TW202110463A - 高濃度細胞包裝和運送 - Google Patents

Abstract

本發明係關於包裝和運送用於細胞療法之治療性細胞的方法及產品。

Description

高濃度細胞包裝和運送 [相關申請之交叉引用]

本申請案係主張2019年5月15日提交之美國專利臨時申請案第62/848,230號之優先權。該申請案之整體內容係藉由引用併入本文。

本發明係關於包裝和運送用於細胞療法之治療性細胞的方法及產品。

細胞療法係涉及向患者施用例如幹細胞或多能細胞(pluripotent cells)之細胞，業經用於治療各種病症。幹細胞或多能細胞係具有藉由有絲分裂之細胞分裂以自我更新並分化為多種專門細胞類型之能力的細胞類型。據此，此類細胞係具有用於治療多種疾病及損傷的潛能，該疾病及損傷係包括神經系統創傷、惡性腫瘤、遺傳性疾病、血紅素病變以及免疫缺乏。

惟，研究顯示如果幹細胞(例如，胎盤血細胞或臍帶血細胞)在取出冷凍之後未迅速處理，將出現功能性祖細胞之喪失(Ivanovic et al.,Transfusion,2011 Sep；51(9)：2044-5)。據此，後勤問題經常阻礙此等細胞之應用。舉例而言， 幹細胞(如臍帶血細胞)經採集後以常規方式極冷保藏於儲存設施(例如細胞庫)中，且於需要時，從該等設施運輸至醫院。此極冷保藏過程係藉由冷卻至低於零下之溫度(通常為77 K或-196℃，液氮之沸點)以保藏細胞或組織，故存在一定風險。舉例而言，所保存之細胞可能由於在降溫過程時冷凍或回溫至室溫的過程中而受到損傷。該等風險對於幹細胞或多能細胞尤其嚴重，蓋因此類細胞移植中之最重要態樣之一係移植時活幹細胞/多能細胞之數量及其發育潛力。出於這一考量，幹細胞/多能細胞係在盡可能短的時間內常規方式極冷保藏運送。事實上，於乾冰上或液氮運送器中過夜運送係工業標準且必須格外小心地監控溫度。惟，此做法仍無法消除風險。

此外，對於極冷保藏(cryopreservation)之標準方案(protocol)係混合細胞與冷凍保護劑至活細胞的最終濃度為每毫升10⁶至10⁷個細胞，此係由於以較低或較高細胞濃度冷凍之細胞往往傾向於具有較低之存活率(Kielberg et al.,Cryopreservation of Mammalian Cells-Protocols,Tech Note No.14,2010 Thermo Fisher Scientific Inc.,https：//assets.thermofisher.com/TFS-Assets/LSG/Application-Notes/D19575.pdf)。然而，此等細胞之治療性應用往往需要更大數量以及高於10⁷細胞/ml之濃度。因此，臨床醫師必須進一步處理此等細胞以增加濃度，從而產生額外的後勤問題和合規性問題。

因此，幹細胞之長途(例如，跨洲)運輸係格外昂貴且不切實際的。是以，需要以高濃度於室溫/環境溫度下運送幹細胞的製程或方法。

本發明係在多個態樣解決上文述及之需求。

在一態樣中，本發明係提供治療性組成物，其係包含(i)約1 x 10⁷至1 x 10⁹/ml(例如，2 x 10⁷至1 x 10⁹/ml、5 x 10⁷至1 x 10⁹/ml、1 x 10⁸/ml、2 x 10⁸/ml、3 x 10⁸/ml、4 x 10⁸/ml、5 x 10⁸/ml)個治療性細胞以及(ii)醫學上可接受之載劑溶液。該醫學上可接受之載劑溶液係(a)含有約25至30mM(例如，26至28mM及27mM)之醋酸鹽以及約20至25mM(例如，21至24mM及23mM)之葡萄糖酸鹽以及(b)具有約270至320mOsmol/L(例如，280至310、280至300、290至300及約294至295mOsmol/L)之滲透壓。該醫學上可接受之載劑溶液可具有126至154mEq/L之鈉。

於一些具體實施態樣中，該醫學上可接受之載劑溶液可含有以下之一者或多者：約120至160mM(例如，130至150及140mM)之Na⁺、約3至7mM(例如，4至6及5mM)之K⁺、約1.0至2.0mM(例如，1.2至1.8及1.5mM)之Mg²⁺、以及約90至110mM(例如，95至100及98mM)之Cl^-。於一些具體例中，該醫學上可接受之載劑溶液係不含Ca²⁺或乳酸鹽或兩者。

於一個實例中，該醫學上可接受之載劑溶液係含有：約140mM之Na⁺、約5mM之K⁺、約1.5mM之Mg²⁺、約98mM之Cl^-、約27mM之醋酸鹽、以及約23mM之葡萄糖酸鹽。在此情況下，該醫學上可接受之載劑溶液可含有約90mM之氯化鈉(NaCl)、約5mM之氯化鉀(KCl)、約1.5mM之氯化鎂(MgCl₂‧6H₂O)、約27mM之三水合醋酸鈉(C₂H₃NaO₂‧3H₂O)、以及約23mM之葡萄糖酸鈉(C₆H₁₁NaO₇)。

該治療性組成物或該醫學上可接受之載劑溶液可具有約4.0至8.0(例如，約5.5至約8.0、約6.0至約7.5、約6.0及約7.4)之pH。該治療性組成物係不含DMSO或含有微量之DMSO(亦即，0.5%或更低)。上述治療性組成 物可含有約0.5%至約5%(例如，約1%至約5%、約1%至3%、約1%至2.5%或約1%)之血清或血清白蛋白。實例係包括人類血清或人類血清白蛋白(HSA)。該治療性組成物可為約1至10℃、約2至8℃或約3至5℃之範圍內的溫度。較佳地，該組成物係具有約4℃的溫度。

該治療性細胞之實例係包括單核細胞、臍帶血細胞、造血幹細胞、間葉幹細胞、胚胎幹細胞、外周血細胞、骨髓細胞或胎盤血細胞。於一些具體例中，該治療性組成物或細胞係包含CD13⁺、CD34⁺或CD134⁺細胞。於一個具體例中，上述細胞可為經冷凍及解凍者，例如，從血庫獲得之細胞。在此情況下，該組成物可含有約10至100U/ml，例如，10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90或100U/ml之DNAse(例如，人類之DNAse)。或者，可從供體新鮮地獲得該細胞且未經冷凍，在此情況下，DNAse係非必需者且該組成物可不含DNAse。

在第二態樣中，本發明係提出一種包裝產品，其係於包含基材之容器中含有上述組成物；該基材係具有聚合物。於一些實例中，該聚合物可為低摩擦或無黏性之特性的聚四氟乙烯(PTFE)、全氟烷氧基聚合物(PFA)、氟化乙烯丙烯(FEP)、聚偏氟乙烯(PVDF)、聚乙烯或聚氯乙烯(PVC)。該聚合物亦可為適用於生物學之其它聚合物，例如，超低密度聚乙烯、低密度聚乙烯(LDPE)、線性低密度聚乙烯(LLDPE)、高密度聚乙烯(HDPE)、同軸定向聚丙烯(COPP)、雙軸定向聚丙烯(BOPP)、聚對苯二甲酸乙二酯(PET)、如尼龍、乙烯-乙烯醇聚合物(EVOH)及其金屬化型式之聚醯亞胺樹脂。

