물 접합체 조성물이 본 명세서에 제공되고, 조성물은 다수의 약물-항체 비 (DAR) 종을 포함하고, 조성물의 평균 DAR는 2 내지 4이다.
항체 (Ab) 및 하기의 구조의 하나 이상의 링커-독소를 포함하는 항체-약물 접합체가 본 명세서에 제공된다:
Figure pct00067
상기 식에서:
Ab는 조직 인자 (TF) 항체이고, Ab는,
하기인 중쇄 서열:
Figure pct00068
Figure pct00069
Figure pct00070
및
하기인 경쇄 서열:
Figure pct00071
Figure pct00072
을 포함하고, 그리고
하나 이상의 링커-독소는 공유 결합을 통해 Ab에 부착되고; 그리고
##는 Ab에 대한 링커-독소의 부착점을 나타낸다.
본 명세서에 기재된 항체-약물 접합체를 포함하는 항체-약물 접합체 조성물이 본 명세서에 제공되고, 조성물은 다수의 약물-항체 비 (DAR) 종을 포함하고, 조성물의 평균 DAR는 2 내지 4이다.
일부 구현예에서, Ab는 다중특이적이다.
일부 구현예에서, Ab는 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, scFv, (scFv)2, 단쇄 항체 분자, 이중 가변 도메인 항체, 단일 가변 도메인 항체, 선형 항체, 또는 V 도메인 항체이다.
일부 구현예에서, 항체는 스캐폴드를 포함하고, 선택적으로 상기 스캐폴드는 Fc, 선택적으로 인간 Fc이다.
일부 구현예에서, 항체는 IgG, IgA, IgD, IgE, 및 IgM으로부터 선택된 클래스의 중쇄 불변 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 클래스 IgG의 중쇄 불변 영역을 포함하고 중쇄 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4로부터 선택된 서브클래스로부터의 것이다.
일부 구현예에서, 항체는 IgG1의 중쇄 불변 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, Fc는 하나 이상의 변형을 포함하고, 상기 하나 이상의 변형은 하나 이상의 변형 없는 Fc와 비교하여 증가된 반감기, 증가된 항체 의존성 세포 세포독성 (ADCC), 증가된 항체 의존성 세포 포식작용 (ADCP), 증가된 보체 의존성 세포독성 (CDC), 또는 줄어든 효과기 기능을 초래한다.
본 명세서에 개시된 항체-약물 접합체 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물이 본 명세서에 제공된다.
치료 또는 예방이 필요한 대상체에서 질환 또는 병태를 치료하거나 예방하는 방법이 본 명세서에 제공되고, 본 명세서에 개시된 항체-약물 접합체 또는 본 명세서에 개시된 바와 같은 약제학적 조성물의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 질환 또는 병태는 암이다.
일부 구현예에서, 암은 두경부암, 난소암, 위암, 식도암, 자궁경부암, 전립선암, 췌장암, 에스트로겐 수용체 음성 (ER-) 유방암, 프로게스테론 수용체 음성 (PR-) 유방암, HER2 음성 (HER2-) 삼중 음성 유방암, 교모세포종, 폐암, 방광암, 흑색종, 및 신장암으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 질환 또는 병태는 신생혈관형성을 수반한다.
일부 구현예에서, 신생혈관형성을 수반하는 질환 또는 병태는 암이다.
일부 구현예에서, 질환 또는 병태는 혈관 염증을 수반한다.
일부 구현예에서, 본 방법은 추가로 하나 이상의 추가 치료제를 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 조성물은 하나 이상의 추가 치료제를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 추가 치료제는 상이한 약제학적 조성물에서 제형화된다.
일부 구현예에서, 추가 치료제는 조성물의 투여 전에 투여된다.
일부 구현예에서, 추가 치료제는 조성물의 투여 후에 투여된다.
일부 구현예에서, 추가 치료제는 조성물과 동시에 투여된다.
일부 구현예에서, 대상체는 인간 대상체이다.
항체-약물 접합체를 제조하는 공정에 본 명세서에 제공되고, 상기 공정은 하기를 포함한다:
(A) 인간 조직 인자(TF)(서열 번호: 810)의 세포외 도메인에 결합하는 항원 결합 단백질(Ab) 상의 친핵성 또는 친전자성 기를 이중작용성 링커와 반응시켜 Ab-링커 중간체를 형성하고, Ab-링커 중간체를 일반 화학식 I의 -NH2 기와 반응시켜
Figure pct00073
화학식 I
상기 식에서:
X는 *-C(O)NHCH(CH2(R2))-+이고, * 및 +는 화학식 I로 표시된 바와 같이 각각의 부착점을 나타내고, 또는 X는 부재하고;
R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:
Figure pct00074
Figure pct00075
및
Figure pct00076
식 중, # 및 %는 화학식 I로 표시된 바와 같이 각각의 부착점을 나타내고; 그리고 R2는 페닐이고,
항체 약물 접합체를 제공하는 단계; 또는
(B) 일반 화학식 I의 아우리스타틴 유도체 상의-NH2 기를 이중작용성 링커와 반응시켜 링커-독소 중간체를 형성하고, 링커-독소 중간체를, 인간 조직 인자 (TF) (서열번호: 810)의 세포외 도메인에 결합하는 항원 결합 단백질 (Ab) 상의 친핵성 또는 친전자성 기와 반응시켜 항체-약물 접합체를 제공하는 단계를 포함하고, (A) 또는 (B)에서,
(a) 상기 Ab는 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3을 포함하고,
i. 상기 VH-CDR1은 서열번호: 872를 포함하고, 상기 VH-CDR2는 서열번호: 873을 포함하고, 상기 VH-CDR3은 서열번호: 874를 포함하고, 상기 VL-CDR1은 서열번호: 875를 포함하고, 상기 VL-CDR2는 서열번호: 876을 포함하고, 그리고 상기 VL-CDR3은 서열번호: 877을 포함하고,
ii. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A3으로 지정된 항체에서 유래하고,
iii. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A로 지정된 항체에서 유래하고,
iv. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A5로 지정된 항체에서 유래하고,
v. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A5-T로 지정된 항체에서 유래하거나, 또는
vi. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25G1로 지정된 항체에서 유래하고; 그리고
(b) 항체-약물 접합체는 화학식 IV로 나타낸 하나 이상의 모이어티를 포함하고:
Figure pct00077
화학식 IV
상기 식에서:
X는 *-C(O)NHCH(CH2(R2))-+이고, * 및 +는 화학식 IV에서 표시된 각각의 부착점을 나타내거나, 또는 X는 부재하고;
L은 링커이고;
!는 Ab에 대한 L의 부착점을 나타내고 L은 공유 결합을 통해 Ab에 부착되고;
R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:
Figure pct00078
Figure pct00079
및
Figure pct00080
식 중, # 및 %는 화학식 VI에서 표시된 각각의 부착점을 나타내고; 그리고
R2는 페닐이다.
항체-약물 접합체를 제조하는 공정이 본 명세서에 제공되고, 이 공정은 하기를 포함한다:
(A) 인간 조직 인자(TF)(서열 번호: 810)의 세포외 도메인에 결합하는 항원 결합 단백질(Ab) 상의 친핵성 또는 친전자성 기를 2개 이상의 링커 성분을 포함하는 이중작용성 링커의 제1 링커 성분과 반응시킨 다음, 나머지 링커 성분(들)을 순차적으로 첨가하여 Ab-링커 중간체를 형성하고 Ab-링커 중간체를 일반 화학식 I의 화합물의 -NH2 기와 반응시켜:
Figure pct00081
화학식 I
상기 식에서:
X는 *-C(O)NHCH(CH2(R2))-+이고, * 및 +는 화학식 I로 표시된 바와 같이 각각의 부착점을 나타내고, 또는 X는 부재하고;
R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:
Figure pct00082
Figure pct00083
및
Figure pct00084
식 중, # 및 %는 화학식 I로 표시된 바와 같이 각각의 부착점을 나타내고; 그리고 R2는 페닐이고,
항체 약물 접합체를 제공하는 단계; 또는
(B) 일반 화학식 I의 화합물 상의-NH2 기를 2개 이상의 링커 성분을 포함하는 이중작용성 링커의 제1 링커 성분과 반응시킨 다음, 나머지 링커 성분(들)을 순차적으로 첨가하여 링커-독소 중간체를 형성하고, 그리고 링커-독소 중간체를, 인간 조직 인자 (TF) (서열번호: 810)의 세포외 도메인에 결합하는 항원 결합 단백질 (Ab) 상의 친핵성 또는 친전자성 기와 반응시켜 항체-약물 접합체를 제공하는 단계를 포함하고, (A) 또는 (B)에서,
(a) 상기 Ab는 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3을 포함하고,
i. 상기 VH-CDR1은 서열번호: 872를 포함하고, 상기 VH-CDR2는 서열번호: 873을 포함하고, 상기 VH-CDR3은 서열번호: 874를 포함하고, 상기 VL-CDR1은 서열번호: 875를 포함하고, 상기 VL-CDR2는 서열번호: 876을 포함하고, 그리고 상기 VL-CDR3은 서열번호: 877을 포함하고,
ii. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A3으로 지정된 항체에서 유래하고,
iii. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A로 지정된 항체에서 유래하고,
iv. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A5로 지정된 항체에서 유래하고,
v. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A5-T로 지정된 항체에서 유래하거나, 또는
vi. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25G1로 지정된 항체에서 유래하고; 그리고
(b) 항체-약물 접합체는 화학식 IV로 나타낸 하나 이상의 모이어티를 포함하고:
Figure pct00085
화학식 IV
상기 식에서:
X는 *-C(O)NHCH(CH2(R2))-+이고, * 및 +는 화학식 IV에서 표시된 각각의 부착점을 나타내거나, 또는 X는 부재하고;
L은 링커이고;
!는 Ab에 대한 L의 부착점을 나타내고 L은 공유 결합을 통해 Ab에 부착되고;
R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:
Figure pct00086
Figure pct00087
및
Figure pct00088
식 중, # 및 %는 화학식 VI에서 표시된 각각의 부착점을 나타내고; 그리고
R2는 페닐이다.
일부 구현예에서, Ab 상의 친핵성 또는 친전자성 기는 티올 또는 아민이다.
일부 구현예에서, 공정은 Ab를 환원제로 처리하여 Ab 내의 하나 이상의 이황화물 연결을 환원시켜 친핵성 티올 기를 제공하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, L은 하기로 제시된다:
Figure pct00089
화학식 VII
상기 식에서:
Z는 Ab의 표적 기에 결합하는 작용기를 나타내고;
D는 화학식 X로 표시된 바와 같이 아미노 기에 대한 부착점을 나타내고;
Str은 스트레처이고;
AA1 및 AA2 각각은 독립적으로 아미노산이고, AA1-[AA2]m은 프로테아제 절단 부위를 형성하고;
X는 자기 희생성 기이고;
s는 0 및 1로부터 선택된 정수이고;
m은 1, 2, 3, 및 4로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이고; 그리고
o는 0, 1, 및 2로부터 선택된 정수이다.
항체-약물 접합체 본원에서 개시된 바와 같이 또는 본 명세서에 개시된 바와 같은 약제학적 조성물, 및 사용 지침을 포함하는 키트가 본 명세서에 제공된다.
본 발명의 이들 및 다른 특징, 양태 및 이점은 다음의 설명 및 첨부 도면과 관련하여 더 잘 이해될 것이며, 여기에서:
도 1은 링커-독소 A(본 명세서에서 LT-A로도 지칭됨)로 지칭되는 링커-독소의 구조를 도시한다.
도 2a는 항체에 부착된 링커-독소 A(LT-A)의 링커-독소 모이어티의 구조를 도시하며, 여기서 ##은 조직 인자(TF) 항체에 대한 부착점을 나타낸다. 도 2b는 링커-독소 A(LT-A)의 링커-독소 모이어티 및 TF 항체를 포함하는 항체 약물 접합체의 묘사를 도시한다.
도 3a는 이소타입 대조군 또는 25A3-LT-A와 함께 4시간 인큐베이션하고, 이어서 세척 및 68시간 배양 후, TF-양성 A431 세포에서 CTG 발광으로 표시되는 세포 생존율 및 계산된 IC50을 도시한다. 도 3b는 이소타입 대조군 또는 25A3-LT-A와 함께 3일 인큐베이션한 후, TF-양성 A431 세포에서 CTG 발광으로 표시되는 세포 생존율 및 계산된 IC50을 도시한다.
도 4a는 면역이 손상된 마우스에서 MDA-MB231 삼중 음성 유방 암종 세포주 이종이식 연구의 결과를 도시한다. 동물을 항-TF 항체 약물 접합체 25A3-LT-A, 이소타입 대조군 LT-A 또는 비히클 대조군으로 2주 동안 매주 1회 복강내(i.p.) 처리하고 체중 및 종양 크기를 격주로 평가하였다. 도 4b는 면역이 손상된 마우스에서 HPAF-II 췌장 암종 세포주 이종이식 연구의 결과를 도시한다. 동물을 항-TF 항체 약물 접합체 25A3-LT-A, 이소타입 대조군 LT-A 또는 비히클 대조군으로 2주 동안 매주 1회 복강내(i.p.) 처리하고 체중 및 종양 크기를 격주로 평가하였다.
도 5a 내지 5d는 단일 투여, 용량 범위 연구로부터의 결과를 도시한다. 항-TF 항체 약물 접합체 25A3-LT-A 또는 비히클 대조군의 표시된 용량으로 평균 종양 크기가 200 mm3(화살표)일 때, TF 양성 HPAF-II 췌장 암종 세포 이종이식을 가진 면역이 손상된 마우스를 복강내로 처리하였다. 도 5a는 각각의 실험 그룹에 대한 평균 종양 부피 측정 ± 평균의 표준 오차(SEM)를 도시한다. 도 5b는 5 mg/kg의 25A3-LT-A로 처리된 개별 마우스에 대한 종양 부피 측정치를 도시한다. 도 5c는 7.5 mg/kg의 25A3-LT-A로 처리된 개별 마우스에 대한 종양 부피 측정치를 도시한다. 도 5d는 10 mg/kg의 25A3-LT-A로 처리된 개별 마우스에 대한 종양 부피 측정치를 도시한다.
도 6은 면역이 손상된 마우스에서 HPAF-II 췌장 암종 세포주 이종이식 연구로부터의 평균 농도-시간 프로파일을 도시한다. 동물은 2.5 mg/kg 또는 10 mg/kg의 항-TF 항체-약물 접합체 25A3-LT-A로 i.p. 1회 처리하고 25A3-LT-A의 농도를 온전한 분자를 검출하는 PK 검정을 사용하여 측정하였다.
도 7a 내지 7d는, 평균 종양 크기가 500 mm3인 경우 7.5 mg/kg 또는 10 mg/kg의 항-TF 항체 약물 접합체 25A3-LT-A 또는 비히클 대조군(PBS)으로 처리했을 때 TF-양성 HPAF-II 췌장 암종 세포 이종이식편을 복강내 처리한 후기 개입 연구의 결과를 도시한다. 도 7a는 각각의 실험 그룹에 대한 평균 종양 부피 측정 ± (SEM)를 도시한다. 도 7b는 비히클 대조군(PBS)으로 처리된 개별 마우스에 대한 종양 부피 측정치를 도시한다. 도 7c는 7.5 mg/kg의 25A3-LT-A로 처리된 개별 마우스에 대한 종양 부피 측정치를 도시한다. 도 7d는 10 mg/kg의 25A3-LT-A로 처리된 개별 마우스에 대한 종양 부피 측정치를 도시한다.
도 8a 내지 e는 환자 유래 이종이식편을 갖고 i.p. 평균 종양 크기가 200 mm3일 때 10 mg/kg의 25A3-LT-A 또는 비히클 대조군(PBS)으로 처리된 면역 손상 마우스의 결과를 도시한다. 종양 크기 평가는 격주로 수행되었다. 플롯은 평균 종양 부피 ± SEM을 보여준다. 도 8a는 CTG-0353 마우스에 대한 종양 부피 측정치를 도시한다. 처리 전에 이 마우스는 위 종양 조각을 이식받았다. 도 8b는 CTG-0707 마우스에 대한 종양 부피 측정치를 도시한다. 처리 전에 이 마우스는 위 종양 조각을 이식받았다. 도 8c는 CTG-0786 마우스에 대한 종양 부피 측정치를 도시한다. 처리 전에 이 마우스는 두경부암 종양 조각을 이식받았다. 도 8d는 CTG-1076 마우스에 대한 종양 부피 측정치를 도시한다. 처리 전에 이 마우스는 방광 종양 조각을 이식받았다. 도 8e는 CTG-1130 마우스에 대한 종양 부피 측정치를 도시한다. 처리 전에 이 마우스는 두경부암 종양 조각을 이식받았다.
도 9a 내지 9e는 면역이 손상된 마우스로부터 수집된 환자 유래 이종이식 종양 샘플로부터의 면역염색을 도시한다. 생검 표본을 절편화단하고 TF 발현을 위해 염색하였다. 도 9a는 위 종양 단편이 이식된 CTG-0353 마우스에 대한 대표적인 면역염색을 도시한다. 도 9b는 위 종양 단편이 이식된 CTG-0707 마우스에 대한 대표적인 면역염색을 도시한다. 도 9c는 두경부암 종양 단편이 이식된 CTG-0786 마우스에 대한 대표적인 면역염색을 도시한다. 도 9d는 방광 종양 단편이 이식된 CTG-1076 마우스에 대한 대표적인 면역염색을 도시한다. 도 9e는 두경부암 종양 단편이 이식된 CTG-1130 마우스에 대한 대표적인 면역염색을 도시한다.
도 10a 내지 10e는 면역이 손상된 마우스로부터 수집된 환자 유래 이종이식 종양 샘플의 결과를 도시한다. 플롯은 평균 종양 부피 ± SEM을 보여준다. 도 10a는 HN2574 마우스에 대한 종양 부피 측정치를 도시한다. 처리 전에 이 마우스는 두경부암 종양 조각을 이식받았다. 도 10b는 ES0147 마우스에 대한 종양 부피 측정치를 도시한다. 처리 전에 이 마우스는 식도 종양 단편을 이식받았다. 도 10c는 ES0214 마우스에 대한 종양 부피 측정치를 도시한다. 처리 전에 이 마우스는 식도 종양 단편을 이식받았다. 도 10d는 PA1332 마우스에 대한 종양 부피 측정치를 도시한다. 처리 전에 이 마우스는 췌장 종양 조각을 이식받았다. 도 10e는 PA6262 마우스에 대한 종양 부피 측정치를 도시한다. 처리 전에 이 마우스는 췌장 종양 조각을 이식받았다.
도 11a 내지 11e는 면역이 손상된 마우스로부터 수집된 환자 유래 이종이식 종양 샘플로부터의 면역염색을 도시한다. 생검 표본을 절편화단하고 TF 발현을 위해 염색하였다. 도 11a는 두경부암 종양 단편이 이식된 HN2574 마우스에 대한 대표적인 면역염색을 도시한다. 도 11b는 식도 종양 단편이 이식된 ES0147 마우스에 대한 대표적인 면역염색을 도시한다. 도 11c는 식도 종양 단편이 이식된 ES0214 마우스에 대한 대표적인 면역염색을 도시한다. 도 11d는 췌장 종양 단편이 이식된 PA1332 마우스에 대한 대표적인 면역염색을 도시한다. 도 11e는 췌장 종양 단편이 이식된 PA6262 마우스에 대한 대표적인 면역염색을 도시한다.
도 12는 지시된 바와 같이 3개의 난소 또는 자궁경부암 종양 환자 유래 이종이식편에 대한 TF 면역염색 및 H-점수를 도시한다.
도 13a는 면역이 손상된 마우스에서 TF-양성 위 환자 유래 이종이식 연구로부터의 결과를 도시한다. 동물을 25A3-LT-A 또는 이소타입 대조군-LT-A i.p.로 1회 처리하고, 체중 및 종양 크기를 격주로 평가하였다. 도 13b는 면역이 손상된 마우스에서 TF-양성 폐 환자 유래 이종이식 연구로부터의 결과를 도시한다. 동물을 25A3-LT-A 또는 이소타입 대조군-LT-A i.p.로 1회 처리하고, 체중 및 종양 크기를 격주로 평가하였다.
도 14a는 연구의 1, 22 및 36차에 표시된 용량의 25A3-LT-A 또는 25A3-MMAE로 처리된 사이노몰구스("cyno") 원숭이에서 평균 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제(AST) 수준을 도시한다. 도 14b는 연구의 1, 22 및 36일차에 표시된 용량의 25A3-LT-A 또는 25A3-MMAE로 처리된 사이노 원숭이에서 평균 알라닌 아미노트랜스퍼라제(ALT) 수준을 도시한다.
도 15a는 연구의 1, 22, 및 36일에 표시된 용량의 25A3-MMAE로 처리된 사이노 원숭이에 대한 평균 호중구 수를 나타낸다. 도 15b는 연구의 1일, 22일 및 36일차에 표시된 용량의 25A3-LT-A로 처리된 사이노 원숭이에 대한 평균 호중구 수를 도시한다. 역사적 평균은 찰스 리버(Charles River)(원숭이의 n>500)의 원숭이 콜로니에서 수집한 기준선 값에서 가져온다.
도 16a 내지 16c는 표시된 처리 군에서 25A3-MMAE의 표시된 용량으로 처리된 개별 사이노 원숭이에 대한 호중구 수를 나타낸다. 역사적 평균은 Charles River(원숭이의 n>500)의 원숭이 콜로니에서 수집한 기준선 값에서 가져온다. 도 16a는 1.5 mg/kg의 25A3-MMAE로 처리된 원숭이에 대한 호중구 수를 나타낸다. 도 16b는 3 mg/kg의 25A3-MMAE로 처리된 원숭이에 대한 호중구 수를 도시한다. 도 16c는 6 mg/kg의 25A3-MMAE로 처리된 원숭이에 대한 호중구 수를 나타낸다.
도 17a 내지 17d는 표시된 처리 군에서 25A3-LT-A의 표시된 용량으로 처리된 개별 사이노 원숭이에 대한 호중구 수를 나타낸다. 역사적 평균은 Charles River(원숭이의 n>500)의 원숭이 콜로니에서 수집한 기준선 값에서 가져온다. 도 17a는 3 mg/kg의 25A3-LT-A로 처리된 원숭이에 대한 호중구 수를 도시한다. 도 17b는 6 mg/kg의 25A3-LT-A로 처리된 원숭이에 대한 호중구 수를 도시한다. 도 17c는 12 mg/kg의 25A3-LT-A로 처리된 원숭이에 대한 호중구 수를 도시한다. 도 17d는 18 mg/kg의 25A3-LT-A로 처리된 원숭이에 대한 호중구 수를 도시한다. 도 18은 연구 1일, 22일 및 36일차에 표시된 용량의 25A3-LT-A 또는 25A3-MMAE로 처리된 사이노 원숭이에 대한 단핵구 수를 도시한다.
1. 정의
달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술 용어들, 표기법 및 다른 과학적 용어는 당해 분야의 숙련가에 의해 통상적으로 이해되는 의미를 갖는 것으로 의도된다. 일부 경우에, 통상적으로 이해되는 의미를 갖는 용어들은 명백하게 하기 위해 및/또는 용이한 참고를 위해 본 명세서에서 정의되고, 이러한 정의의 포함은 반드시 당업계에서 일반적으로 이해되는 것과 차이를 나타내는 것으로 해석되어서는 안된다. 본 명세서에서 기재되거나 언급된 기술 및 절차는 일반적으로 잘 이해되고, 통상적으로 당해 분야의 숙련가에 의해 통상적인 방법론, 예컨대, 예를 들어, 문헌 [Sambrook 등, Molecular Cloning: A Laboratory Manual 제4판 (2012) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY]에서 기재된 널리 이용되는 분자 클로닝 방법론을 사용하여 이용된다. 적절하게는, 상업적으로 이용가능한 키트 및 시약의 사용을 포함한 절차는 달리 지적되지 않는 한 일반적으로 제조자-정의된 프로토콜 및 조건에 따라 수행된다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 단수 형태 "a", "an", 및 "the"는 문맥상 달리 명확하게 나타내지 않는 한 복수의 지시대상을 포함한다. 용어들 "포함한다", "예컨대", 및 기타 동종의 것은 달리 구체적으로 지시되지 않는 한, 비제한적으로 봉입을 의미하는 것으로 의도된다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "포함하는" 또한, 구체적으로 달리 나타내지 않는 한, 구체적으로 인용된 요소로 "구성되는" 및 "본질적으로 구성되는" 구현예를 포함한다.
용어 "약"은 지시된 값 및 그 값의 위와 아래의 범위를 나타내고 포괄한다. 특정 구현예에서, 용어 "약"은 지정된 값　±　10%, ±　5%, 또는 ± 1%를 나타낸다. 특정 구현예에서, 적용가능한 경우, 용어 "약"은 지정된 값(들)　± 그 값(들)의 일 표준 편차를 나타낸다.
용어들 "조직 인자", "TF", "혈소판 조직 인자", "인자 III", "트롬보플라스틴", 및 "CD142"는 세포에 의해 자연적으로 발현되거나 또는 TF 유전자로 형질감염된 세포에 의해 발현되는 TF, 또는 TF의 임의의 변이체 (예를 들어, 스플라이스 변이체 및 대립유전자 변이체), 동형체, 및 종 동족체를 지칭하기 위해 본 명세서에서 상호교환적으로 사용된다. 일부 양태에서, TF 단백질은 영장류 (예를 들어, 원숭이 또는 인간), 설치류 (예를 들어, 마우스 또는 랫트), 개, 낙타, 고양이, 소, 염소, 말, 돼지 또는 양에 의해 자연적으로 발현된 TF 단백질이다. 일부 양태에서, TF 단백질은 인간 TF (hTF; 서열번호:809)이다. 일부 양태에서, TF 단백질은 사이노몰구스 TF (cTF; 서열번호:813)이다. 일부 양태에서, TF 단백질은 마우스 TF (mTF; 서열번호:817)이다. 일부 양태에서, TF 단백질은 돼지 TF (pTF; 서열번호:824)이다. TF는 세린 프로테아제 인자 VIIa에 대한 세포 표면 수용체이다. 이것은 때때로 혈관을 둘러싸는 특정 세포에 의해 그리고 일부 질환 환경에서 구성적으로 발현된다.
용어 "항체-약물 접합체" 또는 "ADC"는 선택적으로 하나 이상의 링커를 통해 하나 이상의 세포독성제에 접합된 항체를 포함하는 콘주게이트를 지칭한다. 용어 "항-TF 항체-약물 접합체" 또는 "항-TF ADC"는 선택적으로 하나 이상의 링커를 통해 하나 이상의 세포독성제에 접합된 항-TF 항체를 포함하는 콘주게이트를 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어들 "TF 항체," "항-TF 항체"는 동의어이다
본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어 "세포독성제"는, 세포 기능을 억제하거나 예방하고/거나 세포사 또는 파괴를 야기하는 물질을 지칭한다. 세포독성제는 항-혈관신생제, 세포자멸유도 제제, 항-유사분열 제제, 항-키나제 제제, 알킬화제, 호르몬, 호르몬 효능제, 호르몬 길항제, 케모카인, 약물, 전구약물, 독소, 효소, 항대사물질, 항생제, 알칼로이드, 또는 방사성 동위원소일 수 있다. 예시적인 세포독성제는 칼리케아마이신, 캄프토테신, 카보플라틴, 이리노테칸, SN-38, 카보플라틴, 캄프토테칸, 사이클로포스파마이드, 사이타라빈, 다카바진, 도세탁셀, 닥티노마이신, 다우노루비신, 독소루비신, 독소루비신, 에토포시드, 이다루비신, 토포테칸, 빈카 알카로이드, 메이탄시노이드, 메이탄시노이드 유사체, 피롤로벤조디아제핀, 탁소이드, 듀오카르마이신, 돌라스타틴, 아우리스타틴, 및 이의 유도체를 포함한다.
"링커"는 하나의 조성물을 또 다른 것에 연결하고, 예를 들어, 항체를 제제에 연결하는 분자를 지칭한다. 본 명세서에 기재된 링커는 항체를 세포독성제에 접합시킬 수 있다. 예시적인 링커는 불안정한 링커, 산 불안정한 링커, 광불안정적인 링커, 하전된 링커, 디설파이드-함유 링커, 펩티다아제-민감한 링커,
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-글루쿠로나이드-링커, 디메틸 링커, 티오-에테르 링커, 및 친수성 링커를 포함한다. 링커는 절단 가능한 또는 비-절단가능할 수 있다.
용어 "면역글로불린"은 폴리펩타이드 사슬의 2개의 쌍인: 한 쌍의 가벼운 (L) 사슬 및 한 쌍의 무거운 (H) 사슬을 일반적으로 포함하는 구조적으로 관련된 단백질의 부류를 지칭한다. "온전한 면역글로불린"에서, 이들 사슬의 4개 모두는 디설파이드 결합에 의해 상호연결된다. 면역글로불린의 구조는 잘 특성규명되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Paul, Fundamental Immunology 제7판, Ch. 5 (2013) Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, PA] 참고. 간단히 각각의 중쇄는 전형적으로는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 중쇄 불변 영역 (CH)을 포함한다. 중쇄 불변 영역은 전형적으로는 3개의 도메인인, 약칭된 CH1, CH2, 및 CH3을 포함한다. 각각의 경쇄는 전형적으로는 경쇄 가변 영역 (VL) 및 경쇄 불변 영역을 포함한다. 경쇄 불변 영역 전형적으로는 하나의 도메인인, 약칭된 CL을 포함한다.
용어 "항체"는 그것의 가장 넓은 의미로 본 명세서에서 사용되고, 그리고 항원 또는 에피토프에 특이적으로는 결합하는 하나 이상의 항원-결합 도메인을 포함하는 특정 유형의 면역글로불린 분자를 포함한다. 항체는 구체적으로 온전한 항체 (예를 들어, 온전한 면역글로불린), 항체 단편, 및 다중-특이적 항체를 포함한다.
용어 "대안적인 스캐폴드"는 하나 이상의 영역이 항원 또는 에피토프에 특이적으로는 결합하는 하나 이상의 항원-결합 도메인을 생성하도록 다양화될 수 있는 분자를 지칭한다. 일부 구현예에서, 항원-결합 도메인은 항체의 것에 유사한 특이성 및 친화도로 항원 또는 에피토프를 결합한다. 예시적인 대안적인 스캐폴드는 파이브로넥틴 (예를 들어, AdnectinsTM), β-샌드위치 (예를 들어, iMab), 리포칼린 (예를 들어, Anticalins®), EETI-II/AGRP, BPTI/LACI-D1/ITI-D2 (예를 들어, 쿠니츠 도메인), 티오레독신 펩타이드 압타머, 단백질 A (예를 들어, Affibody®), 안키린 반복 (예를 들어, DARPins), 감마-B-크리스탈린/유비퀴틴 (예를 들어, Affilins), CTLD3 (예를 들어, Tetranectins), 파미노머, 및 (LDLR-A 모듈) (예를 들어, Avimers)로부터 유래된 것들을 포함한다. 대안적인 스캐폴드에 대한 추가 정보는 문헌 [Binz 등, Nat. Biotechnol ., 2005 23:1257-1268]; 문헌 [Skerra, Current Opin . in Biotech., 2007 18:295-304]; 및 문헌 [Silacci 등, J. Biol . Chem., 2014, 289:14392-14398]에 제공되어 있으며; 이들 각각은 그 전체적으로 참고로 포함되어 있다.
용어 "항원-결합 도메인"은 항원 또는 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있는 항체의 부분을 의미한다. 항원-결합 도메인의 일 예는 항체의 VH -VL 이량체에 의해 형성된 항원-결합 도메인이다. 항원-결합 도메인의 또 다른 예는 아드넥틴의 제10 파이브로넥틴 유형 III 도메인으로부터 특정 루프의 다양성에 의해 형성된 항원-결합 도메인이다. 항원-결합 도메인은 항체 및 키메라 항원 수용체 (CAR), 예를 들어 scFvs와 같은 항체 또는 항체 단편으로부터 유래된 CAR를 포함한 다양한 상황에서 발견될 수 있다.
용어들 "전장 항체", "온전한 항체", 및 "전체의 항체"는 자연 발생 항체 구조에 실질적으로 유사한 구조를 가지고 Fc 영역을 포함하는 중쇄를 갖는 항체를 지칭하기 위해 본 명세서에서 교환가능하게 사용된다. 예를 들어, IgG 분자를 지칭하기 위해 사용될 때, "전장 항체"는 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하는 항체이다.
용어 "Fc 영역"은 자연 발생 항체에서 보체 시스템의 Fc 수용체 및 특정 단백질과 상호작용하는 면역글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 의미한다. 다양한 면역글로불린의 Fc 영역의 구조, 및 그 안에 함유된 당화 부위는 당해 기술에 공지되어 있다. 그 전체적으로 참고로 포함되어 있는, 문헌 [Schroeder 및 Cavacini, J. Allergy Clin . Immunol ., 2010, 125:S41-52]을 참고한다. Fc 영역은 자연 발생 Fc 영역, 또는 당업계 또는 본 개시내용의 다른 곳에서 기재된 바와 같이 변형된 Fc 영역일 수 있다.
VH 및 VL 영역은 더욱 보존된 영역이 산재된 초가변성의 영역 ("초가변성 영역 (HVR);" 또한 소위 "상보성 결정 영역" (CDR))으로 추가로 세분될 수 있다. 더욱 보존된 영역은 프레임워크 영역 (FR)으로 불린다. 각각의 VH 및 VL은 일반적으로는 (N-말단으로부터 C-말단까지) 하기 순서: FR1 - CDR1 - FR2 - CDR2 - FR3 - CDR3 - FR4로 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FR을 포함한다. CDR은 항원 결합에 관여되고 항체의 항원 특이성 및 결합 친화도에 영향을 미친다. 그 전체적으로 참고로 포함되어 있는, 문헌 [Kabat 등, Sequences of Proteins of Immunological Interest 제5판 (1991) Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD]을 참고한다.
"상보성 결정 영역 (CDR)"은 면역글로불린 (Ig 또는 항체) VH β-시트 프레임워크의 비-프레임워크 영역 내의 3개의 초가변성 영역 (H1, H2 또는 H3) 중 하나 또는 항체 VL β-시트 프레임워크의 비-프레임워크 영역 내의 3개의 초가변성 영역 (L1, L2 또는 L3) 중 하나를 지칭한다. CDR은 프레임워크 영역 서열 내에 산재된 가변 영역 서열이다. CDR은 당업계에서 잘 인식되어 있고, 예를 들어, 항체 가변성 (V) 도메인 내에 가장 초가변성의 영역으로 카밧(Kabat)에 의해 정의되었다. 그 전체적으로 참고로 포함되어 있는, 문헌 [Kabat 등, J Biol Chem, 1977, 252:6609-6616 및 Kabat, Adv Protein Chem, 1978, 32:1-75]을 참고한다. CDR은 또한 보존된 β-시트 프레임워크의 일부가 아니고 따라서 상이한 형태로 적응할 수 있는 이들 잔기로 초티아(Chothia)에 의해 구조적으로 정의되었다. 그 전체적으로 참고로 포함되어 있는, 문헌 [Chothia 및 Lesk, J Mol Biol, 1987, 196:901-917]을 참고한다. 카밧 및 초티아 명명법 둘 모두는 당해 기술에 공지되어 있다. AbM, 컨택(Contact) 및 IMGT는 또한 CDR을 정의하였다. 정식 항체 가변 도메인 내의 CDR 위치는 수많은 구조의 비교에 의해 결정되었다. 그 각각이 전체적으로 참고로 포함되어 있는, 문헌 [Morea 등, Methods, 2000, 20:267-279] 및 문헌 [Al-Lazikani 등, J Mol Biol, 1997, 273:927-48]을 참고한다. 초가변성 영역 내의 잔기의 수는 상이한 항체에서 다양하기 때문에, 정식 위치에 대한 추가의 잔기는 정식 가변 도메인 넘버링 체계에서 잔기 번호에 옆에 a, b, c 등으로 통상적으로 넘버링된다 (Al-Lazikani 등(상동)). 그와 같은 용어는 당해 분야의 숙련가에게 잘 알려져 있다.
수많은 초가변성 영역 윤곽이 사용되고 있고 본 명세서에 포함된다. 카밧 CDR은 서열 가변성에 기초하고 가장 통상적으로 사용된다. 그 전체적으로 참고로 포함되어 있는, 문헌 [Kabat 등 (1992) Sequences of Proteins of Immunological Interest, DIANE Publishing: 2719]을 참고한다. 초티아는 대신에 구조 루프의 위치를 언급한다 (Chothia 및 Lesk(상동)). AbM 초가변성 영역은 카밧 CDR과 초티아 구조 루프 사이의 절충안을 나타내고 옥스포드 분자의 AbM 항체 모델링 소프트웨어에 의해 사용된다. 컨택 초가변성 영역은 이용가능한 복합체 결정 구조의 분석에 기초된다. 각각의 이들 초가변성 영역으로부터의 잔기는 표 1에 나타나 있다.
더욱 최근에, 보편적인 넘버링 시스템인 ImMunoGeneTics (IMGT) Information SystemTM이 개발되어 널리 채택되었다. 그 전체적으로 참고로 포함되어 있는, 문헌 [Lefranc 등, Dev Comp Immunol, 2003, 27:55-77]을 참고한다. IMGT는 면역글로불린 (IG), T 세포 수용체 (TR) 및 인간과 다른 척추동물의 주조직 적합성 복합체 (MHC)에서 구체화하는 통합된 정보 시스템이다. IMGT CDR은 경쇄 또는 중쇄 내의 아미노산 서열 및 위치 둘 모두의 관점에서 언급된다. 면역글로불린 가변 도메인의 구조 내의 CDR의 "위치"는 종 간에 보존되고 루프로 불리는 구조 내에 존재하기 때문에, 구조적 특징에 따른 가변 도메인 서열을 정렬하는 넘버링 시스템을 사용함에 의해, CDR 및 프레임워크 잔기가 쉽게 확인된다. 카밧, 초티아 및 IMGT 넘버링 사이의 관련성은 또한 당해 분야에서 잘 알려져 았다 (Lefranc 등(상동)). 본 명세서에 나타난 예시적인 시스템은 카밧 및 초티아 CDR 정의를 조합한다.
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임의의 척추동물 종으로부터 경쇄는 그것의 불변 도메인의 서열에 기초하여 카파 (κ) 및 람다 (λ)로 불리는 2개의 유형 중 하나에 할당될 수 있다.
임의의 척추동물 종으로부터 중쇄는 5개의 상이한 부류 (또는 이소타입): IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM 중 하나에 할당될 수 있다. 이들 부류는 또한 각각 α, δ, ε, γ, 및 μ로 지정된다. IgG 및 IgA 부류는 서열 및 기능에서의 차이에 기반하여 서브클래스로 추가로 분할된다. 인간은 하기 서브클래스: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2를 발현한다.
용어 "불변 영역" 또는 "불변 도메인"은 항원에 항체를 결합하는데 직접적으로 관여되지는 않지만 다양한 효과기 기능, 예컨대 Fc 수용체와 상호작용을 나타내는 경쇄 및 중쇄의 카복시 말단부를 지칭한다. 본 용어들은 항원-결합 부위를 함유하는, 가변 도메인인, 면역글로불린의 다른 부분에 대해 더욱 보존된 아미노산 서열을 갖는 면역글로불린 분자의 부분을 지칭한다. 불변 도메인은 중쇄의 CH1, CH2 및 CH3 도메인 및 경쇄의 CL 도메인을 함유한다.
"EU 넘버링 체계"는 일반적으로 (예를 들어, Kabat 등(상동)에서 보고된 바와 같이) 항체 중쇄 불변 영역에서 잔기를 언급할 때 사용된다. 이와 달리 언급되지 않는 한, EU 넘버링 체계는 본 명세서에 기재된 항체 중쇄 불변 영역에서의 잔기를 지칭하기 위해 사용된다.
"항체 단편"은 온전한 항체의 일부, 예컨대 온전한 항체의 항원-결합 또는 가변 영역을 포함한다. 항체 단편은, 예를 들어, Fv 단편, Fab 단편, F(ab')2 단편, Fab' 단편, scFv (sFv) 단편, 및 scFv-Fc 단편을 포함한다.
"Fv" 단편은 하나의 중쇄 가변 도메인 및 하나의 경쇄 가변 도메인의 비-공유적으로-연결된 이량체를 포함한다.
"Fab" 단편은 중쇄 및 경쇄 가변 도메인에 부가하여, 경쇄의 불변 도메인 및 중쇄의 제1 불변 도메인 (CH1)을 포함한다. Fab 단편은, 예를 들어, 재조합 방법 또는 전장 항체의 파파인 단리에 의해 생성될 수 있다.
"F(ab')2" 단편은 힌지 영역 근처에, 디설파이드 결합에 의해 연결된 2개의 Fab' 단편을 함유한다. F(ab')2 단편은, 예를 들어, 재조합 방법 또는 온전한 항체의 펩신 단리에 의해 생성될 수 있다. F(ab') 단편은, 예를 들어, β-머캅토에탄올로 처리에 의해 해리될 수 있다.
"단일-사슬 Fv" 또는 "sFv" 또는 "scFv" 항체 단편은 단일 폴리펩타이드 사슬에 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함한다. VH 및 VL은 일반적으로 펩타이드 링커에 의해 연결된다. 문헌 [
Figure pct00092
(1994)]을 참고한다. 임의의 적합한 링커가 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 링커는 (GGGGS)n (서열번호:823)이다. 일부 구현예에서, n = 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6이다. 에스케리치아 콜라이로부터의 항체를 참고한다. 그 전체적으로 참고로 포함되어 있는, 문헌 [In Rosenberg M. & Moore G.P. (Eds.), The Pharmacology of Monoclonal Antibodies vol. 113 (pp. 269-315). Springer-Verlag, New York]을 참고한다.
"scFv-Fc" 단편은 Fc 도메인에 부착된 scFv를 포함한다. 예를 들어, Fc 도메인은 scFv의 C-말단에 부착될 수 있다. Fc 도메인은 scFv에서 가변 도메인의 지향에 따라 VH 또는 VL에 이어질 수 있다 (즉, VH -VL 또는 VL -VH). 당업계에서 알려지거나 또는 본 명세서에 기재된 임의의 적합한 Fc 도메인이 사용될 수 있다.
용어 "단일 도메인 항체"는 항체 중 하나의 가변 도메인이 다른 가변 도메인의 존재 없이 항원에 특이적으로 결합하는 분자를 지칭한다. 단일 도메인 항체, 및 이의 단편은 문헌 [Arabi Ghahroudi 등, FEBS Letters, 1998, 414:521-526] 및 문헌 [Muyldermans 등, Trends in Biochem . Sci ., 2001, 26:230-245]에 기재되어 있으며, 이들 각각은 참고로 전체적으로 편입되어 있다. 단일 도메인 항체는 sdAb 또는 나노바디로도 알려져 있다.
"다중특이적 항체"는 2개 이상의 상이한 에피토프를 집합적으로 특이적으로 결합하는 2개 이상의 상이한 항원-결합 도메인을 포함하는 항체이다. 2개 이상의 상이한 에피토프는 동일한 항원 (예를 들어, 세포에 의해 발현된 단일 TF 분자) 또는 상이한 항원 (예를 들어, TF 분자 및 비-TF 분자) 상의 에피토프일 수 있다. 일부 양태에서, 다중-특이적 항체는 bind 2개의 상이한 에피토프 (즉, "이중특이적 항체"). 일부 양태에서, 다중-특이적 항체는 3개의 상이한 에피토프를 결합한다 (즉, "삼중특이적 항체"). 일부 양태에서, 다중-특이적 항체는 4개의 상이한 에피토프를 결합한다 (즉, "사중특이적 항체"). 일부 양태에서, 다중-특이적 항체는 5개의 상이한 에피토프를 결합한다 (즉, "오중특이적 항체"). 일부 양태에서, 다중-특이적 항체는 6, 7, 8, 또는 그 초과 상이한 에피토프를 결합한다. 각각의 결합 특이성은 임의의 적합한 원자가에 존재할 수 있다. 다중특이적 항체의 예는 본 개시내용의 다른 곳에 제공되어 있다.
"단일특이적 항체"는 단일 에피토프에 특이적으로는 결합하는 하나 이상의 결합 부위를 포함하는 항체이다. 단일특이적 항체의 예는, 2가이면서 (즉, 2개의 항원-결합 도메인을 가짐), 각각의 2개의 항원-결합 도메인에서 동일한 에피토프를 인지하는 자연 발생 IgG 분자이다. 결합 특이성은 임의의 적합한 원자가에 존재할 수 있다.
용어 "단클론성 항체"는 실질적으로 동종 항체의 모집단으로부터의 항체를 지칭한다. 실질적으로 동종 항체의 모집단은 실질적으로 유사하고 동일한 에피토프(들)에 결합하는, 단클론성 항체의 생산 동안 정상적으로 일어날 수 있는 변이체를 제외한, 항체를 포함한다. 그와 같은 변이체는 일반적으로 단지 소량으로 존재한다. 단클론성 항체는 전형적으로 복수의 항체로부터 단일 항체의 선택을 포함하는 공정에 의해 수득된다. 예를 들어, 선택 공정은 하이브리도마 클론, 파아지 클론, 효모 클론, 박테리아 클론, 또는 다른 재조합 DNA 클론의 풀과 같은, 복수의 클론으로부터 고유의 클론의 선택일 수 있다. 선택된 항체는, 예를 들어, 표적에 대한 친화력을 개선하고 ("친화도 성숙"), 항체를 인간화하고, 세포 배양에서 그것의 생산을 개선하고/거나 대상체에서 그것의 면역원성을 감소시키기 위해 추가로 변경될 수 있다.
용어 "키메라 항체"는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부는 특정 공급원 또는 종으로부터 유래되는 반면, 중쇄 및/또는 경쇄의 나머지는 다른 공급원 또는 종으로부터 유래되는 항체를 지칭한다.
비-인간 항체의 "인간화된" 형태는 비-인간 항체로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 항체이다. 인간화된 항체는 일반적으로 하나 이상의 CDR로부터의 잔기가 비-인간 항체 (공여체 항체)의 하나 이상의 CDR로부터의 잔기에 의해 대체된 인간 항체 (수령체 항체)이다. 공여체 항체는 원하는 특이성, 친화도, 또는 생물학적 효과를 갖는 임의의 적합한 비-인간 항체, 예컨대 마우스, 랫트, 토끼, 닭, 또는 비-인간 영장류 항체일 수 있다. 일부 사례에서, 수령체 항체의 선택된 프레임워크 영역 잔기는 공여체 항체로부터 해당하는 프레임워크 영역 잔기에 의해 대체된다. 인간화된 항체는 또한 수령체 항체 또는 공여체 항체의 어느 것에서도 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 그와 같은 변형은 항체 기능을 추가로 개선하기 위해 이루어질 수 있다. 추가 세부사항에 대해, 이들 각각이 전체적으로 참고로 포함되어 있는, 문헌 [Jones 등, Nature, 1986, 321:522-525]; 문헌 [Riechmann 등, Nature, 1988, 332:323-329]; 및 문헌 [Presta, Curr . Op. Struct . Biol ., 1992, 2:593-596]을 참고한다.
"인간 항체"는 인간 또는 인간 세포에 의해 생산되거나, 또는 인간 항체 레퍼토리 또는 인간 항체-인코딩 서열 (예를 들어, 인간 공급원으로부터 수득되거나 또는 드 노보 설계됨)을 이용하는 비-인간 공급원으로부터 유래된 항체의 것에 해당하는 아미노산 서열을 보유하는 것이다. 인간 항체는 구체적으로 인간화된 항체를 배제한다.
"단리된 항체" 또는 "단리된 핵산"은 그것의 천연 환경의 구성요소로부터 분리되고/되거나 회수된 항체 또는 핵산이다. 천연 환경의 구성요소는 효소, 호르몬, 및 다른 단백질성 또는 비단백질성 물질을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 단리된 항체는, 예를 들어 회전 컵 서열분석기의 사용에 의해, N-말단 또는 내부 아미노산 서열 중 적어도 15개 잔기를 얻기에 충분한 정도로 정제된다. 일부 구현예에서, 단리된 항체는 환원 또는 비환원 조건 하에서, 쿠마씨 블루 또는 은 염색에 의한 검출로, 겔 전기영동 (예를 들어, SDS-PAGE)에 의해 동종성으로 정제된다. 일부 구현예에서, 항체의 천연 환경 중 적어도 하나의 구성요소는 존재하지 않기 때문에, 단리된 항체는 재조합 세포 내의 원위치에 항체를 포함할 수 있다. 일부 양태에서, 단리된 항체 또는 단리된 핵산은 적어도 하나의 정제 단계에 의해 제조된다. 일부 구현예에서, 단리된 항체 또는 단리된 핵산은 중량으로 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 99%로 정제된다. 일부 구현예에서, 단리된 항체 또는 단리된 핵산은 부피로 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 99%로 정제된다. 일부 구현예에서, 단리된 항체 또는 단리된 핵산은 중량으로 적어도 85%, 90%, 95%, 98%, 99% 내지 100% 항체 또는 핵산을 포함하는 용액으로 제공된다. 일부 구현예에서, 단리된 항체 또는 단리된 핵산은 부피로 적어도 85%, 90%, 95%, 98%, 99% 내지 100% 항체 또는 핵산을 포함하는 용액으로 제공된다.
"친화도"는 분자 (예를 들어, 항체)의 단일 결합 부위와 그것의 결합 파트너 (예를 들어, 항원 또는 에피토프) 사이의 비-공유 상호작용의 총합의 강도를 지칭한다. 이와 달리 나타내지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "친화도"는 결합 쌍의 구성원 (예를 들어, 항체 및 항원 또는 에피토프) 사이의 1:1 상호작용을 반영하는 고유 결합 친화도를 지칭한다. 분자 X의 그것의 파트너 Y에 대한 친화도는 해리 평형 상수 (KD)에 의해 제시될 수 있다. 해리 평형 상수에 기여하는 동력학 구성요소는 아래에 더 상세히 기재되어 있다. 친화도는 본 명세서에서 기재된 것, 예컨대 표면 플라즈몬 공명 (SPR) 기술 (예를 들어, BIACORE®) 또는 생체층 간섭법 (예를 들어, FORTEBIO®)을 포함하여, 당해 분야에서 알려진 일반적 방법에 의해 측정될 수 있다.
표적 분자에 대한 항체의 결합에 관하여, 용어들 특정 항원 (예를 들어, 폴리펩타이드 표적) 또는 특정 항원 상의 에피토프에 "결합한다", "특이적 결합", "특이적으로 결합한다", "대해 특이적인", "선택적으로 결합한다", 및 "대해 선택적"은 (예를 들어, 비-표적 분자와) 비-특이적 또는 비-선택적 상호작용으로부터 측정가능하게 상이한 결합을 의미한다. 특이적 결합은, 예를 들어, 표적 분자에 대한 결합을 측정하고 그것을 비-표적 분자에 대한 결합과 비교함에 의해 측정될 수 있다. 특이적 결합은 또한 표적 분자 상에서 인식된 에피토프를 모방하는 대조군 분자와의 경쟁에 의해 결정될 수 있다. 그 경우에, 특이적 결합은 표적 분자에 대한 항체의 결합이 대조군 분자에 의해 경쟁적으로 억제되는지 여부로 표시된다. 일부 양태에서, 비-표적 분자에 대한 TF 항체의 친화도는 TF에 대한 친화도의 약 50% 미만이다. 일부 양태에서, 비-표적 분자에 대한 TF 항체의 친화도는 TF에 대한 친화도의 약 40% 미만이다. 일부 양태에서, 비-표적 분자에 대한 TF 항체의 친화도는 TF에 대한 친화도의 약 30% 미만이다. 일부 양태에서, 비-표적 분자에 대한 TF 항체의 친화도는 TF에 대한 친화도의 약 20% 미만이다. 일부 양태에서, 비-표적 분자에 대한 TF 항체의 친화도는 TF에 대한 친화도의 약 10% 미만이다. 일부 양태에서, 비-표적 분자에 대한 TF 항체의 친화도는 TF에 대한 친화도의 약 1% 미만이다. 일부 양태에서, 비-표적 분자에 대한 TF 항체의 친화도는 TF에 대한 친화도의 약 0.1% 미만이다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "kd" (sec- 1)는 특정 항체-항원 상호작용의 해리 속도 상수를 지칭한다. 이러한 값은 또한 일명 koff 값이다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "ka" (M-1×sec- 1)는 특정 항체-항원 상호작용의 결합 속도 상수를 지칭한다. 이러한 값은 또한 일명 kon 값이다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "KD" (M)는 특정 항체-항원 상호작용의 해리 평형 상수를 지칭한다. KD = kd/ka. 일부 구현예에서, 항체의 친화도는 이러한 항체와 그것의 항원 사이의 상호작용에 대한 KD의 관점에서 기재된다. 명백하게 하기 위해, 당해 분야에서 알려진 바와 같이, 더 작은 KD 값은 더 높은 친화도 상호작용을 나타내고, 반면에 더 큰 KD 값은 더 낮은 친화도 상호작용을 나타낸다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "KA" (M- 1)는 특정 항체-항원 상호작용의 연관 평형 상수를 지칭한다. KA = ka/kd.
"친화도 성숙된" 항체는 변경(들)을 보유하지 않는 모 항체에 비교하여, 그것의 항원에 대한 항체의 친화도에서 개선을 초래하는 모체 항체 (즉, 변경된 항체가 유래되거나 또는 설계된 항체)에 비하여 (예를 들어, 하나 이상의 CDR 또는 FR에서) 하나 이상의 변경을 갖는 항체이다. 일부 구현예에서, 친화도 성숙된 항체는 표적 항원에 대한 나노몰 또는 피코몰 친화력을 갖는다. 친화도 성숙된 항체는 당해 분야에서 알려진 다양한 방법을 사용하여 생산될 수 있다. 예를 들어, Marks 등 (Bio/Technology, 1992, 10:779-783, 이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)은 VH 및 VL 도메인 셔플링에 의해 친화도 성숙을 기술한다. CDR 및/또는 프레임워크 잔기의 랜덤 돌연변이유발은, 예를 들어, 문헌 [Barbas 등, Proc . Nat. Acad . Sci . U.S.A., 1994, 91:3809-3813]; 문헌 [Schier 등, Gene, 1995, 169:147-155]; 문헌 [Yelton 등, J. Immunol ., 1995, 155:1994-2004]; 문헌 [Jackson 등, J. Immunol ., 1995, 154:3310-33199]; 및 문헌 [Hawkins 등, J. Mol . Biol ., 1992, 226:889-896]에 기재되어 있으며; 이들 각각은 전체적으로 참고로 포함되어 있다.
"Fc 효과기 기능"은 그 활성이 항체 이소타입에 의존하여 다양할 수 있는, 항체의 Fc 영역에 의해 매개된 이들 생물학적 활성을 지칭한다. 항체 효과기 기능의 예는 보체 의존적 세포독성 (CDC)을 활성화하기 위한 C1q 결합, 항체-의존적 세포 세포독성 (ADCC), 및 항체 의존적 세포 식균작용 (ADCP)을 활성화하기 위한 Fc 수용체 결합을 포함한다.
2개 이상의 항체의 맥락에서 본 명세서에서 사용될 때, 용어 "경쟁한다" 또는 "교차-경쟁한다"는 2개 이상의 항체가 항원 (예를 들어, TF)에 대한 결합에 대해 경쟁한다는 것을 나타낸다. 일 예시적인 검정에서, TF는 표면 상에 코팅되고 제1 TF 항체와 접촉되고, 그 후 제2 TF 항체가 첨가된다. 또 다른 예시적인 검정에서, 제1 TF 항체가 표면 상에 코팅되고 TF와 접촉되고, 그 다음 제2 TF 항체가 첨가되었다. 제1 TF 항체의 존재가 어느 하나의 검정에서 제2 TF 항체의 결합을 감소시키는 경우, 항체는 서로 경쟁한다. 용어 "경쟁한다"는 또한 일 항체가 또 다른 항체의 결합을 감소시키지만, 항체가 역순으로 첨가되는 경우 경쟁은 관측되지 않는 항체의 조합을 포함한다. 그러나, 일부 구현예에서, 제1 및 제2 항체는 그것이 첨가되는 순서에 무관하게 서로의 결합을 억제한다. 일부 구현예에서, 일 항체는 적어도 25%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%까지 그것의 항원에 대한 또 다른 항체의 결합을 감소시킨다. 당업자는 TF에 대한 항체의 친화도 및 항체의 원자가에 기초하여 경쟁 검정에 사용된 항체의 농도를 선택할 수 있다. 이 정의에 기재된 검정은 설명적이고, 당업자는 항체가 서로 경쟁하는지를 결정하기 위해 임의의 적합한 검정을 이용할 수 있다. 적합한 검정은, 예를 들어, 문헌 [Cox 등, "Immunoassay Methods," Assay Guidance Manual [Internet], Updated December 24, 2014 (www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK92434/; accessed September 29, 2015)]; 문헌 [Silman 등, Cytometry, 2001, 44:30-37]; 및 문헌 [Finco 등, J. Pharm . Biomed . Anal., 2011, 54:351-358]에 기재되어 있으며; 이들 각각은 전체적으로 참고로 포함되어 있다. 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 실시예 8에서 제공된 바와 같이, 그룹 25의 항체와 그룹 43의 항체는 인간 TF에 결합하기 위해 서로 경쟁하는 반면, 그룹 1, 29, 39, 및 54로부터의 항체는 그룹 25 및 43의 항체와 인간 TF에 결합하기 위해 경쟁하지 않는다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 인간 항원에 특이적으로 결합하는 항체는 KD 값이 마우스 항원을 갖는 ForteBio Octet 상에서 측정될 수 있을 때 마우스 기원의 동일한 항원에 결합하는 것으로 간주된다. 인간 항원에 특이적으로 결합하는 항체는 마우스 항원에 대한 KD 값이 각각의 인간 항원에 해당하는 KD 값의 20배 이하일 때 마우스 기원의 동일한 항원과 "교차-반응성"인 것으로 간주된다. 예를 들어, 그 각각이 모든 목적을 위해 참고로 본 명세서에 편입된, 미국 특허 번호 8,722,044, 8,951,525, 및 8,999,333에 기재된 항체 M1593, 전체적으로 참고로 포함된 문헌 [Ngo 등, 2007, Int J Cancer, 120(6):1261-1267]에 기재된 인간화된 5G9 항체, 및 전체적으로 참고로 포함된 문헌 [Hong 등, 2012, J Nucl Med, 53(11):1748-1754]에 기재된 키메라 ALT-836 항체는 마우스 TF에 결합하지 않는다. 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 실시예 1 및 2에서 제공된 바와 같이, 그룹 25 및 43으로부터의 TF 항체는 마우스 TF에 결합하며, 예를 들어, TF 항체 25G, 25G1, 25G9, 및 43D8은 마우스 TF와 교차-반응성이다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 인간 항원에 특이적으로 결합하는 항체는 사이노몰구스 원숭이 항원에 대한 KD 값이 각각의 인간 항원에 해당하는 KD 값의 15배 이하일 때 사이노몰구스 원숭이 기원의 동일한 항원과 "교차-반응성"인 것으로 간주된다. 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 실시예 1에서 제공된 바와 같이, 그룹 1, 25, 29, 39, 43, 및 54로부터의 모든 시험 항체는 사이노몰구스 원숭이 TF와 교차-반응성이다.
용어 "에피토프"는 항체에 의해 구체적으로 결합된 항원의 부분을 의미한다. 에피토프는 빈번하게 표면-접근가능한 아미노산 잔기 및/또는 당 측쇄를 포함하고 특이적 3차원 구조 특성뿐만 아니라 특이적 하전 특성을 가질 수 있다. 형태적 및 비-형태적 에피토프는 후자가 아닌 전자에 대한 결합이 변성 용매의 존재에서 상실될 수 있다는 점에서 구별된다. 에피토프는 결합에 직접적으로 관여되는 아미노산 잔기, 및 결합에 직접적으로 관여되지 않는 다른 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 항체가 결합하는 에피토프는 에피토프 결정에 대해 알려진 기술 예컨대, 예를 들어, 상이한 점-돌연변이를 갖는 TF 변이체, 또는 키메라 TF 변이체에 결합하는 항체에 대한 시험을 사용하여 결정될 수 있다.
폴리펩타이드 서열과 참조 서열 사이의 퍼센트 "동일성"은 최대 퍼센트 서열 동일성을 달성하도록 서열을 정렬하고 필요하면 갭을 도입한 후, 참조 서열에서의 아미노산 잔기에 동일한 폴리펩타이드 서열에서 아미노산 잔기의 백분율로 정의된다. 퍼센트 아미노산 서열 동일성을 결정하기 위한 정렬은 당업계의 기술 내에 있는 다양한 방식으로, 예를 들어, 공공연하게 이용가능한 컴퓨터 소프트웨어 예컨대 BLAST, BLAST-2, ALIGN, MEGALIGN (DNASTAR), CLUSTALW, CLUSTAL OMEGA, 또는 MUSCLE 소프트웨어를 사용하여 달성될 수 있다. 당해 분야의 숙련가는 비교되는 서열의 전장에 걸쳐 최대 정렬을 달성하기 위해 필요한 임의의 알고리즘을 포함한, 서열을 정렬하기 위한 적절한 파라미터를 결정할 수 있다.
"보존적 치환" 또는 "보존적 아미노산 치환"은 화학적으로 또는 기능적으로 유사한 아미노산에 의한 아미노산의 치환을 지칭한다. 유사한 아미노산을 제공하는 보존적 치환 표는 당해 기술에 공지되어 있다. 예로써, 표 2-4에 제공된 아미노산의 그룹은, 일부 구현예에서, 서로에 대해 보존적 치환인 것으로 간주된다.
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추가의 보존적 치환은, 예를 들어, 문헌 [Creighton, Proteins: Structures and Molecular Properties 2nd ed. (1993) W. H. Freeman & Co., New York, NY]에서 발견될 수 있다. 모체 항체에서 아미노산 잔기의 하나 이상의 보존적 치환을 제조하여 생성된 항체는 "보존적으로 변형된 변이체"로 지칭된다.
용어 "아미노산"은 20 종의 일반적인 자연 발생 아미노산을 지칭한다. 자연 발생 아미노산은 알라닌 (Ala; A), 아르기닌 (Arg; R), 아스파라긴 (Asn; N), 아스파르트산 (Asp; D), 시스테인 (Cys; C); 글루탐산 (Glu; E), 글루타민 (Gln; Q), 글리신 (Gly; G); 히스티딘 (His; H), 이소류신 (Ile; I), 류신 (Leu; L), 라이신 (Lys; K), 메티오닌 (Met; M), 페닐알라닌 (Phe; F), 프롤린 (Pro; P), 세린 (Ser; S), 트레오닌 (Thr; T), 트립토판 (Trp; W), 티로신 (Tyr; Y), 및 발린 (Val; V)을 포함한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "벡터"는 그것이 연결되는 또 다른 핵산을 증식할 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 본 용어는 자가-복제 핵산 구조로서 벡터뿐만 아니라 그것이 도입된 숙주세포의 게놈에 통합된 벡터를 포함한다. 특정 벡터는 그것이 작동가능하게 연결된 핵산의 발현을 지시할 수 있다. 그와 같은 벡터는 본 명세서에서 일명 "발현 벡터"이다.
용어들 "숙주세포", "숙주 세포주", 및 "숙주 세포 배양"는 상호교환적으로 사용되고 그리고 외인성 핵산이 그 안으로 도입된 세포, 및 그와 같은 세포의 자손을 지칭한다. 숙주세포는 "형질전환체" (또는 "형질전환된 세포") 및 "감염체" (또는 "형질감염된 세포")를 포함하며, 그 각각은 일차 형질전환되거나 또는 형질감염된 세포 및 그로부터 유래된 자손을 포함한다. 그와 같은 자손은 핵산 함량에서 모체 세포에 완전히 동일하지 않을 수 있고, 돌연변이를 함유할 수 있다.
용어 "치료하는" (및 이의 변형 예컨대 "치료한다" 또는 "치료")는 치료를 필요로 하는 대상체에서 질환 또는 병태의 자연스러운 과정을 변경하려는 시도에서 임상 개입을 지칭한다. 치료는 예방을 위해 그리고 임상 병리의 과정 동안 둘 모두로 수행될 수 있다. 치료의 바람직한 효과는 질환의 발생 또는 재발 방지, 증상의 완화, 질환의 임의의 직접 또는 간접적 병리적 결과의 약화, 전이 예방, 질환 진행 속도 감소, 질환 상태의 개선 또는 일시적 처방, 및 차도 또는 개선된 예후를 포함한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "치료 유효량" 또는 "유효량"은 대상체에게 투여될 때 질환 또는 장애를 치료하는데 효과적인 본 명세서에 제공된 항체 또는 약제학적 조성물의 양을 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "대상체"는 포유동물 대상체를 의미한다. 예시적인 대상체는 인간, 원숭이, 개, 고양이, 마우스, 랫트, 소, 말, 낙타, 염소, 토끼, 돼지 및 양을 포함한다. 특정 구현예에서, 대상체는 인간이다. 일부 구현예에서 상기 대상체는 본 명세서에 제공된 항체로 치료될 수 있는 질환 또는 병태를 갖는다. 일부 양태에서, 질환 또는 병태는 암이다. 일부 양태에서, 질환 또는 병태는 신생혈관형성 또는 혈관 염증을 포함한다. 특정 양태에서, 신생혈관형성을 수반하는 질환 또는 병태는 암이다.
용어 "포장 삽입물"은 징후, 용법, 투약량, 투여, 병합 요법, 사용금지사유 및/또는 그와 같은 치료적 또는 진단 제품의 사용에 관한 경고에 대한 정보를 함유하는 치료적 또는 진단 제품 (예를 들어, 키트)의 상업적 패키지에 관례상 포함된 지침을 지칭하기 위해 사용된다.
"화학치료제"는 암의 치료에 유용한 화합물을 지칭한다. 화학치료제는 암의 성장을 촉진할 수 있는 호르몬의 효과를 조절, 감소, 차단 또는 억제하는 작용을 하는 "항-호르몬제" 또는 "내분비 치료제"를 포함한다.
용어 "세포증식억제제"는 시험관내 또는 생체내 세포의 성장을 저지하는 화합물 또는 조성물을 지칭한다. 일부 구현예에서, 세포증식억제제는 S 기에서 세포의 백분율을 감소시키는 제제이다. 일부 구현예에서, 세포증식억제제는 적어도 약 20%, 적어도 약 40%, 적어도 약 60%, 또는 적어도 약 80%까지 S 기에서 세포의 백분율을 감소시킨다.
용어 "약제학적 조성물"은 그러한 형태에서 그 안에 함유된 활성 성분의 생물학적 활성이 대상체를 치료하는데 효과적이도록 허용하기 위한 것이고, 약제학적 조성물에 제공된 양으로 대상체에게 허용될 수 없을 정도로 독성이 있는 추가의 구성요소를 함유하지 않는 제제를 지칭한다.
용어들 "조절한다" 및 "조절"은 언급된 변수를 감소 또는 억제하거나, 대안적으로 활성화 또는 증가시키는 것을 지칭한다.
용어들 "증가된다" 및 "활성화된다"는 인용된 변수에서 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%, 2-배, 3-배, 4-배, 5-배, 10-배, 20-배, 50-배, 100-배, 또는 그 초과의 증가를 지칭한다.
용어들 "감소한다" 및 "억제한다"는 인용된 변수에서 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 2-배, 3-배, 4-배, 5-배, 10-배, 20-배, 50-배, 100-배, 또는 그 초과의 감소를 지칭한다.
용어 "효능화한다"는 수용체의 활성화와 관련된 생물학적 반응을 유도하기 위한 수용체 신호전달의 활성화를 지칭한다. "효능제"는 수용체에 결합하고 이를 효능화하는 독립체이다.
용어 "길항시킨다"는 수용체의 활성화와 관련된 생물학적 반응을 억제하기 위한 수용체 신호전달의 억제를 지칭한다. "길항제"는 수용체에 결합하고 이를 길항시키는 독립체이다.
"알킬"은 1 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형 포화 탄화수소 기의 라디칼을 지칭한다 ("C1-20 알킬"). 일부 구현예에서, 알킬 기는 1 내지 12개의 탄소 원자를 갖는다 ("C1-12 알킬"). 일부 구현예에서, 알킬 기는 1 내지 10개의 탄소 원자를 갖는다 ("C1-10 알킬"). 일부 구현예에서, 알킬 기는 1 내지 9개의 탄소 원자를 갖는다 ("C1-9 알킬"). 일부 구현예에서, 알킬 기는 1 내지 8개의 탄소 원자를 갖는다 ("C1-8 알킬"). 일부 구현예에서, 알킬 기는 1 내지 7개의 탄소 원자를 갖는다 ("C1-7 알킬"). 일부 구현예에서, 알킬 기는 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖는다 (또한 "저급 알킬"로 본 명세서에 언급된 "C1-6 알킬"). 일부 구현예에서, 알킬 기는 1 내지 5 탄소 원자 ("C1-5 알킬"). 일부 구현예에서, 알킬 기는 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는다 ("C1-4 알킬"). 일부 구현예에서, 알킬 기는 1 내지 3개의 탄소 원자를 갖는다 ("C1-3 알킬"). 일부 구현예에서, 알킬 기는 1 내지 2개의 탄소 원자를 갖는다 ("C1-2 알킬"). 일부 구현예에서, 알킬 기는 하나의 탄소 원자 ("C1 알킬"). 일부 구현예에서, 알킬 기는 2 내지 6개의 탄소 원자를 갖는다 ("C2-6 알킬"). C1-6 알킬 기의 예는 메틸 (C1), 에틸 (C2), n-프로필 (C3), 이소프로필 (C3), n-부틸 (C4), tert-부틸 (C4), sec-부틸 (C4), 이소-부틸 (C4), n-펜틸 (C5), 3-펜타닐 (C5), 아밀 (C5), 네오펜틸 (C5), 3-메틸-2-부타닐 (C5), 삼차 아밀 (C5), 및 n-헥실 (C6)을 포함한다. 알킬 기의 추가 예는 n-헵틸 (C7), n-옥틸 (C8) 등을 포함한다. 달리 명시되지 않는 한, 알킬 기의 각 경우는 독립적으로 선택적으로 치환되고, 즉, 비치환되거나 ("비치환된 알킬"), 또는 하나 이상의 치환기; 예를 들어, 예를 들어 1 내지 5개의 치환기, 1 내지 3개의 치환기, 또는 1개의 치환기로 치환된다 ("치환된 알킬"). 특정 구현예에서, 알킬 기는 비치환된 C1-10 알킬 (예를 들어, -CH3). 특정 구현예에서, 알킬 기는 치환된 C1-10 알킬이다. 일반적인 알킬 약어는 Me (-CH3), Et (-CH2CH3), iPr (-CH(CH3)2), nPr (-CH2CH2CH3), n-Bu (-CH2CH2CH2CH3), 또는 i-Bu (-CH2CH(CH3)2)를 포함한다.
"알킬렌"은 2개의 수소가 제거되어 2가 라디칼을 제공하고 치환되거나 비치환될 수 있는 알킬 기를 지칭한다다. 비치환된 알킬렌 기는 메틸렌 (-CH2-), 에틸렌 (-CH2CH2-), 프로필렌 (-CH2CH2CH2-), 부틸렌 (-CH2CH2CH2CH2-), 펜틸렌 (-CH2CH2CH2CH2CH2-), 헥실렌 (-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-), 등을 포함하지만 이에 국한되지 않는다. 예를 들어, 하나 이상의 알킬 (메틸) 기로 치환된 예시적인 치환된 알킬렌 기는 치환된 메틸렌 (-CH(CH3)-, (-C(CH3)2-), 치환된 에틸렌 (-CH(CH3)CH2-, -CH2CH(CH3)-, -C(CH3)2CH2-,-CH2C(CH3)2-), 치환된 프로필렌 (-CH(CH3)CH2CH2-, -CH2CH(CH3)CH2-, -CH2CH2CH(CH3)-, -C(CH3)2CH2CH2-, -CH2C(CH3)2CH2-, -CH2CH2C(CH3)2-), 등을 포함하지만 이에 국한되지 않는다.
"할로" 또는 "할로겐"은 플루오로 (F), 클로로 (Cl), 브로모 (Br), 및 아이오도 (I)를 지칭한다. 특정 구현예에서, 할로 기는 플루오로 또는 클로로이다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "자기 희생성 기"는 화합물 또는 접합체의 두 기 사이에 안정적인 결합 형성을 제공하지만 활성화(예를 들어, 친핵성 공격) 시 불안정하여 모이어티 또는 잔기의 급속한 절단 및 2개의 기의 분리로 이어지는 모이어티 또는 잔기를 지칭한다. 자기 희생성 기의 화학은 예를 들어, 문헌[Alouane, A. 등, "Self-immolative spacers: kinetic aspects, structure-property relationships, and applications", Angew. Chem. Int. Ed., 2015, 54, 7492-7509 and Kolakowski, R. V. 등, "The methylene alkoxy carbamate self-immolative unit: Utilization of the targeted delivery of alcohol-containing payloads with antibody-drug conjugates", Angew. Chem. Int. Ed., 2016, 55, 7948-7951]에 기재되어 있다.
2. TF 항체
2.1. TF 결합
TF에 특이적으로 결합하는 단리된 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 양태에서, TF는 hTF (서열번호:809)이다. 일부 양태에서, TF는 cTF (서열번호:813)이다. 일부 양태에서, TF는 mTF (서열번호:817)이다. 일부 양태에서, TF는 토끼 TF (서열번호:832)이다. 일부 양태에서, TF는 pTF (서열번호:824)이다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 hTF (서열번호:809), cTF (서열번호:813), mTF (서열번호:817), 토끼 TF (서열번호:832), 및 pTF (서열번호:824)에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 hTF (서열번호:809), cTF (서열번호:813), mTF (서열번호:817), 및 pTF (서열번호:824)에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 hTF (서열번호:809), cTF (서열번호:813), 및 mTF (서열번호:817)에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 hTF (서열번호:809) 및 cTF (서열번호:813)에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 mTF (서열번호:817)에 결합하지 않는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 pTF (서열번호:824)에 결합하지 않는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 토끼 TF (서열번호:832)에 결합하지 않는다.
다양한 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 인간 TF의 세포외 도메인 (서열번호:810)에 특히적으로 결합한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 149에서의 돌연변이를 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이다. 일부 구현예에서, 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 149에서의 돌연변이는 K149N이다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 68에서의 돌연변이를 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 초과이다. 일부 구현예에서, 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 68에서의 돌연변이는 K68N이다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 171 및 197에서의 돌연변이를 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이다. 일부 구현예에서, 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 171 및 197에서의 돌연변이는 N171H 및 T197K이다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 1-76을 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 1-77을 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 초과이다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 38-76을 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 39-77을 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 초과이다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 99-112를 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 94-107을 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 초과이다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 151-163을 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 146-158을 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 164-224를 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 159-219를 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 164-194를 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 159-189를 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 164-179를 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 159-174를 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 172-179를 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 167-174를 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 136-189를 갖는 인간 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 141-194를 갖는 랫트 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 초과이다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 149에서의 돌연변이를 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 68에서의 돌연변이를 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 초과이고; 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 1-76을 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 1-77을 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 초과이고; 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 38-76을 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 39-77을 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 초과이고; 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 99-112를 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 94-107을 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 초과이고; 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 151-163을 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 146-158을 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; 그리고 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 136-189를 갖는 인간 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 141-194를 갖는 랫트 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 초과이다. 일부 구현예에서, 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 149에서의 돌연변이는 K149N이고; 그리고 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 68에서의 돌연변이는 K68N이다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 149에서의 돌연변이를 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 68에서의 돌연변이를 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 초과이고; 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 171 및 197에서의 돌연변이를 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 1-76을 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 1-77을 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 초과이고; 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 38-76을 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 39-77을 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 초과이고; 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 99-112를 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 94-107을 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 초과이고; 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 151-163을 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 146-158을 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 164-224를 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 159-219를 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 164-194를 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 159-189를 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 164-179를 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 159-174를 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 172-179를 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 167-174를 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; 그리고 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 136-189를 갖는 인간 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 141-194를 갖는 랫트 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 본 명세서에 제공된 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 초과이다. 일부 구현예에서, 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 149에서의 돌연변이는 K149N; 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 68에서의 돌연변이는 K68N이고; 그리고 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 171 및 197에서의 돌연변이는 N171H 및 T197K이다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 기준 항체 M1593과 비교하여 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 인간 트롬빈 생성을 억제하는데 불활성이고, 상기 기준 항체 M1593은 서열번호:821의 VH 서열 및 서열번호:822의 VL 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 인간 트롬빈 생성을 억제하지 않는다. 특정 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 인간 트롬빈 생성을 허용한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체 인간 FX에 의해 결합된 인간 TF 결합 부위와 구별되는 인간 TF 결합 부위에서 인간 TF에 결합한다. 특정 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 FX를 FXa로 전환시키는 TF:FVIIa의 능력을 방해하지 않는다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 인간 FVIIa에 의해 결합된 인간 TF 결합 부위와 구별되는 인간 TF 결합 부위에서 인간 TF에 결합한다. 특정 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 인간 TF에 결합하기 위해 인간 FVIIa와 경쟁하지 않는다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 인간 TF의 세포외 도메인에 결합하고, 인간 FVIIa에 의해 결합된 인간 TF 결합 부위와 구별되는 인간 TF 결합 부위에서 인간 TF에 결합하고, 인간 FX에 의해 결합된 인간 TF 결합 부위와 구별되는 인간 TF 결합 부위에서 인간 TF에 결합하고, 그리고 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 인간 트롬빈 생성을 허용한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 인간 TF의 세포외 도메인에 결합하고, 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 인간 트롬빈 생성을 억제하지 않고, FX를 FXa로 전환시키는 TF:FVIIa의 능력을 방해하지 않고, 그리고 인간 TF에 결합하기 위해 인간 FVIIa와 경쟁하지 않는다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 인간 FVIIa에 의해 결합된 인간 TF 결합 부위와 구별되는 인간 TF 결합 부위에서 인간 TF의 세포외 도메인에 결합하고, 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 인간 트롬빈 생성을 억제하지 않고, 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 인간 트롬빈 생성을 허용하고, 인간 FX에 의해 결합된 인간 TF 결합 부위와 구별되는 인간 TF 결합 부위에서 인간 TF에 결합하고, FX를 FXa로 전환시키는 TF:FVIIa의 능력을 방해하지 않고, 그리고 인간 TF에 결합하기 위해 인간 FVIIa와 경쟁하지 않는다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 FVIIa-의존적 TF 신호전달을 억제한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 인간 FVIIa에 의해 결합된 인간 TF 결합 부위와 구별되는 인간 TF 결합 부위에서 인간 TF의 세포외 도메인에 결합하고, 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 인간 트롬빈 생성을 억제하지 않고, 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 인간 트롬빈 생성을 허용하고, 인간 FX에 의해 결합된 인간 TF 결합 부위와 구별되는 인간 TF 결합 부위에서 인간 TF에 결합하고, FX를 FXa로 전환시키는 TF:FVIIa의 능력을 방해하지 않고, 인간 TF에 결합하기 위해 인간 FVIIa와 경쟁하지 않고, 그리고 사이노몰구스 및 마우스 TF에 결합한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 인간 FVIIa에 의해 결합된 인간 TF 결합 부위와 구별되는 인간 TF 결합 부위에서 인간 TF의 세포외 도메인에 결합하고, 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 인간 트롬빈 생성을 억제하지 않고, 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 인간 트롬빈 생성을 허용하고, 인간 FX에 의해 결합된 인간 TF 결합 부위와 구별되는 인간 TF 결합 부위에서 인간 TF에 결합하고, FX를 FXa로 전환시키는 TF:FVIIa의 능력을 방해하지 않고, 인간 TF에 결합하기 위해 인간 FVIIa와 경쟁하지 않고, 사이노몰구스, 마우스, 및 돼지 TF에 결합한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 인간 TF의 세포외 도메인에 결합하고, FVIIa-의존적 TF 신호전달을 억제하고, 그리고 사이노몰구스 TF에 결합한다.
