TW202045725A

TW202045725A - 用於治療核纖層病的組成物及方法

Info

Publication number: TW202045725A
Application number: TW109106729A
Authority: TW
Inventors: 席里卡伍德; 卡提克拉馬穆爾提; 史黛芬妮泰格利亞特拉; 安譚恩豪斯
Original assignee: 美商編碼治療公司
Priority date: 2019-02-28
Filing date: 2020-03-02
Publication date: 2020-12-16
Also published as: MX2021010301A; EP3931336A1; WO2020176896A1; EA202192376A1; IL285886A; BR112021016783A2; KR20210144696A; US20220193264A1; MA55087A; SG11202109362XA; AU2020229382A1; CL2021002262A1; CN113840927A; CO2021012310A2; JP2022522196A; EP3931336A4; CA3131776A1

Abstract

本發明提供用於治療、預防或抑制核纖層病的組成物及方法。在一個態樣中，本發明提供包含編碼核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C之核苷酸序列的核酸構築體及/或載體。

Description

用於治療核纖層病的組成物及方法

相關申請案之 交叉引用 本申請案主張2019年2月28日申請之美國臨時申請案第62/812,021號的優先權。前述申請案以全文引用之方式併入本文中。

藉由常用替代性剪接LMNA 基因編碼至少三種同功型(核纖層蛋白（lamin）A、核纖層蛋白C及核纖層蛋白AA10)。兩個主要同功型核纖層蛋白A及核纖層蛋白C為纖維核薄層(位於核包膜之內膜與DNA之間的複合分子介面)之組成性組分。核纖層蛋白A及核纖層蛋白C具有在機械核膜維持至基因調節範圍內之不同生理作用。LMNA 基因中之許多突變引起稱為核纖層病之一系列疾病。此等疾病包括至少八個經充分定性之表型，其中一些受限於骨胳肌或表皮，而其他為多系統的。

擴張型心肌症為LMNA 相關疾病之大家族中的疾病中之一種。擴張型心肌症之發生率在1:2500名個體至1:250名個體範圍內。擴張型心肌症之特徵在於左心室或兩個心室之擴張及減弱的收縮以及減弱的收縮性功能。儘管為罕見疾病，擴張型心肌症表現出嚴重的健康負荷，通常引起心律不齊、血栓栓塞及在疾病之任何階段的猝死。沒有用於擴張型心肌症或其他LMNA 相關核纖層病之特定治療。

需要用於核纖層病(例如擴張型心肌症)之新穎治療。

在一些具體實例中，本文提供可用於治療諸如擴張型心肌症之核纖層病的組成物及方法。

在一些具體實例中，本發明提供一種核酸構築體，該核酸構築體包含可操作地連接至具有少於500 bp之調節元件的核苷酸序列，該核苷酸序列編碼(a)核纖層蛋白A多肽、(b)核纖層蛋白C多肽、或(c)核纖層蛋白A多肽及核纖層蛋白C多肽或(a)-(c)中之任一者的生物活性變異體及/或片段。在一些具體實例中，本發明提供一種包含核苷酸序列之核酸構築體，該核苷酸序列編碼(a)核纖層蛋白A多肽、(b)核纖層蛋白C多肽、或(c)核纖層蛋白A多肽及核纖層蛋白C多肽或(a)-(c)中之任一者的生物活性變異體及/或片段，其中該核苷酸序列包含至少一個(但非所有)LMNA 基因之非編碼序列。在某些具體實例中，非編碼序列為內含子。在某些具體實例中，核苷酸序列包含至少一個(但非所有)與野生型人類LMNA 基因之內含子1至11對應的內含子。在某些具體實例中，核苷酸序列包含與野生型人類LMNA 基因之內含子10對應之內含子。在某些具體實例中，與內含子10對應之內含子包含與SEQ ID NO: 79之核苷酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的核苷酸序列或其片段。在某些具體實例中，核苷酸序列包含與野生型人類LMNA 基因之內含子8對應之內含子。在某些具體實例中，與內含子8對應之內含子包含與SEQ ID NO: 77之核苷酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的核苷酸序列或其片段。在某些具體實例中，核苷酸序列包含與野生型人類LMNA 基因之內含子9對應之內含子。在某些具體實例中，與內含子9對應之內含子包含與SEQ ID NO: 78之核苷酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的核苷酸序列或其片段。在某些具體實例中，核苷酸序列包含與野生型人類LMNA 基因之內含子11對應之內含子。在某些具體實例中，與內含子11對應之內含子包含與SEQ ID NO: 80之核苷酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的核苷酸序列或其片段。在某些具體實例中，核苷酸序列包含與野生型人類LMNA 基因之內含子9及10對應之內含子。在某些具體實例中，核苷酸序列包含與野生型人類LMNA 基因之內含子8、9、10及11對應之內含子。在某些具體實例中，核酸構築體包含至少一個與野生型人類LMNA 基因之內含子8至11對應的內含子，且缺少至少一個與野生型人類LMNA 基因之內含子1至7對應的內含子。在某些具體實例中，核酸構築體包含與野生型人類LMNA 基因之內含子10對應的內含子，且缺少與野生型人類LMNA 基因之內含子1至7對應的內含子。在某些具體實例中，核酸構築體包含與野生型人類LMNA 基因之內含子8至11對應的內含子，且缺少與野生型人類LMNA 基因之內含子1至7對應的內含子。在某些具體實例中，核酸構築體包含與野生型人類LMNA 基因之內含子9及10對應的內含子，且缺少與野生型人類LMNA 基因之內含子1至8及11對應的內含子。在某些具體實例中，核酸構築體包含與野生型人類LMNA 基因之內含子10對應的內含子，且缺少與野生型人類LMNA 基因之內含子1至9及11對應的內含子。在某些具體實例中，核苷酸序列可操作地連接至調節元件。在某些具體實例中，核苷酸序列可操作地連接至具有少於或等於400個鹼基對(bp)、300 bp、250 bp、200 bp、150 bp、140 bp、130 bp、120 bp、110 bp、100 bp、70 bp或50 bp之調節元件。在某些具體實例中，調節元件以下者中之任一者或其組合：SEQ ID NO: 30至58中之任一者、CBA、CMV、SCP、SERpE_TTR、Proto1、minCMV、UCL-HLP、CMVe、CAG或EFS。在某些具體實例中，調節元件為SEQ ID NO: 31、SEQ ID NO: 33、CBA或minCMV中之任一者或其組合。在某些具體實例中，調節元件為SEQ ID NO: 33。在某些具體實例中，調節元件為CBA。在某些具體實例中，調節元件為minCMV。在某些具體實例中，調節元件為細胞類型選擇性的。在某些具體實例中，調節元件在心肌細胞中選擇性表達。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者之核苷酸序列或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少80%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者之核苷酸序列或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少90%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者之核苷酸序列或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少95%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含為SEQ ID NO: 1至10中之任一者之序列或其密碼子最佳化變異體及/或片段的核苷酸序列。在某些具體實例中，核苷酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 12之胺基酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列之核纖層蛋白A多肽或其生物活性片段。在某些具體實例中，核苷酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 21之胺基酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列之核纖層蛋白A多肽或其生物活性片段。在某些具體實例中，核苷酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列之核纖層蛋白C多肽或其生物活性片段。在某些具體實例中，核苷酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 12之胺基酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列之核纖層蛋白A多肽或其生物活性片段及包含與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列之核纖層蛋白C多肽或其生物活性片段。在某些具體實例中，核苷酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 21之胺基酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列之核纖層蛋白A多肽或其生物活性片段及包含與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列之核纖層蛋白C多肽或其生物活性片段。在某些具體實例中，核苷酸序列進一步包含多腺苷酸化信號。

在一些具體實例中，本發明提供一種包含編碼核纖層蛋白A多肽及核纖層蛋白C多肽或其生物活性變異體及/或片段之核苷酸序列的核酸構築體，其中該構築體至少包含野生型人類LMNA基因之內含子8或內含子11。在一些具體實例中，內含子8包含與SEQ ID NO: 77之核苷酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的核苷酸序列或其片段。在一些具體實例中，內含子11包含與SEQ ID NO: 80之核苷酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的核苷酸序列或其片段。在一些具體實例中，核苷酸序列進一步包含野生型人類LMNA 基因之內含子10。在一些具體實例中，內含子10包含與SEQ ID NO: 79之核苷酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的核苷酸序列或其片段。在一些具體實例中，核苷酸序列進一步包含野生型人類LMNA 基因之內含子9。在一些具體實例中，內含子9包含與SEQ ID NO: 78之核苷酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的核苷酸序列或其片段。在一些具體實例中，核苷酸序列包含野生型人類LMNA 基因之內含子8及11。在一些具體實例中，核苷酸序列進一步包含野生型人類LMNA 基因之內含子8。在一些具體實例中，核苷酸序列進一步包含野生型人類LMNA 基因之內含子11。在一些具體實例中，核苷酸序列進一步包含野生型人類LMNA 基因之內含子9及10。在一些具體實例中，核苷酸序列包含野生型人類LMNA 基因之內含子8、9、10及11。在一些具體實例中，核酸構築體缺少至少一個與野生型人類LMNA 基因之內含子1至7對應的內含子。在一些具體實例中，核酸構築體缺少野生型人類LMNA 基因之內含子1至7。在一些具體實例中，核酸構築體進一步包含野生型人類LMNA 基因之內含子9，且缺少至少一個與野生型人類LMNA 基因之內含子1至7對應的內含子。在一些具體實例中，核酸構築體進一步包含野生型人類LMNA 基因之內含子10，且缺少至少一個與野生型人類LMNA 基因之內含子1至7對應的內含子。在一些具體實例中，核酸構築體包含野生型人類LMNA 基因之內含子8至11，且缺少野生型人類LMNA 基因之內含子1至7。在一些具體實例中，調節元件具有少於或等於500個鹼基對。在一些具體實例中，調節元件具有少於或等於900個鹼基對。在一些具體實例中，調節元件具有少於或等於800個鹼基對(bp)、700 bp、600 bp、500 bp、400 bp、300 bp、250 bp、200 bp、150 bp、140 bp、130 bp、120 bp、110 bp、100 bp、70 bp或50 bp。在一些具體實例中，調節元件為以下者中之任一者或其組合：SEQ ID NO: 30至58中之任一者、SEQ ID NO: 102、CBA、CMV、SCP、SERpE_TTR、Proto1、minCMV、UCL-HLP、CMVe、Myh6、肌間線蛋白（Desmin）、cTnT、α-MHC、MLC-2、CAG或EFS。在一些具體實例中，調節元件為SEQ ID NO: 31、SEQ ID NO: 33、CBA或minCMV中之任一者或其組合。在一些具體實例中，調節元件為SEQ ID NO: 33。在一些具體實例中，調節元件為CBA。在一些具體實例中，調節元件為minCMV。在一些具體實例中，調節元件為細胞類型選擇性的。在一些具體實例中，調節元件在心肌細胞中選擇性表達。在一些具體實例中，調節元件為Myh6、肌間線蛋白、cTnT、α-MHC或MLC-2中之任一者或其組合。在一些具體實例中，調節元件為cTNT。在一些具體實例中，cTNT調節元件包含SEQ ID NO: 101。在一些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 8之核苷酸序列或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少80%一致的核苷酸序列。在一些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 8之核苷酸序列或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少90%一致的核苷酸序列。在一些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 8之核苷酸序列或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少95%一致的核苷酸序列。在一些具體實例中，核酸構築體包含為SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 8之序列或其密碼子最佳化變異體及/或片段的核苷酸序列。在一些具體實例中，核苷酸序列編碼胺基酸序列與SEQ ID NO: 12之胺基酸序列或其生物活性片段至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的核纖層蛋白A多肽及胺基酸序列與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列或其生物活性片段至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的核纖層蛋白C多肽。在一些具體實例中，核苷酸序列編碼核纖層蛋白A多肽及核纖層蛋白C多肽，該核纖層蛋白A多肽包含與SEQ ID NO: 21之胺基酸序列或其生物活性片段至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列，該核纖層蛋白C多肽包含與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列或其生物活性片段至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列。在一些具體實例中，核苷酸序列進一步包含多腺苷酸化信號。

在一些具體實例中，本發明提供一種包含核苷酸序列之核苷酸構築體，該核苷酸序列編碼：(a)野生型LMNA 基因之外顯子1至12；及(b)野生型LMNA 基因之內含子8。在一些具體實例中，本發明提供一種包含核苷酸序列之核苷酸構築體，該核苷酸序列編碼：(a)野生型LMNA 基因之外顯子1至12；及(b)野生型LMNA 基因之內含子11。在一些具體實例中，本發明提供一種包含核苷酸序列之核苷酸構築體，該核苷酸序列編碼：(a)野生型LMNA 基因之外顯子1至12；及(b)野生型LMNA 基因之內含子8及內含子11。在一些具體實例中，核苷酸序列進一步編碼野生型LMNA 基因之內含子9及10中之一或多者。在一些具體實例中，本發明提供一種包含核苷酸序列之核苷酸構築體，該核苷酸序列編碼：(a)野生型LMNA 基因之外顯子1至12；及(b)野生型LMNA 基因之內含子8至11。在一些具體實例中，核苷酸序列與SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 8之核苷酸序列或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少80%一致。在一些具體實例中，核苷酸序列與SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 8之核苷酸序列或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少90%一致。在一些具體實例中，核苷酸序列與SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 8之核苷酸序列或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少95%一致。在一些具體實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 8之序列或其密碼子最佳化變異體及/或片段。在一些具體實例中，核苷酸序列編碼：a)具有與SEQ ID NO: 12之胺基酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列之核纖層蛋白A多肽及b)具有與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列之核纖層蛋白C多肽。在一些具體實例中，核苷酸序列編碼：a)具有與SEQ ID NO: 21之胺基酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列之核纖層蛋白A多肽及b)具有與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列之核纖層蛋白C多肽。在一些具體實例中，核苷酸序列編碼具有SEQ ID NO: 12至19或21中之任一者或多者之胺基酸序列的多肽。在一些具體實例中，核苷酸序列不包含與野生型LMNA 基因之內含子1至7對應的核苷酸序列。在一些具體實例中，核苷酸序列可操作地連接至調節元件。在一些具體實例中，核苷酸序列可操作地連接至具有少於900 bp之調節元件。在一些具體實例中，核苷酸序列可操作地連接至具有少於或等於900 bp、800 bp、700 bp、600 bp、500 bp、400 bp、300 bp、250 bp、200 bp、150 bp、140 bp、130 bp、120 bp、110 bp、100 bp、70 bp或50 bp之調節元件。在一些具體實例中，調節元件為以下者中之任一者或其組合：SEQ ID NO: 30至58中之任一者、SEQ ID NO: 102、CBA、CMV、SCP、SERpE_TTR、Proto1、minCMV、UCL-HLP、CMVe、Myh6、肌間線蛋白、cTnT、α-MHC、MLC-2、CAG或EFS。

在一些具體實例中，本發明提供包含本文所提供的核酸構築體中之任一者的病毒載體。在某些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列編碼(a)核纖層蛋白A多肽，(b)核纖層蛋白C多肽，或(c)核纖層蛋白A多肽及核纖層蛋白C多肽或(a)至(c)中之任一者的生物活性變異體及/或片段。在某些具體實例中，核苷酸序列包含LMNA 基因之至少一個非編碼區域。在某些具體實例中，非編碼區域為內含子。在某些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列編碼：(a)野生型LMNA 基因之外顯子1至12；及(b)野生型LMNA 基因之內含子10。在某些具體實例中，病毒載體包含本文所提供的核酸構築體，其中核苷酸序列進一步編碼野生型LMNA 基因之內含子8、9及11中之一或多者。在一些具體實例中，本發明提供一種包含核苷酸序列之病毒載體，該核苷酸序列編碼：(a)野生型LMNA 基因之外顯子1至12；及(b)野生型LMNA 基因之內含子9及10。在一些具體實例中，本發明提供一種包含核苷酸序列之病毒載體，該核苷酸序列編碼：(a)野生型LMNA 基因之外顯子1至12；及(b)野生型LMNA 基因之內含子8至11。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者之核苷酸序列或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少80%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者之核苷酸序列或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少90%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者之核苷酸序列或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少95%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含為SEQ ID NO: 1至10中之任一者之序列或其密碼子最佳化變異體及/或片段的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼核纖層蛋白A多肽之核苷酸序列，該核纖層蛋白A多肽包含與SEQ ID NO: 12之胺基酸序列或其生物活性片段至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼核纖層蛋白A多肽之核苷酸序列，該核纖層蛋白A多肽包含與SEQ ID NO: 21之胺基酸序列或其生物活性片段至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼核纖層蛋白C多肽之核苷酸序列，該核纖層蛋白C多肽包含與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列或其生物活性片段至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列編碼(a)具有與SEQ ID NO: 12之胺基酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列之核纖層蛋白A多肽及(b)具有與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列之核纖層蛋白C多肽。在某些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列編碼(a)具有與SEQ ID NO: 21之胺基酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列之核纖層蛋白A多肽，及(b)具有與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列之核纖層蛋白C多肽。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼具有SEQ ID NO: 12至21或24之胺基酸序列的多肽之核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列不包含與野生型LMNA 基因之內含子1至7對應的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含可操作地連接至調節元件之核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含可操作地連接至具有少於或等於400 bp、300 bp、250 bp、200 bp、150 bp、140 bp、130 bp、120 bp、110 bp、100 bp、70 bp或50 bp之調節元件的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含調節元件，該調節元件為以下者中之任一者或其組合：SEQ ID NO: 30至58中之任一者、CBA、CMV、SCP、SERpE_TTR、Proto1、minCMV、UCL-HLP、CMVe、CAG或EFS。在某些具體實例中，病毒載體包含調節元件，該調節元件為SEQ ID NO: 31、SEQ ID NO: 33、CBA或minCMV中之任一者或其組合。在某些具體實例中，病毒載體包含調節元件，該調節元件為SEQ ID NO: 33。在某些具體實例中，病毒載體包含調節元件，該調節元件為CBA。在某些具體實例中，病毒載體包含調節元件，該調節元件為minCMV。在某些具體實例中，病毒載體包含調節元件，該調節元件為細胞類型選擇性的。在某些具體實例中，病毒載體包含調節元件，該調節元件在神經元細胞、視網膜細胞、腎細胞、骨胳肌細胞、脂肪細胞或心肌細胞中選擇性表達。在某些具體實例中，病毒載體包含調節元件，該調節元件在心肌細胞中選擇性表達。在某些具體實例中，病毒載體包含進一步包含多腺苷酸化信號之核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體為腺相關病毒(adeno-associated virus，AAV)載體。在某些具體實例中，AAV載體為AAV6、AAV9、scAAV6或scAAV9。在某些具體實例中，AAV載體包含進一步包含5' AAV反向末端重複(inverted terminal repeat，ITR)序列及3' AAV ITR序列之核苷酸序列。

在一些具體實例中，本發明提供一種病毒載體，其包含編碼核纖層蛋白A多肽及核纖層蛋白C多肽或其生物活性變異體及/或片段之核苷酸序列，其中該核苷酸序列至少包含野生型人類LMNA 基因之內含子8或內含子11。在一些具體實例中，本發明提供一種包含核苷酸序列之病毒載體，該核苷酸序列編碼：(a)野生型LMNA 基因之外顯子1至12；及(b)野生型LMNA 基因之內含子8。在一些具體實例中，本發明提供一種包含核苷酸序列之病毒載體，該核苷酸序列編碼：(a)野生型LMNA 基因之外顯子1至12；及(b)野生型LMNA 基因之內含子11。在一些具體實例中，本發明提供一種包含核苷酸序列之病毒載體，該核苷酸序列編碼：(a)野生型LMNA 基因之外顯子1至12；及(b)野生型LMNA 基因之內含子8及內含子11。在一些具體實例中，核苷酸序列進一步編碼野生型LMNA 基因之內含子9及10中之一或多者。在一些具體實例中，本發明提供一種包含核苷酸序列之病毒載體，該核苷酸序列編碼：(a)野生型LMNA 基因之外顯子1至12；及(b)野生型LMNA 基因之內含子8至11。在一些具體實例中，核苷酸序列與SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 8之核苷酸序列或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少80%一致。在一些具體實例中，核苷酸序列與SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 8之核苷酸序列或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少90%一致。在一些具體實例中，核苷酸序列與SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 8之核苷酸序列或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少95%一致。在一些具體實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 8之序列或其密碼子最佳化變異體及/或片段。在一些具體實例中，核苷酸序列編碼：a)具有與SEQ ID NO: 12之胺基酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列之核纖層蛋白A多肽及b)具有與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列之核纖層蛋白C多肽。在一些具體實例中，核苷酸序列編碼：a)具有與SEQ ID NO: 21之胺基酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列之核纖層蛋白A多肽及b)具有與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列之核纖層蛋白C多肽。在一些具體實例中，核苷酸序列編碼具有SEQ ID NO: 12至19或21中之任一者或多者之胺基酸序列的多肽。在一些具體實例中，核苷酸序列不包含與野生型LMNA基因之內含子1至7對應的核苷酸序列。在一些具體實例中，核苷酸序列可操作地連接至調節元件。在一些具體實例中，核苷酸序列可操作地連接至具有少於500 bp之調節元件。在一些具體實例中，核苷酸序列可操作地連接至具有少於900 bp之調節元件。在一些具體實例中，核苷酸序列可操作地連接至具有少於或等於800 bp、700 bp、600 bp、500 bp、400 bp、300 bp、250 bp、200 bp、150 bp、140 bp、130 bp、120 bp、110 bp、100 bp、70 bp或50 bp之調節元件。在一些具體實例中，調節元件為以下者中之任一者或其組合：SEQ ID NO: 30至58中之任一者、SEQ ID NO: 102、CBA、CMV、SCP、SERpE_TTR、Proto1、minCMV、UCL-HLP、CMVe、Myh6、肌間線蛋白、cTnT、α-MHC、MLC-2、CAG或EFS。在一些具體實例中，調節元件為SEQ ID NO: 31、SEQ ID NO: 33、CBA或minCMV中之任一者或其組合。在一些具體實例中，調節元件為SEQ ID NO: 33。在一些具體實例中，調節元件為CBA。在一些具體實例中，調節元件為minCMV。在一些具體實例中，調節元件為細胞類型選擇性的。在一些具體實例中，調節元件在神經元細胞、視網膜細胞、腎細胞、骨胳肌細胞、脂肪細胞或心肌細胞中選擇性表達。在一些具體實例中，調節元件在心肌細胞中選擇性表達。在一些具體實例中，調節元件為Myh6、肌間線蛋白、cTnT、α-MHC或MLC-2中之任一者或其組合。在一些具體實例中，調節元件為cTNT。在一些具體實例中，cTNT調節元件包含SEQ ID NO: 101。在一些具體實例中，核苷酸序列進一步包含多腺苷酸化信號。在一些具體實例中，病毒載體為腺相關病毒(AAV)載體。在一些具體實例中，AAV載體為AAV1、AAV2、AAV5、AAV6、AAV8、AAV9、scAAV1、scAAV2、scAAV5、scAAV6、scAAV8或scAAV9。在一些具體實例中，核苷酸序列進一步包含5' AAV反向末端重複(ITR)序列及3' AAV ITR序列。

在一些具體實例中，本發明提供一種病毒顆粒，其包含如本文所提供之病毒載體中之任一者。在某些具體實例中，病毒顆粒包含AAV之殼體蛋白。在某些具體實例中，AAV之殼體蛋白為AAV6或AAV9。

在一些具體實例中，本發明提供一種宿主細胞，其包含如本文所提供之核酸構築體、病毒載體或病毒顆粒中之任一者。

在一些具體實例中，本發明提供醫藥組成物，其包含如本文所提供之核酸構築體、病毒載體、病毒顆粒或宿主細胞中之任一者；及一或多種醫藥學上可接受之賦形劑。

在一些具體實例中，本發明提供一種用於治療個體中之核纖層病的方法，其包含向有需要之個體投予治療有效量之如本文所提供的核酸構築體、病毒載體、病毒顆粒、宿主細胞或醫藥組成物中之任一者。

在一些具體實例中，本發明提供一種用於在個體中表現(a)核纖層蛋白A多肽、(b)核纖層蛋白C多肽或(c)核纖層蛋白A多肽及核纖層蛋白C多肽或(a)-(c)中之任一者的生物活性變異體及/或片段之方法，其包含向該個體投予治療有效量之如本文所提供的核酸構築體、病毒載體、病毒顆粒、宿主細胞或醫藥組成物中之任一者。

在一些具體實例中，本發明提供一種用於增加個體中之(a)功能性核纖層蛋白A多肽、(b)功能性核纖層蛋白C多肽或(c)功能性核纖層蛋白A多肽及功能性核纖層蛋白C多肽或(a)-(c)中之任一者的生物活性變異體及/或片段之表現的方法，其包含向該個體投予治療有效量之如本文所提供的核酸構築體、病毒載體、病毒顆粒、宿主細胞或醫藥組成物中之任一者。

在某些具體實例中，根據本文所揭示之方法中之任一者治療的個體患有核纖層病。在某些具體實例中，核纖層病為以下者中之任一者或多者：恰克-馬利-杜斯氏病(Charcot-Marie-Tooth disease)、埃默里-德雷弗斯氏肌肉萎縮症(Emery-Dreifuss muscular dystrophy)、家族性部分脂質營養不良、哈欽森-吉爾福德氏早年衰老症候群(Hutchinson-Gilford progeria syndrome)、肢帶型肌肉萎縮症、LMNA相關先天性肌肉萎縮症、下頜末端（mandibuloacral）發育不良、心律失常性（arrhythmogenic）右心室心肌病、家族性心房微顫、左心室緻密化不全（noncompaction）或擴張型心肌症。在某些具體實例中，核纖層病為擴張型心肌症。在某些具體實例中，將本文所提供的核酸構築體、病毒載體、病毒顆粒、宿主細胞或醫藥組成物中之任一者經心肌內、靜脈內、肌內、鞘內、皮下、全身性或局部投予至心肌中。在某些具體實例中，將本文所提供的核酸構築體、病毒載體、病毒顆粒、宿主細胞或醫藥組成物中之任一者經靜脈內或全身性投予。

核纖層蛋白A及核纖層蛋白C為纖維核薄層(位於核包膜之內膜與DNA之間的複合分子介面)之組成性組分。核纖層蛋白A及核纖層蛋白C具有在機械核膜維持至基因調節範圍內之不同生理作用。藉由常用替代性剪接LMNA 基因編碼至少三種同功型(核纖層蛋白A、核纖層蛋白C及核纖層蛋白A△10)。LMNA 含有十二個外顯子，其藉由外顯子10之替代性剪接產生核纖層蛋白C及前核纖層蛋白A (成熟核纖層蛋白A之前體)之轉錄物。兩種同功型之前566個胺基酸(由外顯子1至10編碼)相同，但其羧基末端序列相異。前核纖層蛋白A在C末端處含有額外98個特有胺基酸(由外顯子11至12編碼)，而核纖層蛋白C以外顯子10序列終止且具有6個獨特C末端胺基酸。前核纖層蛋白A經處理以形成核纖層蛋白A，一種646個胺基酸長蛋白。同時，核纖層蛋白C由572個胺基酸組成。

人類中之LMNA 突變引起多種疾病，包括心肌病、肌肉萎縮症及早老症。已識別超過500種致病突變，其中一些引起諸如擴張型心肌症之疾病。擴張型心肌症之特徵在於左心室或兩個心室之擴張及減弱的收縮以及減弱的收縮性功能。擴張型心肌症之發生率在1:2500名個體至1:250名個體範圍內。儘管為罕見疾病，擴張型心肌症表現出嚴重的健康負荷，通常引起心律不齊、血栓栓塞及在疾病之任何階段的猝死。截至2014年，已在LMNA 基因中識別出165種擴張型心肌症相關突變(Tesson F. Cardiol J. 2014;21(4):331-42)。此等突變包括誤義/無意義突變、剪接突變、少量缺失、少量插入、少量插入缺失、總體缺失或總體插入。大部分引起擴張型心肌症之LMNA 突變為存在於整個基因中的產生突變核纖層蛋白A/C蛋白之常染色體顯性誤義突變。

本發明涵蓋用於治療、預防或抑制擴張型心肌症及其他核纖層病之組成物及方法。在一個態樣中，本發明提供一種包含核苷酸序列之病毒載體、病毒顆粒、宿主細胞或醫藥組成物，該核苷酸序列編碼(a)核纖層蛋白A多肽；(b)核纖層蛋白C多肽；(c)核纖層蛋白A及核纖層蛋白C多肽；或前述任一者之密碼子最佳化變異體及/或片段。在一個態樣中，本發明提供一種包含核苷酸序列之病毒載體、病毒顆粒、宿主細胞或醫藥組成物，該核苷酸序列編碼(a)核纖層蛋白A多肽之生物活性片段；(b)核纖層蛋白C多肽之生物活性片段；(c)核纖層蛋白A之生物活性片段及核纖層蛋白C多肽之生物活性片段；或前述任一者之密碼子最佳化變異體及/或片段。在另一態樣中，本發明提供一種核酸，其包含可操作地連接至以下者中之任一者或組合的核苷酸序列：SEQ ID NO: 31、SEQ ID NO: 33、CBA及/或minCMV，該核苷酸序列編碼(a)核纖層蛋白A多肽；(b)核纖層蛋白C多肽；(c)核纖層蛋白A多肽及核纖層蛋白C多肽或其密碼子最佳化變異體及/或其片段。在另一態樣中，本發明提供一種核酸，其包含可操作地連接至以下者中之任一者或組合的核苷酸序列：SEQ ID NO: 31、SEQ ID NO: 33、CBA及/或minCMV，該核苷酸序列編碼(a)核纖層蛋白A多肽之生物活性片段；(b)核纖層蛋白C多肽之生物活性片段；(c)核纖層蛋白A多肽之生物活性片段及核纖層蛋白C多肽之生物活性片段或其密碼子最佳化變異體及/或其片段。在另一具體實例中，本發明提供一種用於治療個體中之核纖層病的方法，其包含投予本文所揭示之核酸、病毒載體、病毒顆粒、宿主細胞或醫藥組成物中任一者之一或多者。

使用本文所提供之核酸、病毒載體、病毒顆粒、宿主細胞、醫藥組成物及方法可治療或預防廣泛多種核纖層病。使用本發明之核酸、病毒載體、病毒顆粒、宿主細胞、醫藥組成物及方法可治療或預防之核纖層病包括(但不限於)恰克-馬利-杜斯氏病、埃默里-德雷弗斯氏肌肉萎縮症、家族性部分脂質營養不良、哈欽森-吉爾福德氏早年衰老症候群、肢帶型肌肉萎縮症、LMNA相關先天性肌肉萎縮症、下頜末端發育不良、致心律不整型右心室心肌病、家族性心房微顫、左心室緻密化不全及擴張型心肌症。A. 通用技術

除非本文中另外定義，否則本文中所列舉之科學及技術術語應具有所屬技術領域中具有通常知識者通常所理解之含義。一般而言，與本文所述之藥理學、細胞及組織培養、分子生物學、細胞及癌症生物學、神經生物學、神經化學、病毒學、免疫學、微生物學、遺傳學及蛋白及核酸化學結合使用之命名法及其技術為所屬領域中熟知且常用者。在有衝突之情況下，將以本說明書(包括定義)為準。

除非另有指示，否則本發明之實踐將採用分子生物學(包括重組技術)、微生物學、細胞生物學、生物化學及免疫學之習知技術，其完全處於所屬技術領域之範圍內。此類技術完整解釋於以下文獻中，諸如Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 第二版(Sambrook等人, 1989) Cold Spring Harbor Press；Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait編, 1984)；Methods in Molecular Biology, Humana Press；Cell Biology: A Laboratory Notebook (J.E. Cellis編, 1998) Academic Press；Animal Cell Culture (R.I. Freshney編, 1987)；Introduction to Cell and Tissue Culture (J.P. Mather及P.E. Roberts, 1998) Plenum Press；Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B. Griffiths及D.G. Newell編, 1993-1998) J. Wiley and Sons；Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.)；Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M. Miller及M.P. Calos編, 1987)；Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel等人編, 1987)；PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis等人編, 1994)；Sambrook及Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual,第3版, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (2001)；Ausubel等人, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (2002)；Harlow及Lane Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1998)；Coligan等人, Short Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY (2003)；Short Protocols in Molecular Biology (Wile及Sons, 1999)。

酶促反應及純化技術係根據製造商之說明書如所屬領域中通常所實行或如本文所描述執行。本文所述之與分析化學、生物化學、免疫學、分子生物學、合成有機化學、及醫學及醫藥化學結合使用之命名法、及其實驗室程序及技術為所屬領域中熟知且常用者。標準技術係用於化學合成及化學分析。B. 定義

在本說明書及具體實例通篇中，措詞「包含(comprise)」或諸如「包含(comprises)」或「包含(comprising)」之變體應理解為暗示包括所述整數或整數群但不排除任何其他整數或整數群。

應理解在本文中描述的任何地方之具體實例皆用語言「包含」描述，或亦提供用術語「由組成」及/或「基本上由組成」所描述之類似具體實例。

術語「包括」用以意謂「包括(但不限於)」。「包括」及「包括(但不限於)」可互換使用。

在術語「例如(e.g./for example)」之後的任何實例並不意謂為窮盡性或限制性的。

除非另外為情形所需，否則單數術語應包括複數且複數術語應包括單數。

藉助於實例，「元件」意謂一種元件或大於一種元件。

儘管闡述本發明之廣泛範圍之數值範圍及參數為近似值，但具體實例中所闡述之數值儘可能精確地報導。然而，任何數值均固有地含有因其對應測試量測值中發現之標準差所必然引起的某些誤差。此外，本文中所揭示之所有範圍應理解為涵蓋任何及所有其中所包含之子範圍。舉例而言，「1至10」之陳述範圍應視為包括最小值1與最大值10之間(且包括)的任何及所有子範圍；亦即，以最小值1或更大(例如1至6.1)開始且以最大值10或更小(例如5.5至10)結束之所有子範圍。

在本發明之態樣或具體實例根據馬庫西群組(Markush group)或其他替代群組描述的情況下，本發明不僅涵蓋整體列出之整個群組，而且亦單獨地涵蓋群組之每一成員及主群組之所有可能子群，且亦涵蓋缺乏一或多個群組成員之主群組。本發明亦設想明確排除本發明中之群組成員中任一者之一或多者。

如本文所使用，除非上下文另外清楚地指示，否則單數形式「一(a/an)」及「該」意欲亦包括複數形式。此外，就實施方式及/或申請專利範圍中使用的術語「包括(including)」、「包括(includes)」、「具有(having)」、「具有(has)」、「具有(with)」或其變化形式之程度而言，此類術語意欲以類似於術語「包含」之方式為包括性的。

除非另有指示，否則術語「核纖層蛋白A」在本文中用以指前核纖層蛋白A多肽及/或成熟核纖層蛋白A多肽。術語涵蓋藉由前核纖層蛋白A之轉譯後修飾(例如自前核纖層蛋白A之羧基末端移除18個胺基酸以形成成熟核纖層蛋白A)所形成的所有核纖層蛋白A多肽。術語包括所有生物活性核纖層蛋白A蛋白、其片段或變異體。

術語「AAV」為腺相關病毒之縮寫，且可用於指代病毒自身或其衍生物。除非另有要求，否則該術語涵蓋所有血清型、亞型以及天然存在及重組形式兩者。縮寫「rAAV」係指重組腺相關病毒。術語「AAV」包括AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、rh10及其雜合體，禽類AAV、牛類AAV、犬類AAV、馬類AAV、靈長類AAV、非靈長類AAV及綿羊類AAV。AAV之各種血清型的基因組序列，以及自然末端重複序列(TR)之序列、Rep蛋白及殼體子單元之序列為所屬領域中已知的。此類序列可發現於文獻中或諸如GenBank之公共資料庫中。如本文所用之「rAAV載體」係指包含不屬於AAV來源之多核苷酸序列(亦即與AAV異源之多核苷酸)的AAV載體，典型地為用於細胞之遺傳轉化的所關注序列。一般而言，異源多核苷酸係藉由至少一個，且一般藉由兩個AAV反向末端重複序列(ITR)側接。ITR序列為所屬領域中很好理解之術語且係指發現於反向中之病毒基因組的末端處之相對短的序列。rAAV載體可為單股(ssAAV)或自補的(scAAV)。「AAV病毒」或「AAV病毒顆粒」係指由至少一個AAV殼體蛋白及殼體化多核苷酸rAAV載體組成之病毒顆粒。若顆粒包含異源多核苷酸(亦即除野生型AAV基因組，諸如待遞送至哺乳動物細胞之轉殖基因以外的多核苷酸)，則其典型地稱為「rAAV病毒顆粒」或簡稱為「rAAV顆粒」。

術語「約(about)」或「大致(approximately)」意謂在如由所屬領域中具有通常知識者所測定之特定值之可接受誤差範圍內，其將部分取決於如何量測或測定該值，亦即量測系統之限制。舉例而言，根據所屬領域中之實踐，「約」可意謂在一個或大於一個標準差之範圍內。或者，「約」可意謂高於或低於既定值至多20%、至多15%、至多10%、至多5%或至多1%之範圍。

術語「測定(determining)」、「量測(measuring)」、「估量(evaluating)」、「評估(assessing)」、「檢定(assaying)」、「分析(analyzing)」及其文法等效者在本文中可互換使用以指任何量測形式，且包括確定元件是否存在(例如偵測)。此等術語可包括定量及/或定性測定兩者。評估可為相對或絕對的。

「表現卡匣」係指包含一或多種可操作地連接至編碼序列(例如基因)之調節元件的用於表現之核分子。

術語「有效量」或「治療有效量」係指足以影響如下文所定義之預期應用，包括(但不限於)疾病治療的本文所述之組成物之量。治療有效量可根據預期治療應用(於細胞中或活體內)，或所治療之個體及疾病病況(例如個體之體重及年齡、疾病病況之嚴重程度)，投予方式及類似者而改變，其可由所屬領域中具有通常知識者容易地確定。該術語亦適用於將在目標細胞中誘導特定反應之劑量。具體劑量將取決於選擇之特定組成物、待遵循之給藥方案、其是否與其他化合物組合投予、投予時序、其所投予之組織及運載其之物理遞送系統而變化。

核苷酸或肽序列之「片段」係指短於全長或參考DNA或蛋白序列之序列片段。

當提及諸如蛋白、多肽、核酸及/或多核苷酸之分子時如本文所用之術語「生物活性」意謂分子保持至少一個實質上與全長或參考蛋白、多肽、核酸及/或多核苷酸之生物活性類似的生物活性(功能性或結構性)。舉例而言，「生物活性」核纖層蛋白A或核纖層蛋白C蛋白或其片段或變異體將保留至少一個實質上分別與全長或參考野生型核纖層蛋白A或核纖層蛋白C蛋白類似的活性。

術語「宿主細胞」、「宿主細胞系」及「宿主細胞培養物」可互換使用且係指已引入外源核酸之細胞，包括此類細胞之後代。宿主細胞包括「轉型體」及「經轉型細胞」，其包括初級經轉型細胞及由其衍生之後代，不考慮繼代之數目。後代之核酸含量與母細胞可能不完全相同，但可能含有突變。本文包括與針對最初轉型細胞所篩選或選擇的具有相同功能或生物活性之突變型後代。

如本文所用之術語「人類衍生之」係指發現於人類基因組(或人類基因組建構)中之序列或與其同源的序列。同源序列可為具有與人類基因組之區域相比有至少80%序列一致性(例如如藉由BLAST所量測)之區域的序列。舉例而言，與人類序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致性的序列視為人類衍生的。在一些情況下，調節元件含有人類衍生序列及非人類衍生序列以使得整個調節元件與人類基因組序列具有低一致性，而調節元件之一部分與人類基因組中之序列具有100%序列一致性(或局部序列一致性)。

術語「試管內」係指發生於個體體外之事件。舉例而言，試管內檢定涵蓋個體體外之任何檢定操作。試管內檢定涵蓋基於細胞之檢定，其中採用存活或死亡細胞。試管內檢定亦涵蓋無細胞檢定，其中不採用完整細胞。

術語「活體內」係指發生於個體體內的事件。

「經分離」核酸係指已與其天然環境之組分分離的核酸分子。經分離核酸包括通常含有核酸分子之細胞中所含的核酸分子，但該核酸分子存在於染色體外，存在於不同於其天然染色體位置之染色體位置處，或僅含有編碼序列。

