TW202102504A - 作為磷脂肌醇 3-激酶抑制劑之異唏衍生物 - Google Patents

作為磷脂肌醇 3-激酶抑制劑之異唏衍生物 Download PDF

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Abstract

本發明係關於抑制磷脂肌醇3-激酶(PI3K)之化合物、包含其之醫藥組成物及其在與PI3K酶相關聯之病症治療中之治療用途。

Description

作為磷脂肌醇3-激酶抑制劑之異唏衍生物
本發明係關於抑制磷脂肌醇3-激酶(下文為PI3K)之化合物；特定言之，本發明係關於作為異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏衍生物之化合物、製備該等化合物之方法、含有其之醫藥組成物及其治療用途。
更特定言之，本發明化合物為I類PI3K之活性或功能抑制劑，且更具體言之，其為I類PI3K之PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kδ及/或PI3Kγ同功異型物之活性或功能抑制劑。
因此，本發明化合物可適用於治療與PI3K酶機制相關聯之許多病症，諸如包括哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)及咳嗽之呼吸道疾病。
在生物化學中，激酶為將來自諸如ATP之高能供體分子之磷酸根基團轉移至特定受質之類型之酶，稱為磷酸化之過程。具體言之，PI3K酶為可在肌醇環之3'-羥基處磷酸化磷脂肌醇(PI)之脂質酶激酶(Panayotou等人, Trends Cell Biol 2:358-60 (1992))。眾所周知，定位於質膜中之PI可藉由含有普列克底物蛋白同源(pleckstrin-homology，PH)域、FYVE域、PX域及其他磷脂結合域之停靠蛋白(docking protein)充當信號級聯中之第二信使(Vanhaesebroeck B等人, Annu. Rev. Biochem 70, 535-602, 2001；Katso R等人, Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 17, 615-675, 2001)。
因此，PI可充當包括信號轉導、對膜運輸及傳輸之調節、細胞骨架組織、細胞存活及死亡及許多其他功能之許多細胞過程中之第二信使。
PI可經由兩種脂肪酸結合至細胞膜之脂質雙層，該等兩種脂肪酸經由甘油磷酸酯連接子連接至細胞溶質肌醇環。PI肌醇環可經PI3K酶磷酸化，引起對細胞生長、存活及增殖之調節。出於此原因，藉由PI3K酶進行之PI磷酸化為與哺乳動物細胞表面受體活化相關聯之最相關信號轉導事件中之一者(Cantley LC, Science 296, 1655-7, 2002；Vanhaesebroeck B等人, Annu. Rev. Biochem 70, 535-602, 2001)。
PI3K酶已基於序列同源性、結構、結合配偶體、活化模式及受質偏好分成三類：I類PI3K、II類PI3K及III類PI3K (Vanhaesebroeck B等人, Exp. Cell Res. 253(1), 239-54, 1999；及Leslie NR等人, Chem. Rev. 101(8), 2365-80, 2001)。
I類PI3K將磷脂肌醇-(4,5)-二磷酸酯(PI(4,5)P2)轉化成磷脂肌醇-(3,4,5)-三磷酸酯(PI(3,4,5)P3)，充當第二信使。藉由增加PI(3,4,5)P3胞內含量活化之信號級聯經由5'特異性磷酸酶及3'特異性磷酸酶作用而受到負面調節(Vanhaesebroeck B等人, Trends Biochem. Sci. 22(7), 267-72, 1997；Katso R等人, Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 17, 615-75, 2001；及Toker A, Cell. Mol. Life Sci. 59(5), 761-79, 2002)。
II類PI3K酶為最新近識別類別之PI3K且其準確功能仍不明確。
III類PI3K酶由結構上與I類PI3K酶相關且似乎在胞吞作用及囊泡運輸中至關重要之單個家族成員組成。然而，一些證據顯示，III類PI3K可在諸如吞噬作用及類鐸受體(TLR)信號傳導之免疫細胞過程中相關。
I類PI3K酶可基於其活化機制進一步分成IA類及IB類。
更詳言之，IA類PI3K酶包含三種密切相關之同功異型物：PI3Kα、PI3Kβ及PI3Kδ，而IB類僅包含PI3Kγ同功異型物。此等酶為由構成上與調節次單元相關聯之稱為p110之催化次單元構成之異二聚體，該p110具有四種類型：α、β、δ及γ同功異型物。前兩種p110同功異型物(α及β)受到無所不在地表現且參與細胞分化及增殖。因此，PI3Kα及PI3Kβ酶已作為新型化學治療劑研發之目標得到廣泛地研究。
除此以外，p110δ及p110γ同功異型物主要在白血球中表現，且在諸如白血球遷移之免疫反應活化、B及T細胞活化以及肥胖細胞去顆粒中至關重要。因此，PI3Kδ及PI3Kγ同功異型物在發炎性呼吸道疾病中極相關。
當前，本技藝中已知之PI3K酶之抑制劑衍生物一般可抑制該等同功異型物(α、β、δ及γ同功異型物)，且其可作用於在各種疾病中由該等特異性同功異型物所發揮之個別作用。
因此，一種特異性PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kδ及PI3Kγ同功異型物相對於另一者之IA類抑制劑之比活性分析已得到廣泛地發展以便辨別與PI3K酶機制相關聯之病症治療的合適概況。舉例而言，該等病症可包括選自以下之呼吸道疾病：特發性慢性咳嗽、咳嗽變異性哮喘、胸部腫瘤或者肺癌相關咳嗽、病毒或者病毒後咳嗽、上呼吸道咳嗽症候群(UACS)或者鼻涕倒流咳嗽(post nasal drip cough)或者酸性及非酸性胃-食道回流疾病相關咳嗽、哮喘、慢性支氣管炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、間質性肺病、特發性肺纖維化(IPF)。
鑒於由PI3K酶介導之病理反應之數目，持續需要可用於治療許多病症且特定言之呼吸道疾病之PI3K酶抑制劑。因此，本發明係關於作為I類PI3K酶之PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kδ及PI3Kγ同功異型物之抑制劑之新穎化合物，該等新穎化合物出於上文原因可常常具有治療上所需之特徵。
參照呼吸道疾病治療，存在先前技術中已知之具有如PI3K抑制劑之活性的一些化合物。舉例而言，WO 2015/193263、WO 2016/038140、WO 2016/166239及WO 2017/134053揭示作為磷脂肌醇3-激酶抑制劑之吲哚𠯤、嗒𠯤酮、異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏及吡唑衍生物。WO 2015/091685為揭示異薰草素(isocumarine)及異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏化合物衍生物之相同申請人之共同未決申請案。
即使先前技術化合物展現抑制PI3K之活性，但本發明化合物為強效PI3K抑制劑，在次奈莫耳範圍內之酶活體外分析中具活性，且此外亦在PI3K δ抑制之THP-1細胞模型中展現高活性。
此外，本發明化合物在OVA測試中顯示持久活體內活性(作用持續時間)。
本發明係關於式(I)化合物，
Figure 02_image003
(I) 其中R、R1 、R2 、R3 、R4 、R5 、R6 如下文在具體實施方式中所報導，其充當磷脂肌醇3-激酶之抑制劑，係關於其製備方法、包含單獨或與一或多種活性成分之組合、與一或多種醫藥學上可接受之載劑混合之該式(I)化合物的醫藥組成物。
在一個態樣中，本發明係關於用作藥劑之本發明化合物。
在一個態樣中，本發明係關於本發明化合物用於製造藥劑之用途。
在另一態樣中，本發明提供本發明化合物用於製備用以預防及/或治療任何疾病之藥劑之用途，該任何疾病之特徵在於磷脂肌醇3-激酶(PI3K)酶過度活性且/或其中需要PI3K活性抑制且詳言之經由相對於α及β酶同功異型物選擇性抑制δ酶同功異型物或者δ及γ酶同功異型物兩者來進行。
此外，本發明提供用於預防及/或治療其中需要PI3K酶抑制之任何疾病，較佳呼吸道疾病之方法，該方法包含向需要該治療之患者投與治療有效量之本發明化合物。
詳言之，本發明化合物較佳用於預防及/或治療諸如咳嗽、哮喘、COPD及IPF之特徵在於發炎性氣管阻塞之呼吸道疾病。
本發明之另一態樣提供包含具有本發明化合物之醫藥組成物之合適吸入構件，該吸入構件可各別地選自單劑量或多劑量乾燥散劑吸入器(DPI)、霧化器且詳言之軟薄霧霧化器。
本發明之另一態樣提供套組，該套組包含：具有單獨或與一或多種活性成分組合之本發明化合物的醫藥組成物，及可作為單劑量或多劑量乾燥散劑吸入器或霧化器的構件。
定義
如本文所使用之術語「醫藥學上可接受之鹽」係指式(I)化合物之衍生物，其中母化合物適當地藉由用習知地預期為醫藥學上可接受之任何鹼或酸將自由酸基或自由鹼基(若存在)中之任一者轉化成對應加成鹽而經改質。
因此，該等鹽之合適實施例可包括具有諸如胺基之鹼性殘基之礦物或有機酸加成鹽以及具有諸如羧基之酸性殘基之礦物或有機鹼加成鹽。
可適當地用於製備本發明內之鹽之無機鹼之陽離子包含諸如鉀、鈉、鈣或鎂之鹼金屬或鹼土金屬之離子。
藉由使充當鹼之主化合物與無機或有機酸反應以形成鹽而獲得之鹽包含例如氫氯酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、樟腦磺酸、乙酸、草酸、順丁烯二酸、反丁烯二酸、丁二酸及檸檬酸之鹽。
如本文所使用之術語「鹵素原子」包括氟、氯、溴及碘，較佳氯或氟。
其中x為大於1之整數之術語「(C1 -Cx )烷基」係指其中構成碳原子之數目介於1至x範圍內之直鏈或分支鏈烷基。特別較佳之烷基為甲基、乙基、正丙基、異丙基及第三丁基。
表述「(C1 -Cx )鹵烷基」係指上文所定義之「(C1 -Cx )烷基」，其中一或多個氫原子經可彼此相同或不同之一或多個鹵素原子置換。
因此，該等(C1 -Cx )鹵烷基之實施例可包括鹵化、多鹵化及完全鹵化烷基，例如三氟甲基或二氟甲基。
藉由類比，術語「(C1 -Cx )羥烷基」或「(C1 -Cx )胺基烷基」係指上文所定義之「(C1 -Cx )烷基」，其中一或多個氫原子各別地經一或多個羥基(OH)或胺基置換。
在本說明書中，除非另外提供，否則胺基烷基之定義涵蓋經一或多個(NR1 R2 )取代之烷基。
參照如上文所定義之取代基R1 及R2 ，此處進一步解釋當R1 及R2 與其所連接之氮原子一起形成5至6員雜環基時，該雜環基中之至少另一環碳原子可經至少一個雜原子(例如N、NH、S或者O)置換或者可攜帶至少一個-側氧基(=O)取代基。該雜環基可進一步在環中之可用點上，亦即碳原子上，或在可供用於取代之雜原子上選擇性地經取代。因此，該等雜環基之實施例為1-吡咯啶基、1-哌啶基、1-哌𠯤基、4-嗎啉基、哌𠯤-4基-2-酮、4-甲基哌𠯤-1-基。
本發明係關於充當磷脂肌醇3激酶(PI3K)抑制劑之一類化合物。
該類化合物抑制I類PI3K之活性或功能，且更具體言之，其為I類PI3K之PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kγ及/或PI3Kδ同功異型物之活性或功能的抑制劑衍生物。
本發明係關於式(I)化合物：
Figure 02_image005
(I) 其中： 當存在時，各R獨立地選自由以下組成之群：OR7 、鹵素、(C1 -C6 )烷基； 相同或不同之R1 及R2 在每次出現時獨立地為(C1 -C6 )烷基， 相同或不同之R3 及R4 在每次出現時獨立地為H或(C1 -C6 )烷基； 或者 R1 及R2 與其所連接之氮原子一起形成5或6員雜環基，其中該雜環基中之至少另一環碳原子選擇性地經至少一個雜原子(例如N、NH、S或者O)置換且選擇性地攜帶至少一個-側氧基(=O)取代基；該雜環基進一步選擇性地經(C1 -C6 )烷基取代，且R3 及R4 為H； 或者 R3 及R2 一起形成包含N原子之5或6員雜環基；該雜環基進一步選擇性地經(C1 -C6 )烷基取代，R1 為(C1 -C6 )烷基且R4 為H； R5 為OR7 ； R6 選自由以下組成之群：H、OR7 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )鹵烷基、(C1 -C6 )羥烷基； R7 選自由以下組成之群：H、(C1 -C6 )烷基； p為零或介於1至4範圍內之整數，較佳為零或者1，甚至更佳地，當p為1時，R為鹵素； 或其醫藥學上可接受之鹽。
對於熟悉本技藝者顯而易見，式(I)化合物含有至少一個立體對稱中心，亦即在式(Ia)中該至少一個立體對稱中心由標記有星號(*)之碳原子表示，且因此以光學立體異構體之形式存在
Figure 02_image007
(Ia)。
本發明化合物具有該至少一個立體對稱中心，其可因此以對映異構體之形式存在。在本發明化合物具有兩個或更多個立體對稱中心之情況下，其可另外以非對映異構體之形式存在。應理解，所有該等單一對映異構體、非對映異構體及其呈任何比例之混合物(特此亦稱為外消旋物或外消旋化合物)均涵蓋於本發明之範疇內。當確定時，作為立體對稱中心之碳(*)之絕對組構(R)或(S)係基於嵌-英-普(Cahn-Ingold-Prelog)命名法規則基於基團優先權來指派。
化合物之化學名稱中之術語「(R)及/或(S)」之目的在於仍在範疇內包括手性碳(*)上之對映異構體(R)及(S)中之一種或另一對映異構體或呈任何比例之共混物。
在化合物之化學名稱中在不規定絕對組構之情況下術語「單一」對映異構體、非對映異構體意欲指示經由分離法(例如層析法)或立體受控合成獲得超過95%之對映異構增濃(e.e. %)，因此獲得經分離之單一對映異構體，即使絕對組構未經指派。當使用手性層析法時，純異構體(對映異構體或非對映異構體)在化合物名稱中指示為「第一溶離」、「第二溶離」對映異構體或非對映異構體，提供對應於個別化單一對映異構體或非對映異構體之層析峰及ee%之方法及滯留時間。
在一較佳具體例中，本發明係關於如上文所定義之式(Ia)化合物，其中化合物呈一種單一或另一對映異構體之形式，各自經由分離法(例如層析法)或立體受控合成以純形式，亦即以至少95%、較佳超過99%之對映異構增濃獲得。
因此，在一個較佳具體例中，對於式(I)化合物，參照在式(Ia)中由標記有星號(*)之碳原子表示之立體對稱中心，絕對組構為(R)或(S)。
在另一較佳具體例中，本發明中所描繪之式(I)化合物以對映異構體或非對映異構體之混合物形式存在。
第一組較佳化合物為式(Ib)化合物，
Figure 02_image009
(Ib) 其中就式(I)而言： R1 及R2 與其所連接之氮原子一起形成4-甲基哌𠯤-1-基； R3 及R4 為H；且 R、R5 、R6 及p如上文所定義； 或其醫藥學上可接受之鹽。
在此組化合物中，特別較佳的為選自以下之化合物中之至少一者：
3-{1-[4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基]乙基}-4-{3-[(4-甲基哌𠯤-1-基)甲基]苯基}-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮；
Figure 02_image011
3-{1-[4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-4-{4-氟-3-[(4-甲基哌𠯤-1-基)甲基]苯基}-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮；
Figure 02_image013
3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-氟-5-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮；
Figure 02_image015
另一組較佳化合物為式(Ic)化合物，
Figure 02_image017
(Ic) 其中，就式(I)而言： R3 及R2 一起形成包含N原子之5員雜環基；該雜環基進一步經作為甲基之(C1 -C6 )烷基取代；R1 為作為甲基之(C1 -C6 )烷基且R4 為H；且 R、R5 、R6 及p如上文所定義； 或其醫藥學上可接受之鹽。
在此組化合物中，特別較佳的為至少
3-{1-[4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-4-{3-[(2R)-1-甲基吡咯啶-2-基]苯基}-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮；
Figure 02_image019
另一組較佳化合物為式(I)化合物，其中： R1 及R2 為作為甲基之(C1 -C6 )烷基， R3 及R4 獨立地為H或作為甲基之(C1 -C6 )烷基；且 R、R5 、R6 及p如上文所定義； 或其醫藥學上可接受之鹽。
在此組化合物中，特別較佳的為選自隨附表中所列舉之化合物中之至少一者：
3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((二甲胺基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮；
Figure 02_image021
3-{1-[4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基]乙基}-4-{4-氯-3-[(二甲胺基)甲基]苯基}-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮；
Figure 02_image023
3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-(1-(二甲胺基)乙基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮；