2.2. TF 항체의 서열
2.2.1. 중쇄
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 중쇄 서열을 포함한다. 예시적인 중쇄 서열이 표 22에 제공되어 있다. 중쇄 서열은 25A로 확인된 항체 클론으로부터의 중쇄 서열일 수 있다. 중쇄 서열은 25A3으로 확인된 항체 클론으로부터의 중쇄 서열일 수 있다. 중쇄 서열은 25A5로 확인된 항체 클론으로부터의 중쇄 서열일 수 있다. 중쇄 서열은 25A5T로 확인된 항체 클론으로부터의 중쇄 서열일 수 있다. 중쇄 서열은 25G로 확인된 항체 클론으로부터의 중쇄 서열일 수 있다. 중쇄 서열은 25G1로 확인된 항체 클론으로부터의 중쇄 서열일 수 있다. 중쇄 서열은 25G9로 확인된 항체 클론으로부터의 중쇄 서열일 수 있다.
2.2.2. 경쇄
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 경쇄 서열을 포함한다. 예시적인 경쇄 서열은 표 22에 제공되어 있다. 경쇄 서열은 25A로 확인된 항체 클론으로부터의 경쇄 서열일 수 있다. 경쇄 서열은 25A3으로 확인된 항체 클론으로부터의 경쇄 서열일 수 있다. 경쇄 서열은 25A5로 확인된 항체 클론으로부터의 경쇄 서열일 수 있다. 경쇄 서열은 25A5T로 확인된 항체 클론으로부터의 경쇄 서열일 수 있다. 경쇄 서열은 25G로 확인된 항체 클론으로부터의 경쇄 서열일 수 있다. 경쇄 서열은 25G1로 확인된 항체 클론으로부터의 경쇄 서열일 수 있다. 경쇄 서열은 25G9로 확인된 항체 클론으로부터의 경쇄 서열일 수 있다.
2.2.3. V H 도메인
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호: 113, 151, 189, 836, 227, 265, 303, 763, 868 및 870으로부터 선택된 VH 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호:113의 VH 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호:151의 VH 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호:189의 VH 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호:836의 VH 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호:227의 VH 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호:265의 VH 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호:303의 VH 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호:763의 VH 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호:868의 VH 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호: 113, 151, 189, 836, 227, 265, 303, 763, 868, 및 870으로부터 선택된 예시적인 VH 서열에 대해 적어도 약 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 99% 동일성을 갖는 VH 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개의 아미노산 치환을 갖는 서열번호: 113, 151, 189, 836, 227, 265, 303, 763, 868, 및 870으로부터 선택된 VH 서열을 포함한다. 일부 양태에서, 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, 이 단락에 기재된 항체는 본 명세서에서 "변이체"로 지칭된다. 일부 구현예에서, 이러한 변이체는 예를 들어 친화성 성숙, 부위 지향된 돌연변이유발, 랜덤 돌연변이유발, 또는 당업계에 공지되거나 본 명세서에 기재된 임의의 다른 방법에 의해 본 명세서에 제공된 서열로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 이러한 변이체는 본 명세서에 제공된 서열로부터 유래되지 않으며, 예를 들어 항체를 수득하기 위해 본 명세서에 제공된 방법에 따라 새로 단리될 수 있다.
2.2.4. V L 도메인
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호: 114, 152, 190, 837, 228, 266, 304, 764, 869, 및 871로부터 선택된 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호:114의 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호:152의 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호:190의 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호:837의 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호:228의 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호:266의 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호:304의 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호:764의 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호:869의 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호:871의 VL 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호: 114, 152, 190, 837, 228, 266, 304, 764, 869, 및 871로부터 선택된 예시적인 VL 서열에 대해 적어도 약 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 99% 동일성을 갖는 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개의 아미노산 치환을 갖는 서열번호: 114, 152, 190, 837, 228, 266, 304, 764, 869, 및 871로부터 선택된 VL 서열을 포함한다. 일부 양태에서, 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, 이 단락에 기재된 항체는 본 명세서에서 "변이체"로 지칭된다. 일부 구현예에서, 이러한 변이체는 예를 들어 친화성 성숙, 부위 지향된 돌연변이유발, 랜덤 돌연변이유발, 또는 당업계에 공지되거나 본 명세서에 기재된 임의의 다른 방법에 의해 본 명세서에 제공된 서열로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 이러한 변이체는 본 명세서에 제공된 서열로부터 유래되지 않으며, 예를 들어 항체를 수득하기 위해 본 명세서에 제공된 방법에 따라 새로 단리될 수 있다.
2.2.5. V H -V L 조합
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호: 113, 151, 189, 836, 227, 265, 303, 763, 868, 및 870으로부터 선택된 VH 서열 및 서열번호: 114, 152, 190, 837, 228, 266, 304, 764, 869, 및 871로부터 선택된 VL 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호:113의 VH 서열 및 서열번호:114의 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호:151의 VH 서열 및 서열번호:152의 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호:189의 VH 서열 및 서열번호:190의 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호:836의 VH 서열 및 서열번호:837의 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호:227의 VH 서열 및 서열번호:228의 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호:265의 VH 서열 및 서열번호:266의 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호:303의 VH 서열 및 서열번호:304의 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열 763의 VH 서열 및 서열 764의 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호:868의 VH 서열 및 서열번호:869의 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호:870의 VH 서열 및 서열번호:871의 VL 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호: 113, 151, 189, 836, 227, 265, 303, 763, 868, 및 870으로부터 선택된 예시적인 VH 서열에 대해 적어도 약 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 99% 동일성을 갖는 VH 서열, 및 서열번호: 114, 152, 190, 837, 228, 266, 304, 764, 869, 및 871로부터 선택된 예시적인 VL 서열에 대해 적어도 약 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 99% 동일성을 갖는 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개의 아미노산 치환을 갖는 서열번호: 113, 151, 189, 836, 227, 265, 303, 763, 868, 및 870으로부터 선택된 VH 서열, 및 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개의 아미노산 치환을 갖는 서열번호: 114, 152, 190, 837, 228, 266, 304, 764, 869, 및 871로부터 선택된 VL 서열을 포함한다. 일부 양태에서, 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, 이 단락에 기재된 항체는 본 명세서에서 "변이체"로 지칭된다. 일부 구현예에서, 이러한 변이체는 예를 들어 친화성 성숙, 부위 지향된 돌연변이유발, 랜덤 돌연변이유발, 또는 당업계에 공지되거나 본 명세서에 기재된 임의의 다른 방법에 의해 본 명세서에 제공된 서열로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 이러한 변이체는 본 명세서에 제공된 서열로부터 유래되지 않으며, 예를 들어 항체를 수득하기 위해 본 명세서에 제공된 방법에 따라 새로 단리될 수 있다.
2.2.6. CDR
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호: 113, 151, 189, 836, 227, 265, 303, 763, 868, 및 870으로부터 선택된 VH 도메인의 1 내지 3개의 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호: 113, 151, 189, 836, 227, 265, 303, 763, 868, 및 870으로부터 선택된 VH 도메인의 2 내지 3개의 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호: 113, 151, 189, 836, 227, 265, 303, 763, 868, 및 870으로부터 선택된 VH 도메인의 3개의 CDR을 포함한다. 일부 양태에서, CDR은 예시적인 CDR이다. 일부 양태에서, CDR은 카바트(Kabat) CDR이다. 일부 양태에서, CDR은 초티아(Chothia) CDR이다. 일부 양태에서, CDR은 AbM CDR이다. 일부 양태에서, CDR은 컨택(Contact) CDR이다. 일부 양태에서, CDR은 IMGT CDR이다.
일부 구현예에서, CDR은 서열번호: 113, 151, 189, 836, 227, 265, 303, 763, 868, 및 870의 CDR-H1, CDR-H2, 또는 CDR-H3과 적어도 약 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95% 동일성을 갖는 CDR이다. 일부 구현예에서, CDR-H1은 최대 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산 치환을 갖는 서열번호: 113, 151, 189, 836, 227, 265, 303, 763, 868, 및 870으로부터 선택된 VH 도메인의 CDR-H1이다. 일부 구현예에서, CDR-H2는 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8개의 아미노산 치환을 갖는 서열번호: 113, 151, 189, 836, 227, 265, 303, 763, 868, 및 870으로부터 선택된 VH 도메인의 CDR-H2이다. 일부 구현예에서, CDR-H3은 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8개의 아미노산 치환을 갖는 서열번호: 113, 151, 189, 836, 227, 265, 303, 763, 868, 및 870으로부터 선택된 VH 도메인의 CDR-H3이다. 일부 양태에서, 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, 이 단락에 기재된 항체는 본 명세서에서 "변이체"로 지칭된다. 일부 구현예에서, 이러한 변이체는 예를 들어 친화성 성숙, 부위 지향된 돌연변이유발, 랜덤 돌연변이유발, 또는 당업계에 공지되거나 본 명세서에 기재된 임의의 다른 방법에 의해 본 명세서에 제공된 서열로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 이러한 변이체는 본 명세서에 제공된 서열로부터 유래되지 않으며, 예를 들어 항체를 수득하기 위해 본 명세서에 제공된 방법에 따라 새로 단리될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호: 114, 152, 190, 837, 228, 266, 304, 764, 869, 및 871로부터 선택된 VL 도메인의 1 내지 3개의 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호: 114, 152, 190, 837, 228, 266, 304, 764, 869, 및 871로부터 선택된 VL 도메인의 3 내지 3개의 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호: 114, 152, 190, 837, 228, 266, 304, 764, 869, 및 871로부터 선택된 VL 도메인의 3개의 CDR을 포함한다. 일부 양태에서, CDR은 예시적인 CDR이다. 일부 양태에서, CDR은 카바트(Kabat) CDR이다. 일부 양태에서, CDR은 초티아(Chothia) CDR이다. 일부 양태에서, CDR은 AbM CDR이다. 일부 양태에서, CDR은 컨택(Contact) CDR이다. 일부 양태에서, CDR은 IMGT CDR이다.
일부 구현예에서, CDR은 서열번호: 114, 152, 190, 837, 228, 266, 304, 764, 869, 및 871의 CDR-L1, CDR-L2, 또는 CDR-L3과 적어도 약 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95% 동일성을 갖는 CDR이다. 일부 구현예에서, CDR-L1은 최대 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산 치환을 갖는 서열번호: 114, 152, 190, 837, 228, 266, 304, 764, 869, 및 871로부터 선택된 VL 도메인의 CDR-L1이다. 일부 구현예에서, CDR-L2는 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8개의 아미노산 치환을 갖는 서열번호: 114, 152, 190, 837, 228, 266, 304, 764, 869, 및 871로부터 선택된 VL 도메인의 CDR-L2이다. 일부 구현예에서, CDR-L3은 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8개의 아미노산 치환을 갖는 서열번호: 114, 152, 190, 837, 228, 266, 304, 764, 869, 및 871로부터 선택된 VL 도메인의 CDR-L3이다. 일부 양태에서, 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, 이 단락에 기재된 항체는 본 명세서에서 "변이체"로 지칭된다. 일부 구현예에서, 이러한 변이체는 예를 들어 친화성 성숙, 부위 지향된 돌연변이유발, 랜덤 돌연변이유발, 또는 당업계에 공지되거나 본 명세서에 기재된 임의의 다른 방법에 의해 본 명세서에 제공된 서열로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 이러한 변이체는 본 명세서에 제공된 서열로부터 유래되지 않으며, 예를 들어 항체를 수득하기 위해 본 명세서에 제공된 방법에 따라 새로 단리될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호: 113, 151, 189, 836, 227, 265, 303, 763, 868, 및 870으로부터 선택된 VH 도메인의 1 내지 3개의 CDR 및 서열번호: 114, 152, 190, 837, 228, 266, 304, 764, 869, 및 871로부터 선택된 VL 도메인의 1 내지 3개의 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호: 113, 151, 189, 836, 227, 265, 303, 763, 868, 및 870으로부터 선택된 VH 도메인의 2 내지 3개의 CDR 및 서열번호: 114, 152, 190, 837, 228, 266, 304, 764, 869, 및 871로부터 선택된 VL 도메인의 2 내지 3개의 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호: 113, 151, 189, 836, 227, 265, 303, 763, 868, 및 870으로부터 선택된 VH 도메인의 3개의 CDR 및 서열번호: 114, 152, 190, 837, 228, 266, 304, 764, 869, 및 871로부터 선택된 VL 도메인의 3개의 CDR을 포함한다. 일부 양태에서, CDR은 예시적인 CDR이다. 일부 양태에서, CDR은 카바트(Kabat) CDR이다. 일부 양태에서, CDR은 초티아(Chothia) CDR이다. 일부 양태에서, CDR은 AbM CDR이다. 일부 양태에서, CDR은 컨택(Contact) CDR이다. 일부 양태에서, CDR은 IMGT CDR이다.
일부 구현예에서, CDR은 서열번호: 113, 151, 189, 836, 227, 265, 303, 763, 868, 및 870의 CDR-H1, CDR-H2, 또는 CDR-H3과 적어도 약 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95% 동일성 및 서열번호: 114, 152, 190, 837, 228, 266, 304, 764, 869, 및 871의 CDR-L1, CDR-L2, 또는 CDR-L3과 적어도 약 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95% 동일성을 갖는 CDR이다. 일부 구현예에서, CDR-H1은 최대 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산 치환을 갖는 서열번호: 113, 151, 189, 836, 227, 265, 303, 763, 868, 및 870으로부터 선택된 VH 도메인의 CDR-H1이고; CDR-H2는 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8개의 아미노산 치환을 갖는 서열번호: 113, 151, 189, 836, 227, 265, 303, 763, 868, 및 870으로부터 선택된 VH 도메인의 CDR-H2 이고; CDR-H3은 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8개의 아미노산 치환을 갖는 서열번호: 113, 151, 189, 836, 227, 265, 303, 763, 868, 및 870으로부터 선택된 VH 도메인의 CDR-H3 이고; CDR-L1은 최대 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 아미노산 치환을 갖는 서열번호: 114, 152, 190, 837, 228, 266, 304, 764, 869, 및 871로부터 선택된 VL 도메인의 CDR-L1이고; CDR-L2는 최대 1, 2, 3, 또는 4개의 아미노산 치환을 갖는 서열번호: 114, 152, 190, 837, 228, 266, 304, 764, 869, 및 871로부터 선택된 VL 도메인의 CDR-L2이고; 그리고 CDR-L3은 최대 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산 치환을 갖는 서열번호: 114, 152, 190, 837, 228, 266, 304, 764, 869, 및 871로부터 선택된 VL 도메인의 CDR-L3이다. 일부 양태에서, 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, 이 단락에 기재된 항체는 본 명세서에서 "변이체"로 지칭된다. 일부 구현예에서, 이러한 변이체는 예를 들어 친화성 성숙, 부위 지향된 돌연변이유발, 랜덤 돌연변이유발, 또는 당업계에 공지되거나 본 명세서에 기재된 임의의 다른 방법에 의해 본 명세서에 제공된 서열로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 이러한 변이체는 본 명세서에 제공된 서열로부터 유래되지 않으며, 예를 들어 항체를 수득하기 위해 본 명세서에 제공된 방법에 따라 새로 단리될 수 있다.
25A CDR
일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A로부터의 중쇄 CDR 서열을 포함한다. 예시적인 카밧, 초티아, AbM, 컨택 및 IMGT 넘버링 시스템에 의해 결정된 바와 같은 항체 25A CDR 서열이 표 7에 제시되어 있다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A로부터의 CDR-H3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-H3 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A로부터의 CDR-H2 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-H2 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A로부터의 CDR-H1 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-H1 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A로부터의 상응하는 2개의 중쇄 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 2개의 중쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A로부터의 3개의 중쇄 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 3개의 중쇄 CDR을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A로부터의 경쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A로부터의 CDR-L3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-L3 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A로부터의 CDR-L2 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-L2 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A로부터의 CDR-L1 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-L1 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A로부터의 상응하는 2개의 경쇄 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 2개의 경쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A로부터의 3개의 경쇄 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 3개의 경쇄 CDR을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A로부터의 CDR-H3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 CHR-H3 서열 및 항체 클론 25A로부터의 CDR-L3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 CDR-L3 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체는 항체 클론 25A로부터의 상응하는 6개의 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 6개의 CDR 서열을 포함한다.
25A3 CDR
일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A3으로부터의 중쇄 CDR 서열을 포함한다. 예시적인 카밧, 초티아, AbM, 컨택 및 IMGT 넘버링 시스템에 의해 결정된 바와 같은 항체 25A3 CDR 서열이 표 8에 제시되어 있다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A3으로부터의 CDR-H3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-H3 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A3으로부터의 CDR-H2 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-H2 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A3으로부터의 CDR-H1 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-H1 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A3으로부터의 상응하는 2개의 중쇄 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 2개의 중쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A3으로부터의 3개의 중쇄 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 3개의 중쇄 CDR을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A3으로부터의 경쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A3으로부터의 CDR-L3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-L3 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A3으로부터의 CDR-L2 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-L2 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A3으로부터의 CDR-L1 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-L1 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A3으로부터의 상응하는 2개의 경쇄 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 2개의 경쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A3으로부터의 3개의 경쇄 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 3개의 경쇄 CDR을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A3으로부터의 CDR-H3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 CHR-H3 서열 및 항체 클론 25A3으로부터의 CDR-L3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 CDR-L3 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체는 항체 클론 25A3으로부터의 상응하는 6개의 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 6개의 CDR 서열을 포함한다.
25A5 CDR
일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A5로부터의 중쇄 CDR 서열을 포함한다. 예시적인 카밧, 초티아, AbM, 컨택 및 IMGT 넘버링 시스템에 의해 결정된 바와 같은 항체 25A5 CDR 서열이 표 9에 제시되어 있다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A5로부터의 CDR-H3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-H3 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A5로부터의 CDR-H2 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-H2 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A5로부터의 CDR-H1 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-H1 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A5로부터의 상응하는 2개의 중쇄 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 2개의 중쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A5로부터의 3개의 중쇄 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 3개의 중쇄 CDR을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A5로부터의 경쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A5로부터의 CDR-L3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-L3 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A5로부터의 CDR-L2 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-L2 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A5로부터의 CDR-L1 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-L1 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A5로부터의 상응하는 2개의 경쇄 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 2개의 경쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A5로부터의 3개의 경쇄 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 3개의 경쇄 CDR을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A5로부터의 CDR-H3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 CHR-H3 서열 및 항체 클론 25A5로부터의 CDR-L3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 CDR-L3 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체는 항체 클론 25A5로부터의 상응하는 6개의 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 6개의 CDR 서열을 포함한다.
25A5-T CDR
일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A5-T로부터의 중쇄 CDR 서열을 포함한다. 예시적인 카밧, 초티아, AbM, 컨택 및 IMGT 넘버링 시스템에 의해 결정된 바와 같은 항체 25A5-T CDR 서열이 표 10에 제시되어 있다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A5-T로부터의 CDR-H3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-H3 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A5-T로부터의 CDR-H2 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-H2 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A5-T로부터의 CDR-H1 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-H1 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A5-T로부터의 상응하는 2개의 중쇄 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 2개의 중쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A5-T로부터의 3개의 중쇄 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 3개의 중쇄 CDR을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A5-T로부터의 경쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A5-T로부터의 CDR-L3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-L3 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A5-T로부터의 CDR-L2 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-L2 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A5-T로부터의 CDR-L1 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-L1 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A5-T로부터의 상응하는 2개의 경쇄 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 2개의 경쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A5-T로부터의 3개의 경쇄 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 3개의 경쇄 CDR을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25A5-T로부터의 CDR-H3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 CHR-H3 서열 및 항체 클론 25A5-T로부터의 CDR-L3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 CDR-L3 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체는 항체 클론 25A5-T로부터의 상응하는 6개의 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 6개의 CDR 서열을 포함한다.
25G CDR
일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G로부터의 중쇄 CDR 서열을 포함한다. 예시적인 카밧, 초티아, AbM, 컨택 및 IMGT 넘버링 시스템에 의해 결정된 바와 같은 항체 25G CDR 서열이 표 11에 제시되어 있다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G로부터의 CDR-H3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-H3 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G로부터의 CDR-H2 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-H2 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G로부터의 CDR-H1 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-H1 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G로부터의 상응하는 2개의 중쇄 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 2개의 중쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G로부터의 3개의 중쇄 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 3개의 중쇄 CDR을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G로부터의 경쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G로부터의 CDR-L3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-L3 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G로부터의 CDR-L2 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-L2 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G로부터의 CDR-L1 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-L1 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G로부터의 상응하는 2개의 경쇄 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 2개의 경쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G로부터의 3개의 경쇄 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 3개의 경쇄 CDR을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G로부터의 CDR-H3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 CHR-H3 서열 및 항체 클론 25G로부터의 CDR-L3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 CDR-L3 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체는 항체 클론 25G로부터의 상응하는 6개의 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 6개의 CDR 서열을 포함한다.
25G1 CDR
일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G1로부터의 중쇄 CDR 서열을 포함한다. 예시적인 카밧, 초티아, AbM, 컨택 및 IMGT 넘버링 시스템에 의해 결정된 바와 같은 항체 25G1 CDR 서열이 표 12에 제시되어 있다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G1로부터의 CDR-H3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-H3 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G1로부터의 CDR-H2 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-H2 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G1로부터의 CDR-H1 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-H1 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G1로부터의 상응하는 2개의 중쇄 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 2개의 중쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G1로부터의 3개의 중쇄 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 3개의 중쇄 CDR을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G1로부터의 경쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G1로부터의 CDR-L3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-L3 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G1로부터의 CDR-L2 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-L2 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G1로부터의 CDR-L1 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-L1 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G1로부터의 상응하는 2개의 경쇄 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 2개의 경쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G1로부터의 3개의 경쇄 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 3개의 경쇄 CDR을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G1로부터의 CDR-H3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 CHR-H3 서열 및 항체 클론 25G1로부터의 CDR-L3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 CDR-L3 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체는 항체 클론 25G1로부터의 상응하는 6개의 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 6개의 CDR 서열을 포함한다.
25G9 CDR
일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G9로부터의 중쇄 CDR 서열을 포함한다. 예시적인 카밧, 초티아, AbM, 컨택 및 IMGT 넘버링 시스템에 의해 결정된 바와 같은 항체 25G9 CDR 서열이 표 13에 제시되어 있다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G9로부터의 CDR-H3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-H3 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G9로부터의 CDR-H2 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-H2 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G9로부터의 CDR-H1 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-H1 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G9로부터의 상응하는 2개의 중쇄 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 2개의 중쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G9로부터의 3개의 중쇄 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 3개의 중쇄 CDR을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G9로부터의 경쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G9로부터의 CDR-L3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-L3 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G9로부터의 CDR-L2 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-L2 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G9로부터의 CDR-L1 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 CDR-L1 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G9로부터의 상응하는 2개의 경쇄 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 2개의 경쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G9로부터의 3개의 경쇄 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 3개의 경쇄 CDR을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 항체 클론 25G9로부터의 CDR-H3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 CHR-H3 서열 및 항체 클론 25G9로부터의 CDR-L3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 CDR-L3 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체는 항체 클론 25G9로부터의 상응하는 6개의 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 6개의 CDR 서열을 포함한다.
25개의 공통 CDR
일부 구현예에서, 항체는 그룹 25로 확인된 항체 군으로부터의 중쇄 공통 CDR 서열을 포함한다. 카밧 및 초티아 넘버링 시스템에 의해 결정된 항체 군 25 공통 CDR 서열은 표 14에 나타나 있다. 일부 구현예에서, 항체는 그룹 25로 확인된 항체 군으로부터의 CDR-H3 공통 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 CDR-H3 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 그룹 25로 확인된 항체 군으로부터의 공통 CDR-H2 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 CDR-H2 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 그룹 25로 확인된 항체 군으로부터의 공통 CDR-H1 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 CDR-H1 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 그룹 25로 확인된 항체 군으로부터의 상응하는 2개의 공통 중쇄 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 2개의 중쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 그룹 25로 확인된 항체 군으로부터의 3개의 공통 중쇄 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 3개의 중쇄 CDR을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 그룹 25로 확인된 항체 군으로부터의 경쇄 공통 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 그룹 25로 확인된 항체 군으로부터의 공통 CDR-L3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 CDR-L3 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 그룹 25로 확인된 항체 군으로부터의 공통 CDR-L2 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 CDR-L2 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 그룹 25로 확인된 항체 군으로부터의 공통 CDR-L1 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 CDR-L1 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 그룹 25로 확인된 항체 군으로부터의 상응하는 2개의 공통 경쇄 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 2개의 경쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 그룹 25로 확인된 항체 군으로부터의 상응하는 3개의 공통 경쇄 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 3개의 경쇄 CDR을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 그룹 25로 확인된 항체 군으로부터의 공통 CDR-H3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 CHR-H3 서열 및 그룹 25로 확인된 항체 군으로부터의 공통 CDR-L3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 CDR-L3 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 그룹 25로 확인된 항체 군으로부터의 상응하는 6개의 공통 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 6개의 CDR 서열을 포함한다.
25A 공통 CDR
일부 구현예에서, 항체는 항체 군 계통 25A로부터의 중쇄 공통 CDR 서열을 포함한다. 카밧 및 초티아 넘버링 시스템에 의해 결정된 바와 같은 항체 군 계통 25A에 대한 공통 CDR 서열은 표 21에 나타나 있다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 군 계통 25A로부터의 CDR-H3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 공통 CDR-H3 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 군 계통 25A로부터의 CDR-H2 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 공통 CDR-H2 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 군 계통 25A로부터의 CDR-H1 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 공통 CDR-H1 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 군 계통 25A로부터의 상응하는 공통 2개의 중쇄 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 2개의 중쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 군 계통 25A로부터의 3개의 공통 중쇄 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 3개의 중쇄 CDR을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 항체 군 계통 25A로부터의 경쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 군 계통 25A로부터의 CDR-L3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 공통 CDR-L3 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 군 계통 25A로부터의 CDR-L2 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 공통 CDR-L2 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 군 계통 25A로부터의 CDR-L1 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 공통 CDR-L1 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 군 계통 25A로부터의 상응하는 공통 2개의 경쇄 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 2개의 경쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 군 계통 25A로부터의 3개의 경쇄 공통 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 3개의 경쇄 CDR을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 항체는 항체 군 계통 25A로부터의 공통 CDR-H3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 CHR-H3 서열 및 항체 군 계통 25A로부터의 공통 CDR-L3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 CDR-L3 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 군 계통 25A로부터의 상응하는 6개의 공통 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 6개의 CDR 서열을 포함한다.
25G 공통 CDR
일부 구현예에서, 항체는 항체 군 계통 25G로부터의 중쇄 공통 CDR 서열을 포함한다. 카밧 및 초티아 넘버링 시스템에 의해 결정된 바와 같은 항체 군 계통 25G에 대한 공통 CDR 서열은 표 21에 나타나 있다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 군 계통 25G로부터의 CDR-H3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 공통 CDR-H3 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 군 계통 25G로부터의 CDR-H2 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 공통 CDR-H2 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 군 계통 25G로부터의 CDR-H1 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 공통 CDR-H1 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 군 계통 25G로부터의 상응하는 공통 2개의 중쇄 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 2개의 중쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 군 계통 25G로부터의 3개의 공통 중쇄 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 3개의 중쇄 CDR을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 항체 군 계통 25G로부터의 경쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 군 계통 25G로부터의 CDR-L3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 공통 CDR-L3 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 군 계통 25G로부터의 CDR-L2 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 공통 CDR-L2 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 군 계통 25G로부터의 CDR-L1 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 공통 CDR-L1 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 군 계통 25G로부터의 상응하는 공통 2개의 경쇄 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 2개의 경쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 군 계통 25G로부터의 3개의 경쇄 공통 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 3개의 경쇄 CDR을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 항체는 항체 군 계통 25G로부터의 공통 CDR-H3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 CHR-H3 서열 및 항체 군 계통 25G로부터의 공통 CDR-L3 서열과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 CDR-L3 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 군 계통 25G로부터의 상응하는 6개의 공통 CDR과 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 6개의 CDR 서열을 포함한다.
변이체 CDR
본 명세서에 제공된 항체 중 임의의 것의 일부 구현예에서, 항체 CDR은 본 명세서에 기재된 CDR 서열 중 임의의 것에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 일부 양태에서, 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, 이 단락에 기재된 항체는 본 명세서에서 "변이체"로 지칭된다. 일부 구현예에서, 이러한 변이체는 예를 들어 친화성 성숙, 부위 지향된 돌연변이유발, 랜덤 돌연변이유발, 또는 당업계에 공지되거나 본 명세서에 기재된 임의의 다른 방법에 의해 본 명세서에 제공된 서열로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 이러한 변이체는 본 명세서에 제공된 서열로부터 유래되지 않으며, 예를 들어 항체를 수득하기 위해 본 명세서에 제공된 방법에 따라 새로 단리될 수 있다.
2.2.7. 항체 변이체의 기능적 특성
상기, 및 본 개시내용의 다른 곳에 기재된 바와 같이, 본 명세서에 제공된 설명적인 항체 서열에 대한 동일상 퍼센트, 또는 본 명세서에 제공된 설명적인 항체 서열과 비교하여 아미노산 잔기의 치환에 기초하여 정의된 항체 변이체가 본 명세서에 제공된다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 변이체는 hTF에 대한 특이성을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 변이체는 cTF에 대한 특이성을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 변이체는 mTF에 대한 특이성을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 변이체는 hTF 및 cTF에 대한 특이성을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 변이체는 hTF 및 mTF에 대한 특이성을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 변이체는 cTF 및 mTF에 대한 특이성을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 변이체는 hTF, cTF 및 mTF에 대한 특이성을 갖는다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 설명적인 항체 서열로부터 유래된 항체의 변이체는, KD에 의해 측정된 바와 같이, 그와 같은 설명적인 항체의 친화도의 약 1.5-배, 약 2-배, 약 3-배, 약 4-배, 약 5-배, 약 6-배, 약 7-배, 약 8-배, 약 9-배 또는 약 10-배 이내인 hTF에 대한 친화도를 유지한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 설명적인 항체 서열로부터 유래된 항체의 변이체는, KD에 의해 측정된 바와 같이, 그와 같은 설명적인 항체의 친화도의 약 1.5-배, 약 2-배, 약 3-배, 약 4-배, 약 5-배, 약 6-배, 약 7-배, 약 8-배, 약 9-배 또는 약 10-배 이내인 cTF에 대한 친화도를 유지한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 설명적인 항체 서열로부터 유래된 항체의 변이체는, KD에 의해 측정된 바와 같이, 그와 같은 설명적인 항체의 친화도의 약 1.5-배, 약 2-배, 약 3-배, 약 4-배, 약 5-배, 약 6-배, 약 7-배, 약 8-배, 약 9-배 또는 약 10-배 이내인 mTF에 대한 친화도를 유지한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 설명적인 항체 서열로부터 유래된 항체의 변이체는, KD에 의해 측정된 바와 같이, 그와 같은 설명적인 항체의 친화도의 약 1.5-배, 약 2-배, 약 3-배, 약 4-배, 약 5-배, 약 6-배, 약 7-배, 약 8-배, 약 9-배 또는 약 10-배 이내인 hTF 및 cTF 둘 모두에 대한 친화도를 유지한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 설명적인 항체 서열로부터 유래된 항체의 변이체는, KD에 의해 측정된 바와 같이, 그와 같은 설명적인 항체의 친화도의 약 1.5-배, 약 2-배, 약 3-배, 약 4-배, 약 5-배, 약 6-배, 약 7-배, 약 8-배, 약 9-배 또는 약 10-배 이내인 hTF 및 mTF 둘 모두에 대한 친화도를 유지한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 설명적인 항체 서열로부터 유래된 항체의 변이체는, KD에 의해 측정된 바와 같이, 그와 같은 설명적인 항체의 친화도의 약 1.5-배, 약 2-배, 약 3-배, 약 4-배, 약 5-배, 약 6-배, 약 7-배, 약 8-배, 약 9-배 또는 약 10-배 이내인 cTF 및 mTF 둘 모두에 대한 친화도를 유지한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 설명적인 항체 서열로부터 유래된 항체의 변이체는, KD에 의해 측정된 바와 같이, 그와 같은 설명적인 항체의 친화도의 약 1.5-배, 약 2-배, 약 3-배, 약 4-배, 약 5-배, 약 6-배, 약 7-배, 약 8-배, 약 9-배 또는 약 10-배 이내인 hTF, cTF 및 mTF의 모두 3개에 대한 친화도를 유지한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 변이체는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 검정 또는 생물학적 효과에 의해 측정시 TF 신호전달을 억제하는 능력을 유지한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 변이체는 혈액 응고 과정에서 TF의 정상 기능을 유지한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 변이체는 TF에 결합하기 위해 각각 본 개시내용의 표 5에 제공된 바와 같은 25A, 25A3, 25A5, 25A5-T, 25G, 25G1, 및 25G9로부터 선택된 항체와 경쟁한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 변이체는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 인간 트롬빈 생성을 허용한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 변이체는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 인간 트롬빈 생성을 억제하지 않는다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 변이체는 인간 FX에 의해 결합된 인간 TF 결합 부위와 구별되는 인간 TF 결합 부위에서 인간 TF에 결합한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 변이체는 FX를 FXa로 전환시키는 TF:FVIIa의 능력을 방해하지 않는다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 변이체는 인간 FVIIa에 의해 결합된 인간 TF 결합 부위와 구별되는 인간 TF 결합 부위에서 인간 TF에 결합한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 변이체는 인간 TF에 결합하기 위해 인간 FVIIa 와 경쟁하지 않는다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 변이체는 FVIIa-의존적 TF 신호전달을 억제한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 변이체는 마우스 TF (서열번호:817)에 결합한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 변이체는 hTF에 대한 항체의 친화도보다 (더 높은 KD에 의해 지시된 바와 같이) 더 낮은 친화도로 마우스 TF에 결합한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 변이체는 mTF에 결합하지 않는다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 변이체는 돼지 TF (서열번호:824)에 결합한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 변이체는 hTF에 대한 항체의 친화도보다 (더 높은 KD에 의해 지시된 바와 같이) 더 낮은 친화도로 돼지 TF에 결합한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 변이체는 pTF에 결합하지 않는다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 변이체는 그와 같은 항체로서 TF의 동일한 에피토프에 결합한다.
2.2.8. 항체의 다른 기능적 특성
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 하기 (a)-(dd)에서 열거된 특정 중 하나 이상을 갖는다: (a) 인간 FVIIa에 의해 결합된 인간 TF 결합 부위와 구별되는 인간 TF 결합 부위에서 인간 TF에 결합하고; (b) 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 인간 트롬빈 생성을 억제하지 않고; (c) 이소타입 대조군과 비교하여 트롬빈 생성 곡선 (피크 IIa) 상에서 트롬빈 피크를 감소시키지 않고; (d)는 이소타입 대조군과 비교하여 트롬빈 생성 곡선 (ttPeak) 상에서 검정 시작부터 트롬빈 피크까지의 시간을 증가시키지 않고; (e) 이소타입 대조군과 비교하여 트롬빈 생성 곡선하 면적에 의해 측정된 바와 같이 내인성 트롬빈 전위 (ETP)를 줄이지 않고; (f) 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 인간 트롬빈 생성을 허용하고; (g) 이소타입 대조군과 비교하여 트롬빈 생성 곡선 (피크 IIa) 상에서 상기 트롬빈 피크를 유지하고; (h) 이소타입 대조군과 비교하여 트롬빈 생성 곡선 (ttPeak) 상에서 검정 시작부터 트롬빈 피크까지의 시간을 유지하고; (i) 이소타입 대조군과 비교하여 트롬빈 생성 곡선하 면적에 의해 측정된 바와 같이 내인성 트롬빈 전위 (ETP)를 보존하고; (j) 인간 FX에 의해 결합된 인간 TF 결합 부위와 구별되는 인간 TF 결합 부위에서 인간 TF에 결합하고; (k) FX를 FXa로 전환시키기 위해 TF:FVIIa의 능력을 방해하지 않고; (l) 인간 TF에 결합하기 위해 인간 FVIIa와 경쟁하지 않고; (m)는 FVIIa-의존적 TF 신호전달을 억제하고; (n) 사이노몰구스 TF에 결합하고; (o) 마우스 TF에 결합하고; (p) 토끼 TF에 결합하고; (q) 돼지 TF에 결합하고; (s) 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 149에서의 돌연변이를 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; (t) 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 68에서의 돌연변이를 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 초과이고; (u) 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 171 및 197에서의 돌연변이를 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; (v) 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 1-76을 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 1-77을 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 초과이고; (w) 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 38-76을 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 39-77을 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 초과이고; (x) 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 99-112를 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 94-107을 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 초과이고; (y) 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 151-163을 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 146-158을 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; (z) 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 164-224를 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 159-219를 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; (aa) 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 164-194를 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 159-189를 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; (bb) 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 164-179를 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 159-174를 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; (cc) 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 172-179를 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 167-174를 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; 그리고 (dd) 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 136-189를 갖는 인간 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 141-194를 갖는 랫트 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 초과이다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 2개 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 3개 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 4개 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 5개 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 6개 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 7개 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 8개 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 9개 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 10개 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 11개 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 12개 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 13개 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 14개 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 15개 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 16개 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 17개 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 18개 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 19개 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 20개 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 21개를 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 22개를 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 23개를 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 24개를 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 25개를 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 26개를 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 27개를 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 28개를 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 29개를 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 모두 30개를 갖는다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 하기 (a)-(dd)에 열거된 특성 중 하나 이상을 갖는다: (a) 인간 FVIIa에 의해 결합된 인간 TF 결합 부위와 구별되는 인간 TF 결합 부위에서 인간 TF에 결합하고; (b) 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 인간 트롬빈 생성을 억제하지 않고; (c) 이소타입 대조군과 비교하여 트롬빈 생성 곡선 (피크 IIa) 상에서 트롬빈 피크를 감소시키지 않고; (d)는 이소타입 대조군과 비교하여 트롬빈 생성 곡선 (ttPeak) 상에서 검정 시작부터 트롬빈 피크까지의 시간을 증가시키지 않고; (e) 이소타입 대조군과 비교하여 트롬빈 생성 곡선하 면적에 의해 측정된 바와 같이 내인성 트롬빈 전위 (ETP)를 줄이지 않고; (f) 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 인간 트롬빈 생성을 허용하고; (g) 이소타입 대조군과 비교하여 트롬빈 생성 곡선 (피크 IIa) 상에서 상기 트롬빈 피크를 유지하고; (h) 이소타입 대조군과 비교하여 트롬빈 생성 곡선 (ttPeak) 상에서 검정 시작부터 트롬빈 피크까지의 시간을 유지하고; (i) 이소타입 대조군과 비교하여 트롬빈 생성 곡선하 면적에 의해 측정된 바와 같이 내인성 트롬빈 전위 (ETP)를 보존하고; (j) 인간 FX에 의해 결합된 인간 TF 결합 부위와 구별되는 인간 TF 결합 부위에서 인간 TF에 결합하고; (k) FX를 FXa로 전환시키기 위해 TF:FVIIa의 능력을 방해하지 않고; (l) 인간 TF에 결합하기 위해 인간 FVIIa와 경쟁하지 않고; (m)는 FVIIa-의존적 TF 신호전달을 억제하고; (n) 사이노몰구스 TF에 결합하고; (o) 마우스 TF에 결합하고; (p) 토끼 TF에 결합하고; (q) 돼지 TF에 결합하고; (s) 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 돌연변이 K149N을 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; (t) 항체와 및 서열번호:810에 나타낸 서열의 돌연변이 K68N을 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 초과이고; (u) 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 돌연변이 N171H 및 T197K를 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; (v) 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 1-76을 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 1-77을 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 초과이고; (w) 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 38-76을 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 39-77을 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 초과이고; (x) 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 99-112를 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 94-107을 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 초과이고; (y) 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 151-163을 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 146-158을 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; (z) 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 164-224를 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 159-219를 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; (aa) 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 164-194를 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 159-189를 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; (bb) 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 164-179를 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 159-174를 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; (cc) 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 172-179를 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 167-174를 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; 그리고 (dd) 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 136-189를 갖는 인간 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 141-194를 갖는 랫트 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 초과이다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 2개 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 3개 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 4개 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 5개 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 6개 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 7개 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 8개 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 9개 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 10개 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 11개 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 12개 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 13개 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 14개 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 15개 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 16개 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 17개 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 18개 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 19개 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 20개 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 21개를 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 22개를 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 23개를 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 24개를 