如本文所用，「可操作地連接(operably linked)」、「可操作連接(operable linkage)」、「可操作地連接(operatively linked)」或其文法等效者係指基因元件，例如啟動子、增強子、多腺苷酸化序列等的併接，其中元件呈允許其以預期方式操作之關係。舉例而言，若調節元件幫助引發編碼序列之轉錄，則調節元件(其可包含啟動子及/或強化子序列)可操作地連接至編碼區。在調節元件與編碼區之間可存在中間殘基，只要維持此功能關係即可。

「醫藥學上可接受之載劑」係指醫藥調配物或組成物中除活性成分外之對個體無毒的成分。醫藥學上可接受之載劑包括(但不限於)緩衝劑、賦形劑、穩定劑或防腐劑。

術語「醫藥調配物」或「醫藥組成物」係指呈准許其中所含活性成分之生物活性有效的形式，且不含有對調配物將投予之個體有不可接受毒性之額外組分的製劑。

術語「調節元件」係指能夠影響(例如增加、減少或調整)可操作地連接的序列(諸如基因)之表現的核酸序列或基因元件。調節元件包括(但不限於)啟動子、強化子、抑制子、靜止子、絕緣子序列、內含子、UTR反向末端重複(ITR)序列、長末端重複序列序列(LTR)、穩定性元件、轉譯後反應元件或polyA序列或其組合。調節元件可在DNA及/或RNA水平下，例如藉由調整轉錄階段、轉錄後階段之基因表現或轉譯階段之基因表現；藉由調整翻譯水平(例如穩定用於翻譯之mRNA的穩定性元件)、RNA裂解、RNA剪接、及/或轉錄終止；藉由向增加基因表現之編碼區補充轉錄因子；藉由提高產生RNA轉錄物之速率、提高產生RNA之穩定性及/或提高蛋白自RNA轉錄物合成之速率；及/或藉由防止RNA分解及/或提高其穩定性以促進蛋白合成來起作用。在一些具體實例中，調節元件係指強化子、抑制子、啟動子或其組合，尤其強化子加啟動子組合或抑制子加啟動子組合。在一些具體實例中，調節元件衍生自人類序列。

術語「個體(subject)」及「個體(individual)」在本文中可互換使用以指脊椎動物，較佳為哺乳動物，更佳為人類。本文所描述之方法可適用於人類治療學、獸醫學應用及/或疾病或病況之動物模型中的臨床前研究。

如本文所用，術語「治療(treat/treatment)」、「療法」及類似者係指獲得所需藥理學及/或生理學功效，包括(但不限於)緩解、延緩或減緩進展；減少影響或症狀；預防發作；預防復發；抑制、減輕疾病或病症之發作；獲得關於疾病、病症或醫學病況的有益或所需結果，諸如治療效益及/或預防效益。如本文所用之「治療」涵蓋對哺乳動物，尤其人類之疾病的任何治療，且包括：(a)防止疾病出現於易患有疾病或處於獲得疾病之風險下但尚未診斷患有該疾病之個體中；(b)抑制疾病，亦即遏制其發展；及(c)緩解疾病，亦即促使疾病消退。治療效益包括根除或改善所治療之潛在病症。而且，經由根除或改善與潛在病症相關之一或多種生理症狀來達成治療益處，從而觀測到個體之改善，儘管該個體仍可能罹患潛在病症。在一些情況下，為了預防效益，向處於罹患特定疾病風險下之個體，或向報告疾病之生理症狀中的一或多者，即使尚未得到此疾病之診斷的個體投予組成物。本發明之方法可用於任何哺乳動物。在一些情況下，治療可引起症狀之減少或停止。預防性功效包括延緩或消除疾病或病況之出現；延緩或消除疾病或病況之症狀發作；減緩、阻止或逆轉疾病或病況之進展；或其任何組合。

核苷酸序列之「變異體」係指與最常見野生型DNA序列(例如藉由GenBank存取編號提及之cDNA或序列)或指定參考序列相比具有基因改變或突變的序列。

如本文所用之「載體」係指一種核酸分子，其可用於在可複製或表現其處介導與其連接的另一核酸分子遞送至細胞中。該術語包括呈自我複製核酸結構之載體以及併入至已引入其之宿主細胞之基因組中的載體。某些載體能夠導引可操作地連接其之核酸的表現。此類載體在本文中稱為「表現載體」。載體之其他實例包括質體及病毒載體。

一般而言，「序列一致性」或「序列同源性」可互換使用，分別指兩個多核苷酸或多肽序列之精確的核苷酸與核苷酸或胺基酸與胺基酸對應性。兩個或兩個以上序列(多核苷酸或胺基酸)可藉由測定其「一致性百分比」，亦稱為「同源性百分比」來比較。與參考序列(例如核酸或胺基酸序列)之一致性百分比可計算為兩個最佳比對序列之間精確相配物之數目除以參考序列的長度且乘以100。當為了序列一致性測定相配物之數目時未將保守取代視為相配物。應瞭解，當第一序列(A)之長度不等於第二序列(B)之長度時，A:B序列之一致性百分比將不同於B:A序列之一致性百分比。序列比對(諸如出於評估一致性百分比之目的)可由任何適合之比對算法或程式執行，包括(但不限於)尼德曼-翁施算法(Needleman-Wunsch algorithm) (參見例如可於全球資訊網ebi.ac.uk/Tools/psa/emboss_needle/上獲得的EMBOSS Needle比對器)、BLAST算法(參見例如可於全球資訊網blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi上獲得的BLAST比對工具)、史密斯-沃特曼算法(Smith-Waterman algorithm) (參見例如可於全球資訊網ebi.ac.uk/Tools/psa/emboss_water/上獲得的EMBOSS Water比對器)及Clustal Omega比對程式(參見例如全球資訊網clustal.org/omega/及F. Sievers等人, Mol Sys Biol. 7: 539 (2011))。最佳比對可使用所選算法之任何適合之參數，包括預設參數來評估。BLAST程式係基於Karlin及Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-2268 (1990)之比對方法及如Altschul等人, J. Mol. Biol. 215:403-410 (1990)；Karlin及Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877 (1993)；及Altschul等人, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402 (1997)中所論述之比對方法。

除非另有指示，否則本文所用之所有術語具有其對於所屬技術領域中具有知識者所意味之相同含義且本發明之實踐將採用分子生物學、微生物學及重組DNA技術之習知技術，其在所屬技術領域中具有知識者之知識內。C. 核酸構築體 1. 核纖層蛋白構築體

本文提供核酸構築體，其包含編碼核纖層蛋白A、核纖層蛋白C、核纖層蛋白A及核纖層蛋白C (或其生物活性變異體或片段)或其密碼子最佳化變異體及/或片段之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含編碼核纖層蛋白A (或其生物活性變異體或片段)或其密碼子最佳化變異體及/或片段之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含編碼核纖層蛋白C (或其生物活性變異體或片段)或其密碼子最佳化變異體及/或片段之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含編碼核纖層蛋白A及核纖層蛋白C兩者(或其生物活性變異體或片段)或其密碼子最佳化變異體及/或片段之核苷酸序列。

在一些具體實例中，核酸構築體包含可操作地連接至調節元件轉殖基因，其中該轉殖基因編碼(a)核纖層蛋白A (或其生物活性變異體或片段)；(b)核纖層蛋白C (或其生物活性變異體或片段)；(c)核纖層蛋白A及核纖層蛋白C兩者(或其生物活性變異體或片段)或其密碼子最佳化變異體及/或片段。在某些具體實例中，轉殖基因包含編碼核纖層蛋白A (或其生物活性變異體或片段)或其密碼子最佳化變異體及/或片段之核苷酸序列。在某些具體實例中，轉殖基因包含編碼核纖層蛋白C (或其生物活性變異體或片段)或其密碼子最佳化變異體及/或片段之核苷酸序列。在某些具體實例中，轉殖基因包含編碼核纖層蛋白A及核纖層蛋白C兩者(或其生物活性變異體或片段)或其密碼子最佳化變異體及/或片段之核苷酸序列。

在一些情況下，核酸構築體包含核酸，該核酸編碼以准許轉殖基因在目標細胞(例如心肌細胞(cardiomyocyte)或心肌細胞(myocardiocyte)，該等術語在本文中可互換使用)中之轉錄、翻譯及/或表現的方式可操作地連接至調節組件的序列。轉殖基因(異源核酸序列)可衍生自任何生物體。在某些具體實例中，轉殖基因衍生自人類。在某些具體實例中，轉殖基因編碼核纖層蛋白A (或其生物活性變異體或片段)之成熟形式。在某些具體實例中，轉殖基因編碼前核纖層蛋白A (或其生物活性變異體或片段)。在某些具體實例中，轉殖基因編碼核纖層蛋白C (或其生物活性變異體或片段)。在某些具體實例中，轉殖基因編碼核纖層蛋白A及核纖層蛋白C兩者(或其生物活性變異體或片段)。在某些具體實例中，轉殖基因編碼前核纖層蛋白A及核纖層蛋白C兩者(或其生物活性變異體或片段)。在一些具體實例中，轉殖基因編碼一種多肽，該多肽包含與SEQ ID NO: 12之胺基酸序列或其生物活性片段至少60%、65%、70%、75%、80%、82%、85%、87%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列。在一些具體實例中，轉殖基因編碼一種多肽，該多肽包含與SEQ ID NO: 21之胺基酸序列或其生物活性片段至少60%、65%、70%、75%、80%、82%、85%、87%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列。在一些具體實例中，轉殖基因編碼一種多肽，該多肽包含與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列或其生物活性片段至少60%、65%、70%、75%、80%、82%、85%、87%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列。

在某些具體實例中，核酸構築體可包含一或多種轉殖基因。在一些具體實例中，轉殖基因包含多於一種LMNA 剪接變異體(例如核纖層蛋白A及核纖層蛋白C兩者)或衍生自多於一種LMNA 剪接變異體之片段。此可使用攜帶兩個或兩個以上異源序列之單一核酸構築體或使用攜帶編碼兩個或兩個以上LMNA 剪接變異體(例如核纖層蛋白A及核纖層蛋白C)之單一序列的單一核酸構築體來實行。在一些具體實例中，轉殖基因包含僅一種LMNA 剪接變異體(例如核纖層蛋白A或核纖層蛋白C)或衍生自一種LMNA 剪接變異體之片段。預期兩個或兩個以上各自攜帶一或多種編碼至少一種LMNA 剪接變異體之異源序列的核酸構築體可分開或一起使用(例如在相同或不同病毒載體中)。在一些具體實例中，除LMNA 基因、其剪接變異體或片段以外，核酸構築體亦可編碼另外的蛋白、肽、RNA、酶或催化性RNA。

在某些具體實例中，本文所揭示之核酸構築體中之任一者包含編碼野生型LMNA基因(例如SEQ ID NO: 81至93)的外顯子1至12及野生型LMNA基因(例如SEQ ID NO: 77至80)之內含子8至11。在某些具體實例中，核酸構築體包含編碼野生型LMNA 基因(例如SEQ ID NO: 81至93)之外顯子1至12及野生型LMNA 基因(例如SEQ ID NO: 78及79)之內含子9及10。在某些具體實例中，核酸構築體包含編碼野生型LMNA 基因(例如SEQ ID NO: 81至93)之外顯子1至12及野生型LMNA 基因(例如SEQ ID NO: 79)之內含子10的核苷酸序列。

在某些具體實例中，核酸構築體包含核苷酸序列，該核苷酸序列包含以下、由以下組成或基本上由以下組成：SEQ ID NO: 1至10中之任一者的核酸序列及與前述任一者及前述任一者之片段至少60%、65%、70%、75%、80%、82%、85%、87%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的核酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含核苷酸序列，該核苷酸序列為SEQ ID NO: 1至10中之任一者之序列或其密碼子最佳化變異體及/或片段。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少60%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少65%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少70%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少75%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少80%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少82%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少85%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少87%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少90%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少91%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少92%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少93%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少94%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少95%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少96%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少97%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少98%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少99%一致的核苷酸序列。

在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少100%一致的核苷酸序列。在一些具體實例中，核酸構築體包含與編碼SEQ ID NO: 12或21之多肽序列的SEQ ID NO:1至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列。在一些具體實例中，核酸構築體包含與編碼SEQ ID NO: 12或21之多肽序列的SEQ ID NO: 6至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列。在一些具體實例中，核酸構築體包含與編碼SEQ ID NO: 13之多肽序列的SEQ ID NO:2至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列。在一些具體實例中，核酸構築體包含與編碼SEQ ID NO: 13之多肽序列的SEQ ID NO: 7至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列。在一些具體實例中，核酸構築體包含與編碼SEQ ID NO: 12、13或21中之任一者或多者之多肽序列的SEQ ID NO: 3至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列。在一些具體實例中，核酸構築體包含與編碼SEQ ID NO: 12、13或21中之任一者或多者之多肽序列的SEQ ID NO: 4至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列。在一些具體實例中，核酸構築體包含與編碼SEQ ID NO: 12、13或21中之任一者或多者之多肽序列的SEQ ID NO: 5至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列。在一些具體實例中，核酸構築體包含與編碼SEQ ID NO: 12、13或21中之任一者或多者之多肽序列的SEQ ID NO: 8至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列。在一些具體實例中，核酸構築體包含與編碼SEQ ID NO: 12、13或21中之任一者或多者之多肽序列的SEQ ID NO: 9至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列。在一些具體實例中，核酸構築體包含與編碼SEQ ID NO: 12、13或21中之任一者或多者之多肽序列的SEQ ID NO: 10至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列。

在某些具體實例中，核酸構築體包含核苷酸序列，該核苷酸序列包含以下、由以下組成或基本上由以下組成：SEQ ID NO: 3至5中之任一者的核酸序列及/或與前述任一者及前述任一者之片段至少60%、65%、70%、75%、80%、82%、85%、87%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的核酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含為SEQ ID NO: 3至5中之任一者之序列或其密碼子最佳化變異體及/或片段的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 3至5中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少60%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 3至5中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少65%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 3至5中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少70%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 3至5中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少75%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 3至5中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少80%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 3至5中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少82%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 3至5之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少85%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 3至5中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少87%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 3至5中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少90%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 3至5中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少91%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 3至5中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少92%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 3至5中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少93%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 3至5中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少94%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 3至5中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少95%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 3至5中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少96%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 3至5中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少97%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 3至5中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少98%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 3至5中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少99%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 3至5中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段100%一致的核苷酸序列。

在某些具體實例中，核酸構築體包含核苷酸序列，該核苷酸序列編碼包含SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者的胺基酸序列、由其組成或基本上由其組成之多肽，及與前述任一者至少60%、65%、70%、75%、80%、82%、85%、87%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之多肽。在某些具體實例中，核酸構築體包含編碼SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段的多肽之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含編碼與SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段至少60%一致的多肽之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含編碼與SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段至少65%一致的多肽之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含編碼與SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段至少70%一致的多肽之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含編碼與SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段至少75%一致的多肽之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含編碼與SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段至少80%一致的多肽之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含編碼與SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段至少82%一致的多肽之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含編碼與SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段至少85%一致的多肽之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含編碼與SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段至少87%一致的多肽之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含編碼與SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段至少90%一致的多肽之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含編碼與SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段至少91%一致的多肽之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含編碼與SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段至少92%一致的多肽之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含編碼與SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段至少93%一致的多肽之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含編碼與SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段至少94%一致的多肽之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含編碼與SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段至少95%一致的多肽之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含編碼與SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段至少96%一致的多肽之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含編碼與SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段至少97%一致的多肽之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含編碼與SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段至少98%一致的多肽之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含編碼與SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段至少99%一致的多肽之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含編碼與SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段100%一致的多肽之核苷酸序列。

在某些具體實例中，核酸構築體包含編碼核纖層蛋白A之核苷酸序列，該核纖層蛋白A包含以下、由以下組成或基本上由以下組成：與SEQ ID NO: 12或其生物活性片段至少60%、65%、70%、75%、80%、82%、85%、87%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含編碼核纖層蛋白A之核苷酸序列，該核纖層蛋白A包含以下、由以下組成或基本上由以下組成：與SEQ ID NO: 21或其生物活性片段至少60%、65%、70%、75%、80%、82%、85%、87%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含編碼核纖層蛋白C之核苷酸序列，該核纖層蛋白C包含以下、由以下組成或基本上由以下組成：與SEQ ID NO: 13或其生物活性片段至少60%、65%、70%、75%、80%、82%、85%、87%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含編碼核纖層蛋白A且亦編碼核纖層蛋白C之核苷酸序列，該核纖層蛋白A具有與SEQ ID NO: 12或其生物活性片段至少60%、65%、70%、75%、80%、82%、85%、87%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列，該核纖層蛋白C具有與SEQ ID NO: 13或其生物活性片段至少60%、65%、70%、75%、80%、82%、85%、87%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含編碼核纖層蛋白A且亦編碼核纖層蛋白C之核苷酸序列，該核纖層蛋白A具有與SEQ ID NO: 21或其生物活性片段至少60%、65%、70%、75%、80%、82%、85%、87%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列,該核纖層蛋白C具有與SEQ ID NO: 13或其生物活性片段至少60%、65%、70%、75%、80%、82%、85%、87%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含編碼核纖層蛋白A之核苷酸序列，該核纖層蛋白A包含以下、由以下組成或基本上由以下組成：SEQ ID NO: 12之胺基酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含編碼核纖層蛋白A之核苷酸序列，該核纖層蛋白A包含以下、由以下組成或基本上由以下組成：SEQ ID NO: 21之胺基酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含編碼核纖層蛋白C之核苷酸序列，該核纖層蛋白C包含以下、由以下組成或基本上由以下組成：SEQ ID NO: 13之胺基酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含編碼核纖層蛋白A及核纖層蛋白C之核苷酸序列，該核纖層蛋白A及核纖層蛋白C包含以下、由以下組成或基本上由以下組成：SEQ ID NO: 12及/或13之胺基酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含編碼核纖層蛋白A及核纖層蛋白C之核苷酸序列，該核纖層蛋白A及核纖層蛋白C包含以下、由以下組成或基本上由以下組成：SEQ ID NO: 21及/或13之胺基酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含編碼核纖層蛋白A且亦編碼核纖層蛋白C之核苷酸序列，該核纖層蛋白A具有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列，該核纖層蛋白C具有SEQ ID NO: 13之胺基酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含編碼核纖層蛋白A且亦編碼核纖層蛋白C之核苷酸序列，該核纖層蛋白A具有SEQ ID NO: 21之胺基酸序列，該核纖層蛋白C具有SEQ ID NO: 13之胺基酸序列。

在一些情況下，核酸構築體包含編碼核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C之核苷酸序列，其中該核苷酸序列不包含一或多種、兩種或兩種以上、三種或三種以上、四種或四種以上、五種或五種以上、六種或六種以上、七種或七種以上、八種或八種以上、九種或九種以上、十種或十種以上或十一種或十一種以上來自野生型LMNA 基因的內含子。在某些具體實例中，核酸構築體不包含與野生型LMNA 基因之內含子1至7 (例如SEQ ID NO: 70至76)對應的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體不包含與野生型LMNA 基因之內含子1至8及11 (例如SEQ ID NO: 70至77及80)對應的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體不包含與野生型LMNA 基因之內含子1至9及11 (例如SEQ ID NO: 70至78及80)對應的核苷酸序列。

在一些情況下，核酸構築體包含編碼核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C之核苷酸序列，其中該核苷酸序列包含一或多種、兩種或兩種以上、三種或三種以上、四種或四種以上、五種或五種以上、六種或六種以上、七種或七種以上、八種或八種以上、九種或九種以上、十種或十種以上或十一種或十一種以上的內含子(例如SEQ ID NO: 70至80)。在某些具體實例中，一或多種內含子對應於來自野生型LMNA 基因的內含子，例如野生型人類LMNA 基因。在其他具體實例中，一或多種內含子為合成內含子。在特定具體實例中，一或多種內含子位於核酸構築體中以使得核苷酸序列能夠以剪接依賴性方式編碼核纖層蛋白A及核纖層蛋白C兩者。在特定具體實例中，一或多種內含子位於核酸構築體中以使得前mRNA進行替代性剪接而產生編碼核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C之成熟mRNA。在特定具體實例中，一或多種內含子位於核酸構築體中以使得前mRNA進行替代性剪接而產生比編碼核纖層蛋白A之成熟mRNA多的編碼核纖層蛋白C之成熟mRNA。在特定具體實例中，一或多種內含子位於核酸構築體中以使得前mRNA進行替代性剪接而產生比編碼核纖層蛋白C之成熟mRNA多的編碼核纖層蛋白A之成熟mRNA。在某些具體實例中，一或多種內含子位於核酸構築體中以使得前mRNA進行替代性剪接而產生約相同水平的編碼核纖層蛋白A之成熟mRNA及編碼核纖層蛋白C之成熟mRNA。在某些具體實例中，核酸構築體包含與野生型LMNA 基因之內含子8至11 (例如SEQ ID NO: 77至80)對應的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與野生型LMNA 基因之內含子9及10 (例如SEQ ID NO: 78及79)對應的核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與野生型LMNA 基因之內含子10 (例如SEQ ID NO: 79)對應的核苷酸序列。

在一些具體實例中，核酸構築體包含至少一個(但非所有)野生型人類LMNA 基因之內源性內含子。在一些具體實例中，核酸構築體包含至少一個與野生型人類LMNA 基因之內含子8至11 (例如SEQ ID NO: 77至80)對應的內含子，且缺少至少一個與野生型人類LMNA 基因之內含子1至7 (例如SEQ ID NO: 70至76)對應的內含子。在一些具體實例中，核酸包含與野生型人類LMNA 基因之內含子8至11 (例如SEQ ID NO: 77至80)對應的內含子，且缺少至少一個與野生型人類LMNA 基因之內含子1至7 (例如SEQ ID NO: 70至76)對應的內含子。在一些具體實例中，核酸包含與野生型人類LMNA 基因之內含子8至11 (例如SEQ ID NO: 77至80)對應的內含子，且缺少所有與野生型人類LMNA 基因之內含子1至7 (例如SEQ ID NO: 70至76)對應的內含子。在一些具體實例中，核酸包含與野生型人類LMNA 基因之內含子9至10 (例如SEQ ID NO: 78及79)對應的內含子，且缺少至少一個與野生型人類LMNA 基因之內含子1至7 (例如SEQ ID NO: 70至76)對應的內含子。在一些具體實例中，核酸包含與野生型人類LMNA 基因之內含子9至10 (例如SEQ ID NO: 78及79)對應的內含子，且缺少所有與野生型人類LMNA 基因之內含子1至7 (例如SEQ ID NO: 70至76)對應的內含子。在一些具體實例中，核酸包含與野生型人類LMNA 基因之內含子9至10 (例如SEQ ID NO: 78及79)對應的內含子，且缺少所有與野生型人類LMNA 基因之內含子1至8及11 (例如SEQ ID NO: 70至77及80)對應的內含子。在一些具體實例中，核酸包含與野生型人類LMNA 基因之內含子10 (例如SEQ ID NO: 79)對應的內含子，且缺少至少一個與野生型人類LMNA 基因之內含子1至7 (例如SEQ ID NO: 70至76)對應的內含子。在一些具體實例中，核酸包含與野生型人類LMNA 基因之內含子10 (例如SEQ ID NO: 79)對應的內含子，且缺少所有與野生型人類LMNA 基因之內含子1至7 (例如SEQ ID NO: 70至76)對應的內含子。在一些具體實例中，核酸包含與野生型人類LMNA 基因之內含子10 (例如SEQ ID NO:79)對應的內含子，且缺少所有與野生型人類LMNA 基因之內含子1至9及11 (例如SEQ ID NO: 70至78及80)對應的內含子。在一些具體實例中，與野生型人類LMNA 基因之內含子8對應的內含子包含與SEQ ID NO: 77至少60%、65%、70%、75%、80%、82%、85%、87%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列或其片段。在一些具體實例中，與野生型人類LMNA 基因之內含子9對應的內含子包含與SEQ ID NO: 78至少60%、65%、70%、75%、80%、82%、85%、87%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列或其片段。在一些具體實例中，與野生型人類LMNA 基因之內含子10對應的內含子包含與SEQ ID NO: 79至少60%、65%、70%、75%、80%、82%、85%、87%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列或其片段。在一些具體實例中，與野生型人類LMNA 基因之內含子11對應的內含子包含與SEQ ID NO: 80至少60%、65%、70%、75%、80%、82%、85%、87%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列或其片段。

在一些情況下，核酸構築體包含編碼核纖層蛋白A (或其生物活性片段或變異體)及/或核纖層蛋白C (或其生物活性片段或變異體)之核苷酸序列，其中該核苷酸序列包含野生型LMNA基因之內含子8。在一些情況下，核酸構築體包含編碼核纖層蛋白A (或其生物活性片段或變異體)及/或核纖層蛋白C (或其生物活性片段或變異體)之核苷酸序列，其中該核苷酸序列包含野生型LMNA基因之內含子9。在一些情況下，核酸構築體包含編碼核纖層蛋白A (或其生物活性片段或變異體)及/或核纖層蛋白C (或其生物活性片段或變異體)之核苷酸序列，其中該核苷酸序列包含野生型LMNA基因之內含子10。在一些情況下，核酸構築體包含編碼核纖層蛋白A (或其生物活性片段或變異體)及/或核纖層蛋白C (或其生物活性片段或變異體)之核苷酸序列，其中該核苷酸序列包含野生型LMNA基因之內含子11。在一些情況下，核酸構築體包含編碼核纖層蛋白A (或其生物活性片段或變異體)及/或核纖層蛋白C (或其生物活性片段或變異體)之核苷酸序列，其中該核苷酸序列包含野生型LMNA基因之內含子9及10。在一些情況下，核酸構築體包含編碼核纖層蛋白A (或其生物活性片段或變異體)及/或核纖層蛋白C (或其生物活性片段或變異體)之核苷酸序列，其中該核苷酸序列包含野生型LMNA基因之內含子8、9、10及11。

在某些具體實例中，核酸構築體包含有包含以下、由以下組成或基本上由以下組成之核苷酸序列：SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者的核酸序列及與前述中之任一者或多者至少60%、65%、70%、75%、80%、82%、85%、87%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的核酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含核苷酸序列，該核苷酸序列為SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者的序列或其生物活性變異體及/或片段。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者或其生物活性變異體及/或片段至少60%一致之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者或其生物活性變異體及/或片段至少65%一致之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者或其生物活性變異體及/或片段至少70%一致之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者或其生物活性變異體及/或片段至少75%一致之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者或其生物活性變異體及/或片段至少80%一致之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者或其生物活性變異體及/或片段至少82%一致之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者或其生物活性變異體及/或片段至少85%一致之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者或其生物活性變異體及/或片段至少87%一致之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者或其生物活性變異體及/或片段至少90%一致之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者或其生物活性變異體及/或片段至少91%一致之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者或其生物活性變異體及/或片段至少92%一致之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者或其生物活性變異體及/或片段至少93%一致之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者或其生物活性變異體及/或片段至少94%一致之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者或其生物活性變異體及/或片段至少95%一致之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者或其生物活性變異體及/或片段至少96%一致之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者或其生物活性變異體及/或片段至少97%一致之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者或其生物活性變異體及/或片段至少98%一致之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者或其生物活性變異體及/或片段至少99%一致之核苷酸序列。在某些具體實例中，核酸構築體包含與SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者或其生物活性變異體及/或片段100%一致之核苷酸序列。

在一些具體實例中，本發明之轉殖基因包含此等序列之變異體，其中此類變異體可包括誤義突變、無意義突變、重複、缺失及/或添加。在一些具體實例中，變異體包含與SEQ ID NO: 3中所闡述之特定核酸序列至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少82%、至少85%、至少87%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之多核苷酸序列。在一些具體實例中，變異體包含與SEQ ID NO: 4中所闡述之特定核酸序列至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少82%、至少85%、至少87%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之多核苷酸序列。在一些具體實例中，變異體包含與SEQ ID NO: 5中所闡述之特定核酸序列至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少82%、至少85%、至少87%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之多核苷酸序列。在一些具體實例中，變異體包含與SEQ ID NO: 6中所闡述之特定核酸序列至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少82%、至少85%、至少87%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之多核苷酸序列。在一些具體實例中，變異體包含與SEQ ID NO: 7中所闡述之特定核酸序列至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少82%、至少85%、至少87%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之多核苷酸序列。在一些具體實例中，變異體包含與SEQ ID NO: 8中所闡述之特定核酸序列至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少82%、至少85%、至少87%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之多核苷酸序列。在一些具體實例中，變異體包含與SEQ ID NO: 9中所闡述之特定核酸序列至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少82%、至少85%、至少87%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之多核苷酸序列。在一些具體實例中，變異體包含與SEQ ID NO: 10中所闡述之特定核酸序列至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少87%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之多核苷酸序列。

在一些具體實例中，變異體包含核酸構築體，該核酸構築體包含與編碼SEQ ID NO: 12或21之多肽序列的SEQ ID NO: 1至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少82%、至少85%、至少87%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核苷酸序列。在一些具體實例中，變異體包含核酸構築體，該核酸構築體包含與編碼SEQ ID NO: 12或21之多肽序列的SEQ ID NO: 6至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少82%、至少85%、至少87%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核苷酸序列。在一些具體實例中，變異體包含核酸構築體，該核酸構築體包含與編碼SEQ ID NO: 13之多肽序列的SEQ ID NO: 2至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少82%、至少85%、至少87%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核苷酸序列。在一些具體實例中，變異體包含核酸構築體，該核酸構築體包含與編碼SEQ ID NO: 13之多肽序列的SEQ ID NO: 7至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少82%、至少85%、至少87%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核苷酸序列。在一些具體實例中，變異體包含核酸構築體，該核酸構築體包含與編碼SEQ ID NO: 12、13或21中之任一者或多者之多肽序列的SEQ ID NO: 3至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少82%、至少85%、至少87%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核苷酸序列。在一些具體實例中，變異體包含核酸構築體，該核酸構築體包含與編碼SEQ ID NO: 12、13或21中之任一者或多者之多肽序列的SEQ ID NO: 4至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少82%、至少85%、至少87%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核苷酸序列。在一些具體實例中，變異體包含核酸構築體，該核酸構築體包含與編碼SEQ ID NO: 12、13或21中之任一者或多者之多肽序列的SEQ ID NO: 5至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少82%、至少85%、至少87%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核苷酸序列。在一些具體實例中，變異體包含核酸構築體，該核酸構築體包含與編碼SEQ ID NO: 12、13或21中之任一者或多者之多肽序列的SEQ ID NO: 8至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少82%、至少85%、至少87%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核苷酸序列。在一些具體實例中，變異體包含核酸構築體，該核酸構築體包含與編碼SEQ ID NO: 12、13或21中之任一者或多者之多肽序列的SEQ ID NO: 9至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少82%、至少85%、至少87%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核苷酸序列。在一些具體實例中，變異體包含核酸構築體，該核酸構築體包含與編碼SEQ ID NO: 12、13或21中之任一者或多者之多肽序列的SEQ ID NO: 10至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少82%、至少85%、至少87%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核苷酸序列。

所屬技術領域中具有通常知識者應瞭解與核酸互補之核酸序列及核酸之變異體亦在本發明之範圍內。核酸序列可為單股(編碼或反義)或雙股的，且可為DNA (基因體或合成的)、cDNA或RNA分子。RNA分子包括mRNA分子。另外編碼或非編碼序列可(但不必要)存在於本發明之核酸序列內，且核酸序列可(但不必要)連接至其他分子及/或載體材料。在其他具體實例中，本發明之核酸序列可經分離、重組及/或與異源核苷酸序列融合。在一些具體實例中，本文所揭示之任何核苷酸(例如SEQ ID NO: 1至10或其變異體或片段)經密碼子最佳化(例如為了人類表現而經密碼子最佳化)。在一些具體實例中，轉殖基因編碼相對於野生型多肽(例如包含SEQ ID NO: 12、13或21之胺基酸序列的多肽)具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個胺基酸取代、缺失及/或添加之生物活性核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C多肽。在一些具體實例中，轉殖基因編碼相對於野生型多肽(例如包含SEQ ID NO: 12、13或21之胺基酸序列的多肽)具有1、2、3、4或5個胺基酸缺失之生物活性核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C多肽。在一些具體實例中，轉殖基因編碼相對於野生型多肽(例如包含SEQ ID NO: 12、13或21之胺基酸序列的多肽)具有1、2、3、4或5個胺基酸取代之生物活性核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C多肽。在一些具體實例中，轉殖基因編碼相對於野生型多肽(例如包含SEQ ID NO: 12、13或21之胺基酸序列的多肽)具有1、2、3、4或5個胺基酸插入之生物活性核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C多肽。

所屬技術領域中具有通常知識者，由於基因密碼之簡併，存在許多編碼如本文所述之多肽的核苷酸序列。此等多核苷酸中之一些帶有與任何天然基因之核苷酸序列的最小同源性。儘管如此，本發明尤其預期因密碼子使用之差異而改變之多核苷酸(亦即密碼子最佳化)。舉例而言，藉由一種以上三重態指定多種胺基酸。指定相同胺基酸之密碼子或同義語(例如CAU及CAC為組胺酸之同義語)可引起不影響蛋白之胺基酸序列的「靜默」突變。所屬技術領域中具有知識者應瞭解，由於天然對偶基因變異，編碼特定蛋白之核酸的一或多個核苷酸(至多約3%至5%之核苷酸)中之此等變異可存在於既定物種之成員中。任何及全部此類核苷酸變異及所得胺基酸多態性在本發明之範圍內。此外，包含本文所提供之多核苷酸序列之基因的對偶基因在本發明之範圍內。對偶基因為由於核苷酸之一或多個突變(諸如缺失、添加及/或取代)而改變的內源基因。所得mRNA及蛋白可(但不必要)具有經改變的結構或功能。對偶基因可使用標準技術(諸如雜合、擴增及/或資料庫序列比較)來識別。

本發明之核酸/多核苷酸可使用化學合成、重組方法或PCR獲得。化學多核苷酸合成方法為所屬領域中所熟知且不必詳細描述於本文中。所屬技術領域中具有知識者可使用本文所提供之序列及商用DNA合成器以產生所需DNA序列。在其他具體實例中，本發明之核酸亦包括在高度嚴格條件下雜合至SEQ ID NO: 1至10中之任一者(或其變異體或片段)中所闡述的任何核苷酸序列或與其互補之序列的核苷酸序列。所屬領域中具有通常知識者將容易地理解可改變促進DNA雜合之適當嚴格條件。舉例而言，吾人可在約45℃下以6.0 x氯化鈉/檸檬酸鈉(SSC)執行雜合，隨後在50℃下進行2.0 x SSC洗滌。舉例而言，洗滌步驟中之鹽濃度可選自50℃下約2.0 x SSC的低嚴格度至50℃下約0.2 x SSC的高嚴格度。另外，洗滌步驟中之溫度可自室溫(約22℃)下之低嚴格度條件增加至約65℃下之高嚴格度條件。可改變溫度及鹽兩者，或溫度或鹽濃度可保持恆定，而使另一變數變化。在一個具體實例中，本發明提供在室溫下6 x SSC之低嚴格度條件下雜合，隨後在室溫下在2 x SSC下洗滌的核酸。

如本文所提供，本文所揭示之任何LMNA 轉殖基因或其片段(例如編碼核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C之基因)可用以矯正或改善基因缺陷，該等基因缺陷可包括LMNA 之正常變異基因產物以低於正常水平表現的缺陷或未表現功能變異體之缺陷。在一些具體實例中，轉殖基因序列編碼單一LMNA 同功型或其生物活性片段。本發明進一步包括使用多種轉殖基因，例如兩種或兩種以上編碼兩種或兩種以上LMNA 同功型或其生物活性片段之轉殖基因。在一特定具體實例中，不同LMNA 同功型(例如核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C或其生物活性片段或變異體)可藉由利用單核苷酸序列之替代性剪接由同一轉殖基因編碼。在某些情形下，不同轉殖基因可用以編碼不同LMNA 同功型或其生物活性片段(例如核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C或其生物活性片段或變異體)。或者，多種不同LMNA 同功型(例如核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C或其生物活性片段或變異體)可由同一轉殖基因編碼。在一些具體實例中，單一轉殖基因包括編碼多種LMNA 同功型(例如核纖層蛋白A及核纖層蛋白C或其生物活性片段或變異體)之DNA，其中每個蛋白或其功能性片段之DNA藉由一或多個內部核糖核酸酶進入位點(IRES)或自裂解2A肽分隔。在一些具體實例中，當編碼子單元中之每一者的DNA之尺寸較小時，例如，編碼子單元之DNA及IRES之總尺寸小於五千鹼基，此為所期望的。作為IRES之替代物，DNA可藉由一或多個在轉譯後事件中自分裂之編碼2A肽的序列分隔。參見例如MX. Donnelly, 等人, J. Gen. Virol, 78(Pt 1): 13-21 (1997年1月); Furler, S., 等人, Gene Ther., 8(11):864-873 (2001年6月); Klump H., 等人, Gene Ther., 8(10):811-817 (2001年5月)。此2A肽顯著地小於IRES，使得其較適合在空間為限制因素時使用。在一些具體實例中，一或多種自裂解2A肽係選自由T2A、P2A、E2A及F2A組成之群。 2. 調節元件

在某些具體實例中，本文所揭示之核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C構築體為核酸構築體之一部分，除核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C序列以外該核酸構築體亦包含一或多種調節元件。在例示性具體實例中，本文所揭示之核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C構築體為核酸構築體之一部分，該核酸構築體包含定位於核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C構築體之上游以便能夠驅動核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C序列在細胞中之表現的啟動子。

在一個具體實例中，本文所揭示之核酸構築體包含啟動子，該啟動子包含與SEQ ID NO: 30至69或100至102 (如下文表3及4中所示)中之任一者至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的序列。在一個具體實例中，本文所揭示之核酸構築體包含啟動子，該啟動子具有可操作地連接至本文所揭示之核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C序列中之任一者(例如包含SEQ ID NO: 1至5 (如下文表1中所示)中之任一者或其功能性片段的核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C序列)的SEQ ID NO: 30至69或100至102 (如下文表3及4中所示)中之任一者。在一個具體實例中，核酸構築體包含啟動子，該啟動子包含與SEQ ID NO: 102至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之序列。在一個具體實例中，核酸構築體包含具有SEQ ID NO: 102之序列的啟動子。在另一具體實例中，本文所揭示之核酸構築體包含調節元件，該調節元件具有兩種或兩種以上(例如兩種或兩種以上、三種或三種以上、四種或四種以上、五種或五種以上或2、3、4或5種)可操作地連接至本文所揭示之核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C序列中之任一者(例如包含SEQ ID NO: 1至5 (如下文表1中所示)中之任一者或其功能性片段的核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C序列)的SEQ ID NO: 30至69或100至102 (如下文表3及4中所示)中之任一者的組合。

在某些具體實例中，本文所揭示之核酸構築體包含啟動子，該啟動子具有可操作地連接至本文所揭示之核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C序列中之任一者(例如包含SEQ ID NO: 1至5 (如下文表1中所示)中之任一者或其功能性片段的核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C序列)的SEQ ID NO: 30至69或100至102 (如下文表3及4中所示)中之任一者。在某些具體實例中，啟動子序列產生相對於來自CMV啟動子之相同核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C序列在相同類型之哺乳動物細胞中的表現水平至少5倍、10倍、15倍、20倍、25倍、30倍、35倍、40倍、45倍、50倍、55倍、60倍、65倍、70倍或75倍，或至少20至90倍、20至80倍、20至70倍、20至60倍、30至90倍、30至80倍、30至70倍、30至60倍、40至90倍、40至80倍、40至70倍、40至60倍、50至90倍、50至80倍、50至70倍、50至60倍、60至90倍、60至80倍、60至70倍、70至90倍、70至80倍、80至90倍大的核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C序列在哺乳動物細胞中之表現。在某些具體實例中，啟動子序列驅動核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C序列在高百分比心肌細胞中之表現，例如含有核酸構築體之心肌細胞的至少20%、25%、30%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或更大，或至少20至90%、20至80%、20至70%、30至90%、30至80%、30至70%、40至90%、40至80%、40至70%、50至90%、50至80%、50至70%、60至90%、60至80%、60至70%、70至90%、70至80%、80至100%、80至95%、80至90%、90至100%或90至95%表現核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C構築體。在某些具體實例中，啟動子序列驅動核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C序列在高百分比肝細胞中之表現，例如含有核酸構築體之肝細胞的至少20%、25%、30%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或更大，或至少20至90%、20至80%、20至70%、30至90%、30至80%、30至70%、40至90%、40至80%、40至70%、50至90%、50至80%、50至70%、60至90%、60至80%、60至70%、70至90%、70至80%、80至100%、80至95%、80至90%、90至100%或90至95%表現核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C構築體。