Figure 02_image025
另一組較佳化合物為式(I)化合物，其中： R為-H； R5 為-OH； R6 為H； R1 、R2 、R3 及R4 如上文所定義； 或其醫藥學上可接受之鹽。
根據較佳具體例，本發明係關於選自隨附表中所列舉之化合物中之至少一者：
3-{1-[4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基]乙基}-4-{3-[(4-甲基哌𠯤-1-基)甲基]苯基}-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮；
Figure 02_image011
3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((二甲胺基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮；
Figure 02_image021
3-{1-[4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基]乙基}-4-{4-氯-3-[(二甲胺基)甲基]苯基}-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮；
Figure 02_image023
3-{1-[4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-4-{3-[(2R)-1-甲基吡咯啶-2-基]苯基}-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮；
Figure 02_image019
3-{1-[4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-4-{4-氟-3-[(4-甲基哌𠯤-1-基)甲基]苯基}-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮；
Figure 02_image013
3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-氟-5-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮；
Figure 02_image015
3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-(1-(二甲胺基)乙基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮；
Figure 02_image025
及其呈任何比例之對映異構體或非對映異構體混合物或者單一對映異構體或單一非對映異構體以及醫藥學上可接受之鹽及溶劑合物。
本發明之較佳鹽選自 (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮氫溴酸鹽； (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮鹽酸鹽； (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮半1,5-萘二磺酸鹽； (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮半硫酸鹽； (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮甲苯磺酸鹽； (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮甲磺酸鹽； (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮2-萘磺酸鹽； (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮羥乙磺酸鹽； (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮順丁烯二酸鹽； (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮乙磺酸鹽； (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮半雙羥萘酸鹽； (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮羥萘甲酸鹽； (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮柳酸鹽； (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮苯甲酸鹽。
本發明之其他較佳鹽選自 (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((二甲胺基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮氫溴酸鹽； (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((二甲胺基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮鹽酸鹽； (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((二甲胺基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮甲磺酸鹽； (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((二甲胺基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮2-萘磺酸鹽； (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((二甲胺基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮順丁烯二酸鹽； (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((二甲胺基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮乙磺酸鹽。
在一個具體例中，本發明提供用於治療呼吸道病症之方法，該方法包含向有需要之患者投與有效量之本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在一個態樣中，本發明提及用作藥劑之式(I)化合物。
在一個態樣中，本發明提供本發明化合物用於製造藥劑之用途。
包括本文在上文所列舉之所有化合物之式(I)化合物一般可根據在下文所示之流程中詳細概述之程序使用眾所周知的方法來製備。 流程 流程1
Figure 02_image032
流程1提供用於製備實施例1及2之合成途徑。式(VII)中間化合物可藉由諸如鈴木交叉偶合(Suzuki cross-coupling)之交叉偶合反應轉化成中間物(VIII)。其中R'為甲醯基之中間物(VIII)可藉由在存在諸如三乙醯氧基硼氫化鈉之還原劑之情況下用諸如1-甲基哌𠯤或二甲胺之合適胺進行還原性胺化來轉化成對應胺。其中X為諸如鹵原子之合適脫離基(Lg)之中間物(IV)可經由藉由諸如PBr3 之合適鹵化劑促進之羥基取代由中間物(III)來製備。中間物(VI)可藉由使中間物(IV)與合適親核劑反應來製備，該親核劑諸如為其中R''為受保護之羥基吡啶(例如甲氧基吡啶)之式(V)基於氮氣之親核劑。化合物(VI)可在酸性條件中經去保護，得到式(I)化合物，其中R3 、R4 為H，R6 為H，R5 為-OH且R為H。通式結構(Ia)化合物可藉由手性分離由對應式(I)外消旋化合物來製備。 流程2
Figure 02_image034
實施例3-7及4a可如流程2中所概述，藉由使用與流程1中所描繪之方法類似之方法來合成。其中(R)p為如上文所定義之至少一個合適取代基之通式(IIa)中間物可由中間物(VII)及適當的其中R'''為甲醯基或者受保護之甲醯基之式(IX)經合成硼酸或硼酸酯(例如頻哪醇酯)來製備。中間物(IIa)可在其中X表示諸如鹵原子之合適Lg之中間物(X)中藉由與PBr3 反應且後續與市售3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺反應以得到中間物(XI)來進行轉化。其中(R)p為如上文之合適取代基且R4 =R3 =H之中間物(XII)可藉由經由眾所周知之程序對醛官能基進行去保護，接著在存在諸如三乙醯氧基硼氫化鈉之還原劑之情況下用諸如1-甲基哌𠯤或二甲胺之合適胺進行還原性胺化由中間物(XI)來製備(流程2，步驟4a、b)。在本發明之另一具體例中，其中R1 =R2 =R4 =H且R3 為合適(C1 -C6 )烷基取代基之中間物(XII)可根據流程2，步驟5a-c，藉由與合適之市售硼酸或經合成硼酸酯進行鈴木偶合，接著藉由與PBr3 反應將OH轉化成諸如鹵原子之Lg，且最後用市售3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺進行親核取代由中間物(VII)來製備。在步驟5之後獲得之一些化合物可含有可根據眾所周知之程序經去保護且經由還原性胺化經甲基化以得到中間物(XII)(流程2，步驟6a、b)的受保護之胺基。中間物(XII)可藉由與市售5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧雜硼雜環戊-2-基)吡啶-3-醇進行鈴木偶合來轉化成其中R6 為H、R5 為OH之通式(I)化合物。通式結構(Ia)化合物可藉由手性分離由對應式(I)外消旋化合物來製備。舉例而言，對映異構性純實施例4a係藉由層析分離由對應非對映異構體混合物來製備。
在一特定態樣中，本發明係關於式(II)化合物，
Figure 02_image036
II 其中 當R=H時，R3 及R4 =H，K=R''=甲氧基吡啶；p、R1 及R2 如上文所定義(對應於流程1中之化合物(VI))
在另一態樣中，本發明係關於式(II)化合物之用途，
Figure 02_image038
II 其中 當R=H時，R3 及R4 =H，K=R''=甲氧基吡啶；p、R1 及R2 如上文所定義(對應於流程1中之化合物(VI)) 或者 當K=I時，p、R、R1 、R2 、R3 、R4 如上文所定義(對應於流程2中之化合物(XII)) 該等式(II)化合物在如上文所描繪之式(I)化合物製備中用作中間物。
式(II)化合物在式(I)化合物製備中用作中間物之用途特別適用於其中式(II)化合物經歷後續去保護或偶合步驟、接著為最終手性分離步驟之過程。
本發明化合物為激酶活性，詳言之PI3-激酶活性之抑制劑。一般而言，作為PI3K抑制劑之化合物可適用於治療許多病症。
在一個具體例中，可藉由本發明化合物治療之病症為選自以下之呼吸道疾病：諸如特發性慢性咳嗽之咳嗽、咳嗽變異性哮喘、胸部腫瘤或肺癌相關咳嗽、病毒或病毒後咳嗽、上呼吸道咳嗽症候群(UACS)、鼻涕倒流咳嗽、咳嗽相關胃-食道回流疾病(酸性及非酸性回流兩者)、哮喘、慢性支氣管炎、慢性阻塞性肺病(COPD)及間質性肺病(諸如特發性肺纖維化(IPF))。
在另一具體例中，病症選自哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)。
在另一具體例中，病症選自特發性肺纖維化(IPF)、咳嗽及慢性咳嗽。
本發明之治療方法包含向有需要之患者投與有效量之式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽。如本文參照式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽或其他醫藥學上活性劑所使用之「有效量」意謂足以治療患者病況、但足夠低以避免嚴重副作用之化合物之量，然而其可由熟悉本技藝者以常規方式測定。式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽可投與一次或者根據其中以變化時間間隔投與多次劑量達給定時間段之給藥方案投與。典型日劑量可視所選特定投與途徑而變化。
本發明亦提供具有與一或多種醫藥學上可接受之載劑或賦形劑混合之式(I)化合物之醫藥組成物，例如Remington's Pharmaceutical Sciences Handbook, 第XVII版, Mack Pub., N.Y., U.S.A中所描繪之醫藥組成物。
本發明化合物及其醫藥組成物之投與可根據患者需要，例如經口、經鼻、非經腸(皮下、靜脈內、肌內、胸骨內及藉由輸注)、藉由吸入、經直腸、經陰道、外用、局部、經皮及藉由眼部投與來實現。
可使用各種固體口服劑型以投與包括作為錠劑、膠囊錠、膠囊、膠囊型錠劑、顆粒劑、口含錠及散裝散劑之該等固體形式之本發明化合物。本發明化合物可單獨或與以下組合投與：各種醫藥學上可接受之載劑；稀釋劑(諸如蔗糖、甘露醇、乳糖、澱粉)；及已知賦形劑，包括懸浮劑、增溶劑、緩衝劑、黏合劑、崩解劑、防腐劑、著色劑、調味劑、潤滑劑及其類似試劑。延時釋放膠囊、錠劑及凝膠亦在投與本發明化合物中有利。
亦可使用各種液體口服劑型以投與包括水性及非水性溶液、乳液、懸浮液、糖漿及酏劑之本發明化合物。該等劑型亦可含有諸如水之合適已知惰性稀釋劑及諸如防腐劑、潤濕劑、甜味劑、調味劑以及用於乳化及/或懸浮本發明化合物之試劑的合適已知賦形劑。本發明化合物可以等張無菌溶液之形式例如靜脈內注射。其他製劑亦具可能性。
對於呼吸道疾病治療，本發明化合物較佳藉由吸入來投與。
可吸入製劑包括可吸入散劑、含有推進劑之計量噴霧劑或不含推進劑之可吸入調配物，且可經由可各別地選自乾燥散劑吸入器、經加壓之計量給藥吸入器或霧化器之合適吸入構件來投與。
對於以乾燥散劑形式進行之投與，可利用自先前技術已知之單劑量或多劑量吸入劑。在彼情況下，散劑可填充在明膠、塑膠或其他膠囊、藥筒或泡殼包裝中或者填充在儲集器中。例如乳糖或適用於改善可呼吸分率之任何其他添加劑之稀釋劑或者載劑可添加至本發明之粉末狀化合物中。
含有諸如氫氟烷烴之推進劑氣體之吸入噴霧劑可含有呈溶液形式或呈分散形式之本發明化合物。推進劑驅動之調配物亦可含有諸如共溶劑、穩定劑及選擇性其他賦形劑之其他成分。
包含本發明化合物之不含推進劑之可吸入調配物可呈於水性、醇性或水醇性介質中之溶液或懸浮液形式，且其可藉由自先前技術已知之噴射器或超音波霧化器或藉由諸如Respimat® (Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals之註冊商標)之軟薄霧霧化器來遞送(Wachtel, H., Kattenbeck, S., Dunne, S.等人 Pulm Ther (2017) 3: 19. https://doi.org/10.1007/s41030-017-0040-8)。
根據特別較佳之具體例，本發明組成物呈乾燥散劑調配物之形式，其中存在包含一或多種醫藥學上可接受之賦形劑之細粒及/或粗粒的載劑，且進一步選擇性地存在具有潤滑劑或抗黏附特性之添加劑。
較佳地，載劑粗粒所包含之質量直徑介於30微米與500微米之間。
載劑一般為選自由以下組成之群之結晶糖：葡萄糖、阿拉伯糖、麥芽糖、蔗糖、右旋糖及乳糖或者選自由甘露糖醇、麥芽糖醇、乳糖醇及山梨糖醇組成之群之多元醇；且添加劑材料係選自由以下組成之群：胺基酸、水溶性界面活性劑、潤滑劑及滑動劑。
較佳地，載劑粒子為α-乳糖或β-乳糖粒子，甚至更佳地為α-單水合乳糖粒子。
本發明之另一較佳具體例為填充有呈如上文所定義之乾燥散劑調配物形式之醫藥調配物的乾燥散劑吸入器構件。
另一較佳具體例為包含如上文所定義之醫藥調配物及乾燥散劑吸入器構件之套組。
本發明之乾燥散劑調配物可根據諸如WO0053157A1及WO 96/23485中所描繪之方法之已知方法來製備。
根據替代較佳具體例，本發明組成物呈不含推進劑之醫藥調配物之形式以經由噴霧投與至肺臟，其中該化合物或其鹽經溶解或懸浮於水性媒劑中，該不含推進劑之醫藥調配物選擇性地包含另外的醫藥學上可接受之賦形劑。
因此，另一較佳具體例為包含作為如上文所指示之本發明化合物之溶液或懸浮液之醫藥調配物及霧化器的套組。
本發明化合物可作為唯一活性劑或與其他醫藥活性成分組合投與，該等其他醫藥活性成分包括當前用於治療呼吸道病症且熟悉本技藝者已知之醫藥活性成分。
本發明化合物之劑量視包括以下之各種因素而定：待治療之特定疾病、症狀嚴重程度、投與途徑、劑量間隔頻率、所用特定化合物、化合物之功效、毒理學概況及藥物動力學概況。
隨附實施例例示本發明且不限制其範疇。 中間物及實施例製備
化合物之化學名稱係以Structure To Name Enterprise 10.0劍橋軟體生成。 縮寫
Et2 O =二乙醚；Et3 N =三乙胺；DCE = 1,2-二氯乙烷；TEA =三乙胺；DCC = N,N'-二環己基碳化二亞胺；HOBt =羥基苯并三唑；HATU = (二甲胺基)-N,N-二甲基(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基氧基)甲銨六氟磷酸鹽；HBTU = N,N,N',N'-四甲基-O-(1H-苯并三唑-1-基)
Figure 109110464-A0101-12-0011
六氟磷酸鹽、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲
Figure 109110464-A0101-12-0011