該包裝產品可為任意合適之形狀，包括但不限於袋、注射器或用於注射器之小瓶。於一個實例中，該產品係預先填充有用於臨床用途的多能細 胞。該多能細胞可為如造血幹細胞或間葉幹細胞之幹細胞。該組成物可含有外周血細胞、臍帶血細胞或骨髓細胞。

本發明係提出一種用於製造上述包裝產品的方法。該方法係包括以下步驟：(a)提供含有細胞(例如，多能細胞)之組成物；(b)提供包含基材之容器，其中，該基材係包含聚合物；(c)放置該組成物於該容器內；以及(d)密封該容器。

在第三態樣中，本發明係提供一種用於儲存或運送如多能細胞或單核細胞之治療性細胞的方法。該方法係包含(i)提供上述治療性組成物；以及(ii)以1至10℃之範圍內的溫度儲存或運送該組成物約24至96小時，例如，約24至約72小時。於一些具體例中，該方法係包括提供上述包裝產品及遞送該包裝產品至接收者，例如，信使、代理人或接收醫院之人員的步驟。

於該遞送之步驟中，溫度可為1至10℃之範圍內，例如，1至7℃、2至6℃、3至5℃或約4℃。使用該方法，該細胞可在12至96小時內遞送，例如，至少24、36、38、60、72、84或96小時內。於一個實例中，該治療性組成物係經儲存或運送約72小時。

當遞送時，該多能細胞或單核細胞可具有超過40%(例如，45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%及95%)的總共有核細胞數(TNC)之回收率。此外，當遞送時，該多能細胞可具有超過60%(例如，65%、70%、75%、80%、85%、90%及95%)的存活率(例如，藉由本文中所公開之AO/PI方法測定者)。

於一個具體例中，當遞送時，該多能細胞或單核細胞可具有至少0.25%的CD34⁺CD45⁺細胞，例如，0.25%、0.3%、0.35%、0.4%、0.45%、0.5%、 0.55%、0.6%、0.65%、0.7%、0.75%、0.8%、0.85%、0.9%、0.95%、1.0%、1.1%、1.15%、1.2%、1.3%、1.4%、1.5.%、1.6%、1.7%、1.8%、1.9.%或2.0%。

於另一具體例中，當遞送時，該多能細胞或單核細胞可具有至少0.10%的CD133⁺細胞，例如，0.10%、0.25、0.3%、0.35%、0.4%、0.45%、0.5%、0.55%、0.6%、0.65%、0.7%、0.75%、0.8%、0.85%、0.9%、0.95%、1.0%、1.1%、1.15%、1.2%、1.3%、1.4%、1.5.%、1.6%、1.7%、1.8%、1.9.%或2.0%。

於又一具體例中，當遞送時，該多能細胞或單核細胞能夠形成大量的聚落形成單位(colony forming unit,CFU)聚落每板。舉例而言，如圖1中所示，於約2至約8℃儲存或運送超過72小時之後，該細胞能夠形成至少30CFU聚落每3x10⁴個種植之細胞，例如，40、50、60、70、80、90、95、100或110。

上揭數值可根據發明所屬技術領域中已知之方法或下述實施例中揭示之方法測定。

本發明之一個或多個具體例之細節係於下述具體實施方式中詳述。本發明之其它特徵、目標及優點將透過說明書和申請專利範圍而明顯可見。

圖1A、1B、1C及1D係一組圖式，係顯示細胞於鹽水或本發明之組成物中以室溫或4℃下儲存或運輸之後的穩定性研究之結果。

本發明係關於在諸如室溫或環境溫度(亦即，1至25℃)之條件下 以高濃度長時間(例如，12至72小時)包裝及/或運送幹細胞/多能細胞(例如，臍帶血)或包含此類細胞之製劑。如此包裝和運送的幹細胞/多能細胞以及製劑出乎意料地具有令人滿意的存活率和用於臨床應用的發展潛能。

如上所述，發明所屬技術領域中已知，如果幹細胞(例如，胎盤血細胞或臍帶血細胞)於取出冷凍之後未迅速處理將出現功能性祖細胞之喪失(Ivanovic et al.,Transfusion,2011 Sep；51(9)：2044-5)。然而，在很多情況下，尤其是在採集、擴增、濃縮或處理臍帶血細胞的地點(例如，醫院或產科診所)與該等細胞用於治療患者的地點距離很遠時，難以在24小時內實施治療。此外，無論何種製造方法的治療性細胞組成物皆需要滿足嚴格之法規準則。舉例而言，治療性細胞組成物應具有足夠高之細胞濃度(例如，1x10⁷/ml、1x10⁸/ml)。為此，傳統之幹細胞/多能細胞包裝和運送無法以如此高之細胞濃度運送細胞。為了獲得具有如此高細胞濃度的治療性組成物，臨床醫師必須進一步處理細胞以增加細胞數量及/或濃度。

惟，由於細胞之擴增或濃縮被視為不僅僅是最小操作(minimal manipulation)，故相較於自供體簡單獲得且透過最小操作給予捐贈者，經擴增或濃縮之細胞受到更嚴格的規範。於美國，治療性細胞的製造方式必須符合美國食品藥物管理局(FDA)實施之現行藥品優良製造規範(cGMP)之規定。由於治療中心可能符合或不符合cGMP，傳統之幹細胞/多能細胞包裝和運送限制此等細胞之應用。

本發明可於環境溫度下長時間以夠高的濃度保存及運送幹細胞/多能細胞，同時維持至少該幹細胞及造血祖細胞的存活率和功能。據此，本發明滿足以高濃度在室溫/環境溫度下運送幹細胞的製程或方法的需求。

治療性組成物

本發明之一態樣係關於治療性細胞組成物。該組成物係包含(i)約1 x 10⁷至1 x 10⁹個治療性細胞/ml以及(ii)醫學上可接受之載劑溶液。該醫學上可接受之載劑溶液係(a)含有約25至30mM(例如，26至28mM及27mM)之醋酸鹽以及約20至25mM(例如，21至24mM及23mM)之葡萄糖酸鹽以及(b)具有約270至320mOsmol/L(例如，280至310、290至300、290至300及約294至295mOsmol/L之滲透壓。

治療性細胞

各種幹細胞或多能細胞可用於實踐本發明。該等細胞之實例係包括臍帶血細胞、造血幹細胞、胚胎幹細胞、骨髓幹細胞、外周血幹細胞、胎盤血及其它可分化為如神經細胞或神經膠細胞之功能性細胞的幹細胞。本發明所述之治療性細胞可從骨髓、臍帶血、臍帶、臍帶內膠狀結締組織(Wharton's jelly)、外周血、淋巴組織、子宮內膜、源自滋胚層(trophoblast-derived)之組織、胎盤、羊水、脂肪組織、肌肉、肝臟、軟骨、神經組織、心臟組織、牙髓組織、脫落之牙齒(exfoliated teeth)、胚胎源幹細胞(ES)或誘導性多能幹細胞(iPS)的細胞或其組合。

術語「幹細胞」係指能夠分化為許多最終分化之特化細胞類型的任何細胞。幹細胞來自所有胚層(亦即，外胚層、中胚層及內胚層)。幹細胞之典型來源係包括胚胎、骨髓、外周血、臍帶血、胎盤血、肌肉組織及脂肪組織。