在一個具體實例中，本文所揭示之核酸構築體包含具有可操作地連接至核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C序列的SEQ ID NO: 30至69或100至102中之任一者之啟動子，該核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C序列包含(i) SEQ ID NO: 1至5中之任一者，(ii)與SEQ ID NO: 1至5中之任一者具有至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性的序列或(iii)前述任一者之功能性片段。在某些具體實例中，此類核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C核苷酸序列編碼具有與野生型核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C蛋白序列(例如SEQ ID NO: 12、13及/或21)至少90%、95%、98%、99%或100%一致的序列之蛋白。在某些具體實例中，此類核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C序列編碼例如具有SEQ ID NO: 12、13及/或21中之一或多者的全長核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C蛋白。

在一個具體實例中，本發明之核酸構築體包含具有可操作地連接至包含以下者之核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C序列的SEQ ID NO: 33之啟動子：(i) SEQ ID NO: 1至5中之任一者，(ii)與SEQ ID NO: 1至5中之任一者具有至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性的序列，或(iii)前述任一者之功能性片段。在某些具體實例中，此類核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C核苷酸序列編碼具有與野生型核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C蛋白序列(例如SEQ ID NO: 12、13及/或21)至少90%、95%、98%、99%或100%一致的序列之蛋白。在某些具體實例中，此類核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C序列編碼例如具有SEQ ID NO: 12、13及/或21中之一或多者的全長核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C蛋白。

在一個具體實例中，本發明之核酸構築體包含具有可操作地連接至包含以下者之核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C序列的SEQ ID NO: 44之啟動子：(i) SEQ ID NO: 1至5中之任一者，(ii)與SEQ ID NO: 1至5中之任一者具有至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性的序列，或(iii)前述任一者之功能性片段。在某些具體實例中，此類核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C核苷酸序列編碼具有與野生型核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C蛋白序列(例如SEQ ID NO: 12、13及/或21)至少90%、95%、98%、99%或100%一致的序列之蛋白。在某些具體實例中，此類核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C序列編碼例如具有SEQ ID NO: 12、13及/或21中之一或多者的全長核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C蛋白。

在一個具體實例中，本發明之核酸構築體包含具有可操作地連接至包含以下者之核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C序列的SEQ ID NO: 35之啟動子：(i) SEQ ID NO: 1至5中之任一者，(ii)與SEQ ID NO: 1至5中之任一者具有至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性的序列，或(iii)前述任一者之功能性片段。在某些具體實例中，此類核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C核苷酸序列編碼具有與野生型核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C蛋白序列(例如SEQ ID NO: 12、13及/或21)至少90%、95%、98%、99%或100%一致的序列之蛋白。在某些具體實例中，此類核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C序列編碼例如具有SEQ ID NO: 12、13及/或21中之一或多者的全長核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C蛋白。

在一例示性具體實例中，本發明之核酸構築體包含具有可操作地連接至包含以下者之核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C序列的SEQ ID NO: 44之啟動子：(i) SEQ ID NO: 3，(ii)與SEQ ID NO: 3具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性的序列，或(iii)前述任一者之功能性片段。在某些具體實例中，此類核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C核苷酸序列編碼具有與野生型核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C蛋白序列(例如SEQ ID NO: 12、13及/或21)至少90%、95%、98%、99%或100%一致的序列之蛋白。在某些具體實例中，此類核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C序列編碼例如具有SEQ ID NO: 12、13及/或21中之一或多者的全長核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C蛋白。

在一例示性具體實例中，本發明之核酸構築體包含具有可操作地連接至包含以下者之核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C序列的SEQ ID NO: 44之啟動子：(i) SEQ ID NO: 4，(ii)與SEQ ID NO: 4具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性的序列，或(iii)前述任一者之功能性片段。在某些具體實例中，此類核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C核苷酸序列編碼具有與野生型核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C蛋白序列(例如SEQ ID NO: 12、13及/或21)至少90%、95%、98%、99%或100%一致的序列之蛋白。在某些具體實例中，此類核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C序列編碼例如具有SEQ ID NO: 12、13及/或21中之一或多者的全長核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C蛋白。

在一例示性具體實例中，本發明之核酸構築體包含具有可操作地連接至包含以下者之核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C序列的SEQ ID NO: 44之啟動子：(i) SEQ ID NO: 5，(ii)與SEQ ID NO: 5具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性的序列，或(iii)前述任一者之功能性片段。在某些具體實例中，此類核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C核苷酸序列編碼具有與野生型核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C蛋白序列(例如SEQ ID NO: 12、13及/或21)至少90%、95%、98%、99%或100%一致的序列之蛋白。在某些具體實例中，此類核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C序列編碼例如具有SEQ ID NO: 12、13及/或21中之一或多者的全長核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C蛋白。

在一例示性具體實例中，本發明之核酸構築體包含具有可操作地連接至包含以下者之核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C序列的SEQ ID NO: 35之啟動子：(i) SEQ ID NO: 3，(ii)與SEQ ID NO: 3具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性的序列，或(iii)前述任一者之功能性片段。在某些具體實例中，此類核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C核苷酸序列編碼具有與野生型核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C蛋白序列(例如SEQ ID NO: 12、13及/或21)至少90%、95%、98%、99%或100%一致的序列之蛋白。在某些具體實例中，此類核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C序列編碼例如具有SEQ ID NO: 12、13及/或21中之一或多者的全長核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C蛋白。

在一例示性具體實例中，本發明之核酸構築體包含具有可操作地連接至包含以下者之核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C序列的SEQ ID NO: 35之啟動子：(i) SEQ ID NO: 4，(ii)與SEQ ID NO: 4具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性的序列，或(iii)前述任一者之功能性片段。在某些具體實例中，此類核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C核苷酸序列編碼具有與野生型核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C蛋白序列(例如SEQ ID NO: 12、13及/或21)至少90%、95%、98%、99%或100%一致的序列之蛋白。在某些具體實例中，此類核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C序列編碼例如具有SEQ ID NO: 12、13及/或21中之一或多者的全長核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C蛋白。

在一例示性具體實例中，本發明之核酸構築體包含具有可操作地連接至包含以下者之核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C序列的SEQ ID NO: 35之啟動子：(i)SEQ ID NO: 5，(ii)與SEQ ID NO: 5具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性的序列，或(iii)前述任一者之功能性片段。在某些具體實例中，此類核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C核苷酸序列編碼具有與野生型核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C蛋白序列(例如SEQ ID NO: 12、13及/或21)至少90%、95%、98%、99%或100%一致的序列之蛋白。在某些具體實例中，此類核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C序列編碼例如具有SEQ ID NO: 12、13及/或21中之一或多者的全長核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C蛋白。

在一個具體實例中，本文所揭示之核酸構築體包含選自由以下組成之群的啟動子：細胞巨大病毒(cytomegalovirus，CMV)啟動子、雞β肌動蛋白(CBA)啟動子、CBA啟動子(例如SEQ ID NO: 61)之上游使用的CMV強化子、超核啟動子(super core promoter，SCP)啟動子、SerpE_TTR啟動子(例如SEQ ID NO: 63)、Proto1啟動子(例如SEQ ID NO: 64)、最小CMV (minCMV)啟動子、倫敦大學學院雜合肝特異性啟動子(University College London hybrid liver-specific promoter，UCL-HLP)啟動子、CMV強化子(CMVe)、CMV早期強化子/CBA (CAG)啟動子、Myh6啟動子、肌間線蛋白啟動子、心臟肌鈣蛋白T (cardiac troponin T，cTnT)啟動子、α-肌凝蛋白重鏈(alpha-myosin heavy chain，α-MHC)啟動子、肌凝蛋白輕鏈2 (myosin light chain 2，MLC-2)啟動子、SEQ ID NO: 102及EF1a短(EF1a short，EFS)啟動子，啟動子可操作地連接至包含以下者之核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C序列(i)SEQ ID NO: 1至5中之任一者，(ii)與SEQ ID NO: 1至5中之任一者具有至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性的序列，或(iii)前述任一者之功能性片段。在某些具體實例中，此類核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C核苷酸序列編碼具有與野生型核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C蛋白序列(例如SEQ ID NO: 12、13及21)至少90%、95%、98%、99%或100%一致的序列之蛋白。在某些具體實例中，此類核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C序列編碼例如具有SEQ ID NO: 12、13及21中之一或多者的全長核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C蛋白。在一個具體實例中，本文所揭示之核酸構築體包含具有可操作地連接至包含以下者之核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C序列的SEQ ID NO: 30至58或100至102中之任一者之啟動子：(i) SEQ ID NO: 1至5中之任一者，(ii)與SEQ ID NO: 1至5中之任一者具有至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性的序列，或(iii)前述任一者之功能性片段。在某些具體實例中，此類核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C核苷酸序列為編碼蛋白之序列，該蛋白具有與野生型核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C蛋白序列(例如SEQ ID NO: 12、13及/或21)至少90%、95%、98%、99%或100%一致的序列。在某些具體實例中，此類核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C序列可包含(i) SEQ ID NO: 1至5中之任一者，或(ii)與SEQ ID NO: 1至5中之任一者具有至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性的序列，其中此類核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C序列編碼例如具有SEQ ID NO: 12、13及/或21中之一或多者的全長核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C蛋白。

在某些具體實例中，本文所揭示之核酸構築體包含已經截短以編碼核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C蛋白之功能性片段的核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C核苷酸序列。例示性經截短核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C核苷酸序列可包含與SEQ ID NO: 1至5中之任一者具有至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性的序列，其中此類核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C核苷酸序列編碼核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C之功能性片段。在某些具體實例中，本文所揭示之核酸構築體包含已經截短以編碼核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C蛋白之功能性片段的變異體核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C核苷酸序列。例示性經截短核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C核苷酸序列可包含與SEQ ID NO: 1至5中之任一者具有至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性的序列，其中此類經截短變異體核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C核苷酸序列編碼核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C之功能性片段。

在某些具體實例中，本文所述之核酸構築體在啟動子之添加物中包含另一調節元件，諸如(例如)與轉錄起始或終止相關的序列、強化子序列及有效RNA處理信號。例示性調節元件包括例如內含子、增強子、UTR、穩定性元件、WPRE序列、Kozak共同序列、轉譯後反應元件或多腺苷酸化(polyA)序列或其組合。調節元件可用以在基因表現之轉錄階段、轉錄後階段或轉譯階段調節基因表現。在RNA水平，調節可在轉譯(例如使mRNA穩定以用於轉譯之穩定性元件)、RNA裂解、RNA剪接及/或轉錄終止之水平進行。在各種具體實例中，調節元件可將轉錄因子募集至編碼區，其增加所關注之細胞類型中之基因表現選擇性、增加RNA轉錄物之產生速率、增加所產生RNA之穩定性及/或增加自RNA轉錄物之蛋白合成速率。

在一個具體實例中，本文所述之核酸構築體進一步包含強化子序列。例示性強化子序列包括例如En34強化子(來自人類載脂蛋白肝控制區之34 bp核強化子)、EnTTR強化子(來自甲狀腺素轉運蛋白之100 bp強化子序列)、a1-微球蛋白/比庫寧(bikunin)前體強化子、ABPS強化子(來自a1-微球蛋白/比庫寧前體之100 bp末梢強化子變成42 bp之縮短版)該ApoE強化子。參見例如WO 2018/126116及Wu等人, Mol Therapy 16(2): 280-289 (2008))。在另一具體實例中，適合強化子序列為包含SEQ ID NO: 30或SEQ ID NO: 31之內含子序列。在某些具體實例中，在本文所述之核酸構築體中強化子序列位於轉殖基因及啟動子之上游或啟動子與轉殖基因之間。

在某些具體實例中，本文所述之核酸構築體進一步包含polyA序列。適合polyA序列包括例如長度為約75 bp之人工polyA (PA75) (參見例如WO 2018/126116)、牛生長激素polyA、SV40早期polyA信號、SV40晚期polyA信號、兔β血球蛋白polyA、HSV胸苷激酶polyA、魚精蛋白基因polyA、腺病毒5 EIb polyA、生長激素polyA或PBGD polyA。在某些具體實例中，在本文所述之核酸構築體中polyA序列位於轉殖基因之下游。

在某些具體實例中，適合於根據本文所述之核酸分子使用之調節元件包含少於900 bp、850 bp、800 bp、750 bp、700 bp、650 bp、600 bp、550 bp、500 bp、450 bp、400 bp、350 bp、300 bp、250 bp、225 bp、200 bp、175 bp、150 bp、145 bp、140 bp、135 bp、130 bp、125 bp、120 bp、115 bp、110 bp、105 bp、100 bp、95 bp、90 bp、85 bp、80 bp或75 bp，或約80至300 bp、80至275 bp、80至250 bp、80至200 bp、80至150 bp、80至125 bp、80至120 bp、80至115 bp、80至110 bp、80至105 bp、80至100 bp、85至300 bp、85至275 bp、85至250 bp、85至200 bp、85至150 bp、85至125 bp、85至120 bp、85至115 bp、85至110 bp、85至105 bp、85至100 bp、90至300 bp、90至275 bp、90至250 bp、90至200 bp、90至150 bp、90至125 bp、90至120 bp、90至115 bp、90至110 bp、90至105 bp、90至100 bp、95至300 bp、95至275 bp、95至250 bp、95至200 bp、95至150 bp、95至125 bp、95至120 bp、95至115 bp、95至110 bp、95至105 bp、95至100 bp、100至300 bp、100至275 bp、100至250 bp、100至200 bp、100至150 bp、100至125 bp、100120 bp、100至115 bp、100至110 bp或100至105 bp。在例示性具體實例中，適合於根據本文所述之核酸分子使用之調節元件包含約100至120 bp、約117 bp或約100 bp。

在某些具體實例中，本文所述之包含核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C核酸序列及調節元件的核酸構築體適合於封裝於AAV載體(例如包含少於約4.7 Kb)中。在某些具體實例中，本文所述之包含核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C核酸序列及調節元件的核酸構築體包含約4,450至4,550 bp、4,450至4,540 bp、4,450至4,530 bp、4,450至4,520 bp、4,450至4,510 bp、4,450至4,500 bp、4,460至4,550 bp、4,460至4,540 bp、4,460至4,530 bp、4,460至4,520 bp、4,460至4,510 bp、4,460至4,500 bp、4,470至4,550 bp、4,470至4,540 bp、4,470至4,530 bp、4,470至4,520 bp、4,470至4,510 bp、4,470至4,500 bp、4,480至4,550 bp、4,480至4,540 bp、4,480至4,530 bp、4,480至4,520 bp、4,480至4,510 bp、4,480至4,500 bp、4,490至4,550 bp、4,490至4,540 bp、4,490至4,530 bp、4,490至4,520 bp、4,490至4,510 bp或4,490至4,500 bp，或包含約4,498 bp或約4,515 bp。在例示性具體實例中，此類核酸構築體編碼全長核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C蛋白，例如具有SEQ ID NO: 12、13及/或21中之一或多者的核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C蛋白。

在另一具體實例中，適用於本文之轉殖基因包括報告子序列，其在表現後產生可偵測信號。此類報告子序列包括(但不限於)編碼以下者之DNA序列：β-內醯胺酶、β-半乳糖苷酶(LacZ)、鹼性磷酸酶、胸苷激酶、綠色螢光蛋白(green fluorescent protein，GFP)、紅色螢光蛋白(red fluorescent protein，RFP)、氯黴素乙醯轉移酶(chloramphenicol acetyltransferase，CAT)、螢光素酶、膜結合蛋白(包括例如CD2、CD4、CD8)、流感血球凝集素蛋白及所屬領域中熟知之其他存在或可藉由習知方法產生針對其之高親和力抗體的物質，及包含與尤其來自血球凝集素或Myc之抗原標籤域適當融合的膜結合蛋白之融合蛋白。此等編碼序列在與驅動其表現之調節元件相關時，提供藉由習知方法可偵測之信號，習知方法包括酶促、放射性、比色、螢光或其他光譜檢定，螢光活化細胞分選檢定及免疫檢定，包括酶聯免疫吸附檢定(ELISA)、放射免疫檢定(RIA)及免疫組織化學。舉例而言，在標記序列為LacZ基因的情況下，藉由針對β-半乳糖苷酶活性之檢定來偵測攜帶信號之載體的存在。在轉殖基因為綠色螢光蛋白或螢光素酶的情況下，攜帶信號之載體可藉由光度計中之顏色或光產生而目視量測。D. 表現載體

在某些具體實例中，可將核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C核苷酸序列或本文所述之表現構築體併入表現載體中。

表現載體可用以經由轉染或轉導將核酸分子遞送至目標細胞。載體可為整合型或非整合型載體，參考載體將表現卡匣或轉殖基因整合至宿主細胞之基因組中的能力。表現載體之實例包括(但不限於) (a)非病毒載體，諸如包括線性寡核苷酸及環形質體之核酸載體；人工染色體，諸如人類人工染色體(human artificial chromosome，HAC)、酵母菌人工染色體(yeast artificial chromosome，YAC)及細菌人工染色體(bacterial artificial chromosome，BAC或PAC)；游離型載體；轉座子(例如PiggyBac)；及(b)病毒載體，諸如反轉錄病毒載體、慢病毒載體、腺病毒載體及腺相關病毒載體。

表現載體可為線性寡核苷酸或環形質體且可經由各種轉染方法，包括物理及化學方法遞送至細胞。物理方法一般係指在促進基因物質之細胞內遞送中採用物理力來抵消細胞膜障壁之遞送方法。物理方法之實例包括使用針、彈道DNA、電穿孔、聲致穿孔、光致穿孔、磁轉染及水穿孔。化學方法一般係指其中化學載劑將核酸分子遞送至細胞之方法且可包括無機顆粒、基於脂質之載體、基於聚合物之載體及基於肽之載體。

在一些具體實例中，使用無機顆粒將向目標細胞投予表現載體。無機顆粒可指奈米顆粒，諸如經工程化得到各種尺寸、形狀及/或孔隙率以自網狀內皮系統逸出或保護經包覆分子免於降解之奈米顆粒。無機奈米顆粒可由金屬(例如鐵、金及銀)、無機鹽或陶瓷(例如鈣、鎂或矽之磷酸鹽或碳酸鹽)來製備。此等奈米顆粒之表面可經塗佈以促進DNA結合或靶向基因遞送。亦可使用磁性奈米顆粒(例如超磁性鐵氧化物)、富勒烯(例如可溶性碳分子)、碳奈米管(例如圓柱形富勒烯)、量子點及超分子系統。

在一些具體實例中，使用陽離子脂質(例如陽離子脂質體)向目標細胞投予表現載體。已研究各種類型的脂質之基因遞送，諸如(例如)脂質奈米乳液(例如其為藉由乳化劑穩定化的一種不可混溶液體於另一種中之分散液)或固體脂質奈米顆粒。

在一些具體實例中，使用基於肽之遞送媒劑向目標細胞投予本文所揭示之任何表現載體。基於肽之遞送媒劑可具有保護待遞送之基因物質、靶向特定細胞受體、破壞核內體膜及將基因物質遞送至核中之優點。在一些具體實例中，使用基於聚合物之遞送媒劑向目標細胞投予表現載體。基於聚合物之遞送媒劑可包含天然蛋白、肽及/或多醣或合成聚合物。在一個具體實例中，基於聚合物之遞送媒劑包含聚伸乙亞胺(PEI)。PEI可將DNA縮合至帶正電顆粒中，該等帶正電顆粒結合至陰離子細胞表面殘基且經由內飲作用攜帶至細胞中。在其他具體實例中，基於聚合物之遞送媒劑可包含聚-L-離胺酸(PLL)、聚(DL-乳酸) (PLA)、聚(DL-丙交酯-共-醣苷) (PLGA)、聚鳥胺酸、聚精胺酸、組蛋白、魚精蛋白、樹枝狀聚合物、聚葡萄胺糖、聚葡萄糖之合成胺基衍生物及/或陽離子丙烯酸聚合物。在某些具體實例中，基於聚合物之遞送媒劑可包含聚合物之混合物，諸如(例如)PEG及PLL。

本文提供包含本文所揭示之任何核酸構築體及/或多核苷酸序列之病毒載體。在特定具體實例中，病毒載體包含編碼以下者之核苷酸序列：(a)核纖層蛋白A多肽；(b)核纖層蛋白C多肽；(c)核纖層蛋白A及核纖層蛋白C多肽；或前述任一者之生物活性變異體及/或其片段。在特定具體實例中，病毒載體包含編碼以下者之核苷酸序列：(a)核纖層蛋白A多肽之生物活性片段；(b)核纖層蛋白C多肽之生物活性片段；(c)核纖層蛋白A之生物活性片段及核纖層蛋白C多肽之生物活性片段；及/或其片段。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼核纖層蛋白A或其生物活性變異體及/或片段之核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼核纖層蛋白C或其生物活性變異體及/或片段之核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼核纖層蛋白A及核纖層蛋白C或其生物活性變異體及/或片段之核苷酸序列。

在某些具體實例中，表現載體可為適合於基因療法之病毒載體。病毒基因療法載體或基因遞送載體之較佳特徵可包括可再現且穩定地傳播且純化至高效價；介導靶向遞送(例如將轉殖基因特異性遞送至所關注的組織或器官而無他處之廣泛載體傳播)；及在不誘導有害副作用的情況下介導基因遞送及轉殖基因表現之能力。

若干類型之病毒，例如稱為腺相關病毒之非致命性小病毒已出於基因療法之目的藉由利用病毒感染路徑工程化，但避免可導致複製及毒性之病毒基因的後續表現。可如下獲得此類病毒載體：藉由自病毒基因組刪除所有或一些編碼區，但使諸如將載體基因組封裝至病毒殼體中或將載體核酸(例如DNA)整合至宿主染色體中之功能可能需要之彼等序列(例如末端重複序列)保留完整。

在一些情況下，病毒載體包含可操作地連接至一或多個調節元件之轉殖基因，其中轉殖基因編碼核纖層蛋白A、核纖層蛋白C、核纖層蛋白A及核纖層蛋白C或其密碼子最佳化變異體及/或片段。在某些具體實例中，轉殖基因包含編碼以下者之核苷酸序列；(a)核纖層蛋白A多肽；(b)核纖層蛋白C多肽；(c)核纖層蛋白A及核纖層蛋白C多肽；或其生物活性變異體及/或片段。在某些具體實例中，轉殖基因包含編碼核纖層蛋白C或其生物活性變異體及/或片段之核苷酸序列。在某些具體實例中，轉殖基因包含編碼核纖層蛋白A及核纖層蛋白C或其生物活性變異體及/或片段之核苷酸序列。

在某些具體實例中，病毒載體包含編碼野生型LMNA基因之外顯子1至12 (例如SEQ ID NO: 81至93)及野生型LMNA基因之內含子8至11 (例如SEQ ID NO: 77至80)的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼野生型LMNA 基因之外顯子1至12 (例如SEQ ID NO: 81至93)及野生型LMNA 基因之內含子9及10 (例如SEQ ID NO: 78及79)的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼野生型LMNA 基因之外顯子1至12 (例如SEQ ID NO: 81至93)及野生型LMNA 基因之內含子10 (例如SEQ ID NO: 79)的核苷酸序列。

在某些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列包含以下、由以下組成或基本上由以下組成：SEQ ID NO: 1至10中之任一者或多者的核酸序列及與前述任一者至少60%、65%、70%、75%、80%、82%、85%、87%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列為SEQ ID NO: 1至10中之任一者或多者的序列或其密碼子最佳化變異體及/或片段。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少60%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少65%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少70%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少75%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少80%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少82%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少85%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少87%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少90%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少91%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少92%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少93%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少94%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少95%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少96%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少97%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少98%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少99%一致的核苷酸序列。

在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 1至10中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段100%一致的核苷酸序列。在一些具體實例中，病毒載體包含與編碼SEQ ID NO: 12或21之多肽序列的SEQ ID NO: 1至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列。在一些具體實例中，病毒載體包含與編碼SEQ ID NO: 12或21之多肽序列的SEQ ID NO: 6至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列。在一些具體實例中，病毒載體包含與編碼SEQ ID NO: 13之多肽序列的SEQ ID NO: 2至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列。在一些具體實例中，病毒載體包含與編碼SEQ ID NO: 13之多肽序列的SEQ ID NO: 7至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列。在一些具體實例中，病毒載體包含與編碼SEQ ID NO: 12、13或21中之任一者或多者之多肽序列的SEQ ID NO: 3至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列。在一些具體實例中，病毒載體包含與編碼SEQ ID NO: 12、13或21中之任一者或多者之多肽序列的SEQ ID NO: 4至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列。在一些具體實例中，病毒載體包含與編碼SEQ ID NO: 12、13或21中之任一者或多者之多肽序列的SEQ ID NO: 5至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列。在一些具體實例中，病毒載體包含與編碼SEQ ID NO: 12、13或21中之任一者或多者之多肽序列的SEQ ID NO: 8至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列。在一些具體實例中，病毒載體包含與編碼SEQ ID NO: 12、13或21中之任一者或多者之多肽序列的SEQ ID NO: 9至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列。在一些具體實例中，病毒載體包含與編碼SEQ ID NO: 12、13或21中之任一者或多者之多肽序列的SEQ ID NO: 10至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列。

在某些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列包含以下、由以下組成或基本上由以下組成：SEQ ID NO: 3至5中之任一者的核酸序列及與前述任一者至少60%、65%、70%、75%、80%、82%、85%、87%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含為SEQ ID NO: 3至5中之任一者之序列或其密碼子最佳化變異體及/或片段的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 3至5中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少60%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 3至5中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少65%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 3至5中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少70%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 3至5中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少75%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 3至5中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少80%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 3至5中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少82%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 3至5中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少85%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 3至5中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少87%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 3至5中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少90%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 3至5中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少91%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 3至5中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少92%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 3至5中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少93%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 3至5中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少94%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 3至5中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少95%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 3至5中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少96%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 3至5中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少97%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 3至5中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少98%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 3至5中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段至少99%一致的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與SEQ ID NO: 3至5中之任一者或其密碼子最佳化變異體及/或片段100%一致之核苷酸序列。

在某些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列編碼包含以下、由以下組成或基本上由以下組成之多肽：SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或多者的胺基酸序列，及與前述任一者至少60%、65%、70%、75%、80%、82%、85%、87%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的多肽。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者的多肽或其生物活性變異體及/或片段之核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼與SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段至少60%一致的多肽之核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼與SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段至少65%一致的多肽之核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼與SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段至少70%一致的多肽之核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼與SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段至少75%一致的多肽之核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼與SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段至少80%一致的多肽之核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼與SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段至少82%一致的多肽之核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼與SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段至少85%一致的多肽之核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼與SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段至少87%一致的多肽之核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼與SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段至少90%一致的多肽之核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼與SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段至少91%一致的多肽之核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼與SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段至少92%一致的多肽之核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼與SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段至少93%一致的多肽之核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼與SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段至少94%一致的多肽之核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼與SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段至少95%一致的多肽之核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼與SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段至少96%一致的多肽之核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼與SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段至少97%一致的多肽之核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼與SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段至少98%一致的多肽之核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼與SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段至少99%一致的多肽之核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼與SEQ ID NO: 12至21及24中之任一者或其生物活性變異體及/或片段100%一致的多肽之核苷酸序列。

在某些具體實例中，病毒載體包含編碼核纖層蛋白A之核苷酸序列，該核纖層蛋白A包含以下、由以下組成或基本上由以下組成：與SEQ ID NO: 12或其生物活性片段至少60%、65%、70%、75%、80%、82%、85%、87%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼核纖層蛋白A之核苷酸序列，該核纖層蛋白A包含以下、由以下組成或基本上由以下組成：與SEQ ID NO: 21或其生物活性片段至少60%、65%、70%、75%、80%、82%、85%、87%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼核纖層蛋白C之核苷酸序列，該核纖層蛋白C包含以下、由以下組成或基本上由以下組成：與SEQ ID NO: 13或其生物活性片段至少60%、65%、70%、75%、80%、82%、85%、87%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼核纖層蛋白A且亦編碼核纖層蛋白C之核苷酸序列，該核纖層蛋白A具有與SEQ ID NO: 12或其生物活性片段至少60%、65%、70%、75%、80%、82%、85%、87%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列，該核纖層蛋白C具有與SEQ ID NO: 13或其生物活性片段至少60%、65%、70%、75%、80%、82%、85%、87%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼核纖層蛋白A且亦編碼核纖層蛋白C之核苷酸序列，該核纖層蛋白A具有與SEQ ID NO: 21或其生物活性片段至少60%、65%、70%、75%、80%、82%、85%、87%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列，該核纖層蛋白C具有與SEQ ID NO: 13或其生物活性片段至少60%、65%、70%、75%、80%、82%、85%、87%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼核纖層蛋白A之核苷酸序列，該核纖層蛋白A包含以下、由以下組成或基本上由以下組成：SEQ ID NO: 12之胺基酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼核纖層蛋白A之核苷酸序列，該核纖層蛋白A包含以下、由以下組成或基本上由以下組成：SEQ ID NO: 21之胺基酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼核纖層蛋白C之核苷酸序列，該核纖層蛋白C包含以下、由以下組成或基本上由以下組成：SEQ ID NO: 13之胺基酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼核纖層蛋白A及核纖層蛋白C之核苷酸序列，核纖層蛋白A及核纖層蛋白C包含以下、由以下組成或基本上由以下組成：SEQ ID NO: 12及/或13之胺基酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼核纖層蛋白A及核纖層蛋白C之核苷酸序列，核纖層蛋白A及核纖層蛋白C包含以下、由以下組成或基本上由以下組成：SEQ ID NO: 21及/或13之胺基酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼具有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的核纖層蛋白A且亦編碼具有SEQ ID NO: 13之胺基酸序列的核纖層蛋白C之核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含編碼具有SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的核纖層蛋白A且亦編碼具有SEQ ID NO: 13之胺基酸序列的核纖層蛋白C之核苷酸序列。

在一些情況下，病毒載體包含編碼核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C之核苷酸序列，其中該核苷酸序列不包含一或多種、兩種或兩種以上、三種或三種以上、四種或四種以上、五種或五種以上、六種或六種以上、七種或七種以上、八種或八種以上、九種或九種以上、十種或十種以上或十一種或十一種以上來自野生型LMNA 基因的內含子。在某些具體實例中，病毒載體不包含與野生型LMNA 基因之內含子1至7 (例如SEQ ID NO: 70至76)對應的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體不包含與野生型LMNA 基因之內含子1至8及11 (例如SEQ ID NO: 70至77及80)對應的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體不包含與野生型LMNA 基因之內含子1至9及11 (例如SEQ ID NO: 70至78及80)對應的核苷酸序列。

一些情況下，病毒載體包含編碼核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C之核苷酸序列，其中該核苷酸序列包含一或多種、兩種或兩種以上、三種或三種以上、四種或四種以上、五種或五種以上、六種或六種以上、七種或七種以上、八種或八種以上、九種或九種以上、十種或十種以上或十一種或十一種以上內含子(例如SEQ ID NO: 70至80中之任一者或組合)。在某些具體實例中，一或多種內含子對應於來自野生型LMNA 基因的內含子，例如野生型人類LMNA 基因。在其他具體實例中，一或多種內含子為合成內含子。在特定具體實例中一或多種內含子位於病毒載體中之核苷酸序列中以使得其能夠以剪接依賴性方式編碼核纖層蛋白A及核纖層蛋白C兩者。在特定具體實例中一或多種內含子位於核酸構築體中以使得前mRNA進行替代性剪接而產生編碼核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C之成熟mRNA。在特定具體實例中，一或多種內含子位於核酸構築體中以使得前mRNA進行替代性剪接而產生比編碼核纖層蛋白A之成熟mRNA更多的編碼核纖層蛋白C之成熟mRNA。在特定具體實例中，一或多種內含子位於核酸構築體中以使得前mRNA進行替代性剪接而產生約相同水平之編碼核纖層蛋白A的成熟mRNA及編碼核纖層蛋白C的成熟mRNA。在特定具體實例中，一或多種內含子位於核酸構築體中以使得前mRNA進行替代性剪接而產生比編碼核纖層蛋白C之成熟mRNA多的編碼核纖層蛋白A之成熟mRNA。在某些具體實例中，病毒載體包含與野生型LMNA 基因之內含子8至11 (例如SEQ ID NO: 77至80)對應的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與野生型LMNA 基因之內含子9及10 (例如SEQ ID NO: 78及79)對應的核苷酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含與野生型LMNA 基因之內含子10 (例如SEQ ID NO: 79)對應的核苷酸序列。

在一些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列包含野生型人類LMNA 基因之至少一個(但非所有)內源性內含子。在一些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列包含至少一個與野生型人類LMNA 基因之內含子8至11 (例如SEQ ID NO: 77至80)對應的內含子，且缺少至少一個與野生型人類LMNA 基因之內含子1至7 (例如SEQ ID NO: 70至76)對應的內含子。在一些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列包含與野生型人類LMNA 基因之內含子8至11 (例如SEQ ID NO: 77至80)對應的內含子，且缺少至少一個與野生型人類LMNA 基因之內含子1至7 (例如SEQ ID NO: 70至76)對應的內含子。在一些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列包含與野生型人類LMNA 基因之內含子8至11 (例如SEQ ID NO: 77至80)對應的內含子，且缺少所有與野生型人類LMNA 基因之內含子1至7 (例如SEQ ID NO: 70至76)對應的內含子。在一些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列包含與野生型人類LMNA 基因之內含子9至10 (例如SEQ ID NO: 78及79)對應的內含子，且缺少至少一個與野生型人類LMNA 基因之內含子1至7 (例如SEQ ID NO: 70至76)對應的內含子。在一些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列包含與野生型人類LMNA 基因之內含子9至10 (例如SEQ ID NO: 78及79)對應的內含子，且缺少所有與野生型人類LMNA 基因之內含子1至7 (例如SEQ ID NO: 70至76)對應的內含子。在一些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列包含與野生型人類LMNA 基因之內含子9至10 (例如SEQ ID NO: 78及79)對應的內含子，且缺少所有與野生型人類LMNA 基因之內含子1至8及11 (例如SEQ ID NO: 70至77及80)對應的內含子。在一些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列包含與野生型人類LMNA 基因之內含子10 (例如SEQ ID NO: 79)對應的內含子，且缺少至少一個與野生型人類LMNA 基因之內含子1至7 (例如SEQ ID NO: 70至76)對應的內含子。在一些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列包含與野生型人類LMNA 基因之內含子10 (例如SEQ ID NO: 79)對應的內含子，且缺少所有與野生型人類LMNA 基因之內含子1至7 (例如SEQ ID NO: 70至76)對應的內含子。在一些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列包含與野生型人類LMNA 基因之內含子10 (例如SEQ ID NO:79)對應的內含子，且缺少所有與野生型人類LMNA 基因之內含子1至9及11 (例如SEQ ID NO: 70至78及80)對應的內含子。在一些具體實例中，與野生型人類LMNA 基因之內含子8對應的內含子包含與SEQ ID NO: 77至少60%、65%、70%、75%、80%、82%、85%、87%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列或其片段。在一些具體實例中，與野生型人類LMNA 基因之內含子9對應的內含子包含與SEQ ID NO: 78至少60%、65%、70%、75%、80%、82%、85%、87%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列或其片段。在一些具體實例中，與野生型人類LMNA 基因之內含子10對應的內含子包含與SEQ ID NO: 79至少60%、65%、70%、75%、80%、82%、85%、87%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列或其片段。在一些具體實例中，與野生型人類LMNA 基因之內含子11對應的內含子包含與SEQ ID NO: 80至少60%、65%、70%、75%、80%、82%、85%、87%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列或其片段。

在一些情況下，病毒載體包含編碼核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C (或其生物活性片段或變異體)之核苷酸序列，其中該核苷酸序列包含野生型LMNA 基因之內含子8。在一些情況下，病毒載體包含編碼核纖層蛋白A (或其生物活性片段或變異體)及/或核纖層蛋白C (或其生物活性片段或變異體)之核苷酸序列，其中該核苷酸序列包含野生型LMNA 基因之內含子9。在一些情況下，病毒載體包含編碼核纖層蛋白A (或其生物活性片段或變異體)及/或核纖層蛋白C (或其生物活性片段或變異體)之核苷酸序列，其中該核苷酸序列包含野生型LMNA 基因之內含子10。在一些情況下，病毒載體包含編碼核纖層蛋白A (或其生物活性片段或變異體)及/或核纖層蛋白C (或其生物活性片段或變異體)之核苷酸序列，其中該核苷酸序列包含野生型LMNA 基因之內含子11。在一些情況下，病毒載體包含編碼核纖層蛋白A (或其生物活性片段或變異體)及/或核纖層蛋白C (或其生物活性片段或變異體)之核苷酸序列，其中該核苷酸序列包含野生型LMNA 基因之內含子9及10。在一些情況下，病毒載體包含編碼核纖層蛋白A (或其生物活性片段或變異體)及/或核纖層蛋白C (或其生物活性片段或變異體)之核苷酸序列，其中該核苷酸序列包含野生型LMNA 基因之內含子8、9、10及11。

在某些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列包含以下、由以下組成或基本上由以下組成：SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者的核酸序列，及與前述中之任一者或多者至少60%、65%、70%、75%、80%、82%、85%、87%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的核酸序列。在某些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列為SEQ ID NO: 77至80中之任一者的序列或其生物活性變異體及/或片段。在某些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列與SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者或其生物活性變異體及/或片段至少60%一致。在某些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列與SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者或其生物活性變異體及/或片段至少65%一致。在某些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列與SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者或其生物活性變異體及/或片段至少70%一致。在某些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列與SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者或其生物活性變異體及/或片段至少75%一致。在某些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列與SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者或其生物活性變異體及/或片段至少80%一致。在某些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列與SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者或其生物活性變異體及/或片段至少82%一致。在某些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列與SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者或其生物活性變異體及/或片段至少85%一致。在某些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列與SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者或其生物活性變異體及/或片段至少87%一致。在某些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列與SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者或其生物活性變異體及/或片段至少90%一致。在某些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列與SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者或其生物活性變異體及/或片段至少91%一致。在某些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列與SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者或其生物活性變異體及/或片段至少92%一致。在某些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列與SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者或其生物活性變異體及/或片段至少93%一致。在某些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列與SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者或其生物活性變異體及/或片段至少94%一致。在某些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列與SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者或其生物活性變異體及/或片段至少95%一致。在某些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列與SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者或其生物活性變異體及/或片段至少96%一致。在某些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列與SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者或其生物活性變異體及/或片段至少97%一致。在某些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列與SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者或其生物活性變異體及/或片段至少98%一致。在某些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列與SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者或其生物活性變異體及/或片段至少99%一致。在某些具體實例中，病毒載體包含核苷酸序列，該核苷酸序列與SEQ ID NO: 77至80中之任一者或多者或其生物活性變異體及/或片段100%一致。

在某些具體實例中，本文所述之病毒載體進一步包含多腺苷酸化(polyA)序列。適合polyA序列包括例如長度為約75 bp之人工polyA (PA75) (參見例如WO 2018/126116)、牛生長激素polyA、SV40早期polyA信號、SV40晚期polyA信號、兔β血球蛋白polyA、HSV胸苷激酶polyA、魚精蛋白基因polyA、腺病毒5 EIb polyA、生長激素polyA或PBGD polyA。在某些具體實例中，polyA序列包含或由SEQ ID NO: 11組成。在某些具體實例中，在本文所述之核酸構築體中polyA序列位於轉殖基因之下游。E. 病毒載體

在各種具體實例中，適合病毒載體包括反轉錄病毒(例如A型、B型、C型及D型病毒)；腺病毒；小病毒(例如腺相關病毒或AAV)；冠狀病毒；負股RNA病毒，諸如正黏病毒(例如流感病毒)；棒狀病毒(例如狂犬病及水泡性口炎病毒)；副黏病毒(例如麻疹及仙臺病毒(Sendai))；正股RNA病毒，諸如小RNA病毒及α病毒；及雙股DNA病毒，包括腺病毒、疱疹病毒(例如1型及2型單純疱疹病毒(Herpes Simplex virus)、埃-巴二氏病毒(Epstein-Barr virus)、細胞巨大病毒)及痘病毒(例如牛痘、鳥痘及金絲雀痘)。反轉錄病毒之實例包括禽類白血病肉瘤病毒、1型人類T-淋巴病毒(human T-lymphotrophic virus type 1，HTLV-1)、牛白血病病毒(bovine leukemia virus，BLV)、慢病毒及泡沫病毒。其他病毒包括例如諾沃克病毒(Norwalk virus)、披衣病毒、黃病毒、呼腸孤病毒、乳多泡病毒、嗜肝DNA病毒及肝炎病毒。病毒載體可根據其整合至宿主基因組中之能力分為兩組-整合型及非整合型。致癌反轉錄病毒及慢病毒可整合至宿主細胞染色體中，而腺病毒、腺相關病毒及疱疹病毒主要以染色體外游離基因體形式保持於細胞核中。