六氟磷酸鹽；EDC = 1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽；DMAP = 4-二甲胺基吡啶；DMF =二甲基甲醯胺；EtOAc =乙酸乙酯；RT =室溫；THF =四氫呋喃；DCM =二氯甲烷；MeOH =甲醇；EtOH =乙醇；LHMDS =雙(三甲基矽烷基)醯胺鋰；m-CPBA =間氯過氧苯甲酸；TFA =三氟乙酸；LC-MS =液相層析法/質譜法；HPLC =高壓液相層析法；MPLC =中壓液相層析法；SFC =超臨界流體層析法；dppf = 1,1'-雙(二苯膦基)二茂鐵；X-Phos-Pd-G2 =氯(2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯基)[2-(2'-胺基-1,1'-聯苯基)]鈀(II)；S-Phos-Pd-G2 =氯(2-二環己基膦基-2',6'-二甲氧基-1,1'-聯苯基)[2-(2'-胺基-1,1'-聯苯基)]鈀(II)；DIEA或者DIPEA = N,N-二異丙基乙胺；MeCN =乙腈；MTBE =第三丁基甲醚；Ac2O =乙酸酐；AcCl =乙醯氯；HBTU = N,N,N',N'-四甲基-O-(1H-苯并三唑-1-基)
Figure 109110464-A0101-12-0011
六氟磷酸鹽、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲
Figure 109110464-A0101-12-0011
六氟磷酸鹽；TBDMSCl =第三丁基(氯)二甲基矽烷；DMSO =二甲亞碸；BoC2O =二碳酸二第三丁酯；UPLC =超高效液相層析法。 通用實驗細節
1 H-NMR譜係在以400 MHZ (質子頻率)操作之配備有以下之Varian MR-400譜儀上執行：用於逆向偵測之自遮蔽Z-梯度線圈5 mm 1H/nX寬帶探頭、氘數位鎖通道單元、具有發射器偏置頻率位移之正交數位偵測單元；或者在AgilentVNMRS-500上執行；或者在Bruker Avance 400譜儀上執行。相對於作為內標之三甲基矽烷(TMS)之化學位移以ppm為單位報導為δ值。偶合常數(J 值)係以赫茲(Hz)為單位給出，且多峰性係使用隨附縮寫(s=單峰，d=二重峰，t=三重峰，q=四重峰，m=多重峰，br. s=寬峰，nd=未測定)來報導。 LC/UV/MS分析方法
估計LC/MS滯留時間受+0.5 min之實驗誤差影響。LCMS可在隨附條件下進行記錄：可在與以正電子及/或負電子噴霧ES電離模式操作之Micromass ZQTM 或者Waters SQD單一四極質譜儀耦合之UPLC/PDA/MS AcquityTM 系統及/或與以正及/或負ES電離模式操作之ZQTM 單一四極耦合之以分析性模式使用之Fractionlynx系統上獲取二極體陣列DAD層析跡線、質量層析圖及質譜。所用品質控制方法係在低pH條件下或在高pH條件下操作。
方法1：將具有C18-逆相管柱(具有1.7 µm 粒度之50 × 2.1 mm Acquity CSH)之Aquity UPLC-QDa質譜儀維持在40℃下，用以下溶離：A：95/5水/乙腈+ 0.05%甲酸；B：95/5乙腈/水+ 0.05%甲酸。 梯度： 梯度 - 時間  流量(mL/min) %A           %B 0.00           1                   99.0           1.0 1.50           1                   0.1             99.9 1.90           1                   0.1             99.9 2.00           1                   99.0           1.0 偵測-MS、UV PDA MS電離方法-電噴霧(正/負離子)。
方法2，低pH條件：管柱：Acquity UPLC BEH C18，1.7 µm，2.1 × 50 mm，管柱溫度為40℃；移動相溶劑A為超純水+ 0.1% HCOOH，移動相溶劑B為MeCN+ 0.1% HCOOH。流動速率為1 mL/min。梯度表為t=0 min 97% A - 3% B，t=1.5 min 0.1% A - 99.9% B，t=1.9 min 0.1% A - 99.9% B及t=2 min 97% A - 3% B。UV偵測範圍為210-350 nm且ES+/ES-範圍為100=1000 amu。
方法3，低pH條件：管柱：Acquity CSH C18，1.7 µm，2.1 × 50 mm，管柱溫度為40℃；移動相溶劑A為超純水+ 0.1% HCOOH，移動相溶劑B為MeCN+ 0.1% HCOOH。流動速率為1 mL/min。梯度表為t=0 min 97% A - 3% B，t=1.5 min 0.1% A - 99.9% B，t=1.9 min 0.1% A - 99.9% B及t=2 min 97% A - 3% B。UV偵測範圍為210-350 nm且ES+/ES-範圍為100=1000 amu。
方法4：將具有C18-逆相管柱(具有1.7 µm 粒度之50 × 2.1 mm Acquity CSH)之Aquity UPLC-QDa質譜儀維持在40℃下，用以下溶離：A：95/5水/乙腈+ 0.05%甲酸；B：95/5乙腈/水+ 0.05%甲酸。 梯度： 梯度-時間     流量(mL/min)   %A        %B 0.00              1                   99.0       1.0 3.50              1                   0.1         99.9 3.90              1                   0.1         99.9 4.00              1                   99.0       1.0 偵測-MS、UV PDA MS電離方法-電噴霧(正/負離子)。
方法5，高pH條件：管柱：Acquity UPLC BEH C18，1.7 µm，2.1 × 50 mm，管柱溫度為40℃；移動相溶劑A為經氨調節至pH=10之10 mM NH4 HCO3 水溶液，移動相溶劑B為MeCN。流動速率為1 mL/min。梯度表為t=0 min 97% A - 3% B，t=1.5 min 0.1% A - 99.9% B，t=1.9 min 0.1% A - 99.9% B及t=2 min 97% A - 3% B。UV偵測範圍為210-350 nm且ES+/ES-範圍為100=1000 amu。 手性化合物之分析手性
手性化合物之對映異構體過量係在配備有6位切換閥、DAD及CD偵測器之HPLC Agilent 1100上藉由手性HPLC分析測定。使用隨附方法： 方法A1，管柱：Chiralpak IC (25 × 0.46 cm)，5 µm；移動相：正己烷/(乙醇/二氯甲烷90/10 % v/v + 0.1%異丙胺) 80/10 % v/v；流動速率：1.0 mL/min；DAD：220 nm。 方法A2，管柱：Whelk 0-1 (R,R) (25 × 0.46 cm)，10 µm；移動相：正己烷/(2-丙醇/甲醇1/1+0.1%異丙胺) 30/70% v/v；流動速率：1.0 mL/min；DAD：220 nm。 方法A3，管柱：Chiralpak AD-H (25 × 0.46 cm)，5 µm；移動相：正己烷/(乙醇+0.1%異丙胺) 75/25% v/v；流動速率：1.0 mL/min；DAD：220 nm。 方法A4，管柱：Chiralpak AD-H (25 × 0.46 cm)，5 µm；移動相：(2-丙醇+0.1%異丙胺) 32%；流動速率：2.5 mL/min；DAD：220 nm。
使用Isolera MPLC系統(由Biotage製造)，使用預裝填矽膠或逆相料筒(由Biotage供應)進行急驟層析法。隨附實施例中所描繪之許多化合物已由例如95% ee立體化學純起始材料製備。經指示之實施例中之化合物之立體化學係假設起始材料之解析立體對稱中心處之絕對組構在整個任何後續反應條件中得到維持而被指派。在隨附程序中，在各起始材料之後，有時提供對化合物編號之提及。僅為輔助有技藝之化學家而提供此化合物編號。起始材料可能未必已由所提及之批料製備。當提及「類似(similar/analogous)」程序之使用時，熟悉本技藝者應瞭解。此類程序可涉及少量變化形式，例如反應溫度、試劑/溶劑量、反應時間、處理條件或層析純化條件。 中間物製備： 中間物A1：3-(3-(1-羥乙基)-1-側氧基-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-4-基)苯甲醛
Figure 02_image040
在500 mL 3頸圓底燒瓶中裝載(3-甲醯基苯基)硼酸(1 g，6.67 mmol)、4-溴-3-(1-羥乙基)-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮(WO 2015091685中之中間物A2) (2.15 g，8.00 mmol)及磷酸鉀水合物(4.61 g，20.01 mmol)，隨後添加THF (50 mL)及水(50 mL)。使氬氣鼓泡10 min，隨後添加XPhos-Pd-G2 (0.367 g，0.467 mmol)。再繼續鼓泡10 min且隨後將棕色混濁混合物在氬氣氛圍下攪拌隔夜。將混合物傾倒至300 mL水中，隨後用200 mL EtOAc萃取兩次。使有機相經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。將粗物質藉由層析法(SNAP 340 g)用己烷\EtOAc混合物溶離來純化，得到呈膠黏固體狀之3-(3-(1-羥乙基)-1-側氧基-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-4-基)苯甲醛(0.110 g，0.374 mmol，產率6%)。
UPLC-MS：1.45 min，295.1.06 [M+H]+，方法4。 中間物A2：4-[4-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧戊環-2-基)苯基]-3-(1-羥乙基)-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮
Figure 02_image042
步驟1. 2-氯-5-(四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)苯甲醛(中間物A2.1)
Figure 02_image044
將5-溴-2-氯苯甲醛(1.50 g，6.83 mmol)、雙(頻哪醇根基)二硼(2.08 g，8.20 mmol)、乙酸鉀(1.34 g，13.66 mmol)及Pd(dppf)Cl2 (0.150 g，0.205 mmol)於無水1,4-二㗁烷(22.5 mL)中之混合物在100℃下在N2 下加熱隔夜。在冷卻至r.t.之後，將反應混合物用AcOEt稀釋，經由矽藻土墊過濾，且在真空下移除溶劑。殘餘物2-氯-5-(四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)苯甲醛(6.83 mmol理論值)不經進一步純化，但按原樣用於後續步驟中。
UPLC-MS：0.86 min，267.06 [M+H]+，方法2。 步驟2. 2-[4-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧戊環-2-基)苯基]-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
Figure 109110464-A0101-12-0054-2
(中間物A2.2)
Figure 02_image046
將2-氯-5-(四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)苯甲醛(中間物A2.1) (粗物質，6.83 mmol理論值)及頻哪醇(3.23 g，27.32 mmol)之混合物溶解於25.0 mL甲苯中。隨後，添加對甲苯磺酸單水合物(0.065 g，0.342 mmol)且將混合物在90℃下加熱5 h。隨後，添加對甲苯磺酸單水合物(0.100 g，0.526 mmol)且將混合物在90℃下加熱隔夜。在真空中濃縮混合物，且將殘餘物溶解於20 mL異丙醇中。隨後，緩慢地添加30 mL水。在添加之後，使固體沉澱且藉由過濾將其收集，得到呈棕色固體殘餘物狀之2-[4-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧戊環-2-基)苯基]-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
Figure 109110464-A0101-12-0054-2
(2.24 g，6.11 mmol，89%)。
UPLC-MS：1.53 min，367.11 [M+H]+，方法2。 步驟3. 4-[4-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧戊環-2-基)苯基]-3-(1-羥乙基)-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮
標題化合物係以與中間物A1類似之方式使用4-溴-3-(1-羥乙基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮(WO 2015091685中之中間物A2) (1 g，3.72 mmol)、2-[4-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧戊環-2-基)苯基]-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
Figure 109110464-A0101-12-0054-2
(中間物A2.2) (1.24 g，3.38 mmol)、K3 PO4 (2.153 g，10.14 mmol)及XPhos-Pd-G2 (0.133 g，0.169 mmol)來製造。在處理之後，藉由急驟層析法在100 g矽膠Biotage SNAP管柱(溶離劑：5%至50%含AcOEt之環己烷之梯度)上純化殘餘物。蒸發適當溶離份，得到呈灰白色固體狀之4-[4-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧戊環-2-基)苯基]-3-(1-羥乙基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮(0.458 g，1.067 mmol，產率32%)。
UPLC-MS：1.19 min，429.3 [M+H]+，方法3。 中間物A3：(2R)-2-{3-[3-(1-羥乙基)-1-側氧基-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-4-基]苯基}吡咯啶-1-甲酸酯
Figure 02_image048
步驟1. (2R)-2-(3-溴苯基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(中間物A3.1)
Figure 02_image050
在0℃下且在氮氣氛圍下向(2S)-2-(3-溴苯基)吡咯啶鹽酸鹽(1.00 g，3.81 mmoI)於DCM (12 mL)中之攪拌溶液中添加TEA (0.58 mL，4.19 mmol)，接著分批添加Boc2 O (1.08 g，4.95 mmol)於DCM (4 mL)中之溶液。隨後，移除冰浴且將所得反應混合物在r.t.下攪拌隔夜。將混合物用DCM稀釋，用飽和NaHCO3 水溶液洗滌，經Na2 SO4 乾燥且在減壓下濃縮。藉由FC在二氧化矽上(Snap 25，用100/0至90/10 Cy/EA溶離)純化粗材料，得到(2R)-2-(3-溴苯基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(1.15 g，3.53 mmol，92%)。
UPLC-MS：1.32 min，327.1 [M+H]+，方法3。 步驟2. (2R)-2-[3-(四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)苯基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(中間物A3.2)
Figure 02_image052
將(2R)-2-(3-溴苯基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(中間物A3.1) (1.15 g，3.53 mmol)、雙(頻哪醇根基)二硼(1.34 g，5.28 mmol)、乙酸鉀(0.70 g，7.10 mmol)及Pd(dppf)Cl2 (0.080 g，0.11 mmol)於無水1,4-二㗁烷(13 mL)中之混合物在加蓋小瓶中在100℃下搖晃6 h。添加另外的雙(頻哪醇根基)二硼(0.32 g，1.26 mmol)、AcOK (0.21 g，2.14 mmol)及Pd(dppf)Cl2 (0.024 g，0.033 mmol)，且將混合物在100℃下再搖晃5 h。將反應混合物用EtOAc稀釋，過濾且在減壓下移除溶劑。藉由FC在二氧化矽上(Snap 50，用100/0至90/10 Cy/EA溶離)純化粗材料，獲得呈發白蠟狀固體狀之(2R)-2-[3-(四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)苯基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(1.23 g，3.29 mmol，93%)。
UPLC-MS：1.41 min，374.3 [M+H]+，方法3。 步驟3. (2R)-2-{3-[3-(1-羥乙基)-1-側氧基-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-4-基]苯基}吡咯啶-1-甲酸4第三丁酯