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 25개를 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 26개를 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 27개를 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 28개를 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 29개를 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 전술한 (a)-(dd)에서 열거된 특성 중 모두 30개를 갖는다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 하기 (a) 내지 (dd)에 열거된 특성 중 2개 이상을 포함하는 특성의 조합을 나타낸다: (a) 인간 FVIIa에 의해 결합된 인간 TF 결합 부위와 구별되는 인간 TF 결합 부위에서 인간 TF에 결합하고; (b) 트롬빈 생성 검정(TGA)에 의해 결정된 바와 같이 인간 트롬빈 생성을 억제하지 않고; (c) 이소타입 대조군과 비교하여 트롬빈 생성 곡선(피크 IIa)에서 트롬빈 피크를 감소시키지 않고; (d) 이소타입 대조군과 비교하여 트롬빈 생성 곡선(ttPeak)에서 검정 시작부터 트롬빈 피크까지의 시간을 증가시키지 않고; (e) 이소타입 대조군과 비교하여 트롬빈 생성 곡선하 면적에 의해 결정되는 내인성 트롬빈 전위(ETP)를 감소시키지 않고; (f) 트롬빈 생성 분석(TGA)에 의해 결정된 바와 같이 인간 트롬빈 생성을 허용하고; (g) 이소타입 대조군과 비교하여 트롬빈 생성 곡선(피크 IIa)에서 트롬빈 피크를 유지하고; (h) 이소타입 대조군과 비교하여 트롬빈 생성 곡선(ttPeak)에서 검정으로부터 트롬빈 피크까지의 시간을 유지하고; (i) 이소타입 대조군과 비교하여 트롬빈 생성 곡선 아래 면적에 의해 결정된 내인성 트롬빈 전위(ETP)를 보존하고; (j) 인간 FX에 의해 결합되는 인간 TF 결합 부위와 구별되는 인간 TF 결합 부위에서 인간 TF에 결합하고; (k) FX를 FXa로 전환하는 TF:FVIIa의 능력을 방해하지 않고; (l) 인간 TF에 결합하기 위해 인간 FVIIa와 경쟁하지 않고; (m) FVIIa 의존성 TF 신호전달을 억제하고; (n) 사이노몰구스 TF에 결합하고; (o) 마우스 TF에 결합하고; (p) 토끼 TF에 결합하고; (q) 돼지 TF에 결합하고; (s) 항체와 서열번호:810에 제시된 서열의 아미노산 잔기 149에서 돌연변이를 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 항체와 TF의 세포외 도메인은 살아있는 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의한 결정 시, 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; (t) 항체와 서열번호:810으로 나타낸 서열의 아미노산 잔기 68에서 돌연변이를 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 살아있는 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의한 결정 시, 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 초과이고; (u) 항체와 서열번호:810으로 나타낸 서열의 아미노산 잔기 171 및 197에서 돌연변이를 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 살아있는 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의한 결정 시, 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; (v) 항체와 서열번호:838로 나타낸 서열의 랫트 TF 세포외 도메인 아미노산 잔기 1-76으로 대체된 서열번호:810으로 나타낸 서열의 아미노산 잔기 1-77을 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 살아있는 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의한 결정 시, 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 초과이고; (w) 항체와 서열번호:838로 나타낸 서열의 랫트 TF 세포외 도메인 아미노산 잔기 38-76으로 대체된 서열번호:810으로 나타낸 서열의 아미노산 잔기 39-77을 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 살아있는 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의한 결정 시, 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 초과이고; (x) 항체와 서열번호:838로 나타낸 서열의 랫트 TF 세포외 도메인 아미노산 잔기 99-112로 대체된 서열번호:810으로 나타낸 서열의 아미노산 잔기 94-107을 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 살아있는 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의한 결정 시, 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 초과이고; (y) 항체와 서열번호:838로 나타낸 서열의 랫트 TF 세포외 도메인 아미노산 잔기 151-163으로 대체된 서열번호:810으로 나타낸 서열의 아미노산 잔기 146-158을 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 살아있는 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의한 결정 시, 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; (z) 항체와 서열번호:838로 나타낸 서열의 랫트 TF 세포외 도메인 아미노산 잔기 164-224로 대체된 서열번호:810으로 나타낸 서열의 아미노산 잔기 159-219를 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 살아있는 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의한 결정 시, 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; (aa) 항체와 서열번호:838로 나타낸 서열의 랫트 TF 세포외 도메인 아미노산 잔기 164-194로 대체된 서열번호:810으로 나타낸 서열의 아미노산 잔기 159-189를 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 살아있는 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의한 결정 시, 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; (bb) 항체와 서열번호:838로 나타낸 서열의 랫트 TF 세포외 도메인 아미노산 잔기 164-179로 대체된 서열번호:810으로 나타낸 서열의 아미노산 잔기 159-174를 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 살아있는 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의한 결정 시, 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; (cc) 항체와 서열번호:838로 나타낸 서열의 랫트 TF 세포외 도메인 아미노산 잔기 172-179로 대체된 서열번호:810으로 나타낸 서열의 아미노산 잔기 167-174를 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 살아있는 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의한 결정 시, 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; 그리고 (dd) 항체와 서열번호:810으로 나타낸 서열의 인간 TF 세포외 도메인 아미노산 잔기 136-189로 대체된 서열번호:838로 나타낸 서열의 아미노산 잔기 141-194를 갖는 랫트 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 살아있는 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의한 결정 시, 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 초과이다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 하기 (a) 내지 (dd)에 열거된 특성 중 2개 이상을 포함하는 특성의 조합을 나타낸다: (a) 인간 FVIIa에 의해 결합된 인간 TF 결합 부위와 구별되는 인간 TF 결합 부위에서 인간 TF에 결합하고; (b) 트롬빈 생성 검정(TGA)에 의해 결정된 바와 같이 인간 트롬빈 생성을 억제하지 않고; (c) 이소타입 대조군과 비교하여 트롬빈 생성 곡선(피크 IIa)에서 트롬빈 피크를 감소시키지 않고; (d) 이소타입 대조군과 비교하여 트롬빈 생성 곡선(ttPeak)에서 검정 시작부터 트롬빈 피크까지의 시간을 증가시키지 않고; (e) 이소타입 대조군과 비교하여 트롬빈 생성 곡선하 면적에 의해 결정되는 내인성 트롬빈 전위(ETP)를 감소시키지 않고; (f) 트롬빈 생성 분석(TGA)에 의해 결정된 바와 같이 인간 트롬빈 생성을 허용하고; (g) 이소타입 대조군과 비교하여 트롬빈 생성 곡선(피크 IIa)에서 트롬빈 피크를 유지하고; (h) 이소타입 대조군과 비교하여 트롬빈 생성 곡선(ttPeak)에서 검정으로부터 트롬빈 피크까지의 시간을 유지하고; (i) 이소타입 대조군과 비교하여 트롬빈 생성 곡선 아래 면적에 의해 결정된 내인성 트롬빈 전위(ETP)를 보존하고; (j) 인간 FX에 의해 결합되는 인간 TF 결합 부위와 구별되는 인간 TF 결합 부위에서 인간 TF에 결합하고; (k) FX를 FXa로 전환하는 TF:FVIIa의 능력을 방해하지 않고; (l) 인간 TF에 결합하기 위해 인간 FVIIa와 경쟁하지 않고; (m) FVIIa 의존성 TF 신호전달을 억제하고; (n) 사이노몰구스 TF에 결합하고; (o) 마우스 TF에 결합하고; (p) 토끼 TF에 결합하고; (q) 돼지 TF에 결합하고; (s) 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 돌연변이 K149N을 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; (t) 항체와 및 서열번호:810에 나타낸 서열의 돌연변이 K68N을 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 초과이고; (u) 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 돌연변이 N171H 및 T197K를 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; (v) 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 1-76을 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 1-77을 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 초과이고; (w) 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 38-76을 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 39-77을 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 초과이고; (x) 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 99-112를 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 94-107을 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 초과이고; (y) 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 151-163을 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 146-158을 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; (z) 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 164-224를 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 159-219를 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; (aa) 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 164-194를 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 159-189를 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; (bb) 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 164-179를 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 159-174를 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; (cc) 항체와 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 172-179를 갖는 랫트 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 167-174를 갖는 인간 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; 그리고 (dd) 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 136-189를 갖는 인간 TF 세포외 도메인에 의해 대체된 서열번호:838에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 141-194를 갖는 랫트 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 초과이다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 하기에서 열거된 특성의 조합을 나타낸다: 인간 FVIIa에 의해 결합된 인간 TF 결합 부위와 구별되는 인간 TF 결합 부위에서 인간 TF에 결합하고; 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 인간 트롬빈 생성을 억제하지 않고; 그리고 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 171 및 197에서의 돌연변이를 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 하기에서 열거된 특성의 조합을 나타낸다: 인간 FVIIa에 의해 결합된 인간 TF 결합 부위와 구별되는 인간 TF 결합 부위에서 인간 TF에 결합하고; 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 인간 트롬빈 생성을 억제하지 않고; 그리고 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 돌연변이 N171H 및 T197K를 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 하기에서 열거된 특성의 조합을 나타낸다: 인간 FVIIa에 의해 결합된 인간 TF 결합 부위와 구별되는 인간 TF 결합 부위에서 인간 TF에 결합하고; 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 인간 트롬빈 생성을 허용하고; 그리고 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 171 및 197에서의 돌연변이를 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 하기에서 열거된 특성의 조합을 나타낸다: 인간 FVIIa에 의해 결합된 인간 TF 결합 부위와 구별되는 인간 TF 결합 부위에서 인간 TF에 결합하고; 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 인간 트롬빈 생성을 허용하고; 그리고 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 돌연변이 N171H 및 T197K를 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 하기에서 열거된 특성의 조합을 나타낸다: 인간 FVIIa에 의해 결합된 인간 TF 결합 부위와 구별되는 인간 TF 결합 부위에서 인간 TF에 결합하고; 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 인간 트롬빈 생성을 억제하지 않고; 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 149에서의 돌연변이를 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; 그리고 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 171 및 197에서의 돌연변이를 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 하기에서 열거된 특성의 조합을 나타낸다: 인간 FVIIa에 의해 결합된 인간 TF 결합 부위와 구별되는 인간 TF 결합 부위에서 인간 TF에 결합하고; 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 인간 트롬빈 생성을 억제하지 않고; 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 돌연변이 K149N을 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; 그리고 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 돌연변이 N171H 및 T197K를 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 하기에서 열거된 특성의 조합을 나타낸다: 인간 FVIIa에 의해 결합된 인간 TF 결합 부위와 구별되는 인간 TF 결합 부위에서 인간 TF에 결합하고; 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 인간 트롬빈 생성을 허용하고; 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 149에서의 돌연변이를 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; 그리고 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 171 및 197에서의 돌연변이를 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 하기에서 열거된 특성의 조합을 나타낸다: 인간 FVIIa에 의해 결합된 인간 TF 결합 부위와 구별되는 인간 TF 결합 부위에서 인간 TF에 결합하고; 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 인간 트롬빈 생성을 허용하고; 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 돌연변이 K149N을 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; 그리고 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 돌연변이 N171H 및 T197K를 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 하기에서 열거된 특성의 조합을 나타낸다: 인간 FVIIa에 의해 결합된 인간 TF 결합 부위와 구별되는 인간 TF 결합 부위에서 인간 TF에 결합하고; 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 인간 트롬빈 생성을 억제하지 않고; 사이노몰구스 TF에 결합하고; 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 149에서의 돌연변이를 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; 그리고 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 171 및 197에서의 돌연변이를 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 하기에서 열거된 특성의 조합을 나타낸다: 인간 FVIIa에 의해 결합된 인간 TF 결합 부위와 구별되는 인간 TF 결합 부위에서 인간 TF에 결합하고; 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 인간 트롬빈 생성을 억제하지 않고; 사이노몰구스 TF에 결합하고; 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 돌연변이 K149N을 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; 그리고 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 돌연변이 N171H 및 T197K를 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 하기에서 열거된 특성의 조합을 나타낸다: 인간 FVIIa에 의해 결합된 인간 TF 결합 부위와 구별되는 인간 TF 결합 부위에서 인간 TF에 결합하고; 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 인간 트롬빈 생성을 허용하고; 사이노몰구스 TF에 결합하고; 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 149에서의 돌연변이를 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; 그리고 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 171 및 197에서의 돌연변이를 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 하기에서 열거된 특성의 조합을 나타낸다: 인간 FVIIa에 의해 결합된 인간 TF 결합 부위와 구별되는 인간 TF 결합 부위에서 인간 TF에 결합하고; 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 인간 트롬빈 생성을 허용하고; 사이노몰구스 TF에 결합하고; 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 돌연변이 K149N을 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이고; 그리고 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 돌연변이 N171H 및 T197K를 포함하는 변이체 TF 세포외 도메인 사이의 결합은 생존 세포 염색 검정에서 이소타입 대조군에 대한 항체의 중앙 형광 강도 값에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와 서열번호:810에 나타낸 서열의 TF의 세포외 도메인 사이의 결합의 50% 미만이다.
2.3. TF 항체의 친화도 및 다른 특성
2.3.1. TF 항체의 친화도
일부 구현예에서, KD에 의해 지시된 바와 같이 TF에 대한 본 명세서에 제공된 항체의 친화도는 약 10-5 M 미만, 약 10-6 M 미만, 약 10-7 M 미만, 약 10-8 M 미만, 약 10-9 M 미만, 약 10-10 M 미만, 약 10-11 M 미만, 또는 약 10-12 M 미만이다. 일부 구현예에서, 항체의 친화도는 약 10-7 M 내지 10-12 M이다. 일부 구현예에서, 항체의 친화도는 약 10-7 M 내지 10-11 M이다. 일부 구현예에서, 항체의 친화도는 약 10-7 M 내지 10-10 M이다. 일부 구현예에서, 항체의 친화도는 약 10-7 M 내지 10-9 M이다. 일부 구현예에서, 항체의 친화도는 약 10-7 M 내지 10-8 M이다. 일부 구현예에서, 항체의 친화도는 약 10-8 M 내지 10-12 M이다. 일부 구현예에서, 항체의 친화도는 약 10-8 M 내지 10-11 M이다. 일부 구현예에서, 항체의 친화도는 약 10-9 M 내지 10-11 M이다. 일부 구현예에서, 항체의 친화도는 약 10-10 M 내지 10-11 M이다.
일부 구현예에서, cTF에 대한 본 명세서에 제공된 항체의 KD 값은 hTF에 대한 항체의 KD 값의 15× 이하이다. 일부 구현예에서, cTF에 대한 본 명세서에 제공된 항체의 KD 값은 hTF에 대한 항체의 KD 값의 10× 이하이다. 일부 구현예에서, cTF에 대한 본 명세서에 제공된 항체의 KD 값은 hTF에 대한 항체의 KD 값의 8× 이하이다. 일부 구현예에서, cTF에 대한 본 명세서에 제공된 항체의 KD 값은 hTF에 대한 항체의 KD 값의 5× 이하이다. 일부 구현예에서, cTF에 대한 본 명세서에 제공된 항체의 KD 값은 hTF에 대한 항체의 KD 값의 3× 이하이다. 일부 구현예에서, cTF에 대한 본 명세서에 제공된 항체의 KD 값은 hTF에 대한 항체의 KD 값의 2× 이하이다.
일부 구현예에서, mTF에 대한 본 명세서에 제공된 항체의 KD 값은 hTF에 대한 항체의 KD 값의 20× 이하이다. 일부 구현예에서, mTF에 대한 본 명세서에 제공된 항체의 KD 값은 hTF에 대한 항체의 KD 값의 15× 이하이다. 일부 구현예에서, mTF에 대한 본 명세서에 제공된 항체의 KD 값은 hTF에 대한 항체의 KD 값의 10× 이하이다. 일부 구현예에서, mTF에 대한 본 명세서에 제공된 항체의 KD 값은 hTF에 대한 항체의 KD 값의 5× 이하이다. 일부 구현예에서, mTF에 대한 본 명세서에 제공된 항체의 KD 값은 hTF에 대한 항체의 KD 값의 2× 이하이다.
일부 구현예에서, 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 표 5에 제시된 바와 같이 Biacore에 의해 측정된 KD에 의해 지시된 바와 같이 hTF에 대한 본 명세서에 제공된 항체의 친화도는 약 0.31 nM, 약 6.20 nM, 약 0.36 nM, 약 0.08 nM, 약 23.0 nM, 약 0.94 nM, 약 13.3 nM, 약 0.47 nM, 약 0.09 nM, 약 1.75 nM, 약 0.07 nM, 약 0.14 nM, 약 2.09 nM, 약 0.06 nM, 약 0.15 nM, 약 1.46 nM, 약 1.60 nM, 및 약 0.42 nM로부터 선택된다. 일부 구현예에서, KD에 의해 지시된 그와 같은 친화도는 약 23.0 nM 내지 약 0.06 nM의 범위이다. 일부 구현예에서, 그와 같은 것은 약 23.0 nM 이하이다.
일부 구현예에서, 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 표 5에 제시된 바와 같이 ForteBio에 의해 측정된 KD에 의해 지시된 바와 같이 hTF에 대한 본 명세서에 제공된 항체의 친화도는 약 1.28 nM, 약 2.20 nM, 약 8.45 nM, 약 1.67 nM, 약 0.64 nM, 약 21.9 nM, 약 3.97 nM, 약 35.8 nM, 약 3.30 nM, 약 2.32 nM, 약 0.83 nM, 약 2.40 nM, 약 0.96 nM, 약 0.86 nM, 약 3.84 nM, 약 1.02 nM, 약 1.61 nM, 약 2.52 nM, 약 2.28 nM, 및 약 1.59 nM로부터 선택된다. 일부 구현예에서, KD에 의해 지시된 그와 같은 친화도는 약 35.8 nM 내지 약 0.64 nM의 범위이다. 일부 구현예에서, 그와 같은 KD는 약 35.8 nM 이하이다.
일부 구현예에서, 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 표 5에 제시된 바와 같이 Biacore에 의해 측정된 KD에 의해 지시된 바와 같이 cTF에 대한 본 명세서에 제공된 항체의 친화도는 약 0.26 nM, 약 5.42 nM, 약 0.21 nM, 약 0.04 nM, 약 18.0 nM, 약 0.78 nM, 약 16.4 nM, 약 5.06 nM, 약 0.08 nM, 약 5.64 nM, 약 0.12 nM, 약 0.24 nM, 약 5.66 nM, 약 0.39 nM, 약 5.69 nM, 약 6.42 nM, 및 약 1.83 nM로부터 선택된다. 일부 구현예에서, KD에 의해 지시된 그와 같은 친화도는 약 18.0 nM 내지 약 0.04 nM의 범위이다. 일부 구현예에서, 그와 같은 KD는 약 18.0 nM 이하이다.
일부 구현예에서, 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 표 5에 제시된 바와 같이 ForteBio에 의해 측정된 KD에 의해 지시된 바와 같이 cTF에 대한 본 명세서에 제공된 항체의 친화도는 약 1.43 nM, 약 2.70 nM, 약 7.65 nM, 약 1.36 nM, 약 0.76 nM, 약 17.5 nM, 약 4.99 nM, 약 42.9 nM, 약 12.0 nM, 약 15.0 nM, 약 0.57 nM, 약 3.40 nM, 약 1.05 nM, 약 0.94 nM, 약 4.12 nM, 약 1.11 nM, 약 1.96 nM, 약 4.07 nM, 약 2.71 nM, 및 약 4.16 nM로부터 선택된다. 일부 구현예에서, KD에 의해 지시된 그와 같은 친화도는 약 42.9 nM 내지 약 0.57 nM의 범위이다. 일부 구현예에서, 그와 같은 KD는 약 42.9 nM 이하이다.
일부 구현예에서, 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 표 5에 제시된 바와 같이 Biacore에 의해 측정된 KD에 의해 지시된 바와 같이 mTF에 대한 본 명세서에 제공된 항체의 친화도는 약 5.4 nM, 약 2.9 nM, 약 21 nM, 및 약 2.4 nM로부터 선택된다. 일부 구현예에서, KD에 의해 지시된 그와 같은 친화도는의 범위이다. 약 21 nM 내지 약 2.4 nM. 일부 구현예에서, 그와 같은 KD는 약 21 nM 이하이다.
일부 구현예에서, 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 표 5에 제시된 바와 같이 ForteBio에 의해 측정된 KD에 의해 지시된 바와 같이 mTF에 대한 본 명세서에 제공된 항체의 친화도는 약 263 nM, 약 131 nM, 약 188 nM, 약 114 nM, 약 34.2 nM, 약 9.16 nM, 약 161 nM, 약 72.1 nM, 약 360 nM, 약 281 nM, 약 41.4 nM, 약 6.12 nM, 약 121 nM, 및 약 140 nM로부터 선택된다. 일부 구현예에서, KD에 의해 지시된 그와 같은 친화도는 약 360 nM 내지 약 6.12 nM의 범위이다. 일부 구현예에서, 그와 같은 KD는 약 360 nM 이하이다.
일부 구현예에서, 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 도 1a 및 1b에 제시된 바와 같이 인간 TF-양성 HCT-116 세포로 측정된 EC50에 의해 지시된 바와 같이 hTF에 대한 본 명세서에 제공된 항체의 친화도는 약 50 pM, 약 58 pM, 약 169 pM, 약 77 pM, 약 88 pM, 약 134 pM, 약 85 pM, 약 237 pM, 약 152 pM, 약 39 pM, 약 559 pM, 약 280 pM, 약 255 pM, 약 147 pM, 약 94 pM, 약 117 pM, 약 687 pM, 약 532 pM, 및 약 239 pM로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 친화도는 약 687 pM 내지 약 39 pM의 범위이다. 일부 구현예에서, 그와 같은 EC50는 약 687 pM 이하이다.
일부 구현예에서, 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 도 2a 및 2b에 제시된 바와 같이 마우스 TF-양성 CHO 세포로 측정된 EC50에 의해 지시된 바와 같이 mTF에 대한 본 명세서에 제공된 항체의 친화도는 약 455 nM, 약 87 nM, 약 11 nM, 약 3.9 nM, 약 3.0 nM, 약 3.4 nM, 약 255 nM, 약 2.9 nM, 약 3.6 nM, 및 약 4.0 nM로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 친화도는 약 455 nM 내지 약 2.9 nM의 범위이다. 일부 구현예에서, 그와 같은 EC50는 약 455 pM 이하이다.
일부 구현예에서, pTF에 대한 본 명세서에 제공된 항체의 KD 값은 hTF에 대한 항체의 KD 값의 20× 이하이다. 일부 구현예에서, pTF에 대한 본 명세서에 제공된 항체의 KD 값은 hTF에 대한 항체의 KD 값의 15× 이하이다. 일부 구현예에서, pTF에 대한 본 명세서에 제공된 항체의 KD 값은 hTF에 대한 항체의 KD 값의 10× 이하이다. 일부 구현예에서, pTF에 대한 본 명세서에 제공된 항체의 KD 값은 hTF에 대한 항체의 KD 값의 5× 이하이다. 일부 구현예에서, pTF에 대한 본 명세서에 제공된 항체의 KD 값은 hTF에 대한 항체의 KD 값의 2× 이하이다.
일부 구현예에서, 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 표 40에 제시된 바와 같이 Biacore로 측정된 KD에 의해 지시된 바와 같이 pTF에 대한 본 명세서에 제공된 항체의 친화도는 3.31 nM 또는 12.9 nM이다.
2.3.2 TF 항체의 존재에서의 트롬빈 생성
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 TF 항체는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 인간 트롬빈 생성을 억제하지 않는다. 특정 구현예에서, 본 명세서에 제공된 TF 항체는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 인간 트롬빈 생성을 허용한다.
일부 구현예에서, 피크 트롬빈 생성 퍼센트 (피크 IIa %)는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 100 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 40%이다. 일부 구현예에서, 피크 IIa %는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 100 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 50%이다. 일부 구현예에서, 피크 IIa %는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 100 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 60%이다. 일부 구현예에서, 피크 IIa %는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 100 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 70%이다. 일부 구현예에서, 피크 IIa %는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 100 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 80%이다. 일부 구현예에서, 피크 IIa %는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 100 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 90%이다. 일부 구현예에서, 피크 IIa %는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 100 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 95%이다. 일부 구현예에서, 피크 IIa %는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 100 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 99%이다.
일부 구현예에서, 피크 IIa %는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 50 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 40%이다. 일부 구현예에서, 피크 IIa %는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 50 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 50%이다. 일부 구현예에서, 피크 IIa %는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 50 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 60%이다. 일부 구현예에서, 피크 IIa %는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 50 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 70%이다. 일부 구현예에서, 피크 IIa %는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 50 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 80%이다. 일부 구현예에서, 피크 IIa %는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 50 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 90%이다. 일부 구현예에서, 피크 IIa %는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 50 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 95%이다. 일부 구현예에서, 피크 IIa %는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 50 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 99%이다.
일부 구현예에서, 피크 IIa %는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 10 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 60%이다. 일부 구현예에서, 피크 IIa %는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 10 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 70%이다. 일부 구현예에서, 피크 IIa %는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 10 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 80%이다. 일부 구현예에서, 피크 IIa %는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 10 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 90%이다. 일부 구현예에서, 피크 IIa %는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 10 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 95%이다. 일부 구현예에서, 피크 IIa %는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 10 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 99%이다.
일부 구현예에서, 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 표 6 및 표 37에 제시된 바와 같이 100 nM TF 항체의 존재에서의 피크 IIa %는, 항체 사전-인큐베이션 없는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 약 99%, 약 100%, 약 103%, 약 64%, 약 52%, 약 87%, 약 96%, 약 98%, 및 약 53%로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 피크 IIa %는 약 52% 내지 약 103%의 범위이다. 일부 구현예에서, 그와 같은 피크 IIa %는 약 52% 이상이다.
일부 구현예에서, 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 표 6 및 표 37에 제시된 바와 같이 50 nM TF 항체의 존재에서의 피크 IIa %는, 항체 사전-인큐베이션 없는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 약 99%, 약 100%, 약 103%, 약 67%, 약 58%, 약 89%, 약 96%, 약 98%, 약 68%, 약 62%, 및 약 88%로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 피크 IIa %는 약 58% 내지 약 103%의 범위이다. 일부 구현예에서, 그와 같은 피크 IIa %는 약 58% 이상이다.
일부 구현예에서, 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 표 6 및 표 37에 제시된 바와 같이 10 nM TF 항체의 존재에서의 피크 IIa %는, 항체 사전-인큐베이션 없는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 약 100%, 약 99%, 약 103%, 약 87%, 약 83%, 약 95%, 약 98%, 약 86%, 및 약 96%로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 피크 IIa %는 약 83% 내지 약 103%의 범위이다. 일부 구현예에서, 그와 같은 피크 IIa %는 약 83% 이상이다.
일부 구현예에서, 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 표 7 및 표 38에 제시된 바와 같이 100 nM TF 항체의 존재에서의 피크 IIa %는, 10분의 항체 사전-인큐베이션을 갖는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 약 108%, 약 105%, 약 111%, 약 58%, 약 47%, 약 91%, 약 103%, 약 109%, 약 107%, 및 약 45%로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 피크 IIa %는 약 45% 내지 약 111%의 범위이다. 일부 구현예에서, 그와 같은 피크 IIa %는 약 45% 이상이다.
일부 구현예에서, 표 7 및 표 38에 제시된 바와 같이 50 nM TF 항체의 존재에서의 피크 IIa % 는, 10분의 항체 사전-인큐베이션을 갖는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 약 107%, 약 104%, 약 114%, 약 62%, 약 49%, 약 87%, 약 105%, 약 109%, 약 55%, 및 약 92%로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 피크 IIa %는 약 49% 내지 약 114%의 범위이다. 일부 구현예에서, 그와 같은 피크 IIa %는 약 49% 이상이다.
일부 구현예에서, 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 표 7 및 표 38에 제시된 바와 같이 10 nM TF 항체의 존재에서의 피크 IIa %는, 10분의 항체 사전-인큐베이션을 갖는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 약 105%, 약 114%, 약 76%, 약 68%, 약 94%, 약 108%, 약 104%, 약 74%, 및 약 93%로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 피크 IIa %는 약 68% 내지 약 114%의 범위이다. 일부 구현예에서, 그와 같은 피크 IIa %는 약 68% 이상이다.
일부 구현예에서, 내인성 트롬빈 전위 퍼센트 (ETP %)는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 100 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 80%이다. 일부 구현예에서, ETP %는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 100 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 90%이다. 일부 구현예에서, ETP %는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 100 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 95%이다. 일부 구현예에서, ETP %는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 100 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 99%이다.
일부 구현예에서, ETP %는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 50 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 80%이다. 일부 구현예에서, ETP %는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 50 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 90%이다. 일부 구현예에서, ETP %는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 50 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 95%이다. 일부 구현예에서, ETP %는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 50 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 99%이다.
일부 구현예에서, ETP %는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 10 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 80%이다. 일부 구현예에서, ETP %는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 10 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 90%이다. 일부 구현예에서, ETP %는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 10 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 95%이다. 일부 구현예에서, ETP %는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 10 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 99%이다.
일부 구현예에서, 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 표 6 및 표 37에 제시된 바와 같이 100 nM TF 항체의 존재에서의 ETP %는, 항체 사전-인큐베이션 없는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 약 108%, 약 103%, 약 109%, 약 100%, 약 96%, 약 102%, 약 105%, 및 약 92%로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 ETP %는 약 92% 내지 약 109%의 범위이다. 일부 구현예에서, 그와 같은 ETP %는 약 92% 이상이다.
일부 구현예에서, 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 표 6 및 표 37에 제시된 바와 같이 50 nM TF 항체의 존재에서의 ETP %는, 항체 사전-인큐베이션 없는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 약 108%, 약 103%, 약 111%, 약 101%, 약 97%, 약 104%, 약 106%, 약 93%, 약 96%, 및 약 105%로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 ETP %는 약 93% 내지 약 111%의 범위이다. 일부 구현예에서, 그와 같은 ETP %는 약 93% 이상이다.
일부 구현예에서, 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 표 6 및 표 37에 제시된 바와 같이 10 nM TF 항체의 존재에서의 ETP %는, 항체 사전-인큐베이션 없는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 약 106%, 약 109%, 약 105%, 약 104%, 약 107%, 약 99%, 약 101%, 및 약 102%로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 ETP %는 약 99% 내지 약 109%의 범위이다. 일부 구현예에서, 그와 같은 ETP %는 약 99% 이상이다.
일부 구현예에서, 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 표 7 및 표 38에 제시된 바와 같이 100 nM TF 항체의 존재에서의 ETP %는 10분의 항체 사전-인큐베이션을 갖는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 약 110%, 약 104%, 약 106%, 약 98%, 약 95%, 약 108%, 약 107%, 약 96%, 약 92%, 및 약 103%로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 ETP %는 약 92% 내지 약 110%의 범위이다. 일부 구현예에서, 그와 같은 ETP %는 약 92% 이상이다.
일부 구현예에서, 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 표 7 및 표 38에 제시된 바와 같이 50 nM TF 항체의 존재에서의 ETP %는 10분의 항체 사전-인큐베이션을 갖는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 약 110%, 약 106%, 약 108%, 약 103%, 약 96%, 약 109%, 약 102%, 약 104%, 약 94%, 및 약 98%로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 ETP %는 약 94% 내지 약 110%의 범위이다. 일부 구현예에서, 그와 같은 ETP %는 약 94% 이상이다.
일부 구현예에서, 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 표 7 및 표 38에 제시된 바와 같이 10 nM TF 항체의 존재에서의 ETP %는 10분의 항체 사전-인큐베이션을 갖는 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 측정된 바와 같이 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 약 107%, 약 106%, 약 110%, 약 103%, 약 100%, 약 105%, 약 102%, 및 약 101%로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 ETP %는 약 100% 내지 약 110%의 범위이다. 일부 구현예에서, 그와 같은 ETP %는 약 100% 이상이다.
2.3.3. TF 항체의 존재에서의 FXa 전환
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체 인간 FX에 의해 결합된 인간 TF 결합 부위와 구별되는 인간 TF 결합 부위에서 인간 TF에 결합한다. 특정 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 FX를 FXa로 전환시키는 TF:FVIIa의 능력을 방해하지 않는다.
일부 구현예에서, FXa 전환의 백분율 (FXa %)는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 100 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 75%이다. 일부 구현예에서, FXa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 100 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 80%이다. 일부 구현예에서, FXa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 100 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 85%이다. 일부 구현예에서, FXa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 100 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 90%이다. 일부 구현예에서, FXa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 100 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 95%이다.
일부 구현예에서, FXa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 50 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 75%이다. 일부 구현예에서, FXa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 50 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 80%이다. 일부 구현예에서, FXa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 50 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 85%이다. 일부 구현예에서, FXa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 50 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 90%이다. 일부 구현예에서, FXa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 50 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 95%이다.
일부 구현예에서, FXa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 25 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 75%이다. 일부 구현예에서, FXa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 25 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 80%이다. 일부 구현예에서, FXa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 25 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 85%이다. 일부 구현예에서, FXa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 25 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 90%이다. 일부 구현예에서, FXa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 25 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 95%이다.
일부 구현예에서, FXa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 12.5 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 75%이다. 일부 구현예에서, FXa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 12.5 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 80%이다. 일부 구현예에서, FXa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 12.5 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 85%이다. 일부 구현예에서, FXa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 12.5 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 90%이다. 일부 구현예에서, FXa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 12.5 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 95%이다.
일부 구현예에서, 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 표 8에 제시된 바와 같이 100 nM TF 항체의 존재에서의 FXa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 약 89%, 약 96%, 약 116%, 약 108%, 약 117%, 약 105%, 약 112%, 약 106%, 약 103%, 약 111%, 약 98%, 및 약 101%로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 FXa %는 약 89% 내지 약 117%의 범위이다. 일부 구현예에서, 그와 같은 FXa %는 약 89% 이상이다.
일부 구현예에서, 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 표 8에 제시된 바와 같이 50 nM TF 항체의 존재에서의 FXa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 약 94%, 약 93%, 약 78%, 약 102%, 약 99%, 약 104%, 약 105%, 약 108%, 약 107%, 약 97%, 및 약 106%로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 FXa %는 약 78% 내지 약 108%의 범위이다. 일부 구현예에서, 그와 같은 FXa %는 약 78% 이상이다.
일부 구현예에서, 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 표 8에 제시된 바와 같이 25 nM TF 항체의 존재에서의 FXa %는, 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 약 81%, 약 89%, 약 85%, 약 109%, 약 96%, 약 97%, 약 108%, 약 104%, 약 103%, 약 112%, 및 약 89%로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 FXa %는 약 81% 내지 약 112%의 범위이다. 일부 구현예에서, 그와 같은 FXa %는 약 81% 이상이다.
일부 구현예에서, 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 표 8에 제시된 바와 같이 12.5 nM TF 항체의 존재에서의 FXa %는, 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 약 87%, 약 89%, 약 82%, 약 99%, 약 101%, 약 98%, 약 113%, 약 106%, 약 115%, 약 110%, 약 120%, 약 85%, 및 약 108%로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 FXa %는 약 82% 내지 약 120%의 범위이다. 일부 구현예에서, 그와 같은 FXa %는 약 82% 이상이다.
2.3.4. TF 항체의 존재에서의 FVIIa 결합
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 인간 FVIIa에 의해 결합된 인간 TF 결합 부위와 구별되는 인간 TF 결합 부위에서 인간 TF에 결합한다. 특정 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 인간 TF에 결합하기 위해 인간 FVIIa와 경쟁하지 않는다.
일부 구현예에서, FVIIa 결합의 백분율 (FVIIa %)는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 250 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 75%이다. 일부 구현예에서, FVIIa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 250 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 80%이다. 일부 구현예에서, FVIIa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 250 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 85%이다. 일부 구현예에서, FVIIa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 250 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 90%이다. 일부 구현예에서, FVIIa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 250 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 95%이다.
일부 구현예에서, FVIIa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 83 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 75%이다. 일부 구현예에서, FVIIa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 83 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 80%이다. 일부 구현예에서, FVIIa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 83 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 85%이다. 일부 구현예에서, FVIIa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 83 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 90%이다. 일부 구현예에서, FVIIa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 83 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 95%이다.
일부 구현예에서, FVIIa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 28 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 75%이다. 일부 구현예에서, FVIIa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 28 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 80%이다. 일부 구현예에서, FVIIa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 28 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 85%이다. 일부 구현예에서, FVIIa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 28 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 90%이다. 일부 구현예에서, FVIIa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 28 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 95%이다.
일부 구현예에서, FVIIa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 9.25 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 75%이다. 일부 구현예에서, FVIIa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 9.25 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 80%이다. 일부 구현예에서, FVIIa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 9.25 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 85%이다. 일부 구현예에서, FVIIa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 9.25 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 90%이다. 일부 구현예에서, FVIIa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 9.25 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 95%이다.
일부 구현예에서, 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 표 9에서 제시된 바와 같이 250 nM TF 항체의 존재에서의 FVIIa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 약 98%, 약 87%, 약 80%, 약 92%, 약 95%, 약 89%, 약 91%, 약 97%, 약 94%, 약 101%, 및 약 96%로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 FVIIa %는 약 80% 내지 약 101%의 범위이다. 일부 구현예에서, 그와 같은 FVIIa %는 약 80% 이상이다.
일부 구현예에서, 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 표 9에서 제시된 바와 같이 83 nM TF 항체의 존재에서의 FVIIa %는 약 97%, 약 88%, 약 77%, 약 93%, 약 94%, 약 91%, 약 98%, 약 100%, 및 약 92%로부터 선택된다 항체 없는 대조군 조건과 비교하여. 일부 구현예에서, 그와 같은 FVIIa %는 약 77% 내지 약 100%의 범위이다. 일부 구현예에서, 그와 같은 FVIIa %는 약 77% 이상이다.
일부 구현예에서, 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 표 9에서 제시된 바와 같이 28 nM TF 항체의 존재에서의 FVIIa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 약 101%, 약 87%, 약 79%, 약 96%, 약 93%, 약 95%, 약 98%, 약 100%, 약 102%, 약 99%, 약 92%, 및 약 91%로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 FVIIa %는 약 79% 내지 약 102%의 범위이다. 일부 구현예에서, 그와 같은 FVIIa %는 약 79% 이상이다.
일부 구현예에서, 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 표 9에서 제시된 바와 같이 9.25 nM TF 항체의 존재에서의 FVIIa %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 약 100%, 약 90%, 약 76%, 약 97%, 약 93%, 약 99%, 약 98%, 약 102%, 약 101%, 및 약 95%로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 FVIIa %는 약 76% 내지 약 102%의 범위이다. 일부 구현예에서, 그와 같은 FVIIa %는 약 76% 이상이다.
2.3.5. TF 항체의 존재에서의 FVIIa-의존적 TF 신호전달
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 FVIIa-의존적 TF 신호전달을 억제한다. 일부 구현예에서, FVIIa-의존적 TF 신호전달의 억제는 IL8의 감소에 의해 측정된다. 일부 구현예에서, FVIIa-의존적 TF 신호전달의 억제는 GM-CSF의 감소에 의해 측정된다.
일부 구현예에서, 인터류킨 8 농도 (IL8 농도)는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 100 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 70%까지 감소된다. 일부 구현예에서, IL8 농도는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 100 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 80%까지 감소된다. 일부 구현예에서, IL8 농도는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 100 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 90%까지 감소된다.
일부 구현예에서, IL8 농도는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 40 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 70%까지 감소된다. 일부 구현예에서, IL8 농도는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 40 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 80%까지 감소된다. 일부 구현예에서, IL8 농도는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 40 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 90%까지 감소된다.
일부 구현예에서, IL8 농도는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 16 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 60%까지 감소된다. 일부 구현예에서, IL8 농도는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 16 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 70%까지 감소된다. 일부 구현예에서, IL8 농도는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 16 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 80%까지 감소된다. 일부 구현예에서, IL8 농도는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 16 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 90%까지 감소된다.
일부 구현예에서, IL8 농도는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 6.4 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 50%까지 감소된다. 일부 구현예에서, IL8 농도는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 6.4 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 60%까지 감소된다. 일부 구현예에서, IL8 농도는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 6.4 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 70%까지 감소된다. 일부 구현예에서, IL8 농도는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 6.4 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 80%까지 감소된다. 일부 구현예에서, IL8 농도는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 6.4 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 90%까지 감소된다.
일부 구현예에서, 과립구-대식세포 콜로니-자극 인자 농도 (GM-CSF 농도)는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 100 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 70%까지 감소된다. 일부 구현예에서, GM-CSF 농도는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 100 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 80%까지 감소된다. 일부 구현예에서, GM-CSF 농도는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 100 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 90%까지 감소된다.
일부 구현예에서, GM-CSF 농도는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 40 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 70%까지 감소된다. 일부 구현예에서, GM-CSF 농도는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 40 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 80%까지 감소된다. 일부 구현예에서, GM-CSF 농도는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 40 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 90%까지 감소된다.
일부 구현예에서, GM-CSF 농도는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 16 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 60%까지 감소된다. 일부 구현예에서, GM-CSF 농도는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 16 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 70%까지 감소된다. 일부 구현예에서, GM-CSF 농도는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 16 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 80%까지 감소된다. 일부 구현예에서, GM-CSF 농도는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 16 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 90%까지 감소된다.
일부 구현예에서, GM-CSF 농도는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 6.4 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 50%까지 감소된다. 일부 구현예에서, GM-CSF 농도는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 6.4 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 60%까지 감소된다. 일부 구현예에서, GM-CSF 농도는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 6.4 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 70%까지 감소된다. 일부 구현예에서, GM-CSF 농도는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 6.4 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 80%까지 감소된다. 일부 구현예에서, GM-CSF 농도는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 6.4 nM 이상의 TF 항체의 존재에서 적어도 90%까지 감소된다.
일부 구현예에서, 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 표 10에서 제시된 바와 같이 100 nM TF 항체의 존재에서의 인터류킨 8의 백분율 (IL8 %)는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 약 2%, 약 9%, 약 8%, 약 6%, 약 13%, 약 1%, 약 3%, 약 4%, 및 약 5%로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 IL8 %는 약 1% 내지 약 13%의 범위이다. 일부 구현예에서, 그와 같은 IL8 %는 약 13% 이하이다.
일부 구현예에서, 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 표 10에서 제시된 바와 같이 40 nM TF 항체의 존재에서의 IL8 %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 약 2%, 약 8%, 약 7%, 약 10%, 약 14%, 약 4%, 약 5%, 및 약 6%로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 IL8 %는 약 2% 내지 약 14%의 범위이다. 일부 구현예에서, 그와 같은 IL8 %는 약 14% 이하이다.
일부 구현예에서, 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 표 10에서 제시된 바와 같이 16 nM TF 항체의 존재에서의 IL8 %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 약 2%, 약 3%, 약 10%, 약 8%, 약 7%, 약 16%, 약 9%, 약 15%, 약 5%, 및 약 6%로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 IL8 %는 약 2% 내지 약 16%의 범위이다. 일부 구현예에서, 그와 같은 IL8 %는 약 16% 이하이다.
일부 구현예에서, 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 표 10에서 제시된 바와 같이 6.4 nM TF 항체의 존재에서의 IL8 %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 약 3%, 약 4%, 약 11%, 약 9%, 약 14%, 약 22%, 약 12%, 약 6%, 약 5%, 약 15%, 약 21%, 및 약 8%로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 IL8 %는 약 3% 내지 약 22%의 범위이다. 일부 구현예에서, 그와 같은 IL8 %는 약 22% 이하이다.
일부 구현예에서, 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 표 11에서 제시된 바와 같이 100 nM TF 항체의 존재에서의 과립구-대식세포 콜로니-자극 인자의 백분율 (GM-CSF %)는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 약 6%, 약 7%, 약 22%, 약 20%, 약 12%, 약 19%, 약 17%, 약 25%, 약 5%, 약 14%, 약 11%, 및 약 10%로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 GM-CSF %는 약 5% 내지 약 25%의 범위이다. 일부 구현예에서, 그와 같은 GM-CSF %는 약 25% 이하이다.
일부 구현예에서, 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 표 11에서 제시된 바와 같이 40 nM TF 항체의 존재에서의 GM-CSF %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 약 6%, 약 7%, 약 19%, 약 15%, 약 18%, 약 16%, 약 26%, 약 5%, 약 13%, 약 11%, 및 약 10%로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 GM-CSF %는 약 5% 내지 약 26%의 범위이다. 일부 구현예에서, 그와 같은 GM-CSF %는 약 26% 이하이다.
일부 구현예에서, 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 표 11에서 제시된 바와 같이 16 nM TF 항체의 존재에서의 GM-CSF %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 약 6%, 약 7%, 약 22%, 약 19%, 약 14%, 약 32%, 약 17%, 약 26%, 약 5%, 약 12%, 약 13%, 약 9%, 약 11%, 및 약 15%로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 GM-CSF %는 약 5% 내지 약 32%의 범위이다. 일부 구현예에서, 그와 같은 GM-CSF %는 약 32% 이하이다.
일부 구현예에서, 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427의 표 11에서 제시된 바와 같이 6.4 nM TF 항체의 존재에서의 GM-CSF %는 항체 없는 대조군 조건과 비교하여 약 8%, 약 9%, 약 24%, 약 20%, 약 18%, 약 39%, 약 34%, 약 15%, 약 21%, 약 16%, 약 17%, 및 약 10%로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 GM-CSF %는 약 8% 내지 약 39%의 범위이다. 일부 구현예에서, 그와 같은 GM-CSF %는 약 39% 이하이다.
2.4. 생식계열
본 명세서에 제공된 항체는 임의의 적합한 VH 및 VL 생식계열 서열을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 VH 영역은 VH3 생식계열로부터의 것이다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 VH 영역은 VH1 생식계열로부터의 것이다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 VH 영역은 VH4 생식계열로부터의 것이다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 VH 영역은 VH3-23 생식계열로부터의 것이다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 VH 영역은 VH1-18 생식계열로부터의 것이다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 VH 영역은 VH3-30 생식계열로부터의 것이다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 VH 영역은 VH1-69 생식계열로부터의 것이다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 VH 영역은 VH4-31 생식계열로부터의 것이다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 VH 영역은 VH4-34 생식계열로부터의 것이다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 VH 영역은 VH1-46 생식계열로부터의 것이다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 VL 영역은 VK1 생식계열로부터의 것이다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 VL 영역은 VK4 생식계열로부터의 것이다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 VL 영역은 VK3 생식계열로부터의 것이다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 VL 영역은 VK1-05 생식계열로부터의 것이다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 VL 영역은 VK4-01 생식계열로부터의 것이다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 VL 영역은 VK3-15 생식계열로부터의 것이다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 VL 영역은 VK3-20 생식계열로부터의 것이다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 VL 영역은 VK1-33 생식계열로부터의 것이다.
2.5. 단일특이적 및 다중특이적 TF 항체