幹細胞可為全能幹細胞或多能幹細胞。全能幹細胞通常具有發育為任何細胞類型的能力。全能幹細胞可衍生自胚胎幹細胞及非胚胎幹細胞兩者。多能細胞通常係能夠分化為幾種不同最終分化細胞類型的細胞。舉例而言，多能幹細胞可產生神經系統細胞、皮膚細胞、肝臟細胞、腎臟細胞、血液細胞、肌肉 細胞、骨骼細胞等。多能幹細胞之實例係包括但不限於，臍帶血幹細胞、神經幹細胞、造血幹細胞、脂肪源幹細胞、間葉幹細胞、胎盤源幹細胞、落齒源幹細胞以及毛囊幹細胞。相較於此，多能幹細胞或成體幹細胞通常產生有限的細胞類型。除非另有說明，否則本文所用之術語幹細胞係包括祖細胞。單能幹細胞僅可產生一種細胞類型，惟其具有區別於非幹細胞之自我更新的特性。此等幹細胞可源自各種組織或器官系統，包括但不限於，血液、神經、肌肉、皮膚、腸、骨骼、腎臟、肝臟、胰臟、胸腺等。根據本發明，幹細胞可源自成體或新生組織或器官。

本發明所揭示之細胞可為實質上純淨的。術語「實質上純淨的」用於有關幹細胞或源自其之細胞(例如，分化細胞)時，係指所指定之細胞構成製劑中細胞的實質性部分或大部分(亦即，超過20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或95%)。舉例而言，實質上純化之細胞群體構成製劑中細胞的至少約70%，通常為製劑中細胞的約80%，尤其是製劑中細胞的至少約90%(例如，95%、97%、99%或100%)。

於較佳之具體例係使用臍帶血細胞。此等細胞可如下文之實施例部分中所述或藉由發明所屬技術領域中已知之方法獲得，並且隨後藉由標準技術測試。為證實該等細胞之分化能力，可藉由發明所屬技術領域中已知之方法對其實施誘導以形成(例如)各種聚落形成單位。由此證實之細胞可於非分化培養基中進一步繁殖超過10次、20次、50次或100次群體倍增，而不會顯示自發分化、衰老、形態改變、增加之生長速率或分化為神經元之能力變化。該等細胞於使用之前可藉由標準方法儲存。

造血幹細胞

造血幹細胞為多能幹細胞，並且最終產生所有類型的末端分化血 細胞。造血幹細胞可自我更新或可分化為更具親和性之祖細胞，該等祖細胞被不可逆地確定為僅少數類型之血細胞的祖先。例如，造血幹細胞可分化為(i)骨髓祖細胞，該骨髓先驅細胞，該等骨髓祖細胞最終產生單核細胞和巨噬細胞、嗜中性球、嗜鹼性球、嗜酸性球、紅血球、巨核細胞/血小板、樹突細胞，或(ii)淋巴祖細胞，該等淋巴祖細胞最終產生T細胞、B細胞及稱為自然殺手細胞(NK細胞)的淋巴細胞樣細胞。一旦幹細胞分化為骨髓祖細胞，其後裔不能產生淋巴樣譜系之細胞，同樣，淋巴祖細胞不能產生骨髓樣譜系之細胞。對於造血作用及造血幹細胞分化的一般討論，參見阿爾伯茨(Alberts)等人1989年之《細胞的分子生物學(第二版)》(Molecular Biology of the Cell,2nd Ed.,Garland Publishing,New York,N.Y.)第17章《分化細胞及組織的維持》(Differentiated Cells and the Maintenance of Tissues)；美國衛生與人群服務部2006年8月《再生醫學》(Regenerative Medicine)第2章；以及美國衛生與人群服務部幹細胞訊息中心2008年《造血幹細胞》第5章。

開發體外及體內分析以特徵化造血幹細胞，例如，於免疫缺乏小鼠體內進行之脾臟聚落形成(CFU-S)分析以及重構分析。再者，藉由單克隆抗體識別定義的細胞表面蛋白標記物之存在或不存在業已用於識別和分離造血幹細胞。此類標記物係包括CD34、CD38、CD43、CD45RO、CD45RA、CD59、CD90、CD109、CD117、CD133、CD166和HLA DR以及其組合。參見，美國衛生與人群服務部2006年8月《再生醫學》(Regenerative Medicine)第2章及其引用的參考文獻。

臍帶血細胞

人類臍帶血及/或人類胎盤血係臍帶血幹細胞之來源。此類血液可藉由發明 所屬技術領域中已知之任意方法獲得。使用臍帶血或胎盤血作為幹細胞來源可提供大量優點，包括可容易地獲得臍帶血及胎盤血並且不對供體造成創傷。參見，例如，美國專利第5,004,681號和美國專利第7,147,626號。採集應在無菌條件下進行。採集之後，臍帶血或胎盤血可立刻與抗凝劑混合。此類抗凝劑可為發明所屬技術領域中任意已知者，包括CPD(檸檬酸鹽-磷酸鹽-葡萄糖)、ACD(酸性檸檬酸鹽-葡萄糖)、Alsever氏溶液(Alsever et al.,1941,N.Y.St.J.Med.41：126)、De Gowin氏溶液(De Gowin,et al.,1940,J.Am.Med.Ass.114：850)、Edglugate-Mg(Smith,et al.,1959,J.Thorac.Cardiovasc.Surg.38：573)、Rous-Turner氏溶液(Rous and Turner,1916,J.Exp.Med.23：219)、其它葡萄糖混合物、肝素、雙香豆乙酸乙酯(ethyl biscoumacetate)等。參見，例如，Hurn,1968,Storage of Blood,Academic Press,New York,pp.26-160)。臍帶血可藉由直接從臍帶引流及/或藉由在所遞送之胎盤根部及擴張靜脈進行細針穿刺而獲得。通常參見美國專利第5,004,681號。

於特定具體例中，可常規地或在臨床上對採集之血液樣本實施以下測試：(i)細菌培養，以確保不存在微生物污染，可實施所建立之分析，例如，在有氧條件及無氧條件下對細菌進行常規醫院培養；以及(ii)對病原體微生物之診斷性篩選，可採用各種診斷性測試以確保不存在特定病原體微生物。可通過標準程序對血液中可能傳播之多種病原體中任一者進行診斷性篩選。作為一個實例，可使用基於檢測病毒顆粒、病毒編碼蛋白質、HIV特異性核酸、HIV蛋白質抗體等的多種檢測系統中任一者對所採集之血液樣本進行診斷性篩選，以檢測是否存在人類免疫缺乏病毒1或2(HIV-1或HIV-2)。亦可對所採集之血液的進行其它感染性疾病的檢測，包括人類嗜T細胞淋巴球病毒I和II(HTLV-I和HTLV-II)、B型肝炎、C型肝炎、巨細胞病毒、梅毒、西尼羅病毒及其它如美國 食品藥物管理局之相關監管機構指定之感染源。

較佳地，在採集臍帶血之前確定母體之健康史，以鑑定該臍帶血細胞可能傳播之遺傳或感染疾病，例如癌症、白血病、免疫疾病、神經系統疾病、肝炎或AIDS的風險。可對所採集之臍帶血樣本進行下述一種或多種測試：細胞存活率、HLA血型測試、ABO/Rh血型測試、CD34⁺細胞計數及總共有核細胞數計數。