標題化合物係以與中間物A1類似之方式使用4-溴-3-(1-羥乙基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮(WO 2015091685中之中間物A2) (1.33 g，4.94 mmol)、(2R)-2-[3-(四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)苯基]吡咯啶-1-甲酸酯(中間物A3.2) (1.23 g，3.29 mmol)、K3 PO4 (2.10 g，9.87 mmol)及X-Phos-Pd(巴豆基)Cl (0.11 g，0.16 mmol)來製造。在處理之後，藉由急驟層析法在55 g二氧化矽-NH Biotage SNAP管柱(溶離劑：0至35%含AcOEt之環己烷之梯度)上純化殘餘物。蒸發適當溶離份，得到呈深色油狀之(2R)-2-{3-[3-(1-羥乙基)-1-側氧基-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-4-基]苯基}吡咯啶-1-甲酸4第三丁酯(0.89 g，2.04 mmol，62%)。
UPLC-MS：1.19 min，436.3 [M+H]+，方法3。 中間物A4：4-[4-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧戊環-2-基)苯基]-3-(1-羥乙基)-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮
Figure 02_image054
步驟1. 2-[4-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧戊環-2-基)苯基]-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
Figure 109110464-A0101-12-0054-2
(中間物A4.1)
Figure 02_image056
將4-氟-3-甲醯基苯基硼酸(1.5 g，8.93 mmol)及頻哪醇(4.22 g，35.73 mmol)之混合物溶解於30 mL甲苯中。隨後，添加對甲苯磺酸單水合物(0.085 g，0.45 mmol)且將混合物在90℃下加熱4 h。使混合物冷卻至室溫。將所形成之固體過濾掉且在真空中濃縮母液，得到油性殘餘物，其在靜置後結晶。將此固體懸浮於30 mL i PrOH中且在70℃下加熱以幫助溶解。在冷卻之後，逐滴添加12 mL水，以使化合物結晶。在添加之後，在Buchner漏斗上過濾稠漿液。將餅用水洗滌且在減壓下乾燥。自母液中沉澱第二固體且藉由在Buchner漏斗上進行過濾將其回收，且用水洗滌餅。將兩種固體在減壓下乾燥在一起，得到呈灰白色固體狀之2-[4-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧戊環-2-基)苯基]-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
Figure 109110464-A0101-12-0054-2
(3.07 g，8.76 mmol，產率98%)。
UPLC-MS：1.44 min，351.2 [M+H]+，方法3。 步驟2. 4-[4-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧戊環-2-基)苯基]-3-(1-羥乙基)-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮
Figure 02_image058
標題化合物係以與中間物A1類似之方式使用4-溴-3-(1-羥乙基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮(WO 2015091685中之中間物A2) (2.83 g，10.51 mmol)、2-[4-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧戊環-2-基)苯基]-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
Figure 109110464-A0101-12-0054-2
(中間物A4.1) (3.07 g，8.76 mmol)、K3 PO4 (5.58 g，26.28 mmol)及XPhos-Pd-G2 (0.345 g，0.438 mmol)來製造。在處理之後，藉由急驟層析法在100 g矽膠Biotage SNAP管柱(溶離劑：0至35%含AcOEt之環己烷之梯度)上純化殘餘物。蒸發適當溶離份，得到呈淺黃色固體狀之4-[4-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧戊環-2-基)苯基]-3-(1-羥乙基)-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮(1.79 g，4.34 mmol，產率50%)。
UPLC-MS：1.23 min，413.2 [M+H]+，方法3。 中間物A5：4-(3-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧戊環-2-基)苯基)-3-(1-羥乙基)-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮
Figure 02_image060
步驟1. 2-[3-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧戊環-2-基)苯基]-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
Figure 109110464-A0101-12-0054-2
(中間物A5.1)
Figure 02_image062
將3-氟-5-甲醯基苯基硼酸(1 g，5.95 mmol)及頻哪醇76-09-5 (2.8 g，23.8 mmol)之混合物溶解於甲苯(20 mL)中。隨後，添加對甲苯磺酸單水合物(0.057 g，0.3 mmol)且將混合物在90℃下加熱4 h。使混合物冷卻至室溫。在真空下將其濃縮，得到呈淺黃色油狀之2-[3-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧戊環-2-基)苯基]-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
Figure 109110464-A0101-12-0054-2
(粗材料)。按原樣用於下一步中。
UPLC-MS：1.48 min，351.3 [M+H]+，方法3。 步驟2. 4-(3-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧戊環-2-基)苯基)-3-(1-羥乙基)-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮
標題化合物係以與中間物A1類似之方式使用4-溴-3-(1-羥乙基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮(WO 2015091685中之中間物A2) (1.9 g，7.14 mmol)、2-[3-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧戊環-2-基)苯基]-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
Figure 109110464-A0101-12-0054-2
(中間物A5.1) (5.95 mmol理論值)、K3 PO4 (3.8 g，17.85 mmol)及XPhos-Pd-G2 (0.236 g，0.3 mmol)來製造。在處理之後，藉由急驟層析法在110 g二氧化矽-NH SNAP料筒(Cy至EtOAc 30%溶離劑)上純化殘餘物。藉由25 g矽膠SNAP料筒(Cy至EtOAc 30%溶離劑)將其再次純化，獲得呈白色發泡體狀之4-(3-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧戊環-2-基)苯基)-3-(1-羥乙基)-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮(0.250 g，0.61 mmol，9%)。
UPLC-MS：1.22 min，413.3 [M+H]+，方法3。 中間物A6：4-(3-(1-(二甲胺基)乙基)苯基)-3-(1-羥乙基)-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮
Figure 02_image064
標題化合物係以與中間物A1類似之方式使用4-溴-3-(1-羥乙基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮(WO 2015091685中之中間物A2) (1.62 g，6.03 mmol)、(3-(1-(二甲胺基)乙基)苯基)硼酸(970 mg，5.02 mmol)、K3 PO4 (3.47 g，15.1 mmol)及XPhos-Pd-G2 (0.277 g，0.35 mmol)來製造。在處理之後，藉由層析法用H2 O\MeCN\HCOOH 95:5:0.1%及MeCN\H2 O\HCOOH 95:5:0.1%純化殘餘物，獲得4-(3-(1-(二甲胺基)乙基)苯基)-3-(1-羥乙基)-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮(0.356 g，粗材料)。
UPLC-MS：0.45 min，338.2 [M+H]+，方法1。 中間物B1：3-(1-羥乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮
Figure 02_image066
在250 mL圓底燒瓶中將3-(3-(1-羥乙基)-1-側氧基-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-4-基)苯甲醛(中間物A1) (0.500 g，1.699 mmol)溶解於DCM (20 mL)中，添加1-甲基哌𠯤(0.582 mL，5.10 mmol)，接著添加乙酸(0.292 mL，5.10 mmol)。隨後，分批添加三乙醯氧基氫硼化鈉(1.800 g，8.49 mmol)。將混合物傾倒至DCM及飽和NaHCO3 水溶液之混合物(100 mL/100 mL)中且觀測起泡。在真空中濃縮有機相且藉由RP層析法(Biotage Isolera，60 g C18料筒，於10 CV中之0至50%含B之A之梯度溶離；A：95:5水/乙腈+ 0.1% HCOOH，B：5:95水/乙腈+ 0.1% HCOOH；流量30 ml/min)純化所得粗材料，得到3-(1-羥乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮(0.482 g，1.274 mmol，產率75%)。
UPLC-MS：0.73 min，379.1 [M+H]+，方法1。
下表中所見之中間物B2可以下文所報導之合適試劑為起始物遵循與化合物B1類似之程序來製備。
中間物及名稱 分子結構 試劑 UPLC-MS或者1 H-NMR
中間物B2 4-(3-((二甲胺基)甲基)苯基)-3-(1-羥乙基)-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮
Figure 02_image068
 A1及二甲胺 Rt=0.87min，324.0 [M+H]+，方法4。
中間物C1：3-(1-溴乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮
Figure 02_image070
將3-(1-羥乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮(中間物B1) (0.482 g，1.274 mmol)溶解於無水DCM (20 mL)中，隨後緩慢地添加含1M三溴膦之DCM (2.55 mL，2.55 mmol)。在r.t.下攪拌混合物。藉由添加60 mL飽和NaHCO3 水溶液將反應物淬滅(析氣)且用60 mL DCM萃取，在真空中濃縮有機相，得到呈紅色油狀之3-(1-溴乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮(粗材料)。
UPLC-MS：1.07 min，441.0 [M]+及442.9 [M+2]+，方法4。
下表中所見之中間物C2-C7可以下文所報導之合適中間物(Int.)為起始物遵循與化合物C1類似之程序來製備。
中間物及名稱 分子結構 Int. UPLC-MS或者1 H-NMR
中間物C2 3-(1-溴乙基)-4-(3-((二甲胺基)甲基)苯基)-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮
Figure 02_image072
 B2 粗材料 Rt= 1.27min， 385.9 [M]+及 387.9 [M+2]+，方法4
中間物C3 3-(1-溴乙基)-4-[4-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧戊環-2-基)苯基]-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮
Figure 02_image074
 A2 Rt=1.43 min，493.2 [M+H]+，方法3
中間物C4 (2R)-2-{3-[3-(1-溴乙基)-1-側氧基-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-4-基]苯基}吡咯啶-1-甲酸第三丁酯
Figure 02_image076
 A3 Rt=1.46 min，499.2 [M+H]+，方法3
中間物C5 3-(1-溴乙基)-4-[4-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧戊環-2-基)苯基]-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮
Figure 02_image078
 A4 Rt=1.44 min，476.0 [M+H]+，方法3
中間物C6 3-(1-溴乙基)-4-(3-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧戊環-2-基)苯基)-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮
Figure 02_image080
 A5 Rt=1.48 min，476.2 [M+H]+，方法3
中間物C7 3-(1-溴乙基)-4-(3-(1-(二甲胺基)乙基)苯基)-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮
Figure 02_image082
 A6 粗材料 Rt=0.62 min， 400.0 [M]+及 402.0 [M+2]+，方法1
中間物D1：3-(1-(4-胺基-3-(5-甲氧基吡啶-3-基)-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮
Figure 02_image084
在250 mL圓底燒瓶中將3-(5-甲氧基吡啶-3-基)-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-4-胺(0.463 g，1.912 mmol)及碳酸鉀(0.528 g，3.82 mmol)懸浮於無水DMF (15 mL)中，且將混合物在60℃下加熱15 min，之後添加溶解於5 mL無水DMF中之3-(1-溴乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮(中間物C1)。兩小時之後，添加0.200 g 3-(5-甲氧基吡啶-3-基)-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-4-胺及額外量之K2 CO3 ，且繼續在40℃下加熱3 h。將反應物用飽和NaHCO3 水溶液淬滅且用40 mL DCM萃取，隨後濃縮，得到棕色油，藉由RP層析法(Biotage Isolera，60 g C18料筒，於10 CV中之0至50%含B之A之梯度溶離；A：95:5水/乙腈+ 0.1% HCOOH，B：5:95水/乙腈+ 0.1% HCOOH)將其純化，得到呈黃色油狀之3-(1-(4-胺基-3-(5-甲氧基吡啶-3-基)-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮(0.342 g，0.567 mmol，產率45%)。
UPLC-MS：0.60 min，603.2 [M+H]+，方法1。
下表中所見之中間物D2可以下文所報導之合適中間物(Int.)為起始物遵循與化合物D1類似之程序來製備。
中間物及名稱 分子結構 Int. UPLC-MS或者1 H-NMR
中間物D2 3-(1-(4-胺基-3-(5-甲氧基吡啶-3-基)-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((二甲胺基)甲基)苯基)-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮
Figure 02_image086
 C2 Rt=0.89min，548.0[M+H]+，方法4。
中間物E1a：3-(1-{4-胺基-3-碘基-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基}乙基)-4-[4-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧戊環-2-基)苯基]-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮
Figure 02_image088