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 단일특이적 항체이다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 다중특이적 항체이다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 다중특이적 항체는 1개 초과의 항원에 결합한다. 일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 2개의 항원에 결합한다. 일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 3개의 항원에 결합한다. 일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 4개의 항원에 결합한다. 일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 5개의 항원에 결합한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 다중특이적 항체는 TF 항원 상의 1개 초과의 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 TF 항원 상의 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 TF 항원 상의 3개의 에피토프에 결합한다.
많은 다중특이적 항체 작제물은 당해 기술에 공지되어 있고, 그리고 본 명세서에 제공된 항체는 임의의 적합한 다중특이적 적합한 작제물의 형태로 제공될 수 있다.
일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 공통 경쇄 가변 영역와 짝지은 적어도 2개의 상이한 중쇄 가변 영역 각각을 포함하는 면역글로불린을 포함한다 (즉, "공통 경쇄 항체"). 공통 경쇄 가변 영역은 각각의 2개의 상이한 중쇄 가변 영역을 갖는 뚜렷한 항원-결합 도메인을 형성한다. 참고 Merchant 등, Nature Biotechnol ., 1998, 16:677-681(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음).
일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 그와 같은 면역글로불린의 중쇄 또는 경쇄의 N- 또는 C-말단 중 하나 이상에 부착된 항체 또는 이의 단편을 포함하는 면역글로불린을 포함한다. 참고 Coloma 및 Morrison, Nature Biotechnol ., 1997, 15:159-163(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음). 일부 양태에서, 그와 같은 항체는 4가 이중특이적 항체를 포함한다.
일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 적어도 2개의 상이한 중쇄 가변 영역 및 적어도 2개의 상이한 경쇄 가변 영역을 포함하는 하이브리드 면역글로불린을 포함한다. 참고 Milstein 및 Cuello, Nature, 1983, 305:537-540; 및 Staerz 및 Bevan, Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 1986, 83:1453-1457(이들 각각은 전체적으로 참고로 포함되어 있음).
일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 다중특이성을 갖지 않는 부산물의 형성을 감소시키기 위해 변경을 갖는 면역글로불린 사슬을 포함한다. 일부 양태에서, 항체는 미국 특허 번호 5,731,168(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있는 하나 이상의 "놉-인투-홀" 변형을 포함한다.
일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 Fc 헤테로-다량체의 어셈블리를 촉진하기 위해 하나 이상의 정전 변형을 갖는 면역글로불린 사슬을 포함한다. 참고 WO 2009/089004(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음).
일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 이중특이적 단일 사슬 분자를 포함한다. 참고 Traunecker 등, EMBO J., 1991, 10:3655-3659; 및 Gruber 등, J. Immunol., 1994, 152:5368-5374(이들 각각은 전체적으로 참고로 포함되어 있음).
일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 폴리펩타이드 링커에 의해 연결된 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 포함하되, 링커의 길이는 원하는 다중특이성을 갖는 다중특이적 항체의 어셈블리를 촉진하기 위해 선택된다. 예를 들어, 단일특이적 scFvs가, 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인이 12개 초과의 아미노산 잔기의 폴리펩타이드 링커에 의해 연결될 때 일반적으로 형성된다. 참고 U.S. 특허 번호 4,946,778 및 5,132,405(이들 각각은 참고로 전체적으로 편입되어 있음). 일부 구현예에서, 폴리펩타이드 링커 길이의 12 개 미만의 아미노산 잔기로의 감소는 동일한 폴리펩타이드 사슬 상의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 짝짓기를 방지하여, 하나의 사슬로부터의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인과 또 다른 사슬 상의 상보성 도메인과의 짝??기를 허용한다. 따라서 생성된 항체는 다중특이성을 가지며 각각의 결합 부위의 특이성은 1 초과 개의 폴리펩타이드 사슬에 의해 기여된다. 3 내지 12개의 아미노산 잔기 사이에 링커에 의해 연결된 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 포함하는 폴리펩타이드 사슬은 우세하게 이량체 (일명 디아바디)를 형성한다. 0 및 2개의 아미노산 잔기 사이의 링커로, 삼량체 (일명 트리아바디) 및 사량체 (일명 테트라바디)가 선호된다. 그러나, 정확한 유형의 올리고머화는 링커 길이에 추가하여, 아미노산 잔기 조성 및 각각의 폴리펩타이드 사슬 (예를 들어, VH-링커-VL vs. VL-링커-VH)의 가변 도메인의 순서에 따라 나타난다. 숙련된 사람은 원하는 다중특이성에 기초한 적절한 링커 길이를 선택할 수 있다.
일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 디아바디를 포함한다. 참고 Hollinger 등, Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 1993, 90:6444-6448(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음). 일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 트리아바디를 포함한다. 참고 Todorovska 등, J. Immunol . Methods, 2001, 248:47-66(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음). 일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 테트라바디를 포함한다. 참고 id.(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음).
일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 삼중특이적 F(ab')3 유도체를 포함한다. 참고 Tutt 등 J. Immunol ., 1991, 147:60-69(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음).
일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 가교결합된 항체를 포함한다. 참고 미국 특허 번호 4,676,980; Brennan 등, Science, 1985, 229:81-83; Staerz, 등 Nature, 1985, 314:628-631; 및 EP 0453082(이들 각각은 전체적으로 참고로 포함되어 있음).
일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 류신 지퍼에 의해 조립된 항원-결합 도메인을 포함한다. 참고 Kostelny 등, J. Immunol ., 1992, 148:1547-1553(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음).
일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 상보성 단백질 도메인을 포함한다. 일부 양태에서, 상보성 단백질 도메인은 고착 도메인 (AD) 및 이량체화 및 도킹 도메인 (DDD)을 포함한다. 일부 구현예에서, AD 및 DDD는 서로에 대해서 결합하여, "독(dock) 및 락(lock)" (DNL) 접근법을 통해 다중특이적 항체의 어셈블리 구조를 가능하게 한다. 많은 특이성의 항체는 조립될 수 있는데, 이중특이적 항체, 삼중특이적 항체, 사중특이적 항체, 오중특이적 항체, 및 육중특이적 항체를 포함한다. 상보성 단백질 도메인을 포함하는 다중특이적 항체는 예를 들어, U.S. 특허 번호 7,521,056; 7,550,143; 7,534,866; 및 7,527,787(이들 각각은 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 U.S. 특허 공개 번호 2008/0069820(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재된 이중 작용 Fab (DAF) 항체를 포함한다.
일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 2개의 친계 분자의 환원 이어서 2개의 친계 분자의 혼합 및 하이브리드 구조를 조립하기 위한 재산화에 의해 형성된 항체를 포함한다. 참고 Carlring 등, PLoS One, 2011, 6:e22533(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음).
일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 DVD-IgTM을 포함한다. DVD-IgTM는 2개 이상의 항원에 결합할 수 있는 이중 가변 도메인 면역글로불린이다. DVD-IgsTM는 미국 특허 번호 7,612,181(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 DARTTM을 포함한다. DARTTM는 Moore 등, Blood, 2011, 117:454-451(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 DuoBody ®을 포함한다. DuoBodies®는 Labrijn 등, Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 2013, 110:5145-5150; Gramer 등, mAbs, 2013, 5:962-972; 및 Labrijn 등, Nature Protocols, 2014, 9:2450-2463(이들 각각은 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 또 다른 항체 또는 단편에 부착된 항체 단편을 포함한다. 부착은 공유 또는 비-공유일 수 있다. 부착이 공유일 때, 융합 단백질의 형태 또는 화학 링커를 통해서일 수 있다. 다른 항체에 부착된 항체 단편을 포함하는 다중특이적 항체의 예시는 4가 이중특이적 항체를 포함하되, scFv는 IgG로부터 CH3의 C-말단에 융합된다. 참고 Coloma 및 Morrison, Nature Biotechnol., 1997, 15:159-163. 다른 예는, Fab 분자가 면역글로불린의 불변 영역에 부착된 항체를 포함한다. 참고 Miler 등, J. Immunol ., 2003, 170:4854-4861(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음). 임의의 적합한 단편은 본 명세서에 기재되어가나 당업계에서 알려진 단편 중 임의의 것을 포함하여 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 CovX-Bodies를 포함한다. CovX-Bodies는, 예를 들어, Doppalapudi 등, Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 2010, 107:22611-22616(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 Fcab 항체를 포함하되, 하나 이상의 항원-결합 도메인은 Fc 영역에 도입된다. Fcab 항체는 Wozniak-Knopp 등, Protein Eng. Des. Sel ., 2010, 23:289-297(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 TandAb® 항체를 포함한다. TandAb® 항체는 Kipriyanov 등, J. Mol . Biol ., 1999, 293:41-56 및 Zhukovsky 등, Blood, 2013, 122:5116(이들 각각은 참고로 전체적으로 편입되어 있음)에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 탠덤 Fab를 포함한다. 탠덤 Fab는 WO 2015/103072(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 ZybodyTM를 포함한다. ZybodiesTM는 LaFleur 등, mAbs, 2013, 5:208-218(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다.
2.6. 당화 변이체
특정 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 당화되는 정도를 증가시키고, 감소시키거나 제거하기 위해 변경될 수 있다. 폴리펩타이드의 당화는 전형적으로 "N-연결되거나" 또는 "O-연결된다."
"N-연결된" 당화는 탄수화물 모이어티의 아스파라긴 잔기의 측쇄에의 부착을 지칭한다. 트리펩타이드 서열 아스파라긴-X-세린 및 아스파라긴-X-트레오닌(여기서, X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산임)는 탄수화물 모이어티의 아스파라긴 측쇄에의 효소적 부착에 대한 인식 서열이다. 따라서, 폴리펩타이드 중 이들 트리펩타이드 서열의 존재는 잠재적인 당화 부위를 생성한다.
"O-연결된" 당화는 당류 N-아세틸갈락토사민, 갈락토스, 또는 자일로스 중 하나의 하이드록시아미노산, 가장 통상적으로 세린 또는 트레오닌에의 부착을 지칭하지만, 5-하이드록시프롤린 또는 5-하이드록실라이신이 또한, 사용될 수 있다.
본 명세서에 제공된 항체에 대한 또는 그 항체로부터의 N-연결된 당화 부위의 추가 또는 결실은, 상기-기재된 트리펩타이드 서열 중 하나 이상은 생성되거나 제거되도록 아미노산 서열을 변경함으로써 달성될 수 있다. O-연결된 당화 부위의 추가 또는 결실은 (경우에 따라) 항체의 서열에서 또는 그것에 대해 하나 이상의 세린 또는 트레오닌 잔기의 추가, 결실, 또는 치환에 의해 달성될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 자연 발생 항체와 상이한 당화 모티프를 포함한다. 임의의 적합한 자연 발생 당화 모티프은 본 명세서에 제공된 항체에서 변형될 수 있다. 면역글로불린의 구조 및 당화 특성은, 예를 들어, 당해 기술에 공지되어 있고 그리고, 예를 들어, Schroeder 및 Cavacini, J. Allergy Clin. Immunol ., 2010, 125:S41-52(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 요약되어 있다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 아스파라긴 297 (Asn 297)에 부착된 올리고당에 대한 변형을 갖는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 포유동물 세포에 의해 생산된 자연 발생 IgG1 항체는 전형적으로 Fc 영역의 CH2 도메인의 Asn 297에 대한 N-연결에 의해 일반적으로 부탁된 분지형, 바이안테너리 올리고당을 포함한다. 참고 Wright 등, TIBTECH, 1997, 15:26-32(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음). Asn 297에 부착된 올리고당은 다양한 탄수화물 예컨대 만노스, N-아세틸 글루코사민 (GlcNAc), 갈락토스, 및 시알산, 뿐만 아니라 바이안테너리 올리고당 구조의 "스템(stem)"에서 GlcNAc에 부착된 푸코스를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, Asn 297에 부착된 올리고당은 변경된 ADCC을 갖는 항체를 행성하기 위해 변형된다. 일부 구현예에서, 올리고당는 ADCC를 개선하기 위해 변경된다. 일부 구현예에서, 올리고당는 ADCC를 감소시키기 위해 변경된다.
일부 양태에서, 본 명세서에 제공된 항체는 자연 발생 IgG1 도메인과 비교하여 위치 Asn 297에서 감소된 푸코스 함량을 갖는 IgG1 도메인을 포함한다. 그와 같은 Fc 도메인은 개선된 ADCC를 갖는 것으로 알려져 있다. 참고 Shields 등, J. Biol. Chem ., 2002, 277:26733-26740(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음). 일부 양태에서, 그와 같은 항체는 위치 Asn 297에서 임의의 푸코스를 포함하지 않는다. 푸코스의 양은 예를 들어 WO 2008/077546(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재된 바와 같이 임의의 적합한 방법을 사용하여 결정될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 양분된 올리고당, 예컨대 GlcNAc에 의해 양분된 항체의 Fc 영역에 부착된 바이안테너리 올리고당을 포함한다. 그와 같은 항체 변이체는 감소된 푸코실화 및/또는 개선된 ADCC 기능을 가질 수 있다. 그와 같은 항체 변이체의 예는 예를 들어, WO 2003/011878; 미국 특허 번호 6,602,684; 및 U.S. 특허 공개 번호 2005/0123546(이들 각각은 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다.
본 명세서에 제공된 항체에 편입될 수 있는 다른 설명적인 당화 변이체는, 예를 들어, U.S. 특허 공보 번호 2003/0157108, 2004/0093621, 2003/0157108, 2003/0115614, 2002/0164328, 2004/0093621, 2004/0132140, 2004/0110704, 2004/0110282, 2004/0109865; 국제 특허 공보 번호 2000/61739, 2001/29246, 2003/085119, 2003/084570, 2005/035586, 2005/035778; 2005/053742, 2002/031140; Okazaki 등, J. Mol . Biol ., 2004, 336:1239-1249; 및 Yamane-Ohnuki 등, Biotech. Bioeng ., 2004, 87: 614-622(이들 각각은 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 Fc 영역에 부착된 올리고당에서 적어도 하나의 갈락토스 잔기를 갖는 Fc 영역을 포함한다. 그와 같은 항체 변이체는는 개선된 CDC 기능을 가질 수 있다. 그와 같은 항체 변이체의 예는 예를 들어, WO 1997/30087; WO 1998/58964; 및 WO 1999/22764(이들 각각은 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다.
탈푸코실화된 항체를 생성할 수 있는 세포주의 예는 단백질 푸코실화가 부족한 Lec13 CHO 세포 (참고 Ripka 등, Arch. Biochem . Biophys ., 1986, 249:533-545; 미국 특허 공개 번호 2003/0157108; WO 2004/056312; 이들 각각은 참고로 전체적으로 편입되어 있음), 및 녹아웃 세포주, 예컨대 알파-1,6-푸코실전달효소 유전자 또는 FUT8 녹아웃 CHO 세포 (참고 Yamane-Ohnuki 등, Biotech. Bioeng ., 2004, 87: 614-622; Kanda 등, Biotechnol . Bioeng ., 2006, 94:680-688; 및 WO 2003/085107; 이들 각각은 참고로 전체적으로 편입되어 있음)을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 비당화된 항체이다. 비당화된 항체는 당해 분야에 알려지거나 본 명세서에 기재된 임의의 방법을 사용하여 생성될 수 있다. 일부 양태에서, 비당화된 항체는 모든 당화 부위를 제거하기 위해 항체를 변형시킴으로써 생성된다. 일부 양태에서, 당화 부위는 항체의 Fc 영역으로부터만 제거된다. 일부 양태에서, 비당화된 항체는 당화가 불가능한 유기체, 예컨대 대장균(E.coli)에서 항체를 발현시키거나 또는 무세포 반응 혼합물에서 항체를 발현시킴으로써 생성된다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 천연 IgG1 항체와 비교하여 감소된 효과기 기능을 갖는 불변 영역을 갖는다. 일부 구현예에서, Fc 수용체에 대한 본 명세서에 제공된 항체의 Fc 영역의 불변 영역의 친화도는 그와 같은 Fc 수용체에 대한 천연 IgG1 불변 영역의 친화도보다 더 적다.
2.7. 불변 영역, Fc 영역 및 아미노산 서열 변이체
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 하나 이상의 불변 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 인간 Ig 불변 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 IgA, IgG, IgE, IgD, 또는 IgM 항체로부터의 불변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 IgG로부터의 불변 영역을 포함한다. 인간 IgG는 인간 IgG1, 인간 IgG2, 인간 IgG3, 또는 인간 IgG4일 수 있다.
일부 구현예에서, 항체는 인간 IgG1 CH1 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 인간 IgG1 CH1 도메인 서열은 다음과 같다: ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV.
일부 구현예에서, 인간 IgG1 CH1 도메인은 특정 동종이형으로부터 유래한다. 본원의 임의의 항체에 적합한 인간 IgG1 동종이형은 문헌[http://www.imgt.org/IMGTrepertoire/Proteins/allotypes/human/IGH/IGHC/G1m_allotypes.html]에 기재되어 있으며, 이는 그 전체가 본 명세서에 참조로 포함된다. 특정 구현예에서, 동종이형은 G1m3이며, 여기서 IGHG1*03으로도 지칭된다. IGHG1*03 동종이형으로도 알려진 G1m3은 문헌[http://www.imgt.org/IMGTrepertoire/Proteins/allotypes/human/IGH/IGHC/G1m_allotypes.html]에 기재되어 있으며, 이는 그 전체가 본 명세서에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, 동종이형 IGHG1*03의 인간 IgG1 CH1 영역은 하기의 CH1 도메인 서열을 포함한다: ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRV.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 Fc 영역을 포함한다. Fc 영역은 인간 IgA, IgG, IgE, IgD, 또는 IgM 항체로부터 유래될 수 있다.
일부 구현예에서, 항체는 인간 IgG Fc 영역을 포함한다. 인간 IgG Fc 영역은 인간 IgG1 Fc 영역, 인간 IgG2 Fc 영역, 인간 IgG3 Fc 영역, 인간 IgG4 Fc 영역일 수 있다.
특정 구현예에서, 항체는 인간 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 인간 IgG1 Fc 영역은 힌지 서열을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 힌지 서열은 EPKSCDKTHTCP이다.
인간 IgG1 Fc 영역은 인간 IgG1 CH2 도메인 서열을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 인간 IgG1 CH2 도메인 서열은 다음과 같다: PCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK.
인간 IgG1 Fc 영역은 인간 IgG1 CH3 도메인 서열을 포함할 수 있다. 인간 IgG1 CH3 도메인 서열은 다음과 같다: GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG. 일부 구현예에서, 인간 IgG1 CH3 도메인 서열은 C-말단 라이신(K)을 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 인간 IgG1 Fc 영역은 다음의 서열을 포함한다:
PCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG. 일부 구현예에서, 인간 IgG1 Fc 영역 서열은 C-말단 라이신(K)을 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 인간 IgG1 Fc 영역은 다음의 서열을 포함한다: EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG. 일부 구현예에서, 인간 IgG1 Fc 영역 서열은 C-말단 라이신(K)을 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 인간 IgG1 Fc 영역은 특정 동종이형의 것이다. 본원의 임의의 항체에 적합한 인간 IgG1 동종이형은 문헌[http://www.imgt.org/IMGTrepertoire/Proteins/allotypes/human/IGH/IGHC/G1m_allotypes.html]에 기재되어 있으며, 이는 그 전체가 본 명세서에 참조로 포함된다. 특정 구현예에서, 동종이형은 G1m3이며, 여기서 IGHG1*03으로도 지칭된다. IGHG1*03 동종이형으로도 알려진 G1m3은 문헌[http://www.imgt.org/IMGTrepertoire/Proteins/allotypes/human/IGH/IGHC/G1m_allotypes.html]에 기재되어 있으며, 이는 그 전체가 본 명세서에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, 인간 IgG1 동종이형 IGHG1*03 Fc 영역은 하기 CH2 서열을 포함한다: PCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK.
일부 구현예에서, 인간 IgG1 동종이형 IGHG1*03 Fc 영역은 하기 CH3 서열을 포함한다: GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG. 일부 구현예에서, 인간 IgG1 동종이형 IGHG1*03 Fc 영역의 CH3 영역은 C-말단 라이신(K)을 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 인간 IgG1 동종이형 IGHG1*03 Fc 영역은 하기 Fc 서열을 포함한다: PCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG. 일부 구현예에서, 인간 IgG1 동종이형 IGHG1*03 Fc 영역 서열은 C-말단 라이신(K)을 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 인간 IgG1 동종이형 IGHG1*03 Fc 영역은 하기 Fc 서열을 포함한다: EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG. 일부 구현예에서, 인간 IgG1 동종이형 IGHG1*03 Fc 영역 서열은 C-말단 라이신(K)을 추가로 포함한다.
특정 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 자연 발생 Fc 영역과 비교하여 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 Fc 영역, 삽입, 또는 결실을 포함한다. 일부 양태에서, 그와 같은 치환, 삽입, 또는 결실은 변경된 안정성, 당화, 또는 다른 특성을 가진 항체를 산출한다. 일부 양태에서, 그와 같은 치환, 삽입, 또는 결실은 비당화된 항체를 산출한다.
일부 양태에서, 본 명세서에 제공된 항체의 Fc 영역은 Fc 수용체에 대하여 변경된 친화도를 가진 항체, 또는 더욱 면역학적으로 불활성인 항체를 산출하도록 변형된다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체 변이체는, 전체가 아닌, 일부 효과기 기능을 보유한다. 그와 같은 항체는, 예를 들어, 항체의 반감기가 생체내 중요한 경우 유용할 수 있지만, 특정 효과기 기능 (예를 들어, 보체 활성화 및 ADCC)이 불필요하거나 유해한 경우는 아니다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 Fc 영역은 힌지 안정화 돌연변이 S228P 및 L235E 중 하나 이상을 포함하는 인간 IgG4 Fc 영역이다. 참고 Aalberse 등, Immunology, 2002, 105:9-19(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음). 일부 구현예에서, IgG4 Fc 영역은 하기 돌연변이 중 하나 이상을 포함한다: E233P, F234V, 및 L235A. 참고 Armour 등, Mol . Immunol ., 2003, 40:585-593(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음). 일부 구현예에서, IgG4 Fc 영역은 G236 위치에서 결실을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 Fc 영역은 Fc 수용체 결합을 감소시키기 위해 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 인간 IgG1 Fc 영역이다. 일부 양태에서, 하나 이상의 돌연변이는 S228 (예를 들어, S228A), L234 (예를 들어, L234A), L235 (예를 들어, L235A), D265 (예를 들어, D265A), 및 N297 (예를 들어, N297A)로부터 선택된 잔기내에 있다. 일부 양태에서, 항체는 PVA236 돌연변이를 포함한다. PVA236은, IgG1의 233 내지 236 아미노산 위치로부터, 아미노산 서열 ELLG 또는 IgG4의 EFLG가 PVA에 의해 대체되는 것을 의미한다. 미국 특허 번호 9,150,641(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)을 참조한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 Fc 영역은 Armour 등, Eur . J. Immunol., 1999, 29:2613-2624; WO 1999/058572; 및/또는 영국 특허 출원 번호 98099518(이들 각각은 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재된 바와 같이 변형된다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 Fc 영역은 돌연변이 A330S 및 P331S 중 하나 이상을 포함하는 인간 IgG2 Fc 영역이다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체의 Fc 영역은 238, 265, 269, 270, 297, 327 및 329로부터 선택된 하나 이상의 위치에서 아미노산 치환을 갖는다. 참고 미국 특허 번호 6,737,056(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음). 그와 같은 Fc 돌연변이체는, 잔기 265 및 297의 알라닌으로의 치환이 있는 소위 "DANA" Fc 돌연변이체를 포함하는, 265, 269, 270, 297 및 327 아미노산 위치 중 2개 이상에서 치환이 있는 Fc 돌연변이체를 포함한다. 참고 미국 특허 번호 7,332,581(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음). 일부 구현예에서, 항체는 265 아미노산 위치에서 알라닌을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 297 아미노산 위치에서 알라닌을 포함한다.
특정 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 ADCC를 개선하는 하나 이상의 아미노산 치환, 예컨대 Fc 영역의 298, 333, 및 334 위치 중 하나 이상에서 치환이 있 Fc 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는, Lazar 등, Proc. Natl . Acad . Sci . USA, 2006,103:4005-4010(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에서 기재된 바와 같이, 239, 332, 및 330 위치에서 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 Fc 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 C1q 결합 및/또는 CDC를 개선하거나 감소시키는 하나 이상의 변경을 포함한다. 참고 미국 특허 번호 6,194,551; WO 99/51642; 및 Idusogie 등, J. Immunol ., 2000, 164:4178-4184(이들 각각은 전체적으로 참고로 포함되어 있음).
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 반감기를 증가시키기 위해 하나 이상의 변경을 포함한다. 신생 Fc 수용체 (FcRn)에의 개선된 결합 및 증가된 반감기를 가진 항체는, 예를 들어, Hinton 등, J. Immunol ., 2006, 176:346-356; 및 미국 특허 공개 번호 2005/0014934(이들 각각은 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다. 그와 같은 Fc 변이체는 Fc 영역 잔기 중 하나 이상에서 치환을 가진 것들을 포함한다: IgG의 238, 250, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 314, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424, 428, 및 434.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 U.S. 특허 번호 7,371,826, 5,648,260, 및 5,624,821; Duncan 및 Winter, Nature, 1988, 322:738-740; 및 WO 94/29351(이들 각각은 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재된 바와 같이 하나 이상의 Fc 영역 변이체를 포함한다.
2.8. 파이로글루타메이트
당업계에서 알려진 바와 같이, 재조합 단백질의 N-말단에서 글루타메이트 (E) 및 글루타민 (Q) 둘 모두는 자발적으로 고리화되어 시험관내 및 생체내에서 파이로글루타메이트 (pE)를 형성할 수 있다. 참고 Liu 등, J. Biol . Chem ., 2011, 286:11211-11217(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음).
일부 구현예에서, N-말단 위치에서 pE 잔기를 갖는 폴리펩타이드 서열을 포함하는 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 구현예에서, N-말단 잔기가 Q로부터 pE로 전환된 폴리펩타이드 서열을 포함하는 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 구현예에서, N-말단 잔기가 E로부터 pE로 전환된 폴리펩타이드 서열을 포함하는 항체가 본 명세서에 제공된다.
2.9. 시스테인 조작된 항체 변이체
특정 구현예에서, 항체의 하나 이상의 잔기가 시스테인 잔기로 치환되는 "thioMAbs"로도 알려져 있는 시스테인 조작된 항체가 본 명세서에 제공된다. 특정 구현예에서, 치환된 잔기는 항체의 용매 접근가능한 부위에서 생긴다. 그와 같은 잔기를 시스테인으로 치환하여, 반응성 티올 기는 항체의 용매 접근가능한 부위에서 도입되고 항체를 다른 모이어티, 예컨대 약물 모이어티 또는 링커-약물 모이어티에 접합시키기 위해, 예를 들어, 면역접합체를 만들기 위해 사용될 수 있다.
특정 구현예에서, 하기 잔기 중 임의의 하나 이상은 시스테인: 경쇄의 V205; 중쇄 Fc 영역의 A118; 및 중쇄 Fc 영역의 S400으로 치환될 수 있다. 시스테인 조작된 항체는, 예를 들어, 미국 특허 번호 7,521,541(이는 참고로 전체적으로 편입되어 있음)에 기재된 바와 같이 생성될 수 있다.
3. 항-TF 항체-약물 접합체
TF에 특이적으로 결합하는 항체 및 세포독성제을 포함하는 항체-약물 접합체 (ADC)가 본 명세서에 제공된다. 일부 구현예에서, 세포독성제는 항-TF 항체에 직접적으로 연결된다. 일부 구현예에서, 세포독성제는 항-TF 항체에 간접적으로 연결된다.
일부 구현예에서, ADC는 추가로 링커를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 항-TF 항체를 세포독성제에 연결한다.
ADC에서 항체에 접합된 세포독성제의 수는 약물-항체 비율 또는 DAR로 정의된다. 당업계에 공지된 바와 같이, 대부분의 접합 방법은 다양한 DAR 종을 포함하는 ADC 조성물을 산출하며, 보고된 DAR은 개별 DAR 종의 평균이다. 따라서, 본 명세서에 기재된 ADC가 특정 DAR을 갖는 것으로 정의될 때, 제공된 숫자는 ADC 조성물 내의 개별 DAR 종의 평균을 나타내는 것으로 이해되어야 한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 ADC는 1의 약물-항체 비(DAR)를 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 ADC는 2의 DAR을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 ADC는 3의 DAR을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 ADC는 4의 DAR을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 ADC는 5의 DAR을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 ADC는 1-2, 1-3, 1-4, 1-5, 2-3, 2-4, 2-5, 3-4, 3-5, 4-5, 1, 2, 3, 4, 또는 5의 DAR을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 ADC는 5 초과의 DAR을 갖는다. 일부 구현예에서, DAR은 UV/vis 분광법, 소수성 상호작용 크로마토그래피 (HIC), 및/또는 비과 시간 검출 및 질량 특성화(RP-UPLC/질량 분광법)를 이용한 역상 액체 크로마토그래피 분리에 의해 측정된다. 일부 구현예에서, 약물-결합 형태의 분포(예를 들어, DAR0, DAR1, DAR2 등 종의 분획)는 또한 MS (동반되는 크로마토그래피 분리 단계 여부에 관계없이), 소수성 상호작용 크로마토그래피, 역상 HPLC 또는 이소-전기 초점조정 겔 전기영동 (IEF)을 포함하는 당업계에서 알려진 다양한 기술에 의해 분석될 수 있다 (참고, 예를 들어, Sun 등, Bioconj Chem., 28:1371-81 (2017); Wakankar 등, mAbs, 3:161-172 (2011)).
4. TF 항체를 제조하는 방법
4.1. TF 항원 제조
본 명세서에 제공된 항체의 단리에 사용된 TF 항원은 온전한 TF 또는 TF의 단편일 수 있다. TF 항원은, 예를 들어, 세포의 표면에서 발현된 단백질 또는 단리된 단백질의 형태일 수 있다.
일부 구현예에서, TF 항원은 자연에서 발생하지 않는 번역후 변형 또는 아미노산 서열을 갖는 TF, 예컨대 TF 단백질의 비-자연 발생 변이체이다.
일부 구현예에서, TF 항원은, 예를 들어, 세포내 또는 막-스패닝 서열, 또는 신호 서열의 제거에 의해 절단된다. 일부 구현예에서, TF 항원은 이의 C-말단에서 인간 IgG1 Fc 도메인 또는 폴리히스티딘 태그에 융합된다.
4.2. 단클론성 항체를 제조하는 방법
단클론성 항체는, 예를 들어, Kohler 등, Nature, 1975, 256:495-497 (참고로 전체적으로 편입되어 있음)에 의해, 및/또는 재조합 DNA 방법 (참고 예를 들어, 미국 특허 번호 4,816,567, 이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 의해 최초 기재된 하이브리도마 방법을 사용하여, 수득될 수 있다. 단클론성 항체는 또한, 예를 들어, 파아지-디스플레이 라이브러리 (참고 예를 들어, 미국 특허 번호 8,258,082, 이는 참고로 전체적으로 편입되어 있음)을 사용하거나, 대안적으로, 효모 기반 라이브러리 (참고 예를 들어, 미국 특허 번호 8,691,730, 이는 참고로 전체적으로 편입되어 있음)을 사용하여 수득될 수 있다.
하이브리도마 방법에서, 마우스 또는 다른 적절한 숙주 동물은 면역화를 위하여 사용된 단백질에 특이적으로 결합할 항체를 생산하거나 생산할 수 있는 림프구를 유도하기 위해 면역화된다. 대안적으로, 림프구는 시험관내 면역화될 수 있다. 림프구는 그 다음 적합한 융합 제제, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜을 사용하여 골수종 세포와 융합되어 하이브리도마 세포를 형성한다. 참고 Goding J.W., Monoclonal Antibodies: Principles and Practice 3rd ed. (1986) Academic Press, San Diego, CA(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음).
하이브리도마 세포는 미융합된, 친계 골수종 세포의 성장 또는 생존을 억제하는 하나 이상의 물질을 함유하는 적합한 배양 배지에서 씨딩되고 성장된다. 예를 들어, 친계 골수종 세포가 효소 하이포잔틴 구아닌 포스포리보실 전달효소 (HGPRT 또는 HPRT)가 부족하면, 하이브리도마용 배양 배지는 전형적으로 하이포잔틴, 아미노프테린, 및 티미딘 (HAT 배지)를 포함할 것이고, 이들 물질은 HGPRT-결핍된 세포의 성장을 예방한다.
유용한 골수종 세포는 효율적으로 융합하는, 선택된 항체-생성 세포에 의해 항체의 안정한 고-수준 생산을 지원하는, 그리고 배지 조건, 예컨대 HAT 배지의 존재 또는 부재에 민감한 것들이다. 이들 중에서, 바람직한 골수종 세포주는 쥣과 골수종 주, 예컨대 (Salk Institute Cell Distribution Center, San Diego, CA로부터 이용가능한) MOP-21 및 MC-11 마우스 종양, 및 (미국 종균 협회(American Type Culture Collection), Rockville, MD로부터 이용가능한) SP-2 또는 X63-Ag8-653 세포로부터 유래된 것들이다. 인간 골수종 및 마우스-인간 헤테로골수종 세포주는 또한 인간 단클론성 항체의 생산에 대하여 기재되어 왔다. 참고 예를 들어, Kozbor, J. Immunol., 1984, 133:3001(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음).
원하는 특이성, 친화도, 및/또는 생물학적 활성의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포의 확인후, 선택된 클론은 제한 희석 절차에 의해 서브클로닝될 수 있고 표준 방법에 의해 성장될 수 있다. 참고 Goding(상동). 이러한 목적을 위해 적합한 배양 배지는, 예를 들어, D-MEM 또는 RPMI-1640 배지를 포함한다. 또한, 하이브리도마 세포는 동물에서 복수 종양으로서 생체내 성장될 수 있다.
단클론성 항체를 인코딩하는 DNA는 종래의 절차를 사용하여 (예를 들어, 단클론성 항체의 중쇄 및 경쇄를 인코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오타이드 프로브 사용에 의해) 쉽게 단리 및 서열분석될 수 있다. 따라서, 하이브리도마 세포는 원하는 특성을 가진 항체를 인코딩하는 DNA의 유용한 공급원으로서 작용할 수 있다. 일단 단리되면, DNA는 발현 벡터에 배치될 수 있고, 이들은 그 다음 숙주세포 예컨대 박테리아 (예를 들어, 대장균), 효모 (예를 들어, 사카로마이세스 또는 피치아 sp .), COS 세포, 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포, 또는 항체를 달리 생산하지 않는 골수종 세포에 형질감염되어, 단클론성 항체를 생산한다.
4.3. 키메라 항체를 제조하는 방법
키메라 항체를 제조하는 설명적인 방볍은 예를 들어, 미국 특허 번호 4,816,567; 및 Morrison 등, Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 1984, 81:6851-6855(이들 각각은 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다. 일부 구현예에서, 키메라 항체는 비-인간 가변 영역 (예를 들어, 마우스, 랫트, 햄스터, 토끼, 또는 비-인간 영장류, 예컨대 원숭이로부터 유래된 가변 영역)을 인간 불변 영역과 조합하기 위해 재조합 기술을 사용하여 만들어진다.
4.4. 인간화된 항체를 제조하는 방법
인간화된 항체는 비-인간 단클론성 항체의 구조 부분의 대부분 또는 모두를 해당하는 인간 항체 서열로 대체함으로써 생성될 수 있다. 결과적으로, 항원-특이적 가변성, 또는 CDR만이 비-인간 서열로 구성된 하이브리드 분자가 생성된다. 인간화된 항체를 얻는 방법은, 예를 들어, Winter 및 Milstein, Nature, 1991, 349:293-299; Rader 등, Proc . Nat. Acad . Sci . U.S.A ., 1998, 95:8910-8915; Steinberger 등, J. Biol . Chem ., 2000, 275:36073-36078; Queen 등, Proc . Natl . Acad. Sci . U.S.A ., 1989, 86:10029-10033; 및 U.S. 특허 번호 5,585,089, 5,693,761, 5,693,762, 및 6,180,370(이들 각각은 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재된 것들을 포함한다.
4.5. 인간 항체를 제조하는 방법
인간 항체는 예를 들어 형질전환 동물 (예를 들어, 인간화된 마우스)를 사용하여 당업계에서 알려진 다양한 기술에 의해 생성될 수 있다. 참고, 예를 들어, Jakobovits 등, Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A., 1993, 90:2551; Jakobovits 등, Nature, 1993, 362:255-258; Bruggermann 등, Year in Immuno ., 1993, 7:33; 및 U.S. 특허 번호 5,591,669, 5,589,369 및 5,545,807(이들 각각은 전체적으로 참고로 포함되어 있음). 인간 항체는 또한 파아지-디스플레이 라이브러리로부터 유래될 수 있다 (참고 예를 들어, Hoogenboom 등, J. Mol . Biol ., 1991, 227:381-388; Marks 등, J. Mol . Biol ., 1991, 222:581-597; 및 U.S. 특허 번호 5,565,332 및 5,573,905; 이들 각각은 참고로 전체적으로 편입되어 있음). 인간 항체는 또한, 시험관내 활성화된 B 세포에 의해 생성될 수 있다 (참고 예를 들어, U.S. 특허. 번호 5,567,610 및 5,229,275, 이들 각각은 참고로 전체적으로 편입되어 있음). 인간 항체는 또한, 효모 기반 라이브러리로부터 유래될 수 있다 (참고 예를 들어, 미국 특허 번호 8,691,730, 이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음).
4.6. 항체 단편을 제조하는 방법
본 명세서에 제공된 항체 단편은 본 명세서에서 기재된 설명적인 방법 또는 당해 분야에서 알려진 것들을 포함하는 임의의 적합한 방법에 의해 제조될 수 있다. 적합한 방법은 전체 항체의 재조합 기술 및 단백질분해 소화를 포함한다. 항체 단편을 제조하는 설명적인 방법은 예를 들어, Hudson 등, Nat. Med ., 2003, 9:129-134(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다. scFv 항체를 제조하는 방법은 예를 들어,
Figure pct00094
, The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg 및 Moore eds., Springer-Verlag, 신규한 York, pp. 269-315 (1994); WO 93/16185; 및 U.S. 특허 번호 5,571,894 및 5,587,458(이들 각각은 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다.
4.7. 대안적인 스캐폴드를 제조하는 방법
본 명세서에 제공된 대안적인 스캐폴드는 설명적인 본 명세서에서 기재된 방법 또는 당해 분야에서 알려진 것들을 포함하는 임의의 적합한 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, AdnectinsTM을 제조하는 방법은 Emanuel 등, mAbs, 2011, 3:38-48(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다. iMabs를 제조하는 방법은 U.S. 특허 공개 번호 2003/0215914(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다. Anticalins®을 제조하는 방법은 Vogt 및 Skerra, Chem . Biochem., 2004, 5:191-199(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다. 쿠니츠 도메인을 제조하는 방법은 Wagner 등, Biochem . & Biophys . Res. Comm., 1992, 186:118-1145(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다. 티오레독신 펩타이드 압타머를 제조하는 방법은 Geyer 및 Brent, Meth . Enzymol., 2000, 328:171-208(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에서 제공된다. 아피바디를 제조하는 방법은 Fernandez, Curr . Opinion in Biotech., 2004, 15:364-373(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에서 제공된다. DARPins를 제조하는 방법은 Zahnd 등, J. Mol . Biol ., 2007, 369:1015-1028(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에서 제공된다. 아필린을 제조하는 방법은 Ebersbach 등, J. Mol. Biol ., 2007, 372:172-185(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에서 제공된다. 테트라넥틴을 제조하는 방법은 Graversen 등, J. Biol . Chem ., 2000, 275:37390-37396(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에서 제공된다. 아비머를 제조하는 방법은 Silverman 등, Nature Biotech., 2005, 23:1556-1561(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에서 제공된다. 파미노머를 제조하는 방법은 Silacci 등, J. Biol . Chem ., 2014, 289:14392-14398(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에서 제공된다.
대안적인 스캐폴드에 대한 추가 정보는 Binz 등, Nat. Biotechnol ., 2005 23:1257-1268; 및 Skerra, Current Opin . in Biotech., 2007 18:295-304(이들 각각은 참고로 전체적으로 편입되어 있음)에서 제공된다.
4.8. 다중특이적 항체를 제조하는 방법
본 명세서에 제공된 다중특이적 항체는 본 명세서에서 기재된 설명적인 방법 또는 당해 분야에서 알려진 것들을 포함하는 임의의 적합한 방법에 의해 제조될 수 있다. 공통 경쇄 항체를 제조하는 방법은 Merchant 등, Nature Biotechnol ., 1998, 16:677-681(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다. 4가 이중특이적 항체를 제조하는 방법은 Coloma 및 Morrison, Nature Biotechnol ., 1997, 15:159-163(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다. 하이브리드 면역글로불린을 제조하는 방법은 Milstein 및 Cuello, Nature, 1983, 305:537-540; 및 Staerz 및 Bevan, Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 1986, 83:1453-1457(이들 각각은 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다. 놉-인투-홀 변형을 갖는 면역글로불린을 제조하는 방법은 미국 특허 번호 5,731,168(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다. 정전 변형을 갖는 면역글로불린을 제조하는 방법은 WO 2009/089004(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에서 제공된다. 이중특이적 단일 사슬 항체를 제조하는 방법은 Traunecker 등, EMBO J., 1991, 10:3655-3659; 및 Gruber 등, J. Immunol ., 1994, 152:5368-5374(이들 각각은 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다. 링커 길이가 변할 수 있는 단일-사슬 항체를 제조하는 방법은 U.S. 특허 번호 4,946,778 및 5,132,405(이들 각각은 참고로 전체적으로 편입되어 있음)에 기재되어 있다. 디아바디를 제조하는 방법은 Hollinger 등, Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 1993, 90:6444-6448(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다. 트리아바디 및 테트라바디를 제조하는 방법은 Todorovska 등, J. Immunol . Methods, 2001, 248:47-66(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다. 삼중특이적 F(ab')3 유도체를 제조하는 방법은 Tutt 등 J. Immunol ., 1991, 147:60-69(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다. 가교결합된 항체를 제조하는 방법은 미국 특허 번호 4,676,980; Brennan 등, Science, 1985, 229:81-83; Staerz, 등 Nature, 1985, 314:628-631; 및 EP 0453082(이들 각각은 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다. 류신 지퍼에 의해 조립된 항원-결합 도메인을 제조하는 방법은 Kostelny 등, J. Immunol., 1992, 148:1547-1553(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다. DNL 접근법을 통해 항체를 제조하는 방법은 U.S. 특허 번호 7,521,056; 7,550,143; 7,534,866; 및 7,527,787(이들 각각은 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다. 항체 및 비-항체 분자의 하이브리드를 제조하는 방법은 예를 들어 그와 같은 항체의 전체적으로 참고로 포함되어 있는 WO 93/08829에 기재되어 있다. DAF 항체를 제조하는 방법은 U.S. 특허 공개 번호 2008/0069820(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다. 환원 및 산화를 통해 항체를 제조하는 방법은 Carlring 등, PLoS One, 2011, 6:e22533(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다. DVD-IgsTM를 제조하는 방법은 미국 특허 번호 7,612,181(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다. DARTsTM를 제조하는 방법은 Moore 등, Blood, 2011, 117:454-451(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다. DuoBodies®를 제조하는 방법은 Labrijn 등, Proc . Natl. Acad . Sci . USA, 2013, 110:5145-5150; Gramer 등, mAbs, 2013, 5:962-972; 및 Labrijn 등, Nature Protocols, 2014, 9:2450-2463(이들 각각은 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다. IgG로부터 CH3의 C-말단에 융합된 scFv를 포함하는 항체를 제조하는 방법은 Coloma 및 Morrison, Nature Biotechnol ., 1997, 15:159-163(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다. Fab 분자가 면역글로불린의 불변 영역에 부착된 항체를 제조하는 방법은 Miler 등, J. Immunol., 2003, 170:4854-4861(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다. CovX-Bodies를 제조하는 방법은 Doppalapudi 등, Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 2010, 107:22611-22616(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다. Fcab 항체를 제조하는 방법은 Wozniak-Knopp 등, Protein Eng . Des. Sel ., 2010, 23:289-297(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다. TandAb® 항체를 제조하는 방법은 Kipriyanov 등, J. Mol . Biol ., 1999, 293:41-56 및 Zhukovsky 등, Blood, 2013, 122:5116(이들 각각은 참고로 전체적으로 편입되어 있음)에 기재되어 있다. 탠덤 Fab를 제조하는 방법은 WO 2015/103072(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다. ZybodiesTM를 제조하는 방법은 LaFleur 등, mAbs, 2013, 5:208-218(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다.
4.9. 변이체를 제조하는 방법
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는, 예를 들어, 파아지 디스플레이 기반 친화도 성숙화 기술을 사용하여, 생성될 수 있는, 모체 항체의 친화도 성숙된 변이체이다. 간단히, 하나 이상의 CDR 잔기는 돌연변이될 수 있고, 파아지 상에 표시된 그리고 친화도로 스크리닝된, 변이체 항체, 또는 그것의 부분일 수 있다. 그와 같은 변경은 CDR "핫스팟", 또는 체세포 성숙화 과정 동안 고주파수로 돌연변이를 겪는 코돈에 의해 인코딩된 잔기 (참고 Chowdhury, Methods Mol . Biol ., 2008, 207:179-196, 이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음), 및/또는 항원을 접촉시키는 잔기에서 제조될 수 있다.
오류유발 PCR, 사슬 셔플링, 및 올리고뉴클레오타이드-지향된 돌연변이유발 예컨대 트리뉴클레오타이드-지향된 돌연변이유발 (TRIM)을 포함하는, 임의의 적합한 방법은 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열(들)에 가변성을 도입하는데 사용될 수 있다. 일부 양태에서, 몇 개의 CDR 잔기 (예를 들어, 한번에 4-6개의 잔기)는 무작위화된다. 항원 결합에 관여된 CDR 잔기는, 예를 들어, 알라닌 스캐닝 돌연변이유발 또는 모델링을 사용하여, 특이적으로 확인될 수 있다. CDR-H3 및 CDR-L3은 특히 돌연변이용으로 종종 표적화된다.
가변 영역 및/또는 CDR에 다양성의 도입은 이차 라이브러리를 생산하는데 사용될 수 있다. 이차 라이브러리는 그 다음 개선된 친화도를 가진 항체 변이체를 확인하기 위해 스크리닝된다. 이차 라이브러리로부터 작제 및 재선택에 의한 친화도 성숙화는, 예를 들어, Hoogenboom 등, Methods in Molecular Biology, 2001, 178:1-37(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 왔다.
4.10. 벡터, 숙주세포, 및 재조합 방법
또한 TF 항체를 인코딩하는 핵산, 상기 핵산을 포함하는 벡터, 및 상기 벡터 및 핵산을 포함하는 숙주세포, 뿐만 아니라 항체의 생산을 위한 재조합 기술이 제공된다.
항체의 재조합 생산에 대해, 상기 항체를 인코딩하는 핵산(들)은 단리되고 추가 클로닝 (즉, DNA의 증폭) 또는 발현을 위해 복제가능 벡터에 삽입될 수 있다. 일부 양태에서, 핵산은, 예를 들어 미국 특허 번호 5,204,244(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재된 바와 같이 상동 재조합에 의해 생산될 수 있다.
많은 상이한 벡터는 당해 기술에 공지되어 있다. 벡터 구성요소는 일반적으로 신호 서열, 복제의 기원, 하나 이상의 마커 유전자, 인핸서 요소, 프로모터, 및 전사 종결 서열 중 하나 이상을 포함하고, 예를 들어 전체적으로 참고로 포함되어 있는 미국 특허 번호 5,534,615에 기재되어 있다.
적합한 숙주세포의 예시는 아래에 제공된다. 이들 숙주세포는 제한하는 것을 의미하지는 않고, 임의의 적합한 숙주세포는 본 명세서에 제공된 항체를 생성하기 위해 사용될 수 있다.
적합한 숙주세포는 임의의 원핵 (예를 들어, 박테리아), 하등 진핵 (예를 들어, 효모), 또는 고등 진핵 (예를 들어, 포유동물) 세포를 포함한다. 적합한 원핵생물은 진정박테리아, 예컨대 그램-음성 또는 그램-양성 유기체, 예를 들어, 엔테로박테리아세아에 예컨대 에스케리치아 (대장균), 엔테로박터, 어위니아, 클렙시엘라, 프로테우스, 살모넬라 (S. 타이피뮤리움), 세라티아 (S. 마르체칸스), 시겔라, 바실러스 (B. 서브틸리스 및 B. 리케니포르미스), 슈도모나스 (P. 에어루기노사), 및 스트렙토마이세스를 포함한다. 하나의 유용한 대장균 클로닝 숙주는 대장균 294이지만, 다른 균주 예컨대 대장균 B, 대장균 X1776, 및 대장균 W3110이 또한 적합하다.
원핵생물 외에, 진핵 미생물 예컨대 사상균 또는 효모는 또한 TF 항체-인코딩 벡터에 대한 적합한 클로닝 또는 발현 숙주이다. 사카로마이세스 세레비지애, 또는 일반적인 제빵사의 효모는 통상적으로 사용된 하등 진핵생물 숙주 미생물이다. 그러나, 수많은 다른 속, 종, 및 균주는 이용가능하고, 유용하고, 그 예는 쉬조사카로마이세스 폼베, 클루이베로마이세스 (K. 락티스, K. 프라길리스 , K. 불가리쿠스 K. 위케라밀, K. 왈티이, K. 드로소필라룸, K. 써모톨레란스, 및 K. 막시아누스), 야로위아, 피치아 패스토리스, 칸디다 (C. 알비칸스), 트리코데르마 레시아, 뉴로스포라 크라싸, 쉬완니오마이세스 (S. 옥시덴탈리스), 및 사상균 예컨대, 예를 들어 펜니실리움, 톨리포클라디움, 및 아스페르길루스 (A. 니둘란스 및 A. 니제르)이다.
유용한 포유동물 숙주세포는 COS-7 세포, HEK293 세포, 어린 햄스터 신장 (BHK) 세포, 차이니즈 햄스터 난소 (CHO), 마우스 세르톨리 세포, 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포 (VERO-76), 및 기타 동종의 것을 포함한다.
본 발명의 TF 항체를 생성하기 위해 사용된 숙주세포는 다양한 배지에서 배양될 수 있다. 예를 들어, Ham's F10, 최소 필수 배지 (MEM), RPMI-1640, 및 둘베코 변형 이글 배지 (DMEM)와 같은 상업적으로 이용가능한 배지는 숙주세포를 배양하는데 적합하다. 또한, Ham 등, Meth . Enz ., 1979, 58:44; Barnes 등, Anal. Biochem., 1980, 102:255; 및 U.S. 특허 번호 4,767,704, 4,657,866, 4,927,762, 4,560,655, 및 5,122,469; 또는 WO 90/03430 및 WO 87/00195에 기재된 배지 중 임의의 것이 사용될 수 있다. 각각의 전술한 참조문헌은 참고로 전체적으로 편입되어 있다.
임의의 이들 배지는 호르몬 및/또는 다른 성장 인자 (예컨대 인슐린, 트랜스페린, 또는 표피 성장 인자), 염 (예컨대 염화나트륨, 칼슘, 마그네슘, 및 포스페이트), 완충액 (예컨대 HEPES), 뉴클레오타이드 (예컨대 아데노신 및 티미딘), 항생제, (마이크로몰 범위에서 최종 농도로 일반적으로 존재하는 무기 화합물로서 정의된) 미량 원소, 및 글루코스 또는 등가 에너지 공급원으로 필요에 따라 보충될 수 있다. 임의의 다른 필요한 보충물은 또한 당해 분야의 숙련가에게 알려진 적절한 농도로 포함될 수 있다.
배양 조건, 예컨대 온도, pH, 및 기타 동종의 것은 발현용으로 선택된 숙주세포와 이전에 사용된 것들이고, 당업자에 명백할 것이다.
재조합 기술을 사용하는 경우, 항체는, 주변세포질 공간에서, 세포내로 생산될 수 있거나, 배지에 직접적으로 분비될 수 있다. 항체가 세포내로 생산되면, 제1 단계로서, 미립자 잔해, 어느 한쪽 숙주세포 또는 용해된 단편은, 예를 들어, 원심분리 또는 한외여과에 의해 제거된다. 예를 들어, Carter 등 (Bio/Technology, 1992, 10:163-167, 이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)은 대장균의 주변세포질 공간에 분비되는 항체의 단리 절차를 기재한다. 간단히, 세포 페이스트는 약 30분에 걸쳐 아세트산나트륨 (pH 3.5), EDTA, 및 페닐메틸설포닐플루오라이드 (PMSF)의 존재 하에서 해동된다. 세포 잔해는 원심분리로 제거될 수 있다.
일부 구현예에서, 항체는 무세포 시스템에서 생산된다. 일부 양태에서, 무세포 시스템은 Yin 등, mAbs, 2012, 4:217-225(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에서 기재된 바와 같이 시험관내 전사 및 번역 시스템이다. 일부 양태에서, 무세포 시스템은 진핵 세포로부터 또는 원핵 세포로부터 무세포 추출물을 이용한다. 일부 양태에서, 원핵 세포는 대장균이다. 항체의 무세포 발현은, 예를 들어, 항체가 불용성 응집물로서 세포에서 축적하는 경우, 또는 주변세포질 발현으로부터 수율이 낮은 경우 유용할 수 있다.
항체가 배지에 분비되는 경우, 그와 같은 발현 시스템으로부터의 상청액은 상업적으로 이용가능한 단백질 농축 필터, 예를 들어, Amicon® 또는 Millipore® Pellcon® 한외여과 장치를 사용하여 일반적으로 먼저 농축된다. 프로테아제 억제제 예컨대 PMSF는 단백질분해를 억제하기 위해 임의의 전술한 단계들에 포함될 수 있고 항생제는 외래 오염물질의 성장을 예방하기 위해 포함될 수 있다.
세포로부터 제조된 항체 조성물은, 예를 들어, 하이드록실인회석 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석, 및 친화성 크로마토그래피를 사용하여 정제될 수 있고, 친화성 크로마토그래피는 특히 유용한 정제 기술이다. 친화도 리간드로서 단백질 A의 적합성은 항체에서 존재하는 임의의 면역글로불린 Fc 도메인의 이소타입 및 종에 좌우된다. 단백질 A는 인간 γ1, γ2, 또는 γ4 중쇄를 포함하는 항체를 정제하는데 사용될 수 있다 (Lindmark 등, J. Immunol . Meth ., 1983, 62:1-13, 이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음). 단백질 G는 모든 마우스 이소타입에 그리고 인간 γ3에 유용하다 (Guss 등, EMBO J., 1986, 5:1567-1575, 이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음).
친화도 리간드가 부착되는 매트릭스는 가장 자주 아가로스이지만, 다른 매트릭스는 이용가능하다. 기계적으로 안정한 매트릭스 예컨대 제어된 기공 유리 또는 폴리(스티렌디비닐)벤젠은 아가로스로 달성될 수 있는 것보다 더 빠른 유량 및 더 짧은 처리 시간을 허용한다. 항체가 CH3 도메인을 포함하는 경우, BakerBond ABX® 수지는 정제에 유용하다.
다른 단백질 정제 기술, 예컨대 이온교환 칼럼상의 분별화, 에탄올 침전, 역상 HPLC, 실리카상의 크로마토그래피, 헤파린 Sepharose®상의 크로마토그래피, 크로마토포커싱, SDS-PAGE, 및 황산암모늄 침전은 또한 이용가능하고, 당해 분야의 숙련가에 의해 적용될 수 있다.
임의의 예비 정제 단계(들) 이후, 관심 항체 및 오염물질을 포함하는 혼합물은 저 염 농도 (예를 들어, 약 0 내지 약 0.25 M 염)에서 일반적으로 수행된, 약 2.5 내지 약 4.5의 pH에서 용출 완충액을 사용하여 저 pH 소수성 상호작용 크로마토그래피 처리될 수 있다.
5. 세포독성제
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 ADC는 세포독성제을 포함한다. 본 명세서에 제공된 세포독성제는 당업계에서 알려진 다양한 항종양 또는 항암제를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포독성제는 암 세포의 파괴를 야기한다. 일부 구현예에서, 세포독성제는 암 세포의 성장 또는 증식을 억제한다.
적합한 세포독성제는 항-혈관신생제, 세포자멸유도 제제, 항-유사분열 제제, 항-키나제 제제, 알킬화제, 호르몬, 호르몬 효능제, 호르몬 길항제, 케모카인, 약물, 전구약물, 독소, 효소, 항대사제, 항생제, 알칼로이드, 및 방사성 동위원소를 포함한다.
일부 구현예에서, 세포독성제는 하기 중 적어도 하나를 포함한다: 칼리케아마이신, 캄프토테신, 카보플라틴, 이리노테칸, SN-38, 카보플라틴, 캄프토테칸, 사이클로포스파마이드, 사이타라빈, 다카바진, 도세탁셀, 닥티노마이신, 다우노루비신, 독소루비신, 독소루비신, 에토포시드, 이다루비신, 토포테칸, 빈카 알카로이드, 메이탄시노이드, 메이탄시노이드 유사체, 피롤로벤조디아제핀, 탁소이드, 듀오카르마이신, 돌라스타틴, 아우리스타틴 및 이의 유도체.
특정 구현예에서, 세포독성제는 아우리스타틴 유도체이다. 특정 구현예에서, 아우리스타틴 유도체는 모노메틸 아우리스타틴 E 모이어티(MMAE)이다. 특정 구현예에서, 아우리스타틴 유도체는 모노메틸 아우리스타틴 F(MMAF)이다. 일부 구현예에서, 아우리스타틴 유도체는 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2016/041082에 기재된 아우리스타틴 유도체 중 하나이다. 일부 구현예에서, 아우리스타틴 유도체는 일반 화학식 I의 화합물로부터 유래된 모이어티이다:
Figure pct00095
화학식 I
상기 식에서: X는 *-C(O)NHCH(CH2(R2))-+이고, 여기서 * 및 +는 화학식 I에 나타낸 바와 같은 각각의 부착점을 나타내거나, X는 부재하고; R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00096
Figure pct00097
및
Figure pct00098
여기서 # 및 %는 화학식 I에 나타낸 바와 같은 각각의 부착점을 나타내고; 그리고 R2는 페닐이다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 I의 화합물에서, R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00099
및
Figure pct00100
일부 구현예에서, 일반 화학식 I의 화합물에서, 화합물은 화학식 II로 나타낸다:
Figure pct00101
화학식 II
일부 구현예에서, 일반 화학식 II의 화합물에서, R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00102
및
Figure pct00103
일부 구현예에서, 일반 화학식 II의 화합물에서, R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00104
및
Figure pct00105
일부 구현예에서, 일반 화학식 II의 화합물에서, R1은
Figure pct00106
이다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 I의 화합물에서, 화합물은 화학식 III으로 나타낸다:
Figure pct00107
화학식 III
일부 구현예에서, 화학식 III의 화합물에서, R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00108
및
Figure pct00109
일부 구현예에서, 일반 화학식 III의 화합물에서, R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00110
및
Figure pct00111
일부 구현예에서, 일반 화학식 III의 화합물에서, R1은
Figure pct00112
이다.
특정 구현예에서, 화학식 I의 화합물은 화합물 9이다:
Figure pct00113
화합물 9
본 개시내용의 나머지 전체에 걸쳐 일반 화학식 I의 화합물에 대한 언급은, 다양한 구현예에서 이들 화학식 각각을 개별적으로 인용하는 구현예가 구체적으로 인용되는 정도로 일반 화학식 II 및 일반 화학식 III의 화합물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
일부 구현예에서, 세포독성제는 방사성 동위원소, 금속 킬레이트제, 효소, 형광 화합물, 생물발광 화합물 또는 화학발광 화합물과 같은 진단제이다.
일부 구현예에서, 세포독성제는 세포독성 페이로드 개선된 안전성 프로파일, 예를 들어 XMT-1267 및 문헌[Trail 등, Pharmacol Ther, 2018, 181:126-142]에 기재된 다른 세포독성 페이로드이다.
특정 구현예에서, 본 개시내용의 ADC는 링커(L)를 통해 아우리스타틴 유도체(독소)에 접합된 TF 항체를 포함한다. 특정 구현예에서, ADC는 하기를 포함한다: (a) 인간 조직 인자 (TF)의 세포외 도메인에 결합하는 항원 결합 단백질 (Ab)로서, 상기 Ab는 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3을 포함하고, (i) VH-CDR1은 서열번호: 872를 포함하고, 상기 VH-CDR2는 서열번호: 873을 포함하고, 상기 VH-CDR3은 서열번호: 874를 포함하고, 상기 VL-CDR1은 서열번호: 875를 포함하고, 상기 VL-CDR2는 서열번호: 876을 포함하고, 그리고 상기 VL-CDR3은 서열번호: 877을 포함하고, (ii) VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A3으로 지정된 항체에서 유래하고, (iii) VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A로 지정된 항체에서 유래하고, (iv) VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A5로 지정된 항체에서 유래하고, (v) VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A5-T로 지정된 항체에서 유래하거나, 또는 (vi) VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25G1로 지정된 항체에서 유래하는, 항원 결합 단백질 (Ab); 그리고 (b) 하기 화학식 IV로 나타낸 하나 이상의 링커-독소 모이어티:
Figure pct00114
화학식 IV
상기 식에서: X는 *-C(O)NHCH(CH2(R2))-+이고, 여기서 * 및 +는 화학식 IV에 나타낸 바와 같은 각각의 부착점을 나타내거나, X는 부재하고; L은 링커이고; !는 Ab에 대한 L의 부착점을 나타내며, 여기서 L은 공유 결합을 통해 Ab에 부착되고; R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00115
Figure pct00116
및
Figure pct00117
여기서 # 및 %는 화학식 IV에 나타낸 바와 같은 각각의 부착점을 나타내고; R2는 페닐이다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 IV의 링커-독소 모이어티에서, X는 부재한다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 IV의 링커-독소 모이어티에서, L은 절단가능한 링커이다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 IV의 링커-독소 모이어티에서, L은 펩타이드 함유 링커이다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 IV의 링커-독소 모이어티는 일반 화학식 V로 표시된다:
Figure pct00118
화학식 V
여기서 R1, L 및 !는 일반 화학식 IV에 대해 상기 정의된 바와 같다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 V의 링커-독소 모이어티에서, R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00119
및
Figure pct00120
일부 구현예에서, 일반 화학식 V의 링커-독소 모이어티에서, R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00121
및
Figure pct00122
일부 구현예에서, 일반 화학식 V의 링커-독소 모이어티에서, R1은
Figure pct00123
이다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 V의 링커-독소 모이어티에서, L은 절단가능한 링커이다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 V의 링커-독소 모이어티에서, L은 펩타이드 함유 링커이다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 V의 링커-독소 모이어티에서, L은 프로테아제 절단가능한 링커이다.
일부 구현예에서, 화학식 IV 또는 화학식 V의 링커-독소 모이어티에서, L은 N-(β-말레이미도프로필옥시)-N-하이드록시석신이미드 에스테르 (BMPS), N-(ε-말레이미도카프로일옥시)석신이미드 에스테르 (EMCS), N-[γ-말레이미도부티릴옥시]석신이미드 에스테르 (GMBS), 1,6-헥산-비스-비닐설폰 (HBVS), 석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카복시-(6-아미도카프로에이트) (LC-SMCC), m-말레이미도벤조일-N-하이드록시석신이미드 에스테르 (MBS), 4-(4-N-말레이미도페닐)부티르산 하이드라자이드 (MPBH), 석신이미딜 3-(브로모아세트아미도)프로피오네이트 (SBAP), 석신이미딜 아이오도아세테이트 (SIA), 석신이미딜 (4-아이오도아세틸)아미노벤조에이트 (SIAB), N-석신이미딜-3-(2-피리딜디티오) 프로피오네이트 (SPDP), N-석신이미딜-4-(2-피리딜티오)펜타노에이트 (SPP), 석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카복실레이트 (SMCC), 석신이미딜 4-(p-말레이미도페닐)부티레이트 (SMPB), 석신이미딜 6-[(β-말레이미도프로피온아미도)헥사노에이트] (SMPH), 이미노티올란 (IT), 설포-EMCS, 설포-GMBS, 설포-KMUS, 설포-MBS, 설포-SIAB, 설포-SMCC, 설포-SMPB, 및 석신이미딜-(4-비닐설폰)벤조에이트 (SVSB) 중 하나로부터 선택된 링커이다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 IV 또는 화학식 V의 링커-독소 모이어티에서, L은 하기 화학식의 폴리(에틸렌)글라이콜 사슬을 포함한다:
Figure pct00124
식 중, g는 1 내지 20의 정수이다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 IV 또는 화학식 V의 링커-독소 모이어티에서, g는 3이다.
또한, 링커가 하기 기재된 바와 같은 일반 화학식 VIII 또는 화학식 IX를 갖는 일반 화학식 IV 또는화학식 V의 링커-독소에 접합된 TF 항체를 포함하는 ADC가 본 명세서에서 고려된다.
특정 구현예에서, 링커(L)를 통해 아우리스타틴 유도체(독소)에 접합된 조직 인자(TF) 항체를 포함하는 본 개시내용의 ADC는 하기 화학식 VI를 갖는다:
Figure pct00125
화학식 VI
상기 식에서: Ab는 TF 항체를 나타내고; n은 1 이상의 정수이고; X는 *-C(O)NHCH(CH2(R2))-+이고, 여기서 * 및 +는 화학식 VI에 나타낸 바와 같은 각각의 부착점을 나타내거나, X는 부재하고; L은 링커이고, 여기서 L은 공유 결합을 통해 Ab에 부착되고; R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00126
Figure pct00127
및
Figure pct00128
여기서 # 및 %는 화학식 VI에 나타낸 바와 같은 각각의 부착점을 나타내고; 그리고 R2는 페닐이다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 VI의 ADC에서, n은 1 내지 10의 정수이다. 일부 구현예에서, 일반 화학식 VI의 ADC에서, n은 1, 2, 3, 4 및 5로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이다. 일부 구현예에서, 일반 화학식 VI의 ADC에서, n은 2, 3, 및 4로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 VI의 ADC에서, R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00129
및
Figure pct00130
일부 구현예에서, 일반 화학식 VI의 ADC에서, X는 부재한다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 VI의 ADC에서, R1은
Figure pct00131
Figure pct00132
로 이루어진 군으로부터 선택되고, 그리고 X는 부재한다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 VI의 ADC에서, R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00133
및
Figure pct00134
일부 구현예에서, 일반 화학식 VI의 ADC에서, R1은
Figure pct00135
및
Figure pct00136
로 이루어진 군으로부터 선택되고, 그리고 X는 부재한다.
일부 구체예에서, 일반 화학식 VI의 ADC에서, R1은
Figure pct00137
이다.
일부 구체예에서, 일반 화학식 VI의 ADC에서, R1은
Figure pct00138
이고, 그리고 X는 부재한다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 VI의 ADC에서, L은 절단가능한 링커이다. 일부 구현예에서, 일반 화학식 VI의 ADC에서, L은 펩타이드 함유 링커이다. 일부 구현예에서, 일반 화학식 VI의 ADC에서, L은 프로테아제 절단가능한 링커이다. 일부 구현예에서, 일반 화학식 VI의 ADC에서, L은 N-(β-말레이미도프로필옥시)-N-하이드록시석신이미드 에스테르 (BMPS), N-(ε-말레이미도카프로일옥시)석신이미드 에스테르 (EMCS), N-[γ-말레이미도부티릴옥시]석신이미드 에스테르 (GMBS), 1,6-헥산-비스-비닐설폰 (HBVS), 석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카복시-(6-아미도카프로에이트) (LC-SMCC), m-말레이미도벤조일-N-하이드록시석신이미드 에스테르 (MBS), 4-(4-N-말레이미도페닐)부티르산 하이드라자이드 (MPBH), 석신이미딜 3-(브로모아세트아미도)프로피오네이트 (SBAP), 석신이미딜 아이오도아세테이트 (SIA), 석신이미딜 (4-아이오도아세틸)아미노벤조에이트 (SIAB), N-석신이미딜-3-(2-피리딜디티오) 프로피오네이트 (SPDP), N-석신이미딜-4-(2-피리딜티오)펜타노에이트 (SPP), 석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카복실레이트 (SMCC), 석신이미딜 4-(p-말레이미도페닐)부티레이트 (SMPB), 석신이미딜 6-[(β-말레이미도프로피온아미도)헥사노에이트] (SMPH), 이미노티올란 (IT), 설포-EMCS, 설포-GMBS, 설포-KMUS, 설포-MBS, 설포-SIAB, 설포-SMCC, 설포-SMPB 및 석신이미딜-(4-비닐설폰)벤조에이트 (SVSB) 중 하나로부터 선택된 링커이다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 VI의 ADC에서, L은 하기 화학식의 폴리(에틸렌)글라이콜 사슬을 포함한다:
Figure pct00139
식 중, g는 1 내지 20의 정수이다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 VI의 ADC에서, g는 3이다.
일반 화학식 VI의 ADC의 특정 구현예에서, L은 일반 화학식 VII의 링커로 표시된다:
Figure pct00140
화학식 VII
상기 식에서: Z는 TF 항체의 표적 기(예를 들어, 시스테인의 티올 또는 라이신 그룹의 일차 아민)에 결합하는 작용기를 나타내고; D는 화학식 VI으로 표시된 바와 같이 아미노 기에 대한 부착점을 나타내고; Str은 스트레처이고; AA1 및 AA2 각각은 독립적으로 아미노산이고, AA1-[AA2]m은 프로테아제 절단 부위를 형성하고; X1은 자기 희생성 기이고; s는 0 및 1로부터 선택된 정수이고; m은 1, 2, 3, 및 4로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이고; 그리고 o는 0, 1, 및 2로부터 선택된 정수이다