在某些具體實例中，適合病毒載體為反轉錄病毒載體。反轉錄病毒係指反轉錄病毒科之病毒。反轉錄病毒之實例包括致癌反轉錄病毒，諸如鼠類白血病病毒(murine leukemia virus，MLV)；及慢病毒，諸如人類免疫缺陷病毒1 (human immunodeficiency virus 1，HIV-1)。反轉錄病毒基因組為單股(ss) RNA且包含可以順式或反式提供之各種基因。舉例而言，反轉錄病毒基因組可含有順式作用序列，諸如兩個長末端重複序列(long terminal repeat，LTR)，具有用於基因表現、反轉錄及整合至宿主染色體中之元件。其他組分包括用於將特定RNA封裝至新形成之病毒粒子中之封裝信號(psi或ψ)，及作為反轉錄期間起始正股DNA合成位點之多嘌呤管道(polypurine tract，PPT)。另外，反轉錄病毒基因組可包含gag、pol及env基因。gag基因編碼結構蛋白，pol基因編碼伴隨ssRNA且進行將病毒RNA反轉錄為DNA之酶，且env基因編碼病毒包膜。一般而言，gag、pol及env以反式提供用於病毒複製及封裝。

在某些具體實例中，本文所提供之反轉錄病毒載體可為慢病毒載體。識別慢病毒之至少五個血清組或血清型。不同血清型之病毒可不同地感染某些細胞類型及/或宿主。舉例而言，慢病毒包括靈長類反轉錄病毒及非靈長類反轉錄病毒。靈長類反轉錄病毒包括HIV及猿猴免疫缺陷病毒(simian immunodeficiency virus，SIV)。非靈長類反轉錄病毒包括貓免疫缺陷病毒(feline immunodeficiency virus，FIV)、牛免疫缺陷病毒(bovine immunodeficiency virus，BIV)、山羊關節炎-腦炎病毒(caprine arthritis-encephalitis virus，CAEV)、馬感染性貧血病毒(equine infectious anemia virus，EIAV)及維思納病毒(visnavirus)。慢病毒或慢病毒載體可能能夠轉導靜止細胞。如同致癌反轉錄病毒載體，慢病毒載體之設計可基於順式作用及反式作用序列之分離。

在某些具體實例中，本發明提供已經設計用於藉由最佳化治療性反轉錄病毒載體遞送之表現載體。反轉錄病毒載體可為包含左側(5') LTR之慢病毒；有助於病毒之封裝及/或核導入的序列；可操作地連接至編碼核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C之序列的調節元件(諸如(例如)細胞類型選擇性(例如心肌細胞)啟動子及/或強化子)；視情況選用之一或多種另外的調節元件(諸如(例如)polyA序列)；視情況選用之慢病毒反向反應元件(reverse response element，RRE)；視情況選用之絕緣子；及右側(3')反轉錄病毒LTR。

在例示性具體實例中，本文所提供之病毒載體為腺相關病毒(AAV)。AAV為感染人類及一些其他靈長類物種之小型、複製缺乏型、無包膜動物病毒。尚未知曉AAV引起人類疾病及誘導輕度免疫反應。AAV載體亦可在不整合至宿主細胞基因組中的情況下感染分裂及靜止細胞兩者。

AAV基因組由長度為約4.7 kb之直鏈單股DNA組成。基因組由藉由長度為約145 bp之反向末端重複(ITR)序列側接之兩個開放閱讀框架(open reading frame，ORF)組成。ITR由5'端處之核苷酸序列(5' ITR)及含有回文序列之位於3'端處之核苷酸序列(3' ITR)組成。ITR藉由在為了第二股合成之DNA複製之起始期間充當引物之互補鹼基配對摺疊形成T形髮夾結構而以順式起作用。兩個開放閱讀框架編碼參與病毒粒子之複製及封裝的rep及cap基因。在一例示性具體實例中，本文所提供之AAV載體不含rep或cap基因。此類基因可以反式提供用於產生病毒粒子，如下文進一步描述。

在某些具體實例中，AAV載體可包括填充核酸。在一些具體實例中，填充核酸可編碼綠色螢光蛋白或抗生素抗性基因，諸如康黴素(kanamycin)或安比西林(ampicillin)。在某些具體實例中，填充核酸可位於ITR序列外部(例如相比於核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C轉殖基因序列及調節序列，其位於5'與3' ITR序列之間)。

存在各種血清型之AAV，包括AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12及AAV13。此等血清型不同之處在於其趨向性或其所感染的細胞之類型。AAV可包含來自多種血清型(例如假型)之基因組及殼體。舉例而言，AAV可包含在來自血清型5或血清型9之殼體中封裝之血清型2之基因組(例如ITR)。假型可提高轉導效率以及改變趨向性。

在某些具體實例中，本文所述之病毒載體包含最小量之AAV反向末端重複序列(ITR)及轉殖基因，轉殖基因編碼(a)核纖層蛋白A多肽；(b)核纖層蛋白C多肽；(c)核纖層蛋白A及核纖層蛋白C多肽；或其生物活性變異體及/或片段。在某些具體實例中，本文所述之病毒載體包含由最小量之AAV反向末端重複序列(ITR)及轉殖基因組成的袖珍基因，轉殖基因編碼(a)核纖層蛋白A多肽之生物活性片段；(b)核纖層蛋白C多肽之生物活性片段；(c)核纖層蛋白A之生物活性片段及核纖層蛋白C多肽之生物活性片段；或其生物活性變異體及/或片段。在一個特定具體實例中，使用AAV血清型6或AAV血清型9之ITR。然而，可選擇來自其他適合血清型之ITR。將病毒載體封裝至殼體蛋白中且遞送至所選宿主細胞。本發明之AAV載體可由多種腺相關病毒產生。可藉由將一種血清型之重組基因組封裝至衍生自另一AAV血清型之殼體中來改變載體之趨向性。在一些具體實例中，rAAV病毒之ITR可基於AAV1-12中之任一者之ITR且可與選自以下者中之任一者的AAV殼體組合：AAV1-12、AAV-DJ、AAV-DJ8、AAV-DJ9或其他經修飾血清型。

在一些具體實例中，AAV載體或AAV病毒顆粒或病毒粒子可用以遞送包含可操作地連接至編碼核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C的序列之構築體至細胞、細胞類型或組織中，且可活體內、離體或試管內進行。在例示性具體實例中，此類AAV載體為複製缺陷型。在一些具體實例中，AAV病毒經工程化或經基因修飾以使得其可僅在輔助因子存在下複製及產生病毒粒子。

在某些具體實例中，病毒載體可經選擇以在無針對特定細胞類型之選擇性的情況下產生具有高感染性之病毒粒子，同時儘管可用病毒感染其他肌肉細胞，心肌細胞選擇性調節元件賦予轉殖基因在心肌細胞中而不在其他肌肉細胞中的選擇性表現。在某些具體實例中，病毒載體可經設計以產生病毒粒子，該病毒粒子感染許多不同細胞類型但在所關注的細胞類型(例如心肌細胞)中轉殖基因之表現增強及/或最佳化且在其他非目標細胞類型(例如非心肌細胞)中轉殖基因之表現減少及/或降至最低。轉殖基因在不同細胞類型中之差異性表現可使用針對一或多種細胞類型為選擇性的不同調節元件來控制、工程化或操控。在一些情況下，一或多種可操作地連接至轉殖基因之調節元件增強轉殖基因在目標細胞、細胞類型或組織中之選擇性表現，同時一或多種調節元件遏制非目標細胞、細胞類型或組織中之轉殖基因表現，或賦予在一或多種非目標細胞、細胞類型或組織中的顯著降低、最小或統計學上降低之基因表現。對於基因療法，可能需要轉殖基因在目標細胞類型(例如心肌細胞)中之選擇性表現及/或轉殖基因在非目標細胞類型中之最小表現。轉殖基因在非預期細胞類型(例如非目標細胞類型)中之表現可引起對個體之不良影響。轉殖基因在非預期細胞類型中之表現可抵消轉殖基因在預期細胞類型中之療效。

在例示性具體實例中，本發明提供已經設計以用於藉由AAV遞送之表現載體。AAV可為任何血清型，例如AAV1、AAV2、AAV3、AAV3b、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAV-DJ，或嵌合、雜合或變異型AAV。AAV亦可為自補AAV (scAAV)。在某些具體實例中，經設計用於藉由AAV遞送之表現載體包含5' ITR及3' ITR。在某些具體實例中，經設計用於藉由AAV遞送之表現載體包含5' ITR、啟動子、包含可操作地連接至編碼核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C之調節元件(諸如(例如)細胞類型選擇性(例如心肌細胞)啟動子及/或強化子)的構築體及3' ITR。在某些具體實例中，經設計用於藉由AAV遞送之表現載體包含5' ITR、強化子、啟動子、包含可操作地連接至編碼核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C之調節元件(諸如(例如)細胞類型選擇性(例如心肌細胞)啟動子及/或強化子)的構築體、polyA序列及3' ITR。在某些具體實例中，經設計用於藉由AAV遞送之表現載體包含5' ITR、包含SEQ ID NO: 30至69或100至102中之任一者或其變異體或功能性片段的調節元件、編碼核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C之序列及3' ITR。在一個具體實例中，經設計以用於藉由AAV遞送之表現載體包含5' ITR、包含SEQ ID NO: 31、33、60或61中之任一者或多者或其變異體或功能性片段的啟動子、編碼核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C之序列及3' ITR。在另一具體實例中，經設計以用於藉由AAV遞送之表現載體包含5' ITR、包含SEQ ID NO: 31或其變異體或功能性片段的調節元件、編碼核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C之序列及3' ITR。在另一具體實例中，經設計以用於藉由AAV遞送之表現載體包含5' ITR、包含SEQ ID NO: 33或其變異體或功能性片段的調節元件、編碼核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C之序列及3' ITR。在另一具體實例中，經設計以用於藉由AAV遞送之表現載體包含5' ITR、包含SEQ ID NO: 60或其變異體或功能性片段的調節元件、編碼核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C之序列及3' ITR。在另一具體實例中，經設計以用於藉由AAV遞送之表現載體包含5' ITR、包含SEQ ID NO: 61或其變異體或功能性片段的調節元件、編碼核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C之序列及3' ITR。例示性AAV表現載體說明於圖1至5及11A至C中。F. 病毒顆粒

在某些具體實例中，本發明提供包含病毒載體之病毒顆粒，該病毒載體包含編碼以下者之核苷酸序列：(a)核纖層蛋白A多肽；(b)核纖層蛋白C多肽；(c)核纖層蛋白A及核纖層蛋白C多肽；或其生物活性變異體及/或片段。在某些具體實例中，本發明提供包含病毒載體之病毒顆粒，該病毒載體包含編碼以下者之核苷酸序列：(a)核纖層蛋白A多肽之生物活性片段；(b)核纖層蛋白C多肽之生物活性片段；(c)核纖層蛋白A之生物活性片段及核纖層蛋白C多肽之生物活性片段；或其生物活性變異體及/或片段。術語「病毒顆粒(viral particle)」及「病毒粒子(virion)」在本文可互換使用且係關於感染性且典型地複製缺陷性的病毒顆粒，其包含封裝於殼體內之病毒基因組(例如病毒表現載體)，且視具體情況，例如對於反轉錄病毒，包含殼體周圍之脂質包膜。「殼體」係指封裝病毒基因組之結構。殼體由若干由蛋白製成之寡聚結構子單元組成。舉例而言，AAV具有藉由以下三種殼體蛋白之相互作用所形成的二十面體殼體：VP1、VP2及VP3。在一個具體實例中，本文所提供之病毒粒子為藉由將包含調節元件(包括例如細胞類型(例如心肌細胞)選擇性調節元件)的AAV載體封裝於蛋白殼層中而獲得的重組AAV病毒粒子或rAAV病毒粒子，該調節元件可操作地連接至編碼如本文所述之核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C的序列。

在某些具體實例中，本文所提供之重組AAV病毒粒子可藉由殼體化衍生自病毒粒子中之特定AAV血清型之AAV基因組製備，該特定AAV血清型由與相同特定血清型之AAV對應的天然Cap蛋白質形成。在其他具體實例中，本文所提供之AAV病毒顆粒包含病毒載體，該病毒載體包含封裝至來自不同血清型之蛋白中之給定AAV血清型的ITR。參見例如Bunning H等人 J Gene Med 2008; 10: 717-733。舉例而言，具有來自給定AAV血清型之ITR的病毒載體可封裝至以下各者中：a)由衍生自相同或不同AAV血清型之殼體蛋白(例如AAV2 ITR及AAV9殼體蛋白；AAV2 ITR及AAV8殼體蛋白；等)構成之病毒顆粒；b)由來自不同AAV血清型之殼體蛋白或突變體之混合物(例如AAV2 ITR與AAV1及AAV9殼體蛋白)構成之嵌合體病毒顆粒；c)由已藉由不同AAV血清型或變異體之間的域交換截短之殼體蛋白構成之嵌合病毒顆粒(例如具有AAV9域之AAV2 ITR與AAV8殼體蛋白)；或d)靶向病毒顆粒，其經工程化以顯示選擇性結合域，使得能夠與目標細胞特異性受體進行嚴格相互作用(例如藉由插入肽配體而基因截短之AAV5 ITR與AAV9殼體蛋白；或藉由將肽配體偶合至殼體表面而非基因修飾之AAV9殼體蛋白)。

技術人員應瞭解，本文所提供之AAV病毒粒子可包含任何AAV血清型之殼體蛋白。在一個具體實例中，病毒顆粒包含來自選自由AAV1、AAV2、AAV5、AAV6、AAV8及AAV9組成之群的AAV血清型之殼體蛋白，其更適合於遞送至心肌(M. Hocquemiller等人, Hum Gene Ther 27(7): 478-496 (2016))。在一些具體實例中，病毒載體包含來自AAV6血清型之殼體蛋白。在一些具體實例中，病毒載體包含來自AAV9血清型之殼體蛋白。

本領域中已知多種用於產生rAAV病毒粒子之方法，包括轉染、穩定細胞系產生及感染性雜合病毒產生系統，其包括腺病毒-AAV雜合體、疱疹病毒-AAV雜合體(Conway, J E等人, (1997) J. Virology 71(11):8780-8789)及桿狀病毒-AAV雜合體。用於製造rAAV病毒顆粒之rAAV產生培養物均需要：1)在桿狀病毒生產系統情況下，適合宿主細胞，包括例如人類衍生之細胞系，諸如HeLa、A549或293細胞，或昆蟲衍生之細胞系，諸如SF-9；2)藉由野生型或突變體腺病毒(諸如溫度敏感腺病毒)、疱疹病毒、桿狀病毒提供的適合輔助病毒功能，或提供輔助功能之質體構築體；3) AAVrep及cap基因及基因產物；4)藉由AAV ITR序列側接之轉殖基因(例如編碼如本文所述之核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C的序列)；及5)適合培養基及培養基組件以支持rAAV產生。

在各種具體實例中，本文所述之宿主細胞包含以下三種組件：(1) rep基因及cap基因，(2)提供輔助功能之基因，及(3)轉殖基因(例如藉由ITR側接的編碼本文所述之核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C之序列)。AAV rep基因、AAV cap基因及提供輔助功能之基因可藉由將該等基因併入至諸如(例如)質體之載體中，及將該載體引入宿主細胞中而引入細胞中。rep、cap及輔助功能基因可併入相同質體或不同質體中。在一較佳具體實例中，AAV rep及cap基因併入一種質體中且提供輔助功能之基因併入另一質體中。形成用於病毒粒子產生之宿主細胞的各種質體(例如包含AAV rep及cap基因、輔助功能或轉殖基因)可藉由使用所屬領域中熟知之任何適合方法引入細胞中。轉染方法之實例包括(但不限於)與磷酸鈣、DEAE-右旋糖苷、凝聚胺共沈澱；電穿孔；顯微注射；脂質體介導融合；脂質體轉染；反轉錄病毒感染；及基因槍轉染。在某些具體實例中，可將提供rep及cap基因、輔助功能及轉殖基因之質體(例如藉由ITR側接的編碼本文所揭示之核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C之序列)同時引入細胞中。在另一具體實例中，提供rep及cap基因及輔助功能之質體可在引入包含轉殖基因之質體之前或之後引入細胞中。在一例示性具體實例中用以下三種質體同時轉染細胞(例如三重轉染方法)：(1)包含轉殖基因之質體(例如藉由ITR側接之編碼本文所揭示之核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C的序列)，(2)包含AAV rep及cap基因之質體，及(3)包含提供輔助功能之基因的質體。例示性宿主細胞可為293、A549或HeLa細胞。

在其他具體實例中，(1)AAV rep及cap基因、(2)提供輔助功能之基因及(3)轉殖基因中之一或多者可藉由封裝細胞運載，為游離地及/或整合至包裝細胞之基因組中。在一個具體實例中，宿主細胞可為封裝細胞，其中AAV rep及cap基因及輔助功能穩定維持於宿主細胞中且宿主細胞經含有轉殖基因之質體(例如藉由ITR側接之編碼本文所揭示之核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C的序列)短暫轉染。在另一具體實例中，宿主細胞為封裝細胞，其中AAV rep及cap基因穩定維持於宿主細胞中且宿主細胞經含有轉殖基因之質體(例如藉由ITR側接之編碼本文所揭示之核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C的序列)及含有輔助功能之質體短暫轉染。在另一具體實例中，宿主細胞可為封裝細胞，其中輔助功能穩定維持於宿主細胞中且宿主細胞經含有轉殖基因之質體(例如藉由ITR側接之編碼本文所揭示之核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C的序列)及含有rep及cap基因之質體短暫轉染。在另一具體實例中，宿主細胞可為經rep及cap基因、輔助功能及轉殖基因序列(例如藉由ITR側接之編碼本文所揭示之核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C的序列)穩定轉染之生產細胞系。例示性封裝及生產細胞可衍生自293、A549或HeLa細胞。

在另一具體實例中，生產細胞系為經提供Rep及Cap蛋白之桿狀病毒表現載體感染之昆蟲細胞系(典型地為Sf9細胞)。此系統不需要腺病毒輔助基因(Ayuso E等人, Curr. Gene Ther. 2010, 10:423-436)。

如本文所用，術語「cap蛋白」係指具有天然AAV Cap蛋白(例如VP1、VP2、VP3)之至少一種功能活性的多肽。cap蛋白之功能活性之實例包括誘導殼體形成、促進單股DNA積聚、促進AAV DNA封裝至殼體中(亦即殼體化)、結合至細胞受體及促進病毒粒子進入宿主細胞中之能力。原則上，任何Cap蛋白可用於本發明之情形中。

已報導Cap蛋白對宿主趨向性、細胞、組織或器官特異性、受體使用、感染效率及AAV病毒之免疫原性具有影響。因此，用於rAAV之AAV cap可考慮例如個體之物種(例如人類或非人類)、個體之免疫狀態、個體對於長期或短期治療之適合性或特定治療應用(例如特定疾病或病症之治療或遞送至特定細胞、組織或器官)來選擇。在某些具體實例中，cap蛋白衍生自由AAV1、AAV2、AAV5、AAV6、AAV8及AAV9血清型組成之群的AAV。在一些具體實例中，cap蛋白衍生自AAV6。在一些具體實例中，cap蛋白衍生自AAV9。

在一些具體實例中，用於本發明方法之AAV Cap可由前述AAV cap中之一者或其編碼核酸之突變誘發(亦即藉由插入、缺失或取代)產生。在一些具體實例中，AAV cap與前述AAV cap中之一或多者具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%或更大相似性。

在一些具體實例中，AAV cap為嵌合的，包含來自兩個、三個、四個或更多個前述AAV cap之域。在一些具體實例中，AAV cap為源自兩種或三種不同AAV或重組AAV之VP1、VP2及VP3單體之嵌合體。在一些具體實例中，rAAV組成物包含前述cap中之多於一者。

在一些具體實例中，用於rAAV病毒粒子之AAV cap經工程化以含有異源序列或其他修飾。舉例而言，賦予選擇性靶向或免疫逃避之肽或蛋白序列可工程化為cap蛋白。可替代地或另外，cap可經化學修飾以使得rAAV之表面聚乙烯羥乙酸化(亦即聚乙二醇化)，其可促進免疫逃避。cap蛋白亦可經突變誘發(例如以移除其天然受體結合，或掩蔽免疫性抗原決定基)。

如本文所用，術語「rep蛋白」係指具有天然AAV rep蛋白(例如rep 40、52、68、78)之至少一種功能活性之多肽。rep蛋白之功能活性之實例包括與蛋白之生理功能相關之任何活性，包括經由識別促進DNA複製、DNA複製之AAV來源的結合及切口以及DNA解螺旋酶活性。另外的功能包括調節自AAV (或其他異源)啟動子之轉錄及將AAV DNA位點特異性整合至宿主染色體中。在一特定具體實例中，AAV rep基因可來自血清型AAV1、AAV2、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10或AAVrh10。在一些具體實例中，AAV rep基因來自AAV6。在一些具體實例中，AAV rep基因來自AAV9。

在一些具體實例中，用於本發明方法之AAV rep蛋白可由前述AAV rep中之一者或其編碼核酸之突變誘發(亦即藉由插入、缺失或取代)產生。在一些具體實例中，AAV rep與前述AAV rep中之一或多者具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%或更大相似性。

如本文所用，表述「輔助功能」或「輔助基因」係指AAV進行複製所依賴之病毒蛋白。輔助功能包括AAV複製所需之彼等蛋白，包括(但不限於)參與AAV基因轉錄活化、階段特異性AAV mRNA剪接、AAV DNA複製、cap表現產物合成及AAV殼體組裝之彼等蛋白。基於病毒之附件功能可衍生自任何已知輔助病毒，諸如腺病毒、疱疹病毒(除1型單純疱疹病毒以外)及牛痘病毒。輔助功能包括(但不限於)腺病毒E1、E2a、VA及E4或疱疹病毒UL5、ULB、UL52及UL29，及疱疹病毒聚合酶。在一較佳具體實例中，AAV進行複製所依賴之蛋白衍生自腺病毒。

在一些具體實例中，用於本發明方法之AAV進行複製所依賴之病毒蛋白可藉由前述病毒蛋白中之一者或其編碼核酸之突變誘發(亦即藉由插入、缺失或取代)產生。在一些具體實例中，病毒蛋白與前述病毒蛋白中之一或多者具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%或更大相似性。

檢定AAV進行複製所依賴之cap蛋白、rep蛋白及病毒蛋白之功能的方法為所屬領域中眾所熟知的。G. 宿主細胞

在另一態樣中，本發明係關於包含病毒載體或病毒顆粒之宿主細胞，該病毒載體或病毒顆粒包含編碼以下者之核苷酸序列：(a)核纖層蛋白A多肽；(b)核纖層蛋白C多肽；(c)核纖層蛋白A及核纖層蛋白C多肽；或其生物活性變異體及/或片段。在另一具體實例中，本發明係關於包含病毒載體或病毒顆粒之宿主細胞，該病毒載體或病毒顆粒包含編碼以下者之核苷酸序列：(a)核纖層蛋白A多肽之生物活性片段；(b)核纖層蛋白C多肽之生物活性片段；(c)核纖層蛋白A之生物活性片段及核纖層蛋白C多肽之生物活性片段；或其生物活性變異體及/或片段。宿主細胞可為細菌細胞、酵母細胞、昆蟲細胞或哺乳動物細胞。在一例示性具體實例中，宿主細胞係指任何易受所關注之病毒感染，且能夠試管內培養之細胞系。

在某些具體實例中，本文所提供之宿主細胞可用於離體基因療法目的。在此類具體實例中，細胞經包含編碼核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C之序列的核酸分子或表現載體轉染且隨後移植至患者或個體中。移植細胞可具有自體、外源或異源來源。對於臨床使用，細胞分離將一般在良好作業規範(Good Manufacturing Practices，GMP)條件下進行。在移植之前，典型地檢查細胞品質及微生物或其他污染物之不存在且可進行預處理，諸如藉由放射及/或免疫抑制治療。此外，宿主細胞可連同生長因子一起移植以刺激細胞增殖及/或分化。

在某些具體實例中，宿主細胞可用於離體基因療法至心臟或所關注的其他組織中。較佳地，該等細胞為真核細胞，諸如哺乳動物細胞，此等細胞包括(但不限於)人類、非人類靈長類動物，諸如猿；黑猩猩；猴及紅毛猩猩，家養動物，包括狗及貓，以及家畜，諸如馬、牛、豬、綿羊及山羊，或其他哺乳動物物種，包括(但不限於)小鼠、大鼠、天竺鼠、兔、倉鼠及類似者。所屬領域中具知識者將根據待移植之患者或個體選擇更適當細胞。

在某些具體實例中，本文所提供之宿主細胞可為具有自體更新及多能性特性之細胞，諸如幹細胞或經誘導之多能幹細胞。幹細胞較佳為間質幹細胞。間質幹細胞(MSC)能夠分化為成骨細胞、軟骨細胞、脂肪細胞或肌細胞中之至少一者，且可自任何類型的組織分離。一般而言，MSC將自骨髓、脂肪組織、臍帶或外周血分離。獲得其之方法已為所屬領域中具知識者所熟知。經誘導之多能幹細胞(亦稱為iPS細胞或iPSC)為可直接自成人細胞產生之一種類型的多能幹細胞。Yamanaka等人藉由將Oct3/4、Sox2、Klf4及c-Myc基因轉移至小鼠及人類纖維母細胞中，且迫使細胞表現基因而誘導iPS細胞(WO 2007/069666)。Thomson等人隨後使用Nanog及Lin28替代Klf4及c-Myc來產生人類iPS細胞(WO 2008/118820)。

在一例示性具體實例中，本文所提供之宿主細胞為封裝細胞。該等細胞可為黏附或懸浮細胞。封裝細胞及輔助載體或病毒或DNA構築體共同地以反式提供病毒載體之完全複製及封裝所需的所有缺失功能。

較佳地，該等封裝細胞為真核細胞，諸如哺乳動物細胞，包括猿猴、人類、狗及嚙齒動物細胞。人類細胞之實例為PER.C6細胞(WO01/38362)、MRC-5 (ATCC CCL-171)、WI-38 (ATCC CCL-75)、HEK-293細胞(ATCC CRL-1573)、HeLa細胞(ATCC CCL2)及胚胎恆河猴肺細胞(ATCC CL- 160)。非人類靈長類細胞之實例為Vero細胞(ATCC CCL81)、COS-1細胞(ATCC CRL-1650)或COS-7細胞(ATCC CRL-1651)。狗細胞之實例為MDCK細胞(ATCC CCL-34)。嚙齒動物細胞之實例為倉鼠細胞，諸如BHK21-F、HKCC細胞或CHO細胞。

作為哺乳動物來源之替代物，用於本發明之細胞系可衍生自禽類來源，諸如雞、鴨、鵝、鵪鶉或野雞。禽類細胞系之實例包括禽類胚胎幹細胞(WO01/85938及WO03/076601)、永生化鴨視網膜細胞(WO2005/042728)，及禽類胚胎幹細胞衍生之細胞，包括雞細胞(WO2006/108846)或鴨細胞，諸如EB66細胞系(WO2008/129058及WO2008/142124)。

在另一具體實例中，該宿主細胞為昆蟲細胞，諸如SF9細胞(ATCC CRL-1711)、Sf21細胞(IPLB-Sf21)、MG1細胞(BTI-TN-MG1)或High FiveTM細胞(BTI-TN-5B1-4)。

在某些具體實例中，本文所提供之宿主細胞包含病毒載體或病毒顆粒，該病毒載體或病毒顆粒包含編碼以下者之核苷酸序列：(a)核纖層蛋白A多肽；(b)核纖層蛋白C多肽；(c)核纖層蛋白A及核纖層蛋白C多肽；或其生物活性變異體及/或片段，可進一步包含一或多種另外的核酸構築體，諸如(例如) (i)編碼rep及cap基因但並不攜帶ITR序列之核酸構築體(例如AAV輔助質體)；及/或(ii)提供AAV複製必需之腺病毒功能的核酸構築體(例如質體)。在一例示性具體實例中，本文所提供之宿主細胞包含：i)本文所揭示之任何核酸構築體或病毒載體，例如本文所揭示之包含編碼以下者之核苷酸序列的任何核酸構築體或載體：(a)核纖層蛋白A多肽；(b)核纖層蛋白C多肽；(c)核纖層蛋白A及核纖層蛋白C多肽；或其生物活性變異體及/或片段；ii)編碼AAVrep及cap基因而不攜帶ITR序列的核酸構築體；及iii）包含腺病毒輔助基因之核酸構築體(如下文進一步描述)。

在某些具體實例中，rep、cap及腺病毒輔助基因可在單一質體上組合(Blouin V等人 J Gene Med. 2004; 6(增刊): S223-S228；Grimm D.等人 Hum. Gene Ther. 2003; 7: 839-850)。因此，在另一例示性具體實例中，本文所提供之宿主細胞包含：i)包含編碼核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C之序列(亦即重組AAV基因組)的核酸分子或表現載體；及ii)編碼AAV rep及cap基因而不攜帶ITR序列且進一步包含腺病毒輔助基因之質體。

在另一具體實例中，本文所提供之宿主細胞包含：i)本文所揭示之任何核酸構築體或病毒載體，例如本文所揭示之包含編碼以下者之核苷酸序列的任何核酸構築體或載體：(a)核纖層蛋白A多肽；(b)核纖層蛋白C多肽；(c)核纖層蛋白A及核纖層蛋白C多肽；或其生物活性變異體及/或片段；b)編碼AAVrep及cap基因而不攜帶ITR序列的核酸構築體；及c)包含腺病毒輔助基因E2a、E4及VA RNA之質體；其中共-轉染在組成性表現且反補腺病毒E1基因的細胞(較佳為哺乳動物細胞)中執行，如HEK-293細胞(ATCC CRL-1573)。

在某些具體實例中，適合於大規模產生AAV載體之宿主細胞為可經重組桿狀病毒之組合感染之昆蟲細胞(Urabe等人 Hum. Gene Ther. 2002; 13: 1935-1943)。舉例而言，SF9細胞可經分別表現待封裝之AAV rep、AAV cap及AAV載體之三種桿狀病毒載體共感染。重組桿狀病毒載體將提供病毒複製及/或封裝所需的病毒輔助基因功能。

構築及產生用於根據本發明之基因療法之病毒粒子的進一步指導可見於：Viral Vectors for Gene Therapy, Methods and Protocols. Series: Methods in Molecular Biology, 第737卷. Merten及Al-Rubeai (編); 2011 Humana Press (Springer); Gene Therapy. M. Giacca. 2010 Springer-Verlag; Heilbronn R.及Weger S. Viral Vectors for Gene Transfer: Current Status of Gene Therapeutics. In: Drug Delivery, Handbook of Experimental Pharmacology 197; M. Schafer-Korting (編). 2010 Springer-Verlag; 第143-170頁; Adeno-Associated Virus: Methods and Protocols. R. O. Snyder及P. Moulllier (編). 2011 Humana Press (Springer); Bunning H. 等人 Recent developments in adeno-associated virus technology. J. Gene Med. 2008; 10:717-733；及Adenovirus: Methods and Protocols. M. Chillon及A. Bosch (編); 第三版. 2014 Humana Press (Springer)中。

用於表現所關注之轉殖基因(例如編碼核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C之序列)的宿主細胞可在適於AAV病毒粒子之組裝的條件下生長。在某些具體實例中，宿主細胞生長適合之時段以促進AAV病毒粒子之組裝及病毒粒子釋放至培養基中。一般而言，細胞可生長約24小時、約36小時、約48小時、約72小時、約4天、約5天、約6天、約7天、約8天、約9天或至多約10天。在約10天(或更早，取決於培養條件及所使用之特定宿主細胞)之後，產生水平一般顯著降低。一般而言，培養時間自病毒產生之時間點開始量測。舉例而言，在AAV的情況下，病毒產生一般在如本文所述之適當宿主細胞中提供輔助病毒功能後開始。一般而言，在輔助病毒感染之後(或在病毒產生開始之後)約48至約100、較佳約48至約96、較佳約72至約96、較佳約68至約72小時收集細胞。

rAAV產生培養物可在適合於所用特定宿主細胞的多種條件(在寬溫度範圍內、持續不同時間長度及類似者)下生長。rAAV產生培養物包括連接依賴性培養物，其可在適合之連接依賴性容器，諸如(例如)滾瓶、中空纖維過濾器、微載體及填充床或流體化床生物反應器中培養。rAAV載體產生培養物亦可包括懸浮適應宿主細胞，諸如HeLa、293及SF-9細胞，其可以多種方法培養，包括例如旋轉燒瓶、攪拌槽生物反應器及拋棄式系統，諸如Wave袋系統。

本領域中已知之適合培養基可用於產生rAAV病毒粒子。此等培養基包括(但不限於)由Hyclone Laboratories及JRH生產之培養基，包括改良伊格爾培養基(Modified Eagle Medium，MEM)、杜爾貝科氏改良伊格爾培養基(Dulbecco's Modified Eagle Medium，DMEM)，其各自以全文引用的方式併入本文中。在某些具體實例中，rAAV產生培養基可補充有0.5%至20% (v/v或w/v)之含量的血清或血清衍生之重組蛋白。或者，rAAV載體可產生於無血清條件下，其亦可稱為無動物衍生之產物之培養基。

在培養宿主細胞以允許AAV病毒粒子產生之後，隨後可採集及純化所得病毒粒子。在某些具體實例中，AAV病毒粒子可(1)藉由宿主細胞溶解獲自產生培養物之宿主細胞，及/或(2)在轉染後一段時間，較佳72小時之後獲自該等細胞之培養基。rAAV病毒粒子可自來自產生培養物之消耗培養基收集，其限制條件為細胞在引起rAAV病毒粒子自完整細胞釋放至培養基中之條件下培養(參見例如美國專利第6,566,118號)。溶解細胞之適合方法亦為本領域中已知且包括例如多個冷凍/解凍循環、音波處理、微流體化及用化學物質，諸如洗滌劑及/或蛋白酶處理。

在收集之後，rAAV病毒粒子可經純化。如本文所用，術語「純化」包括製備不含亦可存在於rAAV病毒粒子天然存在或最初製備處之其他組分中之至少一些的rAAV病毒粒子。因此，舉例而言，純化rAAV病毒粒子可使用分離技術將其自源混合物，諸如培養溶解物或產生培養上清液富集來製備。富集可以多種方法量測，諸如(例如)藉由存在於溶液中之抗DNA酶粒子DNase-resistant particle，DRP)或基因組複本(genome copy，gc)之比例，或藉由感染力，或其可相對於存在於源混合物(諸如污染物，包括產生培養物污染物或過程內污染物，包括輔助病毒、培養基組分及類似者)中之第二潛在干擾物質來量測。

在某些具體實例中，rAAV產生培養物收集物可經澄清以移除宿主細胞碎片。在一些具體實例中，產生培養物收集物可使用多種標準技術澄清，諸如離心或經由0.2 µm或更大孔徑之過濾器(例如乙酸纖維素過濾器或一系列深度過濾器)過濾。

在某些具體實例中，rAAV產生培養物收集物進一步用Benzonase^TM 處理以消化存在於產生培養物中之任何高分子量DNA。在一些具體實例中，Benzonase^TM 消化在標準條件下執行，例如1至2.5個單元/ml Benzonase^TM 之最終濃度，在環境溫度至37℃範圍內之溫度下，持續30分鐘至數小時之時段。

在某些具體實例中，rAAV病毒粒子可使用以下純化步驟中之一或多者來分離或純化：平衡離心；流通式陰離子交換過濾；用於濃縮rAAV顆粒之切向流過濾(tangential flow filtration，TFF)；藉由磷灰石層析之rAAV捕獲；輔助病毒之熱不活化；藉由疏水相互作用層析之rAAV捕獲；藉由尺寸排阻層析法(size exclusion chromatography，SEC)之緩衝劑交換；奈米過濾；及藉由陰離子交換層析、陽離子交換層析或親和性層析之rAAV捕獲。此等步驟可單獨、以各種組合或以不同次序使用。純化rAAV顆粒之方法見於例如Xiao等人, (1998) Journal of Virology 72:2224-2232；美國專利第6,989,264號及第8,137,948號；及WO 2010/148143中。

在某些具體實例中，經純化AAV病毒粒子可相對於PBS滲析、過濾且儲存於-80℃下。病毒基因組之效價可藉由使用線性化質體DNA作為標準曲線之定量PCR測定(參見例如Lock M等人, Hum. Gene Ther. 2010; 21:1273-1285)。H. 醫藥組成物

在某些具體實例中，本發明提供包含本文所揭示之任何核酸構築體、表現載體、病毒載體、病毒顆粒或宿主細胞之組成物。在一些具體實例中，本發明提供包含病毒載體或病毒顆粒及醫藥學上可接受的載劑之組成物，該病毒載體或病毒顆粒包含編碼以下者之核苷酸序列：(a)核纖層蛋白A多肽；(b)核纖層蛋白C多肽；(c)核纖層蛋白A及核纖層蛋白C多肽；或其生物活性變異體及/或片段。在一些具體實例中，本發明提供包含病毒載體或病毒顆粒及醫藥學上可接受的載劑之組成物，該病毒載體或病毒顆粒包含編碼以下者之核苷酸序列：(a)核纖層蛋白A多肽之生物活性片段；(b)核纖層蛋白C多肽之生物活性片段；(c)核纖層蛋白A之生物活性片段及核纖層蛋白C多肽之生物活性片段；或其生物活性變異體及/或片段。在其他具體實例中，本發明提供包含病毒載體或病毒顆粒及醫藥學上可接受的載劑之宿主細胞，該病毒載體或病毒顆粒包含編碼以下者之核苷酸序列：(a)核纖層蛋白A多肽；(b)核纖層蛋白C多肽；(c)核纖層蛋白A及核纖層蛋白C多肽；或其生物活性變異體及/或片段。在特定具體實例中，此類組成物適合於基因療法應用。醫藥組成物較佳在製造及儲存條件下為無菌且穩定的。無菌溶液可例如藉由經由無菌過濾膜過濾來實現。

醫藥組成物中之可接受載劑及賦形劑較佳在所用劑量及濃度下對接受者無毒。可接受載劑及賦形劑可包括緩衝劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽、HEPES及TAE；抗氧化劑，諸如抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑，諸如氯化六羥季銨、十八烷基二甲基苯甲基氯化銨、間苯二酚及苯紮氯銨；蛋白，諸如人血清白蛋白、明膠、聚葡萄糖及免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、組胺酸及離胺酸；及碳水化合物，諸如葡萄糖、甘露糖、蔗糖及山梨醇。本發明之醫藥組成物可以可注射調配物形式非經腸投予。注射用醫藥組成物可使用無菌溶液或任何醫藥學上可接受之液體作為媒劑來調配。醫藥學上可接受之媒劑包括(但不限於)無菌水及生理鹽水。

本發明之醫藥組成物可在微膠囊，諸如羥甲基纖維素或明膠-微膠囊及聚甲基丙烯酸甲酯微膠囊中製備。本發明之醫藥組成物亦可在其他藥物遞送系統，諸如脂質體、白蛋白微球體、微乳液、奈米顆粒及奈米膠囊中製備。用於基因療法之醫藥組成物可在可接受之稀釋劑中，或可包含緩慢釋放基質，其中嵌入有基因遞送媒劑。

本文所提供之醫藥組成物可經調配用於非經腸投予、皮下投予、靜脈內投予、全身性投予、肌肉內投予、動脈內投予、腦實質內投予、鞘內投予、大池內投予、腦室內投予或腹膜內投予。在一個具體實例中，醫藥組成物經調配以用於靜脈內投予。在一個具體實例中，醫藥組成物經調配以用於全身性投予。醫藥組成物亦可經調配用於，或經由經鼻、噴霧、經口、氣溶膠、經直腸或經陰道投予來投予。在一個具體實例中，將本文所提供之醫藥組成物向肌肉投予，亦即藉由肌肉內注射投予。組織目標可為特異性的，例如心臟，或其可為若干組織，例如心臟及肝臟組織之組合。例示性組織或其他目標可包括肝臟、骨胳肌、心肌、脂肪沈積物、腎、肺、血管內皮、上皮、造血細胞、CNS及/或CSF。在一特定具體實例中，將本文所提供之醫藥組成物向心臟投予，亦即藉由心內注射、靜脈內注射或全身性投予。此等方法中之一或多者可用於投予本發明之醫藥組成物。