使3-碘基-1H -吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(0.311 g，1.19 mmol)及K2 CO3 (0.47 g，3.4 mmol)懸浮於DMF (10 mL)中，且將混合物在60℃下攪拌30 min。隨後，緩慢地添加溶解於DMF (5 mL)中之3-(1-溴乙基)-4-[4-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧戊環-2-基)苯基]-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮(中間物C3) (0.557 g，1.13 mmol)，且將混合物維持在60℃下達90 min。使反應物冷卻至r.t.且隨後添加AcOEt及水。分離各相且用EtOAc萃取水層。將合併有機層用水洗滌，經無水Na2SO4乾燥且在減壓下移除溶劑。藉由急驟層析法在100 g Biotage SNAP KP-Sil料筒上，用50%至100%含AcOEt之環己烷之梯度溶離來純化殘餘物，得到標題化合物3-(1-{4-胺基-3-碘基-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基}乙基)-4-[4-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧戊環-2-基)苯基]-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮(0.379 g，0.564 mmol，產率50%)。
UPLC-MS：1.3 min，671.2 [M+H]+，方法3。
下表中所見之中間物E2a-E5a可以下文所報導之合適中間物(Int.)為起始物遵循與化合物E1a類似之程序來製備。
中間物及名稱 分子結構 Int. UPLC-MS或者1 H-NMR
中間物E2a (2R)-2-{3-[3-(1-{4-胺基-3-碘基-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基}乙基)-1-側氧基-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-4-基]苯基}吡咯啶-1-甲酸第三丁酯
Figure 02_image090
 C4 Rt=1.26min ，679.38 [M+H]+，方法3。
中間物E3a 3-(1-{4-胺基-3-碘基-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基}乙基)-4-[4-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧戊環-2-基)苯基]-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮
Figure 02_image092
 C5 Rt=1.23min ，656.2 [M+H]+，方法3。
中間物E4a 3-(1-(4-胺基-3-碘基-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧戊環-2-基)苯基)-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮
Figure 02_image094
 C6 Rt=1.26min， 656.3[M+H]+，方法3。
中間物E5a 3-(1-(4-胺基-3-碘基-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-(1-(二甲胺基)乙基)苯基)-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮
Figure 02_image096
 C7 Rt= 0.57 min，581.0 [M+H]+， 方法1。
中間物E1b：5-[3-(1-{4-胺基-3-碘基-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基}乙基)-1-側氧基-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-4-基]-2-氯苯甲醛
Figure 02_image098
將3-(1-{4-胺基-3-碘基-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基}乙基)-4-[4-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧戊環-2-基)苯基]-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮(0.379 g，0.565 mmol)溶解於CH3 CN (5 mL)中，且隨後添加1N HCl 水性 (5 mL)。將所得懸浮液在室溫下攪拌隔夜。藉由在Buchner漏斗上進行過濾來回收含固體之懸浮液。用二乙醚洗滌所得餅數次直至pH結果為中性為止，且將其在高真空下乾燥。獲得呈白色固體狀之化合物5-[3-(1-{4-胺基-3-碘基-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基}乙基)-1-側氧基-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-4-基]-2-氯苯甲醛(0.32 g，0.56 mmol，產率99%)且不經進一步純化即用於下一步中。
UPLC-MS：1.06 min， 572.1 [M+H]+，方法3。
下表中所見之中間物E3b-E4b可以下文所報導之合適中間物(Int.)為起始物遵循與化合物E1b類似之程序來製備。
中間物及名稱 分子結構 Int. UPLC-MS 或者1 H-NMR
中間物E3b 5-[3-(1-{4-胺基-3-碘基-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基}乙基)-1-側氧基-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-4-基]-2-氟苯甲醛
Figure 02_image100
 E3a Rt=0.98 min， 556.08 [M+H]+ ， 方法3
中間物E4b 3-(3-(1-(4-胺基-3-碘基-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基)乙基)-1-側氧基-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-4-基)-5-氟苯甲醛
Figure 02_image102
 E4a Rt=1.01min，556.2[M+H]+，方法3
中間物E1c：3-(1-{4-胺基-3-碘基-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基}乙基)-4-{4-氯-3-[(二甲胺基)甲基]苯基}-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮
Figure 02_image104
向5-[3-(1-{4-胺基-3-碘基-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基}乙基)-1-側氧基-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-4-基]-2-氯苯甲醛(中間物F1) (0.150 g，0.26 mmol)於DCM/二㗁烷/CH3 CN (10 mL/2 mL/2 mL)中之攪拌懸浮液中添加含2M二甲胺之THF (0.212 mL，0.39 mmol)。將此懸浮液在室溫下攪拌30 min。隨後，添加Na(OAc)3 BH (0.110 g，0.52 mmol)且將混合物在r.t.下攪拌隔夜。添加額外之1.5 eq含2M 二甲胺之THF (0.212 mL，0.39 mmol)，接著添加2 eq. Na(OAc)3 BH (0.110 g，0.52 mmol)。使混合物在r.t.下反應2 h。用飽和NaHCO3 水溶液淬滅混合物，將產物用DCM萃取(3×)且用水洗滌(1×)。使合併有機層通過相分離器且在真空下移除溶劑。藉由管柱層析法在25 g Biotage矽膠管柱上使用0至10%含MeOH之DCM之梯度作為溶離劑來純化殘餘物。獲得呈白色固體狀之所需化合物3-(1-{4-胺基-3-碘基-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基}乙基)-4-{4-氯-3-[(二甲胺基)甲基]苯基}-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮(0.105.2 g，0.175 mmol，產率67%)。
UPLC-MS：0.48-0.53  min，568.3 [M+H]+，方法3。
下表中所見之中間物E3c-E4c可以下文所報導之合適試劑為起始物遵循與化合物E1c類似之程序來製備。
中間物及名稱 分子結構 試劑 UPLC-MS或者1 H-NMR
中間物E3c 3-(1-{4-胺基-3-碘基-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基}乙基)-4-{4-氟-3-[(4-甲基哌𠯤-1-基)甲基]苯基}-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮
Figure 02_image106
 E3b及1- 甲基哌𠯤 Rt= 0.64-0.66  min，640.1 [M+H]+，方法3
中間物E4c 3-(1-(4-胺基-3-碘基-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-氟-5-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮
Figure 02_image108
 E4b及1-甲基哌𠯤 Rt= 0.65-0.66  min，640.2 [M+H]+，方法3
中間物E7：3-(1-{4-胺基-3-碘基-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基}乙基)-4-{3-[(2R)-吡咯啶-2-基]苯基}-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮鹽酸鹽
Figure 02_image110
將(2R)-2-{3-[3-(1-{4-胺基-3-碘基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基}乙基)-1-側氧基-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-4-基]苯基}吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(中間物E2a) (0.224 g，0.330 mmol)溶解於含1.25M HCl之MeOH (5mL)中，且將混合物在38℃下搖晃4 h。在減壓下移除溶劑，得到呈白色固體狀之3-(1-{4-胺基-3-碘基-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基}乙基)-4-{3-[(2R)-吡咯啶-2-基]苯基}-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮鹽酸鹽(0.212 g，粗物質)。材料不經進一步純化即用於下一步中。
UPLC-MS：1.03  min，579.2 [M+H]+，方法5。 中間物E8：3-(1-{4-胺基-3-碘基-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基}乙基)-4-{3-[(2R)-1-甲基吡咯啶-2-基]苯基}-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮
Figure 02_image112
向3-(1-{4-胺基-3-碘基-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基}乙基)-4-{3-[(2R)-吡咯啶-2-基]苯基}-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮鹽酸鹽(中間物E6) (0.212 g，粗物質)於DCM (4 mL)中之攪拌懸浮液中添加37% Wt.甲醛水溶液(61 µL，0.825 mmol)，接著添加DIPEA (63 µL，0.363 mmol)及乙酸(1滴)。將混合物在室溫下攪拌30分鐘。隨後，添加Na(OAc)3 BH (0.084 g，0.396 mmol)且將混合物在r.t.下攪拌隔夜。將混合物用飽和NaHCO3 水溶液淬滅且用DCM萃取。使有機相過濾通過疏水性相分離器且在減壓下移除溶劑。藉由急驟層析法(Biotage SP1，25 g KP-Sil-管柱，作為溶離劑之100:0至90:10 DCM/MeOH)純化粗物質。蒸發適當溶離份，得到呈灰白色固體狀之3-(1-{4-胺基-3-碘基-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基}乙基)-4-{3-[(2R)-1-甲基吡咯啶-2-基]苯基}-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮(0.142 g，0.24 mmol，產率73%)。
UPLC-MS：1.16 min，593.3 [M+H]+，方法5。 化合物製備 比較例1：3-(1-(4-胺基-3-(3-氟-5-羥基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮，第二溶離對映異構體。
Figure 02_image114
將外消旋物3-(1-(4-胺基-3-(3-氟-5-羥基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮(WO 2015091685中之實施例142) (0.110 g，0.16 mmol)溶解於MeOH/DCM 1/1 (10 mL)中且經受藉由手性製備型層析法進行之手性離析。條件：管柱：Chiralpak IC (25 × 2.0 cm)，5 µm；移動相：正己烷/(乙醇/二氯甲烷9/1 + 0.1%異丙胺) 82/18% v/v；流動速率18 mL/min；DAD偵測：220 nm；迴路：500 µl；注射：6.5 mg/次注射。將含有第二經溶離對映異構體之溶離份蒸發至乾燥，獲得標題3-(1-(4-胺基-3-(3-氟-5-羥基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮(0.031 g，0.056 mmol)。
手性HPLC (方法A1)。
Rt 13.8 min (第二溶離對映異構體)，e.e.＞99%。
UPLC-MS：0.63-0.66 min，606.4 [M+H]+，方法3。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.15-10.24 (m, 1H), 8.19-8.28 (m, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.73-7.80 (m, 1H), 7.58-7.67 (m, 1H), 7.25-7.50 (m, 3H), 6.85-7.00 (m, 3H), 6.78-6.84 (m, 1H), 6.63-6.70 (m, 1H), 5.66-5.81 (m, 1H), 3.23-3.60 (m, 2H), 1.99-2.48 (m, 11H), 1.74-1.89 (m, 3H)。
第一溶離對映異構體之分析資料
手性HPLC (方法A1)。
Rt 12.0 min (第一經溶離對映異構體)，e.e.＞ 99%。
純對映異構體之UPLC及1 H NMR分析在所有態樣中可重疊。 實施例1：3-{1-[4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-4-{3-[(4-甲基哌𠯤-1-基)甲基]苯基}-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮鹽酸鹽
Figure 02_image116
在配備有磁性攪拌器之500 mL圓底燒瓶中將3-(1-(4-胺基-3-(5-甲氧基吡啶-3-基)-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮(中間物D1) (0.342 g，0.567 mmol)懸浮於DCM (10 mL)中，隨後添加含1M BBr3 之DCM (5 mL，5.00 mmol)。將混合物攪拌24 h，隨後添加MeOH (20 mL)及少量2M HCl。隨後，將溶液在真空下濃縮且藉由RP層析法(Biotage Isolera，60 g C18料筒，於10 CV中之0至50%含B之A之梯度溶離；A：95:5水/乙腈+ 0.1% HCOOH，B：5:95水/乙腈+ 0.1% HCOOH，流量20 ml/min)純化，得到所需產物3-{1-[4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基]乙基}-4-{3-[(4-甲基哌𠯤-1-基)甲基]苯基}-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮鹽酸鹽(0.093 g，0.149 mmol，產率26%)。