일부 구현예에서, 일반 화학식 VI의 ADC에서, L은 일반 화학식 VII의 링커이고, [Str]s는 알킬렌, 지방족 산을 기반으로 하는 스트레처, 지방족 이산을 기반으로 하는 스트레처, 지방족 아민을 기반으로 하는 스트레처 및 지방족 디아민을 기반으로 하는 스트레처로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 VI의 ADC에서, L은 일반 화학식 VII의 링커이고, [Str]s는 디글라이콜레이트계 스트레처, 말로네이트계 스트레처, 카프로에이트계 스트레처 및 카프로아미드계 스트레처로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 VI의 ADC에서, L은 일반 화학식 VII의 링커이고, [Str]s는 글리신계 스트레처, 폴리에틸렌 글라이콜계 스트레처, 및 모노메톡시 폴리에틸렌 글라이콜계 스트레처로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 VI의 ADC에서, L은 일반 화학식 VII의 링커이고, [Str]s은 하기이다:
Figure pct00141
여기서 1 내지 20의 정수이고, CC는 AA1에 대한 부착점을 지칭하고; 그리고 DD는 Z에 대한 부착점을 지칭한다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 VI의 ADC에서, L은 일반 화학식 VII의 링커이고, [Str]s은 하기로부터 선택된다:
Figure pct00142
Figure pct00143
및
Figure pct00144
상기 식에서: EE 및 FF는 각각 Z 및 AA1에 대한 부착점을 나타내고; R는 수소 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고; p의 각 경우는 독립적으로 2 내지 10의 정수이고; 그리고 q의 각 경우는 독립적으로 1 내지 10의 정수이다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 VI의 ADC에서, L은 일반 화학식 VII의 링커이고, [Str]s는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00145
및
Figure pct00146
상기 식에서: EE 및 FF는 각각 Z 및 AA1에 대한 부착점을 나타내고; p의 각 경우는 독립적으로 2 내지 10의 정수이고; 그리고 q의 각 경우는 독립적으로 1 내지 10의 정수이다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 VI의 ADC에서, L은 일반 화학식 VII의 링커이고, [Str]s은 하기로부터 선택된다:
Figure pct00147
및
Figure pct00148
상기 식에서: EE 및 FF는 각각 Z 및 AA1에 대한 부착점을 나타내고; p의 각 경우는 독립적으로 2 내지 6의 정수이고, 그리고 q는 2 내지 8의 정수이다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 VI의 ADC에서, L은 일반 화학식 VII의 링커이고, AA1-[AA2]m은 Val-Lys, Ala-Lys, Phe-Lys, Val-Cit, Phe-Cit, Leu-Cit, Ile-Cit, Trp-Cit, Phe-Arg, Ala-Phe, Val-Ala, Met-Lys, Asn-Lys, Ile-Pro, Ile-Val, Asp-Val, His-Val, Met-(D)Lys, Asn-(D)Lys, Val-(D)Asp, NorVal-(D)Asp, Ala-(D)Asp, Me3Lys-Pro, 페닐Gly-(D)Lys, Met-(D)Lys, Asn-(D)Lys, Pro-(D)Lys, Met-(D)Lys, Met-Cit-Val, Gly-Cit-Val, (D)Phe-Phe-Lys, (D)Ala-Phe-Lys, Gly-Phe-Leu-Gly, 및 Ala-Leu-Ala-Leu로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 VI의 ADC에서, L은 일반 화학식 VII의 링커이고, S는 1이다:
일부 구현예에서, 일반 화학식 VI의 ADC에서, L은 일반 화학식 VII의 링커이고, o는 0이다:
일부 구현예에서, 일반 화학식 VI의 ADC에서, L은 일반 화학식 VII의 링커이고, m은 1, 2 및 3으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 VI의 ADC에서, L은 일반 화학식 VII의 링커이고, m은 1이다:
일부 구현예에서, 일반 화학식 VI의 ADC에서, L은 일반 화학식 VII의 링커이고, AA1-[AA2]m은 Val-Lys, Ala-Lys, Phe-Lys, Val-Cit, Phe-Cit, Leu-Cit, Ile-Cit 및 Trp-Cit로부터 선택된 디펩타이드이다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 VI의 ADC에서, L은 일반 화학식 VII의 링커이고, 각각의 X1은 p-아미노벤질옥시카보닐 (PABC), p-아미노벤질 에테르 (PABE) 및 메틸화된 에틸렌 디아민 (MED)로부터 독립적으로 선택된다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 VI의 ADC에서, L은 일반 화학식 VII의 링커이고, 그리고 [Str]s은 하기이다:
Figure pct00149
s는 1이고 h는 3이다.
특정 구현예에서, ADC는 하기 화학식 VIII의 구조를 갖는 링커-독소 모이어티를 포함한다:
Figure pct00150
화학식 VIII
여기서 ##는 TF 항체에 대한 링커-독소 모이어티의 부착점을 나타내고 링커-독소 모이어티는 공유결합을 통해 TF 항체에 부착된다.
일부 구현예에서, 하기 화학식 IX의 항체-약물 접합체가 본 명세서에 제공된다:
Figure pct00151
화학식 IX
상기 식에서:
Ab는 조직 인자(TF) 항체이고, n은 1 이상의 정수이다. 일부 구현예에서, 화학식 IX의 ADC에서, n은 1 내지 10의 정수이다. 화학식 IX의 ADC의 일부 구현예에서, n은 1, 2, 3, 4 및 5로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 화학식 IX의 ADC에서, n은 2, 3 및 4로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이다. 일부 구현예에서, 화학식 IX의 ADC에서, 석신이미딜 기는 공유 결합을 통해 Ab에 부착된다.
화학식 IX의 ADC의 일부 구현예에서, Ab는 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3을 포함하고, 여기서
i. VH-CDR1은 서열번호: 872를 포함하고, 상기 VH-CDR2는 서열번호: 873을 포함하고, 상기 VH-CDR3은 서열번호: 874를 포함하고, 상기 VL-CDR1은 서열번호: 875를 포함하고, 상기 VL-CDR2는 서열번호: 876을 포함하고, 그리고 상기 VL-CDR3은 서열번호: 877을 포함하고,
ii. VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A3으로 지정된 항체에서 유래하고,
iii. VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A로 지정된 항체에서 유래하고,
iv. VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A5로 지정된 항체에서 유래하고,
v. VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A5-T로 지정된 항체에서 유래하거나, 또는
vi. VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25G1로 지정된 항체에서 유래하고, n은 1 이상의 정수이다.
화학식 IX의 ADC의 일부 구현예에서, Ab는 25A3으로 지정된 항체로부터의 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3을 포함한다.
구현예에서, 본 명세서에 기재된 ADC은 하기를 포함하는 항체를 포함한다:
하기인 전체 중쇄 서열: QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDx[V/A]YGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYx[N/S]GNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 및
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구현예에서, 본 명세서에 기재된 ADC은 하기를 포함하는 항체를 포함한다:
하기인 중쇄 서열:
Figure pct00152
Figure pct00153
및
하기인 경쇄 서열:
Figure pct00154
한 구현예에서, 항체(Ab) 및 하기 화학식 VIII의 구조의 하나 이상의 링커-독소를 포함하는 항체-약물 접합체가 본 명세서에 기재된다:
Figure pct00155
화학식 VIII
상기 식에서: Ab는 조직 인자 (TF) 항체이고, Ab는 25A3으로 지정된 항체로부터의 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3을 포함하고; 하나 이상의 링커-독소는 공유 결합을 통해 Ab에 부착되고; 그리고 ##는 Ab에 대한 링커-독소의 부착점을 나타낸다.
일부 구현예에서, 항체(Ab) 및 화학식 VIII의 하나 이상의 링커-독소를 포함하는 ADC를 포함하는 조성물이 본 명세서에 제공된다. 구현예에서, 조성물은 다수의 약물-항체 비(DAR) 종을 포함한다. 일부 구현예에서, 조성물의 평균 DAR은 2 내지 4이다.
한 구현예에서, 항체(Ab) 및 하기 화학식 VIII의 구조의 하나 이상의 링커-독소를 포함하는 항체-약물 접합체가 본 명세서에 제공된다:
Figure pct00156
상기 식에서:
Ab는 조직 인자 (TF) 항체이고, Ab는,
하기인 중쇄 서열:
Figure pct00157
Figure pct00158
및
하기인 경쇄 서열:
Figure pct00159
Figure pct00160
을 포함하고, 하나 이상의 링커-독소는 공유 결합을 통해 Ab에 부착되고; 그리고 ##는 Ab에 대한 링커-독소의 부착점을 나타낸다.
또 다른 구현예에서, 본 개시내용의 ADC를 포함하는 항체-약물 접합체 조성물이 본 명세서에 기재되고, 여기서 조성물은 다수의 약물-항체 비(DAR) 종을 포함하고, 여기서 조성물의 평균 DAR은 2 내지 4이다.
링커
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 ADC는 링커를 포함한다. 일부 구현예에서, 비결합 링커는 2개의 반응성 말단: 항체 접합 반응성 말단 및 세포독성제 접합 반응성 말단을 포함한다. 예를 들어, 링커는 항체 상의 시스테인 티올 또는 라이신 아민 기를 통해 항체에 접합될 수 있으며, 이 경우 항체 접합 반응성 말단은 전형적으로 티올-반응성 기 예컨대 이중 결합, 이탈기 예컨대 클로로, 브로모 또는 아이오도, R-설파닐 기 또는 설포닐 그룹, 또는 아민-반응성 기 예컨대 카복실 기이다. 링커의 세포독성제 접합 반응성 말단은 예를 들어 세포독소 상의 염기성 아민 또는 카복실 기와 아미드 결합의 형성을 통해 세포독성제에 접합될 수 있다.
일부 구현예에서, 링커는 비-절단 가능한 링커이다. 일부 구현예에서, 링커는 절단 가능한 링커이다. 일부 구현예에서, 세포독성제는 세포에서 ADC로부터 방출된다.
ADC의 적합한 링커는 불안정한 링커, 산 불안정한 링커 (예를 들어, 하이드라존 링커), 광불안정적인 링커, 하전된 링커, 디설파이드-함유 링커, 펩티다아제-민감한 링커 (예를 들어, 아미노산을 포함하는 펩타이드 링터, 예를 들어, 발린 및/또는 시트룰린 예컨대 시트룰린-발린 또는 페닐알라닌-라이신), β-글루쿠로나이드-링커 (참고 예를 들어, Graaf 등, Curr Pharm Des, 2002, 8:1391-1403), 디메틸 링커 (참고 예를 들어, Chari 등, Cancer Research, 1992, 52:127-131; 미국 특허 번호 5,208,020), 티오-에테르 링커, 또는 친수성 링커 (참고 예를 들어, Kovtun 등, Cancer Res., 2010, 70:2528-2537)를 포함한다.
다른 링커는 항체, 예컨대 ThioBridgeTM 링커 (Badescu 등, Bioconjug. Chem., 25:1124-1136 (2014)), 디티오말레이미드 (DTM) 링커 (Behrens 등, Mol. Pharm., 12:3986-3998 (2015)), 디티오아릴(TCEP)피리다진디온 기초 링커 (Lee 등, Chem. Sci., 7:799-802 (2016)), 디브로모피리다진디온 기초 링커 (Maruani 등, Nat. Commun., 6:6645 (2015)) 및 당업계에서 알려진 기타에 대한 2개의 사슬간 시스테인의 브릿징을 허용하는 작용기를 갖는 것들이다.
링커는 하나 이상의 링커 성분을 포함할 수 있다. 전형적으로, 링커는 2개 이상의 링커 성분을 포함할 것이다. 예시적인 링커 성분은 항체와 반응하기 위한 작용기, 독소와 반응하기 위한 작용기, 스트레처, 펩타이드 성분, 자기 희생성 기, 자기 제거 기, 친수성 모이어티 등을 포함한다. 다양한 링커 성분이 당업계에 공지되어 있으며, 그 중 일부가 하기에 기술되어 있다.　
특정 유용한 링커 성분은 다양한 상업적 공급원, 예컨대 Pierce Biotechnology, Inc. (지금 Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA) 및 분자 Biosciences Inc. (Boulder, Colo.)으로부터 수득될 수 있고, 또는 당업계 (예를 들어 Toki 등, J. Org. Chem., 67:1866-1872 (2002); Dubowchik, 등, Tetrahedron Letters, 38:5257-60 (1997); Walker, M. A., J. Org. Chem., 60:5352-5355 (1995); Frisch, 등, Bioconjugate Chem., 7:180-186 (1996); 미국 특허 제6,214,345호 및 제7,553,816호, 및 국제 측허 출원 공개 번호 WO 02/088172를 참조한다)에 기재된 절차에 따라 합성될 수 있다. 　
링커 성분의 예는 N-(β-말레이미도프로필옥시)-N-하이드록시석신이미드 에스테르 (BMPS), N-(ε-말레이미도카프로일옥시)석신이미드 에스테르 (EMCS), N-[γ-말레이미도부티릴옥시]석신이미드 에스테르 (GMBS), 1,6-헥산-비스-비닐설폰 (HBVS), 석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카복시-(6-아미도카프로에이트) (LC-SMCC), m-말레이미도벤조일-N-하이드록시석신이미드 에스테르 (MBS), 4-(4-N-말레이미도페닐)부티르산 하이드라자이드 (MPBH), 석신이미딜 3-(브로모아세트아미도)프로피오네이트 (SBAP), 석신이미딜 아이오도아세테이트 (SIA), 석신이미딜 (4-아이오도아세틸)아미노벤조에이트 (SIAB), N-석신이미딜-3-(2-피리딜디티오) 프로피오네이트 (SPDP), N-석신이미딜-4-(2-피리딜티오)펜타노에이트 (SPP), 석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카복실레이트 (SMCC), 석신이미딜 4-(p-말레이미도페닐)부티레이트 (SMPB), 석신이미딜 6-[(β-말레이미도프로피온아미도)헥사노에이트] (SMPH), 이미노티올란 (IT), 설포-EMCS, 설포-GMBS, 설포-KMUS, 설포-MBS, 설포-SIAB, 설포-SMCC, 설포-SMPB 및 석신이미딜-(4-비닐설폰)벤조에이트 (SVSB)을 포함하지만 이에 국한되지 않는다.
추가 예는 비스-말레이미드 시약 예컨대 디티오비스말레이미도에탄 (DTME), 비스-말레이미도-트리옥시에틸렌 글라이콜 (BMPEO), 1,4-비스말레이미도부탄 (BMB), 1,4 비스말레이미딜-2,3-디하이드록시부탄 (BMDB), 비스말레이미도헥산 (BMH), 비스말레이미도에탄 (BMOE), BM(PEG)2 및 BM(PEG)3; 이미도에스테르의 이중작용성 유도체 (예컨대 디메틸 아디프이미데이트 HCl), 활성 에스테르 (예컨대 디석신이미딜 우베레이트), 알데하이드 (예컨대 글루타르알데하이드), 비스-아지도 화합물 (예컨대 비스 (p-아지도벤조일) 헥산디아민), 비스-디아조늄 유도체 (예컨대 비스-(p-디아조늄벤조일)-에틸렌디아민), 디이소시아네이트 (예컨대 톨루엔 2,6-디이소시아네이트) 및 비스-활성 불소 화합물 (예컨대 1,5-디플루오로-2,4-디니트로벤젠)을 포함한다.
특정 구현예에서, 링커는 하기 화학식의 폴리(에틸렌)글라이콜 사슬을 포함한다:
Figure pct00161
식 중, g는 1 내지 20의 정수이다. 일부 구현예에서, g는 3이다.
특정 구현예에서, 링커는 2개 이상의 아미노산을 포함하고 세포내 프로테아제, 예컨대 리소솜 프로테아제 또는 엔도좀 프로테아제에 의해 절단가능한 펩타이드 성분을 포함하는 절단가능한 링커이다. 펩타이드 성분은 자연 발생 아미노산 잔기 및/또는 소수의 아미노산 및/또는 비-자연 발생 아미노산 유사체, 예컨대 시트룰린을 포함할 수 있다. 펩타이드 성분은 특정 효소, 예를 들어 종양 관련 프로테아제, 카텝신 B, C 또는 D, 또는 플라스민 프로테아제에 의한 효소적 절단을 위해 설계되고 최적화될 수 있다.
특정 구현예에서, ADC에 포함된 링커는 디펩타이드 함유 링커, 예를 들어 발린-시트룰린(Val-Cit) 또는 페닐알라닌-리신(Phe-Lys)을 함유하는 링커일 수 있다. 링커에 포함시키기 위한 적합한 디펩타이드의 다른 예는 Val-Lys, Ala-Lys, Me-Val-Cit, Phe-homoLys, Phe-Cit, Leu-Cit, Ile-Cit, Trp-Cit, Phe-Arg, Ala-Phe, Val-Ala, Met-Lys, Asn-Lys, Ile-Pro, Ile-Val, Asp-Val, His-Val, Met-(D)Lys, Asn-(D)Lys, Val-(D)Asp, NorVal-(D)Asp, Ala-(D)Asp, Me3Lys-Pro, 페닐Gly-(D)Lys, Met-(D)Lys, Asn-(D)Lys, Pro-(D)Lys 및 Met-(D)Lys를 포함한다. 절단 가능한 링커는 또한 트리펩타이드, 테트라펩타이드 또는 펜타펩타이드와 같은 더 긴 펩타이드 성분을 포함할 수 있다. 예는 트리펩타이드 Met-Cit-Val, Gly-Cit-Val, (D)Phe-Phe-Lys 및 (D)Ala-Phe-Lys, 및 테트라펩타이드 Gly-Phe-Leu-Gly 및 Ala-Leu-Ala-Leu를 포함하지만 이에 국한되지 않는다.
특정 구현예에서, 세포독성제는 발린-시트룰린(vc)을 포함하는 링커를 사용하여 항체에 접합된다.
절단 가능한 링커는 자기 희생 및 자기 제거성 기, 스트레처 또는 친수성 모이어티와 같은 하나 이상의 추가 성분을 선택적으로 추가로 포함할 수 있다.
링커에서 사용되는 자기 희생성 및 자기 제거 기는 예를 들어, p-아미노벤질옥시카보닐 (PABC) 및 p-아미노벤질 에테르 (PABE) 기, 및 메틸화된 에틸렌 디아민 (MED)을 포함한다. 자기 희생성 기의 다른 예는 PABC 또는 PABE 기와 전자적으로 유사한 방향족 화합물, 예를 들어 헤테로사이클릭 유도체, 예를 들어 미국 특허 제7,375,078호에 기재된 2-아미노이미다졸-5-메탄올 유도체를 포함하지만 이에 국한되지 않는다. 다른 예는 아미드 결합 가수분해 시에 고리화를 겪는 기, 예컨대 치환된 및 비치환된 4-아미노부티르산 아미드 (Rodrigues 등, Chemistry Biology, 2:223-227 (1995)) 및 2-아미노페닐프로피온산 아미드 (Amsberry 등, J. Org. Chem., 55:5867-5877 (1990))를 포함한다.
ADC용 링커에서 사용되는 스트레처는 예를 들어, 알킬렌 기 및 지방족 산을 기반으로 하는 스트레처, 이산, 아민 또는 디아민, 예컨대 디글라이콜레이트, 말로네이트, 카프로에이트 및 카프로아미드를 포함한다. 다른 스트레처는 예를 들어 글리신계 스트레처, 폴리에틸렌 글라이콜 (PEG) 스트레처 및 모노메톡시 폴리에틸렌 글라이콜 (mPEG) 스트레처를 포함한다. PEG 및 mPEG 스트레처는 또한 친수성 부분으로 기능한다.
일부 구현예에서 본 개시내용의 ADC에 사용될 수 있는 절단가능한 링커에서 일반적으로 발견되는 성분의 예는 SPBD, 설포-SPBD, 하이드라존, Val-Cit, 말레이도카프로일 (MC 또는 mc), mc-Val-Cit, mc-Val-Cit-PABC, Phe-Lys, mc-Phe-Lys, mc-Phe-Lys-PABC, 말레이미도 트리에틸렌 글라이콜레이트 (MT), MT-Val-Cit, MT-Phe-Lys 및 아디페이트 (AD)를 포함하지만 이에 국한되지 않는다
특정 구현예에서, 본 개시내용의 ADC에 포함된 링커는 일반 화학식 VII를 갖는 펩타이드계 링커이다:
Figure pct00162
화학식 VII
상기 식에서: Str은 스트레처이고; AA1 및 AA2 각각은 독립적으로 아미노산이고, AA1-[AA2]m은 프로테아제 절단 부위를 형성하고; X1은 자기 희생성 기이고; Z는 항체 상의 표적 기 (예를 들어, 시스테인의 티올 또는 라이신 기의 일차 아민)와 결합하는 작용기에 대한 부착점이고; D는 세포독성제에 대한 부착점이고; s는 0 또는 1이고; m은 1 내지 4의 정수이고, 그리고 o는 0, 1 또는 2이다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 VII의 링커에서, Z는 하기이다:
Figure pct00163
여기서 ##은 TF 항체에 대한 석신이미딜 기의 부착점을 나타내고, 석신이미딜기는 공유결합을 통해 TF 항체에 부착되고, 그리고 &는 [Str]s에 대한 부착점을 나타낸다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 VII의 링커에서, [Str]s는 알킬렌, 지방족 산을 기반으로 하는 스트레처, 지방족 이산을 기반으로 하는 스트레처, 지방족 아민을 기반으로 하는 스트레처 및 지방족 디아민을 기반으로 하는 스트레처로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 VII의 링커에서, [Str]s는 디글라이콜레이트계 스트레처, 말로네이트계 스트레처, 카프로에이트계 스트레처 및 카프로아미드계 스트레처로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 VII의 링커에서, [Str]s는 글리신계 스트레처, 폴리에틸렌 글라이콜계 스트레처, 및 모노메톡시 폴리에틸렌 글라이콜계 스트레처로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 VII의 링커에서, [Str]s는 하기이다:
Figure pct00164
여기서 h는 1 내지 20의 정수이고, CC는 AA1에 대한 부착점을 지칭하고; 그리고 DD는 Z에 대한 부착점을 지칭한다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 VII의 링커에서, [Str]s는 하기로부터 선택된다:
Figure pct00165
Figure pct00166
및
Figure pct00167
상기 식에서: EE 및 FF는 각각 Z 및 AA1에 대한 부착점을 나타내고; R는 수소 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고; p의 각 경우는 독립적으로 2 내지 10의 정수이고; 그리고 q의 각 경우는 독립적으로 1 내지 10의 정수이다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 VII의 링커에서, [Str]s는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00168
및
Figure pct00169
상기 식에서: EE 및 FF는 각각 Z 및 AA1에 대한 부착점을 나타내고; p의 각 경우는 독립적으로 2 내지 10의 정수이고; 그리고 q의 각 경우는 독립적으로 1 내지 10의 정수이다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 VII의 링커에서, [Str]s는 하기로부터 선택된다:
Figure pct00170
및
Figure pct00171
상기 식에서: EE 및 FF는 각각 Z 및 AA1에 대한 부착점을 나타내고; p의 각 경우는 독립적으로 2 내지 6의 정수이고, 그리고 q는 2 내지 8의 정수이다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 VII의 링커에서, AA1-[AA2]m은 Val-Lys, Ala-Lys, Phe-Lys, Val-Cit, Phe-Cit, Leu-Cit, Ile-Cit, Trp-Cit, Phe-Arg, Ala-Phe, Val-Ala, Met-Lys, Asn-Lys, Ile-Pro, Ile-Val, Asp-Val, His-Val, Met-(D)Lys, Asn-(D)Lys, Val-(D)Asp, NorVal-(D)Asp, Ala-(D)Asp, Me3Lys-Pro, 페닐Gly-(D)Lys, Met-(D)Lys, Asn-(D)Lys, Pro-(D)Lys, Met-(D)Lys, Met-Cit-Val, Gly-Cit-Val, (D)Phe-Phe-Lys, (D)Ala-Phe-Lys, Gly-Phe-Leu-Gly, 및 Ala-Leu-Ala-Leu로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 VII의 링커에서, m은 1이다(즉, AA1-[AA2]m은 디펩타이드임).
일부 구현예에서, 일반 화학식 VII의 링커에서, AA1-[AA2]m은 Val-Lys, Ala-Lys, Phe-Lys, Val-Cit, Phe-Cit, Leu-Cit, Ile-Cit 및 Trp-Cit로부터 선택된 디펩타이드이다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 VII의 링커에서, 각각의 X1은 p-아미노벤질옥시카보닐 (PABC), p-아미노벤질 에테르 (PABE) 및 메틸화된 에틸렌 디아민 (MED)로부터 독립적으로 선택된다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 VII의 링커에서, m은 1, 2 또는 3이다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 VII의 링커에서, s는 1이다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 VII의 링커에서, o는 0이다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 VII의 링커에서:
Z는
Figure pct00172
이고;
여기서 ##은 TF 항체의 석신이미딜기의 부착점을 나타내고, 석신이미딜기는 공유결합을 통해 TF 항체에 부착되고, &는 [Str]s에 대한 부착점을 나타내고;
[Str]s은
Figure pct00173
및
Figure pct00174
로부터 선택되고;
EE 및 FF는 각각 Z 및 AA1에 대한 부착점을 나타내고; p는 2 내지 6의 정수이고; q는 2 내지 8의 정수이고; m은 1이고; AA1-AA2는 Val-Lys, Ala-Lys, Phe-Lys, Val-Cit, Phe-Cit, Leu-Cit, Ile-Cit 및 Trp-Cit으로 이루어진 군으로부터 선택되는 디펩타이드이고; s는 1이고; 그리고 o는 0이다.
특정 구현예에서, 본 개시내용의 ADC에 포함된 링커는 일반 화학식 X를 갖는다:
Figure pct00175
화학식 X
상기 식에서: ##는 항체에 대한 부착점이고 석신이미딜 기는 공유결합을 통해 항체에 부착되고; Y는 하나 이상의 추가의 링커 성분이거나, 부재하고, 그리고 D1은 세포독성제에 대한 부착점이다. 일반 화학식 X의 일부 구현예에서, Ab는 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3을 포함하고, 여기서
i. VH-CDR1은 서열번호: 872를 포함하고, 상기 VH-CDR2는 서열번호: 873을 포함하고, 상기 VH-CDR3은 서열번호: 874를 포함하고, 상기 VL-CDR1은 서열번호: 875를 포함하고, 상기 VL-CDR2는 서열번호: 876을 포함하고, 그리고 상기 VL-CDR3은 서열번호: 877을 포함하고,
ii. VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3은 25A3으로 명명된 항체에서 유래하고,
iii. VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3은 25A3으로 명명된 항체에서 유래하고,
iv. VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3은 25A5로 명명된 항체에서 유래하고,
v. VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A5-T로 지정된 항체에서 유래하거나, 또는
vi. VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3은 25G1로 명명된 항체에서 유래한다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 X에서, Y는 [X1]o이고, 여기서 X1은 자기 희생성 기이고 o는 1 및 2로부터 선택된 정수이다. 일부 구현예에서, 일반 화학식 X에서, 각각의 X1은 p-아미노벤질옥시카보닐 (PABC), p-아미노벤질 에테르 (PABE) 및 메틸화된 에틸렌 디아민 (MED)으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 일반 화학식 X에서, Y는 부재한다.
특정 구현예에서, 본 개시내용의 ADC에 포함된 링커는 일반 화학식 XI를 갖는다:
Figure pct00176
화학식 XI
상기 식에서: ##는 항체에 대한 부착점이고 석신이미딜 기는 공유결합을 통해 항체에 부착되고; Y는 하나 이상의 추가의 링커 성분이거나, 부재하고, 그리고 D1은 세포독성제에 대한 부착점이다. 일부 구현예에서, ADC는 일반 화학식 XI의 링커를 포함하고, Ab는 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3을 포함하고, 여기서
i. VH-CDR1은 서열번호: 872를 포함하고, 상기 VH-CDR2는 서열번호: 873을 포함하고, 상기 VH-CDR3은 서열번호: 874를 포함하고, 상기 VL-CDR1은 서열번호: 875를 포함하고, 상기 VL-CDR2는 서열번호: 876을 포함하고, 그리고 상기 VL-CDR3은 서열번호: 877을 포함하고,
ii. VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3은 25A3으로 명명된 항체에서 유래하고,
iii. VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3은 25A3으로 명명된 항체에서 유래하고,
iv. VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3은 25A5로 명명된 항체에서 유래하고,
v. VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A5-T로 지정된 항체에서 유래하거나, 또는
vi. VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3은 25G1로 명명된 항체에서 유래한다.
일부 구현예에서, Y는 [X1]o이고, 여기서 X1은 자기 희생성 기이고 o는 1 및 2로부터 선택된 정수이다. 일부 구현예에서, 각각의 X1은 p-아미노벤질옥시카보닐 (PABC), p-아미노벤질 에테르 (PABE) 및 메틸화된 에틸렌 디아민 (MED)으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, Y는 부재한다. 화학식 X 또는 화학식 XI의 링커의 일부 구현예에서, 세포독성제는 진단제, 금속 킬레이트제, 효소, 형광 화합물, 생물발광 화합물, 또는 화학발광 화합물로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 X 또는 화학식 XI의 링커의 일부 구현예에서, 세포독성제는 개선된 안전성 프로파일을 갖는 세포독성 페이로드이다.
또 다른 구현예에서, 일반 화학식 XII의 링커를 포함하는 화합물은 조직 인자(TF) 항체 상의 표적 기(예를 들어, 시스테인의 티올 또는 라이신 기의 일차 아민)와 화학적으로 결합하여 본 개시내용의 ADC를 형성할 수 있다.
Figure pct00177
화학식 XII
상기 식에서: Str은 스트레처이고; AA1 및 AA2 각각은 독립적으로 아미노산이고, AA1-[AA2]m은 프로테아제 절단 부위를 형성하고; X1은 자기 희생성 기이고; D2는 세포독성제에 대한 부착점이고; Z2는 TF 항체 상기 표적 기와 반응하여 TF 항체와 결합을 형성할 수 있는 작용기이고; s는 0 또는 1이고; m은 1 내지 4의 정수이고, 그리고 o는 0, 1 또는 2이다
일부 구체예에서, 일반 화학식 XII의 링커에서, Z2는
Figure pct00178
이아고, &는 [Str]s에 대한 부착점을 나타낸다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 XII의 링커에서, [Str]s는 알킬렌, 지방족 산을 기반으로 하는 스트레처, 지방족 이산을 기반으로 하는 스트레처, 지방족 아민을 기반으로 하는 스트레처 및 지방족 디아민을 기반으로 하는 스트레처로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 XII의 링커에서, [Str]s는 디글라이콜레이트계 스트레처, 말로네이트계 스트레처, 카프로에이트계 스트레처 및 카프로아미드계 스트레처로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 XII의 링커에서, [Str]s는 글리신계 스트레처, 폴리에틸렌 글라이콜계 스트레처, 및 모노메톡시 폴리에틸렌 글라이콜계 스트레처로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 XII의 링커에서, [Str]s는 하기이다:
Figure pct00179
여기서 h는 1 내지 20의 정수이고, CC는 AA1에 대한 부착점을 지칭하고; 그리고 DD는 Z에 대한 부착점을 지칭한다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 XII의 링커에서, [Str]s는 하기로부터 선택된다:
Figure pct00180
Figure pct00181
및
Figure pct00182
상기 식에서: EE 및 FF는 각각 Z 및 AA1에 대한 부착점을 나타내고; R는 수소 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고; p의 각 경우는 독립적으로 2 내지 10의 정수이고; 그리고 q의 각 경우는 독립적으로 1 내지 10의 정수이다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 XII의 링커에서, [Str]s는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00183
및
Figure pct00184
상기 식에서: EE 및 FF는 각각 Z 및 AA1에 대한 부착점을 나타내고; p의 각 경우는 독립적으로 2 내지 10의 정수이고; 그리고 q의 각 경우는 독립적으로 1 내지 10의 정수이다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 XII의 링커에서, [Str]s는 하기로부터 선택된다:
Figure pct00185
및
Figure pct00186
상기 식에서: EE 및 FF는 각각 Z 및 AA1에 대한 부착점을 나타내고; p의 각 경우는 독립적으로 2 내지 6의 정수이고, 그리고 q는 2 내지 8의 정수이다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 XII의 링커에서, AA1-[AA2]m은 Val-Lys, Ala-Lys, Phe-Lys, Val-Cit, Phe-Cit, Leu-Cit, Ile-Cit, Trp-Cit, Phe-Arg, Ala-Phe, Val-Ala, Met-Lys, Asn-Lys, Ile-Pro, Ile-Val, Asp-Val, His-Val, Met-(D)Lys, Asn-(D)Lys, Val-(D)Asp, NorVal-(D)Asp, Ala-(D)Asp, Me3Lys-Pro, 페닐Gly-(D)Lys, Met-(D)Lys, Asn-(D)Lys, Pro-(D)Lys, Met-(D)Lys, Met-Cit-Val, Gly-Cit-Val, (D)Phe-Phe-Lys, (D)Ala-Phe-Lys, Gly-Phe-Leu-Gly, 및 Ala-Leu-Ala-Leu로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 XII의 링커에서, m은 1이다(즉, AA1-[AA2]m은 디펩타이드임).
일부 구현예에서, 일반 화학식 XII의 링커에서, AA1-[AA2]m은 Val-Lys, Ala-Lys, Phe-Lys, Val-Cit, Phe-Cit, Leu-Cit, Ile-Cit 및 Trp-Cit로부터 선택된 디펩타이드이다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 XII의 링커에서, 각각의 X1은 p-아미노벤질옥시카보닐 (PABC), p-아미노벤질 에테르 (PABE) 및 메틸화된 에틸렌 디아민 (MED)로부터 독립적으로 선택된다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 XII의 링커-독소 화합물에서, m은 1, 2 또는 3이다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 XII의 링커에서, s는 1이다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 XII의 링커에서, o는 0이다.
일부 구현예에서, 일반 화학식 XII의 링커에서:
Z는
Figure pct00187
이고;
&는 [Str]s에 대한 부착점을 나타내고;
[Str]s은
Figure pct00188
및
Figure pct00189
로부터 선택되고;
EE 및 FF는 각각 Z 및 AA1에 대한 부착점을 나타내고; p는 2 내지 6의 정수이고; q는 2 내지 8의 정수이고; m은 1이고; AA1-AA2는 Val-Lys, Ala-Lys, Phe-Lys, Val-Cit, Phe-Cit, Leu-Cit, Ile-Cit 및 Trp-Cit으로 이루어진 군으로부터 선택되는 디펩타이드이고; s는 1이고; 그리고 o는 0이다.
특정 구현예에서, 일반 화학식 XII의 링커를 포함하는 화합물은 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00190
링커-독소 A
항체-약물 접합체의 제조 방법
ADC는 당업자에게 공지된 유기 화학 반응, 조건 및 시약을 사용하여 당업계에 개시된 임의의 적합한 방법을 사용하여 제조할 수 있으며, 예를 들어 문헌[Bioconjugate Techniques, 2nd Ed., G. T. Hermanson, ed., Elsevier, San Francisco, 2008]를 참조한다.
예를 들어, 접합은 (1) 항체의 친핵성 기 또는 친전자성 기와 이중작용성 링커와의 반응에 의해 공유 결합을 통해 항체-링커 중간체 Ab-L을 형성한 후 활성화된 세포독성제(D)와의 반응에 의해 달성될 수 있거나, 또는 (2) 세포독성제의 친핵성 기 또는 친전자성 기와 이중작용성 링커와의 반응에 의해 공유 결합을 통해 링커-독소 D-L을 형성한 후, 항체의 친핵성 기 또는 친전자성 기와 반응에 의해 달성될 수 있다.
특정 구현예에서, 항체-약물 접합체를 제조하는 공정이 본 명세서에 기재되어 있으며, 상기 공정은은 다음을 포함한다: (A) 인간 조직 인자(TF)의 세포외 도메인(서열 번호 810)에 결합하는 항원 결합 단백질(Ab) 상의 친핵성 또는 친전자성 기를 이작용성 링커와 반응시켜 Ab-링커 중간체를 형성하는 단계, 및 Ab-링커 중간체를 일반 화학식 I의 아우리스타틴 유도체 상의 -NH2기와 반응시키는 단계
Figure pct00191
화학식 I
상기 식에서: X는 *-C(O)NHCH(CH2(R2))-+이고, 여기서 * 및 +는 화학식 I에 나타낸 바와 같은 각각의 부착점을 나타내거나, X는 부재하고; R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:
Figure pct00192
Figure pct00193
및
Figure pct00194
식 중, # 및 %는 화학식 I에 나타낸 바와 같은 각각의 부착점을 나타내고; R2는 페닐임), 항체 약물 접합체를 제공하는 단계; 또는 (B) 화학식 I의 아우리스타틴 유도체 상의 -NH2 기를 이작용성 링커와 반응시켜 링커-독소 중간체를 형성하고, 링커-독소 중간체를, 인간 조직 인자 (TF) (서열번호: 810)의 세포외 도메인에 결합하는 항원 결합 단백질 (Ab) 상의 친핵성 또는 친전자성 기와 반응시켜 항체-약물 접합체를 제공하는 단계를 포함하고, 여기서 (A) 또는 (B)에서, (a) 상기 Ab는 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3을 포함하고,
i. VH-CDR1은 서열번호: 872를 포함하고, 상기 VH-CDR2는 서열번호: 873을 포함하고, 상기 VH-CDR3은 서열번호: 874를 포함하고, 상기 VL-CDR1은 서열번호: 875를 포함하고, 상기 VL-CDR2는 서열번호: 876을 포함하고, 그리고 상기 VL-CDR3은 서열번호: 877을 포함하고,
ii. VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3은 25A3으로 명명된 항체에서 유래하고,
iii. VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3은 25A3으로 명명된 항체에서 유래하고,
iv. VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3은 25A5로 명명된 항체에서 유래하고,
v. VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A5-T로 지정된 항체에서 유래하거나, 또는
vi. VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3은 25G1로 명명된 항체에서 유래하고; 그리고
(b) 항체-약물 접합체는 하기 화학식 IV로 표시되는 하나 이상의 모이어티를 포함하고:
Figure pct00195
화학식 IV
상기 식에서: X는 *-C(O)NHCH(CH2(R2))-+이고, 여기서 * 및 +는 화학식 IV에 나타낸 바와 같은 각각의 부착점을 나타내거나, X는 부재하고; L은 링커이고; !는 Ab에 대한 L의 부착점을 나타내며, 여기서 L은 공유 결합을 통해 Ab에 부착되고; R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00196
Figure pct00197
및
Figure pct00198
여기서 # 및 %는 화학식 IV에 나타낸 바와 같은 각각의 부착점을 나타내고; R2는 페닐이다.
특정 구현예에서, 항체-약물 접합체를 제조하는 공정이 본 명세서에 기재되어 있으며, 상기 공정은 다음을 포함한다: (A) 인간 조직 인자(TF)(서열 번호: 810)의 세포외 도메인에 결합하는 항원 결합 단백질(Ab) 상의 친핵성 또는 친전자성 기를 2개 이상의 링커 성분을 포함하는 이중작용성 링커의 제1 링커 성분과 반응시킨 다음, 나머지 링커 성분(들)을 순차적으로 첨가하여 Ab-링커 중간체를 형성하고, Ab-링커 중간체를 일반 화학식 I의 아우리스타틴 유도체 상의 -NH2 기와 반응시켜:
Figure pct00199
화학식 I
상기 식에서: X는 *-C(O)NHCH(CH2(R2))-+이고, 여기서 * 및 +는 화학식 I에 나타낸 바와 같은 각각의 부착점을 나타내거나, X는 부재하고; R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:
Figure pct00200
Figure pct00201
및
Figure pct00202
여기서 # 및 %는 화학식 I에 나타낸 바와 같은 각각의 부착점을 나타내고; R2는 페닐임), 항체 약물 접합체를 제공하는 단계; 또는 (B) 일반 화학식 I의 아우리스타틴 유도체 상의 -NH2 기를 2개 이상의 링커 성분을 포함하는 이중작용성 링커의 제1 링커 성분과 반응시킨 다음, 나머지 링커 성분(들)을 순차적으로 첨가하여 링커-독소 중간체를 형성하고, 그리고 링커-독소 중간체를, 인간 조직 인자 (TF) (서열번호: 810)의 세포외 도메인에 결합하는 항원 결합 단백질 (Ab) 상의 친핵성 또는 친전자성 기와 반응시켜 항체-약물 접합체를 제공하는 단계를 포함하고, (A) 또는 (B)에서, (a) 상기 Ab는 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3을 포함하고, 여기서
vii. VH-CDR1은 서열번호: 872를 포함하고, 상기 VH-CDR2는 서열번호: 873을 포함하고, 상기 VH-CDR3은 서열번호: 874를 포함하고, 상기 VL-CDR1은 서열번호: 875를 포함하고, 상기 VL-CDR2는 서열번호: 876을 포함하고, 그리고 상기 VL-CDR3은 서열번호: 877을 포함하고,
viii. VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3은 25A3으로 명명된 항체에서 유래하고,
ix. VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3은 25A3으로 명명된 항체에서 유래하고,
x. VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3은 25A5로 명명된 항체에서 유래하고,
xi. VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A5-T로 지정된 항체에서 유래하거나, 또는
xii. VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3은 25G1로 명명된 항체에서 유래하고; 그리고
(b) 항체-약물 접합체는 하기 화학식 IV로 표시되는 하나 이상의 모이어티를 포함하고:
Figure pct00203
화학식 IV
상기 식에서: X는 *-C(O)NHCH(CH2(R2))-+이고, 여기서 * 및 +는 화학식 IV에 나타낸 바와 같은 각각의 부착점을 나타내거나, X는 부재하고; L은 링커이고; !는 Ab에 대한 L의 부착점을 나타내며, 여기서 L은 공유 결합을 통해 Ab에 부착되고; R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:
Figure pct00204
Figure pct00205
및
Figure pct00206
여기서 # 및 %는 화학식 IV에 나타낸 바와 같은 각각의 부착점을 나타내고; R2는 페닐이다.
특정 구현예에서, Ab 상의 친핵성 또는 친전자성 기는 티올 또는 아민이다. ADC를 제조하는 공정의 특정 구현예에서, 공정은 Ab를 환원제로 처리하여 Ab 내의 하나 이상의 이황화물 연결을 환원시켜 친핵성 티올 기를 제공하는 단계를 포함한다. ADC를 제조하는 공정의 특정 구현예에서, L은 하기 화학식 VII로 표시된다:
Figure pct00207
화학식 VII
상기 식에서: Z는 Ab의 표적 기에 결합하는 작용기를 나타내고; D는 화학식 I로 표시된 바와 같이 아미노 기에 대한 부착점을 나타내고; Str은 스트레처이고; AA1 및 AA2 각각은 독립적으로 아미노산이고, AA1-[AA2]m은 프로테아제 절단 부위를 형성하고; X1은 자기 희생성 기이고; s는 0 및 1로부터 선택된 정수이고; m은 1, 2, 3, 및 4로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이고; 그리고 o는 0, 1, 및 2로부터 선택된 정수이다
세포독성제가 일반 화학식 I의 화합물인 특정 구현예에서, ADC는 (A) (i) 항체 상의 친핵성 또는 친전자성 기를 이중작용성 링커와 반응시켜 항체-링커 중간체를 형성하는 단계, 또는 (ii) 항체 상의 친핵성 또는 친전자성 기를 2개 이상의 링커 성분을 포함하는 이작용성 링커의 제1 링커 성분과 반응시킨 후, 나머지 링커 성분(들)을 순차적으로 첨가하여 항체-링커 중간체를 형성하는 단계 및 (B) 항체-링커 중간체를 일반 화학식 I의 화합물 상의 -NH2 기와 반응시켜 ADC를 제공하는 단계를 포함한는 방법에 의해 제조된다.
세포독성제가 일반 화학식 I의 화합물인 특정 구현예에서, ADC는 (A) (i) 일반 화학식 I의 화합물 상의 NH2 기를 이중작용성 링커와 반응시켜 링커-독소 중간체를 형성하는 단계, 또는 (ii) 일반 화학식 I의 화합물 상의 NH2 기를 2개 이상의 링커 성분을 포함하는 이중작용성 링커의 제1 링커 성분과 반응시킨 다음, 나머지 링커 성분(들)을 순차적으로 첨가하여 링커-독소 중간체를 형성하는 단계, 및 (B) 링커-독소 중간체를 항체 상의 친핵성 또는 친전자성 기와 반응시켜 항체-약물 접합체를 제공하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조된다.
일부 구현예에서, 항체 상의 친전자성 또는 친핵성 기는 티올(예를 들어, 항체 상의 시스테인 잔기로부터), 또는 아민(예를 들어, 항체 상의 라이신 잔기로부터)이다. 일부 구현예에서, 이작용성 링커는 일반 화학식 VII, 일반 화학식 X 또는 일반 화학식 XI을 갖는다. 화학식 I의 화합물 및 화학식 I의 화합물을 포함하는 링커-독소는 상업적으로 입수가능한 출발 물질로부터 표준 합성 유기 화학 프로토콜에 의해 제조될 수 있다. 예시적인 방법은 국제 특허 출원 공개 제WO 2016/041082호 및 아래의 실시예 섹션에서 제공된다.
특정 구현예에서, 본 개시내용의 ADC는 링커-세포독성제를 항체 상의 1개 이상의 사슬간 이황화물 연결을 감소시킴으로써 유리된 시스테인 잔기에 접합시킴으로써 제조된다. 적합한 환원제는 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어, 디티오트레이톨 (DTT), 트리스(2-카복시에틸)포스핀 (TCEP), 2-머캅토에탄올, 시스테아민 및 다수의 수용성 포스핀.
일부 구현예에서, ADC는 부위-특이적인 콘주게이션 기술로 만들어져, 동종 약물 부하를 생성하고 변경된 항원-결합 또는 약동학을 갖는 ADC 부분모집단을 피한다. 일부 구현예에서, 중쇄 및 경쇄 상의 위치에서 시스테인 치환을 포함하는 "티오맙"은 면역글로불린 폴딩 및 어셈블리를 방해하거나 항원 결합을 변경하지 않는 반응성 티올 기를 제공하기 위해 조작된다 (Junutula 등, J. Immunol . Meth ., 2008, 332: 41-52; Junutula 등, Nat. Biotechnol ., 2008, 26: 925-932,). 일부 구현예에서, 셀레노시스테인은 정지 코돈 UGA를 종결에서 셀레노시스테인 삽입으로 코딩함으로써 항체에 서열에 공-번역으로 삽입되어, 다른 천연 아미노산의 존재에서 셀레노시스테인의 친핵성 셀레놀 기에서 부위 특이적 공유 콘주게이션을 허용한다 (참고 예를 들어, Hofer 등, Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 2008, 105:12451-12456; Hofer 등, Biochemistry, 2009, 48(50):12047-12057). 대안적으로, 항체는 반응성 핸들을 제공하는 다른 비천연 아미노산, 예컨대 p 아세틸페닐알라닌, 포르밀글리신 또는 p-아지도메틸-L-페닐알라닌을 포함하도록 변형될 수 있다(예를 들어, Axup 등, PNAS, 109:16101-16106 (2012); Wu 등, PNAS, 106:3000-3005 (2009); Zimmerman 등, Bioconj. Chem., 25:351-361 (2014)을 참조한다). 특정 구현예에서, ADC는 Behrens 등, Mol Pharm, 2015, 12:3986-98에 기재된 바와 같이 합성되었다.
6. 검정
당업계에서 알려진 다양한 검정은 본 명세서에 제공된 항-TF 항체 및 항-TF ADC를 확인하고 특성화하기 위해 사용될 수 있다.
6.1. 결합, 경쟁, 및 에피토프 맵핑 검정
본 명세서에 제공된 항체의 특이적 항원-결합 활성은 본 개시내용의 다른 곳에 기재되어 있는 바와 같이 SPR, BLI, RIA 및 MSD-SET를 사용하는 것을 포함하는 임의의 적합한 방법에 의해 평가될 수 있다. 추가로, 항원-결합 활성은 ELISA 검정 및 웨스턴 블랏 검정에 의해 평가될 수 있다.
2개의 항체, 또는 항체 및 또 다른 분자 (예를 들어, TF의 하나 이상의 리간드) 사이의 경쟁을 측정하기 위한 검정은 기재된 본 개시내용의 다른 곳에, 그리고 예를 들어, Harlow 및 Lane의, Antibodies: A Laboratory Manual ch.14, 1988, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다.
본 명세서에 제공된 항체가 결합되는 에피토프를 맵핑하기 위한 검정은, 예를 들어, Morris "Epitope Mapping Protocols", Methods in Molecular Biology vol. 66, 1996, Humana Press, Totowa, N.J.(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재되어 있다. 일부 구현예에서, 에피토프는 펩타이드 경쟁에 의해 결정된다. 일부 구현예에서, 에피토프는 질량 분광분석법에 의해 결정된다. 일부 구현예에서, 에피토프는 결정학에 의해 결정된다.
6.2. 트롬빈 생성, FXa 전환, 및 TF 신호전달 검정
본 명세서에 제공된 항체의 존재에서의 트롬빈 생성은 본 개시내용의 다른 곳에 기재되어 있는 바와 같이 트롬빈 생성 검정 (TGA)에 의해 결정될 수 있다.
본 명세서에 제공된 항체의 존재에서 FXa 전환을 측정하기 위한 검정은 본 개시내용의 다른 곳에 기재되어 있다.
TF 신호전달의 억제는 TF 신호전달, 예컨대 IL8 및 GM-CSF에 의해 조절된 사이코카인의 생산을 측정하영 결저될 수 있다. IL8 및/또는 GM-CSF 수준을 결정하기 위한 검정은 본 개시내용의 다른 곳에, 그리고 예를 들어, Hjortoe 등, Blood, 2004, 103:3029-3037에서 제공된다.
6.3. 효과기 기능을 위한 검정
본 명세서에 제공된 항체에 의한 치료 다음의 효과기 기능은 하기에 기재된 것들을 포함하는 당업계에서 알려진 다양한 시험관내 및 생체내 검정을 사용하여 평가될 수 있다: Ravetch 및 Kinet, Annu . Rev. Immunol ., 1991, 9:457-492; U.S. 특허 번호 5,500,362, 5,821,337; Hellstrom 등, Proc . Nat'l Acad . Sci . USA, 1986, 83:7059-7063; Hellstrom 등, Proc . Nat'l Acad . Sci . USA, 1985, 82:1499-1502; Bruggemann 등, J. Exp . Med ., 1987, 166:1351-1361; Clynes 등, Proc. Nat'l Acad . Sci . USA, 1998, 95:652-656; WO 2006/029879; WO 2005/100402; Gazzano-Santoro 등, J. Immunol . Methods, 1996, 202:163-171; Cragg 등, Blood, 2003, 101:1045-1052; Cragg 등 Blood, 2004, 103:2738-2743; 및 Petkova 등, Int'l. Immunol ., 2006, 18:1759-1769(이들 각각은 전체적으로 참고로 포함되어 있음).
6.4. 세포독성 검정 및 생체내 연구
본 명세서에 제공된 항체-약물 접합체 (ADC)의 세포독성을 평가하기 위한 검정은 본 개시내용의 다른 곳에 기재되어 있다.
본 명세서에 제공된 ADC의 생체내 효능을 평가하기 위한 면역 절충된 마우스에서의 이종이식 연구는 본 개시내용의 다른 곳에 기재되어 있다.
ADC의 생체내 효능을 평하기 위한 면역 능숙한 마우스에서의 동질유전자 연구는 본 개시내용에 포함된다.
6.5. 면역조직화학 (IHC) 검정
환자 샘플에서 TF 발현을 평가하기 위한 면역조직화학 (IHC) 검정은 본 개시내용의 다른 곳에 기재되어 있다.
6.6. 키메라 작제물 맵핑 및 에피토프 비닝 검정
본 명세서에 제공된 항-인간 TF 항체 사이의 에피토프 비닝 차이는 본 개시내용의 다른 곳에 기재되어 있는 바와 같이 키메라 TF 작제물 맵핑 실험 및 에피토프 비닝 검정에 의해 결정될 수 있다.
7. 약제학적 조성물
본 명세서에 제공된 항체 또는 ADC는 임의의 적절한 약제학적 조성물에서 제형화될 수 있고 임의의 적합한 투여 경로에 의해 투여될 수 있다. 적합한 투여 경로는 비제한적으로, 유리체내, 동맥내, 진피내, 근육내, 복강내, 정맥내, 비강, 비경구, 폐, 및 피하 경로를 포함한다.
약제학적 조성물는 하나 이상의 약제학적 부형제를 포함할 수 있다. 임의의 적합한 약제학적 부형제가 사용될 수 있고, 그리고 당해 분야의 숙련가는 적합한 약제학적 부형제를 선택할 수 있다. 따라서, 아래에 제공된 약제학적 부형제는 설명하기 위한 것이지 제한하려는 것은 아니다. 추가의 약제학적 부형제는, 예를 들어, Handbook of Pharmaceutical Excipients, Rowe 등 (Eds.) 제6판 (2009)(이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음)에 기재된 것을 포함한다.
7.1. 비경구 투약 형태
특정 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 ADC는 비경구 투약 형태로서 제형화된다. 비경구 투약 형태는 피하, 정맥내 (주입 및 볼러스 주입 포함), 근육내, 및 동맥내를 비제한적으로 포함하는 다양한 경로에 의해 대상체에게 투여될 수 있다. 그것의 투여가 전형적으로 오염물질에 대한 대상체의 자연 방어를 우회하기 때문에, 비경구 투약 형태는 전형적으로, 멸균이거나, 대상체에게 투여되기 전에 멸균될 수 있다. 비경구 투약 형태의 예는 비제한적으로, 주입을 위해 준비한 용액, 주입을 위한 약제학적으로 허용가능한 비히클에 용해 또는 현탁을 위한 준비한 준비된 건조 (예를 들어, 동결건조된) 생성물, 주입을 위해 준비한 현탁액, 및 에멀션을을 포함한다.
8. 투약량 및 단위 투약 형태
인간 치료제에서, 의사는 예방적 또는 근치적 치료에 따라 그리고 연령, 체중, 병태 및 치료받을 대상체에 특이적인 다른 인자에 따라 가장 적절하다고 고려하는 약량을 결정할 것이다.
특정 구현예에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약제학적 조성물 또는 단일 단위 투약 형태이다. 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물 및 단일 단위 투약 형태는 하나 이상의 예방적 또는 치료적 항체 또는 ADC의 예방적 또는 치료적 유효량을 포함한다.
장애 또는 이의 하나 이상의 증상의 예방 또는 치료에서 효과적일 항체/ADC 또는 조성물의 양은 질환 또는 병태의 특성 및 중증도, 그리고 항체/ADC가 투여되는 경로에 따라 다양할 수 있다. 빈도 및 투약량은 또한 투여된 특정 요법 (예를 들어, 치료제 또는 예방제), 장애, 질환, 또는 병태의 중증도, 투여 경로, 뿐만 아니라 대상체의 연령, 신체, 중량, 반응, 및 과거 병력에 의존하여 각각의 대상체에 특이적인 인자에 따라 다양할 수 있다. 유효량은 시험관내 또는 동물 모델 시험 시스템에서 유래된 용량-반응 곡선으로부터 외삽될 수 있다.
상이한 치료적 유효량은, 당해 분야의 숙련가에 의해 쉽게 알려질 바와 같이, 상이한 질환 및 병태에 적용가능할 수 있다. 유사하게, 그와 같은 장애를 예방, 관리, 치료 또는 개선하는데 충분한, 그러나 본 명세서에 제공된 항체 또는 ADC와 관련된 역효과를 야기하는데 불충분한, 또는 상기 역효과를 감소시키는데 충분한 양은 본 명세서에 제공된 투약량 및 투여 빈도 스케줄에 의해 또한 포괄된다. 추가로, 대상체가 본 명세서에 제공된 조성물의 다중 투약량이 투여되는 경우, 모든 투약량이 동일할 필요는 없다. 예를 들어, 대상체에 투여된 투약량은 조성물의 예방적 또는 치료적 효과를 개선하기 위해 증가될 수 있거나 특정 대상체가 경험하는 하나 이상의 부작용을 감소시키기 위해 축소될 수 있다.
본 개시내용의 다른 곳에서 더 상세히 논의된 바와 같이, 본 명세서에 제공된 항체 또는 ADC는 질환 또는 장애를 예방 또는 치료하는데 유용한 하나 이상의 추가 제제와 선택적으로 투여될 수 있다. 그와 같은 추가 제제의 유효량은 제형에서 존재하는 ADC의 양, 장애 또는 치료의 유형, 및 당업계에서 알려지거나 본 명세서에 기재된 다른 인자에 좌우될 수 있다.
9. 치료적 적용
치료적 적용을 위해, 본 발명의 항체 또는 ADC는 약제학적으로 허용가능한 투약 형태 예컨대 당해 분야에서 알려진 것들 및 상기에서 논의된 것들로 포유동물, 일반적으로 인간에게 투여된다. 예를 들어, 본 발명의 항체 또는 ADC는 유리체내, 근육내, 복강내, 뇌척수내, 피하, 관절내, 활막내, 척추강내, 또는 종양내 경로에 의해 일정 기간에 걸쳐 볼러스로서 또는 연속적 주입에 의해 정맥내로 인간에게 투여될 수 있다. 항체 또는 ADC는 또한 국소 뿐만 아니라 전신 치료적 효과를 발휘하기 위해 종양주위, 병소내, 또는 병변주위 경로에 의해 적합하게 투여된다. 복강내 경로는, 예를 들어, 난소 종양의 치료에 특히 유용할 수 있다.
본 명세서에 제공된 항체 또는 ADC는 TF를 수반하는 임의의 질환 또는 병태의 치료에 유용할 수 있다. 일부 구현예에서, 질환 또는 병태는 항-TF 항체 또는 ADC에 의한 치료로부터 유익할 수 있는 질환 또는 병태이다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 ADC는 약제로서 사용하기 위해 제공된다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 ADC는 약제의 제조 또는 준비에서 사용하기 위해 제공된다. 일부 구현예에서, 약제는 항-TF 항체 또는 ADC로부터 유익할 수 있는 질환 또는 병태의 치료를 위한 것이다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항-TF 항체 또는 ADC의 유효량을 상기 대상체에게 투여함으로써 필요로 하는 대상체에서 질환 또는 병태를 치료하는 방법이 본 명세서에 제공된다.
일부 구현예에서, 항-TF 항체 또는 ADC에 의한 치료로부터 유익할 수 있는 질환 또는 병태는 암이다. 일부 구현예에서, 항-TF 본 명세서에 제공된 항체 또는 ADC는 암의 치료용 약제로서 사용하기 위해 제공된다. 일부 구현예에서, 항-TF 본 명세서에 제공된 항체 또는 ADC는 암의 치료용 약제의 제조 또는 준비에서 사용하기 위해 제공된다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항-TF 항체 또는 ADC의 유효량을 상기 대상체에게 투여함으로써 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법이 본 명세서에 제공된다.
TF는 하기 예의 다양한 유형 암의 혈전증, 전이, 종양 성장, 및/또는 종양 혈관신생에 관여한다: 난소암 (참고 Sakurai 등, Int J Gynecol Cancer, 2017, 27:37-43; Koizume 등, Biomark Cancer, 2015, 7:1-13; 이들 각각은 참고로 전체적으로 편입되어 있음), 자궁경부암 (참고 Cocco 등, BMC Cancer, 2011, 11:263, 이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음), 두경부암 (참고 Christensen 등, BMC Cancer, 2017, 17:572, 이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음), 전립선암 (참고 Yao 등, Cancer Invest., 2009, 27:430-434; Abdulkadir 등, Hum Pathol ., 2009, 31:443-447; 이들 각각은 참고로 전체적으로 편입되어 있음), 췌장 암 (참고 Zhang 등, Oncotarget, 2017, 8:59086-59102, 이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음), 삼중 음성 유방암 (참고 Zhang 등, Oncotarget, 2017, 8:59086-59102, 이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음), 교모세포종 (참고 Guan 등, Clin Biochem ., 2002, 35:321-325; Carneiro-Lobo 등, J Thromb Haemost, 2009, 7:1855-1864; 이들 각각은 참고로 전체적으로 편입되어 있음), 폐암 (참고 Yeh 등, PLoS One, 2013, 8:e75287; Regina 등, Clin Chem ., 2009, 55:1834-42; 이들 각각은 참고로 전체적으로 편입되어 있음), 위암 (참고 Lo 등, Br J Cancer., 2012, 107:1125-1130, 이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음), 식도암 (참고 Chen 등, Acta Histochem ., 2010, 3:233-239, 이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음), 방광암 (참고 Patry 등, Int J Cancer., 2008, 122:1592-1597, 이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음), 흑색종 (참고 Bromberg 등, Proc Natl Acad Sci U S A., 1995, 92:8205-8209, 이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음), 및 신장암 (참고 Silva 등, Int Braz J Urol ., 2014, 40:499-506, 이는 전체적으로 참고로 포함되어 있음).
임의의 적합한 암은 본 명세서에 제공된 항체 또는 ADC로 치료될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 암은 두경부암이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 난소암이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 위암이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 식도암이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 자궁경부암이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 전립선암이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 췌장 암이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 에스트로겐 수용체 음성 (ER-), 프로게스테론 수용체 음성 (PR-), 및 HER2 음성 (HER2-) 삼중 음성 유방암이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 교모세포종이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 폐암이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 방광암이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 흑색종이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 신장암이다. 일부 구현예에서, 암은 안구 흑색종이다. 항-TF 항체 또는 ADC로 치료될 수 있는 암의 유형에 대한 추가 정보는 van den Berg 등, Blood 2012, 119:924-932(이는 참고로 전체적으로 편입되어 있음)에서 제공된다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 ADC의 유효량을 대상체에게 투여함으로써 필요로 하는 대상체에서 암의 발병을 지연시키는 방법이 본 명세서에 제공된다. 일부 구현예에서, 이를 필요로 하는 대상체에서 암의 후기 개입 치료의 방법이 본 명세서에 제공된다. 예를 들어, ADC는 필요로 하는 대상에서 종양의 크기(예를 들어, 종양 부피)를 감소시키거나 필요로 하는 대상에서 종양의 성장을 억제할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 ADC의 유효량을 대상체에게 투여함으로써 필요로 하는 대상체에서 암의 발병을 예방하는 방법이 본 명세서에 제공된다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 ADC의 유효량을 대상체에게 투여함으로써 필요로 하는 대상체에서 종양의 크기(예를 들어, 종양 부피)를 감소시키는 방법이 본 명세서에 제공된다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 ADC는 종양 크기(예를 들어, 종양 부피)를 적어도 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 99%까지 감소시킨다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 ADC는 종양 성장을 적어도 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 99% 까지 억제한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 ADC의 유효량을 대상체에게 투여함으로써 이를 필요로 하는 대상체의 전이 수를 감소시키는 방법이 본 명세서에 제공된다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 ADC의 유효량을 대상체에게 투여함으로써 이를 필요로 하는 대상체에서 전체 생존 기간, 중간 생존 시간, 또는 무진행 생존 기간을 연장하는 방법이 본 명세서에 제공된다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 ADC의 유효량을 대상체에게 투여함으로써 표준 관리 치료제에 내성을 갖게 된 대상체를 치료하는 방법이 본 명세서에 제공된다.
일부 구현예에서, 항-TF 항체 또는 ADC를 사용한 치료로부터 이익을 얻을 수 있는 질환 또는 병태는 신생혈관형성을 수반하는 질환 또는 병태이다. 특정 구현예에서, 신생혈관형성형성을 수반하는 질환 또는 병태는 암이다. 일부 구현예에서, 항-TF 항체 또는 ADC를 사용한 치료로부터 이익을 얻을 수 있는 질환 또는 병태는 혈관 염증을 수반하는 질환 또는 병태이다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항-TF 항체 및 ADC는 신생혈관형성을 수반하는 질환 또는 병태의 치료를 위한 약제로서 사용하기 위해 제공된다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공되는 항-TF 항체 및 ADC는 신생혈관형성을 수반하는 질환 또는 병태의 치료를 위한 약제의 제조 또는 준비에 사용하기 위해 제공된다. 특정 구현예에서, 신생혈관형성형성을 수반하는 질환 또는 병태는 암이다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항-TF 항체 및 ADC는 혈관 염증을 수반하는 질환 또는 병태의 치료를 위한 약제로서 사용하기 위해 제공된다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항-TF 항체 및 ADC는 혈관 염증을 수반하는 질환 또는 병태의 치료를 위한 약제의 제조 또는 준비에 사용하기 위해 제공된다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항-TF 항체 또는 ADC의 유효량을 대상체에게 투여함으로써 필요로 하는 대상체에서 신생혈관형성을 수반하는 질환 또는 병태를 치료하는 방법이 본 명세서에 제공된다. 특정 구현예에서, 신생혈관형성형성을 수반하는 질환 또는 병태는 암이다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항-TF 항체 또는 ADC의 유효량을 대상체에게 투여함으로써 필요로 하는 대상체에서 혈관 염증을 수반하는 질환 또는 병태를 치료하는 방법이 본 명세서에 제공된다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 ADC의 유효량을 대상체에게 투여함으로써 이를 필요로 하는 대상체에서 신생혈관형성을 수반하는 질환 또는 병태의 발병을 지연시키는 방법이 본 명세서에 제공된다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 ADC의 유효량을 대상체에게 투여함으로써 이를 필요로 하는 대상체에서 신생혈관형성을 수반하는 질환 또는 병태의 발병을 예방하는 방법이 본 명세서에 제공된다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 ADC의 유효량을 대상체에게 투여함으로써 이를 필요로 하는 대상체에서 혈관 염증을 수반하는 질환 또는 병태의 발병을 지연시키는 방법이 본 명세서에 제공된다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 ADC의 유효량을 대상체에게 투여함으로써 이를 필요로 하는 대상체에서 혈관 염증을 수반하는 질환 또는 병태의 발병을 예방하는 방법이 본 명세서에 제공된다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 ADC는 대상체에 투여 시, 대상체에 의해 잘 용인된다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 ADC는 대상체에 투여 시, MMAE에 연결된 클론 25A3과 같은 다른 항-TF-ADC에 비해 더 나은 내약성을 갖는다. 예를 들어, ADC는 다른 항-TF-ADC에 비해 피부 독성을 감소시킬 수 있다. 피부 독성의 지표는 피부 자극, 피부 궤양, 피부 발진, 피부 염증, 가려움, 긁힘, 갈라짐, 쓰라림, 빛 또는 태양 노출에 대한 민감도 증가, 저림, 작열감, 따끔거림, 타박상, 물집, 두드러기, 박리 및 통증을 비제한적을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 하나 이상의 ADC는 대상체에 투여 시, 하나 이상의 항염증제(예를 들어, 스테로이드 - 예를 들어, 국소 또는 전신)의 투여를 필요로 하지 않는다. 일부 양태에서, 본 명세서에 제공된 하나 이상의 ADC는 대상체에 투여 시, 다른 항-TF-ADC 예컨대 MMAE에 연결된 클론 25A3에 비해 하나 이상의 항-염증제 (예를 들어, 스테로이드 - 예를 들어, 국소 또는 전신)의 투여를 필요로 한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 ADC는 대상체에 투여 시, 예를 들어 기준선에 비해 또는 상이한 항-TF ADC에 비해 낮거나 없는 간 독성을 초래한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 ADC는 대상체에 투여 시, 다른 항-TF ADC 예컨대 MMAE에 연결된 클론 25A3에 비해 감소된 간 독성을 초래한다. 이것은 예를 들어 간 손상에 대한 마커를 사용하여 평가할 수 있다. 간 손상에 대한 마커의 비제한적인 예는 알부민, 빌리루빈, 글로불린, 감마 글루타밀 트랜스퍼라제 (γGT 또는 GGT), 글루타메이트 피루베이트 아미노전이효소 (GPT), 알칼리성 포스파타제 (ALP), 알라닌 아미노트랜스퍼라제 (ALT), 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제 (AST), AST 대 혈소판 비율 지수(APRI), 간 섬유증 강화(ELF), 섬유증-4(FIB-4) 및 섬유소 지수를 포함한다. 예를 들어, 간 손상의 감소 또는 간 손상의 진행 감소는 ALP, AST, ALT, γGT 또는 빌리루빈의 혈청 수준 감소로 측정된다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 ADC, 대상체에 투여 시, 항체-약물 접합체는 기준선 수준에 비해 대상체에서 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제(AST) 수준을 증가시키지 않는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 ADC는 대상체에 투여 시, 기준선 수준에 비해 또는 상이한 항-TF ADC에 비해 대상체에서 감소된 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제(AST) 수준을 초래한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 ADC는 대상체에 투여 시, 기준선 수준에 비해 대상체에서 알라닌 아미노전이효소 수준을 증가시키지 않는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 ADC는 대상체에 투여 시, 기준선 수준에 비해 또는 상이한 항-TF ADC에 비해 대상체에서 감소된 알라닌 아미노전이효소 수준을 초래한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 ADC는 대상체에 투여 시, 예를 들어 기준선에 비해 호중구감소증의 감소, 저하 또는 부재를 초래한다. 이것은 MMAE에 연결된 클론 25A3과 같은 다른 항-TF 항체-약물 접합체와 관련될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 ADC는 대상체에 투여 시, 예를 들어 기준선에 비해 대상체에서 단핵구의 수를 변경, 증가 또는 감소시키지 않는다. 이것은 MMAE에 연결된 클론 25A3과 같은 다른 항-TF 항체-약물 접합체와 관련될 수 있다.
항염증제의 비제한적 예는 비스테로이드성 항염증제(NSAID), 스테로이드성 항염증제, 베타 작용제, 항콜린제, 항히스타민제(예를 들어, 에탄올아민, 에틸렌디아민, 피페라진 및 페노티아진), 및 메틸을 포함한다. 크산틴. NSAID의 예는 아스피린, 이부프로펜, 살리실레이트, 아세토미노펜, 셀레콕십, 디클로페낙, 에토돌락, 페노프로펜, 인도메타신, 케토랄락, 옥사프로진, 나부멘톤, 설린닥, 톨멘틴, 로페콕십, 나프록센, 케토프로펜 및 나부메톤을 포함하지만 이에 국한되지 않는다. 이러한 NSAID는 사이클로옥스게나제 효소(예를 들어, COX-1 및/또는 COX-2)를 억제하여 기능한다. 스테로이드성 항염증 약물의 예는 글루코코르티코이드, 덱사메타손, 코르티손, 하이드로코르티손, 프레드니손, 프레드니솔론, 트리암시놀론, 아줄피딘, 및 에이코사노이드 예컨대 프로스타글란딘, 트롬복산, 및 류코트리엔을 포함하지만 이에 국한되지 않는다. 이러한 항염증제는 국소적이거나 전신적일 수 있다.
항염증제 및 이들의 투여량, 투여 경로 및 권장 사용법은 당업계에 공지되어 있으며 문헌[Physician's Desk Reference(제60판, 2006)]에 기재되어 있다.
10. 병합 요법
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 ADC는 적어도 하나의 추가의 치료제와 함께 투여된다. 임의의 적합한 추가의 치료제는 본 명세서에 제공된 항체 또는 ADC 와 함께 투여될 수 있다. 일부 양태에서, 추가의 치료제는 방사선, 세포독성제, 화학치료제, 세포증식억제제, 항-호르몬제, 면역자극 제제, 항-혈관신생제, 및 이들의 조합으로부터 선택된다.
추가의 치료제는 임의의 적당한 수단에 의해 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 ADC 및 추가의 치료제는 동일한 약제학적 조성물에 포함된다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 ADC 및 추가의 치료제는 상이한 약제학적 조성물에 포함된다.
본 명세서에 제공된 항체 또는 ADC 및 추가의 치료제가 상이한 약제학적 조성물에 포함되는 구현예에서, 항체 또는 ADC의 투여는 추가의 치료제의 투여 전에, 동시에, 및/또는 그 다음에 일어날 수 있다.
11. 진단 방법
또한 대상체로부터의 세포에 대한 TF의 존재를 검출하는 방법이 제공된다. 그와 같은 방법, 예를 들어, 본 명세서에 제공된 항체 또는 ADC에 의한 처리에 대한 반응성을 예측 및 평가하기 위해 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 질환 또는 병태을 가지고 있거나 가지고 있는 것으로 의심되는 대상체에서 TF를 검출하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 방법은 (a) 대상체로부터 샘플을 받는 단계; 및 (b) 상기 샘플을 본 명세서에 제공된 항체과 접촉시켜 샘플에서 TF의 존재 또는 수준을 검출하는 단계. 일부 구현예에서, 본 방법은 (a) 상기 대상체에게 본 명세서에 제공된 항체를 투여하는 단계; 및 (b) 대상체에서 TF의 존재 또는 수준을 검출하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 질환 또는 병태는 암이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 두경부암이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 난소암이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 위암이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 식도암이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 자궁경부암이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 전립선암이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 췌장 암이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 에스트로겐 수용체 음성 (ER-), 프로게스테론 수용체 음성 (PR-), 및 HER2 음성 (HER2-) 삼중 음성 유방암이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 교모세포종이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 폐암이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 방광암이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 흑색종이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 신장암이다. 일부 구현예에서, 질환 또는 병태는 신생혈관형성을 수반한다. 특정 구현예에서, 신생혈관형성을 수반하는 질환 또는 병태는 당뇨 망막병증이다. 특정 구현예에서, 신생혈관형성을 수반하는 질환 또는 병태는 암이다. 일부 구현예에서, 질환 또는 병태는 혈관 염증을 수반한다.
일부 구현예에서, 본 방법은 (a) 상기 대상체에게 본 명세서에 제공된 ADC를 투여하는 단계; 및 (b) 대상체에서 TF의 존재 또는 수준을 검출하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 질환 또는 병태는 암이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 두경부암이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 난소암이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 위암이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 식도암이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 자궁경부암이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 전립선암이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 췌장 암이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 에스트로겐 수용체 음성 (ER-), 프로게스테론 수용체 음성 (PR-), 및 HER2 음성 (HER2-) 삼중 음성 유방암이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 교모세포종이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 폐암이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 방광암이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 흑색종이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 신장암이다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 형광 표지와 접합된다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 방사성 표지와 접합된다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 효소 표지와 접합된다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 ADC는 형광 표지를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 ADC는 방사성 표지를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 ADC는 효소 표지를 포함한다.
일부 구현예에서, 그와 같은 세포에 의해 발현된 TF의 상대적인 양은 결정된. TF를 발현시키는 세포의 분율 및 그와 같은 세포에 의해 발현된 TF의 상대적인 양은 임의의 적합한 방법에 의해 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 유세포측정는 그와 같은 측정을 수행하기 위해 사용된다. 일부 구현예에서, 형광 보조된 세포 분류 (FACS)는 그와 같은 측정을 수행하기 위해 사용된다.
12. 키트
또한 본 명세서에 제공된 항체 또는 ADC를 포함하는 키트가 제공된다. 키트는 본 명세서에서 기재된 바와 같은 질환 또는 장애의 치료, 예방, 및/또는 진단을 위해 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 키트는 용기 및 용기 상의 또는 용기와 관련된 라벨 또는 포장 삽입물을 포함한다. 적합한 용기는, 예를 들어, 병, 바이알, 주사기, 및 IV 용액 백을 포함한다. 용기는 다양한 물질, 예컨대 유리 또는 플라스틱로부터 형성될 수 있다. 용기는, 그것만으로, 또는 또 다른 조성물과 조합될 때, 질환 또는 장애를 치료하고, 예방하고/거나 진단하는데 효과적인 조성물을 수용한다. 용기는 멸균 접근 포트를 가질 수 있다. 예를 들어, 용기가 정맥내 용액 백 또는 바이알이면, 바늘로 뚫을 수 있는 포트를 가질 수 있다. 조성물 중 적어도 하나의 활성제는 본 명세서에 제공된 항체 또는 ADC이다. 라벨 또는 포장 삽입물은, 본 조성물이 선택된 병태를 치료하기 위해 사용됨을 나타낸다.
일부 구현예에서, 본 키트는 (a) 제1 조성물을 수용하고 있는 제1 용기로서, 상기 제1 조성물은 본 명세서에 제공된 항체 또는 ADC를 포함하는 제1 용기; 및 (b) 제2 조성물을 수용하고 있는 제2 용기로서, 상기 제2 조성물은 추가의 치료제를 포함하는 제2 용기를 포함한다. 본 발명의 이러한 구현예에서의 키트는, 본 조성물이 특정 병태를 치료하기 위해 사용될 수 있음을 나타내는 포장 삽입물을 추가로 포함할 수 있다.
대안적으로, 또는 추가로, 본 키트는 약제학적으로-허용가능한 부형제를 포함하는 제2 (또는 제3) 용기를 추가로 포함할 수 있다. 일부 양태에서, 부형제는 완충액이다. 본 키트는 필터, 니들, 및 주사기를 포함하여 상업적 및 사용자 관점으로부터 바람직한 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다.