在某些具體實例中，本文所提供之醫藥組成物包含「有效量」或「治療有效量」。如本文所用，此類量係指在達成所需治療性結果(諸如增加LMNA 表現水平及/或增加心室輸出)所必需的劑量及時間段下之有效量。

本發明之醫藥組成物的劑量取決於包括投予途徑、待治療之疾病及個體之身體特徵(例如年齡、體重、一般健康)的因素。可調節劑量以提供最佳治療反應。通常，劑量可為在不誘導顯著毒性的情況下有效治療疾病之量。在一個具體實例中，可以在5×10¹¹ 至1×10¹⁴ gc/kg (基因組複本/公斤患者體重(gc/kg))範圍內之量或劑量向患者投予本文所提供之AAV載體用於治療核纖層病(包括例如擴張型心肌症)。在一更特定具體實例中，以包含於5×10¹¹ gc/kg至約3×10¹³ gc/kg、或約1×10¹² 至約1×10¹⁴ gc/kg、或約1×10¹² 至約1×10¹³ gc/kg、或約5×10¹¹ gc/kg、1×10¹² gc/kg、1.5×10¹² gc/kg、2.0×10¹² gc/kg、2.5×10¹² gc/kg、3×10¹² gc/kg、3.5×10¹² gc/kg、4×10¹² gc/kg、4.5×10¹² gc/kg、5×10¹² gc/kg、5.5×10¹² gc/kg、6×10¹² gc/kg、6.5×10¹² gc/kg、7×10¹² gc/kg、7.5×10¹² gc/kg、8×10¹² gc/kg、8.5×10¹² gc/kg、9×10¹² gc/kg或9.5×10¹² gc/kg之範圍內的量投予AAV載體。gc/kg可例如藉由qPCR或數位液滴PCR (digital droplet PCR，ddPCR)測定(參見例如M. Lock等人, Hum Gene Ther Methods. 2014年4月;25(2): 115-25)。在另一具體實例中，可以在1×10⁹ 至1×10¹¹ iu/kg (載體之感染性單位(iu)/個體或患者之體重(kg))範圍內之量或劑量向患者投予本文所提供之AAV載體用於治療核纖層病(包括例如擴張型心肌症)。在某些具體實例中，醫藥組成物可以所需單位劑量形成。此類單一劑量單位可含有約1×10⁹ gc至約1×10¹⁵ gc。

本發明之醫藥組成物可例如每天、每週、每月、每半年、每年或按醫學需要向有需要之個體投予一或多次(例如1至10次或更多次）。在一例示性具體實例中，單次投予為足夠的。在一個具體實例中，醫藥組成物適合於用於人類個體且藉由肌肉內注射投予。在一個具體實例中，醫藥組成物適合於用於人類個體且藉由心內注射、靜脈內注射或全身性投予來投予。在一個具體實例中，醫藥組成物係藉由快速注射經由外周靜脈遞送。在其他具體實例中，醫藥組成物係藉由經約10分鐘(±5分鐘)、經約20分鐘(±5分鐘)、經約30分鐘(±5分鐘)、經約60分鐘(±5分鐘)或經約90分鐘(±10分鐘)之輸注而經由外周靜脈遞送。

在另一態樣中，本發明進一步提供包含在一或多種容器中的如本文所述之核酸構築體、病毒載體、病毒顆粒、宿主細胞或醫藥組成物。套組可包括描述如何向患者投予套組內所含之核酸分子、載體、宿主細胞或病毒粒子的說明書或封裝材料。套組之容器可為任何適合之材料，例如玻璃、塑膠、金屬等，且具有任何適合之尺寸、形狀或組態。在某些具體實例中，套組可包括一或多種含有呈適合液體或溶液形式之核酸構築體、病毒載體、病毒顆粒、宿主細胞或醫藥組成物之安瓿或注射器。I. 治療方法

下伏於內核膜之核纖層為主要由A及B型核纖層蛋白構成的V型中間體長絲蛋白之網狀結構。哺乳動物體細胞表現四種主要及三種次要類型之核纖層蛋白。LMNA 基因編碼A型核纖層蛋白，包括兩種主要同功型A及C及兩種次要同功型AA10及C2。B型核纖層蛋白主要同功型B1及B2分別由LMNB1 及LMNB2 編碼。LMNB2 進一步編碼次要同功型B3。除提供機械強度至核以外，核-纖層相關人類疾病中之最新發現已確定核纖層蛋白有助於至少三個路徑：(a)藉由促進基因之亞核定位及表觀遺傳調節之基因表現及分化；(b)DNA損傷修復及基因組穩定性；及(c)控制各種分化路徑的轉錄因子及信號傳導組件之調節。

一些15種不同疾病/異常(稱作核纖層病或核包膜病)與核纖層蛋白及核纖層蛋白-結合蛋白內之突變有關。已報告LMNA內之多於500種突變，其引起核纖層蛋白多肽之異常摺疊、不穩定性及錯誤組裝，或其可影響蛋白域表面之生物化學特性，產生受干擾之核纖層蛋白A/C相互作用。此等突變引起以下四個主要疾病類型中之多種疾病表型：條紋肌肉疾病、脂質營養不良症候群、周邊神經病變及加快老化病症。此等疾病表型在心臟及骨胳肌病、脂質營養不良、外周神經病至過早老化與早期死亡範圍內。

擴張型心肌症為一種類型之條紋肌肉疾病，其特徵在於左心室或兩個心室之擴張及減弱的收縮以及減弱的收縮性功能。擴張型心肌症之發生率在1:2500名個體至1:250名個體範圍內。儘管為罕見疾病，擴張型心肌症表現出嚴重健康負荷，通常在疾病之任何階段引起心律不齊(亦即緩慢性心律失常及快速心律失常)、房室阻斷、血栓栓塞及猝死。截至2014年，已在LMNA 基因中識別出165種擴張型心肌症相關突變(Tesson F. Cardiol J. 2014;21(4):331-42)。此等突變包括誤義/無意義突變、剪接突變、少量缺失、少量插入、少量插入缺失、總體缺失或總體插入。大部分引起擴張型心肌症之LMNA 突變為存在於整個基因中的產生突變核纖層蛋白A/C蛋白之常染色體顯性誤義突變。

在某些具體實例中，本發明提供治療核纖層病之方法。適合於治療之核纖層病包括(但不限於)恰克-馬利-杜斯氏病、埃默里-德雷弗斯氏肌肉萎縮症(EDMD)、家族性部分脂質營養不良、哈欽森-吉爾福德氏早年衰老症候群(HGPS)、肢帶型肌肉萎縮症、LMNA相關先天性肌肉萎縮症、下頜末端發育不良、致心律不整型右心室心肌病、家族性心房微顫、左心室緻密化不全、擴張型心肌症、非典型沃納氏症候群(Atypical Werner syndrome)、巴拉克-西蒙斯氏症候群(Barraquer-Simons syndrome)、布施克-倫多夫氏症候群(Buschke-Ollendorff syndrome)、鄧尼根型家族性部分脂質營養不良(Familial partial lipodystrophy of the Dunnigan type，FPLD)、格林伯格發育不良、腦白質營養不良、1B型肢帶型肌肉萎縮症、伴以糖尿病之脂萎縮、肝脂肪變性、肥厚性心肌症及白色真皮層丘疹(leukomelanodermic papules，LDHCP)、下頜末端發育不良伴以A型脂質營養不良(Mandibuloacral dysplasia with type A lipodystrophy，MADA)、下頜末端發育不良伴以B型脂質營養不良(Mandibuloacral dysplasia with type B lipodystrophy，MADB)、佩爾-格氏畸形(Pelger-Huet anomaly，PHA)、佩利措伊斯-梅茨巴赫氏病(Pelizaeus-Merzbacher disease)及緊繃性表皮攣縮症候群。

在一些具體實例中，核纖層病可為核纖層脂質營養不良症、全身性核纖層病、核纖層神經病症或肌肉核纖層病。藉由「核纖層」脂質營養不良病症及「核纖層」神經病症意謂由異常核包膜形態引起或與異常核包膜形態相關之脂質營養不良及神經病症。脂質營養不良病症特徵在於脂肪組織之異常分散，視情況與諸如糖尿病及高三酸甘油酯血症的代謝病症相關。脂質營養不良患者通常遭受身體之某些區域中的脂肪組織之選擇性缺失及/或過度積聚(例如肢體中的缺失伴隨著上背中之過度沈積)。核纖層脂質營養不良病症之實例包括例如家族性部分脂質營養不良(鄧尼根型)、後天性部分脂質營養不良、A型胰島素抗性症候群、全身性脂萎縮症候群及家族性部分脂質營養不良(科博林(Kobberling))。

全身性核纖層病影響多種組織類型且包括例如非典型沃納氏症候群、早老症(例如哈欽森-吉爾福德氏早年衰老症候群)、限定性皮膚病及下頜末端發育不良。與全身性核纖層病相關之症狀多種多樣。非典型沃納氏症候群患者過早地展現通常與衰老相關之特徵，諸如身材矮小、骨質疏鬆、毛髮稀疏、動脈粥樣硬化症及白內障。另一方面，限定性皮膚病通常與皮膚及關節攣縮、異常顱骨礦化及肺部缺損相關。核纖層神經病症或涉及外周神經之核纖層病亦適合於藉由本發明方法治療。神經核纖層病包括例如2B1型恰克-馬利-杜斯氏病\常染色體顯性腦白質營養不良及常染色體顯性脊肌肉萎縮症。

大部分由核纖層蛋白A/C突變所引起之核纖層病涉及條紋肌肉。埃默里-德雷弗斯氏肌肉萎縮症(EDMD)、1B型肢帶型肌肉萎縮症、先天性肌肉萎縮症、多系統營養不良症候群、擴張型心肌症1A、家族性擴張型心肌症及擴張型心肌症伴以傳導系統缺陷診斷為肌肉核纖層病。患有肌肉核纖層病之患者展現出例如肌無力或消瘦、選定肌肉肥大(例如小牛)、肌肉或肌腱攣縮、心肌病、心臟傳導減弱及智力遲鈍。

在某些具體實例中，本發明提供用於治療個體中之核纖層病的方法，該等方法包含投予治療有效量之本文所揭示之任何核酸構築體、病毒載體、病毒顆粒、宿主細胞及/或醫藥組成物。在某些具體實例中，本發明提供用於在個體中表現以下者之方法：(a)核纖層蛋白A多肽或其生物活性片段；(b)核纖層蛋白C多肽或其生物活性片段；(c)核纖層蛋白A多肽或其生物活性片段及核纖層蛋白C多肽或其生物活性片段；或其生物活性變異體及/或片段，該等方法包含向該個體投予本文所揭示之病毒載體、病毒顆粒、宿主細胞或醫藥組成物。在某些具體實例中，本發明提供用於增加以下各者在個體中之表現的方法：(a)功能性核纖層蛋白A多肽；(b)功能性核纖層蛋白C多肽；(c)功能性核纖層蛋白A多肽及功能性核纖層蛋白C多肽；或其生物活性變異體及/或片段，該等方法包含投予本文所揭示之病毒載體、病毒顆粒、宿主細胞或醫藥組成物。在一些具體實例中，此類個體已診斷患有核纖層病或處於核纖層病之風險下，其中核纖層病為以下者中之任一者或多者：恰克-馬利-杜斯氏病、埃默里-德雷弗斯氏肌肉萎縮症、家族性部分脂質營養不良、哈欽森-吉爾福德氏早年衰老症候群、肢帶型肌肉萎縮症、LMNA 相關先天性肌肉萎縮症、下頜末端發育不良、致心律不整型右心室心肌病、家族性心房微顫、左心室緻密化不全及擴張型心肌症。在一些情況下，使用病毒或病毒載體，諸如AAV6或AAV9遞送編碼多肽之核苷酸序列，該多肽編碼(a)核纖層蛋白A多肽；(b)核纖層蛋白C多肽；(c)核纖層蛋白A多肽及核纖層蛋白C多肽；或其生物活性變異體及/或片段。在一些情況下，需要其之個體在LMNA 、LMNB1 及LMNB2 中之任一者或多者中具有不足基因表現或突變。

在一些情況下，使用本文所述之核酸構築體、病毒載體、病毒顆粒、宿主細胞或醫藥組成物之治療產生經改良之心臟功能、經改良之心臟肌肉收縮、增加之核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C表現或產生減小之mTOR活性。在某些具體實例中，本發明提供一種用於治療患有擴張型心肌症或處於罹患擴張型心肌症之風險下的個體之方法。與擴張型心肌症相關之症狀包括呼吸短促、腿部腫脹、疲乏、體重增加、昏厥、心悸、眩暈、血凝塊、胸部疼痛及/或猝死。此外，由LMNA 突變引起之擴張型心肌症在心臟中產生超活化mTOR信號傳導。用本文所述之核酸構築體、病毒載體、病毒顆粒、宿主細胞或醫藥組成物治療可引起一種或多種症狀之改良，諸如mTOR信號傳導之減少。向處於罹患擴張型心肌症之風險下的個體投予如本文所述之療法可預防一種或多種症狀之出現或減緩其進展。

在某些具體實例中，用本文所述之核酸構築體、病毒載體、病毒顆粒、宿主細胞或醫藥組成物治療使mTOR信號傳導與未經治療對照相比或與治療前水平相比減小至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%。

在某些具體實例中，用本文所述之核酸構築體、病毒載體、病毒顆粒、宿主細胞或醫藥組成物治療使核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C表現與未經治療對照相比或與治療前水平相比增加至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%。

在某些具體實例中，用本文所述之核酸構築體、病毒載體、病毒顆粒、宿主細胞或醫藥組成物治療與選自由以下組成之群的一或多種另外的療法組合：β阻斷劑、血管收縮素轉化酶(angiotensin-converting enzyme，ACE)抑制劑、血管收縮素受體阻斷劑(angiotensin receptor blocker，ARB)、尼普立辛(niprilysin)抑制劑、利尿劑、醛固酮拮抗劑、異山梨醇二硝酸酯、肼酞嗪、地高辛(digoxin)、伊伐布雷定(ivabradine)、心臟再同步療法(cardiac resynchronization therapy，CRT)、植入型心臟複律除顫器(implantable cardioverter defibrillator，ICD)、手術、心臟移植及/或其組合。

在某些具體實例中，本發明之方法及組成物可用於治療已診斷患有疾病(例如核纖層病)之個體。在各種具體實例中，核纖層病可由已知基因事件(例如所屬領域中已知的任何LMNA突變)引起或可具有未知原因。個體可為患有肌肉核纖層病之患者。在一些情況下，個體為患有擴張型心肌症之患者。

在某些具體實例中，本發明之方法及組成物可用於治療處於罹患疾病之風險下的個體。可已知個體易患疾病，例如核纖層病(亦即擴張型心肌症)。個體可由於基因事件，或由於已知風險因素而易患疾病。舉例而言，個體可攜帶與擴張型心肌症相關之LMNA 中的突變。

在某些具體實例中，本文所提供之治療可引起症狀之減少或停止，例如本文所揭示之任何核纖層病症狀。舉例而言，治療可引起經改良之心臟功能、經改良之ECG讀取、ERK1/2下調、減少之mTOR信號傳導及增加之存活時間。心臟功能之量測、ECG讀取、ERK1/2下調、mTOR信號傳導、增加之存活時間及其他恰當的參數可在核纖層病之特定疾病模式中執行。舉例而言，已發現核纖層病(例如肌肉萎縮症或擴張型心肌症)之若干小鼠模型。特定言之，H222PLMNA 小鼠模型含有導致肌肉萎縮症及擴張型心肌症伴傳導系統疾病之點突變(H222P)。儘管異型接合小鼠(LMNA^H222P/+ ) 並不展示如新生兒或成人之任何表型，成年同型接合突變小鼠(LMNA^H222P/H222P ) 罹患與影響條紋肌肉之人類核纖層病的臨床特徵相似之肌肉萎縮症及擴張型心肌症伴傳導系統疾病。參見例如Arimura T, 等人Human Molecular Genetics , 2005;14(1):155-169。LMNA^flox/flox 小鼠模型顯示組織範圍中之更嚴重缺陷，伴以骨胳肌最受損。參見例如Kim Y, Biochem Biophys Res Commun. 2013;440(1):8-13。LMYA^flox/flox 小鼠模型具有側接Lmna 之第二外顯子的loxP位點，有效形成條件性Lmna 基因敲除小鼠。生殖系Cre表現產生Lmna同型接合突變體，其在產後第16至18天具有產後致死性。在一些具體實例中，動物模型為H222PLMNA 突變小鼠。在一些具體實例中，動物模型為LMNA ^flox/flox 突變小鼠(例如傑克遜實驗室儲存號026284)。此類疾病模式系統可用於探索特定核酸構築體、病毒載體、病毒顆粒、宿主細胞或醫藥組成物以治療核纖層病。

在某些具體實例中，將本文所述之核酸構築體、病毒載體、病毒顆粒、宿主細胞或醫藥組成物經靜脈內或全身性投予至個體。可適用於本文所描述之方法的其他投予形式包括(但不限於)直接遞送至所需器官(例如心臟)、經口、靜脈內、肌內、鞘內、皮下、舌下、經鼻、吸入、噴霧、經皮膚、局部、全身性、心肌內、經皮及其他胃腸外投予途徑。若需要，可組合投予途徑。J. 實施例

現已大體描述本發明，參考以下實施例將更容易理解本發明，該等實施例僅為說明本發明之某些具體實例及具體實例而包括，且不意欲限制本發明。 實施例 1 ： 核纖層蛋白 A 及核纖層蛋白 C 之 LMNA 袖珍基因構築體 1 產生

將HEK293T細胞(Fujifilm)以900,000個細胞/孔之密度接種於6孔盤中且在37攝氏度下培育整夜。第二天，在雞β肌動蛋白(CB)啟動子(袖珍基因1)或GFP對照控制下將細胞經3微克編碼LMNA之質體DNA短暫轉染。CB調節元件併入雞β肌動蛋白啟動子且對應於SEQ ID NO: 102。根據標準方法使用Fugene轉染劑(Promega)轉染細胞。在轉染之後兩天，將細胞用胰蛋白酶處理、離心且處理以用於蛋白分析。藉由將細胞溶解於具有β-巰基乙醇之Laemli 4x緩衝液(Biorad)中且在95攝氏度下沸騰5分鐘來製備用於西方墨點分析之樣品。隨後藉由TGX凝膠分離蛋白溶解物且將其轉移至硝化纖維素膜。將膜使用標準西方墨點方案阻斷且洗滌，且在4攝氏度下用初級抗體吸墨整夜。將小鼠抗核纖層蛋白A/C (CST #4777，1:1000)及小鼠抗GAPDH (GeneTex #GT239，1:2000)用作初級抗體。將抗小鼠IgG HRP (Invitrogen A16078，1:5000)用作化學發光偵測之二級抗體。分別在65 kDa及72 kDa下偵測核纖層蛋白C及核纖層蛋白A，而在37 kDa下偵測GAPDH。

如所預期，經編碼單獨核纖層蛋白A或核纖層蛋白C之構築體轉染的HEK293T細胞展示各個別蛋白之產生。經LMNA袖珍基因構築體1轉染的HEK293T細胞展示核纖層蛋白A及核纖層蛋白C兩者之產生，此指示單一構築體能夠產生兩種同功型(圖6)。在測試條件下袖珍基因2及3不產生兩種核纖層蛋白同功型。 實施例 2 ：核纖層蛋白 A 及核纖層蛋白 C mRNA 表現

HEK293T細胞如上文所述生長且短暫轉染。iPS心肌細胞(Fujifilm)亦經短暫轉染。將心肌細胞以500,000個細胞/孔接種於6孔盤中且在37攝氏度下培育兩天。轉染後兩天，將細胞以胰蛋白酶處理、離心且處理用於基於RNA之分析。使用RNAeasy小型套組(Qiagen)遵循製造商之說明書自細胞小球提取RNA，且將其用於用Superscript IV反轉錄酶(Invitrogen)合成cDNA。使用核纖層蛋白A/C、核纖層蛋白A或核纖層蛋白C特異性引子集(表5)執行定量PCR以評估個別基因之表現水平。

如所預期，經編碼單獨核纖層蛋白A或核纖層蛋白C之構築體轉染的細胞展示每個個別基因之mRNA轉錄。然而，經袖珍基因構築體1轉染的HEK293T細胞展示核纖層蛋白A及核纖層蛋白C mRNA兩者之轉錄，指示單一構築體能夠轉錄兩種同功型(圖7)。表 5 ：用於定量PCR實驗之引子

SEQ ID NO:	基因	引子	序列
94	人類核纖層蛋白A	正向	GCTCTTCTGCCTCCAGTGTC
95	反向	ATGATGCTGCAGTTCTGGGG
96	人類核纖層蛋白C	正向	CCTGGT GT GGAAGGCACAGAAC
97	反向	GGCTACCACTCACGTGGTGGTG
98	人類核纖層蛋白A/C	正向	ACCAAGAAGGAGGGTGACCT
99	反向	AGCCTGTTCTCAGCATCCAC

實施例 3 ： 心臟及肝臟組織中核纖層蛋白 A 及核纖層蛋白 C 之袖珍基因構築體 1 產生

試管內量測HEK293T細胞中之核纖層蛋白A及核纖層蛋白C產生。如上文所述生長、短暫轉染及處理用於西方墨點分析之細胞。亦在12週齡野生型(圖8，頂部)小鼠及LMNA 基因之24週齡小鼠異型接合(LMNA^+/- ) (圖8，底部)中活體內量測核纖層蛋白A及核纖層蛋白C產生。兩種小鼠病毒株均投予攜帶袖珍基因構築體1之AAV9病毒。在提取之後收集組織樣品並急凍且將其儲存於-80攝氏度下直至需要。隨後使用珠粒均質器於含有蛋白酶抑制劑混合物之RIPA緩衝液中將其解凍、均質化，且再懸浮於具有β-巰基乙醇之Laemli 4x緩衝液(Biorad)中。如上文所述執行西方墨點分析。

如所預期，經編碼單獨核纖層蛋白A或核纖層蛋白C之構築體轉染的HEK293T細胞展示每個個別蛋白之蛋白(圖8，頂部)。經袖珍基因構築體1轉染的HEK293T細胞展示核纖層蛋白A及核纖層蛋白C兩者之產生，指示單一構築體能夠產生兩種同功型(圖8頂部)。當給予攜帶袖珍基因構築體1 AAV9病毒時在野生型及異型接合LMNA^+/- 小鼠中均偵測到核纖層蛋白A及核纖層蛋白C同功型(圖8，頂部及底部)。在野生型及異型接合LMNA^+/- 小鼠中均可偵測內源性LMNA 水平。 實施例 4 ： LMNA^-/- KO 小鼠中疾病表型之挽救

藉由使LMNA^+/- 雄性及雌性交配產生LMNA^-/- KO動物。在p1使LMNA^+/- xLMNA^+/- 幼仔經受臉部靜脈注射。如Lampe 等人(J Vis Exp. 2014;(93):e52037)中大體描述執行臉部靜脈注射。給予小鼠10微升之攜帶袖珍基因構築體1之AAV9病毒(每隻小鼠2E11個病毒基因組)或PBS。使幼犬留在其母親身邊三週至斷奶，無幼犬操控。

用PBS對照處理之LMNA^-/- KO小鼠存活少於50天(圖9)。然而，給予攜帶袖珍基因構築體1之AAV9的小鼠存活多於80天，指示袖珍基因構築體1實質上緩和通常在LMNA'^- ' KO小鼠中所觀測到的嚴重疾病表型。 實施例 5 ： 核纖層蛋白 A 及核纖層蛋白 C 同功型在小鼠中之活體內表現

經由大致200微升之尾部靜脈對12週齡C57BL/6野生型、雄性小鼠全身性投予攜帶袖珍基因構築體1之AAV9或PBS。AAV9製品包括攜帶袖珍基因構築體1之AAV9 (使用普遍存在的啟動子)、在心臟特異性啟動子(cTNT)控制下的攜帶LMNA構築體之AAV9或在普遍存在的啟動子控制下的攜帶GFP之AAV9。使用4E11 vg/小鼠之低劑量或E12 vg/小鼠之高劑量2。所有動物經處理且在注射之後六週取得樣品。採集心臟及肝臟組織且使用標準方法儲存以用於稍後實驗。

在提取之後將組織保持於RNAlater中且儲存於-80攝氏度下直至需要。隨後使用珠粒均質器將其解凍且在RLT緩衝液中均質化。使用RNAeasy小型套組(Qiagen)遵循製造商之說明書提取RNA。使用TRUseq cDNA文庫製備套組(Illumina)自RNA提取物產生cDNA文庫，且在Nextseq 500平台上對其進行NGS測序並分析。

給予攜帶袖珍基因構築體1之AAV9 (普遍存在的啟動子)之小鼠展示核纖層蛋白A及核纖層蛋白C在心臟及肝臟兩者中之表現(圖10A)。如所預期，給予在心臟特異性啟動子(cTNT)控制下之LMNA的小鼠展示核纖層蛋白A及核纖層蛋白C在心臟而非肝臟中之表現(圖10B)。高劑量之在普遍存在的啟動子控制下之LMNA在小鼠中展示一些肝臟毒性，且分別藉由血清生物標誌物(AST、交替、ALP、膽紅素、肌酸等)之量測確認。低劑量動物為健康的。 實施例 6 ： 核纖層蛋白 A 及 / 或核纖層蛋白 C 在具有 CMV 啟動子之 HEK293T 細胞中之表現

在37攝氏度下培育HEK293T細胞整夜。在第二天，將細胞經編碼在CMV啟動子或GFP對照控制下的LMNA之DNA短暫轉染。根據標準方法轉染細胞。培養細胞且稍後將其胰蛋白酶化、離心且經處理用於蛋白分析。

藉由溶解細胞且在95攝氏度下沸騰製備用於西方墨點分析之樣品。隨後藉由凝膠分離蛋白溶解物且將其轉移至硝化纖維素膜。將膜使用標準西方墨點方案阻斷並洗滌，且在4攝氏度下用初級抗體吸墨整夜。將小鼠抗核纖層蛋白A/C及小鼠抗GAPDH用作初級抗體。將抗小鼠IgG HRP用作化學發光偵測之二級抗體。分別在65 kDa及72 kDa下偵測核纖層蛋白C及A，而在37 kDa下偵測GAPDH。

經編碼單獨核纖層蛋白A或單獨核纖層蛋白C之構築體轉染的HEK293T細胞展示每個個別蛋白之蛋白(圖12)。經具有核纖層蛋白A/C序列之LMNA袖珍基因構築體(參見袖珍基因構築體1之核纖層蛋白A/C序列)轉染的HEK293T細胞，指示單一構築體能夠生成兩種同功型(圖12)。 實施例 7 ：核纖層蛋白 A 及核纖層蛋白 C mRNA 表現

如實施例6中所描述生長並短暫轉染HEK293T細胞。在轉染之後兩天，將細胞用胰蛋白酶處理、離心且處理以用於基於RNA之分析。使用標準提取自細胞小球提取RNA，且將其用於用反轉錄酶合成cDNA。使用核纖層蛋白A/C、核纖層蛋白A特異性引子集執行定量PCR以評估個別基因之表現水平。

經編碼單獨核纖層蛋白A或單獨核纖層蛋白C之構築體轉染的細胞展示每個個別基因之mRNA轉錄。然而，經具有核纖層蛋白A/C序列之LMNA袖珍基因構築體(參見袖珍基因構築體1之核纖層蛋白A/C序列)轉染的HEK293T細胞展示核纖層蛋白A及核纖層蛋白C mRNA兩者之轉錄，指示單一構築體能夠轉錄兩種同功型。K. 序列表 1 ：例示性核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C核酸序列之清單。

SEQ ID NO:	核酸序列	名稱
1	ATGGAGACCCCGTCCCAGCGGCGCGCCACCCGCAGCGGGGCGCAGGCCAGCTCCACTCCGCTGTCGCCCACCCGCATCACCCGGCTGCAGGAGAAGGAGGACCTGCAGGAGCTCAATGATCGCTTGGCGGTCTACATCGACCGTGTGCGCTCGCTGGAAACGGAGAACGCAGGGCTGCGCCTTCGCATCACCGAGTCTGAAGAGGTGGTCAGCCGCGAGGTGTCCGGCATCAAGGCCGCCTACGAGGCCGAGCTCGGGGATGCCCGCAAGACCCTTGACTCAGTAGCCAAGGAGCGCGCCCGCCTGCAGCTGGAGCTGAGCAAAGTGCGTGAGGAGTTTAAGGAGCTGAAAGCGCGCAATACCAAGAAGGAGGGTGACCTGATAGCTGCTCAGGCTCGGCTGAAGGACCTGGAGGCTCTGCTGAACTCCAAGGAGGCCGCACTGAGCACTGCTCTCAGTGAGAAGCGCACGCTGGAGGGCGAGCTGCATGATCTGCGGGGCCAGGTGGCCAAGCTTGAGGCAGCCCTAGGTGAGGCCAAGAAGCAACTTCAGGATGAGATGCTGCGGCGGGTGGATGCTGAGAACAGGCTGCAGACCATGAAGGAGGAACTGGACTTCCAGAAGAACATCTACAGTGAGGAGCTGCGTGAGACCAAGCGCCGTCATGAGACCCGACTGGTGGAGATTGACAATGGGAAGCAGCGTGAGTTTGAGAGCCGGCTGGCGGATGCGCTGCAGGAACTGCGGGCCCAGCATGAGGACCAGGTGGAGCAGTATAAGAAGGAGCTGGAGAAGACTTATTCTGCCAAGCTGGACAATGCCAGGCAGTCTGCTGAGAGGAACAGCAACCTGGTGGGGGCTGCCCACGAGGAGCTGCAGCAGTCGCGCATCCGCATCGACAGCCTCTCTGCCCAGCTCAGCCAGCTCCAGAAGCAGCTGGCAGCCAAGGAGGCGAAGCTTCGAGACCTGGAGGACTCACTGGCCCGTGAGCGGGACACCAGCCGGCGGCTGCTGGCGGAAAAGGAGCGGGAGATGGCCGAGATGCGGGCAAGGATGCAGCAGCAGCTGGACGAGTACCAGGAGCTTCTGGACATCAAGCTGGCCCTGGACATGGAGATCCACGCCTACCGCAAGCTCTTGGAGGGCGAGGAGGAGAGGCTACGCCTGTCCCCCAGCCCTACCTCGCAGCGCAGCCGTGGCCGTGCTTCCTCTCACTCATCCCAGACACAGGGTGGGGGCAGCGTCACCAAAAAGCGCAAACTGGAGTCCACTGAGAGCCGCAGCAGCTTCTCACAGCACGCACGCACTAGCGGGCGCGTGGCCGTGGAGGAGGTGGATGAGGAGGGCAAGTTTGTCCGGCTGCGCAACAAGTCCAATGAGGACCAGTCCATGGGCAATTGGCAGATCAAGCGCCAGAATGGAGATGATCCCTTGCTGACTTACCGGTTCCCACCAAAGTTCACCCTGAAGGCTGGGCAGGTGGTGACGATCTGGGCTGCAGGAGCTGGGGCCACCCACAGCCCCCCTACCGACCTGGTGTGGAAGGCACAGAACACCTGGGGCTGCGGGAACAGCCTGCGTACGGCTCTCATCAACTCCACTGGGGAAGAAGTGGCCATGCGCAAGCTGGTGCGCTCAGTGACTGTGGTTGAGGACGACGAGGATGAGGATGGAGATGACCTGCTCCATCACCACCACGGCTCCCACTGCAGCAGCTCGGGGGACCCCGCTGAGTACAACCTGCGCTCGCGCACCGTGCTGTGCGGGACCTGCGGGCAGCCTGCCGACAAGGCATCTGCCAGCGGCTCAGGAGCCCAGGTGGGCGGACCCATCTCCTCTGGCTCTTCTGCCTCCAGTGTCACGGTCACTCGCAGCTACCGCAGTGTGGGGGGCAGTGGGGGTGGCAGCTTCGGGGACAATCTGGTCACCCGCTCCTACCTCCTGGGCAACTCCAGCCCCCGAACCCAGAGCCCCCAGAACTGCAGCATCATGTAA	核纖層蛋白A序列
2	ATGGAGACCCCGTCCCAGCGGCGCGCCACCCGCAGCGGGGCGCAGGCCAGCTCCACTCCGCTGTCGCCCACCCGCATCACCCGGCTGCAGGAGAAGGAGGACCTGCAGGAGCTCAATGATCGCTTGGCGGTCTACATCGACCGTGTGCGCTCGCTGGAAACGGAGAACGCAGGGCTGCGCCTTCGCATCACCGAGTCTGAAGAGGTGGTCAGCCGCGAGGTGTCCGGCATCAAGGCCGCCTACGAGGCCGAGCTCGGGGATGCCCGCAAGACCCTTGACTCAGTAGCCAAGGAGCGCGCCCGCCTGCAGCTGGAGCTGAGCAAAGTGCGTGAGGAGTTTAAGGAGCTGAAAGCGCGCAATACCAAGAAGGAGGGTGACCTGATAGCTGCTCAGGCTCGGCTGAAGGACCTGGAGGCTCTGCTGAACTCCAAGGAGGCCGCACTGAGCACTGCTCTCAGTGAGAAGCGCACGCTGGAGGGCGAGCTGCATGATCTGCGGGGCCAGGTGGCCAAGCTTGAGGCAGCCCTAGGTGAGGCCAAGAAGCAACTTCAGGATGAGATGCTGCGGCGGGTGGATGCTGAGAACAGGCTGCAGACCATGAAGGAGGAACTGGACTTCCAGAAGAACATCTACAGTGAGGAGCTGCGTGAGACCAAGCGCCGTCATGAGACCCGACTGGTGGAGATTGACAATGGGAAGCAGCGTGAGTTTGAGAGCCGGCTGGCGGATGCGCTGCAGGAACTGCGGGCCCAGCATGAGGACCAGGTGGAGCAGTATAAGAAGGAGCTGGAGAAGACTTATTCTGCCAAGCTGGACAATGCCAGGCAGTCTGCTGAGAGGAACAGCAACCTGGTGGGGGCTGCCCACGAGGAGCTGCAGCAGTCGCGCATCCGCATCGACAGCCTCTCTGCCCAGCTCAGCCAGCTCCAGAAGCAGCTGGCAGCCAAGGAGGCGAAGCTTCGAGACCTGGAGGACTCACTGGCCCGTGAGCGGGACACCAGCCGGCGGCTGCTGGCGGAAAAGGAGCGGGAGATGGCCGAGATGCGGGCAAGGATGCAGCAGCAGCTGGACGAGTACCAGGAGCTTCTGGACATCAAGCTGGCCCTGGACATGGAGATCCACGCCTACCGCAAGCTCTTGGAGGGCGAGGAGGAGAGGCTACGCCTGTCCCCCAGCCCTACCTCGCAGCGCAGCCGTGGCCGTGCTTCCTCTCACTCATCCCAGACACAGGGTGGGGGCAGCGTCACCAAAAAGCGCAAACTGGAGTCCACTGAGAGCCGCAGCAGCTTCTCACAGCACGCACGCACTAGCGGGCGCGTGGCCGTGGAGGAGGTGGATGAGGAGGGCAAGTTTGTCCGGCTGCGCAACAAGTCCAATGAGGACCAGTCCATGGGCAATTGGCAGATCAAGCGCCAGAATGGAGATGATCCCTTGCTGACTTACCGGTTCCCACCAAAGTTCACCCTGAAGGCTGGGCAGGTGGTGACGATCTGGGCTGCAGGAGCTGGGGCCACCCACAGCCCCCCTACCGACCTGGTGTGGAAGGCACAGAACACCTGGGGCTGCGGGAACAGCCTGCGTACGGCTCTCATCAACTCCACTGGGGAAGAAGTGGCCATGCGCAAGCTGGTGCGCTCAGTGACTGTGGTTGAGGACGACGAGGATGAGGATGGAGATGACCTGCTCCATCACCACCACGTGAGTGGTAGCCGCCGCTGA	核纖層蛋白C序列