UPLC-MS：0.52 min，589.0 [M+H]+，方法1。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.39 (br. s., 1H), 9.87-10.49 (m, 1H), 8.05-8.32 (m, 5H), 7.72-7.81 (m, 1H), 7.59-7.67 (m, 1H), 6.67-7.53 (m, 8H), 5.66-5.84 (m, 1H), 3.34-3.63 (m, 2H), 2.24-2.92 (s, 11H), 1.75-1.92 (m, 3H)。 實施例3：3-{1-[4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基]乙基}-4-{4-氯-3-[(二甲胺基)甲基]苯基}-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮
Figure 02_image118
將3-(1-{4-胺基-3-碘基-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基}乙基)-4-{4-氯-3-[(二甲胺基)甲基]苯基}-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮(中間物E1c) (0.105 g，0.175 mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧雜硼雜環戊-2-基)吡啶-3-醇(0.077 g，0.35 mmol)及K3 PO4 (0.113 g，0.53 mmol)於3:1 THF/水(體積：8 mL)中之混合物藉由N2 鼓泡5 min來去氧化，隨後添加SPhos-Pd-G2 (0.025 g，0.035 mmol)且將混合物在85℃下加熱3 h。使混合物冷卻至室溫且分配於水與DCM之間。用DCM萃取水相(3×)，將合併有機層用水洗滌(1×)，通過相分離器且在減壓下移除溶劑。藉由急驟層析法在11g Biotage二氧化矽-NH管柱上使用0至25%含MeOH之DCM之梯度作為溶離劑來純化所獲得之粗物質。獲得呈微黃色固體狀之所需產物3-{1-[4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基]乙基}-4-{4-氯-3-[(二甲胺基)甲基]苯基}-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮(0.068 g，0.12 mmol，產率68%)。
UPLC-MS：0.61 min，601.2 [M+H]+，方法3。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ ppm 8.18-8.25 (m, 3H), 8.05-8.10 (m, 1H), 7.73-7.79 (m, 1H), 7.58-7.66 (m, 1H), 7.30-7.58 (m, 3H), 6.85-7.03 (m, 2H), 5.71-5.79 (m, 1H), 3.13-3.22 (m, 2H), 2.01-2.25 (m, 6H), 1.80-1.87 (m, 3H)。
下表中所見之實施例2可以下文所報導之合適中間物(Int.)為起始物遵循與化合物1類似之程序來製備。下表中所見之實施例4-7可以下文所報導之合適中間物(Int.)為起始物遵循與化合物3類似之程序來製備。
實施例 名稱 分子結構 Int. UPLC-MS或者1 H-NMR
2 3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((二甲胺基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮鹽酸鹽
Figure 02_image120
 D2 Rt= 0.75 min，534.0 [M+H]+，方法4。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.14 (br. s, 1H), 10.18 (br. s., 1H), 8.05-8.31 (m, 4H), 7.73-7.81 (m, 1H), 7.59-7.67 (m, 1H), 7.45-7.57 (m, 1H), 7.28-7.42 (m, 3H), 6.84-7.02 (m, 2H), 5.63-5.86 (m, 1H), 3.36-3.71 (m, 2H), 2.04-2.40 (m, 6H), 1.77-1.87 (m, 3H)。
4 3-{1-[4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基]乙基}-4-{3-[(2R)-1-甲基吡咯啶-2-基]苯基}-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮
Figure 02_image019
 E7 Rt= 0.69 min，560.4 [M+H]+，方法51 H NMR (400 MHz, MeOD) δ ppm 8.31-8.38 (m, 1H), 8.24-8.29 (m, 1H), 8.17-8.23 (m, 1H), 8.04-8.14 (m, 1H), 7.67-7.76 (m, 1H), 7.58-7.66 (m, 1H), 7.18-7.56 (m, 4H), 6.74-7.08 (m, 2H), 5.86-6.04 (m, 1H), 2.82-3.32 (m, 2H), 1.56-2.48 (m, 11H)。
5 3-{1-[4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基]乙基}-4-{4-氟-3-[(4-甲基哌𠯤-1-基)甲基]苯基}-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮
Figure 02_image013
 E3c Rt=：0.61-0.63 min，607.1 [M+H]+，方法51 H NMR (400 MHz, DMSO) δ ppm 10.34 (br. s., 1H), 8.23 (s, 3H), 8.09 (s, 1H), 7.73-7.80 (m, 1H), 7.59-7.67 (m, 1H), 7.11-7.42 (m, 3H), 6.97-7.06 (m, 1H), 6.86-6.93 (m, 1H), 5.70-5.80 (m, 1H), 3.22-3.59 (m, 2H), 1.96-2.47 (m, 11H), 1.78-1.88 (m, 3H)。
6 3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-氟-5-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮
Figure 02_image015
 E4c Rt=：0.52-0.59 min，607.3 [M+H]+，方法31 H NMR (400 MHz, DMSO) δ ppm 10.22 (br. s., 1H), 8.17-8.28 (m, 3H), 8.04-8.11 (m, 1H), 7.72-7.82 (m, 1H), 7.58-7.68 (m, 1H), 7.31-7.39 (m, 1H), 7.06-7.20 (m, 2H), 6.88-6.93 (m, 1H), 6.64-6.75 (m, 1H), 5.74-5.86 (m, 1H), 3.31 (s, 2H), 2.01-2.47 (m, 11H), 1.76-1.88 (m, 3H)。
7 3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-(1-(二甲胺基)乙基)苯基)-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮
Figure 02_image025
 E5c Rt= 0.50 min，548.1 [M+H]+，方法1。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ ppm 10.16 (br. s., 1H), 8.18-8.33 (m, 3H), 8.03-8.16 (m, 2H), 7.74-7.82 (m, 1H), 7.58-7.67 (m, 1H), 7.27-7.54 (m, 4H), 6.85-7.09 (m, 3H), 5.66-5.82 (m, 1H), 3.11-3.27 (m, 1H), 1.93-2.21 (m, 6H), 1.77-1.88 (m, 3H), 1.08-1.20 (m, 3H)。
實施例1a：3-{1-[4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基]乙基}-4-{3-[(4-甲基哌𠯤-1-基)甲基]苯基}-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮，第一經溶離對映異構體。
Figure 02_image126
將外消旋物3-{1-[4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基]乙基}-4-{3-[(4-甲基哌𠯤-1-基)甲基]苯基}-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮鹽酸鹽(實施例1) (0.122 g，0.195 mmol)用MeOH稀釋且通過PL-HCO3 MP樹脂料筒(5 g)，獲得自由鹼(0.080 g)，將其溶解於MeOH (5 mL)中且經受藉由手性製備型層析法進行之手性離析。條件：管柱：Whelk 01 (R,R) (25 × 2.1 cm)，10 µm；移動相：正己烷/(2-丙醇/甲醇1/1 + 0.1%異丙胺) 30/70% v/v；流動速率17 mL/min；DAD偵測：220 nm；迴路：300 µl；注射：4.8 mg/次注射。將含有第一經溶離對映異構體之溶離份蒸發至乾燥，獲得標題化合物3-{1-[4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基]乙基}-4-{3-[(4-甲基哌𠯤-1-基)甲基]苯基}-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮(0.021 g，0.036 mmol)。
手性HPLC (方法A2)。
Rt 8.7 min (第一經溶離對映異構體)，e.e.＞99%。
UPLC-MS: 0.48-0.54 min，589.4 [M+H]+，方法3。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.84-10.55 (m, 1H), 8.02-8.36 (m, 4H), 7.72-7.81 (m, 1H), 7.57-7.67 (m, 1H), 7.25-7.52 (m, 4H), 6.87-7.01 (m, 2H), 6.53-7.88 (m, 2H), 5.64-5.83 (m, 1H), 3.13-3.62 (m, 2H), 2.00-2.47 (m, 11H), 1.76-1.88 (m, 3H)。
第二溶離對映異構體之分析資料
手性HPLC (方法A2)。
Rt 10.0 min (第二經溶離對映異構體)，e.e.=97.4%。
純對映異構體之UPLC及1 H NMR分析在所有態樣中可重疊。
單晶X射線繞射分析(D. de Sanctis, A. Beteva, H. Caserotto, F. Dobias, J. Gabadinho, T. Giraud, A. Gobbo, M. Guijarro, M. Lentini, B. Lavault,; T. Mairs, S. McSweeney, S. Petitdemange, V. Rey-Bakaikoa, J. Surr, P. Theveneau, G.A. Leonard, C. Mueller-Dieckmann,J. Sync. Rad. 2012 ,19 , 455-461)係在歐洲同步加速器輻射設施(ESRF)之結晶學射束線ID29上遵循此處指定之方法及條件來執行：在於EtOH/H2 O 6% (內部溶劑)及EtOAc (外部溶劑)中進行蒸汽擴散實驗之情況下獲得單晶。繞射資料係用快速讀數Pilatus 6M-F像素偵測器(Dectris LTD)記錄。使用應用旋轉晶體方法之Oxford低溫系統及在1.000 Å波長下之單色輻射在100 K下執行資料收集。結構係藉由實施於程式ShelxT中之雙重空間演算法來解析，且用程式SHELXL-2016/6來精確化。Flack參數(S. Parsons, H.D. Flack, T. Wagner, Acta Cryst. 2013,  B69, 249-259)係自在1 Å下以Flack x = 0.07(18)形式收集之資料獲得；且絕對組構被指派為實施例1a之第一經溶離對映異構體之S。測定係用於確認如此處所報導之結構之絕對組構： (S)-3-{1-[4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基]乙基}-4-{3-[(4-甲基哌𠯤-1-基)甲基]苯基}-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮，第一經溶離對映異構體(實施例1a之標題化合物)。 (R)-3-{1-[4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基]乙基}-4-{3-[(4-甲基哌𠯤-1-基)甲基]苯基}-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮，第二經溶離對映異構體。 實施例2a：3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((二甲胺基)甲基)苯基)-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮，第一經溶離對映異構體。
Figure 02_image128
將外消旋物3-{1-[4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-4-{3-[(二甲胺基)甲基]苯基}-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮鹽酸鹽(實施例2) (0.228 g，0.400 mmol)用MeOH稀釋且通過PL-HCO3 MP樹脂料筒(5g)，獲得自由鹼(0.110 g)，將其溶解於1/1/1乙醇/甲醇/正己烷(10 mL)中且經受藉由手性製備型層析法進行之手性離析。條件：管柱：Chiralpak AD-H (25 × 2.0 cm)，5 µm；移動相：正己烷/ (乙醇+ 0.1%異丙胺) 75/25 % v/v；流動速率20 mL/min；DAD偵測：220 nm；迴路：2500 µl；注射：27 mg/次注射。將含有第一經溶離對映異構體之溶離份蒸發至乾燥，獲得標題化合物3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((二甲胺基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮(0.040 g，0.075 mmol)。
手性HPLC (方法A3)。
Rt 6.4 min (第一經溶離對映異構體)，e.e.＞99%。
UPLC-MS: 0.46-0.50 min，534.3 [M+H]+，方法3。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.16 (bs, 1H), 8.18-8.30 (m, 3H), 8.04-8.12 (m, 1H), 7.72-7.81 (m, 1H), 7.57-7.68 (m, 1H), 7.43-7.53 (m, 1H), 7.25-7.40 (m, 4H), 6.82-7.04 (m, 3H), 5.67-5.83 (m, 1H), 3.16-3.49 (m, 2H), 1.97-2.25 (m, 6H), 1.78-1.87 (m, 3H)。
第二溶離對映異構體之分析資料
手性HPLC (方法A3)。
Rt 14.6 min (第二經溶離對映異構體)，e.e.＞99%。
純對映異構體之UPLC及1 H NMR分析在所有態樣中可重疊。 實施例4a：3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((R)-1-甲基吡咯啶-2-基)苯基)-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮，第一經溶離非對映異構體。
Figure 02_image130
將3-{1-[4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基]乙基}-4-{3-[(2R)-1-甲基吡咯啶-2-基]苯基}-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮(實施例4) (0.050 g，0.089 mmol)溶解於1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇(2.5 mL)中且經受藉由手性製備型層析法進行之手性離析。條件：管柱：Chiralpak AD-H (25 × 2.0 cm)，5 µm；移動相：(乙醇+ 0.1%異丙胺) 15%；流動速率46 mL/min；DAD偵測：220 nm；迴路：600 µl；注射：12 mg/次注射。將含有第一經溶離非對映異構體之溶離份蒸發至乾燥，獲得標題化合物3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((R)-1-甲基吡咯啶-2-基)苯基)-1H -異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮(0.017 g，0.03 mmol)。
手性HPLC (方法A4)。
Rt 3.3 min (第一經溶離非對映異構體)，d.e.= 98.5%。
UPLC-MS: 0.70 min，560.5 [M+H]+，方法5。