실시예
하기는 본 발명의 방법 및 조성물의 예이다. 본 명세서에 제공된 일반적인 설명이 주어지면, 다양한 다른 구현예가 실시될 수 있음이 이해된다.
아래는 본 발명을 실시하기 위한 특정 구현예의 예이다. 상기 예는 설명적 목적으로만 제공되고, 어떤 식으로든 본 발명의 범위를 한정하고자 하는 것은 아니다. 사용된 수치 (예를 들어, 양, 온도, 등)에 관하여 정확도를 보장하기 위해 노력하였지만, 일부 실험 오차 및 편차는, 물론, 허용될 수 있어야 한다.
본 발명의 실시는, 달리 나타내지 않는 한, 당업계 내에서, 단백질 화학, 생화학, 재조합 DNA 기술 및 약리학의 종래의 방법을 이용할 것이다. 그와 같은 기술은 문헌에서 충분히 설명된다. 참고, 예를 들어, T.E. Creighton, Proteins: Structures and Molecular Properties (W.H. Freeman and Company, 1993); A.L. Lehninger, Biochemistry (Worth Publishers, Inc., current addition); Sambrook, 등, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2nd Edition, 1989); Methods In Enzymology (S. Colowick and N. Kaplan eds., Academic Press, Inc.); Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition (Easton, Pennsylvania: Mack Publishing Company, 1990); Carey and Sundberg Advanced Organic Chemistry 3 rd Ed. (Plenum Press) Vols A and B(1992).
실시예 1: 항체-약물 접합체 ( ADC )의 합성
항-TF 항체 및 링커-독소 A (본 출원에서 "LT-A"로도 언급됨)의 항체-약물 접합체 (ADC)를 아래에 기재된 바와 같이 제조하였다. 연결되지 않은 링커-독소 A의 구조는 도 1에 도시되어 있다. 항-TF 항체는 2019년 1월 4일에 출원된 PCT/US2019/12427에 기재되어 있으며; 모든 목적을 위해 그 전체가 참조로 본 명세서에 포함되어 있다.
간략하게, 포스페이트-완충 식염수 (PBS), pH 7.4 중 5 내지 10 mg/mL의 25A3 항체 (클론 25A3의 CDR 및 V 영역 서열에 대해서는 표 8 참고)는 트리스(2-카복시에틸)포스핀 (2.0-2.5 또는 3.2 몰 당량) 및 최종 농도 0.8 mM의 디에틸렌트리아민-펜타아세트산을 첨가하여 환원되었다. 37℃에서 2시간 후, 부분적으로 환원된 항체를 얼음 위에서 10분 동안 냉각시킨 다음 얼음 위에서 8 몰 당량의 링커-독소 A로 1시간 동안 접합시켰다. 반응물을 과잉의 N-아세틸-L-시스테인으로 켄칭시켰다. 켄칭된 반응물을 정제 전에 얼음 위에서 30분 동안 두었다. ADC는 제조자의 프로토콜에 따라 각각 두 차례의 40 kDa MWCO Zeba™ 스핀 탈염 칼럼 (10 mL 칼럼, 제품 번호 8772, 로트 번호 RL240689)을 통해 정제되었다. 정제 전에, 두 세트의 칼럼을 멸균 PBS로 프라이밍하였다. ADC를 한 세트의 PBS 프라이밍된 칼럼을 통해 먼저 정제된 다음, 샘플을 수집하고, 다른 세트를 통해 두 번째로 정제하였다. 두 번째 정제 후, ADC를 다시 함께 풀링하고, 멸균 여과하고, -80℃에서 냉동시켰다.
약물-항체 비 (DAR)는, WO 2016/041082에 기재된 바와 같이, UV/vis 분광법, 소수성 상호작용 크로마토그래피 (HIC), 및/또는 비과시간 검출 및 질량 특성화를 통한 역상 액체 크로마토그래피 분리 (RP-UPLC/질량 분광법)에 의해 측정될 수 있다. 약물-연결된 형태의 분포 (예를 들어, DAR0, DAR1, DAR2 등의 종들의 분획)도, WO 2016/041082에 또한 기재된 바와 같이, MS (동반되는 크로마토그래피 분리 단계의 여부에 관계없이), 소수성 상호작용 크로마토그래피, 역상 HPLC 또는 등전점 초점 겔 전기영동 (IEF)을 비롯한 당업계에 알려진 다양한 기술에 의해 분석될 수 있다.
본 실시예에서, 생성된 ADC의 약물-항체 비 (DAR)는 약 3이었다. DAR은 소수성 상호작용 크로마토그래피에 의해 결정되었다: 평균 DAR = (0 x (DAR0 면적%) + 2 x (DAR2 면적%) + 4 x (DAR4 면적%) + 6 x (DAR6 면적%) + 8 x (DAR8 면적%) / 100. 크기 배제 크로마토그래피를 사용하여 ADC 제제가 적어도 95% 단량체였음을 확인하였다.
LT-A를 포함하는 ADC의 묘사가 도 2에 나타나 있다. 예를 들어 이 실시예에서 제조된, 25A3 및 LT-A를 포함하는 ADC는 아래 실시예 2-8의 검정 및 연구에 사용되었다.
실시예 2: 항체-약물 접합체 ( ADC )의 세포독성 검정
ADC의 세포독성을 평가하기 위해, TF-양성 A431 세포를 40 μL의 배지에서 웰당 4x103 세포로 384-웰 플레이트 (Greiner Bio-One, Monroe, NC, USA)에 분주하였다. 링커-독소 A에 접합된 항-TF 항체 25A3 또는 이소타입 대조군 항체를 포함하는 ADC를 실시예 1에 기재된 바와 같이 제조한 다음, 5 nM에서 시작하여 연속 희석하였다. 세포를 ADC와 함께 4시간 동안 인큐베이션한 후 세척하고 새로운 배지에서 또 다른 68시간 동안 배양하거나 ADC와 함께 3일 동안 인큐베이션하였다. 세포 생존력은 이후 CellTiter-Glo (CTG) 검정 시약 (Promega, Madison, WI, USA)에서 용해에 의해 평가되었다. CTG 발광을 Envision 플레이트 판독기에서 측정하고, 4회 반복의 평균 및 표준 편차를 Prism에서 그래프로 표시하였다. 각 ADC에 대해, IC50을 4-파라미터 결합 모델을 사용하여 Prism에서 계산하였다.
도 3a는 CTG 발광에 의해 지시된 바와 같은 세포 생존력, 및 이소타입 대조군 또는 25A3-LT-A와 함께 4시간 인큐베이션한 후 세척하고 68시간 배양한 후 TF-양성 A431 세포에서 계산된 IC50을 나타낸다. 도 3b는 CTG 발광에 의해 지시된 바와 같은 세포 생존력, 및 이소타입 대조군 또는 25A3-LT-A와 함께 3일 인큐베이션 후 TF-양성 A431 세포에서 계산된 IC50을 나타낸다. 항-TF ADC만이 TF-양성 A431 세포에서 세포독성을 야기하였다.
이들 데이터는 항-TF 항체-약물 접합체가 시험관내에서 TF-양성 세포의 생존력을 감소시켰음을 나타낸다.
실시예 3: MDA MB213 이종이식 모델에서 항- TF ADC의 효과
생체 내 ADC의 효능을 평가하기 위해 면역이 손상된 마우스에서 이종이식 연구를 수행하였다. TF-양성 MDA-MB231 삼중-음성 유방 암종 세포주는 무흉선 누드 마우스 (Charles River Laboratories, Wilmington, MA)의 옆구리에 피하로 이식되었다. 종양이 150-200 mm3의 평균 크기에 도달했을 때 동물을 랜덤화하고, 실시예 1에 기재된 바와 같이 제조된 항-TF 항체-약물 접합체 25A3-LT-A의 지시된 용량, 이소타입 대조군-LT-A 또는 비히클 (PBS)으로 2주 동안 매주 1회 복강내로 (i.p.) 처리하였다. 체중 및 종양 크기 평가는 격주로 수행되었다. 종양 크기가 1200 mm3에 도달하거나 피부 궤양화가 분명해지면, 동물을 연구에서 제외시키고 안락사시켰다. 결과는 도 4a에 도시되어 있다. 5 mg/kg 25A3-LT-A를 사용한 치료는 이소타입 대조군 LT-A의 두 용량과 비교하여 종양 부피를 감소시키고 종양 성장을 지연시켰다. 15 mg/kg 25A3-LT-A를 사용한 치료는 이소타입 대조군 LT-A의 두 용량과 비교하여 종양 부피를 감소시키고 종양 성장을 예방하였다. 이들 데이터는 항-TF 항체-약물 접합체 25A3-LT-A가 생체 내에서 종양 크기를 감소시키는 데 효과적이었음을 나타낸다.
실시예 4: HPAF -II 이종이식 모델에서 항- TF ADC의 효과
생체 내 ADC의 효능을 평가하기 위해 면역이 손상된 마우스에서 이종이식 연구를 수행하였다. TF-양성 HPAF-II 췌장 암종 세포를 무흉선 누드 마우스 (Charles River Laboratories, Wilmington, MA)의 옆구리에 피하로 이식하였다. 종양이 150-200 mm3의 평균 크기에 도달했을 때 동물을 처리 그룹으로 랜덤화하고, 실시예 1에 기재된 바와 같이 제조된 항-TF 항체-약물 접합체 25A3-LT-A의 지시된 용량, 이소타입 대조군-LT-A 또는 비히클 (PBS)로 2주 동안 매주 1회 복강내로 (i.p.) 처리하였다. 체중 및 종양 크기 평가는 격주로 수행되었다. 종양 크기가 1200 mm3에 도달하거나 피부 궤양화가 분명해지면, 동물을 연구에서 제외시키고 안락사시켰다. 결과는 도 4b에 도시되어 있다. LT-A에 접합된 항-TF 항체 25A3을 포함하는 ADC는 비히클-처리 그룹 또는 이소타입 대조군 LT-A 처리 그룹과 비교하여 종양 크기가 감소하였다. 이들 데이터는 항-TF 항체-약물 접합체 25A3-LT-A가 생체 내에서 종양 크기를 감소시키는 데 효과적이었음을 나타낸다.
용량 반응 연구를 위해, 종양이 200 mm3의 크기에 도달했을 때, 항-TF 항체-약물 접합체 25A3-LT-A의 지시된 용량을 복강내로 한 번 투여하였다. 도 5a 내지 5d는 1.25 mg/kg 내지 10 mg/kg 범위의 용량으로 투여된 25A3-LT-A가 종양 부피에 미치는 영향을 보여준다. 1.25 mg/kg 또는 비히클로 처리된 마우스는 치료를 받고 15일 이내에 1000 mm3를 초과하는 종양을 가졌다. 그에 반해서, 5 mg/kg, 7.5 mg/kg 또는 10 mg/kg 25A3-LT-A로 처리된 마우스는 처리 후 처음 5주 동안 더 느린 종양 성장을 나타냈다.
약동학적 (PK) 연구를 위해, 종양이 200 mm3의 크기에 도달할 때부터 마우스를 2.5 mg/kg 또는 10 mg/kg의 항-TF 항체-약물 접합체 25A3-LT-A로 한 번 복강내로 처리하였다. 간단히 말해서, 샘플은 하악골 출혈에 의해 5일 동안 24시간마다 수집되었다 (0.1 mL). 25A3-LT-A의 농도는, hTF가 코팅 시약이고, 이차 항-hIgG가 검출기인 PK 검정에서 측정되었다. PK 검정 결과를 도 6 및 표 23에 나타내었다. 데이터는 항-TF 항체-약물 접합체 25A3-LT-A가 선형 약동학을 가졌음을 나타내었다.
Figure pct00208
후기 개입 동안 투여된 항-TF ADC의 효과를 평가하기 위해, 일단 종양이 500 mm3의 크기에 도달했을 때 시작하여, 마우스를 7.5 mg/kg 또는 10 mg/kg의 항-TF 항체-약물 접합체 25A3-LT-A로 복강내로 처리하였다. 결과는 도 7a 내지 7d에 도시되어 있다. 7.5 mg/kg의 25A3-LT-A로 처리된 마우스는 대조군 (비히클)의 마우스에 비해 감소된 종양 성장을 나타냈다. 데이터는 또한 대조군 (비히클)의 마우스에 비해 10 mg/kg의 고용량으로 처리된 마우스에 대해 음성 종양 성장 (즉, 종양 부피 감소)을 보여주었다.
실시예 5: 다양한 환자 유래된 이종이식 모델에서 항- TF ADC의 효과
무흉선 누드 마우스 (Envigo, Indianapolis, IN)에서 환자-유래된 이종이식 (PDX) 연구를 수행하여 생체 내에서 25A3-LT-A ADC의 효능을 평가하였다. 간단히 말해서, 종양은 스톡 동물에서 계대되었고, 재이식을 위해 수거되었다. 연구 동물은 종양 단편이 있는 왼쪽 옆구리에 일방적으로 이식되었고, 종양이 150-200 mm3의 평균 크기에 도달했을 때 처리 그룹으로 랜덤화되었다. 동물을 10 mg/kg의 25A3-LT-A 또는 비히클 대조군 (PBS)으로 1회 복강내로 처리하였다. 체중 및 종양 부피 측정은 격주로 수행되었다. 종양 크기가 1200 mm3에 도달했거나 피부 궤양화가 분명해지면, 동물을 연구에서 제외시키고, 30일 후에 안락사시켰다. 평균의 표준 오차 (SEM)가 있는 평균 종양 부피 (MTV)를 시간 경과에 따라 플롯팅하였다. 치료 효능은, 1200 mm3 이상의 종양 크기로 인해 비히클 암에 있는 모든 동물이 안락사되기 전에, 종양 성장 억제 (% TGI = 100% x [1-(최종 MTV - 처리 그룹의 초기 MTV)/(최종 MTV - 대조군의 초기 MTV)])를 계산하여 결정되었다.
면역조직화학 (IHC) 분석은 TF 발현 및 세포 국소화 (막 대 세포질)의 검출에 사용되었다. 미처리된 마우스의 조직을 Rip Tide (Mosaic Laboratories, Lake Forest, CA)를 사용하여 수조에서 95-97℃에서 40분 동안 전처리하고, 벤치에서 10분 동안 냉각하고, 증류수로 3회 린스하고, Splash-T 완충액 (Mosaic Laboratories)으로 5분 동안 린스하였다. 조직 절편을 EnVision 과산화효소-차단 시약 (EnVision+ Mouse HRP 검출 키트, Agilent, Carpinteria, CA)에서 5분 동안 차단한 다음 Splash-T 완충액에서 각각 5분 동안 2회 린스하였다. 다음으로, 조직 절편을 항-TF 항체 (마우스 클론 HTF-1) 또는 마우스 음성 대조군 시약으로 30분 동안 염색한 후 Splash-T 완충액에서 각각 5분 동안 2회 린스하였다. 조직 절편의 두 번째 염색 단계는 EnVision+ Mouse HRP (EnVision+ Mouse HRP 검출 키트)로 30분 동안 수행된 후 Splash-T 완충액에서 각각 5분 동안 2회 린스하였다. 항-TF 염색을 시각화하기 위해, 조직 절편을 DAB 크로모겐 (EnVision+ Mouse HRP 검출 키트)으로 5분 동안 전개한 다음 증류수에 10회 담그고 5분 동안 린스하였다. 조직 절편을 5분 동안 헤마톡실린으로 대조염색한 후 증류수로 3회 린스하였다.
염색 강도는 인증된 해부 병리학자에 의해 0 (음수)에서 3 (또는 "3+")까지의 반정량적 정수 척도로 점수를 매겼다. 각 강도 수준에서 양성으로 염색된 세포의 백분율을 기록하였다. 평점은 세포막에 대한 TF의 국소화를 기반으로 하였다. H 점수는 염색 강도의 구성요소를 양성 세포의 백분율과 결합시킨 것이다. 이는 0에서 300 사이의 값을 가지며, 아래와 같이 정의된다: 1 x (1+ 강도에서 염색된 세포의 백분율) + 2 x (2+ 강도에서 염색된 세포의 백분율) + 3 x (3+ 강도에서 염색된 세포의 백분율) = H 점수. 3+는 강하게 염색된 것이고, 2+는 적당하게 염색된 것이고, 1+는 약하게 염색된 것이고, 0은 염색이 없는 것이다.
PDX 연구 1
상기 개시된 방법을 사용하여, 5 마리의 마우스 (모델)를 25A3-LT-A ADC의 효능에 대해 평가하였다. 그 결과를 표 24-29 및 도 8a-8e에 나타내었다. 나타낸 바와 같이, 5개 모델 중 4개는 상당한 종양 성장 억제를 나타냈다. 이들 데이터는 다양한 종양 유형 및 TF-발현 암에서 높은 효능을 시사한다. 상기 모델의 IHC 분석은 상이한 종양 모델 간에 견줄만한 H-점수 (모두 100과 200 사이)를 나타내며, 이는 견줄만한 수준의 TF 발현, 및 TF의 이질적 분포를 나타낸다 (도 9a-9e).
Figure pct00209
도 9a 및 표 25는 CTG-0707 위 모델의 IHC 분석 결과를 나타낸다. 다음의 표에서, SCL=세포 아래 국소화이다. M = 막 염색; C = 세포질 염색; MC=막/세포질 염색 CM=세포질/막 염색.
Figure pct00210
도 9b 및 표 26은 CTG-0353 위 모델의 IHC 분석 결과를 나타낸다.
Figure pct00211
도 9c 및 표 27은 CTG-1076 방광 모델의 IHC 분석 결과를 나타낸다.
Figure pct00212
도 9d 및 표 28은 CTG-0786 두경부 모델의 IHC 분석 결과를 나타낸다.
Figure pct00213
도 9e 및 표 29는 CTG-1130 두경부 모델의 IHC 분석 결과를 나타낸다.
Figure pct00214
PDX 연구 2
상기 개시된 방법을 사용하여, 5 마리의 마우스를 25A3-LT-A ADC의 효능에 대해 평가하였다. 그 결과를 하기 표 30-35 및 도 10a-10e에 나타내었다. 나타낸 바와 같이, 5개 모델 중 2개는 상당한 종양 성장 억제를 나타냈다. 다른 타사 공급업체에 의해 수행된 PDX 연구 1에서 시험된 모델과 비교하여 PDX 연구 2에서 시험된 모델 사이에 더 큰 변동이 있었다. 특히 2개의 식도암 모델과 1개의 췌장암 모델 (PA6262)은 낮은 종양 성장 억제를 나타냈다. 이들 모델에서 관찰된 낮은 종양 성장 억제에 대한 몇 가지 잠재적인 설명은 다음을 포함한다:
● 이식 후, 다른 모델에 비해 TF 발현이 낮거나 없음; 및/또는
● 종양 내 괴사; 및/또는
● 실험적 변형 또는 오류.
상기 모델의 IHC 분석은 상이한 종양 모델 (견줄만한 수준의 TF 발현을 나타냄) 및 TF의 이질적 분포 간에 견줄만한 H-점수를 나타냈다 (도 11a-12).
Figure pct00215
도 11a 및 표 31은 HN 2574 두경부 모델의 IHC 분석 결과를 나타낸다.
Figure pct00216
도 11b 및 표 32는 ES0214 식도 모델의 IHC 분석 결과를 나타낸다.
Figure pct00217
도 11c 및 표 33은 ES0147 식도 모델의 IHC 분석 결과를 나타낸다.
Figure pct00218
도 11d 및 표 34는 PA1332 췌장 모델의 IHC 분석 결과를 나타낸다.
Figure pct00219
도 11e 및 표 35는 PA6262 췌장 모델의 IHC 분석 결과를 나타낸다.
Figure pct00220
도 12는 난소 또는 자궁경부암 종양 환자-유래된 이종이식편이 이식되고, 상기 실시예 5에서 개시된 방법을 사용하여 IHC 분석을 받은 3개의 추가 마우스 모델로부터의 면역염색을 보여준다.
실시예 6: 위 환자 유래된 이종이식 모델에서 항- TF ADC의 효과
생체 내 ADC의 효능을 평가하기 위해 면역이 손상된 마우스에서 이종이식 연구를 수행하였다. TF-양성 위 환자 유래된 이종이식을 무흉선 누드 마우스 (Envigo, Indianapolis, IN)의 옆구리에 피하로 이식하였다. 종양이 150-200 mm3의 평균 크기에 도달했을 때 동물을 랜덤화하고, 실시예 1에 기재된 바와 같이 제조된 항-TF 항체-약물 접합체 25A3-LT-A의 지시된 용량, 이소타입 대조군-LT-A 또는 비히클 (PBS)로 2주 동안 매주 1회 복강내로 (i.p.) 처리하였다. 체중 및 종양 크기 평가는 격주로 수행되었다. 종양 크기가 1200 mm3에 도달하거나 피부 궤양화가 분명해지면, 동물을 연구에서 제외시키고 안락사시켰다. 결과는 도 13a에 도시되어 있다. LT-A (25A3-LT-A)에 접합된 항-TF 항체 25A3을 포함하는 ADC는 비히클-처리 그룹 또는 이소타입 대조군 LT-A 처리 그룹과 비교하여 종양 크기가 감소하였다. 4 mg/kg 25A3-LT-A를 사용한 치료는 12 mg/kg의 이소타입 대조군 LT-A와 비교하여 종양 부피를 감소시키고 종양 성장을 지연시켰다. 12 mg/kg 25A3-LT-A를 사용한 치료는 12 mg/kg 이소타입 대조군 LT-A와 비교하여 종양 부피를 감소시키고, 종양 성장을 예방하였다. 이들 데이터는 항-TF 항체-약물 접합체 25A3-LT-A가 생체 내에서 종양 크기를 감소시키는 데 효과적이었음을 나타낸다.
실시예 7: 폐 환자 유래된 이종이식 모델에서 항- TF ADC의 효과
생체 내 ADC의 효능을 평가하기 위해 면역이 손상된 마우스에서 이종이식 연구를 수행하였다. TF-양성 폐 환자 유래된 이종이식을 NSG™ (NOD.Cg-Prkdc scid Il2rgt m1Wjl /SzJ) 마우스 (Jackson Laboratories, Sacramento, CA)의 옆구리에 피하로 이식하였다. 종양이 150-200 mm3의 평균 크기에 도달했을 때 동물을 램덤화하고, 실시예 1에 기재된 바와 같이 제조된 항-TF 항체 약물 접합체 25A3-LT-A의 지시된 용량, 또는 이소타입 대조군-LT-A로 2주 동안 매주 1회 복강내로 (i.p.) 처리하였다. 체중 및 종양 크기 평가는 격주로 수행되었다. 종양 크기가 1200 mm3에 도달하거나 피부 궤양화가 분명해지면, 동물을 연구에서 제외시키고 안락사시켰다. 결과는 도 13b에 도시되어 있다. LT-A에 접합된 항-TF 항체 25A3을 포함하는 ADC는 이소타입 대조군 LT-A 처리 그룹과 비교하여 종양 성장을 지연시켰다. 이들 데이터는 항-TF 항체-약물 접합체 25A3-LT-A가 생체 내에서 종양 진행을 지연시키는 데 효과적임을 나타낸다.
실시예 8: 파일럿 Cyno 독성학 연구: 25A3- LT -A 대 25A3- MMAE
이 연구의 목적은 ADC 25A3-LT-A의 독성 파라미터를 항-TF 항체-약물 접합체 25A3-MMAE와 비교하여 평가하고, 전자가 MMAE (티소투맙 베도틴 (젠맙))를 포함하는 또 다른 항-TF 항체 약물 접합체에 대한 공개적으로 이용가능한 데이터와 비교하여 유사하거나 그렇지 않다면 더 나은 표적내 독성학을 나타내는지 여부를 결정하기 위한 것이었다. 티소투맙 베도틴은 프로테아제 절단 가능한 링커로 MMAE에 접합된 항-TF 완전 인간 단클론성 항체이다. (Chenard-Poirier 등, Annals of Oncology 28.suppl_5 (2017)). 티소투맙 베도틴은 이전의 연구에서 2.2 mg/kg의 용량으로 투여될 때 용량 제한 독성 (예를 들어, 호중구감소증)을 유발하는 것으로 나타났다. (de Bono 등, The Lancet Oncology 20.3 (2019): 383-393). 티소투맙 베도틴으로 3 mg/kg의 용량에서 호중구감소증 및 피부 독성이 또한 관찰되었다. 6 mg/kg에서 용량 제한 독성이 나타났으며, 이때 피험자(들)는 4 등급 호중구감소증 및 심각한 피부 자극 및 피부 궤양을 나타낸다. (Parren, P., Advancing Towards the Clinic As Soon As Possible: Pre-Clinical Development of a Therapeutic ADC Targeting Tissue Factor. World ADC Conference, October 16, 2013; Geoij, B.E.C.G. Antibody-drug conjugates in cancer. Diss. Faculty of Medicine, Leiden University Medical Center (LUMC), Leiden University, 2016.) LT-A에 접합된 HER-2 표적 항체를 사용한 이전의 연구에서는 HER-2-LT-A가 최대 18 mg/kg에서 상당한 호중구감소증을 초래하지 않았음이 밝혀졌다. 또한, 티소투맙 베도틴에 대해 일시적인 ALT 및 AST 상승이 보고되었다.
본 파일럿 독성학 연구를 수행하기 위해, 암컷 사이노몰구스 ("cyno") 원숭이 (그룹당 n=3)를 25A3-LT-A 또는 25A3-MMAE로 처리하고 (정맥내 주사에 의해), 연구 1일, 22일 및 36일에 지시된 용량을 투여받았다. 25A3-MMAE로 처리된 동물은 용량당 1.5 mg/kg, 3 mg/kg 또는 6 mg/kg을 투여받은 반면, 25A3-LT-A로 처리된 동물은 용량당 3 mg/kg, 6 mg/kg 또는 18 mg/kg을 투여받았다. 연구 43일차까지 살아남은 모든 원숭이는 계획대로 안락사되었다.
임상 관찰: 피부 독성
표 36은 연구 종료 시점까지 다양한 처리 그룹에서의 피부 독성과 관련된 정성적 데이터를 제공한다. 나타낸 바와 같이, 25A3-LT-A로 처리된 동물에서보다 25A3-MMAE로 처리된 동물에서 더 심각한 피부 자극이 있었다. 예를 들어, 6.0 mg/kg 25A3- LT-A에서는 3마리 동물 중 단 한 마리만이 국소 스테로이드 치료가 필요한 반면, 6.0 mg/kg 25A3-MMAE 그룹에서는 3 마리 동물 중 2 마리가 피부 자극에 대항하기 위해 국소 및 전신 스테로이드가 필요하였다. 모든 25A3 LT-A 처리 그룹 (n=12) 중에서, 단 한 마리의 동물만이 전신 스테로이드를 필요로 했으며, 해당 동물은 25A3-MMAE 코호트에서 시험된 최고 용량의 3배인 18.0 mg/kg의 최고 시험 용량을 투여받았다. 이들 데이터는, MMAE 기반 항-TF ADC를 사용하는 경우, 대응하는 LT-A 기반 항-TF 항체-ADC와 비교하여 더 큰 피부 독성 (및 더 낮은 내약성)을 나타낸다.
Figure pct00221
임상 화학: 간독성
25A3-MMAE 및 25A3-LT-A 처리와 관련된 간독성 파라미터를 평가하기 위해, 글로불린, 알부민, 알라닌 아미노트랜스퍼라제 (ALT), 및 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제 (AST)를 측정하였다. 연구 0일 (전처리), 8일, 15일, 29일 및 36일째, 및 안락사 전에 각 원숭이로부터 혈액 샘플을 수집하였다. 도 14a 및 14b는 각각 지시된 처리 그룹에 대한 AST 및 ALT 수준을 나타낸다. 이들 데이터는 12 mg/kg 25A3-LT-A 및 18 mg/kg 25A3-LT-A로 처리된 원숭이에서 연구 과정에 걸쳐 AST의 일시적인 증가를 보여주었다. 이들 처리 그룹 모두 2 등급 AST 상승을 나타냈다. 추가로, 12 mg/kg 25A3-LT-A 및 18 mg/kg 25A3-LT-A 처리 그룹은 글로불린의 약간의 증가와 알부민의 약간의 증가를 나타냈다. 25A3-MMAE나 25A3-LT-A 모두 일시적인 ALT 상승을 초래하지 않았다.
혈액학
25A3-MMAE 및 25A3-LT-A의 잠재적인 표적외 효과를 추가로 평가하기 위해, 원숭이에서 중성구 및 단핵구를 측정하였다. 연구 0일 (전처리), 4, 8, 15, 25, 29, 36 및 43일째 및 안락사 전에 원숭이 각각에서 혈액 샘플을 수집하였다. 샘플은, 단핵구 수 및 중성구 수를 포함하지만, 이에 국한되지 않는 혈액학 파라미터를 결정하는 혈구 수를 완료하는 데 사용되었다.
도 15a-17d는 연구 과정에 걸친 중성구 수준을 보여준다. 3 mg/kg 25A3-MMAE 및 6 mg/kg 25A3-MMAE 그룹의 모든 동물에서 중성구의 현저한 감소가 있었다. 그에 반해서, 25A3-LT-A 그룹의 대부분의 원숭이는 과거 평균 이상을 유지하거나 단일 저하가 있었다. 한 가지 예외는 원숭이 4502였지만; 원숭이 4502는 매우 낮은 중성구 수로 시작하였다는 점에 유의해야 한다 (도 17a). 데이터는 6 mg/kg 25A3-MMAE로 처리된 원숭이에서 등급 3 및 4 호중구감소증을 나타냈고, 25A3-LT-A 처리 그룹의 원숭이에 대해서는 호중구감소증이 없음을 보여주었다. 이는 25A3-MMAE로 처리될 때 6 mg/kg에서 용량-제한 호중구감소증을 나타내지만, 25A3-LT-A로 처리될 때는 그렇지 않다.
단핵구 수준은 18 mg/kg 25A3-LT-A 처리 그룹을 제외하고는, 25A3-MMAE 및 25A3-LT-A 처리 그룹에 걸쳐 견줄만하였다 (도 18). 18 mg/kg 25A3-LT-A 처리 그룹 내에서, 일시적인 단핵구 상승은 눈 감염이 있는 원숭이 7503에서 기인하였다.
PK 및 면역원성
ADC PK를 조사하기 위해, 제1 및 제2 용량 투여 후 원숭이로부터 혈액 샘플을 수집하고, 단클론성 항체 (mAB) 검정 및 온전한 ADC 검정을 사용하여 평가하였다. mAB 검정은 코팅 시약으로 hTF를 사용하고, 검출기로 이차 항-hIgG를 사용하였다. 온전한 ADC 검정은 항-독소 mAb를 코팅 시약으로 사용하고, 항-IgG를 검출기로 사용하였다. 표 37 및 38은 mAb 검정 및 온전한 ADC 검정의 결과를 나타낸다.
Figure pct00222
Figure pct00223
25A3-MMAE 및 25A3-LT-A 둘 다에 대해, mAB 및 온전한 ADC 검정으로 결정된 바와 같이, 시간 농도 프로파일은 유사하였다. 이는 각 ADC가 급속하게 저하되지 않음을 시사한다.
PK 및 면역원성 데이터를 분석한 결과를 표 39에 요약하였다. 25A3-MMAE의 경우, PK는 제1 용량으로 거의 선형적으로 증가하였고, 제2 용량 투여 후의 농도는 제1 용량 투여 후보다 현저히 낮았다. 25A3-LT-A의 경우, 그룹에 걸쳐, 제2 용량 투여 후 농도는 제1 투여 후 관찰된 농도와 유사하였다 (3 mg/kg 용량에서는 제외). 데이터는, 용량이 증가함에 따라 감소하는, 약간의 표적-매개된 약물 성향을 시사한다. 데이터는 또한, 3 및 6 mg/kg에서 25A3-LT-A에 비해 25A3-MMAE의 더 빠른 청소능을 보여주었고, 이는 비-표적 매개된 흡수를 시사한다.
표 39에서 나타낸 바와 같이, 모든 원숭이는 항-약물 항체 (ADA)를 발달시켰다. 면역원성이 관찰되었지만, 일반적으로, 사이노몰구스 원숭이의 ADA는 인간의 ADA를 예측하지 못한다.
Figure pct00224
실시예 9: 링커-독소 A의 합성
다음의 실시예는 아우리스타틴 유도체인, 화합물 9를 포함하는 예시적인 링커-독소 (링커-독소 A, LT-A로도 지칭함)의 제조를 설명한다:
Figure pct00225
유사한 프로토콜을 사용하여 본 출원에 기재된 바와 같은 일반 화학식 I의 다른 아우리스타틴 유도체를 포함하는 링커-독소를 제조할 수 있다 (또한 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2016/041082 참고).
7.1 에틸 ( 2R,3R )-3- 메톡시 -2- 메틸 -3-((S)- 피롤리딘 -2-일) 프로파노에이트 (화합물 1)
Figure pct00226
0℃에서 무수 에탄올 (27.0 mL) 중 (2R,3R)-3-((S)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판산 산 (Boc-Dap-OH, 4.31 g, 15.0 mmol)의 교반된 용액에 티오닐 클로라이드 (3.0 mL)를 적가 방식으로 첨가하였다. 생성된 용액을 실온으로 가온되도록 하고, 진행을 HPLC-MS로 모니터링하였다. 18시간 후, 남아 있는 출발 물질이 검출되지 않았고, 용액을 감압 하에서 농축 건조시켰다. 생성된 오일을 톨루엔 (10 mL)에 현탁시키고, 감압 하에서 2회 농축한 다음 디에틸 에테르 (5 mL)에 현탁시키고, 감압 하에서 2회 농축하여 표제 화합물을 백색 고체 포움으로서 수득하였다 (3.78 g, 정량 수율%). MS m/z obs. = 216.5 (M+1).
7.2 ( 3R,4S,5S )-4-((S)-2-((( 벤질옥시 ) 카보닐 )아미노)- N,3 - 디메틸부탄아미도 )-3-메톡시-5-메틸헵탄산 (화합물 3)
Figure pct00227
화합물 2는 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2016/041082에 기재된 바와 같이 제조되었다.
디클로로메탄 (20 mL) 중 화합물 2 (6.965 g, 14.14 mmol)의 교반된 용액에 트리플루오로아세트산 (5.0 mL)을 첨가하였다. 반응 완료에 대해 HPLC-MS로 모니터링하였고, 40시간 후에는 출발 물질이 남아 있지 않았다. 반응물을 감압 하에서 농축하고, 톨루엔 (2 x 10 mL) 및 디클로로메탄 (2 x 10 mL)과 함께 동시-증발시켜 발포성 백색 고체 (6.2 g, 잔류 TFA를 포함하는 정량 수율)를 얻었다. 이 물질을 200 mL의 뜨거운 1:3 EtOAc:헥산에 용해시키고, 실온으로 냉각되도록 하였다. 냉각하는 동안, 침전물과 일부 작은 결정이 형성되었다. 5 mL EtOAc를 첨가하고, 현탁액을 다시 한 번 가열하여 침전물을 완전히 용해시켰다. 실온으로 냉각시키면 더 많은 결정이 형성되었고, 플라스크를 -30℃에서 밤새 두었다. 다음날 아침 모액을 경사분리하고, 결정을 2 x 50mL 헥산으로 린스하고, 고진공 하에 건조시켰다. 표제 화합물 5.67g을 결정질 생성물로서 회수하였다. MS m/z obs. = 405.7 (M+1).
7.3 에틸 (2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-(((벤질옥시)카보닐)아미노)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로파노에이트 (화합물 4)
Figure pct00228
실온에서 디클로로메탄 (5.0 mL)과 N,N-디메틸포름아미드 (5.0 mL)의 혼합물 중 화합물 3 (6.711 g, 15.37 mmol, 1.025 당량)의 교반된 용액에 HATU (5.732 g, 15.07 mmol, 1.005 당량) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (7.84 mL, 3 당량)을 첨가하였다. 실온에서 30분 동안 교반한 후, 디클로로메탄 (1.0 mL)과 N,N-디메틸포름아미드 (1.0 mL)의 혼합물 중 화합물 1 (3.776 g, 15.00 mmol, 1.0 당량)의 용액을 적가하고, 추가 3mL의 1:1 디클로로메탄:N,N-디메틸포름아미드와 함께 잔류 화합물 1에서 린스하였다. 반응을 HPLC-MS로 모니터링하였고, 15분 후에는 남아 있는 화합물 1이 관찰되지 않았다. 반응물을 감압 하에서 농축하고, 에틸 아세테이트 (약 125 mL)로 희석하고, 유기상을 1 M HCl (2 x 50 mL), 1 x dH2O (1 x 50 mL), 포화된 NaHCO3 (3 x 50 mL), 및 염수(25mL)로 추출하였다. 산성 및 염기성 수성층을 모두 25 mL EtOAc로 세척하였다. 그 다음 모든 유기물을 풀링하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축하여 적색 오일을 얻었다. 잔류물을 최소량의 디클로로메탄 (약 10 mL)에 용해시키고, 정제를 위해 Biotage® SNAP Ultra 360 g 실리카겔 칼럼(Isolera™ Flash System; Biotage AB, Sweden) 상에 로딩하였다 (10 칼럼 부피에 걸쳐 헥산 중 20-100% EtOAc). 순수한 생성물을 함유하는 분획을 풀링하여 7.9 g의 발포성 백색 고체를 회수하였다. 불순한 분획은 Biotage® SNAP Ultra 100 g 실리카겔 칼럼 상에서 두 번째 정제를 거치고, 순수한 생성물과 풀링되어 표제 화합물을 백색 포움 고체 (8.390 g, 88.3%)로 회수하였다. MS m/z obs. = 634.7 (M+1).
7.4 ( 2R,3R )-3-((S)-1-(( 3R,4S,5S )-4-((S)-2-((( 벤질옥시 ) 카보닐 )아미노)-N,3-디메틸 부탄아미도 )-3- 메톡시 -5- 메틸헵타노일 ) 피롤리딘 -2-일)-3- 메톡시 -2- 메틸프로판산 (화합물 5)
Figure pct00229
1,4-디옥산 (158 mL) 중 화합물 4 (8.390 g, 13.24 mmol)의 교반된 용액에 dH2O (39.7 ml) 및 수산화리튬 일수화물 (H2O 중 1 M, 39.7 mL, 3 당량)을 첨가하였다. 반응물을 4℃에서 교반하고, 출발 물질의 소모에 대해 HPLC-MS로 모니터링했으며, 이는 미량의 화합물 4만 남을 때까지 3일이 소요되었다. 반응 과정에서 메탄올의 손실(β-제거, <2%)에 상응하는 신규한 생성물이 원하는 물질 외에 작은 비율로 형성되었다. 반응물을 1 M 수성 HCl (50 mL)을 첨가하여 산성화하고, 감압 하에서 농축하여 디옥산을 제거하였다. 나머지 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (4 x 50 mL)로 추출하고, 유기상을 풀링하고, 염수 (15 mL + 2 mL 2 M HCl)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축하여 밝은 색상의 오일을 얻었다. 오일을 디에틸 에테르 (약 50 mL)에 재용해시키고, 감압 하에서 농축하여 (3x) 잔류 디옥산의 제거를 촉진하여 표제 생성물을 경질 오일 (7.81 g 97% 수율, 일부 잔류 디옥산 및 화합물 4 포함)로서 수득하였다. MS m/z obs. = 606.7 (M+1).
7.5 벤질 ((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-((4-(2,2,2-트리플루오로아세트아미도)페닐)설폰아미도)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카바메이트 (화합물 7)
Figure pct00230
화합물 6은 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2016/041082에 기재된 바와 같이 제조되었다.
디클로로메탄 (20 mL) 중 화합물 5 (7.12 g, 11.754 mmol)의 교반된 용액에 2,2,2-트리플루오로-N-(4-설파모일페닐)아세트아미드 (화합물 6, 4.095 g, 1.3 당량, 3 mL DMF에 용해됨), N,N-디메틸피리딘 (1.867 g, 1.3 당량) 및 N,N-디메틸포름아미드 (1.5 mL)를 첨가하여 밝은 황색 현탁액을 생성하였다. 5 mL의 DMF를 더 첨가해도 용액이 맑아지지 않았다. N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드 (EDCI) (2.817 g, 1.25 당량)를 한번에 첨가하고, 반응을 HPLC-MS로 모니터링하였다. 48시간 후, 반응은 더 이상 진행되지 않았고, 추가로 400 mg의 EDCI를 첨가하였다. 18시간 후, 남아 있는 출발 물질이 관찰되지 않았고, 반응물을 감압 하에서 농축하여 황색 오일을 얻었다. 오일을 에틸 아세테이트 (약 150mL) 및 1 M HCl (20 mL)에 용해시키고, 유기상을 차가운 2 M HCl (2 x 10 mL), 포화된 NaHCO3 (1 x 10 mL), 및 염수 (20 mL + 5 mL 2 M HCl)로 세척하였다. 산성 및 염기성 수성 분획을 EtOAc (1 x 20mL)로 추출하고, 모든 유기 분획을 풀링하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에서 농축하여 유성 조 고체 (13 g)를 수득하였다. 잔류물을 디클로로메탄 (약 10 mL)에 용해시키고, Biotage® SNAP Ultra 360 g 실리카겔 칼럼 상에 로딩하고, 50% EtOAc에서 3-칼럼 부피 안정기를 가지면서 헥산 중 10-100% EtOAc (2% AcOH) 구배 하에 12 칼럼 부피에 걸쳐 정제하였다. 순수한 생성물을 함유하는 분획을 풀링하고, 감압 하에서 농축하고, 톨루엔 (2 x 10 mL) 및 디에틸 에테르 (2 x 10 mL)로부터 용해 및 농축하여 원하는 생성물인, 7.1 g의 백색 포움 고체를 수득하였다. 불순한 분획은 Isolera™ 기기에서 Biotage® SNAP Ultra 100 g 실리카겔 칼럼을 사용하여 더 얕은 구배 조건 하에서 반복 정제를 거쳤다. 모든 순수한 분획을 풀링하여 순수한 생성물 (표제 화합물)을 백색 포움 고체 (8.60 g, 86%)로서 회수하였다. MS m/z obs. = 856.7 (M+1).
7.6 (S)-2-아미노-N-((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-((4-(2,2,2-트리플루오로아세트아미도)페닐)설폰아미도)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)-N,3-디메틸부탄아미드 (화합물 7a)
Figure pct00231
화합물 7 (3.71 g, 4.33 mmol)을 자석 교반기를 포함하고, 3방향 가스 라인 어댑터가 구배된 둥근바닥 플라스크에서 에틸 아세테이트 중 10% N,N-디메틸포름아미드 (30 mL)에 용해시켰다. 용기를 감압 하에서 2회 배기시키고, 질소 가스로 충전하였다. 10% 탄소상 팔라듐 (0.461 g, 0.1 당량)을 한번에 첨가하고, 3방향 어댑터를 플라스크에 장착하고, 수소 밸룬을 어댑터에 장착하고, 용기를 감압 하에 2회 배기시키고, 수소로 충전하였다. 반응물을 2일 동안 교반하도록 하고, 이 시간 동안 수소 밸룬을 가끔 재충전하였다. 대략 48시간 후, HPLC-MS 분석은 출발 물질이 남아 있지 않은 것으로 나타났다. 반응물을 메탄올 (20 mL)로 희석하고, 셀라이트 플러그를 통해 여과하였다. 셀라이트를 메탄올 (2 x 50 mL)로 세척하였다. 모든 여액을 풀링하고, 감압 하에서 농축하고, 생성된 오일을 디클로로메탄으로부터 용해 및 농축하였다. 감압 하에서 건조시킨 후, 표제 화합물을 무색 분말로 단리하였다 (3.10 g, 99%). MS m/z obs. = 722.6 (M+1).
7.7 (S)-2-((S)-2-(디메틸아미노)-3-메틸부탄아미도)-N-((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-((4-(2,2,2-트리플루오로아세트아미도)페닐)설폰아미도) 프로필) 피롤리딘 -1-일)-5- 메틸 -1- 옥소헵탄 -4-일)- N,3 -디메틸부탄아미드 (화합물 8)
Figure pct00232
N,N-디메틸포름아미드 중 N,N-(L)-디메틸발린 (1.696 g, 9.35 mmol)의 교반된 용액 (10 mL)에 HATU (3.216 g, 8.46 mmol) 및 디-이소프로필에틸아민 (3.10 mL, 17.8 mmol)을 첨가하였다. 5분 후에 투명한 황색 용액이 생성되었다. 추가로 10분 동안 계속 교반한 다음, 화합물 7a (3.213 g, 4.45 mmol)를 한번에 첨가하였다. 추가로 1시간 동안 교반한 후, HPLC-MS는 미량의 화합물 7a가 잔류하고, 반응이 16시간 동안 지속되었음을 나타냈다. 그 다음, 반응물을 감압 하에서 농축하고, 에틸 아세테이트 (120 mL) 및 40 mL 1:1 NaHCO3 (포화): 5% LiCl로 희석하고, 분별 깔때기로 옮겼다. 수성층을 제거하고, 유기상을 LiCl (1 x 20 mL), NaHCO3 (포화, 2 x 20 mL)으로 세척하였다. 수성층을 풀링하고, EtOAc (3 x 50 mL)로 추출하였다. 유기층을 풀링하고, 염수 (1 x 20 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축하여 DMF가 함유된 오일을 얻었고, 이를 회전식 증발기를 통해 농축하여 잔류 DMF를 제거하여 7 g의 조 짚색 오일을 수득하였다. 오일을 최소량의 디클로로메탄 중 10% 메탄올 (약 11 mL)에 용해시키고, 정제 (15 칼럼 부피에 걸쳐 CH2Cl2 중 2-20% MeOH, 생성물은 10-13% 주위에서 용리)를 위해 Biotage® SNAP Ultra 360 g 실리카겔 칼럼 상에 로딩하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 풀링하고, 감압 하에서 농축하여 표제 화합물을 무색 포움으로서 수득하였다. 불순한 분획을 합하고, 증발시키고, Isolera™ 기기 상의 Biotage® SNAP Ultra 100 g 실리카겔 칼럼 상에서 반복 정제하고, 첫 번째 칼럼으로부터의 순수한 생성물과 합하여 무색 포움 고체 (3.78 g)를 수득하였다. MS m/z obs. = 850.6 (M+1).
7.8 (S)-N-((3R,4S,5R)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-((4-아미노페닐)설폰아미도)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)-2-((S)-2-(디메틸아미노)-3-메틸부탄아미도)-N,3-디메틸부탄아미드 (화합물 9)
Figure pct00233
1,4-디옥산 (15 mL) 중 화합물 8 (0.980 g, 1.154 mmol)의 교반된 용액에 물 (3.5 mL) 및 1 M 수산화리튬 일수화물 (3 당량, 3.46 mL)을 첨가하였다. 생성된 밝은 현탁액을 4℃에서 교반되도록 하고, 출발 물질의 소모에 대해 HPLC-MS로 모니터링하였다. 전환이 완료되었을 때 (약 5일), 반응물을 3.46 mL의 1 M HCl로 중화하고, 감압 하에서 농축하여 디옥산을 제거하였다. 생성된 수성상을 60 mL EtOAc 및 5 mL 염수로 희석한 다음, 에틸 아세테이트 (2 x 30 mL)로 추출하였다. 유기 분획을 풀링하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 표제 화합물을 황갈색 고체 (0.930 g)로서 수득하였다. Rf = 0.5 (CH2Cl2 중 8% MeOH). MS m/z obs. = 753.7 (M+1).
7.9 2 ,3,5,6- 테트라플루오로페닐 3-(2-(2-(2-(2,5- 디옥소 -2,5- 디하이드로 -1H-파이롤-1-일)에톡시)에톡시)에톡시)프로파노에이트 (화합물 15)
Figure pct00234
건조된 50 mL 원추형 플라스크에서, 3-(2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)에톡시)프로판산 (화합물 14, 1.000 g, 4.52 mmol) 및 말레산 무수물 (0.443 g, 4.52 mmol)을 무수 N,N-디메틸포름아미드 (5 mL)에 용해시켰다. 반응물을 N2 하에 실온에서 6시간 동안 교반한 다음, 0℃로 냉각시키고, syn-콜리딘 (1.263 mL, 2.1 당량)을 적가하였다. 별도의 건조된 50 mL 원추형 플라스크에서, 테트라플루오로페놀 (3.002 g, 4 당량)을 무수 N,N-디메틸포름아미드 (10 mL)에 용해시켰다. 플라스크를 빙욕에서 0℃로 냉각시키고, 트리플루오로아세트산 무수물 (2.548 mL, 4 당량)을 적가하였다. 15분 동안 교반한 후, syn-콜리딘 (2.407 mL, 4 당량)을 적가하였다. 플라스크를 또 다른 15분 동안 교반되도록 한 다음, 내용물을 주사기를 통해 첫 번째 플라스크에 적가하였다. 반응물을 실온으로 가온되도록 하고, N2 하에서 계속 교반하였다. 반응을 출발 물질의 소모에 대해 HPLC-MS로 모니터링하였다. 6일 후, 반응은 화합물 14의 총 소모로 완료되면서 화합물 15 및 소량 (약 5%)의 비스-TFP 말레산 아미드 중간체만 남게 되었다. 반응물을 분별 깔때기로 옮기고, 디에틸 에테르 (75 ml)로 희석하고, 5% LiCl (1 x 20 mL), 1 M HCl (2 x 20 mL), 포화 NaHCO3 (5 x 20 mL) 및 염수 (1 x 20 mL)로 세척하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 잔류 DMF가 있는 갈색 조 오일을 얻었다. 조 오일을 8 mL의 1:1 DMF:H2O + 0.1% TFA에 용해시키고, 60 g Biotage® SNAP Ultra C18 칼럼 (Biotage AB, Uppsala, Sweden) 상에 로딩하고, 8 칼럼 부피에 걸쳐 ACN/H2O + 0.1% TFA의 선형 30-100% 구배 하에서 정제하였다. 순수한 분획을 풀링하고, 염수 (20 mL)로 희석한 다음 3 x 50 mL Et2O로 추출하였다. 풀링된 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 표제 화합물을 밝은-황색 오일로서 회수하였다 (1.34 g, 66% 수율).
7.10 tert -부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(N-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(디메틸아미노)-3-메틸부탄아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로파노일)설파모일)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카바메이트 (화합물 12)
Figure pct00235
화합물 11은 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2016/041082에 기재된 바와 같이 제조되었다.
비어있는 25 mL 배 모양 플라스크에, 화합물 11 (1.342 g, 3.58 mmol, 3.0 당량), 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드 하이드로클로라이드 (0.664 g, 3.46 mmol, 2.9 당량) 및 7-하이드록시-아자벤조트리아졸 (HOAT) (0.472 g, 3.46 mmol, 2.9 당량)을 첨가하였다. 이들 고체를 실온에서 30분에 걸쳐 교반하면서 N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL) 및 디클로로메탄 (4.5 mL)의 혼합물에 용해시켰다. 별도로, 화합물 9 (0.900 g, 1.20 mmol)를 N,N-디메틸포름아미드 (0.2 mL)와 디클로로메탄 (1.8 mL)의 혼합물에 용해시키고, 배 모양 플라스크에 첨가하고, 디클로로메탄 (1.0 mL)으로 린스하였다. 교반 속도를 1000 rpm으로 증가시켜 와류를 생성하였다. 화합물 9를 첨가하고 2분 이내에, 구리 (II) 클로라이드 (0.514 g, 3.83 mmol, 3.2 당량)를 좁은 분말 깔때기를 통해 와류의 중심에 직접 한번에 첨가하였다. 처음에 밝은-황색 용액은 암갈색 현탁액으로 바뀌었고, 10분에 걸쳐 암녹색 현탁액으로 바뀌었다. 반응 완료에 대해 HPLC-MS로 모니터링했으며, 30분 및 1시간에 채취한 샘플 사이에 반응 진행의 변화가 관찰되지 않았다 (약 95% 완료). 반응물을 실온에서 밤새 교반되도록 한 다음, 2-(2-아미노에틸아미노)에탄올 (0.483 mL, 4.781 mmol, 4 당량), EtOAc (10 mL) 및 dH2O (5 mL)를 교반된 현탁액에 첨가하였고, 이는 딥블루 색상으로 변화되었다. 현탁된 고체가 2상 혼합물에 점차적으로 용해됨에 따라 현탁액을 4시간 동안 격렬하게 교반하였다. 이 혼합물을 분별 깔때기로 옮기고, EtOAc (100 mL) 및 염수 (10 mL)로 희석하고, 수성층을 10% IpOH/EtOAc (4 x 50 mL)를 사용하여 추출하였다. 유기층을 풀링하고, 염수 (10 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 증발시켜 옅은 청색의 조 고체를 수득하였다. 이 조 고체를 메탄올 (0.5 mL) 및 디클로로메탄 (6 mL)의 혼합물에 용해시키고, Biotage® SNAP Ultra 100 g 실리카겔 칼럼 상에서 정제하였다 (10 칼럼 부피에 걸쳐 CH2Cl2 중 2-20% MeOH, 이어서 20% MeOH에서 8-칼럼 부피 안정기). 생성물은 CH2Cl2 중 약 20% MeOH에서 1-2 칼럼 부피 후에 넓은 피크로 용리되었다. 원하는 물질을 함유하는 분획을 풀링하고, 감압 하에서 농축하여 표제 화합물을 백색 고체 (1.105 g, 83%)로서 수득하였다. MS m/z obs. = 555.9 ((M+2)/2), 1109.8 (M+1).
7.11 (S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-N-(4-(N-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5R)-4-((S)-2-((S)-2-(디메틸아미노)-3-메틸부탄아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로파노일)설파모일)페닐)-5-우레이도펜탄아미드 (화합물 13)
Figure pct00236
화합물 12 (0.926 g, 0.834 mmol)의 용액에 디클로로메탄 (10 mL) 및 트리플루오로아세트산 (2.0 mL)의 혼합물을 첨가하였다. 반응을 출발 물질의 소모에 대해 HPLC-MS로 모니터링하였다 (약 45분). 반응물을 감압 하에서 아세토니트릴 (2 x 10 mL) 및 디클로로메탄 (2 x 10 mL)과 함께 동시-증발시켜 과잉의 트리플루오로아세트산을 제거하였다. 수득한 잔류물을 최소량의 디클로로메탄 및 메탄올 (3:1, v/v, 약 2 mL)에 용해시키고, 디에틸 에테르 (200 mL) 및 헥산 (100 mL)의 교반된 용액에 피펫을 통해 적가하여 밝은 백색 고체의 현탁액을 생성한다. 고체를 여과하고, 진공 하에 건조시켜 백색 분말 형태의 표제 화합물을 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득하였다 (1.04g, 일부 잔류 용매를 포함한 정량적 수율). MS m/z obs. = 505.8 ((M+2)/2).
7.12 (S)-N-(4-(N-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5R)-4-((S)-2-((S)-2-(디메틸아미노)-3-메틸부탄아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로파노일)설파모일)페닐)-2-((S)-1-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-파이롤-1-일)-14-이소프로필-12-옥소-3,6,9-트리옥사-13-아자펜타데칸아미도)-5-우레이도펜탄아미드 (링커-독소 A)
Figure pct00237
N,N-디메틸포름아미드 중 화합물 13 (0.722 g, 0.584 mmol)의 교반된 용액 (4 mL)에 화합물 15 (0.314 g, 1.2 당량) 및 디이소프로필에틸아민 (0.305 mL, 3.0 당량)을 첨가하였다. 2시간에서의 HPLC-MS 분석은 남아 있는 출발 물질이 없음을 나타냈다. 반응물을 TFA (300 μL)로 산성화한 다음 diH2O + 0.1% TFA (9 mL)로 희석하였다. 생성된 용액을 120 g Biotage® SNAP Ultra C18 칼럼 (Biotage, Uppsala, Sweden) 상에 로딩하고, 10 칼럼 부피에 걸쳐 ACN/H2O + 0.1% TFA 구배: 20-60% ACN, 5 칼럼 부피에 걸쳐 60-100% ACN으로 정제하였다. 생성물은 40% ACN 근처에서 용리되었다. LCMS로 확인된 순수한 분획을 풀링하고, 동결건조하였다. 동결건조기로부터 백색 분말 고체를 회수하였다. 더 높은 농도 (2:1 H2O/ACN 중 대략 50 mg/mL)에서 바이알 내로 동결건조를 반복하여 표제 화합물을 더 조밀하고 덜 응집성인 동결건조된 고체 (754.2 mg, 91%)로 생성하였다. MS m/z obs. = 647.4 ((M+2)/2), 1292.8 (M+1).
본 발명이 바람직한 구현예 및 다양한 대안적인 구현예를 참조하여 구체적으로 도시되고 설명되었지만, 당업자는 본 발명의 취지 및 범위에서 벗어남이 없이 그 안에서 형태 및 세부사항의 다양한 변경이 이루어질 수 있음을 이해할 것이다.
본 명세서의 본문 내에서 인용된 모든 참조문헌, 발행된 특허 및 특허 출원은 모든 목적을 위해 그 전체가 참조로 여기에 포함된다.
Figure pct00238
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Figure pct00254
Figure pct00255
Figure pct00256
SEQUENCE LISTING <110> ICONIC THERAPEUTICS, INC. ZYMEWORKS INC. <120> ANTI-TISSUE FACTOR ANTIBODY-DRUG CONJUGATES AND RELATED METHODS <130> ITI-003WO <140> PCT/US2020/040711 <141> 2020-07-02 <150> 62/870,644 <151> 2019-07-03 <160> 944 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <400> 1 000 <210> 2 <400> 2 000 <210> 3 <400> 3 000 <210> 4 <400> 4 000 <210> 5 <400> 5 000 <210> 6 <400> 6 000 <210> 7 <400> 7 000 <210> 8 <400> 8 000 <210> 9 <400> 9 000 <210> 10 <400> 10 000 <210> 11 <400> 11 000 <210> 12 <400> 12 000 <210> 13 <400> 13 000 <210> 14 <400> 14 000 <210> 15 <400> 15 000 <210> 16 <400> 16 000 <210> 17 <400> 17 000 <210> 18 <400> 18 000 <210> 19 <400> 19 000 <210> 20 <400> 20 000 <210> 21 <400> 21 000 <210> 22 <400> 22 000 <210> 23 <400> 23 000 <210> 24 <400> 24 000 <210> 25 <400> 25 000 <210> 26 <400> 26 000 <210> 27 <400> 27 000 <210> 28 <400> 28 000 <210> 29 <400> 29 000 <210> 30 <400> 30 000 <210> 31 <400> 31 000 <210> 32 <400> 32 000 <210> 33 <400> 33 000 <210> 34 <400> 34 000 <210> 35 <400> 35 000 <210> 36 <400> 36 000 <210> 37 <400> 37 000 <210> 38 <400> 38 000 <210> 39 <400> 39 000 <210> 40 <400> 40 000 <210> 41 <400> 41 000 <210> 42 <400> 42 000 <210> 43 <400> 43 000 <210> 44 <400> 44 000 <210> 45 <400> 45 000 <210> 46 <400> 46 000 <210> 47 <400> 47 000 <210> 48 <400> 48 000 <210> 49 <400> 49 000 <210> 50 <400> 50 000 <210> 51 <400> 51 000 <210> 52 <400> 52 000 <210> 53 <400> 53 000 <210> 54 <400> 54 000 <210> 55 <400> 55 000 <210> 56 <400> 56 000 <210> 57 <400> 57 000 <210> 58 <400> 58 000 <210> 59 <400> 59 000 <210> 60 <400> 60 000 <210> 61 <400> 61 000 <210> 62 <400> 62 000 <210> 63 <400> 63 000 <210> 64 <400> 64 000 <210> 65 <400> 65 000 <210> 66 <400> 66 000 <210> 67 <400> 67 000 <210> 68 <400> 68 000 <210> 69 <400> 69 000 <210> 70 <400> 70 000 <210> 71 <400> 71 000 <210> 72 <400> 72 000 <210> 73 <400> 73 000 <210> 74 <400> 74 000 <210> 75 <400> 75 000 <210> 76 <400> 76 000 <210> 77 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 77 Gly Tyr Thr Phe Asp Val Tyr Gly Ile Ser 1 5 10 <210> 78 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 78 Trp Ile Ala Pro Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu Gln 1 5 10 15 Gly <210> 79 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 79 Asp Ala Gly Thr Tyr Ser Pro Phe Gly Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 <210> 80 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 80 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 81 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 81 Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser 1 5 <210> 82 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 82 Gln Gln Phe Gln Ser Leu Pro Pro Phe Thr 1 5 10 <210> 83 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 83 Val Tyr Gly Ile Ser 1 5 <210> 84 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 84 Trp Ile Ala Pro Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu Gln 1 5 10 15 Gly <210> 85 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 85 Asp Ala Gly Thr Tyr Ser Pro Phe Gly Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 <210> 86 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 86 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 87 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 87 Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser 1 5 <210> 88 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 88 Gln Gln Phe 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Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 186 Glu Ser Ile Ser Asn Trp 1 5 <210> 187 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 187 Lys Ala Tyr 1 <210> 188 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 188 Gln Gln Phe Gln Lys Leu Pro Pro Phe Thr 1 5 10 <210> 189 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 189 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Asp Val Tyr 20 25 30 Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Ala Pro Tyr Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg 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Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 192 Trp Val Ala Pro Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu Gln 1 5 10 15 Gly <210> 193 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 193 Asp Ala Gly Thr Tyr Ser Pro Tyr Gly Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 <210> 194 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 194 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 195 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 195 Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser 1 5 <210> 196 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 196 Gln Gln Phe Gln Ser Leu Pro Pro Phe Thr 1 5 10 <210> 197 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 197 Ser Tyr Gly 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Synthetic peptide <400> 243 Ala Gly Thr Tyr Ser Pro Tyr Gly Tyr Gly Met Asp 1 5 10 <210> 244 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 244 Ser His Ser Ile Asp Ser Trp 1 5 <210> 245 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 245 Lys Ala Ser 1 <210> 246 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 246 Phe Gln Ser Leu Pro Pro Phe 1 5 <210> 247 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 247 Gly Tyr Thr Phe Arg Ser Tyr Gly Ile Ser 1 5 10 <210> 248 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 248 Trp Val Ala Pro Tyr Ser Gly Asn Thr Asn 1 5 10 <210> 249 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial 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Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 272 Gln Arg Phe Gln Ser Leu Pro Pro Phe Thr 1 5 10 <210> 273 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 273 Ser Tyr Gly Ile Ser 1 5 <210> 274 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 274 Trp Val Ala Pro Tyr Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu Gln 1 5 10 15 Gly <210> 275 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 275 Asp Ala Gly Thr Tyr Ser Pro Tyr Gly Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 <210> 276 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 276 Gln Ala Ser Gln Ser Ile Asp Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 277 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic 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Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 289 Ser Ala Ser Tyr Leu Glu Ser 1 5 <210> 290 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 290 Gln Arg Phe Gln Ser Leu Pro Pro Phe Thr 1 5 10 <210> 291 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 291 Arg Ser Tyr Gly Ile Ser 1 5 <210> 292 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 292 Trp Met Gly Trp Val Ala Pro Tyr Ser Gly Asn Thr Asn 1 5 10 <210> 293 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 293 Ala Arg Asp Ala Gly Thr Tyr Ser Pro Tyr Gly Tyr Gly Met Asp 1 5 10 15 <210> 294 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 294 Asp Ser Trp Leu Ala Trp Tyr 1 5 <210> 295 <211> 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Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Gln, Leu, or Arg <220> <221> MOD_RES <222> (5)..(5) <223> Ser or Lys <400> 784 Gln Xaa Phe Gln Xaa Leu Pro Pro Phe Thr 1 5 10 <210> 785 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (5)..(5) <223> His or Arg <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> Arg or Tyr <400> 785 Gly Phe Thr Phe Xaa Ser Xaa Gly Met His 1 5 10 <210> 786 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 786 Val Ile Thr Tyr Asp Gly Ile Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Glu 1 5 10 15 Gly <210> 787 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 787 Asp Gly Val Tyr Tyr Gly Val Tyr Asp Tyr 1 5 10 <210> 788 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 788 Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Phe Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 789 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 789 Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser 1 5 <210> 790 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 790 Gln Gln Phe His Ser Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 791 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 791 Gly Gly Thr Phe Ser Ser Asn Ala Ile Gly 1 5 10 <210> 792 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 792 Ser Ile Ile Pro Ile Ile Gly Phe Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 793 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 793 Asp Ser Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ala Ser Ser Phe 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of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 836 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Asp Ala Tyr 20 25 30 Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Ala Pro Tyr Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Ala Gly Thr Tyr Ser Pro Phe Gly Tyr Gly Met Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 837 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 837 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Ile Ser Asn Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Lys Ala Tyr 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Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 926 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Asp Val Tyr 20 25 30 Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Ala Pro Tyr Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Ala Gly Thr Tyr Ser Pro Phe Gly Tyr Gly Met Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 130 135 140 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 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<220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 931 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Arg Ser Tyr 20 25 30 Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Val Ala Pro Tyr Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Ala Gly Thr Tyr Ser Pro Tyr Gly Tyr Gly Met Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 130 135 140 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190 Thr Val Pro Ser 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Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 405 410 415 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 420 425 430 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 435 440 445 Leu Ser Pro Gly 450 <210> 932 <211> 215 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 932 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser His Ser Ile Asp Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Lys Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Leu Phe Gln Ser Leu Pro Pro 85 90 95 Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110 Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 115 120 125 Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu 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Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val <210> 935 <211> 113 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 935 Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 1 5 10 15 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val 20 25 30 Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe 35 40 45 Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 50 55 60 Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 65 70 75 80 Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 85 90 95 Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala 100 105 110 Lys <210> 936 <211> 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Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 65 70 75 80 Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 85 90 95 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 100 105 110 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 115 120 125 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr 130 135 140 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 145 150 155 160 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 165 170 175 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 180 185 190 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 195 200 205 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 210 215 220 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 225 230 <210> 939 <211> 106 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 939 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu 1 5 10 15 Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 20 25 30 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 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Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 130 135 140 Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 145 150 155 160 Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 165 170 175 Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln 180 185 190 Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 195 200 205 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 210 215 <210> 941 <211> 231 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 941 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 1 5 10 15 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 20 25 30 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 35 40 45 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 50 55 60 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 65 70 75 80 Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 85 90 95 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 100 105 110 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 115 120 125 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr 130 135 140 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 145 150 155 160 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 165 170 175 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 180 185 190 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 195 200 205 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 210 215 220 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 225 230 <210> 942 <211> 215 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Arg or Gln <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Gln or Glu <220> <221> MOD_RES <222> (30)..(30) <223> Ser or Asn <220> <221> MOD_RES <222> (31)..(31) <223> Ser or Asn <220> <221> MOD_RES <222> (52)..(52) <223> Ser or Tyr <220> <221> MOD_RES <222> (53)..(53) <223> Ser or Asn <220> <221> MOD_RES <222> (56)..(56) <223> Ser or Tyr <220> <221> MOD_RES <222> (90)..(90) <223> Gln or Leu <220> <221> MOD_RES <222> (93)..(93) <223> Ser or Lys <400> 942 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Xaa Ala Ser Xaa Ser Ile Xaa Xaa Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Lys Ala Xaa Xaa Leu Glu Xaa Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Xaa Phe Gln Xaa Leu Pro Pro 85 90 95 Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110 Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 115 120 125 Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 130 135 140 Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 145 150 155 160 Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 175 Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 180 185 190 Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 200 205 Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 943 <211> 452 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 943 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Arg Ser Tyr 20 25 30 Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Val Ala Pro Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Ala Gly Thr Tyr Ser Pro Tyr Gly Tyr Gly Met Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 130 135 140 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 195 200 205 Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys 210 215 220 Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 225 230 235 240 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 245 250 255 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 260 265 270 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 275 280 285 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 290 295 300 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 305 310 315 320 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 325 330 335 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 340 345 350 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Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Phe Gln Ser Leu Pro Pro 85 90 95 Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110 Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 115 120 125 Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 130 135 140 Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 145 150 155 160 Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 175 Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 180 185 190 Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 200 205 Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215

