TW202102257A - 免疫原組合物以及增強宿主免疫反應的方法 - Google Patents
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Abstract
一種免疫原組合物,包括免疫原以及佐劑添加劑。佐劑添加劑包括具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的受體相關蛋白和/或假單胞菌外毒素A蛋白。使用含有佐劑添加劑的免疫原組合物於增強宿主免疫反應的方法中,藉此可透過免疫原組合物來成功地誘導並增強宿主的抗體免疫反應和細胞免疫反應。
Description
[相關申請的交叉引用] 此申請要求申請日為2019年3月29日的美國臨時申請第62/825,834號的優先權和權益。上述專利申請的全部內容藉由引用併入本文,並成為本說明書的一部分。
本發明是有關於一種免疫原組合物(immunogenic composition),且特別是有關於一種使用含有佐劑添加劑(adjuvant additive)的免疫原組合物來增強宿主免疫反應的方法。
通常,免疫原組合物包括免疫原、佐劑以及賦形劑。免疫原包括引起免疫反應的物質。免疫原可包含胜肽、蛋白質或多醣。但是,免疫原組合物中的其他成分可能會影響免疫原組合物的免疫效果。
本發明提供一種含有佐劑添加劑的免疫原組合物,其可用於增強宿主中的抗體免疫反應和/或細胞免疫反應,並可提供足夠的免疫保護來對抗免疫原。
本發明的提供了一種免疫原組合物。免疫原組合物包括免疫原和佐劑添加劑。佐劑添加劑包括具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的受體相關蛋白(receptor associated protein,RAP)和/或假單胞菌外毒素A蛋白。
在本發明的一實施例中,上述包括標的胜肽(target peptide)的假單胞菌外毒素A (pseudomonas exotoxin,PE)蛋白具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列。
在本發明的一實施例中,上述的假單胞菌外毒素A蛋白具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列。
在本發明的一實施例中,上述的假單胞菌外毒素A蛋白具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列。
在本發明的一實施例中,上述的免疫原包含具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的豬第二型環狀病毒(porcine circovirus type 2,PCV2)之類病毒顆粒(virus-like particle,VLP)。
在本發明的一實施例中,上述的豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒與佐劑添加劑的重量比為1:0.5。
在本發明的一實施例中,上述的豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒與佐劑添加劑的重量比為1:1。
在本發明的一實施例中,上述的豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒與佐劑添加劑的重量比為1:2。
在本發明的一實施例中,上述的豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒的濃度為3微克/劑量。
在本發明的一實施例中,上述的佐劑添加劑的濃度為3微克/劑量。
本發明的增強宿主免疫反應的方法,包括以下步驟:用上述的免疫原組合物對宿主進行疫苗接種,以增強對免疫原的抗體免疫反應和/或細胞免疫反應。
在本發明的一實施例中,上述對宿主進行疫苗接種是透過在至少三週前施用一定劑量的免疫原組合物。
基於上述,本發明的實施例提供了包含佐劑添加劑的免疫原組合物。佐劑添加劑包括具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的受體相關蛋白和/或假單胞菌外毒素A蛋白。透過在免疫原組合物中添加本實施例的佐劑添加劑以進行疫苗接種,可以成功地誘導並增強全身性的抗體免疫反應和/或細胞免疫反應,藉此可提供足夠的免疫保護來對抗免疫原。
為讓本發明的上述特徵和優點能更明顯易懂,下文特舉實施例,並配合所附圖式作詳細說明如下。
當前,一種包含免疫原、受體相關蛋白(receptor associated protein,RAP)以及假單胞菌外毒素A (pseudomonas exotoxin,PE)的融合蛋白,可藉由與抗原呈現細胞(Antigen Presenting Cells)或分化簇91 (cluster of differentiation 91,CD91)結合而誘導病原體的抗原特異性的T細胞免疫反應。然而,製備含有受體相關蛋白和假單胞菌外毒素A的融合蛋白不僅會增加了疫苗開發的難度,且限制了受體相關蛋白和假單胞菌外毒素A的適用性。
本揭露涉及一種免疫原組合物(immunogenic composition),其包括用於增強宿主免疫反應的佐劑添加劑(adjuvant additive)。在一些實施例中,佐劑添加劑可至少包括具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的受體相關蛋白和/或假單胞菌外毒素A蛋白。