3	ATGGAGACCCCGTCCCAGCGGCGCGCCACCCGCAGCGGGGCGCAGGCCAGCTCCACTCCGCTGTCGCCCACCCGCATCACCCGGCTGCAGGAGAAGGAGGACCTGCAGGAGCTCAATGATCGCTTGGCGGTCTACATCGACCGTGTGCGCTCGCTGGAAACGGAGAACGCAGGGCTGCGCCTTCGCATCACCGAGTCTGAAGAGGTGGTCAGCCGCGAGGTGTCCGGCATCAAGGCCGCCTACGAGGCCGAGCTCGGGGATGCCCGCAAGACCCTTGACTCAGTAGCCAAGGAGCGCGCCCGCCTGCAGCTGGAGCTGAGCAAAGTGCGTGAGGAGTTTAAGGAGCTGAAAGCGCGCAATACCAAGAAGGAGGGTGACCTGATAGCTGCTCAGGCTCGGCTGAAGGACCTGGAGGCTCTGCTGAACTCCAAGGAGGCCGCACTGAGCACTGCTCTCAGTGAGAAGCGCACGCTGGAGGGCGAGCTGCATGATCTGCGGGGCCAGGTGGCCAAGCTTGAGGCAGCCCTAGGTGAGGCCAAGAAGCAACTTCAGGATGAGATGCTGCGGCGGGTGGATGCTGAGAACAGGCTGCAGACCATGAAGGAGGAACTGGACTTCCAGAAGAACATCTACAGTGAGGAGCTGCGTGAGACCAAGCGCCGTCATGAGACCCGACTGGTGGAGATTGACAATGGGAAGCAGCGTGAGTTTGAGAGCCGGCTGGCGGATGCGCTGCAGGAACTGCGGGCCCAGCATGAGGACCAGGTGGAGCAGTATAAGAAGGAGCTGGAGAAGACTTATTCTGCCAAGCTGGACAATGCCAGGCAGTCTGCTGAGAGGAACAGCAACCTGGTGGGGGCTGCCCACGAGGAGCTGCAGCAGTCGCGCATCCGCATCGACAGCCTCTCTGCCCAGCTCAGCCAGCTCCAGAAGCAGCTGGCAGCCAAGGAGGCGAAGCTTCGAGACCTGGAGGACTCACTGGCCCGTGAGCGGGACACCAGCCGGCGGCTGCTGGCGGAAAAGGAGCGGGAGATGGCCGAGATGCGGGCAAGGATGCAGCAGCAGCTGGACGAGTACCAGGAGCTTCTGGACATCAAGCTGGCCCTGGACATGGAGATCCACGCCTACCGCAAGCTCTTGGAGGGCGAGGAGGAGAGGCTACGCCTGTCCCCCAGCCCTACCTCGCAGCGCAGCCGTGGCCGTGCTTCCTCTCACTCATCCCAGACACAGGGTGGGGGCAGCGTCACCAAAAAGCGCAAACTGGAGTCCACTGAGAGCCGCAGCAGCTTCTCACAGCACGCACGCACTAGCGGGCGCGTGGCCGTGGAGGAGGTGGATGAGGAGGGCAAGTTTGTCCGGCTGCGCAACAAGTCCAATGAGGACCAGTCCATGGGCAATTGGCAGATCAAGCGCCAGAATGGAGATGATCCCTTGCTGACTTACCGGTTCCCACCAAAGTTCACCCTGAAGGCTGGGCAGGTGGTGACGGTGAGTGGCAGGGCGCTTGGGACTCTGGGGAGGCCTTGGGTGGCGATGGGAGCGCTGGGGTAAGTGTCCTTTTCTCCTCTCCAGATCTGGGCTGCAGGAGCTGGGGCCACCCACAGCCCCCCTACCGACCTGGTGTGGAAGGCACAGAACACCTGGGGCTGCGGGAACAGCCTGCGTACGGCTCTCATCAACTCCACTGGGGAAGTAAGTAGGCCTGGGCCTGGCTGCTTGCTGGACGAGGCTCCCCCTGATGGCCAACATCGGAGCCAGCTGCCCCCAACCCAAGTTTGCCAATTCAGGGCCCCTTTCTAGAGCTCTCTGTTGCAGGCTCCAGACTTCTCCACCCAGTAGGCAAACCAAAAGATGCTTCCTCAACAGCACAAGGGGTGGAAGTTAGACAGTGAGGATTGTTAAAGGCAGAGCCATACTCCTACCCGGAGAGCTTGACAGTGTCCCTCTGGGGTGGAAATGAGTTCCTTAGCTCCATCACCACAGAGGACAGAGTAAGCAGCAGGCCGGACAAAGGGCAGGCCACAAGAAAAGTTGCAGGTGGTCACTGGGGTAGACATGCTGTACAACCCTTCCCTGGCCCTGACCCTTGGACCTGGTTCCATGTCCCCACCAGGAAGTGGCCATGCGCAAGCTGGTGCGCTCAGTGACTGTGGTTGAGGACGACGAGGATGAGGATGGAGATGACCTGCTCCATCACCACCACGTGAGTGGTAGCCGCCGCTGAGGCCGAGCCTGCACTGGGGCCACCCAGCCAGGCCTGGGGGCAGCCTCTCCCCAGCCTCCCCGTGCCAAAAATCTTTTCATTAAAGAATGTTTTGGAACTTTACTCGCTGGCCTGGCCTTTCTTCTCTCTCCTCCCTATACCTTGAACAGGGAACCCAGGTGTCTGGGTGCCCTACTCTGGTAAGGAAGGGAGTGGGAACTTTCTGATGCCATGGAATATTCCTGTGGGAGCAGTGGACAAGGGTCTGGATTTGTCTTCTGGGAAAGGGAGGGGAGGACAGACGTGGGGCATGCCCGCCCTGCCTCTCTCCCCCATTCTTGTTGCATGCATATCCTCTCATTTCCCTCATTTTTCCTGCAAGAATGTTCTCTCTCATTCCTGACCGCCCCTCCACTCCAATTAATAGTGCATGCCTGCTGCCCTACAAGCTTGCTCCCGTTCTCTCTTCTTTTCCTCTTAAGCTCAGAGTAGCTAGAACAGAGTCAGAGTCACTGCTCTGGTTCTCTGTCCCCAAGTCTTCCTGAGCCTTCTCCCCTTTTATGTCTTCCCTCTCCTCCTCCGGGCCCCTAGCCTCCCAAACCCCCATTGCCCGCTGGCTCCTTGGGCACAGAACCACACCTTCCTGCCTGGCGGCTGGGAGCCTGCAGGAGCCTGGAGCCTGGTTGGGCCTGAGTGGTCAGTCCCAGACTCGCCGTCCCGCCTGAGCCTTGTCTCCCTTCCCAGGGCTCCCACTGCAGCAGCTCGGGGGACCCCGCTGAGTACAACCTGCGCTCGCGCACCGTGCTGTGCGGGACCTGCGGGCAGCCTGCCGACAAGGCATCTGCCAGCGGCTCAGGAGCCCAGGTGGGCGGACCCATCTCCTCTGGCTCTTCTGCCTCCAGTGTCACGGTCACTCGCAGCTACCGCAGTGTGGGGGGCAGTGGGGGTGGCAGCTTCGGGGACAATCTGGTCACCCGCTCCTACCTCCTGGGCAACTCCAGCCCCCGAACCCAGGTGAGTTGTCTCTGCTTTGTCTCCAAATCCTGCAGGCGGGTCCCTGGTCATCGAGGGGTAGGACGAGGTGGCCTTGCAGGGGGGAGAGCCTGCCTTCTCTTCCGCAGCCCGGGGGAGTGGGAGCCTCCTCCCCACAGCCTGAGTCCTAGACAGCCCACCTCTGCATCCTGCCCCTCTTGTCTGAGCCCCAGACTGGAGGGCAGGGGCAGGGCTGGAGTGTGAGGGATGGGGGAGATGCTACCTCCCTTCTAGGGGCCAGGGGAGGGAGGGTCTGGGTCCAGGCCCTGCTGCTCACACCTCTCTCCTCTGTTTTCTCTCTTAGAGCCCCCAGAACTGCAGCATCATGTAA	來自袖珍基因1之核纖層蛋白A/C序列
4	ATGGAGACCCCGTCCCAGCGGCGCGCCACCCGCAGCGGGGCGCAGGCCAGCTCCACTCCGCTGTCGCCCACCCGCATCACCCGGCTGCAGGAGAAGGAGGACCTGCAGGAGCTCAATGATCGCTTGGCGGTCTACATCGACCGTGTGCGCTCGCTGGAAACGGAGAACGCAGGGCTGCGCCTTCGCATCACCGAGTCTGAAGAGGTGGTCAGCCGCGAGGTGTCCGGCATCAAGGCCGCCTACGAGGCCGAGCTCGGGGATGCCCGCAAGACCCTTGACTCAGTAGCCAAGGAGCGCGCCCGCCTGCAGCTGGAGCTGAGCAAAGTGCGTGAGGAGTTTAAGGAGCTGAAAGCGCGCAATACCAAGAAGGAGGGTGACCTGATAGCTGCTCAGGCTCGGCTGAAGGACCTGGAGGCTCTGCTGAACTCCAAGGAGGCCGCACTGAGCACTGCTCTCAGTGAGAAGCGCACGCTGGAGGGCGAGCTGCATGATCTGCGGGGCCAGGTGGCCAAGCTTGAGGCAGCCCTAGGTGAGGCCAAGAAGCAACTTCAGGATGAGATGCTGCGGCGGGTGGATGCTGAGAACAGGCTGCAGACCATGAAGGAGGAACTGGACTTCCAGAAGAACATCTACAGTGAGGAGCTGCGTGAGACCAAGCGCCGTCATGAGACCCGACTGGTGGAGATTGACAATGGGAAGCAGCGTGAGTTTGAGAGCCGGCTGGCGGATGCGCTGCAGGAACTGCGGGCCCAGCATGAGGACCAGGTGGAGCAGTATAAGAAGGAGCTGGAGAAGACTTATTCTGCCAAGCTGGACAATGCCAGGCAGTCTGCTGAGAGGAACAGCAACCTGGTGGGGGCTGCCCACGAGGAGCTGCAGCAGTCGCGCATCCGCATCGACAGCCTCTCTGCCCAGCTCAGCCAGCTCCAGAAGCAGCTGGCAGCCAAGGAGGCGAAGCTTCGAGACCTGGAGGACTCACTGGCCCGTGAGCGGGACACCAGCCGGCGGCTGCTGGCGGAAAAGGAGCGGGAGATGGCCGAGATGCGGGCAAGGATGCAGCAGCAGCTGGACGAGTACCAGGAGCTTCTGGACATCAAGCTGGCCCTGGACATGGAGATCCACGCCTACCGCAAGCTCTTGGAGGGCGAGGAGGAGAGGCTACGCCTGTCCCCCAGCCCTACCTCGCAGCGCAGCCGTGGCCGTGCTTCCTCTCACTCATCCCAGACACAGGGTGGGGGCAGCGTCACCAAAAAGCGCAAACTGGAGTCCACTGAGAGCCGCAGCAGCTTCTCACAGCACGCACGCACTAGCGGGCGCGTGGCCGTGGAGGAGGTGGATGAGGAGGGCAAGTTTGTCCGGCTGCGCAACAAGTCCAATGAGGACCAGTCCATGGGCAATTGGCAGATCAAGCGCCAGAATGGAGATGATCCCTTGCTGACTTACCGGTTCCCACCAAAGTTCACCCTGAAGGCTGGGCAGGTGGTGACGATCTGGGCTGCAGGAGCTGGGGCCACCCACAGCCCCCCTACCGACCTGGTGTGGAAGGCACAGAACACCTGGGGCTGCGGGAACAGCCTGCGTACGGCTCTCATCAACTCCACTGGGGAAGTAAGTAGGCCTGGGCCTGGCTGCTTGCTGGACGAGGCTCCCCCTGATGGCCAACATCGGAGCCAGCTGCCCCCAACCCAAGTTTGCCAATTCAGGGCCCCTTTCTAGAGCTCTCTGTTGCAGGCTCCAGACTTCTCCACCCAGTAGGCAAACCAAAAGATGCTTCCTCAACAGCACAAGGGGTGGAAGTTAGACAGTGAGGATTGTTAAAGGCAGAGCCATACTCCTACCCGGAGAGCTTGACAGTGTCCCTCTGGGGTGGAAATGAGTTCCTTAGCTCCATCACCACAGAGGACAGAGTAAGCAGCAGGCCGGACAAAGGGCAGGCCACAAGAAAAGTTGCAGGTGGTCACTGGGGTAGACATGCTGTACAACCCTTCCCTGGCCCTGACCCTTGGACCTGGTTCCATGTCCCCACCAGGAAGTGGCCATGCGCAAGCTGGTGCGCTCAGTGACTGTGGTTGAGGACGACGAGGATGAGGATGGAGATGACCTGCTCCATCACCACCACGTGAGTGGTAGCCGCCGCTGAGGCCGAGCCTGCACTGGGGCCACCCAGCCAGGCCTGGGGGCAGCCTCTCCCCAGCCTCCCCGTGCCAAAAATCTTTTCATTAAAGAATGTTTTGGAACTTTACTCGCTGGCCTGGCCTTTCTTCTCTCTCCTCCCTATACCTTGAACAGGGAACCCAGGTGTCTGGGTGCCCTACTCTGGTAAGGAAGGGAGTGGGAACTTTCTGATGCCATGGAATATTCCTGTGGGAGCAGTGGACAAGGGTCTGGATTTGTCTTCTGGGAAAGGGAGGGGAGGACAGACGTGGGGCATGCCCGCCCTGCCTCTCTCCCCCATTCTTGTTGCATGCATATCCTCTCATTTCCCTCATTTTTCCTGCAAGAATGTTCTCTCTCATTCCTGACCGCCCCTCCACTCCAATTAATAGTGCATGCCTGCTGCCCTACAAGCTTGCTCCCGTTCTCTCTTCTTTTCCTCTTAAGCTCAGAGTAGCTAGAACAGAGTCAGAGTCACTGCTCTGGTTCTCTGTCCCCAAGTCTTCCTGAGCCTTCTCCCCTTTTATGTCTTCCCTCTCCTCCTCCGGGCCCCTAGCCTCCCAAACCCCCATTGCCCGCTGGCTCCTTGGGCACAGAACCACACCTTCCTGCCTGGCGGCTGGGAGCCTGCAGGAGCCTGGAGCCTGGTTGGGCCTGAGTGGTCAGTCCCAGACTCGCCGTCCCGCCTGAGCCTTGTCTCCCTTCCCAGGGCTCCCACTGCAGCAGCTCGGGGGACCCCGCTGAGTACAACCTGCGCTCGCGCACCGTGCTGTGCGGGACCTGCGGGCAGCCTGCCGACAAGGCATCTGCCAGCGGCTCAGGAGCCCAGGTGGGCGGACCCATCTCCTCTGGCTCTTCTGCCTCCAGTGTCACGGTCACTCGCAGCTACCGCAGTGTGGGGGGCAGTGGGGGTGGCAGCTTCGGGGACAATCTGGTCACCCGCTCCTACCTCCTGGGCAACTCCAGCCCCCGAACCCAGAGCCCCCAGAACTGCAGCATCATGTAA	來自袖珍基因2之核纖層蛋白A/C序列
5	ATGGAGACCCCGTCCCAGCGGCGCGCCACCCGCAGCGGGGCGCAGGCCAGCTCCACTCCGCTGTCGCCCACCCGCATCACCCGGCTGCAGGAGAAGGAGGACCTGCAGGAGCTCAATGATCGCTTGGCGGTCTACATCGACCGTGTGCGCTCGCTGGAAACGGAGAACGCAGGGCTGCGCCTTCGCATCACCGAGTCTGAAGAGGTGGTCAGCCGCGAGGTGTCCGGCATCAAGGCCGCCTACGAGGCCGAGCTCGGGGATGCCCGCAAGACCCTTGACTCAGTAGCCAAGGAGCGCGCCCGCCTGCAGCTGGAGCTGAGCAAAGTGCGTGAGGAGTTTAAGGAGCTGAAAGCGCGCAATACCAAGAAGGAGGGTGACCTGATAGCTGCTCAGGCTCGGCTGAAGGACCTGGAGGCTCTGCTGAACTCCAAGGAGGCCGCACTGAGCACTGCTCTCAGTGAGAAGCGCACGCTGGAGGGCGAGCTGCATGATCTGCGGGGCCAGGTGGCCAAGCTTGAGGCAGCCCTAGGTGAGGCCAAGAAGCAACTTCAGGATGAGATGCTGCGGCGGGTGGATGCTGAGAACAGGCTGCAGACCATGAAGGAGGAACTGGACTTCCAGAAGAACATCTACAGTGAGGAGCTGCGTGAGACCAAGCGCCGTCATGAGACCCGACTGGTGGAGATTGACAATGGGAAGCAGCGTGAGTTTGAGAGCCGGCTGGCGGATGCGCTGCAGGAACTGCGGGCCCAGCATGAGGACCAGGTGGAGCAGTATAAGAAGGAGCTGGAGAAGACTTATTCTGCCAAGCTGGACAATGCCAGGCAGTCTGCTGAGAGGAACAGCAACCTGGTGGGGGCTGCCCACGAGGAGCTGCAGCAGTCGCGCATCCGCATCGACAGCCTCTCTGCCCAGCTCAGCCAGCTCCAGAAGCAGCTGGCAGCCAAGGAGGCGAAGCTTCGAGACCTGGAGGACTCACTGGCCCGTGAGCGGGACACCAGCCGGCGGCTGCTGGCGGAAAAGGAGCGGGAGATGGCCGAGATGCGGGCAAGGATGCAGCAGCAGCTGGACGAGTACCAGGAGCTTCTGGACATCAAGCTGGCCCTGGACATGGAGATCCACGCCTACCGCAAGCTCTTGGAGGGCGAGGAGGAGAGGCTACGCCTGTCCCCCAGCCCTACCTCGCAGCGCAGCCGTGGCCGTGCTTCCTCTCACTCATCCCAGACACAGGGTGGGGGCAGCGTCACCAAAAAGCGCAAACTGGAGTCCACTGAGAGCCGCAGCAGCTTCTCACAGCACGCACGCACTAGCGGGCGCGTGGCCGTGGAGGAGGTGGATGAGGAGGGCAAGTTTGTCCGGCTGCGCAACAAGTCCAATGAGGACCAGTCCATGGGCAATTGGCAGATCAAGCGCCAGAATGGAGATGATCCCTTGCTGACTTACCGGTTCCCACCAAAGTTCACCCTGAAGGCTGGGCAGGTGGTGACGATCTGGGCTGCAGGAGCTGGGGCCACCCACAGCCCCCCTACCGACCTGGTGTGGAAGGCACAGAACACCTGGGGCTGCGGGAACAGCCTGCGTACGGCTCTCATCAACTCCACTGGGGAAGAAGTGGCCATGCGCAAGCTGGTGCGCTCAGTGACTGTGGTTGAGGACGACGAGGATGAGGATGGAGATGACCTGCTCCATCACCACCACGTGAGTGGTAGCCGCCGCTGAGGCCGAGCCTGCACTGGGGCCACCCAGCCAGGCCTGGGGGCAGCCTCTCCCCAGCCTCCCCGTGCCAAAAATCTTTTCATTAAAGAATGTTTTGGAACTTTACTCGCTGGCCTGGCCTTTCTTCTCTCTCCTCCCTATACCTTGAACAGGGAACCCAGGTGTCTGGGTGCCCTACTCTGGTAAGGAAGGGAGTGGGAACTTTCTGATGCCATGGAATATTCCTGTGGGAGCAGTGGACAAGGGTCTGGATTTGTCTTCTGGGAAAGGGAGGGGAGGACAGACGTGGGGCATGCCCGCCCTGCCTCTCTCCCCCATTCTTGTTGCATGCATATCCTCTCATTTCCCTCATTTTTCCTGCAAGAATGTTCTCTCTCATTCCTGACCGCCCCTCCACTCCAATTAATAGTGCATGCCTGCTGCCCTACAAGCTTGCTCCCGTTCTCTCTTCTTTTCCTCTTAAGCTCAGAGTAGCTAGAACAGAGTCAGAGTCACTGCTCTGGTTCTCTGTCCCCAAGTCTTCCTGAGCCTTCTCCCCTTTTATGTCTTCCCTCTCCTCCTCCGGGCCCCTAGCCTCCCAAACCCCCATTGCCCGCTGGCTCCTTGGGCACAGAACCACACCTTCCTGCCTGGCGGCTGGGAGCCTGCAGGAGCCTGGAGCCTGGTTGGGCCTGAGTGGTCAGTCCCAGACTCGCCGTCCCGCCTGAGCCTTGTCTCCCTTCCCAGGGCTCCCACTGCAGCAGCTCGGGGGACCCCGCTGAGTACAACCTGCGCTCGCGCACCGTGCTGTGCGGGACCTGCGGGCAGCCTGCCGACAAGGCATCTGCCAGCGGCTCAGGAGCCCAGGTGGGCGGACCCATCTCCTCTGGCTCTTCTGCCTCCAGTGTCACGGTCACTCGCAGCTACCGCAGTGTGGGGGGCAGTGGGGGTGGCAGCTTCGGGGACAATCTGGTCACCCGCTCCTACCTCCTGGGCAACTCCAGCCCCCGAACCCAGAGCCCCCAGAACTGCAGCATCATG	來自袖珍基因3之核纖層蛋白A/C序列
6	GTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTGGTACCGTGTGTATGCTCAGGGGCTGGGAAAGGAGGGGAGGGAGCTCCGGCTCAGGAATTCGCCACCATGGAGACCCCGTCCCAGCGGCGCGCCACCCGCAGCGGGGCGCAGGCCAGCTCCACTCCGCTGTCGCCCACCCGCATCACCCGGCTGCAGGAGAAGGAGGACCTGCAGGAGCTCAATGATCGCTTGGCGGTCTACATCGACCGTGTGCGCTCGCTGGAAACGGAGAACGCAGGGCTGCGCCTTCGCATCACCGAGTCTGAAGAGGTGGTCAGCCGCGAGGTGTCCGGCATCAAGGCCGCCTACGAGGCCGAGCTCGGGGATGCCCGCAAGACCCTTGACTCAGTAGCCAAGGAGCGCGCCCGCCTGCAGCTGGAGCTGAGCAAAGTGCGTGAGGAGTTTAAGGAGCTGAAAGCGCGCAATACCAAGAAGGAGGGTGACCTGATAGCTGCTCAGGCTCGGCTGAAGGACCTGGAGGCTCTGCTGAACTCCAAGGAGGCCGCACTGAGCACTGCTCTCAGTGAGAAGCGCACGCTGGAGGGCGAGCTGCATGATCTGCGGGGCCAGGTGGCCAAGCTTGAGGCAGCCCTAGGTGAGGCCAAGAAGCAACTTCAGGATGAGATGCTGCGGCGGGTGGATGCTGAGAACAGGCTGCAGACCATGAAGGAGGAACTGGACTTCCAGAAGAACATCTACAGTGAGGAGCTGCGTGAGACCAAGCGCCGTCATGAGACCCGACTGGTGGAGATTGACAATGGGAAGCAGCGTGAGTTTGAGAGCCGGCTGGCGGATGCGCTGCAGGAACTGCGGGCCCAGCATGAGGACCAGGTGGAGCAGTATAAGAAGGAGCTGGAGAAGACTTATTCTGCCAAGCTGGACAATGCCAGGCAGTCTGCTGAGAGGAACAGCAACCTGGTGGGGGCTGCCCACGAGGAGCTGCAGCAGTCGCGCATCCGCATCGACAGCCTCTCTGCCCAGCTCAGCCAGCTCCAGAAGCAGCTGGCAGCCAAGGAGGCGAAGCTTCGAGACCTGGAGGACTCACTGGCCCGTGAGCGGGACACCAGCCGGCGGCTGCTGGCGGAAAAGGAGCGGGAGATGGCCGAGATGCGGGCAAGGATGCAGCAGCAGCTGGACGAGTACCAGGAGCTTCTGGACATCAAGCTGGCCCTGGACATGGAGATCCACGCCTACCGCAAGCTCTTGGAGGGCGAGGAGGAGAGGCTACGCCTGTCCCCCAGCCCTACCTCGCAGCGCAGCCGTGGCCGTGCTTCCTCTCACTCATCCCAGACACAGGGTGGGGGCAGCGTCACCAAAAAGCGCAAACTGGAGTCCACTGAGAGCCGCAGCAGCTTCTCACAGCACGCACGCACTAGCGGGCGCGTGGCCGTGGAGGAGGTGGATGAGGAGGGCAAGTTTGTCCGGCTGCGCAACAAGTCCAATGAGGACCAGTCCATGGGCAATTGGCAGATCAAGCGCCAGAATGGAGATGATCCCTTGCTGACTTACCGGTTCCCACCAAAGTTCACCCTGAAGGCTGGGCAGGTGGTGACGATCTGGGCTGCAGGAGCTGGGGCCACCCACAGCCCCCCTACCGACCTGGTGTGGAAGGCACAGAACACCTGGGGCTGCGGGAACAGCCTGCGTACGGCTCTCATCAACTCCACTGGGGAAGAAGTGGCCATGCGCAAGCTGGTGCGCTCAGTGACTGTGGTTGAGGACGACGAGGATGAGGATGGAGATGACCTGCTCCATCACCACCACGGCTCCCACTGCAGCAGCTCGGGGGACCCCGCTGAGTACAACCTGCGCTCGCGCACCGTGCTGTGCGGGACCTGCGGGCAGCCTGCCGACAAGGCATCTGCCAGCGGCTCAGGAGCCCAGGTGGGCGGACCCATCTCCTCTGGCTCTTCTGCCTCCAGTGTCACGGTCACTCGCAGCTACCGCAGTGTGGGGGGCAGTGGGGGTGGCAGCTTCGGGGACAATCTGGTCACCCGCTCCTACCTCCTGGGCAACTCCAGCCCCCGAACCCAGAGCCCCCAGAACTGCAGCATCATGTAAACTAGTAATAAAAGATCTTTATTTTCATTAGATCTGTGTGTTGGTTTTTTGTGTG	核纖層蛋白A構築體
7	GTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTGGTACCGTGTGTATGCTCAGGGGCTGGGAAAGGAGGGGAGGGAGCTCCGGCTCAGGAATTCGCCACCATGGAGACCCCGTCCCAGCGGCGCGCCACCCGCAGCGGGGCGCAGGCCAGCTCCACTCCGCTGTCGCCCACCCGCATCACCCGGCTGCAGGAGAAGGAGGACCTGCAGGAGCTCAATGATCGCTTGGCGGTCTACATCGACCGTGTGCGCTCGCTGGAAACGGAGAACGCAGGGCTGCGCCTTCGCATCACCGAGTCTGAAGAGGTGGTCAGCCGCGAGGTGTCCGGCATCAAGGCCGCCTACGAGGCCGAGCTCGGGGATGCCCGCAAGACCCTTGACTCAGTAGCCAAGGAGCGCGCCCGCCTGCAGCTGGAGCTGAGCAAAGTGCGTGAGGAGTTTAAGGAGCTGAAAGCGCGCAATACCAAGAAGGAGGGTGACCTGATAGCTGCTCAGGCTCGGCTGAAGGACCTGGAGGCTCTGCTGAACTCCAAGGAGGCCGCACTGAGCACTGCTCTCAGTGAGAAGCGCACGCTGGAGGGCGAGCTGCATGATCTGCGGGGCCAGGTGGCCAAGCTTGAGGCAGCCCTAGGTGAGGCCAAGAAGCAACTTCAGGATGAGATGCTGCGGCGGGTGGATGCTGAGAACAGGCTGCAGACCATGAAGGAGGAACTGGACTTCCAGAAGAACATCTACAGTGAGGAGCTGCGTGAGACCAAGCGCCGTCATGAGACCCGACTGGTGGAGATTGACAATGGGAAGCAGCGTGAGTTTGAGAGCCGGCTGGCGGATGCGCTGCAGGAACTGCGGGCCCAGCATGAGGACCAGGTGGAGCAGTATAAGAAGGAGCTGGAGAAGACTTATTCTGCCAAGCTGGACAATGCCAGGCAGTCTGCTGAGAGGAACAGCAACCTGGTGGGGGCTGCCCACGAGGAGCTGCAGCAGTCGCGCATCCGCATCGACAGCCTCTCTGCCCAGCTCAGCCAGCTCCAGAAGCAGCTGGCAGCCAAGGAGGCGAAGCTTCGAGACCTGGAGGACTCACTGGCCCGTGAGCGGGACACCAGCCGGCGGCTGCTGGCGGAAAAGGAGCGGGAGATGGCCGAGATGCGGGCAAGGATGCAGCAGCAGCTGGACGAGTACCAGGAGCTTCTGGACATCAAGCTGGCCCTGGACATGGAGATCCACGCCTACCGCAAGCTCTTGGAGGGCGAGGAGGAGAGGCTACGCCTGTCCCCCAGCCCTACCTCGCAGCGCAGCCGTGGCCGTGCTTCCTCTCACTCATCCCAGACACAGGGTGGGGGCAGCGTCACCAAAAAGCGCAAACTGGAGTCCACTGAGAGCCGCAGCAGCTTCTCACAGCACGCACGCACTAGCGGGCGCGTGGCCGTGGAGGAGGTGGATGAGGAGGGCAAGTTTGTCCGGCTGCGCAACAAGTCCAATGAGGACCAGTCCATGGGCAATTGGCAGATCAAGCGCCAGAATGGAGATGATCCCTTGCTGACTTACCGGTTCCCACCAAAGTTCACCCTGAAGGCTGGGCAGGTGGTGACGATCTGGGCTGCAGGAGCTGGGGCCACCCACAGCCCCCCTACCGACCTGGTGTGGAAGGCACAGAACACCTGGGGCTGCGGGAACAGCCTGCGTACGGCTCTCATCAACTCCACTGGGGAAGAAGTGGCCATGCGCAAGCTGGTGCGCTCAGTGACTGTGGTTGAGGACGACGAGGATGAGGATGGAGATGACCTGCTCCATCACCACCACGTGAGTGGTAGCCGCCGCTGAACTAGTAATAAAAGATCTTTATTTTCATTAGATCTGTGTGTTGGTTTTTTGTGTG	核纖層蛋白C構築體
8	GTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTGGTACCGTGTGTATGCTCAGGGGCTGGGAAAGGAGGGGAGGGAGCTCCGGCTCAGGAATTCGCCACCATGGAGACCCCGTCCCAGCGGCGCGCCACCCGCAGCGGGGCGCAGGCCAGCTCCACTCCGCTGTCGCCCACCCGCATCACCCGGCTGCAGGAGAAGGAGGACCTGCAGGAGCTCAATGATCGCTTGGCGGTCTACATCGACCGTGTGCGCTCGCTGGAAACGGAGAACGCAGGGCTGCGCCTTCGCATCACCGAGTCTGAAGAGGTGGTCAGCCGCGAGGTGTCCGGCATCAAGGCCGCCTACGAGGCCGAGCTCGGGGATGCCCGCAAGACCCTTGACTCAGTAGCCAAGGAGCGCGCCCGCCTGCAGCTGGAGCTGAGCAAAGTGCGTGAGGAGTTTAAGGAGCTGAAAGCGCGCAATACCAAGAAGGAGGGTGACCTGATAGCTGCTCAGGCTCGGCTGAAGGACCTGGAGGCTCTGCTGAACTCCAAGGAGGCCGCACTGAGCACTGCTCTCAGTGAGAAGCGCACGCTGGAGGGCGAGCTGCATGATCTGCGGGGCCAGGTGGCCAAGCTTGAGGCAGCCCTAGGTGAGGCCAAGAAGCAACTTCAGGATGAGATGCTGCGGCGGGTGGATGCTGAGAACAGGCTGCAGACCATGAAGGAGGAACTGGACTTCCAGAAGAACATCTACAGTGAGGAGCTGCGTGAGACCAAGCGCCGTCATGAGACCCGACTGGTGGAGATTGACAATGGGAAGCAGCGTGAGTTTGAGAGCCGGCTGGCGGATGCGCTGCAGGAACTGCGGGCCCAGCATGAGGACCAGGTGGAGCAGTATAAGAAGGAGCTGGAGAAGACTTATTCTGCCAAGCTGGACAATGCCAGGCAGTCTGCTGAGAGGAACAGCAACCTGGTGGGGGCTGCCCACGAGGAGCTGCAGCAGTCGCGCATCCGCATCGACAGCCTCTCTGCCCAGCTCAGCCAGCTCCAGAAGCAGCTGGCAGCCAAGGAGGCGAAGCTTCGAGACCTGGAGGACTCACTGGCCCGTGAGCGGGACACCAGCCGGCGGCTGCTGGCGGAAAAGGAGCGGGAGATGGCCGAGATGCGGGCAAGGATGCAGCAGCAGCTGGACGAGTACCAGGAGCTTCTGGACATCAAGCTGGCCCTGGACATGGAGATCCACGCCTACCGCAAGCTCTTGGAGGGCGAGGAGGAGAGGCTACGCCTGTCCCCCAGCCCTACCTCGCAGCGCAGCCGTGGCCGTGCTTCCTCTCACTCATCCCAGACACAGGGTGGGGGCAGCGTCACCAAAAAGCGCAAACTGGAGTCCACTGAGAGCCGCAGCAGCTTCTCACAGCACGCACGCACTAGCGGGCGCGTGGCCGTGGAGGAGGTGGATGAGGAGGGCAAGTTTGTCCGGCTGCGCAACAAGTCCAATGAGGACCAGTCCATGGGCAATTGGCAGATCAAGCGCCAGAATGGAGATGATCCCTTGCTGACTTACCGGTTCCCACCAAAGTTCACCCTGAAGGCTGGGCAGGTGGTGACGGTGAGTGGCAGGGCGCTTGGGACTCTGGGGAGGCCTTGGGTGGCGATGGGAGCGCTGGGGTAAGTGTCCTTTTCTCCTCTCCAGATCTGGGCTGCAGGAGCTGGGGCCACCCACAGCCCCCCTACCGACCTGGTGTGGAAGGCACAGAACACCTGGGGCTGCGGGAACAGCCTGCGTACGGCTCTCATCAACTCCACTGGGGAAGTAAGTAGGCCTGGGCCTGGCTGCTTGCTGGACGAGGCTCCCCCTGATGGCCAACATCGGAGCCAGCTGCCCCCAACCCAAGTTTGCCAATTCAGGGCCCCTTTCTAGAGCTCTCTGTTGCAGGCTCCAGACTTCTCCACCCAGTAGGCAAACCAAAAGATGCTTCCTCAACAGCACAAGGGGTGGAAGTTAGACAGTGAGGATTGTTAAAGGCAGAGCCATACTCCTACCCGGAGAGCTTGACAGTGTCCCTCTGGGGTGGAAATGAGTTCCTTAGCTCCATCACCACAGAGGACAGAGTAAGCAGCAGGCCGGACAAAGGGCAGGCCACAAGAAAAGTTGCAGGTGGTCACTGGGGTAGACATGCTGTACAACCCTTCCCTGGCCCTGACCCTTGGACCTGGTTCCATGTCCCCACCAGGAAGTGGCCATGCGCAAGCTGGTGCGCTCAGTGACTGTGGTTGAGGACGACGAGGATGAGGATGGAGATGACCTGCTCCATCACCACCACGTGAGTGGTAGCCGCCGCTGAGGCCGAGCCTGCACTGGGGCCACCCAGCCAGGCCTGGGGGCAGCCTCTCCCCAGCCTCCCCGTGCCAAAAATCTTTTCATTAAAGAATGTTTTGGAACTTTACTCGCTGGCCTGGCCTTTCTTCTCTCTCCTCCCTATACCTTGAACAGGGAACCCAGGTGTCTGGGTGCCCTACTCTGGTAAGGAAGGGAGTGGGAACTTTCTGATGCCATGGAATATTCCTGTGGGAGCAGTGGACAAGGGTCTGGATTTGTCTTCTGGGAAAGGGAGGGGAGGACAGACGTGGGGCATGCCCGCCCTGCCTCTCTCCCCCATTCTTGTTGCATGCATATCCTCTCATTTCCCTCATTTTTCCTGCAAGAATGTTCTCTCTCATTCCTGACCGCCCCTCCACTCCAATTAATAGTGCATGCCTGCTGCCCTACAAGCTTGCTCCCGTTCTCTCTTCTTTTCCTCTTAAGCTCAGAGTAGCTAGAACAGAGTCAGAGTCACTGCTCTGGTTCTCTGTCCCCAAGTCTTCCTGAGCCTTCTCCCCTTTTATGTCTTCCCTCTCCTCCTCCGGGCCCCTAGCCTCCCAAACCCCCATTGCCCGCTGGCTCCTTGGGCACAGAACCACACCTTCCTGCCTGGCGGCTGGGAGCCTGCAGGAGCCTGGAGCCTGGTTGGGCCTGAGTGGTCAGTCCCAGACTCGCCGTCCCGCCTGAGCCTTGTCTCCCTTCCCAGGGCTCCCACTGCAGCAGCTCGGGGGACCCCGCTGAGTACAACCTGCGCTCGCGCACCGTGCTGTGCGGGACCTGCGGGCAGCCTGCCGACAAGGCATCTGCCAGCGGCTCAGGAGCCCAGGTGGGCGGACCCATCTCCTCTGGCTCTTCTGCCTCCAGTGTCACGGTCACTCGCAGCTACCGCAGTGTGGGGGGCAGTGGGGGTGGCAGCTTCGGGGACAATCTGGTCACCCGCTCCTACCTCCTGGGCAACTCCAGCCCCCGAACCCAGGTGAGTTGTCTCTGCTTTGTCTCCAAATCCTGCAGGCGGGTCCCTGGTCATCGAGGGGTAGGACGAGGTGGCCTTGCAGGGGGGAGAGCCTGCCTTCTCTTCCGCAGCCCGGGGGAGTGGGAGCCTCCTCCCCACAGCCTGAGTCCTAGACAGCCCACCTCTGCATCCTGCCCCTCTTGTCTGAGCCCCAGACTGGAGGGCAGGGGCAGGGCTGGAGTGTGAGGGATGGGGGAGATGCTACCTCCCTTCTAGGGGCCAGGGGAGGGAGGGTCTGGGTCCAGGCCCTGCTGCTCACACCTCTCTCCTCTGTTTTCTCTCTTAGAGCCCCCAGAACTGCAGCATCATGTAAACTAGTAATAAAAGATCTTTATTTTCATTAGATCTGTGTGTTGGTTTTTTGTGTG	袖珍基因1構築體
9	GTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTGGTACCGTGTGTATGCTCAGGGGCTGGGAAAGGAGGGGAGGGAGCTCCGGCTCAGGAATTCGCCACCATGGAGACCCCGTCCCAGCGGCGCGCCACCCGCAGCGGGGCGCAGGCCAGCTCCACTCCGCTGTCGCCCACCCGCATCACCCGGCTGCAGGAGAAGGAGGACCTGCAGGAGCTCAATGATCGCTTGGCGGTCTACATCGACCGTGTGCGCTCGCTGGAAACGGAGAACGCAGGGCTGCGCCTTCGCATCACCGAGTCTGAAGAGGTGGTCAGCCGCGAGGTGTCCGGCATCAAGGCCGCCTACGAGGCCGAGCTCGGGGATGCCCGCAAGACCCTTGACTCAGTAGCCAAGGAGCGCGCCCGCCTGCAGCTGGAGCTGAGCAAAGTGCGTGAGGAGTTTAAGGAGCTGAAAGCGCGCAATACCAAGAAGGAGGGTGACCTGATAGCTGCTCAGGCTCGGCTGAAGGACCTGGAGGCTCTGCTGAACTCCAAGGAGGCCGCACTGAGCACTGCTCTCAGTGAGAAGCGCACGCTGGAGGGCGAGCTGCATGATCTGCGGGGCCAGGTGGCCAAGCTTGAGGCAGCCCTAGGTGAGGCCAAGAAGCAACTTCAGGATGAGATGCTGCGGCGGGTGGATGCTGAGAACAGGCTGCAGACCATGAAGGAGGAACTGGACTTCCAGAAGAACATCTACAGTGAGGAGCTGCGTGAGACCAAGCGCCGTCATGAGACCCGACTGGTGGAGATTGACAATGGGAAGCAGCGTGAGTTTGAGAGCCGGCTGGCGGATGCGCTGCAGGAACTGCGGGCCCAGCATGAGGACCAGGTGGAGCAGTATAAGAAGGAGCTGGAGAAGACTTATTCTGCCAAGCTGGACAATGCCAGGCAGTCTGCTGAGAGGAACAGCAACCTGGTGGGGGCTGCCCACGAGGAGCTGCAGCAGTCGCGCATCCGCATCGACAGCCTCTCTGCCCAGCTCAGCCAGCTCCAGAAGCAGCTGGCAGCCAAGGAGGCGAAGCTTCGAGACCTGGAGGACTCACTGGCCCGTGAGCGGGACACCAGCCGGCGGCTGCTGGCGGAAAAGGAGCGGGAGATGGCCGAGATGCGGGCAAGGATGCAGCAGCAGCTGGACGAGTACCAGGAGCTTCTGGACATCAAGCTGGCCCTGGACATGGAGATCCACGCCTACCGCAAGCTCTTGGAGGGCGAGGAGGAGAGGCTACGCCTGTCCCCCAGCCCTACCTCGCAGCGCAGCCGTGGCCGTGCTTCCTCTCACTCATCCCAGACACAGGGTGGGGGCAGCGTCACCAAAAAGCGCAAACTGGAGTCCACTGAGAGCCGCAGCAGCTTCTCACAGCACGCACGCACTAGCGGGCGCGTGGCCGTGGAGGAGGTGGATGAGGAGGGCAAGTTTGTCCGGCTGCGCAACAAGTCCAATGAGGACCAGTCCATGGGCAATTGGCAGATCAAGCGCCAGAATGGAGATGATCCCTTGCTGACTTACCGGTTCCCACCAAAGTTCACCCTGAAGGCTGGGCAGGTGGTGACGATCTGGGCTGCAGGAGCTGGGGCCACCCACAGCCCCCCTACCGACCTGGTGTGGAAGGCACAGAACACCTGGGGCTGCGGGAACAGCCTGCGTACGGCTCTCATCAACTCCACTGGGGAAGTAAGTAGGCCTGGGCCTGGCTGCTTGCTGGACGAGGCTCCCCCTGATGGCCAACATCGGAGCCAGCTGCCCCCAACCCAAGTTTGCCAATTCAGGGCCCCTTTCTAGAGCTCTCTGTTGCAGGCTCCAGACTTCTCCACCCAGTAGGCAAACCAAAAGATGCTTCCTCAACAGCACAAGGGGTGGAAGTTAGACAGTGAGGATTGTTAAAGGCAGAGCCATACTCCTACCCGGAGAGCTTGACAGTGTCCCTCTGGGGTGGAAATGAGTTCCTTAGCTCCATCACCACAGAGGACAGAGTAAGCAGCAGGCCGGACAAAGGGCAGGCCACAAGAAAAGTTGCAGGTGGTCACTGGGGTAGACATGCTGTACAACCCTTCCCTGGCCCTGACCCTTGGACCTGGTTCCATGTCCCCACCAGGAAGTGGCCATGCGCAAGCTGGTGCGCTCAGTGACTGTGGTTGAGGACGACGAGGATGAGGATGGAGATGACCTGCTCCATCACCACCACGTGAGTGGTAGCCGCCGCTGAGGCCGAGCCTGCACTGGGGCCACCCAGCCAGGCCTGGGGGCAGCCTCTCCCCAGCCTCCCCGTGCCAAAAATCTTTTCATTAAAGAATGTTTTGGAACTTTACTCGCTGGCCTGGCCTTTCTTCTCTCTCCTCCCTATACCTTGAACAGGGAACCCAGGTGTCTGGGTGCCCTACTCTGGTAAGGAAGGGAGTGGGAACTTTCTGATGCCATGGAATATTCCTGTGGGAGCAGTGGACAAGGGTCTGGATTTGTCTTCTGGGAAAGGGAGGGGAGGACAGACGTGGGGCATGCCCGCCCTGCCTCTCTCCCCCATTCTTGTTGCATGCATATCCTCTCATTTCCCTCATTTTTCCTGCAAGAATGTTCTCTCTCATTCCTGACCGCCCCTCCACTCCAATTAATAGTGCATGCCTGCTGCCCTACAAGCTTGCTCCCGTTCTCTCTTCTTTTCCTCTTAAGCTCAGAGTAGCTAGAACAGAGTCAGAGTCACTGCTCTGGTTCTCTGTCCCCAAGTCTTCCTGAGCCTTCTCCCCTTTTATGTCTTCCCTCTCCTCCTCCGGGCCCCTAGCCTCCCAAACCCCCATTGCCCGCTGGCTCCTTGGGCACAGAACCACACCTTCCTGCCTGGCGGCTGGGAGCCTGCAGGAGCCTGGAGCCTGGTTGGGCCTGAGTGGTCAGTCCCAGACTCGCCGTCCCGCCTGAGCCTTGTCTCCCTTCCCAGGGCTCCCACTGCAGCAGCTCGGGGGACCCCGCTGAGTACAACCTGCGCTCGCGCACCGTGCTGTGCGGGACCTGCGGGCAGCCTGCCGACAAGGCATCTGCCAGCGGCTCAGGAGCCCAGGTGGGCGGACCCATCTCCTCTGGCTCTTCTGCCTCCAGTGTCACGGTCACTCGCAGCTACCGCAGTGTGGGGGGCAGTGGGGGTGGCAGCTTCGGGGACAATCTGGTCACCCGCTCCTACCTCCTGGGCAACTCCAGCCCCCGAACCCAGAGCCCCCAGAACTGCAGCATCATGTAAACTAGTAATAAAAGATCTTTATTTTCATTAGATCTGTGTGTTGGTTTTTTGTGTG	袖珍基因2構築體