一旦在出生時從一個人採集臍帶血及/或胎盤血，可對其進行處理以產生富集之造血幹細胞群體或富集之造血幹細胞與祖細胞群體，從而形成臍帶血幹細胞之群體。相對於其它類型之造血細胞，該等造血幹細胞或造血幹細胞與祖細胞對於增加之水平表現的特定標記物係為陽性。舉例而言，此類標記物可為CD34、CD43、CD45RO、CD45RA、CD59、CD90、CD109、CD117、CD133、CD166、HLA DR或其組合。相對於其它類型之造血細胞，該等造血幹細胞或者造血幹細胞與祖細胞對於特定標記物亦可為陰性。舉例而言，Lin係用作陰性標記物之譜系特異性抗體的組合。CD38亦提供陰性標記物之實例。較佳地，該等造血幹細胞或者造血幹細胞與祖細胞係為CD34+細胞。

視需要地，於富集單核細胞(MNC)、造血幹細胞或者造血幹細胞與祖細胞之前，可分離臍帶血之紅血球(RBC)與白血球(WBC)。一旦分離紅血球與白血球，則可丟棄紅血球部分，並且可於上述磁性細胞分離器中處理白血球部分。白血球部分與紅血球部分之分離可藉由發明所屬技術領域中任意已知方法實施，該方法包括離心技術。可使用之其它分離方法係包括使用市售產品FICOLL或FICOLL-PAQUE或PERCOLL(GE保健公司，GE Healthcare,Piscataway,N.J.)。FICOLL-PAQUE通常係放置於錐形管之底部，而全血係位於上層。離心 之後，可於錐形管內從上至下看到以下各層：血漿及其它成分、稱為膚色血球層(buffy coat)的MNC層，其含有外周血單核細胞(白血球)、FICOLL-PAQUE以及應以粒狀形式存在的紅血球和顆粒性細胞。這一分離技術使得外周血單核細胞易於收穫。

視需要地，於選擇CD34+細胞之前，可檢查等量的新鮮臍帶血單位之總共有核細胞數計數及/或CD34+含量。於具體具體例中，於選擇CD34+細胞之後，回收CD34+(「CB幹細胞」)部分及CD34-細胞部分兩者。視需要，即使未完成與患者的HLA匹配，也可從CD34細胞部分之樣本中提取DNA進行初始HLA血型測定以及未來之嵌合研究。之後，可於擴增之前處理經富集之CD34+幹細胞部分，舉例而言，可將該幹細胞懸浮於適宜之細胞培養基中進行運輸或儲存。

於特定具體例中，排空臍帶血及/或胎盤血樣本中的紅血球，並計算經排空的紅血球部分中的CD34+細胞數。

醫學上可接受之載劑

本文所揭示之治療性組成物係包括醫學上可接受之載劑溶液或保存溶液係(a)含有約25至30mM(例如，26至28mM及27mM)之醋酸鹽以及約20至25mM(例如，21至24mM及23mM)之葡萄糖酸鹽以及(b)具有約270至320mOsmol/L之滲透壓(例如，約280至310、280至300、290至300、294或295mOsmol/L)。

於一些具體例中，該載劑/保存溶液係包括電解質溶液或細胞或組織保存溶液。於一些特定具體例中，該載劑/保存溶液不是細胞生長培養基。換言之，該溶液係缺乏細胞生長所必需之一種或多種營養物(諸如胺基酸之來源及 氮源或碳源)。舉例而言，該保存溶液可僅包含電解質溶液。該電解質溶液可包括，例如，鈉離子、鉀離子、鈣離子、氯離子、鋅離子、鐵離子及/或鎂離子。

較佳地，醫學上可接受之載劑或保存溶液為等張、無菌、無熱原之溶液，其係不含抑菌劑或抗微生物劑或附加之緩衝劑。在這種情況下，實例係包括具有多種不同配方的生理平衡之類晶體溶液，，只要其於電解質含量、滲透壓及pH值方面密切模擬人類血漿。此等溶液亦具有額外的緩衝能力，並且含有可轉化為碳酸氫根、CO₂及水的陰離子，例如，醋酸根、葡萄糖酸根、甚至乳酸根。正常的生理等張範圍係大約280至310mOsmol/L。舉例而言，此電解質溶液可為具有約294或295mOsmol/L的滲透壓之PLASMA-LYTE A或PLASMA-LYTE 148，其係。PLASMA-LYTE A或PLASMA-LYTE 148係含有約90mM之NaCl、約5mM之KCl、約1.5mM之MgCl₂、約27mM之三水合醋酸鈉以及約23mM之葡萄糖酸鈉。PLASMA-LYTE A係具有約7.4之pH值，而PLASMA-LYTE 148係具有約6.0之pH值。

作為變型，該載劑/保存溶液亦可包含緩衝劑及/或一種或多種抗氧化劑。舉例而言，該緩衝劑可為選自生理緩衝劑(硫酸鹽、磷酸鹽或碳酸鹽)或合成緩衝劑(HEPES)。抗氧化劑之實例係包括自由基捕捉劑；如去鐵胺(deferoxamine)之鐵螯合劑；維生素E、維生素C或異抗壞血酸鈉；以及硫醇化之衍生物，例如N-乙醯基半胱胺酸、麩胱甘肽(glutathione)或還原型麩胱甘肽。

本文所揭露之組成物可於環境溫度下長時間保存及運送幹細胞/多能細胞，同時維持至少該幹細胞及造血祖細胞的存活率和功能性。具體地，組成物可具有足以用於臨床用途之細胞濃度。

如本文中所公開，於一些實例中，在運送或儲存約72小時(3天) 之後，相對於取出後於胎盤血液單位中立即測得之存活CD34+細胞數量，該組成物可產生等於至少80%的存活CD34+造血幹細胞的含量，具體地至少90%，且甚至更具體地接近100%。在儲存/運送約3天之後，相對於取出後於胎盤血液單位中立即測得之存活祖細胞數量，該儲存/運送方法可使存活CD34+祖細胞的含量等於至少75%，具體地至少80%，且甚至更具體地至少90%。

包裝產品

在另一態樣中，本發明係關於在諸如室溫或環境溫度之條件下以高濃度長時間包裝及/或運送上揭之治療性幹細胞或製劑。對於臨床應用，由此包裝和運送之該等細胞或製劑出乎意料地具有令人滿意的存活率和發育潛能。

於一個實例中，臍帶血可於醫院現場採集或從臍帶血庫(例如，由STEMCYTE公司維持者)獲得。儘管可使用任何發明所屬技術領域中認可之採集和儲存程序，但較佳程序係揭示於下述實施例中及WO2012112572中。

通常，應對多種感染標記物執行無菌測試。此外，於用於極冷保藏之冷凍之前，應測定並記錄總細胞數、CD34+細胞數及單位體積。經極冷保藏的所採集血液中所含的RBC傾向於在冷凍和解凍過程中破裂。在這種情況下，一旦RBC溶解，則RBC的DNA增加所採集臍帶血細胞的黏度並對臍帶血細胞用於臨床用途之進一步處理造成阻礙。為了防止這一點，可於極冷保藏之前添加DNAse至所採集之細胞中，以令DNA破裂。這麼做可降低細胞的黏性和凝集，從而於滲透梯度(例如，FICOLL)中更好地分離細胞。可使用多種市售DNAse。實例包括由GENENTECH販售的PULMOZYME®。