受體相關蛋白是會與低密度脂蛋白受體(low-density lipoprotein receptor)家族成員緊密結合的拮抗劑(antagonist)和分子伴侶(molecular chaperone),例如是低密度脂蛋白受體相關蛋白1 (low density lipoprotein receptor-related protein 1,LRP1),也稱為分化簇91。
假單胞菌外毒素A蛋白是假單胞菌最具毒性的毒力因子(virulence factor)。假單胞菌外毒素A蛋白可分為Ia結構域(氨基酸序列1-252)、II結構域(氨基酸序列253-364)、Ib結構域(氨基酸序列365-404)以及III結構域(氨基酸序列405-613)。在一些實施例中,氨基酸序列1-407的假單胞菌外毒素A (PE407)具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列,且可用作為佐劑添加劑的一部分。然而,本揭露不限於此。在一些實施例中,在羧基末端(Carboxyl-terminal)融合有標的胜肽(target peptide)的PE407(即,PE407-K3)具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列,且可用作為佐劑添加劑的一部分。例如,包括KDELKDELKDEL(稱為K3)的標的胜肽可在PE407的羧基末端融合成PE407-K3。此外,也可以根據實際需要選擇和使用其他類型的標的胜肽。在一些實施例中,假單胞菌外毒素A蛋白的氨基酸序列1-252 (PE252)具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列,且可用作佐劑添加劑的一部分。
在一些實施例中,免疫原組合物可至少包含免疫原和佐劑添加劑。例如,免疫原可以包括具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒。然而,本揭露不限於此。豬環狀病毒(porcine circovirus)是已知最小的動物病毒,包括豬第一型環狀病毒和豬第二型環狀病毒。豬第二型環狀病毒是從患有離乳後多系統消耗症候群(post-weaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)的豬中分離出。與豬第二型環狀病毒相關的疾病已成為最重要和具有經濟意義的豬疾病之一。
在本實施例中,豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒與佐劑添加劑的重量比為1:0.5。在一些實施例中,豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒與佐劑添加劑的重量比為1:1。在一些實施例中,豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒與佐劑添加劑的重量比為1:2。藉由在上述範圍內調整豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒與佐劑添加劑的比例,可以確保針有足夠的抗體免疫反應和/或細胞免疫反應來對抗豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒。
在一實施例中,在免疫原組合物中,豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒的濃度例如是3微克/劑量,但不以此為限。在一些實施例中,在免疫原組合物中,佐劑添加劑的濃度為例如是3微克/劑量,但不以此為限。
此外,在免疫原組合物中,豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒可以由病毒結構蛋白組裝而成,且不含任何遺傳物質。換句話說,豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒是非感染性的,可以作為滅活的感染性病毒的安全替代品。在一實施例中,豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列。然而,本揭露不限於此。例如,也可以使用具有其他氨基酸序列的豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒的其他菌株。
藉由設計至少包括具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的受體相關蛋白和/或假單胞菌外毒素A蛋白的佐劑添加劑,全身性的抗體免疫反應和/或細胞免疫反應可以成功地被包含上述佐劑添加劑的免疫原組合物誘導,藉此提供了足夠的免疫保護來對抗豬第二型環狀病毒。
藉由使用上述免疫原組合物可作為實現增強宿主免疫反應的方法。例如,在一些實施例中,至少在三週前使用免疫原組合物對宿主進行疫苗接種,以增強對豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒的抗體免疫反應和/或細胞免疫反應。在一實施例中,藉由在至少三週前施用一定劑量的免疫原組合物來對宿主進行疫苗接種。然而,本揭露不限於此。
藉由使用上述在宿主中增強抗體免疫反應和/或細胞免疫反應的方法,可以確保有足夠的免疫保護來對抗豬第二型環狀病毒。
實施例
進行以下實驗例以證明包括本揭露含有佐劑添加劑的免疫原組合物可以成功地誘導抗體免疫反應和/或細胞免疫反應,從而可以賦予足夠的免疫保護來對抗豬第二型環狀病毒。
實施例