10	GTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTGGTACCGTGTGTATGCTCAGGGGCTGGGAAAGGAGGGGAGGGAGCTCCGGCTCAGGAATTCGCCACCATGGAGACCCCGTCCCAGCGGCGCGCCACCCGCAGCGGGGCGCAGGCCAGCTCCACTCCGCTGTCGCCCACCCGCATCACCCGGCTGCAGGAGAAGGAGGACCTGCAGGAGCTCAATGATCGCTTGGCGGTCTACATCGACCGTGTGCGCTCGCTGGAAACGGAGAACGCAGGGCTGCGCCTTCGCATCACCGAGTCTGAAGAGGTGGTCAGCCGCGAGGTGTCCGGCATCAAGGCCGCCTACGAGGCCGAGCTCGGGGATGCCCGCAAGACCCTTGACTCAGTAGCCAAGGAGCGCGCCCGCCTGCAGCTGGAGCTGAGCAAAGTGCGTGAGGAGTTTAAGGAGCTGAAAGCGCGCAATACCAAGAAGGAGGGTGACCTGATAGCTGCTCAGGCTCGGCTGAAGGACCTGGAGGCTCTGCTGAACTCCAAGGAGGCCGCACTGAGCACTGCTCTCAGTGAGAAGCGCACGCTGGAGGGCGAGCTGCATGATCTGCGGGGCCAGGTGGCCAAGCTTGAGGCAGCCCTAGGTGAGGCCAAGAAGCAACTTCAGGATGAGATGCTGCGGCGGGTGGATGCTGAGAACAGGCTGCAGACCATGAAGGAGGAACTGGACTTCCAGAAGAACATCTACAGTGAGGAGCTGCGTGAGACCAAGCGCCGTCATGAGACCCGACTGGTGGAGATTGACAATGGGAAGCAGCGTGAGTTTGAGAGCCGGCTGGCGGATGCGCTGCAGGAACTGCGGGCCCAGCATGAGGACCAGGTGGAGCAGTATAAGAAGGAGCTGGAGAAGACTTATTCTGCCAAGCTGGACAATGCCAGGCAGTCTGCTGAGAGGAACAGCAACCTGGTGGGGGCTGCCCACGAGGAGCTGCAGCAGTCGCGCATCCGCATCGACAGCCTCTCTGCCCAGCTCAGCCAGCTCCAGAAGCAGCTGGCAGCCAAGGAGGCGAAGCTTCGAGACCTGGAGGACTCACTGGCCCGTGAGCGGGACACCAGCCGGCGGCTGCTGGCGGAAAAGGAGCGGGAGATGGCCGAGATGCGGGCAAGGATGCAGCAGCAGCTGGACGAGTACCAGGAGCTTCTGGACATCAAGCTGGCCCTGGACATGGAGATCCACGCCTACCGCAAGCTCTTGGAGGGCGAGGAGGAGAGGCTACGCCTGTCCCCCAGCCCTACCTCGCAGCGCAGCCGTGGCCGTGCTTCCTCTCACTCATCCCAGACACAGGGTGGGGGCAGCGTCACCAAAAAGCGCAAACTGGAGTCCACTGAGAGCCGCAGCAGCTTCTCACAGCACGCACGCACTAGCGGGCGCGTGGCCGTGGAGGAGGTGGATGAGGAGGGCAAGTTTGTCCGGCTGCGCAACAAGTCCAATGAGGACCAGTCCATGGGCAATTGGCAGATCAAGCGCCAGAATGGAGATGATCCCTTGCTGACTTACCGGTTCCCACCAAAGTTCACCCTGAAGGCTGGGCAGGTGGTGACGATCTGGGCTGCAGGAGCTGGGGCCACCCACAGCCCCCCTACCGACCTGGTGTGGAAGGCACAGAACACCTGGGGCTGCGGGAACAGCCTGCGTACGGCTCTCATCAACTCCACTGGGGAAGAAGTGGCCATGCGCAAGCTGGTGCGCTCAGTGACTGTGGTTGAGGACGACGAGGATGAGGATGGAGATGACCTGCTCCATCACCACCACGTGAGTGGTAGCCGCCGCTGAGGCCGAGCCTGCACTGGGGCCACCCAGCCAGGCCTGGGGGCAGCCTCTCCCCAGCCTCCCCGTGCCAAAAATCTTTTCATTAAAGAATGTTTTGGAACTTTACTCGCTGGCCTGGCCTTTCTTCTCTCTCCTCCCTATACCTTGAACAGGGAACCCAGGTGTCTGGGTGCCCTACTCTGGTAAGGAAGGGAGTGGGAACTTTCTGATGCCATGGAATATTCCTGTGGGAGCAGTGGACAAGGGTCTGGATTTGTCTTCTGGGAAAGGGAGGGGAGGACAGACGTGGGGCATGCCCGCCCTGCCTCTCTCCCCCATTCTTGTTGCATGCATATCCTCTCATTTCCCTCATTTTTCCTGCAAGAATGTTCTCTCTCATTCCTGACCGCCCCTCCACTCCAATTAATAGTGCATGCCTGCTGCCCTACAAGCTTGCTCCCGTTCTCTCTTCTTTTCCTCTTAAGCTCAGAGTAGCTAGAACAGAGTCAGAGTCACTGCTCTGGTTCTCTGTCCCCAAGTCTTCCTGAGCCTTCTCCCCTTTTATGTCTTCCCTCTCCTCCTCCGGGCCCCTAGCCTCCCAAACCCCCATTGCCCGCTGGCTCCTTGGGCACAGAACCACACCTTCCTGCCTGGCGGCTGGGAGCCTGCAGGAGCCTGGAGCCTGGTTGGGCCTGAGTGGTCAGTCCCAGACTCGCCGTCCCGCCTGAGCCTTGTCTCCCTTCCCAGGGCTCCCACTGCAGCAGCTCGGGGGACCCCGCTGAGTACAACCTGCGCTCGCGCACCGTGCTGTGCGGGACCTGCGGGCAGCCTGCCGACAAGGCATCTGCCAGCGGCTCAGGAGCCCAGGTGGGCGGACCCATCTCCTCTGGCTCTTCTGCCTCCAGTGTCACGGTCACTCGCAGCTACCGCAGTGTGGGGGGCAGTGGGGGTGGCAGCTTCGGGGACAATCTGGTCACCCGCTCCTACCTCCTGGGCAACTCCAGCCCCCGAACCCAGAGCCCCCAGAACTGCAGCATCATGTAAACTAGTAATAAAAGATCTTTATTTTCATTAGATCTGTGTGTTGGTTTTTTGTGTG	袖珍基因3構築體


11	AATAAAAGATCTTTATTTTCATTAGATCTGTGTGTTGGTTTTTTGTGTG	多腺苷酸化信號序列
70	GTGAGTTCGCCCAGGTGGCTGCGTGCCTGGCGGGGAGTGGAGAGGGCGGCGGGCCGGCGCCCCTGGCCGGCCGCAGGAAGGGAGTGAGAGGGCCTGGAGGCCGATAACTTTGCCATAGTCTCCTCCCTCCCCGGAACTGCCCCCAGCGGGTGACTGGCAGTGTCAAGGGGAATTGTCAAGACAGGACAGAGAGGGAAGTGGTGGTCTCTGGGAGAGGGTCGGGGAGGATATAAGGAATGGTGGGGGTATCAGGGACAAGTTGGGGCTGGGGCCGGCCTGAATTCGGTCAGATTGGGATTTGCCAACTATTTGGAGCCGGGGGGAGGGGCTTGAGCAAAACAGAACTAGCCCTGCCAGCTCGAAGAACTCTGGGCACCCAGGACACATCGGAGTGGCAGAAAGGGTCCTGTTAGAACTTTGTTAGCGGGCTTGGCACTGTGCTAGCTTTGCCCAAGCTGGCTCTGAACACATGATGCCCACTAAGACATAACTCTCAAGTTGGCATCTGTCCAGCGTGTTGGAGCGAGGTCAGGAAGGCAGGGCAATCCCCCTTTTCCCTCCCAAGGGCTTGGCGGTGGCCCCCCCTCAGCATGACCTTGTCCTGGGTTCTAAGGGTTGGGAAGTTCTCCCTCACTCTGCCACTCTGCGTGTCTGGGACCTTCCTTGGGCTCTGACAGGCCCACCAAAAGAGCTCCGGGAGATGAGAGATCGGCTCCCCCGCAGCTCCCACAGCCCTTGGCCTGCTTGGCCCAGGAATGCAAGGGAGGGAGGGAGGCAGAGGGCAGAGGCTCCCAGCTCAGGAAGTTGTGTTATGCCCAGGTCTGGCCGCACTCCTCCCTTGGCCCTCTGCCTAGTGTCTTCGAGGGTTGGGGGCACTGTCCTTCCCTCCTTGGGGTGAGCCACTTTCATTTTCCCAGCGGGGCCAGGCAGTCTTTGCTCGGGCCCATCCTCTTAGCTGCTGACGTTTTGATCTTTGTCTTATTGAAGTGCTGGAATACAGTGACATTTTTGAAATCCAGCCGTTGGAAGATTCAGGCCACTCCCACTTTACCCACCCCTGCCCCACCCTACCCCACCCTACTCAACTGCACCTTCTTCTTTTCTAAAAAAGCCTTTGGGAGCTTGGAAGTATAGGCCCTCTCTTCCAGCCCCATCAAAATTTGTTTCCCTTCTTCCTGCCTTCCCTTTCTCTATGCAGACCCAGGCCAAGAGCACTAAGGGTGCTTGGAGATCCGTAAAGGGCTGTTGGCTTTGACTTCTTCTCTCTCTTTTATCATCTACTCCAAACTTCTGCTCTTCCTAGAACCCTTTGCTAGGTGTGGTTTTGTTGCCCAGGCTGGAGTGCAATGGCACAATCTCGGCTCACTGCAACCTCCGCCTCCCAGGTTCAAGTGATTCTCCTGCCTCAGCCTCCCGAATAGCTGAGATTACAGGCATGTGCCACCATGCCGGGCTAATTTTGTATTTCTAGTAGAGATGGGGTTTCTCCATGTTCGTCAGGCTAGTCTTGAACTCCCAACCTCAGGTGATCCACCCGCCTCAGCCTCCCAAAGTGCTAGGATTACAGGCATGAGCCACCACGCTGGGCCCATCACCCTTCTTTCTGAAGAGTCAATGGAAGTTGTGTGTAGGAAGACAGGCTTAACGGTTTTTTTTTGAGACAGGGTCTTACTCTGTCACCCAGACTGGAGTGAAGTGGTGCGATCTTGGCTCACCACAACCTCTGCCTCCCAGGCTCAAAAGATTCTCCTGCCTCAGCCTCCTGAGTAGCTGGGATTATAAGTGTGTGCCACCACACATGGCTATTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTAATTTTTAGTAGAGATGGGGTTTCACCATGTTGGCTAGGCTGGTCTCAAACTCCTGACTTCAAATGATCCACCTGCCTCGGCCTCCCAAAGTGCTGGGATTACAGGTGTGAGCTACCATGCCCGGCCATCAACCTTTATTTTGTTTTTTTGAGACGGAGTCTTGCTTTGTTGCCCAGGCTGGAGTACAGTAGTGTGACCTCAGGTCACTGCAACCTCTGCCTCCCAGGTTCAAGCCATGCTCCTGCCTCAGCCTCCCAAGTAGCTGGGACTATAGGTGCCTGCCACCACGCCCGGCTACTTTTTATATTTTTAGTAGAGACGGGGTTTCACCATGTTGGCCAGGGTGATCTCGAACTCCTGACCTCAAGTGATCTGCCTGCCTCAGCCTCCCAAAGTGTTGGGATTAGAGACGGGAGCCACTGCGCCTGGCTTCTTTTTTTCTTGAGATAGGGTTTCACTCTGTTACCCAGGCTGGAGTGCAGTGGCAAGGTCATGGCTCACTGCAGCCTCTACCTCTCTGGCTCAAGCCATCCTCCCGCCTCAGCCTCCTGAGTAGCTGGGACCACAGGCAGGCACCACCACCCACAGCTAATGTTTTTGTATTATTTTGTAGAGATGGGGTTTTGCCATGTTGCCCACAGTCTTGAACTCCTGGGTTCATTCTGCTGAAAGAGACCACACCTGTCCTTTTCTTTATTTTTATTATATTTTTCAGAGACAGGGCCTTGCCCTGTTGCTCAGGCTAGAGTGCAATGGTACAATCATAACTTGCTGCAGCCTGGAACTCCTCCTGGGCTCAAGCGATCCTACCGTCTCACCTTCCGGAATAGCTGAGACTAAGGGCAGGCACCACCACGCTTGGCTAATTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGCTTTTTGTTTGTAAAGATGGAAACTTGCTATGTTGCTCAGCTGGTTCCGAAGTTTTGGCCTCAAGCAATCCTCCTGCCTCGGCCTCCGGAAGCACTGGGATTACAGGCATAAGCCACCAGGCCTGACGCCAGGCCTGTCTTTTTTCTACTAGTGATATGAACAATTTAGTTAGCAAGACAGATAGGAAGCAAGGAAGGGGAGACCCAGAGAATTCGTTGCATTCTAAACTAGTCCACTCATCTACCAAAGCCCTGTGAAGGACATTTTTAGCAGTTTTAGCAGTTTTCTGGTCAAAACTTTGATCGAGAAACAGATTGAGTGGATTCGATATTCTCTTGCTCACCCAGCCACGCCAGTTTGTCTCCTCTGCCTCCTAGTGCAGCTGTCCAGGCCTGGGACACCAGGCGGGTATGTGCGCATGTGGGGCAGGGCGGAGGTGGTGTGTGTACTTGTTATATTTAGCCACCTCCCTCTGTTCTCCCCCACTGATCCTGGCTGGAAAGGCTGGGCTTCCGGAAAAGAGAGGTGGATTTGCACACCTGGATCCCAAGCTGATAGAAAGTGGGGTGAAGACAAAGGGGACTCAGACTGGGGTGTCTGTCCTCTTCTATGCCCACAGTAGGAGGAGCCAGGATTGGTTACTCCCTGCTGGGTCTGCTGTGCTCAGAGTGAGGTAGAGAAGTGGGTAGAGTAAAGAATTTGGGAGAGGAAAAAAGGCATTTTCCCAACCCCTCCCACCAAAGCCTAGAGAGAAGGTGTTGTCTGGTTTAATGTTTAATTAGAGCTCAGAGTTCAGGGCCAGATTTGGAGTTGGGATGGAAAGTTGTTTTTAAGACCCTGTAGCAATTTTTGACCCAGCCTGGGTACCTCAACCACACTCAGGAGTTTGGGGGACCTTCTGTTGGGCTGGATTATAGGCTCCAAGAAGAAACCCCTTTCGCCAATACTCTCTCTCTCTTCTTTTTTTGAGACAGGGTCTTGTTCTGTTGCCCAGGCTGGGGTGCAGTGGCATGATCACAGCTCACTGCAACGTCAGCCTCACAGGCTCTGGTGATTCTCCCACCTCAGCCTCCTGAGTAGCTGGGATTACAAGTGTGTGCCACCATGCCCAGCTAATTTTTTTTTTCTTTTTTTTTTTTTGAGACGGAGTCTTGTTCTGTTGCCAGGCTGGAGTGCAGTGGTGCGATCTCGGCTCATTGCAACCTCCACCTCCCAGGTTCAAGCGATTCTCCTGCCTCAGCCTCCCGAGTAGCTGGGACTACAGGCACATGCCATCACGCCCAGTTAATTTTTGTATTTTTAGTAGAGTTGGGGTTTCACCATGTTGGCCAGGATGGTCTTGATCTCTTGACCTCGTGATCCGTCCACCTTGGCCTCCCAAAGTGCTGGGATTACAGGTGTGAGCCACCGTACCCGGCCACTAATTTTTATATATTTTGTAGAGATGGGGTTTCACCGTGTTGCCCAAGCTGGTCTCGAACTCCTAGGCTCAAGTAATCCACCTGCCTTGGCCTTGGCCTCCCAAAGTGCTGGGATGTATAGGCATGAGCTACCGCACCTGGTACCCCCTGCCCCTTCTCTGTCTCTTTCTAGTCTGTAGCCCAAGGGATTTGGATACCCAAGTGCAGGCAGAATGGGAAGGTTGTAAGCACCAGGGAAGCCTGTCTGGAGTCCAGGCTTGCAGCTGGGCCCCACCCCAGGCAAGGCAGCTGGGTGGATGACTCAGATGCTGCCCCCCTCCCTCCCACCCTGGTGGCTTTACAGAAGACAGCAGGAGACAGGGTGGAGACAGCAGTTGTCTTAAAGGGAGGAGTGGTGGTCTGAATGTCTACCTCTTCTGCCCCCCTCCCCATTGCATCCTGGAGTCCCTTGCCTGGCTCCTTCCTGAGACCCTCTGGTGGTGTCTGGACACATAGCTCTCTCTGGACAGGTAACATGCACAAGTAATTAGAATCCAGAGTTGAGTTCAGAGTTATGGATTGGGCTGCAGGATAGTGCCAGGGTCTGTGCCTTCCCATGTGAAACTGATGGAGGAAGGCTGAGTCAGAAGTGGGGAGATCCGAGGCCCACAAAGCAGAAGCGCTACTTCCACTCCAAAAAGGCCCTGGTGCTTGACAACTTCCTGGATTGCCCACTGTTGCAGCCCCAGTGTGGACAGGCAGGGAGATGCAGGCTCCAGTTCATGTAGGCTCTGATCAAGACAAGAACAGCAAAGGCCACAGAGGCACAGATGCTTGTCCCATGTCACACAATAAAGGGGTCAGCACTTGATCAC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GCAGGAGACAAAGGTACCCCTGTCTCTTTGGGAAAGAATGGGAGGAGAGAGAGGGAAAAGCATTCATATCACGGGGTAGAGCTCTGCCCTTGGCCCCAGGCACGTTCCTGAGCCCTGAGTCATGGGAAGGGTGGAGAAGCAGGAAGGGGGTTTTCAAGGACCTTGGGGAGGTGGGAGCCCAGCCCCAGAGGCAAGCAGATGCAAACCAACCTAATGCAAGGATGCCCTCTCCTGGTAATTGCAGGCATAGCAGCGCCAGCCCCCATGGCTGACCTCCTGGGAGCCTGGCACTGTCTAGGCACACAGACTCCTTCTCTTAAATCTACTCTCCCCTCTCTTCTTTAG	核纖層蛋白A及核纖層蛋白C之內含子1
71	GTGAGGCCACCCTGCAGGGCCCACCCATGGCCCCACCTAACACATGTACACTCACTCTTCTACCTAGGCCCTCCCCCATGTGGTGCCTGGTCTGACCTGTCACCTGATTTCAGAGCCATTCACCTGTCCTAGAGTCATTTTACCCACTGAGGTCACATCTTATCCTAATTTGGCTGCCAATGGGATCTACCACAGTGAATTTAAAATAATCCAGGAGGCCGGGCATGGTGGTTCACGCCTGTAATCCCAGCACTTTAGGAGGCCGAGGTGGGCCGATCACGAGGTCAGGAGATCGAGATCATCCTGACTAACATGGTGAAACCCCGTCTCTACTAAAAATACAAAAAATTAGCCTGGCATGGTGGCGGGCGCCTGTAGTCCCAACTACTCGGGAGGCTGAGGCAGGAGAATGGCGTGAGCCTGCGAGGCAGAGCTTGCAGTGAGCTGAGATCATGCCACTGCACTCCAGCCTGGGCAACAGAGTGAGACTCCGTCTCAAAAAAATAATAATAATAATAATAAAAATAATCCAGGCCATGTGTGGTGGCTCATGCCTGTAATCCCAGCATTTTGGGAGGCCAAGGAGGCAGGATTGCTTGAGTCCAGGAGTTTGAGACCAGCCTGGGCAACACAGACCCCATCTCTAGAAAATAAAAATTTAAAGAAATTAGCTGGGCATGGTGGTGTGCACCTATAGTCCCAGCTACTTGGGAGGCTGAGGCAGGAGGATGGCTTGAACCTGAGAGGTCGAGGATACAGTGAGCTGTGATTGCACCACTGCACTTCAGCCTGGGTGACAGAGGGAAACCCTGTCTCTACATAAATAAATACATAAAATAAAATAATCCACAAGCCATTTCTACTTAACTTTGCAATGAACTGTACCTGACCCTAGATCCCTCCCAGTTTGGCCCTCCGGTATACAAGGGCCTCCTATAGGCCCTTGTGATTTCTCTGGGGAAAAGGAGGACTGGAGTTGATCATTTATTGAGGCCATCAGAAGCGGATGGCTAATTACATATGGGACATGTGTTAATAATGCTTTGTGTATATAGAGTGGCCTTTACTTTCAAAACACTCTTCTCCAATTTATCATGTTAAAAGCTAGGAATTGGGCTGGGTGCAGTGGCTCACGCCTATAATCCCAGCACTTTGGGAGGCCAAGGCGGGTGGATCATTTGAGGTCAGGAGTTTGAGACCAGTCTGACCAACATGGTTAAACTCCGTCTCTACTAAAAATACAAAATTAGCCAGGCGTGGTGGCACACACCTGTAGTCCCAACAACTACTTGTGAGGCTGAGGCAGGAAAATCATTTGAACCCAGGATCAGAGGTTGTGGTGAACTGAGATTGCACCATTGCACTCCAGCCTGGGCAACAAGAGCAAAACTCTATCTCAAAAAAAATAAAAAATAGCCAGGCACGGTGGCTCATGCCTGTAATCCTAGCACTTTGGGAGGCAGAGGTGGGCAGATCACCTGAGGTTAGGAGTTCGAGACTAGCCTGGCCAACATGGTGAAACCCCATCTCTACTACAAATACAAAAATTAGCTAGGCATGGTGGCAGCCACCTGTAATCCCAGCTACTTGGGAGGCTGAGGCAGGAGAATCGCTTGAACCCGGGAGGTGGAGGTTGCAGTGAGCCAAGATCGGGTCACAGCACTCCAGCCTAGGCAACAGAGCGAGACTCCATCTCAAAAAAACATAAATAAATAAAAATAAAAATAAATAATAAATAAAAGCTAAGAATCAAAGAAGCAGTTTATTCCTAATTTCACAGTCTCATCTGTTCATAGTGGGGCCAGGATTAGAGTCAGTGGCCAAGCTTCCATCCTGGGTTCTTTCCCTTCCCAGGCCCTACCATCATAGTATACCAGGGAAAGACCTGGAGAAGCCAGCAGGTTGACCACCGAACCAAGGCTGGGCCACCTTCCTCCTGGGTCTGGTCTCCAGCCTCCCAGTTGTACCCTTCCCCCAGCCCTTCCTGGATGCACTGATCAGCCTGTGCTTCCTTGCCCTGTTTTTCTTTATAAATAGAGCCATGTTCTCCTCTCTCTCTCTCTCTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGAGATGGAGTCTTACTCTGTCACCCAGGCTGGAGTGCAATGGCACGATCTCAGCTCACTGCAACCTCTGTCTCCCAGGTTCAAGCAATTCTCCTGCCTCAGCCTCCCGAGTAGCTGGGATTACAGGTGCCCACCACCATGCCCAGCTACTTTTTGGATTTTTAGTAGAGACAGGGTTTCACCATGTTGGTCAGGCTGGTCTTGAACTCCTGACCTTAGGTGTTCTGCCCGCCTCAGCCTCCCAAAGTGCTGGGATTACAGGCGTGAGCCACCACGCCTGGCAAGACGTGTTCTCTCTATGTTGTTGAGGCTGGTCTTGAACTCCTGGCTGCAAGAGATCTTCCTGCCTCAGCCTCCCAATGTGCTGGGATTATAGGCATGAGCCACCACACTTAGCCCAGCCTGTGCTTTCTTAAATGAAAATCTAAGCATACGGCTGGGTGTGGTGGCTCACGCCTGTAATCCCAGCATTTTGGGAGGCCAAGGTGGGCAGATCACGAGGTCAGGAGATCGAGACTATCCTGGCCAACATGGTGAAACCCTGTCTCTACTAAAGATACAAAAATTAGCTGGGTGTGGTGGCCCATGTCTGTAGTCCCAGCTACTCGGGAGACTGAGGCAGGAGAATGGCATGAACCTGGGAGGCAGAGCTTGCAGTGAGCTGAGATCGCGCCACTGCTCTCCAGCCTAGGTGACAGAGCGAGACTCCATCTCAAAAAAAAAATAAAAATAAAAAAAAGAAAATCTAAGCGTGGTGCTCCCCTGCTCAAACATCCTCAGGTTCTTTTCATGGCAGATAAGGGCATCTCTTCATGAGCCAGCCCCTGCCTACTGACCCAGCCACCTCTCCCATCCCTTCCCACCCCGTACTTCAGGCTTCAGCAGTACTGATCTTTCCAAAGACCCCAGAACACACATGCCTTCATACCTCTGTGCCTGTACATGCTTGTTTCTGCCCTTGAAATCATGACAGTAGCTCTCTGTAGGCCCCGCTAGCCTGTCCCTTGGGTCTTAGCCTCTTGGAGGCCTTCCCAGAGCCCCCCAAAAGTACCCCAGGCATACTTTGGTTCCTTCTCTCATGTCCCCTCAGTACTTTGCACATACCTCCTTTATAGCAGTTGCTATGTTGTGCCAGAGAAGGGAGTCCTGTGGCTGGGGGGCATATATCTTTTCTTTTTGAGACAGAGTCTAGCTGTGTCACCCAGGCTGGAGTGCAGTAGTGCGATCTCGGCTCACTGCAACCTCCACCTCCTGGATTCAAGCGATTCTTGTGCCTCAGCCTCCTGAGTAGCTGGGACTACAGGCGTGTGCCACCATCATGCCTGGCTACTTTTTTGTATTAGATATATATTTTCTCTCTTAGCACAGTACCTACCAAGAGTGAGTGAGTAGATGTCCTGACCCCTGCAGGCATCCAAGGCCCTCCTTCCCTGGACCTGTTTCCACATGTGTGAAGGGGTGCACAGGCAGCAGCCCACCTCTCAGCTTCCTTCCAGTTCTTGTGTTCTGTGACCCCTTTTCCTCATCTCTGCCTGCTTCCTCACAG	核纖層蛋白A及核纖層蛋白C之內含子2
72	GTGGGGACTGTGCTTTGCAAGCCAGAGGGCTGGGGCTGGGTGATGACAGACTTGGGCTGGGCTAGGGGGGACCAGCTGTGTGCAGAGCTCGCCTTCCTGAGTCCCTTGCCCTAGTGGACAGGGAGTTGGGGGTGGCCAGCACTCAGCTCCCAGGTTAAAGTGGGGCTGGTAGTGGCTCATGGAGTAGGGCTGGGCAGGGAGCCCCGCCCCTGGGTCTTGGCCTCCCAGGAACTAATTCTGATTTTGGTTTCTGTGTCCTTCCTCCAACCCTTCCAG	核纖層蛋白A及核纖層蛋白C之內含子3
73	GTGCTTGCTCTCGATTGGTTCCCTCACTGCCTCTGCCCTTGGCAGCCCTACCCTTACCCACGCTGGGCTATGCCTTCTGGGGATCAGGCAGATGGTGGCAGGGAGCTCAGGGTGGCCCAGGACCTGGGGCTGTAGCAGTGATGCCCAACTCAGGCCTGTGCCTCCACCCCTCCCAGTCACCACAGTCCTAACCCTTTGTCCTCCCCTCCAG	核纖層蛋白A及核纖層蛋白C之內含子4
74	GTGATACCCCACCTCACCCCTCTCTCCAGGGGCCTAGAGTCTGGGCCGGATGCAGGCTGGAAGCCCAGGGTTGGGGGTGGGGGTGGGGGTGGGAGGTTCCTGAGGAGGAGAGGGATGAAAAGTGTCCCCACAACCACAGAGAAGGGTCGCAGGATGTGGAGTCAGATGGCCTGTGTGCTGTTTCTGTACACTCTTACCTCACCTTCACTTCTCAGGGCTTTGGTTTTCCCATTCGAAAATGGAGGCTGTTCTTAATCTCCCTAACTCAGAGTTGCCACAGGACTCTGCAATGTGAGGTGTTAAAAGCATCAGTATTTTTCTAGTTGGCTGTGCTATTTGTGACAGGAGAAAAAGTCTAGCCTCAGAACGAGAGGTTTCAGTTAGACAAGGGGAAGGACTTCCCAGTTGCCAGCCAAGACTATGTTTAGAGCTTGTGATGTTCAGAGCTGGCTCTGATGAGGGCTCTGGGGAAGCTCTGATTGCAGATCCTGGAGAGAGTAGCCAGGTGTCTCCTACACCGACCCACGTCCCTCCTTCCCCATACTTAGGGCCCTTGGGAGCTCACCAAACCCTCCCACCCCCCTTCAG	核纖層蛋白A及核纖層蛋白C之內含子5
75	GTGGGCTGGGGAGACGTCGGGGAGGTGCTGGCAGTGTCCTCTGGCCGGCAACTGGCCTTGACTAGACCCCCACTTGGTCTCCCTCTCCCCAG	核纖層蛋白A及核纖層蛋白C之內含子6
76	GTAGGCTCCTGCTCAGGGTCTAAGGGGATACAGCTGCATCAGGGAGAGAGTGGCAAGACAGAAGGATGGCATGTGGAGAGAGGAACATCCTTGCCCTCAGAGGGTGGACCAGGGTGAGCCTGTATATCTCCTCCACACTCTGGTTCCAGGCCTGGCTCCTGGACTCTTTGGCTGTGAGACCTTGAGCAGGTTATTTAACCTCTCAGAGCATCAGTTTCCTCATCTGTAAAATGGGGATGAATACTGATCCCTAAGTCTTTGAGTTGTCAGGAAGATGAAAGATAAGGTATCCGTGTGCCTGGTGCTGCGTATGTGTCCACAGATCATGGCTATTATCCCCGGGGGAAGGGCAGTGACAGGGGTGTGTGTAGATGGAAGGAGAGGCCTCAATTGCAGGCAGGCAGAGGGCTGGGCCTTTGAGCAAGATACACCCAAGAGCCTGGGTGAGCCTCCCCGACCTTCCTCTTCCCTATCTTCCCGGCAG	核纖層蛋白A及核纖層蛋白C之內含子7
77	GTGAGTGGCAGGGCGCTTGGGACTCTGGGGAGGCCTTGGGTGGCGATGGGAGCGCTGGGGTAAGTGTCCTTTTCTCCTCTCCAG	核纖層蛋白A及核纖層蛋白C之內含子8
78	GTAAGTAGGCCTGGGCCTGGCTGCTTGCTGGACGAGGCTCCCCCTGATGGCCAACATCGGAGCCAGCTGCCCCCAACCCAAGTTTGCCAATTCAGGGCCCCTTTCTAGAGCTCTCTGTTGCAGGCTCCAGACTTCTCCACCCAGTAGGCAAACCAAAAGATGCTTCCTCAACAGCACAAGGGGTGGAAGTTAGACAGTGAGGATTGTTAAAGGCAGAGCCATACTCCTACCCGGAGAGCTTGACAGTGTCCCTCTGGGGTGGAAATGAGTTCCTTAGCTCCATCACCACAGAGGACAGAGTAAGCAGCAGGCCGGACAAAGGGCAGGCCACAAGAAAAGTTGCAGGTGGTCACTGGGGTAGACATGCTGTACAACCCTTCCCTGGCCCTGACCCTTGGACCTGGTTCCATGTCCCCACCAG	核纖層蛋白A及核纖層蛋白C之內含子9
79	GTGAGTGGTAGCCGCCGCTGAGGCCGAGCCTGCACTGGGGCCACCCAGCCAGGCCTGGGGGCAGCCTCTCCCCAGCCTCCCCGTGCCAAAAATCTTTTCATTAAAGAATGTTTTGGAACTTTACTCGCTGGCCTGGCCTTTCTTCTCTCTCCTCCCTATACCTTGAACAGGGAACCCAGGTGTCTGGGTGCCCTACTCTGGTAAGGAAGGGAGTGGGAACTTTCTGATGCCATGGAATATTCCTGTGGGAGCAGTGGACAAGGGTCTGGATTTGTCTTCTGGGAAAGGGAGGGGAGGACAGACGTGGGGCATGCCCGCCCTGCCTCTCTCCCCCATTCTTGTTGCATGCATATCCTCTCATTTCCCTCATTTTTCCTGCAAGAATGTTCTCTCTCATTCCTGACCGCCCCTCCACTCCAATTAATAGTGCATGCCTGCTGCCCTACAAGCTTGCTCCCGTTCTCTCTTCTTTTCCTCTTAAGCTCAGAGTAGCTAGAACAGAGTCAGAGTCACTGCTCTGGTTCTCTGTCCCCAAGTCTTCCTGAGCCTTCTCCCCTTTTATGTCTTCCCTCTCCTCCTCCGGGCCCCTAGCCTCCCAAACCCCCATTGCCCGCTGGCTCCTTGGGCACAGAACCACACCTTCCTGCCTGGCGGCTGGGAGCCTGCAGGAGCCTGGAGCCTGGTTGGGCCTGAGTGGTCAGTCCCAGACTCGCCGTCCCGCCTGAGCCTTGTCTCCCTTCCCAG	核纖層蛋白A之內含子10
80	GTGAGTTGTCTCTGCTTTGTCTCCAAATCCTGCAGGCGGGTCCCTGGTCATCGAGGGGTAGGACGAGGTGGCCTTGCAGGGGGGAGAGCCTGCCTTCTCTTCCGCAGCCCGGGGGAGTGGGAGCCTCCTCCCCACAGCCTGAGTCCTAGACAGCCCACCTCTGCATCCTGCCCCTCTTGTCTGAGCCCCAGACTGGAGGGCAGGGGCAGGGCTGGAGTGTGAGGGATGGGGGAGATGCTACCTCCCTTCTAGGGGCCAGGGGAGGGAGGGTCTGGGTCCAGGCCCTGCTGCTCACACCTCTCTCCTCTGTTTTCTCTCTTAG	核纖層蛋白A之內含子11
81	ATGGAGACCCCGTCCCAGCGGCGCGCCACCCGCAGCGGGGCGCAGGCCAGCTCCACTCCGCTGTCGCCCACCCGCATCACCCGGCTGCAGGAGAAGGAGGACCTGCAGGAGCTCAATGATCGCTTGGCGGTCTACATCGACCGTGTGCGCTCGCTGGAAACGGAGAACGCAGGGCTGCGCCTTCGCATCACCGAGTCTGAAGAGGTGGTCAGCCGCGAGGTGTCCGGCATCAAGGCCGCCTACGAGGCCGAGCTCGGGGATGCCCGCAAGACCCTTGACTCAGTAGCCAAGGAGCGCGCCCGCCTGCAGCTGGAGCTGAGCAAAGTGCGTGAGGAGTTTAAGGAGCTGAAAGCGCG	核纖層蛋白A及核纖層蛋白C之外顯子1
82	CAATACCAAGAAGGAGGGTGACCTGATAGCTGCTCAGGCTCGGCTGAAGGACCTGGAGGCTCTGCTGAACTCCAAGGAGGCCGCACTGAGCACTGCTCTCAGTGAGAAGCGCACGCTGGAGGGCGAGCTGCATGATCTGCGGGGCCAGGTGGCCAAG	核纖層蛋白A及核纖層蛋白C之外顯子2
83	CTTGAGGCAGCCCTAGGTGAGGCCAAGAAGCAACTTCAGGATGAGATGCTGCGGCGGGTGGATGCTGAGAACAGGCTGCAGACCATGAAGGAGGAACTGGACTTCCAGAAGAACATCTACAGTGAG	核纖層蛋白A及核纖層蛋白C之外顯子3
84	GAGCTGCGTGAGACCAAGCGCCGTCATGAGACCCGACTGGTGGAGATTGACAATGGGAAGCAGCGTGAGTTTGAGAGCCGGCTGGCGGATGCGCTGCAGGAACTGCGGGCCCAGCATGAGGACCAGGTGGAGCAGTATAAGAAGGAGCTGGAGAAGACTTATTCTGCCAAG	核纖層蛋白A及核纖層蛋白C之外顯子4
85	CTGGACAATGCCAGGCAGTCTGCTGAGAGGAACAGCAACCTGGTGGGGGCTGCCCACGAGGAGCTGCAGCAGTCGCGCATCCGCATCGACAGCCTCTCTGCCCAGCTCAGCCAGCTCCAGAAGCAG	核纖層蛋白A及核纖層蛋白C之外顯子5
86	CTGGCAGCCAAGGAGGCGAAGCTTCGAGACCTGGAGGACTCACTGGCCCGTGAGCGGGACACCAGCCGGCGGCTGCTGGCGGAAAAGGAGCGGGAGATGGCCGAGATGCGGGCAAGGATGCAGCAGCAGCTGGACGAGTACCAGGAGCTTCTGGACATCAAGCTGGCCCTGGACATGGAGATCCACGCCTACCGCAAGCTCTTGGAGGGCGAGGAGGAGAG	核纖層蛋白A及核纖層蛋白C之外顯子6
87	GCTACGCCTGTCCCCCAGCCCTACCTCGCAGCGCAGCCGTGGCCGTGCTTCCTCTCACTCATCCCAGACACAGGGTGGGGGCAGCGTCACCAAAAAGCGCAAACTGGAGTCCACTGAGAGCCGCAGCAGCTTCTCACAGCACGCACGCACTAGCGGGCGCGTGGCCGTGGAGGAGGTGGATGAGGAGGGCAAGTTTGTCCGGCTGCGCAACAAGTCCAATGAG	核纖層蛋白A及核纖層蛋白C之外顯子7
88	GACCAGTCCATGGGCAATTGGCAGATCAAGCGCCAGAATGGAGATGATCCCTTGCTGACTTACCGGTTCCCACCAAAGTTCACCCTGAAGGCTGGGCAGGTGGTGACG	核纖層蛋白A及核纖層蛋白C之外顯子8
89	ATCTGGGCTGCAGGAGCTGGGGCCACCCACAGCCCCCCTACCGACCTGGTGTGGAAGGCACAGAACACCTGGGGCTGCGGGAACAGCCTGCGTACGGCTCTCATCAACTCCACTGGGGAA	核纖層蛋白A及核纖層蛋白C之外顯子9
90	GAAGTGGCCATGCGCAAGCTGGTGCGCTCAGTGACTGTGGTTGAGGACGACGAGGATGAGGATGGAGATGACCTGCTCCATCACCACCAC	核纖層蛋白A之外顯子10
91	GAAGTGGCCATGCGCAAGCTGGTGCGCTCAGTGACTGTGGTTGAGGACGACGAGGATGAGGATGGAGATGACCTGCTCCATCACCACCACGTGAGTGGTAGCCGCCGCTGA	核纖層蛋白C之外顯子10
92	GGCTCCCACTGCAGCAGCTCGGGGGACCCCGCTGAGTACAACCTGCGCTCGCGCACCGTGCTGTGCGGGACCTGCGGGCAGCCTGCCGACAAGGCATCTGCCAGCGGCTCAGGAGCCCAGGTGGGCGGACCCATCTCCTCTGGCTCTTCTGCCTCCAGTGTCACGGTCACTCGCAGCTACCGCAGTGTGGGGGGCAGTGGGGGTGGCAGCTTCGGGGACAATCTGGTCACCCGCTCCTACCTCCTGGGCAACTCCAGCCCCCGAACCCAG	核纖層蛋白A之外顯子11
93	AGCCCCCAGAACTGCAGCATCATGTAA	核纖層蛋白A之外顯子12