或者，該臍帶血可經處理以移除紅血球，以實質上排空紅血球。若需要，可藉由滲透梯度(例如，FICOLL)或以下述實施例1中揭示之方式分離 臍帶血為多個可用單位(例如，總單核細胞(TMN)、白血球、淋巴球、CD34+細胞、CD133+細胞、巨噬細胞及其它細胞)。又，如上文所述，待運輸之臍帶血細胞可從供體新鮮獲得且尚未被冷凍。於此等途徑中，在包裝及/或運送此類新鮮單位的過程中無需DNAse。此外，可根據發明所屬技術領域中已知之方法排空血漿，例如，彼等於美國申請案20080166324中揭示者，其內容係藉由全文引用而併入本文。

隨後，於醫院現場或現場外(例如上文所述之血庫)的處理設施內包裝和準備運送所採集細胞。若細胞業經極冷保藏，則可以WO2012112572揭示之方式進行解凍。可再度對多種感染標記物執行無菌測試且應測定並記錄總細胞數、CD34+細胞數、濃度及單位體積。隨後，該等細胞係置於上揭容器中以形成藉由指定載具運輸之包裝。

如上文所揭示，儘管可使用多種醫學上可接受之載劑或保存溶液，但如Plasma-Lyte A之等張或生理平衡鹽溶液係較佳者。此等溶液可以非常高的濃度保存細胞，並導致更好的細胞存活率。此外，此等溶液能夠在無大氣CO₂(0.04%)下維持長期pH穩定性。如此包裝和運送的細胞可不經任何進一步處理(例如，進一步濃縮)而直接作為藥物組成物給藥至有此需要的受試者。

如本文所揭露，該容器之材料可係任何合適材料，並且較佳係核准用於臨床用途者。通常，該材料可為對於細胞為低摩擦或無黏性且對於細胞無毒性或對幹細胞接收者無害之聚合物。合適聚合物的實例係包括但不限於，聚四氟乙烯(PTFE)、全氟烷氧基聚合物(PFA)、氟化乙烯丙烯(FEP)、聚偏氟乙烯(PVDF)、聚乙烯、聚氯乙烯(PVC)、超低密度聚乙烯、低密度聚乙烯(LDPE)、線性低密度聚乙烯(LLDPE)、高密度聚乙烯(HDPE)、同軸定向聚丙烯(COPP)、 雙軸定向聚丙烯(BOPP)、聚對苯二甲酸乙二酯(PET)、聚醯亞胺樹脂(如尼龍)、乙烯-乙烯醇聚合物(EVOH)及其金屬化形式。如果其它聚合物之摩擦係數(相對於經拋光之鋼)與上文述及之聚合物相當或低於後者，亦可使用該等其它聚合物。上述聚合物的摩擦係數係發明所屬技術領域中已知者並且通過引用併入本文。舉例而言，摩擦係數可低於0.5，諸如0.4、0.3、0.2或0.1。於較佳之具體例中，可使用由杜邦公司(DUPONT)以商標TEFLON販售之PTFE、PFA、PEP或PVDF之容器、HYCLONE之聚乙烯的容器或TERUMO之PVC的容器。

該容器之基材可形成為任何適用於接收並容納細胞的形狀。該等形狀之實例係包括但不限於，袋、管、注射器或用於注射器之小瓶。於一些具體例中，該基材係形成為適用於培養之形狀或適用於各種組織(如CNS)中進行幹細胞移植或植入之位點的形狀。實例係包括帶、膜、線、載玻片、微球、微粒、細胞培養板、多孔板及生物反應器，其全部可接收細胞。

如本文中所揭示，在運送過程中，包裝內的細胞不必保持在較低溫度下(如極冷保藏)或連夜遞送。反之，細胞可在相當廣泛的溫度範圍內(包括室溫)運送非常長的時間(例如，1至8天)。儘管此等條件較不嚴格，但較佳係在溫度保護之容器中運送該包裝及/或使用溫度探針進行監控，以在需要時向運送者或接納者提供訊息。由於條件較不嚴格，因而可避免與運送極冷保藏細胞相關的成本。此外，由於運送時間可長達1至8天，如跨洲之長距離運送變為實際可行。因此，遠離特定幹細胞來源之患者(例如，彼等具有罕見、匹配之HLA血型者)將能受益於幹細胞移植。

從信使接收細胞之後，可以下述實施例中揭示之方式處理該等細胞並測試其用於移植的適用性。為此，可使用以下四種標準以確定所運送之單核 細胞是否適用於移植。

細胞計數

必須存在足夠用於移植和分析的活細胞。較佳地，移植(例如，至脊髓中)所需細胞數目至少兩倍較佳，以留下足量細胞用於分析細胞。如果運送所含細胞較少，則該運送應不適用於移植。

存活率

製劑中應避免過多死亡細胞。為此，可使用錐蟲藍排除法(Trypan Blue Exclusion,TBE)之手動計數作為存活率標準。以百分比表示，細胞懸浮液的TBE係表示未染成藍色之細胞除以染色與未染色細胞之總數。對於指定用於移植的細胞，TBE應為至少70%。一般而言，如下文實施例中所揭示之洗滌步驟會清除死亡細胞，並且細胞懸浮液於移植之前通常具有大於90%的TBE。

污染

應報告污染之任何跡象或風險。舉例而言，此係包括運送袋中存在任何流體之洩露、細胞懸浮液中的異常濁度、於顯微鏡下可見之細菌或真菌或先前污染之報告。如本文中所揭露，應小心排除對於母體B型肝炎核心抗原及所有其他感染源為陽性之臍帶血單位，該等其他感染源通常會將臍帶血單位排除登記在國家骨髓捐贈者項目(National Marrow Donor Program,NMDP)下。

單核細胞

最終製劑應具有95%或更多的單核細胞。如果細胞的存活率計數顯示超過5%的其它細胞(如紅血球或嗜中性球)，則不應將該等細胞用於移植。應注意的是，臍帶血中可能存在一些不成熟的有核紅血球。

於上文揭示之過程中，可將抗生素加入細胞製劑中。舉例而言， 可在開始處理細胞時加入健他黴素(gentamycin)以降低處理和運送過程中污染的風險。即使過去之多次培養基填充測試業經表明並未引入污染，健他黴素仍可抑制細菌生長。

於上文揭示之過程中，可使用諸如彼等於美國申請案20100189696、20100323920、20080227197及20080166324中揭示的方法進一步處理臍帶血幹細胞以擴增幹細胞池，亦即，體外擴增。術語「體外擴增」係指於實驗室內培養幹細胞。此類細胞可從哺乳動物提取，並於適宜環境中(例如，於含有鋰鹽之培養基中)培育更多數量的細胞。若可能，建立穩定之細胞系以允許細胞持續繁殖。