1 H NMR (400 MHz, MeOD) δ ppm 8.29-8.35 (m, 1H), 8.22-8.28 (m, 1H), 8.15-8.21 (m, 1H), 8.03-8.12 (m, 1H), 7.65-7.74 (m, 1H), 7.56-7.63 (m, 1H), 7.18-7.55 (m, 4H), 6.76-6.99 (m, 2H), 5.88-6.00 (m, 1H), 2.85-3.28 (m, 2H), 1.54-2.46 (m, 11H)。
第二溶離非對映異構體之分析資料
手性HPLC (方法A4)。
Rt 7.0 min (第二經溶離非對映異構體)，d.e.= 96.2%。
UPLC-MS: 0.70 min，560.5 [M+H]+，方法5。
1 H NMR (400 MHz, MeOD) δ ppm 8.30-8.35 (m, 1H), 8.24-8.29 (m, 1H), 8.17-8.21 (m, 1H), 8.04-8.13 (m, 1H), 7.66-7.75 (m, 1H), 7.56-7.64 (m, 1H), 7.17-7.55 (m, 4H), 6.74-7.06 (m, 2H), 5.83-6.03 (m, 1H), 2.94-3.29 (m, 2H), 1.70-2.45 (m, 11H)。 鹽篩選實施例
本發明之特別較佳鹽係遵循例如Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, 2011 (P. Heinrich Stahl, Camille G. Wermuth (編)中所描繪之已知鹽化方法來製備。
此處在下表中所報導之鹽係由實施例1a之(S)對映異構體化合物製備，且來自(R)對映異構體之鹽係同樣使用該等眾所周知之鹽化方法獲得。
舉例而言，順丁烯二酸鹽係將300 mg自由鹼溶解於丙酮(9 mL)中且在~20℃下攪拌~2小時且隨後在50℃下攪拌~30分鐘以得到完全自由鹼溶解來獲得。隨後，在20℃下添加順丁烯二酸(1.02 eq)。在650 rpm ~ 20℃ o/n下攪拌漿液。將樣品在針筒過濾器(孔隙度20 μL，PTFE玻璃料)上過濾，且在真空下在室溫下乾燥直至到達恆重(3小時)為止(產率= 86%)。
酸 名稱 酸當量 鹽名稱 來自實施例 1a 之 鹽
HBr 1 氫溴酸鹽 (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮氫溴酸鹽
HCl 1 鹽酸鹽 (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮鹽酸鹽
萘-1,5-二磺酸 0.5 半1,5-萘二磺酸鹽 (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮半1,5-萘二磺酸鹽
硫酸 0.5 半硫酸鹽 (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮半硫酸鹽
對甲苯磺酸 1 甲苯磺酸鹽 (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮甲苯磺酸鹽
甲磺酸 1 甲磺酸鹽 (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮甲磺酸鹽
萘-2-磺酸 1 2-萘磺酸鹽 (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮-2-萘磺酸鹽
羥乙磺酸 1 羥乙磺酸鹽 (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮羥乙磺酸鹽
順丁烯二酸 1 順丁烯二酸鹽 (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮順丁烯二酸鹽
乙磺酸 1 乙磺酸鹽 (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮乙磺酸鹽
雙羥萘酸 0.5 半雙羥萘酸鹽 (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮半雙羥萘酸鹽
1-羥萘-2-甲酸 1 羥萘甲酸鹽    (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮羥萘甲酸鹽
柳酸 1 柳酸鹽 (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮柳酸鹽
苯甲酸 1 苯甲酸鹽 (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮苯甲酸鹽
此處在下表中報導由實施例2a之(S)對映異構體化合物製備之一些進一步較佳之鹽，且來自(R)對映異構體之鹽係同樣使用該等眾所周知之鹽化方法獲得。
酸 名稱 酸當量 鹽名稱 來自實施例2a 之鹽
HBr 1 氫溴酸鹽 (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((二甲胺基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮氫溴酸鹽
HCl 1 鹽酸鹽 (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((二甲胺基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮鹽酸鹽
甲磺酸 1 甲磺酸鹽 (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((二甲胺基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮甲磺酸鹽
羥乙磺酸 1 羥乙磺酸鹽 (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((二甲胺基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮2-萘磺酸鹽
順丁烯二酸 1 順丁烯二酸鹽 (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((二甲胺基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮順丁烯二酸鹽
乙磺酸 1 乙磺酸鹽 (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((二甲胺基)甲基)苯基)-1H-異
Figure 109110464-A0304-12-0020-3
唏-1-酮乙磺酸鹽
上文所列舉之鹽係以固體形式獲得，其中大多數呈實質上非晶形固態；一些特別較佳之鹽展現結晶固態。 本發明化合物之藥理學活性 無細胞分析中之PI3K酶抑制活性之活體外測定
人類重組蛋白PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kγ及PI3Kδ係購自Millipore Ltd (Billerica, MA)。將化合物以0.5 mM溶解於DMSO中且在不同濃度下根據製造商說明書使用ADP-GloTM 激酶分析(Promega, Madison WI)測試其抗PI3K活性。
簡言之，在384孔白盤(Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen)中執行激酶反應。各孔裝載有0.1 µl測試化合物及2.5 µl 2×反應緩衝劑(40 mM Tris pH 7.5、0.5 mM EGTA、0.5 mM Na3 VO4 、5 mM β-甘油磷酸酯、0.1 mg/ml BSA、1 mM DTT)，含有50 µM PI及PS受質(L-α-磷脂醯肌醇鈉鹽及L-α-磷脂醯基-L-絲胺酸，Sigma-Aldrich，St. Louis MO)及PI3K重組蛋白(PI3Kγ 0.25 ng/μl、PI3Kδ 1 ng/μl、PI3Kα 0.125 ng/μl、PI3Kβ 1 ng/μl)。
反應係藉由將2.5 µl 2× ATP溶液添加至各孔(最終濃度：PI3Kγ ATP 30 μM；PI3Kδ ATP 80 μM；PI3Kα ATP 50 μM；PI3Kβ ATP 100 μM)中且在室溫下培育60 min來開始。隨後，將各激酶反應物與5 µl ADP-GloTM 試劑一起培育40 min，使未消耗之ATP耗乏。隨後，在各孔中添加激酶偵測試劑(10 µl)以將ADP轉化成ATP且允許使用螢光素酶/螢光素反應來量測新合成之ATP。在60 min培育之後，使用Wallac EnVision®多標記讀取器(PerkinElmer, Waltham MA)來量測發光信號。
曲線擬合及IC50計算係在用於Microsoft Excel (Microsoft, Redmont, WA)之XLfit (IDBS, Guilford, UK)中使用四參數邏輯模型來進行。
結果提供於下。
表1a：比較例之無細胞分析中之PI3K酶抑制活性之活體外測定結果；自WO2015091685複製。
實施例編號的化合物 PI3K α 抑制 PI3K β 抑制 PI3K δ 抑制 PI3K γ 抑制
142 比較例1 + + +++ +
168a 比較例2 ++ ++ +++ ++
67a 比較例3 ++ ++ +++ ++
其中化合物係根據隨附內容就關於其對PI3K-α、PI3K-β、PI3K-γ及PI3K-δ之抑制活性之效力而言進行分類： + + + ：＜ 10 Nm之IC50 + +    ：介於10-1000 nM範圍內之IC50 +       ：＞ 1000 nM之IC50
本發明化合物為如隨附表1b中所報導在酶分析中δ IC50 ＜ 2 nM之強效δ抑制劑。 THP-1分析中之PI3Kδ酶抑制活性之活體外測定
化合物對活細胞中之PI3酶之抑制活性係藉由評估內源性表現於THP-1細胞上之PI3Kδ-AKT路徑之抑制來測定。對T75燒瓶之THP-1細胞懸浮液(0.4-1.0 × 106 /毫升)進行離心，且使細胞集結粒以1.5 × 106 個細胞/毫升再懸浮於饑餓培養基中。細胞盤係藉由分配3 × 105 個細胞/孔且在分析之前在37℃下培育24小時來製備。將測試化合物在DMSO中連續1:3稀釋且隨後在化合物培養基中進一步1:100稀釋。將饑餓THP-1細胞與測試化合物溶液或媒劑一起在37℃下預培育60分鐘。隨後，使細胞經2.5 ng/mL巨噬細胞群落刺激因子(M-CSF)或刺激培養基(具有基礎pAKT含量之對照)刺激10分鐘。隨後，使細胞溶解，且藉由使用Cisbio p-Ser473 AKT HTRF分析套組來量測磷酸化AKT之量。藉由添加補充溶解緩衝液來結束刺激。將細胞盤在室溫下搖晃30分鐘以完成細胞溶解，接著添加HTRF結合物且在室溫下再培育4小時。結合物與pAKT反應，引起用Envision盤讀取器以HRTF讀取方案量測之HTRF信號增強。比率資料係使用邏輯四參數方程來擬合以測定IC50 。使用IPI-145化合物作為藥理學標準。
本發明化合物顯示如隨附表1b中所報導關於PI3K-δ次單元之低於4 nM之細胞IC50 (THP-1 IC50 nM)值。
註釋 δ Ki nM δ IC50 nM THP-1 IC50 nM δ 細胞下降 **
酶 細胞
比較例1    藉由與WO 2015/091685中之實施例142之化合物混合物之手性分離得到之第二溶離對映異構體   
Figure 02_image132
 1.1 2.2 1.8 1.6
比較例2    WO 2015/091685中之實施例168a
Figure 02_image134
 0.6 1.1 1.6 2.7
比較例3    WO 2015/091685中之實施例67a
Figure 02_image136
 0.3 0.7 1.5 5.0
實施例1a
Figure 02_image138
 0.9 1.7 2.8 3.1
實施例2a
Figure 02_image021
 0.5 1.0 0.6 1.2
**細胞/酶活性= THP-1 IC50 nM/ δ Ki nM
註釋 δ Ki nM δ IC50 nM THP-1 IC50 nM δ 細胞下降
酶 細胞
實施例3
Figure 02_image141
 0.4 0.7 3.9 9.7
實施例4a
Figure 02_image143
 0.1 0.3 1.0 10
實施例5
Figure 02_image145
 0.5 1.0 1.8 3.6
實施例6
Figure 02_image147
 0.4 0.8 3.0 7.5
實施例7
Figure 02_image149
 0.8 1.6 3.9 4.9
**細胞/酶活性= THP-1 IC50 nM/ δ Ki nM 大鼠中之卵白蛋白(OVA)誘發之肺嗜酸性球增多症之大鼠模型方案 (WET投與-鹽水溶液) 動物
雄性棕色挪威大鼠(到達時，6週齡)係購自Charles River Laboratories Italy (Calco, Lecco)。在使用之前，使動物適應本地飼養箱條件(室溫：20-24℃；相對濕度：40%-70%)至少5天，自由獲取標準大鼠食物及自來水。本文所描繪之所有動物方案均經機構內動物福利委員會(intramural animal-welfare committee)批准Chiesi Farmaceutici之動物實驗及健康部(Ministry of Health)批准且遵守歐洲指令(European Directive) 2010/63 UE及義大利(Italian) D Lgs 26/2014 (授權號198-PR)來進行。 敏化及過敏原暴露
藉由腹膜內注射於1 mL鹽水中之含有OVA (1 mg/隻大鼠)及Al(OH)3 (100 mg/隻大鼠)之懸浮液達3個連續日來使雄性棕色挪威大鼠敏化；兩週後，藉由噴霧劑投與過敏原來誘發氣管發炎。具體言之，使動物暴露於OVA溶液(於鹽水中1%)噴霧劑，誘發主要代表為嗜酸性球及嗜中性白血球之發炎細胞大量流入氣管中。簡言之，將大鼠約束於塑膠玻璃套管中，引入吸入腔室中且藉由僅鼻吸入30 min暴露於霧化溶液。將吸入腔室連接至Medel Pro霧化器，在腔室中生成流動速率為約3.3 l/min之霧化溶液。使對照動物暴露於霧化鹽水。 用測試化合物進行之治療
為進行消炎作用持續時間(DoA)評估，在OVA攻擊之前2小時或12小時氣管內(i.t.)投與介於0.03 µmol/kg - 1 µmol/kg範圍內之不同劑量之測試化合物。由上文劑量-反應研究測定各經測試化合物之ED80。ED80為實現80%抑制時之劑量。
為進行測試化合物或媒劑之氣管內投與，用異氟醚或七氟烷(於氧氣中4%)麻醉動物，且將喉鏡向前移動至口腔中以觀測氣管且引導PE100插管直接插入氣管中且位於分叉上方1-2 mm處。使化合物與0.2% Tween 80一起再懸浮於鹽水(蒸餾水+ 0.5% NaCl)中且以0.5 ml/kg之體積局部滴注至氣管中。 支氣管肺泡灌洗術及細胞計數
在暴露於OVA或鹽水噴霧劑之後24小時，如先前所描繪用異氟醚或七氟烷麻醉動物，且藉由腹主動脈放血來處死。藉由用3等分試樣之溶液A [漢克氏平衡鹽溶液(Hank's balanced salt solution，HBSS) ×10，100 ml；乙二胺四乙酸(EDTA) 100 mM，100 mL；4-(2-羥基-乙基)-1-哌𠯤乙磺酸(HEPES) 1 mM，10 mL；蒸餾水，790 mL] (每次4 ml)輕輕地洗滌肺臟來獲得支氣管肺泡灌洗液(BALF)。在回收有~80%滴注體積(9.5-10.5 mL)之動物之間，常規BALF回收並無顯著不同。
將所得BALF在4℃下以800 ×g 離心10 min。使集結粒再懸浮於1.5 mL體積中，且在2小時內使用自動化細胞計數器(Dasit, Sysmex)執行整體及分化細胞計數。由用於1 μl BALF之細胞數目乘以用於再懸浮細胞集結粒之體積來計算每隻動物之細胞計數。 資料分析
在OVA攻擊之前12小時以對應於ED80之0.1 µmol/kg之劑量投與之本發明化合物顯示優於45%之抑制BALF中嗜酸性球補充之持久功效。抑制百分比係使用下式計算： 抑制% = 100 × ((經化合物治療之受OVA攻擊之個別 值-經媒劑治療之受OVA攻擊之平均值)-(經媒劑治療之受OVA攻擊之平均值-經媒劑治療之受鹽水攻擊之平均值))/(經媒劑治療之受OVA攻擊之平均值-經媒劑治療之受鹽水攻擊之平均值)。
對於各治療組，自8-10隻大鼠計算平均值。
當與本發明化合物相比時，實際上發現WO2015091685中之對應化合物不持久或不太持久。
表1c：OVA測試結果。
註釋 OVA 攻擊 之前之投與 時間 抑制 %
比較例1    藉由WO 2015/091685中之實施例142之外消旋化合物之手性分離得到之第二經溶離對映異構體   
Figure 02_image132
 12 h 0% (不持久)
比較例2    單一對映異構體    WO 2015/091685中之實施例168a
Figure 02_image134
    化合物甚至未在OVA模型中測試不足肺臟滯留****   
比較例3    單一對映異構體    WO 2015/091685中之實施例67a
Figure 02_image136
 2 h 34% ns***
實施例1a
Figure 02_image138
 12 h 55%
實施例2a
Figure 02_image021
 12 h 57%
***ns = 不顯著 ****J Aerosol Med Pulm Drug Deliv. 2018年2月;31(1):61-70. doi: 10.1089/jamp.2017.1369. Epub 2017年8月2日。 大鼠中之卵白蛋白(OVA)誘發之肺嗜酸性球增多症之大鼠模型方案 (以乾燥散劑形式進行之投與) 材料及方法 動物
雄性棕色挪威大鼠(到達時，6週齡)係購自Charles River Laboratories Italy (Calco, Lecco)。在使用之前，使動物適應本地飼養箱條件(室溫：20-24℃；相對濕度：40%-70%)至少5天，自由獲取標準大鼠食物及自來水。本文所描繪之所有動物方案均經機構內動物福利委員會批准Chiesi Farmaceutici之動物實驗及健康部批准且遵守歐洲指令2010/63 UE及義大利D. Lgs 26/2014來進行。 敏化及過敏原暴露