Claims (103)

  1. 하기를 포함하는 항체-약물 접합체:
    a. 인간 조직 인자(TF)(서열 번호: 810)의 세포외 도메인에 결합하는 항원 결합 단백질(Ab)로서, 상기 Ab는 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3을 포함하고,
    i. 상기 VH-CDR1은 서열번호: 872를 포함하고, 상기 VH-CDR2는 서열번호: 873을 포함하고, 상기 VH-CDR3은 서열번호: 874를 포함하고, 상기 VL-CDR1은 서열번호: 875를 포함하고, 상기 VL-CDR2는 서열번호: 876을 포함하고, 그리고 상기 VL-CDR3은 서열번호: 877을 포함하고,
    ii. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A3으로 지정된 항체에서 유래하고,
    iii. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A로 지정된 항체에서 유래하고,
    iv. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A5로 지정된 항체에서 유래하고,
    v. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A5-T로 지정된 항체에서 유래하거나, 또는
    vi. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25G1로 지정된 항체에서 유래함; 및
    b. 하기 화학식 IV로 나타낸 하나 이상의 링커-독소 모이어티:
    Figure pct00257

    화학식 IV
    상기 식에서:
    X는 *-C(O)NHCH(CH2(R2))-+이고, * 및 +는 화학식 IV에서 표시된 각각의 부착점을 나타내거나, 또는 X는 부재하고;
    L은 링커이고;
    !는 Ab에 대한 L의 부착점을 나타내고 L은 공유 결합을 통해 Ab에 부착되고;
    R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:
    Figure pct00258