用途

本發明之實施方案亦關於在美國FDA或美國以外國家的同等監管機構執行的cGMP規定下製造、儲存或運送治療性細胞的可能性的商業條款。該等治療性細胞和組成物可用於治療多種疾病及病變。病變之實例係包括但不限於，退行性疾病、缺血性病症(例如，肢體缺血、鬱血性心衰竭、心臟缺血、腎缺血和ESRD、中風及眼部缺血)、需要器官或組織再生之疾病(例如，肝臟、胰臟、肺、唾液腺、血管、骨骼、皮膚、軟骨、肌腱、韌帶、腦、毛髮、腎、肌肉、心肌、神經及肢體)、炎性疾病(例如，心臟病、糖尿病、脊髓損傷、類風濕性關節炎、骨關節炎、由於髖關節置換或翻修所致之炎症、克隆氏(Crohn's)症及移植物對抗宿主病)、自體免疫疾病(例如，1型糖尿病、牛皮癬、全身性紅斑狼瘡及多發性硬化症)、先天性疾病(諸如貧血、嗜中性球減少症、血小板增多症、骨髓增生性病變或血液腫瘤及癌症(諸如白細胞和淋巴瘤)。

定義

如本文中所用，「治療性細胞」係指減輕患者之病症、疾病及/或損傷的細胞群體。治療性包可為自體的(亦即，源自該患者)、同種異體的(亦即，源自與該患者同一物種但不同於該患者的個體)或異種的(亦即，源自與該患者不同之物種)。治療性細胞可為均質的(亦即，由單一細胞類型組成)或異質的(亦即，由多種細胞類型組成)。術語「治療性細胞」係包括治療活性細胞以及能夠分化為治療活性細胞的祖細胞兩者。

「生長培養基」係指設計為支持微生物或細胞之生長的固體、液體或半固體。生長培養基係至少包含群落或細胞生長可能所需的最低營養物質，諸如碳源(可能為糖，如葡萄糖，或能量較不豐富之來源，諸如琥珀酸鹽)、各種鹽類(可提供如鎂、氮、磷及硫之必要元素)及水。

如本文所用，「生理平衡之」鹽溶液係指調節鹽和其他組成之濃度以等張於人類細胞之溶液或介質，其滲透壓大約為280至310mOsmol/L，並且係處於生理pH值大約pH 7.3至7.4。生理平衡之鹽溶液的實例係包括但不限於，Hank氏鹼性鹽溶液、α最低必要培養基(aMEM)、Dulbecco氏最低必要培養基(DMEM)、Iscove氏修飾之Dulbecco氏培養基(IMDM)以及如Plasma-Lyte A之Plasma-Lyte溶液。

如本文所用，「高張」、「等張」及「低張」為相對之術語，例如，關於兩個腔室(諸如血漿與細胞內流體(ICF))之間的滲透壓差或梯度的生理滲透壓。據此，「等張」溶液係指與生理滲透壓等張之任何生理及/或醫學上可接受的溶液。

為了確定藥學製劑相對於血液為等張、高張或低張，係計算包括稀釋劑在內之溶液的全部化學組分的滲透壓。可計算液體及溶解或稀釋之藥物 的張度，其係以每公升液體(mOsm/L)或每公斤溶劑(mOsm/kg)之毫莫耳的數值表示。此等兩個值亦分別稱為滲透壓及滲透度。血液之滲透壓係界於285與310mOsm/L間之範圍，而血液之滲透度係界於275與299mOsm/kg間之範圍。

溶液滲透壓係部分基於滲透及滲透壓之概念。滲透為溶質(溶解之顆粒)擴散或流體通過半透膜(例如，血管或細胞膜)之轉移。相較於如血液或血漿之生物液體，以滲透壓濃度表示之滲透壓可促進分子之跨膜運輸且通常稱為低滲透(低張)、等滲透(等張)或高滲透(高張)。術語「張度」與「滲透壓力」通常視為同義詞。

滲透壓力係阻止水因應「滲透梯度」(亦即，位於膜兩側之不同的顆粒濃度)而通過半透膜所需的靜水(或液體)壓力。血清滲透度可使用滲透壓計測量，也可計算為該溶液中存在之溶質濃度總和。

如本文所用，張度及滲透壓應視為同義詞，且應廣義地理解。張度可表示有效滲透度，且等於溶液中具有發揮跨膜(包括細胞膜)滲透力之能力的溶質濃度總和。在嚴格意義上，滲透度係特定溶液之特性，且與任意膜無關。張度係溶液關於特定膜之特性。惟，本發明應指相對於如血液或血漿之生物溶液為等張、高張或低張之溶液，並且這一引用應包括下述意義：該特定溶液係相對於血液或血漿或其它生物溶液中之細胞的細胞膜而與血液或血漿呈等張、高張或低張。

張度之操作定義可用以解釋該術語。這可基於添加測試溶液至全血中並觀察結果的實驗。如果全血中之RBC溶脹並破裂，則稱該測試溶液與正常血漿相比為低張。如果全血中之RBC收縮並變為鋸齒狀，則稱該測試溶液與正常血漿相比為高張。如果RBC保持原狀，則稱該溶液為與血漿等張。RBC細 胞膜可作為參考膜。例如，置於生理鹽水(亦即，0.9%之氯化鈉)中之全血將不會溶脹，因此，生理鹽水被視為等張。

本文關於細胞之可互換使用的術語「繁殖(proliferation)」及「擴增(expansion)」係指相同類型之細胞的數量藉由分裂而增加。術語「分化」係指細胞特化用於特定功能之發育過程，例如，細胞獲得一種或多種不同於初始細胞類型的形態特徵及/或功能。臍帶血幹細胞擴增方法為發明所屬技術領域中已知者。此類擴增技術係包括美國專利第7,399,633號；WO/2013/086436；WO/2013/179633；US20180353541；Delaney et al.,2010,Nature Med.16(2)：232-236；Zhang et al.,2008,Blood 111：3415-3423；及Himburg et al.,2010,Nature Med.16,475-482中揭示者。

術語「分化」係包括譜系定向進程及終末分化進程兩者。舉例而言，分化可藉由使用免疫組織化學或熟悉發明所屬技術領域中具有通常知識者已知之其它程序監測譜系標記物之存在或不存在而評估。源自祖細胞的分化後代細胞可為(但未必)與幹細胞之來源組織相同之胚層或組織有關。例如，神經祖細胞及肌肉祖細胞可分化為造血細胞譜系。

本文中可互換使用之術語「譜系定向」及「特化(specification)」係指幹細胞所經歷之過程，於該過程中，幹細胞產生定向形成特定有限範圍之分化細胞類型的祖細胞。定向祖細胞往往能夠自我更新或細胞分裂。

術語「終末分化」係指細胞最終分化為完全分化之成熟細胞。舉例而言，造血祖細胞及肌肉祖細胞可分化為神經或神經膠細胞譜系，其終末分化產生成熟神經元或神經膠細胞。終末分化通常有關退出細胞週期以及停止增殖。

本文所用術語「祖細胞」係指定向為特定細胞譜系並藉由一系列 細胞分裂產生該譜系之細胞的一種細胞。祖細胞之實例係包括神經元譜系、肝譜系、腎原性譜系、脂肪形成譜系、成骨譜系、破骨譜系、肺泡譜系、心臟譜系、腸譜系或內皮譜系的前驅細胞。