表 2 ：本文所揭示之某些胺基酸序列之清單。

SEQ ID NO:	胺基酸序列	名稱
12	METPSQRRATRSGAQASSTPLSPTRITRLQEKEDLQELNDRLAVYIDRVRSLETENAGLRLRITESEEVVSREVSGIKAAYEAELGDARKTLDSVAKERARLQLELSKVREEFKELKARNTKKEGDLIAAQARLKDLEALLNSKEAALSTALSEKRTLEGELHDLRGQVAKLEAALGEAKKQLQDEMLRRVDAENRLQTMKEELDFQKNIYSEELRETKRRHETRLVEIDNGKQREFESRLADALQELRAQHEDQVEQYKKELEKTYSAKLDNARQSAERNSNLVGAAHEELQQSRIRIDSLSAQLSQLQKQLAAKEAKLRDLEDSLARERDTSRRLLAEKEREMAEMRARMQQQLDEYQELLDIKLALDMEIHAYRKLLEGEEERLRLSPSPTSQRSRGRASSHSSQTQGGGSVTKKRKLESTESRSSFSQHARTSGRVAVEEVDEEGKFVRLRNKSNEDQSMGNWQIKRQNGDDPLLTYRFPPKFTLKAGQVVTIWAAGAGATHSPPTDLVWKAQNTWGCGNSLRTALINSTGEEVAMRKLVRSVTVVEDDEDEDGDDLLHHHHGSHCSSSGDPAEYNLRSRTVLCGTCGQPADKASASGSGAQVGGPISSGSSASSVTVTRSYRSVGGSGGGSFGDNLVTRSYLLGNSSPRTQSPQNCSIM	前核纖層蛋白A序列
13	METPSQRRATRSGAQASSTPLSPTRITRLQEKEDLQELNDRLAVYIDRVRSLETENAGLRLRITESEEVVSREVSGIKAAYEAELGDARKTLDSVAKERARLQLELSKVREEFKELKARNTKKEGDLIAAQARLKDLEALLNSKEAALSTALSEKRTLEGELHDLRGQVAKLEAALGEAKKQLQDEMLRRVDAENRLQTMKEELDFQKNIYSEELRETKRRHETRLVEIDNGKQREFESRLADALQELRAQHEDQVEQYKKELEKTYSAKLDNARQSAERNSNLVGAAHEELQQSRIRIDSLSAQLSQLQKQLAAKEAKLRDLEDSLARERDTSRRLLAEKEREMAEMRARMQQQLDEYQELLDIKLALDMEIHAYRKLLEGEEERLRLSPSPTSQRSRGRASSHSSQTQGGGSVTKKRKLESTESRSSFSQHARTSGRVAVEEVDEEGKFVRLRNKSNEDQSMGNWQIKRQNGDDPLLTYRFPPKFTLKAGQVVTIWAAGAGATHSPPTDLVWKAQNTWGCGNSLRTALINSTGEEVAMRKLVRSVTVVEDDEDEDGDDLLHHHHVSGSRR	核纖層蛋白C序列
14	METPSQRRATRSGAQASSTPLSPTRITRLQEKEDLQELNDRLAVYIDRVRSLETENAGLRLRITESEEVVSREVSGIKAAYEAELGDARKTLDSVAKERARLQLELSKVREEFKELKARNTKKEGDLIAAQARLKDLEALLNSKEAALSTALSEKRTLEGELHDLRGQVAKLEAALGEAKKQLQDEMLRRVDAENRLQTMKEELDFQKNIYSEELRETKRRHETRLVEIDNGKQREFESRLADALQELRAQHEDQVEQYKKELEKTYSAKLDNARQSAERNSNLVGAAHEELQQSRIRIDSLSAQLSQLQKQLAAKEAKLRDLEDSLARERDTSRRLLAEKEREMAEMRARMQQQLDEYQELLDIKLALDMEIHAYRKLLEGEEERLRLSPSPTSQRSRGRASSHSSQTQGGGSVTKKRKLESTESRSSFSQHARTSGRVAVEEVDEEGKFVRLRNKSNEDQSMGNWQIKRQNGDDPLLTY	袖珍基因1核纖層蛋白同功型A/C (外顯子18)
15	RFPPKFTLKAGQVVTIWAAGAGATHSPPTDLVWKAQNTWGCGNSLRTALINSTGE	袖珍基因1核纖層蛋白同功型A/C (外顯子9)
16	EVAMRKLVRSVTVVEDDEDEDGDDLLHHHHVSGSRR	袖珍基因1核纖層蛋白同功型C (外顯子10)
17	EVAMRKLVRSVTVVEDDEDEDGDDLLHHHH	袖珍基因1核纖層蛋白同功型A (外顯子10)
18	GSHCSSSGDPAEYNLRSRTVLCGTCGQPADKASASGSGAQVGGPISSGSSASSVTVTRSYRSVGGSGGGSFGDNLVTRSYLLGNSSPRTQ	袖珍基因1 核纖層蛋白A外顯子11
19	SPQNCSIM	袖珍基因1 核纖層蛋白A外顯子12
20	METPSQRRATRSGAQASSTPLSPTRITRLQEKEDLQELNDRLAVYIDRVRSLETENAGLRLRITESEEVVSREVSGIKAAYEAELGDARKTLDSVAKERARLQLELSKVREEFKELKARNTKKEGDLIAAQARLKDLEALLNSKEAALSTALSEKRTLEGELHDLRGQVAKLEAALGEAKKQLQDEMLRRVDAENRLQTMKEELDFQKNIYSEELRETKRRHETRLVEIDNGKQREFESRLADALQELRAQHEDQVEQYKKELEKTYSAKLDNARQSAERNSNLVGAAHEELQQSRIRIDSLSAQLSQLQKQLAAKEAKLRDLEDSLARERDTSRRLLAEKEREMAEMRARMQQQLDEYQELLDIKLALDMEIHAYRKLLEGEEERLRLSPSPTSQRSRGRASSHSSQTQGGGSVTKKRKLESTESRSSFSQHARTSGRVAVEEVDEEGKFVRLRNKSNEDQSMGNWQIKRQNGDDPLLTYRFPPKFTLKAGQVVTIWAAGAGATHSPPTDLVWKAQNTWGCGNSLTALINSTGE	袖珍基因2 核纖層蛋白同功型A/C (外顯子1-9)
21	METPSQRRATRSGAQASSTPLSPTRITRLQEKEDLQELNDRLAVYIDRVRSLETENAGLRLRITESEEVVSREVSGIKAAYEAELGDARKTLDSVAKERARLQLELSKVREEFKELKARNTKKEGDLIAAQARLKDLEALLNSKEAALSTALSEKRTLEGELHDLRGQVAKLEAALGEAKKQLQDEMLRRVDAENRLQTMKEELDFQKNIYSEELRETKRRHETRLVEIDNGKQREFESRLADALQELRAQHEDQVEQYKKELEKTYSAKLDNARQSAERNSNLVGAAHEELQQSRIRIDSLSAQLSQLQKQLAAKEAKLRDLEDSLARERDTSRRLLAEKEREMAEMRARMQQQLDEYQELLDIKLALDMEIHAYRKLLEGEEERLRLSPSPTSQRSRGRASSHSSQTQGGGSVTKKRKLESTESRSSFSQHARTSGRVAVEEVDEEGKFVRLRNKSNEDQSMGNWQIKRQNGDDPLLTYRFPPKFTLKAGQVVTIWAAGAGATHSPPTDLVWKAQNTWGCGNSLRTALINSTGEEVAMRKLVRSVTVVEDDEDEDGDDLLHHHHGSHCSSSGDPAEYNLRSRTVLCGTCGQPADKASASGSGAQVGGPISSGSSASSVTVTRSYRSVGGSGGGSFGDNLVTRSY	成熟核纖層蛋白A序列
22	[保留]
23	[保留]
24	GSHCSSSGDPAEYNLRSRTVLCGTCGQPADKASASGSGAQVGGPISSGSSASSVTVTRSYRSVGGSGGGSFGDNLVTRSYLLGNSSPRTQSPQNCSIM	袖珍基因2核纖層蛋白同功型A (外顯子11-12)
25	[保留]
26	[保留]
27	[保留]
28	[保留]
29	[保留]

表 3 ：例示性調節元件核酸序列之清單

SEQ ID NO:	核酸序列	長度
30	GTAAGGTAAGAATTGAATTTCTCAGTTGAAGGATGCTTACACTCTTGTCCATCTAG	56bp
31	GTGTGTATGCTCAGGGGCTGGGAAAGGAGGGGAGGGAGCTCCGGCTCAG	49bp
32	GTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTGGTACCGTAAGGTAAGAATTGAATTTCTCAGTTGAAGGATGCTTACACTCTTGTCCATCTAG	266bp
33	GTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTGGTACCGTGTGTATGCTCAGGGGCTGGGAAAGGAGGGGAGGGAGCTCCGGCTCAG	259bp
34	GTGATGACGTGTCCCATAAGGCCCCTCGGTCTAAGGCTTCCCTATTTCCTGGTTCGCCGGCGGCCATTTTGGGTGGAAGCGATAGCTGAGTGGCGGCGGCTGCTGATTGTGTTCTAG	117bp
35	GTGATGACGTGTCCCATACTTCCGGGTCAGGTGGGCCGGCTGTCTTGACCTTCTTTGCGGCTCGGCCATTTTGTCCCAGTCAGTCCGGAGGCTGCGGCTGCAGAAGTACCGCCTGCG	117bp
36	GTGATGACGTGTCCCATATTTTCATCTCGCGAGACTTGTGAGCGGCCATCTTGGTCCTGCCCTGACAGATTCTCCTATCGGGGTCACAGGGACGCTAAGATTGCTACCTGGACTTTC	117bp
37	GTGATGACGTGTCCCATGGCCTCATTGGATGAGAGGTCCCACCTCACGGCCCGAGGCGGGGCTTCTTTGCGCTTAAAAGCCGAGCCGGGCCAATGTTCAAATGCGCAGCTCTTAGTC	117bp
38	GTGATGACGTGTCCCATCCCCCCTCCACCCCCTAGCCCGCGGAGCACGCTGGGATTTGGCGCCCCCCTCCTCGGTGCAACCTATATAAGGCTCACAGTCTGCGCTCCTGGTACACGC	117bp
39	CCCCCCTCCACCCCCTAGCCCGCGGAGCACGCTGGGATTTGGCGCCCCCCTCCTCGGTGCAACCTATATAAGGCTCACAGTCTGCGCTCCTGGTACACGC	100bp
40	GGCCTCATTGGATGAGAGGTCCCACCTCACGGCCCGAGGCGGGGCTTCTTTGCGCTTAAAAGCCGAGCCGGGCCAATGTTCAAATGCGCAGCTCTTAGTC	100bp
41	GGGTGGGGCCCGCGCGTATAAAGGGGGCGCAGGCGGGCTGGGCGTTCCACAGGCCAAGTGCGCTGTGCTCGAGGGGTGCCGGCCAGGCCTGAGCGAGCGA	100bp
42	GGTGCGATATTCGGATTGGCTGGAGTCGGCCATCACGCTCCAGCTACGCCACTTCCTTTTCGTGGCACTATAAAGGGTGCTGCACGGCGCTTGCATCTCT	100bp
43	ACTTCCGGGTCAGGTGGGCCGGCTGTCTTGACCTTCTTTGCGGCTCGGCCATTTTGTCCCAGTCAGTCCGGAGGCTGCGGCTGCAGAAGTACCGCCTGCG	100bp
44	GCTGAGCGCGCGCGATGGGGCGGGAGGTTTGGGGTCAAGGAGCAAACTCTGCACAAGATGGCGGCGGTAGCGGCAGTGGCGGCGCGTAGGAGGCGGTGAG	100bp
45	ATTTTCATCTCGCGAGACTTGTGAGCGGCCATCTTGGTCCTGCCCTGACAGATTCTCCTATCGGGGTCACAGGGACGCTAAGATTGCTACCTGGACTTTC	100bp
46	TGGGACCCCCGGAAGGCGGAAGTTCTAGGGCGGAAGTGGCCGAGAGGAGAGGAGAATGGCGGCGGAAGGCTGGATTTGGCGTTGGGGCTGGGGCCGGCGG	100bp
47	AAGGCCCCTCGGTCTAAGGCTTCCCTATTTCCTGGTTCGCCGGCGGCCATTTTGGGTGGAAGCGATAGCTGAGTGGCGGCGGCTGCTGATTGTGTTCTAG	100bp
48	AGTGACCCGGAAGTAGAAGTGGCCCTTGCAGGCAAGAGTGCTGGAGGGCGGCAGCGGCGACCGGAGCGGTAGGAGCAGCAATTTATCCGTGTGCAGCCCC	100bp
49	GGGAGGGGCGCGCTGGGGAGCTTCGGCGCATGCGCGCTGAGGCCTGCCTGACCGACCTTCAGCAGGGCTGTGGCTACCATGTTCTCTCGCGCGGGTGTCG	100bp
50	ACTGCGCACGCGCGCGGTCGCACCGATTCACGCCCCCTTCCGGCGCCTAGAGCACCGCTGCCGCCATGTTGAGGGGGGGACCGCGACCAGCTGGGCCCCT	100bp
51	CCCTCGAGGGGCGGAGCAAAAAGTGAGGCAGCAACGCCTCCTTATCCTCGCTCCCGCTTTCAGTTCTCAATAAGGTCCGATGTTCGTGTATAAATGCTCG	100bp
52	CTTGGTGACCAAATTTGAAAAAAAAAAAAAACCGCGCCAACTCATGTTGTTTTCAATCAGGTCCGCCAAGTTTGTATTTAAGGAACTGTTTCAGTTCATA	100bp
53	GGCTGAGCTATCCTATTGGCTATCGGGACAAAATTTGCTTGAGCCAATCAAAGTGCTCCGTGGACAATCGCCGTTCTGTCTATAAAAAGGTGAAGCAGCG	100bp
54	GGAAGTGCCAGACCGGAGGTGCGTCATTCACCGGCGACGCCGATACGGTTCCTCCACCGAGGCCCATGCGAAGCTTTCCACTATGGCTTCCAGCACTGTC	100bp
55	CCCTCGAGGGGCGGAGCAAAAAGTGAGGCAGCAACGCCTCCTTATCCTCGCTCCCGCTTTCAGTTCTCAATAAGGTCCGATGTTCGTGTATAAATGCTCG	100bp
56	CTTGGTGACCAAATTTGAAAAAAAAAAAAAACCGCGCCAACTCATGTTGTTTTCAATCAGGTCCGCCAAGTTTGTATTTAAGGAACTGTTTCAGTTCATA	100bp
57	GGCTGAGCTATCCTATTGGCTATCGGGACAAAATTTGCTTGAGCCAATCAAAGTGCTCCGTGGACAATCGCCGTTCTGTCTATAAAAAGGTGAAGCAGCG	100bp
58	GGAAGTGCCAGACCGGAGGTGCGTCATTCACCGGCGACGCCGATACGGTTCCTCCACCGAGGCCCATGCGAAGCTTTCCACTATGGCTTCCAGCACTGTC	100bp
102	GCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCG	584bp

表 4 ：本文所揭示之另外的核酸序列

SEQ ID NO:	核酸序列	來源 / 基因體位置
59	GTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCT	CMV 啟動子
60	TCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCG	CBA 啟動子
61	GCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATG	CBA啟動子之上游使用的CMV強化子
62	GTACTTATATAAGGGGGTGGGGGCGCGTTCGTCCTCAGTCGCGATCGAACACTCGAGCCGAGCAGACGTGCCTACGGACC	SCP
63	GGGGAGGCTGCTGGTGAATATTAACCAAGGTCACCCCAGTTATCGGAGGAGCAAACAGGGGCTAAGTCCACGCTAGCGTCTGTCTGCACATTTCGTAGAGCGAGTGTTCCGATACTCTAATCTCCCTAGGCAAGGTTCATATTTGTGTAGGTTACTTATTCTCCTTTTGTTGACTAAGTCAATAATCAGAATCAGCAGGTTTGGAGTCAGCTTGGCAGGGATCAGCAGCCTGGGTTGGAAGGAGGGGGTATAAAAGCCCCTTCACCAGGAGAAGCCGTC	SerpE TT R
64	GTTTGCTGCTTGCAATGTTTGCCCATTTTAGGGTGGACACAGGACGCTGTGGTTTCTGAGCCAGGGCTAGCGGGCGACTCAGATCCCAGCCAGTGGACTTAGCCCCTGTTTGCTCCTCCGATAACTGGGGTGACCTTGGTTAATATTCACCAGCAGCCTCCCCCGTTGCCCCTCTGGATCCACTGCTTAAATACGGACGAGGACAGGGCCCTGTCTCCTCAGCTTCAGGCACCACCACTGACCTGGGACAGTGAATCGCCAC	Proto1
65	TGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCT	minCMV
66	GTTTGCTGCTTGCAATGTTTGCCCATTTTAGGGTGGACACAGGACGCTGTGGTTTCTGAGCCAGGGGGCGACTCAGATCCCAGCCAGTGGACTTAGCCCCTGTTTGCTCCTCCGATAACTGGGGTGACCTTGGTTAATATTCACCAGCAGCCTCCCCCGTTGCCCCTCTGGATCCACTGCTTAAATACGGACGAGGACAGGGCCCTGTCTCCTCAGCTTCAGGCACCACCACTGACCTGGGACAGTGAATC	UCL-HLP
67	CGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATG	CMVe
68	GTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCACCCCCTCTAGCGGGCGCGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATGGGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCATCTCCAGCCTCGGGGCTGCCGCAGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACGGGGCAGGGCGGGGTTCGGCTTCTGGCGTGTGACCGGCGGCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTGTTGTGCTGTCTCATCATTTTGGCAAAGAATT	CAG
69	GCTCCGGTGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGCCAGAACACAGG	EFS
100	GAGTGGGTAAGTGTGAAAAATCTGCATGTGTGGCTGAAGATGGGCACAGACACGGTCAAGTCTGTATGTGAGAGTGCTGAACTGGGGTTCTGTGTGAAAATCTGCCTGAGGCGGCAGGGAGAATCACTGCCATTGCGTGAGCAGGTTGGATGTTGGCCACTCTATCAGGAGCATTAGGGAAGGGGTGGGGACTCCAGACGTGTCCCCAAACCAGGGTGGCCTCAAGACCTTGGGAGAACACTTGTCTGAAGACTTGGGGAACAGAAGGAGACCAGGCATGGCACTTATGCAGACTGAGGCCAGGACAGAATTTCCTGACAAAAGAAAACTGAGCCATGGAGATGGACAACAGATCCCTTCCCTGGGCACCATACTGCAGCTTTTAGTCCCTAGCACTGGGGGCTCCAGTACTAACAGCAGGAAGATGCTCCCAGCCTGGGACTGTGTGAGGGAGGTCAGAATGGGAAGGAGAGGCTGGGGAACAGGGGAGGAAAGCCCATGGTTGGGAGGCGGAGGACAGGCATTTGGCCTGCAGGAGAAGGTGACCCTCACCCATGTTTTCAGTTCACCCTTCGGGTTAAAAATAACTGAGGTAAGGGCCATGGCAGGGTGGGAGAGGCGGTGTGAGAAGGTCCTGTCTTCCCACTATCTGCTCATCAGCCCTTTGAAGGGGAGGAATGTGCCCAAGGACTAAAAAAAGGCCGTGGAGCCAGAGAGGCTGGGGCAGCAGACCTTTCTTGGGCAAATCAGGGGGCCCTGCTGTCCTCCTGTCACCTCCAGAGCCAAAGGATCAAAGGAGGAGGAGCCAGGAGGGGAGAGAGGTGGGAGGGAGGGTCCCTCCGGAAGGACTCCAAATTTAGACAGAGGGTGGGGGAAACGGGATATAAAGGAACTGGAGCTTTGAGGACAGATAGAGAGACTCCTGCGGCCCAGGTAAGAGGAGGTTTGGGGT	Myh6
101	AGCAGTCTGGGCTTTCACATGACAGCATCTGGGGCTGCGGCAGAGGGTCGGGTCCGAAGCGCTGCCTTATCAGCGTCCCCAGCCCTGGGAGGTGACAGCTGGCTGGCTTGTGTCAGCCCCTCGGGCACTCACGTATCTCCATCCGACGGGTTTAAAATAGCAAAACTCTGAGGCCACACAATAGCTTGGGCTTATATGGGCTCCTGTGGGGGAAGGGGGAGCACGGAGGGGGCCGGGGCCGCTGCTGCCAAAATAGCAGCTCACAAGTGTTGCATTCCTCTCTGGGCGCCGGGCACATTCCTGCTGGCTCTGCCCGCCCCGGGGTGGGCGCCGGGGGGACCTTAAAGCCTCTGCCCCCCAAGGAGCCCTTCCCAGACAGCCGCCGGCACCCACCGCTCCGTGGGAC	cTnT

以引用之方式併入

本說明書中所提及之所有公開案、專利及專利申請案均以引用的方式併入本文中，其引用的程度如同各單獨的公開案、專利或專利申請案經特定及單獨地表明以引用的方式併入一般。

無

本發明之新穎特徵在隨附申請專利範圍中細緻闡述。將參考闡述利用本發明原理之說明性具體實例及其隨附圖式得以下詳細描述來獲得對本發明之特徵及優勢的更佳理解：

[圖1]說明用於表現核纖層蛋白A之完整病毒載體基因組構築體之載體圖譜。病毒載體包含腺相關病毒(AAV)載體，該腺相關病毒(AAV)載體包含CMV啟動子、具有SEQ ID NO: 31之強化子、包含核纖層蛋白A之外顯子1至12的核纖層蛋白同功型A插入序列及多腺苷酸化序列信號。

[圖2]說明用於表現核纖層蛋白C之完整病毒載體基因組構築體之載體圖譜。病毒載體包含腺相關病毒(AAV)載體，該腺相關病毒(AAV)載體包含CMV啟動子、具有SEQ ID NO: 31之強化子、包含核纖層蛋白C之外顯子1至10的核纖層蛋白同功型C插入序列及多腺苷酸化序列信號。

[圖3]說明用於表現核纖層蛋白A及核纖層蛋白C之完整病毒載體基因組構築體(袖珍基因1)之載體圖譜。病毒載體包含腺相關病毒(AAV)載體，該腺相關病毒(AAV)載體包含CMV啟動子，具有SEQ ID NO: 31之強化子，包含核纖層蛋白A/C之外顯子1至12、核纖層蛋白A/C之內含子8至11的核纖層蛋白同功型A/C插入序列及多腺苷酸化序列信號。

[圖4]說明用於表現核纖層蛋白A及核纖層蛋白C之完整病毒載體基因組構築體(袖珍基因2)的載體圖譜。病毒載體包含腺相關病毒(AAV)載體，該腺相關病毒(AAV)載體包含CMV啟動子，具有SEQ ID NO: 31之強化子，包含核纖層蛋白A/C之外顯子1至12、核纖層蛋白A/C之內含子9及10的核纖層蛋白同功型A/C插入序列及多腺苷酸化序列信號。

[圖5]說明用於表現核纖層蛋白A及核纖層蛋白C之完整病毒載體基因組構築體(袖珍基因3)之載體圖譜。病毒載體包含腺相關病毒(AAV)載體，該腺相關病毒(AAV)載體包含CMV啟動子，具有SEQ ID NO: 31之強化子，包含核纖層蛋白A/C之外顯子1至12、核纖層蛋白A/C之內含子10的核纖層蛋白同功型A/C插入序列及多腺苷酸化序列信號。

[圖6]為展示核纖層蛋白A及核纖層蛋白C同功型均產生自HEK293細胞中之LMNA袖珍基因構築體1的西方墨點。

[圖7]為表明LMNA袖珍基因構築體能夠在HEK293T細胞(左側)及iPS心肌細胞(右側)中均表現核纖層蛋白A及核纖層蛋白C兩者之mRNA表現水平之圖示。

[圖8]為展示核纖層蛋白A及核纖層蛋白C同功型均產生自試管內 袖珍基因構築體1 (293T細胞)、及活體內 心臟及肝臟組織(下圖來自24週大的野生型及異型接合Lmna +~雄性小鼠模型動物之心臟組織)中之西方墨點。

[圖9]為展示當用攜帶袖珍基因構築體1之AAV病毒給藥時LMNA^-/- KO小鼠中疾病表型之挽救的圖式。

[圖10A及圖10B]展示當藉由RNAseq量測時核纖層蛋白A及核纖層蛋白C同功型在用攜帶袖珍基因構築體1之AAV9處理的小鼠中之活體內表現。圖10A展示在普遍存在的啟動子控制下核纖層蛋白A及核纖層蛋白C在心臟及肝臟中之表現。圖10B展示在心臟特異性啟動子(cTNT)控制下核纖層蛋白A及核纖層蛋白C在心臟及肝臟中之表現。

[圖11A至11C]為各自併入雞β肌動蛋白啟動子之數種不同構築體之簡化示意圖。在圖11A中，構築體包含CBA啟動子，包含核纖層蛋白A/C之外顯子1至12、核纖層蛋白A/C之內含子8至11之核纖層蛋白同功型A/C插入序列及多腺苷酸化序列信號。在圖11B中，構築體包含CBA啟動子，包含核纖層蛋白A/C之外顯子1至12、核纖層蛋白A/C之內含子9及10之核纖層蛋白同功型A/C插入序列及多腺苷酸化序列信號。在圖11C中，構築體包含CBA啟動子，包含核纖層蛋白A/C之外顯子1至12、核纖層蛋白A/C之內含子10之核纖層蛋白同功型A/C插入序列及多腺苷酸化序列信號。

[圖12]為展示核纖層蛋白A及核纖層蛋白C同功型在HEK293細胞中編碼核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C的LMNA 袖珍基因構築體中之表現的西方墨點。

[圖13]為表明在CMV啟動子下編碼核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C的LMNA袖珍基因構築體能夠在HEK293T細胞中表現核纖層蛋白A及/或核纖層蛋白C之mRNA表現水平的圖示。特定言之在HEK293T細胞中表達核纖層蛋白A及核纖層蛋白C兩者的編碼核纖層蛋白A及核纖層蛋白C之LMNA袖珍基因。

Claims

一種核酸構築體，該核酸構築體包含編碼核纖層蛋白（lamin）A多肽及核纖層蛋白C多肽或其生物活性變異體及/或片段之核苷酸序列，其中該構築體至少包含野生型人類LMNA 基因之內含子8或內含子11。
如請求項1之核酸構築體，其中內含子8包含與SEQ ID NO: 77之核苷酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列或其片段。
如請求項1之核酸構築體，其中內含子11包含與SEQ ID NO: 80之核苷酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列或其片段。
如請求項1至3中任一項之核酸構築體，其中該核苷酸序列進一步包含野生型人類LMNA 基因之內含子10。
如請求項4之核酸構築體，其中內含子10包含與SEQ ID NO: 79之核苷酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列或其片段。
如請求項1至5中任一項之核酸構築體，其中該核苷酸序列進一步包含野生型人類LMNA 基因之內含子9。
如請求項6之核酸構築體，其中內含子9包含與SEQ ID NO: 78之核苷酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列或其片段。
如請求項1至7中任一項之核酸構築體，其中該核苷酸序列包含野生型人類LMNA 基因之內含子8及11。
如請求項1至8中任一項之核酸構築體，其中該核苷酸序列包含野生型人類LMNA 基因之內含子8。
如請求項1至8中任一項之核酸構築體，其中該核苷酸序列包含野生型人類LMNA 基因之內含子11。
如請求項1至10中任一項之核酸構築體，其中該核苷酸序列進一步包含野生型人類LMNA 基因之內含子9及10。
如請求項1至11中任一項之核酸構築體，其中該核苷酸序列包含野生型人類LMNA 基因之內含子8、9、10及11。
如請求項1至12中任一項之核酸構築體，其中該核酸構築體缺少至少一個與野生型人類LMNA 基因之內含子1至7對應的內含子。
如請求項1至12中任一項之核酸構築體，其中該核酸構築體缺少野生型人類LMNA 基因之內含子1至7。
如請求項1至14中任一項之核酸構築體，其中該核酸構築體進一步包含野生型人類LMNA 基因之內含子9，且缺少至少一個與野生型人類LMNA 基因之內含子1至7對應的內含子。
如請求項1至15中任一項之核酸構築體，其中該核酸構築體進一步包含野生型人類LMNA 基因之內含子10，且缺少至少一個與野生型人類LMNA 基因之內含子1至7對應的內含子。
如請求項1至16中任一項之核酸構築體，其中該核酸構築體包含野生型人類LMNA 基因之內含子8至11，且缺少野生型人類LMNA 基因之內含子1至7。
如請求項1至17中任一項之核酸構築體，其中調節元件具有少於或等於500個鹼基對。
如請求項1至17中任一項之核酸構築體，其中該調節元件具有少於或等於900個鹼基對。
如請求項1至17中任一項之核酸構築體，其中該調節元件具有少於或等於800個鹼基對(bp)、700 bp、600 bp、500 bp、400 bp、300 bp、250 bp、200 bp、150 bp、140 bp、130 bp、120 bp、110 bp、100 bp、70 bp或50 bp。
如請求項1至20中任一項之核酸構築體，其中調節元件為以下者中之任一者或組合：SEQ ID NO: 30至58中之任一者、SEQ ID NO: 102、CBA、CMV、SCP、SERpE_TTR、Proto1、minCMV、UCL-HLP、CMVe、Myh6、肌間線蛋白（Desmin）、cTnT、α-MHC、MLC-2、CAG或EFS。
如請求項1至21中任一項之核酸構築體，其中調節元件為SEQ ID NO: 31、SEQ ID NO: 33、CBA或minCMV中之任一者或組合。
如請求項21之核酸構築體，其中該調節元件為SEQ ID NO: 33。
如請求項21之核酸構築體，其中該調節元件為CBA。
如請求項21之核酸構築體，其中該調節元件為minCMV。
如請求項1至25中任一項之核酸構築體，其中調節元件為細胞類型選擇性的。
如請求項1至26中任一項之核酸構築體，其中調節元件在心肌細胞中選擇性表現。
如請求項27之核酸構築體，其中該調節元件為Myh6、肌間線蛋白、cTnT、α-MHC、或MLC-2中之任一者或組合。
如請求項26之核酸構築體，其中該調節元件為cTNT。
如請求項29之核酸構築體，其中該cTNT調節元件包含SEQ ID NO: 101。
如請求項1至30中任一項之核酸構築體，其中該核酸構築體包含與SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 8之核苷酸序列至少80%一致之核苷酸序列或其密碼子最佳化變異體及/或片段。
如請求項1至30中任一項之核酸構築體，其中該核酸構築體包含與SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 8之核苷酸序列至少90%一致之核苷酸序列或其密碼子最佳化變異體及/或片段。
如請求項1至30中任一項之核酸構築體，其中該核酸構築體包含與SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 8之核苷酸序列至少95%一致之核苷酸序列或其密碼子最佳化變異體及/或片段。
如請求項1至30中任一項之核酸構築體，其中該核酸構築體包含SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 8之序列的核苷酸序列或其密碼子最佳化變異體及/或片段。
如請求項1至34中任一項之核酸構築體，其中該核苷酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 12之胺基酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列之核纖層蛋白A多肽或其生物活性片段及包含與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列之核纖層蛋白C多肽或其生物活性片段。
如請求項1至34中任一項之核酸構築體，其中該核苷酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 21之胺基酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列之核纖層蛋白A多肽或其生物活性片段及包含與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列之核纖層蛋白C多肽或其生物活性片段。
如請求項1至36中任一項之核酸構築體，其中該核苷酸序列進一步包含多腺苷酸化信號。
一種病毒載體，其包含如請求項1至37中任一項之核酸構築體。
一種病毒載體，其包含編碼核纖層蛋白A多肽及核纖層蛋白C多肽或其生物活性變異體及/或片段之核苷酸序列，其中該核苷酸序列至少包含野生型人類LMNA 基因之內含子8或內含子11。
一種病毒載體，其包含編碼以下者之核苷酸序列：(a)野生型LMNA 基因之外顯子1至12；及(b)野生型LMNA 基因之內含子8。
一種病毒載體，其包含編碼以下者之核苷酸序列：(a)野生型LMNA 基因之外顯子1至12；及(b)野生型LMNA 基因之內含子11。
一種病毒載體，其包含編碼以下者之核苷酸序列：(a)野生型LMNA 基因之外顯子1至12；及(b)野生型LMNA 基因之內含子8及內含子11。
如請求項39至42中任一項之病毒載體，其中該核苷酸序列進一步編碼野生型LMNA 基因之內含子9及10中之一或多者。
一種病毒載體，其包含編碼以下者之核苷酸序列：(a)野生型LMNA 基因之外顯子1至12；及(b)野生型LMNA 基因之內含子8至11。
如請求項38至44中任一項之病毒載體，其中該核苷酸序列與SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 8之核苷酸序列至少80%一致或為其密碼子最佳化變異體及/或片段。
如請求項38至44中任一項之病毒載體，其中該核苷酸序列與SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 8之核苷酸序列至少90%一致或為其密碼子最佳化變異體及/或片段。
如請求項38至44中任一項之病毒載體，其中該核苷酸序列與SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 8之核苷酸序列至少95%一致或為其密碼子最佳化變異體及/或片段。
如請求項38至44中任一項之病毒載體，其中該核苷酸序列為SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 8之序列或其密碼子最佳化變異體及/或片段。
如請求項38至48中任一項之病毒載體，其中該核苷酸序列編碼：a)具有與SEQ ID NO: 12之胺基酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列之核纖層蛋白A多肽，及b)具有與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列之核纖層蛋白C多肽。
如請求項38至48中任一項之病毒載體，其中該核苷酸序列編碼：a)具有與SEQ ID NO: 21之胺基酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列之核纖層蛋白A多肽，及b)具有與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列之核纖層蛋白C多肽。
如請求項38至50中任一項之病毒載體，其中該核苷酸序列編碼具有SEQ ID NO: 12至19或21中之任一者或多者的胺基酸序列之多肽。
如請求項38至51中任一項之病毒載體，其中該核苷酸序列不包含與野生型LMNA 基因之內含子1至7對應的核苷酸序列。
如請求項38至52中任一項之病毒載體，其中該核苷酸序列可操作地連接至調節元件。
如請求項38至53中任一項之病毒載體，其中該核苷酸序列可操作地連接至具有少於500 bp之調節元件。
如請求項38至53中任一項之病毒載體，其中該核苷酸序列可操作地連接至具有少於900 bp之調節元件。
如請求項38至55中任一項之病毒載體，其中該核苷酸序列可操作地連接至具有少於或等於800 bp、700 bp、600 bp、500 bp、400 bp、300 bp、250 bp、200 bp、150 bp、140 bp、130 bp、120 bp、110 bp、100 bp、70 bp或50 bp之調節元件。
如請求項53至56中任一項之病毒載體，其中該調節元件為以下者中之任一者或組合：SEQ ID NO: 30至58中之任一者、SEQ ID NO: 102、CBA、CMV、SCP、SERpE_TTR、Proto1、minCMV、UCL-HLP、CMVe、Myh6、肌間線蛋白、cTnT、α-MHC、MLC-2、CAG或EFS。
如請求項53至56中任一項之病毒載體，其中該調節元件為SEQ ID NO: 31、SEQ ID NO: 33、CBA或minCMV中之任一者或組合。
如請求項53至58中任一項之病毒載體，其中該調節元件為SEQ ID NO: 33。
如請求項53至58中任一項之病毒載體，其中該調節元件為CBA。
如請求項53至58中任一項之病毒載體，其中該調節元件為minCMV。
如請求項53至59中任一項之病毒載體，其中該調節元件為細胞類型選擇性的。
如請求項53至62中任一項之病毒載體，其中該調節元件在神經元細胞、視網膜細胞、腎細胞、骨胳肌細胞、脂肪細胞或心肌細胞中選擇性表現。
如請求項53至63中任一項之病毒載體，其中該調節元件在心肌細胞中選擇性表現。
如請求項64之病毒載體，其中該調節元件為Myh6、肌間線蛋白、cTnT、α-MHC或MLC-2中之任一者或組合。
如請求項6265中任一項之病毒載體，其中該調節元件為cTNT。
如請求項65或66之核酸構築體，其中該cTNT調節元件包含SEQ ID NO: 101。
如請求項38至67中任一項之病毒載體，其中該核苷酸序列進一步包含多腺苷酸化信號。
如請求項38至68中任一項之病毒載體，其中該病毒載體為腺相關病毒(adeno-associated virus，AAV)載體。
如請求項69之病毒載體，其中該AAV載體為AAV1、AAV2、AAV5、AAV6、AAV8、AAV9、scAAV1、scAAV2、scAAV5、scAAV6、scAAV8或scAAV9。
如請求項69或70之病毒載體，其中該核苷酸序列進一步包含5' AAV反向末端重複(inverted terminal repeat，ITR)序列及3' AAV ITR序列。
一種病毒顆粒，其包含如請求項38至71中任一項之病毒載體。
如請求項72之病毒顆粒，其中該病毒顆粒包含AAV之殼體蛋白。
如請求項69至73中任一項之病毒顆粒，其中該AAV為AAV6或AAV9。
一種宿主細胞，其包含如請求項1至36中任一項之核酸構築體、如請求項38至71中任一項之病毒載體或如請求項72至74中任一項之病毒顆粒。
一種醫藥組成物，其包含如請求項1至36中任一項之核酸構築體、如請求項38至71中任一項之病毒載體、如請求項72至74中任一項之病毒顆粒、如請求項75之宿主細胞及一或多種醫藥學上可接受之賦形劑。
一種用於治療個體中之核纖層病之方法，該方法包含向有需要的個體投予治療有效量之如請求項1至37中任一項之核酸構築體、如請求項38至71中任一項之病毒載體、如請求項72至74中任一項之病毒顆粒、如請求項75之宿主細胞或如請求項76之醫藥組成物。
一種用於在個體中表現核纖層蛋白A多肽及核纖層蛋白C多肽或其生物活性變異體及/或片段之方法，該方法包含向該個體投予治療有效量的如請求項1至36中任一項之核酸構築體、如請求項38至71中任一項之病毒載體、如請求項72至74中任一項之病毒顆粒、如請求項75之宿主細胞或如請求項76之醫藥組成物。
一種用於在個體中增加功能性核纖層蛋白A多肽及功能性核纖層蛋白C多肽或其生物活性變異體及/或片段之表現的方法，該方法包含向該個體投予治療有效量之如請求項1至36中任一項之核酸構築體、如請求項38至71中任一項之病毒載體、如請求項72至74中任一項之病毒顆粒、如請求項75之宿主細胞或如請求項76之醫藥組成物。
如請求項78或79之方法，其中該個體患有核纖層病。
如請求項77或80之方法，其中該核纖層病為以下者中之任一者或多者：恰克-馬利-杜斯氏病(Charcot-Marie-Tooth disease)、埃默里-德雷弗斯氏肌肉萎縮症(Emery-Dreifuss muscular dystrophy)、家族性部分脂質營養不良、哈欽森-吉爾福德氏早年衰老症候群(Hutchinson-Gilford progeria syndrome)、肢帶型肌肉萎縮症、LMNA 相關先天性肌肉萎縮症、下頜末端（mandibuloacral）發育不良、心律失常性（arrhythmogenic）右心室心肌病、家族性心房微顫、左心室緻密化不全（noncompaction）或擴張型心肌症。
如請求項77至81中任一項之方法，其中將該核酸構築體、病毒載體、病毒顆粒、宿主細胞或醫藥組成物經心肌內、靜脈內、肌內、鞘內、皮下、全身性或局部投予至心肌中。
如請求項77至81中任一項之方法，其中將該核酸構築體、病毒載體、病毒顆粒、宿主細胞或醫藥組成物經靜脈內或全身性投予。