    Figure pct00259
    및
    Figure pct00260

    # 및 %는 화학식 IV에서 표시된 각각의 부착점을 나타내고; 그리고
    R2는 페닐이다.
  2. 청구항 1에 있어서, R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 항체-약물 접합체:
    Figure pct00261
    및
    Figure pct00262
  3. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서, X는 부재하는, 항체-약물 접합체.
  4. 청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 IV의 링커-독소 모이어티는 화학식 V로 나타내는, 항체-약물 접합체:
    Figure pct00263

    화학식 V
  5. 청구항 4에 있어서, R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 항체-약물 접합체:
    Figure pct00264
    및
    Figure pct00265
  6. 청구항 4 또는 청구항 5에 있어서, R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 항체-약물 접합체:
    Figure pct00266
    및
    Figure pct00267
  7. 청구항 4 내지 6 중 어느 한 항에 있어서, R1은 하기인, 항체-약물 접합체:
    Figure pct00268
  8. 청구항 1 내지 7 중 어느 한 항에 있어서, L은 절단 가능한 링커인, 항체-약물 접합체.
  9. 청구항 1 내지 8 중 어느 한 항에 있어서, L은 펩타이드 함유 링커인, 항체-약물 접합체.
  10. 청구항 1 내지 9 중 어느 한 항에 있어서, L은 프로테아제 절단 가능한 링커인, 항체-약물 접합체.
  11. 청구항 1 내지 7 중 어느 한 항에 있어서, L은 N-(β-말레이미도프로필옥시)-N-하이드록시 석신이미드 에스테르 (BMPS), N-(ε-말레이미도카프로일옥시) 석신이미드 에스테르 (EMCS), N-[γ-말레이미도부티릴옥시]석신이미드 에스테르 (GMBS), 1,6-헥산-비스-비닐설폰 (HBVS), 석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카복시-(6-아미도카프로에이트) (LC-SMCC), m-말레이미도벤조일-N-하이드록시석신이미드 에스테르 (MBS), 4-(4-N-말레이미도페닐)부티르산 하이드라자이드 (MPBH), 석신이미딜 3-(브로모아세트아미도)프로피오네이트 (SBAP), 석신이미딜 아이오도아세테이트 (SIA), 석신이미딜 (4-아이오도아세틸)아미노벤조에이트 (SIAB), N-석신이미딜-3-(2-피리딜디티오) 프로피오네이트 (SPDP), N-석신이미딜-4-(2-피리딜티오)펜타노에이트 (SPP), 석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카복실레이트 (SMCC), 석신이미딜 4-(p-말레이미도페닐)부티레이트 (SMPB), 석신이미딜 6-[(β-말레이미도프로피온아미도)헥사노에이트] (SMPH), 이미노티올란 (IT), 설포-EMCS, 설포-GMBS, 설포-KMUS, 설포-MBS, 설포-SIAB, 설포-SMCC, 설포-SMPB, 및 석신이미딜-(4-비닐설폰)벤조에이트 (SVSB) 중 하나로부터 선택된 링커인, 항체-약물 접합체.
  12. 청구항 1 내지 7 중 어느 한 항에 있어서, L은 하기 식의 폴리(에틸렌)글라이콜 사슬을 포함하는, 항체-약물 접합체:
    Figure pct00269

    식 중, g는 1 내지 20의 정수이다.
  13. 청구항 12에 있어서, g는 3인, 항체-약물 접합체.
  14. 화학식 VI의 항체-약물 접합체:
    Figure pct00270

    화학식 VI
    상기 식에서:
    Ab는 조직 인자 (TF) 항체를 나타내고;
    n은 1 이상의 정수이고;
    X는 *-C(O)NHCH(CH2(R2))-+이고, * 및 +는 화학식 VI에서 표시된 각각의 부착점을 나타내거나, 또는 X는 부재하고;
    L은 링커이고;
    R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:
    Figure pct00271

    Figure pct00272
    및
    Figure pct00273

    # 및 %는 화학식 VI에서 표시된 각각의 부착점을 나타내고; 그리고
    R2는 페닐이고; 그리고
    상기 Ab는 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3을 포함하고,
    i. 상기 VH-CDR1은 서열번호: 872를 포함하고, 상기 VH-CDR2는 서열번호: 873을 포함하고, 상기 VH-CDR3은 서열번호: 874를 포함하고, 상기 VL-CDR1은 서열번호: 875를 포함하고, 상기 VL-CDR2는 서열번호: 876을 포함하고, 그리고 상기 VL-CDR3은 서열번호: 877을 포함하고,
    ii. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A3으로 지정된 항체에서 유래하고,
    iii. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A로 지정된 항체에서 유래하고,
    iv. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A5로 지정된 항체에서 유래하고,
    v. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A5-T로 지정된 항체에서 유래하거나, 또는
    vi. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25G1로 지정된 항체에서 유래한다.
  15. 청구항 14에 있어서, R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 항체-약물 접합체:
    Figure pct00274
    및
    Figure pct00275
  16. 청구항 14 또는 15에 있어서, X는 부재하는, 항체-약물 접합체.
  17. 청구항 15 또는 청구항 16에 있어서, R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 항체-약물 접합체:
    Figure pct00276
    및
    Figure pct00277
  18. 청구항 15 내지 17에 있어서, R1은 하기인, 항체-약물 접합체:
    Figure pct00278
  19. 청구항 16 내지 17 중 어느 한 항에 있어서, L은 절단 가능한 링커인, 항체-약물 접합체.
  20. 청구항 14 내지 19 중 어느 한 항에 있어서, L은 펩타이드 함유 링커인, 항체-약물 접합체.
  21. 청구항 14 내지 19 중에 있어서, L은 프로테아제 절단 가능한 링커인, 항체-약물 접합체.
  22. 청구항 14 내지 19 중 어느 한 항에 있어서, L은 N-(β-말레이미도프로필옥시)-N-하이드록시 석신이미드 에스테르 (BMPS), N-(ε-말레이미도카프로일옥시) 석신이미드 에스테르 (EMCS), N-[γ-말레이미도부티릴옥시]석신이미드 에스테르 (GMBS), 1,6-헥산-비스-비닐설폰 (HBVS), 석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카복시-(6-아미도카프로에이트) (LC-SMCC), m-말레이미도벤조일-N-하이드록시석신이미드 에스테르 (MBS), 4-(4-N-말레이미도페닐)부티르산 하이드라자이드 (MPBH), 석신이미딜 3-(브로모아세트아미도)프로피오네이트 (SBAP), 석신이미딜 아이오도아세테이트 (SIA), 석신이미딜 (4-아이오도아세틸)아미노벤조에이트 (SIAB), N-석신이미딜-3-(2-피리딜디티오) 프로피오네이트 (SPDP), N-석신이미딜-4-(2-피리딜티오)펜타노에이트 (SPP), 석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카복실레이트 (SMCC), 석신이미딜 4-(p-말레이미도페닐)부티레이트 (SMPB), 석신이미딜 6-[(β-말레이미도프로피온아미도)헥사노에이트] (SMPH), 이미노티올란 (IT), 설포-EMCS, 설포-GMBS, 설포-KMUS, 설포-MBS, 설포-SIAB, 설포-SMCC, 설포-SMPB, 및 석신이미딜-(4-비닐설폰)벤조에이트 (SVSB) 중 하나로부터 선택된 링커인, 항체-약물 접합체.
  23. 청구항 14 내지 19 중 어느 한 항에 있어서, L은 하기 식의 폴리(에틸렌)글라이콜 사슬을 포함하는, 항체-약물 접합체:
    Figure pct00279

    식 중, g는 1 내지 20의 정수이다.
  24. 청구항 23에 있어서, g는 3인, 항체-약물 접합체.
  25. 청구항 14에 있어서, L은 화학식 VII로 나타내는, 항체-약물 접합체:
    Figure pct00280

    화학식 VII
    상기 식에서:
    Z는 TF 항체의 표적 기에 결합하는 작용기를 나타내고;
    D는 화학식 VI으로 표시된 바와 같이 아미노 기에 대한 부착점을 나타내고;
    Str은 스트레처이고;
    AA1 및 AA2 각각은 독립적으로 아미노산이고, AA1-[AA2]m은 프로테아제 절단 부위를 형성하고;
    X1은 자기 희생성 기이고;
    s는 0 및 1로부터 선택된 정수이고;
    m은 1, 2, 3, 및 4로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이고;
    o는 0, 1, 및 2로부터 선택된 정수이다.
  26. 청구항 25에 있어서, n은 1, 2, 3, 4, 및 5로 이루어진 군으로부터 선택된 정수인, 항체-약물 접합체.
  27. 청구항 25 또는 청구항 26에 있어서, [Str]s는 알킬렌, 지방족 산을 기반으로 하는 스트레처, 지방족 이산을 기반으로 하는 스트레처, 지방족 아민을 기반으로 하는 스트레처 및 지방족 디아민을 기반으로 하는 스트레처로 이루어진 군으로부터 선택되는, 항체-약물 접합체.
  28. 청구항 25 내지 27 중 어느 한 항에 있어서, [Str]s는 디글라이콜레이트계 스트레처, 말로네이트계 스트레처, 카프로에이트계 스트레처 및 카프로아미드계 스트레처로 이루어진 군으로부터 선택되는, 항체-약물 접합체.
  29. 청구항 25 또는 청구항 26에 있어서, [Str]s는 글리신계 스트레처, 폴리에틸렌 글라이콜계 스트레처, 및 모노메톡시 폴리에틸렌 글라이콜계 스트레처로 이루어진 군으로부터 선택되는, 항체-약물 접합체.
  30. 청구항 25 또는 청구항 26에 있어서, [Str]s은 하기인, 항체-약물 접합체:
    Figure pct00281

    상기 화학식 중,
    h는 1 내지 20의 정수이고,
    CC는 AA1에 대한 부착점을 지칭하고; 그리고
    DD는 Z에 대한 부착점을 지칭한다.
  31. 청구항 25 또는 청구항 26에 있어서, [Str]s는 하기로부터 선택되는, 항체-약물 접합체:
    Figure pct00282

    Figure pct00283
    및
    Figure pct00284

    상기 식에서:
    EE 및 FF는 각각 Z 및 AA1에 대한 부착점을 나타내고;
    R는 수소 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고;
    p의 각 경우는 독립적으로 2 내지 10의 정수이고; 그리고
    q의 각 경우는 독립적으로 1 내지 10의 정수이다.
  32. 청구항 25, 청구항 26, 또는 청구항 31 중 어느 한 항에 있어서, [Str]s는 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 항체-약물 접합체:
    Figure pct00285
    및
    Figure pct00286

    상기 식에서:
    EE 및 FF는 각각 Z 및 AA1에 대한 부착점을 나타내고;
    p의 각 경우는 독립적으로 2 내지 10의 정수이고; 그리고
    q의 각 경우는 독립적으로 1 내지 10의 정수이다.
  33. 청구항 25, 청구항 26, 청구항 31, 또는 청구항 32 중 어느 한 항에 있어서, [Str]s는 하기로부터 선택되는, 항체-약물 접합체:
    Figure pct00287
    및
    Figure pct00288

    상기 식에서:
    EE 및 FF는 각각 Z 및 AA1에 대한 부착점을 나타내고;
    p의 각 경우는 독립적으로 2 내지 6의 정수이고, 그리고
    q는 2 내지 8의 정수이다.
  34. 청구항 25 내지 33 중 어느 한 항에 있어서, AA1-[AA2]m은 Val-Lys, Ala-Lys, Phe-Lys, Val-Cit, Phe-Cit, Leu-Cit, Ile-Cit, Trp-Cit, Phe-Arg, Ala-Phe, Val-Ala, Met-Lys, Asn-Lys, Ile-Pro, Ile-Val, Asp-Val, His-Val, Met-(D)Lys, Asn-(D)Lys, Val-(D)Asp, NorVal-(D)Asp, Ala-(D)Asp, Me3Lys-Pro, 페닐Gly-(D)Lys, Met-(D)Lys, Asn-(D)Lys, Pro-(D)Lys, Met-(D)Lys, Met-Cit-Val, Gly-Cit-Val, (D)Phe-Phe-Lys, (D)Ala-Phe-Lys, Gly-Phe-Leu-Gly, 및 Ala-Leu-Ala-Leu로부터 선택되는, 항체-약물 접합체.
  35. 청구항 25 내지 34 중 어느 한 항에 있어서, m은 1, 2 및 3으로부터 선택되는, 항체-약물 접합체.
  36. 청구항 25 내지 35 중 어느 한 항에 있어서, m은 1인, 항체-약물 접합체.
  37. 청구항 25 내지 36 중 어느 한 항에 있어서, AA1-[AA2]m은 Val-Lys, Ala-Lys, Phe-Lys, Val-Cit, Phe-Cit, Leu-Cit, Ile-Cit 및 Trp-Cit로부터 선택된 디펩타이드인, 항체-약물 접합체.
  38. 청구항 25 내지 37 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 X1은 p-아미노벤질옥시카보닐 (PABC), p-아미노벤질 에테르 (PABE) 및 메틸화된 에틸렌 디아민 (MED)로부터 독립적으로 선택되는, 항체-약물 접합체.
  39. 청구항 30에 있어서, s는 1이고 h는 3인, 항체 약물-접합체.
  40. 청구항 25 내지 39 중 어느 한 항에 있어서, s는 1인, 항체 약물-접합체.
  41. 청구항 25 내지 40 중 어느 한 항에 있어서, o는 0인, 항체 약물-접합체.
  42. 화학식 VIII의 링커-독소 모이어티를 포함하는 항체 약물-접합체:
    Figure pct00289

    화학식 VIII
    식 중, ##는 TF 항체에 대한 링커-독소 모이어티의 부착점을 나타내고 링커-독소 모이어티는 공유결합을 통해 TF 항체에 부착된다.
  43. 화학식 IX의 항체-약물 접합체:
    Figure pct00290

    화학식 IX
    상기 식에서:
    Ab는 조직 인자 (TF) 항체이고, Ab는 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3을 포함하고,
    i. 상기 VH-CDR1은 서열번호: 872를 포함하고, 상기 VH-CDR2는 서열번호: 873을 포함하고, 상기 VH-CDR3은 서열번호: 874를 포함하고, 상기 VL-CDR1은 서열번호: 875를 포함하고, 상기 VL-CDR2는 서열번호: 876을 포함하고, 그리고 상기 VL-CDR3은 서열번호: 877을 포함하고,
    ii. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A3으로 지정된 항체에서 유래하고,
    iii. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A로 지정된 항체에서 유래하고,
    iv. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A5로 지정된 항체에서 유래하고,
    v. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A5-T로 지정된 항체에서 유래하거나, 또는
    vi. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25G1로 지정된 항체에서 유래하고,
    n은 1 이상의 정수이고, 그리고
    상기 석신이미딜 기는 공유 결합을 통해 Ab에 부착된다.
  44. 청구항 43에 있어서, n은 1, 2, 3, 4, 및 5로 이루어진 군으로부터 선택되는, 항체-약물 접합체.
  45. 청구항 43 또는 44에 있어서, n은 2, 3, 및 4로 이루어진 군으로부터 선택되는, 항체-약물 접합체.
  46. 화학식 X으로 나타낸 링커를 포함하는 항체-약물 접합체:
    Figure pct00291

    화학식 X
    상기 식에서:
    ##는 항체에 대한 부착점이고 석신이미딜 기는 공유결합을 통해 항체에 부착되고;
    Y는 하나 이상의 추가의 링커 성분이거나, 부재하고; 그리고
    D1은 세포독성제에 대한 부착점이고, 그리고
    상기 Ab는 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3을 포함하고,
    i. 상기 VH-CDR1은 서열번호: 872를 포함하고, 상기 VH-CDR2는 서열번호: 873을 포함하고, 상기 VH-CDR3은 서열번호: 874를 포함하고, 상기 VL-CDR1은 서열번호: 875를 포함하고, 상기 VL-CDR2는 서열번호: 876을 포함하고, 그리고 상기 VL-CDR3은 서열번호: 877을 포함하고,
    ii. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A3으로 지정된 항체에서 유래하고,
    iii. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A로 지정된 항체에서 유래하고,
    iv. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A5로 지정된 항체에서 유래하고,
    v. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A5-T로 지정된 항체에서 유래하거나, 또는
    vi. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25G1로 지정된 항체에서 유래한다.
  47. 화학식 XI로 나타낸 링커를 포함하는 항체-약물 접합체:
    Figure pct00292

    화학식 XI
    상기 식에서:
    ##는 항체에 대한 부착점이고 석신이미딜 기는 공유결합을 통해 항체에 부착되고;
    Y는 하나 이상의 추가의 링커 성분이거나, 부재하고; 그리고
    D1은 세포독성제에 대한 부착점이고, 그리고
    상기 Ab는 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3을 포함하고,
    i. 상기 VH-CDR1은 서열번호: 872를 포함하고, 상기 VH-CDR2는 서열번호: 873을 포함하고, 상기 VH-CDR3은 서열번호: 874를 포함하고, 상기 VL-CDR1은 서열번호: 875를 포함하고, 상기 VL-CDR2는 서열번호: 876을 포함하고, 그리고 상기 VL-CDR3은 서열번호: 877을 포함하고,
    ii. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A3으로 지정된 항체에서 유래하고,
    iii. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A로 지정된 항체에서 유래하고,
    iv. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A5로 지정된 항체에서 유래하고,
    v. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A5-T로 지정된 항체에서 유래하거나, 또는
    vi. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25G1로 지정된 항체에서 유래한다.
  48. 청구항 46 또는 청구항 47에 있어서, 상기 세포독성제는 진단제, 금속 킬레이트제, 효소, 형광 화합물, 생물발광 화합물, 또는 화학발광 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는, 항체-약물 접합체.
  49. 청구항 46 또는 청구항 47에 있어서, 상기 세포독성제는 개선된 안전성 프로파일을 갖는 세포독성 페이로드인, 항체-약물 접합체.
  50. 청구항 1 내지 49 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Ab는 다음을 포함하는, 항체-약물 접합체:
    a. 서열번호: 868인 VH 서열 및 서열번호: 869인 VL 서열,
    b. 서열번호: 151인 VH 서열 및 서열번호: 152인 VL 서열,
    c. 서열번호: 113인 VH 서열 및 서열번호: 114인 VL 서열,
    d. 서열번호: 189인 VH 서열 및 서열번호: 190인 VL 서열,
    e. 서열번호: 836인 VH 서열 및 서열번호: 837인 VL 서열, 또는
    f. 서열번호: 265인 VH 서열 및 서열번호: 266인 VL 서열.
  51. 청구항 1 내지 50 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Ab는,
    a. 하기인 중쇄 서열:
    Figure pct00293

    Figure pct00294
    및
    하기인 경쇄 서열:
    Figure pct00295

    b. 하기인 중쇄 서열:
    Figure pct00296

    Figure pct00297

    Figure pct00298
    및
    하기인 경쇄 서열:
    Figure pct00299

    c. 하기인 중쇄 서열:
    Figure pct00300

    Figure pct00301
    및
    하기인 경쇄 서열:
    Figure pct00302

    d. 하기인 중쇄 서열:
    Figure pct00303

    Figure pct00304

    Figure pct00305
    및
    하기인 경쇄 서열:
    Figure pct00306

    e. 하기인 중쇄 서열:
    Figure pct00307

    Figure pct00308
    및
    하기인 경쇄 서열:
    Figure pct00309

    Figure pct00310
    또는
    f. 하기인 중쇄 서열:
    Figure pct00311

    Figure pct00312
    및
    하기인 경쇄 서열:
    Figure pct00313

    Figure pct00314

    를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  52. 화학식 IX의 항체-약물 접합체:
    Figure pct00315

    화학식 IX
    상기 식에서:
    Ab는 조직 인자 (TF) 항체이고, Ab는 25A3으로 지정된 항체로부터의 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3을 포함하고, 그리고
    n은 1 이상의 정수이다.
  53. 청구항 52에 있어서, n은 1, 2, 3, 4, 및 5로 이루어진 군으로부터 선택되는, 항체-약물 접합체.
  54. 청구항 52에 있어서, n은 2, 3, 및 4로 이루어진 군으로부터 선택되는, 항체-약물 접합체.
  55. 청구항 52 내지 54 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Ab는 서열번호: 151인 VH 서열 및 서열번호: 152인 VL 서열을 포함하는, 항체-약물 접합체.
  56. 청구항 52 내지 55 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Ab는,
    하기인 전체 중쇄 서열:
    Figure pct00316

    Figure pct00317

    G 및
    하기인 경쇄 서열:
    Figure pct00318

    Figure pct00319

    를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  57. 화학식 IX의 항체-약물 접합체:
    Figure pct00320

    화학식 IX
    상기 식에서:
    Ab는 조직 인자 (TF) 항체이고, Ab는 하기인 중쇄 서열:
    Figure pct00321

    Figure pct00322
    및
    하기인 경쇄 서열:
    Figure pct00323

    Figure pct00324
    를 포함하고, 그리고 n은 1 이상의 정수이다.
  58. 청구항 57에 있어서, n은 1, 2, 3, 4, 및 5로 이루어진 군으로부터 선택되는, 항체-약물 접합체.
  59. 청구항 57에 있어서, n은 2, 3, 및 4로 이루어진 군으로부터 선택되는, 항체-약물 접합체.
  60. 항체 (Ab) 및 하기의 구조의 하나 이상의 링커-독소를 포함하는 항체-약물 접합체:
    Figure pct00325

    상기 식에서:
    Ab는 조직 인자 (TF) 항체이고, Ab는 25A3으로 지정된 항체로부터의 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3을 포함하고;
    하나 이상의 링커-독소는 공유 결합을 통해 Ab에 부착되고; 그리고
    ##는 Ab에 대한 링커-독소의 부착점을 나타낸다.
  61. 청구항 60의 항체-약물 접합체를 포함하는 항체-약물 접합체 조성물로서, 다수의 약물-항체 비 (DAR) 종을 포함하고, 상기 조성물의 평균 DAR는 2 내지 4인, 항체-약물 접합체 조성물.
  62. 항체 (Ab) 및 하기의 구조의 하나 이상의 링커-독소를 포함하는 항체-약물 접합체:
    Figure pct00326

    상기 식에서:
    Ab는 조직 인자 (TF) 항체이고, Ab는,
    하기인 중쇄 서열:
    Figure pct00327

    Figure pct00328
    및
    하기인 경쇄 서열:
    Figure pct00329

    GEC를 포함하고, 그리고
    상기 하나 이상의 링커-독소는 공유 결합을 통해 Ab에 부착되고; 그리고
    ##는 Ab에 대한 링커-독소의 부착점을 나타낸다.
  63. 청구항 62에 있어서, 다수의 약물-항체 비 (DAR) 종을 포함하고, 조성물의 평균 DAR는 2 내지 4인, 항체-약물 접합체를 포함하는 항체-약물 접합체 조성물.
  64. 청구항 1 내지 63 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Ab는 다중특이적인, 항체-약물 접합체.
  65. 청구항 1 내지 64 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Ab는 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, scFv, (scFv)2, 단쇄 항체 분자, 이중 가변 도메인 항체, 단일 가변 도메인 항체, 선형 항체, 또는 V 도메인 항체인, 항체-약물 접합체.
  66. 청구항 1 내지 65 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 스캐폴드를 포함하고, 선택적으로 상기 스캐폴드는 Fc, 선택적으로 인간 Fc인, 항체-약물 접합체.
  67. 청구항 1 내지 66 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 IgG, IgA, IgD, IgE, 및 IgM으로부터 선택된 클래스의 중쇄 불변 영역을 포함하는, 항체-약물 접합체.
  68. 청구항 67에 있어서, 상기 항체는 클래스 IgG의 중쇄 불변 영역을 포함하고 중쇄 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4로부터 선택된 서브클래스로부터의 것인, 항체-약물 접합체.
  69. 청구항 68에 있어서, 상기 항체는 IgG1의 중쇄 불변 영역을 포함하는, 항체-약물 접합체.
  70. 청구항 66에 있어서, 상기 Fc는 하나 이상의 변형을 포함하고, 상기 하나 이상의 변형은 하나 이상의 변형 없는 Fc와 비교하여 증가된 반감기, 증가된 항체 의존성 세포 세포독성 (ADCC), 증가된 항체 의존성 세포 포식작용 (ADCP), 증가된 보체 의존성 세포독성 (CDC), 또는 줄어든 효과기 기능을 초래하는, 항체-약물 접합체.
  71. 청구항 1 내지 70 중 어느 한 항에 있어서, 종양 보유 대상체에게 투여 시, 항체-약물 접합체는 종양 부피를 감소시키거나 종양 성장을 억제하는, 항체-약물 접합체.
  72. 청구항 1 내지 71 중 어느 한 항에 있어서, 종양 보유 대상체에게 투여 시, 상기 항체-약물 접합체는 종양 부피를 적어도 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 99%까지 감소시키는, 항체-약물 접합체.
  73. 청구항 1 내지 72 중 어느 한 항에 있어서, 종양 보유 대상체에게 투여 시, 항체-약물 접합체는 종양 성장을 적어도 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 99%까지 억제하는, 항체-약물 접합체.
  74. 청구항 1 내지 73 중 어느 한 항에 있어서, 항체-약물 접합체를 대상체에게 투여 시, 상기 항체-약물 접합체는 측정가능한 피부 독성을 초래하지 않는, 항체-약물 접합체.
  75. 청구항 1 내지 73 중 어느 한 항에 있어서, 항체-약물 접합체를 대상체에게 투여 시, 상기 항체-약물 접합체는 상이한 항-TF ADC에 비해 감소된 피부 독성을 초래하는, 항체-약물 접합체.
  76. 청구항 1 내지 75 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에 대한 항체-약물 접합체의 투여는 하나 이상의 항-염증제의 투여를 필요로 하지 않는, 항체-약물 접합체.
  77. 청구항 1 내지 75 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에 대한 항체-약물 접합체의 투여는 상이한 항-TF ADC에 대한 하나 이상의 항-염증제에 비해 필요성을 감소시키는, 항체-약물 접합체.
  78. 청구항 76 또는 77에 있어서, 상기 하나 이상의 항-염증제는 국소 스테로이드 및 전신 스테로이드 중 적어도 하나를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  79. 청구항 1 내지 78 중 어느 한 항에 있어서, 항체-약물 접합체를 대상체에게 투여 시, 상기 항체-약물 접합체는 기준선 수준에 비해 대상체에서 호중구감소증이 감소되거나 부재하는, 항체-약물 접합체.
  80. 청구항 1 내지 78 중 어느 한 항에 있어서, 항체-약물 접합체를 대상체에게 투여 시, 상기 항체-약물 접합체는 기준선 수준에 비해 대상체에서 단핵구의 수를 변경, 증가 또는 감소시키지 않는, 항체-약물 접합체.
  81. 청구항 75 내지 80 중 어느 한 항에 있어서, 상기 상이한 항-TF ADC는 MMAE에 접합된 것을 제외하고는 항체-약물 접합체와 동일한, 항체-약물 접합체.
  82. 청구항 1 내지 81 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  83. 치료 또는 예방이 필요한 대상체에서 질환 또는 병태를 치료하거나 예방하는 방법으로서, 청구항 1 내지 81 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체 또는 청구항 82의 약제학적 조성물의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  84. 치료 또는 지연이 필요한 대상체에서 암을 치료하거나 그 개시를 지연시키는 방법으로서, 청구항 1 내지 81 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  85. 청구항 83에 있어서, 상기 질환 또는 병태는 암인, 방법.
  86. 청구항 84 또는 85에 있어서, 상기 암은 두경부암, 난소암, 위암, 식도암, 자궁경부암, 전립선암, 췌장암, 에스트로겐 수용체 음성 (ER-) 유방암, 프로게스테론 수용체 음성 (PR-) 유방암, HER2 음성 (HER2-) 삼중 음성 유방암, 교모세포종, 폐암, 방광암, 흑색종, 및 신장암으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  87. 청구항 83에 있어서, 상기 질환 또는 병태는 신생혈관형성을 수반하는, 방법.
  88. 청구항 87에 있어서, 상기 신생혈관형성을 수반하는 질환 또는 병태는 암인, 방법.
  89. 청구항 83에 있어서, 상기 질환 또는 병태는 혈관 염증을 수반하는, 방법.
  90. 청구항 83 내지 89 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 추가 치료제를 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
  91. 청구항 90에 있어서, 상기 조성물은 하나 이상의 추가 치료제를 추가로 포함하는, 방법.
  92. 청구항 90에 있어서, 상기 추가 치료제는 상이한 약제학적 조성물에서 제형화되는, 방법.
  93. 청구항 90에 있어서, 상기 추가 치료제는 조성물의 투여 전에 투여되는, 방법.
  94. 청구항 90에 있어서, 상기 추가 치료제는 조성물의 투여 후에 투여되는, 방법.
  95. 청구항 90에 있어서, 상기 추가 치료제는 조성물과 동시에 투여되는, 방법.
  96. 청구항 1 내지 95 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 인간 대상체인, 방법.
  97. 암 세포를 사멸시키는 방법으로서, 암 세포를 청구항 1 내지 81 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체의 유효량과 접촉시키는 것을 포함하는, 방법.
  98. 항체-약물 접합체를 제조하는 방법으로서,
    (A) 인간 조직 인자(TF)(서열 번호: 810)의 세포외 도메인에 결합하는 항원 결합 단백질(Ab) 상의 친핵성 또는 친전자성 기를 이중작용성 링커와 반응시켜 Ab-링커 중간체를 형성하고, Ab-링커 중간체를 일반 화학식 I의 화합물의 -NH2 기와 반응시켜 항체 약물 접합체를 제공하는 단계:
    Figure pct00330

    화학식 I
    (상기 식에서:
    X는 *-C(O)NHCH(CH2(R2))-+이고, * 및 +는 화학식 I로 표시된 바와 같이 각각의 부착점을 나타내거나, 또는 X는 부재하고;
    R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:
    Figure pct00331

    Figure pct00332
    및
    Figure pct00333

    식 중, # 및 %는 화학식 I로 표시된 바와 같이 각각의 부착점을 나타내고; 그리고 R2는 페닐임), 또는
    (B) 일반 화학식 I의 화합물 상의 -NH2 기를 이중작용성 링커와 반응시켜 링커-독소 중간체를 형성하고, 링커-독소 중간체를, 인간 조직 인자 (TF) (서열번호: 810)의 세포외 도메인에 결합하는 항원 결합 단백질 (Ab) 상의 친핵성 또는 친전자성 기와 반응시켜 항체-약물 접합체를 제공하는 단계를 포함하고, (A) 또는 (B)에서,
    (a) 상기 Ab는 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3을 포함하고,
    i. 상기 VH-CDR1은 서열번호: 872를 포함하고, 상기 VH-CDR2는 서열번호: 873을 포함하고, 상기 VH-CDR3은 서열번호: 874를 포함하고, 상기 VL-CDR1은 서열번호: 875를 포함하고, 상기 VL-CDR2는 서열번호: 876을 포함하고, 그리고 상기 VL-CDR3은 서열번호: 877을 포함하고,
    ii. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A3으로 지정된 항체에서 유래하고,
    iii. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A로 지정된 항체에서 유래하고,
    iv. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A5로 지정된 항체에서 유래하고,
    v. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A5-T로 지정된 항체에서 유래하거나, 또는
    vi. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25G1로 지정된 항체에서 유래하고; 그리고
    (b) 상기 항체-약물 접합체는 화학식 IV로 나타낸 하나 이상의 모이어티를 포함하고:
    Figure pct00334

    화학식 IV
    상기 식에서:
    X는 *-C(O)NHCH(CH2(R2))-+이고, * 및 +는 화학식 IV에서 표시된 각각의 부착점을 나타내거나, 또는 X는 부재하고;
    L은 링커이고;
    !는 Ab에 대한 L의 부착점을 나타내고 L은 공유 결합을 통해 Ab에 부착되고;
    R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:
    Figure pct00335

    Figure pct00336
    및
    Figure pct00337

    식 중, # 및 %는 화학식 VI에서 표시된 각각의 부착점을 나타내고; 그리고
    R2는 페닐인, 방법.
  99. 항체-약물 접합체를 제조하는 방법으로서,
    (A) 인간 조직 인자(TF)(서열 번호: 810)의 세포외 도메인에 결합하는 항원 결합 단백질(Ab) 상의 친핵성 또는 친전자성 기를 2개 이상의 링커 성분을 포함하는 이중작용성 링커의 제1 링커 성분과 반응시킨 다음, 나머지 링커 성분(들)을 순차적으로 첨가하여 Ab-링커 중간체를 형성하고, Ab-링커 중간체를 일반 화학식 I의 화합물의 -NH2 기와 반응시켜 항체 약물 접합체를 제공하는 단계:
    Figure pct00338

    화학식 I
    (상기 식에서:
    X는 *-C(O)NHCH(CH2(R2))-+이고, * 및 +는 화학식 I로 표시된 바와 같이 각각의 부착점을 나타내고, 또는 X는 부재하고;
    R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:
    Figure pct00339

    Figure pct00340
    및
    Figure pct00341

    식 중, # 및 %는 화학식 I로 표시된 바와 같이 각각의 부착점을 나타내고; 그리고 R2는 페닐임), 또는
    (B) 일반 화학식 I의 화합물 상의-NH2 기를 2개 이상의 링커 성분을 포함하는 이중작용성 링커의 제1 링커 성분과 반응시킨 다음, 나머지 링커 성분(들)을 순차적으로 첨가하여 링커-독소 중간체를 형성하고, 그리고 링커-독소 중간체를, 인간 조직 인자 (TF) (서열번호: 810)의 세포외 도메인에 결합하는 항원 결합 단백질 (Ab) 상의 친핵성 또는 친전자성 기와 반응시켜 항체-약물 접합체를 제공하는 단계를 포함하고, (A) 또는 (B)에서,
    (a) 상기 Ab는 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3을 포함하고,
    i. 상기 VH-CDR1은 서열번호: 872를 포함하고, 상기 VH-CDR2는 서열번호: 873을 포함하고, 상기 VH-CDR3은 서열번호: 874를 포함하고, 상기 VL-CDR1은 서열번호: 875를 포함하고, 상기 VL-CDR2는 서열번호: 876을 포함하고, 그리고 상기 VL-CDR3은 서열번호: 877을 포함하고,
    ii. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A3으로 지정된 항체에서 유래하고,
    iii. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A로 지정된 항체에서 유래하고,
    iv. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A5로 지정된 항체에서 유래하고,
    v. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25A5-T로 지정된 항체에서 유래하거나, 또는
    vi. 상기 VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2, 및 VL-CDR3은 25G1로 지정된 항체에서 유래하고; 그리고
    (b) 상기 항체-약물 접합체는 화학식 IV로 나타낸 하나 이상의 모이어티를 포함하고:
    Figure pct00342

    화학식 IV
    상기 식에서:
    X는 *-C(O)NHCH(CH2(R2))-+이고, * 및 +는 화학식 IV에서 표시된 각각의 부착점을 나타내거나, 또는 X는 부재하고;
    L은 링커이고;
    !는 Ab에 대한 L의 부착점을 나타내고 L은 공유 결합을 통해 Ab에 부착되고;
    R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:
    Figure pct00343

    Figure pct00344
    및
    Figure pct00345

    식 중, # 및 %는 화학식 VI에서 표시된 각각의 부착점을 나타내고; 그리고
    R2는 페닐인, 방법.
  100. 청구항 98 또는 청구항 99에 있어서, 상기 Ab 상의 친핵성 또는 친전자성 기는 티올 또는 아민인, 방법.
  101. 청구항 100에 있어서, Ab를 환원제로 처리하여 Ab 내의 하나 이상의 이황화물 결합을 환원시켜 친핵성 티올 기를 제공하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  102. 청구항 98 내지 101 중 어느 한 항에 있어서, L은 하기로 표시되는, 방법:
    Figure pct00346

    화학식 VII
    상기 식에서:
    Z는 Ab의 표적 기에 결합하는 작용기를 나타내고;
    D는 화학식 I로 표시된 바와 같이 아미노 기에 대한 부착점을 나타내고;
    Str은 스트레처이고;
    AA1 및 AA2 각각은 독립적으로 아미노산이고, AA1-[AA2]m은 프로테아제 절단 부위를 형성하고;
    X는 자기 희생성 기이고;
    s는 0 및 1로부터 선택된 정수이고;
    m은 1, 2, 3, 및 4로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이고; 그리고
    o는 0, 1, 및 2로부터 선택된 정수이다.
  103. 청구항 1 내지 81 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체 또는 청구항 82의 약제학적 조성물, 및 사용 지침을 포함하는 키트.
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