1
:佐劑添加劑
(
假單胞菌外毒素
A
蛋白和
/
或受體相關蛋白
)
對增強免疫反應的作用
首先,在本實施例中,進行豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒、受體相關蛋白和PE407-K3的製備。具體來說,具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒的製備方法如下:以0.1-1感染劑量(multiplicity of infection,MOI)且攜帶有PCV2-ORF2序列的桿狀病毒(baculovirus)感染1-4×106
個SF9細胞,並培養3-6天。以離心方式收集細胞團塊(cell pellet),並從細胞團塊中萃取和純化出豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒。將豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒在37°C下用1.6-10 mM的二乙醯亞胺(binary ethylenimine,BEI)滅活4-48小時,以獲得豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒。接著,利用白蛋白標準品(Bovine Serum Albumin Standard)來定量豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒的濃度。
SEQ ID NO:1的氨基酸序列的受體相關蛋白的製備方法如下:例如,將具有受體相關蛋白的基因片段的大腸桿菌培養至OD600為0.3-1.2,然後以0.1-10 mM的異丙基-1-硫代-β-D-半乳糖苷(isopropyl-1-thio-β-D-galactopyranoside,IPTG)來誘導受體相關蛋白的基因片段表達2-24小時。以離心方式收集細胞團塊後,用TNE緩衝液進行萃取。離心後,將萃取物的上清液以HIS管柱進行純化,以獲得受體相關蛋白。利用白蛋白標準品定量受體相關蛋白的濃度。
具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的PE407-K3的製備方法如下:例如,將具有PE407-K3的基因片段的大腸桿菌培養至OD600為0.3-1.2,然後以0.1-10 mM的異丙基-1-硫代-β-D-半乳糖苷來誘導PE407-K3的基因片段表達2-24小時。以離心方式收集細胞團塊後,用TNE緩衝液進行萃取。離心後,將萃取後的沉澱物溶解在8M尿素緩衝液中。經過重新摺疊(refolding)的過程後,獲得PE407-K3。利用白蛋白標準品定量PE407-K3的濃度。
接下來,進行免疫原組合物的製備。在本實驗例中,例如是以1:1的比例將豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒與假單胞菌外毒素A蛋白或受體相關蛋白混合均勻。然而,本揭露不限於此。在其他實驗例中,豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒與假單胞菌外毒素A蛋白或受體相關蛋白也可以以1:0.5或1:2的比例混合均勻。在本實驗例中,豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒的濃度例如是3微克/劑量,且佐劑添加劑的濃度例如是3 微克/劑量,但不以此為限。將ISA206佐劑和均勻的混合物在31°C水浴中加熱20分鐘。然後,將混合物在31°C下添加到ISA206佐劑中,並以400至700 rpm(取決於容器的大小)進行攪拌1.5小時。接著,在室溫靜置幾個小時後,即可獲得免疫原組合物。將免疫原組合物放置於4°C保存。
在本實驗例中,以Balb/c小鼠作為試驗動物,並以皮下注射的方式來注射免疫原組合物。將Balb/c小鼠分為4組,且每組4隻,如表1所示。A組使用安慰劑,即未注射豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒、假單胞菌外毒素A蛋白、受體相關蛋白以及ISA206佐劑。 B組注射的免疫原組合物包括豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒以及ISA206佐劑。C組注射的免疫原組合物包括豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒、受體相關蛋白以及ISA206佐劑。D組注射的免疫原組合物包括豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒、PE407-K3以及ISA206佐劑。
注射後,每週以臉頰採血(submandibular blood collection)的方式來收集血液樣品。將血液樣品中的血清以豬第二型環狀病毒之IgG抗體進行酵素免疫分析法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)分析。接著,於注射後3週,以CO2
的方式犧牲小鼠。然後,取出小鼠的脾臟,並以流式細胞儀(flow cytometry)進行細胞免疫染色分析。
表1
組別 | 免疫原組合物 |
A | 安慰劑 |
B | 豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒 + ISA206 |
C | 豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒 + 受體相關蛋白 + ISA206 |
D | 豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒 + PE407-K3 + ISA206 |
[豬第二型環狀病毒之IgG抗體的ELISA分析]
豬第二型環狀病毒之IgG抗體的ELISA分析的實驗步驟:將4隻小鼠(10微升/每隻小鼠)的血清混合到同一管中。將每組血清稀釋50倍後,將100微升血清稀釋液添加到Biocheck PCV2 ELISA試劑盒的抗原盤的一個孔洞中,並在37°C反應30分鐘。用1X的PBST洗滌4次後,加入100微升的anti-mouse-IgG-HRP (1:10000),並在37°C反應30分鐘。用1X的PBST洗滌4次後,加入100微升的3,3',5,5'-四甲基聯苯胺(tetramethylbenzidine,TMB),並在室溫反應15分鐘。在加入100微升1N的H2
SO4
之後,用酵素免疫分析儀(ELISA reader)測量於450 nm波長下的訊號。
圖1是以酵素免疫分析法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)來檢測實施例1的不同測試組的小鼠中的豬第二型環狀病毒的抗體的結果。橫軸表示注射前W0、注射後1週W1、注射後2週W2以及注射後3週W3的每組小鼠的血清。縱軸表示在450 nm波長下的光學密度(optical density,OD)的讀值,其可以代表血清中豬第二型環狀病毒的抗體的相對量。根據圖1的結果,與注射前W0的PCV2抗體的量相比,注射後1週W1和注射後2週W2的PCV2抗體的量沒有顯著變化。但是,注射後3週W3,C組和D組(注射了豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒和佐劑添加劑RAP/PE)的PCV2抗體的量明顯高於B組(僅注射豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒)的PCV2抗體的量。
由此圖1的結果可知,包含佐劑添加劑(RAP或PE)的免疫原組合物可以成功地增強免疫反應,例如是抗體免疫反應,以獲得足夠的免疫保護來對抗豬第二型環狀病毒。
[細胞免疫染色分析]
細胞免疫染色分析(cellular immunostaining analysis)的實驗程序包括以下步驟。步驟1為脾臟細胞的分離和培養:將注射後3週W3的小鼠以CO2
犧牲,並從心臟收集血液(> 0.5毫升)。接著,取出小鼠的脾臟,並置於含有1毫升/孔的DMEM培養基的24孔盤中。用PBS洗滌一次後,將脾臟置於裝有1.5毫升的紅血球分解液(RBC lysis buffer)的6公分培養皿中,並使用注射器頭研磨5分鐘。以細胞濾網(40微米)將研磨後的脾臟過濾至50毫升的離心管中,並用8.5毫升的PBS沖洗細胞濾網至10毫升的總體積。在1300 rpm離心5分鐘後,收集細胞團塊並用5毫升的PBS洗滌。在1300 rpm離心5分鐘後,將細胞團塊懸浮在2毫升的RPMI培養基(10% FBS、1% PSA)中。細胞計數後,將2×107
個脾臟細胞/孔接種在6孔盤中,並在2毫升的RPMI培養基(10% FBS、1%PSA)中培養。加入2微克的PCV2-ORF2免疫原(豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒的免疫原)以反應16小時。豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒的免疫原可以刺激脾臟細胞的CD3+
T細胞產生IFN-γ。步驟2為脾臟細胞的免疫染色:加入高爾基塞(Golgi Plug)並反應4小時後,將細胞放入離心管中。在300 x g,4°C下離心5分鐘後,除去上清液,並加入1毫升的PBS進行洗滌。再次用1毫升的PBS洗滌後,添加100微升/孔的CD3、CD4以及CD8的特異性抗體,並在黑暗中於4°C培養30分鐘。用1毫升的PBS洗滌兩次後,加入200微升的IC固定液(PBS:IC Fix = 1:1),並在4°C及黑暗中反應過夜。用1毫升的1X的通透性洗滌緩衝液(permeabilization wash buffer)洗滌後,加入100微升的IFN-γ-Ab,在黑暗中及室溫反應30分鐘。最後,藉由流式細胞儀檢測CD3+
/IFN-γ T細胞的數量。
圖2A與圖2B是以流式細胞儀(flow cytometry)檢測實施例1的不同測試組的小鼠中的CD3+
/INF-γ T細胞的數量的結果。橫軸表示注射3週後以豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒的免疫原處理(黑柱)的每組小鼠的脾臟細胞,或是注射3週後沒有以豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒的免疫原處理(白柱)的每組小鼠的脾臟細胞。縱軸表示CD3+
/IFN-γ T細胞的數量。根據圖2A的結果,與僅注射豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒的B組的脾臟細胞相比,注射豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒+受體相關蛋白的C組的脾臟細胞,在經由豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒的免疫原刺激後可產生更多的特異性的CD3+