藉由腹膜內注射於1 mL鹽水中之含有OVA (1 mg/隻大鼠)及Al(OH)3 (100 mg/隻大鼠)之懸浮液達3個連續日來使雄性棕色挪威大鼠敏化。兩週後，由經吸入之抗原誘發氣管發炎。使動物暴露於OVA溶液(於鹽水中1%)噴霧劑，誘發主要為嗜酸性球及嗜中性白血球之發炎細胞大量流入氣管中。簡言之，將大鼠約束於塑膠玻璃套管中且藉由僅鼻吸入30 min暴露於吸入腔室之內容物。將吸入腔室連接至Medel Pro霧化器，生成以約3.3 l/min之流動速率流通穿過腔室之霧化卵白蛋白。使經媒劑對照治療之動物暴露於霧化鹽水。 用測試化合物進行之治療
為進行抑制效力及作用持續時間(DoA)評估，在OVA攻擊之前12小時藉由氣管內途徑投與測試化合物。
為進行測試化合物或媒劑之氣管內投與，用七氟烷(於氧氣中4%)麻醉動物，且將喉鏡向前移動至口腔中以觀測氣管且引導乾燥散劑用PennCentury構件直接插入氣管中且位於分叉上方1-2 mm處。使以乾燥散劑形式投與之測試化合物微粉化且以0.233%、0.755%、7.75%強度(對應於0.03-0.1-1.0 μmol/kg之劑量)及10 mg/kg注射重量與0.2% w/w硬脂酸鎂/Respitose SV003共混。對照動物接受10 mg/kg媒劑共混物(0.2% w/w硬脂酸鎂/Respitose SV003)。由上文劑量-反應研究測定各經測試化合物之ED80。
在自發性相吸氣期間以4 mL空氣體積將化合物乾燥散劑吹送至氣管中。 支氣管肺泡灌洗術及細胞計數
在暴露於OVA或鹽水噴霧劑之後24小時，如先前所描繪用異氟醚或七氟烷麻醉動物，且藉由腹主動脈放血來處死。藉由用3等分試樣之溶液A [漢克氏平衡鹽溶液(HBSS) ×10，100 ml；乙二胺四乙酸(EDTA) 100 mM，100 mL；4-(2-羥基-乙基)-1-哌𠯤乙磺酸(HEPES) 1 mM，10 mL；蒸餾水，790 mL] (每次4 ml)輕輕地洗滌肺臟來獲得支氣管肺泡灌洗液(BALF)。在回收有~80%滴注體積(9.5-10.5 mL)之動物之間，常規BALF回收並無顯著不同。
將所得BALF在4℃下以800 ×g 離心10 min。將來源於相同動物之集結粒組合且再懸浮於1.5 mL體積中，且在2小時內使用自動化細胞計數器(Dasit, Sysmex)執行整體及分化細胞計數。由用於1 μl BALF之細胞數目乘以用於再懸浮細胞集結粒之體積來計算每隻動物之細胞計數。 資料分析
所有資料呈現為平均值±標準誤差平均值。在原始資料上使用單因子變異數分析(ANOVA)、接著為鄧尼特事後測試(Dunnett's post-hoc test)以與經OVA敏化、受OVA攻擊組進行比較來執行統計分析。藥物誘導之細胞補充抑制之個別 值係根據下式比較經藥物治療與經媒劑治療之受OVA攻擊之對照動物來計算： 抑制% = {100% × ((經化合物治療之受OVA攻擊之個別 值-經媒劑治療之受OVA攻擊之對照平均值) - (經媒劑治療之受OVA攻擊之對照平均值-經媒劑治療之受鹽水攻擊之對照平均值))/(經媒劑治療之受OVA攻擊之對照平均值-經媒劑治療之受鹽水攻擊之對照平均值)}]。
對於各治療組，自8-10隻大鼠計算平均值。
ED50 值及95%信賴界限係基於個別抑制資料藉由對數線性回歸分析來計算。使用7.0版本GraphPad軟體執行統計分析，p ＜ 0.05視為統計顯著性位準。 結果
測試在OVA攻擊之前2小時及12小時藉由PennCentury i.t.投與之實施例1a之化合物之順丁烯二酸鹽的消炎作用持續時間。1 μmol/kg劑量顯示相當大之抑制(整體細胞補充抑制%：84.1±5.5，p ＜0.01；嗜酸性球補充抑制%：79.3±8.4，p ＜0.01)。
總體而言，資料確認，呈能夠抑制發炎細胞肺部積聚且具有經延長之作用持續時間之消炎藥形式之本發明化合物為有效的。
在1 μmol/kg劑量下之本發明化合物當在OVA暴露之前12小時以DPI調配物形式投與(乾燥散劑方案)時，展現等於或超過50%、甚至較佳地等於或超過70%之抑制%，證實相當大且持久之抑制大鼠肺氣管中嗜酸性球補充之功效。
因此，本發明化合物為強效PI3K抑制劑，在酶活體外分析中在次奈莫耳範圍內具活性(δ Ki ＜ 1 nM)且亦在PI3K δ抑制之THP-1細胞模型中展現高活性(THP-1 IC50 ＜ 4 nM，較佳地≤ 3 nM)。值得注意地，活性在細胞分析中得到維持，其中自酶分析至細胞分析之活性下降低於或等於10倍；較佳地等於或低於3.5倍 THP-1 IC50 ≤10 × δ Ki ；較佳地THP-1 IC50 ≤3.5 × δ Ki 。
此外，在消炎DoA實驗中，在OVA攻擊之前12小時以0.1 µmol/kg之劑量(本發明經測試化合物之ED80)以懸浮液形式投與之本發明化合物展現優於45%之持久性消炎功效。遵循相同實驗方案，在OVA攻擊之前12小時以1 μmol/kg之劑量(ED80)以DPI調配物形式投與之本發明化合物仍維持相當大且持久之抑制肺氣管中細胞補充之消炎作用；在乾燥散劑方案中展現持久性消炎功效，其中抑制%等於或超過50%，甚至較佳地等於或超過70%。
Figure 109110464-A0101-11-0001-1

Claims (24)

  1. 一種式(I)化合物，
    Figure 03_image001
    (I) 其中： 當存在時，各R獨立地選自由以下組成之群：OR7 、鹵素、(C1 -C6 )烷基； 相同或者不同之R1 及R2 在每次出現時獨立地為(C1 -C6 )烷基， 相同或者不同之R3 及R4 在每次出現時獨立地為H或(C1 -C6 )烷基； 或者 R1 及R2 與其所連接之氮原子一起形成5或6員雜環基，其中該雜環基中之至少另一環碳原子選擇性地經選自N、NH、S或O之至少一個雜原子置換且選擇性地攜帶至少一個-側氧基(=O)取代基；該雜環基進一步選擇性地經(C1 -C6 )烷基取代，且R3 及R4 為H； 或者 R3 及R2 一起形成包含N原子之5或6員雜環基；該雜環基進一步選擇性地經(C1 -C6 )烷基取代，R1 為(C1 -C6 )烷基且R4 為H； R5 為OR7 ； R6 選自由以下組成之群：H、OR7 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )鹵烷基、(C1 -C6 )羥烷基； R7 選自由以下組成之群：H、(C1 -C6 )烷基； p為零或者介於1至4範圍內之整數； 及其醫藥學上可接受之鹽。
  2. 如請求項1之化合物，其中，參照在式(Ia)中由標記有星號(*)之碳原子表示之立體對稱中心，碳(*)處之絕對組構為(S)或(R)：
    Figure 03_image157
    Ia                                    。
  3. 如請求項1或2之化合物， 其中： R1 及R2 與其所連接之氮原子一起形成4-甲基哌𠯤-1-基； R3 及R4 為H； R、R5 、R6 及p如請求項1中所定義； 或其醫藥學上可接受之鹽。
  4. 如請求項1或2之化合物， 其中： R3 及R2 一起形成包含N原子之5員雜環基；該雜環基進一步經作為甲基之(C1 -C6 )烷基取代；R1 為作為甲基之(C1 -C6 )烷基且R4 為H；且 R、R5 、R6 及p如上文所定義； 或其醫藥學上可接受之鹽。
  5. 如請求項1或2之化合物， 其中： R1 及R2 為作為甲基之(C1 -C6 )烷基， R3 及R4 獨立地為H或作為甲基之(C1 -C6 )烷基；且 R、R5 、R6 及p如請求項1中所定義； 或其醫藥學上可接受之鹽。
  6. 如請求項1至5中任一項之化合物，其中： R為-H； R5 為-OH； R6 為H； 或其醫藥學上可接受之鹽。
  7. 如請求項1或2之化合物，其選自由以下組成之清單： 3-{1-[4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基]乙基}-4-{3-[(4-甲基哌𠯤-1-基)甲基]苯基}-1H -異
    Figure 109110464-A0304-12-0020-3
    唏-1-酮； 3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((二甲胺基)甲基)苯基)-1H-異
    Figure 109110464-A0304-12-0020-3
    唏-1-酮； 3-{1-[4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基]乙基}-4-{4-氯-3-[(二甲胺基)甲基]苯基}-1H -異
    Figure 109110464-A0304-12-0020-3
    唏-1-酮； 3-{1-[4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-4-{3-[(2R)-1-甲基吡咯啶-2-基]苯基}-1H-異
    Figure 109110464-A0304-12-0020-3
    唏-1-酮； 3-{1-[4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-4-{4-氟-3-[(4-甲基哌𠯤-1-基)甲基]苯基}-1H-異
    Figure 109110464-A0304-12-0020-3
    唏-1-酮； 3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-氟-5-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
    Figure 109110464-A0304-12-0020-3
    唏-1-酮； 3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-(1-(二甲胺基)乙基)苯基)-1H-異
    Figure 109110464-A0304-12-0020-3
    唏-1-酮 或其醫藥可接受之鹽。
  8. 如請求項1之化合物，其選自由以下組成之清單： (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
    Figure 109110464-A0304-12-0020-3
    唏-1-酮氫溴酸鹽； (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
    Figure 109110464-A0304-12-0020-3
    唏-1-酮鹽酸鹽； (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
    Figure 109110464-A0304-12-0020-3
    唏-1-酮半1,5-萘二磺酸鹽； (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
    Figure 109110464-A0304-12-0020-3
    唏-1-酮半硫酸鹽； (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
    Figure 109110464-A0304-12-0020-3
    唏-1-酮甲苯磺酸鹽； (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
    Figure 109110464-A0304-12-0020-3
    唏-1-酮甲磺酸鹽； (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
    Figure 109110464-A0304-12-0020-3
    唏-1-酮2-萘磺酸鹽； (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
    Figure 109110464-A0304-12-0020-3
    唏-1-酮羥乙磺酸鹽； (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
    Figure 109110464-A0304-12-0020-3
    唏-1-酮順丁烯二酸鹽； (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
    Figure 109110464-A0304-12-0020-3
    唏-1-酮乙磺酸鹽； (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-
    Figure 109110464-A0304-12-0020-3
    唏-1-酮半雙羥萘酸鹽； (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
    Figure 109110464-A0304-12-0020-3
    唏-1-酮羥萘甲酸鹽； (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
    Figure 109110464-A0304-12-0020-3
    唏-1-酮柳酸鹽； (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-1H-異
    Figure 109110464-A0304-12-0020-3
    唏-1-酮苯甲酸鹽。
  9. 如請求項1之化合物，其選自由以下組成之清單： (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((二甲胺基)甲基)苯基)-1H-異
    Figure 109110464-A0304-12-0020-3
    唏-1-酮氫溴酸鹽； (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((二甲胺基)甲基)苯基)-1H-異
    Figure 109110464-A0304-12-0020-3
    唏-1-酮鹽酸鹽； (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((二甲胺基)甲基)苯基)-1H-異
    Figure 109110464-A0304-12-0020-3
    唏-1-酮甲磺酸鹽； (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((二甲胺基)甲基)苯基)-1H-異
    Figure 109110464-A0304-12-0020-3
    唏-1-酮2-萘磺酸鹽； (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((二甲胺基)甲基)苯基)-1H-異
    Figure 109110464-A0304-12-0020-3
    唏-1-酮順丁烯二酸鹽； (R)及/或(S)-3-(1-(4-胺基-3-(5-羥基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((二甲胺基)甲基)苯基)-1H-異
    Figure 109110464-A0304-12-0020-3
    唏-1-酮乙磺酸鹽。
  10. 一種醫藥組成物，其包含與一或多種醫藥學上可接受之載劑或賦形劑混合之請求項1至9中任一項之化合物。
  11. 一種醫藥組成物，其包含與一或多種活性成分組合之請求項1至9中任一項之化合物。
  12. 如請求項1至9中任一項之化合物，其用作藥劑。
  13. 如請求項1至9中任一項之化合物，其用於治療選自以下之與PI3K酶機制相關聯之呼吸道病症：特發性慢性咳嗽、咳嗽變異性哮喘、胸部腫瘤或肺癌相關咳嗽、病毒或病毒後咳嗽、上呼吸道咳嗽症候群(UACS)、鼻涕倒流咳嗽、咳嗽相關胃-食道回流疾病(酸性及非酸性回流兩者)、哮喘、慢性支氣管炎、慢性阻塞性肺病(COPD)及間質性肺病。
  14. 如請求項13之化合物，其中，該與PI3K酶機制相關聯之病症為哮喘或慢性阻塞性肺病COPD。
  15. 如請求項13之化合物，其中，該與PI3K酶機制相關聯之病症為特發性肺纖維化(IPF)、咳嗽及慢性咳嗽。
  16. 一種式(II)化合物，
    Figure 03_image159
    II 其中 當R不存在時，p=0，R3 及R4 為H，K=R''為甲氧基吡啶；且R1 及R2 如請求項1中所定義。
  17. 一種式(II)化合物之用途，
    Figure 03_image161
    II 其中 當R不存在時，p=0，R3 及R4 為H，K=R''為甲氧基吡啶；且R1 及R2 如請求項1中所定義 或者 當K=I時，p、R、R1 、R2 、R3 、R4 如請求項1中所定義； 該等式(II)化合物在請求項1之式(I)化合物的製備中用作中間物。
  18. 一種方法，其中，請求項16之式(II)化合物經歷後續去保護或偶合步驟；選擇性地接著為最終手性分離步驟，以獲得請求項1之化合物。
  19. 一種醫藥調配物，其用於根據請求項10以乾燥散劑形式吸入，其中，存在包含一或多種醫藥學上可接受之賦形劑之粗粒之載劑，且進一步選擇性地存在具有潤滑劑或抗黏附特性之添加劑。
  20. 如請求項19之醫藥調配物，其中，該等粗粒所包含之質量直徑介於30微米與500微米之間。
  21. 一種乾燥散劑吸入器構件，其填充有請求項19或20之醫藥調配物。
  22. 一種套組，其包含請求項19或20之醫藥調配物及乾燥散劑吸入器構件。
  23. 一種醫藥調配物，其用於根據請求項10以不含推進劑之醫藥調配物形式吸入，其中，該化合物或其鹽經溶解或懸浮於水性媒劑中，該不含推進劑之醫藥調配物選擇性地包含另外的醫藥學上可接受之賦形劑。
  24. 一種套組，其包含請求項23之醫藥調配物及霧化器。
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