術語「培養」係指維持幹細胞於可增殖並避免衰老的條件下。舉例而言，於本發明中係於含有鋰鹽及視需要之一種或多種生長因子(即，生長因子混合液)之培養基中培養幹細胞。

術語「臍帶血」係指從出生後留下的臍帶之血液中獲得的多能性及多能幹細胞源。臍帶血中得到之幹細胞的實例係包括但不限於，間葉幹細胞、造血幹細胞以及祖細胞。間葉幹細胞及祖細胞通常可分化為神經細胞、骨髓基質細胞、軟骨細胞、成骨細胞、脂肪細胞、肌細胞、腱細胞及韌帶細胞。造血幹細胞通常可產生淋巴樣譜系細胞、骨髓樣譜系細胞及紅血球樣譜系細胞。採集及處理臍帶血之方法的詳細說明係提供於下文中。

術語「臍帶血單位」係指從單一供體採集之臍帶血的體積。本發明之方法中通常使用單一臍帶血單位，但亦可使用如雙臍帶血單位之多臍帶血單位以增加幹細胞數量。

術語「臍帶血幹細胞」係指源自在出生時採集之人類臍帶血及/或人類胎盤血的富含造血幹細胞的群體或富含造血幹細胞及祖細胞的群體。相較於其它類型的造血細胞，該等造血幹細胞或者造血幹細胞與先驅細胞對於造血幹細胞或者造血幹細胞與祖細胞上以增加之水平表現的特定標記物可為陽性。舉例而言，此類標記物可係CD34、CD43、CD45RO、CD45RA、CD59、CD90、CD109、CD117、CD133、CD166、HLA DR或其組合。此外，相對於其它類型之造血細胞，該等造血幹細胞或者造血幹細胞與先驅細胞，對於所表現之標記物 可為陰性。舉例而言，此類標記物可為Lin、CD38或其組合。於特定具體例中，該等造血幹細胞或者造血幹細胞與先驅細胞係為CD34+細胞。

如本文所用，術語「實質上排空血漿」及「血漿排空」係指已移除大於約30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%的血漿體積之經處理臍帶血單位。舉例而言，可藉由離心臍帶血並分離細胞部分與血漿部分以實質上排空血漿。於實質上排空後剩餘之血漿體積通常係為約0體積%至約30體積%，較佳係為約10體積%至約30體積%。

如本文所用，術語「非紅血球排空」及「未排空紅血球」係指已移除小於約30%、25%、20%、15%、10%、5%、4%、3%、2%或1%的紅血球體積之經處理臍帶血單位。本文所用術語「實質上排空紅血球」及「紅血球排空」係指已移除大於約30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%的紅血球體積之經處理臍帶血單位。

「有核細胞」係指具有細胞核(亦即，包含染色體DNA的胞器)的細胞。有核細胞係包括例如白血球及幹細胞。「無核細胞」係包括例如成體紅血球。

製劑內治療有效量之細胞可為大於10²個細胞、大於10³個細胞、大於10⁴個細胞、大於10⁵個細胞、大於10⁶個細胞、大於10⁷個細胞、大於10⁸個細胞、大於10⁹個細胞、大於10¹⁰個細胞或大於10¹¹個細胞。於特定具體例中，製劑可經校準以於給藥至受試者時提供每公斤100萬至2000萬個細胞。

本文揭示之製劑中，細胞之體積通常為1公升或更小、500ml或更小、250ml或更小或者100ml或更小。因此，給藥之細胞的密度通常係大於10⁷個細胞/ml或10⁸個細胞/ml或更大(例如，10⁹個細胞/ml)。

本文揭露之製劑可製備為藉由例如注射、輸注、灌注或灌洗等方式給藥。該製劑可進一步配製為用於骨髓、靜脈內、皮內、動脈內、結節內、淋巴內、腹膜內、病灶內、前列腺內、陰道內、直腸內、局部、腎內、腫瘤內、肌肉內、膀胱內及/或皮下注射。

「有效量」係導致受試者產生所欲之生理變化所需的細胞數量。「預防性治療」係包括給藥於未表現出病症之跡象或症狀之受試者的治療，從而以減少、預防或降低患病之風險的目的進行治療。「治療性治療」係包括給藥至表現出病症之症狀或跡象之受試者的治療，且其係以減輕該病症之嚴重性或進展為目的而給藥至受試者。治療性治療亦可部分地或完全地解決該病症。

術語「治療性組成物」或「藥物組成物」係指活性劑與惰性或活性的載劑之組合，使該組成物尤其適用於體內或體外的診斷或治療用途。

本文所用之術語「醫學上可接受」係指於合理的醫學判斷範圍內，適用於接觸人類及動物之組織而無過度毒性、刺激、過敏反應或其它問題或併發症，且具有合理的效益/風險比例之化合物、材料、組成物及/或劑型。「醫學上可接受之載劑」於給藥至受試者後或給藥至受試者時不會造成不良生理效應。該藥物組成物中之載劑必須為「可接受」，從某種意義上說，其係與活性成分相容並且能夠穩定該活性成分。一種或多種增溶劑可用作遞送活性化合物的藥物載劑。醫學上可接受之載劑的實例包括但不限於，生物相容之媒介物、佐劑、添加劑及稀釋劑，以達成可作為劑型使用之組成物。其它載劑之實例係包括膠質二氧化矽、硬脂酸鎂、纖維素及十二烷基硫酸鈉。

術語「受試者」係包括人類和非人類動物。較佳之治療受試者為人類。如本文中可互換使用之術語「受試者」與「患者」係不考慮該受試者是否 已經或正在接受任何形式之治療。如本文所用之術語「受試者」及「多個受試者」可指任何脊椎動物，包括但不限於，哺乳動物(例如，牛、豬、駱駝、駱馬、馬、山羊、兔、綿羊、倉鼠、豚鼠、貓、狗、大鼠及小鼠、非人靈長動物(例如，如食蟹獼猴、黑猩猩等猴)以及人類)。於一個具體例中，該受試者為人類。於另一具體例中，該受試者係實驗性非人動物或適用於疾病模式之動物。

如本文所用，「治療(treating)或(treatment)」」係指給藥化合物或劑或組成物至具有病症或處於患病風險下的受試者，以治癒、減輕、緩解、補救、延遲該病症之發作、預防或改善該病症、該病症之症狀、該病症繼發性疾病狀態或罹患該病變之傾向。術語「預防(prevent)或prevention)」、「預防性治療」等係指降低沒有疾病或病症或有罹患疾病或病症之風險的受試者罹患該疾病或病症的可能性。「改善」通常係指降低疾病或病症之跡象或症狀的數量或嚴重性。

術語「給藥」係指遞送劑、化合物或組成物至所欲之生物作用部位的方法。此等方法係包括但不限於，局部遞送、腸胃外遞送、靜脈內遞送、皮內遞送、肌肉內遞送、鞘內遞送、結腸遞送、直腸遞送或腹膜內遞送。

如本文中所揭露，係提供大量數值之範圍。應當理解，除非上下文另外明確指明，否則該範圍之上限值與下限值之間的以下限值之十分之一為單位的每個中間值係得以具體公開。界於所指定範圍中任何指定值或中間值與所指定範圍中任何另一指定值或中間值之間的每個較小範圍係涵蓋於本發明內。此等較小範圍之上限值及下限值可獨立地包括或排除於該範圍內，且其中一者或兩者係包括於該較小範圍內的每一範圍以涵蓋於本發明中，以所指定範圍中任何具體排除之限值為準。若所指定之範圍包括一個或兩個限值，則排除彼等所包括之一個或兩個限值的範圍亦包括於本發明中。