/IFN-γ T細胞。
根據圖2B的結果,與僅注射豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒的B組的脾臟細胞相比,注射豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒+PE407-K3的D組的脾臟細胞,在經由豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒的免疫原刺激後可產生更多的特異性的CD3+
/IFN-γ T細胞。
由圖2A與圖2B的結果可知,包含佐劑添加劑(RAP或PE)的免疫原組合物可以成功地增強免疫反應,例如是細胞免疫反應,以獲得足夠的免疫保護來對抗豬第二型環狀病毒。
實施例
2
:不同的假單胞菌外毒素
A
蛋白的片段對增加細胞免疫反應的影響
首先,在本實施例中,進行豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒以及不同的假單胞菌外毒素A蛋白的片段(PE252、PE407以及PE407-K3)的製備。具體來說,在實施例1中已經描述了具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒的製備方法。在實施例1中也已經描述了具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的PE407-K3的製備方法。此外,由於具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的PE407和具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的PE252的製備方法與PE407-K3的製備方法相似,因此,於此不再贅述。
此外,由於免疫原組合物的製備方法與實施例1相似,因此,於此不再贅述。在本實驗例中,例如以1:1的比例將豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒與PE或RAP均勻混合。豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒的濃度例如是3微克/劑量,且佐劑添加劑(PE252、PE407以及PE407-K3)的濃度例如是3微克/劑量,但不以此為限。
在本實驗例中,以Balb/c小鼠作為試驗動物,並以皮下注射的方式來注射免疫原組合物。將Balb/c小鼠分為4組,且每組4隻,如表2所示。A組注射的免疫原組合物包括豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒以及ISA206佐劑。 B組注射的免疫原組合物包括豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒、PE252以及ISA206佐劑。 C組注射的免疫原組合物包括豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒、PE407以及ISA206佐劑。D組注射的免疫原組合物包括豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒、PE407-K3以及ISA206佐劑。
表2
組別 | 免疫原組合物 |
A | 豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒 + ISA206 |
B | 豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒 + PE252 + ISA206 |
C | 豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒 + PE407 + ISA206 |
D | 豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒 + PE407-K3 + ISA206 |
在注射後3週,以CO2
的方式犧牲小鼠。然後,取出小鼠的脾臟,並以流式細胞儀進行細胞免疫染色分析。另外,由於細胞免疫染色分析的實驗步驟與實施例1相似,因此,於此不再贅述。
圖3是以流式細胞儀檢測實施例2的不同測試組的小鼠中的CD3+
/INF-γ T細胞的數量的結果。橫軸表示注射3週後以豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒的免疫原處理(黑柱)的每組小鼠的脾臟細胞,或是注射3週後沒有以豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒的免疫原處理(白柱)的每組小鼠的脾臟細胞。縱軸表示CD3+
/IFN-γ T細胞的數量。根據圖3的結果,與僅注射豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒的A組的脾臟細胞相比,注射豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒+PE252的B組的脾臟細胞,在經由豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒的免疫原刺激後可產生更多的特異性的CD3+
/IFN-γ T細胞。此外,在經由豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒的免疫原刺激後的B組的特異性的CD3+
/IFN-γ T細胞的數量明顯高於C組(注射豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒+PE407)以及D組(注射豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒+PE407-K3)。
由圖3的結果可知,包含佐劑添加劑(PE252、PE407以及PE407-K3)的免疫原組合物可以成功地增強免疫反應,例如是細胞免疫反應,以獲得足夠的免疫保護來對抗豬第二型環狀病毒。
值得注意的是,儘管實施例1和實施例2是在豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒的免疫原中添加了佐劑添加劑(RAP和/或PE)來增強抗體免疫反應和細胞免疫反應,以對抗豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒,但本揭露並不以此為限。在其他實施例中,佐劑添加劑(RAP和/或PE)也可以添加到其他免疫原中以增強宿主對感染性病原體的抗體免疫反應和細胞免疫反應。
根據以上實施例,本揭露的佐劑添加劑包括具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的受體相關蛋白(RAP)或假單胞菌外毒素A(PE)蛋白,可用於添加到免疫原組合物,以誘導和增強抗體免疫反應和/或細胞免疫反應,從而提供針足夠的免疫保護以對抗免疫原。此外,當至少包括RAP以及PE於單個免疫原組合物中一起使用時,可以觀察到更加增強的免疫反應的協同作用。
綜上所述,本發明的實施例提供了包含佐劑添加劑的免疫原組合物。佐劑添加劑包括具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的受體相關蛋白和/或假單胞菌外毒素A蛋白。透過在免疫原組合物中添加本實施例的佐劑添加劑以進行疫苗接種,可以成功地誘導並增強全身性的抗體免疫反應和/或細胞免疫反應,藉此可提供足夠的免疫保護來對抗免疫原。
雖然本發明已以實施例揭露如上,然其並非用以限定本發明,任何所屬技術領域中具有通常知識者,在不脫離本發明的精神和範圍內,當可作些許的更動與潤飾,故本發明的保護範圍當視後附的申請專利範圍所界定者為準。
A、B、C、D:組
W0:注射前
W1:注射後1週
W2:注射後2週
W3:注射後3週
圖1是以酵素免疫分析法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)來檢測實施例1的不同測試組的小鼠中的豬第二型環狀病毒的抗體的結果。
圖2A與圖2B是以流式細胞儀(flow cytometry)檢測實施例1的不同測試組的小鼠中的CD3+
/INF-γ T細胞的數量的結果。
圖3是以流式細胞儀檢測實施例2的不同測試組的小鼠中的CD3+
/INF-γ T細胞的數量的結果。
A、B、C、D:組
W0:注射前
W1:注射後1週
W2:注射後2週
W3:注射後3週
Claims (12)
- 一種免疫原組合物,包括: 一免疫原;以及 一佐劑添加劑,其中該佐劑添加劑包括選自一具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的受體相關蛋白和一假單胞菌外毒素A蛋白的至少一種。
- 如請求項1所述的免疫原組合物,其中包括一標的胜肽的該假單胞菌外毒素A蛋白具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列。
- 如請求項1所述的免疫原組合物,其中該假單胞菌外毒素A蛋白具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列。
- 如請求項1所述的免疫原組合物,其中該假單胞菌外毒素A蛋白具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列。
- 如請求項1所述的免疫原組合物,其中該免疫原包含具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒。
- 如請求項5所述的免疫原組合物,其中該豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒與該佐劑添加劑的重量比為1:0.5。
- 如請求項5所述的免疫原組合物,其中該豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒與該佐劑添加劑的重量比為1:1。
- 如請求項5所述的免疫原組合物,其中該豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒與該佐劑添加劑的重量比為1:2。
- 如請求項5所述的免疫原組合物,其中該豬第二型環狀病毒之類病毒顆粒的濃度為3微克/劑量。
- 如請求項1所述的免疫原組合物,其中該佐劑添加劑的濃度為3微克/劑量。
- 一種增強宿主免疫反應的方法,包括: 用請求項1的該免疫原組合物對該宿主進行疫苗接種,以增強對該免疫原的抗體免疫反應和/或細胞免疫反應。
- 如請求項11所述的增強宿主免疫反應的方法,其中對該宿主進行疫苗接種是透過在至少三週前施用一劑量的該免疫原組合物。
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