術語「約」或「大約」係指於如發明所屬技術領域中具有通常知識者所確定的特定值之可接受範圍內，這將部分地取決於如何測量或確定該值，例如，測量系統之限制。舉例而言，「約」可表示給定值之最多20%、較佳最多10%、更佳最多5%、再更佳最多1%的範圍。除非另作說明，否則術語「約」係表示特定值於可接受的誤差之內。

實施例

實施例1

本實施例係揭示包裝自冷凍STEMCYTE臍帶血單位(UCBU)新鮮收集或解凍之臍帶血細胞的示例性程序。簡而言之，臍帶血細胞係使用發明所屬技術領域中已知之標準方法採集。或者，根據藉由引用而全文併入本文之WO2012112572中揭示之程序解凍一袋或多袋冷凍UCBC。隨後，令該等細胞進行如WO2012112572中揭示之血液溶胞程序或MNC分離程序。接著，混合該等細胞係與含有約1%HAS的醫學上可接受之載劑/保存溶液。這裡使用之兩種醫學上可接受之載劑/保存溶液為鹽水及PLASMA-LYTE A，調節該等細胞之濃度至約1 x 10⁹/ml。在12小時至96小時(4天)時間內，如此包裝之細胞係於室溫或4℃下運輸至不同地點。

實施例2

於本實施例中，執行分析以檢查以上述實施例1中揭示之方式包裝和運送的細胞。簡而言之，該等細胞包裝係以WO2012112572中揭示之方式檢查並開封。細胞存活率分析、UCB-MNC之細胞計數以及CFU分析係以WO2012112572中揭示之方式進行。結果係顯示於圖1A至圖1D中。

如圖中所示，在4℃下以PLASMA-LYTE A中包裝並運送的細胞 (「P-冷」)係顯示高於其它條件下的存活率(藉由吖啶橙/碘化丙啶(AO/PI)染色)、總CFU數、總共有核細胞數(TNC)回收率以及表現CD34/CD45標記物之細胞，該其它條件係諸如室溫之PLASMA-LYTE A(「P-rt」)、室溫之鹽水(「S-rt」)以及2至8℃之鹽水(「S-冷」)。舉例而言，於運送或儲存約72小時(3天)後，於2至8℃下以PLASMA-LYTE A(「P-冷」)包裝和運送的細胞係具有大於80%的存活率、大於80%的TNC回收率、大於90的CFU/板(每3x10⁴個種植之細胞)以及大於0.5%的CD34⁺/CD45⁺細胞。

應將較佳實施例之前述實施例及說明視為示例性說明，而不應視為限制如藉由申請專利範圍界定之本發明。熟悉發明所屬技術領域中之通常知識者可於不背離如申請專利範圍中所述之本發明的情況下使用上述特徵的多種變化及組合，此類變化不應視作背離本發明之範疇，並且所有變化係全部包括於下述之申請專利範圍的範圍內。本文中所引用之全部參考文獻皆以全文引用方式而併入本文中。

Claims (23)

1. 一種治療性組成物，係包含(i)約1x10⁷至1x10⁹/ml之治療性細胞；以及(ii)醫學上可接受之載劑溶液，其係(a)含有約25至30mM之醋酸鹽及約20至25mM之葡萄糖酸鹽，以及(b)具有約270至320mOsmol/L之滲透壓。
2. 如請求項1所述之治療性組成物，其中，該醫學上可接受之載劑溶液係含有以下之一者或多者：約120至160Mm之Na⁺、約3至7mM之K⁺、約1.0至2.0mM之Mg²⁺以及約90至110mM之Cl^-。
3. 如請求項2所述之治療性組成物，其中，該醫學上可接受之載劑溶液係不含Ca²⁺或乳酸鹽或兩者。
4. 如請求項1至3中任一項所述之治療性組成物，其中，該醫學上可接受之載劑溶液係含有：約140mM之Na⁺、約5mM之K⁺、約1.5mM之Mg²⁺、約98mM之Cl^-、約27mM之醋酸鹽以及約23mM之葡萄糖酸鹽。
5. 如請求項4所述之治療性組成物，其中，該醫學上可接受之載劑溶液係含有：約90mM之氯化鈉(NaCl)、約5mM之氯化鉀(KCl)、約1.5mM之氯化鎂(MgCl₂‧6H₂O)、約27mM之三水合醋酸鈉(C₂H₃NaO₂‧3H₂O)、以及約23mM之葡萄糖酸鈉(C₆H₁₁NaO₇)。
6. 如請求項1所述之治療性組成物，其中，該醫學上可接受之載劑溶液係具有126至154mEq/L之鈉。
7. 如請求項1至6中任一項所述之治療性組成物，其中，該醫學上可接受之載劑溶液係具有5.5至8.0之pH。
8. 如請求項1至7中任一項所述之治療性組成物，其中，該治療 性組成物係不含DMSO或含有微量之DMSO。
9. 如請求項1至8中任一項所述之治療性組成物，其中，該治療性組成物係含有約1 x 10⁸/ml治療性細胞。
10. 如請求項1至9中任一項所述之治療性組成物，其中，該治療性細胞係包含單核細胞。
11. 如請求項10所述之治療性組成物，其中，該細胞係包含臍帶血細胞、造血幹細胞、間葉幹細胞、胚胎幹細胞、外周血細胞、骨髓細胞或胎盤血細胞。
12. 如請求項1至11中任一項所述之治療性組成物，其中，該細胞係包含CD13⁺、CD34⁺或CD134⁺細胞。
13. 如請求項1至12中任一項所述之治療性組成物，其中，該治療性組成物係含有約0.5%至約5%的血清或血清白蛋白。
14. 如請求項13所述之治療性組成物，其中，該血清或血清白蛋白係為人類血清或人類血清白蛋白。
15. 如請求項1至14中任一項所述之治療性組成物，其中，該組成物係具有約1至10℃、約2至8℃或約3至5℃範圍內的溫度。
16. 如請求項15所述之治療性組成物，其中，該組成物係具有約4℃的溫度。
17. 一種包裝產品，係包含：

    如請求項1至16中任一項所述之組成物，以及

    容器，係容納該組成物且包含基材，其中，該基材係包含聚合物。
18. 如請求項17所述之包裝產品，其中，該容器係為袋、管、注 射器或用於注射器之小瓶。
19. 如請求項17至18中任一項所述之包裝產品，其中，該容器係經密封。
20. 一種用於儲存或運送細胞之方法，係包括(i)提供如請求項1至19中任一項所述之治療性組成物或包裝產品，以及(ii)以1至10℃之範圍內的溫度儲存或運送該組成物約24至96小時。
21. 如請求項20所述之方法，其中，該細胞係包含單核細胞。
22. 如請求項20或21所述之方法，其中，在所述儲存或運送之後，該細胞於該儲存或運送之後能夠進行以下一者或多者：

    形成超過30CFU/3x10⁴個細胞，

    具有超過40%之回收率，或

    具有超過40%之存活率。
23. 如請求項20至22中任一項所述之方法，其中，該治療性組成物係經儲存或運送約72小時。

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